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Hidrolases de Agrocybe aegerita e Macrolepiota procera: Purificação parcial e Caracterização

Palavras-chave: Hidrolases,Proteases Quitinases,Fungos,Cogumelos

Cogumelos são reconhecidos como uma fonte promissora de novas proteínas. Várias proteínas com características únicas foram isoladas, incluindo enzimas lignocelulolíticas, lectinas, proteases, inibidores da protease e hidrofobinas. Fungos decompositores (sapróbios) como Agrocybe aegerita e Macrolepiota procera produzem hidrolases para degradar o material lignocelulósico e celulolítico. Para degradar estes polímeros dispõem de um sistema enzimático complexo, composto por enzimas que podem ser secretadas, enzimas intracelulares e membranares. O micélio é a estrutura responsável por algumas funções importantes dos fungos, como a respiração, absorção, excreção e reprodução. Para além de fixar o substrato, o micélio tem como função a digestão extracelular. A digestão extracelular é conseguida pela secreção de proteínas para o meio envolvente, as hidrolases são algumas das proteínas secretadas pelos micélios. Desta forma o micélio é um alvo para a investigação de proteínas. O estudo da modificação das condições do meio de cultura é importante no sentido de se criarem as condições necessárias para a secreção de proteínas com interesse biotecnológico. Neste sentido foi feita uma caracterização do perfil proteico a uma dimensão e caracterização da actividade enzimática da secreção e do micélio de A. aegerita e M. procera ao longo de 10 dias de cultura O 8º dia foi tempo de cultura ideal em que a quantidade de proteína e actividade enzimática eram as ideais para ambas as espécies. Também foi feita uma estimulação da secreção de hidrolases pela adição de serradura de acácia e eucalipto e borras de café na proporção de 40 g/l. No entanto a nível das secreções não se verificou incrementos de actividade específica. Apenas a serradura de acácia parece ter estimulado o micélio de M. procera, levando a um aumento da actividade de algumas proteases e a um aumento de β-glucosidases. As proteínas presentes nas secreções foram concentradas por vários métodos no sentido de aumentar a quantidade de proteína e a actividade. As metodologias com melhores resultados foram a liofilização para a secreção de M. procera e a precipitação com sulfato de amónia para a secreção de A. aegerita. Porém, a quantidade de proteína e de actividade permaneceram baixas e insuficientes para a purificação de enzimas de um modo rentável.Uma vez que a concentração de proteína e actividade enzimática das secreções foi baixa, e insuficiente para a purificação de hidrolases, a separação de proteases foi realizada a partir do micélio. Deste material foram purificadas parcialmente proteases do tipo serínico e metaloaminopeptidases por cromatografia de exclusão molecular e cromatografia de interação hidrofóbica em Phenyl Sepharose

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Efeito do ibuprofeno associado ao exercício físico nas células progenitoras do endotelio

Palavras-chave: Exercício físico,EPCs,Angiogénese,Neovascularização,Ibuprofeno

Introdução: O exercício físico tende a aumentar as células endoteliais progenitoras (EPCs) na circulação sanguínea. Estas células, constituídas por varias populações, promovem o aparecimento de novos vasos, quer por angiogénese, quer por neovascularização. Assim, podemos assumir que a vascularização aumenta com a prática de exercício físico. Estudos recentes mostram que inibidores de COX-­‐2 são capazes de inibir a actividade de EPCs e, por tanto, originar uma diminuição do aparecimento e/ou ramificação de novos vasos. Este estudo pretende provar que o ibuprofeno, como inibidor da via das ciclooxigenases, consegue diminuir a vascularização no músculo solear. Metodos: Quatro grupos de ratos Wistar foram submetidos a treino continuado, aérobio, em passadeira rolante, ao longo de oito semanas. De seguida foram retiradas amostras de sangue e os músculos solear. As amostras de tecido foram submetidas a analises moleculares e histológicas, enquanto que as amostras de sangue foram utilizadas para estudo das células progenitoras do endotélio (EPCs) e quantificação de VEGF. As EPCs foram analisadas por citometria de fluxo, utilizando os marcadores CD34, CD133, CD146 e KDR. As concentrações plasmáticas de VEGF foram determinadas por ELISA. Amostras de tecido muscular permitiram a quantificação das fibras musculares tipo I e II, bem como o calculo da razão capilar/fibra. Resultados: Verificámos que com exercício a massa corporal aumentou a cima de todos outros grupos, enquanto que o grupo de exercício com administração de ibuprofeno apresentou valores bastante abaixo dos outros grupos. Pode observar-­‐se também, que, não só houve um aumento de comida ingerida pelo grupo com exercício e uma diminuição no caso do grupo exercício com administração de ibuprofeno. O teste de performance efectuado após o treino mostrou menor eficácia no grupo que consumiu ibuprofeno. As análises ao plasma sanguíneo revelaram que nos grupos de exercício existiu um aumento de VEGF e diminuição dos valores de células KDR+, CD146+ em circulação, o que se reflectiu num aumento da razão fibra/capilar. Já no grupo de exercício com administração de ibuprofeno, existiu uma diminuição de VEGF e um aumento do nível de células KDR+, CD146+, CD133+ e CD34+ em circulação, o que se correlacionou com a diminuição da razão capilar/fibra, quando comparado com o grupo de exercício. Conclusão: Não só o exercício físico revela uma maior activação de EPCs na corrente sanguínea, como o ibuprofeno parece ter a capacidade de inibir a actividade de vascularização dessas células, impedindo que as EPCs circulantes atinjam a diferenciação em células endoteliais maturas(EC), obrigando-­‐as a permanecer na corrente sanguínea por longos períodos de tempo. Acresce o facto de a diminuição da vascularização se correlacionar com uma menor quantidade de fibras tipo I e uma diminuição na performance após treino.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Estudos em Bifurcaria bifurcata: aquacultura, atividade antioxidante e antifúngica

Palavras-chave: Bifurcaria bifurcata,IMTA,Antioxidantes,Antifúngicos,,Cromatografia

O meio marinho é um espaço repleto de diversidade, tanto em organismos como em potenciais recursos naturais. Por isso tem sido um dos focos na investigação científica. Nesta área de conhecimento as algas são, atualmente, um dos temas em voga. Apesar de já serem utilizadas por vários países em tempos remotos, na Europa começam a dar agora passos fundamentais. De vários estudos realizados as algas evidenciam ser uma fonte de vários compostos e metabolitos secundários, com possíveis aplicações e reveladores de atividades biológica. As primeiras investigações resultaram de aplicações no sector alimentar, desde o seu consumo direto até aos aditivos naturais. Posteriormente a sua exploração resultou na descoberta de compostos com aplicações farmacêutica e cosmética. De forma complementar revelaram-se uma ferramenta para a biorremediação, que juntamente com a aquacultura originaram-se sistemas de IMTA (Aquacultura Multi-Trófica Integrada). Verifica-se assim que a biotecnologia das algas assegura um futuro promissor. O nosso país, rodeado de uma extensa zona costeira, apresenta uma variada flora algal. Tal facto permite a aplicação biotecnológica e o enaltecimento de recursos naturais. No entanto ainda precisa de ser explorado. Neste trabalho foi avaliado o potencial de cultivo e biotecnológico de Bifurcaria bifurcata presente na costa portuguesa. Os seus compostos bioativos foram extraídos com recurso a solventes orgânicos e água. Desses, apenas os extratos metanólicos e os aquosos foram utilizados em todos os ensaios experimentais. A atividade antioxidante foi determinada através da quantificação total de polifenóis pelo método de Folin-Ciocalteu e através da avaliação da capacidade de redução do radical 2,2-difenil-1-picril-hidrazilo (DPPH•). A capacidade antifúngica foi avaliada através do método de macrodiluição em caldo contra sete estirpes de dermatófitos patogénicos. Por fim, tentou-se quantificar e identificar alguns compostos que compõem cada extrato, através da aplicação de técnicas de cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) e cromatografia de camada fina (TLC). Os resultados obtidos foram sobretudo de carácter comparativo entre amostras selvagens e de aquacultura. Com base nos resultados, podemos concluir que B. bifurcata é uma alga passível de cultivo em sistemas de aquacultura multi-trófica integrada (IMTA), apesar de requerer alguns cuidados particulares. A nível biotecnológico, demonstrou possuir altoconteúdo de compostos fenólicos, resultado concordante com a sua capacidade antioxidante. Na atividade antifúngica, esta espécie é capaz de inibir grande parte dos dermatófitos testados. Por fim, relativamente aos resultados em HPLC verificou-se que cada extrato possui uma composição, no entanto não se verificaram diferenças qualitativas entre as amostras. Quanto à aplicação do TLC às amostras, confirmou a presença de compostos fenólicos, entre os quais florotaninos

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Aprendizagens de Biologia (Evolução biológica) e Geologia (Ocupação antrópica) no ensino secundário

Palavras-chave: Estratégias e recursos,Estágio pedagógico,Mecanismos de evolução,Ocupação antrópica,Práticas de ensino

As atividades desenvolvidas por um Professor não se reservam apenas à lecionação dos conteúdos presentes nas orientações do programa da disciplina. Existe um conjunto de práticas que orientam o caminho a ser percorrido para obter sucesso nos processos de ensino e aprendizagem. Este estudo desenvolveu-se durante o ano de Estágio Pedagógico, no contexto da prática de ensino supervisionada das unidades didáticas de Biologia, mecanismos evolutivos, e Geologia, ocupação antrópica e problemas de ordenamento do território. Pretendeu-se analisar se as estratégias desenvolvidas durante as aulas, bem como os materiais e instrumentos foram relevantes para os processos de ensino e aprendizagem dos alunos. Descrevem-se as práticas letivas e apresentam-se os resultados, relacionando as atividades desenvolvidas com a investigação educacional. Os participantes (N=10) eram alunos de uma turma do 11º ano de escolaridade do curso Científico-Humanístico de Ciências e Tecnologias da Escola Secundária José Falcão. Os instrumentos usados para avaliar os processos de ensino e aprendizagem foram fichas; de avaliação diagnóstica e formativa (pré-teste e pós-teste); de avaliação sumativa; grelhas de avaliação; e questionários. Os resultados revelaram, que para além das aprendizagens, os alunos desenvolveram competências cognitivas, procedimentais e atitudinais, concluindo que as estratégias adotadas foram adequadas. Este estudo permitiu também refletir sobre as várias dimensões da escola e do ensino e aprendizagem, funcionando como ponto de partida à futura prática docente de Biologia e Geologia.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Desenvolvimento de uma nova estratégia terapêutica para cancro da mama, envolvendo a acção combinada de terapia génica e quimioterapia.

Palavras-chave: Cancro da mama,Terapia génica,Lipoplexos,Docetaxel,Vimblastina,p53,miT-1

