Lymphocytes B mémoire dans la réponse humorale anti-­HLA en transplantation d'organe

Les alloanticorps anti-HLA sont diriges vis-a-vis de differents epitopes des molecules du systeme HLA. Cette immunisation survient lors d'une transplantation d'organe, de transfusions sanguines ou d'une grossesse. On retrouve aussi ces anticorps, lorsque les techniques de detection sont sensibles, en l'absence de tout evenement immunisant. En transplantation d'organe, renale en particulier, la presence d’anticorps anti-HLA, du fait des lesions de rejet humoral qu'ils induisent, constitue une des premieres causes de perte de fonction des greffons a moyen et long terme. Neanmoins, les cellules lymphocytaires qui sont la source de ces anticorps anti-HLA demeurent mal identifiees.Dans la premiere partie de ce travail, nous avons etudie, dans une cohorte de patients en attente de transplantation renale, la distribution des differentes sous-populations lymphocytaires B circulantes par cytometrie de flux en relation avec la nature des evenements immunisants vis-a-vis du systeme HLA, la presence et la diversite des anticorps anti-HLA. Nous avons etudie en parallele les concentrations seriques de BAFF ("B cell activating factor belonging to the TNF family"), principal facteur implique dans la survie et la differenciation des lymphocytes B matures. Nous avons retrouve une association entre la presence et la diversite des anticorps anti-HLA, et l'augmentation de la proportion de lymphocytes B naifs actives Bm2, par rapport aux autres sous-populations lymphocytaires B, et independamment de l'existence d'evenements immunisants. Les concentrations seriques de BAFF etaient egalement associees positivement a la presence et a la diversite des anticorps anti-HLA. Ces donnees suggerent que l'augmentation des lymphocytes B naifs actives et des concentrations seriques de BAFF favorise le developpement des anticorps anti-HLA a la suite d'un evenement immunisant. A l'instar du mecanisme evoque en auto-immunite, BAFF pourrait intervenir en presence de l'alloantigene en favorisant la survie de clones B alloreactifs.Dans la deuxieme partie de notre travail, nous nous sommes interesses plus particulierement a l'implication des lymphocytes B memoire alloreactifs dans la reponse humorale anti-HLA. Pour detecter les lymphocytes B memoire circulants, nous avons utilise un test de stimulation polyclonale permettant leur differenciation en plasmablastes puis nous avons recherche et etudie la specificite des anticorps anti-HLA produits dans les surnageants de culture. Un premier resultat important a ete la possibilite de detecter, chez les patients presentant des anticorps anti-HLA, des lymphocytes B memoire alloreactifs circulants plusieurs annees apres un evenement immunisant. En deuxieme lieu, la presence de ces lymphocytes B memoire etait associee au nombre d'evenements immunisants. En effet, les patients ayant developpe, en l'absence d'evenement immunisant des anticorps anti-HLA - dont nous montrons par ailleurs le caractere potentiellement pathogene - n'ont pas presente de lymphocytes B memoire alloreactifs circulants. Enfin, a l'aide du logiciel HLAMatchmaker, nous avons montre que les anticorps produits par les lymphocytes B memoire etaient diriges contre un nombre restreint d'epitopes partages par plusieurs antigenes HLA, ce qui suggere une oligoclonalite du contingent B memoire alloreactif. Chez les memes patients, les anticorps anti-HLA circulants presentaient une diversite de specificite plus large, etant diriges contre de multiples epitopes HLA. Ces resultats suggerent l'existence d'au moins deux types de reponse humorale vis-a-vis des alloantigenes HLA : l'une aboutissant a la production de lymphocytes B memoire et de plasmocytes a la suite d'une reaction de centre germinatif T-dependante, l'autre impliquant seulement des plasmocytes, possiblement issus de reponses extra-folliculaires. Les facteurs orientant vers l’un ou l’autre type de reponse sont encore mal definis mais pourraient impliquer la dose et la voie d'exposition aux alloantigenes.