INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Selon l’invention, la région en amont du gène cible (c’est-à-dire la séquence 5’ en amont du gène Tr dim5 ) est notamment représentée par la séquence de SEQ ID NO : 10.
Selon l’invention, la région en aval du gène cible (c’est-à-dire la séquence 3’ en aval du gène Tr dim5 ) est notamment représentée par la séquence de SEQ ID NO : 12.
L’expression « marqueur de sélection » s’entend d’un gène dont l’expression confère aux cellules qui le contiennent une caractéristique permettant de les sélectionner. L’utilisation d’un marqueur de sélection permet en effet d’identifier les cellules ayant intégré une modification génétique par rapport à celles qui ne l’ont pas intégrée. Il s’agit par exemple d’un gène de résistance aux antibiotiques, notamment le gène de résistance à l’antibiotique hygromycine hph , tel que représenté par la SEQ ID NO : 11.
Plus précisément, selon l’invention, la cassette d’invalidation est préférentiellement constituée d’un gène de résistance placé sous le contrôle d’un promoteur et d’un terminateur, avec en amont et en aval les régions flanquantes 5’ et 3’ du gène Tr dim5 . Selon l’invention, ladite cassette d’invalidation pourra être liée opérationnellement à un promoteur, un terminateur ou toute autre séquence nécessaire à son expression dans une cellule hôte.
La cassette d’invalidation peut être amplifiée selon les techniques classiques bien connues de l'homme du métier, typiquement par une méthode choisie parmi le clonage classique, la fusion PCR, ou encore le clonage in vivo par PCR. Préférentiellement, cette cassette d’invalidation est amplifiée par PCR, notamment à l’aide des séquences représentée par les SEQ ID NO : 4 (forward) et SEQ ID NO : 5 (reverse). La cassette d’invalidation est ensuite introduite par recombinaison dans une souche de Trichoderma reesei, qui n'exprime pas un gène du marqueur de sélection. L'homme du métier peut aisément identifier les gènes de marqueur de sélection pertinents pour la mise en œuvre de l'invention. Après culture, les souches variantes/mutantes ayant incorporé la cassette d’invalidation sont sélectionnées en fonction de l'expression ou non du marqueur de sélection ; les clones ayant été transformés exprimant ledit marqueur de sélection. Il s’agit des souches selon l’invention. Préférentiellement, les souches mutantes sont identifiées à l’aide des amorces de SEQ ID NO : 6 (forward 5’), SEQ ID NO : 7 (reverse 5’), SEQ ID NO : 8 (reverse 3’) et SEQ ID NO : 9 (forward 3’), pour vérifier par PCR l’insertion de la cassette au locus du gène Tr dim5 . Ces techniques de recombinaison génétiques sont bien connues de l’homme du métier.
Dans un deuxième aspect, l’invention concerne également un procédé de modification génétique d’une souche de champignon selon l’invention, telle que mentionné ci-dessus, comprenant une étape d’invalidation du gène Tr dim5 . Le procédé de modification génétique d’une souche selon l’invention permet ainsi d’obtenir des souches de champignon hyperproductrice par rapport à la souche de champignon parent. C’est pourquoi la souche selon l’invention peut être considérée comme un variant de la souche de champignon parent.
Comme indiquées précédemment, toutes les techniques peuvent être utilisées pour invalider le gène Tr dim5 . Préférentiellement, dans ledit procédé de modification génétique selon l’invention, l’étape d’invalidation du gène Tr dim5 est réalisée à l’aide d’une étape de mutagénèse ou de recombinaison homologue, éventuellement en utilisant la technologie CRISPR/Cas9. Encore plus préférentiellement, dans ledit procédé de modification génétique selon l’invention, l’étape d’invalidation du gène Tr dim5 est réalisée à l’aide d’une cassette d’invalidation telle que mentionnée ci-dessus, notamment représentée par la SEQ ID NO : 1, chez un champignon appartenant à l’espèce Trichoderma reesei .
Dans un troisième aspect, la présente invention concerne aussi un procédé de production de biomasse de champignon, comprenant une étape de culture d'une souche de champignon selon l’invention, dans un milieu de culture comprenant un substrat approprié. Cette étape permet ainsi la croissance de la souche de champignon selon l’invention. L’homme du métier connait les substrats appropriés à la croissance des souches de champignon.
