Desenvolvimento e validação de novas metodologias anlíticas baseadas na MEPS/UHPLC-PDA para a determinação de antidepressivos em amostras de urina

Palavras-chave: Antidepressivos - efeitos colaterais

A descoberta dos medicamentos antidepressivos no final dos anos 50, tornou a depressão um problema médico passível de tratamento. Assim sendo, nas últimas décadas, a psicofarmacologia da depressão evoluiu muito rapidamente, surgindo novos fármacos antidepressivos, retratando-se num aumento de 240% no consumo destes. Contudo, apesar da eficácia antidepressiva e da semelhante gama de indicações, cada antidepressivo possui propriedades individuais, não só farmacodinâmicas como também farmacocinéticas, resultando num perfil de indicações clínicas diferente, assim como efeitos adversos e inclusivamente interações medicamentosas. Além disso, a sua possível aquisição de forma ilegal, contribui para os problemas de automedicação e aumento do risco de suicídio por parte dos indivíduos. Assim sendo, e face aos efeitos colaterais causados por estes medicamentos, torna-se crucial o desenvolvimento de metodologias analíticas que possibilitem a identificação e quantificação destes fármacos em matrizes biológicas de uma forma rápida, simples e económica. Neste sentido, surge o presente estudo cujo objetivo prende-se com a determinação de dois antidepressivos de classes diferentes, nomeadamente a fluoxetina, a clomipramina e os respetivos metabolitos ativos norfluoxetina e desmetilclomipramina, em amostras de urina. Foram utilizadas duas técnicas de preparação de amostra distintas, a microextração por sorvente empacotado (MEPS) e o QuEChERS (quick, easy, cheap, effective, rugged and safe), seguidas de análise por cromatografia líquida de ultra eficiência com detetor de fotodiodos (UHPLC-PDA). Foram avaliados neste trabalho os fatores que influenciam o desempenho da MEPS (tipo de sorvente, número de ciclos de extração, volume de amostra, pH da amostra, sistema de solventes e volume de eluição) e do QuEChERS (volume de amostra, solvente de extração, efeito salting out, etapa do clean up). As melhores condições de extração por MEPS foram obtidas usando um sorvente C18 como fase estacionária e 500 μL como volume de amostra de urina com 5 ciclos de extração. As análises dos extratos obtidos foram efetuadas com recurso a um sistema UHPLC-PDA, utilizando uma coluna analítica de fase reversa Acquity UPLC® HSS T3. A fase móvel utilizada consistiu numa mistura de acetonitrilo e uma solução aquosa de ácido fórmico a 0,1%, num gradiente de concentração ao longo da separação cromatográfica e com um fluxo constante de 250 μL/min. Relativamente à extração por QuEChERS as melhores condições foram adquiridas com 2 mL de amostra de urina e usando acetato de etilo como solvente de extração. Os extratos foram igualmente analisados utilizando o mesmo método cromatográfico descrito anteriormente. A validação dos métodos analíticos incluiu o estudo de vários parâmetros como a seletividade, linearidade, limiares analíticos, eficiência de extração, precisão e exatidão. Os métodos demonstraram ser seletivos para os compostos em estudo, uma vez que não foram detetados interferentes após a análise de amostras brancas de urina, com um desempenho aceitável em termos de linearidade, registando-se coeficientes de correlação (R2) acima de 0,996. Relativamente aos limites de deteção, estes mostraram-se igualmente satisfatórios com valores entre os 0,068 e 0,087 μg/mL para a MEPS, e entre 0,060 e 0,092 μg/mL para o QuEChERS. Quanto aos limites inferiores de quantificação, estes corresponderam à concentração mais baixa da curva de calibração (0,1 μg/mL). A extração evidenciou ser eficiente, tendo sido obtidas recuperações entre 99,4% e 107,1% para a MEPS e entre 93,7% e 102,2% para o QuEChERS. Por último, para avaliar a aplicabilidade dos métodos propostos, foram analisadas 12 amostras provenientes de pacientes em tratamento com os antidepressivos em estudo. As concentrações determinadas variaram entre 0,14 e 1,73 μg/mL para a MEPS e entre 0,13 e 1,58 μg/mL para o QuEChERS, permitindo assim evidenciar a capacidade dos dois métodos para identificar e quantificar este tipo de substâncias. Os métodos analíticos apresentados demonstraram ser eficientes, particularmente ao nível do tempo de análise, e suficientemente sensíveis para a deteção, identificação e quantificação da fluoxetina, clomipramina e respetivos metabolitos ativos em amostras de urina. De realçar, também, que a simplicidade das metodologias propostas torna-as compatíveis com a rotina analítica de um laboratório de toxicologia

Área científica: Ciências Médicas e da Saúde