Formulation de M-CA et M-CMD en présence d'un cryoprotecteur pour un stockage à long terme. Nous déterminons ici les conditions de fabrication d'une formulation de magnétosomes injectables présentant une stabilité à long terme. Cette dernière est évaluée en mesurant le pourcentage de stabilité d'absorption, mesuré à 480 nm au cours du temps, d'une suspension de magnétosomes, préférentiellement de 50 mg de magnétosomes pendant 2 heures après son homogénéisation. Les pourcentages de 100% et 0% correspondent respectivement à des suspensions stables et instables. nous avons choisi de réaliser les mesures de stabilité avec 50 mg de magnétosomes, car nous prévoyons d'administrer cette quantité de magnétosomes dans une tumeur de la prostate humaine de 1 à 2 cm de diamètre sur la base de nos données précliniques d'efficacité chez la souris extrapolées à l'homme. de plus, un laps de temps de 2 heures a été choisi pour l'évaluation de la stabilité, ce qui semble être suffisamment long pour qu'une infirmière ou un médecin puisse administrer une suspension de magnétosomes stable dans les tumeurs. Étant donné que les magnétosomes purifiés dépourvus de matière organique bactérienne active (M-non enrobés) étaient instables, c' est-à-dire que leur pourcentage de stabilité était de 0 %, ils ont été enrobés de CA et de CMD, ce qui a donné M-CA et M-CMD, qui sont parfaitement stables, c' est-à-dire que leur pourcentage de stabilité est de 100 %, ce qui est supérieur à celui de M-non enrobés et de M-gC. Lorsque M-CA et M-CMD sont lyophilisés en l'absence d'un composé spécifique pouvant préserver leur enrobage, ils forment des poudres de NP désignées comme (M-CA) fd et (M-CMD) fd caractérisées par la présence de magnétosomes agglomérés. Lorsque (M-CA) fd et (M-CMD) fd sont remis en suspension dans l'eau après l'étape de lyophilisation, ils sédimentent rapidement, ce qui entraîne un pourcentage de stabilité inférieur à 5 %. Pour permettre la reconstitution de M-CA et M-CMD en suspension aqueuse de NP stable après lyophilisation, c 'est-à-dire sans endommager le revêtement M-CA/M-CMD, M-CA et M-CMD à la dose thérapeutique prévue de 50 mg/ml ont été mélangés avec différents cryoprotecteurs, c' est-à-dire du glucose, du mannitol, du sorbitol, du saccharose ou du tréhalose, utilisés à des pourcentages en masse de 5 % et 10 %. Après avoir été lyophilisées, ces formulations ont été remises en suspension dans l'eau pour déterminer leur stabilité colloïdale. En considérant d'abord la M-CMD, seuls les sorbitols à 5% et 10% parviennent à maintenir une stabilité colloïdale des NP à 100%. En outre, l'osmolalité de la suspension de M-CMD augmente avec le pourcentage de sorbitol ajouté à la suspension de M-CMD, passant de 0 mosm/kg H 2 O en l'absence de cryoprotecteur à 280 et 560 mosm/kg H 2 O pour 5 % et 10 % de sorbitol, respectivement. Le M-CMD formulé avec 5 % de sorbitol conduit à une valeur d'osmolalité se situant dans la gamme de l'osmolalité plasmatique (275 - 290 mosm/kg H 2 O), ce qui est acceptable pour une injection humaine. En ce qui concerne le M-CA, le M-ca mélangé avec 10% de glucose, de sorbitol ou de saccharose, conduit à une stabilité colloïdale de 100%. Cependant, ces formulations sont hypertoniques, c' est-à-dire que leur osmolalité est supérieure à 300 mosm/kg H 2 O. Pour résoudre ce problème, nous avons sélectionné le M-CA mélangé à 10% de saccharose qui conduit à une osmolalité de 330 mosm/kg H 2 O, qui est la valeur la plus proche de l'osmolalité plasmatique, et nous avons ajouté à ce mélange soit du PEG 4000 soit du Dextran T1, pour diminuer l'osmolalité de la formulation jusqu'à l'osmolalité plasmatique. Alors que l'utilisation du Dextran T1 permet de stabiliser la formulation, elle donne une osmolalité inférieure à l'osmolalité plasmatique. Par conséquent, le Dextran T1 a été abandonné. En revanche, en combinant le saccharose avec le PEG 4000, une formulation stable à 100% a été atteinte alors que la seule addition de 7,5% de saccharose ou de 15% de PEG 4000 a conduit à une stabilité d'environ 90 ou 50%, respectivement. Ce résultat suggère un effet synergique entre le saccharose et le PEG 4000, qui semblent se soutenir mutuellement, c' est-à-dire que le PEG 4000 pourrait protéger efficacement les NP pendant la congélation en encapsulant les NP dans une matrice vitreuse, et le saccharose amorphe pourrait servir de réservoir de " remplacement de l'eau " permettant la formation de liaisons hydrogène avec l'acide citrique sur la surface des NP, et par conséquent préserver l'intégrité de l'enrobage contre le stress induit par la déshydratation. La combinaison optimale de saccharose et de PEG 4000 correspond à 1,25% de PEG 4000, c' est-à-dire la plus faible concentration de PEG 4000 pour prévenir le risque de mobilité moléculaire et de dégradation de la formulation pendant le stockage, qui pourrait être une conséquence d'une trop grande concentration de PEG, et le plus grand pourcentage en masse de saccharose, c' est-à-dire 3,75%, pour obtenir une formulation stable de M-CA en suspension. La formulation de M-CA avec 1,25% de PEG 400 et 3,75% de saccharose présente une osmolalité de 225 mOsm/Kg H 2 O, qui peut être ajustée pour être isotonique lors de la reconstitution.