M-CA/M-CMD conservent leurs propriétés physicochimiques après leur formulation. Pour examiner si les magnétosomes formulés avec 5% de sorbitol pour M-CMD, ou 1,25% de PEG 400 et 3.75 % de saccharose pour M-CA, qui sont désignés comme (M-CMD) f et (M-CA) f avant le retrait du cryoprotecteur et comme (M-CMD) wf et (M-CA) wf après le retrait du cryoprotecteur, ont conservé leurs propriétés physicochimiques, nous avons comparé les pourcentages de carbone et d'azote ainsi que les spectres FT-IR et les charges de surface des magnétosomes formulés avec ceux des magnétosomes récoltés aux différentes étapes précédant la formulation, c'est-à-dire M-CA, M-CA, M-CA et M-CA.c'est-à-dire M-CA, M-CMD, M-gC, et M-non enrobés. En ce qui concerne les pourcentages en masse de carbone et d'azote dans les magnétosomes aux différentes étapes de formulation, ils diminuent d'abord des pourcentages de carbone et d'azote de %C=22,7% et %N=2,2% dans M-gC jusqu'à %C=012% et %N=0,01% dans M-uncoated, correspondant à l'élimination de la membrane du magnétosome dans M-gC pour donner M-uncoated. Ensuite, ils augmentent une première fois de M-non enrobé à M-CA (%C =1,61%, %N=0,01%) et M-CMD (%C=3,80%, %N=0,01%), ce qui est dû à l'ajout d'un revêtement de CA et CMD à la surface de M-non enrobé, et une deuxième fois de M-CA et M-CMD à (M-CA) f (%C=18.60% et %N=0,01%) et (M-CMD) f (%C=18,56% et %N=0,01%), lorsque le cryoprotecteur est ajouté aux magnétosomes formulés. Dans l'étape finale, ces pourcentages diminuent à nouveau après le lavage du cryoprotecteur des magnétosomes formulés, c' est-à-dire jusqu'à %C=1,6% et %N=0,01% dans (M-CA) fw et %C=3,83%, %N=0,01% dans (M-CMD) fw . Les spectres FT-IR des magnétosomes aux différentes étapes de leur formulation confirment également les tendances CHNS décrites ci-dessus. En effet, le spectre FT-IR du Mg-C présente des bandes de vibration de P-O (à 1037 cm - 1 ), C-O (à 1410 cm -1 ), N-H (à 1542 et 1641 cm -1 ), et O-H (à 3276 cm -1 ), correspondant aux groupes fonctionnels présents dans la membrane phospholipidique du magnétosome. Concernant M-uncoated, son spectre FT-IR n'indique pas la présence de pics au-dessus de 1100 cm - 1 , ce qui est cohérent avec l'élimination de la plupart des matières organiques dans cet échantillon. Les deux pics à 612 et 693 cm - 1 sont attribués aux vibrations d'étirement Fe-O, qui proviennent de l'oxyde de fer compris dans le noyau minéral du magnétosome, et sont donc présents dans tous les spectres FT-IR des différents types de magnétosomes. L'enrobage de M-non enrobé avec CA et CMD conduit à une série de pics dans la gamme de 1000 - 1300 cm -1 et 1630 - 1750 cm - 1 , qui correspondent aux vibrations d'étirement de c-o et c=o, respectivement, attribuées aux groupes carboxylate de CA et CMD dans M-CA et M-CMD. Plus loin dans le processus de formulation, les magnétosomes lyophilisés (M-CA) f et (M-CMD) f affichent des bandes intenses de groupes alcool et alcane, par ex. les bandes de vibration d'étirement de C-O, O-H et C-H dans la gamme de 970 - 1250 cm -1 , 3200 - 3550 cm -1 et 2850 - 3000 cm -1 , respectivement, correspondant au saccharose et au PEG 4000 dans (M-CA) f , et au sorbitol dans (M-CMD) f . Enfin, après une étape de lavage, (M-CA) fw et (M-CMD) fw présentent des spectres FT-IR très proches de ceux de M-CA et M-CMD, ce qui indique que la procédure de lavage a facilement séparé le cryoprotecteur du magnétosome enrobé, en raison de l'absence de liaison forte entre les molécules de cryoprotecteur et les agents d'enrobage du magnétosome. Les mesures CHNS et FT-IR suggèrent que la surface des magnétosomes formulés reste inchangée par rapport à celle des magnétosomes enrobés avant formulation. Pour confirmer cette déduction, nous avons mesuré les charges de surface des magnétosomes formulés que nous avons comparés à celles des magnétosomes non formulés. (M-CA) f et (M-CMD) f présentent des charges de surface très similaires à celles de M-CA et M-CMD lorsque le pH des suspensions contenant ces NP varie entre 2 et 10. Ce comportement indique que le cryoprotecteur maintient efficacement les charges de surface des magnétosomes dans (M-CA) f et (M-CMD) f , probablement en protégeant efficacement les couches d'enrobage dans M-CA et M-CMD contre la dégradation/la suppression pendant la lyophilisation, et en empêchant le cryoprotecteur de se lier fortement aux NP. En outre, dans les conditions d'utilisation pour l'injection humaine, c' est-à-dire à la dose thérapeutique de 50 mg/ml dans le fer et à un pH de 6,5, (M-CA) f et (M-CMD) f présentent des charges de surface inférieures à -30 mv, créant les conditions de fortes forces électrostatiques répulsives dans les suspensions de (M-CA) f / (M-CMD) f , qui peuvent empêcher l'agglomération des NP causée par les interactions dipolaires magnétiques et stabiliser ces NP en suspension. Les mesures de microscopie électronique réalisées sur des magnétosomes formulés lavés de leur cryoprotecteur, c' est-à-dire sur (M-CA) fw et (M-CMD) fw , montrent que les magnétosomes formulés conservent un arrangement en chaîne après l'étape de lyophilisation, propriété complémentaire à celle de leur charge de surface, assurant leur stabilité et empêchant leur agrégation. Enfin, la stabilité à long terme des magnétosomes formulés, qui est ici recherchée, est assurée lorsque la quantité d'eau restant dans le produit lyophilisé après le processus de lyophilisation, appelée humidité résiduelle (MR), est suffisamment faible, c 'est-à-dire typiquement inférieure à 3% pour un produit pharmaceutique. La teneur en RM de (M-CA) f et (M-CMD) f a été mesurée en introduisant ces NP dans un TGA, en les chauffant à 120°c pendant 1 h avec une vitesse de chauffage de 6°c/min, et en mesurant la perte de poids de ces NP attribuée à l'évaporation de l'eau. Les teneurs en RM de (M-CA) f et (M-CMD) f se situent dans la plage de (1,8-2,4) %, ce qui est pharmaceutiquement acceptable. De plus, grâce à ce processus de lyophilisation efficace, (M-CA) f et (M-CMD) f peuvent être remis en suspension dans l'eau, de préférence après 6 mois, où ils conservent leur stabilité après une période de stockage de six mois.