V.2.1.13. Essai d'activité anticomplémentaire
    de l'immunoglobuline
      La détermination de l'activité anticomplémentaire (AAC) de l'immunoglobuline     est effectuée par incubation d'une quantité donnée du produit à examiner (10     mg d'immunoglobuline) avec une quantité donnée de complément de cobaye (20     CH50) suivie du titrage du complément restant : l'activité anticomplémentaire     est exprimée par la proportion du complément consommée en prenant le témoin     complément comme 100 p. 100.
      L'unité hémolytique d'activité complémentaire (CH50) est la quantité de     complément qui, dans les conditions de réaction données, provoquera la lyse     de 2,5 x 108 sur un nombre total de 5 x 108 érythrocytes sensibilisés de     façon optimale.
      Solution mère de magnésium et de calcium. Dissolvez 1,103 g de chlorure de     calcium R et 5,083 g de chlorure de magnésium R dans de l'eau et complétez à     25 ml avec le même solvant.
      Solution mère de tampon barbital. Dissolvez 207,5 g de chlorure de sodium R     et 25,48 g de barbital sodique R dans 4 000 ml d'eau et ajustez à pH 7,3 avec     de l'acide chlorhydrique 1N. Ajoutez 12,5 ml de solution mère de magnésium et     de calcium et complétez à 5 000 ml avec de l'eau. Filtrez sur membrane (0,22     ,m) et conservez à 4 oC en récipient de verre.
      Solution de gélatine. Dissolvez 12,5 g de gélatine R dans 800 ml environ     d'eau et chauffez à ébullition au bain-marie. Refroidissez à 20 oC et     complétez à 10 litres avec de l'eau. Filtrez sur membrane (0,22 ,m) et     conservez à 4 oC. Utilisez uniquement une solution limpide.
      Solution citratée. Dissolvez 8,0 g de citrate sodique R, 4,2 g de chlorure     de sodium R et 20,5 g de glucose R dans 750 ml d'eau. Ajustez à pH 6,1 avec     une solution à 10 p. 100 m/V d'acide citrique R et complétez à 1 000 ml.
      Solution tampon gélatine-barbital. Ajoutez 4 volumes de solution de gélatine     à 1 volume de solution mère de tampon barbital et mélangez. Ajustez à pH 7,3,     si nécessaire, avec de l'acide chlorhydrique 1N ou de l'hydroxyde de sodium     1N et maintenez à 4 oC. Préparez une nouvelle solution chaque jour.
      Sang de mouton stabilisé. Recueillez 1 volume de sang de mouton sur 1 volume     de solution citratée et mélangez. Conservez le sang stabilisé à 4 oC pendant     au moins 7 jours et au maximum 28 jours. (Le sang de mouton ou les     érythrocytes de mouton stabilisés peuvent être obtenus auprès de plusieurs     fournisseurs commerciaux.)      Hémolysine. Antisérum contre les érythrocytes de mouton, préparé sur lapin.     (De tels antisérums peuvent être obtenus auprès de plusieurs fournisseurs     commerciaux.)      Complément de cobaye. Mélangez les sérums préparés à partir du sang de 10     cobayes au moins. Séparez le sérum du sang coagulé par centrifugation à 4 oC     environ. Conservez le sérum en petites quantités à une température inférieure     à - 70 oC. Le sérum peut également être cryodesséché. Le complément de cobaye     approprié a une activité de 200 CH50 par millilitre au moins. (Le complément     de cobaye cryodesséché peut être obtenu auprès de plusieurs fournisseurs     commerciaux.).