Répression de l’expression génique contrôlée par l’ARN et les histones chaperonnes chez la levure fissipare Schizosaccharomyces pombe

Une fraction non negligeable de proteines qui controlent la dynamique de la chromatine et la transcription est conservee au cours de l'evolution chez les eucaryotes. Ces proteines se retrouvent deregulees dans de nombreuses maladies, dont les cancers. Dans cette etude, nous avons exploite la purification de deux proteines associees a la chromatine pour etudier de nouveaux acteurs impliques dans la reduction au silence (ou silencing) de la transcription au sein de l'heterochromatine et/ou de l'euchromatine chez la levure Schizosaccharomyces pombe, un modele de reference pour la biologie de la chromatine.Mmi1 est un facteur de liaison a l'ARN capable de guider la formation d'heterochromatine facultative sur des genes meiotiques. Parmi les proteines partenaires de Mmi1, nous nous sommes interesses a Ccr4-Not, un complexe multifonctionnel, conserve de la levure a l'Homme, important pour la maturation de l'extremite 3' des ARNs et pour le controle de l'expression des genes. Nos travaux montrent que Ccr4-Not est egalement necessaire pour le depot de la marque H3K9 methylee aux genes cibles de Mmi1, ainsi que pour le silencing de la transcription au sein de l'heterochromatine constitutive, independamment de Mmi1.En parallele, nous avons etudie deux nouveaux partenaires potentiels de RITS (RNA-Induced Transcriptional Silencing), un complexe necessaire a la formation de l'heterochromatine et l'inactivation de gene. Ces partenaires agiraient a l'interface entre la regulation de la chromatine et de la transcription. Le premier partenaire est l'histone chaperonne Spt6. Une caracterisation initiale entreprise sur Spt6 a montre son role crucial dans le silencing des genes a l'heterochromatine constitutive et facultative. Le second partenaire est Abo1, une histone chaperonne putative et homologue a la proteine humaine ATAD2, une proteine exprimee dans de nombreuses tumeurs et consideree comme une cible prometteuse pour le traitement de certains cancers, bien qu'a ce jour il n'y ait que peu d'information disponible sur sa fonction moleculaire. Nous avons dans un premier temps montre qu'Abo1 est necessaire pour le silencing de la transcription au sein de l'heterochromatine constitutive. Cependant, l'analyse du transcriptome des cellules abo1Δ a montre qu'Abo1 est egalement necessaire au silencing transcriptionel de nombreux genes codant et non-codant localises dans l'euchromatine. Par la suite, nous avons purifie Abo1 et identifie par spectrometrie de masse le reseau des proteines qui lui est associe. Cette approche proteomique a montre qu'Abo1 est connectee a de nombreuses proteines impliquees dans le controle de la transcription, comme des histones chaperonnes et des complexes de remodelage ATP-dependant de la chromatine. Enfin, nous avons montre que le defaut de croissance severe observe dans les cellules abo1Δ est completement retabli par l'expression de ATAD2 humain. Ce dernier resultat indique que la caracterisation fonctionnelle d'Abo1, entreprise dans la levure, a le potentiel de fournir des informations importantes sur la fonction moleculaire non seulement d'Abo1, mais aussi d'ATAD2 et de son lien avec les cancers.En resume, nos resultats permettent une meilleure comprehension de la fonction de trois acteurs impliques dans le silencing de la transcription chez la levure fissipare. De plus, la caracterisation plus approfondie d'Abo1 pourrait grandement contribuer a elucider la fonction d'ATAD2 et de son role dans les cancers.