Inactivation virale par méthodes physiques

Les profils de viabilite sur surface, de virus non enveloppes : murine minute virus (MVM), coxsackievirus B4 (CVB4), virus simien 40 (SV40), et de virus enveloppes : virus de grippe A (H1N1), et virus herpes simplex de type 1 (HSV-1), ainsi que la resistance a la chaleur et aux ultraviolets C (UVc) de ces virus ont ete etudies.Pour determiner la viabilite de MVM, CVB4, H1N1 et HSV-1 sur surface, 50 µL de suspension virale ont ete deposees sur des couvercles de boites de Petri et seches sous un flux d’air avant d’etre recuperes et titres sur des lignees cellulaires appropriees. Les virus enveloppes ont persiste moins de 5 jours alors que CVB4 et MVM restent infectieux pendant plusieurs semaines. Cependant, les cycles repetes de sechage et de remise en suspension ont eu un effet plus virucide sur CVB4 que sur H1N1 et HSV-1. Aucun effet des repetitions de ces cycles n’a ete observe sur le titre infectieux du MVM. Quand il est expose au sechage, les concentrations initiales d’albumine de serum bovin, de serum de veau fœtal et de chlorure de sodium, ont un impact sur la survie de CVB4. Dans un milieu riche en proteines, CVB4 a ete plus facilement inactive par le sechage, alors qu’en presence de chlorure de sodium le pouvoir virucide du sechage a ete reduit. Ces resultats montrent que la resistance des virus vis-a-vis du sechage, n’est pas due a une heterogeneite de populations virales, mais peut etre influencee par la composition du milieu et la concentration des composants.Nous avons evalue la resistance thermique de MVM, CVB4, H1N1 et HSV-1 contenus dans des gouttelettes. Quatre microlitres de suspension virale ont ete deposes sur une surface chauffee et exposes a des temperatures comprises entre 70 et 130°c pendant 0 a 90min, selon le virus, avant d’etre titres. Clairement, MVM a ete plus resistant que H1N1, lui-meme plus resistant que HSV-1 et CVB4. Pour la premiere fois, l’inactivation de particules virales contenues dans des gouttelettes exposees a des temperatures superieures a 100°C a ete etudiee. Il apparait que le chauffage peut provoquer un effet plus rapidement virucide que decrit precedemment.La resistance aux UVc (254nm) de MVM, CVB4, H1N1, HSV-1 et SV40 contenus dans des gouttelettes a ete evaluee. Les virus a ADN double brins (HSV-1 et SV40) restaient infectieux apres une exposition a 60mJ/cm² d’UVc, tandis que les virus a ARN (H1N1 et CVB4) et un virus a ADN simple brin (MVM) ont ete totalement inactives par une exposition inferieure ou egale a 35mJ/cm² d’UVc. De plus l’effet des UVc combine a la chaleur sur la viabilite de MVM a ete determine. Le titre infectieux de MVM, contenu dans une gouttelette a ete totalement inactive apres une exposition a 27mJ/cm² d’UVc. Le chauffage (20s a 100°C) a provoque une reduction moderee du titre viral de MVM (-1.8 log10TCID50), alors que le chauffage suivi par une exposition a 17mJ/cm² d’UVc entraine une inactivation complete.En conclusion, nos etudes montrent que les virus peuvent persister pendant des jours voire des semaines sur une surface hydrophobe. Le profil de resistance des virus vis-a-vis du sechage, n’est pas du a une heterogeneite de populations virales, comme l’ont montre les resultats obtenus avec CVB4. De plus, dans la mesure ou la composition du milieu joue un role dans la viabilite des virus exposes au sechage, la persistance des virus devrait etre etudiee dans des milieux naturels plutot que dans des milieux definis. L’impact de temps d’exposition courts a la chaleur sur les virus contenus dans de petits volumes de suspension a ete determine. La resistance thermique de H1N1 jusqu’a 100°C, superieure a celle d’HSV-1, un autre virus enveloppe, et a celle de CVB4 un virus non-enveloppe a ete observee. Une inactivation virale efficace peut etre obtenue en combinant une exposition aux UVc et a la chaleur comme le montrent les resultats obtenus avec MVM.