INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
De préférence, la teneur massique en corps gras solide de point de fusion allant de 30°C à 40°C (S2) est de 10% à 40%, de préférence de 15% à 40%, plus préférentiellement de 20% à 30%, par rapport à la masse totale de la composition. Cela permet de combiner une meilleure stabilité et sensorialité de la composition. Troisième corps gras solide de point de fusion d’au moins 6 0°C ( S 3) :
La composition selon l’invention comprend au moins un troisième corps gras solide ayant un point de fusion d’au moins 60°C, de préférence allant de 60°C à 100°C. Il peut par exemple s’agir d’une cire ou d’un composé de point de fusion correspondant (par exemple acide gras solide, alcool gras solide, ester solide d’acide gras et/ou d’alcools gras, etc.).
Selon un mode de réalisation particulier, la composition selon l’invention peut comprendre un mélange de plusieurs corps gras solides ayant un point de fusion d’au moins 60°C, de préférence allant de 60°C à 100°C.
De préférence, le ou les corps gras solides (S3) utilisables ont un point de fusion allant de 60°C à 90°C. Cela présente un avantage pour la mise en œuvre du procédé de préparation de la composition selon la présente invention, notamment pour les températures de chauffe et l’énergie nécessaire à la préparation de la composition selon la présente invention.
De préférence, le au moins un troisième corps gras solide de point de fusion d’au moins 60°C est d’origine naturelle.
A titre d’exemples non limitatifs de troisièmes corps gras solides (S3) utilisables, on peut citer : - les cires d’origine animale ou végétale, comme par exemple la cire d’abeille, la cire d’abeille synthétique, la cire de carnauba, la cire de candelilla, la cire de lanoline, la cire de son de riz, la cire d’Ouricury, la cire d’Alfa, la cire de berry, la cire de shellac, la cire de fibres de liège, la cire de canne à sucre, la cire du Japon, la cire de sumac, la cire de montan, les cires d’Orange et de Citron, la cire de Laurier, la cire de Jojoba hydrogénée, la cire de tournesol comme par exemple celle commercialisées par la société KAHL GMBH & Co. KG (Allemagne) sous le nom Kahlwax 6607L (de nom INCI : HELIANTHUS ANNUUS SEED CERA ; de point de fusion d’environ 74°C à 80°C) ; - les cires obtenues par hydrogénation d’huiles animales ou végétales, comme par exemple l’huile de ricin hydrogénée (de nom INCI : HYDROGENATED CASTOR OIL, de point de fusion d’environ 85°C à 88°C), la cire commercialisée par la société BASF sous le nom Cegesoft® HF 62 (de nom INCI : HYDROGENATED VEGETABLE OIL et de point de fusion d’environ 60°C à 63°C) ; - les composés solides (de point de fusion d’au moins 60°C) alcool gras (comme par exemple l’alcool cétylique, l’alcool stéarylique, etc), acides gras (comme par exemple l’acide palmitique, l’acide stéarique, l’acide myristique, l’acide laurique, etc.), esters gras (comme par exemple le béhénate de glycérol, etc.), ou un mélange de ceux-ci.
Dans la composition selon la présente invention, la teneur massique en corps gras solide de point de fusion d’au moins 60°C (S3), peut être d’au moins 5%, de préférence d’au moins 8%, plus préférentiellement d’au moins 10%, par rapport à la masse totale de la composition.
La teneur massique en corps gras solide de point de fusion d’au moins 60°C (S3), peut être d’au plus 20%, de préférence au plus 15% par rapport à la masse totale de la composition.
De préférence, la teneur massique en corps gras solide de point de fusion d’au moins 60°C (S3) est de 5% à 20%, de préférence de 8% à 15%, plus préférentiellement de 10% à 15%, par rapport à la masse totale de la composition. Cela permet de combiner une meilleure stabilité et sensorialité de la composition.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l’invention comprend au moins deux corps gras solides ayant un point de fusion d’au moins 60°C (S3) dont l’un (S3a) a un point de fusion supérieur à 80°C, de préférence entre 80°C et 90°C. Cela permet une meilleure stabilité et sensorialité de la composition fondante selon la présente invention.
31 écrou mobile en rotation
311 collerette d'appui de l'écrou
312 rainures d'accouplement de l'écrou
313 billes du mécanisme vis-écrou
32 vis fixe en rotation
323 forme de couplage en rotation de l'écrou
33 platine d'appui - piston de frein
333 vis de fixation de la platine d'appui sur la vis
335 encoches antirotation de la platine d'appui-piston
4 étrier
401 manchon arrière du boîtier d'étrier
402 rondelle de glissement 402, libre en rotation
41 boîtier de frein, boîtier d'étrier
410 logement arrière de boîtier d'étrier
411 butée axiale à roulement
412 palier de guidage à roulement
Ainsi, si l’indicateur de perturbation du sommeil est « faible » (par exemple en dessous d’un seuil de perturbation prédéfini), alors la personne est jugée comme « autonome ». Au contraire, si l’indicateur de perturbation est « élevé » ou augmente au cours du temps (par exemple supérieur ou égal au seuil de perturbation prédéfini), cette personne est alors jugée en perte d’autonomie.
On entend par sommeil « recommandé » ou « idéal » un sommeil qui est considéré comme réparateur pour l’utilisateur selon des normes de structure de sommeil et/ou durée de sommeil... définies de manière théorique en fonction de catégories prenant en compte, par exemple l’âge, le sexe, la corpulence… de l’utilisateur. En effet, la structure du sommeil (par exemple type de stades de sommeil, nombre de cycles, temps passé dans chaque stade et/ou entre les stades etc.) et sa durée varie au cours du temps / de la vie.
Il est ainsi possible de créer un référentiel universel définissant un sommeil comme étant réparateur en fonction par exemple de l’âge de l’utilisateur suivie, de son sexe, de sa corpulence etc. Par exemple, la structure « idéale » du sommeil du nouveau-né est de 3 stades par cycle avec 50 minutes en moyenne par cycle et la structure « idéale » du sommeil de l’adulte est de 5 stades par cycle avec 110 minutes en moyenne par cycle. Idéalement, les 3 phases du cycle du sommeil du nouveau-né sont : l’endormissement, le sommeil agité, et le sommeil calme. Idéalement, les 5 phases du sommeil de l’adulte sont : l’endormissement, le sommeil lent léger, le sommeil lent profond, une autre phase de sommeil lent léger, le sommeil paradoxal. Par exemple, la durée du sommeil recommandée pour les plus de 65 ans est de 7 à 8h alors que pour les 14-17 ans elle est de 8 à 10h.
L’invention repose donc tout d’abord sur la constitution d’un historique de sommeil de l’utilisateur sur une période de référence correspondant à une succession de plusieurs nuits de sommeil pendant une période donnée (par exemple 1 semaine), et représentant la période durant laquelle le sommeil est considéré comme réparateur, ou de qualité suffisante, pour l’utilisateur suivi (sommeil dit « normal » pour cet utilisateur). Cette période de référence est donc par conséquent la période durant laquelle l’utilisateur suivi est considéré comme étant en pleine autonomie. Cet historique de sommeil représente donc les habitudes de sommeil de l’utilisateur. Le sommeil de l’utilisateur pendant cette période est appelé également par la suite « sommeil de référence ».
Cet historique de sommeil de l’utilisateur est ensuite comparé à un sommeil dit « courant » ou « journalier » de l’utilisateur, c’est-à-dire au sommeil de ce même utilisateur pendant une période courante correspondant à une nuit en dehors de la période de référence, afin de détecter un éventuel écart.
Cette période dite « courante » est disjointe de et postérieure à la période de référence.
Ce sommeil « courant » est également comparé à un sommeil « idéal », ou sommeil « recommandé », pour cet utilisateur.
Les écarts détectés entre le sommeil courant, l’historique de sommeil et le sommeil recommandé de l’utilisateur sont exploités pour évaluer un indicateur de perturbation dans le sommeil de l’utilisateur et donc en déduire une éventuelle perte d’autonomie de cet utilisateur. Autrement dit, en fonction de cet indicateur de perturbation du sommeil, il est possible de décider si l’utilisateur est en perte d’autonomie et donc d’alerter des services de télé-vigilance pour lui proposer des solutions d’aide à la personne.
Pour cela, des données de mesure d’au moins un paramètre physiologique de l’utilisateur représentatif de son sommeil sont collectées pendant la période de référence, puis pendant la période courante, par exemple une nuit, afin de caractériser le sommeil (structure et/ou durée) de l’utilisateur pendant cette période de référence et pendant la période courante. Ces données de ce ou ces paramètre(s) physiologiques sont obtenues à partir de mesures collectées par un ou plusieurs capteur(s) intégré(s) dans un ou plusieurs équipement(s) terminal(aux) porté(s) par cet utilisateur, ou à proximité de celui-ci (par exemple sur une table de chevet) pendant son sommeil. Ce ou ces équipement(s) terminal(aux), ou équipement(s) utilisateur(s), sont connectés à un réseau de communication ce qui leur permettent de transmettre, le cas échéant, une ou plusieurs notifications d’alerte à des tiers dans le cadre d’un service de télé-vigilance.
On présente désormais en lien avec la un exemple d’environnement d’un utilisateur pendant son sommeil selon l’invention. Cet environnement peut correspondre par exemple à une chambre à coucher dans le domicile de l’utilisateur, ou à un chambre d’hôtel, ou tout lieu dans lequel l’utilisateur peut dormir.
Afin de pouvoir suivre l’évolution de son sommeil au cours du temps et de manière autonome (c’est-à-dire sans assistance de type médical, ou technique) l’environnement de l’utilisateur UT comprend notamment un réseau de communication local LAN qui est géré par une passerelle résidentielle PAS connectée à un réseau de communication de données R_EXT d'un opérateur.
Dans cet exemple, le réseau LAN est un réseau domestique, auquel peuvent se connecter plusieurs équipements utilisateurs : des tablettes, téléphones intelligents, montres connectées, serre-têtes connectés…
L’équipement utilisateur EQ est par exemple un téléphone intelligent ou un objet connecté type montre connectée, bracelet connecté, serre-tête connecté (aussi appelé casque d’ondes cérébrales) ou encore tout autre équipement terminal équipé d’une interface de communication avec le réseau LAN et de taille suffisamment petite pour être porté facilement par l’utilisateur, ou au moins être à proximité de l’utilisateur UT (par exemple posé sur une table de chevet).
De manière avantageuse, l’équipement utilisateur EQ comprend un ou plusieurs capteurs, identiques ou différents, configurés pour mesurer un ou plusieurs paramètres physiologiques différents de l’utilisateur au cours de son sommeil. Ces paramètres physiologiques peuvent êtres par exemple un ou une combinaisons de paramètres choisis parmi :
- l’activité électrique du cerveau, par exemple mesurée par électro-encéphalogramme (ou EEG) à l’aide d’un capteur d’onde cérébrale compris dans un équipement EQ de type serre-tête connecté porté par l’utilisateur UT pendant son sommeil;
- les mouvements des globes oculaires, par exemple mesurés par électro-oculogramme (ou EOG) à l’aide de la caméra d’un téléphone intelligent de l’utilisateur UT le filmant pendant son sommeil;
Les glycosidases, en particulier les xylanases et les arabinofuranosidases, sont des enzymes essentielles à la dégradation des hémicelluloses, l’un des constituants principaux des parois cellulaires chez les plantes. Les mammifères ne sont cependant pas aptes à produire ces enzymes ou en tout cas pas en quantité suffisante pour une hydrolyse efficace. Les régimes utilisés en nutrition animale étant riches en fibres végétales, il est généralement avantageux d’apporter des glycosidases exogènes dans l’aliment, en particulier pour les animaux d’élevage, et ceci afin d’optimiser l’utilisation de la part fibreuse de l’aliment par l’animal et ainsi améliorer les performances de croissance de ces animaux d’élevage.
Les glycosidases peuvent être produites naturellement par de nombreux organismes comme des plantes, des algues, des gastropodes, des arthropodes, des levures, des champignons, des bactéries, des protozoaires. Leur niveau de production va dépendre du niveau d’expression des gènes codant ces protéines, expression contrôlée de manière très précise par des mécanismes d’activation et de répression dépendants, entre autres, de la (des) source(s) carbonée(s) présente(s) dans leur environnement. En particulier, la présence d’une (de) source(s) carbonée(s) simple(s), telle(s) que le glucose, le saccharose ou encore le glycérol, va déclencher un mécanisme de répression catabolique (Adnan et al . , 2017 ; Galinier, 2018). Ce mécanisme, très conservé chez les microorganismes, leur permet une économie d’énergie en leur évitant de synthétiser des protéines superflues dans des conditions données. En d’autres termes, ce phénomène permet aux microorganismes d’utiliser préférentiellement certaines sources de carbone. Lorsque la source de carbone simple n’est plus disponible, et donc lorsque la répression catabolique est levée, les sources de carbone non préférentielles, telles que les sources carbonées complexes, vont déclencher des mécanismes d’induction de la production des enzymes impliquées dans leur dégradation et leur catabolisme, permettant ainsi leur utilisation par le microorganisme. Par exemple, un champignon va croître dans une première phase en assimilant d’abord les sources de carbone rapidement métabolisables, puis dans une seconde phase en assimilant les sources de carbone non préférentielles.
Les mécanismes de répression et d’induction de l’expression des gènes mettent en jeu de nombreux facteurs de transcription, protéines indispensables qui interagissent avec les séquences régulatrices en amont des gènes et avec l’ARN-polymérase. L’activation ou l’inhibition de ces facteurs de transcription est elle-même dépendante de l’environnement dans lequel se trouve le microorganisme, notamment des sources carbonées présentes.
Chez les champignons filamenteux plusieurs facteurs de transcription, tels que XlnR, AraR, ClrA, ClrB, ManR, et AraA, ont été décrits comme étant des régulateurs positifs de l’expression de gènes codant les glycosidases, alors que CreA et ACEI sont les principaux régulateurs négatifs identifiés.
A l’échelle industrielle, les enzymes sont essentiellement produites par fermentation de microorganismes, par des procédés dits batch , fed batch ou continus, en milieu solide ou liquide, en présence de substrats appropriés. Parmi ces microorganismes, les champignons filamenteux sont particulièrement adaptés à la sécrétion de quantités élevées d’enzymes (Wösten, 2019). Un des enjeux majeurs de cette production est qu’elle soit économiquement rentable. Par conséquent, il est privilégié la mise en œuvre de sources carbonées peu chères et faciles à utiliser, par exemple qui se présentent sous une forme soluble, telles que le glucose et le saccharose ou encore le glycérol. Cependant, ces sources de carbone induisent dans la plupart des organismes les mécanismes de répression catabolique qui ont pour effet la répression de l’expression de gènes, en particulier ceux codant les glycosidases comme les cellulases et hémicellulases.
La solution généralement apportée pour permettre de produire des enzymes en présence d’une source de carbone simple est de modifier génétiquement la souche de production afin de désactiver les mécanismes de répression catabolique. Généralement, ceci consiste à désactiver le facteur de transcription creA, qui est un élément majeur dans la répression catabolique, ou à désactiver l’expression du gène codant correspondant. Cependant, des études montrent qu’une délétion complète et/ou partielle du gène creA induit des effets délétères comme une réduction sévère de la viabilité chez Aspergillus nidulans ou encore une altération de la morphologie des colonies, du développement d’hyphes aériens et de la sporulation chez Trichoderma reesei . Il apparait donc qu’une région spécifique de la protéine CreA, qui est une protéine très conservée chez les champignons (différentes espèces d’ Aspergillus , Trichoderma ), semble essentielle pour la croissance, établissant un rôle important de CreA dans le transport des acides aminés et l’assimilation de l’azote.
