INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Les surnageants ont été recueillis. 20 µl de protéines ont été mélangées avec un tampon de charge et du DTT (Sigma) et chauffées à 90°C pendant 5 minutes. Les échantillons ont ensuite été déposés sur un gel NuPAGE 4-12% Bis-Tris (Invitrogène) et une électrophorèse a été réalisée. Les protéines ont ensuite été transférées du gel vers une membrane nitrocellulosique à l'aide du système iBlot Dry Blotting System (Invitrogen). Les sites non spécifiques ont été saturés pendant 1 heure dans une solution de lait à 5 % dilué dans le tampon TBS 1X. La membrane de nitrocellulose a été incubée pendant la nuit à 4°C dans l'anticorps primaire, dilué dans du lait. Après trois lavages de 15 minutes avec une solution à 0,05 % de Tween 20 dans TBS 1X, l'anticorps secondaire, couplé à une peroxydase, a été appliqué pendant 1 heure à température ambiante. Après une deuxième série de trois lavages de 15 minutes avec une solution à 0,05 % de Tween 20 dans le TBS 1X, la révélation des protéines a été réalisée avec du luminol (Thermo Scientific), et l'émission photonique a été lue par chimiluminescence en utilisant une caméra Sensicam associée au cabinet lumineux Multilmage (AIC).
L'intensité des bandes a été quantifiée avec le logiciel d'analyse d'images Scion.
3.6 Protocole d’immunofluorescence Les sections ont été déparaffinées et réhydratées avec plusieurs bains successifs de xylène, d'alcool et d'eau. Ensuite, un protocole de démasquage a été réalisé comme décrit pour les différentes cibles :
- pour COX-2 : exposition aux micro-ondes à 600 W dans un tampon EDTA pH 9 (Sigma) jusqu'à ébullition, suivie d'une digestion à 0,25% de pepsine (Zymed, Invitrogen) pendant 15 minutes à 37°C,
ladite plaque étant logée au moins partiellement sur le support de plaque,
au moins un module de refroidissement,
caractérisé en ce que la plaque est positionnée sur le module de refroidissement de manière à ce chaque puits de la plaque soit partiellement inséré dans ledit module de refroidissement, le corps de la plaque étant à une distance d prédéterminée du module de refroidissement de sorte à délimiter un espace entre ledit corps de la plaque et le module de refroidissement.
Cette configuration permet de limiter le refroidissement de surfaces et notamment les surfaces du corps de la plaque où la condensation peut se former et devenir problématique. En outre, comme le matériau utilisé pour la fabrication de la plaque présente une conduction thermique basse, compris entre 0,1 Wm -1 K -1 et 0,4 Wm -1 K -1 , il n’est pas nécessaire de refroidir l’ensemble de la plaque mais uniquement les zones où un échange thermique avec les réactifs est recherché c’est-à-dire une portion inférieure de chaque puits.
Selon une caractéristique de l'invention, le système comprend un joint périphérique, préférentiellement en élastomère, ménagé dans l’espace entre le module de refroidissement et du corps de la plaque, ce qui permet d’éviter la transmission de froid par convection du module de refroidissement vers la plaque et de circonscrire les zones à refroidir.
Selon une caractéristique de l'invention, l’espace formé entre le module de refroidissement et du corps de la plaque est pourvu d’un isolant thermique.
Préférentiellement l’isolant thermique est un fluide tel que de l’air, ou un joint ou une couche de mousse isolante. L’adjonction d’un isolant thermique permet d’isoler thermiquement le corps de la plaque par rapport au module de refroidissement.
Selon une caractéristique de l'invention, le système comprend une chambre à vide ménagée entre le corps de la plaque et le module de refroidissement, ce qui permet d’améliorer l’isolation thermique du corps de la plaque.
Selon une caractéristique de l'invention, le système comprend au moins un organe chauffant positionné au niveau du corps de la plaque et isolé du module de refroidissement.
Selon une caractéristique de l'invention, l’organe chauffant est un film électrique résistif. Alternativement, l’organe chauffant est une plaque en céramique ou en alliage conducteur thermique coopérant par complémentarité de forme avec la plaque et notamment avec le fond des puits.
