PROTOCOLE EXPÉRIMENTAL POUR LE TEST DE SENSIBILITÉ AU CHANCRE BACTÉRIEN (XANTHOMONAS POPULI)
L'évaluation de la sensibilité au chancre bactérien à Xanthomonas populi se fait à l'unité expérimentale du centre de recherches INRA d'Angers. Le dispositif de type pépinière est établi avec 6 répétitions par clone. L'espacement est de 0,50 mètre sur la ligne et de 3 mètres entre chaque ligne (pour permettre l'entretien et le passage d'un tracteur).
Les tiges sont inoculées en septembre de la seconde année après plantation (une inoculation dès la première année n'est envisageable que pour un tri drastique).
Les clones sont testés pour leur sensibilité à deux races (1 et 4) de Xanthomonas populi. Ces deux races sont connues pour présenter une agressivité différentielle selon les clones. Deux souches sont utilisées comme références :
- pour la race 1 : une souche française (SPm) ;
- pour la race 4 : une souche anglaise (CFBP 2551).
Des clones témoins, dont la sensibilité est connue, sont utilisés comme références. Ces clones ont les caractéristiques suivantes :
- résistant : nigra Italica et Koster ;
- résistant race 1 et sensible race 4 : Fritzi Pauley et Boelare ;
- sensible race 1 et moyennement sensible race 4 : Blanc du Poitou et Dorskamp ;
- sensible race 1 et très sensible race 4 : S3-31 (P. trichocarpa de Grammont) ;
- sensible race 4 et très sensible race 1 : Donk et S6-2 (P. deltoides x P. trichocarpa de Grammont).
A. - Préparation de l'inoculum
Dans la mesure du possible, les souches utilisées sont entretenues sur le clone Blanc de Poitou par une inoculation en septembre et un réisolement en avril-mai de l'année suivante. D'autres souches conservées lyophilisées (collection CFBP) peuvent aussi être inoculées, elles sont alors réactivées à 20 °C en boîtes de Petri sur un milieu nutritif composé de 5 grammes d'extrait de levures, 5 grammes de peptone, 10 grammes de glucose et 15 grammes d'agar par litre d'eau distillée (LPGA).
Pour l'inoculation, les souches de Xanthomonas populi sont cultivées en tubes, sur pente du milieu nutritif gelosé (LPGA), pendant quarante-huit heures à 20 °C (étuve thermorégulée sans lumière). Une suspension bactérienne est préparée juste avant l'inoculation et ajustée à 108-109 cellules par millilitre avec de l'eau distillée stérile.
B. - Technique d'inoculation
Deux incisions transversales (environ 10 mm de large x 2 mm de haut) sont faites sur le tronc à environ 0,80 mètre et 1,20 mètre du sol. Les incisions sont faites en deux coups de greffoir (un premier puis un second à 2 mm au-dessus) de façon à atteindre le cambium et à évacuer la partie comprise entre les deux coupes. Sur la blessure fraîche sont aussitôt déposés 25 µl de la suspension bactérienne de Xanthomonas populi.
C. - Notation et résultat
Les chancres obtenus sont notés à la fin des troisième et quatrième années, soit un et deux ans après l'inoculation. Les deux chancres sont notés selon un indice de ceinturation (de 0 à 5) et la mesure de la longueur du chancre (en centimètres).
Echelle des correspondances entre l'indice de ceinturation et la sensibilité au chancre :
0 = aucun symptôme ;
1 = moins de 20 % de la circonférence du tronc est couverte par le chancre ;
2 = 20 à 40 % de la circonférence couverte par le chancre ;
3 = 40 à 60 % de la circonférence couverte par le chancre ;
4 = plus de 60 % de la circonférence est chancreuse mais pas la totalité ;
5 = ceinturation totale avec mort de la partie supérieure.
La moyenne des deux notations sur chaque arbre est utilisée pour l'analyse des résultats.
Pour évaluer la sensibilité de ces clones, il faut d'abord considérer l'indice de ceinturation à un an, puis son évolution au cours de la seconde année. La mesure de la longueur nous apporte une information sur l'expression des chancres. On peut admettre, selon l'expérience acquise, qu'au-dessous de l'indice 2 les clones testés présentent une bonne résistance, mais qu'au-dessus le risque d'un développement naturel du chancre bactérien devient important.
La notation à deux ans permet d'étudier la réaction du clone face au chancre avec trois cas possibles :
- tendance vers la cicatrisation ;
- stabilisation ;
- tendance vers la ceinturation.
Les clones suffisamment résistants présentent une tendance vers la cicatrisation au cours du temps.
Si un test drastique est pratiqué un an après la plantation, la réaction chancreuse est alors plus importante et conduit à remonter la limite des clones sensibles à l'indice 3. Seule l'évolution du chancre vers la cicatrisation permet de retenir des clones en limite de sensibilité.
Xanthomonas populi est une bactérie très particulière. L'isolement, la conservation et la préparation des souches à inoculer ne peuvent se faire que dans un laboratoire spécialisé en bactériologie avec du personnel connaissant bien cette bactérie. Par contre, il est tout à fait acceptable que les tests soient mis en oeuvre en dehors de la région d'Angers par quelqu'un respectant le protocole avec les souches prêtes à l'emploi, fournies par l'unité de pathologie végétale de l'INRA d'Angers. Il faudra alors se limiter à l'utilisation exclusive de la race 1 dans la partie Nord de la France où sévit la maladie et ainsi éviter l'introduction de la race 4.