Efecto de la centrifugación sobre la membrana plasmática y el ADN de espermatozoides bovinos

Resumen El objetivo de este estudio fue determinar si la integridad de la membrana plasmatica y el ADN de los espermatozoides pueden ser afectados por la centrifugacion realizada en el proceso de lavado y seleccion. Los espermatozoides fueron sometidos a diferentes tiempos de centrifugacion (10, 30 y 45 min); se utilizo un control negativo con espermatozoides no centrifugados y un control positivo con espermatozoides sometidos a estres oxidativo con peroxido de hidrogeno (H 2 O 2 ) (200 μM). Para evaluar la integridad de la membrana se utilizo la prueba hipoosmotica (HOST) y para evaluar la fragmentacion del ADN se utilizo el ensayo cometa: El analisis estadistico se realizo mediante la prueba de Fisher. La centrifugacion durante 10, 30 y 45 min, presento un efecto estadisticamente significativo sobre el dano en el ADN, respecto de los espermatozoides no centrifugados (p 2 O 2 (200 µM). La comparacion de medias no indico diferencia estadistica significativa entre los espermatozoides no centrifugados y los centrifugados por un periodo de 10 y 30 min (p > 0.05) en la reaccion positiva a la prueba HOST, lo cual si sucedio (p 2 O 2 presento diferencia significativa (p Palabras clave: espermatozoides bovinos, fragmentacion de ADN, integridad de la membrana. Summary The aim of this study was to evaluate the effects of different times of centrifugation on plasma membrane integrity and DNA of bovine sperm cells, by means of the hyposmotic test (HOST) and the comet assay, respectively. The sperm cells were centrifuged at 700 x g for 10, 30 or 45 min. No-centrifuged thawed semen served as negative control whereas hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) (200 mM) treated sperm cells were used as a positive control. The results indicate that while the integrity of the plasma membrane was not affected by centrifugation, bovine sperm DNA was damaged independently of centrifugation times. Significant differences between negative control and treatments were found (p in vitro bovine embryo production. Additionally, some grade of DNA fragmentation in not centrifuged sperm cells (negative control) was registered, suggesting that DNA of bovine sperm cells could be affected by other factors, probably freezing procedure. Key words: bovine spermatozoa, DNA fragmentation, membrane integrity. Resumo O objetivo de este estudo foi determinar se a integridade da membrana plasmatica e o DNA dos espermatozoides podem ser afetados pela centrifugacao realizada no processo de lavado e selecao. Os espermatozoides foram submetidos a diferentes tempos de centrifugacao (10, 30 e 45 min); foi utilizado um controle negativo com espermatozoides nao centrifugados e um controle positivo com espermatozoides submetidos a estresse oxidativo com peroxido de hidrogenio (H 2 O 2 ) (200 μM). Para avaliar a integridade da membrana foi utilizado o teste hipoosmotica (HOST) e para avaliar a fragmentacao do DNA Fo utilizado o ensaio cometa: A analise estatistica se realizou mediante o teste de Fisher. A centrifugacao durante 10, 30 e 45 min, apresentou um efeito estatisticamente significativo sobre o dano no DNA, em relacao aos espermatozoides nao centrifugados (p 2 O 2 (200 µM). A comparacao de medias nao detectou diferenca estatisticamente significativa entre os espermatozoides nao centrifugados e os centrifugados por um periodo de 10 e 30 min (p > 0.05) na reacao positiva a prova HOST, o qual ocorreu ao comparar os nao centrifugados e os centrifugados por 45 min (p 2 O 2 apresentou diferenca significativa (p Palavras chave: espermatozoides bovinos, fragmentacao do DNA, integridade da membrana.