INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Une variété de systèmes de vecteurs d'expression hôte peut être utilisée pour exprimer la protéine à agent AFFIMER® recombinante de la divulgation. De tels systèmes d'expression hôte représentent des véhicules par lesquels les séquences codantes de la protéine à agent AFFIMER® recombinante peuvent être produites puis purifiées, mais représentent également des cellules qui peuvent, lorsqu'elles sont transformées ou transfectées avec les séquences codantes nucléotidiques appropriées, exprimer la protéine à agent AFFIMER® recombinante de la divulgation in situ. Ceux-ci incluent, mais sans s'y limiter, des micro-organismes tels que des bactéries (par ex. E. coli et B. subtilis) transformées avec des vecteurs d'expression d'ADN de bactériophage, d'ADN plasmidique ou d'ADN cosmidique recombinant contenant des séquences codant pour la protéine à agent AFFIMER® ; de la levure (par ex. Saccharomyces pichia) transformée avec des vecteurs d'expression de levure recombinants contenant des séquences codant pour la protéine à agent AFFIMER® ; des systèmes de cellules d'insectes infectés avec des vecteurs d'expression de virus recombinants (par ex. baculovirus) contenant les séquences codant pour la protéine à agent AFFIMER® ; des systèmes cellulaires végétaux infectés par des vecteurs d'expression de virus recombinants (par ex. le virus de la mosaïque du chou-fleur (CaMV, de l’anglais « cauliflower mosaic virus ») et le virus de la mosaïque du tabac (TMV, de l’anglais « tobacco mosaic virus »)) ou transformés avec des vecteurs d'expression de plasmide recombinants (par ex. le plasmide Ti) contenant des séquences codant pour la protéine à agent AFFIMER® ; ou des systèmes cellulaires de mammifères (par ex. des cellules COS, CHO, BHK, 293, 293T, 3T3, des cellules lymphatiques (voir Brevet US n° 5,807,715), des cellules Per C.6 (cellules rétiniennes de rat développées par Crucell)) hébergeant des constructions d'expression recombinantes contenant des promoteurs dérivés du génome de cellules de mammifères (par ex. le promoteur de la métallothionéine) ou de virus de mammifères (par ex. le promoteur tardif de l'adénovirus ; le promoteur 7.5K du virus de la vaccine).
Dans les systèmes bactériens, un certain nombre de vecteurs d'expression peuvent être avantageusement sélectionnés en fonction de l'utilisation prévue pour la protéine à agent AFFIMER® recombinante exprimée. Par exemple, lorsqu'une grande quantité d'une telle protéine doit être produite, pour la génération de compositions pharmaceutiques de la protéine à agent AFFIMER® recombinante, des vecteurs qui dirigent l'expression de niveaux élevés de produits à protéines de fusion qui sont immédiatement purifiés peuvent être souhaitables. De tels vecteurs incluent, mais sans s'y limiter, le vecteur d'expression de E. coli pUR278 (Ruther et al. (1983) "Easy Identification Of cDNA Clones," EMBO J. 2:1791-1794), dans lequel la séquence codante de la protéine à agent AFFIMER® peut être ligaturée individuellement dans le vecteur en cadre avec la région codante lac Z de sorte qu'une protéine de fusion est produite ; vecteurs pIN (Inouye et al. (1985) "Up-Promoter Mutations In The Lpp Gene Of Escherichia coli," Nucleic Acids Res. 13:3101-3110 ; Van Heeke et al. (1989) "Expression Of Human Asparagine Synthetase In Escherichia coli," J. Biol. Chem. 24:5503-5509); etc. Les vecteurs pGEX peuvent également être utilisés pour exprimer des polypeptides étrangers en tant que protéines de fusion avec la glutathion S-transférase (GST). En général, ces protéines de fusion sont solubles et peuvent aisément être purifiées à partir de cellules lysées par adsorption et liaison à une matrice de billes de glutathion-agarose suivie d'une élution en présence de glutathion libre. Les vecteurs pGEX sont conçus pour inclure des sites de clivage de la protéase du facteur Xa ou de la thrombine afin que le produit du gène cible cloné puisse être libéré du groupement GST.
Dans un système d'insecte, le virus de la polyédrose nucléaire d'Autographa californica (AcNPV, de l’anglais « Autographa californica nuclear polyhedrosis virus ») est utilisé comme vecteur pour exprimer des gènes étrangers. Le virus se développe dans les cellules de Spodoptera frugiperda. La séquence codante de la protéine à agent AFFIMER® peut être clonée individuellement dans des régions non essentielles (par ex. le gène de la polyédrine) du virus et placée sous le contrôle d'un promoteur d’AcNPV (par ex. le promoteur de la polyédrine).
Dans les cellules hôtes de mammifères, un certain nombre de systèmes d'expression à base virale peut être utilisé. Dans les cas où un adénovirus est utilisé en tant que vecteur d'expression, la séquence d'intérêt codant pour la protéine à agent AFFIMER® peut être ligaturée à un complexe de contrôle de transcription/traduction d'adénovirus, par ex. le promoteur tardif et la séquence de tête tripartite (de l’anglais « tripartite leader sequence »). Ce gène chimère peut ensuite être inséré dans le génome de l'adénovirus par recombinaison in vitro ou in vivo. L'insertion dans une région non essentielle du génome viral (par ex. la région E1 ou E3) résultera en un virus recombinant qui est viable et capable d'exprimer la molécule d'immunoglobuline chez des hôtes infectés. (Voir par ex. Logan et al. (1984) "Adenovirus Tripartite Leader Sequence Enhances Translation Of mRNAs Late After Infection," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 81:3655-3659). Des signaux d'initiation spécifiques peuvent également être requis pour une traduction efficace des séquences insérées codant pour la protéine à agent AFFIMER®. Ces signaux comprennent le codon d'initiation ATG et les séquences adjacentes. De plus, le codon d'initiation doit être en phase avec le cadre de lecture de la séquence codante souhaitée pour assurer la traduction de l'insert entier. Ces signaux exogènes de contrôle de traduction et ces codons d'initiation peuvent avoir diverses origines, à la fois naturelles et synthétiques. L'efficacité de l'expression peut être amplifiée par l'inclusion d'éléments amplificateurs de transcription appropriés, de terminateurs de transcription, etc. (Voir Bitter et al. (1987) "Expression and Secretion Vectors For Yeast," Methods in Enzymol. 153:516-544).
De plus, une souche de cellule hôte peut être choisie, laquelle module l'expression des séquences insérées ou modifie et transforme le produit génique de la manière spécifique souhaitée. De telles modifications (par ex. une glycosylation) et traitements (par ex. clivage) de produits protéiques peuvent être importants pour la fonction de la protéine. Différentes cellules hôtes ont des mécanismes caractéristiques et spécifiques pour le traitement post-traductionnel et la modification de protéines et de produits géniques. Des lignées cellulaires ou des systèmes hôtes appropriés peuvent être choisis pour assurer la modification et le traitement corrects de la protéine étrangère exprimée. A cette fin, des cellules hôtes eucaryotes qui possèdent la machinerie cellulaire pour le bon traitement de la transcription primaire, la glycosylation et la phosphorylation du produit génique peuvent être utilisées. De telles cellules hôtes de mammifères incluent, mais sans s'y limiter, CHO, VERY, BHK, Hela, COS, MDCK, 293, 293T, 3T3, WI38, BT483, Hs578T, HTB2, BT20 et T47D, CRL7030 et Hs578Bst.
Pour une production à long terme et à haut rendement de protéines recombinantes, une expression stable est envisagée. Par exemple, des lignées cellulaires qui expriment de manière stable un anticorps de la divulgation peuvent être modifiées par ingénierie. Plutôt que d'utiliser des vecteurs d'expression qui contiennent des origines virales de réplication, les cellules hôtes peuvent être transformées avec de l'ADN contrôlé par des éléments de contrôle d'expression appropriés (par ex. promoteur, amplificateur, séquences, terminateurs de transcription, sites de polyadénylation, etc.) et un marqueur sélectionnable. A la suite de l'introduction de l'ADN étranger, les cellules d’ingénierie peuvent être laissées se développer pendant 1 à 2 jours dans un milieu enrichi, puis sont basculées vers un milieu sélectif. Le marqueur sélectionnable dans le plasmide recombinant confère une résistance à la sélection et permet aux cellules d'intégrer de manière stable le plasmide dans leurs chromosomes et de se développer pour former des foyers qui à leur tour peuvent être clonés et développés dans des lignées cellulaires. Ce procédé peut avantageusement être utilisé pour concevoir des lignées cellulaires qui expriment les protéines à agent AFFIMER® recombinantes de la divulgation. De telles lignées cellulaires d’ingénierie peuvent être particulièrement utiles dans le criblage et l'évaluation de composés qui interagissent directement ou indirectement avec les protéines à agent AFFIMER® recombinantes.
Un certain nombre de systèmes de sélection peut être utilisé, y compris, mais sans s'y limiter, la thymidine kinase du virus de l'herpès simplex (Wigler et al. (1977) "Transfer of Purified Herpes Virus Thymidine Kinase Gene to Cultured Mouse Cells," Cell 11:223-232), l’hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransférase (Szybalska et al. (1962) "Genetics Of Human Cess Line. IV. DNA-Mediated Heritable Transformation of a Biochemical Trait," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 48:2026-2034), et l'adénine phosphoribosyltransférase (Lowy et al. (1980) "Isolation Of Transforming DNA: Cloning The Hamster Aprt Gene," Cell 22:817-823) dont les gènes peuvent être employés dans des cellules tk-, hgprt- ou aprt-, respectivement. Aussi, une résistance aux antimétabolites peut être utilisée comme base de sélection pour les gènes suivants : dhfr, qui confère une résistance au méthotrexate (Wigler et al. (1980) "Transformation Of Mammalian Cells With An Amplfiable Dominant-Acting Gene," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 77:3567-3570 ; O'Hare et al. (1981) "Transformation Of Mouse Fibroblasts To Methotrexate Resistance By A Recombinant Plasmid Expressing A Prokaryotic Dihydrofolate Reductase," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 78:1527-1531) ; gpt, qui confère une résistance à l'acide mycophénolique (Mulligan et al. (1981) "Selection For Animal Cells That Express The Escherichia coli Gene Coding For Xanthine-Guanine Phosphoribosyltransferase," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 78:2072-2076) ; neo, qui confère une résistance à l'aminoglycoside G-418 (Tachibana et al. (1991) "Altered Reactivity Of Immunoglobutin Produced By Human-Human Hybridoma Cells Transfected By pSV.2-Neo Gene," Cytotechnology 6(3):219-226; Tolstoshev (1993) "Gene Therapy, Concepts, Current Trials And Future Directions," Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596; Mulligan (1993) "The Basic Science of Gene Therapy," Science 260:926-932; and Morgan et al. (1993) "Human gene therapy," Ann. Rev. Biochem. 62:191-217). Des procédés couramment connus dans l'art de la technologie à ADN recombinant qui peuvent être utilisés sont décrits dans Ausubel et al. (eds.), 1993, CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley & Sons, NY; Kriegler, 1990, GENE TRANSFER AND EXPRESSION, A LABORATORY MANUAL, Stockton Press, NY ; et aux chapitres 12 et 13, Dracopoli et al. (eds), 1994, CURRENT PROTOCOLS IN HUMAN GENETICS, John Wiley & Sons, NY.; Colbere-Garapin et al. (1981) "A New Dominant Hybrid Selective Marker For Higher Eukaryotic Cells," J. Mol. Biol. 150:1-14 ; et hygro, qui confère une résistance à l'hygromycine (Santerre et al. (1984) "Expression Of Prokaryotic Genes For Hygromycin B And G418 Resistance As Dominant-Selection Markers In Mouse L Cells," Gene 30:147-156).
Les niveaux d'expression d'une protéine à agent AFFIMER® recombinante peuvent être augmentés par amplification vectorielle (pour consultation, voir Bebbington et Hentschel, "The Use of Vectors Based On Gene Amplification For The Expression Of Cloned Genes In Mammaian Cells", dans DNA CLONING, Tome 3. (Academic Press, New York, 1987)). Lorsqu'un marqueur dans le système de vecteur exprimant une protéine à agent AFFIMER® recombinante est amplifiable, une augmentation du niveau d'inhibiteur présent dans la culture de la cellule hôte augmentera le nombre de copies du gène marqueur. Puisque la région amplifiée est associée à la séquence nucléotidique de la protéine à agent AFFIMER® recombinante, la production de la protéine à agent AFFIMER® recombinante augmentera également (Crouse et al. (1983) "Expression and Amplification of Engineered Mouse Dihydrofolate Reductase Minigenes," Mol. Cell. Biol. 3:257-266).
Lorsque l'agent AFFIMER® est une fusion d'anticorps AFFIMER® ou un autre complexe multiprotéique, la cellule hôte peut être cotransfectée avec deux vecteurs d'expression, par exemple le premier vecteur codant pour une chaîne lourde et le second vecteur codant pour un polypeptide dérivé d'une chaîne légère, l'un ou les deux desquels comprenant une séquence codant pour le polypeptide AFFIMER®. Les deux vecteurs peuvent contenir des marqueurs sélectionnables identiques qui permettent une expression égale des polypeptides des chaînes lourdes et légères. Alternativement, un unique vecteur peut être utilisé qui code à la fois pour les polypeptides des chaînes lourdes et légères. Dans de telles situations, la chaîne légère doit être placée avant la chaîne lourde pour éviter un excès de chaîne lourde libre toxique (Proudfoot (1986) "Expression and Amplification Of Engineered Mouse Dihydrofolate Reductase Minigenes," Nature 322:562-565; Kohler (1980) « Immunoglobulin Chain Loss In Hybridoma Lines, », Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 77:2197-2199). Les séquences codant pour les chaînes lourdes et légères peuvent inclure de l'ADNc ou de l'ADN génomique.
En général, les glycoprotéines produites dans une lignée cellulaire ou un animal transgénique particulier auront un schéma de glycosylation qui est caractéristique des glycoprotéines produites dans la lignée cellulaire ou l'animal transgénique. Par conséquent, le profil de glycosylation particulier de la protéine à agent AFFIMER® recombinante dépendra de la lignée cellulaire particulière ou de l'animal transgénique particulier utilisé pour produire la protéine. Dans certains modes de réalisation de fusions AFFIMER®/anticorps, un schéma de glycosylation comprenant uniquement des N-glycanes non fucosylés peut être avantageux, parce que dans le cas des anticorps, il a été démontré qu'il présente généralement une efficacité plus puissante que les homologues fucosylés à la fois in vitro et in vivo (Voir par exemple, Shinkawa et al., J. Biol. Chem. 278: 3466-3473 (2003); Brevet U.S. NOS: 6,946,292 et 7,214,775).
Dans certains modes de réalisation, la protéine de fusion comprend une séquence de domaine Fc pour laquelle l'agent AFFIMER® résultant n'a pas (ou qu’un niveau réduit) d'ADCC et/ou l'activation du complément ou la fonctionnalité effectrice. Par exemple, le domaine Fc peut comprendre une région constante naturellement désactivée d'isotype IgG2 ou IgG4 ou une région constante IgG1 mutée. Des exemples de modifications appropriées sont décrits dans EP0307434. Un exemple comprend les substitutions de résidus d'alanine aux positions 235 et 237 (numérotation selon l'index UE).
Dans d'autres modes de réalisation, la protéine de fusion comprend une séquence de domaine Fc pour laquelle l'agent AFFIMER® résultant conservera une partie ou la totalité de la fonctionnalité Fc, par exemple sera capable d'une ou des deux activités ADCC et CDC, comme par exemple si la protéine de fusion comprend le domaine Fc de l'IgG1 ou IgG3 humaine. Les niveaux de fonction effectrice peuvent varier selon des techniques connues, par exemple par des mutations dans le domaine CH2, par exemple où le domaine IgG1 CH2 a au moins une mutation en des positions sélectionnées parmi 239 et 332 et 330, par exemple les mutations étant sélectionnées parmi S239D et I332E et A330L de telle sorte que l'anticorps ait une fonction effectrice amplifiée, et/ou par exemple en altérant le profil de glycosylation de la protéine de liaison à antigène de la divulgation de sorte qu'il y ait une réduction de la fucosylation de la région Fc.
