Tableau 9 : Prolifération de fibroblastes humains normaux, intensité de luminescence proportionnelle à la quantité de BrdU incorporée exprimée en pourcentage d'augmentation par rapport au contrôle non traité. **p<0,01 ; ***p<0,001 - Analyse de variance à un facteur suivie d'un test de Dunnett Contrôle Contrôle positif concentrât de Passiflore concentrât de Passiflore ( I "0 SN,T) ( l 0% SVF) 0,005% 0,01% Intensité de luminescence 1506398 23575410 2741224 2615640 Prolifération moyenne cellulaire Augmentation +1465% +82% +74% (00) *** ** ** 2. Effet sur l'expression des composants de la matrice dermique a. Matériel et Méthodes Des fibroblastes dermiques humains normaux ont été incubés pendant 24 heures dans du milieu de culture à 1% de SVF en présence de concentrât de Passiflore à 0,005% et 0,05% ou de TGF131 à 5 ng/ml (référence). A la fin de l'incubation, les ARNs totaux ont été extraits, dosés puis rétro-transcrits. L'expression génique du collagène I et de l'élastine a été analysée par RT-PCR quantitative en temps réel. b. Résultats Le concentrât de Passiflore a significativement augmenté l'expression génique du collagène de type I et de l'élastine (tableau 10), macromolécules constitutives et majoritaires de la matrice extra-cellulaire dermique. Tableau 10 : Expression génique (en quantité relative) du collagène I et de l'élastine dans des fibroblastes humains normaux traités par le concentrât de Passiflore; pourcentage d'augmentation par rapport au contrôle non traité. *p<0,05 ; **p<0,01 ; ***p<0_001 - Analyse de variance à un facteur suivie d'un test de Dunnett Collagène 1 (Quantité RelatiN e) El astine (Quantité Relative) Contrôle 1,00 1,00 Référence (TC_Wp I) 1,30 +30% ns 1,40 +40% * Concentrât de 1,44 +44% ** 1,58 +58% ** Passiflore 0,005° Concentrât de 1,87 +87% *** 1,92 +92% Passiflore 0,05°,0 *** 3. Effet relaxant dans un modèle de fibroblastes de vergetures Le système GlaSbox® a été utilisé pour évaluer l'effet relaxant du concentrât de Passiflore sur des fibroblastes issus d'une vergeture récente (rouge). Le système GlaSbox® permet de mesurer, au sein d'un derme équivalent, les forces contractiles développées par les fibroblastes. Les fibroblastes issus de vergeture rouge développent des forces contractiles supérieures aux forces développées par des fibroblastes de peau saine. a. Matériel et Méthodes Des fibroblastes de peau saine et des fibroblastes de vergeture rouge ont été mis en culture à partir de biopsies réalisées chez une même patiente. Les dermes équivalents ont été préparés en mélangeant les fibroblastes (de peau saine ou de vergeture rouge) à une solution de collagène. Ce mélange a été coulé dans les cuves rectangulaires de la GlasBox®. Un milieu contenant ou non le concentrât de Passiflore à 0,005% ou 0,05% a été ajouté. Dans chacune de ces cuves plongent deux lames flexibles en silicium. Le derme équivalent se développe ainsi entre deux lames équipées d'un système de jauge de contrainte (« capteur »). Sous l'influence de la force de rétraction développée par les fibroblastes, les lames de silicium se déforment ; cela se traduit par une variation de la valeur de la résistance électrique de la jauge de contrainte. Cette variation, mesurée en temps réel, est représentative de la force développée au sein du derme équivalent. Les forces isométriques ont ainsi été mesurées pendant 24 heures. b. Résultats Les fibroblastes de vergeture rouge ont développé significativement plus de forces contractiles que les fibroblastes de la peau saine avoisinante (résultats non montrés). Le concentrât de Passiflore a significativement diminué les forces contractiles générées par les fibroblastes de vergeture rouge (figures lA et 1B). Figure 1 : Forces contractiles développées par des fibroblastes de vergeture rouge (FVR) en présence, ou non, de concentrât de Passiflore (MJ) au sein d'un derme équivalent sous tension dans le système GlaSbox® A: détail des 6 premières heures ; B : courbes totales Statistiques : Analyse de variance à deux facteurs suivie d'un test de Fisher. ° FVR ; V FVR + MJ 0,005% ; E FVR + MJ 0,05% Axe des x : temps en heures ; axe des y : forces (unité arbitraire/million de cellule) L'analyse des courbes Glasbox® (tableau 11) montre que l'AUC (aire sous la courbe), le maximum de contraction et la pente sont significativement diminués en présence du concentrât de Passiflore, celui-ci diminue donc non seulement les forces de contractions mais aussi la vitesse de contraction des fibroblastes de vergeture rouge.