Procédé de reconstruction d’une distribution spatiale de fluorescence ( ), tridimensionnelle, à l’intérieur d’un objet (10), l’objet étant susceptible d’émettre une lumière de fluorescence sous l’effet d’une illumination dans une bande spectrale d’excitation, l’objet étant discrétisé en voxels objet ( ), de telle sorte que : chaque voxel objet est susceptible d’émettre une lumière dans une bande spectrale de fluorescence ; la distribution spatiale de fluorescence définit une intensité d’émission de lumière de fluorescence dans chaque voxel objet; le procédé comportant les étapes suivantes , a) disposition de l’objet face à un capteur d’image (15), le capteur d’image étant configuré pour former une image dans un plan focal objet, le plan focal objet étant configuré pour s’étendre successivement en différentes profondeur dans l’objet ( …. … ) ; b) illumination de l’objet dans la bande spectrale d’excitation, et acquisition successive de plusieurs images élémentaires ( …. … ), le plan focal objet s’étendant respectivement aux différentes profondeurs de l’objet, chaque image étant définie selon des pixels, à chaque pixel correspondant une valeur d’intensité mesurée, les images élémentaires formant une image acquise ( ) tridimensionnelle, chaque pixel d’une image élémentaire formant un voxel image de l’image acquise ; c) initialisation de la distribution spatiale de fluorescence ; d) prise en compte de la distribution de fluorescence initiale ( ou résultant d’une itération précédente ; e) assignation d’une valeur aléatoire de phase ( ) à chaque voxel objet, et mise en œuvre d’un algorithme de propagation de la lumière à travers l’objet, de façon à estimer une amplitude complexe de l’onde lumineuse détectée par chaque voxel image ; f) répétition de W fois de l’étape e), W étant un entier positif, de façon à obtenir, en chaque voxel image, W estimations d’amplitudes complexes ; g) en chaque voxel image, à partir des W estimations résultant de l’étape f), calcul d’une intensité reconstruite ( ), l’ensemble des intensités reconstruites pour chaque voxel image formant une image reconstruite ( ) ; h) formation éventuelle d’une image différentielle ( ), l’image différentielle correspondant à une comparaison entre l’image reconstruite ( ) et l’image acquise ( ) ; i) assignation d’une valeur aléatoire de phase ( ) à chaque voxel image de l’image acquise résultant de l’étape g) ou de l’image différentielle résultant de l’étape h), et mise en œuvre d’un algorithme de rétropropagation de la lumière à travers l’objet, de façon à obtenir, dans chaque voxel objet : une amplitude complexe d’émission de fluorescence correspondant à l’image reconstruite résultant de l’étape g) ; ou une amplitude complexe différentielle d’émission de fluorescence correspondant à l’image différentielle résultant de l’étape h) ; j) répétition de W’ fois de l’étape i), W’ étant un entier positif, de façon à obtenir, pour chaque voxel objet, W’ estimations d’amplitudes complexes ( ) correspondant à l’image reconstruite ou W’ estimations d’amplitudes complexes différentielles ( ) correspondant à l’image différentielle ; k) à partir des W’ estimations résultant de l’étape j), calcul, en chaque voxel objet, d’une intensité d’émission ( ) ou d’une intensité d’émission différentielle ( )) ; l) mise à jour de la distribution spatiale de fluorescence dans l’objet ( ) à partir de l’intensité d’émission ( ) ou de l’intensité d’émission différentielle ( ) calculée dans chaque voxel de l’objet lors de l’étape k) ; m) réitération des étapes d) à l) jusqu’à l’atteinte d’un critère d’arrêt des itérations. Procédé selon la revendication 1, dans lequel le procédé comportant, à chaque itération, les étapes suivantes : i-bis) assignation d’une valeur aléatoire de phase ( ) à chaque voxel image de l’image acquise lors de b) et mise en œuvre d’un algorithme de réropropagation de la lumière à travers l’objet, de façon à estimer, dans chaque voxel objet, une amplitude complexe d’émission de fluorescence correspondant à l’image acquise ( ); j-bis) répétition de W’’ fois de l’étape i-bis), W’’ étant un entier positif, de façon à obtenir, pour chaque voxel objet, W’’ estimations d’amplitudes complexe d’émission de fluorescence correspondant à l’image acquise ; k-bis) à partir des W’’ estimations résultant de l’étape j-bis), calcul d’une intensité d’émission, en chaque voxel objet, correspondant à l’image acquise ( ) ; le procédé étant tel que lors de l’étape l), la mise à jour est effectuée à partir d’un ratio ( ), calculé pour chaque voxel objet, entre l’intensité d’émission correspondant à l’image acquise et l’intensité d’émission correspondant à l’image reconstruite. Procédé selon la revendication 2, dans lequel lors de chaque répétition de l’étape i-bis), la valeur de phase assignée à chaque voxel image de l’image acquise correspond à la valeur de phase assignée au même voxel image de l’image reconstruite ( ) lors d’une étape i) de la même itération. Procédé selon la revendication 2 ou la revendication 3, dans lequel lors de chaque étape k-bis), pour chaque voxel objet, l’intensité d’émission est calculée à partir d’une moyenne des W’’ intensités d’émission estimées, pour ledit voxel objet, lors de chaque étape i-bis). Procédé selon la revendication 1, dans lequel : lors de l’étape h), l’image différentielle ( ) est une différence quadratique entre l’image reconstruite et l’image acquise ( ) et l’image acquise ( ) ; chaque étape i) comporte une obtention, dans chaque voxel image, d’une amplitude complexe différentielle, calculée à partir de l’image différentielle ; l’étape k) comporte un calcul d’une intensité d’émission différentielle, en chaque voxel objet, correspondant à l’image différentielle calculée en h) ; lors de l’étape l), la mise à jour de la distribution spatiale de fluorescence dans l’objet est effectuée de manière à minimiser l’intensité d’émission différentielle des voxels objets. Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel lors de chaque étape g), pour chaque voxel image, l’intensité reconstruite est calculée à partir d’une moyenne du carré des modules des W estimations d’amplitudes complexes, pour ledit voxel image, lors de chaque étape e) ; lors de chaque étape k), pour chaque voxel objet, l’intensité d’émission est calculée à partir d’une moyenne du carré des modules des W’ estimations amplitudes complexes d’émission de fluorescence, pour ledit voxel, lors de chaque étape i). Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel lors de chaque étape e), une longueur d’onde est assignée à chaque voxel objet, dans la bande spectrale de fluorescence, la longueur d’onde étant assignée de façon aléatoire ou selon une distribution de probabilité prédéterminée ; lors de chaque étape i), une longueur d’onde est assignée à chaque voxel image, dans la bande spectrale de fluorescence, la longueur d’onde étant assignée de façon aléatoire ou selon une distribution de probabilité prédéterminée. Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel lors de l’étape e) et lors de l’étape i), l’algorithme de propagation de la lumière met en œuvre un algorithme de propagation unidirectionnel, de type méthode de propagation de faisceau, de façon à déterminer une lumière se propageant à travers un voxel à partir de la lumière se propageant à partir d’un voxel adjacent. Procédé selon la revendication 8, dans lequel l’indice de réfraction de l’objet varie entre deux voxels objet différents ; l’algorithme de propagation de la lumière prend en compte une variation de l’indice de réfraction entre deux voxels objet adjacents. Dispositif d’observation d’un objet, le dispositif comportant : un capteur d’image (15), configuré pour former une image dans un plan objet, la distance entre le capteur d’image et le plan objet étant variable ; une source de lumière (11), configurée pour illuminer un objet ; une unité de traitement (20), configurée pour recevoir des images acquises par le capteur d’image, et mettre en œuvre les étapes c) à l) d’un procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes. Support d’enregistrement, lisible par un ordinateur ou pouvant être connecté à un ordinateur, le support d’enregistrement étant configuré pour mettre en œuvre les étapes c) à m) d’un procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 9 à partir d’images formées par un capteur d’image en différentes profondeurs dans un objet.