INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
I/ Préparation des liposomes 1/Protocole de préparation des liposomes Les lipides utilisés sont la 2-oléoyl-1-palmitoyl-sn-glycéro-3- phosphocholine (POPC), le 2-oléoyl-1-palmitoyl-sn-glycéro-3-phospho-rac-(1- glycérol) (POPG) et le sel de triéthylammonium de la N-(fluorescéine-5- thiocarbamoyl)-1,2-dihexadécanoyl-sn-glycérol-3-phosphoéthanolamine (DHPEfluorecéine) provenant des Sociétés Sigma ou Avanti Polar Lipids (US) pour les deux premiers et d'Interchim pour le dernier.
Nous avons aussi utilisé deux glycosides amphiphiles dont la structure est décrite sur le schéma ci-dessous.
Tensioactifs utilisés pour les études biologiques La molécule fluorescente qui est encapsulée dans les liposomes, pour les expériences avec les cultures de kératinocytes, est l'iodure de propidium (IP) utilisé à une concentration de 1 umolaire dans du Phosphate Buffer Saline ou PBS et provenant de la Société Fluka.
Dans un premier temps, la préparation des films lipidiques s'effectue par mélange des quantités souhaitées des lipides dissous dans un mélange chloroforme / méthanol puis par évaporation du solvant sous pression réduite. Les rapports molaires POPC/ POPG/ tensioactif sont de 8/ 0,5/ 1,5 pour une quantité totale en lipides de 5.10-7 moles et sont utilisés pour les expériences avec les cultures cellulaires. Les rapports molaires POPC/ POPG/ DHPE-fluorescéine/ tensioactif sont de 7,5 / 0,5 0,5 1,5 pour une quantité totale en lipides de 5.10-7 moles et sont utilisés pour les expériences avec les échantillons de peau. Les différentes conditions opératoires sont réunies dans le tableau présenté ci-dessous. Le film alors obtenu est laissé sous vide poussé pendant une journée afin d'éliminer toutes traces de solvant.
Type lipides % molaire Milieu d'expériences d'hydratation POPC 80 Tests avec les POPC PBS + iodure de cultures cellulaires POPG 5 propidium Tensioactif 4 ou 18 15 POPC 75 Tests sur les POPG 5 PBS échantillons de peau DHPE-fluorescéine 5 Tensioactif 4 ou 18 15
2/ Conditions opératoires pour la préparation des grands liposomes Dans un deuxième temps, soit 0,5 ml de la solution d'iodure de propidium à 1 molaire soit 0,5 ml de la solution de PBS sont respectivement additionnés sur les films ne possédant pas la DHPE-fluorescéine ou sur les films comportant ce lipide. Le mélange aqueux est alors agité une heure à température ambiante. Puis, ce mélange est extrudé 19 fois au travers d'une membrane en polycarbonate de taille de pore de 100 nm (LiposoFastTM Avestin (Canada)). La solution est ensuite centrifugée à 15 000 t/min (Eppendorf Centrifuge 5804 R) pendant une heure pour permettre la précipitation des liposomes. Le surnageant contenant le matériel non incorporé (lipides et molécules fluorescentes) est alors éliminé et les liposomes sont remis en suspension par l'ajout d'un volume identique de PBS et centrifugés à nouveau. Après deux autres lavages avec une solution de PBS, les liposomes sont conservés à 4 C dans un volume final de PBS de 30 l.
Il/ Tests biologiques 1/ Protocole des cultures des kératinocytes et des préparations des coupes de peau.
Les cultures de kératinocytes primaires sont réalisées à partir de cellules isolées de prépuces d'enfants et cultivées en milieu sans sérum (SFM, Invitrogen) constitué de MCDB153 supplémenté avec un facteur de croissance épidermique (EGF, 5 ng/ml), un extrait pituitaire de b#uf (70 mg/ml), de la pénicilline (1 000 u/ml), de la streptomycine (100 u/ml) et de l'amphotéricine B (100 u/ml) (Invitrogen).
Etat de l'art Les solutions que l'on trouve disponibles sur le marché sont à peu près toutes de l'un des deux types suivants : - soit on a une solution fonctionnant sur gros système ( main frame ), grâce à un logiciel propriétaire, relié aux applicatifs existants, et vendu par le fabriquant dudit gros système (IBM, par ex.) ;
soit on a une solution fonctionnant de façon autonome sur PC vendue par un éditeur de logiciels.
Il y a toutefois un type intermédiaire de solutions, solutions propriétaires elles aussi, vendues par des éditeurs de base de base de données (Oracle, par exemple). Ces solutions fonctionnent sur PC serveur ou sur serveurs propriétaires (AS400, par exemple) et fournissent en général des documents de qualité acceptable, mais d'une richesse typographique limitée.
Les solutions propriétaires pour gros systèmes sont presque toujours des solutions qui intègrent l'imprimante dans la chaîne de fabrication, c'est-à-dire que les documents produits sont nécessairement des documents sur papier. Ils produisent généralement des documents de qualité typographique et de mise en page qui sont à peine du niveau atteint par les premiers logiciels de traitement de textes, il y a une vingtaine d'années. Ces solutions sont actuellement adaptées aux productions de masse, quelques millions de pages par mois, mais sont de plus en plus mal acceptées par les services marketing qui réclament aujourd'hui des documents de meilleure qualité typographique.
Les solutions autonomes sur PC sont des solutions beaucoup plus évoluées en terme de qualité de mise en page.
Elles utilisent un système de maquettage propriétaire qui permet de mettre le document en valeur : graphiques, histogrammes, camemberts,... et sont faites pour être connectées à des bases de données suivant des protocoles standard qui les rendent le plus souvent indépendantes des éditeurs de bases de données.
Elles ont toutefois la réputation d'être assez complexes à installer et à maîtriser, du fait précisément de leur degré de généralité : produire des documents reflétant l'état partiel d'une base de données sans faire aucune hypothèse sur la structure de cette base ni sur celle des données à afficher exige de toute évidence une phase de paramétrage complexe pour parvenir à combler le fossé creusé, entre les
données et le document final, par le peu d'hypothèses sur lesquelles le logiciel peut s'appuyer.
Cette phase de paramétrage est à la charge de la personne qui construit les maquettes, qui doit donc maîtriser la complexité de logiciel et bien sûr connaître et utiliser le langage de requêtes associé à la maquette permettant d'extraire les bonnes données au bon moment.
Ces solutions, suivant les éditeurs, peuvent être complètement déconnectées de toute application, ou peuvent être connectables à une application existante afin de s'intégrer au processus de traitement.
On l'aura remarqué, les solutions actuellement disponibles sont caractérisées par le fait que la personne qui dessine les maquettes doit avoir un certain niveau de compétences en base de données, solutions autonomes sur PC, ou en programmation Cobol, AFP, ou autre, solutions sur grands systèmes ou sur serveur de type AS400.
La solution selon l'invention est destinée à rendre possible la conception et la réalisation de maquettes pour une personne sans compétence particulière en bases de données ou en programmation. Elle est aussi explicitement conçue pour s'intégrer à une application existante exploitant les données métier de l'entreprise.
L'invention L'invention concerne un procédé logiciel de génération de documents qui est destiné à permettre à un utilisateur de créer, facilement et sans compétences informatiques particulières, des documents finaux de haute qualité visuelle.
Les documents finaux sont destinés à intégrer des données contenues dans une base de données.
Le procédé comprend : - l'étape de générer, grâce à des premiers moyens de traitement informatique, un fichier-maquette se présentant notamment sous la forme d'un fichier au format XML et comprenant
des caractéristiques telles que des textes fixes, des champs référençant des données, des tableaux, - l'étape de générer, à partir des données contenues dans la base de données, grâce à des seconds moyens de traitement informatique, un flux de données primaire, notamment un flux de données au format XML. Le flux de données primaire ayant un format standard et des caractéristiques indépendantes des caractéristiques du fichier-maquette.
Le milieu cosmétiquement acceptable est généralement constitué par de l'eau ou par un mélange d'eau et d'un ou plusieurs solvants organiques usuels.
Parmi les solvants convenables, on peut citer plus particulièrement, les alcools tels que l'alcool éthylique, l'alcool isopropylique, l'alcool benzylique, et l'alcool phényléthylique, ou les glycols ou éthers de glycol tels que, par exemple, les éthers monométhylique, monoéthylique et monobutylique d'éthylèneglycol, le propylèneglycol ou ses éthers tels que, par exemple, le monométhyléther de propylèneglycol, le butylèneglycol, le dipropylèneglycol ainsi que les alkyléthers de diéthylèneglycol comme par exemple, le monoéthyléther ou le monobutyléther du diéthylèneglycol, ou encore les polyols comme le glycérol. On peut également utiliser comme solvant les polyéthylèneglycols et les polypropylèneglycols, et les mélanges de tous ces composés.
Les solvants usuels décrits ci-dessus, s'ils sont présents, représentent habituellement de 1 à 40 % en poids, plus préférentiellement de 5 à 30 % en poids, par rapport au poids total de la composition.
Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition peut, comprendre, en plus du ou des colorants fluorescents, un ou plusieurs colorants directs additionnels non fluorescents, de nature non ionique, cationique ou anionique, qui peuvent par exemple être choisis parmi les colorants benzéniques nitrés.
Conviennent notamment les colorants directs benzéniques nitrés rouges ou orangés suivants : - le 1-hydroxy-3-nitro-4-N-(y-hydroxypropyl)amino benzène, - le N-(-hydroxyéthyl)amino-3-nitro-4-amino benzène, - le 1-amino-3-méthyl-4-N-(-hydroxyéthyl)amino-6-nitro benzène, - le 1-hydroxy-3-nitro-4-N-(-hydroxyéthyl)amino benzène, - le 1,4-diamino-2-nitrobenzène, - le 1-amino-2-nitro-4-méthylamino benzène, - la N-(p-hydroxyéthyl)-2-nitro-paraphénylènediamine, - le 1 -amino-2-nitro-4-(p-hydroxyéthyl)amino-5-chloro benzène, - la 2-nitro-4-amino-diphénylamine, - le1-amino-3-nitro-6-hydroxybenzène.
- le 1-(i-aminoéthyl)amino-2-nitro-4-((i-hydroxyéthyloxy) benzène, - le 1-((3, y-dihydroxypropyl)oxy-3-nitro-4-(p-hydroxyéthyl)amino benzène, - le 1-hydroxy-3-nitro-4-aminobenzène, - le 1-hydroxy-2-amino-4,6-dinitrobenzène, - le 1-méthoxy-3-nitro-4-(ss-hydroxyéthyl)amino benzène, - la 2-nitro-4'-hydroxydiphénylamine, - le 1-amino-2-nitro-4-hydroxy-5-méthylbenzène.
La composition conforme à l'invention peut également comprendre, en addition ou en remplacement de ces colorants benzéniques nitrés, un ou plusieurs colorants directs additionnels choisis parmi les colorants benzéniques nitrés jaunes, jaune-vert, bleus ou violets, les colorants azoïques, anthraquinoniques, naphtoquinoniques, benzoquinoniques, phénotiaziniques, indigoïdes, xanthéniques, phénanthridiniques, phtalocyanines, ainsi que les colorants dérivés du triarylméthane, ou leurs mélanges.
Ces colorants directs additionnels peuvent notamment être des colorants basiques parmi lesquels on peut citer plus particulièrement les colorants connus dans le COLOR INDEX, 3ème édition, sous les dénominations "Basic Brown 16", "Basic Brown 17", "Basic Yellow 57", "Basic Red 76", "Basic Violet 10", "Basic Blue 26" et "Basic Blue 99", ou des colorants directs acides parmi lesquels on peut plus particulièrement citer les colorants connus dans le COLOR INDEX, 3ème édition, sous les dénominations "Acid Orange 7", "Acide Orange 24", "Acid Yellow 36", Acid Red 33", "Acid Red 184", "Acid Black 2", "Acid Violet 43", et "Acid Blue 62", ou encore des colorants directs cationiques tels que ceux décrits dans les demandes de brevet WO 95/01772, WO 95/15144 et EP-A-0 714 954 et dont le contenu fait partie intégrante de la présente invention.
Parmi les colorants directs additionnels benzéniques nitrés jaunes et jaune-vert, on peut par exemple citer les composés choisis parmi : - le 1--hydroxyéthyloxy-3-méthylamino-4-nitrobenzène,
- le i-méthylamino-2-nitro-5-(P,Y-dihydroxypropyl)oxy benzène, - le i-(p-hydroxyéthyl)amino-2-méthoxy-4-nitrobenzène, - le i-(p-aminoéthyl)amino-2-nitro-5-méthoxy-benzène, - le 1,3-di(p-hydroxyéthyl)amino-4-nitro-6-chlorobenzène, - le 1-amino-2-nitro-6-méthyl-benzène, - le i-(p-hydroxyéthyl)amino-2-hydroxy-4-nitrobenzène, - la N-([3-hydroxyéthyl)-2-nitro-4-trifluorométhylaniline, - l'acide 4-(p-hydroxyéthyl)amino-3-nitro-benzènesulfonique, - l'acide 4-éthylamino-3-nitro-benzoïque, - le 4-([3-hydroxyéthyl)amino-3-nitro-chtorobenzène, - le 4-(p-hydroxyéthyl)amino-3-nitro-méthylbenzène, - le 4-(i,y dihydroxypropyl)amino-3-nitro-trifluorométhylbenzène, - le 1-(ss-uréidoéthyl)amino-4-nitrobenzène, - le 1,3-diamino-4-nitrobenzène, - le 1-hydroxy-2-amino-5-nitrobenzène, - le 1-amino-2-[tris(hydroxyméthyl)méthylamino-5-nitro-benzène, - le 1-(ss-hydroxyéthyl)amino-2-nitrobenzène, - le 4-(ss-hydroxyéthyl)amino-3-nitrobenzamide.
Parmi les colorants directs additionnels benzéniques nitrés bleus ou violets, on peut par exemple citer les composés choisis parmi : - le i-(p-hydroxyéthyl)amino-4-N,N-bis-(p-hydroxyéthyl)amino 2-nitrobenzène, - le 1 -(y-hydroxypropyl)amino 4-N,N-bis-(ss-hydroxyéthyl)amino 2-nitrobenzène, - le 1-(ss-hydroxyéthyl)amino 4- (N-méthyl, N--hydroxyéthyl)amino 2-nitrobenzène, - le i-(p-hydroxyéthyl)amino4-(N-éthyl, N-p-hydroxyéthyl)amino 2-nitrobenzène, - le 1-([3,y-dihydroxypropyl)amino 4-(N-éthyl, N-i-hydroxyéthyl)amino 2-nitrobenzène, - les 2-nitroparaphénylènediamines de formule suivante : NHRS N02 NR6 R7 dans laquelle: R6 représente un radical alkyle en C1-C4, un radical ss-hydroxyéthyle ou -hydroxypropyle ou y-hydroxypropyle ; - R5 et R7, identiques ou différents, représentent un radical -hydroxyéthyle, -ss- hydroxypropyle, y-hydroxypropyle, ou ss,[gamma]-dihydroxypropyle, l'un au moins des radicaux R6, R7 ou Rs représentant un radical y-hydroxypropyle et R6 et R7 ne pouvant désigner simultanément un radical ss-hydroxyéthyle lorsque R6 est un radical [gamma]-hydroxypropyle, telles que celles décrits dans FR 2 692 572.
Lorsqu'ils sont présents, le ou les colorants directs additionnels représentent de préférence de 0,0005 à 12 % en poids par rapport au poids total de la composition, et encore plus préférentiellement de 0,005 à 6 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Lorsqu'elle est destinée à la coloration d'oxydation, la composition conforme à l'invention comprend, en plus du ou des colorants fluorescents, au moins une base d'oxydation choisie parmi les bases d'oxydation classiquement utilisées pour la coloration d'oxydation et parmi lesquelles on peut notamment citer les paraphénylènediamines, les bisphénylalkylènediamines, les para-aminophénols, les ortho-aminophénols et les bases hétérocycliques et leurs sels d'addition avec un acide ou avec un agent alcalin.
Parmi les paraphénylènediamines, on peut plus particulièrement citer à titre d'exemple, la paraphénylènediamine, la paratoluylènediamine, la 2-chloro paraphénylènediamine, la 2,3-diméthyl paraphénylènediamine, la 2,6-diméthyl paraphénylènediamine, la 2,6-diéthyl paraphénylènediamine, la 2,5-diméthyl paraphénylènediamine, la N,N-diméthyl paraphénylènediamine, la N,N-diéthyl paraphénylènediamine, la N,N-dipropyl paraphénylènediamine, la 4-amino N,N-diéthyl 3-méthyl aniline, la N,N-bis-(sshydroxyéthyl) paraphénylènediamine, la 4-N,N-bis-(ss-hydroxyéthyl)amino 2-méthyl aniline, la 4-N,N-bis-(ss-hydroxyéthyl)amino 2-chloro aniline, la 2-p-hydroxyéthyl paraphénylènediamine, la 2-fluoro paraphénylènediamine, la 2-isopropyl paraphénylène diamine, la N-(ss-hydroxypropyl) paraphénylènediamine, la 2-hydroxyméthyl paraphénylènediamine, la N,N-diméthyl 3-méthyl paraphénylènediamine, la N,N-(éthyl, sshydroxyéthyl) paraphénylènediamine, la N-(ss,[gamma]-dihydroxypropyl) paraphénylènediamine, la N-(4'-aminophényl) paraphénylènediamine, la N-phényl paraphénylènediamine, la 2-- hydroxyéthyloxy paraphénylènediamine, la 2--acétylaminoéthyloxy paraphénylène diamine, la N-(ss-méthoxyéthyl) paraphénylènediamine et la 4'aminophényl 1-(3hydroxy)pyrrolidine, et leurs sels d'addition avec un acide ou avec un agent alcalin.
Parmi les paraphénylènediamines citées ci-dessus, on préfère tout particulièrement la paraphénylènediamine, la paratoluylènediamine, la 2-isopropyl paraphénylènediamine, la 2-ss-hydroxyéthyl paraphénylènediamine, la 2--hydroxyéthyloxy paraphénylènediamine, la 2,6-diméthyl paraphénylènediamine, la 2,6-diéthyl paraphénylènediamine, la 2,3diméthyl paraphénylènediamine, la N,N-bis-(ss-hydroxyéthyl) paraphénylènediamine, la 2chloro paraphénylènediamine, la 2-p-acétylaminoéthyloxy paraphénylènediamine, et leurs sels d'addition avec un acide ou avec un agent alcalin.
Parmi les bis-phénylalkylènediamines, on peut plus particulièrement citer à titre d'exemple, le N,N'-bis-(ss-hydroxyéthyl) N,N'-bis-(4'-aminophényl) 1,3-diamino propanol, la N,N'-bis-(-hydroxyéthyl) N,N'-bis-(4'-aminophényl) éthylènediamine, la N,N'-bis- (4-
Le séchage peut être réalisé en étuve, de préférence en couche mince.
Habituellement, la température de séchage est inférieure ou égale à 100 C. Plus particulièrement, des températures comprises entre 50 et 90 C conviennent à la mise en #uvre de cette méthode.
Un autre mode de séchage de l'émulsion est une méthode dite rapide.
Conviennent à ce titre le séchage par atomisation, le séchage par mise en
#uvre des tambours Duprat, ou encore la lyophilisation (congélationsublimation).
Le séchage par atomisation peut s'effectuer de manière habituelle dans tout appareil connu tel que par exemple une tour d'atomisation associant une pulvérisation réalisée par une buse ou une turbine avec un courant de gaz chaud. La température d'entrée des gaz est de l'ordre de 100 C et 200 C et celle de sortie des gaz d'atomisation est de préférence comprise entre 55 et 100 C.
Ces températures sont données à titre indicatif, et dépendent de la stabilité thermique des divers éléments. De plus, elle est définie selon la teneur en eau finale souhaitée dans le granulé.
De manière avantageuse, la taille moyenne recherchée des granulés (d50) est comprise entre 100 m et quelques millimètres (Sympatec), de préférence entre 100 et 800 m. De tels granulés peuvent être obtenus directement à l'aide d'un atomiseur double effet (séchage/granulation). Ils peuvent également être obtenus à l'aide d'un atomiseur simple effet (séchage) associé à un appareil de granulation (lit fluidisé) avec pulvérisation d'eau éventuellement additivée de matériau de la matrice (M).
Dans le cas d'opérations de séchage de l'émulsion multiple réalisées au moyen de tambour Duprat, ou de tout moyen permettant d'obtenir rapidement un film sec qui est séparé du support séchant par une opération de raclage par exemple, on obtient des écailles ou de la poudre que l'on peut éventuellement broyer. Si nécessaire, ces écailles peuvent faire l'objet d'une mise en #uvre ultérieure, comme une étape d'agglomération, de manière à obtenir des granulés agglomérés.
De manière avantageuse, la taille moyenne des granulés (d50) obtenus directement après séchage est comprise entre 100 m et quelques millimètres (Sympatec), de préférence entre 100 et 800 m.
Il est à noter que des additifs, tels que les agents anti-mottants, des charges (comme silice, kaolin, dioxyde de titane, etc. ) peuvent être incorporés aux granulés.
Ces additifs peuvent être introduits pendant le séchage ou en post addition.
Utilisation L'émulsion (E) sous forme d'une émulsion multiple (Em) ou sous forme d'un solide hydrodispersable (Es) peut être mise en #uvre pour véhiculer, en milieu aqueux, la phase hydrophobe vers un substrat présent dans le milieu aqueux. Elle peut notamment être utilisée pour véhiculer et favoriser le dépôt d'un agent lubrifiant hydrophobe sur un article textile, en coton notamment,
lors d'une opération de lavage dudit article à l'aide d'une composition détergente renfermant ladite émulsion.
Un deuxième objet de l'invention consiste donc en l'utilisation de l'émulsion (E) sous forme d'une émulsion multiple (Em) ou sous forme d'un solide hydrodispersable (Es) pour véhiculer, dans un milieu aqueux (B), la phase hydrophobe (A) vers un substrat présent dans ledit milieu aqueux (B), le volume dudit milieu aqueux (B) étant suffisant pour provoquer la déstabilisation ou la rupture de l'émulsion (E) avec libération sur ledit substrat du polysaccharide substitué (SPS) et la phase hydrophobe (A).
Ledit substrat peut être en un matériau quelconque, notamment en un métal ou tout matériau naturel, artificiel ou synthétique, ou en un mélange de ces matériaux.
25 ml de tétrahydrofuranne sont additionnés et le milieu réactionnel est agité 45 mn. Le pH est ajusté à 6 avec qsp d'HCI [1 N]. Le produit est extrait avec 2 x 200 ml d' acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur MgS04 puis est concentrée sous vide.
737 mg sont isolés avec un rendement de 98 %.
3) 1- (3-aminopropyl)1H-pyrrol-2,5-dione 0,7 g (2,75 10-3 mole) du composé B 2) est mis en agitation dans 25 ml d' HCI [2 N] pendant 24 heures.
La solution est concentrée sous vide. 500 mg sont obtenus avec un rendement de 88 % Spectre de masse : M/z = 155,1 (ES+) M théorique = 154,1 Exemple 3 : Préparation du composé C : 1-déoxy-1- [(2,3-dihydropropyl)amino]hexitol 173 g (1,9 mole) de 3-amino-1,2-propanediol sont solubilisés dans 1 litre de méthanol. 360 g (2 mole) de glucose sont ajoutés. L'ensemble est agité 24 heures à température ambiante. Cette solution est réduite sous 20 bars
d'hydrogène à 60 C avec 50 g de palladium sur Charbon et 450 ml d'eau pendant 6 heures.
Le milieu réactionnel est filtré sur clarcel à 35 C. Les jus de filtration sont concentrés jusqu'à un volume final de 850 ml. Le concentrat est versé sur 3 litres d'alcool isopropylique maintenus à 35 C par un bain d'eau chaude. Le précipité est filtré et séché sous vide. 272 g sont isolés avec un rendement de 53 %.
Spectre de masse : M/z = 256,4 (ES+) M théorique = 253,3 Exemple 4 : Préparation du composé D : N-[(2,3-dihydroxypropyl)(2,3,4,5,6pentahydroxyhexyl)]2,4,6-tribromo 5- (glycylamino)isophtlamide 255 g (1 ,9 mole) de composé C sont dissous à 80 C dans 2,5 litres de 1 méthyl-2-pyrolidinone pendant 30 minutes. Le milieu réactionnel est refroidi à 40 C avant l'addition de 67,1 g (0 ,635 mole) de Na2CO3 séché à 170 C et de 407,8 g (0,635 mole) du chlorure de l'acide 5-phtalamido(acétamido) 2,4,6 triaminoisophtalique en maintenant la température inférieure à 45 C.
Le milieu est maintenu 2 heures à 40 C puis est refroidi à 20 C avant filtration des minéraux sur Clarcel.
610 ml d'eau sont ajoutés au filtrat et l'ensemble est chauffé à 70 C avant l'addition de 44,8 ml d'hydrate d'hydrazine (0,889 mole). Le milieu réactionnel est chauffé 2 heures à 90 C.
Le pH est ajusté à 1 avec QSP d'HCI [12 N]. Le précipité formé est éliminé par filtration. Les jus de filtration sont versés dans 30 litres d'éthanol.
Le produit obtenu est dissous dans 3,6 litres d'eau, le pH est ajusté à 6,5 avec QSP de soude [2N] et la solution est diafiltrée. Suivi HPLC de la purification.
Pureté HPLC = 98. 2 %.
Conditions HPLC : Colonne : Symetry C18 250x 4 mm (5 m). Détection : 254 nm Eluant isocratique : 99/1 : H2SO4 0,034 N / CH3CN Dosages de Brome = 23,6% (soit une pureté de 97,2%)
Exemple 5 :Préparation du composé E : N-N'-[bis(2,3,4,5,6-pentahydroxyhexyl)] 2,4,6-tribromo 5-(glycylamino)isophtlamide Le composé E peut être préparé selon le mode opératoire décrit dans le Brevet :EP 0 922 700 A1.
Exemple 6 : Préparation du composé F : Acide (18S)-1-amino-18{[2-amino-4- oxo-3,4-dihydropteridin-6-yl)methyllaminobenzoyl)aminol-15-oxo-4-trioxa-14 azanonadécan-19-oique 9,74 g ( 0,0214 mole) de l'acide (2S) -2-[(4-{[(2-amino-4-oxo-3,4- dihydroptéridin-6-yl)méthyl]amino}benzoyl)amino]-5-méthoxy-5-oxopentanoique (pouvant être préparé selon le mode opératoire décrit dans J. Am. Chem. Soc., 1997,119, 10004-10013 ) sont solubilisés dans 60 ml de DMSO à température ambiante. 235 ml ( 1,07 mole) de 4,7,10-Trioxa-1,13-tridécanediamine sont ajoutés. L'ensemble est agité 48 H à température ambiante.
Le milieu réactionnel est versé dans un mélange de 1,5 L de CH3CN et de 1,5 L d'éther éthylique. Le précipité obtenu est filtré et séché sous vide.
On trouve ainsi sur le marché de nombreux produits fermentés par des bifidobactéries, éventuellement associées à d'autres bactéries lactiques, et dont l'ingestion permet de bénéficier des effets immunomodulateurs des bifidobactéries et de leurs produits de fermentation.