INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Zxl [1-(5- N!- 3-[1-(5- [J - triméthylsilanylethyl-4- i # { ~ triméthylsilanylethylN Amino-3- N 4-Amino-3- ,\ 1 1 Q triméthylsilanylethyl- l "" triméthylsilanylethylnh2 L - phényl)-pyrrolidin-3-yl]- fi) phényl)-pyrrolidin-3- /1 triméthyl-ammonium; 'I N"2 /( yl]-1-méthyl-3Hchlorure imidazol-1-ium; (31) chlorure (32) X l'-(4-Amino-phényl)-1- 0 l'-(4-Amino-3- -N+ méthyl- 'N±-/ méthyl-phényl)-lo ci- [1,3']bipyrrolidinyl-1- cf méthylQN ium; chlorure Jjf [1,3']bipyrrolidinyl-1h! (33) rT! ium; chlorure h (34) NH2 NH2 N H - 0 3-{[1-(4-Amino-phényl)- H 0 3-{[1-(4-Amino-3tJ N pyrrolidin-3- l..J méthyl-phényl)N L--N. ylcarbamoyl]-méthyl}-l- N 0 pyrrolidin-3- 1 ci- \ méthyl-3H-imidazol-1- 0 CI- ylcarbamoyl]- . ium ; chlorure Y' méthyl}-l-méthyl-3HNH2 (35) NH2 imidazol-1-ium ; chlorure (36) 0l--1 3-[1-(4-Amino-phényl)- O'1 3-[1-(4-Aminoci- ' pyrrolidin-3-yl]-1-(3- ci- f phényl)-pyrrolidin-3triméthylsilanyl- ' yl]-l-(3j propyl)-3H-imidazol-l- l "" triméthylsilanylNH ium ; chlorure NH propyl)-3H-imidazol- (37) 1-ium ; chlorure (38) \1. [1-(4-amino-phényl)- \1. [l-(4-amino-phényl)- /#(\ pyrrolidine-3-yl]- , # Ç~\ pyrrolidine-3-yl]- \ éthyldiméthyl- éthyldiméthylci ammonium ; chlorure A ammonium; iodure y (39) Y (40) NH, NE,
\1. [1-(4-amino-phényl)- \/. [1-(4-amino-phényl)I # /~\~ pyrrolidine-3-yl]- ;#(# pyrrolidine-3-yl]- (N) propyldiméthyl- propyldiméthylL ammonium ; iodure, Br ammonium ; bromure y (41) 1 b (42) NH, NR, V [1-(4-amino-phényl)- y.+ [1-(4-amino-phényl)I # f ~~V~ pyrrolidine-3-yl]- ri pyrrolidine-3-yl]- (N) propyldiméthyl- N) butyldiméthyl- 1 Meoso3- ammonium ; Q r ammonium; iodure 1 b méthosulfate 1 b (44) NH= (43) NH2 (1-(4-amino-phényl)- Y [1-(4-amino-phényl)I # T~ pyrrolidine-3-yl]- #v pyrrolidine-3-yll- #pentyldiméthyl- ).- \ hexyldiméthylL ammonium ; iodure 0 ammonium; iodure 1 b (45) Y (46) NH, NR, [1-(4-amino-phényl)- \/. [1-(4-amino-phényl)- / # ( # pyrrolidine-3-yl]- r~) pyrrolidine-3-yl]N >~~ heptyldiméthyl- f v~ / octyldiméthylr. ammonium ; iodure (Tj ammonium ; iodure (47) L. (48) NB, V* [1-(4-amino-phényl)- \/#\ [1-(4-amino-phényl)- (j # pyrrolidine-3-yl]- ---( pyrrolidine-3-yl]- \- décyldiméthyl- 1....; \D hexadécyldiméthyl- 1 : ammonium ; iodure 0 ammonium ; iodure L. (49) k (50) Y [1-(4-amino-phényl)- \1 [1-(4-amino-phényl)- ~\~0H pyrrolidine-3-yl]- r#/~\H pyrrolidine-3-yl]N hydroxyéthyldiméthyl- J hydroxyéthyldiméthyl A. ci ammonium ; chlorure A -ammonium ; iodure y (51) fJ (52)
Les dérivés de formule I utilisés de manière préférée sont [l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-triméthyl-ammonium; chlorure ; [l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-diméthyl-tetradécyl- ammonium ; bromure ; N'-[l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-N,N-diméthyl-guanidine N-[l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-guanidine 3-[l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-l-méthyl-3H-imidazol- 1-ium; chlorure ; [l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-(2-hydroxy-ethyl)- diméthyl-ammonium; chlorure [l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-diméthyl-(3- triméthylsilanyl-propyl)-ammonium ; chlorure ; [l-(4-Amino-3-méthyl-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-triméthyl- ammonium ; chlorure [ 1-(4-Amino-3-méthyl-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-diméthyl- tetradecyl-ammonium ; chlorure N'-[l-(4-Amino-3-méthyl-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-N,N- diméthyl-guanidine N-[l-(4-Amino-3-méthyl-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-guanidine 3-[1-(4-Amino-3-méthyl-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-1-méthyl-3H- imidazol-1-ium ; chlorure [l-(4-Amino-3-méthyl-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-(2-hydroxy- ethyl)-diméthyl-ammonium chlorure [l-(4-Amino-3-méthyl-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-diméthyl-(3- triméthylsilanyl-propyl ammonium ; chlorure r-(4-Amino-phényl)-l-méthyl-[l,3']bipyrrolidinyl-l-ium; chlorure l'-(4-Amino-3-méthyl-phényl)-l-méthyl-[ 1,3']bipyrrolidinyl-1- ium ; chlorure 3-{[l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl]-méthyl}-l- méthyl-3H-imidazol-l-ium ; chlorure 3-{[l-(4-Amino-3-méthyl-phényl)-pyrrolidin-3-ylcarbamoyl]- méthyl}-l-méthyl-3H- imidazol-1-ium ; chlorure
3-[l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-l-(3-triméthylsilanyl- propyl)-3H-imidazol-l-ium ; chlorure 3-[1-(4-Amino-3-méthyl-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-l-(3- triméthylsilanyl-propyl)-3H-imidazol-1-ium ; chlorure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-éthyldiméthyl- ammonium ; chlorure [ 1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3 -yl]-éthyldiméthyl- ammonium ; iodure [1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-propyldiméthyl- ammonium ; iodure, [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-propyldiméthyl- ammonium ; bromure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-propyldiméthyl- ammonium ; méthosulfate [1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-butyldiméthylammonium ; iodure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-pentyldiméthyl- ammonium ; iodure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-hexyldiméthyl- ammonium ; iodure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-heptyldiméthyl- ammonium ; iodure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-octyldiméthyl- ammonium ; iodure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-décyldiméthyl- ammonium ; iodure [1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-hexadécyldiméthyl- ammonium ; iodure [ 1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-hydroxyéthyldiméthyl- ammonium ; chlorure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-hydroxyéthyldiméthyl- ammonium ; iodure.
