Estudio retrospectivo y clasificación de los linfomas según su linaje (B o T) a través de inmmunomarcadores en veintinueve (29) casos del laboratorio de patología veterinaria en los años comprendidos entre 2010-2017
Autor: Cortés Ramirez, Natalia Alejandra
Asesor: Espinosa Almanza, Carmelo José (Thesis advisor)
Fecha: 2018-05
Programa: Bogotá - Medicina - Especialidad en Anestesiología y Reanimación
Facultad: Facultad de Medicina

Resumen: Se realizó un estudio retrospectivo con veintinueve (29) casos de caninos  diagnosticados previamente como Linfomas o como neoplasias malignas de células  redondas, recolectados durante 7 años (2010 al 2017) en el Laboratorio de  Patología Veterinaria de la Universidad Nacional - LNDV. Posteriormente se  procedió a la marcación Inmunohistoquímica con dos marcadores (CD3 Y CD79a)  para determinar el fenotipo y luego de la evaluación microscópicas y siguiendo los  criterios diagnósticos de Valli et al, 2011, las 29 neoplasias fueron reclasificadas,  encontrando en primero lugar que la mayoría de casos fueron diagnosticadas como  neoplasias de células T (72%, 21/29), además en 7 casos de 29 fue imposible  determinar su linaje ya que marcaron para ambos marcadores. Finalmente se  pudieron comparar los resultados emitidos con los presentes diagnósticos según la  clasificación de Valli et al, 2011 y se encontró que la citología celular más el patrón  arquitectónico en algunos casos es un buen indicador del tipo de Linfoma, sin  embargo el inmunofenotipo es fundamental para emitir el diagnóstico final.

ESTUDIO RETROSPETIVO Y CLASIFICACIÓN
DE LOS LINFOMAS SEGÚN SU LINAJE (B o
T) A TRAVES DE INMMUNOMARCADORES
EN VEINTINUEVE (29) CASOS DEL
LABORATORIO DE PATOLOGIA
VETERINARIA EN LOS AÑOS
COMPRENDIDOS ENTRE 2010-2017
Natalia Alejandra Cortés Ramirez
Universidad Nacional de Colombia
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
Bogotá, Colombia
2018ESTUDIO RETROSPETIVO Y CLASIFICACIÓN DE
LOS LINFOMAS SEGÚN SU LINAJE (B o T) A
TRAVES DE INMMUNOMARCADORES EN
VEINTINUEVE (29) CASOS DEL LABORATORIO DE
PATOLOGIA VETERINARIA EN LOS AÑOS
COMPRENDIDOS ENTRE 2010-2017
Natalia Alejandra Cortés Ramirez
Trabajo de investigación presentada(o) como requisito parcial para optar al título de:
Especialidad en Anatomopatología Veterinaria
Directora:
MV, Msc, Ph.D. Lucia Botero Espinosa
Línea de Investigación:
Salud Animal
Universidad Nacional de Colombia
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
Bogotá, Colombia
2018ESTUDIO RETROSPETIVO Y CLASIFICACIÓN DE LOS LINFOMAS SEGÚN SU
LINAJE (B o T) A TRAVES DE INMMUNOMARCADORES EN VEINTINUEVE
(29) CASOS DEL LABORATORIO DE PATOLOGIA VETERINARIA EN LOS
AÑOS COMPRENDIDOS ENTRE 2010-2017
Cortés N y Botero L
RESUMEN:
Se realizó un estudio retrospectivo con veintinueve (29) casos de caninos
diagnosticados previamente como Linfomas o como neoplasias malignas de células
redondas, recolectados durante 7 años (2010 al 2017) en el Laboratorio de
Patología Veterinaria de la Universidad Nacional - LNDV. Posteriormente se
procedió a la marcación Inmunohistoquímica con dos marcadores (CD3 Y CD79a)
para determinar el fenotipo y luego de la evaluación microscópicas y siguiendo los
criterios diagnósticos de Valli et al, 2011, las 29 neoplasias fueron reclasificadas,
encontrando en primero lugar que la mayoría de casos fueron diagnosticadas como
neoplasias de células T (72%, 21/29), además en 7 casos de 29 fue imposible
determinar su linaje ya que marcaron para ambos marcadores. Finalmente se
pudieron comparar los resultados emitidos con los presentes diagnósticos según la
clasificación de Valli et al, 2011 y se encontró que la citología celular más el patrón
arquitectónico en algunos casos es un buen indicador del tipo de Linfoma, sin
embargo el inmunofenotipo es fundamental para emitir el diagnóstico final.
Palabras claves: linfoma, caninos, inmunohistoquímica, clasificación.
INTRODUCCIÓN
Los linfomas son las neoplasias hematopoyéticas malignas más frecuentes en
perros y gatos (Valli et al. 2011; Aniolek et al. 2014). Su incidencia es
aproximadamente de 20 a 100 casos en 100,000 caninos (Zandvliet 2016). Estos
tumores tienen diferentes tipos de presentación clínica (multicéntrico, tímico o
mediastínico, gastrointestinal, cutáneo, extranodal, entre otros) ya que involucra
cualquier tejido que contenga al menos un agregado linfoide. Puede afectar a
cualquier edad pero la mayoría de casos se presentan entre los 5 y los 11 años
(Valli et al. 1981; Valli et al. 2011), afectando principalmente a Razas de grantamaño. Actualmente el sistema de clasificación empleado es una restructuración
de la clasificación de la organización mundial de la salud por sus siglas en ingles
WHO para neoplasias de origen hematopoyético y los modelos anteriormente
utilizados que combinan la inmunofenotipificación, características citológicas y
arquitectónicas (Valli et al. 2011; Frantz et al. 2013).
Histológicamente los linfomas son neoplasias de células redondas, se describen
como foliculares, marginales, de manto o difusos según su origen en el nódulo
linfoide (Valli et al, 2011, Frantz et al, 2012; Valli et al, 2013). En adición, se evalúa
el patrón de crecimiento, la morfología nuclear (patrón de cromatina, número y
localización de los nucléolos), tamaño nuclear respecto al tamaño de un eritrocito
promedio; definiéndose tres tamaños: en primer lugar células pequeñas (núcleo
entre 1 a 1.5 veces un eritrocito); células medianas (~1,5 veces el diámetro de un
eritrocito) y por último en células grandes (2 veces más grande que un eritrocito
promedio) (Valli et al, 2011). El índice mitótico es otro parámetro a evaluar y se
define como la cantidad de figuras mitóticas en 10 campos de 400x, los campos
elegidos deben ser los que expresen una mayor actividad replicativa. En humanos
se ha demostrado que el comportamiento biológico se relaciona con el número de
mitosis y puede ser señalado como: bajo grado (0 a 5 mitosis por campo), grado
intermedio (6 a 10 mitosis por campo) y alto grado (> 10 mitosis por campo) (Valli et
al. 2011; Frantz et al. 2013).
Para el diagnóstico y pronóstico del linfoma es necesario el uso de diversos métodos
diagnósticos como la citología, La histopatología, Inmunohistoquímica, pruebas de
clonalidad – PCR y citometría de flujo. La Inmunohistoquímica es una herramientabásica para determinar el linaje, por lo general los linfomas de células T (TCL) se
asocian con un pronóstico menos favorable con respecto al linfoma de células B
(BCL) (Teske et al, 1994, Marconato et al, 2011; Valli et al, 2013). Pero esta no es
la única herramienta se deben correlacionar a su vez con la morfología celular que
arroja datos importantes para su tipificación. No se conoce la razón por la cual el
comportamiento entre los linajes es diferente; pero se tiene la certeza que el
inmunofenotipo no es suficiente para predecir pronóstico (Ponce et al. 2004; Rao et
al. 2011; Frantz et al. 2013)
A través del uso de marcadores Inmunohistoquímicos el objetivo de este estudio es
establecer la clasificación completa de veinte y nueve (29) casos de Linfoma en
caninos según su linaje (B o T) recolectados durante 7 años en el Laboratorio de
Patología Veterinaria de la Universidad Nacional de Colombia - LNPV teniendo en
cuenta la clasificación de Valli et al, 2011 y la WHO además de conocer otros datos
que nos permitan conocer el comportamiento de esta entidad neoplásica en el
entorno nacional.
MATERIALES Y MÉTODOS
Selección de casos
Se revisó la casuística recibida en el LPV entre los años 2010 y 2017, para
seleccionar todos los casos con diagnóstico final de Linfoma o neoplasias de células
redondas que tenían entre sus diagnósticos diferenciales más probables linfoma.
Entre los criterios de selección para este estudio se tomaron casos exclusivamente
de caninos previamente diagnosticados con linfoma por histopatología, además secolectaron datos epidemiológicos como: raza, edad, sexo y signos clínicos. Los
casos recolectados provenían de biopsias incisionales de ganglios linfáticos y
tejidos provenientes de necropsias. Estas muestras fueron fijadas en su momento
en formalina bufferada al 10 % y posteriormente se procesaron por la técnica de
rutina para hematoxilina y eosina (H&E). Los bloques de parafina de estas muestras
se almacenaron y conservaron en el LPV. El número total de casos seleccionados
fue de veintinueve.
Inmunofenotipificación
Todos los casos fueron procesados para marcación inmunohistoquímica para
antígeno de células B (CD79a) y células T (CD3). Las muestras se procesaron en
el Laboratorio Inmunotech. Se usaron los anticuerpos primarios anti-CD79a
(CLONE11D10) y anti CD3 (CLONE: LN10) ambos marca Leica® y posteriormente
se utilizó el kit de detección- Novolink ™ de la marca Leica®. Terminada la
inmunomarcación se hizo coloración de contraste con hematoxilina y eosina (H&E).
Para todos los casos se hicieron las dos pruebas inmunohistoquímicas.
Clasificación histológica
Los linfomas se clasificaron según lo reportado por Valli et al, 2011, tomando en
cuenta tres criterios. 1) Inmunofenotipo, 2) arquitectura 3) morfología celular. El
primer paso fue examinar las láminas para clasificar los tumores por
inmunofenotipo, a continuación se clasificaron teniendo en cuenta la arquitectura y
la morfología celular.Comparación con resultados previos
Después de realizar la nueva categorización se compararon estos resultados con
los emitidos por el laboratorio anteriormente.
RESULTADOS
Dentro de las consideraciones generales incluidas se pudo determinar que las razas
frecuentes para la presentación de linfoma fueron la mestiza con un 24% (7/ 29) y
Labradore Retriver con un 10,3%, (3/ 29) (Fig. 1), seguidas de la raza Bulldog, Bóxer
y French Poodle con 6,9% de los casos (2/29). Las razas restantes tuvieron un
3,4% de presentación.
En cuanto a la edad el rango comprendido entre los 6 a 15 años fue el más afectado
con 16 caninos (55%), seguido del rango 1-5 años con 31% / (9/29) y finalmente
el rango con menor presentación de tumores fue el de los caninos mayores de 10
años con un 14% (4/29) (Fig. 2). En este estudio el porcentaje de hembras (59%,
17/29) remitidas fue mayor con respecto a la cantidad de machos (11/ 29), uno de
los casos no tuvo información. El 83% de las muestras utilizadas para este estudio
provenían de biopsias (24/ 29), y el 17% restante se tomó de casos de necropsia.%
0,0 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0 30,0
Fox terrier NR Afgano Setter irlandés Pitbull
Basset Hound Chow- Chow Golden retriver Labrador bulldog
Schnauzer gigante Mestizo Pitbull Schnauzer French Poodle
Cocker spaniel Bóxer Pastor alemán
Figura 1. Razas que presentaron Linfoma.
10 a 15 años 14%
5 a 10 años 55%
1 a 5 años 31%
0 10 20 30 40 50 60
Figura 2. Rango de edades de presentación de Linfoma.
Sitios de presentación
En la figura 3 se presentan los sitios anatómicos más frecuentes de ubicación de
las neoplasias. Como puede observarse el sitio más frecuente fue el ganglio linfático
con un 31% (9 de 29) de los tumores, seguido del bazo y la presentación
multicéntrico con 6 de 29 casos (20,7%) respectivamente, otro de las sitios más
usuales de presentación fue la piel con 13,8% (4/ 29 casos).Bazo Ganglio linfático Glándula mamaria Hígado multicéntrico
Piel Pulmón Tejido adiposo Indeterminado
20,7 31,0 20,7 13,8
%
0,0 20,0 40,0 60,0 80,0 100,0
Figura 3. Localización anatómica de los tumores en 29 casos.
Clasificación
Utilizando el sistema reportado por Valli et al, 2011, se encontró que la mayoría de
linfomas eran de células T 72 % (21/29) y únicamente una masa (3%) fue clasificada
como linfoma de célula B. El 24% (7 de 29) restante no pudo ser clasificado debido
a que mostraban una marcación similar para CD3 Y CD79a por lo tanto se
denominaron linfomas heterogéneos. En la tabla 1 se presenta la clasificación
morfológica propuesta.
Tabla 1. Tipos de Linfomas encontrados en este estudio – según la clasificación de
Valli et al, 2011 y WHO.
TIPO DE LINFOMA %
Linfoma de células T periféricas - PTCL 34
Linfoma nodal de células T 17
Leucemia/linfoma linfoblástico de células T 14
Linfoma difuso 14
Linfoma de zona marginal -MZL 10
Linfoma anaplásico de células grandes T - ALCL 3
Linfoma de zona T - TZL 3
Micosis Fungoide - MF 3Como se muestra en la tabla 1, el tipo de linfoma más frecuente fue el de células T
periférico (PTCL) con un 34% de los casos (10/29). En este tipo se incluyen los
tumores que no pueden ser diferenciados en base a su topografía o morfología
celular. En general se caracterizan por una proliferación neoplásica difusa de células
T, con pérdida de la arquitectura de los folículos linfoideos, con heterogeneidad
morfológica extensiva. Las células tienen citoplasma abundante y pálido, con varios
grados de pleomorfismo nuclear, un solo nucléolo distintivo con cromatina fina y
condensada a la periferia. El índice mitótico es muy variable. Dos de los casos
tuvieron presentación multicéntrico presentándose en GL, bazo, hígado y pulmón
(Fig. 4 A-D). En algunos casos estaban acompañados de una evidente
angiogénesis y focos de necrosis. En segundo lugar de frecuencia se ubicó el
linfoma nodal de células T con 5 de 29 casos (21%) el cual arquitectonicamente
muestra un patrón de expansión paracortical a manera de nódulos con compromiso
de senos subcapsulares y el tejido adyacente. En cuanto a la citología las células
exhiben variabilidad de su tamaño, como células intermedias y un núcleo oval o
clivado, la tasa mitótica es variable con nucléolos variables en número y tamaño
(Fig. 4 E-H).Figura 4. Figura A – D: Linfoma periférico de células T – PTCL. (A) Fuerte marcación inmunohistoquímica positiva para el marcador CD3 en
Bazo. (B) Bazo: morfológicamente las células son pequeñas, redondeadas de citoplasma escaso anfofilico con núcleos redondeados e
hipercromaticos, algunos con la cromatina condensada a la periferia y un nucléolo central evidente (flechas). (C) Hígado: Proliferación
neoplásica extensiva alrededor de la triada portal (flechas). (D) Marcación Inmunohistoquímica positiva para el marcador CD3 alrededor de
la triada portal. Figura E – H: Linfoma nodal de células T. (E) Ganglio linfático: expansión neoplásica a manera de nódulos desde la región
paracortical (flecha). (F) Marcación Inmunohistoquímica positiva para el marcador CD3 en Ganglio linfático en las zonas señalas en la figura
4E (flecha). (G) Marcación intracitoplasmatica positiva marcador CD3 (flecha). (H) Ganglio linfático: células de tamaño intermedio (1.5
eritrocitos en diámetro con respecto al diámetro nuclear), de morfología redondeadas con citoplasma escaso basófilico tenue, núcleos
hipercromaticos y cromatina gruesa sin nucléolos evidentes.Figura 5. Figura A –D: Leucemia/Linfoma Linfoblastico de células T - LBL. (A) Ganglio linfático: adelgazamiento irregular de la capsula con
