INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'invention concerne également des dérivés des peptides de l'invention. A titre de dérivés des peptides de l'invention, on peut citer les peptides qui présentent une modification post-traductionnelle et/ou modification chimique en particulier une glycosylation, une amidation, une acylation, une acétylation, une méthylation ainsi que les peptides qui portent un groupement protecteur. On entend par groupement protecteur selon la présente invention, tout groupement permettant d'éviter la dégradation desdits peptides.
Les dérivés des peptides de l'invention peuvent également être ceux dont un ou plusieurs acides aminés sont des énantiomères, des diastéréoisomères, des acides aminés naturels de conformation D, des acides aminés rares notamment l'hydroxyproline, l'hydroxylysine, l'allohydroxylysine, la 6-N méthylysine, la N-éthylglycine, la N-méthylglycine, la N-éthylasparagine, l'allo-isoleucine,
la N-méthylisoleucine, la N-méthylvaline, la pyroglutamine, l'acide aminobutyrique et les acides aminés synthétiques notamment l'ornithine, la norleucine, la norvaline, la cyclohexyl-alanine et les oméga-acides aminés. L'invention couvre également les rétropeptides et les rétro-inversopeptides, de même que les peptides dont la chaîne latérale d'un ou plusieurs des acides aminés est substituée par des groupements qui ne modifient pas l'activité anti-bactérienne des peptides de l'invention.
L'invention concerne aussi des polypeptides constitués par ou comprenant un peptide de l'invention. Ainsi, l'invention envisage un peptide de l'invention comprenant à l'une et/ou l'autre de ses extrémités, un résidu d'acide aminé nécessaire, par exemple à son expression et/ou au ciblage dans un organisme hôte.
Les peptides de l'invention peuvent aussi être préparés par synthèse chimique selon des méthodes conventionnelles.
La concentration de la suspension bactérienne a été contrôlée par dénombrement des Unités Formant Colonies (UFC). La suspension bactérienne à 2.106/ml a été diluée en cascade (10-1, 10-2, 10-3, ... 10-6) puis 100 l des dilutions 10-6, 10-5 et 10-4 ont été étalés sur des boîtes de gélose LB agar. Les boîtes ont été incubées à 35-37 C pendant 16 à 18h puis les UFC ont été dénombrées. b) Détermination des IC90.
Les IC90 ont été déterminées par un test liquide en microplaques de 96 puits. 100 l d'échantillon à tester ont été distribués en duplicats de façon à obtenir une gamme de concentrations finales de 64 à 0.125 pg/ml dans les puits. 100 l de suspension bactérienne à 2.106/ml ont été ajoutés dans chaque puits de façon à obtenir une concentration finale de 106/ml. Les plaques de microtitration ont été incubées à 30-35 C pendant 16 à 18h.
La densité optique des puits a été mesurée à 600-620 nm et les résultats ont été interprétés en calculant le pourcentage de pousse dans chaque puits selon la formule : %Pousse= (DO puits - DO du TS)/ (DO duTP - DO du TS) *100 où DO du TP= DO du témoin de pousse (suspension bactérienne sans échantillon à tester), DO du TS= DO du témoin de stérilité (milieu de culture sans bactéries) et DO puits= DO du puits dont on souhaite calculer le pourcentage de pousse (suspension bactérienne + échantillon à tester).
L'IC90 correspond au puits où le pourcentage de pousse est inférieur ou égal à 10%. Les résultats des activités
antibactériennes (IC90) sont présentés dans le tableau 1 exposée dans la description.
2) Tests antifongiques.
Les activités antifongiques ont été évaluées in vitro par détermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI).
Les tests ont été réalisés sur les souches de levures suivantes : Candida albicans (souche IHEM 8060 ; du Dr. H. Koenig, Hôpital civil, Strasbourg) et Candida glabrata (souche patient 1 ; du Dr. H. Koenig, Hôpital civil, Strasbourg) ainsi que sur les champignons filamenteux suivants : Aspergillus fumigatus (souche GASP 4707 ; Don du Dr. H. Koenig, Hôpital civil, Strasbourg).
Toutes ces souches sont sensibles aux antifongiques communément utilisés en milieu hospitalier. a) Préparation des suspensions fongiques. a-1) Préparation des suspensions de levures.
Une anse de levures prélevée à partir d'un stock de levures en suspension à 4 C a été étalée sur une boîte de gélose Sabouraud Agar. La boîte a été incubée à 30 C pendant 24 à 48h. Quelques colonies de levures ont été prélevées et mises en suspension dans 10 ml de milieu Sabouraud liquide. La suspension de levure obtenue qui doit être laiteuse a été diluée (1 ml qsp 10 ml de milieu Sabouraud). La concentration de la suspension a été évaluée par mesure de la densité optique à 600 nm suivant la relation 0. 1 DO à 600 nm correspond 2,5.106 levures/ml. La concentration a été ajustée par dilution de façon à obtenir une suspension de 2,5.103/ml de concentration finale. La concentration de la suspension de levure a été contrôlée par dénombrement des Unités Formant Colonies (UFC). La suspension de levures à 2,5.103/ml a été diluée en cascade ( 10-1, 10-2, 10-3, ... 10-6) puis 100 l de chaque dilution ont été étalés sur des boîtes de gélose Sabouraud. Les boîtes
ont été incubées à 30 C pendant 24h puis les UFC ont été dénombrées. a-2) Préparation des suspensions de champignons filamenteux.
Les champignons ont été ensemencés sur des boîtes de gélose de malt-agar qui ont été incubées 5 à 7 jours à 37 C. Les spores formées ont été récoltées et mises en suspension dans du milieu YPG. La concentration de la suspension a été évaluée par comptage d'un aliquot sur une lamelle de comptage (Coverslide). La concentration a été ajustée par dilution de façon à obtenir une suspension de 5.103/ml de concentration finale. b) Détermination des CMI.
Les CMI ont été déterminées par un test liquide sur microplaques de 96 puits selon les protocoles M27-A et M38-P du National Committee for Clinical Standard (NCCLS) à la différence près que le milieu RPMI-1640 suggéré par le protocole NCCLS a été substitué par du milieu Sabouraud (Biomérieux) pour les tests sur les levures et par du milieu YPG (1 g peptone, 1 g yeast extract, 3 g glucose par litre) pour les tests sur les champignons filamenteux. Les activités des échantillons à tester ont été déterminées pour la gamme de concentrations finales 0. 125 à 64 g/ml. b-1) Détermination des CMI sur les levures.
La densité optique des microplaques a été mesurée à 600 nm avec un spectrophotomètre pour microplaques après 24 et 48h d'incubation pour les levures du genre Candida.
Le pourcentage de pousse (%pousse) a été calculé à partir des valeurs de densité optique (DO) mesurées selon la formule suivante :
%pousse=((DO puits avec échantillon à tester - DO milieu seul)/(DO puits sans échantillon à tester - DO milieu seul))*100.
La paroi cylindrique 48 du logement 50, les faces arrière de réflexion 62 à 70, et la lentille 54 forment un récupérateur de
Les faces avant de sortie 80 à 96 forment un répartiteur de flux lumineux. On note que le feu de signalisation 10 selon l'invention permet d'optimiser l'emploi des nouvelles diodes de forte puissance. En effet, la pièce optique 12 selon l'invention permet de récupérer la majorité du flux lumineux émis par la diode 14, de o sorte que la diode 14 et la pièce optique 12 suffisent à satisfaire les exigences photométriques pour réaliser une fonction de signalisation réglementaire, alors qu'auparavant il était nécessaire d'utiliser plusieurs diodes, afin d'obtenir à la sortie du
feu de signalisation une énergie lumineuse suffisante.
Le feu de signalisation 10 selon l'invention permet donc de réaliser une fonction de signalisation réglementaire avec un feu de taille inférieure, ce qui facilite notamment l'agencement du feu
dans un véhicule.
Toutefois, selon des variantes de réalisation (non o représentées) de l'invention, on peut réaliser une fonction de signalisation déterminée à l'aide de plusieurs pièces optiques 12
et de plusieurs diodes de faible puissance associses.
Selon une autre variante de réalisation (non représentée) de l'invention, on peut remplacer la diode 14 par une lampe à filament. Cepend ant, cette variante nécessite d 'augmenter de manière importante la taille de la pièce optique 12, notamment
pour permettre l'évacuation de la chaleur produite par le filament.
De plus, une grande partie du flux lumineux émis par la lampe à filament ne pourra pas étre récupéré par la pièce optique, sans
so ajout d'un dispositif de récupération supplémentaire.
Selon encore une variante de réalisation (non représentée) de l'invention, les faces avant de sortie 82 à 96 ne sont pas étagées, c'est à dire que le corps 22 de la pièce optique 12 comporte une seule face de sortie qui forme une surface radiale ronde agencée à l'extrémité axiale avant 24 de la pièce optique 12. Les éléments dioptriques 100 sont alors tous agencés globalement dans le même plan radial. Ces éléments dioptriques 100 peuvent conserver le même agencement que dans le mode de réalisation décrit précédemment, de sorte que l'aspect de la pièce optique 12 en vue avant soit le même que sur la figure 5, ou bien les éléments dioptriques 100 peuvent tous être agencés suivant
un maillage rectangulaire.
o Toutefois, on note que l'étagement des faces avant de sortie 82 à 96, conformément au mode de réalisation décrit en référence aux figures 1 à 7, permet de minimiser l'épaisseur axiale moyenne de la pièce optique 12. Cette caractéristique est facilite la réalisation de la pièce optique 12 en moulage par injection de matière, en particulier parce qu'elle diminue la quantité de matière nécessaire à la réalisation de la pièce optique 12. On a représenté, sur les figures 8 à 11, un deuxième mode de réalisation d'un feu de signalisation 10 réalisé conformément
membranaires sont obtenues par fragmentation cellulaire puis séparation par centrifugation dans un système biphasique. L'intérêt des corps apoptotiques ou des vésicules membranaires est qu'ils peuvent êtres produits en grande quantité à partir d'un échantillon tumoral, alors que les cellules autologues nécessitent une phase de culture et expansion qui retarde considérablement le traitement.
Dans cette application pour la vaccination, les MPA incorporent ou comprennent à leur surface des molécules d'une ou plusieurs cytokines pro inflammatoires ou d'adjuvant stimulant l'action des cellules dendritiques et la réponse T anti-tumorale. On peut citer à titre d'exemples de telles substances celles choisies dans le groupe comprenant l'adjuvant de Freund, le GM-CSF, l'IL12, l'IL4 ou l'IL18.
L'intérêt des MPA pour la préparation de vaccin est remarquable en ce sens que leur caractère immunogène résulte non seulement à l'association de l'antigène membranaire et de la libération prolongée de cytokine, mais aussi de la présentation de l'antigène sur un système microparticulaire. C'est un mode de présentation idéale pour la reconnaissance de l'antigène par les cellules dendritiques. Cette stimulation immunitaire non spécifique, ou le rôle adjuvant des microparticules, est démontrée depuis longtemps (Nakaoka et al., 1995, Scheicher et al.
1995a, 1995b, Venkataprasad et al., 1999).
L'invention a donc aussi pour objet l'utilisation de microparticules à base d'un matériau biocompatible et biodégradable pour la préparation d'une composition pharmaceutique vaccinale, plus particulièrement antitumorale, dans laquelle lesdites microparticules comportent à leur surface des cellules d'intérêt ou des fragments de celles-ci et comprennent des molécules d'au moins une
substance active sur lesdites cellules ou leur environnement lors de l'implantation des microparticules, lesdites molécules étant libérées par les microparticules de façon prolongée et contrôlée.
D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront des exemples qui suivent concernant la préparation et l'utilisation des MPA dans le domaine de la neurotransplantation, où il sera fait référence aux dessins en annexe dans lesquels : - La figure 1 est une représentation schématique des MPA de l'invention.
- La figure 2 montre des cellules PC12 adhérées aux MPA, observées par microscopie optique (A) ou par microscopie électronique à balayage (B).
- La figure 3 est un histogramme représentant le comportement rotatoire induit par amphétamines des différents groupes de rats avant et après implantation de : cellules PC12 avec MPA (libérant donc du NGF), cellules PC12 avec microparticules blanches (ne libérant pas de NGF), cellules PC12 seules ou après injection de seulement le milieu de culture.
- La figure 4 est une représentation schématique de MPA pour une vaccination anti-tumorale selon l'invention.
Exemple 1 : Présentation générale.
Les exemples ci-après se rapporte au domaine de la neurotransplantation (greffes de cellules nerveuses dans le système nerveux central). Des MPA biodégradables et biocompatibles d'un diamètre de 60 um ont été préparés. Ils sont constituées de PLGA et sont enrobées d'une fine couche des molécules d'adhérence synthétiques (poly-D-lysine et
fibronectin-like ) et libèrent un facteur neurotrophique, le NGF, de manière continue (pendant au moins 15 jours). Des cellules répondant au NGF comme la lignée cellulaire PC12, capables de secréter de la dopamine et de se différencier en neurones sympathiques-like sous l'effet de ce facteur ont été utilisées. L'efficacité de ces MPA a été évaluée avec succès, in vivo, en utilisant un modèle animal de la maladie de Parkinson.
Les neurotransplantations ont débuté en clinique dans les années 80, essentiellement dans le cadre de la maladie de Parkinson (Menei et al., 1991a ; 1991b). Elles se poursuivent actuellement sous la forme de recherches cliniques et restent essentiellement limitées par la disponibilité des cellules à greffer (cellules embryonnaires) et le faible taux de survie de ces cellules après implantation (5 à 10%). Des études récentes montrent que la plupart des neurones meurent dans la première semaine après transplantation, probablement à cause d'un manque de support trophique, de connexions neuronales et d'une vascularisation limitée (Emgard et al., 1999 ; Mahalik et al., 1994 ; et al., 1998). Il a été démontré que les facteurs neurotrophiques administrés en parallèle avec les cellules greffées améliorent leur survie, ils agissent aussi sur leur différenciation et le développement des synapses, aidant ainsi à leur meilleure intégration (Mahoney et al., 1999 ; et al., 1998 ; Yurek et al., 1996). Ces facteurs peuvent aussi agir de façon bénéfique sur l'environnement des cellules greffées, en modifiant la réaction inflammatoire et cellulaire (Wei et al., 1999).
1) Choix du facteur de croissance.
Le NGF a été choisi dans un premier temps, parce que c'est un facteur trophique qui présente plusieurs
Le polymère semi-cristallin selon l'invention a une température de fusion supérieure ou égale à 30 C (notamment allant de 30 C à 80 C) , de préférence allant de 30 C à 60 C. Cette température de fusion est une température de changement d'état du premier ordre.
Cette température de fusion peut être mesurée par toute méthode connue et en particulier à l'aide d'un calorimètre à balayage différentiel (D.S.C).
De façon avantageuse, le ou les polymères semi-cristallins auxquelles s'applique l'invention présentent une masse moléculaire moyenne en nombre supérieure ou égale à 1 000.
De façon avantageuse, le ou les polymères semi-cristallins de la composition de l'invention ont une masse moléculaire moyenne en nombre Mn allant de 2 000 à 800 000, de préférence de 3 000 à 500 000, mieux de 4 000 à 150 000, notamment inférieure à 100 000, et mieux de 4 000 à 99 000. De préférence, ils présentent une masse moléculaire moyenne en nombre supérieure à 5 600, allant par exemple de 5 700 à 99 000.
Par "chaîne ou séquence cristallisable", on entend au sens de l'invention une chaîne ou séquence qui si elle était seule passerait de l'état amorphe à l'état cristallin, de façon réversible, selon qu'on est au-dessus ou en dessous de la température de fusion.
Une chaîne au sens de l'invention est un groupement d'atomes, pendant ou latéral par rapport au squelette du polymère. Une séquence est un groupement d'atomes appartenant au squelette, groupement constituant un des motifs répétitif du polymère. Avantageusement, la "chaîne pendante cristallisable" peut être chaîne comportant au moins 6 atomes de carbone.
De préférence, la ou les séquences ou chaînes cristallisables des polymères semi-cristallins représentent au moins 30 % du poids total de chaque polymère et mieux au moins 40 %. Les polymères semicristallins de l'invention à séquences cristallisables sont des polymères, séquences ou multiséquencés. Ils peuvent être obtenus par polymérisation de monomère à double liaisons réactives (ou éthyléniques) ou par
polycondensation. Lorsque les polymères de l'invention sont des polymères à chaînes latérales cristallisables, ces derniers sont avantageusement sous forme aléatoire ou statistique.
De préférence, les polymères semicristallins de l'invention sont d'origine synthétique.
En outre, ils ne comportent pas de squelette polysaccharidique. De façon générale, les motifs (chaînes ou séquences) cristallisables des polymères semi-cristallins selon l'invention, proviennent de monomère(s) à séquence(s) ou chaîne(s) cristallisable(s), utilisé(s) pour la fabrication des polymères semi-cristallins.
Selon l'invention, le polymère semicristallin à bas point de fusion et le polymère semicristallin à haut point de fusion sont choisis parmi les copolymères séquences comportant au moins une séquence cristallisable et au moins une séquence amorphe, les homopolymères et les copolymères portant au moins une chaîne latérale cristallisable par motif de répétition, leurs mélanges.
Les polymères semi-cristallins utilisables dans l'invention sont en particulier : - les copolymères séquences de polyoléfines à cristallisation contrôlée, notamment ceux dont les monomères sont décrits dans EP-A-0 951 897.
- les polycondensats et notamment de type polyester, aliphatique ou aromatique ou copolyester aliphatique/aromatique, - les homo- ou co-polymères portant au moins une chaîne latérale cristallisable et les homoou co-polymères portant dans le squelette au moins une séquence cristallisable, comme ceux décrits dans le document US-A-5 156 911, - les homo- ou co-polymères portant au moins une chaîne latérale cristallisable en particulier à groupement(s) fluoré(s) tels que décrits dans le document WO-A-01/19333, et leurs mélanges. Dans ces deux derniers cas, la ou les chaînes latérales ou séquences cristallisables sont hydrophobes.
A) Polymères semi-cristallins à chaînes latérales cristallisables On peut citer en particulier ceux définis dans le document US-A-5156911 et WO-A-01/19333. Ce sont des homopolymères ou copolymères comportant de 50 à 100% en poids de motifs résultant de la polymérisation d'un ou plusieurs monomères porteurs de chaîne latérale hydrophobe cristallisable.
Ces homo- ou co-polymères sont de toute nature du moment qu'ils présentent les conditions indiquées précédemment.
Ils peuvent résulter : de la polymérisation notamment radicalaire d'un ou plusieurs monomères à double(s) liaison(s) réactive(s) ou éthyléniques vis-à-vis d'une
un réflecteur 36 dans cette variante.
Comme l'indique la figure, dans le réflecteur 36, la partie périphérique externe sur laquelle parvient la lumière émise par la diode photoémissiveet provenant de la partie de réflexion interne 14B de l'organe transparent 14 est sous forme d'une partie de réflecteur de réflexion interne 36B analogue à la partie 26B de réflecteur de réflexion interne du réflecteur 26 de la première variante. Une surface réfléchissante 36Ba de la partie de réflexion interne 36B a plus précisément la configuration de plusieurs éléments réfléchissants 36Bs placés à intervalles réguliers sous
forme décalée avec des parties de gradin 36Bg.
Au contraire, dans le réflecteur 36 de la variante, une partie périphérique interne sur laquelle tombe la lumière émise par la diode photoémissive et provenant de la partie de réfraction 14C de l'organe 14 a une configuration de partie de réflexion interne 36A. Cette partie 36A est formée d'une pièce transparente de résine de synthèse moulée diffé25 rente de l'organe transparent 14. Une surface réfléchissante 36Aa de la partie de réflecteur est formée de plusieurs éléments réfléchissants 36As placés à intervalles réguliers
et décalés avec des parties de gradin 36Ag.
Dans cette configuration de variante aussi, comme dans le mode de réalisation, l'ensemble des surfaces réfléchissantes 36Aa et 36Ba paraît brillant et le réflecteur 36 peut
être aminci.
Lorsqu'on utilise la configuration de cette variante, le réflecteur 36 peut être plus mince que le réflecteur 16 du mode de réalisation décrit, d'un degré correspondant à l'épaisseur du réflecteur 16. La lampe peut donc avoir une
configuration très peu encombrante.
Dans la variante, l'ensemble du réflecteur 36 est f ormé par l'organe transparent. En conséquence, une impression accrue de transparence (cristallinité) peut être obtenue dans l'aspect surtout lorsque la source de lumière à diode photoémissive 12 est arrêtée. On décrit maintenant une troisième variante du mode de réalisation. La figure 7 est analogue à la figure 3 et représente
un organe transparent 24 dans cette variante.
Comme représenté sur la figure, dans l'organe transparent 24, une cavité 24A d'incidence de lumière est différente de la cavité 14A de l'organe transparent 14 du mode de
réalisation de la figure 3.
La cavité 24A d'incidence de lumière de l'organe trans15 parent 24 comporte une première partie sphérique 24A1 qui entoure de manière sphérique le centre luminescent O à proximité de la résine d'étanchéité 12B de la source de lumière à diode photoémissive 12, et une seconde partie sphérique 24A2 qui est à la périphérie de la première partie sphérique 24A1 et qui entoure de manière sphérique le centre luminescent O avec un rayon supérieur à celui de la première partie sphérique 24A1. Dans la lumière émise par la diode photoémissive, la lumière émise suivant un petit angle par rapport à l'axe optique Ax tombe perpendiculairement sur la première partie sphérique 24A1 puis avance sous forme rectiligne dans l'organe transparent 24. La lumière émise avec un grand angle par rapport à l'axe optique Ax tombe perpendiculairement sur la seconde surface sphérique 24A2 puis avance sous forme rectiligne à travers l'organe
transparent 24.
Comme dans le mode de réalisation décrit, une partie de réflexion interne 24B, une partie de réfraction 24C, une partie périphérique externe cylindrique 24D et une partie annulaire plate 24E sont formées à la surface de l'organe transparent 24. Parmi ces parties, la partie de réflexion interne 24B, la partie périphérique externe cylindrique 24D et la partie annulaire plate 24E ont des configurations strictement identiques à celles du mode de réalisation décrit. Au contraire, la partie de réfraction 24C est réalisée afin que l'extrémité avant soit plus proche de l'axe optique Ax que la partie de réfraction 14C du mode de réalisation afin que la lumière émise par la diode photo5 émissive et qui avance dans l'organe transparent 24 sous forme rectiligne et radialement depuis le centre luminescent O soit réfractée en direction pratiquement perpendiculaire
Pour la préparation de cette association d'extraits algaux, on a choisi avantageusement les deux algues suivantes : Ascophyllum nodosum et Halopteris scoparia.
Ascophyllum nodosum et Halopteris scoparia (: Stypocaulon scoparium) sont deux macroalgues marines appartenant au Phylum des Heterokontophyta et à la classe des Phaeophyta (algues brunes). La première Ascophyllum nodosum est utilisée depuis longtemps en agriculture pour ses propriétés stimulatrices et protectrices sur les cultures. La seconde Halopteris scoparia ( : Stypocaulon scoparium) n'a jamais fait l'objet d'applications, à la connaissance de la demanderesse.
Les algues marines régulent leur développement en impliquant des substances de croissance endogènes dont les structures sont identiques à celles qui constituent les phytohormones des végétaux supérieurs (Bradley, 1991 - J. Phycol.