UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS CURSO DE PÓS-GRADUAÇÃO EM FARMACOLOGIA

The L-arginine/nitric oxide (NO) pathways are widely distributed in the central nervous system (CNS) and have been implicated in the modulation of anxiety. The elevated T-maze (ETM) is an animal test pharmacologically validated for the study of experimental anxiety in rats, and designed to evaluate inhibitory avoidance (AVOID) learning and one-way escape (ESC) from open arms, thought to represent learned (conditioned) and innate (unconditioned) fear, respectively. The aim of the present study was to evaluate the effect of prior treatment with the Nω-nitro-L-Arginine methyl ester (L-NAME), a non-selective inhibitor of nitric oxide synthase enzyme (nNOS), on both AVOID and ESC behavior of rats in the ETM, when applied to different cerebral regions associated with defensive behaviors. Moreover, we investigated if the ventral hippocampal (VH) L-arginine/NO/cGMP pathway is involved in the modulation of anxiety in rats evaluated in the ETM using drugs with distinct spectral actions on the L-Arg/NO/cGMP pathway as L-NAME and 7-NI (preferential nNOS inhibitor), methylene blue (MB), a non-selective inhibitor of soluble guanylate cyclase enzyme, and SNP, a NO donor. Central treatment with LNAME (50-800 nmol) did not impair the AVOID response through the trials and had no effect on the ESC behavior. Nevertheless, animals treated with L-NAME (200 nmol) into the lateral ventricle (LV), basolateral amygdala (BLA), dorsolateral periaqueductal gray matter (dlPAG), lateral septal nucleus (LSN), but not in the bed nucleus of stria terminalis (BNST), displayed impaired AVOID2 in comparison to the control group. In the VH, L-NAME (200 nmol) and 7-NI inhibited the AVOID (at doses 10 or 20 nmol) and ESC (at dose 20 nmol). SNP 80 nmol increased AVOID without modifies the ESC and the pre-treatment with MB 10 nmol blocked the effects promoted by SNP. Our results suggest that NO may underlie learned fear in the ETM via BLA, dlPAG and LSN, but not BNST. Moreover, NO may underlie learned fear via VH, compatible with the idea that NO/cGMP pathway exerts a positive modulatory role on defensive reactions in rats evaluated in the ETM. Ana Valquíria Calixto Tese Doutorado LISTA DE ABREVIATURAS ABl Amígdala basolateral ABm Amígdala basomedial AL Amígdala lateral AM Azul de metileno ANOVA Análise de Variância DMSO Dimetilsulfóxido EDRF Fator de relaxamento derivado do endotélio (do inglês -endotheliumderived relaxing factor) Esq1 Esquiva 1 Esq2 Esquiva 2 EPM Erro padrão da média GC Guanilato-ciclase GKc Proteinas-quinases cíclica GMPc Monofosfato cíclico de guanosina ( do inglês guanosina 3’:5’monofosfato cíclico) GTP Guanosina trifosfato HPC Hipocampo HPCv Hipocampo ventral HPCd Hipocampo dorsal i.c. v . intracerebroventricular i.p. Intraperitoneal LB Linha de base LCE Labirinto em Cruz Elevado L-NAME L-N-nitro-L-arginina-metil-ester L-NOARG Nω-nitro-L-arginina LTE Labirinto em T elevado mtNOS Sintase do óxido nítrico mitocondrial NADPH Nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato, forma Reduzida 7-NI 7-nitroindazol NLET Núcleo do leito da estria terminal NO Óxido Nítrico Ana Valquíria Calixto Tese Doutorado NOS Sintase do óxido nítrico eNOS Sintase do óxido nítrico endotelial iNOS Sintase do óxido nítrico induzida nNOS -Sintase do óxido nítrico neuronal NNSL Núcleo do Septo lateral PBS Salina tamponada com fosfato (phosphate buffered saline) SCP Substância cinzenta periaquedutal SCPd Substância cinzenta periaquedutal dorsal SCPdl Substância cinzenta periaquedutal dorsolateral SNC Sistema nervoso central SIN-1 3-morfolinosindnonimina SNP Nitroprussiato de sódio VL Ventrículo lateral WT Wild-type 1400W N-[3-(aminomethyl)benzyl]acetamidine] Ana Valquíria Calixto Tese Doutorado 1 LISTA DE FIGURAS Página Figura 1 Desenho esquemático de um corte coronal na altura do ventrículo lateral de ratos 23 Figura 2 Efeito da administração de L-NAME em um dos ventrículos laterais (VL) de ratos avaliados no Labirinto em T Elevado. A) Linha de base (LB), Esquiva 1 (Esq1), Esquiva 2 (Esq2) avaliadas com intervalo de 30 seg. B) Fuga. 24 Figura 3 Desenho esquemático de um corte coronal na altura da amígdala basolateral de ratos. 25 Figura 4 Desenho esquemático de um corte coronal na altura do núcleo do leito da estria terminal de ratos. 26 Figura 5 Desenho esquemático de um corte coronal na altura da substância cinzenta periaquedutal dorsolateral de ratos. 27 Figura 6 Desenho esquemático de um corte coronal na altura do septo lateral de ratos. 28 Figura 7Desenho esquemático de um corte coronal na altura do hipocampo ventral de ratos. 29 Figura 8 Efeito da injeção de L-NAME no hipocampo ventral de ratos submetidos ao LTE. (A) comportamento de esquiva inibitória. (B) comportamento de Fuga. 32 Figura 9 Efeito da injeção de 7-NI no hipocampo ventral de ratos submetidos ao LTE. (A) comportamento de esquiva inibitória. (B) comportamento de Fuga 34 Figura 10 Efeito da injeção de azul de metileno (MB, 10 nmol) e SNP (80 nmol) no hipocampo ventral de ratos submetidos ao LTE. (A) comportamento de esquiva inibitória. (B) comportamento de Fuga 36 Ana Valquíria Calixto Tese Doutorado 2 LISTA DE TABELAS Página Tabela 1 Efeito da injeção de L-NAME (50 ou 200 nmol) em diferentes estruturas cerebrais aversivo em ratos, avaliados no teste do labirinto em T elevado 30 Tabela 2 -. Efeito da injeção de ODQ 50 nmol, AM (10 ou 30nmol) e SNP (20 e 80) nmol no Hipocampo Ventral de ratos, avaliados no teste do labirinto em T elevado Apêndice Tabela 5 Efeito da injeção central de L-NAME 200nmol e SNP (20 ou 80 nmol) em camundongos, avaliados no teste do labirinto em T elevado Apêndice