INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
On obtient par le procédé ci-dessus une suspension de nanoparticules de polymère et de polysaccharide dont la charge positive dépend de la quantité de polyssacharide ajoutée. La quantité de polysaccharide est avantageusement comprise entre 0,01% et 5% et de préférence comprise entre 0,1% et 1% par rapport au poids de la suspension.
La substance d'intérêt cationique peut être ajouté à tout moment du procédé ci-dessus. En effet, la
polymérisation à un pH, certes acide mais supérieur à 1, permet d'introduire dès le début du procédé des substances d'intérêt sensibles aux pH trop acide. La quantité de substance d'intérêt est avantageusement comprise entre 0,5% et 50% par rapport au poids de la suspension.
A titre d'exemple spécifique, on peut citer le procédé suivant : 100 l de polyisohexylcyanoacrylate contenant 0 à 20000 ppm du S02 sont ajoutés dans une solution d'acide citrique (avec un pH variant de 1 à 5) contenant 1% de tensioactif non ionique, le poloxamer 188, et éventuellement 0,5% de cyclodextrine et contenant 0,2% de chitosan de faible poids moléculaire (5000 ou 10000 Da).
On peut rappeler que l'utilisation de chitosan pour d'obtenir des nanoparticules chargées positivement a déjà été décrit dans l'art antérieur (Yang S.C. et al., 2000). Cependant le procédé de l'art antérieur est réalisé à un pH du milieu de polymérisation très acide pH (pHl) auquel les principes actifs ne sont pas stables.
Dans le procédé selon la présente invention, le pH du milieu de polymérisation est compris entre 2,5 et 5, où les principes actifs sont stables. En outre, le procédé décrit par Yang S. C. et al. met en #uvre un chitosan de poids moléculaire supérieur à 30000 Da. Or, l'utilisation de chitosan de poids moléculaire supérieur à 10000 Da présente une toxicité (Richardson S. C.W., et al., 1999). Au contraire, les nanoparticules selon la présente invention comprennent du chitosan de bas poids moléculaire (5000 et 10000 Da), ce qui permet en outre d'obtenir des nanoparticules présentant une distribution en taille monodisperse et de ce fait avec une meilleure tolérance.
Le procédé décrit par Yang S.C. et al. est limité par la concentration de chitosan présente dans le milieu de polymérisation, car à une concentration de
chitosan inférieure à 0,25%, les nanoparticules obtenues sont instables. Le procédé selon l'invention permet d'obtenir des nanoparticules stables pour des concentrations de chitosan inférieures à 0,25%.
Ainsi, compte tenu de l'événement d'épissage alternatif et de l'existence de la protéine régulatrice SD', les rétrovirus MLV deviennent des rétrovirus complexes.
IV - VECTEURS DERIVES DES MLV ET PRODUCTION DE PARTICULES MLV CONTENANT UN TRANSGENE.
IV.1 - Vecteurs prototypes.
Plusieurs constructions de vecteurs dérivés des MLV peuvent être utilisées. Les vecteurs représentés à la figure 11 contiennent le signal étendu d'encapsidation (Psi) #+. Leurs caractéristiques distinctives principales ont été signalées par un encadré.
Le vecteur LXSN (Miller et al., 1989, Biotechniques, 7, 980) est caractérisé par des LTR 5' et 3' différents, et une mutation de l'ATG d'initiation de la traduction de Gag en codon stop ; la LTR 5' dérivé du virus sarcomateux de Moloney (MSV) qui dirige la synthèse d'ARN viral dans les lignées d'encapsidation, alors que la LTR 3', dérivée du MLV de Moloney (Mo-MLV), dirige la transcription de l'ARNm du gène d'intérêt après intégration du provirus transduit dans les cellules cibles. LXSN comprend aussi le gène de résistance à la
néomycine (neor) placé sous le contrôle du promoteur SV40 (SV).
Le vecteur MFG (Rivière et al., PNAS, 1995,92,6733) est entièrement basé sur les séquences du MLV de Moloney qui a la particularité d'enchaîner à la partie tronquée de gag (Agag) les déterminants du site accepteur d'épissage (SA) ainsi que le contexte ATG natif de l'enveloppe MLV.
Le vecteur MFG (B2) (Rivière et al., PNAS, 1995,92, 6733) est dérivé de MFG et est utilisé pour la thérapie génique d'enfants immunodéficients (CavazzanaCalvo et al, Science, 2000,288, 669), avec une mutation ponctuelle du PBS qui lève le blocage de la transcription MLV dans les cellules non différenciées.
Les vecteurs MESV (Laker et al., J.Virol., 1998,72, 339) et MND (Challita et al. ,J.Virol., 1995, 69,748) sont de structure similaire avec trois caractéristiques distinctives : - contrôle de la transcription du transgène, après transcription inverse, par U3 de MPSV en LTR 3'; - délétion d'une région de contrôle négatif (ou NCR pour Négative Control Région) dans U3, et LTR 5' soit de MPSV (vecteurs MESV), soit du MLV de Moloney (vecteurs MND) ; - substitution du PBS natif MLV reconnu par l'ARNtPro par la séquence PBS d'un mutant de MLV reconnu par l'ARNtGln (Colicelli et Goff, J. Virol., 1986,57, 37).
Il convient de noter que le prototype MFG(B2) (Hacein-Bey, S et al., Blood, 1998, 92,4090-4097) a été utilisé dans le premier cas décrit de thérapie génique réussie. En effet, prototype MFG (B2), le
transgène yc, a été introduit ex vivo dans des cellules précurseurs hématopoïétiques CD34+, et une correction du défaut immunitaire caractéristique de ces patients a pu être observée dès le deuxième mois après implantation (Cavazzana-Calvo, M. et al., Science, 2000, 288, 669-72).
Dans ces vecteurs prototypes, les séquences requises pour la production de la protéine SD' sont absentes, or conformément à la présente invention, la présence du site SD' est nécessaire à l'obtention de titres viraux élevés (Déjardin et al., 2000). En outre, les résultats observés sur des souris inoculées avec un MLV ne portant pas le site SD' (mutant MSD1), pourraient résulter du fait que la présence du site SD' restreint les événements de recombinaison entre le virus et les séquences cellulaires (Audit et al, J. Virol, 1999, déjà cité).
La production de la protéine SD' découlant de l'utilisation du site SD' est donc à prendre en considération dans ces stratégies, au même titre que la production des protéines régulatrices (Tat, Rev, Vpr, etc. ) dans les stratégies utilisant les vecteurs lentiviraux (Zufferey, J. Virol., 1998,72, 9873 ; Srinivasakumar, N and Schuening,F, 1999,J.Virol.,73,9589- 9598).
IV.2 - Vecteurs pour la production de la protéine SD'.
La protéine SD' pourra être apportée en trans en co-transfectant avec le vecteur portant le gène d'intérêt, l'ADNc de la protéine SD' (portant Psi, donc présent dans les cellules cibles).
Il est aussi possible d'utiliser un seul vecteur portant à la fois le gène d'intérêt suivi de
Cette composition peut être administrée par voie orale ou par injection. Administrée par voie orale, elle devra être conditionnée de manière adéquate pour passer l'estomac sans être hydrolysée.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples, qui suivent, donnés à titre illustratif et non limitatif, en référence aux dessins annexés.
BREVEDESCRIPTIONDESFIGURES.
La figure 1 est une représentation schématique des facteurs de rétention Rf de différents anions, par la per(3,6-anhydro)cyclodextrine de l'exemple 1.
La figure 2 est une représentation schématique des facteurs de rétention Rf de différents cations, par la per(3,6-anhydro)cyclodextrine de l'exemple 1.
EXPOSÉ DÉTAILLÉ DE MODES DE RÉALISATION PARTICULIERS EXEMPLE 1 : Préparation du per 2-0-éthylcarbamate de per (3,6-anhydro)cyclomaltohexaose.
Ce composé répond à la formule (I) donnée ci-dessus dans laquelle tous les R1 représentent OCONHCH2CH3 .
On pèse 1 g de per(3,6anhydro)cyclomaltohexaose séché sous vide à la pompe à palettes pendant 2 heures, et on ajoute 50 mL de diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre et 3 mL d'isocyanate d'éthyle à froid. La solution est portée à 100 C pendant toute une nuit. Ensuite, la solution est refroidie et on ajoute 1,5 mL d'isocyanate d'éthyle et on réchauffe à 100 C.
