1 L'invention se rapporte à un extrait de graines de Passiflore, Passiflora incarnata ou edulis et préférentiellement edulis, particulièrement riche en polyphénols et un procédé de préparation d'un tel extrait. La présente invention porte également sur l'utilisation cosmétique, dermatologique ou thérapeutique d'une telle composition ou d'un tel extrait. L'invention concerne enfin un procédé de soin cosmétique de la peau, des phanères ou des muqueuses, consistant à administrer une telle composition ou un tel extrait. LES PASSIFLORES La famille des passiflores (Passiflora) est constituée d'environ 500 espèces. Les espèces sont souvent distribuées dans les régions chaudes tempérées et tropicales et notamment sur le continent américain, mais sont plutôt rares en Asie, Australie et Afrique tropicale. Botanique Les plantes se présentent sont forme d'arbrisseaux ou herbes grimpantes. Les feuilles sont alternes, parfois simples, lobées ou palmées. Les fleurs peuvent attendre 9 cm de diamètre, sont bisexuelles ou unisexuelles et régulières. Elles sont blanches et violettes et présentent des appendices pétaloïdes fins, garnis d'appendices filiformes symbolisant la couronne d'épines du Christ. Le fruit de 4 à 5 cm de longueur est ovalaire et souvent de couleur jaune à orangée. Les espèces les plus répandues sont notamment Passiflora incarnata (P. incarnata) et 25 Passiflora edulis (P. edulis). Eléments de Phytochimie P. incarnata : les constituants majeurs sont représentés par la famille des flavonoïdes qui sont présentes en grande quantité dans les feuilles. Les feuilles contiennent, en particulier, une forte teneur en isovitexine. Les feuilles de P. incarnata contiennent 30 également en faible quantité des alcaloïdes indoliques simples (harmane, harmine...), des sucres comme le raffinose, le saccharose, fructose, glucose, et des huiles essentielles 3045380 2 et du maltol décrit comme la molécule qui serait à l'origine des effets sédatifs et anticonvulsifiants attribués à cette plante. P. edulis : à partir d'un extrait méthanolique de feuilles séchées, un composés spécifiques a été identifié : la passiflorine - cyclopropane triterpène glycoside (E. 5 Bombardelli et al., 1975). Les feuilles de P. edulis contiennent en particulier de l'isoorientine, un flavonoïde qui n'est pas retrouvé dans l'espèce P. incarnata. Elles contiennent également des traces d'huile essentielle et d'alcaloïdes identiques à l'espèce P. incarnata. La pulpe du fruit contient des flavonoïdes, schaftoside, isoschaftoside, isoorientine, 10 orientine, isovitexine, dérivés de lutéoline (M.L. Zeraik, J.H. Yariwake - 2010), de l'acide ascorbique (environ 60 mg/100 g). La pulpe contient également des dérivés cyanogéniques glycosylés : la prunasine, la sambunigrine et l'amygdaline, ainsi que deux mandelonitrile I3-rutinosides récemment identifiés (D. Chassagne and J. Crouzet, 1998 ; D.S. Seigler, 2002). 15 Toxicologie Des constituants cyanogéniques sont présents essentiellement dans les parties aériennes de différentes variétés de passiflore. Caractéristiques de la graine Les graines constituent 6 à 12% du fruit de P. Edulis et elles contiennent : 20 des polyphénols dont le Piceatannol (structure proche du resveratrol) et son dimère la scirpusine B (S. Sano ; K. Sugiyama ; T. Ito, 2011), substances à effets vasorelaxant et anti-oxydant. de l'huile, (rendement de 18% après extraction par solvant) contenant des phytostérols (0.2% dont campestérol, stigmastérol, sitostérol, avenasterol) ; 60 à 73% d'acide linoléique (oméga 6), 14% à 20% d'acide oléique et 465 ppm de tocophérols (G. Piobom, N. Barou et al, 2006 ; R. de V.V. Lopes et al.). Des sucres et des protéines. ART ANTERIEUR Usage Alimentaire Le fruit semble être consommé depuis la préhistoire. Au XVIème siècle au Pérou, les magnifiques fleurs de passiflores étaient déjà considérées comme un remède et de 3045380 3 nombreuses espèces de passiflores sont toujours utilisées dans de nombreux pays dans les pratiques thérapeutiques courantes. Usage Médical Les passiflores (souvent les parties aériennes et parfois les fruits) sont souvent utilisées 5 partout dans le monde comme anxiolytique, sédatif, diurétique ou analgésique (« Passiflora : review update. K. Dhawan, S. Dhawan, A. Sharma, 2004 »). Le maltol et certains de ses dérivés seraient à l'origine de cet effet sédatif. Cette activité serait plus constante et plus significative pour l'espèce P. incarnata. Des extraits de P. incarnata seraient capables de lutter contre la dépendance à la 10 morphine. Un effet anti-hypotenseur d'un extrait méthanolique d'écorces de fruits de P. edulis, ainsi qu'un effet hypocholestémiant d'un extrait de graines délipidées riches en fibres ont également été mis en évidence. Un effet anti-tumoral d'une décoction des fruits via l'inhibition de métalloprotéinases 15 matricielles (MMP2 et MMP9) impliquées dans l'invasion tumorale, les métastases et l'angiogénèse, a également été mis en évidence (S.S. Patel, 2009). Usages Dermo-cosmétiques Au Brésil, les feuilles de P. foetida sont utilisées par voie topique pour traiter les maladies cutanées d'origine inflammatoire, en particulier grâce à la présence de 20 l'isoorientine. A Maurice et Rodrigues, les décoctions de feuilles de P. suberosa sont également utilisées en bain pour traiter les maladies de peau. DESCRIPTION DE L'INVENTION La Demanderesse a découvert que les extraits de graines de passiflore, en 25 particulier Passiflora incarnata ou Passiflora edulis, et avantageusement Passiflora edulis, présentent des propriétés cosmétiques, pharmaceutiques et dermatologiques jamais décrites jusqu'à présent. En particulier, c'est la première fois que de tels extraits de graines de passiflore sont utilisés en tant que tels, pour leurs propriétés spécifiques. L'invention a ainsi pour objet un extrait polyphénolique de graines de Passiflore, 30 en particulier de graines de Passiflora incarnata ou de Passiflora edulis, plus particulièrement de Passiflora edulis, comprenant au moins 30% en poids de polyphénols, exprimés en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids de l'extrait 3045380 4 sec. Cette teneur équivaut à au moins 3 mg de polyphénols par millilitre d'extrait liquide. L'extrait selon la présente invention comprend avantageusement au moins 35% en poids de polyphénols, exprimés en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids 5 total dudit extrait sec, c'est-à-dire au moins 3,5 mg de polyphénols par millilitre d'extrait liquide. L'extrait selon la présente invention comprend plus avantageusement au moins 40% en poids de polyphénols, exprimés en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids total dudit extrait sec, c'est-à-dire au moins 4 mg de polyphénols par ml d'extrait 10 liquide. Parmi les polyphénols présents dans l'extrait selon l'invention, on retrouve majoritairement les dérivés catéchiques. Par « dérivés catéchiques » on entend, au sens de la présente invention, les flavoinoïdes de la famille de la catéchine, également connue sous le nom de catéchol. 15 Les dérivés catéchiques sont plus particulièrement des composés de formule générale (I) suivante : (I) dans laquelle : représente une liaison simple de configuration R ou S; 20 R1 représente OH ou un groupe galloyl de formule (II) suivante : 3045380 5 (II) ; et R2 représente H ou OH. Les dérivés catéchiques sont plus particulièrement des composés de formule générale (I) choisis dans le groupe constitué de : Nom Configuration R1 R2 (+)-catéchine 2R, 3S OH H (-)-épicatéchine 2R, 3R OH H (-)-catéchine 2S, 3R OH H (+)-épicatéchine 2S, 3S OH H (-)-épigallocatéchine 2R, 3R OH OH (-)-épicatéchine gallate 2R, 3R Groupe galloyl H (-)-épigallocatéchine gallate 2R, 3R Groupe galloyl OH (+)-gallocatéchine 2R, 3S OH OH (+)-gallocatéchine gallate 2R, 3S Groupe galloyl OH 5 L'extrait selon l'invention comprend avantageusement au moins 20 % en poids, en particulier au moins 24 % en poids de dérivés catéchiques, exprimés en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids de l'extrait sec. Ainsi, dans l'extrait selon l'invention, au moins 50% en poids, en particulier au moins 60% en poids des 10 polyphénols sont des dérivés catéchiques, exprimés en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids de polyphénols dans l'extrait sec. Avantageusement, l'extrait selon l'invention comprend en outre au moins 10% en poids d'acides organiques, notamment d'acide acétique, d'acide malique, d'acide 15 citrique ou leurs mélanges, par rapport au poids de l'extrait sec. 3045380 6 L'extrait selon l'invention est avantageusement obtenu par extraction solide/liquide des graines de Passiflore dans un solvant choisi parmi l'eau, les glycérols, les glycols, et leurs mélanges. Le solvant est plus particulièrement choisi parmi les mélanges binaires 5 eau/glycérol, eau/glycol, et leurs mélanges, avantageusement dans une proportion comprise entre 30 et 90% de glycérol et/ou de glycol dans l'eau. De préférence le solvant utilisé est choisi parmi les mélanges binaires eau/glycérol ou eau/propanediol, en particulier eau/propanediol, plus particulièrement eau/1,3-propanediol. 10 En particulier, l'extrait selon l'invention contient avantageusement en poids par rapport à l'extrait sec obtenu : - Environ 40 % de polyphénols ; - Environ 10 % de sucres ; - Environ 11 % d'acides de fruits ; et 15 - Environ 5 % de protéines. De manière particulière, l'extrait selon l'invention ne comprend pas d'isoorientine, orientine, vitexine ou encore d'isovitexine. L'invention a également pour objet un procédé de préparation d'un extrait 20 polyphénoliques de passiflore en particulier de graines de Passiflora incarnata ou de Passiflora edulis, avantageusement de Passiflora edulis, comprenant au moins 30% en poids de polyphénols, exprimés en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids de l'extrait sec, ledit procédé comprenant au moins une étape d'extraction solide/liquide dans un solvant choisi parmi l'eau, les glycérols, les glycols, et leurs mélanges. 25 Avantageusement, ledit procédé de préparation d'un extrait polyphénolique de graines de passiflore selon l'invention comprend les étapes successives suivantes : a) broyage des graines ; b) éventuellement délipidation des graines, de préférence par pressage, extraction éthanolique ou extraction CO2 ; 30 c) extraction solide/liquide des graines broyées et éventuellement délipidées dans un solvant choisi parmi l'eau, les glycérols, les glycols, et leurs mélanges ; 3045380 7 d) séparation de la phase solide et de la phase liquide par décantation, et/ou centrifugation et/ou filtrations successives ; e) éventuellement séchage de l'extrait obtenu à l'étape d). 5 L'étape a) de broyage des graines peut être réalisée par des méthodes connues de l'homme du métier, notamment à l'aide d'un broyeur à couteaux, d'un broyeur à marteaux, etc. A l'étape c), la phase d'extraction solide/liquide est réalisée de préférence à une température comprise entre 20°C et 90°C, en particulier entre 30°C et 80 °C, plus 10 particulièrement entre 45 °C et 75°C, typiquement 70°C. La durée d'extraction est avantageusement comprise entre 30 minutes et 4h, en particulier entre lh et 3h, avantageusement elle est d'environ 2 heures. Avantageusement, le solvant d'extraction utilisé à l'étape c) est choisi parmi les mélanges binaires eau/glycérol, eau/glycol, et leurs mélanges, avantageusement dans 15 une proportion comprise entre 30 et 90% de glycérol et/ou de glycol dans l'eau. En particulier, le solvant d'extraction est choisi parmi les mélanges binaires eau/glycérol ou eau/propanediol, en particulier eau/propanediol, plus particulièrement eau/1,3- propanediol. Dans une variante avantageuse du procédé, préalablement à l'étape c), les 20 graines de passiflore sont délipidées. Avant d'être dispersées, les graines broyées peuvent être délipidées, notamment dans de l'éthanol. L'élimination des lipides permet une meilleure efficacité des étapes d'extraction et de filtrations. Il est également et préférentiellement possible d'utiliser des tourteaux de ces graines, c'est-à-dire le résidu issu de l'extraction préalable de l'huile par solvant, technique de CO2 supercritique par 25 exemple et préférentiellement par pressage mécanique. L'étape d) de séparation de la phase solide et de la phase liquide est réalisée par des méthodes connues de l'homme du métier, notamment par décantation, centrifugation et/ou filtrations successives jusqu'à parfaite limpidité et propreté microbiologique. 30 Avantageusement, l'extrait polyphénolique selon l'invention peut être stabilisé par l'étape de séchage e), par des procédés connus de l'homme de l'art. 3045380 8 L'étape de séchage peut, par exemple, être réalisée en présence d'un support de type, par exemple, maltodextrines ou fibres d'acacia (Fibregum® société CNI). La teneur en support varie typiquement selon un ratio allant de 0% à 80% de support par rapport au pourcentage de matière sèche obtenu dans la forme liquide de l'extrait. 5 L'extrait est préférentiellement séché par lyophilisation afin d'obtenir une poudre finale. La poudre finale comprend avantageusement 30 à 70% en poids de matière sèche de l'extrait, le complément à 100% étant le support de lyophilisation. Plus avantageusement la poudre finale comprend 50% de matière sèche issue de l'extrait et 50% de support de lyophilisation. 10 Alternativement, la matière première de départ du procédé selon l'invention peut être un tourteau de graines de passiflore délipidées, notamment par pressage. Dans ce cadre et à titre d'exemple non limitatif, l'extrait polyphénolique selon l'invention peut être obtenu selon le procédé suivant : a') mise en solution de tourteau de graines de passiflore délipidées par pressage, à 15 10% de matière sèche dans l'eau ; b') extraction solide/liquide sous agitation pendant 2 heures à une température de 70°C ; c') purification par étapes de filtrations successives ; et d') filtration stérile. 