INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Les amines grasses sont principalement obtenues à partir d’acides carboxyliques gras. Les acides gras de départ pour obtenir des amines grasses peuvent être notamment choisis parmi les acides laurique, myristique, pentadécylique, palmitique, margarique, stéarique, nonadécylique, arachidique, hénéicosanoïque, béhénique, tricosanoïque, lignocérique, pentacosanoïque, cérotique, heptacosanoïque, montanique, nonacosanoïque, mélissique, hentriacontanoïque, lacéroïque ou des acides gras insaturés tels que l’acide palmitoléique, oléique, érucique, nervonique, linoléique, alinolénique, gamma-linolénique, di-homo-gamma-linolénique, arachidonique, éicosapentaénoïque, docosahexaénoique.
Les acides gras préférés peuvent être issus de l’hydrolyse des triglycérides présents dans les huiles et graisses végétales et animales, telles que l’huile de coprah, de palme, d’olive, d’arachide, de colza, de tournesol, de soja, de coton, de lin, de ricin, de maïs, de carthame, de noix de coco, de suif….
Les huiles naturelles peuvent avoir été génétiquement modifiées de façon à enrichir leur teneur en certains acides gras. A titre d’exemple, on peut citer l’huile de colza ou l’huile de tournesol oléique.
Dans un mode de réalisation, les monoamines ou polyamines grasses utilisées dans un procédé selon l’invention peuvent être obtenues à partir de ressources naturelles, végétales ou animales.
Une monoamine ou polyamine grasse peut contenir plusieurs chaînes grasses issues d’acides gras différents.
Selon un mode de réalisation, la ou les polyamines grasses comprennent au moins une triamine grasse de formule (III) :
Exemple 9 : Procédé de production de sucres (comparatif) :
Une biomasse lignocellulosique 1 contenant 24% poids de xylane et 33% poids de cellulose et dont la teneur en matière sèche est de 88% poids subit un prétraitement 2 qui consiste en : - une imprégnation par une solution aqueuse d’acide sulfurique : l’imprégnation est effectuée en présence de liqueur acide chauffée à 80°C. La concentration en acide dans la liqueur est de 2,5% poids (exprimée en % poids d’H 2 SO 4 ). - l’introduction de cette biomasse imprégnée au sein d’un réacteur sous pression chauffé à 185°C avec injection de vapeur, pendant un temps de séjour de 5 min. - une détente à pression atmosphérique libérant de la vapeur et une biomasse prétraitée ayant un taux de matière sèche de 44% poids. Les conversions sont indiquées dans le tableau 5 ci-dessous : Avancement des réactions Cellulose vers glucose monomère % poids 8,89 Cellulose vers glucose oligomère % poids 2,48 Cellulose vers 5-HMF % poids 0,60 Xylane vers xylose monomère % poids 44,9 Xylane vers xylose oligomère % poids 5,12 Xylane vers furfural % poids 22,0
La concentration en composés d’intérêt de ce jus sucré est donnée dans le tableau 6 ci-dessous, avec des concentrations exprimées en g par kg de jus. A noter qu’il est possible que le jus contienne des impuretés autres, qu’on n’a pas cherché à analyser, par exemple du type sel (minéral) ou acide, dans de (très) faibles teneurs. La teneur en matière sèche dans le jus sucré est de 6,9% poids. Le jus contient 43,0 g/kg de sucres glucose et xylose. Les concentrations des sucres minoritaires, comme l’arabinose, le galactose et le mannose pour cette biomasse, ne sont pas indiquées. Concentration Jus sucré 6 Type de sucre/composé Xylose g/kg 33,0 Sucre C5 Xylose – oligomère g/kg 3,3 Forme oligomérique du xylose Glucose g/kg 10,0 Sucre C6 Glucose -oligomère g/kg 2,5 Forme oligomérique du glucose Furfural g/kg 2,7 Produits de dégradation des sucres 5-HMF g/kg 0,55 Produits de dégradation des sucres
Le rendement en sucres monomériques C5 et C6 dans le jus par rapport aux sucres potentiels C5 et C6 présents dans la biomasse est de 17,4%. Le rendement en sucres monomériques C5 par rapport aux sucres C5 potentiels présents dans la biomasse lignocellulosique est de 33,8% poids, et le rendement en sucres monomériques C6 par rapport aux sucres C6 potentiels présents dans la biomasse lignocellulosique est de 6,7% poids.
La concentration en composés d’intérêt dans le jus sucré 20 est donnée dans le tableau 7 ci-dessous, avec des concentrations exprimées en g par kg de jus. A noter qu’il est possible que le jus contienne des impuretés autres, qu’on n’a pas cherché à analyser, par exemple du type sel (minéral) ou acide, dans de (très) faibles teneurs. La teneur en matière sèche dans le jus sucré est de 9,3% poids. Les concentrations des sucres minoritaires, comme l’arabinose, le galactose et le mannose pour cette biomasse, ne sont pas indiquées. Concentration Jus sucré 20 Type de sucre/composé Xylose g/kg 7,6 Sucre C5 Glucose g/kg 78,6 Sucre C6 Furfural g/kg 0,6 Produits de dégradation des sucres 5-HMF g/kg 0,1 Produits de dégradation des sucres
Ainsi, en rassemblant les deux jus de sucres obtenus, le jus 6 et le jus 20, le rendement en sucres monomériques par rapport aux sucres potentiels présents dans la biomasse est de 53,8% poids. Le rendement en sucres monomériques C5 par rapport aux sucres C5 potentiels présents dans la biomasse lignocellulosique est de 41,9% poids, et le rendement en sucres monomériques C6 par rapport aux sucres C6 potentiels présents dans la biomasse lignocellulosique est de 61,5% poids.
Exemple 10 : Procédé de production de sucres - Selon l’invention
Une biomasse lignocellulosique 1 contenant 24% poids de xylane et 33% poids de cellulose et dont la teneur en matière sèche est de 88% poids subit un prétraitement 2 qui consiste en : - une imprégnation par une solution aqueuse d’acide sulfurique : l’imprégnation est effectuée en présence de liqueur acide chauffée à 80°C. La concentration en acide dans la liqueur est de 2,5% poids (exprimée en % poids d’H 2 SO 4 ). - l’introduction de cette biomasse imprégnée au sein d’un réacteur sous pression chauffé à 185°C avec injection de vapeur, pendant un temps de séjour de 5 min. - une détente à pression atmosphérique libérant de la vapeur et une biomasse prétraitée ayant un taux de matière sèche de 44% poids. Les conversions sont indiquées dans le tableau 8 ci-dessous : Avancement des réactions Cellulose vers glucose monomère % poids 8,89 Cellulose vers glucose oligomère % poids 2,48 Cellulose vers 5-HMF % poids 0,60 Xylane vers xylose monomère % poids 44,9 Xylane vers xylose oligomère % poids 5,12 Xylane vers furfural % poids 22,0
Dans un mode de réalisation, l’organe de distanciation est une excroissance calibrée disposée dans la direction axiale.
Dans un mode de réalisation, l’organe de redressement d’air comprend un organe de distanciation solidaire de l’organe de redressement d’air.
Dans un mode de réalisation, l’ensemble d’étanchéité décrit plus haut est disposé radialement entre la surface externe d’un rotor monté rotatif autour de l’axe A et une partie fixe d’un carter de turbomachine.
Dans un mode de réalisation, la partie fixe d’un carter de turbomachine comprend un renfoncement radial.
Un tel renfoncement radial permet une disposition facilitée du joint d’étanchéité, ce dernier pouvant être disposé simplement en butée contre le renfoncement radial du carter.
Dans un mode de réalisation, l’ensemble d’étanchéité peut être disposé radialement entre une partie fixe d’un carter de turbomachine et la surface externe du rotor monté rotatif autour de l’axe A, et dans lequel le joint d’étanchéité est disposé axialement entre un renfoncement radial de la partie fixe du carter de turbomachine et l’organe de distanciation de l’organe de redressement d’air.
Ce mode de réalisation assure une mise en place simplifiée de l’ensemble d’étanchéité.
Dans un mode de réalisation, le dispositif de redressement d’air peut comprendre un organe de distanciation qui permet une séparation axiale entre la sortie du dispositif de redressement d’air et le joint d’étanchéité.
Dans un tel mode de réalisation, l’organe de distanciation a de préférence une longueur axiale égale à la longueur souhaitée entre l’aval de l’organe de redressement d’air et l’entrée du joint d’étanchéité.
Cela permet une disposition plus aisée de l’organe de redressement d’air, car ce dernier peut alors être disposé en mettant en butée l’organe de distanciation contre le joint d’étanchéité.
Dans un mode de réalisation, le joint d’étanchéité peut être disposé axialement entre un organe de distanciation d’un organe de redressement d’air décrit plus haut, et un renfoncement radial ménagé dans la partie fixe du carter.
Dans un mode de réalisation identique ou différent, le dispositif de redressement d’air peut comprendre une bride de fixation radialement externe qui est montée contre une bride radiale externe de la portion fixe du carter de turbomachine.
Un tel mode de réalisation permet une disposition aisée de l’organe de redressement d’air dans une turbomachine, sa disposition par rapport à la portion fixe du carter étant réalisée en mettant en butée la bride de fixation radialement externe du dispositif de redressement d’air contre la bride de fixation radialement externe de la portion fixe du carter.
Dans un mode de réalisation, l’ensemble d’étanchéité peut être disposé radialement entre une partie fixe d’un carter de turbomachine et une surface externe du rotor monté rotatif autour de l’axe A et dans lequel l’organe de redressement d’air comprend une bride de fixation radialement externe qui est montée contre une bride radiale externe de la portion fixe du carter de turbomachine.
Dans un mode de réalisation, la distance entre l’extrémité radialement interne de l’organe de redressement d’air et la surface externe du rotor monté rotatif autour de l’axe A peut être supérieur ou égale à 2,0 mm.
Une toxine de Botulinum de type A a été approuvée par la Food and Drug Administration (FDA) des États-Unis pour le traitement du blépharospasme essentiel, du strabisme et du spasme hémifacial chez les patients de plus de douze ans, de la dystonie cervicale, des rides de la ligne glabellaire (visage) et pour le traitement de l’hyperhydrose. Une composition pharmaceutique contenant de la toxine de botulinum de type A disponible dans le commerce est commercialisée sous la marque BOTOX® (onabotulinumtoxinA), disponible commercialement auprès de Allergan, société AbbVie, North Chicago, Illinois, États-Unis. BOTOX® contient un complexe de toxine de botulinum de 900 kDa de type A purifié, de l’albumine sérique humaine, et du chlorure de sodium conditionné sous forme stérile, séchée sous vide. Le complexe de toxine de botulinum de type A dans BOTOX® est réalisé à partir d’une culture de la souche Hall de Clostridium botulinum amenée à croître dans un milieu contenant de la caséine amine N-Z et de l’extrait de levure ( i.e. , un procédé non APF) et purifiée à partir de la solution de culture par une série d’étapes de précipitation (y compris la précipitation acide) à un complexe cristallin constitué de la protéine de toxine active de haut poids moléculaire et dʼune protéine dʼhémagglutinine associée. Le complexe cristallin est de nouveau dissous dans une solution contenant une solution saline et de l’albumine et filtré stérile à l’aide d’un filtre irradié gamma (0,2 microns) avant séchage sous vide. BOTOX® peut être ré-constitué avec une solution saline stérile non conservée avant injection intramusculaire. Chaque flacon de 100 unités de BOTOX® est constitué d’environ 5 ng de complexe de toxine de botulinum de type A, 0,5 mg d’albumine sérique humaine, et 0,9 mg de chlorure de sodium, sous forme séchée sous vide et destinée à reconstitution avec une solution saline normale stérile sans conservateur (injection de chlorure de sodium 0,9 %).
