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Papel do ATP na infeção de Macrófagos por Candida albicans

Palavras-chave: Candida albicans,Macrófagos,ATP

As taxas de morbilidade e mortalidade provocadas por infeções fúngicas têm aumentado nas últimas décadas, constituindo um grave problema de saúde pública. Candida albicans é a espécie mais comumente identificada como sendo responsável por este tipo de infeções e, embora faça parte da flora normal do Homem, pode tornar-se patogénico em indivíduos com o sistema imunitário comprometido. As células fagocíticas profissionais têm um papel crucial na resposta a estas infeções, nas quais destacamos os macrófagos. Estes, em resposta à presença de microrganismos patogénicos, iniciam diversos mecanismos de maneira a controlar este tipo de infeções, sendo que o ATP e os seus metabolitos, nomeadamente a adenosina, desempenham um papel importante na regulação desta resposta que é mediada por recetores específicos para o ATP e adenosina. Assim, o ATP, que é libertado para o meio extracelular, atua como um “sinal de perigo”, alertando os macrófagos para a presença de patogénicos, enquanto que a adenosina tem um efeito contrário, funcionando como um sinal stop do sistema imunitário de modo a que este não seja superativado e comece a destruir as células do próprio organismo. A ecto-5'-nucleotidase (CD73) tem um papel importante neste mecanismo, pois é esta enzima que leva à formação da adenosina. Assim, o principal objetivo deste trabalho foi estudar o papel do ATP na infeção de macrófagos, principais células efetoras, por C. albicans. Tentou-se então compreender qual a influência do ATP, tanto na internalização de C. albicans por macrófagos, como na resposta destas células à infeção por esta levedura, verificando a viabilidade de C. albicans, ao longo do tempo, no interior dos macrófagos. Para tal, utilizou-se uma linha celular de macrófagos de ratinhos, células RAW 264.7, a qual foi infetada com várias estirpes de C. albicans. Os resultados obtidos mostraram que o ATP não interfere na internalização de C. albicans pelos macrófagos, pois esta é igual tanto na presença como na ausência de ATP extracelular. Demonstraram também que, efetivamente, existe um aumento do ATP extracelular em resposta á presença de C. albicans de modo a que os macrófagos sejam ativados e se defendam contra as leveduras. Essa defesa contra as leveduras observa-se através da morte destas ao longo do tempo, o que indica que os macrófagos estão a desempenhar o seu papel na defesa contra estes microrganismos. No entanto, a ausência de ATP extracelular (por adição de apirase) não se traduz numa não ativação dos macrófagos, pois os resultados obtidos mostraram que, na ausência deste, a viabilidade de C. albicans diminui, verificando-se uma maior morte das leveduras. xi Em conclusão, este estudo demonstrou que o ATP, efetivamente, pode iniciar uma resposta inflamatória por parte dos macrófagos, no entanto estes não dependem do ATP para iniciar a defesa contra C. albicans, podem ser ativados por outras vias.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Avaliação da actividade anti-inflamatória de Cymbopogon citratus (DC) Stapf. em modelos in vivo de inflamação crónica

Palavras-chave: Cymbopogon citratus (DC) Stapf.,Processo inflamatório crónico,Citocinas,Etnomedicina

