INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
localisée au niveau intracellulaire. Ces courbes montrent que pour les 2 types de NP-chitosan au ratio NPchitosan :ODN 5 : 1, la fluorescence plus faible au niveau de la membrane basale des cellules que dans la membrane apicale exposée au milieu de culture contenant les ODN-FITC. Pour les 2 types de chitosan au ratio NP-chitosan : ODN (5 : 1), la fluorescence est majoritairement localisée dans la fraction intracellulaire. Ces courbes confirment que les ODN AS pénètrent dans les cellules. L'intensité de fluorescence à l'intérieur des cellules est plus forte quand l'ODN-FITC est vectorisé par les NP-chitosan 5 kDa. La localisation cellulaire de la fluorescence est la même pour les ratios NP-chitosan : ODN (10 : 1) et (20 : 1) que le ratio (5 : 1) pour les 2 types de NP-chitosan.
Exemple IX : Inhibition de la croissance tumorale après administration intratumorale des NP-chitosan à des souris nude qui ont développé la forme sous-cutanée du sarcome d'Ewing.
1) Matériels et Méthodes.
35 souris nude femelles âgées de 6-8 semaines sont irradiées à 5 Grey. 24 heures après l'irradiation, les souris reçoivent par voie sous-cutanée dans le flanc droit 200 l d'une suspension de cellules NIH 3T3 EWS-Fli à 5xlO6 cellules/ml dans du PBS. Les animaux développent une tumeur au bout de 14-21 jours. 4 groupes de 7 animaux sont constitués (groupe PBS, groupe ODN EF3008AS, groupe NPchitosan 5 kDa ODN EF3008AS et groupe NP-chitosan 5kDa ODN contrôle. Les groupes sont randomisés et le traitement débutera lorsque la tumeur aura atteint 2 mm3. Le traitement consiste en 5 administrations intratumorales des produits par intervalle de deux jours. L'efficacité des traitements sera évaluée par la mesure de la croissance tumorale des animaux traités par rapport aux témoins. La croissance
tumorale sera évaluée par le volume tumoral (VT). VT sera calculé comme suit : VT(mm3)= a2xb/2 où a et b représentent respectivement le plus petit et le plus grand diamètre de la tumeur. L'analyse statistique des résultats est réalisée à l'aide du logiciel informatique StatView (Abacus Concepts, Berkeley, USA).
Les résultats d'inhibition de croissance tumorale (figure 14) montrent une inhibition de la croissance lorsque les animaux sont traités avec de l'ODN EF3008AS et les NP-chitosan 5kDa ODN EF3008AS. Cependant on note une inhibition de la croissance plus importante lorsque les animaux sont traités avec les NP-chitosan 5kDa ODN EF3008AS Par rapport aux animaux qui ont reçu de l'ODN EF3008AS. Les animaux témoins qui ont reçu du PBS ou des NPchitosan 5kDa ODN control montrent une faible inhibition de la croissance tumorale.
5. 3. Relation entre structure et fonction de MabA D'après les coordonnées atomiques du modèle de MabA, l'unique tryptophane (W145), situé au niveau de la boucle ss5-[alpha]5, est probablement impliqué dans la poche catalytique. Celleci apparaît très hydrophobe en raison de l'implication du bras C-terminal (riche en résidus hydrophobes) dans la structure de cette poche d'une part, et par la présence, en plus du W 145, de résidus tels que 1147 et F205, d'autre part. Dans les protéines FabG d'autres organismes et spécifiques de substrats à chaîne courte, ces deux derniers résidus sont remplacés par des résidus plus polaires, Asn (pour 1147) et Thr, Gln ou Asn (pour F205). La spécificité de MabA pour des substrats à longue chaîne est très probablement liée au caractère hydrophobe de la poche catalytique qui constitue ainsi un environnement favorable à l'accueil de longues chaînes aliphatiques, une relation structure-fonction entre l'hydrophobicité et la taille de la poche de fixation du substrat et l'affinité pour des molécules à longue chaîne a déjà été mise en évidence pour la protéine InhA (Rozwarski et al., 1999), qui fait également partie des REDs.
