INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
des méthodes précédentes Mi à Mn dans l'espace mémoire EM1, et en comparant la taille T2 de l'espace mémoire EM2 à la somme de la taille maximale respective de la partie de variable locale OPn+i de la méthode courante Mon+1 la taille prédéterminée respective de la partie de variable locale VLn+i de la méthode courante moins le chevauchement CMn+l, et la taille de la pile des couples de partie de variable locale et de partie d'opérande VOL -OPE à VLn-OPn des méthodes précédentes Ml à Mn dans l'espace mémoire EM2. La méthode courante est refusée lorsque l'une des sommes excède la taille de l'espace mémoire respectif.
Encore en condition normale lors d'un dépassement inférieur DI par dépilage de la partie d'opérande, le pointeur PP2 ne pourra sortir de la partie d'opérande OPn+l de la méthode active Mn+l que pour entrer dans des parties inférieures VL1 à VLn+l et O i à OPn qui ne sont pas sensibles, contrairement aux parties de données de machine virtuelle DM à DMn+l dans l'autre espace mémoire EM1.
L'invention n'est pas limitée à la séparation très prononcée des espaces mémoires EM1 et EM2 illustrée à la figure 4. En variante, les espaces mémoires EM1 et EM2 sont contigus et leurs pointeurs PP1 et PP2 varient en sens opposé, par exemple l'un croît vers le haut et l'autre croît vers le bas.
Selon une autre réalisation qui peut être combinée à la première, la séparation des espaces mémoires peut être améliorée en choisissant deux espaces dont les instructions d'accès par le processeur PR sont différentes.
SYSTEME DE REPARTITION HOMOGENE DE LA TEMPERATURE A LA SURFACE DUNE SEMELLE SUR LAQUELLE EST DISPOSE UN ELEMENT.
La présente invention concerne un système de répartition homogène de la température à la surface d'une semelle sur laquelle un élément est disposé.
L'invention est notamment applicable au domaine des dispositifs de maintien électrostatiques. Les dispositifs de maintien électrostatiques servent en particulier à maintenir des plaquettes de matériau semi-conducteur lorsqu'elles subissent des traitements ou des usinages Le principe des systèmes de maintien électrostatique est de placer la plaquette de matériau semi-conducteur sur une surface isolante et de disposer deux électrodes sous cette surface. Les deux électrodes sont soumises à une différence de potentiel. Le champ électrique crée par ces deux électrodes engendre alors un phénomène appelé collage électrostatique .
Lors du traitement de la plaquette par plasma par exemple, celle-ci est soumise à une élévation conséquente de température. Il est alors très important que la température de la semelle ne dépasse pas un certain seuil En effet, certaines substances sont sensibles à la température comme les résines de masquage permettant de protéger une zone de la plaquette ne nécessitant pas de traitement. Si la température est excessive, la substance se dégrade et le traitement est imparfait Un autre exemple d'application de l'invention peut être de réaliser l'uniformité de la température d'éléments posés sur chaufferette Il est connu de disposer des conduites d'eau sous la surface de la semelle pour dissiper la chaleur, mais ces mesures sont insuffisantes car certaines zones ne sont pas uniformément refroidies, notamment lorsque la semelle est constituée d'un matériau thermiquement mauvais conducteur. Dans le cas des dispositifs de maintien électrostatique, la surface de la semelle est généralement réalisée en matériau à base de céramique afin d'assurer l'isolation électrique. Ces matériaux présentent une très mauvaise conductivité thermique ce qui rend plus difficile la répartition homogène de la température et le refroidissement de la plaquette.
L'invention propose un système de répartition de la température à la surface d'une semelle sur laquelle un élément à traiter est disposé, permettant une répartition homogène sur toute la surface de la semelle et permettant une parfaite régulation de la température de la surface de l'élément en contact avec la semelle. Ce système de répartition homogène de la température est caractérisé en ce qu'il comporte des micro-canaux creusés dans la semelle depuis la surface de contact de ladite semelle et s'étendant parallèlement à cette dernière et qu'un fluide possédant des propriétés de conduction thermique circule dans lesdits micro-canaux, ledit fluide étant au contact de l'élément à traiter.
stabilisation de la dispersion, contribuant ainsi à augmenter le temps de contact au niveau des zones interstitielles entre molécules attractives et macromolécules ou agglomérats à concentrer.
Le procédé selon l'invention peut s'appliquer à la concentration de tout type de macromolécules ou d'agglomérats.
A titre d'exemples, on peut citer comme macromolécules pouvant être concentrées, selon le procédé de l'invention, les acides nucléiques, les protéines telles les anticorps.
A titre d'exemples, on peut citer comme agglomérats de molécules pouvant être concentrés, selon le procédé de l'invention, les prions.
A titre d'exemples, on peut citer comme agglomérats de particules pouvant être concentrés des particules colloïdales telles que des particules d'or.
Ainsi, le procédé selon l'invention peut être mis en #uvre pour la concentration d'un acide nucléique particulier, qui est l'ADN.
Dans le cas de l'ADN, l'a molécule apte à fixer l'ADN est, par exemple, une molécule fonctionnalisée par une sonde de façon à permettre l'hybridation spécifique de l'ADN à concentrer, par exemple, un lipide fonctionnalisé par un ADN complémentaire de l'ADN à concentrer.
Le fait que la molécule soit un lipide est particulièrement intéressant dans le cadre de cette invention, car cette catégorie de molécules contribue à assurer la stabilisation de la dispersion formée. De
plus, la fonctionnalisation de cette molécule par un ADN complémentaire de l'ADN à concentrer permet une concentration et une extraction sélective dudit ADN.
A titre d'exemples, on peut citer, comme lipides fonctionnalisés efficaces dans la concentration d'ADN, des lipides biotinylés comportant un groupement avidine ou dérivé de l'avidine, sur lequel est greffé l'ADN complémentaire par une extrémité biotinylée précédemment incorporée audit ADN complémentaire ou encore des lipides cationiques comprenant au moins un groupement spermine sur lequel est adsorbé l'ADN complémentaire. De tels lipides cationiques peuvent être des lipides du type DOGS ou Dioctadécylamidoglycylspermine, commercialisé sous la marque TransfectamTM. Ces lipides présentent deux chaînes carbonées saturées en C18 ainsi qu'une tête polaire constituée d'un groupement spermine présentant une forte affinité pour l'ADN. L'ADN complémentaire est ainsi adsorbé sur les sices spermine. Les lipides résultant constituent de véritables sondes fonctionnalisées permettant l'hydridation spécifique des ADN à concentrer, dit 'ADN cibles:'.
Le procédé selon l'invention peut également être utilisé pour la concentration d'agglomérats de molécules, tels que les prions. Ces derniers sont naturellement hydrophobes, de sorte qu'avec un système biphasique eau/air, l'eau correspondant à l'échantillon liquide (ou première phase liquide) contenant les prions à concentrer et l'air à la deuxième phase, ils s'adsorbent naturellement à l'interface eau/air, ladite
interface correspondant selon la terminologie de l'invention, à la couche interfaciale.
Le procédé selon l'invention peut également être utilisé pour la concentration de particules colloïdales. Celles-ci peuvent être, par exemple, des particules submicroniques d'or solubilisées dans l'eau (correspondant selon la terminologie de l'invention à la première phase liquide). Les molécules aptes à fixer ces particules colloïdales d'or, contenues dans la couche interfaciale, sont, par exemple, des molécules portant des groupements thiol-SH concentrées dans la couche interfaciale.
Le procédé de concentration, explicité cidessus, sert, comme son nom l'indique, à concentrer sélectivement dans une couche interfaciale une macromolécule ou un agglomérat de macromolécules donné.
Il peut, de ce fait, être mis en #uvre, afin de purifier, de détecter ou d'amplifier la macromolécule ou un agglomérat de molécules ou particules donné.
