Evaluación de la inflamación y la producción
de IL-20 e IL-17ª en membrana sinovial en
pacientes con osteoartritis de rodilla
Autor: Narvaez Reyes, María Isabel
Asesor: Rondón Herrera, Federico
Fecha: 2020
Programa: Bogotá - Medicina - Especialidad en Anestesiología y Reanimación
Facultad: Facultad de Medicina

Resumen: El objetivo de este estudio es cuantificar y clasificar la gravedad de la inflamación en la sinovial de pacientes con osteoartritis de rodilla (OA) por escala cuantitativa a través de un estudio observacional descriptivo de series de casos. No se estimará el tamaño de la muestra para este estudio, todos los pacientes que tienen Se incluirá una indicación médica de un reemplazo de rodilla durante el período comprendido entre mayo de 2019 y julio de 2019. La presente serie de casos consta de 9 pacientes con un diagnóstico de artrosis de rodilla e indicación de reemplazo de articulación realizado entre mayo de 2018 y junio de 2019, con una edad promedio de 62.7 años (SD 16) al momento de la cirugía y el muestreo, la mayoría de los casos son mujeres 8 (88.9%), el peso promedio fue de 66.1 Kilos (SD 10.9) y un IMC de 27.8 (SD 4.8). Las principales comorbilidades incluyen presión arterial alta en 3 pacientes (33.3%), diabetes mellitus tipo 2 en dos casos (22%), casos de hipotiroidismo 3, casos de osteoporosis 2, osteoporosis 2 y un paciente (11%) con autoinmunidad debido a espondilitis anquilosante y uveítis; El número de pacientes con dos o más comorbilidades fue de 3 (33%).
Demuestra un importante proceso inflamatorio asociado con la osteoartritis documentada histopatológicamente. La presencia de IL 20 e IL-17A es evidente en pacientes con osteoartritis que permite la cuantificación.

Evaluación de la inflamación y la producción
de IL-20 e IL-17ª en membrana sinovial en
pacientes con osteoartritis de rodilla
María Isabel Narvaez Reyes
Médico Internista, Residente de Reumatologia
Universidad Nacional de Colombia
Universidad Nacional de Colombia
Facultad de Medicina
Unidad de Reumatología - Departamento de Medicina
Área de conocimiento: Ciencias de la salud
Bogotá, D.C.
2020Evaluación de la inflamación y la producción
de IL-20 e IL-17ª en membrana sinovial en
pacientes con osteoartritis de rodilla
María Isabel Narvaez Reyes
Médico Internista, Residente de Reumatologia
Universidad Nacional de Colombia
Director:
Federico Rondón Herrera, MD.
Especialista medicina Interna y Reumatología. Profesor Titular. Facultad de Medicina.
Coordinador Unidad de Reumatología. Grupo Investigación Biología Celular y
Autoinmunidad
Codirector:
Angela Patricia Rojas Rojas MSc, P.hD.
Profesora Asociada. Facultad de Ciencias. Departamento de Farmacia. Universidad
nacional de Colombia. Grupo Investigación Biología Celular y Autoinmunidad
Universidad Nacional de Colombia
Facultad de Medicina
Unidad de Reumatología - Departamento de Medicina
Área de conocimiento: Ciencias de la salud
Bogotá, D.C.
2020Resumen y Abstract V
Resumen
El objetivo de este estudio es cuantificar y clasificar la gravedad de la inflamación en la
sinovial de pacientes con osteoartritis de rodilla (OA) por escala cuantitativa a través de
un estudio observacional descriptivo de series de casos. No se estimará el tamaño de la
muestra para este estudio, todos los pacientes que tienen Se incluirá una indicación
médica de un reemplazo de rodilla durante el período comprendido entre mayo de 2019
y julio de 2019. La presente serie de casos consta de 9 pacientes con un diagnóstico de
artrosis de rodilla e indicación de reemplazo de articulación realizado entre mayo de
2018 y junio de 2019, con una edad promedio de 62.7 años (SD 16) al momento de la
cirugía y el muestreo, la mayoría de los casos son mujeres 8 (88.9%), el peso promedio
fue de 66.1 Kilos (SD 10.9) y un IMC de 27.8 (SD 4.8). Las principales comorbilidades
incluyen presión arterial alta en 3 pacientes (33.3%), diabetes mellitus tipo 2 en dos
casos (22%), casos de hipotiroidismo 3, casos de osteoporosis 2, osteoporosis 2 y un
paciente (11%) con autoinmunidad debido a espondilitis anquilosante y uveítis; El
número de pacientes con dos o más comorbilidades fue de 3 (33%).
Demuestra un importante proceso inflamatorio asociado con la osteoartritis documentada
histopatológicamente. La presencia de IL 20 e IL-17A es evidente en pacientes con
osteoartritis que permite la cuantificación.
Palabras clave: osteoartritis, membrana sinovial, rodilla, interleucina 17 (IL-17),
interleucina 20 (IL-20)VI Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana sinovial
en pacientes con osteoartritis de rodilla
Abstract
The Objetive of this study is Quantify and classify the severity of inflammation in the
synovium of patients with knee osteoarthritis (OA) by quantitative scale through an
observational, descriptive case series study A sample size will not be estimated for this
study, all patients who have a medical indication of a knee replacement during the period
from May 2019 to July 2019 will be included The present case series consists of 9
patients with a diagnosis of knee OA and indication of joint replacement performed
between May 2018 and June 2019, with an average age of 62.7 years (SD 16) at the time
of surgery and sampling, the majority of the cases are female 8 (88.9%), average weight
was 66.1 Kilos (SD 10.9) and BMI of 27.8 (SD 4.8). The main comorbidities include high
blood pressure in 3 patients (33.3%), type 2 diabetes mellitus in two cases (22%),
hypothyroidism 3 cases, osteoporosis 2 cases, osteoporosis 2 and one patient (11%) with
autoimmunity due to ankylosing spondylitis and uveitis; The number of patients with two
or more comorbidities was 3 (33%).
It demonstrates an important inflammatory process associated with histopathologically
documented osteoarthritis The presence of IL 20 and IL-17A is evident in patients with
Osteoarthritis allowing quantification.
Keywords: Osteoarthritis, synovial membrane, knee, Interleukin 17 (IL-17), Interleukin 20
(IL-20)Contenido VII
Contenido
Pág.
Resumen y Abstract ........................................................................................................ V
Introducción .................................................................................................................... 1
1. Objetivos ................................................................................................................... 3
1.1 Objetivo General ..................................................................................................... 3
1.2 Objetivos específicos .............................................................................................. 3
2. Hipótesis ................................................................................................................... 5
3. Marco teórico ............................................................................................................ 7
3.1 Características histopatológicas de la sinovitis por OA ........................................... 7
3.1.1 Inflamación, IL-17 y OA ..................................................................................... 8
3.1.2 Inflamación, IL-20 y OA ................................................................................... 10
4. Metodología ............................................................................................................ 13
4.1 Tipo de estudio ..................................................................................................... 13
4.2 Área de estudio ..................................................................................................... 13
4.3 Tamaño de muestra .............................................................................................. 13
4.4 Criterios de inclusión ............................................................................................. 13
4.5 Criterios de exclusión ............................................................................................ 14
4.6 Selección de pacientes ......................................................................................... 14
4.7 Toma de biopsias .................................................................................................. 16
4.8 Transporte de muestras ........................................................................................ 16
4.9 Procesamiento de las muestras ............................................................................ 16
4.9.1 Evaluación del Score de sinovitis .................................................................... 16
4.9.2 Técnica empleada para la identificación de IL-17ª e IL-20 mediante
inmunohistoquimica y cultivo de sionoviocitos para valocaion cuantitativa de IL-20 . 20
4.9.3 Cultivo de sinoviocitos de membrana sinovial, fibroblastos de piel y medición de
IL-20 en sobrenadantes de cultivo ............................................................................ 24
5. Análisis estadístico ................................................................................................ 27
6. Consideraciones éticas ......................................................................................... 29
7. Resultados .............................................................................................................. 31
8. Discusión ................................................................................................................ 37
Bibliografía .................................................................................................................... 39VIII Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodillaIntroducción
La osteoartritis (OA) es una enfermedad articular de origen desconocido, frecuente en
personas de mediana y tercera edad, con prevalencias que han venido en aumento.
Causa dolor, rigidez, hinchazón y destrucción de la articulación con reducción de la
amplitud de movimiento generando un serio impacto en la calidad de vida de los
pacientes(1). Fue considerada como un simple proceso "de desgaste" como enfermedad
degenerativa de las articulaciones. Sin embargo, la patogenia de la OA es mucho más
compleja que el desgaste, en el término "osteoartritis" el sufijo "-itis" es indicativo de una
existencia de un proceso inflamatorio, siendo probablemente aproximación más correcta
a la cual se la ha dado una importancia en la última década (2).
Cada vez se determina su inicio en pacientes jóvenes en edades por debajo de los 40
años, no es exclusiva de pacientes mayores, con una variedad de factores que
desempeñan un papel importante en la patogénesis de la OA: genéticos, biomecánicos y
mediadores pro-inflamatorios (proteasas). Estos definen en la actualidad dos formas de
OA que se confunden en su papel etiológico: una forma primaria, donde el factor
precipitante es la alteración bioquímica del cartílago por factores genéticos y la forma
secundaria donde se identifican factores más precisos de alteración biomecánicos
seguidos al trauma o estrés mecánico de la articulación. La identificación de los factores
claves involucrados en este proceso, ha llevado a proponer nuevos objetivos
terapéuticos, dirigidos a frenar o detener la progresión de OA más allá del simple alivio
sintomático (3).
La evaluación del daño articular se basa en imágenes radiológicas, estableciendo el
diagnóstico y compromiso en etapas tardías e irreversibles de la enfermedad. Esta
situación clínica ha dado pie a la búsqueda de medios diagnósticos que puedan
identificar la enfermedad en etapas tempranas planteándose la posibilidad de utilizar
alguna intervención terapéutica ya utilizada en otras patologías reumáticas inflamatorias,
con la esperanza de intervenir en la historia natural de la OA. Citoquinas como IL1beta y2 Introducción
TNF alfa, han sido ya descritas en este proceso inflamatorio en la Artritis Reumatoidea,
sin establecerse su clara participación en la OA.
La familia de IL17 son un grupo de citoquinas con efecto inflamatorio, que atrae cada vez
más la atención de los investigadores por su participación en la patogénesis de la OA
(4)(5)(6)(7)(3)(8)(9)(10). La evidencia actual no es concluyente en los pocos estudios
clínicos respecto a si este mediador inflamatorio esta elevado en algunas de las formas
clínicas de OA. De igual forma IL-20 es una citoquina que promueve la inflamación, la
angiogénesis y la quimiotaxis, de la cual se ha documentado en la literatura un papel
etiopatogénico en condiciones como la psoriasis, artritis reumatoide, aterosclerosis,
insuficiencia renal aguda y crónica, cáncer de próstata, cáncer de seno, asma y
enfermedad inflamatoria intestinal, pero con evidencia científica muy débil hasta ahora en
la fisiopatología de la OA, probablemente debido a falta de estudios dirigidos, dado sus
mecanismos inductores de la respuesta inflamatoria y amplificación de la misma
(11),(12),(13),(14). Se sabe poco sobre la función de IL-17 e IL-20 en la patogénesis y la
evolución de OA.
El presente estudio forma la primera parte del proyecto de investigación “Evaluación de
la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana sinovial en pacientes
con osteoartritis de rodilla”, en el cual se busca establecer la existencia de un
compromiso inflamatorio en la membrana sinovial de pacientes con OA de rodilla, con
posterior medición de IL-20 e IL-17A como un método de estratificación cuantitativo para
evaluar el compromiso inflamatorio que sirva de ayuda al patólogo y al clínico en su
interpretación de la severidad y progresión de la OA.1. Objetivos
1.1 Objetivo General
Determinar la presencia de inflamación histológica y bioquímica en muestra de tejido
sinovial en pacientes con OA de rodilla.
1.2 Objetivos específicos
 Cuantificar y clasificar la severidad de la inflamación en la sinovial de los pacientes
con OA de rodilla mediante escala cuantitativa.
 Determinar la presencia de IL-17 e IL-20 en tejido sinovial de pacientes con
osteoartritis primaria o secundaria de rodillas, en cualquier fase de la enfermedad.2. Hipótesis
Existe directa correlación entre la severidad de la OA con los hallazgos inflamatorios y
niveles de IL-17A e IL-20, permitiendo cuantificar de manera objetiva los hallazgos
cualitativos y la subjetividad clínica de la OA.3. Marco teórico
3.1 Características histopatológicas de la sinovitis por
OA
Los cambios histológicos que ocurren en la o sinovial Incluyen hipertrofia e hiperplasia
con un aumento en el número de células de revestimiento sinovial. Estos cambios son a
menudo acompañados por la infiltración de los tejidos subyacentes con focos dispersos
de células mononucleares (linfocitos y macrófagos). La infiltración de mononucleares por
células en la sinovial y el espesor de la capa sinovial parecen estar estrechamente
correlacionada. Los pacientes con OA de todos los grados experimentan un
engrosamiento de la capa de la capa sinovial, aumento de la vascularidad e infiltración de
células inflamatorias de las membranas sinoviales, con cambios más marcados en OA
avanzada. Estudios realizados de los cambios en la sinovial que se producen en varias
etapas de la OA revelan que la cantidad de fibrina depositada en la membrana sinovial y
el grado de infiltración de leucocitos están correlacionados con la severidad de la
enfermedad: aunque la deposición de fibrina parece ocurren principalmente en la
inflamación crónica es observable que está presente desde el inicio del proceso de la
enfermedad y podría exacerbar el daño del cartílago.
En contraste con la inflamación sinovial observada en la AR, la inflamación sinovial en la
OA no es un proceso difuso: su distribución es irregular y confinada a áreas adyacentes a
los sitios de la condropatía sin embargo su apariencia microscópica puede ser
indistinguible de lo observado en AR, especialmente en casos de OA tardía que implica
neovascularización e infiltración por fibroblastos y macrófagos. Aunque estas
características patológicas de la sinovial son patente de la OA avanzada, también se
encuentran en estadios tempranos o cuando el daño del cartílago es menos extenso. Lo
que sugiere que la sinovial está involucrada en la fase temprana de la enfermedad. La
sinovitis se ha documentado sólo en los sitios adyacentes al cartílago degenerativo en los8 Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodilla
pacientes con OA, pero el cartílago degenerativo no siempre está completamente ligado
a la sinovitis. Este hallazgo sugiere que la inflamación es causada por los productos de
degeneración del cartílago en OA avanzada(19) .
3.1.1 Inflamación, IL-17 y OA
Cada vez más se resalta la importancia del proceso inflamatorio dentro de la
fisiopatología de la OA. Estudios recientes han intentado dilucidar los eventos en las
cascadas de la inflamación que llevan a prolongar la destrucción del cartílago articular
por las agrecanasas y colagenasas. Las Citoquinas que clásicamente se han asociado
con este proceso son la IL-1 y el TNF- α, estos mediadores de la inflamación son
sintetizados intracelularmente en formas precursoras y convertidas a sus formas activas
mediante clivaje proteolítico por las caspasas, se ha visto que la expresión de dichas
caspasas está aumentada en pacientes con OA (1,17).
