INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
[0044] Dans un mode de réalisation particulier, le milieu réactionnel comprend un inducteur provoquant ou augmentant l’expression d’une molécule d’intérêt produite par le micro-organisme cible. Cette molécule d’intérêt peut être une protéine, un antibiotique, une molécule de résistance à des agents antimicrobiens, une enzyme type protéase, une lipase ou une glucidase. Ainsi la présente invention permet la caractérisation ou la sélection de souches microbiennes par rapport à leur capacité à produire ces molécules d’intérêt. Dans un mode de réalisation particulier, la présente invention peut concerner le domaine de la bioproduction, et plus particulièrement la production de protéines recombinantes à partir d’un micro-organisme génétiquement modifié, pour laquelle il est nécessaire d’identifier les clones producteurs. La présente invention permet ainsi de bien voir que la protéine recombinante est produite. En présence d’un halo, Il est également possible d’estimer la quantité produite. Dans un autre mode de réalisation particulier, la présente invention permet la détection de bactéries pathogènes résistantes.
[0045] Dans un mode de réalisation particulier, le milieu réactionnel comprend un inducteur de toxine. L’inducteur de toxine provoque un stress chez la bactérie qui va déclencher le cycle lytique des prophages dans la bactérie et donc stimuler la production de toxines qui seront libérées. A titre illustratif, on peut citer les toxines sécrétées par Staphylococcus aureus ou les shigatoxines sécrétées par les souches STEC. Il existe deux grands types de shiga-toxines : STX1 et STX2 qui elles-mêmes présentent de nombreux variants. A ce jour, STX1 a 4 sous types STX1a, STX1c, STX1d, STX1e, et STX2 en a 12: STX2a, STX2b STX2c, STX2d, STX2e, STX2f, STX2g, STX2h, STX2i, STX2j, STX2K, STX2l. De manière avantageuse, l’inducteur de toxine est choisi parmi les antibiotiques ou un stress physico-chimique. On citera, en tant qu’antibiotique, trimethoprime, sulfamethoxazole, norfloxacine, azithromycine, gemtamicine, polymyxine B, chloramphénicol, streptomycine, chlortetracycline, oxytetracyline, tylosine, mitomycine C, carbodox, oliquindox, rifampincine, imipenème, ciprofloxacine, cotrimoxazole, peniciline G, linlomycine. Dans un mode de réalisation préféré, le milieu selon l’invention comprend de la ciprofloxacine à une concentration comprise entre 0,005 et 0,030 mg/l. Dans un autre mode de réalisation préféré le milieu selon l’invention comprend de la mitomycine C à une concentration comprise entre 0.10 et 0.5 mg/l.
(B) les solvants aprotiques polaires i.e. possédant un moment dipolaire non nul et dénués d’atomes d’hydrogène susceptibles de former des liaisons hydrogène. On peut citer par exemple, les esters d’acides organiques tels que l’acétate d’éthyle, l’acétate d’isopropyle, l’acétate de propyle, l’acétate de t -butyle, l’acétate d’ Isobutyle, le propionate de méthyle, le butyrate de méthyle, l’isobutyrate de méthyle, l’isovalérate de méthyle, le 2-méthylbutyrate de méthyle, et les carbonates d’alkyles en C 1 -C 4 , tels que le carbonate de diméthyle et
(C) Les solvants aprotiques apolaires i.e. possédant un moment dipolaire permanent nul. Par exemple, les hydrocarbures : alcanes linéaires ou ramifiés, alcanes cycliques, alcènes autre que le n-hexane.
Plus particulièrement les solvants additionnels « verts » différents du ou des solvants hétérocycliques ayant un point d’ébullition supérieur ou égal à 25 °C, de l’invention sont choisis parmi les familles suivantes : Les esters d’acides organiques tels que l’acétate d’éthyle, l’acétate d’isopropyle, l’acétate de propyle, l’acétate de t -butyle, de préférence l’acétate d’isopropyle ; les alcools tels que le bioéthanol, ou l’isopropanol ; les carbonates d’alkyles en C 1 -C 4 , tels que le carbonate de diméthyle ; et leurs mélanges.
Selon un mode de réalisation particulier, le premier système de solvants présente une densité inférieure à 2, et notamment inférieure ou égale à 1,5, de préférence comprise en 0.7 et 1,5.
Plus particulièrement la mise en contact est réalisée à température ambiante, sous agitation ou non, de préférence sous agitation. La ou les matière(s) naturelle(s) i) à x) telle(s) que définie(s) précédemment est(sont) plus particulièrement laissée(s) à macérer ou infuser à une température comprise entre 20 °C et 40 °C tel que 20 °C, dans le système de solvant(s) tel que défini précédemment. Selon une autre forme de l’invention, la mise en contact est réalisée avec chauffage à une température inférieure ou égale d’au moins 1 à 5 °C du point d’ébullition du solvant comportant le plus bas point d’ébullition telle que 45°C. Quelle que soit la température de mise en contact de a) avec b), cette mise en contact est réalisée dans un ballon en verre ou en métal, une cuve en verre ou en métal (inox), industrielle ou non, à simple ou double paroi, ou tout autre réacteur adapté à accueillir des solvants et matières naturelles. La durée de macération ou infusion dudit mélange a) + b) est comprise de préférence entre quelques secondes à une semaine, plus particulièrement entre 30 minutes et 48 heures, encore plus particulièrement entre 1 heure et 36 heures, mieux entre 2 heures et 24 heures, encore mieux entre 2 heures et 6 heures. La macération ou infusion peut être réalisée sous agitation, i.e. le mélange a) + b) peut être maintenu sous agitation mécanique de préférence à une vitesse de rotation comprise entre 10 tours / minute et 1200 tours / minute, en particulier entre 100 tours / minute et 900 tours / minute, encore plus particulièrement entre 200 tours / minutes et 850 tours / minute tel que 200 tours / minute.
Selon un mode de réalisation, après mélange a) + b), ledit mélange est soumis à une étape de sonication, en particulier en mettant ledit mélange dans une cuve à ultrasons à haute ou basse fréquence, de préférence à des fréquences comprises entre 5 et 40 kHz. De préférence la durée de sonication est comprise entre 5 secondes et 1 heures, plus préférentiellement comprise entre 10 secondes et 30 minutes, encore plus préférentiellement entre 30 secondes et 10 minutes tel que 5 minutes. La température lors de cette étape de sonication est comprise entre 0°C et 90°C, de préférence entre 5°C et 45°C.
[0056] Le contrôle microbiologique correspond à l’analyse d’un échantillon dans le but de détecter des micro-organismes susceptibles d’être présents au sein dudit échantillon. Ainsi, d’une manière tout à fait surprenante, il a été constaté qu’un milieu selon l’invention permettait de détecter une bactérie cible et de l’isoler. Avantageusement, le milieu selon l’invention, peut permettre ainsi de repérer et sélectionner un micro-organisme cible parmi une population mixte présente sur un milieu réactionnel non sélectif ou insuffisamment sélectif. Préférentiellement, la méthode selon l’invention permet une détection par l’apparition d’un halo autour dudit micro-organisme cible sur le milieu réactionnel selon l’invention.
[0057] Sans que cela ne soit limitatif, il s’avère que le milieu selon l’invention est particulièrement adapté à la détection des E. coli. Ainsi, selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne un milieu réactionnel gélifié pour la détection, l’identification, le dénombrement et/ou l’isolement d’une souche d’ E. coli, comprenant une protéine de phage spécifique du LPS de ladite souche couplée à une nanoparticule pour former un conjugué.
[0058] Dans ce mode de réalisation particulier, la quantité en protéine de phage spécifique du LPS permet de recouvrir au minimum le tiers de la surface de la nanoparticule.
[0059] Préférentiellement, dans ce mode de réalisation particulier, la nanoparticule est en or, de taille comprise entre 20 et 90 nm et à une concentration comprise entre 10 10 et 10 12 nanoparticules/ml de milieu réactionnel.
[0060] Dans ce mode de réalisation, le milieu réactionnel est formé à partir d’un milieu de culture connu pour la culture des souches d’E. coli tel que les milieux TBX ou chromID® Coli de la demanderesse, dans lesquels ont été ajoutés les conjugués agglutinants.
[0061] Dans un autre mode de réalisation particulier, la présente invention concerne un milieu réactionnel gélifié pour la détection, l’identification, le dénombrement et/ou l’isolement d’une souche d’E. coli, comprenant un anticorps monoclonal spécifique de ladite souche couplé à une nanoparticule pour former un conjugué.
[0062] Préférentiellement, dans ce mode de réalisation particulier, la quantité en anticorps monoclonal permet de recouvrir au minimum la moitié de la surface de la nanoparticule, et encore plus préférentiellement pour recouvrir entre le tiers et la moitié de la surface de la nanoparticule.
[0063] Préférentiellement, dans ce mode de réalisation particulier, la nanoparticule est en or, de taille comprise entre 20 et 90 nm et à une concentration comprise entre 10 10 et 10 12 nanoparticules/ml de milieu réactionnel.
[0064] Dans un autre mode de réalisation particulier, la présente invention concerne un milieu réactionnel gélifié pour la détection, l’identification, le dénombrement et/ou l’isolement d’une souche d’E. coli productrice de shigatoxine comprenant au moins un inducteur de toxine, au moins un anticorps spécifique de Stx1 et/ou de Stx2, ledit au moins un anticorps étant couplé à une nanoparticule pour former un conjugué agglutinant.
[0065] Ce mode de réalisation permet avantageusement de repérer une souche d’E. coli productrice de shiga-toxine par la formation d’un halo autour de ladite souche. En effet les conjugués formés d’anticorps couplés aux nanoparticules, se sont agglutinés autour de ladite colonie. Il est ainsi aisé de visualiser la colonie cible.
[0066] Dans ce mode de réalisation, ledit au moins un anticorps a une quantité permettant de recouvrir au minimum la moitié de la surface de la nanoparticule et préférentiellement au minimum le tiers de la surface de la nanoparticule. Dans ces modes de réalisations particuliers, le milieu comprend de la ciprofloxacine, à une concentration comprise entre 0.005 et 0.030 mg/l. Dans une variante de ces modes de réalisations particuliers, le milieu comprend de la mitomycine C, à une concentration comprise entre 0.10 mg/l à 0.50 mg/l.
[0067] Préférentiellement, dans ces variantes la nanoparticule est une nanoparticule d’or de taille comprise entre 20 et 90nm et à une concentration comprise entre 10 10 et 10 12 nanoparticules/ml de milieu réactionnel.
[0068] Lorsque le milieu selon l’invention comprend des partenaires de liaisons de plusieurs toxines, cette invention est particulièrement avantageuse pour discriminer dans un même échantillon les bactéries productrices de shiga toxine STX1 ou STX2 des bactéries productrices des deux types de shiga toxine STX1 et STX2.
[0069] Cette invention est particulièrement intéressante pour faciliter la détection des STEC dans un échantillon polymicrobien. En effet, sans la présente invention qui permet de localiser la colonie d’intérêt, la méthode de référence ISO 16136 précise qu’il est nécessaire de tester jusqu’à 50 colonies par méthode moléculaire pour confirmer la présence d’un STEC. Au regard du nombre important de colonies sur la boite et la faible représentation du micro-organisme cible, la personne prélevant les colonies à des fins de confirmation, peut ne jamais prélever le micro-organisme cible. Ainsi la présente invention permet un gain de temps dans l’exécution du contrôle microbiologique. Elle est particulièrement avantageuse pour des échantillons chargés en flore annexe, où la quantité importante de colonies sur les boîtes de Pétri peut entraîner un risque de faux négatifs.
Exemples [0070] Exemple 1 : Détection de E. coli O26 avec un milieu selon l’invention comprenant une protéine de phage couplée à une nanoparticule d’or
[0071] Préparation des nanoparticules d’or
La première portion 22 est agencée pour être fixée à la base 2 ou à l’armature 4 tandis que la deuxième portion 24 est agencée pour être fixée à une partie mobile par rapport à la première portion 22 lorsque l’armature 4 est déplacée par rapport à la base 2. En d’autres termes, lorsque la première portion 22 est fixée à la base 2, la deuxième portion 24 est fixée une partie de l’armature 4 (Figs. 1 et 2) ou à l’une des bielles 16 ( ) et lorsque la première portion 22 est fixée à l’armature 4, la deuxième portion 24 est fixée à une partie de la base 2 ou à l’une des bielles 16.
Ainsi, un déplacement de l’armature 4 par rapport à la base 2 entraîne une déformation de la deuxième portion 24 par rapport à la première portion 22 et la mesure de la distance entre la base 2 et l’armature 4 est réalisée en fonction de cette déformation, comme cela sera décrit ultérieurement.
La déformation de la deuxième portion 24 se fait au niveau de la jonction entre la première portion 22 et la deuxième portion 24, la jonction formant une zone de flexion 26 du capteur déformable 20. Plus particulièrement, la première portion 22 s’étend entre une première extrémité 28 et la zone de flexion 26 et la deuxième portion 24 s’étend entre la zone de flexion 26 et une deuxième extrémité 30, les première et deuxième extrémités 28, 30 formant les extrémités du capteur déformable 20.
La déformation de la zone de flexion 26 est telle que, lorsque l’armature 4 est rapprochée de la base 2, la deuxième extrémité 30 de la deuxième portion 24 se rapproche de la première portion 22, comme représenté en pointillés sur les Figs. 2 et 3, et, lorsque l’armature 4 est éloignée de la base 2, la deuxième extrémité 30 s’écarte de la première portion 22, comme représenté en traits mixtes sur les Figs. 2 et 3.
Le capteur déformable 20 est formé par un capteur de flexion résistif ou capacitif dont la résistance ou la capacité varie en fonction du taux de flexion de la zone de flexion 26. En d’autres termes, la résistance ou la capacité du capteur déformable 20 varie en fonction de l’angle formé entre la deuxième portion 24 et la première portion 22. Par conséquent, en mesurant la résistance ou la capacité du capteur déformable 20, le dispositif de mesure permet de déterminer le taux de flexion de la zone de flexion 26 ou l’angle formé entre la première partie 22 et la deuxième partie 26, ce qui permet d’en déduire la distance entre la base 2 et l’armature 4 comme cela sera décrit plus en détail ultérieurement. la résistance électrique ou la capacité du capteur déformable présente de préférence une relation linéaire avec le taux de flexion de la zone de flexion 26 ou l’angle entre la première partie 22 et la deuxième partie 24, de sorte que la résistance ou la capacité varie selon une droite en fonction du taux de flexion ou de l’angle, ce qui simplifie la mesure de la distance entre l’armature 4 et la base 2. De façon connue, un tel capteur déformable 20 se présente sous la forme d’une bande ou d’une tige élastique, intégrant un circuit électrique dont la résistance ou la capacité est mesurée.
Selon le mode de réalisation représenté sur les Figs. 1 et 2, le capteur déformable 20 s’étend dans une gaine 32 articulée d’une part à la base 2 et d’autre part à l’armature 4. Plus particulièrement, la gaine 32 est articulée, par une première extrémité voisine de la première extrémité 28 du capteur déformable 20, à un flanc 8 de la base 2 et, par une deuxième extrémité voisine de la deuxième extrémité 30 du capteur déformable 20, à un flanc 12 de l’armature 4. Les extrémités de la gaine 32 sont par exemple montées dans des orifices préexistants sur ces flancs 8 et 12, de sorte que l’intégration du dispositif de mesure à un siège déjà monté se fait de façon simple. La gaine 32 est agencée pour guider la flexion de la zone de flexion 26 du capteur déformable 20, la zone de flexion 26 se déplaçant avec la gaine 32 entre la base 2 et l’armature 4 lorsque la bielle 16 est déplacée en rotation pour modifier la position de l’armature 4 par rapport à la base 2, comme on peut le constater en comparant la position du capteur déformable 20 en pointillés sur la , qui correspond à une position basse de l’armature 4, la position du capteur déformable 20 en traits mixtes sur la , qui correspond à une position haute de l’armature 4, et la position du capteur déformable en trait plein sur la , qui correspond à une position intermédiaire entre la position basse et la position haute. Au cours de ce déplacement de la gaine 32, le taux de flexion de la zone de flexion 26 est également modifié, comme on peut le constater en comparant les différentes positions indiquées ci-dessus.
Selon le mode de réalisation représenté sur la , le capteur déformable 20 est monté sur une platine 34 solidaire de la base 2 et sur une platine 36 solidaire d’une bielle 16 de sorte que la première portion 22 s’étend dans une gorge 38 formée sur la platine 34 et que la deuxième portion 24 s’étend dans une gorge 40 formée sur la platine 36. La zone de flexion 26 s’étend entre les deux gorges 38 et 40 de sorte à pouvoir se déformer lorsque la bielle 16 est déplacée en rotation pour modifier la position de l’armature 4 par rapport à la base 2, comme on peut le constater en comparant la position du capteur déformable 20 en pointillés sur la , qui correspond à une position basse de l’armature 4, la position du capteur déformable 20 en traits mixtes sur la , qui correspond à une position haute de l’armature 4, et la position du capteur déformable en trait plein sur la , qui correspond à une position intermédiaire entre la position basse et la position haute. Selon ce mode de réalisation, l’axe de rotation R de la bielle par rapport à la base passe par la zone de flexion 26 qui ne se déplace pas entre la base 2 et l’armature 4 lorsque la bielle 16 est déplacée en rotation. Comme mentionné précédemment, en variante, la platine 34 pourrait être solidaire de l’armature 4 plutôt que de la base 2.
Le dispositif de mesure permet de déterminer de façon simple la distance entre l’armature 4 et la base 2 en mesurant la variation de la caractéristique variable du capteur déformable 20 entraînée par la déformation du capteur déformable 20 elle-même entraînée par le déplacement de l’armature 4 par rapport à la base 2. La mesure de la variation de la caractéristique est convertie en une distance entre l’armature 4 et la base 2, par exemple par une unité de commande électronique du véhicule.
On notera que le dispositif de mesure ne dépend pas d’un moteur actionnant le déplacement de l’armature 4 par rapport à la base 2. Ainsi, le dispositif de mesure selon l’invention peut être utilisé dans un siège à actionnement manuel. En outre, le dispositif de mesure est peu couteux et peu susceptible de s’encrasser, à la différence d’un système optique, à ultrason ou autre. Enfin, le dispositif de mesure peut être monté sur des sièges déjà installés dans un véhicule sans nécessiter de modification lourde de la structure du siège.
Siège de véhicule à structure légère La présente invention concerne un siège de véhicule à structure légère.
Afin de bien comprendre le positionnement des différentes pièces impliquées dans un véhicule selon l’invention, la description est réalisée en faisant référence à un repère orthonormé direct XYZ lié à un véhicule dans lequel serait monté un siège selon l’invention, dans lequel X est un axe longitudinal avant-arrière du véhicule orienté vers l’arrière, Y est un axe transversal orienté vers la droite du véhicule et Z est un axe vertical dirigé vers le haut.
Actuellement, la structure des sièges de véhicule présente plusieurs inconvénients : -elle implique des pièces métalliques la rendant lourde et difficile à recycler, -elle rend difficile la conception de sièges chauffants et refroidis, à cause du PU, -elle rend coûteuse les interventions en après-vente, -elle peut s’avérer dangereuse si un court-circuit survenait, car les pièces métalliques qui la composent pourraient conduire l’électricité ainsi produite, avec des risques d’électrocution importants à la clé, notamment pour une personne qui serait assise sur ledit siège.
Un siège selon l’invention permet de s’affranchir des principaux inconvénients relevés dans les sièges de l’état de la technique.
L’invention a pour objet un siège de véhicule comprenant une structure de dossier et une structure d’assise.
[0046] L’inducteur de toxine peut également être un stress physico-chimique réalisé, par exemple, par l’ajout de sel ou d’EDTA ou par une modification du pH ou encore par un stress UV. Le stress peut également être, par exemple, induit par l’ajout de noradrénaline.
Ledit micro-organisme cible est susceptible d’être présent dans un échantillon. Par « échantillon », on entend une petite partie ou petite quantité isolée d'une entité pour l'analyse. L'échantillon peut être d'origine industrielle, soit, selon une liste non exhaustive, un prélèvement d'air, un prélèvement d'eau, un prélèvement effectué sur une surface, une pièce ou un produit manufacturé, un produit d'origine alimentaire. Parmi les échantillons d'origine alimentaire, on peut citer de façon non exhaustive un échantillon de produits lactés (yaourts, fromages...), de viande, de poisson, d'œufs, de fruits, de légumes, d'eau, de boisson (lait, jus de fruits, soda, etc.). Un échantillon alimentaire peut enfin être issu d'une alimentation destinée aux animaux, telle que notamment des farines animales ou végétales. L'échantillon peut être d'origine biologique, soit animale ou humaine. Il peut alors correspondre à un prélèvement de fluide biologique (selles, urine, sang total, sérum, plasma, liquide céphalo-rachidien, sécrétion organique…), un prélèvement externe (peau, nez, gorge, …) ou tissulaire ou des cellules isolées. Le prélèvement peut être utilisé tel quel ou, préalablement à l'analyse, subir une préparation de type enrichissement, extraction, concentration, purification, selon des méthodes connues de l'homme du métier. Le milieu réactionnel selon l’invention peut être d’autant plus intéressant lorsque l’échantillon est un échantillon polymicrobien ou chargé en flore annexe, comme par exemple les échantillons alimentaires tels que le fromage au lait cru ou les selles dans les échantillons cliniques.
[0047] Un autre objet de la présente invention concerne un kit de diagnostic permettant la préparation d’un milieu réactionnel selon l’invention comprenant
- un conjugué agglutinant tel que décrit dans la présente invention
- un milieu gélifiant.
[0048] Avantageusement, le milieu réactionnel peut être fabriqué extemporanément à l’aide d’un kit selon l’invention. Cela permet l’utilisation unitaire d’un milieu réactionnel, et d’augmenter la stabilité de celui-ci.
[0049] Ainsi, un autre objet de la présente invention concerne le procédé d’obtention d’un milieu réactionnel selon l’invention comprenant les étapes de mise en contact d’un conjugué agglutinant avec un milieu gélifiant pour former le milieu réactionnel selon l’invention. La préparation du conjugué s’effectue par le couplage du partenaire de liaison avec la nanoparticule. Ces méthodes de couplage sont bien connues de l’homme du métier (Nicholas G. Weich et al, 2017). Le conjugué est ensuite ajouté au milieu gélifié mis en surfusion. L’ensemble est ensuite homogénéisé et coulé dans la boîte de Pétri.
[0050] Un autre objet de la présente invention concerne une méthode de culture microbiologique in vitro, dans laquelle des micro-organismes susceptibles d’être présents dans un échantillon sont ensemencés dans ou sur un milieu de culture selon l’invention. Le milieu de culture ensemencé est incubé dans des conditions appropriées connues de l’homme de l’art. L’ensemencement est réalisé selon des techniques classiques de microbiologie. Il peut également être effectué dans la masse autrement dit par inclusion.
[0051] Un autre objet de la présente invention concerne une méthode de détection, d’identification, de dénombrement et/ou d’isolement d’au moins un micro-organisme cible dans un échantillon susceptible de le contenir comprenant les étapes suivantes :
- -mettre en contact ledit échantillon avec un milieu réactionnel selon l’invention
- Incuber
- détecter la présence dudit micro-organisme cible.