Micropropagação de Bupleurum spp. e avaliação da atividade anti-inflamatória dos seus óleos essenciais

Palavras-chave: Canais secretores,Embriogénese somática,Floração,Inibição de NO,Proliferação de meristemas

Algumas espécies do género Bupleurum L. contêm metabolitos secundários que apresentam atividade biológica e valor comercial. No entanto, apesar de apresentar grande diversidade, poucos estudos foram efetuados nas espécies deste género presentes em Portugal. O presente trabalho visa a valorização das espécies de Bupleurum que crescem espontaneamente em Portugal, estudando o potencial anti-inflamatório dos seus óleos essenciais e desenvolvendo protocolos de micropropagação in vitro de algumas espécies presentes na região da Beira Litoral. A extração dos óleos essenciais de B. rigidum subsp. paniculatum e B. lancifolium foi realizada através de hidrodestilação. A análise da atividade anti-inflamatória dos óleos essenciais de B. rigidum subsp. paniculatum e B. fruticosum foi realizada, utilizando várias concentrações (0,16-0,64 μl ml-1) de duas amostras de óleo essencial de B. fruticosum (BFI e BFII) e duas amostras de óleo essencial de B. rigidum subsp. paniculatum (BRI e BRII), avaliando o efeito destes na produção de NO e citotoxicidade em linhas celulares de macrófagos de rato (Raw 264,7) estimuladas por LPS. A cultura in vitro de B. rigidum subsp. paniculatum, B. gerardi e B. fruticosum foi estabelecida via proliferação de meristemas e embriogénese somática, utilizando o meio de cultura MS com diferentes concentrações de benzilamino-purina (BAP) e ácido 3-indol acético (IAA). A caracterização das estruturas secretoras foi efetuada com base em observações em microscopia ótica (MO) e microscopia eletrónica de varrimento (SEM) e as suas secreções analisadas a partir de testes histoquímicos. A hidrodestilação permitiu a extração do óleo essencial de partes aéreas floridas de B. rigidum subsp. paniculatum, no entanto, não foi possível isolar o óleo de partes aéreas em flor e frutos secos de B. lancifolium. Os resultados da atividade anti-inflamatória permitiram identificar o efeito inibitório na produção de NO da amostra BRI na concentração de 0,64 μl ml-1. Na micropropagação a adição de 1,0 mg l-1 de BAP e 0,5 mg l-1 IAA, ao meio de cultura MS, foi a mais eficiente na multiplicação de rebentos de B. rigidum subsp. paniculatum, em B. fruticosum a adição de 1,5 mg l-1 de BAP e 1,0 mg l-1 IAA permitiu a multiplicação dos explantes. O enraizamento das plântulas formadas foi possível após o cultivo durante 2 semanas em meio de cultura MS com 1,0 mg l-1 de ácido 3-indol butírico (IBA) e 2 semanas em meio de cultura sem reguladores de crescimento. A proliferação de meristemas de B. gerardi foi possível em meio de cultura com e sem a adição de BAP. No entanto, nesta espécie observou-se floração in vitro e a adição de BAP demonstrou ter um efeito positivo na floração dos explantes. A indução de embriogénese somática, através de secções foliares de plantas estabelecidas in vitro, realizou-se com base num protocolo constituído por duas fases: inicialmente massas pro-embriogénicas formaram-se em meio MS suplementado com 1,0 mg l-1 de ácido 2,4- ix diclorofenoxiacético (2,4-D), 0,2 mg l-1 de Cinetina (KN) e o desenvolvimento de embriões somáticos a partir destas ocorreu somente em meio de cultura sem reguladores de crescimento. A caracterização das estruturas secretoras permitiu identificar canais secretores em B. rigidum subsp. paniculatum, B. gerardi e B. fruticosum e a identificação de secretados terpénicos em plantas in vitro. Os resultados obtidos permitiram, pela primeira, vez identificar o efeito anti-inflamatório do óleo essencial de B. rigidum subsp. paniculatum, estabelecer culturas in vitro de B. rigidum subsp. paniculatum, B. gerardi e a proliferação via embriogénese somática de B. fruticosum. A identificação da presença de compostos terpénicos em plantas estabelecidas in vitro comprova a capacidade destas produzirem compostos desta natureza.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais