Khoản 2.3. Định mức vật liệu: tính cho 1 mẫu 2.3.1. Tách chiết ADN 2.3.2. Đánh giá chất lượng và xác định hàm lượng ADN của sinh vật biến đổi gen (tính cho 1 mẫu) Bảng số 14 TT Danh mục vật liệu ĐVT Mức 1 Tris-Cl (1000 g/lọ) lọ 0,02 2 Na2EDTA (500g/lọ) lọ 0,001 3 H3BO3 (500g/lọ) lọ 0,002 4 Glycerol (1000 ml/lọ) lọ 0,005 5 Bromophenol blue (5g/lọ) lọ 0,0005 6 Nước cất khử ion vô trùng lít 1,00 7 Ethidium bromide (10 mg/lọ) lọ 0,05 8 Thang ADN chuẩn 1 kb (100 ml/ống) ống 0,05 9 Agarose (100 g/lọ) lọ 0,005 10 Hóa chất sát trùng tiêu chuẩn lít 0,01 11 Găng tay hộp 0,04 12 Parafilm (0,1 x 38m) cuộn 0,001 13 Đầu côn loại 10 ml (1000 cái/túi) túi 0,05 14 Đầu côn loại 100, 200 ml (1000 cái/túi) túi 0,02 15 Đầu côn loại 1000 ml (500 cái/túi) túi 0,05 16 Cuvet nhựa cái 5,00 17 Ống eppendorf 1,5 ml (1000 cái/túi) túi 0,025 2.3.3. Phát hiện và nhận dạng ADN của sinh vật biến đổi gen: tính cho 1 mẫu - sử dụng 5 cặp mồi Bảng số 15 TT Danh mục vật liệu ĐVT Mức 1 Các cặp mồi (Primers) nucleotide 0,005 2 Taq polymerase (100 units/lọ) lọ 0,05 3 dNTPs 100 mM, 1ml/lọ lọ 0,005 4 Ethidium bromide (10 mg/Iọ) lọ 0,10 5 Tris Cl (500 g/lọ) lọ 0,08 6 EDTA (500g/lọ) lọ 0,002 7 Glycerol (1000 ml/lọ) lọ 0,0005 8 Bromophenol blue (5g/lọ) lọ 0,0005 9 Nước cất khử ion vô trùng lít 1,50 10 Agarose (100 g/lọ) lọ 0,01 11 Thang ADN chuẩn 1 kb (100 ml/ống) ống 0,1 12 Hóa chất sát trùng tiêu chuẩn lít 0,05 13 Găng tay (50 đôi/hộp) hộp 0,08 14 Khẩu trang (50 cái/hộp) hộp 0,08 15 Đầu côn loại 10 mI (1000 cái/túi) túi 0,05 16 Đầu côn loại 100 ml, 200 ml (1000 cái/túi) túi 0,04 17 Ống PCR 0,5 ml (1000 cái/túi) túi 0,05 18 Ống eppendorf 1,5 ml (1000 cái/túi) túi 0,01 2.3.4. Định lượng ADN của sinh vật biến đổi gen: tính cho 1 mẫu Bảng số 16 TT Danh mục vật liệu ĐVT Mức 1 Các cặp mồi nucleotide nucleotide 0,005 2 Các trình tự nucleotide đặc hiệu chuỗi được đánh dấu huỳnh quang trình tự nucleotide 0,005 3 Nước cất khử ion vô trùng lít 0,005 4 LightCycle® Taqman Master CAT.No 04535286001 (bao gồm: FastStart Taq ADN Polymerase, đệm phản ứng, MgCl2 và dNTP (dùng dUTP thay thế dTTP) kít 0,17 5 LightCycle® Uracil N-glycosylase (tối ưu) kít 0,02 6 Đầu côn loại 10 ml (1000 cái/túi) túi 0,02 7 Đầu côn loại 100, 200 ml (1000 cái/túi) túi 0,02 8 Ống eppendorf loại 1,5 ml (500 cái/túi) túi 0,02 9 Ống mao quản cho phản ứng real-time PCR (96 ống/hộp) hộp 0,18 10 Hóa chất sát trùng tiêu chuẩn lít 0,10 11 Găng tay (dùng 1 lần) hộp 0,06 12 Giấy A4 ram 0,02 13 Mực in hộp 0,004 14 Mực photocopy hộp 0,008 PHỤ LỤC QUY TRÌNH KỸ THUẬT PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG AXIT DEOXYRIBONUCLEIC (Ban hành kèm theo Thông tư số 13/2013/TT-BTNMT ngày 21 tháng 6 năm 2013 của Bộ trưởng Bộ Tài nguyên và Môi trường)