Il ressort de ce qui précède qu’il existe un besoin évident de développer de nouvelles solutions techniques permettant une production efficace de glycosidases, notamment à l’échelle industrielle, ne présentant pas les inconvénients de l’art antérieur tels qu’une production coûteuse, longue et/ou dépendante de la présence dans le milieu de culture d’une source de carbone adaptée.
DESCRIPTION DE L’INVENTION Les inventeurs ont mis au point, de manière inattendue et surprenante, des microorganismes génétiquement modifiés, notamment des champignons filamenteux génétiquement modifiés, ayant une capacité accrue à produire des enzymes participant à la dégradation d’une source de carbone complexe comme les glycosidases (EC 3.2.1), à partir d’une source de carbone simple, indépendamment du mécanisme de répression catabolique, ceci en comparaison avec les microorganismes parents ou des microorganismes de l’état de la technique.
Un objectif de la présente invention est de produire un titre élevé de glycosidases, notamment les hémicellulases, en particulier les xylanases et/ou arabinofuranosidases, à partir d’une source de carbone simple en utilisant un microorganisme génétiquement modifié, en particulier un microorganisme fongique.
Ainsi, la présente invention concerne un microorganisme fongique génétiquement modifié pour la production de glycosidases (EC 3.2.1) en présence d’une source de carbone simple, dont une modification du génome comprend, avantageusement consiste en, l’inactivation, l’altération ou la délétion de l’expression : - du gène consistant en la séquence nucléotidique présentée par la séquence SEQ ID NO: 1 ; - d’une séquence nucléotidique codant la séquence peptidique présentée par la séquence SEQ ID NO: 2 ; ou - d’une séquence présentant au moins 65% voire 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou même 99% d’identité avec la séquence peptidique de séquence SEQ ID NO: 2. Cette modification a pour conséquence l’absence de production de la protéine correspondante ou la production d’une protéine non fonctionnelle ou encore la production d’une protéine tronquée et donc non fonctionnelle.
Un microorganisme fongique modifié génétiquement selon l’invention ou mis en œuvre dans une utilisation ou un procédé selon l’invention est modifié génétiquement pour contourner le mécanisme de répression catabolique présent naturellement chez les microorganismes fongiques, par exemple chez les champignons filamenteux, selon lequel, si une source de carbone simple comme du glucose est présente dans le milieu, le microorganisme « économise ses forces » en stoppant la synthèse des enzymes, comme les glycosidases, impliquées dans la dégradation de substrats plus complexes.
Selon l’invention, le microorganisme fongique ne présente pas naturellement une capacité à produire des glycosidases à partir d’une source de carbone simple et les modifications génétiques apportées ont pour but de lui conférer cette capacité.
La présente invention présente donc divers avantages, notamment : - un intérêt industriel pour la production d’enzymes impliquées dans l’alimentation des animaux, notamment des animaux d’élevage, sans altération de la viabilité et de la morphologie du microorganisme ; - un intérêt économique via l’utilisation d’une source de carbone simple peu coûteuse et soluble ; - une bio-production efficace de glycosidases par des microorganismes à des rendements industriels.
Dans le cadre de l’invention, l’expression « microorganisme modifié génétiquement » signifie que le microorganisme selon l’invention ne se trouve pas dans la nature et est modifié par introduction de nouveaux éléments génétiques et/ou par délétion et/ou modification des éléments génétiques endogènes du microorganisme. Cette modification peut être générée par les techniques d’édition du génome, d’évolution in vivo , de recombinaison génomique, de mutagénèse dirigée ou aléatoire ou tout autre technique d’ingénierie des souches connue de l’Homme du métier.
Dans le cadre de l’invention, les termes « inactivation » et « altération » et « délétion » sont utilisés indifféremment et se réfèrent à l’absence de production de la protéine correspondante ou la production d’une protéine correspondante non fonctionnelle obtenue, par exemple, par la mise en œuvre de la technique d’extinction de gène ( gene silencing ) correspondant à une extinction transcriptionnelle ( transcriptional gene silencing ) ou post-transcriptionnelle ( post transcriptional gene silencing ), par l’introduction d’une mutation dans la séquence du promoteur qui contrôle l’expression du gène codant pour ladite protéine et/ou dans la séquence codante pour ladite protéine, par le décalage du cadre de lecture à l’origine de l’introduction d’un codon stop précoce dans la séquence codante pour la protéine ou encore par la délétion du gène codant pour le promoteur qui contrôle l’expression du gène codant pour ladite protéine et/ou du gène codant pour ladite protéine.
Dans le cadre de l’invention, les termes « identique » et « homologue » sont utilisés indifféremment et se réfèrent à l’identité de séquence entre deux polypeptides. Quand une position dans chacune des deux séquences comparées est occupée par la même sous-unité monomère d’acide aminé, alors les molécules sont homologues ou identiques pour cette position. Le pourcentage d’identité entre deux séquences est fonction du nombre de positions correspondant partagées par les deux séquences, et correspond à ce nombre divisé par le nombre de positions comparées et multiplié par 100. Par exemple, si 6 sur 10 des positions dans deux séquences appariées sont identiques, alors les deux séquences sont identiques à 60%. En règle générale, la comparaison est effectuée en alignant les deux séquences de façon à donner une homologie/identité maximale.
Selon l’un des aspects de l’invention, l’un au moins des canaux est rectiligne sur au moins une portion de sa longueur.
Certains canaux 3 présentent une direction rectiligne.
La boîte 8 comporte une paroi latérale 25, de pourtour globalement rectangulaire, cette paroi 25 étant réalisée d’un seul tenant avec la première plaque 11 qui forme un fond de la boîte 8.
Cette paroi latérale 25 est perpendiculaire à la première plaque 11.
Certains canaux 3 s’étendent au droit de cette paroi latérale 25.
La première plaque 11 comporte plusieurs formes 26, ici des renfoncements, qui sont au pied de la paroi latérale 25 et agencées pour loger partiellement l’une des vannes 5.
La paroi latérale 25 comprend un réseau 28 de nervures de renfort, qui comprend des nervures 29 qui se croisent perpendiculairement.
La paroi latérale 25 comprend un rebord libre 30 agencé pour recevoir un couvercle 31.
Le couvercle 31 est plan et comprend une ouverture 33 pour le passage de la bride 9 de raccordement formant une entrée et une sortie de fluide réfrigérant du composant d’échange de chaleur 10.
Ce composant d’échange de chaleur 10 comporte, de manière connue en soi, des tubes ou des plaques dans lesquels circule le fluide réfrigérant.
Le support 2, pourvu de deux plaques 11 et 12 assemblées, forme une partie 37 d’un corps de la vanne 5 ou de la pompe 6. Cette partie 37 est une collerette annulaire sur la plaque 12, la vanne 5 ou la pompe 6 reposant sur la collerette 37 respective.
Le support 2 comprend des embouts de connexion fluidique 38 agencé pour relier les canaux 3 du support à des tubulures de fluide.
Chaque embout de connexion fluidique 38 peut être de type mâle agencé pour coopérer une tubulure qui est de type femelle, ou inversement.
Ces embouts sont réalisés d’un seul tenant avec la plaque 12.
Le fluide caloporteur circule dans les composants 5 et 6 et dans l’espace intérieur de la boîte 8.
Comme illustré sur la , la pompe 6 est logée dans une cavité 49 du support 2 et un orifice d’aspiration 46 est prévu dans le support 2 pour permettre une communication fluidique avec la pompe 6.