Avaluació de la immunogenicitat de la vacuna RUTI® en humans

El projecte principal d'aquesta tesi es la valoracio de la resposta immune induida per la vacuna RUTI®en el context d'un estudi de Fase 1. La hipotesi fromulada fou que la RUTI®, per ser una vacuna generada a partir dels fragments de M.tuberculosis cultivats en estres, pot generar una resposta poliantigenica segura en pacients no infectats. Per aixo, l'objectiu fou dissenyar i dur a terme l'avaluacio de la immunogenicitat de la vacuna RUTI®per primera vegada en humans. L'estudi va implicar dues fases: la preparacio i l'execucio, d'un any i mig de duracio, que foren seguides d'un altre any per a analitzar les dades obtingudes i la consequent redaccio dels documents pertinents. La preparacio va incloure el treball conceptual de disseny de l'estudi; l'eleccio i l'establiment de tecniques que serien utilitzades en l'execucio; l'organitzacio logistica de l'execucio i el redactat dels procediments especifics referents a les tecniques. Durant la planificacio varen sorgir dubtes conceptuals que es varen haver de resoldre i varen generar dos estudis menors, que tambe s'han inclos: 1) l' avaluacio de la produccio d'autoanticossos en serum de ratolins vacunats amb RUTI® i 2) la deteccio d' ITBL durant l'screening: avaluacio de la influencia del TST sobre les respostes immunologiques mesurades per TIGRA. El primer estudi va demostrar que la vacunacio amb RUTI® no indueix ANA detectables en serum pero que la infeccio per M.tuberculosis si, i de forma independent del tractament administrat. La conclusio de l'estudi numero 2 fou que en realitzar el TST quinze dies abans de comencar el seguiment dels voluntaris, no es podia excloure en absolut detectar mitjancant TIGRA unes respostes immunologiques alterades ficticiament, fins i tot tractant-se d'individus sans. Els resultats obtinguts foren suficientment alarmants com per a decidir no incloure el TST a l'screening de l'assaig de Fase 1. El veritable cos del projecte, l'avaluacio de la immunogenicitat de RUTI®en humans, es descriu al text com a estudi numero 3. Dut a terme en el context d'un assaig clinic de Fase 1, pretenia avaluar la immunogenicitat de 4 dosis diferents de la vacuna en individus sans. Testades sequencialment per tal de detectar qualsevol efecte secundari que pugues posar en perill la seguretat dels voluntaris, cadascuna de les dosis fou assajada en 4 voluntaris sans dins d'un grup en que tambe participaven 2 voluntaris que foren vacunats amb placebo. La vacuna es va administrar dues vegades separades per 28 dies, i el seguiment dels participants es va allargar a 6 mesos cadascun. Donat que abans de comencar l'assaig de Fase 1, es desconeixien els possibles efectes de la vacuna RUTI®en humans i que aquesta havia estat dissenyada per al tractament de la ITBL, es desconeixia si en poblacio sana la RUTI®tindria la forca suficient per a generar una resposta especifica en contra de M.tuberculosis que fos mesurable. Per aixo es va incloure un rang tan ampli de tecniques amb dues finalitats: 1) per a avaluar l'impacte de la vacunacio sobre les respostes immunologiques, per tal de detectar qualsevol resposta deguda a la RUTI®, i 2) determinar quins assajos serien utils en els futurs estudis del desenvolupament clinic. Els resultats de les tecniques que avaluaven la resposta cel·lular van demostrar una tendencia dosi-resposta per la majoria d'assajos, assenyalant la dosi de 25µg de FCMtb com la mes poliantigenica. L'avaluacio de la resposta humoral va demostrar una pauta d'increment d'IgM enfront els antigens de M.tuberculosis amb uns nivells d'IgG baixos similar a la que existeix en individus contactes de malalts tuberculosos. En quant a relacio entre els resultats de l'avaluacio de seguretat i la d'immunogenicitat, si be els EA locals semblaren mantenir certa correlacio amb l'assaig de memoria unicament, una resposta immunologica especifica deguda a la vacunacio amb RUTI®no va implicar una mes alta incidencia d'EA. Les conclusions del treball serien que: 1) la vacuna RUTI®es immunogenica en individus sans, 2) les respostes immunologiques de tipus cel·lulars aconseguides en general seguiren una tendencia dosi-resposta, obtenint la resposta mes poliantigenica amb la dosi de 25µg de FCMtb; i 3) com a experiencia de l'estudi, en la realitzacio en assajos futurs caldria incloure en el desenvolupament clinic de la vacuna: a) l'avaluacio de la immunitat cel·lular mitjancant ELISPOT enfront PPD i els antigens de M.tuberculosis ESAT-6, 85B, i 16 i 38kDa; b) l'assaig de memoria; i c) l'avaluacio de la resposta humoral enfront els mateixos antigens.