From antibodies to diagnosis: FOXP3 and PD-1 markers of human lymphoid malignancies

La tecnica para la produccion de hibridomas, desarrollada en la decada de los 70 por Kohler y Milstein, ha permitido generar cantidades ilimitadas de anticuerpos monoclonales (mAbs) capaces de reconocer con alta afinidad epitopos especificos de diferentes antigenos celulares. Gracias a este gran avance tecnologico, ha sido posible esclarecer tanto el proceso de diferenciacion de los linfocitos normales como la identificacion del origen celular de la mayoria de las neoplasias linfoides. La mejora de las tecnicas inmunohistoquimicas junto con el uso de un amplio panel de anticuerpos, en combinacion con los estudios morfologicos y moleculares, han facilitado el diagnostico, revolucionando la clasificacion de los linfomas y aportado una valiosa herramienta de apoyo pronostico. Estudios recientes han destacado el papel fundamental realizado por dos subtipos de celulas T colaboradoras, las T reguladoras (Treg) y las T colaboradoras del centro germinal (TFH), como actores principales tanto en la inmunidad como en el desarrollo de tumores. Ambos tipos celulares intervienen en la regulacion de la activacion de celulas T y en el mantenimiento de la homeostasis inmunologica. Recientemente se ha puesto de manifiesto la implicacion directa de estos tipos celulares tanto en el desarrollo en enfermedades autoinmunes como en cancer. La elucidacion de los mecanismos por los que las celulas Treg y TFH actuan en diferentes neoplasias es un area de investigacion con una gran proyeccion en el desarrollo de nuevas estrategias terapeuticas. Sin embargo, la carencia de marcadores especificos frente a las poblaciones linfoides Treg y TFH dificultaba la comprension sobre su presencia y distribucion en tejido normal y tumoral. Dado que las tecnicas inmunohistoquimicas son una potente herramienta para poder abordar estos problemas, hemos producido y caracterizado varios anticuerpos monoclonales frente al factor de transcripcion FOXP3. Por primera vez hemos identificado y documentado la expresion de FOXP3 a nivel celular, tanto en el tejido linfoide como en sangre periferica, demostrando que los anticuerpos FOXP3 constituye una herramienta especifica y sensible capaz de detectar la proteina con una gran variedad de tecnicas inmunologicas de rutina. Debido a la importancia que FOXP3 tiene en el desarrollo y funcion de las celulas Treg, hemos estudiado su expresion en 172 muestras de linfoma fijadas y parafinadas. En tejido tumoral, su expresion se encuentra restringida a la leucemia/linfoma de celulas T del adulto (ATLL) (17 de 25 casos, un 68%). Sin embargo, en el resto de los tumores estudiados, la expresion de FOXP3 fue detectada en la poblacion T reactiva presente en el microambiente tumoral. Este resultado fue corroborado en un estudio en colaboracion con otros laboratorios, donde se confirmo la presencia de Treg en el microambiente linfoide. Sorprendentemente, a diferencia de la mayoria de los estudios realizados en tumores solidos, se encontro que una mayor presencia de linfocitos Treg se asociaba a una mayor supervivencia en linfomas de Hodgkin y folicular, lo que sugiere que las celulas FOXP3 actuan de manera diferentes en estos tipos de linfomas. Para poder definir con mayor precision el patron de expresion y el posible valor diagnostico de las proteinas de PD-1 y SAP, marcadores especificos de TFH, hemos generado un mAb especifico capaz de reconocer la proteina PD-1 en tejido fijado y parafinado. Se ha evaluado su expresion en una extensa serie de tejidos tanto normales como tumorales. El estudio inmunohistoquimico de mas de 500 biopsias de linfoma revelo que el 95% de los casos de linfoma T angioinmublastico (AITL) expresaban al menos uno de estos marcadores, dato que refuerza la hipotesis de que los AITL derivan de las celulas TFH, por lo que estos nuevos marcadores constituyen una valiosa herramienta diagnostica para esta enfermedad. La expresion de PD-1 y SAP tambien se encontro en una minoria de casos de linfoma T periferico, sugiriendo la posibilidad de que estos casos se originen en las celulas TFH de centro germinal. Otro hallazgo fundamental ha sido la identificacion de PD-1 como un excelente marcador de las rosetas de linfocitos T que rodean las ceulas B neoplasicas, caracteristica clave en el diagnostico del linfoma de Hodgkin de predominio linfocitico (NPHL). Por primera vez se ha descrito que la presencia de rosetas PD-1+ no es una caracteristica exclusiva del NPHL, sino que tambien se puede encontrar en un porcentaje elevado de linfomas de Hodgkin rico en linfocitos (LHCRL), lo que sugiere una estrecha relacion biologica entre estas entidades. La presencia de rosetas PD-1+ constituye ademas una ayuda adicional en el dificil diagnostico diferencial entre LHPLN y linfoma B rico en celulas T/histiocitos (THRBCL), dado que hemos encontrado que todos los casos analizados de THRBCL carecen de rosetas PD-1+. En conclusion, el uso de mAbs en el diagnostico histopatologico de rutina ha demostrado una vez mas ser una potente herramienta para la identificacion de biomarcadores diagnosticos. Los anticuerpos monoclonales FOXP3 y PD-1 han resultado ser unos excelentes marcadores para la identificacion de las celulas Treg y TFH tanto en condiciones fisiologicas como patologicas, permitiendo un mejor conocimento del papel que estos linfocitos juegan tanto en procesos fisiologicos como en las enfermedades linfoproliferativas.