A Phase I Single-Blind Randomised Trial Investigating Immunisation Strategies Using Ad4-EnvCN54, MVA-CN54 and CN54gp140/MPLA Combinations in Order to Maximise Antibody Responses to Human Immunodeficiency Virus
Phase: PHASE1
Conditions: Human Immunodeficiency Virus
Sponsor: Imperial College London

Ad4HIV Protocol 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
CONFIDENTIAL
 
 
Ad4HIV 
 
A Phase I Single‐Blind Trial Investigating 
Immunisation Strategies Using Ad4‐EnvCN54, 
MVA‐CN54 and CN54gp140/MPLA 
Combinations in order to Maximise Antibody 
Responses to Human Immunodeficiency Virus  
 
Version:  
7.3 
Date:  
01 Nov 2019 
EUDRACT:  
2016‐000052‐94  
REC REF:  
17/LO/0302 
 
IRAS ID: 
186866 
Authorised by:  
Name: 
Dr Katrina Pollock 
 
Role: 
Principal Investigator  
Signature: 
 
Date:   
04 Nov 2019 
 
 
Name: 
 
Role: 
Sponsor – Imperial College London 
Signature: 
 
Date 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 1 ‐ 
1 
GENERAL INFORMATION 
This  protocol  describes  the  Ad4HIV  trial  and  provides  information  about  procedures  for  entering 
participants into it. The protocol should not be used as an aide‐memoire or guide for the treatment 
of  other  patients.  Every  care  has  been  taken  in  drafting  this  protocol,  but  corrections  or 
amendments may be necessary. These will be circulated to the registered investigators in the trial. 
 
COMPLIANCE 
The  trial  will  be  conducted  at  the  clinical  site  in  compliance  with  the  approved  protocol,  the 
Principles  of  Helsinki  (2008),  the  principles  of  Good  Clinical  Practice  (GCP),  Commission  Directive 
2005/28/EC  with  the  implementation  in  national  legislation  in  the  UK  by  Statutory  Instrument 
2004/1031 and subsequent amendments, the UK Data Protection Act (DPA number: Z5886415), and 
the National Health Service (NHS) Research Governance Framework for Health and Social Care (RGF).   
 
SPONSOR 
Imperial College London 
Room 221 
Level 2, Medical School Building 
Norfolk Place 
London  
W2 1PG 
 
COLLABORATING ORGANISATION 
Surrey Clinical Research Centre, University of Surrey, Egerton Road, Guildford GU2 7XP, UK 
 
VACCINES WILL BE SUPPLIED BY IMPERIAL COLLEGE LONDON AND MANUFACTURED AS 
BELOW: 
MVA‐CN54: 
 
 
Bavarian Nordic, Hejreskovvej 10 A, Kvistgård, 3490 Denmark 
 
CN54gp140 / MPLA: 
Polymun 
Scientific 
Immunbiologische 
Forschung 
GmBH, 
Honaustrasse 99, 3400 Klosterneuburg, Austria 
 
Ad4‐EnvCN54  encoding CN54:  PaxVax, Redwood City, California, USA 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 2 ‐ 
GMP STORAGE, LABELLING, PACKAGING, QP RELEASE AND DISTRIBUTION OF VACCINE TO 
SITES 
PCI, Biotech House, Central Park 
Western Avenue, Bridgend Industrial Estate 
Bridgend CF31 3RT 
UK 
 
FUNDING 
UK MRC 
 
AUTHORISATIONS AND APPROVALS 
This protocol will not be implemented until approvals have been received from all the necessary 
regulatory and ethical bodies. 
 
TRIAL REGISTRATION 
This trial has been registered in the EudraCT database where it is identified as 2016‐000052‐94. 
 
 
 
 
 
SAE REPORTING AND IMPORTANT AE NOTIFICATION 
Within 24 hours of becoming aware of an SAE or important AE, please complete the SAE 
form, and email the coordinating centre (Clinical Trials Manager) to notify on: 
Ad4HIV_trial@imperial.ac.uk 
 
Additionally, please email a completed paper SAE form to the Imperial Joint Research 
Compliance Office  (JRCO) on: 
Email jrco.ctimp.team@imperial.ac.uk 
SAE REPORTING AND IMPORTANT AE NOTIFICATION 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 3 ‐ 
 
 
 
TRIAL ADMINISTRATION 
 
Please direct all queries to the Clinical Trial Manager at the Coordinating Center in the first instance; 
clinical queries will be passed to the Prinicpal Investigator. 
 
 
COORDINATING CENTER – IMPERIAL COLLEGE LONDON (ICL) 
 
Imperial College London 
Group of Mucosal Infection & Immunity  
Department of Medicine 
St Mary’s Campus 
Imperial College London 
Wright Fleming Wing 
Norfolk Place 
London  
W2 1PG 
 
 
IMPERIAL COLLEGE LONDON  ‐ STAFF 
Role 
Name 
Telephone Number 
Email Address 
Clinical Trial Manager 
Dr Aleisha Miller 
Tel:  +44 (0)207 594 9717
Mobile: 07714 051 437 
aleisha.miller1@imperial.ac.uk 
Project Manager 
Jennifer O’Connor 
Tel: +44 (0)207 594 2510 
jennifer.oconnor@imperial.ac.uk
Chief Scientific 
Investigator: 
Prof Robin Shattock 
Tel: +44 (0)207 594 5206 
r.shattock@imperial.ac.uk 
 
POSSIBLE SERIOUS BREACH NOTIFICATION 
Within 24 hours of becoming aware of a possible serious breach, please complete the 
Protocol Deviation Form, and email the coordinating centre 
(Clinical Trials Manager) to notify on: 
Ad4HIV_trial@imperial.ac.uk 
 
Additionally, please email a completed paper form to the Imperial Joint  
Research Compliance Office  (JRCO) on: 
Email jrco.ctimp.team@imperial.ac.uk  

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 4 ‐ 
CLINICAL TRIAL SITE 
NIHR Imperial CRF 
Imperial Centre for Translational and Experimental Medicine (L‐Block) 
Hammersmith Hospital 
Imperial College Healthcare NHS Trust 
Du Cane Road 
London  
W12 0HS 
Fax:  0203 313 1763 
 
 
CHIEF/PRINCIPAL INVESTIGATOR (PI) 
Name 
Telephone Number 
Email Address 
Dr Katrina Pollock 
Tel:  +44 (0)203 313 6188 
Mobile: 07564 706787 
k.pollock@imperial.ac.uk 
 
 
COORDINATING TEAM (CLINICAL) AT TRIAL SITE 
Mr Allan Listanco 
Tel:  +44 (0)203 313 6190 
allan.listanco@nhs.net 
Dr Tom Cole 
Tel: +44 (0)203 313 6198 
Tom.Cole@nhs.net  
 
 
TRIAL MONITOR 
Ms Sia Gravani 
Tel:  +44 (0)203 313 6199 
a.gravani@nhs.net 
 
 
PHARMACY AT TRIAL SITE 
Mrs Regina Storch 
Tel:  +44 (0)203 313 4333 
regina.storch@nhs.net  
 
 
LABORATORY INVESTIGATORS – SHATTOCK LABORATORY AT IMPERIAL COLLEGE LONDON 
Dr Hannah Cheeseman 
Tel:  +44 (0)20 7594 2574 
hannah.cheeseman@imperial.ac.uk 
 
DATA MANAGEMENT CENTER & STATISTICAL ANALYSIS 
Name 
Telephone Number 
Email Address 
Dr Victoria Revell 
Tel: +44(0) 1483 689 383 
v.revell@surrey.ac.uk  

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 5 ‐ 
Surrey Clinical Research Centre 
University of Surrey 
Guilford 
Surrey 
GU2 7XH 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 6 ‐ 
2 
SUMMARY OF TRIAL 
Summary Information 
Type 
Summary Details 
ACRONYM (or short 
Title of Trial) 
Ad4HIV 
Long Title of Trial 
Ad4HIV:  A  Phase  I  Single‐Blind  randomised  trial  investigating  immunisation 
strategies using Ad4‐EnvCN54, MVA‐CN54 and CN54gp140/MPLA combinations 
in order to maximise antibody responses to Human Immunodeficiency Virus   
Version 
6.0 
Date 
20 Dec 2018 
EudraCT   
2016‐000052‐94  
REC Reference   
17/LO/0302 
IRAS ID 
186866 
 
Rationale and 
Methodology 
 
This is a randomised two part Phase I study which will explore the impact of 
different boosting options (MVA‐C and protein) for oral Adenovirus serotype 4 
vector  prime  expressing  HIV‐1  CN54  envelope  (Ad4‐EnvCN54)  designed  to 
optimize  systemic  and  mucosal  antibody  response.  The  participants  will  be 
blind  to  the  dose  administered  and  the  laboratory  staff  will  be  blind  to  the 
regimen throughout.  
 
Part 1 is exploratory and designed to select conditions capable of promoting 
enhanced  systemic  and  mucosal  B  cell  responses  in  a  limited  number  of 
participants.  
 
Part 2 is dependent upon Part 1 and is designed to study groups selected on 
performance in part 1 in an expanded number of subjects. Data from both 
stages will be combined for safety and immunological analyses. 
 
Investigational 
Products 
 
1) Ad4‐EnvCN54 encoding CN54 envelope  
2) MVA‐C encoding CN54 gp120 
3) CN54gp140: recombinant HIV‐1 subtype C trimeric envelope protein 
adjuvanted in monophosphopyl lipid A (MPLA) and lyposomes 
4) Placebo 1: Capsule administered orally to match Ad4‐EnvCN54  
5) Placebo 2: Buffered saline administered by I.M needle injection 
 
 
 
 
 
 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 7 ‐ 
Summary 
Information Type 
Summary Details 
Type of 
Participants to be 
Studied 
Healthy  male  or  female  adults,  18  to  50  years  of  age,  at  low  risk  for  HIV 
infection, who are available for the duration of the trial.  They must be willing 
to undergo HIV testing, use an effective method of contraception.  They must, 
in the opinion of the principal investigator or designee, understand the study 
and who provide written informed consent.  
 
Principal  exclusion  criteria  include  confirmed  HIV‐1  or  HIV‐2  infection, 
prexisting  Ad4  serum  neutralising  antibodies,  pregnancy  and  lactation, 
significant  acute  or 
chronic 
disease,  clinically  significant  laboratory 
abnormalities,  recent  vaccination  or  receipt  of  a  blood  product,  previous 
receipt  of  an  HIV  vaccine,  previous  severe  local  or  systemic  reactions  to 
vaccination or history of severe allergic reactions.
Study Design 
Part 1 
The study will enrol 48 participants to Part 1.  Recruitment will select potential 
participants  who  are  willing  to  undergo  serial  blood  draws  and  mucosal 
secretion sampling. Additional participants may be enrolled to replace any early 
withdrawals.  
 
Vaccine & Immunisation Schedule for Part 1 & Part 2 
Table 1 
Group 
N 
Month 0 
Month 3 
Month 6 
A 
6 
Oral placebo 
CN54gp140  
+Oral placebo 
+I.M placebo 
CN54gp140   
+Oral placebo 
+I.M placebo 
B 
6 
Ad4‐EnvCN54 
CN54gp140  
+Oral placebo 
+I.M placebo 
CN54gp140  
+Oral placebo 
+I.M placebo 
C 
6 
Ad4‐EnvCN54 
CN54gp140  
+ Ad4‐EnvCN54 
+ I.M placebo 
CN54gp140 
+Oral placebo 
+ I.M placebo 
D 
6 
Ad4‐EnvCN54 
CN54gp140  
+ Ad4‐EnvCN54 
+I.M placebo 
CN54gp140  
+ Ad4‐EnvCN54 
+I.M placebo 
E 
6 
Oral placebo 
CN54gp140  
+MVA‐CN54 
+Oral placebo 
CN54gp140   
+MVA‐CN54 
+Oral placebo 
F 
6 
Ad4‐EnvCN54 
CN54gp140 
+MVA‐CN54 
+Oral placebo 
CN54gp140  
+MVA‐CN54 
+Oral placebo 
G 
6 
Ad4‐EnvCN54 
CN54gp140  
+MVA‐CN54 
CN54gp140  
+MVA‐CN54 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 8 ‐ 
+ Ad4‐EnvCN54 
+Oral placebo 
H 
6 
Ad4‐EnvCN54 
CN54gp140 
+MVA‐CN54 
+ Ad4‐EnvCN54 
CN54gp140  
+MVA‐CN54 
+ Ad4‐EnvCN54 
 
48 
 
 
Participants will be randomised for recruitment into groups A‐H in Part 1.  The 
number of Ad4‐EnvCN54 administrations combined with either gp140 protein 
boosts  (A‐D)  or  co‐administration  of  gp140  with  MVA‐CN54  (E‐H)  will  vary.  
Groups A (CN54gp140 alone) and E (MVA‐CN54/CN54gp140 alone) will serve as 
control  groups  to  assess  the  added  benefit  of  the  Ad4  vector.    Following 
completion of Part 1, each vaccine group (A‐H) will be assessed for number of 
mucosal  responders  (mucosal  antibody  (rectal/genital/oral)  as  measured  by 
ELISA), and titre (mucosal and systemic) of antigen specific binding antibody. 
The primary immunogenicity endpoint will be Week 26; Visit 9.   The vaccine 
groups  and  regimes  (one  from  B–D  and  one  from  F–H)  that  have  the  best 
positive response at this timepoint will be expanded in Part 2 of the study. 
 
Based  on  data  from  the  MUCOVAC2  study,  in  which  participants  received  3 
intramuscular  doses  of  CN54gp140  with  GLA‐AF  adjuvant,  we  anticipate  that 
there  will  be  no  mucosal  responders  in  group  A  (although  there  will  be 
detectable systemic IgG responses). Enrollment through to completion of the 
primary immunological assessment for each group will be 7 months.   
 
Vaccine Schedule for Part 2 
The study will enrol an additional 12 participants to Part 2.  The best regimes 
from A‐D (Ad4‐EnvCN54  / CN54gp140) and F‐H  (Ad4‐EnvCN54  / MVA‐CN54 / 
CN54gp140) will be expanded to n=12.  Immunogenicity data will be analysed in 
32  participants  at  week  26  (Primary  Immunogenicity  Endpoint).    The  study 
design for Part 2 will be the same as that used for Part 1 (Table 1: Vaccine and 
Immunisation Schedule) for the best responding groups only.   
 
Selection will be based on total number of responders. In the event that more 
than one group has the same number of responders, mucosal antibody titre will 
be used to rank groups to determine which to take forward to Part 2.  Should 
mucosal titers be indistinguishable between groups, then serum antibody levels 
will be taken into consideration in the selection of groups to progress to Part 2. 
The criterion for a positive mucosal response, and methods for ranking groups 
on  the  basis  of  mucosal  and  serum  antibody  titers,  will  be  specified  in  the 
Laboratory  Analysis  Plan  (LAP).   If  any  group  is  associated  with  unacceptable 
product related adverse events, it will be discontinued from further study.  
 
The  decision  to  progress  any  group  to  Part  2  will  be  taken  by  the  Trial 
Management Group.  
 
 
 
Summary 
Summary Details 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 9 ‐ 
Information Type 
 
Formulations 
 
 
Ad4‐EnvCN54 at the dosage of 1010 VP will be administered orally 
 
MVA‐CN54 at the dosage of 1.0 x 108 TCID50 will be administered by IM 
needle injection  
 
CN54gp140 at the  dosage of 100g will be administered with 5g of 
MPLA  in  a  liposomal  formuation  and  administered  by  IM  needle 
injection  
 
Placebo 1: Capsule administered orally  
 
Placebo 2: Buffered saline administered by I.M needle injection 
 
 
 
Vaccine 
Dosage Level(s) 
Total Administered 
Volume (per site) 
Route of 
Administration 
Ad4‐EnvCN54 
1010VP 
Lyophilized powder in 
capsule 
Oral 
MVA‐CN54  
1.0 x 108 TCID50 
0.5ml 
I.M 
CN54gp140 / MPLA + 
Liposome 
100g / 5g 
0.4 mL 
I.M 
Placebo1 
‐ 
Powder in capsule 
Oral 
Placebo2 
‐ 
0.5ml 
I.M 
 
Site:  
 
Clinical  investigations  will  be  carried  out  at  the  NIHR  Imperial  CRF, 
Hammersmith Hospital, Imperial College Healthcare NHS Trust. 
 
Immunogenicity laboratory investigations will be performed in the Department 
of  Infection  and  Immunity  at  Imperial  College  London,  and  safety  laboratory 
investigations will be performed at Imperial College Healthcare NHS Trust. 
 
Aim:  
 
To  explore the impact of different boosting options (MVA‐C and protein) for 
oral Adenovirus serotype 4 vector prime expressing HIV‐1 CN54 envelope (Ad4‐
EnvCN54) designed to optimize systemic and mucosal antibody response. 
 
Primary Objectives 
 
Part 1 & Part 2: 
To  evaluate  the  immunogenicity,  safety  and  tolerability  of  oral  Ad4  vector 
expressing HIV‐1 CN54 envelope (Ad4‐EnvCN54) when combined with different 
boosting  options  (MVA‐CN54  and  CN54gp140/MPLA)  designed  to  optimise 
systemic and mucosal responses. 
 
 
 
Summary 
Information Type 
Summary Details 
 
Secondary 
Objectives 
 
Immunogenicity 
Part 1 & Part 2: 
To select conditions capable of promoting enhanced B cell responses based on 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 10 ‐ 
the following HIV‐specific immune responses: 
 
Kinetics  and  magnitude  of  induced  HIV‐specific  serum  binding 
antibodies  
 
Kinetics  and  magnitude  of  induced  HIV‐specific  mucosal  binding 
antibodies (cervico‐vaginal for women, semen for men and rectal and 
nasal for all) 
 
 
Exploratory 
Objectives  
 
Immunogenicity 
Part 1 & Part 2 
To assess and characterize the following HIV‐specific immune responses:  
 
HIV‐specific neutralizing antibodies in the systemic compartment. 
 
Frequency  and  titer  of  serum  binding  antibodies  to  other  HIV  Env 
antigens (alternative clades) by ELISA or other assays. 
 
Characterisation  of  non‐neutralising  antibody  function  including 
Antibody  Dependent  Cellular  Cytotoxicity  (ADCC)  and  Antibody 
Dependent  Cellular  Viral  Inhibition  (ADCVI),  Antibody  dependent 
phagocytosis (ADCP), viral capture and aggregation assays.  
 
Anti‐vector  mediated  immune  responses  i.e.  anti‐MVA‐CN54  and 
anti_Ad4 antibody responses and functionality if present  
 
HIV‐specific T‐cell‐mediated responses by ICS or Elispot analysis.  
 
Epitope mapping of B‐ and T‐cell responses. 
 
Ex vivo analysis of colorectal biopsies (Part 2 participants only) 
 
PBMC ex‐vivo HIV suceptibility assay 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Summary Information 
Type 
Summary Details 
 
Primary Endpoints 
Measure(s) 
 
Part 1 & Part 2: 
Immunogenicity 
Antigen specific mucosal (cervico‐vaginal for women, semen for men, and rectal 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 11 ‐ 
and  nasal  for  all)  antibody  (µg/ml)  responses  two  weeks  after  the  final 
immunisation.   
     
Safety and Tolerability: 
 
Proportion of participants with severe or greater (Grades 3‐4) adverse 
reactions during the study 
 
Proportion  of  participants  with  vaccine‐related  serious  adverse  events 
(SAEs) throughout the study period 
 
 
Secondary Endpoints 
Measure(s) 
 
Immunogenicity: 
Part 1 & Part 2 
To assess the kinetics of immune responses elicited by each of the vaccine 
regimens:  
 
Frequency of serum and mucosal binding antibodies to HIV CN54gp140 
antigen measured by binding ELISA. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Summary Information 
Type 
Summary Details 
 
Exploratory Endpoints 
Measure(s) 
 
Immunogenicity: 
Part 1 & Part 2 
 
Frequency and magnitude of HIV‐gp140 specific B‐cell‐mediated responses 
in the systemic compartment measured by B‐cell ELISPOT. 
 
Frequency, titer and avidity of serum binding antibodies to other HIV Env 
antigens (alternative clades) by ELISA or other assays. 
 
Frequency and titer of serum neutralising antibodies to homologous virus, 
and, if warranted a wider a panel of viruses representing different clades.  

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 12 ‐ 
 
Longevity  of  serum  and  mucosal  responses  at  12  months  following  final 
immunization 
 
Frequency  and  magnitude  of  HIV‐specific  T‐cell  mediated  responses 
measured by T‐cell and ICS (Intracellular Cytokine Staining). 
 
PBMC ex‐vivo HIV suceptibility assay 
 
Measurement of CN54gp140 serum IgA responses over time  
 
Frequency  and  magnitude  of  T‐cell  chemokine  and  cytokine  release 
following ex‐vivo antigen stimulation quantified by Luminex. 
 
Epitope mapping of B‐ and T‐cell responses 
 
Serum antibody responses to Ad4‐EnvCN54 and MVA‐CN54 as a marker of 
anti‐vector immunity and vaccine “take” 
 
Ex vivo analysis of colorectal biopsies for activation markers by ICS (Part 2 
only) 
 
Susceptibility of rectal biopsies to HIV‐infection – infection assays  
 
Durability  of  responses  will  also  be  determined  by  measurement  of 
response at weeks 26 (visit 9) and 48 (visit 11) of the trial schedule 
 
 
Group selection 
 
Part 1: 
Participants will be recruited and randomised into groups A‐H with an oral and I.M 
placebo  control  (dependent  on  treatment  allocaiton).    This  will  be  a  participant 
blinded study where the particpants are blinded to the group and dosing regime to 
which they are assigned. The laboratory undertaking immunological analysis will 
also be blinded to group and dosing regimen to prevent bias in analysis. 
 
Part 2: 
Participants will be randomised to the groups chosen for expansion.  If only one 
group is expanded, there will be no randomisation.  Participants will be blind to the 
vaccine  regime  group  to  which  they  have  been  assigned.    The  laboratory 
undertaking  immunological  analysis  will  also  be  blinded  to  group  and  dosing 
regimen to prevent bias in analysis. 
 
 
Summary Information 
Type 
Summary Details 
 
Number of 
Participants to be 
Studied 
 
The study will enrol 48 participants to Part 1 and 12 participants for Part 2.   
 
In Part 1, n=6 participants per group will be randomised to groups A‐H.   
 
In Part 2, n=6 participants will be vaccinated to the best responding regimes. 
  
Recruitment  will  select  potential  participants  who  are  willing  to  undergo  serial 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 13 ‐ 
blood  draws.  Additional  participants  may  be  enrolled  to  replace  any  early 
withdrawals. 
 
 
Duration of Study 
Participation  
 
Participants will be screened up to 90 days before the first vaccination and will be 
followed up for 24 weeks after the last vaccine administration. Excluding screening, 
participants will attend for 11 visits in 48 weeks.    
 
 
Evaluation  
for Inter‐ 
Current HIV Infections 
 
Participants will be tested for HIV according to the Trial Assesment Schedule (Table 
2).  Test  results  will  be  interpreted  according  to  a  pre‐determined  diagnostic 
algorithm. Should one or more serological HIV test(s) post‐vaccination be positive, 
a  nucleic‐acid‐based  HIV  test  will  be  performed  (if  clinically  indicated)  to 
distinguish a true HIV infection acquired through exposure in the community from 
HIV  seropositivity  due  to  the  vaccine‐induced  antibody  response.  HIV  testing  at 
additional  time  points  may  be  performed  upon  request  of  the  volunteer  and 
Principal Investigator or designee as medical or social circumstances warrant. 
 
 
Organisation 
 
The Coordinating Center will be the Group of Mucosal Infection & Immunity at ICL. 
Drafting of the SAP will be lead by the Surrey Clinical Research Centre.  
 
Safety Monitoring 
And Statistical 
Considerations 
 
Only a volunteer Trial ID, (and the Date of Birth) will identify collected CRF data.  
Safety will be continually monitored  by the Investigators; pause criteria are pre‐
defined  to  facilitate  consultation  with  the  Trial  Management  Group  prior  to 
deciding  on  a  permanent  stop  to  protocol.    Ad  hoc  safety  review  may  be 
specifically requested by the Sponsor and the Principal Investigator, based on on‐
going review of the data. 
 
At the end of the study, a Clinical Study Report (CSR) will be drafted. Safety and 
tolerability  will  be  addressed  by  examining  the  overall  rates  of  solicited  and 
unsolicited  adverse  events  and  serious  adverse  events  that  might  be  associated 
with vaccination and the number of participants who experience these events. All 
clinical and routine laboratory data will be included in the safety analysis.  
 
 
Summary Information 
Type 
Summary Details 
Sponsor 
Imperial College London (ICL) 
Sponsor Status 
Non‐Profit Organization 
Funder 
MRC UK 
 
Chief/Principal 
Investigator 
Dr Katrina Pollock 
Chief Scientific 
Professor Robin Shattock 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
 
‐Page 14 ‐ 
Investigator 
Clinical Trial Manager 
(Coordinating Center) 
Dr Aleisha Miller 
Clinical Trial Manager 
(ICRF – Clinical Site)  
Dr Tom Cole 
Lead Trial Nurse  
(ICRF – Clinical Site) 
Mr Allan Listanco 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 15 ‐ 
3 
TRIAL SCHEMA  
Table 1: 
VACCINATION SCHEDULE   
The doses, methods and schedule of immunisation are described below. 
PART I 
 
PART II 
 
Group 
N 
Month 0 
Month 3 
Month 6 
N 
Vaccinations 
1,2,&3 
ARM 1 
A 
6 
Oral 
placebo 
 
CN54gp140  
+Oral 
placebo 
+I.M placebo 
CN54gp140  
+Oral 
placebo 
+I.M placebo 
12 
 
Selected 
dosage from 
Part I 
 
B 
6 
Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140  
+Oral 
placebo 
+I.M placebo 
CN54gp140  
+Oral 
placebo 
+I.M placebo 
C 
6 
Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140  
Ad4‐
EnvCN54 
+I.M placebo 
CN54gp140  
+Oral 
placebo 
+I.M placebo 
D 
6 
Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140  
Ad4‐
EnvCN54 
+I.M placebo 
CN54gp140  
Ad4‐
EnvCN54 
+I.M placebo 
ARM 2 
E 
6 
Oral 
placebo 
 
CN54gp140 
+MVA‐CN54 
+Oral 
placebo 
CN54gp140  
+MVA‐CN54 
+Oral 
placebo 
F 
6 
Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140 
+MVA‐CN54 
+Oral 
placebo 
CN54gp140 
+MVA‐CN54 
+Oral 
placebo 
G 
6 
Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140  
+MVA‐CN54 
+Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140  
+MVA‐CN54 
+Oral 
placebo 
H 
6 
Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140 
+MVA‐CN54 
+Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140  
+MVA‐CN54 
+ Ad4‐
EnvCN54 
 
48 
 
max 
12 
 
 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 16 ‐ 
4 
TRIAL ASSESSMENT SCHEDULE 
TABLE 2 ‐ SCHEDULE OF VISITS, IMMUNISATIONS AND ASSESSMENTS ‐ PART 1 & PART 2 
Visit 
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
7 
8 
9 
10 
11 
Study Month 
 
M0 
 
 
M3 
 
 
M6 
 
 
 
M12 
Study Week 
 
W0 
W1 
 
W4 
W12 
W13 
 
W16 
W24 
W25 
W26 
W28 
W48 
Study Day 
 
D0 
D7 
 
D28 
D84 
D91 
 
D112 
D168 
D175 
D182 
D196 
D336 
Visit Windows (Days) 
 
‐90 
 
 
 1 
 
 2 
(1) 
‐7/+14 
 
 1 
 
 2 
(1) 
‐7/+14 
 
 1 
 
 2 
 
 2 
 
 14 
Immunizations 
 
X 
 
 
X 
 
 
X 
 
 
 
 
Informed consent 
X 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Medical history/ demographics 
X 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
General physical examination 
X 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Entry screen for Ad4 neutralising antibodies 
X 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Symptom directed physical exam 
 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
 
Concomitant medications 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
 
Vital signs 
X 
X
6 
X 
 
X
6 
X 
 
X
6 
X 
X 
X 
 
Inspection of administration sites (I.M) 
X 
 
 
 
X
6 
X 
 
X
6 
X 
 
 
 
Solicited Adverse Events 
 
X
6 
X 
 
X
6 
X 
 
X
6 
X 
 
 
 
Review Solicited AE on diary card 
 
 
X 
 
 
X 
 
 
X 
 
 
 
Unsolicited Adverse events 
 
X
6 
X 
X 
X
6 
X 
X 
X
6 
X 
X 
X 
 
Serious adverse events 
 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
Urine pregnancy test (women) 
2 
X 
X 
 
 
X 
 
 
X 
 
 
 
X 
Routine safety bloods
3 
X 
X 
X 
 
X 
X 
 
X 
X 
X 
X 
 
Antinuclear antibody and immunoglobulin
7 tests 
X 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
HIV test4 
X 
(X) 
(X) 
(X) 
(X) 
(X) 
(X) 
(X) 
(X) 
(X) 
(X) 
X 
HBV, HCV and syphilis tests 
X 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
STI screen
5 
X 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Blood for serum – Immunogenicity 
 
X 
 
X 
X 
 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
Blood for PBMC – Immunogenicity 
 
X 
 
X 
X 
 
X 
X 
X 
X 
X 
X 
Blood for PBMC – Infectivity 
 
X 
 
X 
 
 
X 
 
X 
X 
X 
X 
Mucosal antibody responses 
(rectal / genital / nasal) 
 
X 
 
X 
X 
 
X 
X 
 
X 
 
X 
Rectal swab for Ad4‐EnvCN54 PCR 
 
X 
X 
X 
 
X 
X 
 
X 
X 
X 
X 
Rectal biopsies
 (optional; Part 2 only) 
 
X
8 
 
 
 
 
 
 
 
X
9 
 
X
10 
1 The second and third vaccinations (visits 4 and 7) can be shifted by -7 or up to +14 days. Subsequent visits would be shifted 
by the same number of days to ensure the interval to subsequent visits is maintained  
2 Confirmed negative prior to vaccination 
3 The parameters are detailed in section 12.3.3 
4 HIV testing at additional time points may be performed upon request of the volunteer and principal investigator or designee 
as medical or social circumstances warrant   
5 Genital swabs or urine for Neisseria gonorrhoea and chlamydia trachomatis will be collected 
6  Pre-dose, and at 60 (+/–10) min post-dose 
7 Immunoglobulins IgA, IgG and IgM 
8 Biopsy may be performed up to 2 weeks before vaccination 
9 Window for biopsy is –2 to +7 days 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 17 ‐ 
10 Window for biopsy –56 to +56 days 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 18 ‐ 
5 
CONTENTS 
1 
GENERAL INFORMATION ............................................................................... 1 
2 
SUMMARY OF TRIAL ...................................................................................... 6 
3 
TRIAL SCHEMA ............................................................................................. 15 
TABLE 1: VACCINATION SCHEDULE ..................................................................................................... 15 
4 
TRIAL ASSESSMENT SCHEDULE .................................................................... 16 
TABLE 2 ‐ SCHEDULE OF VISITS, IMMUNISATIONS AND ASSESSMENTS ‐ PART 1 & PART 2 ................................... 16 
5 
CONTENTS ................................................................................................... 18 
6 
ABBREVIATIONS .......................................................................................... 21 
7 
INTRODUCTION AND BACKGROUND ............................................................ 23 
7.1 
THE STATUS OF THE FIELD ....................................................................................................... 23 
7.2 
CURRENT VACCINE STRATEGIES ................................................................................................ 24 
7.3 
RESEARCH LEADING TO THE PROPOSAL OF CLINICAL STUDY............................................................. 25 
7.3.1 
ADENOVIRUS TYPE 4 .............................................................................................................. 25 
7.3.2 
THE VACCINES ...................................................................................................................... 25 
7.3.3 
PRE‐CLINICAL IMMUNOGENICITY STUDIES .................................................................................. 26 
7.3.4 
CLINICAL STUDIES IN HUMANS ................................................................................................. 27 
7.3.5 
STUDIES DIRECTLY SUPPORTING THE DESIGN OF AD4HIV ............................................................... 28 
7.4 
STUDY RATIONALE ................................................................................................................ 28 
7.5 
INVESTIGATIONAL PRODUCTS / INTERVENTIONS .............................................................. 29 
7.6 
CLINICAL STUDY DESIGN ......................................................................................................... 30 
7.7 
ANTICIPATED NEXT STEPS ....................................................................................................... 31 
7.8 
RISKS AND BENEFITS .............................................................................................................. 31 
8 
CLINICAL TRIAL SITE ..................................................................................... 33 
8.1 
SITE/INVESTIGATOR INCLUSION CRITERIA ................................................................................... 33 
8.2 
CI'S QUALIFICATIONS & AGREEMENTS ....................................................................................... 33 
8.3 
ADEQUATE RESOURCES .......................................................................................................... 33 
8.4 
SITE ASSESSMENT ................................................................................................................. 34 
9 
SELECTION OF PARTICIPANTS ...................................................................... 35 
9.1 
PARTICIPANT INCLUSION CRITERIA ............................................................................................ 35 
9.2 
PARTICIPANT EXCLUSION CRITERIA ............................................................................................ 36 
9.3 
NUMBER & SOURCE OF PARTICIPANTS .................................................................................... 37 
9.4 
SCREENING PROCEDURES & PRE‐ENROLMENT INVESTIGATIONS ....................................................... 37 
10 
REGISTRATION &  DISTRIBUTION INTO TREATMENT GROUPS ...................... 38 
10.1 
RANDOMISATION PRACTICALITIES ............................................................................................. 38 
10.1.1 Part 1 ......................................................................................................................................... 38 
10.1.2 Part 2 ......................................................................................................................................... 38 
10.1.3 Pass Criterion for Part 2 ............................................................................................................ 38 
10.1.4 GP notification .......................................................................................................................... 38 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 19 ‐ 
10.2 
RANDOMISATION CODES AND & UN‐BLINDING ........................................................................... 39 
10.3 
CO‐ENROLMENT GUIDELINES ................................................................................................... 39 
10.4 
PARTICIPANT’S COMPLIANCE & ADHERENCE ............................................................................... 39 
11 
TREATMENT OF PARTICIPANTS .................................................................... 40 
11.1 
VACCINE PRODUCTS & ADMINISTRATION ................................................................................... 40 
11.2 
ACCOUNTABILITY FOR USED AND UNUSED SUPPLIES ...................................................................... 41 
11.3 
VACCINATION SCHEDULE – PART 1 & PART 2 ........................................................................... 42 
11.4 
COMPLIANCE & ADHERENCE .................................................................................................... 42 
11.5 
DOSE MODIFICATIONS, INTERRUPTIONS & DISCONTINUATIONS ...................................................... 43 
11.6 
CLINICAL MANAGEMENT OF ADVERSE EVENTS .............................................................................. 43 
11.7 
NON‐TRIAL TREATMENT .......................................................................................................... 43 
11.8 
ISSUES RELATED TO HIV ........................................................................................................... 44 
11.9 
VERIFICATION OF HIV STATUS OF PARTICIPANTS .......................................................................... 44 
11.10 HIV INFECTION ..................................................................................................................... 44 
12 
ASSESSMENTS & FOLLOW‐UP ...................................................................... 46 
12.1 
ASSESSMENTS AT SCREENING ................................................................................................... 46 
12.1.1 Informed Consent Process ........................................................................................................ 46 
12.1.2 Demographics, Medical History and physical Examination ...................................................... 46 
12.1.3 HIV Risk Assessment & Serology Testing .................................................................................. 46 
12.1.4 Routine Laboratory Parameters ................................................................................................ 47 
12.2 
VACCINATION AND FOLLOW‐UP VISITS ................................................................................ 47 
12.2.1 ADDITIONAL VISITS................................................................................................................ 48 
12.2.2 VISIT WINDOWS ................................................................................................................... 48 
12.3 
PROCEDURES FOR ASSESSING SAFETY AND TOLERABILITY ......................................................... 48 
12.3.1 ADVERSE EVENT ASSESSMENT .................................................................................................. 48 
12.3.2 PHYSICAL EXAMINATION AND VITAL SIGNS ................................................................................. 49 
12.3.3 ROUTINE SAFETY BLOODS AND URINE PREGNANCY ................................................................. 49 
12.3.4 SOLICITED LOCAL AND SYSTEMIC ADVERSE EVENTS ....................................................................... 49 
TABLE 3:        SOLICITED ADVERSE EVENTS ............................................................................................... 50 
12.3.5 NON‐SOLICITED ADVERSE EVENTS ............................................................................................ 50 
12.3.6 FOLLOW‐UP OF ADVERSE EVENTS AND PREGNANCY ...................................................................... 50 
12.3.7 SERIOUS ADVERSE EVENTS ...................................................................................................... 51 
12.4 
PROCEDURES FOR ASSESSING IMMUNOGENICITY ............................................................. 51 
12.5 
PROCEDURES FOR ASSESSING AD4 SHEDDING ................................................................... 52 
12.6 
CRITERIA FOR STOPPING TREATMENT GROUPS OR WHOLE TRIAL ....................................................... 52 
12.7 
EARLY STOPPING & FOLLOW‐UP ............................................................................................... 52 
12.8 
WITHDRAWAL OF PARTICIPANTS ............................................................................................... 53 
12.9 
END OF TRIAL DEFINITION ........................................................................................................ 53 
13 
SAFETY REPORTING ..................................................................................... 54 
13.1 
DEFINITIONS ........................................................................................................................ 54 
TABLE 4 TYPES OF ADVERSE EVENTS AND DEFINITIONS .............................................................................. 54 
TABLE 4  TYPES OF ADVERSE EVENTS AND DEFINITIONS CONTINUED ............................................................. 55 
13.2 
REPORTING ADVERSE EVENTS .................................................................................................. 56 
13.3 
INVESTIGATOR RESPONSIBILITIES AND ASSESSMENTS ..................................................................... 57 
TABLE 5 ‐ ASSIGNING TYPE OF AE THROUGH CAUSALITY ............................................................................ 58 
13.4 
SAFETY REPORTING FLOWCHART ............................................................................................... 59 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 20 ‐ 
14 
STATISTICAL CONSIDERATIONS .................................................................... 60 
14.1 
METHOD OF RANDOMISATION ................................................................................................. 60 
14.2 
OUTCOME MEASURES ....................................................................................................... 60 
14.2.1 PRIMARY ENDPOINTS ............................................................................................................. 60 
14.2.2 SECONDARY ENDPOINTS ......................................................................................................... 60 
14.2.3 EXPLORATORY ENDPOINTS .................................................................................................. 60 
14.3 
SAMPLE SIZE ........................................................................................................................ 61 
14.4 
INTERIM MONITORING AND ANALYSIS ....................................................................................... 61 
14.5 
DATA ANALYSES AND PRESENTATIONS ....................................................................................... 62 
14.5.1 PARTICIPANT POPULATIONS .................................................................................................... 62 
14.5.2 PRIMARY AND SECONDARY IMMUNOGENICITY OUTCOMES ............................................................. 62 
14.5.3 EXPLORATORY IMMUNOLOGICAL ASSESSMENT OUTCOMES ............................................................ 62 
14.5.4 SAFETY OUTCOMES ............................................................................................................... 63 
15 
DATA MANAGEMENT .................................................................................. 64 
15.1 
DATA MANAGEMENT AND RECORD KEEPING AT THE CLINICAL TRIAL SITE ............................................ 64 
15.2 
ELECTRONIC DATA MANAGEMENT BY PROMASYS ......................................................................... 65 
15.3 
DATA MANAGEMENT AT THE COORDINATING CENTER ................................................................... 66 
16 
TRIAL MONITORING .................................................................................... 67 
16.1 
RISK ASSESSMENT ............................................................................................................. 67 
16.2 
STUDY MONITORING BY THE COORDINATING CENTER .................................................................... 67 
16.3 
CLINICAL SITE MONITORING ..................................................................................................... 68 
16.4 
MONITORING BY THE TRIAL MANAGEMENT GROUP (TMG) ............................................................. 68 
16.5 
CONFIDENTIALITY .................................................................................................................. 69 
17 
ETHICAL CONSIDERATIONS AND APPROVAL ................................................ 70 
17.1 
ETHICAL ISSUES ..................................................................................................................... 70 
17.2 
ETHICAL CONSIDERATIONS ...................................................................................................... 70 
18 
INDEMNITY ................................................................................................. 71 
19 
FINANCE ...................................................................................................... 72 
20 
OVERSIGHT & TRIAL COMMITTEES ............................................................... 73 
20.1 
TRIAL MANAGEMENT GROUP .................................................................................................. 73 
20.2 
INDEPENDENT DATA MONITORING COMMITTEE (IDMC) INTERIM MONITORING AND ANALYSES ........... 73 
21 
PUBLICATION .............................................................................................. 74 
22 
PROTOCOL AMENDMENTS .......................................................................... 75 
23 
REFERENCES ................................................................................................ 76 
24 
APPENDICES ................................................................................................ 79 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 21 ‐ 
6 
ABBREVIATIONS 
Ab 
Antibody 
ADCC 
Antibody‐dependent cell‐mediated cytotoxicity 
ARD 
Acute respiratory disease  
AE 
Adverse event 
ALP 
Alkaline phosphatase  
ALT 
Alanine aminotransferase 
AR 
Adverse reaction 
AST 
Aspartate aminotransferase  
BMI 
Body Mass Index 
CF 
Consent form 
CRF 
Case Report Form 
CTA 
Clinical Trial Authorisation 
CSR 
Clinicial Study Report 
CTM 
Clinical Trial Manager 
 
 
EDC 
Electronic Data Capture 
ELISA 
Enzyme Linked Immunosorbent Assay
ELISpot 
Enzyme Linked Immunosorbent Spot Assay 
ERC 
Endpoint Review Committee 
EUDRACT 
European Union Drug Regulatory Agency Clinical Trial 
GCP 
Good Clinical Practice 
HHC 
Household Contact 
HIV 
Human immunodeficiency virus 
IB 
Investigator Brochure  
ICF 
Informed Consent Form 
ICH 
International Conference on Harmonisation 
ICL 
Imperial College London 
ICS 
Intracellular cytokine staining 
ID 
Intradermal 
IDES 
Internet Data Entry System 
IDMC 
Independent Data Management Committee 
IM 
Intramuscular 
IMP 
Investigational Medicinal Product 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 22 ‐ 
IRB 
Institutional Review Board 
ISF 
Investigator Site File 
ITT 
Intention‐to‐treat 
JRCO 
Joint Research Compliance Office 
LC 
Langerhans Cell 
mBC 
Memory B cell 
MHRA 
Medicines and Healthcare Products Regulatory Agency 
NHS 
National Health Service 
PBMC 
Peripheral Blood Mononuclear Cell 
PCR 
Polymerase Chain Reaction 
PIS 
Participant Information Sheet 
PI 
Principal Investigator 
POC 
Proof of Concept 
PP 
Per‐Protocol 
QA 
Quality Assurance 
QC 
Quality Control 
R&D 
Research and Development 
REC 
Research Ethics Committee 
SAE 
Serious Adverse Event 
SAP 
Statistical Analysis Plan 
SAR 
Serious Adverse Reaction 
SOP 
Standard Operating Procedure 
SUSAR 
Suspected Unexpected Serious Adverse Reaction 
TMG 
Trial Management Group 
TOPS 
The Overvolunteering Prevention System 
UAR 
Unexpected Adverse Reaction 
UKHVC 
UK HIV Vaccine Consortium  

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 23 ‐ 
7 
INTRODUCTION AND BACKGROUND 
At the end of 2012, an estimated 35.3 million people were living with HIV worldwide, up 
17%  from  2001.  This  reflects  the  continued  large  number  of  new  HIV  infections  and  a 
significant  expansion  of  access  to  antiretroviral  therapy  (ART),  which  has  helped  reduce 
AIDS‐related  deaths,  especially  in  more  recent  years  (UNAIDS  Report  on  the  global  AIDS 
epidemic 2013. Geneva 2013). The majority of new HIV infections continue to occur in sub‐
Saharan  Africa.  There  is  an  urgent  need  to  strengthen  and  scale‐up  existing  and  new 
prevention methods such as HIV testing and counselling, behavioural interventions, condom 
use, treatment of sexually transmitted diseases, harm reduction, male circumcision (Wamai 
et al. 2011) and antiretroviral drugs for prevention (Granich et al. 2011). New prevention 
strategies  to  control  the  epidemic  and  prevent  new  infections,  including  pre‐exposure 
prophylaxis (Kim et al. 2010), antiviral treatment for prevention (Granich et al. 2011), topical 
microbicides (Krakower et al. 2011), and HIV preventive vaccines must be explored and their 
access  ensured.    Although  combination  ART  has  transformed  life  expectancy,  and  global 
initiatives such as PEPFAR and the Global Fund to fight AIDS, TB and Malaria have made 
these drugs widely available, treatment has had limited impact on the number of new HIV 
infections.  In  the  UK,  even  against  a  backdrop  of  comprehensive  treatment  and  care 
services, sexual transmission of HIV continues unabated with an estimated incidence of 1‐3 
per 100 person years amongst young homosexual men. Whilst we hope that the strategic 
use of ART to prevent infection will increase, the need for an efficient and realistic vaccine 
regimen  against  HIV‐1  remains  a  priority  for  global  public  health  (Kim  et  al  2010;  Rerks‐
Ngarm et al 2009; Koff 2010).   
 
7.1 
THE STATUS OF THE FIELD 
Important findings from the Thai RV144 trial indicate that a vaccine regimen based on a 
non‐replicating vector prime and a recombinant monomeric HIV envelope subunit protein 
(rgp120) boost could reduce the incidence of HIV‐1 acquisition (Kim et al 2015).  
 
The RV144 phase IIb clinical efficacy trial provided an important proof of concept that HIV 
acquisition can be reduced with a vaccine regimen based on a non‐replicating pox vector 
prime,  and  an  Envelope  subunit  protein  boost.  However,  the  observed  level  of  efficacy 
(31%)  is  likely  insufficient  to  provide  a  cost  effective  vaccine.  Interestingly  the  reported 
efficacy of the RV144 vaccine at 12 months was 60%, but rapidly waned in conjunction with 
systemic antibody levels. Mucosal antibody levels, thought to be critical in preventing HIV 
acquisition and known to wane more rapidly than those in the systemic compartment, were 
not measured in the RV144 trial. Nevertheless it is widely accepted that a vaccine capable of 
delivering  a  sustained  efficacy  of  ≥60%  would  be  clinically  useful  in  both  developing 
(Andersson  et  al  2011)  and  developed  world  settings  (Long  et  al  2011).  However  this  is 
dependent  on  the  level  of  coverage  and  the  required  frequency  of  boosting  to  maintain 
protective  immunity.  This  trial  has  now  become  the  benchmark  for  future  studies.  The 
products to be evaluated in this study (Ad4HIV phase I) offer significant potential to improve 
on this initial and important proof of concept. Specifically, we anticipate that the novel use 
of a mucosal replicating vector will maximize and maintain mucosal responses providing a 
durable efficacy of ≥60%, significantly lengthening the potential interval between required 
re‐vaccination, a critical consideration for cost effectiveness.  
The modest protective efficacy of the RV144 regime over 36 months (31%) highlights the 
need for both increased efficacy and durability of immune protection. In this respect live‐

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 24 ‐ 
attenuated  viral  vaccines  have  been  far  more  effective  in  preventing  viral  infections  in 
humans and animal than any other approach, providing a compelling case for delivery of an 
HIV vaccine with a live vector (Parks et al. 2013). This is mirrored by results in the rhesus 
macaque  model  in  which  live‐attenuated  viruses  like  the  nef  deleted  SIV‐mac239  have 
proven to be the most effective experimental vaccine for preventing AIDS (Koff et al. 2006). 
However a live attenuated HIV vaccine is impractical based on significant inherent safety 
risks. Given that sexual transmission of HIV‐1 is the predominant mode of HIV acquisition in 
adults, a key element for a successful preventative vaccine may be the ability to generate 
potent immune responses not only within the systemic circulation but also at the mucosal 
portals of entry (genital tract and rectum). Therefore a mucosal replication competent (live) 
virus  vector  may  have  additional  advantages  compared  to  non‐replicating  vaccines  for 
priming mucosal and systemic responses.  
 
 
7.2 
CURRENT VACCINE STRATEGIES 
Currently only six replicating viral vectors have progressed to testing in phase I clinical trials: 
Adenovirus serotype 4 vaccine for CN54 (current protocol), Adenovirus serotype 4 vaccine 
for  H5N1  Influenza  (Gurwith  et  al.  2013),  Tiantan  Vaccinia  virus  (National  Center  for 
AIDS/STD Control and Prevention, China CDC), Measles virus (Institut Pasteur), Sendai virus 
(International AIDS Vaccine Initiative) and Vesicular stomatitis virus (NIAID USA). There are a 
range  of  other  replicating  vectors  in  preclinical  development  but  the  transfer  to  clinical 
programs is unclear and depends on appropriate toxicology and manufacturing processes.  
 
We believe Ad4 vectors have a significant advantage over other vector‐based strategies for 
priming mucosal and systemic responses due to their oral application. Here they are non‐
pathogenic  but  replicate  within  the  GI  tract.  Furthermore,  the  “parent  wild‐type”  Ad4 
vaccine has a substantial safety record having been administered orally to more than 10 
million US military recruits without safety concern (Radin et al. 2014). In contrast, the non‐
replicative Ad5 vector was associated with a trend toward increased HIV‐1 acquisition in 
Ad5 seropositive subject in the Merck phase IIb STEP trial and the HVTN503 Phambili trials 
(Gray et al. 2010). However, the Ad4 vector is substantially biologically different from Ad5 
vectors in terms of tropism, cellular receptor usage, innate immune profile, and adaptive 
immune phenotypes.  Adenovirus 4 tropism for the mucosal surface of the GI tract initiates 
replication  in  submucosal  tissues,  thus  maximises  effective  expression  of  native  HIV 
envelope  trimers  on  the  surface  of  infected  cells  (Alexander  et  al.  2013).  This  localised 
mucosal  expression  of  native  envelope  has  the  strongest  potential  to  induce  potent 
immunity  to  strengthen  defences  of  the  mucosal  barriers  at  the  front  lines  of  HIV 
acquisition.  
 
There is currently no clinical data on expression of HIV immunogens using the Ad4 vector, 
however  recent  clinical  studies  using  the  Ad4  vector  to  induce  responses  to  the 
haemagglutinin of avian influenza A H5N1 virus show the platform to be safe and tolerable 
(Gurwith  et  al.  2013).    Although  Ad4  proved  efficient  for  priming  systemic  and  mucosal 
responses  to  the  haemagglutinin,  optimal  antibody  responses  were  only  observed  on 
protein boosting (Gurwith et al 2013). We intend to build on these promising initial findings 
by boosting responses through the use of recombinant protein alone or in combination with 
a non‐replicative MVA vector.  
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 25 ‐ 
This  builds  on  previous  studies  indicating  that  priming  with  non‐replicative  adenovirus 
vectors, can be significantly boosted by MVA vectors and/or recombinant protein (Draper et 
al. 2013) and our own preclinical modelling indicating that co‐administration of MVA‐CN54 
and  GLA‐AF  adjuvanted  HIV  CN54gp140  protein  in  primed  animals  promotes  enhanced 
responses  over  protein  alone  (McKay  et  al  2014).  This  approach  is  currently  under 
evaluation in a phase I clinical trial (UKHVC SPOKE003; EudraCT: 2012‐003277‐26) funded by 
the  MRC  DCS.  While  these  studies  will  inform  our  own  vaccine  development  program, 
indication  that  a  replicating  Adenovirus  4  vector  prime  can  elevate  the  magnitude  and 
duration of pox‐protein strategies would also have significant impact for the wider field.  
 
 
7.3 
RESEARCH LEADING TO THE PROPOSAL OF CLINICAL STUDY 
7.3.1  ADENOVIRUS TYPE 4  
Adenovirus serotype 4 belongs to the family of Adenoviridae, is frequently the causative 
agent  for  conjunctivitis  or  pharyngoconjunctival  fever  and  is  responsible  for  acute 
respiratory disease (ARD) among susceptible populations worldwide.   Adenovirus serotype 
4 is a non‐enveloped, icosahedral virion, 70‐90nm in diameter containing a double‐stranded 
linear  DNA  genome.  Adenovirus  4  transmission  occurs  through  direct  human  to  human 
contact, faecal‐oral and occasionally water transmission.   
 
The incubation period after transmission is between 1‐10 days, and Ad4 infections vary in 
clinical manifestation and severity.  Symptoms include fever, rhinitis, pharyngitis, tonsillitis, 
cough,  or  conjunctivitis.  Usually  a  syndrome  of  fever,  pharyngitis,  and  conjunctivitis 
(pharyngoconjunctival fever) is associated with an Ad4 infection.  In addition, it has been 
documented  that  Ad4,  the  only  known  serotype  of  Adenovirus  species  E,  is  the  leading 
causative agent of febrile respiratory infections (acute respiratory disease [ARD]) in military 
trainees.  In  rare  instances,  Ad4  has  caused  severe  pneumonia  in  military  recruits  or 
immunocompromised individuals. 
 
The  Adenovirus  serotype  4  parental  vaccine  protects  against  respiratory  disease  and  is 
attenuated by the oral route of delivery.  Previous studies of the oral replication competent 
Ad4 vector encoding hemagglutinin (HA) of H5N1 influenza have detected rectal, but not 
respiratory, shedding for up to 28 days after administration.  Most importantly no shedding 
or  evidence  of  seroconversion  to  the  encoded  transgene  HA  was  observed  in  household 
contacts, but shedding was likely to be detected in vaccinees receiving the high dose of 1011 
VP after oral immunisation.  
 
 
7.3.2  THE VACCINES 
7.3.2.A  Recombinant Adenovirus type 4 vector encoding CN54‐Env (Ad4‐EnvCN54) 
The  vaccine  vector  virus  designated  as  Ad4‐EnvCN54,  is  a  recombinant,  replication‐
competent Ad4 encoding the full length of a HIV‐1 membrane expressed trimeric envelope 
protein  (CN54‐Env).    The  recombinant  Ad4  virus  was  derived  from  the  US  Military  Ad4 
vaccine  virus  which  had  been  originally  isolated  from  a  military  recruit  with  acute 
respiratory  disease  before  being  passaged  in  WI‐38  cells  (Lyons  et  al.  2008).      Ad4  will 
encode the HIV‐1 clade C envelope protein from the clade C Chinese viral isolate 97CN54.  
This subunit has been shown to be immunogenic, raising high titre antibodies when given 
systemically  in  B6D2F1  mice,  and  intra‐vaginally  in  New  Zealand  white  rabbits.    Ad4‐
EnvCN54  (or  matching  placebo)  will  be  administered  orally  as  a  lyophilized  powder  in  a 
capsule at each immunisation visit.   The vaccine has been manufactured by PaxVax (USA).  

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 26 ‐ 
  
 
7.3.2.B  MVA‐C encoding CN54gp120 
The MVA‐CN54 has been developed by M. Esteban at the Centro Nacional de Biotecnologia 
of CSIC and expresses the HIV‐1 protein gp120 and the fusion protein gag‐pol‐nef from HIV‐
1 97CN54.  Ad4HIV trial participants will receive 1.0 x 108 TCID50 (or matching placebo) in a 
volume of 0.5mls. MVA‐CN54 will be injected into the left deltoid muscle at the 2nd and 3rd 
immunisation visits.  The vaccine has been manufactured by Bavarian Nordic (Denmark). 
 
 
7.3.2.C  Recombinant CN54gp140 + MPLA  
The CN54gp140 + monophosphoryl lipid A (MPLA)  is a recombinant gp140 protein, derived 
from  the  HIV‐1  97CN54  coding  sequence  and  a  trimeric  recombinant  clade  C  envelope 
protein,  mixed  with  MPLA  liposomes.    The  protein  comprises  a  sequence  of  670  amino 
acids, and has been shown to be immunogenic in humans.  Trial participants will receive 
100g of CN54gp140 and 5g of MPLA in a volume of 0.4mls.  CN54gp140 + MPLA will be 
injected into the right deltoid muscle at the 2nd and 3rd immunisation visits.  The vaccine has 
been manufactured by Polymun Scientific (Austria).     
 
 
7.3.3  PRE‐CLINICAL IMMUNOGENICITY STUDIES 
Studies  have  shown  in  mice,  non‐human  primate  and  human  studies  that  vaginal 
vaccination  in  the  absence  of  strong  adjuvants  is  inefficient  in  induction  of  genital  tract 
antibody  responses  to  HIV  envelope  (Buffa  et  al.  2012;  Cranage  et  al.  2011;  Lewis  et  al. 
2011). This  has also proven to be  the case with direct rectal immunisation in macaques. 
Furthermore,  concerns  over  the  impact  of  local  immune  activation  on  HIV  acquisition 
preclude the use of immune potentiators at the mucosal portals of HIV entry. Indeed the 
possibility that vaccination with human Ad5 vector increased mucosal T‐cell activation at the 
portals  of  HIV  acquisition  remains  a  central  hypothesis  to  explain  the  potential 
enhancement of HIV acquisition within the STEP and Phambili trials (Gray et al. 2014). In 
contrast  oral  immunisation  has  previously  been  shown  to  induce  rectal  and  genital  tract 
antibody  responses  to  both  replicating  vaccines  (poliovirus;  Ogra  and  Ogra,  J  Immunol. 
1973) and adjuvanted subunit immunogens (Rudin et al. 1998). Furthermore the oral route 
of  immunization  offers  significant  advantages  in  relation  to  ease  of  application  and 
acceptability, and is not complicated by the influence of reproductive hormones on local 
immune responsiveness to vaccination. While there is considerable evidence to support the 
oral administration of the Ad4‐EnvCN54 vector, currently there is no available data on the 
safety or efficacy of vaginal or rectal administration of Ad4‐EnvCN54.  
 
A prototype HIV‐1 candidate vaccine based on Ad4 recombinant vectors expressing an HIV‐1 
clade C full‐length Env (Alexander et al. 2013), designed to express and present on the cell 
membrane  the  correct  conformation  of  Env  appropriate  for  immunogenicity,  and  has 
already been evaluated in preclinical studies. This vaccine was compared with other Ad4Env 
vectors expressing gp140 or gp120, secreted from recombinant vector infected cells. The 
immune sera from Ad4 immunised animals efficiently neutralized tier 1 clade C pseudovirus 
and the homologous and heterologous tier 2 pseudoviruses to a lesser extent, reflective of 
the  modest  antibody  titres  achieved  by  repeat  vaccination  with  a  homologous  vector. 
Nevertheless these promising preclinical data likely underestimate the real potential of the 
Ad4 vector platform given its exclusive restriction for replication in human cells.   
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 27 ‐ 
Although  the  mechanistic  correlates  of  protection  in  the  RV144  trial  remain  obscure, 
reduced  risk  of  HIV  acquisition  correlated  with  a  range  of  functional  antibody 
characteristics. This modest and short‐lived immune protection, based on a non‐replicating 
canarypox vector prime and recombinant envelope protein boost regime, suggests the need 
for  much  more  potent  vaccine‐induced  protective  antibody  responses  at  the  mucosal 
portals  of  viral  entry.  A  mucosal  replicating  vector  system  generating  local  Env  antigen 
persistence  could  potentially  lead  to  higher  levels  of  protective  mucosal  and  systemic 
neutralizing antibodies.   
 
 
7.3.4  CLINICAL STUDIES IN HUMANS 
In MucoVac 01 (EudraCT number 2007‐000781‐20), was the first human clinical trial to have 
used the trimeric CN54gp140 to healthy participants, although the vaccine was not given 
systemically and was administered in the absence of an adjuvant. The trial was conducted in 
17 healthy women that were given nine intravaginal (IVAG) immunisations and exposed to a 
total  of  900µg  CN54gp140  in  carbopol  gel  over  the  course  of  one  menstrual  cycle.  The 
vaccine formulation did not cause any serious adverse events. Most of the adverse events 
were genital, and mild in nature, except for 4 which involved genital bleeding. Three of the 4 
were moderate, and in one case a woman on hormonal contraception met the criteria for 
severe, which was defined as bleeding heavier than menses for more than 4 days. There 
were no detectable antibodies seen either locally or systemically, and this might have been 
explained by the proximity of the immunizations which were administered 3 times a week 
for 3 consecutive weeks in one menstrual cycle (Lewis et al. 2011).   
 
In Mucovac 02 (EudraCT: 2010‐019103‐27) built directly on Mucovac 1, and continued to 
focus on mucosal immune responses.  The trial was conducted in 36 healthy women in two 
centres in the UK who were randomised to one of four groups to receive CN54gp140 with or 
without GLA‐AF/Chitosan and by a variety of methods.  Mucovac 02 was the only completed 
trial to have generated safety data on the systemic administration of the CN54gp140 in GLA‐
AF in healthy participants.  The results showed that 1/11 and 0/5 women in the IM IVAG or 
IN  groups  made  systemic  IgG,  and  after  a  single  I.M  boost  of  the  intranasal  (I.N)  group 
increased to 3/3, suggestive of amnestic responses and some effect of priming via the IN 
route.   
Analysis of the (presumed) peak antibody responses measured after the last immunisation 
demonstrated induction of robust antibody responses, with moderate neutralization activity 
against easy to neutralize tier 1 viral isolates.  There were no vaccine related serious adverse 
events although participants experienced at least one mild or moderate solicited adverse 
event.  There were no safety concerns of note attributable to the study products and all 
participants completed all their allocated immunisations.    
In UKHVC SPOKE003 (EudraCT: 2012‐003277‐26) built directly on Mucovac 2, continued to 
focus  on  inducing  durable  systemic  binding  antibodies  to  CN54gp140  at  levels  exceeding 
those seen in the RV144 trial.  In addition, an accelerated regimen, with 5 rather than 7 sets 
of  immunisations  and  shortened  by  8  weeks,  was  implemented  to  investigate  whether 
augmenting humoral responses compromised participant safety.  This approach is currently 
under evaluation.    
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 28 ‐ 
7.3.5  STUDIES DIRECTLY SUPPORTING THE DESIGN OF AD4HIV 
7.3.5.1   Scientific Hypothesis  
The RV144 efficacy trial demonstrated that a vaccine based on a non‐replicating pox vector 
prime,  and  Envelope  subunit  protein  boost  can  provide  protection  up  to  60%  protection 
against HIV‐1 infection for 12 months, although rapidly waning to 31% by 36 months. Our 
hypothesis  is  that  priming  with  an  orally  delivered  mucosal  replicating  vector  (Ad4)  will 
significantly  enhance  the  magnitude  and  durability  of  mucosal  and  systemic  antibody 
responses  to  HIV‐1  gp140  on  boosting  with  recombinant  protein,  with  or  without  co‐
administration of a non‐replicating pox vector (MVA‐C).  
 
We believe there is a compelling case to test this hypothesis as: Ad4 has the longest safety 
record of currently available replicating vectors; is the only available viral vector adapted for 
oral administration; naturally infects mucosal surfaces initiating replication in sub‐mucosal 
tissues; and transduces expression of native HIV envelope on the surface of infected cells. 
Hence we believe the proposed strategy has enhanced potential to strengthen antibody‐
mediated defenses of the mucosal barriers at the front lines of HIV acquisition. 
 
To test this hypothesis we will deliver a two arm phase I clinical trial conducted in the NIHR 
Imperial Clinical Research Facility (ICRF) at Hammersmith Hospital, London.  
 
Arm 1 (Groups A‐D):  Depending on the allocation of groups, participants will receive Ad4‐
EnvCN54 or placebo orally, CN54gp140/MPLA, and placebo I.M injections at month 0 (Week 
0), 3 (Week 12) & 6 (Week 24).  
 
Arm 2 (Groups E‐H):   Depending on the allocation of groups, participants will receive Ad4‐
EnvCN54  or  placebo  orally,  CN54gp140/MPLA  and  MVA‐CN54  I.M  injections  at  month  0 
(Week 0), 3 (Week 12) & 6 (Week 24).  
 
The proposed assessment of combined MVA‐CN54/protein boost in the second of two arms 
in  this  study  is  intended  to  determine  maximal  responses.  The  choice  of  the  MVA‐CN54 
/protein combination is based on our own preclinical and clinical modelling of a DNA /MVA / 
CN54 ‐protein combination trialed in a now closed to recruitment phase I clinical trial study 
(UKHVC SPOKE 003) funded by the MRC‐DCS.  
 
Data  from  animal  studies  suggests  that  co‐administration  of  MVA‐CN54  and  GLA‐AF 
adjuvanted HIV CN54gp140 protein promotes enhanced responses over DNA followed by 
protein alone (McKay PF, et al. 2014). Care has been taken in the design of the proposed 
study  to  facilitate  direct  comparison  between  the  two  experimental  arms,  and  data 
obtained from the on‐going clinical assessment of the more complex (x3)‐DNA (2x)‐ MVA‐C ‐
protein‐GLA strategy in the UKHVC SPOKE003. 
 
 
7.4 
STUDY RATIONALE  
We propose to evaluate the use of new HIV‐1 vaccine products in a phase I clinical trial by 
exploring the impact of different boosting options for MVA‐C and CN54gp140 for oral Ad4 
serotype 4 vector prime expressing HIV‐1 CN54 (Ad4‐EnvCN54).  This regime will identify the 
most immunogenic strategy for the induction of durable mucosal and systemic protective 
antibody  responses.  This  will  facilitate  up‐selection  of  the  most  promising  regime  for 
accelerated development towards a phase II efficacy trial.  

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 29 ‐ 
 
The overall aim of this phase I clinical study is to evaluate the impact of priming with an 
orally  delivered  mucosal  replicating  competent  Ad4  vectored  prime  expressing  HIV‐1 
CN54Env  (Ad4‐EnvCN54),  by  evaluating  potential  enhancement  of  the  magnitude  and 
durability of mucosal and systemic antibody responses to HIV‐1 CN54Env on boosting with 
recombinant trimeric envelope protein boosts, with or without co‐administration of a non‐
replicating pox vector (MVA‐C) to identify the most immunogenic strategy for the induction 
of durable mucosal and systemic protective antibody responses.   The proposed study will 
provide critical data needed to support and inform the further exploration of immunisation 
regimen based on Ad4 vectors for HIV vaccines in a phase II/III trial. 
 
 
7.5 
INVESTIGATIONAL PRODUCTS / INTERVENTIONS  
7.5.1 
Justification of selected dose for the Investigational product: Ad4‐EnvCN54   
Ad4‐EnvCN54 encoding  rgp150  HIV‐1  membrane  expressed  trimeric  envelope  protein 
subtype  C CN54  will  be  administered  orally  at  the  dose  of  1010VP.  This  dose  was 
well tolerated in a recent study of the Ad4 vaccine for H5N1 influenza performed in the US 
(Gurwith et al. 2013), and demonstrated superior vaccine uptake (Ad4 seroconversion) and 
observed immunogenicity (cellular and humoral response to influenza) than lower doses. 
 
7.5.2 
Justification of selected dose for MVA‐C encoding CN54gp120 
The MVA‐CN54 has been developed by M. Esteban at the Centro Nacional de Biotecnologia 
of CSIC and expresses the HIV‐1 protein gp120 and the fusion protein gag‐pol‐nef from HIV‐
1  97CN54.  Participants  will  receive  1.0  x  108  TCID50  in  a  volume  of  0.5mls  intramuscular 
injections (I.M) into the left deltoid muscle. 
 
The dose 1.4 x 108 TCID50 was used in the EuroVacc trials and the doses of MVA‐CN54 used 
in HIVIS/TaMoVac trials (108 TCID50)  in which there have been no concerns about safety. 
This  dose  has  been  shown  to  be  well  tolerated  and  immunogenic  and  has  now  been 
administered  to  many  individuals  in  these  and  many  other  trials  of  other  vaccines.    The 
vaccine has been manufactured by Bavarian Nordic (Denmark). 
 
7.5.3 
Justification of selected dose for CN54gp140 / MPLA: recombinant HIV‐1 subtype 
C  trimeric  envelope  protein  adjuvanted  in  monophosphoryl  lipid  A  adjuvant 
(MPLA) 
Recombinant CN54gp140 / MPLA will be administered I.M at the dose of 100μg adjuvanted 
with 5μg MPLA in a liposomal formulation into the right deltoid muscle. The dose to be 
used in this protocol is identical to the dose of CN54gp140 (100µg) and MPLA (5µg), in the 
same administered volume of 0.4ml, used in three previous UK clinical trials: MUCOVAC2 
(EudraCT 2010‐019103‐27); Spoke 003 (EudraCT 2012‐003277‐26); and X001 (EudraCT 2013‐
001032‐22).  In  these  trials  the  MPLA  was  called  GLA  (glucopyranosyl  lipid  A).  The 
combination was safe, and participants made good immune responses to the CN54gp140. 
 
For the proposed clinical study, the CN54gp140 / MPLA will be manufactured by Polymun 
Scientific. CN54gp140 is a trimeric recombinant HIV‐1 clade C envelope glycoprotein derived 
from a Chinese viral isolate 97CN54 (Rodenburg et al. ; Su et al. 2000).   
 
The HIV‐derived amino acid sequence of CN54gp140, as predicted from the primary DNA 
sequence  of  the  clone,  comprises  634  residues.      The  molecular  mass  predicted  by  the 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 30 ‐ 
polypeptide  sequence  alone  is  approximately  70 kD.  However,  the  protein  is  heavily 
glycosylated and has a mass of approximately 140 kD as determined by SDS‐PAGE and size‐
exclusion  chromatography.  Furthermore,  the  CN54gp140  secreted  by  CHO  cells  is 
oligomeric, and following purification is essentially trimeric, with a projected mass of 420 
kD. CN54gp140 / MPLA vaccine is provided at a concentration of 250 µg/ml of protein and 
12.5 µg/ml of MPLA, in a volume of 0.6ml, as a clear, colourless, sterile liquid, presented in 
translucent polypropylene vials.   
 
 
7.6 
CLINICAL STUDY DESIGN 
To  identify  an  effective  Ad4  based  oral  vaccine  that  promotes  systemic  and  mucosal 
responses  to  the  HIV‐1  envelope  glycoprotein,  our  group  will  adopt  a  two  part  adaptive 
clinical  trial.    The  study  will  assist  in  rapidly  screening  the  impact  of  different  routes, 
combination regimes and boosting options to Ad4‐EnvCN54, MVA‐CN54 and CN54gp140 / 
MPLA, to augment systemic and mucosal antibody responses following initial priming with 
Ad4.  
 
The study will enrol 48 participants to Part 1 and 12 participants in Part 2. Recruitment will 
select  potential  participants  who  are  willing  to  undergo  serial  blood  draws.    Additional 
participants may be enrolled to replace any early withdrawals.  
 
In Part 1, n=6 participants per group will be randomised to groups A‐H (Table 1).  This design 
varies the number of Ad4 administrations, from 1 to 3, combined with either CN54gp140 
protein boosts (A‐D) or co‐administration of gp140 with MVA (E‐H). Groups A (gp140 alone) 
and  E  (MVA‐CN54/CN54gp140  alone)  will  serve  as  control  groups  to  assess  the  added 
benefit of the Ad4 vector.  Each vaccine group (A‐H) will be assessed for number of mucosal 
responders  (mucosal  antibody  (rectal/genital/nasal)  as  measured  by  ELISA),  and  titre 
(mucosal  and  systemic)  of  antigen  specific  binding  antibody.  Based  on  data  from  the 
MUCOVAC2 study, in which participants received 3 intramuscular doses of CN54gp140 with 
GLA‐AF  adjuvant,  we  anticipate  that  there  will  be  no  mucosal  responders  in  group  A 
(although there will be detectable systemic responses). Enrolment through to completion of 
the primary immunological assessment for each group will be 7 months.  
 
In  Part  2,  the  best  regimes  from  A‐D  (Ad4‐EnvCN54/CN54gp140)  and  E‐H  (Ad4‐
EnvCN54/MVA‐CN54/CN54gp140)  will  be  expanded  to  n=12  (additional  n=6)  in  Part  2.  
Immune  responses  at  the  Primary  Immunogenicity  Endpoint  (Week  26)  will  be  analysed.  
Selection will be based on total number of responders. In the event that more than one 
group  has  the  same  number  of  responders,  mucosal  antibody  titre  will  be  used  to  rank 
groups  to  determine  which  to  take  forward  to  Part  2.    Should  mucosal  titers  be 
indistinguishable  between  groups,  then  serum  antibody  levels  will  be  taken  into 
consideration in the selection of groups to progress to Part 2.  
 
The criteria for a positive mucosal response, and methods for ranking groups on the basis of 
mucosal  and  serum  antibody  titers,  will  be  specified  in  the  LAP.     If  any  groups  are 
associated  with  unacceptable  product  related  adverse  events,  they  will  be  discontinued 
from further study. The decision to progress any group to Part 2 will be taken by the Trial 
Management Group.  
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 31 ‐ 
 
7.7 
ANTICIPATED NEXT STEPS 
The selected HIV Envelope insert is based on subtype C, the most common infecting subtype 
globally, and particularly in southern Africa. Should the proposed trial identify a particularly 
promising vaccine strategy, the aim will be to transfer the clinical studies to collaborators in 
southern Africa. Although protection is likely to be clade specific, proof of concept in this 
study  would  allow  the  rapid  development  of  additional  Ad4/MVA/protein  HIV  Envelope 
vaccines to generate a multi‐clade vaccine approach. The European & Developing Countries 
Clinical Trials Partnership (EDCTP) will be the ideal organization  through which to take the 
best results from this study into a phase II study.  Funding will be sought from the Wellcome 
Trust, MRC, DFID, EDCTP and International Trials program for phase II support if this trial 
meets its endpoints. 
 
 
7.8 
RISKS AND BENEFITS  
This is a phase I trial in healthy male and female participants.   
 
There  is  currently  no  clinical  data  for  Ad4‐EnvCN54,  and  limited  data  available  on  the 
systemic use of CN54gp140 and MVA‐C but our group is directly involved in the only trial 
using CN54gp140 delivered I.M in DNA‐MVA‐protein strategy (UKHVC SPOKE 003; EudraCT 
number  2012‐003277‐26)  initiated  in  July  2013  and  now  completed,  and  for  which  our 
group have direct access to safety data as it becomes available.  
 
There  are  extensive  safety  data  on  the  use  of  similar  recombinant  HIV  protein  vaccines 
including  the  large  Phase  III  Vaxgen  and  RV144  trials  ‐  albeit  formulated  with  different 
adjuvants (Andersson et al. 2011; Su et al. 2000; UNIADS Report 2013).  In the RV144 trial, 
the  ALUM  adjuvanted  gp120  protein  (AIDSVAX  B/E)  was  injected  along  with  ALVAC 
(canarypox expressing gag pro and env genes) after two priming immunisations with ALVAC 
alone.  There  were  no  safety  concerns  in  that  trial  of  over  16,000  healthy  participants  in 
Thailand.   
 
Adenovirus  4  and  MVA‐C  based  vaccines  are  widely  used  alone  and  in  combination 
regimens, and previous experience with similar vaccine products is reassuring with respect 
to  safety.  Adverse  reactions  similar  to  those  seen  with  previous  vaccines  and  licensed 
vaccines  are  expected.    There  is  no  direct  benefit  to  the  participants.  They  will  be 
reimbursed  for  their  time  and  travel.      As  there  are  placebo  groups,  there  is  a  risk  that 
adverse events will be over‐reported, but this should not influence severity grading and is 
not a concern at this stage of evaluation.   
 
Immunisation  will  be  carried  out  by  qualified  health  care  professionals  who  have  had 
appropriate  training,  according  to  written  procedures  for  each  clinical  centre.    The 
dispensing records will be checked at each monitoring visit including used vials.  
 
The  vaccination  schedules  are  complex  and  the  study  may  be  difficult  to  recruit  to,  and 
there is an increased risk of loss to follow‐up as a result. We have previous experience of 
similarly complex regimens. Participants will be issued a diary card in addition to a 7 day 
follow‐up visit. 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 32 ‐ 
The Immunogenicity endpoints will be analysed in laboratories at Imperial College London, 
and serum samples may also be shipped to a specialist immunology laboratories in the USA 
for wider measurement of antibodies of interest. Procedures will be put in place to ensure 
the  secure  chain  of  custody  of  samples  when  transporting  from  clinic  to  laboratory  and 
between laboratories; therefore we consider that the risk of loss or compromise of samples 
is low. 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 33 ‐ 
8 
CLINICAL TRIAL SITE 
8.1 
SITE/INVESTIGATOR INCLUSION CRITERIA 
The  Principal  Investigator,  Dr  Katrina  Pollock  (Imperial  Clinical  Research  Facility, 
Hammersmith Hospital) is experienced in Phase I clinical trials.  Participants will be seen by 
clinical staff from the Imperial Clinical Research Facility, Imperial College Healthcare NHS 
Trust, who have experience of running Phase 1 vaccine trials.  
 
8.2 
CI'S QUALIFICATIONS & AGREEMENTS 
1. The investigator should be qualified by education, training, and experience to 
assume responsibility for the proper conduct of the trial at their site and should 
provide evidence of such qualifications through an up‐to‐date curriculum vitae 
and/or other relevant documentation requested by the Sponsor, the REC and/or the 
regulatory authorities. 
 
2. The investigator should be thoroughly familiar with the appropriate use of the 
investigational product(s), as described in the protocol, in the current Investigator 
Brochures, in the product information and in other information sources provided by 
the Coordinating Centre. 
 
3. The investigator should be aware of, and should comply with, the principles of ICH 
GCP and the applicable regulatory requirements. A record of GCP training should be 
accessible for all investigators. 
 
4. The investigator/site should permit monitoring and auditing by the Sponsor, and 
inspection by the appropriate regulatory authority(ies)   
 
5. The investigator should maintain a delegation log of appropriately‐qualified persons 
to whom the investigator has delegated significant trial‐related duties. 
 
6. The investigator should sign an investigator statement, which verifies that the site is 
willing and able to comply with the requirements of the trial. 
 
 
8.3 
ADEQUATE RESOURCES 
1. The investigator should be able to demonstrate a potential for recruiting the 
required number of suitable subjects within the agreed recruitment period. 
 
2. The investigator should have sufficient time to properly conduct and complete the 
trial within the agreed trial period. 
 
3. The investigator should have available an adequate number of qualified staff and 
adequate facilities for the foreseen duration of the trial to conduct the trial properly 
and safely. 
 
4. The investigator should ensure that all persons assisting with the trial are adequately 
informed about the protocol, the investigational product(s), and their trial‐related 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 34 ‐ 
duties and functions. 
 
5. The site should have sufficient data management resources to allow prompt data 
entry into the CRF.  Sites that have previously participated in trials coordinated by 
the same centre should have a proven track record of timely data entry. 
 
 
8.4 
SITE ASSESSMENT 
In addition and in compliance with the principles of ICH GCP, all site staff participating in the 
trial must complete the Signature and Delegation of Responsibilities Log and forward this to 
the Coordinating Centre.  An up‐to‐date copy of this log must be stored in the trial master 
file at the Coordinating Centre and the Investigator Site File (ISF) at the Site. 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 35 ‐ 
9 
SELECTION OF PARTICIPANTS  
The  eligibility  criteria  for  this  trial  have  been  carefully  considered.  There  will  be  no 
exceptions to eligibility requirements at the time of randomisation. The eligibility criteria 
are  the  standards  used  to  ensure  that  only  medically  appropriate  participants  are 
considered for this study. Participants not meeting the criteria will not be permitted to join 
the study. For the safety of the participants, as well as to ensure that the results of this 
study can be useful for making treatment decisions regarding other individuals as well as 
scientific conclusions, it is important that no exceptions be made to these admission criteria. 
 
Participants will be considered eligible for enrolment in this trial if they fulfil all the inclusion 
criteria and none of the exclusion criteria as defined below. 
 
 
9.1 
PARTICIPANT INCLUSION CRITERIA 
1. Men and women aged between 18 and 50 years on the day of screening 
2. BMI between 18‐30 
3. Seronegative for Adenovirus 4 serum neutralising antibodies  
4. Available for follow‐up for the duration of the study  
5. Willing and able to give written informed consent 
6. At low risk of HIV infection and willing to remain so for the duration of the study 
defined as: 
 no history of injecting drug use in the previous ten years 
 no gonorrhoea or syphilis in the last six months 
 no  high  risk  partner  (e.g.  injecting  drug  use,  HIV  positive  partner)  either 
currently or within the past six months 
 no unprotected anal or vaginal intercourse in the last six months, outside a 
relationship with a regular partner known to be HIV negative 
7. Willing to undergo HIV testing 
8. Willing to undergo a STI screen for chlamydia, gonorrhoea and syphilis 
9. Must agree to require male sexual partner to use condoms, from at least 14 days 
before the first vaccination until at least 4 months after the last 
10. If heterosexually active female capable of becoming pregnant, must (in addition to requiring 
male partner to use condoms) agree to use hormonal contraception, or to complete 
abstinence, from at least 30 days before the first vaccination until at least 4 months after the 
last. [Note: Acceptable hormonal contraception is combined (estrogen and progestogen 
containing) or progestogen‐only hormonal contraception associated with inhibition of 
ovulation. Complete abstinence can be used, when in line with the preferred and 
usual lifestyle of the subject. Periodic abstinence (calendar, symptothermal, post‐
ovulation methods), withdrawal (coitus interruptus), spermicides only, lactational 
amenorrhoea method, and IUD/IUS are not acceptable methods of contraception.]  
11. If sexually active male, must agree to use condoms from the day of first vaccination 
until at least 4 months after the last. [Note: Additional use of an effective method of 
contraception is recommended for any non‐pregnant female partner over the same 
period.]   
12. Agree  to  abstain  from  donating  blood,  eggs  or  sperm  from  the  day  of  first 
vaccination until at least 3 months after the end of their participation in the trial 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 36 ‐ 
13. Registered with a GP for at least the past month 
14. Entered and clearance obtained from The Overvolunteering Prevention System 
(TOPS) database1 
F1 Participants will be advised that they cannot enrol in any other trials of medicinal products during the period from screening to 
the final visit in Ad4HIV. All participants will be entered onto the TOPS database as a measure to prevent over volunteering. If 
staff discover that a participant is enrolled on another study during this period, they must immediately contact the Principal 
Investigator for advice. Decisions will be reviewed on a case by case basis and participant safety will be the primary concern 
 
 
9.2 
PARTICIPANT EXCLUSION CRITERIA 
1. Are pregnant or breast feeding, or living with anyone under the age of 5 years old or 
over 75 years old  
2. Have close contact with an immunocompromised individual thought to be at clinical 
risk from Adenovirus infection   
3. Clinically relevant abnormality on history or examination including: 
a. Liver disease with inadequate hepatic function  
b. Any  skin  condition  which  may  interfere  with  the  trial  assessment  of  the 
injection sites 
c. Haematological, metabolic, gastrointestinal  or cardio‐pulmonary disorders 
d. Uncontrolled infection; autoimmune disease, immunodeficiency  
4. Known hypersensitivity to any component of the vaccine formulations used in this trial, 
or have severe or multiple allergies to drugs or pharmaceutical agents 
5. History of severe local or general reaction to vaccination defined as 
 Local: extensive, indurated redness and swelling involving  most of the antero‐
lateral thigh or the arm, not resolving within 72 hours 
 General:  fever  ≥39.5oC  within  48  hours;  anaphylaxis;  bronchospasm;  laryngeal 
oedema; collapse; convulsions or encephalopathy within 72 hours 
6. Receipt of live attenuated vaccine within 60 days or other vaccine within 30 days of 
enrolment 
7. Receipt of an experimental vaccines containing HIV antigens, Ad4 and MVA‐C products 
at any time in the past 
8. Receipt of blood products or immunoglobin within 4 months of screening, or drugs that 
suppress  the  immune  system,  such  as  steroids  (including  inhaled  steroids,  excluding 
topical steroids unless applied to the upper arm), in the preceding 3 months 
9. Participating in another trial of a medicinal product, completed less than 30 days prior 
to enrolment 
10. HIV 1 or 2 positive or indeterminate on screening  
11. Positive for antibodies to hepatitis B surface antigen, hepatitis C antibody or serology 
indicating active syphilis requiring treatment  
12. Clinically  significant  positive  reaction  in  antinuclear  antibody  screen  or  clinically 
significant immunoglobulin (IgA, IgG or IgM) values 
13. Grade 1 or above clinically significant routine laboratory parameters  
14. Unable  to  read  and/or  speak  English  to  a  fluency  level  adequate  for  the  full 
comprehension of procedures required in participation and consent 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 37 ‐ 
15. Women with a history of toxic shock syndrome 
16. Women using an intrauterine device for contraception (as incompatible with softcup 
sampling) 
17. Any other significant disease, disorder or finding which may significantly increase the 
risk  to  the  volunteer  because  of  participation  in  the  study,  affect  the  ability  of  the 
volunteer to participate in the study or impair interpretation of the study data  
18. Unlikely to comply with protocol 
 
 
9.3 
NUMBER & SOURCE OF PARTICIPANTS 
Forty eight healthy participants for Part 1, plus an additional 12 healthy participants for Part 
2 will mainly be recruited through advertising, and through the investigator site's healthy 
volunteer  database,  and  given  contact  details.  They  will  be  provided  with  further 
information about the study and asked to complete a short interview (by telephone or in 
person) to assess their suitability. They will be given or sent an information sheet. 
 
 
9.4 
SCREENING PROCEDURES & PRE‐ENROLMENT INVESTIGATIONS 
Written informed consent must be obtained from participants after explanation of the aims, 
methods,  benefits  and  potential  hazards  of  the  trial  and  BEFORE  any  trial‐specific 
procedures are performed or any blood is taken for the trial. Participants should be given a 
minimum of 24 hours after receiving the information sheet to sign a consent form. It must 
be  made  completely  and  unambiguously  clear  that  the  participant  is  free  to  refuse  to 
participate in all or any aspect of the trial, at any time and for any reason, without affecting 
their treatment. 
 
At the screening visit the volunteer will be allocated a Trial ID.  The trial will be discussed in 
detail, and any questions about the study will be answered. If participants are willing and 
interested they will be asked to sign the informed consent form. 
 
Signed  consent  forms  must  be  kept  by  the  investigator  and  documented  in  the  medical 
notes and case report form (CRF) and a copy given to the participant.  
 
After written informed consent has been collected, assessments and investigations will be 
undertaken according to the schedule in Table 2. These include demographic, sexual and 
medical  histories,  general  examination,  and  collection  of  urine  and  blood  samples  for 
routine  laboratory  investigations.  Samples  for  tests  for  sexually  transmitted  infections 
including HIV will be collected.   As soon as the required test results are available, data will 
be entered into the CRF and medical notes and the results of the screening investigations 
will be reviewed and eligibility signed off by a physician. 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 38 ‐ 
10 REGISTRATION &  DISTRIBUTION INTO TREATMENT GROUPS  
10.1 
RANDOMISATION PRACTICALITIES  
10.1.1 PART 1  
The enrolment visit will take place within 90 days after the screening visit and will be the 
same  day  as  the  first  vaccination.    Assessments  and  procedures  will  be  undertaken 
according to the schedules in Table 2, and data entered on the CRF.   
 
The study will use sentinel dosing as a safety precaution. The first 6 participants successfully 
enrolled into the trial will be sequentially pre‐allocated to treatment groups B, C, D, F, G and 
H. The first participant will be enrolled to group B. The safety data for this participant will be 
reviewed  at  day  7  before  enrolling  the  next  participant  to  group  C.  This  process  will  be 
repeated for the other groups. This will ensure an escalation of the number of Ad4‐EnvCN54 
administrations combined with either CN54gp140 protein boosts (B‐D) or co‐administered 
CN54gp140 and MVA‐CN54 (F‐H).   
 
After the accumulated safety data (up to day 7) for the 6th participant has been reviewed, on 
their first day of dosing the remaining participants will be block randomised into groups as 
follows:  
 Block 1 (n=10): A, A, B, C, D, E, E, F, G, H 
 Blocks 2‐6 (n=8/block): A, B, C, D, E, F, G, H 
 
10.1.2 PART 2 
Six additional healthy participants per group will be recruited and randomised to the best 
two  regimes  from  A‐D  (Ad4‐EnvCN54/CN54gp140)  and  E‐H  (Ad4‐EnvCN54/MVA‐
CN54/CN54gp140).  The visits schedule for participants in Part 2 will be the same as that  for 
participants  in  Part  1.  Assessments  and  procedures  will  be  undertaken  according  to  the 
schedules in Table 2, and data entered on the CRF.   
 
10.1.3 PASS CRITERION FOR PART 2 
The  group  selection  for  Part  2  is  based  on  results  generated  from  the  primary 
immunogenicity endpoint (Week 26, Visit 9).  In the event that more than one group has the 
same  number  of  responders,  mucosal  antibody  titre  will  be  used  to  rank  groups  to 
determine  which  to  take  forward  to  Part  2.  Should  mucosal  titers  be  indistinguishable 
between groups, then serum antibody levels will be taken into consideration in the selection 
of groups to progress to Part 2. The criterion for a positive mucosal response, and methods 
for ranking groups on the basis of mucosal and serum antibody titers, will be specified in the 
LAP.  If any groups are associated with unacceptable product related adverse events, they 
will be discontinued from further study.  
 
10.1.4 GP NOTIFICATION 
With the participant's consent, shortly after randomisation a letter should be sent to the 
general practitioner informing him/her of the trial and the participant's involvement in the 
trial. 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 39 ‐ 
10.2 
RANDOMISATION CODES AND & UN‐BLINDING 
This  is  a  single‐blind,  randomised  trial  with  placebo  controls.    Participants  will  be  block‐
randomised centrally to the study groups shown in Table 1, using a  computer‐generated 
algorithm with a back‐up manual procedure.  Randomisation will be stratified on the basis 
of gender.  All participants in Part 1 and Part 2 will be blinded to the vaccine regime group to 
which they have been assigned.  The laboratory teams undertaking immunological analysis 
will also be blinded to group and dosing regimen to prevent bias in analysis. The clinical 
team will remain unblinded to the vaccine regime of trial participants throughout. 
 
10.3 
CO‐ENROLMENT GUIDELINES  
Participants will be advised that they cannot enrol in any other trials during the period from 
screening to the final visit in Ad4HIV. All participants will be entered onto the TOPS (The 
Over volunteering Prevention System) database as a measure to prevent over volunteering.    
 
If staff discover that a participant is enrolled on another study during this period, they must 
immediately contact the Principal Investigator for advice. Decisions will be reviewed on a 
case by case basis and participant safety will be the primary concern. 
 
10.4 
PARTICIPANT’S COMPLIANCE & ADHERENCE 
In consenting to the trial, participants are consenting to trial treatment, trial follow‐up and 
data collection. However, an individual participant may stop treatment early or be stopped 
early for any of the following reasons: 
 
 Unacceptable adverse event 
 Inadequate compliance with the protocol in the judgement of the treating physician 
 Withdrawal of consent by the participant 
 
As the volunteer’s participation in the trial is voluntary, they may choose to discontinue the 
trial treatment at any time without loss of benefits to which they are otherwise entitled. 
Although  the  participant  is  not  required  to  give  a  reason  for  discontinuing  their  trial 
treatment, a reasonable effort should be made to establish this reason while fully respecting 
his/her rights. 
 
Participants should remain in the trial for the purpose of follow‐up and data analysis (unless 
the volunteer withdraws their consent from all stages of the trial).  Data will be kept and 
included for volunteer who stop follow‐up early. 
   
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 40 ‐ 
11 TREATMENT OF PARTICIPANTS  
11.1 
VACCINE PRODUCTS & ADMINISTRATION 
CN54gp140 / MPLA: 
CN54gp140 / MPLA will be provided by UK HIV Vaccine Consortium (UKHVC) in 2 mL Schott 
type 1 glass vials.  One dose of CN54gp140/MPLA will be 100µg of protein and 5µg of MPLA, 
in a volume of 0.4mL.     
 
MVA‐CN54: 
MVA‐CN54 will be provided by UK HIV Vaccine Consortium in 2 mL Schott type 1 glass vials. 
One dose of MVA‐CN54 delivers 1.0 x 108/TCID50  in a volume of 0.5 mL.    
 
Ad4‐EnvCN54: 
Ad4‐EnvCN54  will  be  provided  by  PaxVax  as  a  lyophilised  powder.    One  dose  of  Ad4‐
EnvCN54 delivers 1010VP per capsule.   
 
Oral Placebo  
Oral placebo capsules were developed by Patheon UK Ltd, to match the active Ad4‐EnvCN54 
oral  capsule.   Hypromellose  (HPMC)  capsule  shells  were  filled  with  sucrose  supplied  as  a 
white crystalline powder, and then coated with an enteric solution.    
 
Intramuscular Placebo 
Intramuscular placebo for injection vials were developed by Polymun Scientific Ltd; Austria, 
to  match  the  active  MVA‐C  investigational  product.   The  placebo  comprises  a  liquid 
formulation containing 20 mM Tris / 0.15 M NaCl (pH 7.5).   Tris is used as buffer substance, 
sodium chloride for appropriate osmolality and hydrochloric acid for buffer pH adjustment. 
 
Investigational medicinal product vials and bottles will be labelled and packaged according 
to regulatory requirements.  The PI will ensure that staff administering the vaccines have 
been appropriately trained in the written procedures for delivery of the vaccines.  
 
Investigators and trained members of the clinical team will be encouraged to administer the 
vaccine as soon as possible and within 2 hours of being removed from cold storage.  The 
date and time of administration will be recorded in the Case Report Form (CRF) and medical 
notes. 
 
Participants will receive I.M injections, and Ad4 or placebo administered orally, as described 
in the schedule of doses (Table 1).  In Part I, 36 participants will receive Ad4CN54‐Env in 
combination  with  CN54gp140,  or  MVA‐CN54  and  CN54gp140,  whilst  12  participants  will 
receive  an  oral  placebo  in  combination  MVA‐CN54  and/or  CN54gp140.  Dosing  will  be  at 
weeks 0 (Month 0), 12 (Month 3) and 24 (Month 6).  The two best vaccine regimes from B‐D 
(Ad4/gp140) and F‐H (Ad4/MVA‐C/gp140), provided they meet the pass criterion, will be 
expanded and 12 participants will be screened and enrolled for Part 2 of the study.    
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 41 ‐ 
11.2 
ACCOUNTABILITY FOR USED AND UNUSED SUPPLIES  
The PI will ensure that the IMPs and placebos are stored and dispensed in accordance with 
the  protocol  and  local  pharmacy  procedures, and  that  records  are  maintained  of  receipt, 
dispensing  and  return/destruction  of  all  supplies.    The  PI  must  ensure  that  all  IMP  and 
placebo  supplies  are  kept  in  a  secure  area  accessible  only  to  authorised  individuals,  and 
maintained in storage at the following temperatures:  
 
 Ad4‐EnvCN54 at –20 ±5 °C  
 Matched oral placebo at –20 ±5 °C 
 MVA‐CN54 at ≤–70 °C 
 CN54gp140/MPLA at 2–8 °C 
 
Matched I.M placebo at 2–8 °C 
                                                            
Upon  receipt  of  supplies,  a  designated  member  of  staff  will  conduct  an  inventory  and 
acknowledge receipt to the supplier.   A record must be kept of all Ad4‐EnvCN54, MVA‐CN54 
and CN54gp140 / MPLA used during the trial. This will include the description (lot numbers 
and expiry dates) and quantity of IMP received at the trial site and date of receipt, as well as 
a record of when (date of administration) and to whom (volunteer trial ID) it was dispensed. 
 
At the end of the trial, IMP accountability will be checked by the designated member of staff 
responsible for the inventory and trial monitors. The Sponsor and the PI will retain copies of 
the complete IMP accountability records.  All unused supplies will be retained at the trial 
site until the Sponsor gives instructions for their return/destruction. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 42 ‐ 
11.3 
VACCINATION SCHEDULE – PART 1 & PART 2 
The doses, methods and schedule of immunisation are described below. 
Table 1:     Schedule of Doses and Method of Vaccinations 
PART I 
 
PART II 
 
Group 
N 
Month 0 
Month 3 
Month 6 
 
N 
Vaccinations 
1,2,&3 
ARM 1 
A 
6 
Oral 
placebo 
 
CN54gp140  
+ Oral 
placebo 
+I.M placebo 
CN54gp140  
+ Oral 
placebo 
+I.M placebo 
12 
 
Selected 
dosage from 
Part I 
 
B 
6 
Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140  
+ Oral 
placebo 
+I.M placebo 
CN54gp140  
+ Oral 
placebo 
+I.M placebo 
C 
6 
Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140  
+ Ad4‐
EnvCN54 
+I.M placebo 
CN54gp140  
+ Oral 
placebo 
+I.M placebo 
D 
6 
Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140  
+ Ad4‐
EnvCN54 
+I.M placebo 
CN54gp140  
+ Ad4‐
EnvCN54 
+I.M placebo 
ARM 2 
E 
6 
Oral 
placebo 
 
CN54gp140 
+ MVA‐CN54 
+ Oral 
placebo 
CN54gp140  
+ MVA‐CN54 
+ Oral 
placebo 
F 
6 
Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140 
+ MVA‐CN54 
+ Oral 
placebo 
CN54gp140 
+ MVA‐CN54 
+ Oral 
placebo 
G 
6 
Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140  
+ MVA‐CN54 
+ Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140  
+ MVA‐CN54 
+ Oral 
placebo 
H 
6 
Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140 
+ MVA‐CN54 
+ Ad4‐
EnvCN54 
CN54gp140  
+ MVA‐CN54 
+ Ad4‐
EnvCN54 
 
48 
 
max 
12 
 
 
 
 
11.4 
COMPLIANCE & ADHERENCE 
All vaccinations will be administered by clinically trained site staff to ensure compliance.  

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 43 ‐ 
 
 
11.5 
DOSE MODIFICATIONS, INTERRUPTIONS & DISCONTINUATIONS 
There are no planned modifications to dose, other than discontinuation. 
The  schedule  may  be  modified  if  a  participant  has  symptoms  or  signs  on  the  day  of 
scheduled immunisation, and the investigator considers it best to defer the immunisation. 
The participant will be asked to return for review within the window period of a scheduled 
immunisation.  
The  Principal  Investigator  may  decide  to  permanently  discontinue  dosing  in  a  participant 
who  has  received  one  or  more  vaccinations,  if  it  is  deemed  that  continuing  might 
compromise  the  participant’s  wellbeing  or  interfere  with  the  achievement  of  the  trial’s 
objectives.  Participants will be encouraged to continue to attend trial visits for sampling 
and safety monitoring.   
Discontinuation of dosing is essential following a grade 3 or 4 clinical or laboratory event 
(confirmed  on  examination  or  repeat  testing  respectively)  which  is  considered  possibly, 
probably or definitely related to the vaccine and which did not resolve within 72 hours.  All 
participants will be followed up fo the duration of the study and samples will be collected at 
the allotted times.  
Dosing must be discontinued in participants who become pregnant or HIV infected. 
Participants may decide to discontinue dosing. They will be encouraged to provide a reason, 
and to remain in follow‐up. If the participant explicitly states their wish not to contribute 
further data to the study, the PI should be informed in writing.   
 
Both  the  PI  and  the  coordinator  centre  should  be  informed  as  soon  as  possible  if  a 
participant chooses to stop receiving vaccines or to withdraw from the trial, and within 1 
working day of a decision being taken to discontinue a participant when that decision is 
informed by an adverse event (Section 13.1). 
 
 
11.6 
CLINICAL MANAGEMENT OF ADVERSE EVENTS  
 
Adverse events will be managed by the clinical trial team who will assess and treat the event 
as  appropriate,  including  referral  to  an  independent  physician  and/or  the  participant’s 
General  Practitioner  if  required.  Clinically  significant  abnormalities  detected  following 
clinical examination or routine laboratory tests will be managed as determined by local PI or 
delegate. 
 
 
 
 
 
11.7 
NON‐TRIAL TREATMENT   
As  stated  in  the  exclusion  criteria,  participants  should  not  have  received  other 
immunisations, blood products, immunoglobulin, immunosuppressive medicines or other trial 
medication within specified periods prior to enrolment.  This applies during the trial through 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 44 ‐ 
to  the  final  safety  visit  28  weeks  after  enrolment,  4  weeks  after  the  last  scheduled 
immunisation, unless the treatment is required for an emergency. 
 
Should a participant require immunisation for the purposes of travel, occupation or other 
clinical need during the trial, the request will be reviewed by the Principal Investigator who 
will  advise  on  timing  and  whether  or  not  the  trial  immunisation  schedule  needs  to  be 
amended. 
 
Participants will be allowed to continue with hormonal contraception if this forms part of 
their regular appropriate contraception plan. Details will be recorded on the screening and 
concomitant medication CRF.  
 
All  concomitant  medication  will  be  recorded  on  the  CRF,  including  any  dispensed  by  the 
investigators in the management of adverse events or reactions.  
 
 
11.8 
ISSUES RELATED TO HIV   
A  4th generation  HIV  antibody/antigen  assay,  the  standard  laboratory  method  for 
diagnosing HIV infection, will be used to screen participants.  An HIV test will be performed 
at  two  time‐points  in  the  study:  the  screening  visit,  and  the  final  visit  48  weeks  from 
enrolment.  During the study clinic staff will determine whether the risk status for HIV has 
changed and repeat tests if necessary.   
After  completing  the  study,  regardless  of  whether  or  not  they  are  reactive  in  HIV  tests, 
participants will be provided with appropriate certification of their HIV antibody status, and 
(if clinically indicated) invited to return to the clinical centre for re‐testing until such time as 
the test becomes negative. 
 
 
11.9 
VERIFICATION OF HIV STATUS OF PARTICIPANTS 
In the event of an equivocal or positive result which the PI is not convinced to be vaccine‐
induced,  a  specimen  will  be  processed  through  a  range  of  assays  according  to  the  local 
laboratory  operating  procedures  to  establish  the  HIV  status  of  the  individuals.  A 
confirmatory specimen will be collected at a later date, if the first result suggests that the 
participant is HIV infected.   
 
 
 
11.10  HIV INFECTION 
In the unexpected circumstances that a participant in the trial acquires HIV infection, they 
will be referred for clinical care and counselling.  Participants will be referred initially to a 
specialist physician for a full discussion of the clinical management of HIV infection. Further 
investigations will be undertaken as necessary. Should the participant prefer to be managed 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 45 ‐ 
at a hospital closer to their home, this will be arranged.  Referral for counselling will be 
arranged by the specialist physician, to a counsellor at their clinical centre. 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 46 ‐ 
12 ASSESSMENTS & FOLLOW‐UP  
12.1 
ASSESSMENTS AT SCREENING 
12.1.1 INFORMED CONSENT PROCESS  
A  site‐specific  Consent  Form  will  be  submitted  and  approved  by  the  Independent  Ethics 
Committee (IEC)/ Ethics Review Board (ERB).  
 
Participant  Information Sheet 
A  qualified  member  of  the  study  staff  will  conduct  the  informed  consent  process  by 
reviewing  the  Participant    Information  Sheet  with  the  volunteer,  and  answering  any 
questions. This process will be documented in the clinic notes.   
 
Consent Form 
The volunteer's consent to participate must be obtained by him/her signing and dating the 
Consent Form. The person obtaining consent will also sign.  
 
The signed/marked and dated Informed Consent Document must remain at the study site. A 
copy of the signed/marked and dated Informed Consent Document, and PIS will be offered 
to the volunteer to take home.  
 
 
12.1.2 DEMOGRAPHICS, MEDICAL HISTORY AND PHYSICAL EXAMINATION 
Demographic information such as age and ethnic origin will be collected at screening and 
entered onto the CRF. 
  
A  past  and  current  medical  history  will  be  collected  at  screening  during  a  face  to  face 
structured interview using a source document, such that relevant aspects of eligibility can 
be adequately assessed.  
 
The general physical examination will include weight (kg), height (cm), calculation of BMI, 
temperature,  blood  pressure  and  heart  rate  (vital  signs),  inspection  of  the  skin  and 
respiratory,  cardio‐vascular,  abdominal,  and  neurological  systems.    An  assessment  of 
cervical, axillary and inguinal lymph nodes will also be undertaken.  
 
 
12.1.3 HIV RISK ASSESSMENT & SEROLOGY TESTING  
An HIV risk assessment will be performed according to the relevant eligibility criterion. 
 
The following will be collected from all participants: 
 Serology for HIV and syphilis  
 Serology for markers of hepatitis B  and hepatitis C infection 
 Urine for Chlamydia and gonorrhoea at screening 
 Serology for Ad4 neutralising antibodies 
 Serology for antinuclear antibodies and immunoglobulins IgA, IgG and IgM 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 47 ‐ 
 
12.1.4 ROUTINE LABORATORY PARAMETERS 
Peripheral  blood  will  be  collected  by  trained  staff  into  the  appropriate  containers  and 
transported to the local laboratory.  
 
All laboratory assessments, except urine pregnancy tests which will be done by the trained 
individuals on site, will be done by the local laboratory. 
The following parameters will be collected from all participants: 
 Hb, total WBC, neutrophils, lymphocytes and platelets 
 creatinine, total bilirubin, alkaline phosphatase (ALP) and alanine aminotransferase 
(ALT)  
 Urine test (female participants) to exclude pregnancy 
 
 
 
 
12.2 
VACCINATION AND FOLLOW‐UP VISITS 
 The assessments that will be performed at each visit are described in Table 2.  
 Participants will be required to make 11 scheduled outpatient visits over the course 
of  48  weeks.  Time  0  will  start  on  the  day  of  enrolment,  which  is  also  the  day  of 
randomisation  and  the  first  immunisation,  and  must  be  within  90  days  after 
screening. 
 Vaccinations will take place at Weeks 0 (Month 0), 12 (Month 3) and 24 (Month 6). 
 Serum  and  peripheral  blood  mononuclear  cells  (PBMC)  will  be  collected  for 
immunogenicity at Weeks 0 (enrolment), 4, 12, 16, 24, 25, 26, 28 and 48.     
 Adverse  events  will  be  assessed  during  the  enrolment  visit  before  and  after 
immunisations and at every visit thereafter until the final safety visit at Week 28; 
thereafter only serious adverse events will be recorded.   
 Injection sites will be inspected vaccination days at Weeks 12 and 24 (pre‐dose and 
60 (+/–10) min post‐dose), and at Weeks 13 and 25. 
 Symptom‐directed physical examinations will be done at Week 0 and at every visit 
thereafter until the final safety visit at Week 28. 
 Vital signs will be done on vaccination days (pre‐dose and 60 (+/–10) min post‐dose) 
and at Weeks 1, 13, 25, 26 and 28. 
 Concomitant medications will be collected at every visit up to the final safety safety 
visit. 
 Blood  for  routine  laboratory  safety  parameters  will  be  collected  at  Weeks  0 
(enrolment), 1, 12, 13, 24, 25, 26 and 28 and at any other visit if clinically indicated. 
 Mucosal samples for antibody responses (genital / rectal / nasal) will be collected at 
Weeks 0, 4, 12, 16, 24, 26 and 48.  
 Urine pregnancy test will be assessed at Weeks 0, 12, 24 and 28. 
 Rectal swabs for Ad4‐EnvCN54 PCR will be assessed at Weeks 0, 1, 4, 13, 16, 25, 26, 28 
and 48. 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 48 ‐ 
 Rectal biopsies will be assessed at Weeks 0, 26 and 48 for participants in Part 2 of 
the clinical trial only.  Participants may opt out of this procedure.   
 
12.2.1  ADDITIONAL VISITS 
Additional  visits  and  assessments  may  be  required  to  evaluate  an  adverse  event,  and/or 
identify a diagnosis. These are compatible with the protocol. 
The safety assessments are intense. Participants will be asked to remain in clinic for about 1 
hour following each immunisation, and to complete a diary card until the day 7 safety visit. 
They will be advised to call the clinic staff if they are concerned, and 24 hour cover will be 
available.  
Referral to an independent specialist with the appropriate expertise will be arranged if there 
is uncertainty about the relationship to vaccine. 
 
12.2.2  VISIT WINDOWS 
The second and third vaccination visits scheduled for weeks 12 and 24 will be compliant 
with the protocol if they take place ‐7 / +14 days either side of the target date determined 
by the date of the previous vaccination. If there is a delay >4 weeks a decision will be made 
by the TMG (see section 20.1) as to whether immunisation will continue. 
The post‐immunisation safety visits scheduled for weeks 1, 13 and 25 will be compliant with 
the protocol if they take place +/‐ 1 day of the target date determined by the date of the 
previous vaccination.  
The primary endpoint visit (Visit 9; Week 26) and final safety visit scheduled for week 28 will 
be compliant with the protocol if they take place + 2 days either side of the target date 
determined  by  the  date  of  the  third  vaccination.  The  follow‐up  visit  at  Week  48  will  be 
compliant  with  the  protocol  if  it  takes  place  ±14  days  either  side  of  the  target  date 
determined by the date of the third vaccination. 
 
 
12.3 
PROCEDURES FOR ASSESSING SAFETY AND TOLERABILITY  
12.3.1  ADVERSE EVENT ASSESSMENT 
Information on adverse events will be collected through questions at every visit from and 
including the enrolment visit up to week 28, as indicated in Table 2.   
The investigator or delegate will record the diagnosis or the symptoms if a diagnosis is not 
apparent, the date of onset and the date of resolution if appropriate.    
 
The  relationship  (to  vaccine)  and  seriousness  of  the  event  will  be  determined  by  the 
investigator or delegate according to the definitions provided in section 13.3.  All of this 
information will be recorded in the adverse event CRF. 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 49 ‐ 
12.3.2  PHYSICAL EXAMINATION AND VITAL SIGNS 
The  general  and  symptom‐directed  examinations,  and  assessment  of  vital  signs  will  be 
performed at time points specified in Table 2.  Additional physical examinations and vital 
signs  assessments  may  be  performed  if  indicated  by  the  results  of  scheduled  safety 
assessments.   
 
 
12.3.3  ROUTINE SAFETY BLOODS AND URINE PREGNANCY 
A  pregnancy  test  will  be  performed  by  analysis  of  a  urine  sample  for  Human  Chorionic 
Gonadotrophin (HCG) collected from female participants as detailed in Table 2. The analysis 
will be conducted by a member of the study team. 
 
Peripheral blood will be collected and analysed for the following parameters at the time 
points  specified  in  Table  2,  and  at  additional  time  points  if  clinically  indicated  to  further 
evaluate or follow up adverse events. 
 
Blood 
 Creatinine, ALT, alkaline phosphatase, total bilirubin  
 Hb, total WBC, neutrophils, lymphocytes, platelets 
  
 
12.3.4  SOLICITED LOCAL AND SYSTEMIC ADVERSE EVENTS 
Various  local  and  systemic  adverse  events  are  known  to  be  associated  with  licensed 
vaccines, and are referred to as ‘solicited adverse events’.   
 
This information will be collected from all study participants on the day of immunisation  
and at the day 7 safety visit following each immunisation, through direct questions asked 
during  a  structured  face  to  face  interview  and  through  examination  according  to  the 
schedule.  
 
Participants will also be asked to complete a diary card recording solicited adverse events 
that start from each immunisation until the day 7 safety visit. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 50 ‐ 
 
TABLE 3:        SOLICITED ADVERSE EVENTS 
 
Type 
Event 
Local AEs 
(Immunisation 
site) 
Pain 
Tenderness   
Erythema / Discolouration 
Warmth 
Itching 
Swelling   
Systemic Clinical 
AEs 
Abnormally raised temperature 
Chills / rigors 
Myalgia / flu‐like general muscle aches 
Malaise  
Excess fatigue 
Headache 
Nausea / Vomiting 
Abdominal Pain 
Diarrhoea  
Sore throat  
 
The events will be graded according to Appendix 1. 
 
Relationship to the product, the assumption is that any of these solicited events starting 
within 7 days of an immunisation are at least possibly related. If the onset is beyond 7 days, 
the event will be recorded on the adverse event CRF and a relationship determined by the 
investigator or delegate. 
 
 
12.3.5  NON‐SOLICITED ADVERSE EVENTS  
Non‐solicited AEs starting from the first vaccination until the final safety visit (Week 28) will 
be  captured  and  reported  on  the  adverse  event  CRF.  When  making  a  non‐solicited  AE 
enquiry, staff should ask a non‐leading question such as 'how have you been feeling?' 
 
 
12.3.6  FOLLOW‐UP OF ADVERSE EVENTS AND PREGNANCY 
The Investigator will make every effort to monitor all adverse events, regardless of severity, 
until resolution or stabilisation in order to report this on the CRF  (see section 15.1.1) during 
the trial. 
After the database is locked and the trial is closed, any additional information about adverse 
events or pregnancy that comes to the attention of an investigator should be reported by 
email to the Principal Investigator. 
 
 
 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 51 ‐ 
12.3.7  SERIOUS ADVERSE EVENTS 
A serious adverse event is defined in section 13.1. These will be collected throughout the 
entire study period. 
All serious adverse events should be reviewed by the PI and discussed at the next TMG call.  
The assessment should include consideration of whether or not to discontinue dosing or to 
withdraw a participant from the trial.   
For all serious adverse events, the investigator will complete the serious adverse event form 
as soon as becoming aware of the event and, within 24 hours, will: 
 Email  it  to  the  Coordinating  Centre  (Clinical  Trials  Manager)  as  well  as  notify  by 
phone the form has been sent 
 Email it to the Imperial Joint Research Compliance Office  
 
 
12.4 
PROCEDURES FOR ASSESSING IMMUNOGENICITY 
Samples  (indicated  below)  will  be  collected  at  the  timepoints  specified  in  Table  2  and 
transferred to the Shattock Laboratory for analysis.  
 
Cervico‐vaginal  secretion  samples  will  be  collected  from  female  participants  using  a 
commercially available, self‐inserted menstrual cup, at the time points indicated in Table 2, 
except  at  visits  when  female  participants  are  menstruating  in  which  case  cervico‐vaginal 
secretions will not be collected. In the case of light spotting, a sample will be collected.  
 
Rectal secretion samples will be collected from male and female participants.  Absorbent 
swabs will be held against the rectal wall for 2 minutes.  Should a participant not wish to 
have a proctoscopy the swab may be inserted by the nurse or doctor or self‐inserted by the 
participant, 3 cm into the anal canal. 
 
Semen samples will be collected from male participants whilst within the clinical trials unit 
or brought into the clinic following donation at the time points indicated in Table 2. Semen 
samples should be donated following 24 hours of sexual abstinence, and produced ≤2 hours 
before being handed to clinic staff. 
 
Nasal  secretion  samples  will  be  collected  from  male  and  female  participants  using  nasal 
synthetic absorptive matrix at the time points indicated in Table 2.   
 
Rectal biopsies (Part 2 only) 
Participants may opt out of this procedure. Rectal biopsies will be collected from the rectal 
walls of male and female participants with a Sarratt biopsy forcep (or similar sterile, single‐
use disposable device).  Biopsies may be taken on the left and/or right rectal wall at each 
scheduled time‐point, from sites selected by the doctor performing the procedure such that 
high quality samples can be safely taken. The time‐points are sufficiently spaced to allow the 
mucosa to heal completely between biopsies.  
 
Blood and Serology Specimens 
For measurement of antibodies in serum, 6ml peripheral venous blood will be collected into 
an appropriate blood collection tube, and then processed to obtain serum. 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 52 ‐ 
Blood for Immunogenicity assays requiring PBMC  
For assessment of T‐cell responses, 40‐50ml ml of peripheral venous blood will be collected 
into tubes containing sodium heparin as an anti‐coagulant, mixed by inverting gently several 
times and then processed to obtain PBMC which will be frozen and stored for future batch 
immunogenicity analysis. 
 
 
12.5 
PROCEDURES FOR ASSESSING AD4 SHEDDING  
 
Rectal swabs will be used to collect stool samples from male and female participants and 
the samples assessed for viral shedding by a polymerase chain reaction (PCR) assay.   
 
 
12.6 
CRITERIA FOR STOPPING TREATMENT GROUPS OR WHOLE TRIAL  
All trial immunisations will be put on hold in the event of a SAR or two severe ARs, and in 
the event of every subsequent SAR or severe AR. 
In the event of a SAR, the PI should notify the sponsor within 24 hours of becoming aware, 
and the PI will arrange for any necessary expert reviews to take place.  
Further immunisations will be put on hold until the review is completed. 
A component of any expert review will be to consider whether or not further immunisations 
should be discontinued in the individual, and/or the trial. 
If  immunisations  are  put  on  hold,  the  TMG  will  determine  whether  or  not  to  call  an 
unscheduled meeting of the Independent Data Monitoring Committee (IDMC) to review the 
safety data, and whether or not to hold further immunisations until this has taken place. If 
an unscheduled IDMC is warranted, the Sponsor will be informed and the IDMC asked to 
make  a  recommendation  to  the  Principal  Investigator  and  the  Sponsor  about  continuing 
further immunisations.  
At any time if the study is put on hold (for example following the occurrence of a SAR) the 
Regulatory  authority  has  to  be  informed  of  the  temporary  halt  and  a  substantial 
amendment with relevant data has to be submitted to the MHRA for approval in case a 
decision to resume dosing is taken.  The Sponsor reserves the right to stop the whole trial at 
any time. 
 
 
12.7 
EARLY STOPPING & FOLLOW‐UP   
If a participant chooses to discontinue their trial treatment, they should always be followed 
up providing they are willing, that is, they should be encouraged to not leave the trial.  If 
they do not wish to remain on trial follow‐up, however, their decision must be respected 
and the participant will be withdrawn from the trial completely. The trial team should be 
informed of this in writing using the appropriate documentation.  
 
If the medical data collected during the participant’s participation in the trial are kept for 
research and analysis purposes, they must remain anonymised. Consent for future use of 
stored samples already collected can be refused when leaving the trial early (but this should 
be discouraged and should follow a discussion). 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 53 ‐ 
12.8 
WITHDRAWAL OF PARTICIPANTS  
Withdrawal means stopping all further visits.  
The reason(s) for withdrawal should be recorded in the CRF. 
All  participants  are  free  to  withdraw  from  the  trial  at  any  time,  for  any  reason,  without 
affecting  their  future  medical  care.  The  PI  may  decide  to  withdraw  a  participant  if  the 
investigator  deems  that  continuing  might  compromise  participant  wellbeing  or  interfere 
with the achievement of the trial’s objectives. 
Participants who are withdrawn due to an adverse event (AE) will be followed‐up until the 
event has stabilised. 
Withdrawn participants who have received any immunisations will be asked to undergo the 
procedures scheduled for the primary endpoint visit (Visit 9; Week 26), with the addition of 
an HIV test and (women only) a pregnancy test. 
 
 
12.8.1 
Policy for Replacing Withdrawals 
As the number of participants per group is small and hence each participant is essential to 
the study we will replace those that withdraw from the study before completion  of the 
week 26 visit. Based on previous experience we would expect potential withdrawal of 10‐
20%  of  participants,  predominantly  as  a  result  of  changes  in  their  personal  circumstance 
that prevents visit attendance. Should we observe a >20% drop out in any group based on 
perceived safety or tolerability (i.e. more than 1 participant per group), further replacement 
with be determined by the TMG. 
 
 
12.9 
END OF TRIAL DEFINITION 
The trial will be closed when all participants have made their final visit (Week 48; Visit 11), 
the data entered into the database and all queries resolved and the database locked.  There 
will be a final monitoring/closeout visit to the clinical site between the last visit and the 
database lock. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 54 ‐ 
13 SAFETY REPORTING 
The  principles  of  ICH  GCP  require  that  both  investigators  and  sponsors  follow  specific 
procedures when notifying and reporting adverse events or reactions in clinical trials. These 
procedures  are  described  in  this  section  of  the  protocol.    Section  13.1  lists  definitions, 
section 13.3 describes details of the responsibilities of the institutions/investigators. 
 
13.1 
DEFINITIONS 
The definitions of the EU Directive 2001/20/EC Article 2 based on the principles of ICH GCP 
apply to this trial protocol. These definitions are given in Table 4.  
 
TABLE 4 
TYPES OF ADVERSE EVENTS AND DEFINITIONS 
 
Type of Event   
Definition 
Adverse Event (AE) 
Any  untoward  medical  occurrence  in  a  patient  or 
clinical trial subject to whom a medicinal 
product has been administered including 
occurrences  that  are  not  necessarily 
caused by or related to that product. 
 
The Principal Investigator will use the following criteria 
when  deciding  whether  to  report  a  laboratory 
parameter  that  falls  outside  the  normal  range 
according  to  the  local  laboratory  guidelines  as  an 
adverse event: 
‐ 
If  it  is  clinically  significant1  and  Grade  1  (or 
above)  according  to  the  grading  system  in 
Appendix  1  the  abnormal  result  will  be 
recorded as an AE 
‐ 
 
Adverse Reaction (AR) 
Any  untoward  and  unintended  response  to  an 
investigational medicinal product related 
to any dose administered. 
‘Related’  means  possibly,  probably  or  definitely  as 
defined below. 
 
All solicited adverse events which start within 7 days of 
a  vaccination  will  be  automatically  classified  as  an 
adverse reaction. 
1 
An abnormal result will be deemed to be clinically significant if any of the following apply: 
 
The test result is associated with relevant accompanying symptoms 
 
Additional diagnostic tests or medication are indicated 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 55 ‐ 
 
As a consequence of the test result, an immunisation is delayed or further immunisations 
are discontinued 
 
The investigator considers the result to constitute an adverse event for any other reason 
 
 
TABLE 4 
 TYPES OF ADVERSE EVENTS AND DEFINITIONS CONTINUED 
 
Type of Event   
Definition 
Unexpected Adverse Reaction 
(UAR) 
An adverse reaction, the nature or severity of which is 
not  consistent  with  the  information 
about the medicinal product in question 
set  out  in  the  Summary  of  Product 
Characteristics 
(SPC) 
or 
Investigator 
Brochure (IB) for that product. 
Serious Adverse Event (SAE) or 
Serious Adverse 
Reaction (SAR) or 
Suspected 
Unexpected Serious 
Adverse Reaction 
(SUSAR) 
Respectively  any  adverse  event,  adverse  reaction  or 
unexpected adverse reaction that:  
 Results in death 
 Is life‐threatening* 
 Requires  hospitalisation  or  prolongation  of 
existing hospitalisation** 
 Results in persistent or significant disability or 
incapacity 
 Consists  of  a  congenital  anomaly  or  birth 
defect 
 Is another important medical condition*** 
Notes: 
‘A threat to life’ refers to an event or reaction in which 
the  patient  was  at  risk  of  death  at  the  time  of  the 
event; it does not refer to an event or reaction which 
hypothetically  might  have  caused  death  had  it  been 
more severe. 
If  an  AE  is  serious  and  unexpected  and  considered 
possibly,  probably  or  definitely  related  to  study 
product according to the classification below then it 
meets  the  criteria  for  a  SUSAR  and  should  be 
reported accordingly.  
 
*The term life‐threatening in the definition of a serious event refers to an event in which the patient is at risk of death at the time of the 
event;  it  does  not  refer  to  an  event  that  hypothetically  might  cause  death  if  it  were  more  severe,  for  example,  a  silent  myocardial 
infarction. 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 56 ‐ 
**Hospitalisation is defined as an inpatient admission, regardless of length of stay, even if the hospitalisation is a precautionary measure 
for  continued  observation.  Hospitalisations  for  a  pre‐existing  condition,  that  has  not  worsened  or  for  an  elective  procedure  do  not 
constitute an SAE. 
 
*** Medical judgement should be exercised in deciding whether an AE or AR is serious in other situations. The following should also be 
considered serious: important AEs or ARs that are not immediately life‐threatening or do not result in death or hospitalisation but may 
jeopardise the subject or may require intervention to prevent one of the other outcomes listed in the definition above; for example, a 
secondary malignancy, an allergic bronchospasm requiring intensive emergency treatment, seizures or blood dyscrasias that do not result 
in hospitalisation or development of drug dependency. 
 
13.2 
REPORTING ADVERSE EVENTS 
Adverse Events should be recorded on the appropriate CRF. 
 
All  SAEs  should  be  reported  to  the  sponsor  within  24  hours  of  the  Clinical  Investigator 
becoming aware of the event fulfilling the criteria. The SAE form should be completed and 
emailed to the Clinical Trials Manager and Joint Research Compliance Office.  The minimum 
criteria required in reporting a SAE are the participant identifiers (Trial ID/Date of Birth), 
reporting  source  (name  of  Investigator),  and  why  the  adverse  event  is  identifiable  as 
serious. 
 
 
Other important adverse events that should be reported to the sponsor within 24 hours of 
the Clinical Investigator becoming aware of the event, include 
 
allergic bronchospasm requiring intensive emergency treatment 
 
a seizure 
 
any adverse event that results in discontinuation of the immunisation schedule 
 
any adverse event that requires intervention to prevent a threat to life or death 
 
 
 
 
Investigators  should  notify  the  Coordinating  Centre  of  all  SAEs  within  24  hours  of  the 
investigator becoming aware of the event, from the time of registration until the end of 
trial. SARs and SUSARs must be notified to the Coordinating Centre until trial closure.  
 
Upon  receipt  of  a  SAE  form  at  the  Coordinating  Centre,  the  PI  (or  a  medically‐qualified 
delegate) will review all SAE reports received. The causality assessment given by the local 
investigator at the hospital cannot be overruled; in the case of disagreement, both opinions 
will be provided in any subsequent reports. 
 
SAE REPORTING AND IMPORTANT AE NOTIFICATION 
Within 24 hours of becoming aware of an SAE or important AE, please complete the SAE 
form, and email the coordinating centre (Clinical Trials Manager) to notify on: 
Ad4HIV_trial@imperial.ac.uk 
 
Additionally, please email a completed paper SAE form to the Imperial Joint Research 
Compliance Office  (JRCO) on: 
Email jrco.ctimp.team@imperial.ac.uk 
SAE REPORTING AND IMPORTANT AE NOTIFICATION 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 57 ‐ 
 
The PI will assess whether the event qualifies in seriousness and relationship as a Suspected 
Unexpected Serious Adverse Reaction (SUSAR). Fatal and life‐threatening SUSARs must be 
reported  to  the  MHRA  within  7  days  of  day  0  which  is  defined  as  the  day  the  sponsor 
became aware of the event. Relevant follow‐up information should be sought and a further 
report completed as soon as possible and submitted within 8 additional days. SUSARs which 
do not result in death or a threat to life should be reported within 15 days of day 0. Ultimate 
responsibility for classification resides with the study Sponsor. 
 
The team at the Coordinating Centre is primarily responsible for the reporting of SUSARs 
and  other  SARs  to  the  sponsors  and  regulatory  authorities  (MHRA  and  competent 
authorities of other European member states and any other countries in which the trial is 
taking place) and the research ethics committees, as appropriate. The study team at the 
Imperial CRF will act as back‐up to the Coordinating Centre in this respect.  
 
 
13.2.1  PREGNANCY 
Pregnancy is not an adverse event. However, it is a reportable event in a Phase I trial, and 
should be reported to the PI within 24 hours of the Clinical Investigator becoming aware of 
the pregnancy by email, fax or phone.  
All pregnancies will be followed up to collect information about the outcome which will be 
recorded in the clinical study report. 
 
 
13.2.2  REPORTING SERIOUS BREACHES 
In the event of a serious breach, the site will inform the Coordinating Centre as soon as they 
are aware of a possible serious breach of compliance, so that the Coordinating Centre can 
report this breach if necessary within 7 days as per the UK regulatory requirements. The 
study team at the Imperial CRF will provide back‐up in this respect. For the purposes of this 
regulation, a 'serious breach' is one that is likely to affect to a significant degree: 
 The safety or physical or mental integrity of the subjects in the trial, or  
 The scientific value of the trial 
 
13.3 
INVESTIGATOR RESPONSIBILITIES AND ASSESSMENTS 
All non‐serious AEs and ARs, whether expected or not, should be recorded in the source 
documents and CRF.  SAEs and SARs should be notified to the Coordinating Centre and the 
JRCO within 24 hours of the investigator becoming aware of the event. 
 
 
13.3.1  SERIOUSNESS 
When an AE or AR occurs, the investigator must first assess whether or not the event is 
serious using the definition given Table 4. If the event is serious then an SAE Form must be 
completed and the Coordinating Centre notified within 24 hours. 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 58 ‐ 
13.3.2  SEVERITY OR GRADING OF ADVERSE EVENTS 
The severity of all AEs and/or ARs (serious and non‐serious) in this trial should be graded 
using the toxicity gradings in Appendix 1. 
Kjjkj 
Kljkjk 
13.3.3  CAUSALITY 
The investigator must assess the causality of all non‐solicited adverse events or reactions in 
relation to each of the trial IMPs using the definitions in Table 5. There are five categories: 
unrelated, unlikely, possible, probable, and definitely related. If the causality assessment is 
unrelated  or  unlikely  to  be  related,  the  event  is  classified  as  an  AE.  If  the  causality  is 
assessed as possible, probable or definitely related, then the event is classified as an SAR. 
 
 
TABLE 5 ‐ ASSIGNING TYPE OF AE THROUGH CAUSALITY 
Relationship to study product classified as: 
 
Relationship 
Description 
AE Type 
Unrelated 
There is no evidence of any causal relationship 
Unrelated AE 
Unlikely 
There is little evidence to suggest that there is a 
causal relationship (for example, the 
event did not occur within a 
reasonable time after administration 
of the trial medication). There is 
another reasonable explanation for 
the event (for example, the patient’s 
clinical condition, other concomitant 
treatment). 
Unrelated AE 
Possible 
There is some evidence to suggest a causal 
relationship (for example, because the 
event occurs within a reasonable time 
after administration of the trial 
medication). However, the influence of 
other factors may have contributed to 
the event (for example, the patient’s 
clinical condition, other concomitant 
treatments). 
AR 
Probable 
There is evidence to suggest a causal relationship 
and the influence of other factors is 
unlikely. 
AR 
Definitely 
There is clear evidence to suggest a causal 
relationship and other possible 
contributing factors can be ruled out. 
AR 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 59 ‐ 
No 
13.3.4  REFERENCE SAFETY INFORMATION AND EXPECTEDNESS OF SARS  
If there is at least a possible causal relationship of a SAR with an IMP, the investigator must 
assess the expectedness of the event. An unexpected adverse reaction is one not previously 
listed in the reference safety information (RSI) in the current Investigator Brochure (IB) or 
one that is listed but is more frequent or more severe than stated in the RSI.  
 
 
13.4 
SAFETY REPORTING FLOWCHART 
Figure 1:  
Safety Reporting Flowchart   
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
AE:  
 
Adverse Event 
AR:  
 
Adverse Reaction 
CRF:  
 
Case report form 
SAE:  
 
Serious adverse event 
SUSAR:  
Suspected unexpected serious adverse reaction 
Adverse Event/Adverse Reaction 
Was the event: 
 Serious  
‐resulted in death 
‐is life‐threatening 
‐required hospitalisation or prolongation of existing hospitalisation 
‐persistent or significant disability/incapacity 
‐consists of a congenital anomaly/birth defect 
Or important? 
‐allergic bronchospasm requiring intensive emergency treatment 
‐a seizure  
‐any event resulting in discontinuation of the immunisation schedule
SAE 
Record on the SAE eCRF. Email 
paper form to the Coordinating 
Centre (Clinical Trial Manager) 
within 24 hours of notification 
of the event. Email the SAE 
form to the Imperial JRCO.  
Yes 
No
Yes 
SAE 
No further action required 
after reporting as above 
Is it expected in character or severity according to the Investigator 
Brochure? 
Yes
Is  it  reasonably  causally  related  to  the  study  intervention?  i.e.  the 
relationship to the product is considered definite, probable or possible 
SUSAR 
It is the role of the team at 
the Coordinating Centre at 
ICL to submit expedited 
reports to the MHRA/REC as 
required 
The Imperial CRF team will 
provide back‐up in this 
respect. 
No 
AE/AR 
Record on the AE form 
No 
Yes

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 60 ‐ 
14 STATISTICAL CONSIDERATIONS  
14.1 
METHOD OF RANDOMISATION 
The first 6 participants successfully enrolled into the trial will be sequentially pre‐allocated 
to treatment groups B, C, D, F, G and H.    
 
Participants  thereafter  will  be  block‐randomised  centrally  using  a  computer‐generated 
algorithm with a back‐up manual procedure.  Randomisation will be stratified on the basis 
of gender. 
  
 
14.2 
OUTCOME MEASURES 
 
14.2.1  PRIMARY ENDPOINTS 
Immunogenicity 
Antigen specific mucosal (cervico‐vaginal for women, semen for men, and rectal and nasal 
for all) antibody (µg/ml) responses two weeks after the final immunisation.   
     
Safety and Tolerability: 
 Proportion of participants with severe or greater (Grades 3‐4) adverse reactions 
during the study 
 Proportion  of  participants  with  vaccine‐related  serious  adverse  events  (SAEs) 
throughout the study period 
 
 
14.2.2  SECONDARY ENDPOINTS 
Immunogenicity: 
To assess the kinetics of immune responses elicited by each of the vaccine regimens:  
 Frequency of serum and mucosal binding antibodies to HIV CN54gp140 antigen 
measured by binding ELISA. 
 
 
 
 
14.2.3  EXPLORATORY ENDPOINTS 
Immunogenicity: 
 Frequency  and  magnitude  of  HIV‐gp140  specific  B‐cell‐mediated  responses  in  the 
systemic compartment measured by B‐cell ELISPOT. 
 Frequency, titer and avidity of serum binding antibodies to other HIV Env antigens 
(alternative clades) by ELISA or other assays. 
 Frequency  and  titer  of  serum  neutralising antibodies  to homologous  virus,  and,  if 
warranted a wider a panel of viruses representing different clades.  

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 61 ‐ 
 Longevity  of  serum  and  mucosal  responses  at  12  months  following  final 
immunization 
 Frequency and magnitude of HIV‐specific T‐cell mediated responses measured by T‐
cell and ICS (Intracellular Cytokine Staining). 
 PBMC ex‐vivo HIV suceptibility assay 
 Measurement of CN54gp140 serum IgA responses over time  
 Frequency and magnitude of T‐cell chemokine and cytokine release following ex‐vivo 
antigen stimulation quantified by Luminex. 
 Epitope mapping of B‐ and T‐cell responses 
 Serum  antibody  responses  to  Ad4‐EnvCN54  and  MVA‐CN54  as  a  marker  of  anti‐
vector immunity and vaccine “take” 
 Ex vivo analysis of colorectal biopsies for activation markers by ICS (Part 2 only) 
 Susceptibility of rectal biopsies to HIV‐infection – infection assays  
 Durability  of  responses  will  also  be  determined  by  measurement  of  response  at 
weeks 26 (visit 9) and 48 (visit 11) of the trial schedule 
 
 
14.3 
SAMPLE SIZE 
It is not the remit of this Phase I trial to recruit a sufficient number of participants to be 
statistically confident  about  the  differences  between  groups.    By  the end  of  this study  6 
participants  will  have  been  exposed  to  each  schedule  in  Part  1  (groups  A  –  H)  and  this 
provides confidence around the response/event proportions of 0–100% in Table 7. 
Table 7: 
Sample Size 
Number of “responders” 
Proportion if n=6 
95% confidence interval1 
0 
0% 
0 – 39% 
1 
17% 
0 – 64% 
2 
33% 
4 – 78% 
3 
50% 
12 – 88% 
4 
67% 
22 – 96% 
5 
83% 
36 – 100% 
6 
100% 
54 – 100% 
1 Clopper‐Pearson method (suitable for small sample sizes) 
It is difficult to give an estimate of the power of group comparisons using quantitative antibody titre outcomes at this stage 
as this is dependent on the number of responders.  
 
14.4 
INTERIM MONITORING AND ANALYSIS 
Part 1 
The  accumulating  safety  and  tolerability  data  will  be  reviewed  by  the  IDMC  (see  section 
20.2) after twenty participants have reached the primary endpoint of the immunisation 
schedule (Week 26; Visit 9). The IDMC will make a recommendation to the statistical team 
should  any  modification  to  the  analysis  plan  or  statistical  tables  be  required.      An 
unscheduled  meeting  of  the  IDMC  may  be  required  at  the  request  of  the  Principal 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 62 ‐ 
Investigator (see section 20.2), in which case the IDMC will make a recommendation about 
whether or not to continue further immunisations in the trial. 
 
 
14.5 
DATA ANALYSES AND PRESENTATIONS 
Main analysis population will be Intention‐to‐treat population.  Per‐protocol population and 
Modified‐Intention‐to‐treat populations will be considered if important differences between 
populations arise.  
 
14.5.1  PARTICIPANT POPULATIONS 
 Intention‐to‐treat (ITT) population:  all  participants  randomised  and  given  at  least 
one vaccination in the trial 
 
 Per‐protocol (PP) population:  
all participants randomised and immunised with 
all  scheduled  vaccinations,  and  who  completed  the  trial  with  no  major  protocol 
deviations 
 
 Modified‐Intention‐to‐treat (MITT): all  participants  randomised  and  given  at  least 
one immunisation in the trial (including those participants whose sample collection 
occurred outside the allowed windows) 
 
14.5.2  PRIMARY AND SECONDARY IMMUNOGENICITY OUTCOMES 
All  mucosal  and  serum  samples  will  be  screened  for  antigen  specific antibodies  IgG  (and 
IgA).    The  absolute  levels  of  antibody  in  samples  that  are  found  to  be  positive  will  be 
determined  using  a  standardised  and  quantitative  ELISA  developed  in  Robin  Shattock’s  
laboratory at Imperial College London.  In this sandwich capture ELISA, the Ab of interest is 
captured by the relevant target antigen and then detected using a labelled isotype specific 
secondary  Ab.    An  estimate  of  the  concentration  of  Ab  in  the  sample  is  calculated  by 
interpolation relative to a standard curve based on titration of purified human standards IgG 
or IgA captured by anti‐human kappa/lambda‐specific antibodies.   
 
The number of ‘responders’ in each assay will be presented by time‐point and group as a 
proportion with 95% confidence interval.  A ‘responder’ will be defined as a participant in 
whom a response was detected in two weeks after the final vaccination immunogenicity 
sample.  A positive result will be defined relative to a pre‐defined cut‐off threshold value 
and assays will be validated using predefined thresholds based on the responses to positive 
and  negative  control  stimuli.  More  information  on  the  assay  and  definition  of  positive 
results will be supplied in the LAP. Titres of antigen specific antibodies will be described by 
time‐point and group, and compared using rank tests where appropriate. 
14.5.3  EXPLORATORY IMMUNOLOGICAL ASSESSMENT OUTCOMES 
Exploratory immunological assessment outcomes will include evaluation of the proportion 
of  individuals  with  systemic  HIV‐specific  neutralising  antibody  responses  (breadth  and 
magnitude), the characterisation of non‐neutralising antibody function including Antibody 
Dependent  Cellular  Viral  Inhibition  (ADCVI),  Antibody  dependent  viral  capture  and 
aggregation  assays,  and  assessment  of  anti‐vector  mediated  immune  responses  i.e.  anti‐

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 63 ‐ 
MVA‐CN54  and  anti‐Ad4‐EnvCN54    antibody  responses.  CN54  gp140  specific  antibody 
isotope responses (IgG1‐4 and IgA) will be analysed and compared between vaccine groups. 
 
 
14.5.4  SAFETY OUTCOMES 
The AEs will be coded using MedDRA. If a participant reports the same event more than 
once  then  the  worst  severity  and  worst  relationship  to  trial  vaccine  will  be  taken. 
Discrepancies between diary card and CRF reports will be queried by the monitor if unclear. 
It is assumed that the grade assigned by the clinician is more accurate, and this will be the 
grade reported in the tables. If the diary card grade is worse, this will be foot noted. 
Safety outcomes will be reported overall with proportion and 95% confidence interval, and 
by group and time‐point, and by relationship to study product, and method.  
For  the  primary  analysis  of  safety  and  tolerability  endpoints  (as  defined  in  section  14.2), 
results will be expressed as a proportion with confidence interval. 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 64 ‐ 
15 DATA MANAGEMENT 
Data management, analysis and reporting of all trial data will be prepared by the Surrey 
Clinical Research Centre and ICL.  
 
15.1 
DATA MANAGEMENT AND RECORD KEEPING AT THE CLINICAL TRIAL SITE  
The dates of visits including immunisation dates, dates and results of pregnancy tests, and 
details of clinical management (description of adverse events and concomitant medication) 
will be documented in the clinical / medical notes and other source documents. 
The CRFs will not bear the participant’s name. The participant’s date of birth and Trial ID 
(which will have been given at screening) will be used for identification. 
 
15.1.1  STAFF AT THE CLINICAL CENTRE WILL BE RESPONSIBLE FOR: 
 Creating  medical  notes  for  each  participant  which  includes  paper  copies  of  the 
consent documents and the blood results 
 Entering  information  relevant  to  eligibility  and  emergent  adverse  events  and 
documenting the result of any pregnancy tests in the medical notes and other source 
documents 
 The accurate completion of CRFs (CRFs) 
 Collection and review of the diary cards from participants 
 Notification  of  SAEs  within  24  hours  of  becoming  aware  of  the  event  to  the  PI, 
Clinical Trial Manager and the JRCO 
 Notification  of  pregnancy  within  24  hours  of  the  PI  becoming  aware  of  the 
pregnancy 
 Recording data directly into the source documents and then entered onto the CRF 
ideally within 24 hours. Additional detail will be expected should there be a clinical 
abnormality relevant to eligibility. Note: the paper CRFs used to capture solicited 
and  unsolicited  adverse  events,  and  concomitant  medications,  are  source 
documents.  
 Notifying the coordinationg site of SUSARs within the timelines defined in section 
13.2   
 Ensuring all written source data is entered legibly in black ink with a ball‐point pen (If 
an error is made, the error will be crossed through with a single line in such a way 
that the original entry can still be read. The correct entry will then be clearly inserted 
and the alterations will be initialed and dated by the person making the alteration. 
Overwriting or use of correction fluid will not be permitted). 
 Preserving the participant confidentiality (CRF will not bear the participant’s name).  
The  participant’s  date  of  birth  and  Trial  ID  (given  at  screening)  will  be  used  for 
identification. 
 Ensuring source documentation are available for review to ensure that the collected 
data are consistent with the CRFs. 
 Ensuring all CRFs and laboratory reports are reviewed by the PI or delegate, who will 
ensure that they are accurate and complete. 
 Ensuring that all source documents and other supporting documents are kept in a 
secure location. Standard GCP practices will be followed to ensure accurate, reliable 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 65 ‐ 
and consistent data collection. 
 Maintaining the Investigator Site File  
 Communication with the coordinating Center by telephone, mail and email  
 
Please note the list above is not an exhaustive list 
A  member  of  the  clinical  trial  team  must  sign  all  laboratory  reports.  In  the  event  of  an 
abnormality,  an  indication  should  be  given  whether  or  not  the  abnormality  is  clinically 
significant (and therefore gradable per Appendix 1), the date of review and the signature of 
the clinician reviewing the result. 
 
The database and source documents should be kept in a secure location for 2 years after the 
last  approval  of  a  marketing  application  or  until  2  years  have  elapsed  since  formal 
discontinuation  of  product  development,  and  at  least  25  years  after  the  clinical  trial  has 
ended. 
 
15.1.2  DATA MANAGEMENT IN THE IMMUNOLOGY LABORATORIES 
Standard operating procedures will be followed in all laboratories to ensure the quality of 
the data. Data will be stored electronically and transferred in an agreed format for analysis 
in accordance to GCP.  
 
 
15.2 
ELECTRONIC DATA MANAGEMENT BY PROMASYS 
The computerized raw data, final data files and tables will be held by the Surrey Clinical 
Research  Facility  and/or  the  Coordinating  Center  on  behalf  of  the  Sponsor.  Principal 
investigators or designees will have access to the clinical study database. 
 
 
15.2.1 
Staff at Surrey Clinical Research Centre for Promasys will be responsible for: 
 Creating a database for data entry (Internet data entry system (IDES)) 
 Training  staff  at  the  clinical  centre  in  data  collection  and  overseeing  data  entry 
which may include data entry at the clinical centre directly into the database  
 Assisting with the drafting of the SAP and conducting the analyses 
 
The  data  analysis  plan  will  be  developed  and  agreed  upon  by  Surrey  Clinical  Research 
Centre,  PI  and/or  the  Coordinating  Center  on  behalf  of  the  Sponsor.    The  Surrey Clinical 
Research Centre, in collaboration with the PI, and/or the Coordinating Centre on behalf of 
the Sponsor will create tables according to this data analysis plan. 
 
The Surrey Clinical Research Centre will conduct the data analysis and will provide interim 
and  final  data  tables  for  the  Coordinating  Centre,  Sponsor,  PI,  and  the  regulatory 
authorities, as appropriate. 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 66 ‐ 
 
15.3 
DATA MANAGEMENT AT THE COORDINATING CENTER  
The Coordinating Center and the Sponsor must be informed of any SAE that occurs during 
this trial regardless of relationship to the investigational product.  
The Sponsor will ensure, by delegating this responsibility to the Principal Investigator, that 
an  annual  safety  report  is  provided  to  REC  and  the  MHRA,  and  that  this  includes  a 
description of all suspected unexpected serious adverse reaction (SUSAR) reports.   
 
Staff at the Coordinating Centre will be responsible for: 
 Arranging clinical site monitoring 
 Maintaining the Trial Master File on behalf of the sponsor 
 
The Coordinating Center will promptly inform the Sponsor if they suspect a serious breach 
of  GCP  or  the  trial  protocol  has  occurred  according  to  the  criteria  stated  in  the  MHRA’s 
guidance. The Sponsor, using the same criteria, will make the decision and notify the MHRA 
and other bodies such as main REC and NHS R&D office, within seven days of becoming 
aware of a serious breach.  
The Coordinating Center will inform the Sponsor of all breaches of GCP and deviations that 
impact on safety or validity. The Coordinating Centre will report to the main REC and to NHS 
R&D office any breaches or deviations that are, in their opinion, of major significance.  
 
Within 90 days after the end of the trial, the main REC and the MHRA will be notified that 
the  trial  has  finished.  If  the  trial  is  terminated  prematurely,  those  reports  will  be  issued 
within 15 days after the termination date which is defined as the final participant visit. 
 
All study results will be fed back to the participants in an open end of study meeting and by 
internet  webex  presentation  once  all  data  is  available  and  has  been  analysed.  Individual 
participant data will not be available for that participant.   
 
The study team at the Imperial CRF will provide back‐up to the Coordinating Centre where 
required due to staff absence etc. 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 67 ‐ 
16 TRIAL MONITORING 
16.1 
RISK ASSESSMENT  
The Clinical Trial Manger at the Coordinating Center will perform a risk assessment to assess 
the risks and benefits of trial participation to individual participant safety, as well as the risks 
that  underlie  the  validity  of  the  trial  results  with  respect  to  safety  and  immunogenicity 
outcome measurements.  
The risk assessment will be discussed by the PI, the Clinical Trial Manger and the Sponsor’s 
representative. 
This  assessment  will  be  used  to  guide  the  development  of  procedures  with  respect  to 
informed consent, confidentiality, trial monitoring and audit.    
 
 
16.2 
STUDY MONITORING BY THE COORDINATING CENTER 
Monitoring  will  be  performed  according  to  ICH‐GCP.    A  monitoring  plan  will  be  written 
based on the risk assessment.  An independent audit of the study may be performed by the 
Sponsor  or  designee  to  establish  the  status  of  applicable  quality  systems.  Inspection  by 
regulatory authorities may also occur. 
 
On‐site monitoring will be delegated to a trained monitor  by the Sponsor’s Institution to 
ensure that the study is conducted in compliance with human subjects’ protection and other 
research regulations and guidelines, recorded and reported in accordance with the protocol, 
is  consistent  with  SOPs,  GCP,  applicable  regulatory  requirements  and  locally  accepted 
practices. The investigators, as well as participants through consenting to the study, agree 
that  the  monitor  may  inspect  study  facilities  and  source  records  (e.g.,  informed  consent 
forms,  clinic  and  laboratory  records,  other  source  documents),  as  well  as  observe  the 
performance of study procedures. Such information will be treated as strictly confidential 
and will under no circumstances be made publicly available. 
 
The  Principal  Investigator  will  permit  inspection  of  the  facilities  and  all  study‐related 
documentation  by  authorized  representatives  of  the  Sponsor,  and  Government  and 
Regulatory  Authorities  responsible  for  this  study.    Monitoring  visits  will  be  performed 
before, during and after the trial has finished as required by the procedures set out in the 
monitoring plan to ensure patient safety, accurate data collection and reporting. Monitoring 
visits will also be dependent on rates of and numbers of participants recruited.  
 
Prior to the first volunteer being screened, an initiation visit will be completed at the clinical 
site , and will consist of review of protocol and trial documents, training with respect to trial 
procedures  (informed  consent,  SAE  reporting,  inclusion  and  exclusion  criteria),  review  of 
recruitment strategy, review of site facilities and equipment, essential document receipt, 
collection  and  filing,  and  archiving and  inspection.    Copies  of  the  trial  specific  procedure 
manuals and related documents will be given to the investigators. The approved version of 
the protocol should be followed at all times, and protocol deviations will be documented in 
a  Protocol  Deviation  Form  and  submitted  to  the  Trial  Coordinating  Centre  as  soon  as 
possible.  The investigators will allow the monitors to:  
 Inspect the site, the facilities, IMP management and materials used for the trial 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 68 ‐ 
 Meet all members of the team involved in the trial, and ensure all staff working on 
the trial are experienced and appropriately trained, and have access to review all of 
the documents relevant to the trial  
 Have access to the CRF and source data  
 Discuss with the Principal Investigator and site staff trial progress and any issues on a 
regular basis  
 Train investigators and site staff at the beginning of the trial and then as appropriate.   
 
 
16.3 
CLINICAL SITE MONITORING 
The trial site will be monitored to ensure that: 
 All participant records will be inspected for confirmation of existence, eligibility and 
informed consent 
 There  is  adherence  to the  protocol,  including consistency with  inclusion/exclusion 
criteria 
 There is compliance with the principles of GCP and regulatory requirements  
 Trial Documentation is complete and up to date (e.g. correct versions of documents 
being used, source data captured) and relevant documents are collected for the trial 
master file  
 The CRFs have been completed correctly and accurately, and all entries correspond 
to data captured in source documents  
 The  IMP  accountability  records  are  in  order  (receipt,  dispensing  and  destruction), 
storage is under appropriate conditions and secure, expiry dates are being checked 
and adhered to, and dispensing is according to the protocol and trial procedures.   
 
All information dealt with during such visits will be treated as strictly confidential.  At the 
end of the trial, a close out visit will be performed by the monitor after the final participant 
visit has been completed and prior to database lock. During this visit the monitor will verify 
that  all  trial  close  out  activities  are  completed  –  all  queries  resolved,  missing  data 
completed,  monitoring  completed,  archiving  arrangements  in  place,  IMP  accountability 
complete and all used and unused IMP destroyed, ISF (investigator site file) completed and 
trial master file documents collected, and end of trial notified.   
 
Each investigator will also be notified that an audit or inspection may be carried out ‐ by the 
sponsor; sponsor's representatives or the regulatory authorities ‐ at any time, before, during 
or after the end of the trial.  The investigator must allow the representatives of the audit or 
inspection team:  
 To inspect the site, facilities and material used for the trial 
 To meet all members of his/her team involved in the trial 
 To  have  direct  access  to  trial  data  and  source  documents,  to  consult  all  of  the 
documents relevant to the trial  
 
16.4 
MONITORING BY THE TRIAL MANAGEMENT GROUP (TMG) 
The TMG (see section 20.1) will monitor the following: 
 
Screening and enrolment / Trial ID 
 
Immunisations completed and any missed or outside the window 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 69 ‐ 
 
Adverse events of note 
 
Missed visits and loss to follow‐up 
 
Logistical difficulties at the clinical centre 
 
Data management issues (timeliness of CRFs, completeness) 
 
Immunology  core  lab  issues  (completeness  of  specimen  collection,  next  batch 
transfer or analysis) 
 
GCP issues (minor or other breaches) 
 
 
 
16.5 
CONFIDENTIALITY 
The  principles  for  the  UK  DPA  will  be  followed.      Identifiable  personal  details  of  the 
participants and the results of the trial will be kept strictly confidential.  The Sponsor, as 
represented  by  the  Imperial  JRCO,  will  not  keep  any  material  on  file  containing  the 
participants’  full  names;  this  information  will  be  kept  by  trial  team  in  the  clinical  trial 
facilities  in  a  secure  location.  The  confidentiality  of  participants  will  be  respected  and 
maintained at all times.  Each participant’s GP will be informed of the nature and timing of 
the trial. 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 70 ‐ 
17 ETHICAL CONSIDERATIONS AND APPROVAL  
17.1 
ETHICAL ISSUES  
There are three aspects of this trial that could raise potential ethical issues. 
 
First, safety: Wild type Ad4 and MVA‐CN54 and protein based vaccines have been widely 
used  in  man  at  similar  doses  to  those  employed  in  this  trial  to  vaccinate  against  a  wide 
range of infectious diseases such as HIV as well as non‐infectious diseases such as cancer. To 
date, there have been no safety concerns.  The nature of the product may lead participants 
to erroneously conclude they are protected against HIV and to engage in riskier behaviour 
as a consequence. They will be warned against this with the PIS. 
 
Second, confidentiality: because the product under investigation is a candidate HIV vaccine, 
and HIV is transmitted sexually, it is necessary to collect sensitive personal information and 
the  participants  will  need  to  undergo  STI  screening.    It  is  possible  that  following 
immunisations, participants may have equivocal results in the standard laboratory tests for 
HIV.  However,  it  will  be  possible  for  any  accredited  laboratory  to  distinguish  between  a 
response to the vaccine and the occurrence of a natural infection using routine assays.  
 
Third,  financial:  the  reimbursement  to  compensate  for  the  intense  follow‐up  schedule, 
which is a feature of healthy volunteer trials, could be sufficient incentive for individuals to 
take part against their better judgement. 
 
17.2 
ETHICAL CONSIDERATIONS 
The  trial  will  be  conducted  in  compliance  with  the  approved  protocol,  UK  Clinical  Trial 
Regulations and any amendments, which include compliance with the principles of GCP and 
will abide by the principles of the Declaration of Helsinki, the UK Data Protection Act (DPA 
number:  Z5886415),  and  the  National  Health  Service  (NHS)  Research  Governance 
Framework for Health and Social Care (RGF). 
The trial proposal including the trial specific information to be provided to participants will 
be reviewed by a recognised Research Ethics Committee (REC), The trial will not proceed 
unless the sponsor obtains a favorable opinion from the REC. 
All participants must give written consent to participate in this trial, before any screening 
evaluation. Before giving consent, participants will be asked to read the information sheet 
about the trial and raise questions. They must also read the consent form. They will have 
the opportunity to discuss the trial with the Principal Investigator or delegate, and be asked 
to explain what the trial involves in their own words, to ensure the volunteer understands 
the  intensity  of  the  schedule  and  the  issues  associated  with  taking  part  in  a  trial  of  a 
candidate HIV vaccine.  
The safety assessments are intense. Participants will be asked to remain in clinic for about 1 
hour following each immunisation, to complete a diary card until the day 7 safety visit. They 
will  be  advised  to  call  the  clinic  staff  if  they  are  concerned,  and  24  hour  cover  will  be 
available.  
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 71 ‐ 
18 INDEMNITY 
The Sponsor for the trial is Imperial College London (ICL). 
 
The Sponsor undertakes to compensate any participants for injuries which are considered, 
on the balance of probabilities to have arisen as a result of their participation in the trial 
regardless of whether the injuries were caused by negligence or not. 
 
ICL  holds  insurance  to  cover  participants  for  injury  caused  by  their  participation  in  the 
clinical trial. Participants may be able to claim compensation if they can prove that IC has 
been negligent. However, as this clinical trial is being carried out in a hospital, the hospital 
continues to have a duty of care to the participant in the clinical trial. ICL does not accept 
liability for any breach in the hospital’s duty of care, or any negligence on the part of the 
hospital employees. This applies whether the hospital is an NHS Trust or not. This does not 
affect the participant’s right to seek compensation via the non‐negligence route. 
 
Participants may also be able to claim compensation for injury caused by participation in 
this clinical trial without the need to prove negligence on the part of ICL or another party. 
Participants who sustain injury and wish to make a claim for compensation should do so in 
writing  in  the  first  instance  to  the  Principal  Investigator,  who  will  pass  the  claim  to  the 
Sponsor’s Insurers, via the Joint Research Compliance Office.  
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 72 ‐ 
19 FINANCE 
The  clinical  trial  activities  and  acquisition  of  product,  data  management  and  analysis  are 
funded by the Medical Research Council. 
 
Participants  will  be  reimbursed  for  their  time,  effort  and  for  costs  to  cover  their  travel 
expenses  to  the  study  site  and  any  inconvenience  caused  due  to  study  participation.  
Participants will receive £150 per vaccination visit, £100 for screening / safety and follow‐up 
visits up to a total of £1350 over the course of the study.  Only enrolled participants will be 
paid for the screening visit.   
 
Participants who undergo rectal biopsies in Part 2 will be paid an extra £50 per biopsy if it is 
done on the same day as other procedures/assessments scheduled at the same time‐point, 
or an extra £100 if they have to make an additional visit to the site for the biopsy. 
 
There are no bonuses or per participant incentives paid to staff.  
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 73 ‐ 
20 OVERSIGHT & TRIAL COMMITTEES 
There are a two committees involved with the oversight of the trial. These committees are 
detailed below. 
 
20.1 
TRIAL MANAGEMENT GROUP 
A TMG will be formed comprising the Principal  Investigator, other lead investigators (clinical 
and non‐clinical) and members of the Coordinating Centre. The TMG will be responsible for 
the day‐to‐day running and management of the trial and will be accountable to the Sponsor. 
 
The TMG will monitor the clinical safety data. During the vaccination phase of the trial, the 
PI will review clinical safety data on an on‐going basis. The TMG will also be responsible for 
the composition of the expert panel to review any emerging SUSAR data. 
 
 
 
20.2 
INDEPENDENT  DATA  MONITORING  COMMITTEE  (IDMC)  INTERIM  MONITORING 
AND ANALYSES 
Analysis of the safety data will be carried out at Surrey Clinical Research Centre where the 
main Promasys database will be held. The immunological data will not form part of the main 
database and will not be analysed by the Surrey Clinical Research Centre.   
An  IDMC  will  be  invited  to  oversee  this  trial,  and  none  of  its  members  have  direct 
involvement with the trial. The IDMC will report to the Sponsor for scheduled meetings, and 
directly  to  the  Sponsor  should  an  unscheduled  meeting  be  required  either  to  review  a 
SUSAR,  other  significant  adverse  event  or  at  the  request  of  the  Principal  Investigator  or 
TMG.  
A  charter  will  be  developed  to  describe  the  functioning  of  the  IDMC.  There  will  be  one 
scheduled interim analysis after twenty participants have completed their immunisations 
and before Part 2 of the trial commences.  Data for all participants will be analysed and 
annotated in a report to be reviewed by the IDMC. 
 
Further details of IDMC functioning, and the procedures for interim analysis and monitoring 
are provided in the IDMC Charter. 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 74 ‐ 
21 PUBLICATION 
The preparation of a manuscript for publication in a peer‐reviewed professional journal or 
an  abstract  for  presentation,  oral  or  written,  to  a  learned  society  or  symposium  will  be 
discussed on the TMG calls.  
The Sponsor will be notified of this intention through the PI and the TMG notes. Every effort 
will be made to allow the Sponsor and other relevant parties involved in the clinical trial and 
named in the clinical trial agreement prepared by the Sponsor, 30 days to comment before 
any results are submitted. This timeline will be strictly observed for peer‐review journals, 
but  may  be  more  difficult  to  adhere  to  for  conference  presentations.  Approval  from  the 
Principal  Investigator,  the  clinical  centre  Principal  Investigator  and  Project  Lead  must  be 
obtained as a minimum before submission to a conference.  
Authorship should reflect work done by the investigators and personnel of the sponsor, in 
accordance with generally recognised principles of scientific collaboration. 
Any publications based on the results of the Clinical Trial and originating from ICL or the 
Investigators will be submitted for review to UKHVC and will require their acceptance for 
further publications, according to the Ad4HIV agreement. 
 
 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 75 ‐ 
22 PROTOCOL AMENDMENTS 
After the protocol has been approved by the main REC and the MHRA, no changes may be 
made without the written agreement of the PI and the sponsor.   
The MHRA and main REC do not need to approve any substantial change to the protocol 
that needs to be implemented urgently to avoid an immediate hazard to trial participants. 
The sponsor will ensure that the MHRA and main REC are informed of urgent amendments 
in accordance with UK clinical trials regulatory guidance. 
The  REC  and/or  MHRA  must  approve  substantial  amendments  before  they  are 
implemented. 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 76 ‐ 
23 REFERENCES 
Andersson, K. M., Palteil, A. D., and Owens, D. K., (2011)  “The Potential impact of an HIV vaccine 
with  rapidly  waning  protection  on  the  epidemic  in  Southern  Africa:    examining  the  RV144  trial 
results”  Vaccine  18; 29(36):6107‐6112. 
Alexander,  J., Mendy,  J., Vang,  L., Avanzini,  J.  B., Garduno,  F., Manayani,  D.  J., Ishioka,  G., Farness 
P., Ping,  L.  H., Swanstrom,  R., Parks,  R., Liao,  H.  X., Haynes,  B.  F.,  Montefiori,  D.  C., LaBranche, 
C., Smith,  J., Gurwith,  M.,  and  Mayall,  T.,  (2013)    “Pre‐clinical  development  of  a  recombinant, 
replication‐competent adenovirus serotype 4 vector vaccine expressing HIV‐1 envelope 1086 clade 
C” PLoS One  3;8(12):e82380. 
Buffa, V., Klein, K., Fischetti, L., and Shattock, R. J.,  (2012)   "Evaluation of TLR agonists as potential 
mucosal adjuvants for HIV gp140 and tetanus toxoid in mice"  7(12): e50529 
Draper, S. J., Cottingham, M. G., and Gilbert, S. C.,  (2013)  "Utilizing poxviral vectored vaccines for 
antibody induction‐progress and prospects"  Vaccine  6;31(39): 4223‐4230 
Granich,  R.,  S.  Gupta,  A.  B.  Suthar,  C.  Smyth,  D.  Hoos,  M.  Vitoria,  M.  Simao,  C.  Hankins,  B. 
Schwartlander, R. Ridzon, B. Bazin, B. Williams, Y. R. Lo, C. McClure, J. Montaner and G. Hirnschall 
(2011). "Antiretroviral therapy in prevention of HIV and TB: update on current research efforts." Curr 
HIV Res  9(6): 446‐469. 
Granich,  R.,  Y.  R.  Lo,  A.  B.  Suthar,  M.  Vitoria,  R.  Baggaley,  C.  M.  Obermeyer,  C.  McClure,  Y. 
Souteyrand, J. Perriens, J. G. Kahn, R. Bennett, C. Smyth, B. Williams, J. Montaner and G. Hirnschall 
(2011).  "Harnessing  the  prevention  benefits  of  antiretroviral  therapy  to  address  HIV  and 
tuberculosis." Curr HIV Res 9(6): 355‐366. 
Gray, G., Buchbinder, S., and Duerr, A.,  (2010)  "Overview of STEP and Phambili trial results: two 
phase IIb test‐of‐concept studies investigating the efficacy of MRK adenovirus type 5 gag/pol/nef 
subtype B HIV vaccine"  Curr Opin HIV AIDS  5(5): 357‐361 
Gray,  G.  E., Moodie,  Z., Metch,  B., Gilbert,  P.  B., Bekker,  L.  G., Churchyard,  G., Nchabeleng, 
M., Mlisana,  K., Laher,  F., Roux,  S., Mngadi,  K., Innes,  C., Mathebula,  M., Allen,  M., McElrath,  M. 
J., Robertson,  M., Kublin,  J., Corey,  L.,  and  HVTN  503/Phambili  study  team.  (2014)  "Recombinant 
adenovirus type 5 HIV gag/pol/nef vaccine in South Africa: unblinded, long‐term follow‐up of the 
phase 2b HVTN 503/Phambili study"  Lancet Infect Dis  14(5): 388‐396 
Gurwith,  M., Lock,  M., Taylor,  E.  M., Ishioka,  G., Alexander,  J., Mayall,  T., Ervin,  J.  E., Greenberg  R. 
N., Strout, C., Treanor, J. J., Webby, R. and Wright, P. F.,  (2013)  "Safety and immunogenicity of an 
oral,  replicating  adenovirus  serotype  4  vector  vaccine  for  H5N1  influenza:  a  randomised,  double‐
blind, placebo‐controlled, phase 1 study"  Lancet  13(3); 238‐250 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 77 ‐ 
Kim, J. H., S. Rerks‐Ngarm, J. L. Excler and N. L. Michael (2010). "HIV vaccines: lessons learned and 
the way forward." Curr Opin HIV AIDS 5(5): 428‐434. 
Kim, S. C., S. Becker, C. Dieffenbach, B. S. Hanewall, C. Hankins, Y. R. Lo, J. W. Mellors, K. O'Reilly, L. 
Paxton, J. S. Roffenbender, M. Warren, P. Piot and M. R. Dybul (2010). "Planning for pre‐exposure 
prophylaxis to prevent HIV transmission: challenges and opportunities." J Int AIDS Soc 13: 24. 
Kim, S. C., Exceler, J. L., (2015) "Lessons from the RV144 Thai phase III HIV‐1 vaccine trial and the 
search for correlations of protection"  Annu Rev Med   66: 423‐437 
Koff, W. C. (2010). "Accelerating HIV vaccine development." Nature 464(7286): 161‐162. 
Koff, W. C., Johnson, P. R, Watson, D. I., Burton, D. R., Lifson, J. D., Hasenkrug, K. L., McDermott, A. 
B., Schultz, A., Zamb, T. J., Boyle, R. and Desrosiers, R. C., (2006).  HIV Vacine Design:  Insights from 
live attunated SIV vaccines.  Nat Immunol  7(1): 19‐23 
Krakower,  D.  and  K.  H.  Mayer  (2011).  "Promising  prevention  approaches:  tenofovir  gel  and 
prophylactic use of antiretroviral medications." Curr HIV/AIDS Rep  8(4): 241‐248. 
Lewis, D. J., Fraser, C. A., Mahmoud, A. N., Wiggins, R. C., Woodrow, M., Cope, A., Cai, C., Giemza, 
R., Jeffs, S. A, Manoussaka, M., Cole, T., Cranage, M. P., Shattock, R. J., and Lacey, C. J.,  (2011)  "Phase 
I randomised clinical trial of an HIV‐1(CN54), clade C, trimeric envelope vaccine candidate delivered 
vaginally"    PLosOne   6(9):e25165  
Long, E. F., and Owens, D. K  (2011)  "The cost‐effectiveness of a modestly effective HIV vaccine in 
the United States"  Vaccine  18;29(36): 6113‐6124 
Lyons A, Longfield J and Kuschner R,  "A double‐blind, placebo‐controlled study of the safety and 
immunogenicity  of  live,  oral  type  4  and  type  7  adenovirus  vaccines  in  adults"    Vaccine    (2008);  
26:2890‐8. 
 
McKay,  P.  F., Cope,  A.  V., Mann,  J.  F., Joseph,  S., Esteban,  M., Tatoud,  R., Carter,  D., Reed,  S. 
G., Weber, J., and Shattock, R. J.,  "Glucopyranosyl lipid A adjuvant significantly enhances HIV specific 
T  and  B  cell  responses  elicited  by  a  DNA‐MVA‐protein  vaccine  regimen"    Plos  One      (2014)  
23;9(1);e84707 
Ogra,  P.  L., Ogra,  S.  S., Al‐Nakeeb,  S.,  and  Coppola,  P.  R.,  (1973)    "Local  antibody  response  to 
experimental poliovirus infection in the central nervous system of rhesus monkeys"  Infect Immun  
8(6):931‐937 
Radin,  J.  M.,  Hawksworth,  A.  W.,  Blair,  P.  J., Faix,  D.  J,.  Raman,  R., Russell,  K.  L.  and  Gray,  G.  C.,  
(2014)  "Dramatic decline of respiratory illness among US military recruits after the renewed use of 
adenovirus vaccines"  Clin Infect Dis  59(7): 962‐968 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 78 ‐ 
Rerks‐Ngarm,  S.,  P.  Pitisuttithum,  S.  Nitayaphan,  J.  Kaewkungwal,  J.  Chiu,  R.  Paris,  N.  Premsri,  C. 
Namwat, M. de Souza, E. Adams, M. Benenson, S. Gurunathan, J. Tartaglia, J. G. McNeil, D. P. Francis, 
D.  Stablein,  D.  L.  Birx,  S.  Chunsuttiwat,  C.  Khamboonruang,  P.  Thongcharoen,  M.  L.  Robb,  N.  L. 
Michael, P. Kunasol and J. H. Kim (2009). "Vaccination with ALVAC and AIDSVAX to prevent HIV‐1 
infection in Thailand." N Engl J Med 361(23): 2209‐2220. 
Rodenburg,  C.  M., Li,  Y., Trask,  S.  A., Chen,  Y., Decker,  J., Robertson,  D.  L., Kalish,  M.  L., Shaw,  G. 
M., Allen,  S., Hahn,  B.  H., Gao,  F.  and  UNAIDS  and  NIAID  Networks  for  HIV  Isolation  and 
Characterization. (2001)  "Near full‐length clones and reference sequences for subtype C isolates of 
HIV type 1 from three different continents"  AIDS Res Hum Retroviruses 20;17(2): 161‐168 
Rudin,  C.  M.,  and  Thompson,  C.  B.,  (1998)    "B‐cell  development  and  maturation"    Semin  Oncol  
25(4):435‐446 
Su,  L., Graf,  M., Zhang,  Y., von  Briesen,  H., Xing,  H., Köstler,  J., Melzl,  H., Wolf,  H., Shao,  Y.,  and 
Wagner, R., (2000)  "Characterization of a virtually full‐length human immunodeficiency virus type 1 
genome of a prevalent intersubtype (C/B') recombinant strain in China"  J Virol  74(23):11367‐11376 
UNAIDS Report on the global AIDS epidemic 2013. Geneva, S. (2013). UNAIDS. 
Wamai, R. G., B. J. Morris, S. A. Bailis, D. Sokal, J. D. Klausner, R. Appleton, N. Sewankambo, D. A. 
Cooper, J. Bongaarts, G. de Bruyn, A. D. Wodak and J. Banerjee (2011). "Male circumcision for HIV 
prevention: current evidence and implementation in sub‐Saharan Africa." J Int AIDS Soc 14: 49. 
  

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 79 ‐ 
24 APPENDICES 
APPENDIX 1   
ADVERSE EVENTS GRADING 
All AEs (except those listed in the tables below) should be graded according to the following 
criteria: 
 
 
 Symptom not experienced (Grade 0) 
 Mild (Grade 1): No interference with daily activity 
 Moderate (Grade 2): Some interference with daily activity  
 Severe (Grade 3): Prevents daily activity  
 Potentially life‐threatening (Grade 4): Emergency treatment or hospitalisation 
 
REACTION 
GRADE 1 
GRADE 2 
GRADE 3 
GRADE 4 
Fever (oral temperature) 
38.0 – 38.4 
38.5 – 38.9 
39.0 – 40.0 
≥ 40.1 
Tachycardia (bpm)* 
101 – 115 
116 – 130 
> 130 
Emergency 
treatment or 
hospitalisation 
Bradycardia (bpm)** 
50 – 54 
45 – 49 
< 45 
Emergency 
treatment or 
hospitalisation 
Hypertension (mm Hg) 
Systolic 
 
141 – 150 
151 – 155 
> 155 
Emergency 
treatment or 
hospitalisation 
Hypertension (mm Hg) 
Diastolic 
91 – 95 
96 – 100 
> 100 
Emergency 
treatment or 
hospitalisation 
Hypotension (mm Hg)*** 
Systolic 
85 – 89 
80 – 84 
< 80 
Emergency 
treatment or 
hospitalisation 
Redness (cm) 
(greatest single diameter) 
2.5 – 5 
5.1 – 10 
≥ 10.1 
Necrosis or 
exfoliative 
dermatitis 
Swelling (cm) 
(greatest single diameter) 
2.5 – 5 
5.1 – 10 
≥ 10.1 
Necrosis 
 
* At rest 
** When resting heart rate is between 60 – 100 beats per minute. Use clinical judgement when characterising 
bradycardia among some healthy subject populations, for example, conditioned athletes. 
*** Only if symptomatic (e.g. dizzy/ light‐headed) 
 
 

Ad4HIV Protocol 
CONFIDENTIAL 
 
Version 7.3 01Nov2019 
 
 
‐Page 80 ‐ 
 
LABORATORY PARAMETERS  
 
 
 
PARAMETER 
 
GRADE 1 
MILD 
GRADE 2 
MODERATE 
GRADE 3 
SEVERE 
GRADE 4 
EXTREME 
HAEMATOLOGY 
Haemoglobin (g/L) 
Female  
113 – 110  
109 – 95   
94 – 80  
< 80 
Haemoglobin (g/L) 
Female (change from baseline)
Any decrease – 15 
16 – 20  
21 – 50 
> 50 
Haemoglobin (g/L) 
Male 
129 – 125 
124 – 105  
104 – 85  
< 85 
Haemoglobin (g/L) 
Male (change from baseline) 
Any decrease – 15 
16 – 20  
21 – 50 
> 50 
White Blood Count (x109/L) 
Increase 
 
Decrease 
 
11.5 – 15.0  
OR 
3.5 – 2.5 
15.1 – 20.0  
OR 
2.4 – 1.5 
 
20.1 – 29.9 
OR 
1.4 – 1.0  
≥ 30.0 
OR 
< 1.0 
Absolute Neutrophils (x109/L) 
1.9 – 1.5  
1.4 – 1.0 
0.9 – 0.5 
< 0.5 
Lymphocytes (x109/L) 
1.0 – 0.8 
0.7 – 0.5  
0.4 – 0.2 
< 0.2 
Platelets (x109/L) 
129 – 125  
124 – 100  
99 – 25  
< 25 
BIOCHEMISTRY 
ALT (increase by factor) 
1.1 – 2.5 x ULN 
2.6 – 5.0 x ULN 
5.1 – 10.0 x ULN 
> 10.0 x ULN 
Alkaline Phosphatase 
(increase by factor) 
1.1 – 2.0 x ULN 
2.1 – 3.0 x ULN 
3.1 – 10.0 x ULN 
> 10.0 x ULN 
Bilirubin (increase by factor) 
1.1 – 1.5 x ULN 
1.6 – 2.0 x ULN 
2.1 – 3.0 x ULN 
> 3.0 x ULN 
Creatinine (increase by factor) 
1.1 – 1.5 x ULN 
1.6 – 3.0 ULN 
> 3.0 ULN 
Dialysis