Optimization of Blood Levels of 25(OH)-Vitamin D in African Americans
Phase: EARLY_PHASE1
Conditions: Vitamin D Deficiency
Sponsor: Louisiana State University Health Sciences Center Shreveport

HRP-503 (v.6.1.2016) 
 
PROTOCOL TITLE: Optimization of 25(OH) vitamin D levels in African Americans  
 
 
Page 1 of 9 
 
PROTOCOL TITLE:  
 
Optimization of blood 25‐hydroxy‐vitamin D levels in African Americans 
 
PRINCIPAL INVESTIGATOR: 
Dr. Sushil K. Jain, Ph.D. 
Department Pediatrics 
Telephone Number 318‐675‐6086 
Email  sjain@lsuhsc.edu 
VERSION NUMBER: 
V‐1 
DATE: 
11/06/2020. 
 

HRP-503 (v.6.1.2016) 
 
PROTOCOL TITLE: Optimization of 25(OH) vitamin D levels in African Americans  
 
 
Page 2 of 9 
 
Table of Contents 
1.0 
Objectives* .......................................................................................................................... 3 
2.0 
Background* ........................................................................................................................ 3 
3.0 
Inclusion and Exclusion Criteria* ......................................................................................... 3 
4.0 
Study‐Wide Number of Subjects* ....................................................................................... 4 
5.0 
Study‐Wide Recruitment Methods*...................................... Error! Bookmark not defined. 
6.0 
Multi‐Site Research* ........................................................................................................... 4 
7.0 
Study Timelines* ................................................................................................................. 4 
8.0 
Study Endpoints* ................................................................................................................. 4 
9.0 
Procedures Involved* .......................................................................................................... 5 
10.0 
Data and Specimen Banking* .............................................................................................. 5 
11.0 
Data Management* ............................................................................................................. 6 
12.0 
Provisions to Monitor the Data to Ensure the Safety of Subjects* ..................................... 6 
13.0 
Withdrawal of Subjects* ..................................................................................................... 6 
14.0 
Risks to Subjects* ................................................................................................................ 6 
15.0 
Potential Benefits to Subjects* ........................................................................................... 7 
16.0 
Vulnerable Populations* ..................................................................................................... 7 
17.0 
Community‐Based Participatory Research* ........................................................................ 7 
18.0 
Sharing of Results with Subjects* ........................................................................................ 7 
19.0 
Setting .................................................................................................................................. 7 
20.0 
Resources Available ............................................................................................................. 7 
21.0 
Prior Approvals .................................................................................................................... 8 
22.0 
Recruitment Methods ......................................................................................................... 8 
23.0 
Local Number of Subjects .................................................................................................... 8 
24.0 
Confidentiality ....................................................................... Error! Bookmark not defined. 
25.0 
Provisions to Protect the Privacy Interests of Subjects ....................................................... 8 
26.0 
Compensation for Research‐Related Injury ........................................................................ 8 
27.0 
Economic Burden to Subjects .............................................................................................. 8 
28.0 
Consent Process .................................................................................................................. 8 
29.0 
Process to Document Consent in Writing ........................................................................... 9 
30.0 
Drugs or Devices .................................................................................................................. 9 
 

HRP-503 (v.6.1.2016) 
 
PROTOCOL TITLE: Optimization of 25(OH) vitamin D levels in African Americans  
 
 
Page 3 of 9 
 
1.0 
Objectives* 
 
Two‐thirds of the US population, particularly African Americans (AA), is at risk for inadequate or 
deficient 25‐hydroxy‐vitamin D (25(OH)VD). Epidemiological studies demonstrate an association 
between better health outcomes and higher blood levels of 25(OH)VD . Randomized controlled 
clinical trials have shown that, while supraphysiological high doses of VD are needed to achieve 
adequate blood levels of 25(OH)VD, not all subjects respond to them. Recent studies have also 
questioned the therapeutic effects of high‐dose VD supplementation. This application presents 
our design for a randomized, double‐blind, placebo‐controlled clinical trial to test the hypothesis 
that supplementation with VD in combination with L‐cysteine (LC) is more successful at optimizing 
the statuses  of 25(OH)VD [biological signatures] and simultaneously decreasing  TNF‐α and IR 
[functional  or  clinical  outcomes],  suggesting  a  better  therapeutic  approach  compared  with 
supplementation with VD alone in AA subjects. 
 
