Ces procédés sont les suivants :
Centrifugation ;
Séparation ;
Pesée ;
Soudure ;
Connexion stérile ;
Filtration pour déleucocytation ;
Congélation ;
Décongélation ;
Addition d'une solution ;
Déplasmatisation-lavage ;
Mélange de produits ;
Irradiation.
V. 4.1. Centrifugation
La centrifugation met en oeuvre des centrifugeuses de capacité adaptée.
Le déroulement de la centrifugation nécessite le respect des étapes suivantes :
CLICHÉ (non reproduit)
La mise en pots des poches à centrifuger doit permettre un tassement identique et éviter toute dégradation des produits.
La nature et la forme de l'élément utilisé pour l'équilibrage ne doivent pas provoquer de déformation et/ou de détérioration des poches.
Un équilibrage correct des pots doit éviter toutes vibrations ou dommages de la centrifugeuse.
Le chargement respecte l'étape précédente. Il est vérifié qu'aucun obstacle ne vienne gêner l'oscillation libre des pots.
La centrifugation est effectuée dans des conditions rigoureusement programmées obéissant aux paramètres préalablement définis tels que pente d'accélération, vitesse, durée, seuil, intensité de freinage et température.
Il ne doit pas y avoir de détérioration des poches, des étiquettes et des tubulures durant la centrifugation.
Le déchargement est réalisé sans heurter les poches afin de ne pas déstabiliser la zone de séparation entre le plasma et les éléments cellulaires sédimentés.
V. 4.2. Séparation
La séparation met en oeuvre des presses manuelles, semi-automatiques ou automatiques.
Le déroulement de ce procédé impose le respect des étapes suivantes :
CLICHÉ (non reproduit)
Le transfert et la mise en place des poches dans la presse ne doivent pas provoquer de remise en suspension de l'interface plasma et éléments cellulaires sédimentés.
La sédimentation des différentes couches doit être vérifiée visuellement.
Durant la séparation, la pression exercée sur la poche peut être variable ou constante. Elle doit être maîtrisée et adaptée à la vitesse d'écoulement choisie.
Le déchargement des presses doit être effectué avec précaution afin d'éviter toute détérioration du récipient.
V. 4.3. Pesée
La pesée des produits sanguins labiles intervient à différentes étapes de la production.
Elle inclut les opérations suivantes :
CLICHÉ (non reproduit)
Les balances sont de portée et de précision appropriées aux opérations de production. Le calibrage (vérification du niveau et remise à zéro) est effectué avant chaque série de mesures.
Les poches sont placées au centre du plateau en évitant toute traction (tubulures). Les tares et les densités utilisées pour le calcul des volumes sont précisées.
V. 4.4. Soudure
Ce procédé intervient dès lors qu'une opération de transfert est réalisée. Il met en oeuvre un appareil individuel ou intégré dans un ensemble.
Son utilisation doit respecter les étapes suivantes :
CLICHÉ (non reproduit)
Avant toute utilisation, la propreté des mâchoires et des éléments de soudure doit être vérifiée.
La tubulure doit être soudée perpendiculairement aux mâchoires, sans exercer de tension afin d'obtenir une obturation nette et étanche.
L'étanchéité est vérifiée par pression manuelle sur la poche en amont et en aval de la soudure réalisée.
V. 4.5. Connexion stérile
Elle met en oeuvre un dispositif spécial permettant, dans des conditions précises et contrôlées, de connecter stérilement une tubulure à une autre. Ce procédé doit respecter les recommandations du fabricant.
Les étapes suivantes en conditionnent l'utilisation :
CLICHÉ (non reproduit)
Lors de la mise sous tension, il convient de vérifier l'installation de la machine, sa propreté et l'alignement des mâchoires. Les tubulures doivent être placées soigneusement dans leurs logements. Leurs sections et la nature du plastique doivent être compatibles.
Un produit resté solidaire de la connexion ne doit être ni centrifugé ni conservé.
Des contrôles doivent garantir la fonctionnalité du système clos. L'identification du produit et sa traçabilité doivent être assurées.
V. 4.6.Filtration pour déleucocytation
La filtration pour déleucocytation met en oeuvre un matériau filtrant permettant la rétention sélective de leucocytes sans dénaturation des éléments cellulaires. L'efficacité de cette opération est liée au respect des étapes suivantes :
CLICHÉ (non reproduit)
Le filtre choisi doit être adapté au produit à filtrer en fonction des performances, des spécifications et des conditions d'utilisation définies par le fabricant.