Plus préférablement on utilisera les composés : [ 1-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-triméthyl-ammonium; chlorure [l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-diméthyl-tetradécyl- ammonium ; bromure N'-[l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-N,N-diméthyl- guanidine N-[l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-guanidine 3-[l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-l-méthyl-3H-imidazol- 1-ium; chlorure [l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-(2-hydroxy-ethyl)- diméthyl-ammonium; chlorure [1-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-diméthyl-(3- triméthylsilanyl-propyl)-ammonium ; chlorure [l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-(-triméthylammonium- hexyl)-diméthyl-ammonium; dichlorure l'-(4-Amino-phényl)-1-méthyl-[1,3']bipyrrolidinyl-1-ium; chlorure 3-[l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-l-(3-triméthylsilanyl- propyl)-3H-imidazol-1-ium ; chlorure 3-[l-(4-Amino-3-méthyl-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-l-(3- triméthylsilanyl-propyl)-3H-imidazol-1-ium ; chlorure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-éthyldiméthyl- ammonium ; chlorure [1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-éthyldiméthyl- ammonium ; iodure [ 1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-propyldiméthylammonium ; iodure, [ 1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-propyldiméthyl- ammonium ; bromure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-propyldiméthyl- ammonium ; méthosulfate [1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-butyldiméthyl- ammonium ; iodure
[l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-pentyldiméthyl- ammonium ; iodure [1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-hexyldiméthyl- ammonium ; iodure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-heptyldiméthyl- ammonium ; iodure [1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-octyldiméthyl- ammonium ; iodure [1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-décyldiméthyl- ammonium ; iodure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-hexadécyldiméthyl- ammonium ; iodure [l-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-hydroxyéthyldiméthyl- ammonium ; chlorure [1-(4-amino-phényl)-pyrrolidine-3-yl]-hydroxyéthyldiméthyl- ammonium ; iodure Encore plus préférablement, on utilisera les composés suivants : [ 1-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-triméthy I-ammonium; chlorure 3-[1-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-1-méthyl-3H-imidazol- 1-ium; chlorure [1-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-(2-hydroxy-ethyl)- diméthyl-ammonium; chlorure l'-(4-Amino-phényl)-1-méthyl-[1,3']bipyrrolidinyl-1-ium; chlorure, et tout particulièrement les [l-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-triméthyl-ammonium; chlorure, et [ 1-(4-Amino-phényl)-pyrrolidin-3-yl]-(2-hydroxy-ethyl)- diméthyl-ammonium; chlorure.
Les polyols utilisables dans la composition selon la présente invention sont les polyols de poids moléculaire compris entre 90 et 350 et correspondant à la formule (V) : dans laquelle R'1, R'2, R'3, R'4 désignent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, un radical alkyle en C1-C6 ou un radical mono ou polyhydroxyalkyle en C1-C6, A désigne un radical alkylène linéaire ou ramifié contenant de 1 à 18 atomes de carbone, ce radical comprend de 0 à 9 atomes d'oxygène, m désigne 0 ou 1, étant entendu que le nombre total d'atomes de carbone contenus dans le radical A et dans l'ensemble des substituants R'1, R'2, R'3, R'4 est supérieur ou égal à 2.
* Leur structure chimique comprend des zones hydrophiles, et des zones hydrophobes caractérisées par au moins une chaîne grasse.
Leur concentration en poids dans la composition colorante peut varier d'environ 0,01 à 10% du poids total de la composition et dans la
composition prête à l'emploi (comprenant l'oxydant) d'environ 0,0025 à 10% du poids total de la composition. Plus préférentiellement, cette quantité varie d'environ 0,1 à 5% en poids dans la composition colorante et d'environ 0,025 à 10% dans la composition prête à l'emploi.
Parmi ces polymères associatifs anioniques, on préfère particulièrement selon l'invention, les polymères formés à partir de 20 à 60% en poids d'acide acrylique et/ou d'acide méthacrylique, de 5 à 60% en poids de (méth) acrylates d'alkyles inférieurs, de 2 à 50% en poids d'éther d'allyl à chaîne grasse de formule (XV), et de 0 à 1% en poids d'un agent réticulant qui est un monomère insaturé polyéthylénique copolymérisable bien connu, comme le phtalate de
diallyle, le (méth) acrylate d'allyl, le divinylbenzène, le diméthacrylate de (poly) éthylèneglycol, et le méthylène-bis-acrylamide.
De préférence, ces polymères sont choisis parmi ceux dont le motif hydrophile de type acide carboxylique insaturé oléfinique correspond au monomère de formule (XVI) suivante : dans laquelle, R1 désigne H ou CH3 ou C2H5, c'est-à-dire des motifs acide acrylique, acide méthacrylique ou acide éthacrylique, et dont le motif hydrophobe de type ester d'alkyl (CIO-C3o) d'acide carboxylique insaturé correspond au monomère de formule (XVII) suivante dans laquelle, R2 désigne H ou CH3 ou C2H5 (c'est-à-dire des motifs acrylates, méthacrylates ou éthacrylates) et de préférence H (motifs acrylates) ou CH3 (motifs méthacrylates), R3 désignant un radical alkyle en C10-C30, et de préférence en C12-C22.
