Polimorfismos de BoLA-DRB3 en el bovino sintético colombiano lucerna y asociación con conteo de células somáticas y mastitis
Autor: Gómez Castro, Santiago
Asesor: Zapata Jaramillo, Carlos Mario (Thesis advisor)
Fecha: 2006-09
Programa: Bogotá - Medicina -Fisioterapia
Facultad: Facultad de Medicina

Resumen: En bovinos se han determinado asociaciones de BoLA-DRB3 con enfermedades infecciosas y con el conteo de células somáticas. En este estudio fue analizada la raza sintética colombiana Lucerna, para el microsatélite DRB3 intrón 2. Fueron identificados 24 alelos por amplificación con PCR y geles de poliacrilamida, encontrando frecuencias alélicas desde 0.02 hasta 0.26. El alelo mas frecuente en la población analizada fue el 161, y el menos frecuente 159. Ambas subpoblaciones afectadas y no afectadas por mastitis, presentaron frecuencias similares para la mayoría de los alelos. La población no se encuentra en equilibrio H.W (Hardy- Weinberg). (p 0.05), y presentó déficit de heterocigóticos. El valor medio de recuento de células somáticas transformado (log2 (CCS / 100000 ) + 3), para la población total fue de 4.8 (+/- 2.89) y para cada subpoblación de afectadas y no afectadas fue de 5.76 y 3.86, respectivamente. Se estudiaron las asociaciones potenciales entre los alelos BoLA-DRB3, el recuento de células somáticas y la mastitis clínica, y se encontrando una asociación significativa (p0.05) entre el alelo 191 con un alto conteo de células somáticas. No se encontró asociación significativa entre el alelo 191 y la enfermedad,  pero si hubo significancia estadística (p0.05) para la asociación de la mastitis con las variables hato y número de partos.

270 Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006
Polimorfismos de BoLA-DRB3 en el bovino
sintético colombiano Lucerna y
asociación con conteo de células
somáticas y mastitis.
Santiago Gómez-Castro1 , Biol; Esperanza Trujillo-Bravo1 , Biol, Msc; Carlos-Vicente Duran2 , Ing Agron, Msc
1Grupo Genética y Mejoramiento Animal, Instituto de Biología, Universidad de Antioquia, A.A. 1226, Medellín, Colombia.
2 Falcultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Colombia sede Palmira. Valle del Cauca.
etbravo@epm.net.co
(Recibido: 10 octubre, 2005; aceptado: 28 julio, 2006)
Resumen
En bovinos se han determinado asociaciones de BoLA-DRB3 con enfermedades infecciosas y con el
conteo de células somáticas. En este estudio fue analizada la raza sintética colombiana Lucerna, para
el microsatélite DRB3 intrón 2. Fueron identificados 24 alelos por amplificación con PCR y geles de
poliacrilamida, encontrando frecuencias alélicas desde 0.02 hasta 0.26. El alelo mas frecuente en la
población analizada fue el 161, y el menos frecuente 159. Ambas subpoblaciones afectadas y no afectadas
por mastitis, presentaron frecuencias similares para la mayoría de los alelos. La población no se encuentra
en equilibrio H.W (Hardy- Weinberg). (p <0.05), y presentó déficit de heterocigóticos. El valor medio de
recuento de células somáticas transformado (log (CCS / 100000 ) + 3), para la población total fue de 4.8
2
(+/- 2.89) y para cada subpoblación de afectadas y no afectadas fue de 5.76 y 3.86, respectivamente. Se
estudiaron las asociaciones potenciales entre los alelos BoLA-DRB3, el recuento de células somáticas y
la mastitis clínica, y se encontrando una asociación significativa (p<0.05) entre el alelo 191 con un alto
conteo de células somáticas. No se encontró asociación significativa entre el alelo 191 y la enfermedad,
pero si hubo significancia estadística (p<0.05) para la asociación de la mastitis con las variables hato y
número de partos.
Palabras clave: BoLA, células somáticas, gen DRB3, mastitis.
Introducción
En los mecanismos involucrados en la resistencia
o susceptibilidad genética a infecciones, se han
Las enfermedades infecciosas son parte de los
identicfi ado varios niveles de respuesta a agentes
problemas que afectan frecuentemente la crianza
de animales, representando un factor limitante en la infecciosos, en los que actúan diversos genes y sus
producción en bovinos. Esto se reefl ja en un aumento variantes alelicas (1, 2). Actualmente se consideran
en los niveles de mortalidad o en bajos índices de los genes del complejo mayor de histocompatibilidad
crecimiento y fertilidad, así como en la disminución (MHC), importantes en la modulación de diferentes
en la cantidad y calidad de carne y leche (24). aspectos de la respuesta inmune (27).Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006 Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006 271
El complejo mayor de histocompatibilidad Este microsatélite se encuentra estrechamente
(MHC) en bovinos se conoce como BoLA "Bovine ligado a las secuencias del exón 2 de DRB3, por lo
Lymphocyte Antigen" (Antígeno Linfocitario cual existe una equivalencia entre los alelos del
Bovino), el cual ha sido mapeado en el brazo corto microsatélite y cada uno de los alelos determinados
del cromosoma 23 y esta conformado por las clases I,
por PCR-RFLP en el exón 2 (11), permitiendo realizar
II y III, de acuerdo con diferencias en la distribución
análisis de DRB3 utilizando cualquiera de los dos
celular y la función (5).
grupos de alelos.
Los alelos BoLA-DRB3, afectan potencialmente
Los genes clase II están distribuidos en dos
muchas características relacionadas con la
diferentes regiones IIa y IIb, codicfi an glicoproteinas
inmunidad, se le han determinado asociaciones con
que se unen a péptidos exógenos (8) y son
enfermedades infecciosas en ganado vacuno (29),
normalmente expresadas por células del sistema
y en estudios en Holstein se ha encontrado relación
inmune como macrófagos, células dendríticas y
de los alelos DRB3.2 con resistencia a mastitis por
linfocitos T y B. En la región IIa están ubicados los
staphylococcus aureus.
genes DRA, DRB, DQA y DQB, y la región IIb,
incluye a los genes DOB, DYB, DYA y DIB (6, 11). Recientemente los alelos DRB3.2*8, *16, *22
El locus DRB presenta tres loci: DRBP1, DRB2 y y *28, fueron asociados con un elevado conteo de
DRB3 (5); el exón 2 del DRB3 (DRB3.2) codicfi a células somáticas (CCS) (13,14) y en reportes
un sitio de unión al antígeno y recientemente se han realizados por Sharif et al (30), en la raza Holstein,
investigado sus características, así como el efecto DRB3.2*16 y DRB3.2*23 se asociaron con un bajo
biológico de sus variaciones (4, 31). Se ha encontrado CCS y con mastitis coliforme severa, respectivamente.
en investigaciones en ganado Shorthorn (37), Jersey
El propósito de este trabajo fue determinar los
(18) y Ayrshire (38), que este sitio de unión presenta
polimorfismos del microsatélite del intrón 2 de DRB3,
una alta tasa de polimorfismo.
en la raza sintética colombiana Lucerna y establecer
su asociación con el conteo de células somáticas y
Mediante técnicas moleculares de reacción en susceptibilidad o resistencia a mastitis.
cadena de la polimerasa y polimorfismos de longitud
(PCR-RFLP), desarrollado por Van Eikj et al (39), se
Materiales y métodos
han detectado alrededor de 30 alelos en el segundo
exón del gen DRB3.2 bovino y se han identicfi ado Población
por técnicas de secuenciamiento más de 63 alelos
Fueron muestreadas 308 hembras de la raza
diferentes (33). Takeshima et al (36) utilizando
sintética Lucerna provenientes de 2 hatos, ubicados
reacción en cadena de la polimerasa y tipicfi ación
geográcfi amente en el departamento del Valle del
de secuencias de bases (PCR-SBT) identicfi aron 90
Cauca-Colombia. Esta raza sintética es derivada de
alelos diferentes.
