La détermination des résidus d'insecticides organochlorés dans les produits laitiers par chromatographie est sujette à de nombreuses causes d'erreurs qui ne peuvent être surmontées que par l'application parallèle de plusieurs techniques offrant des avantages et des inconvénients. 

    Les trois méthodes décrites ci-dessous offrent les possibilités suivantes : 

                    A. METHODE PAR SAPONIFICATION 

    Contrôle rapide donnant de bonnes garanties d'identification pour l'HHDN et l'HEOD. Le zeidane est analysé sous forme de son dérivé éthylénique. 

    La sensibilité est de l'ordre du centième de mg/l pour le lait et du dixième de mg/kg pour le beurre. 

                    B. - METHODE PAR DOUBLE PARTAGE 

    Contrôle du zeidane et de l'HCH, sensibilité voisine de la méthode A. 

                    C. - METHODE PAR DISTILLATION 

    Contrôle de l'HCH, de l'HHDN et de l'HEOD pour des teneurs de l'ordre du centième de mg/kg dans le beurre. 

    A. - Méthode par saponification (HHDN - HEOD - zeidane) 

                              Principe 

    Les matières grasses du lait et du beurre sont éliminées par saponification avant l'extraction des insecticides. L'extrait brut est purifié par chromatographie sur florisil et l'analyse ensuite réalisée par chromatographie gazeuse. 

                               Matériel 

    Equipement indiqué dans la méthode I - 6. 

    Appareil pour la saponification : ballon en verre résistant à la chaleur à fond rond de 100 ml, à col long et rodage 24, surmonté d'un réfrigérant à boules de 30 cm, muni d'un manchon téflon n° 4. 

                                Réactifs 

    Réactifs a - b - e - f - i et k indiqués dans la méthode I - 6. 

    l) Solution d'oxalate de potassium à 5 p. 100 dans l'eau distillée          lavée ; 

    m) Potasse alcoolique 2 N - Pesez 15 g de potasse en pastille          et dissolvez la dans de l'eau distillée de manière à          obtenir 50 ml de solution. Ajoutez 100 ml d'alcool à          95° redistillé. Mélangez. 

             Introduisez cette solution dans une ampoule à décantation          de 250 ml et agitez la avec 30 ml d'éther de pétrole          purifié. Laissez reposer et vidangez la phase          hydro-alcoolique dans son récipient de stockage. 

    n) Chlorure de sodium - Maintenir, avant l'emploi, quarante-huit          heures au moins dans un four à 180° C. 

    o) Solution saturée de chlorure de sodium dans l'eau distillée          lavée. 

    p) Acide sulfurique au dixième - Préparez une solution au dixième        d'acide sulfurique dans l'eau distillée et lavez ensuite        le soluté obtenu par 20 à 25 p. 100 de son volume d'éther        de pétrole purifié. 

    q) Solution de référence : 

             Préparez par dilutions successives dans l'éther de          pétrole des solutions titrées à : 

                0,25 mg/l d'HHDN ; 

                0,5  mg/l d'HEOD ; 

                1,0  mg/l de DDE ; 

                1,0  mg/l de zeidane. 

    NOTA - La pureté des réactifs et la qualité du matériel sont deux conditions essentielles pour assurer le bien-fondé des résultats. 

                            Technique 

          Préparation des extraits destinés à l'analyse chromatographique : 

    1° Cas du lait : 

    Saponification : 

    Dans un ballon en verre résistant à la chaleur de 100 ml, introduisez : 

       5 ml de lait ; 

       1 ml de solution aqueuse d'oxalate de potassium ; 

      20 ml de potasse alcoolique 2 N. 

    Portez à ébullition sous reflux pendant une heure. 

    Extraction : 

    Laissez refroidir, versez dans une ampoule à décantation et ajoutez : 

    10 ml de solution aqueuse saturée de chlorure de sodium ; 

    25 ml d'éther de pétrole. 

    Agitez vigoureusement et laissez reposer avant de soutirer la phase aqueuse. Décantez la phase éthérée dans un bécher. Reversez la phase aqueuse dans l'ampoule et agitez-la modérément avec 25 ml d'éther de pétrole. Après séparation rejetez la phase aqueuse et reversez l'éther de pétrole de la première extraction dans l'ampoule à décantation. Lavez les phases éthérées réunies par 5 ml de solution aqueuse d'acide sulfurique au dixième. Après repos rejetez la phase aqueuse. Lavez à la suite la phase organique trois fois avec 10 ml d'eau distillée lavée. 