Ainsi, la présente invention a également pour objet un procédé de purification d'une macromolécule ou d'un agglomérat de molécules ou particules contenu initialement dans un échantillon liquide, comprenant la concentration de ladite macromolécule ou dudit agglomérat au sein de ladite couche interfaciale par la mise en oeuvre du procédé de concentration décrit précédemment suivie de l'élimination de l'échantillon liquide appauvri en ladite macromolécule ou ledit agglomérat, après l'étape de concentration.
peut être utilisé ici. En particulier, la version 2. 06 peut être utilisée, de même que la version standard d'alignement de nucléotides disponible sur le site de la NCBI ou, pour les séquences entre 7 et 20 nucléotides, la version spécifique pour les séquences courtes, disponible sur ce même site (www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/). Les séquences similaires ainsi envisagées peuvent être de la même longueur que les séquences décrites dans le présent texte et dans le Tableau I, ou d'une longueur différente, alors comprise de préférence entre 15 et 35 bases.
Les termes et expressions amorces , amorces pour amplification et amorces nucléotidiques sont équivalents au sens de la présente invention. Il est entendu que les amorces ainsi désignées sont nécessairement spécifiques et exclusives, même si tel n'est pas toujours explicitement précisé dans le texte.
La présente demande décrit notamment des couples d'amorces spécifiques de certains micro-organismes, et utilisables dans certaines conditions. Il est bien évident qu'un couple d'amorces correspondant aux séquences réverses complémentaires de chacune des amorces d'un couple d'amorces décrit dans la présente demande peut être utilisé en lieu et place dudit couple d'amorces. Un tel couple d'amorces sera dit couple d'amorces réverse complémentaire du premier couple.
De manière préférée, le procédé selon la présente invention conduit à la détection de bactéries pathogènes de mammifères, hommes et/ou animaux. En particulier, ledit procédé permet de détecter la présence éventuelle de plusieurs espèces bactériennes parmi les agents infectieux pathogènes suivants : Escherichia coli et/ou Shigella spp. et/ou Hafnia alvei et/ou Yersinia enterocolitica, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Salmonella spp., Bacillus cereus, Clostridium perfringens, Y. enterocolitica, Campylobacter jejuni, et Legionella spp., notamment Legionella pneumophila. Ces espèces bactériennes figurent, pour l'essentiel, parmi les contaminants alimentaires et les contaminants de l'eau les plus fréquents et les plus préoccupants eu égard à leur
pathogénicité et leur résistance, voire leur multirésistance vis-à-vis des antibiotiques courants.
S'agissant de H. alvei, cette entérobactérie, bien que rare, peut néanmoins être à l'origine de l'altération de certains aliments, notamment des viandes emballées sous une atmosphère pauvre en oxygène. En outre, H. alvei est difficile à identifier par les méthodes conventionnelles et fréquemment confondue avec des Salmonelles par exemple. La présente invention permet précisément de discriminer de façon simple et rapide H. alvei de Salmonella spp..
Pour la plupart, ces bactéries sont pathogènes et provoquent des troubles gastro-intestinaux (diarrhées, vomissements...), parfois sévères et éventuellement accompagnés de fièvres. Elles représentent à cet égard un danger particulier pour les femmes enceintes, les jeunes enfants et les personnes âgées notamment, danger qu'il convient d'écarter par des mesures au besoin drastiques, comme l'atteste le fait que ces dernières années ont vu se multiplier les campagnes de retrait d'aliments, en particulier de fromages au lait cru, dans lesquels les concentrations en Listeria monocytogenes ou Salmonella spp. dépassaient les seuils normatifs tolérés.
Les bactéries du genre Legionella spp. sont plutôt présentes dans l'eau (eaux de boisson, eaux chaudes et froides sanitaires, eaux de tours aéroréfrigérantes, eaux de surface, eaux souterraines), et ont été responsables d'infections nosocomiales ou chez des personnes fréquentant certains établissements thermaux, entraînant la fermeture provisoire desdits établissements. Il est donc important de pouvoir détecter facilement et rapidement une éventuelle contamination de l'eau par des legionelles.
Afin de détecter les espèces bactériennes sus-visées, les couples d'amorces et sondes associées ci-après ont été choisis ou dessinés de manière à remplir les conditions de spécificité et d'exclusivité requises dans le cadre de la mise en #uvre du procédé objet de l'invention et en
particulier, de l'étape d'amplifications multiples, simultanées mais séparées dans l'espace.
Avantageusement, les séquences nucléotidiques dessinées pour E. coli permettent également d'identifier H. alvei, et par-là même de distinguer cette espèce bactérienne des Salmonelles, avec lesquelles elle est généralement confondue.
Le cas échéant, la discrimination ultérieure entre E. coli et H. alvei peut être effectuée par détermination du type de nitrate réductase, la majorité des entérobactéries, dont E. coli, possédant une nitrate réductase du type A, alors que H. alvei possède une nitrate réductase du type B (pour la procédure à suivre aux fins de cette détermination, voir Marchai et al.
1982. In Les milieux de culture pour l'isolement et l'identification biochimique des bactéries. Doin Editeurs, Paris, France).
Les séquences dessinées pour E. coli permettent, outre H. alvei, de détecter également Shigella spp. et Y. enterocolitica.
Cependant, la distinction entre E. coli, Shigella spp. et H. alvei d'une part, et Y. enterocolitica d'autre part, est assurée par l'utilisation des séquences nucléotidiques spécifiques et exclusives de cette dernière espèce bactérienne.
Par ailleurs, la discrimination entre E. coli, Shigella spp. et H. alvei peut être effectuée sur la base de critères biochimiques tels que celui susmentionné et, par exemple, en utilisant des tests commerciaux de type Galerie API20E (bioMérieux, supra).
A titre d'exemple de composé à fonction amine, on peut citer la N- méthyldiéthanolamine, la N-tert-butyl-diéthanolamine, la N- sulfoéthyldiéthanolamine.
La famille de polyuréthanes amphiphiles cationiques selon l'invention a été décrite par la demanderesse dans la demande de brevet français N -0009609; elle peut être représentée par la formule générale (la) suivante : R-X-(P)n-[L-()mJr-L'-(P')p-X'-R'(Ia) dans laquelle : R et R', identiques ou différents, représentent un groupement hydrophobe ou un atome d'hydrogène ; X et X', identiques ou différents, représentent un groupement comportant une fonction amine portant ou non un groupement hydrophobe, ou encore le groupement L" ; L, L' et L", identiques ou différents, représentent un groupement dérivé d'un diisocyanate ;
P et P', identiques ou différents, représentent un groupement comportant une fonction amine portant ou non un groupement hydrophobe; Y représente un groupement hydrophile ; r est un nombre entier compris entre 1 et 100, de préférence entre 1 et 50 et en particulier entre 1 et 25, n, m, et p valent chacun indépendamment des autres entre 0 et 1000 ; la molécule contenant au moins une fonction amine protonée ou quaternisée et au moins un groupement hydrophobe.
Encore une autre famille préférée de polyuréthanes amphiphiles cationiques est celle correspondant à la formule (la) ci-dessus dans laquelle : R et R' représentent tous les deux indépendamment un groupement hydrophobe, X et X' représentent tous les deux indépendamment un groupement comportant une amine quaternaire, n et p valent zéro, et L, L', Y et m ont la signification indiquée ci-dessus.
Les groupements P et P', comprenant une fonction amine peuvent représenter au moins l'une des formules suivantes : dans lesquelles : R5 et R7 ont les mêmes significations que R2 défini précédemment;
R6, R8 et R9 ont les mêmes significations que R1 et R3 définis précédemment ; R10 représente un groupe alkylène, linéaire ou ramifié, éventuellement insaturé et pouvant contenir un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, 0, S et P, et A- est un contre-ion physiologiquement acceptable.
En outre, la présente invention a pour objets des sondes nucléotidiques pouvant être, selon les modes de réalisation, associées à des couples d'amorces pour amplification tels que ceux décrits ci-dessus, aux fins de l'amplification en temps réel de séquences d'acides nucléiques cibles, ou utilisées pour la détection de séquences cibles selon des techniques d'hybridation ADN-ADN.
Ainsi, selon un premier mode de réalisation des sondes objets de l'invention, celles-ci sont utilisées dans le cadre de réactions d'amplification en temps réel, conformément aux principes de la chimie TaqManTM (supra) ou des balises moléculaires évoqués précédemment et connus de l'homme du métier. En particulier, lesdites sondes sont des oligonucléotides de type TaqManTM (supra), marqués en 5' par un fluorophore, telle la 6méthylfluorescéine (FAM), et en 3' par un quencheur, telle la tétraméthylrhodamine (TAMRA), dont les séquences, spécifiques et exclusives d'espèces bactériennes, sont choisies parmi : - Lm113TqFT (SEQ ID N 17) pour L. monocytogenes; - Ye86TqFT (SEQ ID N 18) pour Y. enterocolitica ; - Ec97TqFT (SEQ ID N 19) pour E. coli et/ou H. alvei et/ou Shigella spp. et/ou Y. enterocolitica ; - Se98TqFT (SEQ ID N 20) pour Salmonella spp. ; - Sa193TqFT (SEQ ID N 21) pour S. aureus ; - Bc84TqFT (SEQ ID N 22) pour B. cereus ; - Cp97TqFT (SEQ ID N 23) pour C. perfringens ; - Cju76TqFT (SEQ ID N 24) pour C. jejuni ;
Lg189TqFT (SEQ ID N 38) pour Legionella spp. ; Lg69TqFT (SEQ ID N 39) pour Legionella spp. ; Lpn112TqFT (SEQ ID N 40) pour Legionella pneumophila ; et toute séquence hybridable en conditions strictes à au moins 80 % avec les séquences ci-dessus, ou toute séquence présentant au moins 80 % d'identité avec lesdites séquences SEQ ID 17 à 24 et 38 à 40 ou avec leurs séquences réverses complémentaires.
De préférence, les sondes sus-citées sont utilisées en association avec les couples d'amorces pour amplification décrits ci-dessus. Un autre objet de l'invention est d'ailleurs ensemble d'acides nucléiques comportant un ou plusieurs couple(s) d'amorces et sonde (s) associée(s), tels que les couples d'amorces spécifiques de micro-organismes et les sondes correspondantes décrits ci-dessus. Bien entendu, dans ces ensembles d'acides nucléiques, un couple d'amorces peut être remplacé par son couple d'amorces réverse complémentaire, et la sonde peut être remplacée par sa séquence réverse complémentaire, le remplacement du couple d'amorces ou de la sonde étant indépendants l'un de l'autre. Des amorces ou sondes présentant au moins 80% d'identité avec les séquences décrites dans la présente demande, ou avec leurs séquences réverses complémentaires, sont également utilisables.
Selon un autre mode de réalisation des sondes nucléotidiques objets de la présente invention, celles-ci sont utiles pour la détection de séquences d'acides nucléiques spécifiques et exclusives de bactéries contenues dans un mélange complexe ou dans de l'eau. Lesdites sondes, marquées chimiquement (à froid) ou radioactivement (à chaud), permettent alors la mise en #uvre de procédures d'hybridation telles l'hybridation Southern, l'hybridation sur colonies et l'hybridation sur dépôts en points (Dot Blot) (Sambrook et Russel, 2001, supra). Ces techniques
d'hybridation, couramment utilisées tant en laboratoire que dans l'industrie, font à ce titre partie des connaissances générales de l'homme du métier.
Ainsi, les sondes nucléotidiques objets de l'invention permettent la détection de fragments d'acides nucléiques spécifiques et exclusifs de Y. enterocolitica, E. coli et/ou H. alvei et/ou Shigella spp. et/ou Y. enterocolitica, Salmonella spp., S. aureus, B. cereus, C. perfringens, C. jejuni, Legionella spp. et L. pneumophila.
Selon un premier aspect de ce mode de réalisation, lesdites sondes sont constituées par les produits d'amplification obtenus à l'aide des couples d'amorces choisis parmi : - Ye86f (SEQ ID N 3) et Ye86r (SEQ ID N 4) pour Y. enterocolitica ; - Ec97f (SEQ ID N 5) et Ec97r (SEQ ID N 6) pour E. coli et/ou H. alvei et/ou Shigella spp. et/ou Y. enterocolitica ; - Se98f (SEQ ID N 7) et Se98r (SEQ ID N 8) pour Salmonella spp. ; - Sa193f (SEQ ID N 9) et Sa193r (SEQ ID N 10) pour S. aureus ; - Bc84f (SEQ ID N 11) et Bc84r (SEQ ID N 12) pour B. cereus ; - Cp97f (SEQ ID N 13) et Cp97r (SEQ ID N 14) pour C. perfringens ; et - Cju76f (SEQ ID N 15) et Cju76r (SEQ ID N 16) pour C. jejuni ; - Lg189f (SEQ ID N 33) et Lg69r (SEQ ID N 34) pour Legionella spp. ; - Lg69f (SEQ ID N 35) et Lg69r (SEQ ID N 34) pour Legionella spp. ; - Lpn112f (SEQ ID N 36) et Lpn112r (SEQ ID N 37) pour Legionella pneumophila ;
tout couple d'amorces réverse complémentaire des couples ci-dessus ; et tout couple d'amorces comportant au moins une amorce de séquence hybridable en conditions strictes à au moins 80 % avec les séquences ci-dessus, ou de séquence présentant au moins 80% d'identité avec elles.
Selon un autre aspect, les sondes objets de l'invention sont des oligonucléotides dont les séquences sont choisies parmi : - Lm113TqFT (SEQ ID N 17) pour L. monocytogenes ; - Ye86TqFT (SEQ ID N 18) pour Y. enterocolitica ; - Ec97TqFT (SEQ ID N 19) pour E. coli et/ou H. alvei et/ou Shigella spp. et/ou Y. enterocolitica ; - Se98TqFT (SEQ ID N 20) pour Salmonella spp. ; - Sa193TqFT (SEQ ID N 21) pour S. aureus ; - Bc84TqFT (SEQ ID N 22) pour B. cereus ; - Cp97TqFT (SEQ ID N 23) pour C. perfringens ; - Cju76TqFT (SEQ ID N 24) pour C. jejuni ; - Lg189TqFT (SEQ ID N 38) pour Legionella spp. ; - Lg69TqFT (SEQ ID N 39) pour Legionella spp. ; - Lpn112TqFT (SEQ ID N 40) pour Legionella pneumophila ; et - toute séquence hybridable en conditions strictes à au moins 80 % avec les séquences ci-dessus, ou toute séquence présentant au moins 80 % d'identité avec lesdites séquences SEQ ID 17 à 24 et 38 à 40 ou leurs séquences réverses complémentaires.
Il est entendu que, pour la mise en oeuvre de cet aspect de l'invention, les séquences SEQ ID N 17 à 24 et 38 à 40, utiles pour la détection d'espèces bactériennes par des techniques d'hybridation ADNADN, sont dépourvues des marquages au moyen d'un fluorophore en 5' et
d'un quencheur en 3', caractéristiques des systèmes TaqManTM (supra) ou des balises moléculaires, tels que décrits supra.
La présente invention concerne enfin des outils de biologie moléculaire, kit d'analyse et micro-réseaux ou puces à acides nucléiques, pour la détection de bactéries contenues dans un mélange complexe ou dans un milieu aqueux.