INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Mode opératoire de l'essai : A) Extraction de la 13-endorphine du surnageant de la culture cellulaire, selon les instructions du fabricant. 15 1. Le surnageant d'une culture de kératinocytes humains est séparé en parties aliquotes stockées à -70°C jusqu'à emploi. 2. Une partie aliquote de chaque échantillon est décongelée, homogénéisée et 400 pl sont acidifiés avec le même volume de tampon A, homogénéisés et centrigugés à 10 000 g pendant 20 20 minutes à 4°C. 3. Une colonne C-18 est équilibrée une fois avec du tampon B et trois fois avec du tampon A. 4. L'échantillon est chargé dans la colonne, puis la colonne est lavée deux fois avec le tampon A et éluée avec 25 le tampon B. 5. L'éluat est évaporé dans un dispositif de concentration � speedvac �, et les tubes à essai sont stockés à -20°C jusqu'à emploi.
30 B) Dosage de la 13-endorphine, réalisé selon les instructions du fabricant. 1. L'échantillon déshydraté est mis en suspension au volume initial avec le tampon d'essai. 23 2. Une matrice est diluée afin d'obtenir des concentrations de 100, 10, 1, 0,1 et 0,01 ng/ml de 13-endorphine. 3. 50 pl de chaque dilution de matrice, de témoin et d'échantillons sont déposés à la pipette sur la microplaque.
Un puits est laissé vide pour le blanc de la réaction et un puits est rempli d'un tampon de dilution pour le point zéro de la courbe. 4. 25 pl d'anti-p-endorphine de lapin sont déposés à la pipette dans les puits, sauf le blanc du puits de réaction. 5. 25 pl de 13-endorphine biotinylée sont déposés à la pipette dans chaque puits, sauf le témoin du puits de réaction. 6. La plaque est recouverte et incubée pendant 2 heures à la température ambiante. 7. La plaque est lavée six fois avec du tampon d'essai, sauf le puits correspondant au blanc. 8. La plaque est retournée sur du papier absorbant pour éliminer tout liquide. 9. 100 pl de streptavidine-peroxydase sont déposés à la 20 pipette dans tous les puits, sauf le puits correspondant au blanc. 10. Le mode opératoire du point 7 est répété. 11. 100 pl de TMB sont déposés à la pipette dans tous les puits, y compris le puits correspondant au blanc. 25 12. La plaque est recouverte et incubée pendant une heure à la température ambiante. 13. 100 pl de HC1 2 N sont déposés à la pipette dans tous les puits, y compris le puits correspondant au blanc. 14. On réalise une lecture à 450 nm. 30 Résultats Certaines parties aliquotes sont utilisées pour vérifier la variation entre les essais et dans un essai du 24 procédé. Le coefficient de variation dans un essai est de 8,3 % et entre les essais de 19,6 %. D'après le traitement prédéterminé des cultures de kératinocytes, les données obtenues permettent de définir le comportement de celles-ci en ce qui concerne l'expression de la p-endorphine, comme décrit sur la Figure 1.
Essai 2 : Détermination de la production de (3-endorphine 10 dans une culture de fibroblastes humains. Dans cet essai, des échantillons de caféine et de TC150905MX à différentes concentrations (0,038 pg/ml, 0,075 pg/ml, 0,150 pg/ml, 0,300 pg/ml et 0,600 pg/ml) et des échantillons témoins sont comparés, comme le montre le 15 Tableau 1 ci-dessous.
Tableau 1 Echantillons Concentration utilisée Temps d'incubation (mcg/ml) Caféine 0,038 48 h 0,075 0,150 0,300 0, 600 TC150905MX 0,038 48 h 0,075 0,150 0,300 0, 600 Cultures cellulaires 20 Afin de réaliser les expériences, une lignée cellulaire (culture pure/isolée) de fibroblastes humains, à l'âge adulte (mature), passage 6a est utilisée. 25 Les cellules sont cultivées sur des plaques de culture appropriées (24 puits) dans un milieu de culture spécifique, contenant des compléments nécessaires pour la conservation et la prolifération des cellules. Dans ce but, 1 x 105 cellules/puits sont ensemencées, la confluence étant atteinte au bout d'une incubation de 48 heures, dans un four humide, 5 % de CO2r 37°C. Après la confluence (environ 80 % de la surface totale), les échantillons à tester sont ajoutés, dans les concentrations appropriées et établies au préalable, selon le Tableau 1, en gardant toujours un groupe en tant que TEMOIN (sans traitement), pour des besoins de comparaison pour l'efficacité du test. Les échantillons sont dilués au préalable dans un milieu de culture approprié.
Après une incubation de 48 heures (four humide, 5 % de CO2r 37°C) avec les échantillons, le surnageant des cultures cellulaires est recueilli pour déterminer la libération de la 13-endorphine. La cytotoxicité éventuelle de l'échantillon est également déterminée et prise en compte. La détermination est uniquement qualitative, par analyse de la morphologie et des caractéristiques des cellules.
Quantification de la 13-endorphine La quantification de la production de 13-endorphine par les cellules en culture est réalisée par le procédé immunoenzymatique ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), à l'aide d'un kit approprié pour la détermination de la R- endorphine dans des échantillons biologiques. Les échantillons sont évalués quatre fois.
En analysant la Figure 2, on voit que les cultures de fibroblastes humains qui ont été incubés avec des 26 échantillons de caféine présentent une production de 13- endorphine supérieure à celle avec les échantillons à la même concentration de TC150905MX.
Essai 3 : Détermination de la production de (3-endorphine dans une culture de kératinocytes humains.
Dans cet essai, des échantillons de caféine et de TC150905MX à différentes concentrations (0,038 pg/ml, 0,075 pg/ml, 0,150 pg/ml, 0,300 pg/ml et 0,600 pg/ml) et des échantillons témoins sont comparés, comme le montre le Tableau 2 ci-dessous.
Tableau 2 Echantillons Concentration utilisée Temps d'incubation (mcg/ml) Caféine 0,038 48 h 0,075 0,150 0,300 0, 600 TC150905MX 0,038 48 h 0,075 0,150 0,300 0, 600 Cultures cellulaires Afin de réaliser les expériences, une lignée cellulaire (culture pure/isolée) de kératinocytes humains, à l'âge adulte (mature), passage 7a est utilisée.
La présente invention a spécifiquement pour objet la réalisation de compositions cosmétiques 10 ou dermatologiques contenant, à titre de principe actif, au moins un extrait de Kalanchoe linearifolia, en association ou en mélange avec au moins un excipient et/ou véhicule approprié.
Kalanchoe linearifolia appartient à la famille des Crassulacées. Le genre Kalanchoe 15 comprend approximativement 120 espèces, localisées majoritairement en Afrique, plus particulièrement à Madagascar. Des extraits de Kalanchoe comme Kalanchoe brasiliensis ont déjà montré une activité anti-inflammatoire (Mourào R.H. et. al., Phytotherapy Research 1999, 352-354).
20 La médecine traditionnelle malgache utilise le jus issu des fleurs fraîches broyées de Kalanchoe linearifolia en application topique, notamment pour le traitement de l'eczema.
Bien que certaines espèces apparentées soient connues, aucune littérature spécifique ne décrit les propriétés cosmétiques ou dermatologiques de Kalanchoe linearifolia.
Or, la Demanderesse a constaté que des extraits de Kalanchoe linearifolia présentent des propriétés intéressantes, notamment en terme d'activité anti-inflammatoire et cicatrisante. D'une manière générale, les extraits de Kalanchoe linearifolia ont une toxicité très faible ; ils sont aptes à une utilisation cosmétique ou dermatologique.
Les utilisations cosmétiques et dermatologiques considérées pour les compositions contenant ces extraits de plantes concernent notamment le traitement de l'hypersensibilité cutanée, du vieillissement cutané et la réparation cutanée. 25 30 Les utilisations cosmétiques comprennent, d'une manière générale et non exhaustive, le traitement préventif et/ou curatif des peaux sensibles et intolérantes, des peaux hyperréactives, des peaux sujettes aux rougeurs et des peaux grasses à imperfections. Elles comprennent également le traitement préventif et/ou curatif des peaux marquées par les signes du vieillissement, tels que l'amincissement de la peau, les rides et ridules, le flétrissement de la peau ou le manque d'élasticité. Les utilisations dermatologiques comprennent, de manière non exhaustive, l'usage dans les cas de dermatite atopique (eczema), de psoriasis, de prurit, de rosacée, de dermite séborrhéique, d'acné et pour la cicatrisation des plaies. Un extrait de Kalanchoe linearifolia utilisé selon l'invention peut être préparé à partir de matériel végétal issu de la plante entière ou de partie de plante comme les feuilles, les tiges, les fleurs, les pétales, les fruits ou les racines. Selon une forme préférentielle de l'invention, un extrait de Kalanchoe linearifolia est préparé à partir de matériel végétal issu des feuilles et des tiges de la plante.
Toute méthode d'extraction connue de l'homme du métier peut être utilisée pour préparer un 20 extrait de Kalanchoe linearifolia utilisé selon l'invention.
