Oncogénese e Progressão do Melanoma - Análise Mutacional e Estudo Clínico Retrospectivo

Palavras-chave: Melanoma,Oncogénese

As mutações de genes que regulam a proliferação celular e a apoptose através das vias MAPK, PI3K/AKT e p16INK4A são eventos críticos na oncogénese do melanoma. Diversas mutações potencialmente patogénicas têm sido identificadas em estudos de sequenciação genómica de linhas celulares de melanoma. A biopsia do gânglio sentinela avalia a disseminação linfática do melanoma, sendo preditiva de metastização à distância e de morte relacionada com o tumor. Estando bem estabelecida em doentes de risco intermédio, permanece controversa nos doentes com melanomas espessos (>4,0 mm) devido à alta taxa de invasão linfática e de metastização distante oculta. A disseminação à distância é a principal causa de morte por melanoma e pode ocorrer por via linfática ou por via hemática. Objectivos: (i) Determinar a frequência de 29 mutações em amostras de melanoma e de nevos melanocíticos, inferindo acerca da sua relevância patogénica, (ii) avaliar o valor prognóstico do estado do gânglio sentinela nos doentes com melanomas espessos (>4,0 mm), (iii) identificar factores relacionados com a disseminação da doença loco-regional e (iv) identificar factores preditivos da via de disseminação metastática. Material e métodos: Amostras de tecido fixadas em formol e incluídas em parafina de melanomas primários (n=81) emparelhados com metástases loco-regionais (n=21) e nevos melanocíticos (n=28) foram submetidas a genotipagem de 29 mutações seleccionadas. Após extracção de DNA, cuja concentração e qualidade foi verificada por espectrofotometria e fluorimetria, as amostras foram genotipadas e a relevância patogénica de cada mutação foi avaliada com o auxílio de ferramentas bioinformáticas.  O estudo clínico retrospectivo incluiu 208 doentes com melanoma observados no Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra de 2000 a 2007. As variáveis estudadas foram: sexo, idade, grupo etário, localização do melanoma, tipo de melanoma, espessura, ulceração, estado do gânglio sentinela, metastização em trânsito, metastização ganglionar regional, metastização à distância, progressão da doença loco-regional, via metastática, morte por melanoma, tempo de evolução até à metastização distante e tempo até à morte ou à última observação. Resultados: Identificaram-se 4 mutações: BAI3 D755N (em 1,2% dos doentes com melanoma), DLEC1 D215N (em 3,7% dos doentes com melanoma e em 7,1% dos nevos melanocíticos), MYO9A G2291V (em 1,2% dos doentes com melanoma) e TP63 M499I (em 1,2% dos doentes com melanoma). Todas as mutações foram observadas no tumor primário, à excepção de TP63 M499I, que só se verificou numa metástase em trânsito. Apenas DLEC1 D215N não foi apontada como deletéria pelas ferramentas bioinformáticas, mas o seu papel patogénico foi considerado possível, já que esta mutação nunca foi descrita na população geral. O estudo clínico retrospectivo revelou que a espessura foi o factor de prognóstico com maior valor preditivo da metastização em trânsito, da metastização ganglionar, da metastização à distância, da sobrevivência livre de doença e da sobrevivência global. A espessura e o sexo masculino relacionaram-se com uma maior taxa de positividade da biopsia do gânglio sentinela. O estado do gânglio sentinela foi preditivo de metastização em trânsito, de metastização à distância e de morte relacionada com o melanoma, excepto nos doentes com melanomas espessos (>4,0 mm). A sobrevivência livre de doença foi influenciada pelo estado do gânglio sentinela, mas este não teve impacto na sobrevivência global dos doentes com melanomas espessos (>4,0 mm), excepto em relação à sobrevivência a curto prazo (2,5 anos). A progressão da doença loco-regional para metastização distante (61,4% dos casos) não foi influenciada por nenhuma das variáveis estudadas. A doença metastática à distância ocorreu em 31,7% dos doentes. As metástases ganglionares foram o foco metastático inaugural em 53% dos casos, as metástases em trânsito em 30,3% e as metástases distantes em 16,7%. A sobrevivência livre de doença, a sobrevivência livre de metástases distantes e a sobrevivência global foram semelhantes nas várias vias metastáticas. Conclusões: As mutações BAI3 D755N, DLEC1 D215N, MYO9A G2291V e TP63 M499I ocorreram numa frequência reduzida nos melanomas. DLEC1 D215N foi igualmente observada em nevos melanocíticos. TP63 M499I apenas foi identificada numa metástase. O papel destes genes na oncogénese do melanoma e na nevogénese requer esclarecimento futuro. Nos doentes com melanomas espessos o prognóstico parece ser mais influenciado pela disseminação hemática à distância do que pelo estado do gânglio sentinela, embora este manifeste valor preditivo da sobrevivência livre de doença e da sobrevivência a curto prazo (2,5 anos). Não se identificaram factores clínicos relacionados com a progressão para metastização à distância em doentes com metastização loco-regional nem factores preditivos da via de disseminação do melanoma.

Área científica: Ciências Médicas e da Saúde