INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
On peut aussi citer les esters d'alkyl (C6- C24)polyglycosides carboxyliques tels que les alkylpolyglucoside citrates, les alkylpolyglucoside tartrates, les alkylpolyglucoside sulfosuccinates et les alkylpolyglucoside sulfosuccinamates ; acyl- iséthionates et les N-acyltaurates, le radical alkyle ou acyle de tous ces composés comportant, de préférence, de 12 à 20 atomes de carbone, et le radical aryle désignant, de préférence, un groupement phényle ou benzyle.
# tensioactifs non ioniques : Les agents tensioactifs non ioniques sont des composés bien connus en eux-mêmes (voir, par exemple, le "Handbook of Surfactants", M. R. PORTER, Ed. Blackie & Son, Glasgow and London, 1991,116-178) et leur nature ne revêt pas, dans le cadre de la présente invention, de caractère critique.
conduisant à la désagrégation du floculat (peptisation) et à l'obtention d'une solution colloïdale.
Selon un mode de réalisation préféré, on réalise préalablement une étape consistant à suspendre le floculat formé à l'étape (i) dans une solution aqueuse de pH basique compris entre 10 et 11, avant de revenir à un pH compris entre 6 et 7. Ce traitement à pH basique vise, en effet, à renforcer la liaison du composé gem-bisphosphonate à la surface de la particule magnétique acide (p).
Selon un aspect avantageux, les particules magnétiques acides (p) complexées par les composés gem-bisphosphonates, obtenues à l'issue de l'étape (i) sont très peu polydispersées et présentent un profil en "taille hydrodynamique" très proche du ferrofluide acide de départ. Cette étape de complexation n'entraîne donc aucun phénomène d'agrégation, ce qui permet de s'affranchir de toute étape de filtration supplémentaire.
Selon un autre aspect avantageux, les particules magnétiques complexées par les composés gem-bisphosphonates sont obtenues avec de très bons rendements en fer, généralement compris entre 70 et 95 %.
Les particules magnétiques acides (p) greffées par des composés de formule (1) sont avantageusement stables au pH physiologique en présence, éventuellement, d'un solvant, ce qui permet de réaliser le couplage des biovecteurs directement en milieu ferrofluide.
Selon un autre aspect avantageux, la fonction réactive X du composé de formule (1) greffée à la surface de la particule possède une très bonne réactivité vis-à-vis des biovecteurs, et permet d'obtenir des rendements de couplage élevés. Ceci permet donc de diminuer les pertes en biovecteurs utilisés et de diminuer ainsi le coût de la particule magnétique spécifique obtenue in fine.
Un autre aspect particulièrement avantageux est la détermination du taux de couplage du biovecteur sur la particule magnétique (p) greffée par des composés de formule (1). En effet, la composition déterminée par analyse élémentaire (C, P,Fer) de la particule magnétique (p) greffée par des composés de formule (1) permet de connaître exactement le ratio Phosphore/Fer et l'analyse élémentaire des particules finales sur lesquelles est greffé un biovecteur permet de la même façon de déterminer le ratio Azote/Phosphore ou
Carbone/Phosphore, ce qui permet de calculer le nombre de biovecteurs sur chaque particule. Ce type d'analyse est totalement impossible sur les particules magnétiques obtenues par synthèse dite de Molday enrobées avec des polymères comme le dextrane sur lesquelles ont été greffées des molécules d'affinité spécifique, à cause du caractère polydisperse du polymère d'enrobage.
L'étape (ii) consiste à mettre en contact les particules magnétiques (p) complexées par des composés gem-bisphosphonates avec une quantité suffisante de biovecteur, généralement en milieu ferrofluide, sous agitation à température ambiante pendant quelques heures, la quantité de biovecteur mise en #uvre étant fixée en fonction du taux de couplage que l'on souhaite obtenir.
A l'issue de l'étape ii), une étape de filtration peut être réalisée de manière à séparer les particules magnétiques (p), couplées avec des biovecteurs, des éventuels biovecteurs n'ayant pas réagi.
