Les auteurs ont également étudiés la dégradation thermique du FGF 1 et 2 dans ce même modèle Des solutions de FGF, en présence ou non d'héparine, sont incubées à 0°C, 20°C, 37°C, 60°C et 90°C pendant différents temps : 1h, 24h, 7, 14, 30 et 60 jours. Les résultats obtenus montrent que l'activité du FGF-2 est fonction de la température. L'augmentation de cette dernière provoque une diminution de l'activité du FGF-2. Notamment, à 60°C et 90°C, aucune activité n'est détectée, et ceci même en présence d'héparine. Par contre, pour les autres températures étudiées, l'héparine permet une protection dans le temps de l'activité du io FGF-2. Enfin, la dégradation enzymatique du FGF-1 et 2 a été étudiée face à la trypsine et à la chymotrypsine. Après 3 heures d'incubation à 37°C de solutions de FGF en présence ou non d'héparine, une électrophorèse sur gel à 18% de polyacrylamide est effectuée afin de visualiser le FGF non 15 dégradé. Le temps d'incubation permet de dégrader la totalité du FGF présent dans les échantillons, que ce soit avec la trypsine ou la chymotrypsine. Par contre, la présence d'héparine permet de retrouver la bande à 18 kDa relative au FGF-2 signifiant une protection totale du FGF-2 par l'héparine. 20 De la même façon, il a été montré que les GAG stabilisaient la conformation active du FGF-2, le protégeant de la dénaturation acide ou encore thermique et en augmentant l'interaction spécifique avec des récepteurs cellulaires spécifiques. En présence d'héparine les FGFs sont plus stables lors du stockage et plus résistants aux conditions 25 dénaturantes et protéolytiques. Compte tenu du rôle important du FGF-2 en thérapeutique, dans la cicatrisation, et la réparation tissulaire, et de sa sensibilité à différents stress, tels que la température et la protéolyse enzymatique, des équipes ont étudié les effets d'un apport supplémentaire de FGF-2 ou encore la protection du FGF-2 par des molécules naturelles ou de synthèse. En effet, Yamanaka, en 2005 (Basic fibroblats growth factor treatment for skin ulcerations in scieroderma, cutis, 2005 ; 76 :373-376), décrit l'utilisation topique de FGF-2 recombinant pour traiter des ulcères de la peau. Le FGF-2 stimule les récepteurs au FGF des fibroblastes et induit une activation des fibroblastes et la prolifération vasculaire. Pendant le processus de réparation, pendant la phase restructurante, le FGF-2 agirait aussi sur la prolifération des kératinocytes. ia Des dérivés de dextran ont été synthétisés (Tardieu, 1992, cité précédemment) pour potentialiser l'activité du FGF-2 (activité mitogénique des fibroblastes), en le protégeant contre la chaleur, la dénaturation au pH, la dégradation enzymatique (trypsine et chymotrypsine). Ces dérivés présentent une plus grande protection du FGF-2 que l'héparine, ce qui is permet d'avoir des composés présentant une alternative à l'utilisation de l'héparine qui présente une forte activité anti-coagulante. Ils constituent des stabilisateurs, potentialisateur et protectant de la matrice pour des formulations pharmaceutiques agissant sur la réparation tissulaire. De plus, Franck et ai, en 2004 (J. Biomater Sci. Polymer Edn. Vol. 15. N°11, 20 pp. 1463-1480(2004)), ont montré que d'autres dérivés de dextrans pouvaient en culture de fibroblastes augmenter la prolifération des cellules et promouvoir l'effet du facteur de croissance sur la croissance cellulaire. Enfin, Sylvia Calliec-Jouault et al, (Exopo/ysaccharides produced by bacteria iso/ated from deep-sea hydrothermal vents : new agents with 25 therapeutic potentia/, Pathologie Biologie, 52, 127-130 (2004)), traitent de l'utilisation d'un exopolysaccharide particulier néosynthétisé par une bactérie qui a été utilisée comme implant de comblement osseux dans un modèle expérimental chez le rat. Après 15 jours les animaux montrent une cicatrisation complète avec aucune réaction inflammatoire observée. Ce résultat serait expliqué par l'interaction de l'exopolysaccharide avec les médiateurs solubles dont FGF-2 ; ce qui permettrait d'augmenter l'activité proliférative du FGF-2 et ainsi de favoriser le phénomène de cicatrisation. Cet exopolysaccharide est utilisé pour la cicatrisation dentaire. La peau : FGF-2, protéoglycanes et vieillissement Dans la peau, le FGF-2 se trouve au niveau de l'épiderme, de la jonction dermo-épidermique (IDE), du derme, de l'hypoderme et des lo capillaires ; il possède un large spectre d'activité. Il assure la prolifération des fibroblastes au sein du derme leur permettant ainsi de synthétiser les macromolécules de la matrice, essentielles à l'intégrité de la peau, mais il agit également sur d'autres cellules de la peau. La prolifération des mélanocytes est en effet contrôlée par ce FGF-2 qui constitue également 15 un promoteur de la formation des capillaires. Au niveau des fibroblastes, outre leur prolifération, le FGF-2 augmente également le taux d'ARNm des gènes codant pour la hyaluronane synthase et ainsi accroît la production de hyaluronane, principal GAG du derme. Lors de blessures, le FGF-2 est un important acteur du phénomène 20 de cicatrisation. Il agit au niveau des fibroblastes, toujours en augmentant leur prolifération, mais aussi sur les kératinocytes afin d'inhiber l'expression de la collagènase-1 et ainsi permettre à la peau de se reconstruire plus rapidement. Cette action lors de la cicatrisation ne se fait pas avec l'héparane sulfate comme transporteur/réservoir mais avec le 25 dermatane sulfate. L'expression du FGF-2 est alors effectuée principalement par les kératinocytes, les macrophages et les fibroblastes. Le temps de demie vie du FGF-2 in vitro a été évalué à 24 heures environ à 37°C et à pH neutre (SOMMER & RIFKIN, Journal of cellular physio%ogy5 138:215-220 (1989)). Ainsi le FGF-2 constitue une importante cytokine de la peau du fait des nombreuses fonctions qu'elle remplit. Les protéoglycanes de la peau et leur répartition ont été étudiés. Les principaux GAG révélés pour leur capacité d'interaction avec le FGF-2 se retrouvent dans la peau. La répartition quantitative et qualitative des GAG a été déterminée comme suit : acide hyaluronique (31%), chondroïtine sulfate (25%), kératane sulfate (24%), dermatane sulfate (20%) et enfin héparane sulfate (18%), L'héparane sulfate contenu dans le derme permet un stockage du FGF-2 présent. ~o Au cours du vieillissement, la peau subit de nombreuses modifications physiologiques. Outre les rides qui constituent les marques les plus visibles, ce sont de profonds changements structuraux qui apparaissent. Le derme notamment s'atrophie, conséquence notamment d'une réduction du nombre de fibroblastes et de leur pouvoir de synthèse 15 entraînant des modifications des macromolécules de la matrice extracellulaire. Une diminution de la synthèse des glycosaminoglycanes est constatée impliquant également une réorganisation des protéoglycanes présents. Des études sur des fibroblastes en culture ont permis de montrer que la synthèse d'acide hyaluronique diminuait fortement au 20 cours du vieillissement alors que celle des kératanes et chondro aines sulfates augmentait. Quant au dermatane et héparane sulfate, leur synthèse ne cesserait de diminuer. Cette diminution ne permettrait plus de stocker et donc de protéger le potentiel endogène de FGF-2.