Biomarcadores metabólicos y de reserva energética en lamprea marina (Petromyzon marinus linnaeus, 1758)

Entre las tendencias actuales en el analisis y monitorizacion ambiental se ha potenciado el estudio a las alteraciones individuales como precursoras de los efectos en niveles biologicos superiores, mediante el analisis de indicadores metabolicos y de reserva energetica. En esta categoria se incluye la cuantificacion de diferentes macromoleculas (relacion RNA/DNA, proteinas, glucogeno y lipidos) que permiten obtener una idea general del estado metabolico de los individuos. En el presente trabajo aportamos informacion sobre las fluctuaciones de los niveles de estas macromoleculas en larvas e individuos adultos de lamprea marina (Petromyzon marinus Linnaeus, 1758), adaptando y perfeccionando las tecnicas para utilizar estos indicadores como herramientas para el estudio del desarrollo y de la calidad del habitat. Las larvas utilizadas en este estudio fueron capturadas en los rios Masma, Anllons y Umia (Galicia, NW Espana) mediante el metodo de pesca electrica, seleccionando en cada uno de los rios tres estaciones de muestreo, en las que tambien se midieron los parametros mesologicos (anchura y profundidad media, caudal, velocidad de la corriente.) y fisicoquimicos (pH, temperatura, conductividad, oxigeno disuelto.). Los individuos adultos proceden del rio Mino, donde fueron capturados mediante una red lampreeira. Para la determinacion analitica de los acidos nucleicos se utilizo un metodo de extraccion fenolica con TRIzol, que permite la extraccion simultanea de RNA y DNA y se discutio y mejoro el procedimiento analitico. La cuantificacion de proteinas totales se llevo a cabo mediante un kit comercial basado en el metodo colorimetrico del acido bicinconinico (BCA). Para la extraccion y cuantificacion del glucogeno se utilizo el metodo colorimetrico de la antrona. Los lipidos se analizaron por gravimetria, previa extraccion con cloroformo: metanol. En la etapa larvaria, se estudiaron las caracteristicas biometricas y el estado de condicion de las larvas separadas en clases de talla (T1, T2, T3 y M). En ellas se analizaron y se determinaron los niveles de referencia de la relacion RNA/DNA y de los biomarcadores de reserva energetica. Se analizaron tambien las variaciones espaciales entre cuencas y dentro de cada rio. Se describieron las variaciones ontogenicas de los biomarcadores en cada rio y se analizaron las correlaciones existentes entre los biomarcadores y entre estos y los parametros biometricos y de condicion en el estado larvario. Para el estudio de los adultos, despues de la descripcion biometrica, se realizo el analisis de la relacion RNA/DNA y de los niveles de proteinas, de glucogeno y de lipidos en diferentes organos (musculo, higado, corazon y tegumento). Ademas, se separaron los individuos en dos conjuntos: uno correspondiente al momento de su entrada en el rio durante la migracion reproductora y otro formado por ejemplares que fueron mantenidos varios meses en un acuario bajo condiciones controladas de temperatura y fotoperiodo. En ellos se estudio la variabilidad intersexual de estas macromoleculas en los diferentes organos, y las correlaciones existentes entre los biomarcadores en cada organo y entre estos y los indices biometricos y de condicion (longitud, peso, factor de condicion, indice hepatosomatico e indice gonadosomatico). Por su potencial empleo como indice de senilidad se midieron las proporciones variables de biliverdina y bilirrubina en el higado de los individuos adultos mediante sus picos de absorbancia respectivos (650 nm y 460 nm), como medida indirecta de la relacion entre estos pigmentos biliares y del grado de senescencia de los ejemplares. A modo de sintesis, se detallan las variaciones diacronicas de los niveles de los biomarcadores en el musculo, desde etapas tempranas del desarrollo hasta la metamorfosis. Por ultimo, mediante diagramas de afinidad y analisis de componentes principales, utilizando los parametros fisicoquimicos y mesologicos medidos en las diferentes estaciones y los valores obtenidos para cada biomarcador, se estudia y se discute su idoneidad como bioindicadores de los niveles de estres. Se concluye, de manera general, que los biomarcadores se han revelado como buenos descriptores de los cambios diacronicos que tienen lugar a lo largo del ciclo vital, explicando adecuadamente las condiciones de crecimiento en funcion de la oferta alimentaria, tanto en cantidad como en calidad y reflejan las condiciones ambientales de desarrollo de las lampreas respondiendo adecuadamente a las diferentes caracteristicas fisicoquimicas y de estres ambiental.