INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La phase aqueuse est ajoutée à la phase huileuse tout en mélangeant pour former une émulsion. La dispersion résultante est mise sous bullage d’azote pendant 30 minutes tandis que la température est stabilisée à 25 °C, moment auquel 0,1g d’hydroperoxyde de t-butyle est ajouté à l’émulsion et 5g une solution comprenant 0,75g de MBS est introduite dans la dispersion à débit de 0,1 millilitre par minute. La polymérisation est réalisée à une température comprise entre 38 °C et 42 °C, pendant environ 90 minutes. Les monomères résiduels sont piégés en introduisant 5g d’une solution comprenant 0,3g de MBS à un débit de 1,0 millilitre par minute. On obtient une émulsion de polymère eau dans huile contenant 20% en poids du polymère 1.
On ajoute 50g d’un émulsifiant huile dans eau (Marlophen® NP 8, éthers de nonylphénol et de polyéthylèneglycol 8 OE) dans l’émulsion de polymère eau-dans-huile pour l’utilisation de l’émulsion (les pourcentages sont exprimés en poids par rapport au poids de l’émulsion inverse). On obtient une émulsion de polymère eau dans huile contenant 34% en poids du polymère 1.
Exemple 2 : Evaluation de la production de glycosidases (EC 3.2.1) par la souche Talaromyces versatilis Tr3864 cultivé e en présence de glucose
1. Culture du champignon en fermenteur Préalablement à la fermentation, le champignon selon l’invention, i.e. souche Talaromyces versatilis Tr3864, fait l’objet d’une préculture en fiole Erlenmeyer afin de produire une biomasse suffisante à l’inoculation du fermenteur. Le milieu de préculture est constitué d’une source de carbone simple (glucose) et d’une source nutritive azotée (Corn Steep Liquor).
La durée de la préculture est d’environ 25 heures.
A l’issue de cette préculture, le fermenteur est inoculé avec la préculture à un taux de 5% (v/v).
Le milieu de fermentation est constitué d’une seule source de carbone simple (glucose), d’un inducteur (mélange de cellulose et hémicelluloses), de plusieurs sources d’azote (sulfate d’ammonium, phosphate de diammonium, Corn Steep Liquor), de minéraux (CaCl 2 , KH 2 PO 4 , MgSO 4 ), et d’éléments traces (MnSO 4 , FeSO 4 , ZnSO 4 ).
Parmi les principaux paramètres de la culture qui sont régulés, la température est de 30°C, le pH est de 4, l’agitation varie entre 500 et 950 rpm, et l’aération est de 75 L/h.
Après environ 24 heures de croissance, une alimentation de glucose est mise en œuvre. Cette alimentation est continue, à un débit compris entre 1 et 2 grammes de glucose/heure/Litre.
La culture est poursuivie jusqu’à une durée totale d’environ 72 heures.
2. Suivi de l’activité xylanase au cours de la fermentation
Après 48 heures et 72 heures de culture en fermenteur, la biomasse a été séparée du surnageant par centrifugation. L’activité xylanase du surnageant de culture a été évaluée par la méthode de dosage à l’acide dinitrosalicylique (DNS). Cette méthode consiste à incuber une solution diluée du surnageant de fermentation en présence de xylane de hêtre pendant 10 minutes à 50°C. La xylanase coupe la chaine de xylane (composée de xyloses) en chaines plus courtes ou oligosaccharides et libère ainsi des extrémités réductrices ou xyloses réducteurs. Ceux-ci sont dosés par le DNS à 95°C et à pH alcalin, le DNS se fixe sur les oses réducteurs laissant apparaître une couleur jaune-orangée proportionnelle à la quantité d’oses réduits et mesurable au spectrophotomètre à 540 nm. Chaque mesure est réalisée en duplicat. La quantification est faite grâce à une gamme étalon de xylose, sucre réducteur.
Les résultats sont représentés par la et montrent une production de xylanases au cours de la culture alimentée en glucose très significativement supérieure pour la souche mutante de l’invention (i.e. T. versatilis Tr3864) que pour la souche parente (i.e. T. versatilis IMI 378536) ; la production étant pour cette dernière quasiment nulle du fait des mécanismes de répression catabolique induits par le glucose.
3. Suivi de l’activité arabinofuranosidase au cours de la fermentation
Après 72 heures de culture en fermenteur, la biomasse a été séparée du surnageant par centrifugation. L’activité arabinofuranosidase du surnageant de culture a été évaluée par hydrolyse d’un substrat arabinoxylane suivi d’un dosage de l’arabinose libéré par chromatographie échangeuse d’anion. Une solution diluée du surnageant de fermentation est incubée en présence de xylane de blé pendant 15 minutes à 50°C. L’arabinofuranosidase est capable d’hydrolyser les liaisons osidiques entre les arabinofuranosides ramifiés et la chaine principale de xylane. Il en résulte la libération de monomères d’arabinoses qui sont alors séparés par chromatographie ionique (High Pressure Anion Exchange Chromatography) sur colonne CarboPac PA10 puis quantifiés par détection ampérométrique.
Les résultats sont représentés par la et montrent une production d’arabinofuranosidases au cours de la culture alimentée en glucose très significativement supérieure pour la souche mutante de l’invention (i.e. T. versatilis Tr3864) que pour la souche parente (i.e. T. versatilis IMI 378536) ; la production étant pour cette dernière quasiment nulle du fait des mécanismes de répression catabolique induits par le glucose.
4. Conclusion Il ressort clairement de ces données qu’un champignon filamenteux modifié génétiquement selon l’invention pour altérer le gène consistant en la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 1 assure une production efficace de xylanases (EC 3.2.1.8) et d’arabinofuranosidases (EC 3.2.1.55) en présence d’une source de carbone simple (i.e. le glucose), peu coûteuse. En outre, ce microorganisme ne présente aucune altération de sa viabilité ou de la morphologie des colonies. En d’autres termes, la présente invention assure une croissance efficace du microorganisme sans perturber le transport des acides aminés et l’assimilation de l’azote.
Procédé de fabrication d’une tôle corruguée en acier inoxydable laminée à froid La présente invention concerne un procédé de fabrication d’une tôle en acier inoxydable corruguée.
Dans cet essai, les composition C1 (décrite au tableau 8 et 9) et C2 (décrite au tableau 10) ont été injectées l’une après l’autre avec une 1 heure d’intervalle en commençant par la composition C1. Conjugué PLL (PLL = Poly-L-Lysine) Concentration 1X (mg/mL) Concentration 10X (mg/mL) Alpha-tocophérol-PLL 0,070 0,70 Ascorbyl-PLL 0,063 0,63 Biotinyl-PLL 0,068 0,68 GABA-PLL 0,126 1,26 Glutathion-PLL 0,074 0,74 Panthotényl-PLL 0,068 0,68 Retynoil-PLL 0,202 2,02 Spermine-PLL 0,066 0,66 Taurine-PLL 0,110 1,10 PLL/Cystéine (copolymère) 0,06 0,6 PLL/Méthionine (copolymère) 0,101 1,01
Les fèces de cinq souris mâles et femelles de chaque groupe (WT, SOD1, SOD1 + C1 faible dose et SOD1 + C1 forte dose), collectés dans les cages, ont été analysées à T0 (=T6), T3 semaines (T9) et 10 semaines (T16) soit un total de 55 échantillons.
Dans une première étape, l’ADN génomique total a été extrait de chaque échantillon fécal par la méthode Godon (Godon et al, Appl Envion. Microbiol, 1997). La qualité de l’ADN extrait a été évaluée après migration des échantillons sur gel d’agarose. La concentration d’ADN a ensuite été déterminée par la technologie Nanodrop.
Les échantillons d’ADNg obtenus ont ensuite été séquencés. L’approche utilisée est le séquençage haut débit du gène codant pour l’ARN ribosomal 16S (zone V3-V4) selon la technologie Illumina (longueur des reads : 150 bases, profondeur de lecture : 1 million de reads).
L’affiliation taxonomique de chaque séquence bactérienne obtenue (ou OTU) a été réalisée à l’aide des bases de données silva_nr99_v138.1 (https://www.arb-silva.de/) et GTDB v202 (https://gtdb.ecogenomic.org/).
Le pipeline ranomaly (Theil S and Rifa E. rANOMALY: AmplicoN wOrkflow for Microbial community AnaLYsis [version 1; peer review: 2 approved]. F1000Research 2021, 10:7 https://doi.org/10.12688/f1000research.27268.1 ), et basé sur le programme dada2, a été utilisé pour traiter l’ensemble des séquences, que ce soit pour l’estimation de l’abondance des phyla/Famille bactériens ou pour réaliser les analyses statistiques (composition, analyses de diversité, analyses différentielles d’abondance).
La comparaison de la diversité et de la richesse bactérienne entre microbiotes issus de souris traitées et non traitées a été réalisée par le calcul de l'indice de Shanon. Les différences de structure des populations (béta diversité) ont été mises en évidence par deux méthodes d'analyse multivariée (Anova et Nonmetric Multidimensional Scaling =Method MDS) et une PLS-DA (analyse de régression discriminante des moindres carrés partielles) issue du packages mixOmics.
Les analyses différentielles d'abondances d'OTU ont été réalisé à l'aide des outils de normalisation et d'estimation du package DESeq2 [Love, M.I., Huber, W., Anders, S. Moderated estimation of fold change and dispersion for RNA-seq data with DESeq2 Genome Biology 15(12):550 ; 2014].
Corrélation Microbiote – Paramètres cliniques
La corrélation potentielle entre chacun des paramètres cliniques et physiologiques mesurés et la composition moléculaire du microbiote a été étudiée pour chacune des souris femelles dont le microbiote a été analysé (5 souris par groupe).
Plusieurs méthodes d’analyse ont été testées, basées sur la corrélation de rang (spearman).
La méthode retenue est l’analyse canonique des corrélations (rcca) proposée par le package mixOmics (Rohart F, Gautier B, Singh A, and Le Cao K-A,2017 : mixOmics: An R package for 'omics feature selection and multiple data integration. PLoS computational biology 13(11):e1005752). Cette méthode permet d’effectuer une validation croisée des résultats d’analyses des corrélations entre l’abondance des OTUs et les différents paramètres cliniques mesurés. Les résultats obtenus sont présentés sous la forme de carte de chaleur (heatmap) montrant les corrélations significatives, positives ou négatives, entre l’abondance des OTU et les paramètres cliniques.
Résultat s :
Comparaison de la composition du microbiote fécal de souris KO « SOD1 » à celle de souris « Wild Type » (WT)
L’analyse de l’abondance relative des phyla, ordres, familles voire genres bactériens présents chez les souris SDO1 par rapport aux souris WT montre que la composition du microbiote SOD1 diffère de celle des WT :
- SOD1 ont moins de Firmicutes et plus de Bacteroidetes que les WT
En effet, la présence d’une unité de contrôle permet une automatisation, au moins partielle, de l’élevage réduisant ainsi l’intervention humaine et donc le risque de contamination.
En outre, l’invention concerne aussi une méthode d’élevage d’insectes comprenant les étapes suivantes :
Introduire des insectes et leur substrat d’élevage dans un dispositif d’élevage d’insectes tel que décrit ci-dessus, Déterminer régulièrement au moins un paramètre environnemental dans la partie intermédiaire et ou inférieure de la cuve, En fonction de l’au moins un paramètre environnemental : Injecter de l’air et/ou de l’eau dans la cuve, et/ou Entrainer en rotation la vis sans fin pour convoyer le substrat d’élevage de la partie inférieure de la cuve vers la partie supérieure de la cuve, et/ou Injecter du substrat d’élevage.
La détermination régulière des paramètres environnementaux permet d’optimiser la croissance des insectes tout en réduisant les coûts liés à la logistique. En effet, les modifications apportées au milieu d’élevage par l’injection d’air, d’eau et/ou de substrat ou par la rotation de la vis sans fin ne sont effectuées que lorsque cela est nécessaire.
Dans un mode de réalisation avantageux, la rotation de la vis sans fin est intermittente.
« Insecte » concerne tous les stades de l’évolution entre l’œuf à l’insecte adulte, en passant par la larve et la nymphe (ou pupe). « Milieu d’élevage » concerne l’ensemble des éléments présents dans la cuve. Cela correspond au milieu dans lequel sont élevés les insectes. Ce milieu comprend en particulier un substrat, les insectes, l’air et l’eau contenus dans la cuve. « Substrat d’élevage » concerne un milieu comprenant des nutriments nécessaires à la croissance des insectes et dans lequel les insectes peuvent s’installer et se déplacer.
DESCRIPTION DÉTAILLÉE La présente invention concerne un dispositif 100 d’élevage d’insectes. Plus précisément, le dispositif permet l’élevage d’insectes dans un substrat d’élevage.
Les insectes peuvent être tout type d’insecte d’élevage. De préférence, les insectes sont des insectes comestibles tels que, mais non limité à, Dermestes ater, Dermestes magister, Alphitobius diapennus, Oryzaephilus surinamensis, Cryptolestes ferrugineus, Hermetia Illucens, Trogoderma granarium, Locusta migratoria, Gryllodes sigillatus, Acheta domesticus ou les vers de farines tels que, par exemple, Tribolium castaneum, Tribolium confusum, Zophobas morios, Tenebrio molitor, Gnathocerus cornutus, Tenebroides mauritanicus ou Ephestia kuehniella.
Le substrat d’élevage comprend des nutriments nécessaires à la croissance des insectes. De plus, ce substrat d’élevage est propice à l’installation et au déplacement des insectes. Afin de limiter les risques de contamination, le nutriment utilisé dans le substrat est préférentiellement intégré sous forme de nourriture sèche ou semi-humide. Le substrat peut contenir des résidus de l’industrie agro-alimentaire – par exemple brassicole – des déchets de l’industrie de la restauration ou des déchets banals en vue de leur compostage ou recyclage.
Le dispositif 100, représenté aux figures 1-3, comprend une cuve 101 configurée pour recevoir les insectes et leur substrat d’élevage, une vis sans fin 102 placée dans une gaine 104 à l'intérieur de la cuve 101, au moins un système d’injection (106, 106a, 106b) configuré pour introduire de l’air et/ou de l’eau à l'intérieur de la cuve 101, et un capteur environnemental 108 dans la partie intermédiaire de la cuve 101.
La cuve 101 peut être par exemple un cylindre, un parallélépipède ou un cône tronqué. Dans les modes de réalisations représentés aux figures 1-3, la cuve 101 possède une partie conique surmontée d’une partie cylindrique.
La cuve 101 est de préférence de grande dimension afin de pouvoir contenir un grand volume d’insectes et de substrat. Par exemple, la hauteur de la cuve 101 est comprise entre 100 centimètres et 900 centimètres, de préférence entre 200 centimètres et 450 centimètres. Par exemple encore, la dimension principale D c de la partie intermédiaire de la cuve est compris entre 100 centimètres et 400 centimètres, de préférence entre 100 centimètres et 150 centimètres. La dimension principale de la partie intermédiaire de la cuve D c est, par exemple, le diamètre pour une cuve cylindrique, ou l’un des côtés de la section ou la diagonale pour une cuve parallélépipèdique.
Dans le mode de réalisation dans lequel la cuve 101 possède une partie cylindrique et une partie conique, le rapport entre la hauteur du cylindre et la hauteur du cône peut varier. Par exemple, la hauteur du cylindre peut être grande comparée à la hauteur du cône comme cela est représenté à la et à la . Alternativement, la hauteur du cylindre peut être petite comparée à la hauteur du cône comme cela est représenté à la .
En outre, la présence d’un couvercle fermant hermétiquement la cuve 101 est avantageuse. En effet, cela permet d’obtenir un milieu d’élevage contrôlé et peu sensible aux paramètres extérieurs. De plus, cela permet d’éviter l’attaque des insectes par des prédateurs. Dans le mode de réalisation dans lequel la cuve 101 possède un couvercle, une ouverture peut être présente dans le couvercle afin de permettre l’introduction des insectes et du substrat d’élevage dans la cuve 101. Alternativement, la cuve 101 peut être exempte de couvercle hermétique afin de permettre l’évacuation du CO 2 . Dans ce mode de réalisation, un ou plusieurs filtres peuvent être placés sur les ouvertures de la cuve 101 afin de réduire la propagation des poussières vers l’extérieur de la cuve.
La cuve 101 peut en outre comprendre une trappe 110 située dans sa partie inférieure (la partie inférieure étant définie ci-après). La trappe 110 peut permettre l'évacuation des insectes et du substrat d’élevage. Ceci est avantageux car cela facilite la récolte des insectes et/ou le nettoyage de la cuve. De plus, lorsque la cuve est placée verticalement, l’évacuation est simplement gravitaire.
Comme on peut le voir sur la , la surface de la bordure de faisceau 80 située au contact du deuxième fluide caloporteur (à l’entrée « chaude » 8) est munie d’éléments en saillie 88 formant des nervures obliques.
Comme on peut le voir sur la , la surface de la bordure de faisceau 80 située au contact du premier fluide caloporteur (à la sortie « froide » 6) est munie d’éléments en saillie 89 (en forme de V à l’envers).
La représente la boîte d’alimentation 27 du dispositif d’échange thermique dont une portion de la surface interne 30 est munie de picots 110, se présentant ici sous la forme de six rangées de picots 110 comprenant chacune entre 20 et 25 picots d’un bord à l’autre de la boîte d’alimentation 27.
La représente la boîte d’alimentation 22 du dispositif d’échange thermique dont une portion de la surface interne 32 est munie de trois nervures 120 sensiblement parallèles entre elles.
Les éléments en saillie 88, 89 au contact du premier fluide caloporteur (à sa sortie 6) et du deuxième fluide caloporteur (fluide « chaud ») emmagasinent la chaleur de ce fluide et ainsi favorisent et accélèrent l’augmentation de la température des éléments adjacents ou périphériques du bloc échangeur.
Les figures 7 à 9 représentent deux autres modes de réalisation de bordures de faisceau 90, 100. Chaque bordure de faisceau représentée aux figures 7 à 9, présente des éléments en saillie 92, 102 configurés pour pouvoir être au contact du premier ou du deuxième fluide caloporteur. Ceci permet que les éléments en saillie 92, 102 au contact du deuxième fluide caloporteur (fluide « chaud ») emmagasinent la chaleur de ce fluide et ainsi favorisent et accélèrent l’augmentation de la température des éléments adjacents ou périphériques du bloc échangeur. Les éléments en saillie 92, 102 permettent ainsi de récupérer la chaleur par convection et de la transporter par conduction dans les pièces adjacentes dont la température est inférieure à la température desdits éléments en saillie.
Les éléments en saillie 92, 102 sont disposés sur des portions d’extrémité de chaque bordure de faisceau 90, 100, une zone plane, dénuée de tels éléments en saillie, étant prévue entre ces deux portions d’extrémités.
Dans les modes de réalisation représentés aux figures 7 à 9, chaque bordure de faisceau 90, 100 présente une forme de profilé rectiligne présentant une section droite transversale en T (non symétrique ici). Les éléments en saillie 92, 102 peuvent être disposés sur une même surface de chaque bordure de faisceau 90, 100 en T. Dans les modes de réalisation représentés aux figures 7 à 9, chaque bordure de faisceau 90, 100 présente une paroi 94, 104, sensiblement orthogonale à la surface munies des éléments en saillie 92, 102, libre dont une face peut être fixée à une arête du bloc échangeur, la face opposée de la paroi 94, 104, pouvant être utilisée pour y fixer une boîte d’alimentation et/ou de sortie du deuxième fluide caloporteur.
Les éléments en saillie peuvent présenter diverses formes, par exemple du type ailettes, nervures, languettes, plots, picots, dents, ou encore pointes.
Dans une première variante de réalisation d’un dispositif d’échange thermique selon l’invention représentée aux figures 7 et 8, les éléments en saillie se présentent sous la forme de nervures 92. Trois nervures 92 sont par exemple prévues ici à chaque extrémité de chaque bordure de faisceau 90 dans la variante de réalisation représentée aux figures 7 et 8.
Dans une deuxième variante de réalisation d’un dispositif d’échange thermique selon l’invention représentée à la , les éléments en saillie se présentent sous la forme de picots 102. Six picots 102 sont par exemple prévus ici à chaque extrémité de chaque bordure de faisceau 100 dans la variante de réalisation représentée à la .
Dans une troisième variante de réalisation d’un dispositif d’échange thermique selon l’invention (non représentée), les éléments en saillie se présentent sous la forme de portions de conduits ou de guide-flux.
Les éléments en saillie 92, 102 d’une bordure de faisceau 90, 100 peuvent être moulés simultanément à la bordure de faisceau lors de sa fabrication, ou encore être soudés ou brasés en surface de celle-ci de façon à ne former qu’une même pièce (en un matériau distinct ou non).
D’autre part, dans le mode de réalisation illustré, chaque couche interne du bloc échangeur 12 est munie d’un guide-flux 50 formant une pluralité de canaux sensiblement parallèles entre eux. Les espaces entre les plaques internes 13, 15, 18 sont fermés latéralement par des barres 60, 62 de fermeture. Les plaques internes 13, 15, 18 sont disposées parallèlement les unes aux autres et parallèlement aux plaques externes 2.
Dans les variantes représentées aux figures 1 à 9, le parcours du premier et du deuxième flux de fluide caloporteur à l'intérieur du bloc échangeur est sensiblement rectiligne (sans considérer les sinuosités éventuelles en présence de certains guides-flux). Il est bien sûr également possible d'utiliser tout autre type de bloc échangeur à plaques, par exemple dans lequel le flux de l'un et/ou de l'autre du premier ou du deuxième fluide caloporteur suit un parcours en U ou encore en S.
Dans les modes de réalisation représentés, des guides-flux 50 s’étendent dans l’intégrité des couches internes du bloc échangeur 12.
Synthèse de micro-gels polymériques par polymérisation par précipitation
Le réacteur utilisé pour cette polymérisation est un récipient agité à double enveloppe de 2 L équipé d’une colonne de distillation, d’une sonde de pH, d’un thermomètre, d’un agitateur puissant, d’une buse de barbotage d’azote et d’une entrée de gaz ammoniac.
1570g de tertio-butanol pur (2-méthyl-2-propanol) et 65g d’eau sont initialement introduits dans le réacteur. 112 g d’ATBS acide sont ensuite ajoutés sous agitation. Le monomère est alors entièrement neutralisé grâce à un flux d’ammoniac gazeux qui est passé dans la suspension jusqu’à ce que le pH atteigne 8. L’introduction d’ammoniac est alors arrêtée et 1,3 g de MBA sont ensuite ajoutés. La solution est ensuite aspergée d’azote pendant une heure tandis que la température est portée à 55°C.
Lorsque la température est stabilisée à 55°C, 1,6g de peroxyde de dibenzoyle sont ajoutés à la solution afin d’amorcer la réaction et de précipiter le polymère formé. Après que la température ait cessé d’augmenter, le solvant est évaporé sous vide pour obtenir directement une poudre sèche qui correspond au polymère 2.
Synthèse de micro-gels polymériques par polymérisation en microémulsion inverse
Dans un réacteur de 1L, sont mélangés 440 g d’ATBS (50% en poids dans l’eau) et 0,22g de MBA. Le pH de la solution est ajusté à 6,5 avec quelques gouttes d’acide sulfurique concentré. On introduit alors 440 g d’huile iso parafinique, 12,3g d’oléate de sorbitan et 107,7g d’hexaoléate de sorbitan étoxylé. Le mélange est ensuite agité et devient transparent et homogène. Il est maintenu sous agitation à 200 rpm le temps du dégazage à l’azote pendant 25 minutes. On introduit alors de l’hydroperoxyde de cumène concentré dans le milieu, puis 1mL de métabisulfite de sodium (à 10% en poids dans l’eau). Le mélange est laissé sous atmosphère d’azote le temps de la polymérisation. La réaction est exothermique et la température monte à 50°C en 1 minute. Une fois la polymérisation terminée, 0,2 g de MBS (40% en poids dans l’eau) est ajouté afin d’éliminer les monomères résiduels. Le produit obtenu est transparent et de faible viscosité (24 cP) et correspond au polymère 3.
Différents polymères (4-7) sont synthétisés selon la même méthode en faisant varier différents paramètres (composition, taille des micro-gels polymérique) et sont résumés dans le tableau 2.
Préparation de la composition cimentaire Une composition cimentaire est préparée en mélangeant les éléments résumés dans le tableau 1 dans un bol mixeur, de capacité de 1L, équipé de lames. Les éléments sont ajoutés en 15 secondes à 4000 rpm, puis agités pendant 35 secondes à 12 000 rpm.