I. - Objet.
   La présente méthode est utilisée pour l'évaluation de l'irritation oculaire d'un produit cosmétique ou d'hygiène corporelle.
   II. - Principe.
   La méthode est fondée sur l'observation des réactions oculaires provoquées par l'instillation unique du produit.
   III. - Animaux d'expérience et équipement.
   3.1. Lapins albinos mâles, de souche définie, de 2,5 kg environ.
   Les animaux doivent avoir séjourné dans l'animalerie, en cage individuelle, une semaine au minimum afin d'être parfaitement acclimatés et reçoivent, dès leur arrivée, une alimentation de composition constante et équilibrée.
   3.2. Dispositif de maintien permettant la bonne réalisation du protocole expérimental.
   3.3. Seringue stérile de 1 ml graduée au centième.
   3.4. Solution aqueuse de fluorescéine sodique à 2 p. 100 m/v, de préférence préparée extemporanément.
   3.5. Solution de chlorure de sodium à 9 p. 1.000 M/V, ou isotonique aux larmes ou solution équivalente.
   3.6. Lampe torche.
   3.7. Ophtalmoscope.
   3.8. Lampe loupe U.V. de type utilisé en ophtalmologie.
   3.9. Balance de laboratoire sensible au moins au milligramme.
   IV. - Mode opératoire.
   Cet essai doit être effectué sur six lapins ayant des yeux sains et sans défaut.
   4.1. Appliquer directement le produit dans le sac conjonctival de l'un des yeux des lapins à raison de :
   Produits liquides : 0,1 ml ;
   Produits semi-liquides et pâteux : 0,1 ml ou 100 mg ;
   Produits solides et pulvérulents : 100 mg.
   4.2. Maintenir les paupières fermées pendant 10 secondes, afin d'éviter toute perte.
   4.3. Maintenir les animaux pendant une heure dans le dispositif (3.2) afin qu'ils ne puissent pas se frotter l'oeil, puis les remettre dans leur cage.
   4.4. Observer l'oeil des lapins une heure puis 1, 2, 3, 4 et 7 jours après l'instillation en utilisant l'oeil non instillé comme témoin pour évaluer une irritation éventuelle de l'oeil traité.
   Effectuer les examens dans l'ordre suivant :
   - conjonctive (chemosis, larmoiement, rougissement) ;
   - iris ;
   - cornée (degré et surface d'opacification et/ou d'atteinte épithéliale).
   L'observation des lésions de la conjonctive, de l'iris et de la cornée se fera par examen direct. L'observation de la cornée sera complétée par un examen après instillation de la solution de fluoresceine (3.4) et rinçage à l'aide de la solution (3.5). Elle sera poursuivie en utilisant la lampe U.V. (3.8).
   V. - Notation.
   5.1. Procéder aux différents temps à l'évaluation des lesions dans l'ordre d'instillation des animaux.
   5.2. Noter les observations à l'aide de l'échelle d'évaluation numérique ci-après.
   VI. - Evaluation numérique des lésions oculaires.
   6.1. Conjonctive :
   Commencer l'évaluation du chemosis et du larmoiement avant d'ouvrir les paupières de l'animal.
   6.1.1. Chemosis (A) :
   Pas de gonflement : 0.
   Gonflement léger, y compris la membrane nictitante : 1.
   Gonflement avec éversion de paupière : 2.
   Gonflement avec paupières à demi fermées : 3.
   Gonflement avec paupières fermées plus qu'à moitié ou complètement : 4.
   6.1.2. Larmoiement (B) :
   Absence de larmoiement : 0.
   Larmoiement léger (ne pas tenir compte des légères sécrétions existant normalement dans l'angle interne) : 1.
   Larmoiement, avec humidification des paupières et des poils avoisinant les paupières : 2.
   Larmoiement avec humidification des paupières et des poils sur de larges surfaces autour de l'oeil : 3.
   6.1.3. Rougissement de la conjonctive palpébrale (C) :
   Vaisseaux normaux : 0.
   Vaisseaux nettement plus injectés que la normale : 1.
   Vaisseaux difficiles à distinguer individuellement :
   - couleur rouge vif, diffuse : 2.
   - couleur rouge foncé, diffuse : 3.
   6.1.4. Additionner les trois notes et multiplier le total par 2 :

 (A + B + C) x 2
   Maximum = 20.
   6.2. Iris (D).
   Normal : 0.
   Nettement plus plissé que la normale, congestion, gonflement, iris réagissant encore à la lumière, même lentement (une ou plusieurs de ces caractéristiques) : 1.
