Induction d’une cholestase par la chlorpromazine dans les cellules hépatiques humaines HepaRG : Etude des mécanismes impliqués et de l’influence d’un stress inflammatoire.

La survenue de lesions hepatiques represente une cause majeure de retrait des medicaments au cours de leur developpement et apres leur mise sur le marche. La manifestation la plus frequente des effets secondaires lies aux medicaments est lacholestase qui resulte d’un blocage de la secretion biliaire. Ils peuvent etre previsibles, generalement dependants de la dose, ou dans certains cas n’etre observes que chez un nombre restreint de patients traites, par exemple avec la chlorpromazine (CPZ), un neuroleptique. Il s’agit alors d’une hepatotoxicite idiosyncratique. Notre travail a eu pour but d’induire une cholestase avec ce medicament et d’etudier les mecanismes impliques, en presence ou non d’un stress inflammatoire en utilisant comme modele experimental les cellules hepatiques differenciees HepaRG derivees d’un cholangio-hepatocarcinome humain. Nous avons tout d’abord valide ce modele en montrant que les principaux transporteurs d’influx et d’efflux canaliculaires et basolateraux sont bien localizes dans les domaines membranaires appropries, et que les canalicules biliaires sont fonctionnels et fermes comme dans les hepatocytes humains cultives en sandwich, le modele de reference. Le traitement par CPZ a une concentration elevee (50μM) entraine apres 15min la generation d’un stress oxydant associe a une alteration du potentiel membranaire mitochondrial et de la distribution pericanaliculaire des microfilaments de F-actine et a une inhibition de l’efflux canaliculaire de l’acide taurocholique. Apres 24h, on observe notamment une inhibition de l’expression des deux principaux transporteurs canaliculaires, BSEP et MDR3, du transporter d’influx NTCP et une surexpression du transporteur basolateral MRP4. Ces effets suggerent une reponse compensatrice des cellules face a l’accumulation intracellulaire des acides biliaires. L’inflammation est consideree comme un facteur de susceptibilite dans l’hepatotoxicite idiosyncratique. Nous avons recherche si dans un context inflammatoire induit par l’IL-6 et l’IL-1β, les effets cytotoxiques et cholestatiques de CPZ sont aggraves. Apres un pretraitement de 24h par les deux cytokines proinflammatoires, les cellules HepaRG, ont ete co-exposees a 20μM CPZ pendant 1 a 5 jours. Bien que les cytokines aient induit un stress inflammatoire et inhibe le metabolisme de la CPZ et les transcrits de CYP3A4 et CYP1A2, deux principaux CYPs impliques dans le metabolisme de ce medicament, la modulation des effets cytotoxiques et cholestatiques de la CPZ observes est restee limitee, y compris apres 5 jours. Une cytotoxicite accrue de 20% et une amplification de l’inhibition des transcrits et de l’activite de NTCP ainsi que la deregulation de l’expression d’autres genes lies a la cholestase, ont ete constatees suite au co-traitement a CPZ et aux cytokines. Au total, nos resultats montrent qu’il est possible d’induire une cholestase in vitro a partir des cellules HepaRG et que la cholestase induite par CPZ a pour origine l’induction d’un stress oxydant. Ils montrent en outre que l’etude de certains facteurs de susceptibilite peut etre envisagee.