Excluindo o cancro da pele, o cancro da mama é o tipo de cancro mais frequentemente diagnosticado entre as mulheres, sendo a principal causa de morte por cancro neste género. Apesar dos recentes avanços nas estratégias terapêuticas convencionais para o cancro, a resistência a fármacos e os efeitos tóxicos secundários, frequentemente observados, têm limitado a sua aplicação clínica. Desta forma, urge o desenvolvimento de novas e eficientes estratégias anti-tumorais. Neste sentido, a terapia genética constitui uma estratégia promissora, devido à descoberta de novos alvos moleculares associados a uma doença, o que promove a oportunidade de criar novas técnicas terapêuticas, incluindo as que envolvem a p53 e microRNAs. Por outro lado, a investigação em terapia génica tem também estado focada no desenvolvimento de sistemas de transporte e entrega de material genético eficientes, sendo os complexos de lipossomas catioónicos/DNA ("lipoplexos") os mais promissores.Neste contexto, o principal objectivo deste trabalho foi criar uma nova estratégia para o tratamento de cancro da mama, consistindo na combinação de terapia génica e quimioterapia, com o intuito de proporcionar uma actividade antitumoral efectiva, com menos efeitos adversos. Assim, investigou-se a acção combinada de vimblastina ou docetaxel com estratégias de terapia génica envolvendo a expressão de p53 e/ou miR-1, mediada por lipoplexos, em células de adenocarcinoma mamário (linhas celulares MDA-MB-231 e MCF-7). Os resultados obtidos mostraram que a presença de vimblastina ou docetaxel durante a transfecção de células tumorais, com lipoplexos HSA-EPOPC:Chol/DNA (+/-) (4/1), resulta num aumento substancial da expressão dos transgenes luciferase e GFP. A presença destes fármacos também promove um aumento significativo da percentagem de células transfectadas. Observou-se também que a nova estratégia terapêutica, que combina quimioterapia com terapia génica envolvendo elevados níveis de expressão de p53 e miR-1, resultou num efeito anti-tumoral significativo in vitro. Por outro lado, iniciou-se o esclarecimento dos mecanismos envolvidos na acção terapêutica das estratégias desenvolvidas. A correlação entre o efeito terapêutico e os níveis de alguns alvos do miR e da p53, bem como stress oxidativo e vias de morte celular serão posteriormente investigadas, com o objectivo de contribuir para a clarificação dos mecanismos potencialmente envolvidos no efeito anti-tumoral induzido pela estratégia desenvolvida. Estas estratégias combinadas de terapia génica e quimioterapia poderão assumir uma grande importância em aplicações clínicas futuras, permitindo melhorias substanciais no prognóstico de cancro da mama e constituir uma nova plataforma para o desenvolvimento de estratégias inovadoras contra o cancro

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Micropropaga ção de Acca sellowiana (Berg.): Optimização da indução de embriogénese somática e estabelecimento de novos genótipos

Palavras-chave: Acca sellowiana,Micropropagação,Germinação,Embriogénese somática,Choque auxínico,Maturação

A Acca sellowiana ou Feijoa sellowiana,, é uma árvore que tem vindo a ser estudada ao longo de várias décadas e revelado grandes potencialidades em diversas áreas de estudo, tais como farmacológicas, alimentares, ornamentais, ecológicas e até mesmo como modelo de estudo comparativo (embriogénese zigótica e embriogénese somática) do desenvolvimento embrionário em plantas superiores. No entanto, a reprodução de características de interesse e técnicas de melhoramento ainda estão um pouco aquém do desejável. Desta forma, foram estudadas diferentes técnicas de propagação, como a germinação de sementes, o estabelecimento de meristemas e cultivo de entrenós e a embriogénese somática. Esta última surgiu como o método mais eficaz de obtenção de réplicas a partir de um excerto da planta que no caso da feijoa são os cotilédones de embriões zigóticos. Apesar de se conseguir obter um grande número de clones a partir da embriogénese somática ainda há necessidade de otimizar os protocolos devido a limitações como a elevada produção de embriões anómalos e a variação somaclonal que condicionam a maturação e geração de plântulas. Deste modo delinearam-se vários estudos utilizando diferentes genótipos e métodos de indução como: embriogénese “two step”, choque auxínico e o uso de AGP na indução de embriogénese somática. A variação do genótipo revelou ser significativa em diferentes estudos e o método utilizando 2,4-D (“two-step”) revelou maior indução de calo com embriões, sendo que os embriões transferidos para o meio contendo 0,2 mg/l de 2,4-D mostraram uma maior capacidade de desenvolvimento em plântulas (0,25/calo). Os métodos em que se induziu embriogénese a partir de stress demonstraram capacidade embriogénica, podendo vir a ser uma alternativa de indução de embriogénese. Os embriões produzidos a partir deste método demonstraram um rápido desenvolvimento e uniformidade de estados, e ainda alguma facilidade no isolamento dos embriões somáticos a partir do calo sem que estes ficassem danificados.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
ESPAÇOS DE SOCIABILIDADE A Música como ferramenta de identidade dos imigrantes brasileiros

