COUPLAGE DE PEPTIDES DE PENETRATION CELLULAIRE A UN AGENT ANTI-TUMORAL ET EVALUATION DE L'EFFICACITE DES COMPLEXES

Le transport de substances dotees de proprietes pharmacologiques au travers de la membrane plasmique ainsi que leur acces aux divers compartiments intracellulaires, en particulier le compartiment cytoplasmique et nucleaire, demeure un obstacle pour la recherche biotechnologique et biomedicale et pour l'industrie pharmaceutique. Parmi les moyens actuellement connus pour introduire des substances dans les cellules, les peptides de translocation egalement denommes CPPs (Cell- Penetrating-Peptides) qui representent des vecteurs particulierement interessants. Dans le present travail, nous avons utilise trois CPPs, Tat, penetratine et un analogue de la maurocalcine (MCaAbu) pour la delivrance de la doxorubicine (Dox), une drogue utilisee en chimiotherapie anticancereuse et dont son effet est limite par la resistance des cellules tumorales. Afin d'evaluer l'efficacite des trois complexes formes (Dox-CPPs), deux modeles cellulaires du cancer mammaire ont ete utilises; les cellules MDA-MB 231 et les cellules MCF7 qui presentent une sensibilite differente a la drogue seule. Notre etude nous a permis de monter en premier lieu que les trois CPPs utilises representent de puissants vecteurs pour l'entree de la Dox a l'interieur des cellules et que la conjugaison de la drogue a contourne la resistance des cellules MDA-MB 231 a la Dox. Nous avons egalement montre que la distribution de la Dox est plutot nucleaire a l'etat libre et cytoplasmique lorsqu'elle est couplee aux CPPs. Dans la deuxieme partie de notre travail, nous avons montre que la Dox ainsi que les Dox-CPPs induisent l'apoptose des cellules MDA-MB 231 et que cet effet est observe en traitant les cellules avec une dose cinq fois plus faible de Dox-CPPs par rapport a la Dox. Cette mort est dependante des caspases et implique la voie mitochondriale. De plus, l'apoptose induite par la Dox est mediee par les radicaux oxygenes (ROS). Ceux-ci sont en partie impliques lors de l'apoptose induite par les Dox-CPPs puisque l'utilisation d'un inhibiteur de ROS inhibe partiellement l'apoptose induite par ces composes. Nous avons montre egalement que la surexpression de Bcl-2 protege l'apoptose induite par la Dox et partiellement par les Dox-CPPs, ce qui suggere qu'une autre voie est impliquee dans l'apoptose induite par les Dox-CPPs et qui expliquerait la plus forte toxicite de ces composes. Concernant cette deuxieme voie nous avons pu montre que les recepteurs de mort TRAIL sont bien impliques dans l'apoptose induite par les Dox-CPPs via la clusterisation membranaire des recepteurs de mort DR4 et DR5. Cette clusterisation modifie le taux d'expression de ces recepteurs membranaires et a l'origine d'une sensibilisation des cellules MDA-MB 231 au TRAIL endogene au cours de l'apoptose induite par les Dox-CPPs. Une telle sensibilisation au TRAIL est a l'origine de la generation de ceramide, qui constitue une autre voie d'induction d'apoptose par les Dox-CPPs en plus de la voie mitochondriale. L'ensemble de ces resultats devraient nous permettre a valoriser la strategie de couplage des CPPs a des agents antitumoraux afin d'ameliorer leur effet et de mieux comprendre les voies de signalisation de la mort induite suite au couplage. Ceci pourrait a terme conduire a la conception de nouveaux analogues d'index therapeutique plus eleve. Mots cles : Cell- Penetrating-Peptides, Doxorubicine, resistance cellulaire, apoptose, ROS, recepteurs de mort, ceramide.