I - Objectif.
   Cette méthode est utilisée pour déterminer la capacité d'irritation primaire d'une substance. On désigne par irritant primaire toute substance provoquant une réaction cutanée après une application unique. L'irritation obtenue dépend de la nature de la substance testée, de sa concentration et du temps d'exposition sur la peau.
   II - Matériel et réactifs.
   1. Boîte à double contention pour lapin laissant libre le dos de l'animal ;
   2. Lapin albinos, mâles de 2,5 à 3,5 kg environ. Les animaux doivent avoir séjourné dans l'animalerie huit jours au minimum, afin d'être parfaitement acclimatés ;
   3. Tondeuse électrique pour animal ;
   4. Rasoir électrique à grille ;
   5. Vaccinostyle stérile ;
   6. Bandes de fixation, largeur 3,8 mm ;
   7. Gaze hydrophile : carrés à quatre épaisseurs de 2,5 cm de côté ;
   8. Coton hydrophile ;
   9. Rouleaux de sparadrap de 10 cm de large ;
   10. Seringue de 1 ml au 1/100 ;
   11. Balance de précision.
   III - Mode opératoire.
   A - Préparation de la peau.
   1. Tondre le dos et les flancs de six lapins à la tondeuse électrique pour dégager une surface d'environ 14 cm x 14 cm.
   2. Raser la surface tondue au rasoir électrique. Opérer avec précaution de manière à éviter toute irritation due au contact du rasoir.
   3. Laisser la peau rasée au repos pendant vingt-quatre heures.    4. Conserver le flanc gauche de chaque lapin intact, pour servir de témoin.
   5. Effectuer sur le flanc droit, au vaccinostyle, conservé jusque-là en état de stérilité, trois incisions parallèles de 3 cm de long environ et espacées de 0,5 cm environ. L'incision doit être pratiquée de façon à attaquer l'épiderme sans atteindre le derme. Tout saignement doit être évité et en aucun cas le muscle sous-jacent ne doit apparaître sous l'incision.
   B  - Application de la substance.
   1. Déposer une quantité déterminée de la substance à tester sur deux carrés de gaze :
   Produit pâteux, 0,5 gramme ;
   Produit liquide, 0,5 ml ;
   Produit solide, 0,5 gramme dispersé à l'état de pâte dans un solvant approprié.
   2. Appliquer un carré de gaze ainsi préparé sur le flanc non incisé et un second sur le flanc incisé de l'animal. Les maintenir à l'aide de deux bandes de fixation de 7 cm de long environ disposées en diagonales.
   3. Placer un petit tampon de 1 gramme environ de coton hydrophile au point de croisement des bandes de fixation. Ceci permettra de maintenir une pression uniforme sur toute la surface du carré de gaze.
   4. Enrouler l'animal, au niveau des carrés, avec une bande de sparadrap de 10 cm de large de manière à envelopper le tronc et à bloquer les carrés de gaze.
   5. Maintenir le lapin dans la boîte à double contention pendant vingt-quatre heures.
   6. Enlever le carré de gaze vingt-quatre heures après l'application.
   C - Evaluation de l'irritation primaire cutanée.
   L'indice d'irritation primaire doit être évalué immédiatement après enlèvement des carrés de gaze et de nouveau quarante-huit heures plus tard (vingt-quatre heures et soixante-douze heures après l'application respectivement).
   Ces observations doivent se faire sur le côté incisé et sur le côté non incisé.
   D - Echelle numérique.
   - Erythème et formation d'escarres :
   - Pas d'érythème : 0.
   - Léger érythème (à peine visible) : 1.
   - Erythème bien visible : 2.
   - Erythème modéré à important : 3.
   - Erythème grave (rouge pourpre) avec formation de légères escarres (lésions profondes) : 4.
   E - Echelle numérique.
   Formation d'oedème :
   - Pas d'oedème : 0.
   - Très léger oedème (à peine visible) : 1.
   - Léger oedème (contours bien définis, gonflement apparent) : 2.    - Oedème moyen (épaisseur environ 1 mm) : 3.
   - Oedème grave (épaisseur supérieure à 1 mm et surface supérieure à celle du carré) : 4.
   F - Notation.
   1. Additionner les notes obtenues pour l'oedème et pour l'érythème après vingt-quatre heures et soixante-douze heures sur les six zones correspondant aux surfaces incisées.
   2. Effectuer le même total pour les six zones correspondant aux surfaces non incisées.
   3. Effectuer le total des chiffres obtenus pour les lectures des six zones (surfaces incisées et non incisées).
   4. Calculer la note moyenne en divisant le total précédent par 24.    5. La moyenne obtenue (toujours inférieure à 8) est désignée comme étant l'indice d'irritation primaire cutanée.
   Nota - L'évaluation des érythèmes est facilitée en effectuant une injection intraveineuse dans l'oreille du lapin, d'une solution à 1 p. 100 de trypan bleu dans le sérum physiologique stérile à raison de 1 ml de solution par kilogramme de lapin. Les zones vascularisées se colorent en bleu et l'intensité de la coloration est proportionnelle à l'intensité de l'irritation.
   IV - Interprétation des résultats.
   La substance est considérée comme :
   - Non irritante pour un indice nul ;
   - Légèrement irritante pour un indice compris entre 0 et 2 ;
   - Moyennement irritante pour un indice compris entre 2 et 5 ;
   - Sévèrement irritante pour un indice compris entre 5 et 8.