INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Par « nucléase s Cas12b », on entend en particulier celles dérivées de Alicyclobacillus kakegawensis (AkCas12b) ou de Bacillus hisashii (BhCas12b), et une version mutante améliorée pour l’édition génique de BhCas12b (K846R/ S893R/E837G). Plus particulièrement encore, il est question de la Cas12b de séquence SEQ ID NO : 107 et les mutants de celle-ci.
Par « nu cl éases CasX ou Cas12e », on entend en particulier celles dérivées de Deltaproteobacteria (DpbCasX) ou de Planctomycetes (PlmCasX), sauvage ou désactivée par les mutations N672A, E769A et N935A, ou améliorées pour l’édition génique en cellules de mammifères telles que les versions DpbCasX_R3V2 ou PlmCasX_R1V2 . Plus particulièrement encore, il est question des Cas12e de séquences SEQ ID NOs : 112 et 113, et les mutants de celles-ci.
Par « nucléases CRISPR de type V », sont désignées des nucléases ayant une taille réduite (400 à 700 AA) par rapport aux nucléases Cas9, Cas12a et CasX. Il s’agit notamment des protéines Cas12f (ou Cas14) d’archées non cultivées (Un1Cas12f1), de Syntrophomonas palmitatica (SpCas12f1) ou d’ Acidibacillus sulfuroxidans (AsCas12f1), soit sauvages ou portant une ou plusieurs mutations abolissant l’activité catalytique (D225A et E324A) ou partiellement conduisant à l’obtention d’une nickase (R383A et D401A). Plus particulièrement encore, il est question des Cas12f ou Cas 14 de séquences SEQ ID NOs : 108 à 111 et les mutants de celles-ci.
Par « nucléase s Cas 12j ou Cas Φ », on entend en particulier celles du clade de Biggiephage qui est aussi une CRIPR-Cas de type V.
Au vu de ce qui précède, on comprend également que selon un autre mode de réalisation l’invention a pour objet le conjugué polypeptidique tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite protéine Cas est choisie parmi : les nucléases Cas9, Cas12b, CasX ou Cas12e, CRISPR de type V (Cas12f ou Cas14), Cas 12j ou CasΦ ; les orthologues Cas9, Cas12b, CasX ou Cas12e, CRISPR de type V (Cas12f ou Cas14), Cas 12j ou CasΦ ; et les mutants ou les variants fonctionnels Cas9, Cas12b, CasX ou Cas12e, CRISPR de type V (Cas12f ou Cas14), Cas 12j ou CasΦ,
Tableau 3. Conditions et rendement de la préparation du E-phényléthylènediisopropylaminoborane en présence de DIPOB généré in-situ .
EXEMPLE 4 : Hydroboration du 5-décyne via l’utilisation d’un catalyseur
Protocole général
À une solution de 5-décyne (1 mmol,1 équivalent), et d’un aminoborane (un nombre n e d’équivalents) dans 1 mL d’octane dans un tube scellé, est ajouté un catalyseur (5 mol%). Le mélange est porté à 100°C pendant un nombre d’heures h d .
Le produit est analysé en RMN 1 H et 11 B.
Le rendement est déterminé via un étalon interne mésitylène. Le rendement est déterminé à l’aide des signaux RMN 1 H par comparaison entre les signaux des protons aromatiques du mésitylène et les signaux du proton éthylénique des alcènylaminoboranes A et B .
Le rendement en alcénylaminoborane est déterminé en RMN 1 H via l’étude de la constante de couplage. Les constantes de couplages des composés A et B étant très similaires, l’identification des composés A et B a été réalisée à travers la formation de composés connus de la littérature (i.e. par la transformation des groupements aminoboranes en groupements pinacolboranes).
Les résultats du rendement en A et en B sont reportés dans le tableau 4.
Aminoborane ( n e éq.) R = Acide Temps ( h d heures) Rendement en RMN 1 H A / B 3 iPr Me 2 NPhCOOH 20 h 7% / 12% 1.1 iPr AcOH 16 h 28% / 4% 1.1 iPr CH 3 SO 3 H 16 h 13% / 18% 1.1 iPr CF 3 COOH 16 h 30% / 23% 1.1 iPr HFIP 14 h 13% / 0% 1.1 iPr CF 3 COOH 16 h 30 %/23 % 1.1 Cy CF 3 COOH 16 h 24 %/31 %
Tableau 4. Conditions et rendement de l’hydroboration du 5-décyne via l’utilisation d’un catalyseur
CONJUGUÉS PEPTIDIQUES ET LEUR UTILISATION POUR PROMOUVOIR L’IMMUNOTOLÉRANCE AUX NUCLEASES CAS DANS UNE THÉRAPIE GÉNIQUE PAR INGENIERIE DU GENOME DOMAINE DE L’INVENTION La présente invention concerne généralement le domaine de la médecine. Plus particulièrement, elle concerne les conjugués polypeptidiques, les compositions et les méthodes pour promouvoir l’immunotolérance au système CRISPR-Cas ( Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-CRISPR associated protein) , pour une thérapie génique par ingénierie du génome.
ART ANTÉRIEUR L’immunotolérance est un état de non-réponse du système immunitaire à des substances ou des tissus qui ont la capacité de provoquer un rejet immunitaire dans un organisme sain. Elle est induite par une exposition préalable à un antigène spécifique et contraste avec l’élimination conventionnelle des corps étrangers par les mécanismes de l’immunité (innée). La tolérance immunitaire est importante pour la physiologie normale. La tolérance centrale est le principal moyen par lequel le système immunitaire apprend à distinguer le soi du non-soi. La tolérance périphérique est essentielle pour prévenir la réactivité excessive du système immunitaire à diverses entités environnementales ( p. ex . allergènes, microbes intestinaux, etc. ) ainsi qu’aux antigènes produits par la phagocytose des cellules mortes de l’organisme. Les déficits de tolérance centrale ou périphérique sont également à l’origine de maladies auto-immunes, entraînant des syndromes tels que le lupus érythémateux systémique, la polyarthrite rhumatoïde, le diabète de type 1 ou la sclérose en plaques. Cependant, des découvertes récentes établissent qu’il est possible d’induire l’immunotolérance périphérique, par exemple en ciblant l’entrée d’un antigène dans les cellules présentatrices d’antigènes (APC) par un récepteur présent sur les macrophages et les cellules dendritiques (DC) à savoir, le récepteur des asialoglycoprotéines des cellules dendritiques (DC-ASGPR) (Li D et al. , J Exp Med. 2012;209(1):109-121).
Le système CRISPR-Cas de bactéries, d’archées et de grands bactériophages est un système de défense adaptatif permettant la destruction d’éléments génétiques mobiles (Makarova, KS. et al. 2020. Nat Rev Microbiol 18(2):67-83), ainsi que le développement d’outils de biotechnologie pour l’ingénierie des génomes de tous types cellulaires (Knott, GJ and Doudna, J. 2018 Science 361(6405):866-869). À cette fin, l’utilisation de différentes familles de nucléases guidées par un ARN guide, telle que les protéines Cas9 et Cas12, permettent la reconnaissance d’une séquence ADN double brin et sa coupure à un endroit spécifique. Ainsi, les nucléases programmées par un CRISPR-RNA ou ARN guide pour la reconnaissance d’une séquence cible d’acides nucléiques sont en passe de devenir un composé moléculaire biotechnologique des plus efficaces pour le génie génétique et la thérapie génique pour l’édition de gènes ou le contrôle de l’expression des gènes (F. A. Ran et al. , Nature 520, 186–191 (2015) ; (Knott, GJ and Doudna, J. 2018 Science 361(6405):866-869). Les nucléases Cas coupent l’ADN sur une séquence cible précise, guidée par la reconnaissance d’homologie entre l’ARN guide et un site chromatinien. Le mécanisme de réparation de l’ADN permet alors de modifier une séquence de gènes, dans un but thérapeutique (F. A. Ran et al. , Nature 520, 186–191 (2015)). En outre, certains mutants de nucléases Cas peuvent agir comme une nickase, ou perdre entièrement leur activité de nucléase et assumer d’autres fonctions comme pour la modification chimique de l’ADN ou la transcription de gènes (Knott, GJ and Doudna, J. 2018 Science 361(6405):866-869). Comme les systèmes CRISPR-Cas permettent une édition génétique précise dans les cellules eucaryotes, il ouvre de réelles perspectives de réparation et d’expression génique in vivo et permet d’envisager la guérison de maladies génétiques ou acquises aujourd’hui incurables. Ainsi, un premier essai de phase I/II a été lancé, utilisant le transfert du gène Cas9 dans des cellules photoréceptrices de la rétine avec un vecteur viral AAV, pour réparer un gène RPE65 mutant causant l’amaurose congénitale de Leber (A. Mullard, Nat. Rev. Drug Discov. 18, 656–656 (2019)). Par ailleurs, d’autres protocoles cliniques de réparation génique par édition de bases nucléotidiques in vivo se profilent pour introduire un changement de base par une protéine Cas mutante à activité nickase pour le traitement d’une hyperlipidémie ou de la drépanocytose par modification des gènes Pcsk9 ou de l’hémoglobine, respectivement (Ledford, H. Nature 2022). Enfin, d’autres applications cliniques deviennent également possibles avec l’utilisation de protéines Cas sans activité protéase, mais fusionnées à un domaine capable de moduler directement la transcription de gènes cibles (Jensen, TI. 2021 Genome Res. 31(11):2120-2130), ou à un domaine enzymatique pouvant modifier la méthylation d’un locus et abolir ou activer durablement son expression (Pulecio, J. 2017. Cell Stem Cell 21(4):431-447).
Néanmoins, l’utilisation de nucléases Cas en médecine, pour la modification génétique d’organes in situ , est entravée par la perspective d’une mutagenèse à la suite d’une activité hors cible de Cas, ou au rejet immunitaire des cellules exprimant cette protéine bactérienne (C. T. Charlesworth, et al. , Nat. Med. 25, 249–254 (2019)). Pour réduire la mutagenèse hors cible par Cas, des variantes haute-fidélité de Cas9 et de Cas12 ont été développées (B. P. Kleinstiver, et al. , Nature 529, 490–495 (2016) – I. M. Slaymaker, et al. , Science 351, 84–8 (2016) ; Xiaoshu Xu, Augustine Chemparathy, et al . 2021. Mol Cell 81(20):4333-4345.e4 ; Pausch, P. Soczek, KM. 2021 Nat Struct & mol biol 28(8):652-661 ; Tsuchida, CA. Zhang, S. 2022 Mol Cell 82(6):1199-1209.e6). Toutefois, l’usage des protéines Cas en médecine pose un problème majeur d’immunogénicité, car environ 80% de la population présente une immunité humorale et cellulaire contre les orthologues Cas9 de S. pyog è nes et S. aureus , qui sont des commensaux humains communs (C. T. Charlesworth, et al. , Nat. Med. 25, 249–254 (2019)). Le risque de rejet immunitaire n’est donc pas négligeable et avec lui l’échec de la thérapie génique basée sur le système CRISPR-Cas. Cela soulève des inquiétudes légitimes quant à l’utilisation de Cas en thérapie génique, puisque les immunisations précédentes compromettent fortement l’efficacité de l’édition du génome in vivo chez les patients immunocompétents. Quand bien même cet inconvénient pourrait être réduit via l’usage ponctuel et éphémère de protéines Cas rarement contact avec les humains, en cas de seconde administration ou d’une expression durable de celles-ci, le problème ci-dessus ne serait pas résolu pour autant.
BREF APERÇU DE L’INVENTION Face à ce défi majeur de pouvoir promettre une thérapie génique in vivo sûre et efficace, l’inventeur a créé de nouveaux conjugués polypeptidiques, des compositions et des méthodes capables d’induire une tolérance immunitaire à la protéine Cas, en particulier Cas9, dans l’organisme des mammifères. Grâce à ces outils, il est désormais possible de prévenir le rejet immunitaire des cellules de l’organisme exprimant une protéine Cas et de l’associer à une expression génétique transitoire, inductible ou durable de la protéine Cas. Par conséquent, l’augmentation de la tolérance immunitaire à la protéine Cas devrait jeter les bases de protocoles sûrs et efficaces de réparation génique ou de contrôle de l’expression génique par le système CRISPR-Cas chez l’Homme.
DESCRIPTION DÉTAILLÉE CONJUGUÉS POLYPEPTIDIQUES
Bien entendu, d’autres variantes de progression, sous forme de série arithmétique ou géométrique, ou autre, peuvent être mises en œuvre pour déterminer P fréquences de filtrage de test, chaque fréquence de filtrage de test étant supérieure ou égale à la valeur de fréquence plancher, de préférence égale à 10 Hz, et inférieure aux deux tiers de la fréquence de coupure propre du transducteur.
L’étape 50 est suivie de l’application de plusieurs traitements de test 52_1 à 52_P.
Chacun de ces traitements met en œuvre les étapes 34 à 44 décrites en référence à la , avec, pour chaque traitement 52_i, la mise en œuvre d’un filtrage passe-haut de fréquence F i correspondante, déterminée à l’étape 50.
En d’autres termes, chaque traitement de test 52_i met en œuvre une fréquence de filtrage de test F i et permet de calculer un deuxième gain de filtrage en plateau, correspondant au premier gain d’amplification atténué d’une valeur x i calculée pour limiter la valeur de l’excursion du transducteur à une valeur d’excursion inférieure à la valeur d’excursion maximale.
Le procédé comporte ensuite une sélection 54 d’un filtrage passe-haut à appliquer au signal numérique audio de fréquence de filtrage choisie parmi les fréquences de filtrage de test F 1 à F P .
La sélection 54 comporte, dans un mode de réalisation, un calcul 56 de la puissance P i de chaque signal audio numérique filtré et amplifié de test obtenu par le traitement 52_i, et la détermination 58 du traitement 52_j pour lequel la puissance P j est maximale.
A l’issue de l’étape de sélection 54 est obtenu le couple de fréquence de filtrage Fj et d’atténuation de gain xj à appliquer pour obtenir le deuxième gain de filtre en plateau grave LS à appliquer.
Le traitement 52_j, mettant en œuvre un filtrage passe-haut de fréquence de filtrage F j , et une application d’un filtre LS j de deuxième gain Gl-x j est mis en œuvre.
Avantageusement, le procédé permet d’amplifier les basses ou moyennes fréquences de manière auto-adaptative, tout en évitant toute dégradation du transducteur grâce à la limitation de la valeur d’excursion de manière à ne pas dépasser la valeur d’excursion maximale.
Avantageusement, le procédé proposé permet d’améliorer la restitution du signal audio dans les basses fréquences et dans les moyennes fréquences, sans introduire de distorsion non-linéaires.
Procédé et dispositif de connexion sécurisée dans un réseau local. L’invention se rapporte au domaine général des télécommunications. Elle concerne plus particulièrement la sécurité d’un terminal d’un réseau local contre une attaque qui permettrait à un terminal non autorisé d'y accéder frauduleusement.
Les technologies radio, notamment Wi-Fi, sont de plus en plus utilisées au sein d’un réseau local, qu’il soit domestique ou d’entreprise. Ces technologies permettent de connecter des smartphones, des caméras, des drones, des capteurs et encore toutes sortes d’objets regroupés sous l’acronyme IoT « Internet Of Things ». Bien que ces technologies aient de nombreux avantages, elles comportent aussi des faiblesses liées à la nature même du médium de transmission. Ainsi, n’importe quel individu à portée radio est capable de recevoir les données radio échangées par ces équipements (même si celles-ci sont chiffrées). En particulier, n’importe quel terminal pirate peut utiliser le canal radio de manière malveillante pour détecter les points d’accès Wi-Fi à proximité, obtenir les adresses et la liste des terminaux connectés à chaque point d’accès et finalement envoyer des paquets radio malveillants afin de nuire à un objet, par exemple en le déconnectant de son point d’accès (il peut utiliser à cet effet une attaque bien connue de l’homme du métier, connue sous l’appellation anglo-saxonne de « deauth flood » ) ou en utilisant un type d’attaque qui lui permettrait de déchiffrer les paquets destinés à l’objet (un tel type de vulnérabilité est également bien connue de l’homme du métier sous les acronymes de Krack ou Kr00k).
Il est de surcroît possible, en analysant l’adresse d’un terminal, de déterminer son type. En effet, les premiers caractères de cette adresse, par exemple de type MAC, identifient souvent le fabricant, ou constructeur, du terminal. Ces données peuvent être utilisées pour préparer un vol ou identifier des vulnérabilités particulières de certains terminaux. Par exemple si l’attaquant détecte que le terminal est issu d’un fabricant de caméras, il peut tenter de récupérer les images issues de la caméra, ou de la déconnecter, etc.
On connait une solution pour limiter de telles attaques. Il est connu de rendre aléatoire l’adresse, et notamment l’adresse MAC, d’un terminal, à des fins de protection de la vie privée. Ainsi, aujourd’hui, un téléphone intelligent (smartphone) peut utiliser des adresses différentes en fonction du réseau Wi-Fi auquel il se connecte. Des travaux en cours au sein de l’organisme Wi-Fi Alliance visent à autoriser les terminaux à modifier leur adresse régulièrement. Par exemple, la société Apple© propose pour ses terminaux les plus récents un changement d’adresse MAC toutes les 24 heures.
Cependant, même cette dernière solution présente une faille de sécurité : un terminal malveillant peut intercepter l’adresse d’un objet du réseau, même si la plage temporelle de maintien de l’adresse est limitée.
De surcroît une telle solution implique de modifier le logiciel ( firmware ) des cartes Wi-Fi des terminaux, ce qui est complexe et coûteux.
Les compositions lubrifiantes suivantes (CL compositions selon l’invention et CC compositions comparatives) sont préparées selon les méthodes connues de l’homme du métier.
Les compositions sont indiquées dans le tableau 2 ci-après :
CC1 CC2 CC3 CL Huile de base de groupe II + selon l’invention (% en poids) 12 - - 13,5 Diester selon l’invention (% en poids) - - - 76 Huile de base de groupe II - 10,5 10 - Huile de base de groupe III 79,74 81,24 81,74 - Paquet d’additifs 7,56 7,56 7,56 9,6 Additif - Modificateur de viscosité (% en poids) - - - 0,2 MoDTC (% en poids) 0,5 0,5 0,5 0,5 Additif abaisseur de point d’écoulement (% en poids) 0,2 0,2 0,2 0,2
Les paramètres des compositions lubrifiantes du tableau 2 ci-dessus sont indiquées dans le tableau 3 ci-après :
CC1 CC2 CC3 CL volatilité Noack à 250°C (%)(mesurée selon la méthode CEC L-40-A-93) 15 15 15 15 BOV (Base-Oil Viscosity) (mm 2 /s) 4,0 4,1 4,1 3,2 HTHS 100 (mPa.s) 3,66 3,66 3,66 3,42 KV100 ASTM D445-97 (mm 2 /s) 4,754 4,818 4,823 4,087 KV40 ASTM D445-97 (mm 2 /s) 21,57 21,97 22,00 15,85 Indice de viscosité (VI) 146 147 147 169
La viscosité HTHS (de l’anglais : « High Temperature, High Shear ») est une mesure de la viscosité du film d’huile résiduel sous forte contrainte (cisaillement sous pression mécanique) à température élevée. Ici, la valeur de viscosité HTHS 100 est mesurée à 100°C.
Ces valeurs sont mesurées selon les normes CEC L-036-90 ou ASTM D4683.
La BOV est un calcul de viscosité à 100°C du mélange des huiles de base de la formule (en mm 2 /s).
Exemple 2 : Résultats concernant les propriétés Fuel E co
Un essai a été effectué sur un moteur Suzuki K12C (1.2L 4 cylindres) qui est entrainé (pas de combustion). On mesure la friction (couple résistif en N.m) du moteur qui varie en fonction du lubrifiant utilisé. Les gains en friction sont ensuite convertis en consommation de carburant (Fuel Eco).
Le K12C est un moteur du constructeur Maruti-Suzuki. C’est un bloc 4 cylindres essence de 1.2L de cylindrée atmosphérique, il est en alliage d’aluminium. Il est équipé d’une distribution entraînée par chaine, doubles arbres à cames en tête, 16 soupapes avec système de commande de calage variable à l’admission et à l’échappement.
On mesure la friction (couple résistif en N.m) du moteur qui varie en fonction du lubrifiant utilisé. Les gains en friction sont ensuite convertis en consommation de carburant (Fuel Eco).
Les résultats sont donnés dans le tableau 4 suivant et présentent le gain en friction exprimés en % (par rapport à l’huile de référence) en fonction de la température pour les compositions de l’exemple1.
L’huile de référence est une huile 0W-8 « standard » avec la même additivation que l’huile 0W-20 GF-6. Sa BOV est de 4,1 et sa viscosité à 100°C est de 5,2, et son HTHS 150°C de 1,80.
Gain moyen K12C Calcul gain NEDC 25°C 50°C 80°C 90°C 100°C CC1 5,4% 4,8% 4,2% 3,6% 2,9% 0,22% CC2 3,9% 3,0% 0,8% 1,4% 0,9% 0,11% CC3 3,9% 2,9% 1,5% 1,4% 0,5% 0,14% CL 14,6% 10,2% 6,3% 4,2% 2,9% 0,46%
La composition lubrifiante CL réduit fortement le frottement sur le moteur K12C dû à une meilleure lubrification, en particulier aux températures les plus froides, ce qui est plus favorable sur un véhicule hybride rechargeable ou un moteur de véhicule hybride comprenant un prolongateur d’autonomie. Le gain en carburant calculé sur cycle NEDC est aussi plus important sur la composition lubrifiante CL que les autres huiles (CC1-CC3).
Chacune des chaînes lourdes et des chaînes légères est constituée d’une région constante et d’une région variable. L’assemblage des chaînes qui composent un anticorps permet de définir une structure tridimensionnelle caractéristique en Y, où, la base du Y correspond à la région constante Fc qui est reconnue par le complément et les récepteurs Fc, et l’extrémité des bras du Y correspondent à l’assemblage respectif des régions variables, de la chaîne légère et de la chaîne lourde.
Plus précisément, chaque chaîne légère est constituée d’une région variable (V L ) et d’une région constante (C L ). Chaque chaîne lourde est constituée d’une région variable (V H ) et d’une région constante constituée de trois domaines constants C H 1, C H 2 et C H 3. Les domaines C H 2 et C H 3 composent le domaine Fc.
La région variable de la chaîne légère est constituée, de trois régions déterminant la reconnaissance de l’antigène (CDR) entourées de quatre domaines charpentes. La région variable de la chaîne lourde est également constituée de trois régions déterminant la reconnaissance de l’antigène (CDR) entourées de quatre domaines charpentes. Le repliement tridimensionnel de ces régions variables est tel que les 6 CDR sont exposés du même côté de la protéine et permettent la formation d’une structure spécifique reconnaissant un antigène déterminé.
Les anticorps décrits dans l’invention sont isolés et purifiés, peuvent appartenir à n’importe quel isotype/classe ( e.g. IgG, IgE, IgM, IgD, IgA et IgY) ou à une sous-classe ( p. ex . IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl et IgA2) et sont différents des anticorps naturels. Ces anticorps sont matures, c’est-à-dire qu’ils possèdent une structure tridimensionnelle ad hoc leur permettant de reconnaître l’antigène, et possèdent toutes les modifications post -traductionnelles essentielles à leur reconnaissance antigénique, notamment la glycosylation et la formation de ponts disulfures intra et intermoléculaires.
Il s’agit plus particulièrement d’« anticorps monoclonaux », c’est-à-dire qu’ils ne reconnaissent qu’un seul déterminant antigénique du DC-ASGPR, contrairement aux anticorps polyclonaux qui correspondent à un mélange d’anticorps, et donc peuvent reconnaître plusieurs déterminants antigéniques d’une même protéine.
Par « fragment de celui-ci », on désigne toute partie de l’anticorps selon l’invention qui conserve la capacité de se lier à l’épitope reconnu par l’anticorps complet. Des exemples de tels fragments incluent, sans s’y limiter, Fab, Fab’ et F(ab’) 2 , Fd, les Fv à chaîne unique (scFv), les anticorps à chaîne unique, les Fv liés par un pont disulfure (dsFv) et des fragments comprenant la région V L ou V H . Les fragments se liant à l’épitope, y compris les anticorps à chaîne unique, peuvent comprendre la ou les régions variables seules ou en combinaison avec l’intégralité ou une partie des éléments suivants : région charnière, domaines C H 1, C H 2 et C H 3. De tels fragments peuvent contenir un ou les deux fragments Fab ou le fragment F(ab’) 2 . En outre, les fragments peuvent être ou peuvent combiner des membres de l’une quelconque des classes d’immunoglobulines suivantes : IgG, IgM, IgA, IgD ou IgE et leurs sous-classes.
Les fragments Fab et F(ab’) 2 peuvent être produits par clivage protéolytique, en utilisant des enzymes telles que la papaïne (fragment Fab) ou la pepsine (fragment F(ab’) 2 ). Les fragments « Fv à chaîne unique » (« scFv ») sont des fragments se liant à un épitope qui contiennent au moins un fragment d’une région variable (V H ) d’anticorps liée à au moins un fragment d’une région variable (V L ) d’anticorps à chaîne légère. Le linker peut être un peptide court et flexible choisi pour assurer que le repliement correct en trois dimensions des régions V L et V H se produise une fois qu’elles sont liées, de manière à maintenir la spécificité de liaison à la molécule cible de l’anticorps entier à partir duquel le fragment d’anticorps à chaîne unique est dérivé. L’extrémité carboxyle de la séquence V L ou V H peut être liée de manière covalente par un agent de liaison à l’extrémité aminoacide d’une séquence V L ou V H complémentaire.