Differential regulation of early response genes by fibroblast growth factor (FGF) 8 and  FGF18 in bovine granulosa cells in vitro

Les  « Facteurs de croissance des fibroblastes» (FGF) agissent comme des régulateurs locaux sur la qualité des follicules et sont connus pour promouvoir la prolifération des cellules de granulosa, réduire l’apoptose et la stéroïdogenèse. Parmi la sous-famille FGF8, FGF18 est une exception puisqu’il semblerait avoir une fonction pro-apoptotique alors que FGF8 n’a pas été jusqu’à présent rapporté comme altérant la viabilité des cellules de la granulosa. Ces deux ligands ont un mode d’activation similaire et il pourrait être proposé que toute la sous-famille FGF8 ait la même réponse. L’objectif de cette étude était de déterminer si FGF8 et FGF18 activaient la même réponse précoce de gènes dans des cultures de granulosa bovine. Pour répondre à cette question, nous avons cultivé des cellules de la granulosa dans du milieu de culture sans sérum pendant 5 jours. Le jour 5, les cellules ont été traitées avec FGF8 ou FGF18. Nous avons eu recours à une approche de « puce à ADN » afin d’identifier la réponse précoce de gènes induite par FGF8 et FGF18, et les données ont été confirmées par des PCRs en temps réel lors d’une expérience in vitro où les cellules de granulosa ont été traitées avec FGF8 et FGF18 pendant différents temps. L’analyse du puce à ADN a identifié 12 gènes surexprimés par FGF8, incluant SPRY2, NR4A1, XIRP1, BAMBI, EGR1, FOS et FOSL1. A l’inverse, FGF18 n’a régulé aucun gène de manière significative. Les analyses de PCR ont confirmé l’augmentation d’ARNm codant pour EGR1, EGR3, FOS, XIRP1, FOSL1, SPRY2, NR4A1 et BAMBI après 2 h de traitement. FGF18 a entrainé seulement une augmentation de l’expression de EGR1 après 2 h de traitement parmi tous les gènes testés. Ces résultats démontrent donc que FGF8 et FGF18, malgré leur similarité dans le mode d’activation de leurs récepteurs, agissent sur les cellules de la granulosa via différentes voies de signalisation. FGF8 et FGF18, sont donc tous les deux capables de stimuler l’expression de EGR1, mais les voies de signalisation induites par la suite divergent. Fibroblast growth factors (FGF) act as local regulators of follicular health and are known to increase granulosa cell (GC) proliferation, reduce apoptosis and decrease steroidogenesis. One exception is FGF18, which appears to be a pro apoptotic member of the FGF8-subfamily while FGF8 has not been reported to alter GC health. These two ligands have similar activation patterns and it could be proposed that all FGF8-subfamilies would have the same response. The objective of this study was to determine if FGF8 and FGF18 activate the same early response genes in cultured bovine GC. To address this we cultured GC in serum free medium for five days. On day 5, cells were challenged with FGF8 or FGF18. We used a microarray approach to identify early response genes altered by FGF8 and FGF18, and data were confirmed by real-time PCR in an independent time-course experiment.  Microarray identified 12 genes up-regulated by FGF8, including SPRY2, NR4A1, XIRP1, BAMBI, EGR1, FOS and FOSL1.  In contrast FGF18 did not result in significant regulation of any gene. PCR analysis confirmed the stimulation of abundance of mRNA encoding EGR1, EGR3, FOS, XIRP1, FOSL1, SPRY2, NR4A1 and BAMBI after 2 hours of challenge. FGF18 resulted in an increase of EGR1 mRNA abundance at 2 h, but not of the other genes tested. These results demonstrate that FGF8 and FGF18, despite reportedly similar receptor activation patterns, act on granulosa cells through different intracellular pathways.  Both FGF8 and FGF18 stimulate EGR1 expression, but thereafter their signaling pathways diverge.

Keyphrases: EGR1, cellules de la granulosa, prolifération, apoptose, facteurs de croissance des fibroblastes, granulosa cells, fibroblast growth factors, EGR1, proliferation, apoptosis