INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Exemple 4 : Mise en évidence du rôle de LOXL2, LOXL3, et LOXL4 dans l'élastoaenèse L'invention a aussi porté sur le développement de 2 nouveaux anticorps anti-LOXL2, un de ces anticorps reconnaissant aussi, théoriquement, LOXL3 et LOXL4. Ceci a permis de définir si ces enzymes sont exprimées avec l'élastine dans le derme d'un modèle de peau reconstruite. En fait, l'analyse par immuno-histochimie en utilisant les 2 anticorps anti-LOXL2 montrent que cet antigène, ainsi que les 2 protéines antigèniquement reliées LOXL3 et LOXL4,
ne sont pas ou peu exprimées dans le derme, et qu'elles ne participent donc pas à l'élastogenèse.
Sur la Figure 4 : il est représenté l'immuno-détection sur des sections de peaux reconstruites (16,35 et 45 jours) et de peaux de prépuce humain avec l'anticorps anti-LOXL2517-581 (colonne de gauche) et l'anticorps anti- LOXL2664- 720 reconnaissant théoriquement LOXL2, LOXL3 et LOXL4 (colonne de droite).
Les anticorps anti-LOXL2 ont été obtenus contre des peptides de fusion GST-LOXL2, comme décrit précédemment (Decitre et al., Lab. Invest. 78,143- 151,1998). Le gène de fusion GST-LOXL2 517-581 a été construit en introduisant la séquence 1543 à 1747 du gène humain de LOXL2 (hLOXL2) dans le plasmide décrit précédemment.
Ce segment a été généré par PCR avec les amorces sens 5GAGCTGGGATCCGCGCACTGCC-3' et antisens 5'-GGCTGAGTCGACGAGG CAGTTCTCC-3'.
Le gène de fusion GST-LOXL2 664-720 a été construit en introduisant la séquence hLOXL2 correspondante, grâce aux amorces sens 5'CACAGGATCCGAAGGAGACATCCAGAAG-3' et antisens 5'TTTCTGAGCTCCTGCATTTCATGATG-3'.
Les protéines de fusion et les anticorps anti-lapin générés contre ces protéines ont été préparés comme décrit précédemment. L'anticorps contre le peptide 517-580 a été appelé anti-LOXL2, car cette région est spécifique de LOXL2.
L'anticorps contre le peptide 664-734 a été appelé anti-LOXL-R (pour "relatif à"), car cette région de LOXL2 présente une forte similarité avec LOXL3 et LOXL4 (environ 74,6% et 60,5%, respectivement).
Les peaux reconstruites (Mimeskin, Coletica, Lyon France) à 16 jours (PR-J16), 35 jours (PR-J35) et 45 jours (PR-J45), et la peau de prépuce humain sont analysées comme précédemment par immuno-histochimie avec
les anticorps anti-LOXL2-R et anti-LOXL2. L'anti-LOXL2 met en évidence une expression de LOXL2 dans l'épiderme, et non dans le derme. Alors que l'anticorps dirigé contre la région commune C-terminale de LOXL2, LOXL3 et LOXL4, confirme l'expression de ces enzymes dans l'épiderme et met en évidence une faible expression dans le derme mais dans une zone qui ne correspond pas aux sites d'élastogenèse.
LOXL2, LOXL3 et LOXL4 ne sont donc pas impliquées dans l'élastogenèse.
Exemple 5 : Mise en évidence du rôle de LOXL dans l'élastogenèse L'association entre LOXL ou LOX d'une part, et les fibres élastiques ou les microfibrilles d'autre part, a été clairement démontrée en microscopie électronique à transmission par la présente invention.
LOX et LOXL associées aux microfibrilles constituent la trame sur laquelle se dépose l'élastine, tandis que seule LOX est associée à la formation des fibres de collagène (voir figure 5).
Sur la figure 5 : il est représenté l'immuno-détection de LOXL, de LOX et de l'élastine par microscopie électronique à transmission dans la partie dermique de la peau reconstruite 30 jours après l'application des kératinocytes, et de la peau humaine normale.
Exemple 9 : Emulsion multiple sous forme d'un solide (Es) Composition avant séchage : # 39,71 % en poids d'émulsion multiple de l'exemple 6
# 60,29% poids d'une solution d'un mélange de polyéthylène glycols, correspondant à - 30% en poids de Polyglycol Mw 4000 - 30% en poids de Polyglycol Mw 35000 - 40% d'Eau Préparation de la matrice (solution aqueuse à 60%) (M) Dans un réacteur de 2 1 muni d'une agitation type pale cadre (diamètre 90 mm, vitesse 200 tours/minute), on introduit l'eau. On porte la température à 75-80 C.
