La figure 3 illustre les changements pathologiques de la surface du foie observés à l'oeil nu de chaque groupe. Dans le groupe sain, la surface du foie était lisse (Figure 3A) ; tandis que dans le groupe modèle traité avec CC14, le foie était de couleur jaune, avec une surface rugueuse, inégale et dure et présentant des gonflements (figure 3B). Après, les rats recevant de la silymarine ou diverses quantités de cyclohexénone de l'Antrodia camphorata, l'ampleur des changements pathologiques du foie était sensiblement plus faible que celle du groupe modèle (figures 3C à 3F), montrant cependant un gonflement et des conditions pathologiques. Parmi ceux-ci, les rats alimentés avec de la cyclohexénone en une quantité de 3000 mg/kg de masse corporelle ont démontré les plus légers gonflements et les plus légères conditions pathologiques (figure 3F). Ceci illustre le fait que la cyclohexénone de l'Antrodia camphorata peut améliorer de manière efficace les symptômes de lésion en surface induits par CC14 sur les surfaces du foie. Tableau 3 : Evaluation histologique de lésion du foie induite par CC14 chez les rats des différents groupes Groupe Lésion du foie Evalua- Fibrose du foie Évalua tion tion + ++ +++ +++ - + ++ +++ ++++ + A (sain) 125) - - - - 0,0 12 - - - - 0,0 B (témoin - - 2 3 4 3,2* -- 2 3 4 3,2* modèle, 20 % de CC14) C (témoin - 2 1 4 3 2,8* - 2 1 5 3 2,8* positif, sily- marine) Groupes de traitement Cyclohexénone de l'Antrodia camphorata (mg/kg) D. 5 6 - 1 1,8*a - 6 4 1 1 1,8*a 300 mg/kg E. 3 6 1 1 2,0*a 2 1 4 3 1 2,0*a 1000 mg/kg* F. 2 6 1 2 2,3*a - 2 4 3 2 2,5* 3000 mg/kg 1) Evaluation de la pathologie d'une maladie chronique du foie, de l'ampleur de l'inflammation, de la dégénération vacuolaire, de la nécrose des cellules du foie et de la prolifération de la voie biliaire principale a été évaluée de manière semiquantitative selon Jonker et al. 1992 sur une échelle de 0 à 4 (niveau 0 = -, aucun ; niveau 1 = +, léger ; niveau 2 = ++, moyen ; niveau 3 = +++, modéré et ni-veau 4 = ++++, remarquable). 2) Evaluation d'une maladie chronique du foie chez les rats = nombre de rats patho-25 logiques sur le nombre total de rats. 3) La fibrose a été évaluée selon Gabriele et al. (1997) et Wangs et al. (1999) sur une échelle de 0 à 4 : niveau 0, aucune fibrose, tissu du foie sain ; niveau 1, prolifération du collagène, fibrose portale sans septum (prolifération de radiation de fibre dans la veine centrale ou la région périportale) ; niveau 2, septum incomplet entre la veine centrale et la région périportale (septum sans pontage) ; niveau 3, fibrose septale intacte et pontage, beaucoup de nodules dans le foie, le septum est mince ; et niveau 4, septum épais et complet, cirrhose définie. 4) Evaluation de la fibrose du foie chez les rats = nombre de rats pathologiques sur le nombre total de rats. 5) nombre de rats pathologiques. * : P < 0,05, illustrant une différence significative entre le groupe sain et d'autres groupes testés après une analyse avec le test de Student. a : P < 0,05, illustrant une différence significative entre le groupe de modèle et d'autres groupes testés après une analyse avec le test de Student. En se rapportant maintenant à la figure 4 et au tableau 3, le figure 4 illustre les changements pathologiques de la lésion du foie induite par CC14. Le foie a été gonflé au niveau des sections de tissu, avec une division mitotique abondante et a un nombre accru de cellules de Kuffer (Figure 4A et figure 4B). Des vacuoles sont apparues, de nombreux nodules ont été trouvées et ont pour conséquence une cirrhose du foie dans des conditions sérieuses (figure 4C). Le foie du groupe modèle présentait de manière évidente la condition la plus sé- rieuse de lésion du foie, principalement à des niveaux modérés à remarquables avec une évaluation de 3,2 selon Jonker et al. (tableau 4). La silymarine sur une lésion du foie induite par CC14 avait une évaluation de 2,8, alors que l'étendue de la lésion du foie dans tous les groupes de traitement alimentés avec diverses quantités de cyclohexénone de l'Antrodia camphorata a été améliorée. Les effets remarquables ont été observés avec des dosages de 300 mg/kg et de 1000 mg/kg, principalement distribués avec des niveaux légers à modérés avec une évaluation de 1,8 et 2,0, respectivement. En se rapportant maintenant à la figure 5 et au ta- bleau 3, la figure 5 illustre les changements pathologiques d'une fibrose du foie induite par CC14 chez des rats. Le foie sain ne présente aucune fibrose, et appartient au niveau 0 selon Gabriele et al. (1997) et Wangs et al. (1999) (Figure 5A) ; tandis que divers niveaux de fibrose ont été observés après l'induction par CC14 : niveau 1, prolifération du colla- gène, fibrose portale sans septum (prolifération de radiation de fibre dans la veine centrale ou la région périportale) (Figure 5B) ; niveau 2, septum incomplet entre la veine centrale et la région périportale (septum sans pontage) (Figure 5C) ; niveau 3, fibrose septale intacte et pontage, beaucoup de nodules dans le foie, le septum est mince (Fi- gure 5D) ; et niveau 4, septum épais et complet, cirrhose définie (Figure 5E) . Le collagène dans le foie semblait être vert après la coloration avec une solution trichromique de Masson (figure 5F). Le foie du groupe modèle a démontré une condition de fibrose du foie la plus sérieuse, principalement avec un niveau 3 et un niveau 4 avec une évaluation de 3,2 (tableau 3). La silymarine sur une fibrose du foie induite par CC14 avait une évaluation de 2,8, alors que l'étendue de la fibrose du foie dans tous les groupes de traitement alimentés avec diverses quantités de cyclohexénone de l'Antrodia camphorata a été améliorée. Les effets remarquables ont été observés avec un dosage de 300 mg/kg, principalement distribué avec des niveaux 1 à 2 avec une évaluation de 1,8. Ces résultats illustrent les effets bénéfiques de la cyclohexénone de l'Antrodia camphorata chez des rats traités avec CC14 en ce qui concerne une lésion du foie et une fibrose du foie. Les rats traités avec CC14 alimentés avec des quantités différentes de cyclohexénone de l'Antrodia camphorata ont tous démontrés de meilleurs effets que la silymarine. Et le meilleur effet a été obtenu avec un dosage de 300 mg/kg. (4) Indicateurs de fonction du foie L'alanine aminotransférase (ALT) et l'aspartate aminotransférase (AST) sont des enzymes importantes dans la synthèse d'acide aminé pour les organes humains tels que le foie, le coeur, un muscle et analogues. Ces enzymes maintiennent de faible teneur en sérum dans des conditions normales avec des niveaux de 40 U/L pour l'ALT et de 50 U/L pour l'AST. L'augmentation dans le sérum de la libération d'ALT et d'AST est associée à l'inflammation des cellules des organes mentionnés ci-dessus, qui est provoquée par le changement de la perméabilité des cellules ou de la rupture des cellules. Par conséquent les niveaux d'ALT et d'AST sont de bons indicateurs d'une inflammation du foie et d'une lésion du foie. Tous les rats ont été sacrifiés à la fin de la 8ème semaine d'expérience, des échantillons de sang ont été recueillis au niveau de l'aorte abdominale de façon à évaluer les paramètres biochimiques du foie. Cinq millilitre de sang ont été transférés dans un tube et centrifu- gés à 775 xg pendant 15 min. 0,5 ml de sérum a été analysé sur un analyseur Express plus automatic clinical chemistry analyzer (Chiron diagnostics corporation, OH, Etats-Unis) avec des kits commerciaux d'ALT (Bayer diagnostics, numéro de cat. E36941), d'AST (Bayer diagnostics, numéro de cat. E37041) et de cholestérol (Bayer diagnostics, numéro de cat. E33940). Toutes les valeurs sont exprimées sous la forme d'une moyenne un écart type, lesquelles ont été évaluées en utilisant une analyse de la variance unidirectionnelle. Ceux avec des différences significatives ont en outre été testés avec le test de plus petite différence significative ou le test de Student (t-test) de façon à corn-parer les groupes de traitement avec de la cyclohexénone et les groupes sains, les groupes de témoin positif et modèle. P < 0,05 a été choisi comme critère pour une signification statistique dans tous les cas. Les résultats sont illustrés dans le tableau 4. Tableau 4 : Indicateurs de fonction du foie d'une lésion du foie in-15 duite par CC14 chez les rats de différents groupes Groupe ALT (U/L) AST (U/L) Cholestérol (mg/dl) A (sain) 50,7 9,11 110,9 25,1 63,8 12,2 B (témoin mo- 453,4 120,8* 470,4 310,1* 66,7 8,7 dèle, 20 % de CC14) C (témoin positif, 180,8 94,6* 249,5 105,0* a 69,5 14,3 silymarine) Groupes de traitement Cyclohexénone de l'Antrodia camphorata (mg/kg) D. 300 mg/kg 226,6 138, 7* a 323,4 189,0* 63,71 15,1 E. 1000 mg/kg 181,7 78,4* a 283,2 144, 2* 69,6 14,8 F. 3000 mg/kg 206,0 98,4* a 311,7 99,6* 62,1 16,2 1) toutes les valeurs sont exprimées sous la forme d'une moyenne un écart type en utilisant le logiciel MS-Excels * : P < 0,05, illustrant une différence significative entre le groupe sain et d'autres groupes testés après une analyse avec le test de Student. 20 a : P < 0,05, illustrant une différence significative entre le groupe de modèle et d'autres groupes testés après une analyse avec le test de Student. Les niveaux d'ALT, d'AST et de cholestérol dans le groupe modèle traité avec CC14 étaient tous plus élevés que ceux dans le groupe sain. Il a été démontré que CC14 entraîne une lésion du foie, qui a mené 25 à une augmentation des activités enzymatiques. Le niveau du cholestérol a également augmenté mais pas trop. Les augmentations d'ALT, d'AST et du cholestérol du groupe de témoin positif alimenté avec de la silymarine sont inférieures à celles du groupe modèle étant donné que la silymarine a des effets de protection du foie. D'autre part, les rats traités avec CC14 alimentés avec une quantité différente de cyclohexénone de l'Antrodia camphorata ont présenté des niveaux plus élevés d'ALT, d'AST et de cholestérol que ceux du groupe sain, mais toutes les augmentations sont significativement moins importantes que celles du groupe modèle (P < 0,05). Les diminutions d'ALT et d'AST par comparai-son au groupe modèle dans le groupe de traitement avec 1000 mg/kg de cyclohexénone étaient les plus évidentes (ALT : 181,7 78,4 U/L, et AST : 283,2 144,2 U/L). Ces résultats montrent que 300 mg/kg, 1000 mg/kg et 3000 mg/kg de cyclohexénone de l'Antrodia camphorata peuvent diminuer de manière efficace la libération d'ALT et d'AST sur les rats traités avec CC14. (5) Enzymes antioxydantes dans le foie Le système d'enzymes antioxydantes comprenant la glutathione (GSH), la glutathione peroxydase (GSHPx), la catalase (CAT), la superoxyde dismutase (SOD) et analogues joue un grand rôle dans la protection des organismes d'une lésion oxydante et d'une diminution du stress oxydant lors d'une augmentation des radicaux libres. Cette expérience a détecté les teneurs en enzymes