INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Les méthodes enzymatiques développées ces dernières années sont basées sur le même principe que la méthode miniaturisée par microplaques précédente. Chacune des deux bactéries possède une enzyme qui lui est quasi-spécifique : la β-D-glucuronidase pour E. coli et la β-D-glucosidase pour les entérocoques. Ces enzymes ont la capacité d’hydrolyser des composés artificiels en libérant un produit coloré ou fluorescent qui permet une quantification visuelle des bactéries initialement présentes dans l’échantillon. De nombreux protocoles et dispositifs de détection ont été développés ces dernières années en se basant sur ce principe. Les délais de réponse de ces différents dispositifs sont alors plus courts que ceux observés pour la technique miniaturisée par microplaques mais restent toutefois trop importants pour permettre une gestion active des eaux de baignade. Ces délais sont en effet compris entre 12h à 24h selon la méthode utilisée pour obtenir un résultat <100 bactéries/100ml.
Différentes méthodes ont été développées pour réduire encore plus le temps d’analyse. En particulier, on connait les techniques dites de réaction de polymérisation en chaîne, généralement abrégées PCR, de l’anglais Polymerase Chain Reaction , qui permettent d’obtenir des résultats rapides et pertinents.
La méthode de PCR quantitative, dite qPCR, est basée sur la détection et la quantification d’une section de gène de la bactérie cible. La quantification des bactéries est réalisée grâce à des molécules ou sondes fluorescentes qui sont libérées dans la même proportion que les gènes ciblés après des cycles d’amplification. C’est une méthode sensible, spécifique, détectant également les bactéries présentant une activité glucuronidasique ou glucosidasique réprimée ou non exprimée, et nécessitant moins de 3 heures pour donner un résultat.
Toutefois le problème de ce type de méthode est qu’elle n’est pas discriminante vis-à-vis des différents états physiologiques des bactéries qui peuvent être rencontrés dans une population bactérienne : bactéries cultivables, viables, sénescentes et mortes.
La méthode RT-qPCR (Reverse Transcriptase - quantitative Polymerase Chain Reaction) quant à elle repose sur l’extraction et l’amplification d’acide ribonucléique (ou ARN), l’ARN étant plus représentatif de la viabilité cellulaire que ne l’est l’ADN. La méthode consiste en une extraction de l’ARN cible, puis sa retranscription en brin d’ADN complémentaire. Ce brin d’ADN complémentaire, fréquemment abrégé ADNc, sert par la suite de matrice à une réaction de PCR quantitative classique. Il s’agit d’une méthode sensible et spécifique qui ne détecte que les bactéries viables et qui permet de donner un résultat sur les deux bactéries réglementaires E. coli et entérocoques fécaux en moins de 3 heures et ce jusqu’à une quarantaine d’échantillons en simultané.
Toutefois la méthode RT-qPCR a pour inconvénient de ne pas discriminer les populations bactériennes viables cultivables et viables non-cultivables, alors qu’il est utile de ne connaitre que la population viable cultivable dans certains contextes réglementaires.
le plus préférentiellement, les amino silicones sont des copolymères d’aminoéthylaminopropylméthylsiloxane terminé par triméthylsilyle, le plus préférentiellement des copolymères d’aminoéthylaminopropylméthylsiloxane terminé par triméthylsilyle-diméthylsiloxane. Le radical amino A peut être partiellement ou totalement protoné en ajoutant des acides à l’amino silicone, dans lequel les formes salines du radical amino sont obtenues. Des exemples d’acides sont les acides carboxyliques comportant 3 à 18 atomes de carbone qui peuvent être linéaires ou ramifiés, tels que l’acide formique, l’acide acétique, l’acide propionique, l’acide butyrique, l’acide pivalique, l’acide sorbique, l’acide benzoïque, l’acide salicylique. Les acides sont de préférence utilisés en des quantités de 0,1 à 2,0 mol pour 1 mol de radical amino A dans l’amino silicone de formule (B).
- mélange d’émulsifiants L’émulsion huile dans l'eau comprend en outre un mélange d’émulsifiants comprenant un ou plusieurs émulsifiants non ioniques. Il peut facultativement comprendre un ou plusieurs tensioactifs cationiques.
