I - Objectif et principes.
   L'application répétée de petites doses de produits sur une longue période fait apparaître des réactions qui souvent ne peuvent être décelées au cours des tests d'irritation primaire ou de sensibilisation. Cette méthode est utilisée pour déterminer l'action sur la peau d'une application quotidienne d'un produit pendant 90 jours. La plupart du temps, les réactions apparaissent entre le 50e et le 60e jour d'application et peuvent aller de l'érythème léger avec desquamation jusqu'à une hyperacanthose forte avec névrose des tissus.
   II - Equipement et réactifs.
   1. Lapins albinos, mâles, de 2,5 à 3,5 kg environ. Les animaux doivent avoir séjourné dans l'animalerie huit jours au minimum, afin d'être parfaitement acclimatés.
   2. Pèse-bébé, portée maximum 10 kg.
   3. Tondeuse électrique pour animal.
   4. Spatule en matière plastique souple.
   5. Collier de contention en cuir.
   III - Mode opératoire.
   1. Tondre avec la tondeuse électrique le dos et les flancs de trois lapins.
   2. Peser chaque animal.
   3. Appliquer chaque jour à la même heure la préparation à contrôler sur toute la surface tondue, à l'exception de la zone témoin, à l'aide de la spatule en plastique, de manière bien uniforme. Bien faire pénétrer le produit.
   Dose : 2 grammes de produit par kilogramme de poids vif.
   4. Immobiliser l'animal à l'aide du collier de contention de manière à ce qu'il ne puisse pas lécher la zone traitée.
   5. Effectuer l'application quotidienne pendant quatre-vingt-dix jours.
   IV - Observations.
   1. Chaque semaine, noter le poids de chaque animal et tondre les poils de la zone d'application ainsi que de la zone témoin (deux fois par semaine si nécessaire).
   2. Observer l'aspect et la vitesse de repousse des poils.
   3. Mesurer l'épaisseur de la peau et l'hyperacanthose éventuelle, en mesurant l'épaisseur d'un pli de peau à l'aide d'un palmer.
   4. Rechercher et noter la formation d'érythème et d'oedème comme pour une mesure d'irritation primaire.
   a) Echelle numérique. Erythème et formation d'escarres :
   Pas d'érythème : 0.
   Léger érythème (à peine visible) : 1.
   Erythème bien visible : 2.
   Erythème modéré à important : 3.
   Erythème grave (rouge pourpre) avec formation de légères escarres (lésions profondes) : 4.
   b) Echelle numérique. Formation d'oedème :
   Pas d'oedème : 0.
   Très léger oedème (à peine visible) : 1.
   Léger oedème (contours bien définis, gonflement apparent) : 2.
   Oedème moyen (épaisseur environ 1 mm) : 3.
   Oedème grave (épaisseur supérieure à 1 mm et surface supérieure à celle du carré) : 4.
   c) Notation :
   Additionner les notes obtenues pour l'oedème et pour l'érythème après vingt-quatre heures et soixante-douze heures sur les six zones correspondant aux surfaces incisées.
   Effectuer le même total pour les six zones correspondant aux surfaces non incisées.
   Effectuer le total des deux chiffres obtenus ci-dessus.
   Calculer la note moyenne en divisant le total précédant par 24.
   La moyenne obtenue (toujours inférieure à 8) permet d'apprécier l'agressivité superficielle cutanée du produit essayé par applications itératives.
   Note - L'évaluation des érythèmes est facilitée en effectuant une injection intraveineuse dans l'oreille du lapin, d'une solution à 1 p. 100 de trypan bleu dans le sérum physiologique stérile à raison de 1 millilitre de solution par kilogramme de lapin. Les zones vascularisées se colorent en bleu et l'intensité de la coloration est proportionnelle à l'intensité de l'irritation.
   Nota - Il est souhaitable de procéder à un examen histologique de la peau et à une analyse de sang et d'urine.
   Fréquence des observations : au début de l'expérience et chaque mois.
   Ces essais ne peuvent être effectués que par des experts toxicologues, dermatologues ou vétérinaires qualifiés et spécialisés.