Attempts to improve on a challenge model for subtype C avian pneumovirus

Respiratory disease caused by avian pneumovirus (APV) has a strong negative impact on the economy of the turkey industry in many countries. Progress in developing vaccines against this infection in the US has been slow partly because of the lack of a consistent challenge model to conduct vaccine efficacy studies. This study was designed to determine whether in vivo passages of a US isolate of APV, designated subtype C (APV-C), would increase virus virulence, leading to consistent clinical signs in turkeys. Three different experiments were performed. In experiments 1 and 2, a cell culture adapted APV was passaged four times in vivo in turkeys. Following each passage, clinical signs were found to increase in severity. In addition, inoculated birds were found to shed both APV RNA (by reverse transcriptase-polymerase chain reaction) and live virus (by virus isolation) at each passage. The mean antibody titres also increased with each passage. The results of the second experiment were not in complete agreement with those of experiment 1. In the third experiment, APV grown in three different cell lines was inoculated into three groups of turkeys. Clinical signs were observed in inoculated birds and virus could be isolated from all three groups. The results of this preliminary study indicate that in vivo passage of APV-C in birds may increase virus virulence, but the results obtained in experiment 2 suggest that further studies are needed to confirm this. Essais d'amélioration d'un modèle d'épreuve pour le pneumovirus aviaire de sous type C La maladie respiratoire causée par le pneumovirus aviaire (APV) a un impact fortement négatif sur l'économie de l'industrie de la dinde dans de nombreux pays. Le progrès dans le développement des vaccins contre cette infection aux USA a été lent, en partie à cause de l'absence de modèle d'épreuve performante pour réaliser les études d'efficacité de vaccin. Cette étude a été programmée pour déterminer si les passages in vivo d'une souche américaine d'APV, désignée sous type C (APV-C), pouvait augmenter la virulence du virus, en entraînant des symptômes évidents chez les dindes. Trois expérimentations différentes ont été réalisées. Pour les expérimentations 1 et 2, un APV adapté à la culture cellulaire a été passé quatre fois in vivo sur des dindes. Après chaque passage, les symptômes ont été plus graves. De plus, les animaux inoculés ont diffusé à la fois l'ARN de L'APV détecté par RT-PCR et le virus vivant isolé par culture à chaque passage. Les titres moyens des anticorps ont également augmenté à chaque passage. Les résultats de la deuxième expérimentation n'ont pas été en total accord avec ceux de la première expérimentation. Dans la troisième expérimentation, l'APV, multiplié sur trois lignées cellulaires différentes, a été inoculé à trois groupes de dindes. Des symptômes ont été observés chez les animaux inoculés et le virus a pu être isolé à partir des trois groupes. Les résultats de cette étude préliminaire indiquent que le passage in vivo de l'APV-C chez les oiseaux peut augmenter la virulence du virus mais les résultats obtenus dans l'expérimentation 2, suggèrent que des études complémentaires sont nécessaires pour le confirmer. Versuche zur Verbesserung eines Challengemodels für aviäre Pneumoviren des Subtyps C Durch aviäre Pneumoviren verursachte Respirationserkrankungen führen in vielen Ländern zu starken wirtschaftlichen Einbußen in der Putenindustrie. Die Fortschritte in der Entwicklung von Vakzinen gegen diese Erkrankung waren in den USA nur gering, teilweise wegen des Fehlens eines beständigen Challengemodels zur Durchführung der Vakzine-Wirksamkeitsstudien. Diese Studie sollte klären, ob in vivo-Passagen eines US-APV-Isolats, bezeichnet als Subtyp C (APV-C), die Virusvirulenz erhöhen und damit gleichbleibende klinischen Symptome in Puten hervorrufen würden. Es wurden drei verschiedene Versuche durchgeführt. In Experiment 1 und 2 wurden Zellkultur-adaptierte APV viermal in vivo in Puten passagiert. Nach jeder Passage wurde ein Anstieg der Schwere der klinischen Symptome festgestellt. Außerdem wurde in jeder Passage nachgewiesen, dass die Tiere sowohl APV-RNS (durch RT-PCR) als auch Lebendvirus (durch Virusisolierung) ausschieden. Der mittlere Antikörpertiter stieg ebenfalls mit jeder Passage an. Die Ergebnisse des zweiten Versuchs stimmten mit denen des ersten Versuchs nicht vollständig überein. In einem dritten Experiment wurde in drei verschiedenen Zelllinien vermehrtes APV in drei Putengruppen inokuliert. Bei den inokulierten Tieren wurden klinische Symptome beobachtet und bei allen drei Gruppen konnte Virus isoliert werden. Die Ergebnisse dieser Vorversuche zeigen, dass in vivo-Passagen mit APV-C die Virusvirulenz im Tier erhöhen können, die Resultate aus Experiment 2 legen nahe, dass weitere Versuche notwendig sind, um dies zu bestätigen. Ensayos para mejorar el modelo de infección experimental con el subtipo C de pneumovirus aviar La enfermedad respiratoria causada por el pneumovirus aviar (APV) tiene un importante impacto económico negativo en el sector del pavo en muchos países. Los progresos en el desarrollo de vacunas frente a esta enfermedad realizados en U.S. avanzan lentamente, en parte debido a la falta de un modelo de infección experimental reproducible para llevar a cabo los estudios de eficacia de las vacunas. Este estudio se diseñó para determinar si los pases in vivo de un aislamiento de APV de US, conocido como subtipo C (APV-C), incrementarían la virulencia vírica, produciendo signos clínicos claros en pavos. Se realizaron tres experimentos distintos. En los experimentos 1 y 2, se realizaron 4 pases in vivo en pavos de un APV adaptado a cultivo celular. Después de cada pase, se observó un incremento en la gravedad de los signos clínicos. Además, se detectó que las aves infectadas experimentalmente excretaron tanto RNA de APV (mediante RT-PCR) así como virus vivo (mediante aislamiento vírico) en cada pase. La media de los títulos de anticuerpos también aumentó en cada pase. No hubo correlación absoluta entre los resultados del primer y del segundo experimento. En el tercer experimento, se inoculó APV replicado a partir de tres líneas celulares diferentes en tres grupos de pavos. Se observaron signos clínicos y se aisló virus en los tres grupos de aves infectadas. Los resultados de este estudio preliminar indican que el pase in vivo en aves de APV-C puede aumentar la virulencia vírica, aunque los resultados obtenidos en el experimento 2 sugieren la necesidad de llevar a cabo más estudios para confirmar este hallazgo.