Identificação, Isolamento e Caracterização de Bactérias de Solo de Cerrado Pertencentes ao Filo Acidobactéria

O solo do bioma Cerrado apresenta uma comunidade microbiana pouco estudada, mas estudos metagenomicos revelaram a presenca de Acidobacteria em quatro de suas diferentes fitofisionomias. Embora sequencias do gene do RNAr 16S destas bacterias sejam encontradas em amostras de todo o mundo, existem, ao todo, apenas 14 especies descritas, sendo pouco conhecido sobre sua fisiologia e seu papel no ambiente. No presente trabalho, um meio utilizado para isolamento de Acidobacteria em solo australiano foi testado para cultivar acidobacterias de solo de Cerrado. O solo obtido de reserva do IBGE foi utilizado em experimentos preliminares e demonstrou que em meio VL55 com xilana, quando comparado ao meio R2A, o surgimento das colonias e lento e ha uma maior variabilidade na morfologia das colonias. Alem disso, mostrou tambem que a melhor diluicao foi a de 10-6, assim como a necessidade de adicao de ciclohexamida para inibir crescimento de fungos. Solos de tres locais diferentes da Fazenda Capao Comprido foram utilizados para o isolamento de acidobacteria, e apenas o meio VL55 foi utilizado. Inicialmente foi utilizada, a tecnica de plate wash PCR, onde todas as colonias de uma placa replica sao ressuspendidas e tem seu DNA extraido e submetido a PCR com iniciador especifico para observar a presenca de Acidobacteria. A presenca de fungos impediu o isolamento subsequente das acidobacterias das amostras utilizadas com esta tecnica. Outra tecnica de deteccao testada foi a de colony PCR, na qual cada colonia coletada e utilizada diretamente como template para PCR. Essa tecnica permitiu a deteccao de 19 acidobacterias de um total de 159 colonias submetidas a PCR com iniciador especifico. Apenas cinco isolados permaneceram em cultura e a analise das sequencias do gene RNAr 16S sugere que sejam novas especies de Acidobacteria. Os isolados AB20, AB23 e AB 60 apresentam colonias semelhantes entre si sendo diferentes dos isolados AB39 e AB158, embora a analise filogenetica das sequencias mostre o isolado AB158 dentro do grupo de AB20, AB23 e AB60. Todos os isolados sao capazes de utilizar glicose, extrato de levedura e xilana. Quitina, CMC e avicel tambem foram testadas, mas o resultado nao foi conclusivo. O crescimento a 37oC foi analisado nos isolados AB20, AB23 e AB60 e somente o isolado AB23 apresentou crescimento. O isolado AB60 foi testado quanto a variacao de pH e ocorreu crescimento em pH 4.5 e 5.5, nao sendo observado em 6.5 e o tempo de crescimento em meio liquido foi menor do que o observado em placa. A microscopia mostrou que todos os isolados sao Gram-negativos, tendo alguns dos isolados formatos de bacilo ou cocobacilo. Foi realizada tambem analise do perfil proteico dos isolados por meio de espectrometria de massa MALDI TOF e visualmente, e possivel afirmar que os isolados sao diferentes entre si. Os resultados obtidos neste trabalho nao foram capazes de diferenciar os isolados, exceto pela espectrometria de massa. Embora a analise filogenetica utilizando-se a sequencia do RNAr 16S mostre que essas bacterias sejam novas especies, mais testes bioquimicos sao necessarios para a confirmacao.