Examen du spectre UV de l'extrait de ML après chauffage pendant 45 min dans HCI (2N) a montré un spectre proche du polycarpol un tri-terpène tétra cycliques connus (fig. 1), l'un de le triterpene identifier dans l'écorce de ML et dans quelques familles annonaceae [12, 13]. 3.2. Toxicité aiguë Au cours de l'évaluation de la toxicité aiguë de l'extrait de ML, une dose de 2,0 g/kg administrée par voie orale n'a entraîné ni la mort des souris ni les modifications de comportement. Ce qui indique que l'extrait n'a pas / ou a une faible toxicité. L'analyse histopathologique a confirmé ce résultat. D'autre part, il n'existe pas de différence de poids corporel entre les animaux traités et les témoins (Fig. 2). D'autres études seront effectuées pour confirmer l'absence de toxicité chronique, par le biais des paramètres hématologiques et biochimiques sanguins. 3.3. Activité anti-inflammatoire par test à la carragénine. L'activité anti-inflammatoire de ML a été évaluée par le test de l'oedème de la patte des souris induit par la carragénine. Les résultats sont représentés dans la Fig. 3. Les résultats montrent que l'effet de ML (1 mg/kg) est similaire à celle de l'ASA (150 mg/kg) et l'indométacine (Indo 10 mg/kg) sur la réduction de l'inflammation (c'est-à-dire l'inhibition de rcedème de la patte de souris) pendant - 20 - 3 h. Après 3 h, cet effet protecteur de ML décline (P < 0,001) lorsqu'on le compare à l'effet l'indométacine et ASA, mais il reste significatif. 3.4. Évaluation de l'effet analgésique centrale par méthode de Tail Flick. L'activité analgésique centrale de LM a été étudiée par la méthode de Tail Flick 5 (retrait de queue suite à une radiation par la chaleur), décrite par d'amour et Smith [11]. Les résultats obtenus après administration par voie orale de 1 mg/kg sur les souris sont résumés dans la figure 4. Les résultats montrent que ML augmente le temps de latence au retrait de la queue de souris (p < 0,001) par rapport au contrôle. La principale conclusion est que l'effet analgésique de 1 10 mg/kg de ML est semblable à celle de la morphine à 0,1 mg/kg. 3.5. Évaluation de l'effet analgésique périphérique par le test de l'acide acétique L'administration orale de l'extrait de ML (1, 10 et 100 mg/kg) induit un effet anti nociceptif dose-dépendante en diminuant d'une façon significative le nombre de mouvements contorsions induites par l'administration intra péritonéale de l'acide 15 acétique chez la souris, lorsqu'on les compare au groupe témoin (p < 0,01). Les pourcentages d'inhibition sont de 53.77, 76.73 et 81.45 % pour les doses de ML de 1, 10 et 100 mg/kg, respectivement. L'acide acétylsalicylique induit 50,31% de réduction de contorsions chez les souris après injection de l'acide acétique (Fig.5). 20 3.6. Évaluation de l'effet anti dépression de ML par le test de la natation forcée. Analyse de variance (ANOVA) montre des différences significatives (p < 0,01) entre les groupes traités par rapport au témoin (Fig. 6). Le temps de latence induit par la fluoxétine (Flx) sur le test de la natation forcée est de 100 ± 9.65 seconde rapport au traitement témoins (242 ± 11.8 sec). Le traitement des 25 animaux avec l'extrait de ML (1 mg/kg) réduit le temps de latence 136.50 ± 39.04 seconde est reste stable lorsqu'on augmente la dose de ML. 3.7. Évaluation de l'effet antispasmodique de ML Nous avons comparé l'effet de ML sur l'amplitude et la fréquence sur la contraction spontanée de l'intestin. La figure 7A et 7B montrent les résultats - 21 - obtenus. L'extrait de ML agit non seulement sur la relaxation de l'intestin mais aussi sur la fréquence de la contraction spontanée de l'intestin. DISCUSSION Cette étude avait pour but d'évaluer l'effet anti nociceptif, antidépresseurs, et anti-inflammatoire ainsi que la toxicité aiguë de l'extrait de Meiocarpidium lepidotum (ML) chez le rat et la souris. Les résultats obtenus ont montré que l'extrait de ML avait des propriétés analgésiques, anti-inflammatoires et antidépresseurs. Cette étude est la première effectuée qui montre un effet biologique de l'extrait aqueux de ML. Bien que ML est largement utilise io traditionnellement pour la fabrication des différents outils de la vie quotidienne chez les Fang du Bassin du Congo [1] il n'existe pas la littérature scientifique assez des données faisant état de son utilisation dans la médecine traditionnelle. Le premier criblage phytochimique de cette plante a été réalisé en 1977 par 15 Leboeuf et al. [14]. Ces auteurs ont été les premiers à déterminer la composition phytochimique de l'écorce du tronc et des racines obtenus de l'herbier du Congo (l'Herbier Paul Sita 3337 et l'Herbier P.S 3628). Ils ont montré que les extraits d'écorces ne contenaient pas de flavonoïdes, saponosids, tanins et quinones. Ils ont cependant trouvé des composés tri- 20 terpéniques et leurs dérivés. Ils ont également trouvé des stéroïdes (réaction de Libermann) et des alcaloïdes (réaction de Meyer, Dragendorff modifié). En outre, ils ont trouvé que les dérivés tri-terpéniques étaient le polycarpol ou hydroxyle-15 x agnosterol. Ces deux composés (alcaloïde et polycarpol) ont également été trouvés dans d'autres annonacées africains : oliveri Polyalthia 25 Engl [15], Phaeoramularia confiner fran & Diels [15, 161 and isolona campanulata Engl. & Diels [17]. Notre étude a confirmé la présence de tri-terpènes, mais aucun flavonoïde, saponoside et tanin n'ont été retrouvés. L'alcaloïde n'a pas été retrouvé probablement parce que nous avons utilisé l'extrait aqueux. Les études réalisée en 1977 par Leboeuf ont mis en évidence 30 les alcaloïdes uniquement dans les extraits obtenus par les solvants organiques. - 22 - Au cours de l'évaluation de la toxicité aiguë des ML une dose de 2,0 g/kg administrée par voie orale n'a pas provoqué la mort de souris ni de modifications et comportement voir les paramètres physiologiques des animaux traités, ce qui indique que l'extrait aqueux de ML n'est pas toxique ou sa toxicité est relativement faible. Les études se toxicité subchroniques seront effectuées pour confirmer l'absence de toxicité après analyse des paramètres hématologiques et biochimiques. Activité anti-inflammatoire de la carragénine sur la patte de souris se traduit par l'appariation d'un oedème. Ce modèle de provocation de l'inflammation in vivo est caractérisé comme étant un phénomène biphasique [10]. L'histamine, la bradykinine et la 5- hydroxytryptamine (5-HT) sont libérés dans la première phase de l'oedème (0-1 h). Dans la seconde phase (1 à 6 h), TNF-a, IL-10, cyclo-oxygénase (COX-2), et les prostaglandines (PG) sont produites plus activement [18]. Il est bien connu que l'expression de COX-2 est maximale à la fin de l'inflammation de l'oedème induite par l'injection de la A-carragénine, qui pourrait par la suite augmenter le taux de prostaglandines dans les réactions inflammatoires [19]. Dans cette étude, ML (1 mg/kg), ASA (150 mg/kg) et l'indométacine (10 mg/kg) ont montré leur efficacité anti-inflammatoire sur l'oedème induite par l'injection de la A-carragénine pendant une durée de 3 h et leurs effets sont similaires. En revanche, après 4 h, l'effet de ML décline par rapport à l'effet de l'indométacine et ASA. Considérant l'hypothèse selon laquelle au cours de la ler heure de l'inflammation induite par la À.- carragénine il y'a plus de production des de l'histamine, bradykinine, et 5-HT et que la production de TNF -a, IL-1/3, COX et PGs ne se fait que tardivement, nous pensons que l'extrait aqueux de ML est plus efficace contre l'histamine, bradykinine et la 5-HT, et que son effet est réduite est réduite en présence de TNF -a, 3 de IL-1, COX et PGs. Il peut aussi y avoir une détérioration progressive de ML au cours du temps (supérieur à 3h). En revanche, les AINS, comme l'indométacine et l'acide acétylsalicylique, semblent être plus efficace au cours de la deuxième phase de l'inflammation [20]. Dans cette étude, pour distinguer entre effet anti nociceptif centrale et périphérique de ML, deux tests différents ont été effectuées. Le test de type - 23 - convulsif induit par l'injection de l'acide acétique. L'administration intra péritonéale d'agents qui irritent les membranes séreuse provoque un comportement stéréotypé chez les souris, qui se caractérise par des contractions abdominales, mouvements du corps et la torsion des muscles dorso-abdominales. C'est la douleur typique générée indirectement via des médiateurs endogènes, comme la bradykinine, de la sérotonine et de la capsaïcine, qui stimulent les neurones nociceptifs périphériques. La libération des métabolites de l'acide arachidonique par biosynthèse via COX et PGs sont également impliqués. ML réduit les douleurs induites par l'acide acétique. Ce qui suggère que, l'extrait de ML peut agir en inhibant la synthèse des PG, parce que le mécanisme nociceptif de douleurs abdominales induites par l'acide acétique implique la libération des métabolites de l'acide arachidonique via COX. Mais nous ne pouvons pas déterminer avec ce test si l'activité de ML est d'origine centrale ou périphérique. Évaluation d'une activité analgésique centrale se faisait par la méthode dite tail flick (retrait de la queue lorsqu'on applique une source de chaleur). L'augmentation de la durée du temps de réaction est une caractéristique des médicaments qui agissetat au niveau centrale. Il indique une éventuelle interaction avec les récepteurs opioïdes. Lorsque ML, à 1 mg/kg, est administré à des souris, on obtient un résultat semblable celui de l'effet de 0,1 mg/kg de morphine. Ce résultat suggère que le ML pourrait agir comme les analgésiques opioïdes. L'évaluation de l'effet antidépresseur de l'extrait aqueux de ML a été réalisée avec le test de la nage forcée (forced swimming test). Les groupes ayant reçus la Fluoxetine par voie oralement, et ML, ont réduit le temps de l'immobilité (latence). Cet effet se manifeste par une réduction du temps d'immobilité dans le test de nage forcée sans influence sur l'activité locomotrice [21]. Pendant le test, l'antidépresseur composés (Fluoxetine) et ML ne modifie pas l'activité locomotrice. De plus, les rats ayant reçu le traitement montrent nettement moins d'immobilité et arrêts que les rats témoins. L'immobilisation représente un état de désespoir chez les rongeurs, qui est un symptôme de la dépression. Porsolt et al [22] a constaté que cette immobilité traduit un état de humeur bas chez le rat, qui sont sensibles à un traitement antidépresseur. Toutefois, les rats - 24 - ayant reçu le traitement la fluoxetine et ML sont moins immobiles que les rats témoins. En outre, le comportement de l'animal au cours du temps passé à nager dans le réservoir ou les tentatives de fuite hors du bassin permet la détection les inhibiteurs sélectifs à la recapture de la sérotonine et la discrimination entre les médicaments qui affectent principalement les systèmes sérotoninergiques ou les neurotransmetteurs noradrénergiques [23-25]. Alors que les drogues qui stimulent le système sérotoninergique, tels que les inhibiteurs de la recapture de la sérotonine provoque une nage active dans le réservoir d'eau, et ceux qui 10 bloquent l'absorption de la noradrénaline agissent préférentiellement sur l'augmenter le comportement d'escalade (fuite). L'inhibiteur sélectif de la recapture de Fluoxetine augmente le comportement de la nage. L'effet de ML est similaire, mais moins puissante que celle de la fluoxétine. La théorie de la dépression aux monoamines a prédominé en ce qui concerne 15 l'étiologie de la maladie elle-même, ainsi que le fondement de la plupart des traitements disponibles en cliniques. Actuellement, parmi les médicaments antidépresseurs les plus largement prescrits on trouve ceux qui ont des degrés élevés de sélectivité pour le transporteur de la 5-HT, l'inhibiteur sélectif de la recapture de la sérotonine (par exemple, la fluoxétine) [26]. Le mécanisme 20 d'action de ML était inconnu mais les études seront effectuées pour confirmer ce mécanisme. CONCLUSION En conclusion, Meiocarpidium lepidotum (ML) est efficace comme agent analgésique dans diverses douleurs typiques. L'effet anti nociceptif de ML est 25 semble se faire par l'inhibition des médiateurs de la douleur périphérique et centrale. En outre, ML semble présenter des propriétés anti-inflammatoires et antidépresseur. Nos résultats confirment que ML a un potentiel thérapeutique pour le traitement des troubles douloureuses et la dépression. D'autres études, actuellement en cours, vont nous permettre de comprendre les mécanismes 30 précis de l'action du ML. - 25 - Bibliographie 1. Leboeuf, M., et al., Alcaloides des Annonaces )0(: Composition du Meiocarpidium lepidotum Engler & Diels. Plantes Médicinales et Phytothérapie, 1977. 11(4): p. 284-288. 2. Ngouela, S., et al., Meiocarpin: A novel lignan from the stem bark of Meiocarpidium lepidotum (Annonaceae).Bull. Chem. Soc. Ethiop., 2004. 18(2): p. 221-224. 3. Paech, K. and M.V. Tracey, eds. Modem methods of plant analysis. ed.