Simplificación de la fertilización de ovocitos durante la producción in vitro de embriones bovinos

Resumen El objetivo de este estudio fue evaluar un nuevo procedimiento de fertilizacion in vitro (FIV) de ovocitos bovinos, en el cual se omitio la centrifugacion de los espermatozoides para los procesos de lavado y seleccion espermatica. Dentro de cada uno de los pozos de los platos convencionales de cuatro pozos (pozos externos) se introdujo un nuevo pozo mas pequeno (pozos internos) de aproximadamente 50 μl hecho en material de vidrio (0.3 mm de alto por 0.8 mm de diametro). El procedimiento consistio en llenar los pozos interno y externo con 700 μl de medio de fertilizacion, hasta que el pozo interno quedara cubierto de medio, luego se depositaron 10 CCOs por pozo interno; luego 30 μl de semen previamente descongelado se depositaron en el fondo del pozo externo. Despues de una hora se removio todo el contenido del pozo externo y se dejo el contenido del pozo interno con el medio y las celulas germinales por un periodo de incubacion de 16 h. Los presuntos cigotos fueron cultivados en medio CR1aa por un periodo de siete dias con un cambio de medio a las 72h. Como control, se utilizo un gradiente de Percoll 45-90% para la seleccion espermatica. La tasa de de ovocitos divididos fue de (70.8 vs. 73.1) y la proporcion de ovocitos que llegaron al estadio de morula y blastocisto fue de (18.8 vs. 20.3), respectivamente. Los resultados obtenidos con la nueva propuesta metodologica son similares a los obtenidos con la metodologia convencional (p in vitro . Palabras clave: centrifugacion de espermatozoides, embriones bovinos, fertilizacion in vitro . Summary This study was conducted to evaluate an in vitro fertilization (IVF) procedure that avoids the washingselection-centrifugation of spermatozoa prior to coincubation with oocytes. A special dish was constructed as follows: in the middle of each of the 4-wells of a conventional plastic dish (larger wells), another little (≈50 μl) glass dish (inner well) was placed (0.3 mm-tall x 0.8 mm in diameter), in such a way that when the larger plate was filled with 700 μl of IVF media (Fert-TALP), the inner well was also filled up to overflowing. Ten in vitro matured oocytes were set into the inner well, and 30 μl of thawed semen were placed on the bottom of the outer well. After one hour of incubation, the media from the outer well was removed, and the well with the remaining media and the germ cells, were incubated for 16 hours. Presumptive zygotes were cultured in a CR1aa media for seven days with a culture media replace at 72 h. As a control, a conventional IVF, using the classical 45-90% Percoll gradient selection, was carried out. The cleavage rates (70.8 vs. 73.1) and the proportion of oocytes reaching morula and blastocyst stages (18.8 vs. 20.3) by the "easy-IVF" were similar to the results obtained by the classical method (p in vitro reproduction procedures. Key words: bovine embryos, in vitro fertilization, sperm centrifugation. Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar um novo procedimento de fertilizacao in vitro (FIV) de oocitos bovinos, que foi omitida na centrifuga esperma lavar os processos de selecao e de esperma. Dentro de cada um dos pocos pratos convencionais quatro pocos (pocos externa) um novo bem menor (pocos internos) cerca de 50 μl fato em vidro (0,3 mm de altura por 0,8 mm de diâmetro) foram introduziu. O procedimento foi de encher pocos interna e externamente com 700 μ l meio de fertilizacao, ate que a fossa foi coberto por meios internos e, em seguida, depositadas 10 CCOs em pocos internos; entao 30 μl previamente descongelados semen foi depositado no fundo da cova fora. Depois de uma hora e retirada a todo o conteudo da cova, e foi deixada fora da domestica no conteudo do bem com o ambiente e celulas germinativas por um periodo de incubacao de 16 h. A alegada zygotes foram cultivados em meio CR1aa por um periodo de 7 dias com uma mudanca no meio-72h. Como um controle, utilizado uma gradiente de Percoll 45-90% de seleccao de espermatozoides. A taxa de oocitos foi dividida (70.8 vs 73.1) e da proporcao de oocitos que atingiu o estadio e foi Morula blastocisto (18.8 vs 20.3), respectivamente. Os resultados obtidos com a nova metodologia proposta sao semelhantes aos obtidos com a metodologia convencional (p in vitro. Palavras chave: centrifugacao de semen, embrioes bovinos, fertilizacao in vitro.