Il peut être fait mention des alcools, des α-diols et alkylphénols (en C 1 ﻿ -20 ), ces composés étant des polyéthoxylés et/ou polypropoxylés et/ou polyglycérolés, le nombre de groupes oxyde d’éthylène et/ou oxyde de propylène allant éventuellement de 1 à 100, et le nombre de groupes glycérol allant éventuellement de 2 à 30 ; ou en variante des composés comprenant au moins une chaîne grasse comprenant de 8 à 30 atomes de carbone et en particulier de 16 à 30 atomes de carbone.
dans laquelle : R 1 représente un radical alkyle ou alcényle linéaire ou ramifié comprenant de 6 à 24 atomes de carbone, et notamment de 8 à 18 atomes de carbone, ou un radical alkylphényle dont le radical alkyle linéaire ou ramifié comprend de 6 à 24 atomes de carbone, et notamment de 8 à 18 atomes de carbone ; R 2 représente un radical alkylène comprenant de 2 à 4 atomes de carbone, G représente un motif sucre comprenant 5 à 6 atomes de carbone, t désigne une valeur allant de 0 à 10 et de préférence 0 à 4, v désigne une valeur allant de 1 à 15 et de préférence 1 à 4.
De préférence, les tensioactifs alkylpolyglycoside sont des composés de la formule décrite ci-dessus dans laquelle : R 1 désigne un radical alkyle saturé ou insaturé, linéaire ou ramifié, comprenant de 8 à 18 atomes de carbone, R 2 représente un radical alkylène comprenant de 2 à 4 atomes de carbone, t désigne un nombre allant de 0 à 3, et de préférence égal à 0, G désigne le glucose, le fructose ou le galactose, de préférence le glucose ; le degré de polymérisation, à savoir la valeur de v, allant éventuellement de 1 à 15 et de préférence de 1 à 4 ; le degré de polymérisation moyen étant plus particulièrement compris entre 1 et 2.
Les liaisons glucoside entre les motifs sucre sont généralement de type 1-6 ou 1-4, de préférence de type 1-4. De préférence, le tensioactif alkyl(poly)glycoside est un tensioactif alkyl(poly)glucoside. Les alkyl(poly)glycosides 1,4 en C 8 /C 16 et en particulier les décyl glucosides et les caprylyl/caprylyl glucosides, sont tout particulièrement préférés.
De préférence, la quantité totale de polymère(s) vinylique(s) cationique(s) ou amphotère(s) d), choisie parmi (i) les copolymères halogénure de (méth)acrylamido(C 1 -C 6 alkyl)tri(C 1 -C 4 alkyl) d’ammonium/(méth)acrylamide copolymères, de préférence copolymères chlorure de (méth)acrylamidopropyltrimonium/(méth)acrylamide, et plus préférentiellement copolymères chlorure d’acrylamidopropyltrimonium/acrylamide, (ii) les copolymères de sels de diallyldiméthylammonium (par exemple chlorure) et d’acrylamide, et (iii) et leurs mélanges, avantageusement va de 0,01 à 5 % en poids, plus préférentiellement de 0,02 à 4 % en poids, encore plus préférentiellement de 0,05 à 3 % en poids, mieux de 0,1 à 2 % en poids, et encore mieux de 0,2 à 1 % en poids, par rapport au poids total de la composition.
L’émulsion huile dans l’eau spécifique La composition selon la présente invention comprend une émulsion huile dans l'eau (ou silicone dans l'eau) ayant une taille de particule D50 inférieure à 350 nm et contenant : un mélange de silicone comprenant (i) un dialkylpolysiloxane terminé par trialkylsilyle ayant une viscosité de 40 000 à moins de 100 000 mPa.s à 25 °C et (ii) un amino silicone ayant une viscosité de 1 000 à 15 000 mPa.s à 25 °C et un indice d’amine de 2 à 10 mg de KOH par gramme d'amino silicone, un mélange d’émulsifiants comprenant un ou plusieurs émulsifiants non ioniques, dans laquelle le mélange d’émulsifiants a une valeur HLB de 10 à 16, et de l'eau.
Dans l’émulsion huile dans l’eau, ou émulsion silicone dans l’eau, une phase liquide (la phase dispersée) est dispersée dans l’autre phase liquide (la phase continue) ; dans la présente invention, le mélange de silicone, ou phase de silicone, est dispersé dans la phase aqueuse continue. dialkylpolysiloxanes terminés par trialkylsilyle
Le mélange de silicone comprend un dialkylpolysiloxane terminé par trialkylsilyle, de préférence de formule (A) :
dans laquelle : R’, identiques ou différents, sont un radical hydrocarboné monovalent comportant de 1 à 18 atomes de carbone, de préférence de 1 à 6 atomes de carbone, mieux encore de 1 à 3 atomes de carbone, plus préférentiellement le méthyle, et p est un entier de 500 à 2 000, de préférence de 1 000 à 2 000 ;
Les dialkylpolysiloxanes terminés par trialkylsilyle (ou bloqués en extrémité ou en position α,ω) selon l’invention ont une viscosité de 40 000 à moins de 100 000 mPa.s (100 000 exclus) à 25 °C, de préférence une viscosité de 40 000 à 70 000 mPa.s à 25 °C, plus préférentiellement une viscosité de 51 000 à 70 000 mPa.s à 25 °C.
Les dialkylpolysiloxanes terminés par trialkylsilyle selon l’invention sont de préférence linéaires mais peuvent contenir en plus des motifs R’ 2 SiO 2/2 (motifs D) dans la formule (A), des motifs RSiO 3/2 (motifs T) et/ou motifs SiO 4/2 (motifs Q), dans lesquels R’, identiques ou différents, sont un radical hydrocarboné monovalent comportant de 1 à 18 atomes de carbone.
De préférence, les dialkylpolysiloxanes terminés par trialkylsilyle sont des PDMS (polydiméthylsiloxanes ou diméthicones) terminés par triméthylsilyle. amino silicones
Le mélange de silicone comprend une amino silicone qui est de préférence de formule (B) :
dans laquelle: R, identiques ou différents, sont un radical hydrocarboné monovalent comportant de 1 à 28 atomes de carbone, de préférence de 1 à 18 atomes de carbone, mieux de 1 à 6 atomes de carbone, mieux encore de 1 à 3 atomes de carbone, et mieux encore le méthyle ; X, identique ou différent, est R ou un groupe hydroxyle (OH) ou alcoxy en C 1 -C 6 ; de préférence X est R, à savoir un radical hydrocarboné monovalent comportant de 1 à 28 atomes de carbone, de préférence de 1 à 18 atomes de carbone, mieux de 1 à 6 atomes de carbone, et mieux encore de 1 à 3 atomes de carbone, et mieux encore le méthyle ; A est un radical amino de formule -R 1 -[NR 2 -R 3 -] x NR 2 2 , ou les formes amino protonées dudit radical amino, dans lequel R 1 est un radical alkylène en C 1 -C 6 , de préférence un radical de formule -CH 2 CH 2 - ou -CH 2 CH(CH 3 )CH 2 -, R 2 , identiques ou différents, sont un atome d’hydrogène ou un radical alkyle en C 1 -C 4 , de préférence un atome d’hydrogène, R 3 est un radical alkylène en C 1 -C 6 , de préférence un radical de formule -CH 2 CH 2 -, et x vaut 0 ou 1 ;
et m+n est un entier de 50 à environ 1 000, de préférence de 50 à 600.
De préférence, A est un radical amino de formule -R1-[NR2-R3]xNR22, ou les formes amino protonées dudit radical amino, dans laquelle R 1 est -CH 2 CH 2 CH 2 - ou -CH 2 CH(CH 3 )CH 2 -, R 2 sont des atomes d’hydrogène, R 3 est -CH 2 CH 2 -, et x vaut 1.
De préférence, R, identiques ou différents, sont des radicaux alkyle, de préférence des radicaux alkyle en C 1 -C 28 , plus préférentiellement des radicaux alkyle en C 1 -C 18 tels que les radicaux méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, 1-n-butyle, 2-n-butyle, isobutyle, tert-butyle, n-pentyle, isopentyle, néopentyle et tert-pentyle, des radicaux hexyle, tels que le radical n-hexyle, des radicaux heptyle, tels que le radical n-heptyle, des radicaux octyle tels que le radical n-octyle et des radicaux isooctyle tels que le radical 2,2,4-triméthylpentyle, des radicaux nonyle tels que les radicaux n-nonyle, des radicaux décyle, tels que le radical n-décyle, des radicaux dodécyle, tels que le radical n-dodécyle, et des radicaux octadécyle, tels que le radical n-octadécyle ; des radicaux alcényle tels que le radical vinyle et allyle ; des radicaux cycloalkyle, tels que les radicaux cyclopentyle, cyclohexyle, cycloheptyle et méthylcyclohexyle ; des radicaux aryle, tels que le radical phényle, naphtyle, anthryle et phénanthryle ; des radicaux alcaryle, tels que les radicaux o-, m- et p-tolyle, des radicaux xylyle et des radicaux éthylphényle ; et des radicaux aralkyle tels que le radical benzyle et les radicaux a- et b-phényléthyle. Le radical méthyle est préféré entre tous.
L’invention a également pour objet l’utilisation de la protéine de légumineuse, préférentiellement de pois ou de fèverole de l’invention pour la fabrication de produits alimentaires ou de boissons, notamment d’alternatives végétales au lait.
D’une manière générale, la protéine de légumineuse, préférentiellement de pois ou de fèverole de l’invention peut être utilisée dans des produits alimentaires et des boissons qui peuvent en inclure dans une quantité allant jusqu’à 100% en poids par rapport au poids sec total du produit alimentaire ou de boisson, par exemple en une quantité allant d’environ 1 % en poids à environ 80 % en poids par rapport au poids sec total du produit alimentaire ou de boisson. Tous les montants intermédiaires (c’est-à-dire 2 %, 3 %, 4 %... 77 %, 78 %, 79 % en poids par rapport au poids total du produit alimentaire ou de boisson) peuvent être utilisés, de même que toutes les fourchettes intermédiaires fondées sur ces quantités. Ces produits alimentaires et boissons peuvent être adaptés à des populations végétariennes ou véganes.
Un usage particulièrement intéressant de la protéine de l’invention concerne son utilisation dans les boissons qui présentent un goût plus agréable que celles obtenues à partir d’autres protéines de légumineuse du commerce. La protéine de légumineuse, préférentiellement de pois ou de fèverole de l’invention peut avantageusement être utilisée pour la fabrication de boissons, en particulier d’alternatives au lait, ou autrement dit de succédanés de lait. Par ailleurs, du fait de la note aromatique lactée due à l’ingrédient, ces boissons peuvent en outre présenter une note aromatique plus lactée qu’une boisson ne comprenant pas ladite protéine, ce qui est un avantage indéniable pour la fabrication d’alternatives végétales au lait. Outre une amélioration de l’aromatique, il est également possible selon l’invention d’obtenir une texture plus nappante en bouche (effet « mouthfeel ») que lorsque d’autres protéines de légumineuse, préférentiellement de pois ou de fèverole sont utilisées, ce qui est avantage pour les boissons, et notamment pour les alternatives végétales au lait car les laits animaux présentent généralement une texture nappante également.
Dans les boissons, la teneur en protéine dans ces produits peut varier largement et peut être également une boisson riche en protéine (« high protein drink »). La quantité en protéine peut aller par exemple de 1 à 12% en masse sèche par rapport à la masse totale de la boisson, notamment de 3 à 10% par rapport à la masse totale de la boisson. Les boissons peuvent être de tout type et incluent les alternatives végétales au lait ou succédanés de lait, y compris les laits type « barista » ou encore les « coffee creamer ». Il peut également s’agir d’autres boissons, acides ou non, prêtes à boire telles que les boissons gazeuses (y compris, mais sans s’y limiter, les soft drinks gazeux), les boissons non gazeuses (y compris, mais sans s’y limiter, les soft drinks non gazeux tels que les eaux aromatisées, les jus de fruits et le thé sucré ou non sucré ou les boissons à base de café), les boissons alcoolisées telles que les bières ou les alcools forts, les smoothies, les concentrés de boissons (y compris, mais sans s’y limiter, les concentrés et sirops liquides ainsi que les « concentrés » non liquides, tels que les préparations lyophilisées et/ou en poudre ou « powder mixes »). A noter que dans les boissons, on utilise généralement des arômes ou des agents masquants pour réduire la note aromatique pois ou l’arrière-goût amer de la protéine ou encore parfumer la boisson. Un des avantages de la protéine de légumineuse, préférentiellement de pois ou de fèverole de l’invention est que son utilisation en lieu et place des protéines de légumineuse, préférentiellement de pois ou de fèverole classiques rend possible la réduction de cette quantité en arôme ou agent masquant, voire permet de supprimer totalement ces constituants de la boisson, tout en gardant pour la boisson un goût très satisfaisant. Les boissons peuvent également comprendre des hydrocolloïdes ; toutefois, comme la protéine de légumineuse, préférentiellement de pois permet d’apporter une texture plus nappante, il est possible de réduire voire de supprimer la teneur en agents hydrocolloïdes tout en gardant une texture nappante en bouche.
D’autres produits classiquement préparés à partir de lait animal peuvent également comprendre la protéine de légumineuse, préférentiellement de pois ou de fèverole de l’invention pour former des succédanés. Il peut s’agir de produits acidifiés et/ou ou fermentés avec des ferments, par exemples des ferments lactiques, véganes ou mésophiles. Il peut s’agir de yaourts (y compris, mais sans s’y limiter, les yaourts gras, à teneur réduite en gras et sans gras, ces yaourts pouvant être exempts de protéines de lait et sans lactose). Le terme « yaourts » inclue également les fromages blancs et les petits suisses. Il peut également s’agir de succédanés de fromages tels que les fromages tartinables, fondus, à pâte pressée cuite et non cuite, à pâte molle, à pâte filée, les pâtes persillées ; il peut s’agir d’emmental, fromage en ficelle, ricotta, provolone, parmesan, munster, mozzarella, monterey jack, manchego, bleu, fontina, feta, edam, double Gloucester, camembert, cheddar, brie, asiago et Havarti. Il peut également s’agir d’autres produits tels que les beurres végétaux ou encore la crème fraîche.
D’autres produits pouvant inclure la protéine de légumineuse, préférentiellement de pois ou de fèverole de l’invention sont également les sauces telles que les vinaigrettes ou les sauces à base de mayonnaise ou de ketchup ou les sirops.
Également, les protéines de légumineuse, préférentiellement de pois ou de fèverole de l’invention peuvent être incorporées dans les produits de confiserie (y compris, mais sans s’y limiter, les bonbons gélifiés, les bonbons mous, les bonbons durs, les chocolats, les caramels et les gommes) ; les céréales de petit-déjeuner sucrées et non sucrées (y compris, mais sans s’y limiter, les céréales extrudées, les céréales en flocons et les céréales soufflées) ; et des compositions d’enrobage de céréales pour la préparation de céréales pour petit-déjeuner. Il peut également s’agir de préparations à tartiner sucrées (y compris, mais sans s’y limiter, les gelées, les confitures, les beurres de noix tels que le beurre de cacahuètes, les pâtes à tartiner et autres produits tartinables).
Les protéines de légumineuse, préférentiellement de pois ou de fèverole de l’invention peuvent également être utilisées en support ou en encapsulation d’arôme.
La protéine de légumineuse, préférentiellement de pois ou de fèverole peut également être utilisée, éventuellement après texturation, dans des succédanés de viande tels que des saucisses émulsionnées ou des hamburgers, ou encore des succédanés de poissons ou de fruits de mer. Elle peut également être utilisée dans des formulations de remplacement d’œufs ou pour la fabrication de produits protéique tels que le tofu ou le tempeh. Par protéines texturées, on entend généralement les protéines texturées par extrusion, c’est-à-dire notamment extrusion à sec (« dry extrusion » ou encore « Textured Vegetable Protein »), extrusion humide (« high moisture extrusion »). Les extrudeuses peuvent être des extrudeuses simple vis, double vis ou multiple vis. Dans le cas de l’extrusion double vis, l’extrusion peut être co-rotative ou contrarotative. A titre d’exemples d’extrusion multiple vis, il est possible de citer l’extrudeuse planétaire (« planetary extruder ») ou l’extrudeuse anneau (« ring-extruder »). Il est possible également de citer d’autres technologies plus particulières telles que la technologie « shear cell », la microextrusion ou encore l’impression 3D.
La protéine de légumineuse peut être utilisée comme seule source de protéines, mais peut également être utilisée en combinaison avec d’autres protéines additionnelles, végétales ou animales. Ces protéines additionnelles peuvent être hydrolysées ou non hydrolysées. Généralement, ces protéines additionnelles se présentent sous la forme de concentrats ou d’isolats. On distingue les concentrats des isolats suivant leur teneur en protéines : les concentrés dont les teneurs en protéines sont comprises entre 50% et 70 % et les isolats dont les teneurs en protéines sont supérieures à 70%, préférentiellement comprises entre 80 % et 90%, respectivement. Le terme « protéine végétale » désigne l’ensemble des protéines dérivées des céréales, des plantes oléagineuses, des légumineuses et des plantes tubéreuses, ainsi que toutes les protéines dérivées d’algues et de microalgues ou de champignons, utilisées seules ou en mélange, choisies dans la même famille ou dans des familles différentes. Par « légumineuse », on entend généralement la famille de plantes dicotylédones de l'ordre des Fabales. Plusieurs légumineuses sont d'importantes plantes cultivées parmi lesquelles le soja, les haricots notamment le haricot mungo, le pois chiche, la féverole, l'arachide, la lentille cultivée, la luzerne cultivée, différents trèfles, les fèves, le caroubier, la réglisse et le lupin. La protéine de légumineuse additionnelle peut être choisie parmi ces légumineuses ou encore être une protéine de légumineuse que celle de l’invention. Dans la présente demande, le terme « céréales » désigne les plantes cultivées de la famille des graminées produisant des grains comestibles, par exemple le blé, l’avoine, le seigle, l’orge, le maïs, le sorgho ou le riz. Les tubercules peuvent être la carotte, le manioc, le konjac, la pomme de terre, le topinambour, la patate douce. Les plantes oléagineuses sont généralement des plantes produisant des graines dont sont extraites de l’huile. Les plantes oléagineuses peuvent être choisies parmi le tournesol, le colza, l’arachide, le sésame, la courge ou le lin. Les protéines animales peuvent être par exemple des protéines d’œuf ou de lait, telles que des protéines de lactosérum, de la caséine ou caséinates. La composition protéique de légumineuse, préférentiellement de l’invention peut ainsi être utilisée en association avec une ou plusieurs de ces protéines ou des acides aminés afin d’améliorer les propriétés nutritionnelles du produit final, par exemple pour améliorer le PDCAAS de la protéine ou pour apporter d’autres fonctionnalités.
La protéine de légumineuse, préférentiellement de pois ou de fèverole peut également être utilisée pour la fabrication de produits pharmaceutiques ou encore en fermentation par exemple pour la production de métabolites de fungi ou de métabolites par culture cellulaire.
Fig. 1 montre un profil électrophorétique. La colonne gauche de la photo montre plusieurs bandes dont les valeurs exprimées en kilodaltons (kDa) sont 10,0 ; 15,0 ; 20,0 ; 25,0 ; 37,0 ; 50,0 ; 75,0 ; 100,0 ; 150,0 et 250,0.
Le profil électrophorétique est effectué par migration de l'échantillon en conditions dénaturantes et réductrices au travers d'un gel de polyacrylamide à 20 % suivie d'une coloration au bleu de Coomassie. Exemples
Exemple 1 : Isolat obtenu selon l’invention