INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L’extrait organique intermédiaire 6 issu de l’étape c) d’extraction liquide-liquide est soumis à une étape d) de contre-lavage dans un même dispositif d’extraction (colonne agitée Type Kühni ou ECR). Ledit extrait organique est dispersé dans la phase d’eau pure, à 21,5 °C. Les débits en entrée de colonne sont fixés à 5 kg/h pour l’extrait organique et à 4 kg/h pour la phase aqueuse. La proportion (poids/poids) d’eau introduite comme solvant aqueux de contre-lavage par rapport à l’extrait organique intermédiaire est de 0,8.
On récupère à l’issue de l’étape de contre-lavage d), un contre-extrait aqueux intermédiaire 9 enrichi en DMSO contenant 91 % poids d’eau, 1,8 % poids de DMSO, 5,8 % poids DFF et 1,1 % poids de MIBK, et un raffinat organique 8, contenant 4,8 % poids de DFF, 0,09 % poids DMSO (soit 1,8% poids de DMSO par rapport au poids de DFF) et 93,3 % poids de MIBK, soit un rendement de contre-lavage de 55 % poids pour le DFF et de 95 % poids pour le DMSO.
Le raffinat organique 8 produit à l’étape d) est envoyé à l’étape e) de concentration. La vaporisation du solvant est réalisée sous vide. La température du liquide est fixée à 60 °C, et le niveau de vide à 0,02 MPa.
L’étape e) est mise en œuvre avec un taux massique de vaporisation de 95 %, correspondant à la masse de solvant organique vaporisé par rapport à la masse de raffinat organique issu de l’étape d) engagé. L’extrait organique concentré obtenu à l’issue de l’étape e) présente un taux massique de DFF de 84 % poids, 2 % poids en DMSO et 9 % poids en MIBK. La teneur en DFF de l’extrait organique concentré (84% poids) est conforme à ce qui est attendu (au moins 40% poids et au plus 95% poids), comme sa teneur en solvant résiduel de 11% poids (somme de 9% de MIBK + 2% de DMSO) qui est conforme à la valeur attendue (au moins 5% poids et au plus 60% poids). L’extrait organique concentré obtenu à l’issue de l’étape e) comprend également des impuretés humines (5% poids). Le distillat récupéré contient essentiellement du MIBK et de l’eau, éliminé dans la forme d’un azéotrope avec le MIBK, qui sépare en deux phases non-miscibles lors de la condensation.
L’extrait organique concentré issu de l’étape e) est mise en contact avec de l’eau pure, avec une proportion massique eau/extrait concentré de 0,95, puis envoyé dans une étape f) d’hydrodistillation mise en œuvre par distillation. L’étape f) d’hydrodistillation est mise en œuvre à une température de fond de colonne de 35 °C, et sous un vide de 0,01 MPa, de manière à faciliter l’élimination du solvant organique MIBK résiduel, sous la forme d’un azéotrope eau/MIBK sans dégradation du DFF. La solution aqueuse de DFF obtenue à l’issue de l’étape e) présente une composition de 45 % poids de DFF, 53,3 % poids d’eau, 1 % poids de DMSO (soit 2,2% poids de DMSO par rapport au poids de DFF) et 0,7 % poids MIBK.
OLIGONUCLÉOTIDE LINÉAIRE ET UTILISATION DANS LA DÉTECTION D’ANALYTES D’INTÉRÊT La présente invention concerne le domaine des outils et procédés de détection de molécules d’intérêt.
Plus particulièrement, la présente invention propose une structure oligonucléotidique linéaire particulière, utile notamment pour détecter et éventuellement quantifier au moins un analyte d’intérêt dans un échantillon liquide mettant en œuvre une amplification LAMP (pour « Loop-mediated isothermal AMPlification ») à deux amorces. La présente invention concerne également un tel procédé de détection et d’éventuelle quantification.
Etat de la technique antérieure De nombreux travaux et études dans des domaines englobant notamment la recherche académique ; la recherche et les analyses, cliniques et diagnostiques, avec des essais réalisés sur des prélèvements de sang ou des biopsies cellulaires ou tissulaires ; la surveillance environnementale ; la surveillance civile ; la sécurité alimentaire et notamment le contrôle qualité ; les analyses criminelles sur traces… impliquent la détection de biomarqueurs, de molécules d’intérêt ou de contaminants dans un échantillon et notamment dans un échantillon liquide.
Une première technique immuno-enzymatique de détection intitulée méthode ELISA (pour « Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ») a été développée au début des années 1970. Parmi les différentes mises en œuvre employées dans cette technique, un sandwich entre deux anticorps spécifiques et la cible peut être réalisé. Le premier anticorps est utilisé pour capturer la cible, par exemple, au fond d’un puits, alors que le deuxième anticorps sert à l’amplification enzymatique, directement ou via un anticorps secondaire couplé à une enzyme comme la HRP (pour « Horse Radish Peroxidase »). La méthode ELISA met en œuvre un anticorps et permet une quantification de la cible au moyen d’une gamme de calibration réalisée au préalable ou simultanément. Cette méthode est encore actuellement largement utilisée et de nombreuses variantes existent. En effet, un aptamère qui est une séquence oligonucléotidique sélectionnée spécifiquement pour son interaction avec un analyte ou toute autre séquence oligonucléotidique ayant une affinité spécifique envers un analyte peut être utilisé à la place d’un anticorps et appliqué comme sonde dans une méthode ELISA. Les aptamères constituent une bonne alternative aux anticorps dans la mesure où, présentant une affinité similaire à celle des anticorps, ils peuvent détecter de petites molécules et où ils sont très spécifiques d’une cible, beaucoup plus faciles à produire et à manipuler, plus stables et moins coûteux.
Cependant, lorsque la cible à détecter est présente en très faibles concentrations dans l’échantillon, la technique ELISA avec anticorps ou aptamères s’avère inefficace et ne permet pas d’atteindre des faibles limites de détection. Pour résoudre ce problème, l’amplification d’une sonde ADN est généralement nécessaire.
Même après 10 jours, aucun séchage n’a été constaté, les produits ont restés très collants comme au première jour, y compris à 60°C.
Ainsi, il a été démontré que les composés ne comprenant pas 2 acides carboxyliques dans leur structure ne sèchent pas.
Exemple 1 7 t est de séchage des dérivés esters oxyacétiques
Les dérivés esters oxyacétiques obtenus selon l’exemples 5 ont été testés dans des essais de séchage.
Deux types de tests ont été réalisés : l’un avec une planchette de bois et l’autre sur une plaque de verre. Chacun des produits a été solubilisé dans l’AcOEt (100 mg/mL) puis versé sur la planche en bois et la plaque de verre. Puis les produits ont été séchés à l’air à température ambiante ou à 60°C en étuve. Un test du doigt collant a été réalisée chaque jour, pour apprécier le séchage des produits.. Même après 10 jours, aucun séchage n’a été constaté, les produits ont restés très collants.
Composition élastomérique à base d’au moins un composé oxyde de nitrile comprenant un groupe époxy. La présente invention concerne une composition élastomérique, notamment utilisable pour la fabrication de pneumatiques, à base d’au moins un élastomère diénique, d’au moins une charge renforçante, d’au moins un agent de réticulation et d’au moins un composé oxyde de nitrile aromatique porteur d’un cycle époxy en position para- ou méta- par rapport à la fonction oxyde de nitrile et ne possédant pas de substituant en position ortho- de cette fonction oxyde de nitrile. La demande concerne également un procédé de préparation d’une telle composition, ainsi qu’un article semi-fini pour pneumatique et un pneumatique comprenant une telle composition élastomérique.
Dans le domaine industriel, des mélanges de polymères avec des charges sont souvent utilisés. Pour que de tels mélanges présentent de bonnes propriétés, on recherche toujours des moyens pour améliorer la dispersion des charges au sein des polymères.
En particulier, pour des compositions élastomériques destinées à la fabrication de pneumatiques, les manufacturiers recherchent en permanence que les compositions élastomériques chargées possèdent de bonnes propriétés mécaniques, telles que le renforcement, et une hystérèse aussi faible que possible. En effet, la baisse d’hystérèse d’une composition élastomérique est favorable à la diminution de la résistance au roulement d’un pneumatique et donc à une baisse de la consommation du carburant d’un véhicule roulant avec de tels pneumatiques.
On sait que, d’une manière générale, pour obtenir les propriétés de renforcement optimales conférées par une charge renforçante, il convient que cette dernière soit présente dans la matrice élastomérique sous forme finale qui soit à la fois la plus finement divisée possible et répartie de la façon la plus homogène possible.
De nombreuses solutions ont déjà été expérimentées pour atteindre une bonne dispersion de la charge renforçante dans une composition élastomérique et pour obtenir des compositions élastomériques présentant de bonnes propriétés de renforcement.
En particulier, on peut citer l’utilisation, dans une composition élastomérique, de polymères dont la structure a été modifiée au moyen d'agents de fonctionnalisation, de couplage ou d'étoilage dans le but d'obtenir une bonne interaction entre le polymère ainsi modifié et la charge renforçante, qu'il s'agisse du noir de carbone ou d'une charge inorganique renforçante.
Par exemple, on connait du document WO2019102132A1, une composition élastomérique comprenant un copolymère de styrène et de butadiène sur lequel a été greffé un agent de fonctionnalisation soit l’oxyde 2-(glycidyloxy)-1-naphtonitrile, soit l’oxyde 2,4,6-triméthyl-3-(oxiran-2-ylméthoxy)benzonitrile. Les copolymères ainsi greffés permettent d’obtenir des compositions élastomériques dont l’indice de renforcement est amélioré par rapport à une composition élastomérique comprenant un copolymère de styrène et de butadiène non greffé. L’amélioration du renforcement de ces compositions est obtenue en maintenant les propriétés d’hystérèse à un niveau identique à celui d’une composition comprenant le copolymère de styrène et de butadiène non greffé.
Depuis que les économies de carburant et la nécessité de protéger l'environnement sont devenues une priorité, il s'est avéré nécessaire de produire des pneumatiques ayant une résistance au roulement aussi faible que possible, c’est-à-dire comprenant des compositions élastomériques ayant une hystérèse aussi faible que possible.
L’obtention d’une composition élastomérique présentant une hystérèse aussi faible que possible, tout en conservant un bon niveau de performances pour les autres propriétés, telles que le renforcement et la rigidité, est un défi permanent pour les manufacturiers de pneumatiques. En effet, il est connu qu’une diminution de l’hystérèse des compositions élastomériques s’accompagne d’une diminution de la rigidité à cuit. Or, une bande de roulement doit être suffisamment rigide pour assurer un bon niveau de comportement routier du pneumatique.
Il existe donc un besoin constant de disposer de compositions élastomériques ayant des propriétés d’hystérèse davantage améliorées par rapport aux compositions élastomériques de l’art antérieur sans que cette amélioration se fasse au détriment des propriétés de rigidité.
présente le principe de détection d’une protéine (anticorps 1) fixée sur billes magnétiques par immunoLAMP : greffage d'anticorps sur l’oligonucléotide linéaire selon l’invention à l'aide d’une portion P1, ici « Zip6c » qui reconnait l’entité de reconnaissance « Zip6 » de l’oligonucléotide, l’anticorps correspondant à la portion P2 (gauche), par liaison covalente (centre) et par liaison biotine-streptavidine (droite).
présente la mise en place des protocoles d'immunoLAMP incluant un anticorps fonctionnalisé avec l’oligonucléotide linéaire selon l’invention et différents contrôles négatifs.
présente la courbe d'amplification (fluorescence en fonction du temps) de la détection de protéines immobilisées sur billes par un anticorps fonctionnalisé avec un brin oligonucléotidique « Zip6c » puis lié à l’oligonucléotide selon l’invention par LAMP à 2 amorces. La légende correspond aux schémas de la .
I. Amplification de l’oligonucléotid e selon l’invention par LAMP à deux amorces .
Pour prouver la fonctionnalité de la LAMP à deux amorces, plusieurs séquences sont utilisées : - un oligonucléotide linéaire selon l’invention désigné M1 avec une entité de reconnaissance E1 de 40 bases constituée d’un aptamère anti-thrombine appelé « Thr1 » [ 9 ] , - un oligonucléotide linéaire selon l’invention désigné M2 avec une entité de reconnaissance E2 de 24 bases constituée d’une séquence oligonucléotidique « Zip6 », et - un haltère à double structure tige-boucle comme présenté dans [ 5, 6 ] et utilisé ici comme référence. Cet haltère est dit « minimal » car il ne contient aucune entité de reconnaissance.
Les séquences des deux oligonucléotides M1 et M2, de l’haltère minimal M3 et des amorces FIP et BIP mis en œuvre durant l’amplification LAMP sont données dans le Tableau 1 ci-après.
Plusieurs solutions des oligonucléotides M1 et M2 et de l’haltère M3 à des concentrations différentes ont été amplifiées selon le protocole d’amplification LAMP à deux amorces.
Ce protocole consiste à ajouter 2 µL de solution d’oligonucléotide ou d’haltère diluée dans un tampon contenant du PBS et du MgCl 2 (pH = 7,3) avec 18 µL de mix réactionnel comprenant : - une enzyme catalysant l’amplification, Bst DNA Polymerase par exemple, avec son tampon d’amplification associé, comme « isothermal amplification buffer (NEB) » par exemple, - des désoxyribonucléosides triphosphates (dNTP), - des sels de magnésium tels que MgCl 2 , - un colorant intercalant tel que l’EvaGreen, - de la bétaïne et - les amorces FIP et BIP telles que définies ci-après.
La gamme de calibration comparant les 3 séquences est présentée . Celle-ci représente les valeurs de cycles seuils dits « Ct » en fonction du logarithme de la concentration de la matrice d’ADN. La valeur de Ct est définie par le temps à partir duquel la valeur de fluorescence est supérieure à une valeur de fluorescence seuil.
La valide l’amplification par LAMP à deux amorces des oligonucléotides M1 et M2. Leur amplification est plus lente que la version en double boucle « haltère » i.e. M3, mais ils présentent l’avantage d’avoir une longueur de brin beaucoup plus courte, permettant une synthèse facile.
Ces oligonucléotides sont alors utilisés par la suite dans diverses configurations incluant une entité de reconnaissance pour des applications de détection.
II. Utilisation d’un oligonucléotide selon la présente invention en détection .
L’oligonucléotide M2 est utilisé en détection, car il inclut une partie entité de reconnaissance « Zip6 » permettant de s’hybrider sur la séquence complémentaire « Zip6c ». La séquence de « Zip6 » et celle de « Zip6c » sont respectivement 5'-GACCGGTATGCGACCTGGTATGCG-3’ (SEQ ID NO: 6 dans le listage de séquences en annexe) et 5’-CGCATACCAGGTCGCATACCGGTC-3’ (SEQ ID NO: 7 dans le listage de séquences en annexe).
Par rapport aux haltères utilisés en détection dans [ 5, 6] , l’oligonucléotide M2 a l’avantage d’être court et générique car pouvant s’hybrider sur tout type de sondes.
II.1. Gamme de quantification d’oligonucléotides sur billes (direct ).
La détection de brins d’ADN immobilisés sur billes magnétiques a été réalisée et a permis de montrer que l’oligonucléotide selon l’invention permet de détecter un simple brin d’ADN lorsque celui-ci est complémentaire de la séquence placée à l’extrémité 5’.
Notamment, le circuit correcteur 21 et le convertisseur 22 sont chacun aptes à fonctionner selon un mode dit « boost » dans lequel le circuit correcteur 21 et le convertisseur 22 convertissent une tension en une autre tension continue de valeur plus élevée.
Par exemple, lorsque la batterie 10 fonctionne selon le mode charge, le circuit correcteur 21 est relié à un réseau électrique. Ainsi, le circuit correcteur 21 convertit la tension alternative V AC fournie par le réseau électrique en une tension continue V DC définie sensiblement à 400 V. Enfin, le convertisseur 22 convertit la tension continue V DC en une tension continue V 10 adaptée pour recharger la batterie 10, par exemple une tension continue entre 220 V et 465 V.
A l’inverse, lorsque la batterie 10 fonctionne selon le mode de décharge, alors cela signifie que le circuit correcteur 21 est relié à un équipement électronique à alimenter. Le convertisseur 22 convertit la tension continue V 10 fournie par la batterie 10 en une autre tension continue V DC par exemple environ égale à 400 V. Enfin, le circuit correcteur 21 convertit la tension continue V DC définie sensiblement à 400 V en une tension alternative V AC apte à alimenter en énergie électrique l’équipement relié audit circuit correcteur 21.
En référence à la , il va maintenant être présenté la structure électronique détaillée du circuit correcteur 21 dans le cas où le courant caractérisant le réseau électrique ou l’équipement électrique relié au chargeur 20 est monophasé. Le réseau électrique ou l’équipement comprend donc deux bornes de connexion, dont une phase et une borne de connexion neutre.
Le circuit correcteur 21 comprend une bobine L, nécessaire au fonctionnement du mode boost du circuit correcteur 21, une première branche B1 et une deuxième branche B2.
La bobine L est connectée électriquement à une première borne de connexion d’un réseau électrique ou un équipement électrique externe au véhicule. La première borne de connexion peut être la phase ou le neutre.
La première branche B1 comprend un premier ensemble d’interrupteurs et un deuxième ensemble d’interrupteurs. Chaque ensemble d’interrupteurs comprend au moins deux interrupteurs connectés en parallèle. Afin de simplifier la description, le premier et le deuxième ensemble d’interrupteurs comprennent chacun deux interrupteurs connectés en parallèle. Ainsi, le premier ensemble comprend un premier interrupteur T1 et un deuxième interrupteur T2 connectés en parallèle entre un point haut PH et un premier point milieu PM1. Le deuxième ensemble comprend un troisième interrupteur T3 et un quatrième interrupteur T4 connectés en parallèle entre un point bas PB et le premier point milieu PM1. Le premier point milieu PM1 est connecté électriquement à une première borne de connexion du réseau électrique ou de l’équipement électrique relié au chargeur 20 via la bobine L.
Le circuit correcteur 21 comprend également une deuxième branche B2 dont la structure est semblable à celle de la première branche B1. Ainsi la deuxième branche B2 comprend un cinquième interrupteur T5 et au moins un sixième interrupteur T6 connectés en parallèle entre le point haut PH et un deuxième point milieu PM2, la deuxième branche B2 comprenant un septième interrupteur T7 et au moins un huitième interrupteur T8 connectés en parallèle entre le point bas PB et le deuxième point milieu PM2. Le deuxième point milieu PM2 est connecté électriquement à une deuxième borne de connexion du réseau électrique ou de l’équipement électrique relié au chargeur 20. La deuxième branche B2 peut également comprendre, pour chaque ensemble d’interrupteurs en parallèle, plus de deux interrupteurs en parallèle.
En référence à la , il va maintenant être présenté la structure électronique détaillée du circuit correcteur 21 dans le cas où le courant caractérisant le réseau électrique ou l’équipement électrique relié au chargeur 20 est triphasé. Le réseau électrique ou l’équipement comprend donc trois bornes de connexion et le circuit correcteur 21 comprend une troisième branche B3.
De même, la troisième branche B3 comprend une structure similaire à celle de la première branche B1. La troisième branche B3 comprend ainsi un neuvième interrupteur T9 et au moins un dixième interrupteur T10 connectés en parallèle entre le point haut PH et un troisième point milieu PM3, la troisième branche B3 comprenant un onzième interrupteur T11 et au moins un douzième interrupteur T12 connectés en parallèle entre le point bas PB et le troisième point milieu PM3. Le troisième point milieu PM3 est connecté électriquement à la troisième borne de connexion du réseau électrique ou de l’équipement. La troisième branche B3 peut également comprendre, pour chaque ensemble d’interrupteurs en parallèle, plus de deux interrupteurs en parallèle.
Ainsi, chacune des branches B1, B2, B3 comprend des interrupteurs en parallèle, permettant ainsi de répartir les pertes de commutation sur chacun des deux interrupteurs en parallèle.
La première branche B1, la deuxième branche B2 et la troisième branche B3 constituent chacune un demi-pont électronique.
Le point haut PH est par exemple relié à une tension continue comprise entre 250 V et 850 V, et le point bas PB est par exemple relié à la masse.
Microcontrôleur 30
Le microcontrôleur 30 est apte à commander l’ouverture et la fermeture de chaque interrupteur T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 du circuit correcteur 21. Pour cela, le microcontrôleur 30 est apte à émettre à chaque interrupteur un signal de commande apte à faire varier le rapport cyclique de la fréquence de commutation d’ouverture et de fermeture de chaque interrupteur.
Le microcontrôleur 30 un processeur apte à mettre en œuvre un ensemble d’instructions permettant de réaliser ces fonctions.
Par exemple dans le premier état articulaire EA 1 , représenté sur la , l’électrode de mesure 102 3 mesure une donnée de calibration VPC 3 1 représentative de sa capacité propre C P 3 1 , telle que : VPC 3 1 =f(C P 3 1 ). De manière similaire, dans le deuxième état articulaire EA 2 , représenté sur la , l’électrode de mesure 102 3 mesure une donnée de calibration VPC 3 2 représentative de sa capacité propre C P 3 2 , telle que : VPC 3 2 =f(C P 3 2 ). Ainsi, dans chaque état articulaire EA 1 et EA 2 , un jeu de calibration est mesuré, respectivement JPC 1 et JPC 2 : JPC 1 =(VPC 1 1 ,VPC 2 1 , VPC 3 1 ,VPC 4 1 ) JPC 2 =(VPC 1 2 ,VPC 2 2 , VPC 3 2 ,VPC 4 2 ) Chaque valeur de calibration mesurée par chaque électrode de mesure est représentative de sa capacité propre.
Suivant une définition générale, lorsque le dispositif de détection équipant le robot comporte N électrodes de mesure, et que la première phase de calibration est réalisée pour K états articulaires, avec K≥2, alors la phase de calibration comprend la mesure de K jeux de calibration, chacun comprenant N valeurs de calibration correspondant chacune à une électrode de mesure, et représentative de la capacité propre de ladite électrode de mesure, tel que : JPC 1 =(VPC 1 1 , ... VPC n 1 , ... ,VPC N 1 ) .... JPC k =(VPC 1 k , ... VPC n k , ... ,VPC N k ) .... JPC K =(VPC 1 K , ... VPC n K ,... ,VPC N K ) avec 1≤n≤N et 1≤k≤K. Chaque jeu de calibration JPC k est associé à un jeu de variables articulaires décrivant l’état articulaire k. Lorsque le robot comprend M articulations, chaque état articulaire k est donné par EA k =(VA 1 k ,..., VA m k ,..., VA M k ) avec 1≤m≤M. Ainsi, pour chaque état articulaire k, 1≤k≤K, la première phase de calibration mesure et mémorise : le jeu de variable articulaire EA k =(VA 1 k ,..., VA j k ,..., VA m k ) décrivant ledit état articulaire EA k , et le jeu de calibration JPC k =(VPC 1 k , ... VPC i k , ... ,VPC n k ) pour ledit état articulaire.
La représente, sous la forme d’un diagramme, les différentes étapes d’une première phase de calibration 310.
La première phase de calibration 310 comprend une étape 312 consistant à déplacer le robot dans un état articulaire, tel que par exemple l’état articulaire EA 1 représenté sur la .
Puis, lors d’une étape 314, un jeu de calibration est mesuré en interrogeant chaque électrode de mesure 102 1 -102 N , tel que décrit en référence à la par exemple. Ainsi, pour l’état articulaire EA 1 , on obtient un jeu de calibration JPC 1 comprenant N valeurs de calibration, chacune représentative de la capacité propre de l’une des N électrodes de mesure 102 1 -102 N : JPC 1 =(VPC 1 1 , ... VPC n 1 , ... ,VPC N 1 )
Lors d’une étape 316, le jeu de calibration JC 1 mesuré est mémorisé avec un jeu de variables articulaires EA 1 =(VA 1 1 ,..., VA m 1 ,..., VA M 1 ) représentant l’état articulaire EA 1 .
Les étapes 312-316 sont réitérées K fois pour mesurer et mémoriser un jeu de calibration pour K états articulaires au total, avec K≥2.