INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
2. Plusieurs peptides synthétiques dérivés de la séquence de la filaggrine humaine sont in vitro des substrats de PREP
Afin d’étudier la protéolyse in vitro de la filaggrine par PREP cinq peptides fluorogéniques de 7 à 8 acides aminés de long couplés à un groupement Dabcyl en N-ter et un groupement EDANS en C-ter via un acide glutamique (Table 1) ont été synthétisés (JPT Peptide Technologies) selon le rationnel suivant. Le peptide 1 correspond à une séquence répétée de la filaggrine (Swiss-Prot #P20930 ; positions 2754-2761 et 3078-3085) avec une proline (Pro) centrale. Le peptide 3 correspond au peptide de liaison entre les sous-unités de filaggrine. Les peptides 4 et 6 correspondent à deux autres régions de la séquence du monomère de filaggrine (Swiss-Prot #P20930 ; positions 1522-1528 et 2106-2113) contenant une proline, et donc potentiels substrats de PREP. Le peptide 7 dérive du peptide 1 dans lequel la proline a été substituée par une sérine (Ser). Quand les peptides sont excités à 340 nm en absence de coupure enzymatique, le Dabcyl (4-(dimethylaminoazo)benzene-4-carboxylic acid) joue le rôle d’accepteur (quencher) dans la réaction de transfert d’énergie par résonance de fluorescence (FRET) et il n’y a pas de lumière émise. Lorsque les peptides sont clivés, l’émission de fluorescence par l’EDANS à 490 nm est alors quantifiable.
Peptide séquence note 1 Dabcyl-WTGPSTRG-Glu-EDANS Dérive de la séquence de la filaggrine 3 Dabcyl-FLYQVST-Glu-EDANS Peptide de liaison entre monomères de filaggrine 4 Dabcyl-TTPQGRS-Glu-EDANS Dérive d’une autre partie de la séquence de la filaggrine 6 Dabcyl-QSAPSTGG-Glu-EDANS Dérive d’une autre partie de la séquence de la filaggrine 7 Dabcyl-WTG S STRG-Glu-EDANS Peptide 1 avec la proline substituée par une sérine
Séquence des peptides fluorogéniques. Les peptides sont incubés en absence ou en présence de PREP et la fluorescence est enregistrée au cours du temps. Quand le peptide 1 a été incubé en absence de la protéase aucune émission de fluorescence n’a été observée. Par contre, la fluorescence augmentait en fonction du temps en présence de PREP | ]. Quand la proline du peptide 1 était remplacée par une sérine (peptide 7), la fluorescence restait au niveau du bruit de fond, confirmant la spécificité de la protéase pour la proline. PREP coupe les peptides 4 et 6, ce qui indique que PREP a un large spectre d’action sur plusieurs peptides issus de la filaggrine. Les inventeurs n’ont pas observé de clivage du peptide 3. Le calcul des pentes moyennes confirme l’ensemble de ces résultats .
3 . Extinction de l’expression de PREP dans des RHEs
Pour définitivement prouver l’implication de PREP dans la filaggrinolyse et l’homéostasie épidermique, son expression a été inhibée individuellement par la technique d’interférence à l’ARN, comme décrit précédemment (Pendaries et al, J Invest Dermatol, 2014) en utilisant des shRNAs (small hairpin RNA) transduits dans les kératinocytes primaires à l’aide de particules lentivirales (Merck-Sigma-Aldrich). Des RHEs ont ensuite été produits en humidité relative réduite, condition dans laquelle le métabolisme de la filaggrine est accru (Cau et al, J Dermatol Sci, 2017). Trois shRNAs différents ciblant des exons distincts du gène PREP ont été utilisés (Table 2), ainsi qu’un shRNA contrôle (noté Ctrl) ne ciblant aucune séquence humaine. L’efficacité d’extinction a été analysée en Western Blot et confirmée en RT-qPCR. Les conséquences de cette inhibition ont été analysées aux niveaux morphologiques, moléculaires et fonctionnels.
Nom Identifiant du transcrit #sh-RNA-1* séquence cible (exon cible) #sh-RNA-2* séquence cible (exon cible) sh-RNA-3* séquence cible (exon cible) PREP NM_002726 shPREP-1 CCAGCTTTCTTATATGGCTAT (exon 11) shPREP-2 CCCAACATACTGTCTGACGAT (exon 4) shPREP-3 CCTGACCTCTTTGGTTGTGTT (exon 14)
Caractéristiques des shRNAs utilisés pour éteindre l’expression de PREP ; shRNA, small hairpin RNA.
Les trois shRNAs ont induit une très forte diminution de l’expression de la protéase PREP [Fig 2 et Fig 3], aussi bien au niveau ARN (diminution de 85%) que protéique (diminution de 78%). Ceci a entrainé une très forte diminution de la TEER . La morphologie des RHEs, après coloration à l'hématoxyline et à l'éosine (H&E), était normale. L’expression du mRNA de FLG était légèrement diminuée d’environ 40% et la détection de la profilaggrine et de la filaggrine était diminuée . Une analyse par microscopie électronique à transmission montre une diminution du nombre d’assises de kératinocytes granuleux et, possiblement, de la taille des granules de kératohyaline .
Pour savoir si l’extinction de PREP impacte les enzymes du métabolisme de la profilaggrine et de la filaggrine et plus largement la différenciation des kératinocytes, l’expression des protéases hydrolase de la bléomycine (BLMH), caspase-14, kallikréine 7 et calpaïne 1 ; des peptidylarginine désiminases, des transglutaminases et de quelques autres marqueurs de la différenciation est analysée par RT-qPCR [Fig 7 et Fig 8] et/ou Western blot . Les taux d’ARNm de BLMH et de la caspase-14 diminuent respectivement de 60% et 50%, ceux de la calpaïne-1 et de la kallikréine-7 diminuent légèrement (30%). Cette diminution a été confirmée par Western blot pour BLMH. Au niveau ARNm, l’expression de l’involucrine, l’hornerine et la cornéodesmosine, trois composants des enveloppes cornées, n’est pas modifiée, alors que la loricrine est moins exprimée (diminution de 60%). Les mêmes résultats sont obtenus au niveau protéique. Une diminution de l’expression des ARNm codant les transglutaminases 3 (moins 60%) et 5 (moins 40%) est notée alors que l’expression de la transglutaminase 1 n’est pas modifiée.
Conclusion Cette étude a permis de mettre en évidence une nouvelle protéase importante pour la production du facteur naturel d’hydratation et de manière plus générale la cornification : PREP.
PREP est un nouvel acteur de la filaggrinolyse. Quand PREP est éteinte dans des RHEs, l’abondance d’enzymes clés du métabolisme de la filaggrine, comme BLMH et la caspase 14, est diminuée.
Un point critique correspond donc à l’apparition d’un nouvel objet dans le champ de vision du dispositif d’acquisition d’images car l’objet est alors inconnu, sans vitesse déterminée, c’est-à-dire sans moyen d’estimer la localisation du prochain cadre dans l’image suivante. Cette phase est aussi nommée phase d’initialisation, elle est achevée quand le nouvel objet a pu être associé à un identifiant unique de suivi et sa vitesse courante déterminée.
Il est connu de l’état de la technique de tels procédés de suivi d’objets utilisant des méthodes d’initialisation géométrique des identifiants de suivi entre deux images acquises consécutivement, notamment au moyen de la détermination de score d’intersection sur l'union (ou IOU), tel que l’algorithme appelé SORT décrit dans l’article Simple Online and Realtime Tracking, de Bewley Alex, Ge Zongyuan, Ott, Lionel, Ramos Fabio et Upcroft Ben dans 2016 IEEE International Conference on Image Processing (ICIP), pages 3464-3468, mais ces méthodes ne permettent pas toujours d’initialiser suffisamment rapidement les identifiants de suivi, notamment quand la fréquence d’acquisition des images est faible au regard de la dynamique des objets mobiles suivis.
Des améliorations de ces méthodes ont été développées, on connait notamment la méthode d’initialisation géométrique hybride des identifiants de suivi dans laquelle l’appariement du traceur à son identifiant unique de suivi comporte une analyse comparative des objets des images par apprentissage profond utilisant des réseaux de neurones, tel que l’algorithme appelé DEEPSORT décrit dans l’article Simple Online and Realtime Tracking with a Deep Association Metric de Nicolai Wojke, Alex Bewley et Dietrich Paulus dans 2017 IEEE International Conference on Image Processing (ICIP), pages 3645--3649, cependant cette méthode est coûteuse en temps de calcul et rend le suivi plus lent.
A cet effet, est proposé, selon un premier aspect, un procédé de suivi d'objets multiples dans des acquisitions temporelles d’images, notamment des vidéos monoculaires, composées d’une séquence temporelle d’images acquises consécutivement, ledit procédé comprenant : - une étape de réception de n images acquises consécutivement de ladite séquence, n étant supérieur ou égal à 3; -une étape de détection d’objet dans chacune desdites images, notamment au moyen d’un réseau de neurones convolutif ; - une étape de délimitation de l’objet détecté, notamment par détermination d’un cadre de délimitation englobant ledit au moins un objet détecté, dans un référentiel de l’image dans laquelle ledit objet a été détecté ; - une étape d’association sous un identifiant unique de suivi propre à un objet suivi d’un cadre de délimitation d’une première image de la séquence d’images à un cadre de délimitation d’une deuxième image de ladite séquence, lesdites première et deuxième images étant notamment consécutives, en fonction d’un seuil minimal de chevauchement ; - une étape de détermination d’une vitesse courante dudit objet suivi ; - une étape de détermination de cadre de délimitation d’objet détecté sans identifiant associé parmi les n images; - une étape de détermination d’un ensemble de multiplets séquentiels candidats de k cadres de délimitation d’objet détecté sans identifiant, avec k supérieur ou égal à 3 et k inférieur ou égal à n, chaque multiplet comprenant comme premier élément un cadre sans identifiant d’une image h parmi les n images, comme deuxième élément un cadre sans identifiant d’une image i parmi les n images, avec i supérieur à h et comme troisième élément un cadre sans identifiant d’une image j parmi les n images, avec j supérieur à i; - une étape de calcul d’un indice d’erreur de cohérence pour chaque multiplet séquentiel candidat ; - une étape d’attribution au multiplet candidat ayant l’indice d’erreur de cohérence le plus faible, et notamment inférieur à un seuil d’erreur de cohérence prédéterminé, d’un autre identifiant unique de suivi propre à un autre objet suivi et association sous ledit autre identifiant unique de suivi desdits k cadres du multiplet; et - une étape de détermination d’une vitesse courante dudit autre objet suivi.
Le procédé de suivi d'objets multiples selon l’invention permet d’améliorer les performances de suivi d’objet sans augmentation sensible du temps de calcul, et contribue à la robustesse lors de la phase d’initialisation du suivi d’objet en appariant rapidement le cadre de délimitation englobant chaque nouvel objet détecté apparaissant dans le champ de vision du système d’acquisition d’images à son identifiant unique de suivi.
En effet, le procédé de suivi d’objets selon l’invention permet l’initialisation rapide même en cas de non détection d’un objet dans une image de la séquence et d’associer sous un identifiant unique de suivi des détections issues d’images non consécutives mais cohérentes entre elles. En effet, lesdites première et deuxième images sont notamment consécutives mais ne le sont pas nécessairement.
Le procédé de suivi d’objets selon l’invention s’applique aussi bien à des séquences d’images sous forme de vidéos monoculaires acquises par un dispositif d’acquisition fixe, qu’à des séquences d’images acquises par lidar sous forme de nuages de points, que ce soit par un dispositif fixe ou mobile (dans un véhicule autonome par exemple, sous réserve de connaitre sa vitesse instantanée), ou qu’à une séquences d’images fusionnées provenant d’un dispositif d’acquisition radar et lidar par exemple, fixe ou mobile.
En outre, le procédé de suivi d’objets selon l’invention permet l’utilisation d’un référentiel en deux dimensions ou trois dimensions de l’image, c’est-à-dire de travailler soit en coordonnées pixeliques de l’image soit en trois dimensions, le calcul en trois dimensions permettant des calculs géométriques plus simple que dans un référentiel pixelique. Dans le cas de l’acquisition d’une image monoculaire, en deux dimensions, le passage en trois dimensions est permis par la connaissance de données de contexte, c’est-à-dire ici de l’environnement géométrique en cas de dispositif fixe acquises lors de la mise en place et la calibration du dispositif fixe. Dans le cas d’une acquisition initialement en trois dimensions (par exemple au moyen d’un lidar, d’un capteur temps de vol (ToF pour Time of Fly en anglais), capteur stéréoscopique ou lidar couplé à un radar), l’image reçue est déjà en trois dimensions. Dans le cas d’un référentiel en deux dimensions les cadres de délimitation sont notamment des rectangles et dans le cas d’un référentiel en trois dimensions les cadres de délimitation sont notamment des parallélépipèdes.
De plus, le procédé de suivi d’objets selon l’invention fait référence à un indice d’erreur de cohérence, de manière à raisonner en terme de minimisation d’erreur néanmoins un indice de cohérence pourrait également être utilisé et pour être retenu le multiplet devrait présenter l’indice de cohérence le plus élevé.
La répétition itérative en boucle des étapes ayant pour but d’affecter un identifiant unique de suivi au multiplet candidat ayant l’indice de cohérence d’erreur le plus faible, suit la logique d’un algorithme glouton et permet de n’associer un cadre qu’à un seul identifiant à puisque une fois le cadre associé à un identifiant celui-ci n’est plus déterminé comme un cadre de délimitation d’objet détecté sans identifiant associé.
Avantageusement, l’étape d’attribution et d’association est conditionnée par l’infériorité dudit indice d’erreur de cohérence le plus faible à un seuil d’erreur de cohérence prédéterminé, ce qui permet de ne pas apparier des objets sans rapport sous un identifiant unique de suivi.
Par exemple, le seuil d’erreur de cohérence prédéterminé est fixé en fonction des applications.
De manière avantageuse, pour chaque multiplet candidat l’indice d’erreur de cohérence est calculé en fonction d’un positionnement relatif desdits cadres sans identifiant dudit multiplet, ce qui permet un calcul de cohérence basé sur les considérations géométriques.
Avantageusement, le positionnement relatif desdits cadres sans identifiant dudit multiplet est déterminé relativement au positionnement d’un point unique de référence propre de chacun desdits cadres sans identifiant, ce qui facilite le calcul du positionnement relatif.
Avantageusement, en cas de dispositif d’acquisition fixe, le repère de positionnement est le référentiel de l’image dans laquelle ledit objet a été détecté, ce référentiel étant unique et identique pour toutes les images.
Dans un mode particulier de réalisation, le module de traitement du langage naturel utilisé dans l’invention est un module du dispositif d’entrainement.
Dans un mode de réalisation, ce module de traitement du langage naturel prend en entrée des textes extraits des rapports de maintenance d’aéronef et produit en sortie des labels qui constituent une information structurée utilisée par un module d’enrichissement pour enrichir la base de connaissance.
Dans un mode de réalisation de l’invention, la base de connaissance comporte des enregistrements qui associent des symptômes à des défaillances. Le module de traitement du langage naturel produit : (i) au moins un premier label représentant au moins une information parmi des données de vol, des données d’état, des données de comportement et/ou des symptômes; et (ii) au moins un deuxième label représentant une défaillance.
Dans un mode de réalisation, le module d’enrichissement de la base de connaissance est configuré pour enrichir la base de connaissance avec au moins un enregistrement comportant : (i) au moins un symptôme identifié à partir d’un premier label, associé à (ii) une défaillance identifiée à partir d’un deuxième label.
Dans un mode particulier de réalisation, les différentes étapes du procédé de détermination de composants défaillants et les principales étapes du procédé d’entrainement du réseau bayésien sont déterminées par des instructions de programmes d’ordinateurs.
L’invention vise aussi un support d'informations lisible par un ordinateur, et comportant des instructions d'un programme d'ordinateur tel que mentionné ci-dessus.
Le support d'informations peut être n'importe quelle entité ou dispositif capable de stocker le programme. Par exemple, le support peut comporter un moyen de stockage, tel qu'une ROM, par exemple un CD ROM ou une ROM de circuit microélectronique, ou encore un moyen d'enregistrement magnétique, par exemple un disque dur.
la représente un système de détermination de composants défaillants conforme à l’invention;
la représente l’architecture matérielle d’un terminal conforme à un mode particulier de réalisation de l’invention ;
la représente l’architecture matérielle d’un dispositif d’entrainement conforme à un mode particulier de réalisation de l’invention;
la représente, sous forme d’organigramme, les principales étapes d’un procédé d’entraînement conforme à l’invention ; et
est une vue en perspective de dessous d’un capot du boîtier électronique selon l’invention selon la flèche IV de la ,
est une vue en coupe par la ligne V-V de la ,
est une représentation schématique d’un circuit électrique mise en œuvre dans le boîtier électronique selon l’invention, et
est une représentation schématique d’un exemple d’une unité de contrôle configurée pour gérer les informations délivrées par le commutateur.
La montre un exemple d’un boîtier électronique 100 selon l’invention. Dans l’invention présentée ici, le boîtier électronique 100 comporte un boîtier 102 et une molette 104, mais il peut comporter d’autres éléments tels que des boutons, des écrans, etc.
La molette 104 est mobile en rotation autour d’un axe de rotation X.
La montre le boîtier électronique 100 vu en coupe par un plan contenant l’axe de rotation X et vu de dessous.
Dans le mode de réalisation de l’invention présenté ici, le boîtier 102 comporte une cuve de fond 102a et un capot 102b qui recouvre la cuve de fond 102a. La cuve de fond 102a et le capot 102b sont fixés l’un à l’autre pour délimiter un volume intérieur 106. La cuve de fond 102a et le capot 102b sont fixés par tous moyens connus comme des vis, des clips, etc.
La molette 104 est montée mobile en rotation sur le capot 102b.
Le boîtier électronique 100 comporte également un circuit imprimé 108, un commutateur 110 et un système de transmission 112.
Le circuit imprimé 108 est fixé au boîtier 102 à l’intérieur de ce dernier, c'est-à-dire à l’intérieur du volume intérieur 106 et s’inscrit dans un plan perpendiculaire à l’axe de rotation X.
Le commutateur 110 est fixé sur le circuit imprimé 108 à l’intérieur du volume intérieur 106 et est un commutateur de détection à levier et à deux positions d’activation comme celui de la société AlpsAlpine © connu sous la référence « SSCM110100 ». Le commutateur 110 comporte un corps 110a qui présente une face de fixation (ici la face inférieure) qui est contre le circuit imprimé 108 lorsqu’il y est fixé. Le levier 110b est monté mobile en rotation sur le corps 110a entre deux positions d’activation qui sont de part et d’autre d’une position zéro. Le levier 110b se déplace dans un plan parallèle au circuit imprimé 108 et il est mobile autour d’un axe parallèle à l’axe de rotation X et donc perpendiculaire au circuit imprimé 108. Le commutateur 110 comporte également un système de retour qui rappelle le levier 110b en position zéro lorsqu’il en est écarté.
Le système de transmission 112 transforme le déplacement en rotation de la molette 104 en un déplacement en rotation du levier 110b.
La montre plus spécialement le système de transmission 112 qui comporte un moyeu 112a disposé à l’intérieur du volume intérieur 106 et solidaire de la molette 104. Le moyeu 112a est monté coaxial avec l’axe de rotation X et mobile en rotation autour de l’axe de rotation X. Dans le mode de réalisation de l’invention présenté ici, la molette 104 et le moyeu 112a sont fixés l’un à l’autre par une vis de serrage 114 en prenant en sandwich le capot 102b.
La montre une vue de dessous du capot 102b sans le moyeu 112a.
Cette configuration est particulièrement pertinente pour l’exemple non-limitatif décrit ici dans lequel le premier isolant annulaire 111a comprend, dans la zone de connexion 117, deux pièces distinctes 111aa et 111ab, de forme complémentaire, qui s’emboîtent l’une dans l’autre.
Dans l’exemple non-limitatif représenté à la et aux figures 5 et 6 notamment, s’agissant du connecteur électrique 103, la première pièce 111aa du premier isolant annulaire 111a a une forme d’anneau et la seconde pièce 111ab du premier isolant annulaire 111a a une forme de manchon, complémentaire de la forme de la première pièce 111aa d’une part (et qui recouvre donc ladite première pièce 111aa du premier isolant annulaire 111a du connecteur électrique 103) et de la seconde pièce 111ab du premier isolant annulaire 111a du connecteur électrique 105 (et qui recouvre donc également ladite seconde pièce 111ab du premier isolant annulaire 111a du connecteur électrique 105).
En outre, s’agissant du connecteur électrique 105, la première pièce 111aa du premier isolant annulaire 111a a également une forme d’anneau, dont le diamètre interne varie une fois (i.e. en une seule position selon l’étendue longitudinale de la pièce), de manière à former un appui pour un épaulement complémentaire formé dans la seconde pièce 111ab du premier isolant annulaire 111a.
Dans tous les cas, la pression exercée par le second isolant annulaire 111b sur le premier isolant annulaire 111a tend à maintenir serrées les pièces 111aa et 111ab de ce dernier lorsque le connecteur électrique 103 ou 105 est assemblé.
Les figures 2, 3 et 4 montrent respectivement les pièces 111aa et 111ab du premier isolant annulaire 111a pour un contact électrique 107 de type mâle, avant montage du connecteur électrique, les pièces 111aa et 111ab du premier isolant annulaire 111a pour un contact électrique 107 de type femelle, également avant montage du connecteur électrique, et enfin, le contact électrique 107 mâle (dans la partie gauche de la ) et le contact électrique 107 femelle (dans la partie droite de la ) recouvert par leurs isolants annulaires respectifs.
La division du premier isolant annulaire 111a en plusieurs pièces 111aa et 111ab facilite sa fabrication et le positionnement des pièces de l’isolant lors de l’assemblage du connecteur électrique, notamment en permettant de positionner des pièces de l’isolant annulaire de part et d’autre d’un épaulement du contact électrique (comme c’est le cas dans l’exemple représenté à la ) avant de procéder au serrage de l’ensemble.
En effet, le contact électrique 107 peut présenter un épaulement, c’est-à-dire une modification locale de sa section, sur lequel, du fait de sa forme complémentaire, le premier isolant annulaire 111a vient en appui de manière à bloquer la translation du contact électrique 107 selon l’axe X.
Dans ce cas, les différentes pièces du premier isolant annulaire 111a viennent en contact, de part et d’autre de l’épaulement, au moment de l’assemblage du connecteur électrique 103 ou du connecteur électrique 105.
Dans tous les cas, pour chaque isolant annulaire l’homme du métier saura adapter la forme et le nombre de ces pièces pour faciliter la fabrication et l’assemblage d’un connecteur électrique en particulier en fonction de la forme voulue pour le contact électrique et le corps cylindrique creux.
De plus, la forme et l’agencement des différentes pièces constituant le premier isolant annulaire 111a peuvent être optimisés pour réduire le risque de survenue de décharge partielle, notamment en allongeant les lignes de fuite (représentées par les traits 123 à la ) situées aux interfaces entre ces pièces.
En effet, à la tension de travail, une longueur suffisante de ces lignes est nécessaire afin que des décharges électriques localisées ne court-circuitent pas l'intervalle isolant séparant le contact électrique 107 du corps cylindrique creux 109.
La montre un mode de réalisation particulier dans lequel chaque connecteur électrique 103 et 105 de l’ensemble 101 comprend en outre un joint plat 125, qui est également réalisé en élastomère, et qui est positionné au niveau d’une surface du contact électrique 107 qui s’étend radialement, à l’interface entre le contact électrique 107 et le premier isolant annulaire 111a.