Test de mise en évidence de la présence de tanins On fait bouillir environ 0,5 g de l'extrait de ML dans 10 ml d'eau dans un tube à essai suivi d'une filtration. On ajoute ensuite 10 ml d'HCI (2N) puis on fait - 15 - chauffer la préparation pendant 15 min. L'apparition de la coloration rouge indiquant la présence de tannins. Test de mise en évidence de la présence des anthracènosides Ajouter à 0,5 g de l'extrait de ML 10 ml d'HCI (2N) puis porter à ébullition pendant 10 min et filtré à chaud. Le filtrat est ensuite agité après mélange avec 10 ml de toluène. La phase contenant du toluène (1 ml) est ensuite transféré dans un autre tube à essai, puis on ajoute 1 ml de NaOH (1N). L'apparition de la couleur rouge violacé indique l'apparition des anthracènosides. 2.3. Les animaux Les rats mâles Wistar de 150-200 g, et les souris mâles albinos suisses de 2030 g (animalerie du laboratoire de la faculté de médecine et de pharmacie, Université Mohammed V Souissi, Rabat, Maroc) ont été gardés dans des cages, dans des conditions standards de laboratoire, avec l'eau et la nourriture standard de rat ad libitum, en un cycle de 12-h/12 h de lumière/obscurité, à la température de 21-23 ° C. L'étude a été réalisée conformément aux principes reconnus énoncés dans le « Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoires», selon les recommandations de l'académie de Sciences et publié par le l'institut national de la santé. Tous les efforts ont été faits pour minimiser la souffrance animale et le nombre d'animaux utilisés. L'approbation éthique a été obtenue de l'université Mohammed V-Souissi, Faculté de médecine et de pharmacie, Rabat, Maroc. 2.3 Test de toxicité aigüe. L'étude de toxicité aiguë chez la souris a été réalisée selon les principes directeurs de l'OCDE pour les essais de produits chimiques [6]. Les souris Swiss mâles ont été réparties aléatoirement en deux groupes (10 souris par groupe). Les souris ont reçu l'extrait de ML (2 g/kg) par voie orale puis nourris dans les conditions standards (eau et nourriture), puis mis sous observation régulière pendant 14 jours. Les changements de comportements observés étaient l'hyperactivité, tremblements, ataxie, convulsions, la salivation, diarrhée, léthargie, sommeil, coma et éventuellement la mort. - 16 - 2.5. Test de natation forcé Le test de natation forcé ou forced swimming test (FS) a été utilisé [7]. La procédure utilisée a déjà été décrite par Detke et al. [8]. Les animaux (rats) ont été forcés de nager à l'intérieur d'un cylindre rempli d'eau et sans possibilité pour les animaux de sortir. L'anxiété qui en résulte provoque une nage vigoureuse, comme si l'animal voulait s'échapper de l'enceinte avec tentative de monter sur les parois de l'enceinte sans succès. Lorsque les arrêtent de se débattre, à l'exception de ceux qui gardent un comportement de survie (en gardant la tête hors de l'eau), le comportement est jugé immobile et classé io comme dépression induite. Le premier jour (test de pré-session), les rats sont obligés de nager pendant 15 minutes dans un cylindre acrylique contenant de l'eau à 23 ± 1 ° C (diamètre de 30 cm x 50 cm de hauteur et 40 cm de profondeur). L'eau est changée après chaque test de natation afin d'éliminer les excréments, l'urine et les poils. Après la séance de natation, les rats ont été 15 retirés du bac de natation, séchés avec des serviettes et placés sous une ampoule (32 ° C) pendant 15 à 30 minutes pour se réchauffer. La séance d'examen : animaux reçoivent une dose de leurs médicaments respectifs 1 heure (s) avant la session de test et suite ensuite testés dans les mêmes conditions pendant 6 minutes. L'immobilité et le nombre de fois où que 20 les rats s'arrêtent de nager (nombre d'arrêt) ont été enregistrés. Immobilité est classée comme l'absence de mouvement, avec le corps incliné en avant et flottant passivement et avec les pattes immobiles. L'activité de natation est enregistrée lorsque l'animal fait des grands mouvements de patte, se déplaçant autour du cylindre à une fréquence plus que nécessaire tout en gardant la tête 25 hors de l'eau. L'escalade de la paroi de l'enceinte est enregistrée lorsque le rat commence à réaliser des mouvements vigoureux avec les pattes de devant dans et hors de l'eau, généralement contre la paroi du bac de natation. 2.6. Réponse induite par l'acide acétique. Le test de douleur (l'animal se tord de douleur avec des spasmes) chez la 30 souris a été réalisé selon la méthode de Koster et al. [9]. Les contractions ont été induites par l'injection intra péritonéale d'acide acétique de 1,2 % (v/v, 0,15 - 17 - ml /20 g de poids corporel). Trois différentes doses ont été utilisées (1, 10 et 100 mg/kg) de ML administrée par voie orale pour chaque groupes de souris, 60 min avant la stimulation chimique. L'acide acétylsalicylique et la solution physiologique, ont été utilisés comme contrôles positifs et négatifs, administrait 30 min avant l'injection de l'acide acétique. Le nombre de contractions musculaires a été compté sur une période de 5 min après l'injection de l'acide acétique. Les données représentent le nombre total de contraction musculaire observée durant une période de 10 min. 2.7. OEdème de patte de souris induite par la A- carragénine.