INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La quantité de glucose libérée, à température ambiante (20°C), dans du lysat (20% de matière sèche (MS) par rapport au volume total) et du solubilisât de biomasse de Galdieria sulphuraria à (7,5 % de matière sèche par rapport au volume total) à pH 3.75 sans ajout d’enzyme exogène est étudiée (YSI® 2950). Dans ce contexte, la cinétique de libération de glucose à température ambiante (20°C), dans du lysat de biomasse de Galdieria sulphuraria à pH 3.75 avec ajout d’enzyme exogène (1% « Amylase AG XXL », Novozymes) est prise comme témoin.
Ces cinétiques sont présentées en .
D’après les résultats obtenus et par extrapolation, il est possible de conclure que, y compris sans ajout d’enzyme, dans le cas du lysat, après 24 heures, tout le glycogène digestible sera dégradé et libéré sous forme de glucose libre. En revanche, pour le solubilisât, la réaction semble plus lente et n’est toujours pas complète au bout de 24 heures.
A noter que les échantillons étudiés présentent tous une bonne filtrabilité après digestion du glycogène qu’ils aient été préparés avec ou sans ajout d’une enzyme exogène.
Hal représente un atome d’halogène tel que Br ou Cl, R 7 est tel que défini ci-dessus.
Lorsque n = 1, selon une deuxième alternative, le procédé de préparation peut comprendre le couplage de M 1 -X-A-Y 1 avec Y 2 -Z, pour lesquels M 1 , X, A, Y 1 , Y 2 et Z sont tels que définis ci-dessus.
La molécule M 1 -X-A-Y 1 peut être préparée par couplage entre M 1 -X 1 et X 2 -A-Y 1 ’, pour lesquels M 1 , X 1 , X 2 , A et Z sont tels que définis ci-dessus, et Y 1 ’ représente un groupe Y 1 tel que défini ci-dessus éventuellement sous une forme protégée ou inactive.
Dans le cadre de la présente invention, « forme inactive » signifie que le groupe Y 1 ’ n’est pas capable de se coupler avec Y 2 pour former un motif Y. Lorsque Y 1 ’ représente un groupe Y 1 sous une forme protégée ou inactive, celui-ci sera déprotégé ou activé de sorte à obtenir le groupe Y 1 avant d’effectuer la réaction de couplage. La réaction de déprotection ou d’activation peut se faire in situ , c’est-à-dire que la réaction de déprotection ou d’activation peut se faire au cours de la même étape réactionnelle que le couplage. La réaction de déprotection ou d’activation peut se faire également en une ou deux étapes réactionnelles.
Par exemple, lorsque Y 1 représente -NH 2, alors Y 1 ’ pourra être un atome d’halogène ou un groupe N 3 . Les atomes d’halogène (e.g. Br ou Cl) peuvent être facilement substitués par un azoture, cet azoture peut ensuite être réduit en groupe amine en présence d’un dérivé du phosphore(III) comme la triphénylphosphine (réduction de Staudinger). Ainsi, par exemple, Y 1 ’ peut représenter un atome de brome ou de chlore ou encore un groupe N 3 lorsque Y 1 représente un groupe NH 2 .
Le composé Chem. (I) ainsi obtenu pourra être séparé du milieu réactionnel par des méthodes bien connues de l’homme du métier, comme par exemple par extraction, évaporation du solvant ou encore par précipitation et filtration.
Le composé pourra être par ailleurs purifié si nécessaire par des techniques bien connues de l’homme du métier, comme par recristallisation si le composé est cristallin, par distillation, par chromatographie sur colonne sur gel de silice ou encore par chromatographie liquide haute performance (HPLC).
Particules La présente invention concerne également des particules comprenant : au moins un composé de formule Chem. (I), et au moins une cyclodextrine, de préférence l’ α-cyclodextrine.
Le composé de formule Chem. (I) est tel que défini ci-dessus.
Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, les particules selon l’invention comprennent : au moins un composé de formule suivante : [Chem. (II)] ; et au moins une α-cyclodextrine.
Le ratio molaire entre le composé Chem. (I) et la cyclodextrine est avantageusement de 1 à 20, de préférence de 5 à 10.
Avantageusement, les particules selon l’invention pourront avoir un diamètre hydrodynamique allant de 10 nm à 10 µm, de préférence de 40 nm à 4 µm, plus préférentiellement de 200 nm à 2 µm et/ou un diamètre moyen en nombre D MET allant de 10 nm à 10 µm, en particulier de 20 nm à 1 µm, en particulier de 50 nm à 300 nm.
Le diamètre hydrodynamique peut être déterminé par diffusion dynamique de la lumière (DLS, de l’anglais « Dynamic Light Scattering »), notamment à partir d’une suspension des particules dans l’eau, plus particulièrement selon la méthode décrite dans la partie expérimentale. Les particules selon l’invention en suspension dans un solvant tel que l’eau peuvent former des agrégats et se présenter sous la forme d’un nanogel. Le diamètre hydrodynamique permet de mesurer la taille de ces agrégats.
Le diamètre moyen en nombre D MET peut être déterminé par microscopie électronique en transmission (MET) qui permet d’obtenir une distribution des diamètres en nombre des particules dont la moyenne est appelée D MET . Ce diamètre peut être mesuré plus particulièrement selon la méthode décrite dans la partie expérimentale. Dans ce cas, le diamètre mesuré est celui des particules prises individuellement, et non des agrégats.
Les particules selon l’invention peuvent en outre comprendre au moins une molécule d’intérêt thérapeutique ou cosmétique, qu’elle soit hydrophile ou lipophile.
La molécule d’intérêt thérapeutique pourra être une substance, hydrophile ou lipophile, appartenant aux classes I et III du Système de Classification Biopharmaceutique, à savoir : antibiotiques, peptides tels que les peptides anti-microbiens (par exemple les temporines), agents antiviraux, agents antiparasitaires (par exemple le métronidazole ou le fluconazole), antihistaminiques (par exemple la cimétidine), antalgiques (par exemple le paracétamol), vitamines (par exemple l’acide ascorbique) ou agents anti-inflammatoires (par exemple l’ibuprofène).
Cette technique de sélection in vitro bien connue de l’homme du métier consiste généralement à rechercher des séquences dans une banque d’oligonucléotides aléatoires (par exemple, environ 1015 espèces différentes). Cette méthode comprend différentes étapes dont l’incubation d’ARN ou d’ADN aléatoires avec l’agent biologique ou chimique n, la sélection des séquences qui ont reconnu cette cible, l’amplification de ces séquences par RT-PCR, puis leur transcription in vitro . Ces étapes de sélection, amplification et transcription constituent généralement un cycle de SELEX et doivent typiquement être répétées (par exemple environ 8-15 fois), jusqu’à ce que les candidats ARN/ADN présentant l’affinité la plus forte pour l’agent biologique ou chimique n soient isolés ; on appelle ces candidats des aptamères.
Depuis une dizaine d’années, la méthode SELEX a été utilisée pour générer des aptamères dirigés contre une variété de molécules-cibles de structure et de taille extrêmement variables.
N est un entier naturel représentant le nombre total d’agents biologiques et/ou chimiques.
n, entier naturel allant de 1 à N, représente l’entité n particulière à laquelle il se rapporte, par exemple l’agent biologique et/ou chimique n, ou l’ensemble de ces agents biologiques et/ou chimiques n particuliers, au nombre total de N.
Selon un mode de réalisation particulier, N est compris de 2 à 100, notamment de 5 à 50, en particulier de 10 à 40, plus particulièrement de 15 à 30.
Selon un mode de réalisation particulier, le moyen de régulation est apte à porter la surface S n de chaque section n à deux températures T A et T B distinctes, avec T A B , T A étant notamment comprise de 20 à 30°C, T B étant notamment supérieure ou égale à 50°C, et/ou inférieure à 100°C, en particulier comprise de 60 à 95°C, plus particulièrement de 70-80°C.
Selon un mode de réalisation particulier, le moyen de régulation est apte à porter la surface S n des m x N sections n à une même température, à 5°C près, ou moins, notamment à 2°C près ou moins, en particulier à 1°C près ou moins.
Selon un mode de réalisation particulier, les agents biologiques sont choisis parmi les microorganismes, en particulier virus, bactéries, spores fongiques, et les macromolécules, en particulier les protéines, et/ou les agents chimiques sont choisis parmi mycotoxines, pesticides, et perturbateurs endocriniens.
Selon un mode de réalisation particulier, les virus sont choisis parmi les virus de la famille Arenaviridae , notamment du genre Mammarenvirus , par exemple le virus de Lassa, les virus de la famille Nairoviridae , notamment du genre Orthonairovirus , par exemple le virus de la fièvre hémorragique de Crimée-Congo, les virus de la famille Phenuiviridae , notamment du genre Phlebovirus , par exemple le virus de la fièvre de la Vallée du Rift, les virus de la famille Hantaviridae , notamment du genre Orthohantavirus , en particulier les virus du syndrome pulmonaire à Hantavirus, par exemple Andes et Sin Nombre, les virus de la famille Coronaviridae , par exemple les coronavirus liés au syndrome respiratoire aigu sévère, les virus de la famille Filoviridae , par exemple les virus Ebola et Marburg, les virus de la famille Flaviviridae , notamment du genre Flavivirus , par exemple Zika, de la dengue, de la fièvre jaune et de la fièvre du Nil occidental, les virus de la famille Orthomyxoviridae , par exemple le virus de la grippe, les virus de la famille Pneumoviridae , par exemple le virus respiratoire syncytial, les virus de la famille Paramyxoviridae , par exemple Nipah et parainfluenza, les virus de la famille Poxviridae , par exemple la variole du singe et la variole des camélidés, les virus de la famille Togaviridae , par exemple le virus Chikungunya.
Selon un mode de réalisation particulier, les bactéries sont choisies parmi les bactéries du genre Clostridium , par exemple Clostridium botulinum , les bactéries du genre Pseudomonas , par exemple Pseudomonas aeruginosa , les entérobactéries, les staphylocoques, Francisella tularensis , par exemple Francisella tularensis tularensis , les bactéries du genre Yersinia , par exemple Yersinia pestis , les bactéries du genre Bacillus, par exemple Bacillus anthracis , les bactéries du genre Burkholderia, par exemple Burkholderia mallei ; les bactéries du genre Streptococcus , par exemple Streptococcus pneumoniae .
Selon un mode de réalisation particulier, les spores fongiques sont choisis parmi les spores du genre Aspergillus , par exemple Aspergillus fumigatus , et les spores fongiques de Blastomyces dermatitidis, Coccidioides immitis ou Coccidioides posadasii, Histoplasma capsulatum, Paracoccidioides brasiliensis, et Sporothrix schenckii.
Selon un mode de réalisation particulier, les mycotoxines sont choisies parmi les aflatoxines, l’ochratoxine A ; la patuline ; les trichothécènes, notamment nivalénol, déoxynivalénol ; la zéaralénone (ZEN) ; les fumonisines ; la citrinine ; et la zéaralénone.
Selon un mode de réalisation particulier, les pesticides sont choisis parmi les organophosphorés.
Selon un mode de réalisation particulier, les perturbateurs endocriniens sont choisis parmi les pesticides, notamment organochlorés, fongicides, herbicides ; les plastifiants, notamment les phtalates, le Bisphénol A ; les retardateurs de flamme, notamment les polybromodiphényléthers (PBDE) ; les revêtements, notamment les alcoxydes perfluorés (PFAs) ; les médicaments, notamment le distilbène, les anti-douleurs, par exemple le paracétamol, les anti-inflammatoires non stéroïdiens, l’aspirine, et les antidépresseurs, par exemple la fluoxétine ; les produits émis par les combustions incomplètes issues des incinérateurs, de l’industrie métallurgique et sidérurgique et à la pratique de l'écobuage des végétaux, par exemple les dioxines, les furanes, les polychlorobiphényles (PCB) ; les produits d’hygiène, notamment le triclosan ; les cosmétiques, notamment les parabènes ; et les phyto-estrogènes, par exemple de soja.
Selon un mode de réalisation particulier, les aptamères sont des aptamères ADN, ARN, AXN, ou peptide, de préférence ADN.
Selon un mode de réalisation particulier, les aptamères sont marqués par un luminophore, notamment choisis parmi le luminol et les complexes au ruthénium, en particulier le tris(2,2′-bipyridine)ruthénium(II).
17,96g d’eau, 1g de CoQ10, 1g d’huile de noyau d’abricot, 0,04g de tocophérol, 1g de Xanthane, 1g de sodium hyaluronate, 0,08g de sorbate de potassium, dans un sachet PE de 50 microns.
Par exemple, le mélange est placé dans un sachet en mode statique entre deux aimants pendant 180 minutes pour soumission à une force électromagnétique tel que décrit précédemment.
Après traitement, on obtient une texture homogène et stable à l’ambiant. Elle est transparente. Au bout de 5 semaines à 50° à l’étuve, on observe aucun déphasage, ni crémage et un pH remarquablement stable :
PH Stabilité Semaine 1 7,06 +++ Semaine 2 6,96 +++ Semaine 3 6,95 +++ Semaine 4 6,92 +++ Semaine 5 6,95 +++
Cette expérience montre que le procédé selon l’invention permet la réalisation d’une émulsion (ici à base d’eau et d’huile de noyau d’abricot) qui reste stable dans le temps.
Selon différents tests :
Si deux liquides sont non miscibles, il a été constaté la constitution d’une émulsion stable sans aucun ajout de stabilisant, le temps d’exposition au champ magnétique étant proportionnel à la concentration de l’émulsion.
Si deux liquides sont non miscibles, il a été constaté la diminution de la taille des particules en émulsion sans aucun échauffement ni dispositif de pré-émulsion en amont. De façon très surprenante le liquide reste froid (19,8 à 20°C). Même après plusieurs heures d’exposition et une descente en taille autour de 500 nm.
Si deux liquides sont non miscibles, en particulier dans le cas de concentrés parfumés et huiles essentielles dans l’eau, obtention d’une émulsion translucide à transparente même avec des tailles moyennes de 500 nm à 1 micron.
Exemple : Préservation de propriétés des actifs :
Deux anti-oxydants de référence ont été choisis, pour être comparés en analyse PAOT-Score® à une formulation simple avec traitement : eau déminéralisée et antioxydant, et traitement formulation complexe avec ce même anti-oxydant.
Les antioxydants choisis sont la Quercétine à 0,4g/litre et la Catéchine à 2g/litre.
Ils sont utilisés dilués à 5% dans l’eau déminéralisée, soit 1g pour 19g d’eau.
La première dilution est appelée Solution de référence, elle n’est pas traitée.
La deuxième dilution est traitée pendant 120 min avec le procédé selon l’invention, elle est nommée Solution de référence traitée.
et/ou une concentration en galactose hydrolysé inférieure ou égale à 15 g/L, notamment comprise entre 0,5 et 15 g/L, préférentiellement comprise entre 1 et 13 g/L, plus préférentiellement comprise entre 3 et 8 g/L,
et/ou une concentration en mannose hydrolysé inférieure ou égale à 15 g/L, notamment comprise entre 0,5 et 15 g/L, préférentiellement comprise entre 1 et 13 g/L, plus préférentiellement comprise entre 3 et 8 g/L,
et/ou une concentration en glucose libre inférieure ou égale à 15 g/L notamment comprise entre 0,01 et 15 g/L, préférentiellement comprise entre 0,5 et 8 g/L, encore préférentiellement comprise entre 1 et 4 g/L.
Le ratio en poids C-phycocyanine (g/L) / glucose hydrolysé (g/L) de l’extrait aqueux concentré va de 2 à 80. Préférentiellement, ce ratio est compris entre 10 et 70, plus préférentiellement 15 et 60.
De préférence, l’extrait aqueux concentré présente un rapport C-phycocyanine (g/L) / mannose hydrolysé (g/L) d’au moins 0,01, préférentiellement de 0,01 à 1200, plus préférentiellement 0,1 à 80, encore plus préférentiellement 0,3 à 12.
De préférence, l’extrait aqueux concentré présente un rapport C-phycocyanine (g/L) /galactose hydrolysé (g/L) d’au moins 0,01, préférentiellement de 0,01 à 1200, plus préférentiellement 0,1 à 80, encore plus préférentiellement 0,3 à 12.
De préférence, l’extrait aqueux concentré présente un rapport protéines (%) / glycogène résiduel non digéré estimé (g/L) de 0,2 à 6,0, plus préférentiellement 0,5 à 5,0, encore plus préférentiellement 1,0 à 4,5. De préférence, l’extrait aqueux concentré présente une teneur estimée en glycogène résiduel non digéré (teneur en glucose hydrolysé (g/L) – teneur en glucose libre (g/L)) de 0,1 à 10 g/L, plus préférentiellement de 0,2 à 7 g/L, encore plus préférentiellement 0,3 à 5 g/L.
De préférence, l’extrait aqueux concentré présente un rapport protéines (%) /sucres totaux mesurés par dosage des sucres hydrolysés par HPLC-RID (g/L) inférieur à 1%, préférentiellement compris entre 1 et 0,01%, plus préférentiellement entre 0,8 et 0,05%, encore plus préférentiellement entre 0,6 et 0,1%. La présente invention concerne enfin un procédé de préparation d’un extrait aqueux concentré d’une biomasse d’ARU du genre Galdieria, ledit procédé comprenant un procédé de traitement avec une étape de dégradation du glycogène, et une étape de concentration comme défini précédemment.
L’invention concerne également l’utilisation de tout ou partie d’un extrait aqueux obtenu à partir d’un procédé selon l’invention en tant que produit pour la préparation de compositions pharmaceutiques ou alimentaires, y compris des aliments ou des compositions pharmaceutiques, nutraceutiques, alimentaires, cosmétiques ou industrielles. Il s’agit notamment de l’utilisation d’un extrait aqueux obtenu selon un procédé de l’invention comprenant des phycocyanines pour la préparation de compositions pharmaceutiques ou alimentaires.
Selon un mode de réalisation, une composition selon l’invention comprend tout ou partie d’un extrait aqueux obtenu avec le procédé selon l’invention et un ou plusieurs excipients.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l’invention est une composition acide dont le pH est inférieur ou égal à 6, préférentiellement inférieur ou égal à 5, voire inférieur ou égal à 4 et en particulier compris entre 2 et 4.
Selon l’invention, on entend par composition acide toute composition comprenant tout ou partie d’un extrait aqueux obtenu avec un procédé selon l’invention ainsi qu’un acide minéral ou organique.
Des acides minéraux ou organiques susceptibles d’être employés dans les compositions selon l’invention sont connus de l’homme du métier. Parmi les acides minéraux, on citera en particulier les acides carboniques, phosphorique, chlorhydrique, sulfurique, perchlorique, sulfonique et nitrique. Parmi les acides organiques, on citera en particulier les acides citrique, lactique, malique, tartrique et succinique.
Les compositions acides selon l’invention peuvent en outre comprendre un véhicule pouvant comprendre des constituants structurels associés à des composés actifs identifiés au regard de leurs apports nutritifs ou encore pour leurs propriétés bénéfiques à la santé de l’homme ou de l’animal.
Concernant les compositions autres que les compositions alimentaires, elles peuvent être pharmaceutiques, vétérinaires ou cosmétiques et comprendre en outre un ou plusieurs additifs et/ou actifs connus et utilisés dans ce type d’indication.
Les compositions selon l’invention peuvent se présenter sous toute forme usuelle connues de l’homme du métier. On citera notamment les formes solides, liquides, fluides, pâteuses ou visqueuses et plus particulièrement les crèmes, les gels, les mousses, les pâtes. Les compositions selon l’invention peuvent aussi se présenter sous la forme d’aliments secs à cuire, de poudres à diluer, des compositions gélatineuses pour les compositions alimentaires.
Dans ces compositions solides, tout ou partie de l’extrait obtenu selon l’invention est préférentiellement ajouté sous la forme de poudre.
Les compositions liquides sont avantageusement des compositions aqueuses dans lesquelles tout ou partie de l’extrait obtenu selon l’invention est dissout.
Selon un mode particulier de réalisation de l’invention, la composition liquide peut être une composition alimentaire et plus spécifiquement une boisson acide, gazeuse ou non. On citera en particulier les sodas, les jus, les boissons pour sportifs, boissons d’effort, boissons de récupération, etc. Les compositions de ces boissons sont bien connues de l’homme du métier et peuvent comprendre, notamment, des sucres, des sels minéraux, des additifs alimentaires ou du gaz dissout. Une boisson acide selon l’invention peut être une boisson acide de l’art antérieur dans laquelle le colorant habituellement employé a été remplacé en totalité ou en partie par un extrait aqueux comprenant des phycocyanines résistantes à pH acide selon l’invention.
La teneur en phycocyanines dans les compositions selon l’invention sera conforme aux concentrations usuellement appliquées dans le domaine d’application visé.
Finalement, selon un deuxième aspect, l’invention concerne un procédé de traitement d’une biomasse d’algues rouges unicellulaires (ARU) du genre Galdieria dans lequel la dégradation du glycogène est réalisée sur le lysat obtenu à l’étape b) avec une concentration en enzymes exogènes préférentiellement inférieure ou égale à 0,0001% en poids par rapport au poids total du lysat pour une enzyme avec une activité enzymatique équivalente à celle de l’enzyme Pectinex Ultra SP-L d’activité déclarée par le fabricant de 3300 PGNU/g. La dégradation du glycogène y est réalisée au moyen d’une étape de repos telle que décrite au premier aspect de la présente invention ou selon une méthode connue de l’homme du métier telle que l’utilisation d’enzymes exogènes conformément à WO2020/144330.
Les conditions de mise en œuvre des étapes a), b), c), d) et e) sont identiques à celles décrites pour le premier aspect de l’invention, de même que les enzymes et leurs usages, la composition de l’extrait aqueux obtenu et son usage.
L’homme du métier saura déterminer les quantités d’enzymes, de 0 à 0,0001% en poids par rapport au poids total du lysat, appropriées pour mener à bien la dégradation du glycogène.
De préférence, la dégradation du glycogène est mise en œuvre sur le lysat dans des conditions opératoires (pH, température et temps) correspondant aux conditions de mise en œuvre de l’étape de repos sur le lysat décrites plus haut pour le premier aspect de l’invention.
EXEMPLES Exemple 1 : Étude de la dégradation du glycogène avec et sans ajout d’enzymes exogènes à différents pH
La quantité de glucose libérée dans le temps dans des lysats de biomasse de Galdieria sulphuraria à pH 3.75 sans ajout d’enzyme, à pH 6 sans ajout d’enzyme et à pH 6 avec ajout d’enzyme (1%, « Amylase AG XXL » de Novozymes), à 37 °C a été mesurée en fonction du temps (YSI® 2950).
L’acidification du lysat est réalisée par l’ajout d’une quantité suffisante d’acide citrique, pour passer d’un pH 6 à 3.75.
Les résultats montrent qu’à pH acide, 3.75, une quantité de glucose plus importante qu’à pH 6 est libérée. Après 24 heures d’incubation à pH 3.75 sans ajout d’enzyme, le glucose libéré dans l’échantillon atteint même un niveau identique que dans l’échantillon dans lequel une enzyme exogène a été ajoutée.
Il est à noter que la libération de glucose se fait également à pH 6 en l’absence d’ajout d’enzyme exogène ; la cinétique est seulement plus lente (pente plus faible).
Ce tableau présente des résultats, dont :
– l’indice de polydispersité, dit PDI ; sa valeur est entre 0 et 1 : plus il tend vers 0 plus l’émulsion est mono-disperse, plus il tend vers 1 plus elle est poly-disperse ;
– le potentiel Zeta qui représente la mesure de l'intensité de répulsion ou d'attraction électrostatique entre particules en milli volt.
Une valeur négative est prédictrice ou prédictive de stabilité long terme. Cependant, selon que l’émulsion est anionique ou cationique une valeur élevée peut aussi signifier une stabilité future.
Les échantillons à 3% et 6% présentent un état de sortie stable sans aucun surnageant.
L’échantillon à 10% présente un état de sortie stable mais présente un léger surnageant de surface de billes microscopiques qui se remettent en mélange après une légère agitation. En augmentant la durée d’une vingtaine de minutes, l’état de sortie est également stable sans aucun surnageant.
En outre, les expériences permettent d’obtenir des émulsions présentant les avantages suivants :
- Excellente préservation olfactive des huiles essentielles ;
- Pas de baisse significative de Ph (entre 5 et 7,5 quelles que soit les matières premières) ;
- Pas de hausse de température, quels que soient les temps de traitement et les concentrations d’huiles ;
– une transparence totale ;