On introduit alors progressivement, sous agitation et en maintenant la température, le Polyéthylène glycol 4 000, puis le Polyéthylène glycol 35000.
Les produits fondent et se solubilisent rapidement.
En fin d'addition, on refroidit la solution glycolique à 35-40 C Incorporation de la matrice dans l'émulsion multiple On introduit dans l'émulsion multiple concentrée de l'exemple 6 à température ambiante, la solution glycolique à 35-40 C préparée ci-dessus, en 10 minutes sous agitation lente (pale cadre - diamètre 90 mm, vitesse 200 tours/minute), et l'on maintient l'agitation 15 minutes après la fin de l'introduction de la phase glycolique.
On obtient une émulsion multiple diluée dans la matrice, liquide, et présentant la même granulométrie d (50) que celle de l'émulsion multiple concentrée (10 m).
Obtention de la forme solide sèche (séchage - cristallisation par refroidissement - écaillage) L'émulsion multiple diluée dans la matrice ainsi obtenue, est versée dans des plateaux (plans) d'étuve ventilée, et étalée de façon à réaliser un film liquide d'épaisseur de 0,5 à 1 mm. Les plateaux sont introduits dans l'étuve ventilée (température de l'étuve réglée à 65 C) et maintenus dans l'étuve pendant 1 heure.
La perte en poids (élimination de l'eau) est estimée à 35-40%.
Les plateaux sont sortis de l'étuve et stockés à température ambiante.
Le refroidissement et la cristallisation à température ambiante nécessitent 1 heure.
Le produit sec obtenu est écaillé à l'aide d'une spatule.
On concasse grossièrement les écailles, pour obtenir un produit solide constitué de petites écailles de 1 à 2 mm présentant une épaisseur de 0,5 mm.
Un échantillon de l'émulsion sous forme solide (Es) introduit dans de l'eau conduit à une resolubilisation des polyéthylène glycols, à la libération de l'émulsion multiple (Em), puis à la déstabilisation de l'émulsion multiple (Em) comme décrit précédemment.
Exemple 10 : Emulsion multiple sous forme d'un solide (Es) Composition avant séchage : # Emulsion multiple de 38,85 parties en poids l'exemple 6 (soit 35 parties en poids d'émulsion inverse (Ei) # Solution 1 Saccharose 38 parties en poids Eau 38 parties en poids # Solution 2 Geropon EGPM (solution) 108 parties en poids (soit 27 parties en poids sec) Eau 27 parties en poids Préparation de la matrice On prépare une solution de saccharose à 50% par dissolution dans l'eau du saccharose sous agitation à température ambiante.
On prépare une solution de Géropon EGPM à 20% d'extrait sec par dissolution dans l'eau du Géropon EGPM (solution à 25% d'extrait sec - pH 11) Incorporation de la matrice dans l'émulsion multiple On introduit dans l'émulsion multiple concentrée obtenue à l'exemple 6, à température ambiante, la solution de saccharose, en 10 minutes et sous agitation lente (diamètre 90 mm, vitesse 200 tours/minute), puis la solution de Géropon EGPM et l'on maintient l'agitation 15 minutes en fin d'introduction.
On obtient une émulsion multiple diluée (40,2% d'extrait sec basé sur l'émulsion inverse) dans la matrice liquide présentant la même granulométrie d (50) que celle de l'émulsion multiple concentrée, soit 10 m.
cheveux ont été lavés ou encore des shampoings ou autres produits capillaires avec lesquels ils ont été traités.
Il est, en effet, très important de neutraliser ces cations métalliques, dans la mesure où ils sont susceptibles de catalyser la réaction de réduction et ce, de façon non contrôlée, ce qui peut se traduire par des effets indésirables sévères tels qu'une cassure des cheveux ou des brûlures du cuir chevelu.
Toutefois, dans le cadre de ses travaux, la Demanderesse a constaté que l'EDTA et ses dérivés présentent, dans ce type de compositions, des propriétés insuffisantes.
En effet, outre qu'il doit présenter un pouvoir complexant élevé vis-à-vis des métaux de manière à supprimer ou, à tout le moins, réduire le plus possible le risque d'une catalyse de la réaction
de réduction par les métaux susceptibles d'être présents, même à l'état de traces, dans ces compositions et sur ces fibres, il doit être compatible, et notamment ne pas réagir, avec les autres constituants de ces compositions, et en particulier avec le ou les agents réducteurs.
