Análise molecular em alho consumo nacional e importado para detecção da presença de Allexivírus

O alho e uma monocotiledonea pertencente a familia Aliaceae, originario da Asia Central. No Brasil, foi introduzido pelos portugueses, na epoca do descobrimento, sendo amplamente utilizado na culinaria ate os dias atuais. Botanicamente, trata-se de uma herbacea agâmica, com aproximadamente 50 cm de altura, propagada via bulbilho, o que permite a manutencao das caracteristicas agronomicas. Este metodo de propagacao possibilita uma eficiente disseminacao de patogenos, principalmente virus, que sao um dos principais grupos de patogenos desta cultura, podendo causar uma reducao do potencial produtivo entre 20 e 80%. O alho e hospedeiro natural de especies virais pertencentes aos generos Potyvirus, Carlavirus e Allexivirus. Este ultimo foi recentemente estabelecido como membro da familia Flexiviridae e agrupa as especies Garlic mite-borne filamentousvirus (GarMbFV), Garlic virus A (GarV-A), Garlic virus B (GarV-B), Garlic virus C (GarV-C), Garlic virus D (GarV-D), Garlic virus E (GarV-E), Garlic virus X (GarV-X) e Shallot virus X (ShV-X). No Brasil, o alho consumo importado tem sido empregado para o plantio, o que se constitui um risco de introducao de especies virais exoticas no pais. Atualmente, a deteccao de allexivirus em bulbos pode ser realizada por testes sorologicos e/ou moleculares, sendo necessario plantio para obtencao de tecido foliar com alta concentracao de particulas virais, o que requer, em media, 30 dias. Os testes sorologicos sao eficientes, no entanto, em razao da dificuldade para producao de anti-soros de alta qualidade, atualmente sao menos indicados que os metodos moleculares. Objetivando reduzir o tempo para analise de deteccao de allexivirus em alho, buscou-se um ajustemetodologico para extracao de acido nucleico diretamente dos primordios foliares de bulbilhos. Amostras de alho consumo, oriundos do Rio Grande do Sul e importado daArgentina foram analisadas, empregando-se primordios foliares obtidos por dissecacao dos bulbilhos para extracao de RNA total com uso do reagente Trizol. As amplificacoes do fragmento genomico alvo foram realizadas via RT-PCR. Uma banda na altura correspondente a 500 pb foi observada, em gel de agarose, nas duas amostras estudadas. Os produtos de PCR foram transferidos para membranas para teste de Southern Blot, para o qual empregou-se uma sonda fria capaz de detectar especies de Allexivirus, de cujo teste foi confirmado a presenca de allexivirus. Outra analise de deteccao de allexivirus foi realizada em amostras de alho consumo importado da Argentina, China e Espanha, seguindo a mesma metodologia, sendo verificada, uma banda na altura correspondente a 500 pb em amostras oriundas da Argentina e da China. Teste de Southern Blot, no qual empregou-se uma sonda fria especifica para detectar GarV-C, confirmou infeccao viral pela especie citada. De acordo com os resultados obtidos constatou-se que a extracao de RNA total diretamente de primordios foliares, aliada ao uso de tecnicas moleculares apresenta-se como um metodo rapido e eficiente para deteccao de allexivirus. Constatou-se tambem, que a maior parte das amostras analisadas encontra-se infectada por allexivirus, evidenciando um padrao sanitario que contra-indica o uso deste tipo de material como semente, com o risco de introducao de especies virais exoticas.