Parmi ce type de polymères associatifs anioniques, on utilisera plus particulièrement ceux constitués de 95 à 60% en poids d'acide acrylique (motif hydrophile), 4 à 40% en poids d'acrylate d'alkyles en Cio-C3o (motif hydrophobe), et 0 à 6% en poids de monomère polymérisable réticulant, ou bien ceux constitués de 98 à 96% en poids d'acide acrylique (motif hydrophile), 1 à 4% en poids d'acrylate d'alkyles en C10-C30 (motif hydrophobe), et 0,1 à 0,6% en poids de monomère polymérisable réticulant tel que ceux décrits précédemment.
Parmi lesdits polymères ci-dessus, on préfère tout particulièrement selon la présente invention, les produits vendus par la société GOODRICH sous les dénominations commerciales PEMULEN TR1#, PEMULEN TR2#, CARBOPOL 1382, et encore plus préférentiellement le PEMULEN TR1#, et le produit vendu par la société S.E.P.P.I.C. sous la dénomination COATEX SX.
- (IV) les terpolymères acryliques comprenant : (a) environ 20% à 70% en poids d'un acide carboxylique à insaturation [alpha],ss-monoéthylénique, (b) environ 20 à 80% en poids d'un monomère à insaturation [alpha],ss-monoéthylénique non-tensio-actif différent de (a), (c) environ 0,5 à 60% en poids d'un mono-uréthane nonionique qui est le produit de réaction d'un tensio-actif monohydrique avec un monoisocyanate à insaturation monoéthylénique, tels que ceux décrits dans la demande de brevet EP-A-0173109 et plus particulièrement celui décrit dans l'exemple 3, à savoir, un terpolymère acide méthacrylique /acrylate de méthyle/diméthyl métaisopropényl benzyl isocyanate d'alcool béhényle éthoxylé (400E) en dispersion aqueuse à 25%.
N 0009609; elle peut être représentée par la formule générale (XVIII) suivante : R-X-(P)n-[L-(Y)m]r-L'-(P')p-X'-R' (XVIII) dans laquelle : R et R', identiques ou différents, représentent un groupement hydrophobe ou un atome d'hydrogène ; X et X', identiques ou différents, représentent un groupement comportant une fonction amine portant ou non un groupement hydrophobe, ou encore le groupement L" ; L, L' et L", identiques ou différents, représentent un groupement dérivé d'un diisocyanate ; P et P', identiques ou différents, représentent un groupement comportant une fonction amine portant ou non un groupement hydrophobe ; Y représente un groupement hydrophile ; r est un nombre entier compris entre 1 et 100, de préférence entre 1 et 50 et en particulier entre 1 et 25, n, m, et p valent chacun indépendamment des autres entre 0 et 1000 ; la molécule contenant au moins une fonction amine protonée ou quaternisée et au moins un groupement hydrophobe.
Une famille préférée de polyuréthanes associatifs cationiques est celle correspondant à la formule (XVIII) décrite ci-dessus et dans laquelle : R et R' représentent tous les deux indépendamment un groupement hydrophobe, X, X' représentent chacun un groupe L", n et p valent entre 1 et 1000 et
L, L', L", P, P', Y et m ont la signification indiquée cidessus.
Par groupement hydrophobe, on entend un radical ou polymère à chaîne hydrocarbonée, saturée ou non, linéaire ou ramifiée, pouvant contenir un ou plusieurs hétéroatomes tels que P, 0, N, S, ou un radical à chaîne perfluorée ou siliconée. Lorsqu'il désigne un radical
hydrocarboné, le groupement hydrophobe comporte au moins 10 atomes de carbone, de préférence de 10 à 30 atomes de carbone, en particulier de 12 à 30 atomes de carbone et plus préférentiellement de 18 à 30 atomes de carbone.
On a autoligaturé le fragment de la région vecteur du plasmide pVIC40 préparé comme décrit ci-dessus en utilisant la trousse de ligature d'ADN DNA Ligation Kit Ver. 2 (Takara Shuzo). On a utilisé cette solution de réaction de ligature pour transformer Escherichia coli (cellules compétentes de E coli JM109, Takara Shuzo). On a appliqué les cellules à du milieu gélose LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on les a incubées pendant une nuit à 37 C. On a inoculé chacune des colonies apparaissant sur le milieu gélose à du milieu liquide LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on les a cultivées à 37 C pendant 8 h sous agitation.
On a extrait l'ADN plasmidique de chaque bouillon de culture par le procédé alcali-SDS et on a confirmé la structure de chaque plasmide par digestion avec des enzymes de restriction pour obtenir pRS.
Puis, on a construit le plasmide pRStac comportant le promoteur tac à partir de pRS selon le schéma montré sur la figure 1. On a digéré le vecteur pRS avec les enzymes de restriction EcoRI et PstI, on l'a ajouté à une solution de phénol/chloroforme et on a mélangé pour
terminer la réaction. Après avoir centrifugé le mélange réactionnel, on a recueilli la couche supérieure et on a recueilli les ADN par précipitation à l'éthanol, et on les a séparés sur un gel d'agarose à 0,8 %. On a recueilli un fragment d'ADN de 8 kpb en utilisant la trousse de collecte d'ADN EASY TRAP Ver. 2 (Takara Shuzo). On a amplifié la région du promoteur tac par PCR en utilisant comme matrice le plasmide pKK223-3 (vecteur d'expression, Pharmacia) et les amorces montrées dans SEQ ID NOS:1 et 2 (on a parcouru 30 fois un cycle consistant en une dénaturation à 94 C pendant 20 s, une hybridation à 55 C pendant 30 s et une réaction d'extension à 72 C pendant 60 s). On a utilisé l'ADN polymérase Pyrobest (Takara Shuzo) pour la PCR. On a purifié le fragment d'ADN contenant le promoteur tac amplifié en utilisant PCR prep (Promega) puis on l'a digéré au niveau des sites d'enzymes de restriction préalablement conçus dans les amorces, c'est-à-dire au niveau des sites EcoRI et EcoT22I. Puis, on a ajouté le mélange réactionnel à une solution de phénol/chloroforme et on a mélangé pour terminer la réaction. Après avoir centrifugé le mélange réactionnel, on a recueilli la couche supérieure et on a recueilli les ADN par précipitation à l'éthanol, et on les a séparés sur un gel d'agarose à 0,8 %. On a recueilli un fragment d'ADN d'environ 0,15 kpb avec EASY TRAP Ver. 2.
On a ligaturé le produit de digestion du vecteur pRS et le fragment de région du promoteur tac préparé comme décrit ci-dessus en utilisant la trousse de ligature d'ADN DNA Ligation Kit Ver. 2 (Takara Shuzo). On a utilisé cette solution de réaction de ligature pour transformer Escherichia coli (cellules compétentes de E, coliJM109, Takara Shuzo). On a étalé les cellules sur du milieu gélose LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on les a incubées pendant une nuit à 37 C. On a inoculé chacune des colonies apparaissant sur le milieu gélose à du milieu liquide LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on les a cultivées à 37 C pendant 8 h sous agitation. On a extrait l'ADN plasmidique de chaque bouillon de culture par le procédé alcali-SDS et on a confirmé la structure de chaque plasmide par digestion avec des enzymes de restriction pour obtenir pRStac. On a choisi comme plasmide pRStac un plasmide dans lequel les directions de transcription du gène de résistance à la streptomycine sur le vecteur pRS et du promoteur tac étaient identiques.
Le plasmide pRStac est un plasmide consistant en pRS dans lequel le promoteur tac est inséré pour l'expression des gènes.
Puis, on a digéré le plasmide pRStac avec les enzymes de restriction Sse8387I (Takara Shuzo) et SapI (New England Biolabs), on l'a ajouté à une solution de phénol/chloroforme et on a mélangé pour terminer la réaction. Après avoir centrifugé le mélange réactionnel, on a recueilli la couche supérieure, et on a recueilli les ADN par précipitation à l'éthanol, et on les a séparés sur un gel d'agarose à 0,8 % pour obtenir un fragment d'ADN d'environ 8,0 kpb. Puis, on a digéré pMW-EDDA construit en (1) ci-dessus avec les enzymes de restriction Sali et BamHI, on a ajouté à une solution de phénol/chloroforme et on a mélangé pour terminer la réaction. Après avoir centrifugé le mélange réactionnel, on a recueilli la couche supérieure, on a recueilli les ADN par précipitation à l'éthanol et on les a séparés sur un gel d'agarose à 0,8 % pour obtenir un fragment d'ADN d'environ 2,9 kpb.
On a ligaturé le produit de digestion du vecteur pRStac et le fragment de région des gènes edd et eda préparé comme décrit ci-dessus en utilisant la trousse de ligature d'ADN DNA Ligation Kit Ver. 2 (Takara Shuzo). On a utilisé cette solution de réaction de ligature pour transformer Escherichia coli (cellules compétentes de E. coli JM109, Takara Shuzo). On a étalé les cellules sur du milieu gélose LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on les a incubées pendant une nuit à 37 C. On a inoculé chacune des colonies apparaissant sur le milieu gélosé à du milieu liquide LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on les a cultivées à 37 C pendant 8 h sous agitation. On a extrait l'ADN plasmidique de chaque bouillon de culture en utilisant le procédé alcali-SDS, et on a confirmé la structure de chaque plasmide par digestion avec des enzymes de restriction et détermination de la séquence nucléotidique pour obtenir le plasmide cible. On a appelé ce plasmide pRSedda. Dans pRSedda, les gènes edd et eda étaient positionnés de telle manière que leur direction de transcription était la même que celle du promoteur tac.
Construction d'une bactérie produisant de la L-lysine à partir d'une bactérie Methylophilus.
Pour examiner l'effet du plasmide pRSedda sur la production de L-lysine, on a construit le plasmide pBBR-lysEdapA qui peut coexister avec
un vecteur dérivé de pRS et qui permet l'amplification de gènes codant une protéine ayant une activité de sécrétion de la L-lysine et l'enzyme DDPS.
(1) Construction de pRSIysE On a cloné un gène lyse, qui était un gène homologue du gène facilitant la sécrétion de la L-lysine connu pour Corynebacterium glutamicum R127 (Vrljic M., Sahm H., Eggeling L., Molecular Microbiology 22 :815-826 (1996)) à partir de la souche de Brevibacterium lactofermentum 2256, et on a tenté de l'exprimer dans une bactérie Methylophilus.
On a digéré le plasmide pRStac obtenu comme décrit ci-dessus avec les enzymes de restriction Sse8387I (Takara Shuzo) et SapI (New England Biolabs), on a ajouté à une solution de phénol/chloroforme et on a mélangé pour terminer la réaction. Après avoir centrifugé le mélange réactionnel, on a recueilli la couche supérieure, on a recueilli les ADN par précipitation à l'éthanol et on les a séparés sur un gel d'agarose à 0,8 % pour obtenir un fragment d'ADN d'environ 9,0 kpb.
On a amplifié le fragment de gène lysE par PCR en utilisant comme matrice le chromosome extrait de la souche de Brevibacterium lactofermentum 2256 (ATCC13869) et les amorces montrées dans SEQ ID NOS : 5 et 6 (dénaturation à 94 C pendant 20 s, hybridation à 55 C pendant 30 s et réaction d'extension à 72 C pendant 90 s). On a utilisé l'ADN polymérase Pyrobest (Takara Shuzo) pour la PCR. Dans l'amplification ci-dessus, pour que l'expression du gène lyse devienne possible dans une bactérie Methylophilus, on a conçu les amorces de manière que les nucléotides de 9 à 15 pb à partir du codon d'initiation de la traduction du gène lysE soient remplacés par une séquence dont on sait qu'elle est fonctionnelle dans une bactérie Methylophilus (Wyborn, N. R., Mills, J., Williamis, S. G. et Jones, C. W., Eur. J. Biochem., 240,314-322 (1996)). On a purifié le fragment obtenu en utilisant PCR prep (Promega) puis on l'a digéré avec les enzymes de restriction Sse8387I et SapI. On a ajouté le mélange réactionnel à une solution de phénol/chloroforme et on a mélangé pour terminer la réaction. Après avoir centrifugé le mélange réactionnel, on a recueilli la couche supérieure, on a extrait les ADN par
précipitation à l'éthanol et on les a recueillis à partir d'un gel d'agarose à 0,8 %.
On a ligaturé le produit de digestion du vecteur pRStac et le fragment de région du gène lysE préparé comme décrit ci-dessus en utilisant la trousse de ligature d'ADN DNA Ligation Kit Ver. 2 (Takara Shuzo). On a utilisé cette solution de réaction de ligature pour transformer Escherichia coli (cellules compétentes de E coli JM109, Takara Shuzo). On a étalé les cellules sur du milieu gélose LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on les a incubées pendant une nuit à 37 C. On a inoculé chacune des colonies apparaissant sur le milieu gélose à du milieu liquide LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on les a cultivées à 37 C pendant 8 h sous agitation. On a extrait l'ADN plasmidique de chaque bouillon de culture par le procédé alcali-SDS et on a confirmé la structure de chaque plasmide par digestion avec des enzymes de restriction et détermination de la séquence nucléotidique pour obtenir pRSIysE (figure 1). Dans pRSIysE, le gène lysE était positionné de telle manière que sa direction de transcription était la même que celle du promoteur tac.
On peut aussi citer à titre de carbazole le 3- aminocarbazole décrit dans la demande DE 277496.
A titre d'hydroxyindazoles utilisés de manière préférée dans les compositions selon la présente demande, on peut citer les monohydroxyindazoles suivants : 4-hydroxyindazole, 5hydroxyindazole, 6-hydroxyindazole, 7-hydroxyindazole, 7-hydroxy-1- méthylindazole, 4-hydroxy-6-méthylindazole, 7-hydroxy-6-
méthylindazole, 7-hydroxy-4,6-diméthylindazole, 6-hydroxy-7bromoindazole, 6-hydroxy-7-chloroindazole, 6-hydroxy-5,7dichloroindazole. Ces hydroxyindazoles sont décrits dans la demande de brevet DE 26 23 564, le passage de cette demande de l'art antérieur consacré aux hydroxyindazoles et à leur synthèse est incorporé dans la présente demande par référence.
A titre de benzoxazoles utilisés dans les compositions selon la présente demande, on peut citer les diaminobenzoxazoles suivants : 5,7-diaminobenzoxazole, 5,7-diamino-2-méthylbenzoxazole, 5,7diamino-2-éthylbenzoxazole, 5,7-diamino-2-butylbenzoxazole, 5diméthylamino-7-aminobenzoxazole, 5-amino-7diéthylaminobenzoxazole, 4,6-diaminobenzoxazole . Ces benzoxazoles sont décrits dans la demande de brevet DE 27 19 424, le passage de cette demande de l'art antérieur consacré aux benzoxazoles et à leur synthèse est incorporé dans la présente demande par référence.
A titre de pyrazolo azoles utilisés dans les compositions selon la présente demande, on peut citer les pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazoles, les pyrazolo- [3,2-c] les pyrazolotétrazoles, les pyrazolo-[1,5-a] imidazoles, les pyrazolo-[1,5-e] pyrazoles et les pyrazolo-[1,5-e] 1,2,3-triazoles.