cruzar las razas Holstein (40%), Shorthorn (30%) y la
criolla Hartón del Valle (30%), para formar un grupo
El intrón 2 del gen DRB3 presenta un racial adaptado a condiciones tropicales (35).
microsatélite, compuesto de 10 dinucleótidos
En los hatos seleccionados la colección de
(TG)n, una larga repetición de dinucleótidos
muestras se realizó en forma pareada. Ambos
(GA)n interrumpidos y un corto número de
hatos presentan características comunes tales
tetranucleótidos (CAGA)n. La evolución de este
como: temperatura promedio 24ºC, bosque seco
microsatélite involucra mutaciones de longitud en
tropical, topografía plana, silvopastoreo, pasto
las repeticiones de dinucleótidos (16). estrella y ordeño mecánico; las muestras de
ambos hatos fueron reunidas para esta evaluación,272 Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006
teniendo en cuenta que ambos grupos fueron TABLA 2. Grupo de lactancia en ganado Lucerna, se establecieron
4 grupos de lactancia : primero < 90 días, segundo de 90-180,
derivados de un mismo hato ancestral inicial.
tercero de 181 -270 y cuarto > 90 días.
El número total de animales seleccionados fue
de 308 y fueron utilizados para determinar los
Población
polimorfismos de DRB3 y sus frecuencias. Hato 1 Hato 2
Total
GL N GL N GL N
Se colectaron los registros históricos de mastitis
1 35 1 16 1 19
clínica en las bases de datos para 212 animales del
2 84 2 39 2 45
total muestreados, correspondientes a las hembras
3 70 3 31 3 39
que se encontraban en producción, en el momento 4 23 4 11 4 12
del muestreo, considerando la realización de análisis Total 212 4 97 4 115
posteriores. El hato uno presentó registros históricos GL= Grupo de lactancia
para 74 hembras afectadas y 23 no afectadas. N= Número de animales por grupo
Conteo de células somáticas (CCS)
En el hato dos se encontraron registros para
59 afectadas y 56 no afectadas. Los registros Se tomaron muestras de 15ml de leche (3.5 ml por
históricos permitieron agrupar la población en dos cuarto) del ordeño individual, se jfiaron con dicromato
subpoblaciones así: 133 animales con diagnóstico de potasio y se conservaron a 4°C hasta realizar el
previo recurrente de mastitis clínica (afectado recuento (CCS). El proceso de cuanticfi ación se
= A) y 79 con diagnóstico negativo de mastitis llevó a cabo en un contador automático de células
clínica (no afectado = NA). Los animales que habían somáticas, FOSSOMATIC 215 (Foss Electric, 3400
presentado cuadros de leche anormal, fiebre y Hillerod, DeNAark). Los valores obtenidos fueron
anorexia conformaron la subpoblación A y los que trasformados posteriormente a SCS “somatic cell
no los habían presentado subpoblación NA. score” (calicfi ación de células somáticas) con el
log (CCS / 100000 ) + 3 (3), con el fin de facilitar
2
el análisis.
Para realizar el conteo de células somáticas y los
análisis estadísticos de asociación, se tuvieron en
Extracción de ADN
cuenta los grupos NA y A. En estos dos grupos se
determinaron animales con tres o más partos (véase
Aproximadamente 7 ml de sangre fueron
Tabla 1) y se establecieron cuatro grupos de lactancia
colectados de la vena mamaria o arteria coccígea
(< 90, 90-180, 181 -270 y > 90 días), en el momento
media de cada animal y la sangre completa fue
de la selección (véase Tabla 2).
almacenada a 4°C hasta su procesamiento.
El ADN fue extraído por la metodología de
Tabla 1. Grupo de partos en ganado Lucerna.
“Salting Out” (23) y precipitación con 2-propanol.
La concentración del ADN fue medida por
Lucerna espectrofotometría a 260nm.
Nº de partos Nº de animales
Genotipificación
3 82
4 93 El microsatélite del intrón dos del gen DRB3
>5 37 se genotipicfi ó, utilizando los oligonucleótidos
específicos:5`-GCGAATTCCCGAGTGAGTGAA
Total 212
GTATCT-3` y 5’-GAGAGTTTCACTGTGCAG-3`,
N° de partos= Animales con 3, 4 y más de 5 partos (IDT, Coraville, Iowa 52241, USA), que amplicfi an
una secuencia que varía entre 155pb y 215pb (16).Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006 Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006 273
Se estandarizaron las condiciones de PCR, en Y es la variable dependiente (mastitis clínica),
ijkl
un termociclador T-personal 48 (Biometra® GmbH, medida teniendo en cuenta los registros históricos
D-37079 Goettingen, Germany), usando 20μl de en los hatos, para la presencia o no de mastitis clínica
reacción que contenía: 100 ng de DNA, 1μl de buffer en cada animal muestreado, μ es la media de la
10x (750mM Tris-HCl pH:8.8, 200mM (NH) SO población, hato = sitos del muestreo i = 1-2, partos
4 2 4, i j
y 0.1% Tween 20), 1.25mM de MgCl , 0.15U de = número de partos en los animales j = 1 - 4,
2
Taq DNA polimerasa (recombinante) (MBI Fermentas, Glact , = efecto del grupo de lactancia, k = 1, 2, 3 y 4,
k
Hanover, MD 21076, USA) 2mM de dNTPs, 5pmol b = coecfi iente de regresión en el número de alelos,
l
de cada oligonucleótido. Para la determinación de los BoLA = efecto jfio del número de copias del los
ijlm
genotipos se utilizaron geles de poliacrilamida al 6%. alelos BoLA l (l = 1 – 9 ) presentes en los animales,
e = error.
ijlklm
Métodos estadísticos
Para confirmar la asociación de los alelos BoLA-
Las frecuencias génicas fueron estimadas teniendo DRB3 con las dos variables consideradas (mastitis
en cuenta las 308 hembras Lucerna, con el paquete clínica y conteo de células somáticas), se calculó el
estadístico GDA y GENEPOP versión 3.3 (34, 40). Odd ratio o relación de diferencia (OR) y su intervalo
Para detectar desviaciones signicfi ativas de las de conafi nza, según Lemeshow et al (22). Si el OR
proporciones alélicas observadas y esperadas, se llevó es mayor que 1, el factor es considerado como de alto
a cabo la prueba de Equilibrio de Hardy-Weinberg riesgo según sea la variable analizada, presencia de
(H-W) (19). la enfermedad o incremento en el recuento de células
somáticas. Si OR es menor que 1, el factor puede
Se utilizó el test de diferenciación génica interpretarse sin efecto sobre mastitis clínica o sobre
para establecer las diferencias de las frecuencias el recuento de células somáticas.
obtenidas entre los grupos seleccionados en cada
Resultados
uno de los hatos.
Frecuencias alélicas y equilibrio de Hardy-
El análisis de asociación de los alelos con el Weinberg
recuento de células somáticas, se realizó con el
En la población bovina Lucerna, fueron
procedimiento “General Linear model” GLM de SAS
identicfi ados 19 alelos diferentes para BoLA-DRB3
(28), similar a estudios previos (30) con el modelo:
(véase Tabla 3), indicativo de un alto polimorsfi mo
Y = μ + hato + partos+Glact +Σb BoLA + e
ijklm i j k l l ijkl ijklm para ésta raza sintética colombiana, comparado con
donde Y es la variable dependiente SCS, μ es la
ijklm resultados obtenidos para DRB3.2 en Gyr brasilero
media de la población, hato = sitos del muestreo j = 1-2,
i (10), Holstein Iraní (25), criollo argentino
partos = los animales fueron agrupados en 3,4,5 y 6
k Saavedreno (26), Holstein canadiense (30) y
partos k = 1 - 4, Glact= efecto del grupo de lactancia,l
l Shorton Japonés (37). Además los tamaños en pares
= 1,2,3 y 4, b = coecfi iente de regresión en el número
l de bases presentados por los alelos encontrados,
de alelos, BoLA = efecto jfio del número de copias
ijkl estuvieron en el rango descrito previamente por
del los alelos BoLA l (l = 1 – 9 ) (se utilizaron los
Ellegren et al (16).
alelos con las más altas frecuencias, los alelos de menor
frecuencia fueron agrupados en una sola categoría),
Las frecuencias alélicas en la población total se
e = error.
ijklm ubicaron entre 0.02 hasta 0.26, siendo los alelos
161, 187 y 215 los más frecuentes considerando
Para determinar la asociación de cada
toda la población. La subpoblación afectada (A)
uno de los alelos con susceptibilidad o
presentó con más frecuencia los alelos 161 y 215
resistencia a mastitis se realizó el procedimiento
y la subpoblación no afectada (NA) 161 y 187.