a) Tách chiết ADN các mẫu sinh học có nguồn gốc từ thực vật dựa trên CTAB Bảng số 11 TT Danh mục vật liệu ĐVT Mức 1 Nitơ lỏng lít 0,50 2 CTAB (500 g/lọ) lọ 0,001 3 RNase (25 mg) lọ 0,02 4 Na2EDTA (500 g/lọ) lọ 0,002 5 Tris-Cl (500 g/lọ) lọ 0,0002 6 Cloroform lít 0,01 7 2-isopropanol lít 0,0015 8 Nước cất khử ion vô trùng lít 0,02 9 Proteinase K (25 mg) lọ 0,05 10 Alpha amylase (100 mg) lọ 0,005 11 Ethanol lít 0,01 12 NaCl kg 0,0011 13 HCl 37% lít 0,005 14 NaOH kg 0,001 15 Ống Falcon 50 ml (25 ống/túi) túi 0,20 16 Ống Falcon 15 ml (50 ống/túi) túi 0,04 17 Khẩu trang dùng 1 lần (50 chiếc/hộp) hộp 0,08 18 Đầu côn loại 100, 200 ml (1000 cái/túi) túi 0,02 19 Đầu côn loại 1000 ml (500 cái/túi) túi 0,02 20 Ống eppendorf 1,5 ml (1000 cái/túi) túi 0,03 21 Ống eppendorf 2 ml (1000 cái/túi) túi 0,005 22 Hóa chất sát trùng tiêu chuẩn lít 0,01
b) Tách chiết ADN các mẫu sinh học có nguồn gốc từ động vật dựa trên phenol/cloroform Bảng số 12 TT Danh mục vật liệu ĐVT Mức 1 Nitơ lỏng lít 0,50 2 Natri dodecyl sulfat (SDS) 100 g lọ 0,025 3 RNase (12 mg) lọ 0,04 4 Na2EDTA (500 g/lọ) lọ 0,004 5 Tris-Cl (500 g/lọ) lọ 0,002 6 Cloroform lít 0,0216 7 Phenol lít 0,025 8 Isoamyl alcohol lít 0,001 9 Nước cất khử ion vô trùng lít 0,02 10 Proteinase K (25 mg) lọ 0,16 11 Acid acetic băng lít 0,001 12 Ethanol lít 0,02 13 Kali acetat kg 0,001 14 Ống Falcon 50 ml (25 ống/túi) túi 0,2 15 Ống Falcon 15 ml (50 ống/túi) túi 0,04 16 Khẩu trang dùng 1 lần (50 cái/hộp) hộp 0,08 17 Đầu côn loại 100, 200 ml (1000 cái/túi) túi 0,02 18 Đầu côn loại 1000 ml (500 cái/túi) túi 0,04 19 Ống eppendorf 1,5 ml (1000 cái/túi) túi 0,03 20 Ống eppendorf 2 ml (1000 cái/túi) túi 0,015 21 Hóa chất sát trùng tiêu chuẩn lít 0,01
c) Tách chiết ADN đối với nấm men và nấm sợi thu được từ thực phẩm dựa trên phenol/ cloroform Bảng số 13 TT Danh mục vật liệu ĐVT Mức 1 RNase (25 mg) lọ 0,004 2 Na2EDTA(500 g/lọ) lọ 0,0006 3 Tris-CI (500 g/lọ) lọ 0,0002 4 Cloroform lít 0,0015 5 Phenol lít 0,0016 6 Isoamyl alcohol lít 0,0006 7 Nước cất khử ion vô trùng lít 0,02 8 Natri dodecyl sulfat (SDS) 100 g lọ 0,012 9 Acid acetic glacial lít 0,001 10 Ethanol lít 0,003 11 Kali acetat kg 0,001 12 Ống Falcon 50 ml (25 ống/túi) túi 0,10 13 Ống Falcon 15 ml (50 ống/túi) túi 0,10 14 Khẩu trang dùng 1 lần (50 cái/hộp) hộp 0,08 15 Đầu côn loại 100, 200 ml (1000 cái/túi) túi 0,03 16 Đầu côn loại 1000 ml (500 cái/túi) túi 0,02 17 Ống eppendorf 1,5 ml (1000 cái/túi) túi 0,01 18 Ống eppendorf 2 ml (1000 cái/túi) túi 0,01 19 Hạt thủy tinh 100 g lọ 0,01 20 Hóa chất sát trùng tiêu chuẩn lít 0,01