INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
De façon optionnelle, le premier hublot comprend une première lame de verre et le second hublot comprend une seconde lame de verre, la première, respectivement seconde, lame de verre étant fabriquée à partir d’un verre parmi un verre borosilicate, un verre aluminosilicate ou un verre d'alcali-aluminosilicate. Avantageusement, le système de mesure comprend une deuxième cellule de mesure et l’appareil de spectrométrie Raman comprend une autre source lumineuse apte à émettre un autre faisceau lumineux d’excitation, le système de détection comprenant un capteur de lumière comportant des pixels agencés en plusieurs lignes et configuré pour détecter simultanément le signal Raman induit par la source lumineuse et un deuxième signal Raman émis par le fluide en flux lorsque le fluide en flux est excité par l’autre faisceau lumineux d’excitation.
L’invention concerne aussi un système de mesure d’au moins un fluide entrant et/ou sortant d’un système générateur électrochimique, le système de mesure opérant en temps réel et sans extraction et isolation desdits fluides du circuit du système générateur électrochimique.
Plus particulièrement, on propose selon l’invention un système de mesure d’au moins un composant chimique d’un fluide en flux pour un système générateur électrochimique comprenant une pluralité de conduits fluidiques d’entrée et/ou de sortie, le système de mesure comprenant : - un appareil de spectrométrie Raman comprenant une source lumineuse, un spectromètre Raman comprenant un système de détection et un système de traitement, la source lumineuse étant configurée pour générer un faisceau lumineux d’excitation, un diviseur de faisceau disposé pour recevoir le faisceau lumineux d’excitation et former une pluralité de faisceaux lumineux d’excitation divisés, - une pluralité de cellules de mesure double passe disposées chacune sur un conduit fluidique d’entrée ou de sortie du système générateur électrochimique, chaque cellule de mesure double passe comprenant un conduit fluidique ayant une ouverture d’entrée configurée pour laisser entrer le fluide en flux provenant dudit conduit fluidique d’entrée ou de sortie du système générateur électrochimique et une ouverture de sortie configurée pour laisser sortir le fluide en flux, chaque cellule de mesure comprenant un premier hublot étanche et un second hublot étanche, les deux hublots de chaque cellule de mesure étant disposés latéralement sur le conduit fluidique en aval de l’ouverture d’entrée et en amont de l’ouverture de sortie, les deux hublots de chaque cellule de mesure étant positionnés en regard l’un de l’autre sur un axe optique principal transverse au conduit fluidique et configurés pour recevoir un faisceau lumineux d’excitation divisé et transmettre un premier faisceau lumineux formé par diffusion et/ou simple transmission du faisceau lumineux d’excitation divisé à travers le fluide en flux dans le conduit fluidique, et - un dispositif optique au moins partiellement réfléchissant positionné pour recevoir le premier faisceau lumineux transmis par les deux hublots et configuré pour réfléchir le premier faisceau lumineux en direction du fluide en flux à travers les deux hublots pour former un deuxième faisceau lumineux formé par diffusion et/ou double transmission du faisceau lumineux d’excitation à travers le fluide en flux et les deux hublots, le spectromètre Raman étant configuré pour recevoir de chaque cellule de mesure double passe le deuxième faisceau lumineux, le système de détection étant adapté pour détecter séparément un signal Raman émis par le fluide en flux de chaque cellule de mesure double passe et le système de traitement étant adapté pour en déduire une mesure d’au moins un composant chimique du fluide en flux dans chaque cellule de mesure double passe.
est un graphique représentant un exemple d’évolution d’un signal Raman représentatif du dihydrogène en fonction du temps ;
Il existe par ailleurs un besoin pour un additif ayant pour vocation de favoriser le maintien dans le temps de l’activité antimicrobienne des endolysines sous forme anhydre, ces endolysines conservant notamment leur activité une fois réhydratées dans une composition, notamment cosmétique, en vue de leur mise en œuvre sur une matière kératinique, notamment sur la peau.
Il existe de plus un besoin pour un additif ayant pour vocation (i) de favoriser le maintien dans le temps de l’activité antimicrobienne des endolysines dans des formulations anhydres (ii) tout en conservant la spécificité de ces endolysines pour les bactéries ciblées, en particulier dans la présente invention Staphylococcus aureus .
La présente invention a pour but de résoudre au moins un problème technique précité.
En effet, les inventeurs ont maintenant découvert que le mannitol s’avère apte à permettre le maintien d’une bonne performance de destruction de Staphylococcus aureus par l’endolysine associée après de nombreuses semaines post préparation d’une composition anhydre en comprenant.
Comme mentionné ci-dessus, la présente invention concerne ainsi une composition anhydre (également appelée composition A), notamment cosmétique, comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable : (i) au moins une endolysine dérivée d’un phage de Staphylococcus aureus ; et (ii) du mannitol, l’endolysine comprenant une séquence protéique comprenant au moins 80 %, en particulier au moins 90 %, plus particulièrement au moins 95 % d’identité de séquence avec une séquence d’acides aminés choisie dans le groupe constitué des séquences d’acides aminés de références SEQ ID NO: 1 et SEQ ID NO: 2 .
Comme illustré dans les exemples ci-après, la Demanderesse a découvert de manière surprenante qu’une composition anhydre (composition A) selon l’invention, comprenant une endolysine dérivée d’un phage de Staphylococcus aureus l’endolysine comprenant une séquence protéique comprenant au moins 80 %, en particulier au moins 90 %, plus particulièrement au moins 95 % d’identité de séquence avec une séquence d’acides aminés choisie dans le groupe constitué des séquences d’acides aminés de références SEQ ID NO: 1 et SEQ ID NO: 2 , et du mannitol, permet avantageusement de maintenir la performance de destruction de S. aureus de l’endolysine, même après une longue période de stockage à température ambiante sous forme anhydre (par exemple 13 semaines) après resolubilisation en milieu aqueux (composition B). En outre, cette association permet de maintenir la performance de destruction de S. aureus par l’endolysine, même à de très hautes températures (2 mois 45°C, 3 mois 40°C et 1h à 110°C).
La présente invention concerne également une composition (dite composition B), notamment cosmétique, comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins une composition anhydre (composition A) selon l’invention, en particulier sous une forme solubilisée.
Ainsi, la présente invention concerne également la mise en œuvre d’une composition de l’invention (composition A ou B) pour prévenir et/ou traiter un désordre cutané lié à une colonisation par Staphylococcus aureus chez un individu en ayant besoin, en particulier pour prévenir et/ou traiter de l’acné et/ou de l’eczéma chez l’individu.
De plus, la présente invention concerne également un procédé de stabilisation d’une endolysine dérivée d’un phage de Staphylococcus aureus , en particulier un procédé de séchage d’une endolysine dérivée d’un phage de Staphylococcus aureus , comprenant la mise en contact de l’endolysine avec du mannitol, l’endolysine comprenant une séquence protéique comprenant au moins 80 %, en particulier au moins 90 %, plus particulièrement au moins 95 % d’identité de séquence avec une séquence d’acides aminés choisie dans le groupe constitué des séquences d’acides aminés de références SEQ ID NO: 1 et SEQ ID NO: 2 , en particulier l’endolysine comprenant une séquence protéique consistant en la séquence d’acides aminés de référence SEQ ID NO: 1 .
Elle concerne de plus un procédé cosmétique non thérapeutique de soin des matières kératiniques, en particulier de la peau, comprenant l'application topique sur ces matières kératiniques d'une composition (composition A ou B) selon l’invention.
La présente invention concerne par ailleurs l’utilisation de mannitol pour stabiliser, en particulier sécher, une endolysine dérivée d’un phage de Staphylococcus aureus.