Dans un quatrième aspect, la présente invention concerne également un procédé de production de protéines d’intérêt, notamment des enzymes, comprenant une étape de culture d'une souche de champignon selon l’invention, dans un milieu de culture comprenant un substrat approprié. L’invention concerne ainsi l’utilisation d’une souche de champignon selon l’invention, pour la production de protéines d’intérêt.
De façon avantageuse, ledit procédé comprend ainsi une phase de croissance d’une souche de champignon selon l’invention, puis une phase de croissance et de production de protéines d’intérêt par ladite souche. Encore plus préférentiellement, ladite phase de croissance est réalisée en présence d’un substrat de croissance et ladite phase de croissance et de production de protéines d’intérêt est réalisée en présence d’un substrat inducteur. Le substrat de croissance et le substrat inducteur sont de préférence des substrats carbonés.
Ainsi, le substrat carboné de croissance est choisi de préférence parmi le lactose, le glucose, le xylose, les résidus obtenus après fermentation éthanolique des sucres monomères des hydrolysats enzymatiques de biomasse cellulosique, et/ou un extrait brut de pentoses hydrosolubles provenant du prétraitement d’une biomasse cellulosique.
Le substrat carboné inducteur est ainsi choisi de préférence parmi le lactose, le cellobiose, le cellulose, le glucose, le sophorose, les résidus obtenus après fermentation éthanolique des sucres monomères des hydrolysats enzymatiques de biomasse cellulosique, un extrait brut de pentoses hydrosolubles provenant du prétraitement d’une biomasse cellulosique, ou un mélange de ces substrats. Encore plus préférentiellement, le substrat carboné inducteur est choisi parmi le lactose, le glucose, un mélange lactose et cellulose ou un mélange glucose et cellulose.
Selon l’invention, les protéines d’intérêt sont toutes les protéines pouvant être produites par un champignon, de façon naturelle ou bien par modification génétique (par exemple après transformation à l’aide d’un vecteur approprié).
De façon avantageuse, les protéines d’intérêt selon l’invention sont des enzymes, notamment des enzymes cellulolytiques telles que des cellulases ou des hémicellulases. De façon préférée, les enzymes sont des cellulases. Selon l’invention, le terme « cellulases » s’entend plus particulièrement des enzymes choisies parmi les endoglucanases, les exoglucanases et les glucosidases, et plus particulièrement la β-glucosidase. Le terme « cellulase » fait plus particulièrement référence à une enzyme adaptée à l'hydrolyse de la cellulose et permettant aux microorganismes (tels que Trichoderma reesei ) qui les produisent d'utiliser la cellulose comme source de carbone, en hydrolysant ce polymère en sucres simples (glucose). La production de cellulases par une souche selon l’invention peut être déterminée par toutes techniques usuelles pour l’homme du métier, ou encore par les techniques décrites dans les brevets EP 448 430 B1 ou EP 2 744 899 B1.
Une corrélation entre protéines totales sécrétées et cellulases peut être faite car chez T. reesei , les exoglucanases (CBHI, CBHII) et les endoglucanases (EGI, EGII) principales peuvent représenter jusqu’à 90% de la quantité totale de protéines sécrétées (voir par exemple Markov, A.V., Gusakov, A.V., Kondratyeva, E.G., Okunev, O.N., Bekkarevich, A.O., and Sinitsyn, A.P. (2005). New Effective Method for Analysis of the Component Composition of Enzyme Complexes from Trichoderma reesei. Biochemistry (Moscow) 70 , 657-663).
Dans un cinquième aspect, la présente invention concerne également un procédé de production de produits biosourcés à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, comprenant une étape d’utilisation de la souche de champignon selon l’invention, pour produire des enzymes cellulolytiques. L’invention concerne donc également l’utilisation d’une souche de champignon selon l’invention, pour la production de produits biosourcés à partir de de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques.
Le premier mode de réalisation du procédé 100 selon l’invention comporte des étapes réalisées pour chaque ensemble d’images Ei du flux d’images V en considérant la première image I1 de l’ensemble d’images Ei comme image initiale et la dernière image In de l’ensemble d’images Ei comme image finale.
Une première étape 101 du premier mode de réalisation du procédé 100 selon l’invention consiste à détecter chaque objet présent dans l’image initiale de l’ensemble d’images Ei à l’aide d’un réseau de neurones artificiels entraîné, et permet d’obtenir un ensemble d’objets initial, chaque objet de l’ensemble d’objets initial étant associé à sa position dans l’image initiale, par exemple aux coordonnées d’une fenêtre englobant l’objet.
L’ensemble d’objets initial est affecté à l’image initiale.
Le réseau de neurones artificiels a été préalablement entraîné de manière supervisée sur une base de données d’entraînement pour obtenir un réseau de neurones artificiels entraîné capable de détecter à partir d’une image, chaque objet dans l’image, c’est-à-dire capable de fournir pour chaque objet présent dans l’image, sa position dans l’image.
Le réseau de neurones artificiels utilisé est par exemple un réseau de neurones artificiels de détection d’objets pouvant intégrer des couches de convolution d’images, tels que les réseaux de neurones artificiels YOLO, Faster RCNN, RetinaNet ou SSD.
L’entraînement supervisé permet d’entraîner le réseau de neurones artificiels à une tâche prédéfinie, en mettant à jour les paramètres ou poids du réseau de neurones artificiels de manière à minimiser une fonction de coût correspondant à l’erreur entre la donnée de sortie fournie par le réseau de neurones artificiels et la vraie donnée de sortie, c’est-à-dire ce que le réseau de neurones artificiels devrait fournir en sortie pour remplir la tâche prédéfinie sur une certaine donnée d’entrée.
La base de données d’entraînement comporte une pluralité d’images et pour chaque image, la position de chaque objet dans l’image, par exemple les coordonnées d’une fenêtre englobante pour chaque objet présent dans l’image.
Ainsi, les données d’entrée sont les images et les vraies données de sortie sont les positions des objets.
L’apprentissage supervisé du réseau de neurones artificiels consiste donc à mettre à jour les paramètres de manière à minimiser une fonction de coût correspondant à l’erreur entre chaque position fournie par le réseau de neurones artificiels à partir d’une image de la base de données d’entraînement et la vraie position associée à l’image dans la base de données d’entraînement.
La première étape 101 est réalisée uniquement si aucune détection n’a encore été réalisée pour l’image initiale de l’ensemble d’images Ei.
Une deuxième étape 102 du premier mode de réalisation du procédé 100 selon l’invention consiste à détecter chaque objet présent dans l’image finale de l’ensemble d’images Ei à l’aide du réseau de neurones artificiels entraîné et permet d’obtenir un ensemble d’objets final, chaque objet de l’ensemble d’objets final étant associé à sa position dans l’image finale, par exemple aux coordonnées d’une fenêtre englobant l’objet.
L’ensemble d’objets final est affecté à l’image finale.
La deuxième étape 102 est réalisée uniquement si aucune détection n’a encore été réalisée pour l’image finale de l’ensemble d’images Ei.
Si une première condition C1 et une deuxième condition C2 sont vérifiées, une troisième étape 103 du premier mode de réalisation du procédé 100 selon l’invention est réalisée.
La première condition C1 est vérifiée si l’ensemble d’objets initial obtenu à la première étape 101 a le même cardinal que l’ensemble d’objets final obtenu à la deuxième étape 102, c’est-à-dire que l’ensemble d’objets initial comporte le même nombre d’objets que l’ensemble d’objets final.
Une composition selon l'invention peut convenablement avoir une phase continue aqueuse. Par « phase continue aqueuse », on entend une phase continue qui est à base d'eau. De préférence, la composition comprend au moins 50 % en poids d'eau et mieux encore au moins 70 % en poids d'eau.
Une composition de l'invention comprend convenablement de 5 à 60 % et de préférence de 10 à 40 % (en poids par rapport au poids total de la composition) d'un ou plusieurs tensioactifs détergents.
L'expression « tensioactif détergent », dans le contexte de cette invention, désigne un tensioactif qui réalise un effet détergent (c'est–à–dire nettoyant) au linge traité en tant que partie d'un procédé de lavage domestique du linge.
Antioxydants La composition comprend de préférence un antioxydant. Les antioxydants sont des produits chimiques ajoutés en de faibles proportions à la formulation pour empêcher des réactions d'oxydation, en particulier celles entraînées par des réactions d'oxygène radicalaire ou singulet.
Les antioxydants sont des substances telles que décrites dans Kirk–Othmer (Vol. 3, page 424) ; dans Ullmann’s Encyclopedia (Vol. 3, page 91) ; et dans Oxidation Inhibition in Organic Materials, Vol I & II publié par Jan Pospisil, Peter P. Klemchuk.
Des antioxydants préférés sont des phénols encombrés, des amines encombrées stabilisées vis–à–vis de la lumière, et l'acide ascorbique. Les antioxydants de type phénol encombré préférés sont : le 2,6–bis(1,1–diméthyléthyl)–4–méthylphénol ; l'ester méthylique d'acide 3,5–bis(1,1–diméthyléthyl)–4–hydroxybenzènepropanoïque ; l'ester octadécylique d'acide 3,5–bis(1,1–diméthyléthyl)–4–hydroxybenzènepropanoïque ; le 3,5–di–tert–butyl–4–hydroxytoluène (BHT), et leurs mélanges. Des HALS préférés sont disponibles sous la marque déposée Tinuvin, et englobent le Tinuvin 770.
Les antioxydants sont de préférence présents à raison de 0,001 à 2 % en poids, mieux encore de 0,05 à 0,5 % en poids.
Anti–moussant La composition peut aussi comprendre un anti–moussant, mais de préférence elle n'en contient pas. Les matériaux anti–moussants sont bien connus dans la technique et englobent les silicones et les acides gras.
De préférence, un savon d'acide gras est présent à raison de 0 à 0,5 % en poids de la composition (tel que mesuré en référence à l'acide ajouté à la composition), mieux encore de 0 à 0,1 % en poids, et tout spécialement de 0 %.
Des acides gras convenables dans le contexte de cette invention comprennent les acides carboxyliques aliphatiques de formule RCOOH où R est une chaîne alkyle ou alcényle, linéaire ou ramifiée, contenant de 6 à 24, mieux encore de 10 à 22, tout spécialement de 12 à 18 atomes de carbone, et 0 ou 1 double liaison. Des exemples préférés de tels matériaux comprennent les acides gras en C12 à C18 saturés, tels que l'acide laurique, l'acide myristique, l'acide palmitique ou l'acide stéarique ; et les mélanges d'acides gras dans lesquels 50 à 100 % (en poids par rapport au poids total du mélange) consistent en acides gras en C12 à C18 saturés. Ces mélanges peuvent typiquement dériver de graisses naturelles et/ou d'huiles naturelles éventuellement hydrogénées (telles que l'huile de coco, l'huile de palmiste ou le tallol).
Les acides gras peuvent être présents sous la forme de leurs sels de sodium, de potassium ou d'ammonium et/ou sous la forme de sels solubles avec des bases organiques, telles que la mono–, di– ou tri–éthanolamine.
On peut aussi utiliser des mélanges de n'importe lesquels des matériaux décrits ci–dessus.
Aux fins de la prise en compte de la formulation, dans la formulation, les acides gras et/ou leurs sels (tels que définis ci–dessus) ne sont pas inclus dans la proportion de tensioactif ou dans la proportion d'adjuvant.
De préférence, la composition comprend 0,2 à 10 %, en poids de la composition, d'un polymère nettoyant. De préférence, le polymère nettoyant est choisi parmi les polyamines alcoxylées, les polymères détachants de type polyester, et les copolymères de PEG/acétate de vinyle.
Conservateur La composition comprend de préférence un conservateur.
De préférence, la composition comprend un conservateur pour inhiber la croissance microbienne. Par exemple, des conservateurs peuvent être éventuellement incorporés dans divers modes de réalisation en tant que moyen pour renforcer la protection antimicrobienne contre une contamination brute par des bactéries, des virus ou des champignons introduits par exemple par un consommateur, ou par l'intermédiaire d'un ingrédient, récipient de stockage, équipement, étape de traitement, ou autre source de contamination. On peut utiliser n'importe quel conservateur conventionnel connu dans la technique. Certains conservateurs illustratifs comprennent : le sorbate de potassium, le benzoate de sodium, l'acide benzoïque, le phénoxyéthanol, l'alcool benzylique, l'acide déshydroxyacétique, le borate de sodium, l'acide borique, l'acide usinique, les phénols, les composés d'ammonium quaternaire, les glycols, les isothiazolinones (méthyl–, benzyl–, chloro–), la DMDM hydantoïne, l'hexidine, l'éthanol, l'IPBC, le polyaminopropyl–biguanide, le phénylphénol, l'imidazolinyl–urée, les parabens, le formaldéhyde, l'acide salicylique ou ses sels, le caprylyl–glycol, la D–glucono–1,5–lactone, l'érythorbate de sodium, l'hydroxyméthylglycinate de sodium, les peroxydes, le sulfite de sodium, les bisulfites, la glucose oxydase, la lactoperoxydase, et d'autres conservateurs compatibles avec les ingrédients nettoyants. Certains autres matériaux naturels peuvent aussi être pris en considération, tels que la cannelle, les acides de fruits, les huiles essentielles comme le thym et le romarin, l'écorce de saule, l'écorce de tremble, les tocophérols, le curry, les extraits d'agrumes, le chèvrefeuille, et les conservateurs à base d'acides aminés. On préfère en particulier les conservateurs qui n'entrent pas en compétition avec les ingrédients nettoyants et pour lesquels il n'y a pas de problèmes sanitaires ou environnementaux rapportés. Certains des conservateurs davantage préférés sont : le phénoxyéthanol, l'acide benzoïque/sorbate de potassium, les enzymes, les borates, les isothiazolinones telles que les MIT, BIT et CIT, et les solutions naturelles ci–dessus. Dans un mode de réalisation, le conservateur est présent en une quantité inférieure à environ 5 % en poids par rapport au poids total de la composition nettoyante. Dans un autre mode de réalisation, le conservateur est présent en une quantité d'environ 0,01 à environ 2 % en poids. Dans un autre mode de réalisation, l'agent parfumant est présent en une quantité d'environ 0,01 à environ 1 % en poids.
- un sixième point de jonction 42 disposé en amont du compresseur 18, entre l'évaporateur 34 et le deuxième point de jonction 32 de la deuxième conduite de circulation A2, plus précisément en amont de l’accumulateur 28.
La quatrième conduite de circulation A4 comporte notamment le premier dispositif de détente 22 et l’échangeur de chaleur bifluide 14. Le premier dispositif de détente 22 est disposé en amont de l’échangeur de chaleur bifluide 14, entre le cinquième point de jonction 40 et ledit échangeur de chaleur bifluide 14.
Le circuit 10 de climatisation comporte aussi un dispositif de redirection du fluide réfrigérant afin de définir par quelle conduite de circulation il circule. Dans l’exemple illustré à la , ce dispositif de redirection du fluide réfrigérant comporte notamment :
- une première vanne d’arrêt 44 disposée sur la deuxième conduite de circulation A2 entre le premier point de jonction 30 et le quatrième point de jonction 38,
- une deuxième vanne d’arrêt 46 disposée sur la première conduite de circulation A1 entre le troisième point de jonction 36 et le deuxième point de jonction 32,
- un clapet anti-retour 48 disposé sur la troisième conduite de circulation A3, disposé de sorte à empêcher la circulation de fluide réfrigérant depuis le quatrième point de jonction 38 vers le troisième point de jonction 36,
- un clapet anti-retour 50 disposé sur la deuxième conduite de circulation A2, disposé de sorte à empêcher la circulation de fluide réfrigérant depuis le sixième point de jonction 42 vers l'évaporateur 34.
un groupe aryle perhydrogéné, ou un groupe hétéroaryle perhydrogéné ; ou un groupe –R-Cy où R est un alcane diyle linéaire ou branché en C 1 à C 6 et Cy est un groupe aryle perhydrogéné, ou un groupe hétéroaryle perhydrogéné.
