深川二軒茶屋では、源五兵衛の百両を巻き上げるために、賤ヶ谷伴右衛門に扮する勘九郎と、小万や菊野、小万の兄の役をする伊之助などが一芝居を打つ準備を進めている。伴右衛門が百両で小万を身請けする話をでっち上げ、小万を惜しむ源五兵衛から百両を引き出そうという算段である。
伴右衛門の身請け話を、小万が源五兵衛に心中立てして頑なに拒絶する様子を、三五郎と源五兵衛が窺っている。小万が頑なのを、何か理由があるのだろうと尋ねる伴右衛門に、伊之助が、小万には源五兵衛という相手がいると打ち明け、小万は腕の入れ黒子をみせる。
そこへ三五郎が源五兵衛を連れて座敷に上がるが、源五兵衛はなす術もなく、「女房となろうが妾となろうが、お勝手次第」と言うと、小万は三五郎の指図で源五兵衛の脇差を取り自害しようとする。困り果てた源五兵衛は、身請けすると言って、伯父の用立ててくれた百両を差し出してしまう。
ここに、八右衛門に案内された伯父の助右衛門が入ってくる。助右衛門は源五兵衛の放埓を責め、伯父甥の縁を切ると言い渡して去っていく。
亡君の仇討ちの一味に加わる望みを絶たれた源五兵衛は小万を女房として連れて帰ろうとするが、三五郎は小万は自分の女房だと明かし、これまでのことは源五兵衛から百両を巻き上げるための作り話だと言う。逆上した源五兵衛は三五郎を斬ろうとするが、八右衛門に止められる。これで開き直った三五郎は、源五兵衛を間男と口汚くののしるので、今度は八右衛門が飛びかかろうとするが、源五兵衛はこれを宥めて帰っていく。
二幕目 第二場 五人切の場.
源五兵衛から三五郎が百両を巻き上げるのを手助けした者たちが内びん虎蔵の家に集まっている。菊野は源五兵衛を気の毒がり、小万も気がとがめている様子だが、三五郎は計略の成功に気をよくし、小万の腕の彫り物を（「三」の字と「力」に土偏を加え）「三五大切」と変えて悦に入っている。
夜も更けて皆が寝入ると、丸窓を破って源五兵衛が忍び入り、まず伊之助と菊野を、三五郎と小万と思い込み殺害する。すぐに間違いに気づくが、次々に寝ている者たちを殺していく。物音に気づいて目を覚ました三五郎と小万は難を逃れるが、源五兵衛はさらに、その場に来合わせた幸八を含め五人を斬り殺す。
大詰 第一場 四谷鬼横町の場.