Selon une variante préférée, les particules magnétiques (p) mises en #uvre à l'étape (i) sont obtenues selon un procédé comprenant les étapes consistant à : a) préparer une solution colloïdale de ferrofluide acide ; b) traiter la solution obtenue à l'étape a) par une solution d'acide nitrique ; c) isoler le floculat obtenu à l'étape b) ; d) réaliser une peptisation.
La préparation de la solution colloïdale de ferrofluide acide réalisée à l'étape a) est bien connue et décrite dans de nombreuses références. On pourra se référer notamment au brevet FR 7918842 et aux publications C. R. Acad. Sc.
Paris (7/07/1980), t. 291 - série C et IEE Transactions on Magnetics, 1981, vol.
MAG-17, n 2, p. 1247.
A titre indicatif, les ferrofluides "acides" et "alcalins" sont généralement obtenus par mise en contact d'une solution aqueuse contenant des sels Fe2+ et Fe3+ en des proportions appropriées avec une solution basique, en général l'ammoniaque.
La peptisation ou désagrégation du précipité gélatineux obtenu par une solution acide, généralement d'acide perchlorique ou nitrique, conduit à l'obtention d'un ferrofluide "acide", tandis que la peptisation par une solution
Exemple 3 : du gène VE-statine (figure 3, Tableaux 1 et II) Le gène murin a été isolé à partir de deux banques indépendantes d'ADN génomique de souris, sous-cloné et séquence. Il a une taille de plus de 10 kpb et comprend 11 exons et 11 introns (figure 3 et Tableau II), incluant deux exons alternatifs (exon-la et 1b), correspondant respectivement aux transcrits VE-statine-a et VE-statine-b. L'exon 9 peut être épissé de façon alternative, dans la mesure où certains clones d'ADNc montrent des variations au niveau de cet exon.
La structure du gène humain présente une organisation similaire à celle du gène murin (figure 3), incluant la plupart des jonctions introns-exons et la présence de courts éléments nucléaires dispersés.
Les gènes ont été localisés par hybridation (FISH) à l'aide de sondes du gène VE-statine, sur les chromosomes 9 (9q34. 3-qter) et 2 (2B), respectivement chez l'homme et la souris (figure 3). La cartographie par hybride de radiation (RH mapping) a confirmé la position du gène humain dans la région distale du bras long du chromosome 9, à proximité du marqueur WI-17482, à la position de 151,488 Mb (en référence à la séquence de la base de données UDV http://bioinformatics.weizman.ac.il/udb/ et Santa Cruz : http://genome.ucsc.edu).
Par comparaison, le gène dbl humain a été localisé sur le chromosome 17 (numéro d'accès Genbank NT 010651) et le gène db1murin sur le chromosome 11, confirmant davantage que les gènes dbl et VE-statine sont des gènes distincts.
Les sites d'initiation de la transcription des transcrits VE-statine ont été précisés par des analyses complémentaires de celle effectuée par 5'RACE, à savoir : des essais d'extension d'amorce et de protection à la RNase, à partir d'ARN total de c#ur d'embryon ou de cellules endothéliales (H5V) et des fragments génomiques correspondant à la VE-statine-a et à la VE-statine-b. Ces expériences ont montré que le transcrit VE-statine-a possédait plusieurs sites d'initiation de la transcription, le transcrit le plus long couvrant environ les 75 bases en amont de la première base identifiée, les sites d'initiation se répartissent sur environ 60 pb (figure 4C). Ce variant est exprimé à des niveaux beaucoup plus faibles que le transcrit VEstatine-b, et ce à la fois dans les cellules endothéliales et chez l'embryon (figure 4C). En revanche, le transcrit VE-statine-b présente un site unique de transcription vraisemblablement en raison de la présence d'une boîte CATAAAAAGC, située 42 paires de bases en amont de la première base du transcrit (figure 4C).
Exemple 4 : Mise en évidence de l'expression spécifique de la VE-statine dans les cellules endothéliales (figures 4 et 5) L'expression de la VE-statine (transcrits VE-statine-a et VE-statineb) a été analysée par RT-CPR à partir de différentes lignées cellulaires in vitro. Les 2 variants sont exprimés dans les cellules endothéliales (EOMA, H5V et 1G11) mais pas dans les fibroblastes (353 et L 929), (figure 4B). Par comparaison, mDBl est exprimé à un niveau équivalent dans toutes les lignées testées.
L'expression des transcrits VE-statine-a et VE-statine-b a également été analysée par Northern-Blot dans les tissus adultes, à l'aide de sondes correspondant à la région 5' spécifique de chaque ADNc. Un transcrit majeur de 1,6 kb est reconnu par chacune des sondes (figure 4A) ; cette taille correspond à celle des ADNcs de la VE-statine. L'expression de la VE-statine-a et-b est détectée à des niveaux élevés dans le c#ur, les poumons et les reins et dans ces conditions, elle n'est pas détectable dans les autres tissus (figure 4A).
Le profil d'expression du gène VE-statine a également été analysé par hybridation in situ chez l'embryon de souris et comparé à celui du gène dbl et de celui du facteur endothélial spécifique vegfr-2, utilisé comme contrôle de l'expression mésodermique précoce puis endothéliale spécifique. A E7,5, l'expression du gène VE- statine est détectée exclusivement dans les îlots sanguins primitifs dans lesquels se
différencient les premières cellules endothéliales. En revanche, dbl n'est pas détecté dans ces îlots sanguins primitifs, et comme cela a déjà été montré, l'expression de vegfr-2 est détectée à la fois dans les îlots sanguins primitifs et dans le mésoderme intra-embryonnaire (Breier et al., Blood, 1996,87,630-641 ; Yamaguchi et al., Development, 1993,118, 489-498). A E10,5, l'expression du gène VE-statine se superpose à celle de vegfr-2 dans les cellules endothéliales de la veine et de l'artère ombilicale, des artères des 3ième et 4ième arcs branchiaux, de l'aorte dorsale, et du mésenchyme céphalique (figure 5). Comme cela a été montré pour le gène humain, l'expression de dbl est ubiquitaire à ce stade du développement embryonnaire chez la souris, avec une expression plus élevée dans l'épithélium neural (figure 5) mais n'est jamais détectée dans les vaisseaux sanguins en formation. A 13,5 jours post-conception, le profil d'expression du gène VE-statine est toujours restreint aux cellules endothéliales, comme le montre son expression dans le mésenchyme facial, le cerveau, le foie, l'endocarde, les poumons et le réseau vasculaire péri-costal, ou dans la couche pigmentaire de la rétine (figure 5).
Le profil d'expression du gène VE-statine a également été étudié après la naissance, dans le rein, dans la mesure où les vaisseaux sanguins se développent encore et se remodèlent dans cet organe. Chez les nouveaux-nés âgés de 3 jours, l'expression du gène VE-statine est restreinte strictement à l'endothélium. De façon intéressante, le gène VE-statine est exprimé à la fois dans les veines et les artères (figure 5), ce qui indique que son expression n'est pas restreinte au réseau vasculaire artériel ou veineux, à ce stade. L'expression du gène VE-statine est également détectée dans les capillaires glomérulaires péri-lobulaires et fenestrés et dans les artères arquées et interlobulaires, indiquant que, dans cet organe, son expression n'est pas associée à un type particulier de vaisseaux. Chez la femelle gestante, l'expression du gène VE-statine a également été détectée dans les vaisseaux sanguins de la décidue du mésomètre de l'utérus. De façon intéressante, l'expression du gène vegfr-2 a été détectée à des niveaux beaucoup plus faibles dans cet organe.
Exemple 5 : de la protéine VE-statine (figures 2 et 6A) Le codon d'initiation de la traduction de la protéine VE-statine a été localisé aux codons AUG281-283 et AUG309-311, de respectivement le transcrit VEstatine-a murin et humain, du fait de l'identification des éléments suivants :
- la présence d'une séquence minimale d'initiation de la traduction (séquence de Kozak ; J. Cell. Biol., 1989,108, 229-241) dans les deux espèces, - la présence de codons stops dans les autres cadres ouverts de lecture, et - le degré élevé de similarité (79% d'identité) entre les séquences humaines et murines, à partir de ce point (figure 2).
Ces cadres ouverts de lecture sont traduits en protéines de 275 (SEQ ID NO: 1) et 273 acides aminés (SEQ ID NO: 42) respectivement chez la souris et l'homme, correspondant à des poids moléculaires estimés de 29,8 kDa et 29,6 kDa.
Des expériences de traduction in vitro ont permis de vérifier que ces cadres ouverts de lecture étaient fonctionnels ; les ADNc VE-statine-a et VE-statine-b sont tous les deux traduits en une protéine majeure d'environ 30 kDa, correspondant au poids moléculaire attendu d'après la séquence codante (figure 6A) ; aucun autre produit spécifique n'a été détecté.
Les séquences humaines et murines présentent 78 % d'identité et 87 % de similarité entre elles.
La recherche dans les bases de données de domaines analogues à ceux d'autres protéines a mis en évidence la présence : d'un peptide signal clivable de 19 et 20 acides aminés situé à l'extrémité NH2-terminale des séquences respectivement humaines et murines et de deux domaines semblables aux domaines du facteur de croissance épidermique (EGF-like domains) caractérisés par la conservation des résidus de cystéine essentiels desdits domaines EGF-like (figure 2).
EXEMPLES Les exemples ci-dessous mettent en valeur l'intérêt de l'invention et permettront à l'homme de métier d'extrapoler facilement à d'autres dimensions et/ ou géométries, sans sortir du cadre de l'invention.
Les exemples suivants, nullement limitatifs, illustrent l'intérêt de l'invention. Ils visent à montrer que le procédé par chauffage diélectrique intermittent est économique et permet de chauffer des volumes réactionnels à l'échelle industrielle, tout en bénéficiant des avantages de cette technologie.
1- Volumes exposés aux ondes électromagnétiques Les essais sont réalisés à l'échelle laboratoire et industriel à l'aide de 2 générateurs : - 1 générateur à magnétrons de 6kW fonctionnant à la fréquence de 2450MHz pour les traitements laboratoires - 1 générateur à magnétrons de 60kW fonctionnant à la fréquence de 915MHz pour les traitements industriels
D (mm) H (mm) Vexp Nb Vexp total unitaire réacteurs Pilote 30 45 32 mL 1 32mL Industriel 100 124 1 L 4 4L Avec : D = diamètre des réacteurs cylindriques = 2R H = hauteur du guide d'onde Vexp unitaire = volume exposé en permanence aux ondes pour un réacteur Vexp total= volume exposé en permanence aux ondes pour les réacteurs V (exposé au champ) = # * R2* H
Il- Comparaison entre le chauffage classique et le chauffage diélectrique intermittent a- synthèse de polyglycérol Les essais sont réalisés à 260 C, en présence de 2% d'acétate de sodium de manière à obtenir un polyglycérol de viscosité à 50 C égale à 3600cP.
Ils font référence à la demande de brevet FR N 0108906.
V total Rapport V Temps de réactionnel glycérol Chauffage pilote 2000mL 1/62 3h diélectrique intermittent industriel 200 L 1/50 6h30 Chauffage Schou >72h classique Avec : V total de glycérol = volume total de glycérol traité Rapport V = rapport entre le volume exposé aux ondes et le volume total traité
b- synthèse de esters de polyglycérol Synthèse de diolétate de polyglycérol-6 Les essais sont réalisés en présence de 0. 25% d'acétate de sodium à 230 C.
V total du Rapport V Temps mélange réactionnel Chauffage 2 000mL 1/62 2h10 diélectrique intermittent Chauffage 4h30 classique Avec : V total du mélange = volume total traité Rapport V = rapport entre le volume exposé aux ondes et le volume total traité Synthèse de tristéarate de polyglycérol-2 Les essais sont réalisés en présence de 0. 25% d'acétate de sodium à 260 C Ils font référence à la demande de brevet FR N 0108906.
V total du Rapport V Temps mélange réactionnel Chauffage 2 OOOmL 1/62 1 h40 diélectrique intermittent Chauffage 4-5h classique Avec : V total du mélange = volume total traité Rapport V = rapport entre le volume exposé aux ondes et le volume total traité c- Conclusion : Même si tout le volume réactionnel n'est pas exposé aux ondes électromagnétiques, les temps réactionnels sous chauffage diélectrique intermittent sont nettement plus faibles que ceux obtenus par chauffage classique.
