<< Identification
      << A. - Examinez le profil électrophorétique obtenu par électrophorèse sur     gel de polyacrylamide à une concentration supérieure ou égale à 12,5 % m/m     (2.2.31). Comparez avec un venin de référence d'un insecte de la même espèce.      << B. - Phospholipase A.
      << La présence de la phospholipase A est mise en évidence en se rapportant à     l'activité hydrolysante vis à vis de la lécithine de jaune d'oeuf incorporée     dans un gel d'agarose. Le diamètre de la zone d'action de la phospholipase A     est comparé à celui d'un témoin de phospholipase A 2 purifiée.
      << Préparation des boîtes de Pétri. Ajoutez 1 g d'agarose pour diffusion R     et 0,1 g d'azide de sodium R à 100 ml de solution tampon     tris(hydroxyméthyl)aminométhane pH 7,95 R. Chauffez la solution sous     agitation jusqu'à éclaircissement juste avant ébullition. Refroidissez la     solution à 56   3 oC à l'aide d'un agitateur chauffant. Ajoutez 1 ml de     solution de chlorure de calcium 0,01 M R et 1 ml de substrat de jaune d'oeuf     R et mélangez. Versez cette solution en couche uniforme de 2 mm à 5 mm     d'épaisseur dans des boîtes de Pétri. Faites solidifier. Conservez les boîtes     retournées à une température de 2 oC à 8 oC.
      << Solution à examiner. Préparez une solution de venin à examiner à la     concentration de 200 mg/ml dans la solution d'albumine bovine R. Conservez     dans la glace pendant l'utilisation.
      << Solution témoin (a). Diluez au 1/25 la solution de phospholipase A2 de     venin d'abeille R dans la solution d'albumine bovine R.
      << Solution témoin (b). Diluez au 1/500 la solution de phospholipase A 2 de     venin d'abeille R dans la solution d'albumine bovine R.
      << Solution témoin (c). Diluez au 1/100 la solution témoin (a) dans la     solution d'albumine bovine R.
      << Percez dans chaque boîte de Pétri le nombre de puits approprié d'un     diamètre de 4 mm environ. Aspirez les morceaux de gel d'agarose des puits     ainsi que d'éventuelles traces de liquide. Laissez les boîtes à température     ambiante pendant 3 heures environ. Aspirez le liquide résiduel éventuellement     présent dans les puits avant de déposer les solutions. Déposez un même volume     de solution de venin à examiner, de solution de phospholipase A 2 de venin     d'abeille R, des solutions témoins (a), (b) ou (c) et de solution d'albumine     bovine R. Effectuez en double les déterminations pour chaque solution.
     Laissez incuber à 25   2 oC pendant 20 heures.
      << Mesurez le diamètre des zones claires obtenues pour chaque dépôt à l'aide     d'un dispositif de mesure approprié. Calculez la moyenne des valeurs obtenues     pour la solution à examiner et chaque solution témoin.
      - << pour les venins d'Apidae, le diamètre moyen d'hydrolyse est supérieur     au diamètre moyen de la solution témoin (a) [20 U(1)/ml] ;
      - << pour les venins de Vespidae, à l'exception de Dolichovespula sp., le     diamètre moyen d'hydrolyse est supérieur au diamètre moyen de la solution     témoin (b) [1 U(1)/ml] ;
      - << pour les venins de Dolichovespula sp., le diamètre moyen d'hydrolyse     est supérieur au diamètre moyen de la solution témoin (c) [0,2 U(1)/ml].
      << Les venins de Vespidae donnent un cercle opaque à l'intérieur de la zone     d'éclaircissement, ce qui permet de les distinguer du venin d'abeille.
      << C. - Le venin d'hyménoptères pour produits allergènes satisfait à l'essai     "Hyaluronidase".