INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
EXEMPLE 4 : IMMUNOGENICITE DE PEPTIDES NS3 IN VITRO La capacité des peptides ayant une bonne affinité pour les molécules HLA II à induire in vitro une stimulation de lymphocytes T spécifiques a été évaluée à partir de prélèvements sanguins de personnes séronégatives pour le VHC. Il s'agit d'évaluer la capacité à recruter des lymphocytes précurseurs CD4+ alors qu'ils sont chez un individu naïf à une très faible fréquence c'est-à-dire d'effectuer une immunisation in vitro au moyen de ces peptides. a) Matériels et méthodes Les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) ont été séparées sur un gradient de Ficoll. Les PBMCs ont ensuite été mises en culture dans du milieu AIM V (LIFE TECHNOLOGIES) et incubées dans des flasques, à l'étuve à 37 C en présence de 5% CO2. Après une nuit d'incubation, les cellules non adhérentes ont été récupérées, déposées sur une colonne LS+ (MYLTENYI), puis les lymphocytes T CD4+ aini purifiés ont été congelés. Les cellules adhérentes ont été incubées pendant 5 jours, dans du milieu AIM V contenant 1000U/ml de GM-CSF et 1000U/ml d'IL-4. puis les cellules différenciées en cellules dendritiques ont ensuite
été cultivées pendant 2 jours, en présence de lug/ml de LPS. 1000 U/ml d'IL-4 et 1000 U/ml de GM-CSF, de manière à induire leur maturation.
Les cellules dendritiques matures (100 000 cellules/puits) ont alors été incubées avec un mélange de peptides (10 g de chaque peptide), pendant 5 heures à 37 C. Les cellules dendritiques matures ont ensuite été lavées puis incubées, en présence des lymphocytes T CD4+ (100 000 cellules/puits) préalablement décongelés, dans du milieu contenant 1000 U/ml d'IL-6 et lOng/ml d'IL-12. Après 7 jours, la culture a été restimulée une première fois. au moyen de cellules dendritiques matures préalablement décongelées et chargées par le mélange de peptides, dans du milieu contenant de l'IL-2 (10 U/ml) et de l'IL-7 (5ng/ml). 7 jours plus tard, la culture a été restimulée, de façon similaire, dans un milieu ne contenant pas d'IL-2. Après deux stimulations supplémentaires, dans les conditions précédentes. les cellules ont été testées en ELISPOT. de la façon suivante : Des anticorps anti-IFN y (1-D1K, MABTECH) dilués à 1 g/ml dans du tampon PBS ont été adsorbés sur des plaques de nitrocellulose (MILLIPORE) pendant Iheure à 37 C. Les plaques ont ensuite été lavées avec du PBS puis saturées avec du milieu RPMI contenant 10 % SVF (100|il/puits). pendant 2 h à 37 C. Les cellules dendritiques matures préalablement décongelées (10000 cellules/puits) et 10 000 lymphocytes à tester ont ensuite été ajoutés dans les plaques et incubées 24 h à 37 C, en présence ou en l'absence d'un seul peptide ou d'un mélange de peptides. Après un lavage avec du tampon PBS puis avec du PBS Tween 0.05%, 100 l d'anticorps secondaire anti-IFN-y conjugué à la biotine (7-B6-l-biotin, MABTECH), dilué à 1 g/ml dans du PBS contenant 0,05% Tween 20 et 1% BSA. a été ajouté dans chaque puits. Après une heure d'incubation, les plaques ont été lavées à nouveau et incubées avec 100 l/puits d'Extravidin-AKP (n 2636, SIGMA.). diluée au 1/5000 dans du PBS contenant 0. 05 % Tween 20 et 1 % BSA. La révélation de la réaction immunoenzymatique a ensuite été réalisée à l'aide du kit n 170-6432 (BIORAD) b) Résultats Les PBMC d'un patient séronégatif (POI4) ont été testées selon le protocole tel que défini ci-dessus. avec le mélange des peptides suivants : 8N 1007- 1021, 8N 1019-1033,15N 1178-1192, 28N 1538-1552, 18N 1250-1264 et 8N 1024- 1037.
