Leur conservation est assurée par un mélange Acide Ascorbique-Acide Lactique à 0,01%. 5/ les analyses en CPG/DIF et CPG/SM de l'hydrolat : Les techniques de chromatographie en phase gazeuse permettent une identification et une quantification des molécules organiques présentes dans l'hydrolat. 6/ la détermination des activités biologiques associées aux molécules identifiées : La composition chimique des hydrolats permet de définir la ou les activité(s) biologiques qui leur est (sont) associée(s). Cette invention est destinée à une utilisation médicinale, pharmaceutique et parapharmaceutique. III) c) Exemple d'hydrolat de plante non aromatique : - 6 - A titre d'exemple, la figure 1 montre l'analyse par chromatographie (CPG/DIF) de l'hydrolat de fruits du carambolier, Averrhoa carambola. Cet hydrolat a préalablement subi un partage liquide-liquide (volume/volume) avec du n-hexane, puis concentré sous pression réduite jusqu'à un volume de un (1) millilitre. Cinq (5) microlitres du concentré sont alors injectés dans le chromatographe, sur une colonne polaire de type INNOWAX, 60m x 0,25mm x 0,5 gm, avec une programmation de température de 6 minutes à 60°C, suivie d'une montée en température de 2°C par minute jusqu'à 250°C et d'un plateau de 10 minutes à 250°C. L'hélium est utilisé comme gaz vecteur, à une pression de 30 psi pour l'analyse en CPG/DIF et de 23 psi pour l'analyse en CPG/SM. Pour la détection en CPG/SM, la gamme de masse utilisée va de 30 à 350 grammes par mole. Après l'identification et la quantification des composés aromatiques isolés, le pourcentage massique de ces molécules est de treize (13) milligrammes pour un litre d'hydrolat (0,0013%). Le tableau 1 présente les quatre-vingt (80) composés identifiés par une recherche combinée des temps de rétention (base de données personnelles) et des spectres de masse (libraire NKS contenant plus de 75.000 spectres de masse). Les pourcentages de chaque constituant sont calculés à partir des surfaces de pics données par l'analyse en CPG/DIF, sans l'utilisation de facteur de correction. Le tableau 2 présente les cent soixante-dix-huit (178) composés aromatiques identifiés par MacLeod & Ames dans la pulpe de fruit de carambole (Volatile components of Starfruit, Phytochemistry, Vol 29, N°1, 165-172, 1990). L'extrait a été obtenu après extraction organique au diéthyl éther selon la méthode Likens-Nickerson. - 7 - Tableau 1 (1/2) Pourcentage et identité des 80 composés chimiques présents dans l'hydrolat du fruit tropical, Averrhoa carambola. fableau de résultats 1 - HYDROLAT DE CARAMBOLE DE TAHITI LOT 25 - 01 - 2014 Pics TR(min) Constituants Allergènes (/o ) 0,08 1 6,1 COMPOSE PYRANIQUE TETRAHYDRO-2,5-DIMETHYL FURANE 0,06 2 6,3 BUTYRATE DE METHYLE 0,29 3 9,0 0,30 4 10,5 a-PINENE 0,94 11,0 BUTYRATE D'ETHYLE 1,67 6 11,4 TOLUENE 7 11,8 3-HEXANONE 0,81 0,93 8 13,2 2-HEXANONE 0,27 9 13,3 HEXANAL 0,23 14,7 13-PINENE 0-MYRCENE 