A inflamação crónica, fortemente associada a várias doenças da actualidade, afecta drasticamente a qualidade de vida de uma grande parte da população mundial. Actualmente, o tratamento de tais patologias prende-se com terapêuticas aliadas a várias limitações, entre as quais graves efeitos secundários. Com o intuito de ultrapassar essas adversidades, a procura de compostos de origem natural, com potencial terapêutico e reduzidos efeitos secundários, tem sido incessante. O infuso de Cymbopogon citratus (DC) Stapf., espécie com grande distribuição geográfica, tem sido amplamente usado pela medicina tradicional no tratamento de diversas patologias, entre as quais condições inflamatórias. Contudo, pouco conhecimento existe ainda sobre as suas reais acções terapêuticas, e subsequentes mecanismos de acção. Este trabalho surge, deste modo, com o objectivo de investigar o efeito do extracto aquoso de C. citratus (livre de óleo essencial) num processo inflamatório crónico. Para tal, o estudo utilizou um modelo in vivo desse processo induzido pelo método de cotton pellet (cotton pellet-induced granuloma), realizado em ratos Wistar machos. Este modelo foi tratado com o extracto de C. citratus por um período de cinco dias, após o qual se procedeu à análise do efeito imunomodelador. O procedimento referido também foi utilizado para os controlos do estudo (indometacina, 1 mg/Kg; dexametasona, 2,5 mg/Kg; veículo). As relações percentuais de citocinas IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-13, IFN-γ, TNF-α, GM-FEC e RANTES, no foco inflamatório crónico, foram comparadas entre os grupos teste e controlo negativo pela técnica de ELISA. O C. citratus reduziu a expressão da maioria dos elementos proteicos próinflamatórios analisados, à excepção das isoformas da IL-1. O efeito nas citocinas antiinflamatórias foi igualmente uma redução, embora não se tenha verificado uma diminuição tão acentuada como a que se verificou para a indometacina. Daqui pode concluir-se que, de facto, o extracto aquoso de C. citratus possui um efeito imunomodelador e um maior efeito protector em comparação com os AINES, evidenciando, por isso, uma possível actividade anti-inflamatória crónica. Além disso, os resultados da análise histológica efectuada não evidenciaram qualquer citotoxicidade associada à administração da toma crónica.Os resultados obtidos no presente estudo constituem, deste modo, fortes indicadores de efeito terapêutico do Cymbopogon citratus (DC) Stapf. no que toca a desordens inflamatórias de carácter crónico, edificando, desta forma, uma base a futuros estudos que possam confirmar totalmente a propriedade originalmente descrita pela etnomedicina.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Uma estratégia para a discriminação entre compostos activos e inactivos em experiências de rastreio virtual : COX-1 como caso de estudo

Palavras-chave: Rastreio virtual,Acoplamento molecular,Ciclooxigenase

Um dos grandes desafios para a realização de experiências de rastreio virtual aplicando técnicas de acoplamento molecular está em encontrar ferramentas capazes de prever boas poses de compostos no local activo de uma proteína e de as pontuar correctamente, de uma forma rápida e com um baixo custo. Neste trabalho foram testadas diferentes estratégias para obter uma melhor discriminação entre compostos activos e inactivos em experiências de rastreio virtual baseadas em técnicas de acoplamento molecular utilizando a COX-1 (ciclooxigenase-1) como caso de estudo. A COX-1 foi escolhida como caso de estudo porque a sua actividade pode ser afectada por diferentes fármacos sem que estes tenham sido desenvolvidos para esse propósito, sendo por isso importante desenvolver estratégias para a identificação desses fármacos. O acoplamento molecular dos compostos no pacote da DUD (A Database of Useful Decoys) para a COX-1 foi realizado com o objectivo de se validar a capacidade do programa AutoDock Vina de prever e pontuar resultados de acoplamento molecular utilizando a COX-1. Adicionalmente, os resultados do acoplamento molecular foram analisados para obter os valores dos parâmetros constituintes da função de pontuação do programa. Estes foram utilizados para gerar classificadores através da utilização do SVM-light, um programa que implementa um algoritmo de Máquinas de Vectores de Suporte (SVM). A avaliação do desempenho da função de pontuação do AutoDock Vina e dos classificadores obtidos com o SVM-light foi realizada para dois conjuntos de “melhores” poses seleccionadas com base: (i) na ordenação dada pela função de pontuação do AutoDock Vina, e (ii) nos resultados de análise de grupos (clustering), aplicando uma análise de curvas ROC, das áreas abaixo das curvas ROC (AUC) e de curvas de enriquecimento e factores de enriquecimento. Os resultados obtidos mostram que a utilização de SVM para o desenvolvimento de classificadores a partir dos parâmetros constituintes da função de pontuação do AutoDock Vina apresenta melhorias significativas na discriminação de compostos activos e inactivos. Adicionalmente, os resultados demonstram que a utilização de novas estratégias como a utilização de uma análise de grupos para seleccionar as “melhores” poses pode melhorar significativamente os resultados do acoplamento molecular.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Flora e vegetação da zona calcária Souselas/Brasfemes

Palavras-chave: Vegetação,Zonas calcárias,Souselas/Brasfemes,Geologia,Descrição de Angiospérmicas,Biologia reprodutiva,Dispersão,Guia de Campo

A bolsa de calcários margosos e margas de Souselas/Brasfemes localiza-se entre a Pampilhosa do Botão, a norte, e o complexo calcário Alvaiázere-Sicó a sul, o Maciço Hespérico a este e a Orla Mesocenozóica Ocidental a oeste. Esta zona apresenta um tipo de solo árido e clima tipicamente Mediterrânico, factores favoráveis ao desenvolvimento de uma elevada riqueza florística e espécies com diversas estratégias reprodutivas. O objectivo principal desta tese de mestrado assenta no estabelecimento dos fundamentos teóricos e práticos para a elaboração de um Guia de Campo sobre a diversidade vegetal e as estratégias reprodutivas da vegetação da zona calcária Souselas/Brasfemes. Para tal, efectuou-se um levantamento florístico intensivo, com colheita, identificação de plantas e captura de imagens digitais. Entre as 192 espécies inventariadas, observa-se uma grande variedade de famílias (54), dominando na amostra as Asteraceae, Poaceae, Fabaceae, Lamiaceae e Orchidaceae pelo número de espécies. Das plantas colhidas foram seleccionados 61 taxa para incluir no Guia e, para estes, foi reunida informação para identificação fácil no campo e ainda informação relativa aos mecanismos de polinização e dispersão dos diásporos. Verifica-se que a maioria das espécies possui (1) distribuição essencialmente Mediterrânica ou a ela associada, (2) polinização essencialmente por factores bióticos, nomeadamente insectos; uma pequena fracção de plantas tem a capacidade de se autopolinizar, enquanto outras adoptam mecanismos que promovem a polinização cruzada (i.e., hercogamia, dicogamia e auto incompatibilidade). Algumas das espécies possuem dispersão de diásporos por aves. É apresentada ainda a estrutura geral do Guia de Campo.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Efeito da berberina em animais obesos : disfunção endotelial e síndrome metabólica

Palavras-chave: Síndrome metabólica,Obesidade,Doenças macrovasculares,Disfunção endotelial,Berberina

A síndrome metabólica é considerada um estado de inflamação crónica que aumenta a disfunção endotelial precipitando eventos isquémicos cardiovasculares e aumentando a mortalidade. A disfunção endotelial, caracterizada genericamente pela reduzida disponibilidade de óxido nítrico (NO), é uma condição que precede o desenvolvimento precoce de doença macrovascular. A hiperglicemia, a dislipidemia, o stress oxidativo e a resistência à insulina estão na génese do desenvolvimento de doenças macrovasculares. A berberina é um alcalóide natural existente em rizomas e raízes de várias plantas . Foi inicialmente utilizada como um agente destoxificante e anti-inflamatório na medicina chinesa e tem sido associada a benefícios para a saúde. Contudo, ainda não estão completamente esclarecidos os seus efeitos. Este trabalho teve como objectivo estudar o potencial terapêutico da berberina na disfunção endotelial associada à síndrome metabólica induzida por dieta gorda em ratos Sprague - Dawley. Para isso foram avaliados diferentes grupos de ratos Sprague-Dawley (SD), grupo SD controlo mantido com dieta normal, grupo SD mantido com dieta gorda durante 16 semanas e grupo SD mantido com dieta gorda ao qual foi administrado berberina (100mg/Kg) durante um mês, por via oral. Foram avaliados diferentes biomarcadores metabólicos e de stress oxidativo e efectuada a caracterização funcional e estrutural da artéria aorta nos diferentes grupos de animais. Verificámos que a berberina melhorou o perfil metabólico e a disfunção endotelial e diminuiu os níveis de stress oxidativo da parede da artéria aorta. A berberina tem um potente efeito anti-oxidante e promotor da função endotelial vascular, tendo por isso um elevado potencial terapêutico na síndrome metabólica e suas complicações macrovasculares.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Terra em transformação : avaliação de questões e atividades práticas em manuais de Ciências Naturais do 7.º ano de escolaridade

Palavras-chave: Atividades práticas,Capacidades cognitivas,Ciências Naturais,Manuais escolares,Literacia científica,Questões

Os manuais escolares devem promover o desenvolvimento de capacidades de resolução de problemas, pensamento crítico e criativo e de competências para planear uma pesquisa ou investigação. Algumas das estratégias importantes consistem na formulação de questões e na realização de atividades práticas no ensino das Ciências Naturais. O objetivo geral deste trabalho foi avaliar as questões e atividades práticas incluídas nos manuais escolares de Ciências Naturais do 7º ano de escolaridade, de quatro edições de 2012 e quatro anteriores. Para o efeito, foram selecionados oito manuais, de cinco editoras, sujeitos a uma análise documental e de conteúdo. Na avaliação das questões foram selecionados os subtemas Estrutura interna da Terra, Dinâmica interna da Terra e Consequências da dinâmica interna da Terra, e na avaliação das atividades práticas foi selecionado o subtema Os fósseis e a sua importância na reconstituição da história na Terra. O primeiro estudo, apresentado no capítulo I, considera duas dimensões de avaliação: a localização e o nível cognitivo das questões, admitindo que poderão estar relacionadas com o desenvolvimento de competências cognitivas, conducentes a literacia científica. Os manuais de 2012 revelaram um aumento de questões de nível cognitivo elevado, mas ambas as edições têm maior número de questões no nível cognitivo baixo. Quanto à localização das questões estas situam-se na sua maioria em atividades práticas, em ambas as edições. O segundo estudo, desenvolvido no capítulo II, avalia as atividades práticas em função da tipologia e do nível cognitivo, tendo revelado um ligeira evolução no nível cognitivo elevado (57%) das atividades práticas nos manuais de 2012, mas tipologia de ambas as edições revelou um menor número de atividades de Trabalho de campo, de Pesquisa e Laboratorial, comparativamente às atividades de Resolução de exercícios. Dada a importância das questões e atividades práticas no ensino das Ciências Naturais seria recomendável incluir mais questões e atividades práticas de nível cognitivo elevado, em futuras edições de manuais.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Ecologia trófica da Gaivota de patas-amarelas (Larus michahellis) e do Pintainho (Puffinus baroli) : uma abordagem isotópica em áreas costeiras e pelágicas

Palavras-chave: Ecologia trófica,Isótopos estáveis,Puffinus baroli,Larus michahellis

A monitorização e gestão dos ecossistemas marinhos requerem um conhecimento profundo da ecologia trófica de predadores de topo como as aves marinhas. Assim, este trabalho foi composto por três objectivos distintos: i) avaliar a sazonalidade na ecologia trófica da população da Gaivota de patas-amarelas (Larus michahellis) nidificante na ilha da Berlenga; ii) comparar a ecologia trófica entre duas colónias distintas de Pintainhos (Puffinus baroli), nas ilhas de Porto Santo e das Selvagens; iii) comparar a variação inter-anual da ecologia trófica dos Pintainhos da colónia da ilha de Porto Santo entre os anos de 2011 e 2012. Para tal foram avaliados os rácios isotópicos de δ15N e δ13C no sangue e em três tipos de penas (Primeira pena primária (P1), Oitava pena secundária (S8) e penas do peito), recolhidos durante a época de reprodução destas aves. No primeiro caso, as assinaturas isotópicas de δ15N e δ13C evidenciaram diferenças significativas entre os vários tecidos analisados, o que indica que as Gaivotas de patas-amarelas nidificantes na ilha da Berlenga alteraram a sua ecologia trófica ao longo do ano. No segundo caso, comprovou-se existir uma variação interpopulacional entre os Pintainhos nidificantes nas colónias de Porto Santo e das Selvagens quanto à sua ecologia trófica. Por fim, foram ainda encontradas diferenças significativas nos rácios isotópicos de δ13C nas amostras de sangue de Pintainhos recolhidas em dois anos consecutivos na colónia de Porto Santo, o que indica que os indivíduos desta colónia, possivelmente alteraram a sua área de alimentação durante a sua época de reprodução. Este trabalho confirma assim que as aves marinhas podem alterar as suas estratégias alimentares consoante as condições do meio em que estão inseridas, facto este que pode funcionar como indicador das condições ecológicas dos ecossistemas marinhos.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Corpo, Imagem, Tuberculose : uma investigação histórica e etnográfica sobre o Centro de Diagnóstico Pneumológico de Coimbra

Palavras-chave: Corpo,Visualização médica,Tuberculose,Doença,Centro de Diagnóstico Pneumológico de Coimbra

A presente dissertação de Mestrado em Antropologia Médica tem como propósito compreender o modo como a visualização do corpo humano se foi historicamente associando à produção de conhecimento biomédico sobre a saúde e a doença, o normal e o patológico. Em específico, nesta dissertação pretende-se compreender se o modo como o paciente experiencia corporalmente a tuberculose é (ou não,) influenciado pela forma como a biomedicina compreende e concebe a doença. O objeto de estudo escolhido para a realização da investigação em apreciação foi o Centro de Diagnóstico Pneumológico de Coimbra. Com as descobertas bacteriológicas obtidas nos finais do séc. XIX, que confirmariam o caráter contagioso da tuberculose, iriam-se conduzir a transformações ao estatuto social da tuberculose. De forma a combater o agente bacilífero, mas também os hábitos individuais nocivos que seriam (indiretamente) responsáveis pela expansão da tuberculose, a medicina no país teria nesse período quer uma ação cuidadora, mas igualmente de disciplina e controlo dos corpos tuberculosos. Para o pensamento médico, só através da obediência aos preceitos máximos da higiene poderia conduzir-se à libertação desse terrível flagelo. Nestes ideais se orientariam as políticas de prevenção e assistências produzidas no âmbito da obra antiturberculose dirigida por Bissaya Barreto no distrito de Coimbra. O organismo central responsável pela organização de toda a obra antituberculosa seria o Dispensário Central Antituberculoso do Pátio da Inquisição. O Centro de Diagnóstico Pneumológico de Coimbra (CDPC) corresponde ao último dos estabelecimentos implementados em Coimbra, originários no antigo Dispensário. Nesse sentido, ao estabelecer o CDPC como objeto de estudo, será possível esclarecer como o exercício da medicina, em Coimbra, no âmbito do tratamento da tuberculose, poderá se ter modificado desde o período das políticas de Bissaya Barreto até à atualidade, considerando as suas implicações futuras na construção de uma experiência individual com a tuberculose.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
O preço da arte: discursos da medicina, jornais e gamers sobre videojogos

