INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Comme on le voit, même inoculé à des taux relativement faibles (soit entre 10 2 CFU/g et 10 4 CFU/g), le consortium colonise rapidement le milieu pour induire la fermentation. Le procédé se déroule en présence de la plante qui devient une source continue de nutriments sous l’action des outils biochimiques des différents micro-organismes. Cela permet de la maintenir dans le milieu de culture pendant plusieurs jours, voire quelques semaines, sans intervention humaine. Bien qu'une fermentation se déroule en principe en anaérobie, le processus est conduit ici en milieu ouvert pour des échanges de gaz avec l'atmosphère, et sans contrainte particulière pour assurer la stérilité. Il est fait l'hypothèse que les conditions induites et tolérées par le consortium dans le réacteur empêchent le développement de la flore pathogène présente sur le substrat et dans l’environnement, même en conditions non-aseptiques.
La composition de micro-organismes inoculée est capable de diriger la fermentation extractive de toute sorte de végétaux. Le substrat peut être choisi au sein des végétaux supérieurs de tout type, qu'il s'agisse de plantes à fleur, de plantes aromatiques, de céréales, de plantes fourragères, de protéagineux, d'oléagineux, ou autres, représentant une grande diversité de composés susceptibles d'être utilisés et valorisés. Il peut aussi appartenir aux végétaux inférieurs, parmi lesquels on trouve les fougères, les mousses, les champignons, les lichens et les algues. Il peut encore être choisi parmi les organismes se trouvant dans le phytoplancton, c’est-à-dire l’ensemble des organismes végétaux vivant en suspension dans l’eau, autotrophes vis-à-vis du carbone, ce qui inclut notamment les microalgues et des bactéries telles que les cyanobactéries (anciennement "algues bleu-vert"). C'est pourquoi, selon une caractéristique du procédé selon l'invention, le substrat végétal est choisi parmi les végétaux supérieurs, les végétaux inférieurs ou les organismes du phytoplancton.
On le voit, le procédé de fermentation objet de l'invention est d'une grande polyvalence et revêt un caractère général, voire universel. De manière remarquable, le consortium est à même de s’adapter à différents types de substrats sensibles à la putréfaction(céréales, plantes fourragères, algues, plantes riches en protéines, …), riches en minéraux ou en composés aromatiques (romarin, lavande, camomille, gingembre, curcuma, café, thé, cacao …), ainsi qu'à des organismes unicellulaires comme par exemple la spiruline. Quel que soit le substrat, on aura recours autant que possible à des sources d'approvisionnement respectant les normes de l'agriculture biologique qui refuse l'emploi de produits chimiques de synthèse.
Selon des modes de réalisation particuliers de l'invention, le substrat végétal peut être l'ortie ( Urtica dioica ), le pastel ( Isatis tinctoria ), la rose de Damas ( Rosa damascena ), le Jujubier ( Ziziphus zizyphus ), le Ginkgo biloba , le romarin ( Rosmarinus officinalis ), la lavande ( Lavandula ), la camomille (camomille romaine Chamaemelum nobile ou camomille sauvage, allemande, matricaire …), la bruyère (notamment l'espèce C alluna vulgaris ), le gingembre ( Zingiber officinale ), le curcuma ( Curcuma longa ), le café ( Rubiaceae coffea ), le thé ( Camellia sinensis ), le cacao ( Theobroma cacao ), ou encore la spiruline ( Spirulina ).
Le substrat végétal peut inclure une plante entière ou une partie de plante. Il peut en outre être frais ou séché, natif ou transformé. La partie de la plante choisie peut être celle qui est connue dans l’état de l'art comme contenant des composés d'intérêt ou possédant des propriétés particulières, comme la racine de curcuma, le fruit du Jujubier, la fleur de lavande, etc. On peut aussi choisir d'autres parties du végétal, qui pourront révéler leur teneur en composés actifs négligés, voire ignorés jusqu'à aujourd'hui, mais qu'il est possible d'extraire et de valoriser grâce à l'action synergique du consortium microbien selon l'invention. Des coproduits végétaux peuvent aussi être utilisés : les feuilles de pastel restant après extraction des pigments par décoction sont un substrat prometteur comme source de composés intéressants pour d'autres applications. En outre, le substrat végétal peut se présenter sous une forme solide ou sous une forme ayant une composante liquide prépondérante. Leur mise en œuvre sera adaptée en conséquence.
Selon un premier mode de réalisation de l'invention, le substrat végétal peut être obtenu sous une forme solide, c'est-à-dire sous la forme de fragments, de broyat ou de poudre, à partir d'une plante entière ou d'une partie de plante, ou un coproduit solide issu d'un traitement dudit végétal pour d'autres buts et dans d'autres procédés.
Conformément à l'invention, pour la production d'un extrait végétal adaptée à un substrat sous forme solide, à l'étape a), ledit substrat est mélangé à de l'eau puis porté à une température comprise entre 25°C et 90°C, et si nécessaire un ajout de sucre est effectué, avant ou après mise à température, pour amener le milieu fermentaire à un degré Brix compris entre 2 et 10. L'apport de sucre peut aller jusqu'à 100 g/l de milieu fermentaire, ou être inutile quand le substrat est en lui-même suffisamment sucré.
Selon un deuxième mode de réalisation de l'invention, le substrat végétal peut être sous une forme liquide ou essentiellement liquide, obtenu notamment sous la forme d'un jus, d'une infusion, d'une décoction ou d'une macération, à partir d'une plante ou d'une partie de plante fraiche ou sèche, ou en tant que coproduit liquide issu d'un traitement dudit végétal. Sont concernés ici des jus de fruits frais, le nectar de fleurs, ainsi que toutes les plantes en phase aqueuse avec ou sans chauffage. Des fragments peuvent rester dispersés dans la phase liquide, comme de la pulpe de fruits, les feuilles d'une infusion, ou des cellules de spiruline. La phase liquide issue de l’extraction du pastel après précipitation et décantation du pigment de pastel est un coproduit qui doit être mentionné parmi d'autres également intéressants.
Selon un mode de production d'un extrait végétal adapté à un substrat sous forme essentiellement liquide, conformément à l'invention, à l'étape a), le substrat végétal est chauffé à une température comprise entre 25°C et 85°C, et si nécessaire un ajout de sucre est effectué avant ou après mise à température, pour amener le milieu fermentaire à un degré Brix compris entre 2 et 10. L'apport de sucre peut aller jusqu'à 100 g/l de milieu fermentaire si besoin. Par exemple, le substrat liquide additionné de 50 g/l de saccharose est chauffé à une température de l'ordre de 70°C, pendant 5 mn à 10 mn. Une fraction d'eau déchlorée peut être ajoutée pour diluer les jus dans certains cas que l'homme du métier saura identifier.
Dans les cas où à l'étape a), l'ajout de sucre est requis pour amener le milieu fermentaire au taux souhaité, il est possible de procéder de différentes manières, et notamment, le milieu fermentaire peut être sucré par addition d'une source de sucres assimilables choisie parmi le saccharose, le glucose, le fructose, la mélasse, le miel, ou un mélange de ceux-ci. À noter que le miel peut apporter sa propre contribution aux propriétés de l'extrait obtenu. Par exemple, certains miels particulièrement riches en minéraux et en polyphénols, comme le miel de bruyère ou de châtaigner, peuvent exprimer leur pouvoir antiseptique ou d'autres effets bénéfiques renforçant ceux conférés par les actifs provenant du substrat végétal.
L'extrait végétal obtenu est stable. Il est remarquable qu'aucun phénomène de putréfaction ne soit observé durant le processus d’extraction-fermentation, alors que les substrats végétaux sont généralement chargés d'une flore microbienne provoquant leur dégradation, comme l'est singulièrement l'ortie. Il peut être utilisé immédiatement ou conservé par une technique connue. Quoi qu'il en soit, il peut subir différentes opérations avant d'être utilisé ou stocké, de préférence entre 4°C et 18°C.
À l'issue du processus d’extraction-fermentation, on peut porter son intérêt sur le surnageant dans lequel des composés extraits sont dissous, auquel cas le procédé de production d'un extrait végétal selon l'invention peut comprendre : - une étape de filtration de l'extrait fermenté pour éliminer les résidus végétaux, - une étape de filtration stérilisante pour éliminer la flore microbienne, communément effectuée sur filtre de 0,2 µm.
Ces filtrations seront omises si la biomasse est conservée comme c'est le cas quand on cherche à récupérer des actifs restés dans la biomasse, mais rendus bio-disponibles par la fermentation et l'action de l'équipement enzymatique des micro-organismes du consortium. Il est précisé que dans la présente description, l'expression "extrait végétal" désigne le produit issu du processus d’extraction par la fermentation, avec ou sans filtration, et aussi bien avec que sans la biomasse végétale et microbienne du milieu fermentaire.
Que l'extrait végétal soit un soluté ou une masse, on fera en sorte de stopper la fermentation et d'autres processus indésirables, afin de stabiliser le produit obtenu. On pourra recourir à tout moyen connu, par exemple la pasteurisation ou la stérilisation par chauffage, la décontamination microbiologique par une technique employée dans le domaine alimentaire (rayons gamma, pression hydrostatique, …). On pourra lyophiliser les extraits aqueux, sécher les extraits solides, par exemple par un passage en étuve entre 30°C et 45°C, et les broyer plus ou moins finement selon l'usage envisagé.
Le procédé selon l'invention peut ainsi comprendre après l'étape d), une ou plusieurs des opérations suivantes : une filtration de l'extrait fermenté pour éliminer les résidus végétaux, une filtration stérilisante pour éliminer la flore microbienne, une décontamination microbiologique, une lyophilisation, un séchage en étuve, un broyage. La personne du métier saura choisir les techniques appropriées en fonction de l'état initial de l'extrait et de la forme souhaitée en vue de sa conservation et de son utilisation ultérieure.
Selon des modes de réalisation non limitatifs, l’élément d’un dispositif lumineux de véhicule peut comporter en outre une ou plusieurs caractéristiques supplémentaires prises seules ou selon toutes les combinaisons techniquement possibles, parmi les suivantes.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit au moins un coude comprend un angle d’environ 90°.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit au moins un coude est arrondi ou à angle vif.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit point d’injection est configuré pour réaliser une injection sensiblement perpendiculaire au plan dudit élément.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit volume primaire et ledit volume secondaire sont séparés ou bord à bord.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ladite surcroissance a une section transversale en forme de trapèze ou demi-sphérique ou rectangulaire.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit canal d’injection de matière est surmoulé.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit élément est composé d’une ou plusieurs couches.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit élément est composé de trois couches
Selon un mode de réalisation non limitatif, une des trois couches est opaque et une autre des trois couches et transparente.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit élément est un écran intermédiaire.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit élément est réalisé en PMMA ou en PC.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit élément comprend deux coudes.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit canal d’injection de matière comprend plus de deux parties.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit canal d’injection de matière comprend plus qu’un coude.
Selon un mode de réalisation non limitatif, ledit canal d’injection de matière comprend deux coudes.
- chaque source de lumière comporte au moins deux émetteurs à semi-conducteur ;
- deux des émetteurs à semi-conducteur émettent des couleurs différentes ;
- chaque source de lumière comporte au moins trois émetteurs à semi-conducteur ;
- trois des émetteurs à semi-conducteur émettent des couleurs différentes ;
- les couleurs sont le rouge, le vert et le bleu ;
- les sources lumineuse sont disposées sur un support commun ;
- le support est plan ;
- le support est de couleur claire, en particulier de couleur blanche ;
- le support est parallèle à l’écran à cristaux liquides ;
- le module lumineux comprend en plus un élément d’habillage qui fait liaison mécanique entre le support et l’écran à cristaux liquides, et qui entoure les sources lumineuses et l’élément optique ;
- l’élément d’habillage présente une face intérieure de couleur claire, en particulier de couleur blanche.
Dans l’ensemble de la demande, une couleur claire caractérise un matériau dont l’albédo, c’est-à-dire le pouvoir réfléchissant global, est supérieur à 50%, de préférence supérieur à 70%.
L’invention vise également un dispositif lumineux pour véhicule automobile comprenant : un boîtier ; un module lumineux selon l’invention ; le module lumineux étant disposé à l’intérieur du boîtier.
L’invention vise également un véhicule automobile comportant au moins un dispositif lumineux selon l’invention.
Les objets, caractéristiques et avantages de la présente invention seront exposés en détail dans la description suivante de plusieurs modes de réalisation particuliers, donnés à titre non-limitatif, en relation avec les figures jointes parmi lesquelles :
représente un module lumineux selon l’invention, vu en perspective.
Extrait 9 La spiruline est une cyanobactérie utilisée pour la santé humaine du fait de sa richesse en micronutriments (minéraux, vitamines, acides aminés, pigments, acides gras essentiels). Elle est aussi connue pour sa teneur en phycocyanine, pigment bleu aux nombreuses propriétés biologiques (antioxydantes, anti-inflammatoires, hépatoprotectrices, …). L’extraction de celle-ci nécessite actuellement des procédés complexes faisant appel à des étapes multiples, des solvants ou des adjuvants de synthèse ou à des procédés énergivores (ultra-sons, micro-ondes, vortex, congélation / décongélation). Une extraction-fermentation de spiruline a été réalisée pour libérer la phycocyanine et accroître sa durée de conservation sous forme humide.
La spiruline sous forme de poudre sèche à 20 g/l est mise dans de l’eau déchlorée chauffée à 80°C. Le saccharose est ajouté à hauteur de 50 g/kg. La composition C1 préparée selon l’exemple 1 est ajoutée à la suspension aqueuse de spiruline à hauteur de 2%. L’essai est incubé pendant 6 jours à 28°C.
Extrait E10 La callune ou bruyère commune est connue pour ses propriétés calmante, antiseptique et antioxydante liées à la présence de tanins et de polyphénols tels que la quercétine. Les préparations commerciales sont des extraits alcooliques susceptibles d’engendrer des effets secondaires sur la santé et lors de la préparation, sur l’environnement. L’extraction par fermentation en milieu totalement aqueux offre une solution à ce problème. Il est en outre proposé de sucrer le milieu fermentaire par du miel, bien que l’acidité de la bruyère et du miel, conjuguée à leurs propriétés antiseptiques créent des conditions de fermentation défavorables à la réussite de cette extraction.
La fermentation de fleurs de bruyère (calluna vulgaris ) a été réalisée en présence de miel de châtaigner. Les fleurs en boutons sont introduites à 10 g/l dans de l’eau et infusées pendant 30 mn à 80°C-90°C. L’infusion est filtrée et lorsque sa température est inférieure à 45°C, le miel de châtaigner est ajouté à hauteur de 70 g/l. Quand la température est inférieure à 30°C, le milieu est ensemencé avec 20% de composition C2. Au bout de 12 jours de fermentation à 26°C, les sucres sont consommés et le taux d’acide formé voisin de 2,5%, ce qui indique avec la présence d’un biofilm, que le consortium s’est développé. Le surnageant est filtré sur 0,2 µm pour assurer sa stabilisation microbiologique. On constate que le consortium selon l'invention a parfaitement assuré la fermentation extractive, malgré des conditions difficiles. EXEMPLE 3 : Extraction du fer d'un extrait d'ortie
L'ortie étant riche en fer, des tests ont été réalisés concernant son extraction par le procédé objet de l'invention. Le milieu de fermentation avec résidu (noté ORT-AR) conduisant à l'extrait d'ortie E1 a été comparé avec deux autres milieux préparés comme suit : - Une fermentation est réalisée de manière similaire à celle de E1, mais une filtration du milieu est effectuée avant l'ajout de la composition C2 pour éliminer les résidus d’ortie (le milieu fermentaire est noté ORT-AR). - Une fermentation témoin sans inoculation de ferment est réalisée en remplaçant la composition C2 par de l’eau (le milieu fermentaire est noté ORT-SSF).
Des échantillons du surnageant des trois milieux sont prélevés au cours de la fermentation à J0, J3, J6 et J12 et le fer est dosé par colorimétrie avec du permanganate de potassium. Les résultats obtenus sont présentés à la Figure 1. Les échantillons avec résidus ORT-AR présentent un taux de fer extrait croissant au cours du temps, alors que ce taux n'évolue pas dans le milieu sans poudre d'ortie ORT-SR. Ceci atteste de l’extraction en continu du fer à partir des résidus de la plante au cours de la fermentation, le taux d’extraction maximal étant atteint dès le 6 ème jour par l’action des ferments ajoutés. En effet, une extraction de fer est visible aussi dans les échantillons sans ferment ORT-SSF, mais elle est plus lente puisqu'elle n'atteint son maximum qu'au bout de 12 jours. D’autre part, les échantillons ORT-SSF présentent une prolifération importante de la flore indigène de l’ortie, entraînant le développement d’une odeur forte, désagréable, ainsi qu’un noircissement du produit, signes de sa dégradation. Au contraire, les échantillons ORT-AR sont vert foncé avec une odeur végétale puissante. L’acidité totale a également été mesurée, par dosage colorimétrique par la soude en présence de phénolphtaléine. Elle est exprimée en % d’équivalents acide acétique, comme présenté à la Figure 2. Le taux de sucre en degrés Brix a été relevé à J0 et J6.
La différence d'acidité entre les trois milieux est marquée dès le 6 ème jour et se poursuit jusqu’au 11 ème jour. Dans l’essai ORT-SSF, l'acidité se stabilise à partir du 8 ème jour ce qui indique que la production d’acide est arrêtée, signant ainsi l’absence de fermentation à proprement parler, alors que les sucres ne sont pas complétement consommés (à J6, le sucre est dosé à 4,6 °Bx pour une valeur initiale de 4,9). Par contre, en présence de la composition C2, l'acidité augmente régulièrement, avec consommation concomitante du sucre (pour les échantillons ORT-AR, le sucre est à 2,9 °Bx à J6, contre 5,3 à J0 ; pour les échantillons ORT-SR, le sucre est à 2,7 °Bx à J6, contre 5,1 à J0). La production d'acide avec consommation du sucre au cours des fermentations est caractéristique de la mise en place du consortium de la composition C2 dans les milieux fermentaires.
Ces résultats montrent que le traitement par extraction/fermentation selon l'invention a permis simultanément de libérer rapidement le fer contenu dans l’ortie et d’empêcher le développement microbien sauvage, protégeant tant l'extrait liquide que la biomasse résiduelle de la plante ainsi traitée. EXEMPLE 4 : Propriétés biologiques d'un extrait d'ortie
Cytotoxicité L’extrait d'ortie E2 obtenu à l'exemple 2 a été testé au regard de sa cytotoxicité in vitro sur deux types cellulaires : les kératinocytes épidermiques humains normaux, représentatifs de l’épiderme, et les fibroblastes dermiques humains normaux, représentatifs du derme. Pour ce faire, l'extrait est préalablement dilué en cascade dans un milieu de culture adapté à chaque type de cellules dans des concentrations comprises entre 0,01% et 10%. Les extraits dilués sont mis en contact avec les cellules pendant 24 heures. Durant les 3 dernières heures, le réactif coloré WST1 (Roche) est introduit dans le milieu. La densité optique à 450 nm (coloration jaune) est proportionnelle au nombre de cellules vivantes. Les résultats donnés à la Figure 3 (fibroblastes) et à la Figure 4 (kératinocytes), montrent que l’extrait E2 ne manifeste aucune cytotoxicité par rapport au témoin sans extrait, sur les deux types cellulaires, lorsqu'il est présent à une teneur comprise entre 0,01% et 1% in vitro , ce qui est compatible avec des applications cutanées.
Activités cellulaires L'extrait E2 a ensuite été testé sur puce génomique pour identifier les activités stimulées. L’extrait est préalablement dilué dans du milieu de culture, à la concentration non-toxique de 0,01%, puis incubé avec des kératinocytes épidermiques humains normaux pendant 24 heures. Les ARN messagers (ARNm) sont extraits puis analysés par RT-qPCR (Real Time quantitative Polymerase Chain Reaction). Les résultats sont présentés à la Figure 5. Ils sont exprimés en %, positif en cas de surexpression et négatif en cas d’inhibition par rapport à l’expression du gène dans des cellules cultivées dans des conditions normales.
On observe une surexpression de 60% à plus de 150% des gènes correspondant aux des activités suivantes : fibrillines 1 et 2, collagène VII, occludine, syndécan, aquaporine, facteur de croissance HBEGF (Heparin-Binding EGF-like Growth Factor), sirtuine, catalase et propiomellanocortine. La surexpression de ces gènes est intéressante pour des applications cosmétiques de type "anti-âge". EXEMPLE 5 : Propriétés biologiques d'un extrait de Ginkgo biloba
Cytotoxicité L’extrait de Ginkgo biloba E3 obtenu à l'exemple 2 a été testé au regard de sa cytotoxicité in vitro sur deux types cellulaires humains normaux : les kératinocytes et les fibroblastes, selon la procédure identique à l'exemple 4. Les résultats donnés à la Figure 6 (fibroblastes) et à la Figure 7 (kératinocytes), montrent que l’extrait E3 ne manifeste aucune cytotoxicité par rapport au témoin sans extrait lorsqu'il est présent à une teneur comprise de 0,01% à 1% in vitro , ce qui est compatible avec des applications cutanées.
Activités cellulaires L'extrait E3 a ensuite été testé sur puce génomique pour identifier les activités stimulées, après dilution dans du milieu de culture, à la concentration non-toxique de 0,01%, puis incubation avec des kératinocytes épidermiques humains normaux pendant 24 heures. Les ARN messagers (ARNm) sont extraits puis analysés comme ci-dessus. Les résultats sont présentés à la Figure 8.
On observe une surexpression de 60% à plus de 100% des gènes correspondant aux des activités aquaporine, filaggrine, involucrine et transglutaminase 1 et jusqu'à 320% pour l'inhibiteur de peptidase-3. Par contre, l'activité de la métalloprotéase est inhibée. Les modifications d’expression de ces gènes sont intéressantes pour des applications cosmétiques visant à renforcer la fonction barrière de la peau. EXEMPLE 6 : Extraction de la curcumine et dérivés d'un extrait de Curcuma longa
On sait que le curcuma est naturellement riche en curcuminoïdes, majoritairement de la curcumine. L'extrait E4 préparé à l'exemple 2 dont l'observation visuelle laisse présumer la solubilisation de composés colorés, a été analysé. Pour ce faire, à la fin du processus d’extraction/fermentation, le surnageant de fermentation est séparé de la poudre résiduelle de curcuma, laquelle est séchée à l’étuve à 45°C. La phase liquide (curcuma-F-jus) et la phase solide séchée (curcuma-F-poudre) sont analysées par spectrophotométrie et comparées au curcuma natif non fermenté repris dans l’eau (curcuma-H 2 O). À cette fin, les poudres de curcuma, fermentée et native, sont reprises à 100 mg/ml et des dilutions au ¼ sont effectuées pour pouvoir comparer les échantillons. Les échantillons sont centrifugés et le surnageant est analysé en spectrophotométrie visible. Les spectres obtenus sont présentés à la Figure 9.