INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La protéine NOV (4 g/ml) est immobilisée sur du plastique selon les conditions décrites dans la partie expérimentale, puis incubée avec du VEGF165 iodé (1 ng/puits) en absence (colonne PBS) ou présence de 2 g/ml de VEGF165 (colonne 0) ou de NOV (colonne NOV). Les résultats sont exprimés en cpm de VEGF165 iodé fixé par puits, après lavage.
La Figure 2 correspond à la liaison de la forme iodée du VEGF189 sur la protéine NOV.
La protéine NOV (4 u.g/ml) est immobilisée sur du plastique selon les conditions décrites dans la partie expérimentale, puis incubée avec du VEGF189 iodé (1 ng/puits) en absence (colonne PBS) ou présence de 2 g/ml de VEGF189 (colonne 0) ou de NOV (colonne NOV). Les résultats sont exprimés en cpm de VEGF189 iodé fixé par puits, après lavage.
La Figure 3 correspond au test de migration des cellules. Les cellules sont comptées dans 8 champs et la moyenne est représentée sur l'axe des ordonnées. L'axe des abscisses correspond à la concentration de la protéine NOV en g/ml. Les points représentés par des losanges correspondent aux cellules non incubées avec VEGF et les points représentés par des carrés correspondent aux cellules préalablement traitées avec du VEGF.
La Figure 4 correspond au test de prolifération des cellules. L'axe des abscisses correspond à la concentration de la protéine NOV en g/ml et l'axe des ordonnées à la densité optique mesurée à 595 nm. Les points représentés par des losanges correspondent aux cellules qui n'ont pas été stimulées par le VEGF et les points représentés par des carrés correspondent aux cellules qui ont été stimulées par le VEGF.
La Figure 5 correspond au test d'adhésion des cellules FBAE. L'axe des abscisses correspond à la concentration de la protéine NOV en g/ml et l'axe des ordonnées à la densité optique mesurée à 595 nm. Les points représentés par des losanges correspondent aux cellules non incubées avec VEGF et les points représentés par des carrés correspondent aux cellules préalablement traitées avec du VEGF.
PARTIE EXPÉRIMENTALE Matériels : La molécule NOV est produite par infection de cellules d'insecte SF9 par un baculovirus recombinant contenant l'ADNc correspondant (SEQ ID NO : l)(Thibout et al., 2003).
Les isoformes de 165 et 189 acides aminés du VEGF sont produites par infection de cellules d'insecte SF9 par un baculovirus recombinant contenant l'ADNc correspondant (Plouët et al., 1997).
Des cellules endothéliales artérielles ombilicales humaines (HUAEC) ont été isolées à partir d'artères ombilicales perfusées avec du collagène (Sigma) pour digérer la membrane basale. Les cellules HUAEC ont été maintenues dans du SFM (Life Sciences) additionné de 20% de sérum de veau f#tal (SVF) inactivé par la chaleur. Les cultures souches ont reçu 1 ng/ml de VEGF chaque jour.
Les particules, en tant qu'actifs cosmétiques, sont autres que les particules à structure c#ur-enveloppe de l'invention et peuvent être choisis parmi les particules organiques, minérales ou en composite.
Les compositions cosmétiques selon l'invention sont essentiellement caractérisées par les
particules qu'elles contiennent. Ces particules sont selon l'invention des particules qui peuvent être définies comme étant des nanoparticules métalliques encapsulées par un matériau inorganique.
Au sens de la présente invention, on entend par "nanoparticules" des particules dont la taille est comprise entre 1 nm et 500 nm, de préférence comprise entre 1 nm et 100 nm, de préférence encore de 1 nm' à 50 nm.
On entend par "taille de particule" la dimension maximale qu'il est possible de mesurer entre deux points de la particule. De telles tailles sont mesurables directement par des techniques de microscopie comme la microscopie à balayage électronique ou la microscopie à force atomique, ou par des techniques indirectes comme la diffusion dynamique de la lumière.
Les particules incorporées dans les compositions de l'invention peuvent avoir des formes variées ; elles peuvent revêtir par exemple la forme de sphères, de lamelles, de fibres, de tubes, de polyèdres, elles peuvent aussi avoir une forme totalement aléatoire. Une forme préférée est sphérique.
Les particules incorporées dans les compositions de l'invention ont un c#ur, noyau ("core") constitué en majorité par au moins un métal.
Par métal, on entend un corps simple constitué uniquement d'atomes d'un élément métallique susceptible d'engendrer des cations.
Par "en majorité", on entend que le c#ur de la particule est constitué par 50% ou plus en masse d'au moins un métal.
De préférence, le c#ur est constitué par au moins 80% en masse, de préférence encore par au moins 90%, en masse et mieux par 100% en masse d'au moins un métal.
On entend généralement par métal, l'aluminium et tous les éléments de numéro atomique allant de 21 à 82 et composant les colonnes 3 à 13 de la classification périodique des éléments selon la nouvelle notation IUPAC : on pourra à ce sujet se référer au "CRC Handbook of Chemistry and Physics", 80th Print Edition.
Le terme métal inclut également tous les alliages de ces éléments, et les mélanges de ces métaux et alliages.
Le c#ur peut, ainsi également, être constitué dans les pourcentages cités ci-dessus par un mélange de deux ou plus de ces métaux et/ou alliages de ceux-ci.
Le c#ur ou noyau peut aussi être un c#ur composite constitué de plusieurs zones, des zones adjacentes étant constituées par des métaux, alliages ou mélanges différents.
Des c#urs composites préférés sont des c#urs multicouches comprenant un c#ur ou noyau interne formant substrat constitué par un métal, alliage ou mélange de métal recouvert au moins partiellement par une première couche en un métal, alliage de métal ou mélange de métaux ou alliage différent de celui
constituant le c#ur ou noyau interne, et éventuellement par une ou plusieurs autres couches, chacune de ces couches recouvrant au moins partiellement la couche précédente et chaque couche étant constituée par un métal, alliage ou mélange de métal différent de la couche suivante (si celle-ci existe) et de la couche précédente.
Des cellules endothéliales d'aorte foetale bovine (FBAE) ont été isolées à partir d'aortes foetales obtenues auprès d'un abattoir local. Les cellules ont été maintenues dans du DMEM glutamax (Life Sciences) additionné de 10% de sérum de veau nouveau-né (NBCS) inactivé par la chaleur, 100 g/ml de pénicilline et 100 g/ml de streptomycine à 37 C dans 10% de C02 et 1 ng/ml de VEGF tous les 2 jours.
Interaction directe entre VEGF et NOV Pour la liaison à la protéine NOV immobilisée, des plaques ELISA à 96 puits ont été recouvertes de 4 ug/ml de protéine NOV dans un tampon carbonate 0,05 M à pH 9,6 pendant la nuit à 4 C. Les sites de liaison non spécifiques ont été bloqués avec 5 mg/ml de BSA dans du tampon carbonate. Après avoir lavé deux fois les puits avec du PBS à pH 7,4, on a ajouté 1 ng de VEGF iodé à chaque puits en présence ou non de 2 g/ml de VEGF165 ou de NOV, dilués dans du PBS contenant 0,05 % de Tween 20,0,5% de BSA, 1 mM de MgCl2 et 1 mM de CaCl2.
Les puits ont été lavés 3 fois avec un mélange PBS-Tween 20 0,1%-BSA 0,5% et les protéines liées ont été solubilisées dans du NaOH 0,2M.
Les résultats de ces expériences sont représentés dans les figures 1 et 2.
La Figure 1 montre que le VEGF165 iodé s'associe spécifiquement à NOV puisque l'addition de VEGF non radiomarqué (VEGF) inhibe cette liaison. De même, l'addition de NOV inhibe la liaison de VEGF165 radiomarqué à NOV.
Tests de migration Des cellules FBAE sont inoculées dans des puits de 4 cm2 à haute densité (50 000 cellules/puits). Quand la monocouche est confluente, la prolifération est arrêtée par l'incubation, pendant une nuit, en présence de DMEM sans sérum. Une blessure est alors pratiquée dans la monocouche à l'aide d'un grattoir mousse, permettant de délimiter une surface libre de toute cellule. Les monocouches sont ensuite lavées 3 fois par du DMEM pour enlever les cellules non adhérentes. Une photographie est alors prise pour délimiter la surface avant toute migration cellulaire. Les puits sont ensuite incubés en DMEM seul ou en présence de 50 ng/ml de, VEGF en présence de concentrations variables de NOV. Après 24 h les puits sont lavés 3 fois et colorés au May-Grunwald-Giemsa et photographiées. Les photographies prises avant et après l'expérience sont alors superposées pour permettre le comptage des cellules ayant migré.
