INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Grade Atypies Activité Différenciation histologique nucléaires mitotique G1 + + cellule bien différenciée G2 ++ ++ cellule moyennement différenciée G3 +++ +++ cellule peu différenciée
D'un point de vue symptomatique, l'hématurie et les signes fonctionnels urinaires irritatifs (pollakiurie, impériosités, fuites par impériosité) représentent l'essentiel des manifestations cliniques des TV.
L'on observe plus rarement des complications liées à la lésion (obstructions urétérales, phénomènes de compression pelvienne) ou bien à sa dissémination (métastases à distance).
Au moment du diagnostic initial, environ 70 à 80 % des tumeurs sont classées superficielles (Le., n'envahissant pas le muscle vésical), et 20 à 30 % invasives. Parmi ces dernières, plus de la moitié présentent dès le premier diagnostic un envahissement ganglionnaire ou systémique.
Pour obvier à ces inconvénients majeurs, à la fois en termes de faisabilité et d'interprétation des résultats, la présente invention utilise, aux fins de la mise en évidence des DA, des marqueurs autres que les microsatellites usuels, que sont les marqueurs polymorphes bi-alléliques d'insertion-délétion, ou SIDP pour Short Insertion Deletion Polymorphism .
Les SIDP se caractérisent par la présence ou l'absence de quelques nucléotides. Si l'on prend pour exemple la séquence suivante : ... ATTTGCGCTAAGCTAGCTATTAT.... elle correspond à un SIDP si elle est susceptible de contenir une ou deux copies de la séquence courte GCTA.
Les SIDP sont, par définition, bi-alléliques, puisqu'il existe seulement deux allèles différents d'un même marqueur. En conséquence, l'individu peut être homozygote pour l'un des deux allèles, ou hétérozygote, possédant alors les deux allèles différents possibles (Figure 1 B).
Le taux d'hétérozygotie des SIDP est plus faible que celui des microsatellites. En particulier, ce taux est de l'ordre de 40 % pour les marqueurs ayant servi à l'étude des TV (cf. Exemples ci-après).
Des SIDP ont été identifiés et recensés par l'équipe du Docteur Weber, au Center for Medical Genetics de Marshfield (Wisconsin). Les séquences des SIDP sont disponibles sur le site : http ://www. research. marshfieldclinic. org.
L'invention consiste donc en un nouveau test de dépistage des tumeurs, notamment des tumeurs de la vessie, ledit test reposant sur la
mise en évidence de DA dans les cellules contenues dans un prélèvement biologique, urinaire par exemple, à l'aide de marqueurs bi-alléliques du type SIDP.
Ainsi, la présente invention a pour objet un procédé de détection de cellules tumorales contenues dans un prélèvement biologique par mise en évidence des DA d'au moins quinze, et de préférence au moins dix-huit marqueurs chromosomiques d'insertion-délétion, ledit procédé comprenant au moins les étapes suivantes : a) l'amplification par PCR quantitative multiplex desdits marqueurs ; b) le calcul du rapport R de hauteur des deux pics correspondant aux deux allèles de chaque marqueur ; c) le calcul d'un score statistique global relatif à l'ensemble des marqueurs, obtenu par comparaison du rapport R avec un rapport de référence Rf ; et d) la comparaison dudit score par rapport au seuil de normalité fixé.
Selon l'invention, les termes procédé , méthode et test sont équivalents.
Au sens de la présente invention, la détection de cellules tumorales s'entend de la mise en évidence de telles cellules. Ladite détection est utile au diagnostic non invasif de tumeurs, et/ou au pronostic après identification de tumeurs, et/ou au suivi d'un traitement anticancéreux.
Les termes cancer et tumeur sont, conformément à l'usage médical, équivalents.
Selon l'acception usuelle dans le domaine médical, un prélèvement biologique ou un échantillon biologique , ou encore un échantillon désigne tout élément extrait d'un corps vivant, en particulier du corps humain, tel que le sang, les biopsies, urines, crachats, ledit élément contenant des cellules et étant utile notamment à des fins de diagnostic.
L'on entend par marqueur , une séquence particulière d'acide nucléique, permettant une détection et un suivi tout à fait spécifiques des DA au sein d'un échantillon contenant des cellules. Ledit marqueur peut être assimilé à un traceur de DA dans ces cellules. Pour ce faire, encore faut-il que le marqueur soit informatif, c'est-à-dire, en l'occurrence, présenter un taux d'hétérozygotie aussi élevé que possible, ceci afin de fournir un élément de comparaison susceptible d'être exploité, par exemple en termes de différence entre les signaux représentant les produits d'amplification des deux allèles dudit marqueur (Figure 1 B).
Par référence à l'étape a) du procédé de détection sus-visé, le terme amplification est revêtu d'un sens générique, en ce qu'il englobe toute technique de biologie moléculaire dont le principe consiste à amplifier ou multiplier une séquence d'acide nucléique cible. L'on peut citer à titre d'exemples non limitatifs, la PCR, l'amplification par transcription (Transcription-Mediated Amplification ; TMA), l'amplification basée sur des séquences d'acides nucléiques (Nucleic Acid Sequence Based Amplification ; NASBA), l'auto-réplication de séquences (Self-Sustained Sequence Replication ; 3SR), l'amplification par déplacement de brin (Strand Displacement Amplification ; SDA) et la réaction de ligature en chaîne (Ligase Chain Reaction ; LCR).
Il convient de noter que l'acronyme PCR peut être utilisé dans le cadre de la présente invention pour désigner de manière spécifique la réaction de PCR, ou de manière indifférente une réaction d'amplification, notamment choisie parmi celles sus-citées.
Les réactions d'amplification ainsi visées peuvent être isothermes ou nécessiter l'exposition cyclique à différentes températures. Selon cette dernière configuration, l'on parle avantageusement de réaction d'amplification thermo-dépendante , bien que ce dernier terme puisse parfois être tacite, auquel cas l'homme du métier est à même de le déduire clairement et sans ambiguïté du contexte.
Pour faciliter la compréhension de l'invention, seule une partie des rayons lumineux émis par la diode 14 ont été
so représentés sur la figure 6.
En considérant de manière approximative que la diode 14 est une source lumineuse ponctuelle, agencée sur l'axe optique A-A, on suppose que les rayons lumineux sont émis radialement, globalement vers l'avant, depuis le centre 106 de l'hémisphère
formant le globe 20.
On note que, la diode 14 étant du type à forte puissance, elle a une ouverture proche de 180 dogrés, c'est à dire qu'elle émet des rayons lumineux suivant un angle solide de 180 degrés. Parmi les rayons lumineux émis par la diode 14, on constate qu'une majeure partie de ces rayons impacte sur la paroi
cylindrique 50 du logement 48.
Etant donné l'angle d' incidence de ces rayons lumineux su r o la paroi cylindrique 50, on considère que la majeure partie du flux lumineux formé par ces rayons pénètre à l'intérieur du corps 22 de la pièce optique 12 en se réfractant, selon les lois optiques classiques. Bien entendu, plus les rayons lumineux émis sont proches de la direction verticale, en considérant la figure 6, moins ils sont réfractés. Par exemple, en admettant que la diode 14 émette un rayon R1 verticalement vers le haut, depuis son centre 106, donc perpendiculairement à la paroi cylindrique 50, alors ce rayon R1
o pénètre dans le corps 22 sans déviation.
On note que, pour que la pièce optique 12 exploite la majorité du flux lumineux émis par la diode 14, il importe que la face de réflexion 62, la plus proche de l'axe optique A-A, s'étende axialement en arrière du centre 106 de la diode 14, de sorte que le rayon R1, qui est le rayon le plus à l'arrière, soit réfléchi vers l'avant par ladite face de réflexion 62. Dans le cas contraire, le rayon R1, et des rayons lumineux voisins, seraient < perdus " à l'intérieur du corps 22, par exemple en se réfractant vers la paroi
externe du tronçon tubulaire 38.
so Après avoir traversé la paroi cylindrique 50 du logement, les rayons iumineux sont réfractés de sorte qu'ils " impactent " contre une face de réflexion 62 à 70 du corps 22 de la pièce optique 22. En arrivant sur les faces de réflexion 62 à 70, ces rayons lumineux sont totalement réfléchis vers l'avant, conformément au principe optique de la réflexion totale de la lumière dans un milieu d'indice de réfraction supérieur à celui de l'air. Ainsi, lorsqu'un rayon lumineux " impacte " sur une face de réflexion 62 à 70 du corps 22, avec un angle d'incidence suffisamment éloigné d'une direction orthogonale, alors il est totalement réfléchi par ladite face de réflexion 62 à 70, sans qu'il soit nacessaire par exemple de déposer un matériau réfléchissant
sur ladite face 62 à 70.
L'inclinaison de la génératrice de chaque face de réflexion o 62 à 70 est prévue pour que les rayons lumineux qu'elle reçoit soient réfléchis vers l'avant, suivant une direction globalement
parallèle à l'axe optique A-A.
A cet effet, l'angle d'inclinaison des génératrices des faces de réflexion 62 à 70 par rapport à l'axe optique A-A, dans le sens horaire en considérant la figure 6, tend à diminuer lorsque l'on
Ainsi, les catalyseurs spécifiques de dimérisation sont ceux qui sont connus de l'homme du métier pour former des groupements urétidinediones à partir de fonctions isocyanates et sont choisis parmi les composés de type tris-(N,Ndialkyl)phosphotriamide, N,N-dialkylaminopyridine ou encore de type trialkylphosphine. Un exemple tout particulièrement préféré de catalyseurs de dimérisation pour l'obtention des compositions selon l'invention sont les catalyseurs de type trialkylphosphine.
Selon une variante, il peut être avantageux de chauffer le milieu réactionnel lors de la réaction de formation des composés urétidinediones par voie catalytique. La réaction de dimérisation est alors effectuée par voie catalytique et thermique.
Certains catalyseurs, tels ceux de type tris-(N,Ndialkyl)phosphotriamide et N,N dialkylaminopyridine, conduisent très majoritairement à la formation spécifique de dimères. Lorsque de tels catalyseurs dits de dimérisation sont utilisés, il peut être avantageux d'ajouter un catalyseur de trimérisation de manière à réaliser conjointement les réactions de dimérisation et de trimérisation (étapes ii-2) et iii) ou bien étapes ii) et iii-2)).
En outre, certains catalyseurs permettent à la fois les réactions de dimérisation et de trimérisation. Un exemple de ces catalyseurs est représenté par ceux de type trialkylphosphine.
L'originalité du procédé catalytique de dimérisation dans la présente invention réside dans le fait que, bien que les réactions de dimérisation catayltiques soient connues en soi, cette dimérisation catalytique est conduite jusqu'à obtenir des taux de transformation des espèces monomères et/ou oligomères de départ supérieurs à 35 %, avantageusement supérieurs à 40 %, voir encore supérieurs à ces limites.
Cette formation de cycles urétidinediones est notamment réalisée en présence de composés de type trialkylphosphine, tris-(N,N-dialkyl)phosphotriamide, N,N,N',N'-tétra-alkylguanidines.
Le catalyseur de cyclotrimérisation peut être tout catalyseur connu à cet effet. On peut citer les amines tertiaires telles que la triéthylamine, les bases de Mannich telles que le tris-(N,N-diméthylaminométhyl)phénol, les hydroxydes ou sels d'acides organiques faibles de tétrra-alkylammoniums tels que les tétra-méthyl-, tétra-éthyl- et tétra-butyl-ammoniums, les hydroxydes et sels d'acides organiques faibles d'hydroxy-alkylammoniums tels que le N,N,N-triméthyl-N-hydroxyéthylammonium carboxylate ou le N,N,N-triméthyl-N-hydroxypropylammonium hydroxyde ; les sels de métaux alcalins, alcalino-terreux, d'étain, de zinc ou d'autres métaux d'acides carboxyliques, tels que l'acide acétique propionique, octanoïque, ou benzoïque ou les carbonates de ces métaux ; les alcoolates ou phénates de métaux alcalins, alcalino-terreux, étain, zinc ou autres métaux ; les alkyl phosphines tertiaires telles que décrites dans US 3,211,703, les composés de métaux lourds tels que l'acétylacétonate de fer décrits dans US 3,135,111, les amines silylées et hexaméthyldisilazane décrites dans EP 89297 ; oules alcoolates de terres rares décrits dans FR 99 16 687.
À l'issue de la réaction de cyclotrimérisation, on désactive le catalyseur de cyclotrimérisation par tout moyen connu, notamment par addition d'un poison de catalyseur ou encore par absorption sur une colonne d'alumine.
Dans le cas où on effectue l'étape de cyclodimérisation catalytique après la réaction de cyclotrimérisation, il conviendra de s'assurer que le catalyseur de trimérisation est effectivement désactivé.
Lorsque l'on souhaite obtenir une composition polyisocyanate masquée telle que définie ci-dessus, on fait réagir les fonctions isocyanates
présentes dans le milieu réactionnel avec l'agent masquant avant, pendant ou après les étapes décrites ci-dessus.
On préfère toutefois réaliser la réaction de masquage après la réaction de polycondensation et après élimination des isocyanates monomères n'ayant pas réagi.
L'un des nombreux intérêts des compositions polyisocyanates selon l'invention est qu'elles peuvent servir de base à la préparation de polymères et/ou de réticulats et être utilisées notamment comme un des constituants principaux de revêtements en tous genres, tels que vernis et peintures. Dans de telles utilisations, les qualités de dureté des polymères réticulables font partie de celles qui sont recherchées sur le plan technique et fonctionnel.
Le procédé de préparation de polymères comporte les étapes suivantes : - mettre une composition polyisocyanate selon l'invention en présence d'un coréactif qui contient des dérivés présentant des hydrogènes réactifs sous forme d'alcool, de phénol, de thiol, de certaines amines y compris les anilines ; ces dérivés peuvent avoir des squelettes hydrocarbonés aliphatiques, alicycliques ou aromatiques, de préférence alcoyles, y compris cycloalcoyles et aralcoyles, aryles, linéaires ou branchés, substitués ou non (ces coréactifs, en général des polyols sont en eux-mêmes connus) et forment après réaction avec les polyisocyanates un réseau ; - et chauffer le milieu réactionnel ainsi constitué à une température permettant la réticulation des composants.
Avantageusement, la température est au plus égale à environ 300 C, de préférence au moins égale à 60 C, plus préférentiellement au moins égale à 80 C et de préférence au plus égale à 250 C et plus préférentiellement encore à 200 C et ce, pour une durée inférieure ou égale à 15 heures, de préférence à 10 heures, et plus préférentiellement encore à 8 heures. Il est connu de l'homme de métier que plus la température est élevée moins il faut de temps pour réaliser la réticulation par cuisson. Ainsi une cuisson à 300 C ne nécessite que quelques dizaines de secondes voire quelques minutes, alors que qu'une température de 60 C nécessite un temps qui s'exprime en heures.
On peut prévoir d'inclure un solvant organique dans le milieu réactionnel de réticulation. On peut également prévoir une suspension dans l'eau.
En ce qui concerne les matières minérales non siliceuses, elles peuvent intervenir comme charge minérale semi-renforçante, de bourrage ou à propriétés spécifiques. Des exemples de ces charges non siliceuses utilisables seules ou en mélange sont le noir de carbone, le dioxyde de titane, l'oxyde d'aluminium, l'alumine hydratée, la vermiculite expansée, la vermiculite non expansée, le carbonate de calcium, l'oxyde de zinc, le mica, le talc, l'oxyde de fer, le sulfate de baryum et la chaux éteinte. Ces charges ont une granulométrie généralement comprise entre 0,01 et 300 m et une surface BET inférieure à 100 m2/g.
On peut généralement utiliser de 0,5 à 60 % en poids, de préférence de 10 à 25 % en poids de charge, par rapport au poids de la phase silicone de la formule.
La composition de l'émulsion selon l'invention est, par exemple la suivante :
# 100 parties en poids d'une huile POS (A) a, #-divinylée dont la teneur en groupements vinyles est comprise entre 2 et 100 méq/1 OOg ; # 0 à 150 parties en poids d'une dispersion de charge (J) renforçante, semi-renforçante et/ou de bourrage dans l'eau , ou dans une huile POS [alpha],#-divinylée (à raison de 10 à 60 % de charge dans la dispersion) ; # 1 à 7 parties en poids d'au moins une huile POS (B1) à #SiH, telle que le rapport nombre de groupes Si-H/ nombre de groupes Si- alcényle va de 0,4 à 10, de préférence de 0,6 à 5 ; # 0,2 à 5 parties en poids de promoteur d'adhérence (C), pris à l'état sec ; # un catalyseur de polyaddition (D), qui est composé d'au moins un métal appartenant au groupe du platine, à raison de 2 à 150 ppm de platine ; # 0,5 à 10 parties en poids de tensioactif (E) ; # 0 à 100 parties en poids d'une résine POS (F) ; # 0 à 1 partie en poids d'un inhibiteur de réticulation (G) ; # 0 à n parties en poids d'agent de fixation de pH (H), n étant tel que le pH soit maintenu entre 7 et 8 ; # 0 à m parties en poids d'un additif de formulation (I) ; # 0 à 150 parties en poids d'une dispersion de charge (J) renforçante, semi-renforçante et/ou de bourrage dans une huile POS [alpha],#- divinylée, à raison de 10 à 80 % de charge dans la dispersion ; # 40 à 2000 parties en poids d'eau (K), de manière à ce que l'émulsion finale ou le bain (réalisé par mélange de plusieurs émulsions et d'eau), servant au traitement du tissu, ait un extrait sec compris entre 5 et 65 %.
Selon un autre de ses aspects la présente invention concerne également un procédé de préparation d'une émulsion aqueuse de POS telle que définie ci-dessus, caractérisé en ce que l'on réalise une mise en émulsion par introduction dans un même réacteur des constituants (A) à (K).
Mais de préférence, l'émulsion est produite par mélange de pré- émulsions qui sont chacune inaptes à réticuler séparément du fait qu'elles ne présentent pas toutes les espèces réactives et le catalyseur nécessaire (POS =SiVi + POS =SiH + platine) pour la polyaddition. Par exemple on peut réaliser une émulsion contenant les =SiVi et les =SiH et l'inhibiteur (partie A),
et une émulsion catalysante à base de platine et d'huile =SiVi (partie B), qui seront associées lors de la confection du bain d'enduction.
Cela facilite grandement l'obtention d'une émulsion stable selon l'invention et qui peut être aisément préparée dans des conditions industrielles. Il est envisageable de mettre en oeuvre des ingrédients (A) et/ou (B) et/ou (C) se présentant sous forme de pré-émulsions contenant ou non les autres ingrédients (D) à (J).
Ainsi, selon une variante : # on réalise les pré-émulsions suivantes : (i) une pré-émulsion comme base du POS (A), (ii) une pré-émulsion comme base du POS (B) (émulsion réticulante), (iii) une pré-émulsion comme base du catalyseur (D) (émulsion catalysante) constitué par exemple d'une émulsion aqueuse d'un catalyseur au platine dilué dans une huile silicone vinylée ; # on mélange ces pré-émulsions, l'une ou l'autre des pré-émulsions (i) à (iii) pouvant renfermer, en outre, le tensioactif (E), éventuellement la résine POS (F), éventuellement l'inhibiteur de réticulation (G) et/ou éventuellement l'agent (H) de fixation du pH et/ou éventuellement l'additif de formulation (1).
De préférence l'émulsion catalysante est ajoutée aux autres émulsions silicones (notamment celle à base de SiH) lors de la formulation du bain, avant application sur le tissu.
Selon des modalités avantageuses de l'invention : # lorsque l'on utilise le tensioactif (E) comme seul émulsifiant, la mise en émulsion se fait par voie directe ou par inversion de phase ; . lorsqu'on utilise (en tout ou partie) un APV (C) comme seul émulsifiant, la mise en émulsion se fait par voie directe uniquement ; la voie directe consistant à couler la phase silicone dans la solution aqueuse contenant le tensioactif.
Une autre modalité avantageuse de l'invention peut consister en l'introduction du promoteur d'adhérence (C), notamment le silane ou POS aminé salifié, uniquement lors de la préparation du bain d'enduction.
Une autre possibilité pourrait être de préparer des parties A et B d'émulsion ou des pré-émulsions (i), (ii), (iii) ne contenant pas de promoteur d'adhérence, de prévoir l'incorporation séparée de ce dernier lors du mélange de A et B ou de (i), (ii), (iii).
La présente invention a aussi pour objet un procédé de préparation d'un support fibreux revêtu d'au moins une couche d'élastomères obtenus par réticulation de l'émulsion aqueuse de POS telle que définie ci-dessus.
Ce procédé comprend les étapes suivantes : # une étape de dépôt d'au moins une couche de l'émulsion telle que définie ci-dessus sur ledit support fibreux ; # puis une étape de réticulation, de manière à obtenir un support fibreux revêtu d'une couche d'élastomère, de telle sorte que le rapport du poids de l'enduction exprimée en sec au poids du support fibreux soit inférieur à 0,2 et de préférence compris entre 0,05 et 0,11.
L'étape de dépôt est avantageusement une enduction.
Après résection trans-urétrale éventuellement associée à un traitement adjuvant (immunothérapie ou chimiothérapie endovésicale), l'histoire naturelle des lésions superficielles est marquée par deux risques majeurs, que sont la récidive et la progression.
Il apparaît donc nécessaire, à la lumière de leur importance tant en termes épidémiologiques qu'évolutifs, de surveiller les TV superficielles avec vigilance.
Cette surveillance peut être effectuée par différentes méthodes, lesquelles se révèlent plus ou moins adaptées en fonction des cas. Elles sont parfois insuffisantes à elles seules, ne sont alors utiles que combinées, et présentent, en tout état de cause, un certain nombre d'avantages et inconvénients sommairement rappelés ci-après.
L'examen clinique, bien que rarement contributif, s'attache à la recherche de survenue d'hématuries (macroscopiques ou microscopiques dépistées grâce aux bandelettes urinaires), et à l'apparition de troubles mictionnels irritatifs (pollakiurie, impériosités). Enfin, les touchers pelviens permettent de déceler une infiltration de la base vésicale, signe du caractère infiltrant d'une tumeur.
La cytoscopie est réalisée à l'aide d'un cystoscope rigide ou d'un fibroscope souple. Cet examen, certes performant, est invasif, parfois mal toléré et peut être source de complications (sténoses de l'urètre, infections urinaires). De plus, la cytoscopie ne permet pas toujours une bonne exploration de la face antérieure de la vessie, pas plus que des régions intrad ive rticulaires.
Le cytodiagnostic urinaire a ce double avantage d'être à la fois simple et non invasif. Sa sensibilité globale, c'est-à-dire sa capacité à déceler l'anomalie lorsqu'il y a lieu, reste néanmoins faible (entre 40 et 60 %) (4,5). En effet, cette sensibilité dépend dans une large mesure de l'anatomopathologiste effectuant l'examen étant donné qu'une part de subjectivité intervient inéluctablement dans l'interprétation finale. En outre, sensibilité et spécificité du cytodiagnostic urinaire varient considérablement selon le grade tumoral, la spécificité désignant ici l'aptitude de la méthode à conclure à juste titre à l'absence d'anomalies. Ainsi, dans le cas de lésions de haut grade (G3, cf. Tableau It, supra), la sensibilité est évaluée à 90 % et la spécificité à 98 % (6). En revanche, la sensibilité chute entre 11 et 25 % s'agissant des tumeurs de bas grade (G1, ibid.) (6).
Une autre méthode de surveillance des TV consiste à doser la Nuclear Matrix Protein 22 (Protéine 22 de la Matrice Nucléaire, NMP22).
Cette protéine joue un rôle dans l'organisation du fuseau mitotique. En l'espèce, elle est dosée dans les urines grâce à un test immunoenzymatique quantitatif. En fonction des limites de positivité choisies, la sensibilité demeure très variable (7). Néanmoins, la plupart des études retrouvent des sensibilités et spécificités de 60 à 70 % (8). L'avantage de ce test réside dans le fait que sa sensibilité ne dépend pas du grade tumoral.