INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Dans les modes de réalisation qui détectent le produit amplifié à la fin de l’étape d’amplification ou presque, une sonde de détection linéaire peut être utilisée pour fournir un signal indiquant l’hybridation de la sonde au produit amplifié. Un exemple d’une telle détection utilise une sonde marquée par luminescence qui s’hybride avec l’acide nucléique cible. Le marqueur luminescent est ensuite hydrolysé à partir d’une sonde non hybridée. La détection est effectuée par chimioluminescence à l’aide d’un luminomètre. ( voir, par exemple, la publication de demande de brevet internationale WO 89/002476, citée dans la présente invention à titre de référence). Dans d’autres modes de réalisation qui utilisent la détection en temps réel, la sonde de détection peut être une sonde en épingle à cheveux, telle que, par exemple, une balise moléculaire, une torche moléculaire ou une sonde à commutation d’hybridation qui est marquée par une fraction rapporteuse qui est détectée lorsque la sonde se lie au produit amplifié (par exemple, une sonde en épingle à cheveux à double marquage comprenant à la fois un marqueur fluorescent et une fraction d’extinction). Dans d’autres modes de réalisation pour la détection en temps réel, la sonde de détection est un oligomère linéaire tel que, par exemple , un oligomère marqué à la fois par un fluorophore et une fraction d’extinction ( par exemple , une sonde TaqMan). De telles sondes peuvent comprendre des séquences d’hybridation cibles et des séquences d’hybridation non-cibles. Diverses formes de telles sondes ont été décrites précédemment ( voir, par exemple , les brevets américains n o 5 210 015 ; 5 487 972 ; 5 118 801 ; 5 312 728 ; 5 925 517 ; 6 150 097 ; 6 849 412 ; 6 835 542 ; 6 534 274 ; et 6 361 945 ; et les publications de demande de brevet américain n o 20060068417A1 et 20060194240A1 ; chacun étant cité dans la présente invention à titre de référence).
Les tests de détection de l’acide nucléique à GBS peuvent éventuellement comprendre un acide nucléique de contrôle interne (IC) non-GBS qui est amplifié et détecté dans les mêmes mélanges réactionnels de test à l’aide des oligomères d’amplification et de détection spécifiques à la séquence IC. Les séquences d’acide nucléique IC peuvent être, par exemple , un plasmide d’ADN, une séquence de matrice d’ARN ( par exemple , un transcrit in vitro ), ou un acide nucléique synthétique qui est ajouté à un échantillon. En variante, la séquence d’acides nucléiques IC peut être un composant cellulaire, qui peut provenir de sources cellulaires exogènes ou de sources cellulaires endogènes par rapport à l’échantillon. Dans ces cas, un acide nucléique de contrôle interne est co-amplifié par l’acide nucléique GBS dans les mélanges réactionnels d’amplification. Le produit d’amplification de contrôle interne et le produit d’amplification de séquence cible à GBS peuvent être détectés indépendamment.
Dans certains modes de réalisation, l’amplification et la détection d’un signal provenant d’une séquence IC amplifiée démontrent que les réactifs, les conditions et la réalisation des étapes de test ont été correctement utilisés dans le test si aucun signal n’est obtenu pour l’acide nucléique cible à GBS visé ( par exemple , des échantillons dont le test au GBS est négatif). Un IC peut également être utilisé comme étalonneur interne pour le test lorsqu’un résultat quantitatif est souhaité, c’est-à-dire que le signal obtenu à partir de l’amplification et de la détection de l’IC est utilisé pour définir un paramètre utilisé dans un algorithme de quantification de la quantité d’acide nucléique à GBS dans un échantillon sur la base du signal obtenu pour une séquence cible de GBS amplifiée. Les IC sont également utiles pour surveiller l’intégrité d’une ou de plusieurs étapes dans un test. Les amorces et la sonde de la séquence cible IC sont configurées et synthétisées à l’aide d’un procédé bien connu quelconque, à condition que les amorces et la fonction de sonde servent à l’amplification de la séquence cible IC et à la détection de la séquence IC amplifiée en utilisant sensiblement les mêmes conditions de test que celles utilisées pour amplifier et détecter la séquence cible à GBS. Dans les modes de réalisation préférés qui comprennent une étape de purification basée sur la capture de cible, il est préférable qu’une sonde de capture de cible spécifique à la cible IC soit incluse dans l’analyse lors de l’étape de capture de cible, de sorte que l’IC soit traité dans le test de manière analogue à celui de l’analyte à GBS visé dans toutes les étapes du test.
La présente invention fournit également des formulations pour déterminer la présence ou l’absence de GBS dans un échantillon. Dans certains modes de réalisation, une formulation est une formulation aqueuse comprenant (1) au moins deux oligomères d’amplification spécifiques à SIP ou à CFB pour l’amplification d’une région cible SIP ou CFB telle que décrite dans la présente invention et (2) un tampon organique. Une formulation aqueuse destinée à l’amplification d’un acide nucléique à GBS peut comprendre un ou plusieurs composants supplémentaires tels que, par exemple , une enzyme ADN polymérase, une enzyme transcriptase inverse ou un oligomère de sonde de détection. Dans certains modes de réalisation, une formulation est une formulation aqueuse comprenant (1) un oligomère de sonde de détection spécifique à SIP et/ou à CFB tel que décrit dans la présente invention et (2) sur un tampon organique. Une formulation aqueuse destinée à comprendre plusieurs oligomères de sonde de détection peut comprendre un ou plusieurs composants supplémentaires tels que, par exemple , un tensioactif, une enzyme ADN polymérase, une enzyme transcriptase inverse ou au moins un oligomère d’amplification. Les tensioactifs particulièrement appropriés comprennent, par exemple, le polyéthylène glycol mono [4-(1,1,3,3-tétraméthylbutyl) phényl] et les esters d’acides gras de sorbitan de polyoxyéthylène ( par exemple , le polysorbate 20, le polysorbate 40 ou le polysorbate 60). Dans certains modes de réalisation, un tensioactif dans une formulation de sonde de détection aqueuse est un tensioactif non-linéaire tel que, par exemple, un ester d’acide gras de sorbitan de polyoxyéthylène (par exemple, le polysorbate 20, le polysorbate 40 ou le polysorbate 60) ou la digitonine. Une formulation aqueuse telle que ci-dessus pour l’amplification ou la détection de l’acide nucléique à GBS peut en outre comprendre un agent gonflant tel que, par exemple , le tréhalose, le raffinose ou une combinaison de ceux-ci. Dans certains modes de réalisation, une formulation aqueuse telle que ci-dessus contient un sel inorganique tel que, par exemple , le magnésium, le potassium ou le sodium ; dans certaines de ces variations, la concentration du sel inorganique est inférieure ou égale à 4 mM. Un tampon organique particulièrement approprié pour une formulation aqueuse telle que ci-dessus est le Tris (2-amino-2-(hydroxyméthyl)-1,3-propanediol).
Selon un aspect associé, pour une conservation à long terme, une formulation aqueuse telle que décrite dans la présente invention peut être aliquotée, par exemple , dans des flacons, des ampoules ou d’autres récipients, et séchée ( par exemple , lyophilisée) selon des procédures connues dans le domaine. Le produit séché se présente généralement sous forme de poudre ou de gâteau. Les récipients sont ensuite scellés. Les procédés de préparation de telles formulations séchées à partir de la formulation aqueuse, ainsi que les formulations séchées préparées par ces procédés, sont des aspects supplémentaires de la présente invention. Selon un autre aspect, la présente invention propose une formulation séchée qui permet la reconstitution dans une formulation aqueuse telle que décrite dans la présente invention. Les formulations séchées destinées à l’amplification ou à la détection de l’acide nucléique à GBS contiennent, en plus d’un ou de plusieurs oligomères d’amplification et/ou de sondes de détection telles que décrites dans la présente invention, un agent gonflant tel que, par exemple , le tréhalose, le raffinose ou une combinaison de ceux-ci. Dans certains modes de réalisation comprenant en outre un sel inorganique, le pourcentage en masse du sel inorganique par rapport à la masse de la formulation séchée est inférieur ou égal à 0,249 %, inférieur ou égal à 0,222 %, inférieur ou égal à 0,195 %. Les procédés de préparation d’une formulation séchée à partir d’une formulation lyophilisée tels que décrits dans la présente invention sont également englobés par la présente invention ; ces procédés comprennent généralement la dissolution de la formulation séchée dans un diluant approprié ( par exemple , un tampon organique ou de l’eau) pour fournir une formulation reconstituée.
La présente invention fournit également un mélange réactionnel destiné à déterminer la présence ou l’absence d’un acide nucléique cible à GBS dans un échantillon. Un mélange réactionnel selon la présente invention comprend l’une ou les deux (1) combinaisons d’oligomères, telles que décrites dans la présente invention, destinées à l’amplification d’un acide nucléique cible SBS et/ou CFB à GBS et (2) un ou plusieurs oligomères de sonde de détection, tels que décrits dans la présente invention, destinés à la détermination de la présence ou de l’absence d’un produit d’amplification SIP et/ou CFB à GBS. Le mélange réactionnel peut en outre comprendre un certain nombre de composants facultatifs tels que, par exemple, des sondes de capture, par exemple des sondes de capture de poly-(k) telles que décrites dans le brevet US 2013/0209992, qui est incorporé dans la présente invention à titre de référence. Pour un mélange réactionnel d’amplification, le mélange réactionnel comprendra typiquement d’autres réactifs appropriés pour effectuer une amplification in vitro tels que, par exemple , des tampons, des solutions salines, des triphosphates nucléotidiques appropriés ( par exemple , dATP, dCTP, dGTP et dTTP ; et/ou ATP, CTP, GTP et UTP), et/ou des enzymes ( par exemple , une ADN polymérase thermostable, ou une transcriptase inverse et/ou une ARN polymérase), et comprendront typiquement des composants d’échantillon de test, dans lesquels un acide nucléique cible à GBS peut être présent ou non. Un mélange réactionnel peut comprendre des oligomères d’amplification pour une seule région cible d’un génome à GBS, ou peut comprendre des oligomères d’amplification pour plusieurs régions cibles de GBS ( par exemple , une région cible de SIP et une région cible de CFB ). En outre, pour un mélange réactionnel qui comprend une sonde de détection comportant une combinaison d’oligomères d’amplification, la sélection d’oligomères d’amplification et des oligomères de sonde de détection d’un mélange réactionnel sont reliées par une région cible commune (par exemple, le mélange réactionnel comprend une sonde qui se lie à une séquence amplifiable par une combinaison d’oligomères d’amplification du mélange réactionnel). Dans certains modes de réalisation, un mélange réactionnel comprend une formulation aqueuse telle que décrite ci-dessus. Dans certains modes de réalisation, un mélange réactionnel est reconstitué à l’aide de l’eau ou d’un tampon organique à partir d’une formulation séchée telle que décrite ci-dessus.
La présente invention fournit également des kits pour la mise en œuvre des procédés tels que décrits dans la présente invention. Un kit selon la présente invention comprend l’une ou les deux (1) combinaisons d’oligomères, telles que décrites dans la présente invention, destinées à l’amplification d’un acide nucléique cible SBS et/ou CFB à GBS et (2) un ou plusieurs oligomères de sonde de détection, tels que décrits dans la présente invention, destinés à la détermination de la présence ou de l’absence d’un produit d’amplification SIP et/ou CFB à GBS. Dans certains modes de réalisation, toute combinaison d’oligomères décrite dans la présente invention est présente dans le kit. Les kits peuvent en outre comprendre un certain nombre de composants facultatifs tels que, par exemple, des sondes de capture, par exemple des sondes de capture poly-(k), telles que décrites dans le brevet US 2013/0209992. D’autres réactifs pouvant être présents dans les kits comprennent des réactifs appropriés pour effectuer une amplification in vitro tels que, par exemple , des tampons, des solutions salines, des triphosphates nucléotidiques appropriés ( par exemple , dATP, dCTP, dGTP, dTTP ; et/ou ATP, CTP, GTP et UTP) et/ou des enzymes ( par exemple une ADN polymérase thermostable, ou une transcriptase inverse et/ou une ARN polymérase). Les oligomères tels que décrits dans la présente invention peuvent être emballés dans une variété de modes de réalisation différents, et le spécialiste du domaine comprendra que la description englobe de nombreuses configurations de kits différentes. Par exemple, un kit peut comprendre des oligomères d’amplification pour une seule région cible d’un génome à GBS, ou peut comprendre des oligomères d’amplification pour plusieurs régions cibles de GBS ( par exemple , une région cible de SIP et une région cible de CFB ). En outre, pour un kit qui comprend une sonde de détection comportant une combinaison d’oligomères d’amplification, la sélection d’oligomères d’amplification et des oligomères de sonde de détection d’un kit sont reliées par une région cible commune (par exemple, le kit comprend une sonde qui se lie à une séquence amplifiable par une combinaison d’oligomères d’amplification du kit). Dans certains modes de réalisation, le kit comprend en outre un ensemble d’instructions pour la mise en œuvre des procédés selon la présente invention, les instructions pouvant être associées à une notice d’emballage et/ou à l’emballage du kit ou de ses composants.
L’invention est également illustrée par les exemples non exhaustifs suivants.
Dix-sept combinaisons d’amorces et de sondes, telles qu’indiquées dans le tableau 2, ont été évaluées pour la détection de Streptococcus agalactiae (GBS) in vitro .
Activer certaines fonctions véhicule à distance le cas échéant, par exemple le déverrouillage du véhicule sur appui d’un bouton de la télécommande, l’activation de la climatisation mais aussi la mise en marche de la climatisation, du chauffage, de la radio par exemple ou bien,
Détecter par ULB, la présence proche de l’équipement d’accès, c’est-à-dire dans un rayon de quelques mètres, par exemple 10 m autour du véhicule, et localiser précisément la position dudit équipement,
Activer la fonction véhicule, lorsqu’il est détecté l’approche de l’équipement vers la portière ou le contact de la main près de la portière c’est-à-dire le déverrouillage.
Le procédé d’activation ainsi décrit fonctionne de manière fiable lorsque la communication est établie entre le véhicule et un téléphone portable. Cependant lorsque le nombre d’équipements d’accès connectés en ULB avec le véhicule augmente, par exemple non seulement des téléphones portables, mais aussi des montres connectées, la probabilité de collisions entre les émissions ULB avec les différents équipements et le véhicule augment de manière considérable, ce qui impacte la localisation desdits équipements. Ceci est illustré à la , qui représente la probabilité P de collisions entre les émissions ULB en fonction du nombre d’équipements connectés. Il apparait qu’à partir de quatre équipements connectés simultanément au véhicule, la probabilité de collision atteint 40%, c’est-à-dire que 40% des émissions ne sont pas assez fiable pour procéder à une localisation précise.
La localisation devient complétement impossible avec huit appareils connectés en parallèle au véhicule car la probabilité de collision des émissions s’approche de 100%.
Le procédé d’activation de l’art antérieur donne une priorité aux équipements d’accès détectés en premier. Cependant il peut arriver que ces dits équipements d’accès, lorsque l’utilisateur se déplace vers le véhicule, ne soient pas les équipements d’accès dont les émissions sont les plus fiables pour procéder à une localisation précise. Il est alors préjudiciable de ne pas considérer les autres équipements.
L’invention propose donc un procédé d’activation d’une fonction véhicule et un dispositif d’activation associé permettant de détecter l’intention de l’utilisateur de déverrouiller (ou de verrouiller) son véhicule
L’invention concerne un procédé d’activation d’une fonction véhicule, par un dispositif d’activation, à partir d’un équipement d’accès «mains libres» porté par un utilisateur équipé d’un magnétomètre, d’un accéléromètre et d’un gyroscope, l’activation de la fonction étant déclenchée par une détection de présence de l’équipement dans une zone prédéterminée autour du véhicule, et en fonction d’un résultat d’authentification de l’équipement, le dispositif d’activation comprenant au moins un émetteur récepteur apte à communiquer avec ledit équipement en ultra large bande et en ultra haute fréquence, le procédé étant remarquable en ce qu’il comprend les étapes suivantes : Emission en ultra haute fréquence d’une requête à destination d’une pluralité d’’équipement d’accès, Réception de la requête par la pluralité d’équipement et acquisition pendant une durée prédéterminée pour chaque équipement, des valeurs du magnétomètre, de l’accéléromètre et du gyroscope, Détermination pour chaque équipement d’un vecteur d’approche à partir des valeurs du magnétomètre, de l’accéléromètre et du gyroscope ainsi acquises pendant la durée prédéterminée, Si le nombre d’équipements d’accès est supérieur à un seuil, alors Détermination d’un coefficient de corrélation entre les différents vecteurs d’approche, Regroupement par groupe de communication des équipements ayant des vecteurs d’approche dont le coefficient de corrélation entre eux est supérieur une valeur de coefficient de corrélation prédéterminée, Comparaison, entre les équipements d’accès d’un même groupe de communication, d’au moins un paramètre d’émissions reçues par le dispositif d’activation, Sélection parmi les équipements d’accès d’un même groupe de communication, de l’équipement d’accès en fonction d’une valeur de l’au moins un paramètre, Détection de présence de l’utilisateur dans une zone prédéterminée et authentification en ultra large bande à l’aide de l’équipement d’accès ainsi sélectionné.
Judicieusement, le paramètre d’émissions reçues est : une puissance totale des émissions reçues, ou un rapport signal sur bruit ou une densité spectrale de puissance et en ce que l’équipement d’accès présentant la puissance totale ou le rapport signal sur bruit ou la densité spectrale la plus élevée est sélectionné.
Alternativement, le paramètre d’émissions reçues est un temps de vol ou un type de visibilité des émissions reçues et en ce que l’équipement d’accès présentant des émissions avec un temps de vol le plus bas ou présentant une visibilité directe est sélectionné.
L’invention concerne également un dispositif d’activation d’une fonction véhicule, équipé d’un magnétomètre, d’un accéléromètre et d’un gyroscope, l’activation de la fonction étant déclenchée par une détection de présence d’un équipement d’accès « mains libres » dans une zone prédéterminée autour du véhicule, et en fonction d’un résultat d’authentification dudit équipement, le dispositif d’activation comprenant au moins un émetteur récepteur apte à communiquer avec ledit équipement en ultra large bande, et en ultra haute fréquence , le dit dispositif étant remarquable en ce qu’il comprend dans un premier mode de réalisation de l’invention : Des moyens de réception en ultra haute fréquence, en provenance d’une pluralité d’équipements d’accès de valeurs de gyroscope, de magnétomètre et d’accéléromètre acquises pendant une durée prédéterminée, Des moyens de détermination pour chaque équipement d’un vecteur d’approche à partir des valeurs du magnétomètre, de l’accéléromètre et du gyroscope ainsi acquises pendant la durée prédéterminée, Des moyens de détermination d’un coefficient de corrélation entre les différents vecteurs d’approche, Des moyens de regroupement par groupe de communication des équipements ayant des vecteurs d’approche dont le coefficient de corrélation entre eux est supérieur à une valeur de coefficient de corrélation prédéterminée, Des moyens de comparaison, entre les équipements d’accès d’un même groupe de communication, d’au moins un paramètre d’émissions reçues, Des moyens de sélection parmi les équipements d’accès d’un même groupe de communication, de l’équipement d’accès selon une valeur de l’au moins un paramètre, Des moyens de détection de présence de l’utilisateur dans une zone prédéterminée et authentification en ultra large bande à l’aide de l’équipement d’accès ainsi sélectionné.
Dans un deuxième mode de réalisation de l’invention, le dispositif d’activation d’une fonction véhicule, est équipé d’un magnétomètre, d’un accéléromètre et d’un gyroscope, l’activation de la fonction étant déclenchée par une détection de présence d’un équipement d’accès « mains libres » dans une zone prédéterminée autour du véhicule et en fonction d’un résultat d’authentification dudit équipement, le dispositif d’activation comprenant au moins un émetteur récepteur apte à communiquer avec ledit équipement en ultra large bande, et en ultra haute fréquence , le dit dispositif étant remarquable en ce qu’il comprend : Des moyens de réception en ultra haute fréquence, en provenance d’une pluralité d’équipements d’accès de vecteurs d’approche, déterminés à partir des valeurs du magnétomètre, de l’accéléromètre et du gyroscope ainsi acquises pendant la durée prédéterminée, Des moyens de détermination d’un coefficient de corrélation entre les différents vecteurs d’approche, Des moyens de regroupement par groupe de communication des équipements ayant des vecteurs d’approche dont le coefficient de corrélation entre eux est supérieur à une valeur de coefficient de corrélation prédéterminée, Des moyens de comparaison, entre les équipements d’accès d’un même groupe de communication d’au moins un paramètre d’émissions reçues, Des moyens de sélection parmi les équipements d’accès d’un même groupe de communication, de l’équipement d’accès en fonction de l’au moins un paramètre d’émissions reçues, Des moyens de détection de présence de l’utilisateur dans une zone prédéterminée et authentification en ultra large bande à l’aide de l’équipement d’accès ainsi sélectionné.
Judicieusement, le paramètre est une puissance totale des émissions reçues, ou un rapport signal sur bruit, ou une densité spectrale de puissance.
Alternativement, le paramètre est un temps de vol ou un type de visibilité des émissions reçues.
L’invention s’applique également à tout produit programme d’ordinateur comprenant des instructions de code de programme pour l’exécution des étapes du procédé selon les caractéristiques énumérées ci-dessus lorsque ledit programme est exécuté sur un ordinateur.
L’invention concerne également, dans le deuxième mode de réalisation, tout équipement d’accès portable remarquable en ce qu’il comprend un magnétomètre, un accéléromètre, un gyroscope, des moyens d’acquisitions des valeurs du magnétomètre, de l’accéléromètre et du gyroscope pendant une durée prédéterminée des moyens de détermination d’un vecteur d’approche, à partir des valeurs du magnétomètre, de l’accéléromètre et du gyroscope ainsi acquises pendant la durée prédéterminée, et des moyens d’émissions en ultra haute fréquence du vecteur d’approche ainsi déterminé.
RMN 1 H (300 MHz, MeOD/CDCl 3 90:10 v:v) : δ 4,75 (s, 1H), 3,93 – 3,21 (m, 10H), 2,22 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 1,87 – 1,76 (m, 2H), 1,62 (br s, 2H), 1,29 (br s, 28H, 14xCH 2 ), 0,98 – 0,84 (m, 3H, CH 3 ).
RMN 13 C (75 MHz, MeOD/CDCl 3 90:10 v : v) : δ 175,3 (CO amide), 100,2, 73,2 (C Man ), 71,3 (C Man ), 70,7 (C Man ), 67,2 (C Man ), 64,6, 61,6, 36,5, 35,7, 31,7, 29,5 – 28,9 (13xCH 2 ), 25,8, 22,4, 13,3.
3 - Préparation des particules selon l’invention Dans des flacons en verre de 10 mL ont été successivement introduits le mannolipide dont la synthèse est décrite ci-dessus (ML), l’alpha-cyclodextrine (α-CD) et de l’eau MilliQ®. Les suspensions sont laissées sous agitation magnétique à 300 rpm pendant 72 h à 25°C.
Plusieurs synthèses de particules ont été réalisées à différentes concentrations d’α-CD et de ML (cf. Tableau 2).