Les conditions de filtration telles que la température et le délai entre le prélèvement et la filtration doivent être définies dans la procédure. Il est recommandé de réaliser cette filtration dans un délai n'excédant pas huit jours pour les globules rouges et quarante-huit heures pour les plaquettes.
La connexion du filtre peut s'effectuer de deux manières :
- en ouvrant le circuit sous hotte à flux laminaire ;
- en utilisant un dispositif à connexion stérile.
Si le produit fait l'objet d'un lavage, celui-ci doit être effectué après filtration.
La correspondance entre le numéro d'identification de la poche primaire et celui de la poche de recueil doit être contrôlée avant leur désolidarisation.
V. 4.7.Congélation
Ce procédé met en oeuvre des équipements électriques, des fluides cryogéniques et des moyens de contrôle.
La congélation est une opération au cours de laquelle des paramètres tels que la vitesse de refroidissement et la température finale doivent être parfaitement définis et maîtrisés.
La congélation respecte les étapes suivantes :
CLICHÉ (non reproduit)
Selon le type de produit à congeler, le conditionnement comprend :
- l'addition ou non d'un cryoprotecteur ;
- le choix du récipient.
Le produit doit rester identifiable au cours de cette étape de production.
Le mode de congélation doit être adapté à la nature, au nombre et au volume des produits à traiter.
Le transfert pour stockage ne doit pas entraîner d'altération des produits.
L'étiquetage et son contrôle permettent d'assurer la traçabilité du produit.
V. 4.8.Décongélation
La décongélation est un procédé pouvant intervenir lors de la préparation des produits sanguins et/ou lors de la distribution.
Elle doit respecter les étapes suivantes :
CLICHÉ (non reproduit)
Toutes les précautions nécessaires sont mises en oeuvre pour éviter d'éventuelles contaminations du produit.
Les modalités et le matériel de décongélation doivent être adaptés au volume à décongeler, à la présence ou non d'un cryoprotecteur et au produit sanguin.
L'aspect du produit et de son conditionnement sont contrôlés visuellement.
L'étiquetage et son contrôle permettent d'assurer la traçabilité du produit.
V. 4.9.Addition d'une solution
La solution choisie doit permettre de conserver les cellules remises en suspension.
Cette opération respecte les étapes suivantes :
CLICHÉ (non reproduit)
Les modalités d'addition et d'homogénéisation, les règles d'asepsie et d'étiquetage doivent être établies par écrit.
L'étiquetage et son contrôle permettent d'assurer la traçabilité du produit.
V. 4.10.Déplasmatisation-lavage
La méthode retenue, le choix et le volume de la solution de lavage doivent être adaptés aux spécifications des produits. Cette opération est réalisée dans des conditions d'asepsie rigoureusement définies.
Ce procédé nécessite le respect des étapes suivantes :
CLICHÉ (non reproduit)
Une étape de prédilution avant centrifugation peut améliorer l'efficacité de la déplasmatisation.
Ces opérations, effectuées de manière simultanée ou successive, ont déjà été décrites dans les paragraphes précédents.
V. 4.11.Mélange de produits
Le mélange de produits est défini dans les Caractéristiques des produits sanguins labiles.
Une maîtrise parfaite de la traçabilité des produits constitue la condition préalable à toute opération de mélange.
Cette opération s'effectue selon le schéma suivant :
CLICHÉ non reproduit
La connexion des récipients est réalisée dans des conditions d'asepsie rigoureusement définies. La méthode de connexion choisie détermine le délai de conservation.
L'enregistrement assure le lien entre les numéros d'identification des dons et le numéro d'identification du mélange.
V. 4.12. Irradiation
La qualification irradié s'applique à l'ensemble des produits sanguins thérapeutiques cellulaires lorsque ces produits ont été soumis à une dose de rayonnement ionisant de 25 à 45 grays.
Le temps d'exposition de chaque produit sanguin labile doit figurer dans la procédure.
Elle impose le respect des étapes suivantes :
CLICHÉ (non reproduit)
Un témoin radio sensible à une dose de rayonnement ionisant de 25 grays minimum peut être utilisé.
Le temps d'exposition est programmé afin d'obtenir une dose d'irradiation comprise entre 25 et 45 grays.
Il est nécessaire de vérifier périodiquement le débit de dose dans la chambre d'irradiation et de l'ajuster, si nécessaire. Le temps d'exposition doit être contrôlé à intervalles réguliers.
Un registre d'irradiation est établi mentionnant les renseignements suivants :
- date d'irradiation ;
- type de produit ;
- numéro du produit ;
- temps d'exposition ;
- nom de l'agent ayant effectué l'irradiation.
L'enregistrement a pour but d'assurer la traçabilité et permet le contrôle des témoins radio sensibles.