INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Excellente source de fibres alimentaires, la poire est un fruit à ne pas négliger dans le cadre d'une saine alimentation. Elle contient des vitamines et des minéraux essentiels. Fibres alimentaires. La poire est une source élevée de fibres alimentaires, importantes pour la régularisation du transit intestinal et la prévention des maladies cardiovasculaires. Environ deux tiers des fibres contenues dans la poire sont des fibres dites insolubles. Le protocole utilisé pour obtenir cette composition est de prendre comme unité 100 grammes de liquide. Sur les 100 grammes, nous isolerons environ entre 2 et 2.5 grammes de bicarbonate de sodium et entre 8 et 12 grammes de miel passés dans une centrifugeuse, que nous aurons laissé tourner 3 minutes à 1000 tours/minute. Au produit et jus obtenus et récupérés, nous les mélangerons à environ entre 65 et 75 grammes d'huile d'olive à laquelle nous associerons entre 8 et 12 grammes d'hydrolat de café et entre 0.5 et 1 gramme d'huile essentielle de géranium. Le tout est ensuite passé en centrifugeuse pendant 3 minutes afin d'homogénéiser l'ensemble des ingrédients.
Le liquide obtenu sera associé à entre 6 et 8 grammes de jus de fruit de poire ( en particulier mais non limitatif) et entre 0.3 et 0.5 grammes d'arôme naturel de fruit ou autre ( plus particulièrement de poire mais non limitatif) et passé à nouveau dans la centrifugeuse pendant 3 minutes à 500 tours minutes. Ainsi nous obtiendrons un liquide à boire et à consommer par dose de 10 à 15 cl, afin de réaliser un pansement stomacal facilitant la digestion et l'absorption d'alcool. •
Fibres alimentaires poly-osidiques et inulines.
UTILISATION COSMETIQUE D'ACTIVATEURS DE L'AUTOPHAGIE DES CELLULES CUTANEES
La présente invention concerne l'utilisation dans une composition cosmétique, d'un activateur de l'autophagie des cellules de la peau comme principe actif cosmétique. L'invention vise également des compositions cosmétiques comprenant au moins un activateur de l'autophagie des cellules de la peau comme principe actif cosmétique ainsi qu'un procédé cosmétique pour détoxifier la peau et/ou pour prévenir ou lutter contre le vieillissement cutané, comprenant l'application topique sur la peau de telles compositions. La peau, organe de contact avec l'environnement, est constamment soumise à des 10 agressions, tant externes qu'internes, qui menacent son équilibre et modifient son aspect. On sait par exemple que l'exposition excessive aux rayons ultraviolets (UV) se traduit par diverses manifestations cutanées, comme des érythèmes actiniques, de l'élastose solaire ou encore l'apparition prématurée des effets du 15 vieillissement cutané : la peau devient lâche, profondément ridée, rugueuse, sèche, parsemée de taches hypopigmentées ou hyperpigmentées et de vaisseaux dilatés. Ces manifestations, qui reflètent de profonds changements structuraux dans le tissu cutané, sont inesthétiques et disgracieuses et beaucoup de gens ont tendance à vouloir les estomper. 20 C'est pourquoi l'objectif de la présente invention est de proposer un moyen efficace pour protéger la peau contre les agressions susceptibles d'altérer son bon fonctionnement et son aspect, et pour lutter contre les manifestations qui en découlent.
Pour y répondre, la présente invention propose d'utiliser comme principe actif cosmétique dans une composition cosmétique au moins un activateur de l'autophagie des cellules de la peau, en particulier des kératinocytes et des fibroblastes.
En effet, l'utilisation d'au moins un activateur de l'autophagie des cellules cutanées permet de lutter contre l'accumulation de molécules délétères dans les cellules cutanées produites en cas de stress et ainsi lutter contre les manifestations qui en découlent. En particulier, l'invention vise l'utilisation dans une composition cosmétique d'au moins un activateur de l'autophagie des cellules de la peau, en particulier des kératinocytes et/ou des fibroblastes, comme principe actif, pour détoxifier les cellules cutanées, lutter contre le vieillissement de la peau, restructurer la peau, hydrater et protéger la couche cornée, augmenter le renouvellement cellulaire, protéger les cellules des effets néfastes des radiations UVA et UVB et limiter les phénomènes d'inflammation. Préférentiellement, l'invention vise l'utilisation dans une composition cosmétique d'au moins un activateur de l'autophagie des cellules de la peau, comme principe actif destiné à détoxifier les cellules de la peau et/ou lutter contre le vieillissement cutané.
Avantageusement, en augmentant le mécanisme d'autophagie dans les cellules cutanées, l'utilisation selon l'invention permet d'augmenter l'élimination des molécules endommagées, de détoxifier la peau et de limiter le vieillissement cutané. En effet, dans certaines conditions, en particulier avec l'âge et la surexposition au soleil, les cellules de la peau ne sont plus en état d'évacuer les molécules endommagées par les radiations et les stress divers. Les cellules sont engorgées par ces molécules endommagées et par des radicaux libres. L'utilisation cosmétique d'activateurs de l'autophagie des cellules cutanées selon l'invention permet de limiter cet engorgement cellulaire et de débarrasser les cellules d'éléments délétères et inutiles qui entravent son fonctionnement optimal en s'accumulant. L'invention vise également une composition cosmétique pour application topique sur la peau comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, une quantité efficace d'au moins un activateur de l'autophagie des cellules cutanées choisi parmi des principes actifs issus de Lithothamnium calcareum, Melilotus officinalis, Citrus limonum, Candida saitoana, Lens culinaris, Averrhoa carambola, Momordica charantia, Yarrowia lipolytica et au moins un adjuvant cosmétique.
Préférentiellement l'activateur de l'autophagie des cellules cutanées est présent en une quantité comprise entre 0,1 et 15% en poids par rapport au poids total de la composition. Enfin l'invention a également pour objet un procédé cosmétique pour détoxifier la peau et/ou pour prévenir ou lutter contre le vieillissement cutané, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition comprenant au moins un activateur de l'autophagie des cellules de la peau. L'invention est maintenant décrite en détail. La présente invention vise donc l'utilisation dans une composition cosmétique d'un activateur de l'autophagie, en tant que principe actif cosmétique.
L'autophagie est un mécanisme de recyclage et de détoxification des constituants et des organites cellulaires. L'autophagie permet notamment de réguler, réparer et éliminer les protéines de longue durée de vie dans les cellules, assurant ainsi un contrôle au cours de la différenciation et du vieillissement de la peau humaine.
Sur le plan cellulaire, le mécanisme d'autophagie, comprend quatre étapes : l'initiation, la formation d'une vacuole initiale, nommée autophagosome, qui séquestre le matériel cytoplasmique, la maturation de l'autophagosome en vacuole dégradative et la fusion avec le lysosome, jusqu'à la dégradation du matériel séquestré. Selon un premier aspect, un activateur de l'autophagie des cellules cutanées utile selon l'invention peut être un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression des MAP-LC3 (� microtubule-associated membrane protein � protéines membranaires associées aux microtubules) et/ou des ATG5-12 (� Autophagy-related genes �, gènes de l'autophagie) des cellules de la peau. En effet, la formation de l'autophagosome, étape essentielle dans le mécanisme de l'autophagie, implique deux systèmes de conjugaison : le complexe ATG5-12 et les MAP-LC3. La première étape de l'autophagie est la formation d'une structure multimembranaire, appelée phagophore, dont l'origine reste inconnue. Cette structure s'étend pour former l'autophagosome qui séquestre du matériel cytoplasmique. L'autophagosome fusionne avec le lysosome et son contenu est ensuite dégradé par les enzymes lysosomales. Au cours de la formation de l'autophagosome, des protéines ATG sont recrutées à partir du cytoplasme et s'associent transitoirement avec la membrane autophagosomale. Ce processus fait intervenir principalement trois complexes protéiques : la PI(3)K de classe III associée à la protéine Bécline 1 et deux systèmes de conjugaison. L'évènement précoce dans l'induction de la formation de l'autophagosome est la production de phosphatidyl inositol 3-phosphate par le complexe Bécline 1-PI(3)K de classe III qui permet le recrutement du premier système de conjugaison ATG12-ATG5, noté aussi ATG5-12. Ce dernier, permet, à son tour, la conjugaison de la phosphatidyl éthanolamine (PE) à la protéine MAP-LC3 pour former le conjugué MAP-LC3 - PE, qui est alors recruté à la membrane autophagosomale.
Les gènes ATG sont donc impliqués dans la formation de l'autophagosome et l'ATG5-12 est précurseur de la conjugaison MAP-LC3 et phosphatidyl éthanolamine (PE). Les Map-LC3 sont des protéines de 15kba présentes chez les mammifères. Elles sont mises en jeu au moment de la formation des membranes des autophagosomes. Il en existe deux formes : une forme cystolique les LC3-I et une forme liée à la membrane LC3-II. Les Map-LC3 sont dans un premier temps clivées, directement après leur synthèse, au niveau de leur partie C-terminale afin de donner la forme cystolique LC3-I. Au cours de l'autophagie, LC3-I est converti en LC3-II, et les protéines s'associent aux vacuoles autophagiques. Ainsi, l'utilisation d'un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression des MAP-LC3 et/ou des ATG5-12 des cellules de la peau, permet de stimuler la formation de l'autophagosome et donc de stimuler l'autophagie des cellules de la peau. Selon un deuxième aspect, un activateur de l'autophagie des cellules cutanées utile selon l'invention peut être un principe actif inhibant l'activation de mTOR phosphorylée. Le complexe mTOR (� mammalian Target Of Rapamycine" ou cible de la rapamycine des mammifières) est une molécule intervenant dans l'initiation de la formation de l'autophagosome. Il joue un rôle de senseur de l'ATP et des acides aminés régulant l'équilibre entre la disponibilité des nutriments et la croissance cellulaire. Lorsque la quantité de nutriments est suffisante, mTOR est phosphorylée sur la 25 sérine 2448 et transmet un signal positif activant la croissance cellulaire et inhibant l'autophagie.
Dans le cas contraire, c'est-à-dire en conditions de privation nutritionnelle ou starvation, cette phosphorylation disparaît au profit d'une phosphorylation de la thréonine 2446, ce qui permet la levée de l'inhibition de l'autophagie. Le mécanisme de l'autophagie est donc initié lorsqu'il y a déphosphorylation de mTOR sur la sérine 2448. Ainsi, l'utilisation cosmétique d'un actif inhibiteur de l'activité de mTOR dans les cellules de la peau permet de favoriser l'initiation de l'autophagie, de mobiliser la formation des autophagosomes et donc de stimuler l'autophagie des cellules de la peau.
Selon un dernier aspect, un stimulateur de l'activité autophagique des cellules cutanées utile selon l'invention peut être un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression de la protéine p53, de l'AMPK et/ou de DRAM. La protéine p53 est une protéine majeure du stress, capable notamment - d'activer la protéine DRAM (� Damage Regulated Autophagy Modulator � modulateur des dommages régulés par autophagie), une protéine directement impliquée dans l'initiation du mécanisme de l'autophagie, et - d'inhiber mTOR par le biais de l'activation d'un protéine kinase, l'AMPK. L'activation de DRAM et/ou de l'AMPK, soit directement, soit par le biais de la 20 p53 permet donc de stimuler l'autophagie. Ainsi, l'utilisation cosmétique d'un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression de la protéine p53 phosphorylée, de DRAM et/ou de l'AMPK des cellules de la peau, permet de favoriser l'initiation de l'autophagie, de mobiliser la formation des autophagosomes et donc de stimuler l'autophagie des 25 cellules de la peau. La conséquence cellulaire d'une activation du mécanisme de l'autophagie par un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression des MAP-LC3, des ATG5-12, de la protéine p53 phosphorylée, de DRAM et/ou de l'AMPK et/ou présentant une activité inhibitrice de mTOR phosphorylée, est une meilleure détoxification des cellules, c'est-à-dire une diminution des espèces oxygénées réactives et des macromolécules dégénérées bloquées dans les cellules cutanées. Préférentiellement le stimulateur de l'activité autophagique des cellules cutanées utile selon l'invention est un principe actif issu d'au moins une plante, une algue ou une levure. De façon préférée, l'activateur de l'autophagie est un principe actif issu d'au moins une algue du genre Lithothamnium calcareum, ou d'une plante choisie parmi Melilotus officinalis, Citrus limonum, Lens culinaris, Averrhoa carambola, Momordica charantia ou d'une levure choisie parmi Candida saitoana et Yarrowia lipolytica. Selon un aspect de l'invention, l'activateur de l'autophagie des cellules cutanées est susceptible d'être sélectionné par un test réalisé sur des cultures de cellules cutanées comprenant les étapes suivantes - culture de cellules cutanées, kératinocytes ou fibroblastes, dans un milieu de culture adapté, - retrait du milieu de culture et remplacement par un milieu de culture comprenant un agent stressant induisant un stress nutritif et/ou oxydatif, - ajout d'un principe actif issu de plante, d'algue ou de levure à tester dans le milieu de culture, - retrait de l'agent oxydant et remplacement du milieu de culture par un milieu de culture comprenant le principe actif, et - analyse de l'expression de MAP-LC3, d'ATG5-12, de mTOR phosphorylée, de la protéine p53 phosphorylée, de l'expression de la protéine DRAM et/ou de l'AMPK par lesdites cellules, et comparaison des résultats avec ceux obtenus sur des cultures de cellules cutanées non traitées avec l'extrait à tester.
Si on constate une augmentation de l'expression de MAP-LC3, d'ATG5-12, de la protéine p53 phosphorylée, de la protéine bRAM et/ou de l'AMPK, et/ou une diminution de mTOR phosphorylée, alors le principe actif testé peut être utilisé dans une composition cosmétique en tant qu'activateur de l'autophagie des cellules de la peau. Pour illustrer l'invention, plusieurs principe actifs ont été testés pour étudier leur capacité à augmenter l'autophagie des cellules cutanées. Tout d'abord il a été vérifié que l'induction d'un stress au niveau des cellules de la peau entraînait bien une augmentation de l'autophagie.
Il a ensuite été comparé le niveau d'autophagie de cellules jeunes et âgées soumises aux mêmes stress oxydatifs et nutritifs. Enfin des principes actifs ont été sélectionnés par la mise en oeuvre du procédé test selon l'invention. 1/ Visualisation de l'autophagie des cellules cutanées après un stress nutritif Le protocole réalisé consiste à soumettre des cultures de kératinocytes type HaCaT ou kératinocytes humains normaux à un stress nutritif, c'est-à-dire à une absence de facteurs de croissance, pendant un certain temps et à évaluer l'expression de plusieurs marqueurs de l'autophagie au cours de la récupération cellulaire. Le protocole est le suivant : cultures de cellules de la peau pendant 24 heures en milieu de culture complet (avec facteurs de croissance) retrait du milieu de culture complet et remplacement par un milieu de culture non nutritif (sans facteur de croissance). Les cellules sont cultivées pendant plusieurs temps (de 0,5h à 24h) en état de stress nutritif, après ces temps de cultures en état de stress nutritif, retrait du milieu de culture non nutritif et remplacement par du milieu de culture complet, et enfin évaluation de l'état d'autophagie des cellules cutanées par évaluation de l'expression de MAP-LC3, du complexe ATG5-12, de mTOR phosphorylée, de p53 phosphorylée, de bRAM et de AMPK phosphorylée après récupération cellulaire.
1.1/ Evaluation de l'expression de MAP-LC3 après un stress nutritif Il est possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées en visualisant l'expression de la protéine MAP-LC3 par marquage immunofluorescent. L'expression de MAP-LC3 a été évaluée sur des cultures de cellules cutanées de lignées HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux après différents temps de contact du stress nutritif. Les résultats d'immunomarquage étant qualitatif, il a été défini plusieurs niveaux d'expression des MAP-LC3 - très faible détection d'immunoréactivité - - faible détection d'immunoréactivité � - moyenne détection d'immunoréactivité + - forte détection d'immunoréactivité ++ Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau suivant : Temps de culture en état de Expression stress nutritif (heures) MAP-LC3 0 - 0,5 - 1 - 2 + 3 + 4 ++ 8 + 24 - Lors de la culture des kératinocytes HaCaT en état de stress nutritif, on observe l'apparition nette d'un marquage ponctiforme MAP-LC3 au niveau du cytoplasme des cellules. Ce marquage traduit la formation d'autophagosomes dans les kératinocytes soumis au stress nutritif.
Ce marquage est observable dès 2 heures de starvation et atteint un maximum après 4 heures de starvation. Ces conditions de stress nutritif permettent donc d'induire la formation d'autophagosomes et par conséquent une autophagie, visualisée par l'expression de MAP-LC3. 1.2/ Evaluation de l'expression du complexe ATG5-12 après un stress nutritif Il est aussi possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées en visualisant l'expression du complexe ATG5-12 par marquage immunofluorescence.
L'évaluation de l'expression du complexe ATG5-12 a été réalisée sur des cultures de cellules cutanées de lignées HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux après différents temps de culture en état de stress nutritif. Les résultats d'immunomarquage étant qualitatif, il a été défini plusieurs niveaux d'expression desATG5-12 : - très faible détection d'immunoréactivité - - faible détection d'immunoréactivité � - moyenne détection d'immunoréactivité + - forte détection d'immunoréactivité ++ - très forte détection d'immunoréactivité +++ Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau suivant : Temps de culture en état de Expression ATG5-12 stress nutritif (heures) 0 � 1 ++ 2 ++ 3 ++ 4 + Lors de la culture des kératinocytes HaCaT en état de stress nutritif, on observe l'apparition nette d'un marquage ponctiforme ATG5-12 au niveau du cytoplasme des cellules. Ce marquage traduit la formation d'autophagosomes dans les kératinocytes soumis à un stress nutritif. Ce marquage est observable dès 1 heure et jusqu'à 3 heures de starvation. Les conditions de stress nutritif permettent donc d'induire un phénomène de type autophagique, visualisé par l'expression ATG5-12. 1.3/ Evaluation de l'expression de mTOR phosphorylée après un stress nutritif Il est aussi possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées en visualisant l'expression de mTOR phosphorylée par Western Blott.
L'évaluation de l'expression de mTOR phosphorylée a été évaluée sur des cultures de cellules cutanées de lignées HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux après différents temps de culture en état de stress nutritif. L'expression de mTOR phosphorylée est présentée dans le tableau ci-après en pourcentage par rapport au témoin (sans stress nutritif).
Temps de culture en état de Expression mTOR stress nutritif (heures) phosphorylée (%) 0 100 2 118 4 122 8 78 12 64 24 58 Cette expérience a montré une nette diminution de la protéine mTOR phosphorylée visible dès 8 heures de privation, dans des cultures de cellules 5 cutanées soumises à une starvation. Lorsque la protéine mTOR phosphorylée diminue, il y a levée de l'inhibition de l'autophagie. Les conditions de stress nutritif permettent donc d'induire l' autophagie sur des cultures de cellules cutanées, visualisée par la diminution de l'expression 10 de mTOR phosphorylée.
1.4/ Evaluation de l'expression de p53 phosphorylée après un stress nutritif Il est aussi possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées en visualisant 15 l'expression de la protéine p53 phosphorylée par Western Blott. L'évaluation de l'expression de la protéine p53 phosphorylée a été évaluée sur des cultures de cellules cutanées de lignées HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux après différents temps de culture en état de stress nutritif. L'expression de p53 phosphorylée est présentée dans le tableau ci-après en 20 pourcentage par rapport au témoin (sans stress nutritif).
Temps de culture en état de Expression p53 stress nutritif (heures) phosphorylée (%) 0 100 0,5 140 1 170 1,5 168 2 161 Cette expérience a montré une nette augmentation de l'expression de la protéine p53 phosphorylée visible dès 1 heure, dans des cultures de cellules soumises à une starvation.
Les conditions de stress nutritif permettent donc d'induire un phénomène de type autophagique sur des cultures de cellules cutanées, visualisé par l'augmentation de l'expression de la protéine p53 phosphorylée.
1.5/ Evaluation de l'expression de la protéine bRAM après un stress 10 nutritif Il est aussi possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées en visualisant l'expression de la protéine bRAM, par Western Blott, sur des cultures de cellules cutanées de lignées HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux après différents temps de culture en état de stress nutritif. L'expression de 15 bRAM est présentée dans le tableau ci-après en pourcentage par rapport au témoin (sans stress nutritif). Temps de culture en état de Expression de la protéine stress nutritif (heures) bRAM (0/0) 0 100 0,5 260 1 220 1,5 330 2 95 Cette expérience a montré une nette augmentation de l'expression de la protéine bRAM après 0,5 heure de culture en état de stress nutritif. L'expression de la protéine bRAM devient maximale après 1,5 heure de culture en état de stress nutritif. Ceci coïncide avec la cinétique d'expression de la protéine p53 qui atteint son maximum après une heure de stress nutritif. Les conditions de stress nutritif permettent donc d'induire un phénomène de type autophagique sur des cultures de cellules cutanées, visualisé par l'augmentation de l'expression de la protéine bRAM. 1.6/ Evaluation de l'expression de la protéine AMPK phosphorylée après un stress nutritif Il est aussi possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées en visualisant l'expression de la protéine AMPK phosphorylée, par Western Blott, sur des cultures de cellules cutanées de lignées HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux après différents temps de culture en état de stress nutritif. L'expression de bRAM est présentée dans le tableau ci-après en pourcentage par rapport au témoin (sans stress nutritif). Temps de culture en état de Expression AMPK stress nutritif (heures) phosphorylée (%) 0 98 0,5 155 1 170 1,5 172 2 130 Cette expérience a montré que l'expression de AMPK phosphorylée est augmentée dès 0,5 heure de culture en état de stress nutritif et est maximale à 1,5 heure. Ceci coïncide avec la cinétique d'expression de la protéine p53 qui atteint son maximum après une heure de stress nutritif.