La familia de la IL-17 se compone de seis miembros (IL-17 A-F) que pueden interactuar a
través de cinco tipos de receptores (IL-17 RA-E) (15). La fuente de IL-17 son
principalmente las células T CD4 + estimuladas y los mastocitos que infiltran la
membrana sinovial y toda la articulación a través de los vasos sanguíneos. Las células
principales de la articulación que están afectadas por IL-17 son los condrocitos y los
sinoviocitos similares a fibroblastos (FLS) que exhiben la expresión del receptor IL-17R
en su superficie (2). La IL-17 puede inducir la producción de TNF-a, IL-1b e IL-6 a partir
de cartílago, sinoviocitos, macrófagos y células óseas, y actuar sobre condrocitos
mediante la activación de la sintasa de óxido nítrico inducible (iNOS), ciclooxigenasa
(COX) -2 que afectan negativamente al cartílago (10). Se ha demostrado que IL-17 inhibe
la síntesis de proteoglicanos por los condrocitos y promueve la producción de enzimas
del grupo MMP (Colagenasas). El efecto de la IL-17 sobre la secreción de VEGF (Factor
de crecimiento endotelial y vascular) tanto por los condrocitos como por el FLS es
también característico; favorece el desarrollo excesivo de la red de vasos sanguíneos
dentro de la membrana sinovial, conduciendo a su hipertrofia (15). Por lo expuesto se
propone un papel fundamental de la IL-17 en la fisiopatología de la OA.
En un estudio experimental se aislaron fibroblastos sinoviales y condrocitos de pacientes
con OA de rodilla y cadera los cuales fueron estimulados in vitro con IL-17, IL-1 β O TNFMarco teórico 9
– α con resultados que sugirieron que la IL-17 podría contribuir a la descomposición del
cartílago y a la infiltración sinovial en la OA induciendo tanto la liberación de
quimioquinas por condrocitos como fibroblastos sinoviales y en menor grado, la síntesis
de IL-1 β por los condrocitos(3) . De forma similar a partir de especímenes de cartílago
de 26 pacientes con OA de rodillas que fueron sometidos a trasplante total, se extrajeron
y cultivaron condrocitos, los cuales a su vez fueron expuestos a los efectos pro
inflamatorios de la IL- 17 e IL-1 β demostrando que se indujo la producción de
colagenasa-3 (MMP-13) por estos, responsable de la degradación del colágeno en el
cartílago patológico (5). En un escenario similar a partir de tejido sinovial obtenido en
cirugía de rodillas de 32 pacientes con OA, se realizó una evaluación macroscópica de la
inflamación que permitió separar las áreas inflamadas y no inflamadas. Se tomaron
muestras de las áreas identificadas y se incubaron para obtener medios acondicionados
en los tejidos. La expresión cuantitativa de ARNm de mediadores pro inflamatorios se
analizó mediante RT-PCR (PCR en tiempo real) y los niveles de proteína se
determinaron mediante ELISA y zimografía de gelatina encontrando que las áreas
inflamadas se asociaron con una mayor expresión de IL-17 e IL-22 (7). De esta suma de
experimentos in vitro, dada la presencia frecuente o la evidente respuesta a la
estimulación con IL-17 en el tejido sinovial se presume su papel fisiopatológico en la OA,
no obstante es importante resaltar que los análisis se hicieron concomitante con la
medición o estimulación de otros mediadores inflamatorios, que no permite dilucidar entre
un aporte individual o en conjunto de cada uno de ellos.
Ya en el ámbito de estudios in vivo varios estudios en su mayoría de población china han
revelado niveles elevados de la IL-17 en liquido sinovial y algunos en suero de los
pacientes, tal es el caso del estudio de corte trasversal que incluyó a 152 pacientes con
OA de rodillas y cadera en estadio final sometidos a reemplazo de articulación, donde se
obtuvo muestra de líquido sinovial en la mañana del procedimiento quirúrgico y se
midieron los niveles de IL-17 entre otras interleuquinas, la cual estuvo presente en 14
muestras (9,2%), a su vez se asoció con altos niveles de varias otras adipocinas pro
inflamatorias, citoquinas, quimiocinas, demostrando además un patrón radiográfico
diferente de OA, con pacientes que tendían a ser más jóvenes, más a menudo mujeres y
obesos grado II(4) . Otros estudios previos, de tipo retrospectivo tomaron muestras de
suero y líquido sinovial de pacientes con osteoartritis de rodilla primaria apareados con
sujetos sanos por edad y sexo se encontró que el nivel de IL-17 medido en el suero y el10 Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodilla
líquido sinovial de los pacientes fue más elevado comparado con los controles
evidenciando una correlación directa con las alteraciones radiográficas más severas
según el sistema de clasificación de Kellgren y Lawrence (KL).(6) También en población
china un análisis de 226 pacientes con OA de rodilla y 106 controles apareados por
edad, sexo e IMC, evidencio que los niveles en liquido sinovial de IL-17 fueron
significativamente mayores en los pacientes en comparación con los controles (P <0,01),
y se correlacionaron negativamente con la gravedad de OA medida por índices de dolor,
funcionalidad e índice radiográfico de de Kellgren y Lawrence.(8)
De lo anterior podemos concluir que es clara la presencia local y sistémica de niveles
detectables de IL-17 en pacientes con OA principalmente de rodilla en la población
oriental, sin disponer de información en otras razas o zonas geográficas, así mismo no
hay evidencia de una alteración genética predisponente o asociada a la enfermedad en
las zonas codificantes para la IL-17.
3.1.2 Inflamación, IL-20 y OA
La interleucina-10 (IL-10) es una citocina pleiotrópica que Inhibe la inmunidad mediada
por células mientras que aumenta la inmunidad humoral. Se estableció la familia de IL-10
recientemente a partir del descubrimiento de varias citosinas relacionadas, tales como IL-
19, IL-20, IL-22, IL-24, e IL-26. Aunque estas IL-10 familias, comparten una homología
primaria y estructural sus actividades biológicas son muy diferentes(16). La IL-20 actúa
sobre múltiples tipos de células activando un complejo heterodímero receptor de IL-
20R1-IL-20R2 o IL-22R1-IL-20R2(17). La IL-20 es una citoquina que promueve la
inflamación, la angiogénesis y la quimiotaxis(12). La IL-20 también regula la
diferenciación de los osteoclastos alterando el activador del receptor del eje NF-kB
(RANK) y del ligando RANK (RANKL)(17).
Aunque varios tipos de células expresa IL-20, se expresa predominantemente por
monocitos y en la piel por queratinocitos, también se ha encontrado en concentraciones
en el líquido sinovial de pacientes con artritis reumatoide. Otros estudios también han
sugerido un papel potencial para la IL-20 en la aterosclerosis y angiogénesis,
Insuficiencia renal aguda y crónica, cáncer de próstata, cáncer de seno, asma y
enfermedad inflamatoria intestinal(11),(12),(13). Anteriormente se ha demostrado que la
IL-20 indujo a fibroblastos sinoviales (RASF) en AR a la producción de proteínaMarco teórico 11
quimioatrayente monocítica-1, IL-6 e IL-8, y también aumentó la quimiotaxis de
neutrófilos. Además, el tratamiento con anticuerpo monoclonal anti - IL - 20 (7E) o
electroporación Soluble IL-20R1 en ratas con artritis inducida por colágeno (CIA) redujo
la gravedad de la artritis, lo que sugirió que IL-0 podría ser el objetivo terapéutico en la
AR y la osteoartSin embargo, se sabe poco sobre la función de IL-20 en la patogénesis
de OA. Solamente se dispone de un estudio donde se utilizó tinción inmunohistoquímica
para detectar la IL-20 y sus receptores en tejido sinovial y cartílago de pacientes con OA,
y en fibroblastos sinoviales OA(OASF) y condrocitos (OACC) de roedores con OA
inducida cirugía, donde se encontró que la IL-20 y sus receptores se expresaron en
OASFs y OACCs. La IL-20 indujó la expresión del TNF-α, IL-1β, MMP-1, y MMP-13
mediante la activación de ERK-1/2 y señales JNK (Janus KInasa) en OASFs. Asi mismo
la IL-20 no sólo aumentó la expresión de MCP-1, IL-6, MMP-1 y MMP–13, sino también
regulo a la baja el agrecan, el colágeno tipo 2, TGF-β en OACCs. La gravedad de la
artritis fue significativamente menor en las ratas con OA tratadas con 7E ( Anticuerpo
monoclonal Inhibidor de IL-20), sugiriendo que estos hallazgos proporcionan evidencia de
que IL-20 es un nuevo objetivo terapéutico potencial en OA(14).4. Metodología
4.1 Tipo de estudio
Estudio observacional, descriptivo tipo serie de casos
4.2 Área de estudio
Consulta de los servicios de Ortopedia y Reumatología de la Subred Centro Oriente de la
cuidad de Bogotá y un consultorio particular durante el período comprendido entre el mes
de Mayo de 2019 a Julio de 2019
4.3 Tamaño de muestra
No se estimará un tamaño de muestra para el presente estudio, se incluirán todo los
pacientes que tengan sospecha clínica OA de rodilla y que cumplan con los criterios de
clasificación del Colegio Americano de Reumatología para OA de rodilla durante el
período comprendido entre el mes de Marzo de 2019 a mayo de 2019.
4.4 Criterios de inclusión
1. Pacientes masculinos o femeninos colombianos
2. Pacientes mayores de 18 años
3. Pacientes procedentes de la consulta externa de los servicios de Ortopedia o
Reumatología de la Subred Centro Oriente/ Consultorio particular que tengan
sospecha clínica OA de rodilla y que cumplan con los criterios de clasificación del
Colegio Americano de Reumatología para OA de rodilla (Mayores de 45 años, Dolor
articular que se intensifica con la actividad, sin rigidez matutina o de presentarla se
encontrará por menos de 30 minutos) que sean refractarios a las medidas14 Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodilla
farmacológicas (Analgésicos no esteroideos AINES tópicos y sistémicos, uso de
corticoides intra-articulares) y medidas no farmacológicas (Fisioterapia, educación del
paciente y reducción de peso) persistiendo con dolor intenso, rigidez articular y
reducción de la funcionalidad articular con impacto importante en la calidad de vida.
4. Pacientes con síntomas clínicos antes mencionados y que por lo anterior requieran de
reemplazo de rodilla
5. Pacientes con los síntomas antes mencionados con cambios inflamatorios mono-
articulares, con compromiso de rodilla dada por edema y sinovitis localizada, que
requieran estudio de líquido sinovial, con biopsia percutánea con aguja de membrana
sinovial PARKER PEARSON para diagnóstico diferencial de la artropatía con una
puntuación a la radiografía simple de rodilla de 0 a 4, en escala radiológica de
severidad de Kellgren y Lawrence (K/L)
6. Deseo de participar en el estudio, si durante el procedimiento se documentan cambios
inflamatorios de OA previa explicación y firma del consentimiento informado.
4.5 Criterios de exclusión
1. Pacientes con OA secundaria con cuadro infeccioso activo
2. Pacientes con diagnóstico de Artritis Reumatoide, Lupus Eritematoso Sistémico,
Artritis reactiva, espondiloartropatías seronegativas, artropatía por depósito de
cristales (urato mono sódico, hidroxiapatita, pirofosfato cálcico)
3. Pacientes con clínica que sugiera cualquier otra condición inflamatoria crónica no
sospechosa de OA a criterio del médico tratante e historia de uso de corticoides oral o
intra-articular en los últimos 3 meses previo a la consulta
4.6 Selección de pacientes
Se realizará una selección de manera prospectiva pacientes que consulten a la consulta
externa de los servicios de Ortopedia y Reumatología de la Subred Centro Oriente de laMetodología 15
ciudad de Bogotá, así como de la consulta particular de Reumatología, que tengan
sospecha clínica OA de rodilla y que cumplan con los criterios de clasificación del Colegio
Americano de Reumatología para OA de rodilla (Mayores de 45 años, Dolor articular
que se intensifica con la actividad, sin rigidez matutina o de presentarla se encontrará por
menos de 30 minutos) que sean refractarios a las medidas farmacológicas (Analgésicos
no esteroideos AINES tópicos y sistémicos, uso de corticoides intra-articulares) y
medidas no farmacológicas (Fisioterapia, educación del paciente y reducción de peso)
persistiendo con dolor intenso, rigidez articular y reducción de la funcionalidad articular
con impacto importante en la calidad de vida.
Los pacientes que serán incluidos en el estudio deberán tener indicación médica para la
realización de reemplazo de rodilla por los síntomas antes descritos.
Se llevaran a toma de biopsia sinovial percutánea a los pacientes con los síntomas antes
mencionados que presenten sinovitis o edema mono-articular con el fin de realizar un
estudio de líquido sinovial y realizar un diagnóstico diferencial de otras artropatías
inflamatorias.
Éstos procedimiento serán realizados por el médico ortopedista y/o Reumatólogo tratante
los cuales cuenta con la experiencia en reemplazo articular y en la toma de muestra de
membrana sinovial.
Es importante anotar además, que el procedimiento de la biopsia percutánea con aguja
es un procedimiento de rutina que se realiza en pacientes específicos los cuales tienen
una indicación precisa para el diagnóstico diferencial de las artropatías inflamatorias
cuando por clínica no logra establecerse.
El día en que se realice el reemplazo de rodilla o biopsia percutánea con aguja por parte
de médico tratante, se solicitará que posterior a la toma de muestra, esta no se descarte
y sea almacenada para trasladarla a la Universidad Nacional de Colombia para así
realizarle los análisis planteados para el presente estudio.
Teniendo en cuenta que se tomará una muestra biológica del paciente, se le solicitará la
firma de consentimiento informado, para de esta manera explicarle al paciente los16 Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodilla
objetivos del estudio y obtener la autorización de procesar la muestra extraída por su
médico tratante con el fin de realizar el diagnóstico diferencial.
4.7 Toma de biopsias
De la muestra extraída durante procedimiento quirúrgico (reemplazo de rodilla)
programada por el médico tratante, el grupo de investigadores le solicitará a este, un
fragmento de membrana sinovial extraído para el estudio en mención.
4.8 Transporte de muestras
Las muestras serán transportadas de acuerdo con los lineamientos y especificaciones de
las normas técnicas colombianas y el manual de bioseguridad de la OMS, cuyo manejo
corresponde a categoría B: Transporte de tejidos biológicos no infecciosos.
4.9 Procesamiento de las muestras
Las muestras que sean suministradas por el médico tratante posterior a su análisis, serán
almacenadas y procesadas en los laboratorios de investigación del Departamento de
Farmacia y el Laboratorio de Patología de la Facultad de Medicina, debidamente
acreditados, propios de la Universidad Nacional de Colombia.
La evaluación histopatológica de la membrana sinovial por parte del servicio de patología
consiste en la cuantificación del score de sinovitis y posteriormente la medición de IL-17A
e IL-20 mediante inmunohistoquímica.