La présente invention concerne également un kit de formulation d’un produit cosmétique, comprenant au moins : (i) une composition anhydre (composition A) selon l’invention ; et (ii) une composition cosmétique contenant un gel aqueux ou une émulsion ; la composition anhydre (i) et la composition cosmétique (ii) étant chacune dans un compartiment, les deux compartiments étant séparés spatialement.
La présente invention concerne par ailleurs une composition cosmétique comprenant au moins une composition anhydre (composition A) selon l’invention dispersée dans une huile.
Description détaillée Par « cosmétique », on entend une composition compatible avec les matières kératiniques, en particulier la peau, les muqueuses et les phanères, plus particulièrement la peau. La composition selon l’invention est non-thérapeutique.
Par « composition anhydre », on entend une composition caractérisée par une absence d’eau ou la présence d’eau en une quantité telle que les personnes qualifiées peuvent déterminer qu’elle est exempte ou sensiblement exempte d’eau. Par exemple, une composition « anhydre » selon la présente invention peut comprendre moins de 10%, notamment moins de 5%, en particulier moins de 2%, de préférence moins de 0,5% en poids d’eau, par rapport au poids total de la composition. De préférence, une composition « anhydre » selon la présente invention ne comprend pas une quantité détectable d’eau, la « quantité détectable » signifiant une quantité pouvant être détectée par un dispositif classiquement utilisé dans l’art pour mesurer la teneur en eau.
En particulier, une composition anhydre selon l’invention peut se présenter sous la forme d’un lyophilisat ou sous une forme atomisée, en particulier sous la forme d’un lyophilisat.
Aussi, on entend par solution fermentée, une solution qui a atteint, suite à la fermentation anaérobie du substrat à base de glucides par ledit au moins un ferment lactique, un pH compris dans l'intervalle allant de 4,5 à 6, de préférence une solution dont le pH est compris dans l'intervalle allant de 4,5 et 5,5.
Avantageusement, et lors de ce processus de fermentation anaérobie, après une première phase de mélange, la solution n’est soumise à aucune agitation après au plus 10 minutes suivant l’inoculation de la solution par ledit au moins un ferment lactique, de préférence, la solution n’est soumise à aucune agitation après au plus 5 minutes suivant l’inoculation de la solution par ledit au moins un ferment lactique.
De façon générale, ladite solution fermentée est obtenue au terme d’un processus de fermentation pendant un temps compris entre 6 et 36 heures, de préférence entre 10 et 24 heures et de manière particulièrement préférée entre 10 et 20 heures, et à une température comprise entre 20 et 37°C, de préférence entre 22 et 34°C.
Par « ferment lactique », on entend un microorganisme, bactérie lactique ou levure lactique, qui est capable de former de l’acide lactique, à partir de glucides, lors d’une fermentation anaérobie (en l’absence d’oxygène). De préférence, le ferment lactique est une bactérie lactique.
Les bactéries lactiques sont des bactéries anaérobies à Gram positif. Ces bactéries ont pour habitat de nombreux milieux naturels et accompagnent l'activité humaine en tant que bactéries de la flore commensale des muqueuses et de la flore alimentaire. Les bactéries lactiques appartiennent à :
- l'embranchement des Bacillota et font partie de l’ordre des Lactobacillales comportant les familles Aerococcaceae, Carnobacteriaceae, Enterococcaceae, Lactobacillaceae, Leuconostocaceae et Streptococcaceae.
– l’embranchement des Actinobacteria et font partie de la famille Bifidobacteriaceae appartenant à l'ordre des Bifidobacteriales.
Avantageusement, le au moins un ferment lactique est choisi parmi les bactéries lactiques appartenant au genre Lactobacillus, Pediococcus , Lactococcus, Streptococcus, Tetragenococcus, Leuconostoc, Oenococcus ou Bifidobacterium.
Avantageusement encore, ledit au moins un ferment lactique appartient à une espèce de bactéries lactiques choisie dans le groupe comprenant Streptococcus thermophilus, Streptococcus lactis, Streptococcus cremosis, Lactobacillus bulgaricus , Lactobacillus lactis, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus pentosus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus paraplantarum, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus casei/ Lactobacillus zeae, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus sanfranciscencis, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus amylovorus, Lactobacillus mali, Lactobacillus coryneformis, Lactobacillus xiangfangensis, Lactobacillus diolivorans, Lactobacillus pontis, Lactobacillus rossiae, Lactobacillus hominis, Lactobacillus kunkeei, Lactobacillus sakei , Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc lactis, Leuconostoc dextranicum et Leuconostoc cremosis.
Selon un mode de réalisation particulier, le substrat à base de glucides destiné à être fermenté, par le ferment lactique, est d’origine animale.
A titre de tels substrats d’origine animale, on peut citer le lait, la crème, la poudre de lait, poudre de lactose, de préférence ledit substrat est de la poudre de lait.
Avantageusement, et dans le cas d’un tel substrat d’originale animale, la solution comprend de préférence entre 10 et 25% en poids (par rapport au poids total de la solution) du substrat à base de glucides d’origine animale, de préférence entre 15 et 20% en poids.
Avantageusement, et toujours dans le cas d’un tel substrat d’origine animale, le volume de solution fermentée incorporé correspond à 1 à 5% du volume final de l’émulsion-eau-dans-huile obtenue, de préférence, le volume de solution fermentée incorporée correspond à 1 à 2% du volume final de l’émulsion-eau-dans-huile obtenue.
Avantageusement, et dans le cas substrat d’origine animale, ledit au moins un ferment lactique appartient à une espèce de bactéries lactiques choisie dans le groupe comprenant Streptococcus thermophilus, Streptococcus lactis, Streptococcus cremosis, Lactobacillus bulgaricus , Lactobacillus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc lactis, Leuconostoc dextranicum, Leuconostoc cremosis.
Selon un mode de réalisation particulier alternatif, le substrat à base de glucides destiné à être fermenté, par le ferment lactique, est d’origine végétale comme l’amidon, l’inuline, le fructose ou encore le glucose.
Les inventeurs ont en effet mis en évidence qu’il était également possible, en utilisant un tel substrat, d’obtenir une émulsion eau-dans-huile aux propriétés organoleptiques particulièrement appréciables.
Les connecteurs auto-dénudant sont agencés de sorte que l’assemblage d’une bobine sur le support central entraine l’insertion des languettes des connecteurs auto-dénudant du dispositif d’interconnexion électrique dans une embase respective de connecteur auto-dénudant d’une bobine, connectant ainsi électriquement les deux extrémités de la bobine au dispositif d’interconnexion électrique.
Selon un deuxième exemple de réalisation du procédé d’assemblage, les bobines sont d’abord montées sur les dents du support central, puis on monte axialement le dispositif d’interconnexion électrique sur le support central pour connecter électriquement les deux extrémités de toutes les bobines au dispositif d’interconnexion électrique.
La montre une vue schématique en perspective d’une machine électrique.
La montre une vue schématique en perspective d’un premier exemple de bobine de la machine électrique de la pour un premier exemple de réalisation du procédé d’assemblage.
La montre une vue schématique similaire à la pour un deuxième exemple de réalisation de bobine adaptée au premier exemple de réalisation du procédé d’assemblage.
La montre une vue schématique en coupe de profil d’une extrémité d’enroulement de fil électrique montée dans une embase de connecteur auto-dénudant de la bobine de la .
La montre une vue schématique de côté des éléments de la .
La est une vue schématique en perspective d’un dispositif d’interconnexion électrique monté sur un support central d’un stator de la machine électrique de la .
La est une vue schématique d’une languette d’un connecteur auto-dénudant du dispositif d’interconnexion électrique à l’aplomb d’une embase d’une connecteur auto-dénudant de bobine.
La est une vue schématique de dessus de la machine électrique au cours d’une étape du procédé d’assemblage selon le premier exemple de réalisation.
La est une vue schématique similaire et successive à la .
La est une vue schématique d’un autre exemple de languette, la languette étant raccordée à une extrémité d’enroulement de fil électrique.
La montre une vue schématique en perspective d’un premier exemple de bobine de la machine électrique de la pour un deuxième exemple de réalisation du procédé d’assemblage.
La montre une vue schématique similaire à la pour un deuxième exemple de réalisation de bobine adapté au deuxième exemple de réalisation du procédé d’assemblage.
La est une vue schématique en perspective de la machine électrique au cours d’une étape du procédé d’assemblage selon le deuxième exemple de réalisation.
est une vue schématique d’un système à plusieurs cellules de mesure utilisé par exemple dans un système générateur électrochimique de type pile à combustible.
Le principe actif selon l’invention peut éventuellement être intégré dans une composition, notamment une composition comprenant au moins 0,1% en poids dudit principe actif et un milieu physiologiquement acceptable, préférentiellement un milieu cosmétiquement acceptable.
Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d’émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux, poudres, ou fond de teint ou sous forme de film. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l’aspect de crèmes, émulsions, gels, masques ou tous autres aspects connus de l’Homme du métier.
Préférentiellement, il peut s’agir de compositions comprenant entre 0,1 et 20% du principe actif liquide selon l’invention, plus préférentiellement entre 0,5 et 10%.
Le cresson de fontaine est une plante à croissance rapide qui ne nécessite que peu de fertilisants. Avantageusement, la culture, est réalisée dans des cressonnières, par semis successifs.
Selon un mode de réalisation préféré, le procédé d’extraction comprend au moins une étape de solubilisation de Nasturtium officinale , préférentiellement des parties aériennes de Nasturtium officinale, une étape d’hydrolyse, préférentiellement au moins une hydrolyse enzymatique et une étape de filtration.
Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, le principe actif selon l’invention est obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes : Solubilisation de parties aériennes de Nasturtium officinale , dans l’eau à raison d’au moins 50 g/L, Hydrolyse, préférentiellement hydrolyses enzymatiques, Séparation des phases soluble et insoluble, Traitement thermique, Concentration de la phase soluble, préférentiellement par tri moléculaire, Éventuellement, désodorisation et/ou décoloration, Éventuellement, filtration et filtration stérilisante.
L’étape de traitement thermique est avantageusement réalisée pour inactiver la ou les enzyme(s) présente(s). Cette inactivation est alors réalisée selon les préconisations du fournisseur de la ou des enzyme(s) utilisée(s).
Affinité du ProAMFA1 pour le RM6P-CI Le ProAMFA1 a été évalué pour son affinité éventuelle pour le récepteur RM6P-CI en comparaison avec l’AMFA1 et le M6P. Comme déjà indiqué, l’affinité désigne l’intensité de l’interaction du ligand, par exemple l’AMFA1, pour son récepteur, à savoir pour le RM6P-CI. Pour ce faire, un test basé sur la compétition d’interaction avec le RM6P-CI est réalisé selon le protocole décrit ci-dessous. Protocole expérimental : Les tests d’affinité sont réalisés en utilisant du RM6P-CI biotinylé (RM6P-CIb) qui reconnaît du pentamannose 6-phosphate (PMP) préalablement adsorbé sur des plaques de 96 puits MaxiSorp TM . Avant d’être distribué dans les puits, le RM6P-CIb est pré-incubé 2 h en présence de M6P, AMFA1 ou ProAMFA1 à différentes concentrations. Les solutions pré-incubées sont ensuite distribuées dans les puits contenant le PMP. Après 2 h à température ambiante, la quantité de RM6P-CIb lié au PMP est déterminée en utilisant une solution de streptavidine couplée à la peroxydase en présence de substrat OPD ( o -phenylènediamine) et par mesure de densité optique à 450 nm. Les résultats obtenus sont illustrés à la et dans le tableau 7 ci-après. Le tableau 7 indique les concentrations nécessaires de M6P, AMFA1 et ProAMFA1 pour avoir une interaction de 50% avec le RM6P-CI (IC 50 ).
