Effet des agonistes des TRL sur la production des FRO par la NADPH oxydase des polynucléaires neutrophiles humains

Le polynucleaire neutrophile (PN) humain est une cellule phagocytaire qui constitue une des premieres barrieres de defense de l’organisme contre les agents pathogenes. Sa stimulation par des facteurs chimioattractants, provoque sa migration de la circulation sanguine vers le foyer inflammatoire. Dans le site inflammatoire, les PN reconnaissent l’agent pathogene par l'intermediaire d'opsonines, des fractions resultant de l'activation du complement et par l’intermediaire de motifs de reconnaissance conserves au cours de l’evolution des agents pathogenes qui se lient a des recepteurs de la famille Toll (Toll-like receptors ; TLR). Le contact du pathogene avec le PN va provoquer sa phagocytose et sa destruction par la liberation de molecules contenues dans les granules du PN et par la production de formes reactives de l’oxygene (FRO) par un complexe enzymatique la NADPH phagocytaire composee au repos de de proteines cytosoliques (p40phox, p47phox, p67phox et Rac 2) et membranaires (gp91phox et p22phox formant le cytochrome b558). Un des evenements majeur de l’activation de la NADPH oxydase est la phosphorylation de certains composants cytosoliques comme la p47phox ou la p67phox ce qui conduit a la translocation de ces proteines vers le cytochrome b558 membranaire et permet d’activer l’enzyme pour la production de FRO. L’hyperactivation de cette enzyme ou son « priming » consiste en une pre-activation du PN par des agents dit « primants » tels que des cytokines (TNFα, GM-CSF, IL-1), des chimiokines comme l’IL-8, des molecules lipidiques (PAF et LTB4), ou encore des endotoxines bacteriennes LPS, agoniste de TLR4. Les TLR sont des recepteurs exprimes a la surface de nombreuses cellules dont les cellules immunitaires ; ils detectent des motifs conserves au cours de l’evolution des agents pathogenes appeles PAMPs pour "pathogen-associated molecular patterns", des proteines modifiees reconnues comme etrangeres, des lipides oxydes, des ligands endogenes. Quelques agonistes des TLR comme le LPS ont ete decrits pour induire un priming de la production des FRO par les PN. D’autres ont ete connus par leur pouvoir activateur de la NADPH oxydase des PN. Le CL097 (Imidazoquinoline : agoniste des TLR7/8) etait l’agoniste des TLR induisant le plus fort effet de « priming » par les PN stimules par le fMLP. Le CL097 induit la phosphorylation de la p47phox sur la serine 345. Cette phosphorylation implique des MAPKinases ERK1/2 et de la p38MAPK. La phosphorylation de ce site induit le changement de conformation de la p47phox sous l’action d’une proline isomerase Pin1. Ce changement de conformation favorise la phosphorylation des autres sites (Ser-315, Ser-328) et par consequent l’activation de la NADPH oxydase. La comparaison de l’effet du CL097 a deux agonistes reconnaissant l’un le TLR7, l’autre le TLR 8 a montre que l’action du CL097 dependait du TLR8. Le zymosan non opsonise (agoniste de TLR2) stimule l’activation de la NADPH oxydase des neutrophiles. IL induit la phosphorylation de la p47phox au niveau des Ser-345, -315 et -328. Ces phosphorylations font intervenir respectivement les MAPK ERK1/2 et p38, une proteine tyrosine kinase et les PKC. En plus cet agoniste active la petite proteine cytosolique Rac2, necessaire a l’activation de la NADPH oxydase des PN. Ces donnees permettraient d’identifier de nouvelles cibles therapeutiques de premiere importance afin de moduler les reponses inflammatoires pathologiques.