4.9.1 Evaluación del Score de sinovitis
A las muestras de membrana sinovial se les practicará la coloración básica en cortes
histológicos procesados con parafina mediante la aplicación de la técnica de
Hematoxilina y Eosina de Harris, procedimiento adoptado por el laboratorio de patología
de la Universidad Nacional de Colombia y aceptado por la comunidad científica
internacional y nacional, normalizado y editado en textos científicos de Histotecnología.
El procedimiento secuencial se realizará de la siguiente manera:Metodología 17
 Desparafinar e hidratar (pasar por Alcohol y Xilol tres veces)
 Teñir con hematoxilina de Harris filtrada recientemente durante 6 a 15 minutos
 Lavar en agua corriente de 2 a 5 minutos
 Diferenciar en alcohol ácido al 1% por 5 a 30 segundos (control al microscopio)
 Azular en agua corriente durante 5 segundos
 Las láminas posteriormente se colocarán en una solución débil de agua amoniacal o
en una solución saturada de Carbonato de Litio hasta que las secciones se vean de
color azul brillante
 Lavar con agua corriente durante un minuto
 Se tiñe con eosina-floxina recientemente filtrada durante 30 segundos a un minuto
 Lavar en agua corriente (en etanol al 70% si es eosina alcohólica) hasta obtener la
intensidad deseada de coloración por 10 minutos
 Deshidratar, aclarar y montar
 Tratamiento de los cortes tras la coloración: Después de completar la coloración, los
cortes deben ser deshidratados y aclarados nuevamente para conseguir la
conservación definitiva. La deshidratación se realiza a través de baños sucesivos de
alcohol etílico de reciente gradación (80, 96 y 100%). El aclaramiento se realiza
mediante el uso de tres baños consecutivos de xileno (xilol) de un minuto cada uno,
después de uno de acetona al 100%.
 Montar en medio resinoso18 Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodilla
 El producto de trabajo finalmente es revisado por el director de calidad o quien haga
sus veces (formato de evaluación de calidad).
La estratificación cuantitativa o Score de sinovitis evalúa los cambios inmunológicos e
inflamatorios de forma graduada (método aditivo): Se cuantifica las capas de células del
revestimiento sinovial (método cuantitativo), densidad de células estromales e infiltrado
inflamatorio (método semicuantitativo). Para cada variable se le asigna un puntaje según
la severidad del compromiso y su sumatoria finalmente resulta en el score de sinovitis.
En la imagen superior se muestra una histología de tejido sinovial 4X, de izquieda a
derecha encontramos el revestimiento sinovial, la densidad de células estromales y el
infiltrado inflamatorio. Tomado de: Krenn V., Morawietz L., Burmester G., Kinne R.,
Mueller-Ladner U., Muller B., Haupl T. Synovitis score: discrimination between chonic
low-grade and high-grade synovitis, Histopathology, 49, págs. 348 (2006).Metodología 19
Un score de 0-1 indica que no hay evidencia histopatológica de sinovitis, 2-4: sugiere
sinovitis de bajo grado y de 5-9 sugiere sinovitis de alto grado (27)20 Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodilla
4.9.2 Técnica empleada para la identificación de IL-17ª e IL-20
mediante inmunohistoquimica y cultivo de sionoviocitos
para valocaion cuantitativa de IL-20
4.9.2.1 Inmunohistoquímica básica para la evaluación de IL-17ª e
IL-20
El proceso para la inmunohistoquímica consiste en realizar manualmente los procesos de
marcación de antígenos tisulares en láminas histológicas de tejido parafinado y de
revelado de reacción positiva con sustancias cromógenas. La técnica se desarrollará de
la siguiente manera:
 El histotecnólogo de turno realiza cortes de 4 a 5 micras de espesor del tejido incluido
en parafina, los traslada al baño de flotación y los “pesca” con lámina preparada con
adhesivo (histogrip) montando uno o dos cortes por lámina según sea solicitado
 Desparafinar las láminas colocándolas en la incubadora a 60oC durante 12 a 18
horas
 Continuar la desparafinación pasando las láminas por xilol dos a tres veces durante
tres minutos cada una
 Hidratar los cortes pasando por etanol en concentraciones descendentes (absoluto,
90% y 80%) durante tres minutos en cada paso
 Lavar con agua corriente durante un par de minutos, dejando circular el agua. Luego
enjuagar con agua destilada
 Disponer las láminas en vaso de Coplin y adicione la solución de peróxido de
hidrógeno al 3%. Tal solución se logra mezclando 5 mL de peróxido de hidrógeno al
30% con 45 mL de metanol (absoluto). Incubar durante 15 a 30 minutos a
temperatura ambiente
 Lavar con agua corriente y enjuagar con agua destiladaMetodología 21
 Disponer las láminas en vaso de Coplin y adicione la solución de recuperación de
antígenos (solución buffer citrato ph 6, ph 7 y ph 9). Tape el vaso con papel aluminio.
Ubique el vaso en la olla vaporera, por un tiempo de 20 a 40 minutos según el caso. Si se
cuenta con olla de presión y microondas se puede cambiar éste paso por el siguiente:
Ubicar las láminas en canastilla portaláminas; llene la olla con 1000 cc de solución de
Citrato, disponer la canastilla con las láminas en la olla y caliente el microondas durante
16 minutos hasta que pite; dejarla pitar durante un minuto y diez segundos exacto
 Dejar enfriar durante 15 a 20 minutos, lavar las láminas tres veces con agua destilada
y deposítelas en vaso Coplin con buffer Tris y dejar reposar por 10 minutos
 Preparar las diluciones con los anticuerpos primarios en Eppendorf debidamente
rotulados y ubicarlos en una gradilla. La cantidad de reactivo a preparar es de 50
microlitros para fragmentos pequeños de tejido y para grandes fragmentos de hasta
100 microlitros; esta cantidad se incrementa proporcionalmente y se realiza
simultáneamente el mismo proceso para varios casos diferentes
 Sacar las láminas del búffer, elimine el exceso de humedad con papel absorbente y
con lápiz hidrófobo marcar un círculo alrededor del tejido para evitar el escurrimiento
de los reactivos por toda la lámina
 Adicionar la cantidad necesaria de Power Block (BioGenex HK085-5K) por diez
minutos y luego adicionar la dilución del anticuerpo primario acorde al tamaño del
tejido. Disponer las láminas en la cámara húmeda
 Incubar a temperatura ambiente durante una hora o durante toda la noche a 4 grados
centígrados
 Lavar tres veces con buffer Tris las láminas y depositar en vaso Coplin con buffer Tris
durante cinco minutos
 Sacar las láminas del buffer, eliminar el exceso de líquido con papel absorbente sin
desecar el tejido y agregar el anticuerpo secundario en la misma cantidad del22 Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodilla
primario. Incubar durante 15 a 30 minutos en cámara húmeda a temperatura
ambiente
 Nuevamente lavar tres veces con buffer Tris las láminas y deposítar en vaso Coplin
con buffer Tris durante cinco minutos
 Sacar las láminas del buffer, eliminar el exceso de líquido con papel absorbente y
cubra el tejido de acuerdo a su tamaño con Super Enhancer (BioGenex HK 518-YAK)
e incubar por 20 minutos en cámara húmeda a temperatura ambiente
 Nuevamente lavar tres veces con buffer Tris las láminas y depositar en vaso Coplin
con buffer Tris durante cinco minutos
 Sacar las láminas del buffer, eliminar el exceso de líquido con papel absorbente y
cubrir el tejido de acuerdo a su tamaño con Polyp-HRP (BioGenex HK 519-YAK) e
incubar por 30 minutos en cámara húmeda a temperatura ambiente
 Preparar el reactivo de DAB (BioGenex HK 520-YAK) mezclando 1 mL de buffer
peróxido con una gota de solución matriz de Diaminobencidina en un Eppendorf.