20 L'extrait obtenu par le procédé selon l'invention, tel que décrit dans les paragraphes précédents, comprend avantageusement au moins 35% en poids, plus avantageusement au moins 40% en poids, de polyphénols, exprimés en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids de l'extrait sec. 25 Avantageusement, l'extrait obtenu par le procédé selon l'invention comprend au moins 20 % en poids, en particulier au moins 24 % en poids de dérivés catéchiques, exprimés en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids de l'extrait sec. Ainsi, dans l'extrait obtenu par le procédé selon l'invention, au moins 50% en poids, en particulier au moins 60% en poids des polyphénols sont des dérivés catéchiques 30 exprimés en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids de polyphénols dans l'extrait sec. 3045380 9 Avantageusement, l'extrait obtenu par le procédé selon l'invention comprend au moins 10% en poids d'acides organiques, notamment d'acide acétique, d'acide malique, d'acide citrique ou leurs mélanges, par rapport au poids de l'extrait sec. La présente invention a donc également pour objet un extrait de graines de 5 passiflore en particulier de graines de Passiflora incarnata ou de Passiflora edulis, avantageusement de Passiflora edulis, susceptible d'être obtenu par le procédé mentionné ci-dessus. Un tel extrait répond aux spécifications définies précédemment concernant l'extrait selon l'invention. 10 Dans la suite de la description, on parlera d'« extrait selon l'invention » pour désigner l'extrait en tant que tel, tel que défini ci-dessus, ou l'extrait susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention tel que décrit ci-dessus. L'invention a en outre pour objet une composition comprenant un extrait riche en polyphénols de graines de passiflore selon l'invention, en tant que principe actif, et le 15 cas échéant un excipient approprié. L'extrait selon l'invention est tel que défini dans les paragraphes ci-dessus concernant l'extrait en tant que tel et ceux concernant l'extrait susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention. La composition selon l'invention comprend avantageusement de 0,001 à 10% en poids, avantageusement de 0,01 à 5% en poids, dudit extrait polyphénolique de graines 20 de Passiflore selon l'invention, le poids de l'extrait étant exprimé en extrait sec, par rapport au poids total de la composition. La composition est avantageusement cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique. Ladite composition est de préférence formulée pour être administrée par voie topique externe. 25 La composition selon l'invention peut comprendre en outre un ou plusieurs autres principes actifs. La composition selon l'invention peut être formulée sous la forme de différentes préparations adaptées à une administration topique. En particulier, les compositions topiques peuvent être notamment les crèmes, les 30 émulsions, les laits, les pommades, les lotions, les huiles, les solutions aqueuses ou hydro-alcooliques ou glycoliques, les poudres, les patchs, les sprays, les shampooings, les vernis ou tout autre produit pour application externe. 3045380 10 Selon sa nature (cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique), la composition selon l'invention peut en outre comprendre au moins un excipient cosmétiquement, pharmaceutiquement ou dermatologiquement acceptable. Notamment, la composition selon la présente invention peut en outre comprendre au moins un 5 adjuvant cosmétiquement, pharmaceutiquement ou dermatologiquement connu de l'homme du métier, choisi parmi les tensioactifs, les épaississants, les conservateurs, les parfums, les colorants, des filtres chimiques ou minéraux, les agents hydratants, les eaux thermales, etc. L'homme du métier sait adapter la formulation de la composition selon l'invention en utilisant ses connaissances générales. 10 Les modes d'administration, les posologies et les formes galéniques optimales des compositions selon l'invention peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement pharmaceutique, dermatologique ou cosmétique adapté à un patient ou à un animal, comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient ou de l'animal, la gravité de son état général, la 15 tolérance au traitement, les effets secondaires constatés, le type de peau. L'invention a également pour objet un extrait selon l'invention ou une composition selon l'invention pour son utilisation pour prévenir et/ou traiter des troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères, 20 avantageusement des réactions inflammatoires, des réactions d'oxydation, des désordres liés à des attaques radicalaires liées ou non à la pollution, des troubles de la barrière ou de l'homéostasie, du vieillissement, notamment du vieillissement chronologique et/ou actinique, de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères. L'invention a également pour objet un extrait selon l'invention ou une 25 composition selon l'invention pour son utilisation pour prévenir et/ou traiter des troubles vasculaires et/ou des altérations du tissu adipeux. L'invention a également pour objet l'utilisation d'un extrait de graines de passiflores selon l'invention ou d'une composition selon l'invention, pour la fabrication d'une composition cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique pour prévenir et/ou 30 traiter des troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères, avantageusement des réactions inflammatoires, des réactions d'oxydation, des désordres liés à des attaques radicalaires liées ou non à la pollution, des troubles de la barrière ou 3045380 11 de l'homéostasie, du vieillissement, notamment du vieillissement chronologique et/ou actinique, de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères. L'invention a également pour objet l'utilisation d'un extrait de graines de passiflores selon l'invention ou d'une composition selon l'invention, pour la fabrication 5 d'une composition cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique pour prévenir et/ou traiter des troubles vasculaires et/ou des altérations du tissu adipeux. L'invention a en outre pour objet une méthode pour prévenir et/ou traiter des troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères, avantageusement des réactions inflammatoires, des réactions d'oxydation, des désordres 10 liés à des attaques radicalaires liées ou non à la pollution, des troubles de la barrière ou de l'homéostasie, du vieillissement, notamment du vieillissement chronologique et/ou actinique, de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères, comprenant l'administration, notamment l'administration topique, d'une quantité efficace d'un extrait de graines de passiflores selon l'invention ou d'une composition selon 15 l'invention, à un sujet en ayant besoin. L'invention a en outre pour objet une méthode pour prévenir et/ou traiter des troubles vasculaires et/ou des altérations du tissu adipeux, comprenant l'administration, notamment l'administration topique, d'une quantité efficace d'un extrait de graines de passiflores selon l'invention ou d'une composition selon l'invention, à un sujet en ayant 20 besoin. En particulier, la composition ou l'extrait selon l'invention est destiné(e) à la prévention et/ou au traitement des réactions inflammatoires, des réactions d'oxydation, des désordres liés à des attaques radicalaires liées au stress environnemental, tel que la pollution, les UV, la cigarette, etc., des troubles de la barrière ou de l'homéostasie, du 25 vieillissement, notamment du vieillissement chronologique et/ou actinique, de la peau, des phanères (cheveux et ongles) et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s). Notamment, la composition ou l'extrait selon l'invention est destiné(e) à la prévention et/ou au traitement des troubles liés à des réactions inflammatoires et/ou 30 radicalaires provoqués par des expositions UV, et/ou à des polluants ou des réactions intrinsèques, et engendrant ainsi un vieillissement accéléré, des troubles de la barrière, des troubles vasculaires, des rougeurs, etc. 3045380 12 Notamment, la composition ou l'extrait selon l'invention est destiné(e) à lutter contre le vieillissement de la peau, notamment contre le vieillissement chronologique et/ou actinique. Les troubles ou pathologies de la peau cité(e)s ci-dessus sont plus 5 particulièrement des troubles vasculaires, la dermatite atopique, l'eczéma, la dermatite irritative, la peau sensible, la peau réactive, la peau avec rougeur, l'érythème cutané, la peau âgée ou photoâgée, la peau photosensibilisée, les coups de soleil et les inflammations dues aux rayons de toutes sortes. L'invention concerne également un procédé de soin cosmétique de la peau et/ou 10 des phanères et/ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état et/ou leur aspect, consistant à administrer une composition ou un extrait selon la présente invention, avantageusement par voie topique externe. L'invention concerne un procédé de soin cosmétique de la peau, en vue d'en prévenir le vieillissement, consistant à appliquer sur la peau une composition ou un 15 extrait selon la présente invention. Les exemples qui suivent permettent d'illustrer l'invention. 20 DESCRIPTION DES FIGURES La Figure 1 représente le pourcentage d'activation du NrF2 par un extrait selon l'invention. La Figure 2 représente l'Immunomarquage de la Claudine 4 dans des explants de peau traités par le BaP (Protocole 1) 25 La Figure 3 représente l'Immunomarquage de la filaggrine dans des explants de peau traités par le BaP+Nicotine (Protocole 2) La Figure 4 représente l'Immunomarquage de la loricrine dans des explants de peau traités par le BaP+Nicotine (Protocole 2) La Figure 5 représente l'Immunomarquage du Collagène I dans des explants de 30 peau traités par le BaP+Nicotine (Protocole 2) La Figure 6 représente l'Immunomarquage de l'Elastine dans des explants de peau traités par le BaP (Protocole 1) 3045380 13 La Figure 7 représente l'Immunomarquage de la fibronectine dans des explants de peau traités par le BaP (Protocole 1) La Figure 8 représente l'aspect visuel de comète après électrophorèse de kératinocytes humains normaux traités. La Figure 8A correspond à un échantillon de 5 contrôle négatif, la Figure 8B à un échantillon de contrôle UV et la Figure 8C à un extrait selon l'invention à 0.001 %. EXEMPLE Exemple 1 : extrait selon l'invention 10 Un extrait polyphénolique est obtenu selon le procédé suivant : a) mise en solution de tourteau de graines de Passiflore edulis délipidées par pressage et broyées, à 10% de matière sèche dans un mélange 1, 3-propanediol / eau 70/30 p/p ; b) extraction sous agitation 2h à 70°C ; 15 c) élimination de la plante résiduelle par filtration grossière ; et d) purification de l'extrait obtenu par filtrations dont une filtration stérile supplémentaire. L'extrait polyphénolique liquide ainsi obtenu présente les caractéristiques suivantes (% 20 sur Extrait Sec): - Extrait sec (étuve): 0,9% (m/m) - Teneur en polyphénols totaux (par spectrophotométrie - en équivalent acide gallique) : 43% - Teneur en dérivés catéchiques (par HPLC - en équivalent acide gallique) : 22,3 25 - Teneur en acide malique (par kit enzymatique) : 5,4% - Teneur en acide citrique (par kit enzymatique): 3,7% - Teneur en Protéines (par Kjeldahl x 6.25) : 4,5% 30 Exemple 2 : extrait selon l'invention Un extrait polyphénolique est obtenu selon le procédé suivant : 3045380 14 a) mise en solution de 13.3% graines de Passiflore edulis non délipidées et broyées dans un mélange 1, 3 - propanediol / Eau 70/30 b) extraction sous agitation 2h à 70°C c) élimination de la plante résiduelle par filtration grossière 5 d) purification de l'extrait obtenu par filtrations, dont une filtration stérile supplémentaire. L'extrait polyphénolique liquide ainsi obtenu présente les caractéristiques suivantes (% sur Extrait Sec) : 10 - Extrait sec (étuve) : 1.07 % (m/m) - Teneur en polyphénols totaux (par spectrophotométrie - équivalent acide gallique) : 40% - Teneur en Protéines (Kjeldahl x 6.25) : 5,7% 15 Exemple 2 : Activité biologique de l'extrait selon l'invention 1. Potentiel biologique Le potentiel Biologique d'un extrait selon l'invention a été recherché grâce à un test de modulation de l'expression génique sur des Fibroblastes Humains Normaux (FHN) et 20 sur des épidermes humains reconstruits et mélanisés. Ainsi, l'expression de 46 gènes impliqués dans divers voies physiologiques de l'Epiderme (Barrière, pigmentation, inflammation...) et du Derme (Cicatrisation, élasticité, fermeté...) a été étudiée par PCR-array. 25 Matériel et méthodes : Des fibroblastes humains normaux (FHN) et des épidermes reconstruits mélanisés ont été incubés pendant 24h en présence d'un extrait selon l'invention, tel qu'obtenu dans l'exemple 1, à 0,002% et 0,05% (p/v) pour les FHN ou à 0,002% et 0,005% (p/v) pour les épidermes reconstruits, et en présence de TGF-f31 à 2Ong/m1 sur les FHN ou en 30 présence de Vitamine D3 à 1nM sur les épidermes reconstruits (contrôles de validation des essais). Au terme du traitement, les ARN ont été extraits et les expressions géniques ont été analysées par qRT-PCR à l'aide de carte TaqMan ciblant les fonctions clés du derme et de l'épiderme. 3045380 15 Résultats et conclusion: 5 Les résultats sont présentés dans les tableaux 2 et 3 ci-dessous et montrent notamment que l'extrait selon l'invention, en faisant varier l'expression génique de certains marqueurs, a un intérêt particulier dans les activités suivantes : - l'homéostasie et la structure de la matrice extracellulaire dermique (1 MMP3) ; et 10 - la Jonction Dermo-Epidermique (71 LAMC2). Plus particulièrement, les polyphénols de l'extrait selon l'invention ont permis de moduler l'expression génique de gènes impliqués dans les défenses anti-oxydantes et le phénomène de l'Hormesis (71 HMOX1, FTL et G6PD). 15 Cela démontre que l'extrait selon l'invention a une activité antioxydante, anti- radicalaire et anti-âge. Tableau 2 - Screening sur FHN Extrait selon Extrait selon l'invention à l'invention à 0,002% 0,05% QR* p-value QR* p-value Heme oxygenase (HMOX1) - - 4,0641 0,0025 Ferritin, Light polypeptide (FTL) - - 2,3263 0,0221 Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) - - 1,7197 0,0218 Matrix metalloproteinase 1 (MMP1) - - 0,6052 0,0282 Matrix metalloproteinase 3 (MMP3) 0,5513 0,0173 - - 20 * Niveau d'expression génique exprimé en quantité relative (QR) par rapport au contrôle non traité =1 25 3045380 16 Tableau 3 - Screening sur Epidermes reconstruits Extrait selon Extrait selon l'invention à l'invention à 0,002% 0,05% QR* p-value QR* p-value Laminin subunit gamma-2 (LAMC2) 2,2309 0,0387 4,1885 0,0165 Proopiomelanocortin (POMC) 2,3447 0,0398 1,7019 0,0183 Melanocyte-stimulating hormone receptor (MC1R) 0,7109 0,0175 0,6188 0,0127 Cytosolic phospholipase A2 (PLA2G4A) 0,6829 0,0391 - - L-dopachrome tautomerase (DCT) - - 0,4637 0,0296 * Niveau d'expression génique exprimé en quantité relative (QR) par rapport au contrôle non traité =1 5 2. Activité inductrice de l'Hormesis et de la détoxification cellulaire Une molécule Hormétique (ou Hormétine) est une substance ayant un effet biphasique, qui à faible dose va avoir un effet bénéfique mais qui à forte dose aura l'effet inverse (Ex : Prooxydant ou Antioxydant). Une Hormétine est également décrite comme étant 10 une molécule reproduisant les effets d'un léger stress sur l'organisme mais qui en retour va permettre à la cellule de se protéger de futures agressions et ainsi protéger l'organisme de diverses maladies (cancers) ou phénomènes physiques liés à l'âge (vieillissement cutanée, mauvaise cicatrisation...) ou encore des effets nocifs de l'environnement (UV, pollution...). 15 Les analyses suivantes permettent d'étudier l'activité inductrice de l'Hormesis et de la détoxification cellulaire d'un extrait selon l'invention. A- Activation de la translocation du facteur de transcription NrF2 : L'effet de l'extrait selon l'invention a été évalué vis-à-vis de l'activation de la 20 translocation du Nrf2, précurseur de la cascade responsable de la réponse hormétique et de certaines voies de détoxification de l'organisme. Matériel et méthodes Des kératinocytes HaCaT transfectés ARE-Luciférase, contenant le plasmide Nqol 25 Antioxydant Response Element (ARE) qui est un plasmide spécifique de l'activation du NrF2 et la luciférase (gène rapporteur), ont été traités pendant 6h à 37°C par un extrait 3045380 17 selon l'invention, tel qu'obtenu dans l'exemple 1, à des concentrations allant de 0,01% à 0,0005% (p/v) et par une référence positive le Ter-butylhydroquinone à 20uM. A la fin du traitement les tapis cellulaires sont lyses, l'activité de la luciférase est dosée grâce à un « Luciferase Assay Kit » de chez PROMEGA et la teneur en protéines de 5 chaque lysat est dosée par la méthode de Bradford (BioRad). Résultats et conclusion Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 4 et à la Figure 1. Ces résultats montrent que l'extrait selon l'invention a induit une augmentation de l'activité du Nrf2 10 dans les noyaux et donc une translocation de celui-ci à travers la membrane nucléaire montrant une activation de ce facteur de transcription. Cela démontre que l'extrait selon l'invention a une activité antioxydante, antiradicalaire et anti-âge. 15 Tableau 4 - Activité Nrf2 dans des HaCaT ARE-Luciférase (RLU = Relative Luciferase Activity) Activité NRF2 Activation (moyenne normalisée RLU/pg de protéines) (%) Control 0 0 Tert-butylhydroquinone 20uM 23216,4 100 *** Extrait selon l'invention à 0,0005% 4149,6 18 * Extrait selon l'invention à 0,001% 8178,2 35 *** Extrait selon l'invention à 0,005% 9998,6 43 *** Extrait selon l'invention à 0,01% 6324,6 27 *** * 0,01<p<0,05; ** 0,001<p<0,01; *** p<0,001 et ns non significatif vs cellules 20 contrôles ANOVA à un facteur suivie d'un test de Dunnett 3045380 18 B- Expression génique des marqueurs principaux de l'Hormesis et de la détoxification cellulaire. L'effet d'un extrait selon l'invention a été étudié sur l'expression génique de différents marqueurs impliqués dans les voies de l'Hormesis et dans la détoxification cellulaire. 5 Matériel et méthodes : Des Fibroblastes humains normaux, ont été traités pendant 6h, 24h et 48 heures à 37°C par un extrait selon l'invention, tel qu'obtenu dans l'exemple 1, à 0,005% et 0,002% (PAT). 10 A la fin du traitement, l'expression génique des marqueurs de l'Hormesis (HMOX1, FTL, G6PD et Nrf2) ainsi que des marqueurs impliqués dans la détoxification cellulaire (la SOD1 et la Catalase) a été analysée par RT-PCR quantitative en temps réel et normalisée vis-à-vis du gène de ménage HPRT (technologie SybrGreen). 15 Les résultats ont été analysés statistiquement par une ANOVA à un facteur suivie d'un test de Dunnett (Logiciel GraphPad Prism version 5.02, GraphPad Software, San Diego California USA). Résultats : 20 Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 5. Ces résultats montrent que l'extrait selon l'invention a significativement stimulé l'expression génique de la HMOX1 en 6h et 24h, de FTL aux trois temps, de la G6PD en 6h et 24h, de la SOD1 en 24h, du NrF2 en 24h et 48h ainsi que la Catalase en 24h. Cela démontre que l'extrait selon l'invention a une activité antioxydante, anti- 25 radicalaire et anti-âge. Tableau 5 - Expression génique des marqueurs de l'Hormesis dans des fibroblastes humains normaux (Quantité Relative) 6h HMOX1 FTL G6PD SOD1 Nrf2 Catalase Cellules contrôles 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 Extrait selon 3,38 l'invention à 0,002% (+238% ***) Extrait selon 23.06 l'invention à 0,005% (+2206% ***) (+37% ***) 1.31 1.03 1.00 0.97 (+31% *) (+3% ns) (+0% ns) (3% ns) 1.31 1.05 1.04 1.02 (+31% *) (+5% ns) (+4% ns) (+2% ns) 0,94 (6% ns) 1.37 Nrf2 Catalase 24h HMOX1 FTL G6PD SOD1 Cellules contrôles 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 Extrait selon 1.66 1.62 1.41 1.13 l'invention à 0,002% (+66% ***) (+62% **) (+41% ns) (+13% ns) Extrait selon 2.68 2.40 1.70 1.33 l'invention à 0,005% (+168% ***) (+140% ***) (+70% **) (+33% *) 1.25 1.23 (+25% *) (+23% ns) 1.30 1.31 (+30% *) (+31% *) Nrf2 Catalase 48h HMOX1 FTL G6PD SOD1 Cellules contrôles 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 3045380 19 Extrait selon l'invention à 0,002% Extrait selon l'invention à 0,005% * 0,01<p<0,05; 0.88 1.39 1.34 1.06 (-12% ns) (+39% ns) (+34%*) (+6% ns) 0.86 0.97 1.26 1.04 (0% ns) (+66% ***) (-14% ns) (-3% ns) (+26% ns) (+4% ns) ** 0,001<p<0,01; *** p<0,001 et ns non significatif vs cellules 0.98 (2% ns) 1.00 contrôles ANOVA à un facteur suivie d'un test de Dunnett 5 C- Production de la Heme Oxygenase : Un extrait selon l'invention a été analysé sur l'expression protéique de la Heme Oxygénase. Matériel et méthodes : 10 Des fibroblastes humains normaux, ont été traités pendant 24h, par un extrait selon l'invention, tel qu'obtenu dans l'exemple 1, à 0,002% et 0,005% (p/v) et par le Curcumin à 5 et 101.1M (Hormétine de référence). A la fin du traitement la Hème Oxygénase 1 (ou HMOX1 ou H01) intracellulaire a été 15 quantifiée par une technique ELISA. La coloration, proportionnelle à la quantité du marqueur étudié, a été mesurée par lecture de la densité optique (DO) à 450nm et la valeur obtenue a été ramenée à la quantité de cellules obtenue par un dosage des protéines par la technique du BC Assay (Interchim). 20 Les résultats ont été analysés statistiquement par une ANOVA à un facteur suivie d'un test de Dunnett (Logiciel GraphPad Prism version 5.02, GraphPad Software, San Diego California USA). 3045380 20 Résultats : Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 6. Ces résultats montrent que l'extrait selon l'invention a une induction de même intensité que le Curcumin sur la production de la Heme Oxygénase 1. Ce résultat confirme l'action de l'extrait selon 5 l'invention que nous avons observée lors de l'étude de l'expression génique de ce même marqueur. Cela démontre que l'extrait selon l'invention a une activité antioxydante, antiradicalaire et anti-âge. Tableau 6 - Production d'HMOX1 par des fibroblastes HMOX1 Inhibition (ng/ml sur quantité de cellules) Cellules contrôles 0.033 ± 0.003 Curcumin à 5uM 0.060 ± 0.002 82% *** Curcumin à 10uM 0.105 ± 0.006 218% *** Extrait selon l'invention à 0,002% 0.056 ± 0.002 69% *** Extrait selon l'invention à 0,005% 0.098 ± 0.004 197% *** *** p<0,001 vs cellules contrôles - ANOVA à un facteur suivie d'un test de Dunnett D- Production de la Heme Oxygenase en condition siRNA Nrf2 : Afin de vérifier si la voie d'activation de la hème oxygénase par un extrait selon l'invention passe bien par une activation du Nrf2, le potentiel d'induction de la production de Heme Oxygenase a été vérifié dans un système où l'expression du Nrf2 est bloquée (small interference siRNA). Matériel et méthodes : Des fibroblastes humains normaux, ont été prétraités pendant 24h par du siRNA Nrf2 et par du siRNA Scrambled (témoin siRNA sans actions) puis, sur chacune des conditions 25 précédentes, pendant 24h par un extrait selon l'invention, tel qu'obtenu dans l'exemple 1, à 0,005% (p/v). 10 15 20 3045380 21 A la fin du traitement la Hème Oxygénase 1 (ou HMOX1) intracellulaire a été quantifiée par une technique ELISA. La coloration, proportionnelle à la quantité du marqueur étudié, a été mesurée par lecture de la densité optique (DO) à 450nm. 5 Les résultats ont été analysés statistiquement par une ANOVA à un facteur suivie d'un test de Tukey (Logiciel GraphPad Prism version 5.02, GraphPad Software, San Diego California USA). Résultats : 10 Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 7. Ces résultats montrent que la stimulation de la production d'HMOX1 induite par un extrait selon l'invention est largement diminuée (-62%, p<0,001) lorsque la voie Nrf2 est partiellement bloquée (siRNA Nrf2). L'activité d'un extrait selon l'invention sur la production d'Hème Oxygénase passe 15 donc bien par la voie du Nrf2. Cela démontre que l'extrait selon l'invention a une activité antioxydante, antiradicalaire et anti-âge. 20 Tableau 7 - Production d'HMOX1 par des fibroblastes - Comparatif siRNA Scrambled vs siRNA Nrf2 HMOX1 Inhibition liée au siRNA Nrf2 (ng/ml) Cellules contrôles Scrambled 3,371 ± 0.702 - - Cellules contrôles siRNA Nrf2 2.199 ± 0.089 -35% * Extrait selon l'invention à 18.821 ± 0,005% Scrambled 0.316 Extrait selon l'invention à 7.105 ± 0.131 -62% *** 0,005% siRNA Nrf2 *** p<0,001 vs cellules contrôles - ANOVA à un facteur suivie d'un test de Tukey 25 E- Effet sur la production d'espèces réactives de l'oxygène (ER0): Le potentiel antioxydant d'un extrait selon l'invention vis-à-vis de l'induction d'espèces réactives de l'oxygène induit par de l'H202 a été étudié. 3045380 22 Matériel et méthodes : Des kératinocytes humains normaux ont été incubés, pendant 24 heures, en présence d'un extrait selon l'invention, tel qu'obtenu dans l'exemple 1, à 0,002%; 0,005% et 0,01% (p/v) ou de la vitamine C à 5001.1M et de la Quercétine à 101.1M (Antioxydants de 5 références) avant incorporation de la sonde H2DCF-DA (incubation de 60 minutes). Les kératinocytes ont ensuite été stimulés par du peroxyde d'hydrogène (H202) à 100 1.11\4 pendant 20 minutes et la production d'ERO (Espèces Réactives de l'Oxygène) a été évaluée par mesure de fluorescence. 10 Les résultats ont été analysés statistiquement par une ANOVA à un facteur suivie d'un test de Tukey (Logiciel GraphPad Prism version 5.02, GraphPad Software, San Diego California USA). Résultats : 15 Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 8. Ces résultats montrent que l'extrait selon l'invention a significativement inhibé la production d'ERO par des kératinocytes en réponse à un stress oxydant induit par le peroxyde d'hydrogène (H202). Cette activité antioxydante étant d'un niveau équivalent à celle des deux témoins antioxydants (Vitamine C et Quercétine). 20 Cela démontre que l'extrait selon l'invention a une activité antioxydante, antiradicalaire et anti-âge. Tableau 8 - Production d'ERO dans des kératinocytes traités par H202 25 ERO Significativité (Unités de fluorescence) Cellules contrôles 30752.921 ± 4555.136 - - Cellules stimulées (H202) 44179.976 ± 7445.110 +44% *** Référence (Vit. C) 21719.018 ± 3174.253 -51% *** Référence (Quercétine) 14367.847 ± 1790.753 -67% *** Extrait selon l'invention à 0,002% 18769.676 ± 2780.206 -58% *** Extrait selon l'invention à 0,005% 14404.891 ± 2974.938 -67% *** Extrait selon l'invention à 0,01% 16531.685 ± 1902.378 -63% *** *** p<0,001 - ANOVA à un facteur suivie d'un test de Tukey 3045380 23 3. Protection contre les effets néfastes de la pollution Les précédents résultats ont montré qu'un extrait selon l'invention stimule la production de l'hème oxygénase 1 via l'activation de la translocation du facteur de transcription 5 Nrf2. En conséquence, l'extrait selon l'invention a permis une protection cellulaire anti- oxydante via la diminution de la formation des ERO induits par un stress H202. L'extrait selon l'invention permettant de stimuler les défenses de la peau, nous avons évalué leur effet protecteur vis-à-vis de divers stress environnementaux, ici la pollution. 10 A- Effet sur le stress oxydant : Matériel et méthodes : Des kératinocytes humains normaux ont été traités pendant 24 heures par un extrait selon l'invention, tel qu'obtenu dans l'exemple 1, à 0,002% (p/v), la vitamine C à 5001.1M et la Quercétine à 101.1M (Antioxydants de référence), par le Curcumin à 101.1M 15 (Hormétine de référence) ou par le Resveratrol à 101.1M avant incorporation de la sonde H2DCF-DA (incubation de 45 minutes). Les kératinocytes ont ensuite été stimulés par du Benzo-a-pyrène (BaP) à 9 µg/m1 pendant 20 minutes. La production d'ERO a été évaluée par mesure de fluorescence. 20 La significativité des résultats a été vérifiée par un test t de Student. Résultats et conclusion : Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 9. Ces résultats montrent que l'extrait selon l'invention à 0,002% a inhibé la production de ROS par des kératinocytes 25 en réponse à un stress oxydant induit par le BaP à 6 et 91.1g/ml. Donc l'extrait selon l'invention exerce un effet protecteur vis-à-vis du stress oxydant induit par la pollution. L'extrait selon l'invention a donc une activité antioxydante, antiradicalaire, anti-pollution et anti-âge. 30 35 3045380 24 Tableau 9 - Production d'ERO dans des kératinocytes traités par du BaP à 9 1.1g/m1 ROS Significativité (Unités de fluorescence) Cellules contrôles 4730 ± 324 - - Cellules stimulées 16777 ± 1755 +255% *** (BaP à 9µg/m1) Référence (Vit. C) 14089 ± 1719 -16% NS Référence (Quercétine) 17140 ± 930 -32% NS Curcumin à 101.M 14065 ± 1231 -16% NS Resveratrol à 101.1M 20357 ± 503 -21% * Extrait selon 11052 ± 828 34% ** l'invention à 0,002% * p<0,05; **p<0,01 ; ***p<0,001 et ns = non significatif - test t de Student 5 B- Protection des structures cutanées : La capacité d'un extrait selon l'invention à protéger l'intégrité de la peau (derme et épiderme) des effets néfastes de la pollution a été étudiée sur des explants de peau humaine. 10 Matériel et méthodes : Des explants de peau humaine, provenant d'une femme de 45 ans, ont été prétraités pendant 24h par une application topique d'une formule cosmétique contenant ou non (placebo) un extrait selon l'invention, tel qu'obtenu dans l'exemple 1 à 3%. Ces explants ont ensuite à nouveau été traités par les formules cosmétiques en présence 15 de Benzo-a-Pyréne (BaP à 201.1M) pour le protocole 1 ou de Bap+Nicotine (201.1M) pour le protocole 2. Des Immunomarquages de différents marqueurs des structures cutanées ont été réalisés. Résultats et conclusion : 20 Les résultats obtenus sont présentés par les Figures 2 à 7. Le stress mimant la pollution induit par le BaP +/- Nicotine a conduit à une altération de l'expression des marqueurs structurels étudiés. 3045380 25 Dans ces conditions, l'extrait selon l'invention a protégé les marqueurs épidermiques suivants : - la Claudine 4 (Marqueur des jonctions serrées/fonction barrière), - la Filaggrine (Marqueur de la fonction barrière et précurseur des facteurs 5 naturels d'hydratation), et - la Loricrine (Marqueur impliqué dans la différenciation cellulaire/fonction barrière) ; Ainsi que les marqueurs dermiques comme : - le Collagène I (Marqueur impliqué dans la fermeté de la peau), 10 - l'Elastine (Marqueur impliqué dans l'élasticité de la peau), et - de la Fibronectine (Marqueur impliqué dans la structure du Derme). Ces résultats montrent un réel effet protecteur de l'intégrité structurelle de l'épiderme et de sa fonction barrière ainsi que le maintien d'une structure normale du derme et donc 15 une action protectrice globale de la peau vis-à-vis de la pollution environnementale. L'extrait selon l'invention a donc une activité antioxydante, anti-radicalaire, antipollution et anti-âge. 20 4. Protection contre les effets délétères liés au soleil Les Ultraviolets (UV) et les infrarouges (IR) pénètrent plus ou moins profondément dans la peau et sont responsables, entre autre, d'une diminution de sa fermeté et d'une augmentation de la quantité de radicaux libres relargués entrainant un vieillissement 25 cutané prématuré. Ils sont également responsables de la formation des mélanomes et d'une immunodépression de la peau. L'effet protecteur d'un extrait selon l'invention vis-à-vis d'un stress induit par les UV ou les IR a é été étudié. A- Protection contre les dommages à l'ADN induits par les UV (Cornet 30 Assay) : Le maintien de l'intégrité nucléaire de la cellule, vis-à-vis des UVs, a été testé grâce à un test des comètes (Comet Assay). Matériel et méthodes : 35 Des kératinocytes humains normaux ont été traités pendant 2h par un extrait selon l'invention, tel qu'obtenu dans l'exemple 1, à 0,001% (p/v). 3045380 26 Un Cornet Assay est réalisé suivant la méthode décrite par "Singh and al" en 1988 et par "De Meo and al" en 1991, et qui consiste en une irradiation des cellules par de la lumière à 4,5J/cm2 (0,28J/cm2 d'UVA ; 0,08J/cm2 d'UVB et 4,14J/cm2 de lumière visible) correspondant à une exposition de 1 à 3 min au soleil en plein été. Puis en une 5 migration éléctrophorétique en gel d' agarose des ADN sur un gel. Une valeur relative de x2 OTM est calculée grâce au logiciel "Systat Software", celle-ci étant directement proportionnel à la taille de la comète et donc au degré de protection de l'actif vis-à-vis des UV. La significativité des résultats a été vérifiée par une analyse de variance sur le logiciel 10 SigmaPlot (version 11.0, Systat Software, Chicago, IL, USA). Résultats et conclusion : Les résultats sont présentés dans le tableau 10 et par la Figure 8 Ces résultats montrent que l'extrait selon l'invention à 0,001%, a protégé les 15 kératinocytes vis-à-vis des dommages à l'ADN induits par une irradiation UV (54% de protection, p<0,001). L'extrait selon l'invention a donc une activité antioxydante, anti-radicalaire, antipollution et anti-âge. Tableau 10 - Pourcentage de protection des cellules vis-à-vis des UV x2 OTM % de Protection Témoin sans UV 2,09 ± 0,1 100 Témoin Irradié à 4,5J/cm2 11.59 ± 0.41 0 *** Extrait selon l'invention à 0,001% 6.43 ± 0.28 54.4 *** * * * p<0,001 vs cellules non irradié et vs cellules irradié à 4, 5J/cm2. Statistiques sur SigmaPlot 30 B- Inhibition de la production de WP 1 induite par les IR Les Infrarouge (IR), qui représentent plus de la moitié du spectre solaire, peuvent induire la dégradation de la matrice dermique, contribuant au vieillissement cutané, en stimulant la production de protéases telles que la MMPl. La capacité d'un extrait selon l'invention à protéger les cellules dermiques des effets 35 néfastes des IR a été étudiée en évaluant la production de MMPl. 20 25 3045380 27 Matériel et méthodes : Des Fibroblastes Humains Normaux (FHN) ont été incubés en présence d'un extrait selon l'invention, tel qu'obtenu dans l'exemple 1, à 0,001% ou par de la déxaméthasone à 10-7M (référence antiinflammatoire) pendant 48h à la suite d'une irradiation de lh par 5 des infrarouges (0,57kJ/cm2). Après incubation, les surnageants sont récupérés afin de doser la MMP1 (Kit ELISA, R&D Systems) libérée. La significativité des résultats a été vérifiée par un test t de Student. 10 Résultats et conclusion : Les résultats sont présentés dans le tableau 11. Ces résultats montrent que l'extrait selon l'invention à 0,001%, a significativement inhibé la production de MMP1 induite par les Infra Rouges dans des Fibroblastes humains normaux. 15 L'extrait selon l'invention a donc une activité antioxydante, anti-radicalaire, anti- pollution et anti-âge. Tableau 11 - Production de MMP1 induite par les IR dans des fibroblastes humains normaux MMP1 (ng/ml) % de Protection Témoin sans IR 11 100 *** Témoin Irradié à 0,57kJ/cm2 88.6 0 Déxaméthasone à 10-7M 9.3 102 *** Extrait selon l'invention à 0,001% 77.4 14 * * 19<0, 05 , *** p<0,001 vs cellules irradiées 30 5. Protection contre les effets d'un stress chimique Effet sur la production de PGE2 induit par le PMA : La protection antiinflammatoire d'un extrait selon l'invention vis-à-vis d'une molécule chimique, le PMA, a été étudiée grâce à l'analyse du relargage de la Prostaglandine 2 35 (PGE2) 20 25 3045380 28 Matériel et méthodes : Des kératinocytes humains normaux ont été prétraités par un extrait selon l'invention, tel qu'obtenu dans l'exemple 1, à 0,002% et 0,005% et par de l'Indométacine à 10-6M (témoin-anti inflammatoire de la voie des Prostaglandines) pendant 24h à 37°C, et ce 5 afin de pouvoir mesurer un niveau de protection de l'actif vis-à-vis d'une inflammation au PMA (Phorbol 12-myristate 13-acetate) à 0,1µg/m1 utilisé sur ces mêmes tapis cellulaire pendant 24h de plus. A la fin du traitement les surnageant sont récoltés et un dosage de la Prostaglandine E2 (PGE2 ; RetD Systems) est réalisé. La coloration, proportionnelle à la quantité de 10 PGE2, a été mesurée par lecture de la densité optique (DO) à 450nm. La significativité des résultats a été vérifiée par un test t de Student. Résultats : Les résultats sont présentés dans le tableau 12. Ces résultats montrent que l'extrait selon 15 l'invention aux deux concentrations a significativement diminué le relargage de la PGE2 vis-à-vis d'une induction par le PMA à 0,1µg/ml. L'extrait selon l'invention a donc une activité antioxydante, anti-radicalaire, antipollution et anti-âge. 20 Tableau 2 - Production de PGE2 dans des kératinocytes traités par du PMA PGE2 (pg/ml) Inhibition Cellules contrôles 39 ± 0 100% *** PMA à 0,1µg/ml 113806 ± 11441 0% Indométacine à 10- 52 + 8 100% *** 6m Extrait selon 35750 ± 2192 69% ** l'invention à 0,002% Extrait selon 30382 ± 2401 73% ** l'invention à 0,005% ** 0,001<p<0,01 et *** p<0,001 vs cellules stimulées le PMA test t de Student 25 3045380 29 6. Protection contre les effets du vieillissement L'action répétée de stress environnementaux, tels que, la pollution, les effets néfastes du soleil, les molécules chimiques et toutes autres formes d'inductions d'un stress oxydant, 5 entraine une dégradation de la matrice dermique et donc un vieillissement cutané prématuré. Un extrait selon l'invention a été analysé sur un modèle de vieillissement cellulaire afin d'analyser leurs actions vis-à-vis de protéines qui sont sous-exprimées ou surexprimées avec l'âge. 10 Matériel et méthodes : Des kératinocytes sont mis en culture, et trypsines toutes les semaines, pendant 4 semaines dans un milieu de culture induisant un phénotype de vieillissement (milieu « pro-âge ») en présence ou en absence d'un extrait selon l'invention, tel qu'obtenu 15 dans l'exemple 1, à 0,000025% de MS. Au bout de 3 semaines de cultures/passages une analyse protéomique est réalisée. Celles-ci étant impliquées dans divers voies cellulaires regroupées ensuite en 6 domaines : métabolisme, apoptose, détoxification, catabolisation protéique et synthèse protéique. 20 Résultats et conclusion : Les résultats sont présentés dans le tableau 13. Dans ce contexte d'induction du vieillissement, l'extrait selon l'invention a stimulé et/ou protégé l'expression de plusieurs protéines impliquées principalement dans la détoxification/protection 25 cellulaire et dans les défenses immunitaires : Détoxification et protection cellulaire : - Stimulation de la Peroxiredoxine 2 (PRDX2) : enzyme antioxydante jouant un rôle dans la protection cellulaire contre les dommages causés par 30 les ERO intracellulaire. - Stimulation de la Carbonyl Reductase 1 (CBRI) : dehydrogénase/réductase permettant de réduire les composés carbonylés (médicaments) et intervient dans la détoxification lors de la peroxydation lipidique. Celle-ci est inhibée dans les conditions « pro-âges » et stimulée par 35 l'extrait selon l'invention dans ces conditions. - Inhibition de l'Aldehyde Dehydrogenase 2 (ALDH2) : enzyme mitochondriale jouant un rôle dans la protection cellulaires et dans la 3045380 30 différentiation qui vont catalyser/détoxifier des molécules aldéhydes/carbonyles (médicaments, pollution...). Cette protéine est stimulée dans les conditions « pro-âge », l'extrait selon l'invention restaure son niveau d'expression à un niveau basal. 5 - Stimulation de la Fatty Acid Binding Protein 5 (FABP5) : protéine chaperonne essentiellement exprimée dans l'épiderme et impliquée dans la régulation de l'homéostasie lipidique et donc jouant un rôle dans la fonction barrière. Les conditions « pro-âge » inhibent son expression, celle-ci est restaurée par les polyphenols de Maracuj a. 10 - Stimulation des Proteasome subunits I32 et I36 (PSMB2 et PSMB6) : Le Proteasome est impliqué dans l'élimination des protéines altérées/oxydées et dans le renouvellement des protéines intracellulaires. Il est constitué de sous unités a et (3 qui vont, entre autre, couper les protéines altérées au niveau de la glutamine ((36) et au niveau trypsine ((32). L'âge diminue l'activité du 15 Proteasome ce qui entraine une accumulation des protéines altérées/oxydées ; cet effet de l'âge est retrouvé dans les conditions « pro-âge » et dans ces conditions l'extrait selon l'invention stimule l'expression de ces deux sous-unités du protéasome. 20 Défense immunitaire : - Inhibition de la Beta-2-microglobuline (B2MG): petite protéine de surface (épiderme) impliquée dans la réponse immunitaire. Elle fait partie du complexe majeur d'Histocompatibilité et est surexprimée en condition pathologique ce qui va induire la production d'interleukines, notamment 6 et 25 8, ainsi que la 10 qui est une interleukine immunosuppressive. Ici, dans les conditions induisant un vieillissement, son expression est augmentée. L'extrait selon l'invention empêche cette augmentation. - Inhibition de la Lectin, mannose-binding, 1 (LMANI) : protéine faisant partie de la réponse immunitaire inné en permettant la phagocytose des 30 cellules apoptotiques et des pathogènes. Une déficience en ce gène implique une augmentation des débris cellulaires dans la peau. Il n'est pas ou peu présent à l'état basal et est augmenté en condition inflammatoire (Ex : UV). Dans les conditions « pro-âge », son expression est augmentée et modulée sous l'action de l'extrait selon l'invention. 35 3045380 31 Tableau 13 - Expression protéiques de marqueurs impliqués dans la détoxification et dans l'immunité (en %) % d'induction vis-à-vis du Milieu normal % d'induction vis-à-vis du milieu « Pro-Age » Protéines Milieu Extrait selon l'invention Milieu Extrait selon l'invention « Pro-Age » 0,000025% « Pro-Age » 0,000025% Peroxiredoxin 2 (PRDX2) 11.46 16.68 0.00 45.51 Carbonyl reductase 1 -15.87 -7.46 0.00 52.99 (CBR1) Aldehyde dehydrogenase 2 (ALDH2) 46.81 4.97 0.00 -89.38 Fatty acid binding protein 5 (FABP5) -24.82 4.68 0.00 118.87 Proteasome D2 (PSMB2) -21.15 -10.96 0.00 48.21 Proteasome D6 (PSMB6) -16.85 -10.92 0.00 35.21 Beta-2-microglobulin (B2MG) 31.16 -0.57 0.00 -101.83 Lectin, mannose-binding, 40.13 3.71 0.00 -90.75 1 (LMAN1) 5 7. Conclusion Ces différents tests montrent un effet anti-inflammatoire, anti-oxydant, et anti-pollution et donc anti-âge de l'extrait polyphénolique selon l'invention. 10 Exemple 3 : Compositions pour application par voie topique Plusieurs compositions pour application par voie topique sont présentées ci-dessous. L'extrait polyphénolique de graines de Passiflore, de l'exemple 1 ou 2, peut être incorporé à divers produits cosmétiques, tels que des eaux nettoyantes, des émulsions 15 huile dans eau, des émulsions eau dans huile, des huiles, des laits, des lotions, des shampooings, des produits moussants et sprays, dont les compositions sont présentées ci-dessous à titre d'exemples. 3045380 32 EAU NETTOYANTE PEAU SENSIBLE Matière première / Nom commercial ou Nom INCI CAPRYLOYL GLYCINE LESSIVE SOUDE SEQUESTRANT BUTYLENE GLYCOL BETA CARO1ENE EXTRAIT POLYPHENOLIO UE DE PASSIFLORE CONSERVATEURS EURS PEG-32 PEG-7 PALMCOCOA1E GLUCONATE ZINC ACIDE CITRIQUE EAU PURIFIÉE PARFUM POLOXAMER 184 De 0 à 1 °/0 De 0 à 1 % De 0 à 1 % De 1 à 5 % De 0 à 2 % De 0,001 à 10% De 0 à 1 % De 1 à 5 % De 1 à 5 % De 0 à 1 % De 0 à 1 % QSP 100 % De 0 à 1 % De 1 à 5 % ZINC OXYDE MICRONISE BUTYLENE GLYCOL RETINOL VITAMINE C EXTRAIT POLYPHENOLIQ UE DE PASSIFLORE ISONONYL ISONONANOATE CIRE D'ABEILLE TARTRA'T'E DE SODIUM CHLORURE DE SODIUM GLYCINE CONSERVATEURS EURS CHOLES IEROL PHYTOSPHINGOSINE `ACIDE TARTRIQUE EAU PURIFIÉE De 5 à 20 % De 5 à 20 % De 5 à 20 % De 1 à 5 % De 1 à 5 % De 1 à 5 % De 1 à 5 % De 1 à 5 % De 0 à 1% De 0 à 5% De 0,01 à 10% De 1 à 5 % De 1 à 5 % De 1 à 5 % De 0 à 5 °/0 De 1 à 5 % De 0 à 1 % De 0 à 1 % De 0 à 1 % De 0 à 1 % QSP 100 % EMULSION ANTI-AGE Matière première / Nom commercial ou Nom INCI ;ISOPARAFFINE LIQUIDE STEARATE D 'ISOCETYLE HYDROXYSTEARATE AL - MG ABIL WE 09 IGLYCEROL ;HUILE VASELINE