« Dosage
    « Opérez par chromatographie liquide (2.2.29).
    « Solution à examiner. A 1,00 g (m1) de fruit de Vitex agnus-castus L. pulvérisé (355), ajoutez 100 ml de méthanol R. Agitez pendant trente minutes. Filtrez. Reprenez le résidu avec 100 ml de méthanol R et traitez deux fois comme précédemment. Réunissez les filtrats. Evaporez à siccité sous pression réduite à une température à 40 oC. Reprenez le résidu avec 20 ml d'un mélange d'un volume d'eau et de deux volumes de méthanol R. Déposez quantitativement cette solution sur une colonne d'oxyde d'aluminium neutre R d'environ 10 cm de hauteur et 1,2 cm de diamètre. Eluez avec le même solvant jusqu'à obtention de 150 ml, en s'aidant du vide. Transvasez quantitativement dans un ballon à col rodé de 250 ml et concentrez l'éluat, sous pression réduite, jusqu'à 15 ml environ. Introduisez la solution concentrée dans un flacon jaugé de 50,0 ml. Rincez le ballon avec deux fois 10 ml d'eau et ajoutez les solutions de rinçage dans le flacon jaugé. Ajoutez, ensuite, 1,5 ml d'acétonitrile R et complétez au trait de jauge avec de l'eau.
    « Solution témoin. Dans un flacon jaugé de 100,0 ml, dissolvez 0,020 g (m2) d'aucubine R dans 50 ml de phase mobile et complétez à 100,0 ml avec le même solvant.
    « La chromatographie peut être réalisée en utilisant :
    « - une colonne d'acier inoxydable d'une longueur de 0,25 m et d'un diamètre intérieur de 4,6 mm, remplie de gel de silice octadécylsilylé pour chromatographie R (5 mm) ;
    « - comme phase mobile, à un débit de 0,5 ml par minute, une solution d'acétonitrile R à 3 % V/V ;
    « - comme détecteur, un spectrophotomètre réglé à 204 nm ;
    « - un injecteur à boucle.
    « Injectez des volumes appropriés de chaque solution.
    « Calculez la teneur pour cent en aucubine à l'aide de l'expression :
    m2 x A1 x 50 
    m1 x A2
    « A1 = aire du composé dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner ;
    « A<#2039#><%2040%>« Conservation
    « En récipient bien fermé.
    « SOUCHE
    « Définition
    « La teinture mère de Agnus-castus est préparée à la teneur en éthanol de 65 % V/V, à partir du fruit séché de Vitex agnus-castus L., selon la technique générale de préparation des teintures mères (voir la monographie PREPARATIONS HOMEOPATHIQUES). Elle contient de 0,004 % à 0,03 % d'aucubine (C15H22O9 ; Mr346,3).
    « Caractères
    « Liquide jaune clair.
    « Identification
    « A. - Opérez par chromatographie sur couche mince (2.2.27) en utilisant une plaque recouverte d'un gel de silice approprié.
    « Solution à examiner. Teinture mère de Agnus-castus à examiner.
    « Solution témoin. Dissolvez 10 mg d'aucubine R dans 5 ml de méthanol R et complétez à 10 ml avec le même solvant.
    « Déposez séparément, en bandes, 10 ml de chacune des solutions. Développez sur un parcours de 15 cm avec un mélange de 5 volumes de méthanol R, de 20 volumes d'eau et de 70 volumes de butanol R. Laissez sécher la plaque à l'air. Pulvérisez un mélange de 10 ml d'une solution de phloroglucinol R à 250 g/l dans le méthanol R et de 10 ml d'une solution d'acide chlorhydrique R à 25 % V/V dans le méthanol R. Chauffez la plaque à 100-105 oC. Examinez à la lumière du jour. Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner présente plusieurs bandes, dont deux brunes, l'une d'un Rf voisin de 0,50, semblable quant à sa position et sa coloration à la bande principale du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (aucubine), et l'autre d'un Rf voisin de 0,75 (agnuside).
    « B. - Opérez par chromatographie sur couche mince (2.2.27) en utilisant une plaque recouverte d'un gel de silice approprié.
