Essai n° 489 : Test des Comètes In Vivo en Conditions Alcalines sur Cellules de Mammifères [electronic resource] /
Organisation de coopération et de développement économiques.
Organisation for Economic Co-operation and DevelopmentContributor
Organisation for Economic Co-operation and DevelopmentContent Provider
Paris : OECD Publishing,
2014.
L'essai in vivo d'électrophorèse sur gel en conditions alcalines de cellules isolées, aussi appelé test des comètes est une méthode mesurant les cassures de brins d'ADN dans les cellules eucaryotes. Chaque groupe traité est composé au minimum de 5 animaux d'un même sexe (ou de chaque sexe si besoin est). On utilise également un groupe témoin positif et un groupe témoin négatif. Les animaux reçoivent un traitement quotidien sur une durée de 2 jours ou plus, permettant au produit chimique d'essai d'atteindre le tissu cible, celui-ci peut être le foie, le rein, ou tous autres tissus si cela est justifié. Les tissus à étudier sont disséqués et des suspensions de cellules/noyaux isolés sont préparées, puis incluses dans un gel d'Agarose pour être fixé sur des lames. Les cellules/noyaux sont traitées avec un tampon de lyse pour éliminer la membrane cellulaire et/ou nucléaire. L'ADN nucléaire dans l'agar est ensuite soumis à une électrophorèse à pH élevé produisant des structures ressemblant à des comètes qui, si l'on utilise les colorants fluorescents appropriés, peuvent être observées par microscopie à fluorescence. En fonction de leur taille les fragments d'ADN migrent de la tête vers la queue de la comète, et l'intensité de la queue de la comète relative à l'intensité totale (tête plus queue) reflète l'ampleur des cassures de l'ADN.
L'essai in vivo d'électrophorèse sur gel en conditions alcalines de cellules isolées, aussi appelé test des comètes est une méthode mesurant les cassures de brins d'ADN dans les cellules eucaryotes. Chaque groupe traité est composé au minimum de 5 animaux d'un même sexe (ou de chaque sexe si besoin est). On utilise également un groupe témoin positif et un groupe témoin négatif. Les animaux reçoivent un traitement quotidien sur une durée de 2 jours ou plus, permettant au produit chimique d'essai d'atteindre le tissu cible, celui-ci peut être le foie, le rein, ou tous autres tissus si cela est justifié. Les tissus à étudier sont disséqués et des suspensions de cellules/noyaux isolés sont préparées, puis incluses dans un gel d'Agarose pour être fixé sur des lames. Les cellules/noyaux sont traitées avec un tampon de lyse pour éliminer la membrane cellulaire et/ou nucléaire. L'ADN nucléaire dans l'agar est ensuite soumis à une électrophorèse à pH élevé produisant des structures ressemblant à des comètes qui, si l'on utilise les colorants fluorescents appropriés, peuvent être observées par microscopie à fluorescence. En fonction de leur taille les fragments d'ADN migrent de la tête vers la queue de la comète, et l'intensité de la queue de la comète relative à l'intensité totale (tête plus queue) reflète l'ampleur des cassures de l'ADN.
Bibliographic Level Mode of Issuance: Monograph
Environment
Biology
Health & Biological Sciences
Genetics