Protocole Des kératinocytes humains à confluence ont été mis ou non (contrôle négatif) au contact avec l'extrait de Globularia cordifolia pendant 24 heures jusqu'à obtenir une confluence. A ce stade, ces cellules reçoivent et métabolisent la sonde DCFH mise dans un tampon, la sonde peut alors réagir avec les peroxydes intracellulaires. Le milieu est alors remplacé par un milieu contenant ou non l'extrait de Globularia cordifolia et l'agent oxydant modèle peroxyde d'hydrogène (ni le milieu ni l'extrait de Globularia cordifolia ne réagissent directement avec H2O2). Une lecture de fluorescence est effectuée pour estimer le niveau de peroxyde intracellulaire ayant réagi avec la sonde. Une quantification du nombre de cellules est réalisée par une méthode de marquage de noyau (Hoechst 33258). Les résultats sont donnés dans le tableau 10 ci-après. Tableau 10 : Peroxyde % Variation ; significativité intracellulaires (UFA/103 tells) Contrôle non 37,3 ± 2,2 Référence 1 peroxydé Kératinocytes ; Contrôle négatif 1099 ± 24,0 X29 ; p<0, 01 Référence 2 n=5 avec H202 H2O2 et extrait de Globularia 137 +/- 4,0 - -88°/U; p<0,01 cordifolia UFA : Unités fluorescence arbitraires ; Contrôle positif Trolox à 500µm : -91%, p<0, 01. L'extrait de Globularia cordifolia selon l'invention permet de préserver le contenu intracellulaire de l'augmentation des peroxydes induite par le peroxyde d'hydrogène. Ce résultat traduit une réduction des dégâts générés par des agents radicalaires ou des espèces oxygénées réactives, suite au stress oxydatif, en présence de l'extrait de Globularia cordifolia. b. SOD et Catalase Les enzymes antioxydantes telles que la catalase ou la SOD, produites par notre organisme, tout comme les antioxydants, vitamines E et C, caroténoïdes,... qui sont puisés dans notre alimentation, aident à lutter contre les effets délétères des radicaux libres et des espèces réactives oxygénées. Il y a donc un intérêt clair à en accroître leur quantité en stimulant leur synthèse. Un essai préliminaire portant sur le potentiel antioxydant cutané a permis de constater que des kératinocytes humains traités avec le peroxyde d'hydrogène, modèle de stress oxydatif, ont vu leur activité intracellulaire en SOD (superoxyde dismutase) augmenter de +22%* (p<0,01) par rapport au contrôle négatif, en présence de l'extrait de Globularia cordifolia. * Contrôle positif Trolox â 0,012% : SOD +21%, p<0,01. Par ailleurs, des expiants de peau abdominale (femme ; 58 ans) ont reçu 1 application topique par jour pendant 6 jours d'une crème contenant l'extrait de Globularia cordifolia ou son placebo. A l'issu de ce traitement, les expiants ont été préparés et marqués à l'aide d'anticorps fluorescents anti-SOD d'une part ou anti-Catalase d'autre part. La quantification a été faite à l'aide d'un système d'analyse d'image après prise de photos (50 photos / cas). Les résulats sont donnés dans les tableaux 11 et 12 ci-dessous. Tableau 11 : SOD % Variation ; (Intensité Fluorescence). significativité Explants de peau; Placebo 6,31 f 2,00 Référence n=5 Extrait de Globularia +36% cordifolia 8,58 1,40 p<0,01 Tableau 12 : Catalase °/U Variation ; (Intensité Fluorescence). significativité Explants de peau; Placebo 6,87 ± 2,90 Référence n=5 Extrait de Globularia +780/0 cordifolia 12,24 3,70 p<0,01 L'extrait de Globularia cordifolia permet donc de stimuler la production de SOD et de la Catalase, indépendamment de tout stress. Ces stimulations « spontanées », retrouvées dans l'Hormésis, permettent à la peau de préparer des défenses appropriées contre des stress pouvant subvenir ultérieurement. c. Protéasome et glycation Les protéines endommagées par les glycations, oxydations (protéines carbonylées) ou conjugaisons avec les peroxydes lipidiques, tendent à s'accumuler dans la cellule lors du vieillissement. Leur élimination est assurée en routine par le protéasome qui limite leur effet néfaste pour l'homéostasie cellulaire. Cependant l'activité du protéasome diminue du fait même de ces accumulations de molécules oxydées, de celle de la lipofuscine, un déchet lipoprotéique, ou avec le temps, provoquant ainsi par effet retour une augmentation des protéines endommagées. Le maintien de l'activité du protéasome est une des conséquences positives de l'hormésis car il complète l'arsenal des défenses anti-âges de la cellule. Il permet d'éliminer les déchets qui en s'accumulant provoquent la fabrication de produits pré-inflammatoires et qui de plus, opacifient les cellules.