INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Par article thermoplastique multicouches de type AB, ABA, ABC, BAB, BAC, ABCA, BACB, BCACB ou ACBCA, on entend selon l’invention un article dont les couches sont liées entre elles et pas simplement associées par simple juxtaposition. En particulier et de préférence, les couches sont liées par coextrusion. Par exemple, on entend par article de type ABA, un article comprenant une couche centrale B encadrée par deux couches adjacentes A. Les deux couches A ont de préférence la même composition. Selon certains modes de réalisation de l’invention, l’article multicouche peut comprendre une ou deux couches C entre les couches A et B pour apporter des propriétés particulières aux articles selon l’invention, plus particulièrement pour apporter des propriétés barrière aux gaz et notamment à l’oxygène. A titre d’exemple, l’article ABCA ou ACBCA comprend une couche C entre la couche A externe et la couche B centrale.
Par « article en matière plastique » selon l’invention on désigne tout article réalisé à partir d'au moins un polymère, tel qu’une feuille, film, tube, tige, profilé, forme, bloc massif, fibre, etc. en matière plastique.
Le terme « film plastique » ou « film en matière plastique » fait référence à un film de plastique souple (c'est-à-dire capable d'être pliée sans se casser) d'une épaisseur inférieure à 250 µm. Les films minces sont considérés comme ayant une épaisseur inférieure à 100 µm et sont de préférence produits par extrusion de film soufflé tandis que les films épais ont une épaisseur supérieure à 100 µm et sont de préférence produits par extrusion de film coulé.
Selon l'invention, le terme « article rigide » ou « article rigide en matière plastique » fait référence à un article plastique qui n'est pas un film. Ces articles sont de préférence réalisés par injection, thermoformage, soufflage ou encore par rotomoulage ou impression 3D.
Tel qu'utilisé ici, le terme "mélange maître" désigne un mélange concentré d'ingrédients sélectionnés (par exemple, des enzymes, des additifs, etc.) et un polymère support qui peut être utilisé pour introduire lesdits ingrédients dans des articles en plastique afin de leur conférer les propriétés souhaitées. Les compositions du mélange maître permettent au procédé d'introduire économiquement des ingrédients sélectionnés au cours du processus de fabrication du plastique. Avantageusement, le mélange maître est composé d'un polymère support dans lequel les ingrédients sélectionnés sont incorporés à haute concentration. Généralement, le mélange maître est destiné à être mélangé avec un ou plusieurs polymères ou une matrice à base de polymères pour produire un article en plastique final contenant une quantité souhaitée d'ingrédients sélectionnés. Le mélange maître peut en outre comprendre des charges minérales ou organiques.
Selon un agencement, une droite passant par le centre de chaque empreinte 72 d’une rangée paire et le centre d’une empreinte 72 d’une rangée impaire la plus proche forme avec la direction transversale Y un angle sensiblement égal à l’angle de décalage α.
Ainsi, les gobelets 16 positionnés dans les empreintes 72 d’un même groupe G1, G2 sont remplis par la même tête de distribution 32 qui se déplace pas à pas selon la direction longitudinale X pour remplir successivement les gobelets 16 à chaque pas, la tête de distribution 32 remplissant un gobelet 16 positionné au niveau de chaque rangée d’empreintes R1, R2, R3. Selon ce mode de réalisation, la tête de distribution 32 remplit trois gobelets 16 à chaque pas.
Une même tête de distribution 32 peut remplir les gobelets 16 positionnés dans les empreintes 72 de plusieurs groupes G1, G2. Dans ce cas, après avoir rempli les gobelets 16 positionnés dans les empreintes d’un groupe G1, la tête de distribution 32 se translate selon la direction transversale Y pour remplir les gobelets 16 positionnés dans les empreintes d’un autre groupe G2. En variante, le système de distribution 28 comprend autant de têtes de distribution 32 que de groupes d’empreintes G1, G2.
Selon une première configuration, les gobelets 16 sont directement positionnés dans les empreintes 72. Dans ce cas, chaque empreinte 72 présente un diamètre supérieur à la plus petite section des gobelets du plus grand format et inférieur à la plus grande section des gobelets du plus petit format.
Selon une deuxième configuration visible sur les figures 2, 8 à 10, le dispositif de remplissage 12 comprend, pour chaque empreinte 72, un support de gobelets 74 positionné dans l’empreinte 72 et configuré pour supporter des gobelets de différents formats. Grâce aux supports de gobelets 74, la position du bord supérieur des gobelets 16 est parfaitement connue.
Comme illustré sur les figures 8 à 10, chaque support de gobelet 74 comprend une paroi de révolution 76 qui présente un axe A76 et s’étend entre des bords supérieur et inférieur 76.1, 76.2 ainsi qu‘une paroi de fond 78 sensiblement perpendiculaire à l’axe A76, positionnée entre les bords supérieur et inférieur 76.1, 76.2 et configurée pour recevoir un seul gobelet 16 à la fois. La paroi de révolution 76 présente une face extérieure F76 configurée pour s’emboîter dans une empreinte 72 et immobiliser le support de gobelet 74 par rapport au plateau 20.
Pour connaître la position de la paroi de fond 78 par rapport à la surface supérieure F20 du plateau 20, le support de gobelet 74 comprend au moins une butée 80, en saillie par rapport à la face extérieure F76, configurée pour prendre appui contre la face supérieure F20 du plateau 20. Selon une configuration, la butée 80 se présente sous la forme d’une collerette 80.1 qui s’étend sur toute la périphérie de la face extérieure F76. Selon un agencement, la collerette 80.1 est positionnée au niveau du bord supérieur 76.1 de la paroi de révolution 76 et présente un diamètre extérieur supérieur au diamètre des empreintes 72, la paroi de révolution 76 présentant un diamètre extérieur juste en dessous de la collerette 80.1 sensiblement égal ou légèrement inférieur au diamètre des empreintes 72.
Selon un agencement, la paroi de fond 78 présente un orifice traversant 82 permettant d’éviter l’accumulation de liquide dans le support de gobelet 74.
Chaque support de gobelet 74 est configuré pour maintenir un gobelet 16 et éviter son basculement.
La paroi de fond 78 est décalée par rapport au bord supérieur 76.1 de la paroi de révolution 76 de manière à délimiter avec cette dernière un logement configuré pour recevoir la partie inférieure d’un gobelet 16.
Selon un mode de réalisation, la paroi de révolution 76 présente une face intérieure F76’ qui s’évase en partant de la paroi de fond 78 en direction du bord supérieur 76.1. Tous les gobelets ayant une forme légèrement tronconique, cette forme évasée permet d’emboîter la partie inférieure de chaque gobelet.
Selon une configuration, la paroi de fond 78 comprend, au niveau de sa face supérieure F78 orientée vers le bord supérieur 76.1, au moins une nervure circulaire 84 en saillie par rapport à la face supérieure F78 et présentant un diamètre intérieur sensiblement égal au diamètre du fond 16.1 des gobelets d’un premier format. Chaque nervure circulaire 84, 84’ peut être continue sur toute sa circonférence ou comprendre au moins une découpe 86, comme illustré sur la .
Selon un premier agencement, la paroi de fond 78 présente plusieurs nervures circulaires 84, 84’, une pour chaque format de gobelets, chacune d’elles ayant un diamètre intérieur adapté à la section inférieure des gobelets d’un format. Selon cet agencement, les nervures 84, 84’ ont des hauteurs différentes qui augmentent en fonction du diamètre des nervures circulaires.
Selon un autre agencement, chaque nervure circulaire 84, 84’ d’un support de gobelet 74 présente une hauteur sensiblement égale à la hauteur d’une nervure circulaire 16.3 d’un gobelet. Pour chaque format de gobelets, la paroi de fond 78 comprend deux nervures circulaires 84, 84’ espacées d’une distance sensiblement égale à l’épaisseur E d’une nervure circulaire 16.3 des gobelets d’un premier format. Ainsi, la nervure circulaire 16.3 des gobelets d’un premier format vient s’emboîter et s’immobiliser entre deux nervures circulaires 84, 84’ du support de gobelets 74. Le nombre de nervures circulaires 84, 84’, leur espacement et leur forme sont configurés de sorte que les nervures circulaires des gobelets de chaque format puissent s’emboîter et s’immobiliser entre deux nervures circulaires 84, 84’ d’un support de gobelets 74.
Bien entendu, l’invention n’est pas limitée à ces modes de réalisation pour éviter le basculement des gobelets positionnés dans les supports de gobelets 74.
Selon un mode de réalisation, le dispositif de remplissage 12 est configuré pour remplir différents formats de gobelets. Ainsi, une même commande peut comprendre une liste de boissons avec des volumes différents, chacun d’eux adapté à un format de gobelet donné.
Par conséquent, un des tests de référence pour suivre les altérations immunitaires chez les patients en unité de soins intensifs (e.g. patients atteints de sepsis, de traumatismes, ayant subi une chirurgie lourde, brûlés, ou patients atteints de pancréatites) est la diminution de l’expression d’un récepteur de surface appartenant au complexe majeur d’histocompatibilité (CMH) de classe II, à savoir le HLA-DR ( human leucocyte antigen-D related ), à la surface des monocytes (mHLA-DR), mesurée par cytométrie en flux. En effet, ce marqueur fournit des informations précieuses en terme de prédiction de mortalité ou encore de l’évaluation du risque d’infections secondaires chez ces patients (Venet et al. (2018) Nat Rev Nephrol 2018;14:121–137) .
La mesure de l’expression du mHLA-DR est une méthode connue dans la littérature pour identifier si un patient, par exemple atteint de sepsis, est immunodéprimé ou non (Monneret et Venet (2016) Cytometry Part B (Clinical Cytometry) 90B:376-386). Grâce à une mesure standardisée, un seuil de décision clinique a été proposé, à savoir un mHLA-DR d’au moins 5000 anticorps liés par cellule (en anglais : antibodies bound per cell ou AB/C ), comme par exemple 8000 AB/C, et utilisé pour identifier les patients immunodéprimés en soins intensifs.
À ce jour, la mesure du mHLA-DR est basée sur la cytométrie en flux, une technologie qui ne peut pas être mise en œuvre dans tous les sites hospitaliers pour la routine clinique en raison de nombreuses limitations. En effet, la cytométrie en flux présente des contraintes pré-analytiques et nécessite des techniciens qualifiés pour exploiter et interpréter les résultats. De plus, les carences en termes d’implantation des cytomètres en flux dans les hôpitaux n’est pas compensée par une accessibilité 24h/24 et 7j/7 lorsqu’ils sont présents (Monneret et Venet (2014),Crit Care 18:102). Enfin, c’est une technologie qui demande du temps dont on ne que rarement lorsque le patient est en service de réanimation ou en unités de soins intensifs.
Pour pallier ces inconvénients, d'autres biomarqueurs, utilisant des outils de biologie moléculaire, ont été proposés. Par exemple, on peut citer un biomarqueur basé sur le ratio du niveau d'expression, au niveau ARN messager (ARNm), de CD74 au jour J3 (suivant l'admission du patient au sein d'une structure médicale) sur le niveau d'expression de CD74 au jour J1. Le CD74 représente la chaîne invariante γ du HLA-DR. Il a été montré que le ratio d'expression CD74 J3/J1 est associé avec l'apparition d'infections secondaires acquises en soins intensifs (Peronnet et al. (2017) Intensive Care Medicine ;43(7):1013-20).
Il a également été proposé, dans le document WO2013/156627, une méthode de détermination du statut immunodéprimé ou non-immunodéprimé, à partir de la détermination de la charge en anellovirus, dans un échantillon biologique.
En parallèle, un prototype d’outil moléculaire multiplex permettant d’évaluer sur une plateforme automatisée l’expression d’un ensemble de 16 biomarqueurs, notamment des ARNm, a été mis en œuvre pour identifier le profil immunitaire de patients. (Tawfik et al. (2020) JID 2020 :222 (suppl 2)). Cependant, les biomarqueurs ne sont pas issus d’une étude sur cohorte dédiée et ne sont donc pas suffisamment fiables pour discriminer et stratifier les patients. De plus, les performances obtenues nécessitent d’être améliorées et aucune corrélation n’est faite entre les expressions des différents biomarqueurs et une valeur du mHLA-DR caractéristique de l’immunocompétence.
A ce jour, plusieurs gènes sont identifiés comme un lien potentiel avec le statut immunitaire chez un sujet. A titre d’exemple, - le gène TAP2 ( Antigen peptide transporter 2 ) code pour une protéine associée aux membranes de la superfamille des transporteurs ABC ( ATP-binding cassette ), qui est impliquée dans le transport de peptides du cytoplasme au réticulum endoplasmique dans le cadre du processus de présentation de l’antigène des molécules de classe I. L’expression du transcrit de ce gène a par ailleurs été étudiée chez des patients septiques, chez lesquels il a été montré qu’elle permettait d’identifier des patients avec un endotype particulier associé à la survenue du décès à 28 jours (Scicluna et al. (2017), Lancet Respir Med 5(10) : 816-826) ; - le gène C3AR1 ( complement component 3a receptor 1 ) code pour le récepteur du complément C3a, une protéine relarguée lors de l’activation du complément. La liaison de l’anaphylatoxin C3a sur son récepteur active la chimiotaxie et l’opsonisation des bactéries. Dans la littérature, il a été montré que le transcrit du gène C3AR1 était plus fortement exprimé chez les patients septiques que chez des volontaires sains (Napier et al. (2016) J. Exp. Med. 213(11):2365-2382) ; - le gène CD177 code pour la glucoprotéine de membrane des neutrophiles CD177, découverte en 1971 chez un cas de neutropénie néonatale. Il a été mis en évidence dans une étude une augmentation du niveau d’expression de CD177, au niveau ARNm et protéine, dans les neutrophiles circulants de patients ayant eu un choc septique (Demaret et al. (2016), Immunol. Letters 178 :122-130) ; - le gène IL1R2 code pour un récepteur de l’interleukine-1, et plus particulièrement l’interleukine-1α (IL1A) et l’interleukine-1β (IL1B), qui transmettent des signaux intracellulaires via des voies partagées par d’autres récepteurs comme le récepteur de l’Interleukine 18 (IL18), entrainant la sécrétion de facteurs médiateurs de l’inflammation. Le récepteur IL1R2 est décrit comme un récepteur « leurre », qui fixe IL1A et IL1B et les empêche donc de se lier à leurs récepteurs réguliers, ce qui se traduit par une inhibition de la traduction du signal médiée normalement par ces interleukines. Le transcrit d’IL1R2, a été identifié comme différentiellement exprimé dans les neutrophiles de patients septiques dans une étude bioinformatique (He et al. (2019) 35(6):481-490). IL1R2 a été proposé comme marqueur de diagnostic du sepsis, sur la base de résultats de mesure de la concentration sérique d’IL1R2 chez des volontaires sains et des patients septiques (Lang et al. (2017) Shock 47(1):119-124). Des analyses par immunoprécipitation de chromatine ont montré des différences au niveau de la chromatine (méthylation et acétylation des histones) du promoteur du gène d’IL1R2 entre des patients septiques et des volontaires sains (Weiterer et al. (2015) PLoS One 10(3):e0121748).
Bien que ces marqueurs soient décrits individuellement, à ce jour, aucune étude n’a mis en évidence de lien suffisamment robuste entre leurs expressions combinées et l’immunodépression des patients, de même qu’aucune corrélation n’a été démontrée entre ces marqueurs et ceux de l’immunosuppression communément utilisés, tels que l’expression de HLA-DR à la surface des monocytes, le pourcentage des cellules T régulatrices ou le nombre de cellules T CD4+ (Demaret et al. (2016) Immunology Letters 178:122–130). En d’autres termes, il n’existe pas d’alternative aux techniques de cytométrie en flux.
Il subsiste donc un besoin évident d’identifier un moyen fiable (i.e. présentant une sensibilité et/ou une spécificité acceptable) et rapide, qui soit également facile à lire/interpréter, simple d’utilisation et intégrable en routine clinique, afin de statuer sur l’état immunitaire du patient, notamment pour identifier l’immunosuppression.
DESCRIPTION DE L’INVENTION Après de nombreuses recherches, il est du mérite des inventeurs d’avoir pu identifier, de manière inattendue et surprenante, une signature de plusieurs gènes dont l’expression dérégulée est caractéristique d’un statut immunodéprimé.
Un objectif de la présente invention est d’identifier les mêmes patients immunodéprimés, notamment en service de soins intensifs, que ceux caractérisés par une expression mHLA-DR <8 000 anticorps liés/cellule (AB/C).
Ainsi, un premier objet de la présente invention concerne un procédé de détection in vitro ou ex vivo d’un statut immunodéprimé chez un sujet , comprenant les étapes suivantes : a. Quantification, dans un échantillon biologique dudit sujet, de l’expression d’au moins 2 gènes cibles sélectionnés dans le groupe constitué par TAP2, C3AR1, CD177 et IL1R2 ; b. Comparaison de l’expression de chacun des gènes respectivement à une valeur de référence de sorte à identifier la présence ou non d’une variation de l’expression.
La présente invention présente donc divers avantages, notamment le fait de permettre une généralisation de l’immunosurveillance des sujets, comme celle des patients en soins intensifs, de manière simple et rapide au moyen d’une technologie (outils et procédé) qui peut être mise en œuvre sur tous les sites hospitaliers, à l’inverse de la cytométrie en flux. La présente invention permet également d’identifier les patients immunodéprimés, pour lesquels il serait pertinent d'administrer des traitements immunostimulants dans le cadre d’essais cliniques, et de permettre ainsi de démontrer l’efficacité de tels traitements. En outre, l’invention ouvre la voie à la médecine personnalisée chez les patients, notamment ceux en soins intensifs.
A la connaissance des inventeurs, il n'a jamais été décrit ni suggéré que la mise en évidence d’une variation de l’expression d’au moins 2 gènes cibles sélectionnés dans le groupe constitué par les gènes TAP2, C3AR1, CD177 et IL1R2 permet de détecter, in vitro ou ex vivo , un statut immunodéprimé chez un sujet. De surcroît, il n'a jamais été décrit ni suggéré que le résultat de cette détection est corrélé avec une quantification de l’expression du HLA-DR à la surface des monocytes (mHLA-DR) inférieure à 8000 AB/C, avantageusement inférieure à 7500 AB/C , inférieure à 7500 AB/C, de préférence inférieure à 7000 AB/C, inférieure à 6500 AB/C, voire même inférieure à 6000 AB/C, inférieure à 5500 AB/C ou encore inférieure à 5000 AB/C, mesurée par cytométrie en flux.
Les gènes cibles dont l’expression est quantifiée dans le procédé objet de la présente invention sont connus de la personne du métier et les localisations chromosomiques sont notamment données dans le tableau 1 ci-dessous.
Biomarqueurs Localisation chromosomique (GRCh38/hg38) TAP2 chr6:32,821,833-32,838,823 C3AR1 chr12:8,058,302-8,066,471 CD177 chr19:43,353,659-43,363,172 IL1R2 chr2:101,991,816-102,028,544
Dans le cadre de l’invention, et par opposition à un statut immunitaire normal, qualifié d’immunocompétent, les expressions « immunodéprimé », « immunosupprimé », « immunodéficient », « statut immunitaire hypoactif » ou « paralysie immunitaire » sont utilisées indifféremment et désignent un système immunitaire/une réponse immunitaire moins actif que la normale en réponse à une infection ou un état inflammatoire. En particulier, il s’agit d’une immunodépression caractérisée par une altération des réponses immunitaires innées et adaptatives, notamment une apoptose accrue et un dysfonctionnement des lymphocytes, une altération des fonctions phagocytaires, une désactivation des monocytes avec diminution de l’expression de surface du HLA de classe II et une altération de la production de cytokines.
Dans le cadre de l’invention, le terme « sujet » désigne un être humain et de préférence, le sujet est un patient. Le patient est défini comme une personne entrée en contact avec un professionnel de santé, notamment un médecin, une structure médicale ou un établissement de santé.
Selon un mode de réalisation particulier, le sujet est un patient au sein d’un établissement de santé, de préférence au sein d’un hôpital, de préférence encore au sein du service des urgences, du service de réanimation, en unité de soins intensifs (USI) ou en unité de soins continus, et tout particulièrement, le sujet est un patient en USI.
Dans le cadre de l’invention, les expressions « biomarqueur » et « marqueur » sont utilisées indifféremment et désignent une caractéristique biologique mesurable objectivement qui représente un indicateur des processus biologiques normaux ou pathologiques. Il peut s'agir en particulier d'un biomarqueur moléculaire, de préférence détectable au niveau ARNm. Plus particulièrement, le biomarqueur peut être un biomarqueur endogène ou loci, tel qu'un HERV ou un gène.
Le « sepsis » est une pathologie dans laquelle la réponse immunitaire est dérégulée chez un individu, suite à une infection, conduisant à une défaillance et des dysfonctions d'organes multiples et potentiellement mortelles. Le « choc septique » est un sous-type de sepsis, dans lequel une hypotension persiste, malgré un remplissage vasculaire adéquat.
Dans le cadre de l’invention, l’expression « échantillon biologique » désigne tout échantillon provenant d’un sujet, et pouvant être de différentes natures, comme le sang ou ses dérivés, les expectorations, l’urine, les selles, la peau, le liquide céphalo-rachidien, le liquide de lavage broncho-alvéolaire, le liquide de ponction de la cavité abdominale, la salive, les sécrétions gastriques, le sperme, le liquide séminal, les larmes, la moelle épinière, ganglion du nerf trijumeau, tissu adipeux, tissu lymphoïde, tissu placentaire, tissu du tractus gastro-intestinal, tissu du tractus génital, tissu du système nerveux central. En particulier, cet échantillon peut être un fluide biologique, comme un échantillon de sang ou un échantillon dérivé du sang, qui peut notamment être choisi parmi le sang total (tel que collecté de la voie veineuse, c’est-à-dire contenant les cellules blanches et rouges, les plaquettes et le plasma), le plasma, le sérum, ainsi que tout(tous) type(s) de cellules extraites à partir du sang, telles que les cellules mononuclées sanguines périphériques (ou PBMC, contenant les lymphocytes (B, T et cellules NK), les cellules dendritiques et les monocytes), des sous-populations de cellules B, des monocytes purifiés, ou des neutrophiles.
Dans le cadre de l’invention, les expressions « valeur de référence », « valeur normale », « norme », « valeur usuelle » ou « échantillon biologique de référence » sont utilisées indifféremment et désignent une valeur ou une moyenne des valeurs d’un paramètre (e.g. expression de gène, notamment au niveau ARNm, …) issue d’un ou plusieurs sujets sains, présentant un statut immunitaire normal ou immunocompétent, c’est-à-dire un sujet dont on sait que le statut immunitaire n’est pas immunodéprimé avec notamment une valeur du mHLA-DR supérieure à 5000 AB/C, notamment supérieure à 5500 AB/C, supérieure à 6000 AB/C, supérieure à 6500 AB/C, voire même supérieure à 7000 AB/C, supérieure à 7500 AB/C, et tout particulièrement, supérieure à 8000 AB/C, que le sujet ne présente pas de réponse immunitaire altérée consécutive à une inflammation ou sepsis, par opposition à une « valeur testé », « valeur test » ou « échantillon biologique test ». La valeur de référence et la valeur test sont obtenues par la mise en œuvre du même procédé de détection, quantification, identification…