La superposition du modèle de MabA avec la structure cristalline de InhA (complexe ternaire InhA-NAD±substrat en C16, (Rozwarski et al., 1999) ; PDB1BVR) révèle que les poches de liaison du substrat des deux protéines présentent des tailles. similaires, en accord avec leur affinité pour des substrats possédant des longueurs de chaîne similaires (C12-C24 pour InhA, C8-C20 pour MabA; [(Rozwarski et al., 1999) ; (Quémard et al., 1995) ]. Toutefois, la poche de liaison de l'énoyl réductase InhA est encore plus hydrophobe que celle de MabA, ce qui pourrait expliquer le léger décalage dans la spécificité de substrats entre InhA (activité spécifique maximale en présence du C16, (Quémard et al., 1995)) et MabA (activité spécifique maximale en présence du C12).
L'alignement de séquences de MabA avec les protéines supports et avec l'ensemble des protéines FabG connues indique que l'extrémité amino-terminale n'est pas conservée ; région "flotte" à l'extérieur de la protéine et ne correspond pas à une structure secondaire définie.
Ceci suggère que ce domaine de la protéine peut tolérer des variations, et qu'il n'est pas important pour la fonction de la protéine. Une donnée expérimentale en accord avec cette proposition est fournie par l'étude de l'activité catalytique de H-MabA. La protéine comporte une étiquette poly-histidine en NH2-terminale dont la présence ne semble pas affecter l'activité catalytique .
5. 4. Structure quaternaire de MabA Du fait de leurs structures secondaire et tertiaire caractéristiques, toutes les protéines RED décrites sont dimériques ou tétramériques (dimère de dimères). La région C-terminale de MabA, correspondant à la boucle [alpha]6-ss7, et au brin ss7, présente une très forte similitude avec la région équivalente des REDs tétramériques connues, en particulier avec celle de PDB2HSD pour laquelle il a été montré que cette région était impliquée dans l'interface dimère-dimère de l'hétérotétramère (Persson et al., 1991). La seconde interface entre deux monomères dans PDB2HSD implique les hélices a4 et a5. La conservation dans MabA de l'extrémité C-terminale et la présence d'acides aminés hydrophobes à la surface des hélices [alpha]4 et a5 suggèrent que MabA est tétramérique. Ces résultats sont en accord avec l'analyse par chromatographie d'exclusion, suggérant un équilibre entre les formes dimérique et tétramérique de MabA.
L'analyse des interfaces monomère-monomère et dimère-dimère dans un modèle tétramérique de MabA pourrait permettre de renforcer cette conclusion.
5. 5. Interaction avec des antibiotiques ""c'>C- Il a été montré que la forme active de l'INH qui inhibe la protéine InhA serait un radical ou anion isonicotinoyl-NAD (Rozwarski et al., 1998). Ces auteurs ont suggéré que l'adduit isonicotinoyl-NAD se forme dans le site catalytique de InhA, alors que Wilming et Johnsson ont montré que sa formation peut se faire en absence de l'enzyme (Wilming & Johnsson, 1999). Ainsi, un doute subsiste quant au mode d'action exact de l'INH sur InhA in vivo. La superposition du modèle de MabA avec la structure du complexe binaire InhA-isonicotinoylNAD (PDB1ZID) montre qu'il n'y a pas d'incompatibilité pour la fixation, dans le site actif de MabA, de molécules telles que l'isoniazide ou l'éthionamide. De même que pour la protéine InhA, l'adduit isonicotinoyl-NADP pourrait a priori se fixer sur MabA, une fois qu'il est formé.
Toutefois, dans le cas où l'adduit se formerait au sein du site catalytique, on ne peut prévoir si l'isoniazide aurait une orientation adéquate et pourrait interagir avec le cofacteur NADPH. En tous les cas, une inhibition de l'activité de MabA par l'INH doit être vérifiée biochimiquement, car le modèle ne permet pas de renseigner de façon précise sur la topologie des chaînes latérales du site actif.
