INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
On effectue la réaction enzymatique en mélangeant 20 l de DNP-HSBiotine à 1,2 pg/ml avec 20 l de solution d'héparitinase de concentration variable (de 0,2 à 20000 punités/ml).
Ce mélange est laissé 5 h à température ambiante.
10 (il de chaque mélange réactionnel sont placés dans des puits de microplaques, dans lesquels on rajoute 5 [il/puits de aDNP-K (0,8 g/ml) et 5 l de SA-XL (1 g/ml).
La composition contient préférentiellement de 1 à 70 % en poids de composé de formule (Z), préférentiellement de 5 à 40 %, par rapport au poids total de la composition.
Le système d'ignifugation selon la présente invention peut comprendre tout type d'agents ignifugeants, c'est à dire des composés permettant de diminuer la propagation de la flamme et/ou ayant des propriétés d'ignifugation, bien connus de l'homme du métier. Ces agents ignifugeants sont habituellement utilisés dans des compositions ignifugées et sont notamment décrits, par exemple, dans les brevets US6344158, US6365071, US6211402 et US6255371, cités ici à titre de référence.
Avantageusement, le système d'ignifugation comprend au moins un agent ignifugeant choisi parmi le groupe constitué par : - les dérivés du magnésium tel que par exemple l'hydroxyde de magnésium ; - les dérivés de l'aluminium tels que par exemple l'hydroxyde d'aluminium et le phosphate d'aluminium ; - les dérivés du phosphore tels que par exemple le phosphore rouge ; - les composés organiques azotés telles que par exemple les triazines, l'acide cyanurique et/ou isocyanurique, la mélamine ou ses dérivés comme le cyanurate de mélamine, l'oxalate, le phtalate, le borate, le sulfate, le phosphate, polyphosphate et/ou pyrophosphate de mélamine, les produits condensés de la mélamine, tel que la melem et la mélom, le tris (hydroxyéthyl) la benzoguanamine, la guanidine, l'allantoïne, et le glycoluril ; - les dérivés du brome tels que par exemple le PBDPO (polybromodiphényloxyde), le BrPS (polystyrène bromé et polybromostyrène), le polypentabromobenzylacrylate,
l'indane bromé, le tétradécabromodiphenoxybenzene (Saytex 120), l'éthane-1,2bis (pentabromophényl), le tétrabromobisphénol A et les oligomères époxy bromés ; - les composé comprenant de la chlorine, tel que par exemple un composé cycloaliphatique chloriné comme le Dechlorane plus (vendu par OxyChem, voir CAS 13560-89-9) ; - les dérivés du soufre, tels que par exemple la tiouréa, le thiocyanate d'ammonium, le sulphammate d'ammonium et/ou de guanidine, les sulfamides et les sulfonates ; - les composés organo-phophoreux tels que par exemple les acides phosphoniques ou diphosphoniques, comme les acides phosphoniques cycliques comme par exemple l'oxyde de 1-hydroxyphospholane, l'oxyde de 1-hydroxydihydrophosphole, ou non cycliques comme par exemple l'acide dimethylphosphinique, l'acide éthylméthylphosphinique, l'acide diéthylphosphinique, l'acide méthyl-n-propylphosphinique, l'acide méthanedi (méthylphosphinique, l'acide benzene-1,4-(dimethylphosphinique), l'acide méthylphenylphosphinique, l'acide diphénylphosphinique, l'acide isobutyle éthylméthyl phosphinique, l'acide n-butyl méthylpropyle phosphinique, l'acide amyl isobutylméthyl phosphinique, l'acide isopropyl hexylméthyl phosphinique, l'acide n-butyl méthyloctyl phosphinique, l'acide n-butyl méthylphénylphosphinique, l'acide n-pentyl diphénylphosphinique, l'acide di-n-butyl hexane-1,6-di(méthylphosphinique) et l'acide diisobutyl benzene-1,4-di(méthylphosphinique), les phosphinoxides, les phosphonates, les chlorophosphates et les phosphates organiques, tels que les triarilphosphates, le bisphénol A bisdicresylphosphate, le bisphénol A bisdiphénylphosphate (BDP Fyroflex Akzo Nobel), le résorcinol bisdiphénylphosphate (RDP Fyroflex RDP), les esters de diphosphate cyclique tel que par exemple l'antiblaze 1045 (vendu par Rhodia Consumer Specialities, voir CAS n 42595-45-9), les phosphates inorganiques tels que les phosphates et polyphosphates d'ammonium, et leurs sels.
Les agents ignifugeants mentionnés précédemment peuvent être utilisés seuls ou en combinaison. Les sels des composés organo-phosphoreux peuvent être par exemple des sels d'aluminium, de calcium, zinc, alcalino-terreux et/ou magnésium.
On peut également ajouter au système d'ignifugation des agents synergistes qui vont accroître les propriétés d'ignifugation des agents ignifugeants. Le système d'ignifugation peut comprendre au moins un agent synergiste choisi dans le groupe constitué par :
- les zéolites, telles que par exemple les phillipsites, les chabazites et les natrolites ; - les poudres de céramique ; - les nanocomposites, tels que par exemple la momorillonite et l'alpha Zr-P ; - les hydrotalcites telles que par exemple les carbonates de magnésium et les autres carbonates alcalino-terreux, par exemple le MgC03, le 5Mg(OH)2 et le 2A1(OH)3 ; - les dérivés du zinc tels que par exemple l'oxyde de zinc, le stannate de zinc, l'hydroxystannate de zinc, le phosphate de zinc, le borate de zinc et le sulfide de zinc ; - les retardateurs de flammes par intumescence, tels que par exemple l'acide silicoet/ou phospho-tungstique, les alcools polyhidriques comme le pentaeritritol, la glycérine et l'alcool polyvinylique, les novolaques, les acides siliciliques, les silanes, les polysiloxanes et les silicones - les oxydes métalliques, tels que par exemple l'oxyde d'étain, l'oxyde de molybdène et l'oxyde de fer ; et - les dérivés de l'antimoine tels que par exemple le trioxyde d'antimoine et l' antimoinate de sodium.
Préférentiellement, le système d'ignifugation est choisi parmi le groupe constitué par : - un système à base de mélamine cyanurate et de calcium stéarate ; - une combinaison de poly dibromo styrène et de trioxyde d'antimoine ; et - une combinaison de diphosphate ester cyclique tel que par exemple l'antiblaze 1045 (vendu par Rhodia Consumer Specialities, voir CAS n 42595-45-9) et de fibres de verre.
La composition selon l'invention peut également comprendre des charges de renfort bien connues de l'homme du métier et choisies parmi le groupe comprenant des fibres de verre, des fibres de carbone, des fibres minérales, des poudres et/ou fibres céramiques, des fibres organiques thermorésistantes comme les fibres en polyphthalamide et des charges minérales telles que la wollastonite, le kaolin, le talc, l'argile, la silice et le mica, et des nanocharges minérales telles que la montmorillonite et l'a-Zr phosphate ; ou leurs mélanges. Les fibres de verre sont particulièrement préférées selon l'invention.
Les fibres de verre préférentiellement utilisées sont des fibres de verre pour polyamide, ayant, par exemple, un diamètre moyen compris entre 5 et 20 m, préférentiellement entre 10 et 14 m, telles que par exemple les fibres de verre CS123D-10C (Owens Corning
Fibreglass), CS1103 (Owens Corning Fibreglass) et CS983 (Vetrotex) et CS99B (Vetrotex). On peut avantageusement utiliser des fibres de verre broyées et/ou des fibres non enzymées en surface.
Les charges de renfort peuvent représenter de 0 à 80 %, préférentiellement de 5 à 55 %, encore plus préférentiellement de 10 à 40 % en poids par rapport au poids total de la composition.
La composition selon l'invention peut également comprendre un ou plusieurs additifs habituellement utilisés par un homme du métier dans les compositions à base de polyamide utilisées pour la fabrication d'articles moulés. Ainsi, on peut citer à titre d'exemple d'additifs les stabilisants thermiques, les agents de moulage tels que le calcium stéarate, les stéaramides et les erucamides, les stabilisants U. V., les antioxydants, les lubrifiants, les réducteurs d'abrasion, les pigments, colorants, plastifiants, les promoteurs de marquage au laser ou des agents modifiant la résilience. A titre d'exemple, les antioxydants et stabilisants chaleur sont, par exemple, des halogénures d'alcalins, des halogénures de cuivre, les composés phénoliques stériquement encombrés, les phosphites organiques et les amines aromatiques. Les stabilisants U. V. sont généralement des benzotriazoles, des benzophénones ou des HALS en association avec des antioxydants.
La présente invention concerne également un procédé de fabrication d'une composition ignifugée dans lequel on mélange au moins un polyamide branché et un système d'ignifugation à l'exception d'une combinaison de sel d'acide phosphinique et d'un produit de réaction entre de l'acide phosphorique et de la mélamine ou un dérivé de la mélamine.
Les polyamides branchés et le système d'ignifugation sont les mêmes que ceux décrits précédemment.
Préférentiellement, le polyamide étoile est obtenu à partir des monomères de formule : HOOC-R2-NH2 (III)
La distance entre le premier et le deuxième composé fluorescent constitue un aspect critique dans un dosage utilisant le phénomène de FRET. En particulier, le transfert d'énergie est inversement proportionnel à la distance entre le donneur et l'accepteur à la puissance 6. Cet aspect doit être pris en compte pour marquer le substrat utilisé dans le dosage selon l'invention : la distance séparant le premier et le deuxième composé fluorescent doit permettre à la fois que le transfert d'énergie ait lieu et que le clivage du substrat entraîne effectivement un éloignement des deux composés fluorescents.
Par conséquent, les quantités de chacun des composés fluorescents donneur et accepteur doivent être optimisées : si le substrat comporte un trop grand
nombre de composés fluorescents, le signal observé ne variera pas de manière significative lors du clivage par une enzyme ayant une activité endoglycosidase, en particulier une activité de type héparanase. Dans le cas contraire, si trop peu de composés fluorescents sont utilisés, le transfert d'énergie n'aura pas lieu ce qui se traduira par une absence de signal. Les inventeurs ont ainsi optimisé les proportions de composés fluorescents donneur et accepteur à utiliser pour fonctionnaliser le substrat. Ces proportions correspondent au rapport molaire initial (Rmi) et au rapport molaire final (Rmf) pour chaque fluorophore. Le Rmi correspond à la proportion de fluorophore par rapport au substrat lors de la réaction de marquage.
Si le fluorophore est couplé de manière indirecte au substrat, par l'intermédiaire d'un couple ligand/récepteur, le Rmi correspondra à la proportion de ligand sur la quantité de substrat. Le Rmf se calcule de la même façon mais après la réaction de marquage : il correspond donc au nombre de molécules de fluorophore ou de ligand fixées sur le substrat.
D'autres paramètres ont dû être pris en considération lors de la fabrication du substrat utilisable dans les procédés selon l'invention.
Le pH du milieu réactionnel joue un rôle important lors de la réaction de marquage, en particulier si les groupements amine ou carboxyles de l'héparansulfate sont utilisés lors du couplage du composé fluorescent donneur, du composé fluorescent accepteur, ou d'un membre d'un couple ligand/récepteur. En effet, le pH détermine la réactivité des fonctions amines ou carboxyles utilisées lors de la fonctionnalisation du substrat. Les inventeurs ont ainsi déterminé que le pH optimal pour la fabrication d'un substrat utilisable dans les méthodes selon l'invention se situe dans une plage de 7,5 à 9 et est de préférence égal à 8,3 lorsque les amines libres de l'HS sont utilisées, et dans une plage de 5 à 7, de préférence égal à 6 lorsque des fonctions carboxyles libres sont utilisées.
Pour développer un dosage d'activité endoglycosidase, et en particulier une activité enzymatique de type héparanase, basé sur le phénomène de FRET, les inventeurs ont dû surmonter un certain nombre de difficultés techniques spécifiques du dosage de ces enzymes, qui n'apparaissent pas dans les dosages de substrats protéiques ou d'autres activité enzymatiques : 1/ Dans les dosages d'activités enzymatiques basés sur la technique de FRET de l'art antérieur, les sites de clivage enzymatiques sont clairement caractérisés alors que des incertitudes demeurent en ce qui concerne les HS : il est
par conséquent très difficile de fonctionnaliser le substrat de part et d'autre d'un site de coupure.
2/ Les HS présentent une très grande hétérogénéité aussi bien en ce qui concerne la séquence des unités glycosidiques que la longueur des chaînes : une fonctionnalisation chimiquement localisée et donc difficile à obtenir puisque la structure des HS varie d'une molécule à l'autre.
3/ Les interactions protéine-HS sont beaucoup moins stables que les interactions protéines-protéines : la fixation directe ou indirecte des composés donneur et accepteurs peut perturber d'autant plus facilement l'interaction endoglycosidase / HS.
L'invention concerne en premier lieu une méthode de détermination d'une activité enzymatique endoglycosidase dans un échantillon, comprenant les étapes suivantes : i. mettre en contact un substrat susceptible d'être clivé par une endoglycosidase avec ledit échantillon, et ii. mesurer l'évolution de la quantité de substrat intact, une diminution de quantité de ce substrat étant représentative d'une activité endoglycosidase dans l'échantillon.
Dans cette méthode, le substrat est marqué de manière directe ou indirecte par un premier composé donneur et par un second composé accepteur, et la quantité de substrat intact est déterminée en mesurant un signal émis par le composé accepteur, ce signal résultant d'un transfert par effet de proximité entre le donneur et l'accepteur.
Cette méthode peut être utilisée pour mesurer des endoglycosidases capables de cliver des héparanes sulfates comme par exemple l'héparanase ou l'héparitinase.
Dans une mise en #uvre particulière de cette méthode, le premier composé donneur et le second composé accepteur sont des composés fluorescents, le transfert de proximité est un transfert d'énergie et le signal émis est un signal fluorescent.
Par marquage de manière directe , on entend la liaison du marqueur fluorescent sur un groupe fonctionnel présent ou préalablement introduit ou généré sur le substrat. Un bras d'espacement peu être introduit entre le marqueur fluorescent et le substrat.
Par marquage de manière indirecte , on entend la liaison du marqueur fluorescent au substrat par l'intermédiaire d'un couple ligand-récepteur. Dans ce cas, le marqueur fluorescent et le substrat sont chacun marqués par un membre d'un couple ligand-récepteur.
. Leutropine (LH/HCG) . MET -enképhaline . Peptides opioïdes . Oxytocine . Hormone parathyroïde (PTH) et (PTHrP) . Peptides activant l'adényl cyclase pituitaire (PACAP) . Secretine . Somatostatine . Thrombine . Thyrotropine (TSH) . Peptide instestinal vasoactif (VIP) . Vasopressine . Vasotocine # Eicosanoïdes . IP - Prostacyclines . PG - Prostaglandines . TX - Thromboxanes # Composés à base de rétinal . 11-cis rétinal de vertébré . 11-cis rétinal d'invertébré # Lipides et composés à bases de lipides . Cannabinoïdes . Anandamide . Acide lysophosphatidique . Facteur d'activation des plaquettes . Leukotriènes # Amino acides excitateurs et ions . Ion Calcium . Glutamate # Récepteurs orphelins La présente invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que l'on détermine la variation :
- de la cinétique de dissociation du complexe formé entre le susdit récepteur et l'un de ses ligands en présence dudit effecteur allostérique, par rapport à la cinétique de dissociation du complexe formé entre ledit récepteur et ledit ligand, en l'absence dudit effecteur, - et/ou de l'amplitude de la liaison formée entre le susdit récepteur et l'un de ses ligands en présence dudit effecteur allostérique, par rapport à l'amplitude de la liaison formée entre ledit récepteur et ledit ligand, en l'absence dudit effecteur.
La présente invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que l'on détermine uniquement la cinétique de dissociation du complexe formé entre le susdit récepteur et l'un de ses ligands en présence dudit effecteur allostérique, par rapport à la cinétique de dissociation du complexe formé entre ledit récepteur et ledit ligand, en l'absence dudit effecteur.
Dans tous les cas, la mesure de la variation de la cinétique est suffisante afin de détecter un effecteur allostérique.
L'intérêt d'observer seulement la cinétique de dissociation réside dans le fait qu'à des concentrations élevées (saturantes) de ligand fluorescent, il est possible qu'aucune variation d'amplitude ne soit détectable car tous les sites de liaison sont saturés.
La présente invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que l'on détermine uniquement l'amplitude de la liaison formée entre le susdit récepteur et l'un de ses ligands en présence dudit effecteur allostérique, par rapport à l'amplitude de la liaison formée entre ledit récepteur et ledit ligand, en l'absence dudit effecteur.
Dans certains cas, la mesure seule de l'amplitude est suffisante afin de détecter un effecteur alllostérique, tandis que dans d'autres, elle doit être couplée à la mesure de la variation de la cinétique.
Selon un mode de réalisation avantageux de la présente invention, le procédé tel que défmi ci-dessus est caractérisé en ce que le ligand est un antagoniste.
Comme défini ci-dessus, on rappelle que par "antagoniste", on entend toute molécule inhibant l'effet de l'agoniste en se liant sur le même récepteur que ce dernier.
Selon un mode de réalisation avantageux de la présente invention, le procédé tel que défini ci-dessus est caractérisé en ce que le ligand est un agoniste.
Comme défini ci-dessus, on rappelle que par "agoniste", on entend toute molécule se liant au site du ligand endogène naturel et capable d'activer la réponse biologique.
Tout système biologique complexe peut être décrit par un modèle partiel comprenant un nombre d'états réduits suffisants pour décrire le phénomène observé.
Dans le cas des modulateurs ou effecteurs allostériques, on emploie un modèle partiel comprenant deux états : l'état de repos (R) et l'état actif (A) du récepteur.
On a ainsi un équilibre R A.
Dans ce modèle, les ligands présentent des affinités distinctes pour les états R et A. De manière qualitative, on peut décrire les affinités relatives KR et KA pour respectivement R et A de la manière suivante, avec c = KA / KR : Affinité pour État de repos État actif c Agoniste moins bonne meilleure c Antagoniste compétitif meilleure moins bonne c > 1 Dans cette description, un agoniste déplace l'équilibre R # A en faveur de A car son affinité est meilleure pour A que pour R. Inversement, l'antagoniste compétitif déplace l'équilibre vers R. Les écarts d'affinité entre l'état R et l'état A varient de 1 fois (c = l)(pas de différence d'affinité) à plus de 100 fois selon le ligand (c # 100 ou c # 0,01). On obtient ainsi, pour un ensemble de ligands d'une cible, une palette de molécules agonistes (c 1) d'efficacité variable.
En pratique, l'association d'un ligand à un site récepteur est contrôlée par la diffusion de ce ligand dans le milieu biologique. Des différences d'affinité pour un ligand donné, et pour un site donné, résultent d'une vitesse de dissociation différente dudit ligand pour le site dans chacune des conformations qu'il peut adopter. Il en est de même pour les agonistes, les antagonistes compétitifs et les effecteurs allostériques. Il résulte de ceci que l'effecteur allostérique, en stabilisant par exemple une conformation de haute affinité pour l'agoniste, va augmenter la proportion des récepteurs dans la conformation de haute affinité, et donc entraîner une diminution de la vitesse de dissociation de l'agoniste lié à son site. Dans une mesure expérimentale de vitesse de dissociation, on obtiendra une courbe de dissociation en fonction du temps dont l'allure générale sera plus lente si l'effecteur stabilise des états de haute affinité pour le ligand fluorescent. Ces courbes sont correctement analysées selon un modèle multiexponentiel
Cependant, il est de plus en plus demandé que
l'ouvrage de franchissement soit percé d'ouvertures destinées à former des puits de lumière ou des trémies d'extraction de fumées. Or, les longerons du type précité rendent difficile la réalisation de telles ouvertures qui pourraient, si elles étaient mal réalisées, affaiblir la structure.
Il serait donc intéressant de disposer d'un moyen permettant la construction, au moyen de longerons préfabriqués, d'ouvrages de franchissement percés d'ouvertures.
A cet effet, on prévoit, selon l'invention, un longeron de pont préfabriqué comprenant une poutre comportant une section principale et une semelle ayant des portions qui s'étendent en saillie latérale de la section principale et qui présentent une face latérale d'accostage, la poutre ayant au moins une extrémité pourvue d'éléments d'appui s'étendant au-dessus de la semelle latéralement en saillie de chaque face d'accostage.
Ainsi, le longeron peut prendre appui par une extrémité sur une des culées et par l'autre extrémité sur les poutres adjacentes par l'intermédiaire des éléments d'appui qui vont reposer sur les portions latérales des semelles des poutres adjacentes pour former un chevêtre. Il est alors possible de réaliser une ouverture par exemple en disposant bout-à-bout deux longerons de ce type de manière à laisser entre eux un espace formant l'ouverture.
De préférence, chaque élément d'appui a transversalement à la poutre une dimension sensiblement égale au double de la largeur de la portion de semelle correspondante.
Chaque élément d'appui peut alors s'étendre jusqu'à la section principale de la poutre adjacente.
Avantageusement, ce longeron comprend : - au moins un élément de précontrainte s'étendant longitudinalement pour contraindre en compression une
partie de la poutre située sous la fibre neutre de celleci, - et une armature de renfort noyée dans la poutre et ayant des fers d'attelage transversaux s'étendant en saillie dans une réserve latérale définie par les portions de semelle et la section principale.
Ainsi, la résistance du longeron est apportée par la combinaison de la forme particulière de la poutre, la présence d'une armature de renfort et l'exercice d'une précontrainte. Cette combinaison permet de réaliser des ponts de portée relativement importante, jusqu'à trentecinq mètres environ. En outre, les fers d'attelage permettent de relier transversalement deux longerons adjacents de manière simple en coulant du béton dans les réserves latérales en regard. Ceci permet une meilleure répartition des efforts de cisaillement et une reprise des sollicitations de flexion transversale. De plus, les longerons sont en appui sur la culée par une des extrémités des semelles qui sont accolées par les faces d'accostage.
La surface d'appui des longerons sur les culées est donc relativement importante et assure la stabilité provisoire de l'ouvrage.
L'invention concerne également un longeron en béton préfabriqué comprenant une poutre comportant une section principale et une semelle ayant au moins une portion qui s'étend en saillie latérale de la section principale et qui présente une face latérale d'accostage, la portion de semelle possédant au moins une zone de résistance mécanique renforcée.
Des longerons de ce type peuvent être utilisés de part et d'autre du longeron comportant les éléments d'appui pour que ces derniers reposent sur les zones de résistance mécanique renforcée, ces longerons reposant sur les culées par leurs extrémités. la zone de résistance mécanique renforcée comporte
une surépaisseur.
La zone de la portion latérale de la semelle de ces longerons sur laquelle repose un élément d'appui est alors renforcée par la surépaisseur.
Avantageusement, le longeron comprend : - au moins un élément de précontrainte s'étendant longitudinalement pour contraindre en compression une partie de la poutre située sous la fibre neutre de celleci, - et une armature de renfort noyée dans la poutre et ayant des fers d'attelage transversaux s'étendant en saillie dans une réserve latérale définie par les portions de semelle et la section principale.
sur cette armature qu'est fixé le moto-réducteur (1).
Le dit moto-réducteur (1) transmet le mouvement de rotation au pIgnon (18) grace à une douille d'entrainement (7) et à deux goupilles (19). Le pignon (18) assure une liaison pivot par deux roulement (6) logés dans une cage (20). Cette même cage (20) est maintenue par le support cage (2) qui est lui-même soudé à l'armature (8). Le maintien de la cage (20) et des roulements (6) est assuré par
trois vis pointeau (17).