Les résultats de ces tests sont indiqués dans la Figure 3.
L'addition de NOV en l'absence de VEGF n'a pas d'effet sur la migration basale des cellules. En revanche, NOV inhibe l'activité du VEGF et 50% de l'effet maximal est obtenu avec une concentration de 50-100 ng/ml de NOV.
Tests de prolifération Des plaques de culture à 96 puits ont été ensemencées avec 1000 cellules FBAE par puits dans du DMEM additionné de 5% de NBCS. Les cellules ont été stimulées ou non avec 2 ng/ml de VEGF165 et différentes concentrations de NOV. Au bout de 5 jours, les puits ont été rincés doucement avec du DMEM et les cellules ont été fixées dans 1% de glutaldéhyde pendant 20 minutes à température ambiante. Les cellules fixées ont été quantifiées par incorporation de violet cristallisé (Kueng et al., 1989) : cellules ont été incubées dans 0,1% de violet cristallisé (Sigma) dilué dans 0,2 M de tampon borate à pH 9,5 pendant 20 minutes à température ambiante, le colorant non incorporé a été éliminé en lavant complètement les puits avec de grandes quantités d'eau et le colorant violet cristallisé incorporé a ensuite été solubilisé par 100 l de 10% d'acide acétique par puits. Les lectures de densité optique ont été effectuées à 595 nm. Des résultats similaires ont été obtenus dans trois expériences séparées (voir Figure 4). Les valeurs indiquées sont des densités optiques moyennes de 6 puits SD.
La protéine NOV utilisée seule n'a pas d'effet significatif sur la prolifération basale (due au sérum seul). En revanche, la protéine NOV inhibe la prolifération induite par le VEGF sur un mode dépendant de la dose. 50% de l'effet maximal est obtenu avec une concentration de 100-200 ng/ml de NOV.
Tests d'adhésion cellulaire Des plaques ELISA à 96 puits (Nunc) ont été recouvertes de protéine VEGF165 selon le protocole décrit dans l'article de Hutchings et al. (2003), diluée dans du tampon carbonate 0,05 M à pH 9,6 pendant la nuit à 4 C. Les sites de liaison non spécifiques ont été bloqués pendant 1 heure à 37 C avec 5 mg/ml de BSA dans du tampon carbonate et lavés deux fois avec du DMEM avant les expériences. Les cellules ont été trypsinisées, lavées et remises en suspension dans 5 ml de DMEM avec 10% de SVF dans un tube de plastique non traité et incubées pendant 1 heure à 37 C avec 10% de CO2. Les cellules ont ensuite été concentrées par centrifugation et remises en suspension dans un mélange DMEM + 0,2% BSA sans sérum et la suspension cellulaire a été traitée pendant 20 minutes (37 C, 10% de CO2) avec la protéine NOV utilisée pour moduler l'adhésion. 40 000 cellules par puits ont été distribuées dans les puits dans un volume de 100 l de DMEM + 0,2% de BSA. Les cellules ont été laissées adhérer à 37 C sous 10% de C02 pendant le temps voulu. Les puits ont été lavés doucement trois fois avec du DMEM pour retirer les cellules non adhérentes et les cellules adhérentes
ont été fixées avec 1% de glutaraldéhyde pendant 20 minutes à température ambiante.
Les cellules fixées ont été quantifiées par incorporation de cristal violet (Kueng et al., 1989) : les cellules ont été incubées avec 0,1% de violet cristallisé (Sigma) dilué dans 0,2 M de tampon borate à pH 9,5 pendant 20 minutes à température ambiante, le colorant non incorporé a été éliminé en lavant complètement les puits avec de grandes quantités d'eau et le colorant cristal violet incorporé a ensuite été solubilisé par 100 l de 10% d'acide acétique par puits (voir Figure 5).
