Role des microARNs dans le controle de la voie de la sécrétion régulée dans les phéochromocytomes

Le pheochromocytome (PCC) est une tumeur neuroendocrine rare qui se developpe principalement aux depens des cellules chromaffines de la medullo-surrenale. Dans la majorite des cas, les PCCs sont caracterises par une hypersecretion de catecholamines responsables de divers effets deleteres chez les patients dont le principal est une hypertension (pheochromocytomes symptomatiques, PS). Cependant, il existe egalement une forme particuliere de PCCs asymptomatiques qui secretent des taux physiologiques de catecholamines (pheochromocytomes incidentaux, PI). Parmi les patients porteurs de PI, certains sont hypertendus (PIH) et d’autres non (PIN). Afin de mieux caracteriser les differents profils secretoires de PCCs (PS et PI), nous avons recherche une implication potentielle des microARNs (miRNAs). Nous avons realise une analyse transcriptionnelle des miRNAs exprimes dans 32 echantillons de PCCs (12 PS, 12 PIN et 8 PIH). Le miRNome a ete realise par qRT-PCR microfluidique (Taqman Low Density Array, TLDA) pour 671 miRNAs. L’analyse statistique (Limma) des donnees d’expression a permis d’identifier 4 miRNAs significativement sur-exprimes (hsa-miR-7-1-3p, 7-2-3p, 26a-1-3p et 550a-3p) et 3 miRNAs sous-exprimes (497-3p, 32-5p, 190b-5p) dans les tumeurs PIN par rapport aux PS. Pour identifier les cibles potentielles des miRNAs, de nombreux logiciels de predictions bioinformatiques sont disponibles en ligne mais les resultats qu’ils generent sont tres divergents. Afin de contourner ce probleme nous avons developpe miRabel, un nouvel outil de prediction des cibles potentielles des miRNAs et des fonctions biologiques qui leurs sont associees. Le principe general consiste a agreger les resultats de 3 autres algorithmes de prediction selectionnes pour leur complementarite. Au final, les analyses des courbes ROC (Receiver Operating Characteristic), de la precision et du Recall ont montre que cet outil est plus efficace i) que les algorithmes qu’il agrege et ii) que d’autres logiciels de predictions couramment utilises tels que miRWalk, MBSTAR et TargetScan. Une analyse d'enrichissement (Modular Enrichment Analysis ou MEA, Genecodis3) des cibles predites pour les miRNAs differentiellement exprimes a revele qu’ils peuvent moduler significativement l’activite de quelques dizaines de voies de signalisation dont celles du cytosquelette d’actine et des SNAREs (impliquees dans le transport vesiculaire). En se basant sur l’expression des miRNAs, leurs energies d’hybridation avec leurs cibles ainsi que leurs effets physiologiques potentiels, les ARNm des genes PAK3, MLCP, MLCK (cytosquelette d’actine), SNAP25 et STX1A (SNAREs) ont ete retenus pour la suite de l’etude. Les essais luciferases ont mis en evidence une interaction entre la totalite de l’extremite 3’UTR des ARNm de MLCK et miR-32, STX1A et miR-550a-3p, SNAP25 et miR-7-1-3p ainsi que miR-550a-3p. Les autres interactions testees se sont revelees negatives. Les analyses par RT-qPCR ont montre une diminution significative du niveau d’ARNm de MLCK et de STX1A suite a la transfection de miR-32-5p et miR-550a-3p respectivement. Concernant SNAP25, un effet inhibiteur de miR-550a-3p / 7-1-3p est observe. Cet effet a ete confirme au niveau proteique pour STX1A et SNAP25.