INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Cet exemple définit le processus de Schantz de l’art antérieur pour obtenir une neurotoxine botulinum . Le procédé est un procédé non-APF utilisant des milieux et réactifs dérivés de l’animal ( à savoir , des plaques d’agar de sang de bœuf pour la culture, la caséine dans le milieu de fermentation et l’utilisation d’enzymes de Rnase et de Dnase pour la purification de neurotoxine botulique). Le processus de Schantz présente environ 16 à 20 étapes majeures, pour un travail à l’échelle de production utilise un fermenteur de 115 L et prend environ 3 semaines. Le processus de Schantz est débuté par décongélation d’un flacon de banque de cellules maîtres (MCB) de Clostridium botulinum non APF à température ambiante suivie de quatre étapes de culture. Premièrement pour sélectionner des colonies avec une morphologie appropriée, des aliquotes provenant du flacon MCB décongelé sont striées sur des plaques d’agar sanguin Columbia pré-réduit (CBA) et incubées de manière anaérobie pendant 30 à 48 heures à 34 °C ± 1 °C. Deuxièmement, des colonies sélectionnées sont inoculées dans des tubes à essai de 9 mL contenant un milieu de croissance de caséine pendant 6 à 12 heures à 34 °C. Le contenu du tube de 9 mL avec la croissance la plus rapide et la densité la plus élevée (étape de sélection de croissance) est ensuite en outre cultivé à travers deux incubations anaérobies d’intensification (les troisième et quatrième étapes de culture), étant une incubation de 12-30 heures à 34 °C dans une bouteille de culture de semences de 600 mL à 1 L, suivie d’une culture dans un fermenteur de semences de 15 L à 25 L contenant un milieu de croissance de caséine pendant 6 à 16 heures à 35 °C. Ces deux cultures d’intensification sont réalisées dans un milieu nutritif contenant 2 % d’hydrolysat de caséine (un condensé de caséine [protéine de lait]), 1 % d’extrait de levure et 1 % de glucose (dextrose) dans l’eau à pH 7.3.
Les cultures d’intensification sont suivies d’une incubation supplémentaire pendant 60 à 96 heures à 35 °C dans un fermenteur de production à l’échelle commerciale ( à savoir de 115 L) dans un milieu contenant de la caséine sous une atmosphère anaérobie contrôlée. La croissance de la bactérie est généralement complète après 24 à 36 heures, et lors de l’étape de fermentation réalisée pendant environ 65 à environ 72 heures où la plupart des cellules subissent une lyse et libèrent la neurotoxine botulique. On pense que la toxine est libérée par lyse cellulaire et activée par des protéases présentes dans le milieu. Un filtrat du milieu de culture peut être préparé en utilisant un filtre à profondeur de couche unique pour éliminer les impuretés brutes ( à savoir des cellules entières et rompues) obtenant ainsi une solution limpide appelée culture clarifiée. La récolte de neurotoxine botulique à partir de culture clarifiée est réalisée en abaissant le pH de la culture clarifiée à pH 3,5 avec de l’acide sulfurique 3M pour précipiter la toxine brute à 20 °C (précipitation d’acidification). La neurotoxine botulique brute est ensuite concentrée (pour atteindre une réduction volumique) par ultramicrofiltration (microfiltration) (dite MF ou UF) suivie d’une diafiltration (DF). Un filtre de 0,1 µm est utilisé pour l’étape de microfiltration.
L’achèvement de ce processus de Schantz (non-APF) de l’exemple 5, y compris les étapes de récolte et de purification, prend environ deux à trois semaines. La neurotoxine botulique en vrac résultante est une suspension de complexe de toxine botulique de haute qualité de 900 kDa de type A, réalisée à partir de la souche Hall A de Clostridium botulinum avec une puissance spécifique ≥ 2 X 10 7 U/mg, un A 260 /A 278 inférieur à 0,6 et un motif de bandes distinct sur électrophorèse sur gel, et convenant pour le mélange dʼune composition pharmaceutique de toxine botulique.
6.6 . Ex e mple 6: Systèmes et procédés APF, chromatographiques sur colonne pour obtenir une neurotoxine botulinum
Des systèmes et procédés basés sur une chromatographie anion-cation rapide, APF, sont développés pour obtenir une neurotoxine botulinum à rendement élevé et haute pureté. Le procédé de cet exemple 6 à des fins de production (i.e pour obtenir des quantités de gramme de la neurotoxine botulinum finale) utilise un récipient de fermentation de 20 L et prend uniquement 4 à 7 jours, de préférence environ 4 à environ 6 jours, pour compléter toutes les étapes du processus du début de culture à lʼachèvement du stockage final et de la purification de la toxine. Des appareils utilisés dans les systèmes décrits ici sont abordés ci-dessous. Les processus à milieux chromatographiques sont développés et sont présentés ici. Ces procédés à milieux chromatographiques utilisent un, deux ou trois des suivants : chromatographie d’interaction hydrophobe (HIC), chromatographie d’échange d’anions, chromatographie d’échange de cations. Spécifiquement, les procédés de milieux chromatographiques développés comportent : (1) un procédé à un milieu qui utilise HIC ; (2) un procédé à deux milieux qui utilise HIC suivie d’une chromatographie d’échange d’anions ; (3) un procédé à deux milieux qui utilise HIC suivie d’une chromatographie d’échange de cations ; (4) un procédé à trois milieux qui utilise HIC suivie d’une chromatographie d’échange d’anions suivie d’une chromatographie d’échange de cations ; (5) un procédé à trois milieux qui utilise HIC suivie d’une chromatographie d’échange de cations suivie d’une chromatographie d’échange d’anions ; (6) un procédé à un milieu qui utilise une chromatographie d’échange d’anions ; (7) un procédé à deux milieux qui utilise une chromatographie d’échange d’anions suivie d’une HIC ; (8) un procédé à deux milieux qui utilise une chromatographie d’échange d’anions suivie d’une chromatographie d’échange de cations ; (9) un procédé à trois milieux qui utilise une chromatographie d’échange d’anions suivie d’une HIC suivie d’une chromatographie d’échange de cations ; (10) un procédé à trois milieux qui utilise une chromatographie d’échange d’anions suivie d’une chromatographie d’échange de cations suivie d’une HIC ; (11) un procédé à un milieu qui utilise une chromatographie d’échange de cations ; (12) un procédé à deux milieux qui utilise une chromatographie d’échange de cations suivie d’une HIC ; (13) un procédé à deux milieux qui utilise une chromatographie d’échange de cations suivie d’une chromatographie d’échange d’anions ; (14) un procédé à trois milieux qui utilise une chromatographie d’échange de cations suivie d’une HIC suivie d’une chromatographie d’échange d’anions ; et (15) un procédé à trois milieux qui utilise une chromatographie dʼéchange de cations suivie dʼune chromatographie dʼéchange dʼanions suivie dʼune HIC. La HIC élimine les impuretés telles qu’une impureté de 49 kDa (qui s’avère être une isomérase glucose phosphate de cellule hôte, comme discuté ci-après).
L’APF-MCB est faite dans des conditions de GMP en élargissant le RCB en milieu APF sans oxygène (200 mL, réduit pendant un minimum de 12 heures dans une chambre anaérobie) et en culture dans une chambre anaérobie MACS à 34,5 °C ±1 °C (agitée à 60 tr/min) jusqu’à ce que la OD 540 de la culture atteigne 2,5 ± 1,0 AU. Du glycérol stérile est ajouté à la culture résultante à une concentration finale d’environ 20 % après quoi le mélange est transféré dans des cryoflacons à 1 mL/flacon (flacons APF-MCB). Les flacons sont surgelés dans de l’azote liquide, puis stockés en dessous de -135 °C. Une APF-WCB est réalisée en conditions GMP par extension comme ci-dessus. Les banques de cellules APF résultantes sont caractérisées pour une identité, une pureté, une viabilité et une stabilité génétique.
La solution comprenant du zinc citrate commercial est ajoutée après addition de la solution de hyaluronate de sodium de haut poids moléculaire.
Les hydrogels obtenus ont été tamisés puis conditionnés en seringue.
Enfin, les hydrogels obtenus ont été stérilisés à l’autoclave (température au plateau comprise entre 121°C et 135°C avec F0 ≥ 15).
Les résultats des hydrogels observés au microscope sont présentés aux figures 1 et 2. Le microscope utilisé est : Olympus SZX16, le logiciel : OLYMPUS Stream Start.
L’hydrogel obtenu en accord avec le procédé selon l’invention ( – prototype C3) est transparent.
Un précipité est observé dès sortie de la stérilisation de l’hydrogel incorporant du zinc citrate commercial ( ), ce qui n’est pas souhaitable pour un hydrogel.
3.4 Exemple 3 Une étude conduite par le laboratoire d’analyses médicales NAMSA, selon la norme ISO 10993-23 « Biological Evaluation of Medical Devices, Part 23 (2021) : Tests for Irritations », a permis d’évaluer le potentiel irritant des hydrogels selon l’invention après injection intradermique dans des lapins.
Les hydrogels contrôle C1 et selon l’invention C2 testés sont préparés comme suit :
L’hydrogel d’acide hyaluronique réticulé est préparé à partir d’un acide hyaluronique de haut poids moléculaire 1,5MDa et du BDDE dans une solution aqueuse de soude à 0,25M. Le polysaccharide réticulé présente un taux de modification de 4% et une concentration de 23 mg d'acide hyaluronique par gramme de produit. Du tampon phosphate PBS et une solution d’HCl 1N est ensuite ajoutée au polysaccharide réticulé jusqu’à obtenir un pH de 7,3 ± 0,5. L’hydrogel obtenu est homogénéisé au moyen d’un agitateur tridimensionnel. L’hydrogel est par la suite dialysé.
L’hydrogel à base d’un polysaccharide réticulé obtenu est par la suite divisé en 2.
Aux hydrogels obtenus, sont ensuite ajoutées :
- pour l’hydrogel C1 et C2 une solution aqueuse de chlorhydrate de lidocaïne pour obtenir 0,3% en poids de chlorhydrate de lidocaïne par rapport au poids de l’hydrogel final et une solution de hyaluronate de sodium de haut poids moléculaire non réticulé en tant que lubrifiant (même quantité dans les différents mélanges) ;
- pour l’hydrogel C2, une solution comprenant 0,46 mM d’ions zinc et 2,3 mM d’ions citrates.
La solution comprenant du zinc et des ions citrates est préparée comme suit. L'acide citrique (sous forme de poudre) est d'abord dissout dans du tampon phosphate puis le chlorure de zinc est dissout (poudre de ZnCl 2 ) et enfin du NaOH 5M est ajouté pour ajuster le pH à un niveau physiologique. L'objectif est de faire une solution concentrée 100 fois (en zinc et en ions citrates) par rapport à la concentration réelle souhaitée dans l’hydrogel final. Cela permet d'éviter un trop fort effet de dilution de l’hydrogel dû à l'ajout de la solution de zinc et d’acide citrique.
La solution comprenant du zinc et des ions citrates est ajoutée après addition de la solution de hyaluronate de sodium de haut poids moléculaire.
En référence à la , au moins un troisième élément de butée longitudinal 944 du système de butée 940 peut avantageusement s’étendre longitudinalement depuis le joint annulaire hydrostatique 950. Ledit au moins troisième élément de butée longitudinal 944 est apte à entrer en butée longitudinalement avec une portion radiale 932 de la virole annulaire 931 en vis-à-vis longitudinal. Une telle caractéristique permet d’assurer un contact entre la virole et le joint annulaire hydrostatique en cas de mouvement longitudinal relatif entre la virole et l’étage statorique, et en particulier en cas de rupture de l’arbre du rotor. Ainsi, ledit au moins un troisième élément de butée longitudinal peut avantageusement contribuer au freinage du rotor en cas de survitesse.
Ledit au moins un troisième élément de butée longitudinal 944 peut préférablement présenter une forme annulaire.
Les éléments de butée ont été présentés individuellement de manière non-limitative dans la précédente description, l’ensemble pouvant comprendre une combinaison dudit au moins un premier élément de butée radiale, dudit au moins un deuxième élément de butée radiale et dudit au moins un troisième élément de butée longitudinal.
Joint d’étanchéité pour turbomachine Le présent exposé concerne un joint d’étanchéité particulier, ainsi qu’une turbomachine comprenant un tel joint.
La conception des circuits de ventilation d’une turbomachine aéronautique est délicate et représente une perte potentielle de performance.
En effet, la turbomachine est d’autant plus performante qu’elle fonctionne à haute température. Cependant, les matériaux la constituant nécessitent alors un refroidissement plus important. Le refroidissement est généralement réalisé par prélèvement d’une partie de l’air de la veine d’air froid, ce qui nuit à la performance générale.
En outre, le circuit de refroidissement impose de réaliser une architecture complexe pour permettre à l’air de refroidissement d’atteindre les aubes à refroidir depuis l’endroit où il est prélevé.
Afin d’assurer que le circuit d’air ne soit pas alimenté par plus d’air de refroidissement que nécessaire, et ne nuise donc pas outre mesure à la performance de la turbomachine, il est généralement disposé des joints à labyrinthes aux endroits de prélèvement d’air.
De tels joints d’étanchéité permettent d’assurer un passage d’air contrôlé aux endroits où ils sont disposés. L’architecture classique des joints à labyrinthe comprend des léchettes disposées face à des éléments abradables qui présentent une structure alvéolaire de type nids d’abeilles.
Ce type de joint présente néanmoins pour désavantage que l’usure des léchettes par frottement contre les éléments abradables augmente le jeu du joint à l’échelle de la durée de vie du joint, et permet ainsi un passage d’air plus grand, ce qui conduit in fine à un trop grand prélèvement d’air et donc à une perte de performance de la turbomachine.
C’est pourquoi il demeure un besoin pour des joints qui s’usent moins au cours de leurs durées de vie que des joints à labyrinthe.
Elle propose pour cela un joint d’étanchéité configuré pour assurer un jeu prédéfini entre ledit joint et une surface externe d’un rotor monté rotatif autour d’un axe A disposée en regard du joint, l’axe A définissant une direction axiale, le joint s’étendant circonférentiellement autour de l’axe A et comprenant une pluralité de secteurs de joints répartis circonférentiellement autour de l’axe A, chaque secteur de joint comprenant un secteur d’anneau interne relié à un secteur d’anneau externe par un organe de rappel, le joint d’étanchéité étant caractérisé en ce que la surface interne de chaque secteur d’anneau interne comprend au moins une rangée de motifs creusés à partir de la surface interne des secteurs d’anneau interne, chacun des motifs ayant une forme longiligne s’étendant selon une direction oblique par rapport à la direction axiale et étant séparé d’un autre motif par une portion non creusée de la surface interne.
Une telle architecture du joint diffère radicalement d’un joint à labyrinthe.
Le système de butée 940 peut aussi comprendre au moins deux premiers éléments de butée radiale 941, l’un étant porté par la deuxième patte 956 en vis-à-vis radial de la paroi annulaire radialement externe 951 ou inversement, et l’autre étant porté par la première patte 955 en vis-à-vis radial de la paroi annulaire radialement interne 952 ou inversement.
Ledit au moins un premier élément de butée radiale 941 permet de renforcer le contact radial entre le joint annulaire hydrostatique et la virole, et ainsi d’améliorer le freinage de la virole en cas de survitesse. De plus, le premier élément de butée radiale est alors avantageusement directement intégré au joint annulaire hydrostatique, permettant de faciliter sa mise en œuvre du point de vue de la fabrication de l’ensemble. En particulier, le premier élément de butée radiale 941 peut être formé dans la masse du joint annulaire hydrostatique.
Le premier élément de butée radiale 941 peut former une protrusion radiale.
Le premier élément de butée radiale 941 peut présenter une première surface de butée 945 sensiblement parallèle à une face contre laquelle la première surface de butée est apte venir en butée.
Comme représenté sur la , un deuxième jeu J2 entre la première surface de butée 945 et la face contre laquelle la première surface de butée est apte venir en butée, doit être inférieur ou égal au premier jeu J1. Comme représenté sur la un deuxième jeu J2, entre la première surface de butée 945 et la face contre laquelle la première surface de butée est apte à venir en butée et peut valoir 0,2 mm ou plus. Ainsi, lorsque la virole se déforme radialement vers l’extérieur sous l’effet d’une survitesse, le mouvement radialement vers l’extérieur de la paroi annulaire radialement interne du joint est limitée, ce qui permet d’assurer un contact entre cette paroi et la virole 931.
Le premier élément de butée radiale 941 peut s’étendre sur une partie ou sur toute la dimension longitudinale du joint annulaire hydrostatique 950.
En particulier, le système de butée 940 comprend de préférence une pluralité de premiers éléments de butée radiale 941. Par exemple, chacun de la pluralité d’organes élastiquement déformables peut comprendre l’un de la pluralité de premiers éléments de butée radiale 941.
Les figures 44 et 45 représentent des exemples de réalisation de l’ensemble selon le présent document. L’ensemble peut comprendre au moins un deuxième élément de butée radiale 942, 943 formant un doigt s’étendant radialement vers l’intérieur depuis la rangée annulaire d’aubes statoriques. Ledit au moins un deuxième élément de butée radiale 942, 943 est apte à entrer en butée radialement avec la paroi annulaire radialement interne 952 (comme représenté à la ) et/ou avec la deuxième patte 956 de l’un de la pluralité d’organes élastiquement déformables 953 (comme représenté à la ).
Le deuxième élément de butée radiale 942, 943 peut être relié à la cloison radiale 923 à une première extrémité. Le deuxième élément de butée radiale 942, 943 peut comprendre une deuxième extrémité opposée à la première extrémité en vis-à-vis de la face radialement externe de la paroi annulaire radialement interne 952 ou de l’extrémité radialement externe de la deuxième patte 956 de l’un de la pluralité d’organes élastiquement déformables.
Le deuxième élément de butée radiale 942, 943 peut notamment s’étendre sur une partie ou sur toute la dimension longitudinale de la cloison radiale 923.
Le deuxième élément de butée radiale peut traverser radialement au moins une ouverture 957a, 957b, 957b’ aménagée dans le joint annulaire hydrostatique.
En référence à la , le deuxième élément de butée radiale 942 est apte à entrer en butée radialement avec la deuxième patte 956. Une première ouverture 957a est notamment aménagée dans la paroi annulaire radialement externe 951, la première ouverture 957a étant en vis-à-vis de l’extrémité radialement externe de la deuxième patte 56. Ainsi, le deuxième élément de butée radiale 942 traverse la première ouverture 957a.
En référence à la , le deuxième élément de butée radiale 943 est apte à entrer en butée radialement avec la paroi annulaire radialement interne 952, en particulier avec la face radialement externe de la paroi annulaire radialement interne 952. Le deuxième élément de butée radiale 943 traverse une première ouverture 957a aménagée dans la paroi annulaire radialement externe 951, et une deuxième ouverture 957b, 957b’ aménagée dans chaque lame de ladite au moins une lame 954. Le deuxième élément de butée radiale 943 peut notamment être circonférentiellement positionné entre la première patte 955 et la deuxième patte 956, notamment sensiblement au milieu de la première patte 955 et de la deuxième patte 956.
Le deuxième élément de butée radiale 942, 943 peut présenter une deuxième surface de butée 946 sensiblement parallèle à une face contre laquelle la deuxième surface de butée est apte venir en butée.
Un troisième jeu entre la deuxième surface de butée et la face contre laquelle la deuxième surface de butée est apte à venir en butée, peut de préférence être du même ordre de grandeur que le premier jeu. Cette caractéristique technique permet de s’assurer que, lorsque la virole s’étend radialement sous l’effet d’une survitesse, puis que le joint annulaire hydrostatique et la virole entrent en contact, le joint annulaire hydrostatique ne puisse pas suffisamment se déformer radialement pour laisser passer un flux de gaz entre le joint annulaire hydrostatique et la virole.
L’ensemble peut comprendre une pluralité de deuxièmes éléments de butée radiale 942, 943. Par exemple, chacun de la pluralité d’organes élastiquement déformables peut comprendre l’un de la pluralité de deuxièmes éléments de butée radiale.
Exemples de traitement de jus sucré par hydrolyse enzymatique L’invention consiste, dans son deuxième mode de réalisation, à traiter par hydrolyse enzymatique ce type de jus sucré, afin d’hydrolyser les sucres sous forme oligomérique en sucres sous forme monomérique, tout en conservant les sucres monomériques déjà présents dans le jus sucré initial.
Exemple 7 (comparatif) On part d’un jus sucré initial M issu de biomasse prétraitée par imprégnation acide de la biomasse puis explosion à la vapeur, biomasse prétraitée qui est ensuite lavée et séparée en fraction liquide (le jus sucré) et en fraction solide conformément à l’enseignement du brevet FR 3 083 126 précité, auquel on se rapportera pour plus de détails. C’est le jus provenant du flux 6 décrit plus loin.
Succinctement, ce prétraitement est une opération d’imprégnation de biomasse lignocellulosique (ici de la paille de blé) par une liqueur acide, suivie par une opération d’explosion vapeur de la biomasse imprégnée. La biomasse prétraitée subit une opération de séparation liquide/solide à l’issue de l’étape de prétraitement, cette étape de séparation liquide/solide comprenant une étape de contactage entre la biomasse lignocellulosique prétraitée et de l’eau, et une étape de filtration et optionnellement de lavage. Pour obtenir le jus sucré initial M à traiter selon l’invention, 550 kg de biomasse prétraitée sont mélangés avec 1010 kg d’eau, puis filtrés puis pressés. Après filtration et pressage, 885 kg d’un jus M, appelé aussi hydrolysat C5, est obtenu. Le prétraitement se déroulant dans des conditions acides, ce jus a un pH de 1,7.
La concentration en composés d’intérêt de ce jus sucré initial M est donnée dans le tableau 3 ci-dessous, avec des concentrations exprimées en g par kg de jus. A noter qu’il est possible que la composition contienne des impuretés autres, qu’on n’a pas cherché à analyser, par exemple du type sel (minéral) ou acide, 5-HMF et furfural, dans de (très) faibles teneurs. La teneur en matière sèche dans le jus sucré initial est de 6,9% poids. Le jus M contient 38,4 g/kg de sucres glucose et xylose. Les concentrations des sucres minoritaires, comme l’arabinose, le galactose et le mannose pour cette biomasse, ne sont pas indiquées.
Concentration Jus initial M Type de sucre/composé Xylose g/kg 31,7 Sucre C5 Xylose potentiel g/kg 40,3 Xylose – oligomère g/kg 8,5 Forme oligomérique du xylose Xylose – oligomère % poids xylose potentiel 21 Glucose g/kg 6,7 Sucre C6 Glucose potentiel g/kg 9,3 Glucose -oligomère g/kg 2,7 Forme oligomérique du glucose Glucose -oligomère % poids glucose potentiel 29 Sucres -oligomère % poids sucres potentiels 23 Formes oligomériques du xylose et du glucose
Ce jus est le jus témoin, qui sera traité selon l’invention dans les exemples suivants.
Exemple 8 (selon l’invention) On part du jus sucré initial M défini à l’exemple 7. On le traite selon l’invention avec les conditions opératoires suivantes : Le jus M initial est à pH 1,7. Il alimente un réacteur agité, la réaction est opérée en batch. On y ajoute une solution aqueuse de KOH en quantité suffisante pour augmenter le pH du jus jusqu’à un pH d’environ 4,8. Le jus est ensuite traité en ajoutant 0,1 g protéines /kg de jus par l’ajout d’un cocktail enzymatique produit par Trichoderma reesei et ayant une concentration en protéines de 35,8 g/kg (mesure par la méthode Kjeldhal), une activité FPase (de 0,8 IU/mg),une activité beta-glucosidase (de 35,6 IU/mg) et une activité xylanase , puis en agitant le mélange pendant 24 heures à 50°C.