2.0 
Background* 
Previous human studies report that VD supplementation increases circulating 25(OH)VD 
status but has limited success in reducing insulin resistance (IR). Other human studies report that 
supplementation with LC lowers TNF‐α and IR. This clinical trial will determine the impact of 
combined  supplementation  with  VD+LC  on  increases  in  levels  of  25(OH)VD  as  well  as 
simultaneous  reduction  in  TNF‐α  and  IR  biomarkers  (mediators  of  clinical  benefit)  in  the  AA 
population.  The  mechanistic  focus  of  this  clinical  trial  will  determine  whether  combined 
supplementation with VD and LC provides a more successful approach to increasing 25(OH)VD 
[biological signatures] as well as simultaneously decreasing TNF‐α and IR [functional or clinical 
outcomes], compared with supplementation with VD alone. If the results are positive, future 
studies will investigate potential of this approach to reduce the inflammation, pain, and other 
health issues among AA in a full‐scale efficacy trial.  
 
3.0 
Inclusion and Exclusion Criteria* 
Informed  written  consent  will  be  obtained  from  all  subjects  according  to  the  IRB  approved 
protocol. All subjects in this study will be adult AA volunteers and will meet the inclusion/exclusion 
criteria given below.  
 
INCLUSION CRITERIA: (1) African‐American adults aged 18‐65 years willing to participate in 5 clinic 
visits where blood will be drawn; (2) participants who demonstrate an understanding of 
the risks and benefits of the protocol and sign the informed consent form; (3) participants 
willing to complete standard health history questionnaire before and during the study 
(Copy  enclosed);  (4)  women  with  negative  pregnancy  tests  (pregnancy  test  will  be 
performed on all women participants)  
EXCLUSION  CRITERIA:  (1)  History  of  cardiovascular  disease,  sickle  cell  disease,  or  metabolic 
disorders including: diabetes, uncontrolled hypertension, hypothyroid, or hyperthyroid; 
(2) any sign of hepatic dysfunction or renal dysfunction, hypercalcemia, or nephrolithiasis; 
(3) those taking antiepileptic medications, glucocorticoids, or weight loss or other dietary 
supplements within the two months previous to enrollment or during the study; (4) those 
who  visit  tanning  booths;  (5)  any  subject  who  develops  an  infection  and  has  to  take 
antibiotics; and (6) women with positive pregnancy tests or those who are nursing. (7) 
adults unable to consent or prisoners. Any subject taking vitamin D or any other vitamin 

HRP-503 (v.6.1.2016) 
 
PROTOCOL TITLE: Optimization of 25(OH) vitamin D levels in African Americans  
 
 
Page 4 of 9 
 
or herbal supplement even advised by a doctor or over‐the‐counter will not be enrolled 
in the study. 
 
4.0 
Study‐Wide Number of Subjects* 
This is the only site for enrollment and will enroll 160 subjects.  
5.0 
Multi‐Site Research* N/A (This is only site) 
6.0 
Study Timelines* 
 
Potential subjects will be contacted over phone or potential subjects may call in response to 
advertisement and agrees to participate in this study will be asked to come to the clinic after 
fasting overnight. Fasting blood will be collected after written informed consent. Blood collected 
at V‐1 will serve as the sample for the screening visit for the clinical trial. Subjects meeting the 
inclusion/ exclusion criteria will continue in the clinical trial. All subjects will fill out the complete 
standard health history before the study and at each visit during the study. This clinical trial will 
be registered at the ClinTrial.gov site. 
 
 
Initially, all of the study subjects will be provided placebo supplementation as a placebo run‐in 
period for one month before randomization. Visit 2 (V0) is for obtaining baseline levels after the 
run‐in period. AA‐subjects will be block randomized into four groups. Members of the groups will 
ingest capsules containing placebo and supplements, orally, daily: (I) placebo (P); (II) LC (1000 mg); 
(III) VD (2000 IU); (IV) VD and LC. Each capsule will contain a placebo or cholecalciferol (2000 IU) 
or LC (1000 mg). Placebo group will take two placebo capsules a day in the morning; II LC group 
will receive two capsules of LC daily; (III) VD group will take two capsules and each capsule will 
contain 1000 IU VD daily; (IV) VD+LC group will take daily two capsule containing 1000 IU+500 mg 
LC.  Supplements  will  be  taken  daily  with  food  at  breakfast  for  6  months,  while  participants 
continue to carry on a normal lifestyle. During the placebo run‐in period, all subjects will also take 
two placebo capsules daily. Based on previous experience, we expect a dropout rate of about 16% 
as a result of non‐compliance, lost contact, taking another medicine, or a subject found to have 
another disorder. We expect that at least 30 subjects in each group will complete the study. 
Overnight fasting blood will be collected at each visit. Also, anthropomorphic data, body weight, 
and  height  (BMI),  the  record  of  any  drug  use,  any  adverse  effects/complaints  (related  or 
unrelated), and Questionnaire will be collected at each visit by the nurse. It is likely to require ~90 
minutes to collect the subject’s history and other data in interviews with the nurse/dietician and 
investigators.  
 
The placebo run‐in period is meant to stabilize subjects in the study and will prevent any effect 
due  solely  to  inclusion  in  the  study.  Placebo  and  supplement  capsules  will  be  similar  in 
appearance, taste, texture, and smell, and will be provided by the Dr. Shi/pharmacist, who will 
have the codes for which subjects are assigned to which supplement or placebo. Both subjects 
and  investigators  will  be  blinded  to  the  supplement  each  subject  will  receive.  Dr.  Shi  will 
randomize the subjects. Documentation about capsules/supplements to be used is enclosed on 
last page (page 9) of this protocol. 
 
7.0 
Study Endpoints* 

HRP-503 (v.6.1.2016) 
 
PROTOCOL TITLE: Optimization of 25(OH) vitamin D levels in African Americans  
 
 
Page 5 of 9 
 
Primary Endpoints: Blood levels of 25(OH)VD, TNF‐α, and HOMA‐IR. 
 
Safety Endpoints: Serum calcium (Ca2+), PTH, liver, and kidney function tests will be carried out at 
visits 0, 2, 4, and 6. Whole blood CBC and pregnancy tests will be done at all visits. 
Secondary  Endpoints:  Blood  levels  of  1,25(OH)2VD,  HbA1C,  and  pro‐inflammatory  and  anti‐
inflammatory cytokines (such as IL‐2, IL‐6, and IL‐10). 
 
We will also perform tests to monitor liver and kidney function tests at each visit and complete 
blood count analyses for any sign of any anemia or unexpected changes in white or red blood cell 
profiles.  
 
8.0 
Procedures Involved* 
Fasting blood will be drawn after an overnight fast into precooled tubes kept in an ice 
bucket: 2 mL in a tube without anticoagulant (for the chemistry profile), 1 mL each EDTA‐blood 
for HbA1c and 1 ml for CBC, 8 mL for isolation of plasma, and 12 mL for PBMC isolation. Samples 
will be transported in an ice‐bucket. EDTA‐blood will be centrifuged, and the clear plasma saved 
in several aliquots for various assays. The plasma will be stored at ‐80°C.  Information on age, 
height, body weight and records of any medication use will be collected from each patient at the 
time of enrollment.  HbA1c, CBC, and blood chemistry profile for glucose, Ca++, liver, and kidney 
function  tests,  and  pregnancy  tests  will  be  done  at  the  clinical  chemistry  labs  of  LSUHSC‐
Shreveport. Frozen aliquots stored at ‐80°C will be used for all assays. Appropriate control and 
standards will be used, and analyses will be done in duplicate for each sample. This will eliminate 
inter‐assay variability. 
PBMC isolation and PCR studies: PBMC will be isolated using Histopaque (Sigma‐Aldrich 
catalog # 10771) from EDTA ‐blood as described in our previous publications. We will assay GSH 
and VD metabolism genes in PBMC as described in our earlier studies.  
25(OH)VD and 1,25(OH)2VD assays: We have already standardized tests for simultaneous 
determinations of total 25(OH)VD and 1,25(OH)2VD in human plasma using UPLC‐MS/MS.  
Whole blood total GSH, L‐cysteine, will be determined using HPLC, and a whole blood 
Glucose‐6‐Phosphate Dehydrogenase (G6PD) Activity Assay Kit (Sigma, Cat # MAK015); TNF‐α will 
be determined using an ELISA kit from R&D Systems (Minneapolis, MN). Insulin will be determined 
using ELISA kits from ALPCO Diagnostics (Salem, NH), and the HOMA insulin resistance index will 
be calculated (136). IL‐2, IL‐6, and IL‐10 will be determined using ELISA kits from R&D Systems 
(Minneapolis, MN).  All appropriate controls and standards as specified by the manufacturer's kits 
will be used; control samples will be analyzed each time to check the variation from plate to plate 
on different days to reduce the variability of assays. All of the analyses will be done in duplicate 
on each sample.  
 
Total 24 ml blood will be collected (2 mL in a tube without anticoagulant (for the chemistry 
profile), 1 mL each EDTA‐blood for HbA1c and 1 ml for CBC, 8 mL for isolation of plasma, and 12 
mL for PBMC isolation).  
 
9.0 
Data and Specimen Banking* 
Plasma will be separated from blood. Aliquots of plasma stored at ‐80°C and will be used 
for  all  assays.  Appropriate  control  and  standards  will  be  used,  and  analyses  will  be  done  in 
duplicate for each sample. Data on each subject will be stored in computer and will be protected 
by a password. 

HRP-503 (v.6.1.2016) 
 
PROTOCOL TITLE: Optimization of 25(OH) vitamin D levels in African Americans  
 
 
Page 6 of 9 
 
 
10.0 Data Management* and Confidentiality 
Analyses of data will be performed by the biostatistician, Dr. Shi. A p‐value of less than 0.05 for a 
statistical test will be considered significant. Data will be analyzed statistically to compare the 4 
groups at baseline and various visits using ANOVA. The Wilcoxon signed‐rank or paired t‐test will 
be used to determine significant changes after supplementation for each treatment group, and 
the ANOVA test to compare the 4 treatment groups on changes. The results for the pairwise 
comparisons among the 4 time points will determine whether there is a significant change in the 
outcome variables over time. The effect of covariates or possible confounders (age, sex, BMI, 
initial levels of outcomes, etc.) will be controlled for and tested for their significant effects by 
including them in the repeated measures model used.  
 
Based on animal studies, co‐supplementation with LC+VD will be more successful and raise serum 
25(OH)VD levels by nearly 30 ng/mL(17, 18). Our goal is to raise circulating 25(OH)VD levels by an 
average of 30 ng/mL, and reduce IR levels by 35% in all AA subjects receiving combined VD+LC 
supplementation. To observe a significant response or change, a sample size of 7 for 25(OH)VD, 
and 27 for IR were considered adequate using a paired t‐test conducted at 5% level of significance 
and 80% power. We chose a goal of 30 subjects in each group who complete the study in the 
VD+LC supplementation and other groups. Based on our experience from a previously completed 
clinical trial (H‐09‐073), enrollment of and consent from 160 AA volunteers who participate in 
blood collection for screening should give us more than the required sample size of 30 subjects in 
each group (120   in 4 groups) after factoring in a dropout rate of about 16% for screen failures, 
withdrawal before randomization, or those who did not complete all the visits. Our experience 
also suggests that nearly 190 subjects will need to be contacted to achieve our goal of 160 AA 
volunteers who complete the written consent form and are enrolled in this clinical trial. This takes 
into account the fact that only about 85% of those initially contacted will indeed show up for the 
screening visit and complete the written informed consent.  
 
11.0 Provisions to Monitor the Data to Ensure the Safety of Subjects* 
Vitamin D and L‐cysteine is a common micronutrients and is widely present in many food items, 
such as milk, cheese, eggs and green vegetables. The dose used falls within normal range for a 
healthy person consuming a healthy diet. Thus, this research is considered and falls under minimal 
risk. The Data Safety Monitoring Plan committee will review clinical laboratory reports for any 
unanticipated observation. Names of members of DSMP committee are enclosed. DSMP will meet 
once in three months or as required in case any adverse side effect is reported by any subject or 
seen in clinical report. 
12.0 Withdrawal of Subjects* 
Subjects found to be consuming over the counter supplement, positive pregnancy tests or 
not able to follow the instructions will be withdrawn from the study. Any data collected on 
subject withdrawn from the study will not be used in any analyses. The investigator will 
ask a subject who is withdrawing whether the subject wishes to provide further data 
collection from routine medical care. 
13.0 Risks to Subjects* 
The blood collection for this study will require needle pricks to your vein, which may cause you 
minimal  discomfort.  You  may  experience  some  bruising  and/or  slight  soreness  at  the  blood 
collection site. There should not be any restriction on your normal activities due to participation 

HRP-503 (v.6.1.2016) 
 
PROTOCOL TITLE: Optimization of 25(OH) vitamin D levels in African Americans  
 
 
Page 7 of 9 
 
in this study. No other extra examinations, procedures or tests, such as, pulmonary functions 
tests, etc. are required for participation in this study. All participants will agree not to eat anything 
for about 8 hours before coming to the clinic for blood draw.  
14.0 Potential Benefits to Subjects* 
  There is no direct benefit. You will be paid $50 for each visit during this study period to cover 
your transportation or other expenses. This is done because you will need to come to clinic for 
blood  draw  required  for  research  investigations.  Costs  for  all  the  tests  done  for  research 
investigations will be paid by the investigators.   
15.0 Vulnerable Populations* 
15.1 Research  does  not  involve  Vulnerable  population.  Research  involve  only 
healthy adult African Americans.  
16.0 Community‐Based Participatory Research* 
16.1 There is no involvement of the community in the design and conduct of the 
research. 
17.0 Sharing of Results with Subjects* 
17.1 Results will be shared by presentation of data in Scientific meetings. Data 
will not have any personal identifiers of any subject. 
18.0 Setting 
Blood will be drawn in the clinics located at the Margret palace in the clinical trial by the 
nurse coordinator. All the tests will be formed at the clinical laboratories of the LSUHS and 
the laboratory of Dr. Jain Room 5‐314 of the School Building. 
19.0 Resources Available 
Dr. Jain and Dr. Levine have conducted and published the results of many clinical studies carried 
out in African Americans. This team has previously conducted three clinical trials and has a track 
record  of  successfully  enrolling  African  Americans  volunteers  following  IRB  guidelines  and  a 
commitment to maintaining high ethical standards. Dr. Jain will spend 60% of his time and Dr. 
Levine will spend 10% of his time. Dr. Jain have been the PI of three clinical trials carried out to 
translate from basic to clinical research and investigations of the efficacy of micronutrients in type 
1 and type 2 diabetic patients. Dr. Jain has a demonstrated track record of past collaborations, 
conducting clinical trials and many years of co‐publications with co‐investigator Dr. Levine. As a 
result  of  these  previous  experiences,  I  am  very  much  aware  of  the  importance  of  frequent 
communication  among  all  of  the  investigators,  compliance,  regular  research  meetings,  the 
construction of a realistic time line, and the need for high level of ethics and high quality clinical 
research protocols. Dr. Jain has published over 169 articles in peer‐reviewed journals with over 
14000 citations.  A qualified nurse will be hired to draw blood.  Nurse coordinator and Dr. Jain will 
also  be  responsible  for  enrolling  volunteers,  obtaining  informed  written  consent,  making 
telephone calls and compliance with visits and supplementation. Dr. Jain and nurse coordinator 
will also be responsible for coordination with IRB and obtaining any required modifications. 50% 
salary  support  is  requested  for  the  nurse  coordinator.  Dr.  Jain  and  nurse  coordinator  will 
coordinate with the Research pharmacy and Dr. Shi to ensure random subject assignment of 
placebo, VD, LC, VD+LC for each group of subjects. Dr. Shi is a biostatistician and will do data 
management and statistical analyses of data. 

HRP-503 (v.6.1.2016) 
 
PROTOCOL TITLE: Optimization of 25(OH) vitamin D levels in African Americans  
 
 
Page 8 of 9 
 
20.0 Prior Approvals 
20.1 We have already approval from the Biosafety committee. We also have IND 
waiver from the FDA. Copy of FDA letter enclosed with this protocol. 
21.0 Recruitment Methods 
IRB  approved  poster  will  be  displayed  in  the  hospital  and  Medical  School  building  asking  for 
volunteers to participate in this clinical trial. PI and nurse will also visit the local health fairs, 
community gathering such as churches, to educate all the African American community members 
about the clinical trial and ask for willingness to participate in this study. Investigators will also ask 
other faculty, nurses, residents and fellows about the clinical trial and help in contacting healthy 
adults to participate in this study. Volunteers will be informed in layman language about this 
study, time needed to participate in this study, any reimbursement participant will receive and 
how many visits are required to successfully complete the enrollment and study. Similarly, we will 
also advertise in the local newspaper  for AA volunteers to participate in our clinical trial. All 
volunteers will be reimbursed $50 for each visit for the time and travel. Check will be mailed to 
the address provided by the department office.   
 
22.0 Local Number of Subjects 
We plan to enroll in 160 subjects. 
23.0 Provisions to Protect the Privacy Interests of Subjects 
No  body  other  than  research  team  is  permitted  to  access  any  sources  of 
information about the subjects. 
24.0 Compensation for Research‐Related Injury 
This  research  involves  Minimal  Risk  to  subjects.  You  will  not  be  given  any  other  monetary 
compensation for taking  part in this study.  The  costs for tests done  because you are in the 
research study will be at no charge to you and will be paid for by the study sponsor.  However, 
you or your insurance company must pay for all tests and procedures that are not part of the 
study but that your doctors feel are needed to help you.  
 
25.0 Economic Burden to Subjects 
There is no cost to research participant for any medical or laboratory tests performed by the 
Nurse/investigators. 
26.0 Consent Process 
We will obtain written informed consent from all the participants using IRB approved 
consent form. Each consent form will be signed by a witness. Dr. Jain and Dr. Levine have 
conducted  and  published  the  results  of  many  clinical  studies  carried  out  in  African 
Americans. This team has previously conducted three clinical trials and has a track record 
of  successfully  enrolling  African  Americans  volunteers  following  IRB  guidelines  and  a 
commitment to maintaining high ethical standards.  Our research will not include whole 
genome sequencing (i.e., sequencing of a human germline or somatic specimen with the 
intent to generate the genome or exome sequence of that specimen). 
 
 

HRP-503 (v.6.1.2016) 
 
PROTOCOL TITLE: Optimization of 25(OH) vitamin D levels in African Americans  
 
 
Page 9 of 9 
 
 
27.0 Process to Document Consent in Writing 
This  research  presents  no  more  than  minimal  risk  of  harm  to  subjects  and  involves  written 
documentation of consent will be required. A copy of the signed and dated consent document 
will be given to the person signing the document. 
 
28.0 Drugs or Devices 
This  research  involves  dispensing  micronutrient  supplements  vitamin  D  and  L‐
cysteine.  These  are  also  sold  over  the  counter  in  any  discount  store.  These 
nutrients  are  normal  part  of  our  food  consumed  by  the  public,  such  as  milk, 
cheese, eggs and green vegetables. The supplement capsules will be provided by 
the investigators free of any cost to the participants.  
Capsules details. 
  
1. The study subjects will ingest capsules containing placebo and supplements, 
orally, daily: (I) placebo (P); (II) L-cysteine (LC) (1000 mg); (III) Vitamin D 
(VD) (2000 IU); (IV) VD+LC groups 
  
2. To start with each group/subject will have placebo run-in period for one month 
and all subjects will take two placebo capsules daily. 
  
3. After one month of Placebo run-in period, all subjects will be randomized into 
four groups. Each capsule will contain a placebo or cholecalciferol (2000 IU) or 
LC (1000 mg) or VD+LC. Supplements will be taken daily with food at breakfast 
for 6 months.  
  
4. Placebo group will take two placebo capsules a day in the morning; II LC group 
will receive two capsule of LC (500 mg each) daily; (III) VD group will take two 
capsule of VD (1000 IU) daily; (IV) VD+LC group will take daily two capsule of 
combination (VD 1000 IU VD+ 500 mg LC) daily.  
  
5. Supplements will be taken daily with food at breakfast for 6 months.  
 
6. We are working with Company named: Superior Supplement Manufacturing, 
Fountain Valley California, to get these capsules made. These capsules will look 
similar and will be of similar size.