Terapia génica : avaliação do potencial terapêutico em células de carcinoma hepatocelular em cultura

Palavras-chave: Neoplasias do fígado,Terapia génica

O carcinoma hepatocelular (CHC) é uma doença com mau prognóstico cuja incidência tem aumentado dramaticamente nas últimas décadas. Muitos estudos têm vindo a ser realizados e variados protocolos investigados para o seu tratamento. Apesar disso, a taxa de mortalidade dos doentes com CHC avançado ainda é muito elevada, havendo assim a necessidade de desenvolvimento de novos fármacos, e de novas opções de tratamento, que poderão ser utilizados como agentes únicos ou em combinação. Esta falta de opções terapêuticas seguras e eficientes contra muitos tipos de cancro tem vindo a incentivar o desenvolvimento de novas aplicações para a terapia génica. A terapia génica suicida envolve a entrega de um gene suicida às células-alvo, tornando-as sensíveis a determinado pró-fármaco sendo os sistemas mais utilizados a timidina cinase do Vírus Herpes Simplex (HSV-TK)/ ganciclovir (GCV) e a citosina desaminase bacteriana (CD)/ 5-fluorocitosina (5-FC). A entrega do material genético pode ser feita por vectores virais ou não virais. Devido aos problemas que têm surgido com a utilização de vectores virais, principalmente relacionados com questões de segurança, os lipossomas catiónicos surgiram como sistemas promissores, devido à sua baixa toxicidade e imunogenicidade, à falta de patogenicidade e versatilidade. O objectivo do presente estudo consiste na avaliação do potencial terapêutico in vitro, em linhas celulares de carcinoma hepatocelular (HUH-7 e Hep-G2), das estratégias de terapia génica suicida (HSV-TK / GCV ou CD / 5-FC), em monoterapia ou em terapia combinada com agentes de quimioterapia convencional (doxorrubicina) e novos fármacos dirigidos a alvos moleculares (inibidor proteasoma MG-262), utilizando para a transfecção lipossomas associados a transferrina. A viabilidade foi avaliada pela técnica do Alarmar Blue e os mecanismos de morte verificados por citometria de fluxo com AV/IP, morfologia em esfregaços corados por May-Grünwald-Giemsa e análise do ciclo celular. Os resultados obtidos indicam que a aplicação da terapia génica suicida utilizando os sistemas HSV-TK/GCV ou CD/5-FC, tem um efeito antiproliferativo e citotóxico dependente da dose de pro-fármaco utilizada e do tempo de incubação. A combinação destas abordagens terapêuticas com doses inferiores ao IC50 de MG-262 ou doxorrubicina apresenta aumento do efeito antiproliferativo e citotóxico, indicando que a aplicação combinada de doses mais baixas de outros fármacos poderá levar a uma potenciação dos resultados com níveis de toxicidade e efeitos secundários reduzidos. Este efeito antiproliferativo foi verificado através das alterações observadas no ciclo celular das células (acumulação na fase G2 / M). Por citometria de fluxo e por estudos de morfologia, verificou-se que o mecanismo de morte celular predominantemente observado após aplicação dos diferentes tratamentos foi a apoptose. Estes resultados sugerem que a terapia de génica suicida com HSV-TK/GCV ou CD/5-FC pode constituir uma nova abordagem com potencial terapêutico no CHC não só em monoterapia, mas também, em associação com as terapias convencionais ou novos fármacos dirigidos a alvos moleculares.

Área científica: Ciências Médicas e da Saúde