INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Des effets antioxydants, anti-inflammatoires et anti-tumoraux ont été attribués à l’extrait méthanoïque des graines délipidées. En revanche, les parties aériennes sont souvent des déchets de la filière huile d’onagre obtenue à partir des graines, et sont rarement valorisées. Les travaux concernant la composition chimique et les propriétés des extraits préparés à partir des parties aériennes des espèces Oenothera sont assez limités et montrent que les parties aériennes contiennent des flavonoïdes, des acides phénoliques, des tanins et des triterpènes.
L’ Oenothera biennis utilisée est un halophyte, c’est-à-dire capable de se développer dans un environnement soumis au stress salin .
Selon l’invention, la biomasse utilisée est constituée par des parties aériennes séchées d’Onagre ( Oenothera biennis ). En particulier la variété Oenothera biennis ssp maritima peut être utilisée. De préférence, cette plante est cultivée dans la région Bretagne Nord (France) par la société Setalg. Les parties aériennes sont de préférence récoltées en pleine floraison en juillet.
L’extrait hydro-alcoolique de parties aériennes d’Onagre ( Oenothera biennis ) selon l’invention est obtenu par un procédé comprenant l’extraction des parties aériennes, de préférence préalablement broyées, dans un mélange d’eau et d’au moins un alcool, de préférence un mono-alcool ayant de 2 à 6 atomes de carbone, de préférence l’éthanol.
L’extrait hydro-alcoolique selon l’invention est de préférence obtenu comme décrit dans l’exemple 1. En particulier, il est obtenu par le procédé comprenant les étapes suivantes :
a : broyage en fines particules des parties aériennes séchées d’onagre dans un broyeur (1 – 2mm de granulométrie);
Le principe actif est obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes : a/ Solubilisation de poudre d’écorce de fruits de Punica granatum immatures dans l’eau, à raison de 50g/L, b/ Hydrolyse enzymatique à l’aide d’une carbohydrase, c/ Séparation des phases soluble et insoluble, par centrifugation, d/ récupération de la phase soluble, et inactivation enzymatique par traitement thermique, e/ purification par filtration des composés polyphénoliques, f/ désodorisation par ajout d’un adjuvant de procédé permettant la désodorisation, g/ filtrations et filtration stérilisante.
Le principe actif obtenu présente les caractéristiques analytiques suivantes : - un taux de matières sèches de 14,8 g/L, - une teneur en polyphénols totaux (gamme en acide ellagique) de 5,5g/l, soit 37% en poids de matière sèche
-une teneur en sucres totaux de 5.2g/l, soit 35% en poids de matière sèche de l’hydrolysat (calculé à l’aide d’une gamme de glucose)
- une teneur en peptides de 0.28g/l, soit 2% en poids de matière sèche de l’hydrolysat (déterminée par la méthode de KJELDAHL) - et 1.6g/l de cendres soit 11% de cendres en poids de matière sèche (déterminée par la pesée des résidus issus de l’incinération des échantillons de l’hydrolysat à 550°C dans un four à moufle électrique).
Les polyphénols de l’hydrolysat sont des Ellagitanins, plus précisément, ce sont la Punicalagine et ses dérivés, la Punicaline, les dérivés d’HHDP et l’acide Ellagique.
IV.A2. Exemple 2 : exemple de principe actif selon l’invention sous forme poudre
Le principe actif est obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes : a/ Solubilisation de poudre d’écorce de fruits de Punica granatum immatures dans l’eau, à raison de 50g/L, b/ Hydrolyse enzymatique à l’aide d’une carbohydrase, c/ Séparation des phases soluble et insoluble, par centrifugation, d/ récupération de la phase soluble, et inactivation enzymatique par traitement thermique, e/ purification par filtration des composés polyphénoliques, f/ introduction de maltodextrine, à raison de 90% (v/v), g/ concentration, stérilisation et atomisation.
Le principe actif comprenant l’hydrolysat selon l’invention et un support, obtenu par la mise en œuvre du procédé ci-avant décrit, présente les caractéristiques analytiques suivantes : - un taux de matières sèches de 965 mg/g de principe actif, -une teneur en sucres totaux de 897,5 mg/g, soit 93% en poids de matière sèche du principe actif (calculé à l’aide d’une gamme de glucose) - une teneur en polyphénols totaux (gamme en acide ellagique) de 38,6 mg/g, soit 4% en poids de matière sèche du principe actif - une teneur en peptides de 1% en poids de matière sèche du principe actif (déterminée par la méthode de KJELDAHL) - et 2% de cendres en poids de matière sèche (déterminée par la pesée des résidus issus de l’incinération des échantillons de l’hydrolysat à 550°C dans un four à moufle électrique).
Les polyphénols présents dans l’hydrolysat sont des Ellagitanins. Ce sont la Punicalagine et ses dérivés, la Punicaline, les dérivés d’HHDP et l’acide Ellagique.
IV.A3. Essais comparatifs démontrant le caractère inventif du principe actif selon l’invention
a. Comparaison jus commercial, jus frais et écorce
L’objectif de cette étude est de comparer l’efficacité de plusieurs produits issus de grenade. Un jus commercial de grenade a été sélectionné. Un jus de grenade fraiche a été préparé par pression des grenades. Une extraction aqueuse d’écorce de grenade fraiche a été réalisée par solubilisation aqueuse à raison de 200g/l et filtration. Des dilutions ont été réalisées afin d’obtenir des produits ayant des teneurs en matière sèche semblables.
Ces trois produits ont été comparés à l’hydrolysat de l’exemple 1. Les informations sont présentées dans le tableau 2.
Caractéristique de la matière première Teneur en Matières sèches (g/L) % des Ellagitanins vs Hydrolysat Hydrolysat d’Ecorce de grenade immature MS = 13 g/L 100% Extrait d’écorce fraiche de grenade MS = 14.3g/L 54% Jus de grenade fraiche MS = 13.5g/L 0% Jus commercial de grenade MS = 11.6g/L 5%
Pour des teneurs en matières sèches similaires (11,6g/L à 14,3 g/L)), les 4 produits présentent de fortes différences en termes de teneur en Ellagitanins. L’hydrolysat d’écorce de grenade immature présente bien une plus grande teneur en Ellagitanins que les deux jus de grenade fraiche ou jus commercial de grenade et que l’extrait d’écorce fraiche de grenade.
b. Comparaison fruits immatures vs. fruits matures
Les résultats sont donnés dans le Tableau 9 (Capacité d’un principe actif selon l’invention à restaurer l’expression de HBD2 et TLR2 par des SILABSKIN® RE soumis à un stress hydrique).
Expression de HBD2 (%) Capacité à restaurer l'expression de HBD2 (%) Expression de TLR2 (%) Capacité à restaurer l'expression de TLR2 (%) SILABSKIN® RE normaux Témoin 100 100 Exemple 2 à 0,50% 113 144 SILABSKIN® RE - stress hydrique Témoin 43 67 Exemple 2 à 0,25% 62 33 128 185 Exemple 2 à 0,50% 100 100 147 242
Ces résultats montrent que soumis à un stress hydrique, les SILABSKIN® RE présentent une diminution significative des défenses innées anti bactériennes. On constate que testé à 0,50 % sur ce modèle, le principe actif selon l’invention restaure significativement l’expression de : - HBD2 : +100%, -TLR2 : +242%
L’utilisation d’un principe actif selon l’invention limite ainsi les effets délétères d’un stress hydrique sur la barrière immune cutanée.
Effet du principe actif selon l’invention sur la sécretion de l’ IL-17 par les lymphocytes TT helper 17
L’interleukine 17 (IL-17) est une cytokine produite par les lymphocytes T helper 17 (Th17L) qui a des effets sur la biologie de l’épiderme. Elle cause une inflammation et une prolifération épidermale anormale. En particulier, l’IL-17 est impliqué dans le psoriasis.
Cette étude a été réalisée afin de démontrer l’activité potentielle du principe actif selon l’invention sur la sécrétion de l’IL-17 par les Th17L.
Le protocole est le suivant : Les lymphocytes T natifs sont isolés de cellules mononuclées du sang périphérique et cultivés dans un milieu contenant un mélange permettant leur différenciation en Th17L. Les cellules sont ensuite incubées à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2.
Après plusieurs jours, le milieu de culture est éliminé et remplacé par un milieu contenant un mélange permettant la différenciation en présence ou en absence de cyclosporine ou du principe actif selon l’exemple 2 à 0,1%. Après plusieurs heures, le surnageant est recueilli et congelé à -80°C.
Les IL-17 sont dosés par test ELISA. Les résultats sont résumés dans le tableau 10 suivant :
Sécrétion d’IL-17 (pg/mL) Capacité à limiter la sécrétion d’IL-17 (%) Témoin 1 497 Cyclosporine à 1 µg/mL 567 -62 Principe actif exemple 2 à 0,1% 865 -42
Lorsqu’ils sont placés dans un milieu induisant leur différenciation, les lymphocytes T natifs se différencient en Th17L. Ce procédé conduit à une augmentation de la production d’IL-17.
Testé à 0,1% sur des lymphocytes Th17, le principe actif selon l’invention limite la sécrétion d’IL-17 de 42%.
Essais in vivo
Le principe actif de l’exemple 2 a été formulé au sein d’une formule unique pour réaliser l’ensemble des études in vivo, sur panel caucasien et asiatique. La formule est décrite dans le Tableau 11.
Isononyl isononanoate (Lanol 99, Seppic) 5,0 Behenyl Alcohol / Arachidyl glucoside / Arachidyl alcohol (Montanov 202, Seppic) 3,0 Principe actif selon l’invention – exemple 1 1 Cetearyl alcohol / cetearyl glucoside (Montanov 68, Seppic) 2,0 Conservateurs 1,0 Polyacrylamide / C13-14 isoparaffin / Laureth-7 (Sepigel 305, Seppic) 0,3 Eau qsp 100
La détermination des masses molaires des sucres est réalisée par HPLC avec détection RI.
La fraction glucidique du principe actif selon l’invention sous forme de poudre est préférentiellement composée de 55% à 65% d’oligosaccharides et de 35% à 45% de polysaccharides constitués de glucose et de fructose. La taille moyenne des sucres est une masse molaire moyenne 13 140 Da.
La fraction glucidique du principe actif sous forme liquide est préférentiellement composée de 85 à 100% d’oligosaccharides constitués de glucose et de fructose. Leurs tailles sont inférieures à 3600Da.
Le dosage des protéines dans le principe actif selon l’invention peut être réalisé notamment par la méthode de KJELDHAL (référence : Official method of analysis of the A.O.C., 12th ed. W Horwitz, E.D., New-York, 15-60, 1975). La teneur en protéines est exprimée en pourcentage par rapport à la teneur en matières sèches. De plus, pour déterminer la taille des composés peptidiques présents dans le principe actif selon l’invention, il est possible de réaliser une chromatographie de type F.P.L.C.
La teneur en cendres brutes peut être déterminée par la pesée des résidus issus de l’incinération des échantillons de l’extrait selon l’invention à 550°C dans un four à moufle électrique.
Les minéraux, présents dans le principe actif, sont le potassium, sodium et le chlore majoritairement. D’autres minéraux tels que le phosphore, le magnésium et le soufre peuvent être présents. L’analyse des minéraux constituant les cendres du principe actif selon l’invention peut être réalisée par spectrométrie d’émission optique (ICP/OES) et le dosage des ions chlorures par titration au nitrate d’argent.
L’hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum selon l’invention peut être obtenu par tout moyen. Préférentiellement il est obtenu par la mise en œuvre d’un procédé comprenant au moins une extraction aqueuse et une hydrolyse enzymatique.
Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l’hydrolysat selon l’invention est obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes : a/ Solubilisation de poudre d’écorce de fruits de Punica granatum immatures dans l’eau, à raison d’au moins 50g/L, b/ Hydrolyse enzymatique, préférentiellement à l’aide d’une carbohydrase, c/ Séparation des phases soluble et insoluble, par tout moyen permettant de séparer une phase insoluble de la phase soluble, par exemple par centrifugation, filtration ou décantation d/ récupération de la phase soluble, et inactivation enzymatique par tout moyen permettant l’inactivation des activités enzymatiques, par exemple par traitement thermique, e/ purification des composés polyphénoliques par tout moyen permettant le tri moléculaire, f/ éventuellement désodorisation ou décoloration par ajout d’un adjuvant de procédé permettant la désodorisation ou la décoloration g/ préférentiellement filtration et filtration stérilisante.
Les étapes du procédé décrit ci-avant, prises individuellement, sont usuelles dans le domaine des extractions d’actifs à partir de matières premières naturelles et l’homme du métier est à même d’en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales.
L’hydrolysat obtenu peut être utilisé tel quel sous forme liquide et constituer le principe actif selon l’invention.
L’hydrolysat peut également éventuellement être associé à un support et séché (atomisation ou lyophilisation notamment), pour se présenter sous forme poudre.
L’hydrolysat peut également éventuellement être associé à des composés permettant sa présentation sous forme d’un film sec.
II. Composi tion
Le principe actif selon l’invention est préférentiellement utilisé dans des compositions, comprenant un milieu cosmétiquement/dermatologiquement acceptable. Il s’agit de compositions dans différentes formes galéniques, adaptées à une application par voie topique sur la peau.
Il peut s’agir de compositions comprenant au moins 0,1% d’un principe actif selon l’invention sous la forme liquide, préférentiellement entre 0,1 et 10% ou au moins 0,05% du principe actif selon l’invention sous la forme poudre, préférentiellement entre 0,05% et 2%.
Selon un exemple, le revêtement est disposé sur la face intérieure du de la pièce 1 pour être protégé d’éventuels chocs et intempéries. Ainsi, la durée de vie du revêtement 11, et par conséquent de la pièce 1, peut être augmentée. Selon un autre exemple, le revêtement est disposé sur la face externe de la pièce 1. La pièce 1 peut alors être disposée à l’intérieur d’un ensemble, par exemple d’un ensemble étanche. Le revêtement peut alors être protégé d’éventuels chocs et intempéries. Lorsque la pièce 1 est comprise dans, voire forme, le dioptre de sortie du dispositif lumineux 2, il est préférable que le revêtement soit disposé sur la face externe de la pièce 1. Ainsi, on évite que des éléments présents dans l'épaisseur du de la pièce 1 soient visibles. En complément ou en alternative à la disposition de la pièce 1 dans un ensemble, le revêtement peut être recouvert d’une couche protectrice configurée pour résister à d’éventuels chocs et intempéries. Par exemple, cette couche protectrice est un vernis incolore ou teinté.
Le corps 10 de la pièce 1 est maintenant décrit en détail. Le corps 10 est à base d’un polymère, voire de plusieurs polymères. Le polymère peut être choisi parmi le polycarbonate, le polyméthacrylate de méthyle , le polyméthacrylate de butyle, les polypropylènes, les polyamides, les polyéthylènes, les polyéthers, les résines polyester, les époxy, les polyuréthanes, et autres matières thermoplastiques et thermodurcissables, non revêtues ou revêtues au préalable d'une ou plusieurs sous-couches polymères, et leurs dérivés. Par exemple, le polycarbonate présente d'excellentes propriétés mécaniques et d'une résistance thermique permettant une utilisation sur une large gamme de température, typiquement entre −100 °C et 130 °C, voire jusqu’à 180 °C pour les polycarbonates de grade « haute température », ce qui est particulièrement avantageux pour une pièce 1 de véhicule automobile. Notons que le corps 10 peut comprendre d’autres matériaux, par exemple une charge et/ou un renfort pour former un composite. Le corps 10 de la pièce 1 peut en outre présenter une forme au moins selon deux dimensions, voire en trois dimensions. Lorsque la pièce 1 est comprise dans, voire forme, le dioptre de sortie du dispositif lumineux 2, le corps 10 est de préférence en trois dimensions.
Selon un exemple, le corps 10 peut être opaque. La surface 100 du corps 10 peut présenter une couleur distincte du revêtement 11 afin de présenter un élément visuel ou un motif par contraste entre la zone non-revêtue 112 sur la surface 100 et la zone opacifiée 111.
En alternative, le corps 10 peut être partiellement transparent, voire transparent. Le revêtement 11 peut former au moins une zone opacifiée 111 et au moins une zone non-revêtue 112. La zone opacifiée 111 permet de bloquer une transmission de lumière à la surface 100 du corps 10, et la zone non-revêtue 112 forme une zone passante permettant une transmission de lumière, et pouvant donc former un dioptre de sortie.
Le corps 10 peut comprendre en outre une charge diffusante, notamment pour former un dioptre de sortie diffusant la lumière transmise.
Le revêtement 11 est maintenant décrit en détail. le revêtement 11 est formé d’au moins une couche mince 110. Le revêtement 11 est configuré pour opacifier au moins une portion 1000 revêtue de la surface 100. De préférence, la portion 1000 revêtue par le revêtement n’est pas visible par un utilisateur, et plus particulièrement sa couleur peut être masquée. Comme illustré en figure 9, la couche mince 110 peut être directement en contact avec la surface 100.
La couche mince 110 est à base de fer et comprend au moins un parmi un oxyde de fer et un nitrure de fer. L’oxyde de fer et/ou le nitrure de fer, de couleur noire, permet de foncer la couche 110 et ainsi de l’opacifier efficacement par rapport à une couche à base de fer non oxydé ni nitruré, d’aspect métallique.
Le revêtement 11 est plus particulièrement configuré pour opacifier la pièce 1 majoritairement par absorption de lumière, plutôt que par réflexion comme c’est le cas dans les solutions existantes d’opacification de pièces par blanchiment ou par effet miroir. Pour cela, le revêtement 11 peut être configuré pour présenter une absorption d’un rayonnement incident sensiblement supérieure à 70 %. Le rayonnement incident appartient plus particulièrement au domaine du visible. Selon un exemple, le revêtement présente une absorption d’un rayonnement incident sensiblement supérieure à 80 %. Ainsi, le revêtement présente une teinte grise avec une opacification satisfaisante de la pièce 1. Selon un exemple, le revêtement présente une absorption d’un rayonnement incident sensiblement supérieure à 90 %. Ainsi, le revêtement présente une teinte noire avec une opacification satisfaisante de la pièce 1. Selon un exemple alternatif ou complémentaire, le revêtement 11 peut être configuré pour présenter une réflexion du rayonnement lumineux incident sensiblement inférieure à 30%, préférablement sensiblement inférieure à 20% et plus préférentiellement encore sensiblement inférieure à 10%.
La couleur du revêtement 11 peut être décrite dans l’espace chromatique L*a*b* CIE 1976, généralement utilisé pour la caractérisation des couleurs de surface. Dans cet espace, trois paramètres caractérisent les couleurs ː la clarté L* décrit la luminance de la surface ; les deux paramètres a* et b* expriment l'écart de la couleur par rapport à celle d'une surface grise de même clarté. De préférence : L* est compris entre 20 et 55, et de préférence entre 25 et 50, a* est compris entre -5 et +5, b* est compris entre -5 et +5. Le revêtement 11 présente ainsi une couleur grise à noire, assurant une opacification efficace de la portion 1000 revêtue. Par exemple, L* est sensiblement égal à 30, ce qui correspond à une couleur noire. Selon un autre exemple, L* est sensiblement égal à 45, ce qui correspond à une couleur grise, et plus particulièrement gris anthracite. Une méthode de mesure de la couleur du revêtement 11 dans l’espace chromatique L*a*b* CIE 1976 consiste à utiliser un spectrocolorimètre en contact sur le revêtement. Les valeurs de L*, a* et b* sont mesurées par le spectrocolorimètre. On peut par exemple utiliser un spectrocolorimètre CM-700 ou CM-2600 de Konica Minolta ©.
Le revêtement 11 présente une épaisseur E supérieure ou égale à 100 nm sur au moins 50 % de la portion 1000 revêtue. Ainsi, la couche présente, une épaisseur suffisante pour assurer une bonne opacification de la portion 1000 revêtue, et ce sur une majorité de cette portion 1000 . En outre, cette épaisseur permet d’assurer une bonne opacification pour un ensemble de pièces 1, malgré une éventuelle variation de l’épaisseur entre les pièces 1 lors du dépôt de la couche 110, décrit ultérieurement. Le revêtement 11 d’opacification est donc fiable et reproductible. L’épaisseur E du revêtement 11 peut plus particulièrement être supérieure ou égale à 200 nm sur au moins 30 % de la portion 1000 revêtue. La couche 110 assure ainsi mieux encore l’opacification de la portion 1000 revêtue. L’épaisseur E du revêtement peut être inférieure ou égale à 1 µm, et de préférence inférieure ou égale à 600 nm, pour minimiser le coût associé à l’élaboration du revêtement 11.
D’autres caractéristiques du revêtement 11 sont ultérieurement décrites dans la description du procédé de fabrication de la pièce 1.
Le procédé de fabrication de la pièce 1 est maintenant décrit en référence aux figures 3 à 9.
Comme illustré en figure 3, le procédé comprend une fourniture d’un corps 10 selon les caractéristiques précédemment décrites.
Le procédé comprend ensuite au moins un dépôt d’une couche mince 110, pour obtenir une couche 110 comprenant au moins un parmi un oxyde de fer et un nitrure de fer. Pour cela, la couche 110 peut être formée par oxydation et/ou nitruration de fer. Par exemple, le fer peut être issu d’une source métallique à base de fer évaporée lors du dépôt, et la couche 110 peut être formée par condensation du métal après oxydation et/ou nitruration. La source métallique peut être du fer pur ou un alliage de fer, et plus particulièrement tout type d’acier, y compris de l’acier inoxydable.
Pour permettre l’oxydation et/ou la nitruration, le dépôt peut être effectué dans une atmosphère comprenant au moins un gaz propre à régir au moins avec le fer, désigné de façon équivalente comme gaz réactif. Le gaz réactif peut être dilué dans un gaz ne réagissant pas lors du dépôt, désigné de façon équivalente comme gaz inerte, tel que l’argon par exemple Le gaz réactif peut être choisi parmi le dioxygène, pour une réaction d’oxydation, et le diazote, pour une réaction de nitruration.
Selon un exemple, le gaz réactif est du dioxygène, éventuellement en mélange avec du diazote et/ou dilué dans un gaz inerte. L’atmosphère peut comprendre du dioxygène à un taux compris entre 10 % et 100 %, et de préférence entre 20 % et 80 %. Selon le taux de dioxygène, la réaction d’oxydation entre le fer et le dioxygène peut être modulée.
-la modification de la composition du sébum : Les changements quantitatif et qualitatif du sébum observés dans l’acné seraient associés à l’apparition des défauts de prolifération et kératinisation des kératinocytes tapissant la paroi du canal pilosébacé. Le squalène, composant du sébum, est la principale source de lipides péroxydés dans la peau acnéique. Au-delà de provoquer une irritation cutanée, les squalènes péroxydés exercent un fort pouvoir comédogène
-la colonisation par C. acnes En colonisant le canal pilosébacé, C. acnes est capable de modifier la biologie des kératinocytes et d’influencer leur prolifération et leur différenciation. La bactérie stimule la synthèse de cytokines pro-inflammatoires dans le follicule pilosébacé, en particulier l’interleukine 1α (IL-1α), facteur majeur de l’apparition d’une hyperkératinisation. En effet, cette cytokine est capable d’activer les gènes codant pour des cytokératines, notamment CK-16 mais également induire la production d’autres kératines telles que CK-5. De plus, des études ont montré que C. acnes est capable d’exercer un effet direct sur la biologie des kératinocytes et la formation de microcomédons.
Avantageusement, un hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum selon l’invention est capable d’avoir un effet sur l’hyperkératinisation qui intervient dans l’acné. En particulier, lorsqu’il est appliqué sur la peau, le principe actif selon l’invention est capable de : - renormaliser l’épaisseur du stratum corneum et, - diminuer la synthèse des cytokératines CK-5 et CK-16.
III. C./ Influence sur l’inflammation
Le principe actif selon l’invention est également capable d’agir sur l’inflammation qui intervient dans l’acné.