INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La présente invention concerne enfin une composition selon 10 la présente invention pour la traitement du vieillissement cutané, de l'inflammation et de la cicatrisation. Les exemples suivants sont donnés à titre indicatif non limitatif. Exemples d'obtention la préparation selon la présente 15 invention Exemple 1 : biomasse fraîche / procédé mené en erlenmeyer Des feuilles d'Arganier âgées de 3 à 4 mois de préférence sont stérilisées par les bains successifs suivants : alcool à 70% 1 min, hy ochlo£ite de sodium à 2% 3 min puis rincés par 20 deux bains successifs d'eau déminéralisée de 8 min et 10 min. Les expiants foliaires stérilisés sont déposés sur la face adaxiale en contact avec le milieu gélosé composé d'un milieu de Murashige et Skoog (Murashige, T., Skoog, F. 1962. A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue 25 cultures. Physiol. Plant 15: 473-496) avec 30g/L de saccharose, 8g/L d'aga=, complémenté avec 0,5 mg/L de kinetine et 0.75 mg/1, d'acide 2-4 dichloro-phenoxyacetique (2,4-D) et ajusté à pH 6 avant un autoclavage de 20 min à 121°C (1 bar). Les boîtes de pétri contenant les expiants sont laissés à incuber à 30 l'obscurité à 28°C, et propagés jusqu'à l'obtention de cals friables et stabilisés. La mise en suspension cellulaire initiale est réalisée en déposant environ 40 g de cals friables dans un erlenmeyer de 500ml contenant 200 ml de milieu autoclavé dont la composition 35 est détaillée dans le tableau 1 précité.
La culture est réalisée pendant une semaine sur une table d'agitation à 115 RPM à l'obscurité à 29°C. Ensuite le surnageant cellulaire est récolté à la pipette laissant les amas de cals résiduels. La suspension cellulaire obtenue est cultivée pendant 15 J puis propagée par dilution au 1/5ème dans du nouveau milieu sur la même durée. La suspension est ensuite filtrée sous vide et la biomasse récupérée. Le rendement de biomasse fraîche obtenu est de 168g/L.
La biomasse est conservée à -20°C.
Exemple 2 : biomasse sèche Exemple 2a : biomasse sèche / procédé mené en bioréacteur en culture batch Quatre erlenmeyers de suspension cellulaire de 500ml obtenus tel que décrit dans l'exemple 1 sont regroupés dans un dispositif inoculateur et forment un inoculum de 2L qui est déversé stérilement dans un bioréacteur de 10L. Ce bioréacteur est rempli de 8L de milieu optimal (voir tableau 1) complémenté de 30mg/L d'antimousse préalablement stérilisé puis refroidi et maintenu à 29,5°C par une circulation d'eau thermostatée en circuit fermé dans l'enveloppe du bioréacteur. Une sonde à oxygène est étalonnée par saturation et renseigne en temps réel un dispositif informatisé de régulation de la pO2. Celui-ci permet de maintenir la pO2 à 80% par injection d'oxygène pur stérile dans le dispositif d'aération. Ce bioréacteur est équipé également d'un dispositif de mesure en ligne du CO2 au niveau des gaz effluents (head space) qui renseigne en temps réel un dispositif informatisé de régulation de la pCO2 de manière à maintenir la pCO2 à 6%. Cette dernière est faite par injection d'air atmosphérique stérile dans le dispositif d'aération en mélange avec l'oxygène. Le bioréacteur est également équipé d'un système d'agitation à pale marine tournant à 75RPM de manière suffisante pour brasser la suspension cellulaire et éviter qu'elle ne sédimente. En aval du bioréacteur est installé un dispositif automatique permettant un prélèvement stérile de la biomasse et un suivi de celle-ci. La culture batch est maintenue dans ces conditions de température et de gaz dissous constantes pendant 15 à 17 jours de manière à atteindre une densité cellulaire de 280 à 320g/L de biomasse fraîche. A l'issue de cette culture en batch, le bioréacteur est vidé et la biomasse récoltée par filtration sur un filtre à l'aide d'un entonnoir Büchner. La biomasse fraîche récoltée reprise dans le même volume 10 d'eau distillée est broyée à froid à l'aide d'un sonicateur puis lyophilisée.
Exemple 2b : biomasse sèche / procédé mené en bioréacteur en culture Fed-batch 15 Quatre erlenmeyers de suspension cellulaire de 500ml sont utilisés comme inoculum tel que décrit dans l'exemple 2a. Le bioréacteur est préparé comme indiqué dans l'exemple 2a. Les dispositifs de régulation des gaz dissous, de la température et de l'agitation sont préparés comme indiqué dans l'exemple 2a. 20 La culture initiale est maintenue dans ces conditions de température et de gaz dissous constantes pendant 15 à 17 jours de manière à atteindre une densité cellulaire de 280 à 320g/L de biomasse fraîche. A l'issue de cette culture en initiale, le bioréacteur de 10L est vidé à 80%. On récolte alors 8L 25 suspension cellulaire. La biomasse de cette suspension est récoltée par filtration sur un filtre à l'aide d'un entonnoir Büchner. On récolte 2240g à 2560g de biomasse fraîche. La biomasse fraîche récoltée reprise dans le même volume d'eau distillée est broyée à froid à l'aide d'un sonicateur puis 30 lyophilisée. On obtient 100 à 130g de biomasse lyophilisée. Simultanément à la récolte partielle de 80% on déverse 8L de milieu ARGMS préalablement autoclavé et refroidi dans le bioréacteur contenant alors 2L de suspension cellulaire de manière à rétablir le volume de culture de 10L. La culture Fed- 35 batch est maintenue dans ces conditions de température et de gaz dissous constantes pendant 5 à 7 jours de manière à atteindre une densité cellulaire de 280 à 320g/L de biomasse fraîche. Cette culture est plus courte (plus grande productivité) que la culture initiale car la biomasse est dans un état physiologique de division cellulaire soutenu si bien que le deversement de milieu nutritif neuf se caractérise par une phase de latence de moins de 24 heures et une expansion immédiate de la biomasse. A l'issue de cette culture en Fed-batch, le bioréacteur de 10L est vidé à 80%. On récolte alors 8L suspension cellulaire. La biomasse de cette suspension est récoltée par filtration sur un filtre à l'aide d'un entonnoir Büchner. La culture est ensuite relancée comme précédemment.
Exemple 2c : biomasse sèche / procédé mené en bioréacteur en culture Continue Quatre erlenmeyers de suspension cellulaire de 500ml sont utilisés comme inoculum tel que décrit dans l'exemple 2a. Le bioréacteur est préparé comme indiqué dans l'exemple 2a. Les dispositifs de régulation des gaz dissous, de la température et de l'agitation sont préparés comme indiqué dans l'exemple 2a.
La culture initiale est maintenue dans ces conditions de température et de gaz dissous constantes pendant 10 jours de manière à atteindre une densité cellulaire de 150g/L et un taux de croissance instantané de la biomasse fraîche de 0,2 j-1. A ce stade le bioréacteur de 10L est vidé à 1,2 % toutes les 1 heures et 20 minutes. Ces prélèvements sont compensés automatiquement par le déversement de même volume de milieu ARGMS neuf dans le bioréacteur. Cette méthode permet de maintenir les cellules dans un état physiologique et une densité cellulaire constante. On récolte alors 100 à 120ml de suspension cellulaire. La biomasse de cette suspension est récoltée par filtration sur un filtre à l'aide d'un entonnoir Büchner. On récolte 15g à 18g de biomasse fraîche à chaque prélèvement. La biomasse fraîche récoltée reprise dans le même volume d'eau distillée est broyée à froid à l'aide d'un sonicateur puis lyophilisée. On obtient 0,71 à 0,85g de biomasse lyophilisée à chaque prélèvement. La culture est ainsi maintenue, pendant au moins 60 jours. Il est théoriquement possible de la maintenir sans limite de durée. L'avantage de la culture en mode continu ra2port aux modes précédents est l'absence de £e-préparation du bioréacteur consistant en un nettoyage et une stérilisation de celui-ci ainsi que l'absence de phase de latence cellulaire. En effet les prélèvements de 1 à 1.5% la suspension cellulaire suivi automatiquement par la compensation en milieu neuf dans le bioréacteur inflige des variations minimes de composition du milieu de culture en cours dans le bioréacteur. Ainsi la population cellulaire ne procède pas aux réajustements métaboliques de la phase latence responsable d'une perte de productivité volumique en biomasse observé dans les autres modes de culture.
