Papel del estrés oxidativo y la inflamación en la retinosis pigmentaria. Efecto de la inhibición del TNFA en la progresión de la degeneración retiniana.

Las degeneraciones retinianas son la principal causa de ceguera hereditaria debida, principalmente, a la perdida de los fotorreceptores, los conos y los bastones. La retinosis pigmentaria (RP) es una forma frecuente de degeneracion retiniana que constituye la principal causa genetica de ceguera en los paises desarrollados. Las mutaciones geneticas son las responsables de la muerte de los bastones. Sin embargo, la muerte de los conos parece debida a los cambios metabolicos que provoca la degeneracion de los bastones como la hiperoxia (estres oxidativo y nitrosativo), la secrecion de diversos factores (citoquinas, quimioquinas) por parte de los bastones y otras celulas del entorno, etc. La muerte de los conos provoca la perdida de la vision central en RP. El principal objetivo de esta tesis es profundizar en el papel del estres oxidativo y la inflamacion en la muerte de los fotorreceptores en la RP. Para ello, en primer lugar, se analizo la respuesta antioxidante, la presencia de marcadores de estres oxidativo/nitrosativo y el contenido de citoquinas en humor acuoso y en sangre periferica de pacientes con RP, que pudiesen estar implicados en la progresion o en el retraso de la enfermedad. En segundo lugar, se desarrollo un modelo ex vivo de degeneracion retiniana mediante la realizacion de cultivos organotipicos de retina porcina expuestos a Zaprinast, un inhibidor de fosfodiesterasas (PDEs), simulando una de las mutaciones tipicas de RP. Por ultimo, se evaluo el efecto de la inhibicion de TNF? con anticuerpos anti-TNF? sobre la progresion de la degeneracion retiniana en el modelo ex vivo de retina porcina y en un modelo in vivo de RP, el raton rd10. Los resultados obtenidos en este estudio muestran que los pacientes con RP presentan una deficiente respuesta antioxidante en el ojo y niveles elevados de algunos marcadores de estres oxidativo/nitrosativo en sangre periferica. A nivel ocular, estos pacientes tienen menor capacidad antioxidante total incluyendo una menor actividad del enzima superoxido dismutasa (SOD) 3. A nivel periferico, tambien presentan menor actividad del enzima SOD3, ademas de un incremento de indicadores de peroxidacion lipidica y una activacion de la via oxido nitrico/GMP ciclico. Los pacientes con mejor respuesta antioxidante ocular mostraban mejor funcion visual sugiriendo un papel del estres oxidativo en la progresion de la enfermedad. Por otro lado, se observo un incremento de la concentracion de IL-6 y TNF? en el humor acuoso de estos pacientes corroborando resultados obtenidos por otros autores que sugieren que en RP existe una inflamacion cronica sostenida. El modelo experimental de degeneracion retiniana ex vivo, reproduce algunas de las alteraciones que se han descrito en modelos murinos y en pacientes con RP. En este modelo la degeneracion retiniana observada al inhibir el enzima PDE6 con Zaprinast, va acompanada de estres oxidativo e inflamacion. En este modelo la inhibicion de TNF? con el anticuerpo Infliximab, reduce la degeneracion retiniana, la activacion de las celulas de Muller y normaliza la capacidad antioxidante total aunque no reduce el contenido de marcadores de estres oxidativo. En el raton rd10, el tratamiento con Adalimumab, anticuerpo monoclonal anti-TNF? , reduce la muerte de los fotorreceptores y la gliosis reactiva a dia postnatal 18. La inhibicion de TNF? reduce la actividad de la poli(ADP) ribosa polimerasa (PARP), enzima implicada en el proceso de muerte celular, previene la sobreexpresion de las citoquinas TNF? y factor inhibidor de leucemia (LIF) y mejora la respuesta antioxidante. En definitiva, estos resultados confirman la hipotesis de que alteraciones del sistema antioxidante y los procesos inflamatorios a nivel ocular estan implicados en la patogenesis de la RP en pacientes. El modelo ex vivo de degeneracion retiniana en retina porcina puede ser un modelo alternativo util para la busqueda de dianas terapeuticas y el ensayo de diversas drogas que prevengan o retrasen la muerte de los fotorreceptores. Nuestros resultados sugieren que en RP el TNF? desempena un papel importante en la muerte de las celulas de la retina activando diversas vias de muerte celular. El diseno de estrategias que promuevan su bloqueo pueden ser terapias prometedoras en pacientes con RP.