Angiogenèse in vitro Quatre queues de rat ont été dépiautées et disséquées pour récupérer les faisceaux blancs qui sont constitués en majeure partie de collagène de type I. Le collagène est extrait de ces fibres dans 50 ml d'acide acétique 0,5 M froid et agités sur une nuit. Le liquide est ensuite centrifugé à 5000g pendant 40 minutes et le surnageant est récupéré.
L'extraction est refaite une fois avec 20 ml d'acide acétique, les surnageants sont mélangés et puis dialysés contre 1 1 d'acide acétique 0,2 M. La concentration en collagène est ajustée à 3 mg/ml par pesée. La préparation des gels pour l'angiogenèse in vitro s'effectue sur de la glace pour conserver la solution de collagène sous forme liquide. Un ml de collagène (5 mg/ml) est mélangé à 0,5 ml de DMEM 10X (contenant une concentration 10X en antibiotiques et en glutamine), 0,9 ml de H20 stérile et 0,1 ml de bicarbonate de sodium 1M. Une fois le pH ajusté à 7,4, il est ajouté un volume égal de matrigel (Becton Dickinson). Le gel est coulé dans des puits de culture (2 mm d'épaisseur) et incubé à 37 C pour se solidifier. Les cellules sont rajoutées après 15 minutes (100 000 cellules/cm2) sur la surface du gel. Après 2 heures, les différents facteurs solubles sont ajoutés et les cellules sont observées et photographiées après 24 heures.
Production d'anticorps anti-idiotypiques Dans un premier temps on prépare un anticorps neutralisant de NOV en injectant à un animal, notamment une souris, de la protéine NOV mélangée avec de l'adjuvant complet de Freund (1 volume par volume de protéine NOV). On choisira une quantité de NOV comprise entre 1 et 200 g/kg de poids corporel pour immuniser l'animal. La même opération est effectuée à 15 et 30 jours d'intervalle, excepté que l'adjuvant complet est remplacé par de l'adjuvant incomplet. Au jour 40 une saignée est pratiquée, le sérum est séparé et les immunoglobulines sont purifiées par toute méthode de
Parmi les hétérocycles, on peut notamment citer à titre d'exemple les groupes pyridiniques, pyrazoliques, pyrimidiniques, imidazoliques, triazoliques, thiazoliques, pyrroliques, pyrrolidiniques, benzothiazoliques, thiophéniques, benzimidazoliques, benzothiophéniques, benzotriazoliques, pyrazolopyridiniques, pyrazolopyrimidiniques.
Selon l'invention, X et Y représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'azote ou un groupe CR' avec R' représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle comportant 1 à 6 atomes de carbone.
De préférence, X et Y représentent chacun un atome d' azote .
Selon l'invention, R6 représente un groupe mono- ou polycyclique comportant de 5 à 100 atomes de carbone et éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes
et une ou plusieurs insaturations, ledit groupe monoou polycyclique pouvant être substitué(s). De préférence, R6 représente un groupe aryle comportant de 6 à 18 atomes de carbone éventuellement substitué par un ou plusieurs substituants choisis parmi les groupes hydroxyle, cyano, halogène, amino, aryle, alcoxy ou alkyle comportant de 1 à 4 atomes de carbone. A titre d'exemples, R6peut représenter un groupe phénol.
Pour les composés de formule (I), l'indice p peut être égal à 0 ou 1, de préférence est égal à 0.
Lorsque p est égal à 0, Z représente une liaison simple et les composés de formule (I) répondent à la formule suivante : R3 représentant un groupe mono- ou polycyclique tel que défini précédemment, à l'exclusion des groupes aryles.
Lorsque p est égal à 1, les composés de formule (I) sont conformes à la formule suivante :
avec Z représentant un groupe alkylène tel que défini précédemment, ledit groupe alkylène étant substitué par un à cinq groupes R3, lesdits groupes R3 pouvant être identiques ou différents lorsque q est supérieur ou égal à 2.
Selon l'invention, lorsque p est égal à 1, q est de préférence égal à 1, c'est-à-dire que le groupe Z est substitué préférentiellement par un groupe R3.
A titre de composés de formule (I) utilisables dans le cadre de la présente invention, on peut citer le composé suivant particulier répondant à la formule (II) , pour lequel le contre-ion anionique A est tel que défini précédemment, de préférence un ion chlorure, et W est un contre-ion anionique, de préférence un ion chlorure :
Ces colorants peuvent être obtenus par des schémas classiques de synthèse comme ceux décrits dans la demande de brevet FR 1285848.
Les composés de formule (I) peuvent être définis comme des colorants directs, c'est-à-dire ne nécessitent pas de révélation par un agent approprié telle que les colorants d'oxydation (nécessitant d'être révélés par un agent oxydant).
Il s'avère que les colorants de l'invention permettent d'obtenir des colorations intenses sur cheveux naturels ou éventuellement sensibilisés.
Ces colorants permettent également d'obtenir des reflets variés chromatiques ou sombres, très puissants, peu sélectifs et présentant un bon niveau de ténacité.
En particulier, les colorants de l'invention permettent d'obtenir des reflets gris neutres et noirs, qui virent peu au cours du temps.
Fig.5 est une vue en perspective éclatée du motif de Fig.4.
Fig.6 est un schéma illustrant le trajet des rayons lumineux dans un motif de l'écran, à plus grande échelle.
Fig.7 est une vue en perspective de l'avant de l'écran.
Fig.8 est une vue en perspective, sous un autre angle, de l'avant 5 de l'écran muni d'un écran de style.
Fig.9 est une vue en perspective de l'arrière d'une version plane de l'écran, et Fig.10 est une vue en perspective de l'arrière d'une version en trois dimensions de l'écran.
En se reportant à Fig.l des dessins, on peut voir un feu de signalisation A pour véhicule comportant au moins un compartiment C équipé d'une lampe L, avec un système optique S pour former un faisceau, un écran E en avant de la lampe et une glace de sortie G. Le terme "avant " doit être compris en considérant le sens de propagation de la lumière. Ainsi, pour un feu de signalisation situé à l'arrière du véhicule et éclairant vers l'arrière, l'écran E tout en se trouvant en avant de la lampe L suivant le sens de propagation de la lumière, se trouvera derrière cette lampe suivant le sens normal de progression du véhicule. Dans le cas d'un feu de signalisation A situé à l'avant du véhicule, l'écran E se trouve en avant de la lampe L quel que soit le sens considéré.
La glace de sortie G est généralement transparente. Bien que cet élément soit appelé "glace" il peut être réalisé en une matière transparente ou translucide autre que le verre.
Selon la réalisation de Fig.l le système optique S est constitué par une lentille de Fresnel 1 qui recueille le flux lumineux de la source L suivant un angle solide d'amplitude maximale, y compris suivant la direction axiale. Le point milieu du filament se trouve sensiblement au foyer de la lentille 1. La lentille de Fresnel 1 fournit en sortie un faisceau pseudo-collimaté 2 à rayons tels que 2a, 2b parallèles ou sensiblement parallèles. La lentille de Fresnel 1, ou un élément optique équivalent, traversée par le faisceau lumineux constitue un écran primaire.
La source lumineuse peut être de type lampe à filament, la moins couteuse. Mais on peut la remplacer avec une ou plusieurs diodes électroluminescentes, tout particulièrement dans le cas où la source lumineuse est associée à la lentille de Fresnel 1.Utiliser des diodes électroluminescentes comme source lumineuse présente des avantages: on peut alors se permettre d'utiliser des glaces de sortie G cristal , c'est-à-dire non colorées, puisque la couleur du feu peut être obtenue directement par le choix approprié de la diode: on peut obtenir des feux dits en version californienne , c'est-à-dire tous blancs. En outre, les diodes électroluminescentes étant froides et résistant bien à la chaleur comparativement aux lampes à filament classique, on peut diminuer la distance entre les diodes et les écrans, et de fait obtenir des feux très compacts en profondeur.
L'écran E est un écran concentrateur, cristal ou coloré, en une matière transparente ou translucide. Il est constitué par un ensemble de motifs 3 permettant d'assurer en sortie de l'écran, par transmission directe et / ou par réflexion interne, une répartition spatiale de l'énergie lumineuse dans des zones localisées 4 quasiment ponctuelles, ayant l'apparence de pixels ou points élémentaires. L'écran E est situé à l'intérieur du feu A et est éclairé par le flux lumineux 2.
Le motif élémentaire 3 de l'écran E présente la forme d'un entonnoir (Figs.4 et 5) délimité, du côté de la sortie de la lumière, par une surface 5 sensiblement tronconique de révolution d'axe parallèle à celui du faisceau lumineux. L'inclinaison des génératrices de la surface 5 par rapport à l'axe est choisie pour assurer la réflexion totale d'un rayon lumineux tel que 2a qui entre directement dans l'écran E et arrive sur la surface 5. Le rayon 2a subit au moins une autre réflexion interne avant de sortir du motif 3 par la zone 4.
La surface tronconique 5 se raccorde, par sa petite base, à un pion cylindrique coaxial 6 en saillie vers l'avant dont l'extrémité frontale, orthogonale à l'axe de la surface 5, constitue la zone localisée 4. Le motif 3 est délimité, du côté de l'entrée de la lumière, par une cavité de révolution 7 à méridienne en gradins à angle droit, favorisant la réflexion totale.
La cavité 7 (voir Fig.5) comprend une partie centrale cylindrique 7a dont le fond 7b est orthogonal à l'axe du motif et à la direction du faisceau 2, pour permettre une transmission directe comme illustré pour le rayon lumineux 2b sur Fig.l. L'extrémité ouverte vers l'arrière de la partie 7a est suivie par une première surface annulaire 7c orthogonale à l'axe du motif 3, puis par une surface cylindrique 7d de plus grand diamètre que la partie centrale 7a, débouchant sur la face arrière de l'écran E. L'extrémité frontale du pion 6 est orthogonale à l'axe du motif 3 et est avantageusement munie d'au moins un et de préférence de plusieurs 2857434 6 motifs 8, du genre tore, propres à assurer la répartition spatiale de la lumière sortante.
Le diamètre d'entrée De (Fig.6) d'un motif 3 peut être de l'ordre de 20mm, tandis que le diamètre de sortie Ds, correspondant au diamètre du pion cylindrique 6, est de l'ordre de 5mm. Plus généralement, le rapport entre le diamètre d'entrée De et le diamètre de sortie Ds est de l'ordre de quatre (par exemple entre 3.5 et 4.5, notamment entre 3.8 et 4.2). Les motifs 3 peuvent être organisés en nids d'abeille, les centres des motifs de deux rangées successives étant décalés de sorte que l'on obtienne une configuration hexagonale des centres. Le pas des motifs, c'est-à-dire la distance entre deux centres voisins, est alors de 17.3mm avec l'exemple numérique de dimensions du motif 3 précédent. On peut adopter une organisation matricielle des motifs avec les centres alignés sur des rangées et des colonnes orthogonales entre elles; le pas des motifs est alors de 14.1 mm avec le même exemple numérique de dimensions.
Bien entendu, il est possible d'avoir des paramètres différents, en fonction des exigences du style ou de contraintes ponctuelles.
L'écran E peut être de forme circulaire comme illustré sur Fig.7 ou de forme rectangulaire ou autre, en fonction du style recherché. L'écran E est moulé d'une seule pièce, la matière utilisée pouvant être du PMMA (polyméthyl méthacrylate) ou du PC (polycarbonate) selon les contraintes thermiques.
- en supportant la partie arylique de la façon suivante : Y±, X1-, L, Rf et X3 étant tels que définis ci-dessus, - en supportant les parties acrylique et arylique notamment de la façon suivante :
Y±, Xi , L et Rg étant tels que définis ci-dessus.
La présente invention concerne également l'utilisation telle que définie ci-dessus pour la mise en #uvre du couplage de Suzuki, selon l'un des schémas réactionnels suivants : estérification YL-F 0' X - 1 ou amidation 1, L-F1 , X1- solvant (s) solvant(s) réaction de Suzuki avec R3B(OR7)2 clivage par transestérification + ou transamidation Y±L-F Y#L#JbQ , xi- + G < -- Y L t2 ' il- solvant (s)