Mancha marrom de alternativa em tangerineira 'Dancy': Aspectos morfofisiológicos, variabilidade genética e indução de resistência

A diversidade genetica do fungo Alternaria alternata (Fr:Fr) Keissler f. sp. citri esta associada aos fatores geneticos e ambientais e tem-se verificado influencia na reproducao deste patogeno, responsavel por causar serios problemas economicos em frutos e em mudas de tangerineira ‘Dancy’ (Citrus tangerina hort. ex Tanaka) no Estado da Paraiba. Entretanto, para o controle da mancha marrom de alternaria (MMA) sao empregadas taticas dentro do manejo integrado utilizando produtos alternativos como o extrato etanolico de pau-ferro (Caesalpinia ferrea (Benth.)) Ducke, Quitosana® e o antagonista Trichoderma asperellum. Foram realizados tres experimentos sendo que o primeiro no LAFIT e LAPOA, onde foi feito o teste in vitro, submetendo-se trinta isolados aos meios V8 agar, extrato de folha agar (EF), aveia dextrose agar (ADA), batata dextrose agar (BDA), nas temperaturas de 15, 25 e 35 oC e regimes de luz, escuro e luz continua e luz alternada, incubados em B.O. D. O crescimento micelial (CM) foi avaliado em intervalos de 24 horas ate sete dias e a esporulacao foi quantificada em câmara de Newbauer e ajustada a 105 esporos/mL. Em seguida, foi feita a caracterizacao molecular com 38 isolados por meio de marcadores ISSR e a similaridade genetica quantificada pelo indice de Jaccard. O delineamento experimental utilizado na caracterizacao morfofisiologica foi o inteiramente casualizado em arranjo fatorial, 30 isolados, quatro meios de cultura: AV, BDA, EF e V8, tres regimes de luz: claro continuo, luz alternada e luz continua e tres temperaturas: 15, 25 e 35 oC com 12 repeticoes, constituindo um total de 12.960 placas de Petri, considerando uma placa de Petri por repeticao. A analise de variância dos isolados foi realizada atraves do teste F (p ≤ 0,05). As medias gerais foram comparadas pelo teste Scott-Knott (p ≤ 0,05) e as demais pelo teste Tukey (p ≤ 0,05). As analises estatisticas foram realizadas utilizando os softwares SISVAR® 5.3 e SAS/STAT® 9.3. A diversidade genetica nos trinta e oito isolados avaliados foi determinada com base na presenca e ausencia de fragmentos de DNA amplificados por tres primers e visualizados em geis de eletroforese. As imagens foram processadas no software BioNumerics® para analise de similaridade genetica de Jaccard. O dendrograma foi obtido pelas medias aritmeticas dos grupos de isolados formados em pares de dados combinados (UPGMA). Independente do local de coleta e da condicao de cultivo utilizada, todos os isolados apresentaram diferenca estatistica em relacao ao crescimento micelial e esporulacao. Os isolados de A. alternata patotipo tangerina coletados de Massaranduba-PB apresentaram alto crescimento micelial, esporulacao e alta diversidade genetica em relacao aos demais isolados avaliados. De forma geral, o regime de luz continuo, a 25 °C nos meios BDA e V8 foram os ideais para o crescimento micelial e esporulacao dos isolados avaliados A. alternata patotipo tangerina, no entanto, escuro continuo em meio AV foi melhor aos isolados de Pratânia-SP ate o setimo dia de avaliacao. Todos os isolados apresentaram alta diversidade genetica entre eles e ocorreu uma tendencia de agrupamento por local demonstrada pelos marcadores morfofisiologicos e moleculares avaliados. O segundo experimento, foi realizado no LAFIT e LAPOA, onde frutos de tangerina ‘Dancy’ foram desinfestados e imersos em extrato de C. ferrea nas concentracoes 0; 10; 100; 500 e 1000 μg/mL, Quitosana® a 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 g/L. e T. asperellum a 1010 esporos/mL. Apos 24 h da aplicacao dos tratamentos, foi inoculado A. alternata (105 esporos/mL) nos frutos. No segundo dia apos a inoculacao (DAI), foram realizadas diariamente as avaliacoes da severidade em frutos de tangerineira ‘Dancy’ ate atingir a ultima escala de notas que se deu no decimo segundo dia e tambem verificou-se as atividades enzimaticas de fenil alanina amonia-liase, peroxidase e polifenoloxidase e a pos-colheita em frutos de tangerineira ‘Dancy’. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com 10 tratamentos (0; 10; 100; 500 e 1000 μg/mL do extrato de C. ferrea), (0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 g/L da Quitosana®), (1010 esporos/mL de T. asperellum) e cinco repeticoes de cinco frutos, constituindo uma unidade experimental com 250 frutos de tangerineira ‘Dancy’. As concentracoes 500 μg/mL do extrato de C. ferrea, 1,5 g/L de Quitosana® e T. asperellum reduziram a severidade da MMA, promoveram alta atividade das enzimas fenil alanina amonia-liase, peroxidase e polifenoloxidase e em todos os tratamentos mantiveram a qualidade pos-colheita em frutos de tangerineira ‘Dancy’. O terceiro experimento, foi realizado no LAFIT e LAPOA, onde as mudas com 90 dias apos a enxertia foram pulverizadas com extrato de C. ferrea nas concentracoes de 0; 10; 100; 500 e 1000 μg/mL, acondicionadas em câmara umida e mantidas em temperatura ambiente (28 ± 2 oC). Apos 24 horas da pulverizacao com o extrato, foi realizada a inoculacao de A. alternata (105 esporos/mL) e apos as 96 horas da inoculacao ate o vigesimo terceiro dia, foram feitas as avaliacoes de incidencia, severidade, AACPD. Para as analises das atividades enzimatica, foram retiradas tres folhas/repeticao no primeiro e no ultimo dia do experimento. O delineamento foi inteiramente casualizado com cinco tratamentos (0; 10; 100; 500 e 1000 μg/mL do extrato de C. ferrea) e 25 repeticoes, formando a unidade experimental com 125 mudas. Nos dois ultimos experimentos, foram realizados analises de regressao para as concentracoes dos produtos, os dados foram submetidos a analise de variância e as medias comparadas pelo teste de Dunnett (P ≤ 0,05) no programa SAS® System 9.3. Verificou-se que as concentracoes 100 e 500 μg/mL do extrato de C. ferrea reduziram a incidencia de A. alternata e a severidade da MMA, apresentaram baixa atividade da enzima fenil alanina amonia-liase, porem, promoveram altas atividades da peroxidase e polifenoloxidase em folhas de tangerineira ‘Dancy’.