6. INHIBITION DE L'ACTIVITÉ DE MABA Nous avons testé l'effet de l'isoniazide sur l'activité -cétoacyl réductase de MabA en adoptant des conditions expérimentales similaires à celles permettant d'observer une inhibition de l'activité de InhA. La protéine MabA (150 nM) est préincubée 2 heures en présence de 100 M ou 2 mM isoniazide, 100 M NADPH et 1 M MnCl2. En présence de 100 M en INH, l'activité de MabA, mise en évidence en présence d'acétoacétyl-CoA, est inhibée de 44 ~ 3% par rapport au témoin sans INH et l'addition de 2 mM d'isoniazide, entraîne une inhibition de 62 + 6%. Le fait que l'on n'observe pas d'inhibition totale de l'activité de MabA même en présence de 2 mM isoniazide pourrait être expliquée par une oxydation très lente de l'isoniazide par les ions Mn3+ dans les conditions utilisées (en absence de catalyseur tel que KatG), et donc une concentration en forme active de l'antibiotique qui n'est pas proportionnelle à la concentration de départ en isoniazide. Cette explication suppose que MabA est inhibée par un mécanisme similaire à celui décrit pour InhA. Rappelons que le mécanisme d'inhibition de la protéine InhA par l'isoniazide nécessite au minimum la présence du cofacteur NADH, d'ions Mn2+ et de l'oxygène moléculaire.
Les ions Mn2+ seraient oxydés en Mn3+, qui, à leur tour catalysent l'oxydation de l'isoniazide.
Ainsi, nous avons testé l'effet de l'absence de MnCl2 ou de NADPH sur l'inhibition de MabA par l'INH. En absence de MnCl2dans la réaction, une baisse non significative de l'activité de l'enzyme est observée, indiquant que les ions Mn2+ sont nécessaires pour obtenir un effet de l'INH. La détermination de l'implication du NADPH dans le processus d'inhibition est plus délicate à réaliser, car la préincubation de la protéine MabA en absence de ce cofacteur entraîne une baisse importante (-74%) de l'activité après 2h de préincubation sans antibiotique. On n'a donc pas pu évaluer l'implication du NADPH dans l'inhibition par l'isoniazide.
Nos résultats montrent que l'activité de la protéine MabA est inhibée par l'isoniazide, et suggèrent que le mécanisme d'action de cet antibiotique sur MabA ferait intervenir les ions Mn2+.
Etant donnée l'homologie de structure et de fonction des deux protéines, il est probable que le mécanisme d'inhibition soit analogue à celui de InhA, passant par la formation d'un adduit isonicotinoyl-NADP+.
Chez les mycobactéries, une mutation ou une surexpression du gène inhA entraîne une résistance croisée aux deux antituberculeux isoniazide et éthionamide (ETH). L'éthionamide est probablement également une prodrogue puisque l'inhibition de la protéine InhA par cet
antibiotique sous sa forme native n'a pas été observée in vitro. Cependant, le mode d'activation de l'ETH n'est pas connu. Nous avons néanmoins testé l'effet de l'éthionamide sur l'activité de InhA, dans les conditions expérimentales d'inhibition par l'INH, en présence de MnCl2 et de NADH. En présence de 100 M d'ETH, l'activité de InhA est inchangée. Le même résultat est obtenu sur MabA. Il n'a pas été possible de tester des concentrations supérieures en antibiotique du fait de la forte absorbance qu'il présente dans la région de longueur d'onde utilisée pour les tests enzymatiques. Néanmoins, les conditions d'oxydation de l'INH in vitro, adoptées pour le test de l'éthionamide, ne semblent pas celles requises pour l'activation de l'ETH. Le fait que la catalase-peroxydase KatG, qui accélère l'oxydation de l'isoniazide ne soit pas l'activateur de l'ETH [(Johnsson et al., 1995) ; (Basso et al., 1996) ] est en accord avec cette conclusion. D'autre part, si une oxydation de l'ETH est requise pour son action sur sa (ses) cibles (s), d'une fonction thioamide s'avère plus difficile que celle d'une fonction hydrazide (INH) et devrait nécessiter un oxydant plus fort que les ions Mn3+.
7. CONCLUSION ET DISCUSSION L'étude de la structure tridimensionnelle de MabA par modélisation moléculaire, a permis de montrer que la protéine présente un seul domaine, avec une structure secondaire de type [alpha]/ss, et qu'elle appartient à la superfamille structurale des RED (réductases/épimérases/deshydrogénases). La protéine MabA possède le motif spécifique des protéines fixant le NADP (H) une poche de fixation du substrat dont la taille et l'hydrophobicité favoriseraient l'accueil de -cétoesters à longue chaîne. Ces données structurales fournies par le modèle de MabA sont en accord avec les résultats biochimiques obtenus précédemment. Le modèle de MabA indique que le résidu tryptophane (Trp), situé au niveau de la boucle ss5-[alpha]5, serait impliqué dans la poche de fixation du substrat. Grâce à l'unicité de ce résidu Trp, des expériences de spectroscôpie en fluorescence ont pu être réalisées. Elles ont permis de valider le modèle de MabA, confirmant d'une part, l'implication du Trp et d'au moins une des deux Met de l'extrémité C-terminale dans la poche de fixation du substrat, et la spécificité de MabA pour des substrats à longue chaîne, d'autre part. La superposition du modèle de MabA avec la structure cristalline de InhA (en complexe avec NAD+ et le substrat en C16, (Rozwarski et al., 1999) révèle que les deux protéines présentent des sites de liaison du substrat de taille équivalente et plus hydrophobes que leurs homologues d'autres organismes, impliqués
L'invention a encore pour objet l'utilisation d'une cire ayant un collant supérieur ou égal à 0,7 N. s et une dureté inférieure ou égale à 3,5 MPa, dans une composition de mascara, pour obtenir un maquillage des cils homogène et/ou lisse et/ou épais et/ou obtenir un mascara stable et/ou une bonne séparation des cils maquillés.
On entend par milieu cosmétiquement acceptable un milieu cosmétique compatible avec les cils ou la peau.
La cire présente dans la composition selon l'invention a un collant supérieur ou égal à 0,7 N. s, notamment allant de 0,7 N. s à 30 N. s, de préférence supérieur ou égal à 1 N. s , notamment allant de 1 N. s à 20 N. s, et préférentiellement supérieur
ou égal à 2 N. s, notamment allant de 2 N. s à 10 N. s, et plus préférentiellement supérieur ou égal à 2 N. s, notamment allant de 2 N. s à 5 N.s.
La cire collante a une dureté inférieure ou égale à 3,5 MPa, en particulier allant de 0,01 à 3,5 MPa, de préférence allant de 0,05 MPa à 3 MPa, et plus préférentiellement allant de 0,1 MPa à 2,5 MPa.
En portant la cire à sa température de fusion, il est possible de la rendre miscible aux huiles et de former un mélange homogène microscopiquement, mais en ramenant la température du mélange à la température ambiante, on obtient une recristallisation de la cire dans les huiles du mélange.
Le collant de la cire est mesuré à 20 C à l'aide du texturomètre vendu sous la dénomination TA-TX2i par la société RHEO, équipé d'un mobile en polymère acrylique en forme de cône formant un angle de 45 , en mesurant l'évolution de la force (force de compression ou force d'étirement) (F) en fonction du temps, pendant l'opération suivante : Le mobile est déplacé à la vitesse de 0,5 mm /s puis pénètre dans la cire jusqu'à une profondeur de pénétration de 2 mm. Lorsque le mobile a pénétré dans la cire à la profondeur de 2 mm, le mobile est maintenu fixe pendant 1 seconde (correspondant au temps de relaxation) puis est retiré à la vitesse de 0,5 mm/s. Pendant le temps de relaxation, la force (force de compression) décroît fortement jusqu'à devenir nulle puis, lors du retrait du mobile, la force (force d'étirement) devient négative pour ensuite croître à nouveau vers la valeur 0. Le collant correspond à l'intégrale de la courbe de la force en fonction du temps pour la partie de la courbe correspondant aux valeurs négatives de la force (force d'étirement). La valeur du collant est exprimée en N.s.
Pour effectuer la mesure du collant de la cire, la cire est fondue à une température égale au point de fusion de la cire + 10 C. La cire fondue est coulée dans un récipient de 25 mm de diamètre et de 20 mm de profondeur. La cire est recristallisée à température ambiante (25 C) pendant 24 heures de telle sorte que la surface
de la cire soit plane et lisse, puis la cire est conservée pendant au moins 1 heure à 20 C avant d'effectuer la mesure du collant.
La dureté de la cire est déterminée par la mesure de la force en compression mesurée à 20 C à l'aide du texturomètre vendu sous la dénomination TA-XT2i par la société RHEO, équipé d'un cylindre en inox d'un diamètre de 2 mm se déplaçant à la vitesse de mesure de 0,1 mm/s, et pénétrant dans la cire à une profondeur de pénétration de 0,3 mm. Pour effectuer la mesure de dureté, la cire est fondue à une température égale au point de fusion de la cire + 20 C. La cire fondue est coulée dans un récipient de 30 mm de diamètre et de 20 mm de profondeur. La cire est recristallisée à température ambiante (25 C) pendant 24 heures, puis la cire est conservée pendant au moins 1 heure à 20 C avant d'effectuer la mesure de dureté. La valeur de la dureté est la force de compression maximale mesurée divisée par la surface du cylindre du texturomètre en contact avec la cire.
Comme cire collante, on peut utiliser un (hydroxystéaryloxy)stéarate d'alkyle en C2o-C4o (le groupe alkyle comprenant de 20 à 40 atomes de carbone), seul ou en mélange, en particulier un 12-(12'-hydroxystéaryloxy)stéarate d'alkyle en C20-C40, de formule (1) : dans laquelle n est un entier allant de 18 à 38, ou un mélange de composés de formule (1).
Aussi, l'invention a également pour objet une composition de mascara comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, un (hydroxystéaryloxy)stéarate d'alkyle en C20-C40, en particulier un 12-(12'hydroxystéaryloxy)stéarate d'alkyle en C20-C40, notamment de formule (I) comme décrit précédemment.
La cire collante peut être présente dans la composition de mascara selon l'invention en une teneur allant de 0,5 % à 60 % en poids, par rapport au poids total de la composition, de préférence allant de 1 % à 50 % en poids, et plus préférentiellement allant de 10 % à 40 % en poids.
Le disaccharide donneur 26 (29) est, quant à lui, préparé par isomérisation de l'allyle en 1-propényle par un catalyseur à base d'iridium, (30), puis hydrolyse de l'éther d'énol, ainsi formé, catalysé par des sels de mercure, ce qui permet la libération de la position anomérique, qui est ensuite activée sous forme de trichloroacétimidate (schéma 9).
Schéma 9 Le couplage du disaccharide accepteur 25 et du disaccharide donneur 26 à -40 C, en présence de TBDMSOTf, conduit avec un excellent rendement au tétrasaccharide 27, avec une totale stéréosélectivité alpha. En appliquant au tétrasaccharide 27 les mêmes opérations qu'au disaccharide, on peut préparer, avec de très bons rendements, le tétrasaccharide accepteur 28 et le tétrasaccharide donneur 29 (schéma 10) qui permettent d'obtenir les hexa et octasaccharides 30 et 31. Cette méthodologie s'étend sans problème à la préparation d'un hexadécasaccharide ou d'un dodécasaccharide.
4. Préparation des néoconjugués.
Les oligosaccharides protégés sont transformés en composés partiellement déprotégés et solubles dans l'eau par : désacétylation, réduction de la fonction azido, sulfatation, puis saponification (schéma 11).
Schéma 11 On obtient ainsi les composés 32-34, solubles dans l'eau et prêts pour le couplage aux bisthioPEGs. Sous irradiation UV d'une lampe moyenne pression, le produit attendu se forme, mais accompagné de produits secondaires, issus vraisemblablement d'une oxydation des groupements benzyles que l'on élimine par chromatographie en phase inverse C18. La déprotection finale des néoglycoconjugués
est réalisée par hydrogénolyse, sur hydroxyde de palladium sur charbon en présence de tampon phosphate pH 7, après oxydation des thioéthers en sulfone pour éviter l'empoisonnement du catalyseur (schéma 12).
Schéma 12 Les produits ainsi synthétisés ont été testés pour leur capacité à se lier à l'IFNy.
L'utilisation d'un système d'analyse d'interaction moléculaire, en temps réel (BIAcore) offre la
possibilité d'identifier et de quantifier très rapidement les affinités existant entre différentes molécules.
Cet appareil utilise un système de détection optique, le phénomène de résonance plasmonique de surface, pour mesurer la concentration de molécules ayant réagi à la surface d'un biocapteur ("sensor chip"). On immobilise de l'héparine biotinilée sur une "sensor chip" préalablement activée à la streptavidine. Il est alors possible de mesurer l'interaction d'IFNy, injecté en flux continu à la surface de ce capteur, avec l'héparine immobilisée.
L'interaction entre l'héparine et l'IFNy entraîne une modification de masse à la surface du capteur, qui est enregistrée en fonction du temps. Dans une deuxième étape, l'IFNy est préalablement incubé avec les différents produits synthétisés, puis les complexes sont injectés à la surface du biocapteur. On mesure alors la capacité des produits testés à inhiber l'interaction l'IFNy/héparine.
Les résultats sont exposés sur la figure 2, et indiquent qu'une molécule contenant un bras espaceur de 5 nm (50 A), reliant deux octasaccharides, possède une très forte affinité pour la cytokine.
Il en est de même pour les molécules contenant un bras espaceur de 33 A et de 114 A qui ont aussi la capacité d'interagir avec l'IFNy, mais avec des affinités, cependant moindres.
L'invention va maintenant être décrite en référence à l'exemple suivant, donné à titre illustratif et non limitatif.
Exemple 1 Dans cet exemple, on décrit la synthèse de composés selon l'invention : à savoir, de néoglycoconjugués fixant l'interféron, dans lesquels le groupe ou bras espaceur est issu de poly(éthylène glycol)s de longueurs variables et les deux oligosaccharides d'extrémités sont constitués par des disaccharides trisulfatés. Le produit de départ de la synthèse est le composé 8[alpha], préparé selon LUBINEAU A. ; ESCHER S. ; ALAIS J. ; BONNAFFE D., Tetrahedron Lett. 1997,38, 4 087 - 4 090, c'est-à-dire selon le mode opératoire 1 suivant : Mode opératoire 1 : Le chlorydrate de glucosamine commercial est peracétylé dans un mélange d'anhydride acétique (20 équivalents) et de pyridine (30 équivalents). Après évaporation des réactifs et coévaporation par du toluène, le mélange est cristallisé dans un mélange acétate d'éthyle-éther de pétrole pour conduire à la glucosamine peracétylée avec un rendement de 90%. Les cristaux récupérés sont traités par 1,1 équivalent d'acétate d'hydrazine dans le THF anydre (concentration 0,3 M) pendant 20h à 20 C. Le THF est alors évaporé à température ambiante sous pression réduite, le résidu coévaporé par du toluène et l'huile résiduelle directement chromatographiée sur gel de silice par un mélange AcOEt/Ether de pétrole/CH2Cl2 (8/1/1 à 8/0/2). Le composé libre en position anomérique est obtenu avec 75% de rendement. Il est ensuite solubilisé dans le volume nécesaire de CH2C12 pour avoir une concentration de 0,5 M et ajouté goutte-à-goutte à un mélange de bromure de tétrabutylammonium (2 eq.), de NaH
(1,5 eq) et de bromure d'allyle (20 eq.) refroidit à -20 C.
Les longerons l.A, l.B, l.C sont réalisés au moyen
de procédés de fabrication connus en eux-mêmes pour la construction d'ouvrages en béton armé et en béton précontraint.
La construction d'un ouvrage de franchissement conformément à l'invention débute par la construction de culées 15 ici réalisées en béton armé directement sur le site.
Après solidification des culées 15, les longerons l.A, l.B, l.C sont disposées sur les culées 15.
Les deux longerons centraux longs l.B sont tout d'abord disposés sur les culées 15 sur lesquelles ils reposent par les extrémités de leur semelle 4. Les longerons l.B sont espacés l'un de l'autre de manière à pouvoir disposer entre ceux-ci les deux longerons centraux courts l.C. Les deux longerons centraux courts l.C ont ici une longueur inférieure à la moitié de celle des longerons l.A et l.B. Les deux longerons centraux courts l.C sont montés dans le prolongement l'un de l'autre pour laisser entre leurs extrémités 12 une ouverture 16. Les deux longerons centraux courts l.C reposent chacun par leur extrémité 11 sur une des culées 15 et par les éléments d'appui 13 de leur extrémité 12 sur les zones 14 des portions 5 de semelle 4 des longerons centraux longs l.B.
Les longerons de rive l.A sont ensuite disposés de part et d'autre des longerons centraux longs l.B.
Les longerons l.A, l.B, l.C sont accolés les uns aux autres par leurs faces d'accostage 6 (les longerons de rive l.A sont donc disposés de manière que la face d'accostage 6 de l'un soit orientée vers la face d'accostage 6 de l'autre).
Les fers d'attelage transversaux 10 de chaque longeron l.A, l.B, l.C sont agencés de manière qu'ils puissent être insérés entre les fers d'attelage transversaux 10 du ou des longerons adjacents. La longueur en saillie des fers d'attelage transversaux 10, la section