0,16 11 17,7 METHYL HEXANONE 0,19 12 19,0 2,68 13 19,2 CAPROATE DE METHYLE HEPTANAL 0,54 14 19,3 1,19 1,19 20,1 LIMONENE 1,02 16 20,8 1,8-CINEOLE 1,36 17 22,1 CAPROATE D'ETHYLE 0,15 18 23,1 y-TERPINENE 19 24,8 ip-CYMENE 0,12 3 26,0 OCTANAL ACETATE DE cis-3-HEXENYLE 0,16 21 2= ACETATE DE trans-2-HEXENYLE 0,72 22 28,8 23 29,8 1-HEXANOL 0,40 0,22 24 32,0 3-HEXEN-1-0L 0,16 32,7 CAPR'YLATE DE METHYLE 26 33,2 NONANAL 7,60 0,32 27 35,8 CAPRYLATE D'ETHYLE 28 36,4 Cis-OXYDE DE LINALOL 0,09 0,08 29 36,7 D'ETHYLE 0,34 36,8 0,10 31 38,4 0,20 32 39,2 0,27 33 40,4 DECANAL 2,63 34 42,1 BENZALDEHYDE 42,9 LINALOL 0,55 0,55 5,25 36 43,6 1-OCTANOL 37 46,6 CETONE TERPENIQUE 0,10 0,44 38 47,0 TERPINENE-4-0L 0,44 39 47,7 IONONE ISOMERE 1,27 48,4 BENZOATE DE METHYLE 1,70 41 49x4 DIMETHYL BENZENE DIOL Mw=138 1,19 42 49,8 COMPOSÉ AZOTÉ Mw=166 1,61 43 50,1 1-NONANOL 0,88 44 0,09 50, 1-NONANOL 5 - 8 - Tableau 1 (1/2) Pourcentage et identité des 80 composés chimiques présents dans l'hydrolat du fruit tropical, Averrhoa carambola. 2 - HYDROLAT DE CARAMBOLE DE TAHITI LOT 25-01 - 2014 Pics TR(min) Constituants E%. Allergènes 01/0) 0,44 46 52,8 a-TERPINEOL 47 56,5 i-DECANOL 0,46 0,82 48 58,0 SALICYLATE DE METHYLE 4,18 49 61,3 ACIDE VALERIANIQUE 50 62,3 E-GERANYL ACETONE 0,17 51 62,4 a-IONONE 0,13 COMPOSÉ AZOTÉ 0,17 52 63,1 0,16 53 65,3 ALCOOL PHENYLETHYLQUE 54 66,2 1-DODECANOL 0,35 p-IONONE 4,28 55 67,4 METHYL ALCOOL ALIPHATIQUE 0,15 56 68,1 CARBOXYLATE D'ALKYLE Mw=196 0,32 57 68,3 58 70,4 5.6-EPDXYDE DEI3-10NONE Mw=208 0,41 59 71,9 IONONE DERIVÉ 0,20 ALDEHYDE ALIPHATIQUE 0,20 60 72,4 ACIDE CAPRYLIQUE 32,22 61 72,9 62 73,5 COMPOSÉ OXYGÉNÉ 0,11 63 75,5 DIMETHYL JASMONE M w=192 0,27 COMPOSÉ ALCOOL INSATURÉ 0,34 64 77,4 65 78,4 CINNAMATE D'ETHYLE 0,93 66 78,5 DECANOLIDE 1,70 67 78,8 EUGENOL 0,43 0,43 68 80,2 4-V1NYL QUAJACOL 0,58 69 83,6 Ar-TURMERONE Mw=216 + ACIDE CAPRIQUE 168 70 85,0 TRICOSANE 1,41 71 85,9 9-TRICOSENE 2,04 72 86,3 TRICOSENE ISOMERE 0,24 73 89,2 DIHYDRO BENZOFURANE Mw=120 0,35 74 89,5 y-HEPTYL BUTYROLACTONE 0,68 75 90,8 COMPOSÉ AZOTÉ 0,20 76 91,6 INDOLE 0,13 77 93,4 COMPOSÉ ALKYL BENZENEACETALDEHYDE 2,26 78 95,1 PENTACOSENE 0,54 79 96,5 COMPOSÉ PHTHALATE 0,15 80 100,8 BENZOATE DE BENZYLE 0,15 0,15 TOTAL 99,69 2,32 5 - 9 - Tableau 2 (1/3): Pourcentage et identité des 178 composés chimiques identifiés dans l'extrait au diéther éthylique du fruit tropical, Averrhoa carambola. Component and MS ref * R, (mm) Kovàts index Oit )t %R A Acetone [10] Ethanol [10] Pentane 359 399 467 483 447 005 002 040 001 001 Sulphur dioxide Dtmethyl sulpinde 2,3-Dtmethylbutane 2,4-Dtmethylpentane 5 13 500 001 34 49311 020 739 57(), 2-Methylbutan-2-ol 9 32 631 tr 3-Methy lbutanal 10 91 649 002 Pentanal 13 21 694 Ir Pentan-2-o I [10] 13 31 685 tr 2,3-Dunethylhexane 19 05 tr Toluene 19 25 765" 001 2.4-Dirnethythexane 19 66 003 A dtmethylcyclohexane 20 23 002 Octane [10] 22 12 800 009 A dimethylLyclohexane 22 78 001 2-Furaldehyde [10] 25 41 815 008 Ethylbenzene 29 11 855'. 001 2-Acetylfuran [10] 32 98 892 001 Methoxybenzene [10] (t e arnsole) 33 57 900 003 5-Methy1-2-fura1dehyde [10] 37 95 942 002 asoPropylbenzene (te cumene) 38 Il 947k 001 1-Met hoxy-4-methylbenzene (t c p-methylarnsole) 43 33 1000 002 Methyl heptanoate [10] 43 33 1006 010 Methyl 2-ethylhexanoate 45 06 001 A Trtmethylcyclopent-2-e000e 49 52 tr A Trtmethylcyclopent-2-enone 50 64 004 2-Ethylheptanote acid 51 51 002 3-L,oPropy1-2-methoxy-5-methy1pyraztne 53 76 006 2,6,6-Trime1hy1eyc1ohex-2-en-1,4-d10ne 54 22 001 1-Methox y-2-phen y let bene 54 94 001 (1 e ft-methoxystyrene) Methyl phenylacetate [10] 56 89 1154 001 Hexyl methylpropanoate [10] 57 55 1135 003 Hex-2(E)-enyl butanoate 110] 57 80 1180 020 z-Terpmeol [10, 15] 58 16 1185 01(1 "A megasligmatetraene 58 73 0 04 Decanal [10] 58 83 1188 002 4-Vinylpheno1 [Demole, E, prtvate communication] 59 70 001 Carvomenthone [15] 59 95 1181 003 "A megasttgmatetraene 60 16 030 Geramol [15] 62 71 1243 003 Dec-2-enal 63 33 - 1250 006 /A megasugmatetraene 63 95 002 Hexyl pentanoate [10] 65 12 1275 001 Hex-3(Z)-enyl pentanoate [10] 65 32 1270 005 Undecan-2-one [10] 65 58 1276 002 Undecanal [10] 66 70 1290 004 2-Methylnaphthalene 66 80 12814 004 2-Methoxy-4-vmylphenol 67 73 0 30 (1 e p-vmylguatacol) 1-Methylnaphthalene 68 24 1298": tr Megastigma-4,6(Z),8(Z)-triene** [14, 16] 68 75 1318tt 007 Methyl 2-methoxybenzoate 69 27 003 Megastigma-4,6(E),8(E)-triene** [14, 16] 69 68 1328ti- 030 An alk yl 1,2-dthydronaphthalene 70 54 008 - 10 - Tableau 2 (2/3) : Pourcentage et identité des 178 composés chimiques identifiés dans l'extrait au diéther éthylique du fruit tropical, Averrhoa carambola. Kovàts index Component and MS ref * R, (mm) )t %RAI Megast1gma-4,6(48(Z)-tr1ene** [14, 161 Megastigma-4,6(Z),8(E)-tnene** [14, 16] 71 10 1344tt 1349tt 0.20 71 36 090 Heic-3(Z)-enyl hexanoate [10] 71 97 1370 002 Hexyl hexanoate [10] 72 28 1371 005 4-isoPropylacetophenone 72 28 001 Heit-2(E)-enyl hexanoate [10] 72 49 1375 020 1-(2,6,6-trmiethylcyclohexa-1,3-dien-1-y1)-But-2(E)-en-l-0ne (i.e /3-damascenone) [18] 73 05 007 1,1,6-Tnmethy1-1,2,3,4,-tetrahydr0naPhthalene [14] 74 69 1347tt 020 1-(2,6,6-tnmethylcyc1ohex-1-en-1-y1)-But-1(3-0l (i e (1-ionol) 75 25 090 0.04 Geranyl acetate [10] 76 02 1364 A dimethylnaphthalene 76 02 004 (E) or (Z)-6,10-Dunethylundeca-5,9-d1en-2-0ne [i. e (E) or (2)-geranylacetone] [16] A dimethylnaphthalene 77 19 143411 030 tr 77 45 Ethyl 4-methoxybenzoate [10] (t e ethyl annate) 77 45 1426 002 Dimethyl phthalate 77 76 002 A dimethylnaphthalene 77 76 002 I -MethOxynaphthalene 77 96 002 1-(2,6,6-trunethylcyc1ohexa-1,3-dien-1-y1)-But-1(E)-or- 78 42 1433 0 10 (Z)-en-3-one (Demole, E, pnvate communication) [i e. (E) or (Z)-3,4-dehydro-fi-ionone1 4-Hydroxydecanoic acid, lactone [10] (t e y-decalactone) 78.68 1437 0.40 1-(2,6,6-trimethy1cyclohexa-1,3-chen-1-y1)-But4(Z) or (E)-en-3-one (Demole, E, pnvate communication) 79 86 1435 tr [i e (Z) or (E)-3,4-dehydro-Ponone] Hex-2(E)-enyl heptanoate [10] 80 62 1474 005 A methoxypropenylphenol 80 62 005 344-isopropylpheny1)-2-Methy1pr0panal [10] (je cyclamen aldehyde) 81 34 1444 002 1-(But-2(E) or (Z)-2,6,6-Trimethylcyclohex-1-en-3-0ne [19] 81 59 030 [i e megastigma-5,8 (E) or (Z)-dien-4-one] 2,6-Di-t-buty1-4-methylphe110l 81 75 1501e 1 20 0 e. 13HT) 3-Hydroxy-1-(2,6,6-tnmethylcyclohex-1-en-l-y1)but- 82.26 005 1(E)-en-3-01 [19] (i.e 4-hydroxy-fi-ionol) 1-(But-2(Z) or (E)-2,6,6-Tnmethylcyclohex-1-en-3-0ne [19] 83 08 0 10 [i e megastigma-5,8(Z) or (E)-dien-4-one] 3-t-Buty1-1,2-d1hydronaphtha1ene 83 08 tr 1(or 2)-isoPropylnaphtha1ene 83 44 002 Dodecanoic acid 84 05 0 10 A tnmethylnaphthalene 84 67 009 A trunethyltetrahydronaphthalene 85 33 004 4-Hydroxyundecanoic acid, lactone (i e y-undecalactone) 85 59 1542 005 Hex-3(Z)-enyl benzoate 86 25 1553 003 A trimethy1-1,2-dihydronaphthalene 8640 020 Diethyl phthalate [10] 86 91 1565 0 10 9H-Fluorene 87 27 002 (i e 2,2'-methylenebiphenyl) A trimethylnaphthalene 87 48 tr 4-Hydroxydodecancue acid, lactone [10] (i e y-dodecalactone) 92 28 1647 1 80 A branched alkane 92 49 020 A branched alkane 92 85 008 Tableau 2 (3/3) : Pourcentage et identité des 178 composés chimiques identifiés dans l'extrait au diéther éthylique du fruit tropical, Averrhoa carambola. Component and MS ref * R, (n'un) Kovàts index (lit ) 1)/0RM 5-H ydroxydodecanoic acid. lactone [10] (m e b-dodecalactonc) 94 08 1675 007 A methy1-9H-fluorene 94 90 002 Tetradecanoic acid 96 43 120 3,5-DI-t-buty1-4-hydroxybenzaldehyde 97 71 006 Dibenzothlophen 98 02 008 Octadecane [10] 98 27 1800 020 A branched alkane 98 89 0 10 Phenant in elle 99 61 009 A S-lactone 100 38 003 2,3-Dimethy1-9H-fluorene 101 80 003 Pentadeeanotc acld 102 11 020 D1-(2-methylpropy0 phthalate 103 55 0 50 3(or 4)-Methyldtbenzotfuophen 104 42 001 1.1-Dunethoxypentadecane 104 88 009 A y-lactone 105 19 002 «or 3)-Methyldibenzotinophen 105 80 tr A b-lactone 106 42 0 08 Methyl hexadecanoate 106 73 1911 040 A methy1phenanthrene 107 34 tr 5-HydroxytridecanoiL acid, lactone (me b-tridecalactone) 107 86 1 50 Hexadecanoic end 110 81 12 30 Phcnylacetylenc 115 23 006 Methyl 4-(1,5-dimethylhexan-3-on-1-Acyclohex-1-enoate 116 42 003 3,7,I1,15-Tetramethylhexadeca-1,3,6,10,14-pentaene 116 93 1 40 An aliphatic acid 117 35 007 Heneicos-1-ene 120 69 0 30 Methyl nona-2,6-dienoate 121 21 0 10 Henelcosane Lio] I252 2100 090 Octadeca-9,12-dienotc acid (i e hnoleic actc0 133 46 15 50 Docos-l-cne 135 17 090 Docosane 138 32 2200 1 50 An alkene 150 65 020 Tricos-1-enc 155 08 21 40 3-(2(or 3)-methoxyphenyl) Propenoic acid 164 68 001 [1. e 2(or 3)-methoxycmnamic acid] A branched alkanc 171 97 0 10 A dihydroxyanthraqinnone 171 97 tr Tetracos-1-enc 177 67 070 Tetracosane 184 92 24(X) 0 50 Pentacos-l-ene 216 53 10 30 Dioctyl ph thalate 244 92 0 30