Análise haplotípica de mutações comuns no gene HFE associadas à Hemocromatose em Portugal

Palavras-chave: Hemocromatose Hereditária,HFE,p.C282Y,p.H63D,p.S65C,Portugal,África,Sobrecarga de ferro,Haplótipo,SNP

A Hemocromatose Hereditária (MIM: 235200) é uma doença autossómica recessiva caracterizada pelo aumento da absorção de ferro. Esta patologia é uma das doenças genéticas mais comuns entre os indivíduos de origem Europeia, e na maioria dos casos encontra-se associada a mutações no gene HFE. A fim de investigar os haplótipos associados às mutações c.845 G˃A (p.C282Y), c.187 C˃G (p.H63D) e c.193 A˃T (p.S65C) na população Portuguesa, foram estudados os polimorfismos no gene HFE, -1206G˃C / -467C˃G / IVS2(+4)T>C / IVS4(+48)G>A / IVS4(-44)T>C / IVS5(-47)G>A / Poli-A+5C˃T. Os sete SNPs foram analisados num total de 151 amostras de indivíduos, homozigóticos p.C282Y (n=11), heterozigóticos p.C282Y (n=19), homozigóticos p.H63D (n=20), heterozigóticos p.H63D (n=34), heterozigóticos compostos p.C282Y/p.H63D (n=17), heterozigóticos p.S65C (n=6), heterozigóticos compostos p.S65C/p.H63D (n=3) e indivíduos sem mutações comuns HFE (n=41). Foi ainda analisada uma amostra populacional de origem Africana (n=27) e comparada com uma amostra populacional de origem Portuguesa. A associação de SNPs e haplótipos à sobrecarga de ferro foi avaliada recorrendo a um estudo caso/controlo: 63 indivíduos adultos com níveis elevados de ferritina (> 300 ng/mL) (excluindo a presença da mutação p.C282Y e sem outras causas conhecidas para a sobrecarga de ferro), foram comparados com um grupo de 21 indivíduos adultos com níveis normais/baixos de ferritina (<100 ng/mL). Os SNPs foram genotipados por PCR-RFLP, e as análises estatísticas foram realizadas recorrendo aos programas Plink (http://pngu.mgh.harvard.edu/purcell/plink/) e Arlequin v.3.11. A mutação p.C282Y foi encontrada associada aos haplótipos GCTGTGC (0,98) e CCTGTGC (0,02), ou apenas TTG para os polimorfismos IVS2(+4)T>C / IVS4(- 44)T>C / IVS5(-47)G>A, o mesmo haplótipo descrito nas restantes populações Europeias. Este resultado permite concluir que, em Portugal, a principal mutação causadora de hemocromatose do tipo HFE tem a mesma origem da mutação p.C282Y na Europa. À mutação p.H63D foram associados seis haplótipos: GCCGTAC (0,51), CGCGTAC (0,26), GGCGTAC (0,03), CCCGTAC (0,17), CGCGTAT (0,01) e CCCGTGC (0,02). Se considerarmos os polimorfismos IVS2(+4)T>C / IVS4(-44)T>C / IVS5(-47)G>A observam-se dois haplótipos, um idêntico ao encontrado nas restantes populações Europeias (CTA) e um segundo observado pela primeira vez numa população de origem Europeia (CTG). O facto de ter sido encontrado um haplótipo diferente associado à mutação p.H63D, sugere que a mutação p.H63D pode ter ocorrido uma segunda vez (mutação recorrente) na amostra populacional Portuguesa. Associados à mutação p.S65C (n=9) foram encontrados os haplótipos GCCGCAC (0,10), CCCGCAC (0,80) e CGCGCAC (0,10). Para os polimorfismos IVS2(+4)T>C / IVS4(- 44)T>C / IVS5(-47)G>A, a mutação p.S65C foi encontrada associada a um haplótipo único CCA, semelhante ao encontrado na população Russa mas diferente do haplótipo CTA, encontrado numa amostra populacional Francesa (Bretanha). O estudo dos polimorfismos numa população Africana (n=27) e numa amostra populacional Portuguesa de indivíduos normais (n=21) revelou uma distribuição de frequências semelhante, exceto para os polimorfismos -467C˃G e IVS5(-47)G>A, com distribuição de frequências alélicas inversa nas duas populações. O teste exato de diferenciação entre as duas populações com base nas frequências alélicas (incluindo a mutação p.H63D) mostrou um valor p significativo (p<0,001). No estudo de associação à sobrecarga de ferro, a mutação p.H63D (OR 2,75; p=0,012), e os alelos IVS2(+4)C (OR 3,64; p=0,003) e IVS5(-47)A (OR 0,34; p=0,002) foram encontrados associados positivamente à sobrecarga de ferro. Por sua vez, observa-se que os haplótipos CCCATGGTGC e GCCATGGTGC nos cromossomas normais, que incluem os alelos ancestrais IVS2(+4)T e IVS5(-47)G (sublinhados nos haplótipos), têm um efeito protetor relativamente à sobrecarga de ferro (0,162 e 0,155, respetivamente, no grupo controlo vs. 0,008 e 0,035, respetivamente, em indivíduos com níveis elevados de ferritina) (p=7,13x10-5 e p=0,0081, respetivamente) e o haplótipo GCGACGGTAC, com a mutação c.187C˃G (p.H63D) (sublinhada no haplótipo), está associado ao aumento da sobrecarga de ferro (0,066 no grupo controlo vs. 0,241 em indivíduos com níveis elevados de ferritina) (p=0,015).

Área científica: Ciências Exactas e Naturais