INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Néanmoins, une seule purification par IMAC s'avère souvent insuffisante pour obtenir une pureté suffisante pour les analyses et études biochimiques. En effet, bien que l'IMAC présente de nombreux avantages, tels qu'une purification rapide et une mise à l'échelle facile, les niveaux de pureté élevés ne sont pas toujours atteints après un seul cycle de purification. Par conséquent, une deuxième étape de purification est souvent nécessaire, soit sous la forme d'une purification par affinité en tandem (TAP), soit par une étape de séparation par un autre type de chromatographie, comme la chromatographie d'exclusion stérique (Size-Exclusion Chromatography, SEC) (Y. Li, Biotechnology letters 33 (2011) 1487–1499).
La SEC a été développée pour permettre la séparation des produits par taille, avec une résolution et un pouvoir de séparation élevés, ce qui la rend appropriée comme étape de séparation (G.H. Lathe, et al., The Biochemical Journal 64 (1956) 665–674). Depuis lors, elle est considérée comme une application standard dans la préparation des molécules biologiques et des protéines, y compris, mais sans s'y limiter, les applications préparatoires, l'étude du repliement des protéines (V. N. Uversky, et al., Biochemistry 32 (1993) 13288–13298), le dessalage et l'échange de tampons (T. Burnouf, J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 664 (1995) 3–15) et l'élimination des agrégats (Katakam, et al. PDA Journal of pharmaceutical science and technology 49 (1995) 160–165). Cependant, en raison de la nature de la SEC, la séparation prend généralement beaucoup de temps car le principe de séparation repose sur la rétention différente des protéines dans les matrices réticulées. Par conséquent, les longues durées d'exécution de 30 minutes ou plus et la consommation élevée de phase mobile jouent un rôle critique, rendant souvent cette approche économiquement non viable. En outre, la faible capacité volumique des colonnes SEC a empêché son application dans les processus industriels de séparation. Bien que les applications de la SEC dans les approches de chromatographies continues telles que le lit mobile simulé (SMB), le contre-courant périodique (PCC) ou la chromatographie annulaire continue (CAC) soient connues, elles nécessitent un équipement spécialisé et très coûteux ainsi qu'un personnel spécialement formé, ce qui limite ces approches aux processus industriels dédiés (Dr. Rahul Godawat et al. Biotechnol. J. 7 (2012) 1496–1508 ; G. Iberer, et al., J. Chromatogr. A 921 (2001) 15–24; S.R. Schmidt, BioProcess Technical 15 (2017) 30–37).
Résumé Les inventeurs ont pour la première fois développé une méthode de purification des glycoprotéines permettant d’améliorer le rendement tout en obtenant une bonne pureté du composé cible avec un équipement de chromatographie en phase liquide haute performante (HPLC ; pour en anglais « High Performance liquid Chromatography ») classique, ou UPLC (pour en anglais « Ultra Performance Liquid Chromatography »), ou FPLC (pour en anglais « Fast Protein Liquid Chromatography ») mais avec un débit beaucoup plus rapide. Les inventeurs ont utilisé une chromatographie d’affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC) combinée à une méthode de chromatographie continue utilisant une seule colonne dans une approche en deux étapes telle que décrite dans la demande WO2012/062985 afin d’obtenir une séparation à très haute fréquence. Contrairement à la méthode utilisée précédemment par les inventeurs pour purifier une adhésine fortement glucosylée de l'Haemophilus influenzae de type non déterminable (HMW1ct-Glc) (M.T.C. Walvoort, et al., Sci. Rep. 6 (2016) 39430), comme illustré dans les exemples de la présente demande, la méthode de la présente invention permet d’atteindre un degré de pureté plus élevé tout en ayant un rendement plus important.
La présente invention concerne une méthode de purification d’une glycoprotéine d’intérêt en solution comprenant les étapes de : i. séparation de la fraction comprenant une glycoprotéine par chromatographie d’affinité, ii. séparation de ladite fraction comprenant la glycoprotéine d’intérêt par chromatographie d’exclusion stérique en phase liquide comprenant les étapes de : a) injections multiples de la fraction, lesdites injections se succédant après des intervalles de temps t1 dans une colonne de chromatographie d’exclusion stérique, b) soutirages multiples, le dit soutirage des fractions se succédant après des intervalles de temps t1, générant un éluat enrichi en glycoprotéine d’intérêt formé à partir d’au moins d’une des fractions soutirées, c) injections multiples de l’éluat recueilli précédemment, les dites injections se succédant après des intervalles de temps t2 dans une colonne de chromatographie d’exclusion stérique, d) soutirages multiples, les dits soutirages des fractions se succédant après des intervalles de temps t2 dans une seconde colonne de chromatographie d’exclusion stérique.
La présente invention concerne également une glycoprotéine susceptible d’être obtenue par la méthode précédente présentant un degré de pureté supérieur à 80%, de préférence 90% de la masse totale des protéines.
Fig. 1 montre une représentation schématique de la chromatographie d’exclusion stérique en phase liquide selon l’invention (WO2012/062985). A) Au cours de la première étape, le produit est introduit dans la colonne à une fréquence déterminée, choisie de manière à ce que le produit co-élue avec une petite quantité d'impuretés (gris foncé). B) Au cours de la deuxième étape, le produit est réinjecté en utilisant une fréquence différente optimisée de manière à le séparer de l'impureté précédemment co-éluée.
Fig. 2 montre une analyse SEC de HMW1ct-Glc purifié après IMAC His-Tag et après purification par chromatographie d’exclusion stérique en phase liquide en deux étapes selon l’invention. L'analyse SEC a été réalisée à 1 mL/min. 500 µL de produit ont été chargés sur la colonne. La glycosyltransférase HMW1C (Grass, S. et al. Mol Microbiol 48 (2003) 737; Gross, J. et al. J Biol Chem 283, (2008) 26010) élue en premier à 7.9 min tandis que l'adhésine HMW1 élue à 14.8 min.
Fig. 3 montre un SDS-PAGE de (1) HMW1ct-Glc purifié après IMAC His-Tag et purification par chromatographie d’exclusion stérique en phase liquide en deux étapes selon l’invention (gauche), (2) après purification IMAC (droite). La glycosyltransférase utilisée pour la glycosylation orthogonale est toujours présente, à 70 kDa, alors qu'après purification par chromatographie d’exclusion stérique en phase liquide en deux étapes selon l’invention (1), seule la HMW1ct-Glc est visible, à 40-35 kDa.
La présente divulgation concerne une méthode de purification d’une glycoprotéine d’intérêt en solution comprenant les étapes de : i. séparation de la fraction comprenant une glycoprotéine par chromatographie d’affinité, ii. séparation de ladite fraction comprenant la glycoprotéine d’intérêt par chromatographie d’exclusion stérique en phase liquide comprenant les étapes de : a) injections multiples de la fraction, lesdites injections se succédant après des intervalles de temps t1 dans une colonne de chromatographie d’exclusion stérique, b) soutirages multiples, le dit soutirage des fractions se succédant après des intervalles de temps t1, générant un éluat enrichi en glycoprotéine d’intérêt, c) injections multiples de l’éluat recueilli précédemment, les dites injections se succédant après des intervalles de temps t2 dans une colonne de chromatographie d’exclusion stérique, d) soutirages multiples, le dit soutirage des fractions se succédant après des intervalles de temps t2 dans une seconde colonne de chromatographie d’exclusion stérique.
La méthode décrite dans la présente demande permet de séparer une glycoprotéine et en particulier d’obtenir une glycoprotéine fortement purifiée, de préférence avec un degré de pureté de plus de 80%, de préférence de plus de 90% de la masse des protéines totales.
Ainsi la présente demande porte sur une glycoprotéine susceptible d’être obtenue par la méthode décrite dans la présente demande, qui présente de préférence un degré de pureté supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90% de la masse des protéines totales.
Par degré de pureté de la glycoprotéine dans une solution, on entend le pourcentage massique de la glycoprotéine par rapport à la masse totale en protéine.
Plus particulièrement, différents procédés peuvent être mis en œuvre par l’unité de traitement pour obtenir un vecteur de signature.
La illustre un premier mode de mise en œuvre d’un procédé de génération de vecteurs de signature VCS d’une image IMG acquise isolément ou bien dans une succession d’images.
Dans ce premier mode de mise en œuvre, l’unité de traitement UT additionne, à l’étape 50, les valeurs des pixels de même composante de couleur d’une même ligne de l’image IMG pour chaque ligne de l’image, de façon à obtenir pour chaque ligne une valeur représentative de la ligne pour cette composante de couleur.
Puis, à l’étape 51, l’unité de traitement UT effectue, pour chaque ligne de l’image et pour chaque composante de couleur, une division entre la valeur représentative de cette composante de couleur de cette ligne et une valeur représentative de cette même composante de couleur d’une ligne adjacente de cette même image. En variante, l’unité de traitement effectue, pour chaque ligne de l’image et pour chaque composante de couleur, une division entre la valeur représentative de cette composante de couleur de cette ligne et une valeur représentative de cette même composante de couleur de la même ligne d’une image précédente ou d’une image suivante de ladite succession d’images acquises.
Les divisions effectuées permettent d’obtenir un vecteur de signature VCS pour chaque composante de couleur de l’image. Chaque vecteur de signature associé à une composante de couleur comprend le résultat des divisions effectuées pour chaque ligne de l’image pour cette composante de couleur.
Les vecteurs de signature VCS obtenus par les divisions susmentionnées présentent l’avantage d’être indépendants de la réflectance des objets de la scène et du niveau de lumière dans la scène. Les vecteurs de signature VCS permettent donc de visualiser principalement les changements de luminosité entre deux bandes à luminosités différentes apparaissant dans l’image générée. Il est alors plus simple de détecter les bandes à luminosités différentes à partir de tels vecteurs de signature.
Néanmoins, la division implique un coût en ressources de calcul important.
Afin de simplifier les calculs devant être réalisés par l’unité de traitement UT, il est avantageux de passer dans un domaine logarithmique pour éviter d’effectuer une division entre les valeurs représentatives.
À ce titre, la illustre un deuxième mode de mise en œuvre d’un procédé de génération de vecteurs de signature VCS d’une image IMG acquise isolément ou bien dans une succession d’images.
Dans ce deuxième mode de mise en œuvre, l’unité de traitement UT additionne, à l’étape 60, les valeurs des pixels de même composante de couleur d’une même ligne de l’image pour chaque ligne de l’image, de façon à obtenir pour chaque ligne une valeur représentative de la ligne pour cette composante de couleur.
Puis, pour chaque ligne et pour chaque composante de couleur, l’unité de traitement UT calcule, à l’étape 61, une valeur logarithmique de la valeur représentative de cette composante de couleur dans cette ligne. En particulier, l’unité de traitement calcule le logarithme binaire de chaque valeur représentative des composantes de couleur de cette ligne.
L’unité de traitement UT calcule ensuite, à l’étape 62, pour chaque ligne de l’image et pour chaque composante de couleur, une différence entre la valeur logarithmique de la valeur représentative de cette composante de couleur pour cette ligne de l’image et une valeur logarithmique d’une valeur représentative de la même composante de couleur d’une ligne adjacente de l’image. En variante, l’unité de traitement UT peut calculer, pour chaque ligne de l’image et pour chaque composante de couleur, une différence entre la valeur logarithmique de la valeur représentative de cette composante de couleur pour cette ligne de l’image et une valeur logarithmique d’une valeur représentative de la même composante de couleur de la même ligne d’une image précédente ou d’une image suivante de ladite succession d’images acquises.
Les différences effectuées permettent d’obtenir un vecteur de signature VCS pour chaque composante de couleur de l’image. Chaque vecteur de signature associé à une composante de couleur comprend le résultat des différences effectuées pour chaque ligne de l’image pour cette composante de couleur.
Ainsi, dans ce mode de mise en œuvre, l’unité de traitement effectue simplement une différence dans le domaine logarithmique au lieu d’une division. Cela permet de simplifier les calculs par l’unité de traitement UT.
La illustre un troisième mode de mise en œuvre d’un procédé de génération de vecteurs de signature VCS d’une image IMG acquise isolément ou bien dans une succession d’images.
Dans ce troisième mode de réalisation, l’unité de traitement UT comptabilise, à l’étape 70, pour chaque ligne et pour chaque composante de couleur, un nombre de pixel à prendre en considération pour générer le vecteur de signature de cette composante de couleur. Par exemple, l’unité de traitement peut prendre en considération l’ensemble des pixels de même composante de couleur d’une ligne.
Poche aumônière pour siège de véhicule La présente description est relative à une poche aumônière pour un siège de véhicule, notamment un dossier de siège de véhicule automobile. Il est également décrit un procédé de fabrication d’une telle poche aumônière.
Dans le domaine automobile, en particulier, il est connu de réaliser une poche aumônière sur un dossier de siège de véhicule en fixant la poche sur une garniture de dossier.
Le document FR3037880B1 divulgue un exemple de poche aumônière fixée sur un dossier de siège. La pièce formant la poche est par exemple un filet, ou une pièce en cuir, en textile tissé ou non, ou en matière synthétique. La pièce est fixée au dossier par un cadre rigide, généralement en matière plastique, que l’on vient fixer au dossier de siège.
Un cadre plastique permet de maintenir fermement la poche au dossier de siège mais est inesthétique et nécessite un montage complexe, engendrant un coût de fabrication supplémentaire. Dans un souci de simplification de fabrication de la poche aumônière et d’une meilleure intégration au dossier de siège, les solutions connues ne sont pas satisfaisantes.
Résumé La présente divulgation vise à améliorer la situation.
À cette fin, il est décrit une garniture de dossier pour un dossier de siège de véhicule, la garniture de dossier comprenant : - une coque avec une face interne prévue pour être orientée vers l’intérieur du dossier et une face externe prévue pour former une face arrière du dossier, et - une poche aumônière fixée à la face externe de la coque, la poche aumônière comprenant un panneau qui présente un bord inférieur et des bords latéraux, et au moins un élément de rigidification agencé dans le bord inférieur et les bords latéraux, la coque comprenant en outre au moins une gorge dans laquelle sont logés l’un au moins parmi les bords latéraux et/ou le bord inférieur du panneau pour l’assemblage du panneau avec la coque.
Ainsi, avantageusement, la gorge permet de fixer la poche aumônière à la coque. Il n’est ainsi pas nécessaire d’ajouter un cadre ou un autre élément quelconque pour maintenir la poche aumônière sur la coque.
Selon des modes de réalisations préférés, la garniture de dossier comprend une ou plusieurs des caractéristiques suivantes, prises seules ou en combinaison : - la coque est en plastique et / ou comprend un matériau à base de polyuréthane ; - des organes de fixation sont en prise avec l’élément de rigidification et la coque au niveau de la gorge pour la fixation de la poche aumônière à la coque ; - les organes de fixation traversent la coque de part et d’autre de ladite au moins une gorge pour accrocher l’élément de rigidification à la coque ; - les organes de fixation sont des anneaux s’étendant du côté de la face interne de la coque de part et d’autre de ladite au moins une gorge.
Selon un autre aspect, il est également décrit un procédé de fabrication d’une garniture de dossier pour un dossier de siège de véhicule, le procédé comprenant : - fournir un moule de forme complémentaire à au moins une gorge prévue pour y loger un bord inférieur et des bords latéraux d’un panneau d’une poche aumônière, - appliquer sur une première surface du moule au moins un matériau pour obtenir la coque en formant ladite au moins une gorge. Le procédé peut également prévoir : - le matériau pour obtenir la coque comprend du plastique et / ou du polyuréthane ; - le matériau est en polyuréthane et à l’état visqueux lors de son application ; - le matériau est en polyuréthane et est pulvérisé sur un film fonctionnel de transfert pour obtenir au moins une couche de polyuréthane, le film fonctionnel de transfert étant de préférence en polypropylène, et rapporté sur une face envers d’un matériau textile, en cuir ou en matière synthétique, et dans lequel on presse l’ensemble, formé par la couche de polyuréthane, le film fonctionnel de transfert et le matériau textile, cuir ou en matière synthétique, dans le moule pour former la gorge ; - au préalable de l’application sur le moule d’au moins un matériau pour obtenir la coque en formant ladite au moins une gorge, appliquer au moins une couche de peinture contre une première surface du moule, et l’étape d’application comprenant en outre appliquer sur la première surface du moule (60) une première couche de polyuréthane dépourvue d’eau sur la couche de peinture, et appliquer une seconde couche de polyuréthane présentant une formulation contenant de l’eau et un catalyseur de moussage au moment de son application sur la première couche de polyuréthane ; - une couche d’un agent démoulant est appliquée contre la première surface du moule avant l’application de la couche de peinture ; - la seconde couche de polyuréthane est formée sur un film fonctionnel de transfert avant l’application de la seconde couche de polyuréthane sur la première couche de polyuréthane, l’ensemble formé par la seconde couche de polyuréthane et par le film fonctionnel de transfert étant appliqué sur la première couche de polyuréthane, le film fonctionnel de transfert étant retiré après l’application de la seconde couche de polyuréthane sur la première couche de polyuréthane ; - fournir le panneau de la poche aumônière, comprenant un élément de rigidification agencé dans les bords latéraux et le bord inférieur, placer les bords latéraux et le bord inférieur dans ladite au moins une gorge, du côté de la deuxième couche de la coque, attacher les bords latéraux et inférieur à la coque par des organes de fixation.
Selon un autre aspect, il est également décrit un dossier de siège comprenant une garniture de dossier conforme à la précédente description.
D'autres caractéristiques et avantages apparaîtront au cours de la description suivante d’une de ses formes de réalisation, donnée à titre d'exemple non limitatif, en regard des dessins joints. Sur les dessins :
représente schématiquement un exemple de siège de véhicule comprenant une poche aumônière, dans une vue éclatée ;
représente schématiquement en coupe un exemple de réalisation de siège comprenant une poche aumônière ;
représente schématiquement en coupe un autre exemple de réalisation de siège comprenant une poche aumônière ;
illustre un détail d’une portion du siège comprenant une poche aumônière de la ;
Bien entendu, encore plus préférentiellement, le centre de gravité de l’ensemble de rétention ou de l’ensemble électronique est sensiblement aligné circonférentiellement avec le milieu de la distance circonférentielle séparant les première et deuxième extrémités circonférentielles l’une de l’autre. En d’autres termes, le centre de gravité de l’ensemble de rétention ou de l’ensemble électronique et le milieu de la distance circonférentielle séparant les première et deuxième extrémités circonférentielles l’une de l’autre présentent sensiblement le même azimut.
Dans une variante dans laquelle la couche additionnelle présente intrinsèquement une adhérence insuffisante à la surface interne, l’assemblage comprend des moyens de fixation de la couche additionnelle à la surface interne.
Optionnellement, les moyens de fixation de la couche additionnelle à la surface interne comprennent une couche d’une composition adhésive radialement interposée entre la couche additionnelle et la surface interne. Une telle couche de composition adhésive peut être une couche d’une composition polymérique, notamment une colle, par exemple comme décrites dans WO2015165899. On pourra également envisager d’utiliser une composition ayant également d’autres fonctions, comme par exemple une composition auto-obturante, telle que par exemple décrite précédemment en référence aux moyens de fixation du dispositif de rétention.
Dans une autre variante dans laquelle la couche additionnelle présente intrinsèquement une adhérence suffisante à la surface interne, la couche additionnelle est au contact direct de la surface interne. Par contact direct, on entend qu’aucune couche de composition adhésive n’est radialement interposée entre la couche additionnelle et la surface interne. On utilisera notamment, mais pas exclusivement, cette variante dans le mode de réalisation dans lequel la couche additionnelle comprend une couche auto-obturante. En effet, la plupart des compositions auto-obturantes étant suffisamment adhérentes à la surface interne, il est possible de se dispenser d’utiliser une couche de composition adhésive radialement interposée entre la couche additionnelle de composition auto-obturante et la surface interne.
Dans une configuration optionnelle préférée, le dispositif de rétention comprend des moyens de rétention de l’organe électronique sur ou dans le dispositif de rétention.
Dans une variante préférée, les moyens de rétention de l’organe électronique sur ou dans le dispositif de rétention comprennent un logement de rétention de l’organe électronique dans le dispositif de rétention. Dans cette variante préférée, les moyens de rétention de l’organe électronique sur ou dans le dispositif de rétention comprennent avantageusement des moyens de rétention réversible de l’organe électronique dans le logement de rétention. De préférence, les moyens de rétention réversible comprenant des moyens de rétention par clipsage élastique de l’organe électronique dans le logement de rétention.
Optionnellement, de façon à permettre l’obtention de paramètres utiles à l’utilisateur du pneumatique, l’organe électronique est un organe électronique d’identification du pneumatique et/ou de mesure d’au moins un paramètre physique de la cavité interne choisi parmi la pression du gaz de la cavité interne et la température du gaz de la cavité interne.
Dans un mode de réalisation applicable au premier objet, l’ensemble de rétention est dépourvu d’organe électronique retenu par le dispositif de rétention. Dans ce mode de réalisation, l’ensemble de rétention comprend alors le dispositif de rétention, les moyens de fixation mais pas d’organe électronique retenu dans le dispositif de rétention.
De façon optionnelle et avantageuse, la masse de l’ensemble de rétention va de 1 g à 10 g, de préférence de 2 g à 6 g et plus préférentiellement de 3 g à 5 g. Ainsi, on réduit autant que possible la sur-masse localisée associée à la présence du dispositif de rétention seul et des moyens de fixation. Une masse suffisante de l’ensemble de rétention garantit une résistance mécanique suffisante.
De façon optionnelle et préférée, la différence entre : - la masse d’une portion de l’assemblage de longueur circonférentielle L comprenant une partie de la couche additionnelle dépourvue de la portion de compensation, et - la masse d’une portion de l’assemblage de même longueur circonférentielle L comprenant une partie de la couche additionnelle comprenant la portion de compensation et l’ensemble de rétention, va de 0 g à 16 g, de préférence de 3 g à 13 g et plus préférentiellement de 6 g à 10 g.