INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le terme « fil » désigne un terme générique pour un brin continu de fibres ou de filaments textiles. Un fil se présente sous les formes indiquées ci-après, à savoir : (1) un certain nombre de fibres qui ont été soumises à une torsion les uns avec les autres ; (2) un certain nombre de filaments posés de manière conjointe en l’absence de torsion ; (3) un certain nombre de filaments posés de manière conjointe avec un degré de torsion ; (4) un filament unique avec ou sans torsion (monofilament) ; et (5) une bande étroite de matière avec ou sans torsion.
La présente invention sera décrite en se référant aux dessins annexés, dans lesquels :
la représente une vue schématique en coupe transversale d’un bandage pneumatique donné à titre d’exemple pour son utilisation dans le cadre de la présente invention ; et
b) l’ajout d’un agent de liaison (tel qu’un anticorps ou un fragment fonctionnel d’anticorps, notamment un anticorps à domaine unique) tel que défini ci-dessus au mélange de l’étape a);
c) la détection de la présence ou de l’absence d’au moins un sarbecovirus dans le mélange de l’étape b), et/ou la détection de la présence ou de l’absence d’au moins un composé/une molécule à tester.
Avantageusement, l’étape de détection (et/ou de quantification) des méthodes susmentionnées est réalisée comme décrit ci-dessus en lien avec les compositions et les kits selon l’invention, mutatis mutandis .
Avantageusement, les méthodes sont mises en œuvre comme décrit ci-dessus en lien avec les méthodes de diagnostic, de pronostic, de suivi, de stratification, ou d’évaluation de l’efficacité d’un traitement, telles que définies ci-dessus, mutatis mutandis .
Selon un mode de réalisation, la méthode comprend en outre une étape a’) réalisée avant l’étape a), d’amplification ( in vitro ) des éventuels sarbecovirus présents dans l’échantillon. L’amplification des sarbecovirus peut être réalisée par toute technique connue de l’homme du métier. De telles techniques sont notamment décrites dans la section « Compositions et Kits » ci-dessus.
La présente invention concerne également une utilisation in vitro d’au moins un agent de liaison (tel qu’un anticorps ou un fragment fonctionnel d’anticorps, notamment un anticorps à domaine unique) tel que définie ci-dessus, pour :
détecter la présence ou l’absence d’au moins un sarbecovirus dans un échantillon; déterminer la quantité d’au moins un sarbecovirus dans un échantillon ; cribler des composés/molécules capables de détecter et/ou reconnaitre au moins un sarbecovirus ; de préférence cribler des composés/molécules capables de neutraliser au moins un sarbecovirus ; ou une combinaison quelconque de a) à c).
Avantageusement, l’étape de détection (et/ou de quantification) des utilisations susmentionnées est réalisée comme décrit ci-dessus en lien avec les compositions et les kits selon l’invention, mutatis mutandis .
Avantageusement, les utilisations sont mises en œuvre comme décrit ci-dessus en lien avec les méthodes de diagnostic, de pronostic, de suivi, de stratification, ou d’évaluation de l’efficacité d’un traitement, telles que définies ci-dessus, mutatis mutandis .
Selon un mode de réalisation, l’utilisation comprend en outre une étape préliminaire d’amplification ( in vitro ) des éventuels sarbecovirus présents dans l’échantillon. L’amplification des sarbecovirus peut être réalisée par toute technique connue de l’homme du métier. De telles techniques sont notamment décrites dans la section « Compositions et Kits » ci-dessus.
Les exemples qui suivent visent à illustrer la présente invention, et ne sauraient être considérés comme limitatifs.
Description des figures : Scanning mutationnel profond (Deep Mutational Scanning) sondant la liaison de VHH-72 au domaine RBD de la protéine Spike du SARS CoV2.
(A) Deux bibliothèques d'ADN de mutants uniques de VHH72 (correspondant à la partie N-terminale et C-terminale du nanocorps) ont été transformées en levure en utilisant la recombinaison de réparation des lacunes. (B) Principe général du criblage fonctionnel par affichage de surface en levure. Les cellules sont incubées avec l'antigène et les clones portant les mutations VHH72 avec une liaison accrue du RBD SARS-CoV2 par rapport à l'anticorps parental sont triés en FACS. (C) Analyse par cytométrie en flux bivariée des bibliothèques L1 et L2 de cellules de levure exprimant des variants VHH72 à leur surface. Les cellules ont été doublement marquées avec un antigène biotinylé/Streptavidin-PE (liaison RBD SARS-CoV2) et des marqueurs APC anti-HA tag (expression VHH). Les bibliothèques ont été enrichies de 10 % de cellules clonales exprimant la VHH72 parentale avec la protéine egfp pour distinguer les cellules présentant une liaison antigénique accrue. Les cellules sélectionnées (délimitées par un cadre « cellules triées ») ont été triées et séquencées avec Illumina Deep Sequencing.
: Cartographie des paratopes du nanocorps VHH72 et conception de bibliothèques combinatoires pour la sélection de clones améliorés.
Carte thermique basée sur le NGS représentant les valeurs d'enrichissement de chaque mutant unique VHH72 après un tri fonctionnel dans FACS. Le score d'enrichissement est une fonction logarithmique en base 2 de l'enrichissement entre les populations de levures VHH72 triées et non triées pour une substitution d'acide aminé donnée. Le tableau correspondant est coloré en gris clair pour les mutations enrichies et en gris foncé pour les mutations appauvries. Les substitutions en noir ont été sélectionnées pour la conception de bibliothèques combinatoires visant à identifier des variants de VHH72 ayant des propriétés de liaison améliorées. En raison de la grande diversité générée, deux bibliothèques distinctes ont été conçues (avec des diversités théoriques respectives de 4,14e4 et 1,12e7 clones).
la mise en contact d’un échantillon biologique dudit sujet avec au moins un agent de liaison (tel qu’un anticorps ou un fragment fonctionnel d’anticorps, notamment un anticorps à domaine unique) tel que défini ci-dessus; la détection de la présence ou l’absence (et/ou la quantification) d’au moins un sarbecovirus dans l’échantillon biologique de l’étape a) ; et l’évaluation de l’efficacité du traitement préventif chez ledit sujet en fonction du résultat de l’étape b) ;
Avantageusement l’étape b) de détection (et/ou de quantification) des différentes méthodes est réalisée comme décrit ci-dessus en lien avec les compositions et les kits selon l’invention.
Selon un mode de réalisation préféré des méthodes de pronostic, de suivi, de stratification, ou de toute combinaison de ceux-ci, ou d’évaluation de l’efficacité d’un traitement, la maladie liée aux sarbecovirus est aggravée, ou le pronostic de la maladie liée aux sarbecovirus est négatif, ou la maladie liée aux sarbecovirus a évolué, ou le traitement de la maladie liée aux sarbecovirus est inefficace ou peu efficace, si on détecte la présence d’au moins un sarbecovirus dans l’échantillon.
Selon un mode de réalisation, la méthode comprend en outre une étape a’) réalisée avant l’étape a), d’amplification ( in vitro ) des éventuels sarbecovirus présents dans un échantillon biologique dudit sujet (appelé échantillon (A)). L’amplification des sarbecovirus peut être réalisée par toute technique connue de l’homme du métier. De telles techniques sont notamment décrites dans la section « Compositions et Kits » ci-dessus.
Le sujet sera stratifié comme étant à un stade/niveau de stratification plus avancé (plus grave), ou le sujet aura un pronostic plus négatif, ou la maladie liée aux sarbecovirus aura évolué (aura empiré, se sera aggravée) chez le sujet, ou le traitement de la maladie liée aux sarbecovirus sera inefficace ou peu efficace, si le résultat de l’étape b) montre une détection plus importante de sarbecovirus, ou une quantité de sarbecovirus plus élevée, que celui obtenu à l’étape b’). A l’inverse, le sujet sera stratifié comme étant à un stade/niveau de stratification moins avancé (moins grave), ou le sujet aura un meilleur pronostic, ou la maladie liée aux sarbecovirus se sera améliorée (sera moins grave, aura reculé) chez le sujet, ou le traitement de la maladie liée aux sarbecovirus sera efficace, si le résultat de l’étape b) montre une détection moins importante de sarbecovirus, ou une quantité de sarbecovirus moins élevée, que celui obtenu à l’étape b’).
La méthode selon le mode de réalisation susmentionné peut également comprendre en outre une étape a’) réalisée avant l’étape a), d’amplification ( in vitro ) des éventuels sarbecovirus présents dans un échantillon biologique dudit sujet (appelé échantillon (A)). L’amplification des sarbecovirus peut être réalisée par toute technique connue de l’homme du métier. De telles techniques sont notamment décrites dans la section « Compositions et Kits » ci-dessus.
Selon un mode de réalisation, si le sujet est stratifié comme étant à un stade/niveau de stratification plus avancé (plus grave), ou si le sujet a un pronostic plus négatif, ou si la maladie liée aux sarbecovirus a évolué (a empiré, s’est aggravée) chez le sujet, ou si le traitement de la maladie liée aux sarbecovirus est inefficace ou peu efficace ;
un traitement pourra être administré au sujet si le sujet n’était pas sous traitement au moment du prélèvement de l’échantillon ; ou le traitement pourra être modifié (par exemple par la modification du médicament et/ou de la dose de médicament administrée et/ou de la fréquence d’administration du médicament), si le sujet était déjà sous traitement au moment du prélèvement de l’échantillon.
Selon un mode de réalisation, si le sujet est stratifié comme étant à un stade/niveau de stratification moins avancé (moins grave), ou si le sujet a un meilleur pronostic, ou si la maladie liée aux sarbecovirus s’est améliorée (est moins grave, a reculé) chez le sujet, ou si le traitement de la maladie liée aux sarbecovirus est efficace;
le traitement pourra être modifié (par exemple par la modification du médicament et/ou de la dose de médicament administrée et/ou de la fréquence d’administration du médicament), si le sujet était déjà sous traitement au moment du prélèvement de l’échantillon ; ou aucun traitement ne sera administré au sujet si le sujet n’était pas sous traitement au moment du prélèvement de l’échantillon ; ou le traitement pourra être arrêté en cas de guérison complète.
La présente invention se rapporte également à l’utilisation in vitro d’au moins un agent de liaison (tel qu’un anticorps ou un fragment fonctionnel d’anticorps, notamment un anticorps à domaine unique) tel que défini ci-dessus, pour le diagnostic d’une maladie liée aux sarbecovirus chez un sujet susceptible de souffrir d’une maladie liée aux sarbecovirus, ou pour le suivi chez un sujet souffrant d’une maladie liée aux sarbecovirus, ou pour la stratification d’un sujet souffrant d’une maladie liée aux sarbecovirus, ou pour l’évaluation de l’efficacité d’un traitement (notamment curatif) administré à un sujet souffrant d’une maladie liée aux sarbecovirus, ou toute combinaison de ceux-ci.
la représente une vue schématique en coupe transversale d’un câblé en conformité avec la présente invention.
Description d’une forme de réalisation préférée de la présente invention
Le vocabulaire utilisé ci-après représente le meilleur mode ou les meilleurs modes d’exemples que l’on envisage à l’heure actuelle pour la mise en œuvre de la présente invention. À titre de supplément à la description fournie ci-dessous, les brevets des États-Unis portant les numéros 6.412.534 et 7.104.299 sont incorporés dans le présent document à titre de référence dans leur entièreté.
En se référant à la , un bandage, de type pneumatique ou de type non pneumatique, pour son utilisation dans le cadre de la présente invention englobe une paire de portions 1 qui font office de talons, une paire de portions 2 qui font office de flancs, une portion 3 faisant office de bande de roulement qui s’étend entre chaque portion 2 faisant office de flanc, une carcasse 5 constituée par une ou plusieurs nappes (une seule nappe en ) qui s’étendent entre une paire de tringles de talons 4 incluses dans les portions 1 faisant office de talons dans le but de renforcer les portions 1, 2, 3 faisant office de talons, de flancs, et de bande de roulement, ainsi qu’une ceinture 6 qui renforce la portion 3 faisant office de bande de roulement sur la circonférence externe de la carcasse 5. La carcasse 5 et/ou la ceinture 6 englobe(nt) une nappe à base de caoutchouc dans laquelle sont incorporés un certain nombre de câblés 100. La ceinture 6 englobe de préférence au moins deux couches (trois couches comme représenté en ) à base de caoutchouc contenant des éléments sous la forme de fils métalliques en acier. Chaque câblé 100 est de préférence réalisé à partir d’un métal, tel que de l’acier, du titane, de l’aluminium, etc., et/ou à partir de fibres organiques, telles qu’une fibre à base de polyamide aromatique, une fibre à base de nylon, une fibre à base de polyester, etc., et/ou à partir de fibres inorganiques, telles qu’une fibre à base de carbone, etc., et/ou à partir de l’une quelconque de leurs combinaisons.
De préférence, une couche de ceinture la plus externe dans la direction radiale (par exemple un recouvrement, etc.) 6 O de la ceinture 6 représente une couche qui contient des câblés/fils métalliques en acier ou des câblés organiques ou des câblés inorganiques 100 qui sont disposés en formant un angle entre -5° plus 5° par rapport à un plan équatorial E du bandage pneumatique.
De préférence, au moins une autre couche 6 M (deux couches dans la ) est disposée à l’intérieur, dans la direction radiale, de la couche de ceinture la plus externe 6 O . Dans le cas d’acier, les câblés 100 constituent de préférence un squelette de chacune des couches 6 O , 6 M de la ceinture 6 définie par un ou plusieurs faisceaux d’un ou de plusieurs filaments en acier en l’absence de torsion, et/ou par un ou plusieurs câblés en acier que l’on obtient en soumettant à une torsion plusieurs filaments en acier et/ou un ou plusieurs monofilament(s) en acier.
Des renforcements sous la forme de câblés du type à brins multiples ont été utilisés pour renforcer le caoutchouc dans des bandages pneumatiques qui sont destinés à des services hors route à la fois dans les nappes 5 et dans les ceintures 6. Dans des bandages pneumatiques de type conventionnel, on utilise une résine pour remplir l’espace ou les espaces libres qui est/sont ménagés entre les brins internes de la partie centrale et les brins externes de la gaine des câblés 5 ou 6 du type à brins multiples et dans le but d’optimiser l’angle de croisement des filaments entre les brins externes de la gaine et les brins internes de la partie centrale. Dans un procédé conventionnel, on procède à une extrusion conjointe d’un caoutchouc ou d’une résine sur le brin interne de la partie centrale au cours de la production du câble. Une solution plus résistante, dans laquelle on peut mieux gérer l’espace libre ou les espaces libres, serait souhaitable.
La durabilité d’un bandage pneumatique peut être prolongée si l’on arrive à limiter la propagation de la corrosion. Lorsqu’un objet interne pénètre jusqu’à un niveau d’un câblé 5 de la carcasse ou d’un câblé 6 de la ceinture, en l’exposant ainsi à l’oxydation à partir de l’environnement de la mise en service, en particulier à partir de l’humidité, une corrosion peut se propager. On peut augmenter la profondeur de la pénétration dans le caoutchouc lorsque les brins faisant partie de la structure du type à brins multiples possèdent des espaces libres 140 entre les brins en question, ce qui permet d’obtenir une plus grande quantité du caoutchouc qui doit être pénétré à partir de la gaine externe 130 en direction de la partie centrale interne 140 du brin 100 et entre la gaine et la partie centrale en question. Par conséquent, lorsqu’on augmente ainsi la quantité de caoutchouc qui doit être pénétré, on peut diminuer l’exposition des câblés 5, 6 et ainsi diminuer la corrosion qui fait suite à une pénétration du caoutchouc par un objet externe.
En conformité avec la présente invention, on réalise cet espace libre/ces espaces libres 140 d’une manière avantageuse en appliquant un fil métallique d’enveloppement ou d’espace libre 110 qui est constitué d’un monofilament, de préférence fin, autour du brin interne de la partie centrale 120 et de préférence qui représente au moins 50 % des brins externes 130 de la gaine, comme on le représente en .
De préférence, le fil métallique d’enveloppement 110 est appliqué sur une longueur de pose qui est inférieure à la longueur/aux longueurs de pose des brins 130, 140, et il est de préférence soumis à une torsion dans la même direction ou dans une direction opposée.
Le fil métallique d’enveloppement 110 peut être constitué d’un matériau métallique ou polymère, tel qu’un acier à monofilament et/ou un polyester à monofilament.
Le fil métallique d’enveloppement 110 peut représenter en variante un câblé en acier plaqué au zinc ou un câblé en acier plaqué au laiton avec un revêtement supérieur à base de zinc.
Le diamètre du fil métallique d’enveloppement 110 se situe de préférence entre 0,1 mm et 0,2 mm.
Le fil métallique d’espace libre 110 permet ainsi d’obtenir une ouverture/un espace libre minimal permanent et stable 140 entre les brins de câblés en acier 120, 130 dans le but de maximiser la pénétration du caoutchouc de manière complète jusqu’au brin interne 120 de la partie centrale.
Une fois que le bandage pneumatique a été vulcanisé, ce fil métallique d’espace libre 110 ne procure de préférence aucun support de structure supplémentaire et l’amélioration de la durabilité que l’on obtient à partir de l’augmentation de la pénétration du caoutchouc permet de surpasser n’importe quels effets délétères potentiels liés au fil métallique d’espace libre 110.
Une augmentation de la pénétration du caoutchouc permet également d’augmenter la résistance aux chocs que manifestent les câblés 5, 6, étant donné que le caoutchouc qui est situé entre les brins de câblés 120, 130 permet de réduire les concentrations de contraintes dans les espaces libres qui sont vides, en l’absence de caoutchouc, entre les brins 120, 130.
: Criblage de bibliothèques basé sur le Yeast Surface Display et tri des clones VHH72 avec une liaison améliorée pour l'antigène RBD SARS-CoV2.
(A) La bibliothèque A a été incubée avec 10nM de RBD SARS-CoV2 et analysée en FACS. Peu de clones présentant une meilleure liaison à l'antigène étaient détectables. La bibliothèque B a été triée deux fois aux concentrations respectives de 10 nM et 1 nM de RBD SARS-CoV2. Au deuxième tour, une sélection basée sur K off a été entreprise. Après l'équilibre avec 1 nM d'antigène, une quantité excédentaire de 100 nM d'antigène non biotinylé a été introduite pour entraîner la dissociation et limiter la réassociation. (B) Clones sélectionnés dans la bibliothèque B après deux cycles de sélection FACS. Tous les clones sélectionnés présentent une forte liaison aux antigènes RBD de SARS-CoV-1 et SARS-CoV-2.
: (A) Logo de la séquence des clones contenus dans la bibliothèque B avant le tri (B) Logo de la séquence des clones sélectionnés après la sélection par maturation d'affinité basée sur le FACS.
: Affinité de l'anticorps VHH-Fc Mut76 pour le RBD de SARS-CoV et SARS-CoV-2.
Mesure de l'affinité de VHH-Fc Mut76 pour le RBD de SARS-CoV-2 par interférométrie en couche biologique. Les anticorps ont été chargés sur des biocapteurs anti-Fc humain via la protéine A pour la mesure de l'association et de la dissociation du RBD SARS-CoV-2 à des concentrations variables.
: Essai de neutralisation en ELISA de la liaison entre le récepteur ACE2 et le domaine RBD du virus SARS-CoV2.
Ce test permet d’évaluer la capacité des anticorps VHH-Fc sélectionnés à bloquer l'interaction entre l'ACE2 et différents variants du domaine RBD. Les IC50 ont été déterminées à l'aide du logiciel Prism 6.0. Les valeurs ont été générées à partir de 3 expériences indépendantes.
: Modélisation moléculaire de l'interaction entre le VHH-72 muté (avec les mutations S57G / T103V / V104W) et le RBD SARS-CoV-2.
(A) Localisation des substitutions d'acides aminés présentes dans les différentes variantes de la préoccupation (VOC) du SARS-CoV-2 dans le modèle d'homologie de l'interaction entre la VHH72 mutée et le domaine RBD du SARS-CoV-2. (B) Interaction du résidu tryptophane muté W104 avec une cavité hydrophobe délimitée par les résidus RBD F377 et P384. Les résidus RBD SARS-CoV2 Y369 présentent une conformation préférentielle différentielle par rapport à la structure SARS-CoV-1, imposée par la présence d'une proline en position 384 dans SARS-CoV-2. L'introduction de la mutation S57G pourrait introduire plus de flexibilité dans la CDR2 et pourrait aider à accommoder l'orientation préférentielle de Y369 vers l'interface avec VHH72.
Exemples EXEMPLE : Conception et mises au point d’anticorps VHH72 à large spectre
1. Matériels et méthodes 1.1. Conception et génération des bibliothèques de DMS (Deep Mutational Scanning)
Deux banques de variants de VHH72 (dont la séquence sauvage, non mutée, est SEQ ID NO :1) avec des mutations d'un seul acide aminé ont été générées par épissage par PCR d'extension par recouvrement (SOE-PCR) en utilisant des amorces NNK dégénérées. Une banque a été générée pour chacune des deux régions ciblées (banque 1 : acides aminés 1 à 59 et banque 2 : acides aminés 61 à 125) correspondant respectivement à une diversité théorique de 1888 et 2112 variants d'ADN.
1.2. Génération de bibliothèques combinatoires pour la maturation par affinité
La conception d'amorces mutagènes contenant des codons dégénérés a été réalisée à l'aide de SwiftLib (http://rosettadesign.med.unc.edu/SwiftLib/). Deux banques distinctes ont été conçues, correspondant respectivement aux régions CDRH1 et CDRH2+CDRH3.
1.3. Affichage de VHH à la surface de levures
La préparation des cellules de levure compétentes EBY100 (ATCC® MYA-4941) et la transformation des banques ont été effectuées selon Benatuil et al [27]. Les transformations utilisant la technique du gap-repair ont été effectuées dans le plasmide pNT VHH72 entre les sites de restriction NheI et NotI avec 1 µg de vecteur digéré et un rapport molaire de 12:1 (banque linéaire/vecteur digéré ; (A)). Après transformation, 250 mL de milieu SD-CAA [6,7 g/L de base azotée de levure sans acides aminés, 20 g/L de glucose, 5 g/L d'acides aminés, 100 mM de phosphate de sodium, pH 6,0] ont été ensemencés avec 400 µL de cellules transformées et incubés pendant la nuit à 30°C, 200 rpm. La culture saturée (typiquement OD600 de 8-10) a été passée afin d'obtenir une culture initiale OD600 de 0.25-0.50 dans 50 mL. La culture a été cultivée à 30°C jusqu'à ce que sa DO600 atteigne 0,5-1,0. Les cellules ont été centrifugées et remises en suspension dans 50 mL de milieu d'induction au galactose SG-CAA [6,7 g/L de base azotée de levure sans acides aminés, 20 g/L de galactose, 5 g/L d'acides aminés, 100 mM de phosphate de sodium, pH 6,0] et induites pendant 16-36 h à 20°C, 200 rpm.
BorneMax3M = max [0, min[(PMaxBatt_D - BorneMax1M – BorneMax2M), PInt3M]]
Mode de charge de la batterie de traction
La répartition de la puissance électrique entre les machines peut être réalisée de la manière suivante en considérant que les machines électriques fonctionnent en mode générateur.
On détermine en premier une puissance électrique disponible au niveau du réseau formé par l’ensemble des machines électriques et de la batterie de traction, il s’agit ici d’une puissance disponible en charge (PDispoR_C). Elle assure la charge de la batterie de traction et est égale à la somme de la puissance électrique en charge de la batterie de traction plus la puissance électrique que les machines électriques en mode moteur consomment au même moment pour assurer la motricité du véhicule.
On répartit alors la puissance électrique entre les machines électriques dans l’ordre suivant : machine électrique avant secondaire, machine électrique avant principale, machine électrique arrière.