INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Comme l'expose la figure 2 en annexe, les régions variables n 1, n 2 et n 3 correspondent respectivement à la boucle N-terminale, à la boucle située entre l'hélice a et le premier brin (3 et à la boucle C-terminale située entre les 2 brins (3 des défensines d'insectes.
Afin de préparer une banque de mutants associant ces différentes régions, la demanderesse a désigné et synthétisé 94 séquences nucléotidiques simples brins
chevauchants qui couvrent la séquence de tout ou partie de polynucléotides codant une population de départ de défensines d'insectes (les résidus d'acides aminés entre parenthèses sur la figure 1 n'étant pas couverts par les séquences nucléotidiques simples brins chevauchants), pour obtenir à l'issu de l'étape (a) des polynucléotides doubles brins recombinés qui comprennent à leurs extrémités 5' (brin codant) la fin de la séquence pro du facteur MF[alpha]1 de S.cerevisiae et à leurs extrémités 3' (brin codant) le début de la séquence du terminateur de transcription du gène PGK1. Chacune de ces séquences nucléotidiques simples brins est constituée ou comprend : - un segment nucléotidique interne codant une séquence en acides aminés d'une des régions variables d'une des défensines d'insectes de la population de départ, ledit segment nucléotidique variable étant flanqué - en 5' par un segment nucléotidique codant la séquence en acides aminés de la région substantiellement conservée de la défensine du diptère Anopheles gambiae de la population de départ, qui est immédiatement adjacente à l'extrémité N terminale de la région variable, - en 3' par un segment nucléotidique codant la séquence en acides aminés de la région substantiellement conservée de la défensine du diptère Anophèles gambiae de la population de départ, qui est immédiatement adjacente à l'extrémité C terminale de la région variable, ledit segment nucléotidique étant lui-même éventuellement flanqué en 3' d'une séquence nucléotidique simple brin supplémentaire correspondant au début de la séquence du terminateur de transcription du gène PGK1.
Les séquences nucléotidiques simples brins chevauchants qui comprennent une séquence nucléotidique simple brin supplémentaire correspondant au début de la séquence du terminateur de transcription du gène PGK1 sont les séquences nucléotidiques simples brins chevauchants
constituant les extrémités 3' (brin codant) des polynucléotides doubles brins recombinés, avant l'assemblage (a) c'est-à-dire celles qui sont constituées ou comprennent des segments nucléotidiques internes codant la séquence en acides aminés d'une des régions variables n 3 des défensines d'insectes de la population de départ.
La listes des séquences nucléotidiques simples brins chevauchants est exposée sur la figure 3. Les séquences nucléotidiques simples brins chevauchants sont décrites dans la liste de séquence sous les identificateurs de séquences SEQ ID NO : 1 à 94.
3 séries d'acides nucléiques simples brins ont également été synthétisés : EM363 (SEQ ID NO : 95), EM351 (SEQ ID NO : 96) et EM357 (SEQ ID NO : 97).
L'acide nucléique simple brin EM363 est constitué d'une première région qui est complémentaire de la séquence du segment nucléotidique codant la séquence en acides aminés de la région substantiellement conservée de la défensine du diptère Anopheles gambiae de la population de départ, qui est immédiatement adjacente à l'extrémité N terminale de la région variable n 1 codée par le segment nucléotidique interne, des séquences nucléotidiques simples brins chevauchants constituant l'extrémité 3' (brin codant) des polynucléotides doubles brins recombinés, avant l'assemblage (a). L'acide nucléique simple brin EM363 est également constitué d'une seconde région qui correspond à une première partie de la fin de la séquence pro du facteur MF(Xl de S.cerevisiae.
L'acide nucléique simple brin EM351 est constitué d'une première région qui est complémentaire de la seconde région de l'acide nucléique EM363 et d'une seconde région qui correspond au reste de la fin de la séquence pro du facteur MF[alpha]1 de S. cerevisiae.
L'acide nucléique simple brin EM357 est constitué d'une première région qui est complémentaire de la
séquence correspondant au début du terminateur de transcription du gène PGK1 des séquences nucléotidiques simples brins chevauchants constituant les extrémités 3' (brin codant) des polynucléotides doubles brins recombinés, avant l'assemblage (a). L'acide nucléique simple brin EM357 est également constitué d'une seconde région qui correspond au reste du début du terminateur de transcription du gène PGK1.
L'étape (a) d'assemblage est réalisée par PCR comme l'expose la figure 4 en annexe. Les acides nucléiques simples brins EM351, EM357 et EM363 sont utilisés à une concentration de 10 picomoles dans un volume réactionnel final de 60 l. Des mélanges de séquences nucléotidiques simples brins chevauchants sont utilisés à raison de 10 picomoles pour chacune des séries de séquences nucléotidiques simples brins suivantes : picomoles par séquence nucléotidique simple brin constituée ou comportant un segment nucléotidique interne codant une séquence en acides aminés d'une des régions variables n 1 d'une des défensines d'insectes de la population de départ ; 0,36 picomoles par séquence nucléotidique simple brin constituée ou comportant un segment nucléotidique interne codant une séquence en acides aminés d'une des régions variables n 2 d'une des défensines d'insectes de la population de départ et 0,30 picomoles par séquence
nucléotidique simple brin constituée ou comportant un segment nucléotidique interne codant une séquence en acides aminés d'une des régions variables n 3 d'une des défensines d'insectes de la population de départ.
La réaction de PCR d'assemblage débute par la dénaturation à une température de 94 C pendant 3 minutes. Les étapes suivantes sont répétées 5 fois : i) dénaturation à une température de 94 C pendant 45 secondes, ii) hybridation à une température de 50 C pendant 45 secondes, iii) extension en présence d'une polymérase à une température de 72 C pendant 45 secondes.
L'invention concerne également une composition à usage topique, particulièrement cosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (II) telle que définie précédemment et un milieu physiologiquement acceptable.
Les composés utilisés dans les compositions selon la présente invention sont commerciaux, ou peuvent être aisément préparés par l'homme du métier selon des méthodes de synthèse classique. On peut citer notamment la méthode décrite dans Chem. Pharm. Bull., 1967,15(9), p. 1339-1342. Cette méthode met en oeuvre le chauffage à reflux d'éthanol d'une amine de formule (III) : dans laquelle R6, R7, et n ont la même signification que précédemment, en présence d'un aldéhyde de formule (IV) : H R5 # (IV) O dans laquelle R5 a la même signification que précédemment,
et d'un imide de formule (V) : dans laquelle Ri, R2, R3, et R4 sont tels que définis précédemment, pour conduire, après une purification classique, à un composé de formule (I) ou (II) telles que définies précédemment.
Les dérivés selon l'invention, seuls ou en mélange, ainsi que la composition les comprenant, peuvent être utilisés en application topique sur la peau, les poils et/ou les cheveux.
La quantité de dérivés utilisable dans le cadre de l'invention dépend bien évidemment de l'effet recherché.
A titre d'exemple, cette quantité peut aller par exemple de 0,001% à 10% en poids, de préférence de 0,01% à 5% en poids, notamment de 0,1 à 2% en poids, par rapport au poids total de la composition.
La composition selon l'invention est notamment destinée à une application topique ; comprend par ailleurs un milieu physiologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau y compris éventuellement le cuir chevelu, les muqueuses, les cheveux, les poils et/ou les yeux et peut constituer notamment une composition cosmétique ou dermatologique.
La composition peut également comprendre tous les constituants usuellement employés dans l'application envisagée.
On peut notamment citer l'eau, les solvants, les huiles d'origine minérale, animale et/ou végétale, les cires, les pigments, les charges, les tensioactifs, les actifs cosmétiques ou dermatologiques, les filtres UV, les polymères, les gélifiants, les conservateurs.
Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la proportion de la phase grasse peut aller de 5 à 80 % en poids, et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les huiles, les émulsionnants et les éventuels coémulsionnants utilisés dans la composition sous forme d'émulsion sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. L'émulsionnant et le coémulsionnant sont présents, dans la composition, en une proportion pouvant aller de 0,3 à 30 % en poids, et de préférence de 0,5 à 20 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Bien entendu l'homme du métier veillera à choisir ce ou ces éventuels composés complémentaires, et/ou leur quantité, de manière telle que les propriétés avantageuses des composés selon l'invention ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées par l'adjonction envisagée.
La composition selon l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées dans les domaines cosmétiques et dermatologiques ; peut être notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, éventuellement gélifiée, d'une dispersion du type lotion éventuellement biphasée, d'une émulsion huile-dans- eau ou eau-dans-huile ou multiple, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide, d'une dispersion d'huile dans une phase aqueuse à l'aide de sphérules, ces sphérules pouvant être des nanoparticules polymériques telles que les nanosphères et les nanocapsules ou, mieux, des vésicules lipidiques de type ionique et/ou non-ionique.
Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau ou sur les cheveux sous forme d'aérosol. Elle peut également se présenter sous forme solide, et par exemple sous forme de stick. Elle peut être utilisée comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage. Elle peut également être sous une forme de shampooing ou d'après-shampooing.
Cette composition peut constituer une crème de protection, de traitement ou de soin pour le visage, pour les mains, pour les pieds, pour les grands plis anatomiques ou pour le corps (par exemple crèmes de jour, crèmes de nuit, crèmes anti-solaires), un lait corporel de protection ou de soin, un lait anti-solaire ; lotion, gel ou mousse pour le soin de la peau.
Dans un aspect avantageux de l'invention, les compositions utilisées peuvent comporter en plus au moins un agent apaisant, et/ou au moins agent photoprotecteur organique et/ou au moins un agent photoprotecteur inorganique actif dans l'UVA et/ou l'UVB (absorbeurs), hydrosolubles ou liposolubles ou bien insolubles dans les solvants cosmétiques couramment utilisés.
Comme agents apaisants utilisables dans la composition selon l'invention, on peut citer : les triterpènes pentacycliques et les extraits de plantes (ex : Glycyrrhiza glabra) en contenant comme l'acide (3-glycyrrhétinique et ses sels et/ou ses dérivés (l'acide glycyrrhétinique monoglucuronide, le stearyl glycyrrhetinate, l'acide 3-stéaroyloxy glycyrrhetique), l'acide ursolique et ses sels, l'acide oléanolique et ses sels, l'acide bétulinique et ses sels, un extrait de Paeonia suffruticosa et/ ou lactiflora, les sels de l'acide salicylique et en particulier le salicylate de zinc, les phycosaccharides de la société Codif, un extrait de Laminaria saccharina, l'huile de Canola, le bisabolol et les extraits de camomille, l'allantoïne, le Sépivital EPC (diesterphosphorique de vitamine E et C) de Seppic, les huiles insaturées en oméga 3 telles que les huiles de rosier musca, de cassis, d'ecchium, de poisson, des extraits de plancton, la capryloyl glycine, le Seppicalm VG (sodium palmitoylproline et nymphéa alba) de Seppic, un extrait du Pygeum, un extrait de Boswellia serrata, un extrait de Centipeda cunnighami, un extrait d'Helianthus annuus, un extrait de Linum usitatissimum, les tocotrienols, les extraits de Cola nitida, le piperonal, un extrait de clou de girofle, un extrait d'Epilobium Angustifolium, l'aloe vera, un extrait de Bacopa moniera, les phytostérols, la cortisone, l'hydrocortisone, l'indométhacine et la beta méthasone.
Le c#ur des nanocapsules conforme à l'invention est un c#ur essentiellement lipidique, composé de d'esters d'acides gras et/ou de triglycérides et/ou d'huile à titre de corps gras. Les triglycérides sont avantageusement choisis parmi les triglycérides à chaîne moyenne portant de 6 à 14 atomes de carbone et/ ou des triglycérides des acides capriques ou capryliques ainsi que leurs mélanges. Plus préférentiellement, on utilisera comme mélange de corps gras composant le c#ur des nanocapsules conformes à l'invention le Labrafac# CC ou le Miglyol 812 N qui répondent aux appellations suivantes des Pharmacopées : mélange de triglycérides à chaîne moyenne (Medium Chain Triglycerides), huile de coco fractionnée (Fractionated Coconut Oil) ou triglycérides des acides capryliques et/ou capriques (CapryliclCapric Triglyceride). Ces triglycérides peuvent être employés seuls ou en mélange avec d'autres esters d'acides gras ou huiles pharmaceutiques faisant également l'objet d'une approbation pour l'usage parentéral.
Les esters d'acides gras composant ledit c#ur essentiellement lipidique sont avantageusement choisis parmi les acides gras à chaîne moyenne portant de 8 à18 atomes de carbone, tels que le palmitate d'éthyle, l'oléate d'éthyle, le myristate d'éthyle, le myristate d'isopropyle, le myristate d'octyldodécyle ainsi que leurs mélanges.
Bien entendu, la composition et les proportions de chacun de ces constituants sont modulables et ajustables en fonction de la balance hydrophile/lipophile (ou HLB) que l'on veut donner au mélange. En effet, la
face interne de l'enveloppe étant de nature lipophile, il n'y aura pas d'incompatibilité entre la nature de l'enveloppe et le contenu du c#ur.
Ces lipides sont sous forme liquide ou semi-liquide à température ambiante en fonction de la taille et du degré de saturation des chaînes carbonées portées par les triglycérides et les huiles constituant ledit c#ur. La présence de corps gras à l'intérieur du c#ur des nanocapsules selon l'invention contribue à la fois à servir de solvant aux anticancéreux transportés, mais constitue également une masse pleine qui sert au maintien et à la relative stabilité de ces nanocapsules dans l'environnement externe : que ce soit en solution dans un liquide aqueux ou à l'état sec à l'issue d'une étape de lyophilisation. Contrairement aux liposomes ou aux autres vecteurs colloïdaux ayant une membrane lipidique et un intérieur aqueux , la présence d'un contenu de corps gras assure donc une certaine stabilité (variation de la force ionique ou de la pression osmotique) aux nanocapsules selon l'invention.
Avantageusement, la surface externe de l'enveloppe lipidique externe des nanocapsules lipidiques furtives objets de la présente invention est de nature hydrophile et le c#ur essentiellement lipidique est de nature lipophile.
Ainsi, l'association de lipides biodégradables et assimilables composant le c#ur et l'enveloppe permet à la fois d'envisager une libération rapide des principes actifs transportés et apporte également aux nanocapsules une stabilité physique qui autorise leur lyophilisation et même leur stérilisation par passage sur filtre de 0,45 à 0,22 m. Les nanocapsules conformes à l'invention peuvent donc être stérilisées et éventuellement conservées sous forme sèche sur de longues périodes de temps. Le nouveau vecteur conforme à l'invention offre ainsi une certaine facilité d'emploi qui en fait un produit aisément exploitable dans l'industrie.
Avantageusement, le c#ur essentiellement lipidique des nanocapsules lipidiques furtives objets de la présente invention représente entre 20 à 60 %, de préférence entre 25 et 50 % en poids par rapport au poids total desdites nanocapsules.
Avantageusement, la phase aqueuse ou phase dispersante, dans laquelle les nanocapsules (ou phase dispersée) conformes à l'invention peuvent être préparées, contient initialement une certaine concentration en sels, avantageusement en NaCI. Cette concentration est comprise entre 4 et 8 %, avantageusement comprise dans l'intervalle de 4,4 à 5,2 %. A l'issue du procédé de synthèse, cette phase aqueuse peut faire l'objet d'ajout d'agents osmotiques, cryo ou lyoprotecteurs et éventuellement d'agents de conservation.
La demanderesse a en effet constaté que cette concentration en sel permettait à la fois d'obtenir une température d'inversion de phase (ou TIP) plus basse qu'en l'absence de sels, de permettre une incorporation plus massive de molécules de phospholipides couplées au PEG et enfin, de diminuer de façon conséquente la taille des nanocapsules obtenues.
Le mélange de corps gras constituant ledit c#ur permet d'envisager le transport de principes actifs faiblement à fortement lipophiles et plus particulièrement de substances anticancéreuses. En effet, en fonction de la liposolubilité de chaque principe actif, la HLB sera ajustée pour permettre une dissolution complète du principe actif. La présente invention permet même le transport d'un mélange de principes actifs de solubilité différente, pour lesquels une HLB intermédiaire sera appliquée, assurant une solubilité au moins partielle de chaque anticancéreux.
Avantageusement, les nanocapsules lipidiques furtives objets de la présente invention contiennent un ou plusieurs principes actifs, notamment de nature lipophile.
Ainsi, les principes actifs anticancéreux suivants, de nature majoritairement lipophile pourront être employés, seuls ou en mélange : le paclitaxel et ses dérivés tels que le docétaxel, la camptothécine et ses dérivés tels que l'irinotécan, le topotécan ou le rubitécan, le busulfan, le chlorambucil, les phthalocyanines, les caroténoïdes et la daunomycine notamment.
Par ailleurs, des principes actifs anticancéreux de nature amphiphile tels que la cytarabine, la cyclophosphamide, le methotréxate, les dérivés
fluorés tels que le 5-Fluorouracile ou le 5-fluorouridine, par. exemple ou la doxorubicine notamment pourront également être transportés par les nanocapsules conformes à l'invention. Les principes actifs seront préalablement dissous dans les esters d'acides gras, les triglycérides ou dans des huiles et corps gras pharmaceutiques de grade injectable. Les solutions de principe actif ainsi réalisées pourront être directement mises en oeuvre dans le procédé ou faire l'objet de dilutions ultérieures dans des mélanges de triglycérides avant leur mise en #uvre.
Enfin, on peut tout à fait prévoir le transport de tout autre type de principes actifs, et en particulier d'agents permettant le traitement des inflammations ou des foyers d'infections tissulaires. Ainsi, les nanocapsules conformes à l'invention, de par leur furtivité et la modulabilité de leur taille sont particulièrement adaptées au transport et à la délivrance de médicaments au niveau des tissus en inflammation. En effet, lors d'une inflammation, telle qu'observée dans les formes d'arthrite par exemple, les capillaires irriguant la zone inflammée voient leurs fenestrations s'élargir pour permettre un transport accru de certains éléments présents dans le sang, en particulier de protéines. Il en est de même au niveau de tissus présentant des foyers d'infection. De ce fait, même si l'accumulation à ce niveau est moins marquée qu'au niveau des tumeurs, on peut concevoir que la libération de principes actifs adaptés, dans une région proche de l'inflammation ou de l'infection par des nanocapsules conformes à l'invention permette de réduire les conséquences de telles pathologies. Ainsi, on peut tout à fait prévoir le transport par les nanocapsules conformes à l'invention de substances anti-inflammatoires telles que l'ibuprofène, les corticoïdes tels que la dexaméthasone, ainsi que les antibiotiques, les antalgiques et les antiinfectieux tels que l'amphotéricine B.
Les sapogénines sont des composés résultant de l'hydrolyse acide (généralement en présence d'acide chlorhydrique ou sulfurique en milieu aqueux bouillant) ou enzymatique (généralement pendant environ 5 jours à environ 37 C), habituellement suivie d'une extraction par un solvant organique apolaire, des saponosides qui sont des hétérosides fonctionnalisés, de poids moléculaire très élevé, présents dans les turbercules de certaines plantes. Comme sources de saponosides, on pourra citer : les plantes de la famille des dioscorées comme Dioscorea composita, Dioscorea deltoides, Dioscorea floribunda, Dioscorea sylvatica, Dioscorea spiculiflora et Dioscorea villosa, qui sont riches en dioscine ; les plantes de la famille des Agaves et les plantes de la famille des Liliacées, dont le yucca.
Parmi les sapogénines que l'on peut obtenir à partir des plantes précitées, la diosgénine a déjà été décrite comme anti-inflammatoire (Yamada et al., Am. J.
Physiol., 273 :G355-G364, 1997), comme actif amincissant par son action sur les adipocytes (WO 00/30603), comme inhibiteur de collagénase et comme agent antimicrobien utilisable dans le traitements de diverses pathologies à composante infectieuse dont l'acné et la dermatite séborrhéique (DE-198 41 795).
En outre, des extraits de Dioscorea tokoro, qui renferment de la dioscine, ont par ailleurs été décrits comme efficaces pour hydrater la peau et ainsi l'assouplir. Ainsi, le document JP-10 194 947 divulgue un extrait de Dioscorea tokoro préparé par
extraction à l'aide d'eau, d'alcool ou d'acétone à une température comprise entre 0 et 50 C, de préférence de 0 C. Cet extrait est décrit comme utile pour améliorer la souplesse et l'hydratation de la peau en raison des glycoprotéines qu'il contient. Il aurait en outre un effet de suppression de la sécrétion sébacée.
De son côté, le document JP-2000 143 488 divulgue une composition pour prévenir et améliorer le dessèchement cutané, comprenant un extrait de plante choisi parmi une longue liste, dont Dioscorea tokoro maquino et Dioscorea gracillima miq., qui sont des sources de saponosides. Là encore, le procédé d'extraction comprend simplement l'immersion de la plante dans un solvant à température ambiante, suivie d'étapes de filtration et de séchage et l'extrait ainsi obtenu peut être considéré comme contenant les saponosides de la plante.
De même, le document WO 00/13693 décrit un complexe végétal anti-pollution, présentant un effet hydratant, qui contient notamment des plantes à saponosides comme agents anti-oxydants. Ces plantes sont extraites par broyage, macération dans un solvant hydroalcoolique à moins de 50 C et filtration.
Ainsi, les procédés d'extraction décrits dans ces documents ne permettent pas d'obtenir des compositions contenant des sapogénines (dont la diosgénine), dans la mesure où ils ne comprennent pas d'étape d'hydrolyse acide ou enzymatique. Les compositions décrites ne contiennent donc que des saponosides (dont la dioscine).
Par ailleurs, le document FR-2 802 412 divulgue une composition destinée à hydrater notamment la peau, après exposition aux infrarouges. La composition contient, comme actif principal, un extrait placentaire, et également, à titre d'agents antimicrobiens et anti-inflammatoires, des sapogénines dont la ruscogénine et l'hédéragénine. Toutefois, ces compositions sont appliquées sur des peaux deshydratées par évaporation de l'eau, due à l'échauffement causé par l'exposition aux infrarouges et non sur des peaux oligoséborrhéiques.
La présente invention a donc pour objet l'utilisation cosmétique d'une composition renfermant au moins une sapogénine, ou un extrait naturel en contenant, pour le traitement des peaux sèches oligoséborrhéiques ou du cuir chevelu sec.
Elle a également pour objet l'utilisation cosmétique d'une sapogénine, ou d'un extrait naturel en contenant, en tant qu'agent pour le traitement des peaux sèches oligoséborrhéiques ou du cuir chevelu sec.