INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
D'ores et déjà, il a été établi que le disfonctionnement de la voie de dégradation des protéines ubiquitine-protéasome est clairement impliqué dans de nombreuses pathologies de nature extrêmement variée : les cancers, les maladies génétiques, la maladie de parkinson, la maladie d'Alzheimer, les
syndromes inflammatoires et les infections virales. En ce qui concerne plus spécifiquement les complexes SCF, on connaît aujourd'hui des exemples clairs de leurs implications dans des pathologies humaines. Ainsi que toute mutation affectant la phosphorylation des protéines cible reconnues par la protéine p-TrcP, empêche leur reconnaissance par le complexe SCF et conduit à leur stabilisation. De telles mutations ont été identifiées et caractérisées dans le cas de la sscaténine : ces mutations affectent soit la p-caténine elle-même, soit la voie de signalisation (APC-GSK3) qui induit la phosphorylation de la ss-caténine. Dans les deux cas, ces mutations se traduisent par une transformation tumorale et sont retrouvées associées à des phénomènes de tumorigénèse, cancer colorectal principalement, mais aussi mélanome, hépatocarcinome,.... A l'inverse, la dégradation excessive de la sscaténine dans les neurones a été mise en cause dans la maladie d'Alzheimer, et est impliquée dans la mort neuronale par apoptose caractéristique de cette pathologie. Le complexe SCFss-TrcP est également directement impliqué dans la réponse inflammatoire et toutes ses manifestations pathologiques.
La caractérisation d'agents chimiques capables de moduler l'activité de reconnaissance et d'ubiquitination des complexes SCF est donc susceptible de permettre la mise au point de nouvelles stratégies thérapeutiques humaines dans de nombreuses aires thérapeutiques comme le cancer, l'inflammation, les infections virales, bactériennes et fongiques, les syndromes inflammatoires, les pathologies cardio-vasculaires et neuro-dégénératives.
Il existe donc un besoin dans l'état de la technique pour l'isolement et la caractérisation de nouvelles protéines à boîte F, qui constituent des cibles privilégiées de composés thérapeutiques utilisables pour la prévention ou le traitement des pathologies dans lesquelles ces protéines sont impliquées, notamment les pathologies indiquées ci-dessus.
SOMMAIRE DE L'INVENTION La présente invention a pour objet de nouvelles protéines Fbox et de nouveaux substrats des protéines Fbox. Elle a pour objet les méthodes de criblage mise au point pour identifier les substrats des nouvelles protéines Fbox et pour identifier les petites molécules et drogues qui modulent l'interaction et/ou l'activité des protéines Fbox et de leurs substrats. Les méthodes de criblages de cette invention peuvent être utilisées pour identifier des agents thérapeutiques qui pourraient être utilisés dans des protocoles et pour le traitement de diverses
pathologies, incluant cancer, inflammations, pathologies cardio-vasculaires, maladies neuro-dégénératives, infections virales, bactériennes et fongiques.
Cette invention englobe l'utilisation des nucléotides codant ces nouvelles protéines Fbox, les protéines Fbox et les peptides dérivants de ces protéines, les vecteurs permettant l'expression de ces protéines chez des bactéries, champignons, insectes, plantes et organismes mammifères ainsi que les animaux chez lesquels les gènes codant ces protéines Fbox auront été inactivés.
Un premier objet de l'invention consiste en un acide nucléique codant pour un polypeptide à boîte F choisi parmi les séquences d'acides aminés comprenant les séquences SEQ ID N'l à SEQ ID N 17, ou pour un fragment ou un variant du polypeptide choisi parmi les séquences d'acides aminés comprenant les séquences SEQ ID N'l à SEQ ID N 17.
Selon l'invention, le fragment du polypeptide à boîte F comprend ou consiste en le peptide définissant la boîte F stricto sensu d'un polypeptide choisi parmi les séquences d'acides aminés comprenant les séquences SEQ ID N'l à SEQ ID N017.
Selon l'invention, un fragment du polypeptide à boîte F comprend ou consiste en un polypeptide choisi parmi les séquences d'acides aminés comprenant les séquences SEQ ID N01 à SEQ ID ? 17 dans lequel a été délétée la séquence en acides aminés de la boîte F stricto sensu.
Un acide nucléique tel que défini ci-dessus peut en outre être caractérisé en ce que le polypeptide à boîte F, un fragment ou un variant de ce polypeptide est fusionné avec un polypeptide hétérologue, par exemple un marqueur détectable ou la protéine GAL4.