On peut notamment utiliser les méthodes d'extraction par des solvants comme l'eau, les alcools ou les solvants organiques. On peut également utiliser des mélanges de ces différents solvants, comme par exemple des mélanges hydroalcooliques. Les extractions peuvent 25 notamment avoir lieu à température ambiante ou à une température plus élevée, selon le point d'ébullition du solvant utilisé.
30 Parmi les alcools pouvant être utilisés comme solvant d'extraction, on peut notamment citer l'éthanol.15 Parmi les solvants organiques pouvant être utilisés comme solvant d'extraction, on peut notamment citer l'acétate d'éthyle, le dichlorométhane et les alcanes comme l'hexane, le cycloh.exane, l'heptane ou l'octane.
On peut également réaliser une série d'extractions successives par différents solvants, chaque phase d'extraction étant concentrée et le concentrât étant soumis à une nouvelle extraction par un solvant différent. Cette méthode permet de réaliser plusieurs extraits au contenu spécifique, pouvant présenter des propriétés originales.
Par exemple, on peut effectuer une première extraction du matériel végétal à l'aide d'un solvant alcoolique ou hydroalcoolique comme l'éthanol ou un mélange éthanol/eau, concentrer la phase d'extraction obtenue et effectuer une extraction du concentrât à l'aide d'un solvant organique, comme un alcane ou l'acétate d'éthyle. Cette opération peut être répétée plusieurs fois à l'aide de différents solvants.
Selon une forme de l'invention, un extrait de Kalanchoe linearifolia constitue le principe actif des compositions selon l'invention.
Selon une autre forme de l'invention, le principe actif des compositions selon l'invention est 20 constitué de l'association d'un extrait de Kalanchoe linearifolia avec un ou plusieurs autres composés naturels ou synthétiques, purs ou sous forme d'extraits végétaux, d'action complémentaire, similaire ou synergique.
Selon une forme préférentielle de l'invention, le principe actif des compositions selon 25 l'invention est constitué de l'association d'un extrait de Kalanchoe linearifolia avec un extrait de Sida acuta. Cette plante tropicale appartient à la famille des Malvacées. Des extraits de cette plante présentent également des propriétés anti-inflammatoires et cicatrisantes.
Un extrait de Sida acuta utilisé selon l'invention peut être préparé à partir de matériel végétal 30 issu de la plante entière ou de partie de plante comme les feuilles, les tiges, les fleurs, les pétales, les fruits ou les racines.
La peau reconstruite (Mimeskin , Coletica, Lyon, France) a été ensuite préparée dans le fixateur de Bouin (LOX, LOXL, élastine) ou dans une solution de formol à 10% (pour l'élastine) puis incluse en paraffine pour une étude d'immunihistochimie ou ont été congelées directement dans l'azote liquide pour des analyses d'immunofluorescence. Des sections de 6 pm d'épaisseur ont été déparaffinées et blanchies en glycine-HCI (100 mmol/I). Les immuno-détections de Ki67 (marqueur de prolifération), de la Kératine 14 (marqueur de toutes les couches cellulaires), de la kératine 10 (marqueur des couches de kératinocytes suprabasaux), de l'involucrine, de la tranglutaminase et de la nestine sont réalisées sur la peau reconstruite au jour 45.
Exemple 10: Utilisation des produits de l'invention en combinaison avec des molécules existantes brevetées Il est possible de combiner les produits de l'invention à, en particulier, des extraits stimulant la trophicité des nerfs cutanés, active sur les nerfs sensitifs cutanés comme par exemple un extrait de paprika (Capsicum annuum), et/ ou de pigment rouge (Red pepeer), et/ou de poivre (Piper nigrum) (L'OREAL FR2825273), et/ ou le glutamylamidoethylindole (Exsymol). Il est envisageable de combiner les produits de l'invention à des extraits qui miment l'action de la 13 endorphine afin d'améliorer la fonction barrière de la peau comme par exemple un extrait de coque de fève de cacao (L'OREAL US2006069032). 15 20 est aussi envisageable de combiner les produits de l'invention à des extraits qui activent la [3 endorphine afin de générer une sensation de bien être comme par exemple un extrait de Tephrosia purpurea (Soliance).
Il est encore envisageable de combiner les produits de l'invention avec d'autres molécules tel que a-MSH, p endorphine ou des dérivés comme par exemple la P3-endorphine, des huiles essentielles afin de stimuler la différenciation des kératinocytes destiné à avoir une action anti-vieillissement (CODIF FR2857874) ou du NGF afin d'avoir un effet sur la trophicité des nerfs.
Exemple 11 : Utilisation des produits de l'invention dans des formulations cosmétiques ou pharmaceutiques de type émulsion huile dans eau
Formulation 11a :
Eau qsp 100 Butylene Glycol 2 Glycerine 3 Sodium Dihydroxycetyl 2 Phosphate, Isopropyl Hydroxycetyl Ether
Glycol Stearate SE 14 Triisononaoin 5 Octyl Cocoate 6
Butylene Glycol, 2 Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben, pH ajusté â 5,5 Produits de l'invention 0,0 A B Formulation 114 : A Eau qsp 100 Butylene Glycol 2 Glycerine 3 Polyacrylamide, Isoparafin, 2,8 Laure h-7 B Butylene Glycol, 2 Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben ; Phenoxyethanol, 2 Methylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben 0,5 Butylene Glycol D Produits de l'invention 0,01 ù 10 % Formulation llc : A Carbomer 0,50 Propylene Glycol Glycerol 5 Eau qsp 100 B Octyl Cocoate 5 Bisabolol 0,30 Dimethicone 0,30 C Sodium Hydroxide 1,60 D Phenoxyethanol, 0,50 Methylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben E Parfum 0,30 Produits de l'invention 0,01 ù 10 Exemple 12 : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de tvoe eau dans huile PEG 30 ù 3 di polyhydroxystearate 3 Capric Triglycerides Cetearyl Octanoate 4 Dibutyl Adipate 3 B Grape Seed Oil 3 Jojoba Oil Phenoxyethanol, Methylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben Glycerine Butylene Glycol 3 Magnesium Sulfate 0,5 EDTA 0,05 Eau qsp 100 C Cyclomethicone 0,3 D Dimethicone Parfum E Produits de l'invention 0, 01ù10% Exemple 13: Utilisation des produits de l'invention dans une 10 formulation de type shampoing ou gel douche
Xantham Gum 0,8 Eau qsp 100
Butylene Glycol, 0,5 Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben Phenoxyethanol, 0,5 Methylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben Citric acid 0,8 A B 15 Sodium Laureth Sulfate 40,0
Produit de l'invention 0,01 ù 10 %
Exemple 14: Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de type rouge à lèvres et autres produits anhydres
Minerai Wax 17,0 Isostearyl Isostearate 31,5 Propylene Glycol Dipelargonate 2,6 Propylene Glycol Isostea rate 1,7 PEG 8 Beewax 3,0 Hydrogenated Pa Kernel Oil 3,4 Glycerides, Hydrogenated Palm Glycerides Lanoline Oil 3,4 Sesame Oil 1,7 Cetyl Lactate 1,7 Minerai OH, Lanolin Alcohol 3,0
Produits de l'invention 0,01 ù
Exemple 15: Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de gels aqueux (contours de )'oeil, amincissants, etc...)
Selon un mode avantageux de l'invention, l'écran comprend des moyens de réflexion et/ou de réfraction déviant latéralement la partie du ou des faisceaux lumineux du ou des modules optiques. Selon un mode avantageux de l'invention, l'écran comprend une face d'entrée disposée en face du ou des modules optiques, une face de sortie, et des facettes de réflexion sur au moins une desdites faces d'entrée et de sortie. Ces facettes sont préférentiellement transparentes, plus précisément vierges de revêtement réfléchissant. Selon un mode avantageux de l'invention, les facettes de réflexion de l'écran sont inclinées de manière à ce que les rayons de la partie du ou des faisceaux lumineux dudit ou desdits modules optiques, respectivement, rencontrent lesdits facettes avec un angle d'incidence supérieur à l'ange limite de réfraction, lesdits rayons subissant alors une réflexion totale. Selon un mode avantageux de l'invention, les facettes de réflexion s'étendent au moins essentiellement verticalement et forment un motif répétitif dans une direction horizontale. Alternativement, les facettes de réflexion peuvent former un motif variable dans la direction horizontale. Selon un mode avantageux de l'invention, la ou les faces de l'écran sur laquelle ou lesquelles les facettes de réflexion sont présentes, est/sont au moins essentiellement généralement plane(s). Alternativement, cette ou ces faces peuvent être courbes. Selon un mode avantageux de l'invention, la partie du ou de chacun des faisceaux lumineux dudit ou desdits modules optiques, respectivement, qui est déviée latéralement correspond à moins de 15%, préférentiellement 10%, plus préférentiellement 5% de la puissance lumineuse dudit faisceau. Selon un mode avantageux de l'invention, le ou au moins un des modules comprend une source lumineuse et un réflecteur avec une surface réfléchissante dont une zone est configurée pour réfléchir les rayons provenant de ladite source majoritairement vers l'écran en vue d'être déviés latéralement, la surface de ladite zone étant comprise entre 1% et 15%, préférentiellement 2% et 10%, plus préférentiellement 3% à 8% de la surface totale de la surface réfléchissante.
Selon un mode avantageux de l'invention, le dispositif comprend un premier et un deuxième module optique apte à produire un faisceau lumineux et logé dans le boîtier, l'écran étant disposé de manière à ce qu'une première portion dudit écran dévie latéralement une partie du faisceau lumineux du premier module et une deuxième portion dudit écran dévie latéralement une partie du faisceau lumineux du deuxième module. Selon un mode avantageux de l'invention, l'écran comprend des moyens de fixation situés entre la première portion et la deuxième portion dudit écran. Selon une réalisation de l'invention, ces dits moyens de fixation peuvent comprendre une patte de fixation s'étendant en arrière de l'écran. Par exemple, cette patte présente une extrémité jointe à la face arrière de l'écran et s'étend vers l'arrière du dispositif lumineux, à savoir dans le sens opposé au sens d'émission de la lumière par le dispositif lumineux, la deuxième extrémité de la patte étant agencé de manière à ce que l'écran soit devant celle-ci, en particulier lorsqu'observé dans le sens opposé au sens d'émission de la lumière par le dispositif lumineux. Ceci permet que l'écran masque en grande partie, voire totalement cette patte, à la vue d'un observateur extérieur au dispositif lumineux. L'écran semble ainsi flotter dans l'air à l'intérieur du dispositif. Pour renforcer cet effet, cette patte de fixation peut s'étendre essentiellement perpendiculairement aux première et deuxième portions.
Selon un mode avantageux de l'invention, le dispositif comprend un masque avec une portion séparant les premier et deuxième modules, l'écran étant fixé à ladite portion de masque. Selon un mode avantageux de l'invention, le premier module est situé au-dessus du deuxième module ou vice versa.
Selon un mode avantageux de l'invention, la portion de masque séparant les premier et deuxième modules, et la patte de fixation de l'écran s'étendent généralement horizontalement. Selon un mode avantageux de l'invention, le deuxième module est situé en retrait rapport au premier module, et ce suivant une direction longitudinale correspondant aux directions principales des faisceaux desdits modules.
Les figures 2 et 3 illustrent le projecteur 4 sans sa glace. Le projecteur 4 comprend un boîtier 8 dans lequel sont logés quatre modules optiques lumineux, en l'occurrence un premier module optique 10 assurant une fonction indicateur de direction (ou encore clignotant) et un deuxième module optique 12 assurant une fonction de lampe ville. Le projecteur peut également comprendre un troisième module optique 16 (non représenté) assurant une fonction d'éclairage du type code (ou encore de croisement), et/ou un quatrième module optique 14 (non représenté) assurant une fonction d'éclairage du type route. Comme cela est visible aux figures 2 à et 3, le module indicateur de direction 10 est disposé au-dessus du module lampe ville 12. Un masque 22 est disposé entre ces deux modules 10 et 12, ce masque comprenant une portion 221 s'étendant essentiellement horizontalement entre lesdits modules. Un écran 20 est fixé sur cette portion de masque 22 de manière à être disposé partiellement dans le faisceau lumineux du module indicateur de direction 10 et partiellement dans le faisceau lumineux du module lampe ville.
L'écran 20 est réalisé en matériau transparent ou translucide de manière à former un dioptre avec l'air ambiant. Il est disposé préférentiellement à distance de la face interne de la glace, comme par exemple à une distance comprise entre 1 et 10mm, préférentiellement entre 1 et 5mm. L'écran est configuré pour dévier les rayons le traversant, et ce transversalement vers l'axe longitudinal central du véhicule. En référence aux figures 2 et 3, l'écran 20 dévie une partie des rayons des faisceaux lumineux desdits modules optiques 10 et 12 vers la gauche (ou vers la droite si l'on se met dans le sens de marche du véhicule), de manière à être visibles depuis une position d'observation sur l'axe longitudinal central du véhicule, conformément aux réglementations discutées ci- avant. Comme cela est bien visible à la figure 2 et davantage à la figure 3, l'écran est configuré pour n'intercepter qu'une partie de chacun des faisceaux des modules optiques 10 et 12 avec lesquelles il est prévu de coopérer. Il ne dévie par conséquent qu'une partie des rayons de chacun de faisceaux, cette partie pouvant être inférieure à 15%, préférentiellement 10%, plus préférentiellement 5%, de la puissance lumineuse de chacun des faisceaux.