INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Description détaillée On a représenté sur les figures 1 à 10 un système 1 de mise à l’eau selon l’invention, utilisable pour mettre à l’eau une charge constituée par une embase gravitaire E comportant un socle B et un mât F, tous deux en béton et construits sur terre.
L’embase E est destinée à recevoir une partie supérieure de mat et une nacelle de générateur éolien (non représentées).
Le mat F s’étend par exemple sur une hauteur de plus de 20 m au-dessus du socle B.
Une mutation rare peut également résulter d'une méthylation affectant l'expression de l'ADN, notamment une méthylation se produisant dans des séquences régulatrices telles que les régions promotrices ou amplificatrices. Dans ce cas, la mutation rare correspond à la présence d'une cytosine comme marqueur de la méthylation de l'ADN et la méthode comprend donc une étape de traitement de l'échantillon d'ADN avant l'amplification d'ADN de l'étape 2 afin de révéler le site de méthylation. Cette étape peut être réalisée par des méthodes connues de l'homme de l'art telles que la conversion au bisulfite ou la conversion enzymatique.
Une mutation rare peut correspondre à un SNP, ou plus généralement à une séquence variante. En outre, une mutation rare peut affecter l'ARN, incluant sans limitation l'ARNm, mais aussi éventuellement l'ARN si, l'ARNm ; dans ce cas, elle peut être détectée par la méthode de l'invention après conversion de l'ARNm en ADNc à l'aide de la transcriptase inverse. En conséquence, la méthode comprend une étape de traitement de l'échantillon d'ADN avant l'amplification d'ADN de l'étape 2 afin de convertir l'ARN en ADN.
Une mutation est considérée comme "rare" lorsqu'elle est représentée dans moins de 50% de l'ADN de l'échantillon analysé. De préférence, la méthode de l'invention est appliquée à la détection de mutations ayant une fréquence inférieure ou égale à 1%, notamment une fréquence inférieure à 0,1%, ou inférieure à 0,001% ou inférieure à 0,0001%. La limite de détection de la méthode a été évaluée à environ 0,00001% ou moins ; cette gamme de limites de détection est compatible avec la détection de mutations ultra-rares. La méthode a permis de détecter 10 molécules d'ADN mutant dans un contexte de 10 9 molécules de type sauvage.
L'étape 1 de la méthode consiste à fournir un échantillon contenant de l'ADN. Cet échantillon est un échantillon biologique ou est dérivé d'un échantillon biologique.
Tel qu'utilisé ici, "échantillon biologique" signifie un échantillon comprenant au moins de l'ADN ou de l'ARN. Il peut s'agir d'un fluide biologique complexe tel que le sang, l'urine, les larmes ou un extrait d'un tel fluide qui contient de l'ADN ou de l'ARN. L'échantillon biologique peut également être préparé à partir d'une cellule procaryote ou eucaryote, d'un virus ou de tout autre tissu biologique.
La méthode de l'invention est particulièrement pertinente pour la détection de mutations rares dans l'ADN circulant libre (cfDNA) dans une biopsie liquide.
L'étape 2 de la méthode consiste en une amplification sélective des mutations rares par une PCR d'amplification des mutations (MEP) dérivée des travaux de Huang et al , 2019. La technologie MEP repose sur l'utilisation d'une amorce Enhancer.
Tel qu'utilisé ici, un " enhancer " est une amorce contenant trois régions disposées de l'extrémité 5′ à l'extrémité 3′ dans l'ordre suivant - la région de reconnaissance (R), la région de liaison et la région d'extension (E) ( ). La région R est conçue pour reconnaître un site riche en mutations (point chaud) et s'hybrider à la version sauvage de la séquence. En cas de mutation, la liaison de la région R est compromise. La région-E se lie aux séquences en amont du point chaud. La valeur Tm de la région R est environ 5 à 10°C plus élevée que celle de la région E. Environ 4 à 10 bps de la séquence d'extrémité 3′ de la région E chevauchent l'extrémité 5′ de la région R. La région de liaison peut être composée, par exemple, d'une région d'espacement comprenant de 3 carbones (“C3 spacer”) à 12 carbones (“C12 spacer”), par exemple 3, 6, 8 , 9 ou 12 carbones. Cette région de liaison est une région non-nucléotidique capable de bloquer l'amplification de la séquence.
La PCR avec Enhancer (MEP) a deux températures d'hybridation pour faciliter la liaison de deux régions des amorces alternativement. La liaison de la matrice avec la région R ou E de l'amorce Enhancer dépend de la séquence de la matrice, qu'elle soit sauvage ou mutante, et est contrôlée par les températures d’hybridation. La région R de l'amplificateur est conçue pour se lier à la version sauvage de la matrice dans la région du point chaud. Au cours de la première hybridation, toutes les séquences sauvages sont saturées par la liaison de l'activateur avec la région R. Dans cette configuration de liaison, la PCR ne peut pas se faire. Dans cette configuration de liaison, la PCR ne peut pas se dérouler en raison de la présence d'une structure non-nucléotidique de la région de liaison et aucun produit n'est donc formé. D'autre part, si une version mutante est présente dans la matrice dans la région du point chaud (hotspot), la liaison avec la région R est compromise en raison d'un mauvais appariement des paires de bases. Dans ce cas, la région-E permet la liaison avec la version mutante. La deuxième température d’hybridation permet la liaison de la région-E avec l'amont de la région du point chaud et la formation éventuelle d’un produit. La PCR avec enrichissement de mutations (MEP) entraîne le blocage de la version sauvage et l'amplification de la version mutée.
Telle qu'utilisée dans le contexte de l'invention, la technologie MEP comprend les étapes suivantes -
Fourniture d'une amorce amplificatrice pour PCR comprenant 3 régions - (i) la région ‘R’ qui reconnaît et se lie spécifiquement à la séquence de type sauvage mais ne peut pas se lier si la région contient une mutation, (ii) une région de liaison et (iii) la région ‘E’ qui se lie à une séquence située en amont du site de mutation ; Réalisation d'une PCR comprenant deux étapes d’hybridation- (i) une première hybridation à une température T1 qui permet la liaison de la région-R de l'amorce à la séquence de type sauvage et (ii) une seconde hybridation à une température T2 qui permet la liaison de la région-E de l'amorce ; dans laquelle T1 est supérieure d'au moins 5°C à T2 ; la première hybridation à la température T1 peut être accompagnée d'une coupe par la DSN pour se débarrasser des séquences de type sauvage. En cas de liaison de la région E, la séquence contenant la mutation est amplifiée.
L'étape 3 consiste à ajouter une séquence permettant la liaison à chaque extrémité de l'amplicon résultant. Cette séquence peut être un A-tailing ajoutée à l'aide d'une polymérase ou un site de restriction ajouté par PCR, plus préférentiellement un site de restriction orienté à chaque extrémité de l'amplicon résultant par PCR. Cette étape permet d'intégrer la séquence Corrector prévue à l'étape 4.
Une fois les amplicons produits avec les amplificateurs de PCR à l'étape 2, une autre PCR est effectuée pour ajouter un site de liaison, par exemple un site de restriction tel que le site de l'enzyme de restriction BsaI aux extrémités 5' et 3' de l'amplicon (étape 3). Les séquences Corrector sens et antisens sont fournies avec le même site de liaison, par exemple un site d'enzyme de restriction BsaI (voir étape 4). Afin de préparer les extrémités des Correctors et des amplicons, ils sont digérés, par exemple par l'enzyme de restriction BsaI. Lorsque des sites de restriction sont utilisés, l'extrémité cohésive produit après la digestion est spécifique des extrémités 5' et 3', ce qui rend la liaison très spécifique. La digestion est suivie d'une réaction de liaison avec l'ADN ligase T4.
Dans un mode de réalisation particulier de l’invention, une nucléase spécifique de l’ADN double brin peut être ajoutée après la première étape d’hybridation de la PCR.
En effet, de manière optionnelle, une étape de digestion enzymatique spécifique de l’ADN double brin peut être ajoutée juste après la première étape d'hybridation de la MEP. Les Enhancers ont la propriété de fonctionner soit comme une sonde, soit comme une amorce selon en fonction de la nature de la séquence et des conditions de réaction . Pendant la première étape d'hybridation, la région-R des Enhancers peut se lier à la région de type sauvage. À ce moment-là, on peut ajouter une nucléase spécifique de l’ADN double brin (DSN) qui coupera les régions double brin parfaitement alignées sans tenir compte de la spécificité de la séquence dans la version sauvage (Shagin et al. 2002 ; Song et al. 2016). Ce processus élimine donc l'excès d'ADN de type sauvage. En revanche, l'ADN muté ne formera pas un alignement parfait avec la région R et ne sera donc pas clivé de préférence par la DSN. La température sera portée à 98°C après l'étape de digestion par la DSN pour inactiver l'enzyme. La PCR peut continuer après l'ajout de réactifs à la deuxième température d'hybridation lorsque la région-E se lie à la matrice (mutée) et l'amplifie.
De préférence, la liaison est réalisée à l'aide d'une technologie dérivée du Golden Gate, en utilisant des enzymes de restriction de type II qui permettent une insertion directionnelle avec une plus grande flexibilité que celle des enzymes de restriction de type III.
Les dispersants, modificateurs de tension de surface et agents gélifiants sont bien connus de l’homme du métier.
A titre d’exemples, on peut citer, - comme dispersants, la famille des polyméthacrylates de sodium ou d’ammonium, la famille des polyacrylates de sodium ou d’ammonium, la famille des citrates, par exemple d’ammonium, la famille des phosphates de sodium, et la famille des esters de l’acide carbonique ; - comme modificateurs de tension de surface, les solvants organiques tels que des alcools aliphatiques ; - comme agents gélifiants, des polysaccharides naturels.
Le mélange particulaire est de préférence ajouté dans un mélange d’eau et de dispersants/défloculants dans un broyeur à boulets. Après agitation, on ajoute de l’eau dans laquelle a été préalablement dissout un agent gélifiant de manière à obtenir une suspension.
Si la mise en forme résulte d’une extrusion, des polymères thermoplastiques ou des polymères thermodurcissables peuvent être ajoutés à la charge de départ, ladite charge de départ ne contenant de préférence pas de solvant.
A l’étape d), tout procédé conventionnel de mise en forme connu pour la fabrication de billes frittées peut être mis en œuvre.
Parmi ces procédés, on peut citer : - les procédés de granulation, mettant par exemple en œuvre des granulateurs, des granulateurs à lit fluidisé, ou des disques de granulation, - les procédés de gélification, - les procédés de moulage par injection ou extrusion, et - les procédés de pressage.
Dans un procédé de gélification, des gouttes de la suspension décrite ci-dessus sont obtenues par écoulement de la suspension à travers un orifice calibré. Les gouttes sortant de l’orifice tombent dans un bain d’une solution de gélification (électrolyte adapté pour réagir avec l’agent gélifiant) où elles durcissent après avoir recouvré une forme sensiblement sphérique.
A l’étape e) , optionnelle, les billes crues obtenues lors de l’étape précédente sont lavées, par exemple à l’eau.
A l’étape f) , optionnelle, les billes crues, éventuellement lavées, sont séchées, par exemple à l’étuve.
A l’étape g) , les billes crues, éventuellement lavées et/ou séchées, sont frittées. De préférence, le frittage s’effectue sous air, de préférence dans un four électrique, de préférence à pression atmosphérique.
Le frittage à l’étape g) est effectué à une température de préférence supérieure à 1330°C, de préférence supérieure à 1350°C et de préférence inférieure à 1600°C, de préférence inférieure à 1550°C, de préférence inférieure à 1500°C, de préférence inférieure à 1450°C.
La durée de maintien au palier de température est de préférence supérieure à 1 heure et/ou de préférence inférieure à 10 heures, de préférence inférieure à 7 heures, de préférence inférieure à 5 heures, de préférence inférieure à 3 heures. De préférence, la durée de frittage est comprise entre 1 et 3 heures.
Les billes frittées de zircone obtenues présentent de préférence un plus petit diamètre supérieur à 0,005 mm, de préférence supérieur à 0,1 mm, de préférence supérieur à 0,15 mm et inférieur à 10 mm, de préférence inférieur à 5 mm, de préférence inférieur à 2,5 mm.
Les billes frittées de zircone selon l'invention sont particulièrement bien adaptées comme agents de broyage, notamment en milieu humide, ou comme agents de dispersion en milieu humide. L’invention concerne donc également l’utilisation d’une poudre de billes selon l’invention, ou de billes fabriquées suivant un procédé selon l’invention, en tant qu’agents de broyage, notamment en milieu humide, ou agents de dispersion en milieu humide.
Les propriétés des billes frittées de zircone selon l’invention, ainsi que leur facilité d'obtention, les rendent aptes à d'autres applications, notamment pour le traitement de surfaces (par projection des billes frittées selon l’invention en particulier).
L’invention concerne donc encore un dispositif choisi parmi une suspension, un broyeur, et un appareil de traitement de surfaces, ledit dispositif comportant une poudre de billes selon l’invention.
Le second avantage de la présente invention est qu’elle permet une augmentation sensible de la structure pouvant être obtenue au niveau d’une surface donnée, comme le montre la . Sur cette figure, les étiquettes de numérotation sur des points de données désignent les numéros d’exemple dans les tableaux 6 à 9 ; les étiquettes « N » sur des points en losange vide se rapportent à des exigences de qualité ASTM pour une structure particulaire au niveau d’une surface donnée. Tous les exemples présentés ici étaient sans utilisation d’additif de métal alcalin, de telle sorte qu’ils représentent la structure pouvant être obtenue maximale pour la configuration de fonctionnement décrite. Comme on peut le voir, la matière première de noir de carbone à faible rendement déficiente en aromatiques seule (exemples 1, 3 et 5) a produit des qualités de noir de carbone de très faible structure. L’utilisation de la présente invention a produit des structures maximales bien supérieures (exemples 6 à 10).
On note également que l’échelonnement de la matière première éthylène seule, comme le montre l’exemple 3, n’a guère contribué à améliorer la structure pouvant être obtenue à partir de la matière première de noir de carbone à faible rendement. Au lieu de cela, il semblerait que la matière première riche en aromatiques ou la première matière première de noir de carbone, doive être injectée dans la première phase.
Des points représentant des structures types pour des qualités de noir de carbone répertoriées dans l’ASTM communes (losanges vides) sont inclus sur la . Cela aide à illustrer la façon dont la présente invention peut utiliser une matière première qui est incapable de fabriquer des qualités de noir de carbone communes, d’elle-même, et fournir un processus utilisant une telle matière première pour fabriquer ces qualités.
De même, la montre la structure par rapport à la surface à partir des tableaux 8 et 9. Une fois encore, la présente invention montre qu’en injectant une matière première riche en aromatiques en amont de la matière première de noir de carbone à faible rendement, une structure et une surface peuvent être obtenues telles que requises pour les qualités de noir de carbone communes alors qu’avec la matière première de noir de carbone à faible rendement seule, cela n’est pas possible dans un processus de noir de carbone au fourneau ordinaire.
Tableau 11.
La configuration de réacteur pour les exemples 19 à 26 est illustrée sur la . Les dimensions clés pour cette configuration sont indiquées dans le tableau 12. Dans ces exemples, une partie de la matière première totale, qu’elle soit de l’huile de décantation ou bien un mélange d’huile de décantation et d’HTPO, a été parfois injectée dans la conduite centrale 73 en utilisant l’injecteur indiqué dans le tableau 12. Le reste de la matière première totale a été injecté dans l’étranglement 76 sur la . Les injecteurs d’étranglement étaient un ensemble de 4 petits tubes de diamètres de 0,7 à 1,5 mm, espacés de manière régulière autour de la circonférence de l’étranglement, installés de sorte à être orientés perpendiculairement à l’écoulement transversal. Les tailles des injecteurs d’étranglement ont été choisies de telle sorte que la matière première liquide pénètre suffisamment dans l’écoulement transversal de l’étranglement. Dimension Description Unités Valeur Dchambre Diamètre de la chambre de combustion cm 20,3 Détranglement Diamètre de l’étranglement cm 11,4 Dréacteur Diamètre du réacteur cm entre 22,9 et 91,4 Lconduite Comme indiqué dans les exemples Lrefroidissement rapide Comme indiqué dans les exemples Tableau 12.
Comme le montre la , lorsque de l’HTPO pure a été utilisée, dans un seul emplacement d’injection, la structure telle que mesurée par l’OAN était faible (exemples 19 et 20). Dans les exemples 21 et 22, un mélange de 30 % d’huile de décantation et de 70 % d’HTPO est utilisé dans l’étranglement, et la structure augmente. Dans les exemples 23 et 24, ce même mélange a été utilisé, excepté que 30% de la quantité de matière première totale a été injectée dans la conduite centrale, le reste étant injecté dans l’étranglement. Dans les exemples 25 et 26, l’huile de décantation a été injectée en tant que matière première pure dans la conduite centrale, tandis que l’HTPO a été injectée en tant que matière première pure dans l’étranglement, de telle sorte que l’huile de décantation constituait 30% de la matière première totale injectée et que l’HTPO constituait 70 % de celle-ci. C’est ce procédé – dans lequel la première matière première de noir de carbone était une matière première traditionnelle, tandis que la matière première à faible rendement était injectée en aval – qui a généré la capacité de structure la plus grande.
Les exemples 27 et 28 dans le tableau 13 illustrent des exemples dans lesquels une configuration telle que celle donnée sur la a été utilisée. Le tableau 14 donne les dimensions du réacteur utilisé dans ces exemples. La illustre ces exemples ainsi que les exemples 21 et 22. Numéro d’exemple num 27 28 Débit d’air vers brûleur N/m3/h 2000 2000 Température de l’air ° C 500 500 Débit de gaz naturel N/m3/h 160 160 Température du gaz naturel ° C 25,0 25,0 Configuration du réacteur nom Figure 4B Figure 4B Type d’injecteur de conduite centrale nom Aucun Aucun Concentration de solution d’acétate de potassium g/L 1 1 Température moyenne de la matière première ° C 139 139 Débit de matière première totale vers premier étranglement Kg/h 250 250 Fraction d’huile de pyrolyse des pneus dans la charge de conduite centrale fr 0,5 0,7 Débit de solution d’acétate de potassium Kg/h 2 2 Débit de matière première totale vers second étranglement Kg/h 167 168 Fraction d’huile de pyrolyse des pneus dans la charge d’étranglement fr 1 0,7 Débit de solution d’acétate de potassium Kg/h -- -- Fraction d’huile de pyrolyse des pneus dans la charge totale fr 0,7 0,7 Longueur refroidissement rapide Lrefroidissement rapide m 6,7 6,7 Φp 0,77 0,77 ΦO 2,95 2,95 Rendement de carbone Kg/kg 0,435 0,444 Rendement adimensionnel num 0,484 0,494 Surface par STSA m2/g 111 104 Absorption I2 g/100 g 109 115 OAN ml/100 g 176 157 Tableau 13. Dimension Description Unités Valeur Dchambre 55 Diamètre de la chambre de combustion cm 20,3 Détranglement 64 Diamètre du premier étranglement cm 11,4 Dsection 58 Diamètre de la 1ère chambre de réacteur cm 16 Lsection 66 Longueur de la 1ère chambre de réacteur cm 61 Détranglement 65 Diamètre du second étranglement cm 16 Lrefroidissement rapide 67 Comme indiqué dans les exemples Tableau 14. Les numéros de la colonne Dimension se rapportent à la .
Tous les exemples sur la ont utilisé un mélange global de matière première de 30 % d’huile de décantation et de 70 % d’HTPO. Lorsque ce mélange a été injecté dans un étranglement simple avec la configuration de la , on a obtenu une structure relativement faible (exemples 21 et 22). Bien que cette structure faible ait été partiellement le résultat d’un additif alcalin relativement élevé par rapport aux exemples 27 et 28, les exemples 21 et 22 seraient les structures les plus faibles même si aucun alcalin n’était utilisé. Lorsque le même mélange a été injecté dans deux emplacements d’étranglement, une structure supérieure a été obtenue (exemple 28). Cependant, lorsque la totalité de la première matière première, ou matière première traditionnelle, a été injectée dans le premier étranglement, avec la matière première à faible rendement utilisée exclusivement dans le second étranglement, alors une structure supérieure a été obtenue au niveau d’une surface donnée (exemple 27). Les indications de ligne en pointillés sur les points de données, dont la pente correspond à celle entre l’exemple 22 et l’exemple 21 sont données à titre indicatif.
Les exemples 29 à 33 dans le tableau 15, illustrent des exemples où la matière première à faible rendement était une huile végétale, dans ce cas, de l’huile de maïs de distillerie. Le tableau 11 donne les propriétés de cette huile végétale telle qu’utilisée dans l’expérience. La configuration de réacteur pour ces exemples est illustrée sur la avec des dimensions telles que dans le tableau 12. Numéro d’exemple num 29 30 31 32 33 Débit d’air vers brûleur N/m3/h 2000 2000 2000 2000 2000 Température de l’air ° C 500 500 500 500 500 Débit de gaz naturel N/m3/h 160 160 160 160 160 Température du gaz naturel ° C 25 25 25 25 25 Configuration du réacteur nom Figure 4B Figure 4B Figure 4B Figure 4B Figure 4B Type d’injecteur de conduite centrale nom Aucun Aucun Aucun Aucun Aucun Concentration de solution d’acétate de potassium g/L 1 1 1 1 1 Température moyenne de la matière première ° C 160 160 145 166 151 Débit de matière première totale vers premier étranglement Kg/h 360 400 277 244 226 Fraction d’huile de maïs de dist. dans la charge d’étranglement fr 0,7 0,7 0,7 0,5 0,5 Débit de solution d’acétate de potassium Kg/h 1,75 1,86 2,0 2,2 1,9 Débit de matière première totale vers le second étranglement Kg/h 0 0 152 157 151 Fraction d’huile de maïs de dist. dans la charge d’étranglement fr -- -- 0,7 1,0 1,0 Débit de solution d’acétate de potassium Kg/h -- -- -- -- -- Fraction d’huile de maïs de dist. dans la charge totale fr 0,7 0,7 0,7 0,7 0,7 Longueur refroidissement rapide Lrefroidissement rapide m 4,4 5,7 7,3 6,7 6,7 Φp Num 0,76 0,76 0,76 0,76 0,76 ΦO num 2,63 2,84 2,73 2,86 2,72 Rendement de carbone Kg/kg 0,336 0,387 0,358 0,362 0,333 Rendement adimensionnel num 0,375 0,432 0,399 0,404 0,376 Surface par STSA m2/g 109,5 90,5 108,3 133,1 137 Absorption I2 g/100 g 112,4 98,8 113,1 136,9 137 OAN Ml/100 g 79,9 83,3 113,8 174,9 168,4 COAN Ml/100 g 71 67,40,3 95,2 120,6 120,2 Tableau 15.
La illustre l’aptitude d’exemples de modes de réalisation à améliorer la capacité de structure de la matière première fragile. Tous ces exemples ont utilisé 30 % d’huile de décantation et 70 % d’huile de maïs de distillerie en tant que matière première de noir de carbone. Dans les exemples 29 et 30, ces deux matières premières ont été mélangées directement et injectées dans un étranglement simple du réacteur. Il en résulte une structure faible, avec un OAN inférieur à 90 ml/100 g. Lorsque deux étranglements ont été utilisés, dans l’exemple 31, mais que les matières premières ont été mélangées directement, la structure s’est modestement améliorée mais restait faible.
Cependant, dans un exemple de mode de réalisation où la totalité de l’huile de décantation est allée exclusivement dans le premier étranglement, la structure a fortement augmenté, comme le montrent les exemples 32 et 33. Pour ce faire, un mélange de 50 % d’huile de décantation et de 50 % d’huile de maïs a été injecté dans le premier étranglement, tandis que 100 % d’huile de maïs a été injecté dans le second étranglement. L’utilisation globale de matière première dans ces exemples était la même que dans les exemples 29 à 33 : 30 % de la matière première totale utilisée était de l’huile de décantation et 70 % était de l’huile de maïs de distillerie.