Exemple 1 ù Obtention d'un extrait de Passiflora alata 50g de feuilles de Passiflora alata ont été placés dans 1,000 L d'eau distillée et le mélange a été chauffé à 80°C pendant 3 heures. Le mélange a ensuite été passé sur une colonne de polystyrène, puis élué avec solution d'éthanol à 30% acidifiée à pH 5,0 avec de l'acide acétique. L'extrait résultant a été filtré et séché. Exemple 2 ù Obtention d'un extrait de Passiflora alata purifié par contact avec du PVPP 100g de feuilles séchées de Passiflora alata ont été soumis à une extraction à l'eau distillée dans un rapport de 1:10 (p/v) à 80°C pendant 2 heures. Après une filtration sur Büchner, 4 aliquots de 50 ml ont été prélevés et mélangés à 2.5g de PVPP (Divergan F BASF) à 8 C. Après 90 minutes sous agitation, les échantillons ont été élués en Büchner et le PVPP a été soumis aux éluants suivants pour retirer les flavonoïdes contenus dans le mélange résultant : a) 50 ml H2O + NH4OH 10/0, 60°C, 30 min b) 50 ml H2O + HCI 1%, 60°C, 30 min c) 50 ml EtOH + NH4OH 1%, 60°C, 30 min d) 50 ml EtOH + HCI 1%, 602C, 30 min Les aliquots ont été dilués 8,33 fois puis analysés par HPLC dans les 1 o conditions d'analyse suivantes: Phase mobile (A): Acide formique à 0,2% dans l'eau Phase mobile (B): ACN Détection: 337 nm (pour les flavonoïdes) Flux: 0,8 mUmin 15 Standards: dissous dans le méthanol: orientine, isoorientine, vitexine, isovitexine, luteoline, apigenine. Concentration de 105 ppm Colonne: Phjenomenex Synergil 4 pm Fusion RP-80 150 x 4.6 mm Gradient: Temps % (A) % (B) 0 85 15 85 15 40 70 30 50 85 15 20 La valeur de l'aire de la vitexine a été considérée à des fins de comparaison puisqu'il s'agit du flavonoïde majeur. La Figure 1 contient un graphe comparatif des résultats obtenus pour plusieurs échantillons, et la Figure 2 liste des chromatogrammes de plusieurs cycles réalisés dans cette analyse dans lesquels il a été noté que le PVP est capable d'absorber les flavonoïdes glycosylés à faible température. Exemple 3 ù Obtention et identification de flavonoïdes de différents extraits de Passiflora alata Les flavonoïdes présents dans différents types d'extraits de Passiflora alata ont été obtenus par 2 méthodologies différentes. a) Voie 1 100g de feuilles séchées de Passiflora alata ont été mis en suspension dans 1000 ml d'eau dé-ionisée. Ensuite, les flavonoïdes ont été 1 o extraits pendant 2 heures dans un ballon de réaction sous agitation constante à 3 températures différentes: 60, 70 et 80°C. L'extrait a ensuite été filtré sous vide dans un entonnoir de Büchner en éliminant le restant de feuilles retenu et en complétant le volume du filtrat de nouveau à 1000 ml (pour chacune des différentes températures 15 d'extraction) A partir de ce volume, 500 ml d'extrait a été laissé reposer sur la nuit dans une chambre froide à 52C. Après 24 heures, l'extrait a été centrifugé à 5°C et 4100 rpm pendant 21 minutes, obtenant ainsi deux fractions: le précipité et le surnageant. Le précipité a été suspendu dans de l'éthanol, filtré sur un papier filtre banal et le volume d'éthanol a été 20 complété à 80 ml. b) Voie 2 Le volume de l'autre extrait de 500 ml séparé par la Voie (1) ci-dessus a été précipité dans l'éthanol deux fois, après un refroidissement préalable à température ambiante. Ensuite l'extrait a été centrifugé à 20°C 25 et 4100 rpm pendant 21 minutes, obtenant deux fractions: le précipité et le surnageant. Le précipité a été suspendu dans de l'éthanol, filtré sur un papier filtre banal et le volume d'éthanol a été complété à 80 ml. Dosage de la concentration en flavonoïdes La concentration en flavonoïdes contenus dans les extraits obtenus 3 0 par les Voies 1 et 2 a été déterminée selon Rolim et aI, 2005, et le 10 flavonoïde rutine a été utilisé comme standard. La concentration peut être vue dans la Figure 3, où elle est exprimée en pg/ml. La Figure 3 montre (de la gauche vers la droite) le précipité de la Voie 1 suspendu dans de l'éthanol à 602C (R1-60), le précipité de la Voie 1 suspendu dans de l'éthanol à 702C (R1-70), le précipité de la Voie 1 suspendu dans de l'éthanol à 802C (R1-80), le précipité de la Voie 2 suspendu dans de l'éthanol à 602C (R2-60), le précipité de la Voie 2 suspendu dans de l'éthanol à 702C (R2-70) et le précipité de la Voie 2 suspendu dans de l'éthanol à 802C (R2-80). Pour suivre les concentrations exactes des extraits, les résultats de la Figure 3 sont également présentés dans la Table ci-dessous : Table 1 û Absorbances et concentrations respectives des flavonoïdes des différents extraits de P. alata Echantillon Abs (391 nm) [ ] ug/ml R 1-60 0,1908 10,10 R 1-70 0,5093 26,78 R1-80 0,8166 42,87 R2-60 0,3397 17,90 R2-70 0,2791 14,73 R2-80 0,6023 31,65 A travers les résultats présentés dans la Figure 3, il est possible de suivre le profil de concentration en flavonoïdes de tous les précipités suspendus dans l'éthanol obtenus par les Voies 1 et 2 aux trois températures adoptées dans les procédures (60, 70 et 802C) et il est conclu que la température d'extraction de 80°C était la plus efficace.