樱田门外之变是发生于日本安政七年三月三日（1860年3月24日）的一起政治暗杀事件，不满幕府大老兼彦根藩藩主井伊直弼的水户藩激进浪士，于江户城樱田门（今东京都千代田区的警视厅正对面）外突袭准备进城的井伊直弼队伍，井伊直弼当场惨死。
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自黑船来航后，主张开国的彦根藩主井伊直弼与主张攘夷的水户藩主德川齐昭对立日深，之后又为了十三代将军的继承人问题各自形成对立派系，政争的结果由井伊直弼胜出，安政五年（1858年）井伊直弼出任幕府大老，不但独断地与美国签订《日美修好通商条约》。翌年（1859年）德川齐昭发动反攻，联合越前藩主松平庆永、尾张藩主德川庆恕及自己的儿子一桥家当主一桥庆喜闯入江户城质问井伊直弼，结果因为这种过于无礼的行为反遭井伊直弼下达永久退隐的处份。之后井伊直弼决定全力镇压反对势力，大举逮捕水户藩及攘夷派的志士，并以严刑论处，酿成安政大狱，一时间风声鹤唳，尤其水户藩士的积怨已濒临界，有些谋画暗杀的激进藩士为免连累本藩而事先脱藩变成浪士，反扑活动暗潮汹涌。
水户藩的和等激进派浪人脱藩和萨摩藩的暗地沟通，打算带领萨摩兵上京以孝明天皇敕书的名义发动军事政变，但因萨摩藩局势变化，两藩士的计划受挫。水户的激进派决定策划袭击大老，萨摩只有有村一人参加。
暗杀
安政七年三月三日（1860年3月24日），这天是上巳之日，也是驻居在江户的大名固定要进城谒拜的日子，以水户藩浪士为主的暗杀集团决定于今日起事。
天寒未明，路上积雪处处，一行人饱餐一顿由东海道品川宿（今东京都品川区）的旅店出发，经过大木户后在札之辻转向，途经网坂（今东京都港区的庆应义塾大学附近）、神明坂、中之桥，接著穿过樱田通，在爱宕山的爱宕神社与次会合，向樱田门进发。此时共计有水户浪士17人、萨摩浪士1人，后世合称「樱田十八士」。由于井伊直弼的宅邸在樱田门附近，樱田门为井伊直弼进城的必经之路，所以暗杀集团便埋伏在樱田门附近等候，直弼身边仅带著随从等人，并没有任何防备。
当天不合时令地下着大雪，能见度很差，护卫的侍从穿着蓑衣，刀藏在里面，对袭击方来说是有利的条件。江户幕府开幕以来在光天化日之下胆敢袭击大名座轿是想也未曾想到的事情，造成彦根藩的大意。
上午9时许，井伊家开门，约60人的护卫队伍围绕著井伊直弼的大轿出来。暗杀团的森五六郎手持诉状，伪装成拦轿喊冤的样子迅速接近井伊的队伍，在与井伊家护卫纠缠之际，冷不防地拔刀砍杀井伊的护卫，其他护卫见状蜂涌上前，此时暗杀团的黒泽忠三郎以手枪向井伊直弼的轿子开枪，贯穿轿子，射中井伊直弼的腰部与大腿，井伊直弼立刻无法动弹。这枪响同时也是暗杀团发动总攻击的暗号，四面埋伏的暗杀份子纷纷突袭井伊队伍。轿夫受惊吓一轰而散。数名侍卫想搬动座轿，被当场斩倒，不得不放弃座轿。彦根藩士因为刀在袋中无法拔出，有的只能用刀鞘抵抗，有的徒手抓对方刀时手指被斩落，处于不利的境地。只有二刀流高手河西忠左卫门冷静地脱掉蓑衣拔出刀来守护在座轿一侧，斩杀了稻田重藏等袭击者。但是一人难敌众人最后被杀。河西刀刃卷起的刀保存在彦根城博物馆。
井伊从附近赶来的护卫虽有人数上的优势，但因大雪与措手不及而招架不住败退。暗杀团的稻田重藏首先攻入井伊直弼的轿子附近，但遭直弼身边的护卫砍死。随后唯一的萨摩藩浪士有村次左卫门成功击倒轿旁的护卫，一把将受重伤井伊直弼由轿中拖出斩首，与广冈子之次郎一同带著井伊的首级突围，但先后被砍成重伤，最后朝向日比谷门方向逃逸。有村次左卫门在若年寄的宅邸前切腹自尽，广冈子之次郎则在姬路酒井家前切腹。暗杀团中同样因重伤而切腹自杀的尚有山口辰之介及鲤渊要人。
