INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L’articulation peut en outre comprendre un moyen de fixer ensemble le premier manchon et le deuxième manchon. Ce moyen peut fixer les manchons en rotation et/ou en translation. Ce moyen peut comprendre une fixation insérée dans les armatures internes. Plus précisément, la fixation est une pièce (par exemple en métal tel que l’acier), telle qu’une une lame (par exemple en métal tel que l’acier), insérée (e.g. en force) dans un passage central de la première armature interne et dans un passage central de la deuxième armature interne. La fixation insérée dans les armatures internes fixe les deux manchons en rotation. La fixation et les armatures internes peuvent également présenter un tel frottement et/ou un tel agencement que la fixation insérée fixe en outre les deux manchons en translation. Ce moyen peut de manière alternative ou additionnelle comprendre le boitier, précédemment discuté, qui fixe les manchons en translation. Le boitier peut être présent en plus de la fixation insérée dans les armatures internes, de sorte à coopérer avec celles-ci pour fixer les manchons. Ainsi, dans ce cas, le boitier fixe les manchons en translation tandis que la fixation insérée dans les armatures internes les fixe en rotation. De manière alternative, le moyen de fixer ensemble les manchons peut ne pas comprendre la fixation insérée dans les armatures internes. Dans ce cas, au lieu d’y avoir la fixation insérée dans les armatures internes, les deux armatures internes peuvent présenter des formes complémentaires de sorte à s’imbriquer l’une dans l’autre. De manière additionnelle ou alternative, les deux armatures externes peuvent présenter des formes complémentaires de sorte à s’imbriquer l’une dans l’autre. Ces formes complémentaires permettent de fixer les manchons en rotation. De manière encore alternative, l’articulation peut comprendre la fixation insérée dans les armatures internes et les armatures internes et/ou externes peuvent en outre avoir des formes complémentaires. Dans ce cas, l’articulation peut comprendre ou ne pas comprendre le boitier.
Un exemple de l’articulation élastique va maintenant être décrit en référence aux figures 1 à 4B. L’articulation élastique dans cet exemple peut être utilisée dans un véhicule. Dans ces figures, l’axe U est l’axe de l’articulation, les axes V et W étant les directions radiales.
La montre le premier manchon 10 de l’articulation. Le premier manchon 10 comprend le premier corps élastique 16. Le premier corps élastique 16 entoure la première armature interne 12, qui comprend un passage central 120, et est entouré par la première armature externe 14. Le premier corps élastique 16 est moulé entre la première armature interne 12 et la première armature externe 14, le moulage pouvant comprendre un encollage du premier corps élastique 16 aux armatures 12 et 14. Le premier corps élastique 16 comprend deux dépressions 162 selon la première direction radiale W (une seule étant visible sur la figure). Par « selon », on entend que les deux dépressions 162 sont situées sur l’axe qui correspond à la première direction radiale W, de part et d’autre de l’armature interne 12. Les deux dépressions 162 sont symétriques par rapport à la deuxième direction radiale V. Le premier corps élastique 16 comprend également deux protrusions 160 selon la deuxième direction radiale V (une seule étant visible sur la figure). Par « selon », on entend que les deux protrusions 160 sont situées sur l’axe qui correspond à la deuxième direction radiale V, de part et d’autre de l’armature interne 12. Les deux protrusions 160 sont symétriques par rapport à la première direction radiale W. Chaque protrusion 160 forme une butée de fin de course selon la deuxième direction radiale V, i.e. une butée de fin de course pour le deuxième corps élastique.
La montre le deuxième manchon 20 de l’articulation. Le deuxième manchon 20 comprend le deuxième corps élastique 26. Le deuxième corps élastique 26 entoure la deuxième armature interne 22, qui comprend un passage central 220, et est entouré par la deuxième armature externe 24. Le deuxième corps élastique 26 est moulé entre la deuxième armature interne 22 et la deuxième armature externe 24, le moulage pouvant comprendre un encollage du deuxième corps élastique 26 aux armatures 22 et 24. Le deuxième corps élastique 26 comprend deux dépressions 262 selon la deuxième direction radiale V (une seule étant visible sur la figure). Par « selon », on entend que les deux dépressions 262 sont situées sur l’axe qui correspond à la deuxième direction radiale V, de part et d’autre de l’armature interne 22. Les deux dépressions 262 sont symétriques par rapport à la première direction radiale W. Le deuxième corps élastique 26 comprend également deux protrusions 260 (une seule étant visible sur la figure) selon la première direction radiale W. Par « selon », on entend que les deux protrusions 260 sont situées sur l’axe qui correspond à la première direction radiale W, de part et d’autre de l’armature interne 22. Les deux dépressions 260 sont symétriques par rapport à la deuxième direction radiale V. Chaque protrusion 260 forme une butée de fin de course selon la première direction radiale W, i.e. une butée de fin de course pour le premier corps élastique.
Cette expérience est réalisée avec la protéine Mmi1 endogène de S. pombe , de séquence d’acides aminés SEQ ID No : 1 (protéine Mmi1 complète).
Schématiquement, un extrait obtenu par lyse cellulaire de cellules exprimant la protéine Mmi1 est mis en présence pendant 1 h avec un anticorps anti-Mmi1.
Après séparation du milieu au moyen de billes de Sepharose® sur lesquelles est greffée la protéine A, les protéines fixées sur les billes sont éluées, et analysées par western blot, après séparation des protéines par électrophorèse sur gel SDS-PAGE, au moyen de l’anticorps anti-Mmi1.
Les résultats obtenus sont montrés sur la . On observe bien, sur la piste associée aux protéines capturées par immunoprécipitation avec l’anticorps anti-Mmi1 (piste « anti-Mmi1 »), une bande correspondant au poids moléculaire de la protéine Mmi1, qui ne se retrouve pas sur les autres pistes. On observe cependant également une bande de très forte intensité correspondant à une contamination par les IgG présents dans l’extrait cellulaire initial (bande indiquée par une flèche à droite sur la figure).
En comparaison de cette purification par l’anticorps anti-Mmi1, le procédé selon l’invention tel que mis en œuvre dans l’expérience 1, dont le résultat obtenu est illustré sur la , permet, quatre fois plus rapidement (15 min versus 1 h), de purifier la protéine Mmi1 avec un degré de pureté bien plus élevé.
C/ Expérience 3 - comparaison avec une immunoprécipitation TAP
Cette expérience est réalisée avec la protéine Mmi1 endogène de S. pombe fusionnée à la TAP.
Schématiquement, un extrait obtenu par lyse de cellules exprimant la protéine Mmi1 en fusion avec la protéine A est mis en présence pendant 1 h avec des billes de Sepharose® sur lesquelles sont greffés des IgG, afin d’isoler la protéine Mmi1 du milieu en tirant profit de la haute affinité des IgG pour la protéine A (Kd > 10 -9 M).
Après séparation des billes du milieu, les protéines fixées sur les billes sont éluées, et analysées par western blot, après séparation des protéines par électrophorèse sur gel SDS-PAGE, au moyen de l’anticorps anti-Mmi1.
Les résultats obtenus sont montrés sur la . On observe bien, sur la piste associée aux protéines capturées par immunoprécipitation avec les IgG (piste « Mmi1-TAP »), une bande correspondant au poids moléculaire de la protéine de fusion Protéine A - Mmi1.
En comparaison de cette purification par le système « Protéine A – IgG », le procédé selon l’invention tel que mis en œuvre dans l’expérience 1, dont le résultat obtenu est illustré sur la , permet, quatre fois plus rapidement (15 min versus 1 h), de purifier la protéine Mmi1 avec un degré de pureté équivalent, et même légèrement supérieur, notamment car il évite toute contamination avec les IgG.
D/ Expérience 4 – fusion avec la protéine GFP
Cette expérience est réalisée avec la protéine Mmi1 produite dans les cellules HEK293, en fusion avec la protéine GFP.
A cet effet, le gène de séquence SEQ ID No : 2 est cloné dans le plasmide pEGFP-C3 ou pEGFP-N3, pour permettre l’expression par les cellules HEK293, de la protéine Mmi1 (complète) en fusion, en C-terminal ou en N-terminal, avec la protéine GFP. Un témoin GFP seul est également réalisé.
Les cellules obtenues sont analysées par western blot après lyse cellulaire ou observées par microscopie par fluorescence pour y vérifier la localisation de la GFP.
Les résultats obtenus sont montrés sur la pour l’analyse par western blot après lyse cellulaire et sur la pour l’analyse de fluorescence des cellules non lysées.
Selon un mode de réalisation, la composition de shampoing solide pâteux malléable selon l’invention comprend : de 1% à 5% en poids de la composition de beurre de graines d'astrocaryum murumuru.
Selon un mode de réalisation, la composition de shampoing solide pâteux malléable selon l’invention comprend : de 1% à 5% en poids de la composition de beurre de graines de mangues.
Selon un mode de réalisation, la composition de shampoing solide pâteux malléable selon l’invention comprend : de 1% à 5% en poids de la composition d’huile de graines de tournesol.
Selon un mode de réalisation, la composition de shampoing solide pâteux malléable selon l’invention comprend : de 0,1 à 1% en poids de la composition d’extrait de fruit de concombre.
De manière préférée, ledit extrait de fruit de concombre est un mélange comprenant de l’eau, de la glycérine et un extrait de fruit de concombre.
Selon un mode de réalisation, l’invention peut comprendre des hydrolats végétaux.
Par hydrolats végétaux sont entendus des produits aqueux de condensation obtenu après distillation d'une matière première végétale, qui subsiste après l’entraînement à la vapeur d’eau et la séparation de l’huile essentielle lorsque c'est possible. Les eaux florales sont des hydrolats obtenus à partir de fleurs.
De manière préférée, lesdits hydrolats végétaux sont choisis parmi les hydrolats d’orange, de romarin, de camomille
Selon un mode de réalisation, l’invention peut comprendre en outre au moins une eau florale.
De manière préférée, ladite eau florale peut être de l’eau florale de citron ou de tilleul.
De telles eaux florales permettent d’apaiser et d’adoucir le cuir chevelu
Selon un mode de réalisation, la composition de shampoing solide pâteux malléable selon l’invention comprend : de 5% à 10% en poids de la composition d’eau florale de tilleul.
Selon un mode de réalisation, les combinaisons d’huiles végétales et/ou beurre végétal, et d’hydrolat végétal peuvent comprendre les combinaisons suivantes : Extrait de fruit de concombre ; Eau florale de tilleul ; Poudre d’aloé vera ; Huile de tournesol ; Beurre de mangue ; Beurre de murumuru.
Selon un mode de réalisation, les combinaisons d’huiles végétales et/ou beurre végétal, et d’hydrolat végétal peuvent comprendre les combinaisons suivantes : Beure de cacao ; Huile de noix du Brésil ; Huile de ricin ; Beurre de cupuacu ; Hydrolats d’oranger.
Selon un mode de réalisation, les combinaisons d’huiles végétales et/ou beurre végétal, et d’hydrolat végétal peuvent comprendre les combinaisons suivantes : Extrait huileux de gingembre ; Huile de ricin ; Hydrolat de romarin ; Extrait huileux de laurier ; Huile de Neem.
Selon un mode de réalisation, les combinaisons d’huiles végétales et/ou beurre végétal, et d’hydrolat végétal peuvent comprendre les combinaisons suivantes : Eau florale de citron ; Huile de noisette ; Huile de jojoba ; Extrait sec de thé blanc.
