Etude de l’efficacité et des mécanismes de la présentation croisée d’antigènes cellulaires tumoraux intacts par les cellules dendritiques

Les cellules dendritiques (DC) sont specialisees dans la capture, l’appretement et la presentation des antigenes. Elles ont developpe une voie specifique de presentation, la presentation croisee, leur permettant d’internaliser des antigenes exogenes, de les digerer et de les associer aux molecules du CMH de classe I afin de les presenter aux lymphocytes T CD8+. La presentation croisee est essentielle a la presentation d’antigenes qui ne sont pas synthetises directement dans les DC (antigenes du soi, de tumeurs, de microorganismes n’infectant pas les DC) et donc a l’etablissement de reponses T CD8+ anti‐infectieuses ou anti-tumorales. Son etude est donc primordiale pour la vaccination et pour l’immunotherapie mettant en jeu une presentation par les DC. Notre equipe a montre qu’a l’instar des cellules apoptotiques, les cellules vivantes sont une source d’antigenes efficace pour la presentation croisee par les DC in vitro et in vivo. Elle a ainsi montre que l’immunisation de souris avec des DC ayant capture du materiel provenant de cellules vivantes permettait de proteger efficacement contre une tumeur derivee de cellules de melanome (B16) dans un protocole de type prophylactique. Durant ma these, j’ai pu montrer que cette immunisation etait egalement tres efficace dans un protocole de type therapeutique. De facon surprenante, la protection et la reponse T CD8+ obtenues en utilisant des cellules vivantes comme source d’antigenes sont meilleures que celles obtenues avec des cellules apoptotiques. Les DC cultivees avec des cellules donneuses d’antigenes, vivantes ou apoptotiques, expriment des niveaux equivalents de molecules de costimulation. En revanche, les DC cultivees avec des cellules apoptotiques secretent plus d’IL--‐10, leur conferant un phenotype plus tolerogene. De plus, nous avons egalement montre que les antigenes tumoraux etaient mieux preserves au sein des cellules vivantes que des cellules apoptotiques, et que la quantite de complexes CMH--‐I/peptide a la surface des DC apres culture avec des cellules vivantes etait plus importante qu’apres culture avec des cellules apoptotiques. Dans une seconde partie de ma these, je me suis attachee a caracteriser les recepteurs et mecanismes impliques dans le transfert d’antigenes provenant de cellules vivantes aux DC. J’ai pu montrer que ce transfert ne depend ni de la secretion d’exosomes, ni du « cross-dressing ». En revanche, il est initie apres un contact etroit avec les DC qui semble dependre au moins en partie des recepteurs de type scavenger (SR) et de la calreticuline. Les images obtenues en microscopie suggerent le passage de molecules de grande taille au sein d’une structure qui pourrait s’apparenter aux jonctions annulaires (Annular Gap Junctions). En effet, nous observons le passage de connexine 43 (Cx3) et de materiel cellulaire sous une conformation native (proteine GFP de 70kDa) provenant de la cellule vivante et colocalisant partiellement avec le marqueur d’endosomes precoces EEA-1 dans la DC. Cependant, l’utilisation de shRNA specifique de la Cx43 indique que la presentation croisee ne necessite pas son expression. Nos resultats suggerent donc l’existence d’un mecanisme de communication intercellulaire permettant le passage d’antigenes de grande taille, qui pourraient ensuite etre appretes par la DC.