SOLUTION ALCOOLIQUE D'HUILE ESSENTIELLE
    DE MENTHE POIVREE A 10 %
    Solutum spirituosum aetherolei menthae piperitae
    « Définition
    « Huile essentielle de menthe poivrée ....................  dix millilitres  10
    « Alcool ....................  QS 100
    « La solution alcoolique d'huile essentielle de menthe poivrée est obtenue par dissolution totale de l'huile essentielle de menthe poivrée dans l'alcool.
    « Caractères
    « Liquide limpide, incolore, à odeur de menthe et de saveur brûlante.
    « Identification
    « Première identification : B.
    « Seconde identification : A.
    « A. - Opérez par chromatographie sur couche mince (2.2.27) en utilisant une plaque de verre recouverte d'un gel de silice approprié.
    « Solution à examiner. Solution alcoolique d'huile essentielle de menthe poivrée à examiner.
    « Solution témoin. Dissolvez 10 ml de cinéole R, 10 ml d'acétate de menthyle R, 30 ml de menthone R et 50 mg de menthol R dans du toluène R et complétez à 10 ml avec le même solvant.
    « Déposez séparément sur la plaque 5 ml de chaque solution. Développez sur un parcours de 15 cm avec un mélange de 5 volumes d'acétate d'éthyle R et de 95 volumes de toluène R. Laissez sécher la plaque à l'air. Pulvérisez du réactif à la vanilline sulfurique R. Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner présente une tache rose pâle d'un Rf voisin de 0,90 dont la coloration s'intensifie au cours du séchage à l'air (menthofuranne). Chauffez la plaque à 100-105 oC pendant 10 minutes. Examinez à la lumière du jour les chromatogrammes dans les 10 minutes qui suivent. Le chromatogramme obtenu avec la solution témoin présente cinq taches principales : une tache bleu foncé correspondant au menthol (Rf voisin de 0,25), une tache bleu foncé moins intense correspondant au cinéole (Rf voisin de 0,35), une tache vert clair correspondant à l'isomenthone (Rf voisin de 0,50), une tache vert clair plus importante correspondant à la menthone (Rf voisin de 0,65) et une tache bleue correspondant à l'acétate de menthyle (Rf voisin de 0,75). Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner présente cinq taches semblables quant à leur position et leur coloration aux taches principales du chromatogramme obtenu avec la solution témoin, ainsi qu'une autre tache rose violacé correspondant au menthofuranne (Rf voisin de 0,90) et une tache violette proche du front de solvant.
    « B. - Examinez les chromatogrammes obtenus dans l'essai "Teneur en éthanol". Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner présente au moins 6 pics semblables, quant à leur position, aux pics du chromatogramme obtenu avec la solution témoin correspondant au limonène, au cinéole, à la menthone, au menthofuranne, à l'acétate de menthyle et au menthol.
    « Essai
    « Teneur en éthanol. Opérez par chromatographie en phase gazeuse (2.2.28).
    « Solution à examiner. A 5,0 ml de solution alcoolique d'huile essentielle de menthe poivrée, ajoutez 2,7 g de propanol-1 R.
    « Solution témoin (a). A 4,50 g d'éthanol R, ajoutez 2,70 g de 1-propanol R et 1,9 ml d'eau.
    « Solution témoin (b). Préparez le mélange suivant en pesant à 20 % près les quantités indiquées ; à 20 g d'alcool, ajoutez 0,1 g de limonène R, 0,2 g de cinéole R, 0,4 g de menthone R, 0,1 g de menthofuranne R, 0,4 g d'acétate de menthyle R, 0,6 g de menthol R, 0,2 g de pulégone R et 0,1 g de carvone R. Mélangez soigneusement par agitation.
    « La chromatographie peut être réalisée en utilisant :
    « - une colonne capillaire de silice fondue d'une longueur de 25 m à 60 m et d'un diamètre intérieur voisin de 0,30 mm imprégnée de macrogol 20 000 R (0,5mm) ;
    « - comme gaz vecteur, de l'hélium pour chromotographie R ou de l'hydrogène R ;
    « - un détecteur à ionisation de flamme ;
    « - un injecteur avec diviseur (rapport de fuite de 1/100) ;
    en maintenant la température de la colonne à 60 oC pendant 10 minutes puis en l'augmentant de 2 oC par minute jusqu'à 190 oC et en la maintenant à 190 oC ; en maintenant la température de la chambre à injection à 200-230 oC et celle du détecteur à 220-250 oC.
    « L'essai n'est valable que si le nombre de plateaux théoriques, calculé à 130 oC sur le pic du linalol d'une solution hexanique contenant 0,5 % m/V de linalol et 0,5 % m/V d'acétate de linalyle, n'est pas inférieur à 30 000 et le facteur de résolution entre les pics de linalol et d'acétate de linalyle, calculé à 130o C sur cette même solution, n'est pas inférieur à 2,0.
    « Injectez 1 ml de chacune des solutions. La teneur en éthanol est établie à partir des chromatogrammes obtenus avec la solution témoin (a) et la solution à examiner, en utilisant le propanol-1 comme étalon interne.
    « Calculez la teneur pour cent en éthanol (V/V) à l'aide de l'expression :
    m3 x R1
    m2
    100
    1
    x
    x
    x
    R2
    m1
    5
    0,789 32
    « 0,789 32 = masse volumique de l'éthanol à 20 oC (en g/ml) ;
    « R2 = rapport des surfaces (éthanol/1-propanol) pour la solution témoin (a) ;
    « R1 = rapport des surfaces (éthanol/1-propanol) pour la solution à examiner ;
    « m3 = masse d'éthanol en g contenue dans la solution témoin (a) ;
    « m2 = masse de 1-propanol en g contenue dans la solution témoin (a) ;
    « m1 = masse de 1-propanol en g contenue dans la solution à examiner.
