INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Ainsi, une réponse à l'ordre d'Ecriture ci-dessus peut être : p 1 0 3 B 0 0 1 0 5 total de contrôle 7D 0F 70 31 30 33 7C 42 30 30 3130 7 05 3E C Ajout de Rubrique de Répertoire Un ordre d'étape de programme pour ajouter un enregistrement de répertoire (étape numéro 20 dans cet exemple) peut avoir des champs définis dans le Tableau 5 et peut avoir la forme "P20 t c[c] # s t [t] # n[n] # d L[L]".
Nom Variable Remarques Type de rubrique t = 3 pour un code de répertoire Code c 0-65534 Ne pas déranger s 0 = pas de restriction n de téléphone t 0-9, virgule, tiret, astérisque, symbole "livre" et espace Nom n jusqu'à 20 caractères Présentation du nom d 0 = non, 1 = oui Lien L 0 = non, 1 = oui Ainsi, pour un code de résident de 12345, correspondant au numéro de téléphone 1-818-700-5009 pour un résident appelé Jones, l'étape de programme peut avoir des rubriques de champ sélectionnées correspondantes comme indiqué dans le Tableau 6.
Nom Variable Contenu Type de rubrique t = 3 pour un code de répertoire Code c 12345 Ne pas déranger s 0 = pas de restriction n de téléphone t 1-818-700-5009 Nom n Jones Présentation du nom d 1 = oui Lien L 0 = non et dans cet exemple, l'étape de programme résultante, avant d'être incorporée dans un paquet, peut avoir la forme : P 2013112345101 50 32 30 7C 33 7C 31 32 33 34 35 7C4 30 7C 1 - 8 1 8 - 7 0 0 - 5 0 0 9 31 2D 38 31 38 2D 37 30 30 2D 35 30 30 39 7C J o n e s # 1 @ 0 4A 6F 6E 65 73 7C 31 7C 30 Une réponse caractéristique aurait la forme p20 ee t c [c] s 1t[t] n [n] d [LI 1, dans laquelle ee est un code d'erreur et d'autres champs ont les significations indiquées dans le Tableau 5, et dans cet exemple l'étape de programme résultante peut avoir la forme : p 2 0 1 013 112 3 4 5 0 70 32 30 7C 0 7C 33 31 32 33 34 35 7C 30 7C 181 8 700 5 0 091 31 2D 38 31 38 2D 37 30 30 2D 35 30 30 39 7C J o n e s # 1 # 0 4A 6F 6E 65 73 7C 31 7C 30
Ainsi, en utilisant l'architecture et le protocole, et les étapes de programme d'usage général décrits cidessus, il est possible d'écrire des sous-programmes appropriés pour assurer l'interface entre le SET et l'ordinateur universel. Ainsi, par exemple, il est possible d'écrire des sous-programmes et de les intégrer dans un logiciel de comptabilité, de façon que lorsque des employés sont introduits dans le logiciel de comptabilité, une rubrique correspondante soit établie dans le SET pour l'employé. Lorsque des employés sont supprimés, une rubrique d'employé correspondante est supprimée dans les codes de SET. De plus, lorsqu'une rubrique est ajoutée au logiciel de comptabilité pour chaque nouvel employé, des codes d'accès sont automatiquement ajoutés au SET. En outre, ces rubriques de SET peuvent être ajoutées en coïncidence avec des rubriques dans la base de données de comptabilité, ou sous la forme d'actualisations périodiques, par exemple conjointement à des sauvegardes ou d'autres opérations de servitude qui peuvent être effectuées sur l'ordinateur universel.
Selon un mode de réalisation de l'invention, la grille isolée inférieure est reliée au puits par une métallisation isolée de la métallisation inférieure .
Selon un mode de réalisation de l'invention, la métallisation inférieure recouvre toute la face inférieure.
Selon un mode de réalisation de l'invention, la métallisation inférieure est reliée au mur périphérique.
Selon un mode de réalisation de l'invention, la région de substrat traversée par le puits est isolée des régions du substrat où sont réalisés les réseaux de cellules supérieures et inférieures par le mur périphérique qui se prolonge par un mur auxiliaire du second type de conductivité.
Selon un mode de réalisation de l'invention, le mur périphérique se prolonge du côté de la face inférieure par un anneau inférieur du second type de conductivité entourant le réseau de cellules inférieures.
Selon un mode de réalisation de l'invention, du côté de la face supérieure, un anneau supérieur du second type de conductivité entoure le réseau de cellules supérieures et relié à la métallisation supérieure.
Selon un mode de réalisation de l'invention, du côté de la face supérieure, un anneau d'arrêt de canal fortement dopé du premier type de conductivité entoure l'anneau supérieur du second type de conductivité.
Cet objet, ces caractéristiques et avantages, ainsi que d'autres de la présente invention seront exposés en détail dans la description suivante d'un mode de réalisation particulier faite à titre non-limitatif en relation avec les figures jointes parmi lesquelles : la figure 1, précédemment décrite, représente une vue en coupe schématique d'un commutateur bidirectionnel selon l'art antérieur ; la figure 2 représente une vue en coupe schématique d'un mode de réalisation d'un commutateur bidirectionnel selon la présente invention ; et la figure 3 représente une vue de dessus schématique d'un mode de réalisation du commutateur bidirectionnel de la figure 2.
Comme l'illustre la figure 2, le commutateur 10 est formé dans un substrat 40 de type N entouré d'un mur d'isolement 41 de type P. Du côté de la face supérieure du substrat 40 est formé un réseau de cellules 42, seules trois cellules étant représentées sur la figure 2. Chaque cellule 42 comprend un caisson 43 comportant une région centrale 44 fortement dopée de type P et une région périphérique plus faiblement dopée de type P. Un anneau 45 fortement dopé de type N est formé dans le caisson 43. La partie du caisson 43 à l'extérieur de l'anneau 45 est recouverte d'une grille isolée 46.
Du côté de la face inférieure du substrat 40, est formé un agencement similaire de cellules 48. La structure des cellules 48 est identique à celle des cellules 42. Sur la figure 2, seules
trois cellules inférieures 48 sont représentées. Une grille isolée inférieure 49 recouvre la partie du caisson à l'extérieur de l'anneau de chaque cellule inférieure 48.
Le mur 41 comporte une extension 50 en forme d'anneau du côté de la face inférieure du substrat qui entoure le réseau de cellules inférieures 48.
Comme pour l'art antérieur, du côté de la face supérieure, un anneau supérieur 51 de type P dont la périphérie externe est faiblement dopée entoure le réseau de cellules supérieures 42. Un anneau d'arrêt de canal 52 de type N fortement dopé est disposé autour de l'anneau supérieur 51 de type P.
Une métallisation Ml' contacte la région centrale 44 du caisson 43 et l'anneau de type N 45 de chaque cellule supérieure 42, ainsi que l'anneau de type P 51. Une métallisation M2' contacte du côté de la face inférieure la région centrale du caisson de type P et l'anneau de type N de chaque cellule inférieure 48. La métallisation M2' vient recouvrir toute la face inférieure du substrat 40. Elle est en outre connectée au mur périphérique 41.
Un anneau métallique M3' en contact avec l'anneau d'arrêt de canal 52 égalise le potentiel sur l'anneau d'arrêt de canal 52. De même, un anneau métallique M4' en contact avec le mur périphérique 41 égalise le potentiel sur celui-ci au niveau de la face supérieure.
La métallisation M2' est montée sur un support conducteur 54, par exemple un radiateur, avec lequel elle est en contact électrique.
Son analyse permet de mesurer la capacité réplicative d'un virus, aussi appelée infectivité ou fitness".
EXEMPLE 10-2 1-(R,S)-1-(3,4-diméthoxy-phényl)-2-méthoxy-1-phényl- éthanol
1) Le 1-(R,S)-1-(3,4-diméthoxy-phényl)-2-méthoxy-1-phényl-éthanol est obtenu de la manière suivante : A un mélange de 1,56 g de magnésium, 2 cm3 de 4-bromo-1,2-diméthoxybenzène et 5 cm3 de tétrahydrofurane chauffé à une température voisine de 60 C, on ajoute 7,4 cm3 de 4-bromo-1,2-diméthoxy-benzène en solution dans 10 cm3 de tétrahydrofurane. Le mélange résultant est chauffé à une température voisine de 60 C, pendant 2 heures. A la solution ainsi obtenue, refroidie à une température voisine de 20 C, on additionne 3 cm3 de 2-méthoxy acétophénone en solution dans 15 cm3 de tétrahydrofurane. Après 24 heures d'agitation à une température voisine de 20 C, le mélange réactionnel est versé sur une solution aqueuse saturée en chlorure d'ammonium. Le mélange ainsi obtenu est extrait par 2 fois 50 cm3 d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont lavées par 2 fois 100 cm3 d eau distillée puis séchées sur sulfate de magnésium et concentrées à sec sous pression
réduite. Le résidu obtenu est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (35-70 um), en éluant avec un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (80/20) pour donner 4,3 g de 1-(R,S)-1-(3,4-diméthoxy-phényl)-2-méthoxy-1- phényi-éthanol, sous forme d'un solide jaune dont les caractéristiques sont les suivantes : - point de fusion : 66-68 C (Banc-Köfler) - spectre de masse (El) : M/Z=289 (MH+) 2) Le (R, S)-(3,4-diméthoxy-phényl)-phényl-acétaldéhyde est obtenu de la manière suivante : Un mélange de 47,85 g de 1-(R,S)-1-(3,4-diméthoxy-phényl)-2-méthoxy-1- phényl-éthanol et 50 cm3 d'acide formique sont chauffés au reflux, pendant 13 heures. Le mélange réactionnel est alors versé sur 750 cm3 d'une solution aqueuse saturée en carbonate de sodium et le mélange résultant est extrait par 3 fois 400 cm3 d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, lavées par 2 fois 500 cm3 d'eau distillée et par 1 fois 300 cm3 d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium puis séchée sur sulfate de magnésium et concentrée à sec sous pression réduite. Le résidu est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (35-70 um), en éluant avec un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (85/15) pour donner 15,2 g de (R, S) - (3, 4-diméthoxy-phényl) -phényl-acétaldéhyde, sous forme d'une huile visqueuse incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : - Rf CCM silice éluant : cyclohexane-acétate d'éthyle (70/30) = 0,22 - spectre de masse (El) : M/Z = 257 (MH+) 3) La 4-(R,S)-4-(3,4-diméthoxy-phényl)-4-phényl-cyclohex-2-énone est obtenue de la manière suivante : A une solution, refroidie à 0 C, de 15,2 g de (R, S)- (3, 4-diméthoxy- phényl)-phényl-acétaldéhyde dans 120 cm3 d'éther éthylique, on ajoute successivement 5,85 cm3 de méthylvinylcétone et 1,3 g d'hydroxyde de potassium en pastille dissous dans 7 cm3 d'éthanol. La température du
mélange résultant est laissée au voisinage de 20 C pendant 4 heures. On concentre alors à sec le mélange réactionnel sous pression réduite. Le résidu est dissous dans 500 cm3 de dichlorométhane et la solution résultant est lavée par 2 fois 400 cm3 d'eau distillée et par 1 fois 400 cm3 d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium. La phase organique ainsi obtenue est séchée sur sulfate de magnésium puis concentrée à sec sous pression réduite. Le résidu est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (30- 70 um), en éluant avec un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (85/15) pour donner 8,3 g de 4- (R, S) -4- (3, 4-diméthoxy-phényl) -4-phényl-cyclohex-2- énone sous forme d'une huile visqueuse jaune dont les caractéristiques sont les suivantes : - Rf CCM silice éluant : cyclohexane-acétate d'éthyle (70/30) = 0,23 - spectre de masse (El) : M/Z = 309 (MH+) - spectre de RMN : 1H (300 MHz, (CD3) 2SO d6, Ó en ppm) : 2,29 (mt : 2H) ; 2,66 (mt : 2H) ; 3,69 (s : 3H) ; 3,75 (s : 3H) ; 6,13 (d, J = 10, 5 Hz : 1 H) ; 6,80 (mt : 2H) ; 6,94 (mt : 1 H) ; de 7,20 à 7,35 (mt : 3H) ; 7,36 (t large, J = 7,5 Hz : 2H) ; 7, 57 (d large, J = 10,5 Hz : 1H).
4) L'ester éthylique de l'acide 6- (R, S) -6- (3, 4-diméthoxy-phényl) -6- phényl-6, 7-dihydro-1 H-indazole-3-carboxylique est obtenu de la manière suivante : A une solution, refroidie à-70 C, de 1 g de 4- (R, S)-4- (3, 4-diméthoxy-phényi)- 4-phényl-cyclohex-2-énone dans 10 cm3 de tétrahydrofurane, est ajoutée goutte à goutte 0,44 cm3 d'éthyl diazoacétate puis lentement 2,3 cm3 de diisopropylamidure de lithium commercial en solution 2M dans le tétrahydrofurane. Après agitation du mélange réactionnel à une température voisine de-70 C pendant 5 heures, on ajoute 0,38 cm3 d'acide acétique glacial et on laisse la température remonter au voisinage de 20 C. On ajoute alors 40 cm3 d'acétate d'éthyle et le mélange résultant est lavé par 2 fois 30 cm3 d'eau distillée puis séché sur sulfate de sodium et concentré à sec sous pression réduite. Le résidu obtenu est purifié par flash-chromatographie
sur gel de silice (35-70 um), en éluant avec un mélange gradient de dichlorométhane-acétate d'éthyle (98/02 à 90/10) pour donner 80 mg de l'ester éthylique de l'acide 6- (R, S) -6- (3, 4-diméthoxy-phényl) -6-phényl-6, 7- dihydro-1 H-indazole-3-carboxylique sous forme d'une meringue blanche dont les caractéristiques sont les suivantes : - Rf CCM silice éluant : dichlorométhane-acétate d'éthyle (90/10) = 0,12 - spectre de RMN diisopropyle (400 MHz, (CD3) 2SO d6, en ppm) : 1,30 (t, J = 7 Hz : 3H) ; 3,39 (s large : 2H) ; 3,64 (s : 3H) ; 3,72 (s : 3H) ; 4,29 (q, J = 7 Hz : 2H) ; 6, 47 (d large, J = 10 Hz : 1H) ; 6,70 (dd, J = 8, 5 et 2 Hz : 1H) ; 6,76 (d, J = 2 Hz : 1H) ; 6,83 (d, J = 10 Hz : 1H) ; 6,84 (d, J = 8,5 Hz : 1H) ; de 7,15 à 7,25 (mt : 3H) ; 7,29 (t large, J = 7,5 Hz : 2H) ; de 13,40 à 13,60 (mf étalé : 1H).
1) La 6-diméthylaminométhylène-4, 4-diphényl-cyclohex-2-ènone est préparée de la manière suivante : A une solution de 2,48g de 4, 4-diphényl-cyclohex-2-ènone dans 20cm3 de N, N-diméthylformamide, sont ajoutés 4,77 g de N, N-diméthylformamide diméthylacétal. Le mélange est porté au reflux pendant environ 4 heures.
Après retour à une température voisine de : 1H la solution est concentrée à sec sous pression réduite (13 kPa). Le résidu est repris par 50 cm3 d'oxyde de 20 C, et laissé précipiter pendant environ 20 heures à une température voisine de 20 C. Le solide est essoré, lavé par 3 fois 10 cm3 d'oxyde de diisopropyle puis séché sous pression réduite (13 kPa) sur
hydroxyde de potassium à une température voisine de 20 C. On obtient ainsi 1, 7 g de 6-diméthylaminométhylène-4, 4-diphényl-cyclohex-2-ènone sous forme d'une poudre crème, dont les caractéristiques sont les suivantes : - point de fusion : 1300C (Banc-Köfler) - spectre de R. M. N. 1H (300 MHz, (CD3) 2SO d6, S en ppm) : 3,08 (s : 6H) ; 3,44 (s large : 2H) ; 6,03 (d, J = 10 Hz : 1 H) ; de 7, 15 à 7, 40 (mt : 12H).
2) Le 2-chloro-5, 5-diphényl-cyclohexa-1, 3-diènecarbaldéhyde est préparé de la manière suivante : A une solution de 0,607 g de 6-diméthylaminométhylène-4, 4-diphényl- cyclohex-2-ènone dans 15 cm3 de dichlorométhane est ajouté 0,193 cm3 d'oxychlorure de phosphore. Le mélange est porté au reflux et ce dernier est maintenu pendant environ 3 heures. Après retour à une température voisine de 20 C, la solution est concentrée à sec sous pression réduite (13 kPa). Le résidu est dissous dans 20 cm3 de tétrahydrofurane et 20 cm3 d'eau sont ajoutés en une seule fois. Le mélange est chauffé au reflux pendant environ 24 heures. Après retour à une température voisine de 20 C, le mélange est concentré à sec sous pression réduite (13 kPa). Le résidu est repris par 10 cm3 d'acétate d'éthyle. La solution est lavée par trois fois 30 cm3 d'eau puis séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et concentrée à sec sous pression réduite (13 kPa). On obtient ainsi 0,6 g de 2-chloro-5, 5-diphényl- cyclohexa-1, 3-diènecarbaldéhyde sous forme d'une résine orangée utilisée telle quelle dans les synthèses ultérieures et dont les caractéristiques sont les suivantes : - spectre de masse (ire) : M+ = 294 - spectre de R. M. N. 1H (300 MHz, (CD3) 2SO d6, ô en ppm) : 3,09 (s : 2H) ; 6,38 (d, J = 10 Hz : 1H) ; 7,14 (d large, J = 7, 5 Hz : 4H) ; 7,23 (d, J = 10 Hz : 1H) ; 7,26 (tt, J = 7,5 et 2,5 Hz : 2H) ; 7,33 (t large, J = 7,5 Hz : 4H) ; 10,09 (s : 1H).
3) Le 5, 5-diphényl-4, 5-dihydro-2H-isoindole-1-carboxylate d'éthyle est préparé de la manière suivante : A une suspension de 0,589 g de 2-chloro-5, 5-diphényl-cyclohexa-1, 3diènecarbaldéhyde dans 20 cm3 de N, N-diméthylformamide est ajouté 0,307 g de chlorhydrate de glycinate d'éthyle. Le mélange réactionnel est porté à reflux pendant environ 20 heures. Après retour à une température voisine de 20 C, le mélange est concentré à sec sous pression réduite (13 kPa). Le résidu est repris par 100 cm3 d'acétate d'éthyle, lavé par 3 fois 50 cm3 d'eau puis séché sur sulfate de magnésium, filtré et concentré à sec sous pression réduite. Après purification par flash chromatographie sur colonne de silice [éluant : dichlorométhane], on obtient 0,11 g de 5, 5-diphényl-4, 5-dihyd ro-2H-isoindole-1-carboxylate d'éthyle sous forme d'une solide brun dont les caractéristiques sont les suivantes : - point de fusion : 1600C (Banc-Köfler) - Rf CCM silice (éluant : dichlorométhane) = 0,23 - spectre de R. M. N. 1H (300 MHz, (CD3) 2SO d6, 8 en ppm) : 1,27 (t, J = 7 Hz : 3H) ; 3,24 (s : 2H) ; 4,20 (q, J = 7 Hz : 2H) ; 6,47 (d large, J = 10 Hz : 1H) ; 6,53 (d, J = 10 Hz : 1H) ; 6,67 (s large : 1H) ; de 7,15 à 7,35 (mt : 10H) ; 11,65 (mf : 1H).
1) La 5, 5-diphényl-cyclohex-3-ène-1, 2-dione 1-oxime est préparée de la manière suivante :
A une solution de 6,5 g de ter-butylat de potassium dans 50 cm3 de tert-butanol à une température voisine de 30 C, est ajoutée une solution de 10,1 g de 4, 4-diphényl-cyclohex-2-ènone dans 60 cm3 de tert-butanol. Après environ 15 minutes d'agitation, à une température voisine de 30 C, cette solution est coulée goutte à goutte sur 14 cm3 de nitrite de tert-butyle. Le mélange réactionnel est agité à une température voisine de 200C pendant 2 heures. 100 cm3 d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 3M et 100 cm3 de d'oxyde de diéthyle sont alors ajoutés au mélange précédent à une température voisine de 20 C. Après décantation, la phase aqueuse est extraite par 100 cm3 d'oxyde de diéthyle. Les phases organiques réunies sont lavées par 3 fois 100 cm3 d'une solution aqueuse saturée en bicarbonate de sodium puis par 100 cm3 d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium puis séchées sur sulfate de magnésium, filtrées et concentrées.
Après concentration à sec sous pression réduite (13 kPa), le résidu est purifié par flash chromatographie sur colonne de silice [éluant : cyclohexane/acétate d'éthyle (80/20 en volumes)]. On obtient ainsi 2,23 g de 5, 5-diphényl- cyclohex-3-ène-1, 2-dione 1-oxime sous forme d'une meringue jaune utilisée telle quelle pour les synthèses ultérieures, dont les, caractéristiques sont les suivantes : - Rf CCM silice [éluant : dichlorométhane/méthanol (95/5 en volumes = 0,36 - spectre de R. M. N. 1H (300 MHz, (CD3) 2SO d6, 0 en ppm) : 3,52 (s : 2H) ; 6,32 (d, J = 10,5 Hz : 1 H) ; 7,20 (d large, J = 7,5 Hz : 4H) ; 7,27 (tt, J = 7,5 et 1,5 Hz : 2H) ; 7,36 (t large, J = 7,5 Hz : 4H) ; 7,86 (dd, J = 10,5Hz : 1 H) ; 12,65 (s : H).
Des cellules HeLa, 293 T et P4 sont cultivées dans du milieu DMEM supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal (SVF), 50 UI/ml de pénicilline et 50 pg/m1 de streptomycine. Les cellules P4 son des cellules Hela-CD4, LTR-LacZ dans lesquelles l'expression de la beta-
galactosidase est strictement inductible par la protéine Tat transactivateur du VIH, permettant par conséquent, une quantification précise de l'infectivité ou de la capacité réplicative des virus VIH-I basée sur un cycle unique de réplication (Charneau, P., Mirambeau, G., Roux, P., Paulous, S., Buc, H. and Clavel, F. (1994) HIV-1 reverse transcription. A termination step at the center of the genome". J Mol Biol 241 (5), 651-62. ). Les cellules P4 sont cultivées en présence de 500 pg/m1 de geneticine.
La détermination de la susceptibilité d'un virus VIH à un inhibiteur de transcriptase inverse est effectuée de la manière suivante : des cellules 293 T sont transfectées avec 7,5 ug de plasmide pSRT linéarisé par NruI, 0,1 ug du plasmide pVSV-G et 0,5 et 1 ug du produit issu de la réaction PCR de la transcription inverse de VIH. Le précipité de transfection est retiré des cellules après 18 heures d'incubation et du milieu de croissance frais est ajouté. Après 24 heures de culture, le surnageant est clarifié par centrifugation (500 g, 15 minutes) et transféré sur des cellules indicatrices P4 lesquelles ont été pré-incubées avec des dilutions sériées d'un inhibiteur de la transcriptase inverse, dans de puits triplicatas, durant quatre heures. La gamme de concentrations d'inhibiteur utilisée varie selon les composés. Le signal produit par l'activation du gène marqueur a été développé avec du CPRG durant 48 heures, comme pour l'analyse de la susceptibilité à un inhibiteur de transcriptase inverse et l'indice ICso a été calculé en utilisant l'équation d'effet médian.
Les conditions de transfert sont optimisées au moyen d'un test en échiquier. La variation du ratio du plasmide/produit issu de PCR ne modifie significativement la quantité de p24 ou de transcriptase inverse produites ou la vitesse de réaction avec CPRG. Etant donné que le plasmide circulaire, pVSV-G semble être extrêmement toxique pour les cellules 293T, la quantité de celui-ci a été réduite de 3 ig à 0,1 ug dans le mélange de transfection, conduisant à des rendements élevés en p24 ( > 20 ng/ml comparé à 9,8 ng/ml).
