Interferência da inibição do proteossoma com a via Wnt no cancro do ovário

Palavras-chave: Ovário,Cancro,Inibidores do proteossoma,β-catenina,Wnt

O cancro do ovário representa o cancro ginecológico com maior taxa de mortalidade em Portugal. O mau prognóstico explica-se pelo estádio avançado em que a maioria dos tumores é diagnosticada. Os tratamentos atualmente à disposição são de eficácia limitada uma vez que induzem o desenvolvimento de resistência e o seu sucesso a longo prazo é questionável, com a maioria das pacientes a desenvolver recorrências. No sentido de ultrapassar estas barreiras, foram testados novos fármacos, como é o caso dos inibidores do proteossoma, um complexo enzimático que regula o proteoma celular por degradação de proteínas desnecessárias ou anómalas. Os inibidores dos proteossomas revelaram desde o início grande eficácia em tumores hematológicos, mas o mesmo não se verificou na generalidade dos cancros sólidos, como é o caso do cancro do ovário. Esta diferença não parece ser facilmente explicada, pelo que o conhecimento das vias que intercetam a função do proteossoma pode ajudar a desvendar os mecanismos envolvidos. Neste trabalho abordámos a via Wnt/-catenina, uma via de transdução de sinal particularmente envolvida no cancro do ovário, cujo funcionamento é influenciado pelo proteossoma. Especificamente, o proteossoma regula os níveis citoplasmáticos de -catenina, limitando a sua transmigração nuclear e consequente ativação dos genes alvo. Como modelo recorremos à linha celular de cancro do ovário TOV-112D; o inibidor do proteossoma usado foi o MG262. Estudou-se o tipo de morte celular por citometria de fluxo com dupla marcação para a Anexina IV e iodeto de propídeo; avaliou-se o grau de inibição do proteossoma por citometria de fluxo após marcação celular com anticorpo dirigido a proteínas conjugadas com ubiquitina; analisou-se a ativação da via NF-KB por citometria de fluxo após marcação com anticorpo específico para o NF-KB livre, ativo; avaliou-se a ativação da via Wnt/-catenina quer por imunofluorescência, quantificando a transmigração nuclear da -catenina, quer quantificando a expressão de um dos seus genes alvo, o gene da ciclina D1 (CCND1) por qRT-PCR; para avaliar a interferência da inibição do proteossoma com a agressividade tumoral, analisaram-se a expressão da subunidade catalítica da telomerase, hTERT e a expressão do gene SNAIL, associado ao fenótipo de transição epitélio-mesênquima, também por qRT-PCR, e a mobilidade celular, pelo teste wound-healing e teste de migração em câmaras transwell. Após 48 horas de exposição ao inibidor do proteossoma MG262, houve uma diminuição da viabilidade celular dependente da concentração (P < 0.05). O IC50 para este composto foi obtido para a concentração de 14 nM (R2=0.9945), uma concentração muito superior à registada para as doenças hematológicas. O tipo de morte celular preferencial foi a necrose e apoptose/tardia necrose. A inibição proteossoma ocorreu para a concentração de 5 nM (P < 0.05) e inesperadamente, verificou-se uma activação da via NFκB (P < 0.01) desencadeada por esta inibição. Por sua vez, verificou-se um aumento da expressão da β-catenina ao nível do núcleo (P < 0.01). Contudo houve diminuição da expressão do gene alvo CCND1 (P < 0.05), atribuída a uma sobreposição do efeito inibidor da viabilidade celular do MG262. Também a análise do gene hTERT refletiu a diminuição da proliferação celular (P < 0.05). Para o gene SNAIL não foram observadas variações significativas (P < 0.05). Ocorreu ainda uma diminuição estatisticamente significativa (P < 0.001) do potencial de migração celular por exposição ao MG262. Em suma, foi verificada uma tendência para diminuição da viabilidade celular com o aumento da concentração do inibidor do proteossoma MG262. Também se constatou uma diminuição de expressão de genes relacionados com a proliferação celular, além de diminuição de capacidade migratória das células. No entanto, a inibição do proteossoma promoveu a ativação da via NFκB e a transmigração nuclear da β-catenina, o que pode explicar as elevadas concentrações necessárias para obter perda de viabilidade celular, e o tipo de morte celular verificado. Conclui-se que os efeitos dos inibidores do proteossoma sobre as vias Wnt/ β-catenina e NF-KB poderão constituir uma possível justificação para o seu fraco desempenho no cancro do ovário.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais