固定は生物試料を顕微鏡などによる解析に用いるための最初の過程である。したがって固定法の選択はその後の過程や最終的な目的によって変わる。目的に応じて適切な固定剤の選択と条件の調節を行うことで相当の効果を上げることができる。細胞組織学的研究や免疫組織化学的研究では酵素活性や抗原性の保持が重要であるため、固定液の選定が大きな影響を及ぼす。たとえば免疫組織化学では特定のタンパク質に結合する抗体を用いるが、固定時間が長くなると標的タンパク質が化学的に遮蔽されて抗体が結合できなくなることがある。そのため通常はたとえば冷却ホルマリン1日程度の短時間固定が用いられる。機序.生体に含まれるタンパク質を変性させることで酵素の活性が失われる。またゲルやゾルの状態だった原形質が完全に固体となることで形態が固定される。通常は薬品(固定剤)による化学的な処理を用いるが、温度・圧力による物理的な変性を利用することもある。架橋固定.生体分子間に共有結合をつくることによるもの。これにより可溶性のタンパク質なども細胞骨格や生体膜などに固定され、機械的強度も高まる。アルデヒド.ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドなど。アルデヒド系固定液はタンパク質を架橋して変性凝固させ、浸透性も優れているため、古くから広く用いられている。酸化剤.四酸化オスミウム、二クロム酸カリウム、クロム酸、過マンガン酸カリウムなど。四酸化オスミウムは電子顕微鏡用の試料の固定に頻用される。これは、タンパク質の固定だけでなく細胞の構造維持に重要な働きを持つ脂質も固定も行うことができるため、人為構造の出現がきわめて少なく形態保持に有効であるためである。単独でも固定可能だが浸透性が悪いため、アルデヒド(パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドの混合液)による前固定を行ったあと後固定として用いるのが普通である(重固定)。生体膜を固定する力が強く、生体膜の電子染色を兼ねている。固定によって試料が黒化し抗原性もほとんど失われるため、光学顕微鏡や免疫電子顕微鏡法用の試料には用いられない。析出固定.各種アルコール、酢酸、アセトンなど。タンパク質の溶解度を減少させ、また疎水結合を破壊することによるもの。これによりタンパク質は変性し、析出・凝集して不活化される。