Or, après de longues recherches menées sur la question, la Demanderesse a constaté que, de manière surprenante, certains acides hydroxycarboxyliques et leurs sels sont susceptibles de répondre à toutes ces exigences et de représenter, par conséquent, des agents complexants de choix dans des compositions réductrices pour la décoloration et la déformation permanente de fibres kératiniques.
EXPOSÉ DE L'INVENTION L'invention a, en premier lieu, pour objet l'utilisation d'un ou plusieurs composés répondant à la formule générale (I) suivante : R-(CHOH)4-CO2X (I) dans laquelle : # R représente un groupe CH20H ou CO2X, et . X représente un atome d'hydrogène ou un cation monovalent ou divalent issu d'un métal alcalin, d'un métal alcalino-terreux, d'un métal de transition, d'une amine organique, ou un cation ammonium, dans une composition réductrice pour la décoloration ou la déformation permanente de fibres kératiniques, pour complexer les cations métalliques présents dans cette composition et/ou sur les fibres kératiniques sur lesquelles ladite composition est destinée à être appliquée.
Conformément à l'invention, le cation monovalent ou divalent est choisi dans le groupe
On a donc testé les sels d'onium comme supports solubles pour la préparation des a-aminoacides supérieurs selon le schéma réactionnel suivant : OH DCC/DMAP (D,,,,,O,,NHBoc '3 BocHN -- ,y 0 DCM, 20-C (Me)3N 9 Il ci 1)HC!/DCM 2) Pu ≥nu Ph R' CD H2N -,y OMe 1) R'-X, K2COg, CH3CN PhN^ 'ON(Me)3 , O 33 0 2) MeOH,:HCI, Ph R' = Bu : Rdt= 73% 10 R' = Allyle : Rdt= 82%
La réaction d'estérification est effectuée directement sur la N-Boc-glycine en présence d'un équivalent de DCC et de 5% de DMAP à température ambiante dans le dichlorométhane (DCM). Le groupement protecteur Boc est ensuite éliminé en présence d'acide chlorhydrique dans le DCM avec un bon rendement. De même, la condensation de l'aminoester avec la biphénylméthylène imine conduit à l'iminoester 10 avec un excellent rendement et peut-être conservé plusieurs jours à température ambiante.
Il faut noter que le support qui est un sel d'ammonium joue aussi le rôle du catalyseur de transfert de phase dans l'étape d'alkylation de la base de Schiff 10, et nous avons constaté une réactivité plus importante que celle décrite dans la littérature pour l'alkylation du même substrat supporté sur PEG ou support solide.
C - Exemple 4 : les Réactions Multi-Composants RMC Les réactions multi-composants mettent en présence simultanément au moins trois partenaires dans des conditions expérimentales qui ne varient pas au cours du temps et permettent la création de plusieurs liaisons covalentes en cascade dans un seul réacteur, à la différence des réactions classiques ou deux réactifs conduisent à un produit par création d'une nouvelle liaison. Ainsi il est possible d'accéder en une seule étape à une molécule hautement fonctionnalisée à partir d'entités relativement simples. De plus les RCM allient convergence et économie d'atomes, deux principes essentiels en synthèse organique mais aussi en chimie combinatoire. Signalons enfin que ces réactions ont généralement lieu avec un rendement élevé, puisqu'elles évitent la succession d'étapes des synthèses linéaires ou multiétapes qui, font, à chaque pas, chuter le rendement.
Les RMC les plus connues et les plus développées sont celles de Passérini et de Ugi. Un des réactifs clef de ces réactions est un isonitrile de formule générale RN=C, dont la structure électronique du carbone terminal compte un doublet et une lacune électronique (structure de type carbènique) et permet le passage d'un atome de carbone formellement divalent à un atome de carbone tétravalent par addition d'un électrophile et d'un nucléophile. Le schéma qui suit représente un exemple de réaction de Passérini (réaction 3CC pour 3 component condensation).
