Avaliações imunogenéticas do desenvolvimento de anticorpos inibidores do fator VIII na hemofilia A

Hemofilia A (HA) e uma coagulopatia com transmissao hereditaria ligada ao cromossomo X decorrente da deficiencia ou defeito no fator VIII da coagulacao (FVIII). Individuos portadores dessa coagulopatia necessitam de infusoes constantes de FVIII para manter sua hemostasia e sua integridade fisica. Durante o tratamento algunspacientes desenvolvem uma resposta imune que produz anticorpos anti-FVIII. Esses anticorpos, tambem chamados inibidores, afetam a atividade pro-coagulante dessa proteina e diminuem a eficiencia do tratamento, aumentando os custos desse e debilitando ainda mais o paciente. Apesar da relevancia clinica dos inibidores de FVIII para o disturbio da atividade hemostatica dos pacientes com HA, os mecanismos imunologicos que levam a sua producao sao desconhecidos. Neste trabalho, foram desenhados e sintetizados dez peptideos cujas sequencias estao em epitopos de superficie dos dominios a1 e C2 do FVIII. Todos os peptideos foram capazes de bloquear anticorpos anti-FVIII do plasma de pacientes. Observou-se umperfil individual de reatividade com os peptideos e esse perfil alterou-se ao longo do tempo. Tres peptideos foram ligados a uma resina e construiu-se uma cromatografia de afinidade com o objetivo de remover anticorpos anti-FVIII do plasma. As IgGs anti-FVIII foram ignificativamente capturadas pelas matrizes de afinidade peptideo-Sepharose, o que foi confirmado por teste de ELISA. Genotipagens de haplotipos da regiao promotora do gene da citocina IL-10 revelaram associacoes com a presenca de inibidores de FVIII. A coexistencia de um haplotipoGCC que define maior sintese de IL-10 e o haplotipo ACC que confere producao intermediaria esta associada com o grupo de pacientes que tem historico de desenvolvimento de inibidores. Adicionalmente, a coexistencia de haplotipos que definem maior e menor sintese de IL-10 esta fortemente associada com a ausencia de inibidores de FVIII no plasma. Com o objetivo de caracterizar o padrao de citocinas dos leucocitos do sangue periferico dos pacientes com [HA-FVIII(+)] e sem [HA-FVIII(-)] inibidores de FVIII, amostras de sangue total foram estimuladas com pdFVIII ou rFVIII. Os resultados mostraram quebaixos niveis de neutrofilos TNF-+ com alto valor de razao IL-5/TNF- ecaracteristico do grupo HA-FVIII(+). Embora todos os pacientes com HAapresentaram baixos niveis de monocitos IL-10+, o grupo HA-FVIII(+) teve menores niveis de monocitos TNF-+, levando a um aumento na razao IL-10/TNF- desse grupo. Analises da imunidade adaptativa revelaram que niveis aumentados de celulas T(CD4+ and CD8+) IFN-+, TNF-+ e IL-4+ sao seletivamente observados no grupo HA-FVIII(-). Ademais, maiores frequencias de celulas B IL-10+ e maiores niveis deanticorpos IgG1 anti-FVIII foram observados no grupo HA-FVIII(-), ao passo que niveis basais de celulas B citocinas+ e maiores niveis de anticorpos IgG4 anti-FVIII foram encontrados no grupo HA-FVIII(+). Adicionalmente, no perfil global de citocinas predomina um padrao anti-inflamatorio/regulador no grupo HA-FVIII(+), o que foi mantido apos estimulo in vitro com pdFVIII ou rFVIII. A resposta imune polarizada anti-inflamatoria/reguladora no grupo HA-FVIII(+) e pro-inflamatoriamodulada no grupo HA-FVIII(-) pode ser o elemento chave que controla o desenvolvimento de anticorpos inibidores de FVIII. Esses resultados podem ter implicacoes para o aprimoramento ou desenvolvimento de protocolos terapeuticos mais seguros e mais eficazes visando controlar ou impedir a sintese de inibidores em pacientes com HA.