Palavras-chave: Discursos,Gamers,Jornais,Psicologia,Videojogos

Os videojogos são ainda um tema de forte controvérsia nos meios de comunicação contemporâneos. A principal razão disso advém dos discursos criados no seio da medicina acerca dos seus potenciais efeitos nos utilizadores. Infelizmente, ainda não existe um consenso acerca de quais e quão extensos são, realmente. Não obstante, os jornais e outros meios de comunicação apresentam resultados e comentários dessas pesquisas. A linguagem que os mass media utilizam acerca da temática está, contudo, longe de ser parcial, sendo deformada por influências políticas e económicas, assim como pela falta, em termos gerais, de conhecimentos específicos acerca dos discursos médicos. Aliás, a presença da crítica ao entretenimento nos jornais não é uma coisa nova, tendo uma já longa história. Para se saber como os utilizadores de videojogos vêm esta realidade, e como criam os seus próprios discursos acerca do tema, realizou-se uma curta etnografia junto de um grupo de gamers em Aveiro. Concluiu-se que existe desconfiança para com o que é normalmente apresentado nos jornais, e uma tendência para racionalizar alguns dos perigos normalmente relacionados aos videojogos. Também se detectaram sinais que parecem indicar que alguns destes possíveis perigos não serão tão críticos com é normalmente retratado nos media noticiosos.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais
Estudo do gene PRKCG em doentes portugueses com ataxia dominante

Palavras-chave: Ataxia espinocerebelosa,Diagnóstico genético,Neurodegeneração

A ataxia espinocerebelosa tipo 14 (SCA14) é uma doença neurodegenerativa, com modo de transmissão  autossómico dominante, causada por mutações no gene PRKCG que codifica a enzima PKCγ. Caracteriza-se  clinicamente pela apresentação de ataxia progressiva da marcha e dos membros, disartria e alteração dos movimentos  oculares.  O presente trabalho teve por objectivo o rastreio de mutações na sequência codificante do gene PRKCG, bem como  de parte das respectivas sequências intrónicas flanqueantes, numa série de doentes portugueses com ataxia  espinocerebelosa. Este é o primeiro estudo da totalidade da sequência do gene, constituído por 18 exões, num grupo  de indivíduos portugueses.  Dos 60 doentes estudados, nos quais tinha sido excluída a presença de uma expansão CAG nos loci SCA 1, 2,  3/MJD, 6, 7, 17 e DRPLA, responsável pela maioria dos casos de ataxia espinocerebelosa, 54 correspondem a casos  índice de famílias com ataxia cerebelosa com transmissão dominante (ADCA) e, os restantes 6 casos não possuem,  aparentemente, história familiar da doença.  A pesquisa de mutações foi realizada por PCR e sequenciação directa dos produtos amplificados.  Em três dos casos índice familiares foram identificadas novas mutações na região reguladora, uma no exão 3 (no  sub-domínio C1A da PKCγ) e duas no exão 4 (em C1B). As mutações missense c.234C>A (p.His78Gln), c.319A>G  (p.Ser107Gly) e c.349T>A (p.Cys117ser) são descritas, pela primeira vez, neste trabalho.  Embora a análise de co-segregação da mutação com a doença nas famílias ainda não tenha sido concluída, para  duas destas mutações foi possível confirmar a sua segregação noutro elemento afectado da família. A avaliação da  causalidade das alterações detectadas, pela utilização de diversas ferramentas bioinformáticas, sugere um efeito  patogénico para as três mutações. Clinicamente, todos os casos identificados com mutações no gene PRKCG  detectadas neste estudo apresentam ataxia cerebelosa progressiva pura, com início tardio da doença.  O facto de 3 dos 54 casos de ataxia cerebelosa com transmissão dominante apresentarem mutações no gene  PRKCG sugere que no diagnóstico diferencial se efectue o rastreio da SCA14 em doentes com ADCA, nos quais não  foram detectadas as mutações responsáveis pelas SCAs mais frequentes.  Os resultados obtidos confirmam o domínio regulador C1 da PKCγ (com 80,6% do total de mutações descritas) mas,  especialmente, o C1B (64,5% do total) como um hot-spot mutacional. A pesquisa de mutações no gene PRKCG deverá  ser efectuada de forma sequencial, de acordo com a distribuição das mutações descritas no gene, iniciando-se pelo    2  rastreio dos exões 4 e 5 (sub-domínio C1B), sendo depois alargada aos exões 1, 2 e 3 (sub-domínio C1A e pseudo substrato), exões 10 (motivo rico em resíduos de glicina no domínio cinase C3) e 18 (domínio AGC-cinase C-terminal)  e, caso não sejam detectadas mutações, aos restantes exões do gene.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais