Identificación de la proteína del cuello de las roptrias 2 (RON2) de plasmodium vivax

IDENTIFICATION OF THE Plasmodium vivax RHOPTRY NECK PROTEIN 2 (RON2) by GABRIELA ARÉVALO PINZÓN PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA Director: Manuel Alfonso Patarroyo, M.D., Dr.Sc. About 100 million clinical cases of malaria occur per year due to Plasmodium vivax infections, mainly in tropical and subtropical regions of Asia and Latin America. Our current understanding of the parasite‟s biology and the antigens involved in the invasion of target cells is very limited, partly because the lack of a Plasmodium vivax continuous in vitro culture, which makes it particularly difficult to study this species. We have developed a comparative approach to identify and characterize P. vivax molecules involved in invasion, which have been previously described in Plasmodium falciparum (the most lethal species causing malaria), in order to overcome this inconvenient. Based on the knowledge that has been emerging regarding the molecular interactions between AMA-1 protein (which is conserved in all Plasmodium ssp. species) and the rhoptry neck proteins (RONs) during the strong bond formation in the P. falciparum and Toxoplasma gondii invasion processes, the first P. vivax rhoptry neck protein, which is homologous to PfRON2 and here named PvRON2, was identified in the present study. Different bioinformatics tools and immunological and molecular assays allowed identifying a 2,204 residue-long protein, encoded by a single 6,615 bp exon. The amino acid sequence contains a signal peptide, a transmembranal domain and two αhelical coiled coil motifs, all of them being characteristics found in several previously described vaccine candidates. Similar to what has been reported for PfRON2, PvRON2 is expressed in late schizonts and located in the rhoptries neck, findings that suggest its participation during the invasion of host cells. LISTADO DE ABREVIATURAS AAPs: Proteínas Asociadas a AMA-1, del inglês, AMA1-associated proteins. ACF: Adyuvante Completo de Freund. ADN: Ácido desoxirribonucléico. ADNg: ADN genómico. ADNc: ADN complementario. AIF: Adyuvante Incompleto de Freund. AMA-1: Antígeno Apical de Membrana 1, del inglés, Apical Membrane Antigen 1. ARN: Ácido ribonucleico. BLAST: Herramienta Básica de Búsqueda de Alineamientos Locales, del inglés, Basic Local Alignment Search Tool. CelTOS: Proteína para el cell traversal de ooquinetes y esporozoitos, del inglés, Cell Traversal Protein for Ookinetes and Sporozoites. CMH: Complejo Mayor de Histocompatibilidad. CR1: Receptor del complemento tipo 1, del inglés, Complement Receptor Type 1. CSP: Proteína Circumsporozoito, del inglés, Circumsporozoite Protein. DAPI: 4',6-diamidino-2-fenilindol diclorhidrato. DBL: Familia de proteínas similares a aquella de unión a Duffy (DBL, del inglés, Duffy Binding Like). DBP: Proteína de Unión a Duffy, del inglés, Duffy Binding Protein. EDTA: Ácido Etilendiaminotetraacético. EGF: Factor de Crecimiento Epidérmico, del inglés, Epidermal Growth Factor. ELISA: Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas, del inglés, Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay. FITC: Isotiocianato de Fluoresceína. GD: Gránulos Densos. GPI: Glicosilfosfatidilinositol. HABPs: Péptidos de alta actividad de unión, del inglés, High Activity Binding Peptides. HPLC-RP: Cromatografía Líquida de Alta Eficacia en Fase Reversa, del inglés, High Performance Liquid Chromatography-Reverse Phase. IgM: Inmunoglobulina M. IgG3: Inmunoglobulina G isotipo 3. KAHRP: Proteína Rica en Histidinas Asociada a los Knob, del inglés, Knob-Associated Histidine Rich Protein. LB: Luria Bertani. MCP1: Proteína de Capping del Merozoito 1, del inglés, Merozoite Capping Protein-1. MET: Microscopia Electrónica de Transmisión. MJ: Moving Junction. M-MLV: Virus de la Leucemia Murina Moloney. MSP: Proteínas de Superfície del Merozoito, del inglés, Merozoite Surface Proteins. MVP: Membrana de la Vacuola Parasitófora. OMS: Organización Mundial de la Salud. ORF: Marco de Lectura Abierto, del inglés, Open Reading Frame. PBS: Buffer Fosfato Salino. PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa, del inglés, Polymerase Chain Reaction. PMSF: Fluoruro de Fenilmetilsulfonilo. PS: Péptido Señal. RBL: La familia de Proteínas Similares a aquellas de Unión a Reticulocitos, del inglés, Reticulocyte Binding Like Proteins. RCT: Receptor de Células T. RESA: Antígeno de superficie del eritrocito infectado en estadio de anillo, del inglés, RingInfected Erythrocyte Surface Antigen. Rhs: Proteínas homólogas a aquellas de unión al reticulocito, del inglés, Reticulocyte-binding protein homologue. RIMA: Antígeno de membrana de los anillos, del inglés, Ring Membrane Antigen. ROM4: Proteasa Romboide 4, del inglés, Rhomboid protease 4. RONs: Proteínas del Cuello de las Roptrias, del inglés, Rhoptry Neck Proteins. RT: Repeticiones en Tándem. RT-PCR: Transcripción Reversa-Reacción en Cadena de la Polimerasa, del inglés, Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction. SDS-PAGE: Electroforesis en Gel de Poliacrilamida con Dodecilsulfato Sódico. SIVIGILA: Sistema de Vigilancia en Salud Pública. SMART: Del inglés, Simple Modular Architecture Research Tool. SPECT 1 y 2: Proteínas de las Micronemas del Esporozoito Esenciales para el Cell Traversal 1 y 2, del inglés, Sporozoite microneme Protein Essential for Cell Traversal. SUB-2: Subtilisina 2. TAE: Tris-Acetato-EDTA. TJ: Enlace Fuerte, del inglés, Tight Junction. TRAP: Proteína Adherente Relacionada a Trombospondina, del inglés, ThrombospondinRelated Anonymous Protein. VCG-1: Vivax Colombia Guaviare-1. VP: Vacuola Parasitófora.