Occurrence of Cryphonectria hypovirus 1 in the chestnut blight fungus in Macedonia

Summary In Macedonia, hypoviruses in the chestnut blight fungus, Cryphonectria parasitica, were first identified in 1995, more than 20 years after the discovery of chestnut blight. Between 1995 and 2000, 488 isolates of the fungus were collected from 19 sites throughout Macedonia. These isolates were screened for hypoviruses by extraction of double-stranded RNA (dsRNA) and electrophoresis on agarose gels. We found dsRNA of approximately 12 kb in length in 95 isolates in eight subpopulations of the fungus. Subpopulations with the highest virus incidence were Skudrinje (63%) and Jepiste (43%) in the Debar region, and Frangovo (46%) in the Struga region. Virus incidence in other subpopulations was much lower. To test whether the 12-kb dsRNAs are Cryphonectria hypovirus 1 (CHV-1), we subjected a sample of 27 isolates to reverse transcription (RT)-PCR and RFLP analyses. All 27 were identified as CHV-1 and belonged to the Italian subtype (subtype-I); all of these isolates were white in culture, typical of CHV-1-containing isolates. Most isolates had RFLPs identical to those previously found in other countries of southern Europe. Future studies will investigate hypoviruses from various origins in Macedonia for their biological control potential. Preliminary field surveys identified superficial cankers at all chestnut populations where CHV-1 was found. Resume En Macedoine, des souches hypovirulentes de Cryphonectria parasitica, l'agent pathogene du chancre de l’ecorce du châtaignier, ont ete identifiees pour la premiere fois en 1995, plus de 20 ans apres la premiere apparition du chancre du châtaignier. Entre 1995 et 2000, 488 isolats de C. parasitica furent rassembles dans 19 sites de l'ensemble de la Macedoine. L'on rechercha alors la presence d'hypovirus dans ces isolats au moyen de l'extraction de l'ARN a double helice (dsARN) puis d'une electrophorese sur gel d'agarose. Du dsARN d'une longueur avoisinant 12 kb fut retrouve dans 95 isolats de 8 sous-populations. Ce fut dans les sous-populations de Skudrinje (63%) et Jepiste (43%) de la region de Debar, et Frangovo (46%) de la region de Struga, que l'incidence de l'hypovirus fut la plus elevee. Dans les autres sous-populations, son incidence fut nettement inferieure. Une selection de 27 hypovirus fut soumise a des analyses par RT-PCR et par RFLP. L'ensemble des 27 virus furent identifies comme Cryphonectria hypovirus 1 (CHV-1), et relevant du sous-type italien (sous-type I). Les souches de C. parasitica infectees par ces virus prirent une couleur blanche en culture, typique des infections par le CHV-1. La majorite des hypovirus originaires de Macedoine presenterent un profil RFLP identique a celui des hypovirus d'Europe du sud. Des etudes ulterieures examineront des hypovirus de differentes regions de Macedoine par rapport a leur potentiel de controle biologique du chancre de l’ecorce du châtaignier. De premieres observations sur le terrain ont demontre que l'on retrouvait des chancres superficiels dans l'ensemble des populations de châtaigniers ou le CHV-1 etait present. Zusammenfassung In Mazedonien wurden Hypovirus-infizierte Stamme von Cryphonectria parasitica, dem Erreger des Kastanienrindenkrebses, zum ersten Mal 1995 identifiziert, mehr als 20 Jahre nach dem ersten Nachweis der Kastanienkrankheit. Zwischen 1995 und 2000 wurden 488 Isolate von C. parasitica an 19 Standorten in ganz Mazedonien gesammelt. Diese Isolate wurden mittels Extraktion von doppelstrangiger RNA (dsRNA) und anschliesender Agarose-Gelelektrophorese auf das Vorhandensein von Hypoviren gestestet. In 95 Isolaten aus 8 Subpopulationen wurde dsRNA mit einer Lange von ca. 12 kb gefunden. Am haufigsten traten Hypoviren in den Subpopulationen Skudrinje (63%) und Jepiste (43%) in der Region Debar und in Frangovo (46%) in der Region Struga auf. In den anderen Subpopulationen war die Inzidenz des Hypovirus deutlich kleiner. Eine Auswahl von 27 Hypoviren wurde durch RT-PCR und RFLP Analysen typisiert. Alle 27 Viren wurden dem Cryphonectria hypovirus 1 (CHV-1) und innerhalb von CHV-1 dem italienischen Subtyp (Subtyp I) zugeordnet. Die C. parasitica Stamme, die diese Viren enthielten, zeigten die fur CHV-1 Infektionen typische weise Kulturmorphologie. Die meisten Hypoviren aus Mazedonien hatten identische RFLP Muster wie Hypoviren aus Sudeuropa. In weiterfuhrenden Studien werden Hypoviren aus verschiedenen Regionen Mazedoniens auf ihre Eignung fur die biologische Kontrolle des Kastanienrindenkrebses gepruft. Erste Feldbeobachtungen zeigten, dasuberall dort, wo CHV-1 vorkommt, auch ausheilende Kastanienrindenkrebse gefunden werden.