Infertilidade equina : múltiplas fragilidades ou um "fado" do espermatozóide

Palavras-chave: Puro sangue lusitano,Antioxidantes,Égua Caballus,Sorraia,integridade cromatina (ADN)

As raças autóctones portuguesas de equinos estão representadas pelos Puro Sangue Lusitano (PSL), Garrano e Sorraia, sendo o PSL a que assume maior expressão. O Sorraia corresponde a um tipo equino com elevados níveis de consanguinidade que se encontra classificado como mantido de forma crítica. Para PSL e Sorraia, falta definir o padrão espermático e a capacidade dos seus espermatozóides (SPZ) suportarem as tecnologias de conservação ex situ. Além disto, os equinos são uma espécie de reprodução sazonal de dias longos não se sabendo, à nossa latitude, como varia a qualidade espermática ao longo do ano. Em produção animal, a predição do potencial de fertilidade do macho é importante contudo, em equinos, os exames tradicionais de avaliação da qualidade do esperma falham em detetar casos de subfertilidade e/ou infertilidade. Assim, constituíram objectivos deste trabalho avaliar: parâmetros do esperma, a sua capacidade para refrigeração e a fertilidade, em PSL e Sorraia; variações na qualidade devidas à sazão; e a aplicabilidade de outros exames como complemento ao espermograma sumário em garanhões. Para os PSL, utilizaram-se duas estratégias: colheita única/múltiplos garanhões (n=152) e múltiplas colheitas (n=371)/garanhão (n=9). Estas últimas foram comparadas com 113 ejaculados obtidos de 4 Sorraias. A sazonalidade foi avaliada sobre 589 ejaculados obtidos nos diferentes meses do ano, de 12 garanhões com diferentes índices reprodutivos, e analisados de acordo com 4 períodos: Setembro- Dezembro, Janeiro-Março, Março-Maio e Maio-Julho. Espermas obtidos de garanhões férteis e in(sub)férteis (n=53) permitiram estudar a presença, nos SPZ, de proteínas relacionadas com a hipótese SNARE de fusão de membranas, a ubiquitinação (n=29) à superfície dos SPZ, a funcionalidade das mitocôndrias (JC-1, n=210), a qualidade do ADN nuclear (TUNEL, n=165), a estabilidade (M540, n=77), a funcionalidade (HOS, n=94) e a integridade (eosina-nigrosina, n=309 e IP/SYBR 14, n=207) da membrana celular e do acrossoma (PSA-FITC, n=239) e a oxidação (C11BODIPY e TBARS, n=232) dos fosfolípidos de membrana. A oxidação lipídica foi também avaliada no plasma seminal (TBARSPS) e relacionada com os parâmetros referidos assim como com a actividade antioxidante total não-enzimática (TEAC) no PS e nos SPZ e com a integridade do ADN, avaliada, neste caso, pelo teste de dispersão da cromatina (SCDT), em PSL e Sorraia. No PSL, a mobilidade, morfologia e pH após colheita diferiram significativamente (P<0,05) entre “colheita única/múltiplos garanhões” e “múltiplas colheitas/garanhão” sem que se tenham observado efeitos da idade sobre os parâmetros avaliados. Contrariamente ao cavalo do Sorraia, que apresenta valores marginais e baixos índices reprodutivos, no PSL, os parâmetros do esperma são similares aos descritos para a generalidade das outras raças equinas. Para as duas raças autóctones foi notório o efeito do garanhão (P<0,05), enquanto fator individual de variação, sobre os parâmetros do esperma. Para a nossa latitude, observou-se a influência da sazão na modulação dos parâmetros seminais (P<0,05) observando-se, entre Março-Maio, superior qualidade espermática e entre Setembro-Dezembro, os valores de qualidade seminal mais baixos. A análise imunocitoquímica revelou a presença das proteínas sintaxina, VAMP, sinaptotagmina,Rab3a e NSF na região acrossómica dos SPZ assim como a presença de caveolina-1, proteína envolvida na organização de lipid rafts. Os garanhões in(sub)férteis apresentaram, nos seus ejaculados, uma percentagem de SPZ marcados para SNAREs e caveolina-1 significativamente inferior (P<0,001) ao observado nos animais de fertilidade comprovada. Um problema associado ao macho foi confirmado quando as éguas que tinham ficado vazias após inseminações com sémen de um macho com espermograma normal, foram beneficiadas com sucesso por um macho de fertilidade comprovada. A marcação da NSF, sintaxina e caveolina-1 parece útil na predição do potencial de fertilidade do garanhão. A utilização de vários marcadores da qualidade dos SPZ evidenciou também diferenças significativas nos ejaculados de animais férteis e in(sub)férteis, confirmando-se a melhor qualidade seminal durante a estação de reprodução, apesar da diversidade de populações espermáticas presentes em cada ejaculado. No conjunto das observações, os parâmetros PMS, vitalidade, morfologia, AI e integridade/estabilidade do ADN são modulados pelos parâmetros funcionais avaliados, excepto o teste HOST, contudo este revelou medir propriedades diferentes das dos métodos de exclusão de corantes. Os TBARS parecem situar-se dentro de níveis fisiológicos excepto no PS da raça Sorraia, uma vez que se observou um elevado nível de peroxidação lipídica coexistente com uma elevada atividade antioxidante não enzimática assim como com uma elevada percentagem de células com danos no ADN, conforme revelado pelo teste SCD. Os resultados sugerem alguma disfunção nos SPZ (ou na espermatogénese) desta raça, para além da observável ao nível morfológico e sugerem que a produção de ATP, nos SPZ, assente sobre a via glicolítica. A introdução dos testes HOS e SCDT na rotina laboratorial parece-nos útil na medida em que não necessitam de equipamento sofisticado e podem ser aplicados em condições de campo. Além disto, a marcação dos acrossomas e da superfície celular com marcadores moleculares pode constitur uma ferramenta útil na avaliação de casos de infertilidade idiopática em garanhões. Os resultados realçam, ainda, a importância do conhecimento do padrão espermático não só da raça mas do indíviduo em si mesmo de forma a maximizarem-se os índices reprodutivos. A interpretação de espermogramas efectuados na contra-estação deverá ser feita à luz dos valores próprios dos parâmetros espermáticos nesta altura do ano.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais