INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La diffusion des messages peut avoir lieu suivant deux modes donnés ci-après à titre d'exemple : e Un mode automatique qui permet l'émission des messages sans intervention d'un opérateur, pendant des périodes prédéfinies par des paramètres. e Un mode manuel, dans lequel il est possible de composer, d'écouter et de diffuser n'importe quel message.
Dans le mode automatique, il y a deux types de déclenchement de diffusion de messages : 'Déclenchement de la diffusion d'un message dès l'apparition d'un nouvel événement, de modification d'un événement en cours ou de la disparition d'un nouvel événement.
Déclenchement de la rediffusion de tous les messages liés aux événements en cours.
Le passage du mode automatique au mode manuel pendant la diffusion d'un message stoppe cette diffusion (arrêt d'urgence).
Dans une alternative également envisagée, le substrat ADN comprend un site de coupure pour une autre endonucléase que celle testée et cette autre endonucléase est ajoutée à l'étape 4).
De préférence, ledit récipient est un puit de microplaque ou équivalent.
Facultativement, une étape de purification du substrat ADN peut être ajoutée avant l'étape de discrimination. Cette étape permet de séparer le substrat ADN des endonucléases utilisées.
Cette étape est de préférence effectuée par une extraction Phénol/Chloroforme. Cette étape de purification peut se révéler nécessaire lorsque les endonculéases restent fixées au site de coupure après le clivage.
Dans le mode de réalisation alternatif où le substrat contient un site de coupure, l'invention concerne une méthode de criblage permettant d'identifier parmi une banque de séquences codantes
pour des endonucléases, présentant un type de coupure décalée, la ou les endonucléase(s) capable (s) de couper un site de coupure déterminé comprenant les étapes suivantes : 1) fournir ladite banque de séquences codantes pour des endonucléases ; 2) fournir un substrat ADN double-brin contenant un site de coupure présentant une localisation distale sur ledit substrat ADN et portant un ligand à l'extrémité proche dudit site de coupure; 3) distribuer chaque séquence codante de ladite banque dans des récipients; 4) exprimer l'endonucléase codée par la séquence codante en présence dudit substrat ADN dans des conditions propices à l'activité de coupure ; 5) dépléter les substrats ADN non coupés avec la cible du ligand immobilisée sur un support solide ; 6) détecter le substrat ADN coupé; la détection dudit substrat ADN coupé révélant l'activité de clivage et permettant d'identifier la ou les endonucléase(s) capable (s) de couper ledit site de coupure déterminé. De préférence, le ligand, la cible et le support solide sont respectivement la biotine, la streptavidine et une bille paramagnétique.
Facultativement, l'étape de détection 6) comprend : a) amplifier par PCR le substrat ADN coupé ; et, b) détecter le produit d'amplification ; ledit produit d'amplification constituant la mesure de l'activité de clivage de ladite endonucléase.
L'invention concerne une méthode de criblage permettant d'identifier parmi une banque de séquences codantes pour des endonucléases, présentant un type de coupure décalée, la ou les endonucléase(s) capable (s) de couper un site de coupure déterminé comprenant les étapes suivantes : 1) fournir ladite banque de séquences codantes pour des endonucléases ; 2) fournir un substrat ADN double-brin contenant un site de coupure présentant une localisation distale sur ledit substrat ADN; 3) distribuer chaque séquence codante de ladite banque dans des récipients; 4) exprimer l'endonucléase codée par la séquence codante en présence dudit substrat ADN dans des conditions propices à l'activité de coupure ; 5) ajouter dans chaque récipient un adaptateur capable de s'hybrider à l'extrémité sortante dudit substrat générée par la coupure de ladite endonucléase et soit le lier covalemment soit l'intégrer audit substrat par élongation, ledit adaptateurs permettant d'introduire une séquence non présente sur le substrat ADN ; 6) amplifier spécifiquement lesdits substrat ADN coupés avec une amorce s'hybridant sur ladite séquence non présente ; 7) détecter le substrat ADN amplifié;
la détection dudit substrat ADN amplifié révélant l'activité de clivage et permettant d'identifier la ou les endonucléase (s) de couper ledit site de coupure déterminé.
Dans un mode de réalisation, ledit substrat ADN comprend en outre une cassette d'expression pour une séquence codante de ladite banque.
SELECTION D'ENDONUCLEASES La sélection permet d'identifier dans un mélange d'endonucléases, plus précisément une banque de séquences codantes pour des endonucléases, la séquence codante pour une endonucléase présentant l'activité de coupure désirée. Plus particulièrement, la sélection permet d'enrichir une banque ou un mélange de séquences codantes pour des endonucléases en séquences codantes pour des endonucléases présentant l'activité de coupure désirée.
La méthode selon la présente invention est bien adaptée pour faire une sélection. Pour cela, chaque substrat ADN porte de préférence au moins deux sites de coupure entourant une cassette d'expression pour une endonucléase. La sélection nécessite que chaque substrat ADN soit isolé dans un compartiment durant l'expression et la coupure éventuelle du substrat par l'endonucléase exprimée.
COMPARTIMENTATION La méthode de compartimentation préférée pour la présente invention est la technique d'émulsion (Tawfik et Griffiths, 1998, Nat Biotechnol, 16, 652-656 ; Griffiths et Tawfik, 2000, Cur Opin Biotechnol, 11,338-353 ; Griffiths et Duncan, 1998, Cur Opin Biotechnol, 9,102-108 ; WO 99/02671 (plus particulièrement pl4-19 et p37-38 ; de ces documents étant incorporé par référence). Une émulsion est un mélange hétérogène de deux liquides non miscibles dont l'un forme des gouttelettes microscopiques en suspension dans l'autre. Cependant, toute méthode équivalente de compartimentation est également envisagée dans la présente invention (WO 99/02671 pl3-14 ; Benita, 1996, Microencapsulation : and industrial applications.
Drug and pharmaceutical sciences. Ed. Swarbrick, J. New York : Marcel Dekker ; l'enseignement de ces documents étant incorporé par référence). Dans la présente invention, les termes goutte , compartiment , microcapsule sont interchangeables.
ESN : 2-éthylsuccinonitrile mmol : millimole.
25 2PN : 2-pentènenitrile.
TT : taux de transformation du produit de départ.
30 RR (X) : rendement réel du composé X = nb de mole formé de X / nb de mole maximale de X.
RT (X) : sélectivité du composé X égale à RR(X) / TT Linéarité = RT(AdN) / RT (DN)
Exemple 1 Préparation du ligand A de formule générale suivante : 5 Sous argon, dans un ballon de 100 ml sont dissous 2. 67 g de 1,1'-biphenyl-2,2'-diyl phosphorochloridite dans 10 ml de toluène anhydre. La solution est agitée à 0 C. Une solution de 620 mg de saligénol et de 1.7 ml de triéthylamine dans 25 ml de toluène anhydre est chargée dans l'ampoule de coulée et introduite goutte à goutte dans le milieu réactionnel maintenu à 0 C : 10 Un précipité blanc se forme. La suspension est agitée vigoureusement 18h à 25 C puis filtrée sous argon sur un milieu filtrant commercialisé sous la dénomination florisil. Après 2 rinçages au toluène (10 ml), le filtrat est concentré sous pression réduite pour conduire à 2. 8 g de produit brut sous forme d'une huile translucide épaisse. L'analyse RMN de ctte huile montre que le produit obtenu correspond à la formule ci-dessus.
15 Exemple 2 : Hydrocyanation du 3-pentènenitrile (3PN) en adiponitrile (AdN).
Sous atmosphère d'argon, dans un tube en verre type Shott de 60 ml équipé d'un bouchon- septum, sont chargés successivement - le ligand A (2,5 eq), 20 -1,6 ml (15,4 mmol ; 30 eq) de 3PN anhydre, -142 mg (0,52 mmol ; 1 eq) de Ni(cod)2 et -l'acide de Lewis (0,52 mmol ; 1 eq).
Le mélange est porté, sous agitation, à 70 C. La cyanhydrine de l'acétone est injectée dans le milieu réactionnel par un pousse-seringue à un débit de 0,45 ml par heure. Après 3 heures 25 d'injection, le pousse-seringue est stoppé. Le mélange est refroidi à température ambiante, dilué à l'acétone et analysé par chromatographie en phase gazeuse.
L'analyse du milieu réactionnel montre la formation d'adiponitrile.
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L'ECU de moteur 4 reçoit des signaux provenant du capteur de papillon 18, du capteur de quantité d'admission 20, du capteur de rapport air-carburant 28 et des deux capteurs d'oxygène 30,32. L'ECU de moteur 4 reçoit également des signaux provenant d'un capteur de pédale d'accélération 62 et d'un capteur de vitesse de moteur 64.
Le capteur de pédale d'accélération 62 détecte le degré d'enfoncement de la pédale d'accélération 60, ou degré d'enfoncement de la pédale d'accélération ACCP, et le capteur de vitesse de moteur 64 détecte une vitesse de moteur NE sur la base de la rotation du vilebrequin 2a.
L'ECU de moteur 4 reçoit de plus des signaux provenant d'un capteur de température de liquide de refroidissement 66 et d'un capteur de vitesse de véhicule 68. Le capteur de température de liquide de refroidissement 66 détecte la température du liquide de refroidissement du moteur 2, ou température du liquide de refroidissement THW. Bien que non illustrés, des capteurs autres que ceux énoncés ci-dessus, nécessaires pour la commande du moteur, sont prévus.
L'ECU de transmission 8 reçoit des signaux provenant d'un interrupteur de position de levier de vitesse 8b, du capteur de papillon 18, du capteur de pédale d'accélération 62, du capteur de vitesse de moteur 64 et du capteur de température du liquide de refroidissement 66.
L'interrupteur de position de levier de vitesse 8b détecte la position du levier de vitesse, qui est sélectionnée par un conducteur. L'ECU de transmission 8 reçoit également des signaux provenant du capteur de vitesse de véhicule 68, d'un capteur de vitesse d'embrayage 70 et d'un interrupteur de position de frein 72. Le capteur de vitesse de véhicule
68 détecte la vitesse du véhicule SPD sur la base de la rotation d'un arbre de sortie 54 de la transmission automatique 6. Le capteur de vitesse d'embrayage 70 détecte une vitesse de rotation NCO de l'embrayage C0. L'interrupteur de position de frein 72 détecte l'état de freinage d'un frein à pied.
Sur la base des résultats de détection des capteurs connectés, l'ECU de moteur 4 commande le calage d'injection de carburant, la quantité d'injection de carburant, le calage d'allumage et le degré d'ouverture du papillon TA du moteur 2. En conséquence, le mode de combustion est, par exemple, commuté entre une combustion à charge stratifiée et une combustion homogène. Dans le premier mode de réalisation, dans un état de fonctionnement normal autre que les cas dans lesquels le moteur 2 est froid, le mode de combustion est déterminé sur la base d'une carte de la vitesse de moteur NE et d'un facteur de charge eklq.
Spécifiquement, la combustion à charge stratifiée est sélectionnée lorsque la vitesse du moteur NE est basse (comprenant le ralenti) et le facteur de charge eklq est bas. Dans les autres cas, la combustion à charge homogène est sélectionnée. Le facteur de charge eklq représente le rapport de la charge actuelle à la charge de moteur maximale, et est calculé sur la base d'une carte comportant des paramètres tels que le degré d'enfoncement de la pédale d'accélération ACCP et la vitesse de moteur NE.
Lorsque la combustion à charge homogène est sélectionnée, la combustion à charge homogène est réalisée au rapport air-carburant st#chiométrique (dans certains cas, à un rapport plus riche), dans les chambres de combustion. Spécifiquement, une quantité de carburant qui forme le rapport st#chiométrique avec la quantité d'admission GA est calculée, et la quantité calculée de
carburant est injectée pendant la course d'admission. Le rapport air-carburant peut être plus riche que le rapport air-carburant st#chiométrique dans certains cas. Dans ce cas, le rapport air-carburant d'échappement est le rapport air-carburant st#chiométrique (dans certains cas, plus riche que le rapport air-carburant st#chiométrique).
Lorsque la combustion à charge stratifiée est sélectionnée, le papillon des gaz 16 est ouvert relativement plus largement, et une quantité de carburant qui est calculée sur la base du facteur de charge eklq et qui est inférieure rapport air-carburant st#chiométrique est injectée pendant la course de compression. Dans chaque chambre de combustion, une combustion à charge stratifiée pauvre est réalisée. Dans ce cas, le rapport air-carburant d'échappement est pauvre.
Comme cela est décrit ci-dessous, l'ECU de moteur 4 réalise un processus de commande de température de catalyseur pour le catalyseur de NOx 26, qui est davantage affecté par la température que ne l'est le catalyseur de démarrage 24 dans le passage d'échappement 22.
Sur la base des résultats de détection des capteurs décrits ci-dessus, l'ECU de transmission 8 actionne un clapet à solénoïde dans le circuit de commande hydraulique 8a conformément à une carte de point de changement de vitesse prédéterminé qui comporte des paramètres tels que l'ouverture du papillon et la vitesse du véhicule. L'ECU de transmission 8 modifie la prise des embrayages CO, Cl, C2 et des freins BO, Bl, B2, B3, changeant de ce fait les vitesses.
Le processus de commande de température de catalyseur, qui est exécuté par l'ECU de moteur 4 destinée à commander la température du catalyseur de NOx 26, sera maintenant
décrit en se référant à la figure 3. Le processus de la figure 9 est répété à un intervalle prédéterminé.
Dans ce processus, il est déterminé à l'étape S100 si le moteur 2 est au ralenti. Si le résultat de l'étape S100 est négatif ou si le moteur 2 n'est pas au ralenti, un indicateur d'augmentation de charge Fqup est désactivé (étape S102). Ensuite, le processus est temporairement suspendu.
Les agglomérats formés de lamelles minérales empilées à exfolier sont préalablement traités au moyen d'un agent organique intercalant qui peut être choisi dans le groupe formé par des oligomères ou des polymères tels que le polyvinyl pyrolidone, l'alcool polyvinylique ou des copolymères tels que le copolymère d'acétate de vinyl et le vinylpyrolidone. Lors du traitement, cet agent organique intercalant a la propriété de s'insérer entre les particules lamellaires empilées à exfolier et d'augmenter l'espace interlamellaire entre deux lamelles adjacentes d'une manière significative d'environ au moins 5 A jusqu'à environ 100 A (Angstrom). Par ce traitement, les agglomérats formés de particules minérales lamellaires empilées à exfolier seraient facilement exfoliées dans la matrice polymère fondue, constituée d'alcool polyvinylique, sans qu'il y ait dégradation dudit alcool polyvinylique.
Selon la description qui en est faite, l'exfoliation des agglomérats préalablement traités, formés de lamelles minérales empilées, dans la matrice d'alcool polyvinylique à l'état fondu, peut être conduite dans un mélangeurmalaxeur discontinu tel qu'un Bambury ou un Brabender, ou bien dans un mélangeur-malaxeur continu tel qu'une extrudeuse, en soumettant le mélange composé de la matrice polymère fondue et des agglomérats minéraux lamellaires à exfolier à l'action d'un cisaillement dont le taux peut varier d'environ 10 secondes-' à 20.000 secondes' et, de manière préférentielle, de 100 secondes' à 10.000 secondes'.
Pour cette action d'exfoliation des agglomérats minéraux lamellaires à exfolier en milieu polymère fondu, lesdits agglomérats peuvent être soumis à une température au moins égale à la température de fusion des oligomères et/ou polymères ayant été intercalés entre les lamelles minérales empilées à exfolier et/ou à des pressions appliquées de 0,5 à 60 atmosphères.
L'observation de l'état de la technique, malgré les substantielles améliorations proposées pour l'obtention de matériaux nanocomposites, révèle l'existence d'inconvénients qui peuvent être majeurs et qui peuvent compromettre, au moins pour partie, l'excellence des caractéristiques apportées par les nanocharges aux matériaux polymères qui sont, par exemple, l'amélioration des propriétés mécaniques, thermiques, de surfaces, de barrières aux gaz, d'ignifugation et autres.
Il est, en effet, observé que l'état de la technique : - s'intéresse aux traitements préalables des aggomérats de particules minérales lamellaires à exfolier pour faciliter la séparation des lamelles les unes des autres et améliorer la capacité des lamelles minérales élémentaires exfoliées à être dispersées dans la matrice polymère à l'état fondu : ces traitement portent essentiellement sur la nécessité de rendre les agglomérats de particules minérales lamellaires à exfolier organophiles et d'intercaler, entre les lamelles minérales à exfolier, un composé organique qui peut être un oligomère ou polymère pour augmenter la distance interlamellaire et rendre compatibles les particules minérales lamellaires une fois exfoliées à l'égard du polymère constituant la matrice ; - décrit des moyens d'exfoliation des agglomérats minéraux lamellaires empilés à exfolier qui peuvent être considérés comme énergiques concernant aussi les niveaux de températures du milieu d'exfoliation formé par la matrice polymère à l'état fondu, qui peuvent être excessifs, les pressions auxquelles peut être soumis le milieu d'exfoliation (0,5 à 60 atmosphères), enfin les actions mécaniques de cisaillement du milieu d'exfoliation dont le taux apparaît éminemment variable, allant de 10 secondes-' à 20000 secondes.1 ;
- alors que ces moyens procurent des résultats qui peuvent paraître insuffisants dès lors que les matériaux nanocomposites produits selon les procédés de l'état de la technique manifestent des inconvénients tels que dégradation plus ou moins perceptible du ou des polymères formant la matrice d'accueil des agglomérats minéraux lamellaires à exfolier, la présence après l'exfoliation d'agglomérats minéraux lamellaires empilés non exfoliés, une dispersion assez irrégulière des particules minérales lamellaires élémentaires résultant de l'exfoliation au sein de la matrice polymère à l'état fondu, avec apparition de zones de forte et de faible concentrations en particules minérales lamellaires élémentaires et, enfin, résultant de ces procédés, des matériaux nanocomposites dont les caractéristiques attendues sont affaiblies.
Objets de l'invention Les divers objets assignés à l'invention découlent naturellement des inconvénients de l'état de la technique encore existants et à éliminer.
Parmi les objets les plus importants assignés à l'invention, peuvent être évoqués : - la nécessité d'éliminer le risque de dégradation des composés polymères formant la matrice par des chocs thermiques provoqués par un excès de cisaillement mécanique des polymères dans un état thermovisqueux ; - l'obligation de conduire l'exfoliation des agglomérats minéraux lamellaires dans la matrice polymère dans un état thermovisqueux sous un profil de températures qui soit raisonnable pour l'intégrité du matériau polymère de la matrice ; - l'exigence de parvenir à un taux d'exfoliation en milieu polymère dans un état thermovisqueux des agglomérats minéraux lamellaires empilés à exfolier d'au moins 95%, et préférentiellement d'au moins 98%, pour limiter, voire éliminer des matériaux nanocomposites, la présence d'agglomérats non exfoliés ;
- l'exigence également de parvenir à une dispersion homogène, dans la matrice polymère dans un état thermovisqueux, des particules minérales lamellaires élémentaires ou feuillets résultant de l'exfoliation ; - enfin, l'exigence que le procédé selon l'invention produise des matériaux nanocomposites ayant des caractéristiques physiques, mécaniques et autres améliorées et que ce procédé ait l'aptitude de reproduire, sans défaillance, lesdits matériaux nanocomposites.
Pour faciliter la compréhension de la description de l'invention, certaines expressions régulièrement utilisées dans le texte sont commentées : - les particules minérales lamellaires empilées à exfolier sont des agglomérats minéraux, d'origine naturelle ou synthétique formés d'une pluralité de lamelles élémentaires, empilées, adjacentes et liées entre elles, ayant chacune une épaisseur inférieure à 100 A, et préférentiellement comprise entre 2 A et 20 A, les surfaces des lamelles élémentaires pouvant être rendues organophiles par un traitement approprié. Les particules minérales monolamellaires élémentaires résultent de l'exfoliation des agglomérats d'argile et constituent les nanocharges.
- Les nanocharges ou particules minérales lamellaires élémentaires sont formées de particules minérales essentiellement monolamellaires ou monofeuillets, qui résultent de l'exfoliation d'agglomérats qui sont des particules minérales lamellaires empilées, ces particules monolamellaires, ayant une épaisseur entre 2 A et 20 A et pouvant contenir également des particules multilamellaires ou multifeuillets dont les lamelles élémentaires ou feuillets, liées entre elles, sont en nombre très restreint et constituent des empilements ayant résisté à l'exfoliation et ne dépassant pas l'épaisseur de 20 A.
- La matrice polymère est constituée de composés polymères thermoplastiques au sein de laquelle s'effectue l'exfoliation en milieu matriciel thermovisqueux des particules minérales lamellaires empilées à exfolier.
- Les matériaux thermoplastiques nanocomposites sont formés d'une matrice polymère thermoplastique au sein de laquelle sont dispersées les nanocharges résultant de l'exfoliation des particules minérales lamellaires empilées.