Degradación del ADN por exposición a campos magnéticos pulsados y agentes genotóxicos

Debido a la preocupacion por los danos que ocasiona las radiaciones a lo largo de los anos se han desarrollado un gran numero de dosimetros para cuantificar dichas radiaciones. Se han disenado fisicos y biologicos pero ninguno llega a resultar completo en sus resultados. Los agentes fisicos UVC y CMP se han analizado y descrito sus efectos en muchos articulos. Pero hasta la fecha, en el caso del CMP, no se ha encontrado consenso en los resultados; puesto que existen ensayos en los que a una misma dosis de CM en unos casos ha dado efectos y en otros no. Pero de lo que si existe un consenso es que el CMP y UVC provocan dano sobre la molecula de ADN, aunque no se ha encontrado una relacion lineal entre los danos y la dosis. Ademas, se han estudiados en esta tesis otros dos agentes, MMS y Bleomicina; ambos se han demostrado capaces de provocar rotura de la molecula de ADN. En el trabajo que aqui se presenta se pretende analizar danos a nivel de la molecula de ADN de diferentes agentes. Para evitar los mecanismos de reparacion celular se analizaron el efecto de los agentes sobre la molecula de ADN directamente. Se han escogido diferentes modelos de ADN (genomico de S. Cerevisae, marcador HL-I y fago T7), para poder encontrar el modelo que presenta una mejor sensibilidad. Y se han analizado agentes fisicos (UVC y CMP) y quimicos (MMS y Bleomicina); por separado y en combinacion. Para la visualizacion de los resultados se ha empleado electroforesis en gel de agarosa; asi como una cuantificacion del gel a traves del programa de analisis de geles GelAnalyzer. Los resultados de este trabajo muestra que existe un efecto del CMP (25 Hz, 1,5 mT), pero solo se detecta sobre ADN genomico, no sobre marcador HL-I y los tiempos de exposicion necesarios son largos. Cuando se combina CMP con MMS o Bleomicina, se produce un aumento del dano y son necesarios un tiempo menor y dosis mas bajas del agente quimico para provocar dano sobre la molecula de ADN. El MMS provoca dano sobre la molecula de ADN marcador HL-I, genomico y fago T7, pero se observo un menor dano sobre el marcador HL-I en las dosis y tiempos analizados. Estadisticamente se analizo su efecto sobre ADN genomico y fago T7 siendo significativo la region de ADN danado a 48 horas y ADN total a 24 horas en el caso de ADN genomico; y en las regiones danado, enrollado y lineal del fago T7 tras 48 horas de exposicion. Por lo que el resultado de los ensayos debe ser combinacion de observacion de gel, grafica y estadistica. Teniendo en cuenta estas tres cosas se observo que existe efecto de MMS sobre la molecula de ADN. Bleomicina tambien mostro efecto sobre ADN genomico cuando las dosis aplicadas fueron elevadas y el tiempo de exposicion fue igual o superior a 24 horas. El efecto combinado de los agentes UVC y MMS se analizo sobre dos modelos de ADN: genomico y fago T7. Como resultado las imagenes del gel indican que la dosis con mas efecto es 51,75 J/m2 en el caso de ADN genomico y ADN fago T7 para los tiempos 24 y 48 horas. Ademas, la dosis mas alta 103,5 J/m2 parece mostrar menos degradacion. Pero el analisis estadistico la dosis de UVC que muestra una mejor relacion fue 75,9 J/m2 en el caso de ADN genomico y la dosis 103,5 J/m2 en fago T7. Teniendo en cuenta que la medicion del gel es poco sensible y hay que combinar con lo observado en el gel; se puede concluir que las dosis mas altas de 75 J/m2 UVC provocan menor dano que las dosis mas bajas. Se concluye que la exposicion durante un largo periodo de tiempo a campo magnetico pulsado induce un incremento en la degradacion espontanea del ADN genomico. Su combinacion con MMS y bleomicina potencia el efecto de estos agentes genotoxicos. La radiacion UVC en combinacion con MMS induce un incremento del efecto de degradacion del ADN provocado por el MMS.