Factor 4 Plaquetar indueix activitat proinflamadora en les cèl·lules "Natural Killer" Humanes, El

Lactivacio de les plaquetes en resposta a la lesio vascular o la inflamacio porta a la secrecio de gran nombre de mediadors els quals son capacos de modular les funcions de les cellules implicades en la Inflamacio. El F4P (Factor 4 Plaquetar) es una proteina especifica de les plaquetes i membre de la superfamilia de proteines anomenades quemoquines. Encara que estan forca establertes lactivitat del F4P com a efector antiangiogenic i procoagulant, es coneix poc sobre la seva implicacio en la regulacio de la Inflamacio. En aquest estudi es demostra la capacitat del F4P per estimular les anomenades cellules Natural Killer a sintetitzar citoquines proinflamatories com son la IL-8, IL-1beta, IL-6, INF-gamma, TNF-alfa i GM-CSF. Assaigs de cinetica i de dosi resposta (10-200 ng/ml) es demostren que el F4P incrementa els nivells de mRNA i proteina de totes les citoquines estudiades. Es va determinar la capacitat del F4P per induir aquest efecte unit a heparansulfats, ja que en condicions fisiologiques el F4P es troba unit als glicosaminoglicans de la paret vascular. Els resultats obtinguts posen de manifest que el F4P, en aquestes condicions, mante la capacitat dactivar les cellules NK. Lestimulacio daquestes cellules a traves del receptor Fc-gamma-RIIIA (CD16) provoca un efecte dincrement sinergic amb el F4P en el lliurament de citoquines. En canvi no varem observar cap efecte del F4P sobre cellules NK primaries en repos en aquelles activitats regulades per la IL-2 com son les activitats citotoxiques Natural Killer NK, Lymphokine-Activated Killer LAK o lexpressio del receptor IL-2R (CD25). En canvi el F4P es capac dinduir un increment dosi-resposta en la antibody-dependent cellular cytotoxicity ADCC, activitat citotoxica no regulada, en aquestes condicions, per la IL-2. A mes a mes, el F4P incrementa lexpressio de CD69, demostrant la induccio dun estat dactivacio. Les cellules NK estimulades amb F4P lliuren citoquines amb capacitat per desencadenar el quimiotactisme dels neutrofils. El 70% daquest potencial quimiotactic induit pels factors lliurats per les cellules NK estimulades amb F4P, es deu a la IL-8 lliurada per aquestes cellules. Es va iniciar lestudi del possible mecanisme de transduccio de senyal desencadenat pel F4P en les cellules NK. Per aixo es va tenir en compte que el F4P pertany a la familia de proteines anomenada quemoquines. La major part de les proteines daquesta familia interaccionen amb receptors de 7 segments de domini transmembrana acoblats a proteines G i amb el Ca2+ com a missatger secundari. Per poder valorar la possible implicacio dun receptor daquestes caracteristiques pel F4P, es va determinar per un costat laugment transitori de Ca2+ aixi com la implicacio de les proteines G. Els resultats que varem obtenir ens demostren que lactivitat del F4P sobre aquestes cellules no sassocia a un increment transitori de Ca2+ i cap dels inhibidors de proteines G testats va revertir lefecte del F4P. En canvi, varem poder associar lestimul del F4P a lactivacio denzims fosfo-tirosinquinasa i mes concretament a la fosforilacio en residus tyr de lenzim PI3-K. Per altre banda, els resultats obtinguts amb inhibidors de la transcripcio, per una banda, i de la traduccio per laltre apunten que el F4P indueix la sintesi de citoquines estimulant la seva transcripcio genica. Finalment, els resultats suggereixen lexistencia en les cellules NK de dues vies complementaries i contraposades que semblen bloquejar-se mutuament dirigint lactivitat daquestes cellules vers un comportament citolitic o pro-inflamatori. Amb aquests resultats evidenciem, per tant, una nova capacitat pel F4P en potenciar la resposta pro-inflamatoria a traves de les cellules Natural Killer. Una de les funcions menys conegudes daquestes cellules. "SUMMARY: The activation of platelets in response to vascular injury or inflammation leads to the secretion of a variety of mediators, which modulate the functions of inflammatory cells. Platelet Factor 4 (PF4) is a platelet-specific protein member of the chemokine superfamily. Although the capacity of PF4 as an antiangiogenic factor or its procoagulant activity are well established, little is known about its proinflammatory functions. In the present study, we demonstrate the ability of PF4 to activate resting Natural Killer cells, to synthesize proinflammatory cytokines, such as IL-8, IL-1-beta, IL-6, IFN-gamma, TNF-alpha and granulocyte/macrophage colony-stimulatory factor (GM-CSF). Dose-response curves (10-200 ng/ml) and time-course assays show that PF4 increases mRNA levels and protein release for all cytokines studied. This ability was retained even while PF4 was bound to heparin, the physiological conditions must to greate affinity to glycosaminoglycans of the endotelial cells surface. Stimulation of Natural Killer cells through the Fc receptor for immunoglobulin gamma-IIIAwas found to synergistically increase the effect of PF4 on cytokines production. Conversely, PF4 does not have any effect in resting primary NK cells on the biological activities regulated by IL-2, such as Natural Killer (NK) and Lymphokine-Activated Killer (LAK) cytotoxic activities or high affinity IL-2 receptor (CD25) expression. However, PF4 was able to induce a dose-response increase in antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC), an activity not regulated by IL-2 under these conditions. PF4 also increases CD69 expression, demonstrating the induction of a cellular activation state. The biological effects of PF4 are not Ca2+ mobilization dependent. Pertussis toxin did not block the PF4-derived cytokines production, which demonstrates that response to PF4 is not coupled to a pertussis toxin-sensitive Gi and G0 class of G proteins. Different evidences implicating a role of phosphatidilinositol 3-kinase in the intracellular signalling pathway triggered by platelet factor 4. Finally these results characterize a new capacity for PF4 and provide further evidence for the pivotal role of Natural Killer cells in the environment of inflammation. "