INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
En conséquence, une poussette selon la présente invention comporte des pieds avant gauche et droit ayant des extrémités formant pivot, des pieds arrière gauche et droit disposés vers l'arrière des pieds avant et ayant des extrémités formant pivot, une poignée en forme de U, deux articulations, une paire de tiges de liaison et un ensemble de verrouillage. La poignée en forme de U comporte des tubes de poignée gauche et droit ayant des extrémités de montage. Les articulations sont fixées respectivement sur les extrémités de montage des tubes de poignée. L'extrémité formant pivot de chacun des pieds
avant et l'extrémité formant pivot de chacun des pieds arrière pivotent par rapport à une articulation respective des articulations autour d'un premier et d'un second pivot, respectivement, les premier et second pivots étant parallèles l'un à l'autre. Les tiges de liaison sont respectivement interposées entre les pieds avant et arrière gauches et sont reliées de manière pivotante à ceux-ci en dessous des premier et second pivots, et aux pieds avant et arrière droits en dessous des premier et second pivots de manière telle que les pieds avant et arrière gauches et droits et les tubes de poignée sont mobiles les uns par rapport aux autres entre une position de stockage dans laquelle les pieds avant et les tubes de poignée peuvent être pliés sur les pieds arrière de manière à aboutir à un espace de stockage minimum, et une position d'utilisation dans laquelle les pieds avant et les tubes de poignée sont éloignés des pieds arrière. L'unité de verrouillage verrouille de manière libérable les pieds arrière sur les tubes de poignée de manière à empêcher que les tubes de poignée ne soient pliés sur les pieds arrière lorsque les pieds avant et arrière et les tubes de poignée sont disposés dans la position d'utilisation.
D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture de la description détaillée qui va suivre du mode préféré de réalisation de celle-ci, faite en référence aux dessins annexés, sur lesquels : - la figure 1 est une vue schématique latérale d'un mode préféré de réalisation d'une poussette selon la présente invention dans une position d'utilisation, un siège et un auvent ayant été enlevés pour des raisons de clarté, - la figure 2 est une vue schématique latérale du mode préféré de réalisation dans une position de stockage,
- la figure 3 est une vue partielle en coupe du mode préféré de réalisation, montrant comment les pieds avant et arrière supportant des roues sont bloqués sur une poignée lorsqu'ils sont dans la position d'utilisation, - la figure 4 est une vue partielle en coupe du mode préféré de réalisation, représentant comment les pieds avant et arrière supportant des roues peuvent être libérés de la poignée dans la position de stockage, - la figure 5 est une vue partielle partiellement en coupe, à plus grande échelle, du mode préféré de réalisation, représentant comment le pied avant supportant une roue est verrouillé sur la poignée dans la position d'utilisation, et - la figure 6 est une vue partielle partiellement en coupe, à plus grande échelle, du mode préféré de réalisation, représentant comment le pied avant supportant une roue peut être libéré de la poignée dans la position de stockage.
En se reportant aux figures 1 à 3, le mode préféré de réalisation d'une poussette selon la présente invention est représenté incluant une paire de pieds avant supportant une roue 20, une paire de pieds arrière supportant une roue 10, une poignée en forme de U 40, deux articulations 43, deux tiges de liaison 30, deux premiers ensembles de verrouillage 50, et deux seconds ensembles de verrouillage 60.
Comme représenté, les pieds avant supportant une roue 20ont deux extrémités formant pivot 23, qui ont la forme de pattes.
Hippophae rhamnoide. Cette solution est utilisée en raison de ses qualités de dispersion, d'embellissement de la peau et de la sensation agréable que provoque son utilisation sur la peau.
Constantino et al, Fitoterapia, vol LXV, 1,1994, 44-47) décrit l'étude du fruit de Hippophae rhamnoides dans le but d'identifier des substances naturelles susceptibles de traiter les pathologies dues aux radicaux libres. Les propriétés antiradicalaires et antilipopéroxydantes de ce fruit sont dues aux polyphénols et aux anthocyanines présentes dans la phase méthanolique. De même, la publication de X. Gao (X. Gao et al, J. Agric Food Chem, 2000,48, 1485-1490) s'intéresse aux propriétés anticancéreuses du fruit de Hippophae rhamnoides et a pour but d'optimiser leur utilisation dans des traitements anticancéreux. Ce document montre que la fraction hydrophile a de bonnes propriétés antiradicalaires.