invasión difusa de zona cortical y paracortical. (B) Ganglio linfático: células de tamaño intermedio (1.5 eritrocitos de diámetro con respecto al
tamaño nuclear), núcleos redondeados u ovalados y cromatina gruesa hipercromatica (flechas). (C) Marcación positiva de algunas células
linfoideas neoplásicas para el marcador CD3 (flecha). (D) las células linfoideas neoplásicas no exhiben ninguna marcación para el
inmunomarcador CD79a. Figura E – H. (E) Ganglio linfático: crecimiento neoplásico difuso sin un patrón determinado que comprime el seno
subcapsular. (F) Ganglio linfático: invasión neoplásica en el tejido adiposo adyacente (flecha). (G) Ganglio linfático: citológicamente el tamaño
celular variable; morfología redondeada y ovalada, núcleos redondeados con cromatina fina granular condensada a la periferia, nucléolo
central evidente y en algunas se observan ligeras identaciones nucleares.Figura 6. Figura A – D: Linfoma de Zona Marginal – MZL. (A) Bazo: proliferación neoplásica a manera de nódulos de la zona marginal que
tienden a coalescer y ejerce presión sobre las estructuras trabeculares. (B) Bazo: el crecimiento de la zona marginal (flecha) colabora al
desvanecimiento de los centros germinales. (C) células de tamaño pequeño e intermedio con núcleos redondeados hipercromaticos y
citoplasma eosinofílico tenue escaso (flechas). (D) Marcación positiva de la mayoría de células Neoplásicas para el marcador CD79a
(flechas). Figuras E-H: Linfoma anaplásico de células grandes T – ALCL. (E) Ganglio linfático: expansión neoplásica focalmente extensa
que involucra corteza y medula a manera de nódulos de diferentes tamaños (flecha). (F) Ganglio linfático: las zonas más oscuras (flecha)
señalan la atrofia de los centros germinales. (G) citológicamente, las células son de gran tamaño, limites citoplasmáticos ligeramente
distinguibles, citoplasma eosinofílico abundante, núcleos redondeados, reniformes y piriformes, cromatina fina granular condensada a la
periferia, múltiples nucléolos de diferentes tamaños (flecha) y abundantes figuras mitóticas aberrantes (asteriscos). (H) Inmunomarcación
positiva generalizada para el marcador CD3.Figura 7: Figuras A- D: Micosis fungoide (A) Piel: crecimiento neoplásico de células redondas compuesta por una población
monomórfica densamente celular con un patrón de crecimiento infiltrativo en dermis superficial y en epidermis formando cavidades
interepiteliales conteniendo células neoplásicas – microabscesos de Pautrier. (B) Invasión folicular y destrucción de la estructura por el
infiltrado neoplásico (flecha). (C) células pequeñas, núcleos redondeados y pequeños algunos arriñonados, algunos hendidos, cromatina
gruesa Hipercromíca. (D) Marcación positiva generalizada de células neoplásicas en epidermis y dermis para el marcador CD3. Figura E-
H: Linfoma de zona T. (E) Ganglio linfático: proliferación neoplásica que se origina de la zona paracortical a manera de nódulos y se
extiende hasta la zona medular, obliterando el espacio de los centro germinales (flecha). (F) células pequeñas e intermedias en tamaño,
con núcleos redondeados de cromatina gruesa e hipercromáticos sin nucléolos evidentes (flechas). (G) fuerte marcación positiva de las
células neoplásicas al marcador CD3 a excepción de las células que corresponde n al área B. (H) leve marcación para el marcador
CD79a de las células del centro germinal.En el tercer lugar de frecuencia se describió el Linfoma Leucemia/Linfoma
linfoblastico de celulas T - T-LBL (14% (4/29)) se observó como un tumor de GL,
con patrón de proliferación difusa, con compromiso de la cápsula e invasión y
pérdida de senos subcapsulares y medulares. Hacia el centro del ganglio se vieron
áreas de necrosis. Las células se caracterizaron por ser redondas u ovaladas, de
tamaño intermedio, núcleos redondeados, hipercromáticos, con cromatina gruesa y
alta tasa mitótica y fue positivo al marcador CD3 (linaje T) (Fig. 5 A-D).
El siguiente tipo descrito fue el linfoma difuso (14 % (4/ 29)), aquí se incluyen
aquellos casos que no pudieron ser correctamente clasificados por que marcaban
positivamente para los dos marcadores, adicionalmente no se podía determinar con
exactitud su lugar de origen en el ganglio linfático o por su localización en otros
órganos. Sus características son variables pero principalmente exhiben un tamaño
celular pequeño, núcleos redondeados hipercromáticos y nucléolos indistinguibles
(Fig. 5 E-H).
El linfoma de zona marginal (MZL) con 10% (3/29) fue otro descrito, se caracterizó
por formar agregados de células neoplásicas que se originan zona marginal y su
crecimiento atrofia y desaparece los centros germinales, además ejerce un efecto
compresivo sobre la cápsula produciendo su adelgazamiento. Citológicamente las
células son de tamaño intermedio, con citoplasma eosinofílico, núcleos redondos u
ovalados, de un tamaño intermedio con un nucléolo central prominente (Fig. 6 A-D).
Los tipos menos encontrados con un 3% de presentación (1/29) fueron Linfoma
anaplásico de células grandes T (ALCL), la micosis fungoide (MF) y el linfoma dezona T (TZL). El primero Linfoma anaplásico de células grandes T- ALCL se
caracterizó por tener un crecimiento difuso y extensivo con perdida severa de la
arquitectura, las células presentaban un gran tamaño (> 2 eritrocitos de diámetro
nuclear), abundante citoplasma de tonalidad eosinofílico y basófilico tenue, limites
ligeramente distinguibles, núcleos de morfología variable entre los cuales se
destacan: reniformes, vesiculados, redondeados e irregulares, cromatina fina
granular condensada a la periferia y múltiples nucléolos de diferentes tamaños (Fig
6. E-H). El segundo pertenece a los linfomas cutáneos epiteliotrópicos,
histológicamente se evidenció un crecimiento neoplásico con tropismo marcado por
la epidermis y las estructuras anexas. Estaba compuesto por una población
monomórfica de células intermedias, núcleos ovalados con cromatina dispersada y
nucléolo indistinguible. Un hallazgo clave fue la presencia de cavidades
interepiteliales con abundante cantidad de linfocitos neoplásicos, los llamados
microabscesos de Pautrier. El tumor observado presentaba úlceras extensas (Fig.
7 A-D). Por último el TZL se reconoció como una neoplasia cuyas células se
expandían desde la paracorteza e involucraban los cordones medulares sin perder
la arquitectura nodular, no se evidenció compromiso del tejido perinodal ni tampoco
del seno subcapsular. Las células eran pequeñas a intermedias en tamaño, con
núcleos redondeados hipercromáticos sin nucléolos evidentes (Fig. 7 A-D). Como
dato complementario en la figura 12 es posible observar que la mayoría de los casos
evaluados muestran un alto índice mitótico (>10 mitosis en 10 campos de alto
poder).I.M
120
100
F
P
H
80
0
1
/ 60
S
IS
O 40
T
IM
20
0
N°DE CASO
Figura 8. Relación del índice mitótico y los casos estudiados.
Comparación con resultados previos
Todos los casos seleccionados en este período tenían un diagnóstico morfológico
de linfoma y algunos intentaban una clasificación morfológica, tomando algunas
características arquitectónicas y citológicas. En la tabla 2 se presenta una
comparación entre el diagnóstico definido en este estudio (diagnóstico actual) y el
emitido por el Laboratorio previamente (diagnóstico previo). Al hacer esta
comparación se evidenció que únicamente un diagnóstico actual concuerda
perfectemente con el definido previamente, se trata del linfoma linfoblástico de
células T o como los describieron linfoma linfoblastico de precursores T, este
diagnóstico efectuado únicamente con descripción morfológica sin realizar prueba
inmunohistoquímica para fenotipo. Trece de veintinueve casos presentaron
moderada correlación entre los resultados actuales y previo, principalmente en el
patrón arquitectónico. Algunos se diagnósticaron como linfomas difusos pero ya
que no se les realizó el inmunofenotipo en el examen previo, no es posible saber sison B, T o heterogéneos. Cinco de los 29 casos no correspondieron con el
diagnóstico final y tres de los casos fueron clasificados de manera general como
linfomas sin analizar las características respectivas siendo esta una clasificación y
a otros tres se les dio un diagnóstico general como tumores malignos de células
redonda. Finalmente dos de los casos se diagnósticaron como linfoma estadio V,
clasificación que se utiliza para la presentación clínca.
DISCUSIÓN
En este estudio se hizo una revisión retrospectiva y clasificación de los linfomas
recibidos en el Laboratorio de Patologìa entre los años 2010-2017, utilizando los
marcadores fenotípicos CD3 (marcador de células T) y CD79a (marcador de células
B) según lo reportado por Valli y cols, 2011 (Valli et al 2007). En primer lugar se
estableció la presentación de linfomas con relación a la raza y se verificó que las
razas más frecuentes eran la mestiza y la Labrador. La literatrua ha reportado que
la mayor incidencia de esta neoplasia es en razas grandes, aunque es imposible
determinar la talla de los animales reportados como mestizos. Sin embargo cuando
se analiza la frecuencia de presentación de enfermedad según la raza, se debe
tener en cuenta que este factor varía mucho y depende en gran parte del gusto de
las personas por las razas, factor que puede cambiar mucho de un año a otro (Teske
et al. 1994; Dobson et al, 2022, Edwards et al. 2003; Villamil et al. 2009).TABLA 2. Comparación de resultados obtenidos en este estudio con los reportados
anteriormente por el laboratorio.