Composés IC 50 (M) M6P 2,4 x 10 -5 AMFA1 4,5 x 10 -5 ProAMFA1 > 1,0 x 10 -3
Il ressort de la et du tableau 7 que le ProAMFA1 n’a pas d’affinité pour le RM6P-CI. Cette caractéristique très intéressante permet de valider son potentiel de pro-ligand. L’absence d’affinité du ProAMFA1 vis-à-vis du RM6P-CI permet d’éviter l’internalisation cellulaire par ces récepteurs des principes actifs auxquels le ProAMFA1 sera associé (comme un produit d’intérêt et éventuellement une cible biologique).
Activation du ProAMFA1 en AMFA1 Afin de vérifier son potentiel thérapeutique en qualité de pro-ligand, la capacité du ProAMFA1 à être dépourvu de son groupement P1 = phosphate (P(O)(OH) 2 ) a été étudiée. Une étude cinétique de déphosphorylation a été réalisée en incubant le ProAMFA1 en présence d’une phosphatase alcaline isolée de placenta humain et suivie par une analyse par RMN 31 P selon le protocole décrit ci-après. Test de digestion enzymatique par la phosphatase alcaline de ProAMFA1 Un aliquote de 2,3 mg de ProAMFA1 est dissout dans 200 µL de D 2 O et 300 µL de tampon Tris 50 mM pH 7,4. Une première analyse de l’échantillon placé dans le tube RMN est effectuée à 37°C à l’aide d’un spectromètre Bruker AVANCE 400 MHz avec les paramètres suivants : 162 MHz, ns=16, D 1 =2s, largeur d’impulsion : 15°, 310 K. Un aliquote de 2,3 mg de phosphatase alcaline isolée de placenta humain est dissout dans 100 µL de Tris 50 mM pH 7,4 puis additionné dans le tube RMN. Les paramètres indiqués sont employés pour une étude cinétique de la digestion enzymatique. La cinétique de conversion du ProAMFA1 en AMFA1 a pu être établie après intégration des différents signaux observés en RMN. Les résultats obtenus sont illustrés à la . Comme indiqué sur la série de spectres de cette figure, la diminution du signal du phosphate du ProAMFA1 au profit de l’apparition du phosphate minéral (formé lors de la réaction d’hydrolyse par la phosphatase) est observée en présence de phosphatase. Dans le même temps, le signal 31 P du phosphonate du ProAMFA1 disparaît au profit du signal 31 P du phosphonate de l’AMFA1. La formation de l’AMFA1 a été confirmée par l’addition d’une quantité connue d’AMFA1 entraînant l’augmentation du signal spécifique de l’AMFA1. Dans le cadre du test, un échantillon de ProAMFA1 de pureté égale à 87% a été utilisé. Le sous-produit présent est le ProAMFA1-oxime (ProAMFA1ox), qui provient de la réaction entre le ProAMFA1 et de l’acétone. ProAMFA1ox présente la formule développée suivante :
. Il ressort également de la série de spectres de la figure 10 que la phosphatase alcaline hydrolyse de la même manière le phosphate du ProAMFA1ox conduisant à la formation du ligand AMFA1-oxime (AMFA1ox).
Exemple 4 : É valuation biologique des conjugués (II)
Évaluation de la cytotoxicité d u conjugué Myo _ P roAMFA1 La cytotoxicité du conjugué Myo _ ProAMFA1 de l’invention et du conjugué Myo _ AMFA1 a été évaluée en comparaison avec l’enzyme lysosomale seule Myo, sur des cellules humaines MCF-7 du cancer du sein ( ) et sur des fibroblastes humains sains ( ) selon le même protocole que celui décrit dans l’exemple 3.