Des patins antiderapants sont posés sur ces plaques
Un boitier en aluminium (5) fixe par vis (14) au caisson (1).
Ce boitier contient l'axe de rotation du mouvement des pédales-axe (15)-Figure 5.
L'axe (15) tourne librement à l'interieur des cuvettes filetées (16) Le boitier est fileté pour recevoir les cuvettes filetees (16). Les cuvettes filetées sont bloquées sur le boitier par la rondelle filetée (17) Figure 5.
Le filetage de la cuvette droite est un filetage à droite-le filetage de la cuvette gauche est a gauche.
L'axe de rotation (15) Figure 6 a deux evidements à droite et à gauche, opposés. Ces evidements servent de logements au clavettes boulonnées (7) et (7b) Figure 6 Les cuvettes filetées (16) Figure 7 contiennent les roulements à billes sur lesquels tourne 1'axe (15) La rondelle de serrage (17) Figure 7 est vissée sur la cuvette filetée (16) gauche. Le systeme de fixation des manivelles des pédales Ce systeme comprend : deux pieces de laison une à droite (6) figure 8, et une a gauche (9) Ces deux pieces de liaison sont fixées à l'axe (15 par les clavettes boulonnées (7) et (10).
Les deux pièces de liaison ont une encoche où se fixent les manivelles porte pédales.
Les encoches sont inversées (entre la droite et la gauche)
C) Système de fixation des manivelles porte pedales Les d'aux pieces de liaison (6) et (9) figure 8 de forme speciale sont percees au diametre de l'axe (15) où elles sont fixées tres facilement par les deux clavettes boulonnées (7) et (10) figure 8.
Le détail de la piece de liaison (6) est dans la figure 9. La piece de liaison gauche (9) de Figure 8, n'est pas dessinée car exactement similaire en fabrication que la piece (6).
La piece de liaison (6) figure 9 presente donc un evidement perce pour permettre de rentrer dans l'axe (15) La piece (6) est percée au niveau de l'evidement de l'axe (15)-voir Figure 6-pour permettre le logement de la clavette boulonnée (7) Figure 9 Ceci assure une parfaite liaison avec l'axe (15) et ce systeme permet un montage-démontage très facile : on peut serrer les boulons de clavette (7) à la main.
La piece de liaison (6) Figure 9 présente une encoche (l8) où va se loger 1'équerre de la manivelle porte pédale (8) figure 9.
La piece (6) est percée à son sommet pour permettre le passage de la vis (19) figure 9 de liaison avec la manivelle porte pedale (8).
L'ajustement de l'encoche (18) Figure 9 est precis avec l'equerre de la manivelle (8) de façon à placer tres facilement la. vis (19) Figure 9 Tout ceci a été étudié pour réaliser des jonctions à montage - démontage tres facile.
C) Systeme de fixation des manivelles porte pédales La manivelle porte pédale droite (8) figure 10 est en forme d'equerre, sa section est carrée de façon à pénétrer parfaitement dans l'encoche (18) de la piece (6) figure 9.
La manivelle est percée au sommet et filetée pour la fixation de la vis (19) figure 10, qui sert de liaison avec la piece (6) figure 9.
Dans l'invention, les plots peuvent avoir une section transversale circulaire ou elliptique parallèlement au plan du réseau, la couche mince formée latéralement sur chaque plot ayant ainsi un gradient latéral d'épaisseur, et l'on utilise ce gradient pour induire un axe d'anisotropie magnétique perpendiculaire au plan du réseau.
Dans l'invention, on peut former en outre une couche protectrice sur toute la surface du réseau puis effectuer un planage de cette surface ainsi pourvue de la couche protectrice, afin d'éliminer tout relief.
Certes, la technique de dépôt de matière sous incidence oblique est connue mais n'a jamais été utilisée pour la fabrication de structures du genre de celles qui font l'objet de la présente invention.
Dans le domaine des structures magnétiques, le dépôt sous incidence oblique a seulement été utilisé pour déposer un matériau magnétique sur le flanc d'une unique ligne en silicium gravé. A ce sujet, on se reportera au document suivant : [2] K. Matsuyama, S. Komatsu, Y. Nozaki, Magnetic properties of nanostructures wires deposited on the side edge of patterned thin film , Journal of Applied Physics 87,4724 (2000).
BRÈVE DESCRIPTION DES DESSINS La présente invention sera mieux comprise à la lecture de la description d'exemples de réalisation donnés ci-après, à titre purement indicatif et nullement limitatif, en faisant référence aux dessins annexés sur lesquels : - la figure 1 est une vue en perspective schématique et partielle d'un mode de réalisation particulier du support magnétique de stockage d'informations, objet de l'invention, les figures 2A et 2B illustrent schématiquement des procédés de fabrication de ce support magnétique,
- la figure 3 est une vue de dessus schématique d'un plot à section circulaire faisant partie d'un support magnétique conforme à l'invention, - la figure 4 est une représentation schématique de différents cas considérés pour le calcul de la composante, suivant un axe normal au plan d'un réseau de plots d'un support conforme à l'invention, du champ magnétique existant au-dessus de ce réseau, et - la figure 5 montre les variations de cette composante en fonction de la distance au centre d'un plot, dans ces différents cas considérés.
EXPOSÉ DÉTAILLÉ DE MODES DE RÉALISATION PARTICULIERS La figure 1 est une vue en perspective schématique et partielle d'un mode de réalisation particulier d'une mémoire magnétique de stockage d'informations, qui est faite à partir d'un réseau de plots submicroniques 2.
Ces plots 2 sont par exemple en silicium, en verre, en aluminium ou en résine polymère durcie.
Les dimensions des plots 2 ainsi que les espaces entre plots adjacents sont dans l'intervalle allant de 10 nm à 500 nm.
Dans cet exemple le réseau de plots comprend des lignes et des colonnes de plots parallélépipédiques, l'espace entre deux lignes adjacentes est noté el, l'espace entre deux colonnes adjacentes est noté e2, chaque plot a une hauteur h, une profondeur dl, comptée parallèlement aux colonnes, et une largeur d2, comptée parallèlement aux lignes, et chacune de ces dimensions el, e2, h, dl et d2 appartient à l'intervalle mentionné plus haut. Si l'on
utilisait des plots à section transversale circulaire (respectivement elliptique), le diamètre (respectivement le grand axe et le petit axe) de ces plots appartiendrait à cet intervalle.
Sur chacun des plots 2 on a déposé une couche mince unique, faite d'un matériau magnétique classique (par exemple un matériau ferromagnétique), sous incidence oblique.
Un but de la présente invention est la réalisation d'un dépôt magnétique uniquement sur un flanc ou une pluralité de flancs des plots. Dans l'exemple de la figure 1, ce dépôt magnétique 4 est formé sur un seul flanc des plots 2.
On définit un repère (x, y, z) dans lequel chacun des axes x, y, z est perpendiculaire aux deux autres. Le plan (x, y) est le plan du réseau, c'est-àdire le plan de la surface 6 du substrat 8 à partir duquel on a formé les plots 2. Les lignes du réseau sont parallèles à l'axe y et ses colonnes, à l'axe x.
L'axe z est perpendiculaire à ce plan (x, y) et le plan (x, z) est le plan d'incidence du flux de matériau à partir duquel on a formé le dépôt 4 sur chaque plot, c'est-à-dire le plan auquel ce flux est parallèle.
Il en résulte que l'aimantation du dépôt 4 formé sur le flanc de chacun des plots 2 est parallèle au plan (y, z) dans le cas d'un matériau magnétique à aimantation planaire. Cette aimantation, notée M sur la figure 1, peut être dirigée selon l'axe y ou selon l'axe z.
Distribution régionale des sites de liaison du [3H] Xanthurénate.
(Coupes sériées de 20 um de cerveau de Rat Wistar).