DIAGNOSTICO ACTUAL DIAGNOSTICO PREVIO CONCORDANCIA
Leucemia/Linfoma linfoblastico de células T Linfoma linfoblastico de precursores T Completa concordancia
Linfoma de la zona marginal (MZL) Linfoma folicular Moderada concordancia
Linfoma difuso Linfoma difuso de célula pequeña Moderada concordancia
Leucemia/Linfoma linfoblastico de células T Leucemia/linfoma linfoblastico Moderada concordancia
Linfoma difuso Leucemia/linfoma multicéntrico Moderada concordancia
Linfoma nodal de células T Linfoma difuso de células grandes Moderada concordancia
Linfoma difuso Linfoma de células B grandes difuso (Valli et al, 211) Moderada concordancia
Linfoma de células T periféricas (PTCL) Linfoma difuso de células pequeñas Moderada concordancia
Linfoma difuso Linfoma difuso de células intermedia Moderada concordancia
Linfoma nodal de células T Linfoma difuso de alta agresividad Moderada concordancia
Linfoma nodal de células T Linfoma difuso de células grandes Moderada concordancia
Linfoma de células T periféricas (PTCL) Linfoma cutáneo Moderada concordancia
Linfoma de células T periféricas (PTCL) Linfoma difuso Moderada concordancia
Linfoma nodal de células T Linfoma difuso nodular de células intermedias Moderada concordancia
Linfoma de la zona marginal (MZL) Linfoma difuso de células pequeñas No concordancia
Linfoma de la zona marginal (MZL) Linfoma difuso de células mixta No concordancia
Linfoma de células T periféricas (PTCL) Linfoma de células pequeñas leucémico -WHO No concordancia
Linfoma nodal de células T Linfoma folicular de células grandes No concordancia
Linfoma de células T periféricas (PTCL) Linfoma folicular y Hemangiosarcoma No concordancia
Micosis fungoides (MF) Linfoma de células T cutáneo epitelio trópico No concordancia
(Hiomitsu et al, 2012) o linfoma de células T
periféricas (Valli et al, 2011)
Linfoma anaplasico de células grandes T Linfoma linfoblastico de células grandes No concordancia
(ALCL)
Linfoma de células T periféricas (PTCL) Tumor maligno de células redondas Clasificación general (células
redondas)
Linfoma de células T periféricas (PTCL) Neoplasia maligna de células redondas Clasificación general (células
redondas)
Linfoma de células T periféricas (PTCL) Neoplasia de células redondas Clasificación general (células
redondas)
Leucemia/Linfoma linfoblastico de células T Linfoma estadio V Clasificación clínica
Leucemia/Linfoma linfoblastico de células T Linfoma estadio V Clasificación clínica
Linfoma de zona T (TZL) Clasificación general (linfoma)
Linfoma de células T periféricas (PTCL) Linfoma y Sarcoma de células fusiformes Clasificación general (linfoma)
Linfoma de células T periféricas (PTCL) Linfoma Clasificación general (linfoma)
La edad de presentación de linfomas en este trabajo fue variada no obstante los
tumores se presentaron más en animales mayores de seis años, desde la década
pasada se conoce que la incidencia de presentación del linfoma, lo que coincide con
la mayoría de reportes (Geyer et al. 2010; Burkhard and Bienzle 2015; Zandvliet2016; Head, KW; Else, RW; Dubielzig 2017). La predisposición por sexo no es una
característica fundamental a evaluar para esta neoplasia ya que su presentación es
aleatoria. En algunas razas como Golden Retriver se ha encontrado relación entre
la ovariohisterectomía en perras menores de un año y el riesgo de padecer Linfoma
(Torres de la Riva et al. 2013; Zink et al. 2014).
La prevalencia de Linfoma de células T (72%) fue mayor con respecto a lo reportado
en otros estudios donde el Linfoma de células B es el más prevalente (Fournel-
Fleury et al, 2002, Ponce et al. 2010; Vezzali et al. 2010), en este caso solo había
un Linfoma de células B. La particularidad de este estudio es que el 31% de los
casos marcaron para ambos inmunomarcadores, aquellos denominados como
Linfomas heterogéneos. La inmunomarcación exclusiva con solo dos anticuerpos
(CD3, CD79a y CD20) es cuestionable ya que aproximadamente el 20% de los
casos de Linfoma no son positivos a ninguno de estos marcadores, (Appelbaum et
al. 1984; Guija de Arespacochaga et al. 2007; Fedchenko and Reifenrath
2014))incluso no existe un marcador efectivo tanto para células B o T. Por tal motivo
es necesario la implementación de otros inmunomarcadores y el uso de otras
técnicas como; PARR y citometría de flujo (Thalheim et al. 2013; Aniolek et al. 2014;
Johnston et al. 2014) que hasta el momento no están disponibles en el país, para
lograr un diagnóstico más preciso.
Los sitios anatómicos que se encontraron en este estudio concuerdan con los
referidos por la literatura por ejemplo uno de las localizaciones más remitidas fue la
presentación multicéntrica, este tipo es la más común en Medicina Veterinaria
(Ponce et al. 2010; Vezzali et al. 2010). Del Linfoma cutáneo se diagnosticaroncuatro casos; uno correspondiente a Micosis fungoide (MF) (Fig. 7) y tres como
LCTP, es importante mencionar que el Linfoma cutáneo tiene dos formas de
presentación: epiteliotrópico (MF, síndrome de Szary y Reticulosis pagetoide) o no
epiteliotrópico según la clasificación de WHO. La MF es casi exclusiva de perros
mayores de 11 años (Brachelente et al. 2016) y la raza en la que más se diagnostica
es en los Bóxer (Magnol, 1996).
Uno de los sitios comunes de metástasis es el pulmón pero también esta descrito
como un sitio primario de localización de Linfomas (Yohn, 1994), en este estudio se
describe un linfoma en el pulmón, no obstante no se puede determinar si es primario
o producto de una metástasis Un hallazgo que se destaca en este estudio fue la
presentación de dos neoplasias en el mismo órgano, el primero corresponde a un
Bazo donde simultáneamente había un Linfoma de células T periféricas y un
Hemangiosarcoma y el segundo caso es una piel con diagnóstico de PTCL y un
Sarcoma de células fusiformes.
