Définitions: Cytotoxicité: Le test permet de déterminer la concentration cytotoxique d'un composant actif, lorsque les cellules 3T3 sont incubées avec celui-ci pendant 24 heures. La toxicité est déterminé en fonction de la viabilité cellulaire, suivie par l'incubation des cellules 3T3 avec du Rouge Neutre, un colorant vital qui est incorporé dans les cellules vivantes après 24 heures de contact avec le composant actif (Guidance Document on Using ln Vitro Data to Estimate ln Vivo Starting Doses for Acute Toxicity . NIH Publication 01-4500 (2001)). Phototoxicité: Le principe du test est de comparer la toxicité d'un composant actif en présence et en absence d'une dose non-toxique de rayons UVA. La phototoxicité est mesurée par la capture de Rouge Neutre par les cellules qui survivent à l'incubation avec le composant actif, selon le protocole de Borenfreund & Puerner (1985), qui a déjà été établi et standardisé par le NIH ("ZEBET/ECVAM/COLIPA Standard Operating Procedure. In Vitro 3T3 Phototoxicity Test. 26 Ap, 1998"). La phototoxicité/Photoirritation est définie comme la réponse toxique provoquée après la première exposition de la peau à certains produits/composés actifs avec une exposition ultérieure à la lumière solaire ou qui est induite par l'irradiation de la peau après une administration systémique d'un compose actif/produit ("Spielmann H, Liebsch M, Doring B, Moldenhauer F. First results of an EC/COLIPA validation project of in vitro phototoxicity testing methods. ALTEX. 1994;1 1(1):22-31"). Matériel: Cellules 3T3 (lignée cellulaire fibroblastique de peau de souris Balb/C). 3 0 Réactifs: 12 Milieu Eagle modifié de Dulbecco (Dulbecco's Modified Eagle Medium, DMEM), Serum de Veau Foetal (Fetal Bovine Serum, FBS), Rouge Neutre (SIGMA-ALDRICH), Dimethylsulfoxide (DMSO), Ethanol, Acide Acétique et PBS (Phosphate Buffer Saline ou Solution Saline Tamponée de Phosphate). Méthodes: Analyse de la solubilité and définition des concentrations de l'expérience: La solubilité des échantillons est évaluée selon des tests standardisés de manière internationale par le NIH. De manière à avoir une meilleure solubilisation des échantillons en solutions aqueuses, telles que le DMEM (dans le test de cytotoxicité) ou le PBS (dans le test de phototoxicité), l'utilisation d'une concentration maximale de 1% de DMSO ou d'Ethanol est autorisée Les concentrations utilisées dans les tests de cytotoxicité et de phototoxicité varient en fonction des résultats des tests de solubilité des échantillons. La concentration maximale testée ne devrait pas excéder 3 mg/ml. Cytotoxicité: Les cellules 3T3 sont ensemencées dans une plaque 96-puits stérile, à une densité de 1 x104 cellules/puits. Après 24 heures, les cellules sont incubées pendant 24 heures avec les échantillons dilués dans un milieu de culture avec 5% SFB. Ensuite, elles sont incubées avec du Rouge Neutre pendant 3 heures. L'excédent de colorant est lavé avec du PBS et les cristaux formés sont dissous avec de l'Ethanol: Acide Acétique: Eau (50:1:49). La lecture de l'absorbance est réalisée à 540 nm et, à partir des résultats obtenus, la concentration à laquelle 50% des cellules sont viables (C150) est calculée. Par conséquent, plus la valeur de CI50 est élevée, plus le potentiel cytotoxique de l'échantillon est faible, et vice-versa. Phototoxicité: Les cellules 3T3 sont ensemencées dans une plaque 96-puits stérile, à une densité de 1x104 cellules/puits. Deux plaques identiques sont préparées mais l'une d'elle sera irradiée aux UVA et l'autre sera conservée à l'obscurité, en tant que témoin. 24 heures après l'ensemencement, les cellules sont incubées pendant une heure à l'obscurité avec les échantillons dilués dans le PBS. Après cela, l'un d'eux est irradié avec 5 Joules/cm2 de lumière UVA pendant 50 minutes. Les plaques sont lavées avec du PBS et reçoivent un milieu de culture avec 10% de sérum de veau foetal pendant la période de rétablissement qui dure approximativement 12 heures. Le deuxième jour de l'expérience, les cellules sont incubées avec une solution de Rouge Neutre pendant 3 heures. L'excédent de colorant est lavé avec du PBS et les cristaux formés sont dissous avec de l'Ethanol: Acide Acétique: Eau (50:1:49). La lecture de l'absorbance est réalisée à 540 nm et, à partir des résultats obtenus, la concentration à laquelle 50% des 1 o cellules sont viables (CI50) est calculée pour chaque plaque. Le rapport entre les deux valeurs est le facteur de Photolrriration (FPI), qui classe l'échantillon comme phototoxique ou non. Calcul du FPI: FPI = C150 -UV 15 CI50 (+UV) Lorsque le FPI est supérieur ou égal à 5, l'échantillon est phototoxique. S'il n'est pas possible d'obtenir la valeur de CI50 avant la concentration maximale testée en absence d'UV, alors qu'en présence d'UV il est possible d'observer une action phototoxique et de calculer CI50, >FPI 20 est calculé en divisant la concentration maximale testée par la CI50 de la courbe de phototoxicité UV: >FPI = Cmax (-UV) Cl50 (+UV) Lorsque >FPI est supérieur à 1, l'échantillon est phototoxique. 25 Exemple 4.1 Les échantillons suivants d'extrait de Passiflora alata selon l'invention ont été analysés pour la cytotoxicité: Passiflora A = 16,54% flavonoïdes; 11,02% vitexine-2-o-r Passiflora B = 11,49% flavonoïdes; 0,39% vitexine-2-o-r D'abord, une solution stock de l'échantillon a été préparée dans du PBS à 30 mg/ml contenant 10% de DMSO. Dans le cas de la cytotoxicité, la solution stock a été diluée 10 fois dans du DMEM contenant 5% de SFB, obtenant la concentration maximale utilisée de 3 mg/mi contenant 1% de DMSO. Les autres dilutions testées pour la cytotoxicité ont aussi été préparées dans du DMEM contenant 5% de SFB. Dans le cas de la phototoxicité, la solution stock a été diluée 10 fois dans du PBS, obtenant la concentration maximale utilisée de 3 mg/ml contenant 1% de DMSO. Les autres dilutions testées pour la phototoxicité ont aussi été préparées dans du PBS. Les données relatives au test de cytotoxicité des échantillons décrits dans la présente demande ont été utilisées pour fabriquer les graphes des Figures 4 et 5. Les échantillons testés et leurs potentiels cytotoxiques respectifs in vitro sont indiqués dans la Table 2. L'échantillon 550 a été considéré comme cytotoxique in vitro au-dessus de 0,2 mg/ml. Table 2: Données obtenues dans le test de cytotoxicité Echantillons Registre CI50 (mg/ml) Extrait de Passif lora A NA Extrait de Passiflora B 2,0 Exemple 4.2 Les échantillons suivants d'extrait de Passiflora alata selon l'invention ont été analysés pour la phototoxicité: Passiflora A = 16,54% flavonoïdes; 11,02% vitexine-2-o-r Passiflora B == 11,49% flavonoïdes; 0,39% vitexine-2-o-r D'abord, une solution stock de l'échantillon a été préparée dans du PBS à 30 mg/ml contenant 10% de DMSO. Dans le cas de la phototoxicité, la solution stock a été diluée 10 fois dans du PBS, obtenant la concentration concentration maximale utilisée de 3 mg/ml contenant 1% de DMSO. Les autres dilutions testées pour la phototoxicité ont aussi été préparées dans du PBS. Les échantillons ont été filtrés sur des membranes de 0,22 pm. Les données relatives au test de phototoxicité des échantillons 5 décrits dans la présente demande ont été utilisées pour fabriquer les graphes des Figures 6 et 7. Les échantillons testés et leurs potentiels phototoxiques respectifs sont indiqués dans la Table 3. Les échantillons A et B ont été considérés comme non-phototoxiques in vitro. 10 Table 3: Données obtenues dans le test de phototoxicité Echantillon Registre FPI Extrait de Passiflore A NA Extrait de Passiflora B NA Exemple 5 û Evaluation du potentiel mutaqène à travers le test de mutation réverse chez Salmonella typhimurium (test Amesi Le test AMES (Maron & Ames, 1983; OECD Guidelines, 1997) a pour 15 but d'évaluer le potentiel de certains produits chimiques à induire des mutations dans le génome de souches de Salmonella typhimurium par des mutations réverses his- à his+, avec ou sans un système d'activation métabolique. Dans cette étude, il a été observé que les extraits de Passiflora alata n'ont pas de potentiel d'activité mutagène dans des 2 0 souches de Salmonella typhimurium. Exemple 5.1 Les échantillons suivants d'extrait de Passiflora alata selon la présente invention ont été utilisés: Echantillon C (contenu en flavonoïdes totaux 16,46% et contenu en 25 vitexine-2-o-r 11,87%) Echantillon F (contenu en flavonoïdes totaux 16,10% et contenu en vitexine -2-o-r 9,67%) Matériels: Souches TA97a, TA98, TA 100, TA102 and TA1535 and TA1537 Réactifs: Azide de sodium, 2-nitrofluorène; 9-aminoacridine, hydropéroxyde de cumène, 2-aminoanthracène, milieu glycosylé minimum, top agar, fraction S9 (Molecular Toxicology Incorporated, EUA), eau de-, 4-nitroquinoline-1-oxyde, mitomycine C Performance du Test 0,1 ml de bactéries ayant poussé sur la nuit et 0,l ml des échantillons testés sont ajoutés à chaque tube contenant 3 ml of top agar préalablement conditionné dans du bouillon sec à 45°C. Dans les tests avec activation métabolique, 0,5 ml/boîte de fraction S9 ayant une concentration en protéines de 39,7 mg/ml ont été ajoutés. Avant le test, les génotypes des souches ont été évalués dans le but de s'assurer des caractéristiques génétiques d'origine des bactéries. Grâce un milieu de croissance sélectif, la dépendance des souches vis-à-vis de l'histidine et de la biotine a été analysée. La présence de la délétion uvrB a été détectée par la sensibilité à la lumière ultraviolette irradiant les boîtes. La mutation da, qui augmente la perméabilité de la paroi bactérienne à l'entrée des substances à tester, a été détectée par la sensibilité au violet cristal. En testant la résistance à l'ampicilline, la présence du plasmide pKM101 a été notée, qui agit au niveau de la réparation de l'ADN, en augmentant la mutagénicité chimique et spontanée. La présence du plasmide pAQ1 a été vérifiée car elle fournit une résistance à tétracycline.