CATMOD de SAS (28), con el modelo:
Los alelos con menor frecuencia en la población
Y = μ hato+ partos+Glact +ΣbBoLA + e donde
ijlk + i j k l l ijkl ijkl total fueron 159, 195, 203 y 207 (véase Tabla 3).274 Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006
No se encontraron los alelos 159, 177 y 217 en la La población Lucerna no presentó equilibrio
subpoblación A y 195, 203 y 207 en NA. Ambas de Hardy-Weinberg y muestró un décfi it de
subpoblaciones fueron muy similares para la mayoría heterocigóticos signicfi ativo (p < 0.05).
de los alelos más frecuentes (véase Tabla 3).
Tabla 3. Frecuencias de los alelos BoLA -DRB3 en 308 hembras Conteo de células somáticas
de la raza Colombiana Lucerna, tipificadas por PCR y geles de
poliacrilamida.
Número El valor medio del conteo de células somáticas
Alelos de copias Frecuencia Frecuencia Frecuencia transformado SCS (3), para la población total fue de
DRB3 del población (A) (NA) 4.81 (+/- 2.89 DE), los resultados entre las
alelo
subpoblaciones A y NA muestran una diferencia
†‡*161 159 0.258 0.255 0.261
signicfi ativa (p < 0.01) en los valores de SCS. Para
163 4 0.006 0.054 0.008
NA la media fue de 3.86 (+/- 2.48 DE) y para A de
165 6 0.009 0.054 0.016
5.76 (+/- 2.88 DE) (véase Tabla 4).
167 10 0.016 0.021 0.008
169 23 0.037 0.032 0.043
171 42 0.068 0.063 0.075 Cuando se analizaron las muestras de acuerdo con
173 28 0.045 0.043 0.048 su lugar de origen, los hatos uno y dos presentaron
175 12 0.019 0.016 0.023 diferencias en cuanto al recuento de células somáticas
177 2 0.003 0 0.008 para cada una de las subpoblaciones (A y NA). En
179 13 0.021 0.024 0.016
el hato uno el promedio de SCS para NA fue de 4.11
181 15 0.024 0.032 0.012
(2.40 DE) y en A de 5.12 (2.87 DE), en el hato dos,
183 16 0.025 0.032 0.016
las NA tuvieron un promedio de 3.61 (2.49 DE) y las
185 60 0.097 0.101 0.091
A de 6.40 (2.74 DE). El promedio total de SCS en el
187 64 0.103 0.09 0.123
hato uno fue de 4.61 y en el hato dos de 5.0 (véase
189 10 0.016 0.01 0.024
191 55 0.089 0.09 0.079 Tabla 4).
193 9 0.014 0.013 0.016
205 2 0.003 0.027 0.004
En el cálculo de las medias de SCS en animales
215 81 0.131 0.14 0.119
con 0, 1 y 2 copias de cada uno de los alelos más
TOTAL 615
frecuentes, el mayor promedio de SCS encontrado fue
*Alelos más frecuentes en la población para animales con los alelos 171, 191 y 215, (teniendo
†Alelos más frecuentes en la subpoblación con diagnóstico previo de mastitis
en cuenta el número de alelos) la media mas alta de
(A)
‡Alelos más frecuentes en la subpoblación sin diagnóstico previo de mastitis SCS fue para el alelo 191 (6.07 +/- 2.75 DE) (véase
(NA)
Tabla 5).
Tabla 4. Registros históricos de mastitis clínica y promedio de SCS por Hato.
