Les effets de l’Angiopoietin-like 2 sur la voie cytoprotectrice antioxydante Nrf2

L’angiopoietin-like 2 (angptl2) est une glycoprotéine de 64 kDa pro-inflammatoire et pro-athérogénique associée à divers maladies inflammatoires chroniques. Il est probable que l’angptl2 possède également un effet pro-oxydant, puisqu’elle stimule la production aigüe de dérivés réactifs oxygénés (DRO). Le facteur de transcription « nuclear factor (erythroidderived 2)-like 2 » (Nrf2) fait partie d’un mécanisme antioxydant majeur permettant de maintenir l’équilibre redox via l’induction de plusieurs gènes de l’élément de réponse antioxydante (ERA). En présence de DRO, la protéine Keap-1 se dissocie de Nrf2 et cesse de promouvoir sa dégradation protéasomale. Cette dissociation est stimulée par la protéine DJ-1 qui favorise la translocation nucléaire de Nrf2. La p38MAPK peut phosphoryler Nrf2 et promouvoir son interaction avec Keap-1. Nous avons posé l’hypothèse selon laquelle l’angptl2 causait un stress oxydant chronique, d’abord en stimulant en aigu la production de DRO, puis en inhibant la voie antioxydante Nrf2. Nous avons étudié, par immunobuvardage de type Western sur des cellules endothéliales en culture (HUVEC), les effets de l’angptl2 recombinante (100 nM) sur les niveaux protéiques nucléaires de Nrf2, les niveaux de Keap-1 dans le cytosol et de DJ-1 dans le noyau, en absence et en présence de l’antioxydant NAC (10 μM). Nous avons également étudié l’activation de la p38MAPK. Les niveaux nucléaires de Nrf2 n’ont pas été affectés par la stimulation aigüe (10 min) à l’angptl2 recombinante, mais ont été diminués par la stimulation chronique (24 h). L’ajout d’un agent antioxydant n’a pas altéré l’effet chronique, indiquant que les DRO ne sont pas directement impliqués. Les niveaux protéiques cytosoliques de Keap-1, protéine inhibitrice de Nrf2, et les niveaux nucléaires de DJ-1, protéine stabilisatrice de Nrf2, n’ont pas été affectés par l’angptl2 de manière significative. La phosphorylation de la p38MAPK n’a pas été non plus affectée par la stimulation aigüe ou chronique à l’angptl2. Ces données suggèrent que l’angptl2 n’a pas d’effet aigu, mais a un effet chronique inhibiteur sur la voie Nrf2, qui n’est pas associé à un effet sur Keap-1, DJ-1 ou p38MAPK. Angiopoietin-like 2 (angptl2) is a 64 kDa pro-inflammatory and pro-atherogenic glycoprotein associated with various chronic inflammatory diseases. It is likely that angptl2 also has a pro-oxidant property, since it stimulates the acute production of reactive oxygen species (ROS). The transcription factor nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (Nrf2) constitutes a major antioxidant mechanism, responsible for maintaining redox balance within the cell via the induction of various genes composing the antioxidant response element (ARE). In the presence of ROS, cytosolic protein Keap-1 dissociates from Nrf2 and is thus no longer able to target Nrf2 for proteasomal degradation. The interaction between Nrf2 and Keap-1 is inhibited by DJ-1, another regulator of Nrf2, but is favoured by phosphorylation of Nrf2 by p38MAPK. Our hypothesis was that angptl2 caused a chronic oxidative stress, at first by stimulating an acute ROS production, and later by inhibiting the Nrf2 antioxidant pathway. We studied, by Western Blot on cultured endothelial cells (HUVEC), the effects of recombinant angptl2 (100 nM) on nuclear protein levels of Nrf2, as well as cytosolic levels of Keap-1 and nuclear levels of DJ-1 in the absence and presence of the antioxidant NAC (10 μM). We also measured the activation of p38MAPK in response to angptl2 stimulation. Nuclear protein levels of Nrf2 were not affected by acute simulation (10 min) by recombinant angptl2, but were diminished after chronic stimulation (24 h). The addition of an antioxidant did not alter angptl2’s chronic effect on Nrf2, indicating that ROS were not directly implicated. Cytosolic levels of Keap-1 and nuclear levels of DJ-1 were not significantly affected by angptl2. Similarly, angptl2 did not affect p38MAPK phosphorylation. These data suggest that angptl2 has no acute effect on Nrf2, but has an inhibitory chronic effect, which is not likely to involve Keap-1, DJ-1 or p38MAPK.

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