INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La présente invention a pour objet une composition d'ensimage apte à revêtir des fils de verre, en particulier sous forme de verranne, qui améliore leur résistance à la rupture en traction, et permet ainsi un meilleur tissage.
Eliminer le surnageant à l'aide de la pompe à vide, laisser sécher environ une demi heure sur la paillasse, et 2 min sous vide.
Resuspendre le culot dans 20 l TE (0,1X soit 1 mM).
Incuber 10 min à 65 C.
Incuber environ 4 heures à 4 C, de manière à ce que l'ADN soit bien resuspendu.
Vérification sur minigel d'agarose à 1%, mettre en parallèle un marqueur de poids moléculaire.
C) Ligation de l'ADN chromosomique de Photorhabdus luminescens souche TT01 dans le vecteur pSYX34.
Reprendre 6 l d'ADN chromosomique Ajouter 2 l de pSYX34 Ajouter 2 {il de tampon de ligation (LB : ligation buffer) Ajouter 2 l de ligase Puis 8 l H20 (volume total : 20 l) En parallèle, faire un témoin de ligation, en remplaçant l'ADN chromosomique, par du TE 0,1X (1 mM).
Vortexer, laisser une nuit à 16 C.
Transformation de cellules ultra compétentes XL 1 O-Gold Kanr (Stratagene) La banque d'ADN génomique obtenue à l'étape précédente à été intégrée dans les cellules ultra compétentes XL10 Gold Kanr (Stratagene) selon les conditions préconisées par le fabriquant.
L'analyse des inserts de 24 clones par digestion par l'enzyme de restriction Sali et par séquençage des extrémités a été effectuée et a donné des résultats satisfaisant.
D) Cartographie des clones BAC sur le génome de Photorhabdus luminescens Connaissant la presque totalité de la séquence du génome de la bactérie Photorhabdus luminescens, ainsi que les séquences des extrémités des inserts des clones des différentes librairies, les inventeurs ont effectué une cartographie permettant de positionner le clone BAC8C11. Le clone 8C11(dépôt CNCM 1-2700), dont la taille du fragment inséré est de 22,5 kb, comprend le gène codant pour SEQ ID N 3, flanqué du gène codant pour SEQ ID N 5.
EXEMPLE 2 : d'activité entomopathogène sur les larves de Plutella xylostella, menés à partir de la banque de BAC décrite précédemment.
Une série de tests a été effectuée selon le protocole suivant. Des bactéries (souche E. coli DHlOB, contenant un plasmide pBeloBAC11) ont été mises en culture une nuit dans 5 ml LB+chloramphenicol à 28 C sous agitation à 200 rpm. La DO540 de chaque culture a été systématiquement prise. Chaque culture est diluée avec du LB jusqu'à obtenir une concentration de 5x10 bactéries/ml. Six feuilles (3 cm de diamètre) sont incubées dans une culture diluée pendant une heure avec 0,05 % Tween 20 (Sigma). Les feuilles traitées sont mises dans des plaques 6 puits et 5 larves sont placées dans chaque puits, soient 30 larves testées par clone. Chaque puits contient un support gélosé contenant 15 g/1 d'agar (Difco) et 1,5 g/1 d'antifongique (nipagine, Sigma).
De préférence, les larves utilisées pour ce test sont des larves en phase tardive du stade L2 (2eme stade larvaire), sélectionnées juste avant leur mue vers le stade L3. En effet, les inventeurs ont observé que les larves étaient nettement plus sensibles à la bactérie à ce stade L2 et que les essais y étaient bien plus reproductibles.
% de sensibilité % de sensibilité n (calcul par score) (calcul par marqueur) Global 63 68,25 76,19 pTa 28 57, 14 67, 86 pT1 24 81, 82 86, 37 pT2-4 11 72,73 81,82 G1 11 54,55 63,64 G2 27 66,67 74, 07 G32578, 2686, 96
Cette analyse a mis en évidence une sensibilité moindre pour les lésions pTa par rapport aux pT1 (p = 0,02). L'échantillon de tumeurs pT2-4 était trop peu important pour permettre une comparaison avec les pT1 par le test du khi-deux.
De la même façon, le test était moins sensible pour les lésions G1 que pour les lésions G2 (p = 0, 001). Il n'existait pas de différence significative en termes de sensibilité entre les tumeurs G2 et G3 (p > 0,05).
11-3-Intérêt des différents bras chromosomiques 11-3-1) Sensibilité globale des bras chromosomiques Dans le tableau XI suivant, figure pour chaque bras chromosomique la sensibilité observée.
Tableau XI
Bras 10q 13q 3p 5q 6q 9p 9q 17p Sensibilité 45% 40% 34% 37 % 41 % 42% 58% 33%
11-3-2) Sensibilité en fonction des bras et des critères histologiques Le tableau XII ci-après donne les sensibilités de chaque bras en fonction des stade et grade tumoraux.
Tableau XII
n 10q 13q 3p 17p 5q 6q 9p 9q pTa 28 33% 19% 18% 8% 16% 19% 47% 48% pT1 24 53% 61% 38% 44% 47% 58% 50% 75% pT2-4 11 50% 56% 29% 50% 100% 40% 0% 50% G1 11 20% 9% 0% 0% 29% 38% 38% 50% G2 27 41% 39% 25% 15% 12% 25% 50% 59% G3 25 57% 58% 42% 50% 71% 52% 38% 60%
11-4-Intérêt des différents marqueurs La sensibilité a été calculée pour chaque marqueur. Les résultats sont consignés dans le tableau XIII suivant.
Tableau XIII 1
Marqueur 1 Sensibilité 17 10,53 18 29,63 22 25 116 44 118 44,44 390 40 402 51,61 471 20 516 54,29 561 65,52 562 19,23 663 27,59 671 41,67 682 31,25 686 36,36 714 39,02 752 37,04 894 48. 15
111-Conclusions 111-1-Spécificité du test La spécificité du test peut être choisie en fonction de la valeur attribuée au risque a (95 % pour le calcul par score dans les expériences ici recensées, c'est-à-dire 1 faux-positif sur 17 témoins).
La spécificité peut être augmentée par l'amélioration de la reproductibilité des réactions d'amplification par PCR. A cet égard, il est avantageux d'effectuer chaque PCR en double. En cas de discordance des résultats, une troisième PCR discriminante peut être alors réalisée.
111-2-Sensibilité du test Selon le mode de détermination des DA, la sensibilité du test était de 68,25 % (score global) ou 76,19 % (critères individuels de DA).
Une des limites de la sensibilité réside dans le nombre de marqueurs informatifs.
La phase d'intervention comprend en outre l'étape suivante : réglage du système d'acquisition 2D peropératoire en fonction desdites premières valeurs du jeu de paramètres de réglage.
Outre les éléments d'information qu'elle apporte pour la réalisation de la procédure de recalage et de localisation (voir discussion détaillée ci-après de ces autres caractéristiques de l'invention), la simulation de l'acquisition virtuelle permet une planification et ainsi une amélioration de l'image 2D réalisée lors de l'intervention. Les paramètres déterminés en simulation indiquent au praticien comment positionner l'appareil d'acquisition 2D peropératoire et régler l'incidence optimale pour l'observation de la structure anatomique considérée et de la lésion.
Cette approche permet ainsi de localiser l'outil à l'intérieur des structures anatomiques, et dans le cas particulier d'une acquisition par rayons X, de limiter les doses de rayons X et la quantité de produit de contraste absorbées par le patient lors de l'acquisition peropératoire par une diminution du nombre d'acquisitions de mise au point rendue possible grâce à la simulation.
De façon avantageuse, dans ladite étape de recalage, on part de valeurs initiales des paramètres de la transformation géométrique de type prédéterminé qui sont fonction desdites premières valeurs du jeu de paramètres de réglage du système d'acquisition 2D peropératoire.
Ainsi, l'algorithme effectué au cours de l'étape de recalage (minimisation d'au moins un critère de distance) converge plus rapidement vers les paramètres recherchés, puisque ces derniers sont proches des valeurs initiales choisies.
Selon une caractéristique avantageuse, ladite étape de réglage du système d'acquisition 2D peropératoire, en fonction desdites premières valeurs du jeu de paramètres de réglage, est suivie des étapes suivantes : restitution au praticien, sur ladite au moins une image 2D peropératoire de référence faisant apparaître lesdites premières structures anatomiques arborescentes, de la projection desdites premières primitives 3D de recalage selon lesdites valeurs initiales des paramètres de la transformation géométrique de type prédéterminé ; affinage par le praticien du réglage du système d'acquisition 2D peropératoire, par tentative de superposition, sur ladite au moins une image 2D peropératoire de référence, desdites premières structures anatomiques premières avec ladite projection des premières primitives 3D de recalage.
De cette façon, le praticien peut affiner le réglage du système d'acquisition 2D peropératoire et l'algorithme effectué au cours de l'étape de recalage converge encore plus rapidement. Ceci revient à faire effectuer manuellement par le praticien le début de l'étape de recalage.
Avantageusement, ladite phase de planification comprend en outre les étapes suivantes :
simulation de l'acquisition, sous au moins une incidence de test, d'images 2D peropératoires, à l'aide, d'une part, d'un modèle géométrique réaliste du système d'acquisition 2D peropératoire et, d'autre part, dudit modèle descriptif des premières structures anatomiques arborescentes ; sélection, notamment à partir des images 2D peropératoires simulées, de données à restituer lors d'une étape de conduite de navigation comprise dans la phase d'intervention.
Il est clair cependant qu'il peut exister d'autres éléments sur la base desquels la décision de sélection est prise (notamment des éléments liés aux données 3D préopératoires et aux données résultant de la navigation exploratoire virtuelle).
Selon une caractéristique avantageuse, ladite phase de planification comprend en outre les étapes suivantes : simulation de l'acquisition, sous au moins une incidence de test, d'images 2D peropératoires, à l'aide, d'une part, d'un modèle géométrique réaliste du système d'acquisition 2D peropératoire et, d'autre part, dudit modèle descriptif des premières structures anatomiques arborescentes ; choix, à partir des images 2D peropératoires simulées, desdites premières primitives 3D de recalage qui sont utilisées lors de ladite étape de recalage.
De façon avantageuse, ladite phase de planification comprend en outre les étapes suivantes : simulation de l'acquisition, sous au moins une incidence de test, d'images 2D peropératoires, à l'aide, d'une part, d'un modèle géométrique réaliste du système d'acquisition 2D peropératoire et, d'autre part, dudit modèle descriptif des premières structures anatomiques arborescentes ; choix, à partir des images 2D peropératoires simulées, desdites premières ou secondes primitives 3D activées qui sont utilisées lors de ladite étape de fourniture au praticien d'informations de localisation ponctuelle dudit au moins un marqueur dans l'image 3D préopératoire.
Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, ladite transformation géométrique de type prédéterminé entre le référentiel 3D préopératoire et le référentiel 2D peropératoire est une combinaison de : au moins une transformation rigide (#SP) entre le référentiel 3D préopératoire et un référentiel 3D rapporté à la source du système d'acquisition 2D peropératoire, ladite au moins une transformation rigide étant définie par des paramètres extrinsèques de rotation et de translation ; au moins une projection perspective (#IS) entre le référentiel 3D rapporté à la source du système d'acquisition 2D peropératoire et un repère associé aux images 2D peropératoires, ladite au moins une projection perspective étant définie par des paramètres intrinsèques de projection..
Avantageusement, ladite étape de recalage consiste à déterminer d'une part lesdits paramètres extrinsèques de rotation et de translation, définissant ladite au moins une transformation rigide, et d'autre part lesdits paramètres intrinsèques de projection, définissant ladite au moins une projection perspective.
Selon une première variante avantageuse, ladite étape de recalage consiste à déterminer lesdits paramètres extrinsèques de rotation et de translation, définissant ladite au moins une transformation rigide. Lesdits paramètres intrinsèques de projection, définissant ladite au moins une projection perspective, sont prédéterminés et supposés connus.
Selon une seconde variante avantageuse, l'étape de recalage consiste à déterminer lesdits paramètres extrinsèques de rotation et de translation, définissant ladite au moins une transformation rigide. Ledit procédé comprend en outre une étape de calibrage, pouvant inclure une estimation des distorsions géométriques, et permettant de déterminer lesdits paramètres intrinsèques de projection, définissant ladite au moins une projection perspective.
Un CPC plus élevé peut ou non aboutir à un profit plus élevé. En général, le profit total peut croître ou décroître moyennant des modifications de rang. L'exemple qui suit représente le comportement non monotone du profit total avec le rang pour un unique listing. Le publicitaire dispose d'un profit moyen/cliquage de 4 dollars 90. Le fait d'avoir une offre au rang 6 aboutit au profit maximum pour le
publicitaire lorsqu'un budget pour les listings est supérieur ou égal à 46 dollars. Par ailleurs, si la limite de budget est de 20 dollars, alors le profit optimum est au rang 8 puisque ce rang présente le profit le plus élevé tout en tombant toujours au-dessous du budget.
rang Nombre de CPC Profit/cliquage Profit total Coût du cliquages (en dollars) (en dollars) (en dollars) trafic (en dollars) 1 18 4,90 4,90 0,00 88,20 2 17 4,80 4,90 1,70 81,60 3 16 4,79 4,90 1,76 76,64 4 15 4,78 4,90 1,80 71,70 5 12 4,70 4,90 2,40 56,40 6 10 4,60 4,90 3,00 46,00 7 5 4,40 4,90 2,50 22,00 8 4 4,30 4,90 2,40 17,20 9 3 4,20 4,90 2,10 12,60
Le fait de trouver l'offre optimum pour un listing est un processus itératif si l'opérateur du marché ne publie pas le nombre moyen de cliquages en fonction du rang pour chaque terme ou expression. Selon cet exemple, le publicitaire peut démarrer au rang 3 puis tenter le rang 4, ce qui conduit à une augmentation du profit total, puis peut poursuivre pour examiner le rang 5 etc... Un autre problème est que le fait de trouver un maximum local peut aboutir au fait de manquer le rang présentant un profit optimum - le rang 6 peut présenter un profit plus élevé que ses voisins mais il est possible que le rang 10 soit meilleur que le rang 6.
Afin de compliquer le sujet, le taux de conversion pour des listings différents ne peut pas être le même. Par exemple, un listing avec le terme "automobile" peut disposer de 1% des chercheurs qui achètent une information concernant les coûts de vendeur pour une automobile tandis que pour un listing avec le terme "voiture", ce pourcentage peut être de 1,5. La différence peut être une fonction du terme ou de l'expression du listing ou de son titre, de sa description ou de la page WEB sur laquelle l'URL pointe. Par ailleurs, les taux de conversion pour un unique listing peuvent dépendre du rang auquel le
listing est affiché. Par exemple, ce pourrait être lorsque le listing est affiché au rang 1 que 2 % des chercheurs achètent le produit tandis que si le listing est au rang 5, seulement 1 % des chercheurs achètent le produit.
Le publicitaire doit gérer les listings sur une base régulière. Ceci a pour but d'assurer que le budget est dépensé de façon régulière ou uniforme ou irrégulière selon les souhaits et que le budget complet est dépensé à la fin de la campagne. Le fait de dépenser le budget complet avant la fin de la campagne peut aboutir à une mauvaise allocation de ressources - trop de clients suivi par aucun - et le fait de ne pas dépenser le budget complet peut aboutir à des opportunités de revenus manquées.
Un publicitaire doit réaliser une estimation initiale des offres optimum pour tous les listings et doit surveiller en continu ces offres afin de s'assurer que la campagne est en cours. Il y a de nombreuses raisons pour lesquelles les offres peuvent avoir besoin d'être modifiées au fil du temps. Les estimations initiales des nombres de cliquages à différents rangs pour chaque listing peuvent être incorrectes, les estimations initiales des taux de conversion peuvent être incorrectes ou les taux de conversion peuvent varier au fil du temps. Par exemple, les listings peuvent présenter une pertinence vis-à-vis d'une date particulière (par exemple la fête des pères) qui vient juste de passer.
En outre, du fait de la dynamique du marché, le nombre de cliquages pour chaque rang de chaque terme ou expression peut varier. Par exemple, le listing présentant le terme "automobile" peut présenter une offre de 1,43 dollars et être au rang 3. Ultérieurement, un autre publicitaire entre dans le marché avec une offre de 1,44 dollars, ce qui a pour effet de déplacer le listing du rang 3 au rang 4.
Au rang 4, le listing de "automobile" disposera de moins de cliquages le coût/cliquage pour le terme "automobile" a juste augmenté au niveau du marché. D'autres modifications peuvent être générées par le fait que des publicitaires quittent le marché, des publicitaires existants augmentent/diminuent leurs offres et l'opérateur de marché augmente/diminue le nombre de chercheurs réalisant une recherche
(par exemple en additionnant des affiliés ou en les éliminant). La dynamique du marché de CPC peut aboutir à ces modifications à n'importe quel instant.
Il y a d'autres conditions de marché dont des publicitaires doivent garder trace afin de maximiser le profit. Ces conditions incluent la vérification de si l'offre d'un listing est trop élevée pour son rang courant. Par exemple, un publicitaire A1 peut établir le CPC d'un listing à 0,50 dollar pour que le listing soit au rang 2 - le publicitaire A2 est au rang 3 avec un CPC de 0,49 dollar. Quelques jours plus tard, le publicitaire A2 modifie le CPC de son listing à 0,45 dollar tout en restant toujours au rang 3. Le publicitaire A1 peut maintenant réduire le CPC de son listing de 0,50 dollar à 0,46 dollar tout en maintenant toujours le listing au rang 2.
Les exemples précédents illustrent les diverses actions que des publicitaires doivent réaliser de manière manuelle afin de gérer leur campagne. Certains publicitaires réalisent ces tâches plusieurs fois par jour. Certains publicitaires disposent d'une pluralité d'employés dédiés à la gestion de la participation à un paiement pour un marché, lesquels employés surveillent les positions de leurs listings et règlent leurs offres, gèrent leurs budgets etc...
Le processus manuel d'interrogation de l'état de listings, de vérification des compétiteurs sur le marché et de vérification de l'état de compte est consommateur de temps et source de gaspillage. Par conséquent, il existe un besoin pour un procédé et un appareil permettant à des publicitaires de gérer leurs campagnes de publicité de manière davantage efficace ou efficiente.
Il existe un besoin pour fournir un système de gestion de campagne automatisé à des publicitaires. Un tel système devrait considérer en tant qu'entrée les paramètres de la campagne de publicité : le budget, la durée, les termes ou expressions, le CPC moyen maximum, les taux de conversion et le profit moyen/action pour chaque terme ou expression. Le système devrait établir de manière automatique le CPC pour chaque listing afin de maximiser le profit du publicitaire et devrait dépenser le budget sur la campagne comme
spécifié par le publicitaire. Le système devrait recalculer de façon périodique le CPC de listings, en prenant en compte la performance historique de la campagne afin de mieux optimiser le profit. Le système devrait générer de façon périodique des rapports concernant la performance du système de gestion de campagne automatisé et devrait communiquer ces rapports au publicitaire. Le système devrait octroyer à des publicitaires la capacité de personnaliser le plan de campagne automatisé qui est généré par le système.
Le 5'-O- (3, 4-dicarboxy-3-hydroxy) butanoate-2', 3'didésoxyadénosine est obtenu avec un rendement quantitatif après lavage de la phase aqueuse puis recristallisation.
II. Préparation d'immunogènes. Procédés de couplage ou activation de l'haptène et couplage à la protéine porteuse Le couplage à une protéine porteuse implique l'activation d'un ou plusieurs groupements carboxylate de l'haptène. L'activation de ce carboxylate s'effectue soit par un chloroformiate d'alkyle (généralement le chloroformiate d'éthyle), soit par un chlorocarbonate d'alkyle soit un
carbodiimide en présence de N-hydroxysuccinimide permettant d'augmenter le rendement de couplage à la protéine porteuse.
Concernant les nucléosides possédant un groupement carboxylate, l'activation de ce dernier est réalisable avec les réactifs précédemment décrit. En revanche, avec un chloroformiate ou un chlorocarbonate d'alkyle, la réaction d'activation induit la libération d'acide chlorhydrique dans le milieu réactionnel. Or la liaison glycosidique des nucléosides est sensible au milieu acide. Il est donc important de piéger cet acide en ajoutant au milieu réactionnel une base comme par exemple la triéthylamine.
(Kaul, S., et al. 1996. Specific radioimmunoassays for the measurement of stavudine in human plasma and urine. J Pharm Biomed Anal. 15 : 165-174. et Ferrua, B. et'al. 1994. Measurement of the anti-HIV agent 2', 3' -didehydro-2', 3'- dideoxythymidine (D4T) by competitive ELISA. J Immunol Methods. 176 : 103-110.) Cinq mg de 5'-O- (3, 4-dicarboxy-3-didésoxy-3hydroxy) butanoate-2', 3'-adénosine (12 jumelés) sent solubilisés dans 320 l de DMF anhydre. On ajoute 8 mg de dicyclohexylcarbodiimide (3,6 équivalent) et 5 mg de Nhydroxysuccinimide (3,6 équivalent). Le mélange réactionnel est agité à 4 C pendant 3 heures. On solubilise 15 mg de KLH dans 1 ml de tampon Tris 10 mM à pH 7,7. Puis on ajoute goutte-à-goutte la solution contenant l'ester activé à la solution de KLH préalablement refroidie dans la glace. Le mélange réactionnel est agité pendant 4 heures à 4 C. Cette solution est conservée à-20 C.
Le rapport molaire entre molécule porteuse et haptène est un paramètre important qui permet l'obtention d'un conjugué où le taux d'incorporation de l'haptène est suffisamment élevé pour induire une réponse immunitaire
maximale entraînant la stimulation et l'activation des clones immunocompétents. (Cupo A. et al. (1984)"Quantitation and localization of Met-enkephalin-Arg-Gly-Leu in rat brain using highly sensitive antibodies". Neuropeptides 4,389-401. ; Cupo A. et al. (1984)"A new immunological approach to the detection and the quantification of the Met5-enkephalin precursors in rat brain". Neuropeptides 4,375-387. ; Cupo et al. (1985) Detection of methionine-enkephaline at the 10-16 mole level. J. Neuroimmunology, 8 : 57-67. ; Cupo A. et al. (1987)"A new immunization procedure for the obtention of anti-leucine enkephalin antibodies. Part I. Immunization procedure and physicochemical characteristics of antibodies".
Neuropeptides 8,207-219.) ; Cucumel K. et al. (1996) "Production and characterization of site-directed antibodies against dermorphin and dermorphin related peptides"Peptides 17,973-982. ; Garreau I., et al. (1997)"Radioimmunoassay against the C-part of VV-hemorphin7 peptide : An alternative assay for Cathepsin D activity"Peptides 18,293-300.).
III Préparation d'anticorps polyclonaux Les anticorps polyclonaux ont été produits chez le lapin.
Les immunsérums ont été obtenus par immunisation de 2 lapins albinos (Centre d'élevage des Combes, Ain, France).
III. 1-Protocole d'immunisation.
Lors de l'immunisation primaire, l'immunogène est administré à l'animal par voie intradermique, mais on peut également l'administrer par voies sous-cutanée, intramusculaire ou intrapéritonéale à raison de 500 J. 1g d'immunogènes par immunisation et par lapin dilué au demi avec de l'adjuvant complet de Freund.
Un mois après l'immunisation primaire, les immunisations ont été effectuées à raison de un rappel toutes les trois semaines sur une période de quatre mois. Les saignées ont été réalisées dix jours après chaque rappel dans un tube hépariné pour éviter la coagulation du sang. Après centrifugation, le plasma est recueilli et conservé à-20 C.
III. 2 Caractérisation et sélection des anticorps ayant une affinité pour les dérivés ddNTPs.
Les anticorps ayant une affinité pour les dérivés ddNTPs peuvent être identifiés par des techniques immunologiques, soit à l'aide de dosages immunoenzymatiques, soit des dosages radioimmunologiques (RIA).
Les anticorps obtenus ont été caractérisés par dosage radioimmunologique en utilisant comme traceur le 5'-0hémisuccinate-2', 3'-didésoxyadénosine couplé au dipeptide Tyrosyl-Lysine radiomarqué à l'iode 125.