Exemple 3 : surnageant de biomasse fraîche, ladite biomasse étant obtenue selon l'exemple 2a g de biomasse fraîche et broyée obtenue selon l'exemple 2a sont centrifugés à 10000g pendant 15 minutes, et le surnageant est récolté. Il est ensuite lyophilisé. 20 Le rendement moyen est de 3Omg de surnageant lyophilisé par g de biomasse fraîche. Exemples de compositions cosmétiques : Exemple 4 : Formule 8/E Composants % Biomasse fraîche (exemple 1) 5 Glycérine 10.0 Na2EDTA 0.1 Gomme xanthane 0.3 C12-C15 alkyl benzoate 10.0 Octyl palmitate 5.0 Conservateurs qs alcool stéarique 2.5 Monostéarate de glycérol 2.5 Potassium cetyl phosphate 1.8 Eau déminéralisée QSP 100 Exemple 5 : Formule E/H Composants % Surnageant (exemple 3) 0,5 Glycérine 4,0 Na2EDTA 0,1 MgSO4 1,0 Gomme xanthane 0,1 C12-C15 alkyl benzoate 12,5 Isohexadécane 3,5 Cyclométhicone 3,0 Conservateurs qs Esters de polyglycérol et de sorbitan 4,0 Myreth-3 myristate 2,0 Eau déminéralisée QSP 100 Exemple 6 : EVALUATION DE L'ACTIVITE ANTI-OXYDANTE Chemiluminescence C'est une méthode qui génère des radicaux libres (radical superoxide 02°-) par un signal photochimique. L'intensité de l'oxydation est 1000 fois supérieure à celle obtenue en conditions normales. La détection se fait par chemiluminescence et permet l'évaluation d'extraits ou de molécules anti-oxydants lipo- ou hydrosolubles. Les résultats sont exprimés respectivement en quantité équivalente de vitamine C ou de Trolox (6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic Acid). La sensibilité est de l'ordre de la nanomole. L'analyse des résultats dépend de 2 critères : de l'allure de la courbe (intégration) et de la valeur numérique en nanomole donnée par le logiciel. (Igor Popov and Gudrun Lewin. Methods in enzymology [44] vol 300. 437-456 ; Maibach I Howard and coll. Journal of Cosmetic Dermatology Vol 7(2) 96-100 (2008)).
Par ce présent test in tuba, nous pouvons détecter de potentiels inhibiteurs d'activité MMP1, enzyme ayant un rôle crucial dans l'initiation de la dégradation des collagènes. Nous mesurons des pourcentages d'inhibition d'activité MMP1. Calcul du pourcentage d'inhibition enzymatique liée à l'inhibiteur ou au produit : inhibition = 100 x (Activité nette enzymatique rnaximale-Activité nette en:manque en présence d' inhibiteur) % Activité nette enzymatique maximale Résultats : Le surnageant préparé selon l'exemple 3 inhibe l'activité MMP1 de façon significative et dose dépendante de 60 à 25 500 pg/ml. Tableau 3: Surnageant de biomasse broyée lyophilisé (préparé selon l'exemple 3), résultats de l'inhibition de la MMP1 en pourcentage (%). Moyenne % d'inhibition Concentration en pg/ml 100 500 58 300 41 150 20 60 La biomasse lyophilisée préparée selon l'exemple 2a a été testée de 60 àl000pg/ml. En raison d'interférences physico chimiques de la biomasse dans son ensemble, nous n'avons pas pu mesurer l'activité inhibitrice. Toutefois, un extrait très proche ayant été testé a montré des inhibitions significatives de 6Opg/ml à 1000pg/ml. L'extrait préparé selon l'exemple 3 permet de lutter contre l'activité accrue des MMPs lors la sénescence et de contribuer à la conservation du rôle mécanique du collagène, conférant résistance et élasticité au niveau de la peau.
Exemple 8 : Mesure de la synthèse de TGF- Al chez les k ratinocy es HaCaT Le TGF pl (Transforming Growth Factor-beta 1) a2partient à la super-famille des TGF-& ,qui sont sécrétés par différents types cellulaires et qui jouent un rôle important dans le contrôle la croissance cellulaire et la régulation de multiples réponses cellulaires et processus biologiques. Les cytokines de cette super-famille possèdent les activités majeures suivantes : elles modulent la prolifération de la plupart des cellules, elles stimulent la prolifération des fibroblastes, elles augmentent la formation de la matrice extracellulaire (Lawrence, 1996). Par ailleurs, le TGF-&l est impliqué dans la réparation des blessures, les processus de cicatrisation (Cullen et al., 1997) notamment en induisant une réorganisation du cytosquelette cellulaire (active) et en promouvant la migration des cellules épithéliales (Boland et al., 1996). La population cellulaire la plus représentée au niveau du tissu cutané est la population kératinocytaire. Elle constitue une source importante de facteurs de croissance susceptibles de réguler et influencer le comportement des cellules dermiques : les fibroblastes (Ghahary et al., 2001).35 Matériels et Méthodes
Production de biomasse non élicitée : selon l'exemple 2a Préparation de biomasse élicitée Du milieu de Murashige & Skoog est préparé sans facteurs de croissance (kinétine et 24D) Ce milieu est ajusté à pH 6 par l'ajout de KOH suivi d'un autoclavage de 20 min à 121°C (p = 1 bar). Ce milieu est ensuite inoculé au 1l5ème du volume à l'aide 10 de suspension cellulaire issue d'une culture de propagation. Les conditions d'élicitation sont réalisées immédiatement après par l'ajout stérile de solution concentrée dans du DMSO de kinétine, de 6-benzylaminopurine (BAP ou (N-(phénylméthyl)-7H-purin-6- amine) et d'agents éliciteurs acide acétylsalicylique et 15 méthyl-jasmonate. Il en résulte un milieu EMS d'élicitation (Cf Tableau 4). La culture élicitée est ensuite maintenue pendant 15 jours sur une table d'agitation à 115 RPM à l'obscurité à 29°C. La biomasse fraîche est ensuite récoltée et essoré sur entonnoir buchner avant d'être broyée, centrifugée et le surnageant 20 stabilisé par lyophilisation. 25 30 24 35 5 Tableau 4. Milieu EMS qui est le milieu de Murashige Skoog modifié servant pour la culture en condition élicitée des cellules d'arganier en suspension en erlenmeyer. Milieu EMS - milieu d'élicitation NH4NO3 1,650 g/L KNO3 1,900 g/L CaC12.2H2O 0,44 g/L Micro MgSO4.7H2O 0,37 g/L éléments KH2PO4 0,17 g/L K1 0,83 mg/L H3BO3 6,2 mg/L MnSO4.4H2O 22,3 mg/L ZnSO4.1H2O 6,62 mg/L Na2MoO4.2H2O 0,25 mg/L Micro CuSO4.5H2O 0,025 mg/L éléments CoC12.6H2O 0,025 mg/L FeSO4.7H2O 27,8 mg/L Na2EDTA.2H2O 37,8 mg/L myo-Inositol 100 mg/L Acide nicotinique 0,5 mg/L Pyridoxine-HC1 0,5 mg/L Vitamines Thiamine-HC1 0,5 mg/L Glycine 2 mg/L 6-benzylaminopurine (HAM 1 mg/L Facteurs (hormones de croissance} Kinétine 1 mg/L Acide acétylsalicylique 100 PM Agents Méthyl-jasmonate 100 PM éliciteurs Saccharose 35 g/L Sources Pyruvate de Na 3 g/L carbonées Les kératinocytes HaCaT sont traités 5h avec les différents extraits, puis les cellules sont incubées pendant 24h dans du DMEM à 37°C. Le TGF-f31 est dosé dans les surnageants de culture avec un kit ELISA.
Dans un deuxième mode de fonctionnement du dispositif d'éclairage et de signalisation représenté à la figure 8, l'actionneur 34 est dans une deuxième configuration et un troisième faisceau lumineux produit par le premier système optique se retrouve relevé, plus orienté vers le haut, par rapport au premier faisceau lumineux. Ce troisième faisceau lumineux est une composante d'un faisceau lumineux de type signalisation diurne. La composante complémentaire du faisceau lumineux de type signalisation diurne, à savoir le deuxième faisceau lumineux, est produite par le deuxième système optique.
Ainsi, visuellement, les signatures allumées, de jour et de nuit, du dispositif d'éclairage et de signalisation peuvent être identiques ou très ressemblantes. En effet, entre les deux modes de fonctionnement, la surface visible allumée du premier système optique n'a pas varié ou a très peu varié (variation d'inclinaison de quelques degrés du réflecteur 32). La surface visible allumée du deuxième système optique est identique dans les deux modes de fonctionnement.
Dans cette deuxième variante du deuxième mode de réalisation, les moyens de modification des conditions de fonctionnement du deuxième système optique peuvent être identiques aux moyens de modification des conditions de fonctionnement décrits précédemment pour le deuxième mode de réalisation.
Les moyens de modification des conditions de fonctionnement du premier système optique comprennent l'actionneur 34. Cet actionneur permet de modifier l'orientation du faisceau lumineux produit par le premier système optique et/ou de modifier la forme du faisceau lumineux produit par le premier système optique. Par ailleurs, les moyens de modification des conditions de fonctionnement du premier système peuvent aussi comprendre des moyens électriques d'interruption et/ou des moyens de mise en forme de signaux électriques d'alimentation des sources de lumière de sorte à moduler l'éclairement produit par le premier système optique.
Selon une troisième variante de réalisation du deuxième mode de réalisation, décrite ci-après en référence aux figures 9 et 10, l'actionneur 44 permet de déplacer l'ensemble des éléments optiques du premier système optique 49, à savoir la source de lumière 43 et le réflecteur 42 et éventuellement la lentille optique et une plieuse.
Dans les deuxièmes et troisièmes variantes du deuxième mode de réalisation, l'actionneur permet de relever le premier faisceau de type code pour le transformer en un troisième faisceau éclairant plus haut. Cependant, ce troisième faisceau peut ne pas suffire pour remplir toutes les contraintes d'éclairement définies par la grille photométrique réglementaire d'un faisceau de signalisation diurne. Ainsi, pour compléter cette grille règlementaire, on utilise un deuxième faisceau lumineux généré par le deuxième système optique.
23 Un mode d'exécution d'un procédé de fonctionnement d'un dispositif d'éclairage et de signalisation d'un véhicule automobile est décrit ci-après.
Dans un premier mode de fonctionnement (utilisé la nuit), on active le premier système optique et on fixe les conditions de fonctionnement du premier système optique, de sorte qu'il produise un premier faisceau lumineux à coupure, notamment un feu de croisement. De plus, dans ce premier mode de fonctionnement, on active le deuxième système optique et on fixe les conditions de fonctionnement du deuxième système optique, de sorte qu'il produise un quatrième faisceau lumineux.
Dans un deuxième mode de fonctionnement (utilisé le jour), on active le premier système optique et on fixe ses conditions de fonctionnement, de sorte qu'il produise un troisième faisceau lumineux. Les troisième et deuxième faisceaux lumineux générés sont tels que leur union constitue un faisceau lumineux résultant de type signalisation diurne.
Le deuxième système optique peut être éteint lorsque le premier système optique génère le premier faisceau lumineux.
Comme vu précédemment, les conditions de fonctionnement du premier système optique, de sorte qu'il produise le troisième faisceau lumineux, peuvent comprendre une sous-alimentation du premier système optique et/ou un allumage ou une extinction de certaines sources de lumière du premier système optique.
Comme vu précédemment, les conditions de fonctionnement du deuxième système optique, de sorte qu'il produise le quatrième faisceau lumineux, peuvent comprendre une sous-alimentation du deuxième système optique, le deuxième système optique produisant par exemple, sous alimentation nominale, un deuxième faisceau lumineux procurant en combinaison avec le troisième faisceau lumineux un faisceau de type DRL. Les conditions de fonctionnement du deuxième système optique, de sorte qu'il produise le quatrième faisceau lumineux, peuvent aussi comprendre un allumage ou une extinction de certaines sources de lumière du deuxième système optique.
Comme vu précédemment, les conditions de fonctionnement du premier système optique, de sorte qu'il produise le troisième faisceau lumineux, peuvent comprendre un mouvement d'au moins un élément du premier système optique, de sorte que le troisième faisceau lumineux soit déduit du premier faisceau lumineux par au moins une déviation du premier faisceau lumineux vers le haut.
Comme vu précédemment, les conditions de fonctionnement du premier système optique, de sorte qu'il produise le troisième faisceau lumineux, peuvent comprendre un mouvement d'au moins un élément du premier système optique, de sorte que le faisceau lumineux produit par le premier système optique impacte un élément diffusant et/ou réfléchissant. Pour ce faire, le faisceau lumineux produit par le premier système optique peut être dévié vers le bas pour impacter l'élément réfléchissant et/ou diffusant.
Pour ce faire, on peut activer un actionneur de correction du premier système optique pour contribuer au mouvement de l'au moins un élément du premier système ou obtenir le mouvement de l'au moins un élément du premier système. Alternativement ou complémentairement, on peut activer un actionneur spécifique, distinct d'un actionneur de correction du premier système, pour contribuer au mouvement de l'au moins un élément du premier système ou obtenir le mouvement de l'au moins un élément du premier système.
Dans ce cas, l'actionneur spécifique permet de déplacer un réflecteur du premier système relativement à une source de lumière du premier système ou de déplacer une lentille optique et/ou une plieuse relativement à la source de lumière et/ou relativement au réflecteur.
Les motifs 463, 453 et 443 peuvent également être convergents, de manière à faire converger les rayons à faible distance, ce qui permet d'étaler le faisceau d'une manière similaire à celle obtenue avec des motifs divergents lorsqu'on l'observe à distance.
Dans un autre mode de réalisation 17 représenté à la figure 9, le dispositif optique de véhicule automobile comprend deux sources surfaciques de lumière 21, 22. Ces deux sources peuvent être disposées côte à côte. Elles peuvent émettre de la lumière principalement selon deux directions distinctes 51, 52. Le système optique 4 permet de dévier et de mettre en forme les faisceaux de rayons lumineux émis par chacune des deux sources. Les faisceaux de rayons lumineux ainsi obtenus peuvent être globalement orientés selon la même direction 6. Alternativement, les faisceaux lumineux issus de la première source 21 peuvent être déviés globalement selon une première direction et les faisceaux lumineux issus de la deuxième source 22 être déviés globalement selon une deuxième direction, ces première et deuxième directions étant distinctes.
La partie du système optique en regard de la première source de lumière pourra présenter des caractéristiques optiques différentes de la partie du système optique en regard de la deuxième source de lumière. De préférence, dans un tel cas, les variations de caractéristiques pourront être progressives pour éviter toute brusque variation d'aspect du optique de véhicule automobile. Comme on peut le voir sur cet exemple représenté en figure 9, en prenant deux sources lumineuses émettant perpendiculairement à leur surface, on peut disposer celles-ci, jointivement ou non, en orientant leur plan d'émission différemment. Le système optique 4, va permettre de conférer la direction globale voulue au faisceau provenant de chaque source indépendante. Il est ainsi possible de s'affranchir des contraintes d'orientation de la source surfacique. Ainsi la disposition des sources surfaciques peut être effectuée en fonction de la conception du dispositif optique de véhicule automobile selon l'invention, et particulièrement lorsqu'il s'agit d'un dispositif d'éclairage et/ou de signalisation, par exemple pour suivre son galbe. Le système optique sera ensuite adapté pour conférer la direction globale et l'étalement souhaité des faisceaux lumineux. Un tel mode de réalisation permet également de donner un aspect éteint différent de l'aspect allumé, la surface de la source surfacique, par exemple la diode électroluminescente organique, n'étant pas perçue pareillement selon qu'elle est allumée ou éteinte, surtout lorsque elle émet de façon fortement directrice. Ce dernier mode de réalisation peut bien entendu être combiné avec les autres modes de réalisation décrits précédemment.