« Dosage
    « Dans une fiole de verre borosilicaté de 250 ml, introduisez 5,000 g de teinture de benjoin et ajoutez 20,0 ml d'hydroxyde de potassium alcoolique 0,5 M. Chauffez à reflux au bain-marie pendant 30 minutes. Laissez refroidir et rincez le réfrigérant avec 20 ml d'alcool R. Titrez l'excès d'hydroxyde de potassium par l'acide chlorhydrique 0,5 M. Déterminez le point de fin de titrage par potentiométrie (2.2.20). Effectuez un titrage à blanc.
    « 1 ml d'hydroxyde de potassium alcoolique 0,5 M correspond à 61,05 mg de C<#2033#><%2034%>VENINS D'HYMENOPTERES
    POUR PRODUITS ALLERGENES
    Remplacer la rubrique Identification B par le texte suivant :
    « B. - Phospholipase A.
    « La présence de la phospholipase A est mise en évidence en se rapportant à l'activité hydrolysante vis-à-vis de la lécithine de jaune d'oeuf incorporée dans un gel d'agarose. Le diamètre de la zone d'action de la phospholipase A est comparé à celui d'un témoin de phospholipase A2 purifiée.
    « Préparation des boîtes de Pétri. Ajoutez 1 g d'agarose pour diffusion R et 0,1 g d'azide de sodium R à 100 ml de solution tampon tris(hydroxyméthyl)aminométhane pH 7,95 R. Chauffez la solution sous agitation jusqu'à éclaircissement juste avant ébullition. Refroidissez la solution à 56 ý 3 oC à l'aide d'un agitateur chauffant. Ajoutez 1 ml de solution de chlorure de calcium 0,01M R et 1 ml de substrat de jaune d'oeuf R et mélangez. Versez cette solution en couche uniforme de 2 mm à 5 mm d'épaisseur dans des boîtes de Pétri. Faites solidifier. Conservez les boîtes retournées à une température de 2 oC à 8 oC.
    « Solution à examiner. Préparez une solution de venin à examiner à la concentration de 200 mg/ml dans la solution d'albumine bovine R. Conservez dans la glace pendant l'utilisation.
    « Solution témoin (a). Diluez au 1/50 la solution de phospholipase A2 de venin d'abeille R dans la solution d'albumine bovine R.
    « Solution témoin (b). Diluez au 1/500 la solution de phospholipase A2 de venin d'abeille R dans la solution d'albumine bovine R.
    « Solution témoin (c). Diluez au 1/50 la solution témoin (a) dans la solution d'albumine bovine R.
    « Percez dans chaque boîte de Pétri le nombre de puits approprié d'un diamètre de 4 mm environ. Aspirez les morceaux de gel d'agarose des puits ainsi que d'éventuelles traces de liquide. Laissez les boîtes à température ambiante pendant trois heures environ. Aspirez le liquide résiduel éventuellement présent dans les puits avant de déposer les solutions. Déposez un même volume de solution de venin à examiner, de solution de phospholipase A2 de venin d'abeille R, des solutions témoins (a), (b) ou (c) et de solution d'albumine bovine R (1). Effectuez en double les déterminations pour chaque solution. Laissez incuber à 25 ý 2 oC pendant vingt heures.
    « Mesurez le diamètre des zones claires obtenues pour chaque dépôt à l'aide d'un dispositif de mesure approprié. Calculez la moyenne des valeurs obtenues pour la solution à examiner et chaque solution témoin.
    « Pour les venins d'Apidae, le diamètre moyen de la zone d'hydrolyse est supérieur au diamètre moyen de la solution témoin (a) (10 Ul/ml) ;
    « Pour les venins de Vespidae, à l'exception de Dolichovespula sp., le diamètre moyen de la zone d'hydrolyse est supérieur au diamètre moyen de la solution témoin (b) (1 Ul/ml) ;
    « Pour les venins de Dolychovespula sp., le diamètre moyen de la zone d'hydrolyse est supérieur au diamètre moyen de la solution témoin (c) (0,2 Ul/ml).
    « Les venins de Vespidae donnent un cercle opaque à l'intérieur de la zone d'éclaircissement, ce qui permet de les distinguer du venin d'abeille. »
    « (1) Une unité de phospholipase A2 de venin d'abeille correspond à la quantité qui hydrolyse 1 mmole/min de L- a-phosphatidylcholine en L- a-lysophosphatidylcholine et acide gras à pH 8,5 et à 25 ý 2 oC.