Procédé de détermination des propriétés de résistance aux antibiotiques de type beta-lactamines d’une souche d’entérobactérie présente dans un échantillon biologique, comprenant les étapes suivantes : a) lyse des bactéries et hydrolyse des protéines bactériennes, pour obtenir un mélange de peptides, b) analyse de ce mélange de peptides par spectrométrie de masse ciblée couplée à une chromatographie liquide en phase inverse, la détection d’au moins un peptide spécifique d’une enzyme à activité beta-lactamase à spectre étendu (BLSE) étant indicative de la résistance aux beta-lactamines de la souche d’entérobactérie présente dans ledit échantillon biologique, ledit procédé étant caractérisé en ce que l’étape (b) d’analyse est effectuée en présence d’un agent d’appariement d’ion (IPR). Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l’IPR est présent en une quantité suffisante pour ralentir l’élution des peptides de moins de 7 résidus d’acides aminés. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l’IPR est soit injecté en amont de la séparation des peptides, soit ajouté au mélange de peptides. Procédé selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l’analyse par spectrométrie de masse est ciblée pendant l’analyse (mode de type SRM/MRM, MRM3, PRM) ou après l’analyse (mode de type DIA/SWATH). Procédé selon l’une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l’agent d’appariement d’ion est l’acide heptafluorobutyrique. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l’acide heptafluorobutyrique est présent dans une solution aqueuse à une concentration d’au moins 0.4%. Procédé selon l’une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que l’hydrolyse des protéines bactériennes à l’étape (a) est une hydrolyse enzymatique, en particulier est une hydrolyse par la trypsine. Procédé selon l’une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que la spectrométrie de masse est ciblée pour la détection de peptides constitués de 5 à 20 acides aminés. Procédé selon l’une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que la spectrométrie de masse est ciblée pour la détection de peptides choisis parmi le groupe de 34 peptides présentant les séquences suivantes : SEQ ID NO. 1 à SEQ ID NO. 34. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que la spectrométrie de masse est ciblée pour la détection de peptides choisis parmi le groupe de 7 peptides présentant les séquences suivantes : - SGASER (SEQ ID NO. 7) - SGAGK (SEQ ID NO. 8) - SGTGK (SEQ ID NO. 9) - SGAGER (SEQ ID NO. 21) - TGASER (SEQ ID NO. 25) - TGASK (SEQ ID NO. 26) - TGAGER (SEQ ID NO. 33). Procédé selon l’une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que l’entérobactérie est de l’espèce Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis ou Enterobacter cloacae. Procédé selon l’une des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que l’échantillon biologique est choisi parmi : - Un fluide biologique tel que le sang, le sérum, le plasma, l’urine, le liquide céphalo-rachidien ou les larmes, - Une culture bactérienne telle qu’une hémoculture, une colonie sur gélose ou un bouillon de culture, - Un échantillon alimentaire, et - tout autre type d’échantillon biologique. Kit pour son utilisation dans la mise en œuvre du procédé selon l’une des revendications 1 à 12, comprenant de la trypsine et de l’acide heptafluorobutyrique.