Realizar este procedimiento bajo campana de extracción de gases. Evitar inhalar en
vapor de la DAB
 Centrifugar esta solución a 11000 rpm durante 3 minutos
 Nuevamente lavar tres veces con buffer Tris las láminas y depositar en vaso Coplin
con buffer Tris durante cinco minutos
 Secar las láminas con papel absorbente evitando desecar el tejido. Bajo campana de
extracción de gases aplicar la cantidad necesaria de reactivo diluido DAB sobre el
tejido
 Observar al microscopio la aparición del color café y deje actuar el cromógeno
aproximadamente por dos minutos o hasta obtener la coloración deseada.Metodología 23
 Introduzcir la lámina en agua corriente para detener la reacción de la DAB.
Completado el proceso con todas las láminas ubíquelas en canastilla portaláminas y
llévelas a un recipiente con agua corriente y lávelas exhaustivamente.
 Eliminar las impurezas del recipiente de Hematoxilina con papel absorbente.
 Contraste con Hematoxilina de Harris por 5 segundos. Realice azulamiento con agua
amoniacal.
 Lavar con Tween 20 diluido para eliminar la coloración de fondo y la inespecificidad
 Deshidratar el tejido con etanol en concentraciones ascendentes con pases de tres
minutos por cada paso
 Aclarar las láminas con tres pasos por Xilol de tres minutos cada uno
 Sacar las láminas del Xilol y limpie su exceso. Agregue una gota de Citoresina con un
toque de Xilol a la lámina y cubra con laminilla
 Rotular las láminas, embálelas y entréguelas para su distribución.
La interpretación del resultado del proceso de inclusión de tejidos es una valoración
subjetiva realizada por el personal profesional a cargo del procedimiento, y se basa en su
experiencia y conocimiento. El desenlace óptimo del procedimiento se traduce en una
apariencia “sui generis” de las láminas que se describen brevemente a continuación:
 Láminas montadas con laminillas sin exceso de medio de montaje es las que se
identifica claramente el número de caso y reactivo.
 Láminas visualizadas al microscopio de luz con escasa o nula reactividad de fondo y
reactividad adecuada en áreas claramente definidas con patrón citoplasmático o de
membrana. Dicha reactividad genera un color café.24 Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodilla
Estas características mencionadas, se traducen en la consecuencia de una adecuada
acción de los técnicos y profesionales, al ejecutar los pasos que dependen de su pericia
con respecto del procedimiento, de los reactivos utilizados y el buen estado de los
dispositivos. Si en la ejecución del proceso existieron fallas, se pueden observar
características como: Láminas con escasa o nula reactividad o excesiva reactividad de
fondo que haga imposible una interpretación adecuada del tejido.
4.9.3 Cultivo de sinoviocitos de membrana sinovial, fibroblastos
de piel y medición de IL-20 en sobrenadantes de cultivo
4.9.3.1 Estandarización de cultivos primarios de sinoviocitos
 La membrana sinovial (MS) es recolectada en medio RPMI 1640 conteniendo
penicilina-estreptomicina (100 u/ml penicilina y 100 ug/ml estreptomicina) (Gibco) y
suplementado con suero fetal bovino (SFB) (Gibco) al 5%
 El tejido será digerido empleando Colagenasa tipo II, 0,2 % por 4h en incubadora a
37C y 5% CO en medio RPMI 1640 conteniendo penicilina-estreptomicina (100 u/ml
2
penicilina y 100 ug/ml estreptomicina) (Gibco)
 Luego de la digestión enzimática, el tejido será centrifugado por 10 min a 1.500 rpm.
 El sobrenadante producto de la centrifugación, será pasado por membrana de nylon
para colectar todo el material particulado
 Luego se realizará recuento celular y medición de viabilidad empleando azul tripán
(1:1) tomando una alícuota del sobrenadante
 Posteriormente, éste será colocado en botellas de cultivo de 25 cm2 en medio RPMI
1640 conteniendo penicilina-estreptomicina (100 u/ml penicilina y 100 ug/ml
estreptomicina) (Gibco) y suplementado con suero fetal bovino (SFB)(Gibco) al 20%
 El sobrenadante conteniendo las células adherentes (sinoviocitos) será cultivado en a
37 C y 5 % de CO hasta que las células lleguen a confluencia (5-7 días).
2Metodología 25
 Durante este tiempo, se harán cambios con medio RPMI 1640 conteniendo penicilina-
estreptomicina (100 u/ml penicilina y 100 ug/ml estreptomicina) (Gibco), para
mantener el cultivo en condiciones óptimas y retirar las células no adherentes
 El cultivo primario, será tratado con Tripsina /EDTA al 0,25 % y los sinoviocitos se
cultivarán a una concentración celular de 1x105 células/ml de RPMI con SBF en placa
de 24 pozos
 Posteriormente los sinoviocitos serán estimulados con TNF- alfa 10 ng/ml
(BIOLEGEND) por 24h, para estimular la producción de citoquinas
 Luego de este tiempo, el sobrenadante de cultivo será tomado para evaluar la
secreción de IL-20 empleando un kit de ELISA (Thermofisher-
Invitrogen).(23,24,25,26).
4.9.3.2 Medición de citoquinas por ELISA
IL-20 será medida en sobrenadantes de cultivo, luego de estímulo con TNF alfa, de
acuerdo con el protocolo establecido en el numeral 2.1, empleando un kit comercial.
(Invitrogen). El proceso se llevará a cabo de acuerdo con las recomendaciones del
fabricante.5. Análisis estadístico
El análisis de la información se realizará utilizando un Software estadístico Stata (13.0).
Las variables cuantitativas se presentarán en forma de medidas de resumen y dispersión,
según su distribución estadística, la cual será evaluada con la prueba Shapiro-Wilks. Las
variables cualitativas se presentarán en forma de frecuencias absolutas y relativas.6. Consideraciones éticas
La participación de los individuos del estudio fue completamente voluntaria, se solicitó la
firma del consentimiento informado donde se encuentra consignada la información
necesaria del proyecto, los objetivos, los riesgos de la participación, expresados en
lenguaje cotidiano. Adicionalmente se informa que el grupo de investigadores no
realizará intervención alguna sobre su ser, sino que solicitará al médico tratante un
pequeño fragmento de la muestra extraída para poder ser analizada en la Universidad
Nacional de Colombia, para objeto de esta investigación.
El presente estudio cumple con los requisitos para la investigación en humanos según la
resolución 8430 de 1993 del Ministerio de Salud. De acuerdo al artículo 11 de la misma
resolución se pueden identificar una categoría de riesgo mínimo para el presente estudio,
dado que se analizarán los fragmentos de los pacientes con indicación clínica y
terapéutica durante procedimiento programado por el servicio de ortopedia y
reumatologia.
El estudio no pretende evaluar recursos profilácticos, tampoco terapéuticos en el
tratamiento de la Osteoartritis. Los pacientes continuaron con el esquema de tratamiento
sin modificaciones por el grupo de investigación.7. Resultados
La presente serie de casos consta de 9 pacientes con diagnóstico de OA de rodilla e
indicación de reemplazo articular realizada entre mayo 2018 y junio de 2019, con edad
promedio de 62.7 años (SD 16) al momento quirúrgico y toma de la muestra, la mayoría
de los casos son de sexo femenino 8 (88.9%), peso promedio fue de 66.1 Kilos (SD 10.9)
e IMC de 27.8 (SD 4.8). Entre las principales comorbilidades destacan hipertensión
arterial en 3 pacientes (33.3%), diabetes mellitus tipo 2 en dos casos (22%),
hipotiroidismo 3 casos, osteoporosis 2 casos, osteoporosis 2 y un paciente (11%) con
autoinmunidad dada por espondilitis anquilosante y uveítis; el número de pacientes con
dos o más comorbilidades fue de 3 (33%).
La mediana de tiempo en meses desde el inicio de los síntomas articulares en rodilla hasta
el reemplazo articular fue de 21 meses (RIC 11.5 - 72), Entre las modalidades de manejo
usadas previo a la cirugía fueron, terapia física en 7 pacientes (77.8%), corticoides orales
y/o infiltraciones en 4 (44.4%), opioides en 5 pacientes (55.6%) y AINES en el 100% de los
pacientes; 8 (88.9%) requiriendo manejo farmacológico multimodal .
Tabla 1. Características demográficas
Variable
Edad al reemplazo articular (años) (SD) 62.7 (16)
Sexo femenino No (%) 8 (88.9)
Peso (Kilos) (SD) 66.1 (10.9)
IMC (SD) 27.3 (4.8)
Antecedentes No (%)
HTA 3 (33.3)
DM 22.2 (2)
Hipotiroidismo 3 (33.3)
Osteoporosis 2 (22.2)
Manejo previo a Cirugía No (%)
Fisioterapia 7 (77.8)
Corticoides* 4 (44.4)
AINES 9 (100)
Opioides 5 (55.6)32 Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodilla
Tiempo desde síntomas a cirugía (meses) Mediana 21 (11.5 - 72)
(RIC)
Puntaje de sinovitis¥ 2.11 (2.2)
*Corticoides orales y/o inyectados
SD Desviación estándar para variables con distribución normal
RIC: Rango intercuartil en distribución no normal
¥Puntaje de inflamación de sinovitis, mínimo 0: sin inflación, máximo 9 a mayor
grado de inflamación.
El puntaje de sinovitis medio fue de 2.11 (DS 2.2), 5 casos con puntaje 0-1 sin evidencia de
sinovitis (55.6%), 3 casos con puntaje 2-4 para sinovitis de bajo grado (22%) y 1 caso con
puntaje 5-9 para sinovitis de alto grado (11%), sin correlación alguna con sus comorbilidades.
Tabla 2. Características individuales de cada paciente
Tiempo
Manejo Puntaje de
Caso Edad Sexo IMC Comorbilidades a
previo Sinovitis
cirugía
Fisioterapia/
1 55 F 23,3 No 14 0
AINES
Fisioterapia/
2 30 F 24,3 No AINES / 7 0
Opioides
Fisioterapia/
3 52 M 29,5 Espondilitis/Uveítis Corticoides 11 1
/ AINES
Fisioterapia/
4 69 F 30,4 Hipotiroidismo Corticoides 36 0
/ AINES
Corticoides
5 84 F 23,6 Hipotiroidismo / AINES / 24 6
Opioides
Fisioterapia/
6 60 F 23,4 Osteoporosis AINES / 12 1
Opioides
AINES /
7 65 F 38,0 HTA / DM2 21 4
Opioides
HTA / DM2 / Fisioterapia/
8 71 F 28,6 204 4
Osteoporosis AINES
Corticoides
HTA /
9 78 F 29 / AINES / 108 3
Osteoporosis
Opioides
HTA: Hipertensión arterial, DM2: Diabetes mellitus Tipo 2,Resultados 33
En la imagen podemos evidenciar las diferencias histológicas encontradas en los casos
7, 5 y 4, con puntajes representantes los diferentes grados de sinovitis, se logra
identificar claramente la diferencia de la celularidad:
β α
γ
Caso 4, puntaje 0 Caso 5, puntaje 6
α
γ
β
γ
Caso 7, puntaje 4
β
γ
α
Revestimiento sinovial (α), densidad estromal (β) e infiltrado inflamatorio (γ).34 Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodilla
Al evaluar la correlación entre el grado de sinovitis al momento quirúrgico (severidad) y el
tiempo desde el inicio de los síntomas (progresión) no se halló adecuado correlación
(r=0.48, p = 0.18) (Grafica 1), tampoco se halló asociación estadística para con el uso o
no de AINES y/o corticoides con mayor o menor grado de inflamación (p>0.05 para todos
las pruebas)
Grafica 1. Correlación en tiempo a manejo quirúrgico e inflamación por sinovitis
Como parte del protocolo del proyecto se evaluó la marcación de IL-17A e IL20 mediante
inmunohistoquimica de las primeras 4 muestras, para su valoración cualitativa,
encontrando que pese a tener un puntaje de sinovitis 0 (cero), considerado sin
compromiso infalmatorio histológico (sin “sinov-itis”) se evidencian agregados
citoplasmáticos de IL-17A mediante el color café y los núcleos de perfil redondeado en
coloración azul como se muestra en este ejemplo del caso número 4.Resultados 35
En el revestimiento sinovial se observa una fuerte señal citoplasmática, los núcleos
presentan una tinción azul que se distingue con facilidad8. Discusión
Esta serie de casos compone el estudio inicial del proyecto “Evaluación de la
inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana sinovial en pacientes
con osteoartritis de rodilla”, en la cual se busca establecer la existencia de un
compromiso inflamatorio en la membrana sinovial y su relación con la severidad y
progresión de la OA, se compone de 9 casos con distribución similar a estudios previos,
predominio de mujeres (88.9%), de edad variable (30 a 84 años en la serie) con
tendencia al sobrepeso (IMC medio 27.3) (4)(10). Pese a ser una pequeña muestra
presenta distribución similar justificando su análisis inicial para el proyecto, además no se
disponen de estudios in vivo, para el análisis bioquímico (IL-17A, IL-20).
Entendiendo la OA como una patología inflamatoria el puntaje de sinovitis permite la
cuantificación de un patrón cualitativo mediante estándares descritos y validados, donde
el puntaje para la sinovitis en la OA va de 0 a 6 puntos, al igual que lo encontrado en esta
serie, entendiendo el mayor puntaje según el grado de progresión y severidad (22),(27).
En esta serie no se halló ninguna relación entre el tiempo de progresión, la severidad o
terapéutica de la OA que se correlacionara con el puntaje de sinovitis, pese a contar con
estadios severos de la enfermedad que condicionaron el manejo quirúrgico, con una
media de duración en meses de 21, superior a los estudios descritos (22),(27). Esto
puede ser atribuible a la heterogeneidad de la enfermedad, al distinguirse como un
proceso inflamatorio de distribución irregular y confinada a áreas adyacentes a los sitios
de la condropatía, con hallazgos histológicos variables según la zona tomada para la
histología (19). Asi mismo la descripción de dos formas distintas de la enfermedad, una
primada por un componente pro-inflamatorio de características genéticas, y otra asociada
el estrés constante de la articulación (3). Otro punto a considerar es el pequeño tamaños
de la muestra no suficiente para demostrar alguna relación en cualquiera de los dos
escenarios.38 Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodilla
En un estudio previo del mismo proyecto sobre la IL-20 en OA se identificó la marcación
de IL-20 mediante inmunohistoquimica en la patología de las biopsias iniciales, así
mismo con un puntaje de 0 del puntaje de sinovitis, sin evidencia de mayor patrón
inflamatorio, hallazgo que puede suponer la evidencia de citoquinas como la IL-20 y
potencialmente IL-17A como biomarcadores iniciales de la OA previo al compromiso
inflamatorio de la enfermedad, considerando la pertinencia de continuar el proyecto para
la cualtificacion de la IL-20 como un marcador objetivo en la OA (28).
En conclusión se demuestra de un proceso inflamatorio importante asociado con
Osteoartritis documentado histopatológicamente.
