Les inflammasomes : de la régulation aux maladies auto-inflammatoires

Les inflammasomes sont des complexes proteiques intracellulaires qui ont un role majeur dans l'immunite innee. Leur activation conduit a la mort de la cellule dans un contexte hyperinflammatoire. Compte-tenu des effets potentiellement deleteres, tissulaires et systemiques, les inflammasomes sont strictement regules. A l'heure actuelle, la comprehension des mecanismes conduisant a leur activation et leur regulation reste partielle. Dans une premiere partie de cette these, nous avons utilise une technique de biotinylation proximale (BioID) pour identifier les proteines interagissant avec l'inflammasome. Nous avons identifie 111 proteines dont la relation etroite avec l'inflammasome etait vraisemblable. Parmi ces 111 proteines, 25% avaient d'ailleurs deja ete decrites comme des proteines interagissant avec le complexe. L'identification d'un adaptateur majeur de l'autophagie, p62/sequestosome-1 (p62), nous a conduit a focaliser notre attention sur son role dans la regulation de l'inflammasome. Nous avons d'abord demontre que l'interaction entre p62 et l'inflammasome existait, sur le plan biochimique. Par la suite, nous avons prouve que p62 etait un substrat du complexe et que l'activation de ce dernier entrainait le clivage de p62 au niveau d'un residu aspartique en position 329. Enfin, nous avons caracterise les consequences fonctionnelles de ce clivage, en montrant que les fragments proteiques generes entrainaient une regulation positive ou negative du complexe. Nous avons alors emis l'hypothese que p62 pourrait reguler l'inflammasome de maniere differente selon le signal activateur. Dans une seconde partie, translationnelle, nous nous sommes interesses aux consequences des mutations dans la sequence de genes codant les constituants de l'inflammasome ou des proteines regulatrices du complexe. Celles-ci sont a l'origine des maladies auto-inflammatoires monogeniques. Ces maladies sont caracterisees par des episodes recurrents de fievre associes variablement a d'autres symptomes systemiques. La plus frequente est la fievre mediterraneenne familiale (FMF), avec une prevalence estimee entre 1 et 5 pour 10 000 habitants en France. Les mutations du gene MEFV, codant la pyrine, sont a l'origine de la FMF. La pyrine peut induire la formation d'un inflammasome specifique. Recemment, le mecanisme d'activation de l'inflammasome pyrine a ete mieux caracterise : certaines toxines (comme la toxine B du Clostridium difficile, TcdB) induisent l'activation de l'inflammasome pyrine. Nous avons utilise ces nouvelles connaissances afin d'explorer les consequences de l'activation de l'inflammasome pyrine par la TcdB dans les monocytes des patients atteints de FMF, compares aux monocytes de donneurs sains. Nos resultats indiquent que ces mutations induisent un abaissement du seuil d'activation de l'inflammasome pyrine. Par ailleurs, les correlations genotype/phenotype indiquent qu'il existe un effet de dosage genetique, en lien avec le nombre d'alleles mutes. Ces resultats ouvrent de nouvelles perspectives pour les patients atteints de FMF, tant dans la comprehension de la physiopathologie que dans la possibilite de mise au point de tests fonctionnels pour le diagnostic de la maladie