0 /l 0 + R4-=C: RMC de Passérini R4,N o 0 R Pi OH R2 R3 H R2R3 V Il a-acyloxyamide
Bien sûr les RCM ont été transposées sur support solide, par exemple une résine à terminaison amine a été engagée dans une réaction de type Ugi pour conduire après clivage à une série d'adduits d'une grande pureté avec des rendements s'échelonnant de moyens à excellents : RL-CHO R2-CO2H R3-N=C: \#-NH2 N/O O R1 R1 - C6H11 C6H5, iPr 2CI2 MeOH(2/1) H R2 j Rs 0 iI R2=CeHn C6H5, Et pureté > 95% R3 - C6H11 Rdt = 40-95% Bien que les réaction de Ugi et Passerini soient les plus connues et les plus développées, il existe d'autres RMC, qui répondent au critère essentiel que tous les réactifs sont présents dès le début de la réaction et les conditions ne varient pas au cours de celles-ci. A la différence des réactions de Ugi et Passerini, ces autres réactions ne reposent pas sur l'utilisation d'un isonitrile comme un des acteurs centraux de la création de nouvelles liaisons covalentes. Ces différents types de réactions permettent d'accéder à des structures hautement fonctionnalisées variées en une seule étape.
Les quinoléines substituées sont des pharmacophores intéressants. Leur synthèse sur support solide a été réalisée par une RCM dite de Doebner, mettant en jeu une aniline, un aldéhyde et un composé [alpha]-dicarbonylé. Les quinoléines sont obtenues avec une grande pureté et de très bons rendements.
H 0 Nî1'N 0 0 R2 NH2 1 ) C6H6, 80 C J,.J 2)TFA.
TFA. NH2 O Ï(H CHO h 1 pureté > 90% . P2 Rdt = 62-92% R2 R = H, OCH3 R2 = H, 4-N02, 4-CN, 4-CI Il a été décidé ici de profiter des nombreux avantages offerts par les supports oniums, comme cela a été mis en évidence dans les différents exemples décrits précédemment. Ainsi, on a choisi de les tester dans les RMC de type Grieco (Grieco et
al., 1988). Cet exemple a fait l'objet de plusieurs travaux décrits par W. Armstrong et al. (1997 et 1998) sur support solide et il a permis la préparation d'une librairie de 80 produits avec des rendements allant de 50 à 93%.
Pour ce faire, on a supporté l'aniline 34 qui a été mise en présence d'un aldéhyde et du cyclopentadiène pour conduire à des tétrahydroquinoléines. Cet exemple à trois composants, consiste en une première condensation de l'aldéhyde et de l'aniline pour conduire à l'imine. Celle-ci réagit ensuite dans ce qui est formellement une réaction de Diels-Alder avec le cyclopentadiène en présence d'une quantité catalytique d'acide trifluoroacétique.
8 (D NTfs (Me)3N-N\,,,----O -IUNH2 TFA, CH3CN 34 0"" NH2 TFA, CH3CN TFA, CH3CN 0 TA t (h) NTf2 f2 (Me)a O R 1) Lavage l'éther 1) Lavage à t'éther + 3) Extraction 3) Extraction à l'éther Tf, (MehN #> OH -0( 0 Me-0 36 H \ RUZ Avec R =4-N02, H, 4-Cl, 2-MeO Le suivi des différentes réactions a été effectué par RMN 'H et on a observé une conversion allant de 80% à 100% selon la nature de l'aldéhyde. En effet, en présence d'aldéhyde riche en électrons la réaction est ralentie. Ainsi en présence du 4- nitrobenzaldhéyde la réaction est totale au bout de 12 heures alors que l'avancement n'est que de 70% dans le cas du benzaldéhyde. Le schéma réactionnel ci-dessus illustre le cas du 4-nitrobenzaldéhyde, après évaporation du solvant (CH3CN) et lavage à l'éther pour éliminer l'excès des deux réactifs et de l'acide trifluoroacétique. Ce schéma montre aussi que le suivi d'une réaction qui conduit à des composés complexes est
possible et d'une clarté remarquable. Il faut toute fois noter que la trans-estérification par le méthanol conduit à des produits très propres qui sont extraits à l'éther et purifiés par filtration sur silice.
Les différents exemples que nous avons réalisés et les résultats obtenus sont regroupés dans le tableau 16 ci-dessous.
Tableau 16 : Réaction de Griéco réalisée sur sel d'ammonium utilisé comme support soluble : R Temps en (h) Rdt de 35 en (%) Rdt de 36 en (%)
Les prélèvements de selles sont faits dans des tubes à hémolyse stériles et sont pesés aseptiquement puis dilués en solution préréduite de Ringer diluée au quart et supplémentée en chlorhydrate de cystéine (0,3 g/1), de façon à obtenir des dilutions au dixième allant de 10-1 à 10-4. Le contenu est enfin déposé à raison de 100 l par boîte, sur différents milieux de culture contenus dans des boîtes de Pétri : - Milieu de Beerens (Be) (composé de 35 g/1 de base gélose Columbia, 5 g/1 de glucose, 0,3 g/1 de chlorhydrate de cystéine, 0,5 % d'acide propionique et ajusté à pH 5) pour la recherche et le dénombrement de Bifidobacterium, après étalement de dilutions allant de 10-1 à 10-4; - Milieu Bacteroïdes Bile Esculine (BBE) (composé de 37 g/1 de tryptone, 32 g/1 de Bile Esculin Agar (DIFCO), 0,5 g/1 d'esculine, 0,5 g/1 de citrate de fer ammoniacal, 0,2 % d'une solution d'hémine à 5 mg/ml, 0,25 % d'une solution de
gentamicine à 40 mg/ml et 10 g/1 d'agar; ajusté à pH 7 et autoclavé 15 minutes à 120 C) pour la recherche et le dénombrement de Bacteroïdes fragilis, après étalement de dilutions allant de 10-1 à 10-3.
L'étalement est réalisé à l'aide de billes de verre stériles sur les milieux indiqués et la lecture des milieux est réalisée après 5-7 jours d'incubation en anaérobiose à 37 C.
L'identification des bactéries est réalisée d'une part après description des colonies obtenues sur chacun des milieux et d'autre part à l'aide d'une coloration de Gram.
Les résultats concernant l'évolution de Bifidobacterium et de Bacteroïdes fragilis dans les selles des souris sont reportés respectivement dans les Tableaux II et III suivants : TABLEAU II
Bifidobacterium TO T7 T15 T21 3,660,56 4,420,55 4,73 1,23 nd Fraction filtrée (7) (8) (8) ** ~~~~~~~~ n=12 n=12 n=12 - 4,020,74 4,541,0 4,560,36 4,76 0,27 Fraction exclue (8) (11) (12)* (6) * n= 18 n= 18 n= 12 n=6 nd : non déterminé, * : p TABLEAU III
Bacteroïdes fragilis TO T7 T15 T21 4,580,95 4,420,51 4,260,81 Nd Fraction filtrée (8) (9) (9) ~~~~~~~~ n=12 n=12 n=12 4,280,35 3,990,37 3,740,283,20,16 Fraction exclue (18) (8) (9) (4)** n= 18 n= 18 n= 12 n = 6 -- nd : non déterminé, * : p<0,025 ; ** : p<0,05
Dans ces tableaux, les résultats obtenus sont exprimés en moyenne et écart-type du log du nombre d'UFC/g de selles, et n est le nombre de souris utilisées pour chaque produit et jours testés (comparaison de rang par test de Wilcoxon pour échantillons appariés), les astérisques indiquent les résultats significatifs par rapport au temps TO. Dans ces tableaux, le chiffre mentionné entre parenthèse correspond au nombre de souris dans lesquelles est présente la bactérie en question au dessus du seuil de détection. Les résultats correspondants au milieu non ensemencé sont similaires à la valeur obtenue à TO et restent constants au cours du temps pendant les 21 jours de l'expérience (résultats non représentés dans les tableaux).
Ces résultats montrent que l'administration de l'une quelconque des deux fractions (exclue ou filtrée) conduit effectivement à une augmentation des Bifidobacterium mais que seule la fraction exclue est efficace pour provoquer une diminution de la population en Bacteroïdes fragilis au sein de la flore intestinale des souris.
2) Effet de la fraction exclue sur la régulation de la translocation intestinale des micro-organismes La mesure de la translocation intestinale des micro-organismes chez la souris est effectuée sur les souris mâles de lignée C3H à flore humaine adulte (élevage au CDTA-CNRS, Orléans, France). Pendant toute la durée d'adaptation et jusqu'au début de l'expérience, ces souris disposent d'eau stérile comme boisson.
Pendant toute la durée de l'expérience, ces souris seront nourries avec des granulés R03 stérilisés par irradiation.
A l'âge de 10-12 semaines, début de l'expérience, on constitue trois groupes, un groupe de 18 souris qui recevra pendant toute la durée de l'expérience la fraction exclue des métabolites de Bifidobacterium breve CNCM 1-2219 à la place de l'eau des biberons, à raison de 8-10 ml par jour et par souris pendant que deux autres groupes de 12 et 23 souris recevront respectivement la fraction filtrée ou continueront de recevoir de l'eau stérile (groupe contrôle).
Au 21ème jour, on effectue un prélèvement de selles comme décrit précédemment et les souris sont sacrifiées pour réaliser une étude bactériologique.
Deux types de données sont obtenus à partir de l'analyse des organes des souris sacrifiées : - la translocation par organe cible, c'est-à-dire l'évaluation du nombre de souris ayant l'organe cible contaminé et du pourcentage de la population présentant une contamination de l'organe cible.
- la dissémination bactérienne, c'est-à-dire l'intensité de la dissémination bactérienne représentée par le nombre d'organes positifs ainsi que le nombre de souris et le pourcentage de la population présentant une dissémination d'une intensité donnée.
Afin de prélever les organes à analyser, l'animal est extrait de l'isolateur, transféré dans des conditions aseptiques sous une hotte à flux laminaire, et sacrifié par inhalation de chloroforme.
R4 : Le trafficker prend connaissance dudit mot de passe R5 : Le trafficker communique, par exemple par email, ledit mot de passe au Webmestre du site PS~i2j2.
# L'interface Agence Al: L'utilisateur de l'interface agence (en général l'agence qui gère les achats d'espaces publicitaires pour le compte d'un annonceur par l'intermédiaire de son trafficker) commence par entrer un mot de passe l'identifiant.
A2: Elle choisit ensuite un site Web dans la liste déroulante "URL Site Web" qui lui présente l'ensemble des URL des sites Web de la base de données PS, constituée des sites Web
qui ont, indépendamment, renseigné l'interface de développement qui leur est dédiée. Ici elle choisit l'URL PS~i2j2.
A3: L'agence indique, dans le champ "Mot(s)" prévu à cet effet, le (ou les) mot(s) sur lequel (lesquels) elle désire communiquer sur le site qu'elle a sélectionné. Ici, elle sélectionne le mot "Web", indiquant ainsi qu'elle désire communiquer sur le mot "Web" sur la page Web PS~i2j2.
A4: L'agence sélectionne un des annonceurs dont elle assure la gestion. Elle sélectionne ici l'annonceur AD~i1j1 par le biais de la liste déroulante "Annonceur".
A5: Le choix de l'annonceur provoque l'affichage, dans la liste déroulante "Arbre" de l'ensemble des structures arborescentes de l'annonceur AD~iljl . L'agence sélectionne un des arbres présentés dans cette liste déroulante. Elle choisit ici l'arbre noté T~iljlk.
# L'interface Webmestre Wl: Le Webmestre entre le mot de passe que lui a communiqué la régie dans le champ "Mot de passe" prévu à cet effet.
W2: ceci a pour effet d'indiquer, à partir de la base de données PS, l'URL PS~i2j2 du site du Webmestre.
W3: Dans le champ "répertoire", le Webmestre indique, sous la forme d'une URL relative, la portion du site dont les pages sont les espaces publicitaires que la régie a en charge de gérer pour le Rich-Word.
W4,W5: Lorsque le Webmestre clique sur le bouton OK, chacune des pages Web incluses dans le répertoire susmentionné, sont agrémentées d'un code JavaScript permettant, lorsque la page est consultée, d'aller rechercher les structures arborescentes correspondant aux mots achetés sur cette page.
W6 : la nouvelle page est enregistrée à l'Url de l'ancienne.
La diminution de l'intrusion correspond à une non-intervention du Webmestre.
On peut rendre la phase de développement encore moins intrusive en permettant au Webmestre de ne pas y intervenir. Il suffit, pour ce faire, d'enrichir les marqueurs originels des bandeaux publicitaires d'un appel au script serveur "searchWord.jsp" qui requête la base de données RW. Ce procédé peut également s'étendre aux bandeaux publicitaires qui ne sont pas des Rich-Banner.
Ainsi, il n'est pas nécessaire de modifier les pages Web que la régie désire mettre à disposition des agences pour la réservation de mots, dans la mesure où le tag y figure déjà par le biais des bandeaux publicitaires dont les marqueurs ont été enrichis de l'appel au serveur de RichWord.
La phase de production du Rich-Word est illustrée figure 21.
Par ailleurs, il a été démontré son rôle dans la lutte contre l'aspect papyracé de la peau (FR 00/00349), sa capacité à moduler la pigmentation de la peau et des cheveux (FR 99/12773) et son action contre l'atrophie de l'épiderme (FR 00/06154). Bien que ces propriétés en fassent un candidat de choix comme actif cosmétique ou dermatologique, l'utilisation thérapeutique de la DHEA a révélé des effets secondaires indésirables en particulier chez la femme, en tant que précurseur potentiel des hormones androgènes.