Rôle de la Tétraspanine Co-029/TSPAN8 dans le processus métastatiquedans le cancer du côlon

Ce travail porte sur la tetraspanine Co-029/Tspan8 et son role dans la progression tumorale dans le cancer du colon. Les tetraspanines constituent une famille de glycoproteines membranaires qui ont la propriete de s’associer directement a d’autres proteines membranaires pour former des complexes primaires. Ces complexes primaires s’assemblent ensuite pour former des complexes d’ordre secondaire realisant ainsi une compartimentation membranaire, appelee « Tetraspanin Web » ou microdomaines enrichis en tetraspanines. De nombreuses etudes cliniques et experimentales ont etabli une correlation entre le niveau d'expression de certaines tetraspanines et la progression tumorale, notamment la formation de metastases.L’objectif de ce travail etait de faire avancer la comprehension du mecanisme par lequel la tetraspanine Co-029/Tspan8 peut moduler l’action d’autres molecules de surface comme des recepteurs de facteurs de croissance ou des molecules d’adherence sur la migration cellulaire, necessaire a l’invasion et au processus metastatique. Nous avons utilise comme outils cellulaires, des lignees n’exprimant pas ou peu de Co-029/Tspan8 et les memes lignees transduites exprimant fortement cette tetraspanine. Nous avons identifie de nombreux partenaires de Co-029/Tspan8 par co-immunoprecipitation, pontage covalent et spectrometrie de masse (SM), en particulier EGFR, CD44 et ECE1.L’EGFR dans les cellules inhibe la migration cellulaire seulement quand Co-029/Tspan8 est exprime, ce qui a ete demontre par l’inhibition d’expression par ARN interference ou l’utilisation des inhibiteurs de l’EGFR comme AG-1478 ou le Cetuximab. Cet effet est supprime soit par la double inhibition d’EGFR et Co-029/Tspan8 ou par traitement simultane avec l’anticorps anti-Co029. Nous avons observe, d’une part une nette augmentation de l’association d’EGFR aux complexes a tetraspanines en presence de Co-029/Tspan8 et, d’autre part une augmentation de la phosphorylation d’EGFR (pEGFR) suggerant un mecanisme possible impliquant la signalisation de ce recepteur.Nous avons egalement observe que l’effet de CD44 sur la migration de cellules isolees est dependante de Co-029/Tspan8. Comme de nombreux types de tumeurs, ainsi que leurs metastases expriment des niveaux eleves de variants de CD44 tels que le cancer gastro-intestinal ou le cancer du sein, nous avons etudie les isoformes de CD44 associees au Co-029/Tspan8. Nous avons retrouve les peptides des exons variables v8-v10 de CD44 par immunoprecipitation de CD44 sur notre modele cellulaire exprimant Co-029/Tspan8 apres analyse en spectrometrie de masse. CD44 v8-v10 correspond a des produits des 3 derniers exons de la region variable de CD44. D’autre part, pour etudier si l'effet de CD44 pouvait etre medie par une interaction avec EGFR, nous avons mesure le niveau de pEGFR dans les cellules traitees par ARN interference ciblant CD44. Nous avons observe qu’une reduction de l'expression de CD44 etait accompagnee d’une reduction de 50% de pEGFR specifiquement dans les cellules exprimant Co-029/Tspan8.Finalement, l’analyse des complexes a tetraspanines en spectrometrie de masse nous a permis de decouvrir un nouveau partenaire de Co-029/Tspan8, l’enzyme de conversion de l’endotheline de type 1 (ECE1). Il s’agit d’une une enzyme membranaire de la famille des metallopeptidases a Zn qui genere la forme active de l’endotheline. Il est exprime dans differents types de cancer et est associe a un phenotype invasif. Sa presence dans les complexes a tetraspanines depend de Co-029/Tspan8 et cette association augmente son activite de clivage de la Big-endotheline, precurseur de l’endotheline. Nous avons etudie la relation fonctionnelle entre Co-029/Tspan8 et ECE1 dans des tissus digestifs normaux en comparant des souris sauvages et des souris dont nous avons inactive le gene Co-029/Tspan8.