Selon un mode de réalisation particulier, la composition de l’invention est telle que:
X est un groupe aryle perhydrogéné, X étant notamment un groupe cyclohexyle ; ou X est un groupe hétéroaryle perhydrogéné, X étant notamment choisi parmi les groupes pipéridinyle, pipérazinyle, hexahydropyrimidinyle, et hexahydropyridazinyle.
Selon un mode de réalisation particulier, le au moins premier composé et le au moins deuxième composé sont respectivement :
cyclohexanol, cyclohexylméthanol ; cyclohexanol, méthanol ; méthanol, 1,4-butanediol ; méthanol, 1,3-butanediol ; méthanol, 1,3-propanediol ; méthanol, 1,5-pentanediol; méthanol, 1,4-pentanediol; méthanol, 1,3-pentanediol; méthanol, 2,4-pentanediol; cyclohexyléthanol, méthanol ; ou méthanol, cyclohexyléthanol.
Le rapport molaire Rm entre la quantité du au moins un premier composé sur la quantité du au moins un deuxième composé est compris de 0,1 à 10, notamment de 0,8 à 1,25, en particulier de 0,9 à 1,1, par exemple 1.
Par exemple, lorsque R 3 est un groupe alkyle linéaire ou branché en C 2 à C 6 substitué par au moins un groupe –OH ou un groupe –CH 2 -OH, Rm est notamment compris de 1 à 10, notamment de 1 à 1,25, en particulier de 1 à 1,1.
Par exemple, lorsque R 1 est différent de H, Rm est notamment compris de 0,1 à 1, notamment de 0,8 à 1, en particulier de 0,9 à 1.
L’invention concerne également une composition de liquides organiques porteurs d'hydrogène (LOHC) comprenant ou constituée de:
Lorsque l’accumulateur n’est plus capable d’évacuer suffisamment de chaleur, la température de la cellule augmente jusqu’à destruction, ce phénomène étant désigné usuellement sous l’appellation d’emballement thermique (en anglais «Thermal Runaway»).
Autrement dit, un emballement thermique se produit dans une cellule (accumulateur), lorsque l’énergie dégagée par les réactions exothermiques qui surviennent à l’intérieur de celle-ci, excède la capacité à la dissiper à l’extérieur. Cet emballement peut être suivi d’une génération de gaz et d’explosion et/ou feu.
Également, le maintien d’une température inférieure à 70°C permet d’augmenter la durée de vie d’un accumulateur, car plus la température de fonctionnement d’un accumulateur est élevée, plus sa durée de vie sera diminuée.
En outre, certaines chimies d’accumulateurs requièrent une température de fonctionnement bien au-delà de la température ambiante et par conséquent, il s’avère nécessaire de réguler leur niveau de température par un préchauffage initial des accumulateurs, voire par un maintien en température permanent des accumulateurs.
Au niveau d’une cellule (accumulateur), les différents dispositifs internes de protection connus sont:
- un dispositif à coefficient de température positif (PTC acronyme anglo-saxon pour « Polymeric positive Temperature Coefficient ») : actuellement, un grand nombre d’accumulateurs cylindriques déjà commercialisés en sont munis. Un tel dispositif se présente sous la forme d’un anneau en polymère (polyéthylène) laminé avec un métal. En cas de surcharge, ce polymère chauffe, change de phase, devient plus résistif et limite ainsi le passage du courant ;
- un dispositif d’interruption du courant (CID pour « current interruption device ») : il interrompt le courant si la pression du gaz dans la cellule dépasse les limites spécifiées ;
- un dispositif coupe circuit (en anglais « shutdown ») qui empêche la génération de courants élevés ;
- un évent constitué d’une soupape ou d’un disque de rupture, qui s’ouvre lorsque la pression augmente brutalement, et dépasse une pression critique déterminée, afin d’éviter l’explosion de la cellule ;
- un fusible thermique, actuellement mis en œuvre dans les accumulateurs de grande capacité, qui coupe le courant dès lors que la température dans l’accumulateur est trop élevée.