Embriogénese somática em genótipos de Quercus suber análise bioquímica e histológica de produtos de reserva

Palavras-chave: Calos embriogénicos,Embriogénese recorrente,Reguladores de crescimento,SDS-PAGE,Sobreiro

Quercus suber (sobreiro) é uma planta com um grande interesse económico devido à produção de cortiça, sendo Portugal o principal produtor. A propagação tradicional da espécie por técnicas de multiplicação vegetativa permite assegurar a propagação clonal, mas apresenta fortes limitações, pelo que têm sido desenvolvidos métodos para a propagação do sobreiro utilizando técnicas de cultura in vitro. Assim, a embriogénese somática foi induzida nesta espécie a partir de explantes de origem adulta. Primeiramente, calos embriogénicos obtidos num meio rico em auxinas (2,4-D e NAA) e citocininas (KIN e BAP) a partir de folhas obtidas por abrolhamento de estacas de diferentes árvores, foram subcultivados para um meio com menores concentrações de reguladores de crescimento (NAA e BAP), surgindo embriões somáticos em diferentes estádios aquando da cultura num meio sem hormonas. Os embriões somáticos primários têm capacidade de sofrer embriogénese recorrente em meios com NAA e BAP, ocorrendo a sua maturação num meio sem reguladores de crescimento. A combinação de reguladores de crescimento que deu melhores resultados foi 50 μM NAA + 10 μM BAP. Noutros genótipos, para os quais os calos já estavam previamente induzidos de acordo com o mesmo protocolo, obtiveram-se embriões somáticos em quatro estádios de desenvolvimento (desde um estádio precoce globular até um estádio cotiledonar bem desenvolvido), pelo cultivo num meio sem reguladores de crescimento com subculturas feitas a cada 6 semanas, e em condições de 16h luz:8 h escuro. Para compreender melhor o desenvolvimento dos embriões somáticos nesta espécie, analisaram-se bioquímica e histoquimicamente os níveis de compostos de reserva (proteínas, lípidos e amido) nos quatro estádios de desenvolvimento dos embriões, comparando com os valores obtidos para embriões zigóticos (cotilédones e eixos embrionários). Os resultados mostraram que o teor em reservas dos embriões somáticos era sempre inferior ao dos embriões zigóticos. Durante o desenvolvimento dos embriões somáticos o teor de reservas variava em função do estádio de desenvolvimento tendo-se verificado um aumento do teor de amido e proteína, enquanto no caso dos lípidos se verificou um valor constante, sendo o teor particularmente elevado na fase de calo embriogénico. Os perfis proteicos obtidos por SDS-PAGE das várias amostras de embriões somáticos e de eixos embrionários zigóticos mostraram uma maior expressão de determinadas bandas (60 kDa, 46 kDa e 26 kDa) em embriões mais desenvolvidos enquanto outrasapresentavam uma nítida redução (30 kDa, 40 kDa e 50 kDa). Verificou-se ainda que o perfil proteico encontrado em embriões somáticos maduros é semelhante ao perfil proteico originado por embriões zigóticos, embora com algumas diferenças que poderão explicar a dificuldade que os embriões somáticos têm em germinar. Os resultados mostraram ainda ser possível a obtenção de material embriogénico e não embriogénico a partir dos embriões somáticos, situação que permitirá no futuro a realização de estudos de proteómica e genómica entre os dois tipos de calo com o objetivo de identificar fatores envolvidos no controlo da embriogénese somática.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais