The Meleagrid herpesvirus 1 Genome Is Partially Resistant to Transposition

SUMMARY. The propagation of herpesvirus genomes as infectious bacterial artificial chromosomes (iBAC) has enabled the application of highly efficient strategies to investigate gene function across the genome. One of these strategies, transposition, has been used successfully on a number of herpesvirus iBACs to generate libraries of gene disruption mutants. Gene deletion studies aimed at determining the dispensable gene repertoire of the Meleagrid herpesvirus 1 (MeHV-1) genome to enhance the utility of this virus as a vaccine vector have been conducted in this report. A MeHV-1 iBAC was used in combination with the Tn5 and MuA transposition systems in an attempt to generate MeHV-1 gene interruption libraries. However, these studies demonstrated that Tn5 transposition events into the MeHV-1 genome occurred at unexpectedly low frequencies. Furthermore, characterization of genomic locations of the rare Tn5 transposon insertion events indicated a nonrandom distribution within the viral genome, with seven of the 24 insertions occurring within the gene encoding infected cell protein 4. Although insertion events with the MuA system occurred at higher frequency compared with the Tn5 system, fewer insertion events were generated than has previously been reported with this system. The characterization and distribution of these MeHV-1 iBAC transposed mutants is discussed at both the nucleotide and genomic level, and the properties of the MeHV-1 genome that could influence transposition frequency are discussed. RESUMEN. El genoma del herpesvirus de los pavos 1 es parcialmente resistente a la transposición. La propagación de los genomas de herpesvirus dentro de cromosomas bacterianos artificiales (con las siglas en inglés iBAC) ha permitido la aplicación de estrategias altamente eficientes para investigar la función de los genes en todo el genoma. Una de estas estrategias, que es la transposición, se ha utilizado exitosamente con varios herpesvirus propagados dentro de cromosomas bacterianos artificiales para generar bibliotecas de mutantes con genes interrumpidos. En este trabajo se realizaron estudios mediante la supresión de genes con el objetivo de determinar el repertorio de genes prescindibles del genoma del herpesvirus de los pavos 1 (MeHV-1), con el fin de aumentar la utilidad de este virus como una vacuna recombinante. Se utilizó un herpesvirus de los pavos 1 propagado en un cromosoma bacteriano artificial en combinación con los sistemas de transposición Tn5 y MuA en un intento por generar librerías de herpesvirus de pavos con genes interrumpidos. Sin embargo, estos estudios han demostrado que los eventos de transposición por el sistema Tn5 dentro del genoma de este herpesvirus se produjeron en frecuencias inesperadamente bajas. Además, la caracterización de las ubicaciones genómicas de estos raros eventos de inserción del transposón por Tn5 indicaron una distribución no aleatoria dentro del genoma viral, en donde siete de las 24 inserciones ocurrieron dentro del gene que codifica a ICP4. Aunque los eventos de inserción con el sistema de MuA ocurrieron con una frecuencia más alta en comparación con el sistema de Tn5, se generaron un menor número de eventos de inserción en comparación con los que previamente se habían informado con este sistema. La caracterización y distribución de estos mutantes del herpesvirus de los pavos propagados en cromosomas artificiales se discute tanto a nivel de nucleótidos como genómico, y también se discuten las propiedades del genoma del herpesvirus de los pavos 1 que podrían influir en la frecuencia de transposición.