B - Méthode usuelle.
   1. Définition.
   La teneur en acide sorbique est le résultat obtenu par l'application de la méthode décrite ci-après. Elle est exprimée en milligrammes par kilogramme de pulpe.
   2. Principe.
   Extraction de l'acide sorbique par l'isooctane en milieu acide ; spectrophotométrie de l'absorption moléculaire en ultraviolet ; détermination de l'absorbance au maximum d'absorption et quantification à l'aide d'une courbe étalon établie à partir d'une solution aqueuse de sorbate de potassium.
   3. Réactifs.
   Les réactifs doivent être de qualité analytique. L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou de l'eau de pureté au moins équivalente.
   3.1. Isooctane (triméthyl-2,2,4 pentane) de qualité pour spectrophotométrie U.V. visible.
   3.2. Acide orthophosphorique 85 % rho 20 = 1,70 g/ml.
   3.3. Sorbate de potassium, solution aqueuse à 1,34 g/l, soit 1 g/l en acide sorbique.
   4. Appareillage.
   Matériel courant de laboratoire, et notamment :
   4.1. Agitateur magnétique réglable ;
   4.2. Barreau aimanté, diamètre 7 mm et longueur 45 mm ;
   4.3. Spectrophotomètre U.V., visible, permettant la lecture d'au moins 1/100 d'absorbance ;
   4.4. Cuves en quartz de 10 mm et de 20 mm de trajet optique ;
   4.5. Tubes en verre de 20 ml minimum à bouchage hermétique ;
   4.6. Centrifugeuse munie de pots de 40 ml minimum ;
   4.7. Pipettes automatiques.
   5. Mode opératoire.
   5.1. Préparation de l'échantillon analytique.
   Prendre un minimum de vingt fruits d'une masse minimale de 200 g, les dénoyauter et les broyer à l'aide d'un hachoir, type hachoir à viande avec grille portant des trous de 4 à 5 mm.
   5.2. Mise en solution.
   5.2.1. Introduire une prise d'essai (E) de 15 g environ pesée à 1 cg près, dans un erlenmeyer de 250 ml contenant un barreau aimanté (4.2) et ajouter 150 ml d'eau amenée à environ + 60° C. Porter sur l'agitateur magnétique (4.1) réglé de façon à obtenir une bonne agitation. Noter cette vitesse et déterminer la durée de macération nécessaire pour obtenir un rendement optimal en suivant le mode opératoire défini ci-après. Pour ce faire, mettre à macérer sur l'agitateur (4.1), réglé à la vitesse notée précédemment, trois prises d'essai pendant respectivement deux heures, deux heures trente, trois heures.
   Ensuite, toutes les déterminations seront effectuées en respectant cette durée de macération définie pour la vitesse donnée. Ces deux critères dépendent du type d'agitateur utilisé.
   5.2.2. Retirer le barreau aimanté (4.2) et transvaser après refroidissement sous courant d'eau dans une fiole jaugée de 200 ml ; rincer l'erlenmeyer, ajouter les eaux de lavage dans la fiole, ajuster et homogénéiser.
   5.2.3. Transvaser immédiatement une partie aliquote de 30 ml environ dans un pot (4.6), centrifuger afin d'obtenir une bonne séparation, filtrer le liquide sur un filtre plissé (solution X).
   Noter que la centrifugation n'est pas toujours nécessaire.
   5.3. Dosage.
   5.3.1. Réalisation de la gamme étalon à partir de la solution de sorbate de potassium (3.3). Introduire 2,5 ; 5 et 10 ml de cette solution dans respectivement trois fioles de 100 ml.
   Compléter au trait de jauge avec de l'eau. Mélanger. Les concentrations respectives de ces solutions, exprimées en acide sorbique, sont 25, 50 et 100 mg/l.
   5.3.2. Extraction.
   Distribuer les réactifs dans les tubes (4.5) selon les indications du tableau 1. Ajouter deux billes de verre. Obturer et agiter énergiquement pendant deux minutes. Laisser reposer cinq minutes. Lire l'absorbance au maximum d'absorption soit aux environs de 254 mm en utilisant pour l'essai des cuves (4.4) de 10 ou 20 mm de trajet optique suivant la teneur présumée en acide sorbique.
   5.3.3. Construction de la courbe d'étalonnage.
   Porter en ordonnée les absorbances lues pour A1, A2, A3 et en abscisse les teneurs correspondantes en acide sorbique mg/l.
   5.3.4. Détermination.
   Reporter sur cette courbe l'absorbance lue pour l'essai, soit S la valeur correspondante en acide sorbique.
   6. Expression des résultats.
   6.1. Mode de calcul et formule.
   La teneur en acide sorbique est donnée par la relation suivante :
   Acide sorbique mg/kg = (S x 200 x 1000) / (E x 1000) = (S x 200) / E,
   où :
   E est la masse en grammes de la prise d'essai 5.1 ;
   S est la concentration lue sur la courbe d'étalonnage pour la solution X obtenue en 5.2.3 en tenant compte éventuellement du trajet optique de la cuve (4.4) utilisée.
   6.2. Répétabilité.
   La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées simultanément ou rapidement l'une après l'autre par le même analyste ne doit pas excéder 5 %.
   Tableau I.
   Volumes des réactifs :
   - Eau distillée (ml).
     Blanc réactif = 0,25.
   - Solutions-étalons (5.4.1) ml.
     A1 = 0,25.
     A2 = 0,25.
     A3 = 0,25.
   - Solution d'essai x (5.2.3) ml.
     X = 0,25.
   - Acide phosphorique (3.2) ml.
     Blanc réactif = 0,1.
     A1 = 0,1.
     A2 = 0,1.
     A3 = 0,1.
     X = 0,1.
   - Isooctane (3.1) ml.
     Blanc réactif = 10.
     A1 = 10.
     A2 = 10.
     A3 = 10.
     X = 10.