Dans certains modes de réalisation, l'agent AFFIMER® est une protéine de fusion comprenant, en plus d'au moins une séquence AFFIMER®, une séquence d'albumine ou un fragment d'albumine. Dans d'autres modes de réalisation, l'agent AFFIMER® est conjugué à la séquence d'albumine ou à un fragment d'albumine par l’intermédiaire d’une liaison chimique autre qu'une incorporation dans la séquence polypeptidique incluant le polypeptide AFFIMER®. Dans certains modes de réalisation, l'albumine, une variante de l'albumine ou un fragment d'albumine est de l’albumine sérique humaine (HSA), une variante de l’albumine sérique humaine ou un fragment d’albumine sérique humaine. Des protéines sériques d'albumine comparables à l'HSA se trouvent, par ex. chez les singes cynomolgus, les vaches, chiens, lapins et rats. Parmi les espèces non humaines, l'albumine sérique bovine (BSA, de l’anglais « bovine serum albumin ») est structurellement la plus similaire à l’HSA. Voir, par ex., Kosa et al., (2007) J Pharm Sci. 96(11):3117-24. La présente divulgation envisage l'utilisation d'albumine provenant d'espèces non humaines, dont, mais sans s'y limiter, une séquence d'albumine dérivée de l’albumine sérique cyno ou de l’albumine sérique bovine.
L’HSA mature, un polypeptide de 585 acides aminés (env. 67 kDa) ayant une demi-vie sérique d'environ 20 jours, est principalement responsable du maintien de la pression artérielle osmotique colloïdale, du pH sanguin, et du transport et de la distribution de nombreux ligands endogènes et exogènes. La protéine a trois domaines structurellement homologues (domaines I, II et III), est presque entièrement de conformation alpha-hélicoïdale et est hautement stabilisée par 17 ponts disulfure. Dans certains modes de réalisation, l'agent AFFIMER® peut être une protéine de fusion d'albumine comprenant au moins une séquence polypeptidique AFFIMER® et la séquence pour l'albumine sérique humaine mature (SEQ ID NO : 468) ou une variante ou un fragment de celle-ci qui maintient les propriétés PK et/ou de biodistribution de l'albumine mature dans la mesure souhaitée dans la protéine de fusion.
La séquence d'albumine peut être séparée de la séquence polypeptidique AFFIMER® ou d'autres séquences flanquantes dans l'agent AFFIMER® par utilisation de séquences de lieurs comme décrit ci-dessus.
Dans des modes de réalisation alternatifs, plutôt que fournis en tant que partie d'une protéine de fusion avec le polypeptide AFFIMER®, le polypeptide d'albumine sérique peut être couplé de manière covalente au polypeptide contenant AFFIMER® par l’intermédiaire d’une liaison autre qu'une liaison amide de squelette, tel que réticulé par l’intermédiaire d’une conjugaison chimique entre des chaînes latérales d'acides aminés sur chacun parmi le polypeptide d'albumine et le polypeptide contenant AFFIMER®.
Dans certains modes de réalisation, un procédé de modification chimique qui peut être appliqué dans la génération des agents AFFIMER® sujets pour augmenter la demi-vie des protéines est la lipidation, qui implique la liaison covalente d'acides gras aux chaînes latérales peptidiques. Conçue à l'origine et développée en tant que procédé pour étendre la demi-vie de l'insuline, la lipidation partage le même mécanisme de base d’extension de la demi-vie que la PEGylation, à savoir l'augmentation du rayon hydrodynamique pour réduire la filtration rénale. Cependant, le groupement lipidique est lui-même relativement petit et l'effet est médié indirectement par la liaison non covalente du groupement lipidique à de l'albumine circulante. Une conséquence de la lipidation est qu'elle réduit la solubilité dans l'eau du peptide, mais l'ingénierie du lieur entre le peptide et l'acide gras peut moduler cela, par exemple en utilisant du glutamate ou des mini PEG au sein du lieur. L'ingénierie des lieurs et la variation du groupement lipidique peuvent affecter l'auto-agrégation, ce qui peut contribuer à augmenter la demi-vie en ralentissant la biodistribution, indépendamment de l'albumine. Voir, par exemple, Jonassen et al. (2012) Pharm Res. 29(8):2104-14.
D'autres exemples de groupements de liaison à l'albumine à utiliser dans la génération de certains agents AFFIMER® incluent les adnectines de liaison à l'albumine (PKE2) (voir WO2011140086 "Serum Albumin Binding Molecules", WO2015143199 "Serum albumin-binding Fibronectin Type III Domains" et WO2017053617 "Fast-off rate serum albumin binding fibronectin type iii domains"), le domaine de liaison à l'albumine 3 (ABD3, de l’anglais « albumin binding domain 3 ») de la protéine G de la souche G148 de Streptocoque, et l'anticorps du domaine de liaison à l'albumine GSK2374697 (« AlbudAb ») ou la portion de nanocorps de liaison à l'albumine de l'ATN-103 (Ozoralizumab).
