INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
90 autres variantes de la protéine Stéfine A ont été clonées à partir du phagémide et caractérisées de manière similaire. 55 clones ont été repris et la liaison confirmée par analyse Mirrorball. Une caractérisation plus poussée a été effectuée par ELSA en concurrence pour tester leur capacité à bloquer l'interaction entre hTNFR2-hFc-his-avi et le TNF-alpha recombinant. Une série d'expériences a été réalisée pour déterminer l'EC80 de hTNFR2-hFc-his-Avi lors de la liaison au hTNF alpha enrobé (593 pM). La variante de la protéine Stéfine A ont été testées à trois concentrations différentes (10, 1 et 0,1 µM) lorsque possible, en présence de l'antigène hTNFR2 à sa CE80 déterminée. La détection de hTNFR2-hFc-his-Avi lié a été effectuée par l’anticorps anti-hFc-HRP. Parmi les 75 clones testés, 32 clones, qui ont montré un % d'inhibition supérieur à 65 % à 10 µM, ont été sélectionnés pour être caractérisés davantage afin de déterminer leur CI50 ( ). Les clones 06, 21, 26, 27, 44, 108 et 115 ont montré une inhibition totale de l'interaction entre TNFα et hTNFR2 aux concentrations testées.
A ce stade, ces 55 clones ainsi que les 14 clones du groupe accéléré (13 agonistes, un négatif, clone 06) ont été clonés dans le vecteur pDisplay (Thermo Fisher). Ce vecteur contient un domaine transmembranaire de protéine PDGFR en C-term pour permettre l'expression d'Affiner à la surface des cellules d'expression et en tant que protéines solubles. Des étiquettes supplémentaires telles que HA en N-term sont également codées par ce vecteur permettant une vérification facile de l'expression d’Affimer. Une fois clonées, ces Affimer ont été transfectées de manière transitoire dans des cellules Expi293F™ pour une analyse SEAP comme décrit précédemment. En prenant toutes les données ensemble, 43 clones ont été sélectionnés pour une caractérisation supplémentaire.
EXEMPLE 3 : Caractérisation de 43 clones sélectionnés
Essai Biacore
Les 43 clones sélectionnés ont été testés dans une analyse cinétique Biacore en tant que protéines solubles. En bref, des cinétiques multicycles ont été réalisées à l'aide d'une puce CM5 sur laquelle l'antigène dimérique hTNFR2-hFc-his-avi a été immobilisé à 500. Une variante de la protéine Stéfine A ont été titrées à la baisse (de l’anglais « downtitrated ») dans un tampon HBS-EP+ à partir de 1 µM dans une série de dilutions à 1:2. Le temps d'association et la dissociation utilisés étaient respectivement de 200 s et 400 s à un débit de 20 µl/min avec une régénération avec 10 mM de glycine à pH 1,5 pendant 30 s à 30 µl/min. Douze clones ont montré une réponse très faible et aucune valeur KD n'a pu être estimée pour ceux-ci. Le clone 09 a été ajusté à l'aide du modèle de liaison à 1:1, cependant, la valeur KD rapportée était trop élevée (>E-05) pour être fiable avec la plage de concentration utilisée. Pour 16 clones, le signal atteint était adéquat et ils ont pu être ajustés avec succès en utilisant le modèle de liaison à 1:1, la courbe et leur ajustement sont compilés. Deux clones (21 et 69) qui sont des dimères ont été ajustés en utilisant à la fois le modèle de liaison à 1:1 et un état d'équilibre afin d'estimer leur KD, tandis que dans 12 clones, un faible Rmax a rendu difficile leur ajustement en utilisant le modèle de liaison à 1:1 et le modèle d'état d’équilibre (en anglais « Steady State ») a été utilisé à la place. Dans ce cas, la valeur KD obtenue n'a pas été rapportée ; à la place, un ordre de grandeur l'a été. Les résultats sont présentés en .
Dans un autre exemple, le circuit cryptographique 118 est configuré pour crypter une donnée et transmettre la donnée cryptée au circuit de couplage et de chainage 114, par l’intermédiaire du bus 122. L’opération de chainage consiste alors à transmettre la donnée cryptée au bus système 110, par l’intermédiaire du bus 116, ainsi qu’un circuit de contrôle de redondance cyclique 120, par l’intermédiaire du bus 124. Le code de vérification d’erreur est alors calculé, par le circuit 120, sur la base de la donnée cryptée.
Selon un mode de réalisation, l’opération de chainage est effectuée suite à l’envoi, par exemple par le processeur 104 ou par le circuit d’accès direct à la mémoire 112, d’une seule commande d’accès pour lecture. A titre d’exemple, le circuit de couplage et chainage 114 est alors configuré pour générer une demande d’accès pour écriture dans un registre du circuit de contrôle de redondance cyclique 120.
Dans l’exemple où d’autres circuits périphériques, en plus des circuits 118 et 120, sont reliés au circuit de couplage et de chainage 114, le circuit 114 est par exemple configuré pour générer, en réponse à une demande d’accès pour écriture ou lecture transitant sur le bus 116, des demandes d’accès pour lecture ou écriture sur des bus reliant le ou les autres circuits périphériques au circuit de couplage et de chainage 114. Ces demandes d’accès pour lecture ou écriture sont par exemple transmises vers les bus reliant les autres circuits en même temps celle transmise sur le bus 124.
A titre d’exemple, en plus des circuits 118 et du circuit de contrôle de redondance cyclique 120, un circuit configuré pour effectuer des opérations de hachage est en outre relié au circuit de couplage et de chainage 114 par l’intermédiaire d’un bus dédié. Dans ce cas, le circuit de couplage et de chainage 114 est par exemple configuré pour intercepter une donnée fournie par le circuit 118 ou par le bus 116, et transmettre une copie de cette donnée non seulement vers le circuit 120, mais également vers cet autre circuit périphérique, avec par exemple une demande d’accès pour écriture. Ainsi, une valeur de hachage est générée, en plus du code de vérification d’erreur calculé par le circuit 120, sur la base de la donnée transmise vers, ou par, le circuit 118.
La illustre un exemple de données manipulées par le circuit de couplage et chainage 114 lors d’une opération de couplage.
A titre d’exemple, le circuit de couplage et chainage 114 comprend une mémoire volatile 300 (FIFO) reliée au bus 124. La mémoire 300 est par exemple une mémoire de type premier arrivé-premier sorti, ou FIFO (de l’anglais « First In First Out ») configurée pour stocker des données par ordre de réception. A titre d’exemple, une demande d’accès pour lecture dans la mémoire 300 renvoie la donnée la plus ancienne stockée dans la mémoire 300. A titre d’exemple, chaque fois qu’une donnée de la mémoire 300 est envoyée vers le bus 124, la donnée est supprimée de la mémoire 300. Bien que, dans cet exemple, la mémoire 300 est décrite comme étant une mémoire FIFO, d’autres types de mémoire volatile peuvent bien sûr être utilisé.
A titre d’exemple, le processeur 104, ou le circuit d’accès direct à la mémoire 112, envoie une demande d’accès pour écriture d’une donnée CRYP1 dans le circuit cryptographique 118. A titre d’exemple, le bus 116 comprend un bus de données S_WDATA configuré pour transmettre les données à écrire vers le circuit de couplage et chainage 114. A titre d’exemple, le circuit de couplage et chainage 114 est configuré pour transmettre la valeur de la donnée CRYPT1 au circuit cryptographique 118, par l’intermédiaire d’un bus M2_HWDATA du bus 122. A titre d’exemple, la donnée CRYP1 est écrite dans un registre 302 (DINR) du circuit cryptographique 118.