通说袭击事件后彦根藩邸马上派人前往案发现场，回收了座轿和沾满鲜血的手指、耳朵；但由于直弼的首级被带走存放于远藤家宅邸。彦根藩知道以后，谎称遭有村带走的是年龄、体格和直弼相仿的斗死藩士加田九郎太的首级，经沟通后将直弼首级带回，在藩邸命典医和躯体缝合后下葬。
暗杀团事成后各自散逃，8人带伤向官府自首，2人于逃亡途中被捕，1人于逃亡两年后自杀，只有2人在逃亡后得享余年。
死伤者和处分
袭击者中最初接近座轿的稻田重藏被河西斩倒后立刻死亡。有村次左卫门，广冈小之次郎、山口辰之介、鲤渊要人等在彦根藩士的拼死反击之下负重伤，到其他藩邸自首后切腹自刃，除此之外的要么自首要么被捕后被杀或死于狱中，只有增子金八和海后磋矶之介潜伏到明治年代活了下来。
井伊家除了井伊直弼另有8人死亡（当场死亡4人、伤重死亡4人）、13人负伤。死亡者准许保留武士名分。作为担当直弼护卫失败的责任，2年后1862年（文久2年）下达了对幸存者的处分决定：草刈锹五郎等重伤者减俸并流放到藩领的下野国佐野幽禁处分，轻伤者全部被勒令切腹，无伤者和轿夫一律斩首、除去武士名分。处分不光涉及本人还连带亲族，对幕府家臣是很大的警示。
影响
井伊试图把幕政由「与雄藩协调」的体制拉回「由幕府主导、阻止朝廷介入政治」的政治路线出现破绽，造成幕府权威丧失，幕末的尊王攘夷运动开始激化。最终拉开依靠恐怖暗杀来达到政治目的的序幕。
1864年（元治1年）天狗党之乱中，彦根藩士口号是为井伊直弼报仇，封锁中山道迎击从筑波山向京都进发的水户藩士。天狗党人不得不走美浓经飞驒进入越前，最后在敦贺投降，武田耕云斎等水户浪人352人在此被处决。彦根藩士处决水户浪人的刑场是来迎寺。
其后的井伊家
据当时的官方记载：「井伊直弼急病发作，在与病魔斗争中提出家业继承状，受理中病死」。这是幕府为了防止谱代大名井伊家和水户藩进一步关系激化而作的掩盖。井伊家的菩提寺豪德寺井伊直弼墓碑上所刻死亡日期是「三月二十八日」。是为了隐瞒直弼的死讯，装作直弼在樱田门外受伤；将军还给直弼的藩邸送来慰问品。大名们也纷纷效仿派使者来慰问，当中也有水户藩的人，彦根藩士怒目相对。根据井伊家飞地世田谷代官大场家的记录，为了假装直弼只不过是受伤，大场家的人还举行了祈愿直弼早日康复的仪式。然而袭击过后尾张德川家等其他大名的座轿不断经过，很多人看到雪地上的鲜血，大老被暗杀的事情很快传扬出去。
1862年（文久2年）率兵上京的岛津久光拥护勅使大原重徳要求幕府革新，要幕府在松平庆永的主导下清算井伊政权，结果罢免了直弼亲信的老中安藤信正和久世広周、剥夺井伊家京都守护的家职、让松平容保担任京都守护。井伊家石高也从35万石减为25万石。彦根藩不得不把直弼心腹长野主膳和宇津木景福斩首并断绝往来，但是没有对他们减封。
华族令施行时井伊家被封为伯爵，这个爵位是按照减封后的石高作为标准。如果石高35万石，井伊家认为领有半个近江国的话，应该是侯爵。然而减封后是9万石左右，即使不减封石高15万石也不可能是侯爵。爵位是按照华族令施行时的石高为准，跟因为安政大狱而遭到新政府冷遇完全没有关系。戊辰战争中，鸟羽伏见之战中和萨摩藩兵一同守卫东寺和大津最初就显示出勤王的姿态，在逮捕近藤勇的过程中因为有功赏与2万石。直弼的儿子井伊直宪的妻子是有栖川宫家，井伊家作为旧谱代大名已经受到很多优待。
相关人物
樱田十八士
* 関鉄之介（徒士格，现场总指挥，没参加格斗；逃亡后被捕，1862年被斩首，享年40）
* 冈部三十郎忠吉（战斗现场清点，没参加格斗；逃亡后被捕，1861年被斩首，享年44）
* 稻田重藏正辰（郡方；本来要其与金子一同逃走，应本人强烈要求参加，战死，享年47）
* 山口辰之介正（重伤后自刃，得年29）
* 鲤渊要人珍陈（神官；重伤后自刃，享年51）
* 广冈子之次郎则赖（小普谱；重伤后自刃，得年21）
* 黑泽忠三郎胜算（马廻组；自首后病死，享年33）
