INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
A pH 3, les phages T5 co-séchés avec la levure CNCM I-3856 restent actifs pendant au moins 30 min avant de passer sous le seuil de détection.
A pH 3.5, après 2h, une perte en phages T5 co-séchés avec la levure CNCM I-3856 est observée en Log PFU/g plus importante.
A pH 4, les phages T5 co-séchés avec la levure CNCM I-3856 sont dans un environnement plus stable. A noter que la concentration en PFU/g des échantillons peut augmenter entre les temps T0 et T30. Cela est très certainement dû au fait que la poudre (notamment la poudre atomisée) peut former des agglomérats qui ne se dissolvent pas toujours très rapidement.
Les levures des échantillons mis en contact avec le liquide gastrique à pH 2.5 ont été dénombrées au début (T0) puis à la fin (T120) de l’expérience. Les résultats sont similaires sur tous les essais, après 2h dans un environnement acide, la concentration de levure est très faiblement diminuée. temps 0 120 min Log CFU/g 9,01 8,91 Exemple 5. Test gastro résistance en liquide gastrique avec un mélange issu du co-séchage par atomisation d’une levure avec le cocktail de bactériophages SalmoFresh TM pH 0 30 min 120 min Temps et mélange testé 2,5 6,19 5,11 Log PFU/G levure CNCM I-3856 + cocktail bactériophage SalmoFresh™ 3 7,72 7,59 5,70 3,5 7,95 8,08 7,63 4 8,03 8,03 7,92 2,5 ND ND ND Log PFU/G cocktail bactériophage SalmoFresh™ seul 3 ND ND ND 3,5 5,90 5,31 ND 4 7,53 6,80 6,19
En comparant les résistances gastrique des solutions de phages seuls (T5 et SalmoFresh™) entre elles, une meilleure survie est observée des phages présents dans la solution SalmoFresh TM . Il est également à noter que la solution de SalmoFresh TM contient un cocktail de phages et que la sensibilité au pH de chacun des phages le composant peut être différente.
Il est à noter que le co-séchage avec des levures par atomisation permet aux phages de rester actifs pendant 30 min même à pH 2,5 avant de passer sous le seuil de détéction.
A pH 3,0, 3,5 et 4,0, les échantillons restent actifs pendant les 2h de l’expérience.
De même, les levures des échantillons mis en contact avec le liquide gastrique à pH 2,5 ont été dénombrées au début (T0) puis à la fin (T120) de l’expérience. Les résultats sont similaires sur tous les essais, après 2h dans un environnement acide, la concentration de levure est très faiblement diminuée. temps 0 120 min Log CFU/g 9,75 9,46 Exemple 6. Test gastro résistance en liquide gastrique avec un mélange issu du co-séchage d’écorces de levure soit avec le bactériophage T5 soit avec le cocktail de bactériophages SalmoFresh TM . pH 0 30 min 60 min 120 min Temps et mélange testé 2,5 ND ND ND ND Log PFU/G écorces de levure + bactériophage T5 3 7,7’ 7,60 6,57 ND 3,5 8,02 8,33 8,19 7,81 4 8,23 8,43 8,34 8,19 2,5 ND ND ND ND Log PFU/G écorces de levure + cocktail bactériophage SalmoFresh™ 3 7,09 8,34 7,79 6,78 3,5 8,67 8,29 7,53 7,25 4 9,09 8,83 8,40 7,41
Ces échantillons ont été réalisés par co-séchage par atomisation. La survie des phages semble identique pour les pH 3,0, 3.5, et 4,0 malgré une acidité plus faiblement neutralisée par les échantillons comparée aux autres essais atomisés utilisant la levure CNCM I-3856.
