INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Chaque culture d'une nuit a ensuite été diluée 100x dans un milieu frais additionné d'antibiotiques appropriés (comme ci-dessus) et distribuée dans 3 à 6 nouvelles cultures auxquelles a été donné du xylitol à différentes concentrations dans une plage de 0 % à 5 % (les concentrations exactes de xylitol sont listées dans les figures afférentes en section 4). Les cultures ont ensuite été transférées sous forme d'aliquotes de 200 µl dans une plaque de microtitration noire à 96 puits à fond transparent. Pour normaliser les émissions de fluorescence, une rangée de puits dans la plaque a été dédiée à des cellules qui hébergent les plasmides témoins pSNP958 et pSNP1617 qui ne codent pas pour gfp (pour estimer l'autofluorescence) et une autre rangée dédiée aux milieux sans aucune cellule (pour estimer la fluorescence de fond). La plaque de microtitration a été scellée avec une membrane d'étanchéité Breath-Easy® de Merck (Whitehouse station, NJ, USA) et placée dans le lecteur de microplaques Synergy H1 d'Agilent Biotek (Winooski, VT, USA) programmé pour incuber pendant 24 heures à 37 °C avec une agitation constante. L’OD600 et la fluorescence GFP (excitation à 485 nm, émission à 516 nm, gain de 90) ont toutes deux été mesurées toutes les 10 minutes tout au long de l'incubation. Les émissions de fluorescence enregistrées ont été normalisées conformément aux densités cellulaires correspondantes et corrigées quant aux niveaux de fond et d'autofluorescence.
Critères et choix du promoteur inductible
Nous avons développé une stratégie de bioconfinement utilisant les systèmes CRISPR/Cas comme interrupteurs d’arrêt de nos circuits de production ou souches. Cela nécessite que le système CRISPR/Cas soit sous contrôle transcriptionnel étroit à partir d'un promoteur qui est activé lors de l'ajout d'une molécule inductrice externe.
Dans le domaine de la microbiologie moléculaire, des opérons de gènes liés à la conversion/utilisation de sucres peuvent être induits par les sucres eux-mêmes lorsqu'ils se lient et influencent les protéines répresseurs transcriptionnels. Pour la présente étude, il a été décidé d'étudier un promoteur négativement inductible dont il a été prévu l’induction par le xylitol. Cet alcool de sucre à 5 carbones présente plusieurs avantages. Tout d'abord, le xylitol est généralement considéré comme sûr pour la consommation humaine par la FDA (Xiang et al., 2021). De plus, plus de la moitié du xylitol ingéré n'est pas adsorbé par les cellules humaines mais atteint plutôt le tractus gastro-intestinal où il est absorbé par le microbiome (Livesey, 2003), ce qui est utile pour contrôler nos interrupteurs dans le tractus gastro-intestinal. Enfin, le xylitol est un métabolite connu pour certaines bactéries : Il est soit repris directement par un complexe transporteur de type ABC (Madigan et al., 2015) et/ou généré par l’intermédiaire d’une réduction du sucre D-xylose correspondant. Subséquemment, le xylitol peut être déshydrogéné et phosphorylé en xylulose-5-phosphate qui est ensuite catabolisé dans la voie des pentoses phosphates.
A partir d'une thèse de doctorat datée (Gallo, 1991), nous avons trouvé un opéron dans le génome de la souche de bactérie Morganella morganii ZJG812 qui contient des gènes relatifs à l'absorption et au métabolisme du xylitol (détails résumés en (ii) ). Cet opéron est situé en aval d'une région de régulation d'environ 1800 pb qui, entre autres éléments, consiste en un promoteur inductible négativement et une protéine de régulation transcriptionnelle apparentée IZ184_04885 (détails en Annexe E ) à laquelle le xylitol est suggéré de se lier.
Estimation de l'activité du promoteur en réponse au xylitol dans le milieu de croissan ce
Pour cette étude, deux plasmides rapporteurs ont été construits consistant en un gène rapporteur de la Protéine Fluorescente Verte (GFP, de l’anglais « Green Fluorescent Protein ») situé en aval du système de régulation inductible par le xylitol, soit sans (pSNP1902, (i)A ) soit avec (pSNP1903, (ii)B ) une délétion avec perte de fonction située dans le cadre de lecture ouvert (ORF) du régulateur transcriptionnel.
Les plasmides rapporteurs consistent en un gène rapporteur de la protéine fluorescente verte (GFP) situé en aval du promoteur prévu inductible par le xylitol, qui à son tour est contrôlé par le régulateur transcriptionnel de liaison à l'ADN de la famille LacI (gène IZ184_04885). Deux plasmides rapporteurs sont faits, soit (A) avec un régulateur transcriptionnel pleine longueur (plasmide pSNP1902) ou (B) avec une délétion de perte de fonction (LOF, de l’anglais « Loss-Of-Function ») de 595 pb dans le cadre de lecture ouvert (ORF) du régulateur transcriptionnel (plasmide pSNP1903) .
Les plasmides rapporteurs de la GFP pSNP1902 et pSNP1903 ont été transformés en la souche d'isolat probiotique bSNP463 et testés en mesurant la densité optique (OD600) et la fluorescence verte émise à partir de cultures après une incubation de 24 heures en présence de quantités croissantes de xylitol. Les résultats de ces tests sont résumés en . On observe comment l'intensité de fluorescence par cellule augmente jusqu'à 6 fois lorsque le xylitol est ajouté aux souches qui hébergent le plasmide rapporteur de la GFP avec le régulateur transcriptionnel pleine longueur (Figure 9A ). Lorsque le régulateur transcriptionnel est muté par une délétion de 595 pb ( Figure 9B ), l'intensité de fluorescence basale est environ 30 fois plus élevée que celle des souches avec le régulateur transcriptionnel pleine longueur et l'intensité de la fluorescence ne change pas lorsque du xylitol est ajouté. Ceci suggère que le xylitol induit l'expression en levant la répression que le régulateur transcriptionnel exerce sur le promoteur.
En conséquence, même en l’absence de couche poreuse barrière (1’’) au niveau des zones de joints (6), les éléments extérieurs de type insecte ne peuvent pas atteindre la face inférieure (2’) des corps (1’), sous la couche (14) : en effet la barrière de type chicane, formée par coopération des moyens d’engagement (5’ et 5’’) complémentaires, les en empêche.
De plus, les deux moyens d’engagement complémentaire (5’ et 5’’) assurent la cohésion d’assemblage lors de l’aboutement de deux corps (1’) ou panneaux (1) tout en permettant la circulation de l’air ou de l’eau propice au drainage des flux entre la face supérieure (2) et la face inférieure (2’) des corps (1’).
De préférence, avec le dispositif de toiture (10) de l’invention, les panneaux (1) et les corps (1’) sont disposés de telle manière, pour former la couche protectrice et à propriétés drainantes (14), qu’au moins les rainures (4’) de la face supérieure (2) et/ou les rainures (4) de la face inférieure (2’), sont orientées pour favoriser la circulation de liquide, présent sur la face supérieure (2) et/ou sous la face inférieure (2’) du corps (1’) concerné, vers lesdits moyens (12) d’évacuation du support (11), de sorte à évacuer les liquides en dehors du dispositif de toiture (10) et d’éviter la formation de zones humides de liquide stagnant.
Ainsi, cette configuration d’assemblage particulier des corps (1’) et des panneaux (1) de la couche protectrice à propriété drainante (14) permet de diriger et concentrer les liquides à proximité des moyens d’évacuation (12), de sorte à les évacuer par un écoulement et un mouvement des flux du liquides continu dans les rainures (4, 4’) formant les canaux de drainage. La formation de zones de liquide stagnant, propices à la prolifération et au développement des insectes, n’est plus possible.
En outre, en plus de favoriser le drainage des liquides, cette configuration particulière facilite l’assemblage : il suffit de suivre l’orientation des rainures (4, 4’) pour assembler selon une bonne orientation les corps (1’) et les panneaux (1) les uns avec les autres.
Selon un mode de réalisation du dispositif de toiture 10 visible sur les figures 1 et 3, la couche (1’’) en matériau poreux formant la face supérieure de la couche protectrice et à propriétés drainantes (14) est recouverte d’un matériau de lestage constituant une surface non accessible, notamment d’une couche minérale de type gravillons, ou de moyens (15) constituant une surface accessible et marchable, tels que par exemple les composants d’un plancher à lattes ou encore d’un plancher de dalles (151) sur plots (152).
Dans le cas d’une surface non accessible, le matériau de lestage peut être de type gravillon, formant ainsi une barrière supplémentaire au passage de insectes.
Dans le cas d’une surface accessible, les utilisateurs peuvent se déplacer sur le dispositif de toiture (10) aisément au travers du moyen (15), ceci sans être en contact direct avec la couche protectrice à propriété drainante (14). En outre, les plots peuvent être avantageusement pourvus d’embase de grande surface pour répartir les charges sur ladite couche (14).
Le moyen (15) est une première barrière de protection pour la couche protectrice drainante (14) à l’encontre d’une éventuelle dégradation par les utilisateurs ou de tous autres contraintes environnementale extérieures possibles.
De manière avantageuse, un plancher à dalles (151) sur plots (152) comme moyen (15) aura pour avantage de répartir les forces de pressions en jeu appliquées sur la couche protectrice à propriétés drainantes (14) uniquement à l’endroit où se trouvent les plots (152), ce qui limitera également sa dégradation et la formation de point bas pouvant constituer des zones de stagnation (pouvant être néanmoins assécher par la prévision de moyens de drainage traversants 7).
L’invention a également pour autre objet permettant de répondre aux demandes et d’aboutir au but recherché, un panneau (1) de construction à fonction drainante, notamment pour de l’eau, du type panneau de couverture pour toiture plate, ce panneau (1) comprenant un corps (1’) en forme de plaque, préférentiellement rectangulaire, avec des faces supérieure (2) et inférieure (2’) opposées et quatre bords latéraux (3, 3’). Au sens de l’invention, on entend par « panneau de construction à fonction drainante » un panneau, de type plaque, notamment plaque parallélépipédique, utilisé pour la construction de bâtiments, immeuble, maisons et constructions analogues, qui permet le drainage et l’évacuation des liquides, notamment des eaux, de type eaux de pluies.
Conformément à l’invention et comme le montrent à titre d’exemples les figures 8 à 14, ce panneau (1) est caractérisé en ce que :
– le corps (1’) est formé d’au moins une couche de matériau, autoportante, avec des propriétés de résistance à la compression, de préférence de constitution essentiellement creuse ou alvéolaire,
- ledit corps (1’) intègre structurellement i) au moins un moyen (4, 4’) de drainage de liquide vers au moins un des bords latéraux (3, 3’), lequel moyen (4, 4’) est présent sur au moins la face supérieure (2) dudit corps (1’) et, éventuellement, aussi sur la face inférieure (2), et/ou, ii) au moins un moyen (7) de drainage de liquide à travers l’épaisseur dudit corps (1’) et au moins un moyen de drainage (4, 4’) de liquide vers au moins un des bords latéraux (3, 3’), qui est présent sur au moins la face inférieure (2’),
- ledit corps (1’) comporte, le long d’au moins deux bords latéraux contigus ou consécutifs (3, 3’), des moyens de recouvrement (5) et/ ou des moyens d’engagement (5’, 5’’), arrangés et configurés pour coopérer chacun avec un panneau similaire (1) adjacent de manière à constituer une barrière aux passages d’insectes, notamment de la taille des moustiques-tigres, au niveau de zones de joint latérales (6) formées par aboutement des bords (3, 3’) du corps dudit panneau (1) avec ceux des corps de panneaux (1) similaires en vue de constituer une couche protectrice et à propriétés drainantes (14), et,
- ledit panneau (1) comprend également au moins une couche (1’’) de matériau poreux, perméable aux liquides et constituant une barrière aux passages d’insectes, notamment ceux de la taille des moustiques-tigres, ladite couche poreuse (1’’) étant rapportée sur la face supérieure (2) du corps (1’) et recouvrant au moins les moyens drainants latéraux (4, 4’) présents sur la face supérieure (2), et le cas échéant les ouvertures (71) débouchant au niveau la face supérieure (2) des moyens drainants traversants (7) éventuellement présents.
est une vue en coupe d’un demi-boitier selon l’invention,
est une vue en coupe d’un premier mode de réalisation d’un dispositif d’étanchéité du demi-boitier,
est une vue en coupe d’un deuxième mode de réalisation du dispositif d’étanchéité,
est une vue en coupe d’un troisième mode de réalisation du dispositif d’étanchéité,
est une vue en coupe d’un quatrième mode de réalisation du dispositif d’étanchéité.
La est un schéma en coupe d’un moteur électrique 1 intégré au sein d’un véhicule. Ledit moteur électrique est apte à assurer ou à participer à la propulsion du véhicule. Pour cela, le moteur électrique comprend un ensemble rotor/stator 2 à flux axial agencé autour d’un axe 3 correspondant à un axe de rotation du rotor. Cet ensemble rotor/stator 2 est intégré au sein d’un boitier 4 et permet la mise en rotation d’un arbre 5, pouvant être partiellement intégré au sein du boitier 4. L’arbre 5 fait partie d’une chaine de traction du véhicule, non représentée, qui participe à la propulsion du véhicule grâce à l’énergie générée par le moteur électrique 1. L’ensemble rotor/stator 2 comprend un rotor 6 et un stator 7 assurant la mise en rotation de l’arbre 5 et disposés au sein d’un volume interne délimité par le boitier 4.
Le boitier 4 est composé d’un premier demi-boitier 8a et d’un deuxième demi-boitier 8b. Chaque demi-boitier 8 présente une première paroi 9 et une deuxième paroi 10 s’étendant de manière annulaire autour de l’axe 3, principalement selon la direction axiale X, et une troisième paroi 11 présentant une forme circulaire s’étendant principalement selon la direction radiale Y et reliant la première paroi 9 à la deuxième paroi 10. Sur la , la deuxième paroi 10 de chaque demi-boitier 8 présente une section annulaire inférieure à une section annulaire de la première paroi 9 desdits demi-boitiers 8. La deuxième paroi 10, de par sa section annulaire, délimite ainsi une ouverture 12 permettant la mise en place de l’arbre 5 évoqué précédemment.
Chaque demi-boitier 8, de par la première paroi 9, la deuxième paroi 10 et la troisième paroi 11, délimite partiellement une zone de réception 12 permettant de recevoir au moins un bobinage 13 du stator 7. La zone de réception 13 est refermée par une membrane 14 s’étendant de manière annulaire, principalement selon la direction radiale Y afin de relier la première paroi 9 à la deuxième paroi 10, tout comme la troisième paroi 11. La membrane 14 présente une épaisseur la plus faible possible afin de conserver un espace, appelé entrefer 15, entre le rotor 6 et le stator 7.
Lorsque les demi-boitiers 8 sont assemblés entre eux, leur zone de réception 12 respective participe à former le volume interne contenant l’ensemble rotor/stator 2. Le volume interne comprend donc une section 16 au sein de laquelle est agencé le rotor 6 et une partie de l’arbre 5, ainsi que les zones de réception 12 relatives à chaque demi-boitier 8 et où sont agencées chaque bobinage 13 du stator 7. La section 16 et les zones de réception 12 sont séparées au moins par la membrane 14 de chaque demi-boitier 8.
Le rotor 6 comprend une extension radiale 17 circulaire qui s’étend jusqu’au voisinage des premières parois 9 des deux demi-boitiers 8. Les bobinages 13 du stator 7 sont électriquement alimentés afin de générer un champ magnétique agissant sur l’extension radiale 17 du rotor 6 afin d’entraîner ce dernier en rotation. Les bobinages 13 s’étendent de manière annulaire au sein du boitier 4, de sorte à ce que l’extension radiale 17 du rotor 6 soit intercalée entre les deux bobinages 13 du stator 7 tout autour de l’axe 3 et espacé desdits bobinages 13 par les entrefers 15. Le champ magnétique est alors transmis des bobinages 13 au rotor 6 selon la direction axiale X, d’où le terme « flux axial » pouvant être attribué au moteur électrique 1. Un flux axial permet d’améliorer la compacité et la densité énergétique du moteur électrique 1, et ce tout en limitant les pertes d’énergie par rapport à un moteur électrique à flux radial.
Les bobinages 13 du stator 7 sont susceptibles d’émettre de la chaleur lors de leur fonctionnement. Afin de les refroidir, ceux-ci sont immergés dans un bain de fluide de refroidissement, par exemple de l’huile, ledit bain correspondant à la zone de réception 12 de chaque demi-boitier 8. Ledit fluide de refroidissement ne doit toutefois pas se propager au sein de la section 16 et nuire au bon fonctionnement du rotor 6. La membrane 14 permet de maintenir le fluide de refroidissement au sein de la zone de réception 12, notamment grâce à un dispositif d’étanchéité assurant une interaction mécanique entre la première paroi 9 et la membrane 14, et entre la deuxième paroi 10 et la membrane 14. Les caractéristiques structurelles du dispositif d’étanchéité seront développées en détails par la suite.
La est une vue en coupe de l’un des demi-boitiers 8 illustré en . La permet notamment d’observer que la membrane 14 et le dispositif d’étanchéité 18 s’étendent le long de la totalité de la circonférence de la première paroi 9 et de la deuxième paroi 10. La zone de réception 12 est ainsi entièrement étanche.
Le dispositif d’étanchéité 18 est disposé de sorte à empêcher toute fuite de fluide de refroidissement hors de la zone de réception 12, et est donc agencé au niveau d’une jonction entre la membrane 14 et la première paroi 9 ou la deuxième paroi 10. Avantageusement, le demi-boitier 8 comprend deux dispositifs d’étanchéité 18, chacun d’entre eux assurant l’étanchéité entre la membrane 14 et l’une des parois 9, 10 s’étendant principalement selon la direction axiale X.
Plus particulièrement, le dispositif d’étanchéité 18 est configuré pour joindre la membrane 14 et une première face 19 de la première paroi 9 ou de la deuxième paroi 10. Par première face 19, il faut comprendre que cela correspond à la face de l’une ou l’autre des parois axiales, c’est-à-dire la première paroi 9 ou la deuxième paroi 10, qui est orientée vers la zone de réception 12.
De plus, la membrane 14 comprend au moins un anneau axial 20 s’étendant principalement selon la direction axiale X, en regard de la première face 19 où est agencée le dispositif d’étanchéité 18. Idéalement, la membrane 14 comprend donc deux anneaux axiaux 20, chacun étant en regard de la première face 19 de la première paroi 9 et de la première face 19 de la deuxième paroi 10. L’anneau axial 20 permet d’augmenter la surface de la membrane 14 en regard de la première face 19 et ainsi d’améliorer l’efficacité du dispositif d’étanchéité 18, ce dernier pouvant être mis en place plus aisément le long de l’anneau axial 20.
Le dispositif d’écriture peut comprendre un premier joint d’étanchéité torique interposé entre l’élément scripteur et le réservoir.
Le stylo-plume peut comporter un deuxième joint d’étanchéité torique interposé entre le réservoir et la tête de la colonne de verrouillage dans la position de fermeture.
Le stylo-plume peut comporter un troisième joint d’étanchéité torique interposé entre le réservoir et une queue de la colonne de verrouillage.
Le premier joint d’étanchéité torique et/ou le deuxième joint d’étanchéité torique et/ou le troisième joint d’étanchéité torique sont par exemple réalisés en silicone.
Selon un exemple de réalisation, un bouchon du réservoir et un organe de maintien du corps de stylo comprennent des moyens d’accouplement complémentaires de type glissière pour indexer le dispositif d’écriture avec le corps de stylo. Le bouchon présente par exemple une portion cylindrique tronquée par deux faces planes parallèles entre elles et l’organe de maintien présente une glissière complémentaire. Il est ainsi possible d’indexer l’orientation d’éléments externes visibles du corps de stylo avec des éléments du dispositif d’écriture, comme par exemple pour aligner des éléments de décors ou une fenêtre du corps de stylo avec l’orientation de la plume, par exemple pour que le niveau d’encre dans le réservoir puisse être vu à travers la fenêtre alors que l’utilisateur est en train d’écrire.
On peut prévoir qu’une queue de la colonne de verrouillage et un bouchon du réservoir présentent des surfaces d’appui coniques complémentaires formant une butée pour retenir le dispositif d’écriture dans le corps de stylo en position d’écriture. Les butées sont par exemple ménagées dans un bourrelet annulaire de la queue et autour d’un orifice d’entrée d’un logement cylindrique du bouchon dans lequel la queue peut coulisser.
Le capuchon et le corps de stylo sont par exemple configurés pour coopérer par vissage.
La montre une vue en perspective d’un stylo-plume en position de fermeture.
La montre un dispositif d’écriture du stylo-plume de la .
La montre une vue éclatée du dispositif d’écriture de la .
La montre des éléments du stylo-plume de la .
La montre une vue éclatée des éléments de la .
La montre une autre vue du capuchon du stylo-plume de la .
La montre une vue éclatée du capuchon de la .
dans lequel/lesquels
(d) NS2 est sous le contrôle d'un deuxième promoteur qui peut être régulé pour l'expression de P2, la liaison d'un agent régulateur (R) à l'acide nucléique du vecteur régulant le deuxième promoteur, régulant ainsi l'expression de P2 et P1 (par exemple R lie un opérateur qui est opérationnellement connecté au deuxième promoteur).
Ledit « au moins un vecteur » peut concerner un vecteur ou une pluralité de vecteurs, par exemple des premier et deuxième vecteurs, par exemple 2 vecteurs. Ici, lorsque les caractéristiques sont décrites dans le contexte d'un vecteur ou "le vecteur", la personne du métier réalisera que les caractéristiques peuvent s'appliquer mutatis mutandis audit "au moins un vecteur" tel qu'un premier et un deuxième vecteur, ou tel qu’une pluralité de vecteurs. Le vecteur unique peut être en outre conforme au vecteur de la Quatrième Configuration. Chacun desdits premier et deuxième, 2 ou pluralité de vecteurs peut être en outre conforme au vecteur de la Quatrième Configuration. Ceci est avantageux pour limiter la présence ou la dispersion de NS1 et/ou NS2 (limitant ainsi P1 et/ou P2 respectivement) dans le microbiote ou sujet comprenant le microbiote.
Par exemple, ledit au moins un vecteur comprend un premier vecteur et un deuxième vecteur, le premier vecteur comprenant NS1 (et optionnellement pas NS2) et le deuxième vecteur comprenant NS2 (et optionnellement pas NS1) et les vecteurs étant capables de coexister dans la cellule hôte pour l'expression de P1 et P2. Ainsi, le premier vecteur peut comprendre NS1 et pas NS2 ; et le deuxième vecteur peut comprendre NS2 et pas NS1. Les premier et deuxième vecteurs sont capables d'être transférés dans la même cellule hôte et de coexister dans la cellule, moyennant quoi P1 et P2 peuvent être exprimés dans la cellule. Par exemple, ledit au moins un vecteur est un vecteur qui comprend à la fois NS1 et NS2.
Un microbiote peut être dans n'importe quel environnement, par exemple dans le sol ou un cours d’eau, compris par une plante, ou compris par un sujet humain ou animal. Comme la personne du métier le saura, un microbiote peut comprendre des bactéries, des archées, des champignons et des virus.
Un Premier Aspect de la Première Configuration prévoit :
Un vecteur d’acide nucléique pour transfert dans une cellule hôte d'un microbiote, le vecteur comprenant un acide nucléique qui comprend
a) Une séquence nucléotidique exprimable d'intérêt (NS1) pour produire un produit d'intérêt (P1) dans la cellule hôte ; et
b) Une séquence nucléotidique exprimable (NS2) pour produire un produit régulateur (P2) dans la cellule hôte, P2 étant exploitable dans la cellule hôte pour se lier à l’acide nucléique du vecteur pour réguler l'expression de P1 ;
c) NS1 est sous le contrôle d'un premier promoteur (par exemple un promoteur constitutif ou inductible) pour l'expression de P1 ; et
d) NS2 est sous le contrôle d'un deuxième promoteur qui peut être régulé pour l'expression de P2, la liaison d'un agent régulateur (R) à l'acide nucléique du vecteur régulant le deuxième promoteur, régulant ainsi l'expression de P2 et P1.