INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Un autre aspect de l’invention concerne un procédé de traction d’un tissu biologique (101) au sein d’une cavité au moyen du dispositif de traction (1) objet de l’invention. Ce procédé intervient généralement dans le cadre d’une intervention de résection du tissu biologique (101) de type muqueux et présentant une tumeur (102). Le tissu biologique (101) est généralement agencé au sein de la paroi digestive (100). Au cours de cette intervention, les contours du tissu biologique (101) à réséquer sont découpés à l’aide d’un outil de dissection endoscopique. La figure représente le tissu biologique (101) après découpe de ses contours (103). Le tissu biologique (101) doit ensuite être séparé du reste de la paroi digestive (100). Pour se faire, il est nécessaire d’appliquer un effort de traction sur le tissu biologique (101) de manière à l’écarter du reste de la paroi digestive (100). La sous-muqueuse (104) composer de fibre va alors s’étende et s’exposer de sorte qu’il soit possible de le disséquer au moyen d’un outil de dissection endoscopique (220). Le procédé de traction permet d’appliquer l’effort de traction sur le tissu biologique (101). Le procédé de traction comprend les étapes suivantes : a) Fixer l’ancre proximale (3) sur une partie proximale du tissu biologique (101) au moyen d’un premier clip endoscopique hémostatique (203), b) Fixer l’ancre distale (4) sur une partie distale du tissu biologique (101) au moyen d’un deuxième clip endoscopique hémostatique (204), c) Fixer l’organe élastique (2) sur une paroi (105) de la cavité agencée en vis-à-vis du tissu biologique (101) au moyen d’un troisième clip endoscopique hémostatique (202) de sorte que la partie extensible de l’organe élastique (2) s’allonge au-delà de la longueur contractée (Lc) et exerce un effort de traction sur l’ancre distale (4) et sur l’ancre proximale (3).
Lorsque le tissu biologique (101) comporte une zone proximale de largeur supérieure à 3 cm, ce procédé de traction peut également comprendre l’étape suivante : d) Fixer la deuxième ancre proximale (3’) écartée de l’ancre proximale (3) fixée à l’étape a) sur la partie proximale du tissu biologique (101) au moyen d’un autre clip endoscopique hémostatique.
Lorsque le tissu biologique (101) s’étend sur plus de 8cm de long et plus d 5 cm de large, ce procédé de traction peut encore comprendre une ou plusieurs fois l’étape suivante selon le nombre d’ancres latérales que comprend le dispositif de traction : e) Fixer une ancre latérale (5, 5’) sur une partie latérale du tissu biologique (101) au moyen d’un autre clip endoscopique hémostatique.
Dans des modes de réalisation, le milieu comprenant l’acétoïne est obtenu par un procédé biologique mis en œuvre en utilisant des microorganismes recombinants.
Dans des modes de réalisation, les microorganismes recombinants sont des levures appartenant au genre Saccharomyces .
L’invention concerne en deuxième lieu de l’acétoïne, obtenue à partir du procédé décrit ci-contre.
L’invention concerne en troisième lieu l’utilisation d’une membrane hydrophile, telle que décrite ci-contre, pour obtenir de l’acétoïne.
La présente invention permet de répondre aux besoins exprimés ci-dessus.
De manière surprenante, les inventeurs ont démontré que l’acétoïne peut être isolée et purifiée de manière satisfaisante, tant du point de vue de la qualité que du rendement, en sélectionnant des membranes hydrophiles. En utilisant de telles membranes, seuls l’eau et des composés hydrophiles migrent à travers la membrane dans le perméat (filtrat), alors que l’acétoïne reste dans le rétentat (milieu traité), ce qui entraîne une déshydratation progressive et satisfaisante de l’acétoïne. Cette technique de déshydratation par pervaporation permet également de s’affranchir des contraintes de séparation associés à la formation de mélanges azéotropes.
La technique d’extraction liquide-liquide, communément utilisée, a l’inconvénient d’être mise en œuvre avec des solvants, par exemple l’acétate d’éthyle, utilisés en de grande quantité. En outre, de manière désavantageuse, les inventeurs ont démontré que cette technique conduit à la formation d’impuretés, par exemple l’acétate de méthyl-allyle, produit de réaction entre l’acétoïne et l’acétate d’éthyle. Enfin, cette technique ne permet pas d’obtenir de l’acétoïne pouvant être labelisée « naturel ».
La technique selon la demande PCT WO 2021/060334 A1 permet de s’affranchir de l’utilisation de solvants, mais n’est pas viable économiquement, en ce que le rendement en acétoïne est trop faible, en raison de la formation d’un mélange azéotrope eau-acétoïne et de l’élimination d’une part significative de l’acétoïne avec l’eau.
Le recours à la technique de déshydratation par pervaporation selon l’invention, en utilisant une membrane hydrophile, permet de s’affranchir de l’utilisation de solvant, d’éviter la génération d’impuretés dans le produit final, de contourner les difficultés de séparation liées à la formation d’un mélange azéotrope et d’obtenir un rendement satisfaisant d’acétoïne.
En outre, et de manière contre-intuitive, les inventeurs ont également démontré que l’utilisation d’une membrane hydrophile permet d’obtenir un procédé présentant une performance améliorée par rapport à un procédé utilisant une membrane organophile, c’est-à-dire un rendement et un degré de déshydratation plus élevés et ceux bien que l’eau soit initialement majoritaire dans le milieu.
BRÈVE DESCRIPTION DES FIGURES représente un graphique concernant la concentration d’acétoïne et d’eau (% massique) dans le rétentat en fonction du temps (min).
représente un graphique concernant la concentration d’acétoïne dans le rétentat (% massique) et la sous-pression au niveau de la surface de permeation (.10 5 mPa) en fonction du temps (min).
DESCRIPTION DÉTAILLÉE L’invention est maintenant décrite plus en détail et de façon non limitative dans la description qui suit.
Dans la description, sauf indication contraire, tous les pourcentages indiqués sont des pourcentages massiques.
Dans un premier aspect, la présente invention concerne un procédé d’obtention d’acétoïne à partir d’un milieu la comprenant (milieu à traiter), le procédé comprenant une étape de déshydratation par pervaporation au moyen d’une membrane hydrophile.
Etape de déshydratation L’étape de déshydratation consiste en la mise en contact du milieu à traiter avec une première surface de la membrane hydrophile et d’appliquer une sous-pression au niveau de la surface de perméation (seconde surface) de la membrane hydrophile.
L’ancre proximale (3) peut être montée mobile par rapport à l’ancre distale (4) entre une distance d’écartement minimale et une distance d’écartement maximale. La distance d’écartement minimale est préférentiellement comprise entre 0 mm et 10 mm. La distance d’écartement maximale est préférentiellement comprise entre 10 mm et 50 mm. En pratique, l’ensemble des modes de réalisations précédemment décrits pour l’ancre distale (4) et l’ancre proximale (3) permettent une mobilité de l’ancre proximale (3) par rapport à l’ancre distale (4).
L’organe de réglage (6) peut alors être configuré pour réduire la distance d’écartement maximale entre une distance d’écartement maximale initiale et une distance d’écartement maximale finale inférieure à la distance d’écartement maximale initiale. En pratique, l’ensemble des modes de réalisations précédemment décrits pour l’organe de réglage (6) permet de réduire la distance d’écartement maximale.
Comme représenté sur les figures à , l’organe de réglage (6) peut comprendre un lien de serrage (70) configuré pour maintenir la cage (63) à une distance de serrage déterminée de l’ancre distale (4). La distance de serrage est préférablement comprise entre 0 mm et 20 mm. La distance de serrage est préférentiellement inférieure à 5 mm. Ce lien de serrage (70) peut se présenter sous la forme d’un fil s’étendant de la cage (63) du collier de serrage (61) vers l’ancre distale (4). Le fil peut être réalisé en coton, en polyester, en nylon, ou tout autre matériau convenant à l’homme du métier. Alternativement, le lien de serrage (70) peut se présenter sous la forme par une bande, une tige, une bague ou tout autre lien mécanique convenant à l’homme du métier. Le lien de serrage (70) peut alors être réalisé en tissu, en matière plastique, en métal, ou tout matériau convenant à l’homme du métier. Préférentiellement, le matériau du lien de serrage (70) est hypoallergénique, ou lorsqu’il ne l’est pas, ledit lien de serrage (70) comporte un revêtement hypoallergénique.
