INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L’induction conjointe de ces gènes codant pour des protéines possédant une activité antioxydante et/ou détoxifiante confère une protection contre les UVs et les métaux lourds issus par exemple de la pollution urbaine.
La matrice extracellulaire et l’élasticité de la peau pour un effet anti-âge :
La fonction principale des fibroblastes présents dans le derme est de produire, de dégrader, et donc de réguler les composants de la matrice extracellulaire (MEC) avec laquelle ils interagissent. La MEC est une structure complexe formée d’un réseau de fibres de collagène, de fibres d’élastine et de glycoprotéines de structure.
Parmi les protéines de la MEC régulées par l’actif BCP, on retrouve l’élastine (ELN) mais aussi les fibrillines-1 et -2 encodées respectivement par les gènes FBN1 et FBN2. En plus de l’induction des gènes ELN et FBN1, l’actif BCP induit également FBN2, constituant également les microfibrilles.
En parallèle de son action sur les fibres élastiques, l’actif BCP agit également sur les fibres de collagène puisqu’il augmente l’expression de la sous-unité alpha 1 du collagène 3 (COL3A1).
L’action conjointe de BCP sur l’expression des constituants des fibres d’élastine et de collagène ainsi que sur MMP1 et la paxilline va dans le sens d’un effet sur l’élasticité de la peau, particulièrement intéressante dans un contexte anti-âge.
Par ailleurs, il est démontré que le vieillissement cutané est associé à la diminution de la prolifération des fibroblastes. On observe une diminution d’expression du facteur de prolifération Ki-67 lié à l’âge ( Ma, C. et al., 2011. Expression of metallothionein-I and II in skin ageing and its association with skin proliferation. Br. J. Dermatol., 164(3), pp. 479-482 ). L’actif BCP augmente l’expression de MKI67 témoignant d’une augmentation de la prolifération des cellules, ce qui renforce son effet anti-âge.
La lamine nucléaire :
Il a été montré que l’expression de la lamine B1 (LMNB1) au sein de la peau diminue avec l’âge. La lamine B1 est ainsi considérée comme un marqueur de la sénescence des cellules de la peau. En effet, il a été montré que la sénescence liée à l’âge ou associée à des pathologies de la peau s’accompagne d’une perte d’expression, au niveau protéique et ARNm, de la lamine B1 ( Dreesen, O. et al., 2013. The contrasting roles of lamin B1 in cellular aging and human disease. Nucleus, 4(4), pp. 283-290 ).
Dès lors, une augmentation d’expression de LMNB1 au sein des fibroblastes de derme témoigne d’un effet de l’actif BCP réduisant la sénescence pouvant être associée à l’âge ou à des pathologies de la peau, et d’autre part s’avère bénéfique pour le maintien de la structure et de l’intégrité du noyau.
L’autophagie :
L’extrait BCP, induit une diminution de l’expression de SESN2. SESN2 en particulier est impliqué dans la réponse aux UV des cellules de la peau. Ceci va dans le sens d’une activité plus importante du complexe mTORC1 qui va de pair avec une diminution de l’activité autophagique des cellules et ainsi un effet régulateur de l’activité mitophagique.
La cicatrisation cutanée :
Au sein des sites d’adhésion focale, les intégrines sont liées, par l’intermédiaire de protéines d’adhésion, aux filaments d’actine intracellulaires. Parmi ces protéines cytoplasmiques d’adhésion, on retrouve notamment la taline-1 encodée par le gène TLN1 surexprimé par l’actif BCP. Elle constitue le lien initial entre les intégrines et le cytosquelette d’actine. La liaison de la taline aux intégrines régule leurs affinités pour la MEC alors que la liaison de la taline à l’actine constituerait le premier lien à la machinerie contractile des cellules. Ces 2 évènements sont particulièrement importants pour la migration cellulaire. En effet, celle-ci implique l’attachement et le détachement cycliques des intégrines à la MEC mais aussi la génération d’une force requise pour la translocation du contenu cellulaire (Atherton, P. et al., 2015. Vinculin controls talin engagement with the actomyosin machinery. Nat. Commun, Volume 6, p. 10).
L’augmentation d’expression du gène de la taline-1 combinée à celle de la paxilline témoigne d’une action sur la migration des cellules bénéfique notamment dans le processus de cicatrisation cutanée.
La sous-expression de PTGS2 dans un contexte anti-inflammatoire :
Selon une caractéristique de l’invention, les ouvertures traversantes s’étendent suivant une direction longitudinale.
Selon une caractéristique de l’invention, les ouvertures traversantes s’étendent suivant la direction longitudinale de manière périodique.
Par « de manière périodique », on entend que les ouvertures traversantes sont réparties suivant la direction longitudinale selon une période spatiale.
Ainsi, un avantage procuré est de pouvoir définir des motifs périodiques comme signature stylistique.
Selon une caractéristique de l’invention, les ouvertures traversantes présentent une section longitudinale rectangulaire.
Par « section longitudinale », on entend une section effectuée suivant la direction longitudinale des ouvertures traversantes.
Selon une caractéristique de l’invention, les ouvertures traversantes sont agencées pour former des lucarnes dans le masque.
Selon une caractéristique de l’invention, le projecteur comporte une couche métallique agencée pour recouvrir le masque.
L’invention a également pour objet un véhicule, comportant un projecteur conforme à l’invention.
est une vue schématique en perspective d’un projecteur de phare de véhicule selon l’invention.
est une vue schématique partielle en coupe d’un projecteur de phare de véhicule selon l’invention
Il est à noter que les dessins décrits ci-avant sont schématiques, et ne sont pas nécessairement à l’échelle par souci de lisibilité et pour en simplifier leur compréhension.
1.1. Des explants de peau avec ou sans vergetures ont été fixées et des analyses histologiques ont été réalisées : coloration Verhoeff (marquage des fibres élastiques (élastine)); immunomarquages de la Fibrilline 1.
Coloration Verhoeff : Cette coloration met en évidence les fibres élastiques dans les tissus. Après déparaffinage, les coupes sont plongées dans les solutions suivantes : Verhoeff modifiée, chlorure ferrique et Van Gieson. Après déshydratation, les coupes sont montées entre lame et lamelle dans l’Entellan®. Les cellules sont de couleur brune. Les fibres élastiques apparaissent en bleu-marine/noir et les autres composants de la matrice extracellulaire en rouge.
Un marquage en immunofluorescence de la fibrilline 1 a été réalisé : Après fixation dans l’acétone, les coupes sont réhydratées et incubées avec l’anticorps primaire anti-Fibrilline 1. Après rinçage, les coupes sont incubées avec l’anticorps secondaire couplé à un marqueur fluorescent [Alexa Fluor® 488]. Les coupes sont montées entre lame et lamelle en milieu aqueux contenant du DAPI afin de contre-colorer l’ADN et mettre en évidence les noyaux.
La figure 1 montre que le nombre et la taille de fibres élastiques et des fibres d’oxytalanes est diminuée dans la peau vergeturée, comparativement à la peau normale (peau non vergeturée).
1.2. Les fibroblastes sont isolés à partir d’échantillons de peau prélevée au niveau des vergetures de coloration rouge (vergetures rouges) chez 3 sujets et comparés aux fibroblastes isolés à partir de biopsies de peau prélevées au niveau de peau normale (sans vergetures) chez ces mêmes 3 sujets.
Les fibroblastes sont mis en culture, dans des conditions de culture classiques.
La production des marqueurs dermiques (marqueurs de l’organisation des fibres matricielles et particulièrement des fibres élastiques) que sont l’élastine, la fibronectine, le collagène I, et le collagène III (protéines matricielles) est analysée par mesure des niveaux protéiques (dosage ELISA). La Figure 2 montre que les niveaux d’expression de ces protéines est plus faible dans les fibroblastes de vergetures que dans les fibroblastes de la peau normale.
Une analyse transcriptomique est également réalisée, afin d’identifier les processus physiologies modulés dans les fibroblastes de vergetures, comparativement aux fibroblastes de peau normale. Les résultats montrés sur la Figure 3 révèlent un profil d’expression très différents entre les fibroblastes de vergeture et des fibroblastes sains.
Une analyse par donneur est réalisée, les marqueurs pour lesquels les Fold Change (ou variations) étaient significativement régulés (≤x0,5 et ≥x2) pour au moins deux donneurs ont été retenus et sont récapitulés dans le tableau 4 ci-dessous.
Le tableau 4 ci-dessous montre les variations de niveaux d’expression de différents gènes dans les fibroblastes de vergeture comparativement aux fibroblastes sains, pour les 3 donneurs.
Les données montrent notamment que la production de TNFα est induite dans les fibroblastes de vergetures.
Donneur 1 Donneur 2 Donneur 3 Angiopoietin like 4 -- -- / Secretogranin II -- -- - Integrine 8 -- -- - Endotheline-1 -- -- ++ Protocadherine 10 -- -- / Synémine -- -- / Zonula Occludens -- - -- Dermokine -- - -- Microfibrillar-associated protein 4 -- - -- Claudine 11 -- - -- Syndécane 1 ++ ++ - Serpine 1 Fibrilline 2 ++ ++ - Plasminogen activator Tissue ++ ++ + Laminine 2 ++ ++ - Prostaglandin E synthase ++ ++ - TIMP3 ++ - ++ Spondine 1 ++ / ++ Kératine7 -- ++ ++ TNF ++ ++ ++
Exemple 2 : Efficacité d’ une Crème anti- Vergetures selon l’invention sur des explants de peau sous contrainte mécanique
L’étude consiste à placer des explants de peau sous contrainte mécanique afin de modéliser l’étirement de la peau, notamment au cours de la grossesse, dans le but d’étudier la formation des vergetures et d’évaluer l’efficacité d’un produit anti-vergetures ayant une composition selon la présente invention.
2. 1 . Matériel et Méthodes
- au moins une seconde huile choisie parmi les esters d’acide gras.
La composition selon l’invention comprend un milieu aqueux physiologiquement acceptable.
Par « milieu aqueux physiologiquement acceptable », on entend au sens de l’invention un milieu aqueux compatible avec les matières kératiniques, notamment avec la peau et/ou les phanères.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l’invention comprend, en poids par rapport au poids total de composition :
- de 50 % à 90 % d’eau,
- de 0,1 % à 5% de gélifiant(s) hydrophile(s),
- de 0,5 % à 20 % d’huile(s) d’origine végétale,
- de 0,5 % à 20 % d’alcool(s) primaire(s),
- de 0,5 à 20 % de polyol(s), et
- de 0,5 % à 20 % de monoester(s) d’acide gras.
De préférence, la composition selon l’invention comprend, en poids par rapport au poids total de composition :
- de 55 % à 85% d’eau,
- de 0,5 % à 3 % en poids de gélifiant(s) hydrophile(s),
- de 0,7 % à 15 % en poids d’huile(s) d’origine végétale,
Des explants de peau provenant d’une plastie abdominale d’une femme caucasienne de 43 ans ont été placés en survie pendant 10 jours entre deux mors, avec ou sans contrainte mécanique à force constante (une force constante uniaxiale de 1N, jusqu’à 50% d’allongement), à 37°C en atmosphère humide enrichie de 5% de CO2. L’application d’une telle tension mime donc l’étirement de la peau causant les vergetures, notamment au cours de la grossesse.
Les explants ont été traités, ou non, en surface par le produit « Crème anti-Vergetures » (ou « Crème Vergeture ») à raison de 2 mg/cm² à J0, J3, J5 et J7. Le milieu de culture a été renouvelé à J3, J5 et J7.
La composition de la crème anti-vergeture testée est indiquée dans le tableau 5.
Tableau 5 : Composition de la Crème anti- Vergetures testée (les quantités sont indiquées en % en poids par rapport au poids total de crème).
Ingrédient % en poids / poids total de crème EAU PURIFIEE UP4 20-90% DICAPRYLYLCARBONATE 4-8% CAPRYLATE/CAPRATE DE COPRAH 4-8% EMULIUM KAPPA2 2-8% GLYCEROL 0,5-10% BEURRE DE KARITE 0,5-10% HYDROGENATED PALM GLYCERIDE 0,5-5% HYDROLITE-6 0,5-5% HUILE AVOCAT 0,5-10% EXTRAIT D’HAMAMELIS 0,0001-50% POLYACRYLATE CROSSPOLYMER 0,1-2% ALPHA-TOCOPHEROL 0.1-2% OCTANEDIOL XI 0.01-1,5% PARFUM 0.01-1,5% EUMULGINS G 0,001-1% POLYPHENOLS DE MARACUJA 0,0025-10% PEPTIDES D’AVOCAT 0.001-5% ACIDE CITRIQUEI 0,001-1% LESSIVE SOUDE 0,001-1% TOTAL 100 %
A J3, J5, J7 et J10, du milieu de culture a été prélevé afin de procéder aux dosages ELISA des marqueurs suivants : Interleukine 8 (IL8), Interleukine 6 (IL6), Matrix-Metalo-Proteinase-1 ou métalloprotéinase 1 (MMP1).
Des analyses histologiques ont été réalisées à J0 (pour la condition contrôle) et à J10 (pour l’ensemble des conditions) : coloration au trichrome de Masson ; immunomarquages de l’Interleukine-1 alpha (IL1α), Elastine, Fibrilline 1, Collagène III.
Coloration au trichrome de Masson : L’orientation des faisceaux de collagène a été observée en lumière polarisée sur les coupes histologiques après coloration au trichrome de Masson.
Immunomarquage de I’interleukine-1 alpha : L’interleukine-1 alpha a été marquée sur coupes en paraffine formol avec un anticorps monoclonal anti- IL-1 alpha, pendant 1h à température ambiante, avec un système amplificateur biotine/ streptavidine et révélé en VIP, un substrat violet de peroxydase.
Immunomarquage de l’Elastine : L’élastine a été marquée sur coupes congelées avec un anticorps polyclonal anti-élastine pendant 1h à température ambiante et révélé par le fluorophore AF488. Les noyaux ont été contre-colorés à l’iodure de propidium. Immunomarquage de la Fibrilline-1 : la fibrilline-1 a été marquée sur coupes congelées avec un anticorps monoclonal anti-fibrilline 1 pendant 1 h à température ambiante, avec un système amplificateur biotine/streptavidine et révélé en FITC. Les noyaux ont été contre-colorés à l’iodure de propidium.
Immunomarquage du Collagène III : le collagène III a été marqué sur coupes congelées avec un anticorps polyclonal anti-collagène III pendant 2 heures à température ambiante, avec un système amplificateur biotine/streptavidine et révélé en VIP, un substrat violet de la peroxydase.
Les conditions à l’essai sont les suivantes :
- Contrôle : Explants à J0
- Témoin non étiré : Explants non traités, non étirés (non soumis à la contrainte mécanique), à J10
- Témoin étiré : Explants non traités, étirés (soumis à la contrainte mécanique), à J10
- Non étiré + Produit : Explants traités par la crème anti-vergeture, non étirés, à J10
L’objectif de l’invention est de proposer une optique de collimation de forme simple, qui soit compacte et efficace.
A cet effet, un premier objet de l’invention concerne une optique de collimation comprenant un corps en matériau transparent comportant :
- au moins une cavité destinée à recevoir une diode électroluminescente, cette cavité étant définie par une surface centrale et une surface latérale, ces surfaces étant destinées à recevoir des rayons lumineux émis par la diode électroluminescente et à les réfracter à l’intérieur du corps,
et, associées à chaque cavité :
- une surface de réflexion interne totale entourant la cavité,
- une surface de sortie située en regard de la surface centrale de la cavité,
la surface de réflexion interne totale étant conformée pour réfléchir totalement les rayons lumineux réfractés à l’intérieur du corps par la cavité et à les diriger vers la surface de sortie parallèlement à une direction de collimation,
caractérisée en ce que la surface de sortie présente au moins une zone de diffraction texturée dans son épaisseur dont la géométrie est conformée de sorte que les rayons lumineux réfractés à l’intérieur du corps par la cavité sont diffractés à l’extérieur du corps par la zone de diffraction texturée suivant un faisceau lumineux présentant une photométrie et une forme déterminées, réalisant notamment une fonction d’éclairage, en particulier une fonction d’éclairage automobile.
L’optique de collimation est ainsi formée d’une seule pièce, par exemple par moulage, permettant une réalisation simple et compacte.
Par « zone de diffraction texturée », on entend une zone de la surface de sortie présentant une géométrie de forme non plane de hauteur variable, cette hauteur étant mesurée suivant une direction donnée, par exemple une direction parallèle à la direction de collimation. Une telle zone de diffraction texturée s’étend typiquement sur une épaisseur (profondeur) qui dépend de la photométrie et de la forme du faisceau lumineux sortant de la surface de sortie. Cette épaisseur peut être définie comme la différence de hauteur entre un point de la zone présentant une hauteur la plus faible et un point de la zone présentant une hauteur la plus élevée.
La zone de diffraction texturée permet ainsi de réfracter et/ou diffracter les rayons lumineux de la diode électroluminescente suivant un faisceau lumineux présentant une photométrie et une forme déterminées, notamment en fonction d’une application particulière. Ceci permet de réaliser une optique de collimation transmettant l’intensité lumineuse émise par la source de lumière de manière efficace et optimale.
Avantageusement, cette zone de diffraction texturée peut être une surface optique de forme libre asymétrique, aussi appelée « freeform surface » (surface de forme libre) en anglais. En particulier, la géométrie de la surface de la zone texturée ne forme pas un réseau de motifs bi ou tridimensionnels.
Avantageusement, la zone de diffraction texturée peut présenter une première texture dont la géométrie est conformée de sorte que les rayons lumineux réfractés à l’intérieur du corps par la cavité sont diffractés à l’extérieur du corps par la zone de diffraction texturée suivant un faisceau lumineux présentant une photométrie et une forme réalisant une fonction d’éclairage, notamment d’éclairage automobile, par exemple choisie parmi une fonction de feu de route et une fonction de feu de croisement. Typiquement, une telle première texture s’étend sur une épaisseur de 0,5µm à 15mm, par exemple de 1µm à 10mm.
Au surplus, la zone de diffraction texturée peut présenter une deuxième texture dont la géométrie est conformée de sorte que les rayons lumineux réfractés à l’intérieur du corps par la cavité sont diffractés à l’extérieur du corps par la zone de diffraction texturée suivant un faisceau lumineux présentant en outre une couleur blanche uniforme, en particulier sans bandes de couleur.
Alternativement ou en combinaison, la géométrie de cette deuxième structure peut être conformée de sorte que des rayons lumineux réfléchis à l’intérieur du corps par un bord de la surface de sortie sont réfractés à l’extérieur du corps à l’intérieur du faisceau lumineux réfracté par la première structure. Dans ce cas, une ou plusieurs diodes électroluminescentes peuvent être disposées à proximité d’un bord d’une surface de sortie de l’optique de collimation, par exemple disposées de sorte que l’axe du faisceau qu’elles émettent soit parallèle à un plan défini par la surface de sortie. De manière générale, la surface de sortie associée à chaque cavité est globalement plane : sa surface n’est pas plane au niveau des zones de diffraction texturée, mais en moyenne, les points de cette surface définissent un plan médian.
Cette deuxième texture est en fait superposée à la première texture et s’étend sur une épaisseur plus faible que l’épaisseur de la première texture. Typiquement, cette deuxième texture s’étend sur une épaisseur de 150 à 1500 nm, par exemple de 200 à 1400nm. On peut ainsi parler de micro-texture.
Les prostaglandin-endoperoxide synthases dont fait partie la cyclooxygénase-2 COX2 ou PTGS2 catalysent la biosynthèse des prostaglandines (PG) à partir de l’acide arachidonique afin d’induire le processus inflammatoire via la sécrétion de cytokines et la vasodilatation cutanée.
La diminution d’expression de COX2 témoigne de la capacité de l’actif BCP à réduire un éventuel phénomène inflammatoire pouvant être induit par différents stimuli comme des agents pathogènes, les UVs, des radiations ionisantes, etc.
I. Activité Anti-inflammatoire
L’activité anti-inflammatoire de l’extrait de Polysaccharide de Bombax costatum selon l’exemple 1 a été mise en évidence vis-à-vis d’une inflammation induite par un stress au PMA.
Des Kératinocytes Humains Normaux (KHN), ont été traités pendant 24 heures à 37°C par l’extrait de Polysaccharides de Bombax costatum selon l’exemple 1 (appelé extrait BCP) à 0,01% et/ou à 0,05% de matière sèche (MS) ou par la Dexaméthasone ou l’Indométacine à 10-7M (molécules de référence anti-inflammatoires). Les cellules ont ensuite été traitées par ajout de PMA à 10 µg/ml (Phorbol Myristate Acetate, agent induisant l’inflammation) pendant 16 heures à 37°C.
A l’issue du traitement, les quantités d’IL1α (interleukine 1α), de PGE2 (Prostaglandine-E2), d’IL1β (Interleukine 1β), de TNFα (Tumor Necrosis Factor α), d’IL6 (Interleukine 6) et d’IL8 (Interleukine 8) sécrétées ont été mesurées par la technique ELISA dans les surnageants de culture.
La significativité des résultats a été évaluée par une analyse de variance à un facteur suivie d’un test de Tuckey.
Comme le montrent les résultats des tableaux 3 à 8, l’extrait BCP a significativement inhibé la production des médiateurs inflammatoires IL1α, IL1β, IL6, IL8, TNFα et PGE2 dans des kératinocytes sous conditions inflammatoires.
Ces résultats montrent l’activité anti-inflammatoire de l’extrait BCP.
Tableau 3 : Dosage d’IL1-alpha produit par des KHN sous l’effet d’un stress PMA
$$p<0,01 vs Contrôle ; *p<0,05 **p<0,01 vs PMA ; ns Non Significatif
IL1α (pg/ml) Moyenne Ecart-type Evolution Significativité Contrôle 33,869 2,340 PMA 10µg/ml 372,604 91,220 +1000% $$ Dexaméthasone 0,1µM 230,583 29,293 -38% ns BCP 0,05% ms 116,557 25,046 -69% *
Tableau 4 : Dosage d’IL1-beta produit par des KHN sous l’effet d’un stress PMA
Par « puces d’acides nucléiques », on entend ici plusieurs sondes d’acides nucléiques différentes qui sont attachées à un substrat, lequel peut être une micropuce, une lame de verre, ou une bille de la taille d’une microsphère. La micropuce peut être constituée de polymères, de plastiques, de résines, de polysaccharides, de silice ou d’un matériau à base de silice, de carbone, de métaux, de verre inorganique, ou de nitrocellulose.
Les sondes peuvent être des acides nucléiques tels que les ADNc (« puce à ADNc »), les ARNm (« puce à ARNm ») ou des oligonucléotides (« puce à oligonucléotides »), lesdits oligonucléotides pouvant typiquement avoir une longueur comprise entre environ 25 et 60 nucléotides.
Pour déterminer le profil d’expression d’un gène particulier, un acide nucléique correspondant à tout ou partie dudit gène est marqué, puis mis en contact avec la puce dans des conditions d’hybridation, conduisant à la formation de complexes entre ledit acide nucléique cible marqué et les sondes attachées à la surface de la puce qui sont complémentaires de cet acide nucléique. La présence de complexes hybridés marqués est ensuite détectée.
Ces technologies permettent de suivre le niveau d’expression d’un gène en particulier ou de plusieurs gènes voire même de tous les gènes du génome (full genome ou full transcriptome) dans un échantillon biologique (cellules, tissus...). Ces technologies sont utilisées en routine par l’homme du métier et il n’est donc pas besoin de les détailler ici. Des exemples de mises en œuvre de l’invention basées sur l’analyse d’expression génique (puces à ADNc) et sur la PCR quantitative sont décrits dans la section expérimentale.