Les résultats seront exprimés en pg d'échantillon nécessaire pour obtenir une activité équivalente à l'activité détectée pour lpg de standard (= trolox). (Kit ACL). 19 Résultats : L'activité anti-oxydante étudiée dans ce test représente la capacité à piéger spécifiquement les anions superoxydes par chemiluminescence. Tableau 2: Evaluation et quantification du pouvoir anti oxydant en équivalent trolox. ACL Echantillon testé pg d'échantillon pour lpg de Trolox Trolox (référent) 1 Surnageant (exemple 3) 171 Coenzyme l0 = Molécule 272 antioxydante de référence Biomasse (exemple 2a) 278 10 La biomasse lyophilisée préparée selon l'exemple 2a et le surnageant de biomasse broyée lyophilisé préparé selon l'exemple 3 ont une activité vis à vis du piégeage anti radicalaire globalement équivalente. 278 pg de biomasse lyophilisée est nécessaire pour obtenir 15 une activité équivalente à l'activité détectée pour 1 pg de trolox : activité équivalente au coenzyme 010 molécule antioxydante de référence. 171 pg de surnageant de biomasse broyée lyophilisé est nécessaire pour obtenir une activité équivalente à l'activité 20 détectée pour 1 9g de trolox. Les radicaux libres, dont la production est accrue suite aux agressions extérieures (froid, pollution, tabac, UV) sont responsables des altérations de l'ADN des cellules cutanées, mais aussi des membranes cellulaires et mitochondriales. Ces 25 radicaux libres jouent un rôle très important également dans le processus d'inflammation. Ces métabolites très réactifs sont des seconds messagers de la signalisation cellulaire du stress5 oxydatif et donc médiateurs précoces de l'inflammation (A. Van Der Vliet and colt, Chem Biol Interaction 85 : 95- 116 1992). L'activité anti-radicalaire des préparations décrites dans les exemples 2a et 3 permettent de lutter contre le vieillissement cutané intrinsèque et extrinsèque et contre l'inflammation. Exemple 7 EVALUATION DE L'INHIBITION DE L'ACTIVITE METALLOPROTEASIQUE SUR LE COLLAGENE CONSTITUANT DE LA MATRICE EXTRA-CELLULAIRE. La matrice extracellulaire (MEC) est une structure dynamique ayant un rôle structurel et régulateur pour les tissus. Elle confère à la peau sa turgescence et ses propriétés mécaniques. Au niveau de l'épiderme elle occupe l'espace intercellulaire et joue un rôle de maintien pour l'édifice épidermique. Elle assure également les échanges entre les cellules de l'épiderme et joue un rôle dans l'activité cellulaire. Elle est constituée de fibres, notamment de collagène et de substance fondamentale (eau, sels, glycoprotéines, glycosaminoglycanes). Les collagènes sont des protéines fibreuses, formées de trois chaînes polypeptidiques, identiques ou différentes, reliées par des liaisons covalentes et hydrogènes. Les collagènes constituent le composant essentiel du réseau fibreux et jouent un rôle mécanique conférant résistance et élasticité de la peau. Lorsqu'une cellule est sénescente, les composants de la MEC sont majoritairement dégradés par des enzymes du type endopeptidases à zinc appelés métalloprotéinases matricielles ou MMPs (Hideaki Nagase § and J. Frederick Woessner. J Biol Chem, Vol. 274, Issue 31, 21491-21494, July 30, 1999). Elles sont membranaires ou sécrétées. Toutes les MMPs ont une forte homologie de séquence et de structure mais se distinguent par la spécificité de substrat. La MMP1 ou « collagénase interstitielle » dégrade majoritairement le collagène de type I (présent à 800 dans le derme d'une peau normale) et dégrade également les collagènes II VII VIII et X.35 Sur un modèle d'enzyme recombinante humaine à l'aide d'un substrat peptidique spécifique Mca - Lys-Pro-Leu-Gly-Leu-DPAAla-Arg-NH2, nous avons analysé l'effet des extraits sur l'activité enzymatique directe par un dosage fluorimétrique. (David Leppertd and colt , Analytical Biochemistry 328 (2004) 166-17). L'enzyme activée est pré incubée avec les différentes préparations puis mise en présence du substrat. L'enzyme clive le peptide séparant le fluorophore Mca (7 methoxycoumarin -4-yl) acethyl) du quencher Dpa (N - 3 - (2,4-Dinitrophenyl) - L-2,3 diaminopropionyl). Le peptide émet alors une fluorescence d'une longueur d'onde de 405nm lorsqu'il est excité à 320nm. Ainsi, l'activité enzymatique de la MMP-1 est mesurée et est proportionnelle à la fluorescence émise.