INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Une étape a) de glycosylation, consistant en une réaction entre au moins un alcool de formule (I) et au moins un sucre réducteur de formule (III), en présence d’au moins un catalyseur acide (CA), à une température supérieure ou égale à 100°C et inférieure ou égale à 120°C, de préférence supérieure ou égale à 100°C et inférieure ou égale à 115°C, encore plus préférentiellement supérieure ou égale à 100°C et inférieure ou égale à 110°C, Une étape b) d’élimination du sucre réducteur de formule (III), qui n’a pas réagi à l’étape a), du milieu réactionnel, Une étape c) de neutralisation du milieu réactionnel issu de l’étape b) avec une solution aqueuse comprenant un agent basique (Ab), Une étape d) de récupération d’au moins une composition (C) de couleur inférieure ou égale à 1,5 vcs.
L’indice de couleur caractérisant la composition (C) préparée selon le procédé objet de la présente invention, est l’indice de couleur Gardner, tel que défini par la norme DIN-ISO 463. L’indice de couleur Gardner est mesuré en utilisant un colorimètre LICO 200/Dr LANGE (ou équivalent) qui effectue des mesures par transmission de la lumière sur tout milieu. Un tel colorimètre fonctionne avec une lampe halogène correspondant à l’illuminant normalisé C, défini par la norme DIN 5033 et avec un observateur normalisé 2°. Pendant la mesure, un faisceau de rayonnement de référence compense les variations des valeurs enregistrées dues aux différences de lampe et de température.
ladite composition (C1) consistant en un mélange de composés représentés par les formules (II1), (II2), (II3), (II4) et (II5):
À l’heure actuelle la répartition du couple entre moteur thermique et machine électrique est fournie par une stratégie du gain intrinsèque : une cartographie du régime et du couple permet de savoir pour chaque point de fonctionnement s’il est préférable d’utiliser la machine électrique ou le moteur thermique d’un point de vue énergétique.
Cette stratégie n’est pas satisfaisante à plusieurs points de vue : - Elle ne tient pas compte des émissions de polluants. Malheureusement, un point de fonctionnement présentant un bon rendement énergétique est susceptible d’être très mauvais du point de vue des polluants (voir les figures 1 et 2 : on voit que les meilleures zones de fonctionnement pour la consommation – zone circulaire centrale sur la – sont également les pires pour les émissions de NOx - zone circulaire centrale sur la , la référence tn représentant des couples de moteur thermique normalisés, ω N représentant des vitesses normalisées et Cmax représentant une ligne de couple maximal) ; - Une cartographie est une représentation statique, c’est-à-dire qu’en s’en servant on fait l’hypothèse que le moteur est capable de fournir instantanément le couple demandé, sans effet transitoire. Cependant, des effets transitoires sont présents et sont particulièrement importants pour les émissions de polluants. En effet, des imprécisions de calcul dans la boucle d’air sont inévitables pendant la phase transitoire. Cela mène à dévier légèrement de la stœchiométrie du mélange air/carburant dans les cylindres ; - On ne prend pas en compte l’évolution future de la situation, notamment l’évolution de la vitesse et des points de fonctionnement du véhicule automobile. Ceci est susceptible de poser des problèmes quand les points de fonctionnement sont proches de la limite entre moteur thermique et machine électrique dans la stratégie intrinsèque : notamment le problème de savoir s’il faut démarrer le moteur thermique, au risque de devoir rapidement l’éteindre, ou s’il faut continuer en roulage électrique, au risque de continuer à visiter des points de fonctionnement peu avantageux pour la machine électrique.
L’invention vise à pallier les problèmes posés par l’art antérieur, notamment le problème de la répartition de couples sur un véhicule hybride, tout en prenant en compte l’avenir à très court terme et en limitant les émissions de polluants.
Pour atteindre cet objectif, l’invention propose un système de commande pour véhicule automobile de type hybride comportant un moteur thermique et une machine électrique connectée à une batterie, le système de commande comprenant - un moyen de prédiction d'une vitesse future du véhicule automobile sur un horizon temporel donné, - un moyen d’évaluation d’un paramètre de compromis entre un coût thermique, représenté par une consommation et des polluants, et un coût électrique représenté par une variation d’état de charge de la batterie, - un moyen d’évaluation d’un couple optimal du moteur thermique sur l’horizon temporel, en complément de la machine électrique étant en fonctionnement,
- un moyen de contrôle configuré pour appliquer une consigne selon le couple optimal dans des conditions données en complément de la machine électrique étant en fonctionnement.
L’invention propose donc une loi de commande visant à déterminer la répartition du couple entre moteur thermique et machine électrique de façon à minimiser de manière conjointe la consommation de carburant et les émissions de polluants, tout en prenant en compte l’avenir immédiat.
Le problème de la répartition du couple sur un véhicule hybride, en prenant en compte l’avenir à très court terme, est résolu en utilisant en particulier des outils mathématiques (Model Predictive Control, Principe du Maximum de Pontryagin) pour obtenir un signal de commande optimal du point de vue de la minimisation d’un compromis consommation/émissions de polluants, en s’appuyant sur une prédiction de la vitesse du véhicule.
Selon une variante, le système de commande est caractérisé en ce que - le paramètre de compromis est évalué au moyen des équations (5) (6)
La valeur du pH d’une dispersion à 5% massique dans l’eau de la Composition 1’ est de 6,2, et la mesure de la couleur de Composition 1’ est de 3,8 VCS.
Exemple 2.2 : exemple comparatif (alcool C-12 et NaOH comme agent pré-neutralisant et et NaOH comme agent neutralisant)
190,6 g d’alcool laurylique (C-12) (ou dodécanol-1) sont chargés dans un réacteur équipé d’une agitation mécanique et d’un montage de distillation sous vide. L’alcool est fondu à 85°C et mis sous agitation et sous barbotage d’azote. Le milieu est mis sous vide à 30 Torrs. 26,6 g de glucose anhydre sous forme de poudre sont ajoutés. Le milieu est inerté sous azote. Pour démarrer la réaction d’éthérification 0,2 g d’une solution aqueuse de H3PO2 à 50 % puis 0,3 g d’une solution aqueuse de H2SO4 à 98 % sont ajoutés et la température est augmentée et maintenue à 105°C. La réaction est poursuivie pendant 5h00.
Le milieu est ensuite refroidi à 75°C à pression atmosphérique puis pré-neutralisé en introduisant 0,70 g d’une solution aqueuse de NaOH à 25 % sous agitation. Une dispersion à 5% massique dans l’eau montre une valeur de pH de 5,6 et le produit une couleur de 2,0 VCS. Le produit est filtré sur filtre K200 (~ 3-6 μm) afin d’éliminer le glucose résiduel. Le produit (78 g) est ensuite neutralisé en réacteur à 80°C en introduisant 0,08 g d’une solution aqueuse de NaOH à 25 % sous agitation.
Le produit est récupéré et référencé (Composition 2’).
La valeur du pH d’une dispersion à 5% massique dans l’eau de la Composition 2’ est de 6,5, et la mesure de la couleur de Composition 2’ est de 4,5 VCS. Observation et analyse des résultats
Le tableau 1 suivant rassemble des résultats du procédé de préparation de compositions (C) obtenues par la réaction entre le glucose et des alcools C-16/18 (mélange de 1-hexadécanol et de 1-octadécaniol). Les différents paramètres étudiés sont : i) la nature de l’agent de pré-neutralisation (Na 2 CO 3 ou NaOH) et ii) la nature de l’agent de neutralisation final (Na 2 CO 3 , NaHCO 3 ou NaOH).
Les compositions référencées “Composition 1”, “Composition 2” et “Composition 3” sont obtenues par la mise en oeuvre d’un procédé selon l’invention, et la composition référencée “Composition 1’” est obtenue par la mise en oeuvre d’un procédé comparatif de l’état de la technique.
