GERMINATION, EFFECT OF PLANT GROWTH REGULATORS, AND CHITOSAN ON THE MASS PROPAGATION OF STANHOPEA

Stanhopea hernandezii was collected from natural habitat in Mexico for its beautiful fragrant flowers. Biotechnological strategies of propagation may satisfy the market demand and are useful for conservation programs. Vigorous seedlings of S. hernandezii can be produced in vitro by asymbiotic seed germination techniques and the addition of chitosan to the culture medium in the temporary immersion system (RITA) and in semi-solid medium systems. The first step was the in vitro germination of seeds obtained from a mature capsule of wild plants, followed by multiplication via adventitious protocorm induction known as protocorm-like bodies, using plant growth regulators. For this purpose, we utilized Murashige and Skoog (MS) basal medium amended with 0.5 mg/L α-Naphthaleneacetic acid, combined with different concentrations of 6Benzylaminepurine (1, 3, and 5 mg/L). The following step comprised the growth and development of protocorms to obtain plantlets in RITA flasks containing 250 mL of liquid MS medium combined or not with different chitosan concentrations (5, 10, 15, 20, and 25 mg/L). The results showed that media supplemented with 5, 10, and 15 mg/L chitosan concentrations enabled the obtaining of a larger biomass with a range of 40-48 seedlings/RITA and an average height of 13 mm. The last step was the development from seedlings into plantlets, the latter being, vigorous and achieving up to 100 % survival after 12 weeks of ex vitro cultivation. This paper describes an efficient process of asymbiotic germination and mass propagation of S. hernandezii, a vulnerable orchid species endemic to Mexico. Micropropagation, orchid, protocorm-like bodies, temporary immersion system. Resumen Stanhopea hernandezii es colectada de su hábitat natural en México por sus bellas y fragantes flores. Las estrategias biotecnológicas de propagación pueden satisfacer las demandas del mercado y ser de utilidad en los programas de conservación. Plántulas vigorosas de S. hernandezii pueden producirse in vitro mediante la germinación asimbiótica de semillas y adición de quitosano al medio de cultivo en sistemas de inmersión temporal (RITA) y medio semisólido. El primer paso fue la germinación in vitro de semillas obtenidas de cápsulas maduras procedentes de plantas silvestres, seguido por la multiplicación vía inducción de protocormos adventicios conocidos como cuerpos parecidos a protocormos, usando reguladores de crecimiento vegetal. Nosotros usamos medio basal Murashige y Skoog (MS) adicionado con 0.5 mg/L de ácido α-naftalenacético combinado con diferentes concentraciones de 6-bencilaminopurina (1, 3 y 5 mg/L). El siguiente paso fue el desarrollo y crecimiento de protocormos para la obtención de plántulas en contenedores RITA con 250 mL de medio MS líquido combinado o no con 5, 10, 15, 20 y 25 mg/L de quitosano. El medio suplementado con quitosano a concentraciones de 5, 10 y 15 mg/L permitió obtener la mayor cantidad de biomasa, entre 40 a 48 plántulas por RITA de 13 mm de altura promedio. Después de 12 semanas de cultivo ex vitro el desarrollo de las plántulas fue vigoroso y se alcanzó un 100 % de supervivencia. Este artículo describe un proceso eficaz de germinación asimbiótica y propagación masiva de una especie vulnerable y endémica de México. Cuerpos parecidos a protocormos, micropropagación, orquídea, sistema de inmersión temporal. Background: