INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
De nombreux agents dispersants peuvent être utilisés tels que les agents dispersants inorganiques comme l'hexamétaphosphate de sodium (vendu par les sociétés BASF et Aldrich Chimies), et/ou les agents dispersants organiques tels que les polyacrylates comme le Dispex N40@ (vendu par la société Coatex).
Le papier selon l'invention peut aussi contenir un agent antifloculant tel que les polyacrylamids cationiques, des agents colorants et/ou des pigments.
Le papier selon l'invention peut également contenir un agent d'encollage pour rendre le papier hydrophobe lui permettant ainsi de résister à l'humidité. Bien que tout agent d'encollage puisse convenir, on utilise avantageusement de la colophane ou un mélange d'un ou plusieurs produits choisis parmi les alkyls cétènes dimères et leurs dérivés, les phosphates fluorés, les anhydrides d'acides carboxyliques à chaîne grasse, les polyuréthanes et les copolymères styrène/anhydride maléique.
La présente invention a également pour objet un procédé de préparation d'un papier tel que défini précédemment comprenant les étapes suivantes : a) on mélange de la pâte à papier avec des particules magnétisables et éventuellement un agent dispersant ; b) on élimine l'eau de la pâte du papier ; et c) on récupère le papier.
Un tel procédé de préparation d'un papier selon l'invention peut être réalisé sur les machines de fabrications de papier classiques habituellement utilisées.
La pâte à papier, selon l'invention, possède préférentiellement un degré Schôpper compris entre 10 et 30 SR, préférentiellement entre 15 et 25 SR.
Le degré Schôpper correspond au degré d'égouttage des fibres de papier. Il peut être déterminé selon la norme NF Q50 en suivant, par exemple, la technique décrite ci-dessous qui utilise un appareil Schöpper-Riegler mesurant la capacité d'égouttage d'une suspension fibreuse.
On égoutte d'un seul coup, à travers une toile, 1 litre (1000 cm3) d'une suspension de fibre de papier contenant 2 grammes de matières sèches calibrées. L'eau passant à travers la toile tombe dans un récipient conique dont la partie inférieure comprend un orifice calibré.
Au début de l'expérience, l'égouttage est rapide. Le cône se remplit et déborde par un orifice latéral. Ce volume de débordement est recueilli dans un vase latéral. Au bout d'un certain temps, toute la suspension s'écoule par le fond.
Si par exemple on recueille dans le vase latéral un volume de 500 cm3, le degré Schöpper-Riegler se détermine ainsi : (1000-500)/10 = 50, soit 50 SR Une valeur faible en degré Schôpper, 20 SR par exemple, correspond à une faible résistance à l'écoulement de la suspension fibreuse.
Une valeur élevée en degré Schôpper, 80 SR par exemple, correspond à une forte résistance à l'écoulement de la suspension fibreuse.
L'élimination de l'eau dans l'étape b) peut être effectuée par séchage, égouttage gravitaire et/ou mécanique.
Lorsque l'élimination de l'eau est effectuée par égouttage, le procédé de fabrication de papier selon l'invention peut être effectué en mettant en oeuvre des déchets de moteurs xérographiques sans qu'il soit nécessaire de procéder à la séparation des particules magnétisables et des particules de Toner. En effet, ces dernières particules s'écoulent en grande partie dans les eaux d'égouttage.
tissulaire) avec le peptide. En pratique, le peptide présente à chacune de ses extrémités respectivement une molécule fluorogénique donneuse et une molécule fluorogénique accepteuse, l'intensité de la réaction fluorogénique étant déterminée par FRET.
Selon un second mode de réalisation, la méthode consiste : - à préparer un échantillon biologique contenant le peptide de l'invention, - puis à mettre en contact ledit échantillon avec la substance à identifier, - et à détecter la présence ou l'absence d'une réaction colorimétrique ou fluorométrique, signant respectivement la présence ou l'absence d'une substance activatrice ou inhibitrice de la calpaine 3.
Dans ce cas, l'échantillon biologique est constitué de cellules ou de lignées cellulaires transfectées avec un vecteur comprenant la séquence d'ADN codant pour le peptide de l'invention, dans l'hypothèse où la molécule rapporteuse est d'origine protéique.
Dans un mode de réalisation avantageux, le peptide présente à chacune de ses extrémités respectivement une molécule fluorogénique donneuse et une molécule fluorogénique accepteuse et la méthode consiste à : a/préparer un échantillon biologique contenant ledit peptide, b/mesurer le taux de FRET en l'absence de la substance activatrice ou inhibitrice de la calpaine 3, cl mettre en contact l'échantillon biologique contenant le peptide avec la substance activatrice ou inhibitrice de la calpaine 3, d/mesurer le taux de FRET en présence de la substance activatrice ou inhibitrice de la calpaine 3, e/conclure à la présence : d'une substance activatrice si le taux de FRET mesuré en b/est supérieur au taux de FRET mesuré en d/ d'une substance inhibitrice si le taux de FRET mesuré en b/est égal au taux de FRET mesuré en d/
L'invention a également pour objet une méthode d'analyse de l'efficacité du transfert de gène de la calpaine 3 consistant : - tout d'abord à transfecter des cellules animales ou humaines avec un plasmide codant pour la calpaine 3, - puis à mettre les cellules transfectées au contact du peptide de l'invention soit in vitro, soit in vivo, - puis à mesurer l'intensité de la réaction colorimétrique ou fluorométrique.
Dans un mode de réalisation avantageux, le peptide présente à chacune de ses extrémités respectivement une molécule fluorogénique donneuse et une molécule fluorogénique accepteuse, l'intensité de la réaction fluorogénique étant déterminée par FRET.
Le gène de la calpaine 3 est parfaitement identifié et les technique de transfection précisément décrites dans le document EP 717110 de sorte qu'ils ne seront pas d'avantage détaillés.
L'invention et les avantages qui en découlent ressortiront mieux des exemples de réalisation suivants à l'appui des figures annexées.
Figure 1 : Séquence partielle de la calpaine 3 ; la position des sites d'autolyse est indiquée par les flèches ; les séquences utilisées dans les peptides sont soulignées et sont identiques chez toutes les espèces pour lesquelles la séquence de la calpaïne 3 est connue à ce jour (homme, souris, singe, rat, boeuf).
Figure 2 : Mesure au cours du temps de l'activité de clivage des peptides correspondant au site d'autolyse 1,2 et 3 de la calpaïne 3 (courbes A, B et C, respectivement) par les calpaïnes 1 (colonne de gauche) et 2 (colonne de droite) recombinantes Figure 3 : Mesure au cours du temps de l'activité de clivage des peptides correspondant aux sites d'autolyse de la calpaïne 3 par des extraits de cellules C2C12 transfectées ou non avec un plasmide codant pour la calpaïne 3.
Figure 4 : Mesure au cours du temps de l'activité de clivage des peptides correspondant aux sites d'autolyse de la calpaïne 3 par des extraits de myoblastes de souris normales (+/+) ou déficientes en calpaïne 3 (-/-).
Figure 5 : Mesure au cours du temps de l'activité de clivage du peptide correspondant au site 3 d'autolyse de la calpaïne 3 par des extraits de myotubes de souris normales (+/+) ou déficientes en calpaïne 3 (-/-) Figure 6 : Mesure pendant 6 heures de l'activité de clivage des peptides correspondant aux sites d'autolyse de la calpaïne 3 par des extraits de myoblastes de souris normales (+/+) ou déficientes en calpaïne 3 (-/-) Figure 7 : Mesure pendant 6 heures de l'activité de clivage des peptides correspondant aux sites d'autolyse de la calpaïne 3 par des extraits de quadriceps de souris normales (+/+) ou déficientes en calpaïne 3 (-/-) Figure 8 : portion de séquence du plasmide pTOM. Les acides aminés en italique font partie de la séquence de EYFP. Les acides aminés en gras font partie de celle de ECFP. Le codon STOP de EYFP a été éliminé dans le vecteur pTOM. Les bases en italique et en gras montrent les phases des séquences de EYFP et ECFP, respectivement. Les bases en soulignées correspondent au fragment qui a été éliminé pour construire le vecteur pTOMp. Les séquences protéiques A et B correspondent à la traduction du vecteur pTOM à partir de l'ATG de la séquence codante de EYFP, respectivement avant et après élimination du fragment double-brin situé entre les sites de restriction Eco13611 et seal. Dans la séquence A, les séquences codant pour EYFP et ECFP ne sont pas en phase. Elles le sont dans la séquence B.
Figure 9 : A : Migration sur gel d'agarose des produits de PCR sur colonies repiquées après transformation avec pTOMp. Les PCR ont été effectuées avec les oligonucléotides midEYFP. a et midECFP. m. B : Migration de ces produits de PCR après digestion par ECORI ; Puits n l : échelle lkb ; n 2 : pTOM ; n 3 : pTOM après digestion par EcoRI ; n 4 à n09 : migration des produits de PCR du gel A après digestion par EcoRI ; leur taille est toujours de 800pb.
Figure 10 : site de clonage sur le vecteur pTOM (lOa) et séquence des oligonucléotides codant pour les sites d'autolyse de la calpaïne 3 (lOb, 10c, lOd). Chaque couple d'oligonucléotides complémentaires est composé d'un oligonucléotide
dont le nom se termine par . a et d'un oligonucléotide dont le nom se termine par . m.
Figure 11 : Migration sur gel d'agarose de produits de PCR sur colonies repiquées après transformation avec pTOM et l'insert codant pour le site 2 d'autolyse ; la PCR a été réalisée avec les oligonucléotides SGp94S2. a et midECFP. m.
Procédé et dispositif de gestion de mémoire.
La présente invention se rapporte au domaine de la gestion des mémoires de type FIFOs (de l'anglais First In, First Out qui est une mémoire tampon dont les éléments sont extraits dans le même ordre que celui dans lequel ils ont été stockés), notamment, mais non exclusivement, dans le cadre de systèmes de commutation, de transmission et/ou de réception de données numériques.
Plus précisément, l'invention concerne l'optimisation de l'utilisation de moyens de stockage de type FIFO, alimentés par des données reçues et devant être transférées vers au moins un élément destinataire.
Dans les systèmes de communication, les FIFOs sont souvent utilisées pour le stockage temporaire de données durant le transfert entre ux éléments de système non parfaitement synchronisés. Les caractéristiques initiales d'une FIFO (notamment emplacement et taille) sont généralement choisies en fonction de des critères ou paramètres comme la charge des chemins de données, la capacité à transférer les données d'une source vers une destination, les conditions de transfert...
Ces paramètres peuvent cependant évoluer au fil du temps et les caractéristiques initiales de la FIFO devenir inadaptées à de nouvelles requêtes.
Ainsi, des tailles de FIFOs figées à leur initialisation présentent les inconvénients d'être surdimensionnées (ce qui entraîne un surcoût, une consommation accrue et un encombrement supplémentaire) ou de conduire à un fonctionnement non optimal des échanges de données et notamment à des engorgements, blocages, ou pertes de données.
Une solution à ce problème consiste à modifier les tailles de FIFO en fonction des paramètres.
Ainsi, on connaît dans l'état de la technique un document de brevet US 5 359 568 de la société MOTOROLA Inc. (marque déposée) qui décrit un système de mémoire de type FIFO permettant la modification dynamique de taille en se
basant sur des FIFOs paginées. Le mode de réalisation décrit dans ce brevet consiste essentiellement : - à instancier un ensemble de FIFOs ( instancier une FIFO signifiant ici, décrire la constitution d'une FIFO notamment sa taille, son emplacement,...) en fonction d'un nombre de pages de DPRAM (de l'anglais Double Port Random Access Memory ou mémoire volatile à double port ) ; - à augmenter la taille de chaque FIFO lorsqu'elle devient pleine en utilisant un traitement d'agrément reposant sur l'addition d'une page appartenant à un ensemble de pages partagées mais a priori non affectées de la DPRAM, la page ajoutée étant positionnée après le pointeur d'écriture de la FIFO ; et - à diminuer la taille de chaque FIFO précédemment agrandie, lorsqu'une FIFO est lue, en libérant une à une les pages précédemment empruntées à l'ensemble des pages partagées, cette page étant placée avant le pointeur de lecture de la FIFO.
Selon cette technique, une seule FIFO peut être accédée à un moment donné.
Un autre inconvénient de cette technique de l'art antérieur est qu'elle ne permet pas de réduire une taille initiale de FIFO instanciée lorsque, par exemple, la variation de la gigue (ou jitter en anglais qui signifie ici, la variation des débits de données autour d'une valeur moyenne qui entraîne une variation de latence entre l'écriture et la lecture d'une donnée) varie de manière importante.
Encore, un autre inconvénient de cette technique de l'art antérieur est qu'elle ne permet pas de modifier la taille d'une FIFO indépendamment de son usage (lecture/écriture en cours).
Un inconvénient de cette technique de l'art antérieur est également, qu'elle ne permet pas de modifier plusieurs pages à la fois lorsque, notamment, il y a une variation de gigue importante.
Plus précisément, un objectif & l'invention est de fournir un procédé et un dispositif de gestion de FIFOs permettant de modifier dynamiquement la taille de FIFOs.
Un autre objectif de l'invention est d'optimiser l'espace mémoire globalement nécessaire à l'utilisation de plusieurs FIFOs de taille variable.
Après 48 heures de traitement, l'extrait de Shitaké montre une stimulation de la prolifération des kératinocytes. En effet, testé à la concentration de 1,5 ng/ml, le Shitaké permet un gain de croissance de 20% par rapport au témoin de base.
Les résultats obtenus par cette technique montrent que le Shiitaké agit de façon relativement importante sur la formation des enveloppes cornées. Cela se traduit par une augmentation de 107% de la cornification par rapport au contrôle négatif (0%).
L'ergostérol (Sigma E6510) testé en parallèle (non montré) semble agir sur la prolifération des kératinocytes mais ne semble pas intervenir sur leur différenciation.
EXEMPLE 4 : Détermination de l'effet de l'extrait de Shitaké à 20% en ergostérol sur la prolifération et la différenciation cellulaire : évaluation par un test MTT et un test Elisa-Transglutaminase.
Au cours de la différenciation, une enzyme intervient dans la formation des enveloppes cornées, la transglutaminase 1. Cette enzyme qui est un marqueur tardif de différenciation permet d'évaluer le degré de
différenciation des cellules dans les différentes conditions de cultures réalisées.
Lorsque les cellules ont atteint la pré confluence, une trypsination est réalisée et les cellules sont ensemencées en plaque 96 puits, à raison de 6000 cellules/puit (JO). Les traitements des cultures cellulaires (actifs, témoins de base et de différenciation) sont effectués à J3 et à J5. Le Shiitaké est testé sur ce modèle à la concentration de 1,5 ng/ml.
- Test MTT.
Ce test permet d'évaluer la prolifération cellulaire à travers l'activité d'une enzyme mitochondriale, la succinate deshydrogénase. Dans notre protocole, ce test est réalisé après 6 jours de culture.
Les cellules sont alors mises en contact avec une solution de MTT à lmg/ml dans du DMEM pendant 3 heure à 37 C. Puis 2 cycles de congélation/décongélation sont réalisés et les cristaux formés par le MTT sont ensuite dissout dans un mélange éthanol-acétone (60/40 p/p). La coloration ainsi obtenue est lue 540 nm en enlevant le bruit de fond à 650 nm.
- Test Elisa-transglutaminase.
Le niveau d'expression cellulaire de la transglutaminase 1 est évalué en utilisant un anticorps monoclonal spécifique dirigé contre cette protéine (Tebu, Harbor Bio-products). La fixation de cet anticorps est révélée par un second anticorps, le reconnaissant et couplé à une enzyme, la peroxydase (Beckman Coulter, Jackson Immunoresearch).
Les réactions de fixation aspécifique des plaques sont tout d'abord bloquées avec une solution de PBS-BSA 4% pendant 1 heure à 37 C. Puis les cellules sont
incubées avec le premier anticorps au 1/2000ième pendant 1 heure à 37 C. Après trois rinçages au PBS-tween 0, 05%, les cellules sont incubées avec le second anticorps au 1/5000ième pendant 1 heure à 37 C. Trois rinçages au PBStween 0,05% sont à nouveau effectués puis les cellules sont mises en contact pendant 30 min à l'obscurité avec le substrat de la peroxydase : l'O-phenylenediamine. La réaction colorimétrique est stabilisée avec une solution d'acide sulfurique 2N. La lecture des plaques est effectuée à 490 nm (une contre-lecture est effectuée à 650 nm afin d'éliminer les bruits de fond).
traitées soit avec la zidovuidine (AZT, panels A et C) ou la lamivudine (3TC, panels B et D), selon la technique décrite plus loin, dans le paragraphe matériel et méthodes. Pour le patient I, les échantillons ont été testés à 0 (+), 9 (e) et 18 (cri) mois après le traitement, et, pour le patient 2, à 0 (+) et 27 (e) mois après le traitement.
La figure 4 est un schéma des étapes (c) à (g) d'une mise en oeuvre particulière de la méthode de l'invention. Ce schéma illustre l'étape (d) de cotransfection dans des cellules HeLa/293T des acides nucléiques amplifiés de l'étape (b), d'un premier plasmide p43xcsnAenv RT construit à partir d'un génome d'un virus VIH, ne comprenant pas un segment d'acide nucléique correspondant à tout ou partie de la séquence d'acide nucléique amplifiée à l'étape (b) ni un fragment de la séquence d'acide nucléique codant pour la protéine d'enveloppe et un deuxième plasmide pVSV-G comportant la séquence codant pour la protéine d'enveloppe ; l'étape (e) de culture permettant de produire des particules virale, l'étape (f) de transfection des particules virales obtenues à l'étape (e) dans des cellules P4, préalablement incubées en présence ou non de dilutions sériées de différents inhibiteurs de la transcriptase inverse, lesdites cellules indicatrices P4 comportant un
système d'expression du gène codant pour l'enzyme betagalactosidase activable exclusivement par les séquences d'activation tat exprimées par le virus recombinant, et l'étape (g) de détection et/ou quantification de la betagalactosidase au moyen du substrat CPRG.
Les produits ainsi obtenus par PCR sont purifiés sur des colonnes QuiaAmp et analysés en ce qui
concerne leur taille, leur degré de pureté et leur concentration approximative par électrophorèse sur des gels d'agarose.
Des cellules HeLa, 293 T et P4 sont cultivées dans du milieu DMEM supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal (SVF), 50 UI/ml de pénicilline et 50 ug/ml de
streptomycine. Les cellules P4 son des cellules Hela-CD4, LTR-LacZ dans lesquelles l'expression de la betagalactosidase est strictement inductible par la protéine Tat transactivateur du VIH, permettant par conséquent, une quantification précise de l'infectivité ou de la capacité réplicative des virus VIH-I basée sur un cycle unique de réplication (Charneau, P., Mirambeau, G., Roux, P., Paulous, S., Bue, H. and Clavel, F. (1994) HIV-1 reverse transcription. A termination step at the center of the genome". J Mol Biol 241 (5), 651-62. ). Les cellules P4 sont cultivées en présence de 500 pg/ml de geneticine.
La détermination de la susceptibilité d'un virus VIH à un inhibiteur de transcriptase inverse est effectuée de la manière suivante : des cellules 293 T sont transfectées avec 7,5 pg de plasmide pSRT linéarisé par NruI, 0, 1 ug du plasmide pVSV-G et 0, 5 et 1 ug du produit issu de la réaction PCR de la transcription inverse de VIH. Le précipité de transfection est retiré des cellules après 18 heures d'incubation et du milieu de croissance frais est ajouté. Après 24 heures de culture, le surnageant est clarifié par centrifugation (500 g, 15 minutes) et transféré sur des cellules indicatrices P4 lesquelles ont été pré-incubées avec des dilutions sériées d'un inhibiteur de la transcriptase inverse, dans de puits triplicatas, durant quatre heures. La gamme de concentrations d'inhibiteur utilisée varie selon les composés. Le signal produit par l'activation du gène marqueur a été développé avec du CPRG durant 48 heures, comme pour l'analyse de la susceptibilité à un inhibiteur
de transcriptase inverse et l'indice ICso a été calculé en utilisant l'équation d'effet médian.
Les conditions de transfert sont optimisées au moyen d'un test en échiquier. La variation du ratio du plasmide/produit issu de PCR ne modifie significativement la quantité de p24 ou de transcriptase inverse produites ou la vitesse de réaction avec CPRG. Etant donné que le plasmide circulaire, pVSV-G semble être extrêmement toxique pour les cellules 293T, la quantité de celui-ci a été réduite de 3 119 à 0, 1 119 dans le mélange de transfection, conduisant à des rendements élevés en p24 ( > 20 ng/ml comparé à 9,8 ng/ml).
Les gammes de concentration d'inhibiteur utilisées sont choisies en fonction de la toxicité cellulaire de chaque composé et du ratio ICso/ICgo pour la susceptibilité des isolats résistants (Tableau 1). Par exemple, comme l'indice ICgo pour l'abacavir pour les cellules P4 est d'environ 250 uM alors que l'indice ICgo pour ce composé pour la souche native du virus est d'environ 3 uM, la détection de la résistance est limitée par la toxicité. Une gamme de quatre dilutions en série, commençant à 200 uM a été utilisée pour l'abacavir, permettant la détection de jusqu'à 60 fois plus de résistance.
D'autre part, puisque la toxicité de l'AZT pour les cellules P4 est élevée ( > 300 uM) alors que l'indice ICgo est considérablement inférieur, une gamme plus large de dilutions a été utilisée (dilution en série 1/10 à partir de 5 uM) de manière a permettre la détection de niveaux élevés de résistance (jusqu'à 100 fois).
Pour la transcriptase inverse RVA, l'indice ICgo est utilisé plutôt que l'indice ICgo car la détection de l'indice ICgo pour les virus résistants pourrait demander des niveaux de composé toxiques pour la plupart d'inhibiteurs de transcriptase inverse.
La réaction immunitaire humorale qui est induite par le polypeptide (b) constitutif d'un superimmunogène composite selon l'invention permet de rendre efficace la réaction immunitaire spécifique du polypeptide (a) : (i) en neutralisant ou en bloquant l'activité immunosuppressive (I'immunotoxicité) de certaines protéines circulantes locales du stroma anormalement produites, comme l' ! FNa ou la protéine Tat ; ou (ii) en neutralisant ou en bloquant les propriétés apoptogènes vis-à-vis des cellules immunitaires (I'immunotoxicité) induite par certaines protéines circulantes du stroma anormalement produites, comme le facteur de régulation cellulaire p53 ; ou (iii) en neutralisant ou en bloquant l'angiogénèse, incluant la néovascularisation des tumeurs, induite par certaines protéines circulantes du stroma anormalement produites, comme le VEGF.
Une première famille préférée de superimmunogènes composites utilisés pour la prévention ou le traitement de certains cancers et de certaines infections virales est constituée des superimmunogènes composites suivants : - le superimmunogène composite (a) gp160- (b) Tat toxoïde ; - le superimmunogène composite (b) peptide Tat [1-15 ; 46-60]- (a) gp160 ; - le superimmunogène composite (a) Tat toxoïde- (b) IFNU - le superimmunogène composite (a) Tat toxoïde- (b) peptide Tat [1- 15 ; 46-60]
Une seconde famille préférée de superimmunogènes composites est constituée des superimmunogènes suivants : - le superimmunogène composite (a) L 1 - (b) E7 ; - le superimmunogène composite (a) E7- (b) VEGF ; Ci-dessus, (a) désigne le polypeptide (a) et (b) désigne le polypeptide (b). La structure des superimmunogènes composites listés ci- dessus va, de la gauche vers la droite, de la partie NH2-terminale vers la partie COOH-terminale.
Dans le superimmunogène composite (a) gp160- (b) Tat toxoïde, la protéine gp160 induit une réaction immunitaire cellulaire à l'encontre des cellules infectées par VIH1, réaction immunitaire qui est facilitée par l'induction d'anticorps neutralisant ou bloquant les propriétés immunotoxiques de la protéine Tat de HIV1, connue pour provoquer la production d'IFNa, facteur cytokinique immunosupprssif.