INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La présente invention s'intéresse plus particulièrement aux défensines d'insectes. Ces peptides sélectivement actifs contre les bactéries à Gram positif ont une structure tridimentionnelle bien définie comportant une hélice a et un feuillet (3 constitué de 2 brins antiparallèles, reliés par trois ponts disulfures (motif CSa(3). Les ponts disulfures de type recouvrant sont établis entre les cystéines 1 et 4, 2 et 5 et 3 et 6 dans l'ordre de leur position relative au sein de la séquence peptidique. L'analyse de l'alignement des séquences
peptidiques de 40 défensines d'insectes dont certaines sont décrites dans la littérature et d'autres nouvellement isolées par la demanderesse (notifiées (*), Figure 1) , a permis de révéler la présence de 3 régions variables séparées (en caractères gras, figure 1) par des régions substantiellement conservées. On entend par régions substantiellement conservées selon la présente invention, 40 sous-séquences peptidiques de défensines d'insectes ayant au moins 60% et de préférence 85% à 95% des résidus d'acides aminés qui sont identiques lorsque ces sousséquences sont alignées pour le maximum de correspondance.
Les régions variables nommées région variable n 1, région variable n 2 et région variable n 3 correspondent respectivement à la boucle N-terminale, à la boucle située entre l'hélice a et le premier brin ss, et à la boucle Cterminale située entre les 2 brins (3 des défensines d'insectes comme l'expose la figure 2 en annexe.
La demanderesse a maintenant préparé une banque de polynucléotides doubles brins recombinés et les défensines d'insectes hybrides pour lesquelles ils codent par mise en #uvre d'un procédé innovant qui permet d'associer de façon aléatoire des séquences définies correspondant aux différentes régions variables et substantiellement conservées des défensines d'insectes. Le procédé développé par la demanderesse pour préparer la banque de polynucléotides doubles brins recombinés et les défensines d'insectes hybrides pour lesquelles ils codent une comprend les étapes suivantes: a) l'assemblage de séquences nucléotidiques simples brins chevauchants qui couvrent la séquence de tout ou partie de polynucléotides codant une population de départ de défensines d'insectes, pour obtenir des polynucléotides doubles brins recombinés, lesdits polynucléotides doubles brins recombinés comprenant éventuellement à l'une au moins de leurs
extrémités une séquence de régulation de l'expression d'un gène ou une partie 3' ou 5' de cette séquence de régulation, b) l'introduction aux extrémités 3' et/ou 5' de chacun des polynucléotides doubles brins recombinés obtenus à l'étape (a) de séquences nucléotidiques complémentaires d'une séquence nucléotidique d'un vecteur de clonage et/ou d'expression.
L'une au moins des extrémités dudit vecteur de clonage et/ou d'expression linéarisé peut correspondre à la partie 3' ou 5' de séquence(s) de régulation de l'expression d'un gène dont la partie 3' ou 5' complémentaire correspond à l'une des extrémités des polynucléotides doubles brins recombinés obtenus à l'étape (b) du procédé. On entend par séquence(s) de régulation de l'expression d'un gène selon la présente invention, des séquences régulatrices de la transcription, de la traduction et/ou de la maturation de peptides, en particulier de défensines d'insectes telles qu'un promoteur, une séquence codant pour un peptide signal ou de transit (séquences pré, séquence pro), une séquence codant pour une endoprotéase, ou un terminateur. L'ensemble de ces séquences de régulation est connu de l'homme du métier et ce dernier est capable de les choisir en fonction des organismes hôte dans lesquels les peptides codés par les polynucléotides doubles brins recombinés obtenus par le procédé de l'invention sont exprimés.
A l'étape (a) du procédé, les polynucléotides doubles brins recombinés comprennent à l'une au moins de leurs extrémités tout ou partie d'une séquence de régulation de l'expression d'un gène, qui est apportée auxdits polynucléotides doubles brins recombinés par des séquences nucléotidiques simples brins supplémentaires présentes :
i) soit à l'une des extrémités des séquences nucléotidiques simples brins chevauchants constituant les extrémités des polynucléotides doubles brins recombinés, avant l'assemblage (a), ii) soit, lors de l'assemblage (a), sous la forme d'un ou plusieurs acides nucléiques simples brins, chacun constitué d'une première et d'une seconde région nucléique, dont : - un premier groupe est constitué de premières régions complémentaires des séquences nucléotidiques simples brins chevauchants constituant l'un au moins des extrémités des polynucléotides doubles brins recombinés, avant l'assemblage (a), et les secondes régions de ce premier groupe correspondent à tout ou partie d'une séquence de régulation de l'expression d'un gène, - le second groupe, s'il est présent, est constitué de premières régions et secondes régions, pour une part complémentaires des secondes régions du premier groupe et pour une seconde part complémentaires les unes des autres, de façon à former ladite séquence de régulation de l'expression d'un gène ou une partie de celle-ci, iii) soit par la combinaison de (i) et (ii).
Chacune des séquences nucléotidiques simples brins utilisées à l'étape a) du procédé est constituée ou comprend : - un segment nucléotidique interne codant une séquence en acides aminés d'une des régions variables d'une défensine d'insecte de la population de départ, ledit segment nucléotidique variable étant flanqué - en 5' par un segment nucléotidique codant la séquence en acides aminés de tout ou partie de l'une quelconque des régions substantiellement conservées
des défensines d'insectes de la population de départ, qui est immédiatement adjacente à l'extrémité N terminale d'une région variable, ledit segment nucléotidique étant lui-même éventuellement flanqué en 5' d'une séquence nucléotidique simple brin supplémentaire correspondant à tout ou partie d'une séquence de régulation de l'expression d'un gène, - en 3' par un segment nucléotidique codant la séquence en acides aminés de tout ou partie de l'une quelconque des régions substantiellement conservées des défensiens d'insectes de la population de départ, qui est immédiatement adjacente à l'extrémité C terminale d'une région variable, ledit segment nucléotidique étant lui-même éventuellement flanqué en 3' d'une séquence nucléotidique simple brin supplémentaire correspondant à tout ou partie d'une séquence de régulation de l'expression d'un gène.
Les étapes (a) et (b) sont réalisées par polymérisation de préférence par une réaction de polymérisation en chaîne (PCR).
La polymérisation de l'étape (a) comprend plusieurs cycles de dénaturation, hybridation, extension en présence d'une polymérase, dans des conditions telles que chaque séquence nucléotidique simple brin et acide nucléique simple brin s'il est présent, sert de matrice pour l'élongation d'une autre séquence nucléotidique simple brin ou acide nucléique simple brin s'il est présent.
L'étape (b) de polymérisation est réalisée avec des amorces comprenant des séquences nucléotidiques complémentaires d'une séquence nucléotidique d'un vecteur d'expression.
L'utilisation de séquences nucléotidiques simples brins telles que précédemment définies, dans l'étape (a) du procédé permet de préserver l'intégrité des motifs
structuraux élémentaires des défensines d'insectes. Le repliement global des chaînes peptidiques et par voie de conséquence la fonctionnalité des défensines d'insectes hybrides ne sont pas altérés.
Mais, plus globalement, que remarque-t-on au travers de cette brève présentation ? En fait, tous ces dispositifs sont ajoutés au moteur; d'où alourdissement, encombrement, complexification de sa conception et accroissement des risques de panne.
La présente invention cherche à remédier à ces problèmes en permettant, dans le cas de moteurs quatre-temps (Diesel ou à allumage commandé) une suralimentation sans mécanisme compresseur d'appoint, si ces moteurs sont à nombre pair de cylindres.
Pour ce faire, il est d'abord nécessaire de donner au carter-moteur les spécificités d'un carter deux-temps ; àsavoir : - sa séparation en autant de "carters-pompe" qu'il existe de cylindres; ceci étant obtenu à l'aide de cloisons verticales étanches. Un carter-pompe sera alors défini comme l'enceinte hermétiquement close située sous un cylindre et où tourne une manivelle de vilebrequin.
Du fait que, le plus classiquement, un carter moteur est démontable et assemblé selon le plan du vilebrequin, chaque cloison étanche sera formée de deux parties séparables dans ce plan. L'étanchéité de la jonction au vilebrequin est alors assurée par l'ajustement - et le lubrifiant - des coussinets. Selon un mode de réalisation, un joint spécial à lèvres pourra être ajouté. Notons que ses cloisons isolent aussi, par voie de conséquence, le mécanisme d'entraînement de distribution, en prise sur le vilebrequin (que ce mécanisme soit à chaîne, engrenages ou courroie crantée).
- la présence d'un orifice d'aspiration, perçé dans la paroi de chaque carter-pompe, et où s'adaptent une courte tubulure (pipe d'aspiration) ainsi qu'un clapet d'aspiration (préférentiellement à lamelle ; laquelles'ouvre vers l'intérieur du carter-pompe et est placée en un point où cette ouverture ne gêne pas le mouvement de la bielle). Toutefois, si le moteur est destiné à fonctionner à hauts régimes, des dispositifs moins sujets à "l'affolement" (qui est l'incapacité à assurer un fonctionnement correct à hauts régimes) pourront être utilisés.
Notons qu'il n'est pas nécessaire que les pipes d'aspiration se rejoignent si l'on se place dans une configuration d'injection électronique directe (leur jonction étant, en effet, le plus souvent nécessitée par le besoin d'utiliser un carburateur unique). De la même manière, il n'est pas nécessaire d'utiliser de filtre à air du fait que l'air transite par les carters : les poussières y seront captées par l'huile (selon une ancienne technique de filtration).
- la présence d'un orifice (orifice de gavage) perçé dans la partie haute de la paroi de chaque carter-pompe, et où s'adapte une tubulure (dite de gavage). Ces tubulures de gavage pourront recevoir avantageusement des
ailettes de refroidissement (ce refroidissement pouvant être passif, à air forçé ou à circuit d'eau).
Selon un mode de réalisation, un clapet (dit de gavage ; préférentiellement à lamelle) pourra être adapté à chaque orifice de gavage. Dans cette éventualité, la tubulure de gavage sera avantageusement de section carrée (ou rectangulaire) afin que le clapet (de forme aussi carrée - ou rectangulaire) puisse s'y mouvoir.
Les orifices d'aspiration et de gavage sont perçés, préférentiellement, dans le plan du mouvement de la bielle et, de la manière la plus simple, positionnés du même côté du moteur (côté soupapes d'admission).
En plus de posséder une architecture de carter de type deux-temps, un moteur fonctionnant selon la présente invention doit avoir une configuration particulière de ses tubulures de gavage : elles doivent être appariées.
Ainsi, dans le cas typique d'un moteur quatre-cylindres (notés A, B, C, D), elles se rejoignent et communiquent deux-à-deux de manière à ce que les tubulures de gavage des carters-pompe A et C se rejoignent, communiquent et alimentent les cylindres A et C ; de manière à ce que les tubulures de gavage des carters-pompe B et D se rejoignent, communiquent et alimentent les cylindres B et D.
Enfin, selon un mode de réalisation, un dispositif modifiant les volumes morts pourra être adapté. Ce dispositif sera, préférentiellement, constitué de deux cylindres contenant chacun un piston mobile et placés, chacun, à la jonction de deux tubulures de gavage. Les pistons seront simultanément mûs par rotation d'un arbre cannelé activé par un moteur électrique ; moteur étant géré, préférentiellement, par une électronique.
Les dessins annexés aideront à mieux comprendre l'invention. Pour ce faire, la figure 1 schématise d'abord le fonctionnement classique d'un moteur quatretemps quatre-cylindres. En figure 2 est représentée une coupe d'un tel moteur (choisi être à prise de distribution centrale) maintenant muni de cloisons d'étanchéité 5 séparant les carters-pompe 4. La figure 3 présente une coupe de ce moteur adapté pour être suralimenté selon la présente invention. La figure 4 montre les tubulures de gavage, et les figures 5 explicitent le fonctionnement du moteur ainsi adapté ; qui sont condensées dans les figures 6 et 7. La figure 8 clarifie les notations utilisées tandis que les figures 9 et 10 précisent les comportements aéroliques aux PMH et PMB. Enfin, la figure 11 schématise un variateur de volume mort.
Si l'on considère, en premier lieu, le fonctionnement d'un moteur quatre-temps quatre-cylindres classique, on observe que, lors d'un premier demi-tour de vilebrequin (Fig. 1-1), les pistons A et C descendent et les pistons B et D montent. Or, dans ce premier demi-tour, seul le cylindre A est en phase d'admission ; lui seul devra donc être suralimenté.
Au second demi-tour (Fig. 1-II), les pistons A et C montent et les pistons B et D descendent. Ici aussi, seul un cylindre (D) devra être suralimenté.
Découper le gel côté marqueur à l'aide d'un scalpel, et repérer la région recherchée, en l'occurrence la bande correspondant à 4 Kb.
A. 7) Purification du vecteur pSYX34.
Reprendre dans 3 volumes de solution Iodure de Sodium (lml pour un échantillon de 0,2g), mettre à 49 C, en agitant toutes les 2 minutes, jusqu'à complète dissolution de l'agarose.
Ajouter 8 l de micro-billes : GLASSMILK R, laisser 5-10 min à température ambiante, l'ADN se fixe sur les micro-billes.
Centrifuger 2 min à 14. 000 tpm, éliminer le surnageant par aspiration.
Laver 3 fois avec la solution New Wash (600 l / eppendorf, vortexer, centrifuger quelques secondes à 10. 000 tpm), cette solution a été préparée et, est gardée à -20 C. Resuspendre le culot dans 10 l d'H20, Vortexer, laisser 5 min à 49 C. Ceci permet à l'ADN de se décrocher des micro-billes.
Centrifuger 2 min à 14. 000 tpm.
Récupérer les surnageants dans de nouveaux eppendorfs.
Ajouter à nouveau 10 l d'H20 sur les culots, pour être sûr de tout récupérer, vortexer, laisser 2 min à 49 C.
Récupérer les surnageants dans les eppendorfs précédents.
Environ 20 l de surnageant sont obtenus, centrifuger 2 min à 14. 000 tpm.
Transférer les surnageants dans de nouveaux eppendorfs, de manière à être sûr qu'il ne reste plus de micro-billes.
Déposer sur un minigel d'agarose à 1%, 1 l de chaque préparation (+ 5 l d'H20 + 2 l de solution de dépôt), laisser migrer à 80 volts, 2 heures.
On gardera les échantillons les plus concentrés, ils seront alors congelés à -20 C.
B) Préparation de l'ADN chromosomique de Photorhabdus luminescens souche TT01.
Dans un premier mode de réalisation particulier de l'invention, ladite phase de planification comprend en outre une étape de sélection de données 3D préopératoires.
Ladite phase d'intervention comprend en outre une étape de conduite de navigation, permettant de restituer au cours de l'intervention les données 3D préopératoires
sélectionnées au cours de ladite étape de sélection comprise dans la phase de planification.
De façon préférentielle, ladite étape de sélection de données 3D préopératoires consiste à déterminer une trajectoire virtuelle de l'outil et à sélectionner des données 3D préopératoires associées à ladite trajectoire virtuelle. Ladite étape de conduite de navigation consiste à restituer les données 3D préopératoires sélectionnées, en fonction d'informations relatives à la localisation de l'outil le long de ladite trajectoire virtuelle.
Avantageusement, les informations relatives à la localisation de l'outil le long de ladite trajectoire virtuelle sont fournies de façon interactive par le praticien, au cours de l'intervention.
Selon une variante avantageuse, les informations relatives à la localisation de l'outil le long de ladite trajectoire virtuelle sont fournies automatiquement, en utilisant les résultats de l'étape de localisation et de suivi dudit outil.
Dans un second mode de réalisation particulier de l'invention, ladite phase d'intervention comprend en outre une étape de conduite de navigation, comprenant ellemême les étapes suivantes : estimation d'une trajectoire réelle de l'outil, en utilisant les résultats de l'étape de localisation et de suivi dudit outil ; obtention de données 3D préopératoires associées à ladite trajectoire estimée ; restitution, au cours de l'intervention et en fonction d'informations relatives à la localisation de l'outil le long de la trajectoire estimée, des données 3D préopératoires obtenues.
Avantageusement, ladite étape de sélection ou d'obtention de données 3D préopératoires s'appuie sur le résultat de l'exécution du processus de navigation exploratoire virtuelle, processus sur lequel est basée ladite étape de segmentation des premières structures anatomiques arborescentes apparaissant sur l'image 3D préopératoire.
De façon avantageuse, les données 3D préopératoires restituées au cours de l'étape de conduite de navigation appartiennent au groupe comprenant :
des images permettant de restituer et interpréter la localisation de l'outil dans l'environnement 3D préopératoire, c'est-à-dire notamment par rapport aux premières ou secondes structures anatomiques ; des images permettant de mieux apprécier localement des caractéristiques des premières ou secondes structures anatomiques et/ou d'une lésion, au fur et à mesure de la progression de l'outil ; des alarmes visuelles et/ou sonores.
Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, le procédé selon l'invention comprend en outre une étape de suivi et d'enregistrement d'au moins une information relative à l'exécution dudit procédé.
Avantageusement, ladite au moins une information relative à l'exécution dudit procédé appartient au groupe comprenant : - des trajectoires simulées de l'outil ; - des images virtuelles associées à des trajectoires simulées de l'outil ; - des paramètres de l'acquisition 2D peropératoire virtuelle ; - des paramètres de l'acquisition 2D peropératoire réelle ; - des instructions du praticien pendant l'intervention ; - des gestes du praticien pendant l'intervention.
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, lesdites premières primitives 3D et 2D et lesdites secondes primitives 3D comprennent au moins un des éléments appartenant au groupe comprenant : des lignes centrales des premières ou secondes structures anatomiques ; des maillages d'au moins une surface interne ou externe des premières ou secondes structures anatomiques.
Avantageusement, ladite étape de fourniture au praticien d'informations de localisation dudit au moins un marqueur dans l'image 3D préopératoire comprend une étape d'utilisation des informations de localisation contextuelle pour levée une ambiguïté dans l'obtention des informations de localisation ponctuelle.
De façon avantageuse, ladite étape de fourniture au praticien d'informations de localisation dudit au moins un marqueur dans l'image 3D préopératoire comprend un
processus d'activation/désactivation de premières ou secondes primitives 3D en fonction de la trajectoire suivie par ledit outil et/ou d'informations fournies par le praticien.
Biscuits aux Biscuits pépites de coextrudés aux chocolat fruits ( valeurs pour ( valeurs pour 100 g) 100g) Énergie (Kcal) 440 365 Protides (g) 7,5 4,0 Glucides (g) 64 66 dont sucres 29 40 dont amidon (g) 34,7 18,5 Lipides (g) 17 9,0 dont acides gras saturés (g) 4,1 2,4 Fibres alimentaires 6,6 6,6 Dont FOS 0 2,8
,,....# .. 3333 ug (soit 4000 ug (soit Vitamine A ((3-carotène ) 3333 , (soit 4000 plu (soit
@ 69 % des AJR) 83 % des AJR) Vitamine 16,7 mg (soit 20 mg (soit Vitamine E 167 % des AJR ) 200 % des AJR ) 100 mg (soit 120 mg (soit
Vitaminée ,#"g ("* 200% des AJR) Vitamine 166 % des AJR) 200 des
Zinc 10 mg (soit 66 % 12 mg (soit 80 % des AJR ) des AJR ) Sélénium 56,7 ug (soit 68 ug (soit 97 % Sélénium 81 % des AJR) des AJR) EXEMPLE 2 : Évaluation in vitro de la capacité antioxydante des biscuits La mesure de la capacité antioxydante est une analyse globale qui ne détermine pas de façon spécifique la nature des antioxydants concernés mais qui reflète l'activité des molécules présentes vis à vis d'une source des radicaux.
Chimiquement, la capacité antioxydante d'une molécule correspond à sa capacité à inhiber ou à retarder l'oxydation d'une molécule cible soumise à une attaque radicalaire. Pour exprimer les résultats de l'analyse, on compare le temps et/ou le degré d'inhibition des réactions radicalaires provoquées par le composant étudié avec ceux
d'un antioxydant référence. En général, la forme hydrosoluble de la vitamine E (Trolox) est prise comme référence.
La capacité antioxydante in vitro d'un aliment n'est pas toujours significativement corrélée à la capacité antioxydante du plasma après consommation de cet aliment (capacité antioxydante in vivo). En effet, les molécules d'antioxydants contenues dans les aliments possèdent des taux et des vitesses d'absorption différents.
De plus, lors de l'absorption, ces molécules peuvent changer leur forme chimique et donc leur capacité antioxydante. Cependant, quelques auteurs ont trouvé que la capacité antioxydante du plasma augmentait en fonction de la capacité antioxydante de l'alimentation après plusieurs jours.
2.1. Méthodologie La capacité antioxydante des biscuits a été mesurée in vitro par la méthode ORAC (Oxygen Radical Antioxidant Capacity).
La méthode ORAC mesure dans le temps la perte d'intensité de fluorescence de la fluorescéine en présence de radicaux peroxyle et ce jusqu'à disparition totale de la fluorescence. La présence de composés antioxydants dans l'échantillon inhibe l'action oxydante des radicaux libres envers la sonde fluorescente, et le calcul de l'aire sous la courbe (AUC) par rapport à un blanc permet donc la détermination quantitative relative de la capacité antioxydante de ces composés envers les radicaux libres. Cette technique de calcul informe sur deux paramètres indicateurs de la capacité antioxydante : le temps d'inhibition et le pourcentage d'inhibition de l'activité oxydante des radicaux libres en présence d'antioxydants.
Capacité antioxydante = AUCantioxydant - AUCblanc Valeur ORAC relative = [(AUCéch.- AUCblanc) / (AUCstd- AUCblanc)] x (molarité std / molarité éch.) Cette formule s'applique généralement pour l'analyse de composés antioxydants purs de molarités connues. Dans le cas des biscuits selon l'invention, le paramètre molarité (mole/L) est remplacé par des valeurs exprimées en g/L. La valeur ORAC
finale est alors exprimée en mol de Trolox (c'est-à-dire en Équivalents de Trolox, ou TE) par gramme de matière sèche.
Cette méthode est sensible, fiable et robuste. Elle est reproductible dans le temps avec un coefficient de variation inférieur à 15 %, une limite de détection basse équivalente à 5 M et une limite de quantification de 12.5 M. C'est à dire que des valeurs de capacité antioxydante supérieures à 12.5 mole TE/g sont complètement fiables. En revanche, des valeurs entre 5 et 12. 5 sont quantifiables mais moins fiables, et des très faibles valeurs, inférieures à 5 umole TE/g, ne pourront pas être quantifiées par cette méthode.
2. 2 Échantillons analysés Les 4 produits suivants ont été analysés : Produits Description A : Croustillants pépites de chocolat sans les antioxydants : vitamines E, C, p-carotène + sélénium + zinc.
B : Croustillants pépites de chocolat selon l'exemple 1.
Enfin, selon un autre type de moyens, un film continu et protecteur est créé sur la surface des mortiers et/ou des bétons fraîchement coulés en y déposant, par pulvérisation ou par brossage, une émulsion dans l'eau d'une paraffine seule ou associée à au moins un autre composé tel que une résine hydrocarbonée, une huile hydrocarbonée et/ou une charge pigmentaire et/ou des alcools gras et/ou des acides gras, pour former, d'une manière précoce au début de la prise, une barrière entre ladite surface et l'atmosphère ambiante et empêcher ainsi que se produise le phénomène d'évaporation de l'eau intervenant dans la composition des mortiers et/ou bétons. Cette émulsion a en commun avec les mortiers et bétons la présence de l'eau qui rend compatible et particulièrement intéressant ce type de traitement anti-évaporation.