INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
De préférence, ledit vecteur recombinant est un vecteur d'expression dans lequel ladite molécule d'acide nucléique ou l'un de ses fragments sont placés sous le contrôle d'éléments régulateurs de la transcription et de la traduction appropriés.
Ces vecteurs sont construits et introduits dans des cellules hôtes par les méthodes classiques d'ADN recombinant et de génie génétique, qui sont connues
en elles-mêmes. De nombreux vecteurs dans lesquels on peut insérer une molécule d'acide nucléique d'intérêt afin de l'introduire et de la maintenir dans une cellule hôte eucaryote ou procaryote, sont connus en eux-mêmes ; le choix d'un vecteur approprié dépend de l'utilisation envisagée pour ce vecteur (par exemple réplication de la séquence d'intérêt, expression de cette séquence, maintien de la séquence sous forme extrachromosomique ou bien intégration dans le matériel chromosomique de l'hôte), ainsi que de la nature de la cellule hôte. Par exemple, on peut utiliser des vecteurs viraux comme les baculovirus ou non-viraux comme des plasmides. Pour exprimer l'AChEl, l'ADNc d'ace-1 peut être placé sous le contrôle d'un promoteur constitutif comme le promoteur de l'actine 5C, dans un vecteur approprié et ledit vecteur recombinant est introduit dans des cellules d'insecte telles que des cellules de drosophile (cellules de Schneider S2).
La présente invention a également pour objet des cellules procaryotes ou eucaryotes, modifiées par un vecteur recombinant tel que défini ci-dessus ; de préférence ces cellules sont des cellules d'insectes.
Les vecteurs recombinants et les cellules modifiées telles que définies ci-dessus, sont utiles notamment pour la production des protéines et des peptides AChEl selon l'invention.
La présente invention a également pour objet un animal invertébré transgénique, caractérisé en ce qu'il contient des cellules modifiées par au moins une molécule d'acide nucléique telle que définie ci-dessus ; de préférence ledit animal est un insecte.
Les animaux transgéniques et les cellules modifiées telles que définis ci-dessus, sont utiles notamment pour le criblage de substances insecticides et pour la lutte biologique contre les vecteurs de pathogènes et les insectes nuisibles.
La présente invention a également pour objet une méthode de criblage d'une substance insecticide, caractérisée en ce qu'elle comprend : a) la mise en contact de la substance à tester avec une protéine AChEl sélectionnée parmi : la protéine AChEl isolée selon l'invention, un extrait de cellules modifiées ou un échantillon biologique d'un animal transgénique contenant ladite protéine AChEl, tels que définis ci-dessus, en présence d'acétylcholine ou de l'un de ses dérivés,
b) la mesure par tout moyen approprié, de l'activité acétyl- cholinestérase du mélange obtenu en a), et c) la sélection des substances capables d'inhiber ladite activité.
La présente invention a également pour objet une méthode de criblage d'une substance insecticide, caractérisée en ce qu'elle comprend : - la mise en contact d'un animal transgénique tel que défini ci-dessus, avec la substance à tester, et - la mesure de la survie de l'animal.
Avantageusement, lesdites méthodes de criblages mettent en #uvre des AChEl résistantes aux organophosphorés ou aux carbamates ou bien des cellules ou des animaux transgéniques les contenant.
La présente invention a également pour objet un réactif de criblage de substances insecticides, caractérisé en ce qu'il est sélectionné dans le groupe constitué par les protéines AChEl, les vecteurs recombinants, les cellules modifiées et les animaux transgéniques tels que définis ci-dessus.
Des substances insecticides capables d'inhiber l'activité acétylcholinestérase des protéines AChEl résistantes aux insecticides de la classe des organophosphorés et des carbamates couramment utilisés ont des applications : en santé humaine et animale, pour lutter contre les vecteurs de pathogènes (par exemple Aedes aegypti, vecteur d'arboviroses comme la dengue et la fièvre jaune, Culexpipiens vecteur du virus WestNile, Anopheles gambiae vecteur africain de l'agent du paludisme, etc) et dans le domaine de l'agriculture, pour lutter contre les insectes nuisibles qui dévastent les récoltes (par exemple le doryphore (Leptinotarsa decemlineata) qui s'attaque aux pommes-de-terre, les pucerons ravageurs comme Aphis gossypii et Myzus persicae, etc. ).
L'invention a en outre pour objet une trousse de détection et/ou de criblage pour la mise en #uvre des méthodes telles que définies ci-dessus, caractérisée en ce qu'elle inclut au moins un réactif tel que défini ci-dessus.
Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en #uvre du gène ace-1 et de ses produits (ADNc, protéine) selon la
présente invention ainsi qu'au tableau résumant les séquences de la Demande et aux dessins annexés dans lesquels : - la figure 1 illustre l'alignement des séquences en acides aminés des protéines AChEl d'Anophèles gambiae, Schizaphis graminum, An. stephensi, Aedes aegypti, Drosophila melanogaster, Lucilia cuprina, Musca domestica et Culex pipiens. Par convention, les acides aminés sont numérotés en référence à la séquence de l'AChE du poisson torpille (Torpedo californica; SWISSPROT P04058). Les séquences N- et C- terminales ne sont pas représentées en raison de leur variabilité.
améliorer la solubilité, ne semblaient pas avoir de conséquences significatives sur la production préférentielle de la protéine MabA sous telle ou telle forme. En revanche, nous avons été surpris de constater que la technique adoptée pour lyser les bactéries modulait la répartition de la protéine entre les fractions soluble et insoluble. Par exemple, la sonication à froid dans un volume réduit (facteur de concentration de la culture FC> 20) est vraisemblablement responsable de la précipitation de MabA dans le culot (fraction insoluble). L'effet des températures locales élevées engendrées par les ultrasons pourrait expliquer ce phénomène d'agrégation-précipitation de MabA. La lyse d'une suspension bactérienne à plus faible densité cellulaire permet d'éviter la précipitation de MabA lors de la sonication.
Une étude effectuée sur les effets des ultrasons sur les enzymes (Coakley et al., 1973) révèle que les extraits cellulaires préparés par désintégration ultrasonique sont sensibles aux dommages causés par les radicaux libres, qui sont probablement générés par les ultrasons, ainsi que par l'effet de températures locales élevées. Ces auteurs montrent que l'effet "endommageant" durant la lyse des bactéries peut-être minimisé par une sonication à forte concentration en cellules et en présence de composants du milieu tels que les sucres (agissant comme des "scavengers" de radicaux). Ces conclusions ne semblent pas être en accord avec nos résultats qui montrent qu'à une plus faible densité cellulaire lors de la lyse de MabA, la protéine se trouve dans la fraction du @ "soluble". On ne peut toutefois rien avancer quant à l'activité de la protéine dans ces conditions.
Après comparaison de plusieurs techniques de lyse à l'échelle de production voulue, nous avons opté pour une lyse par le lysozyme, suivie d'un cycle de congélation-décongélation. Selon ce protocole, et dans les conditions d'induction adoptées [D06oo = 0.8, 2h à 37 C, 0. 8 mM IPTG], une grande partie de la protéine MabA se retrouve dans la fraction soluble.
2. 2 Système de purification L'obtention de la protéine MabA avec une étiquette poly-His (H-MabA) facilite sa purification. En effet, la haute affinité des résidus histidine pour les ions métalliques permet d'utiliser la méthode de chromatographie d'affinité sur ion métallique immobilisé (IMAC). Une des matrices les plus utilisées pour son efficacité est le nickel-nitrilotriacétate Ni-NTA-agarose (Qiagen). Le groupement NTA présente 4 sites de chélation intéragissant avec 4 des 6 sites de coordination de l'ion métallique Ni. Les noyaux imidazole des résidus histidine se lient aux ions
nickel sur la matrice Ni-NTA. L'ajout de molécules d'imidazole permet, par compétition avec les résidus histidine, de rompre les liaisons entre les protéines et la matrice, et d'éluer la protéine poly-His fixée. L'affinité d'une protéine pour la matrice Ni-NTA-agarose est fonction du nombre de résidus histidine qu'elle possède et qui sont exposés à la matrice. Ainsi, en jouant sur la concentration en imidazole, on peut éluer différentes espèces de protéines présentant des degrés d'affinité différents. L'affinité très élevée des protéines présentant une étiquette poly-His pour le Nickel permet de les séparer de la majorité des protéines co-produites par E. coli. Ainsi, si la fixation de la protéine H-MabA s'avère suffisamment spécifique, la purification se limitera à la seule étape de chromatographie d'affinité.
2. 3 Purification de MabA en conditions natives La mise au point des conditions d'élution de la protéine MabA sur résine Ni-NTA-agarose est effectuée à petite échelle (50 l), en utilisant la méthode par sédimentation de résine dite en batch. Grâce à cette technique, nous avons pu déterminer les différentes concentrations en imidazole nécessaires à l'élution de la protéine MabA et à l'élimination des autres protéines.
La purification adaptée à plus grande échelle est effectuée en colonne ouverte avec -500 l de résine en suspension (Matériel et Méthodes). Le passage de la purification en batch à la purification en colonne a demandé une étape de mise au point supplémentaire.
Les fractions protéiques correspondant aux différentes étapes de purification sont analysées par SDS-PAGE. Dans le lysat clarifié, la bande majoritaire obtenue entre 30 et 43 kDa et correspondant à MabA, témoigne d'une surproduction assez importante de la protéine sous forme soluble, supérieure à 50% des protéines solubles de E. coli. Après l'étape de fixation des protéines sur la résine, la fraction contenant les protéines non fixées sur la colonne est dépourvue de MabA, indiquant une fixation efficace de la protéine H-MabA à la matrice Ni-NTA.
L'élimination d'autres protéines faiblement fixées à la matrice (par la présence d'histidines dispersées dans leur séquence), est obtenue après des lavages extensifs à 50 mM en imidazole. Il faut une concentration en imidazole égale à 175 mM pour éluer la protéine H-MabA seule et en très grande quantité. La masse apparente de H-MabA déduite de sa migration électrophorétique est estimée à 35 kDa.
2. 4 Problèmes de précipitation de MabA au cours de la purification Durant la purification, nous avons constaté que la protéine MabA, éluée à très forte concentration, précipitait aussitôt dans le tube. Ce comportement souvent observé pour les protéines avec une étiquette poly-His, est probablement dû à des interactions protéine-protéine non spécifiques du fait de la très forte concentration locale en protéine lors de la purification (TALON Metal affinity Resin - User Manual CLONTECH).
Les tentatives de solubilisation de la protéine éluée avec des détergents (Triton X-100, NP- 40) se sont avérées vaines. Il fallait donc intervenir avant l'élution de la protéine. Afin de prévenir la précipitation de la protéine, nous avons effectué un traitement avant et après purification. Pour vérifier si la protéine précipite, la fraction qui contient MabA après élution est centrifugée (5 min, à 12000g) puis le surnageant et le culot sont analysés par SDS-PAGE (Matériel et Méthodes). Le traitement pré-purification consiste à ajouter au lysat des agents "solubilisants" doux. Après purification, la protéine éluée est récupérée directement dans du glycérol (50% final) (le glycérol est un agent protecteur, très utilisé pour la préservation de l'activité des enzymes).
Trois conditions ont été testées: * 10% (v/v) glycérol seul # 10% (v/v) glycérol + 0.1% (v/v) Triton X-100 (détergent non-ionique) # 10% (v/v) glycérol + 0. 05% (v/v) (7 mM) ss-mercaptoéthanol (agent réducteur).
Les trois procédés ont permis d'améliorer la solubilité de la protéine MabA. On note toutefois, lors de l'utilisation du ss-mercaptoéthanol à 7 mM, que H-MabA commence à être éluée à une concentration en imidazole bien plus faible (50 mM au lieu de 175 mM).
La solubilisation de MabA en présence des trois agents testés étant comparable, nous avons opté pour l'addition de glycérol 10% seul au lysat.
2. 5 Protocole optimisé pour la surproduction et la purification de H-MabA L'optimisation des conditions de surexpression et de purification de H-MabA nous a permis de retenir le protocole suivant :
,,'Cultiver 200 ml de E. coli/h-mabA sur LB + CBC 50 ug/ml jusqu'à D06oo = 0.8; Induire l'expression avec 0. 8 mM IPTG pendant 2h, à 37 C; Sédimenter les bactéries par centrifugation 15 min à 10 000g, à 4 C. Reprendre le culot dans 9 ml de tampon de lyse (5 mM imidazole et 500 mM NaCl); Ajouter le lysozyme (0,5 mg/ml) et les inhibiteurs de protéases (0,113 mg/ml); Congeler une nuit à -70 C; Décongeler 1h à température ambiante et traiter par la Dnasel (5 g/ml) et la RnaseA (10 ug/ml) en présence de MgCl2 (10 mM), 15 min à 4 C; Centrifuger le lysat à 3 000g puis à 10 000g, et récupérer la fraction soluble; Centrifuger le surnageant 45 min à 44 000g, à 4 C et récupérer le "lysat clarifié"; Ajouter 10% de glycérol pur (v/v) à la fraction soluble et la déposer sur une mini-colonne (500 l de phase Ni-NTA-agarose). Incuber lh à 4 C sous agitation douce; Laver la phase avec 5 x 4 ml de tampon d'élution à 5 mM imidazole; Pré-éluer avec 8 x 500 l à 50 mM imidazole; Éluer avec 8 x 500 l à 175 mM imidazole; Laver avec 10 x 500 l à 250 mM imidazole; Rassembler les fractions contenant la protéine, selon leur concentration et leur pureté.
SM IC : 221 [M+1] Synthèse du 6-Amino-2,3,8,8a-tetrahydro-1 H-3a-aza-cyclopentafalinden-1 -ol dichlorydrate (10) A un mélange de 200 mg de 6-Nitro-2,3,8,8a-tetrahydro-1H-3a-aza-cyclopenta[a]inden- 1-ol (9), 6 ml d'éthanol, 0,1ml d'eau, 0,02 g de chlorure d'ammonium, on ajoute au reflux par portions 2g zinc en poudre. Après 1 heure au reflux, le zinc est éliminé par filtration, le 8,8a-Dihydro-3H-3a-aza-cyclopenta[a]inden-6-ylamine (10) est piégé sous forme de chlorhydrate.
R M N H1 (400MHz-DMSO) 8 ppm 7. 17 (m, 3H) ; (m, 1 H ); 4. 28 (m, 1 H) ; 3. 89 (m, 1 H) ; 3. 35 (dd, 1 H) ; 3. 15 (m, 2H) ; (m, 2H) Exemples colorimétriques : EXEMPLES 1 A 3 DE TEINTURE EN MILIEU ALCALIN A PARTIR du 6-Amino- 2,3,8,8a-tetrahydro-1H-3a-aza-cyclopenta[a]inden-1-ol, dichlorhydrate (10) Les compositions tinctoriales suivantes ont été préparées :
Exemples 1 2 3 6-Amino-2,3,8,8a-tetrahydro- 1 H-3a-aza-cyclopenta[a]inden- 10-3 mole 10-' mole 10-3 mole 1-ol, dichlorhydrate (10) (base) 2- (2,4-Diamino-phénoxy)- éthanol, dichlorhydrate 10-3 mole (coupleur) mole 3-Amino-2-chloro-6-méthylphénol, chlorhydrate (coupleur) 10-3 mole 3,6-Diméthyl-1 H-pyrazolo[5, 1 -c] 10-3 mole [1,2,4] triazole (coupleur) Support de teinture (1) (*) (*) (*) Eau déminéralisée q. s.p. 100 g 100 g 100 g (*) Support de teinture (1) pH 9,5 Alcool éthylique à 96 20,8 g Métabisulfite de sodium en solution 0,23 g M.A aqueuse à 35% Sel pentasodique de l'acide diéthylène- 0,48 g M.A triamine-pentaacétique en solution aqueuse à 40% Alkyl en C8-C10 polyglucoside en solution 3,6 g M.A aqueuse à 60% Alcool benzylique 2,0 g Polyéthylène glycol à 8 motifs d'oxyde 3,0 g d'éthylène NH4CI 4,32 g Ammoniaque à 20% de NH3 2,94 g Au moment de l'emploi, chaque composition est mélangée avec un poids égal d'eau oxygénée à 20 volumes (6% en poids). On obtient un pH final de 9,5.
Chaque mélange obtenu est appliqué sur des mèches de cheveux gris à 90 % de blancs. Après 30 min de pose, les mèches sont rinçées, lavées avec un shampooing standard, rinçées à nouveau puis séchées.
Les résultats de teinture suivants ont été obtenus.
Exemples 1 2 3 Nuance Brun Violet gris Violet observée rouge EXEMPLES 4 A 6 DE TEINTURE EN MILIEU ACIDE A PARTIR du 6-Amino- 2,3,8,8a-tetrahydro-1H-3a-aza-cyclopenta[a]inden-1-ol, dichlorhydrate (10) Les compositions tinctoriales suivantes ont été préparées :
Exemples 4 5 6 6-Amino-2,3,8,8a-tetrahydro-1 H- 10-3 mole 10-3 mole 10-'mole 3a-aza-cyclopenta[a]inden-1-ol, dichlorhydrate (10) (base) 2- (2,4-Diamino-phénoxy)- 10-3 mole éthanol, dichlorhydrate (coupleur) 3-Amino-2-chloro-6-méthyl- 10-3 mole phénol, chlorhydrate (coupleur) 2-Amino-pyridin-3-ol (coupleur) 10-3 mole Support de teinture (2) (*) (*) (*) Eau déminéralisée q. s.p. 100 g 100 g 100 g (*) Support de teinture (2) pH 7 Alcool éthylique à 96 20,8 g Métabisulfite de sodium en solution 0,23 g M.A aqueuse à 35% Sel pentasodique de l'acide diéthylène- 0,48 g M.A triamine-pentaacétique en solution aqueuse à 40% Alkyl en CS-C1O polyglucoside en solution 3,6 g M.A aqueuse à 60% Alcool benzylique 2,0 g Polyéthylène glycol à 8 motifs d'oxyde 3,0 g d'éthylène
Na2HP04 0,28 g KH2PO4 0,46 g Au moment de l'emploi, chaque composition est mélangée avec un poids égal d'eau oxygénée à 20 volumes (6% en poids). On obtient un pH final de 7.
Exemples 4 5 6 Nuance Brun Violet Gris observée rouge orangé EXEMPLES 7 ET 8 DE TEINTURE EN MILIEU ALCALIN à partir du 8,8a-Dihydro- 3H-3a-aza-cyclopenta[a]inden-6-ylamine, dichlorhydrate (4) Les compositions tinctoriales suivantes ont été préparées :
Exemples 7 8 8,8a-Dihydro-3H-3a-azacyclopenta[a]inden-6-ylamine, 10-3 mole 10-3 mole dichlorhydrate (4) (base) 2- (2,4-Diamino-phénoxy)- éthanol, dichlorhydrate 10-3 mole (coupleur) 3-Amino-2-chloro-6-méthylphénol, chlorhydrate (coupleur)- 10-3 mole Support de teinture (1) (*) (*) Eau déminéralisée q. s.p. 100 g 100 g
(*) Support de teinture (1) pH 9,5 Alcool éthylique à 96 20,8 g Métabisulfite de sodium en solution 0,23 g M.A aqueuse à 35% Sel pentasodique de l'acide diéthylène- 0,48 g M.A triamine-pentaacétique en solution aqueuse à 40% Alkyl en C.-Cl.polyglucoside en solution 3,6 g M.A aqueuse à 60% Alcool benzylique 2,0 g Polyéthylène glycol à 8 motifs d'oxyde 3,0 g d'éthylène NH4CI 4,32 g Ammoniaque à 20% de NH3 2,94 g Au moment de l'emploi, chaque composition est mélangée avec un poids égal d'eau oxygénée à 20 volumes (6% en poids). On obtient un pH final de 9,5.
Exemples 7 8 Nuance Orangé Brun observée brun rouge EXEMPLES 9 ET 10 DE TEINTURE EN MILIEU ACIDE à partir du 8,8a-Dihydro-3H- 3a-aza-cyclopenta[a]inden-6-ylamine, dichlorhydrate (4) Les compositions tinctoriales suivantes ont été préparées :
(6) Les polyaminoamides solubles dans l'eau préparés en particulier par polycondensation d'un composé acide avec une polyamine ; ces polyaminoamides peuvent être réticulés par une épihalohydrine, un diépoxyde, un dianhydride, un dianhydride non saturé, un dérivé bis-insaturé, une bis-halohydrine, un bis-azétidinium, une bis-haloacyldiamine, un bis-halogénure d'alkyle ou encore par un oligomère résultant de la réaction d'un composé bifonctionnel réactif vis-à-vis d'une bis-halohydrine, d'un bisazétidinium, d'une bis-haloacyldiamine, d'un bis-halogénure d'alkyle, d'une épilhalohydrine, d'un diépoxyde ou d'un dérivé bis-insaturé ;l'agent réticulant étant utilisé dans des proportions allant de 0,025 à 0,35 mole par groupement amine du polyaminoamide ; ces polyaminoamides peuvent être alcoylés ou s'ils comportent une ou plusieurs fonctions amines tertiaires, quaternisées. De tels polymères sont notamment décrits dans les brevets français 2. 252.840 et 2. 368.508 .
Parmi ces dérivés, on peut citer plus particulièrement les polymères acide adipiqueldiméthylaminohydroxypropylldiéthylène triamine.
(8) Les polymères obtenus par réaction d'une polyalkylène polyamine comportant deux groupements amine primaire et au moins un groupement amine secondaire avec un acide dicarboxylique choisi parmi l'acide diglycolique et les acides dicarboxyliques aliphatiques saturés ayant de 3 à 8 atomes de carbone. Le rapport molaire entre le polyalkylène polylamine et l'acide dicarboxylique étant compris entre 0,8 : et 1,4 : 1; le polyaminoamide en résultant étant amené à réagir avec l'épichlorhydrine dans un rapport molaire d'épichlorhydrine par rapport au groupement amine secondaire du
formule (VII) dans laquelle : R10, R11, R12 et R13, identiques ou différents, représentent des radicaux aliphatiques, alicycliques, ou arylaliphatiques contenant de 1 à 20 atomes de carbone ou des radicaux hydroxyalkylaliphatiques inférieurs, ou bien R10, R11, R12 et R13, ensemble ou séparément, constituent avec les atomes d'azote auxquels ils sont rattachés des hétérocycles contenant éventuellement un second hétéroatome autre que l'azote ou bien R10, R11, R12 et R13 représentent un radical alkyle en C1-C6 linéaire ou ramifié substitué par un groupement nitrile, ester, acyle, amide ou -CO-O- R14-D ou-CO-NH- R14-D où R14 est un alkylène et D un groupement ammonium quaternaire ; A1 et B1 représentent des groupements polyméthyléniques contenant de 2 à 20 atomes de carbone pouvant être linéaires ou ramifiés, saturés ou insaturés, et pouvant contenir, liés à ou intercalés dans la chaîne principale, un ou plusieurs cycles aromatiques, ou un ou plusieurs atomes d'oxygène, de soufre ou des groupements sulfoxyde, sulfone, disulfure, amino, alkylamino, hydroxyle, ammonium quaternaire, uréido, amide ou ester, et X- désigne un anion dérivé d'un acide minéral ou organique; A1, R10 et R12 peuvent former avec les deux atomes d'azote auxquels ils sont rattachés un cycle pipérazinique ; en outre si A1 désigne un radical alkylène ou hydroxyalkylène linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, B1 peut également désigner un groupement - (CH2)n-CO-D-OC-(CH2)n- dans lequel n est compris entre 1 et 100 et de préférence entre 1 et 50, et D désigne : a) un reste de glycol de formule : -O-Z-O-, où Z désigne un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié ou un groupement répondant à l'une des formules suivantes : -(CH2-CH2-O)x-CH2-CH2- - [CH2-CH(CH3)-O]y-CH2-CH(CH3)- où x et y désignent un nombre entier de 1 à 4, représentant un degré de polymérisation défini et unique ou un nombre quelconque de 1 à 4 représentant un degré de polymérisation moyen ; b) un reste de diamine bis-secondaire tel qu'un dérivé de pipérazine ; c) un reste de diamine bis-primaire de formule : -NH-Y-NH-, où Y désigne un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié, ou bien le radical bivalent
Des polymères de ce type sont notamment décrits dans les brevets français 2.320.330, 2. 270.846, 2. 316.271, 2. 336.434 et 2. 413.907 et les brevets US 2. 273.780, 2.375.853, 2. 388.614, 2. 454.547, 3. 206.462, 2.261.002, 2. 271.378, 3. 874.870, 4. 001.432, 3.929.990, 3. 966.904, 4. 005.193, 4. 025.617, 4. 025.627, 4. 025.653, 4. 026.945 et 4. 027.020.
Cela correspond à une résine POS : # d'une part, hydroxylée et comprenant des motifs siloxyles T et éventuellement M et/ou D et/ou Q ou bien encore des motifs siloxyles Q et M et/ou D et/ou T; # d'autre part, portant au moins un motif aminé et salifié.
Les motifs siloxyles M, D, T, Q du POS (C) sont définis comme suit : - motif M = R3 SiO1/2 - motif D = R2 Si02/2 - motif T = RSi03/2 - motif Q = SiO4/2 Les radicaux R sont identiques ou différents et correspondent : o à un radical R1 tel que défini ci-dessus (comme par exemple un radical alkyle (e. g. méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle et n- hexyle), un hydroxyle, alcényle (e. g. vinyle, allyle) o ou bien encore un motif R2 aminosalifiable ou salifié, tel que défini ci-dessus.
A titre d'exemple de résine POS hydroxylée linéaire, utilisable comme promoteur (C), on peut citer le PolyMéthylSiloxane, dont les deux extrémités comportent un hydroxyle et dont chaque atome de silicium est porteur d' un motif aminosalifiable ou salifié.
Les résines plus particulièrement sélectionnées sont celles du type T(OH), DT(OH), DQ(OH), DT(OH), MQ(OH), MDT(OH) MDQ(OH) ou les mélanges de celles-ci. Dans ces résines, chaque groupement OH est porté par un atome de silicium appartenant à un motif D, T ou Q.