Après 4 restimulations, un ELISPOT a été réalisé sur différents puits. Trois lignées spécifiques ont pu être mises en évidence (figure 5). Ces trois lignées répondent en présence du mélange de peptides (mix) mais pas en l'absence du mélange. Chaque lignée répond à au moins un des peptides du mélange. La lignée P014/A répond au peptide 15N 172-186 et au peptide 18N 244-258 (figure 5A). La lignée P014/B répond au peptide 8N 13-27 (figure 5B) et la lignée P014/C aux peptides 15N 172-186 et 28N 532-546 (figure 5C).
EXEMPLE 5 : DETECTION DE LYMPHOCYTES T SPECIFIQUES DU VHC A L'AIDE DES PEPTIDES C ET NS3.
B. Résultats : 1-Absence de toxicité de l'hétérocomplexe in vivo et in vitro Les souris immunisées aussi bien par la préparation de gp160-Tat toxoide que par le Tat toxoide uniquement ne présentent aucun signe clinique et aucune lésion anatomique. Le test d'immunosuppression montre que des doses de 100 ng/ml à 1 g/ml de gp160-Tat toxoide ne diminuent pas la prolifération des lymphocytes.
TABLEAU 6 Titre j-2 J72 souris contrôles ; souris contrôle 1 <500-1 <500-1 souris contrôle 2 <500-1 <500-1 souris contrôle 3 <500-1 <500-1
TABLEAU 6 (suite) souris immunisées avec le Tat toxoïde : souris 4 Les souris immunisées avec la préparation de gp160-Tat toxoïde présentent des titres d'anticorps de type IgG anti-Tat plus importants que ceux des souris immunisées avec le Tat toxoïde uniquement.
L'activité neutralisante de ces anticorps a été mesurée à l'aide du Cat assay. Différentes dilutions de sérums (1/100- 1/800) prélevés à J-2 et J72 sont incubées pendant 2 heures avec 50 ng/ml de Tat natif. Ces dilutions sont ensuite déposées sur des cellules HeLa, cellules transfectées de manière stable avec un plasmide contenant le LTR du VIH-1 comme promoteur du gène Chloramphénicol Acétyl transférase (CAT). Après 24 heures de culture, les cellules sont lysées et la quantité de protéine CAT produite est mesurée par un test ELISA, le Cat assay, (Boehringer Mannheim). Les sérums neutralisants empêchent la protéine Tat d'induire l'expression de la protéine CAT, alors que les sérums non neutralisants permettent la synthèse de cette protéine CAT.Les résultats sont données en % de neutralisation.
TABLEAU 7 souris immunisées avec le Tat toxoïde : 1/100 1/200 1/400 1/800 souris 4 j-2 0 0 0 0 j72 60 50 25 20 souris 5 j-2 0 0 0 0 j72 60 55 30 20 souris 6 j-2 0 0 0 0 j72 65 50 30 30 souris immunisées avec le conjugué gp160-Tat toxoïde : 1/100 1/200 1/400 1/800 souris 7 j-2 0 0 0 0 j72 100 100 100 100 souris 8 j-2 0 0 0 0 j72 100 100 100 100 souris 9 j-2 0 0 0 0 j72 100 100 100 100 Les anticorps induits par le conjugué gp160-Tat toxoïde ont un pouvoir neutralisant plus important que celui induit par le Tat toxoïde.
2. Production de MIP1a La production de MIP1[alpha] dans les surnageants de culture des splénocytes. Les splénocytes des souris immunisées et des souris contrôles sont isolées puis cultivées dans des puits à fond rond d'une plaque de microculture à raison de 100 000 cellules/puits en présence de 5 g/ml de p24, de gp160, de Tat natif et d'un mélange de 5 g/ml gp160 et de 5 ug/m! de Tat natif. Les surnageants sont prélevés après 24 heures de culture et la présence de MIP10 dans les surnageants est mesurée à l'aide d'un test ELISA de R&D. Les résultats sont exprimés en pg/ml.
TABLEAU 8 Gp160 Tat nati gp160 + Tat natif p24 Souris contrôles: Souris 1 j72 MIP1a 95 90 145 9 Souris 2 j72 MIP1[alpha] 100 90 136 7 Souris 3 j72 MIP1[alpha] 120 110 132 9 Souris immunisées par le Tat toxoïde: Souris 4 j72 MIP1a 145 130 190 7 Souris 5 j72 MIP1a 128 145 225 9 Souris 6 j72 MIP1a 150 230 295 10 Souris immunisées par le conjugué gp160-Tat toxoïde Souris 7 j72 MIP1 a 875 736 1725 9 Souris 8 j72 MIP1[alpha] 945 905 1900 7 Souris 9 j72 MIP1[alpha] 1025 795 1755 8 Les splénocytes des souris immunisées avec le conjugué gp160-Tat toxoïde produisent plus de chimiokines MIP10 que les cellules des souris immunisées par le Tat toxoïde uniquement lorsqu'elles sont activées, in vitro, par les immunogènes utilisés lors de l'immunisation.
4. Prolifération des splénocytes de souris immunisées (test CMI) Les splénocytes des souris immunisées et des souris contrôles sont isolées puis cultivées dans des puits à fond rond d'une plaque de microculture à raison de 100 000 cellules/puits en présence de p24, de gp160, de Tat natif et d'un mélange de gp160 et de Tat natif. La culture cellulaire est poursuivie à 37 C en atmosphère humide chargée à 5 % de C02 pendant 6 jours. 18 heures avant la fin de l'incubation, 0.5 Ci de thymidine tritiée/ puits sont ajoutés. L'intensité de la réponse immunitaire est proportionnelle à l'index de prolifération Ip.
Ip = cpm (coups par minute) pour l'antigène donné / cpm contrôle TABLEAU 9 Gp160 Tat natif gp160 + Tat natif p24 Souris contrôles : Souris 1 j72 1,1 1,1 1 1,2 Souris 2 j72 1 1,1 1,1 1,1 Souris 3 j72 1,2 1 1 1,1 Souris immunisées avec le Tat toxoïde Souris 4 j72 1,2 8 10 1,1 Souris 5 j72 1 9 9 1,2 Souris 6 j72 1 10 9 1,2 Souris immunisées avec le conjugué gp160-Tat toxoïde : Souris 7 j72 9 11 8 1 Souris 8 j72 10 9 7,5 1 Souris 9 j72 10,5 9 8 1 Les splénocytes des souris immunisées avec le conjugué gp160-Tat toxoïde ou le Tat toxoïde, prolifèrent, lorsqu'elles sont activées, in vitro, avec les immunogènes utilisés lors de l'immunisation.
Exemple 24 : Activité immunogénique de l'hétérocomplexe gp160-Tat GM A, Matériel et méthodes L'activité immunogénique (humorale et cellulaire) de la préparation gp160-Tat GM par rapport à celle du Tat toxoide a été étudiée chez la souris balb c de 18-20 g.
Comme polymères poly (vinyllactame) selon l'invention, on utilise notamment les terpolymères vinylpyrrolidone / diméthylaminopropylméthacrylamide tosylate de dodécyldiméthylméthacrylamidopropylammonium, les terpolymères vinylpyrrolidone /diméthylaminopropylméthacrylamide/ tosylate de cocoyldiméthylméthacrylamidopropylammonium, les terpolymères vinylpyrrolidone / diméthylaminopropylméthacrylamide / tosylate ou chlorure de lauryldiméthylméthacrylamidopropylammonium.