    « La solution à examiner contient de 83,0 % V/V à 90,0 % V/V d'éthanol.
    « Méthanol et 2-Propanol. Opérez par chromatographie en phase gazeuse (2.2.28) en utilisant le 1-propanol comme étalon interne.
    « Solution mère d'étalon. A 0,5 ml de méthanol R et 0,5 ml de 2-propanol R, ajoutez 99 ml d'éthanol R1.
    « Solution d'étalon interne. A 0,5 ml de 1-propanol R, ajoutez 99,5 ml d'éthanol R1.
    « Solution à examiner. A 10,0 ml de solution alcoolique d'huile essentielle de menthe poivrée, ajoutez 1,0 ml de solution d'étalon interne.
    « Solution témoin. A 10,0 ml de solution mère d'étalon et 10,0 ml de solution d'étalon interne, ajoutez 80 ml d'éthanol R1.
    « La chromatographie peut être réalisée en utilisant :
    « - une colonne capillaire de silice fondue d'une longueur de 30 m et d'un diamètre intérieur voisin de 0,30 mm, avec une phase stationnaire à 6 % de polycyanopropylphénylsiloxane et 94 % de polydiméthylsiloxane ;
    « - comme gaz vecteur, à un débit de 1,7 ml/min, de l'hélium pour chromatographie R ou de l'hydrogène R ;
    « - un détecteur à ionisation de flamme ;
    « - un injecteur avec diviseur (rapport de fuite 1/10),
    en maintenant la température à 40 oC pendant 10 minutes, puis en l'augmentant de 10 oC par minute jusqu'à 240 oC et en la maintenant à 240 oC ; en maintenant la température de la chambre d'injection à environ 250 oC et celle du détecteur à environ 250 oC.
    « Injectez 1 ml de la solution à examiner et de la solution témoin. Les teneurs en méthanol et en 2-propanol sont établies à partir des chromatogrammes obtenus avec la solution à examiner et la solution témoin en utilisant le 1-propanol comme étalon interne.
    « Calculez la teneur pour cent en méthanol à l'aide de l'expression :
    V2 x R1 x 100 
    R2 x V1 x 10
    « V1 = volume de solution alcoolique d'huile essentielle de menthe poivrée contenu dans la solution à examiner ;
    « V2 = volume de méthanol contenu dans la solution témoin ;
    « R2 = rapport des surfaces (méthanol/1-propanol) pour la solution témoin ;
    « R1 = rapport des surfaces (méthanol/1-propanol) pour la solution à examiner.
    « La teneur en méthanol de la solution alcoolique d'huile essentielle de menthe poivrée n'est pas supérieure à 0,05 %.
    « Calculez la teneur pour cent en 2-propanol à l'aide de l'expression :
    V2 x R1 x 100 
    R2 x V1 x 10
    « V1 = volume de solution alcoolique d'huile essentielle de menthe poivrée contenu dans la solution à examiner ;
    « V2 = volume de 2-propanol contenu dans la solution témoin ;
    « R2 = rapport des surfaces (2-propanol/1-propanol) pour la solution témoin ;
    « R1 = rapport des surfaces (2-propanol/1-propanol) pour la solution à examiner.
    « La teneur en 2-propanol de la solution alcoolique d'huile essentielle de menthe poivrée n'est pas supérieure à 0,05 %.
    « Profil chromatographique. Opérez par chromatographie en phase gazeuse dans les conditions décrites dans l'essai "Teneur en éthanol" ».
    « La résolution calculée entre le pic correspondant au cinéole et celui correspondant au limonène n'est pas inférieure à 1,5.
    « Injectez environ 0,1 ml de la solution témoin (b). Identifiez les constituants qui ont élué selon l'ordre de classement des substances dans la formule de la solution témoin. Notez les temps de rétention de ces substances.
    « Injectez environ 0,1 ml de la solution à examiner. A l'aide des temps de rétention déterminés avec le chromatogramme obtenu avec la solution témoin (b), localisez sur le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner les composants de la solution témoin.
    « Déterminez pour le limonène et le cinéole, la pulégone et la carvone à l'aide du chromatogramme obtenu avec la solution à examiner, le pourcentage de surface du pic considéré par rapport à la surface de l'ensemble des pics.
    cinéole pour cent
    « Le rapport
    est supérieur à 2.
    limonène pour cent
    « Le pourcentage correspondant à la pulégone ou à la carvone est inférieur à 0,5 %.
    « Huile essentielle. Introduisez 25,0 ml de solution alcoolique d'huile essentielle de menthe poivrée dans une fiole à aldéhyde. Ajoutez 5,0 ml de xylène R. Remplissez à moitié la fiole avec un mélange de 90 ml de solution saturée de chlorure de sodium R, additionnée de 1 ml d'acide chlorhydrique R. Agitez fortement. Ajoutez de la solution saline de façon à faire monter la phase supérieure organique au niveau des graduations du col du flacon. Laissez reposer au moins 2 heures et jusqu'à volume constant. Soit n le volume de la phase organique exprimé en millilitres.
    « Calculez la teneur pour cent en huile essentielle à l'aide de l'expression :
    100 
    (n - 5) x 
    25
    « La solution à examiner contient de 9,0 % V/V à 12,0 % V/V d'huile essentielle de menthe poivrée. »