Detection of turkey coronavirus in commercial turkey poults in Brazil

Poult enteritis complex has been incriminated as a major cause of loss among turkey poults in other countries. We have observed this in Brazil, associated with diarrhoea, loss of weight gain and, commonly, high mortality. In this study, we have used the reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) to detect turkey coronavirus (TCoV) in sick poults 30 to 120 days of age from a particular producer region in Brazil. The RT-PCR was applied to extracts of intestine tissue suspensions, and the respective intestinal contents, bursa of Fabrícius, faecal droppings and cloacal swabs. Primers were used to amplify the conserved 3′ untranslated region of the genome, and the nucleocapsid protein gene of TCoV. Histopathological and direct immunohistochemical examinations were performed to detect TCoV antigen in infected intestine and bursa slides. All the results from stained tissues revealed lesions as described previously for TCoV infection. The direct immunohistochemical positive signal was present in all intestine slides. However, all bursa of Fabrícius tissues analysed were negative. RT-PCR findings were positive for TCoV in all faecal droppings samples, and in 27% of cloacal swabs. Finally, the best field material for TCoV diagnosis was faecal droppings and/or intestine suspensions. Détection du coronavirus de la dinde chez des dindonneaux au Brésil Le complexe entéritique du dindonneau (PEC) a été incriminé comme étant une cause majeure des pertes observées chez les dindonneaux dans d'autres pays. Nous avons observé ceci au Brésil, associé à une diarrhée, une réduction du gain de poids et généralement une mortalité élevée. Dans cette étude, nous avons utilisé une réaction de transcription inverse et de polymérisation en chaîne (RT-PCR) pour détecter le coronavirus de la dinde (TCoV) chez des dindonneaux malades âgés de 30 à 120 jours dans une région du Brésil où la production est importante. La RT-PCR a été appliquée à des extraits de suspensions de tissu d'intestin (IS), ainsi qu'aux contenus intestinaux (IC), bourse de Fabricius (BF), fientes fécales (FD) et écouvillons cloacaux (CS) issus des mêmes animaux. Des amorces ont été utilisées pour amplifier la région 3’ conservée non traduite (3′UTR) du génome, et le gène de la protéine de la nucléocapside du TCoV. Des examens d'histopathologie et d'immunohistochimie directe ont été réalisés pour détecter l'antigène TCoV dans les coupes d'intestins infectés et de bourse. Tous les résultats obtenus à partir des tissus colorés ont révélé des lésions comme celles décrites précédemment dans les cas d'infection par le TcoV. Le signal positif de l'immunohistochimie directe a été présent au niveau de toutes les coupes d'intestin. Cependant, toutes les BF analysées ont été négatives. Les résultats de RT-PCR ont été positifs pour le TCoV dans tous les échantillons de FD, et dans 27% des CS. Finalement, le meilleur matériel pour diagnostiquer le TCoV a été les fientes fécales et/ou les suspensions d'intestin. Nachweis von Putencoronavirus bei kommerziellen Putenküken in Brasilien Der Enteritiskomplex bei Küken wird in vielen Ländern als häufigste Ursache für Verluste bei Putenküken angesehen. Wir haben diesen Krankheitskomplex verbunden mit Diarrhoe, Gewichtsverlusten und meistens hohen Mortalitätsraten auch in Brasilien beobachtet. In dieser Studie verwendeten wir die Reverse Transkriptase-Polymerasekettenreaktion (RT-PCR) für den Putencoronavirus(TCoV)-Nachweis bei erkrankten Putenküken im Alter von 30- 120 Tagen aus einer bestimmten Produktionsregion in Brasilien. Die RT-PCR wurde mit Extrakten von Darmgewebsproben (IS), entsprechendem Darminhalt (IC), Bursa Fabricii (BF), Kotproben (FD) und Kloakenabstrichen durchgeführt. Es wurden Primer für die Amplifikation der konservierten, nicht translatierten 3’ Region (3'UTR) des Genoms und des Nukleokapsid-Proteingens des TcoV verwendet. Zum Nachweis des TCoV-Antigens in Schnitten von infiziertem Darm- und Bursagewebe wurden histopathologische und direkte immunhistochemische Untersuchungen vorgenommen. Alle beobachteten Veränderungen in den gefärbten Geweben stimmten mit den in der Literatur beschriebenen Veränderungen einer TCoV-Infektion überein. Bei der direkten immunhistochemischen Untersuchung wiesen alle Darmschnitte positive Reaktionen auf, wohingegen alle BF negativ waren. alle FD-Proben sowie 27% der CS-Proben waren in der RT-PCR für TCoV positiv. Daraus ergibt sich, dass sich Kotproben und/oder Darmsuspensionen am besten für die Diagnose von TCoV in Probenmaterial aus dem Feld eignen. Detección de coronavirus del pavo en pavipollos comerciales en Brasil El síndrome de enteritis del pavipollo (PEC) ha sido identificado como una de las principales causas de pérdidas económicas en pavipollos en otros países. Nosotros hemos observado este síndrome en Brasil, asociado a diarrea, pérdida de peso y, normalmente, alta mortalidad. En este estudio se ha llevado a cabo la transcriptasa reversa y reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) para la detección del coronavirus del pavo (TCoV) en pavipollos enfermos de entre 30 y 120 días de vida, procedentes de una región concreta de Brasil. La RT-PCR se realizó a partir de extracciones de homogeneizados de tejido intestinal (IS) y los respectivos contenidos intestinales (IC), bolsa de Fabricio (BF), heces (FD) e hisopos cloacales (CS). Para la amplificación de la región no codificante 3’ (3'UTR) del genoma y del gen de la nucleocápside del TCoV se utilizaron cebadores. Se llevaron a cabo estudios histopatológicos y la técnica de immunocitoquímica directa para la detección del antígeno de TCoV en preparaciones de intestinos infectados y de bolsas de Fabricio. Todos los resultados de las tinciones mostraron lesiones previamente descritas en la infección por TCoV. Se observaron tinciones positivas en immunocitoquímica directa de todas las muestras intestinales. Sin embargo, todas las BF analizadas fueron negativas. Todas las muestras de FD y un 27% de las de CS fueron positivas mediante RT-PCR. Finalmente, se determinó que la mejor muestra para el diagnóstico de TCoV son las heces y/o los homogeneizados intestinales.