Campylobacter spp. en granjas de pollos de engorde

La campilobacteriosis es la zoonosis de transmision alimentaria mas comunmente reportada en la Union Europea (UE) desde 2005. La principal fuente de infeccion es el consumo o manipulacion de carne de pollo contaminada con Campylobacter (principalmente C. jejuni y C. coli). La alta prevalencia de Campylobacter en pollos de engorde en granja supone un elevado riesgo de contaminacion del producto final y por ende el riesgo de infeccion para el consumidor. Es por ello que para la UE es prioritaria la prevencion y reduccion del numero de lotes positivos a Campylobacter en edad de sacrificio. De ahi la importancia de conocer en profundidad el comportamiento y la epidemiologia de este patogeno. De este modo, en el marco de esta tesis (i) se estudio la diversidad y dinamica de cepas de Campylobacter de pollos de engorde en granja; (ii) se caracterizaron los aislados desde el punto de vista de resistencia a un panel de antimicrobianos asi como de genes de virulencia; (iii) se caracterizo en profundidad una seleccion de aislados mediante secuenciacion masiva, analizando los mecanismos de resistencia, distribucion de genes de virulencia, genotipo y relaciones filogeneticas. Los aislados objeto de estudio proceden de un estudio longitudinal previo, realizado durante dos anos en cinco granjas de Cataluna. De aquellos lotes positivos a Campylobacter se conservaron una serie de aislados al azar de diferentes individuos a lo largo de cada crianza. Para estudiar en profundidad la diversidad, estacionalidad y dinamica de cepas de Campylobacter circulantes en las granjas, se realizo la tipificacion molecular de los aislados utilizando las tecnicas de electroforesis en campo pulsado (PFGE) y multilocus sequence typing (MLST). Mediante PFGE y utilizando dos enzimas de restriccion, se analizaron un total de 343 aislados (254 de C. jejuni y 89 de C. coli) y se identificaron un total de 92 perfiles diferentes de macrorestriccion (de 12 a 24 perfiles por granja). Globalmente, detectamos una gran diversidad genotipica, identificando mayoritariamente entre 1 y 2 genotipos diferentes por crianza, pero que no se aislaron en crianzas sucesivas. Por otro lado, observamos persistencia de algunos genotipos dentro de un mismo lote a lo largo de la crianza. Al comparar los aislados de las diferentes granjas, encontramos genotipos comunes de C. jejuni entre diferentes granjas. De los diferentes genotipos obtenidos mediante PFGE, seleccionamos un total de 127 aislados (93 de C. jejuni y 34 de C. coli) que analizamos mediante MLST, encontrando igualmente una gran diversidad genetica. Los aislados de C. jejuni se agruparon en 15 complejos clonales (CC) distribuidos en 34 secuencias tipo (ST), mientras que los aislados de C. coli se agruparon en su totalidad dentro del CC828 distribuidos en 12 STs. Ademas, identificamos cinco STs nuevos de C. jejuni y dos de C. coli. Se observo cierta estacionalidad en determinados CC. Los CC21 y CC206 se encontraban a lo largo del ano, excepto durante el trimestre mas frio, siendo mas frecuentes en los meses mas calidos. Por otro lado el CC48 se observo unicamente en los meses mas calidos. En el segundo estudio, evaluamos el perfil de susceptibilidad de 344 aislados frente a un panel de 12 antimicrobianos de diferentes familias, utilizando el metodo de difusion en disco. La resistencia a quinolonas (acido nalidixico y ciprofloxacina) fue la mas prevalente, seguida de tetraciclinas. Esto representa un problema de salud publica importante puesto que estos son los agentes mas usados para tratar infecciones entericas humanas. Por el contrario, las resistencias a eritromicina y gentamicina fueron las menos prevalentes. Todos los aislados analizados fueron sensibles a cloranfenicol, amoxicilina + clavulanato, imipenem y meropenem. Un 62,2% de los aislados fueron multiresistentes, siendo el perfil de resistencia mas frecuente: acido nalidixico, ciprofloxacina, enrofloxacina, tetraciclina, doxiciclina y ampicilina. Por otro lado, analizamos 14 genes de virulencia involucrados en la colonizacion e infeccion, donde observamos una distribucion heterogenea de los mismos, en los aislados analizados. Cabe destacar la deteccion del gen wlaN en un 19% de aislados; este gen esta relacionado con el sindrome de Guillain-Barre, un sindrome neurologico grave que puede desarrollarse tras una infeccion por Campylobacter. En el ultimo estudio se realizo la secuenciacion del genoma completo, mediante la plataforma Illumina, de un total de 16 aislados de C. jejuni y C. coli para su caracterizacion en profundidad. La tecnologia de secuenciacion masiva se ha convertido en una herramienta potente, rapida y asequible para caracterizar patogenos de interes como Campylobacter en estudios epidemiologicos. Los datos obtenidos en esta tesis confirman la diversidad genetica de Campylobacter en los pollos de engorde y la gran complejidad de la dinamica de cepas circulantes en granja. Ello probablemente sea el principal factor que dificulta conseguir estrategias eficaces de control de la bacteria en granja. Por otro lado, la elevada proporcion de cepas resistentes y multiresistentes a antibioticos, aisladas de pollos de engorde ponen de relieve la importancia de concienciar a los productores y/o encargados de la produccion intensiva sobre el uso prudente de antimicrobianos. Unas medidas de bioseguridad efectivas para el control de Campylobacter en granja, no solo conseguirian reducir la alta prevalencia de lotes positivos a edad de sacrificio, sino que indirectamente mejorarian el estatus sanitario general de la granja. Ello conllevaria una menor necesidad del uso terapeutico de antibioticos y probablemente una reduccion de cepas resistentes.