Essai
      Solubilité. Dans le cas d'une préparation cryodesséchée, ajoutez le volume     du liquide indiqué sur l'étiquette. La préparation se dissout complètement en     20 minutes à 20-25 oC.
      Détermination du pH (V.6.3.1). Diluez l'immunoglobuline humaine normale dans     une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V jusqu'à une     concentration de 1 p. 100 m/V en protéines. Le pH de la solution est de 6,4 à     7,2.
      Protéines totales. Diluez l'immunoglobuline humaine normale dans une     solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V pour obtenir une solution     contenant 15 mg environ de protéines dans 2 ml. Dans un tube à centrifugation     à fond rond, introduisez 2 ml de cette solution. Ajoutez 2 ml d'une solution     de molybdate de sodium R à 7,5 p. 100 m/V et 2 ml d'un mélange de 1 volume     d'acide sulfurique exempt d'azote R et de 30 volumes d'eau. Agitez,
     centrifugez pendant 5 minutes, décantez le liquide surnageant et laissez     égoutter le tube renversé sur du papier filtre. Effectuez le dosage de     l'azote dans le culot après minéralisation par l'acide sulfurique (V.3.5.2).     Calculez la teneur en protéines en multipliant la quantité d'azote par 6,25.     La teneur en protéines n'est pas inférieure à 10 p. 100 m/V ni supérieure à     18 p. 100 m/V. Elle n'est pas inférieure à 90 p. 100 ni supérieure à 110 p.
     100 de la quantité indiquée sur l'étiquette.
      Composition en protéines. Opérez par électrophorèse de zone (V.6.21) en     utilisant comme support des bandelettes de gel d'acétate de cellulose     approprié et comme solution d'électrolyte la solution tampon barbital pH 8,6     R1.
      Solution à examiner. Diluez l'immunoglobuline humaine normale dans une     solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V jusqu'à une concentration     de 5 p. 100 m/V en protéines.
      Solution témoin. Reconstituez l'immunoglobuline humaine pour électrophorèse     PBR et diluez-la dans une solution de chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V     jusqu'à une concentration de 5 p. 100 m/V en protéines.
      Déposez sur une bandelette 2,5 ,l de solution à examiner en bande de 10 mm     ou déposez 0,25 ,l par millimètre si une bandelette plus étroite est     utilisée. Sur une autre bandelette, déposez dans les mêmes conditions le même     volume de solution témoin. Appliquez un champ électrique approprié tel que la     bande de l'albumine du sérum humain normal dans un électrophorégramme témoin     migre de 30 mm au moins. Traitez les bandelettes avec de la solution de noir     amido 10B R pendant 5 minutes, puis avec un mélange de 10 volumes d'acide     acétique glacial R et de 90 volumes de méthanol R pendant le temps     strictement nécessaire pour obtenir la décoloration du support. Développez la     transparence du support avec un mélange de 19 volumes d'acide acétique     glacial R et de 81 volumes de méthanol R. Mesurez l'absorbance des bandes à     600 nm à l'aide d'un instrument ayant à cette longueur d'onde une réponse     linéaire sur l'intervalle de mesure. Effectuez 3 fois la mesure sur chaque     bandelette et calculez la moyenne des lectures sur chaque bandelette. Dans     l'électrophorégramme obtenu avec la solution à examiner, 10 p. 100 au plus     des protéines ont une mobilité différente de celle de la bande principale.
     L'essai n'est valable que si, dans l'électrophorégramme obtenu avec la     solution témoin, la proportion de protéines contenues dans la bande     principale est dans les limites indiquées dans la notice accompagnant la     préparation de référence.
      Distribution de la taille moléculaire. Examinez par chromatographie liquide     (V.6.20.4).
      Solution à examiner. Diluez la préparation à examiner dans une solution de     chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V jusqu'à une concentration appropriée au     système chromatographique utilisé. Une concentration entre 4 g/l et 12 g/l et     l'injection de 50 ,g à 600 ,g de protéine conviennent généralement.
      Solution témoin. Diluez l'immunoglobuline humaine PBR dans une solution de     chlorure de sodium R à 0,9 p. 100 m/V pour obtenir la même concentration en     protéines que dans la solution à examiner.
      La chromatographie peut être réalisée en utilisant :
      - une colonne d'une longueur de 0,6 m et d'un diamètre intérieur de 7,5 mm,     remplie de gel de silice hydrophile pour chromatographie R;
      - comme phase mobile, à un débit de 0,5 ml par minute, une solution     contenant par litre : 4,873 g de phosphate disodique dihydraté R, 1,741 g de     phosphate monosodique monohydraté R, 11,688 g de chlorure de sodium R et 50     mg d'azide de sodium R;
      - comme détecteur, un spectrophotomètre réglé à 280 nm.
      Dans le chromatogramme obtenu avec la solution témoin, le pic principal     correspond à l'IgG monomère et il apparaît un pic correspondant au dimère à     un temps de rétention relatif au monomère de 0,85 environ. Identifiez les     pics dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner par     comparaison au chromatogramme obtenu avec la solution témoin ; les pics ayant     un temps de rétention plus petit que celui du dimère correspondent aux     polymères et aux agrégats. La préparation à examiner satisfait à l'essai si     dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner :
      - le temps de rétention par rapport au pic correspondant dans le     chromatogramme obtenu avec la solution témoin est de 1   0,02 pour le     monomère et pour le dimère;
      - la somme du monomère et du dimère représente 85 p. 100 au minimum de la     surface totale du chromatogramme et les polymères et agrégats représentent 10     p. 100 au maximum de la surface totale.
      Teneur en eau (V.3.5.6). Déterminée par semi-microdosage sur 0,500 g     d'immunoglobuline humaine normale, la teneur en eau d'une préparation     cryodesséchée n'est pas supérieure à 3,0 p. 100.
      Stérilité (V.2.1.1). L'immunoglobuline humaine normale satisfait à l'essai     de stérilité.
      Pyrogènes (V.2.1.4). L'immunoglobuline humaine normale satisfait à l'essai     des pyrogènes. Injectez à chaque lapin, par kilogramme de masse corporelle, 1     ml de la préparation à examiner.
      Anticorps contre l'antigène de surface de l'hépatite B. Le taux d'anticorps     contre l'antigène de surface de l'hépatite B de l'immunoglobuline humaine     normale, déterminé par une méthode immunochimique appropriée (V.2.1.10),
     n'est pas inférieur à 0,5 U.I. par gramme d'immunoglobuline.
      L'immunoglobuline humaine normale destinée à être utilisée dans la     prophylaxie de l'hépatite A satisfait également à l'essai suivant :
      Anticorps contre le virus de l'hépatite A. Déterminez le taux d'anticorps     contre le virus de l'hépatite A par comparaison avec une préparation de     référence étalonnée en unités internationales, à l'aide d'un immunodosage de     sensibilité et de spécificité appropriées (V.2.1.10).
      L'unité internationale correspond à l'activité d'une quantité donnée de la     préparation de référence internationale (2) d'immunoglobuline de l'hépatite     A.
      L'activité indiquée n'est pas inférieure à 100 U.I. par millilitre.
     L'activité mesurée n'est pas inférieure à l'activité indiquée. Les limites de     confiance (P = 0,95) de l'activité mesurée ne sont pas inférieures à 80 p.
     100 ni supérieures à 125 p. 100.