INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Selon un mode de réalisation, des données prises parmi les données d’entrée du premier modèle d’apprentissage machine A M1 sont divisées en plusieurs sous-ensembles. Il s’agit par exemple d’un ensemble de données d’entraînement et d’un ensemble de données de validation. Le modèle est ensuite par exemple entraîné sur l’ensemble de données d’entrainement.
Selon un mode de réalisation, des paramètres du premier modèle d’apprentissage machine A M1 sont ajustés pour réduire une fonction d’erreur, (ou fonction de coût). Une telle étape est par exemple mise en œuvre au moyen d’un algorithme d’optimisation tel qu’une descente de gradient, une erreur quadratique moyenne ou encore une entropie croisée binaire.
Selon un mode de réalisation, le premier modèle d’apprentissage machine A M1 est évalué au moyen de données prises parmi les données de validation.
Un avantage est d’estimer la capacité du modèle prédictif de consommation électrique MOD p à généraliser ses prédictions à de nouvelles données d’entrée.
Selon un mode de réalisation, le procédé comprend plusieurs cycles d’entraînement et d’évaluation pour optimiser le modèle prédictif de consommation électrique MOD p .
Selon un mode de réalisation, l’entraînement du modèle de consommation électrique MOD p comprend une étape de réglages de paramètres. Il s’agit par exemple de paramètres réglables définis avant le début de l’apprentissage. Les paramètres comprennent par exemple des hyperparamètres. Des exemples d’hyperparamètres comprennent un taux d’apprentissage, un nombre d’époques (ou d’itérations), une taille du lot de données d’entraînement, ou encore une fonction d’activation. Cela permet avantageusement d’optimiser les performances du modèle.
Selon un autre exemple un réseau de neurones de type RNN, désignant « recurrent neural network » dans la terminologie anglo-saxonne est mis en œuvre.
Les valeurs de sorties du modèle prédictif de consommation électrique MOD p comprennent par exemple des valeurs continues, par exemple une valeur continue de consommation électrique en kilowatts-heure, ou encore une valeur discrète de consommation électrique, par exemple une valeur arrondie.
Selon un autre exemple, les valeurs de sortie du modèle prédictif de consommation électrique MOD p comprennent des vecteurs de sortie comprenant une classification de la consommation électrique du conteneur CTN.
Les valeurs de sortie du modèle prédictif de consommation électrique MOD p comprennent par exemple une composante temporelle. Par exemple, les valeurs de sortie comprennent chacune une valeur de consommation électrique du conteneur CTN par heure, ou encore une valeur de consommation électrique du conteneur CTN par jour.
Selon un autre exemple, une forêt aléatoire est mise en œuvre et comprend plusieurs arbres de décisions, qui sont créés à partir de sous-ensembles de données d’entrainement chacun entrainés sur un échantillon différent de données, qui sont par exemple sélectionné aléatoirement parmi un ensemble de données d’entraînement. Chaque arbre de décision calcule par exemple une valeur prédite en fonction des variables d’entrée, qui sont par exemple des variables continues telles que des valeurs de pression, d’humidité, de température, de nébulosité, de vitesse du vent etc. pour délivrer en sortie une valeur prédite de consommation électrique.
Première fonction F1 : généralités Dans un mode de réalisation, en référence à la , le premier modèle prédictif MOD p est choisi au moyen d’une première fonction F 1 .
WO2020/024917A1
Utilisation de polykétide synthases de type III de cyanobactéries comme phloroglucinol synthases DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention se situe dans les domaines de la biochimie microbienne et plus particulièrement dans le domaine de la synthèse par des enzymes microbiennes du phloroglucinol. Elle concerne l’utilisation de polykétide synthases de type III de cyanobactéries comme phloroglucinol synthases, des méthodes de production de phloroglucinol associées, ainsi que des acides nucléiques, vecteurs et cellules hôtes destinés à la production de phloroglucinol.
ETAT DE LA TECHNIQUE Le phloroglucinol est un composé organique aromatique utilisé notamment dans la fabrication de produits pharmaceutiques et d’explosifs.
La synthèse de phloroglucinol est catalysée par certaines polykétide synthases de type III appelées phloroglucinol synthases. Les phloroglucinol synthases réalisent la condensation de trois molécules de malonyl-CoA pour former une molécule de phloroglucinol selon le schéma réactionnel suivant (Réaction I): Réaction I
De nombreux oligomères peuvent ensuite être synthétisés à partir du phloroglucinol, tels que les phlorotannins. Les phlorotannins incluent notamment les fucols, les phloretols et les fucophloretols, qui sont des produits dérivés du phloroglucinol composant la paroi des algues brunes. En outre, diverses activités protectrices des algues brunes ont également été attribuées aux phlorotannins.
La synthèse naturelle de phloroglucinol a été décrite initialement chez les bactéries Gram- Pseudomonas fluorescens (Achkar et al., 2005 ; Zha et al., 2006) et chez l’algue brune Ectocarpus siliculosus (Meslet-Cladière et al., 2013). L’enzyme phloroglucinol synthase impliquée dans la synthèse du phloroglucinol a été identifiée chez ces deux espèces.
Chez Pseudomonas fluorescens , la phloroglucinol synthase est codée par le gène PHLD (Achkar et al., 2005 ; Zha et al., 2006). L’activité de phloroglucinol synthase de PHLD a pu être démontrée chez Escherichia coli exprimant un gène PHLD hétérologue (Achkar et al., 2005). Cette activité a été confirmée in vitro , par des tests enzymatiques à petite échelle réalisés avec une PHLD recombinante exprimée et purifiée à partir de cultures d’ Escherichia coli (Zha et al., 2006) .
Chez Ectocarpus siliculosus , la phloroglucinol synthase est codée par le gène PKS1 (Meslet-Cladière et al., 2013). L’activité de phloroglucinol synthase de PKS1 a été démontrée in vitro , à partir de PKS1 recombinante exprimée et purifiée chez Escherichia coli et à partir d’extraits cellulaires d’ E. siliculosus (Meslet-Cladière et al., 2013, WO 2013/045510).
Toutefois, les enzymes PHLD et PKS1 présentent des activités enzymatiques faibles. En outre, il a été montré que les enzymes PHLD de Pseudomonas fluorescens et PKS1 de Ectocarpus siliculosus ne produisent pas ou peu de phloroglucinol lorsque ces séquences sont exprimées chez la levure au lieu de chez Escherichia coli (WO2019/002799 ; WO2019/002798). Or, les systèmes eucaryotes peuvent être avantageux, notamment pour des productions à grande échelle. Ils permettent en effet l’obtention d’enzymes pouvant être modifiées au niveau post-traductionnel.
WO2019/002799 et WO2019/002798 décrivent des phloroglucinol synthases capables de synthétiser du phloroglucinol à un niveau bien plus élevé que la PKS1 de Ectocarpus siliculosus lorsque des séquences codant pour ces enzymes sont transfectées chez la levure. Ces phloroglucinol synthases sont issues de bactéries actinomycètes (WO2019/002799) ou d’algues eucaryotes (WO2019/002798).
Il existe cependant un besoin pour d’autres phloroglucinol synthases capables de synthétiser du phloroglucinol à haut niveau, notamment lorsque des séquences codant pour ces enzymes sont transfectées dans une cellule hôte, en particulier chez la levure.
De manière surprenante, car des gènes codant pour des phloroglucinol synthases n’avaient jusqu’ici été identifiés que chez Pseudomonas fluorescens et chez les bactéries Actinomycètes et les algues, les Inventeurs ont toutefois pu identifier de nouvelles phloroglucinol synthases issues de cyanobactéries (embranchement Cyanobacteriota , différent de l’embranchement Actinomycetota , auquel appartiennent les bactéries Actinomycètes), capables de synthétiser du phloroglucinol à un niveau intéressant lorsque des séquences codant pour ces enzymes sont transfectées dans une cellule hôte, en particulier chez une levure ou chez une bactérie.
Ainsi, selon un premier aspect, l’invention concerne l’utilisation d’un polypeptide choisi parmi les polykétide synthases de type III de cyanobactérie, d’une molécule d’acides nucléiques codant pour celui-ci, d’un vecteur comprenant une molécule d’acides nucléiques codant pour celui-ci ou d’une cellule hôte exprimant celui-ci, pour produire du phloroglucinol.
Selon un deuxième aspect, l’invention concerne une molécule d’acides nucléiques isolée comprenant une séquence d’acides nucléiques codant pour un polypeptide tel que défini dans l’utilisation selon l’invention, caractérisée en ce que : a) la molécule d’acides nucléiques isolée comprend en outre un promoteur contrôlant l’expression de la séquence d’acides nucléiques ; ou b) la molécule d’acides nucléiques isolée comprend en outre un terminateur de transcription contrôlant l’expression de la séquence d’acides nucléiques ;ou c) la séquence d’acides nucléiques est en outre optimisée pour l’expression dans une cellule hôte, en particulier dans une levure ou une bactérie; ou d) toute combinaison de a) à c).
Les termes et expressions qui ont été employés sont utilisés à titre de termes de description et non de limitation, et l’utilisation de ces termes et expressions ne vise en aucun cas à exclure toute équivalence des caractéristiques présentées et décrites ou de parties de celles-ci, mais il est entendu que diverses modifications sont possibles dans le cadre des exemples de la présente invention. Ainsi, il doit être entendu que, bien que la présente invention ait été spécifiquement présentée par des modes de réalisation spécifiques et des caractéristiques facultatives, la personne du métier peut recourir à une modification et une variation des concepts divulgués ici, et que de telles modifications et variations sont considérées comme incluses dans le cadre des exemples de la présente invention.
Nouvelles utilisations d’un extrait aqueux de Porphyridium cruentum et composition orale ou sublinguale le comprenant La présente invention est relative à de nouvelles utilisations d’un extrait aqueux de Porphyridium cruentum pour augmenter la récupération et/ou l’endurance musculaire, et/ou pour diminuer les courbatures et/ou pour augmenter la relaxation musculaire, ainsi qu’à une composition orale ou sublinguale le comprenant.
En réponse à un exercice physique, les muscles squelettiques en contraction synthétisent et libèrent des cytokines pro-inflammatoires dans l'interstitium ainsi que dans la circulation systémique, dont les interleukines 6 (IL6). Si plusieurs sources d'IL6 sont connues, les muscles contractants contribuent à la majeure partie des IL6 présentes dans la circulation en réponse à l'exercice physique. Différents mécanismes peuvent expliquer leur synthèse en réponse aux contractions musculaires : modifications de l'homéostasie du calcium, altération de la biodisponibilité du glucose, synthèse d'espèces réactives de l'oxygène (ROS). Ces mécanismes sont capables d'activer des facteurs de transcription connus pour réguler la synthèse des IL6. Par ailleurs, via leurs effets sur le foie, le tissu adipeux, l'axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien et les leucocytes, les IL6 peuvent moduler la réponse immunologique et métabolique à l'exercice physique. Toutefois, un exercice physique prolongé impliquant une masse musculaire importante dans l'activité contractile s’avère nécessaire pour produire une réponse marquée des IL6. En outre, l'entraînement permet de réduire le niveau de production basal des IL6 de même que l'intensité de la réponse des IL6 à l'exercice physique en neutralisant plusieurs stimuli potentiels des IL6.
L’exercice physique libère par ailleurs d’autres cytokines pro-inflammatoires telles que les IL17, IL10 ou encore IL1-α. Ces interleukines sont elles aussi présentes dans les muscles et le plasma.
A l’inverse, les interleukines IL4 sont des cytokines anti-inflammatoires et une augmentation de leur concentration dans les muscles va permettre d’améliorer la récupération musculaire après l’effort.
Par ailleurs, un effort physique, notamment s’il est intense, va entrainer une augmentation de la production de lactate dans les muscles. Le lactate va alimenter dans un premier temps le métabolisme aérobie en se transformant en pyruvate mais un effort physique prolongé peut entrainer une production trop importante de lactate et par conséquent une acidose musculaire. Cette acidose induit une contractilité musculaire amoindrie, donc une fatigue musculaire.
La conversion du lactate en pyruvate, réversible, est catalysée par la lactate déshydrogénase (LDH). La LDH est une enzyme présente dans de nombreux tissus et organes chez les humains, dont les muscles, y compris le muscle cardiaque, et le foie mais aussi les poumons et le plasma. Elle est relarguée dans le sang suite à une lyse cellulaire ou en cas d’altération d’un tissu. Son augmentation dans le sang est le signe d’un dommage tissulaire.
Avec l’entraînement physique, les muscles sont capables de réduire la production de lactate pour une intensité donnée et de mieux utiliser le lactate pour reformer du glucose (source d’énergie) via notamment une augmentation de l’activité de la LDH (cycle de Cori). Une augmentation de l’activité de la LDH musculaire permet donc d’augmenter l’endurance musculaire. A ce titre, mesurer l’activité de la LDH directement au niveau des muscles squelettiques présente un avantage en comparaison d’une mesure de ladite activité au niveau sanguin, laquelle activité est par ailleurs fonction de l’activité des autres muscles, tels que le muscle cardiaque et les muscles lisses.
Les interleukines pro-inflammatoires IL6, IL17, IL10, IL-α, anti-inflammatoires IL4, de même que la LDH représentent par conséquent des cibles de choix dans le cadre d’une solution d’amélioration des performances physiques et de récupération musculaire chez les sportifs notamment.
Des solutions sous forme de compléments alimentaires chez le sportif existent déjà sur le marché. On citera en premier lieu les acides aminés, base d’un apport alimentaire dédié, ou la créatine. Une supplémentation en magnésium va permettre notamment d’améliorer les performances à l’effort en captant le lactate durant l’effort. Des apports en antioxydants permettraient une récupération plus rapide. La caféine, le ginseng, les acides gras oméga-3 ou encore le curcuma ont aussi montré leur intérêt via leurs propriétés antioxydantes et/ou anti-inflammatoires. Ces solutions sont préconisées en conjonction avec une bonne qualité de sommeil.
Cependant, il existe un besoin important de solutions alternatives dans le domaine du complément alimentaire, en particulier des solutions totalement naturelles, ce domaine n’offrant aujourd’hui que peu d’alternatives aux protéines ou extraits végétaux antioxydants.
La Demanderesse a découvert de manière surprenante qu’un extrait aqueux de P. cruentum avait la capacité d’augmenter la récupération et l’endurance musculaire, de favoriser l’endormissement et la qualité du sommeil, ainsi que de diminuer l’anxiété et le stress. En outre, l’extrait est efficace pour augmenter la relaxation musculaire. Il a la capacité par ailleurs de diminuer la douleur musculaire, en particulier les courbatures.
Un des avantages de l’extrait est qu’il est totalement naturel, il provient d’une biomasse cultivée sans OGM, sans ajout d’hormone, sans utilisation de produit phytopharmaceutique, et sans empiéter sur des terres arables. L’extrait ou la composition le comprenant peuvent être ingérés ou dissouts sous la langue sans danger, sans effet secondaire connu.
L’extrait peut être facilement produit à l’échelle industrielle dans des conditions contrôlées en photobioréacteurs tout au long de l’année, sans contrainte de changement de luminosité ni de température. L’extrait et la composition le comprenant sont par ailleurs aisément obtenus à l’échelle industrielle. Le procédé d’extraction mis en œuvre pour obtenir l’extrait comporte une étape de pasteurisation permettant l’élimination de la flore totale (bactéries), donc sa production à l’échelle industrielle et sa consommation ultérieure sous forme de complément alimentaire.
L’extrait aqueux de P. cruentum selon l’invention provient de la microalgue Porphyridium cruentum. Cette microalgue appartenant à la famille des Porphyridiaceae (genre Porphyridium) et à la classe des Rhodophytae. C’est une microalgue rouge.
Des utilisations cosmétiques d’extraits de P. cruentum sont déjà connues de l’art antérieur. On citera la demande KR20160170783 décrivant un extrait éthanolique de P. cruentum dans une composition cosmétique pour promouvoir la différentiation des cellules du derme papillaire. Il s’agit toutefois ici d’un extrait éthanolique et non d’un extrait aqueux tel que celui selon l’invention. Il s’agit en outre d’une composition destinée à un usage topique et cette composition n’est donc pas adaptée à un usage oral ou sublingual.
MIP-Xaa1-GLSEAKPATPEIQEIVDKVKPQLEEKTGETYGKLEAVQYKTQVV-(Xaa)n-Xaa2-TNYYIKVRAGDNKYMHLKVF-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa)m-Xaa6-D-Xaa7-VLTGYQVDKNKDDELTGF (SEQ ID NO: 4)
Dans certains modes de réalisation, le polypeptide TNFR2 AFFIMER® comprend une séquence d'acides aminés ayant au moins 90 % (par ex. au moins 95 %, au moins 96 %, au moins 97 %, au moins 98 %, au moins 99 %, ou 100 %) d’identité avec la séquence d'acides aminés de :
Dans certains modes de réalisation, Xaa1 est Gly, Ala, Val, Arg, Lys, Asp ou Glu, plus préférablement Gly, Ala, Arg ou Lys, et plus encore plus préférablement Gly ou Arg ; Xaa2 est Gly, Ala, Val, Ser ou Thr, plus préférablement Gly ou Ser ; Xaa3 est Arg, Lys, Asn, Gln, Ser, Thr, plus préférablement Arg, Lys, Asn ou Gln, et encore plus préférablement Lys ou Asn ; Xaa4 est Gly, Ala, Val, Ser ou Thr, plus préférablement Gly ou Ser ; Xaa5 est Ala, Val, Ile, Leu, Gly ou Pro, plus préférablement Ile, Leu ou Pro, et encore plus préférablement Leu ou Pro ; Xaa6 est Gly, Ala, Val, Asp ou Glu, plus préférablement Ala, Val, Asp ou Glu, et encore plus préférablement Ala ou Glu ; et Xaa7 est Ala, Val, Ile, Leu, Arg ou Lys, plus préférablement Ile, Leu ou Arg, et encore plus préférablement Leu ou Arg.
Dans certains modes de réalisation des séquences et formules ci-dessus, (Xaa)n est une séquence d'acides aminés sélectionnée parmi les SEQ ID NO : 6 à 102, ou est une séquence d'acides aminés ayant au moins 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou même 98 % d'homologie avec une séquence sélectionnée parmi les SEQ ID NO : 6 à 102. Dans certains modes de réalisation, (Xaa)n est une séquence d'acides aminés ayant au moins 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou même 98 % d'identité avec une séquence sélectionnée parmi les SEQ ID NO : 6 à 102.
Dans certains modes de réalisation des séquences et formules ci-dessus, (Xaa)m est une séquence d'acides aminés sélectionnée parmi les SEQ ID NO : 103 à 199, ou est une séquence d'acides aminés ayant au moins 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou même 98 % d'homologie avec une séquence sélectionnée parmi les SEQ ID NO : 103 à 199. Dans certains modes de réalisation, (Xaa)m est une séquence d'acides aminés ayant au moins 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou même 98 % d'identité avec une séquence sélectionnée parmi les SEQ ID NO : 103 à 199.
Dans certains modes de réalisation, le polypeptide TNFR2 AFFIMER® a une séquence d'acides aminés sélectionnée parmi les SEQ ID NO : 200 à 296, où la séquence exclut optionnellement un ou plus des vingt-et-un résidus carboxy terminaux. Dans certains modes de réalisation, le polypeptide TNFR2 AFFIMER®® a une séquence d'acides aminés ayant au moins 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou même 98 % d'identité avec une séquence sélectionnée parmi les SEQ ID NO : 200 à 296, où la séquence exclut optionnellement un ou plus des vingt-et-un résidus carboxy terminaux.
Il se forme un agrégat serré de particules de boues entrecroisées de fibres de polymère. La structure fibreuse donne une force de résistance contre la turbulence liée à la déshydratation des boues.
Pour favoriser la floculation, on ajuste le pH des boues avant leur mise en contact avec le polymère, à une valeur comprise entre 9 et 11. L’ajustement du pH se fait avantageusement par dilution des boues avec de l’eau ou par l’ajout d’un agent acide dans les boues.
Après la floculation, la séparation solide/liquide des boues est de préférence réalisée par filtration. Elle peut être réalisée par centrifugation selon un autre mode de réalisation.
Pour pouvoir réutiliser le filtrat dans le procédé d’hydrolyse alcaline, on ajuste le cas échéant le pH du liquide, après la séparation solide/liquide, à une valeur comprise entre 8 et 11., L’ajustement du pH se fait avantageusement par l’ajout d’un agent alcalin dans le filtrat. Cet agent peut être sous forme liquide ou solide. Il peut s’agir par exemple de l’hydroxyde de potassium et/ou l’hydroxyde de sodium.
De la sorte, le liquide récupéré ayant déjà un pH basique convenable à une utilisation dans un nouveau processus d’hydrolyse, il nécessitera l’ajout d’une quantité limitée d’agent alcalin pour ajuster son pH.
En pratique, entre 50 % et 80 % du liquide contenu dans les boues est récupéré grâce au procédé selon l’invention et recyclé pour une nouvelle hydrolyse alcaline, avantageusement entre 60 % et 70 %.
Ceci permet d’économiser de l’eau et des agents alcalins.
Dans un mode de réalisation particulier, on évacue la matière solide issue de la séparation solide/liquide des boues.
Dans un autre mode de réalisation, on recycle la matière solide issue de la séparation solide/liquide des boues.
Selon une autre caractéristique, l’hydrolyse alcaline étant conduite en général à une température comprise entre 90°C et 190°C, les boues issues de ce procédé présentent une température élevée, de l’ordre de 90°C en général.
En conséquence, on maintient, de préférence, une température comprise entre 80°C et 95°C, avantageusement 90°C, tout au long du procédé de traitement des boues.
Ceci signifie donc que la température du liquide issu de la séparation des boues est sensiblement égale à celle des boues. Ainsi, le liquide recyclé dans un nouveau processus d’hydrolyse nécessitera un apport énergétique limité pour ajuster sa température.
Dans un mode de réalisation particulier, le polymère est un polymère floculant d’au moins un monomère cationique choisi parmi les dérivés cationiques de (méth)acrylate, les dérivés cationiques du (méth)acrylamide et de chlorure de polydiallyldiméthylammonium, de préférence un polymère de diméthylaminoéthylacrylate quaternisé.
Le polymère est de préférence un homopolymère. Il peut être linéaire ou ramifié.
Le polymère est avantageusement hydrosoluble. Par « polymère hydrosoluble », on désigne un polymère qui donne une solution aqueuse lorsqu’il est dissous sous agitation à 25°C et avec une concentration de 10 g.L -1 dans l’eau.
Le polymère a de préférence un poids moléculaire compris entre 500 000 g/mol à 50 millions g/mol.
Le châssis 62 équipé de ses organes d’obturation 26, s’étend ainsi transversalement entre les deux traverses 78, 80 du flasque droit 82 jusqu’au flasque gauche 83.
On retrouve sur la , partiellement, la traverse inférieure 78 et la traverse supérieure 80 réunies ensemble par le flasque droit 82 en formant une rainure inférieure droite 84 opposée à une rainure supérieure droite 86. On retrouve en outre le montant droit 54, ainsi que le coulisseau inférieur droit 64 engagé dans la rainure inférieure droite 84 et le coulisseau supérieur droit 66 engagé dans la rainure supérieure droite 86. On observera que les rainures 84, 86 sont débouchantes axialement. Une telle configuration permet d’éviter l’accumulation de salissures et de poussières qui pourraient venir gripper à terme le mouvement des coulisseaux 64, 66 dans les rainures 84, 86.
À l’opposé, les coulisseaux gauche 68, 70 sont montés de la même façon à coulissement dans des rainures ménagées de la même façon à la jonction entre les deux traverses 78, 80 et le flasque gauche 83.
De la sorte, le châssis 62 est apte à coulisser à l’intérieur du cadre 76. Par là-même, les organes d’obturation 26 peuvent être entraînés simultanément selon un mouvement de translation parallèle la direction longitudinale X du véhicule automobile.