Epidemiología y caracterización de mecanismos de resistencia a carbapenems en pseudomonas aeruginosa de muestras clínicas y de portadores fecales

P. aeruginosa es un patogeno oportunista y nosocomial que causa graves infecciones con una elevada tasa de mortalidad especialmente en pacientes inmunodeprimidos. Los aislados multirresistentes, suelen presentar resistencia frente a beta-lactamicos, aminoglucosidos y quinolonas. Ademas se han descrito clones epidemicos de alto riesgo como, el ST111, ST175 o el ST235, detectados en hospitales y sobretodo en las Unidades de Cuidados Intensivos (UCI). La elevada prevalencia de cepas de P. aeruginosa multirresistentes es un problema de salud publica a nivel mundial, debido a la limitacion de las opciones terapeuticas. Actualmente, el incremento del uso de carbapenems ha propiciado la aparicion de resistencias frente a esta familia de antibioticos por adquisicion de diferentes mecanismos de resistencia, como hiperproduccion de la betalactamasa AmpC, bombas de expulsion activa, alteracion o perdida de proteinas de la membrana (como la porina OprD) y produccion de carbapenemasas de clase A y de clase B o metalobetalactamasas (MBL). Este ultimo, es el que mas preocupa ya que se ha descrito la presencia de genes codificantes de carbapenemasas en elementos geneticos moviles, lo cual favorece su diseminacion. El primer objetivo de esta tesis fue caracterizar los mecanismos de resistencia a carbapenems en aislados procedentes de muestras del tracto respiratorio superior recogidas durante un ano (Febrero 2013-2014) en el Servicio de Microbiologia del Hospital Clinico Universitario Lozano Blesa de Zaragoza. Asi se analizaron 164 muestras procedentes de 160 pacientes. Se detecto una elevada prevalencia en el tracto respiratorio inferior de P. aeruginosa productoras de MBL entre los aislados resistentes a carbapenems (52%), porcentaje que ha aumentado en los ultimos anos. El unico gen codificante de carbapenemasas detectado ha sido blaVIM-2 siempre asociado al clon de alto riesgo ST235. La alteracion de la proteina OprD asociada con la presencia codones de finalizacion prematuros, inserciones o deleciones fue el principal mecanismo de resistencia a imipenem detectado en nuestros aislados, aunque se evidencio un elevado polimorfismo en el gen oprD de nuestras cepas, lo que puede estar relacionado con la sensibilidad variable a carbapenems que presentaron los aislados no productores de MBL. La diseminacion del gen blaVIM-2 a traves de integrones de clase 1, la mayoria de los cuales incluian al mismo tiempo genes de resistencia a aminoglucosidos, es preocupante, ya que estos elementos geneticos moviles constituyen una forma muy efectiva de diseminacion de multiples mecanismos de resistencia. La mayoria de nuestros aislados presentaron el genotipo de virulencia exoU+/exoS- . Los clones de alto riesgo detectados en nuestro hospital han sido ST235 y ST175, siendo el primero claramente mayoritario. El segundo objetivo de esta tesis fue estudiar la prevalencia de P. aeruginosa en muestras fecales de ninos, asi como analizar la sensibilidad antibiotica en dichos aislados. Para ello, se recogieron cepas de P. aeruginosa de muestras de heces procedentes de menores de 15 anos durante 5 meses (junio-octubre 2013), en las que no se aislo ningun enteropatogeno. Durante estos 5 meses se recibieron 790 muestras de ninos menores de 15 anos (una muestra por nino). Hemos detectado una baja prevalencia (5,32%) de colonizacion intestinal por P. aeruginosa en ninos no hospitalizados, inferior a la prevalencia detectada en otros estudios. Ningun aislado presento multirresistencia ni se encontraron cepas con fenotipo de carbapenemasa de clase A o MBL. Unicamente uno de los aislados fue resistente a imipenem, siendo la aparicion de un codon de finalizacion prematuro en la proteina OprD la posible responsable de esta resistencia. No se detecto la presencia de inserciones o deleciones en esta proteina, aunque se evidencio un alto grado de polimorfismo en el gen oprD en esta coleccion de cepas. Tampoco se detecto la presencia de integrones de clase 1. El genotipo mayoritario de virulencia detectado en los portadores fue exoU-/exoS+ aunque el genotipo exoU+/exoS- se identifico en un numero elevado de aislados. Se ha evidenciado una elevada variabilidad clonal, describiendose nuevas combinaciones alelicas. Dentro de ellas se han encontrado algunas previamente descritas como clones intercontinentales (ST244), nosocomiales y relacionadas con pacientes con fibrosis quistica (ST274, ST313), y finalmente algunas de ellas tambien habian sido descritas en portadores sanos. No se detectaron clones de alto riesgo (ST111, ST175 o ST235) entre las cepas procedentes de portadores fecales.