Etant donné que les phases précoces de la réplication du virus, incluant la transcription inverse,
se produisent dans les cellules P4 indicatrices dans ce type de détermination, ce sont ces cellules qui sont traitées avec des dilutions en série des inhibiteurs de la transcriptase inverse.
Les gammes de concentration d'inhibiteur utilisées sont choisies en fonction de la toxicité cellulaire de chaque composé et du ratio ICso/IC9o pour la susceptibilité des isolats résistants (Tableau 1). Par exemple, comme l'indice ICso pour l'abacavir pour les cellules P4 est d'environ 250 uM alors que l'indice ICso pour ce composé pour la souche native du virus est d'environ 3 uM, la détection de la résistance est limitée par la toxicité. Une gamme de quatre dilutions en série, commençant à 200 uM a été utilisée pour l'abacavir, permettant la détection de jusqu'à 60 fois plus de résistance.
D'autre part, puisque la toxicité de l'AZT pour les cellules P4 est élevée ( > 300 uM) alors que l'indice ICso est considérablement inférieur, une gamme plus large de dilutions a été utilisée (dilution en série 1/10 à partir de 5 pM) de manière a permettre la détection de niveaux élevés de résistance (jusqu'à 100 fois).
Pour la transcriptase inverse RVA, l'indice ICso est utilisé plutôt que l'indice ICgo car la détection de l'indice IC90 pour les virus résistants pourrait demander des niveaux de composé toxiques pour la plupart d'inhibiteurs de transcriptase inverse.
Concentrations en drogues Moyenne Susceptibilité Inhibiteurs utilisées Déviation géométrique détectable de RT standarda IC50a maximumb Gamns / Etapes de dilution AZT 50 M - 5 nM 10 x 0,018 M 2,7 2700 3TC 200 - 0,02 M 10 x 1,512 M 2,2 130 D4T 100 - 0,01 M 10 x 0,444 M 2,7 220 DDI 100 - 0,01 M 10 x 1,613 M 2,5 60 Abacavir 200 - 0,8 M 4 x 2,229 M 1,8 90 Effavirenz 100 - 0,16 nM 5 x 0,716 nM 2,2 140 Nevirapine 50 M - 5 nM 10 x 0,037 M 2,0 1300 a-moyenne géométrique et déviation standard de 20 tests répétés pour les inhibiteurs de transcriptase inverse. b-différence maximale approximative pour les indices ICgo et ICgo entre NL43 et le virus testé qui peut être mesurée en utilisant la gamme de concentrations en drogues donnée
Les recombinaisons obtenues en utilisant pour l'amplification de l'étape (b) la paire d'amorces FuA : 5'AAGCAATGTATGCCCCTCCCAT3' (SEQ ID No : 23) et FuB : 51 GGTGGTAGCTGAAGAGGCACAGG3' (SEQ ID No : 24) suivie d'une deuxième amplification, effectuée avec l'amorce : FuC : 5'ATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGA3' (SEQ ID No : 25) et un mélange des amorces suivantes : FuDl : 5'TCTGTCTCTCTCTCCACCTTCTTCTT3' (SEQ ID No : 26) FuD2 : 5'TCTGTCTTGCTCTCCACCTTCTTCTT3' (SEQ ID No : 27) sont très efficaces.
L'augmentation de l'ICSO pour un virus fortement résistant NL-DIM (décrit par Rimsky L. T. et al. J. Virol. 1998, vol 72, pages 986-993) et pour le virus NL4.3 (qui est partiellement résistant) ont été mésurées vis-à-vis de cet inhibiteur.
Avantageusement la longueur de la séquence variable est de 6 bases azotées compte tenu des techniques actuelles et du coût de fabrication des puces à ADN. Selon la présente invention, les bases azotées peuvent être celles présentées dans le tableau (I) ci-dessus.