Plusieurs étapes sont requises pour fabriquer les compositions de BoNT/a décrites ici appropriées pour une administration à un humain ou un animal pour un but thérapeutique, diagnostic, de recherche ou cosmétique. Dans un mode de réalisation, ces étapes peuvent comporter l’obtention d’une neurotoxine de Clostridium botulinum de sérotype A (BoNT/A) avec à la fois des formes oxydées et non oxydées puis le mélange de la BoNT/A purifiée. Une première étape peut être de cultiver des bactéries de Clostridial ( par ex. , la souche de Hall de Clostridium botulinum ), typiquement sur des plaques d’agar, dans un environnement propice à la croissance bactérienne, comme dans une atmosphère anaérobie chaude. L’étape de culture à l’aide de plaques d’agar permet d’obtenir des colonies de Clostridial à morphologie et autres caractéristiques souhaitables. L’étape de culture peut également être effectuée avec des bactéries provenant d’une cellule active exempte de produit d’origine animale ( voir , par ex. , exemple 6). Dans une deuxième étape, les colonies de Clostridial cultivées sélectionnées peuvent être fermentées dans un milieu approprié. Après une certaine période de fermentation les bactéries de Clostridial réalisent typiquement une lyse et libèrent la toxine Clostridial ( e. g ., BoNT/A) dans le milieu. Troisièmement, la toxine peut être purifiée à partir du milieu de culture pour obtenir une substance médicamenteuse de toxine BoNT/A en vrac ou brute. De préférence, la substance médicamenteuse de toxine BoNT/A n’a pas été soumise à une précipitation ( par ex. , précipitation avec éthanol froid, acide chlorhydrique et/ou sulfate d’ammonium), par ex. , lors de la purification. On préfère également la substance médicamenteuse de toxine BoNT/A qui a été purifiée par chromatographie sur colonne, en particulier la substance médicamenteuse de toxine BoNT/A produite par purification en utilisant une colonne de chromatographie d’interaction hydrophobe (HIC). Lorsque plusieurs colonnes de chromatographie sont utilisées pour purifier la BoNT/A, il est préférable que la toxine soit purifiée à l’aide d’un procédé dans lequel une colonne HIC est utilisée avant toutes autres colonnes de chromatographie. Il est préférable que la substance médicamenteuse BoNT/A soit produite par un procédé qui se qualifie pour une utilisation sous les bonnes régulations pratiques de fabrication promulguées par la Food and Drug Administration des États-Unis.
Dans certains modes de réalisation, les compositions de BoNT/A décrites ici sont obtenues en utilisant un procédé sensiblement, essentiellement ou totalement, exempt de protéine d’origine animale (APF). Le procédé peut comprendre les étapes séquentielles suivantes : culture de bactéries de Clostridium botulinum ( par ex. , la souche de Hall de Clostridium botulinum ) dans un milieu de culture essentiellement APF ; la fermentation des bactéries de Clostridium botulinum du milieu de culture dans un milieu de fermentation sensiblement APF, la récolte du milieu de fermentation en éliminant les débris cellulaires présents dans le milieu de fermentation par filtration ou centrifugation ; la concentration du milieu de fermentation récolté par filtration, telle que par ultrafiltration (UF) ; la dilution du milieu de fermentation concentré en ajoutant un tampon. Après dilution avec le tampon, un procédé chromatographique sensiblement APF peut être effectué pour obtenir un complexe BoNT/A biologiquement actif hautement purifié. Dans certains modes de réalisation, le procédé APF décrit ici n’implique pas l’utilisation d’un inhibiteur de protéase. Dans certains modes de réalisation, le procédé APF décrit ici n’implique pas l’utilisation de chlorhydrate de benzamidine. Dans un mode de réalisation, les compositions de BoNT/A décrites ici sont obtenues en utilisant le procédé APF décrit dans l'exemple 1.
Le milieu de culture et/ou de fermentation essentiellement APF peut contenir un produit protéique obtenu à partir de levure ( par ex. , un extrait de levure ou un concentré d’extrait de levure), ou d’un légume ( par ex. , blé, soja, malt, lupins, maïs, graine de coton, graine de L. campestri , etc.). Le milieu de culture et/ou de fermentation APF peut comprendre en outre une source de carbone ( par ex. , glucose) et/ou source de sel ( par ex. , du chlorure de sodium). Dans un mode de réalisation, le milieu utilisé pour la fermentation de Clostridium botulinum est exempt de produits dérivés d’origine animale et comprend environ 10 à 100 g/L ( par ex. , de 20 à 60 g/L) de soja hydrolysé (Hy-Soy), environ 7,5 g/L de glucose, et 5,0 g/L de NaCl, comme décrit dans le brevet U.S. No. 7 354 740. Dans un mode de réalisation, le milieu de fermentation peut comprendre 3 % p/v ou 5 % p/v de Hysoy ; 1 % p/v de levure de Hy ; et 1 % p/v de glucose, comme décrit dans le brevet U.S. No. 8 129 139. Dans un mode de réalisation, le milieu de fermentation APF peut comprendre 3,25 % p/v de peptone de soja de type II, 1,2 % p/v d’extrait de levure, 1,5 % p/v de glucose, pH ajusté à 7,3 en utilisant de l’hydroxyde de sodium, comme illustré dans l’exemple 1 ci-dessous.
Dans certains modes de réalisation, les compositions de BoNT/A décrites ici sont obtenues sous une condition de choc à froid, i.e. , à une température inférieure à la température typique de fermentation ( i.e. , à environ 35 ± 1 °C) pendant une courte période de temps au sein du processus de fermentation. Dans certains modes de réalisation, les compositions de BoNT/A sont obtenues dans des conditions de choc à froid d’environ 33 °C, 30 °C, 27 °C, 25 °C, 22 °C, 20 °C, 19 °C, 18 °C, 17 °C, 16 °C ou 15 °C. Les conditions de choc à froid peuvent durer pendant toute période de temps au sein du processus de fermentation entier, par exemple pendant environ 2 heures, 5 heures, 8 heures, ou 10 heures dans un processus de fermentation de 72 heures. Les conditions de choc à froid peuvent se produire une fois ou plusieurs fois lors du processus de fermentation. Dans certains modes de réalisation, les compositions de BoNT/A décrites ici sont obtenues en utilisant un choc à froid d’environ 15 °C à 20 °C ( par ex. , environ 15 °C, 16 °C, 17 °C, 18 °C, 19 °C, ou 20 °C) pendant environ 5 heures ( par ex. , de la 13 ème à la 17 ème heure dans un processus de fermentation de 72 heures) pendant la fermentation.
Dans certains modes de réalisation, les compositions de BoNT/A décrites ici sont obtenues sous une condition froide continue, i.e. , à une température inférieure en continu ( par ex. , environ 25 °C) que la température typique de fermentation ( i.e. , à environ 35 ± 1 °C) pendant toute la durée de fermentation. Dans certains modes de réalisation, les compositions de BoNT/A sont obtenues sous une condition froide continue à environ 33 °C, 30 °C, 27 °C, 25 °C, 22 °C, 20 °C, 19 °C, 18 °C, 17 °C, 16 °C, ou 15 °C. Dans certains modes de réalisation, les compositions de BoNT/A décrites ici sont obtenues par fermentation d’une culture de Clostridium botulinum à environ 25 °C pendant environ 160 heures.
Selon un aspect, la présente invention a pour objet un procédé de production d’une composition comprenant un complexe de BoNT/A de 900 kDa (tel que l’onabotulinumtoxinA), ledit procédé comprenant l’incubation d’une culture de bactéries de Clostridium botulinum ( par ex. , bactéries de souche de Hall de Clostridium botulinum de type A) dans un fermenteur de production à une température qui est inférieure à 35 °C pendant une période de temps.
Dans certains modes de réalisation, la température est d’environ 33 °C, 32 °C, 31 °C, 30 °C, 29 °C, 28 °C, 27 °C, 26 °C, 25 °C, 24 °C, 23 °C, 22 °C, 21 °C, 20 °C, 19 °C, 18 °C, 17 °C, 16 °C, ou 15 °C. Dans certains modes de réalisation, la température est d’environ 15 °C à 20 °C ( par ex. , environ 15 °C, 16 °C, 17 °C, 18 °C, 19 °C, ou 20 °C). Dans certains modes de réalisation, la température est d’environ 15 °C. Dans certains modes de réalisation, la température est d’environ 20 °C. Dans certains modes de réalisation, la température est d’environ 25 °C.
Dans certains modes de réalisation, le procédé comprend, dans l’ordre suivant : (a) l’incubation de la culture de bactéries de Clostridium botulinum dans le fermenteur de production à 35 °C pendant environ 12 heures ; (b) le réglage de la température à environ 15 °C -20 °C ( par ex. , environ 15 °C, 16 °C, 17 °C, 18 °C, 19 °C, ou 20 °C) à la fin de l’étape (a) ; (c) la culture à la température réglée jusqu’à environ 5 heures après l’étape (a) ; (d) le réglage de la température à 35 °C à la fin de l’étape (c) ; et (e) la culture à 35 °C jusqu’à environ 55 heures après l’étape (c).
Le complexe de BoNT/A obtenu à partir des procédés de fermentation et de purification APF décrits ici est biologiquement actif et hautement purifié. Dans un mode de réalisation, les compositions de BoNT/A décrites ici comprennent moins de 3 % ( par ex. moins de 2,5 %, moins de 2,0 %, moins de 1,8 %, moins de 1,5 %, moins de 1,2 %, moins de 1,0 %, moins de 0,8 %, moins de 0,6 %, moins de 0,5 %, moins de 0,4 %, moins de 0,3 %, moins de 0,2 % ou moins de 0,1 %) de la protéine de cellule hôte. Le taux de la protéine de la cellule hôte peut être évalué en utilisant des procédés connus dans la technique, par ex. en utilisant la chromatographie liquide haute Performance dʼexclusion de taille (SEC-HPLC) ou la SEC-HPLC en conjugaison avec la diffusion de lumière laser à angles multiples (MALLS) comme décrit dans Lietzow et al. (2008) Protéine J 27:420-425. Dans un mode de réalisation, le pourcentage de la protéine de cellule hôte dans les compositions de BoNT/A décrites ici est déterminé en utilisant la SEC-HPLC, par ex. en utilisant le procédé SEC-HPLC tel qu’illustré dans l’exemple 3.
I.1 Méthode analytique d’évaluation de la présence des lipides polaires et la chlorophylle :
Une méthode HPLC-DAD-CAD (DAD= détecteur à barette de diode UV, CAD= détecteur Corona) a été développée pour analyser en une seule fois la présence de lipides polaires et de chlorophylle dans les extraits évalués. Cette méthode analytique utilise une colonne phase inverse C18 et un gradient de polarité décroissant obtenu comme suit :
Voie A : isopropanol + 0,1% acide formique
Voie B : acétonitrile + 0,1% acide formique
Voie C : H2O MQ + 0,1% acide formique
Voie D : Acétonirile/H20 MQ 80/20 Time Flow %A %B %C %D - 0.8 0 2 98 0 5 0.8 0 2 98 0 20 0.8 0 100 0 0 25 0.8 0 100 0 0 35 0.8 80 20 0 0 40 0.8 80 20 0 0 45 0.8 0 100 0 0 50 0.8 0 2 98 0 55 0.8 0 2 98 0
Critère d’évaluation des extraits selon la méthode ci-dessous : Présence lipides polaires :
Détection CAD, temps de rétention entre 20 et 38 min
on considère que la présence des lipides polaires est d'intérêt à partir d’une intensité de 20 pA Présence de chlorophylle :
Détection DAD (650 nm), temps de rétention entre 30 et 42 min; Identification via spectre UV caractéristique (λmax = 430 et 660 nm)
On considère l’absence de chlorophylle lorsque l’intensité du pic chromatographique de la chlorophylle est inférieur ou égal à une valeur de 0,02 AU (seuil au delà duquel on considère que les traces de chlorophylle n'ont pas d’impact sur la couleur du produit)
I.2 Analyse colorimétrique :
Les extraits obtenus sont analysés par colorimétrie en suivant le paramètre “ a *” selon l’espace colorimétrique CIELAB. Le paramètre “ a *” correspond à la valeur sur l’axe vert (valeur négative) -> rouge (valeur positive).
Ainsi la présence de notes de couleur vertes liées à la chlorophylle visibles à l’œil nu se manifeste par un paramètre “ a *” supérieur ou égale à -5.
II. Exemples :
Exemple 1 : Extraction selon le procédé de l’invention de l’algue Himanthalia elongata (famille: Himanthaliaceae; ordre: Fucales; classe: Phaeophyceae)
Dans un mode de réalisation, le niveau d'oxydation en position M550 de SEQ ID NO : 3 est d'environ 0,3 % à environ 0,5 % ( par ex. , environ 0,3 %, environ 0,35 %, environ 0,4 %, environ 0,45 %, ou environ 0,5 %) et le niveau d’oxydation en position M1004 de SEQ ID NO : 3 est d'environ 1 % à environ 2 % ( par ex. , environ 1 %, environ 1,1 %, environ 1,2 %, environ 1,3 %, environ 1,4 %, environ 1,5 %, environ 1,6 %, environ 1,7 %, environ 1,8 %, environ 1,9 % ou environ 2 %).