<< Activité
    << Hyaluronidase
      << L'activité de la hyaluronidase est mesurée par diffusion dans un gel     d'agarose contenant de l'acide hyaluronique. La zone hydrolysée est mise en     évidence par précipitation de l'acide hyaluronique demeuré intact, à l'aide     d'une solution de chlorure de cétylpyridinium. Le diamètre des zones claires     obtenues est fonction de l'activité enzymatique.
      << Préparation des boîtes de Pétri. Chauffez une solution de gel d'agarose     pour diffusion R à 30 g/l dans la solution tampon citrate pH 5,3 R sous     agitation jusqu'à éclaircissement juste avant ébullition. Refroidissez la     solution à 60 oC en maintenant l'agitation. Préparez une solution à 2 g/l de     hyaluronate de potassium R dans la solution tampon citrate pH 5,3 R en     agitant pendant 3 heures jusqu'à dissolution complète. Mélangez un volume de     la solution de gel d'agarose pour diffusion R avec un volume de solution de     hyaluronate de potassium R en agitant à 60 oC. Versez en couche uniforme de 2     mm à 5 mm d'épaisseur dans des boîtes de Pétri et laissez refroidir. Refermez     les boîtes de Pétri. Celles-ci doivent être utilisées le jour même.
      << Solution à examiner. Préparez une solution de venin à examiner à la     concentration de 200 mg/ml de venin à examiner dans la solution tampon     citrate pH 5,3 R.
      << Gamme étalon de venin d'abeille PBR fr. Diluez au 1/4, au 1/8, au 1/16 et     au 1/32 la solution de venin d'abeille PBR fr en utilisant la solution tampon     citrate pH 5,3 R comme diluant.
      << Percez dans chaque boîte de Pétri le nombre de puits approprié d'un     diamètre de 4 mm environ. Aspirez les morceaux de gel d'agarose des puits     ainsi que d'éventuelles traces de liquide. Déposez sans déborder un même     volume de chaque solution. Effectuez au moins deux déterminations pour chaque     solution. Recouvrez les boîtes de Pétri et mettez-les à l'étuve à 37 oC     pendant 20 heures. Sortez les boîtes de l'étuve et versez 30 ml de la     solution de chlorure de cétylpyridinium R à 100 g/l. Laissez agir 40 minutes,     puis mesurez le diamètre des zones claires obtenues pour chaque dépôt avec     une précision de 0,1 mm à l'aide d'un dispositif de mesure approprié.
      << Calculez la moyenne des valeurs obtenues pour chaque solution étalon et     tracez sur papier semilogarithmique la courbe de régression, diamètre (en mm)     en fonction du log de l'activité (en unités/mg). La pente de la droite doit     être de 4,5 à 7,5 avec un coefficient de corrélation supérieur à 0,95.
     Calculez la moyenne des valeurs obtenues pour la solution de venin à     examiner. Déterminez la concentration de hyaluronidase de la solution de     venin à examiner à l'aide de méthodes statistiques appropriées. Par rapport à     un venin d'abeille de référence titrant 1 000 unités de hyaluronidase par mg     de venin, les venins doivent titrer :
      - 750   350 unités/mg de venin d'abeille (Apis mellifera) ;
      - 850   350 unités/mg de venin de guêpe (Vespula sp.) ;
      - 1 050   600 unités/mg de venin de guêpe (Polistes sp.) ;
      - 1 450   800 unités/mg de venin de guêpe (Dolichovespula sp.), appelée     communément << faux frelon >> ;
      - 650   300 unités/mg de venin de frelon (Vespa crabro).