Etude du profil d'expression génique de pathologies tumorales thyroïdiennes se développant dans différents modèles de souris transgéniques

Les tumeurs thyroidiennes representent les tumeurs endocrines les plus frequentes. Parmi ces tumeurs les adenomes autonomes sont des tumeurs benignes se developpant secondairement a l’activation constitutive de la voie de l’AMPc. Cette activation est secondaire a des mutations somatiques survenant a differents niveaux de la cascade de signalisation induite par l’activation du recepteur TSH. La pathologie thyroidienne maligne est essentiellement representee par les carcinomes papillaires de la thyroide pour lesquelles de nombreuses modifications genetiques ont ete decrites, les plus frequentes etant les rearrangements impliquant la tyrosine kinase Ret. Differents modeles de souris transgeniques ont ete developpes et representent d’excellents outils pour etudier in vivo l’expression genique secondaire aux mutations initiales. Nous avons choisis d’utiliser la technologie des microarrays pour analyser simultanement l’expression de milliers de genes dans differents modeles de souris transgeniques developpant des pathologies thyroidiennes benignes et malignes . Au cours de cette these de doctorat, nous avons determine a l’aide de microarrays le profil d’expression genique de souris exprimant a la surface des cellules thyroidiennes de maniere specifique le recepteur A2a de l’adenosine, ce qui mene a l’activation constitutive de la voie de l’AMPc et au developpement d’une hyperthyroidie severe associee a un enorme goitre. Cette etude nous a permis d’identifier des genes dont le role potentiel dans le developpement de tumeur benigne etait jusqu’a lors inconnu. Nous avons egalement compare deux modeles murins developpant des tumeurs malignes de la thyroide. D’une part les souris exprimant le rearrangement Ret/PTC3, tres commun dans les carcinomes papillaires de la thyroides issus de la premiere vague de cancer survenu apres la catastrophe de Chernobyl, d’autre part les souris exprimant l’oncoproteine E7 derivee de l’HPV16 responsable du cancer du col de l’uterus. Les differences et les similarites entre ces deux lignees et differentes pathologie humaine ont ete decrites.La PCR quantitative en temps reel a ete utilise pour confirmer et quantifier la difference d’expression des genes d’interets entre les thyroides de souris controles de meme souche et les thyroides issues de souris transgeniques. La PCR en temps reel permet de monitorer a l’aide d’un signal fluorescent emis lors de l’hydrolyse d’une sonde, la quantite d’amplicons produite dans la reaction. La courbe d’amplification se caracterise par une phase exponentielle, suivie par une phase non exponentielle se terminant par un plateau. Contrairement aux idees recues, nous avons pu demontrer que le plateau etait explique par la depletion de la sonde hydrolysee par la Taq polymerase lors de la reaction d’amplification. Des lors que l’hydrolyse de la sonde reflete quantitativement la synthese d’amplicons, la fluorescence produite dans la phase exponentielle de la reaction reflete la concentration des amplicons produits. Nous avons donc, sur base de ces observations pu estimer la quantite d’ADN complementaire engage dans la reaction en se basant directement sur les donnees de fluorescence d’une seule courbe de PCR en temps reel sans passer par une courbe de calibration utilisant une quantite connue d’ADN complementaire.