Palavras-chave: Antropologia da música,Migração,Identidade,Música Brasileira

O contexto que a visão deste trabalho habita é o da modernidade líquida e do capitalismo tardio, que proporciona através do desencaixe das instituições, da grande flexibilização de algumas fronteiras, as atividades de trabalho descoladas de um local, o sistema monetário internacionalizado, cursos académicos que aceitam pessoas do mundo todo, a possibilidade do cidadão ser um indivíduo do mundo. Com estas características somadas ao percurso histórico que liga Portugal e Brasil, o prestígio que a Universidade de Coimbra tem em Portugal e vários países, que (por isso) atrai uma grande quantidade de estudantes e imigrantes, temos um campo de entrecruzamento nacional e internacional de pessoas. Este trabalho pretende fazer uma análise dos espaços de sociabilidade por onde circula a música brasileira voltada para os imigrantes brasileiros, mas também a todas as nacionalidades que apreciam este universo sonoro. É través destes pontos de observação e análise, espalhados pela cidade de Coimbra, que é voltada uma atenção especial para as ferramentas de sociabilidade, inicialmente pelo entretenimento, construção de laços sociais, encontros e/ou choques culturais, (re)construção de identidade e inerentes conflitos. Vale ressaltar que o trabalho é uma composição de alguém que é músico, antropólogo, imigrante, brasileiro da Amazônia e cidadão português

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
A fotografia no álbum de família

Palavras-chave: Fotografia,Imagem,Analógico,Simbólico,Memória,História de família

Este projeto de investigação analisa imagens fotográficas analógicas retiradas de álbuns de família. Esta análise está centrada na interpretação social das imagens, ou seja, na simbologia e materialidade da fotografia. Dois dos fatores mais importantes prendemse com o facto de existir sempre uma intenção na fotografia, ou seja, uma performance e a questão da troca, o facto de a fotografia ser herdada ou oferecida. A partir desta interpretação percebemos como as famílias se relacionam através de um material tão complexo. Desta forma são observados os contextos de produção, de circulação e de consumo das mesmas. A análise das fotografias no álbum de família relaciona, assim, uma identidade social com uma memória familiar. Esta relação está focada no contexto dos retornados, isto porque as fotografias recolhidas são de famílias que tiveram que fugir de Angola na época dos conflitos pela independência

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Melhoramento em Actinidia chinensis Planch. e Actinidia deliciosa  A. Chev: Clonagem, Indução de poliploides e Avaliação da germinação de pólen

Palavras-chave: Actinidia sp.,Dodecaplóides,Germinação de pólen,Octaplóides,Organogénese,Poliploidização

