Preparação de triterpenóides e avaliação da atividade antiparasitária em tripanossomatídeo Leishmania infantum

Palavras-chave: Leishmanias,Leishmaniose

A leishmaniose é uma doença infeciosa parasitária endémica em 98 países, predominantemente em regiões tropicais e subtropicais, onde afeta cerca de 12 milhões e coloca em risco mais de 350 milhões de pessoas. O agente etiológico é o tripanossomatídeo do género Leishmania e sua a transmissão ocorre através da picada do flebótomo. Durante o ciclo de vida os parasitas são digenéticos e expostos a diferentes ambientes: um extracelular dentro do hospedeiro invertebrado e um intracelular dentro do hospedeiro vertebrado. Consequentemente, como estratégia de sobrevivência, a Leishmania adota dois estádios morfologicamente distintos: o promastigota e o amastigota. A virulência da Leishmania spp. que causa a infeção e a resposta originada pelo sistema imunitário do hospedeiro são fatores determinantes na manifestação clínica da parasitose: leishmaniose cutânea, leishmaniose mucocutânea e leishmaniose visceral. Segundo a OMS a leishmaniose visceral tem vindo a surgir como uma complicação associada a doenças que comprometem o sistema imunitário, como o VIH, alterando os padrões tradicionais epidemiológicos da transmissão de Leishmania. Os fármacos utilizados possuem limitações nomeadamente o preço, níveis de toxicidade, sucesso reduzido e devido à monoterapia estão associados ao desenvolvimento de resistência. É, portanto, necessário desenvolver terapias alternativas e caracterizar novos alvos terapêuticos para obter tratamentos mais eficientes, específicos e menos tóxicos. Na literatura são encontrados alguns estudos que relatam a atividade anti-Leishmania de triterpenos derivados da betulina e do ácido betulínico. Idealmente, a modificação química destes produtos naturais pode melhorar significativamente a sua atividade e manter os níveis de toxicidade geralmente baixos, sendo por isso uma área de interesse crescente na descoberta de novos compostos com atividade anti-Leishmania. Com o objetivo de estudar a atividade leishmanicida dos derivados da betulina e do ácido betulínico, foram realizados ensaios de viabilidade celular em Leishmania infantum. Entre os 20 compostos testados, três compostos apresentaram elevada atividade anti-Leishmania (CI50<100 μM), seis atividade moderada (100 <CI50> 200 μM) e onze não apresentaram atividade biológica significativa (CI50> 200 μM), A análise da estrutura/atividade dos derivado da betulina indicou que geralmente a carbamoilação das posições C3 e/ou C28 com a inserção do grupo 1,2,4-triazole nessas posições resulta num aumento da atividade leishmanicida, enquanto as mesmas modificações ii realizadas com a adição do grupo 2-metilimidazole conduz à diminuição da atividade, demonstrando-se, assim, a importância do grupo triazole na atividade destes compostos. Os resultados obtidos sugerem que as modificações em C20 e C29 têm um impacto positivo na atividade anti-leishmanicida dos derivados da betulina e que a acetilação das posições C3 e/ou C28 diminui a atividade biológica dos derivados. Nos derivados do ácido betulínico a esterificação dos grupos hidroxilos em C3 e C28 na maioria dos casos reteve a atividade leishmanicida e a oxidação do grupo hidroxilo secundário em C3 aumentou a ação antiparasitária. Os compostos mais ativos, ou seja, que induziram a redução do número de promastigotas sob menor concentração, foram o derivado da betulina 24 (CI50 de 48,68 μM) e o derivado do ácido betulínico 31 (CI50 de 37,54 μM). Foi também objetivo estudar os mecanismos de ação farmacológica dos compostos mais ativos de forma a elucidar possíveis alvos moleculares de atividade anti-Leishmania. Deste modo, estudaram-se os efeitos dos derivados 24 e 31 no ciclo celular e na morfologia do parasita. Os resultados obtidos por citometria de fluxo indicam que os derivados betulínicos testados não alteram de forma significativa o ciclo celular. Deste modo, tudo indica que o mecanismo de ação principal dos derivados betulínicos testados não deverá estar relacionado com a inibição das topoisomerases, enzimas descritas como potenciais alvos celulares. As alterações morfológicas induzidas pelo composto 31, nomeadamente células arredondadas, mais pequenas e com flagelos mais curtos, sugerem que o mecanismo de ação possa estar relacionado com alterações no citoesqueleto, na permeabilidade membranar e/ou na atividade mitocondrial. Em conclusão, os resultados demonstraram a atividade leishmanicida dos derivados betulínicos e permitiram identificar os grupos funcionais mais importantes para a obtenção dessa atividade biológica. As modificações no grupo hidroxilo secundário da posição C3, na porção de alceno da posição C20 e no grupo hidroxilo primário da posição C28 conduziram à obtenção de diversos derivados betulínicos com atividades anti-Leishmania distintas. É de destacar que a adição de grupos triazóis aumenta o potencial dos derivados da betulina contra a Leishmania

Área científica: Ciências Médicas e da Saúde