INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Tableau 6 : Pourcentage de viabilité des kératinocytes en fonction des traitements. Viabilité des cellules KSFM Ficoïde Ficoïde soumises à un (témoin Glaciale Glaciale stress avec négatif) (0,5%) (5.10-2%) traitements Traitement curatif 100% 116% 120% Traitement préventif 100% 116% 138% Les traitements n'entraînent pas de modifications de la viabilité cellulaire en conditions normales. En conditions de stress des effets protecteurs sont observés 25 pour les deux types de traitement. L'extrait de ficoïde glaciale permet donc non seulement de protéger l'activité mitotique des kératinocytes en condition de stress hydrique mais aussi de mieux réparer les dommages liés à ce stress.
Exemple 6 : activité de l'extrait de ficoïde glaciale sur la protection des kératinocytes face à un stress thermique Des cultures de kératinocytes humains normaux ont été réalisées et soumises à un stress thermique chaud (45°C pendant 2h30) ou à un stress froid (4°C pendant 2h30). 24H après les stress, la viabilité résiduelle des cellules a été évaluée par quantification de l'activité métabolique des déshydrogénases mitochondriales, par mesure d'hydrolyse du MTT (MéthylThiazoleTétrazolium). Les traitements avec l'extrait de ficoïde glaciale (0,5% et 5.10-2% en volume/volume) étaient préventif (avant le stress) et curatif (après le stress). Ces stress occasionnent une mortalité cellulaire : la viabilité résiduelle est en moyenne de 40-60 %.
Les données du tableau 7 ci-après concernent le pourcentage de viabilité résiduelle des kératinocytes en fonction des traitements. Chaque condition a été réalisée trois fois et l'expérience, renouvelée 2 fois. Le témoin négatif correspond au milieu de culture seul (KSFM) ayant subi le stress, qui sert de base 100 dans chaque condition pour les calculs.
Tableau 7 : Pourcentage de viabilité des kératinocytes en fonction des traitements. Viabilité des KSFM Ficoïde Ficoïde cellules soumises (témoin Glaciale Glaciale à un stress négatif) (0,5%) (5.10-2%) CHAUD Traitement curatif 100% 127% 112% Traitement 100% 102% 106% préventif Viabilité des KSFM Ficoïde Ficoïde cellules soumises (témoin Glaciale Glaciale à un stress négatif) (0,5%) (5.10-2%) FROID Traitement curatif 100% 111 % 96% Traitement préventif 100% 126% 123% Le tableau montre que l'extrait de ficoïde glaciale présente des activités complémentaires sur la viabilité des kératinocytes en condition de stress thermiques chaud et froid.5
-1- DEMANDE DE BREVET B06/0036FR GD/LM Société par Actions Simplifiée dite
: CASTER Extrait polysaccharidique de Lentinus et compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou nutraceutiques comprenant un tel extrait Invention de : ALES Patrick ESCAUT Alexandre CHOULOT Jean-Christophe Extrait polysaccharidique de Lentinus et compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou nutraceutiques comprenant un tel extrait
La présente invention concerne un extrait polysaccharidique issu de champignon du genre Lentinus ainsi que le procédé de préparation d'un tel extrait. Cet extrait riche en polysaccharides est utilisable en tant que préparation nutraceutique, cosmétique ou pharmaceutique.
La peau est un organe à part entière, jouant un rôle fondamental dans la santé et également dans l'apparence. Barrière à la fois résistante et fragile, elle est en perpétuel renouvellement. Malgré cela, les premiers signes du vieillissement cutané se manifestent, discrètement, avant 30 ans. Avec le temps, la peau perd sa souplesse et sa capacité à retenir l'eau diminue. Bien que la déshydratation ne soit qu'un des aspects du vieillissement cutané, il apparaît que la teneur en eau est étroitement liée à nombre de caractéristiques morphologiques et moléculaires de la peau normale. La protection contre la perte en eau est principalement assurée par l'épiderme et sa couche cornée (Verdier-Sevrain., S. & F., Bonte, 2007, J. Cosmet. Dermatol. 6(2):pp 75-82). L'épiderme est un épithélium pavimenteux stratifié constitué principalement de kératinocytes (90 %), le derme étant le support conjonctif nourricier de l'épiderme dont la principale finalité biologique est la formation de la couche cornée. Le stratum corneum ou couche cornée est la zone la plus superficielle de l'épiderme. Elle est constituée d'un empilement de cellules plates anucléées, les cornéocytes, résultat ultime du processus de différenciation et de prolifération des kératinocytes. Le stratum corneum, par sa solidité et grâce à sa structure stratifiée compacte, assure une fonction barrière : il s'oppose à la perte en eau transcutanée et protège les couches sous-jacentes des agressions mécaniques, chimiques et de l'irradiation ultraviolette. La teneur en eau de la peau est conditionnée par des différents paramètres parmi lesquels se trouve, entre autres, le degré d'élimination d'eau, qui dépend de l'équilibre existant entre la capacité de la peau à retenir l'eau et les pertes transépidermiques par évaporation, sorte de déshydratation physiologique reflétant l'intégrité de la barrière épithéliale cutanée ainsi que sa fonctionnalité. Tous les épithéliums, compris celui de la peau, sont constitués de cellules associées les unes aux autres avec plus ou moins de cohésion. Les jonctions serrées ou imperméables (tight junctions) sont spécifiques de tous les tissus épithéliaux.
Localisées généralement au sommet des cellules, elles scellent les cellules épithéliales cutanées entre elles et empêchent ainsi le passage des fluides par la voie intercellulaire à l'extérieur des tissus. Leur principale fonction est donc d'assurer l'étanchéité de l'épiderme et d'éviter que l'organisme ne se vide de son eau au contact du milieu extérieur (Tsuruta, D., et al., 2002, Trends Cell Biol. 12(8): pp 355-7). La jonction entre des cellules de l'épiderme est due en effet à des interactions homophiles qui concernent plusieurs protéines d'adhérence. La première est l'occludine (du latin occludere = enfermer). C'est une protéine transmembranaire d'un poids de 64 kDa, constituée d'une chaîne polypeptidique qui traverse quatre fois la membrane. La deuxième est la claudine (du latin claudere = fermer), une protéine transmembranaire d'un poids de 22 kDa, constituée également d'une chaîne polypeptidique qui traverse quatre fois la membrane. La claudine fait partie d'une famille d'au moins 24 membres, dont plusieurs peuvent être présents dans une même jonction. La troisième protéine est JAM (junctional adhesion molecule), une protéine d'un poids moléculaire de 33 kDa et dont la chaîne polypeptidique traverse la membrane une seule fois. Occludine, claudines et JAM s'assemblent pour former un réseau de fibrilles qui ceinture le domaine apical des cellules épithéliales. Les jonctions serrées sont liées à des protéines intracellulaires comme ZO-1 et ZO-2 (zonula occludens) qui à leur tour sont liées au cytosquelette (actine). Cette interaction avec le cytosquelette détermine la localisation de la jonction au domaine apical de la cellule. En fonction de l'expression des protéines qui constituent les jonctions serrées, les cellules de l'épiderme sont plus ou moins capables de limiter la perméabilité de l'épithélium cutané. L'hydratation de la peau reste un phénomène complexe et d'une importance capitale en cosmétologie ou en dermatologie d'où la recherche constante de nouveaux soins qui reprogramment le processus d'hydratation en profondeur et en surface pour regonfler la peau de l'intérieur et lisser le relief cutané. Lentinus edodes (Shii-take), un champignon forestier comestible du Japon, est connu dans de nombreux pays asiatiques (Chine, Corée, etc.) comme un des meilleurs champignons pour son goût et son parfum. Le Lentinus edodes est en effet caractérisé par quelques substances spécifiques, comme, par exemple, la guanosine 5'-monophosphate qui induit un parfum agréable et une substance aromatique, la lenthionine. Il existe actuellement au monde des centaines de champignons comestibles mais la majorité n'est pas cultivée. Seulement quelques champignons Agaricus bisporus en Europe et Lentinus edodes en Asie sont cultivés à grande échelle, mais Agaricus bisporus est cultivé sur compost et utilisé frais alors que le Lentinus est cultivé sur bois et, souvent séché. Le séchage du Lentinus permet en effet de le conserver, tout en préservant son arôme et son goût.
Le Shii-take est un champignon cher qui est connu aussi sous le nom de Elixir de la vie . D'après le grand médecin chinois WU SHUI qui a vécu au temps de la dynastie Ming (1364-1644), le shii-take augmente la vigueur et la vitalité et est très efficace dans le traitement préventif de l'hémorragie cérébrale. Récemment, les propriétés médicales du Shii-take ont été étudiées par des chercheurs japonais et on a pu mettre en évidence des actions antivirale, antibiotique, antitumorale et hypo lipidémique. Il y a environ 800 ans, on a commencé à cultiver le champignon en Chine (le nom chinois du Shii-take est HOANG-KO). Aujourd'hui il existe près de 230000 petits producteurs de Shii-take au Japon. Ce champignon est cultivé également en Corée et en Chine et est cueilli à l'état sauvage dans les forêts des autres pays asiatiques. En 1974, la production totale du Japon a été de 12000 de tonnes de champignons séchés et de 55000 de tonnes de champignons frais. Le Shii-take est exporté uniquement séché. Il est connu du brevet FR2776184 un extrait aqueux de Lentinus riche en lentinane, pour ses propriétés anti-tumorales. Le brevet FR2829389 décrit un procédé d'extraction de Lentinus comprenant des étapes d'hydrolyse enzymatique afin d'obtenir un extrait capable d'inhiber l'activité de certaines métalloprotéases, les MMPs et en particulier les MMP-1 et 2.
La composition chimique du Shii-take a été déterminée par des méthodes standard d'analyse publiées par l'Association de Chimie Analytique. Les dosages ont porté sur l'humidité, les protéines brutes, les graisses et les cendres. Les protéines brutes ont été déterminées par rapport à l'azote contenu dosé par la méthode de Kjeldahl, en utilisant le facteur de conversion (N x 6,25). En fait, les études et les dosages faits sur la protéine brute ont montré que seulement une partie est digestible.
D'autres travaux démontrent que le taux probable de digestibilité est de 60-70%. Ce taux réduit s'explique par le fait que les champignons contiennent un pourcentage non négligeable d'azote non protéique lié à la chitine des parois cellulaires. On peut donc considérer que le facteur de conversion est 70% N x 6,25 ou (N x 4,38).
Le pourcentage de graisse contenu dans les champignons peut varier entre 1 et 15-20% du poids sec. En moyenne, les champignons contiennent 2 à 8% de graisses et on y trouve toutes les catégories de lipides comme les acides gras libres (stéarique, oléique, palmitique et linoléique) les mono, di et triglycérides, les stérols (ergostérol) stérols-esters et phospholipides. Les graisses ont été analysées par extraction aux solvants ; les fibres, comme résidu après digestion, les cendres comme résidu après incinération. Les champignons frais contiennent entre 3 et 28% d'hydrates de carbone et 3 à 32% de fibres. Les carbohydrates ont été calculés par différence, comme carbohydrates totaux (fibres incluses) ou comme carbohydrates sans fibres. On peut penser que la plus grande quantité d'azote non protéique se trouve sous forme de chitine et, en petite quantité sous forme d'urée ou de sels d'ammonium. Echantillon Humidité Protéine Graisse Carbohydrates Cendres Valeur Brute Energéti N x 4,68 que Kcal Total Sans N Fibres Séché (1) 15,8 10,3 1 ,9 2,3 5,8 6,5 5,5 375 Séché (4) 19,5 26,0 2,9 5,0 1 ,5 13 ,5 6, 1 345 Séché (3, 4) 18,4 13,1 1 ,2 9,2 4,5 14,7 6,5 333 Frais (3, 4) 90,0 17,5 8,0 7,5 9,5 8,0 7,0 387 Frais (2) 91 ,8 13,4 4,9 8,0 0,7 7,3 3,7 392 1 - Singer (1961) 2 - Organisation Agro-Alimentaire (1972) 15 3 -Soweda (1965) ; 4 - Adriano et Gruz (1933)
Le Lentinus edodes contient 17.5 % de son poids sec en protéines et pratiquement tous les acides aminés essentiels. Environ 25-35% des acides aminés totaux sont des 20 acides aminés libres, le reste étant lié aux protéines. En dehors des acides aminés communs, on a détecté dans ces champignons des acides aminés rares ou des substances azotées telle que : (3-alanine, sulfoxyde de méthionine, acide cystéique, hydroxyproline, hydroxylysine, acide a-aminoadipique, acide a, et y aminobutyrique, acide pipecolique et 5-hydroxypipecolique, phosphosérine, cystathione canavanine, créatinine, citrulline, arnithine, glucosamine et éthanolamine.
Composition en acides aminés de Lentinus edodes selon Kagawa (1970), Sawada (1965), Sugimosi et col. (1971). Acide aminé mg d'acides aminés par gramme de protéine brute. Isoleucine 218 Leucine 348 Lysine 174 Méthionine 87 Phénylalanine 261 Cystine non déterminé Tyrosine 174 Thréonine 261 Tryptophane non déterminé Valine 261 Aruinine 348 Histidine 87 Alanine 305 Aride asnartiane 392 Aride ulntamiane 1182 Glycine 218 Serine 261 Total des acides aminés 4962 On trouve dans les champignons du genre Lentinus des pentoses (xylose et ribose), méthyl pentoses (rhamnose et fucose) hexoses (glucose, galactose et mannose), disaccharides (sucrose), sucres aminés (glucosamine et N-acétylglucosamine), sucres-alcools (manutol et inositol) sucres acides (acide galacturonique et glucuronique) etc. Le mannitol se trouve en concentration élevée (9-13%).
Le champignon Lentinus contient des polysaccharides et de la chitine (polymère de N-acétylglucose amine). De même, on trouve du a, a' tréhaloxe, nommé de façon populaire, le sucre des champignons. Les vitamines les plus répandues dans le champignon Shii-take sont la thiamine, la riboflavine, la niacine, la biotine. La vitamine A (rétinol) ne se trouve pas de façon habituelle dans ces champignons mais on peut doser parfois la provitamine A exprimée en équivalents de 13-carotène. De même, la vitamine D est rare mais on trouve de l'ergostérol qui peut être transformé en vitamine D par irradiation ultraviolette.
La demanderesse a mis au point de nouveaux extraits polysaccharidiques issus de champignons du genre Lentinus, qui constituent l'objet de l'invention. L'invention a également pour objet le procédé d'obtention de cet extrait. Un autre objet est constitué par les applications de cet extrait comme composition nutraceutique, cosmétique ou comme médicament.
D'autres objets apparaîtront à la lecture de la description, des dessins et des exemples qui suivent. Les figures 1 et 2 montrent une analyse par spectrométrie de masse (MALDITOF) de l'extrait polysaccharidique obtenu dans l'exemple 1. Les poids moléculaires des composés visualisés s'étagent de 500 à 10 000 m/z (masse/charge).
Les figures 3 et 4 montrent des analyses chromatographiques de l'extrait polysaccharidique obtenu dans l'exemple 1. L'analyse résumée sur la figure 3 a été réalisée sur chromatographie liquide échangeuse d'ions. Celle de la figure 4 est une chromatographie d'exclusion stérique. Les figures 5a et 5b, 6a et 6b, 7a et 7b montrent l'expression des protéines structurales de jonctions serrées dans des cellules HaCaT par une technique d'immunohistochimie. Les figures 5a et 5b montrent la détection de claudine, les figures 6a et 6b, la détection d'occludine-1 et les figures 7a et 7b, la détection de ZO-1. Les figures 5a, 6a et 7a sont les témoins négatifs des expériences d'immuno-marquage effectuées. Les figures 5b, 6b et 7b sont le résultat des expériences en présence de l'extrait polysaccharidique selon l'invention dilué à (0% dans du milieu de culture cellulaire.
