Desenvolvimento de um sistema de base lipidica para transporte e entrega de material genético a células de hepatocarcinoma

Palavras-chave: Hepatocarcinoma,Terapia génica

O hepatocarcinoma (HCC) tem origem nas principais células do fígado, os hepatócitos, sendo por isso considerado o cancro primário deste orgão. O hepatocarcinoma é o terceiro tipo de cancro que causa maior mortalidade a nível mundial. Actualmente, as opções primárias de tratamento do HCC consistem na recessão cirúrgica do tumor, no transplante de fígado e na quimioterapia, apresentando qualquer uma destas opções de tratamento múltiplas limitações. Assim sendo, existe uma necessidade urgente de desenvolvimento de novas estratégias antitumorais, direccionadas para o HCC, que apresentem uma elevada eficiência. A terapia génica tem contribuído significativamente para o desenvolvimento de estratégias antitumorais promissoras. Contudo, a sua aplicação clínica ainda se encontra bastante limitada, nomeadamente devido à reduzida eficiência de entrega de material genético às células alvo. Assim, a aplicação da terapia génica está dependente, em grande parte, do desenvolvimento de sistemas de entrega de material genético mais eficientes. O HCC é caracterizado pela sobreexpressão do receptor das asialoglicoproteínas (ASGP), que é expresso exclusivamente no fígado. A asialofetuina é um dos ligandos reconhecidos especificamente por este receptor. Deste modo, a utilização deste ligando em sistemas de transporte de material genético poderá permitir uma entrega eficiente e direccionada dos ácidos nucleicos no HCC. O principal objectivo deste trabalho consistiu em desenvolver um novo sistema de transporte e entrega de material genético, específico para células de hepatocarcinoma, baseado em lipossomas catiónicos, compostos por EPOPC (1-palmitoil-2-oleoil-snglicero- 3-etilfosfocolina) e Colesterol, e em asialofetuina. Os resultados obtidos, nos estudos de transfecção realizados na linha celular de hepatocarcinoma HepG2, mostraram que a associação de asialofetuina aos lipoplexos promove uma potenciação significativa da sua actividade biológica, nomeadamente para a formulação composta por EPOPC:Colesterol/ADN, na razão de carga (+/-) 2/1, contendo 10μg de asialofetuina/μg de ADN e para a formulação preparada com EPOPC:Colesterol/ADN, na razão de carga (+/-) 4/1, contendo 20μg de asialofetuina/μg de ADN. Este aumento substancial da actividade biológica dos lipoplexos, induzido pela associação de asialofetuina, foi verificado não apenas pelo aumento da expressão do transgene (quantificação da expressão da luciferase) mas também pelo aumento da percentagem de células transfectadas (quantificação das células que expressavam a proteína verde fluorescente). Os resultados obtidos mostraram também que a actividade biológica registada com os complexos preparados com asialofetuina, em células HepG2, foi superior à verificada com formulações que apresentaram, em diversos estudos, elevada actividade biológica em vários tipos de linhas celulares. O ensaio de protecção de material genético mostrou que a presença de asialofetuina nos lipoplexos resulta num menor acesso do brometo de etídeo ao ADN dos complexos, constituindo um indício da sua maior protecção. Na presença de galactose, que compete com a asialofetuína pela ligação ao receptor ASGP, verificou-se uma diminuição significativa da actividade biológica dos lipoplexos preparados com asialofetuina, não tendo sido, no entanto, observada uma redução da capacidade de transfecção para as outras formulações de complexos. Os resultados registados nos estudos de ligação e associação celular demonstraram que a presença de asialofetuina induz um aumento da ligação e da internalização dos lipoplexos nas células HepG2, sendo esse aumento parcialmente inibido pela presença de galactose. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram que estes lipoplexos, preparados com lipossomas catiónicos de EPOPC:Colesterol e asialofetuina, constituem um novo sistema de transporte e entrega de material genético que poderá ser de grande importância para o desenvolvimento de novas estratégias antitumorais contra o HCC.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais