Lĩnh vực: Vi khuẩn Streptococcus agalactiae
Câu hỏi: Môi trường thạch BA có thành phần cấu tạo như thế nào? Cách điều chế ra sao?
Trả lời: Theo Phụ lục A Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8710-21:2019 về Bệnh thủy sản - Quy trình chẩn đoán - Phần 21: Bệnh do vi khuẩn Streptococcus Agalactiae ở cá quy định về thành phần và chuẩn bị dung dịch thuốc thử như sau:
A.1 Môi trường thạch BA (thạch máu)
Thành phần:
Special nutrient substrate 23,0 g
Starch 1,0 g
Sodium chloride 5,0 g
Agar 13,0 g
Nước cất vô trùng 1000 ml
Máu ngựa hoặc cừu vô trùng 5 %
Chuẩn bị:
Hòa tan các thành phần (trừ máu ngựa hoặc cừu) với nước cất trong chai tam giác vô trùng. Điều chỉnh pH 7,3 ± 0,2 bằng dung dịch NaOH 1N hoặc dung dịch HCl 1N. Hấp tiệt trùng ở nhiệt độ 121 °C trong 15 phút. Làm nguội 45 °C đến 50 °C. Cho 5ml máu cừu hoặc máu ngựa vào 95 ml môi trường, trộn đều và đổ đĩa.
GHI CHÚ: Có thể sử dụng thạch BA thương mại và chuẩn bị theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
A.2 Môi trường thạch chọn lọc Chromagar Strep B
Thành phần:
Peptone và yeast extract 20,0 g
Muối 7,5 g
Hỗn hợp Chromogenic 2,2 g
Thạch 15,0 g
Nước cất vô trùng 1010 ml
Chất bổ sung (supplement) S1 8 ml
Chất bổ sung (supplement) S2 0,25 g
Chuẩn bị:
Hòa tan các thành phần (trừ chất bổ sung) với 1000 ml nước cất trong chai tam giác vô trùng. Thêm 8ml chất bổ sung S1 vào dung dịch huyền phù trên. Khuấy đều cho đến khi thạch tan hết. Điều chỉnh pH 7,3 ± 0.2 bằng dung dịch NaOH 1N hoặc dung dịch HCl 1N. Hấp tiệt trùng ở nhiệt độ 121 °C trong 15 phút. Làm nguội 45 °C đến 50 °C.
Hòa tan 0,25 g chất bổ sung S2 vào 10 ml nước cất.
Dùng lọc tiệt trùng và cho 10 ml chất bổ sung S2 vào môi trường đã làm nguội 45 °C đến 50 °C. Lắc hoặc khuấy nhẹ để đồng nhất môi trường, đổ vào đĩa petri vô trùng.
GHI CHÚ: Có thể sử dụng thạch Chromagar Strep B thương mại và chuẩn bị theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
A.3 Môi trường thạch dinh dưỡng TSA
Thành phần:
Peptone từ casein 15,0 g
Peptone từ đậu nành 5,0 g
NaCl 5,0 g
Thạch 15,0 g
Nước cất vô trùng 1000 ml
Chuẩn bị:
Hòa tan các thành phần với nước cất trong chai tam giác vô trùng. Điều chỉnh pH 7,3 ± 0.2 bằng dung dịch NaOH 1N hoặc dung dịch HCl 1N. Hấp tiệt trùng ở nhiệt độ 121°C trong 15 phút. Làm nguội 45 °C đến 50 °C, trộn đều và đổ đĩa.
GHI CHÚ: Có thể sử dụng môi trường thạch TSA thương mại và chuẩn bị theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
A.4 Môi trường canh BHI
Thành phần:
Chất dinh dưỡng (chiết xuất từ não, tim và peptone) 27,5 g
Glucose 2,0 g
NaCl 5,0 g
Disodium phosphate 2,5 g
Nước cất vô trùng 1000 ml
Chuẩn bị:
Hòa tan các thành phần với nước cất trong chai tam giác vô trùng. Hấp tiệt trùng ở nhiệt độ 121 °C trong 15 phút. Điều chỉnh pH 7,4 ± 0.2 bằng dung dịch NaOH 1N hoặc dung dịch HCl 1N.
GHI CHÚ: Có thể sử dụng môi trường BHI thương mại và chuẩn bị theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
A.5 Môi trường kiểm tra tính chất sinh hóa
Sử dụng card định danh vi khuẩn gram dương hoặc kít kiểm tra sinh hóa theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
Theo đó, môi trường thạch BA được cấu tạo từ những thành phần sau:
- Special nutrient substrate 23,0 g
- Starch 1,0 g
- Sodium chloride 5,0 g
- Agar 13,0 g
- Nước cất vô trùng 1000 ml
- Máu ngựa hoặc cừu vô trùng 5 %
Hòa tan các thành phần (trừ máu ngựa hoặc cừu) với nước cất trong chai tam giác vô trùng. Điều chỉnh pH 7,3 ± 0,2 bằng dung dịch NaOH 1N hoặc dung dịch HCl 1N. Hấp tiệt trùng ở nhiệt độ 121 °C trong 15 phút. Làm nguội 45 °C đến 50 °C. Cho 5ml máu cừu hoặc máu ngựa vào 95 ml môi trường, trộn đều và đổ đĩa.
Có thể sử dụng thạch BA thương mại và chuẩn bị theo hướng dẫn của nhà sản xuất.