INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Une autre classe encore d'agents tenseurs utilisables dans la présente invention est constituée par des particules colloïdales. Par "particules colloïdales", on entend des particules ayant un diamètre moyen en nombre compris entre 0,1 et 100 nm, de préférence entre 3 et 30 nm.
Il peut s'agir de particules colloïdales de charges inorganiques ou de cires.
Des exemples de charges inorganiques comprennent : la silice, l'oxyde de cérium, l'oxyde de zirconium, l'alumine, le carbonate de calcium, le sulfate de baryum, le sulfate de calcium, l'oxyde de zinc et le dioxyde de titane, sous forme de particules ayant un diamètre allant de 0,1 à 100 nm, et de préférence de 3 à 30 nm. Une charge inorganique particulièrement préférée est la silice. Des particules colloïdales de silice sont notamment disponibles sous forme de dispersion aqueuse auprès de la société
CATALYSTS & CHEMICALS sous les dénominations commerciales COSMO S-40 et COSMO S-50.
Les microgels utilisables comme autres agents tenseurs additionnels dans la présente invention ont des tailles de particule de gel inférieure au micron. Il peut s'agir de particules de cire ou de polyholoside. Ainsi, on peut utiliser des microparticules de cires ayant un diamètre généralement inférieur à 5 um et constituées essentiellement d'une cire ou d'un mélange de cires choisies par exemple parmi les cires de Carnauba, de Candelila ou d'Alfa. Le point de fusion de la cire ou du mélange de cires est de préférence compris entre 50 C et 150 C.
Enfin, les particules colloïdales de polyholosides ont généralement une taille comprise entre 0,5 et 100 um et peuvent être constituées de carraghénanes, d'alginates, d'agars, de gellanes, de polymères cellulosiques ou de pectines.
Du point de vue des formulations, les compositions peuvent se présenter sous différentes formes telles qu'une lotion, un sérum, une crème.
Un autre objet de la présente invention est un procédé de traitement cosmétique d'une peau ridée consistant à appliquer sur ladite peau une composition comportant une phase aqueuse, et au moins un polymère comprenant des unités hydrosolubles ou hydrodispersibles et des unités à LCST, lesdites unités
LCST présentant dans l'eau une température de démixtion de 5 à 40 C à une concentration massique de 1%, et le polymère présentant une température de gélification de 5 à 40 C pour une concentration massique de 2 %.
L'application se fait selon les techniques habituelles, par exemple par application de crèmes, de gels, de sérums, de lotions..etc sur la peau destinée à être traitée. Dans le cadre de ce procédé, la composition peut être, par exemple, une composition de soin, une composition de maquillage ou un produit solaire.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples qui suivent donnés à titre illustratif et non limitatif.
EXPOSÉ DÉTAILLÉ DE MODES DE RÉALISATION PARTICULIERS Différentes formulations ont été préparées, incorporant des polymères tels que définis ci-dessus, et testées afin de mettre en évidence l'effet tenseur induit par l'utilisation de tels polymères.
L'évaluation de l'effet tenseur est effectuée par un dermomètre.
2. 2.a.9 Certains sacs possèdent Lerams sacs ne 1''vlwiJVV~ulll. pas d'anses mais ne disposent que de formes poignées.
Dans ce cas une série d'Ech permanentes ,sécables ou combinées est réalisée sur -Le côté comportant -La P.P.S et l'O.P.S.. les Ech sont donc réalisées sur les ceux côtés de la bande.
2. 2.a.10 Certains sacs ne possèdent ni d' anses ni de poignées dans ce cas il surfit de retrousser et de boudiner l'ouverture du sac puis l'enchevêtrer dans les échancrures Ech côté P.P.S pour assurer la fixation du sac.
2. 2.b.1 Le paragraphe 2.2.a.5 définit 1 Q"""'"' ni r'≤' 1 D T 17", Q--o- - -F-n-'- Q- -,-,-,-.6'Tr- Y' ï u u' i '..Á--- 1 'J . ~ . V ......J.J-1 '#J-' i i .L(";"1..J..L '~ "J.1 1 ' . a. J i un supplémentaire avec l'axe de la languette parallèle à l'axe longitudinal de la bande sensiblement centré compris entre l'O.P.F et l'extrémité supérieure languette orientée vers le bas.
2.2.b.2 La mise en place de cet O.P.U évoque une forme de museau dans la tête de la bande.
2. 2.b.3 La fonction de cet O.P.U est de servir de pince s'accrochant sur une toile ,une rôle
mince, un élastique ou sur une ficelle augmentant ainsi les facultés de fixation de l'objet au repos .
La dimension de la languette peut être standardisée aux Ech ou être rallongée.
2. 2.b.5 Un deuxième O.P.U semblable, d'axe de languette longitudinal , ,réalisé dans la partie inférieure de la bande permet la mise partie inférieure bande permet mise place d'une ficelle à deux boucles extrêmes faisant office de bretelle de protage de l'objet.
Languette pendante vers le dégageant l'impression visuelle de la lettre les O.P.U n'eu vent être orientés de 90, 180 et 270 degrés par rapport 'axe longitudinal de bande et à 1 leur première description en 2.2.a.5.
3. 1.a Dans a partie supérieure de l'objet entre l'O.P.U , l'O.P.U et l'extrémité supérieure sont réalises deux orifices supplémentaires circulaires allongés , comme des gouttes d'eau , ,destinés à s'accrocher sur des rivets , boutons ,tire-fond ou têtes de vis baptisés Orifices Pour Rivets : O.P.R.
Ainsi les possibilités d'accrochage et de fixation sont accrues l'allongement est pratiqué dans le sens plutôt anti- pondéral pour assurer une fonction de blocage tout en Ga-rciant un asr, Ct (''t'&'f" r'l if OC 3 . 1 .b Avec son O. P.F, son O.P.U et ses deux O.P.R la partie supérieure de l'objet suggère visuellement une forme de tête d'animal ou de personnage .
3. 2.a Le corps large de la bande, dans sa partie supérieure, possède un Orifice de Portage (et d'accrochage) Interne baptisé : O.P.I sous forme sécable ou permanente sensiblement dans l'axe de la bande.
3. 2.b La forme générale de l'O.P.I se ~ ~ 1^ .--...~. - l 11 rapproche l'8.?S par un trou oblong rayonné / 't' 1..',rnC~101 de -co-'Lgnée C.rieY',r'7n<iarl'~ extrémités faisant fonction poignée correspondant aux formes poignées des sacs dépourvus d'' anses u..t.::.. .J.....I. L"-" 1:--' ...1....'::1':"...,-,~0 (--es sacs --'<''''''''''..f:-IJU..I............ '-".............L1I-,JC C:;-L-;i;"1t- r.7 .-. ,.. l a i"1 l D D Ç été ''too '" T'' f .I......--.........---"-",--- """,,,,.......t,.-.L-- --1..... ""'.-.!o.-; ,--L.:...:::--.;:--""""'-"'.-----.
3 . forlTs c.rificE:: cJô.rè.8 -jâ orin.e ac- Or C. 9 a el r rs m .r, i 8 F8e 1 T r T .' ''' . ri . R " c n c i 't Î , m ç ^ -tcenrrée sur la face latérale côté r . . S , d 0 G.l a:=:Dec"t cle c, c-, . v. r. rCi.,o.c'nnan L rorme raoezorQa#e combinant ses facultés de transport et d'accrochage évitant le glissement .
3. 2.d Le long de la face allongée du trou et sur fc'rme arrondie sont prévues des 6""""t}.-!;:=;..,......!('.Y'""'''''''''PC 'QrnT 1 :;::'0rY"'n/'"""'1}..?0C rJoC" ?.e-Cic' n C?r 3. 2.e L'objet possède un deuxième O.P.I, en partie basse du corps principal, de forme identique .semblable ou simplifiée sécable ou non .
Exemples 9 10 8,8a-Dihydro-3H-3a-azacyclopenta[a]inden-6-ylamine, 10-3 mole 10-3 mole dichlorhydrate (4) (base) 2-(2,4-Diamino-phénoxy)- éthanol, dichlorhydrate 10-3 Mole (coupleur) 3-Amino-2-chloro-6-méthylphénol, chlorhydrate (coupleur) 10-3 mole Support de teinture (2) (*) (*) Eau déminéralisée q. s.p. 100 g 100 g (*) Support de teinture (2) pH 7 Alcool éthylique à 96 20,8 g Métabisulfite de sodium en solution 0,23 g M.A aqueuse à 35% Sel pentasodique de l'acide diéthylène- 0,48 g M.A triamine-pentaacétique en solution aqueuse à 40% Alkyl en C8-C10 polyglucoside en solution 3,6 g M.A aqueuse à 60% Alcool benzylique 2,0 g Polyéthylène glycol à 8 motifs d'oxyde 3,0 g d'éthylène Na2HP04 0,28 g KH2PO4 0,46 g Au moment de l'emploi, chaque composition est mélangée avec un poids égal d'eau oxygénée à 20 volumes (6% en poids). On obtient un pH final de 7.
Exemples 9 10 Nuance Orangé Brun observée brun rouge EXEMPLES 11 A 14 DE TEINTURE EN MILIEU ALCALIN à partir du 2,3,8,8aTetrahydro-1 H-3a-aza-cyclopenta[a]inden-6-ylamine, dichlorhydrate (5) Les compositions tinctoriales suivantes ont été préparées :
Exemples 11 12 13 14 12,3,8,8a-Tetrahydro-1 H-3a-azacyclopenta[a]inden-6-ylamine , 10- 3 mole 10-3 mole 10-3 mole 10-3 mole dichlorhydrate (5) (base) 2-(2,4-Diamino-phénoxy)- éthanol, dichlorhydrate 10-3 mole - (coupleur) 3-Amino-2-chloro-6-méthyl-phénol, chlorhydrate (coupleur) 10-3 mole
3,6-Diméthyl-1 H-pyrazolo[5,1-c]
[1,2,4]triazole (coupleur) 10-3 mole 2-méthyl-5-aminophénol- - 10-3 mole (coupleur) Support de teinture (2) (*) (*) (*) (*) Eau déminéralisée q.s.p. 100 g 100 g 100 g 100 g (*) Support de teinture (1) pH 9,5 Alcool éthylique à 96 20,8 g Métabisulfite de sodium en solution 0,23 g M.A aqueuse à 35% Sel pentasodique de l'acide diéthylène- 0,48 g M.A triamine-pentaacétique en solution aqueuse à 40% Alkyl en C8-C10polyglucoside en solution 3,6 g M.A aqueuse à 60% Alcool benzylique 2,0 g Polyéthylène glycol à 8 motifs d'oxyde 3,0 g d'éthylène NH4CI 4,32 g
Ammoniaque à 20% de NH3 2,94 g Au moment de l'emploi, chaque composition est mélangée avec un poids égal d'eau oxygénée à 20 volumes (6% en poids). On obtient un pH final de 9,5.
Exemples 11 12 13 14 Nuance Bleu Bleu violet Violet Brun observée intense intense rouge orangé
EXEMPLES 15 A 19 DE TEINTURE EN MILIEU ACIDE à partir du 2,3,8,8a- Tetrahydro-1 H-3a-aza-cyclopenta[a]inden-6-ylamine, dichlorhydrate (5) Les compositions tinctoriales suivantes ont été préparées :
Exemples 15 16 17 18 19 2,3,8,8a-Tetrahydro-1 H-3a-azacyclopenta[a]inden-6-ylamine, 10-3 mole 10-3 mole 10-3 mole 10-3 mole 10-3 mole dichlorhydrate (5) (base) 2-(2,4-Diamino-phénoxy)- éthanol, dichlorhydrate 10-3 mole (coupleur) 3-Amino-2-chloro-6-méthylphénol, chlorhydrate (coupleur) 10-3 mole 2-Amino-pyridin-3-ol (coupleur) 10-3 mole 6-Hydroxy-1-H-indole (coupleur) 10-3 mole 2-méthyl-5-aminophénol 10-3 mole (coupleur) Support de teinture (1) (*) (*) (*) (*) (*) Eau déminéralisée q.s.p. 100 g 100 g 100 g 100 g 100 g (*) Support de teinture (2) pH 7 Alcool éthylique à 96 20,8 g Métabisulfite de sodium en solution 0,23 g M.A aqueuse à 35% Sel pentasodique de l'acide diéthylène- 0,48 g M.A triamine-pentaacétique en solution aqueuse à 40% Alkyl en C8-C10 polyglucoside en solution 3,6 g M.A aqueuse à 60% Alcool benzylique 2,0 g Polyéthylène glycol à 8 motifs d'oxyde 3,0 g d'éthylène Na2HP04 0,28 g KH2P04 0,46 g Au moment de l'emploi, chaque composition est mélangée avec un poids égal d'eau oxygénée à 20 volumes (6% en poids). On obtient un pH final de 7.
Exemples 15 16 17 18 19 Nuance Bleu Bleu violet Rouge Brun Brun observée intense intense brun rouge rouge
Elles ont de préférence une surface spécifique allant de 50 à 1000 m2/g et plus particulièrement de 150 à 800 m2/g.
Elles ont de préférence un volume poreux spécifique allant de 0,5 à 5 ml/g et plus particulièrement de 1 à 2 ml/g A titre d'exemple de microbilles de silice poreuse, on peut utiliser les produits commerciaux suivants : Silica Beads SB 150 de Myoshi Sunsphere H-51 de Asahi Glass Sunsil 130 de Sunjin.
Spherica P-1500 de Ikeda Corporation Sylosphere de Fuji Silysia Les microparticules sphériques de silice poreuse conformes à la présente invention sont utilisées dans les compositions conformes à l'invention à des concentrations allant de préférence de 0,1 à 10% en poids par rapport au poids total de la composition et plus particulièrement de 0,2 à 5% en poids.
Selon l'invention, le système photoprotecteur peut être constitué par un ou plusieurs filtres organiques et/ou un ou plusieurs (nano) pigments minéraux.
Les filtres organiques sont notamment choisis parmi les anthranilates ; les dérivés cinnamiques ; les dérivés de dibenzoylméthane ; les dérivés salicyliques, les dérivés du camphre ; les dérivés de triazine tels que ceux décrits dans les demandes de brevet US 4367390, EP863145, EP517104, EP570838, EP796851, EP775698, EP878469, EP933376, EP507691, EP507692, EP790243, EP944624 ; les dérivés de la benzophénone ; les dérivés de ss,ss-diphénylacrylate; les dérivés de benzotriazole ; les dérivés de benzalmalonate ; les dérivés de benzimidazole ; les imidazolines ; les dérivés bis-benzoazolyle tels que décrits dans les brevets EP669323 et US 2,463,264; les dérivés de l'acide paminobenzoïque (PABA) ; les dérivés de méthylène bis-(hydroxyphényl benzotriazole) tels que décrits dans s les demandes US 5,237,071, US 5,166,355, GB2303549, DE 197 26 184 et EP893119 ; les polymères filtres et silicones filtres
tels que ceux décrits notamment dans la demande WO-93/04665 ; les dimères dérivés d'a-alkylstyrène tels que ceux décrits dans la demande de brevet DE19855649 ; les 4,4-diarylbutadiènes tels que décrits dans les demandes EP0967200, DE19746654, DE19755649, EP-A-1008586, EP1133980 et EP133981 et leurs mélanges.
Comme exemples de filtres organiques actifs dans l'UV-A et/ou l'UV-B, on peut citer désignés ci-dessus sous leur nom INCI : Dérivés de l'acide para-aminobenzoique : PABA, Ethyl PABA, Ethyl Dihydroxypropyl PABA, Ethylhexyl Diméthyl PABA vendu notamment sous le nom ESCALOL 507 par ISP, Glyceryl PABA, PEG-25 PABA vendu sous le nom UVINUL P25 par BASF, Dérivés salicyliques : Homosalate vendu sous le nom Eusolex HMS par Rona/EM Industries, Ethylhexyl Salicylate vendu sous le nom NEO HELIOPAN OS par Haarmann et REIMER, Dipropyleneglycol Salicylate vendu sous le nom DIPSAL par SCHER, TEA Salicylate, vendu sous le nom NEO HELIOPAN TS par Haarmann et REIMER, Dérivés du dibenzoylméthane : Butyl Methoxydibenzoylmethane vendu notamment sous le nom commercial PARSOL 1789 par HOFFMANN LAROCHE, Isopropyl Dibenzoylmethane, Dérivés cinnamiques : Ethylhexyl Methoxycinnamate vendu notamment sous le nom commercial PARSOL MCX par HOFFMANN LAROCHE, Isopropyl Methoxy cinnamate, Isoamyl Methoxy cinnamate vendu sous le nom commercial NEO HELIOPAN E 1000 par HAARMANN et REIMER, Cinoxate, DEA Methoxycinnamate, - Diisopropyl Methylcinnamate, Glyceryl Ethylhexanoate Dimethoxycinnamate Dérivés de ss,ss-diphénylacrylate: Octocrylene vendu notamment sous le nom commercial UVINUL N539 par BASF, Etocrylene, vendu notamment sous le nom commercial UVINUL N35 par BASF, Dérivés de la benzophénone : Benzophenone-1 vendu sous le nom commercial UVINUL 400 par BASF,
Benzophenone-2 vendu sous le nom commercial UVINUL D50 par BASF Benzophenone-3 ou Oxybenzone, vendu sous le nom commercial UVINUL M40 par BASF, Benzophenone-4 vendu sous le nom commercial UVINUL MS40 par BASF, Benzophenone-5 Benzophenone-6 vendu sous le nom commercial Helisorb 11 par Norquay Benzophenone-8 vendu sous le nom commercial Spectra-Sorb UV-24 par American Cyanamid Benzophenone-9 vendu sous le nom commercial UVINUL DS-49 par BASF, Benzophenone-12, le 2-(4-diéthylamino-2-hydroxybenzoyl)-benzoate de n-hexyle Dérivés du benzylidène camphre : 3-Benzylidene camphor fabriqué sous le nom MEXORYL SD par CHIMEX, 4-Methylbenzylidene camphor vendu sous le nom EUSOLEX 6300 par MERCK, Benzylidene Camphor Sulfonic Acid fabriqué sous le nom MEXORYL SL par CHIMEX, Camphor Benzalkonium Methosulfate fabriqué sous le nom MEXORYL SO par CHIMEX, -Terephthalylidene Dicamphor Sulfonic Acid fabriqué sous le nom MEXORYL SX par CHIMEX, Polyacrylamidomethyl Benzylidene Camphor fabriqué sous le nom MESORYL SW par CHIMEX, Dérivés de benzimidazole : Phenylbenzimidazole Sulfonic Acid vendu notamment sous le nom commercial EUSOLEX 232 par MERCK, Disodium Phenyl Dibenzimidazole Tetra-sulfonate vendu sous le nom commercial commercial NEO HELIOPAN AP par Haarmann et REIMER, Dérivés de triazine : Anisotriazine vendu sous le nom commercial TINOSORB S par CIBA SPECIALTY CHEMICALS Ethylhexyl triazone vendu notamment sous le nom commercial UVINUL T150 par BASF, Diethylhexyl Butamido Triazone vendu sous le nom commercial UVASORB HEB par SIGMA 3V la 2,4,6- tris-(4'amino-benzalmalonate de diisobutyle)-s-triazine.
Dérivés de benzotriazole : Drometrizole Trisiloxane vendu sous le nom Silatrizole par RHODIA CHIMIE , Methylène bis-Benzotriazolyl Tetramethylbutylphénol, vendu sous forme solide sous le nom commercial MIXXIM BB/100 par FAIRMOUNT CHEMICAL ou sous forme micronisé en dispersion aqueuse sous le nom commercial TINOSORB M par CIBA SPECIALTY CHEMICALS, Dérivés anthraniliques : Menthyl anthranilate vendu sous le nom commercial commercial NEO HELIOPAN MA par Haarmann et REIMER,
Dérivés d'imidazolines : Ethylhexyl Dimethoxybenzylidene Dioxoimidazoline Propionate, Dérivés de benzalmalonate : Polyorganosiloxane à fonctions benzalmalonate vendu sous la dénomination commerciale PARSOL SLX par HOFFMANN LAROCHE Dérivés de 4,4-diarvlbutadiène : -1,1-dicarboxy (2,2'-diméthyl-propyl)-4,4-diphénylbutadiène et leurs mélanges.
Les filtres organiques plus particulièrement préférés sont choisis parmi les composés suivants : Ethylhexyl Salicylate, Ethylhexyl Methoxycinnamate Octocrylene, Phenylbenzimidazole Sulfonic Acid, Benzophenone-3, Benzophenone-4, Benzophenone-5, le 2-(4-diéthylamino-2-hydroxybenzoyl)-benzoate de n-hexyle 4-Methylbenzylidene camphor, Terephthalylidene Dicamphor Sulfonic Acid, Disodium Phenyl Dibenzimidazole Tetra-sulfonate, la 2,4,6-tris-(4'-amino benzalmalonate de diisobutyle)-s-triazine Anisotriazine, Ethylhexyl triazone, Diethylhexyl Butamido Triazone, Methylène bis-Benzotriazolyl Tetramethylbutylphénol Drometrizole Trisiloxane 1,1-dicarboxy (2,2'-diméthyl-propyl)-4,4-diphénylbutadiène et leurs mélanges.
Les filtres inorganiques sont choisis parmi des pigments ou bien encore des nanopigments (taille moyenne des particules primaires : généralement entre 5 nm et 100 nm, de préférence entre 10 nm et 50 nm) d'oxydes métalliques enrobés ou non comme par exemple des nanopigments d'oxyde de titane (amorphe ou cristallisé sous forme rutile et/ou anatase), de fer, de zinc, de zirconium ou de cérium qui sont tous des agents photoprotecteurs UV bien connus en soi. Des agents d'enrobage classiques sont par ailleurs l'alumine et/ou le stéarate d'aluminium. De tels nanopigments d'oxydes métalliques, enrobés ou non enrobés, sont en particulier décrits dans les demandes de brevets EP518772 et EP518773.
Le système photoprotecteur selon l'invention est généralement présent dans les compositions selon l'invention à une teneur allant de 0,1 % à 30 % en poids et de préférence de 0,5 à 15 % , en poids, par rapport au poids total de la composition.
Les compositions vaporisables conformes à l'invention sont appliquées sur la peau ou les cheveux sous forme de fines particules au moyen de dispositifs de
pressurisation. Les dispositifs conformes à l'invention sont bien connus de l'homme de l'art et comprennent les pompes non-aérosols ou "atomiseurs", les récipients aérosols comprenant un propulseur ainsi que les pompes aérosols utilisant l'air comprimé comme propulseur. Ces derniers sont décrits dans les brevets US 4,077,441 et US 4,850,517 (faisant partie intégrante du contenu de la description).
Les compositions conditionnées en aérosol conformes à l'invention contiennent en général des agents propulseurs conventionnels tels que par exemple les composés hydrofluorés le dichlorodifluorométhane, le difluoroéthane, le diméthyléther, l'isobutane, le n-butane, le propane, le trichlorofluorométhane. Ils sont présents de préférence dans des quantités allant de 15 à 50% en poids par rapport au poids total de la composition.
Le nombre de tours en cycles de sélection nécessaire dépend généralement de la taille de la banque de départ. Le nombre de tours de sélection est de préférence compris entre 1 et 10, plus particulièrement entre 2 et 5. Un cycle de sélection comprend : 1- préparation du substrat adapté pour l'expression ; 2- compartimentation ; 3- expression/activité ; 4- discrimination.
En conséquence, l'invention concerne une méthode de sélection d'endonucléases capables de couper un site de coupure parmi une banque de séquences codantes pour des endonucléases, présentant un type de coupure décalée, comprenant les étapes suivantes : 1) fournir ladite banque de séquences codantes pour des endonucléases ; 2) préparer une banque de substrats ADN double-brins comprenant deux sites de coupure encadrant une cassette d'expression pour une endonucléase de ladite banque ; 3) préparer un mélange comprenant lesdits substrats ADN et un extrait de transcription/traduction in vitro ; 4) compartimenter ledit mélange dans des microcapsules ; 5) mettre dans des conditions propices à l'expression de l'endonucléase et à son activité de coupure ; 6) rompre la compartimentation ; 7) discriminer les substrats ADN coupés aux deux sites et les substrats ADN non coupés aux deux sites ; de manière facultative, 8) amplifier le substrat ADN coupé aux deux sites afin de restaurer le substrat ADN initial;
9) reproduire les étapes 3) à 8) jusqu'à un stade de sélection suffisant.
L'avancement de la sélection est généralement déterminé par la quantification du taux d'enrichissement à l'aide d'une méthode de criblage. La méthode de criblage peut éventuellement être une des méthodes de la présente invention.
Un stade de sélection est suffisant lorsque le rapport taux d'enrichissement par rapport à la diversité est correct. En effet, la sélection doit permettre d'enrichir la population en endonucléase présentant l'activité de coupure désirée tout en gardant une bonne diversité. De préférence, la sélection est suffisante lorsque la diversité a été réduite à une taille compatible pour le criblage.
Par exemple, une sélection est suffisante lorsque les endonucléases capables de couper le site testé représentent plus de 5% de la population, de préférence plus de 10 %, de manière privilégiée plus de 20%. De préférence, une sélection est suffisante lorsqu'une endonucléase représente plus de 5% de la population, de préférence plus de 10 %, de manière privilégiée plus de 20%.
De préférence, lesdits sites de coupure ont une localisation distale sur ledit substrat ADN. Plus particulièrement, ils sont situés aux extrémités du substrat ADN. Lesdits sites de coupure sont de préférence identiques. Lorsqu'ils sont identiques, ils présentent une orientation inverse. Lesdits sites de coupure peuvent également être différents.
Dans un mode de réalisation préféré, la discrimination consiste en la dégradation du substrat ADN non coupé par une exonucléase incapable de dégrader le substrat ADN coupé aux deux sites. Facultativement, ladite exonucléase est inactivée avant l'étape 8). Lorsque ladite endonucléase possède un type de coupure décalée, plus particulièrement d'au moins 4 nucléotides, générant une extrémité 3' sortante, ladite exonucléase est de préférence l'exonucléase III. Lorsque ladite endonucléase possède un type de coupure décalée, plus particulièrement d'au moins 4 nucléotides, générant une extrémité 5' sortante, ladite exonucléase est de préférence l'exonucléase Lambda.
Dans un mode de réalisation additionnel, la discrimination consiste en l'amplification sélective des substrats ADN coupés aux deux sites. Ainsi, des adaptateurs capables de s'hybrider à au moins une des extrémités sortantes générées par la coupure de ladite endonucléase sur le
substrat ADN coupé, de préférence aux deux extrémités, sont ajoutés et soit liés covalemment par l'action d'une ligase soit intégrés au substrat ADN par élongation, lesdits adaptateurs permettant d'introduire une séquence non présente sur le substrat ADN utilisée pour les amorces de PCR.
Ladite séquence non présente sur le substrat ADN varie à chaque tour de sélection.
De préférence, ladite compartimentation est faite par une émulsion eau/huile. Dans ce mode de réalisation, la rupture de la compartimentation est faite par centrifugation suivie d'une extraction.
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