Estudios in vitro, ex vivo e in vivo de formulaciones de pranoprofeno para administración ocular

El presente trabajo de investigacion versa sobre la caracterizacion in vitro, ex vivo e in vivo de dos sistemas nanoestructurados de liberacion sostenida (PF-F1NPs y PF-F2NPs) conteniendo pranoprofeno (PF) como principio activo. Estas formulaciones fueron optimizadas en estudios previos desarrollados por Abrego y colaboradores (a) como una estrategia innovadora para el tratamiento del dolor y los procesos inflamatorios asociados a patologias oculares. Inicialmente se prepararon y caracterizaron morfologica y fisicoquimicamente las formulaciones PF-NPs bajo las condiciones descritas por Abrego y colaboradores. Los resultados obtenidos revelaron que las formulaciones PF-NPs presentaban caracteristicas apropiadas para su administracion ocular. Se llevo a cabo entonces un ensayo in vitro de citotoxicidad para las formulaciones PF-NPs, las mismas formulaciones pero sin farmaco (NPs blancas) y para una solucion de PF en tampon fosfato (PBS) usando la linea celular Y-79 de retinoblastoma humano. Este analisis evidencio que cuando las celulas fueron tratadas con concentraciones de 150 μg/mL para la formulacion PF-F1NPs y de 200 μg/mL para PF-F2NPs, la viabilidad celular resulto cercana al 20% en comparacion con el grupo control transcurridas 48 h de ensayo. Por otra parte, la exposicion de las celulas Y-79 a una concentracion superior a 750 μg/mL de las NPs blancas y de la solucion de PF en PBS, mostro una viabilidad celular inferior al 50% respecto al grupo control. Los resultados obtenidos podrian atribuirse a que el farmaco en solucion es susceptible de degradarse originando metabolitos menos toxicos para las celulas, mientras que el farmaco encapsulado en las NPs se encuentra protegido de la degradacion y se libera continuamente en su forma estable para interactuar con las celulas causando mayor toxicidad. Adicionalmente, concentraciones altas de las formulaciones PF-NPs y de las NPs blancas limitan el suministro de oxigeno y nutrientes a las celulas, lo que interfiere en el metabolismo y la proliferacion de las mismas. Asimismo, en esta investigacion se dedicaron esfuerzos significativos a validar una metodica bioanalitica para la cuantificacion del PF por cromatografia liquida de alta eficacia (HPLC) en muestras que hubieran estado en contacto directo con tejidos oculares. Los resultados demostraron que el metodo escogido es lineal, exacto y preciso para el intervalo de concentraciones ensayadas (6.25 – 100 μg/mL), ademas de establecerse como selectivo y robusto. Se llevaron a cabo estudios ex vivo en cornea y esclera de cerdo para evaluar el perfil de permeacion del PF a partir de una solucion a saturacion del farmaco. El analisis revelo que la cantidad de PF permeada a traves de la esclerotica es superior a la observada para la cornea, quedando una mayor cantidad del PF retenido en esta ultima. Estos resultados podrian deberse a las diferencias anatomicas existentes entre las dos membranas oculares. La idoneidad del metodo extractivo escogido fue evaluada a traves de la recuperacion y cuantificacion del PF retenido en las membranas biologicas tras los ensayos ex vivo de permeacion. Los datos obtenidos revelaron que el metodo validado es adecuado para tal fin. Ademas, se desarrollo un ensayo ex vivo en cornea de conejo con el proposito de evaluar el perfil de permeacion del PF desde las formulaciones PF-NPs en comparacion con la formulacion comercial de PF (Oftalar®) y con una solucion de PF en PBS (1.0 mg/mL). El estudio demostro que tanto la cantidad permeada como la cantidad retenida de PF a partir de las formulaciones PF-NPs es superior respecto a la presentada por el Oftalar® y la solucion de PF en PBS. Estos resultados se encuentran en concordancia con los obtenidos en el ensayo in vivo de eficacia antiinflamatoria en el que la formulacion PF-F2NPs evidencio la mayor eficacia antiinflamatoria respecto al resto de formulaciones sometidas a ensayo. Finalmente, no se detecto ningun signo de irritacion corneal, del iris o de la conjuntiva tras un ensayo in vivo de tolerancia ocular para las formulaciones PF-NPs.