Se evidencia presencia de IL 20 e IL-17ª en los pacientes con Osteoartrosis permitiendo
su cuantificación.Bibliografía
1. Egloff C, Hügle T, Valderrabano V. Biomechanics and pathomechanisms of osteoarthritis.
Swiss Med Wkly. 2012;142(July):1–14.
2. Liu-Bryan R, Terkeltaub R. Emerging regulators of the inflammatory process in
osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol [Internet]. 2015;11(1):35–44. Available from:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25266449%5Cnhttp://www.pubmedcentral.nih.gov/ar
ticlerender.fcgi?artid=PMC4374654
3. Honorati MC, Bovara M, Cattini L, Piacentini A, Facchini A. Contribution of interleukin 17
to human cartilage degradation and synovial inflammation in osteoarthritis. Osteoarthr
Cartil. 2002;10(10):799–807.
4. A. L, S. B, G.J. P, D. S, A. F, C. G. Presence of interleukin-17 in osteoarthritis: Does it
indicate a different osteoarthritis phenotype. Osteoarthr Cartil [Internet].
2015;23(2015):A321. Available from:
http://ovidsp.ovid.com/ovidweb.cgi?T=JS&PAGE=reference&D=emed13&NEWS=N&AN=
71907078
5. Benderdour M, Tardif G, Pelletier JP, Di Battista JA, Reboul P, Ranger P, et al. Interleukin
17 (IL-17) induces collagenase-3 production in human osteoarthritic chondrocytes via AP-
1 dependent activation: Differential activation of AP-1 members by IL-17 and IL-1?? J
Rheumatol. 2002;29(6):1262–72.
6. Chen B, Deng Y, Tan Y, Qin J, Chen L-B. Association between severity of knee
osteoarthritis and serum and synovial fluid interleukin 17 concentrations. J Int Med Res
[Internet]. 2014;42(1):138–44. Available from:
http://imr.sagepub.com/content/42/1/138.full
7. Deligne C, Casulli S, Pigenet A, Bougault C, Campillo-Gimenez L, Nourissat G, et al.
Differential expression of interleukin-17 and interleukin-22 in inflamed and non-inflamed
synovium from osteoarthritis patients. Osteoarthr Cartil. 2015;23(11):1843–52.
8. Liu Y, Peng H, Meng Z, Wei M. Correlation of IL-17 Level in Synovia and Severity of Knee40 Evaluación de la inflamación y la producción de IL-20 e IL-17ª en membrana
sinovial en pacientes con osteoartritis de rodilla
Osteoarthritis. Med Sci Monit [Internet]. 2015;21:1732–6. Available from:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26076201%5Cnhttp://www.pubmedcentral.nih.gov/ar
ticlerender.fcgi?artid=PMC4480114
9. Southam L, Heath O, Chapman K, Loughlin J. Association analysis of the interleukin 17
genes IL17A and IL17F as potential osteoarthritis susceptibility loci. Ann Rheum Dis
[Internet]. 2006;65(4):556–7. Available from:
http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=1798089&tool=pmcentrez&ren
dertype=abstract
10. Wang K, Xu J, Cai J, Zheng S, Yang X, Ding C. Serum levels of resistin and
interleukin-17 are associated with increased cartilage defects and bone marrow lesions in
patients with knee osteoarthritis. Mod Rheumatol [Internet]. 2016;7595(July):1–6.
Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27400438
11. Commins S, Steinke JW, Borish L. The extended IL-10 superfamily: IL-10, IL-19,
IL-20, IL-22, IL-24, IL-26, IL-28, and IL-29. J Allergy Clin Immunol. 2008;121(5):1108–11.
12. Wei CC, Hsu YH, Li HH, Wang YC, Hsieh MY, Chen WY, et al. IL-20: Biological
functions and clinical implications. J Biomed Sci. 2006;13(5):601–12.
13. Leng R-X, Pan H-F, Tao J-H, Ye D-Q. IL-19, IL-20 and IL-24: potential therapeutic
targets for autoimmune diseases. Expert Opin Ther Targets [Internet]. 2011;15(2):119–
26. Available from: http://www.scopus.com/inward/record.url?eid=2-s2.0-
78651375087&partnerID=tZOtx3y1
14. Hsu Y-H, Yang Y-Y, Huwang M-H, Weng Y-H, Jou I-M, Wu P-T, et al. Anti-IL-20
monoclonal antibody inhibited inflammation and protected against cartilage destruction in
murine models of osteoarthritis. PLoS One [Internet]. 2017;12(4):e0175802. Available
from:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28426699%0Ahttp://dx.plos.org/10.1371/journal.pon
e.0175802
15. Wojdasiewicz P, Poniatowski ŁA, Szukiewicz D. The role of inflammatory and anti-
inflammatory cytokines in the pathogenesis of osteoarthritis. Mediators Inflamm.
2014;2014.
16. Xu W. Interleukin-20. Int Immunopharmacol. 2004;4(5):627–33.
17. Hsu Y, Chang M. Review The Therapeutic Potential of Anti-Interleukin-20
Monoclonal Antibody. 2014;23(3):631–9.
18. Hsu YH, Li HH, Hsieh MY, Liu MF, Huang KY, Chin LS, et al. Function of
interleukin-20 as a proinflammatory molecule in rheumatoid and experimental arthritis.Bibliografía 41
Arthritis Rheum. 2006;54(9):2722–33.
19. Sellam J, Berenbaum F. The role of synovitis in pathophysiology and clinical
symptoms of osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol [Internet]. 2010;6(11):625–35. Available
from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20924410
20. Miller M-C, Manning HB, Jain A, Troeberg L, Dudhia J, Essex D, et al. Membrane
type 1 matrix metalloproteinase is a crucial promoter of synovial invasion in human
rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum [Internet]. 2009;60(3):686–97. Available from:
http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=2819053&tool=pmcentrez&ren
dertype=abstract
21. Gualco G, Prodanov A y cols. Papel de la biopsia sinovial en reumatología.
Análisis de 80 casos. Rev Med Uruguay 2000; 16: 14-17
22. Krenn V, et al. 15 years of the histopathological synovitis score, further development
and review: A diagnostic score for rheumatology and orthopaedics, Pathol. – Res. Pract
2017
23. Natsuko Kusunoki, Ryuta Yamazaki and Shinichi Kawai. Arthritis and Rheumatism.2002.
Induction of apoptosis in rheumatoid synovial fibroblasts by celecoxib, but not by other
selective cyclooxygenase 2 inhibitors. https://doi.org/10.1002/art.10692
24. Hiroshi Sato, et al. Arthritis Research & Therapy.2017. Resistin upregulates chemokine
production by fibroblast-like synoviocytes from patients with rheumatoid arthritis.
https://doi.org/10.1186/s13075-017-1472-0.
25. Takashi Emori.J Immunol. 2018. Integrin α9 Augments Self-Directed Hyperplastic and
Proinflammatory Properties of Fibroblast-like Synoviocytes of Rheumatoid Arthritis. DOI:
https://doi.org/10.4049/jimmunol.1700941.
26. Elke Kunisch, et al. 2009.The Journal of Rheumatology. Prostaglandin E2 Differentially
Modulates Proinflammatory/Prodestructive Effects of TNF-α on Synovial Fibroblasts via
Specific E Prostanoid Receptors/cAMP. DOI: 10.4049/jimmunol.0900801.
27. Krenn V., Morawietz L., Burmester G., Kinne R., Mueller-Ladner U., Muller B., Haupl T.
Synovitis score: discrimination between chonic low-grade and high-grade synovitis,
Histopathology, 49, págs. 348 (2006).
28. Silva D., Rojas A. Estudio de Interleuquina-20 (IL-20) en Osteoartritis. Tesis de grado.
Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias, Departamento de Farmacia,
Bogotá D.C., Colombia