Dans une variante de réalisation au lien de serrage, l’organe de réglage (6) peut encore comprendre un guide de serrage configuré pour permettre le passage du corps (62) du collier de serrage (61) de sorte que la cage (63) dudit collier de serrage soit confinée entre le guide distal (67) et ledit guide de serrage.
Le guide de serrage peut être agencé sur l’ancre distale (4). Le guide de serrage peut prendre toute forme convenant à l’homme du métier.
En particulier, lorsque l’ancre distale (4) est réalisée au moyen d’un fil, le guide de serrage peut se présenter sous la forme d’une pièce rapportée cylindrique, torique ou de toute autre forme convenant à l’homme du métier.
Également, lorsque l’ancre distale (4) est réalisée dans un matériau rigide, le guide de serrage peut être formé d’une seule pièce avec le corps de ladite ancre distale. Le guide de serrage peut alors avoir la forme d’un orifice agencé sur le corps de l’ancre distale (4) ou encore sous la forme d’un cylindre, d’un anneau, ou autre, agencé en saillit sur le corps de l’ancre distale (4) vers l’intérieur ou vers l’extérieur de ladite ancre distale.
Le guide de serrage peut alternativement être agencé sur le fil distal (42). Dans ce cas, le guide de serrage est avantageusement agencé à proximité de l’ancre distale (4). Le guide de serrage peut se présenter sous la forme d’une pièce rapportée cylindrique, torique ou de toute autre forme convenant à l’homme du métier. Lorsque l’ancre distale (4) est une bande, le guide de serrage peut se présenter sous la forme d’un œillet.
Le guide de serrage peut encore être agencé sur un fil de serrage. Ce dernier est fixé sur l’ancre distale (4). Le fil de serrage peut être réalisé en coton, en polyester, en nylon, ou tout autre matériau convenant à l’homme du métier. Le fil de serrage peut avoir une longueur comprise entre 5 mm et 20 mm. Dans des variantes de réalisation, le fil de serrage est remplacé par une bande flexible, ou une tige flexible. Le guide de serrage est avantageusement agencé à proximité de l’ancre distale (4). Le guide de serrage peut se présenter sous la forme d’une pièce rapportée cylindrique, torique ou de toute autre forme convenant à l’homme du métier.
Le guide de serrage peut présenter un passage dont les dimensions sont au moins supérieures de 0.2mm, préférentiellement supérieures de 0.5mm, au diamètre, ou à l’épaisseur, du corps (62) du collier de serrage (61).
Comme dans l’exemple de réalisation représenté sur la figure , le dispositif de traction (1) peut comprendre une seconde ancre proximale (3’) du même type que l’ancre proximale (3) précédemment décrite. C’est-à-dire que la seconde ancre proximale (3’) procède les mêmes caractéristiques que l’ancre proximale (3) précédemment décrite, notamment en termes de forme, de matériau, de mobilité, de distanciation par rapport aux autres éléments, etc. En particulier la seconde ancre proximale (3’) peut comprendre un orifice (31’) et être montée mobile par rapport à l’organe élastique au moyen d’un second fil proximal (32’). De même que précédemment décrit, la partie extensible de l’organe élastique (2) est configurée pour exercer un effort de traction la seconde ancre proximale (3’) lorsque sa longueur (L) est étendue au-delà de la longueur contractée (Lc). En outre, la seconde ancre proximale (3’) peut être montée mobile par rapport à l’ancre proximale (3) précédemment décrite entre une distance frontale minimale et une distance frontale maximale.
De même, l’organe de réglage (6) peut être configuré pour régler la seconde distance proximale maximale entre une seconde distance proximale maximale initiale et une seconde distance proximale maximale finale inférieure à la seconde distance proximale maximale initiale. À ce titre, l’organe de réglage (6) peut comporter un second guide proximal (66’) ou une seconde bobine proximale selon le mode de réalisation choisi. L’organe de réglage (6) peut également être configuré pour régler la distance frontale maximale entre une distance frontale maximale initiale et une distance frontale maximale finale inférieure à la distance frontale maximale initiale.
En se rapportant à l’exemple de réalisation représenté sur la figure , l’organe de réglage (6) peut également comprendre un second guide central (65’) agencé sur l’organe élastique (2). Le second guide central (65’) est du même type que le guide central (65). C’est-à-dire que le second guide central (65’) procède les mêmes caractéristiques que le guide central (65) précédemment décrit, notamment en termes de forme, de matériau, d’agencement par rapport l’organe élastique (2), etc. À ce titre, le second guide central (65’) est configuré pour permettre le passage du corps (62) du collier de serrage (61). Avantageusement, le corps (62) du collier de serrage (61) passe par le guide distal (67), puis par le guide central (65), puis par le guide proximal (66), puis par le second guide proximal (66’), puis par le second guide central (65’). Alternativement, et comme représenté sur la figure , le corps (62) du collier de serrage (61) passe par le guide distal (67), puis par le second guide central (65’), puis le second guide proximal (66’), puis par le guide proximal (66), puis par le guide central (65).
Comme dans l’exemple de réalisation représenté sur la figure , le dispositif de traction (1) peut en outre comprendre une ou plusieurs ancres latérales (5, 5’). Préférentiellement, le dispositif de traction (1) comprend un nombre pair d’ancres latérales (5, 5’). Pour chaque pair d’ancres latérales (5, 5’), l’une des ancres latérales (5, 5’) est agencée d’un côté du dispositif de traction (1), l’autre desdites ancres latérales est agencée de l’autre côté dudit dispositif de traction.
Une ancre latérale (5, 5’) peut se présenter sous la forme d’une boucle de forme circulaire, de forme triangulaire, de forme rectangulaire ou de toute autre forme convenant à l’homme du métier. Cette boucle peut être rigide, flexible, ou élastique. Par exemple, la boucle peut être réalisée en métal, en matière plastique, en latex, ou tout autre matériau convenant à l’homme du métier. La boucle peut également être réalisée au moyen d’un fil en coton, en polyester en nylon, ou tout autre matériau convenant à l’homme du métier. Préférentiellement, l’ancre latérale (5, 5’) est réalisée dans un ou plusieurs matériaux hypoallergéniques du type de ceux précédemment décrits. Astucieusement, l’ancre latérale (5, 5’) comporte un revêtement de surface réalisée dans un ou plusieurs matériaux hypoallergéniques du type de ceux précédemment décrits. Préférentiellement, la boucle présente un orifice (51, 51’) configuré pour permettre le passage d’un mors d’un clip endoscopique hémostatique. En particulier, la boucle peut présenter un orifice (51, 51’) s’étendant au-delà d’un demi-cercle de 8mm de diamètre.
La partie extensible de l’organe élastique (2) peut alors être configurée pour exercer un effort de traction les ancres latérales (5, 5’) lorsque sa longueur (L) est étendue au-delà de la longueur contractée (Lc).
Étude d'efficacité in vitro de différents extraits séparés
L'étude décrite ici concerne l'évaluation in vitro de la capacité des extraits d’ Angelica Archangelica , de racine de Bletilla Striata , de racine d’ Iris Pallida , de fleur de Centaurea Cyanus et de Polianthes Tuberosa testés isolément à stimuler la synthèse ex novo du collagène sur culture cellulaire. Le modèle biologique utilisé est constitué de fibroblastes humains.
- culture cellulaire traitée avec un extrait d’ Angelica Archangelica testé à trois concentrations (0,5%, 1% et 2,5%) ;
- culture cellulaire traitée avec un extrait de racine de Bletilla Striata testé à trois concentrations (0,5%, 1% et 2,5%) ;
- culture cellulaire traitée avec un extrait de racine d’ Iris Pallida testé à trois concentrations (0,5%, 1% et 2,5%) ;
- culture cellulaire traitée avec un extrait de fleur de Centaurea Cyanus testé à trois concentrations (0,5%, 1% et 2,5%) ;
- culture cellulaire traitée avec un extrait de Polianthes Tuberosa testé à trois concentrations (0,5%, 1% et 2,5%).
Après 24h d'incubation, chaque extrait testé a été dilué dans le milieu de culture cellulaire pour obtenir les concentrations finales : 0,5 %, 1 % et 2,5 %. Etant donnés les degrés de pureté des extraits utilisés donnés précédemment, les concentrations finales de 0,5%, 1% et 2,5% correspondent respectivement à 0,1%, 0,2% et 0,5% de matière active pour les extraits d’ Angelica Archangelica , de racine de Bletilla Striata , de racine d’ Iris Pallida et à 0,095%, 0,19% et 0,475% de matière active pour les extraits de fleur de Centaurea Cyanus et de Polianthes Tuberosa.
L'exposition des cellules à chaque extrait a duré 24 heures. A la fin de cette période expérimentale, les milieux de culture ont été collectés et utilisés pour la quantification de la synthèse du collagène par la méthode colorimétrique.
La détermination de la synthèse du collagène est effectuée par une méthode quantitative de fixation de colorant. L'agent chromogène utilisé dans le dosage est le rouge Sirius (Direct red 80). Le rouge Sirius est un colorant anionique avec des groupes de chaînes latérales d'acide sulfonique. Ces groupes réagissent avec les groupes de la chaîne latérale des acides aminés basiques du collagène. L'affinité spécifique du colorant pour le collagène, dans les conditions du test, est due au fait que les molécules de colorant allongées s'alignent parallèlement à la structure longue et rigide du collagène natif qui présente une organisation en triple hélice intacte (l'affinité du colorant est très réduite lorsque le collagène est dénaturé).
2. Peptides bioactifs La matrice composite peut également comprendre des peptides bioactifs. Les peptides bioactifs sont capables de remplir une fonction biologique lorsque la matrice composite est implantée dans un tissu ou organe d'un sujet. Un tel peptide bioactif peut notamment être un peptide d'adhésion, capable de lier une cellule d'intérêt, ou un peptide permettant la fixation du calcium.
Ces peptides bioactifs inclus dans la matrice composite de l'invention peuvent comprendre des résidus cystéine à chacune de leurs extrémités. Les résidus cystéines peuvent être liés de manière covalente directement à la séquence d’acides aminés du peptide, ou par l’intermédiaire d’espaceurs, notamment un espaceur peptidique ou pseudopeptidique. L’espaceur peut notamment être un acide aminé ou une séquence d’acides aminés (notamment un di- ou tripeptide), notamment un acide aminé bêta, plus particulièrement un acide aminé bêta-Ala.
Selon un mode particulier de réalisation, la quantité de peptides bioactifs dans la matrice composite selon l'invention est comprise entre 99,9 et 0,1 % (p/v). Selon un autre mode particulier de réalisation, pour une matrice composite de concentration comprise entre 3 et 5% (p/v) et pour un ratio thiol:alcène 1:1, ladite matrice comprend de 0,1 à 3 % (p/v) du au moins un peptide bioactif.
2.1. Peptide d'adhésion
Une première catégorie de peptides bioactifs susceptibles d'être utilisés dans la matrice composite de l'invention sont les peptides d'adhésion, capables de recruter des cellules neuronales, des cellules mésenchymateuses et/ou endothéliales. On peut notamment citer à titre de peptides capables de recruter des cellules endothéliales les peptides dérivés de la laminine, de la fibronectine ou du collagène de type I, plus particulièrement de la laminine. Ainsi, les peptides d'adhésion peuvent être choisis parmi les peptides REDV, RGD et GRGDSP dérivés de la fibronectine, IKLLI, IKVAV, PDSGR et YIGSR, dérivés de la laminine, et le peptide DGEA dérivé du collagène de type I. A titre de peptides capables de recruter des cellules neuronales, nous pouvons citer, notamment, les peptides YIGSR, RNIAEIIKDI et IKVAV dérivés de la laminine.
Dans un mode préféré de réalisation, la matrice composite comprend au moins un peptide d'adhésion choisi parmi IKVAV et YIGSR.
Selon un mode particulier de réalisation, le peptide d'adhésion et un peptide IKVAV. Le peptide IKVAV peut notamment être un peptide IKVAV de formule Cys-{espaceur}-Ile-Lys-Val-Ala-Val-{espaceur}-Cys, notamment le peptide de formule Cys-{Beta-Ala}-Ile-Lys-Val-Ala-Val-{Beta-Ala}-Cys.
Selon un autre mode particulier de réalisation, le peptide d'adhésion et un peptide YIGSR. Le peptide YIGSR peut notamment être un peptide YIGSR de formule Cys-{espaceur}-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-{espaceur}-Cys, notamment le peptide de formule Cys-{Beta-Ala}- Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-{Beta-Ala}-Cys.
Selon un mode de réalisation encore plus préféré, la matrice composite comprend le peptide IKVAV et le peptide YIGSR.
Selon une variante préférée de réalisation, et ce afin d'optimiser et contrôler la réticulation de la matrice composite, cette dernière comprend un peptide d'adhésion unique comprenant au moins deux peptides d'adhésion, notamment un peptide biomimétique comprenant les peptides d'adhésion IKVAV et YIGSR. Les peptides composant le peptide d'adhésion unique peuvent être inclus dans n'importe quel ordre. Selon une variante de réalisation, le peptide d'adhésion unique comprend, de la partie amino-terminale à la partie carboxy-terminale, les peptides YIGSR et IKVAV. Selon une variante de réalisation, préférée, le peptide d'adhésion unique comprend, de la partie amino-terminale à la partie carboxy-terminale, les peptides IKVAV et YIGSR. Le peptide d'adhésion unique peut comprendre des résidus cystéine à chacune de ses extrémités. Les résidus cystéines peuvent être liés de manière covalente directement à la séquence d’acides aminés du peptide d'adhésion unique, ou par l’intermédiaire d’espaceurs, notamment un espaceur peptidique ou pseudopeptidique. L’espaceur peut notamment être un acide aminé ou une séquence d’acides aminés (notamment un di- ou tripeptide), notamment un acide aminé bêta, plus particulièrement un acide aminé bêta-Ala. Par ailleurs, les peptides composant le peptide d'adhésion unique peuvent être liés de manière covalente directement entre eux ou par l'intermédiaire d'espaceurs. L'espaceur entre les peptides composant le peptide d'adhésion unique peut notamment être un espaceur peptidique ou pseudopeptidique, notamment un acide aminé glycine, une diglycine ou une triglycine.
En outre, le peptide d'adhésion unique comprenant au moins deux peptides d'adhésion peut également avantageusement inclure une ou plusieurs séquence(s) cible(s) d'une ou plusieurs métalloprotéases, notamment des métalloprotéases 2 et 9. A titre illustratif, nous pouvons citer les peptides:
- PVGLIG;
- les peptides QPQGLAK, GPLGLSLGK et GPLGMHGK décrits dans Jha et al., Biomaterials, mai 2016; 89; p. 136-47; et
- les peptides GPQGIAGQ, GPQGIWGQ et VPMSMRGG décrits dans Lin et al., Acta Biomaterialia, 10(12), Décembre 2014, p. 5106-5115.
Un tel peptide cible de métalloprotéases peut être introduit afin de permettre le clivage entre les peptides d'adhésion, qui restent liés à la matrice de l'invention tout en étant disponibles pour l'adhésion aux cellules. Par ailleurs, un peptide cible de métalloprotéases peut être utile pour déclencher une dégradation de la matrice, facilitant ainsi la colonisation cellulaire. Un peptide cible de métalloprotéase peut être inclus dans le peptide d'adhésion unique en toute position, notamment à son extrémité amino-terminale, entre deux peptides d'adhésion compris dans le peptide d'adhésion unique, ou à son extrémité carboxy-terminale. De préférence, le ou les peptides cibles de métalloprotéase(s) sont positionnés entre deux peptides d'adhésion dans le peptide d'adhésion unique.
Selon un mode particulier de réalisation le peptide d'adhésion unique inclus au moins une occurrence, en particulier une seule occurrence, de la séquence cible des métalloprotéases 2 et 9 PVGLIG.