INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'acide bicinchoninique (BCA) sous forme de sel de sodium soluble en milieu aqueux réagit de façon stable, sensible et hautement spécifique avec les ions cuivreux. Les protéines réagissent avec les ions cuivriques en milieu alcalin pour produire des ions cuivreux. Deux molécules de BCA réagissent avec un ion cuivreux pour former un complexe violet qui montre un pic d'absorption à 562 nm.
B) Mode opératoire
Une gamme d'étalonnage (0-2 mg/ml) est réalisée à partir d'une solution de sérum albumine bovine. 20 μl de chaque point de la gamme d'étalonnage ou d'échantillon sont placés dans des puits d'une plaque de 96 puits, en duplicat. 200 μl de réactif de Pierce sont ajoutés et la plaque est incubée pendant 30 minutes à 37°C. L'absorbance est lue immédiatement à 550 nm (spectrophotomètre MultiSkan FC, Thermo).
La gamme permet de tracer une droite d'étalonnage à partir de laquelle la concentration en protéines des échantillons est déterminée. Les résultats sont exprimés en mg de protéines/ml.
6) Calculs et analyses statistiques
Les valeurs sont exprimées en pourcentage par rapport au témoin plus ou moins l’erreur-type de la distribution des moyennes (sem). Une analyse de variance à un facteur est réalisée, suivie si nécessaire d'un test de Fisher. Les significativités ne sont retenues que lorsque p<0,05.
II. Résultats
1) Cytotoxicité actifs seuls
L’actif 7 (acide cholorogénique) n’entraîne aucune modification de la viabilité cellulaire par rapport au témoin, quelle que soit la concentration.
L’actif 9 (baïcaline) entraîne une diminution significative de la viabilité cellulaire à partir de 50 μM par rapport au témoin, notamment pour les concentrations de 75 et 100 μM où la diminution est très importante.
Tableau 2 : Acide Chlorogénique Concentration (μM) Viabilité (%/Tém) Sem Tem 100 3,23 0,5 95,14 3,70 0,75 98,62 2,66 1,0 94,89 3,27 2,5 100,93 4,43 5,0 101,75 3,35 7,5 92,30 2,57 10,0 89,63 2,33 25,0 100,28 3,06 50,0 99,64 2,57 75,0 103,28 3,47 100,00 100,41 2,95
EXEMPLES EXEMPLE 1 : EXEMPLES DE REALISATION D’UN DISPOSITIF DE L’INVENTION ET SA MISE EN OEUVRE
Principe général de l’enceinte du dispositif de l’invention en action sur la conjonctive ( ) :
A gauche de la , l’enceinte du dispositif de l’invention est appliquée sur l’œil.
A droite de la , la dépression générée à l’intérieur de l’enceinte a provoqué une « bulle » de succion / excroissance de l’œil au travers de la fenêtre, c’est-à-dire une bulle dont la surface est le tissu conjonctival et ‘intérieur le liquide interstitiel.
La dépression à l’intérieur de l’enceinte va créer du fait de la différence de pression avec l’extérieur, une force (Pext) appliquée sur l’enceinte en direction de l’œil au niveau des zones de contact (joint) de l’enceinte avec la surface de l’œil, et symétriquement, il va y avoir une surpression (Pint) de l’intérieur de l’œil au niveau de la fenêtre poussant vers l’intérieur de l’enceinte. La combinaison de ces deux forces contraires va générer l’excroissance de l’œil ( i.e. une bulle dont la surface extérieure est le tissu conjonctivale et l’intérieur le liquide interstitiel) au travers de la fenêtre.
Illustration de l’usage du dispositif de l’invention sur la conjonctive ( ) :
Le moyen de prélèvement, le moyen de dépression et l’enceinte font partie du dispositif de l’invention. Ce dernier comprend un corps tubulaire à 3 étages, ayant des parois creuses. Sa partie inférieure, définissant le 1 er étage, est appliquée sur la conjonctive, et a une face supérieure comprenant une partie centrale hermétique et une partie périphérique communiquant avec les parois du 2 ème étage. Ce 2 ème étage comprend des parois creuses d’une épaisseur supérieure aux parois du 1 er étage communiquant avec les parois et l’intérieur du 1 er étage. Le centre de ce 2 ème étage possède un réservoir tubulaire pouvant coulisser de manière hermétique le long des parois, traversé sur sa face inférieure par une aiguille et prolongé en haut par un bras. La pression du 2 ème étage est P2 ème étage comprend des conduits communiquant avec les parois du 2 ème étage et, à son sommet, une lamelle étanche coulissante, traversée en son centre par le bras issu du réservoir sans que l’air puisse passer à cet endroit.
La séquence d’utilisation de ce dispositif est la suivante : après avoir appliqué le bas du dispositif (surface proximale) sur la conjonctive, la lamelle étanche du 3 ème étage est coulissée de manière à créer une dépression dans les parois et à l’intérieur du 1 er étage (via la communication d’air entre les parois des 1 er et 2 ème étages et les conduits du 3 ème étage). Cette dépression P1, crée une « bulle » de succion à la surface de l’œil et est telle que P2 er étage et perce la « bulle » de succion, provoquant le prélèvement de liquide interstitiel. Une fois que le prélèvement a eu lieu, le retrait du dispositif peut être effectué en rabaissant le 3 ème étage, ce qui annule la dépression.
A gauche de la , le dispositif de l’invention est apposé sur l’œil. Le 1 er étage servant d’enceinte a des parois creuses et une fenêtre.
Au milieu de la , l’élévation du 3 ème étage crée, via un réseau de parois creuses et de conduits, une dépression dans le 1 er étage (intérieur et parois) qui sert d’enceinte. Cette élévation peut être rendue aisée via des anses servant de support aux doigts de l’opérateur qui de l’autre main tient le corps du dispositif. Il y a alors formation de la bulle de succion.
A droite de la , la pression sur le bras pousse le réservoir et l’aiguille au travers de la bulle de succion. Du fait de la différence de pression entre le 1 er étage et le réservoir, il y a aspiration du liquide interstitiel contenu dans la bulle de succion vers le réservoir.
Dispositif orthopédique à came pour une articulation Domaine technique de l’invention La présente invention concerne un dispositif orthopédique destiné à équiper une articulation, notamment une articulation de genou.
Le domaine technique est celui des prothèses et dispositifs articulaires, qui nécessitent des techniques particulières du fait de la complexité de l’articulation qui doit en particulier garder sa liberté de mouvement dans un plan sagittal tout en assurant le support du poids du corps.
Arrière-plan technique Les articulations telles que l’articulation du genou ou l’articulation de la cheville sont très sollicitées. Elles peuvent subir des dégradations en particulier au niveau des cartilages recouvrant le condyle fémoral et le plateau tibial à la suite d’un accident mécanique, en raison d’une usure et/ou en raison du développement d’arthrose. Il a donc été développé depuis de nombreuses années différents types de prothèses et dispositifs pour tenter de remédier à ces dégradations en remplaçant les surfaces naturelles abîmées par des implants artificiels.
Ces dispositifs, qui visent à remplacer complètement l’articulation du genou, nécessitent une opération chirurgicale très lourde pour le patient. De plus ce type d’opération est irréversible.
Alternativement il a été proposé, par exemple par le document EP2585001B1, des dispositifs de prothèse implantables comportant au moins deux pièces d’appui non reliées l’une à l’autre, l’une étant apte à être fixée du côté du tibia et l’autre du côté du fémur. Les deux pièces d’appui se trouvent alors positionnées latéralement et extérieurement par rapport à l’articulation du genou, avec une mobilité de l’une par rapport à l’autre suivant un plan sagittal, sur un des côtés, par exemple le côté extérieur du genou.
La figure illustre une réalisation possible particulière de l’invention, au travers d’un assemblage (41), comportant des sous-armatures (33) assemblées avec des sous-armatures (32), l’ensemble étant maintenu par des dispositifs de maintien (38a) et (38b). L’ensemble est monté sur un axe support optionnel (30). Dans une réalisation préférentielle, le diamètre interne (Da1) de la culasse (5), et le diamètre interne (Da2) de la sous-armature (33), sont sensiblement égaux. Dans une réalisation possible particulière, le diamètre (Da2) peut être légèrement plus petit que le diamètre (Da1), de telle sorte que les sous-armatures (33) soient insérées en force sur l’axe support optionnel (30), et les culasses (5) soient insérées en glissant sur ledit axe support optionnel (30). De façon symétrique, une autre réalisation possible particulière se traduit par une insertion en force des culasses (5) et libres pour les sous-armatures (33). Dans une autre réalisation possible, les culasses (5) et les sous-armatures (33), peuvent glisser librement sur l’axe support (30), ou dans une dernière réalisation possible, lesdites culasses (5) et sous-armatures (33), peuvent être insérées en force sur l’axe support optionnel (30).
La figure illustre pour une réalisation possible particulière de l’invention, un assemblage provisoire, non-utilisé, des sous-armatures (33) sur l’axe support optionnel (30).
La figure illustre pour une réalisation possible particulière de l’invention un assemblage partiel (43) du circuit magnétique, où des sous-armatures (33) sont assemblées avec les culasses (36) sur un axe support optionnel (30). Lesdites sous-armatures (33) séparent les culasses (36) dans la direction axiale (z). Dans cet assemblage partiel (43), un dispositif d’isolation (21) recevant un bobinage (20) est inséré sur un groupe de dents (4) des sous-armatures (33).
La figure illustre pour une réalisation possible particulière de l’invention un assemblage final (44) du circuit magnétique, où les sous-armatures (32) et (33) sont assemblées sur un axe support optionnel (30), et reliées par des dispositifs de maintien (38a) et (38b), traversant respectivement dans les trous (37a) et (39a) d’une part, et d’autre part traversant les trous (37b) et (39b), des sous-armatures (32) et (33).
La figure illustre pour une réalisation possible particulière de l’invention, un assemblage (45) non-utilisé, des sous-armatures (33) sur l’axe support optionnel (30), avec les dispositifs de maintien (38a) et (38b) mis en place.
La figure illustre pour une réalisation possible particulière de l’invention, un exemple du procédé d’insertion d’un dispositif d’isolation (21) recevant une bobine (20) sur une dent (4) d’une sous-armature (33), puis l’insertion d’une dent amovible (31) sur l’ensemble ainsi formé (44).
La figure illustre pour une réalisation possible particulière de l’invention, les dimensions servant au calcul d’une position optimale des trous de maintien (39a) et (39b) des sous-armatures (33).
La figure illustre pour une réalisation possible particulière de l’invention, les dimensions servant au calcul d’une autre position optimale des trous de maintien (37a) et (37b) des dents amovibles (31).
La figure illustre pour une réalisation possible particulière de l’invention, les dimensions servant au calcul d’une autre position optimale des trous de maintien (37a), (37b), (39a) et (39b).
La figure décrit une première réalisation possible de la forme et de l’assemblage d’un appendice (34) et d’un orifice (35) de formes circulaires complémentaires.
La figure décrit une deuxième réalisation possible de la forme et de l’assemblage d’un appendice (34) et d’un orifice (35) de formes coniques complémentaires.
La figure décrit une première réalisation possible (47a) de la forme et de l’assemblage (46) de l’état de l’art, illustré à la figure , où l’armature (2) est remplacée un assemblage de sous-armatures (32) et (33) de l’invention. La sous-armature (33) n’est pas représentée sur la figure , afin de mettre en évidence les emmanchements circulaires (35a) des dents amovibles (31) sur la culasse (5).
La figure décrit une deuxième réalisation possible (47b) de la forme et de l’assemblage (46) de l’état de l’art, illustré à la figure ,où l’armature (2) est remplacée par un assemblage de sous-armatures (32) et (33) de l’invention. La sous-armature (33) n’est pas représentée sur la figure , afin de mettre en évidence les emmanchements coniques (35b) des dents amovibles (31) sur la culasse (5).
Dans l’invention telle que décrite, les différentes dimensions de l’armature (2) et des sous-armatures (32) et (33), autre que celles explicitées dans la description de l’invention, répondent aux règles de l’art connu, et n’interviennent pas dans la description de l’invention. L’homme de l’art est libre de choisir les différentes dimensions et formes qu’il souhaite pour la configuration optimale des sous-armatures.
L’invention telle que décrite s’applique de façon préférentielle à une machine électrique tournante, mais elle s’applique de façon non-exclusive à toute machine non-tournante et/ou non-électrique. L’homme de l’art saura transposer les éléments donnés dans la présente invention, aux machines non-tournantes, qu’elles soient électriques ou non.
L’invention telle que décrite s’applique à toute forme, dimension, et/ou profil de dent (4) et de champignon (3). L’homme de l’art saura adapter la description de la présente invention à d’autres configurations.
- C1 : concentration la plus forte
- C2 : dilution au 1/2
- C3 : dilution au 3/4
Le mélange codé M41 correspond au mélange des produits GPCB07 et GPCB09.
3) Culture et traitement des fibroblastes
A) Culture cellulaire
A confluence, les fibroblastes sont trypsinés et ensemencés dans des plaques 6 puits à raison de 0,08.106 cellules par puits dans du DMEMc 10% SVF. Après 24 heures de culture, le milieu est remplacé par du DMEMc 1% SVF.
B) Traitement des monocouches
Après 24 heures de culture, 2 ml de milieu avec ou sans actif sont ajoutés. Les actifs sont dilués aux concentrations choisies suite aux tests de cytotoxicité dans du milieu de culture DMEMc 1% SVF.
C) Prélèvements
Après 48 heures de culture en présence des actifs, le surnageant est prélevé sur antiprotéase (10%). Les aliquots sont conservés à -80°C jusqu'aux dosages. Les monocouches cellulaires sont lavées avec du PBS et 500 μl de NaOH 0,1N sont ajoutés. Le lysat cellulaire est conservé à -20°C jusqu'au dosage des protéines.
4) Dosage de l'acide hyaluronique
La quantité d'acide hyaluronique des différents échantillons est déterminée par dosage ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) à l'aide d'un kit TECO®. Ce kit est un dosage sandwich sensible qui utilise d’une part des microplaques recouvertes par la protéine de liaison de l’acide hyaluronique (HABP) et d’autre part la protéine de liaison HABP conjuguée à HRP pour la détection. La protéine de liaison HABP conjuguée à HRP se lie à l’acide hyaluronique contenu dans l’échantillon, puis réagit avec le substrat. L’intensité de la couleur est proportionnelle au taux d’AH contenu dans les échantillons
100 μl de standard ou 100 μl d'échantillons dilués au 1/50ème sont déposés dans chaque puits. La plaque est incubée 2 heures à température ambiante, sous agitation. Après lavage de la plaque, 100 μl de conjugué HRBP-HRP sont déposés dans chaque puits. La plaque est incubée 30 minutes à température ambiante, sous agitation. Après lavage des puits, 100 μl de substrat TMB sont ajoutés. La plaque est incubée 30 minutes à température ambiante, à l'obscurité et sous agitation. La réaction est stoppée par l'ajout de 100 μl de solution stop par puits. La lecture des densités optiques est immédiatement effectuée à 450 nm.
Ainsi pour surmonter cette difficulté d’administration, de nombreuses compositions topiques pour augmenter le taux d’AH dans la peau sont proposées.
Par exemple, EP2868313 divulgue une composition pour application topique cosmétique et/ou dermatologique comprenant l'association d'acide hyaluronique de faible poids moléculaire et d'acide ascorbique, et optionnellement d'un oligosaccharide.
US-2011/0003020 décrit une composition pour application topique permettant de traiter le vieillissement de la peau. Cette composition comprend une quantité pharmaceutiquement efficace d'estradiol (i.e. oestradiol), d'estriol (i.e. oestriol), d'acide hyaluronique et d'un extrait de thé vert, et optionnellement d'une quantité efficace d'acide ascorbique.
FR3084592 décrit une composition comprenant de l’AH pour lutter contre l'ensemble des signes de l'âge (rides, perte de fermeté, élasticité, perte d'éclat...) en stimulant la régénération cellulaire.
Toutefois, lorsque ces solutions passent par un enrichissement en AH par un apport direct de celui-ci, ces solutions ne permettent alors pas une stimulation de la synthèse naturelle d’AH. Ceci peut ainsi résulter en une augmentation de la dépendance vis-à-vis de ces compositions (topiques) pour compenser le manque d’AH, qui est de moins en moins synthétisé de manière naturelle.
Il manque ainsi, dans l’état de la technique, une variété de solutions permettant d’inhiber la dégradation de l’AH ou en stimulant sa synthèse, voire de combiner les deux approches pour amplifier l’effet.
L’objectif de la présente invention est de proposer une composition permettant de remédier à ce manque.
L’objet de la présente invention concerne donc une utilisation cosmétique de la baïcaline ou dérivé de celle-ci, optionnellement en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci, dans la synthèse cellulaire d’acide hyaluronique, en particulier au niveau cutané.
L’objet de la présente invention concerne également une composition comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci, optionnellement en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci, pour son utilisation dans la synthèse cellulaire d’acide hyaluronique et/ou dans une réponse immuno-cutanée.
L’objet de la présente invention concerne ainsi une composition comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci.
L’objet de la présente invention concerne en outre l’utilisation cosmétique d’une composition comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci, selon l’invention, pour améliorer l’aspect général de la peau.
L’objet de la présente invention concerne également une composition cosmétique comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci.
L’objet de la présente invention concerne également un complément alimentaire comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci, plus particulièrement en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci .
L’objet de la présente invention concerne en outre une composition comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci pour son utilisation comme médicament.
La baïcaline est une molécule naturelle que l’on rencontre dans certaines plantes comme Scutellaria baicalensis Georgi. Sa structure est la suivante (I) :
[Tableau 2]
Effet du dérivé de la tyrosine selon l’invention sur la production de mélanine et de l’activité tyrosinase par des cellules B16 de souris (n=4) : Mélanine (µg / 10 6 cell.) Variation (%); significativité Tyrosinase (U/1000µg protéine) Variation (%); significativité Contrôle 136+/-2,8 Référence 2,5 +/- 0 Référence 5,5 ppm du dérivé de la tyrosine selon l’invention 171,1+/-2,3 +26% ; p 2,8 +/- 0 +9,7% ; p 11 ppm du dérivé de la tyrosine selon l’invention 220,7+/-8,7 +62% ; p 3,1 +/- 0 +20,5% ; p
La tyrosinase est la première enzyme dans la chaine de la mélanogenèse, elle transforme la tyrosine en DOPA-quinone. Les résultats montrent que la production de mélanine et l’activité tyrosinase par des cellules B16 de souris sont fortement augmentées grâce au dérivé selon l’invention en l’absence d’induction UV.
Ces deux tests démontrent l’activité pro-pigmentante d’un dérivé de la tyrosine selon l’invention, et l’utilisation cosmétique ou cosméceutique pouvant en découler.
b) Comparaison de l’ o leyl tyrosine vs . le dérivé de la tyrosine selon l’invention
Protocole Les tests ont été réalisés sur des MNH, le protocole est identique à celui-ci-dessus.
Résultats A 16ppm, le dérivé de la tyrosine selon l’invention induit une augmentation de la pigmentation de ces cellules de 52% ( p , 01 vs . contrôle) alors que 16ppm d’oleyl tyrosine induit une variation de 9% ( dns vs . contrôle).
Avec environ 3 fois plus d’oleyl tyrosine appliqué sur les cellules, on atteint +35% de pigmentation des MNH ( p . contrôle).
A concentration équivalente, le dérivé de la tyrosine selon l’invention est donc plus actif que l’oleyl tyrosine. Il faut environ 3 fois plus d’oleyl tyrosine pour avoir un effet équivalent au dérivé de la tyrosine selon l’invention.
c) Augmentation de la p hagocytose des kératinocytes
Protocole Des kératinocytes humains normaux (KHN) ont été ensemencés et, une fois à 50% de sub-confluence, ont reçu le dérivé de la tyrosine selon l’invention, ou son solvant, à différentes concentrations pendant 24h. A l’issue de cette période, les cellules ont reçu les microbilles fluorescentes mimant les mélanosomes pendant 3h. Les cellules ont ensuite été rincées pour retirer l’excès de microbilles, et les tapis sont visualisés sous microscope à fluorescence afin de quantifier la phagocytose. La concentration cellulaire a été estimée à l’aide de la méthode Hoescht.
Résultats [Tableau 3]
Effet du dérivé de la tyrosine selon l’invention sur la phagocytose des KHN (n=4) : Phagocytose (µbilles: (Total Area /1000)) Variation (%); significativité Contrôle 3864+/-582 Référence 5,5 ppm du dérivé de la tyrosine selon l’invention 6599+/-1115 +71% ; p 11 ppm du dérivé de la tyrosine selon l’invention 9910+/-1161 +129% ; p
Les résultats montrent que la phagocytose des kératinocytes est fortement augmentée grâce au dérivé selon l’invention.
Cela montre notamment que plus de mélanine est transférée aux kératinocytes, ce qui augmente d'avantage la coloration de la peau et protège mieux les cellules des irradiations solaires.
d) S ynthèse de la matrice extracellulaire des kératinocytes
Dans une variante alternative de réalisation, la rondelle 21 pourrait être intégrée dans l’épaisseur de la paroi du casque 2, tandis que la rondelle 11 serait réalisée en surépaisseur sur la face intérieure des branches 1a, 1b de la mentonnière 1.
Dans le mode de réalisation illustré par les figures, les moyens de réglage sont prévus de chaque côté du casque 2. Ainsi, chaque branche 1a, 1b est pourvue d’une rondelle 11 coopérant avec une rondelle 21 correspondante portée par chacune des parties latérales 2a, 2b du casque 2.
Toutefois dans une variante non représentée et sans sortir du cadre de l’invention, il est possible de ne prévoir la présence des moyens de réglage de l’orientation de la mentonnière 1 que sur l’un seulement des côtés du casque 2. Dans une telle variante, l’une des branches 1a ou 1b de la mentonnière est dépourvue d’une embase de réglage et porte alors un pion qui est, soit non fileté et introduit dans un alésage cylindrique du casque 2 en formant ainsi un axe de pivotement, soit muni d’une portion filetée destinée à renforcer la fixation latérale de la mentonnière 1 déjà assurée par l’autre branche symétrique. Cette autre branche comporte alors, à la fois, un pion 31 à filetage 31b tel que décrit ci-dessus assurant, avec l’orifice taraudé 20 correspondant, le verrouillage latéral de la mentonnière 1 et une embase crantée assurant, d’un seul côté, avec une embase correspondante du casque 2, le réglage de la mentonnière dans la position angulaire sélectionnée.
Comme illustré par la , les crans 11a, 21a portés, respectivement, par les rondelles 11, 21 forment des crémaillères périphériques. Sur le casque 2, ces crans sont répartis en deux crémaillères diamétralement opposées et séparées par un créneau 21b. Sur les branches de la mentonnière 1, les crans sont réalisés sur tout le pourtour de la surface de la rondelle 11.
La profondeur de l’alésage taraudé 20 du casque est supérieure à la profondeur des crans 11a, 21a de telle sorte que le dévissage des pions 31 permette le désengagement des crans des embases en vis-à-vis et la libération des moyens de réglage, comme illustré par la .
Ainsi, en fin de course de vissage de la portion filetée 31b du pion 31 dans l’alésage taraudé 20 du casque 2, les crans en vis-à-vis sont en prise et la mentonnière est bloquée en rotation en appui contre les parties latérales 2a, 2b du casque 2.