Après une nuit, la solution est refroidie puis traitée avec 10 mL de méthanol et laissé sous agitation pendant 1 heure. La solution est ensuite amenée à sec, par passage à l'évaporateur rotatif suivi de la pompe à palette. Le résidu obtenu est ensuite passé sur colonne de gel de silice (éluant méthanol/eau 1 :6) .
Ce produit peut être utilisé tel quel pour la complexation de chrome ou de manganèse.
EXEMPLE 2 : Préparation du per 2-0-hexylcarbamate de per (3,6-anhydro)cyclomaltohexaose.
Ce composé répond à la formule (I) donnée ci-dessus dans laquelle tous les R1 répondent -OCONH(CH2)5-CH3 et n est égal à 6.
On pèse 444 mg de per(3,6anhydro)cyclomaltohexaose après 3 heures de séchage à la pompe à palette, et on ajoute 25 mL de diméthylsulfoxyde (DMSO) sous argon et 1,5 mL d'isocyanate d'hexyle. La solution est chauffée à 70 C sous agitation magnétique. Après une nuit de chauffage à 70 C, la solution refroidie est additionée de 0,8 mL d'isocyanate d'hexyle et est maintenue à 10 C pendant toute une nuit. Ensuite, la solution est refroidie et est additionnée de méthanol sous agitation. Après 1 heure d'agitation, on élimine les solvants et le résidu est purifié par chromatographie sur colonne (gel de silice, méthanol/chloroforme : 1/6).
EXEMPLE 3 : Mise en évidence de la complexation d'anions par le composé de l'exemple 1, par chromatographie sur plaques échangeuses d'ions.
L'utilisation de plaques de chromatographie sur couches minces chargées en ions permet une évaluation rapide de la complexation de ces ions par les espèces à évaluer. Dans le cas présent, des plaques
de type Polygram Ionex 25-SA-Na (Macherey-Nagel, réf.: 80613) chargées en divers contre-ions ont été évaluées.
Termes ou Cliquages Offre Coûts expressions (en dollars) (en dollars) [T1 @ 1, T2 @ 1] 3564 0,7200000 2566,08 [T2 @ 2, T1 @ 1] 3216 0,7155410 2301,18 [T1 @ 1, T2 @ 3] 2755 0,7129365 1964,14 [T2@4, T1 @ 1] 2423 0,7094181 1718,92 [T2 @ 6, T1 @ 1] 2309 0,7017410 1620,32 [T1@1,T2@7] 2248 0,6992705 1571,96 [T2@8, T1 @1 2240 0,6811518 1525,78 T1 @2, T2@8 1892 0,6664270 1260,88 [T2@8, T1 @3 1431 0,6455905 923,84 T1 @4, T2@81 1099 0,6174886 678,62 T1 @6, T2@81 985 0,5888528 580,02 [T2 @ 8, T1 @ 7] 924 0,5753896 531,66 [T1 @ 8, T2 @ 8] 916 0,5300000 485,48 [T1 @ 8, T2 @ 10] 894 0,4861074 434,58 [T2 @ 10, T1 @ 10] 872 0,4400000 383,68
Par exemple, pour un budget B de 2100 $, la gestion de campagne guidée trouve la solution : être au rang 1 pour le terme ou l'expression T1 (moyennant une offre de 0,72 $) et être au rang 3 pour le terme ou l'expression T2 (moyennant une offre de 0,70 $). Le coût total attendu pour cette campagne est de 1964,14 $ et le nombre de cliquages total attendu est de 2755. Au vu de cela, il s'ensuit que l'offre moyenne est de 1964,14/2755 = 0,7129365.
Pour ce même exemple, la gestion de campagne optimum trouvera la solution : être au rang 2 pour les termes ou les expressions Ti et T2 (moyennant une offre de 0,71 $ pour chacun ou chacune). Le coût total attendu est de 2036,28 $ et le nombre total de cliquages attendu est de 2868. L'offre moyenne est de 0,71 $. Il est à noter que la gestion de campagne optimum présente une offre moyenne plus faible (0,71 $ contre 0,7129365 $), ce qui conduit à davantage de
cliquages (2868 contre 2755) bien que moyennant un coût attendu légèrement supérieur (2036,28 $ contre 1964,14 $).
L'exploration guidée est un algorithme d'ascension - qui commence à la combinaison présentant l'offre la plus basse puis qui se déplace d'une étape ou d'un pas depuis la combinaison courante jusqu'à la combinaison voisine qui présente la meilleure valeur.
L'exploration par ascension est beaucoup plus efficiente que la vérification de chaque combinaison, du fait qu'elle présente une complexité polynomiale. On suppose que les k termes ou expressions dans {T1, T2,...Tk} présentent chacun(e) approximativement r rangs.
Pour chaque itération, l'algorithme examine k extensions d'unique étape ou pas par rapport à la combinaison courante (et retient l'extension présentant l'offre moyenne la plus basse en tant que nouvelle "combinaison courante") et réalise k x r itérations (en partant du rang le pire pour tous les termes ou toutes les expressions dans {T1, T2,...Tk} pour aller jusqu'au meilleur rang). Ceci conduit à un coût de temps total de k2x r.
Une exploration guidée peut ne pas être optimum pour certaines entrées puisqu'elle ne considère pas une offre pour toutes les combinaisons de rangs pour les termes ou expressions {T1, T2,...Tk}.
Par conséquent, cette exploration ne permet pas de garantir de trouver la combinaison d'offres qui maximise le profit du publicitaire pour la campagne. Cependant, la technique heuristique pour rechercher les combinaisons présentant l'offre la plus basse conduit à des solutions qui peuvent être optimum et qui sont souvent très proches de l'optimum.
OPTIMISATIONS Selon un autre mode de réalisation de l'invention, il y a un certain nombre d'optimisations qui sont appliquées à la gestion de campagne guidée. Les modes de réalisation optimisés ont pour avantage un temps et un espace de calcul réduits.
Les optimisations ignorent le fait de considérer certains des rangs des termes ou expressions d'entrée {T1, T2,...Tk} qui sont non susceptibles d'avoir part à la solution finale, compte tenu du premier
budget B et d'autres contraintes émanant du publicitaire. Ceci a pour avantage de réduire de manière significative le temps de calcul et l'espace de calcul. Ces optimisations peuvent être appliquées à la fois à la gestion de campagne optimum et à la gestion de campagne guidée.
La première optimisation ignore les rangs des termes ou expressions {T1, T2,...Tk} présentant moins de cliquages qu'un certain seuil. Ceci revient à ignorer des rangs qui ne peuvent pas contribuer de manière significative à l'envoi de chercheurs sur un site web de publicitaire.
La seconde optimisation considère seulement une bande de rangs possibles pour chaque terme ou expression {T1, T2,...Tk}. Par exemple, le publicitaire peut spécifier qu'aucun rang pire que le rang 3 ne doit être considéré pour un quelconque terme ou une quelconque expression ou peut spécifier que pour le terme ou l'expression T1, seulement les rangs 3 à 10 doivent être considérés tandis que pour tous les autres termes ou toutes les autres expressions, seulement les rangs 2 à 5 doivent être considérés. Ces contraintes permettent à un publicitaire de mieux réaliser ces buts d'affaires, par exemple en projetant une image de qualité plus élevée et un degré de confiance plus élevé en étant aux rangs supérieurs ou en étant à de meilleurs rangs par rapport à des compétiteurs afférents.
La troisième optimisation est une variante selon laquelle le système décide de manière automatique la bande de rangs possibles à considérer pour chaque terme ou expression {T1, T2,...Tk}. Du fait qu'une gestion de campagne automatique est déroulée de façon périodique sur toute la campagne, les résultats de la passe précédente sont utilisés pour sélectionner la bande de rangs appropriée à considérer pour chaque terme ou expression {T1, T2,...Tk}.
La passe précédente de la gestion de campagne retient une entité offre/rang spécifique pour chaque terme ou expression {T1, T2,...Tk}, dont on s'attend à ce qu'elle maximise le profit du publicitaire.
De préférence, ces corps gras sont des composés hydrocarbonés, éventuellement de type polymérique ; ils peuvent également être choisis parmi les composés siliconés; ils peuvent aussi se présenter sous forme d'un mélange de composés hydrocarbonés et/ou siliconés. Dans le cas d'un mélange de différents corps gras pâteux, on utilise de préférence les composés pâteux hydrocarbonés (contenant principalement des atomes de carbone et d'hydrogène et éventuellement des groupements ester), en proportion majoritaire.
Parmi les composés pâteux susceptibles d'être utilisés dans la composition selon l'invention, on peut citer les lanolines et les dérivés de lanoline comme les lanolines acétylées ou les lanolines oxypropylènées ou le lanolate d'isopropyle, ayant une viscosité de 18 à 21 Pa. s, de préférence 19 à 20,5 Pa. s, et/ou un point de fusion de 30 à 55 C et leurs mélanges. On peut également utiliser des esters d'acides ou d'alcools gras, notamment ceux ayant 20 à 65 atomes de carbone (point de fusion de l'ordre de 20 à 35 C et/ou viscosité à 40 C allant de 0,1 à 40 Pa.s)
comme le citrate de tri-isostéaryle ou de cétyle ; propionate d'arachidyle ; le polylaurate de vinyle ; les esters du cholestérol comme les triglycérides d'origine végétale tels que les huiles végétales hydrogénées, les polyesters visqueux comme l'acide poly(12-hydroxystéarique) et leurs mélanges.
On peut aussi citer les corps gras pâteux siliconés tels que les polydiméthylsiloxanes (PDMS) ayant des chaînes pendantes du type alkyle ou alcoxy ayant de 8 à 24 atomes de carbone, et un point de fusion de 20-55 C, comme les stearyl dimethicones notamment ceux vendus par la société Dow Corning sous les noms commerciaux de DC2503 et DC25514, et leurs mélanges.
Le corps gras pâteux peut être présent dans la composition selon l'invention en une teneur allant de 0,01 à 60% en poids, par rapport au poids total de la composition, de préférence allant de 0,5 à 45 % en poids, et mieux allant de 2 % à 30 % en poids, dans la composition.
La composition selon l'invention peut contenir des agents tensioactifs émulsionnants présents notamment en une proportion allant de 2 à 30 % en poids par rapport au poids total de la composition, et mieux de 5 % à 15 %. Ces agents tensioactifs peuvent être choisis parmi des agents tensioactifs anioniques ou non ioniques. On peut se reporter au document Encyclopedia of Chemical Technology, KIRK-OTHMER , volume 22, p.333-432, 3ème édition, 1979, WILEY, pour
la définition des propriétés et des fonctions (émulsionnant) des tensioactifs, en particulier p.347- 377 de cette référence, pour les tensioactifs anioniques et non-ioniques.
Les tensioactifs utilisés préférentiellement dans la composition selon l'invention sont choisis : - parmi les tensioactifs non-ioniques : les acides gras, les alcools gras, les alcools gras polyéthoxylés ou polyglycérolés tels que des alcools stéarylique ou cétylstéarylique polyéthoxylés, les esters d'acide gras et de saccharose, les esters d'alkyl glucose, en particulier les esters gras de Cl-C6 alkyl glucose polyoxyéthylénés, et leurs mélanges.
On utilise de préférence des tensioactifs permettant l'obtention d'émulsion huile-dans-eau ou cire-dans-eau.
La composition selon l'invention peut comprendre au moins un polymère filmogène.
Le polymère filmogène peut être présent dans la composition selon l'invention en une teneur en matières sèches allant de 0,1 % à 60 % en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,5 % à 40 % en poids, et mieux de 1 % à 30 % en poids.
Dans la présente demande, on entend par "polymère filmogène", un polymère apte à former à lui seul ou en présence d'un agent auxiliaire de filmification, un film continu et adhérent sur un support, notamment sur les matières kératiniques comme les cils.
Parmi les polymères filmogènes utilisables dans la composition de la présente invention, on peut citer les polymères synthétiques, de type radicalaire ou de type polycondensat, les polymères d'origine naturelle, et leurs mélanges.
Par polymère filmogène radicalaire, on entend un polymère obtenu par polymérisation de monomères à insaturation notamment éthylénique, chaque monomère étant susceptible de s'homopolymériser (à l'inverse des polycondensats).
Après chromatographie sur gel de silice avec le mélange éther de pétrole/AcOEt, les produits secondaires sont désacétylés et soumis de nouveau à la réaction d'acylation : on obtient ainsi après un recyclage le composé 24 avec 85 % de rendement.
Le traitement de ce dernier par 2 équivalents de trichloroacétimidate de l'alcool paraméthoxybenzylique dans le dichlorométhane en présence de 0,1 équivalent de triflate de triméthylsilyle permet d'obtenir le composé 10 avec un rendement de 80 % accompagné de 20 % de 24 n'ayant pas réagi. Ces deux produits 10 et 24 sont aisément
séparables par chromatographie sur gel de silice avec le mélange éther de pétrole/AcOEt.
Le disaccharide de base 10 est transformé avec 95 % de rendement en disaccharide donneur 26 (synthétisé par une autre voie dans TABEUR C. ; MALLET J.M. ; BONOF. ; HERBERT J. M. ; M. ; P., Bioorg., Med. Chem.
1999,7, 2 003 - 2 012, par isomérisation de l'allyle, en présence de C8H14MePh2PIr1PF6 et coupure de l'énol par des sels de mercure, comme cela est décrit par OLTVOORT J. J. ; VAN BOECKEL C. A. A. ; KONING J. H. ; VAN BOOM J. H., Synthesis 1981, 305 - 308, c'est-à-dire selon le mode opératoire 5 suivant : Mode opératoire 5 : Le disaccharide 10 est solubilisé dans du THF anydre de façon à avoir une concentration de 0,06 M. La solution est dégazée sous vide, puis on ajoute 0,013 équivalents de C8H14MePh2PIrIPF6. Le mélange est redégazé puis laissé au contact de dihydrogène pendant 2 minutes et enfin redégazé puis mis sous atmosphère d'argon. Après deux heures sous agitation à température ambiante, le mélange est évaporé puis repris dans le volume d'acétone nécessaire pour obtenir une concentration de 0,05 M, on ajoute alors 1,2 équivalents d'HgO et 1,1 d'HgCl2. Après deux heures sous agitation à température ambiante, le mélange est filtré sous Célite 545, évaporé et repris par de l'éther éthylique. La phase éthérée est lavée par une solution à 10% de KI, puis à l'eau, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée, évaporée et enfin chromatographiée sur gel de silice (éluant toluène/AcOEt 8/2 à 6/4) pour conduire au disaccharide libre en position anomérique avec un rendement de 97%.
Puis, on réalise un traitement dans le dichlorométhane par 6 équivalents de trichloroacétonitrile et 2 équivalents de K2C03, suivi d'une chromatographie sur gel de silice avec le mélange éther de pétrole/AcOEt 1 # NEt3. Le disaccharide 10, traité par 1,5 équivalents de DDQ dans du dichlorométhane saturé en eau conduit après lavage de la phase organique par une solution saturée de NaHC03 et chromatographie sur gel de silice avec le mélange éther de pétrole/AcOEt au disaccharide accepteur 25 avec un rendement de 95 %.
Le couplage du disaccharide accepteur 25 et du disaccharide donneur 26 (1,3 équivalents) est effectué dans le dichlorométhane à -40 C en présence de tamis 4 A et de triflate de terbutyldiméthylsilyle (0,2 équivalents). Après addition du catalyseur, la réaction est laissée 30minutes à -40 C, puis on laisse la température remonter à 0 C, température à laquelle on arrête la réaction par ajout de 0,2 équivalents de triéthylamine. Une chromatographie sur gel de silice directe du mélange réactionnel avec le mélange CH2Cl/AcOEt/éther de pétrole permet d'isoler le tétrasaccharide 27 avec un rendement de 95 %.
Ce dernier est alors transformé en tétrasaccharides accepteur 28 (rendement 90 %) et donneur 29 (rendement 95 %) en utilisant les mêmes séquences réactionnelles que pour le disaccharide 10. En utilisant les mêmes conditions que pour la préparation du tétrasaccharide 27, les couplages du disaccharide donneur 26 avec le tétrasaccharide accepteur 28 et du tétrasaccharide donneur 29 avec le tétrasaccharide accepteur 28 conduisent à l'hexasaccharide 30 et à l'octasaccharide 31 avec des rendements de 95 %.
Les oligosaccharides 27,30 et 31 sont désacétylés dans le méthanol anhydre en présence de 0,5 équivalent de K2CO3 anhydre. Après neutralisation des milieux réactionnels par de la DOWEX 50 X 8 200 H+ et évaporation, les produits sont purifiés par chromatographie sur gel de silice et obtenus avec des rendements de 86 à 95 %. La réduction des groupements azido est effectuée par le propane dithiol (2 équivalents par groupement azido) dans le méthanol en présence de triéthylamine (2 équivalents par groupement azido). Après évaporation du méthanol par balayage d'argon, les résidus sont chromatographiés sur gel de silice (CH2C12/MeOH) pour conduire aux composés aminés avec des rendements de 90 % à 80 %.