CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA DE BACTÉRIAS PSICROTRÓFICAS DE TANQUES DE REFRIGERAÇÃO DE LEITE E FORMAÇÃO DE BIOFILME POR Pseudomonas fluorescens E Staphylcoccus aureus EM AÇO INOXIDÁVEL

Bacterias psicrotroficas multiplicam-se no leite cru quando armazenado sob temperatura de refrigeracao por periodos prolongados. Dentre as fontes de contaminacao destacam-se as falhas nos procedimentos de higienizacao de superficies e equipamentos, como tanques de resfriamento de leite, que favoreceram a adesao e formacao de biofilme por bacterias psicrotroficas, que apresentam como caracteristica relevante na deterioracao de alimentos pela producao de enzimas hidroliticas termorresistentes (proteases, lipases e lecitinase). A expressao das enzimas hidroliticas alem da formacao de biofilme e resistencia a agentes antimicrobianos e controlada pelo sistema de autoinducao ou quroum sensing que, em bacterias Gram-negativas como Pseudomonas fluorescens e Serratia liquefaciens e regulado pela homoserina lactona acilada (AHL) sendo que, em bacterias Gram-positivas como Staphylococcus aureus essa regulacao ocorre pela sintese de peptideos. Pelas observacoes relatadas objetivou-se com esta pesquisa: isolar, identificar e caracterizar, quanto a capacidade de produzir enzimas hidroliticas, bacterias psicrotroficas de tanques coletivos de resfriamento de leite; determinar a susceptibilidade dos isolados identificados a agentes antimicrobianos; detectar a producao de homoserina lactona acilada em estirpes de S. liquefaciens e P. fluorescens e avaliar a formacao de biofilme em aco inoxidavel por S. aureus e P. fluorescens em condicoes de monocultivo e cultivo combinado e determinar a atividade proteolitica das celulas aderidas. Foram amostrados por meio de swabs estereis 100 cm2 do fundo, 100 cm2 da parede e 100 cm2 da pa de homogeneizacao de tanques, seguido de diluicoes seriadas e plaqueamento em agar triptona de soja (TSA), com incubacao a 7o/7-10 dias, em seguida os isolados foram submetidos a testes bioquimicos utilizando-se kits de identificacao: Bactray I e II e API20NE. Para determinacao da atividade das enzimas hidroliticas utilizou-se o teste de difusao em agar. Em seguida, foram selecionadas 2 isolados de P. fluorescens e 6 isolados de S. liquefaciens para avaliar a producao de AHL, utilizando Agrobacterium tumefaciens A136 como estirpe monitora. Os isolados foram estriados paralelos a estirpe monitora em placa contendo agar luria-bertani suplementado com 50 ug/mL de X-Gal e incubados a 28oC/24 horas. A formacao de biofilme por S. aureus e P.fluorescens foi avaliada sob condicoes de monocultivo e cultivo combinado, alem da determinacao da atividade proteolitica das celulas aderidas. Foi observada grande diversidade bacteriana entre os isolados com predominância de Pseudomonas sp. dentre aqueles identificados pelo API20NE e de Serratia sp. dentre as bacterias identificadas pelo Bactray I e II, a atividade proteolitica foi mais pronunciada entre todos os isolados, seguida da atividade lipolitica e da lecitinase. A multirresistencia aos antiboticos testados foi observada em 100% dos isolados. A producao da molecula sinalizadora foi observada em todas os isolados. Houve formacao de biofilme no monocultivo e cultivo combinado por P. fluorescens e S. aureus, sendo que, nas duas condicoes S. aureus apenas aderiu a superficie de aco inoxidavel. A atividade proteolitica foi detectada com mais intensidade em P. fluorescens sendo dependente da alta densidade celular indicando a importância do sistema de quorum sensing em bacterias psicrotroficas.