INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Dans un mode de réalisation particulier, la composition selon l’invention consiste essentiellement en : - Un pourcentage massique de poly vinyl alcohol (PVA) allant de 30% à 70%, par exemple allant de 40% à 60%, un pourcentage massique de régolithe allant de 2% à 10%, par exemple d’environ 5%, et un pourcentage massique de charge fertilisante allant de 25% à 70%, par exemple de 35% à 55%. - Un pourcentage massique de polybutylène adipate téréphtalate (PBAT) allant de 20% à 60%, par exemple allant de 30% à 50%, et un pourcentage massique de régolithe allant de 30% à 80%, par exemple de 50% à 70%. - Un pourcentage massique de polybutylène adipate téréphtalate (PBAT) allant de 20% à 60%, par exemple allant de 40% à 55%, un pourcentage massique de poly vinyl alcohol (PVA) allant de 30% à 70%, par exemple allant de 45% à 55%, et un pourcentage massique de régolithe allant de 2% à 10%, par exemple d’environ 5%. - Un pourcentage massique de polybutylène adipate téréphtalate (PBAT) allant de 20% à 60%, par exemple allant de 40% à 55%, un pourcentage massique de caséinate de sodium extrudé au glycérol (LACTIPS) allant de 30% à 70%, par exemple de 45% à 55%, et un pourcentage massique de régolithe allant de 2% à 10%, par exemple d’environ 5%. - Un pourcentage massique de polybutylène adipate téréphtalate (PBAT) allant de 20% à 60%, par exemple allant de 40% à 55%, un pourcentage massique de régolithe allant de 2% à 10%, par exemple d’environ 5%, et un pourcentage massique de charge porogène allant de 35% à 65%, par exemple allant de 45% à 55%.
Des compositions selon l’invention sont décrites dans les tableaux ci-après. PVA (%m) Régolithe (%m) Carbonate de calcium (%m) Phosphate (%m) 40 5 27,5 27,5 50 5 22,5 22,5 60 5 17,5 17,5 PBAT (%m) Régolithe (%m) 50 50 40 60 30 70 PBAT (%m) Régolithe (%m) PVA (%m) Lactips (%m) NaCl (%m) PEG (%m) 40 5 55 50 5 45 40 5 55 50 5 45 40 5 45 10 50 5 36,8 8,2 51,5 4,4 39,7 4,4
Consommable pour imprimante 3D
La composition selon l’invention peut être utilisée pour préparer un consommable, tel qu’un filament, un cylindre ou un granulé.
Ainsi, l’invention concerne également un consommable pour imprimante 3D ayant une composition selon l’invention, tel qu’un consommable sous forme solide, par exemple un filament, un cylindre, un granulé ou un film.
Les filaments et les granulés sont des consommables classiquement utilisés en impression 3D, on parle alors de filament pour impression 3D et de granulé pour impression 3D.
La composition est généralement utilisée telle quelle pour préparer le consommable. Le consommable selon l’invention peut être préparé par n’importe quel procédés adapté. Par exemple, un filament peut être obtenu par extrusion à partir d’une composition selon l’invention qui a été chauffée à une température supérieure à sa température de fusion.
Il est à noter que les souches I-5565 et I-5679 produisent 14 autres nouvelles mycosubtilines mineures (en terme de niveau de production) à savoir : Gln3-C16 ; Gln7-C16 ; Gln1, Gln3-C16 ; Gln3,Gln7-C16 ; Gln1-C16 ; Gln1,Gln3,Gln7-C16 ; Gln7-C17 ; Gln1,Gln3-C17 ; Gln3,Gln7-C17 ; Gln1-C17 ; Gln3-C18 ; Gln7-C18 ; Gln1-C18 et A-C19.
Un troisième objet de l’invention concerne une composition comprenant au moins une mycosubtiline choisie parmi les isoformes Gln3-C16, Gln1-C16 et Gln1-C17.
Une composition selon l’invention comprend une, deux ou trois de ces isoformes, à savoir : l’isoforme Gln3-C16 l’isoforme Gln1-C16 l’isoforme Gln1-C17 les isoformes Gln3-C16 et Gln1-C16 les isoformes Gln3-C16 et Gln1-C17 les isoformes Gln1-C16 et Gln1-C17 les isoformes Gln3-C16, Gln1-C16 et Gln1-C17.
