INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L’inflammation est un processus fondamental présent tout au long du développement des lésions d’acné. En effet, elle est présente dès les stades précoces jusqu’aux stades les plus tardifs de la pathologie. En tant que bactérie majeure associée à la pathogénèse de l’acné, C. acnes p articipe activement à la création d’un environnement inflammatoire. En colonisant le follicule pilosébacé, la bactérie joue un rôle essentiel dans le déclenchement de la réaction inflammatoire et l’apparition des lésions inflammatoires. Elle stimule la production de médiateurs de l’inflammation par plusieurs types cellulaires de l’unité pilosébacée. De plus, des facteurs exogènes et endogènes tels que les hormones, le stress, composition du sébum, etc, accentuent le phénomène inflammatoire.
Plusieurs types cellulaires du follicule pilosébacé sont impliqués dans ces mécanismes inflammatoires : les kératinocytes, les sébocytes mais également les cellules immunitaires infiltrant les lésions d’acné.
-Inflammation kératinocytaire : Dans une peau acnéique, la modification de la composition du sébum et notamment la peroxydation des squalènes influence l’état inflammatoire du follicule pilosébacé en stimulant la sécrétion de la cytokine pro-inflammatoire IL-1α par les kératinocytes. De plus, la colonisation du follicule pilosébacé par C. acnes entraîne la production et la sécrétion par les kératinocytes de nombreux médiateurs pro-inflammatoires :
*des cytokines pro-inflammatoires (IL-8, IL-1α, etc) ; *des chimiokines (CCL5, CCL20, CXCL1, etc) ; * des métalloprotéinases (MMP2, MMP9, etc). Avantageusement le principe actif selon l’invention inhibe la sécrétion des chimiokines, des cytokines et des métalloprotéinases dans des épidermes reconstruits 3D mimant une peau acnéique.
-Inflammation sébocytaire : L’acné est caractérisée par un changement de la composition du microenvironnement des follicules sébacés induisant une colonisation et une activité métabolique accrue de C. acnes . La bactérie est capable d’induire une réponse inflammatoire au niveau des sébocytes qui produisent de nombreux médiateurs pro-inflammatoires. Parmi ces derniers, les sébocytes sécrètent des cytokines pro-inflammatoires (IL-6, IL-8, etc) contribuant à la réaction inflammatoire observée dans les lésions d’acné. La sécrétion de ces médiateurs confère aux sébocytes la capacité de promouvoir la différenciation des lymphocytes T helper naïfs en Th17, renforçant ainsi le phénomène inflammatoire.
De plus, la glande sébacée est sensible à des émotions négatives telles que le stress. Il a été montré que les patients acnéiques présentent une innervation accrue dans l’environnement des glandes sébacées témoignant de l’existence d’une communication entre les systèmes nerveux et sébacé. Le rôle pathogène de la substance P comme neuromédiateur de l’inflammation dans l’acné est à ce jour bien décrit dans la littérature. Elle entraîne la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires (IL-6, IL-8, etc) exacerbant l’environnement inflammatoire des glandes sébacées.
La suite de la description montrera que le principe actif selon l’invention inhibe la sécrétion d’IL-6 et d’IL-8 par les sébocytes humains soumis à l’inflammation par la substance P et/ou C. acnes .
-Inflammation lymphocytaire Th17 :
Un infiltrat de cellules immunitaires est présent dans les lésions d’acné, infiltrat composé majoritairement de lymphocytes T helper CD4 + .Récemment, des études ont mis en évidence le profil Th17 de ces cellules, suggérant que l’acné est une pathologie dans laquelle les lymphocytes Th17 contribuent de manière significative au phénomène inflammatoire. Il a été démontré que C. acnes détient la capacité à induire une différenciation des lymphocytes naïfs en lymphocytes Th17. Ces cellules produisent une cytokine pro-inflammatoire impliquée dans de nombreuses pathologies inflammatoires, l’interleukine 17 (IL-17) et dont la quantité est également retrouvée augmentée dans les lésions d’acné. La présence d’IL-17 entraîne la sécrétion de médiateurs pro-inflammatoires par les cellules épithéliales, tels que l’IL-8 et le CCL20, exacerbant alors le processus inflammatoire. L’apparition et l’exacerbation du phénomène inflammatoire décrit dans les lésions d’acné fait donc intervenir divers protagonistes et facteurs. Les médiateurs inflammatoires produits favorisent la comédogénèse puis la rupture du follicule conduisant à l’apparition des lésions inflammatoires.
Avantageusement le principe actif est capable de réguler la bilogie des LTh17 et de limiter l’inflammation induite par ces cellules.
Ainsi, un hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum est capable d’avoir un effet sur l’inflammation qui intervient dans l’acné. En particulier, lorsqu’il est appliqué sur la peau, le principe actif selon l’invention est capable de : - réguler la biologie de l’épiderme acnéique et limiter l’inflammation marqueur de la physiopathologie de l’acné, notamment en inhibant la sécrétion de CCL5, de CCL20, de CXCL1, et en inhibant la sécrétion d’IL-1α, d’IL-8, et en inhibant la sécrétion de MMP2 et MMP9 ; - réguler la biologie des LTh17 et limiter ainsi l’inflammation induite par ces cellules, actrices importantes de la physiopathologie de l’acné, -limiter l’inflammation sébocytaire caractéristique de la physiologie de l’acné, notamment en inhibant la sécrétion d’IL-6 et d’IL-8.
représente une photographie au microscope (Leica modèle ICCS50) sous grossissement x10 d’un exemple de base cosmétique concentrée selon l’invention
représente une photographie au microscope (Leica modèle ICCS50) sous grossissement x10 d’un exemple d’une composition cosmétique obtenue par mélange de la base cosmétique concentrée avec une composition cosmétique contenant des actifs selon l’invention
Exemple 1 : Exemples de base concentrée de formulation cosmétique
Les compositions ont été préparées selon le procédé suivant en utilisant pour les étapes de mélange : Rayneri /défloculeuse, comme contenant un bécher de 600 ml pour la réalisation de 400 gr de produit, une plaque chauffante, des spatules, des maryses et une balance.
Les ingrédients utilisés pour la fabrication de bases concentrées de formulations cosmétiques sont décrits dans les tableaux 1 et 2 ci-dessous.
Tableau 1 : ingrédients pour la fabrication d’une base concentrée 1 de formulations cosmétiques
PHASES INGREDIENTS Base 1 (Pourcentage en poids par rapport au poids total de la composition) A Eau 29,15 Propylene glycol 26,6 Glycérine 10 B Gélifiant Acrylate 1,5 C Emollients 20 Cire émulsionnante 6,7 D Silice 3,35 tocopherol 0,2 Actif anti pollution 0,2 Ajusteur de pH 0,6 Poudre de bambou 1,7
Procédé de fabrication pour d’une base concentrée 1 de formulations cosmétiques :
Les matières premières de la phase A ont été pesées à l’aide de la balance et chauffées à 75°C en utilisant le Rayneri/Défloculeuse et la plaque chauffante.
L’ingrédient de la phase B a été introduit dans la phase A et chauffé jusqu’à dispersion.
Les ingrédients de la phase C ont été pesés à l’aide de la balance et chauffés à 75°C (bécher/plaque chauffante).
Lorsque les températures des phases A et B ont été atteintes, la phase C a été ajoutée dans la phase A sous agitation avec un Rayneri afin de réaliser une émulsion et la vitesse d’agitation a été augmentée progressivement à 3000 tr/min. le mélange a été laissé émulsionné à cette vitesse pendant 3 minutes puis la vitesse d’agitation diminué à 800 tr/min. L’ensemble a été refroidi à une vitesse d’agitation de 800 tr/min. Une fois la température de 45°C atteinte, les ingrédients de la phase D ont été ajoutés et la vitesse d’agitation a été raugmentée à 1500 tr/min pendant 3 min. L’ensemble a été laissé refroidi à 30°C à 800 tr/min.
Tableau 2 : ingrédients pour la fabrication d’une base concentrée 2 de formulations cosmétiques
Phases INGREDIENTS Base 2 (Pourcentage en poids par rapport au poids total de la composition) A Eau 0 Glycérine 38,6 Lécithine 0,24 Gélifiant acrylate 1 0,96 B Butylene glycol 37 C Emollient 20 Antioxydants 0,2 Gélifiant acrylate 2 3
L’association de ces composants confère à la composition une action anti-vergetures remarquable, ces quatre composés agissant en synergie pour protéger la peau. Une telle composition permet d’obtenir un effet particulièrement bénéfique sur les vergetures existantes, ainsi que sur la prévention de leur apparition, comme l’ont montré les Inventeurs.
Selon un mode de réalisation avantageux, la composition se présente sous une forme propre à une administration par voie topique ou par voie orale. Avantageusement, la composition comprend en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable. Dans ce cas, la composition est une composition cosmétique et/ou esthétique, qui est de préférence topique ou orale.
Ladite composition topique peut comprendre en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable et/ou au moins un véhicule approprié qui peut être tout excipient et/ou tout véhicule parmi ceux connus de l’homme du métier en vue d’obtenir une composition cosmétique telle que définie ci-dessus, en particulier sous forme d’une crème, d’une lotion, d’un gel, d’un spray, d’un patch, d’une eau, d’une pommade, de lait ou d’huile, d’une émulsion, avec en outre des composants connus de l’homme du métier pour améliorer, modifier ou stabiliser la composition d’un point de vue cosmétique ou esthétique.
Pour l’ingestion par voie orale, de nombreuses formes de réalisation et notamment des compléments alimentaires sont possibles. Leur formulation est réalisée par les procédés usuels pour produire des comprimés, des gélules, des capsules molles, des dragées, des émulsions, des gels. En particulier, le mélange d’extrait de polyphénols de graines de passiflore, d’extrait de peptides d’avocat et d’extrait d’hamamélis tels que définis ci-dessus, et les éventuels autres ingrédients de la composition orale peuvent être incorporés dans toutes formes de compléments alimentaires ou d’aliments enrichis, par exemple, des barres alimentaires, des poudres compactées ou non, des boissons, des produits laitiers et en particulier des yaourts et des yaourts à boire. Les poudres peuvent être diluées dans de l’eau, des sodas, des jus de fruits, des produits laitiers ou à base de soja, de riz, ou être incorporées dans des barres alimentaires. La composition orale peut également comprendre au moins un excipient cosmétiquement acceptable et/ou au moins un véhicule approprié qui peut être tout excipient et/ou tout véhicule parmi ceux connus de l’homme du métier en vue d’obtenir une composition cosmétique orale.
Les conditions opératoires pour préparer ces compositions cosmétiques font partie des connaissances générales de l’homme du métier.
Selon un mode de réalisation alternatif, la composition d’intérêt comprend en outre au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Dans ce cas, la composition est une composition pharmaceutique. La composition pharmaceutique selon l’invention se présente avantageusement sous une forme propre à une administration par voie topique ou par voie orale. Ladite composition pharmaceutique peut également comprendre au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou au moins un véhicule approprié qui peut être tout excipient et/ou tout véhicule parmi ceux connus de l’homme du métier en vue d’obtenir une composition pharmaceutique utilisable selon l’invention, avec en outre des composants connus de l’homme du métier pour améliorer, modifier ou stabiliser la composition d’un point de vue pharmaceutique.
Les conditions opératoires pour préparer ces compositions pharmaceutiques selon l’invention font partie des connaissances générales de l’homme du métier.
Utilisation cosmétique et/ou esthétique et méthode de soin cosmétique non thérapeutique et/ou esthétique de la peau
Les Inventeurs ont montré, de manière surprenante, qu’une composition cosmétique comprenant un extrait de polyphénols de graines de passiflore, un extrait de peptides d’avocat et un extrait d’hamamélis permet de prévenir la formation de vergetures et de réduire les vergetures existantes sur la peau, notamment chez des femmes enceintes et post-partum, avec une grande efficacité. En particulier, les Inventeurs ont montré que, de manière surprenante, l’application d’une telle composition permet de restaurer l’organisation et l’orientation des fibres matricielles du derme et en particulier des fibres élastiques de la peau ainsi que les niveaux d’expression de marqueurs de l’organisation des fibres matricielles du derme et en particulier des fibres élastiques et de marqueurs de l’inflammation. Il en résulte un effet anti-vergetures démontré in vivo, en particulier chez des femmes enceintes et après accouchement. La présente composition améliore de manière significative les aspects inesthétiques (visuels, tactiles) des vergetures existantes ainsi que les gênes, inconforts ou incommodités associés (démangeaisons, sensations de tiraillement, sensations d’inconfort), et limite l’apparition de ces aspects inesthétiques et incommodants ou inconfortables des vergetures, tout en étant très bien tolérée.
La mise au point de cette composition cosmétique ayant une grande efficacité anti-vergetures a notamment reposé sur l’utilisation d’un nouveau modèle de peau, capable de reproduire les différentes caractéristiques physiologiques de la peau vergeturées, notamment des vergetures des femmes enceintes.
Ce modèle de peau utilisé par les Inventeurs est obtenu en plaçant des cellules cutanées (cellules de peau) sous contrainte mécanique afin de modéliser l’étirement de la peau, notamment au cours de la grossesse.
Avantageusement, les cellules cutanées ont été obtenues à partir d’un échantillon cutané.
Par « échantillon cutané », on entend ici tout échantillon contenant des cellules de la peau. Les échantillons cutanés comprennent donc aussi bien les explants de peau, que les cultures de cellules cutanées en suspension, les cultures de cellules cutanées en monocouche, les cultures de cellules cutanées en bicouche et les modèles tissulaires, dont les cultures de peaux reconstruites (ou modèle de peau reconstruite) et les cultures de muqueuses reconstruites. Avantageusement, les cellules cutanées utilisées dans le modèle de peau sont choisies parmi les cultures de peau reconstruite et les explants de peau. Les cellules cutanées utilisées dans le modèle de peau sont préférentiellement des explants de peau.
Dans le présent modèle de peau, les cellules cutanées sont placées dans des conditions de culture appropriées (notamment dans des conditions de survie) pendant le temps désiré (en général plusieurs jours, par exemple entre 2 et 28 jours, avantageusement entre 3 et 10 jours) entre deux mors, avec ou sans contrainte mécanique à force constante (avantageusement une force constante uni-axiale, comprise entre 0,1 et 2 Newton, préférentiellement 1N, jusqu’à 50% d’allongement
Le modèle utilisé permet de reproduire fidèlement la physiologie de la vergeture. Il a notamment été montré que la matrice extra cellulaire dermique subissait des modifications similaires à celles observées dans des zones de vergetures in vivo (orientation des fibres de collagène et d’élastine dans le sens de la tension ; altération des fibres oxytalanes sous la jonction dermo-épidermique ; diminution de l’expression du collagène III au niveau des fibres réorientées ; induction d’une inflammation via le relargage de cytokines (IL6, IL8, IL1α)). Une telle tension mime donc l’étirement de la peau causant les vergetures, notamment au cours de la grossesse.
Un tel modèle de peau permet donc avantageusement d’étudier la physiologie de la vergeture et d’identifier des actifs ou des formulations permettant de prévenir et de traiter les vergetures.
L’objectif est de doser l’endothéline de type 1 dans les cellules endothéliales micro-vasculaires humaines après exposition pendant 24h à l’hydrolysat peptidique peregrina selon l’invention.
Protocole : Les cellules endothéliales micro-vasculaires humaines ont été fournies par la société PELOBiotech et mise en culture dans les plaques 96 puits selon les procédures de production du fournisseur. Il s'agit de laisser agir les extraits à différentes concentrations sur les cellules endothéliales à 80% de confluence pendant 24 heures, puis de quantifier l’endothéline 1 à l’aide du kit ELISA PicoKine (EDN1) dans les surnageants cellulaires. Un test de viabilité au préalable est réalisé pour définir les doses non-toxiques à utiliser lors de dosage de l’endothéline 1. Le contrôle négatif est réalisé à l'aide des cellules en milieu de culture sans traitement. Le contrôle positif dans le test de viabilité est le SDS à 0,5%. Toutes les conditions sont préparées dans des milieux de culture, et les cellules sont ensuite incubées à 36.5°C / 5% CO2 pendant 24 heures. a) Application des solutions à tester sur les cellules endothéliales : Les produits à tester sont mis en contact avec les cellules endothéliales en sub-confluence dans les plaques 96 puits. Pour chaque concentration le test est réalisé sur 3 puits. Les plaques sont incubées pendant 24 heures ± 1 heure à 36.5°C / 5% CO2. b) Test de viabilité : La viabilité cellulaire est évaluée par la méthode MTT sur les cellules après incubation avec les produits. Après 24 heures d'incubation, les surnageants sont récupérés et conservés à -20°C pour les dosages. Les puits sont ensuite rincés 1 fois avec 200 μL de PBS. Dans chaque puits 50 μL de solution de MTT à 0,5 mg/ml sont ajoutés : incubation pendant 3 heures à 36.5°C / 5% CO2. Dans chaque puits 100 μL d'isopropanol sont ajoutés. Après homogénéisation, une lecture de l'absorbance est réalisée à 550 nm. Pour chaque condition, le rapport de la moyenne des densités optiques des cellules sur la moyenne des densités optiques des contrôles négatifs déterminera le taux de viabilité. c) Dosage de l’endothéline 1 : Le dosage est réalisé à l’aide du kit ELISA. Les résultats de l’inhibition de l’action de l’endothéline sont donnés ci-dessous.
Extrait concentration Croissance cellulaire versus contrôle (%) Endothelin 1 versus contrôle (%) Endothelin 1 versus contrôle ( pg/ml) Extrait peregrina selon l’invention 2% +8.46 -34.90 -47.09 1% 1.54 -13.03 -17.58 0.10% -1.15 -12.44 -16.79
Conclusion : Le test de viabilité réalisé à la fin de traitement n’a pas montré d’effet toxique pour les concentrations testées. Le dosage de l’endothéline 1 est réalisé dans les surnageants cellulaires à des concentrations non toxiques. La quantité de l’endothéline 1 pour chaque condition est dosée à l'aide du kit ELISA. Pour les cellules du contrôle négatif, les valeurs sont de l'ordre de 134.94 pg/ml. Pour les cellules traitées avec différentes concentrations d’extraits, les valeurs sont de 87.85 pg/ml (avec 2% de l’extrait selon l’invention) à 118.15 pg/ml (avec 0.1% de l’extrait selon l’invention), ce qui montre des inhibitions très significatives dès 0.1% de l’extrait selon l’invention avec environ 12.44% d’inhibition de production d’endothéline de type 1 et jusque 34.90% d’inhibition avec 2% de l’extrait selon l’invention. Les résultats sur l’endothéline et son inhibition dose-dépendante spécifique démontrent que l’hydrolysat peptidique selon l’invention est un puissant éclaircissant de la peau.
Exemple 7 : Effet de l’hydrolysat peptidique peregrina selon l’invention pour libérer les acides gras libres.
La lipolyse dans les adipocytes, ou l'hydrolyse du triacylglycérol (TAG) pour libérer les acides gras et le glycérol pour une utilisation par d'autres organes, est une fonction unique du tissu adipeux blanc. La lipolyse dans les adipocytes se produit à la surface des gouttelettes lipidiques cytosoliques, qui ont récemment attiré beaucoup d'attention en tant qu'organites dynamiques, partie intégrante du métabolisme lipidique. L'identification récente de l'AdPLA en tant que principale phospholipase adipeuse A(2) a conduit à la découverte d'une régulation autocrine/paracrine dominante de la lipolyse par la PGE (2). Les mécanismes ci-dessus sont des acteurs clés de la lipolyse et de sa régulation. Des découvertes récentes relient la lipolyse aux altérations ou mutations génétiques et prévoient l'activation de la lipolyse dans les adipocytes comme cible thérapeutique potentielle ( A hmadja n M. et al., 2010, Lipolysis in Adipocytes, The International Journal of Biochemistry and Cell Biology , 42(5): 555-559).
L’objectif de l’étude est d'évaluer la capacité de l’hydrolysat peptidique selon l’invention à augmenter la libération de glycérol dans la culture de cellules humaines (adipocytes). La teneur en glycérol est corrélée à la lipolyse. L'augmentation de la teneur en glycérol implique un effet de lipolyse. L'effet amincissant cosmétique est associé à l'effet lipolyse.
Protocole : Les adipocytes humains sont mis en culture dans les plaques 24 et 12 puits selon les procédures internes. Il s'agit de laisser agir les échantillons à des concentrations définies sur les adipocytes à confluence pendant 24 heures. Un test préalable de viabilité au MTT après 24 heures permet d’évaluer la cytotoxicité et de choisir les concentrations pour le test « effet lipolytique ». Cet « effet lipolytique » est évalué par le dosage du glycérol dans les surnageants après 24 heures d’exposition aux échantillons.
Le contrôle négatif est réalisé à l'aide des cellules en milieu de culture sans traitement. Le contrôle positif pour le test de viabilité est le SDS à 0.5%. Le contrôle positif pour le test « effet lipolytique » est la caféine à 0.05%. Toutes les conditions sont préparées dans des milieux de culture, et les cellules sont ensuite incubées à 36.5°C / 5% CO2 pendant 24 ± 1 heure. Application des solutions à tester sur les adipocytes : Les produits à tester sont mis en contact avec les adipocytes en confluence dans les plaques 24 puits (test de cytotoxicité) et 12 puits (test « effet lipolytique »). Pour chaque concentration, le test est réalisé sur 3 puits. Les plaques sont incubées pendant 24 ± 1 heures à 36.5°C / 5% CO2. Test de viabilité : La viabilité cellulaire est évaluée par la méthode MTT sur les cellules après 24 heures d’incubation avec les produits. Après 24 heures d'incubation, les puits prévus sont rincés 1 fois avec 200µL de PBS. Dans chaque puits 300 µl de solution de MTT à 0,5 mg/ml sont ajoutés : incubation pendant 3 heures à 36.5°C / 5% CO2. Dans chaque puits 800 µl d'isopropanol sont ajoutés. Après homogénéisation, une lecture de l'absorbance est réalisée à 550 nm. Pour chaque condition, le rapport de la moyenne des densités optiques des cellules sur la moyenne des densités optiques des contrôles négatifs déterminera le taux de viabilité. Une valeur seuil de viabilité à 70 % par rapport à la valeur du contrôle négatif est utilisée pour classifier les substances testées comme cytotoxiques ou non cytotoxiques. Test « effet lipolytique » : L’effet lipolytique est évalué par le dosage de glycérol dans les milieux de culture après 24 ± 1 heures d’incubation avec les produits. Les milieux de cultures sont mélangés avec le « free glycerol reagent » selon le protocole du fournisseur. La solution de glycérol est utilisée pour faire la gamme étalon à des concentrations de 0 à 6250 µM. La lecture de DO est réalisée à 550nm. Les résultats de la libération des acides gras libres sont donnés ci-dessous.
Concen-tration Croissance cellulaire versus contrôle (Caféine, %) I Augmentation de la production de glycérol versus contrôle (%) Production de glycérol Production ( µM) Hydrolysat peptidique peregrina 2% -6.16 +40.00 8.32 0.5% -7 +3.00 0.63 0.10% +9.03 NS 0
Conclusion : L’hydrolysat peptidique selon l’invention a montré qu'il favorisait la libération de glycérol des adipocytes humaines et induisait de ce fait un effet amincissant.
Exemple 8 : Effet de l’ extrait peregrina selon l’invention pour stimuler la protéine ZAG