INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Pour la construction d'un'adénovirus recombinant conforme à ce mode de réalisation, ladite séquence hétérologue sera, dans le cas d'un adénovirus réplieatif, insérée dans la région du génome correspondant à celle située entre les positions 311 et 319 dans le génome de l'adénovirus canin de type 2.
Dans le cas d'un adénovirus pseudo-réplicatif, ladite séquence hétérologue peut également être insérée dans cette région, ou à tout autre endroit de la région du génome correspondant à celle située entre les positions 311 et 499 dans le génome de l' adénovirus canin de type 2 . L'insertion dans cette région peut s'effectuer en lieu et place de la portion délétée ou à proximité de celle-ci.
On peut également insérer une séquence hétérologue dans un quelconque des sites qui sont habituellement utilisés à cet effet pour la construction d'adénovirus réplicatifs. L'insertion peut par exemple être effectuée dans la région E3, ou dans la région située entre la région E4 et l'ITR droite, comme décrit dans le Brevet US 6090393, ou dans la portion 3' de 1' ITR droite, comme décrit dans le Brevet US 5616326.
On entend par séquence hétérologue , toute séquence autre que celle comprise entre les positions 311 et 499 du génome dudit adénovirus sauvage.
A titre d'exemples non-limitatifs, on peut citer : - des gènes codant pour un antigène vaccinal, par exemple les gènes gag ou env du virus de l'immunodéficience
féline (FIV), la protéine S, M ou N du coronavirus félin, une protéine de capside de parvovirus canin ou félin, la glycoprotéine G du virus de la rage ou la protéine Hap-1 de Leptospira sp. , etc.
- des gènes correcteurs utilisables en thérapie génique, par exemple celui de l'érythropoiétine (Epo), du facteur de croissance de l'endothélium vasculaire (VEGF), de la neurotrophine 3 (NT-3) ou du facteur atrial natriurétique (ANF) , etc. ; - des gènes utilisables pour le traitement du cancer, par exemple celui de l'IL-2, de l'IFNy, etc.
Des adénovirus recombinants conformes à l'invention peuvent en particulier être issus d'adénovirus de mammifères, et notamment d'adénovirus canins, en particulier d'adénovirus canins de type 2.
Les adénovirus recombinants conformes à la présente invention peuvent être préparés par des techniques usuelles, bien connues en elles-mêmes de l'homme de l'art (cf. par exemple GRAHAM et PREVEC (Manipulation of Adénovirus Vectors, Methods Mol. Biol., 7,109-128, 1991), notamment par des techniques comprenant : (i) la génération de génomes recombinants chez E.coli par des techniques classiques de double recombinaison homologue et (ii) la transfection des génomes recombinants ainsi obtenus dans des lignées cellulaires appropriées permettant l'amplification desdits génomes et leur encapsidation dans des particules virales infectieuses.
On pourra par exemple utiliser des techniques de recombinaison homologue chez E.coli, telles que celles décrites par CHARTIER et al., (J. Virol., 70, 7, 4805-4840, 1996) et dans le Brevet US 6110735 au nom de TRANSGENE ou bien celles décrites par CROUZET et al.(Proc. Nat. Acad. Sci.
USA, 94, 1414-1419, 1997). Ces procédés sont basés sur une recombinaison homologue intermoléculaire entre une molécule d'ADN receveuse contenant le génome complet d'un adénovirus, et une molécule d'ADN donneuse comprenant une séquence hétérologue à insérer dans ledit génome, flanquée de séquences homologues à celles de la région du génome
adénoviral où l'on souhaite effectuer l'insertion. La molécule receveuse est linéarisée par clivage à un site de restriction unique dans le génome de l'adénovirus, situé au niveau du site d'insertion. La sélection des génomes recombinants repose ensuite sur la circularisation de la molécule receveuse.
Ces procédés présentent donc l'inconvénient de ne pouvoir insérer ladite séquence hétérologue que dans une région comprenant un site de restriction unique dans le génome de l'adénovirus.
La Figure 8 montre, pour comparaison, le spectre du film obtenu avec la lame d'or conforme à l'Invention et celui d'une pastille de KBr contenant de l'hydroxyéthyl cellulose. Ce spectre confirme la fixation de l'hydroxyéthylcellulose sur le support de l'Invention.
EXEMPLE 7 : DE PMAN ÉLECTROGREFFÉ PRÉCURSEUR DE GROUPEMENTS AMIDES ET ACIDE CARBOXYLIQUE SUR DES SURFACES CONDUCTRICES ET SEMI-CONDUCTRICES.
On illustre ici le fait que l'on peut utiliser un film de PMAN tel que celui obtenu ci-dessus à l'exemple 3 comme précurseur simple de groupements amide et acide carboxylique sur des surfaces métalliques. Cette transformation présente l'avantage d'aboutir facilement à la formation de groupements réactifs différents du film de départ, mais aussi de permettre la réalisation simple de surfaces hydrophiles à partir de films électro-greffés hydrophobes (ce qui facilite notamment l'utilisation des films comme primaires d'adhésion de composés hydrophiles, et peut être utile dans la fabrication de revêtements mieux admis dans les applications biomédicales).
Les fonctions nitrile ont été modifiées en fonctions acide carboxylique en deux étapes : @ Une étape acide : R-CN + H2SO4 # R-CONH2 > Une étape basique : R-CONH2 + NaOH # R-COOH
Suivant le temps de réaction, on peut avoir de quelques % à 100 % de transformation. Ces traitements s'accompagnent d'une perte d'épaisseur importante. Après le traitement acide, la zone traitée est hydrophile. L'eau mouille bien la partie modifiée et forme "une couche" sur la surface.
Les deux réactions sont effectuées à l'atmosphère, à 100 C (température interne) dans des Bechers ou flacons ouverts. Après chaque traitement, les lames sont rincées par trempage de 5 minutes dans l'eau puis séchées par soufflage à l'azote.
Les solutions utilisées sont les suivantes : # Solution acide : 21 ml de H2SO4à 95% minimum 3,5 g de NaHS04 : solution à environ 37 N ; # Solution basique : 18g de NaOH / 25 ml H2O : solution à 18N.
Un traitement partiel est obtenu en trempant la lame dans le milieu acide pendant un temps égal ou inférieur à 5 secondes et en la trempant pendant 5 à 10 secondes dans le milieu basique. Un traitement de 30 secondes dans les 2 milieux conduit à la disparition totale des fonctions nitrile, ce qui correspond à leur conversion complète.
Une analyse IRRAS est effectuée avant et après chaque étape : lame d'or recouverte du film de PMAN électro-greffé avant et après hydrolyse des groupements nitrile en amide (traitement acide) puis après conversion en fonctions acide carboxylique (traitement basique).
Les spectres IRRAS obtenus sont représentés sur la figure 9 annexée.
L'analyse de ces spectres révèle, pour le traitement acide, la formation de bandes amide à 1680 cm-1 (élongation C=O), et des bandes de déformation des groupements NH2 à 1605 cm-1. Après traitement basique, on remarque le décalage de la bande carbonyle vers 1700 cm-1, ce qui correspond à des groupements acide carboxylique, probablement dimérisés.
EXEMPLE 8 : DE L'AVIDINE SUR UN FILM DE PMAN ÉLECTRO-GREFFÉ On illustre ici que les groupements nitriles d'un film de PMAN électrogreffé peuvent être utilisés pour la fixation covalente de protéines. On sait en effet que les nitriles peuvent réagir avec les alcools, pour donner des imino-ethers (synthèse de Pinner, cf : P. L. Compagnon, M. Miocque, Annales de Chimie, 1970, 5, 23), selon la réaction suivante : R-CN + R'-OH # R-C (OR')=NH Le même type de réaction est également connu pour les amines et les thiols. Comme dans l'exemple 6 ci-dessus, on parvient à réaliser la fixation d'une macromolécule de structure tridimensionnelle complexe, ce qui n'est possible que du fait de la grande accessibilité des fonctions nitrile du polymère électro-greffé. Dans l'exemple suivant, on illustre que cette accessibilité est telle qu'elle permet même la fixation de la protéine dans une conformation où elle conserve son activité, par réaction avec une molécule porteuse d'un fragment biotine ayant une très grande affinité pour l'avidine.
Dans un tube équipé d'un septum, on introduit 30 ml d'une solution à 2 mg/1 d'avidine dans un tampon phosphate salin (PBS) de pH 7,2. On place une lame d'or recouverte d'un film de PMAN électro-greffé tel que préparée ci-dessus à l'exemple 3. La lame est laissée à réagir pendant 15 heures à une température de 4 C.
Elle est ensuite sortie et rincée à l'eau désionisée.
Le spectre IRRAS de la lame ainsi obtenu est représenté sur la figure 10 annexée.
L'analyse de ce spectre montre la présence des bandes amide I (1666 cm-') et II (1545 cm-1), ainsi que les bandes du squelette (1469 cm-1) caractéristiques de la protéine.
De préférence, la plaquette formant guide de lumière est en une matière plastique transparente, notamment en polyméthyleméthacrylate.
Pour qu'une sortie par couplage de la lumière hors de la plaquette formant guide de lumière et vers l'observateur soit uniforme dans les deux dimensions, de façon que soit produit un aspect visuel uniforme, il est possible que la plaquette formant guide de lumière comporte une structuration superficielle sur sa surface tournée vers l'observateur et/ou sa surface tournée à l'opposé de celui-ci.
Les sources de lumière servant à l'introduction par couplage de lumière dans la face étroite de la plaquette formant guide de lumière peuvent être des diodes luminescentes (DEL ou LED) ou des tubes fluorescents de faible épaisseur. Des diodes luminescentes qui peuvent de préférence être utilisées sont des DEL dites à micro-côté ("microside").
Il est possible, pour accroître l'uniformité de l'aspect visuel du champ de visualisation, que la structure superficielle du champ de visualisation qui est tournée vers l'observateur soit réalisée, sur toute l'étendue du champ de visualisation, d'une manière au moins approximativement identique, notamment avec un niveau de brillance identique.
Si d'autres éléments de visualisation éclairés doivent pouvoir être représentés dans le champ environnant, il est possible que des champs lumineux qui forment des graduations et/ou des chiffres et/ou des signes et/ou des symboles et qui doivent pouvoir être éclairés par transmission à partir de la face tournée à l'opposé de
l'observateur et au moyen d'une ou plusieurs sources de lumière, soient disposés dans le champ environnant.
Pour concentrer cette lumière des sources de lumière sur les champs lumineux à éclairer, il est possible qu'à un champ lumineux ou à un groupe de champs lumineux, il soit associé une chambre de lumière qui est disposée sur la face de l'élément de surface lumineuse et de la couche translucide qui est tournée à l'opposé de l'observateur et dans laquelle se trouvent une ou plusieurs sources de lumière.
Il est possible, pour rendre minimales les pertes de lumière, que la paroi intérieure de la chambre de lumière soit réalisée de façon à réfléchir la lumière, notamment soit blanche.
De préférence, les sources de lumière sont des diodes luminescentes, des lampes à incandescence ou des tubes fluorescents.
Un autre éclairage des champs lumineux qui ne nécessite aucune source de lumière particulière est possible grâce au fait que, dans le champ environnant, une graduation et/ou chiffre et/ou signe et/ou symbole peuvent être éclairés au moyen de l'élément de surface lumineuse.
Grâce à l'uniformisation de l'aspect visuel du champ de visualisation, il est possible qu'un verre de recouvrement coloré servant à obtenir un effet de panneau noir ("black panel") soit disposé, du côté observateur, en avant du dispositif de visualisation, de sorte que, lorsque celui-ci n'est pas allumé, l'ensemble du champ de visualisation apparaît sous la forme d'une surface uniformément sombre.
Pour que, d'une manière simple, le champ lumineux se décale optiquement vis-à-vis du reste du champ environnant, il est possible que, dans la zone environnante du champ lumineux, il soit disposé une couche translucide de densité accrue comportant un évidement transparent qui corresponde à la graduation et/ou au chiffre et/ou au signe et/ou au symbole et qui puisse être éclairé par transmission d'une manière plus claire.
De préférence, la couche translucide de densité accrue est disposée du côté observateur en avant de l'élément de surface lumineuse et la couche colorée translucide est disposée par-dessus, en recouvrant la totalité de la zone environnante.
Il est possible, pour faire particulièrement ressortir les éléments de visualisation sur le champ environnant, que la couche translucide soit évidée d'une manière correspondant aux graduations et/ou aux chiffres et/ou aux signes et/ou aux symboles et une impression transparente d'une autre couleur soit disposée dans l'évidement.
Une autre possibilité pour obtenir les éléments de visualisation consiste en ce que, sur la face de l'élément de surface lumineuse qui est tournée à l'opposé de l'observateur, il est disposé une couche opaque comportant une partie en retrait qui correspond à la graduation et/ou au chiffre et/ou au signe et/ou au symbole et qui est recouverte par la couche translucide.
Si, dans ce cas, le long du contour de l'élément lumineux et en pénétrant dans une faible mesure dans l'élément lumineux, une couche blanche est posée sur la face de la couche translucide qui est tournée à l'opposé de l'observateur, cette couche blanche joue, à l'état non éclairé de l'élément lumineux, le rôle d'une surface de réflexion pour la lumière environnante, de sorte que, même lorsque l'élément lumineux n'est pas éclairé, celui-ci peut être reconnu suivant un contour net et avec un bon contraste.
L'uréthrographie rétrograde est communément utilisée pour définir l'apex de la prostate à la simulation. L'étude de S. Malone (2000) a évalué l'hypothèse que l'uréthrographie provoque le déplacement de la prostate, résultant en une erreur dans le planification de traitement. Quarante-cinq patients atteints de carcinome de la prostate ont évalués. Des grains d'or ont été placés dans l'apex, la paroi postérieure, et la base de la glande. Dans les 20 premiers patients, la position de l'apex définie par des grains a été comparée à la simulation (avec uréthrogramme) et au Jour 1 du traitement ( sans uréthrogramme). Dans la seconde cohorte de 25 patients, les effets d'uréthrographie sur la position de la prostate ont été évalués directement à la simulation en comparant la position de l'apex pré- et post-uréthrographie. Une analyse a été réalisée pour estimer l'impact possible du mouvement de la prostate uréthrogramme-induit sur le couverture de la cible. Le déplacement (displacement) supérieur moyen dans la première et la seconde cohorte était respectivement de 5,2 mm et 6,8 mm (combiné au shift moyen de 6,1 mm. Avec une marge de champ de 10 mm en dessous de la pointe du cône de l'uréthrogramme, 56 % des patients dans
cette étude pourraient avoir une couverture inadéquate de volume cible de planification (PTV). L'uréthrographie rétrograde provoque cause une ascension supérieure significative de la prostate. Une confiance stricte sur l'urethrographie en déterminant la marge inférieur du champ pourrait résulter en traitement inadéquate (S. Malone, R. Donker, M. Broader, S. Dahrouge, J. Szanto, L. Gerig, G. Bociek, and J. Crook : Effects of urethrography on prostate position : considérations for radiotherapy treatment planning of prostate carcinoma. Int J Radial Oncol Biol Phys 2000 Jan 1 ; 46 (1): 89-93.) La Radiothérapie conformationnelle devrait servir plutôt à cerner cette réalité mou- vante de la cible y compris au niveau de la prostate enclavée dans le pelvis non seulement du point de vue des contours mais également du point de vue des aspects histobiologiques de la tumeur. Des études récentes ont démontré que l'imagerie spectroscopique par résonance magnétique (MRSI) de la prostate peut effectivement distinguer entre les régions d'épithélium prostatique cancéreux et normal. Cet outil d'imagerie diagnostique prend l'avantage sur la choline plus la créatine augmentées versus le ratio des citrates trouvés dans le tissu prostatique malin par rapport au tissu prostatique normal. On peut parvenir au même résultat avec la cinéscanographie de perfusion tissulaire de la présente invention. Pour décrire un nouveau module d'optimisation de la planification de traitement de curiethérapie, utilisant une techni- que de programmation de nombre entier qui utilise l'optimisation basée sur la biologie, une méthode, qui enregistre le MRSI aux images US obtenues en intraopératoire et incorpore cette information dans un système de planification de traitement, est décrite pour réaliser l'escalade de dose aux dépôts intra-prostatiques de la tumeur. Le MRSI a été obtenu pour un patient ayant un cancer de la prostate de Gleason 7 cliniquement localisé. Les ratios de choline plus créatine par rapport à la citrate était analysé pour la prostate et pour les cellules malignes des régions à risque élevé ont été identifiées. Les pics des ratios représentatifs sur le spectres RMN ont été calculés sur une grille spatiale couvrant le tissu prostatique. Une procédure pour cartographier les points des images est décrite. Une technique de nombre entier programmant est décrite comme un module d'optimisation pour déterminer la distribution optimale de grains pour une implantation interstitielle permanente.
Les données du MRSI sont incorporés dans le système de planification du traitement pour tester la faisabilité de l'escalade e dose aux voxels positifs avec une sauvegarde relatif des tissus normaux environnants. La probabilité de contrôle tumoral (TCP) résultante est estimée et comparée au TCP pour l'implantation standard planifié pour
la curiethérapie. Le système de planification de traitement de curiethérapie proposé est à même de réaliser une dose minimum de 120 % de la prescription de 144 Gy aux voxels MRS positifs de 100 -150 % à la prostate et de 100 à 120 % à l'urètre ont été maintenue. Lorsque comparé à un plan standard sans optimisation MRS-guidée, le TCP estimé pour le plan MRS-optimisé est supérieur. La TCP rehaussée était plus prononcée pour les volumes plus petits des depôts tumoraux intra-prostatiques comparé aux valeurs estimées de TCP pour des lésions plus grandes. En utilisant ce système d'optimisation de la curiethérapie, nous pouvons démontrer la faisabilité des distributions de dose MRS-optimisées pour les implants prostatiques permanents d'125I. Basés sur les estimées de la probabilité du TCP amélioré anticipé, cette approche peut avoir un impact sur l'aptitude d'escalader sûrement la dose et d'améliorer potentiellement le résultat pour les patients ayant un organe confiné mais des cancers prostatiques agressifs. La grandeur du rehaussement de la TCP et donc les risques d'ignorer les données RMN semblent être plus substantiels, lorsque la tumeur est bien localisée ; toutefois, le gain réalisable en TCP peut dépendre tout à fait considérablement de l'efficience de la détection tumorale par le MRS.
L'étude de K. Kitamura et coll. (2000) sur la relation entre les paramètres techniques de la Radiothérapie externe et les complications concernant le traitement de la prostate fut réalisée pour revoir rétrospectivement, en tant que complication de la radiothérapie par faisceau externe pour le cancer localisé de la prostate et pour analyser la relation entre les paramètres techniques de la radiothérapie et les complications, l'évolution clinique du saignement rectal chronique. 71 patients avec le stade A2, B et C étaient traités, entre 1989 et 1998, par radiothérapie à champ local (dose totale 52,2 - 66 Gy, dose quotidienne de 2,0-3,28 Gy, surface du champ 30-81 cm2, nombre des champs 3-15 ports, les simulations de planification basées sur la radiographie ou le CT), dans trois institutions. Les protocoles ont été consistent durant cette même période à ces institutions. L'analyse multivariate révélait que la somme du Psa et du Gleason de pretraitement être, dans une période de suivi moyenne de 42 mois (allant de 12-119 mois), des prédicteurs statistiquement signifi- catifs des taux de 5 années sans récidive des antigènes spécifiques prostatiques (Psa). Les facteurs significatifs de risque pour le gradmg plus élevé de la morbidité aiguë était une dose biologique équivalente, alpha/bêta = 10 (BED10) > ou = 65 Gy, la dose par fraction > ou = 3,0 Gy, l'aire du champ > ou = 42 cm2, moins de portes (plus rares) et la simulation radiographique de planification. Toutefois, aucun paramètre n'a été associé au grading élevé de morbidité tardive. IIpatient CI 5,4 %)
firent l'expérience d'une complication tardive GI : grade 1 (4,2 %), grade 2 (9,8 %), grade 3 (1,4 %). Le temps médian à la survenue du saignement rectal était de 12 mois après la radiothérapie et la durée moyenne de morbidité était de 11mois. La dose et la dose par fraction les plus élevées, la surface de champ la plus large, le port le moindre et la simulation radiographique augmentaient les grades de la morbidité aiguë. Une majorité des saignements rectaux chroniques étaient transitoires et répondaient au traitement conservatoire. (K. Kitamura, H. Shirato, K. Suzuki, N.
Shinohara, T. Demura, T. Harabayashi, T. Nishioka, K. Kagei, N. Takayama, Y, Shinno, K. Kawakura, T. Koyanagi, and K. Miyasaka : The relationship between technical parameters of external beam radiation therapy and complications for localized prostate cancer. Jpn J Clin Oncol 2000 May ; 30 (5) : 225-9. ). Mais tout ceci pourrait être éviter par une irradiation dont la visée est irréprochable et donc sans biais, ceci est aussi vrai pour le calcul de la dose délivrée.
5. 5.4. - Modélisation en vue d'une DOSIMETRIE EN TEMPS REEL et EN LIGNE du dispositif Dans la description précédente, la référence particulière est faite aux accélérateurs linéaires à onde voyageant, puisque chacun des accélérateurs linéaires sont en usage commun, dont la simulation et la dosimétrie peuvent être faite à partir des données de l'appareil de stéréoradioradiothérapie et de la présente invention. Cependant, il est évident que les avantages de notre invention s'appliquent également bien à la dosimétrie des sources de télécuriethérapie comme aux sources multiples des photons X d'orthovoltage, moyennant une modélisation intégrée dans le calculateur du dispositif.
La dosimétrie de haute résolution est, excepté en Radiothérapie stéréotaxique utili- . sée dans le traitement de petites lésions bien délimitées, une préoccupation dans tous les domaines de la Radiothérapie. La StéréoRadiothérapie dynamique est une technique d'irradiation externe bicéphalique d'une symétrie en miroir. Contraire- ment à la Radiothérapie fractionnée conventionnelle, une dose élevée des radiations en Radiothérapie stéréotaxique est souvent administrée en une séance unique.
. Pour éviter les effets secondaires, la sauvegarde de tissus sains réalisée par le fractionnement de la dose, doit être compensée par une dose correspondante plus faible au tissu normal adjacent à la cible de Radiothérapie. Cette exigence basique peut être complètement remplie par une technique d'irradiation soigneusement élaborée, permettant une délivrance sélective notamment par faisceaux simultanés multiples et exactement reproductible de la dose au volume cible. La planification
exacte du traitement nécessite une connaissance détaillée dans le faisceau individuel de la distribution de la dose afin de déterminer la distribution de la dose à l'intérieur . du patient. Les données physiques requises par le système de planification de traitement doivent souvent être expérimentalement déterminée. Plusieurs études sur les caractéristiques spécifiques des faisceaux photoniques et électroniques ainsi que sur les méthodes d'exécuter les mesures de dosimétrie du faisceau photonique étroit, ont été conduites par différentes équipes (Rice et al, 1987 ; Heyderian et al, 1996 ; Rustzi and Frye, 1995 ; McLaughlin et al, 1994 ; et al, 1998, Francescon et al, 1998 ; McKerracher and Twaites, 1999). Elles peuvent être en plus de la méthode des kernels d'énergies adaptées à des sources multiples d'irradiation photonique simultanée et la présente invention peut servir d'outil de calcul de telles procédures pour d'autres appareils thérapeutiques plus conventionnels.