INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Au sens de l’invention, un « agent d’appariement d’ion », également dénommé par son acronyme IPR (Ion-pairing reagent), désigne un composé permettant de réduire les interactions ioniques entre les peptides et la phase stationnaire hydrophobe de la chromatographie. De nombreux IPR sont connus, tels que par exemple l’acide formique, les acides perfluorés tels que l’acide trifluoroacétique (TFA), l’acide pentafluoropropionique (PFPA) et l’acide heptafluorobutyrique (HFBA), ainsi que les composés n-butyl, n-pentyl, n-hexyl, n-heptyl et n-octyl-1-sulfonate,
L’utilisation d’un tel IPR peut rendre difficile la détection des peptides par spectrométrie de masse. Les solutions sont soit d’adapter les concentrations d’IPR utilisées, soit de choisir un IPR plus approprié.
Dans le cadre de l’invention, on entend par « élution des peptides » l’étape de la chromatographie en phase liquide où les peptides « sortent » de la colonne de chromatographie avec la phase mobile.
On entend par « peptide de courte séquence » des peptides constitués de moins de 7 résidus d’acides aminés, en particulier des peptides constitués de 5 ou de 6 acides aminés.
On entend par « peptide spécifique d’une beta-lactamase à spectre étendu (BLSE) » un peptide obtenu par l’hydrolyse des protéines bactériennes de type beta-lactamases, telles que définies dans l’introduction, et en particulier les enzymes BLSE de type TEM et SHV, et indiquant le caractère « BLSE » de l’enzyme. Il s’agit en particulier des peptides présentant les séquences suivantes : - IHYSQNDLVK (SEQ ID NO. 4), - LDHWEPELNEAIPNDER (SEQ ID NO. 5), - LDSWEPELNEAIPNDER (SEQ ID NO. 6), - SGASER (SEQ ID NO. 7), - SGAGK (SEQ ID NO. 8), - SGTGK (SEQ ID NO. 9), - TGASER (SEQ ID NO. 25) et - TGASK (SEQ ID NO. 26).
Eléments scientifiques sous-tendant l’invention L’invention repose sur l’analyse en LC-MS/MS basse résolution de peptides issus de la digestion enzymatique de protéines des souches bactériennes pour détecter les activités de type β-lactamase à spectre étendu (BLSE) des enzymes de type TEM et SHV exprimées par les entérobactéries.
Un agent d’appariement d’ion est utilisé pour augmenter la rétention des peptides de courte séquence sur la phase stationnaire de la chromatographie, et donc de retarder leur élution avec la phase mobile. La détection de ces peptides de courte séquence est en effet nécessaire pour caractériser les souches bactériennes présentant une activité enzymatique BLSE.
L’utilisation d’agent d’appariement d’ion a déjà été proposée pour retarder l’élution de peptides de courte séquence et/ou hydrophiles. Toutefois, il s’agit ici de la première fois que cette technologie est appliquée à la détection de peptides issus de protéines BLSE. En effet, il n’était pas prévisible que l’hydrolyse de protéines BLSE génèrerait autant de peptides indétectables par une utilisation « classique » de la spectrométrie de masse ciblée, telle que décrite dans le brevet EP 2 699 692.
Les articles de (Guo et al., 1987) et (Shibue et al., 2005) décrivent les effets de ces composés dits « ion-pairing reagent » et de leur concentration sur la rétention des peptides, dans le cadre d’une séparation par chromatographie liquide en phase inverse. Les effets des IPR sur une analyse ultérieure par spectrométrie de masse ne sont pas abordés.
De préférence, les catalyseurs inorganiques de Brønsted hétérogènes sont choisis parmi les oxydes, hydroxydes ou phosphates des éléments des colonnes 1 à 14 de la classification périodique des éléments, pris seuls ou en mélange. De manière préférée, le catalyseur inorganique hétérogène est choisi parmi les aluminosilicates cristallins ou non, les silico-alumino phosphates cristallins ou non. De manière très préférée, le catalyseur inorganique hétérogène est choisi parmi les matériaux de la classe des zéolithes.
Le catalyseur acide est habituellement présent dans une quantité telle que le ratio molaire acide/alcool furfurylique est compris entre 0,01 et 1,0 mol/mol, de préférence entre 0,02 et 0,5 mol/mol.
