INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le soufflet 20 peut être aussi avantageusement mis sous vide durant sa fabrication : il est alors soudé sous vide à deux brides ou flasques formant les deux dits supports en forme de disques pleins, qui ferment chacun une extrémité du manchon 20 et qui sont eux-mêmes fixées, tel que par soudure également, l’un à l’élément mobile 4 2 , l’autre au fond 16 du corps creux du dispositif.
Sur la l’élément mobile 4 2 est en appui sur l’orifice d’entrée 13 qu’il ferme et sur la il est soulevé en ouvrant cet orifice 13 pour laisser passer le gaz en surpression qui a ainsi fait remonter l’élément mobile et qui s’échappe par la sortie 8.
Sur ces deux figures c’est la face externe 15 de l’élément mobile 4 qui comporte un joint d’étanchéité 10 2 au moins en forme de couronne et qui coopère, en position de fermeture de l’élément mobile 4 2 contre le bord de l’orifice 13 d’entrée 7 du gaz, avec une couronne 18 2 périphérique de section en forme de pointe 9 2 formant appui de fermeture de l’élément mobile 4, soit donc l’inverse de la disposition représentée sur les figures 1 et 2.
Sur les figures 5 et 6 il est représenté le même type de mode de réalisation que sur la avec un ressort 2 comme moyen appuyant sur la face dite interne 14 de l’élément mobile 4 suivant une force prédéterminée mais avec en plus des éléments permettant de réaliser mécaniquement au moins un vide partiel dans la chambre 3 de référence de tarage de la soupape : pour cela celle-ci ou le dispositif suivant l’invention comporte dans le fond 16 du corps creux 1 d’une part un conduit apte à faire communiquer la chambre 3 avec l’extérieur pour justement et uniquement l’opération de tirage au vide, et d’autre part une gorge périphérique dans laquelle peut être comprimé le ressort 2 afin que la face supérieure de l’élément mobile 4 1 puisse venir au plus près si ce n’est au contact de la paroi du fond 16 pour le tirage au vide.
Le procédé consiste alors à pousser vers le haut l’ensemble élément mobile 4 1 et ressort 2 en comprimant celui-ci, le bouchon d’étanchéité/herméticité 23 2 étant enlevé, puis de refermer celui-ci comme sur la (lequel bouchon restant en place en opération, aucune communication n’étant alors en effet possible avec l’extérieur de la chambre 3 quand la pression extérieure n’est pas nulle) et de ne plus retenir vers le haut l’élément mobile 4 1 : le ressort 2 va alors repousser celui-ci vers le bas jusqu’à ce que l’élément mobile 4 1 vienne en appui sur le joint 10 1 comme sur la et créer naturellement le vide à l’intérieur de la chambre 3.
Alternativement, le matériau est un alliage métallique. L’état solidifié est alors un état monobloc de l’alliage métallique et l’état non-solidifié est par exemple un état pulvérulent de l’alliage métallique.
De préférence, comme c’est le cas pour un carter d’huile 3, l’élément a une autre fonction que celle d’atténuer les nuisances sonores. Par exemple, l’élément est une pièce structurelle, par exemple remplissant une fonction de maintien.
Un mode d’exécution d’un procédé de fabrication de l’élément 10 va maintenant être décrit.
Le procédé comprend de préférence des itérations successives des étapes suivantes afin de former l’élément 10 par couches successives de matériau.
Tout d’abord, on procède à une étape de dépôt du matériau dans un état non-solidifié, suivie d’une étape de traitement du matériau pour le solidifier au moins localement.
Ainsi, on forme la première paroi 11 réalisée par le matériau dans un état solidifié, la deuxième paroi 13 réalisée par le matériau dans un état solidifié, et l’espace 12 ménagé entre la première paroi 11 et la deuxième paroi 13. Simultanément, on piège ou emprisonne du matériau dans un état non-solidifié dans l’espace 12. Par exemple, la formation de la première paroi peut être réalisée simultanément avec la formation de la deuxième paroi ce qui crée simultanément l’espace 12. Alternativement, la première paroi est réalisée avant la réalisation de la deuxième paroi. Alternativement encore, la deuxième paroi est réalisée avant la réalisation de la première paroi.
Par exemple, les formations des parois 11, 13 sont réalisées simultanément avec la formation des séparations 15 de la variante du mode de réalisation illustrée sur la . De préférence, les ouvertures ou orifices sont réalisés en ne traitant pas le matériau localement de sorte qu’il ne se solidifie pas localement.
Avantageusement, le procédé est mis en œuvre sur, ou avec, une imprimante à trois dimensions, dite imprimante 3D.
En cas de matériau de type polymère, l’état solidifié est un état polymérisé monobloc, l’état non-solidifié est un état liquide ou pulvérulent. Le traitement est de préférence une polymérisation locale, par exemple par application d’un rayonnement localement.
En cas de matériau de type alliage métallique, l’état solidifié est un état monobloc de l’alliage métallique, l’état non-solidifié est un état pulvérulent de l’alliage métallique. Le traitement est de préférence une fusion locale, par exemple par application d’un rayonnement localement.
En cas d’élément tel qu’un carter d’huile de moteur thermique de véhicule, la présence de matériau non solidifié dans l’espace abaisse la propagation du bruit du moteur, en particulier les amplitudes, une partie des vibrations et des émissions sonores étant absorbée. Le confort acoustique pour les occupants du véhicule s’en trouve amélioré. Les nuisances sonores pour le milieu environnant le véhicule sont limitées. En effet, le ou les déplacements des particules ou grains 20 notamment, ou du matériau à l’état liquide (non illustré), entre les parois 11, 13, c’est-à-dire au sein de l’espace 12, et/ou au sein de cavités 14, éventuellement entre des cavités 14 adjacentes, via des passages ménagés à travers les séparations 15, absorbe des émissions sonores.
De préférence, les deux parois 11, 13 participent ensemble à la rigidité de l’élément. La solution permet de réaliser une paroi isolante, notamment de carter, et non seulement une enveloppe de carter. Les piliers d’écartement 16 qui solidarisent les deux parois, et/ou les deux parois qui s’appuient l’une sur l’autre avec de la matière (notamment plastique), permettent d’obtenir une rigidité suffisante pour une paroi de carter.
La solution permet de prévoir du matériau apte à amortir ou atténuer des émissions sonores et/ou limiter des amplitudes sonores, sans recourir à un procédé complexe. En effet, la création des parois 11, 13 et/ou des séparations 15, et/ou des cavités 14, peut éventuellement être simultanée. Les particules laissées libres (non polymérisées, non collées) sont formées sensiblement en même temps que les parois.
L’apport de matériau non-solidifié pour l’amortissement se fait sans recourir à un procédé de remplissage. Il en résulte un procédé particulièrement simple, rapide et exempt de gaspillage de matériau.
Les particules de polymères sont particulièrement avantageuses du fait de leur faible densité, de vitesse d’ondes plus faible, et d’un grand facteur de perte par viscoélasticité. Ainsi, les particules de polymère ont une bonne capacité à dissiper de l’énergie visqueuse ce qui confère un bon amortissement structurel à l’élément.
La solution est particulièrement adaptée à un élément agencé à proximité de la source sonore. C’est notamment le cas d’un carter d’huile de moteur à combustion interne, les émissions sonores émanant en partie de la combustion au niveau du bloc moteur comprenant le carter d’huile. Les particules libres de matériau (non collées, non polymérisées) emprisonnées dans l’espace 12 et/ou les cavités 14 dans l'épaisseur du carter d'huile créent un amortissement s’opposant aux ondes acoustiques. Les ondes sont atténuées, notamment leurs amplitudes.
Les caractéristiques et avantages de l’invention apparaîtront plus clairement à la lumière des exemples de mise en œuvre ci-après, fournis à simple titre illustratif et nullement limitatifs de l’invention, avec l’appui des figures 1 à 5, dans lesquelles :
La montre des images de cytométrie de flux pour des CTEACDs humaines isolées de cellules mononucléées de sang humain issues d’un individu immunisé ayant été infecté par le virus de la grippe dans le passé, stimulées avec l’antigène de la grippe, les différentes fenêtres représentant respectivement : a/ la totalité des cellules mononucléées de sang humain (PBMCs) ; b/ les cellules individuelles, non agrégées entre elles ; c/ les cellules vivantes ; d/ les lymphocytes ; e/ les lymphocytes T CD8+ ; f/ les lymphocytes T CD8+ effectrices ; g/ les lymphocytes T CD8+ effectrices qui produisent les granules lytiques Granzyme B.
La représente un graphe montrant, pour une analyse immunologique par ELISPOT mesurant le nombre de cellules sécrétant l’IFN-gamma, la caractérisation immunologique de la fonctionnalité de cellules mononucléées de sang humain (PBMCs) et de CTEACDs humaines isolées de ces PBMCs stimulées avec l’antigène de la grippe, issues de deux individus donneurs différents convalescents ayant été infectés par le virus de la grippe dans le passé (donneur 1 et donneur 2).
La représente un graphe montrant, en fonction du temps, le % de viabilité cellulaire de CTEACDs humaines isolées de cellules mononucléées de sang humain issues d’un individu ayant été infecté par le virus de la grippe dans le passé et ayant développé une immunité contre ce virus, stimulées avec l’antigène de la grippe, le jour 0 correspond au jour d’isolement des CTEACDs après leur production.
La représente un graphe montrant le % de viabilité cellulaire in vitro pour des cellules humaines HEK293 (« HEK ») et des cellules canines MDCK (« MDCK ») infectées par le virus H1N1, 7 jours après l’infection par 103 ou 105 particules infectieuses, les cellules ayant été cultivées seules (« 103 H1N1 », « 105 H1N1 ») ou en présence, à partir de 2 jours après l’infection, de CTEACDs humaines isolées de cellules mononucléées de sang humain issues d’un individu ayant été infecté par le virus de la grippe dans le passé et ayant développé une immunité contre le virus, stimulées avec l’antigène de la grippe H1N1 (« 103 H1N1 + CTEACD », « 105 H1N1 + CTEACD ») ; « Contrôle » représente des cellules non infectées cultivées seules et « CTEACD » représente des cellules non infectées co-cultivées avec les CTEACD.
La représente des graphes montrant le % de viabilité cellulaire in vitro pour des cellules humaines HEK293 en A/ et des cellules canines MDCK en B/, ces cellules ayant été transfectées pour exprimer les antigènes S, M, N et E du SARS-Cov2, les cellules transfectées ayant été cultivées pendant 48 h seules (« T ») ou en présence, à partir de 2 jours après la transfection, de CTEACDs humaines isolées de cellules mononucléées de sang humain issues d’un individu convalescent du Covid-19, à raison de 25000 CTEACDs (« T + 25000 CTEACD ») ou de 50000 CTEACDs (« T + 50000 CTEACD ») ; « NT + 25000 CTEACD » et « NT + 50000 CTEACD » représente des cellules non transfectées cultivées pendant 48 h en présence des CTEACDs humaines isolées de cellules mononucléées de sang humain issues d’un individu convalescent du Covid-19, à raison respectivement de 25000 CTEACDs et de 50000 CTEACDs.
Exemple 1 – Production et isolement de CTEACDs humaines spécifiques d’un antigène grippal
Toutes les étapes du procédé sont réalisées à 18 à 20 °C, à l’exception de l’étape de culture cellulaire, et en conditions aseptiques.
1.1/ Isolement et stimulation des PBMCs à partir de sang périphérique humain
Matériel Prélèvements de 30 ml (4 x 7,5 ml) de de sang périphérique de deux donneurs humains sains convalescents ayant été infectés par le virus de la grippe par le passé, dans des tubes à prélèvement Vacutainer® contenant de l’EDTA Tubes UNI-SEP et UNI-SEPMAXI, UNI-SEP+ et UNI-SEPMAXI+ (Eurobio) Solution saline tampon de Hanks (10x) (Eurobio) NaHCO 3 (Eurobio) Sérum de veau fœtal SVF (Eurobio) Tampon phosphate salin PBS 1X (Eurobio) acide éthylènediaminetétraacétique EDTA à partir d'une solution mère à 500 mM, pH = 7,8 stérilisé à l'autoclave Solution de lyse érythrocytaire 10x (BD Biosciences) Bleu de trypan filtré Eau distillée stérile Tubes Falcon® stériles de 50 et 15 ml (Dutscher France) Centrifugeuse de culture tissulaire Hettich® ROTINA 420 / 420R Milieu de culture cellulaire AIM-V® (Gibco, Fisher)
Isolement des PBMCs On utilise du sang périphérique d’adulte humain prélevé dans l'EDTA. 25 mL de sang sont dilués avec un volume égal de tampon Hanks 1X + 1% EDTA 0,5M. Le sang dilué est transféré dans un tube UNI-SEP, qui est fermé et centrifugé (à 18-20 °C) à 3000 tr/min pendant 20 min (accélération = 9 / décélération = 0). Les tubes sont retirés de la centrifugeuse et transférés dans un poste de sécurité biologique classe II. La couche de cellules mononucléées est récoltée à l'aide d'une pipette et la suspension cellulaire est transférée dans un nouveau tube Falcon®. Dix ml de plasma riche en plaquettes sont récoltés dans des tubes fermés et stockés à -20 °C. La suspension de cellules mononucléées est diluée avec un volume de Hanks 1x + EDTA 5mM puis centrifugée à 3000 tr/min, à 20 °C pendant 10 min (accélération = 9 / décélération = 9). Le surnageant est éliminé, et le culot de PBMCs est remis en suspension dans 20 mL de solution contenant du PBS 1X et de l’EDTA 5 mM. La suspension est centrifugée à 3000 tr/min, à 20 °C pendant 10 min accélération = 9 / décélération = 9). Le surnageant est éliminé et le culot cellulaire, contenant les PBMCs, est remis en suspension dans 10 ml de solution contenant du PBS 1X et d’EDTA 5 mM.
La concentration / quantité de cellules dans la suspension cellulaire obtenue est déterminée par comptage sur une cellule de Malassez. A cet effet, 10 µl de suspension cellulaire sont mélangés avec 10 µL de bleu de trypan préalablement filtré, et le mélange est transféré dans la chambre de Malassez. Le comptage est réalisé sous microscope sur 5 carrés in dépendants pris au hasard et le total est divisé par 5. Etant donné que chaque carré représente 0,01 µL, le nombre de cellules par carré est multiplié par 10 5 pour avoir le nombre de cellules par mL selon la formule suivante : Concentration (cellules / ml) = (nombre de cellules x 10 5 ) x 2 / 5
La congélation des cellules est réalisée comme suit : centrifugation de la suspension cellulaire à 3000 tr/min, 20 °C pendant 10 min (accélération = 9 / décélération = 9) ; élimination du surnageant ; remise en suspension dans X mL de milieu SVF (10 millions de cellules dans 2 mL de volume final) (X = 9/10 ème du volume pour avoir 5x10 6 cellules/ml - 1/10 du volume est du DMSO ajouté goutte à goutte aux cellules sous agitation douce). Les suspensions cellulaires sont immédiatement refroidies dans de la glace avant transfert à -80 °C.
Stimulation des PBMCs 10 millions de cellules PBMCs fraîches récemment isolées ou décongelées sont introduites dans un tube conique en polypropylène de 15 ml. Les cellules sont centrifugées à 1500 tr/min, à température ambiante, pendant 10 min et le surnageant décanté. Les cellules sont remises en suspension dans 5 ml d'AIM-V® (cellules non colorées). 1 ml de cellules sont aliquotées dans 3 puits d’une plaque à 96 puits profonds et 0,5 ml de cellules sont aliquotées dans 4 puits de la plaque. Sont ajoutés dans chaque puits : de la concanavaline A (Con-A à 2 μg/ml) ou 15 μL des antigènes du vaccin grippal Vaxigrip (vaccin grippal à virion fragmenté quadrivalent inactivé injectable contenant 2 souches de type A (H1N1 et H3N2) et 2 souches de type B (lignées Yamagata et Victoria)), à raison de 15 mg d’hémagglutinine pour chaque souche. La plaque est placée dans un incubateur pour culture de cellules pendant 48-72 h à 37 °C, 5% de CO 2 . Les cellules sont par la suite utilisées pour la purification des CTEACDs.
1.2/ Purification des CTEACDs humaines
Matériel Microbilles magnétiques greffées par un anticorps anti-CD45RO (Miltenyi, réf. 130-046-001) Microbilles magnétiques greffées par un anticorps anti-CD27 (Miltenyi, réf. 130-051-601) Compteur de cellules à fluorescence automatisé LUNA-FL® (Dutscher) Tubes de prélèvement de 5 ml en polystyrène SIMPT415-6 (VWR) Séparateur MidiMACS® (Miltenyi Biotec) Colonne LS pour séparation magnétique (Miltenyi Biotec, réf 130-042-401).
Le premier module de calcul 64 calcule alors à partir d'au moins un point choisi 78 accessible à l'aéronef, une pluralité de courbes d’iso-déplacement 79, 80, 81 correspondant chacune à un déplacement de l’aéronef à un palier de vol distinct (par exemple FL300, FL350, FL400), après un ou plusieurs incréments de déplacement.
Avantageusement, comme décrit dans EP3715786, le premier module de calcul 64 détermine ensuite sur la base des courbes d’iso-déplacement 79, 80, 81 obtenues à un même intervalle de déplacement correspondant à plusieurs incréments de déplacement à différents paliers de vol FL300, FL350, FL400, au moins une courbe d’iso-déplacement étendue 83, maximisant le déplacement effectué à partir du point géographique d’origine 18 ou minimisant le déplacement à effectuer vers le point géographique de destination 20.
Le premier module de calcul 64 calcule alors au moins une trajectoire optimale 64A entre le point d'origine 18 et le point de destination 20 sur la base de courbes d’iso-déplacement 79, 80, 81 et éventuellement, sur la base des courbes d’iso-déplacement étendues 83.
Le premier module de calcul 64 établit au moins chaque courbe d’iso-déplacement 79, 80, 81 sur un incrément de temps prédéterminé à partir du point choisi, en tenant compte de la vitesse air choisie, du contexte météorologique, des performances avion déterminées par les fonctions de calcul de consommation instantanée de carburant et de variation de la masse avion instantanée et de détermination des niveaux de vol atteignables décrites plus haut, et des spécifications opérationnelles définies par le module d’initialisation 58.
Le premier module de calcul 64 est propre à sélectivement exclure les points qui sont situés dans les zones ou niveaux de vol interdits 24, dans les zones 28 de phénomènes météorologiques dangereux et/ou dans les zones de turbulences 30. Le module de calcul 24 est propre à exclure également les points qui ne seraient pas situés dans une zone de couverture satellite 32.
Le premier module de calcul 64 détermine chaque point de la trajectoire optimale 64A de manière non contrainte par un réseau de points de passage 53A et/ou de trajectoires 53B imposées entre les points de passage 53A.
En référence à la , la trajectoire optimale 64A est déterminée de préférence à partir du point géographique de destination 20, ou d’un point de début de descente vers le point 20, en remontant les courbes d’iso-déplacement 80 au niveau de vol final FL350 ayant permis d'atteindre en premier le point géographique de destination 20 ou le point de début de descente, jusqu'au point 87A de la courbe d’iso-déplacement étendue 83 correspondant au dernier intervalle de déplacement composé de plusieurs incréments d’iso-déplacement. Ceci définit une première section de trajectoire 88A
La trajectoire optimale 64A et la masse correspondant de l’aéronef au décollage sont obtenues.
Dans cet exemple, des courbes d’iso-déplacement 79, 80, 81 sont des courbes isochrones telles que définies plus haut. Chaque incrément de temps est par exemple compris entre 1 minute et 1 heure, notamment entre 2 minutes et 10 minutes, par exemple 5 minutes. Chaque intervalle de temps entre deux courbes d’iso-déplacement étendues 83 est alors défini avantageusement par au moins 3 incréments de temps, notamment par entre 4 et 20 incréments de temps.
Comme précisé plus haut, la trajectoire optimale 64A est obtenue à chaque itération de manière non contrainte par le réseau de points de passage 53A et/ou de trajectoires 53B imposées entre les points de passage 53A.
Eventuellement, à chaque itération, comme illustré sur la , le module de définition 63 définit avantageusement la région d’optimisation 63A de la trajectoire autour de la trajectoire optimale 64A en fonction d’une distance latérale prédéterminée à chaque point de la trajectoire optimale 64A définie par le premier module de calcul 64 et en fonction des spécifications opérationnelles de mission, notamment du contexte de mission, en particulier des contraintes de navigation, des contraintes météorologiques, et des contraintes de confort passager.
Avantageusement, le module de définition 63 délimite latéralement la région d’optimisation 63A de la trajectoire 64A par des limites latérales s’étendant latéralement à une distance choisie en fonction de la densité du réseau aérien de chaque point de la trajectoire optimale 64A.
Ensuite, comme illustré par la , l’application de définition 92 charge les coordonnées de points de passage 53A et de trajectoires 53B imposées entre les points de passage 53A à partir de la base de données 52, au sein de la région d’optimisation 63A.
L’application de définition 92 définit, parmi les points de passage 53A, les nœuds 96 qui sont les points de passage 53A possibles pour l’aéronef en tenant compte notamment des contraintes de mission, en particulier des contraintes de navigation, des contraintes météorologiques, et des contraintes de confort passager.
L’application de définition 93 définit en outre le coût associé au passage entre deux nœuds adjacents 96 sur la base de la distance géographique séparant les deux nœuds 96, et également du contexte météorologique récupéré à partir du module 60, et éventuellement du contexte avion, par exemple le type et l’âge des moteurs, récupéré à partir du module d’initialisation 58.
L’application de détermination 98 de la trajectoire optimisée 65A met ensuite en œuvre un algorithme de minimisation du coût pour définir la trajectoire la moins coûteuse passant par les nœuds 96 et par les trajectoires imposées entre les nœuds 96, depuis le point géographique d’origine 18 jusqu’au point géographique de destination 20. Cet algorithme est par exemple par un algorithme de Dijkstra. Une trajectoire optimisée 65A est alors obtenue en minimisant le coût, comme décrit dans la demande de brevet n°1800734.
une molécule organique de masse moléculaire inférieure à 2000 Da, telle qu’un acide aminé, l’oligonucléotide étant un aptamère spécifique de ladite molécule organique ; ou l’ion mercurique Hg 2+ , l’oligonucléotide étant un ADN riche en thymine non structuré et spécifique de l’ion mercurique Hg 2+ ; ou un peptide, l’oligonucléotide étant un aptamère spécifique du peptide.
L’invention porte également sur une composition en phase aqueuse de détection d’un analyte cible dans un échantillon, caractérisée par le fait que la composition comprend du bleu du Nil, un sel capable de s’agréger au bleu du Nil et un oligonucléotide spécifique de la cible.
Le bleu du Nil peut être présent dans la composition à une concentration 10 à 80 µmol/L, de préférence de 45 à 55 µmol/L.
Le sel capable de s’agréger au bleu du Nil peut être du chlorure de sodium ou du chlorure de potassium et peut être présent dans la composition à une concentration de 50 à 1000 mmol/L, de préférence de 150 à 500 mmol/L dans la composition.
Le pH de la composition peut se situer entre 6 et 8, le pH étant réglé par un tampon choisi parmi le tampon MES et le tampon Hepes.
La composition peut comprendre un co-solvant organique, notamment choisi parmi les solvants polaires tels que le méthanol, l’éthanol, l’acétonitrile, en particulier à raison de 10 % en volume de la composition totale.
Dans le cas de la détection d’une molécule organique de masse moléculaire inférieure à 2000 Da, telle qu’un acide aminé, l’oligonucléotide est un aptamère spécifique de ladite molécule organique.
Dans le cas de la détection de l’ion mercurique Hg 2+ , l’oligonucléotide est un ADN riche en thymine non structuré et spécifique de l’ion mercurique Hg 2+ .
Dans le cas de la détection d’un peptide, caractérisée par le fait que l’oligonucléotide est un aptamère spécifique du peptide.
La présente invention porte également sur l’utilisation de la composition telle que définie ci-dessus pour la détection d’un analyte cible choisi parmi les molécules organiques de masse moléculaire inférieure à 2000 Da, telles que la tyrosinamide ou l’ochratoxine A, les ions tels que l’ion mercurique Hg 2+ , les peptides tels que l’arginine vasopressine.
Les exemples ci-dessous illustrent la présente invention sans toutefois en limiter sa portée.