INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La présente invention concerne également une méthode de dosage de la protéine telle que définie ci-dessus, caractérisée en ce qu'elle comprend les étapes suivantes : - des anticorps monoclonaux de lapin dirigé contre différents épitopes de la protéine de l'invention (anti-HPB) sont fixés sur une plaque et le sérum humain à analyser contenant ladite protéine (HPB) est déposé sur la plaque susmentionnée, - la plaque est rincée et lavée, - on dépose sur la plaque des anticorps anti-anticorps de lapin (anti-IGrabbitper) marqués avec de la peroxydase durant 30 minutes, afin de former un complexe ternaire entre un anticorps monoclonal de lapin, la protéine selon l'invention et un anticorps anti-anticorps de lapin susmentionnés (anti-HPB - HPB - anti-IGrabbit-per), - la plaque est rincée et lavée, - on fait réagir la peroxydase fixée sur la plaque avec son substrat (kit disponible en commerce, Chemiluminescent Peroxidase Substrate (Sigma)) et la réaction est arrêtée au bout de 30 minutes avec la 3,3',5,5'-tétraméthylbenzidine (TMB, Sigma), - la densité optique du produit formé à l'étape précédente est mesurée à 450 nm à l'aide d'un spectrophotomètre, et la comparaison de cette mesure avec une courbe étalon permet de déterminer la concentration de la protéine selon l'invention (HPB) présente dans le sérum.
Ainsi, la méthode de dosage susmentionné utilise une méthode par immunodosage du type ELISA (Engvall et al., 1971).
D'autres méthodes peuvent être utilisées pour doser la concentration de la protéine de l'invention dans le plasma telles que : - les méthodes électrophorétiques, ou - la quantification de son activité.
La présente invention concerne également l'application de la méthode de dosage telle que définie ci-dessus au diagnostic in vitro de maladies liées à une hyperphosphatémie notamment lorsque la quantité de protéine telle que définie ci-dessus, dosée selon la méthode telle
que définie ci-dessus, est inférieure à la quantité de cette protéine normalement présente dans le sang d'un individu sain, ou au diagnostic in vitro de maladies liées à une hypophosphatémie notamment lorsque la quantité de protéine telle que définie ci-dessus, dosée selon la méthode telle que définie ci-dessus, est supérieure à la quantité de cette protéine normalement présente dans le sang d'un individu sain, ou au diagnostic in vitro d'une prédisposition d'un individu à de telles pathologies.
Le taux de la protéine selon l'invention est un indicateur de prédisposition à un risque de maladie cardiovasculaire. Ainsi, les personnes ayant un taux faible de ladite protéine auront un taux plus important de phosphate libre qui précipitera avec le calcium du plasma pour former des plaques de phosphate de calcium, ce qui est un facteur aggravant notamment les risques de maladies cardiovasculaires ou d'arthrite.
Un taux anormal de cette protéine est aussi le signe d'une pathologie existante. Par exemple une hyperphosphatémie peut déclencher une production accrue de protéine dans le but de limiter le taux de phosphate. Un taux faible peut être lui aussi révélateur d'un dysfonctionnement.
La présente invention concerne également l'application telle que définie ci-dessus au diagnostic in vitro de maladies liées à une hyperphosphatémie telles que les maladies cardiovasculaires, notamment les maladies cardiovasculaires liées à la formation de plaques d'athéromes, ou au diagnostic in vitro d'une prédisposition d'un individu au développement d'une des maladies susmentionnées.
La présente invention concerne également l'application telle que définie ci-dessus au diagnostic in vitro de maladies liées à une hypophosphatémie, ou au diagnostic in vitro d'une prédisposition d'un individu au développement de ces maladies.
Parmi les signes cliniques ou physiologiques caractérisant les maladies liées à une hypophosphatémie, on peut citer : - une déminéralisation des os, - les manifestations musculaires de l'hypophosphatémie qui comportent une myopathie proximale affectant le muscle squelettique et une dysphagie et un iléus affectant les muscles lisses, - des carences cardiopulmonaires par le manque d'ATP, et - une encéphalopathie métabolique.
LEGENDES DES FIGURES La Figure 1 représente un gel SDS-PAGE des fractions finales dans le cadre de la purification de la paraoxonase humaine et de la protéine de l'invention SEQ ID NO : 1.
