# PBR322

pBR322 és un plasmidi que durant molt de temps va ser el principal en clonació en E. coli. Va ser creat el 1977 al laboratori Herbert Boyer a la Universitat de California a San Francisco. La P significa plasmidi mentre que la B i la R fa honor als seus creadors, Francisco Bolivar Zapata i Raymond L. Rodriguez.
pBR322 té una longitud de 4361 parells de bases i té dos gens de resistència als antibiòtics:
- el gen bla que codifica la proteïna de resistència a l'ampicil·lina (AmpR)
- el gen tetA que codifica la proteïna de resistència a la tetraciclina (TetR). Conté l'origen de la replicació de pMB1 i el gen rop, que codifica un restrictor del nombre de còpies del plasmidi.
El plasmidi té llocs de restricció únics per a més de quaranta enzims de restricció. Onze d'aquests quaranta llocs es troben dins del gen TetR. Hi ha dos llocs per als enzims de restricció HindIII i ClaI dins del promotor del gen TetR.
Hi ha sis llocs clau de restricció dins del gen AmpR. La font d'aquests gens de resistència als antibiòtics són pSC101 per a la tetraciclina i RSF2124 per a l'ampicil·lina.
La seqüència circular es numera de manera que 0 és el centre del únic lloc EcoRI i el recompte augmenta a través del gen TetR. Si hem d'eliminar l'ampicil·lina, per exemple, hem d'utilitzar endonucleasa de restricció o tisores moleculars contra PstI i aleshores pBR322 es tornarà antiresistent a l'ampicil·lina. El mateix procés d'inactivació d'inserció es pot aplicar a la tetraciclina. El gen AmpR és la penicil·lina beta-lactamasa.
Els promotors P1 i P3 són per al gen de la beta-lactamasa. P3 és el promotor natural i P1 es crea artificialment mitjançant la lligadura de dos fragments d'ADN diferents per crear pBR322. P2 es troba a la mateixa regió que P1, però està a la cadena oposada i inicia la transcripció en la direcció del gen de resistència a la tetraciclina.
La seqüència del pBR322 és
* pBR322
* 1 ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa
* 61 ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg
* 121 caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt
* 181 gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata
* 241 tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg
* 301 ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac
* 361 cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac
* 421 aggtgcggtt gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca
* 481 cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg
* 541 actgttgggc gccatctcct tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct
* 601 caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat
* 661 gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt
* 721 cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct
* 781 ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct
* 841 tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa
* 901 acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccgacgcgc tgggctacgt
* 961 cttgctggcg ttcgcgacgc gaggctggat ggccttcccc attatgattc ttctcgcttc
* 1021 cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag atgacgacca
* 1081 tcagggacag cttcaaggat cgctcgcggc tcttaccagc ctaacttcga tcactggacc
* 1141 gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt tggcatggat
* 1201 tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg catggagccg
* 1261 ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga
* 1321 attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac
* 1381 atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg cagcgttggg
* 1441 tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg
* 1501 ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc
* 1561 tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca acatgaatgg tcttcggttt ccgtgtttcg
* 1621 taaagtctgg aaacgcggaa gtcagcgccc tgcaccatta tgttccggat ctgcatcgca
* 1681 ggatgctgct ggctaccctg tggaacacct acatctgtat taacgaagcg ctggcattga
* 1741 ccctgagtga tttttctctg gtcccgccgc atccataccg ccagttgttt accctcacaa
* 1801 cgttccagta accgggcatg ttcatcatca gtaacccgta tcgtgagcat cctctctcgt
* 1861 ttcatcggta tcattacccc catgaacaga aatccccctt acacggaggc atcagtgacc
* 1921 aaacaggaaa aaaccgccct taacatggcc cgctttatca gaagccagac attaacgctt
* 1981 ctggagaaac tcaacgagct ggacgcggat gaacaggcag acatctgtga atcgcttcac
* 2041 gaccacgctg atgagcttta ccgcagctgc ctcgcgcgtt tcggtgatga cggtgaaaac
* 2101 ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga tgccgggagc
* 2161 agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt gtcggggcgc agccatgacc
* 2221 cagtcacgta gcgatagcgg agtgtatact ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg
* 2281 tactgagagt gcaccatatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc
* 2341 gcatcaggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc
* 2401 ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata
* 2461 acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg
* 2521 cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct
* 2581 caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa
* 2641 gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc
* 2701 tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt
* 2761 aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg
* 2821 ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg
* 2881 cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct
* 2941 tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc
* 3001 tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg
* 3061 ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc
* 3121 aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt
* 3181 aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa
* 3241 aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat
* 3301 gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct
* 3361 gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg
* 3421 caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag
* 3481 ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta
* 3541 attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg
* 3601 ccattgctgc aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg
* 3661 gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct
* 3721 ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta
* 3781 tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg
* 3841 gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc
* 3901 cggcgtcaac acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg
* 3961 gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga
* 4021 tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg
* 4081 ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat
* 4141 gttgaatact catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc
* 4201 tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca
* 4261 catttccccg aaaagtgcca cctgacgtct aagaaaccat tattatcatg acattaacct
* 4321 ataaaaatag gcgtatcacg aggccctttc gtcttcaaga a

## Enllaços externs

* Fermentas Arxivat 2009-03-02 a Wayback Machine.