La composition hydroalcoolique décrite ci-dessus peut être administrée par contact direct ou indirect sur une partie du corps d'un individu, ou diffusée ou vaporisée pour être inhalée. L'administration par contact indirect consiste à placer l'essence de diffusion à l'intérieur d'un flacon et disposé ce flacon sur une partie d'un corps d'un individu.
Ces modes d'administrations sont simples à mettre en oeuvre et permettent d'éviter toute addiction à l'alcool, tout en évitant d'exposer le thérapeute au traitement du patient.
Cette composition hydroalcoolique est particulièrement adaptée à une administration par diffusion dans l'air permettant l'inhalation par le patient. La composition hydroalcoolique selon l'invention est utilisée, avantageusement, comme essence de diffusion pour lampe à alcool, diffuseur à alcool ou vaporisateur à alcool. En effet, l'utilisation d'un solvant hydroalcoolique permet une diffusion à température ambiante ou par fumigation, par exemple, au moyen d'un diffuseur à alcool ou d'une lampe à alcool.
Le conditionnement de la composition hydroalcoolique selon l'invention, sous forme d'une lampe à alcool, d'un diffuseur à alcool ou d'un vaporisateur à alcool facilite son transport, son stockage et sa conservation sur une longue durée.
Selon un mode de réalisation particulier représenté à la figure 1, un procédé de préparation d'une composition hydroalcoolique telle que décrite ci-dessus comprend une première étape de préparation des trois essences décrites ci-dessus à partir des trois matières végétales naturelles correspondantes.
Chaque essence est obtenue indépendamment à partir de la matière végétale naturelle correspondante afin d'en retirer un ou plusieurs extraits actifs responsables des propriétés énergétique, thérapeutique et/ou prophylactique.
Pour l'obtention de chaque essence, il est d'abord procédé à l'extraction alcoolique de la matière végétale naturelle correspondante selon tout procédé connu, par exemple, à l'aide d'un extracteur de Soxhlet. A titre d'exemple, 50g de matière végétale naturelle est préalablement congelée puis concassée au pilon mortier en granulés grossiers. 300mL d'alcool pur sont utilisés pour extraire la matière végétale naturelle en granulés, placée dans le corps de l'extracteur de Soxhlet. 10 On entend par alcool pur, un alcool ayant une pureté supérieure à 90 idéalement supérieure à 95°. L'alcool pur est, de préférence, de l'éthanol.
En chauffant à reflux, l'alcool dans le ballon récepteur de l'extracteur de Soxhlet 15 prend une teinte colorée. Cette coloration correspond à l'enrichissement de l'alcool en essence extraite de la matière végétale naturelle par passages successifs de l'alcool chaud à travers les granulés de la matière végétale naturelle.
20 On arrête le chauffage lorsque le reflux d'alcool qui se condense dans le corps de l'extracteur de Soxhlet est totalement transparent, classiquement après 8H à 10H de reflux.
On obtient un alcoolat contenant l'essence de la matière végétale 25 correspondante, dissous dans l'alcool, et un résidu de l'extraction alcoolique demeurant dans le corps de l'extracteur de Soxhlet.
Le résidu d'extraction alcoolique est ensuite calciné. La calcination est suivie du lavage à l'eau du résidu calciné. L'eau utilisée pour le lavage est de l'eau5 déminéralisée ou distillée. Le résidu ainsi lavé à l'eau est filtré puis séché par évaporation de l'eau, pour obtenir un résidu rectifié.
On mélange ensuite le résidu rectifié et l'alcoolat ainsi obtenus. Puis, on concentre le mélange, selon tout procédé connu, par exemple par distillation de l'alcool jusqu'à obtention d'une essence. À partir de 50g de matière végétale naturelle, on obtient 50mL ± 10mL d'essence extraite.
L'essence issue par le procédé de préparation décrit ci-dessus, également nommée teinture, a une texture plus ou moins huileuse et colorée quelque soit les matières végétales naturelles sélectionnées parmi l'Oliban, la Myrrhe, le Benjoin, le Storax, le Sang-Dragon, le Santal Blanc et le Copal.
Comme représenté à la figure 1, on prépare trois essences à partir d'Oliban, de Myrrhe et de Benjoin ou d'Oliban, de Storax et de Sang-Dragon ou encore de Myrrhe, de Copal et Santal Blanc selon les étapes décrites ci-dessus.
Les trois essences sont ensuite mélangées, diluées et dynamisées avec une solution hydroalcoolique pour obtenir un pourcentage volumique cumulé des trois essences strictement inférieur à 0,5%, de préférence inférieur ou égal à 0,1%. La dynamisation est une technique connue d'agitation spécifique d'une solution propre à accroître l'homogénéité et l'efficacité d'un constituant dissout dans ladite solution, de manière à pouvoir l'utiliser en doses infinitésimales.
La solution hydroalcoolique est un mélange eau-alcool, formulée avantageusement à partir d'eau déminéralisée ou distillée et d'alcool pur dans les proportions volumiques, respectivement, de 1/3 et 2/3.
Selon différents modes de réalisation, on prévoit de disposer la deuxième source directement en regard de la paroi arrière, longitudinalement en retrait de la lentille et radialement au niveau de la zone intermédiaire, ou bien d'intercaler un réflecteur, notamment parabolique, disposé en regard de la paroi arrière, longitudinalement en retrait de la lentille et radialement au niveau de la zone intermédiaire, la deuxième source étant disposée au foyer de ce réflecteur. Dans le premier cas, la deuxième source est disposée de façon à ce que les rayons qu'elle émet pénètrent dans la lentille perpendiculairement à la deuxième face d'entrée. Dans le second cas, le réflecteur est disposé de façon à ce que les rayons issus de la deuxième source qu'il réfléchit pénètrent dans la lentille perpendiculairement à la deuxième face d'entrée. Selon une caractéristique avantageuse de l'invention, la zone intermédiaire de la paroi frontale présente un profil différent de celui de la zone annulaire périphérique de cette même paroi frontale. On peut réaliser avantageusement la zone intermédiaire avec un billage qui permet la diffusion des rayons issus de la deuxième source vers l'extérieur de la lentille. La lentille, par sa forme de révolution, comporte trois parties fonctionnelles distinctes parmi lesquelles une partie centrale de collection des rayons lumineux issus de la première source, une partie périphérique de sortie des rayons issus de la première source, ainsi qu'une partie intermédiaire, qui s'étend radialement entre les deux autres parties, qui assure alternativement la réflexion transversale des rayons issus de la première source et qui assure le guidage rectiligne et longitudinal des rayons issus de la deuxième source. On remarque notamment le rôle de cette partie intermédiaire qui assure le guidage de rayons lumineux dans deux directions perpendiculaires selon la source de lumière qui est actionnée. Selon une caractéristique particulière de l'invention, une source lumineuse complémentaire est disposée sur l'axe de révolution de la lentille de telle sorte que la première source lumineuse se trouve entre la lentille et ladite source complémentaire qui émet principalement dans le sens opposé à celui de la première source lumineuse. Avantageusement, la source lumineuse complémentaire et la première source lumineuse sont des diodes électroluminescentes et la disposition dos à dos l'une de l'autre permet qu'elles soient portées toutes les deux par une plaque commune de circuits imprimés adaptés à assurer leur alimentation. Ainsi, on limite encore le nombre de pièces et le poids du dispositif en assurant une grande diversité d'éclairage et/ou de signalisation.