La colonne A correspond au marqueur de poids moléculaire et les colonnes B, C et D à trois purifications différentes issues de différentes poches de plasma humain. Elles contiennent toute les 3 la paraoxonase humaine et la protéine de fixation du phosphate.
La Figure 2 représente la structure schématique de la protéine de l'invention SEQ ID NO : 1 à laquelle est fixée une molécule de phosphate.
La Figure 3 correspond à un test de fixation du phosphate par la protéine de l'invention.
ESI-MS m/z 439 [M+H] 4.50) Composés préparés à partir de l'intermédiaire 35.
Exemple 306 : Préparé à partir de l'intermédiaire 35 et de 3,4- dichloroaniline selon la méthode N.
1H-NMR (DMSO-d6) 8 1. 69 (s, 4H) ; (t, 2H) ; (t, 2H) ; 3. 17 (s, 2H) ; (s, 2H) ; (m, 7H) ; 10.25(s, 1H) .
ESI-MS m/z 459 [M+H]+ Exemple 307: Préparé à partir de l'intermédiaire 35 et de 4- (trifluoromethyl)aniline selon la méthode O.
1H-NMR (DMSO-d,) # 1.69 (s, 4H) ; (t, 2H) ; 2. 97 (t, 2H) ; 3. 17 (s, 2H) ; 4. 79 (s, 2H) ; (m, 8H) ; 10. 32 (s, 1H).
ESI-MS m/z 459 [M+H]+ 4. 51) Composés préparés à partir de l'intermédiaire 36.
Exemple 308 : Préparé à partir de l'intermédiaire 36 et de 3,4- dichloroaniline selon la méthode N.
1H-NMR (DMSO-d,) # 1.70 (s, 4H) ; (t, 2H) ; 2. 92 (t, 2H) ; 3. 18 (s, 2H) ; 4. 79 (s, 2H) ; 7. 02-7.99 (m, 7H) ; 10.60(s, 1H) .
ESI-MS m/z 459 [M+H]+ Exemple 309 : Préparé à partir de l'intermédiaire 36 et de 4- (trifluoromethyl)aniline selon la méthode 0.
ESI-MS m/z 459 [M+H]+ 4. 52) Composés préparés à partir de l'intermédiaire 37.
Exemple 310 : Préparé à partir de l'intermédiaire 37 et de 4- (trifluoromethyl)aniline selon la méthode 0.
1H-NMR (DMSO-d6) # 1. 78 (s, 4H) ; (s, 2H) ; 4. 90 (s, 2H) ; 7. 51-8.13 (m, 8H) ; (s, 1H).
ESI-MS m/z 431 [M+H]+ Exemple 311 : Préparé à partir de l'intermédiaire 37 et de 3,4- dichloroaniline selon la méthode O.
ESI-MS m/z 431 [M+H]+ 4. 53) Composés préparés à partir de l'intermédiaire 38.
Exemple 312 :
Préparé à partir de l'intermédiaire 38 et de 4- (trifluoromethyl)aniline selon la méthode 0.
Les colonnes A à F correspondent à différents lots de purification de la protéine de l'invention provenant de différentes poches de plasma humain ; la colonne G au lysozyme 1 mg/ml et la colonne H à la P-lacto globuline.
La Figure 4 représente les coordonnées moléculaires de la protéine cristallisée de l'invention.
PARTIE EXPÉRIMENTALE Isolation de la protéine La protéine est obtenue à partir du plasma humain suivant le procédé de Gan et al.
(1991) : La protéine est purifiée à partir de poches de plasma congelé (-200 ml) fournies par l'Etablissement de Transfusion Sanguine de Lyon-Beynost. Le caillot de fibrine, formé par l'ajout de 1 M (1% v/v) de CaCl2 au plasma est séparé du sérum par filtration.
Le sérum est alors mélangé à 400 ml de Gel d'affinité (Cibacron 3GA-Agarose, C-1535, Sigma) équilibré avec un tampon A (Tris/HCl 50 mM, CaCl2 1mM, NaCl 4M, pH 8).