La clasificación final permitió concluir que los dos tipos de Linfomas más referidos
en este estudio fueron PCTL (34%) y el linfoma nodal de células T (17%). Estos
subtipos también hacen parte de los más reportados por Valli, et al 2011 revelando
cierto grado de correlación entre ambos estudios. Sin embargo hay un grupo que
corresponde a Linfomas difusos (14%) los cuales no pudieron ser clasificados
apropiadamente por dos condiciones; primero su inmunomarcación fue positiva
para ambos marcadores impidiendo su inmunofeotipificación y además
arquitectonicamente era imposible saber la zona de origen en el nódulo linfático u
en otros órganos.Al hacer la comparación con los resultados previos se ve en primera instancia que
existe cierto grado de correspondencia entre el patrón arquitectónico inicialmente
descrito y el diagnóstico final, no obstante hay algunos casos en donde hay ligeras
discrepancias en el resultado emitido, estas diferencias se centran más que todo en
la descripción de la citología celular ya que muchas veces no corresponde al patrón
descrito, cabe mencionar que la mayoría de los anteriores diagnosticos no tenían
un método claro de clasificación simplemente se hacía énfasis en mencionar ciertas
características que podrían indicar al clínico tratante algún indicio pronóstico. Uno
de los casos que más llama la atención es el referenciado 152194 luego de hacer
la evaluación correspondiente en un primer momento el diagnóstico final se emitió
como Linfoma de células T cutáneo epiteliotrópico (Shiomitsu et al, 2012) o linfoma
de células T periféricas - PTCL (Valli et al, 2011), al hacer la evaluación del caso se
observó la formación de microabscesos de Pautrier y la invasión por parte de células
neoplásicas a los estratos epidermales tanto por tinción de H&E e
inmunohistoquimica, estos hallazgos son claves para concluir que se trata de un
caso típico de Micosis fungoide (Fig. 7) (Moore et al, 2009 , Gonzalez-domingez et
al. 2014, Brachelente et al. 2016).
Este estudio refleja que la buena aplicación de los criterios diagnósticos tanto
morfológicos como citológicos combinados con la aplicación de la técnica
Inmunohistoquímica permiten una correcta calificación de los Linfomas según los
criterios de la WHO y Valli et al, 2011, a pesar de esto siguen existiendo limitaciones
como las ya mencionadas para algunos casos que dejan al descubierto ciertas
inconsistencias de la actual clasificación, además comparada con los resultadosemitidos previamente muchas veces la morfología celular da serios indicios de que
neoplasia podría ser. Es importante recalcar la necesidad de combinar el
diagnóstico histopatológico con la citología ya que en muchos casos se pierde el
detalle celular siendo la citología esencial para evaluarlo (Zink et al. 2014; Burkhard
and Bienzle 2015; Caniatti et al. 2015; Zandvliet 2016). Actualmente el método de
diagnóstico de Linfomas combina el uso de citología, histopatología, inmunofenotipo
por citometría de flujo o Inmunohistoquímica y PARR, está claro que todas estas
herramientas son imposibles de utilizar en nuestro medio ya que no contamos con
la disponibilidad ni tampoco con los recursos económicos, pero el uso de todas
estas herramientas permitirá en un futuro contar con una mejor precisión diagnóstica
y pronóstica.
REFERENCIAS:
Aniolek O, Gajewski Z, Gizinski S. 2014. Application of flow cytometry in diagnosing
lymphomas in dogs and cats. Cent. Eur. J. Immunol. 39:327–330.
doi:10.5114/ceji.2014.45943.
Appelbaum FR, Sale GE, Storb R, Charrier K, Deeg HJ, Graham T, Wulff JC. 1984.
Phenotyping of canine lymphoma with monoclonal antibodies directed at cell surface
antigens: Classification, morphology, clinical presentation and response to
chemotherapy. Hematol. Oncol. 2:151–168. doi:10.1002/hon.2900020205.
Brachelente C, Affolter VK, Fondati A, Porcellato I, Sforna M, Lepri E, Mechelli L,
Bongiovanni L. 2016. CD3 and CD20 Coexpression in a Case of Canine Cutaneous
Epitheliotropic T-Cell Lymphoma (Mycosis Fungoides). Vet. Pathol. 53:563–566.
doi:10.1177/0300985815604724.
Burkhard MJ, Bienzle D. 2015. Making Sense of Lymphoma Diagnostics in Small
Animal Patients. Clin. Lab. Med. 35:591–607. doi:10.1016/j.cll.2015.05.008.
Caniatti M, Roccabianca P, Scanziani E, Paltrinieri S, Moore PF. 2015. Canine
Lymphoma : Immunocytochemical Analysis of Fine-needle Aspiration Biopsy.
12:204–212.
Edwards DS, Henley WE, Harding EF, Dobson JM, Wood JLN. 2003. Breed
incidence of lymphoma in a UK population of insured dogs. Vet. Comp. Oncol.1:200–206. doi:10.1111/j.1476-5810.2003.00025.x.
Fedchenko N, Reifenrath J. 2014. Different approaches for interpretation and
reporting of immunohistochemistry analysis results in the bone tissue – a review.
Diagn. Pathol. 9:221. doi:10.1186/s13000-014-0221-9.
Frantz AM, Sarver AL, Ito D, Phang TL, Karimpour-Fard A, Scott MC, Valli VEO,
Lindblad-Toh K, Burgess KE, Husbands BD, et al. 2013. Molecular Profiling Reveals
Prognostically Significant Subtypes of Canine Lymphoma. Vet. Pathol. 50:693–703.
doi:10.1177/0300985812465325.
Geyer NE, Reichle JK, Valdés-Martínez A, Williams J, Goggin JM, Leach L, Hanson
J, Hill S, Axam T. 2010. Radiographic appearance of confirmed pulmonary
lymphoma in cats and dogs. Vet. Radiol. Ultrasound 51:386–390.
doi:10.1111/j.1740-8261.2010.01683.x.
