A. Activité in vitro - modulation d'expression de gènes L'analyse de la modulation d'expression de gènes de l'huile concentrée en fraction insaponifiable - appelé ensuite concentrât de passiflore, a été réalisée dans deux modèles différents : des fibroblastes humains normaux et des épidermes humains reconstruits mélanisés.15 1) Effet sur l'expression de gènes dans des fibroblastes humains normaux Les effets du concentrât de Passiflore ont été mesurés dans des fibroblastes humains normaux sur l'expression de gènes impliqués dans la biologie du derme, le remodelage des tissus conjonctifs et le vieillissement par qRT-PCR sur cartes TaqMan microfluidiques. a. Matériel et Méthodes Des fibroblastes dermiques humains normaux ont été incubés pendant 24 heures en présence du concentrât de Passiflore à 0,01% et 0,05%. A la fin de l'incubation, les cellules ont été lysées et les ARNs totaux extraits puis dosés. Les différences d'expression géniques ont été analysées par RT-PCR quantitative à l'aide de cartes TaqMan. L'analyse des modifications d'expression et les analyses statistiques ont été réalisées à l'aide du logiciel Data Assist (Applied Biosystems). b. Résultats Le concentrât de Passiflore a significativement modulé l'expression des gènes impliqués dans les fonctions suivantes (cf tableau 7) : Tableau 7 : Liste des gènes dont l'expression varie de manière significative en présence de concentrât de Passiflore dans des fibroblastes humains normaux RQ = quantité relative d'expression du gène par rapport au témoin non traité (RQ=1) Concentrat 0,01% Concentrat 0,05% Nom des gènes RQ valeur de p RQ valeur de p synthase 2 de l'acide hyaluronique 2,6872 0,0276 - - Fibrilline-1 2,3906 0,0047 - - procollagène-lysine 2-oxoglutarate 5- dioxygenase 1 (Lysyl hydroxylase (LH1)) 2,1811 0,0253 - - NAD(H)dehydrogénase, quinone 1 2,1395 0,0405 2,1312 0,0153 Fibromoduline 2,078 0,0339 - - Sous-unité alpha 1 du collagène 1 subunit (COL1A1) 1,6491 0,0248 1,4726 0,0091 Catalase - - 1,9473 0,0216 Sous-unité alpha 1 du collagène 7 (COL7A1) - - 1,6802 0,0137 Sous-unité alpha 1 du collagène 4 (COL4A1) - - 1,5343 0,0359 Mitochondrial peptide methionine sulfoxide reductase - - 1,5218 0,0375 Lumican - - 1,4417 0,0441 Glutathione synthétase - - 1,4294 0,016 Fibronectine - - 1,401 0,0419 Matrix metalloproteinase 3 (stromelysin 1) - - 1,328 0,043 1) Réponse anti-oxydante Le concentrât de Passiflore a induit l'expression des enzymes anti-oxydantes Mitochondrial peptide methionine sulfoxide reductase, NADH dehydrogénase, catalase (dont l'activité diminue au cours du vieillissement) et glutathion synthétase qui catalyse la synthèse du glutathion (molécule anti-oxydante). Ainsi par l'augmentation de ces gènes, le concentrât de Passiflore contribue à protéger le derme des dommages oxydatifs. 2) Homéostasie de la matrice extra-cellulaire Le concentrât de Passiflore a induit l'expression de la hyaluronane synthase 2, enzyme impliquée dans la synthèse d'acide hyaluronique, polysaccharide connu pour sa capacité à retenir l'eau, à supporter l'architecture des tissus et l'élasticité de la peau et pour réguler la migration cellulaire. Ainsi le concentrât de Passiflore augmente la biosynthèse d'acide hyaluronique et donc favorise l'hydratation du derme et son élasticité. Le concentrât de Passiflore a induit l'expression des gènes codant pour les collagènes de type 1, 4 et 7, la fibrilline (composant des fibres élastiques), la lysyl hydroxylase 1 (enzyme impliquée dans la formation des fibres élastiques), la fibromoduline et le lumican (petits protéoglycans qui régulent la formation de fibrilles), la fibronectine et la MMP3 (impliquée dans le remodelage du réseau de collagène). Ainsi le concentrât de Passiflore contribue à augmenter la fibrillogénèse et le remodelage de la matrice extracellulaire du derme pour permettre une meilleure cohésion et élasticité du derme. 2) Effet sur l'expression de gènes dans des épidermes humains reconstruits mélanisés Les effets du concentrât de Passiflore ont été évalués dans des épidermes humains reconstruits mélanisés par qRT-PCR sur cartes TaqMan microfluidiques sur l'expression de gènes impliqués dans la pigmentation. a. Matériel et Méthodes Des épidermes reconstitués contenant des mélanocytes humains primaires (provenant d'un donneur de phototype foncé) ont été incubés pendant 24 heures en présence du concentrât de Passiflore à 0,01% et 0,05%. A la fin de l'incubation, les tissus ont été lyses et les ARNs totaux extraits puis dosés, les différences d'expression géniques ont été analysées par RT-PCR quantitative à l'aide de cartes TaqMan. L'analyse des modifications d'expression et les analyses statistiques ont été réalisées à l'aide du logiciel Data Assist (Applied Biosystems). b. Résultats Le concentrât de Passiflore a significativement réprimé l'expression des gènes tyrosinase et MITF (Microphtalmia-associated transcription factor), tous deux impliqués dans la mélanogénèse (cf tableau 8). La tyrosinase est une enzyme clé de la production de mélanine par les mélanocytes tandis que MITF régule la différenciation des mélanocytes et la transcription d'enzymes impliquées dans le processus de mélanogénèse. Ces diminutions d'expression suggèrent une activité dépigmentante du concentrât de Passiflore. D'autre part, le concentrât de Passiflore a diminué l'expression du NGF, récepteur du nerve growth factor, une neurotrophine impliquée notamment dans l'inflammation neurogène.