   Chromatographie sur colonne : 

    Préparez une colonne de florisil-sulfate de sodium de la manière suivante : 

    Tassez dans la colonne 1,5 à 2 cm de sulfate de sodium anhydre, 5 cm environ (10 g) de florisil et 1,5 à 2 cm de sulfate de sodium anhydre. 

    Lavez la colonne avec 40 ml de mélange "i" à 20 p. 100 d'éther sulfurique suivis de 50 ml d'éther de pétrole. 

    Après passage de ces liqueurs qui sont rejetées, introduisez dans la colonne la phase éthérée desséchée et réduite à 10 ml environ au bain-marie et sous jet d'air froid. Eluez successivement au moyen de : 

    100 ml d'éther de pétrole purifié (E1) ; 

     40 ml de mélange éluant (E2). 

    Recueillez séparément les deux éluats (E1) et (E2). 

    2° Cas du beurre : 

    Les opérations décrites pour l'analyse du lait sont effectuées en utilisant les quantités suivantes : 

    Saponification : 

       0,5 g de beurre ; 

      10 ml de potasse alcoolique 2 N. 

    Portez l'ébullition sous reflux pendant une heure. 

    Extraction : 

    Laissez refroidir, versez dans une ampoule à décantation et ajoutez : 

       4 ml d'eau distillée lavée ; 

       6 ml de solution aqueuse saturée de chlorure de sodium ; 

      25 ml d'éther de pétrole. 

    Les opérations ultérieures sont identiques à celles décrites au sujet de l'analyse du lait. 

          Analyse des extraits par chromatographie gazeuse 

    L'HHDN et l'HEOD résistent parfaitement à l'hydrolyse alcaline. Le zeidane est quantitativement décomposé en DDE qui résiste. 

    Le premier éluat E1 permet d'isoler quantitativement l'HHDN et le DDE (isomères op' et pp' existant dans le lait et formés par hydrolyse du zeidane) éventuels. 

    L'HEOD est obtenue seule dans l'éluat E2. 

        Recherche et dosage de l'HHDN et du DDE (Eluat E1) 

    Ajoutez 0,5 ml de solution "k" en premier éluat E1 et concentrez le sous-vide à 2 ml. 

    Effectuez l'analyse par chromatographie gazeuse dans les conditions habituelles (par exemple à 190° avec la phase DC 200 et à 175° avec la phase QF 1) à partir d'une injection de 2 microlitres d'extrait concentré à 2 ml : quantité équivalente à 5 microlitres de lait ou 0,5 mg de beurre. 

    Si un résidu d'HHDN ou de DDE est identifié par l'analyse chromatographique sur les deux colonnes DC 200 et QF 1, calculez sa concentration dans le lait ou le beurre après comparaison des surfaces des pics avec celles des pics donnés dans les conditions opératoires précises du moment par des quantités voisines de substances de référence. 

    Les surfaces seront déterminées soit d'après les données de l'intégrateur, soit par le produit de la hauteur réelle du pic par sa largeur mesurée à 54,6 p. 100 de la hauteur totale comptée à partir du sommet. 

    Il ne sera pas tenu compte de pics ne dépassant pas 10 p. 100 de l'échelle de l'enregistreur, pics pouvant être donnés - avec un détecteur de sensibilité moyenne - par environ 0,05 ng d'HHDN et 0,1 ng de DDE. Cette restriction limite la sensibilité de la méthode à : 

       0,01 mg/l d'HHDN ; 

       0,02 mg/l de DDE dans le lait, et à des quantités dix fois          plus élevées dans le beurre (0,9 partie de DDE correspond          1,0 partie de zeidane). 

    Les résidus d'insecticides peuvent être identifiés en première approximation par l'examen de leurs temps de rétention par rapport à celui de l'HHDN. Ces valeurs - données à titre indicatif seulement dans la méthode I - 6 - varient légèrement avec des conditions opératoires et devront être précisées au moment de chaque analyse.

               Recherche et dosage de l'HEOD (Eluat E2)  

    L'HEOD éventuelle serait éluée en totalité par les 40 ml de mélange éluant "i" à 20 p. 100 d'éther sulfurique. 

    L'éluat, additionné de 0,5 ml de solution "k" est concentré à 2 ml au bain-marie sous jet d'air froid. 

    Les injections sont réalisées avec 2 microlitres d'extrait dans chacune des deux colonnes QF 1 et DC 200. 

    Comme précédemment, il ne sera pas tenu compte des pics ne dépassant pas 10 p. 100 de l'échelle de l'enregistreur, pics pouvant être donnés normalement par 0,1 ng de HEOD (toujours avec un détecteur de sensibilité moyenne). 

    Ces restrictions limitent la sensibilité de la méthode à 0,02 mg/l de HEOD dans le lait et 0,2 mg/kg dans le beurre.

         B. - Méthode par double partage (HCH - zeidane) 

                           Principe 

    Les insecticides organochlorés extraits avec la matière grasse du produit laitier sont isolés en solution éthérée par un double partage entre l'acétonitrile et l'éther de pétrole suivi d'une élution sélective sur colonne de florisil. L'analyse est ensuite réalisée par chromatographie gazeuse. 

                       Matériel et réactifs 

    Déjà cités au sujet de la première méthode, à l'exception de :

 c) Acétonitrile fraîchement redistillée sur quelques gouttes d'acide       phosphorique ; 

 r) Acétonitrile et éther de pétrole en saturation réciproque. Agitez    dans une ampoule à décantation 50 ml de chacun des solvants. 

    Après repos, soutirez la phase acétonitrile saturée d'éther    de pétrole ; 

 s) Alcool à 95° redistillé sur potasse. 

                        Technique 

       Préparation des extraits destinés à l'analyse          chromatographique : 

    1° Cas du lait : 

    Dans une ampoule à décantation de 125 ml, introduisez : 

       25 ml de mélange : 

          Alcool à 95° : 2 volumes ; 

          Ether éthylique : 4 volumes ; 

          Solution aq. d'oxalate de potassium à 5 p. 100 :

             0,1 volume. 

        5 ml de lait. 

    Agitez, laissez reposer et ajoutez : 

       10 ml d'eau distillée ; 

       30 ml d'éther de pétrole redistillé. 

    Agitez 2 mn, laissez reposer. 

    Séparez la phase inférieure. Décantez la phase éthérée dans un petit bécher de 50 ml en la filtrant sur un tampon de laine de verre. 

    Rincez deux fois l'ampoule à décantation et le coton avec 5 ml d'éther de pétrole. 

    Evaporez juste à sec au bain-marie en s'aidant d'un jet d'air froid. 

    Reprenez le résidu par 10 ml d'éther de pétrole saturé d'acétonitrile. 

    Dans une ampoule de 125 ml épuisez trois fois cette solution avec 10 ml d'acétonitrile saturé d'éther de pétrole. Les trois phases acétonitrile sont successivement versées et agitées dans une ampoule de 250 ml contenant 150 ml d'eau distillée lavée, 5 ml de solution saturée de NaCl et 30 ml d'éther de pétrole. 

    La phase éthérée lavée par agitation avec 10 ml d'eau distillée et desséchée ensuite sur sulfate de sodium anhydre, est versée dans une colonne florisil-sulfate de sodium préparée et lavée comme il a été indiqué précédemment. 

    La phase aqueuse est épuisée avec 10 ml d'éther de pétrole qui, après séparation, lavage à l'eau et déshydratation, sont introduits à la suite dans la colonne de florisil. 

    Poursuivez l'élution en ajoutant 100 ml d'éther de pétrole dans la colonne. Concentrez l'éluat E1 à 2 ml en présence de 0,5 ml de solution k.

    1 ml d'extrait purifié équivaut à 2,5 ml de lait.

    2° Cas du beurre : 

    Dans un bécher de 100 ml, pesez exactement 1 g de beurre. Dissolvez-le dans un mélange d'alcool à 95° + éther sulfurique (1 + 2), transvasez la solution dans un ballon jaugé de 100 ml et complétez au trait de jauge en rinçant le bécher avec le même mélange. Agitez. 

   Dans une ampoule à décantation de 125 ml introduisez : 

       1 ml de solution aqueuse d'oxalate de potassium          à 5 p. 100 ; 

      25 ml de la solution éthéro-alcoolique de beurre (soit          0,25 g de beurre) ; 

      30 ml d'éther de pétrole. 

    Agitez et ajoutez ensuite : 25 ml d'eau distillée. Agitez vigoureusement et laissez reposer avant de soutirer la phase aqueuse. 

    Décantez la phase éthérée dans un vase renfermant du sulfate de sodium anhydre et de ce vase dans un bécher de 50 ml. 

    Reversez la phase aqueuse dans l'ampoule et agitez-la modérément avec 25 ml d'éther de pétrole qui sera ajouté au premier extrait. 

    Evaporez juste à sec l'extrait éthéré et reprenez-le avec 10 ml d'éther de pétrole saturé d'acétonitrile. 

    Continuez en suivant la technique décrite pour l'analyse du lait à partir de : "Dans une ampoule de 125 ml épuisez trois fois cette solution avec 10 ml d'acétonitrile saturé d'éther de pétrole ...". 

    Concentrez également à 2 ml l'éluat E1 en présence de 0,5 ml de solution "k". 

    1 ml d'extrait purifié équivaut à 0,125 g de beurre. 

          Analyse des extraits par chromatographie gazeuse 

    Injectez sur colonne DC 200 et QF1 2 microlitres des solutions de référence d'HCH et de zeidane pour contrôler la sensibilité et les temps de rétention des insecticides recherchés. 

    Injectez 4 microlitres d'extrait purifié E1 concentré à 2 ml. 

    Les résultats sur les deux colonnes devront être concordants. 

    Il ne sera pas tenu compte des pics inférieurs à 10 p. 100 de l'échelle de l'enregistreur, soit généralement moins de 0,05 ng d'HCH technique et 0,2 ng de zeidane. 

    Ces conditions limitent la sensibilité de la méthode pour le lait à 0,005 mg/l de HCH et 0,02 mg/l de zeidane, et pour le beurre à 0,1 mg/kg de HCH et 0,4 mg/kg de zeidane. 

    Lorsque l'analyse du beurre est négative, l'extrait pourra être concentré à 0,50 ml de manière à abaisser le seuil de sensibilité de l'analyse. 

    NOTA - Les deux techniques ci-dessus : méthode par saponification et méthode par double partage ont été étudiées en fonction de limites déterminées de sensibilité d'un appareillage particulier dans ses conditions moyennes de travail. Si un détecteur plus sensible est utilisé, la concentration des éluats sera réduite proportionnellement à l'augmentation de sensibilité du nouveau détecteur de manière à conserver les seuils indiqués ici. 

     C - Méthode par distillation extractive (HCH - HHDN - HEOD) 

                           Principe 

    Les insecticides sont entraînés par la vapeur d'eau surchauffée par une solution glycérinée du beurre ou du lait. Après distillation d'un mélange d'éther de pétrole et d'octane, le distillat est épuisé par ces mêmes hydrocarbures maintenus à la température ordinaire par un réfrigérant. 

    Après élution sélective sur colonne florisil, les éluats sont analysés par chromatographie gazeuse avec détecteur à capture d'électron. 

                          Matériel particulier 

    - appareil de DEAN et STARK pour distillation extractive avec solvant plus léger que l'eau et dont le réservoir récepteur est équipé d'un réfrigérant. 

                                Réactifs 

    Réactifs a - b - e - f de la méthode I - 6. 

 t) Glycérine bidistillée R. P. d = 1,26. 

 u) Octane E. K. P. 1107 Eb : 125''8. 

                              Mode opératoire 

    Distillation extractive : 

    Dans le ballon de 250 ml de l'appareil à distiller pesez exactement : 

    5 g de beurre, 

    Ajoutez exactement : 

   40 ml de glycérine ; 

    5 ml d'eau distillée ; 

    5 ml d'octane ; 

   15 ml d'éther de pétrole, 

    Et quelques billes de verre. 

    Introduisez dans l'appareil récepteur v ml d'eau distillée, volume préalablement déterminé comme suit : 

    L'appareil étant séparé du ballon à distillation, garnissez-le complètement d'eau distillée, introduisez ensuite au-dessus de l'eau 20 ml d'éther de pétrole et laissez l'équilibre s'établir librement. Vidangez ensuite l'eau restant au-dessous de l'éther et dans la tubulure de retour et notez son volume v ml. 

    Ce volume variera avec la capacité particulière de chaque appareil (12 à 20 ml). 

    Adaptez le ballon sous le récepteur. Distillez pendant deux heures. 

    Pour l'analyse du lait, introduisez les mêmes quantités de réactifs avec 10 ml de lait dans le ballon et (v - 5) ml d'eau distillée dans le récepteur.

                   Séparation chromatographique : 

    Après arrêt de la distillation soutirez le contenu de l'extracteur dans une ampoule à décantation de 125 ml. Séparez la phase aqueuse, décantez la phase éthérée dans un bécher de 100 ml renfermant 5 g de sulfate de sodium anhydre et de celui-ci dans la colonne de florisil-sulfate de sodium préparée comme il a été indiqué précédemment. 

    Rincez le réfrigérant et l'appareil extracteur avec 20 ml d'éther de pétrole qui sera reçu successivement dans l'ampoule, le bécher et la colonne à la suite de l'extrait précédent. 

    Après disparition des solutions éthérées dans la colonne continuez l'élution avec 65 ml d'éther de pétrole de manière à recueillir dans un ballon jaugé 100 ml d'éluat, soit E1 cet éluat.

    Eluez ensuite avec 40 ml de mélange "i" à 20 p. 100 d'éther sulfurique dans l'éther de pétrole, soit E2 cet éluat. 

           Analyse des éluats par chromatographie gazeuse 

    a) Eluat E1 - Recherche et dosage de l'HCH et de l'HHDN : 

    L'éluat E1 renferme la totalité des résidus éventuels de HCH et d'HHDN quantitativement extraits du lait ou du beurre. 

    Il peut renfermer en partie (30 p. 100 environ) le zeidane du produit laitier. 

    En raison des variations des teneurs en insecticides dans le beurre et des limites étroites de la gamme de mesure du détecteur à capture d'électron, le choix de la meilleure concentration de l'éluat est difficilement prévisible. 

    Une première détermination avec 4 microlitres d'éluat E1 non concentré sera effectuée avant de procéder à la concentration de l'extrait à 10 ml dans le cas du beurre (ou 5 ml dans le cas du lait). 

    L'évaporation peut être réalisée au bain-marie sous jet d'air froid et filtré et après addition de 0,5 ml de solution "k" à 1 p. 100 d'huile de paraffine. Elle sera effectuée dans un bécher au début et ensuite dans un tube conique gradué de 15 ml avec les précautions d'usage. 

    En fonction du volume final de l'éluat représentant 5 g de beurre ou 10 ml de lait, l'injection de 4 microlitres d'extrait permet le contrôle des teneurs en HCH et HHDN indiquées au tableau I. Dans chaque cas les valeurs des limites peuvent être multipliées par quatre en réduisant le volume injecté de 4 à 1 microlitres.

                          TABLEAU n° 1 

  Teneurs en HCH ou en HHDN contrôlées correctement avec un détecteur      de sensibilité moyenne (gamme de mesure : 0,05 à 0,20 ng)          après injection de 4 microlitres d'éluat E1, en fonction                  de la concentration choisie 

    Les teneurs sont exprimées en mg/kg : 
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 :  CONCENTRATION :               :
 :  de l'éluat E1 :     100 ml    :
 :     à ...      :               :
 :----------------:---------------:
 :  Beurre ..     :  0,25 à 1,0   :
 :                :               :
 :  Lait ..       :  0,12 à 0,50  :
 :                :               :
 :================================:
 :================================:
 :  CONCENTRATION :               :
 :  de l'éluat E1 :     10 ml     :
 :     à ...      :               :
 :----------------:---------------:
 :  Beurre ..     :  0,02 à 0,10  :
 :                :               :
 :  Lait ..       :  0,01 à 0,05  :
 :                :               :
 :================================:
 :================================:
 :  CONCENTRATION :               :
 :  de l'éluat E1 :      5 ml     :
 :     à ...      :               :
 :----------------:---------------:
 :  Beurre ..     :  0,01 à 0,05  :
 :                :               :
 :  Lait ..       : 0,005 à 0,025 :
 :                :               :
 :================================:

    L'analyse chromatographique est réalisée dans les conditions habituelles.   b) Eluat E2 - Recherche et dosage de l'HEOD : 

    L'HEOD éventuelle serait éluée en totalité par les 40 ml du mélange éluant "i". 

