Composition de mélange maître pour l’amplification de séquences d’acides nucléiques, destinée à être mélangée à un échantillon biologique contenant une ou plusieurs séquences d’acides nucléiques cibles et à des amorces spécifiques de la ou des séquences d’acides nucléiques cibles, ainsi que des sondes fluorescentes pour révéler une amplification de la ou des séquences d’acides nucléiques cibles, la composition comprenant des réactifs et des enzymes d’amplification d’acides nucléiques, caractérisé en ce que la composition comprend en outre un réactif polymérisable, lequel polymérise sous l’influence d’une stimulation choisie parmi une stimulation thermique et une stimulation lumineuse, de sorte à former un hydrogel encapsulant localement chaque séquence d’acides nucléiques cible lorsque ladite composition est exposée à ladite stimulation. Composition selon la revendication 1, dans laquelle le réactif polymérisable est choisi parmi un réactif photosensible qui polymérise lorsqu’il est exposé à une lumière, de préférence ultraviolette, et un réactif thermosensible qui polymérise lorsqu’il est exposé à une température seuil. Composition selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle le réactif polymérisable est choisi parmi la classe des PEG et autres polymères hydrosolubles compatibles avec la PCR. Composition selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle le réactif polymérisable est présent en une teneur de 2% à 25%, de préférence de 5% à 15%, en poids par unité de volume (p/V). Composition selon l’une des revendications précédentes, comprenant en outre un agent initiateur choisi parmi un photoinitiateur, de préférence du lithium phenyl-2,4,6-trimethylbenzoylphosphinate (LAP) et un thermoinitiateur, de préférence le 2,2’-azobis[2-(2-imidazolin-2-yl)propane]dihydrochloride, en une teneur de 0,02% à 1% en poids par unité de volume (p/V). Composition selon l’une des revendications précédentes, comprenant les amorces spécifiques de la ou des séquences d’acides nucléiques cibles, ainsi que des sondes fluorescentes pour révéler une amplification de la ou des séquences d’acides nucléiques cibles. Procédé d’amplification de séquences d’acides nucléiques comprenant les étapes suivantes : (i) mise à disposition d’une composition selon la revendication 1 à 6 ; (ii) le mélange de ladite composition avec un échantillon biologique à analyser (iii) l’application d’une stimulation choisie parmi une stimulation thermique et une stimulation lumineuse de sorte à polymériser le mélange de l’étape (ii) pour obtenir un hydrogel ; (iv) exposer l’hydrogel à une réaction d’amplification de séquences d’acides. Procédé selon la revendication 7, dans lequel l’étape (i) de mise à disposition est maintenue pendant une durée comprise entre plusieurs heures et plusieurs mois, de préférence comprise entre plusieurs jours et plusieurs mois Procédé selon l’une des revendications 7 et 8, dans lequel ladite réaction est une réaction en chaine par polymérase. Procédé d’amplification selon l’une des revendications 7 à 9, dans lequel l’étape (iii) de l’application d’une stimulation comporte l’exposition de ladite composition à une lumière UV ou à une température seuil. Procédé d’amplification selon l’une des revendications 7 à 10, dans lequel l’hydrogel est obtenu en un temps inférieur ou égal à 10 minutes, de préférence inférieur ou égal à 1 minute après l’application de ladite stimulation. Procédé d’amplification selon l’une des revendications 7 à 11, dans lequel l’étape (iii) comporte une réaction choisi parmi le groupe constitué d’une réaction bio-orthogonale thiol-ène et une réaction de dimérisation.