Regulação genética do receptor 5-HT2A na Demência Frontotemporal

Palavras-chave: DLFT,vcDFT,gene HTR2A e rs3125

A demência foi definida como um dos principais desafios do século XXI, devido à sobrecarga que é imposta, não apenas aos cuidadores, mas também aos sistemas social e de saúde. Assim, as demências devem ser o foco, não apenas para o planeamento de cuidados específicos a todos os níveis, na sociedade, mas também para a investigação mais aprofundada e eficaz. A Degenerescência Lobar Frontotemporal (DLFT), a segunda causa mais frequente de demência neurodegenerativa precoce, inclui um grupo de doenças heterogéneas que têm em comum a degenerescência seletiva dos lobos frontais e/ou temporais, mas com subtipos clínicos e neuropatológicos distintos. A idade de início varia entre os 45-65 anos e a duração entre 6-8 anos. Existe uma distribuição semelhante entre os géneros. Atualmente, a DLFT inclui essencialmente três síndromes clínicas: a variante de comportamento da Demência Frontotemporal (vcDFT) e duas variantes da linguagem - a Demência Semântica (DS) e a Afasia Progressiva Não Fluente (APNF). Além disso, existem variantes menos frequentes ou indefinidas, que correspondem a uma sobreposição de sintomas com outras doenças motoras, nomeadamente quando se associa a Doença do Neurónio Motor ou a sinais parkinsónicos: a DFTP-17 (associada a mutações no cromossoma 17), a Degenerescência Corticobasal e a Paralisia Supra-Nuclear Progressiva. A heterogeneidade genética da DLFT evidencia-se pela identificação de mutações nos genes MAPT, GRN VCP, CHMP2B, TARDBP. FUS e C9ORF72. No entanto, desconhecem-se ainda as causas genéticas envolvidas em aproximadamente 30% dos doentes que manifestam uma história familiar positiva, bem como o mecanismo subjacente à etiologia da DLFT. Apesar dos poucos estudos existentes, tem sido evidenciada uma disfunção do sistema serotoninérgico, que desempenha um papel importante na modulação comportamental, associada à DLFT. Foi descrita a diminuição significativa do recetor serotoninérgico 5-HT2A, envolvido em funções cognitivas, tais como a memória e a aprendizagem, em áreas cerebrais de doentes com DLFT. Adicionalmente, foi descrita uma associação genética entre os polimorfismos do 5HTR2A (gene codificante do 5-HT2A) e os sintomas psicóticos na Demência de Alzheimer, que possui algumas características clínicas e neuropatológicas comuns à DLFT. Por conseguinte, o gene 5HTR2A constitui um bom candidato para ser estudado como fator de suscetibilidade para o desenvolvimento desta patologia Nesse sentido, o objetivo neste trabalho foi averiguar o envolvimento do gene 5HTR2A na patogénese da DLFT. O gene 5HTR2A foi analisado para a identificação de variações de sequência que pudessem eventualmente estar associadas ao fenótipo clínico de DLFT. Foram incluídos 70 doentes com o diagnóstico provável de DLFT, avaliados na Consulta de Demências no Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra, E.P.E.. O DNA foi extraído a partir de sangue e a análise genética foi realizada através de amplificação por PCR, usando primers específicos, e subsequente sequenciação automática. Na análise estatística, incluindo a correlação genótipo-fenótipo, foram usados os testes de 2 e exato de Fisher (nível de significância quando p<0,05). Foram identificadas 17 variações de sequência (13 descritas e 4 novas), confirmadas posteriormente por PCR-RFLP. Não foi encontrada associação de qualquer das variantes com a DLFT. Os resultados sugerem que as variações de sequência identificadas no gene 5HTR2A não constituem uma causa primária para o desenvolvimento da DLFT ou um fator de risco para algum subgrupo clínico. Contudo, não pode ser excluído o seu envolvimento sem estudos funcionais adicionais. Adicionalmente, as variações de sequência identificadas, que têm como consequência a alteração de aminoácido ou que se localizam em regiões reguladoras, foram analisadas para verificar a sua ocorrência num grupo constituído por 92 indivíduos saudáveis (ajustados para etnicidade, idade e género, sem problemas neurológicos), tendo sido realizado um estudo de associação caso-controlo. As variações de sequência selecionadas foram genotipadas por mini-sequenciação, sequenciação de Sanger e PCR-RFLP. O estudo de associação caso-controlo sugere que o alelo G do rs3125 (localizado na região reguladora 3’UTR) pode constituir um fator de risco associado ao desenvolvimento de vcDFT em mulheres (genótipos: p=0.047, alelos: p=0.037). Foi igualmente obtido um valor estatisticamente borderline, na comparação genotípica entre os doentes com DLFT de início precoce e os indivíduos saudáveis com menos de 65 anos (genótipos: p=0.052, alelos: p=0.066). Finalmente, a patogenicidade da alteração genética rs3125 foi avaliada através de um estudo funcional. O RNA foi extraído a partir de plaquetas e células mononucleares do sangue periférico de 6 mulheres doentes com o diagnóstico provável de vcDFT e 10 mulheres saudáveis. A genotipagem do rs3125 foi realizada para ambas as isoformas do 5HTR2A por sequenciação de Sanger e PCR-RFLP. Os níveis de RNAm de cada transcrito foram quantificados por PCR em tempo real quantitativo relativo, após a seleção do controlo endógeno mais apropriado. Foi observada uma diminuição estatisticamente significativa da expressão do transcrito NM_000621.4 nas mulheres doentes (vcDFT) portadoras do genótipo GG, comparativamente às saudáveis. Este resultado poderá constituir uma possível justificação para a associação obtida do alelo G como um fator de risco para a vcDFT (no estudo de associação caso-controlo). Tendo em conta a literatura científica disponível, este estudo forneceu a primeira evidência de que o gene 5HTR2A poderá estar envolvido na suscetibilidade para a vcDFT, sendo por isso, uma contribuição relevante para o esclarecimento da patogenicidade da DLFT.

Área científica: Ciências Médicas e da Saúde