Desarrollo de vacunas recombinantes marcadoras multiserotipo frente al virus de la lengua azul

El virus de la lengua azul (bluetongue virus, BTV) pertenece al genero Orbivirus. Se han descrito 27 serotipos. El genoma de BTV comprende 10 moleculas de RNA de doble cadena, que codifican 7 proteinas estructurales y 5 no estructurales. Es el agente etiologico de la enfermedad de la lengua azul, una enfermedad hemorragica transmitida por la mordedura de las hembras del genero Culicoides que afecta a rumiantes. El uso de modelos animales pequenos de laboratorio ha posibilitado el estudio de la patogenesis, inmunologia y ensayos de vacunacion frente a BTV, de manera rapida, economica y reproducible. En este trabajo analizamos la caracterizacion de los aspectos histopatologicos que acompanan a la infeccion por BTV en el modelo de raton IFNAR(-/-), deficiente en el receptor del IFN tipo I. La infeccion por BTV provoco una fuerte deplecion linfoide, un incremento en la presencia de monocitos/macrofagos y apoptosis en los organos diana. Ademas se detecto un aumento de algunas citoquinas proinflamatorias en estos tejidos, que correlacionaba con la carga viral encontrada en ellos. Todas estas alteraciones patologicas mimetizan las observadas en el hospedador natural, por lo que estos resultados apoyan el uso de este modelo a la hora de avanzar en el estudio de la patogenesis, interaccion virus-hospedador asi como de facilitar el desarrollo de nuevas vacunas frente a BTV. El modelo de raton IFNAR(-/-) se ha empleado en este trabajo para el estudio de nuevas estrategias de vacunacion basadas en microesferas generadas con la fraccion minima de la proteina muNS del reovirus aviar (ARV) que incorporan los antigenos VP2, VP7 y NS1 de BTV-4, o en microesferas combinadas con el vector viral vacunal recombinante MVA (virus vaccinia Ankara) expresando dichos antigenos. La vacunacion con microesferas siguiendo una estrategia de inmunizacion prime-boost confirio proteccion total frente al desafio homologo con BTV-4 y parcial frente al desafio heterologo con BTV-1, induciendo anticuerpos neutralizantes y una respuesta inmune celular T principalmente de tipo CD4, mientras que la combinacion de microesferas y rMVAs estimulo una fuerte respuesta celular T CD8, necesaria para controlar la infeccion frente a multiples serotipos, posibilitando que los animales sobrevivieran tanto al desafio homologo con BTV-4 como al heterologo con BTV-1. Por ultimo, nos centramos en el estudio de la proteina no estructural NS1, ya que es la proteina mas conservada entre todos los serotipos de BTV y principal estimulador de la respuesta inmune celular. Ambos factores son criticos para conseguir proteccion frente a multiples serotipos. En este trabajo hemos demostrado que el vector viral rMVA-NS1 indujo una fuerte respuesta inmune celular citotoxica CD8 y protegio a los animales inmunizados frente a los desafios con los serotipos 1, 4, 4M, 8 y 16 de BTV. Esta capacidad antigenica protectora reside en la region amino-terminal (aminoacidos 1-270) de NS1. Se ha descrito un epitopo T CD8 en la proteina NS1, epitopo conservado en los 27 serotipos del virus. Se ha confirmado que el peptido 152 (GQIVNPTFI) de NS1 activa una respuesta CD8 citotoxica en esplenocitos de animales inmunizados con MVA-NS1. La respuesta T CD8 protectora inducida por NS1 requiere de la presencia del epitopo T 152, epitopo inmunodominante cuya delecion suprime la capacidad protectora de esta proteina. Estos datos destacan las ventajas del uso del modelo de raton IFNAR(-/-) en los estudios de eficacia de vacunas y patogenesis de BTV. Ademas este trabajo ha permitido avanzar en el desarrollo de vacunas multiserotipo, incluyendo el uso de estrategias de inmunizacion combinadas como las aqui presentadas basadas en microesferas y rMVAs. Estos estudios demuestran la importancia de la respuesta inmune mediada por celulas CD8+ frente a proteinas tan conservadas y antigenicas como la proteina no estructural NS1 como base para un candidato de vacuna universal frente a BTV.