* 斋藤监物一德（神官；自首后因伤重死亡，享年39）
* 佐野竹之助光明（小普谱；自首后因伤重死亡，得年21）
* 大关和七郎增美（大番组；自首，1861年被斩首，得年26）
* 森五六郎直长（自首，1861年被斩首，得年24）
* 莲田一五郎正实（寺社方；自首，1861年被斩首，得年29）
* 森山繁之介政德（町方属吏；自首1861年被斩首，得年27）
* 海后磋矶之介（神职；逃亡后改名为菊池刚藏，明治维新后在警视厅水户县警察本部供职1903年没，享寿78）
* 杉山弥一郎当人（留付列；自首，1861年被斩首，享年38）
* 广木松之介有良（町方属吏；逃亡后1862年自刃，得年27）
* 增子金八（逃亡后1881年殁，享年59）
* 有村次左卫门兼清（萨摩藩士；重伤后自刃，得年23）
彦根藩侧
* 井伊直弼（大老，彦根三十五万石藩主；享年46）
* 岩崎德之进重光（伊贺奉行；负伤，归宅后死亡）
* 小河原秀之丞宗亲（小姓；战死，享年30）
* 加田九郎太包种（骑马徒士；战死，享年31）
* 河西忠左卫门良敬（剑豪；战死，享年30）
* 日下部三郎右卫门令立（物头；负伤，在藩邸死亡，享年39）
* 越石源次郎满敬（负伤，归宅后死亡）
* 泽村军六之文（战死）
* 永田太郎兵卫正备（战死）
* 朝比奈三郎八（无伤，归宅后入狱，1862年被斩首）
* 朝比奈文之进（无伤，归宅后入狱，1862年被斩首）
* 小幡又八郎（无伤，归宅后入狱，1862年被斩首）
* 小岛新太郎（无伤，归宅后入狱，1862年被斩首）
* 长野十之丞（无伤，归宅后入狱，1862年被斩首）
* 藤田忠藏（轻伤，归宅后入狱，1862年被斩首）
* 水谷求马（无伤，归宅后入狱，1862年被斩首）
参与袭击
* 金子孙二郎教孝（郡奉行，主谋；在伏见被捕，1861年被斩首，享年58）
* 高桥多一郎爱诸（小姓头取，矢仓奉行，主谋之一；在大阪自刃，享年47）
* 高桥庄左卫门诸惠（多一郎的长子；在大阪自刃，得年19）
* 有村雄介兼武（次左卫门兄长；和萨摩藩的联络人、金子、佐藤一同上京；在伏见萨摩藩邸被捕，切腹，得年28）
* 佐藤鉄三郎（金子的副手，和金子一起在伏见被捕。流放后更名为安岛铁三郎，后写书记录下暗杀和上京途中的经过，明治期任水户藩吏，1915年去世）
* 川崎孙四郎健干（郡吏，在大坂的联络人；自刃，享年35）
* 小室治作（高桥的随从，自刃）
* 大贯多介则光（高桥的随从，被捕后死于狱中。得年26）
* 山崎猎藏恭礼（和萨摩藩士的联络人，被捕后绝食死。享年33）
* 岛男也龙雄（笠间藩士，高桥的随从，被捕后1861年死于狱中，享年53）
* 小野寺慵斋（土浦藩士，兵学者；参谋之一，1861年自刃）
* 宫田濑兵卫（事件后声称有关，向熊本藩自首，死于狱中，享年47）
其他
* 饭田左马忠彦（国学者，也是有栖川宫家的家臣，怀疑与此事有关联而被抓，自杀。享寿63）
* 滝本いの（关铁之介的情人。原本是吉原谷本楼的妓女。隐藏铁之介。被追踪铁之介的幕吏所抓，在传马町牢内受拷问致死，得年23）
* 佐久良东雄良哉（京都妙法院的武士。因为隐藏高桥多一郎，庄左卫门遭逮捕，绝食死，享年50）
* 后藤权五郎辉（乡士。和事件无关但因和当事人原本是朋友。用广木松之介的名义自首。1862年死于狱中，享年32）
和解
樱田门外之变中敌对的水户和彦根在事件发生110年后的1970年缔结为友好城市。水户以偕乐园的梅花、彦根以城壕中的天鹅互赠对方。水户和彦根和解的中介是敦贺，敦贺是天狗党之乱中屠杀天狗党的地方。水户和敦贺因为天狗党的关系，在1964年结为友好城市。
2013年彦根市长选举时，有反对者指出候选人之一有村国知是仇人有村次左卫门的后代，这样人的怎么能成为彦根市市长。