Dans certains modes de réalisation, la molécule qui se lie à une protéine sérique telle que l’HSA comprend un polypeptide HSA AFFIMER®. Des exemples de tels polypeptides HSA AFFIMER® peuvent être trouvés dans WO2022/023540. Un polypeptide HSA AFFIMER® proposé ici, dans certains modes de réalisation, est lié à une autre molécule et étend la demi-vie de cette molécule (par ex. un polypeptide thérapeutique). Il a été démontré que ces polypeptides HSA AFFIMER® dans des études pharmacocinétiques (PK, de l’anglais « PharmacoKinetic ») in vivo prolongent, de manière contrôlée, la demi-vie sérique de tout autre polypeptide AFFIMER® thérapeutique auquel il est conjugué en une seule fusion génétique, par ex. qui peut être faite dans E. Coli. Les polypeptides AFFIMER® XT™ peuvent également être utilisés pour prolonger la demi-vie d'autres agents thérapeutiques peptidiques ou protéiques, tels que le TNFR2 AFFIMER® de la présente invention.
Dans certains modes de réalisation, un polypeptide HSA AFFIMER® prolonge la demi-vie sérique du polypeptide TNFR2 AFFIMER® in vivo. Par exemple, un polypeptide HSA AFFIMER® peut étendre la demi-vie du polypeptide TNFR2 AFFIMER® d'au moins 2 fois, par rapport à la demi-vie de la molécule non liée à un polypeptide HSA AFFIMER®. Dans certains modes de réalisation, un polypeptide HSA AFFIMER® prolonge la demi-vie du polypeptide TNFR2 AFFIMER® d'au moins 3 fois, au moins 4 fois, au moins 5 fois, au moins 6 fois, au moins 7 fois, au moins 8 fois, au moins 9 fois, au moins 10 fois, au moins 20 fois, ou au moins 30 fois, par rapport à la demi-vie du polypeptide TNFR2 AFFIMER® non lié à un polypeptide HSA AFFIMER®. Dans certains modes de réalisation, un polypeptide HSA AFFIMER® prolonge la demi-vie du polypeptide TNFR2 AFFIMER® de 2 fois à 5 fois, 2 fois à 10 fois, 3 fois à 5 fois, 3 fois à 10 fois. 15 fois à 5 fois, 4 fois à 10 fois, ou 5 fois à 10 fois, par rapport à la demi-vie du polypeptide TNFR2 AFFIMER® non lié à un polypeptide HSA AFFIMER®. Dans certains modes de réalisation, un polypeptide HSA AFFIMER® prolonge la demi-vie du polypeptide TNFR2 AFFIMER® d'au moins 6 heures, d'au moins 12 heures, d'au moins 24 heures, d'au moins 48 heures, d'au moins 72 heures, d'au moins 96 heures, par exemple au moins 1 semaine après administration in vivo, par rapport à la demi-vie de la molécule non liée à un polypeptide HSA AFFIMER®.
Un polypeptide HSA AFFIMER® comprend un polypeptide AFFIMER® dans lequel au moins une des boucles accessibles à solvant provient de la protéine Stéfine A de type sauvage ayant des séquences d'acides aminés pour permettre à un polypeptide AFFIMER® de se lier à l'HSA, sélectivement, et dans certains modes de réalisation, avec un Kd de 10 -6 M ou moins.
Dans certains modes de réalisation, le polypeptide HSA AFFIMER® est dérivé de la protéine Stéfine A humaine de type sauvage ayant une séquence squelette et dans laquelle l'une ou les deux parmi la boucle 2 (désignée (Xaa)n) et la boucle 4 (désignée (Xaa)m) sont remplacées par des séquences de boucles alternatives (Xaa)n et (Xaa)m, pour avoir la Formule générale (I) :
Selon un mode de réalisation, le procédé comprend une étape de prétraitement des données d’entrée du premier modèle d’apprentissage machine A M1 . Les données d’entrée sont par exemple collectées, nettoyées et prétraitées.