K0690) couplé au chromogène AEC (DAKO, K346111). Après contre-coloration à l'hématoxyline et lavage en eau ultrapure, les coupes sont montées entre lame et lamelle en milieu aqueux Glycergel (DAKO, C056330). Les coupes sont observées à l'aide d'un microscope NIKON E400. Les images numériques sont enregistrées avec une caméra NIKON DS-Ri1 et le logiciel NIS-Elements 3.10. 2) Résultats Le passage à l'interface air-liquide conduit, dans les conditions optimales de reconstruction épidermique, à une très forte différenciation qu'il est très difficile de 10 sur-stimuler. Aussi il convient de se mettre en conditions non-optimales ou légèrement carencées pour voir l'effet de produits stimulant la différenciation. Les images numériques obtenues sont présentées à la figure 2. Dans ces conditions expérimentales présentant une carence (vitamine C), l'extrait EX1OMF1046 montre une nette compensation et une forte stimulation de 15 l'expression de KRT10, filaggrine et TGK. Exemple 4: Effets protecteur des lésions cutanées induites par l'inflammation (psoriasis, dermatites) de l'épiderme ; évaluation dans des épidermes reconstruits (RHE) 20 1) Matériels et méthodes Cellules et épidermes reconstruits Les NHEK sont préparés comme dans l'exemple 2. Les RHE sont préparés comme dans l'exemple 3 (milieu complet incluant 25 vitamine C). Mélange inflammatoire, référence Le mélange inflammatoire (mix cytokines, M3) est constitué d'interleukine-17 (IL-17), oncostatine M (OSM) et tumor-necrosis factor alpha (TNFoc), toutes provenant de chez R&D Systems, à la concentration finale de 3 ng/ml chaque. 30 La référence est le « JAK inhibitor 1)> (Calbiochem CAS 457081-03-7) à I.J.M final. Extrait testé Extrait EX1OMF1046, testé à 20 ug/ml, dans le milieu de culture des RHE. Analyse des transcrit, RT-qPCR 35 Les NHEK sont pré-cultivés comme dans l'exemple 2 puis traités pendant 24 h avec l'extrait EX1OMF1046 (20 ug/m1) ou le JAK inhibitor (10 uM). Le mélange de cytokines est ensuite ajouté aux milieux contenant ou non l'extrait et les cultures sont poursuivies pendant 24 h. A la fin de l'incubation, les tapis cellulaires sont rincés puis extraits en tampon de lyse ; les protocoles et analyses suivants sont les mêmes que ceux de l'exemple 2. Les résultats sont donnés en % des témoins non traités, ils sont représentés à la figure 3. Immunomarquages in situ Les RHE sont placés à l'interface air-liquide (JO) et cultivés jusqu'à J11. 10 Puis les RHE sont traités en systémique avec l'extrait EX10MF1046 (20 ug/m1) ou le JAK inhibitor (10 uM) pendant 7h. Le mélange de cytokines est ajouté aux milieux contenant ou non les produits et les cultures sont poursuivies pendant 48 h. Le traitement des tissus, les marquages et l'analyse sont réalisés comme dans l'exemple 3. Des images numériques des coupes observées sont enregistrées. 15 Les NHEK ou les RHE sont traités par l'extrait EX10MF1046 ou la référence, puis par un mélange cytokinique constitué par au moins une cytokine activant la voie Jak/Stat, soit OSM ou IL-22 (activateurs de STAT-3/1) ; un activateur de voie NF-kB, soit IL-1 ou TNF-cc et une troisième cytokine pouvant être l'IL-17 (activateur de CREBP) orientant vers une réponse de type psoriasis ou l'IL-4/IL-13 20 (activateur de STAT-6), orientant vers la dermatite atopique 5-7. A noter que toutes ces cytokines sont aussi plus ou moins activatrices des voies MAKPkinases (mitogenactivated protein kinases) chez le kératinocyte. Dans ces mélanges, les cytokines inductrices de STAT-3/1 (OSM, IL-22) 2-3' 7 sont cruciales dans la physiopathologie cutanée, elles sont responsables de l'effet sur la différenciation cutanée et des 25 modifications morphologiques observées dans ces pathologies. Les autres cytokines, notamment IL-17, TNF-a et IL-1 5-7 sont plus impliquées et de façon hautement synergique dans l'induction de l'immunité innée (peptides antimicrobiens) et la production de chimiokines responsables du maintien et de l'amplification de la boucle inflammatoire responsable de ces pathologies chroniques 5-7. 30 Ce mélange choisi contient l'OSM comme inducteur de STAT-3/1, associé au TNF-a (NF-kB, MAPkinases) et à l'IL-17 (pour donner l'orientation « psoriasis », Th17. Ce mélange a un effet inflammatoire hautement synergique qui mime donc la pathologie inflammatoire cutanée au niveau de l'épiderme et en particulier le psoriasis. Le remplacement de L'IL-17 (cytokine Th17) par une ou plusieurs cytokines 35 Th2 (IL-4/IL-13) conduirait à un phénotype cutané plus proche de la dermatite atopique6. Dans les deux cas, la différenciation anormale de l'épiderme est remarquable, avec perte des marqueurs de différenciation terminale, hyperplasie (etc). La référence est le « JAK inhibitor 1 », inhibiteur large de voie Jak-Stat et testé à forte concentration.