   Pas de réaction à la lumière, hémorragie, destruction importante (une ou plusieurs de ces caractéristiques) : 2.
   6.2.1. Multiplier la note obtenue D par 5 : D x 5.
   Maximum = 10.
   6.3. Cornée.
   Ne tenir compte en ce qui concerne l'opacification et l'atteinte épithéliale que de la zone présentant le degré de lésion le plus élevé.
   Les zones d'atteinte épithéliale se distinguent par une fluorescence très nette.
   6.3.1. Absence d'atteinte cornéenne :
   Aucune modification visible à l'examen direct (perte de brillant ou de poli) ou après instillation de fluoresceine : 0.
   6.3.2. Degré d'opacification cornéenne (E) :
   Présence de zones translucides (diffuses ou disséminées), détails de l'iris clairement visibles : 1.
   Présence d'une zone translucide facilement identifiable, détails de l'iris légèrement masqués : 2.
   Présence d'une zone opalescente, aucun détail de l'iris visible, contour de la pupille à peine discernable : 3.
   Présence d'une opacité cornéenne totale, rendant l'iris et la pupille invisibles : 4.
   6.3.3. Surface d'opacité et/ou d'atteinte épithéliale (F) :
   Un quart (ou moins mais non nulle) : 1.
   Entre le quart et la moitié : 2.
   Entre la moitié et les trois quarts : 3.
   Des trois quarts à toute la surface : 4.
   6.3.4. En cas d'atteinte cornéenne, faire le produit des deux notes et le multiplier par 5.
   E x F x 5
   Maximum = 80.
   VII. - Détermination des indices d'irritation oculaire.
   7.1. Additionner les notes obtenues pour chacun des six lapins, à chaque temps d'observation. On obtient ainsi l'indice d'irritation oculaire individuel : I.O.I..
   7.2. Faire à chaque temps la moyenne des I.O.I. des six lapins.
   On obtient ainsi l'indice d'irritation oculaire moyen : I.O..
   7.3. Noter parmi les six I.O. celui qui a la valeur la plus élevée. On obtient ainsi l'indice d'irritation oculaire maximum :

 I.O.Ma. Le temps d'apparition de celui-ci sera précisé au procès-verbal.
   VIII. - Expression des résultats.
   L'appréciation du produit examiné sera faite en fonction des différents indices mentionnés au point VII, selon le tableau suivant :
   Valeurs des différents indices :
   I.O.Ma : avant 5,
   I.O. : A un jour = O.
   Appréciations : Non irritant.
   Valeurs des différents indices :
   I.O.Ma : supérieur ou égal à 5 et jusqu'à 15,
   I.O. : A deux jours : inférieur ou égal à 2.
   Appréciations : Très faiblement irritant.
   Valeurs des différents indices :
   I.O.Ma : supérieur ou égal à 15 et jusqu'à 25,
   I.O. : A quatre jours : inférieur ou égal à 2.
   Appréciations : Légèrement irritant.
   Valeurs des différents indices :
   I.O.Ma : supérieur ou égal à 25 et jusqu'à 50,
   I.O. : A sept jours : inférieur ou égal à 20,
   I.O.I. : inférieur ou égal à 30 chez 6 lapins et inférieur ou égal à 15 chez au moins 4 lapins à sept jours.
   Appréciations : Irritant.
   Valeurs des différents indices :
   I.O.Ma : supérieur ou égal à 50 et jusqu'à 80,
   I.O. : A sept jours : inférieur ou égal à 40,
   I.O.I. : inférieur ou égal à 60 chez 6 lapins et inférieur ou égal à 30 chez au moins 4 lapins à sept jours.
   Appréciations : Trés irritant.
   Valeurs des différents indices :
   I.O.Ma : au-delà de 80,
   Appréciations : Extrêmement irritant.
   Dans une première approximation, le produit est classé dans l'une des six catégories en fonction de l'I.O.Ma.
   Dans un second temps, la persistance des lésions intervient pour corriger le classement précédent, en tenant compte des I.O. puis des I.O.I. à différents temps :
   Soit en confirmant l'appréciation de première approximation si toutes les conditions sont remplies ;
   Soit en reclassant le produit dans la catégorie immédiatement supérieure si toutes les conditions ne sont pas remplies.
   Nota :
   1. - En cas d'impossibilité absolue d'utiliser la méthodologie décrite, l'expérimentateur devra mentionner avec précision et justifier dans son compte rendu les modifications apportées.
   2. - Les animaux morts en cours d'essai seront remplacés par d'autres animaux qui seront traités dans les mêmes conditions.