INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Chem. 2001,40 (1) 234-236), par acylation énantiosélective d'amines à l'aide d'un dérivé ferrocène chiral de 4-pyrrolidinopyridine comme agent d'acylation.
L'inconvénient de cette séparation réside dans le fait que la température de réaction doit être très basse (-78 C) pour obtenir de bons excès énantiomériques.
La méthode développée par les inventeurs est rapide, elle nécessite environ sept jours pour être réalisée et peut dons être utilisé pour des déterminations de routine tels que la mesure de la
susceptibilité des patients infectés par des VIH aux inhibiteurs de l'activité virale.
L'invention concerne donc une méthode d'analyse d'une caractéristique phénotypique des virus VIH présents dans un échantillon biologique d'un patient, ladite caractéristique phénotypique résultant d'une ou plusieurs mutations du génome viral susceptibles d'influencer l'infection virale, caractérisée en ce qu'elle comprend : a) l'extraction des acides nucléiques contenus dans un échantillon biologique, b) au moins une amplification par PCR d'un segment des acides nucléiques de l'étape (a), chacune avec une paire d'amorces encadrant une séquence d'acide nucléique du génome viral susceptible de porter au moins une mutation,
c) la préparation d'un vecteur comprenant les parties d'un génome d'un virus VIH nécessaires à la réplication virale à l'exception du segment amplifié à l'étape (b) et éventuellement à l'exception du gène codant pour la protéine d'enveloppe, d) la transfection d'un premier hôte cellulaire avec : - les acides nucléiques obtenus à l'étape (b), - le vecteur préparé à l'étape (c), - éventuellement un second vecteur comprenant un gène codant pour une protéine d'enveloppe si le gène d'enveloppe est délété du vecteur préparé à l'étape (c), pour obtenir par recombinaison homologue un virus chimérique, e) la culture dudit premier hôte cellulaire dans des conditions permettant de produire des particules virales au cours d'un seul cycle de réplication, f) l'infection par les particules virales obtenues à l'étape (e) d'au moins un second hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH ou un virus pseudotypé VIH et comportant éventuellement un gène marqueur activable uniquement à la suite de l'infection virale, et g) la détection et/ou la quantification du marqueur exprimé à l'étape (f) afin de mettre en évidence au moins une caractéristique phénotypique des virus VIH présents dans l'échantillon biologique.
Plus particulièrement, l'amplification par PCR de l'étape (b) est réalisée avec une paire d'amorces encadrant une séquence d'acide nucléique comprenant tout ou partie d'une région du génome virale choisie parmi : gag, pol, protéase, transcriptase inverse, RNAse H,
intégrase, vif, vpr, tat, rev, vpu, env, nef, séquences cis-actives, LTR, séquences de dimérisation, séquences régulatrices de l'épissage ou l'élément de réponse de Rev (RRE).
Avantageusement, l'amplification de l'étape (b) selon la méthode d'analyse de l'invention, d'une séquence d'acide nucléique susceptible de porter au moins une mutation dans le gène codant pour la protéase est effectuée avec une paire d'amorces ayant une taille comprise entre 10 et 50 oligonucléotides, comprenant les séquences Fit A- : (5'TCA CCT AGA ACT TTA AAT GC 3') (SEQ ID No : 1) et Pro A- : (5'GGC AAA TAC TGG AGT ATT GTA TG3'3') (SEQ ID No : 2), ou constitués par des fragments de celles-ci, ou encore des séquences analogues de celles-ci portant des mutations d'un ou plusieurs nucléotides qui ne modifient pas de manière essentielle leur capacité à hybrider la région du gène de la protéase portant la ou les mutations, suivie d'une deuxième amplification avec une paire d'amorces ayant une taille comprise entre 10 et 50 oligonucléotides, comprenant les séquences : Fit B : (5'AGA ACT TTA AAT GCA TGG GT 3')
(SEQ ID No : 3) et Pro B- : (5'GGA GTA TTG TAT GGA TTT TCA GG 3') (SEQ ID No : 4), ou constitués par des fragments de celles-ci, ou encore des séquences analogues de celles-ci portant des mutations d'un ou plusieurs nucléotides qui ne modifient pas de manière essentielle leur capacité à hybrider la région du gène de la protéase portant la ou les mutations Tout préférentiellement, l'amplification de l'étape (b) selon la méthode d'analyse de l'invention, d'une séquence d'acide nucléique susceptible de porter au moins une mutation dans le gène codant pour la protéase est effectuée avec une paire d'amorces : Fit A- : (5' TCA CCT AGA ACT TTA AAT GC 3') (SEQ ID No : 1) et Pro A- : (5'GGC AAA TAC TGG AGT ATT GTA TG3' 3') (SEQ ID No : 2), suivie d'une deuxième amplification avec une paire d'amorces : Fit B : (5'AGA ACT TTA AAT GCA TGG GT 3') (SEQ ID No : 3) et Pro B- : (5'GGA GTA TTG TAT GGA TTT TCA GG 3') (SEQ ID No : 4), pour obtenir un segment d'ADN de 1460 paires de bases, s'étendant entre les résidus 3950 et 5410 inclus, et le vecteur de l'étape (c) est un vecteur retroviral délété de la région du cadre de lecture pol codant pour la protéase du VIH-1 s'étendant des résidus 1505 à 2565 inclus, délété de la région d'enveloppe et comportant un site unique de restriction MluI.
Selon un deuxième mode de mise en oeuvre particulier de la méthode d'analyse de l'invention, l'amplification par PCR de l'étape (b) de la méthode
d'analyse selon l'invention est réalisée avec une paire d'amorces encadrant une séquence d'acide nucléique susceptible de porter au moins une mutation dans le gène codant pour la transcriptase inverse, et la transfection de l'étape (c) est réalisée avec un premier vecteur construit à partir d'un génome d'un virus VIH où tout ou partie du gène codant pour la transcriptase inverse est délété.
Avantageusement, l'amplification de l'étape (b) selon la méthode d'analyse de l'invention, avec une paire d'amorces encadrant une séquence d'acide nucléique susceptible de porter au moins une mutation dans le gène codant pour la transcriptase inverse est effectuée avec une paire d'amorces ayant une taille comprise entre 10 et 50 oligonucléotides, comprenant les séquences MJ3 (5'AGT AGG ACC TAC ACC TGT CA 3') (SEQ ID No : 5) et RT-EXT (5' TTC CCA ATG CAT ATT GTG AG 3') (SEQ ID No : 6), ou constitués par des fragments de celles-ci, ou encore des séquences analogues de celles-ci portant des mutations d'un ou plusieurs nucléotides qui ne modifient pas de manière essentielle leur capacité à hybrider la région du gène de la transcriptase portant au moins une mutation, suivie d'une deuxième étape d'amplification avec une paire d'amorces comprenant les séquences : A35 (5'TTG GTT GCA TAA ATT TTC CCA TTA GTC CTA TT 3') (SEQ ID No : 7) et RT-IN (5'TTC CCA ATG CAT ATT GTG AG 3') (SEQ ID No : 8) ou constitués par des fragments de celles-ci, ou encore des séquences analogues de celles-ci portant des mutations d'un ou plusieurs nucléotides qui ne modifient pas de manière essentielle leur capacité à hybrider la région du gène de la transcriptase inverse portant au moins une mutation.
Tout préférentiellement, l'amplification de l'étape (b) selon la méthode d'analyse de l'invention, avec une paire d'amorces encadrant une séquence d'acide nucléique susceptible de porter au moins une mutation dans le gène codant pour la transcriptase inverse est effectuée avec une paire d'amorces : MJ3 (5'AGT AGG ACC TAC ACC TGT CA 3') (SEQ ID No : 5) et RT-EXT (5'TTC CCA ATG CAT ATT GTG AG 3') (SEQ ID No : 6), suivie d'une deuxième étape d'amplification avec une paire d'amorces : A35 (5'TTG GTT GCA TAA ATT TTC CCA TTA GTC CTA TT 3') (SEQ ID No : 7) et RT-IN (5'TTC CCA ATG CAT ATT GTG AG 3') (SEQ ID No : 8) pour obtenir un segment d'ADN de 1530 paires de bases s'étendant au-delà du codon 93 de la région codant pour la protéase et au-delà du codon 503 de la région codant pour la polymèrase (POL) et le vecteur de l'étape (c) est un vecteur retroviral délété de la région du cadre de lecture pol codant pour la transcriptase inverse du VIH-1, s'étendant des résidus 2618 à 2872 inclus, et comportant un site unique de restriction MluI.
Figure 12 : carte de restriction du plasmide pTOM Figure 13 : carte de restriction du plasmide pTOMsl, pTOMs2, TOMs3 I/TEST D'ACTIVITÉ DE LA CALPAÏNE 3 À PARTIR D'EXTRAITS PROTÉIQUES : Le clivage de peptides synthétiques correspondant aux sites d'autolyse de la calpaïne 3 (Figure 1) permet la détection de son activité à l'aide d'une technique faisant intervenir le FRET.
A/Matériel et méthode 1/Fluorimètre : SpectraMax Gemini XS Microplate fluorometer (Molecular Devices).
2/Séquence des peptides fluorescents : Mca-NMTYGTS-Dnp (site 1) Mca-NMDNSLL-Dnp (site 2) Mca-PVQYETR-Dnp (site 3) 3/Références des enzymes commerciales et des inhibiteurs utilisés : calpaïne 1 : Human eryhtrocytes (Calbiochem) calpaïne 2 : Rat, recombinant, E. coli (Calbiochem) caspase 3 : Human, recombinant, E. coli (Calbiochem) 4/Conditions de réaction : Volume final de 200il ; calcium (CaCI2) 10mM final ; peptides fluorescents 1, 9uM final.
5/Détection de la fluorescence : La réaction se fait à 37 C, soit sur une heure (avec dans ce cas une mesure de fluorescence toutes les 50 secondes) ou sur 6 heures (mesure toutes les 2 minutes).
Le milieu est agité entre chaque mesure. Les longueurs d'onde utilisées pour la détection de la fluorescence des peptides sont : Longueur d'onde d'excitation de Mca : 325nm.
- Longueur d'onde d'émission de Dnp : 392nm.
6/Mise au point des tampons Dans un premier temps, les conditions de réaction ont été mises au point, et en particulier la composition du tampon de réaction. Effectivement, la détection de la fluorescence s'est révélée y être très sensible. Les premiers tests ont consisté à faire varier les différents composants du tampon et leur concentration. Différentes concentrations en NaCl ont été testées. L'importance d'une faible concentration en DMSO, dans lequel sont resuspendus les peptides, a été démontrée. Il a également été montré que la présence du CHAPS dans le milieu de réaction, ainsi que de la BSA permettait une détection optimale de la fluorescence. Pour être certain d'activer la calpaïne 3, les réactions se font à 37 C, en présence de 10mM de calcium.
Effectivement, la calpaine 3 est active lorsqu'elle est en présence de concentrations en calcium de l'ordre du nanomolaire.
Composition des tampons : Tampon de resuspension des calpaïnes commerciales : NaCl 100mM, EDT A 5mM, TrisHCI 50mM, Bmercaptoéthanol 5mM, glycérol 40%, pH=7,8. Conservation à température ambiante.
Tampon de resuspension des peptides fluorescents : Les peptides sont resuspendus à Img/ml dans du DMSO 100%. Conservation à 4 C, à l'abri de la lumière.
Tampon de réaction : NaCl 100mM, HEPES 50mM, DIT 1 OmM, EDT A ImM, glycérol 10%, CHAPS 0,1%, BSA lOOng/ul, pH=7,4, filtration. Conservation à température ambiante.
7-Culture des cellules eucaryotes : Lignées cellulaires utilisées : C ; C12 : Myoblastes murins ; Milieux utilisés : DMEM : Milieu de Eagle modifié par Dulbecco (Gibco BRL) MEM : Solution d'acides aminés non essentiels (Gibco BRL) SVF : Sérum de veau foetal (Gibco BRL) Milieu utilisé pour C2C12 : DMEM + 10% SVF
Activation des calpaïnes : Du chlorure de calcium à 6mM final et de la ionomycine (Calbiochem) à 0, 5uM final sont ajoutés dans le milieu de culture.
8-Protocole de transfections des vecteurs d'expression dans des cellules eucaryotes : Matériel : L'ADN des différents plasmides est préparé selon le protocole QIAGEN Endofree (ref. 12362) Plasmides utilisés : pECFP-Nl (Clontech) ; pEYFP-Cl (Clontech).
2 jour : Dans un premier tube stérile en polystyrène (Tl), déposer 94 p. l de milieu sans sérum de veau foetal.
Dans une mise en oeuvre avantageuse, la déformation plastique permanente de l'onde 20 est obtenue en modifiant la valeur de l'angle ss jusqu'à obtenir la valeur de l'angle a entre les deux tronçons 2,3, suivant une loi qui sera prédéterminée par l'homme du métier pour obtenir la courbure souhaitée. La
courbure peut être effectuée dans un plan, mais aussi en 3D, c'est-à-dire suivant les trois directions de l'espace.
Il est bien précisé que la déformation plastique permanente d'un corps est une déformation obtenue par application de forces sur ce corps pour le faire passer d'un état initial à un état final sans destruction de ce corps, ce dernier demeurant dans son état final lorsque ces forces sont annulées.
La présente invention a aussi pour objet un dispositif permettant de mettre en oeuvre le procédé défini ci-dessus.
Ce dispositif, dont deux modes de réalisation sont illustrés schématiquement sur les figures 4 et 5, comporte des moyens 30 pour réaliser, dans la paroi 4 du tube 1, une onde 20 définie entre deux flancs 22,23 faisant entre eux un angle ss non nul et centrée sensiblement sur le plan de séparation 21 entre les deux tronçons, et des moyens 50 pour effectuer une déformation plastique permanente de cette onde 20 jusqu'à obtenir la valeur de l'angle a entre les deux tronçons 2,3.
La figure 4 représente schématiquement et partiellement un premier mode de réalisation possible d'un tel dispositif.
Selon ce premier mode de réalisation, les moyens 30 pour réaliser, dans la paroi 4 du tube 1, une onde 20 définie entre deux flancs 22,23 faisant entre eux un angle ss non nul, sont constitués par une olive solide 40 ou analogue, des moyens 41 pour maintenir l'olive solide 40 à l'intérieur 32 du tube, au moins deux mâchoires 33,34 formant entre elles sensiblement un dièdre d'angle P non nul, ces deux mâchoires étant montées en coopération avec la face externe de la paroi 4 du tube pour guider la formation de l'onde 20, et des moyens 42 pour déplacer l'olive solide 40 en translation et en rotation par rapport au tube tout en lui imprimant une force pour la plaquer contre la face interne de la paroi 4 du tube afin de la déformer par fluage de façon à obtenir l'onde 20.
Ces moyens 42 peuvent être constitués par exemple par une combinaison d'éléments moteurs montés en série pour obtenir la rotation de l'olive autour de son axe, sa rotation autour d'un axe excentré et sa translation parallèlement à l'axe 5 du tube 1.
Pour obtenir une onde 20 avec les moyens décrits ci-dessus, on place le tube à courber autour des moyens 30 de façon que l'olive se trouve dans le tube
sensiblement au niveau du plan de séparation 21, puis les deux mâchoires sont amenées au contact de la face externe de la paroi 4 du tube 1, comme représenté sur la figure 4, en définissant l'angle P non nul. La position relative des mâchoires est déterminée pour obtenir la courbure souhaitée.
Ensuite, par une commande programmée adaptée du dispositif, l'olive est translatée et pivotée pour agir en pression contre la face interne du tube, de façon à faire fluer la matière de la partie de paroi 4 du tube située dans l'espace E délimité par les deux mâchoires 33,34. Les mouvements de l'olive sont arrêtés quand l'onde a pris la forme souhaitée et prédéterminée pour donner, après sa déformation permanente comme défini ci-dessus au procédé, l'angulation ex recherchée entre les deux tronçons 2,3, figure 3.
L'obtention de la courbure finale ex à partir d'une onde 20 obtenue comme décrit ci-dessus, sera définie ci-après lors de la description du fonctionnement du mode de réalisation illustré sur la figure 5.
Le mode de réalisation des moyens 30 décrit ci-dessus permet d'obtenir des résultats acceptables, mais le mode de réalisation illustré schématiquement sur la figure 5 pourra lui être préféré à cause de la simplicité de sa mise en oeuvre et des très bons résultats qu'il donne dans de nombreuses applications.
Dans ce mode de réalisation, les moyens 30 pour réaliser, dans la paroi 4 du tube 1, une onde 20 définie entre deux flancs 22,23 faisant entre eux un angle P non nul et centrée sensiblement sur le plan de séparation 21 entre les deux tronçons, sont constitués par une chambre étanche 31 délimitée à l'intérieur 32 du tube et sensiblement centrée sur le plan de séparation 21, au moins deux mâchoires 33,34 formant entre elles sensiblement un dièdre d'angle ss et montées en coopération avec la face externe de la paroi 4 du tube 1 pour guider la formation de l'onde, et des moyens commandables 35 pour alimenter la chambre étanche 31 en un fluide sous pression, avantageusement incompressible.
Avantageusement, la chambre étanche 31 comporte deux pistons 36,37 montés coulissants de façon étanche dans le tube 1 pour délimiter un volume étanche V à l'intérieur 32 du tube, des moyens de liaison 38 entre les deux pistons 36,37, notamment en rotation pour, dans certains cas, les maintenir sensiblement à distance constante l'un de l'autre tout en admettant un
déplacement angulaire entre eux, ces moyens 38 pouvant être constitués par exemple par une bielle montée rotative à chacune de ses extrémités respectivement sur les faces en regard des deux pistons.
Ensuite, au cours d'une étape 305, le module de contrôle 107 attend que qu'un évènement d'acquittement correspondant IT buff added soit activé au moins une fois par chacun de pointeurs de lecture PtRO, PtRl et PtR2 lors de l'étape 216 illustrée en regard de la figure 6.
Lorsque l'événement IT buff added est activé ou après un résultat négatif du test 303, l'étape 301 est réitérée.
La figure 8 illustre un algorithme d'initialisation d'un nouveau pointeur de lecture PtR~num d'une FIFO 1 telle qu'illustrée en figure 2.
Au cours d'une étape 400, la FIFO 1 est initialisée.
Ensuite, au cours d'un test 401, le module de contrôle 107 vérifie si un nouveau pointeur de lecture est requis, c'est-à-dire si un nouveau destinataire requiert l'envoi des données stockées dans la FIFO 1. On note qu'un signal de contrôle 1394pkgap géré par le module écrivant dans la FIFO vaut 1. Ce signal vaut 1 lorsque le mot écrit correspond à un début de paquet IEEE1494. En effet, les premiers paquets ultérieurement commutés sur le réseau IEEE 1355 doivent pour la première lecture être alignés sur un paquet IEEE 1394.
Dans la négative, l'étape 401 est réitérée.
Dans l'affirmative, au cours d'un test 402, le module de contrôle 107 vérifie si le pointeur d'écriture PtRW pointe sur le début d'un paquet, par exemple de type IEEE1394.
Si le résultat du test 402 est négatif, le test 402 est réitéré.
Si le résultat du test 402 est positif, au cours d'une étape 403, un nouveau pointeur de lecture PtR~num est créée (on réserve notamment l'espace nécessaire) avec les registres et tables nécessaires, associés à PtR~num et à la FIFO 1, notamment, les registres et tables décrits en regard de la figure 3 : - un registre PtR~num de pointeurs en lecture ; - une table de statuts de page associée àPtR~num ; et - un registre de seuil de pointeur de lecture Threshold PtRnum (ou Threshold (PtMum, fifo~number) où fifo~number représente un identifiant de la FIFO 1).
Chacun de ces registres ou tables est initialisé.
Ainsi, au cours de l'étape 403, le registre PtR~num de pointeurs en lecture est affectée d'une valeur égale au pointeur PtR d'écriture de la FIFO 1. La table de statuts de page associée à PtR~num est initialisée avec des statuts nuls indiquant que les pages de la FIFO ne contiennent pas de données écrites, destinées au destinataire associé au pointeur nouvellement créé PtR~num.
Ensuite, au cours d'une étape 404, le seuil de pointeur de lecture Threshold (PtR~num, fifo~number) est initialisé avec une valeur qui est la somme (modulo la taille de la FIFO 1 mémorisée dans le registre 30) : de l'adresse du premier mot à lire (pointé par le pointeur PtR~num égal àPtRW) ; et du seuil de la FIFO 1 mémorisé dans le registre 60.
Puis, l'étape 401 est réitérée.
La partie de la séquence nucléotidique ou polypeptidique dans la fenêtre de comparaison peut ainsi comprendre des additions ou des délétions (par exemple des"gaps") par rapport à la séquence de référence
(qui ne comprend pas ces additions ou ces délétions) de manière à obtenir un alignement optimal des deux séquences.
Un acide nucléique possédant au moins 95% d'identité en nucléotides avec un acide nucléique selon l'invention englobe les "variants"d'un acide nucléique selon l'invention.
En général, les différences entre l'acide nucléique de référence et l'acide nucléique" variant" sont réduites de telle sorte que l'acide nucléique de référence et l'acide nucléique variant ont des séquences nucléotidiques très similaires et, dans de nombreuses régions, identiques. Les modifications nucléotidiques présentes dans un acide nucléique variant peuvent être silencieuses, ce qui signifie qu'elles n'affectent pas la séquence d'acides aminés qui peut être codée par cet acide nucléique variant.
Les modifications de nucléotides dans l'acide nucléique variant peuvent aussi résulter en des substitutions, additions ou délétions d'un ou
plusieurs acides aminés dans la séquence du polypeptide qui peut être codé par cet acide nucléique variant.
Font partie des variants d'un acide nucléique codant le polypeptide ISUM2A les acides nucléiques des gènes orthologues à ISUM2 inclus dans le génome de plantes autres que le maïs, et possédant une identité en nucléotides d'au moins 95% avec un acide nucléique codant le polypeptide ISUM2A.
Ajouter la moitié des silices, mélanger 3 min sous vide.
Ajouter la seconde moitié des silices, mélanger 3 min sous vide.
Mélanger pendant un temps T jusqu'à homogénéisation.
Ajouter le SIPON, mélanger 1 min 30s sous vide.
On mesure pour chaque pâte préparée le temps total de fabrication, le temps T nécessaire à la dispersion des silices, la viscosité après fabrication et la viscosité après 24 heures (appareil HELIPATH, viscosité en centipoises).
Les résultats sont repris dans le tableau suivant.
PÂTE 1 PÂTE 2 PÂTE 3 PÂTE 4 Temps total 30min30s 28min30s 21min30s Temps T de mélange des 21min30s 19min30s 12min30s ** silices viscosité à 360000 360000 460000 To (cps) viscosité à 440000 460000 520000 24h (cps) ** dans ce cas, l'incorporation de la deuxième moitié des silices est incomplète car la viscosité du mélange est trop élevée pour le mélangeur utilisé.
Observations : les sirops de sorbitol conformes à l'invention réduisent considérablement le temps nécessaire à une dispersion parfaitement homogène des silices. On constate d'après les formules selon l'invention que la quantité d'eau disponible est augmentée (jusqu'à 12% d'eau) ce qui améliore la dispersion et/ou solubilisation des
autres ingrédients. Les viscosités sont meilleures, ce qui entraîne une texture de pâte améliorée et un temps de mélange des silices moins long.
Dans le cas de la pâte 4, préparée avec un sirop de sorbitol à 86,8% de matière sèche, la dispersion des silices est insuffisante.
La mise en oeuvre de sirops de sorbitol conformes à l'invention pour la préparation de pâtes dentifrice est donc techniquement et économiquement tout à fait avantageuse (gain de temps important, qualité des pâtes améliorée). De tels sirops sont de plus tout à fait avantageux en termes d'économie de coût de transport, diminution des volumes à stocker, facilité de mise en oeuvre.
Exemple 2 : formulation de pâtes dentifrice au carbonate de calcium.
On prépare des pâtes dentifrice conformément à l'exemple 1 en remplaçant les silices abrasives par du carbonate de calcium.
On prépare des sirops de sorbitol (NEOSORB70/70) à 70,75 et 80% de matière sèche (pâtes 1,2 et 3). Les teneurs en sorbitol de chaque pâte sont identiques.
La formule est la suivante : Carbonate de calcium (SOCAL 90A) : 45% Sipon LCSV95 (30% MS) : 5, 66% Blanose 7MXF : 1,2% Arôme menthe Silesia : 1% Monofluorophosphate de sodium : 0,8% Saccharinate de sodium : 0,2% Methyl paraben : 0,18% Propyl paraben : 0,02%
Pâte 1 : NEOSORB 70/70 à 70% MS : 35,7% Eau : 10,29% Pâte 2 : NEOSORB à 75% MS : 33,32% Eau : 12,67% Pâte 3 : NEOSORB à 80% MS : 31,24% Eau : 14,75% Mode opératoire : Dans un bécher, dissoudre les parabens dans l'eau à 720C : solution S Dans un bol en inox, mélanger le sirop de sorbitol et la carboxyméthyl cellulose pendant 1 minute.
Lorsque les particules magnétisables sont des particules de développeurs, il peut être nécessaire de procéder à une réduction mécanique de leurs tailles de façon à obtenir la taille moyenne désirée.
Le poids des particules magnétisables peut être compris entre 2 et 75 %, préférentiellement entre 10 et 40 % par rapport au poids total du papier. Le rapport considéré est établi en poids sec de matière résiduelle.
Le poids d'agent dispersant peut être compris entre 0,05 et 2 %, préférentiellement entre 1 et 1,5 %, par rapport au poids total du papier. Le rapport considéré est établi en poids sec de matière résiduelle.