SCS
Prom Prom
Nº de NA Total
Lucerna Nº de A A NA
Hato uno 74 6.40 (+/- 2.74 DE) 23 3.61(+/-2.49 DE) 4.61
Hato dos 59 5.12 (+/-2.87 DE) 56 4.11(+7- 2.40 DE) 5.00
Prom total 133 5.76 (+/- 2.89 DE) 79 3.86(+/- 2.51 DE) 4.80
A= Animales Lucerna con registro de mastitis clínica
NA= Animales lucerna con registro de no mastitis clínica
Prom SCS= Promedio de conteo de células somáticas transformado, log (CCS / 100000 ) + 3
2Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006 Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006 275
Tabla 5. Medias (+/-DS) de SCS, para cada uno de los alelos mas partos, se encontraron asociadas signicfi ativamente
frecuentes en la población de ganado Colombiano Lucerna.
con susceptibilidad a mastitis (p < 0.05).
Lucerna SCS
Discusión
Alelos 0 copias 1 copia 2 copias
169 5.11(2.81DE) 4.73(2.9DE) 4.11(3.58DE) Los resultados del estudio de DRB3 en la raza
171 4.87(2.88DE) 5.74(3.11DE) 5.94* sintética colombiana Lucerna y su asociación con
SCS y mastitis clínica, contribuirán a evaluar la
173 4.89(2.86DE) 5.06(3.21DE) 7.07*
respuesta en bovinos a la susceptibilidad o resistencia
183 4.92(2.9DE) 4.83(2.85DE) **
a enfermedades infecciosas, así como también la
185 5.02(2.92DE) 4.45(2.82DE) 5.74(2.02DE) inufl encia de los polimorsfi mos de este marcador
sobre el recuento de células somáticas.
187 5.05(2.92DE) 4.40(2.75DE) 4.11(1.57DE)
191 4.71(2.87DE) 6.07(2.75DE) **
En estudios previos en bovinos, sobre infecciones
215 4.77(2.86DE) 5.36(3.0DE) 5.92(2.05DE) y otras enfermedades, se han investigado potenciales
asociaciones entre alelos de BoLA-DRB3, con la
*Sólo se encontró un animal
** No se encontraron animales con 2 copias presencia de enfermedades infecciosas y un elevado
Alelos= alelos mas frecuentes en la población muestreada conteo de células somáticas (9, 30). El CCS ha sido
0 Copias = ninguna copia del alelo DRB3
1 copia= Una copia del aleloo DRB3 considerado como indicador de salud de la ubre y de
2 copias= 2 copias del alelo DRB3 la incidencia de mastitis (20).
SCS= promedio de los valores de células somáticas transformados
La mastitis epidemiológicamente es considerada
Análisis de varianza
la enfermedad más común y costosa del ganado
Con el procedimiento GLM para análisis de lechero en la mayor parte del mundo (15, 17); de
varianza con datos desbalanceados, se determinó un origen multifactorial, es el resultado del efecto de
efecto signicfi ativo (p < 0.05) del alelo 191 (equivale condiciones ambientales, grado de exposición a
a DRB3.2*22, identicfi ado con PCR-RFLP) (11), patógenos y susceptibilidad individual (7). Una
sobre un alto recuento de células somáticas. Las forma de disminuir su impacto en la población
demás variables consideradas (nº de parto, hato es incrementando la capacidad de resistencia
de origen y grupo de lactancia) no presentaron natural de los individuos, por lo que actualmente la
efectos signicfi ativos (p > 0.05) sobre el SCS en esta investigación se ha enfocado hacia la potenciación
evaluación. El OR calculado para una copia del alelo de los mecanismos de defensa naturales, durante los
191 fue de 3.35, con un intervalo de confianza al períodos de susceptibilidad a la enfermedad (12),
95% de 1.22 a 9.14 (véase Tabla 6), confirmando la aunque hay que considerar el importante papel que
asociación del alelo 191 con alto recuento de células pueden desempeñar las condiciones ambientales
somáticas. (15).
Tabla 6. Odd ratio o relación de diferencia, e intervalo de confianza En el análisis de equilibrio de H-W
(IC) 95%, para el alelo BoLA-191 y asociación con SCS.
(Hardy- Weinberg), los resultados encontrados para
Alelo 191 OR IC (95%) la población Lucerna en esta evaluación, podrían ser
explicados como una consecuencia de que estos hatos
0 y 1 copias 3.35 1.22 – 9.14
fueron mantenidos en aislamiento, y los machos que
OR= mayor a 1, asociación del alelo 191 con incremento del SCS. son utilizados como parentales sean hijos de hembras
IC= Intervalo de confianza.
del mismo hato, presentando valores de cría superiores
Con el procedimiento CATMOD para el análisis para características de interés económico como la
de datos categóricos, las variables hato y número de producción de leche, favoreciendo en gran medida
los cruces consanguíneos.276 Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006
Los resultados del test de diferenciación génica, infectadas (21). Y de otro lado el ordeño mecánico
indican que ambas poblaciones (hato uno y hato dos), puede llevar a incrementar el valor de recuento de
no diefi ren signicfi ativamente (p > 0,05). Con relación células somáticas, teniendo en cuenta que puede
a los análisis derivados del cálculo de SCS, los producir maltrato directo sobre el esfínter del
promedios para cada uno de los alelos deterinados pezón.
mostraron que, los alelos DRB3-171, 191 y 215,
Teniendo en cuenta los resultados del análisis de
presentaron un alto SCS, según el número de copias
varianza, y el efecto signicfi ativo (p < 0.05) del alelo
presentes por alelo.
191 sobre un alto SCS, se analizó el efecto de la
presencia o ausencia del alelo 191 sobre el promedio
Los valores de SCS encontrados en las
de SCS, en la población total y en cada una de las
subpoblaciones A y NA y la población total de lucerna
subpoblaciones (A y NA). Se pudo observar en los
que fue muestreada, son bastante altos (véase Tabla
resultados presentados en la tabla 7, que en animales
4).
con una copia del alelo 191, el conteo de células
somáticas se incrementó en relación con las hembras
En estos resultados puede estar inufl yendo
que no lo presentaron en cada uno de los 3 grupos.
además, el aspecto ambiental particular de cada hato,
Para el alelo 191, el promedio de SCS se redujo a
considerado como uno de los factores que incrementa
4.71 (+/- 2.87DE), en animales que no presentaron
en gran medida el recuento de células somáticas por
ninguna copia del alelo (véase Tabla 5), siendo
animal (15). Además las situaciones estresantes de
signicfi ativa (p < 0.05) la diferencia con el promedio
diversa naturaleza que pueden encontrarse en cada
de SCS, presentado por animales con un solo alelo.
hato, pueden agravar el proceso inafl matorio de vacas
No se encontraron muestras con dos copias de 191.
infectadas y tener poco efecto sobre el CCS de las no
Tabla 7. Promedios de SCS para el alelo 191, en la población total y en las subpoblaciones afectada y no afectada.
Promedio SCS
Alelo 191
N Población total N Afectadas N No afectadas
0 copias 178 4.71 (2.87DE) 109 5.41 (2.89 DE) 69 3.62 (2.49 DE)
1 copia 34 6.07 (2.75DE) 27 6.37 (2.75 DE) 7 4.56 (2.44 DE)
N = Número de animales
0 copias = ninguna copia del alelo 191
1 copia = Una copia del alelo 191
DE = desviación estandar
Afectadas = con mastitis según los registros históricos
No afectadas = no mastitis según los registros históricos
El efecto signicfi ativo del alelo 191 sobre el alto es menos frecuente en el hato uno que en el hato dos
recuento de células somáticas, también fue encontrado (véase Figura 1). La menor frecuencia de este alelo en
en estudios realizados por Dietz et al (13) en la raza el hato uno coincide con un menor promedio de SCS
Holstein, quienes determinaron la asociación de en este mismo hato (véase Tabla 4).
