INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Les figures 7B à 71 montrent, pour chaque molécule testée, la variation d'amplitude de liaison de NKA-Bo et la variation d'amplitude de la dissociation rapide. Ces figures montrent que toutes les molécules indiquées se comportent comme des effecteurs allostériques car elles provoquent une augmentation de l'amplitude de la dissociation rapide de NKA-Bo.
L'augmentation d'amplitude de la dissociation rapide reflète la capacité des molécules à stabiliser une fraction plus importante des récepteurs dans l'état de faible affinité. On voit ainsi que la fraction initiale de récepteurs dans l'état de faible affinité passe d'environ 25% en absence d'effecteur à 60-75% en présence des molécules 805, NP234, Al 1, G11, F7, F3, et H10 (à 100 M d'effecteur) et à près de 100% en présence de A11et NP246.
EXEMPLE 5 : de l'inhibition de la liaison de l'antagoniste compétitif SR 48968 radioactif par l'agoniste NKA et l'effecteur allostérique 805.
25 000 cellules exprimant le récepteur EGFP-NK2R sont incubées pendant 3 heures à 4 C dans un volume final de 500 l de tampon Hepes en présence de 1 nM de [3H] SR48968 et de concentrations variables de NKA ou de 805. Au terme de l'incubation, les mélanges réactionnels sont filtrés sur des filtres GF/C (Whatmann) en fibre de verre préalablement incubés dans du tampon Hepes complémenté de 1% (W/V) de lait en poudre semi-écrémé, et rincés trois fois par 5 ml de tampon hepes à 4 C. Les filtres sont ensuite disposés dans des fioles de comptage à scintillation dans lesquelles on ajoute 3 ml de cocktail scintillant. La radioactivité est mesurée après 16 h dans un compteur de radioactivité. La figure 8A montre que l'agoniste NKA déplace quantitativement la liaison de SR 48968 avec une affinité apparente Ki = 22 nM. En revanche, l'effecteur 805 est incapable de déplacer la totalité du SR 48968 lié, même lorsque sa concentration est de l'ordre du millimolaire. Il renverse seulement 27-33% de la liaison du radioligand avec une affinité apparente Ki = 5 M. L'effet de 805 sur la liaison de SR 48968 ne reflète pas une interaction compétitive mais plutôt de nature non-compétitive.
EXEMPLE 6 : de l'effet de la molécule 805 sur la réponse d'accumulation de cAMP dans des cellules HEK 293 exprimant le récepteur EGFP-NK2R.
Des boîtes de culture cellulaire à 6 puits de 30 mm sont traitées au collagène puis ensemencées avec 50 000 cellules exprimant le récepteur EGFP-NK2R. Après deux à trois jours de culture, le milieu est remplacé par du tampon hepes contenant de l'inhibiteur de phosphodiestérase IBMX (isobutyl-methyl-xhantine) et incubées pendant 30 minutes avec des concentrations croissantes de NKA en présence ou en absence i) d'inhibiteur compétitif H8565 (1 M) ou ii) d'effecteur 805 (10 ou 50 M). La quantité de cAMP produit (exprimé en pmoles/puits) est déterminée selon un procédé radi,oimmunologique décrit dans Gicquiaux et al. (2002). Il en résulte une mesure de la courbe concentration-effet de NKA (Figure 9A).
La NKA seule est capable de stimuler la production de cAMP dans les cellules exprimant le récepteur EGFP-NK2R avec une EC50 voisine de 100 nM.
La mise au point de nouveaux systèmes de délivrance ou libération de principes actifs a pour objectif premier la délivrance contrôlée d'un agent actif, notamment pharmacologique, à son site d'action à une vitesse et à une posologie thérapeutiquement optimale (J. Kreuter, 1994). On peut aussi citer l'amélioration de l'index thérapeutique, qui peut être obtenue par modulation de la distribution du principe actif dans l'organisme. L'association du principe actif au système de délivrance permet notamment sa délivrance spécifiquement au site d'action ou sa libération contrôlée après le ciblage du site d'action. La réduction de la quantité de principe actif dans les compartiments où sa présence n'est pas souhaitable permet d'accroître l'efficacité dudit principe actif, de réduire ses effets secondaires toxiques, voire même de modifier ou de restaurer son activité.
Une des questions majeure de la délivrance est son application à la biologie moléculaire et tout particulièrement l'application à des principes actifs comme les acides désoxyribonucléiques (ADN), les oligodésoxynucléotides (ODN), les peptides, les protéines chargés tous négativement. La compréhension des bases de biologie moléculaire dans les maladies génétiques permet de moduler ou de remplacer un gène en disfonctionnement. Le développement de la thérapie génique en routine dans la pratique clinique dépend de la possibilité d'administration par voie systémique de façon répétée, de la capacité à atteindre une cible et à transfecter efficacement des cellules in vivo (Felgner, 1990, Kabanov et Alakhov, 1993, Crook, 1995, Douglas et Curiel, 1995, Lasic et Templeton, 1996) ainsi que de la possibilité de fabriquer des vecteurs qui seront capables d'être transposés à l'échelle industrielle. Les techniques de transfection in vitro utilisées jusqu'à présent, comme l'électroporation et la coprécipitation de l'ADN avec le phosphate de calcium sont des approches dont l'application in vivo paraît difficile (Fynan et al., 1993).
Les systèmes actuellement utilisés pour la transfection in vivo tiennent compte de la charge naturelle négative des ADN ou des ODN. Ce sont soit des systèmes viraux (Morgan et Anderson, 1993) soit des constructions non virales comme des lipides cationiques (Ledley, 1994, Zelphati et Szoka, 1996). Les vecteurs viraux sont très efficaces en termes de transfection in vitro, mais ils possèdent des limitations in vivo à cause de leur immunogénécité (Wilson et al., 1990, Douglas et Curiel, 1995 ; Verma et Somia, 1997). Parmi les vecteurs non viraux, les lipides cationiques tels que le Transfectam (Behr et al., 1989) présentent de bonnes propriétés de transfection, mais leur application in vivo est limitée par leur toxicité,
l'activation du complément et leur important tropisme pour le foie et les poumons.
Depuis les études effectuées avec la poly(llysine) à la fin des années 1980 (Wu et Wu, 1987), plusieurs polymères cationiques ont été étudiés comme vecteurs de transfection non viraux. Ces vecteurs incluent la polyéthylène-imine (Boussif et al., 1995 ; Remy et al., 1998), le polybrene (Mumper et al., 1996), les dendrimers de poly (amidoamine) (PAMAM) (Tang et al., 1996).
Jusqu'à présent, l'efficacité de transfection avec les polymères est relativement faible et beaucoup de ces polymères cationiques ont montré une toxicité relative avec de faibles potentiels d'administration répétée par voie intraveineuse. Les polymères utilisés directement avec les principes actifs notamment l'ADN sont limités par leur efficacité de transfection et consomment une grande quantité de principe actif et de ce fait obligent à utiliser une grande quantité de polymère, elle même toxique. Les systèmes colloïdaux utilisés pour la délivrance notamment de gènes in vivo sont plus économes en polymères et en principe actif.
Les systèmes colloïdaux de délivrance de principes actifs comprennent les liposomes, les microémulsions, les nanocapsules, les nanosphères, les microparticules et les nanoparticules. Les nanoparticules présentent des avantages de ciblage, de modulation de distribution et de souplesse de formulation et ont une structure polymère qui peut être conçue et réalisée de façon adaptée au but poursuivi. Elles se sont révélées tout particulièrement prometteuses pour obtenir un meilleur index thérapeutique au sens défini ci-dessus, en raison de leur aptitude à assurer une libération contrôlée, une délivrance spécifique au site d'action ou délivrance ciblée, permettant à la fois une augmentation de l'efficacité et une réduction
des effets secondaires toxiques au niveau des autres organes.
Parmi ceux-ci, les poly(cyanoacrylates d'alkyle) décrits dans les EP-B-0 007 895 (US-A-4,329,332 & US-A- 4,489,055) et EP-B-0 064 967 (US-A-4,913,908) sont particulièrement intéressants car leur bioérosion est observée rapidement par rapport à d'autres polymères biodégradables et se déroule pendant des durées compatibles avec les applications thérapeutiques ou diagnostiques. Les nanoparticules sont des vecteurs colloïdaux dont le diamètre varie entre 10 nm et 1000 nm. Ces particules sont formées par des macromolécules dans lesquelles la substance biologiquement active est piégée, encapsulée ou adsorbée à la surface. Les nanoparticules ou nanosphères ont été décrites par Birrenbach et Speiser (1976) en terme de nanopellet , et nanocapsules, et qualifiées par Kreuter et Speiser (1976) d' adjuvants et de systèmes de délivrance de substances actives par Kreuter (1983).
Dans le but d'augmenter la stabilité des oligonucléotides, d'augmenter leur pénétration dans les cellules et d'éviter la distribution non spécifique, l'utilisation de vecteurs particulaires, comme les nanoparticules, est considérée comme une approche des plus prometteuses. Cependant leur utilisation a été limitée par la toxicité de la substance utilisée pour fixer le principe actif à la nanoparticule.
Les nanoparticules polymères les plus étudiées sont les polyisohexylcyanoacrylates (PIHCA). Cependant, comme ces nanoparticules présentent une charge négative en surface, un copolymère cationique (Diethylaminoethyl (DEAE) Dextran) ou un détergent hydrophobe cationique (Cétyl triméthyl ammonium bromide (CTAB)) ont été combinés aux polyalkylcyanoacrylates (PACA) afin de faciliter l'association des ODN par formation de paires d'ions sur les
nanoparticules. Ainsi, les ODN ont été associés efficacement aux nanoparticules de PACA contenant un cation hydrophobe tel que le CTAB (Cétyl triméthyl ammonium bromide, Chavany et al., 1992). Le CTAB présente des problèmes de toxicité, Zobel et al., 1987 ont remplacé le CTAB par le DEAE dextran qui a été introduit dans le milieu de polymérisation avant la formation des nanosphères. Le DEAE Dextran s'est avéré également toxique.
Le vecteur nanoparticulaire idéal pour la délivrance des principes actifs comme les ADN, les ODN, les peptides, les protéines, doit être : - capable de former un complexe avec la molécule d'intérêt en prenant compte ses caractéristiques physicochimiques et la substance choisie pour fixer le principe actif doit être adaptée à la charge et aux données de toxicité, - capable de protéger le principe actif de la dégradation pendant son transport dans la circulation sanguine, - biocompatible (non toxique, non immunogène, et de préférence biodégradable), capable de délivrer le principe actif au niveau du tissu cible en quantité suffisante, et capable de cibler spécifiquement un type cellulaire.
Ce but est atteint grâce à l'utilisation de nanoparticules de polymères, en particulier de poly(cyanoacrylates d'alkyle), associés à un ou plusieurs polysaccharides chargés positivement.
L'invention a donc pour objet un système de vectorisation et de délivrance de substances d'intérêt thérapeutique ou de diagnostic, du type constitué de nanoparticules, caractérisé en ce que lesdites
nanoparticules présentent une distribution de taille homogène et comprennent (i) au moins un polymère et (ii) au moins un polysaccharide chargé positivement non toxique.
En ce qui concerne les "éléments réfléchissants", la forme de la surface de réflexion n'est pas limitée à une forme particulière dans la mesure o elle réfléchit la lumière provenant de la source de lumière à diode photoémissive et réfléchie à la surface avant de l'organe transparent afin qu'elle pénètre dans la section de réflexion interne avec un angle d'incidence inférieur ou égal à l'angle critique. Ainsi, on peut utiliser un élément de réflexion qui soumet simplement la lumière sortant de la surface avant de l'organe transparent à une réflexion normale. Dans une variante, on peut utiliser un élément de réflexion destiné à soumettre la lumière sortant de la surface avant de l'organe transparent à une réflexion diffuse. Comme on peut le noter d'après la configuration qui précède, une lampe de véhicule selon l'invention a une configuration dans laquelle un organe transparent est disposé afin qu'il provoque l'entrée de la lumière provenant d'une source de lumière à diode photoémissive orientée vers l'avant d'une lampe dans l'organe transparent et de manière que la lumière de la diode photoémissive qui sort après avoir pénétré dans l'organe transparent soit réfléchie vers l'arrière par la surface avant puis réfléchie vers l'avant par une surface arrière et sorte ainsi en avant de la lampe en dehors de l'organe transparent. Une région de la surface avant de l'organe transparent placée au voisinage d'un axe optique de la source de lumière à diode photoémissive forme une surface de réflexion normale soumise à un traitement de surface réfléchissante. Une région de la surface avant de l'organe transparent autre que la section de réflexion normale est formée par une section de réflexion interne qui provoque une réflexion interne de la lumière sortant de la
diode photoémissive qui a pénétré dans l'organe transparent.
Plusieurs éléments réfléchissants sont formés à la surface arrière de l'organe transparent afin que la lumière provenant de la diode photoémissive et réfléchie par la surface avant de l'organe transparent soit réfléchie pour pénétrer dans la section de réflexion interne avec un angle d'incidence inférieur ou égal à l'angle critique. On peut
obtenir alors les effets suivants.
Même lorsque la section de réflexion normale, qui a subi le traitement de formation d'une surface réfléchis35 sante, est disposée afin que la lumière provenant de la source de lumière à diode photoémissive et qui a pénétré dans l'organe transparent pénètre dans la section de réflexion normale avec un angle d'incidence inférieur ou égal à l'angle critique, la lumière peut être réfléchie de toute manière. En conséquence, la configuration géométrique de la surface de la section de réflexion normale peut être réglée librement. L'étendue de la surface arrière de l'organe transparent à laquelle la lumière réfléchie par la section de réflexion normale pénètre et la région de la surface arrière dans laquelle la lumière qui a subi la réflexion interne dans la section de réflexion normale pénètre peuvent être réglées facilement afin qu'elles ne se recouvrent pas. En conséquence, le réglage de la réflexion peut être exécuté de façon convenable grâce à la surface
arrière de l'organe transparent.
En conséquence, selon l'invention, la lampe de véhicule équipée d'une source de lumière à diode photoémissive permet une utilisation efficace de la lumière provenant de la source de lumière à diode photoémissive constituant une lampe d'éclairage, avec réglage convenable de la lumière
d'éclairage de la lampe.
Comme indiqué précédemment, aucune restriction particu20 lière n'est imposée à la configuration géométrique de la surface de la section de réflexion normale et à celle de la section de réflexion interne. Pourvu que la section de réflexion normale soit formée avec une surface courbe de rotation centrée sur l'axe optique et ayant pratiquement une forme d'entonnoir et que la section de réflexion interne soit formée par une surface courbe centrée sur l'axe optique et ayant pratiquement une forme de dôme annulaire, l'effet
suivant peut être obtenu.
La lumière provenant de la source de lumière à diode photoémissive peut être réfléchie par la surface avant de l'organe transparent à toute la circonférence autour de l'axe optique et provoque ainsi l'entrée de la lumière à une surface arrière de l'organe transparent. En conséquence, une large surface d'éclairage peut être obtenue avec une source de lumière à une seule diode photoémissive. La source de lumière à diode photoémissive peut en outre être placée au centre de la lampe si bien que la configuration externe de
la lampe peut être réglée librement.
Dans cette configuration, tant que la section de réflexion normale et la section de réflexion interne sont formées par des surfaces à courbure continue, l'étendue de la surface arrière de l'organe transparent par laquelle pénètre la lumière réfléchie par la section de réflexion normale et l'étendue de la surface arrière par laquelle pénètre la lumière qui a subi la réflexion interne sur la section de réflexion interne peuvent être adjacentes sans recouvrement ni séparation. En conséquence, on peut éliminer le risque d'une plage sombre ou analogue à la surface arrière de l'organe transparent observé depuis l'avant de la lampe lorsque la source de lumière à diode photoémissive fonctionne. A ce moment, on peut obtenir l'effet suivant par réglage de la position d'une ligne de limite formée entre la section de réflexion normale et la section de réflexion interne à un emplacement auquel l'angle d'incidence de la
lumière provenant de la source de lumière à diode photoémissive devient égal à l'angle critique pratiquement.
Plus précisément, lorsque la lampe de véhicule est observée par l'avant alors que la source de lumière est éclairée, la section de réflexion normale soumise au traitement de surface réfléchissante paraît sombre. En conséquence, la région de la section de réflexion normale destinée à subir le traitement de formation de surface réfléchissante est de préférence réduite au minimum. Pour ces raisons, si la position de la ligne de limite entre la section de réflexion normale et la section de réflexion interne est réglée à une position dans laquelle l'angle d'incidence de la lumière provenant de la source de lumière à la diode photoémissive et pénétrant à la surface avant de l'organe transparent devient égal à l'angle critique pratiquement, la section de réflexion normale peut être réglée à une dimension minimale alors que la lumière provenant de la source de lumière à diode photoémissive est réfléchie vers l'arrière par la surface avant de l'organe transparent sans
aucune fuite notable.
Le comportement viscoélastique des compositions selon l'invention est notamment caractérisé par un module de rigidité plateau Gp supérieur ou égal à 5500 Pa, et en particulier qui peut être supérieur ou égal à 7000 Pa, voire supérieur ou égal à 10 000 Pa.
En outre, les compositions selon l'invention peuvent présenter une élasticité plateau 8p pouvant aller de 1 à 45 , et mieux allant de 5 à 30 .
En particulier, les cires convenant à l'invention peuvent présenter un point de fusion supérieur à 45 environ, et en particulier supérieur à 55 C.
Le point de fusion de la cire peut être mesuré à l'aide d'un calorimètre à balayage différentiel (D.S.C.), par exemple le calorimètre vendu sous la dénomination DSC 30 par la société METLER.
Le protocole de mesure est le suivant : Un échantillon de 15 mg de produit disposé dans un creuset est soumis à une
première montée en température allant de 0 C à 120 C, à la vitesse de chauffe de 10 C/ minute, puis est refroidi de 120 C à 0 C à une vitesse de refroidissement de 10 C/minute et enfin soumis à une deuxième montée en température allant de 0 C à 120 C à une vitesse de chauffe de 5 C/minute. Pendant la deuxième montée en température, on mesure la variation de la différence de puissance absorbée par le creuset vide et par le creuset contenant l'échantillon de produit en fonction de la température. Le point de fusion du composé est la valeur de la température correspondant au sommet du pic de la courbe représentant la variation de la différence de puissance absorbée en fonction de la température.
Les cires susceptibles d'être utilisées dans les compositions selon l'invention sont choisies parmi les cires, solides et rigides à température ambiante, d'origine animale, végétale, minérale ou de synthèse et leurs mélanges.
La cire peut également présenter une dureté allant de 0,05 MPa à 15MPa, et de préférence allant de 6 MPa à 15 MPa . La dureté est déterminée par la mesure de la force en compression mesurée à 20 C à l'aide du texturomètre vendu sous la dénomination TATX2i par la société RHEO, équipé d'un cylindre en inox d'un diamètre de 2 mm se déplaçant à la vitesse de mesure de 0,1 mm/s, et pénétrant dans la cire à une profondeur de pénétration de 0,3 mm.
On peut notamment utiliser les cires hydrocarbonées comme la cire d'abeilles, la cire de lanoline, et les cires d'insectes de Chine ; cire de riz, la cire de Carnauba, la cire de Candellila, la cire d'Ouricurry, la cire d'Alfa, la cire de fibres de liège, la cire de canne à sucre, la cire du Japon et la cire de sumac ; cire de montan, les cires microcristallines, les paraffines et l'ozokérite; les cires de polyéthylène, les cires obtenues par la synthèse de
Fisher-Tropsch et les copolymères cireux ainsi que leurs esters.
Là encore, de préférence, au moins une partie de la matière active présente dans la phase aqueuse est conservée à l'issue de cette étape.
La teneur en eau restant dans la particule peut être évaluée par diverses méthodes comme par exemple la détermination de l'extrait sec des particules après le séchage (étuve à 110 C pendant 1 heure).
La détermination de la quantité de matière active restant dans les particules avant et/ou après le séchage peut être réalisée selon toute méthode connue de l'homme de
l'art, selon la nature de cette matière active. Ainsi, on pourra utiliser la méthode de mesure de l'extrait sec, la spectrométrie UV, la conductimétrie, la chromatographie, etc.
Le séchage a généralement lieu en mettant en #uvre l'air ou encore l'azote par exemple.
Les conditions de mise en #uvre du séchage, plus spécialement de température et de durée, sont telles que la température atteinte par la particule lors du séchage, ne dépasse pas la température de transition vitreuse du polymère.
Les conditions de séchage sont aussi fonction des caractéristiques finales du produit.
Ainsi, la température de séchage est plus particulièrement comprise entre 20 C et la température de ramollissement polymère. Par exemple, la température de séchage est habituellement comprise entre 20 et 150 C.
Les appareillages dans lesquels peut être effectué le séchage sont classiques. A titre d'exemple, on peut le mettre en #uvre dans une étuve, sur un lit transporté, dans un lit fluidisé.
Des méthodes de séchage comme l'atomisation, la lyophilisation peuvent être employées.
Un autre objet de l'invention est constitué par des particules susceptibles d'être obtenues par le procédé selon l'invention, chaque particule présentant une surface externe fermée, ainsi que des pores internes non connectés entre eux.
Selon un premier mode de réalisation, les particules présentent au moins l'un des pores interne de la particule ouvert vers l'extérieur de la particule, après contact avec la surface. Selon ce mode de réalisation, et si le nombre de pores internes ouverts vers l'extérieur est suffisamment important, la surface externe de la particule a un aspect général non uniforme (présence de creux).
Selon un autre mode de réalisation de l'invention, aucun des pores internes de la particule n'est ouvert vers l'extérieur de la particule, par contact avec la surface. Par conséquent, conformément à ce mode de réalisation particulièrement avantageux, l'aspect général de la surface externe de la particule est uniforme (absence de creux).
Bien évidemment, la combinaison de ces deux mode de réalisation est envisageable.
De telles caractéristiques peuvent être observées par microscopie électronique à balayage.
En fait, les pores de chaque particule sont issus de la phase aqueuse interne de l'émulsion multiple.
courbure de l'objet 2, en particulier à la courbure d'une plaque de microtitration.
COMPOSANT ELECTRONIQUE NUMERIQUE PROTEGE CONTRE DES ANALYSES DE TYPE ELECTRIQUE ET/OU ELECTROMAGNETIQUE, NOTAMMENT DANS LE DOMAINE DE LA CARTE A PUCE DESCRIPTION DOMAINE TECHNIQUE La présente invention concerne un composant électronique numérique protégé contre des analyses de type électrique et/ou électromagnétique, notamment dans le domaine de la carte à puce.