Regeneração nervosa periférica após tubulização do nervo isquiático e emprego de nanopartículas de carbono e fator de crescimento fibroblástico (FGF-2)

Lesoes nervosas perifericas, onde ocorre neurotomia, necessitam de intervencao cirurgica visando a uniao dos cotos. Contudo, comumente a neurorrafia termino-terminal nao e possivel, havendo a necessidade do uso de autoenxertos. Nesse sentido, estrategias alternativas tem sido propostas com o intuito de evitar-se o uso de enxertos autologos. Dentre elas, a tubulizacao oferece inumeras vantagens, como a orientacao do crescimento das fibras, o fato de minimizar a formacao de neuromas e a possibilidade do espaco entre os cotos poder ser preenchido por moleculas potencialmente capazes de aumentar a eficiencia do processo regenerativo. As nanoestruturas de carbono, como os nanotubos de carbono e o grafeno, possuem muitas caracteristicas que os tornam excelentes dispositivos biocompativeis para implantes neurais. Alem das nanoparticulas, os fatores neurotroficos sao importantes moleculas indutoras de regeneracao. Entre eles, o fator de crescimento fibroblastico (FGF-2) tem mostrado importantes efeitos no sistema nervoso, promovendo desenvolvimento de neuritos, neovascularizacao e sobrevivencia neuronal. Assim, a proposta deste trabalho foi utilizar a tecnica de tubulizacao para regeneracao de nervos perifericos, avaliando-se a eficacia de nanoparticulas de carbono, bem como a eficiencia do FGF-2 no interior de proteses tubulares de polietileno. Para tanto, foram utilizados 70 camundongos machos adultos pertencentes a linhagem C57BL/6J. Os animais foram divididos em sete grupos: (1) proteses tubulares de polietileno vazias (n=10); (2) proteses tubulares de polietileno com adicao de nanotubos de carbono em solucao salina (1mg/Kg, n=10); (3) proteses tubulares de polietileno com adicao de grafeno em solucao salina (1mg/Kg, n=10); (4) proteses tubulares de polietileno com adicao de FGF-2 (10? g/? l, n=10); (5) proteses tubulares de polietileno com adicao de FGF-2 (10? g/? l) + nanotubos de carbono em solucao salina (1mg/Kg, n=10); (6) proteses tubulares de polietileno com adicao de FGF-2 (10? g/? l) + grafeno em solucao salina (1mg/Kg, n=10) e (7) proteses tubulares de polietileno com adicao de FGF-2 (1? g/? l, n=10). Foram eutanasiados 5 animais de cada grupo, 4 e 8 semanas pos-operatorias. Os animais com 4 semanas de sobrevida foram submetidos a analise de imunoistoquimica para estudar a expressao de proteinas relacionadas ao processo regenerativo axonal. Ja os animais com 8 semanas pos-operatorias, tiveram o nervo isquiatico regenerado dissecado e processado para contagem dos axonios mielinicos e para analise de parâmetros histomorfometricos. A recuperacao motora de todos os animais foi avaliada pelo "walking track test" (Catwalk). Os resultados indicaram que todos os materiais utilizados para preencher as proteses tubulares mostraram-se biocompativeis. As imunomarcacoes se mostraram quantitativamente equivalentes entre os grupos experimentais e evidenciaram organizacao apropriada do nervo regenerado no interior das proteses tubulares. Nas analises histomorfometricas e funcionais nao foram observadas diferencas entre os grupos, porem as fibras analisadas apresentaram sinais tipicos de processo regenerativo ativo. Desta forma, concluimos que as nanoparticulas empregadas no presente estudo, bem como o FGF-2, nas condicoes experimentais e concentracoes utilizadas, nao foram eficazes em amplificar o processo regenerativo. Nao obstante, e possivel que a funcionalizacao das nanoestruturas ora empregadas possa gerar resultados positivos futuros, capazes de possibilitar o reparo de nervos perifericos sem o uso de autoenxertos. Abstract