    « Solution à examiner. Teinture mère d'Agnus-castus à examiner.
    « Solution témoin. Dissolvez 10 mg d'isoorientine R, 10 mg d'isovitexine R et 10 mg de lutéolol-7-glucoside R dans l'alcool R et complétez à 10 ml avec le même solvant.
    « Déposez séparément, en bandes, sur la plaque, 40 ml de la solution à examiner et 10 ml de la solution témoin. Développez sur un parcours de 10 cm avec un mélange de 10 volumes d'acide formique anhydre R, de 10 volumes d'eau et de 80 volumes d'acétate d'éthyle R. Laissez sécher la plaque à l'air. Pulvérisez une solution de diphénylborate d'aminoéthanol R à 10 g/l dans le méthanol R, puis une solution de macrogol 400 R à 50 g/l dans le méthanol R. Examinez en lumière ultraviolette à 365 nm. Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner présente une bande de fluorescence jaune orangé de Rf voisin de 0,40 (isoorientine), une bande de fluorescence jaune-vert de Rf voisin de 0,50 (isovitexine) et une bande de fluorescence jaune orangé de Rf voisin de 0,60 (lutéolol-7-glucoside), semblables respectivement, quant à leur position et leur fluorescence, aux bandes du chromatogramme obtenu avec la solution témoin. Il présente également une bande de fluorescence jaune orangé de Rf voisin de 0,10 et une bande de fluorescence orange voisine du front du solvant.
    « Essai
    « Teneur en éthanol (2.9.10). La teneur en éthanol est comprise entre 60 % V/V et 70 % V/V.
    « Résidu sec. Le résidu sec (voir la monographie PREPARATIONS HOMEOPATHIQUES) est supérieur ou égal à 0,30 %.
    « Dosage
    « Opérez par chromatographie liquide (2.2.29).
    « Solution à examiner. Pesez exactement une prise d'essai (m1) voisine de 10,0 ml de teinture mère de Agnus-castus. Evaporez à siccité sous pression réduite à une température inférieure à 40 oC. Reprenez le résidu avec 20 ml d'un mélange de 1 volume d'eau et de 2 volumes de méthanol R. Déposez quantitativement cette solution sur une colonne d'oxyde d'aluminium neutre R d'environ 10 cm de hauteur et 1,2 cm de diamètre. Eluez avec le même solvant jusqu'à obtention de 150 ml, en s'aidant du vide. Transvasez quantitativement dans un ballon à col rodé de 250 ml et concentrez l'éluat, sous pression réduite, jusqu'à 15 ml environ. Introduisez la solution concentrée dans un flacon jaugé de 50,0 ml. Rincez le ballon avec 2 fois 10 ml d'eau et ajoutez les solutions de rinçage dans le flacon jaugé. Ajoutez, ensuite, 1,5 ml d'acétonitrile R et complétez au trait de jauge avec de l'eau.
    « Solution témoin. Dans un flacon jaugé de 100,0 ml, dissolvez 0,020 g (m2) d'aucubine R dans 50 ml de phase mobile et complétez à 100,0 ml avec le même solvant.
    « La chromatographie peut être réalisée en utilisant :
    « - une colonne d'acier inoxydable d'une longueur de 0,25 m et d'un diamètre intérieur de 4,6 mm, remplie de gel de silice octadécylsilylé pour chromatographie R (5 mm) ;
    « - comme phase mobile, à un débit de 0,5 ml par minute, une solution d'acétonitrile R à 3 % V/V ;
    « - comme détecteur, un spectrophotomètre réglé à 204 nm ;
    « - un injecteur à boucle.
    « Injectez des volumes appropriés de chaque solution.
    « Calculez la teneur pour cent en aucubine à l'aide de l'expression :
    m2 x A1 x 50 
    m1 x A2
    « A1 = aire du composé dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner ;
    « A<#2040#><%2041%>CALCAREA PHOSPHORICA
    POUR PREPARATIONS HOMEOPATHIQUES
    Remplacer la monographie par le texte suivant :
    « La souche satisfait aux exigences de la monographie PHOSPHATE TRICALCIQUE (1052). »