Dans ces conditions, principalement les HDL ("high density lipoprotein" : lipoprotéines de haute densité) sont adsorbées. Après 6 à 8 heures d'incubation, les protéines non adsorbées sur le gel sont éliminées par filtration sur fritté de porosité n 2. Ce lavage s'effectue jusqu'à ce que l'on ne détecte plus de protéine dans l'éluat (absorption UV à 280 nm). Le gel est ensuite équilibré avec un tampon B (Tris/HCl 50 mM, CaCl2 lmM, pH 8) puis placé en colonne XK 50/30 (Pharmacia). L'élution est réalisée en rajoutant lg/1 de déoxycholate de sodium et 0,1% de triton X-100 au tampon B. Les fractions montrant une activité arylestérase sont injectées sur 50 ml d'un gel échangeur d'anions (DEAE Sepharose Fast Flow, Pharmacia) disposé en colonne XK 26/70 (Pharmacia) et équilibré avec le tampon B et 0,05% de triton X-100. L'élution se fait par gradient de NaCl. Un premier palier est réalisé à 87,5 mM de NaCl afin d'éliminer l'apo A-I, une protéine liée à la paraoxonase, et la majorité des protéines contaminantes. La paraoxonase humaine (PON1) est environ éluée à la concentration de 140 mM de NaCl.
Toutes les fractions conservées montrent une activité paraoxonase et arylestérase, ces activités étant vérifiées selon les tests mentionnés plus loin. Les fractions éluées ne sont pas regroupées. Les gels SDS-PAGE des fractions obtenues montrent des bandes comprises entre 38 kDa et 45 kDa (voir Figure 1). Chaque purification n'apporte pas toujours la même distribution de masse apparente. Cette légère hétérogénéité peut s'expliquer par la présence de 2 chaînes glycosylées sur la PON1.
En plus de la PON1 dans ces lots une autre protéine a été isolée par cristallisation, en substituant le triton par le C12-maltoside et en utilisant le sulfate d'ammonium comme agent précipitant. Les cristaux obtenus sont ceux d'une protéine inconnue caractérisée par radiocristallographie. La cristallisation est actuellement le seul procédé existant pour purifier cette protéine.
L'activité paraoxonase est mesurée dans un tampon Glycine 50 mM/NaOH, CaCl2 1 mM, en présence de 1 M NaCl, pH 10,5 et est déterminée au moyen d'un spectrophotomètre à double faisceau (Shimadzu UV 160A) thermostaté à 25 C. La vitesse d'hydrolyse est déterminée d'après la variation d'absorbance a 412nm, correspondant à la formation de p-nitrophénol libéré par l'hydrolyse de paraoxon, en fonction du temps, s = 18290 M-1cm-1(Smolen, 1991).
L'activité arylestérase est mesurée dans un tampon tris 50mM/HCl, CaClz 1mM, pH 8 et est déterminée au moyen d'un spectrophotomètre à double faisceau (Shimadzu UV 160A) thermostaté à 25 C. La vitesse d'hydrolyse est déterminée d'après la variation d'absorbance a 270nm, correspondant à la formation de phénol libéré par l'hydrolyse de phényl acétate, en fonction du temps, s = 1310 M-1cm-1(Smolen, 1991).
Structure La structure de la protéine cristallisée a été obtenue par cristallographie des rayons X. La structure à 1,9 de résolution a été obtenue par la méthode SIRAS (Single Isomorphous Replacement and Anomalous Scattering)(Figure 2).
Les données de diffraction des rayons X ont été collectées sur la ligne BM30 de l'ESRF (Grenoble).
Un dérivé de sel d'atome lourd a été obtenu en trempant un cristal dans une solution contenant des sels d'uranium.
Les images ont été intégrées, mises à l'échelle et combinées avec les programmes XDS2000 (Kabsch, 1993) et la suite CCP4 (COLLABORATIVE COMPUTATIONAL PROJECT, NUMBER 4.1994. "The CCP4 Suite: Programs for Protein Crystallography". Acta Cryst. D50,760-763).
Les programmes CNS (BRUNGER, 1998) et SnB (Weeks, 1999) ont été utilisés pour localiser les atomes d'uranium. Le programme SHARP (Copyright # 2001-2002 the Buster Development Group) a été utilisé pour obtenir les phases par la technique SIRAS.
372 acides aminés ont été construits automatiquement dans la carte de densité électronique par le programme ARP/wARP (Perrakis, 1997). Ce premier modèle a ensuite été affiné par le programme CNS.
CIRE(S) Les compositions selon l'invention comprennent une cire ou un mélange de cires en une teneur supérieure à 3 % en poids par rapport au poids total de la composition.
La cire considérée dans le cadre de la présente invention est d'une manière générale un composé lipophile, solide à température ambiante (25 C), à changement d'état solide/liquide réversible, ayant un point de fusion supérieur ou égal à 30 C pouvant aller jusqu'à 200 C et notamment jusqu'à 120 C.
En particulier, les cires convenant à l'invention peuvent présenter un point de fusion supérieur ou égal à 45 C, et en particulier supérieur ou égal à 55 C.
Au sens de l'invention, la température de fusion correspond à la température du pic le plus endothermique observé en analyse thermique (DSC) telle que décrite dans la norme ISO 11357-3 ; Le point de fusion de la cire peut être mesuré à l'aide d'un calorimètre à balayage différentiel (DSC), par exemple le calorimètre vendu sous la dénomination MDSC 2920 par la société TA Instruments.
Le protocole de mesure est le suivant : Un échantillon de 5 mg de cire disposé dans un creuset est soumis à une première montée en température allant de -20 C à 100 C, à la vitesse de chauffe de 10 C/minute, puis est refroidi de 100 C à -20 C à une vitesse de refroidissement de 10 C/minute et enfin soumis à une deuxième montée en température allant de -20 C à 100 C à une vitesse de chauffe de 5 C/minute. Pendant la deuxième montée en température, on mesure la variation de la différence de puissance absorbée par le creuset vide et par le creuset contenant l'échantillon de cire en fonction de la température. Le point
de fusion du composé est la valeur de la température correspondant au sommet du pic de la courbe représentant la variation de la différence de puissance absorbée en fonction de la température.
Les cires susceptibles d'être utilisées dans les compositions selon l'invention sont choisies parmi les cires, solides, à température ambiante d'origine animale, végétale, minérale ou de synthèse et leurs mélanges.
Les cires pouvant être utilisées dans les compositions selon l'invention présentent généralement une dureté allant de 0,01 MPa à 15 MPa, notamment supérieure à 0,05 MPa et en particulier supérieure à 0,1 MPa.
La dureté est déterminée par la mesure de la force en compression mesurée à 20 C à l'aide du texturomètre vendu sous la dénomination TA-TX2i par la société RHEO, équipé d'un mobile en inox en forme de cylindre d'un diamètre de 2 mm en mesurant l'évolution de la force (force de compression ou force d'étirement) (F) en fonction du temps, pendant l'opération suivante : Le mobile est déplacé à la vitesse de 0,1mm/s puis pénètre dans la cire jusqu'à une profondeur de pénétration de 0,3 mm. Lorsque le mobile a pénétré dans la cire à la profondeur de 0,3 mm, le mobile est maintenu fixe pendant 1 seconde (correspondant au temps de relaxation) puis est retiré à la vitesse de 0,1 mm/s. Pendant le temps de relaxation, la force (force de compression) décroît fortement jusqu'à devenir nulle puis lors du retrait du mobile, la force (force d'étirement) devient négative pour ensuite croître à nouveau vers la valeur 0. La dureté correspond à la force de compression maximale mesurée entre la surface du mobile et la cire au moment de leur mise en contact. La valeur de cette force est exprimée en MPa.
Pour effectuer la mesure de la dureté, la cire est fondue à une température égale au point de fusion de la cire + 20 C. La cire fondue est coulée dans un récipient de 30 mm de diamètre et de 20 mm de profondeur. La cire est recristallisée à température ambiante (25 C) pendant 24 heures, puis la cire est conservée pendant au moins 1 heure à 20 C avant d'effectuer la mesure de dureté.
A titre illustratif des cires convenant à l'invention, on peut notamment citer les cires hydrocarbonées comme la cire d'abeilles, la cire de lanoline, les cires d'insectes de Chine, la cire de sumac, les paraffines, certaines cires de polyéthylène et les copolymères cireux ainsi que leurs esters.
On peut aussi citer des cires obtenues par hydrogénation catalytique d'huiles animales ou végétales ayant des chaînes grasses, linéaires ou ramifiées, en Cg-C32. Parmi celles-ci, on peut notamment citer l'huile de jojoba isomérisée telle que l'huile de jojoba partiellement hydrogénée isomérisée trans fabriquée ou commercialisée par la société DESERT WHALE sous la référence commerciale Iso-Jojoba-50 , l'huile de tournesol hydrogénée, l'huile de ricin hydrogénée, l'huile de coprah hydrogénée, l'huile de lanoline hydrogénée, et le tétrastéarate de di-(triméthylol-1,1,1 propane) vendu sous la dénomination de Hest 2T-4S par la société HETERENE.
On peut également utiliser les cires obtenues par hydrogénation d'huile de ricin estérifiée avec l'alcool cétylique vendues sous les dénominations de Phytowax ricin 16L64# et 22L73# par la société SOPHIM. De telles cires sont décrites dans la demande FR-A- 2792190.
Selon un mode de réalisation particulier, les compositions selon l'invention peuvent comprendre au moins une cire dite cire collante c'est-à-dire possédant un collant supérieur ou égal à 0,7 N. s et une dureté inférieure ou égale à 3,5 MPa.
Un procédé de dissociation avantageux de l'invention est caractérisé en ce que le tampon de dissociation comprend 0,1 M de base Trisma (tris[hydroxyméthyl] aminométhane) et 0 à 10 mM d'EDTA ajusté à un pH compris d'environ 5 à environ 12.
De préférence, ledit tampon de dissociation comprend de l'EDTA à une concentration d'environ 1 mM ajusté à un pH d'environ 10 avec une solution de soude 2N.
Selon un mode de réalisation avantageux, le procédé de dissociation de l'invention est caractérisé en ce que les dix chaînes protéiques constituant ladite
molécule sont obtenues par la dissociation de quatre sous-unités par exemple en présence de DTT, lesdites sous-unités étant elles-mêmes obtenues par mise en présence d'un échantillon d'hémoglobine extracellulaire d'Arenicola marina avec différents agents dissociants, notamment un tampon de dissociation.
La molécule native se dissocie en sous-unités sous l'action d'agents dissociants non réducteurs. Il n'y a donc pas rupture des liaisons covalentes. Toutefois, après l'action d'un agent réducteur (coupure des liaisons covalentes), les sous-unités sont réduites en chaînes polypeptidiques (chaînes protéiques constituées de l'assemblage d'acides aminés).
Les 4 sous-unités susmentionnées sont donc : les monomères, les dimères, les trimères et les dodécamères.
Les monomères sont des chaînes de globine.
Les dimères sous forme homo et héterodimères sont des chaînes de structure.
Les trimères sont des assemblages covalents de trois chaînes de globine.
Les dodecamères sont constitués de 12 chaînes protéiques ; par exemple : 3 trimères + 3 monomères, 2 trimères + 6 monomères, 1 trimère + 9 monomères.
On peut donc obtenir les 10 chaînes protéiques soit en une seule étape par dissociation directe de l'hémoglobine extracellulaire d'Arenicola marina, soit en deux étapes, l'une consistant en la dissociation de l'hémoglobine extracellulaire d'Arenicola marina en 4 sous-unités et l'autre en la dissociation desdites 4 sous-unités en dix chaînes protéiques.
La présente invention concerne également un procédé de dissociation tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que les agents dissociants utilisés pour obtenir les 4 sous-unités susmentionnées sont les suivants : - une solution tampon de dissociation comprenant : 0,1 M de base Trisma (tris[hydroxyméthyl] aminométhane) et 0 à 10 mM d'EDTA ajusté à un pH compris d'environ 5 à environ 12, et - une solution d'urée dont la concentration est comprise d'environ 0,1 M à environ 8 M, et est notamment égale à 3 M.
La présente invention concerne également un procédé de dissociation tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que les agents dissociants pour obtenir les 4 sousunités sont les suivants : - une solution tampon de dissociation comprenant 0,1 M de base Trisma et 1 mM d'EDTA ajusté à pH 10, et
- 3 M d'urée.
Le procédé de dissociation de l'invention permet d'obtenir une composition contenant le mélange des dix chaînes protéiques constituant la molécule d'hémoglobine extracellulaire d'Arenicola marina.
La présente invention concerne également un procédé de préparation de couples d'amorces à partir des chaînes protéiques telles qu'obtenues selon le procédé tel que défini ci-dessus, ledit procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - l'isolement de chacune des dix chaînes protéiques constituant la molécule d'hémoglobine telles qu'obtenues selon le procédé tel que défini ci-dessus, - le microséquençage de chacune des dix chaînes protéiques isolées susmentionnées par spectrométrie de masse, afin d'obtenir une microséquence correspondant à chacune des dix séquences constituées de 5 à 20 acides aminés, et - la détermination de dix couples d'amorces dégénérées à partir des microséquences susmentionnées.
- La figure 2 est un graphique montrant la quantité de follicules pileux en phase anagène sur le groupe traité (T) et sur le groupe contrôle (C).
- La figure 3 est un graphique montrant la quantité de follicules pileux en phase catagène sur le groupe traité (T) et sur le groupe contrôle (C).
EXEMPLE: Evaluation de l'effet de la composition selon l'invention sur la prolifération et l'activation des mastocytes dans un modèle in vivo réalisé sur des souris.
Les études ont été réalisées sur des jeunes souris mâles BAL/C âgées de 7 semaines. 30 de ces animaux ont été épilés avec un rasoir dans la région dorsale le matin et partagés ensuite en deux groupes: un groupe contrôle (C) sans traitement et un groupe traité (T) avec la composition de la demanderesse utilisée pure, deux fois par jour, sur la région épilée.
Le mélange de base de la composition objet de l'invention est dosé dans des proportions voisines des valeurs suivantes: base % masse éthanol 20 acétate d'éthyle 1 eucalyptol 1 dipropylène glycole 20 linalol 13 acétate de linalol 2 anydride itaconique ou méthyle 1 succinique 5 terpinène-4-ol a-terpinéol 5 camphre 1 acétate de bornyle 4 formiate de géranyle 2 géraniol ou acétate de géranyle 5 coumarine 1 diethyle phtalate 20 25 30 Après 2, 7, 14 et 21 jours de traitement, les animaux ont été sacrifiés et des échantillons de peau retirés et fixés dans du formol pour réaliser des coupes histologiques destinées à être testées par une solution aqueuse 0.5% de bleu de toluidine (Merck ).
L'analyse des mastocytes est réalisée en utilisant un Système d'Analyse d'Images (Kontrom300 ) sur une surface du derme et la densité de mastocytes est exprimée par le nombre de cellules par mm2 de tissu.
Parallèlement à cette analyse, une étude histologique d'une section des tissus a permis de compter les follicules pileux en phase anagène de croissance et en phase catagène d'involution.
Analyse statistique: les différences entre chaque groupe sont estimées par le test T de Student et la corrélation entre le comptage et les jours de traitement est évaluée par une simple analyse régressive. Les données sont évaluées avec le Sigma Stat Softwear (Jandel Sientific ). P<0.05 est considéré comme significatif.
Les résultats des analyses relatives aux mastocytes sont présentés dans le tableau suivant: Nombre de jours 2 7 14 21 Nombre de Groupe 49.3 46. 8 48.7 46.2 mastocytes contrôle (C) par mm2 Groupe 75.3 77.7 49.6 48.1 traité (T) La comparaison de la densité de mastocytes entre les deux groupes d'animaux, en utilisant le test de Student, est représentée figure 1 (p<0.001).
Les résultats du comptage des follicules pileux en phase anagène et en phase catagène, en utilisant le test de Student, sont représentés respectivement figures 2 et 3 (p<0.001).
On observe sur le groupe traité (T) une augmentation de la densité de mastocytes des jours 2 à 7 puis une diminution de la densité des jours 14 à 21. Sur le groupe contrôle (C), on n'observe aucune variation de densité aux différents points de mesure. En comparant la densité de mastocytes entre les deux groupes étudiés (figure 1), on constate une densité plus importante de mastocytes chez le groupe traité (T). Ces résultats montrent que la composition de la demanderesse stimule de façon significative la prolifération des mastocytes dans la peau.
On observe parallèlement une quantité plus importante de follicules pileux en phase anagène dans le groupe traité (T) que dans le groupe contrôle (C) (figure 2) et inversement une quantité moins importante de follicules pileux en phase catagène dans le groupe traité (T) que dans le groupe contrôle (C) (figure 3). Or, la phase anagène du cycle pileux est caractérisée par une activation des mastocytes (Maurer M et al. Actived skin mast cens are involved in murine hair follicle regression. Lab Invest. 1997 Oct. 77(4):319). Ces résultats montrent que la composition de la demanderesse active de façon significative les mastocytes dans la peau.
Dispositif d'éclairage et/ou de signalisation pour automobile
L'invention est relative à des dispositifs d'éclairage et/ou de signalisation pour automobile, et notamment à des projecteurs pour véhicule automobile.