Ainsi, le système présente deux zones distinctes présentant une température différente, la première zone étant située entre le corps de la plaque et un isolant thermique ou un joint périphérique, la deuxième zone étant située au niveau du module de refroidissement et la température dans la première zone étant supérieure à la température au sein de la deuxième zone.
L’intérêt d’une telle configuration avec deux zones distinctes, est de pouvoir à la fois maintenir les réactifs à température pour limiter leur activité biologique ou leur dégradation tout en maintenant le corps de la plaque à une température au-dessus du point de rosée.
Selon une caractéristique de l'invention, le module de refroidissement comprend une première partie configurée pour coopérer avec une portion de la plaque. Préférentiellement, la première partie du module de refroidissement coopère avec la portion inférieure de chaque puits.
Selon une caractéristique de l'invention, la première partie du module de refroidissement présente une pluralité de cavités réparties sur la surface de la première partie, chaque cavité étant conformée pour accueillir partiellement un puits de la plaque.
Selon une caractéristique de l'invention, le support comprend un logement configuré pour recevoir la plaque.
Selon une caractéristique de l'invention, le logement comprend un bord circonférentiel sur lequel repose une partie du module de refroidissement. Préférentiellement, la première partie du module de refroidissement est positionnée sur le bord circonférentiel du logement du support.
Le copolymère statistique de propylène peut avoir un indice de fluidité allant de 1,2 à 2,5 g/10 min, et de préférence allant de 1,5 à 2,5 g/10 min, mesuré à 230°C environ avec une charge de 2,16 kg environ selon la norme ASTM D1238-00.
Le copolymère hétérophasé de propylène peut avoir un indice de fluidité allant de 0,5 à 1,5 g/10 min, et de préférence allant de 0,5 à 1,4 g/10 min, mesuré à 230°C environ avec une charge de 2,16 kg environ selon la norme ASTM D1238-00.
La composition polymère thermoplastique de chacune des deux couches polymères thermoplastiques, notamment semi-conductrice et électriquement isolante, peut comporter au moins deux copolymères de propylène différents, notamment un copolymère statistique de propylène (en tant que premier copolymère de propylène) et un copolymère de propylène hétérophasé (en tant que deuxième copolymère de propylène), ou deux copolymères de propylène hétérophasés différents, lesdits copolymères de propylène étant tels que définis ci-dessus.
Lorsque la composition polymère thermoplastique de chacune des deux couches polymères thermoplastiques, notamment semi-conductrice et électriquement isolante, comporte un copolymère statistique de propylène et un copolymère de propylène hétérophasé, ledit copolymère de propylène hétérophasé a de préférence un module élastique allant de 600 à 1200 Mpa environ.
Selon une forme de réalisation de l’invention, les deux copolymères de propylène hétérophasés ont un module élastique différent. De préférence, la composition polymère thermoplastique de chacune des deux couches polymères thermoplastiques, notamment semi-conductrice et électriquement isolante, comprend un premier copolymère de propylène hétérophasé ayant un module élastique allant de 50 à 550 MPa environ, et de façon particulièrement préférée allant de 50 à 250 MPa environ ; et un deuxième copolymère de propylène hétérophasé ayant un module élastique allant de 600 à 1200 MPa environ.
Avantageusement, les premier et deuxième copolymères de propylène hétérophasés ont un indice de fluidité tel que défini plus haut.
Ces combinaisons de copolymères de propylène peuvent permettre avantageusement d’améliorer les propriétés mécaniques des couches polymères thermoplastiques, notamment semi-conductrice et électriquement isolante. En particulier, la combinaison permet d’obtenir des propriétés mécaniques optimisées des couches, notamment en termes d’allongement à la rupture, et de flexibilité ; et/ou permet de former des couches plus homogènes.
Selon une forme de réalisation préférée, le copolymère de propylène ou les copolymères de propylène lorsqu’il y en a plusieurs, représente(nt) au moins 50% en poids environ, de préférence de 55 à 90% en poids environ, et de préférence encore de 60 à 90% en poids environ, par rapport au poids total de la composition polymère thermoplastique.
Le copolymère statistique de propylène peut représenter au moins 20% en poids environ, et de préférence de 30 à 70% en poids environ, par rapport au poids total de la composition polymère thermoplastique.
Le copolymère hétérophasé de propylène, ou les copolymères de propylène hétérophasés lorsqu’il y en plusieurs, peu(ven)t représenter de 5 à 95% en poids environ, de préférence de 50 à 90% en poids environ, et de façon particulièrement préférée de 60 à 80% en poids environ, par rapport au poids total de la composition polymère thermoplastique.
La composition polymère thermoplastique de chacune des deux couches polymères thermoplastiques, notamment semi-conductrice et électriquement isolante, peut comporter en outre au moins un homopolymère ou copolymère d’oléfine autre que le propylène.
La combinaison d’au moins un homoplolymère ou copolymère de propylène avec au moins un homopolymère ou copolymère d’oléfine autre que le propylène permet d’obtenir des couches polymères thermoplastiques, notamment semi-conductrice et électriquement, présentant de bonnes propriétés mécaniques, notamment en termes de module élastique, et électriques.
L’homopolymère ou copolymère d’oléfine autre que le propylène est de préférence un homopolymère ou copolymère d’éthylène.
L’homopolymère ou copolymère d’éthylène peut être un polyéthylène basse densité, un polyéthylène moyenne densité, ou un polyéthylène haute densité, et de préférence un polyéthylène linéaire basse densité.
Les expressions « basse densité », « moyenne densité » et « haute densité » correspondent à une densité, mesurée selon la norme ISO 1183A à une température de 23°C, allant de 0,91 à 0,925 environ, de 0,926 à 0,940 environ et de 0,941 à 0,965, respectivement.
L’homopolymère ou copolymère d’oléfine autre que le propylène peut représenter de 5 à 50% en poids environ, et de préférence de 10 à 40% en poids environ, par rapport au poids total de la composition polymère thermoplastique.
L’effet de la fraction bioactive isolée de pétales de roses selon l’invention tel que préparé à l’exemple 1.1, sur la fonction barrière cutanée a été testé.
HMGB1 est une molécule centrale dans divers processus physiologiques. On la trouve localisée au niveau de la chromatine, où elle est notamment impliquée dans la modulation de l’expression de différents gènes, et en particulier de gènes impliqués dans la formation du stratum corneum et la croissance de l’épiderme. HMGB1 joue donc un rôle crucial dans la physiologie de l’épiderme et plus particulièrement dans la fonction barrière cutanée.
Capacité de la fraction bioactive isolée de pétales de roses selon l’invention à moduler l’expression de la filaggrine
Il a notamment été montré sur des modèles cellulaires de peau que la stimulation d’HMGB1 régule négativement l’expression de la filaggrine, protéine jouant un rôle essentiel dans la régulation de l’homéostasie épithéliale et activement impliquée dans la fonction barrière de la peau.
La capacité de l’extrait de pétales de rose sous forme de fraction bioactive selon l’invention à moduler l’expression de la filaggrine a été évaluée sur des biopsies de peau humaine.
- Peau humaine (biopsies selon l’Exemple 3.2) provenant de deux donneurs indépendants.
- Conditions : les biopsies ont été traitées deux fois par jour pendant 48h par les différents extraits ou solutions contrôles comme indiqué ci-après :
(1) « Contrôle » : PBS dilué,
(2) « ZF sérum » à 0.3%,
(3) « Placebo » à 3%,
(4) « Cryoextrait » à 3%.
- Méthode d’analyse : évaluation de l’expression de la filaggrine par immunofluorescence, et quantification des résultats avec Volocity selon le protocole détaillé à l’Exemple 3.6.
Les résultats de la montrent que le traitement par la fraction bioactive isolée de pétales de roses selon l’invention permet d’augmenter de façon significative (+ 49%) le niveau d’expression protéique de la filaggrine dans des biopsies de peau humaine. Aucun effet significatif n’est observé avec le cryoextrait de pétales de rose (comparatif) ou avec la solution placebo.
Exemple 5 : Effet de la fraction bioactive isolée de pétales de roses selon l’invention sur le vieillissement cellulaire
L’effet de la fraction bioactive isolée de pétales de rose sur le vieillissement cellulaire cutané a été testé.
Il est évident qu’il est possible d’assembler une ou plusieurs pièces en zircone avec un ou plusieurs éléments en titane. Par exemple, il est possible d’assembler deux pièces en zircone avec une pièce en titane. On met alors en œuvre deux brasures et les deux faces de la pièce en titane destinée à être en contact avec les deux brasures sont métallisées.
La brasure 40 est une brasure riche en or telle que de l’or pur ou un alliage d’or.
Par or pur, on entend de l’or ayant une pureté supérieure à 99% massique et de préférence supérieure à 99,5% massique.
L’alliage d’or est par exemple une brasure de composition Au3Ni0,6Ti (% massique), par exemple commercialisée sous la référence GoldABA ou une brasure AuxTi ou AuxZr avec x compris entre 0,5 et 3% massique.
La température de fusion de la brasure est inférieure à la température de fusion de l’élément en titane.
La brasure 40 est, avantageusement, sous la forme d’une feuille.
L’épaisseur de la feuille de brasure est, par exemple comprise entre 25 et 200 µm, de préférence entre 50 et 150 µm.
La brasure 40 peut également être sous la forme d’une poudre.
Lors de l’étape c) et lors de l’étape d) un outillage pour maintenir la pièce 20 en zircone, l’élément en titane 10 et la brasure 30 peut être utilisé.
Lors de l’opération de brasage (étape d), on assemble la pièce de zircone 20 avec l’élément en titane 10 par fusion de la brasure 40. On chauffe l’ensemble de façon à faire fondre la brasure. La température du palier de brasage dépend de la composition de la brasure. La température du palier de brasage est supérieure à la température de fusion de la brasure 40. Typiquement, la température du palier de brasage est supérieure à 1064°C dans le cas de l’or pur et, de préférence, inférieure à 1120°C. Dans le cas de la brasure commerciale GoldABA, le liquidus et le solidus sont, respectivement, de 1030°C et de 1003°C. La température de brasage est de préférence supérieure à 1030°C et inférieure à 1120°C.
La durée du palier de brasage est par exemple comprise entre 0 et 15 minutes, de préférence entre 30 secondes et 10 minutes.
Après le palier de brasage, l’ensemble est refroidi jusqu’à la température ambiante. La brasure se solidifie au refroidissement et les pièces sont alors liées par la brasure solidifiée.
La métallisation de l’élément 10 en titane par le niobium ne conduit pas à la formation de porosités à l’interface titane métallisé Nb/ brasure Au lors du chauffage associé au cycle de brasage, contrairement au cas de la métallisation de la zircone (interface zircone métallisée Ti+Nb / Au fragilisée par la formation de porosités lors du chauffage).
Ce procédé de brasage peut être réalisé sous vide secondaire ou sous atmosphère protectrice (gaz neutre ou atmosphère réductrice). Il est réalisé de préférence dans un four sous vide secondaire.
L’assemblage obtenu par le procédé précédemment décrit comprend successivement :
- une pièce 20 en zircone,
Une quantité accrue de cortisol au niveau de la peau est associée au vieillissement cutané et à ses effets, tels que la diminution de l’épaisseur de l’épiderme, la dégradation des fibres de collagène ou encore une réduction de la prolifération cellulaire. Une des voies de majeures impliquée dans la synthèse du cortisol passe par l’activation de l’enzyme 11β-HSD1. Dans les cellules de la peau, 11β-HSD1 augmente avec l’âge, et en lien avec une surexposition aux UV, contribue à l’apparition de dommages cutanés localisés.
Nous avons donc évalué la capacité de la fraction de pétales de rose selon l’invention à moduler l’expression de 11β-HSD1.
- Cultures cellulaires de kératinocytes humains, en milieu de culture pendant 6h.
- Conditions : les kératinocytes ont été traités une fois au cours des 6 heures de culture par les différents extraits ou solutions contrôles comme indiqué ci-après :
(2) « ZF sérum » à 0.1%,
(2) « Placebo » à 1%,
(4) « Cryoextrait » à 1%.
- Méthode d’analyse : évaluation de l’expression de 11β-HSD1 par PCR quantitative en temps réel selon le protocole détaillé à l’Exemple 3.7.
Les résultats de la montrent que le traitement des kératinocytes par la fraction bioactive isolée de pétales de roses selon l’invention permet de réduire significativement (- 28%) le niveau d’expression de 11β-HSD1, connu pour réguler le niveau de cortisol dans les cellules de la peau. Ces effets ne sont pas observés avec le cryoextrait de pétales de roses (comparatif) ni avec la solution placébo.
Ainsi, la fraction bioactive de pétales de roses selon l’invention possède un effet bénéfique sur la peau, permettant de lutter contre le vieillissement cellulaire cutané.
Exemple 6 : Effet de la fraction bioactive isolée de pétales de roses selon l’invention sur le rythme circadien
L’effet de la fraction bioactive de pétales de roses selon l’invention sur le processus rythmique des cellules cutanées a été testé. Pour cela nous avons étudié par immunofluorescence l’effet de l’extrait de pétales de roses selon l’invention sur l’expression du gène CLOCK, un facteur de transcription jouant un rôle central dans le dans la régulation de cette voie, notamment en activant plusieurs éléments de la cascade signalétique permettant la génération des rythmes circadiens.
L’éthylène ou l’oléfine α1 du copolymère de propylène et d’oléfine représente de préférence au plus 15% en mole environ, et de préférence encore au plus 10% en mole environ, par rapport au nombre de moles total de copolymère de propylène et d’oléfine.
L’oléfine α1 peut répondre à la formule CH2=CH-R 1 , dans laquelle R 1 est un groupe alkyle linéaire ou ramifié ayant de 2 à 12 atomes de carbone, notamment choisie parmi les oléfines α1suivantes : 1-butène, 1-pentène ; 4-méthyl-1-pentène, 1-hexène, 1-octène, 1-décène, 1-dodécène, et un de leurs mélanges.
Les copolymères de propylène et d’éthylène sont préférés à titre de copolymères de propylène.
Le copolymère statistique de propylène a de préférence un module élastique allant de 600 à 1200 MPa environ.
À titre d’exemple de copolymère statistique de propylène, on peut citer celui commercialisé par la société Repsol sous la référence ISPLEN ® PR230C1E.
Le copolymère de propylène hétérophasé peut comprendre une phase thermoplastique de type propylène et une phase élastomère thermoplastique de type copolymère d’éthylène et d’une oléfine α2.
L’oléfine α2 de la phase élastomère thermoplastique du copolymère hétérophasé peut être le propylène.
La phase élastomère thermoplastique du copolymère hétérophasé peut représenter au moins 20% en poids environ, et de préférence au moins 45% en poids environ, par rapport au poids total du copolymère hétérophasé.
Le copolymère de propylène hétérophasé a de préférence un module élastique allant de 50 à 1200 MPa, et de façon particulièrement préférée : soit un module élastique allant de 50 à 550 MPa environ, et de façon plus particulièrement préférée allant de 50 à 250 MPa environ ; soit un module élastique allant de 600 à 1200 Mpa environ.
À titre d’exemple de copolymère hétérophasé, on peut mentionner le copolymère hétérophasé commercialisé par la société LyondellBasell sous la référence Adflex ® Q 200 F, ou le copolymère hétérophasé commercialisé par la société LyondellBasell sous la référence Moplen EP2967.
L’homopolymère ou le copolymère de propylène peut avoir une température de fusion supérieure à 110°C environ, de préférence supérieure à 130°C environ, de façon particulièrement préférée supérieure ou égale à 140°C environ.
L’homopolymère ou le copolymère de propylène peut avoir une enthalpie de fusion allant de 20 à 100 J/g environ.
En particulier, l’homopolymère de propylène a une enthalpie de fusion allant de 80 à 90 J/g environ.
Le copolymère statistique de propylène peut avoir une enthalpie de fusion allant de 40 à 80 J/g environ.
Le copolymère hétérophasé de propylène peut avoir une enthalpie de fusion allant de 20 à 50 J/g environ.
L’homopolymère ou le copolymère de propylène peut avoir un indice de fluidité allant de 0,5 à 3 g/10 min, mesuré à 230°C environ avec une charge de 2,16 kg environ selon la norme ASTM D1238-00.
- Une calotte en aluminium d’épaisseur de 45/10 ème , est dégraissée puis grenaillée ou sablée avant de suivre un traitement de surface adapté pour éliminer les contaminants organiques. La rugosité a un Ra de l’ordre de 5 µm. Ce disque est préchauffé à une température de maxi. 100°C et utilisé pour appliquer un mélange de poudre de la torche PEEK/ SiC.
Le PEEK (Poly éther ether cétone) est fabriqué et vendu sous le nom de marque VICTREX VICOTE PEEK® 703 diamètre volumique D50 = 25 µm.
Le carbure de silicium (marque SIKA ABR I F500) de diamètre D50 = 12,8 µm.
Le procédé thermique par flamme spray est utilisé pour obtenir un dépôt discontinu du mélange des deux poudres ci-dessus en ratio massique respectivement 70/ 30 et afin de déposer une masse pour atteindre une épaisseur de cette couche de l’ordre de 60 à 80 µm.
La rugosité en 3D de la surface de la poêle grenaillée et après dépôt par flamme spray du mélange poudre PEEK/ SiC a été observée.
L’analyse de la topographie ci-dessous de cet échantillon sur une échelle de 200 µm montre une certaine macroporosité de cet échantillon, de l’ordre micronique.
La rugosité en 2D (norme ISO4287) du profil de rugosité est telle que le Ra est de l’ordre de 14 µm et le Rt de l’ordre de 90 µm.
Une calotte en aluminium d’épaisseur de 45/10 ème , est dégraissée puis grenaillée ou sablée avant de suivre un traitement de surface adapté pour éliminer les contaminants organiques. La rugosité a un Ra de l’ordre de 5 µm, l’état de surface a été décrit plus haut. Ce disque est préchauffé à une température de maxi. 260°C et utilisé pour appliquer un mélange de poudres de PEEK et de carbure de silicium en ratio massique 70/30, par un procédé par Cold Spray (Projection dynamique par gaz froid).
Le procédé thermique par cold spray est utilisé pour obtenir un dépôt discontinu de la poudre ci-dessus et afin de déposer une épaisseur de cette couche de l’ordre de 50 µm.
Alternativement, la séquence de tirs pourra avoir été définie préalablement par le praticien à l’aide du dispositif HIFU et les données correspondantes auront été transmises au système de paramétrage. Ce pourra notamment être le cas si un traitement précédent du patient a été enregistré dans le dispositif HIFU.
En tout état de cause, la zone à traiter ainsi que les tirs successifs pourront être visualisés sur l’afficheur du dispositif d’imagerie. Ce dispositif pourra être par exemple celui d’un échographe classique.
Le praticien pourra à l’aide de l’interface utilisateur définir des tirs additionnels ou supprimer des tirs programmés, modifier la position et/ou l’orientation de la sonde, régler la puissance et/ou la durée voire la fréquence de répétition des tirs etc. La séquence de tirs pourra être représentée en superposition avec l’image de la zone à traiter.
Une fois les paramètres nominaux de traitement définis (positions et orientations de la sonde, puissance et durée des tirs, fréquence ultrasonore, fréquence de répétition des tirs etc.), le module de simulation permet, comme décrit plus loin, de calculer en quasi temps réel la distribution spatiale du champ ultrasonore à chaque tir, et d’en déduire la distribution de la dose thermique dans les tissus. Cette possibilité de simulation en quasi-temps réel des effets d’une séquence de tirs est essentielle dans la mesure où elle permet un traitement en ambulatoire.