Le rôle de CD81 et de ses protéines associées dans le mécanisme d'entrée du virus de l'hépatite C

Le virus de l'hepatite C (VHC) touche 2 a 3% de la population mondiale et la plupart des individus infectes developpe une hepatite chronique qui est fortement associee au developpement d'un cancer du foie. Bien que les mecanismes de regulation de l'entree du VHC dans ses cellules cibles, les hepatocytes, soient encore tres mal connus, plusieurs proteines de surface cellulaire ont ete identifiees comme des facteurs necessaires a l'entree virale. Parmi ces proteines, la te��traspanine CD81 est essentielle a l'entree du VHC. Les membres de la famille des tetraspanines ont la particularite de s'associer entre eux et avec d'autres proteines, appelees partenaires, pour former des complexes multimoleculaires dans des microdomaines appeles microdomaines enrichis en tetraspanines (TEM). Dans notre etude, nous avons analyse le role de CD81 et de ses proteines associees dans le mecanisme d'entree du VHC. En effet, nous avons identifie un nouveau partenaire de CD81, EWI-2wint, qui inhibe l'infection par le VHC, et nous avons analyse le role de la fraction de CD81 associee aux TEM dans l'infection par le VHC. Dans un premier temps, nous avons donc montre qu'EWI-2wint, un nouveau partenaire de CD81, est exprime dans differentes lignees cellulaires mais pas dans les hepatocytes. L'expression ectopique d'EWI-2wint dans des Huh-7, une lignee de cellules hepatiques susceptibles a l'infection par le VHC, bloque l'entree virale. Nous avons pu montrer que ce blocage se fait par une inhibition de l'interaction entre CD81 et les glycoproteines d'enveloppe presentes a la surface des particules virales. Notre travail suggere ainsi que l'hepatotropisme du VHC ne serait pas lie uniquement a la presence de facteurs d'entree specifiques, mais egalement a l'absence du facteur inhibiteur EWI-2wint. Ce type de mecanisme de controle de l'entree virale par un inhibiteur cellulaire n'avait jamais ete decrit auparavant. En parallele, nous avons montre que l'entree du VHC est directement correlee au niveau d'expression de CD81 dans les cellules hepatocytaires. En utilisant des particules du VHC hautement infectieuses produites en culture cellulaire, nous avons isole des clones cellulaires independants presentant des niveaux d'infection variables. Parmi ces clones, un clone resistant a l'infection avait perdu l'expression de CD81 (cellules Huh-7w7) et l'expression ectopique de la CD81 humaine (hCD81) permet de restaurer la permissivite de ces cellules. De maniere interessante, l'expression ectopique de la CD81 d'origine murine (mCD81) dans les cellules Huh-7w7 restaure egalement la permissivite au virus, suggerant que la mCD81 dans un contexte cellulaire humain est capable de mimer la hCD81 dans le mecanisme d'entree du VHC et probablement dans les interactions avec les facteurs cellulaires. Nous avons donc utilise ces cellules exprimant la mCD81 et des anticorps monoclonaux decrits precedemment, MT81/MT81w, pour analyser le role de CD81 associee aux TEM dans l'infection par le VHC. L'anticorps MT81w, qui reconnait uniquement CD81 associee aux TEM, n'inhibait pas l'infection et la depletion des cellules en cholesterol, qui inhibe l'infection, n'affectait pas les niveaux de CD81 associee aux TEM. De maniere similaire, le traitement des cellules avec la sphingomielinase, qui reduit l'infection, augmentait les niveaux de CD81 associee aux TEM. En resume, nous avons montre que l'entree du VHC dans ses cellules cibles est directement liee au niveau d'expression de CD81 et la sous-population de CD81 associee aux TEM ne participe pas aux etapes initiales du cycle viral du VHC