La masse moléculaire en poids des polymères poly(vinyllactame) cationiques selon la présente invention est de préférence comprise entre 500 et 20 000 000. Elle est plus particulièrement comprise entre 200 000 et
2 000 000 et encore plus préférentiellement comprise entre 400 000 et 800 000.
Parmi les polymères amphiphiles cationiques selon l'invention, on peut aussi citer les terpolymères acryliques tels que décrits dans la demande de brevet EP- 1090 623 et qui sont constitués de : - de 5 à 80% en poids, préférentiellement de 15 à 70% en poids et plus préférentiellement de 40 à 70% en poids, d'un monomère acrylate (a), choisi parmi un acrylate d'alkyle en C1-C6 et un méthacrylate d'alkyle en C1-C6 ; - de 5 à 80% en poids, préférentiellement de 10 à 70% en poids et plus préférentiellement de 20 à 60% en poids, d'un monomère (b), choisi parmi un composé vinylique héterocyclique contenant au moins un atome d'azote ou de soufre, un (méth) acrylamide, un (méth) acrylate de mono- ou di-(CiC4)alkylamino(C1-C4)alkyle et un mono ou di- (C1-C4)alkylamino(C1C4)alkyl (méth)acrylamide; - de 0,1 à 30% en poids, préférentiellement de 0,1 à 10% en poids d'un monomère (c), choisi parmi (i) un uréthane produit par réaction entre un isocyanate insaturé monoéthylénique et un tensioactif non ionique à terminaison C 1-C4 alkoxy; (ii) un copolymère à blocs de 1,2-butylène oxyde et de 1,2-éthylène oxyde; (iii) un monomère tensioactif insaturé éthylénique copolymérisable obtenu par condensation d'un tensioactif non-ionique avec un acide carboxylique insaturé a,-éthylénique ou son anhydride ; un monomère tensioactif choisi parmi les produits de réaction de type urée d'un monoisocyanate insaturé monoéthylénique avec un tensioactif non-ionique présentant une fonction amine; (v) un éther de (méth) allyle de formule CH2=
CR1CH2OAmBnApR2 dans lequel R1 désigne un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, A désigne un groupement propylèneoxy ou butylèneoxy, B désigne l'éthylèneoxy, n est égal à zéro ou désigne un nombre entier inférieur ou égal à 200 et préférentiellement inférieur à 100, m et p désignent zéro ou un nombre entier inférieur à n et R2 est un groupe hydrophobe d'au moins 8 atomes de carbone et préférentiellement en C8C30; et (vi) un monomère non-ionique de type uréthane produit par réaction d'un tensioactif non ionique monohydrique avec un isocyanate insaturé monoéthylénique ; les pourcentages en poids de monomères étant basés sur le poids total des monomères constituant le terpolymère.
Des monomères acrylates (a) préférés comprennent notamment les acrylates d'alkyle en C2-C6. L'acrylate d'éthyle est tout particulièrement préféré.
Comme exemples de monomères (b) préférés, il faut citer le méthacrylate de N,N-diméthylaminoéthyle (DMAEMA), l'acrylate de N,Ndiéthylaminoéthyle, le méthacrylate de N, N-diéthylaminoéthyle, l'acrylate de N-t-butylaminoéthyle, le méthacrylate de N-t-butylaminoéthyle, le N,Ndiméthylaminopropyl-acrylamide, le N,N-diméthylaminopropyleméthacrylamide, le N,N-diéthylaminopropyl-acrylamide et le N,Ndiéthylaminopropyl-méthacrylamide. Le méthacrylate de N,Ndiméthylaminoéthyle est tout particulièrement préféré.
Les monomères (c) préférés sont les monomères tensio-actifs insaturés éthyléniques copolymérisables obtenus par condensation d'un tensioactif non-ionique avec un acide carboxylique insaturé a,(3- éthylénique ou son anhydride, de préférence les acides mono ou dicarboxyliques en C3-C4 ou leurs anhydrides et plus particulièrement l'acide acrylique, l'acide méthacrylique, l'acide crotonique, l'acide
maléique, l'anhydride maléique et tout particulièrement l'acide itaconique et l'anhydride itaconique.
Parmi les tensioactifs non-ioniques, on peut citer notamment les alcools gras en C 10-C30 alkoxylés avec 2 à 100, et de préférence de 5 à 50 moles d'oxyde d'alkylène, comme par exemple les éthers de polyéthylène glycol et d'alcools gras en C10-C30 et plus particulièrement les éthers de polyéthylène glycol et d'alcool cétylique, dénommés CETETH dans le dictionnaire CTFA, 7ème édition, 1997.
Parmi ces terpolymères, on préfère utiliser en particulier le polymère "STRUCTURE PLUS" vendu par la Société NATIONAL STARCH, qui est constitué d'acrylates, d'amino(méth)acrylates et d'itaconate d'alkyle en C10-C30 polyoxyéthyléné à 20 moles d'oxyde d'éthylène sous forme de dispersion aqueuse à 20% de Matière Active.
En plus de ces monomères, les terpolymères peuvent contenir d'autres monomères qui permettent de réticuler lesdits terpolymères. Ces
On peut en particulier citer les extraits aqueux et/ou alcooliques ou utilisant un solvant organique. Par solvant aqueux on entend tout solvant constitué totalement ou pour part d'eau.
Parmi les solvants alcooliques on peut citer notamment les monoalcools tels que l'éthanol, et les polyols. On peut citer aussi l'eau elle-même, les solvants hydroalcooliques en toute proportion ou encore les solvants constitués d'eau et d'un composé comme le propylène glycol en toute proportion.
On peut ainsi utiliser un extrait préparé par la méthode décrite dans la demande de brevet français n 95-02379 déposée par la demanderesse.
Dans une première étape on broie le matériel végétal dans une solution aqueuse à froid, dans une deuxième étape les particules en suspension sont éliminées de la solution aqueuse issue de la première étape, et dans une troisième étape on stérilise la solution aqueuse issue de la deuxième étape. Cette solution aqueuse correspond à l'extrait.
D'autre part, la première étape peut avantageusement être remplacée par une opération de congélation simple des tissus végétaux (par exemple à -20 C), suivie d'une extraction aqueuse reprenant les deuxièmes et troisième étapes ci-dessus décrites.
Quel que soit le mode de préparation utilisé selon l'invention, des étapes subséquentes visant à favoriser la conservation et/ou la stabilisation peuvent être ajoutées sans pour cela modifier la nature même de l'extrait. Ainsi, par exemple l'extrait obtenu peut être lyophilisé par toutes méthodes classiques de lyophilisation. On obtient ainsi une poudre qui peut être utilisée directement ou bien mélangée dans un solvant approprié avant utilisation.
Préférentiellement selon l'invention, on utilise un extrait aqueux sec de Ginkgo biloba vendu par la société LINNEA sous le nom commercial "extrait de Ginkgo biloba standard".
Selon l'invention, la quantité d'extrait de Ginkgo biloba utilisée dans la composition est bien entendu fonction de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure.
Pour donner un ordre de grandeur, selon l'invention, l'extrait peut être utilisé en une quantité représentant de 0,001% à 20% du poids total de la composition et préférentiellement en une quantité représentant de 0,005% à 5% du poids total de la composition.
Les compositions utilisées selon l'invention sont destinées à une application topique sur la peau et/ou ses phanères et contiennent donc un milieu physiologiquement acceptable, c'est-àdire compatible avec les tissus cutanés tels que la peau, le cuir chevelu, les cils, les sourcils, les cheveux, les ongles et les muqueuses. Ce milieu physiologiquement acceptable peut être plus particulièrement constitué d'eau et éventuellement d'un solvant organique physiologiquement acceptable choisi par exemple parmi les alcools inférieurs comportant de 1 à 8 atomes de carbone et en particulier de 1 à 6 atomes de carbone, comme l'éthanol, l'isopropanol, le propanol, le butanol ; polyéthylène glycols ayant de 6 à 80 unités oxyde d'éthylène ; les polyols comme le propylène glycol, l'isoprène glycol, le butylène glycol, la glycérine, le sorbitol.
Quand le milieu physiologiquement acceptable est un milieu aqueux, il a généralement un pH compatible avec la peau, allant de préférence de 3 à 9 et mieux de 3,5 à 7,5.
Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toutes les formes galéniques classiquement utilisées pour une application topique et notamment sous forme de solutions aqueuses, hydroalcooliques, d'émulsions huile-dans-eau (H/E) ou eau-dans-huile (E/H) ou multiple (triple : E/H/E ou H/E/H), de gels aqueux, ou de dispersions d'une phase grasse dans une phase aqueuse à l'aide de sphérules, ces sphérules pouvant être des nanoparticules polymériques telles que les nanosphères et les nanocapsules, ou des vésicules lipidiques de type ionique et/ou non ionique (liposomes, niosomes, oléosomes). Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles.
En outre, les compositions utilisées selon l'invention peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse. Elles peuvent être éventuellement appliquées sur la peau sous forme d'aérosol. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, et par exemple sous forme de stick.
Quand la composition utilisée selon l'invention comporte une phase huileuse, celle-ci contient de préférence au moins une huile choisie parmi les huiles hydrocarbonées d'origine animale, les huiles hydrocarbonées d'origine végétale, les esters et les éthers de synthèse, les hydrocarbures linéaires ou ramifiés, d'origine minérale ou synthétique, les alcools gras ayant
de 8 à 26 atomes de carbone, les huiles fluorées partiellement hydrocarbonées et/ou siliconées, les huiles de silicone, et leurs mélanges.
On entend par huile hydrocarbonée dans la liste des huiles citées ci-dessus, toute huile comportant majoritairement des atomes de carbone et d'hydrogène, et éventuellement des groupements ester, éther, fluoré, acide carboxylique et/ou alcool.
On ajoute ensuite quelques gouttes d'acide chlorhydrique concentré (12 N) et on porte au reflux de l'alcool pendant 18 heures. Après évaporation de l'alcool, on extrait le mélange des biarylesters par l'éther. On obtient donc 3 séries de 9 esters qui sont alors analysées en GC/MS. Les différents biarylesters attendus sont tous identifiés sans ambiguïté.
Ci-dessous sont représentés tous les résultats sous forme de tableaux. Un chromatogramme correspondant au mélange des esters propyliques biaryliques est représenté ci-dessous.
1/ Esterspropyliques biaryliques : Le tableau XI ci-après correspond au chromatogramme de la Figure 7.
TABLEAU XI Bibliothèque des esters propyliques 23 R Temps de rétention en Masse moléculaire minutes et secondes o OCH3 oetp 26,42; 27,36 270 On 28,13 268 ~~~~~~~0~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 0. NO2 32,29 285 JyJ 19,28 258 <28,96 265 CN 9 22,82 254 o 19,53 240
1 34,52 eu 34,52 290 2/Esters méthyliques biaryliques : TABLEAU XII Bibliothèque des esters méthyliques R Temps de rétention Masse moléculaire o OCH3 0 et 21,31 ; 22,35 242 OCH3 O-u 23,24 240 0 ) .1 28,58 257 9 16,28 230 F 9 24,23 237 CN IJ 18,25 226 ( J 16,41 212 ) j[.J 27,74 262
3/ Esters éthyliques biaryliques : TABLEAU XIII Bibliothèque des esters éthyliques Ar Temps de rétention Masse moléculaire i VJ oetp 23,76; 24,73 256 -OCHs On 25,19 254 0 a N02 28,72 271 9 17,33 244 F (fi 25,95 251 CN 9 19,82 240 |J) 17,50 226 CO' 1 30,12 276 B- Halogénure d'aryle supporté : Dans un deuxième temps, on a essayé de greffer un acide arylboronique sur un sel afin de l'engager ensuite dans une réaction de couplage de Suzuki. Cette étude peut être effectuée selon deux approches différentes : - la première, est de supporter un acide arylboronique sur le cation du sel fonctionnalisé par la diéthanolamine pour former des boratranes (voir ci- dessous) :
- la seconde est de le supporter via l'anion du sel fonctionnalisé. En effet, si l'anion X2- du sel fonctionnalisé servant de support est assez nucléophile, il va réagir avec l'acide phénylboronique en quaternarisant l'atome de bore pour donner un borate : OH 0 0 ' RN, X-B#Ar R4N X2 - 1 OH 1 - Sel à cation fonctionnalisé : 1) Synthèse des sels fonctionnalisés : Les sels fonctionnalisés ont été synthétisés selon le schéma réactionnel suivant :
La réaction de condensation de la triméthylamine sur un dibromure d'alkyle est effectuée dans des conditions anhydres avec de très bons rendements (> 95%). Le bromure d'ammonium ainsi obtenu subit une réaction d'échange d'anions (métathèse) dans les conditions classiques. La deuxième étape a été effectuée en présence d'un équivalent de diéthanolamine avec un rendement quantitatif. De même, l'étape de greffage de l'acide arylboronique a été effectuée avec des bons rendements et permet
d'obtenir un produit sous deux formes différentes. En effet, en fonction du solvant et de l'anion du support on obtient ou non un équilibre entre les bores tri et tétravalent. Ainsi, si on opère dans le THF et en présence d'un anion bis-trifluorométhanesulfonamidure l'équilibre obtenu est de 80/20 en faveur du bore tétravalent. En revanche, l'utilisation d'un mélange éther, chloroforme et isopropanol conduit exclusivement au bore tétravalent (boratrane). Dans les mêmes conditions et en présence de l'anion tétrafluoroborate, on obtient un équilibre 60/40 en faveur du bore trivalent, selon le schéma suivant :
Il faut noter que les déplacements chimiques du bore obtenus dépendent de la nature de l'anion. En effet, dans le cas du bis-trifluorométhanesulfonamidure le signal du bore tétravalent apparaît à 13,06 ppm. En revanche, avec l'anion tétrafluoroborate il apparaît à 4 ppm. Ceci montre que la nature du contre ion influe aussi sur la nature de la liaison entre les atomes d'azote et de bore, et donc sur le transfert d'électrons depuis l'azote vers le bore.
Ensuite, les boratranes synthétisés ont été engagés dans la réaction de couplage de Suzuki selon le schéma réactionnel suivant : + Solution 0. 85 M dans (Me)3NBu , NTf2 Une solution de boratrane (0,85 mol/1) dans le bis-trifluorométhanesulfonamidure de N,N',N"-triméthylbutylammonium servant de matrice est mise en contact avec le 1- bromo-3-méthoxybenzéne, en présence de K2C03 solide comme base et d'acétate de palladium comme catalyseur. Le mélange est chauffé à 80 C pendant 18 heures. Les résultats obtenus sont regroupés dans le tableau XIV suivant :
TABLEAU XIV Taux 0-0 OMe 0-0 Taux essai boratrane Taux de homoconversion Rdt Couplage i o a \ ~ / , 72% 66,8% 51 1 j/\/-IZfL Les essais préliminaires qui ont été réalisés montrent que les acides boroniques supportés peuvent subir le couplage de Suzuki. Par contre, cette réaction nécessite un apport énergétique, car à température ambiante aucune réaction n'a été observée pour les différents substrats.