(b)'environ 0,01 à environ 3 % en poids, de préférence environ 0,05 à environ 2 % en poids, de manière davantage préférée environ 0,1 à environ 1 % en poids, du chélatant acide aminé, par exemple, la glycine, la lysine, la méthionine et leurs combinaisons, de préférence la glycine ;
(d) environ 0,5 à environ 25 % en poids, de préférence environ 0,5 à environ 20 % en poids, de manière davantage préférée environ 1 à environ 20 % en poids, desdits un ou plusieurs tensioactifs anioniques choisis parmi les sulfates d’alkyle, les éthersulfates d’alkyle, les sulfonates d’alkyle, les sulfosuccinates d’alkyle, les sulfoacétates d’alkyle, les iséthionates d'acyle, les monoacides alcoxylés, les acides aminés acylés tels que les taurates d'acyle, les glycinates d'acyle, les glutamates d'acyle, les sarcosinates d'acyle, leurs sels, et un mélange de ceux-ci, de préférence un ou plusieurs sulfates d'alkyle supplémentaires tels que le lauryl sulfate de sodium (SLS) et/ou le dodécyl sulfate de sodium (SDS) ; et
facultativement, environ 0,1 à environ 15 % en poids, de préférence environ 0,1 à environ 10 % en poids, de manière davantage préférée environ 1 à environ 5 % en poids d'un ou de plusieurs tensioactifs amphotères, de préférence une ou plusieurs bétaïnes ; et
(e) environ 50 à environ 95 % en poids, de préférence environ 60 à environ 92 % en poids, de manière davantage préférée environ 70 à 85 % en poids, d'eau ;
(f) facultativement, environ 0,1 à environ 25 % en poids, de préférence environ 0,1 à environ 10 % en poids, de manière davantage préférée, environ 1 à environ 5 % en poids d'un ou de plusieurs solvants solubles dans l'eau, par exemple, choisis parmi la glycérine, les monoalcools, les polyols (alcools polyhydriques), les glycols et un mélange de ceux-ci, de préférence, choisis parmi la glycérine, les monoalcools, les alcools polyhydriques, les glycols et un mélange de ceux-ci, de manière davantage préférée, choisis parmi la glycérine, l'alcool isopropylique, l'hexylène glycol et des mélanges de ceux-ci ;
tous les pourcentages en poids étant basés sur le poids total du shampooing.
Le pH du shampooing est typiquement inférieur à 7, par exemple, d'environ 3 à environ 6,5, d'environ 3 à environ 6, d'environ 3 à environ 5,5, d'environ 3,5 à environ 6,5, d'environ 3,5 à environ 6, d'environ 3,5 à environ 5,5, incluant les plages et les sous-plages intermédiaires. La viscosité du shampooing peut être d'environ 2 500 cP à environ 15 000 cP à une température de 25 °C. En outre, le shampooing peut être exempt ou essentiellement exempt de teintures de coloration capillaire, de pigments de coloration capillaire et/ou de colorants de coloration capillaire. Il est préférable que le shampooing soit sous la forme d'une dispersion.
Les conditionneurs selon la divulgation peuvent comprendre ou consister en :
(a) environ 0,1 à environ 5 % en poids, de préférence environ 0,1 à environ 3 % en poids, de manière davantage préférée environ 0,1 à environ 2 % en poids, du glucoside d’ascorbyle ;
(b) environ 0,01 à environ 3 % en poids, de préférence environ 0,05 à environ 2 % en poids, de manière davantage préférée environ 0,1 à environ 1 % en poids, du chélatant acide aminé, par exemple, la glycine, la lysine, la méthionine et leurs combinaisons, de préférence la glycine ;
Pour toute protéine de séquence d’acides aminés donnée ayant au moins 90 %, de préférence au moins 95 %, préférentiellement au moins 98 % et préférentiellement encore au moins 99 %, d’identité avec la séquence d’acides aminés de la protéine Mmi1 ou dudit fragment de la protéine Mmi1, il entre dans les compétences de l’homme du métier d’évaluer sa capacité de liaison au motif d’ARN de séquence UNAAAC, par des tests de liaison classiques en eux-mêmes, par exemple par des tests de retard sur gel après électrophorèse ou de spectroscopie à fluorescence, de dichroïsme circulaire ou de résonnance plasmonique. La spécificité de liaison peut être évaluée par ces mêmes méthodes, par comparaison avec de molécules d’ARN de séquence proche de la séquence UNAAAC (par exemple la séquence CNAAAC ou GNAAAC) et de comparer les résultats obtenus avec ceux obtenus avec ladite protéine Mmi1 ou ledit fragment de la protéine Mmi1.
La protéine de séquence d’acides aminés ayant au moins 90 %, de préférence au moins 95 %, préférentiellement au moins 98 % et préférentiellement encore au moins 99 %, d’identité avec la séquence d’acides aminés de la protéine Mmi1 ou dudit fragment de la protéine Mmi1 peut présenter, par rapport à la séquence de la protéine Mmi1 ou dudit fragment de la protéine Mmi1, qui constitue la séquence de référence, des insertions, délétions et/ou substitutions. Dans le cas d’une substitution, celle-ci est de préférence réalisée par un acide aminé de la même famille que l’acide aminé d’origine, par exemple par substitution d’un résidu basique tel que l’arginine par un autre résidu basique comme un résidu lysine, d’un résidu acide tel que l’aspartate par un autre résidu acide comme le glutamate, d’un résidu polaire comme la sérine par un autre résidu polaire comme la thréonine, d’un résidu aliphatique comme la leucine par un autre résidu aliphatique comme l’isoleucine, etc.
Le pourcentage d’identité entre deux séquences d’acides aminés est ici déterminé de manière classique en elle-même, en comparant les deux séquences alignées de manière optimale, à travers une fenêtre de comparaison, la partie de la séquence d’acides aminés à comparer située dans la fenêtre de comparaison pouvant comprendre des additions ou des délétions par rapport à la séquence de référence de sorte à obtenir un alignement optimal entre les deux séquences. Le pourcentage d’identité est ensuite calculé en déterminant le nombre de positions pour lesquelles un résidu d’acide aminé est identique dans les deux séquences comparées, puis en divisant ce nombre de positions par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaison, le nombre obtenu étant multiplié par cent pour obtenir le pourcentage d’identité entre les deux séquences.
Au sein de la protéine de fusion, l’étiquette protéique peut être fusionnée à l’extrémité N-terminale ou à l’extrémité C-terminale de la protéine d’intérêt.
Le cas échéant, un espaceur peut être intégré entre la protéine d’intérêt et l’étiquette protéique.
Dans des modes de mise en œuvre particuliers de l’invention, un site de clivage enzymatique est inséré entre la protéine d’intérêt et l’étiquette protéique. Tout site de clivage classique en lui-même entre dans le cadre de l’invention, notamment les sites de clivage par protéase tel que le site de clivage de la protéase TEV (protéase du virus de la gravure du tabac).
Dans de tels modes de mise en œuvre, le procédé selon l’invention comprend de préférence une étape de clivage de la protéine de fusion, par une enzyme adéquate, au niveau de ce site de clivage enzymatique, de sorte à séparer la protéine d’intérêt de l’étiquette protéique.
Une telle étape de clivage de la protéine de fusion n’est cependant qu’optionnelle, et n’est en particulier nécessaire que lorsque la fusion de l’étiquette protéique à la protéine d’intérêt modifie l’activité de cette dernière utile pour l’application visée de la protéine d’intérêt. Lorsque la fusion de l’étiquette protéique à la protéine d’intérêt ne modifie pas l’activité de cette dernière, et n’induit pas non plus d’effet secondaire néfaste dans le cadre de l’application visée, alors une étape de séparation de la protéine d’intérêt et de l’étiquette protéique n’est nullement nécessaire. En particulier, les protéines Mmi1 du genre Schizosaccharomyces interagissent avec l’ARN de manière tout à fait différente des protéines à domaine YTH des mammifères, si bien que la protéine de fusion préparée et purifiée selon l’invention peut avantageusement être administrée, telle quelle, à un mammifère, en particulier à un humain, sans que l’étiquette protéique ne vienne y perturber les processus biologiques normaux.
De manière tout à fait avantageuse, la présence de l’étiquette protéique selon l’invention en fusion avec la protéine d’intérêt n’entraine aucun effet indésirable dans les cellules d’eucaryotes supérieurs. Cette étiquette protéique ne présente aucune toxicité pour ces cellules, et n’y provoque pas de modification de la localisation de la protéine d’intérêt.
L’étape de préparation de la protéine de fusion peut être réalisée de toute manière conventionnelle, en particulier par voie biologique, en mettant en œuvre des techniques de génie génétique classiques en elles-mêmes.
En particulier, la protéine de fusion peut être préparée par transfection d’un organisme hôte adéquat avec une molécule d’acide nucléique codant pour la protéine de fusion, ou transformation d’un organisme hôte adéquat avec un vecteur d’expression dans lequel le gène hybride codant pour la protéine de fusion est lié de manière opérante à une séquence d’ADN contrôlant son expression ; et culture de cet organisme hôte dans des conditions permettant l’expression de la protéine de fusion, de telles conditions étant classiques en elles-mêmes et bien connues de l’homme du métier.
Les organismes hôtes pouvant être utilisés à cet effet incluent, de manière non limitative, les bactéries gram-positives et gram-négatives telles que des souches d’ Escherichia coli ou Bacillus subtilis , des levures telles que des souches de Saccharomyces cerevisiae , et des organismes eucaryotes supérieures, notamment des lignées cellulaires mammifères.
Le gène hybride codant pour la protéine de fusion peut être préparé par des méthodes de recombinaison d’ADN classiques ou par des méthodes de synthèse génique également classiques en elles-mêmes. Il peut être incorporé dans tout vecteur d’expression de protéine classique.
A l’issue de cette étape de préparation du procédé selon l’invention, la protéine de fusion produite est séparée de l’organisme hôte et du milieu de culture par mise en présence du milieu la contenant, le cas échéant après une lyse cellulaire (une telle étape de lyse cellulaire n’étant pas nécessaire lorsque la protéine de fusion à séparer du milieu est du type à adressage extracellulaire) la molécule d’ARN cible, greffée sur un support solide ou couplée de manière covalente à un ligand de capture.
Dans des modes de mise en œuvre particuliers de l’invention, cette molécule d’acide ribonucléique contient une ou plusieurs répétitions du motif de séquence UNAAAC. Ces différentes répétitions peuvent aussi bien être contigües, qu’espacées les unes des autres par une séquence espaceur.
La illustre une vue schématique d’un véhicule automobile 1 conforme au premier aspect de l’invention. Le véhicule automobile 1 comporte un ensemble 2 conforme au deuxième aspect de l’invention comprenant une traverse 3 avant selon l’invention s’étentant selon une direction transversale 45 à l’avant du véhicule automobile 1. La traverse 3 conforme au premier aspect de l’invention forme une poutre destinée à s’étendre latéralement entre deux longerons latéraux 4 du véhicule automobile 1.
La montre que le véhicule automobile 1 comporte en outre un capot 5 mobile en rotation autour d’un axe transversal 6 s’étendant latéralement dans le véhicule automobile 1. Le capot 5 comporte deux gâches 6, 7 de fermeture, une première gâche 6 et une deuxième gâche 7, situées chacune de part et d’autre d’un axe longitudinal 8 du véhicule automobile 1. Chaque gâche 6, 7 de fermeture collabore avec l’une des serrures 9, 10 de capot 5 de l’ensemble 2, parmi lesquelles une première serrure 9 et une deuxième serrure 10, lorsque le capot 5 est en position fermée tel qu’illustré en .
La illustre une vue schématique de la traverse 3 conforme au premier aspect de l’invention. La traverse 3 selon l’invention comporte une première extrémité latérale 11 opposée à une deuxième extrémité latérale 12. La traverse 3 selon l’invention comporte trois interfaces de montage 13, 14, 15 : une première interface de montage 13, une deuxième interface de montage 14 et une troisième interface de montage 15.
La montre que la première interface de montage 13 est située au niveau de la première extrémité latérale 11 de la traverse 3 conforme au premier aspect de l’invention. La première interface de montage 13 est destinée à permettre la fixation de la première serrure 9 de capot 5 comme montré en .
La montre que la deuxième interface de montage 14 est située au niveau de la deuxième extrémité latérale 12 de la traverse 3 conforme au premier aspect de l’invention. La deuxième interface de montage 14 est destinée à permettre la fixation d’une deuxième serrure 10 de capot 5 comme montré en .