Estudo da contribuição das integrinas na motilidade de células de glioblastoma

Palavras-chave: Glioblastoma,Integrinas,Movimento celular

Introdução: O glioblastoma multiforme (GBM) constitui 50% dos tumores que invade o sistema nervoso central. As principiais caracteristicas do GBM são a elevada proliferação, angiogénese e a invasão local. Apesar dos avanços consideravéis relativamente aos mecanismos envolvidos na genética, biologia e no comportamento clínico, a patologia do tumor não está completamente compreendida. No entanto, até agora, não há uma estratégia terapêutica proporcione uma diminuição da invasão e proliferação tumoral nas células de GBM. Os principais objectivos deste trabalho foram avaliar: 1) a contribuição das integrinas numa linha celular de glioma humano, U-118, 2) a contribuição das integrinas na motilidade, proliferação e sobrevivência do GBM recorrendo a um bloqueador da expressão das subunidades das integrinas, Shikonin; 3) a existência de um efeito sinergístico entre a Shikonin e a temozolamida (TMZ), considerada o “gold standard” no tratamento do GBM. Métodos e Resultados: A expressão das integrinas foi avaliada através de western blot recorrendo a anticorpos específicos para as diferentes subunidade das integrinas. Tendo em conta as subunidades de integrinas mais expressas nas células de glioma U-118 , avaliou-se a sensibilidade que estas células possuem quando incubadas com o bloqueador da expressão das subunidades αV e β3, shikonin. Para além disso, determinou-se o efeito do mesmo na proliferação e apoptose das células através da quantificação do BrdU, iodeto de propidío e anexina V, respectivamente através de citometria de fluxo. Para observar a migração celular usou-se a técnica do Scracth nas celúlas U-118. Além disso, para complementar os resultados obtidos da apoptose e migração, observou-se a coloração nuclear com Hoechst 33344 e a faloidina para observar os filamentos de actina através de microscopia de fluorescência e confocal, respectivamente. A proliferação celular e apoptose foram determinadas através de um kit de BrdU/iodeto de propídeo. Para a identificação de apoptose inicial recorremos à marcação com anexina V. Relativamente à expressão das integrinas os nossos resultados demonstraram que a linha celular U-118 expressa maioritariamente as subunidades alfa V, beta 3 e alfa 5. Tendo em consideração este resultado, usou-se a Shikonin, um bloqueador da expressão das subunidades αV e β3, e verificou-se que possui um efeito citotóxico nas células U-118 e que ocorre uma diminuição da expressão das subunidades das integrinas, αV e β3. Portanto, avaliamos o efeito que a shikonin possui no crescimento e sobrevivência das células U-118. Os resultados demonstraram que a redução da expressão das integrinas é acompanhada pela redução das capacidades proliferativas e migratórias das células U-118, quando incubadas com a Shikonin e consequentemente induz a apoptose celular. Nas células U-118 sujeitas à incubação simultânea de shikonin com temozolomida, observou-se um efeito sinergístico entre os dois fármacos, sugerindo a possibilidade de usar a shikonin como agente quimioterapêutico em combinação com a temozolomida no tratamento do glioma. Conclusões: Neste trabalho, demostramos que as subunidades das integrinas, especificamente as subunidades αV e β3 possuem um papel importante na invasão, migração e proliferação das células de glioma. A shikonin aparenta ter um grande efeito modulador nas células de glioblastoma. O bloqueio da expressão das integrinas resulta numa alteração morfológica e comportamental durante a progressão tumoral. A shikonin bloqueia parcialmente a expressão das integrinas nas células do glioma. Para além disso, a shikonin induz apoptose e diminui a proliferação das células U-118. Os resultados obtidos do efeito sinergístico entre a shikonin e a temozolomida sugerem que a combinação de bloqueadores das subunidades das integrinas αV e β3 com a terapêutica convencional, poderá constituir uma estratégia futura para a inibição do crescimento e invasão tumoral para os tecidos que rodeiam o tumor.

Área científica: Ciências Médicas e da Saúde