Aspectos microbiológicos de Burkholderia cepacia complex en pacientes con fibrosis quística

La fibrosis quistica (FQ) es la enfermedad hereditaria autosomica recesiva mas frecuente entre la poblacion caucasica. La principal causa de morbilidad y mortalidad en estos pacientes es por afectacion pulmonar; mayoritariamente se producen infecciones respiratorias por Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa, Stenotrophomonas maltophilia y algunas especies del complejo Burkholderia cepacia (Bcc). Cerca del 5% de los pacientes con FQ, se encuentran colonizados o infectados por Bcc, aunque estas tambien son conocidas por infectar a pacientes con enfermedad granulomatosa cronica y por ser patogenas nosocomiales. Las especies del Bcc son bacilos gramnegativos fenotipicamente similares y con una relacion genetica muy estrecha; por ello la identificacion y diferenciacion mediante tecnicas de microbiologia convencionales es de elevada complejidad. Actualmente se han descrito 20 especies diferentes dentro Bcc. Debido a su elevada resistencia natural a numerosos antimicrobianos, su erradicacion en los pacientes con FQ es dificultosa. Ademas el Bcc se caracteriza por poseer multiples factores de virulencia, asi como por su capacidad de formar biofilm. Entre las especies descritas del Bcc, B. multivorans y B. cenocepacia son las mas prevalentes; no obstante esta distribucion no se ha mantenido igual en el tiempo, ni en todos los paises. Los objetivos del presente trabajo fueron; estudiar la epidemiolgia-molecular de los aislados bacterianos pertenecientes a Bcc obtenidos de muestras respiratorias de pacientes con FQ del Hospital Vall d'Hebron de Barcelona durante los anos 2010 y 2012, determinar la sensibilidad a antimicrobianos y establecer la capacidad para formar biofilm de estos aislados. Por ello se identificaron mediante secuenciacion del gen recA los aislados. Tambien se comprobo la utilidad de MALDI-toF (VITEK MS y Daltonics MicroflexLT) para su identificacion. La relacion clonal se realizo por electroforesis en campo pulsante (PFGE) mediante la enzima SpeI. A su vez se determinaron los secuenciotipos (MLST) de los aislados y la relacion clonal de estos. Se estudio la sensibilidad a diferentes antimicrobianos utilizando la tecnica disco-difusion y mediante la tecnica del cristal violeta la capacidad de formar biofilm. El 5,3% de pacientes con FQ estuvo colonizado o infectado por Bcc. B. multivorans fue la especie mas prevalente (43,8%), seguida de B. contaminans (37,5%), B. cepacia (18,8%) y B. stabilis (6,3%). Ambos MALDI-ToF ensayados determinaron el genero del 100% de aislados, no obstante VITEK MS no determino la especie de los aislados que pertenecian a B. stabilis y B. contaminans. Igualmente Daltonics MicroflexLT no identifico a nivel de especie los aislados de B. contaminans y un aislado de B. cepacia. En seis pacientes se aislo un mismo clon de B. contaminans (ST482), por lo que se constato la diseminacion clonal de secuentiotipo. Se describieron los secuenciotipos ST17, ST450, ST723, ST724, ST725 y ST814 de B. multivorans; ST9 y ST726 de B. cepacia y ST51 de B. stabilis. De estos, ST723, ST724, ST725, ST726 y ST814 se describieron por primera vez en este estudio. El 68,2% de los aislados fueron sensibles a meropenem, 65,1% a piperacilina-tazobactam, 60,3% a ceftazidima, 54,6% a doxiciclina, 47,6% a trimetoprim-sulfametoxazol y 26,9% a ciprofloxacina. B. multivorans y B. cepacia fueron las especies mas resistentes a antibioticos β-lactamicos, trimetoprim-sulfametoxazol y ciprofloxacina. B. contaminans y B. stabilis fueron los mas sensibles a antibioticos β-lactamicos. Doxiciclina fue el antimicrobiano mas activo frente a los aislados de B. multivorans y meropenem a los aislados de B. cepacia. Practicamente todos los aislados tuvieron capacidad de formar biofilm. La capacidad de formar biofilm es diferente segun la especie, siendo B. multivorans la que mostro mayor capacidad, aunque los aislados de un mismo clon mostraron cuantificaciones diferentes esgrimiendo la existencia de diferentes subpoblaciones de un mismo clon, con diferente capacidad de formar biofilm