antioxydantes après une lésion du foie induite par CC14 chez les rats et a évalué la capacité antioxy- dante de la cyclohexénone de l'Antrodia camphorata. Le foie stocké à -80 C tel que décrit ci-dessus a été immergé dans une solution tampon PBS (solution saline tamponnée avec un phosphate, pH = 7,4) contenant 0,16 mg/ml d'héparine. Des globules rouges ont été retirés du tissu. Le foie a été préparé sous la forme de 1,0 g de tissu/ 10 ml d'homogénéisat tamponné dans 50 mM de phosphate frais et réfrigéré, 1 mM de tampon EDTA (pH = 6-7) en utilisant un homogénéisateur Polytron (en position 5, sonde PT 10, Brinkmann Instruments, Westbury, NY) pendant une minute. La solution a été centrifugée à 10 000 xg pendant 15 min à 4 C. La concentration en protéine a été déterminée avec un kit de dosage de protéine BCA (Pierce, IL, Etats-Unis) à 550 nm en utilisant un lecteur de dosage par méthode ELISA (MAX ELISA Reader, Quant, Bio-Tek instrument, Vermont, Etats-Unis). Des kits commerciaux de glutathione (GSH), de glutathione peroxydase (GSHPx), de catalase (CAT), de superoxyde dismutase (SOD) (kit de dosage de glutathione, numéro de cat. 703002 ; Kit de dosage de glutathione peroxydase, numéro de cat. 703102 ; Kit de dosage de Catalase, numéro de cat. 707002 ; Kit de dosage de superoxyde dismutase, numéro de cat. 706002) ont été achetés auprès de Cayman Chemical Company (MI, Etats-Unis) et analysés par une lecture à 405 nm, à 340 nm, à 540 nm et à 450 nm en utilisant un lecteur de dosage par méthode ELISA. L'étape de déprotéinisation a été effectuée pour tous les dosages mentionnés ci-dessus à l'exception du dosage de SOD. Des protéines ont été précipitées par le mélange avec un volume égal d'acide métaphosphorique à 10 % (en masse par volume), mélangées avec un vortex de manière uniforme, centrifugées à 2 000 xg pendant 2 minutes. Le surnageant a été retiré du dosage de l'enzyme. Toutes les valeurs sont exprimées sous la forme d'une moyenne un écart type, lesquelles ont été évaluées en utilisant une analyse de la variance unidirectionnelle. Ceux avec des différences significatives ont en 15 outre été testés avec le test de plus petite différence significative ou le test de Student (t-test) de façon à comparer les groupes de traitement avec de la cyclohexénone et les groupes sains, les groupes de témoin positif et modèle. P < 0,05 a été choisi comme critère pour une signification statistique dans tous les cas. Les résultats sont illustrés dans le 20 tableau 5. Tableau 5 : Effets de la cyclohexénone de l'Antrodia camphorata sur les enzymes antioxydantes chez les rats témoins après une lésion du foie traités par CC14 Groupe GSH (uM/mg GSHPx Catalase (U/mg USODde de protéine) (nmol/min/ml) de protéine) ( / g protéine) A (sain) 31,5 3,81 11,4 2,8 8,9 1,4 0,65 0,22 B (témoin mo- 31,5 6,5 9,9 2,5 9,6 1,6 0,80 0,41 dèle, 20 % de CC14) C (témoin positif, 30,5 6,5 9,6 3,0 9,2 1,4 0,68 0,23 silymarine) Cyclohexénone de Groupes (mg/kg) de traitement l'Antrodia camphorata D. 300 mg/kg 30,3 3,2 9,6 1,7 9,1 1,0 0,47 0,17*a E. 1000 mg/kg 25,2 1,8*a 11,2 3,4 10,1 1,4* 0,52 0,28 F. 3000 mg/kg 26,7 4,3*a 10, 6 3,1 9,8 0,9 0,73 0,23 GSH : activité de la glutathione (uM/mg de protéine) ; GSHPx : activité de la glutathio- 25 ne peroxydase (nmol/min/ml) ; une unité est définie comme la quantité d'enzyme en-traînant l'oxydation de 1 nmol de NADPH en NADPH+ par minute à 25 C ; catalase et SOD : U/mg de protéine. 1) toutes les valeurs sont exprimées sous la forme d'une moyenne un écart type en utilisant le logiciel MS-Excels * : P < 0,05, illustrant une différence significative entre le groupe sain et d'autres groupes testés après une analyse avec le test de Student. a : P < 0,05, illustrant une différence significative entre le groupe de modèle et d'autres groupes testés après une analyse avec le test de Student. En se rapportant maintenant au tableau 5, les niveaux des enzymes antioxydantes dans le groupe modèle traité avec CC14 n'étaient pas significativement différents de ceux dans le groupe sain ; les niveaux dans le groupe de témoin positif alimenté par de silymarine n'étaient pas non plus significativement différents de ceux dans le groupe sain ou dans le groupe modèle. Relativement, le niveau de SOD dans le groupe D (le groupe alimenté avec 300 mg/kg de cyclohexénone) était sensiblement inférieur à tous les autres groupes. Les niveaux de GSHPx et de CAT dans le groupe E (le groupe alimenté avec 1000 mg/kg de cyclohexénone) et le groupe F (le groupe alimenté avec 3000 mg/kg de cyclohexénone) étaient plus élevés que dans d'autres groupes. La GSHPx et la CAT peuvent toutes les deux décomposer le peroxyde d'hydrogène en eau non-toxique de façon à prévenir les lésions provoquées par des peroxydes. Par conséquent la cyclohexénone de l'Antrodia camphorata peut diminuer la lésion due aux radicaux libres, réduire la pression oxydante de façon à augmenter en outre la capacité antioxydante en augmentant la teneur en GSHPx et en CAT. En résumé, le composé 4-hydroxy-2,3-diméthoxy-6-méthyl- 5(3,7, 1 1-triméthyl-dodéca-2,6, 10-triényl)-cyclohex-2-énone isolé à partir de l'Antrodia camphorata selon la présente invention peut être utilisé de façon à diminuer de manière efficace l'ampleur d'une lésion du foie et d'une fibrose du foie induite par des produits chimiques. Les indicateurs d'inflammation par ALT et AST ont également été réduits. En augmentant la teneur en GSHPx et en CAT, la cyclohexénone dimi- nue en outre la lésion du foie et la pression oxydante provoquées par les radicaux libres, augmente la capacité antioxydante et réalise la protection du foie. D'autre part, la cyclohexénone de l'Antrodia camphorata est un extrait naturel, qui n'induira pas d'effets secondaires inconfortables, de toxicité ou de complications lorsqu'elle est appliquée dans le traitement d'une lésion du foie ou la protection du foie. Elle contient égale-ment une fonction anti-radicaux libres tel que des anti-peroxydes, ce qui la rend bénéfique pour la santé des êtres humains en prévenant une lésion du foie lorsqu'elle est préparée sous forme de compléments diététiques, de boissons et analogues. En outre, elle peut être incorporée à des compositions pharmaceutiques. Les compositions pharmaceutiques comprennent non seulement le composé actif 4-hydroxy-2,3-diméthoxy-6-méthyl- 5 (3,7, 1 1 -triméthyl-dodéca-2 ,6, 1 0-triényl) -cyclohex-2 -énone, mais également les supports pharmaceutiquement acceptables. Les exemples de tels supports comprennent, mais sans s'y limiter, des excipients tels que l'eau, des charges telles que le saccharose ou l'amidon, des liants tels que des dérivés de cellulose, des diluants, des agents désintégrants, des agents améliorant l'absorption ou des édulcorants. La composition pharmaceutique peut être préparée en mélangeant le composé cyclohexénone de l'Antrodia camphorata à au moins un des supports au moyen de procédés classiques connus dans le domaine des techniques pharmaceutiques, laquelle composition peut être formulée sous la forme de poudre, de comprimés, de capsules, de pastilles, de granules ou d'une autre formulation liquide, mais sans s'y limiter. Le but de prévention et de traitement d'une lésion du foie et de protection du foie peut alors être atteint.20