III- Comparaison entre le chauffage diélectrique intermittent et le chauffage diélectrique permanent a- efficacité du chauffage diélectrique intermittent Le tableau ci-dessous montre l'efficacité du chauffage diélectrique intermittent par rapport au chauffage diélectrique permanent, traditionnellement utilisé.
Les essais sont réalisés dans les mêmes conditions (composition des mélanges réactionnels, températures, catalyseurs...) - à l'échelle laboratoire (utilisation d'un synthewave 402) qui utilise le chauffage diélectrique permanent, - à l'échelle pilote à l'aide d'un générateur 2450 MHz qui utilise le chauffage diélectrique intermittent - et à l'échelle production à l'aide d'un générateur 915 MHz qui utilise le chauffage diélectrique intermittent La synthèse testée consiste à fabriquer des polymères d'acides gras insaturés, d'esters d'acides gras insaturés, d'hydrocarbures insaturés, de dérivés insaturés de ces composés, seuls ou en mélange.
Laboratoire Pilote Industriel MOp MOi Mop MOi Mop extrapolé extrapolé Vtraité 25 2000 2000 200000 200000 (mL) RapportV 1/1 1/62 1/1 1/50 1/1 t réaction 2h15 2h15 # 2h15** 2h15 # 2h15** (h) Avec : Mop = chauffage micro-ondes permanent
Mop extrapolé = chauffage micro-ondes permanent dans le cas d'un traitement de 200kg de produit.
Parmi ces gommes, citons les scléroglucanes comme notamment Actigum CS de Sanofi Bio Industries ; Amigel de Alban Muller International, ainsi que les scléroglucanes traités au glyoxal décrits dans FR 2 633 940) ; les gommes xanthanes comme Keltrol, Keltrol T, Keltrol Tf, Keltrol Bt, Keltrol Rd, Keltrol Cg (Nutrasweet Kelco), Rhodicare S, Rhodicare H (Rhodia Chimie) ; les dérivés d'amidon comme Primogel (Avebe) ; les hydroxyéthylcelluloses telles que Cellosize QP3L, QP4400H, QP30000H, HEC30000A, Polymer PCG10 (Amerchol),
Natrosol 250HHR, 250MR, 250M, 250HHXR, 250HHX, 250HR, HX (Hercules), Tylose H1000 (Hoechst) ; les hydroxypropylcelluloses comme Klucel EF, H, LHF, MF, G (Aqualon) ; les carboxyméthylcelluloses comme Blanose 7M8/SF, raffinée 7M, 7LF, 7MF, 9M31F, 12M31XP, 12M31P, 9M31XF, 7H, 7M31,7H3SXF (Aqualon), Aquasorb A500 (Hercules), Ambergum 1221 (Hercules), Cellogen HP810A, HP6HS9 (Montello), Primellose (Avebe).
La composition peut de plus comprendre, en remplacement ou en association avec au moins un agent d'ajustement de la rhéologie, au moins un alkylamide d'acide carboxylique en C6-C30, linéaire ou non, saturé ou non, et portant éventuellement un ou plusieurs groupements hydroxyle.
L'amide peut comprendre de 1 à 20 motifs oxyalkylénés (oxyéthylénés et/ou oxypropylénés), de préférence, oxyéthylénés.
Toutefois, on préfère que ce pH soit compris entre 1,5 et 10 et, mieux encore, entre 1,5 et
7 dans le cas où la composition réductrice est destinée à la décoloration de fibres kératiniques, et qu'il soit compris entre 6 et 12 et, de préférence, entre 7 et 11 lorsque ladite composition est destinée à la déformation permanente de fibres kératiniques.
A titre d'exemples d'agents acidifiants susceptibles d'être utilisés, on peut citer les acides minéraux ou organiques comme l'acide chlorhydrique, l'acide phosphorique, l'acide orthophosphorique, l'acide acétique, l'acide tartrique, l'acide citrique, l'acide lactique, l'acide borique et les acides sulfoniques.
Les agents alcalinisants peuvent, eux, être notamment choisis parmi l'ammoniaque, les carbonates alcalins ou d'ammonium, les alcanolamines telles que les mono-, di- et triéthanolamines ainsi que leurs dérivés, les hydroxyalkylamines, les éthylène-diamines oxyéthylénées et/ou oxypropylénées, les hydroxydes de sodium ou de potassium et les composés répondant à la formule (XIX) suivante : (XIX) dans laquelle :
# R15 est un reste propylène éventuellement substitué par un groupement hydroxyle ou un radical alkyle en C1-C4 ; tandis que # R16, R17, R18 et R19, qui sont identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un radical alkyle en Cl-C4 ou un radical hydroxyalkyle en C1-C4.
Bien entendu, entre également dans le cadre de l'invention le couplage de la fonction X et du biovecteur de façon indirecte, c'est-à-dire via un réactif homobifonctionnel ou hétérobifonctionnel. A titre illustratif de réactif homobifonctionnel, le glutaraldéhyde peut convenir pour réaliser le couplage, par exemple, d'une fonction X =-NH2 avec une fonction-NH2 du biovecteur.
Selon une variante préférée de l'invention, les fonctions X forment une liaison covalente avec le biovecteur de type -CONH-,-COO-, -NHCO-,-OCO-, -NH-CS-NH-,-C-S-, -N-NH-CO-,-CO-NH-N-, -CH2-NH-, -N-CH2-, -N-CS-N-, -CO-CH2-S-, -N-CO-CH2-S-, -N-CO-CH2-CH2-S-, -CH=NH-NH-,-NH-NH=CH-, -CH=N-O-, -O-N=CH- ou répondant aux formules suivantes
Selon un mode de réalisation particulier, on peut envisager de coupler deux biovecteurs sur une même fonction X via une liaison de type :
Les sites protonés des particules magnétiques acides (p) selon l'invention peuvent être bien entendu complexés par au moins deux composés de formule (I) de structures identiques ou différentes.
Selon un mode de réalisation préféré, les particules magnétiques (p) sont complexées par une ou plusieurs molécules de deux composés de formule (I) de structures différentes, notamment de fonctions X différentes. Ceci permet avantageusement le greffage ultérieur de biovecteurs possédant des fonctions susceptibles de réagir avec des fonctions X différentes.
On préfère particulièrement que les particules magnétiques acides (p) soient complexées sur au moins 90% de leurs sites protonés par des composés
de formule (I), ce par quoi on obtient avantageusement un bon recouvrement de la particule, apte en particulier à assurer une bonne stabilité de la particule, à empêcher la reconnaissance de la particule par le système immunitaire et à rendre l'éventuel couplage ultérieur avec un biovecteur plus efficace.
Selon un mode préférentiel, tout ou partie des fonctions X du composé gem-bisphosphonate sont couplées à un biovecteur.
BIOVECTEUR Par "biovecteur", au sens de la présente invention, on entend de préférence une entité de ciblage spécifique, généralement un ligand, possédant une affinité spécifique pour un tissu et/ou pour un récepteur biologique et/ou un transporteur, et/ou une matrice biologique cibles donnés.
Les couples d'affinités récepteurs/ligands sont multiples et l'invention telle que définie pourra être aisément appliquée par l'homme du métier à différents ligands susceptibles de former une paire d'affinité avec un récepteur cible tels que les couples anticorps/antigènes, lectines/polysaccharides, biotine/avidine, acides nucléiques (brin + et-), étant entendu que le ligand puisse être couplé par liaison covalente soit directement à l'extrémité X du composé de formule (I), soit indirectement par l'intermédiaire d'un réactif bifonctionnel.
Par extension, au sens de la présente description, le terme "biovecteur" peut également couvrir des molécules organiques ayant une activité pharmacologique et/ou cytotoxique, ou plus généralement des pharmacophores utiles dans les méthodes de traitement thérapeutique ou prophylactique.
Le terme "pharmacophore" couvre au sens de la présente invention des molécules organiques à activité pharmacologique et/ou cytotoxique, ainsi que leurs analogues structuraux, ces derniers pouvant posséder ou non une activité pharmacologique et/ou cytotoxique.
Au sens de la présente description, un "biovecteur" désigne par extension des molécules biocompatibles possédant un caractère hydrophile marqué, telles que les aminoalcools.
A titre de biovecteurs préférés, on peut notamment citer les protéines éventuellement recombinantes ou mutées, les glycoprotéines, les lectines, la biotine, les vitamines, les dérivés ptéroïques ou aminoptéroïques, les dérivés de