De plus, une composition selon l’invention peut contenir au moins l’une des mycosubtilines nouvelles choisie parmi Gln3-C16 ; Gln7-C16 ; Gln1, Gln3-C16 ; Gln3,Gln7-C16 ; Gln1-C16 ; Gln1,Gln3,Gln7-C16 ; Gln7-C17 ; Gln1,Gln3-C17 ; Gln3,Gln7-C17 ; Gln1-C17 ; Gln3-C18 ; Gln7-C18 ; Gln1-C18 et A-C19, ainsi que toute autre mycosubtiline connue.
Une telle composition peut aussi comprendre d’autres lipopeptides que la mycosubtiline (qui est une iturine), notamment : des molécules de la famille des iturines, telles que l’iturine A, la mojavensine, et les bacillomycines A, B, C, D, F et L ; des molécules de la famille des surfactines , telles que les surfactines A, B ou C, la lichenysine et la pumilacidine ; des molécules de la famille des fengycines, telles les fengycines A et B, les plipastatines A et B et les agrastatines A et B.
Une telle composition peut également comprendre d’autres composants telles que d’autres molécules tensioactives, des conservateurs, de adjuvants.
Les molécules tensioactives regroupent les molécules amphiphiles, les surfactants, les lipopeptides, comme par exemple, la surfactine, la fengycine, les tensioactifs chimiques et les tensioactifs biologiques, comme par exemple les rhamnolipides, les polysaccharides, etc….
Parmi les agents tensioactifs, on peut citer l’héparine, l’acide hyaluronique, le dextrane, l’amylose, le chitosane, des tensioactifs anioniques dérivés d’acides aminés, des tensioactifs non-ioniques dérivés des poly-glycosides, des tensio-actifs hydrotropes, des lipopeptides tels que les isomères de surfactine et/ou les isomères de fengycine (ou plipastatine), les rhamnolipides et les huiles végétales.
Les tensioactifs de la famille des tensio-actifs non ioniques sont choisis par exemple parmi : les fatty alcohol axalkylate, le pentylène glycol et ses dérivés, les molécules hydrotropes de type alkylpolyglycoside (alkypolyglycoside et alkylethoxypolyglycoside, les molécules de type agent de texture polyglycoside (gomme de xanthane, gomme arabique, gomme adragante, gomme guar, gomme de caroube, gomme de tamarin, pectine, gomme gellane, carraghénates, agar-agar, alginates.)
Les tensioactifs de la famille des tensio-actifs anioniques sont choisis par exemple parmi les surfactines, les fengycines, le laureth sulfate de sodium et ses dérivés ou des dérivés d’acide aminés.
Les tensioactifs de la famille des huiles sont choisis par exemple parmi les huiles et extraits d’huiles modifiés (acifidiés, méthylés, esterifiés) notamment issus de : amande, arachide, argan, avocat, colza, ricine, lorenzo, neem, noisette, noix de cajou, noix de macadamia, olive, pistache, riz, tournesol oléique, cameline, lin, bourrache, carthame, chanvre, coton, germe de blé, mais, noix, oeillette, onagre, orge, pépins de courge, pépins de raisin, pois, sésame, soja, tournesol.
Parmi les adjuvants, certains peuvent faciliter la pénétration de la composition dans la plante (comme les huiles), d’autres augmenter la surface de contact entre la feuille des plantes et la composition (les mouillants), d’autres peuvent absorber l’humidité de l’air et lutter ainsi contre la dessiccation (les sels), d’autres encore peuvent fixer la composition sur les feuilles de sorte à limiter le lessivage et la volatilisation. Les adjuvants sont donc à adapter aux modes d’action des compositions (racinaires, contact, systémique ou pénétrant), aux types de formulations des produits et aux types de plantes ciblées (feuilles glabres ou velues, épaisseur des cuticules, stades des plantes, positions des stomates …).
Un troisième objet de l’invention concerne l’utilisation d’au moins une mycosubtiline choisie parmi les isoformes Gln3-C16, Gln1-C16 et Gln1-C17 ou d’une composition comprenant une telle mycosubtiline (telle que décrite précédemment) en tant qu’agent antifongique.
Ces trois isoformes sont efficaces contre un champignon ascomycète, en particulier contre les souches B. Cinera, Aspergillus sp . et Z. tritici.
Dans un mode de réalisation particulier, cette utilisation consiste à utiliser au moins une mycosubtilinecorrespondant à l’isoforme Gln1-C16 comme agent antifongique contre la souche B. Cinera .
Dans un autre mode de réalisation particulier, cette utilisation consiste à utiliser au moins une mycosubtiline correspondant à l’isoforme Gln1-C17 comme agent antifongique contre la souche Aspergillus sp .
En 2011, une nouvelle isoforme de mycosubtiline a été découverte dans une souche modifiée de B. subtilis et brevetée. Cette molécule avec une chaîne d'acides gras en C17 contient une Glutamine en position 3 [Gln3] au lieu d'une Asparagine (W02013/050700). Dans ce brevet les inventeurs ont montré qu'un mélange d'isoformes de mycosubtiline contenant cette nouvelle isoforme [Gln3-C17] (même en petite quantité, de l'ordre de 1%) était aussi actif qu'un mélange ne la contenant pas, démontrant le meilleur pouvoir antifongique de cette isoforme par rapport aux autres.
Il existe très peu d'études sur la toxicité et l'écotoxicité des molécules lipopeptidiques produites par B. subtilis et en particulier de chaque isoforme lipopeptidique. L'écotoxicité a été étudiée sur des mélanges d'isoformes de surfactine et de mycosubtiline seules ou en mélange binaire. Les résultats de cette étude ont montré que la CE 50 des mycosubtilines dans le test microtox (sur Aliivibrio fischeri) était au moins 4,5 fois inférieure à celle des surfactines. Mais aussi que la CE 50 sur Daphnia magna pour les mycosubtilines (8 mg/L) est 3 fois inférieure à celle des surfactines (26 mg/L) (Deravel et al. 2014). Dans une autre étude portant sur l’iturine A, sa toxicité aiguë a été investiguée chez les rats pendant 28 jours. L'iturine A n'a montré aucun effet toxique sur les poumons, le cœur et les reins après les 28 jours de traitement, ainsi qu'après une période de récupération (14 jours) (Dey et al., 2016). Plus récemment, une étude de cytotoxicité a été réalisée avec le mélange de trois familles de lipopeptides (surfactines, fengycines et mycosubtilines) sur deux lignées cellulaires différentes : les cellules Caco-2 et Vero. Les résultats ont montré que le mélange d'isoformes de mycosubtilines présente une CI 50 entre 10 et 20 mg/L sur ces deux lignées cellulaires (Kourmentza et al., 2021).
A ce jour, il existe un besoin de disposer de molécules antifongiques en grande quantité et aux propriétés améliorées afin de rendre ces alternatives biologiques économiquement viables à l'échelle industrielle.
Les inventeurs ont développé de nouvelles souches de Bacillus subtilis capables de produire de nouvelles isoformes de mycosubtiline qui sont à la fois plus efficaces en tant qu’agent antifongique et moins cytotoxiques que les mycosubtilines décrites à ce jour.
Ainsi l’invention concerne deux nouvelles souches de Bacillus subtilis modifiées génétiquement par 7 mutations ponctuelles de sorte qu’elles produisent les nouvelles isoformes de mycosubtiline. Ces deux souches sont déposées après de la CNCM sous les numéros CNCM I-5565 et CNCM I-5679.
L’invention concerne 3 nouvelles isoformes de mycosubtiline à savoir Gln3-C16, Gln1-C16 et Gln1-C17 ainsi que des compositions les contenant.
L’invention concerne aussi l’utilisation de ces 3 nouvelles isoformes en tant qu’agent antifongique, en particulier contre les souches B. cinerea , Aspergillus sp et Z. tritici.
Enfin, l’invention concerne un procédé de production d’au moins une de ces nouvelles isoformes par mise en culture d’une souche de Bacillus subtilis génétiquement modifiée conformément à l’invention.
Avantages de l’invention La présente invention donne accès à des surfactants adaptés à une utilisation en agriculture à savoir des composés qui ne soient pas toxiques et qui soient disponibles en grande quantité.
En effet, les nouvelles isoformes de mycosubtiline présentées ici présentent des activités antifongiques supérieures à celles des mycosutilines décrites à ce jour. En particulier, l’isoforme Gln1C16 présente une activité antifongique supérieure à celle de l’isoforme C16. De plus, ces nouvelles isoformes présentent une cytotoxicité moindre comparée à ces mêmes mycosubtilines connues.
En agriculture, ces nouvelles isoformes peuvent être utilisées dans la production de biopesticides ou de biosurfactants destinés à l'industrie phytosanitaire pour le biocontrôle des maladies des plantes ou le traitement post-récolte, ainsi que pour la stimulation de la croissance des plantes.
De tels surfactants présentent un intérêt d’usage dans d’autres domaines du fait de leurs propriétés, notamment dans les domaines de l'industrie alimentaire, cosmétique, chimique, médicale, pharmaceutique, détergente, pétrolière et de l'environnement.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L’INVENTION Un premier objet de l’invention concerne une souche de Bacillus sp . modifiée génétiquement et caractérisée en qu’elle comprend au moins les mutations ponctuelles suivantes : remplacement d’une sérine par une asparagine du fait d’une mutation en position 1118 du gène resE_1 remplacement de l'acide aspartique par une asparagine du fait d’une mutation en position 3466 du gène rpoC remplacement d’une alanine par une valine du fait d’une mutation en position 886 du gène addB remplacement d’un acide glutamique par une lysine du fait d’une mutation en position 121 du gène araA remplacement d’une proline par une sérine du fait d’une mutation en position 154 du gène cotY remplacement d’une sérine par une phénylalanine du fait d’une mutation en position 32 du gène 03427 remplacement d’une sérine par une phénylalanine du fait d’une mutation en position 92 du gène 03457
Les mutations opérées dans ces gènes sont en particulier des mutations nucléotidiques ponctuelles.
Un exemple de chacun des gènes mutés est présenté dans le listage de séquences à savoir : le gène resE_1 muté est représenté par la séquences SEQ ID NO. 1 le gène rpoC muté est représenté par la séquences SEQ ID NO. 2 le gène addB muté est représenté par la séquences SEQ ID NO. 3 le gène araA muté est représenté par la séquences SEQ ID NO. 4 le gène cotY muté est représenté par la séquences SEQ ID NO. 5 le gène 03427 muté est représenté par la séquences SEQ ID NO. 6 le gène 03457 muté est représenté par la séquences SEQ ID NO. 7
D’autres mutations sont possibles du fait que le code génétique est dégénéré. L’homme du métier saura déterminer les mutations alternatives à celles décrites dans ces séquences.
Dans encore un autre mode de réalisation particulier, cette utilisation consiste à utiliser au moins une mycosubtiline correspondant à l’un des isoformes Gln1-C16 ou Gln3-C16 comme agent antifongique contre la souche Z. tritici .
Un quatrième objet de l’invention concerne un procédé de production d’au moins une nouvelle isoforme de mycosubtiline choisie parmi les isoformes Gln3-C16, Gln1-C16 et Gln1-C17 consistant à cultiver une souche Bacillus modifiée génétiquement telle que définie précédemment.
De manière séquentielle, ce procédé consiste à :
-mettre une souche de Bacillus sp . selon l’invention en culture
- incuber cette souche dans un milieu de culture approprié
- récolter la souche et/ou le surnageant de culture.
Ce procédé peut se poursuivre par une ou plusieurs des étapes suivantes: purification des mycosubtilines (globale ou différenciée par isoforme) concentration de la solution comprenant la mycosubtiline ou les isoformes d’intérêt de la mycosubtiline déshydratation de solution comprenant la mycosubtiline ou les isoformes d’intérêt de la mycosubtiline
Les nouvelles isoformes de mycosubtiline décrites précédemment ainsi que les compositions les contenant peuvent être utilisées dans de nombreuses applications du fait de leurs propriétés tensioactives et/antifongiques et de leur absence ou faible niveau de toxicité : En agriculture : production de biopesticides ou de biosurfactants destinés à l'industrie phytosanitaire pour le biocontrôle des maladies des plantes ou le traitement post-récolte ou comme agent de stimulation de la croissance des plantes Dans l'industrie alimentaire : agent de conservation En cosmétique : agent de conservation et en tant qu’agent de formulation En chimie Dans le domaine médical et pharmaceutique : action ou prévention antifongique, agent de conservation En tant que détergent Dans l’industrie pétrolière Dans le domaine de la protection de l'environnement : lutte biologique contre les nuisibles, agent de formulation non toxique.
DESCRIPTION DES FIGURES : Formule classique de la mycosubtiline A-C17 (n=13)
: Représentation schématique du chromatogramme de la HPLC préparative. Les pics P3, P5, P6, P7 et P8 sont des isoformes classiques de la mycosubtiline, tandis que les pics P1, P2 et P4 sont de nouvelles isoformes de la mycosubtiline. L'acide aminé modifié dans l'anneau peptidique a été marqué.
: Formule de la nouvelle isoforme de la mycosubtiline Gln3-C16
: Formule de la nouvelle isoforme de la mycosubtiline Gln1-C16
: Formule de la nouvelle isoforme de la mycosubtiline Gln1-C17
: Analyse quantitative de la mycosubtiline produite par les nouvelles souches modifiées de Bacillus subtilis .
: Pourcentage du test de viabilité cellulaire des cellules vero traitées avec différentes isoformes de mycosubtiline à différentes concentrations de chaque isoforme.
Les inventeurs ont montré que la combinaison de ces 7 mutations permet la production de nouvelles isoformes de mycosubtiline, en particulier les isoformes Gln3-C16, Gln1- C16 et Gln1- C17.
Les sept gènes modifiés dans les souches de Bacillus sp . selon l’invention sont les suivants :
- resE est un gène qui code pour une protéine similaire à celle des systèmes de transduction de signaux à deux composants et joue un rôle régulateur dans la respiration. ResE, est impliqué dans la régulation globale de la respiration aérobie et anaérobie chez B. subtilis . ResE (ainsi que ResD) sont des protéines régulatrices à deux composants qui sont nécessaires à l'activation transcriptionnelle de Fnr en cas de limitation en oxygène chez B. subtilis. (Sun et al., 1996). La production de mycosubtiline est fortement impactée par les conditions d'oxygénation (Guez et al., 2008).
- rpoC est un gène responsable de la sous-unité bêta de l'ARN polymérase dirigée par l'ADN. Une mutation ponctuelle de rpoC conduit à une expression élevée des régulateurs sensibles au stress, notamment ceux des facteurs σ de la fonction extracytoplasmique (ECF) (σM, σW et σX) et du facteur σ de stress général (σB). SigB (σB) joue un rôle important dans la réponse adaptative, y compris la réponse de la présence pathogène conduisant à un impact positif sur les molécules antifongiques produites par les espèces de Bacillus . (Lee et al., 2013; Rodriguez Ayala et al., 2020).
- araA est un gène codant la L-arabinose isomérase. Ce gène est réprimé par une concentration élevée de glucose (Sá-Nogueira et al., 1997).
- addB est un gène qui contribue à la réparation de l'ADN et à la recombinaison. L'enzyme est fonctionnelle en tant qu'hétérodimère des sous-unités AddA et AddB, qu'elle est une hélicase d'ADN rapide et processive, et qu'elle catalyse le déroulement de l'ADN (Yeeles et al., 2009). Une mutation ponctuelle dans ce gène peut avoir un impact sur l'activité de l'enzyme (Haijema et al., 1996).
- cotY est le gène qui code pour la la protéine Y de l'enveloppe de la spore. Ce gène fait partie du régulateur sigE et il y a un site de liaison SigE dans la région du promoteur de l'opéron mycosubtiline. (Wu et al., 2015).
- Le gène 03427 code pour une protéine dont la fonction n'est pas précisément décrite dans la littérature mais qui pourrait être apparentée à la protéine Rap. Les protéines Rap chez B. subtilis régulent le niveau de phosphorylation ou l'activité de liaison à l'ADN des régulateurs de réponse tels que Spo0F, impliqué dans l'initiation de la sporulation, ou ComA, régulant le développement de la compétence (Diaz et al., 2012). Les protéines Rap sont également impliquées dans l'expression des gènes codant pour la biosynthèse des lipopeptides.
- Le gène 03457 code pour une protéine dont la fonction est inconnue mais qui pourrait être liée au transport des métabolites secondaires.
La souche de Bacillus peut être choisie parmi les souches Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus licheniformis, Paenibacillus polymixa, Bacillus pumilus, Bacillus thuringiensis, Bacillus sphaericus, Bacillus coagulans, Bacillus mycoides, Bacillus velenzensis et Bacillus firmus, Bacillus methylotrophicus, Bacillus megaterium, Bacillus vallismortis . Avantageusement, les souches de Bacillus sont choisies parmi les souches de Bacillus subtilis et de Bacillus amyloliquefaciens (récemment reconnu comme Bacillus velenzensis ). Dans un mode de réalisation préféré, la souche de Bacillus sp . est une souche Bacillus subtilis .
Une première souche particulière selon l’invention est la souche Bacillus subtilis déposée le 30 juillet 2020 sous le numéro CNCM I-5565 à la Collection nationale de cultures de micro-organismes (CNCM) de l'Institut Pasteur (Paris, France).
Une seconde souche particulière selon l’invention est la souche Bacillus subtilis déposée le 05 mai 2021 sous le numéro CNCM I-5679 dans la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) de l'Institut Pasteur (Paris, France).
Les souches I-5565 et I-5679 présentent toutes deux les 7 mutations ponctuelles et diffèrent par la nature du promoteur de la mycosubtiline : la souche I-5565 comprend le promoteur natif alors que la souche I-5679 a été modifiée par remplacement du promoteur endogène par le promoteur constitutif PrepU .
L’introduction des sept mutations a conduit à une augmentation de la production de mycosubtiline et à l’apparition de nouvelles isoformes. Dans ce contexte, le changement de promoteur a conduit à une augmentation de la production globale de la mycosubtiline : de la forme classique de mycosubtiline et de celle des nouvelles isoformes.
Un deuxième objet de l’invention concerne une nouvelle isoforme de mycosubtiline choisie parmi les isoformes Gln3-C16, Gln1-C16 et Gln1-C17.
Ces molécules sont représentées aux Figures 3, 4 et 5 respectivement.
Dans un agencement d’éléments conducteurs 21 empilés tel qu’illustré sur la , la résistance électrique peut être avantageusement diminuée en appliquant une pression au sommet de la colonne d’éléments conducteurs 21. Ainsi, une structure de mise en compression de l’amas d’éléments conducteurs 21 disposés dans le réceptacle 10 de la structure d’interconnexion peut être prévue.
Dans l’exemple de réalisation particulier illustré sur les figures 7A, 7B, une structure 160 de mise en compression des éléments conducteurs est ainsi prévue. Cette structure 160 comporte un ou plusieurs embouts 162 souples configurés pour pénétrer dans les fentes 105 et appliquer une pression sur les amas d’éléments conducteurs 21, par exemple sous forme de disque. Les embouts 162 souples peuvent être réalisés par exemple en matière élastomère. Les embouts 162 sont ici agencés sur un support rigide, par exemple sous forme d’une barre 165. La structure 160 de mise en compression est, dans l’exemple illustré, dotée d’éléments de fixation, par exemple sous forme de vis 167 permettant de maintenir la barre contre la plaque 102. La barre 165 forme également un élément de fermeture du réceptacle 10 dans lequel les éléments conducteurs sont disposés.
La structure 160 de mise en compression en partie supérieure des colonnes, permet d’exercer une force verticale sur les colonnes d’éléments conducteurs, par exemple de disques conducteurs. L’embout souple permet d’homogénéiser la pression, et la maintenir en cas de chocs ou vibrations.
Là encore, pour permettre de supprimer la connexion entre cellules et éventuellement supprimer l’alimentation électrique des cellules, un élément obturateur 50 sous forme de trappe est déplacé pour permettre la libération des éléments ou disques conducteurs hors des fentes.
Dans l’exemple de réalisation particulier des figures 7A-7B, illustrant respectivement la position de fermeture du réceptacle 10 et une position d’ouverture du réceptacle 10, des récipients 171 de collecte peuvent être prévus en aval de la sortie 41 d’évacuation afin de récupérer les éléments conducteurs 21.
Dans cet exemple et comme pour les exemples de réalisation présentés précédemment, disposant d’une sortie en partie basse, c’est la gravité, éventuellement aidée d’une force de compression qui peut aider au vidage voire assurer le vidage des éléments conducteurs (non représentés sur cette figure) par une forme d’écoulement.