Il a été observé à pH3 que les phages T5 survivent 60 min et les phages de la solution SalmoFresh TM survivent durant les 120 min de l’expérience. L’hypothèse probable est que la poudre obtenue avec ces essais étant encore moins soluble que la poudre atomisée obtenues avec des levures vivantes, la diffusion des phages se ferait plus tardivement, ce qui pourrait participer à leur protection. Cette hypothèse pourrait aussi expliquer pourquoi plus de phages sont dénombrés après 30 min d’exposition comparé aux dénombrements réalisés à T0 min. Exemple 7. Test de résistance en liquide intestinal avec un mélange issu du co-séchage de levures soit avec le bactériophage T5 soit avec le cocktail de bactériophages SalmoFresh TM Méthode de séchage 0 30 min 60 min 120 min Temps et mélange testé Contrôle 6,87 6,95 6,85 6,90 bactériophage T5 Lit fluidisé 6,18 5,78 6,11 6,20 Log PFU/G levure L13 + bactériophage T5 Atomisation 6,92 7,24 7,29 7,37 Log PFU/G levure CNCM I-3856 + bactériophage T5 Lyophilisation 7,58 7,66 7,68 7,75 Contrôle 8,04 8,04 8,10 7,92 cocktail bactériophage seul Lit fluidisé 6,56 6,39 6,36 6,48 Log PFU/G levure CNCM I-3856 + cocktail bactériophage SalmoFresh™ Atomisation 8,34 8,57 8,68 8,70 Lyophilisation 8,01 8,05 8,15 8,19
La biomasse produite par la souche appartenant au genre Clostridium
La biomasse bactérienne est principalement adsorbée sous forme de biofilm sur un support solide. Préférablement, les bactéries sont des souches appartenant à l’espèce Clostridium beijerinckii et/ou Clostridium acetobutylicum . Les bactéries utilisées dans le procédé peuvent être des souches génétiquement modifiées ou non et naturellement productrices d’isopropanol, et/ou des souches de Clostridium naturellement productrices d’acétone génétiquement modifiées pour les faire produire de l’isopropanol. Dans les exemples suivants, il s’agit de Clostridium beijerinckii DSM 6423.
Le support solide
Le support solide comprend une mousse en polyuréthane. La mousse en polyuréthane est particulièrement avantageuse car elle donne accès non seulement à la production de mélanges de type IBEA, mais elle donne aussi accès à la production de type continu par immobilisation de la biomasse bactérienne. En effet, la mousse en polyuréthane est capable de fixer les bactéries du genre Clostridium de façon suffisamment importante ( i.e., au-delà du taux de dilution causant le lavage cellulaire) permettant de produire en continu des mélanges de type IBEA. De plus, la mousse en polyuréthane est adaptée pour être immobilisée par immersion dans un réacteur. Alternativement, on peut utiliser une mousse à base de matériau(x) céramique(s).
Selon un ou plusieurs modes de réalisation, la mousse en polyuréthane présente : - des cavités volumiques ( i.e., pores ou cellules) dont le diamètre de sphère équivalent est compris entre 0,1 et 5 mm, de préférence entre 0,25 mm et 1,1 mm, de préférence entre 0,55 et 0,99 mm, et/ou - une densité apparente ( i.e., masse sur volume apparent) mesurée dans l’air comprise entre 10 et 90 g/L, de préférence entre 10 et 80 g/L, de préférence entre 15 et 45 g/L, tel qu’entre 20 et 45 g/L ou entre 25 et 45 g/L.
Dans le cas d’une fermentation batch avec Clostridium beijerinckii DSM6423, la corrélation entre cellules actives en suspension et débit de gaz de fermentation a premièrement été établie et est présentée à la , qui est un graphe qui représente en abscisse la concentration en cellules actives en cellules. mL -1 , et en ordonnée le débit de gaz sortant du bioréacteur en L.h -1 . Ces essais ont été réalisés sur milieu GAPES, à 34°C et sans régulation pH.
Les conditions opératoires de ces essais sont les suivantes : Après réduction du milieu CALAM dont la composition est donnée dans le tableau 1 ci-dessous, les spores sont activées par un choc thermique à 100°C pendant une minute, et une inoculation du milieu à 2% est réalisée. La préculture est ensuite incubée à 34°C, en anaérobie et sous agitation à 100 rpm pendant 24 h.
Composant Concentration (g.L-1) Pomme de terre 250 (NH 4 )2SO 4 2,0 CaCO 3 2,0 Glucose 10,0
Une seconde préculture en milieu GAPES, dont la composition est donnée dans le tableau 2 ci-dessous, est ensuite réalisée avant l’ensemencement final du fermenteur. Une inoculation du milieu GAPES est cette fois-ci effectuée à 10% puis la préculture incubée à 34°C, en anaérobie et sous agitation à 100 rpm pendant 24 h.
Composant Concentration (g.L-1) FeSO 4 , 7H 2 O 0,0066 MgSO4, 7H 2 O 1,0 KH 2 PO 4 1,0 K 2 HPO 4 0,6 CH 3 COONH 4 2,9 Acide p-amino-benzoïque 0,1 Extrait de levure granulé 2,5 Glucose 45 ou 60
Enfin la fermentation en réacteur est réalisée avec du milieu GAPES préalablement réduit et avec une inoculation à 10%. Les conditions de cultures employées sont : température à 34°C, agitation de 200 rpm, sans bullage à l’azote et sans régulation de pH.
Dans le cas des fermentations continues, une première phase de croissance en batch a lieu pendant 8h puis le réacteur est connecté à une bouteille d’alimentation (milieu GAPES) et une bouteille de soutirage. L’alimentation est démarrée et progressivement augmentée.
Le débit de gaz a été mesuré à l’aide d’un compteur volumétrique Ritter et la quantité de cellules actives par marquage au cFDA et analyse par cytométrie en flux.
Le protocole de mesure est le suivant : Tampon Mac Ilvaine pH 4 1. Préparer une solution d’acide citrique à 0,1 M (soit 19,21 g/L) et une solution de Na2HPO 4 à 0,2 M (soit 28,38 g/L). 2. Pour obtenir un pH égal à 4, mélanger 307,25 mL de la solution d’acide citrique à 0,1 M avec 192,75 mL de la solution de Na2HPO4 à 0,2 M. Vérifier le pH de la solution tampon obtenue. 3. Filtrer la solution et la conserver à 4°C.
Marqueur de viabilité Iodure de propidium : 1,4986 mM dans de l’eau milliQ – à conserver à 4°C Chemchrome V8 commercialisé par Biomérieux (cFDA : diacétate de carboxyfluoresceine ) : 0,217 µM dans de l’acétone – à conserver à -20°C
Marquage des cellules 1. Diluer la suspension cellulaire dans du tampon Mac Ilvaine afin d’obtenir une concentration d’environ 1.106 cellules/mL. 2. Ajouter 10 µL de Chemchrome V8 et 10 µL d’iodure de propidium dans 1 mL de la suspension cellulaire diluée 3. Incuber 10 min à 40 °C. 4. Passer l’échantillon au cytomètre en flux.
Méthode de culture de la bactérie enregistrée sous le numéro de dépôt CNCM I_5079
Le milieu M3 est composé de 0,5 g/L de NH 4 Cl, 0,5 g/L de MgSO·7H 2 O, 0,1 g/L de CaCl 2 ·2H 2 O, 0,04 g/L de KH 2 PO 4 , 0,12 g/L de K 2 HPO 4 , 20 g/L de NaCl et 6 g/L de HEPES. Une solution d’éléments traces a également été préparée. Elle est constituée de 7,3 g/L de Na2-EDTA, 2,5 g/L de FeSO 4 ·7H 2 O, 0,02 g/L de MnCl 2 ·4H 2 O, 0,242 g/L de Na 2 MoO 4 ·2H 2 O, 0,038 g/L de CuCl 2 ·2H 2 O et est ajoutée après autoclavage au milieu de culture.
Il y a donc un besoin de mélanges de levures et de bactériophages ayant une résistance aux variations de pH et aux rayons UV tout en assurant l’activité des levures ou des dérivés de levures et l’activité lytique des bactériophages.
Un phage est un virus qui infecte une bactérie. Selon l’invention, les termes « phage » et « bactériophage » sont interchangeables.
Selon un premier aspect, la présente invention a pour objet un procédé de fabrication d’un mélange sec d’au moins une levure et/ou d’un dérivé de levure et d’au moins un bactériophage ledit procédé étant caractérisé en ce qu’il est effectué par le mélange d’au moins une levure et/ou d’un dérivé de levure et d’au moins un bactériophage en suspension et le séchage de ce mélange.
Selon un deuxième aspect, la présente invention a pour objet un mélange sec d’au moins une levure et/ou d’un dérivé de levure et d’au moins un bactériophage, caractérisé en ce qu’il se présente sous forme d’entités solides, chaque entité solide étant composée d’au moins une levure et/ou au moins un dérivé de levures et d’au moins un bactériophage et éventuellement au moins un excipient de séchage.
De préférence, ledit mélange est obtenu par le procédé selon le premier aspect.
Selon un troisième aspect, la présente invention a pour objet une utilisation du mélange sec selon le deuxième aspect ou du mélange sec obtenu à partir du procédé selon le premier aspect en tant que médicament dans une composition destinée à diminuer l’acidité du jus gastrique.
Selon un quatrième aspect, la présente invention a pour objet une utilisation du mélange sec selon le deuxième aspect ou du mélange sec obtenu à partir du procédé selon le premier aspect dans une composition pour la stimulation, la protection, le biocontrôle et/ou la nutrition des plantes.
Selon un cinquième aspect, la présente invention a pour objet une utilisation du mélange sec selon le deuxième aspect ou du mélange sec obtenu à partir du procédé selon le premier aspect dans une composition alimentaire ou dans un complément alimentaire.
Selon un sixième aspect, la présente invention a pour objet une utilisation du mélange sec selon le deuxième aspect ou du mélange sec obtenu à partir du procédé selon le premier aspect en brasserie et/ou en œnologie.
Selon un septième aspect, la présente invention a pour objet une utilisation du mélange sec selon le deuxième aspect ou du mélange sec obtenu à partir du procédé selon le premier aspect en panification.
Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention a pour objet un procédé de fabrication d’un mélange sec d’au moins une levure et/ou d’un dérivé de levure et d’au moins un bactériophage ledit procédé étant caractérisé en ce qu’il est effectué par le mélange d’au moins une levure et/ou dérivé de levure ou d’un dérivé de levure et d’au moins un bactériophage et le séchage de ce mélange.
Un tel procédé permet de produire des formulations stables contenant des phages assurant leur protection optimale et leur acheminement vers les sites d'action, tels que le tractus gastro-intestinal ou la phyllosphère des plantes (parties aériennes). Les formes sèches sont privilégiées en raison de leur facilité de manipulation et de leur stabilité de stockage à long terme, par exemple à des températures ambiantes, évitant ainsi la nécessité d'une chaîne de froid pour le stockage.
Les levures ou dérivés de levure, utilisées comme probiotiques en santé animale, humaine et végétale ont été caractérisées pour leur tolérance et leur résistance à plusieurs facteurs de stress associés à la fois aux procédures de fabrication (processus en aval, par exemple séchage, stockage) et aux conditions stressantes du tractus intestinal (pH gastrique, bile et enzymes digestives).
La combinaison de levure et/ou dérivé de levure et de phage constitue une alternative pour protéger les phages par la levure ou ses dérives et les véhiculer jusqu'au site cible. Ainsi, les levures (ou ses dérivés) ont un double rôle : d’un côté elles jouent le rôle de probiotiques et, d’un autre côté, elles servent de support lors de l’étape de séchage, comme montré par les exemples ci-dessous. Cette solution permet de maximiser les effets bénéfiques de chacun des composants de la combinaison.
Par ailleurs, et notamment dans le cas d’une utilisation pour la protection des végétaux, le mélange obtenu par le procédé de co-séchage de phage avec de la levure et/ou des dérivés de levure permet d’améliorer la protection des phages vis-à-vis des conditions environnementales et des effets UV (conditions in vitro ), tout en conservant l’activité et les propriétés bénéfiques de la levure.
La , déjà décrite, représente une vue en coupe transversale d’un moteur à commande intégrée équipé d’un autre dispositif selon l’état de la technique pour empêcher les fuites d’air chaud via le jeu autour de l’arbre de rotation ;
La représente une vue schématique en perspective d’un exemple de pompe centrifuge selon l’invention monté sur un arbre de rotation d’un moteur à commande intégrée ;
La représente une vue schématique en coupe partielle de la pompe centrifuge de la montée à la jonction de la première cavité et de la deuxième cavité ;
La représente une vue schématique en coupe transversale d’un moteur à commande intégrée équipé de la pompe centrifuge de la ;
La représente les vues de la pompe centrifuge des figures 4 et 5 sur lesquelles est schématisée la circulation du flux d’air généré par la pompe centrifuge ;
La représente schématiquement une vue de côté d’un exemple d’aube de la pompe centrifuge de la ; et
La représente une vue en coupe transversale partielle d’un moteur à commande intégrée selon un mode de réalisation de l’invention.
DESCRIPTION DETAILLEE Un exemple de réalisation d’un moteur à commande intégrée et équipé d’une pompe centrifuge selon l’invention, générant la circulation d’un flux d’air de la cavité abritant l’unité de commande vers la cavité abritant la machine électrique, est décrit en détail ci-après, en référence aux dessins annexés. Cet exemple illustre les caractéristiques et avantages de l'invention. Il est toutefois rappelé que l'invention ne se limite pas à cet exemple.
Un exemple d’une pompe centrifuge 100 selon l’invention est représenté sur les figures 4, 5 et 9. Cette pompe centrifuge 100 est une pompe ou un compresseur qui aspire de l’air de la première cavité 21 pour l’envoyer dans la deuxième cavité 22 sous l’effet de la force centrifuge. La pompe centrifuge 100 est montée autour de l’arbre de rotation 40 du moteur à commande intégrée 10 afin de réduire la température de l’unité de commande 12 en empêchant l’air chaud de passer, par le jeu autour de l’arbre de rotation 40, de la première cavité 21 vers la deuxième cavité 22. Pour cela, la pompe centrifuge 100 est montée à la jonction entre la première cavité 21 qui abrite la machine électrique 11 et la deuxième cavité 22 qui abrite l’unité de commande 12. On appelle « jonction » la zone du carter qui s’étend autour de l‘arbre de rotation de part et d’autre de la cloison thermique, à la frontière entre la première cavité et la deuxième cavité.
Comme expliqué dans l’état de la technique, un moteur à commande intégrée peut comprendre une ou plusieurs cloisons thermiques 30 séparant la première cavité 21 et la deuxième cavité 22. Le moteur à commande intégrée selon l’invention peut également, en fonction du mode de réalisation, comporter une ou plusieurs cloisons thermiques 30. Dans la suite de la description, on parlera indifféremment de la cloison thermique ou des cloisons thermiques, étant entendu que le positionnement et le fonctionnement de la pompe centrifuge 100 est identique quel que soit le nombre de cloisons thermiques.
La pompe centrifuge 100 a pour fonction d’aspirer de l’air de la deuxième cavité 22 et de faire circuler le flux d’air aspiré à travers le jeu entre l’arbre 40 et la cloison thermique 30 en direction de la première cavité 21. L’air ambiant de la deuxième cavité 22 (c'est-à-dire l’air au voisinage de l’unité de commande 12) est ainsi chassé vers la première cavité 21 de sorte que, non seulement les fuites d’air potentielles dans le jeu entre la cloison thermique et l’arbre sont neutralisées, mais aussi que l’air chauffé de la deuxième cavité 22 est envoyé vers la première cavité 21 (où règne un air encore plus chaud), ce qui refroidit l’air ambiant de la deuxième cavité.
Selon certains modes de réalisation représentés sur les figures 4 à 6, la pompe centrifuge 100, comporte un cylindre 110 et des aubes rotatives 120 réparties sur la circonférence dudit cylindre 110 pour former une roue aubée. Le cylindre 110 est monté autour de l’arbre de rotation 40 (appelé plus simplement arbre) et entrainé par ce dernier. Lorsque le moteur est en fonctionnement, le cylindre 110, et par conséquent les aubes rotatives 120, sont ainsi mis en rotation par l’arbre 40. Le cylindre 110 peut, par exemple, être monté en force autour de l’arbre 40 ou fixé par tout moyen de fixation connu dans le domaine des moteurs et de la transmission comme, par exemple, par assemblage vissé, clavette, cannelure, pion, goupille élastique ou autre…. Le cylindre 110 peut s’étendre sur une portion plus ou moins longue de l’arbre 40 et peut, par exemple, traverser l’unité de commande 12 ou la machine électrique 11. Dans l’exemple des figures 4 et 5, le cylindre 110 s’étend depuis la zone avoisinant la cloison thermique 30 de la première cavité 21 jusqu’à la première paroi externe arrière 23 du carter 20. Dans cet exemple, le cylindre 110 est bloqué axialement sur l’arbre 40 par l’intermédiaire d’un premier épaulement 130 et d’un second épaulement 140 en butés directement ou indirectement sur des éléments du rotor, comme la roue 11 et le roulement arrière. En alternative, le cylindre pourrait être bloqué axialement par butée (directe ou indirecte) de part et d’autre de la cloison thermique 30 ou par butée (directe ou indirecte) sur d’autres éléments du rotor.
Les aubes rotatives 120, appelées plus simplement aubes, sont montées sur le cylindre 110 de sorte à être solidaires dudit cylindre. Elles peuvent, par exemple, être réalisées d’une seule pièce avec le cylindre 110 ou être fixées sur le cylindre par tout moyen de fixation connu dans le domaine des moteurs et de la transmission, comme par exemple par soudage, collage, vissage, rivetage ou autre…. Les aubes rotatives 120 sont réparties régulièrement sur le contour du cylindre 110 et forment une couronne d’aubes. Lorsque ces aubes, entraînées par le cylindre 110, sont en rotation, elles impriment un mouvement de rotation au volume d’air situé entre chaque paire d’aubes. Sous l’effet de la rotation des aubes 120, le flux d’air entre chaque paire d’aubes subit une force centrifuge et tend à se déplacer radialement vers l’extérieur des cavités. Le vide créé par l’évacuation de ce volume d’air va avoir pour effet d’aspirer l’air entre chaque paire d’aubes générant ainsi une différence de pression et donc un flux d’air.
Selon certains modes de réalisation, les aubes rotatives 120 sont localisées radialement entre la ou les cloison(s) thermique(s) 30 et le cylindre 110. Autrement dit, les aubes 120 sont positionnées au moins partiellement dans un jeu entre la cloison thermique 30 et l’arbre 40, à la jonction entre la première cavité 21 et la deuxième cavité 22. Dans l’exemple de la , deux cloisons thermiques 30 et 35 sont représentées, la cloison thermique 30 fermant la première cavité 21 et la cloison thermique 35 fermant la deuxième cavité 22. Dans l’exemple de la , une seule cloison thermique 30 est représentée qui assure la séparation entre la première et la deuxième cavité. Quelle que soit le nombre de cloisons thermiques, la rotation des aubes 120 engendre une différence de pression entre la première cavité et la deuxième cavité, cette différence de pression assurant le flux d’air de la deuxième cavité 22 vers la première cavité 21.
Comme représenté sur les figures 4 et 7, le cylindre 110 de la pompe centrifuge 100 peut comporter une paroi cylindrique 150 qui se termine, à une première extrémité, par un épaulement 130 (appelé aussi première extrémité radiale) en saillie par rapport au cylindre 110 et/ou aux aubes 120. Cet épaulement 130 forme une dérivation pour le flux d’air généré par la rotation des aubes. Cette dérivation a pour effet de chasser le flux d’air loin de l’arbre de rotation 40, par exemple vers l’extérieur de la première cavité, créant ainsi un manque d’air entre les aubes, ce qui engendre une aspiration le long de la paroi cylindrique 150 du cylindre.
La section de chaque aube est délimitée par un extrados et un intrados, l’extrados et l’intrados de la section de chaque aube partant d’un même bord d’attaque et se rejoignant en un même bord de fuite.
L’un de l’intrados et de l’extrados, de préférence l’intrados, comprend une première partie courbe (incurvée) du bord d’attaque à un point d’intersection et une deuxième partie courbe (incurvée) du point d’intersection au bord de fuite. Ainsi, l’intrados ou l’extrados, de préférence l’intrados, comprend donc au moins deux parties de courbes dont l’intersection a lieu au point d’intersection.
Par ailleurs, au point d’intersection, la tangente (à l’intrados par exemple si l’intrados comporte ledit point d’intersection) de la première partie courbe forme un angle non nul (et inférieur à 180°) avec la tangente (à l’intrados par exemple si l’intrados comporte ledit point d’intersection) de la deuxième partie courbe. En d’autres termes, les tangentes de la première partie courbe et de la deuxième partie courbe ne sont pas alignées. Ainsi, l’un de l’intrados et de l’extrados (de préférence l’intrados) présente une singularité au point d’intersection : au point d’intersection, l’intrados ou l’extrados comprend une dérivée à gauche (ou dérivée de la première partie courbe) différente de la dérivée à droite (ou dérivée de la deuxième partie courbe).
La première partie courbe peut de préférence être dérivable. La deuxième partie courbe peut de préférence être dérivable. Ainsi, l’intrados ou l’extrados comprend une seule singularité.