Régulation de l'expression des immunoglobulines au cours du développement lymphocytaire B tardif

Le processus aleatoire des recombinaisons V(D)J permet d’obtenir un repertoire d’anticorps (Ac) ou immunoglobulines (Ig) hautement diversifie. En revanche, le caractere imprecis des jonctions V(D)J conduit a l’apparition de decalages du cadre de lecture dans deux tiers des cas. Ainsi, la plupart des cellules B hebergent des alleles d’Ig avec des rearrangements V(D)J non-productifs au sein de leur genome. Plusieurs etudes incluant celles menees au laboratoire ont montre que ces alleles non-productifs sont transcrits mais subissent une regulation post-transcriptionnelle impliquant le mecanisme de degradation des ARNm appele NMD « Nonsense-Mediated mRNA Decay ». Cette surveillance ARN diminue ainsi le taux d’ARNm codant pour des chaines d’Ig tronquees. En revanche, l’impact de l’epissage alternatif des transcrits d’Ig non-productifs sur la production d’Ig aberrantes reste jusqu’ici peu explore. L’etude de ce processus appele NAS (« Nonsense-associated Altered Splicing »), et en particulier du phenomene de saut d’exon, presente un grand interet car cet epissage alternatif peut permettre la synthese d’Ig tronquees presentant des deletions internes. Les projets developpes lors de cette these ont revele la toxicite des chaines d’Ig depourvues de domaine variable (V) dans les plasmocytes, et mis en evidence l’existence d’un nouveau point de controle au cours de la differenciation plasmocytaire. Ce phenomene nomme TIE-checkpoint (Truncated-Ig Exclusion) conduisant a l’elimination des plasmocytes exprimant des Ig tronquees, est la consequence d’un saut d’exon lors de l’epissage des transcrits Ig non-productifs. Pour etudier les evenements de NAS lors de l’epissage des transcrits d’Ig dans les plasmocytes, il faut par consequent limiter l’activation du TIE-checkpoint. A l’aide d’un modele murin presentant un exon non-sens additionnel au locus IgH, nous avons pu analyser in vivo l’epissage alternatif par « saut d’exon » des transcrits d’Ig non-productifs. En effet, l’elimination de cet exon addtionnel aboutit a la synthese d’une chaine d’Ig normale et non a la production de chaines tronquees. Cette etude a ete menee dans des cellules B primaires et des plasmocytes. Les resultats obtenus ont revele que l’hypertranscription des genes d’Ig, qui accompagne la differenciation plasmocytaire, favorise l’epissage alternatif des transcrits d’Ig non-productifs, par un phenomene de saut d’exon. Nous avons egalement etudie les eventuelles connexions entre le mecanisme de NMD, implique dans la surveillance des ARNm, et l’UPR (« Unfolded Protein Response ») permettant de reguler l’homeostasie proteique dans les plasmocytes. De facon originale, nous avons identifie une boucle de regulation positive entre les processus de surveillance ARN (NMD) et proteique (UPR, autophagie, proteasome). La mise en evidence de cette cooperation dans les plasmocytes constitue un exemple unique au vue de la litterature et, aurait pour effet de limiter la synthese d’Ig tronquees tout en autorisant la synthese massive d’Ig. Enfin, nous avons etudie le role de l’epissage des transcrits d’Ig non-codants (appeles transcrits I « germinaux ») au cours du processus de CSR « Class Switch Recombination ». Cette etude a apporte des precisions sur le role des sites donneurs d’epissage des exons I et revele que la reconnaissance de ces sites d’epissage module l’intensite de la transcription de la region « switch » S adjacente, et par consequent, son accessibilite a AID « Activation-Inducedcytidine Deaminase » lors de la CSR.