COMET ASSAY OPTIMIZATION WITH ALLIUM CEPA AS AN INDICATOR FOR ECOTOXICOLOGICAL USAGE

A b s t r a c t The pollutants discharged to the environment cause a real threat for all types of the ecosystem. One of the most important recalcitrants directed to the environment is hospital wastewater, harmful because of both, microbiological and ecotoxicologi cal potential (they consist of a large amount of drugs and its metabolites). These substances can cause cells damage at the genetic level and they can be dangerous to the human and animals life. To estimate ecotoxicological potential of environmen tal mutagens comet assay is often used. It is cheap, fast, simple and sensitive technique enabling to estimate the damages of genetic material and the effectiveness of its treatment. Fast increase of the hospital wastewater volumes and changes of its com position cause the necessity of fast and reliable testing systems introduction for potentially genotoxic compounds analysis. Such tests should be performed on easy to obtain and inexpensive eucaryotic indicators leading to their common usage for mutagenicity and toxicity test. The eukaryotic organism fulfilling these requirements is an onion – Allium cepa . Due to its sen sitivity and good correlation with mammalian cells results A. cepa is an effective tool for routine environmental mutagens geno toxicity tests and they can be used in comet assay. Although, it is still not commonly used for ecotoxicological research. The comet test with A. cepa gives the possibility of fast and not – expensive analysis of hospital wastewater toxicity assessment. The comet assay is relatively easy to perform, but it requires individual protocol optimization for a particular experiment. That was the reason why the aim of this study was to optimize comet assay on the basis of already published protocols using Allium cepa meristematic root cells as a good indicator for hospital wastewater ecotoxicological potential estimation. S t r e s z c z e n i e Ścieki przedostające sie do środowiska stwarzają realne zagrozenie dla kazdego ekosystemu. Jednym z wazniejszych zanieczyszczen kierowanych do środowiska są ścieki szpitalne, bedące zagrozeniem zarowno mikrobiologicznym, jak i eko toksykologicznym, ze wzgledu na znaczną zawartośc lekow i ich metabolitow. Związki te mogą powodowac uszkodzenia komorek na poziomie ich materialu genetycznego, a co za tym idzie, stanowic powazne zagrozenie zdrowia i zycia ludzi. Do sza cowania potencjalu ekotoksykologicznego mutagenow środowiskowych stosuje sie czesto test kometowy (ang. comet assay ). Jest on tanią, szybką, prostą i czulą techniką, pozwalającą ocenic uszkodzenia materialu genetycznego oraz efektywnośc jego naprawy. Wzrost ilości i szybkie zmiany skladu zanieczyszczen szpitalnych powodują koniecznośc opracowania szybkich i wiarygodnych systemow testowych do badan wplywu substancji potencjalnie genotoksycznych. Analizy tego typu powinny byc wykonywane na latwo dostepnych i tanich indykatorach eukariotycznych, co ulatwi ich powszechne wprowadzenie i wykorzys tanie w testach mutageniczności i toksyczności substancji badanych. Organizmem eukariotycznym spelniającym te wymagania jest cebula zwyczajna ( Allium cepa ), ktora ze wzgledu na czulośc i korelacje z wynikami uzyskanymi z uzyciem ssaczych komorek, moze stanowic alternatywe dla testow na komorkach zwierzecych. Wciąz jednak nie jest ona powszechnie stosowana w analizach ekotoksykologicznych. Zastosowanie testu kometowego z uzyciem komorek A. cepa daje mozliwośc szybkiej i taniej analizy toksyczności ściekow szpitalnych. Pomimo swej prostoty wymaga on jednak indywidualnego dopracowania metodyki do określonego eksperymentu. W związku z powyzszym podjeto probe zoptymalizowania testu kometowego w oparciu o analize dostepnych w bibliografii procedur badawczych w celu wykazania przydatności komorek merystematycznych korzeni Allium cepa jako indykatora toksycznego wplywu ściekow szpitalnych na komorki eukariotyczne.