INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La densité des micropores de l’élément de support est un paramètre très important, car il conditionne le nombre de connexions possibles entre les photorécepteurs et les cellules de l’épithélium rétinien. Dans le cas du document WO2017164992, la distance entre 2 micropores adjacents est de 0,1-5 μm (bord à bord) ou de 16 μm de centre à centre. Cet échafaudage est favorable à la réalisation de nombreuses connexions intercellulaires. Mais la profondeur des pores n’est pas favorable à une maturation optimale des photorécepteurs. Une profondeur de l’ordre de 100 µm (correspondant à la taille d’un photorécepteur mature humain) est souhaitée pour ce type de cellule. Cependant la réalisation de membranes microstucturées avec une épaisseur voisine de 100 µm et une périodicité des pores voisine de celle présentée dans le document WO2017164992 ne serait pas compatible actuellement avec les procédés de fabrication. Il y a un risque d’arracher les motifs (de la présente invention) du moule maître lors du démoulage de la membrane du fait que la période est inférieure à la hauteur des motifs (50 µm versus 100-120 µm). Cependant la réalisation de ce type d’échafaudage peut être problématique en raison de contraintes physiques importantes de fabrication, notamment des risques de déchirure de la membrane microstructurée lors de son démoulage.
On peut également indiquer que l’état de la technique décrit de nombreux échafaudages microstructurés pour la culture de cellules, en particulier de photorécepteurs comprenant des micropores de forme cylindrique. Lorsqu’un échafaudage de ce type est ensemencé avec des photorécepteurs matures ou immatures, une partie des cellules tombe au fond des micropores, ce qui est problématique.
En effet, les photorécepteurs sont des cellules polarisées et orientées avec des segments externes (allongement des photorécepteurs) qui forment des contacts, au niveau basal, avec des cellules de l’épithélium pigmentaire rétinien et au niveau apical, avec des synapses dans un tissu in vivo . Sans support de culture adapté et d’indices de signalisation appropriés, l'orientation correcte des photorécepteurs dans un tissu reconstruit in vitro pourrait être difficile à obtenir. Pour surmonter cela, la bonne maturation est guidée à travers un échafaudage polymère microstructuré spécialement conçu avec des micropores dans lesquels des photorécepteurs immatures peuvent être ensemencés tandis que leur orientation est imposée par la microstructure d'un tel échafaudage. L'échafaudage microstructuré guide la maturation des photorécepteurs en imposant des contraintes physiques latérales à l'intérieur des micropores au-dessus d'un épithélium pigmentaire rétinien qui fournit des indices pour guider la maturation des photorécepteurs avec l'orientation attendue.
Il existe donc un besoin de préparer de nouveaux échafaudages pour la culture cellulaire, qui soient plus faciles à manipuler en raison des contraintes de fabrication et qui permettent une optimisation de la maturation et de l’organisation des photorécepteurs à l'intérieur des micropores.
Un des objectifs de l'invention est donc proposer un échafaudage de type membrane microstructurée pour la culture cellulaire, en particulier de photorécepteur, dont la densité des micropores a été optimisée pour à la fois limiter les problèmes de fabrication de l’échafaudage et de proposer une organisation cellulaire la plus proche possible d’un tissu rétinien in vivo .
Dans un premier aspect, l'invention concerne donc un échafaudage qui comprend ou est constitué d’une membrane microstructurée pourvue d’une pluralité de micropores traversants de forme conique.
Un autre aspect de l’invention concerne l’échafaudage microstructuré pour son utilisation comme support de culture cellulaire, en particulier de photorécepteur.
Dans un deuxième aspect, l'invention concerne une composition comprenant l’échafaudage microstructuré et des cellules, en particulier des photorécepteurs.
Un autre aspect de l’invention concerne un procédé de préparation d’une composition comprenant l’échafaudage microstructuré et des cellules, en particulier des photorécepteurs.
- une peau inférieure 3a, ménagée du côté de la couche support 2, et
- une peau supérieure 3b, ménagée du côté de la couche supérieure 4.
La bande périphérique 33 est ainsi pincée entre le profilé 6 et une couche sous-jacente.
Les organes traversants 7 traversent le profilé 6 et la bande périphérique 33, de sorte à s’ancrer avantageusement dans la couche support 2.
La bande périphérique 33 présente avantageusement une largeur allant de 100 à 200 mm.
En l’espèce, la bande hermétique 32 et la bande périphérique 33 sont confondus ou forme une même structure.
Encore de manière générale, la couche supérieure 4 est avantageusement solidarisée avec la couche support 2, de préférence par l’intermédiaire de profilés 41 qui sont rapportés par d’organes traversants 42.
La couche supérieure 4 est ainsi pincée entre les profilés 41 et une couche sous-jacente.
Les organes traversants 42 traversent avantageusement les profilés 41 et la couche supérieure 4, de sorte à s’ancrer dans la couche support 2.
De manière générale, le contour périphérique de cette couche supérieure 4 correspond avantageusement au contour périphérique de la couche support 2.
Couche élastique Tel qu’illustré sur les figures, l’équipement de sol multicouches 1 comprend encore avantageusement au moins une couche élastique 8 (ou plaque), pleine et réalisée en matériau élastomère.
La couche élastique 8 comprend avantageusement des granules de caoutchouc agglomérés.
Les granules de caoutchouc sont avantageusement issus d’une opération de recyclage (par exemple de pneus).
Les granules de caoutchouc sont avantageusement solidarisés ensemble par :
- vulcanisation, et/ou
- polymérisation, avantageusement au moyen de résine polyuréthane, de latex ou tout autre liant polymère.
De manière générale, la couche élastique 3 présente des caractéristiques choisies parmi :
- une épaisseur allant de 10 à 50 mm, et/ou
- une masse volumique allant de 400 à 1 000 kg / m 3 , et/ou
- une dureté Shore A allant de 45 à 70.
Ladite au moins une couche élastique 8 peut avantageusement présenter divers dispositions par rapport au matelas intercalaire 3 au sein de l’équipement de sol multicouches 1, à savoir par exemple :
- une couche élastique 8 sus-jacente du matelas intercalaire 3 ( ), ou
Dans un aspect particulier de l’invention, l’épaisseur de la membrane microstructurée est comprise de 80 µm à 120 µm, de préférence de 90 µm à 110 µm, encore plus de préférence de 95 µm à 105 µm ou encore plus de préférence d’environ 100 µm.
Dans un aspect particulier de l’invention, les micropores sont espacés d’une distance comprise de 20 µm à 40 µm, de préférence de 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37 38, 39 ou 40 µm de bord à bord.
Pour augmenter le nombre de contacts des photorécepteurs avec les cellules de l’épithélium pigmentaire rétinien, le nombre de micropores du côté basal de la membrane microstructurée est augmenté d’un facteur 2, 3 ou 4 ou plus. Cette stratégie technique améliore le nombre d'interactions cellulaires sans qu'il soit nécessaire d'augmenter la densité des micropores comme c’est le cas dans le document WO2017164992.
En raison des contraintes physiques de fabrication de la membrane microstructurée, la densité des micropores de la membrane microstructurée de la présente invention est telle que la distance entre deux micropores adjacents sur la face apicale de la membrane est de 20 µm au minimum, de préférence de 25 µm au minimum, encore plus de préférence de 30 µm au minimum et encore plus de préférence de 35 µm au minimum.
Dans un aspect particulier de l’invention l’échafaudage est constitué d’une membrane microstructurée comprenant des micropores de forme conique traversants ladite membrane au niveau d’une première surface (1) et au niveau d’une seconde surface (2) caractérisée en ce que,
-la surface apicale de la membrane (1) présente des micropores d’un diamètre (d1) compris de 18 µm à 22 µm, de préférence de 20 µm,
-la surface basale de la membrane (2) présente des micropores d’un diamètre (d2) compris de 4 µm à 8 µm, de préférence de 5 µm,
-les micropores sont espacés d’une distance comprise de 20 µm à 40 µm, de préférence de 35 µm, de bord à bord,
-l’épaisseur de la membrane microstructurée est comprise de 80 µm à 120 µm, de préférence de 100 µm.
L'échafaudage selon la présente invention comprend ou est constitué d’une membrane microstructurée constituée d'un polymère biocompatible, flexible et/ou extensible, et dans certains modes de réalisation particulièrement appropriés, le polymère est biodégradable.
Les polymères appropriés comprennent, sans s'y limiter, les caoutchoucs synthétiques tels que les caoutchoucs de silicone (par exemple, le polydiméthylsiloxane (PDMS)), le caoutchouc polyuréthane, le caoutchouc styrène butadiène et le caoutchouc acrylonitrile butadiène, les caoutchoucs naturels élastomères (par exemple, polyuréthane thermoplastique, copolyester thermoplastique, polyamide thermoplastique), époxy (par exemple, SU-8), polyimides, polyuréthanes, polyamides, polyesters (par exemple, poly(acide lactique-co-glycolique) (PLGA), acide polylactique (PLA), l'acide polyglycolique (PGA), la polycaprolactone (PCL), le poly(sébaçate de glycérol) (PGS)), les polysaccharides (par exemple, le chitosan), le parylène, et leurs combinaisons.
Avantageusement, ces polymères sont « de type plastique » ce qui facilite la manipulation de l’échafaudage.
Dans un aspect particulier, le polymère est le PDMS ou le PLGA.
Un autre aspect de l'invention concerne une composition comprenant l’échafaudage microstructuré et des cellules, en particulier des photorécepteurs.
Dans un mode de réalisation particulier de l’invention, les cellules ensemencées sont en particulier des photorécepteurs, des précurseurs de photorécepteurs ou des progéniteurs rétiniens.
Dans un mode de réalisation particulier de l’invention, l’échafaudage est caractérisé en ce que la membrane microstructurée est ensemencée avec des cellules en particulier des photorécepteurs, des précurseurs de photorécepteurs ou des progéniteurs rétiniens.
« Comporter » ou « comprendre » ou « présenter » doivent être interprétés de manière non limitative.
Par « fil selon l’invention », « fibre selon l’invention » ou « textile selon l’invention », on entend un produit thermorésistant selon l’invention se présentant sous la forme d’un fil, d’une fibre ou d’un textile, respectivement.
Sauf mention contraire, toutes les moyennes sont des moyennes arithmétiques.
Description détaillée Produit thermorésistant Le produit thermorésistant selon l’invention comporte, de préférence est constitué de : - un support, - un revêtement comportant les particules protectrices et s’étendant à la surface du support, et - optionnellement d’une couche organique.
De préférence, les particules protectrices recouvrent plus de 55%, de préférence plus de 60%, de préférence plus de 65%, de préférence plus de 70%, de préférence plus de 75% et/ou moins de 85% de la zone protégée du support, en pourcentage surfacique, lesdites particules étant de préférence choisies parmi des particules comportant plus de 95% en masse d’Al 2 O 3 et/ou de ZrO 2 .
Support Le support peut être une fibre unitaire ou un assemblage de fibres, par exemple un fil simple, un feutre ou un papier, ou un assemblage de fils, par exemple un fil assemblé, un voile ou un tissu, par exemple un tissu de fils simple et/ou de fils assemblés, ou une tresse.
Dans un mode de réalisation, les fils du support comportent, de préférence sont composés eux-mêmes de produits thermorésistants selon l’invention, en particulier de fibres et/ou de fils selon l’invention.
Dans un premier mode de réalisation , le support se présente sous la forme d’une fibre et, dans un mode de réalisation, est une fibre optique.
Dans une première variante, la fibre présente : - une longueur supérieure à 10 mm ; et - un diamètre équivalent, mesuré à mi-longueur, supérieur à 2 µm, de préférence supérieur à 4 µm et/ou de préférence inférieur à 50 µm, de préférence inférieur à 30 µm, de préférence inférieur à 20 µm.
Dans une deuxième variante, la fibre présente : - une longueur inférieure ou égale à 10 mm ; et - un diamètre équivalent, mesuré à mi-longueur, supérieur à 2 µm, de préférence supérieur à 4 µm et/ou de préférence inférieur à 50 µm, de préférence inférieur à 30 µm, de préférence inférieur à 20 µm.
Dans une troisième variante, la fibre, de préférence une fibre optique, présente : - une longueur supérieure à 10 mm, de préférence supérieure à 50 mm, de préférence supérieure à 100 mm ; et - un diamètre équivalent, mesuré à mi-longueur, supérieur à 30 µm, de préférence supérieur à 40 µm, voire supérieur à 50 µm, voire supérieur à 80 µm, voire supérieur à 100 µm et /ou de préférence inférieur à 300 µm, de préférence inférieur à 200 µm.
Dans un deuxième mode de réalisation, le support se présente sous la forme d’un assemblage de fibres, de préférence choisi parmi un feutre ou un papier.
Plus de 90%, de préférence plus de 95%, en nombre des fibres de l’assemblage peuvent en particulier être selon une ou plusieurs des trois variantes du premier mode de réalisation et/ou être des fibres de verre, notamment selon l’art antérieur.
Tout ou partie des fibres de l’assemblage peuvent être elles-mêmes des produits thermorésistants selon l’invention. De préférence, plus de 85%, de préférence plus de 90%, de préférence plus de 95%, de préférence 100% en nombre des fibres sont des produits thermorésistants selon l’invention.
Dans un mode de réalisation, l’assemblage comporte, sur plus de 85%, de préférence plus de 90%, de préférence plus de 95% de l’épaisseur dudit assemblage, des fibres qui sont elles-mêmes des produits thermorésistants selon l’invention.
Dans un troisième mode de réalisation, le support se présente sous la forme d’un fil.
A toutes fins utiles, sont fournis ci-après les couples [température ; durée] appropriés pour la réalisation de cette congélation. Il s’agit, par exemple, des couples : [– 120°C ; 45 min], [– 80°C ; 4 h], [– 40°C ; 8 h], [– 24°C ; 12 h] et [– 5°C ; 24 h].
Aussi et au vu de ce qui précède, l’invention a pour objet le procédé de production d’un produit alimentaire fibreux ou feuilleté, et texturé, à partir de protéines végétales, ou un procédé de production dudit produit alimentaire fibreux ou feuilleté, et texturé tel que décrit ci-dessus, à partir de protéines végétales, comprenant au moins les étapes suivantes :
a. le traitement enzymatique d’une solution protéique comprenant de 1 % à 30 % en masse de protéines végétales par rapport à la masse de la solution protéique et dont au moins 20 % desdites protéines végétales sont solubles dans ladite solution protéique
ladite solution protéique additionnée de ladite enzyme étant incubée dans des conditions de température comprises de 30°C à 60°C et de durée comprises de 15 min à 120 min permettant à ladite enzyme de catalyser au moins une réaction enzymatique pour obtenir une solution protéique traitée enzymatiquement ; et
b. la congélation de ladite solution protéique traitée enzymatiquement dans des conditions de température comprises de – 120°C à – 5°C et de durée comprises de 15 min à 48 h permettant la formation de fibres protéiques pour obtenir un produit alimentaire fibreux ou feuilleté, texturé et congelé.
Au vu de ce qui précède, on comprend également qu’un autre mode de réalisation de l’invention concerne le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel la solution protéique comprenant de 1 % à 30 % en masse de protéines végétales est issue d’un mélange comprenant : au moins 70 % de protéines d’origine végétale dont le score lysine est compris de 50 à 150 et le score glutamine est compris de 50 à 150 lorsque ladite enzyme appartient à la classe des aminoacyltransférases, ou
dont le score tyrosine est compris de 50 à 150 lorsque ladite enzyme appartient à la classe des oxydoréductases ; et au plus 30 % de protéines autres.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite congélation à l’étape b. est une congélation directionnelle. En particulier, un autre mode de réalisation de l’invention concerne le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite congélation à l’étape b. est une congélation uni-directionnelle.
Par « congélation directionnelle », on entend qu’au moins deux fronts de froid rectilignes se déplacent dans la solution protéique traitée enzymatiquement pendant la congélation de celle-ci. Par exemple, c’est ce qui se produit lorsque la solution protéique traitée enzymatiquement est placée sans isolation dans une enceinte froide (comme un congélateur ou un surgélateur) dans laquelle le froid est uniformément réparti.
Par « congélation uni-directionnelle », on entend qu’un seul front de froid se déplace dans la solution protéique traitée enzymatiquement pendant la congélation de celle-ci. Pour aboutir à ce contrôle de la direction de la congélation les moyens utilisables sont connus. En effet, il est possible de le faire : en contrôlant la position de la source de froid par rapport à l’échantillon ( e.g. plaque froide sur laquelle on place le produit ou bain thermostaté dans lequel on immerge partiellement le produit) ; en isolant le produit dans une enceinte froide (comme un congélateur ou un surgélateur) dans laquelle le froid est uniformément réparti ; ou par tout autre moyen permettant un contrôle de la direction du ou des fronts de congélation dans le produit tel que l’isolation d’une ou plusieurs faces du produit par un matériau isolant, par exemple un moule.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, lequel comprend en outre une étape préalable de préparation à partir d’une source de protéines (végétales) de ladite solution protéique comprenant de 1 % à 30 % en masse de protéines végétales, ou comprenant de 1 % à 30 % en masse de protéines végétales issues d’un mélange protéique comprenant : au moins 70 % de protéines d’origine végétale dont le score lysine est compris de 50 à 150 et le score glutamine est compris de 50 à 150 lorsque ladite enzyme appartient à la classe des aminoacyltransférases ( e.g. transglutaminase), ou
dont le score tyrosine est compris de 50 à 150 lorsque ladite enzyme appartenant à la classe des oxydoréductases ( e.g. laccase, tyrosinase et peroxydase) ; et au plus 30 % de protéines autres, d’origine végétale ou non,
par rapport à la masse de la solution protéique et dont au moins 20 % desdites protéines végétales sont solubles dans ladite solution protéique. En particulier, un autre mode de réalisation de l’invention concerne le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite solution protéique comprend de 5 % à 25 % en masse de protéines végétales par rapport à la masse de la solution protéique. En particulier, un autre mode de réalisation de l’invention concerne le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite solution protéique comprend des protéines végétales dont au moins 50 % sont solubles dans ladite solution protéique. En particulier, un autre mode de réalisation de l’invention concerne également le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite solution protéique comprend au moins 0,2 % en masse de protéines végétales solubles par rapport à la masse de la solution protéique.
Par « source de protéines (végétales) », on entend un produit tel qu’une farine, un concentrat ou un isolat, lequel comprend des protéines suffisamment concentrées pour permettre de préparer la solution protéique de l’invention au concentration protéique voulue. Par « farine » on entend une poudre issue du broyage et/ou du pressage de produits végétaux, généralement composée principalement de protéines (dont la concentration ne dépasse généralement pas 60 % en masse de protéines par rapport à la masse totale de la poudre) et de sucres (sucres simples et complexes, dont amidon). Par « concentrat » on entend une poudre obtenue après une extraction de l’huile et des sucres complexes plus fine (taille des granules < 50 µm) que celle mise en œuvre pour obtenir une farine. Sa concentration finale en protéines est généralement comprises aux alentours de 55 % à 65 % en masses de protéines par rapport à la masse totale de la poudre. Par « isolat », on entend une poudre obtenue après diverses étapes d’extraction qui ont permis d’optimiser l’extraction de l’huile et des sucres, afin de concentrer davantage la poudre en protéines. Sa concentration en protéines est généralement comprise aux alentours de 80 % à 90 % en masses de protéines par rapport à la masse totale de la poudre.
A noter par ailleurs que la farine, le concentrat ou l’isolat sous forme de poudre peuvent contenir dans la matière sèche du sel, en plus des protéines et d’éventuels autres composants (glucides simples, résidus lipidiques). Aussi et une fois mis en solution, la solution protéique obtenue peut être considérée comme une solution protéique « salée » qu’il convient de dialyser pour obtenir ladite solution protéique (non salée) telle que définie ci-dessus, i.e. dont la concentration saline est inférieure à 0,85 % en masse par rapport à la masse de la solution protéique. Pour ce faire, par exemple, on prépare des bains de dialyse contenant de l’eau distillée (conductivité ≤ 0,001 mS/cm laquelle peut être mesurée à l’aide du pHenomenal ® CO 3100L de VWR). On prépare également et après dispersion de la farine, du concentrat ou de l’isolat dans de l’eau distillée une solution protéique. Celle-ci est ensuite versée dans des boudins de dialyse ( e.g. Spectra/Por, produit par Spectrum) avec un seuil de coupure inférieure à 5 kDa, 3 kDa ou 1 kDa. Les boudins de dialyse sont alors déposés dans les bains de dialyse, laquelle dure 48h, avec un renouvellement des bains de dialyse au moins trois fois au cours desdites 48h. On entend par renouvellement des bains de dialyse, la sortie des boudins de dialyse du bain afin de le vider et de le remplir à nouveau d’eau distillée, avant d’y redéposer les boudins de dialyse. Pour une meilleure efficacité, les bains de dialyse peuvent être mis sous agitation (500 rpm) à l’aide d’un agitateur magnétique et d’un barreau aimanté. A l’issue de la dialyse, une conductivité inférieure à 10 mS/cm peut indiquer que la solution protéique est dénuée de sel ( i.e. concentration saline inférieure à 0,85 % en masse par rapport à la masse de la solution protéique) et dont la conductivité n’est due qu’aux protéines.
De préférence, les unités collectrices sont équiréparties dans le filet, c’est-à-dire sensiblement à égale distance les unes des autres. En variante, la distance entre les unités collectrices du filet peut varier.
De préférence, le filet comporte au moins 5 unités collectrices, mieux au moins 10 unités collectrices, encore mieux au moins 20 unités collectrices, encore mieux au moins 50 unités collectrices.
De préférence, le filet présente une solidité, définie comme l’aire du filet occupée par les unités collectrices par rapport à l’aire totale du filet observée dans une direction normale au filet, comprise entre 0,1 et 0,8, mieux entre 0,3 et 0,6. Une telle solidité permet à la fois un débit de collecte de l’aérosol efficace et une bonne circulation de l’aérosol entre les unités collectrices. Une solidité plus faible ne permet pas un nombre suffisant d’unités collectrices pour collecter efficacement l’aérosol et une solidité plus grande génère des interactions entre les unités collectrice adjacentes qui diminuent l’efficacité de la collecte.
De préférence, les espaces de collecte s’étendent sur toute la hauteur des unités collectrices.
De préférence, la dimension transverse des espaces de collecte est sensiblement identique sur toute leur longueur et/ou entre eux.
De préférence, le filet est dépourvu de fils se croisant.
De préférence, chaque espace de collecte présente une dimension transverse inférieure ou égale à 75%, mieux à 70%, encore mieux comprise entre 65% et 55%, encore mieux entre 62% et 58% de la dimension transverse de l’unité collectrice correspondante.
La hauteur du filet peut être inférieure ou égale à 3 m.
Chaque unité collectrice peut comporter : - un fil présentant une gorge longitudinale formant l’espace de collecte, ou - au moins deux fils espacés l’un de l’autre et formant entre eux l’espace de collecte.