Guija de Arespacochaga A, Schwendenwein I, Weissenböck H. 2007. Retrospective
Study of 82 Cases of Canine Lymphoma in Austria based on the Working
Formulation and Immunophenotyping. J. Comp. Pathol. 136:186–192.
doi:10.1016/j.jcpa.2007.01.009.
Head, KW; Else, RW; Dubielzig R. 2017. Tumors in Domestic Animals.
Johnston SA, Thamm DH, Legutki JB. 2014. The immunosignature of canine
lymphoma: characterization and diagnostic application. BMC Cancer 14:657.
doi:10.1186/1471-2407-14-657.
Ponce F, Magnol JP, Ledieu D, Marchal T, Turinelli V, Chalvet-Monfray K, Fournel-
Fleury C. 2004. Prognostic significance of morphological subtypes in canine
malignant lymphomas during chemotherapy. Vet. J. 167:158–166.
doi:10.1016/j.tvjl.2003.10.009.
Ponce F, Marchal T, Magnol JP, Turinelli V, Ledieu D, Bonnefont C, Pastor M,
Delignette ML, Fournel-Fleury C. 2010. A Morphological Study of 608 Cases of
Canine Malignant Lymphoma in France With a Focus on Comparative Similarities
Between Canine and Human Lymphoma Morphology. Vet. Pathol. 47:414–433.
doi:10.1177/0300985810363902.
Rao S, Lana S, Eickhoff J, Marcus E, Avery PR, Morley PS, Avery AC. 2011. C l a s
s II M a j o r H i s t o c o m p a t i b i l i t y Co m p l e x E x p r e s s i o n a n d C e l l
S ize Independently Pr edi ct Surviv al in C anine B-C ell Lymphoma. :1097–1105.
Teske E, de Vos JP, Egberink HF, Vos JH. 1994. Clustering in canine malignant
lymphoma. Vet. Q. 16:134–136. doi:10.1080/01652176.1994.9694435.
Thalheim L, Williams LE, Borst LB, Fogle JE, Suter SE. 2013. Lymphoma
immunophenotype of dogs determined by immunohistochemistry, flow cytometry,
and polymerase chain reaction for antigen receptor rearrangements. J. Vet. Intern.
Med. 27:1509–1516. doi:10.1111/jvim.12185.Torres de la Riva G, Hart BL, Farver TB, Oberbauer AM, Messam LLM V, Willits N,
Hart LA. 2013. Neutering Dogs: Effects on Joint Disorders and Cancers in Golden
Retrievers. PLoS One 8. doi:10.1371/journal.pone.0055937.
Valli VE. Mature (peripheral) nodal T-cell (T-zone) lymphoma. In: Veterinary
Comparative Hematopathology, pp. 294–302. Blackwell, Ames, IA, 2007.
Valli VE. Peripheral T-cell lymphoma, NOS. In: Veterinary Comparative
Hematopathology, pp. 360–365. Blackwell, Ames, IA, 2007.
Valli VE. Anaplastic large cel lymphoma. In: Veterinary Comparative
Hematopathology, pp. 339–343. Blackwell, Ames, IA, 2007.
Valli VE. Mature nodal and extranodal T- cell Lymphoma. In: Veterinary Comparative
Hematopathology, pp. 312–326. Blackwell, Ames, IA, 2007.
Valli VE. Precursor T- cell Neoplasms. In: Veterinary Comparative
Hematopathology, pp. 274–285. Blackwell, Ames, IA, 2007.
Valli VE, McSherry BJ, Dunham BM, Jacobs RM, Lumsden JH. 1981. Histocytology
of lymphoid tumors in the dog, cat and cow. Vet. Pathol. 18:494–512.
doi:10.1177/030098588101800408.
Valli VE. Mycosis Fungoides and Sézary Sindrome. In: Veterinary Comparative
Hematopathology, pp. 331–337. Blackwell, Ames, IA, 2007.
Valli VE. Peripheral T-cell lymphoma, NOS. In: Veterinary Comparative
Hematopathology, pp. 360–365. Blackwell, Ames, IA, 2007.
Valli VE. Marginal Zone and MALT Lymphoma. In: Veterinary Comparative
Hematopathology, pp. 168–188. Blackwell, Ames, IA, 2007.
Valli VE, Myint MS, Barthel A, Bienzle D, Caswell J, Colbatzky F, Durham A, Ehrhart
EJ, Johnson Y, Jones C, et al. 2011. Classification of Canine Malignant Lymphomas
According to the World Health Organization Criteria. Vet. Pathol. 48:198–211.
doi:10.1177/0300985810379428.
Vezzali E, Parodi AL, Marcato PS, Bettini G. 2010. Histopathologic classification of
171 cases of canine and feline non-Hodgkin lymphoma according to the WHO. Vet.
Comp. Oncol. 8:38–49. doi:10.1111/j.1476-5829.2009.00201.x.
Villamil JA, Henry CJ, Hahn AW, Bryan JN, Tyler JW, Caldwell CW. 2009. Hormonal
and Sex Impact on the Epidemiology of Canine Lymphoma. J. Cancer Epidemiol.
2009:1–7. doi:10.1155/2009/591753.
Zandvliet M. 2016. Canine lymphoma: a review. Vet. Q. 36:76–104.
doi:10.1080/01652176.2016.1152633.
Zink MC, Farhoody P, Elser SE, Ruffini LD, Gibbons TA, Rieger RH. 2014.
Evaluation of the risk and age of onset of cancer and behavioral disorders ingonadectomized Vizslas. J. Am. Vet. Med. Assoc. 244:309–319.
doi:10.2460/javma.244.3.309.