La synthèse par hydratation d’alcool furfurylique peut être effectuée en présence d’un solvant. Le solvant est de préférence un solvant dans lequel l’eau est en partie ou en totalité soluble. Le solvant présente avantageusement un point d’ébullition plus bas que celui de l’acide lévulinique ce qui permet de séparer le solvant pour recyclage et de limiter la température de chauffe lorsque l’étape de séparation thermique préliminaire optionnelle est effectuée évitant ainsi la formation d’humines et/ou la dégradation de l’acide lévulinique.
Selon une variante, le solvant peut être choisi parmi une cétone aliphatique, comme l’acétone, la méthyléthylcétone, la diéthylcétone, la méthylisobutylcétone, la methylisopropylcétone ou le cyclohexanone. De manière préférée, le solvant est la méthyléthylcétone.
Selon une autre variante, le solvant peut être choisi parmi un éther et/ou un acétal. Selon cette variante, le solvant est choisi parmi les composés correspondant à l’une ou l’autre des structures I et II, pris seul ou en mélange :
dans lesquelles R 1 , R 2 , R 3 et R 4 sont choisis indépendamment parmi :
les groupements aliphatiques linéaires ou ramifiés de 1 à 6 atomes de carbone, éventuellement substitués par des groupements alkoxy, les groupements aliphatiques cycliques ou polycycliques de 5 à 12 atomes de carbone, éventuellement substitués par des groupements alkoxy ou alkyle, les groupements oléfiniques linéaires ou ramifiés de 1 à 6 atomes de carbone, éventuellement substitués par des groupements alkoxy, les groupements aromatiques ou polyaromatiques de 6 à 12 atomes de carbone,
R 1 et R 2 peuvent être liés entre eux par des liaisons covalentes de manière à former un cycle,
R 3 et R 4 peuvent être liés entre eux par des liaisons covalentes de manière à former un cycle,
n est un entier compris entre 1 et 6.
Selon une variante, le solvant est un solvant à base d’éther et est choisi parmi l'éther diéthylique, le diisopropyléther, le diisobutyléther, le dibutyléther, le diphényléther, le 2-méthoxy-2-méthylpropane, 2-methoxy-2-méthylbutane, le 2,5-dihydrofurane, le tétrahydrofurane, le 2-méthyltétrahydrofurane, le 3-méthyltétrahydrofurane, le 2,3-dihydropyrane, le tétrahydropyrane, le 1,3-dioxolane, le 1,3-dioxane, le 1,4-dioxane, le 1,2-diméthoxyéthane et le benzofurane, pris seuls ou en mélange.
Selon une autre variante, le solvant est un solvant à base d’acétal et est choisi parmi le diméthoxy-2,2 propane, le di(2-éthylhexyloxy)-2,2 propane, le 2-méthoxytétrahydrofurane et le di(2-méthoxyéthyl)éther, pris seuls ou en mélange.
Selon une autre variante, le solvant est un mélange d’un solvant à base d’éther et d’acétal choisi parmi un des éthers et d’acétals cités ci-dessus, dans n’importe quelle proportion.
De manière préférée, le solvant est choisi parmi le diisobutyléther, le dibutyléther, le 2-méthyltétrahydrofurane, le 3-méthyltétrahydrofurane, le 1,4-dioxane et le 1,2-diméthoxyéthane, pris seuls ou en mélange.
De manière encore plus préférée, le solvant est choisi parmi le 1,4-dioxane et le 1,2-diméthoxyéthane, pris seuls ou en mélange.
Selon une autre variante, le solvant peut être un mélange d’une cétone aliphatique et d’un éther et/ou un acétal, dans n’importe quelle proportion.
- lorsque la phase continue est huileuse, la phase intermédiaire est aqueuse et la phase interne est huileuse ; et
- lorsque la phase continue est aqueuse, la phase intermédiaire est huileuse et la phase interne est huileuse.
Avantageusement, la phase intermédiaire comprend au moins un agent gélifiant (ou agent de texture), notamment tel que défini ci-dessous. L’agent gélifiant contribue notamment à améliorer la suspension de la/les goutte(s) interne(s) disposée(s) dans la goutte intermédiaire et prévient/évite les phénomènes de crémage ou de sédimentation de la/les goutte(s) interne(s) disposée(s) dans la goutte intermédiaire.
Agent gélifiant lipophile Selon un mode de réalisation, la phase grasse comprend en outre au moins un agent gélifiant lipophile.
Un tel agent gélifiant est différent des polymères anioniques et cationiques et des huiles décrit(e)s ci-dessus.
Ces agents gélifiants lipophiles sont décrits plus en détail dans WO2021234135.
Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, l’agent gélifiant lipophile est choisi parmi le Castor Oil/IPDI Copolymer (and) Caprylic/Capric Triglyceride, notamment commercialisé sous la dénomination Estogel® M par PolymerExpert, l’Hydrogenated Castor Oil/Sebacic Acid Copolymer ainsi que ses dérivés, notamment commercialisés respectivement sous les dénominations Estogel® Green (ou Estogel® G) et Estogel® Green 40 par PolymerExpert le Caprylic/Capric Triglyceride (and) Polyurethane-79, notamment commercialisé sous la dénomination OILKEMIA™ 5S polymer par la société Lubrizol, le Trihydroxystearin, notamment commercialisé sous la dénomination THIXCIN® R par la société Elementis Specialties, et leurs mélanges, et mieux le Castor Oil/IPDI Copolymer (and) Caprylic/Capric Triglyceride.
Avantageusement, un agent gélifiant lipophile est un agent gélifiant thermosensible, à savoir qui réagit à la chaleur, et notamment est un agent gélifiant solide à température ambiante et liquide à une température supérieure à 50°C, de préférence supérieure à 60°C, et mieux supérieure à 70°C. De préférence, un agent gélifiant lipophile thermosensible selon l’invention a un point de fusion compris entre 50°C et 130°C, et de préférence entre 60°C et 120 °C. Avantageusement, un agent gélifiant de phase grasse selon l’invention est un agent gélifiant thixotrope ou apte à conférer à la solution qui le comprend un comportement thixotrope. Un tel agent gélifiant thixotrope est notamment choisi parmi les silices pyrogénées éventuellement traitées hydrophobes, décrites précédemment.
Selon un mode de réalisation, une dispersion selon l’invention peut comprendre de 0,1% à 75%, de préférence de 0,5% à 60%, en particulier de 1% à 40%, mieux de 1,5% à 20%, et préférentiellement de 1% à 4%, en poids d’agent(s) gélifiant(s) par rapport au poids total de la dispersion.
L’homme du métier veillera à choisir le(s) agent(s) gélifiant(s) lipophile(s) et/ou leur quantité de manière à satisfaire aux contraintes imposées par le procédé de fabrication mis en œuvre (notamment de type « non-microfluidique » ou « microfluidique ») pour la fabrication de la dispersion selon l’invention. Ces ajustements relèvent des compétences de l’homme du métier au regard de l’enseignement de la présente description.
Fluide Nom INCI % w/w Phases IF (phase grasse gélifiée) Cetiol® C5C Coco-Caprylate/Caprate Qsp* Huile de Meadowfoam Limnanthes alba seed oil 15 EMC30 ** Castor Oil/IPDI Copolymer (and) Caprylic/Capric Triglyceride 33,33 NATPURE COL RED LC318L Helianthus Annuus Seed Oil, CI 40800 0,012 Brut réactionnel obtenu en Exemple 13 *** 0,41 OF (phase aqueuse continue) Eau osmosée Aqua Qsp* Microcare® PE Phenoxyethanol, aqua 0,99 Microcare® emollient PTG Pentylene glycol, aqua 2,47 Glycerine codex Glycerin, aqua 9.88 Zemea Propanediol Propanediol, aqua 8.64 Butylene Glycol 1.3 Butylene glycol, aqua 6.17 Edeta BD Disodium EDTA 0.05 Carbopol® ETD 2050 polymer Carbomer 0,33 Carbopol® Ultrez 10 polymer Carbomer 0.10 Blanose CMC 7HF Cellulose, aqua 0.04 Sodium hydroxide pellets PRS codex Sodium hydroxyde 0,01 Total 100 BF (base) Eau osmosée Aqua Qsp Sodium hydroxide pellets PRS codex Sodium hydroxyde 0,64 Total 100
** EMC30 : pré-mélange d’Estogel M (INCI : Castor Oil/IPDI Copolymer (and) Caprylic/Capric Triglyceride) dans l’huile Caprylic/Capric Triglyceride dans un ratio 30/70 ; concentration correspondante en agent gélifiant lipophile (ie Estogel M) = 10%% par rapport au poids total IF.
*** Brut réactionnel obtenu dans l’exemple 13 = 0,41 %, signifie que la teneur en « priamine + composé(s) de formule (I) » dans l’IF est de 0,03 % (ie (%Brut réactionnel purifié X %PA)/100 = (0,41 X 8,2) / 100 = 0,03).
- Mélange D : sous agitation sous pâle défloculeuse, les humectants (ie glycérine, zemea propanediol et butylene glycol 1.3) sont ajoutés au mélange C. Le mélange D obtenu est maintenu sous agitation pendant 10 min.
- Mélange E : la blanose, préalablement prédispersée à 1% dans l’eau sous agitation magnétique à 80°C, après retour à température ambiante, est ajoutée au mélange D sous agitation sous pâle défloculeuse.
La solution d’OF est ensuite introduite dans une seringue sOF reliée à un chauffage permettant de maintenir l’OF à chaud (80°C).
- Mélange A : le Brut réactionnel obtenu en Exemple 13 et le colorant sont pré-dispersés dans une partie du Cetiol® C5C. Le mélange est chauffé à 50°C et mélangé à l’aide d’un agitateur magnétique.
- Mélange B : le reste du Cetiol® C5C est mis sous agitation et chauffé à 80°C/90°C selon le gélifiant à disperser ; on y ajoute l’agent gélifiant lipophile (ie Estogel® M) sous agitation magnétique à 80°C jusqu’à obtenir une solution homogène garantissant une bonne dispersion du polymère.
- Mélange C : sous agitation à 80°C, on ajoute l’huile de Meadowfoam au mélange B.
L’élément de contrôle 340 peut être apte à contrôler l’activation et la désactivation de tous les modules, c’est à dire du ou des modules d’éclairage, du ou des modules lumineux, et du ou des modules de signalisation optionnels. Dans ce cas, l’élément de contrôle intègre les fonctionnalités de l’élément de contrôle 240 précédemment décrit selon les deuxième et troisième modes de réalisation. L’élément de contrôle 340 peut contrôler l’activation, la désactivation de chaque module en fonction de signaux de commande, reçus par exemple par un module de contrôle central du véhicule automobile, tel qu’une unité de commande électronique, de type ECU pour “ Electronic Control Unit ” en anglais.
L’élément de contrôle 340 peut comprendre un processeur configuré pour communiquer de manière unidirectionnelle ou bidirectionnelle, via un ou des bus ou via une connexion filaire, avec une mémoire telle qu’une mémoire de type « Random Access Memory », RAM, ou une mémoire de type « Read Only Memory », ROM, ou tout autre type de mémoire (Flash, EEPROM, etc). En variante, la mémoire comprend plusieurs mémoires des types précités. De manière préférentielle, la mémoire est une mémoire non volatile. Le processeur est apte à exécuter des instructions, stockées dans la mémoire, contrôler les modules du dispositif lumineux 300 en fonction de signaux de commande. De manière alternative, le processeur peut être remplacé par un microcontrôleur conçu et configuré pour la mise en œuvre du contrôle des modules en fonction des signaux de commande reçus.
En variante, chaque module parmi les modules lumineux, d’éclairage et de signalisation, comprend un élément de contrôle dédié.
Selon l’invention, l’élément de contrôle 340 est apte à activer le ou les modules lumineux 100, 200 en regard d’un module d’éclairage qui est désactivé. La signature du dispositif lumineux 100, qui est constituée par les formes des modules de signalisation et d’éclairage, et par leurs agencements respectifs, est ainsi homogène que le ou les modules d’éclairage soient activées ou non.
Ainsi, un observateur extérieur ne voit pas de zone sombre au niveau du module d’éclairage lorsque ce dernier est désactivé, comme c’est le cas généralement durant la journée. L’invention permet ainsi d'homogénéiser la signature du dispositif lumineux 300.
Ainsi, selon les deuxième, troisième et quatrième modes de réalisation, au moins un module lumineux 200 est apte à être traversé par les rayons lumineux issus du module d’éclairage 301.1 et/ou du module d’éclairage 301.2. Lorsque le dispositif lumineux 300 comprend un unique module lumineux 200, la couche émissive 205 peut former un premier motif agencé en regard du module d’éclairage 301.1 et un deuxième motif agencé en regard du module d’éclairage 301.2.
Lorsque le dispositif lumineux 300 comprend deux modules lumineux 200, un premier module lumineux 200 comprend une couche émissive 205 formant un premier motif lumineux agencé en regard du premier module d’éclairage 301.1 et un deuxième module lumineux 200 comprend une couche émissive 205 formant un deuxième motif lumineux agencé en regard du deuxième module d’éclairage 301.2.
Lorsque les modules d’éclairage ont des surfaces optiques de formes différentes, les motifs lumineux du ou des modules lumineux 200 varient de manière à être identiques aux surfaces optiques respectives des modules d’éclairage qu’ils recouvrent. Il est ainsi rendu possible d’homogénéiser des signatures complexes entre les périodes de jour et de nuit.
Plusieurs exemples de réalisation sont également possibles avec au moins un module lumineux 100 selon le premier mode de réalisation. Ces exemples sont décrits ci-après en référence aux figures 4, 5 et 6.
La montre un premier exemple d’un module lumineux 400 d’un dispositif lumineux selon le premier mode de réalisation de l’invention.
Le module lumineux 400 comprend un guide de lumière 405 comprenant une nappe de guidage 410 et un élément d’injection 420, et une source de lumière 430, similaires au guide de lumière 105 et à la source de lumière 130 du module lumineux 100 précédemment décrit.
La nappe de guidage 410 est gravée de manière à renvoyer les rayons lumineux injectés par l’élément d’injection 420 selon un motif lumineux 450, suite à l’activation de la source de lumière 430, par l’élément de contrôle 340.
Le motif 450 est agencée en regard d’une surface optique de projection d’un module d’éclairage. Le motif 450 peut en outre être conformée pour se superposer avec la surface optique de projection du module d’éclairage. Le motif 450 peut ainsi avoir la même forme qu’une projection dans le plan de la nappe de guidage , de la surface optique de projection du module d’éclairage.
Il est ainsi rendu possible d’éclairer le motif 450 par activation de la source 430, lorsque le module d’éclairage, sur lequel est placé le module lumineux 400, est désactivé. Ainsi, un observateur extérieur ne voit pas de zone sombre au niveau du module d’éclairage lorsque ce dernier est désactivé, comme c’est le cas durant la journée. L’invention permet ainsi d'homogénéiser la signature du dispositif lumineux comprenant un module lumineux 400 agencé sur un module d’éclairage.
Le module lumineux 400 peut par exemple être utilisé dans l’exemple de la , en étant agencé en regard du module d’éclairage 301.1 ou du module d’éclairage 301.2. En variante, le dispositif lumineux 300 comprend un premier module lumineux identique au module lumineux 400 agencé en regard du premier module d’éclairage 301.1, et un deuxième module lumineux identique au module lumineux 400 agencé en regard du deuxième module d’éclairage 301.2.
Ainsi, plusieurs modules lumineux 400 selon le premier mode de réalisation peuvent être avantageusement utilisés dans un dispositif lumineux comprenant plusieurs modules d’éclairage. Lorsque les modules d’éclairage ont des surfaces optiques de formes différentes, les motifs 450 des modules lumineux 400 peuvent être identiques aux surfaces optiques respectives des modules d’éclairage qu’ils recouvrent. Il est ainsi rendu possible d’homogénéiser des signatures complexes entre les périodes de jour et de nuit.
Composé(s) additionnel(s) Une dispersion selon l’invention, en particulier la phase aqueuse et/ou la phase grasse, peut/peuvent en outre comprendre au moins un composé additionnel différent des polymères cationique et anionique, des agents gélifiants lipophiles et des huiles susmentionné(e)s.
Les dispersions selon l’invention peuvent ainsi en outre comprendre des poudres ; des paillettes ; des agents colorants, notamment choisis parmi les agents colorants hydrosolubles ou non, liposolubles ou non, organiques ou inorganiques, les matériaux à effet optique, les cristaux liquides, et leurs mélanges ; des agents particulaires insolubles dans la phase grasse ; des charges, de nature organique ou minérale ; des conservateurs ; des humectants ; des stabilisateurs ; des chélateurs ; des émollients ; des agents modificateurs choisis parmi les agents de texture (ou agents gélifiants), de pH, de force osmotique et/ou des modificateurs d’indice de réfraction etc… ou tout additif cosmétique usuel ; et leurs mélanges.
Selon un mode de réalisation, les agents particulaires insolubles dans la phase grasse des gouttes sont choisis dans le groupe constitué des pigments, des nacres, des céramiques, des polymères, notamment des polymères acryliques, et de leurs mélanges.
Les dispersions selon l’invention peuvent en outre comprendre au moins un actif biologique/cosmétique choisi parmi les agents hydratants, les agents cicatrisants, les agents dépigmentants, les filtres UV, les agents desquamants, les agents antioxydants, les actifs stimulant la synthèse des macromoléculaires dermiques et/ou épidermiques, les agents dermodécontractants, les agents anti-transpirants, les agents apaisants et/ou les agents anti-âge, et leurs mélanges.
Agent(s) de texture hydrophile(s) Une phase aqueuse selon l’invention peut en outre comprendre au moins un agent de texture hydrophile, différent des polymères cationique et anionique, des huiles, des agents gélifiants lipophiles et de la base décrit(e)s précédemment.
Un tel agent de texture hydrophile permet avantageusement de moduler la viscosité et la sensorialité d’une dispersion selon l’invention, voire d’améliorer sa stabilité cinétique. Lorsque présent en phase aqueuse continue, l’agent de texture hydrophile peut également impacter la suspensivité des gouttes.
Comme agents de texture hydrophiles, c'est-à-dire solubles ou dispersibles dans l’eau, et donc pouvant être présents dans la phase aqueuse d’une composition selon l’invention, on peut citer :
les agents de texture naturels, notamment choisis parmi les extraits d'algues, les exsudats de plantes, les extraits de graines, les exsudats de microorganismes, tel que l’alcasealan (INCI : Alcaligenes Polysaccharides), et autres agents naturels, en particulier l’acide hyaluronique, les agents de texture semi-synthétiques, notamment choisis parmi les dérivés de la cellulose et les amidons modifiés, les agents de texture synthétiques, notamment choisis parmi les homopolymères d'acide (méth)acrylique ou un de leurs esters, les copolymères d'acide (méth)acrylique ou un de leurs esters, les copolymères d’AMPS (2-acrylamido-2-méthylpropane sulfoniques acide), les polymères associatifs, les autres agents de texture, notamment choisis parmi les polyéthylèneglycols (commercialisé sous la dénomination « Carbowax »), les argiles, les silices telles que celles commercialisées sous les dénominations Aérosil® 90/130/150/200/300/380), la glycérine, et leurs mélanges.
Bien entendu, l’homme du métier veillera à choisir les éventuels composé(s) additionnel(s) et/ou leur quantité de telle manière que les propriétés avantageuses de la dispersion selon l’invention ne soient pas ou substantiellement pas altérées par l’adjonction envisagée. En particulier, la nature et/ou la quantité du/des composé(s) additionnel(s) dépend(ent) de la nature aqueuse ou grasse de la phase considérée de la dispersion selon l’invention. Ces ajustements relèvent des compétences de l’homme du métier.
La viscosité de la phase aqueuse continue peut être maîtrisée, notamment, en jouant sur la quantité de polymère anionique (notamment carbomère), le pH de la solution et/ou de la nature et/ou de la teneur en agent(s) de texture hydrophile(s). De manière générale, le pH de la phase aqueuse est inférieur à 4,5, ce qui peut impliquer l’ajout d’une troisième solution d’augmentation de viscosité (BF) dans un dernier temps pour atteindre un pH compris entre 5,5 et 6,5.
La viscosité des phases et la force de cisaillement appliquée au mélange sont les deux principaux paramètres qui influencent la taille et la monodispersité des gouttes de la dispersion.
- Mélange final : sous agitation à 80°C, on ajoute le mélange A au mélange C.
L’IF chauffée est ensuite introduite dans une seringue sIF reliée à un chauffage permettant de maintenir l’IF à chaud (80°C). Pour réduire les pertes thermiques, le dispositif microfluidique a été installé directement en sortie des seringues sIF et sOF et est lui-même maintenu à 80°C.