INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
De préférence, le moteur du dispositif d’automatisation du winch correspond à un moteur électrique alimenté par une batterie qui lui est associée.
Dans les winchs automatisés existants, le moteur électrique est classiquement alimenté par une énergie électrique provenant d’un réseau électrique intégré dans le bateau. Cependant, pour fournir la puissance nécessaire à l’alimentation du moteur, il est souvent requis d’utiliser un réseau électrique transportant une puissance importante. En effet, les batteries de service des bateaux sont classiquement en 12 ou 24 volts et, pour alimenter des moteurs électriques de winch, il est requis d’utiliser de gros câble, typiquement d’une section de 35 mm², pour pouvoir acheminer une intensité qui peut dépasser 100 ampères.
Or, l’intégration et le cheminement de ces câbles électriques de puissance à l’intérieur d’un bateau pose un grand nombre de contraintes d’installation.
En utilisant une batterie pour alimenter le moteur électrique, il n’est pas nécessaire d’intégrer des câbles électriques de puissance à l’intérieur du bateau et des câbles électriques de faibles puissances peuvent être suffisants pour recharger la batterie, hors des phases d’utilisation du winch. Pour ce faire, la batterie est préférentiellement connectée à un circuit de recharge avec une tension inférieure à 40 volts et un courant inférieur à 3 ampères.
De préférence, le moteur correspond à un moteur sans balai associé à un réducteur par engrenages. Un moteur sans balai est également appelé moteur « brushless » dans la littérature anglo-saxonne.
Un réducteur par engrenages peut correspondre à un train épicycloïdale suivi d’un éventuel dispositif de renvoi d’angle pour faciliter l’intégration du moteur sous le winch.
Dans les motorisations classiques de winch, les moteurs correspondent à un moteur à courant continu associé à un réducteur de type roue et vis san fin, le rendement global de ces moteurs est de l’ordre de 30%. Avec ce mode de réalisation de l’invention utilisant moteur sans balai associé à un réducteur par engrenages, le rendement global du moteur peut être de l’ordre de 60%, limitant ainsi les pertes d’énergie.
En outre, pour obtenir le même effort, le niveau de puissance électrique nécessaire pour alimenter un moteur sans balai associé à un réducteur par engrenages peut être plus faible que pour alimenter un moteur à courant continu associé à un réducteur de type roue et vis san fin. Ainsi, pour une même tension, il est possible de limiter l’intensité pour alimenter un moteur sans balai associé à un réducteur par engrenages.
Par exemple, pour obtenir une puissance mécanique de l’ordre de 500 watts, les moteurs actuels demandent un courant de 138 ampères et ce mode de réalisation permet d’utiliser uniquement 28 ampères. Il s’ensuit qu’il est possible d’utiliser un câble de 6 mm² de section entre la batterie et le moteur au lieu d’utiliser un câble de 35 mm² de section.
L’interface homme-machine peut également afficher une information sur le niveau de charge de la batterie.
Ainsi, l’interface homme-machine comporte au moins un écran pour afficher l’effort engagé, au moins un effort limite associé à la manœuvre sélectionnée, éventuellement une description de la manœuvre sélectionnée, éventuellement la vitesse du winch sélectionnée, éventuellement le niveau de charge de la batterie et éventuellement la manœuvre suivante et la manœuvre précédente afin que l’utilisateur puisse facilement changer de manœuvre sélectionnée. En effet, pour sélectionner la manœuvre, l’interface homme-machine peut intégrer des boutons poussoirs permettant de passer d’une manœuvre à une autre.
Outre les boutons de sélection de la manœuvre, l’interface homme-machine peut comprendre deux moyens d’actionnement du moteur pour chaque sens de rotation du winch. De préférence, l’actionnement du moteur est conditionné à l’utilisation d’une commande de type « homme mort » imposant à l’utilisateur de presser au moins deux boutons pour commander le fonctionnement du moteur afin qu’un appui non-intentionnel sur un bouton n’entraine pas un démarrage du moteur.
En outre, l’interface homme-machine peut être connecté en filaire ou sans fil avec l’organe de supervision.
L’invention a également pour objet un microcompartiment cellulaire en trois dimensions clos de forme ovoïde, cylindrique, sphéroïde ou sphérique ou sensiblement ovoïde, cylindrique, sphéroïde ou sphérique, dont la plus petite dimension est comprise entre 200 et 400µm, comprenant une couche externe en hydrogel définissant une partie interne, ladite partie interne comprenant dans un milieu entre 500 et 5000 lymphocytes formant une culture groupée en trois dimensions et ayant une teneur en TNF alpha inférieure à 100 ng/mL, en particulier inférieure à 50 ng/mL de milieu, notamment inférieure à 30ng/mL, plus préférentiellement inférieure à 10 ng/mL, encore plus préférentiellement inférieure à 3 ng/mL.
Selon un mode de réalisation, lorsque les lymphocytes sont des lymphocytes NK, la partie interne du microcompartiment comprend une teneur en IL6 inférieure à 0,5μg/ml de milieu, préférentiellement inférieure à 0,1µg/mL, plus préférentiellement inférieure à 50ng/mL, encore plus préférentiellement inférieure à 10ng/mL.
L’invention a également pour objet un microcompartiment cellulaire en trois dimensions clos de forme ovoïde, cylindrique, sphéroïde ou sphérique ou sensiblement ovoïde, cylindrique, sphéroïde ou sphérique, dont la plus petite dimension est comprise entre 200 et 400µm, comprenant une couche externe en hydrogel définissant une partie interne, ladite partie interne comprenant dans un milieu entre 500 et 5000 lymphocytes NK formant une culture groupée en trois dimensions et ayant une teneur en IL6 inférieure à 0,5μg/ml de milieu, préférentiellement inférieure à 0,1µg/mL, plus préférentiellement inférieure à 50ng/mL, encore plus préférentiellement inférieure à 10ng/mL.
Selon un mode de réalisation, lorsque les lymphocytes sont des lymphocytes NK, la partie interne du microcompartiment comprend une teneur en GM-CSF inférieure à 0,5μg/ml de milieu, préférentiellement inférieure à 0,1µg/mL, plus préférentiellement inférieure à 50ng/mL, encore plus préférentiellement inférieure à 10ng/mL.
L’invention a également pour objet un microcompartiment cellulaire en trois dimensions clos de forme ovoïde, cylindrique, sphéroïde ou sphérique ou sensiblement ovoïde, cylindrique, sphéroïde ou sphérique, dont la plus petite dimension est comprise entre 200 et 400µm, comprenant une couche externe en hydrogel définissant une partie interne, ladite partie interne comprenant dans un milieu entre 500 et 5000 lymphocytes NK formant une culture groupée en trois dimensions et ayant une teneur en GM-CSF inférieure à 0,5μg/ml de milieu, préférentiellement inférieure à 0,1µg/mL, plus préférentiellement inférieure à 50ng/mL, encore plus préférentiellement inférieure à 10ng/mL.
Selon un mode de réalisation, l’invention a pour objet un microcompartiment cellulaire en trois dimensions clos de forme ovoïde, cylindrique, sphéroïde ou sphérique ou sensiblement ovoïde, cylindrique, sphéroïde ou sphérique, dont la plus petite dimension est comprise entre 200 et 400µm, comprenant une couche externe en hydrogel définissant une partie interne, ladite partie interne comprenant dans un milieu entre 500 et 5000 lymphocytes T formant une culture groupée en trois dimensions et ayant une teneur en granzyme B inférieure à 1µg/mL de milieu et : - une teneur en perforine inférieure à 0,5μg/ml de milieu, et/ou - une teneur en TNF-α inférieure à 100 ng/mL de milieu.
Selon un mode de réalisation, l’invention a pour objet un microcompartiment cellulaire en trois dimensions clos de forme ovoïde, cylindrique, sphéroïde ou sphérique ou sensiblement ovoïde, cylindrique, sphéroïde ou sphérique, dont la plus petite dimension est comprise entre 200 et 400µm, comprenant une couche externe en hydrogel définissant une partie interne, ladite partie interne comprenant dans un milieu entre 500 et 5000 lymphocytes NK formant une culture groupée en trois dimensions et ayant une teneur en granzyme B inférieure à 1µg/mL de milieu et : - une teneur en perforine inférieure à 0,5μg/ml de milieu, et/ou - une teneur en TNF-α inférieure à 100 ng/mL de milieu, et/ou - une teneur en IL6 inférieure à 0,5μg/ml de milieu et/ou - une teneur en GM-CSF inférieure à 0,5μg/ml de milieu.
Selon un mode de réalisation, l’invention a pour objet un microcompartiment cellulaire en trois dimensions clos de forme ovoïde, cylindrique, sphéroïde ou sphérique ou sensiblement ovoïde, cylindrique, sphéroïde ou sphérique, dont la plus petite dimension est comprise entre 200 et 400µm, comprenant une couche externe en hydrogel définissant une partie interne, ladite partie interne comprenant dans un milieu entre 500 et 5000 lymphocytes NK formant une culture groupée en trois dimensions et ayant une teneur en granzyme B inférieure à 1µg/mL de milieu et : - une teneur en perforine inférieure à 0,5μg/ml de milieu, et/ou - une teneur en IL6 inférieure à 0,5μg/ml de milieu et/ou - une teneur en GM-CSF inférieure à 0,5μg/ml de milieu.
Selon l’invention, de façon surprenante, une teneur en granzyme B inférieure à 1µg/mL de milieu dans la partie interne du microcompartiment, préférentiellement inférieure à 0.5µg/mL, plus préférentiellement inférieure à 0.1µg/mL, encore plus préférentiellement inférieure à 50ng/mL et/ou une teneur en perforine inférieure à 0,5μg/ml de milieu, préférentiellement inférieure à 0.1µg/mL, plus préférentiellement inférieure à 50ng/mL, encore plus préférentiellement inférieure à 10ng/mL est un critère garantissant le phénotype fonctionnel des lymphocytes au sein de la partie interne du microcompartiment selon l’invention.
Les granzymes font partie de la famille des sérines protéases et sont connues pour être des moyens d’action des cellules immunitaires cytotoxiques, notamment les lymphocytes T et lymphocytes NK, pour lyser leur cible. Les granzymes sont stockées dans des granules cytotoxiques comprenant également de la perforine. Ces granules sont classiquement libérés dans l’environnement immédiat des cellules cibles, puis pénètre le cytoplasme via l’action de la perforine. Parmi ces granzymes, on retrouve la granzyme B qui est connue pour activer l’apoptose des cellules par des voies de signalisation impliquant des caspases.
Dans les méthodes de culture classique, les lymphocytes sont soumis à différentes contraintes physiques et/ou stress ayant tendance à provoquer un relargage d’interleukines et des granules contenant les granzymes, plus particulièrement la granzyme B. Ce relargage va provoquer une diminution significative de la viabilité des lymphocytes en provoquant l’apoptose d’une partie d’entre eux. D’autre part, les lymphocytes restants ne présentent plus un phénotype fonctionnel. En effet, les lymphocytes ont perdu leur capacité à sécréter des interleukines sous l’induction de la présentation d’un antigène ce qui affectent ainsi leur capacité d’action sur l’antigène cible.
Le facteur de nécrose tumorale (TNF alpha) est une cytokine pléiotrope impliquée dans de nombreux processus physiologiques qui contrôlent l’inflammation, la réponse aux tumeurs, et l’homéostasie du système immunitaire. Le TNF alpha peut être sécrété par des lymphocytes ou par d’autres cellules (notamment les macrophages activés) pour agir directement sur des cellules infectées par certains pathogènes ou pour favoriser la prolifération des lymphocytes.
Le TNF alpha peut ainsi promouvoir l’activation et la prolifération des cellules T naïves et effectrices, mais peut aussi induire l’apoptose de cellules T effectrice activées. Le TNF alpha est stocké dans des vésicules de sécrétion intracellulaires. Ces vésicules sont classiquement libérées dans l’environnement immédiat des cellules cibles.
Dans les méthodes de culture classique, les lymphocytes sont soumis à différentes contraintes physiques et/ou stress ayant tendance à provoquer un relargage d’interleukines plus particulièrement de TNF alpha. Ce relargage incontrôlé du TNF alpha va modifier l’environnement direct des lymphocytes et peut provoquer une diminution significative de la viabilité des lymphocytes en provoquant l’apoptose d’une partie d’entre eux. D’autre part, les lymphocytes restants ne présentent plus un phénotype fonctionnel. En effet, les lymphocytes ont perdu leur capacité à sécréter des interleukines sous l’induction de la présentation d’un antigène ce qui affectent ainsi leur capacité d’action sur l’antigène cible.
Avantageusement, le microcompartiment selon l’invention permet d’obtenir des lymphocytes présentant un phénotype fonctionnel.
Contrairement à ce qui est suggéré dans l’art antérieur, une teneur en granzyme B inférieure à 1µg/mL de milieu, préférentiellement inférieure à 0.5µg/mL, plus préférentiellement inférieure à 0.1µg/mL, encore plus préférentiellement inférieure à 50ng/mL et/ou une teneur en perforine inférieure à 0,5μg/ml de milieu , préférentiellement inférieure à 0.1µg/mL, plus préférentiellement inférieure à 50ng/mL, encore plus préférentiellement inférieure à 10ng/mL est particulièrement recherchée dans le cadre de la culture de lymphocytes.
formules (3) et (18) dans laquelle R 5 représente :
et comprenant en outre une étape de préparation J de d’un composé de formule (11) à partir d’un composé de formule (3),
sous réserve que l’un au moins des groupements R o ou R 5 comporte une fonction alcényle.
Ainsi le composé de formule (3) comprend au moins une fonction alcényle supplémentaire par rapport au composé de formule (11), ladite fonction étant époxydée pour former ledit composé de formule (11).
On comprend que le composé de formule (3) peut être un composé présentant déjà des fonctions époxydes mais que ce dernier comprend au moins une fonction alcényle supplémentaire par rapport au composé de formule (11).
La fonction époxyde supplémentaire du composé de formule (11) est située à la même position que la fonction alcényle supplémentaire du composé (3). En terme plus simple, le composé de formule (11) est issu d’une époxydation d’une fonction alcényle présente dans le composé de formule (3).
Ce mode de réalisation comprend une étape B d’estérification de l’acide anacardique de formule (17) avec un alcool de formule (18) pour obtenir l’ester de formule (3) suivi d’une époxydation d’au moins une fonction alcényles du composé de formule (3).
Avantageusement des époxydations de plusieurs fonctions alcényles présentes dans le composé (3) peuvent être mises en œuvre pour obtenir le composé (11). Ces époxydations peuvent être successives ou simultanées.
Selon un autre mode de réalisation particulier, la présente invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel, dans la composition comprenant l’agent plastifiant, celui-ci est un composé de formule (11), et comprenant les étapes suivantes :
une étape de préparation B du composé de formule (3) consistant en une estérification B du composé de formule (17) avec un composé (18) pour obtenir le composé de formule (3),
De manière particulièrement préférée, le composé (c) comprend de 10 à 150 éthoxylations, plus préférentiellement de 20 à 100 éthoxylations ou de 10 à 70 éthoxylations. Bien plus préférentiellement, le composé (c) comprend de 20 à 60 éthoxylations.
La méthode de préparation selon l’invention peut mettre en œuvre des composés polyalkoxylés (c), (c1) et (c3) dont la masse molaire (Mw) mesurée par CES peut varier dans des proportions importantes. De manière préférée selon l’invention, les composés (c), (c1) ou (c3) ont indépendamment une masse molaire (Mw) mesurée par CES allant de 1 500 à 40 000 g/mol, de préférence de 2 000 à 20 000 g/mol. Plus préférentiellement selon l’invention, la masse molaire (Mw) des composés (c), (c1) ou (c3) va, indépendamment, de 2 000 à 15 000 g/mol ou de 2 000 à 12 000 g/mol.
Selon l’invention, la masse molaire des composés (c), (c1) ou (c3) est déterminée par Chromatographie d'Exclusion Stérique (CES) ou en anglais « Gel Permeation Chromatography » (GPC). Cette technique met en œuvre un appareil de chromatographie liquide de marque «Waters» doté d'un détecteur. Ce détecteur est un détecteur de concentration réfractométrique de type «Waters» 2414. Cet appareillage de chromatographie liquide est doté de deux colonnes d'exclusion stérique afin de séparer les différents poids moléculaires des polymères ou composés étudiés. La phase liquide d'élution est une phase organique composée de THF (grade HPLC, non stabilisé).
Lors d’une première étape, on solubilise environ 25 mg de composé dans 5 mL de THF, additionné de 0,1 % molaire d’eau utilisée comme marqueur interne de débit. Puis, on filtre la solution à 0,2 µm. 50 µL sont ensuite injectés dans l'appareil de chromatographie (éluant : THF, grade HPLC, non stabilisé).
L'appareil de chromatographie est étalonné au moyen d’étalons de polyméthacrylate de méthyle certifiés par le fournisseur «Agilent» ( «EasiVial» PMMA).
Selon l’invention, le composé (c) peut être utilisé sous différentes formes liquide ou solide, de préférence solide à une température supérieure à 25°C. Sous forme solide, le composé (c) peut prendre différentes formes, par exemple sous une forme choisie parmi pastille, flocon, broyat, copeau, poudre et leurs combinaisons.
De manière essentielle selon l’invention, le composé (c) possède un degré de pureté très élevé, en particulier pour ce qui concerne la présence de composés organiques volatils, notamment de composés organiques volatils résiduels provenant des procédés mis en œuvre pour sa préparation. Ainsi, le composé (c) mis en œuvre selon l’invention comprend une quantité nulle ou particulièrement faible d’alcanes, de composés hydrocarbonés aromatiques ou d’alcènes.
Selon l’invention, les quantités de composés résiduels sont mesurées au moyen de techniques largement disponibles et aisées à mettre en œuvre. En effet, de manière particulièrement avantageuse selon l’invention, les quantités de composés résiduels sont mesurées par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS). Le chromatographe utilisé est équipé d’un spectromètre de masse comme détecteur. Selon l’invention, la mesure par GC-MS comprend l’injection dans le chromatographe, à une température régulée, du composé (c) à analyser puis la séparation des différents composés volatils au moyen d’une colonne capillaire puis la détection d’éventuels composés résiduels volatils au moyen d’un spectromètre de masse et le traitement analytique des pics de détection.
Ainsi, le composé (c) mis en œuvre selon l’invention comprend une quantité d’au moins un composé choisi parmi alcanes, composés hydrocarbonés aromatiques, alcènes et leurs combinaisons, mesurée par GC-MS, qui est inférieure à 0,5 ppm en poids de composé (c).
De manière préférée selon l’invention, le composé (c) comprend une quantité d’alcanes qui est inférieure à 0,5 ppm en poids de composé (c). Également de manière préférée selon l’invention, le composé (c) comprend une quantité de composés hydrocarbonés aromatiques, qui est inférieure à 0,5 ppm en poids de composé (c). Également de manière préférée selon l’invention, le composé (c) comprend une quantité d’alcènes, qui est inférieure à 0,5 ppm en poids de composé (c).
De manière plus préférée selon l’invention, le composé (c) comprend une quantité d’alcanes inférieure à 0,2 ppm en poids, de préférence une quantité inférieure à 0,1 ppm en poids voire une quantité nulle, mesurée par GC-MS.
Préférentiellement, les alcanes selon l’invention sont choisis parmi les C 3 -C 20 -alcanes, en particulier les C 7 -C 14 -alcanes.
De manière également plus préférée selon l’invention, le composé (c) comprend une quantité de composés hydrocarbonés aromatiques inférieure à 0,2 ppm en poids, de préférence une quantité inférieure à 0,1 ppm en poids voire une quantité nulle, mesurée par GC-MS.
Également préférentiellement, les composés hydrocarbonés aromatiques selon l’invention sont choisis parmi le toluène, le benzène, le xylène, le naphtalène et leurs combinaisons.
De manière également plus préférée selon l’invention, le composé (c) comprend
Une concentration en granzyme B supérieure 1µg/mL de milieu et/ou une teneur en perforine supérieure à 0,5μg/ml de milieu et/ou une concentration en TNF alpha supérieure 100ng/mL de milieu indiquerait qu’un processus anarchique de relâchement d’interleukines a lieu dans le microcompartiment selon l’invention et le rendrait incompatible avec une culture à grande échelle de lymphocytes présentant un phénotype fonctionnel.
Il en est de même pour une concentration en IL6 supérieure à à 0,5μg/ml de milieu et/ou une concentration supérieure à 0,5μg/ml de milieu GM-CSF pour les lymphocytes NK. IL6 en particulier est connue pour diminuer l’activité cytotoxique des NK (Cifadi et al., « Inhibition of natural killer cell cytotoxicity by interleukin-6: implications for the pathogenesis of macrophage activation syndrome » Artritis Rheumatol, 2015 Nov;67(11):3037-46. doi: 10.1002/art.39295.). Ainsi une diminution de la concentration en IL6 permet avantageusement d’augmenter l’efficacité des NK.
Avantageusement, le microcompartiment selon l’invention est adapté à une culture à grande échelle.
Le microcompartiment selon l’invention présente avantageusement un taux d’expansion des lymphocytes T d’au moins fois 20 après 3 jours de mise en culture, et un taux d’expansion des lymphocytes NK d’au moins 40 fois après 14 jours de mise en culture.
Le microcompartiment selon l’invention comprend une couche externe en hydrogel. Préférentiellement l’hydrogel utilisé est biocompatible, c’est-à-dire qu’il n’est pas toxique pour les cellules. La couche externe d’hydrogel doit permettre la diffusion d’oxygène et de nutriment pour alimenter les cellules contenues dans le microcompartiment et permettre leur survie. Selon un mode de réalisation, la couche externe d’hydrogel comprend au moins de l’alginate. Elle peut être constituée exclusivement d’alginate. L’alginate peut être en particulier un alginate de sodium, composé à 80% d’α-L-guluronate et 20% de β-D-mannuronate, avec une masse moléculaire moyenne de 100 à 400 kDa et une concentration totale comprise entre 0,5 et 5% en masse. La couche externe en hydrogel est dépourvue de cellules.
La couche externe d’hydrogel permet notamment de protéger les cellules du stress mécanique des bioréacteurs, de limiter la sécrétion anarchique par les lymphocytes en culture de cytokines potentiellement toxiques quand accumulées dans le milieu.
L’épaisseur moyenne de couche externe peut être variable. Elle est préférentiellement comprise entre 20 et 60um, plus préférentiellement entre 30 et 40um. Le ratio entre le plus petit rayon de la partie interne et cette épaisseur est préférentiellement comprise entre 2 et 10 um.
Le microcompartiment selon l’invention peut être obtenu après encapsulation de lymphocytes sans ajout de matrice extracellulaire, naturelle ou de synthèse.
Selon une variante, le microcompartiment selon l’invention ne comprend pas dans sa partie interne de matrice extracellulaire telle que du Matrigel® et/ou de la Geltrex® et/ou une matrice type hydrogel d’origine végétale comme des alginates modifiés ou d’origine synthétique ou de copolymère de poly(N-isopropylacrylamide) et de poly(éthylène glycol) (PNIPAAm-PEG) type Mebiol®.
Selon une variante, le microcompartiment selon l’invention peut être obtenu après encapsulation de lymphocytes sans ajout d’aucun élément de matrice extracellulaire.Les éléments de matrice extracellulaire peuvent être les séquences peptidiques ou peptidomimétiques, les mélanges de protéines, les composés extracellulaires ou les protéines structurelles, telles que collagène, des laminines, de l’entactine, de la vitronectine, ainsi que des facteurs de croissance ou des cytokines.
L’absence d’élément de matrice extracellulaire dans la partie interne du microcompartiment selon l’invention après encapsulation garantie aux lymphocytes une liberté d’organisation structurelle au sein du microcompartiment selon l’invention.
Avantageusement, l’absence d’élément de matrice extracellulaire améliore de taux d’expansion des lymphocytes.
Au sein du microcompartiment, les lymphocytes se regroupent en trois dimensions préférentiellement en amas ou grappes (« clusters »).