Procédé d’acquisition d’image d’un échantillon biologique par microscopie à balayage, ledit échantillon étant situé dans une surface de référence (S) définie par une pluralité de pixels, caractérisé en ce qu’il comprend les étapes suivantes : a) pré-balayage (100) de la surface de référence, au cours duquel seul un sous-ensemble de pixels de la surface de référence (S), dit ensemble initial des pixels sondés, est illuminée, b) détermination (200) de pixels brillants (P B ) parmi les pixels sondés, dit ensemble de pixels sondés brillants (P B ), c) pré-sélection (300), au voisinage des pixels sondés brillants (P B ), d’un ensemble de pixels non illuminés pouvant appartenir à une structure d’intérêt de l’échantillon, dit ensemble de pixels à estimer (P E ). d) estimation (350) de l’intensité lumineuse des pixels à estimer (P E ), e) sélection (400), parmi les pixels à estimer (P E ), à l’aide de l’estimation de leur intensité lumineuse, de pixels considérés comme brillants par application d’un critère prédéterminé, dits pixels à sonder (P S ), f) balayage (500) de la surface de référence, au cours duquel seul l’ensemble de pixels à sonder (P S ) est illuminé. Procédé d’acquisition d’image selon la revendication 1, dans lequel le critère prédéterminé permettant de considérer un pixel comme étant brillant est que l’intensité lumineuse du pixel considéré est supérieure à un seul prédéterminé. Procédé d’acquisition d’image selon la revendication 2, dans lequel l’image de la surface de référence (S) étant inscrite dans un fond (F), le seuil d’intensité lumineuse est déterminé en fonction d’une estimation de l’intensité lumineuse des pixels appartenant au fond (F) de l’image. Procédé d’acquisition d’image selon la revendication 3, dans lequel le seuil d’intensité lumineuse est déterminé en fonction d’une analyse statistique de l’intensité lumineuse des pixels du fond (F), de préférence de sorte qu’un pixel ayant une intensité lumineuse supérieure au seuil d’intensité lumineuse ait plus de 99% de chances de ne pas appartenir à l’ensemble de pixels formant le fond (F) de l’image. Procédé d’observation d’image selon la revendication 1 ou 2, dans lequel on réitère les étapes b), c) et d), e) et f) jusqu’à interruption volontaire (700) par un opérateur ou jusqu’à détermination (800) qu’aucun pixel brillant ne soit déterminé à l’étape b). Procédé d’observation d’image selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l’étape a) consiste à balayer tous les pixels de la surface de référence (S) et n’illuminer que les pixels à sonder (P S ). Procédé d’observation d’image selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel l’étape a) consiste à ne balayer et illuminer que les pixels à sonder. Procédé d’observation d’image selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel les pixels de l’ensemble initial de pixels sont répartis aléatoirement dans la surface de référence (S). Procédé d’observation d’image selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l’étape d’estimation de l’intensité lumineuse des pixels à estimer (P E ) implique une interpolation numérique, par exemple une interpolation au plus proche voisin, une inférence bayésienne ou utilise un réseau neuronal convolutif. Procédé d’observation d’image selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel, l’étape d’estimation de l’intensité lumineuse des pixels à estimer (P E ) impliquant une interpolation numérique au plus proche voisin, au cours de l’étape de sélection des pixels à sonder (P S ), on sélectionne un pixel à sonder (P S ) par le fait que le pixel sondé le plus proche est brillant (P B ). Procédé d’observation d’image selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le sous-ensemble de la surface de référence représente entre 0,01% et 0,2% des pixels de la surface de référence, de préférence entre 0,05% et 0,1% des pixels de la surface de référence. Dispositif d’acquisition d’image en trois dimensions d’un échantillon biologique par microscopie à balayage, caractérisé en ce qu’il est configuré pour mettre en œuvre le procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes. Dispositif d’acquisition d’image selon la revendication 12, dans lequel le balayage des échantillons est réalisé par un microscope confocal, un microscope non-linéaire, un microscope à scanner acousto-optique, ou un microscope à matrice d’illumination. Dispositif d’acquisition d’image selon la revendication 12 ou 13, comprenant un système d’illumination comprenant au moins un laser, une matrice de micro-miroirs et un relais optique.