Lĩnh vực: Bệnh nhiễm trùng máu ở cá
Câu hỏi: Nguyên liệu dùng cho việc xác định đặc tính sinh hóa của vi khuẩn khuẩn Aeromonas hydrophila gây bệnh nhiễm trùng máu ở cá gồm những gì?
Trả lời: Theo mục B.1 Phụ lục B Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8710-15:2015 về Bệnh thủy sản - Quy trình chẩn đoán - Phần 15: Bệnh nhiễm trùng do Aeromonas Hydrophila ở cá quy định nguyên liệu dùng cho việc xác định đặc tính sinh hóa của vi khuẩn Aeromonas hydrophila như sau:
B.1. Nguyên liệu cho giám định sinh hóa
B.1.1. Môi trường nước pepton
Chuẩn bị môi trường nước pepton theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
B.1.2. Thuốc thử Kovac’s
B.1.2.1. Thành phần
Paradimetyl aminobenzaldehyt 5 g
Cồn amylic 75 ml
Axit clohydric đặc 25 ml
B.1.2.2. Chuẩn bị
Trộn dung dịch paradimetyl aminobenzaldehyt vào cồn amylic cho tan hết và để trong tủ lạnh. Thêm từ từ 5 ml đến 10 ml axit clohydric đặc, trộn đều rồi để tủ lạnh, sau đó tiếp tục bổ sung axit clohydric đặc.
Bảo quản thuốc thử trong lọ màu, ở 4 °C.
CHÚ THÍCH: Có thể sử dụng thuốc thử Kovac's thương mại và làm theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
B.1.3. Thuốc thử H2O2, 3 %.
B.1.4. Môi trường nước pepton - đường
B.1.4.1. Thành phần
- Nước pepton;
- Dung dịch chỉ thị màu bromocrezol: cho 0,2 g bromocrezol vào 100 ml etanol 90 % (thể tích) và lắc cho tan hết;
- Dung dịch đường: glucose, sucrose.
B.1.4.2. Chuẩn bị
Pha glucose hoặc sucrose thành dung dịch 10 % (trong nước), hấp tiệt trùng môi trường bằng nồi hấp (4.1.5) ở 115 °C trong 15 min hoặc hấp cách quãng 3 lần ở 100 °C trong 30 min hoặc lọc qua màng lọc có kích thước lỗ lọc 0,45 µm.
Cho 0,1 ml chỉ thị màu bromocrezol vào 100 ml môi trường nước pepton, chia ra các ống (4 ml mỗi ống). Hấp tiệt trùng bằng nồi hấp (4.1.5) ở 120 °C trong 30 min. Chỉnh pH môi trường ở 6,8 ± 0,2.
Thêm 0,4 ml dung dịch đường 10 % vào ống chứa 4 ml môi trường.
B.1.5. Môi trường thạch TSI (Tripie Sugar Iron agar)
Chuẩn bị môi trường thạch TSI (theo hướng dẫn của nhả sản xuất);
Thạch nghiêng chế từ TSI: thạch màu đỏ và có 2 phần: phần thạch đứng bên dưới để kiểm tra khả năng lên men glucose, sinh hơi, sinh H2S, phần thạch nghiêng để kiểm tra khả năng lên men đường lactose.
B.1.6. Môi trường thạch urê
Có thể sử dụng môi trường urê cơ bản (urea agar base - Christensen). Chuẩn bị môi trường và bổ sung urê theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
B.1.7. Môi trường thạch lỏng kiểm tra khả năng di động
B.1.7.1. Thành phần
Pepton 10 g
Chất chiết thịt 3 g
Natri clorua 5 g
Thạch 4 g
Gelatin 80 g
Nước cất 1000 ml
B.1.7.2. Chuẩn bị
Hòa gelatine vào nước để 30 min, bổ sung các thành phần khác, đun cho tan hoàn toàn. Chia ra các ống nghiệm khoảng 6 ml/ống. Hấp tiệt trùng trong nồi hấp (4.1.5) ở 115 °C trong 15 min.
B.1.8. Môi trường ornithine decacbolxylase
B.1.8.1. Thành phần
Pepton 0,5 g
Chất chiết nấm men 0,3 g
Glucose 0,1 g
Chỉ thị bromocresol đỏ tía 0,2 % 0,1 ml
L-ornithin clohydric 0,5 g
Nước 100 ml
B.1.8.2. Chuẩn bị
Hòa tan pepton, chất chiết nấm men, glucose trong nước, chỉnh môi trường về pH = 6,7 và thêm chất chỉ thị màu bromocresol đỏ tía 0,2 %. Hấp môi trường trong nồi hấp (4.1.5) ở 115 °C trong 15 min.
Bổ sung thêm L-ornithine hydrochloride 0,5%. Chỉnh lại pH môi trường về 6,7. Chia môi trường ra các ống nghiệm, mỗi ống nghiệm khoảng 2 ml.
Hấp tiệt trùng trong nồi hấp (4.1.5) ở 115 °C trong 15 min.
B.1.9. Môi trường OF
B.1.9.1. Thành phần
Thạch OF 1 g
Glucose 2 g
Nước cất 100 ml
B.1.9.2. Chuẩn bị
Hòa các thành phần trên vào lọ sạch, đun cho tan hoàn toàn.
Chia ra các ống nghiệm, mỗi ống 6 ml.
Hấp tiệt trùng trong nồi hấp (4.1.5) ở 115 oC trong 15 min.
B.1.10. Thuốc thử cho phản ứng Oxidase
Theo đó, nguyên liệu dùng để xác định đặc tính sinh hóa của vi khuẩn Aeromonas hydrophila gồm:
- Môi trường nước pepton;
- Thuốc thử Kovac’s;
- Thuốc thử H2O2, 3 %.;
- Môi trường nước pepton - đường;
- Môi trường thạch TSI (Tripie Sugar Iron agar);
- Môi trường thạch urê;
- Môi trường ornithine decacbolxylase;
- Môi trường OF;
- Thuốc thử cho phản ứng Oxidase.