INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L’aptaméro-PCR, quant à elle, permet de remplacer l’anticorps secondaire par un oligonucléotide contenant une séquence d’aptamère spécifique de la cible à détecter. La détection est obtenue par l’amplification directe de cette sonde par PCR. Cette méthode permet d’atteindre une limite de détection de quelques picomolaires. Cependant, l’immuno-PCR et l’aptaméro-PCR présentent, toutes deux, les inconvénients de la PCR, à savoir la nécessité de cycles de températures longs et comportant différentes températures.
Enfin, une autre méthode d’amplification a été développée pour remplacer la PCR dans le cadre de l’amplification de doubles brins d’ADN. Cette méthode appelée LAMP et brevetée [1] présente l’avantage majeur d’être isotherme, l’amplification étant réalisée à une température constante typiquement comprise entre 60°C et 65°C.
Ainsi, une méthode de détection de protéines avec amplification LAMP a été décrite par Pourhassan-Moghaddam et al , 2013 [2] . Elle met en œuvre, d’une part, un anticorps ou un aptamère fixé à une surface pour capturer la cible et, d’autre part, un oligonucléotide contenant une séquence aptamère qui reconnaît la cible. Cet oligonucléotide est, par la suite, amplifié par la méthode LAMP classique avec quatre amorces.
Cependant, le design complexe des quatre amorces indispensables à la méthode d’amplification LAMP rend ce procédé complexe et coûteux à mettre en œuvre, malgré le développement de nombreux logiciels de design des amorces LAMP comme, par exemple, LAMP designer (OPtigene) ou primer Explorer.
Enfin, une méthode de détection de micro-ARNs (mi-ARNs) par une méthode LAMP avec deux amorces a été développée [3,4] . Cette méthode présente l’avantage d’être quantitative. Toutefois, elle ne permet de détecter que de l’ARN à partir duquel est formé un fragment d’ADN complémentaire (ADNc) au moyen d’une réaction de transcription inverse. Deux sondes d’ADN en épingle à cheveux désignées H1 et H2 dans Du et al , 2016 [4] sont conçues, la sonde H1 présentant à son extrémité 3’ une extension complémentaire à la moitié du fragment d’ADNc et la sonde H2 présentant à son extrémité 5’ une extension complémentaire à l’autre moitié du fragment d’ADNc. En présence du fragment d’ADNc, les sondes H1 et H2 s’hybrident sur ce dernier et, si aucun mésappariement n’existe entre les extensions des sondes H1 et H2 et le fragment d’ADNc, une liaison covalente entre les deux sondes d’ADN H1 et H2 peut être formée grâce à une ligase haute-fidélité comme la Taq DNA ligase. Il est donc clair que cette méthode de détection de mi-ARNs n’est pas générique puisqu’elle nécessite la préparation de deux sondes spécifiques de chaque mi-ARN à détecter. Par ailleurs, cette méthode implique plusieurs étapes avant la mise en œuvre de la technique LAMP avec une étape de transcription inverse et une étape de ligation, cette dernière pouvant être complexe avec un rendement possiblement faible et la nécessité d’utiliser une enzyme supplémentaire. Malgré cela, dans leur publication Du et al , 2016 [4] , les auteurs insistent sur le fait que cette étape est primordiale notamment pour une meilleure discrimination des mutations dans les mi-ARNs (phrase pontant les colonnes de la page 12722).
Les inventeurs ont déjà mis au point une méthode innovante permettant de réaliser une amplification LAMP avec seulement deux amorces [5] . Cette méthode permet de détecter des analytes d’intérêt de nature variée dans un échantillon et ne présente pas les inconvénients des méthodes de l’état de la technique. Elle met en œuvre une séquence se présentant sous forme d’un oligonucléotide à double structure tige-boucle, servant de matrice à l’amplification LAMP. Elle permet de combiner la reconnaissance d’analytes par des brins oligonucléotidiques et l’amplification LAMP à deux amorces, et donne une détection à haute sensibilité. En effet, l’oligonucléotide à double structure tige-boucle mis en œuvre intègre, au sein de sa structure, une entité de détection de l’analyte d’intérêt. En d’autres termes, l’oligonucléotide présente, au sein de sa structure, au moins une séquence spécifique de l’analyte à détecter, comme, par exemple, un aptamère ou au moins une séquence complémentaire à une partie de la séquence nucléotidique de l’analyte à détecter lorsque ce dernier est une molécule nucléotidique. Dans une telle configuration, seule une séquence nucléotidique peut être utilisée comme entité de détection d’analyte, et celle-ci est intégrée dans la structure à amplifier, rendant son utilisation unique pour chaque application.
Les inventeurs se sont donc fixé pour but de proposer un outil utile dans un procédé permettant de détecter des molécules d’intérêt de nature variée dans un échantillon, ledit procédé ne présentant pas les inconvénients des méthodes de l’état de la technique et d’améliorer encore l’oligonucléotide à double structure tige-boucle décrit dans [5] .
La présente invention permet de résoudre des problèmes techniques et inconvénients précédemment listés. En effet, les inventeurs ont proposé un nouvel outil oligonucléotidique notamment utile dans un procédé de détection et éventuellement de quantification d’un analyte, qui permet de profiter des avantages de l’amplification LAMP à deux amorces, à savoir méthode isotherme, quantifiable et ne nécessitant que deux amorces.
L’outil oligonucléotidique objet de la présente invention est un oligonucléotide à double structure tige-boucle. Les expressions et terme « oligonucléotide à double structure tige-boucle », « oligonucléotide à deux structures tige-boucle », « oligonucléotide à structure d’haltère » et « haltère » sont équivalents et utilisables de façon interchangeable dans le cadre de la présente invention.
Les inventeurs ont montré qu’il était possible d’introduire, au niveau de l’une quelconque des extrémités de cet haltère (i.e. extrémité 5’ ou 3’), une entité spécifique de l’analyte à détecter et qui permet également une amplification LAMP à deux amorces (voir point I.2. de la partie expérimentale ci-après). Cette amplification est même plus rapide que l’amplification obtenue avec un haltère tel que défini dans [5] i.e. un haltère dans l’une quelconque des portions duquel a été introduite une séquence nucléotidique spécifique de l’analyte à détecter. A noter que l’amplification LAMP du procédé de détection objet de [5] est plus rapide, moins complexe à réaliser et moins coûteuse qu’une amplification LAMP à 4 amorces, notamment en raison de la réduction du nombre d’amorces. Ces propriétés sont maintenues et voire améliorées en utilisant l’haltère objet de la présente invention.
L’oligonucléotide à double structure tige-boucle objet de la présente invention répond à la formule (I) suivante :
la portion F1c présente une séquence nucléotidique complémentaire à la séquence nucléotidique de la portion F1, moyennant quoi la portion F1c et la portion F1 s’hybrident pour former la tige de la première structure tige-boucle,
F0’ séparant la portion F2 et la portion F1 est soit une liaison covalente, soit une portion comprenant au moins un nucléotide,
Sur la , on a représenté un système 1 de détermination d’un état de présence E d'un occupant 50 au sein d’un véhicule 40, ici un véhicule automobile, conforme à l’invention. Le système 1 comprend : - un capteur de présence 10 ; - un capteur de vibration 20 ; et - un calculateur 30 connecté au capteur de présence 10 et au capteur de vibration 20.
Le capteur de présence 10 est adapté pour déterminer la présence d’un occupant 50 au sein du véhicule 40. Ici, le capteur de présence 10 est plus généralement adapté pour déterminer, pour chaque siège 41 du véhicule 40, la présence d’une personne, c’est-à-dire la présence du conducteur ou d’un passager. Un seul occupant 50, ici le conducteur, est représenté sur la . En plus de pourvoir déterminer la présence au niveau des sièges 41, le capteur de présence 10 couvre aussi ici le coffre et le voisinage des sièges, typiquement l’espace pour les pieds situé sous les sièges 41.
En plaçant le capteur de présence 10 dans une zone centrale du véhicule 40, ici au centre du toit 42 du véhicule 40 comme représenté en , le capteur de présence 10 peut alors avantageusement couvrir tous les sièges 41 du véhicule 40.
Le capteur de présence 10 peut être tout instrument permettant de déterminer la présence d’un occupant 50 au sein du véhicule 4. Le capteur de présence 10 peut être constitué d’un seul élément sensible ou d’un réseau d’éléments sensibles répartis à travers le véhicule 40.
Le capteur de présence 10 peut par exemple être une caméra ou un réseau de caméra ou encore un capteur ultrasons ou un réseau de capteurs ultrasons.
Le capteur de présence 10 est ici un dispositif d’émission – réception d’une onde. Cette onde est par exemple une onde acoustique.
Ici, cette onde est une onde électromagnétique 11. Le dispositif d’émission – réception comprend ici au moins une antenne (non représentée) conçue pour émettre l’onde électromagnétique 11 et au moins un capteur (non représenté) conçu pour recevoir une onde électromagnétique réfléchie 12 après réflexion de l’onde électromagnétique 11, et en particulier après réflexion sur un occupant 50.
Le dispositif d’émission – réception est ici plus spécifiquement un radar (d’après l’acronyme anglais usuel « radio detection and ranging ») utilisant des ondes électromagnétiques millimétriques. Le radar est par exemple un radar de type doppler utilisant des ondes entretenues ou des ondes continues. Le radar est par exemple du même type qu’un radar utilisé dans le véhicule 40 pour l’aide à la conduite et/ou la détection d’obstacle.
Le calculateur 30 comprend au moins une mémoire et au moins un processeur. Le calculateur 30 peut-être par exemple l’unité de commande électronique (UCE) du véhicule 40. Le calculateur 30 peut aussi être un calculateur dédié à au système 1. Des instructions permettant la détermination de l’état de présence E sont enregistrées sur la mémoire et sont implémentées par le processeur. Lorsqu’elles sont implémentées, ces instructions permettent de mettre en œuvre le procédé décrit ultérieurement.
Le calculateur 30 est en particulier programmé pour commander le dispositif d’émission – réception, notamment pour piloter l’émission de l’onde électromagnétique 11.
En analysant l’onde électromagnétique réfléchie 12 captée par le capteur du dispositif d’émission – réception, le calculateur 30 détermine, ici pour chaque siège 41, l’état de présence E indiquant si le siège 41 est occupé ou vide. Un état de présence E peut aussi être déterminé pour le coffre du véhicule 40 et indiquer si un occupant 50 se trouve dans ce dernier.
Pour chaque siège 41, et ici aussi pour son voisinage, l’état de présence E comprend ici un état d’occupation dans lequel un occupant 50 est assis sur le siège 41 ou situé à proximité immédiate du siège 41, par exemple légèrement au-dessus du siège 41, et un état de vacance dans lequel aucune personne n’est pas assise sur le siège 41 ou située à proximité du siège 41. L’état de vacance correspond donc à l’état de présence E dans lequel le siège 41 est libre.
Le capteur de vibration 20 permet quant à lui de mesurer l’accélération du véhicule 40 selon au moins un axe. Comme pour le capteur de présence 10, le capteur de vibration 20 peut lui-aussi comporter un ou plusieurs éléments répartis dans le véhicule. Ici, un élément du capteur de vibration 20 est situé à proximité de chaque élément sensible du capteur de présence 10 et de préférence sur la même carte électronique que cet élément sensible.
Le capteur de vibration 20 peut par exemple être un gyroscope à fibre optique.
Ici, le capteur de vibration 20 est plus spécifiquement un accéléromètre.
L’accéléromètre est ici un système microélectromécanique (plus connus sous l’acronyme MEMS). En variante, l’accéléromètre pourrait être un accéléromètre piézoélectrique.
On a représenté sur les figures 1 à 14 un dispositif de commande d’ouverture extérieure d’un ouvrant de véhicule automobile selon l’invention. Dans la suite de la description, le dispositif sera désigné par la référence générale 20, l’ouvrant par la référence générale 12 et le véhicule automobile par la référence générale 10.
Par exemple, la serrure a pour fonction de maintenir en position fermée l’ouvrant 12 du véhicule automobile 10. La serrure permet aussi de décrocher l'ouvrant 12 par action sur le dispositif de commande d'ouverture extérieure 20 qui est reliée à la serrure et actionnable par un utilisateur. Le pêne est dégagé de la gâche par actionnement électrique ou mécanique de la commande d’ouverture extérieure 20.
Dans le mode de réalisation préféré de l’invention, le dispositif 20 comprend encore une pièce de barillet 30 présentant frontalement une face de présentation 30A. La pièce de barillet 30 a dans l’exemple illustré sur la une forme générale cylindrique avec une face frontale 30A de présentation de préférence relativement plane.
Lorsque le dispositif de commande 20 est prévu pour être monté dans une configuration d’ouvrant dit « passager », comme cela est illustré notamment sur les figures 1 et 3, la pièce de barillet 30 est de préférence une pièce factice et est inopérante. De préférence, dans ce cas, la poignée 22 se prolonge selon la direction longitudinale pour recouvrir et pour masquer la pièce de barillet 30 dans la position de repos de la poignée 22.
Dans cet exemple de réalisation, la poignée de préhension 22 se présente sous la forme d’un corps de forme générale allongée qui s’étend selon la direction longitudinale X. Le côté de la poignée 22 qui comporte l’axe d’articulation sera qualifié de côté arrière 22B et le côté opposé sera qualifié de côté avant 22A. Cette orientation d’arrière en avant correspond sensiblement à une orientation de la droite vers la gauche sur la .
Conformément à l’invention, comme cela est visible sur la , la poignée 22 est montée articulée sur le support 26 par le côté arrière d’extrémité 22B autour d’un axe d’articulation s’étendant selon la direction verticale Z par rapport au corps de boîtier 40 et par exemple au travers d’une ouverture 23 pratiquée dans la paroi périphérique 46 du boîtier 40. L’axe d’articulation sera qualifié de vertical, c’est-à-dire sensiblement parallèle au plan du panneau extérieur 14 et perpendiculaire à la direction longitudinale X de la poignée de préhension 22.
Pour l’induction de la colite, des rats Sprague Dawley ont été anesthésiés pendant 2h et ont reçu une injection intrarectale de TNBS (Trinitrobenzene sulfonic acid, 80 mg/kg dissous en éthanol 40%).
Les animaux ont été sacrifiés 4 jours après l’injection de TNBS. DSM 33715 a été administrée par voie orale à une dose de 10 9 CFU/ml, gavage débutant 14 jours avant l’induction de la colite et jusqu’au jour de l’euthanasie. Les animaux du groupe ”contrôle positif” ont reçu le Pentasa mixé dans leur alimentation, à une dose de 150 mg/kg. L’effet anti-inflammatoire des produits testés a été évalué au sacrifice, suite à une période totale de traitement de 18 jours.
Les variations de poids ont été suivies durant la totalité de la période de l’expérience. La longueur du côlon a été évaluée le jour de l’autopsie. Les scores macroscopique et microscopique ont été réalisés par deux opérateurs différents pour valider les scores. Le côlon de chaque rat a été examiné pour évaluer les lésions macroscopiques selon le score de Wallace. Le score de Wallace est une évaluation des lésions macroscopiques sur une échelle de 0 à 10, et ce score est basé sur des caractéristiques reflétant l’inflammation, telles que l’hyperémie, l’épaisseur de l’intestin et l’étendue des ulcérations.
La méthode est décrite par Wallace JL et al. Gastroenterology. 1992 Jan;102(1):18-27. PMID: 1309357 ou Wallace JL et al. Inhibition of leukotriene synthesis markedly accelerates healing in a rat model of inflammatory bowel disease. Gastroenterology. 1989 Jan;96(1):29-36. PMID: 2535830.
Pour l’évaluation histologique, basée sur les critères d’Ameho, une coupe à 2 cm au-dessus du canal anal a été réalisée. Les coupes obtenues ont été colorées selon la technique de coloration MGG (May-Grünwald Giemsa). Ce classement sur une échelle de 0 à 6 prend en compte le degré de l'infiltrat inflammatoire, la présence d'érosion, d'ulcération ou de nécrose, ainsi que la profondeur et l’étendue des lésions. La méthode est décrite par Ameho et al., 1997, Gut.
L’inflammation a été évaluée dans le côlon par mesure de la production d’IL-1β (cytokine pro-inflammatoire) (kit eBioscience), ainsi que le niveau de la Lipocaline-2 (Lcn-2), marqueur de l’infiltration par les neutrophiles (Clinisciences) par quantification ELISA. Brièvement, un centimètre de côlon distal a été collecté et homogénéisé dans une solution de Tris-HCl contenant un cocktail d’inhibiteurs de protéases (Sigma-Aldrich) par l’utilisation de l’homogénéisateur Precellys utilisant des billes de céramique (1,4 et 2,8 mm). Les échantillons obtenus ont été centrifugés pendant 20 min et les surnageants collectés et conservés à -80°C, jusqu’à leur utilisation pour les ELISAs.
: Les inventeurs ont observé une diminution significative de la longueur du côlon dans le groupe de rats traité au TNBS et ayant reçu le véhicule en traitement par rapport au groupe contrôle ayant reçu le véhicule, comme attendue. Une augmentation significative de la longueur du côlon a été constatée dans le groupe de rats traités au TNBS ayant reçu la souche DSM 33715 par rapport au groupe TNBS-Véhicule. La souche DSM 33715 a un effet protecteur sur le côlon dans le modèle de colite induite par le TNBS.
: L’intensité de l’inflammation et des lésions du côlon a été évaluée au niveau macroscopique selon le score de Wallace. Une augmentation significative du score de Wallace a été observée dans les rats du groupe TNBS-Véhicule par rapport au groupe de rats “sains”, avec respectivement un score de 7,00+/-0,41 vs 0,0+/-0,0, p<0,0001. Ce résultat indique que les rats présentaient une colite sévère 4 jours après l’induction avec un site ulcératif ou inflammatoire supérieur à 3 cm de colon (correspondant au score de 7, sur une échelle allant de 0 à 10). Une diminution significative du score a été observée dans le groupe TNBS-Pentasa et le groupe TNBS-DSM 33715. DSM 33715 améliore de 38% les lésions inflammatoires observées au niveau macroscopique par rapport au groupe TNBS-véhicule, avec un score de Wallace respectivement de 4,33+/-0,33 vs 7,00+/-0,41, p=0,049. Il en résulte que le traitement induit un effet anti-inflammatoire important.
: Une amélioration significative du score histologique – intensité des lésions inflammatoires- est observée dans le groupe de rats TNBS ayant reçu le Pentasa, contrôle positif, et la souche DSM 33715, par rapport aux rats TNBS ayant reçu le véhicule. Le Pentasa améliore le score de 13% et DSM 33715 de 36%.
: Le niveau de lipocaline-2, marqueur de l’infiltration des neutrophiles, est significativement augmenté chez les rats colitiques (TNBS-Véhicule) par rapport au contrôle sain, confirmant le développement d’une colite sévère. Une tendance à la diminution est observée pour le Pentasa et une diminution significative de la LCN-2 est observée dans le groupe de rats TNBS traités par la souche DSM 33715.
Comme attendu, une augmentation significative de l’IL-1β a été mesurée dans le côlon des rats du groupe TNBS-Véhicule, corrigée en partie par le traitement avec le Pentasa, validant le modèle. L’administration de DSM 33715 chez les rats colitiques a montré une diminution significative des niveaux d’IL-1β, indiquant un effet anti-inflammatoire de DSM 33715 dans le modèle de colite aigue induite par le TNBS chez le rat.
L’ensemble de ces résultats est en corrélation pour mettre en évidence des propriétés anti-inflammatoire de la souche DSM 33715, en particulier par rapport au traitement de référence sur ce type de pathologies mais également en comparaison avec la souche de référence de C. minuta. Ainsi, la souche selon l’invention possède un potentiel thérapeutique certain dans la dysbiose intestinales et en particulier dans la prévention et/ou le traitement des maladies inflammatoires.
Production d'éthanol par oxycombustion, conversion de gaz à l'eau inversée, et fermentation. L’invention porte sur la production d'éthanol. Plus particulièrement, l’objet de l’invention est de pouvoir produire de l'éthanol par un procédé d’oxycombustion de composés hydrocarbonés riches en oxygène tels que de la biomasse.
Les procédés d’oxycombustion de composés hydrocarbonés riches en oxygène produisent un mélange de CO2, d’eau et de CO ainsi que de l’énergie qui peut être utilisée pour par exemple produire de l’électricité. Ce mélange de CO2, d’eau et de CO ne contient que peu voire pas d’azote car un gaz enrichi en oxygène voire de l’oxygène pur est utilisé pour la combustion.
L'enjeu est alors de valoriser ce carbone, et en particulier ce carbone bio-sourcé sous forme CO2 et CO en composés à haute valeur ajoutée ce qui est l’objet de la présente invention.
la est une photographie d’une vue de biais d’une coupe d’un matériau architecturé poreux selon un second mode de réalisation selon l’invention.
En référence aux FIGURES 1 à 5, il est décrit un mode de réalisation du matériau tridimensionnel architecturé 1 dit matériau architecturé 1 selon l’invention. Ce matériau architecturé 1 comprend un ensemble de motifs élémentaires 2, dits motifs 2, formant une structure monobloc. La structure monobloc constitue le matériau architecturé 1. Chacun des motifs 2 présente une structure tridimensionnelle. Au moins un motif 2, chacun des motifs 2 selon le mode de réalisation, présente une structure tridimensionnelle creuse et comprend au moins un orifice 3 par lequel une cavité 4 de l’au moins un motif 2 communique avec l’extérieur de l’au moins un motif 2.
Selon le mode de réalisation présentés, chacun des motifs 2 comprend au moins un orifice 3. Les orifices 3 sont visibles sur les FIGURES 3 à 5.
L’orifice 3 a pour effet de diminuer la masse, ou la masse volumique apparente, du matériau architecturé 1. L’orifice 3 permet d’obtenir un matériau structuré 1 allégé.
L’orifice 3 a pour effet d’augmenter le volume interstitiel et/ou le volume poreux du matériau architecturé 1. L’orifice 3 permet d’augmenter la porosité du matériau architecturé 1.
Selon le mode de réalisation présentés, le motif 2 est une sphère.
Selon le mode de réalisation présentés, le matériau architecturé 1 est en acier. En particulier, le matériau architecturé 1 est en acier inox 316L. Des matériaux architecturés en Titane Ta6V et en alliage base nickel IN718 ont également été mis en œuvre.
Chacun des motifs 2 est constitué d’une paroi 6 formant la structure tridimensionnelle creuse 2. La paroi 6 du motif 2 délimite la cavité 4.
La structure tridimensionnelle creuse 2 a pour effet de diminuer la masse, ou la masse volumique apparente, du matériau architecturé 1. La structure tridimensionnelle creuse 2 permet d’obtenir un matériau structuré 1 allégé.
La structure tridimensionnelle creuse 2 a pour effet d’augmenter le volume interstitiel et/ou le volume d’évacuation et/ou le volume poreux du matériau architecturé 1. La structure tridimensionnelle creuse 2 permet d’augmenter la porosité du matériau architecturé 1.
Le diamètre d’un orifice 3 est typiquement compris entre 0,3 et 5 mm selon le mode de réalisation.
Le diamètre de la cavité 4 est typiquement compris entre 3 et 30 mm selon le mode de réalisation.
L’épaisseur de la paroi 6 est typiquement comprise entre 0,5 et 5 mm selon le mode de réalisation.
La distance entre deux motifs 2 contigus reliés entre eux est typiquement comprise entre 0 (motifs 2 accolés au niveau de la zone de la jonction 7) et 50 µm selon le mode de réalisation, et/ou typiquement entre 3 et 50 mm lorsque deux motifs 2 contigus sont reliés par une structure de soutien 5).
Le ratio entre la dimension minimale de l’au moins un orifice 3 et le diamètre de Féret minimal de l’au moins motif 2 est inférieur ou égal à 0,35. Selon le mode de réalisation, le ratio entre la dimension minimale de l’au moins un orifice 3 et le diamètre de Féret minimal de l’au moins motif 2 est typiquement compris entre 0,1 et 0,35.