Référence Composition 1’ Composition 1 Composition 2 Composition 3 Agent Pré-neutralisant NaOH Na 2 CO 3 NaOH NaOH Agent Neutralisant NaOH Na 2 CO 3 Na 2 CO 3 NaHCO 3 pH dispersion 5% dans l’eau 6,2 6,8 7,2 6,3 Couleur (vcs) 3,8 0,5 0,9 0,4
Ces essais mettent en évidence que la présence d’une étape de pré-neutralisation par une solution aqueuse de NaOH et d’une étape de neutralisation par une solution aqueuse de NaOH, aboutit à une coloration trop élevée de la composition obtenue (jusqu’à 3,8 VCS pour la Composition 1’). En comparaison, lorsque l’étape de pré-neutralisation est réalisée avec une solution de NaOH (Composition 2) ou de Na 2 CO 3 (Composition 1) et que l’étape de neutralisation est réalisée avec une solution aqueuse de Na 2 CO 3 les couleurs des compositions obtenues sont très basses (< 1 vcs).
Pour la préparation de la Composition 3, le procédé selon l’invention a été mis en oeuvre en effectuant une étape de pré-neutralisation par une solution aqueuse de NaOH (pour atteindre un pH compris entre 3,5 et 5,5), puis une étape de neutralisation par une solution de NaHCO 3 après filtration (pour atteindre un pH compris entre 5,5 et 7,5).
Cet essai met en évidence qu’il est possible d’utiliser l’hydrogénocarbonate de sodium lors de l’étape de neutralisation du procédé selon l’invention pour garantir une faible couleur des Compositions recherchées (puisque la couleur finale obtenue est de 0,4 vcs pour la Composition 3).
De manière tout à fait surprenante, il a été découvert par les présents inventeurs que non seulement la fusion d’une protéine Mmi1 des espèces du genre Schizosaccharomyces , ou d’un de ses fragments comprenant au moins son domaine YTH élargi du côté N-terminal et du côté C-terminal (ce domaine YTH élargi, constitué par les 173 acides aminés C-terminaux de la protéine Mmi1, étant désigné dans la présente description, pour plus de commodité, par l’abréviation « YTH+ »), à une protéine d’intérêt, n’impacte pas la capacité de cette protéine Mmi1 ou de ce fragment à se lier spécifiquement à la séquence d’ARN à motif UNAAAC mentionnée ci-dessus, et ceci que la fusion soit réalisée en N-terminal ou en C-terminal de la protéine Mmi1 ou de son fragment ; mais qu’en outre, la mise en présence d’une molécule d’acide ribonucléique contenant au moins un motif de séquence nucléotidique UNAAAC avec un extrait de culture cellulaire contenant une protéine de fusion « protéine d’intérêt / protéine Mmi1 ou fragment de cette dernière contenant le domaine YTH+ », ne provoque pas de dégradation massive de cette molécule d’ARN dans cet extrait de culture cellulaire. Ainsi, alors que l’homme du métier n’aurait jamais envisagé de mettre en œuvre, dans un procédé de purification d’une protéine d’intérêt produite par un procédé biologique, une étape de mise en présence du milieu contenant la protéine à purifier avec une molécule d’ARN en tant que partenaire d’une liaison par affinité avec l’étiquette fusionnée à la protéine d’intérêt, il a été découvert par les présents inventeurs que non seulement un tel procédé est tout à fait réalisable pour le cas particulier du couple « Mmi1 de Schizosaccharomyces ou fragment de cette dernière contenant le domaine YTH+ / molécule d’ARN à séquence UNAAAC », mais qu’il s’avère en plus hautement performant, puisqu’il permet de purifier la protéine d’intérêt avec une haute spécificité et un haut rendement, en un temps court, sans altérer les fonctions de la protéine d’intérêt.
Ainsi, selon un premier aspect, il est proposé par la présente invention un procédé de purification d’une protéine d’intérêt, qui comprend : - la préparation d’une protéine de fusion comprenant la protéine d’intérêt fusionnée à une étiquette protéique, ladite étiquette protéique comprenant au moins, ou étant constituée de : la protéine Mmi1 d’un microorganisme du genre Schizosaccharomyces , un fragment de cette protéine Mmi1 en comprenant au moins les 173 acides aminés C-terminaux (le domaine de la protéine Mmi1 formé par ces 173 acides aminés C-terminaux étant désigné dans la présente description par l’abréviation YTH+), ou une protéine de séquence d’acides aminés ayant au moins 90 % d’identité avec la séquence d’acides aminés de ladite protéine Mmi1 ou dudit fragment et capable de se lier à un motif d’acide ribonucléique de séquence nucléotidique UNAAAC, - la mise en présence de cette protéine de fusion avec une molécule d’acide ribonucléique contenant au moins un motif de séquence nucléotidique UNAAAC, de sorte à permettre la liaison par affinité de l’étiquette protéique avec cette molécule d’acide ribonucléique, plus précisément avec son motif de séquence nucléotidique UNAAAC, cette molécule d’acide ribonucléique étant greffée sur un support solide ou couplée à un ligand de capture, - le cas échéant, lorsque ladite molécule d’acide ribonucléique est couplée à un ligand de capture, la mise en présence de cette molécule d’acide ribonucléique, à laquelle est liée la protéine d’intérêt par l’intermédiaire de l’étiquette protéique, avec un partenaire d’affinité du ligand de capture greffé sur un support solide, - optionnellement, l’isolement du support solide du milieu dans lequel il est contenu, par exemple un milieu de culture cellulaire dans lequel les cellules exprimant la protéine de fusion ont été cultivées, et/ou un milieu de lyse cellulaire de telles cellules, - et la séparation de la protéine d’intérêt, seule ou au sein de la protéine de fusion qui la contient, et du support solide, pour récupérer la protéine d’intérêt.
On entend dans la présente description, par ligand de capture, une molécule qui est d’une part apte à être couplée de manière covalente avec une molécule d’acide ribonucléique, et d’autre part capable se lier avec une forte affinité et spécificité à un partenaire d’affinité, par exemple un récepteur protéique, celui-ci pouvant quant à lui être fixé sur un support solide. A titre d’exemple de tel ligand de capture utilisable selon l’invention, on peut citer la biotine, dont des partenaires d’affinité sont l’avidine et la streptavidine.
Le procédé selon l’invention permet avantageusement, à lui seul, de produire la protéine d’intérêt, sous forme d’une protéine de fusion recombinante, et de la séparer du milieu de production en tirant avantage de la forte capacité de liaison hautement spécifique de l’étiquette protéique comprenant le domaine YTH+ d’une protéine Mmi1 d’une espèce du genre de Schizosaccharomyces avec la séquence d’ARN UNAAAC, pour obtenir la protéine d’intérêt rapidement avec un haut degré de pureté et un haut rendement. Ces étapes peuvent avantageusement être réalisées facilement et rapidement, et à bas coût.
De manière conventionnelle, dans la séquence nucléotidique UNAAAC, U désigne l’uracile, A désigne l’adénine, C désigne la cytosine et N désigne toute base parmi l’adénine, la cytosine, la guanine et l’uracile. Cette séquence nucléotidique est ici représentée, comme toutes les autres séquences nucléotidiques décrites, de manière conventionnelle, c’est-à-dire dans le sens de l’extrémité 5’ vers l’extrémité 3’ (les séquences d’acides aminés étant quant à elles représentées, de manière également conventionnelle, dans le sens de lecture de l’extrémité N-terminale vers l’extrémité C-terminale).
La molécule d’acide ribonucléique contenant le motif UNAAAC peut comprendre un seul exemplaire de ce motif, ou une ou plusieurs répétitions de ce motif. Elle peut en outre comprendre, en 5’ ou en 3’ de ce motif UNAAAC ou de cette série de motifs UNAAAC, un ou plusieurs acides ribonucléiques supplémentaires, par exemple 2 à 10, en particulier 2 à 6, acides ribonucléiques supplémentaires.
Le greffage / couplage de la molécule d’acide ribonucléique au support solide / au ligand de capture peut être réalisé par toute méthode classique en elle-même. Ce greffage / couplage est de préférence réalisé par liaison covalente, préférentiellement au niveau de l’extrémité 5’ ou à l’extrémité 3’ de la molécule d’acide ribonucléique.
On entend dans la présente description, par protéine d’intérêt, toute protéine, peptide ou polypeptide, sous forme native ou recombinante, présentant un intérêt pour une application visée, en particulier pour une application comprenant une administration à un mammifère, notamment un humain.
Le procédé selon l’invention peut par exemple avantageusement être utilisé pour la purification de complexes endogènes dans le domaine de la recherche fondamentale, d’hormones, de peptides antibiotiques ou encore de régulateurs d’enzymes dans le domaine de la recherche appliquée, une telle liste n’étant nullement limitative de l’invention.
L’étiquette protéique mise en œuvre dans le procédé selon l’invention peut comprendre la protéine Mmi1 d’un microorganisme d’une espèce du genre Schizosaccharomyces entière ou un de ses fragments en contenant au moins le domaine YTH+ (c’est-à-dire les 173 acides aminés C-terminaux).
La protéine Mmi1 est de préférence issue d’une espèce choisie parmi Schizosaccharomyces pombe , Schizosaccharomyces japonicus , Schizosaccharomyces octosporus et Schizosaccharomyces cryophilus .
Il est du ressort de l’homme du métier d’identifier, pour une espèce du genre Schizosaccharomyces donnée, la séquence d’acide aminés de la protéine Mmi1, ainsi, le cas échéant, que la séquence du gène codant pour cette protéine. De telles données sont notamment accessibles dans les bases de données de séquences protéiques et de séquences nucléotidiques. A titre d’exemple, dans la base de données GenBank, les séquences d’acides aminés de la protéine Mmi1 sont accessibles, pour l’espèce Schizosaccharomyces pombe , sous le numéro d’accession NP_587783.2 (SEQ ID No : 1 – le gène codant pour cette protéine de cette espèce a pour séquence la séquence SEQ ID No : 2), pour l’espèce Schizosaccharomyces japonicus , sous le numéro d’accession XP_002173827.2 (SEQ ID No : 3 – le gène codant pour cette protéine de cette espèce a pour séquence la séquence SEQ ID No : 4), pour l’espèce Schizosaccharomyces octosporus , sous le numéro d’accession XP_013019124.1 (SEQ ID No : 5 – le gène codant pour cette protéine de cette espèce a pour séquence la séquence SEQ ID No : 6), et pour l’espèce Schizosaccharomyces cryophilus , sous le numéro d’accession XP_013025346.1 (SEQ ID No : 7 – le gène codant pour cette protéine de cette espèce a pour séquence la séquence SEQ ID No : 8).
Lorsque le microorganisme du genre Schizosaccharomyces appartient à l’espèce Schizosaccharomyces pombe , le domaine YTH+ de la protéine Mmi1 s’étend du résidu en position 316 (résidu leucine) au résidu en position 488 (résidu arginine, en position C-terminale dans la séquence de la protéine). Le domaine YTH+ a alors pour séquence d’acides aminés la séquence SEQ ID No : 9.
Lorsque le microorganisme du genre Schizosaccharomyces appartient à l’une des espèces Schizosaccharomyces japonicus, Schizosaccharomyces octosporus et Schizosaccharomyces cryophilus , le fragment de la protéine Mmi1 contient de préférence les 174 acides aminés C-terminaux de la protéine. Le fragment de la protéine Mmi1 utilisé selon l’invention contient ainsi de préférence, ou consiste en : - pour l’espèce Schizosaccharomyces japonicus , le domaine de la protéine Mmi1 s’étendant du résidu en position 306 (résidu leucine) au résidu en position 479 (résidu arginine, en position C-terminale dans la séquence de la protéine). Le domaine a alors pour séquence d’acides aminés la séquence SEQ ID No : 10 ; - pour l’espèce Schizosaccharomyces octosporus , le domaine de la protéine Mmi1 s’étendant du résidu en position 307 (résidu leucine) au résidu en position 480 (résidu arginine, en position C-terminale dans la séquence de la protéine). Le domaine a alors pour séquence d’acides aminés la séquence SEQ ID No : 11 ; - pour l’espèce Schizosaccharomyces cryophilus , le domaine de la protéine Mmi1 s’étendant du résidu en position 306 (résidu leucine) au résidu en position 479 (résidu arginine, en position C-terminale dans la séquence de la protéine). Le domaine a alors pour séquence d’acides aminés la séquence SEQ ID No : 12.
Ainsi, dans des modes de mise en œuvre particuliers de l’invention, le fragment de la protéine Mmi1 en comprenant au moins les 173 acides aminés C-terminaux présente une séquence d’acides aminés comprenant, ou consistant en, la séquence d’acides aminés SEQ ID No : 9 (correspondant à Schizosaccharomyces pombe ), SEQ ID No : 10 (correspondant à Schizosaccharomyces japonicus ), SEQ ID No : 11 (correspondant à Schizosaccharomyces octosporus ) ou SEQ ID No : 12 (correspondant à Schizosaccharomyces cryophilus ) : - SEQ ID No : 9 : LNFSRASEHRNEKGERISMINPRVVLDENGISHRSRYFIMLCDNETAIAHAKKTSIWAVKKDSSKRISDAYKKASVYFIFVAQQTYNALGYAQVVSDLNSTELPFWSDSSHAGGVRIKWIKTCNLFSAEISEIVSHMDHGSEARDGMEMMYDEGSRLCTLINYAIMKRIGRDR - SEQ ID No : 10 : LDFEHAHEYRNEKGERVSMINPRVILDENGISHRSRYFIMLVDNETAISHAKRSSVWSLKQNYANAISEAYKQEANVYFIFINAKSYNALGYAQLTSDVGTVAKPFWADTTYTNGVNVKWIKTCNLYSNEISEIVSRMDHGARARDGQEMMYDEGSRLCTLINSAIMKRIGRDR - SEQ ID No : 11 : LNFARASEYRNDKGERISMINPRVILDENGISSRSRYFIMLCDNETAISHAKKTSIWAVKHDAASRVSDAYKNASIYFIFIAKPTNNALGYAQVVSDLNSAELPFWADNATYAGGVRVKWIKTCNLFSAEISDIVGRMNHGATARDGMEMMYDEGCRLCILVNSAIMKRIGRDR - SEQ ID No : 12 : LNFARASEYRNDKGERISMINPRVILDESGISHRSRYFIMLCDNETAIAHAKKTSIWAVKHEAASRVSDAYKKASIYFIFIAKPTNNALGYAQVVSDLNSAELPFWADNATYAGGVRVKWIKTCNLFSAEISDIVGRMNHGMTAKDGMEMMYDEGCRLCILVNSAIMKRIGRDR
L’étiquette protéique mise en œuvre selon l’invention peut aussi bien comprendre, ou consister en, la protéine Mmi1 ou un fragment de la protéine Mmi1 contenant au moins le domaine YTH+ de la protéine, qu’une protéine de séquence d’acides aminés ayant au moins 90 %, de préférence au moins 95 %, préférentiellement au moins 98 % et préférentiellement encore au moins 99 %, d’identité avec la séquence d’acides aminés de la protéine Mmi1 ou dudit fragment de ladite protéine Mmi1, et capable de se lier à un motif d’acide ribonucléique de séquence nucléotidique UNAAAC, de préférence avec une spécificité au moins aussi bonne que le domaine YTH+ de la protéine.
Le boîtier 5 illustré comprend un premier moyen de maintien 571 disposé au niveau du côté latéral 52 du boîtier 5 comprenant l’ouverture 53 apte à recevoir le moyen de déplacement 6. Le premier moyen de maintien 571 borde ladite ouverture 53. Il s’étend notamment depuis une face interne du premier côté 51 jusqu’à l’une des nervures 561 du rail de l’organe de maintien 56 de la lame 4 de sorte à ne pas entraver le déplacement de cette dernière.
Le boîtier 5 comprend également un deuxième moyen de maintien 572, présentant un positionnement opposé au premier moyen de maintien 571 le long de la première direction D1. Le deuxième moyen de maintien 572 comprend un plot comportant un renfoncement apte à recevoir en partie le moyen de déplacement 6, notamment une extrémité libre du moyen de déplacement 6. A titre d’exemple, un tel plot peut être configuré pour recevoir 5 à 30% d’une longueur d’un corps 41 du moyen de déplacement 6, mesurée le long de la première direction D1, lorsque celui-ci consiste en une vis, voire 5 à 20%. Le premier moyen de maintien 571 et le deuxième moyen de maintien 572 du moyen de déplacement 6 sont ainsi centrés sur un même axe passant par le trou 441 de réception du moyen de déplacement 6, ici l’axe de rotation 600. Il est entendu qu’une telle représentation du boîtier 5 n’est en rien limitative, le nombre et la forme du ou des moyen(s) de maintien 57 pouvant être altérés.