    L'éluat, additionné de 0,5 ml de solution "k", est concentré à 5 ml au bain-marie sous jet d'air froid, pour les analyses de routine. 

    Les injections sont réalisées avec 4 microlitres d'extrait E2 concentré à 5 ml dans chacune des deux colonnes DC 200 et QF 1. 

    Une gamme de mesures comprise entre 0,1 et 2 ng permet un dosage correct des résidus de HEOD entre : 

       0,02 et 0,4 mg/kg d'HEOD dans le beurre 

    ou 0,01 et 0,2 mg/l d'HEOD dans le lait. 

    Si la chromatographie de l'éluat E2, comprend divers pics dont l'un est assimilable à celui de l'HEOD, à défaut de contrôle par microcoulométrie, une purification complémentaire analogue à celle de la méthode A sera exécutée comme suit : 

    Introduisez l'éluat E2, déjà concentré à 5 ml dans un tube gradué, dans un ballon à fond rond de 100 ml muni d'un rodage permettant de l'adapter à un réfrigérant ascendant. 

    Rincez le tube avec 2 ml d'éther de pétrole suivis de 10 ml de potasse alcoolique 2 N. 

    Portez le mélange à l'ébullition sous reflux pendant 45 mn. 

    Après refroidissement, versez dans une ampoule à décantation et ajoutez : 

       10 ml d'eau distillée lavée ; 

       20 ml d'éther de pétrole. 

    Agitez vigoureusement et laissez reposer avant de soutirer la phase aqueuse. Décantez la phase éthérée dans un bécher. Reversez la phase aqueuse dans l'ampoule et agitez-la modérément avec 20 ml d'éther de pétrole. Après séparation, rejetez la phase aqueuse et reversez l'éther de pétrole de la première extraction dans l'ampoule à décantation. 

    Lavez les phases éthérées réunies par 5 ml de solution aqueuse d'acide sulfurique au dixième. Après repos, rejetez la phase aqueuse. Lavez à la suite la phase organique 3 fois avec 10 ml d'eau distillée lavée. 

    La phase éthérée, séchée sur sulfate de sodium, est concentrée exactement à 10 ml (ou 5 ml) pour l'analyse chromatographique.

                      Contrôle des résultats 

    Un premier contrôle qualitatif des résultats obtenus avec le détecteur à capture d'électron a été acquis par l'analyse sur deux colonnes de polarité différente DC 200 et QF 1. Les résultats ont été considérés comme valables lorsque les deux essais sur le même extrait purifié ont donné des valeurs comparables, compte tenu des approximations suivantes acceptables pour l'analyse des traces : 

    plus ou moins 10 p. 100 entre 1 et 10 mg/kg ; 

    plus ou moins 20 p. 100 pour 0,1 mg/kg ; 

    plus ou moins 50 p. 100 pour 0,01 mg/kg ; 

    plus ou moins 100 p. 100 pour 0,001 mg/kg. 

    Il convient de ne pas oublier que le détecteur à capture d'électron n'offre pas de garantie de spécificité pour les insecticides organochlorés. 

    La teneur calculée d'après le signal enregistré donne l'expression, dans la mesure où la méthode est quantitative, d'une concentration limite au-dessus de laquelle l'absence de résidu peut être garantie. 

    Une deuxième analyse au moyen d'une technique différente devra confirmer un résultat positif. 

   Le choix de la deuxième méthode à utiliser est schématisé dans le tableau suivant : 
 :================================:
 :                 :   METHODE    :
 :                 :   POUR LA    :
 :     METHODE     : CONFIRMATION :
 :    UTILISEE     :  DU RESULTAT :
 :  la première    :--------------:
 :                 :      HCH     :
 :-----------------:--------------:
 :       C         :       B      :
 :                 :              :
 :       A         :       C      :
 :                 :              :
 :       B         :       C      :
 :                 :              :
 :================================:
 :================================:
 :                 :   METHODE    :
 :                 :   POUR LA    :
 :     METHODE     : CONFIRMATION :
 :    UTILISEE     :  DU RESULTAT :
 :  la première    :--------------:
 :                 :     HHDN     :
 :                 :     HEOD     :
 :-----------------:--------------:
 :       C         :       A      :
 :                 :              :
 :       A         :       C      :
 :                 :              :
 :       B         :       C      :
 :                 :              :
 :================================:

 :================================:
 :                 :   METHODE    :
 :                 :   POUR LA    :
 :     METHODE     : CONFIRMATION :
 :    UTILISEE     :  DU RESULTAT :
 :  la première    :--------------:
 :                 :   Zeidane    :
 :-----------------:--------------:
 :       C         :       A      :
 :                 :              :
 :       A         :       B      :
 :                 :              :
 :       B         :       A      :
 :                 :              :
 :================================:

    Le contrôle qualitatif et quantitatif du résultat pourra être effectué par analyse microcoulométrique après chromatographie gazeuse, méthode capable d'assurer un contrôle spécifique des substances organophalogénées (Cl-Br-I).  Recherche et dosage des résidus par analyse microcoulométrique 

    A titre de vérification des résultats positifs obtenus avec le détecteur à capture d'électron, l'analyse microcoulométrique pourra être effectuée à la suite sur les mêmes extraits pratiquement conservés en totalité. 

    Les extraits purifiés obtenus dans les méthodes décrites ci-dessus peuvent être analysés directement par microcoulométrie au moyen d'un microcoulomètre Dohrmann relié à la sortie d'une colonne pour chromatographie gazeuse. La colonne sera en verre résistant à la chaleur : longueur 1,20 m, diamètre extérieur 6 mm garnie de silicone DC 200 à 10 p. 100 sur chromosorb G 60/80 mesh. 

    La vérification du résultat au moyen du détecteur microcoulométrique est correcte pour l'HCH, l'HHDN et l'HEOD entre 10 et 100 ng et pour le zeidane entre 40 et 400 ng. Le volume de l'injection sera limité à 50 microlitres, mais il pourra être porté à 100 microlitres si nécessaire. 

    Il convient donc de concentrer les éluats E1 ou E2 de manière à ce qu'ils titrent au moins entre 0,5 et 1 mg/kg en insecticide recherché. 

    L'évaporation sera effectuée sous jet d'air froid filtré. 

    Les éluats renfermant déjà 0,5 ml de solution "k" afin de réduire les pertes par évaporation. Ces pertes sont d'autant plus importantes que l'extrait est mieux purifié et que la concentration est plus poussée. Elles pourront être sensibles pour l'HHDN et surtout l'HCH, le gamma HCH, insecticides pour lesquels l'évaporation à sec est irréalisable sans pertes. 

    Après concentration à 0,1 ml, par exemple, un résultat inférieur de 10 à 30 p. 100 à celui obtenu avec le détecteur à capture d'électron peut donc être considéré comme normal. 

    La méthode par distillation extractive, grâce à une prise d'essai plus importante, permet d'éviter une concentration excessive. 

    Compte tenu de ces conditions, les limites suivantes de détection peuvent être atteintes par microcoulométrie après injection de 100 microlitres d'éluat concentré à 0,20 ml. 

               A - Méthode par saponification 

       (prise d'essai de 5 ml de lait ou 0,5 g de beurre) 

    HHDN et HEOD ..         0,004 mg/l dans le lait ; 

                            0,04 mg/kg dans le beurre. 

    Zeidane ..              0,016 mg/l dans le lait ; 

                            0,16 mg/kg dans le beurre. 

                 B - Méthode par double partage 

       (prise d'essai du 5 ml de lait ou 0,25 g de beurre) 

    HCH ..                  0,004 mg/l dans le lait ; 

                            0,08 mg/kg dans le beurre. 

    Zeidane ..              0,016 mg/l dans le lait ; 

                            0,3 mg/kg dans le beurre. 

              C - Méthode par distillation extractive 

         (prise d'essai de 10 ml de lait ou 5 g de beurre) 

    HCH, HHDN, HEOD ..      0,004 mg/l dans le lait ; 

                            0,04 mg/kg dans le beurre. 

    Moins sujette à des causes d'erreurs, la méthode microcoulométrique peut être ici appliquée à la recherche de teneurs plus faibles que ne le permet le détecteur à capture d'électron. De telles mesures n'étant pas nécessaires, la concentration des éluats E1 et E2 de cette troisième méthode sera limitée à 2 ml afin d'assurer une meilleure analyse quantitative.