Identification d'un facteur cellulaire interagissant avec la proteine UL24 du virus de l'Herpés Simplex 1.

Le gene u/24 du virus de l'herpes simplex 1 (VIIS-1) est conserve parmi les membres de la famille des Herpesviridae. La proteine multifonctionnelle UL24 est importante pour la replication en culture cellulaire et in vivo dans un modele murin d'infection oculaire. Un virus deficient en UL24 demontre des plages de lyse syncytiales ou les membranes des cellules infectees tusionnent de maniere aberrante. D'une part, le domaine N-terminal de la proteine est hautement conserve parmi les orthologues d'UL24. Lorsque ce domaine est exprime seul, il se localise au noyau el il a ete demontre qu'il etait suffisant pour induire des modifications au nucleole causees par le VHS-1. D'autre part, le domaine C-terminal, faiblement conserve, se localise dans le cytoplasme et dans l'appareil de Golgi lorsqu'il est exprime seul. Dans cette etude, notre hypothese est que la partie C-terminale de la proteine UL24 interagirait avec des proteines cellulaires qui interviendraient dans le role de la proteine dans le cytoplasme. Afin de tester cette hypothese, un criblage double hybride chez la levure a ete effectue. Pour cela, la partie C-terminale d'UL24 (aa 190-269) a ete utilisee comme appât pour cribler une librairie de proteines provenant de cellules HeLa S3. Sur 9xl 07 clones cribles, quatre clones remplissaient tous les criteres d'interaction. Les sequences de ces clones correspondaient toutes, en partie ou en totalite, a la sequence codante de la forme mature de la proteine ClQBP. CIQBP est une proteine multifonctionnelle qui se localise dans le cytoplasme et dans le noyau et qui joue plusieurs roles dans differentes infections virales. L'interaction de la forme mature de CIQBP avec la forme entiere de la proteine UL24 a ete confirmee dans le systeme double hybride. Par la suite, des essais de co-immunoprecipitation dans des cellules HeLa infectees avec le virus ont montre que C 1 QBP est presente lorsqu'on precipite UL24. Des essais d'immunofluorescence indirecte et microscopie confocale ont par ailleurs montre que les deux proteines colocalisent dans le cytoplasme des cellules HeLa et des cellules HFF. On a voulu ensuite determiner l'importance de Cl QBP lors de l'infection par le VHS-1. Pour cela, une reduction de l'expression de C 1 QBP par une approche d'interference ARN a ete realisee. La diminution de l'expression de ClQBP ne semblait pas affecter ni la replication ni la dissemination du virus en culture cellulaire. Des etudes supplementaires sont necessaires pour caracteriser l'interaction entre UL24 et CIQBP et comprendre son role lors de l'infection par le VHS-1 in vitro et in vivo. Abstract The herpes simplex virus (HSV-1) gene u/24 is conserved among ali llerpesviridae family members. The multifunctional UL24 protein is important for viral replication in vitro as weil as for pathogenesis in a mouse madel of ocular infection. Mutations in the u/24 gene also lead to syncytial plaques in infected cells. The N-terminal domain of UL24 is highly conserved among orthologs of the protein. This domain is located in the nucleus when expressed alone, and is sufficient to induce nucleolar modifications. Little is known about the role of the C-terminal domain of UL24, which is poorly conserved. When expressed alone, this part of the protein is found in the cytoplasm and the Golgi apparatus. In this study, we hypothesized that the Cterminal domain of UL24 can interact with cellular factors involved in cytoplasmic functions of the protein. To test this hypothesis we performed a yeast two-hybrid screen using the C-terminal domain of UL24 (aa 190-269) as hait to screen a HeLa S3 cell library fused to the GAL4 activation domain. From a total of9xl07 transformants screened, four clones fulfilled the criteria for interaction of gene products. The gene sequences of these clones ail corresponded to the coding sequence of the mature form of ClQBP. ClQBP is a multifunctional protein located in the cytoplasm and nucleus and has been shawn to play a role in different viral infections. We confirmed the interaction between the full length UL24 protein with the mature form of Cl QBP in the yeast two-hybrid system. Co-immunoprecipitation assays showed that the two proteins interact in infected HeLa cells. Indirect immunofluorescence studies also demonstrated the colocalization of UL24 and Cl QBP in the cytoplasm of infected HeLa and HFF cells. Next, we wanted to test the importance of ClQBP in HSV-1 infection. By an siRNA approach, we reduced the level of ClQBP expression in HeLa cells. We infected these cells with the strain KOS at low and high multiplicities of infection. We observed that the knock-down of ClQBP reduced neither viral replication nor dissemination in cell culture. Further studies are needed to characterize the UL24-C1QBP interaction and to investigate its role in HSV-1 infection bath in vitro and in vivo.