Biomarkers of Exposure and Effect in Standardized Research E-cigarette (SREC) Users
Phase: PHASE1
Conditions: Smoking, Cigarette
Sponsor: Masonic Cancer Center, University of Minnesota

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 1 of 46 
Revised: April 19, 2017 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
PROTOCOL TITLE: 
 
Biomarkers of Exposure and Effect in SREC Users 
 
 
 
PRINCIPAL INVESTIGATORS: 
 
Principal Investigator (corresponding): 
Co­Principal Investigator: 
Irina Stepanov, PhD. 
Division of Environmental Health Sciences 
612­624­4998 
stepa011@umn.edu 
Dorothy Hatsukami, Ph.D. 
Department of Psychiatry 
612­626­2121 
hatsu001@umn.edu 
 
 
 
 
 
 
VERSION NUMBER/DATE: 
 
Version 16: 03/13/2024 
 
 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 2 of 46 
Revised: April 19, 2017 
REVISION HISTORY 
 
Revision # 
Version Date 
Summary of Changes 
Consent Change? 
1 
12/20/17 
Minor changes to schedule of 
measures and administrative 
corrections.  
Yes 
2 
05/30/18 
Clarified inclusion/exclusion criteria 
and made editorial updates. Minor 
changes to schedule of measures. 
Yes 
3 
07/30/18 
Changes to schedule of measures 
and made editorial updates 
Yes 
4 
09/14/18 
Research related injury language 
was updated per IRB request, data 
sharing language was updated per 
IRB request, minor change to 
schedule of measures table.  
Yes 
5 
10/11/18 
Changed bonus payment structure 
for usual brand group, aligned 
primary/secondary aims with SAP & 
DSMP 
Yes 
6 
05/14/19 
Minor changes to study measures 
table 
No 
7 
09/13/21 
Reduced sample size, reduced study 
duration, changed study product, 
updated COVID procedures,  
Yes 
8 
03/29/22 
Revised study visit and procedure 
processes, noted that SREC. flavors 
will be used, subject payment 
section revised 
Yes 
9 
04/25/22 
Revised protocol from three arms to 
one arm (removed NRT and control 
group). Removed several subjective 
measures. Updated pod dispensing 
calculation.  
Yes 
10 
06/13/22 
Revised inclusion criteria 
No 
11 
10/05/22 
Updated flavor dispensing process, 
revised eligibility criteria, adjusted 
quit­date timeframe and added 
ability to withdraw participants who 
have not completely switched by 
week 2 
Yes 
12 
2/20/2023 
Clarified SAE reporting 
requirements. Updated flavor 
dispensing process, buccal cell 
collection process, and compliance 
session dates. Removed outdated 
No 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 3 of 46 
Revised: April 19, 2017 
references to surveys that were not 
being collected and added exclusion 
criteria for marijuana use. 
13 
4­25­2023 
Per IRB request, updated 
recruitment numbers to reflect 
enrollment versus completer goals 
for the study. Per IRB request, 
language in the consent form was 
updated. 
Yes 
14 
07/28/2023 
Per IRB request, updated monitoring 
responsibility text. Removed Hanna 
Vanderloo from study information. 
No 
15 
10/30/2023 
Per IRB request, updated exclusion 
criteria to exclude persons with 
medical history of thromboembolic 
events and/or cerebrovascular 
events, or medical diagnosis that 
LMP believes is high risk for 
thromboembolic events and/or 
cerebrovascular events. 
No 
16 
03/13/2024 
Following HRPP audit, the protocol 
and consent form are being revised 
to address findings. Clarified 
biosample tracking language and 
procedures in the protocol. Revised 
explanation of circumstances in 
which clinical health data like BP 
would be shared with clinicians in 
the protocol and consent. Updated 
the consent to include new language 
on the use of deidentified data and 
samples of participants in future 
research.  Added section 4.6 
detailing product destruction 
procedures. 
Yes 
 
 
 
 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 4 of 46 
Revised: April 19, 2017 
Table of Contents 
 
1.0 
Objectives 
7 
2.0 
Background 
8 
3.0 
Study Endpoints/Events/Outcomes 
13 
4.0 
Study Intervention/Investigational Agent 
15 
5.0 
Procedures Involved 
16 
6.0 
Data and Specimen Banking 
21 
7.0 
Sharing of Results with Participants 
22 
8.0 
Study Population 
22 
9.0 
Vulnerable Populations 
24 
10.0 
Local Number of Participants 
24 
11.0 
Local Recruitment Methods 
24 
12.0 
Withdrawal of Participants 
25 
13.0 
Risks to Participants 
26 
14.0 
Potential Benefits to Participants 
30 
15.0 
Statistical Considerations 
30 
16.0 
Confidentiality 
32 
17.0 
Provisions to Monitor the Data to Ensure the Safety of Participants 
32 
18.0 
Provisions to Protect the Privacy Interests of Participants 
36 
19.0 
Compensation for Research­Related Injury 
36 
20.0 
Consent Process 
37 
21.0 
Setting 
38 
22.0 
Multi­Site Research 
38 
23.0 
Resources Available 
38 
24.0 
References 
38 
 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 5 of 46 
Revised: April 19, 2017 
ABBREVIATIONS/DEFINITIONS 
●  AE:  Adverse effect 
●  BP:  Blood pressure 
●  BPM:  Beats per minute 
●  CES:  Cigarette Evaluation Scale 
●  CESD:  Centers for Epidemiological Studies­Depression 
●  CO:  Carbon monoxide 
●  CPD:  Cigarettes per day 
●  FDA:  Food and Drug Administration  
●  FTND:  Fagerström Test for Nicotine Dependence 
●  HMPMA:  4­hydroxybut­2­ylmercapturic acid 
●  2­HPMA: 2­Hyrdoxypropylmercapturic acid 
●  3­HPMA: 3­Hydroxypropylmercapturic acid 
●  HR:  Heart rate 
●  ITP:  Investigational Tobacco Product 
●  ITR:  Interactive Text Response 
●  ITRS: Interactive Text Response System 
●  NIDA:  National Institute for Drug Abuse 
●  NMR:  Nicotine metabolite ratio 
●  NNAL:  4­(Methylnitrosamino)­1­(3­pyridyl)­1­butanol  
●  NNN:  N′­Nitrosonornicotine 
●  PAH:  Polycyclic aromatic hydrocarbons  
●  PheT:  Phenanthrene tetraol 
●  PS­ECDI: Penn State Electronic Cigarette Dependence Index  
●  SAE:  Serious adverse event 
●  SREC:  Standardized Research E­cigarette 
●  TNE:  Total Nicotine Equivalents 
●  VOC:  Volatile organic compounds 
 
 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 6 of 46 
Revised: April 19, 2017 
STUDY SUMMARY 
 
Study Title 
Biomarkers of Exposure and Effect in SREC 
Users 
Study Design 
Within­subjects, repeated measures study  
Primary Objective 
Measure biomarkers of tobacco constituents and 
inflammation in smokers who will switch for six 
weeks to the Standardized Research E­cigarette 
(SREC) developed by the National Institute on Drug 
Abuse. 
Secondary Objective(s) 
Collect and analyze information on behavioral 
aspects and a comprehensive panel of subjective 
measures, including patterns and topography of 
SREC use. 
Research 
Intervention(s)/Investigationa
l Agents 
Standard Research E­cigarette (SREC) developed 
by the National Institute on Drug Abuse  
IND/IDE # (if applicable) 
IU0000806, IU0000807, IU0000935, IU0000937, 
IU0000939/P00128 
Investigational Drug Services 
# (if applicable) 
NA 
Study Population 
Cigarette smokers 
Sample Size (number of 
abstinent completers) 
30 
Study Duration for Individual 
Participants 
A total 11 weeks: 1 week baseline period, 6 weeks 
of assigned product use and a follow­up at week 10 
 
 
 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 7 of 46 
Revised: April 19, 2017 
1.0 
Objectives 
Given the exponential growth of the prevalence of e­cigarette use in the United States, 
particularly among the youth and cigarette smokers,1­3 understanding the potential 
toxicity associated with these devices is paramount. For instance, some e­cigarettes may 
be exposing users to harmful constituents, and the number of such constituents identified 
in various e­cigarettes continues to grow, including toxic chemicals formed from the e­
liquid base components propylene glycol and glycerol.4­7 Therefore, better assessment of 
harmful exposures and resulting macromolecular alterations in e­cigarette users are 
critical for characterizing electronic cigarettes.  
This study is focused on characterizing the toxic and carcinogenic potential of the 
Standardized Research E­cigarette (SREC) developed by the National Institute on Drug 
Abuse. In the environment of continuously changing e­cigarette market, SREC was 
developed as a model e­cigarette that will remain available for an extended period of time 
and can be used as a bridging element in various studies aimed at evaluating the value 
and limitations of e­cigarettes as tobacco risk reduction tools.  
Our overall goal is to generate initial reference data on chemical exposures and 
associated effects in smokers switching to SREC. Biomarkers of exposure and effect are 
important tools in assessing harmful effects. In smokers, biomarkers of certain tobacco 
toxicants and carcinogens, such as tobacco­specific N­nitrosamines (TSNA), polycyclic 
aromatic hydrocarbons (PAH), and volatile organic compounds (VOC) have been related 
to both the levels of exposure and the risk of cancer. In addition, certain chemicals 
identified in some e­cigarettes can potentially cause oxidative stress and inflammation, 
and result in DNA damage – effects that are strongly implicated in the etiology of chronic 
diseases, including cancer and cardiovascular disease.8­11 Therefore, it is also important to 
assess relevant biomarkers of effect, such as DNA adducts and inflammatory markers. 
Lastly, our recent data indicate that the potent oral and esophageal carcinogen N′­
nitrosonornicotine (NNN), which is present only in trace levels in e­cigarettes, can be 
formed in saliva of e­cigarette users,12 and this process needs to be carefully examined. 
In the proposed study, over the 6­week experimental phase, subjects will be asked to 
completely switch from smoking to SREC. The specific aims and hypothesis are as 
follows: 
Primary Aim 1: To analyze a panel of exposure biomarkers in the urine of smokers 
switched to SREC and compare the exposure profiles against baseline measures (while 
smoking) and the available data on the levels of these biomarkers in non­users of 
tobacco/nicotine products. The biomarkers will include total nicotine equivalents (TNE, 
biomarker of nicotine), total NNAL and total NNN (TSNA biomarkers), PheT (PAH 
biomarker), and mercapturic acids HMPMA, 2­HPMA, and 3­HPMA (biomarkers of 
VOC). 
Hypothesis: There will be significant reductions in exposure in switchers to SREC, to the 
levels typically found in non­users of nicotine/tobacco products.  
Secondary Aim 1: To compare formaldehyde­DNA adducts and oxidative DNA adduct 
8­oxo­dG in DNA from oral cells and leukocytes, a comprehensive panel of circulating 
cytokines and chemokines, and the urinary biomarkers of oxidative damage and 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 8 of 46 
Revised: April 19, 2017 
inflammation 8­iso­PGF­2α and PGEM in smokers switched to SREC against the 
baseline levels and the available data on non­users of nicotine/tobacco products. In a 
subset of study participants, a comprehensive panel of circulating cytokines and 
chemokines will be also analyzed in plasma. 
Hypothesis: The levels of biomarkers of effect in SREC switchers will be lower than at 
baseline (while smoking cigarettes), but higher than those found in non­users of 
nicotine/tobacco.  
Secondary Aim 2: To analyze salivary NNN and the NNN­derived HPB­releasing DNA 
adducts in oral cell in smokers who completely switch to SREC, and compare to baseline 
measures (while smoking) and the available data on the levels of these biomarkers in 
non­users of tobacco/nicotine products. Only verified switchers to SREC (as determined 
by analyzing urinary biomarkers in Aim 1) will be included in these analyses. 
Hypothesis: Levels of salivary NNN and HPB­releasing DNA adducts will be lower after 
switching to SREC than at baseline, and higher than in non­users of nicotine/tobacco.  
For all Aims, data on the levels of biomarkers in non­users of tobacco/nicotine products 
will be retrieved from our recently completed study. In addition, data on smokers from 
the same study will be used as a reference, to verify that baseline levels of biomarkers 
assessed in our participants in Aims 1­3 are representative of the typical levels found in 
smokers. 
Collectively, this study will contribute to better understanding of the long­term health 
effects that may be associated with e­cigarette use. 
 
2.0 
Background 
Electronic cigarettes (e­cigarettes) offer a promise of a less harmful alternative to 
smoking tobacco cigarettes. Compared to more than 7,000 constituents that have been 
identified in tobacco and cigarette smoke, the number of constituents that may be present 
in e­liquid and e­cigarette aerosol is relatively small. Furthermore, the levels of harmful 
constituents that have been measured in some e­cigarette aerosols are generally much 
lower when compared to cigarette smoke.13 However, emerging data including our 
preliminary studies suggest that e­cigarette use may pose certain health risks. For 
instance, aerosol of e­cigarettes operated at high voltage may contain substantial amounts 
of formaldehyde, a genotoxic agent that has been classified by the International Agency 
for Research on Cancer (IARC) as carcinogenic to humans.14 In addition, our preliminary 
data indicate that e­cigarette users may experience elevated oxidative damage and 
inflammation. Lastly, while the reported levels of the tobacco­specific oral and 
esophageal carcinogen N′­nitrosonornicotine (NNN) are extremely low in e­cigarettes, 
endogenous formation of this carcinogen has been demonstrated in laboratory animals,15 
is possible in humans,16;17 and our preliminary data show that it can be found in saliva of 
e­cigarette users.12 Better assessment of such exposures and resulting macromolecular 
alterations are critically important in characterizing an electronic cigarette device and can 
provide critical insights into the potential long­term health effects of e­cigarette use. 
Given that popularity of e­cigarettes has grown exponentially since they were first 
introduced in the U.S., particularly among the youth and cigarette smokers,1­3 such 
research is highly significant.  

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 9 of 46 
Revised: April 19, 2017 
In this proposal we will use a panel of relevant and novel biomarkers in smokers who will 
switch for six weeks to the Standard Research E­cigarette (SREC) developed by the 
National Institute on Drug Abuse. We will monitor our study subjects for the levels of 
tobacco constituent metabolites in urine (biomarkers of exposure, Aim 1), DNA adducts 
and inflammatory markers (biomarkers of effect, Aim 2), and will investigate NNN 
formation and the resulting DNA damage in the oral cavity (Aim 3). This panel of 
biochemical measures will be accompanied by a comprehensive panel of subjective 
measures, including patterns and topography of SREC use, altogether generating valuable 
reference data for SREC.  
Tobacco constituent biomarkers  
Nicotine is the major known addictive agent of tobacco and cigarette smoke,22 and a key 
component of most e­cigarette liquids. Nicotine exposure is measured by analyzing total 
nicotine equivalents (TNE), the sum of urinary total nicotine, nicotine­N­oxide, total 
cotinine, and total 3'­hydroxycotinine. TNE account for 73 – 96% of the nicotine dose22 
and are an outstanding monitor of nicotine uptake.22 Tobacco­specific N­nitrosamines 4­
(methylnitrosamino)­1­(3­pyridyl)­1­butanone (NNK) and NNN are likely causative 
agents for cancers of the lung, pancreas, oral cavity, and esophagus in tobacco users,23­25 
and are classified as human carcinogens by the International Agency for Research on 
Cancer (IARC).24;25 NNN and NNK are present at relatively high levels in cigarette 
smoke, but only trace levels have been measured in e­cigarettes.13;26  Human exposure to 
NNK is measured by analyzing the sum of 4­(methylnitrosamino)­1­(3­pyridyl)­1­
butanol (NNAL) and its glucuronides in urine; this validated and widely applied 
biomarker is referred to as total NNAL.27­29 Total NNAL correlates with cigarettes per 
day, nicotine equivalents in urine, and cotinine,30;31 and is an effective uptake marker for 
NNK.32 Human exposure to NNN is measured by analyzing the sum of unchanged NNN 
and its N­glucuronide excreted in urine (total NNN).33;34 Consistent with the known 
carcinogenicity of NNK and NNN, several nested case­control studies in smokers have 
demonstrated that urinary total NNAL is related to lung cancer and urinary total NNN is 
related to esophageal cancer risk.35­39 Thus, urinary NNAL and NNN are biomarkers of 
both exposure and cancer risk. Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) are formed 
during the incomplete combustion of organic matter, always occur as mixtures, and many 
are potent carcinogens or toxicants in laboratory animals.40;41 PAH are widely accepted as 
major contributors to lung cancer in smokers,41­44 and only trace levels of a few PAH 
have been reported in e­cigarettes.45 1­Hydroxypyrene (1­HOP) is an established 
biomarker of PAH exposure.34 Certain volatile compounds such as acrolein, 
crotonaldehyde and propylene oxide are important toxicants and carcinogens in cigarette 
smoke,29 and can also be also formed upon heating and vaporization of propylene glycol 
and glycerin in e­cigarette aerosol. Acrolein is an intense irritant, causes cilia­toxicity in 
the lung, and is proposed to be a lung carcinogen,46;47 crotonaldehyde is a potent irritant 
and forms DNA adducts in the human lung,48 and propylene oxide is an IARC Group 2B 
carcinogen. Acrolein, crotonaldehyde, and propyene oxide are excreted in the urine as 3­
hydroxypropylmercapturic acid (3­HPMA), 3­hydroxy­1­methylpropylmercapturic acid 
(HMPMA), and 2­hyrdoxypropylmercapturic acid (2­HPMA), respectively. These 
biomarkers can be readily measured by established validated methods.49­52 The structures 
of these urinary tobacco constituent biomarkers are illustrated in Figure 1.  

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 10 of 46 
Revised: April 19, 2017 
Figure 1. Urinary biomarkers to be analyzed in this study 
In our preliminary published study on carcinogen and toxicant biomarkers in urine of 28 
e­cigarette users who quit smoking 2­36 months before study entry (median 9 months), 
levels of NNAL, 1­HOP, 2­HPMA, 3­HPMA, and HMPMA were significantly lower in 
the urine of e­cigarettes users than in smokers.53 In studies by Ruiz et al.54 and Goniewicz 
et al.55, in which cigarette smokers switched to e­cigarette use for 5 days and 2 weeks, 
respectively, significant reductions in the levels of these biomarkers were also observed. 
The findings of these three studies are summarized in Table 1. While all three studies 
show general decrease in toxicant and carcinogen exposures in e­cigarette users as 
compared to smokers, the inconsistencies in study designs (e.g., recruitment of current e­
cigarette users vs. switching from smoking to e­cigarettes for various periods of time), 
the differences in e­cigarette brands and duration of use, and reported biomarker units 
make it difficult to clearly define these exposures in e­cigarette users and generalize the 
results to other e­cigarette products.  
Formaldehyde­derived DNA adducts 
As with most chemical carcinogens, DNA damage is critical in formaldehyde 
carcinogenesis because DNA adducts, if unrepaired, can cause mutations in critical genes 
such as K­RAS and TP53, leading to loss of normal cellular growth control mechanisms 
and cancer. Our group was the first to demonstrate the presence of a specific 
formaldehyde­DNA adduct, N6­hydroxymethyldeoxyadenosine (N6­HOCH2­dAdo), in 
DNA from smokers’ leukocytes. Measurement of this adduct in humans showed that its 
levels are related to smoking, with remarkable differences in N6­HOCH2­dAdo being 
observed between smokers and nonsmokers.56;57 These adducts can be measured in DNA 
extracted from either blood or oral cells.58  

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 11 of 46 
Revised: April 19, 2017 
Table 1. Reported reductions in tobacco­related urinary biomarkers in e­cigarette users. 
Study 
Our preliminary study53 
28 e­cigarette users who quit 
smoking 2­36 months before 
study entry; a variety of e­
cigarette brands used. 
Ruiz et al.54 
15 smokers who completely 
switched to researchable Blu e­
cigarettes with tobacco­flavored 
e­liquid containing 24 mg/mL 
nicotine. 
Goniewicz et al.55 
20 smokers who 
switched to M201 Mild 
e­cigarettes with 
tobacco­flavored 
cartridges containing 11 
mg nicotine (only 9 
complete switchers). 
Biomarker 
Level in e­
cigarette users 
Estimated 
% of 
smokers’ 
levels 
Level after 5 
days of e­
cigarette use 
% of baseline 
smoking level 
Level after 
2 weeks of 
e­cigarette 
use 
% of 
baseline 
smoking 
level 
NNAL 
0.02 pmol/mL 
1.3 
174 ng/24h 
40 
80 ng/g 
35 
1­HOP 
0.38 pmol/mL 
43 
94 ng/24 h 
30 
746 ng/g 
96 
2­HPMA 
141 pmol/mL 
35 
Not analyzed 
Not analyzed 
21 µg/g 
47 
3­HPMA 
1100 pmol/mL 
19 
214 µg/24 h 
14 
410 µg/g 
44 
HMPMA 
705 pmol/mL 
14 
71 µg/24 h 
13 
616 µg/g 
33 
Inflammation and oxidative damage 
Inflammation involves infiltration of lymphocytes, macrophages, and neutrophils into 
tissues under stress, and  induces lipid peroxidation, resulting in the generation of a 
spectrum of reactive oxygen and nitrogen species capable of causing extensive damage to 
DNA and proteins, and leading to toxic and mutagenic events.59;60 Chronic inflammation 
and oxidative stress are important interlinked contributing factors in the pathogenesis of 
cigarette smoke­associated diseases, including lung cancer.61­66 Inflammation leads to the 
induction of the immediate­early response gene prostaglandin G/H synthase­2 (COX­2).67 
The product of COX­2, prostaglandin E2, is metabolized to PGEM, a urinary metabolite 
which has been associated with cancer development in a variety of studies.68 Levels of 
PGEM are reported to be significantly higher in current smokers than in former smokers 
than in never­smokers, which is thought to reflect inflammation in the lung due to 
induction of COX­2.69;70 Oxidative stress­induced peroxidation of arachidonic acid 
results in the production of F2­iosprostanes, among which urinary 8­iso­PGF2α is an 
accepted biomarker of oxidative damage.71;72 Many studies consistently report that levels 
of 8­iso­PGF2α are elevated in smokers.34;73­75  
In our preliminary study, we have found that levels of 8­iso­PGF2α and PGEM are similar 
in the urine of e­cigarette users and cigarette smokers (same subjects as in Table 1). The 
median levels of 8­iso­PGF2α were 0.80 pmol/mL urine (range 0.13­2.17, N=28) in e­
cigarette users, the same as 0.80 pmol/mL (range 0.18­2.74, N=83) in cigarette smokers 
from a recently completed study. For PGEM, the median values (in pmol/mL) were 32.1 
(5.0­184, N=28) in e­cigarette users vs. 31.4 (range 3.0­149, N=86) in cigarette smokers. 
This is in contrast with the expected decrease to normal levels after 2 weeks of smoking 
cessation.71;76­78 Our subjects used various e­cigarette brands and e­liquid types, and it is 
not clear whether the elevated levels of inflammatory and oxidative markers were due to 
exposures to high levels of formaldehyde from their e­cigarettes. Measurement of 8­iso­
PGF2α and PGE­M in the proposed study, in which subjects will use SREC e­cigarettes 
containing low levels of formaldehyde (0.1 µg per puff) and operating at a relatively low 
voltage (3.30 V), will eliminate this potential contributing factor and allow to examine 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 12 of 46 
Revised: April 19, 2017 
the potential capacity of the low­formaldehyde e­cigarette aerosol to sustain the high 
levels of systemic inflammatory state in former smokers.   
Oxidative DNA damage is likely involved in tumor promotion and other harmful effects 
of smoking79;80. Measurement of DNA adducts can offer a direct assessment of such 
damage. Direct oxidation of guanine produces 8­oxo­7,8­dihydro­2′­deoxyguanosine (8­
oxo­dG), which is widely used as a biomarker of oxidative stress.81 We recently 
developed a highly sensitive LC­MS/MS method for the analysis of 8­oxo­dG in very 
small amounts of DNA,82 and will use this method to assess oxidative DNA damage in 
our study subjects. Circulating cytokines and chemokines, such as CRP, TGFα, IL6, IL8, 
and others, are well­established biomarkers associated with lung cancer and 
cardiovascular disease risk.83 These systemic inflammation markers will be also assessed 
to provide a comprehensive oxidative and inflammatory profile in our study subjects.  
Endogenous formation of NNN  
Human exposure to NNN can result from two sources: in addition to the direct intake 
from tobacco­containing products, this carcinogen can also be formed endogenously from 
nornicotine, which is a tobacco constituent and also a nicotine metabolite. For instance, 
co­administration of nornicotine and nitrite led to the formation of NNN in laboratory 
animals,15 and we previously reported evidence of endogenous NNN formation in some 
users of oral nicotine replacement therapy products such as nicotine gum or lozenge.16;17 
This process is likely to occur in the oral cavity where metabolically­formed nornicotine 
can be excreted by salivary glands and react with nitrite, which is formed in oral cavity 
via the bacterial reduction of dietary nitrate.84­87 In agreement with this hypothesis, we 
recently reported that NNN can be formed from nornicotine in human saliva without 
deliberate addition of any other substance.88 We also conducted preliminary investigation 
of NNN formation of NNN in saliva of e­cigarette users. Salivary NNN and urinary 
tobacco biomarkers, including total NNN, were analyzed in 20 e­cigarette users (various 
e­cigarette brands, 3 to 36 months reported duration of exclusive e­cigarette use) and 
compared to smokers and nonsmokers. The geometric mean of NNN in saliva of e­
cigarette users was 2.60 pg/mL, ranging from non­quantifiable (LOQ) to 76.0 pg/mL, 
while in smokers, salivary NNN ranged from LOQ to 739.0 pg/mL. Approximately 80% 
of smokers had salivary NNN in the range of levels found in e­cigarette users (Figure 2). 
Consistent with a previous report,53 very low levels of urinary total NNN were present in 
only 5 out of 20 e­cigarette users (ranging from 0.001 to 0.01 pmol/mL urine), and only 
trace levels of NNN were found in e­cigarette liquids. Together, our findings demonstrate 
that NNN is formed in the oral cavity of e­ cigarette users. However, there were 
important limitations in this preliminary study. We did not analyze NNN content in 
specific e­cigarettes/e­liquids used by the study subjects. Therefore, even though the 
results of our and other studies consistently indicate that levels of NNN are minimal in e­
cigarette liquids and aerosols, we could accurately quantify the potential contribution of 
e­cigarette­derived NNN to the amount of this carcinogen measured in saliva of e­
cigarette users. In addition, we did not collect information on secondhand smoke 
exposure in nonsmokers or e­cigarette users, and such exposure could have been  

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 13 of 46 
Revised: April 19, 2017 
Figure 2. Distribution of  salivary NNN in e­
cigarette users and smokers.12 
 responsible for the presence of trace levels of tobacco biomarkers in some e­cigarette 
users in our study. The proposed study will address these limitations and will help to 
better understand the factors affecting the extent of NNN formation in the oral cavity of 
e­cigarette users. 
 
HPB­releasing DNA adducts in oral cells 
Metabolic activation of NNN and NNK leads to the formation of pyridyloxobutyl 
(POB)−DNA adducts.23;89 Under strong acid hydrolysis conditions, the majority of 
POB−DNA adducts decompose to release 4­hydroxy­1­(3­pyridyl)­1­butanone 
(HPB).90;91 HPB­releasing adducts may cause mutations in critical genes associated with 
cancer, and the importance of these adducts in NNN and NNK carcinogenesis has been 
demonstrated.23;42 We recently developed a highly sensitive high resolution LC­MS/MS 
assay for the measurement of HPB­releasing DNA adducts in oral cells – a non­invasive 
source of DNA and a promising surrogate tissue for assessing NNN­ and NNK­induced 
molecular alterations in the aerodigestive tract.92;93 The method was tested by analyzing 
oral samples from 65 smokers, including 30 head and neck squamous cell carcinoma 
(HNSCC) patients and 35 cancer­free controls. These analyses revealed a remarkable 
difference between the two groups: the median HPB­releasing DNA adduct level was 6.6 
times greater for those with HNSCC than for smokers without HNSCC (p = 0.002).93 
Additional multivariate regression adjusting for gender, age and alcoholic frequency 
showed persistent significant difference in HPB­releasing adduct levels between cases 
and controls with a ratio of geometric means equal to 20.0 (95% CI=2.7­148.6) 
(unpublished data). Together, these findings suggest that levels of HPB­releasing DNA 
adducts in oral cells may be an independent predictor of HNSCC in smokers. Therefore, 
in Aim 3, we will also investigate whether HPB­releasing DNA adducts will be present in 
oral cells after complete switching to SREC (due to NNN formation in saliva). The 
lifespan of buccal cells is approximately 7­11 days (from formation to shedding), and we 
expect that only new cells, not previously exposed to cigarette smoke, will be collected in 
complete switchers at weeks 4 and 6. 
 
 
3.0 
Study Endpoints/Events/Outcomes 
3.1  Primary Endpoints 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 14 of 46 
Revised: April 19, 2017 
●  Changes in biomarkers of various toxicant and carcinogen exposures at 4 and 6 
weeks after participant switched to the SREC device (Aim 1).  
3.2  Secondary Endpoints 
●  Changes in inflammatory biomarkers and DNA adducts at 4 and 6 weeks after 
switching to the SREC device (Aim 2). 
●  Levels of NNN and nornicotine in saliva and HPB­releasing DNA adducts in oral 
cells of complete switchers to SREC.  
Biomarkers that will serve as primary endpoints are summarized in Table 2. For all 
biomarkers, the potential changes relative to baseline (% change) will be assessed. 
Table 2. Carcinogen, toxicant, and inflammatory biomarkers to be analyzed in this 
study 
Biomarkers* 
Source 
Matrix 
Aim 1 – Biomarkers of exposure 
TNE 
Nicotine 
Urine 
Total NNAL 
NNK 
Urine 
Total NNN 
NNN 
Urine 
PheT 
PAH 
Urine 
2­HPMA 
Propylene oxide 
Urine 
3­HPMA 
Acrolein 
Urine 
HMPMA 
Crotonaldehyde 
Urine 
CEMA 
Acrylonitrile 
Urine 
Aim 2 – Biomarkers of effect 
N6­HOCH2­dAdo 
Formaldehyde 
Oral cells, 
leukocytes 
8­oxo­dG 
Oxidative stress, inflammation 
Oral cells, 
leukocytes 
Cytokines and chemokines 
Oxidative stress, inflammation 
Plasma 
8­iso­PGF2α  
Oxidative stress 
Urine 
PGE­M 
Inflammation 
Urine 
Aim 3 – NNN formation in oral cavity 
NNN 
Nornicotine nitrosation 
Saliva 
Nornicotine 
Nornicotine or nicotine metabolism 
Saliva 
HPB­releasing DNA adducts 
NNN and NNK metabolic activation 
Oral cells 
* Abbreviations: TNE, total nicotine equivalents; NNAL, 4­(methylnitrosamino)­1­(3­pyridyl)­1­butanol; 
NNN, N′­nitrosonornicotine; PheT, phenanthrene tetraol; 2­HPMA, 2­hyrdoxypropylmercapturic acid; 3­
HPMA, 3­hydroxypropylmercapturic acid; HMPMA, 4­hydroxybut­2­ylmercapturic acid; N6­HOCH2­
dAdo, N6­hydroxymethyl­deoxyadenosine; 8­oxo­dG, 8­oxo­7,8­dihydro­2′­deoxyguanosine; 8­iso­PGF2α, 
9,11,15­trihydroxyprosta­5,13­dien­1­oic acid; PGE­M, 11α­hydroxy­9,15­dioxo­2,3,4,5­tetranorprostane­
1,20­dioic acid; HPB, 4‑hydroxy­1­(3­pyridyl)­1­butanone. 
●  Product use: For cigarettes, cigarettes per day will be assessed based on a daily 
entries into an Interactive Text Response System (ITRS). For SREC, number of 
bouts and estimated number of puffs will be assessed based on self­reported daily 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 15 of 46 
Revised: April 19, 2017 
ITR entries, and amount of e­liquid consumed will be assessed by difference in 
pod weights before and after use.  
●  Cigarette avoidance: the number of cigarette avoidance days, defined as no 
tobacco cigarettes smoked in the past 24 hours based on daily ITR entries, and the 
rate of cigarette avoidance, calculated as the proportion of cigarette avoidance 
days out of the total number of days in the product use period (approximately 42 
days for those who complete the study).  
3.3 Exploratory Endpoints 
●  Scores on subjective measures:  
o  Fagerstrom Test for Nicotine Dependence (FTND);94  
o  Wisconsin  Index  of  Smoking  Dependence  Motives  is  a  multidimensional 
measure of dependence based on theoretically grounded motives for drug use 
and intended to reflect mechanisms underlying dependence; subscales have 
been found to be related to smoking heaviness and relapse;95  
o  Product Evaluation Scale is a 7­point Likert­type scale that includes items 
from  the  Cigarette  Evaluation  Scale98  and  from  a  scale  that  was  used  to 
evaluate  various  medicinal  nicotine  products97  to  assess  psychological 
reward, satisfaction and aversiveness (Cigarette Evaluation Scale will be used 
at baseline);  
o  Product Expectancies Scale; 
o  Drug Effects/Liking Questionnaire;99  
o  E­Cigarette Purchase Task 
3.4 Safety Endpoints 
●  Adverse Events Scale assesses the nature, severity, duration, action taken, and 
outcome of adverse events related to tobacco product use;  
●  Potential adverse consequences: Change in mental (CESD) or physical health 
(heart rate, blood pressure, exhaled CO level, weight, Respiratory and Global 
Health Questionnaire, Health Changes Questionnaire, Adverse Events)  
●  Change in alcohol, substance use (Alcohol Use Questionnaire, Drug Use 
Questionnaire) 
●  Other tobacco product use 
 
4.0 
Study Intervention/Investigational Agent 
4.1  Description of Product 
Standardized research e­cigarette (SREC). The device and the disposable pods with 
liquids are manufactured by the NJOY company. The use of SREC is subject to the FDA 
Investigational Tobacco Product (ITP) review and will be used only after such review is 
completed. The device operates using a rechargeable 400 mAh lithium­ion battery and 
uses sealed disposable 1.9­mL pods with e­liquid containing 5% w/w nicotine. Flavors 
that will be used include tobacco, menthol, watermelon and blueberry. The device uses a 
battery that can be recharged via a micro USB port. The e­liquid and the aerosol are well­
characterized in terms of chemical impurities and by­products (such as aldehydes), which 
are minimal.  

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 16 of 46 
Revised: April 19, 2017 
4.2  Product Handling  
Participants will receive the SREC products free of charge. The product will be used ad 
libitum. SREC will be purchased directly from NJOY, and all packaging will be labeled 
“for investigational use only.” The products will be stored at Tobacco Research Programs 
at 717 Delaware SE in locked cabinets. Only authorized study coordinators will have 
access to the products and will dispense them to study participants.  
4.3  ITP for SREC 
An Investigational Tobacco Product application has been submitted for the use of SREC 
in this study. The communication from the FDA Center for Tobacco Products stated that 
there are no concerns with the proposed investigational use of SREC as described in this 
protocol (FDA STN # IU0000806, IU0000807, IU0000935, IU0000937, 
IU0000939/P00128).  
4.4 
Biosafety 
Not applicable  
4.5 
Stem cell research 
Not applicable 
4.6      Product Disposal 
Any unused, expired or returned products will be disposed of in collaboration with the U 
of M Department of Environmental Health and Safety – Regulated Waste. All disposed 
product will be counted, logged and weighed prior to disposal. A disposal professional 
from Environmental Health and Safety will collect the products slated for disposal after 
the last participant completes the study. The disposal log and destruction trail will be 
stored on Box. See SREC.Product.Disposal.SOP.V1 for additional details. 
 
5.0 
Procedures Involved 
5.1  Study Design  
Smokers will be asked to completely switch to SREC for 6 weeks. Study participants will 
be assessed at baseline and weeks 1, 2, 3, 4, and 6 for complete switching from cigarettes 
to SREC, as well as SREC use patterns and subjective measures. The potential changes in 
the levels of various toxicant and carcinogen exposures, inflammatory biomarkers, DNA 
adducts, and oral NNN formation will be assessed at baseline and at 4 and 6 weeks. The 
proposed clinical trial procedures and measures have been used in a number of studies we 
have conducted.101­103  
5.2  Study Procedures  
Smokers will undergo a screening visit, a baseline period to collect data and biological 
samples for the assessment during usual brand cigarette smoking, five clinic visits over 
the 6­week assessment period after product assignment, and a follow­up visit at 4 weeks 
after the end of the study. Study visits and measures are summarized in Table 3.  

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 17 of 46 
Revised: April 19, 2017 
Screening:  The purpose of this visit is to inform the subjects about the study protocol, 
obtain informed consent, and further screen for eligibility (after being pre­screened over 
the telephone or online).  In­person procedures will be completed curbside at the research 
clinic or socially distanced in the clinic to minimize contact between the study subject 
and coordinator. After obtaining informed consent, which will be done remotely using a 
secure video­conferencing link, screening questionnaires will be completed to collect 
demographic data and smoking history.  Additionally, we will administer medical, and 
medication history questionnaires. Those who meet our preliminary eligibility will have a 
Baseline 1 visit scheduled. Our Licensed Medical Professional will review these health 
questionnaires for consistency and eligibility for the study.  A reminder call or text will 
be sent to the participant prior to this visit. 
Baseline period: (Baseline 1) Once the participant arrives to the clinic visit (University 
of Minnesota – Tobacco Research Programs, 717 Delaware St. SE), their vitals will be 
collected. Next, participants will be handed a carbon monoxide (CO) device and asked to 
blow into the machine. Participants of childbearing potential will be asked to provide a 
urine sample to test for pregnancy. Vitals collection, CO measurement and confirmation 
of pregnancy will be the final criteria to determine the subject’s eligibility. If eligible, the 
participants will be shown how to complete the daily ITR and given a urine cup and 
instructions on how to collect their first morning void urine the morning of their next 
visit. They will be asked to return to the clinic one week later for Baseline 2. Upon 
arriving to Baseline 2, the first morning void urine will be collected and the daily ITR  
reviewed. Vitals and CO will be collected. Participants will be given a plastic cup and 
asked to rinse their mouth with tap water. This is done in preparation for the oral sample 
collection (saliva and buccal cells), which will occur at the end of visit, at least 20 
minutes after the rinse. Participants will also be asked to complete several online surveys. 
 
Participants will be provided counseling throughout the study to help them quit the use of 
cigarettes. Once assigned to SREC, the study coordinator will work with the participant 
to set a quit date approximately 3­5 days after assignment. In the period leading up to the 
quit date, participants will be encouraged to try the product and use it regularly to ensure 
the product and the study are a good fit for them. This approach is incorporated to 
maximize the likelihood that participants who proceed with the study will comply with 
the requirements.  One day before the set quit date, the coordinator will schedule a zoom 
meeting with the participant to go over ways to quit and discuss the incentive program we 
are using to help them quit. Approximately one day after the set quit date, the coordinator 
will contact the participant to see how they are managing and discuss ways to address any 
barriers to quitting they are experiencing. Additional counseling will be available 
throughout the study as needed for each individual participant. 
Product dispensing and use instructions: Participants will be instructed to stop smoking 
and completely switch to SREC, using it ad libitum. At the baseline 2 visit, they will 
receive two devices with the USB cable, and sufficient number of refill pods to last until 
the next visit. Participants who smoke <10 cigarettes per day (CPD) will receive 4 pods, 
10­20 CPD will receive 6 pods and 20+ CPD will receive 8 pods. Participants will be 
asked to contact the study staff if (s)he uses more than one pod on two days during the 
week, to supply them with additional pods. Participants will be allowed to choose a 
primary flavor they want to use and will be given a sample of one alternative flavor to try 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 18 of 46 
Revised: April 19, 2017 
if they choose. They will be allowed to request a different flavor if they decide they no 
longer like the current flavor.  Prior to dispensing to participants, each pod box will be 
labeled with a unique ID, weight of on pod per batch will be recorded, and the pods will 
be placed in an envelope. The envelope will be marked with the dates of the week during 
which they will be used (e.g., “Start: January 22, 2021. End: January 29, 2021”). 
Subjects will be instructed on how to use the SREC device and told to completely empty 
a pod before opening a new one. They will be asked to save all the used pods and put 
them back in the envelope. At the next clinic visit, which will occur one week later, they 
will be asked to bring back the envelope with used and unused pods. The returned pods 
will be counted and weighed to record the consumption. The unused pods will be re­
dispensed to the same subject to use in the following week. Participants will be asked to 
return devices and all remaining pods at the end of the study. 
 
Blood collection. Participants may opt in to have their blood drawn during this study. To 
attenuate the influence of diurnal variations and the influence of feeding status on the 
levels of inflammatory cytokines, the baseline visit and visits at weeks 4 and 6 will be 
held in the mornings. If a subject cannot come in the morning for the clinic visit at 
baseline, weeks 4 or 6, the visit will be scheduled for a later time of the same day, and the 
subject will be offered to come for a blood draw in the morning of the day prior, or up to 
two days after, that visit. Participants will be asked to fast (10 hours) prior to the 
scheduled visit.  By opting in, participants are agreeing to have their blood drawn in the 
morning (before 11:00 am) under fasting conditions. Two 10 mL EDTA tubes will be 
drawn.  
 
Intervention period:  The study calendar is based off of the quit date and subjects will 
come to the clinic weekly for 4 weeks and at week 6.  Biological samples will be 
collected at weeks 4 and 6 after the start of the assigned product use. Prior to the 
biological sample clinic visit, the participant will collect their first morning void urine. 
Once the participant arrives to the clinic, their first morning void urine will be collected.  
Next, they will be asked to rinse their mouth with tap water in preparation for the buccal 
cell collection. At each of the clinic visits, participants will provide a breath CO. If 
participant reports smoking or the CO is high (> 6 ppm), a brief compliance counseling 
session will be conducted to discuss any challenges the participant is facing.  Tools to 
deal with these challenges will be provided.  Their vitals will also be collected. 
Participants will be asked to complete the relevant online surveys (see Table 3). The ITR 
data will also be reviewed for completeness.  Used and unused SREC pods will be 
collected, recorded, and new envelopes with the products will be dispensed to last until 
the next visit, as outlined below.  
At week 1, subjects will receive one envelope with enough product to use until their next 
scheduled visit at week 2. The envelope will be marked with the start and end date. The 
envelope will be brought back to the clinic when they come to the next scheduled visit so 
that weekly use of the product can be assessed. Similarly, at the weeks 2 and 3 visits, 
subjects will receive one envelope with products for the use until their next scheduled 
visit.  At week 4 they will receive two envelopes with enough product to last until their 
week 6 visit. Subjects will be instructed to use the products from the corresponding 
envelopes during each week and place all used and unused products back in the same 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 19 of 46 
Revised: April 19, 2017 
envelopes at the end of each week. Again, subjects will be told to use the entire pod 
before starting a new one.  The number of dispensed SREC pods will be adjusted based 
on the participant’s daily use. Participants will continue to record their product use and if 
applicable, cigarettes smoked.  Daily SREC use will be reported using number of bouts of 
e­cigarette use, estimated number of puffs per bout reported in the ITRS, and the total 
weight of consumed e­liquid (based on the difference of pod weights before and after 
use). Daily use regular cigarettes will be also recorded using the ITRS. 
 
If a participant is unable to achieve cessation (confirmed biologically either via CO or 
urine) within the first two weeks of the study, the participant will be withdrawn. This 
allows us to maximize the number of complete switchers in the study.  
 
Follow up assessment: The purpose of the follow­up visit is to assess the potential 
changes in smoking status or patterns in study participants. Week 10 will be done 
remotely using a secure video­conferencing link. Online surveys will be completed. 
Those continuing to smoke will be strongly advised to quit and treatment resources will 
be provided if requested (Clearing the Air manual). 
 
All in person visits may be switched to curbside or fully virtual if COVID restrictions 
require. The visit procedures will remain the same.   
 
 
Table 3. Schedule of visits and measures 
Study period 
Screen 
Baseline 1 
Baseline 
2 
Product use 
F/U 
WEEK 
92 
91 
0 
1 
2 
3 
4 
6 
10 
Visit window 
 
1 week 
Can be done anytime 
during the week 
­1 
day, + 
3 days 
­1 
day, + 
3 days 
­1 
day, + 
3 
days 
Biological samples and biomarker measures 
Alveolar carbon 
monoxide (CO)  
 
x 
x 
x 
X 
x 
x 
x 
 
Vital signs  
 
x 
x 
x 
X 
x 
x 
x 
 
Urine Pregnancy 
tests* 
 
x 
 
x 
 
 
x 
x 
 
NicCheck Test 
(if applicable) 
 
x 
x 
 
 
 
 
 
 
First morning 
void urine (for 
urinary 
biomarkers 
according to 
Aims 1­3) 
 
 
x 
 
 
 
x 
x 
 
Blood collection 
(morning, 
fasting)******* 
 
 
x 
 
 
 
x 
x 
 
Oral cells 
 
 
x 
 
 
 
x 
x 
 
Saliva 
 
 
x 
 
 
 
x 
x 
 
Subjective measures 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 20 of 46 
Revised: April 19, 2017 
Demographics 
Questionnaire 
x 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tobacco Use 
History and 
Exposure  
x 
 
 
 
 
 
 
 
 
Nicotine 
Dependence 
(FTND)** 
 
 
x 
 
 
 
 
 
 
E­Cigarette 
Dependence (PS­
ECDI) 
 
 
 
 
 
 
 
x 
 
Environmental 
Tobacco Smoke 
Exposure  
 
 
x 
 
 
 
x 
 
 
Occupational & 
Environmental 
Toxicants 
 
 
x 
 
 
 
x 
 
 
Brief Medical 
History 
x 
 
 
 
 
 
 
 
 
Concomitant 
Medications 
x 
 
x 
x 
x 
x 
x 
x 
 
Prime MD  
x 
 
 
 
 
 
 
 
 
CESD 
x 
 
 
 
 
 
x 
x 
 
Alcohol Use 
Questionnaire*** 
x 
 
 
 
x 
 
 
x 
 
Recreational 
Drug Use 
Questionnaire*** 
x 
 
 
 
x 
 
 
x 
 
Respiratory and 
Global Health 
 
 
x 
x 
x 
x 
x 
x 
 
Health Changes 
Questionnaire 
 
 
x 
x 
x 
x 
x 
x 
X 
Adverse Events 
Scale  
 
 
x 
x 
x 
x 
x 
x 
X 
ITR product use 
recording 
 
x 
x 
x 
x 
x 
x 
x 
 
Timeline Follow 
Back (TLFB)***** 
 
 
x 
x 
x 
x 
x 
x 
 
Product Evaluation 
Scale 
 
 
x 
x 
x 
 
x 
x 
 
Purchasing 
Task****** 
 
 
x 
 
 
 
 
x 
 
Drug 
Effects/Liking**** 
 
 
x 
x 
x 
x 
x 
x 
 
Tobacco Use 
Status  
 
 
 
 
 
 
 
 
X 
 
* Pregnancy tests may also be administered at clinic visits if last menstruation reported being more than 35 days ago. 
** All subjects will be evaluated at baseline.  
*** Use over the past 30 days at weeks 2 and 6. 
**** Regular cigarettes will be evaluated at baseline for all subjects; at the following visits only SREC will be evaluated. 
*****To be done if participant reports using other tobacco products on the daily ITR or if there is missing data in the ITRS 
****** At baseline, the cigarette purchase task will be done. At week 6, a product specific purchasing task will be performed. 
*******  Participants may opt-in to have their blood drawn  
 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 21 of 46 
Revised: April 19, 2017 
5.3  Study Duration  
There will be approximately 11 weeks of participation for each subject (1­2 weeks 
between screening and the baseline period, 6 weeks of treatment, and 4 weeks follow­up). 
Over approximately 18 months, male and female smokers (N= up to 120) will be 
recruited for eligibility screening with the goal of 30 compliant completers (total 
abstinence for 6 weeks).   
5.4  Individually Identifiable Health Information  
Information about each subject will be entered into a database by the Study Coordinator.  
Each subject will be coded with a unique number, and only these coded ID’s will be 
entered into the database.  All raw data will be kept in locked file cabinets.   
Only the Study Coordinator and Principal Investigators will have access to individually 
identifiable private information about subjects.  Coded ID’s will be used throughout the 
study by all the researchers involved.  Because this study uses a research e­cigarette and 
we are required to submit an Investigational Tobacco Product application through the 
Food and Drug Administration, the records may potentially be monitored by this 
governmental agency. This information will be provided to the IRB and will be included 
in the human consent form. While all the samples and information will be collected 
specifically to achieve the goals of this proposal, de­identified individual subject data and 
back­up samples may be available to other researchers for research purposes after our 
study is complete.  Consent will be obtained from subjects to allow de­identified 
biosamples to be stored in a biorepository for future analyses of biomarkers or 
genotyping. 
5.5  Use of radiation  
Not applicable  
 
5.6  Use of Center for Magnetic Resonance Research  
Not applicable 
 
6.0 
Data and Specimen Banking 
6.1  Storage and Access  
Biomarker specimens will be collected and stored at the study site (University of 
Minnesota ­ Tobacco Research Programs, 717 Delaware St. SE) until delivery to the 
Masonic Cancer Center’s Dr. Irina Stepanov laboratory for storage and analysis. Sample 
location will be logged in REDCap during initial collection and processing and following 
the transfer from 717 Delaware to Dr. Stepanov’s lab. All biosamples transferred from 
717 Delaware St. SE to Dr. Stepanov’s lab will be logged on the day of their transfer both 
outgoing from 717 and received by the lab. Samples that are not used for the primary 
analysis of study biomarkers will be banked for future use. The banked samples will be 
stored until analyses and destroyed if it is determined they are no longer needed. The 
samples, which may also include DNA or RNA, may be stored up to a maximum of 10 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 22 of 46 
Revised: April 19, 2017 
years from the study’s end. A subject has the right to withdraw consent at any time by 
informing the Principal Investigator by following the instructions provided in the consent 
and HIPAA documents. If this occurs, any remaining identifiable research sample(s) will 
be destroyed.   
6.2  Data  
Data will be stored in a secure database (RedCap) at the study site at the University of 
Minnesota, Masonic Cancer Center. Only study personnel directly involved with the 
study will have access to the linked records.  The samples that will be transferred to the 
laboratory or stored for future analyses will be de­identified.  We will not be transferring 
data that has any identifying information over the internet.     
Biomarker samples (blood, urine, oral and buccal cells) that are banked after the 
completion of the primary analyses will be stored at the Masonic Cancer Center Stepanov 
laboratory located at the Cancer and Cardiovascular Research Building for future use. 
6.3  Release/Sharing  
No identifying information will be shared with outside investigators. If used in any 
collaborative efforts beyond the scope of this study, any shared data will be de­identified. 
However, records for the study may be reviewed by other investigators in the Tobacco 
Research Programs, for instance with the goal of ensuring that participants are enrolled in 
only one study at a time or that they meet the eligibility criteria to participate and to 
maintain their safety.  The records may also be reviewed by departments at the University 
with appropriate regulatory oversight or a representative of the funding agency, National 
Institutes of Health, and the Food and Drug Administration.  
 
7.0 
Sharing of Results with Participants 
Information on the biomarker measurements will not be shared with participants. 
However, results of clinical measures, such as blood pressure or heart rate, may be shared 
with participants if they ask about it or if such measures are out of normal range. If a 
participant will request to share these clinical measures with their clinician, they can 
provide a written request that this clinical information be shared. No biomarker 
measurements will be shared with clinicians.   
 
8.0 
Study Population 
8.1  Inclusion Criteria  
a)  Male or female smokers who are 21­65 years of age and are willing to stop 
smoking and completely switch to e­cigarettes;   
b)  Report smoking ≥ 5 cigarettes daily;  
c)  Biochemically confirmed regular smoking status by a CO level ≥ 6 ppm, (if < 6, 
then NicCheck test of 6 or greater); 
d)  Smoking daily for at least 1 year;  

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 23 of 46 
Revised: April 19, 2017 
e)  No unstable and significant medical or physical conditions as determined by the 
licensed medical professional (to ensure safety of the subject, to minimize the 
effects of poor health on biomarker measures and to maximize compliance to 
study procedures); 
f)  No unstable pulmonary illness (COPD, asthma, COVID, current bronchitis) or 
exacerbation of symptoms in the past 3 months as determined by the licensed 
medical professional; 
g)  Subjects are in stable, good mental health (i.e. not currently, within the past 3 
months, experiencing unstable or untreated psychiatric diagnosis, including 
substance abuse) as determined by the licensed medical professional;   
h)  Subjects who are not taking medications that affect relevant metabolic enzymes 
(as noted on the excluded medication list);  
i)  Women who are not pregnant or nursing or planning to become pregnant; 
j)  Subject has provided written informed consent to participate in the study. 
8.2  Exclusion Criteria  
a)  Regular tobacco or nicotine product use (including nicotine replacement) (> 9 
days in last 30 days) other than cigarettes; 
b)  Currently (within the last week) using nicotine replacement or other products for 
cessation purposes; 
c)  Significant immune system disorders, respiratory diseases, kidney or liver 
diseases or any other medical disorders that may affect biomarker data; 
d)  Excessive drinking (5 or more drinks daily) or problems with drinking or drugs 
(self­report of binge drinking alcohol or treatment for drug or alcohol abuse 
within last 3 months); to be assessed by PI or licensed medical professional;  
e)  Failure to agree to take adequate protection to avoid becoming pregnant during 
the study; 
f)  Vital signs outside of the following range (participants failing for vital signs will 
be allowed to re­screen once): 
●  Systolic BP greater than or equal to 160 mm/hg 
●  Diastolic BP greater than or equal to 100 mm/hg 
●  Systolic BP below 90 mm/hg and symptomatic (dizziness, extreme 
fatigue, difficulty thinking, inability to stand or walk, feeling faint) 
●  Diastolic BP below 50 mm/hg and symptomatic (dizziness, extreme 
fatigue, difficulty thinking, inability to stand or walk, feeling faint) 
●  Heart rate greater than or equal to 105 bpm 
●  Heart rate lower than 45 bpm and symptomatic (dizziness, extreme 
fatigue, difficulty thinking, inability to stand or walk, feeling faint) 
g)  Expired air carbon monoxide (CO) level greater than 80 ppm; 
h)  Self­reported allergies to propylene glycol, lactic acid or vegetable glycerin;   
i)  Adverse reactions when previously using electronic cigarettes; 
j)  Unable to read for comprehension or completion of study documents (determined 
during the consenting/screening process); 
k)  Unstable living environment that would compromise the ability to attend visits, 
sequester study products or complete study procedures outside of visits.  

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 24 of 46 
Revised: April 19, 2017 
l)   Smoked marijuana use >9 times per month, and/or unwillingness to abstain from 
smoked marijuana during switch to study product (non­combusted forms of 
marijuana are acceptable) 
m) Medical history of thromboembolic events and/or cerebrovascular events, or 
medical diagnosis that the medical professional believes indicates a high risk of 
thromboembolic or cerebrovascular events. 
 
8.3  Screening  
Cigarette smokers will be first pre­screened for eligibility over the telephone or online. If 
subjects meet the initial eligibility criteria for the study, they will be asked to complete a 
remote screening visit (completed via secured video­conferencing meeting link) where 
the entire study will be explained in detail, informed consent will be obtained and the 
screening questionnaires will be completed.  
 
9.0 
Vulnerable Populations 
No vulnerable populations will be recruited. 
 
10.0  Local Number of Participants 
We will recruit up to 120 smokers in order to complete at least 30 participants 20 
achieving complete abstinence.  
 
11.0  Local Recruitment Methods 
11.1  Recruitment Process  
Cigarette smokers will be recruited through the University of Minnesota Tobacco 
Research Programs.  A variety of media will be used that will foster the recruitment 
across a spectrum of age, education and socioeconomic status, and race/ethnicity.   
Cigarette smokers will contact the Tobacco Research Programs and will be pre­screened 
for eligibility over the telephone or in REDCap. During this pre­screening, information 
will be obtained on where the subject heard about the study, their geographic location, 
and basic demographics. This data will provide information on the primary media 
avenue, radio or television station, advertisement placements, internet location or domain 
responsible for recruiting subjects. We will use this information in our recruitment 
efforts.  
11.2  Source of Participants  
Primary recruitment via advertisements from Minneapolis­St. Paul metro area. 
11.3  Identification of Potential Participants  
Participants will self­identify first in response to advertisements and contact the study 
coordinator. Then, they will be screened over the phone or online for eligibility. 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 25 of 46 
Revised: April 19, 2017 
11.4  Recruitment Materials  
Subjects will be recruited through printed flyers and advertisements through a variety of 
media outlets and the internet. 
11.5  Payment  
Subjects will receive $25 for screening, $30 for the Baseline and Intervention visits ($20 
for the visit and $10 for transportation expenses). Those who consent to the blood draw 
will receive an additional $20 for each blood draw.  In order to maximize overall 
compliance, participants will be paid a $600 bonus,).  Subjects will be told that the bonus 
is contingent on compliance and this will be monitored via their daily ITR responses, 
product accountability, completion of forms, and submission of biological samples, and 
CO < 6 ppm.   The maximum amount they can earn is $925. 
 
12.0  Withdrawal of Participants 
12.1  Withdrawal Circumstances  
If a participant is unable to achieve cessation (confirmed biologically either via CO or 
urine)  within  the  first  two  weeks  of  the  study,  the  participant  will  be  withdrawn. 
Additionally,  a  study  participant  may  be  discontinued  from  the  study  if  investigators 
determine that this is the best decision in order to protect his/her safety. If a participant 
either withdraws from the study or the investigators decide to discontinue a participant due 
to  an  adverse  event  (AE)  or  serious  adverse  event  (SAE),  the  participant  will  have 
appropriate follow­up assessments and if necessary, referrals will be made for medical 
care. The participant experiencing an AE/SAE will be followed until the problem resolves, 
stabilizes, or is clearly unrelated to the study product. Any AE that remains open will be 
reviewed and closed at the Week 10 follow­up interview. 
For the participant’s protection, they will be withdrawn immediately from the study 
if any of the following occur: 
1)  Cardiovascular disease (CVD) event: Typically includes MI (heart attack), PTCA 
(angioplasty/stenting), bypass surgery, stroke, or peripheral vascular disease.  Less 
common CVD problems would be new cardiac arrhythmias (e.g., new atrial 
fibrillation) or new valvular disease (e.g., mitral or aortic regurgitation). 
2)  DVT/PE (deep vein thrombosis/pulmonary embolism, i.e., blood clots in the venous 
system). 
3)  Suicide Attempt:  A participant will be withdrawn if he/she attempts suicide at any 
time during participation in the study. 
4)  Psychiatric Hospitalization: A participant will be withdrawn if he/she is 
hospitalized for psychiatric reasons at any time during participation in the study. 
5)  Pregnancy: If a participant becomes pregnant, she be immediately withdrawn from 
the study.  In addition, the licensed medical professional will follow­up after 
delivery to ask questions about the health of the baby. 
6)  Expired breath carbon monoxide increase: A participant will be withdrawn from the 
study if the average of the 2 (or 3) CO readings is 100 ppm or greater.   

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 26 of 46 
Revised: April 19, 2017 
7)  Respiratory Illness Event: A participant will be withdrawn if they develop a severe 
(hospitalized or the symptom had a significant impact on his/her activities) 
respiratory illness that is related or possibly related to the SREC product as 
determined by the licensed medical professional. 
The following will be monitored and can lead to the participant being withdrawn by 
the Principal Investigators or Medical Monitor: 
1)  Blood pressure (BP) or heart rate (HR) changes: If any of the following occur post­
enrollment:  
1) BP is at or above 160 systolic/100 diastolic; 2) BP is below 90 systolic/50 
diastolic and the participant is experiencing symptoms listed on the ‘Blood Pressure 
and Heart Rate Symptom Checklist; 3) HR is at or above 105 bpm; 4) or below 45 
bpm and the participant is experiencing symptoms listed on the ‘Blood Pressure and 
Heart Rate Symptom Checklist.   
2)  Medication changes: If a participant begins taking any of the exclusionary 
medications or other medications that could potentially have a smoking­drug 
interaction post­ enrollment, the licensed medical professional will determine how 
best to monitor and minimize potential risks (including withdrawal if warranted).  
We will also recommend that a letter be provided to the participant to give to their 
physician (with their consent) making them aware of the potential changes in 
smoking that could occur because of participation in the study.   
3)  Any hospitalization or debilitation in which participation in the study could be 
detrimental to the recovery process.  This will be self­reported by the participant 
and reviewed by the investigators and medical professional to determine if 
continued participation in the study is appropriate.   
4)  If a participant is behaving in an inappropriate or threatening manner, admits to 
lying about eligibility criteria, including omitting previous medical diagnoses and 
medications, is participating in other smoking research studies that could affect the 
primary outcome measures, does not follow study instructions, etc., then he/she can 
be withdrawn at the investigators’ discretion.  
5)  If there is reason to believe the participant is sharing large quantities of the study 
product with other people. 
If a participant chooses to withdraw from the study at any time, we will ask them to return 
to the clinic to return study product and to receive their final study payment.  
12.2  Withdrawal Procedures  
Subject will be informed about the withdrawal at the visit and data collection will stop. 
12.3  Termination Procedures  
No additional procedures will be conducted if subjects are withdrawn. 
 
13.0  Risks to Participants 
13.1  Foreseeable Risks  

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 27 of 46 
Revised: April 19, 2017 
The foreseeable risks for this study are minimal. Potential risks for all participants 
include: emotional discomfort, breach of confidentiality, nicotine withdrawal symptoms, 
effects of returning to regular smoking, effects of smoking the SREC e­cigarettes, risks 
associated with smoking, risks to fetuses, and changes in blood pressure/heart rate and 
pain/bruising at the site of the phlebotomy.   
1.  Survey Questionnaires: The interviews will include questions about medical 
history, drug and alcohol use, and questionnaires about mood. Answering these 
personal questions could make the subject feel uncomfortable. 
2.  Breach of Confidentiality: The risk of the interview is loss of privacy if other 
people find out the results. 
3.  Obtaining Blood Pressure: The blood pressure cuff may cause minimal 
discomfort. In obtaining blood pressure, researchers may find out the subject has 
abnormal blood pressure and must refer them to their primary care physician. 
4.  Smoking Cigarettes: All cigarettes are detrimental to a person’s health and can 
lead to severe or fatal medical problems including: 
a.  Cardiovascular Diseases: Coronary heart disease, heart attack, stroke, 
peripheral vascular disease, reduced blood circulation, abdominal aortic 
aneurysm 
b.  Respiratory Diseases: Emphysema, bronchitis, tuberculosis and chronic 
airway obstruction  
c.  Cancers: Lung, bladder, liver, colon, cervical, esophageal, kidney, larynx, 
mouth, pancreatic, throat, stomach cancers and acute myeloid leukemia  
d.  Diabetes 
e.  Immune function, rheumatoid arthritis 
f.  Other Health Risks Associated with Smoking: Including but not limited to 
infertility, ectopic pregnancy, lower bone density in postmenopausal 
women, hip fracture in women, male sexual dysfunction; age­related 
macular degeneration, blindness and cataracts 
5.  Use of SREC e­cigarette: The side effects of SREC may be similar to other 
commercially available vaping devices. Such devices can expose users to several 
chemicals, including nicotine, carbonyl compounds, and volatile organic 
compounds, known to have adverse health effects. The health effects and 
potentially harmful doses of heated and aerosolized constituents of e­liquids, 
including solvents, flavorants, and toxicants, are not completely understood. E­
cigarette aerosol is not harmless “water vapor” although it generally contains 
fewer toxicants than combustible tobacco products. Specific potential known risks 
include: 
a.  Refill pods that will be used in this study contain nicotine. Nicotine is an 
addictive chemical. It is possible that this experience could lead to long­
term use of e­cigarettes after the trial is over. 
b.  Nicotine may contribute to some of the disease associated with smoking 
c.  The most common side effects related to e­cigarette use are changes in 
taste, mucus in throat/sinus, dry mouth, dry cough, throat irritation, sore 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 28 of 46 
Revised: April 19, 2017 
throat, mouth ulcers, dizziness, headache, and nausea, difficulty breathing, 
heart palpitations, vomiting, abnormal heart rate, stomach discomfort, 
rash, chest pain. 
d.  Although uncommon, batteries from e­cigarettes have exploded/ignited 
and injured users. 
e.  E­cigarettes can overheat and present a minor burn risk if the button is 
turned on repeatedly.   
f.  Ingestion of e­liquids containing nicotine can cause acute toxicity and 
possible death if e­liquids containing nicotine are consumed. Participants 
will be directed to keep device and all e­liquid refill cartridges away from 
pets and children.  
g.  On rare occasions, allergic reactions have occurred after using e­
cigarettes. 
h.  Severe lung disease has been associated with using e­cigarette/vaping 
products. The CDC and FDA continue to investigate, but the majority of 
cases have involved the use of cannabis oil, such as THC, obtained on the 
black market. In addition, one of the chemicals of concern is the addition 
of Vitamin E acetate to e­liquid cartridges and pods.  
6.  Dual Use of Tobacco or Nicotine Products:  There is also the chance of use of 
more than one product (e.g., continued smoking among participants) and/or 
continued use of the products. Cessation of all tobacco products will be strongly 
recommended to the subjects both at the end of the experimental phase and at 
follow­up.  
7.  Smoking Withdrawal: Participants may experience smoking withdrawal 
symptoms during this study.  The symptoms can be uncomfortable but are 
typically of minimal risk. Smoking withdrawal symptoms include: 
a.  Anger, irritability, frustration 
b.  Anxiousness, nervousness 
c.  Depressed mood or sadness  
d.  Desire or craving to smoke 
e.  Difficulty concentrating 
f.  Increased appetite, hunger or weight gain 
g.  Insomnia, problems sleeping or awakening at night 
h.  Restlessness 
i.  Impatience 
j.  Constipation 
k.  Dizziness 
l.  Coughing 
m.  Dreaming or nightmares 
n.  Nausea 
o.  Sore Throat 
8.  Returning to Regular Smoking: It is possible that if participants return to smoking 
their usual brand of cigarette at the end of the study they may experience mild and 
transient nausea, dizziness, and lightheadedness. 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 29 of 46 
Revised: April 19, 2017 
9.  Changes in Blood Pressure and/or Heart Rate: Smoking and nicotine can affect 
the cardiovascular system which may result in changes in blood pressure and/or 
heart rate. 
10. Changes in Mood, Emotions and Psychiatric Symptoms: Smoking and nicotine 
can affect a person’s mood and emotions and are associated with psychiatric 
disorders including major depressive disorder, general anxiety disorder, bipolar 
disorder and eating disorders. Any changes in nicotine use or cigarette 
consumption could adversely affect mood, emotions and the symptoms related to 
psychiatric conditions in some individuals. 
11. Risk to Fetus: Smoking during pregnancy can lead to miscarriage, preterm 
delivery, stillbirth, low birth weight, problems with the placenta, birth defects 
such as cleft palate, sudden infant death syndrome (SIDS), early childhood 
behavioral problems, altered lung development and possible propensity for 
addiction. Although unknown, similar effects could occur with the use of vaping 
devices.  
12. Smoking and Oral Contraceptives in Women: Women who smoke and are over 
the age of 35 should not take oral contraceptives that contain estrogen without 
consulting their physician. Smoking while using oral contraceptives can increase 
the risk of having a cardiovascular event such as a heart attack or stroke. 
Additionally, there is a potential risk of thrombosis associated with hormonal 
therapy (including contraceptives) and smoking.  
13. Smoking and Medications: Quitting smoking can greatly benefit participants’ 
health. However, changes in smoking can lead to changes in how well some 
medications work. Participants should disclose all medications they are taking. 
We also recommend that participants discuss any planned or actual changes in 
how much they smoke with their doctor, especially if they are taking any 
medications for psychiatric, cardiovascular, or other serious diseases. 
14. Unforeseen risks: There may be additional unforeseen short and long­term risks 
of participation. 
Because smoking causes a multitude of diseases, if at any time the smoker wants to quit 
smoking, this decision will be encouraged and supported. At the end of study 
participation, subjects will be strongly encouraged to stop use of all tobacco products and 
to set a quit date and provided with a treatment resources and referral to different 
treatments.  
13.2  Reproduction Risks:  
Pregnant women will not be recruited. If participants choose to be sexually active, they 
should use an appropriate “double barrier” method of birth control (such as female use of 
a diaphragm, intrauterine device (IUD), or contraceptive sponge, in addition to male use 
of a condom) or the female should be using prescribed “birth control” pills, injections, or 
implants. Female participants with child­bearing potential will be tested for pregnancy at 
the baseline visit and monthly thereafter, if applicable. If a participant becomes pregnant 
during the study, she will be withdrawn from the study. Approximately 30 days after 
being withdrawn or having a positive pregnancy test, the research staff will call the 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 30 of 46 
Revised: April 19, 2017 
participant to confirm her due date. The licensed medical professional will follow­up 
with the participant after delivery to ask questions about the baby’s health.  
13.3  Risks to Others:  
Second­hand exposure from SREC or usual brand cigarettes may be a risk to others. 
 
14.0  Potential Benefits to Participants 
Whereas no assurance can be made to an individual subject that he/she will personally 
benefit from such research, the experience should not impose any significant risk. 
Subjects will have the opportunity to learn about factors that may be associated with 
cigarette smoking.  Quitting tobacco will be strongly recommended to our subjects and 
cessation materials will be provided.  Referrals to community resources will also be 
made.  
 
15.0  Statistical Considerations 
15.1  Data Analysis Plan  
The goals of this study are: to determine the effect of switching to SREC on biomarkers 
of exposure and effect (assessed at 4 and 6 weeks); to determine levels of salivary NNN 
and HPB­releasing DNA adducts in SREC users (assessed in the verified complete 
switchers at weeks 4 and 6); and to determine important moderators for SREC use and 
exposure/effect measures. 
Demographic and smoking history variables will be summarized and compared to 
national survey data for the general population of smokers. Baseline covariates will be 
summarized to inform the comparison data retrieval on non­users of nicotine/tobacco and 
smokers from recently completed studies. Continuous measures will be summarized by 
mean (SD), median (range) or other summary measures. The distribution of biomarker 
and cytokine levels is usually highly right­skewed and will be analyzed in the log scale 
and reported as geometric means and 95% confidence intervals. Categorical covariates 
will be summarized by contingency tables.  
The primary endpoints are the weeks 4 and 6 for (1) toxicant and carcinogen exposure 
biomarkers; (2) inflammatory biomarkers; and (3) DNA adducts adjusted for the baseline 
value. The analysis of our primary endpoints will use linear mixed models to account for 
potential intra­subject correlation due to repeated measurements at 4 and 6 weeks from a 
single individual. With two repeat observations, the within subject correlation structure 
will be compound symmetry. Residual plots and other diagnostic methods will be used to 
check model assumptions. The mean model for each hypothesis will include the overall 
mean and an effect for time (4 or 6 weeks) Therefore, our primary analysis for all 
endpoints will only adjust for the baseline biomarker level (for precision).  Due to the 
multiple biomarkers being tested in this exploratory trial, a reduced alpha level of 0.001 
will be used to determine statistical significance for the time effect.    An additional 
analysis will be completed adjusting for important factors such as environmental toxicant 
exposures, stress and health to determine the effect their inclusion has on the association 
between group and biomarkers. The secondary endpoints include the amount of product 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 31 of 46 
Revised: April 19, 2017 
used (cigarettes per day, number of e­cigarette episodes and puffs per day and the number 
of smoke­free days (cigarette avoidance).  These outcomes are considered counts and will 
be analyzed as Poisson or negative binomial variables.  Product use by visit will be 
analyzed by generalized estimating equation (GEE) models, which account for the 
multiple visits for each individual.  Smoke­free days across the entire study period 
(approximately 42 days) will be analyzed by a Poisson or negative binomial regression.  
These analyses will include an offset term to adjust for the number of days reported by 
visit and in total.  Covariates will include baseline patient characteristics that may affect 
patterns of use.  Exploratory endpoints include the subjective measures which will be 
collected up to 6 times during the study period.  Measures providing a score will be 
analyzed using a linear mixed model.   The fixed effect is visits.   AEs and SAEs (safety 
endpoints) will be tabulated. Compliance to the assigned treatment is a concern and we 
are considering the possibility that the non­compliance rate could be as high as 50%, 
despite our efforts to keep it at low as possible. Complete switching will be 
biochemically verified; therefore the analysis will be repeated with only those identified 
as completely switching to SREC. Estimates and confidence intervals of the degree of 
reduction in outcome variables can be determined for those that successfully switched to 
the study product. In addition, we will summarize compliance and evaluate the 
correlation between compliance and baseline covariates to identify potential predictors of 
treatment compliance. Finally, we will complete a sensitivity analysis that accounts for 
missing information using multiple imputation with the Markov Chain Monte Carlo 
(MCMC) method carried out in PROC MI in SAS.  Missing values are imputed using 
regression models developed from baseline covariates.  Values can be imputed for both 
continuous and categorical variables.104  Following imputation, standard statistical 
methods can be applied.  A final single assessment of time effect will be obtained from 
combining the results across the imputed datasets using PROC MIANALYZE in SAS. 
15.2  Power Analysis  
Based on our previous experience, we estimate the inter­subject coefficient of variation 
(CV) for the biomarkers listed in Table 1 to be between 30% and 40%. Biomarkers will 
be analyzed in the logarithmic scale; as a result, the standard deviation (SD) of the log of 
the level of these biomarkers is approximately equal to the CV in their original scale. For 
purposes of our power calculations, we will set the SD for each biomarker at 0.4 and 
assume a correlation of 0.5 between baseline and 6­week biomarker levels. The major 
hypotheses will be tested including only smokers who completely switch from smoking 
to SREC use. If a conservative estimate of only 50% of the 30 enrolled subjects achieving 
complete switching to SREC is applied, then 15 subjects would have greater than 90% 
power to detect a 45% decrease in the biomarker level in 6 weeks with a paired t­test.  
However, we incorporated measures to maximize the complete switching (as described in 
the Study procedures section) and will aim to have at least 20 subjects achieving this 
goal.  The significance level was set at 0.001 due to multiple biomarkers being tested.  
15.3  Data Integrity  
A variety of measures will be taken to ensure data accuracy and completeness. The 
regular research team meetings will include discussions of proper methods for data 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 32 of 46 
Revised: April 19, 2017 
collection, transmission, and storage, limiting data collection to those in protocol required 
to answer a research question, de­identifying data, and encryption methods.  
A comprehensive data dictionary will be created to specify definitions and value codes 
for all variables that will be entered into REDCap and other study databases. Electronic 
forms for the collection of subjective measures via REDCap will include programming 
features to ensure valid data (i.e., input masks, validation criteria, skipout logic) and will 
be stored on the University of Minnesota, HIPAA compliant, computing system.  Double 
entry will be used for all other de­identified data entered into REDCap.  Biological 
specimens will be labeled with barcode labels that incorporate the participant ID. The 
secured biospecimen website will identify the location of each sample at the clinic (prior 
to submission to the laboratory) and in the Stepanov laboratory.   
Oversight of the product distribution will be conducted by the Project Manager in 
collaboration with the co­Principal Investigators. A Product Tracking database will be 
created. This database will be used to track product purchases, product inventory, and 
assignment of study product to participants.  
Quality control procedures will be conducted for all data collected, including analysis of 
missing data, and logic checks for out of range and other anomalous values. Queries will 
be made regarding such data issues, with documentation of any changes made in the data.  
 
16.0  Confidentiality 
All investigators and staff associated with this project have been trained, and new hires 
will be trained, on human research ethics and Good Clinical Practice in accordance with 
the requirements of the University of Minnesota. 
Only the Study Coordinator and Principal Investigators will have access to individually 
identifiable private information about subjects.  Coded ID’s will be used throughout the 
study by all the researchers involved.  Because this study uses a research e­cigarette and 
we are required to submit an Investigational Tobacco Product application through the 
Food and Drug Administration, the records may potentially be monitored by this 
governmental agency. This information will be provided to the IRB and will be included 
in the human consent form.  
 
17.0  Provisions to Monitor the Data to Ensure the Safety of 
Participants 
17.1  Data Integrity Monitoring 
Oversight for quality control and adherence to protocol procedures will be conducted by 
the Project Manager in collaboration with the co­Principal Investigators. A start­up 
meeting with whole research team will take place prior to participant enrollment. During 
this meeting, there will be training on the study protocol, standard operating procedures, 
equipment and data collection platforms. The co­Principal Investigators will closely 
monitor the research staff on the procedures to be used in this study.  Such monitoring 
will consist of frequent in­person discussion of study visits and other procedures to make 
sure that all protocol procedures are followed, and regular research team meetings to 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 33 of 46 
Revised: April 19, 2017 
provide updates on study progress and review the data collection process, the results from 
data monitoring and other issues of concern. 
Standard operating procedures will be developed for consistent implementation of the 
protocol. Study Coordinator will be administering all measures during clinic visits and 
entering the information about each subject into a database. Each visit will have a 
checklist of all measures that need to be obtained and the order by which they will be 
administered. Project Manager will be directly supervising the Study Coordinator and 
periodically review protocol compliance and implementation, and adherence to good 
clinical practice procedures.  
The Study Coordinator will go over the questionnaire instructions and will be available to 
the participant to answer any questions he/she may have.  Questionnaires will be 
reviewed for completeness while the participant is present.  Other questionnaires are 
completed on the computer, so that participants cannot accidentally skip a question. 
However, they may choose not to answer questions.  Several biochemical measures 
(expired breath CO and urine pregnancy) will be analyzed immediately, while the 
participant is present.  If necessary (e.g., if the sample volume is insufficient for 
analysis), the Study Coordinator can gather another sample immediately and re­analyze.  
Once a participant has completed all study procedures and all open events have been 
closed, the PI will review the participant’s binder and sign a form indicating study 
completion for that participant. 
17.2  Data Safety Monitoring 
CTSI is responsible for periodically monitoring this study. While participating in the trial, 
AEs and concomitant medications will be assessed at every study visit and vital signs will 
be obtained periodically.  AEs will typically be identified during the administration of the 
Health Changes Questionnaire and Respiratory and Global Health Questionnaire, and in 
some cases during the administration of the CES­D.  Other events may be identified from 
physiological study measures or by spontaneous reports during assessments.   
Assessment of Questionnaire Items  
●  Health Changes Questionnaire: If the participant answers ‘YES’ to Questions 1, 2, 
or 3, the interviewer will assess for an ‘Adverse Event.’  
1)  Have you had any negative changes in your health since your last visit?  
2)  Have you had any changes in medication since your last visit?  
3)  Since your last visit, have you received any form of medical care?   
●  Respiratory Health Questionnaire: If the participant indicates ‘YES’ to Question 6 
regarding having a cold or flu the interviewer will administer the ‘Adverse Event 
Log.’ 
6)  In the past week, have you experienced any health problems, such as cold, 
flu, or other respiratory illness that would affect these respiratory 
symptoms? 
●  CES­D: If the participant scores 16 or higher and are not already being monitored 
for depression, an ‘Adverse Event’ will be recorded and the licensed medical 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 34 of 46 
Revised: April 19, 2017 
professional will provide information regarding follow­up.  If there is already an 
open event, information will be added to the existing ‘Adverse Event.’ 
Assessment of Physiological Data 
●  CO level: An ‘Adverse Event’ will be recorded if the average of two consecutive 
measurements in the same visit is: 
o  CO is greater than 50 ppm if CO at Baseline is < 20 ppm  
o  CO is greater than 60 ppm if CO at Baseline is 20 – 34 ppm. 
o  CO is greater than 70 ppm if CO at Baseline is 35 – 49 ppm. 
o  CO is greater than 80 ppm if CO at Baseline is 50 – 64 ppm. 
o  CO is greater than 90 ppm if CO at Baseline is 65 – 80 ppm. 
●  Blood Pressure:  
o  The ‘Adverse Event Log’ and ‘Blood Pressure and Heart Rate Symptom 
Checklist’ will be completed if an automatic and subsequent manual blood 
pressure measurement during the same visit is at or above 160 systolic or 
100 diastolic. 
o  The ‘Adverse Event Log’ and ‘Blood Pressure and Heart Rate Symptom 
Checklist’ will be completed if an automatic and subsequent manual blood 
pressure measurement during the same visit is below 90 systolic or 50 
diastolic and the participant is experiencing symptoms listed on the ‘Blood 
Pressure and Heart Rate Symptom Checklist.’ 
●  Heart Rate:  
o  The ‘Adverse Event Log’ and ‘Blood Pressure and Heart Rate Symptom 
Checklist’ will be completed if an automatic and subsequent manual heart 
rate measurement during the same visit is at or above 105 bpm. 
o  The ‘Adverse Event Log’ and ‘Blood Pressure and Heart Rate Symptom 
Checklist’ will be completed if an automatic and subsequent manual heart 
rate measurement during the same visit is below 45 bpm and the 
participant is experiencing symptoms listed on the ‘Blood Pressure and 
Heart Rate Symptom Checklist.’ 
 
 
Adverse Events Communicated by Participants 
The occurrence of AEs will be sought by non­directive questioning of the participant at 
each visit during the study. AEs also may be detected when the participant volunteers 
them during or between visits or through physical examination, laboratory test, or other 
assessments. 
Review and Reporting of Adverse Events and Serious Adverse Events 
Co­Principal Investigators with oversight from Sharon Allen, M.D. (Medical Monitor) 
and Jane Schulz (Nurse Practitioner) will review all AEs and assess whether they are 
related to the study product.  

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 35 of 46 
Revised: April 19, 2017 
An AE is defined as the appearance or worsening of any undesirable sign, symptom, or 
medical condition occurring after starting the study procedures even if the event is not 
considered to be related to the study product. Medical conditions/diseases present before 
starting the study are only considered adverse events if they worsen after starting the 
study product. Abnormal laboratory values or test results constitute adverse events only if 
they induce clinical signs or symptoms, are considered clinically significant, or require 
therapy; there are no plans for active monitoring of laboratory tests as part of this project.  
Withdrawal symptoms are considered adverse event if the symptom had a significant 
impact on the participant’s daily life, caused a major disruption of functioning, or took 
any medication for it. 
To the extent possible, each adverse event will be evaluated to determine: 
1.  the severity grade (mild, moderate, severe) 
2.  its relationship to the study product used (suspected/not suspected) 
3.  its duration (start and end dates or if continuing at final exam) 
4.  outcome (resolved/improved/unchanged/worsened; study product 
temporarily interrupted or permanently discontinued due to this adverse 
event; concomitant medication taken; non­drug therapy administered) 
5.  whether it constitutes a SAE 
Information about all SAEs will be collected and recorded on the project’s Serious 
Adverse Event Report Form. A SAE is defined an undesirable sign, symptom or medical 
condition which: 
1.  is fatal or life­threatening; 
2.  requires or prolongs hospitalization; 
3.  results in persistent or significant disability/incapacity; 
4.  constitutes a congenital anomaly or a birth defect; 
5.  is medically significant, in that it may jeopardize the subject and may 
require medical or surgical intervention to prevent one of the outcomes 
listed above. 
Events not considered to be SAEs are hospitalizations that are: 
1.  elective or pre­planned, for a pre­existing condition that is unrelated to the 
products under study and did not worsen; 
2.  for general care, and/or overnight observation; 
3.  treatment on an emergency, outpatient basis for an event not fulfilling any 
of the definitions of serious given above and not resulting in hospital 
admission. 
Safety evaluation will be performed on all accrued participants for whom SREC was 
dispensed. The assessment of safety will be based on the frequency of AEs and severity 
grade of AEs. Other safety data (e.g. CO, vital signs) will be considered as appropriate.  
SAEs occurring after the participant has signed the consent form and until 4 weeks after 
the participant has stopped use of study product that are unexpected and at least possibly 
related will be reported. SAEs occurring more than 4 weeks after study discontinuation 
need only be reported if a relationship to study product is suspected. All AEs will be 
summarized by presenting, for each treatment group, the number and percentage of 
participants who experienced any AE, the number reporting AEs in each body system and 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 36 of 46 
Revised: April 19, 2017 
the number of AEs by type. Any other information collected (e.g., severity or relatedness 
to study medication) will be listed as appropriate. A summary of clinically relevant toxic 
events, such as AEs leading to death or rated as SAEs, those with a suspected relationship 
to study product, or AEs requiring further medication or non­drug therapies will be 
provided. Reports will be reviewed regularly by the study investigators and the NIDA 
Scientific Officer. 
Data Safety Monitoring Plan administration 
The Co­Principle Investigators will be responsible for monitoring the safety of this trial, 
executing the DSM plan for this project and complying with the reporting requirements.   
Investigators will meet at least monthly throughout this project to review any recruitment, 
data quality, and safety issues. Specifically, they will assess enrollment information, 
demographics and characteristics of the participants, the expected versus actual 
recruitment rates, quality assurance or regulatory issues that may have occurred during 
the past month, protocol violations, and review AEs to determine if there are any changes 
in participant risk. Investigators are available to meet outside of the scheduled meetings, 
if concerns regarding a particular participant or another problem should arise. 
The DSM report will include treatment group information. This includes enrollment 
information, demographics and characteristics of the participants, the expected versus 
actual recruitment rates, quality assurance or regulatory issues that may have occurred 
during the year, a summary of AEs and SAEs, protocol violations, and any actions or 
changes to the protocol.  Also included will be any and all actions by the IRB. 
 
18.0  Provisions to Protect the Privacy Interests of Participants 
18.1  Protecting Privacy  
It will be made clear to participants that all information obtained during assessments is 
confidential and that no information will be shared with the participants’ clinicians unless 
the participant requests this in writing. The only information that will be shared with 
clinicians upon such request by a participant would be clinical measures such as blood 
pressure or heart rate. Biomarkers analyzed for the study will not be shared. 
While all the samples and information will be collected specifically to achieve the goals 
of this proposal, de­identified individual subject data and back­up samples may be made 
available to other researchers for research purposes after our study is complete.  We will 
obtain permission from subjects to allow de­identified biosamples to be stored in a 
biorepository for future analyses of biomarkers or genotyping. 
18.2  Access to Participants  
There will be no access to medical records or any other sources of private information 
about the participating subjects. 
 
 
19.0  Compensation for Research­Related Injury 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 37 of 46 
Revised: April 19, 2017 
19.1  Compensation for Research-Related Injury  
The study poses minimal risk to participants. In the event that this research activity 
results in an injury, treatment will be available, including first aid, emergency treatment 
and follow­up care as needed.  Care for such injuries will be billed in the ordinary 
manner, to the participant or the participant’s insurance company.  The participants will 
be asked to let the study physicians know right away if they think that they have suffered 
a research related injury.   
19.2  Contract Language  
Not applicable 
 
20.0  Consent Process 
20.1  Consent Process (when consent will be obtained) 
The consenting process will take place remotely via a secured video­conferencing 
meeting invitation. Potential participants will be told the nature of the research 
during pre­screening and then at the screening visit. They will be told they may 
discontinue participation at any time and will not be discriminated against if they 
choose to do so. Interested subjects will be provided considerable time to review 
the consent form, consider whether or not to participate, and have any questions 
answered by the coordinator. Participants will be required to demonstrate an 
understanding of the study purpose and procedures prior to signing the consent 
form. Assessment of the subject’s understanding will be completed via questions 
by a slideshow presentation. The consent form must be signed before the research 
is started. Immediately after signing, the participant will receive an email with a 
signed copy of the consent form.  
The electronic consent forms will be stored in a REDCap database with restricted access 
for essential study personnel only. The electronic informed consent (eIC) will be built us 
the ‘UMN e­Consent HRP­592­TEMPLATE­Biomedical’. The template will be 
customized to match the written informed consent form exactly. The electronic signatures 
obtain in the outline above are intended to be the equivalent of handwritten signatures. 
Therefore, the electronic signatures will occur in accordance with the predicated rule (e.g. 
approved, reviewed and verified) as outlined in the Food and Drug Administration’s CFR 
part 11. 
20.2  Waiver or Alteration of Consent Process 
Not applicable 
20.3  Non­English Speaking Participants 
Not applicable 
20.4  Participants Who Are Not Yet Adults 
Not applicable 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 38 of 46 
Revised: April 19, 2017 
20.5  Cognitively Impaired Adults, or adults with fluctuating or diminished capacity 
to consent 
Not applicable 
20.6  Adults Unable to Consent: 
Not applicable 
 
21.0  Setting 
21.1  Research Sites 
The study will be conducted at the University of Minnesota, Twin Cities. 
●  Subject recruitment and sample collection will take place at Tobacco Research 
Programs (717 Delaware St. SE, Minneapolis, MN 55414).  
●  Biochemical analyses will be carried out in the Masonic Cancer Center (2231 
Sixth Street SE, Minneapolis, MN 55455). 
 
22.0  Multi­Site Research 
Not applicable 
 
23.0  Resources Available 
The study will be conducted at the University of Minnesota’s Tobacco Research 
Programs housed at the Delaware Clinical Research Unit at 717 Delaware St. SE 
Minneapolis, MN. Dr. Dorothy Hatsukami serves as the Director for this Program. We 
have a Research Project Manager (Andrew Egbert) who oversees all research and is 
responsible for logistics of implementing the protocols and standard operating 
procedures. We also have an Administrator who ensures the smooth operation of the 
daily activities of the Program.  In addition, the Program has a registered nurse 
practitioner and many research project coordinators. The shared space at the Delaware 
Clinical Research Units includes a shared waiting room with a receptionist, 7 physical 
exam rooms (two dedicated to the Tobacco Research Programs), 1 phlebotomy room, 5 
interview rooms, 2 day hospital rooms, an infusion room, 1 smoking laboratory with one 
way observation room, laboratory space for processing blood, urine processing 
laboratory, a locked medication supply room, locked protocol room for subject files, 
cubicles for data entry, management and analyses, locked supply storage and access to 
three conference rooms. Two restrooms are in the clinical space for urine collections. We 
have dedicated space for our biorepository with key card access containing ten ­20 
freezers. We also have access to all of the resources of the University of Minnesota for 
our use, as needed. 
 
24.0  References 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 39 of 46 
Revised: April 19, 2017 
 
1.   King, B. A., Alam, S., Promoff, G., Arrazola, R., and Dube, S. R. Awareness and ever­
use of electronic cigarettes among US adults, 2010­2011. Nicotine & Tobacco Research, 
15: 1623­1627, 2013. 
 
2.   McMillen, R. C., Gottlieb, M. A., Shaefer, R. M. W., Winickoff, J. P., and Klein, J. D. 
Trends in electronic cigarette use among US adilts: Use is increasing in both smokers and 
nonsmokers. Nicotine & Tobacco Research, 17: 1195­1202, 2015. 
 
3.   Singh, T., Arrazola, R. A., Corey, C. G., Husten, C. G., Neff, L. J., Homa, D. M., and 
King, B. A. Tobacco use among middle and high school students ­ United States, 2011­
2015. Morbidity and Mortality Weekly Report, 65: 361­367, 2016. 
 
4.   Pankow, J. F., Kim, K., McWhirter, K. J., Luo, W., Escobedo, J. O., Strongin, R. M., 
Duell, A. K., and Peyton, D. H. Benzene formation in electronic cigarettes. PLOS ONE, 
12: e0173055, 2017. 
 
5.   Wang, P., Chen, W., Liao, J., Matuso, T., Ito, K., Fowles, J., Shusterman, D., Mendell, 
M., and Kumagai, K. A device­independent evaluation of carbonyl emissions from 
heated electronic cigarette solvents. PLOS ONE, 12: e0169811, 2017. 
 
6.   Hess, C. A., Olmedo, P., Navas­Acien, A., Goessler, W., Cohen, J. E., and Rule, A. M. E­
cigarettes as a source of toxic and potentially carcinogenic metals. Environ. Res., 152: 
221­225, 2017. 
 
7.   Jensen, R. P., Strongin, R. M., and Peyton, D. H. Solvent chemistry in the electronic 
cigarette reaction vessel. Scientific Reports, 7: 42549, 2017. 
 
8.   Coussens, L. M. and Werb, Z. Inflammation and cancer. Nature, 420: 860­867, 2002. 
 
9.   Hussain, S. P. and Harris, C. C. Inflammation and cancer: an ancient link with novel 
potentials. Int. J. Cancer, 121: 2373­2380, 2007. 
 
10.   Black, P. H. and Garbutt, L. D. Stress, inflammation and cardiovascular disease. J. 
Psychosom. Res., 52: 1­23, 2002. 
 
11.   Pearson, T. A., Mensah, G. A., Alexander, R. W., Anderson, J. L., Cannon III, R. O., 
Criqui, M., Fadl, Y. Y., Fortmann, S. P., Hong, Y., Myers, G. L., Rifai, N., Smith Jr., S. 
C., Taubert, K., Tracy, R. P., and Vinicor, F. Markers of inflammation and cardiovascular 
disease: Application to clinical and public health practice: A statement for healthcare 
professionals from the Centers for Disease Control and Prevention and the American 
Heart Association. Circulation, 107: 499­511, 2003. 
 
12.   Bustamante, G., Yakovlev, G., Yershova, K., Ma, B., Le, C. T., Jensen, J., Hatsukami, 
D., and Stepanov, I. Endogenous formation of the oral and esophageal carcinogen N'­
nitrosonornicotine in e­cigarette users. Cancer Res., submitted: 2017. 
 
13.   Goniewicz, M. L., Knysak, J., Gawron, M., and et al. Levels of selected carcinogens and 
toxicants in vapour from electronic cigarettes. Tobacco Control, 23: 133­139, 2014. 
 
14.   International Agency for Research on Cancer A Review of Human Carcinogens: 
Chemical Agents and Related Occupations. IARC Monographs on the Evaluation of 
Carcinogenic Risks to Humans, Vol. 100F,  Lyon, France: 2012. 
 
15.   Porubin, D., Hecht, S. S., Li, Z. Z., Gonta, M., and Stepanov, I. Endogenous formation of 
N'­nitrosonornicotine in F344 rats in the presence of some antioxidants and grape seed 
extract. J Agric. Food Chem., 55: 7199­7204, 2007. 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 40 of 46 
Revised: April 19, 2017 
 
16.   Stepanov, I., Carmella, S. G., Han, S., Pinto, A., Strasser, A. A., Lerman, C., and Hecht, 
S. S. Evidence for endogenous formation of N'­nitrosonornicotine in some long term 
nicotine patch users. Nicotine & Tobacco Research, 11: 95­105, 2009. 
 
17.   Stepanov, I., Carmella, S. G., Briggs, A., Hertsgaard, L., Lindgren, B., Hatsukami, D., 
and Hecht, S. S. Presence of the carcinogen N'­nitrosonornicotine in the urine of some 
users of oral nicotine replacement therapy products. Cancer Res., 69: 8236­8240, 2009. 
 
18.   Murray, R. P., Bailey, W. C., Daniels, K., Bjornson, W. M., Kurnow, K., Connett, J. E., 
Nides, M. A., Kiley, J. P., and for the Lung Health Study Research Group Safety of 
nicotine polacrilex gum used by 3,094 participants in the Lung Health Study. CHEST, 
109: 438­445, 1996. 
 
19.   Joseph, A. M., Norman, S. M., Ferry, L. H., Prochazka, A. V., Westman, E. C., and 
Steele, R. N. The safety of transdermal nicotine as an aid to smoking cessation in patients 
with cardiac disease. N. Engl. J. Med., 225: 1792­1798, 1996. 
 
20.   McRobbie, H. and Hajek, P. Nicotine replacement therapy in patients with cardiovascular 
disease: guidelines for health professionals. Addiction, 96: 1548­1551, 2001. 
 
21.   Murray, R. P., Connett, J. E., and Zapawa, L. M. Does nicotine replacement therapy 
cause cancer? Evidence from the Lung Health Study. Nicotine & Tobacco Research, 11: 
1076­1082, 2009. 
 
22.   Hukkanen, J., Jacob, P., III, and Benowitz, N. L. Metabolism and disposition kinetics of 
nicotine. Pharmacol. Rev., 57: 79­115, 2005. 
 
23.   Hecht, S. S. Biochemistry, biology, and carcinogenicity of tobacco­specific N­
nitrosamines. Chem. Res. Toxicol., 11: 559­603, 1998. 
 
24.   International Agency for Research on Cancer Tobacco Smoke and Involuntary Smoking. 
IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans,  Lyon, FR: 
IARC, 2004. 
 
25.   International Agency for Research on Cancer Smokeless tobacco and tobacco­specific 
nitrosamines. IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans, v. 
89,  Lyon, FR: IARC, 2007. 
 
26.   Stepanov, I., Knezevich, A., Zhang, L., Watson, C. H., Hatsukami, D. K., and Hecht, S. 
S. Carcinogenic tobacco­specific N­nitrosamines in US cigarettes: three decades of 
remarkable neglect by the tobacco industry. Tobacco Control, 21: 44­48, 2012. 
 
27.   Carmella, S. G., Akerkar, S., and Hecht, S. S. Metabolites of the tobacco­specific 
nitrosamine 4­(methylnitrosamino)­1­(3­pyridyl)­1­butanone in smokers' urine. Cancer 
Res., 53: 721­724, 1993. 
 
28.   United States Department of Health and Human Services How Tobacco Smoke Causes 
Disease: The Biology and Behavioral Basis for Smoking­Attributable Disease: A Report 
of the Surgeon General. Ch. 5. Washington, D.C.: U.S. Department of Health and Human 
Services, 2010. 
 
29.   International Agency for Research on Cancer Tobacco Smoke and Involuntary Smoking. 
IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans, pp. 33­1187. 
Lyon, FR: IARC, 2004. 
 
30.   Hecht, S. S. Human urinary carcinogen metabolites: biomarkers for investigating tobacco 
and cancer. Carcinogenesis, 23: 907­922, 2002. 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 41 of 46 
Revised: April 19, 2017 
 
31.   Hecht, S. S. Progress and challenges in selected areas of tobacco carcinogenesis. Chem. 
Res. Toxicol., 21: 160­171, 2008. 
 
32.   Stepanov, I., Upadhyaya, P., Feuer, R., Jensen, J., Hatsukami, D. K., and Hecht, S. S. 
Extensive metabolic activation of the tobacco­specific carcinogen 4­(methylnitrosamino)­
1­(3­pyridyl)­1­butanone in smokers. Cancer Epidemiol Biomarkers & Prev, 17: 1764­
1773, 2008. 
 
33.   Stepanov, I. and Hecht, S. S. Tobacco­specific nitrosamines and their N­glucuronides in 
the urine of smokers and smokeless tobacco users. Cancer Epidemiol Biomarkers & Prev, 
14: 885­891, 2005. 
 
34.   Hecht, S. S., Yuan, J. M., and Hatsukami, D. Applying tobacco carcinogen and toxicant 
biomarkers in product regulation and cancer prevention. Chem. Res. Toxicol., 23: 1001­
1008, 2010. 
 
35.   Church, T. R., Anderson, K. E., Caporaso, N. E., Geisser, M. S., Le, C. T., Zhang, Y., 
Benoit, A. R., Carmella, S. G., and Hecht, S. S. A prospectively measured serum 
biomarker for a tobacco­specific carcinogen and lung cancer in smokers. Cancer 
Epidemiol Biomarkers Prev, 18: 260­266, 2009. 
 
36.   Yuan, J. M., Koh, W. P., Murphy, S. E., Fan, Y., Wang, R., Carmella, S. G., Han, S., 
Wickham, K., Gao, Y. T., Yu, M. C., and Hecht, S. S. Urinary levels of tobacco­specific 
nitrosamine metabolites in relation to lung cancer development in two prospective 
cohorts of cigarette smokers. Cancer Res., 69: 2990­2995, 2009. 
 
37.   Yuan, J.­M., Gao, Y.­T., Murphy, S. E., Carmella, S. G., Wang, R., Zhong, Y., Moy, K. 
A., Davis, A. B., Tao, L., Chen, M., Han, S., Nelson, H. H., Yu, M. C., and Hecht, S. S. 
Urinary levels of cigarette smoke constituent metabolites are prospectively associated 
with lung cancer development in smokers. Cancer Res., 71: 6749­6757, 2011. 
 
38.   Yuan, J. M., Knezevich, A. D., Wang, R., Gao, Y. T., Hecht, S. S., and Stepanov, I. 
Urinary levels of the tobacco­specific carcinogen N'­nitrosonornicotine and its 
glucuronide are strongly associated with esophageal cancer risk in smokers. 
Carcinogenesis, 32: 1366­1371, 2011. 
 
39.   Stepanov, I., Sebero, E., Wang, R., Gao, Y. T., Hecht, S. S., and Yuan, J. M. Tobacco­
specific N­nitrosamine exposures and cancer risk in the Shanghai cohort study: 
Remarkable coherence with rat tumor sites. Int. J. Cancer, 134: 2278­2283, 2013. 
 
40.   Ding, Y. S., Ashley, D. L., and Watson, C. H. Determination of 10 carcinogenic 
polycyclic aromatic hydrocarbons in mainstream cigarette smoke. J. Agric. Food Chem., 
55: 5966­5973, 2007. 
 
41.   International Agency for Research on Cancer Some Non­Heterocyclic Polycyclic 
Aromatic Hydrocarbons and Some Related Exposures. IARC Monographs on the 
Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans, v. 92, pp. 35­818. Lyon, FR: IARC, 2010. 
 
42.   Hecht, S. S. Tobacco carcinogens, their biomarkers, and tobacco­induced cancer. Nature 
Rev. Cancer, 3: 733­744, 2003. 
 
43.   Pfeifer, G. P., Denissenko, M. F., Olivier, M., Tretyakova, N., Hecht, S. S., and Hainaut, 
P. Tobacco smoke carcinogens, DNA damage and p53 mutations in smoking­associated 
cancers. Oncogene, 21: 7435­7451, 2002. 
 
44.   Hecht, S. S. Tobacco smoke carcinogens and lung cancer. J. Natl. Cancer Inst., 91: 1194­
1210, 1999. 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 42 of 46 
Revised: April 19, 2017 
 
45.   Cheng, T. Chemical evaluation of electronic cigarettes. Tobacco Control, 23: ii11­ii17, 
2013. 
 
46.   International Agency for Research on Cancer Dry Cleaning, Some Chlorinated Solvents 
and Other Industrial Chemicals. IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic 
Risks to Humans, pp. 337­372. Lyon, France: IARC, 1995. 
 
47.   Feng, Z., Hu, W., Hu, Y., and Tang, M.­S. Acrolein is a major cigarette­related lung 
cancer agent. Preferential binding at p53 mutational hotspots and inhibition of DNA 
repair. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103: 15404­15409, 2006. 
 
48.   Zhang, S., Villalta, P. W., Wang, M., and Hecht, S. S. Analysis of crotonaldehyde­ and 
acetaldehyde­derived 1,N2­propanodeoxyguanosine adducts in DNA from human tissues 
using liquid chromatography­electrsopray ionization­tandem mass spectrometry. Chem. 
Res. Toxicol., 19: 1386­1392, 2006. 
 
49.   Carmella, S. G., Chen, M., Zhang, Y., Zhang, S., Hatsukami, D. K., and Hecht, S. S. 
Quantitation of acrolein­derived 3­hydroxypropylmercapturic acid in human urine by 
liquid chromatography­atmospheric pressure chemical ionization­tandem mass 
spectrometry: effects of cigarette smoking. Chem. Res. Toxicol., 20: 986­990, 2007. 
 
50.   Scherer, G., Engl, J., Urban, M., Gilch, G., Janket, D., and Riedel, K. Relationship 
between machine­derived smoke yields and biomarkers in cigarette smokers in Germany. 
Regulatory Toxicol. and Pharmacol., 47: 171­183, 2007. 
 
51.   Feng, S., Roethig, H. J., Liang, Q., Kinser, R., Jin, Y., Scherer, G., Urban, M., Engl, J., 
and Riedel, K. Evaluation of urinary 1­hydroxypyrene, S­phenylmercapturic acid, 
trans,trans­muconic acid, 3­methyladenine, 3­ethyladenine, 8­hydroxy­2'­
deoxyguanosine and thioethers as biomarkers of exposure to cigarette smoke. 
Biomarkers, 11: 28­52, 2006. 
 
52.   Scherer, G., Urban, M., Hagedorn, H. W., Feng, S., Kinser, R. D., Sarkar, M., Liang, Q., 
and Roethig, H. J. Determination of two mercapturic acids related to crotonaldehyde in 
human urine: influence of smoking. Hum. Exp. Toxicol., 26: 37­47, 2007. 
 
53.   Hecht, S. S., Carmella, S. G., Kotandeniya, D., Pillsbury, M. E., Chen, M., Ransom, B. 
W. S., Vogel, R. I., Thompson, E., Murphy, S. E., and Hatsukami, D. K. Evaluation of 
toxicant and carcinogen metabolites in the urine of e­cigarette users versus smokers. 
Nicotine & Tobacco Research, 17: 704­709, 2015. 
 
54.   D'Ruiz, C. D., Graff, D. W., and Robinson, E. Reductions in biomarkers of exposure, 
impacts on smoking urge and assessment of product use and tolerability in adult smokers 
following partial or complete substitution of cigarettes with electronic cigarettes. BMC 
Public Health, 16: 543, 2016. 
 
55.   Goniewicz, M. L., Gawron, M., Smith, D. M., Peng, M., Jacob III, P., and Benowitz, N. 
L. Exposure to Nicotine and Selected Toxicants in Cigarette Smokers Who Switched to 
Electronic Cigarettes: A Longitudinal Within­Subjects Observational Study. Nicotine & 
Tobacco Research, 19: 160­167, 2017. 
 
56.   Wang, M., Cheng, G., Balbo, S., Carmella, S. G., Villalta, P. W., and Hecht, S. S. Clear 
differences in levels of formaldehyde­DNA adduct in leukocytes of smokers and non­
smokers. Cancer Res., 69: 7170­7174, 2009. 
 
57.   Chen, L., Wang, M., Villalta, P. W., Luo, X., Feuer, R., Jensen, J., Hatsukami, D. K., and 
Hecht, S. S. Quantitation of an acetaldehyde adduct in human leukocyte DNA and the 
effect of smoking cessation. Chem. Res. Toxicol., 20: 108­113, 2007. 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 43 of 46 
Revised: April 19, 2017 
 
58.   Balbo, S., Meng, L., Bliss, R. L., Jensen, J. A., Hatsukami, D. K., and Hecht, S. S. 
Kinetics of DNA adduct formation in the oral cavity after drinking alcohol. Cancer 
Epidemiol Biomarkers & Prev, 21: 601­608, 2012. 
 
59.   Nair, U., Bartsch, H., and Nair, J. Lipid peroxidation­induced DNA damage in cancer­
prone inflammatory diseases: A review of published adduct types and levels in humans. 
Free Radical Biology & Medicine, 43: 1109­1120, 2007. 
 
60.   Bartsch, H. and Nair, J. Accumulation of lipid peroxidation­derived lesions: potential 
lead markers for chemoprevention of inflammation driven malignancies. Mutat. Res., 
591: 34­44, 2005. 
 
61.   Church, D. F. and Pryor, W. A. Free radical chemistry of cigarette smoke and its 
toxicological implications. Environ. Health Perspect., 64: 111­126, 1985. 
 
62.   Bhalla, D. K., Hirata, F., Rishi, A., and Gairola, C. G. Cigarette smoke, inflammation, 
and lung injury: a mechanistic perspective. Journal of Toxicology and Environmental 
Health, Part B, 12: 45­64, 2009. 
 
63.   United States Department of Health and Human Services The Health Consequences of 
Smoking: 50 Years of Progress. A Report of the Surgeon General. Atlanta, GA: U.S. 
Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention, 
National Center for Chronic Disease Prevention and Health Promotion, Office on 
Smoking and Health, 2014. 
 
64.   Dedon, P. C. Oxidation and Deamination of DNA by Endogenous Sources. In: T. M. 
Penning (ed.), Chemical Carcinogenesis, pp. 209­225. New York: Humana Press, 2011. 
 
65.   Lee, S. H. and Blair, I. A. Lipid Peroxide–DNA Adducts. In: T. M. Penning (ed.), 
Chemical Carcinogenesis, pp. 227­244. New York: Humana Press, 2011. 
 
66.   Weinberg, R. A. The Biology of Cancer. New York: Garland Science, Taylor and Francis 
Group, 2007. 
 
67.   Wang, D. and DuBois, R. N. Urinary PGE­M: a promising cancer biomarker. Cancer 
Prev Res (Phila), 6: 507­510, 2013. 
 
68.   Wang, D. and DuBois, R. N. Urinary PGE­M: a promising cancer biomarker. Cancer 
Prev Res (Phila), 6: 507­510, 2013. 
 
69.   Duffield­Lillico, A. J., Boyle, J. O., Zhou, X. K., Ghosh, A., Butala, G. S., Subbaramaiah, 
K., Newman, R. A., Morrow, J. D., Milne, G. L., and Dannenberg, A. J. Levels of 
prostaglandin E metabolite and leukotriene E(4) are increased in the urine of smokers: 
evidence that celecoxib shunts arachidonic acid into the 5­lipoxygenase pathway. Cancer 
Prev Res (Phila Pa), 2: 322­329, 2009. 
 
70.   Gross, N. D., Boyle, J. O., Morrow, J. D., Williams, M. K., Moskowitz, C. S., 
Subbaramaiah, K., Dannenberg, A. J., and Duffield­Lillico, A. J. Levels of prostaglandin 
E metabolite, the major urinary metabolite of prostaglandin E2, are increased in smokers. 
Clin. Cancer Res., 11: 6087­6093, 2005. 
 
71.   Morrow, J. D., Frei, B., Longmire, A. W., Gaziano, J. M., Lynch, S. M., Shyr, Y., 
Strauss, W. E., Oates, J. A., and Roberts II, L. J. Increase in circulating products of lipid 
peroxidation (F2­isoprostanes) in smokers. N. Engl. J. Med., 332: 1198­1203, 1995. 
 
72.   Milne, G. L., Yin, H., Hardy, K. D., Davies, S. S., and Roberts, L. J. Isoprostane 
generation and function. Chem Rev, 111: 5973­5996, 2011. 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 44 of 46 
Revised: April 19, 2017 
 
73.   Yan, W., Byrd, G. D., and Ogden, M. W. Quantitation of isoprostane isomers in human 
urine from smokers and nonsmokers by LC­MS/MS. J Lipid Res, 48: 1607­1617, 2007. 
 
74.   Roethig, H. J., Munjal, S., Feng, S., Liang, Q., Sarkar, M., Walk, R. A., and Mendes, P. 
E. Population estimates for biomarkers of exposure to cigarette smoke in adult U.S. 
cigarette smokers. Nicotine Tob. Res., 11: 1216­1225, 2009. 
 
75.   Frost­Pineda, K., Liang, Q., Liu, J., Rimmer, L., Jin, Y., Feng, S., Kapur, S., Mendes, P., 
Roethig, H., and Sarkar, M. Biomarkers of potential harm among adult smokers and 
nonsmokers in the total exposure study. Nicotine Tob. Res., 13: 182­193, 2011. 
 
76.   Oguogho, A., Lupattelli, G., Palumbo, B., and Sinzinger, H. Isoprostanes quickly 
normalize after quitting cigarette smoking in healthy adults. Vasa, 29: 103­105, 2000. 
 
77.   Pilz, H., Oguogho, A., Chehne, F., Lupattelli, G., Palumbo, B., and Sinzinger, H. Quitting 
cigarette smoking results in a fast improvement of in vivo oxidation injury (determined 
via plasma, serum and urinary isoprostane). Thromb Res, 99: 209­221, 2000. 
 
78.   Chehne, F., Oguogho, A., Lupattelli, G., Palumbo, B., and Sinzinger, H. Effect of giving 
up cigarette smoking and restarting in patients with clinically manifested atherosclerosis. 
Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids, 67: 333­339, 2002. 
 
79.   Frenkel, K. Carcinogen­mediated oxidant formation and oxidative DNA damage. 
Pharmacol Ther, 53: 127­166, 1992. 
 
80.   Ziech, D., Franco, R., Pappa, A., and Panayiotidis, M. I. Reactive oxygen species (ROS)­
­induced genetic and epigenetic alterations in human carcinogenesis. Mutat Res, 711: 
167­173, 2011. 
 
81.   Lonkar, P. and Dedon, P. C. Reactive species and DNA damage in chronic inflammation: 
Reconciling chemical mechanisms and biological fates. Int. J. Cancer, 128: 1999­2009, 
2011. 
 
82.   Ma, B., Jing, M., Villalta, P. W., Kapphahn, R. J., Montezuma, S. R., Ferrington, D. A., 
and Stepanov, I. Simultaneous determination of 8­oxo­2'­deoxyguanosine and 8­oxo­2'­
deoxyadenosine in human retinal DNA by liquid chromatography nanoelectrospray­
tandem mass spectrometry. Scientific Reports, 6, 22375; doi: 10.1038/srep22375: 2016. 
 
83.   Shiels, M. S., Pfeiffer, R. M., Hildesheim, A., Engels, E. A., Kemp, T. J., Park, J. H., 
Katki, H. A., Koshiol, J., Shelton, G., Caporaso, N. E., Pinto, L. A., and Chaturvedi, A. 
K. Circulating inflammation markers and prospective risk for lung cancer. Journal of the 
National Cancer Institute, 105: 1871­1880, 2013. 
 
84.   Rose, J. E., Levin, E. D., and Benowitz, N. Saliva nicotine as an index of plasma levels in 
nicotine patch users. Ther. Drug. Monit., 15: 431­435, 1993. 
 
85.   Jiebarth, D., Spiegelhalder, B., and Bartsch, H. N­nitrosation of medicinal drugs 
catalysed by bacteria from human saliva and gastro­intestinal tract, including 
Helicobacter pylori. Carcinogenesis, 18: 383­389, 1997. 
 
86.   Duncan, C., Dougall, H., Johnston, P., Green, S., Brogan, R., Leifert, C., Smith, L. M., 
Golden, M., and Benjamin, N. Chemical generation of of nitric oxide in the mouth from 
the enterosalivary circulation of dietary nitrate. Nature Medicine, 1: 546­551, 1995. 
 
87.   Marletta, M. A. Mammalian synthesis of nitrite, nitrate, nitric oxides, and N­nitrosating 
agents. Chem. Res. Toxicol., 1: 249­257, 1988. 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 45 of 46 
Revised: April 19, 2017 
 
88.   Knezevich, A., Muzic, J., Hatsukami, D. K., Hecht, S. S., and Stepanov, I. Nornicotine 
nitrosation in saliva and its relation to endogenous synthesis of N'­nitrosonornicotine in 
humans. Nicotine & Tobacco Research, Advance access, doi:10.1093/ntr/nts172: 2012. 
 
89.   Hecht, S. S. DNA adduct formation from tobacco­specific N­nitrosamines. Mutat. Res., 
424: 127­142, 1999. 
 
90.   Hecht, S. S., Spratt, T. E., and Trushin, N. Evidence for 4­(3­pyridyl)­4­oxobutylation of 
DNA in F344 rats treated with the tobacco specific nitrosamines 4­(methylnitrosamino)­
1­(3­pyridyl)­1­butanone and N'­nitrosonornicotine. Carcinogenesis, 9: 161­165, 1988. 
 
91.   Wang, M., Cheng, G., Sturla, S. J., Shi, Y., McIntee, E. J., Villalta, P. W., Upadhyaya, P., 
and Hecht, S. S. Identification of adducts formed by pyridyloxobutylation of 
deoxyguanosine and DNA by 4­(acetoxymethylnitrosamino)­1­(3­pyridyl)­1­butanone, a 
chemically activated form of tobacco­specific carcinogens. Chem. Res. Toxicol., 16: 
616­626, 2003. 
 
92.   Stepanov, I., Muzic, J., Le, C. T., Sebero, E., Villalta, P., Ma, B., Jensen, J., Hatsukami, 
D., and Hecht, S. S. Analysis of 4­hydroxy­1­(3­pyridyl)­1­butanone (HPB)­releasing 
DNA adducts in human exfoliated oral mucosa cells by liquid chromatography­
electrospray ionization­tandem mass spectrometry. Chem. Res. Toxicol., 26: 37­45, 
2013. 
 
93.   Ma, B., Ruszczak, C., Jain, V., Khariwala, S. S., Lindgren, B., Hatsukami, D. K., and 
Stepanov, I. Optimized Liquid Chromatography Nanoelectrospray­High­Resolution 
Tandem Mass Spectrometry Method for the Analysis of 4­Hydroxy­1­(3­pyridyl)­1­
butanone­Releasing DNA Adducts in Human Oral Cells. Chem. Res. Toxicol., 29: 1849­
1856, 2016. 
 
94.   Heatherton, T. F., Kozlowski, L. T., Frecker, R. C., and Fagerstrom, K. O. The 
Fagerstrom test for nicotine dependence: a revision of the Fagerstrom tolerance 
questionnaire. Br. J. Addict., 86: 1119­1127, 1991. 
 
95.   Piper, M. E., McCarthy, D. E., Bolt, D. M., Smith, S. S., Lerman, C., Benowitz, N., 
Fiore, M. C., and Baker, T. B. Assessing dimensions of nicotine dependence: an 
evaluation of the Nicotine Dependence Syndrome Scale (NDSS) and the Wisconsin 
Inventory of Smoking Dependence Motives (WISDM). Nicotine & Tobacco Research, 
10: 1009­1020, 2008. 
 
96.   Hughes, J. R. and Hatsukami, D. Signs and symptoms of tobacco withdrawal. Arch Gen 
Psychiatry, 43: 289­294, 1986. 
 
97.   Tiffany, S. T. and Drobes, D. J. The development and initial validation of a questionnaire 
on smoking urges. Br J Addict, 86: 1467­1476, 1991. 
 
98.   Westman, E. C., Levin, E. D., and Rose, J. E. Smoking while wearing the nicotine patch: 
Is smoking satisfying or harmful? Clin. Res., 40: 871A, 1992. 
 
99.   Zacny, J. P., Conley, K., and Marks, S. Comparing the subjective, psychomotor and 
physiological effects of intravenous nalbuphine and morphine in healthy volunteers. J 
Pharmacol Exp Ther, 280: 1159­1169, 1997. 
  100.   Prochaska, J. and Goldstein, M. Process of smoking cessation. Implications for clinicians. 
Clin. Chest Med., 12: 727­735, 1991. 
  101.   Hatsukami, D. K., Severson, H., Anderson, A., Vogel, R. I., Jensen, J., Broadbent, B., 
Murphy, S. E., Carmella, S., and Hecht, S. S. Randomised clinical trial of snus versus 

PROTOCOL TITLE: Biomarkers in SREC Users 
VERSION DATE: 03/13/2024 
 
Page 46 of 46 
Revised: April 19, 2017 
medicinal nicotine among smokers interested in product switching. Tobacco Control, 25: 
267­274, 2016. 
  102.   Donny, E. C., Denlinger, R. L., Tidey, J. W., Koopmeiners, J. S., Benowitz, N. L., 
Vandrey, R. G., al'Absi, M., and et.al. Randomized clinical trial of reduced­nicotine 
standards for cigarettes. N. Engl. J. Med., 373: 1340­1349, 2015. 
  103.   Hatsukami, D. K., Hertsgaard, L. A., Vogel, R. I., Jensen, J. A., Murphy, S. E., Hecht, S. 
S., Carmella, S. G., al'Absi, M., Joseph, A. M., and Allen, S. S. Reduced nicotine content 
cigarettes and nicotine patch. Cancer Epidemiol Biomarkers & Prev, 22: 1015­1024, 
2013. 
  104.   Jin, H. and Rubin, D. B. Principal stratification for causal inference with extended partial 
compliance. Journal of the American Statistical Association, 103: 101­111, 2008.