Importância do TRAIL e da Survivina como alvos terapêuticos na Leucemia Linfoblástica Aguda

Palavras-chave: Leucemia linfoblástica Aguda T,Quimioterapia convencional,TRAIL recombinante,Ácido gambógico,Silibinina,Apoptose

A Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) representa um grupo de doenças biologica e clinicamente heterogéneo. A quimioterapia continua a ser a terapêutica mais utilizada, no entanto, muitos doentes desenvolvem mecanismos de resistência aos fármacos convencionais, nomeadamente por resistência à apoptose, associados ao aparecimento de recidivas hematológicas frequentes. O TRAIL (TNF-Related Apoptosis Inducing Ligand) ou APO2L (APO 2 ligand), é uma proteína transmembranar do tipo II, com capacidade selectiva de indução de morte celular. Esta citocina pode ligar-se a dois tipos de receptores da membrana celular: os receptores de morte celular 4 e 5 (DR4/TRAIL-R1 e DR5/TRAIL-R1) induzindo morte celular por apoptose; e os receptores armadilha (ou decoy) 1 e 2 (DcR1/TRAIL-R3 e DcR2/TRAIL-R4), que inibem a apoptose. Para além disto, verifica-se que apesar do TRAIL induzir apoptose de forma preferencial nas células cancerígenas, nem todas as células tumorais apresentam sensibilidade ao TRAIL, nomeadamente pelo aumento da expressão de proteínas anti-apoptóticas, como a survivina. Neste sentido, encontramse em estudo vários moduladores da resistência à apoptose, nomeadamente os compostos naturais Ácido Gambógico (GA) e Silibinina (SLB). Tendo em conta estas observações pretendeu-se com este trabalho avaliar a eficácia terapêutica do rhTRAIL, e dos fármacos inibidores da survivina, GA e SLB, em monoterapia e em combinação terapêutica, entre si e com a quimioterapia convencional, em células de Leucemia Linfoblástica Aguda, em particular na recidiva da doença, bem como analisar alguns dos mecanismos envolvidos na citotoxicidade e na sensibilidade das células a estes compostos. Para tal, as células CEM e MOLT-4, obtidas de doentes com LLA de linhagem T (LLA-T) na fase de apresentação da doença e na recidiva hematológica, respectivamente, foram mantidas em cultura na ausência e na presença de concentrações crescentes destes fármacos, em monoterapia (em toma única e em administração diária) e em associação terapêutica entre si e com a quimioterapia convencional (Doxorrubicina e Vincristina), administrados simultaneamente e desfasados de 4 horas. A proliferação e viabilidade celular foram avaliadas pelo teste de exclusão com azul de tripano e o tipo de morte celular foi analisado por microscopia óptica, através da análise morfológica com solução de May-Grünwald-Giemsa, e por citomeria de fluxo (CF) recorrendo à dupla marcação com anexina V e Iodeto de Propídeo (IP). Os níveis de caspase 3, de citocromo c, bem como o ciclo celular e o potencial de membrana mitocondrial foram avaliados por CF com recurso a anticorpos monoclonais específicos, ao IP e à sonda fluorescente JC1, respectivamente. Os níveis de expressão basal do ligando TRAIL e dos seus receptores, do receptor da transferrina (TfR), bem como da survivina, foram também avaliados por CF. Assim, os resultados obtidos neste trabalho mostram que os fármacos em estudo induzem diminuição na proliferação e viabilidade celular de forma dependente da dose, do tempo de exposição, do tipo de administração e da linha celular em estudo. Os efeitos citotóxicos induzidos pelos diferentes compostos são mediados por apoptose, acompanhados de aumento da expressão de caspase 3 activada e de citocromo c, bem como de disfunção mitocondrial. As alterações ao nível do ciclo celular revelam aumento da população celular em G0/G1 e o aparecimento de pico apoptótico confirmando a morte celular por apoptose. A diferença na sensibilidade das células ao rhTRAIL pode estar relacionada com a razão entre os receptores pró- e antiapoptóticos do TRAIL, a qual é superior nas células CEM em relação às células MOLT-4. Estes resultados podem justificar a maior sensibilidade das células CEM ao rhTRAIL. Além disso, os níveis de expressão basal da survivina e do receptor da transferrina (TfR) são também superiores nas células CEM, podendo explicar a maior sensibilidade destas células ao GA e a necessidade de maiores concentrações de SLB, para obter os mesmos efeitos que nas células MOLT-4. Adicionalmente, a administração diária e a associação entre os diversos fármacos revelou efeito sinérgico, o que sugere que estas associações para além de benéficas pela redução da toxicidade dos fármacos, poderão ser úteis para ultrapassar a resistência ao sinal efectivo de morte celular mediada pelo rhTRAIL. Em suma, podemos concluir que os fármacos rhTRAIL, GA e SLB poderão constituir uma abordagem terapêutica promissora em leucemias agudas, nomeadamente na recidiva da doença, quer em monoterapia quer em terapêutica combinada com a quimioterapia convencional.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais