USING A COMMERCIALLY AVAILABLE RADIOIMMUNOASSAY TO QUANTIFY CORTICOSTERONE IN AVIAN PLASMA

Abstract Using a commercially available corticosterone I125 double-antibody radioimmunoassay, we developed and validated an assay procedure for determining corticosterone levels in small-volume (≤30 μL) avian plasma samples. We evaluated this procedure's utility by measuring plasma corticosterone levels in Indigo Buntings (Passerina cyanea), American Goldfinches (Carduelis tristis), Red-eyed Vireos (Vireo olivaceus), and Mourning Doves (Zenaida macroura). Standard biochemical validations (e.g., parallelism, recovery of exogenous corticosterone) demonstrated that the assay accurately and precisely measured corticosterone in avian plasma. We used a stress capture protocol to physiologically validate the assay's ability to determine biologically important changes in corticosterone levels. Males and females from four bird species exhibited a significant increase in plasma corticosterone in response to capture, handling, and restraint. Baseline and stress-induced corticosterone levels in our study were similar to reported values for other passerine species using other radioimmunoassay procedures. Our results suggest that this radioimmunoassay procedure is very effective for determining corticosterone levels in small-volume avian plasma samples and is sensitive enough to detect biologically important changes in the adrenocortical activity of birds. Thus, this assay has considerable utility for measuring stress levels and stress responses in small birds (<15 g), from which only small volumes of plasma (≤30 μL) can be collected. Utilización de un Radioinmunoensayo Disponible Comercialmente para la Cuantificación de Corticosterona en el Plasma de Aves Resumen. Desarrollamos y validamos un proceso de ensayo para determinar los niveles de corticosterona en muestras de pequeño volúmen (≤30 μL) de plasma de aves utilizando un radioinmunoensayo para corticosterona I125 de doble anticuerpo disponible comercialmente. Evaluamos este procedimiento midiendo los niveles de corticosterona en Passerina cyanea, Carduelis tristis, Vireo olivaceus y Zenaida macroura. Validaciones bioquímicas estándares (e.g., paralelismo, recuperación de corticoesteroide exógeno) demostraron que el ensayo midió de modo exacto y preciso la corticosterona en el plasma de las aves. Utilizamos un protocolo de captura que producía estrés para validar fisiológicamente la habilidad del ensayo de detectar cambios biológicamente importantes en los niveles de corticosterona. Hembras y machos de las cuatro especies de aves mostraron un incremento significativo en los niveles de corticosterona en el plasma en respuesta a la captura, manipulación y retención. Los niveles basales e inducidos por el estrés de nuestro estudio fueron similares a valores reportados para otras especies paserinas que utilizaron otros procedimientos de inmunoensayo. Nuestros resultados sugieren que este procedimiento de radioinmunoensayo es muy efectivo para determinar los niveles de corticosterona en muestras de pequeño volúmen de plasma de aves y que es suficientemente sensible como para detectar cambios biológicamente importantes en la actividad adenocortical de las aves. De esta manera, este ensayo presenta considerable utilidad para medir los niveles y respuesta al estrés en aves pequeñas (<15 g) de las cuales sólo es posible colectar pequeños volúmenes de plasma (≤30 μL).