Pour mesurer les effets des additifs alimentaires sur la résistance des animaux pendant les coccidioses provoquées par ces agents pathogènes, on a évalué les scores lésionnels selon la méthode de Johnson J et Reid W 1970 : de J18 à J21 (18 à 21 jours après la naissance, soit 4 à 7 jours après l'inoculation), on abat une partie de la population de chaque lot, et on compte les lésions dans l'intestin des poulets abattus. On évalue les lésions par les échelles suivantes : Eimeria tenella 0 Pas de lésions grossières. + 1 Très peu de pétéchies répandues sur les parois cæcales ; contenus cæcaux présents normaux. Il existe un début de déshydratation du contenu cæcal. + 2 Lésions plus nombreuses avec du sang présent dans les contenus cæcaux ; la paroi cæcale est quelque peu épaissie ; les contenus coecaux présents sont normaux. Noter un début de transformation des caeca. + 3 Grande quantité de sang ou bouchons cæcaux ; parois cæcales fortement épaissies : peu parfois ou pas de contenus coecaux dans les caeca. Les fientes 30 sont moins moulées. + 4 Paroi cæcale fortement distendue avec du sang et des gros bouchons caséeux ; débris fécaux manquant ou inclus dans les bouchons. Animaux morts notés + 4 Eimeria acervulina 35 0 Pas de lésions grossières. + 1 Lésions répandues ressemblant à des plaques blanches ù contenant des oocystes en développement ù localisées dans le duodénum. Ces lésions sont 5II8FDEP.doc 2923161 4 allongées avec l'axe le plus long orienté transversalement sur les parois intestinales comme les barreaux d'une échelle. Elles peuvent être observées soit sur les surfaces séreuses soit sur les surfaces de la muqueuse intestinale. Elles peuvent être jusqu'à un nombre de 5 lésions par cm2. Une infection notée 1 n'a pas 5 d'incidence sur les performances zootechniques mais cause une légère décoloration sérique et une dépigmentation de la peau chez le poulet jaune. + 2 Les lésions sont plus proches les unes des autres mais pas coalescentes ; les lésions peuvent s'étendre jusqu'à 20 cm en dessous du duodénum chez des oiseaux de 3 semaines. Les parois intestinales ne montrent pas d'épaississement. 10 Le contenu du tractus digestif est normal. Une légère diminution du gain de poids peut être observée. + 3 Les lésions sont assez nombreuses pour entraîner une coalescence avec réduction de la taille lésionnelle et donnent à l'intestin un aspect enduit. La paroi intestinale est épaissie et les contenus sont liquides. Les lésions peuvent s'étendre 15 jusqu'au diverticule du sac vitellin ou au diverticule de Meckel. Les modifications de la paroi intestinale provoquent des perturbations de l'absorption, d'où l'apparition de diarrhées, la chute de coloration sérique et des conséquences sur les performances zootechniques. + 4 La muqueuse est grisâtre avec des colonies complètement coalescentes. 20 La congestion peut être confinée à de petites pétéchies ou, dans les infections extrêmement sévères, la muqueuse entière prend une couleur rouge brillant. Les lésions individuelles sont parfois non différentiables dans la partie haute de l'intestin. Des lésions typiques comme une échelle apparaîssent dans la partie médiane de l'intestin. La paroi intestinale est très épaissie, et les intestins 25 contiennent un exsudat crémeux qui peut porter un grand nombre d'oocystes. Animaux morts notés + 4. Simultanément, on a contrôlé l'excrétion oocystale (EO) des poulets, avec la méthode décrite par Holdsworth P et al., 2004, qui décrit la méthode de prélèvements des échantillons, la méthode de traitement, et l'analyse des échantillons. On a utilisé notamment la méthode de la chambre de Mc Master : - 10 g de fèces (prélevé sur les plateaux des cages) dans 100 ml d'eau pendant 24h à 4°C couvert avec un parafilm, - agitation et filtration de la suspension à travers un filtre, - ajustement à 100 ml, - le filtrat est placé dans un tube de centrifugation, - centrifugation, - le supernageant est jeté, 511 SFDEP.doc 2923161 5 - le fond est récupéré et remis en suspension avec une solution de chlorure de sodium saturée, - vortexer (pour homogénéiser), -prélèvement de la solution avec une pipette Pasteur, 5 - remplir une chambre de Mc Master pour le comptage des oocystes, - placer sous le microscope et attendre la flottation, - utilisation de la formule de calcul qui permet de convertir les oocystes comptés en oocystes par g/fèces, - calcul du nombre d'oocystes/poulet par division du nombre de poulets par cage. 10 On a simultanément cherché l'effet éventuel de doses différentes d'additifs alimentaires dans l'alimentation des poulets : Ganoderma lucidum a été ajouté à la ration alimentaire d'une première population de poulets selon une dose journalière de 35 mg par kg d'aliment, soit 1,5 mg par kg de poids vif par jour, Ganoderma lucidum a été ajouté à la ration alimentaire d'une seconde population 15 de poulets selon une dose journalière de 70 mg par kg d'aliment, soit 3 mg par kg de poids vif par jour, Lentinus edodes a été ajouté à la ration alimentaire d'une troisième population de poulets selon une dose journalière de 80 mg par kg d'aliment, soit 4 mg par kg de poids vif par jour, et Lentinus edodes a été ajouté à la ration alimentaire d'une quatrième population de poulets selon une dose 20 journalière de 160 mg par kg d'aliment, soit 8 mg par kg de poids vif par jour. Dans tous les essais réalisés, les extraits utilisés présentaient les propriétés suivantes : - extraits de reishi (Ganoderma lucidum) : au minimum 12,5 % de polysaccharides de type beta-glucanes (ganodéranes ...) et 4 % de triterpenoïdes de reishi (dérivé 25 d'acide ganodérique ...), - extraits de shiitake (Lentinus edodes) : au minimum 15 % de polysaccharides de type beta-glucanes (avec du lentinane), - extraits de Chardon-marie (Silybum marianum) : environ 60 % de silymarine. Un autre critère de mesure de l'effet des additifs alimentaires a été 30 d'évaluer le gain de poids des poulets. 15 5118FDEP.doc 2923161 6 Le tableau 1 ci-dessous montre les résultats d'évaluation des scores lésionnels et de l'excrétion oocystale lors du premier test effectué sur 21 jours sur des poulets inoculés ou non par le protozoaire E. acervulina : Lots Concentration Scores lésionnels Réduction du score EO / poulet Aliment lésionnel /jour (mg/kg) x 106 J18 à J21 % J18 J21 J18 J21 4 jpi 7 jpi 4 jpi 7 jpi Non Infecté Non Traité 0 Oa Oa - - Oa Infecté Non Traité (INT) 0 2,5e 2,7cd - - 206b Infecté Traité 35 1,8bcde 1,5b 31.9 43.2 248bc Ganoderma lucidum Infecté Traité 70 1,5b 1,6bc 42.9 41.0 184b Ganoderma lucidum Infecté Traité 80 1,3b 2,3cd 47.6 17.0 270bc Lentinus edodes Infecté Traité 160 1,5bc 2,0bc 39.4 26.2 238bc Lentinus edodes 5 Tableau 1 Dans ce tableau, ainsi que dans les tableaux suivants, a, b et c sont des significations de probabilités. a, b, c, d et e indiquent respectivement des résultats significativement différents à la probabilité de 5%. 10 Le tableau 2 ci-dessous donne le poids et le gain de poids des poulets inoculés ou non par le protozoaire E. acervulina, au cours de ce même premier test de 21 jours. Lots C* Poids (g) Gains de poids (g) (mg/kg aliment) J7 J14 J18 J21 J7-14 J14-18 J18-21 J14-21 J7-21 NINT 0 133.8 377.3 590.3 808.9 243.4 213.Oc 218.7 a 431.7 a 675.1 a INT 0 133.8 379.7 574.3 704.1 245.8 194.7a 129.8 bc 324.4 b 570.3 b Ganoderma 35 133.9 372.6 580.5 709.2 238.8 207.9abc 128.7 bc 336.6 b 575.3 b Ganoderma 70 134.3 388.4 589.4 712.3 254.1 201.0bc 122.9 c 323.9 b 578.0 b Lentinus edodes 80 133.6 376.3 585.3 742.1 242.7 209.1 c 156.8 b 365.8 b 608.5 b Lentinus edodes 160 134.6 382.1 583.2 715.1 247.5 201.1abc 131.9 bc 333.0 b 580.5 b NS NS NS NS NS Tableau 2 Le tableau 1 montre l'intérêt des extraits de Ganoderma lucidum (reishi) et des extraits de Lentinus edodes (shiitake) dans la réduction des scores .51 I8FDEP.doc 7 lésionnels suite à des coccidioses chez le poulet, alors que l'infection se maintient (maintien de EO). Le tableau 2 montre que l'extrait de Lentinus edodes (shiitake) à la dose de 80 mg/kg d'aliment a un meilleur effet de maintien des performances de gain de 5 poids malgré les coccidioses. On constate aussi que Lentinus edodes stimule la croissance compensatrice de l'animal en guérison : voir le gain de poids J18-21. Le second test a été effectué avec un protocole similaire basé sur des animaux en cage sur 28 jours, infectés ou non avec le même protozoaire que 10 précédemment E. acervulina. Le tableau 3 ci-dessous donne le résultat de l'excrétion oocystale et des scores lésionnels à 21 jours, au cours de ce second test : Lots Code lot Concentration Scores Réduction du poulet / Aliment lésionnels score lésionnel EO / jour (mg/kg) J21 % z 106 7 iPi J21 J18 à J21 7 iPi J21 7 iPi Non Infecté Non Traité A 0 Oa 0 Infecté Non Traité B 0 2,25c - 2334 Infecté Traité Di 70 1,17b 48 2923 Ganoderma lucidum Infecté Traité D 140 1,17b 48 2637 Ganoderma lucidum Infecté Traité E 80 1,25b 44 1723 Lentinus edodes Infecté Traité F 160 1,09b 52 1886 Lentinus edodes Tableau 3 18PDEP.doc 8 Le tableau 4 ci-dessous donne le poids et le gain de poids des poulets dans ce second test : Lots Doses Poids (g) GMQ (g/j) (mg/kg J7 J14 J21 J28 J7-14 J14-21 J21-28 J14-28 J7-28 aliment) NINT 0 135 396 837 1445 37 62 85 75 62 INT 0 135 410 769 1312 39 51 77 64 56 Ganoderma 70 134 411 778 1386 40 52 84 70 52 Ganoderma 140 135 408 797 1339 39 56 77 67 57 Lentinus 80 135 408 805 1383 39 57 83 70 59 Lentinus 160 135 418 815 1422 39 57 83 72 61 NS NS NS Tableau 4 GMQ est le gain de poids moyen quotidien, en grammes par jour. Les résultats sont similaires de ceux de l'essai précédent : les scores lésionnels sont réduits, le gain de poids est maintenu, l'excrétion oocystale se maintient.