A titre d’exemple, le circuit de couplage et chainage 114 est en outre configuré pour générer une nouvelle demande d’accès pour écriture. A titre d’exemple, le circuit de couplage et chainage 114 transmet à la mémoire 300, la valeur de la donnée CRYP1 par l’intermédiaire d’un bus interne HWDATA.
A titre d’exemple, les circuits 118 et 120 n’ont pas la même vitesse de calcul. La mémoire 300 agit alors comme une mémoire tampon afin de permettre au circuit 120 d’effectuer les calculs à son rythme. A titre d’exemple, la mémoire 300 est configurée pour stocker 8 mots de 32 bits. A titre d’exemple, une demande d’accès pour lecture est transmise par le circuit de calcul de redondance cyclique 120, par l’intermédiaire d’un bus M3_HRDATA du bus 124, à la mémoire 300. La valeur de la donnée CRYP1 est par exemple ensuite écrite dans un registre 304 (DR) du circuit de contrôle de redondance cyclique 120, par l'intermédiaire d'un bus de donnée M3_HWDATA du bus 124.
A titre d’exemple, le circuit de couplage et chainage 114 retourne un code d’erreur d’exécution, par exemple généré par le circuit cryptographique 118, au circuit d’accès direct à la mémoire 112 ou au processeur 104, par l’intermédiaire d’un bus S_HRESP. A titre d’exemple, le circuit cryptographique 118 est configuré pour retourner un code d’erreur d’exécution lorsqu’un problème a lieu lors du chiffrage ou du déchiffrage. A titre d’exemple, si une clef de chiffrement ou de déchiffrement est erronée et empêche par exemple le circuit cryptographique de chiffrer ou déchiffrer une donnée, le circuit 118 retourne un code d’erreur d’exécution. A titre d’exemple, le circuit cryptographique 118 retourne un code d’erreur d’exécution lorsque, pour une quelconque raison, il n’est pas capable de générer une sortie.
Selon un mode de réalisation, dans le cas où le circuit cryptographique signale une erreur par l’intermédiaire d’un code d’erreur d’exécution, les valeurs de données comprises dans la mémoire 300 sont supprimées. A titre d’exemple, le code d’erreur d’exécution est transmis à la mémoire 300 par l’intermédiaire d’un bus OPCODE.
La illustre un exemple de données manipulées par le circuit de couplage et chainage 114 lors d’une opération de chainage.
A titre d’exemple, le processeur 104, ou le circuit d’accès direct à la mémoire 112, envoie une demande d’accès pour lecture d’une donnée de sortie du circuit cryptographique 118, par exemple stockée dans un registre 306 (DOUTR). A titre d’exemple, le bus 120 comprend un bus de données M2_HRDATA configuré pour transmettre la donnée vers le circuit de couplage et chainage 114 puis vers un bus S_HRDATA du bus 116. A titre d’exemple, le circuit de couplage et chainage 114 est configuré pour transmettre la valeur de la donnée fournie par le circuit cryptographique 118 à la mémoire 300, par l’intermédiaire d’un bus HWDATA. A titre d’exemple, la donnée est ensuite fournie au circuit de contrôle de redondance cyclique 120, plus particulièrement au registre 304, par l’intermédiaire du bus M3_HWDATA.
A titre d’exemple, comme pour l’opération de couplage, le circuit de couplage et chainage 114 retourne un code d’erreur d’exécution, fournie par le circuit cryptographique 118, par exemple au circuit d’accès direct à la mémoire 112 ou au processeur 104, par l’intermédiaire du bus S_HRESP. A titre d’exemple, si le code d’erreur d’exécution indique une erreur, les valeurs de données comprises dans la mémoire 300 sont supprimées.
A titre d’exemple, le circuit de couplage et chainage 114 comprend en outre un registre (non illustré en figures 3A et 3B). Le registre comprend par exemple une valeur de configuration, programmable par le processeur 104. A titre d’exemple la valeur de configuration est une valeur sur un ou plusieurs bits. A titre d’exemple, la valeur de configuration est une valeur sur un bit et une programmation à la valeur binaire « 1 » indique au circuit de couplage et chainage 114 que l’opération à suivre est une opération de couplage. Une programmation à la valeur binaire « 0 » indique par exemple au circuit de couplage et chainage 114 que l’opération à suivre est une opération de chainage. Cet exemple n’est bien sûr pas limitatif, une programmation à la valeur binaire « 1 » peut indiquer une opération de chainage et une programmation à la valeur « 0 » peut indiquer une opération de couplage. Dans d’autres exemples, la valeur de configuration est codée sur au moins deux bits.
La est un organigramme illustrant des étapes d’un procédé de couplage et/ou de chaînage entre deux circuits périphériques, tels que le circuit cryptographique 118 et le circuit de contrôle de redondance cyclique 120.
La montre un système de nettoyage 200 appliqué à un capteur lidar 100. Le système de nettoyage 200 a un bras de nettoyage 102. Le bras de nettoyage 102 nettoie la surface 104 du capteur lidar 100 par le déplacement en translation du système d’essuyage.
La est une vue de côté du système de nettoyage 200 du capteur lidar 100.
Selon la , le bras de nettoyage 102 pousse avec une force sur le système d’essuyage 10 pour appliquer le système d’essuyage 10 contre la surface 104. Ainsi, le système de nettoyage nettoie la surface 104 avec les éléments d’essuyage par le mouvement de translation T.
La montre un système d’essuyage avec une unité de boîtier munie d’un élément de fixation 16. Cet élément de fixation 16 a un évidement 26.
La montre à la différence de la , une unité de boîtier 12 avec un élément de fixation 16 comportant plusieurs évidements 26.
La , par comparaison aux figures 3a et 3b montre une unité de boîtier 12 avec un élément de fixation 16 sous la forme d’un élément de serrage 28 de type canal pour engager l’élément d’essuyage 14.
La montre, par comparaison aux figures 3a-3c, une unité de boîtier 12 avec un élément de fixation 16 en forme d’élément de serrage 283. L’élément de serrage 28 a sur son autre côté des entretoises pour fixer l’élément d’essuyage à l’unité de boîtier.
La montre un système d’essuyage 10 avec une unité de boîtier 12 ainsi qu’un élément d’essuyage 14. L’élément d’essuyage 14 est tenu à l’unité de boîtier 12 par un élément d’étanchéité 18. L’élément d’étanchéité est fixé au capot 24 par une liaison par la force et/ou la forme par un engagement de type « sapin ».
La , à la différence de la , montre un élément d’essuyage qui est poussé contre le capot 24 par un élément d’étanchéité 18. L’élément d’étanchéité 18 est relié à l’unité de boîtier dans l’élément par une liaison par la force et/ou la forme de type « sapin ».
La montre un mode de réalisation d’un système d’essuyage avec un premier élément d’étanchéité 18 et un second élément d’étanchéité 20 installés en opposition l’un par rapport à l’autre et qui fixent l’élément d’essuyage 16 au système d’essuyage 10. Ainsi, le premier élément d’étanchéité 18 est relié par une liaison par la forme et/ou la force au capot 24. Le second élément d’étanchéité 18 est relié par une liaison par la force et/ou la forme à l’élément de boîtier 22.
La montre une unité de boîtier 12 équipée d’un élément d’étanchéité 18. L’élément d’étanchéité 18 a un élément de serrage 30 en forme de U qui entoure au moins partiellement l’unité de boîtier 12 et fixe ainsi l’élément d’étanchéité 18 à l’unité de boîtier 12.
La est une vue en coupe de l’élément de serrage en forme de U 30 qui a notamment sur son côté intérieur de la forme en U des dents pour une fixation par la forme et/ou la force de l’élément de serrage 30 à l’unité de boîtier 12.
La montre en outre un système d’essuyage 10 selon une forme de réalisation avec un élément d’essuyage 14 poussé par un élément d’étanchéité 18 contre l’élément de l’unité de boîtier 22. L’élément d’étanchéité 18 est relié par une liaison par la matière, notamment par collage à l’élément de capot 24.
La montre un mode de réalisation du système d’essuyage 10 ; l’élément d’étanchéité 18 est fixé à l’élément de boîtier 22 notamment par une liaison par la matière telle que collage, pour presser l’élément d’essuyage 14 contre l’élément de capot 24.
La montre un système d’essuyage 10 qui fixe avec un premier élément d’étanchéité 18 et un second élément d’étanchéité 20 l’élément d’essuyage 14. Le premier élément d’étanchéité 18 et le second élément d’étanchéité 20 peuvent être reliés notamment par une liaison par la matière, par exemple, collage, à l’élément de boîtier ou à l’élément de capot 24.
La montre un véhicule 30 équipé d’un système d’essuyage 10 et comportant le système de nettoyage 200.
Edition génétique Les constructions plasmidiques ont été introduites dans C. acetobutylicum comme décrit par Mermelstein LD et al. . Les événements d’édition génétique ont été sélectionnés comme décrit par Wasels F. et al. (2020) et Wasels F. et al. (2017). Les oligonucléotides utilisés pour la confirmation des éditions génétiques sont présentés dans le Tableau 3 ci-dessous.
Locus Oligonucléotide Séquence (5’-3’) hbd P19 (SEQ ID NO : 19) GTAATATTATAGCAGCTATTTTAAGTTTAC P20 (SEQ ID NO : 20) AAAGGTAAGGAAATGGCTGAG pdc P21 (SEQ ID NO : 21) TTGGCGCTGTTAATGGGCTA P22 (SEQ ID NO : 22) ACCCAGCTAAATGAATGGCCT
L’emploi d’autres outils génétiques, telle que ceux basés sur la recombinaison homologue ou l’insertion d’éléments génétiques mobiles, peut permettre d’obtenir des mutants possédant des génotypes équivalents, i.e. n’exprimant plus les produits des gènes hbd et pdc , ou exprimant une version non fonctionnelle de ceux-ci.
Fermentation Les performances fermentaires des micro-organismes décrits dans cette étude ont été évaluées en batch. Des précultures ont été réalisées en chambre anaérobie dans un volume de 1 mL de milieu CGM (KH 2 PO 4 0,75 g.L -1 , K 2 HPO 4 0,75 g.L -1 , MgSO 4 ∙H 2 O 0,4 g.L -1 , MnSO 4 ∙H 2 O 0,01 g.L -1 , FeSO 4 ∙7H 2 O 0,01 g.L -1 , NaCl 1,0 g.L -1 , Asparagine 2,0 g.L -1 , Extrait de levure 5,0 g.L -1 , (NH 4 ) 2 SO 4 2,0 g.L -1 , Glucose 80 g.L -1 ). Après une incubation de 18h, un volume de 500 µL de ces précultures a été utilisé pour inoculer 9,5 mL de milieu CGM dans des fioles. Une fois serties, ces dernières ont ensuite été incubées pendant 96h à 34°C, 100 rpm. En fin de fermentation, des échantillons ont été centrifugés à 5000 g pendant 5 minutes, et les surnageants ont été dilués à l’aide d’un standard interne (concentration finale de 0,5 g.L -1 de n-propanol) puis filtrés à 0,22 µm avant d’être analysés par chromatographie.
La détection des solvants a été réalisée par chromatographie en phase gazeuse sur une colonne PoraBOND-Q (Agilent Technologies) avec un détecteur à ionisation de flamme. L’hélium a été utilisé comme gaz vecteur à un débit de 1,6 mL.min -1 , et la colonne chauffée de 50 à 250°C au cours d’un run de 30 min. La détection des acides a été réalisée par chromatographie en phase liquide à haute performance sur une colonne Aminex HPX-87H (Biorad) couplée à un refractomètre Spectra System RI-150 et un détecteur UV Waters 2487 dual λ réglé à 210 nm. La phase mobile consistait en une solution d’acide sulfurique 0,1 M, et la température de la colonne a été fixée à 60°C. Les résultats présentés sont la moyenne d’au moins trois essais indépendants.
Résultats Un mutant Δ hbd a été construit dans la souche DSM 792 de C. acetobutylicum . Les performances fermentaires de ce mutant par rapport à la souche sauvage sont présentées dans le tableau 4 ci-dessous.
Souches Solvants (g.L -1 ) Ethanol Acétone Propan-2-ol n-Butanol Total DSM 792 1,1 ± 0,2 8,6 ± 0,8 0,1 ± 0,0 12,3 ± 0,7 22,1 ± 0,4 Δ hbd 33,3 ± 1,3 2,9 ± 0,2 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 36,3 ± 1,5 Acides (g.L -1 ) Ac. acétique Ac. Butyrique Ac. Lactique Total DSM 792 1,6 ± 0,5 1,6 ± 0,5 0,0 ± 0,0 3,1 ± 1,0 Δ hbd 0,7 ± 0,0 0,0 ± 0,0 0,5 ± 0,0 1,3 ± 0,0
Ce mutant n’est plus capable de produire de n-butanol ni de butyrate. Il permet la production de quantités importantes d’éthanol, qui devient son produit de fermentation largement majoritaire. La quantité d’acétone produite est diminuée de plus de 65% par rapport à la souche sauvage.
Afin de diminuer la quantité d’éthanol produite par ce mutant, le mégaplasmide pSOL contenant les gènes adhE1 et adhE2 codant des enzymes à activité acétaldéhyde déshydrogénase (Ald) a été ciblé à l’aide de l’outil CRISPR-Cas9 (décrit dans la demande WO2017/064439) employé pour la création du mutant ∆ hbd . La perte du mégaplasmide est facilement réalisable dans la souche sauvage, et ne nécessite que l’introduction d’un plasmide permettant l’expression d’un ARNg ciblant cet acide nucléique (Wasels et al. , 2017).
La fréquence d’obtention de transformants de la souche sauvage contenant le plasmide pCas9 acr avec le plasmide pEC750C est de l’ordre de 10 1 à 10 2 ufc.µg ADN -1 .
La fréquence d’obtention de transformants de la souche sauvage contenant le plasmide pCas9 acr avec un plasmide dérivé de pGRNA con ciblant le chromosome du micro-organisme et ne contenant pas de matrice d’édition du locus ciblé, en présence d’anhydrotétracycline (aTc), l’inducteur de l’expression de cas9 , est nulle.
De plus, la fréquence d’obtention de transformants de la souche sauvage contenant le plasmide pCas9 acr avec un plasmide dérivé de pGRNA con ciblant le mégaplasmide pSOL en présence d’aTc est de l’ordre de 10 1 à 10 2 ufc.µg ADN -1 . L’analyse des transformants obtenus montre que ceux-ci ont perdu le mégaplasmide pSOL.
La fréquence d’obtention de transformants du mutant ∆ hbd contenant le plasmide pCas9 acr avec le plasmide pEC750C est habituellement de l’ordre de 10 3 ufc.µg ADN -1 . De manière surprenante, la fréquence de transformation de ce mutant avec un plasmide dérivé de pGRNA con ciblant le mégaplasmide pSOL en présence d’aTc et ne contenant pas de matrice d’édition du locus ciblé est nulle.
Ce résultat indique que le mégaplasmide pSOL est indispensable dans le mutant ∆ hbd et ne peut être éliminé, au contraire de ce qui est observé dans la souche sauvage. Il devient donc possible d’utiliser l’outil CRISPR-Cas9 pour réaliser des modifications précises au sein du mégaplasmide dans le mutant ∆ hbd .
A titre d’exemple, le plasmide pGRNA-∆ pdc a été utilisé pour inactiver le gène pdc qui se trouve sur le pSOL. La transformation de la souche sauvage DSM 792 avec ce plasmide induit la perte du mégaplasmide pSOL dans les transformants obtenus. En revanche, il a été possible d’obtenir des mutants ∆ hbd ∆ pdc dont les performances fermentaires sont présentées dans le Tableau 5 ci-dessous.
Souches Solvants (g.L -1 ) Ethanol Acétone Propan-2-ol n-Butanol Total DSM 792 1,1 ± 0,2 8,6 ± 0,8 0,1 ± 0,0 12,3 ± 0,7 22,1 ± 0,4 Δ hbd 33,3 ± 1,3 2,9 ± 0,2 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 36,3 ± 1,5 Δ hbd Δ pdc 32,7 ± 0,7 4,5 ± 0,2 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 37,3 ± 0,9 Acides (g.L -1 ) Ac. acétique Ac. Butyrique Ac. Lactique Total DSM 792 1,6 ± 0,5 1,6 ± 0,5 0,0 ± 0,0 3,1 ± 1,0 Δ hbd 0,7 ± 0,0 0,0 ± 0,0 0,5 ± 0,0 1,3 ± 0,0 Δ hbd Δ pdc 0,2 ± 0,0 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 0,2 ± 0,0
L’étape a) permet à partir d’un polyène de former un intermédiaire polythioester tel que défini ci-dessus. Le milieu réactionnel obtenu à l’issue de l’étape a) peut ainsi comprendre : un intermédiaire polythioester tel que défini ci-dessus ; le solvant ou le mélange de solvants tel que défini ci-dessus ; éventuellement des sous-produits tels que des (x-1)polythioesters ; et éventuellement un ou des réactifs n’ayant pas réagi.
Le milieu réactionnel peut ainsi comprendre entre 10% et 85% en poids d’intermédiaire polythioester, par rapport à la totalité du milieu réactionnel.
Le milieu réactionnel peut comprendre entre 15% et 90% en poids de solvant(s), par rapport à la totalité du milieu réactionnel.
Etape b) L’étape b) de déprotection de l’intermédiaire polythioester obtenu à l’étape a) permet d’obtenir un polythiol. Elle peut se faire par tout moyen connu de l’homme du métier. L’étape a) et l’étape b) étant réalisées en synthèse one pot selon l’invention, il est entendu que le milieu réactionnel comprenant le polythioester obtenu à l’issue de l’étape a) est conservé pour réaliser l’étape de déprotection b). Ainsi, les étapes a) et b) se font en présence du même solvant (ou mélange de solvants). Il est possible de rajouter dudit solvant (ou dudit mélange de solvants) pendant l’étape b). En particulier, le procédé selon l’invention ne comprend pas d’étape de séparation et/ou d’extraction et/ou de lavage de la phase (organique) qui comprend le polythioester entre les étapes a) et b). En particulier, on n’effectue aucune étape intermédiaire de purification du polythioester. Plus particulièrement, on n’effectue pas d’étape de recristallisation et/ou de distillation du polythioester.
La déprotection b) peut être réalisée par des méthodes classiques : à l’aide d’une base ou d’un acide, d’un catalyseur de type Dy(OTf) 3 (cf. Liang et al., Asian J. Org. Chem. 10.1002/ajoc.201700481) ou d’un composé de type sel de cyanure d’ammonium quaternaire (cf. US 7,173,156).
De façon préférée, la déprotection b) est une déprotection basique, de préférence en présence d’un alcool tel que défini ci-dessus. Elle se fait généralement par ajout d’un hydroxyde alcalin, de préférence NaOH ou KOH. L’ajout peut se faire en goutte-à-goutte.