Exemple 13 .: analyse de l'expression des ARN messagers de LOX et de NRAGE par des kératinocytes en culture, différenciés en milieu calcique, avec et sans mise en contact de principes actifs dont l'activité est à tester (Analyse réalisée, par exemple, par RTPCR quantitative, Criblage de principes actifs). Les actifs ont été testés sur des kératinocytes de prépuces humains 15 normaux de sujets jeunes (pooled normal human epidermal keratinocytes foreskin ù Clonetics). Les kératinocytes sont amplifiés, par exemple, en milieu K-SFM (keratinocytes serum free medium) supplémenté en antibiotiques jusqu'au troisième passage à 37 C sous 5% de CO2. 20 Les cellules sont ensemencées en plaques 96 puits, par exemple, à raison de 40 000 cellules par cm2 et cultivées jusqu'à environ 80% de confluence. Les cellules sont ensuite cultivées en milieu hyper-calcique (CaCl2 - I,7mM à 37 C sous 5% de CO2) afin d'induire une différenciation des cellules. 25 La matière première utilisée pour la préparation des principes actifs, lorsqu'il s'agit de plantes (de préférence racines, tiges, écorces, fleurs, fruits, graines, germes, gommes, exsudats, feuilles, ou plante entière) ou de protéines, est stérilisée ou non par rayonnement, par exemple beta ou gamma à une dose de préférence de 5kGy puis est réduite en poudre si nécessaire, par exemple par broyage à température ambiante. La poudre est ensuite dispersée à raison de 2 à 5% (poids/poids) de poudre, de préférence 5%, soit dans un solvant polaire, par exemple eau ou butylène glycol, et/ou dans un mélange de solvants polaires, avantageusement un mélange eau/(alcool, glycol ou polyol) (tels que éthanol, glycérol, butylène glycol et autres glycols, xylitol etc..,) en proportions variables et de préférence dans un mélange eau/butylène glycol 75/25 ou 50/50, soit dans un solvant apolaire, comme par exemple un alcane, soit dans un mélange de solvants apolaires, soit dans un mélange de solvants polaires et apolaires. Après agitation pendant au minimum 2 heures sous agitation, par exemple magnétique, l'échantillon est clarifié par décantation ou centrifugation puis filtré de préférence à 0,45pm ou 0,22pm. La matière première utilisée pour la préparation des principes actifs, lorsqu'il s'agit de molécules caractérisées (par exemple molécules obtenues par synthèse ou hémisynthèse, molécules biologiques obtenues par purification) est diluée dans un solvant, de préférence eau ou diméthylsulfoxide (concentration de préférence comprise entre 10"6M et de 10-2M, et préférentiellement de l'ordre de 10-4M, ou de préférence comprise entre 1% poids/poids et 5% poids/poids, en fonction des molécules). La solution obtenue est ensuite éventuellement filtrée, de préférence, à 0,45pm ou 0,22pm. Les principes actifs obtenus selon l'une des méthodes décrites ci-dessus sont ensuite testés à une concentration finale de préférence comprise entre 0,01% volume/volume (v/v) et 10 % (v/v) et avantageusement comprise entre 0,1% et 1% (v/v). L'incubation en présence des cellules est réalisée avantageusement pendant 24 heures en milieu K-SFM hyper-calcique sans facteurs de croissance. Les cellules sont congelées à sec à -80 C après un rinçage en tampon phosphate pH 7,4.