A - Méthode de référence.
   1. Définition.
   La teneur en acide sorbique est le résultat obtenu par l'application de la méthode décrite ci-après. Elle est exprimée en milligrammes par kilogramme de pulpe.
   2. Principe.
   Extraction de l'acide sorbique par l'eau à 60° C.
   Dosage par chromatographie liquide haute performance.
   3. Réactifs.
   Les réactifs doivent être de qualité analytique. L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou de l'eau de pureté au moins équivalente.
   3.1. Solution d'acide sulfurique N..
   3.2. Méthanol de qualité C.L.H.P..
   3.3. Tétrahydrofurane de qualité C.L.H.P..
   3.4. Solution étalon de sorbate de potassium à 20 mg/l d'acide sorbique ou à toute autre concentration si nécessaire.
   4. Appareillage.
   Matériel courant de laboratoire, et notamment :
   4.1. Agitateur magnétique réglable ;
   4.2. Barreau aimanté, diamètre 7 mm et longueur 45 mm ;
   4.3. Centrifugeuse munie de pots de 40 ml minimum ;
   4.4. Chromatographe en phase liquide haute performance équipé d'une colonne de silice greffée type C18 et d'un détecteur spectrophométrique permettant de travailler à une longueur d'onde de 254 nm.
   5. Mode opératoire.
   5.1. Préparation de l'échantillon analytique.
   Prendre un minimum de vingt fruits d'une masse minimale de 200 g, les dénoyauter et les broyer à l'aide d'un hachoir, type hachoir à viande avec grille portant des trous de 4 à 5 mm.
   5.2. Mise en solution.
   5.2.1. Introduire une prise d'essai (E) de 15 g environ pesée à 1 cg près, dans un erlenmeyer de 250 ml contenant un barreau aimanté (4.2) et ajouter 150 ml d'eau amenée à environ + 60° C. Porter sur l'agitateur magnétique (4.1) réglé de façon à obtenir une bonne agitation. Noter cette vitesse et déterminer la durée de macération nécessaire pour obtenir un rendement optimal en suivant le mode opératoire défini ci-après. Pour ce faire, mettre à macérer sur l'agitateur (4.1), réglé à la vitesse notée précédemment, trois prises d'essai pendant respectivement deux heures, deux heures trente, trois heures.
   Ensuite, toutes les déterminations seront effectuées en respectant cette durée de macération définie pour la vitesse donnée.
   Ces deux critères dépendent du type d'agitateur utilisé.
   5.2.2. Retirer le barreau aimanté (4.2) et transvaser après refroidissement sous courant d'eau dans une fiole jaugée de 200 ml, rincer l'erlenmeyer, ajouter les eaux de lavage dans la fiole, ajuster et homogénéiser.
   5.2.3. Transvaser immédiatement une partie aliquote de 30 ml environ dans un pot (4.3), centrifuger afin d'obtenir une bonne séparation, filtrer le liquide sur un filtre plissé.
   Noter que la centrifugation n'est pas toujours nécessaire.
   5.3. Dosage.
   5.3.1. Conditions chromatographiques.
   Colonne, phase stationnaire, silice greffée type C18 (5 microns de m) :
   - longueur : 15 cm ;
   - diamètre intérieur : 4 mm.
   Phase mobile :
   - 65 p. 100 d'eau ajustée à pH 2 avec la solution d'acide sulfurique N ;
   - 28 p. 100 méthanol ;
   - 7 p. 100 de tétrahydrofurane.
   Température : ambiante.
   Volume injecté : 20 microns de l.
   Début : 1 ml/min.
   Détection : UV 254 nm.
   5.3.2. Injecter le filtrat dans le chromatographe et procéder dans les mêmes conditions et à la même sensibilité avec la solution étalon.
   6. Expression des résultats.
   6.1. Mode de calcul et formule.
   La teneur en acide sorbique est donnée par la relation suivante :
   Acide sorbique mg/kg = (S x A x 200 x 1000) / (E x Ae x 1000) =

 (S x A x 200) / (E x Ae) où :
   E est la masse en grammes de la prise d'essai ;
   S est la concentration en milligrammes par litre de la solution étalon d'acide sorbique ;
   A est l'aire du pic d'acide sorbique dans l'échantillon ;
   Ae est l'aire du pic d'acide sorbique dans la solution étalon.
   6.2. Répétabilité.
   La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées simultanément ou rapidement l'une après l'autre par le même analyste ne doit pas excéder 2 p. 100.