Characterization of monoclonal antibodies against Brucella melitensis.

Summary Eight specific monoclonal antibodies were isolated from fusions of myeloma cells with spleen-cells from mice immunized with Brucella melitensis 16 M. An Enzyme-linked immunosorbent assay was used to screen the hybridoma supernatants and to determine the cross-reactivity of the monoclonal antibodies with other bacteria. Five monoclonal antibodies reacted with smooth and rough Brucella strains and with all gram-negative bacteria tested. One monoclonal antibody reacted with smooth Brucella strains and with Yersinia enterocolitica 0:9, and two monoclonal antibodies were specific for smooth Brucella strains. The latter two antibodies belonged to the antibody subclasses IgG 2 a (BM/38) and IgG 1 (BM/40). Both cultures were grown in serum-free medium and were subsequently concentrated by AMICON ultrafiltration. The protein concentrations ranged between 1 and 3.5 mg/ml, the main contamination being residues of bovine serum albumin (40—60%). Samples of the concentrated antibodies were used for peroxidase-labelling and were found to have high titres as determined by ELISA. A double antibody sandwich ELISA with both monoclonal antibodies was devised which was highly specific for Brucella melitensis 16 M. The applicability of such a test for diagnostic purposes is discussed. Zusammenfassung Brucella melitensis 16 M wurde zur Immunisierung von Mausen verwendet. Durch die Fusion von Lymphozyten immuner Tiere mit Myelomzellen wurden acht Zellinien etabliert, die spezifische Antikorper produzieren. Ein „Enzyme-linked Immunsorbent Assay” (ELISA) wurde zum Nachweis der Antikorper in den Hybridoma Uberstanden und zum Nachweis von Kreuzreaktionen mit anderen Bakterien verwendet. Funf monoklonale Antikorper reagierten mit glatten und rauhen Brucella sp. und mit allen untersuchten gramnegativen Bakterien. Ein monoklonaler Antikorper reagierte mit glatten Brucella sp. und mit Yersinia enterocolitica 0 : 9, wahrend zwei monoklonale Antikorper spezifisch fur glatte Brucella-Stamme waren. Die beiden letzteren gehorten zur IgG Subklasse 2 a (BM/38) bzw. zur Subklasse 1 (BM/40). Beide Antikorper wurden in serumfreiem Kulturmedium produziert und durch Amicon Ultrafiltration konzentriert. Die Proteinkonzentrationen lagen zwischen 1 und 3.5 mg/ml. Die Hauptkontamination bestand aus Resten von fetalem Kalberserum (40—60%). Ein Teil der konzentrierten Antikorper wurde mit Peroxidase markiert. Diese Antikorper zeigten einen hohen Titer im ELISA. Mit markiertem BM/40 und nicht-markiertem BM/38 wurde ein ELISA zum Antigennachweis etabliert. Der Test war spezifisch fur Brucella melitensis 16 M. Die mogliche Anwendung einer solchen Nachweismethode fur diagnostische Zwecke wird erortert. Resume Caracterisation d'anticorps monoclonaux contre Brucella melitensis Brucella melitensis 16 M a ete utilisee pour immuniser des souris. Par la fusion de lymphocytes des animaux immunises avec des cellules de myelome, on a etabli huit lignees cellulaires qui produisaient des anticorps. Un test ELISA (Enzyme-linked-Immunosorbent Assay) fut utilise pour la mise en evidence des anticorps dans les surnageants des hybridoma et pour detecter des reactions croisees avec d'autres bacteries. Cinq anticorps monoclonaux ont reagi avec des Brucella sp. «smooth» et «rough» et avec toutes les bactiries gram-negatives examinees. Un anticorps monoclonal a reagi avec Brucella sp. «smooth» et avec Yersinia enterocolitica 0 : 9, alors que deux anticorps monoclonaux furent specifiques pour Brucella «smooth». Ces deux derniers appartenaient aux IgG sous-classe 2 a (BM/38) et sous-classe 1 (BM/40). Les deux anticorps ont ete produits dans un milieu de culture sans serum et concentres par ultracentrifugation Amicon. Les concentrations de proteines se situaient entre 1 et 3,5 mg/ml. La contamination principale provenait de restes du serum de fœtus de veau (40—60%). Une partie des anticorps concentres furent marquis a la peroxydase. Ces anticorps presenterent un titre eleve a l'ELISA. Un test ELISA a ete developpe pour la mise en evidence de l'antigene avec BM/40 marque et BM/ 38 non marque. Le test fut specifique pour Brucella melitensis 16 M. L'emploi possible d'une telle methode pour le diagnostic est discute. Resumen La caracterizacion de los anticuerpos monoclonales anti Brucella melitensis Se utilizo Brucella melitensis 16 M para inmunizar ratones. Por medio de fusion de linfocitos de animales inmunes con celulas de mielomas se establecieron ocho lineas celulares, las cuales producen anticuerpos especificos. Se empleo un «Enzyme-linked Immunosorbent Assay» (ELISA) para la puesta en evidencia de anticuerpos en las fracciones sobrenadantes de hibridoma y para la puesta en evidencia de reacciones cruzadas con otras bacterias. Cinco anticuerpos monoclonales reaccionaban con Brucella sp. lisas y rugosas y con todas las bacterias gramnegativas estudiadas. Un anticuerpo monoclonal reacciono con Brucella sp. has y con Yersinia enterocolitica 0:9, mientras que dos anticuerpos monoclonales eran especificos para estirpes Brucella lisas. Los dos ultimos pertenecian a la subclase IgG 2 a (BM/38) y a la subclase 1 (BM/40), resp. Los anticuerpos fueron producidos en medio de cultivo libre de suero sanguineo y concentrados mediante ultrafiltracion Amicon. Las concentraciones proteicas se hallaban entre 1 y 3.5 mg/ml. La contaminacion principal consistia en restos de suero fetal de ternero (40—60%). Una parte de los anticuerpos concentrados se marco con peroxidasa. Estos anticuerpos mostraban un titulo elevado en el ELISA. Con BM/40 marcada y BM/38 sin marcar se establecio un ELISA para la puesta en evidencia de antigenos. El test era especifico para Brucella melitensis 16 M. Se delibera sobre la accion posible de este metodo de puesta en evidencia para fines diagnosticos.