DRB3.2*22 con un alto conteo de células somáticas
y susceptibilidad a mastitis. En otras investigaciones,
En investigaciones sobre susceptibilidad a
DRB3.2*22 también fue asociado con un bajo riesgo
mastitis, algunos alelos de la región BoLA han
de presentar ovario quístico (30).
sido asociados con la enfermedad. Sharif et al (28),
La comparación entre los hatos muestreados con encontraron asociación del alelo DRB3.2*23 con
respecto al alelo 191, permitió establecer que este alelo mastitis severa.Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006 Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006 277
En otros estudios, los alelos 207 y DRB3.2*24 que en la población total, un 70% de animales del
fueron signicfi ativamente asociados con susceptibi- grupo NA se encuentran ubicados en los cuatro
lidad a esta enfermedad (9, 11). primeros rangos (< 300000 cel/ml) (véase Figura 2).
Esto quiere decir que en la subpoblación con diagnóstico
negativo de mastitis clínica histórica, la mayor
proporción de animales presentó bajo conteo de
células somáticas y una mayor tendencia a salud
en la ubre. Para el grupo A una mayor proporción
de animales se encuentra entre los rangos 5 – 9
(véase Figura 2), es decir, un conteo de células
somáticas superior a 300000 cel/ml. Este resultado
corrobora lo encontrado en otros estudios donde
un alto recuento de células somáticas es indicativo
de la incidencia de mastitis (20).
Figura 1.Comparación de las frecuencias para cada uno de los
alelos en los hatos 1 y 2.
1= Hato 1
2= Hato 2
DRB3 = Alelos más frecuentes en la población analizada. 0,8
0,7
0,6 aicneucerF
0,5
En este estudio, el análisis de asociación de la Rango 0-4
0,4
Rango 5-9
mastitis clínica reconocida por registros históricos, 0,3
con cada uno de los alelos DRB3 determinados en 0,2
la población Lucerna, utilizando el procedimiento 0,1
CATMOD de SAS (28), no se encontró asociación 0
signicfi ativa (p>0.05), para ninguno de los alelos 1 2
determinados.
Figura 2. Frecuencia de animales en los rangos de SCS según
Resultado que puede ser consecuencia de Shook (30), para afectadas y no afectadas.
considerar los registros históricos de mastitis clínica.
1 = Animales con diagnóstico negativo de mastitis clínica (NA).
Estos registros históricos pueden presentar errores de 2 = Animales con diagnóstico previo recurrente de mastitis clínica (A)
Rango = Clasificación de SCS de 0-4 y 5-9
apreciación de los evaluadores de la enfermedad.
Agradecimientos
Cuando se analizan conjuntamente el SCS y
mastitis clínica, considerando la clasicfi ación por A Mario Cerón Muñoz por su asesoría estadística.
rangos para el conteo de células somáticas establecido A la hacienda Lucerna y a la reserva natural del
por Shook (32) y la clasicfi ación de animales con
Hatico por su participación en la toma de muestras.
respecto a mastitis clínica en afectados y no afectados
A la Cooperativa lechera COLANTA por el apoyo
según los registros históricos, los resultados indican
económico en esta investigación.
Summary
BoLA-DRB3 Polymorphism in Colombian synthetic cattle Lucerna and association with somatic cell
counts and mastitis.
Previous studies have demostrated an association between BoLA-DRB3, infectious diseases and
somatic cells counts in cattle. Polymorphism at the level of the microsatellite intron 2 of synthetic Bovine
Colombian Lucerna was investigated. Twentyfour alleles were identified using PCR and poliacrylamide
gels; their frequencies ranged from 0.02 to 0.26 among 308 individuals studied. Allele 161 was the most278 Rev Col Cienc Pec Vol. 19:3, 2006
frequent and 159 was the least prevalent. Both subgroups mastatis affected and non affected presented
similar frequencies for most alleles, indicating that the population is not in hardy Weinberg equilibrium
(p< 0.05). The mean somatic cells score (log (CCS / 100000) + 3) for the population was 4.8(+/- 2.89).
2
There was found a significant association between allele 191 and high somatic cell scores but not with
clinical mastitis. But mastitis did present a significant association with the variables herd and number of
deliveries.
Key Words: BoLA, DRB3, mastitis, somatic cells.
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