Avaliação da integridade da cromatina em espermatozóides humanos : relevância clínica

Palavras-chave: Infertilidade masculina,Integridade da cromatina,Método Diff-Quik

O estado da cromatina e os danos no ADN de espermatozóides podem ser detectados usando ensaios bem estabelecidos baseados em análises de microscopia de fluorescência e citometria de fluxo, por exemplo. Contudo, estes são morosos, envolvem protocolos elaborados e equipamentos sofisticados. O método de coloração Diff-Quik, já implementado para avaliação da morfologia espermática, demonstrou poder ser utilizado como um indicador do estado da cromatina em espermatozóides humanos de forma fácil, rápida e reprodutível em qualquer laboratório de andrologia. Assim, neste trabalho foi avaliado o estado da cromatina de espermatozóides humanos exclusivamente pelo método do Diff-Quik. A integridade da cromatina foi avaliada antes e depois da realização de uma técnica de migração de espermatozóides (swim-up), e o estado da cromatina desses espermatozóides migrados foi correlacionado com os resultados obtidos em diversos parâmetros clínicos relativos a técnicas de reprodução assistida (TRA). Os efeitos do varicocelo (um síndrome anatómico de varizes escrotais), a tomada de um antioxidante na dieta, e a idade do dador no estado da cromatina de espermatozóides foram também estudados. Os resultados obtidos mostraram o benefício da realização das técnicas de preparação de espermatozóides, onde se enquadra o swim-up, na selecção dos que apresentam uma melhor integridade da cromatina. Além disso, a análise dos resultados obtidos com TRA, também mostrou que a presença de danos na cromatina afecta a qualidade do embrião e a existência de uma gravidez clínica, assim como está associada a uma menor taxa de fertilização. Quando analisadas separadamente a fertilização in vitro (FIV) e a injecção intracitoplasmática de um espermatozóide (ICSI) verificou-se que a presença de danos na cromatina afectava a qualidade embrionária e a existência de uma gravidez clínica no caso das FIV, mas somente a qualidade do embrião nas ICSI. Tendo como base as observações do estado da cromatina dos espermatozóides e considerando os vários parâmetros clínicos estudados, a FIV mostrou possuir algumas vantagens em relação à ICSI, resultando num maior número (percentual) de gravidezes. Relativamente ao estudo do varicocelo, e apesar dos espermatozóides destes indivíduos possuírem mais danos na cromatina que os de indivíduos sem varicocelo, não foi verificado qualquer efeito na integridade da cromatina após a embolização, um VII procedimento utilizado para tratar este síndrome. Da mesma forma, o estudo do tratamento oral com antioxidantes, não resultou em efeitos positivos na integridade da cromatina dos espermatozóides após o tratamento. Tal sugere que a menor integridade da cromatina observada, neste caso, não será devido a stresse oxidativo ou que o número de amostras analisadas terá sido escasso. Foi também verificado que os indivíduos subférteis apresentam um aumento dos danos na cromatina a partir dos 35 anos, aparentando serem mais susceptíveis a alterações no ADN de espermatozóides a partir dessa idade. O método do Diff-Quik fornece assim informações úteis em vários aspectos clínicos, demonstrando ser uma mais valia na monitorização da integridade da cromatina em qualquer clínica de reprodução assistida.

Área científica: Ciências Exactas e Naturais