Actinidia chinensis e A. deliciosa são espécies fruteiras de elevada importância económica. Nativas da China e regiões limítrofes, são actualmente cultivadas em muitas zonas do globo devido à qualidade dos seus frutos. Em Portugal, a cultura do kiwi, tornouse um caso de sucesso sendo actualmente uma das fruteiras mais cultivadas. No entanto, os genótipos utilizados são importados, não tendo sido especialmente desenvolvidos para as nossas condições edafo-climáticas. Torna-se assim imperioso desenvolver estratégias que permitam o melhoramento desta fruteira. Neste trabalho, procedeu-se à indução de octoplóides e dodecaplóides, e à avaliação da germinação de pólen da A. deliciosa para posterior cruzamento com A. chinensis e formação de híbridos.  Os ensaios de germinação do pólen ‘Hayward’ mostraram-se eficazes tendo-se atingido taxas de germinação da ordem dos 80% em meios com 6% de sacarose com ou sem GA3. O pólen germina igualmente de forma eficaz em ensaios de polinização cruzada em que se utilizou como progenitor feminino A. deliciosa.  De forma a rentabilizar a indução dos poliplóides, realizou-se antecipadamente o estabelecimento de linhas in vitro, e ensaios de micropropagação por meristemas, organogénese e enraizamento para escolher os melhores tratamentos a aplicar aos poliplóides induzidos. Os melhores resultados foram obtidos em meios com 1 mg/l de BAP e 10 mg/l de GA3 nos ensaios de proliferação dos meristemas axilares e com 1mg/l de BAP combinado com 0,1 mg/l de NAA na indução de organogénese. Taxas consideráveis de enraizamento (100% em K3 e 93% em K2) foram conseguidas após submersão da parte basal dos rebentos caulinares em meio líquido com 1g/l de IBA.  Conseguiu-se ainda a obtenção de linhas de A. deliciosa (6x) e A. chinensis (4x) por estacas e/ou sementes, nas quais se induziu ulteriormente a poliplóidização, para colquicina a 0,05% e 0,1%, com obtenção de octaplóides e dodecaplóides: a maior percentagem de dodecaplóides obtida foi de 38% em fitómeros K3 e a maior percentagem de obtenção de octoplóides foi 7% em plântulas KG. Na sua globalidade os resultados são promissores e estabelecem as bases de um futuro programa de melhoramento mais global para esta espécie.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Análise métrica do dimorfismo sexual da escápula na população portuguesa: Um novo método de diagnose sexual

Palavras-chave: CEI/XXI,CEIE,CEIUC,Perfil biológico,Bioarqueologia,Antropologia forense

Quer na área da antropologia forense, quer na área de bioarqueologia, a diagnose sexual é um dos parâmetros com maior relevo nas análises efetuadas. O presente estudo, tem como objetivo a análise métrica do dimorfismo sexual de cinco medidas na escápula, de uma amostra da população portuguesa. Baseia-se em estudos similares, desenvolvidos em outras populações (entre eles: Dabbs et al., 2010; Papaiannous et al., 2012). Em análise estão o comprimento e largura máximos (CM e LM, respetivamente), o comprimento da espinha escapular (CEE) e a altura e largura da cavidade glenóide (ACG e LCG, respetivamente). A amostra representativa da população portuguesa é composta por 235 indivíduos adultos de ambos os sexos (113 mulheres e 122 homens), provenientes de três coleções esqueléticas identificadas portuguesas: CEI/XXI (Coleção de Esqueletos Identificados do Século XXI), CEIE (Coleção de Esqueletos Identificados de Évora), CEIUC (Coleção de Esqueletos Identificados da Universidade de Coimbra). Para este estudo, apenas foram consideradas escápulas sem evidência de patologia e/ou trauma ante mortem, em bom estado de preservação e de indivíduos adultos. Os dados foram analisados por estatística descritiva, inferencial e preditiva. Foi também analisada a percentagem de dimorfismo sexual (%DS) de cada medida, verificando-se que as medidas com maior percentagem de dimorfismo sexual integram a cavidade glenóide. Foram analisados os pontos de cisão de cada medida. Foram desenvolvidas equações de regressão tendo em conta as medidas analisadas. As mesmas apresentam valores gerais compreendidos entre os 86,6% e os 89,5%. A amostra foi também analisada por Probabilistic Neural Network modificada por Tomand e Schober (2001). Esta análise permitiu obter modelos preditivos, com níveis de significância a atingir valores de 90,72%. Os modelos obtidos através deste método, foram validados através de leave-one-out jackknife re-sampling.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais