INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'invention concerne également la ou les nanoparticules obtenues par la méthode selon l'invention, dans laquelle le rendement de production de nanoparticules est inférieur à 10 50 , 10 30 , 10 10 , 10 5 , 10 2 , 10, 5, 1, 10 -1 , 10 -2 , 10 -3 ou 10 -5 mg de nanoparticules, préférentiellement par cellule, préférentiellement par litre de milieu ou milieu de pré-croissance et/ou de croissance.
L'invention concerne également la ou les nanoparticules de haute pureté selon l'invention, qui sont des magnétosomes.
Dans un mode de réalisation de l'invention, les magnétosomes sont des nanoparticules produites par des bactéries magnétotactiques traitées préférentiellement de la façon suivante: i) extraction et/ou isolation de nanoparticules de la bactérie pour obtenir des magnétosomes comprenant des minéraux cristallisés entourés d'une membrane biologique, ii ), retrait de la membrane biologique, de préférence en utilisant l'étape de purification, iii), recouvrement des magnétosomes d'un revêtement synthétique qui ne provient pas de la bactérie magnétotactique pour la stabilisation, de préférence pour éviter que les magnétosomes ne s'agrègent et/ou ne sédimentent.
L'invention concerne également une composition, un médicament, un dispositif médical, une composition de diagnostic, une composition thérapeutique ou une composition cosmétique, comprenant la ou les nanoparticules de haute pureté selon l'invention.
Dans encore un autre mode de réalisation de l’invention, la ou les propriétés ou caractéristiques, préférentiellement de la ou des nanoparticules ou de la méthode, décrites dans chaque mode de réalisation individuel ou section ou phrase de cette demande de brevet peuvent être combinées pour aboutir à une combinaison de propriétés ou de caractéristiques, préférentiellement de la ou des nanoparticules ou de la méthode.
Dans encore un autre mode de réalisation de l'invention, lorsqu'un composé tel que la nanoparticule ou l'élément chimique a une propriété dans une condition 1 (P1) qui est supérieure, plus longue ou plus grande d'un facteur α qu'une propriété dans une condition 2 (P2) , cela signifie que P1 = α P2.
Dans encore un autre mode de réalisation de l'invention, lorsqu'un composé tel que la nanoparticule ou l'élément chimique a une propriété dans une condition 1 (P1) plus petite ou plus courte d'un facteur α qu'une propriété dans une condition 2 (P2), cela signifie que P1 = P2/α.
: Analyse TGA-DSC de bactéries magnétotactiques entières et de magnétosomes extraits de bactéries magnétotactiques selon la condition 2 de lyse. a), La variation du pourcentage en poids en fonction de la température ainsi que la dérivée de cette variation en fonction de la température pour un échantillon comprenant 3 mg de bactéries magnétotactiques lyophilisées lorsqu'il est chauffé entre 20 °C et 600 °C à une vitesse de 6 °C/min. (b), flux de chaleur en mW en fonction de la température produit par un échantillon comprenant 3 mg de bactéries magnétotactiques lyophilisées lorsqu'il est chauffé entre 20 °C et 600 °C à une vitesse de 6 °C/min. (c), La variation du pourcentage en poids en fonction de la température ainsi que la dérivée de cette variation en fonction de la température pour un échantillon comprenant 3 mg de magnétosomes lyophilisés extraits de bactéries entières selon la condition 2 de lyse lorsque l'échantillon est chauffé entre 20 °C et 600 °C à une vitesse de 6 ° C/min. (d), flux de chaleur en mW en fonction de la température produit par un échantillon comprenant 3 mg de magnétosomes lyophilisés extraits de bactéries entières selon la condition 2 de lyse lorsque l'échantillon est chauffé entre 20 °C et 600 °C à une vitesse de 6 °C/min. En ce qui concerne les figures 1(a) et 1(c), l'axe des y peut être remplacé par le pourcentage en masse conduisant aux mêmes courbes.
: Analyse TGA-DSC de magnétosomes extraits de bactéries magnétotactiques selon la condition 3 et de nanoparticules SIGMA synthétisées chimiquement. (a), Variation du pourcentage en poids en fonction de la température ainsi que la dérivée de cette variation en fonction de la température pour un échantillon comprenant 3 mg de magnétosomes lyophilisés extraits de bactéries magnétotactiques selon la condition 3. (b), Flux thermique en mW en fonction de la température produit par un échantillon comprenant 3 mg de magnétosomes lyophilisés extraits de bactéries magnétotactiques selon la condition 3. (c), Variation du pourcentage en poids en fonction de la température ainsi que la dérivée de cette variation en fonction de la température pour un échantillon comprenant 3 mg de nanoparticules SIGMA lyophilisées. (d), Flux de chaleur en mW en fonction de la température produit par un échantillon comprenant 3 mg de nanoparticules SIGMA lyophilisées. En ce qui concerne les Figures 2(a) et 2(c), l'axe des y peut être remplacé par le pourcentage en masse conduisant aux mêmes courbes.
: Schéma de principe représentant trois pics différents dus à la variation du flux de chaleur des nanoparticules en fonction de la température. Tmax, TminFWHMheatflow, TmaxFWHMheatflow, sont les températures menant à la valeur maximale du flux thermique (Imax) pour Tmaxheatflow, la valeur du flux thermique égales à Imax/2 pour les températures TminFWHMHeatflow et TmaxFWHMHhF. Les régions de: i), début ou aval du pic de flux de chaleur et ii), fin ou amont du pic sont indiquées. Les emplacements de T1, T2 et T3, par rapport au pic de flux de chaleur, sont indiqués.
: Schéma de principe représentant un pic dû à la variation en fonction de la température de la dérivée de la variation en masse des nanoparticules en fonction de la température. Tmax(pic), TminFWHM, TmaxFWHM, sont les températures conduisant à la valeur maximale du flux de chaleur (Imax) pour Tmax(pic), les valeurs du flux de chaleur égales à Imax/2 pour les températures TminFWHM et TmaxFWHM, où TminFWHM < TmaxFWHM. Les régions de: i), début ou aval du pic et ii), fin ou amont du pic sont indiquées. Les emplacements de T1, T2 et T3, par rapport au pic, sont indiqués.
: Diagramme schématique représentant un traitement thermique typique utilisé pour chauffer les nanoparticules, où la température des nanoparticules a été augmentée d'une température Ti à une température T1 pendant un temps t11P, puis la température des nanoparticules a été maintenue à la température T1 pendant t12P, la température des nanoparticules a été augmentée de T1 à T3 pendant t31P, puis la température des nanoparticules a été maintenue à une température T3 pendant t32P, puis la température des nanoparticules a été augmentée de T3 à T2 pendant t21P, puis la température des nanoparticules a été maintenue à T2 pendant t22P, puis la température des nanoparticules a été réduite de T2 à Tf pendant t23P.
Dans encore un autre mode de réalisation de l'invention, les nanoparticules de haute pureté, préférentiellement les noyaux de ces nanoparticules, comprennent plus de matériau dopant que d'impureté (s), préférentiellement d'un facteur supérieur à 1,0000000001, 1.1, 1.2, 1.5, 2, 5, 10 , 10 3 , 10 5 , 10 10 ou 10 100 .
Dans un mode de réalisation de l'invention, les nanoparticules de haute pureté, préférentiellement le revêtement de ces nanoparticules, comprennent plus de 10-50, 10-30, 10-20, 10-10, 10-5, 10-3, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,7, 0,8, 0,9, 0,99, 0,999 ou 0,9999999999 g d'impureté (s) par gramme de nanoparticules ou de revêtement de nanoparticules. Dans certains cas, cette situation peut survenir lorsque la méthode ne permet pas de purifier efficacement les nanoparticules.
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, les nanoparticules de haute pureté, préférentiellement le revêtement de ces nanoparticules, comprennent moins de 0,9999999999, 0,999, 0,99, 0,9, 0,8, 0,7, 0,5, 0,3, 0,2, 0,1, 10-3, 10-5, 10-10 ou 10-50 g d'impureté(s) par gramme de nanoparticules ou de revêtement de nanoparticules. Dans certains cas, cette situation peut survenir lorsque la méthode permet de purifier efficacement les nanoparticules.
Dans encore un autre mode de réalisation de l'invention, les nanoparticules de haute pureté comprennent moins d'impuretés que de matériau dopant et/ou d'oxyde de fer, de préférence d'un facteur supérieur à 1,0000000001, 1,1, 1,2, 1,5, 2, 5, 10, 10 3 , 10 5 , 10 10 ou 10 100 .
L'invention concerne également les nanoparticules de haute pureté selon l'invention, dans lesquelles le matériau dopant est choisi dans le groupe constitué par: l'aluminium, l'antimonite, le baryum, le chrome, le cuivre, l'or, le manganèse, l'argent, l'étain, le titane et le zinc.
Dans un mode de réalisation de l'invention, comparé aux nanoparticules à forte concentration en impuretés, préférentiellement à plus de 15 000 µg d'impuretés par gramme de nanoparticules, dites N1, les nanoparticules à faible concentration en impuretés, préférentiellement à moins de 15 000 µg d'impuretés par gramme de nanoparticules, désigné par N2, possèdent au moins l’une des propriétés avantageuses suivantes: i) des propriétés magnétiques meilleures, telles qu’une plus grande coercivité, aimantation rémanente, aimantation saturante, préférentiellement d’un facteur plus grand que f, pour N2 que pour N1, ii), un taux d’absorption spécifique (SAR) plus élevé, préférentiellement d’un facteur supérieur à f, pour N2 que pour N1, iii), une distribution en taille des nanoparticules inférieure, préférentiellement d’un facteur supérieur à f, pour N2 que pour N1, iv ), une taille supérieure, préférentiellement d’un facteur supérieur à f, pour N2 que pour N1, v), une toxicité inférieure pour N2 que pour N1 et/ou vi), une amélioration des propriétés médicales, thérapeutiques, diagnostiques ou cosmétiques. pour N2 que pour N1 et/ou vi), une immunogénicité moindre pour N2 que pour N1.
Dans un mode de réalisation de l'invention, le facteur f est 1,0000001, 1,00001, 1,0001, 1,01, 1,1, 1,2, 1,5, 2, 5, 10, 10 3 , 10 5 , 10 7 ou 10 9 , ou un facteur compris entre 1,000001 et 10 9 , 1,00001 et 10 7 , 1,0001 et 10 5 , 1,01 et 10 3 , 1,1 et 10 3 , 1,5 et 10 3 , 2 et 10 3 , 5 et 10 3 ou 5 et 100.
Dans un mode de réalisation de l'invention, la SAR est proportionnelle à la pente, préférentiellement initiale, de la variation de température en fonction du temps des nanoparticules, (ΔT/δt), préférentiellement entourée d'un milieu tel que l'eau, le matériel biologique, la partie corporelle, ou un tissu, où (ΔT/δt) est préférentiellement estimée en °C/s., où SAR = α (ΔT/δt). Dans certains cas, α=Cv/Cnano, où Cv est la capacité thermique spécifique, préférentiellement de l'eau, du matériel biologique, de la partie du corps ou du tissu, comprenant les nanoparticules, et Cnano est la concentration en nanoparticules ou la quantité ou le nombre de nanoparticules, comprises de préférence dans de l'eau, du matériel biologique, une partie du corps ou des tissus.
Dans un mode de réalisation, la SAR est mesurée en exposant les nanoparticules à un rayonnement, de préférence un rayonnement qui produit de la chaleur, préférentiellement un laser, un champ magnétique, un champ magnétique alternatif, une onde acoustique, des ultrasons, une radiofréquence.
Dans un mode de réalisation de l'invention, la SAR des nanoparticules est supérieure à 10 -100 , 10 -50 , 10 -20 , 10 -10 , 10 -5 , 10 -3 , 10 -1 , 1, 10, 10 3 ou 10 5 Watt par gramme de nanoparticules. Dans certains cas, la SAR est importante lorsque l'élimination des impuretés augmente la SAR.
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, la SAR des nanoparticules est inférieure à 10 100 , 10 50 , 10 30 , 10 20 , 10 10 , 10 5 , 10 2 , 10, 1, 10 -1 , 10 -3 ou 10 -5 watts par gramme de nanoparticules. Dans certains cas, la SAR est faible lorsque l'élimination des impuretés détruit ou dénature partiellement ou totalement les nanoparticules.
Dans un mode de réalisation de l'invention, la distribution en taille des nanoparticules est supérieure à 10 -50 , 10 -20 , 10 -10 , 10 -5 , 10 -2 , 10 -1 , 1, 5, 10, 10 2 ou 10 5 nm. Dans certains cas, la distribution en taille des nanoparticules est importante lorsque l'élimination des impuretés détruit ou dénature partiellement ou totalement ou même réduit ou augmente la taille des nanoparticules, de préférence par un facteur supérieur à 1,00001, 1,001, 1,1, 2, 5, 10, 50, 10 2 , 10 3 , 10 5 , 10 10 , 10 20 ou 10 50 entre avant et après la méthode.
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, la distribution en taille des nanoparticules est inférieure à 10 50 , 10 20 , 10 10 , 10 5 , 10 3 , 10 2 , 10, 1, 10 -1 , 10 -2 ou 10 -5 nm. Dans certains cas, la distribution en taille des nanoparticules est faible lorsque l'élimination des impuretés ne détruit pas ou ne dénature pas ou pas totalement ou ne réduit ni n'augmente la taille des nanoparticules, de préférence par un facteur supérieur à 1,00001, 1,001, 1,1, 2, 5, 10, 50, 10 2 , 10 3 , 10 5 , 10 10 , 10 20 ou 10 50 entre avant et après la méthode.
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, les nanoparticules, préférentiellement à une concentration supérieure à 10 -6 , 10 -3 , 10 -1 , 1, 10 mg de nanoparticules par ml ou mm 3 , détruisent plus de 1, 10, 10 3 , 10 6 , 10 9 cellules, de préférence lorsque les nanoparticules et les cellules sont comprises dans un volume inférieur à 1 cm 3 ou 1 mm 3 . Dans certains cas, préférentiellement lorsque la ou les impuretés sont toxiques ou induisent une toxicité, les nanoparticules détruisent davantage de cellules, de préférence d’un facteur supérieur à 1,00001, 1,001, 1,1, 2, 5, 10, 50, 10 2 , 10 3 , 10 5 , 10 10 , 10 20 ou 10 50 avant la méthode, lorsque la quantité d’impuretés est la plus grande, qu’après la méthode, lorsque la quantité d’impuretés est la plus faible.
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, les nanoparticules après la méthode ou après le traitement selon la méthode mènent à une activité améliorée: i), médicale ou thérapeutique, par exemple en permettant la destruction d'un plus grand nombre de cellules pathologiques, de virus, de cellules cancéreuses, ou en étant moins toxiques pour les tissus sains, ii) une activité de diagnostic, par exemple en permettant la détection d'un plus grand nombre de cellules pathologiques, de virus, de cellules cancéreuses, ou en étant moins toxiques pour les tissus sains, et/ou, iii), une activité cosmétique, par exemple en améliorant l’apparence d’un plus grand nombre de cellules ou en étant moins toxique pour les tissus sains.
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, les nanoparticules après la méthode ou après avoir été traitées par la méthode sont moins immunogènes qu'avant la méthode ou avant d'être traitées par la méthode. Préférentiellement, elles attirent un nombre moins important de cellules immunitaires, préférentiellement sous l'application (ou non) de radiations, préférentiellement d'un facteur supérieur à 1,00001, 1,001, 1,1, 2, 5, 10, 50, 10 2 , 10 3 , 10 5 , 10 10 , 10 20 ou 10 50 , après qu'avant la méthode.
Ainsi, l’invention fournit une méthode de préparation continue d’un copolymère P par extrusion réactive comprenant : * la réaction de polymérisation en présence d’une base : a) d'au moins un composé dihalogéné a ; b) d’au moins un monomère polyhydroxylé b mis en œuvre en une quantité molaire apportant un nombre de groupements hydroxyles (OH) supérieur au nombre d’halogénures apportés par le composé a ; puis * la réaction avec au moins un composé hydrophobe monohalogéné c.
Généralement selon l’invention la base permet d’obtenir le dérivé alcoolate du composé b. De manière avantageuse, le traitement, total ou partiel au moyen de la base, du composé b, préalablement à la mise en œuvre de l’extrusion réactive, peut permettre d’introduire directement ce dérivé alcoolate du composé b. Le dérivé alcoolate du composé b peut éventuellement être stocké séparément puis introduit lors de la mise en œuvre de l’extrusion réactive en présence du composé a.
Plus préférentiellement, le composé polyhydroxylé b est un composé b1 de formule II : [Chem II] HO-Q n -OH (II) dans laquelle : - Q représente indépendamment un groupement oxyalkylène, de préférence choisi parmi oxyéthylène, oxyéthylène–oxypropylène comprenant au plus 40 % molaire d’oxypropylène, oxyéthylène–oxybutylène comprenant au plus 20 % molaire d’oxybutylène, et leurs combinaisons, - n représente indépendamment un nombre allant de 20 à 800.
Également de manière préférée, la méthode selon l’invention met en œuvre un unique composé hydrophobe monohalogéné c ou bien 2 ou 3 composés hydrophobes monohalogénés c différents.
Plus préférentiellement, le composé hydrophobe monohalogéné c est un composé c1 de formule III : [Chem III] R-X 2 (III) dans laquelle : - R représente indépendamment un groupement hydrocarboné hydrophobe, de préférence un groupement hydrocarboné linéaire, ramifié ou cyclique, saturé, insaturé ou aromatique, ou comprenant de 6 à 40 atomes de carbone ; - X 2 représente indépendamment Br, Cl ou I, de préférence Br.
Selon l’invention, le groupement hydrocarboné R peut également représenter un groupement aromatique comprenant de 6 à 40 atomes de carbone, préférentiellement de 7 à 32 atomes de carbone.
Dans certains cas, les éléments chimiques prédominants peuvent être les mêmes éléments chimiques prédominants, c'est-à-dire préférentiellement des éléments chimiques prédominants comprenant les mêmes éléments chimiques.
Dans un mode de réalisation de l’invention, le(les) élément(s) chimique(s), le(les) élément(s) chimique(s) prédominant(s), le(les) matériau(x) dopant(s) et/ou le(les) impureté(s) est/sont ou représentent plus de 1, 10, 10 3 , 10 5 , 10 10 , 10 20 , 10 50 ou 10 100 élément(s) chimique(s), élément(s) chimique(s) prédominant(s), matériau(x) dopant(s) et/ou impureté(s).
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, le(les) élément(s) chimique(s), le(les) élément(s) chimique(s) prédominant(s), le(les) matériau(x) dopant(s) et/ou le(les) impureté(s) est/sont ou représente(nt) moins de 10 100 , 10 50 , 10 20 , 10 10 , 10 5 , 10 3 , 100, 50, 10, 5 ou 2 élément(s) chimique(s), élément(s) chimique(s) prédominant(s), matériau(x) dopant(s) et/ou impureté(s).
Dans certains cas, le(les) élément(s) chimique(s), le(les) élément(s) chimique(s) prédominant(s), le(les) matériaux dopant(s) et/ou les impuretés, peuvent être compris à l'intérieur de la(des) nanoparticule(s).
Dans d'autres cas, le(les) élément(s) chimique(s), le(les) élément(s) chimique(s) prédominant(s), le(les) matériaux dopant(s) et/ou les impuretés, peuvent être compris à la surface de la(des) nanoparticule(s).
Dans d'autres cas encore, le(les) élément(s) chimique(s), le(les) élément(s) chimique(s) prédominant(s), le(les) matériaux dopant(s) et/ou les impuretés, peuvent être compris à l'extérieur de la(des) nanoparticule(s).
Dans un mode de réalisation de l'invention, le(les) élément(s) chimique(s), le(les) élément(s) chimique(s) prédominant(s), le(les) matériaux dopant(s) et/ou les impuretés, est/sont compris dans ou occupe(nt) ou est/sont inséré(s) dans: i), la structure cristalline, ii), la structure amorphe, iii), un défaut, et/ou iv), une vacance de la(des) nanoparticule(s).
Dans un mode de réalisation de l'invention, le(les) élément(s) chimique(s), le(les) élément(s) chimique(s) prédominant(s), le(les) matériaux dopant(s) et/ou la(les) impureté(s), est/sont en interactions, tels qu’en interactions électrostatiques, fortes, faibles, nucléaires, métalliques, Van der Waals, Debye, London ou hydrogène avec la(les) nanoparticule(s).
Dans un mode de réalisation de l'invention, le(les) élément(s) chimique(s), le(les) élément(s) chimique(s) prédominant(s), le(les) matériaux dopant(s) et/ou le(les) impureté(s), est/sont situé(s) à une distance de la/des nanoparticule(s), de préférence à partir du centre, de la partie centrale ou de la surface de la(des) nanoparticule(s), qui est inférieure à 10 50 , 10 20 , 10 10 , 10 5 , 10 3 , 100, 10, 5 ou 1 nm.
Dans encore un autre mode de réalisation de l'invention, le(les) élément(s) chimique(s), élément(s) chimique(s) prédominant(s), matériaux dopant(s), et/ou impureté(s), est/sont localisé(s) à une distance de la/des nanoparticule(s), préférentiellement à partir du centre, de la partie centrale ou de la surface de la(des) nanoparticule(s), qui est supérieure à 0,001, 0,01, 0,1, 1, 10, 100, 10 3 , 10 5 , 10 10 , 10 20 ou 10 50 nm.
Dans un mode de réalisation de l'invention, le(les) élément(s) chimique(s), préférentiellement compris dans l'impureté, sont choisis dans le groupe consistant en: actinide, actinium, aluminium, américium, antimoine, argon, arsenic, astatine, baryum, béryllium, béryllium, bismuth, bismuth, bohrium, bore , brome, césium, calcium, californium, carbone, cérium, chlore, chrome, cobalt, copernicum, cadmium, cuivre, curium, darmstadtium, dubnium, dysprosium, einsteinium, erbium, europium, fermium, fluorium, fluorium, fluorium, gallium , germanium, or, hafnium, hélium, hessium, holmium, hydrogène, indium, iode, iridium, fer, krypton, lanthanide, lanthane, lawrencium, plomb, lithium, livermorium, lutétium, magnésium, manganèse, meetherium, meitherium, mendélévium, mercure, molybdène , néodyme, néon, néptunium, nickel, niobium, azote, nobelium, osmium, oxygène, palladium, phosphore, platine, plutonium, polonium, potassium, praséodyme, proctactinium, prométhium, radium, radon, rhénium, rhénium, rhodium, rhodium, rongénium, ruthénium, rutherfordium, samarium, sélénium, silicium, argent, sodium, strontium, soufre, scandium, seaborgium, tellure, terbium, thorium, thulium, étain, tantale, technétium, thallium, titane, tungstène, ununoctium, ununpentium, ununpentium, ununseptium, uranium, vanadium, xénon, ytterbium, yttrium, zinc, zirconium et tout dérivé de ces éléments chimiques.
Dans un mode de réalisation de l'invention, l'impureté est ou comprend au moins un élément chimique différent d'au moins un élément chimique compris dans l'élément chimique prédominant et/ou le matériau dopant. Par exemple, l’impureté peut être un élément chimique toxique alors que l’élément chimique prédominant et/ou le matériau dopant sont non toxiques.
Dans certains cas, la toxicité peut être mesurée à la même concentration pour l’impureté, l’élément chimique prédominant et le matériau dopant.
Dans certains cas, la toxicité peut être une toxicité envers une cellule ou un animal, ou une toxicité pouvant détruire, dénaturer, tuer, désassembler au moins une cellule ou un animal.
Dans un autre mode de réalisation de l’invention, l’impureté est ou comprend au moins un élément chimique qui est le même qu’au moins un élément chimique compris dans l’élément chimique prédominant et/ou matériau dopant. Par exemple, l’impureté peut être faite du même élément chimique que le matériau dopant ou élément chimique prédominant, mais sous une forme ionique différente. Par exemple, l’impureté peut être constituée de Fe2+, alors que l’élément chimique prédominant peut être constitué de Fe3+.
Dans un mode de réalisation de l’invention, le matériau dopant est ou comprend au moins un élément chimique qui est diffèrent d’au moins un élément chimique compris dans l’élément chimique prédominant et/ou impureté.
Dans un autre mode de réalisation de l’invention, le(les) nanoparticule(s) the nanoparticle(s) comprenne(nt) ou est/sont assemblées de moins de 10 100 , 10 50 , 10 20 , 10 10 , 10 5 , 10 3 , 100, 50, 10, 5 or 2 nanoparticule(s).