Entwicklung serologischer Nachweisverfahren einer Taubencircovirusinfektion auf der Basis eines rekombinanten Kapsidproteinantigens

Infektionen mit Pigeon-Circovirus gelten als Wegbereiter fur ein verlustreiches und bei jungen Brieftauben weit verbreitetes multifaktorielles Krankheitsgeschehen, der Jungtaubenkrankheit. Neben der klinisch manifesten Form einer PiCV-Infektion kommt es auch zu subklinischen Infektionen, die am lebenden Tier durch die bislang entwickelten Nachweismethoden nicht sicher zu diagnostizieren sind. Im Rahmen dieser Arbeit wurde ein indirektes Virusnachweisverfahren entwickelt und zur Untersuchung von Taubenseren eingesetzt. Da PiCV nicht mit klassisch-kulturellen Verfahren vermehrt werden kann, wurde das Antigen fur die Antikorperdetektion, basierend auf dem PiCV-Kapsidprotein, rekombinant in E. coli exprimiert. Um die Expression des Virusproteins im prokaryotischen System zu erleichtern, wurde die cap-Sequenz ohne die Arginin-Codon-reichen, 5’-terminalen 117 Nukleotide kloniert. Ein 5’-terminal eingefugter 6xHistidin-Tag ermoglichte die Aufreinigung mittels Metall-Affinitats-Chromatographie und den Nachweis des rekombinanten Kapsidproteins rCapPiCV uber anti-His-Antikorper. Durch Expression des Konstrukts und anschliesende denaturierende Aufreinigung konnte rCapPiCV in groser Menge und hoher Reinheit gewonnen werden. Durch vergleichende Untersuchung der Reaktivitat von rCapPiCV gegen Praimmun- und Immunseren von experimentell PiCV-infizierten Tauben und einem anti-His-Antikorper im Western Blot konnte die spezifische Bindung von anti-PiCV-Antikorpern durch das rekombinante Protein gezeigt werden. Damit gelang erstmals der Nachweis von anti-PiCV-Antikorpern. Auf der Basis des rCapPiCV wurde ein indirekter ELISA entwickelt und zur Untersuchung von Taubenseren eingesetzt. Mit Hilfe des rCapPiCV-ELISAs konnte die Serokonversion experimentell PiCV-infizierter Tauben ein bis drei Wochen p. i. gezeigt werden. Die Untersuchung im Western Blot bestatigte bei allen Seren das Ergebnis der serologischen Untersuchung im ELISA und damit die Spezifitat der Antigenpraparation. Der rCapPiCV-ELISA wurde daraufhin zur Untersuchung eines naturlich, subklinisch infizierten Taubenbestands eingesetzt und detektierte in 30 (81 %) von 37 getesteten Taubenseren anti-PiCV-Antikorper. Dadurch wurde gezeigt, dass das entwickelte indirekte Virusnachweisverfahren geeignet ist, PiCV-Infektionsgeschehen auf Bestandsebene nachzuweisen. Aus dem Patientengut der Klinik fur Vogel wurden Seren von Tauben mit unbekannten PiCV-Infektionsstatus aus den Jahren 1989, 1991 und 1994 ausgewahlt und im rCapPiCV-ELISA getestet. Von 81 Seren waren 59 (73 %) PiCV-seropositiv, was darauf schliesen lasst, dass PiCV schon vor seiner Erstbeschreibung 1997 in Deutschland in Taubenpopulationen zirkulierte. Die vorgestellten serologischen Methoden konnen in weiterfuhrenden Studien zu Epidemiologie, Pathogenese und Verlauf der PiCV-Infektion eingesetzt werden. Diese Daten aus der Forschung sind notig, um die Bedeutung der PiCV-Serologie auf Bestands- und Einzeltierebene und ihren Nutzen fur die klinische Diagnostik zu bewerten. Neben dem Einsatz zur Bindung virusspezifischer Antikorper, ist rCapPiCV eine potenzielle Subunit-Vakzine fur die PiCV-Impfstoffentwicklung.