Structure cérébrale Valeur densitométrique intégrée nCi/g t SD (n=3) Noyau caudé partie latérale 195 t 3. 1 1942. 6 t 30.3 252.0 t 4.0 fmol/mg Substance noire compacte 126 t 2. 0 806. 5 t 13. 8 104. 6t 1. 8 (Ag) Noyau interpédonculaire 127t 4. 3 822. 9 t 17.3 106. 8 t 2.2
Noyau amygdale centrale 194 t 4.3 1921. 3 t 42.9 249. 4 t 5.6 Hippocampe dorsal 203 t 9. 8 2068 t 41. 1 268. 5 t 5.3 Hippocampe ventral 128 t 2. 1 847. 5 t 16. 9 110. 0 t 2.2 Noyau thalamus médiodorsal 172 t 3. 5 1568. 8 t 39. 3 203. 7 t 5.1 Noyau thalamus median post. 180 t 7. 5 1701 t 69. 9 220. 9 t 9.0 Hypothalamus dorsomédian 180 t 6. 3 1700 t 73.2 220. 7 t 9.5 Aire tegmenta) e ventra) e (Aie) 119t 7. 5 691. 8 t 43. 6 89. 8 t 5.6 Noyau accumnbens latéral 193 t 10 1904. 9 t 99.0 247. 3 t 12.8 Noyau raphé dorsal (B7) 121 t 10 724. 5 t 59. 8 94. 1 t 7.7 Noyau raphé médian (Bg) 110 t 2. 0 544. 2 t 16. 9 70. 6 t 2.2 Lobules cérébelleux 180t 3. 5 1740. 9 t 58. 5 226. 0 t 7.6 Cortex pariétal 184 t 1.4 1757.3 t 23.3 228.2 t 3.0 Cortex temporal 115 t 7. 7 634. 4 t 52. 3 82. 4 t 6.8 Cortex cingulaire partie ant. 180 t 5.2 1691. 8 t 49.5 219. 7 t 6.4 Cortex préfrontal 180 t 11. 5 1691. 8 t 108.2 219. 7 t 14.0 Gris périaqueducal 125 t 5. 65 724. 5 t 40. 0 94. 1 t 5.2 Cortex pynforme 186 t 7. 7 1798. 3t 91. 7 233.5 t 11.9 Bulbes olfactifs 181 t 7. 0 1703 t 81. 5 221. 2 t 10.6 Medulla oblongata 149 t 4. 9 1249. 1 t 50. 7 162. 2 t 6.6 Globus pallidus 163 t 7. 7 1413. 2 t 67. 2 183. 5 t 8.7 Noyau septum latéral 175 t 6.1 1609 t 55. 7 208. 9 t 7.2 Noyau septum médian 14714. 9 1150 t 116. 3 149. 4 t 15.1 Cortex occipital 152 t 51 1232 t 291. 7 160. 0 t 37.8 5. ETUDE DE LA MODULATION PAR LE XA DE L'ACTIVITE DOPAMINERGIQUE NIGRO-STRIEE ET MESO-CORTICO- LIMBIQUE.
Matériels et Méthodes Animaux : Rats males adultes Wistar pesant 250 à 275 g, hebergés par deux dans des cages plastiques avec une illumination standard de 7h à 19 heures et ayant un accès) libre à l'eau et à la nourriture. Les études sur ces animaux ont été menées en accord avec les réglements du Conseil des Communautés Européennes du 24 novembre 1986 (86/609/EEC).
. Produits chimiques : XA ; 6-OHDA hydrobromide ; 2,4, 5- trihydroxyphenylethylamine et desipramine ont été obtenus chez Sigma). Le NCS-486 à été fabriqué par le Laboratoire de Pharmacochimie du CNRS, Strasbourg.
Protocole chirurgical : Une canule en !, avec une extrémité de 4 mm, (CMA 12, Carnegie, Suéde) a été utilisée pour les expériences, . La membrane de dialyse, de diamètre 500 um, est constituée de polycarbonate-polyether avec un seuil d'arrêt à 20 Kda. Le guide de sonde est implanté dans le CPF sous repaire stéréotaxique, les animaux étant anesthésiés par du chlorhydrate de kétamine (150 mg/kg/i. p.) Lésions à la 6-hydroxydopamine des noyaux dopaminergiques A9 et A10 Les animaux sont anesthésiés à la Kétamine (100 mg/kg i. p. ). La 6-OHDA est dissoute dans du sérum physiologique contenant 0.01% d'acide ascorbique à la concentration de 4 ug/ul. Un ul sont injectés en deux minutes, sous repaires stéreotaxiques, à l'aide d'une seringue de Hamilton dans A9/A10. Après injections, on attend la diffusion de la toxine pendant une minute. Les neurones noradrénergiques sont protégés par l'injection préalable à l'animal de desipramine 25 mg/kg i. p., 45 minutes avant la 6-OHDA.
4 semaines après, les rats sont administrés par 1 mg/kg d'apomorphine en injection sous-cutanée et le nombre de tours controlatéraux effectués 15 minutes après l'injection, sont enregistrés.
Les rats lésés ont effectué 130 45 tours/15 minutes. Six semaines après l'injection locale de 6-OHDA dans les nayaux dopaminergiques A9/A10 droits, les rats présentant une bonne altération fonctionnelle ont été sélectionnés et implantés pour des études en microdialyse.
Protocole de microdialyse Les expériences ont été réalisées sur des rats conscients lésés et non lésés, 24 à 48 heures après l'intervention chirurgicale (mise en place du guide de microdialyse).
La composition du milieu de microdialyse est : NaCI 147 mM ; CaCI2 1,2 mM ; MgCI2 1,2 mM ; KCI 4,0 mM, pH 6,5. La vitesse de dialyse est de 1 1-11/min (pompe CMA 100, Carnegie). Les dialysas sont collectés toutes les 20 minutes et immédiatement stockés dans l'azote liquide jusqu'à l'analyse.
. Analyse de la dopamine, DOPAC et HVA dans les liquides de microdialyse Ces composés sont analysés par HPLC avec détection électrochimique. Le système chromatographique consiste en une colonne 25 cm X 4.6 mm C18 maintenu à une température constante de 30 C. La phase mobile est constituée de NaH2PO4 50 mM contenant 0.1 mM EDTA et du méthanol 6%, le pH de la solution étant réglé à 4.85.
. Rendements in vitro Le rendement in vitro pour le dialyse de la dopamine a été préalablement mesuré à 16% à la température du laboratoire et pour une vitesse de dialyse de 11-11/min.
. Histologie Après les expériences, le placement correct de la sonde est toujours vérifié par examen histologique post-mortem du cerveau de l'animal, après fixation dans du paraformaldéhyde.
. Analyses statistiques Les analyses de microdialyse ont été évaluées statistiquement par un ANOVA suivi d'un test de comparaison multiples de Newman-Keuls.
RESULTATS Effet 1 dose du XA infusé localement dans le CPF sur la modification des concentrations extracellulaires de dopamine.
Mesure de la zone de proportionnalité en fonction des protéines Le binding est réalisé selon le modèle classique : Le milieu d'incubation est préparé à partir de tampon Pipes 50 mM pH 7,4 (pH optimum). On fait varier la quantité protéique (0.04 mg à 0.5 mg par tube). La concentration en acide xanthurénique tritié ([3H]-AX) est de 200 nM et pour l'étude de la liaison non spécifique on utilise une concentration de 2 mM d'acide xanthurénique non tritié (AX). La soustraction entre liaison totale et liaison non spécifique donne la liaison spécifique qui varie en fonction de la quantité protéique : jusqu'à une quantité protéique de 0.5 mg par tube on reste dans la zone de proportionnalité. Les résultats sont présentés sur la Figure 9. Pour les expériences ultérieures, on travaillera entre 0.15 à 0.3 mg de protéines par tube.
Mesure des constantes cinétique du bindinq ** Constante du taux d'association ou (ki ou kon) : Le binding est réalisé selon le modèle classique : Le milieu d'incubation est préparé à partir de tampon Pipes 50 mM pH 7,4 (pH optimum). La concentration en acide xanthurénique tritié ([3H]-AX) est de 200 nM et pour l'étude de la liaison non spécifique on utilise une concentration de 2 mM d'acide xanthurénique non tritié (AX). La préparation membranaire synaptique est ajoutée dans chaque tube et on procède à la filtration rapide aux différents temps étudiés ; les temps d'incubation varient de 1 minute à 40 minutes. La soustraction entre liaison totale et liaison non spécifique donne la liaison spécifique qui augmente en fonction du temps pour atteindre un équilibre : l'équilibre est atteint aux alentours de 10-15 minutes.
L'analvse au logiciel Graohoad Prism de l'équation de rassnciatinn exnonentie) ! e
donne une constante du taux observé Kob exprimé en min-1 qui n'est pas le même que le kon. La valeur du kob est de 0.53 0. 16 min-1 (Figure 10).
Equation utilisée pour le calcul du kon : kon = kob-koff en M 1 min- [radlollgand] ** Constante du taux de dissociation ou (k-1 ou koff) : Le binding est réalisé selon le modèle classique : Le milieu d'incubation est préparé à partir de tampon Pipes 50 mM pH 7,4 (pH optimum). On procède à une incubation de la préparation membranaire synaptique avec l'acide xanthurénique tritié (200 nM) pendant 25 minutes (liaison totale) puis on y ajoute l'acide xanthurénique non radiomarqué (2 mM) que l'on laisse incuber pendant différents temps pour observer la dissociation et on procède à la filtration rapide ; les temps d'incubation varient de 1 minute à 45 minutes. Initialement ! e [H]-AX est iié à son site de binding, l'équilibre est atteint puis plus on incube pendant des temps prolongés avec l'AX non radiomarqué plus il y a une diminution du binding qui traduit la dissociation du complexe site de binding- [H]-AX. La dissociation est rapide et l'analyse au logiciel Graphpad Prism de l'équation de la dissociation exponentielle donne la constante du taux de dissociation koff exprimé en min-1. La valeur du koff est de 0.33 ~ 0. 07 min-1 (Figure 11).
**Ces deux constantes permettent d'extrapoler de façon approximative une valeur pour le Kd = koff/kon = 330 nM.
Expérience de saturation, mesure réelle du Kd et Bmax Le binding est réalisé dans du tampon Pipes 50 mM pH 7,4 à 0 C (sur glace) en présence de membranes synaptiques (quantité protéique variant de 0.1 à 0.3 mg par tube), d'acide xanthurénique tritié et soit du tampon (pour la détermination de la
liaison totale) soit de l'acide xanthurénique non radiomarqué à 2 mM (pour la détermination de la liaison non spécifique). Le temps d'incubation est de 25 min. puis on procède à la filtration.
On fait varier la concentration en acide xanthurénique tritié de façon croissante afin d'arriver à une occupation des sites de liaison maximale (plateau de saturation). On réalise la même chose en présence d'un excès d'acide xanthurénique non radiomarqué afin de déterminer la liaison non spécifique du [3H]-AX. Ainsi en soustrayant la liaison totale de la liaison non spécifique on obtient la liaison spécifique de l'acide xanthurénique à son (ou ses) site (s) de binding. L'analyse au logiciel Graphpad Prism permet de déterminer l'affinité de l'acide xanthurénique pour son (ou ses) site (s) de liaison : le Kd est de 743 nom : t 250 nM. De même le logiciel Graphpad Prism permet de déterminer le nombre de sites de liaison présents sur une préparation de membranes d'origine synaptique obtenues à partir de cerveaux entiers de rat : le Bmax est de 6.9 pmol/mg de protéines 1. 2 pmol/mg de protéines (Figure 12).
Expérience de compétition, mesure d'une CI50 (concentration inhibitrice 50) Le binding est réalisé dans du tampon Pipes 50 mM pH 7,4 à 0 C (dans la glace) en présence de membranes synaptiques (quantité protéique variant de 0.1 à 0.3 mg par tube), d'acide xanthurénique tritié (200 nM) et soit du tampon (pour la détermination de la liaison totale), soit de l'acide xanthurénique non radiomarqué à 2 mM (pour la détermination de la liaison non spécifique) et soit des concentrations variables d'une molécule non radiomarquée. Si la molécule reconnaît le site de liaison du [3H]-AX de façon réversible alors les 2 ligands vont entrer en compétition et on obtiendra une courbe de déplacement du [3H]-AX en fonction de la concentration de la molécule compétitrice. Le temps d'incubation est de 20-25 min. puis on procède à la filtration.
L'analyse au logiciel Graphpad Prism permet de déterminer la CI50 qui représente la concentration de la molécule qui bloque 50 % du binding de l'acide
xanthurénique. Lorsque l'on effectue une expérience de compétition entre le [3H]-AX et l'AX non radiomarqué, on obtient une courbe de déplacement dont l'analyse au logiciel Graphpad Prism nous donne un modèle de liaison à deux sites, une CI50 à 300 nM et une CI50 à 57 uM. Selon ce protocole, on peut effectuer des expérience de compétition avec des molécules de synthèse et ainsi identifier ou caractériser des agonistes ou antagonistes, en particulier ayant une meilleure affinité pour le récepteur de l'acide xanthurénique que l'AX lui-même.
Pour cela avant de procéder à une expérience de compétition classique pour déterminer une C150, on effectue d'abord un"screening"c'est à dire que l'on teste à une concentration relativement basse (10 pM) les molécules sur le déplacement de 200 nM de [3H]-AX (en gardant comme contrôle l'AX non radiomarqué) et l'on regarde si cette concentration déplace de façon identique ou meilleure cette même concentration en AX non radiomarqué. Si oui, on détermine la CI 50.