六ツ半（午後七時頃）、薩摩屋からの返書を持った峰吉が近江屋に到着した。そのころ龍馬と中岡は何事か話し合っていたが、峰吉が中岡に返書を渡した後、岡本健三郎が入ってきた。小半時ほど雑談した後、龍馬が「腹が減った」と言い出し、峰吉に軍鶏を買いに行かせ、用事があった岡本も峰吉と同行した。峰吉は四条小路の鳥新に向かい、軍鶏肉を購入して近江屋に戻ったのは五ツ半（午後九時頃）だった。
襲撃.
襲撃時の状況は証言者によって違いがある。
山田藤吉襲撃.
夜になり客が近江屋を訪れた。
谷干城が中岡から聞いた証言によれば、客は十津川郷士を名乗って「龍馬に会いたい」と願い出た。応対に出た山田藤吉は、名刺を龍馬のもとに持っていった。藤吉は戻っていったところで斬られた。谷は「藤吉は龍馬らが襲撃された八畳間で倒れていた」と証言した。これに対して峰吉は、藤吉が階段下で斬られていたことから、「取り次いだ形跡はない」としている。
今井信郎は刑部省の口上書において、五ツ半ごろ、「松代藩士を名乗って応接を求め、四名が部屋に上がっていった」と証言している。
龍馬への襲撃.
藤吉が倒れ、大きな物音がすると、龍馬は「ほたえな!」と叫んだ。このあと二人の刺客が奥の八畳間に乱入、そのうちの一人の今井信郎は龍馬の前頭部を横に払い、一人は中岡の後頭部を斬った。龍馬は奥の床の間にあった刀を取ろうと振り返ったところを右の肩先から左の背中にかけて斬られた。龍馬は刀をとって立ち上がったが、抜くには至らず、鞘のままで刀を受け止めた。しかし刺客の刀は鞘ごと刀を削り、龍馬の前頭部に大きな傷を与えた。龍馬は「石川、刀はないか、石川、刀はないか」と叫びつつ倒れた。
慎太郎への襲撃.
慎太郎は刀を屏風の後ろにおいており、刀を抜くこともできずに鞘のままで防戦していた。しかし最初の傷が深く、両手両足を斬られ、特に右手はほとんど切断されるほどであった。また臀部を骨に達するほど斬られたが、慎太郎は死んだふりをしていた。刺客は「もうよい、もうよい」と叫び、引き上げた。
襲撃後の様子.