Le Demandeur a mis en évidence que la fraction hydrophile de fruit de Hippophae rhamnoides est, de manière inattendue, capable d'inhiber les protéases destructrices du derme et de l'épiderme, cause du vieillissement cutané, ainsi que l'application en cosmétique d'une telle fraction.
La fraction hydrophile trouve ainsi pour la première fois une utilité cosmétique pour prévenir ou traiter le vieillissement cutané.
Ainsi, l'effet de la fraction hydrophile de fruit de Hippophae rhamnoides, déjà connue pour être in vitro un inhibiteur de la production des radicaux libres, permet également d'inhiber certaines protéases du derme et de l'épiderme, ce qui aura un double effet pour lutter contre le vieillissement.
L'invention a donc pour objet une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique qui contient
comme agent actif une fraction hydrophile de fruit de Hippophae rhamnoides.
De manière avantageuse, ladite fraction hydrophile est un pressurat.
Avantageusement, ladite fraction hydrophile est un pressurat dépulpé.
Avantageusement, ladite fraction hydrophile est un extrait aqueux.
Suivant un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition peut en outre comprendre une fraction lipophile de fruit de Hippophae rhamnoides.
L'invention a également pour objet l'utilisation cosmétique de la composition selon l'invention pour prévenir ou traiter les signes du vieillissement cutané et plus particulièrement ceux choisis parmi : la perte d'élasticité et d'hydratation du derme, les troubles pigmentaires cutanés, la perte de la résistance cutanée.
L'invention a encore pour objet l'utilisation d'une fraction hydrophile de fruit de Hippophae rhamnoides comme définie ci-dessus, seule ou associée à une fraction lipophile de fruit de Hippophae rhamnoides, pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique destinée à inhiber l'activité d'au moins une enzyme choisie dans le groupe comprenant une protéase, la tyrosinase, la hyaluronidase, pour la prévention et/ou le traitement d'affections de la peau.
Avantageusement, cette protéase est une protéase dermique, plus particulièrement la collagénase et l'élastase.
Avantageusement, l'enzyme est une protéase dermique et la composition est utile pour la prévention et/ou le traitement d'une perte d'élasticité et de résistance du derme.
Les composés capables de générer une solution apte à teindre les fibres kératiniques peuvent être utilisés sous forme de poudre placée directement dans le dispositif générant de la vapeur d'eau sous pression dans un récipient destiné à cet usage. Ils peuvent être conditionnés dans un dispositif de conditionnement particulier comprenant un logement fermé délimité par au moins une paroi au moins en partie perméable à de la vapeur d'eau sous pression d'au moins 3 bars. De tels dispositifs sont par exemples décrits dans les demandes de brevets WO 00/56629, EP512470 ou dans le WO 990373.
Selon un mode de réalisation particulier, le logement est délimité par deux feuilles scellées. Selon un autre mode de réalisation, le logement est délimité par une barquette fermée par un couvercle.
Ces dispositifs peuvent être fabriqués à partir de matériaux tissés ou non tissés, en matière plastique ou végétales par exemple en cellulose, en métal tel que l'aluminium ou en composite. De tels dispositifs sont par exemple décrits dans les demandes de brevets WO 00/56629, EP512470 ou WO 990373.
Les composés pulvérulents capables de générer une solution apte à teindre les fibres kératiniques sont bien connus de la technique. De tels composés sont par exemple des bases d'oxydation, des coupleurs ou des colorants directs. Ces composés peuvent être des composés synthétisés de façon classique ou extraits d'espèces végétales ou animales, cet extrait étant obtenu à partir de tout l'organisme ou de partie de celui ci en utilisant par exemple les feuilles ou les racines. Les substances actives pouvant être extraites d'espèces végétales sont par exemple les quinones hydroxylées, les indigoïdes, les hydroxyflavones, les santalines A et B, l'isatine et ses dérivés, la brasiline et son dérivé hydroxylé. Les espèces végétales qui peuvent être utiles dans la présente invention sont par exemple le henné, l'indigotier, la matricaire, le rocou, l'orcanette. Les espèces animales qui peuvent être utilisées sont par exemple les cochenilles.
Les bases d'oxydation sont généralement choisies parmi les paraphénylènediamines, les bis-phénylalkylènediamines, les para-
aminophénols, les ortho-aminophénols, les bases hétérocycliques et leurs sels d'addition.
Parmi les paraphénylènediamines, on peut citer à titre d'exemple, la paraphénylènediamine, la paratoluylènediamine, la 2-chloro paraphénylènediamine, la 2,3-diméthyl paraphénylènediamine, la 2,6-diméthyl paraphénylènediamine, la 2,6-diéthyl paraphénylènediamine, la 2,5-diméthyl paraphénylènediamine, la N,N-diméthyl paraphénylènediamine, la N,N-diéthyl paraphénylènediamine, la N,N-dipropyl paraphénylènediamine, la 4-amino N,N-diéthyl 3-méthyl aniline, la N,N-bis-(ss- hydroxyéthyl) paraphénylènediamine, la 4-N,N-bis-(3-hydroxyéthyl)amino 2méthyl aniline, la 4-N,N-bis-(P-hydroxyéthyl)amino 2-chloro aniline, la 2-p-hydroxyéthyl paraphénylènediamine, la 2-fluoro paraphénylènediamine, la 2-isopropyl paraphénylènediamine, la N-(ss-hydroxypropyl) paraphénylènediamine, la 2-hydroxyméthyl paraphénylènediamine, la N,N-diméthyl 3-méthyl paraphénylènediamine, la N,N-(éthyl, p-hydroxyéthyl) paraphénylènediamine, la N-(P,y-dihydroxypropyl) paraphénylènediamine, la N-(4'-aminophényl) paraphénylènediamine, la N-phényl paraphénylènediamine, la 2-p-hydroxyéthyloxy paraphénylènediamine, la 2-ssacétylaminoéthyloxy paraphénylènediamine, la N-(ss-méthoxyéthyl) paraphénylène-diamine, la 4-aminophénylpyrrolidine, la 2-thiényl paraphénylènediamine, le 2-ss hydroxyéthylamino 5-amino toluène, la 3hydroxy 1-(4'-aminophényl)pyrrolidine et leurs sels d'addition avec un acide.
Parmi les paraphénylènediamines citées ci-dessus, la paraphénylènediamine, la paratoluylènediamine, la 2-isopropyl paraphénylènediamine, la 2-p-hydroxyéthyl paraphénylènediamine, la 2-p-hydroxyéthyloxy paraphénylène-diamine, la 2,6-diméthyl paraphénylènediamine, la 2,6-diéthyl paraphénylènediamine, la 2,3-diméthyl paraphénylènediamine, la PN,N-bis-(sshydroxyéthyl) paraphénylènediamine, la 2-chloro paraphénylènediamine, la 2-p-acétylaminoéthyloxy paraphénylènediamine, et leurs sels d'addition avec un acide sont particulièrement préférées.
Parmi les bis-phénylalkylènediamines, on peut citer à titre d'exemple, le N,N'-bis-(ss-hydroxyéthyl) N,N'-bis-(4'-aminophényl) 1,3-diamino propanol, la N, N'-bis-(ss-hydroxyéthyl) N,N'-bis-(4'-aminophényl) éthylènediamine, la N,N'-bis-(4-aminophényl) tétraméthylènediamine, la N,N'-bis-(P-hydroxyéthyl) N, N'-bis-(4-aminophényl) tétraméthylènediamine, la N,N'-bis-(4-méthyl-aminophényl) tétraméthylènediamine, la N,N'-bis-(éthyl) N,N'-bis- (4'-amino, 3'-méthylphényl) éthylènediamine, le 1,8-bis-(2,5-diamino phénoxy) -3,6-dioxaoctane, et leurs sels d'addition avec un acide.
Parmi les para-aminophénols, on peut citer à titre d'exemple, le para-aminophénol, le 4-amino 3-méthyl phénol, le 4-amino 3-fluoro phénol, le 4-amino 3-hydroxyméthyl phénol, le 4-amino 2-méthyl phénol, le 4-amino 2-hydroxyméthyl phénol, le 4-amino 2-méthoxyméthyl phénol, le 4-amino 2-aminométhyl phénol, le 4-amino 2-(ss-hydroxyéthyl aminométhyl) phénol, le 4-amino 2-fluoro phénol, et leurs sels d'addition avec un acide.
Parmi les ortho-aminophénols, on peut citer à titre d'exemple, le 2amino phénol, le 2-amino 5-méthyl phénol, le 2-amino 6-méthyl phénol, le 5acétamido 2-amino phénol, et leurs sels d'addition avec un acide.
Parmi les dérivés pyridiniques, on peut citer les composés décrits par exemple dans les brevets GB 1 026 978 et GB 1 153 196, comme la 2,5-diamino pyridine, la 2-(4-méthoxyphényl)amino 3-amino pyridine, la 2,3-diamino 6-méthoxy pyridine, la 2-(ss-méthoxyéthyl)amino 3-amino 6méthoxy pyridine, la 3,4-diamino pyridine, et leurs sels d'addition avec un acide.
D'autres bases d'oxydation pyridiniques utiles dans la présente invention sont les bases d'oxydation 3-amino pyrazolo-[1,5-a]-pyridines ou leurs sels d'addition décrits par exemple dans la demande de brevet FR 2801308. A titre d'exemple, on peut citer la pyrazolo[1,5-a]pyridin-3-ylamine ; la 2-acétylamino pyrazolo-[1,5-a] pyridin-3-ylamine ; la 2-morpholin-4-ylpyrazolo[1,5-a]pyridin-3-ylamine ; l'acide 3-amino-pyrazolo[1,5-a]pyridin-2carboxylique ; la 2-méthoxy-pyrazolo[1,5-a]pyridine-3-ylamino ; le (3-amino-
pyrazolo[1,5-a]pyridine-7 -yl)-méthanol ; le 2-(3-amino-pyrazolo[1,5- a]pyridine-5-yl)-éthanol ; le 2-(3-amino-pyrazolo[1,5-a]pyridine-7-yl)-éthanol ; le (3-amino-pyrazolo[1,5-a]pyridine-2-yl)-méthanol ; la 3,6-diamino- pyrazolo[1,5-a]pyridine ; la 3,4-diamino-pyrazolo[1,5-a]pyridine la pyrazolo[1,5-a]pyridine-3,7-diamine la 7-morpholin-4-yl-pyrazolo[1,5- a]pyridin-3-ylamine ; la pyrazolo[1,5-a]pyridine-3,5-diamine ; la 5-morpholin- 4-yl-pyrazolo[1,5-a]pyridin-3-ylamine ; le 2-[(3-amino-pyrazolo[1,5-a]pyridin- 5-yl)-(2-hydroxyéthyl)-amino]-éthanol ; le 2-[(3-amino-pyrazolo[1,5-a]pyridin- 7-yl)-(2-hydroxyéthyl)-amino]-éthanol ; la 3-amino-pyrazolo[1,5-a]pyridine-5- ol ; 3-amino-pyrazolo[1,5-a]pyridine-4-ol ; la 3-amino-pyrazolo[1,5- a]pyridine-6-ol ; la 3-amino-pyrazolo[1,5-a]pyridine-7-ol ; ainsi que leurs d'addition avec un acide ou avec une base.
Parmi les dérivés pyrimidiniques, on peut citer les composés décrits par exemple dans les brevets DE 2359399 ; 88-169571 ; 05-63124 ; 0770375 ou demande de brevet WO 96/15765 comme la 2,4,5,6-tétra- aminopyrimidine, la 4-hydroxy 2,5,6-triaminopyrimidine, la 2-hydroxy 4,5,6- triaminopyrimidine, la 2,4-dihydroxy 5,6-diaminopyrimidine, la 2,5,6-triaminopyrimidine, et les dérivés pyrazolo-pyrimidiniques tels ceux mentionnés dans la demande de brevet FR-A-2750048 et parmi lesquels on peut citer la pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidine-3,7-diamine ; la 2,5-diméthyl pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidine-3,7-diamine ; la pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidine-3,5- diamine ; la 2,7-diméthyl pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidine-3,5-diamine ; le 3-amino pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidin-7-ol ; le 3-amino pyrazolo-[1,5-al-pyrimidin-5-oi ; le 2-(3-amino pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidin-7-ylamino)-éthanol, le 2-(7-amino pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidin-3-ylamino)-éthanol, le 2-[(3-amino-pyrazolo[1,5a]pyrimidin-7-yl)-(2-hydroxy-éthyl)-amino]-éthanol, le 2-[(7-aminopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)-(2-hydroxy-éthyl)-amino]-éthanol, la 5,6diméthyl pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidine-3,7-diamine, la 2,6-diméthyl pyrazolo- [1,5-a]-pyrimidine-3,7-diamine, la 2, 5, N 7, N 7-tetraméthyl pyrazolo-[1,5-a]pyrimidine-3,7-diamine, la 3-amino-5-méthyl-7-imidazolylpropylamino pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidine et leurs sels d'addition avec un acide et leurs formes tautomères, lorsqu'il existe un équilibre tautomérique.
à l'axe optique Ax.
Lors de l'utilisation de la configuration de cette variante, comme dans le mode de réalisation, la lumière émise par la diode photoémissive peut tomber sur la surface réfléchissante 16a du réflecteur 16 sous forme de rayons pratiquement parallèles dirigés en direction pratiquement
Lors de l'utilisation de la configuration de cette variante en outre, la lumière émise par la diode photoémissive avance directement dans l'organe transparent 24 en direction radiale et le calcul optique de détermination de la forme courbe de la partie de réfraction 24C peut être
facilement réalisé.
On décrit maintenant une quatrième variante du mode de réalisation. La figure 8 est analogue à la figure 3 mais représente
un organe transparent 34 dans cette variante.
Comme l'indique la figure, dans l'organe transparent 34, une cavité 34A d'incidence de lumière a une configuration différente de celle de la cavité 14A de l'organe
transparent 14 du mode de réalisation de la figure 3.
La cavité 34A d'incidence de lumière de l'organe transparent 34 est réalisée avec une forme cylindrique ayant une partie inférieure. Un espace compris entre la cavité 34A et la résine d'étanchéité 12B de la source 12 de lumière à diode photoémissive est rempli d'un organe transparent de remplissage 40. Cet organe de remplissage 40 est constitué d'un matériau de résine de synthèse dont l'indice de réfraction est approximativement égal à celui de l'organe transparent 34. Dans l'organe transparent 34, la lumière émise par la diode photoémissive avance dans l'organe transparent 34 directement et radialement depuis le centre luminescent
O par l'intermédiaire de l'organe de remplissage 40.
L'organe transparent 34 possède une partie de réflexion interne 34B, une partie de réfraction 34C, une partie péri5 phérique externe cylindrique 34D, et une partie annulaire plate 34E qui ont des formes strictement identiques à celles des parties correspondantes de l'organe transparent 24 du
troisième mode de réalisation.
Lorsque cette configuration de variante est utilisée, il est aussi possible d'obtenir les mêmes fonctions et
effets qu'avec la troisième variante.
Dans cette variante, comme l'espace compris entre la cavité 34A et la résine d'étanchéité 12B de la source de lumière à diode photoémissive 12 est rempli par l'organe de remplissage 40 dont l'indice de réfraction est à peu près égal à celui de l'organe transparent 34, aucune réfraction pratiquement n'existe à l'interface de l'organe de remplissage 40 et de l'organe transparent 34. En conséquence, la forme de la cavité 34A de l'organe 34 peut être déterminée arbitrairement. Bien que la cavité 34 d'incidence de lumière de la variante ait une forme simple et une forme cylindrique
L'épissage alternatif étant un événement décrit comme générant de nouveaux produits de traduction à partir d'un unique ARN précurseur chez les eucaryotes, il est important de considérer que la capacité de codage de l'ARN SD' peut être directement impliquée dans la capacité d'infection des particules rétrovirales. Le potentiel codant est vaste puisqu'il inclut tous les codons d'initiation de la traduction des cadres ouverts de lecture glycogag, gag et env qui sont utilisés dans l'ARN full-length et l'ARN subissant un épissage canonique, tout comme les codons d'initiation putatifs dans tous les autres cadres ouverts de lecture. La traduction de l'ARN SD' a été examinée dans un système de lysat de réticulocytes de lapins (RRL). Pour ce faire, le plasmide ADNc SD' linéarisé SD'au site XhoI, situé dans le vecteur en aval du LTR3', a été utilisé comme matrice pour produire une réaction couplée de transcription/traduction. Comme décrit dans la Figure 8, deux produits principaux ont été synthétisés avec une masse moléculaire apparente de respectivement 50 et 60 kDa. En parallèle, le clone moléculaire de Friend-MLV (p57(2LTR)) a été utilisé comme contrôle positif. L'ARN génomique MLV dirige la synthèse de deux protéines relatives à gag : Pr65gag, le précurseur gag avec MA, pl2, CA, et NC et Pr75glyco-gag, le précurseur de gag glycosylé.
La traduction de Pr65gag commence à un AUG (position 619
pour Friend-MLV) alors que Pr75glyco-gag est initié à un CUG (position 355 pour Friend-MLV) dans le cadre avec AUGgag (Evans et al, 1977, J. Virol, 24,865 ; Saris et al, 1983, J. Virol, 46, 841 ; Edwards et Fan, J. Virol, 1979,30, 551-563 ; Prats, AC, et al, JMB, 205,363-372) (Figure 8).
D'après la taille des deux bandes vues avec le vecteur SD' (50 et 60 kDa), la traduction de SD' pourrait correspondre au recrutement des codons CUGglyco-gag et AUGgag avec le codon stop pol naturel. L'usage de ces deux codons d'initiation est également testé par des expériences réalisées avec les mêmes plasmides p57(2LTR) et p57cDNASD' mais linéarisés cette fois au site PvuII (position 1528) situé en amont du site d'épissage SD'. Si les codons d'initiation recrutés sont ceux de Gag et GlycoGag alors les profils d'expression doivent être similaires entre les deux constructions. En effet, deux bandes, respectivement à des poids moléculaires apparents de 33 et 43 KDa, sont observées à la fois dans le contrôle et le clone SD', indiquant une même initiation de la traduction, aux codons AUG et CUG, et précocement stoppée par la linéarisation des vecteurs dans le gène gag (Figure 8). Pour confirmer l'identité des produits traduits, le gel de protéine a été électrotransféré sur une membrane de nitrocellulose pour effectuer un immunoblot. Alors que les protéines traduites à partir de l'ARN full-length ont été détectées avec un anticorps monoclonal anti CA (H187), ce dernier était incapable de détecter les produits transcrits à partir de l'ARN SD', ce qui suggère que les protéines SD' ne contenaient pas l'épitope correspondant. Le même résultat négatif a été observé en utilisant un anticorps monoclonal anti enveloppe (anti SU) excluant l'usage d'AUGenv. Pour finir, les deux protéines SD' ont réagi avec un anticorps anti IN. Considérées ensemble, ces données suggèrent que la
traduction de l'ARNm SD' est initiée soit aux codons CUGglycogag (60 kDa) , soit au codon AUG gag (50 kDa) , et s'arrête au codon stop naturel de pol. Ainsi, la protéine SD' inclut MA, pl2, les 110 premiers acides aminés de CA, avec les 116 derniers acides aminés du cadre d'IN. c) Traduction dans les cellules murines.
La traduction in vitro pouvant masquer des caractères particuliers comme la translecture traductionnelle, l'initiation cap-indépendante, ou l'usage d'un codon d'initiation sub-optimal, qui sont communément rapportés dans la traduction rétrovirale, la capacité à coder de l'ARNm SD' a aussi été étudiée dans les cellules murines NIH3T3 et dans les cellules infectées avec Friend-MLV.
Premièrement, la traduction de l'ARNm SD' a été évaluée dans les trois cadres ouverts de lecture par clonage de l'ADNc dans des vecteurs comportant le gène codant pour la EGFP (enhanced fluroscent protein) dans différents cadres (pEGP-Nl, -N2 et-N3). Seule la construction hébergeant l'ARNm SD' dans le même cadre de lecture que la EGFP exprime la protéine SD' comme une fusion avec la séquence N-terminale de la EGFP. Ces trois constructions SD'/GFP ont été transfectées de manière transitoire dans des cellules murine NIH3T3 et humaine 293T. L'analyse des protéines a été conduite par Western blot en utilisant un anticorps anti-GFP. Les protéines de fusion ont été vues seulement quand SD' a été insérée telle que son codon AUGga9 était dans le même cadre que EGFP (Figure 9). Cette approche n'a pas révélé de codon d'initiation fonctionnel dans d'autres cadres de lecture de l'ARNm SD'. La bande principale obtenue à la fois dans les cellules murines et les cellules humaines correspondent à une protéine de 77 kDa approximativement
qui a probablement un rapport avec la protéine de 50 kDa observée dans la précédente traduction in vitro. Une bande mineure de 10 kDa plus lourde a aussi été observée dans les cellules NIH3T3 avec une masse moléculaire apparente (87 kDa) correspondant probablement à l'usage de CUGglycogag. Ces résultats sont corrélatifs avec ceux obtenus avec l'expression de l'ADNc SD' non fusionné dans les cellules NIH3T3, infectées ou pas par Friend-MLV.
Dans les deux cas, les protéines traduites SD' et SD'/GFP ont été détectées avec un anticorps anti-intégrase (IN) et un anti-matrice (MA) Ces expériences montrent que l'ARNm SD' code pour une polyprotéine incluant MA, pl2, la séquence N-terminale de CA et la séquence C-terminale de IN et une protéine plus lourde de 10 kDa utilisant le codon CUGglycogag situé en amont.
II.5 - Localisation intracellulaire des protéines SD'.