Cultura in vitro e análise molecular de Olea europaea L. cultivar Galega Vulgar

Palavras-chave: androgénese,clones,embriogénese somática,manitol,micropropagação,RAPDs,androgenesis,clones,,mannitol,micropropagation,somatic embryogenesis,RAPDs

A oliveira (Olea europaea L.) é uma das 35 espécies do género Olea, não se conhecendo de forma inequívoca o seu local de origem. Esta espécie encontra-se muito difundida na zona Mediterrânica, sendo aqui que se situam 98% das oliveiras cultivadas, representando portanto uma enorme importância económica. São conhecidos cerca de 2000 cultivares, embora alguns sejam os mesmos, mas sob denominação diferente. Em território nacional foram descritos 22 deles, destacando-se o cultivar Galega vulgar pela vasta área que ocupa, cerca de 80% da área total de olival, e pelas características que o tornam tão importante, tais como a resistência à salinidade, ao stresse hídrico e a algumas doenças como a provocada pelo fungo Verticillium. Para além disso, produz um dos azeites existentes no mercado mais apreciado pelos consumidores devido ao seu sabor característico, aroma, baixa acidez e grande estabilidade oxidativa. Tendo em conta a importância deste cultivar e o reduzido número de estudos nele realizados, optou-se neste trabalho pela análise do potencial embriogénico desta espécie, quer em termos de embriogénese somática e polínica. Para além disso, tentouse a manutenção de alguns clones por micropropagação e analisou-se também a variabilidade de alguns cultivares comparativamente à Galega Vulgar. Relativamente à micropropagação através da proliferação de meristemas axilares, foi testado o meio base OM com a substituição do manitol por sacarose. Testou-se ainda o efeito de alguns reguladores de crescimento tendo-se verificado que a inclusão de ácido indolbutírico (IBA) e de benziladenina (BA) não permitiu uma propagação eficaz. Para além disso, verificou-se uma forma de contaminação endógena que limitou severamente os ensaios. Em relação à embriogénese somática, a sua indução foi estudada em embriões zigóticos maduros (EZ) provenientes de três clones de Galega vulgar (1061, 2052, 502), colocados em cultura intactos ou seccionados em três partes (radicular, meristemática e cotiledonar) em diferentes meios. Foi observada a formação de estruturas embrionárias, embora com aspecto anómalo, nos meios contendo 2 ou 5 mg/l de ácido naftaleno-acético (NAA), 0,5 mg/l de dimetil-alil-amino-purina (2IP) e 8% de sacarose, após cerca de dois meses de cultura. A maior percentagem de indução foi conseguida no meio OM com 2 mg/l de NAA com embriões zigóticos intactos do clone 502, embora não se tenham verificado diferenças significativas na percentagem de indução de embriogénese somática entre as diferentes situações. Foram utilizados também embriões zigóticos em estados mais precoces de desenvolvimento, tendo a resposta sido muito mais reduzida. Na indução de embriogénese polínica, foram cultivadas anteras com 2 ou 3 mm, não tendo havido, em situação alguma, a formação de embriões, apenas calo. No entanto, por esmagamento de anteras de 2 mm em cultura, foi possível observar grãos de pólen multinucleados nas anteras cultivadas em meios com BA combinado com NAA ou ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D). A análise de variabilidade foi feita recorrendo a marcadores RAPD, utilizando primers, descritos anteriormente como discriminativos para Galega, que demonstraram um polimorfismo de 95%. Os sete cultivares estudados foram agrupados em três grupos, de acordo com o índice de similaridade, com uma boa correlação entre eles (r=0.81132). Assim, a Galega Grada de Évora parece ser próxima da Cobrançosa e Cordovil e as Galega Grada Normal, Grada de Serpa e a Galega X podem não ser mesmo Galegas, aparecendo separadas da Galega vulgar. Os resultados aqui obtidos devem ser complementados com análises mais aprofundadas para optimizar os protocolos desenvolvidos para os poder confirmar.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais