Avaliação de alterações genéticas e epigenéticas envolvidas na susceptibilidade a cancro na síndrome de Down

Palavras-chave: Síndrome de Down,Metabolismo do folato,Variabilidade genética,Epigenética

A Síndrome de Down (SD) é a forma mais comum de aneuploidia constitucional, afectando cerca de 1 em cada 700 nascimentos. As crianças com SD apresentam um risco aumentado de desenvolver cancro 10 a 20 vezes, relativamente a crianças sem SD, em particular leucemias agudas, nomeadamente Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) e Leucemia Mieloblástica Aguda (LMA), mais especificamente o subtipo Leucemia Aguda Megacarioblástica (LAMeg). Pelo contrário, verifica-se baixa incidência de tumores sólidos nas crianças com SD (Rabin and Whitlock, 2009). Alguns genes localizados na banda 21q22 estão associados ao aumento da incidência de leucemia na SD, nomeadamente os genes ERG, ETS2 e RUNX1. Estes genes codificam factores de transcrição que estão envolvidos quer na hematopoiese, quer na megacariopoiese (Fonatsch, 2010; Stankiewicz et al., 2009). Por outro lado, o folato desempenha um papel chave na manutenção da estabilidade genómica, na metilação do ADN de diversos genes, em particular genes envolvidos na regulação do ciclo celular e genes que codificam enzimas reparadoras do ADN (p16, p15, DAPK e MGMT, respectivamente). O metabolismo do folato pode ser influenciado pelos hábitos alimentares e por polimorfismos no transportador de folato reduzido (RFC), e nas enzimas metiltetrahidrofolato redutase (MTHFR) e cistationina beta-sintetase (CBS), desempenhando um papel importante na susceptibilidade a aneuploidias e no desenvolvimento de eventos iniciais na carcinogénese. Este estudo teve como objectivos o estudo dos níveis de expressão dos genes ETS2, CBS, SOD1 e RUNX1 do cromossoma 21, assim como a análise da prevalência de variantes polimórficas em genes envolvidos no metabolismo do folato, da enzima antioxidante Cu/Zn SOD1 e o padrão de metilação dos genes p15, p16 DAPK e MGMT de forma a identificar o seu papel na ocorrência de aneuploidias, nomeadamente em doentes com SD. Para tal, nós analisámos as variantes polimórficas 844ins68 e T833C (cosegregadas em cis) do gene CBS, A251G do gene SOD1, A80G do gene RFC1 e A1298C do gene MTHFR por técnicas de PCR-RFLP em 31 amostras de fibroblastos de fetos com SD e em 30 amostras de sangue periférico de controlos saudáveis. O perfil de metilação dos genes p15, p16, DAPK e MGMT foram analisados a partir do ADN convertido com bissulfito através da técnica de MSP. Por outro lado, os níveis de expressão dos genes ETS2, CBS, SOD1 e RUNX1 foram analisados por RT-PCR em tempo real. Os nossos resultados mostram que o alelo 844ins68 wild type apresenta uma frequência alélica na SD e nos controlos de 90%. Nos controlos, foram observados cerca de 3% de homozigóticos para 844ins68 do gene CBS, 13% de heterozigóticos e 84% sem inserção, enquanto na SD observou-se uma frequência de 0%, 19% e 81%, respectivamente. Para além disto, observámos que as frequências alélicas da forma wild type dos polimorfismos de SOD1, RFC1 e MTHFR (alelo A) são semelhantes nos controlos e na SD (SOD1: 92% e 90%; RFC1: 52% e 50%; MTHFR: 70% e 69%, respectivamente para os controlos e para a SD). Resultados semelhantes foram observados nos genótipos de SOD1 e MTHFR analisados (SOD1: 83% e 80% AA, 17% e 20% AG, e 0% GG; MTHFR: 13% e 10% AA, 33% e 42% AC, e 53% e 48% CC, respectivamente para os controlos e para a SD). Por outro lado, o genótipo AA do RFC1 apareceu com menor frequência na SD (19%) comparado com os controlos (27%). As frequências genótipicas observadas não apresentam um desvio ao Equilíbrio de Hardy-Weinberg, excepto no caso dos controlos no gene CBS. A força de associação entre os polimorfismos e o risco para a SD foi medida através da avaliação do risco associado (Odd’s ratio) com um intervalo de confiança de 95% (IC95%), não tendo sido observada relação significativa entre estes polimorfismos e a SD. Contudo, a forma wild type para 844ins68 do gene CBS (OR=0.833; CI95% 0.2248-3.089), o genótipo AA de SOD1 (OR=0,8333; CI95% 0.2248- 3.089) e o genótipo AA de RFC1 (OR=0,6600; CI95% 0.1980-2.200) podem ter um efeito protector. Por outro lado, a variante 844ins68 do gene CBS (OR=1.560; CI95% 0.3927-6.198), o genótipo AG de SOD1 (OR=1.20; CI95% 0.3237-4.448) e genótipo AC de MTHFR (OR=1.444; CI95% 0.5095-4.095) podem ser factores de risco para esta patologia. Além disso, a metilação do ADN mostra que os genes p15, p16, DAPK e MGMT estão todos desmetilado nos fetos com SD. Finalmente, o estudo da expressão génica de genes localizados no cromossoma 21 não revelou diferenças significativas na variação dos níveis de expressão dos genes, apesar da existência de três cópias dos genes estudados. Este facto pode dever-se a mecanismos reguladores dos genes durante o desenvolvimento embrionário. Além disso, não foram encontradas associações estatisticamente significativas entre os polimorfismos ou o perfil de metilação e os fetos com SD. O aumento do número de amostras de doentes e de controlos poderá contribuir para uma melhor análise do risco destes polimorfismos no desenvolvimento de SD.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais