INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Au sens de l'invention, les groupements HALS peuvent être définis comme une chaîne hydrocarbonée cyclique (HALS) de formule : dans laquelle : # les radicaux R, identiques ou différents entre eux, sont choisis parmi les radicaux alkyles, linéaires ou ramifiés, ayant de 1 à 3 atomes de carbone, phényle et benzyle ; # R8 est choisi parmi un atome d'hydrogène, les radicaux alkyles linéaires ou ramifiés, ayant de 1 à 12 atomes de carbone, les radicaux allkylcarbonyles, où le reste alkyle est un reste linéaire ou ramifié ayant de 1 à 18 atomes de carbone, les radicaux phényle et benzyle et un radical 0 ; # t est un nombre choisi parmi 0 et 1 ; # de préférence les radicaux R7 sont des méthyles, le radical R8 est un nombre d'hydrogène ou un radical méthyle et t étant avantageusement un nombre égal à 1 .
Les motifs aminosalifiables ou salifiés sont avantageusement choisis de telle sorte qu'ils soient aptes à se lier avec le support textile sur lequel l'émulsion
est appliqué, de manière à procurer de l'adhérence, et ce sans mettre à mal l'hydrosolubilité souhaitable pour le promoteur (C).
Pour plus de détails sur ces promoteurs (C) de type résine silicone hydrosoluble, aminosalifiable ou salifiée et hydroxylée, et sur leur obtention, on se référera au brevet FR-B- 2 753 708 ou à la demande de brevet européen EP-A- 0 675 128.
A titre d'exemples précis de motifs aminosalifiables, on peut citer notamment : - aminopropyle : (H2N)(CH2)-3 - N-méthyl-3-aminopropyle : (H3CNH) (CH2)-3 - N-aminoéthyl-3-aminopropyle : (H2N) (CH2)2NH(CH2)-3 - C6H5CH2NH(CH2)2 (NH) (CH2)-3 - 3-uréidopropyle : (H2N CO NH)(CH2)-3 - 3-4,5-dihydroimidazole-1-yl-propyle : de manière optionnelle, le promoteur comportant des motifs aminosalifiables peut aussi porter des fonctions non aminées, telles que les suivantes : - 3-méthacryloxypropyl : (H2C = C)(CH3) (COO)(CH2)3- / "" - 3-glycidyloxypropyl : H2C -CH -CH20(CH273- - 3-mercaptopropyl : (HS) (CH2)-3 - 3-chloropropyle : (CI)(CH2)-3
- Vinyle : CHz = CH- ces motifs pouvant être incorporés par des techniques connues par l'homme de métier, notamment par co-hydrolyse/co-condensation d'un alcoxysilane aminé avec un alcoxysilane non aminé portant les motifs décrits ci-dessus.
L'une des caractéristiques essentielles du promoteur (C) sélectionné conformément à l'invention, est d'être salifié au travers des motifs aminés qui sont tels que décrits ci-dessus et qui comprennent au moins un =N +, X - , avec X représentant un contre-anion choisi parmi les carboxylates, les halogénures, de préférence un lactate, un acétate ou un chlorure.
Pour que le promoteur (C) soit salifié, il convient de faire en sorte que la phase continue aqueuse de la dispersion ait un pH tel que ce promoteur (C) (de préférence une résine POS hydroxylée) se maintienne sous forme ionisée. Le choix du pH s'effectue, de manière connue en soi, selon le pKa de l'acide qui correspond au contre-anion mis en oeuvre.
D'autre part, l'étude de l'effet de l'isoniazide (2 mM) sur les enzymes purifiées du système FES isolé de M. avium a montré que deux étapes du système sont sensibles à l'INH, la ss-cétoacyl
réductase (93% d'inhibition et K1 =353 M), qui est la plus sensible, et l'énoyl-réductase (26% d'inhibition et K,=5,5 mM) (Kikuchi et al., 1989).
Nous avons donc décidé de purifier la protéine MabA et d'étudier certaines de ses propriétés biochimiques, en adoptant une stratégie de surproduction de la protéine dans un système procaryote.
1. SURPRODUCTION DE MABA DANS ESCHERICHIA COLI Réaliser une étude enzymatique et produire des anticorps anti-MabA pour la localisation intracellulaire de MabA, imposait l'obtention de la protéine pure, sous forme soluble et en grande quantité. Pour surproduire MabA, nous avons utilisé un système d'expression et de purification dans Escherichia coli, qui est simple et très efficace pour la surexpression de gènes procaryotes.
La mise au point d'une procédure expérimentale de manière à atteindre une surproduction suffisante, tout en obtenant la protéine sous forme soluble, a nécessité l'optimisation à plusieurs niveaux du schéma de surexpression et de purification.
1. 1 Clonage du gène mabA de Mycobacterium tuberculosis H37Rv La détermination de la séquence complète du génome de Mycobacterium tuberculosis H37Rv (Cole et al., 1998) et le développement des techniques de biologie moléculaire permettant la manipulation d'ADN recombinant, ont facilité la production et l'étude de la protéine d'intérêt, MabA.
1. 1.1 Description du système d'expression de mabA dans Escherichia coli # Choix du vecteur d'expression pET (plasmid for Expression by T7 RNA polymerase) Dans le vecteur d'expression utilisé, pET-15b (Novagen), le gène cible est cloné sous le contrôle des signaux de transcription et de traduction du bactériophage T7. Le gène mabA (fabGl) de 741 paires de bases, codant pour la protéine MabA a été amplifié par réaction de polymérisation en chaîne (PCR) à partir du cosmide MTCY277 (Institut Pasteur), et cloné entre les sites de restriction NdeI et Xho du plasmide. Ce plasmide offre l'avantage de pouvoir obtenir en fusion NH2-terminale de la protéine recombinante, une séquence poly-histidine, clivable, permettant une purification rapide de la protéine par chromatographie d'affinité. La construction
comprend donc en amont du gène mabA, une séquence codant pour 6 histidines successives et le site de clivage par la thrombine.
# Choix de la souche hôte La souche hôte de E. coli choisie, BL21(ÀDE3) (Novagen), présente l'avantage d'avoir les 2 gènes ompT et Ion inactivés. Les gènes ompT [(Studier & Moffatt, 1986); (Studier et al., 1990) ] et Ion ((Phillips et al., 1984)) codent respectivement pour la protéase pariétale (responsable de la dégradation des protéines hétérologues) et la principale protéase cytoplasmique (responsable de la dégradation des protéines mal repliées ou instables). BL21(#DE3) est lysogène pour le bactériophage DE3 (dérivé de #), et porte de ce fait une copie chromosomique du gène de l'ARN polymérase T7 sous le contrôle du promoteur lacUVS, qui est inductible à l'IPTG (isopropyl-ssD-thiogalactopyranoside). L'addition d'IPTG à une culture du lysogène induit l'expression de l'ARN polymérase T7, qui à son tour va transcrire l'ADN cible sur le plasmide.
1.1.2 Transformation et sélection La transformation de la souche E. coli BL21(#DE3) compétente par le plasmide pET- 15b::mabA a été effectuée par choc thermique (Matériel et Méthodes). L'efficacité de transformation obtenue est de 5,9 103 CFU/ g d'ADN. On note la faible efficacité de transformation caractérisant les souches de coli B dont dérive BL21(#DE3).
La sélection des cellules ayant incorporé le plasmide est réalisée grâce à l'acquisition de la résistance à l'ampicilline. Dans nos expériences de sélection, nous avons préféré utiliser la carbenicilline, un /?-lactame stable, plutôt que l'ampicilline qui est connue pour être rapidement dégradée par les ss-lactamases sécrétées par les bactéries résistantes. , 1. 1.3 Vérification de la séquence du gène mabA cloné Afin de vérifier qu'aucune mutation n'a été introduite lors de l'étape d'amplification par PCR de mabA, la séquence du gène cloné a été analysée. Aucune mutation n'a été trouvée ; séquence clonée est identique à celle portée par le cosmide d'origine.
1. 2. Expression hétérologue et optimisation L'optimisation de l'expression d'un gène hétérologue nécessite une étude préalable à petite échelle pour déterminer le choix des conditions de culture et des paramètres de l'induction (DO, température, concentration de l'inducteur et temps d'induction). La mise au point de ces conditions nous a permis de définir la procédure à suivre pour obtenir une surproduction suffisante de la protéine qui soit visible en SDS-PAGE. Cependant, malgré nos efforts pour reproduire la surexpression à plus grande échelle, nous ne sommes pas arrivés à faire produire la protéine MabA par les bactéries induites. L'hypothèse la plus plausible était la perte du plasmide, en dépit du maintien des cultures en milieu contenant l'antibiotique. Face à ce problème, le test de stabilité de plasmide sur boîte (Matériel et Méthodes) nous offrait un moyen rapide et fiable de vérifier, dans les cultures avant induction, la présence du plasmide cible d'une part, et la capacité des bactéries transformées, en culture, à exprimer l'ADN hétérologue, d'autre part.
L'expression hétérologue de mabA dans E. coli s'est avérée particulièrement sensible aux conditions de culture qui affectent la stabilité du plasmide. Pour une expression optimale, deux conditions sont importantes à respecter: 4 Les colonies transformantes doivent être fraîches (provenant directement d'une transformation ou d'un étalement par stries à partir d'un stock liquide conservé à -70 C).
+ Le nombre de générations entre la transformation des bactéries par le plasmide et l'induction de l'expression doit être réduit au minimum (éviter les cultures intermédiaires).
2. PURIFICATION DE MABA 2. 1 Solubilité de la protéine surproduite et optimisation Pour établir la stratégie de purification, il est important de savoir si la protéine est produite sous forme soluble, ou localisée dans des corps d'inclusion (agrégats de protéines).
Les tests à petite échelle pour déterminer la solubilité dans les conditions d'induction optimales, ont révélé certains points intéressants et inattendus. Le premier est que les variations opérées sur les paramètres d'induction (température, DO ou durée d'induction), visant à
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La cire peut également présenter une dureté allant de 0,05 MPa à 15 MPa, et de préférence allant de 6 MPa à 15 MPa . La dureté est déterminée par la mesure de la force en compression mesurée à 20 C à l'aide du texturomètre vendu sous la dénomination TATX2i par la société RHEO, équipé d'un cylindre en inox d'un diamètre de 2 mm se déplaçant à la vitesse de mesure de 0,1 mm/s, et pénétrant dans la cire à une profondeur de pénétration de 0,3 mm.
On peut notamment utiliser les cires hydrocarbonées comme la cire d'abeilles, la cire de lanoline, et les cires d'insectes de Chine ; cire de riz, la cire de Carnauba, la cire de Candellila, la cire d'Ouricurry, la cire d'Alfa, la cire de fibres de liège, la cire de canne à sucre, la cire du Japon et la cire de sumac ; cire de montan, les cires microcristallines, les paraffines et l'ozokérite; les cires de polyéthylène, les cires obtenues par la synthèse de Fisher-Tropsch et les copolymères cireux ainsi que leurs esters.
Lorsque la cire ou le mélange de cires est présent, dans les compositions selon l'invention, sous la forme d'une dispersion aqueuse de particules, la taille des particules exprimée en diamètre effectif moyen en volume D [4,3] que défini ci-après, peut être avantageusement inférieure ou égale à 1 m et notamment inférieure ou égale à 0,75 m.
Cette linéarité peut s'avérer insuffisante pour les jonctions interférometriques dans la mesure où les valeurs de puissance peuvent dépasser la limite qui assure la loi de variation quadratique. Dans ce cas on utilise une loi polynomial [8] qui associe une valeur de tension (v) à une valeur de puissance (P) correspondante : TTt \ / &7 P( )- )nv où bn sont les coefficients du polynôme. A fin de déterminer les valeurs de bn, on utilise un atténuateur programmable relié entre l'accès de référence du réflectomètre et un générateur. A partir des valeurs de tension mesurées à la sortie du détecteur obtenues pour différents niveaux d'atténuation, un système linéaire d'équations donné par l'expression ci-dessous est résolu, permettant déterminer les coefficients bn du polynôme correcteur.
N Y&(v.n -vn,,,,)=Iog(v.,i)-log(v.)-logL pour m variant de 1 à Np n=1 où N est le degré du polynome correcteur, vm sont des valeurs de tension mesurées à la sortie du détecteur, Np+1 est le nombre de valeurs de tension mesurés et L est le pas d'atténuation entre les mesures qui doit être forcement constant.
Les circuits échantillonneurs-bloqueurs 19,20, 21 ont la fonction de maintenir les valeurs de tension pendant la période d'échantillonnage des convertisseurs analogiques numériques 22,23, 24. Ils présentent une bande passante minimale égale à la différence de fréquence entre le signal de référence et le signal synthétisé. A l'inverse des circuits SPLL actuel, il n'est pas nécessaire que la fréquence d'échantillonnage des circuits 19,20 et 21 soit égale à la fréquence du signal de référence - puisque l'échantillonnage permet simplement de disposer des puissances pour calculer la différence de phase.
Les convertisseurs analogique-numériques 22,23 et 24 transforment les signaux de tension en donnés numériques. Ils sont choisis pour suivre la fréquence d'échantillonnage avec une résolution suffisamment haute pour permettre la détection précise de l'erreur de phase.
Le circuit de traitement numérique 13 a pour fonction, comme expliqué plus haut, de calculer l'erreur de phase et de filtrer le signal. Ces deux fonctions étant réalisées numériquement, il est avantageux d'utiliser un circuit unique. La première
fonction consiste à déterminer la valeur de l'erreur de phase entre les signaux de référence et de sortie de l'oscillateur contrôlé par tension à partir des valeurs à la sortie des convertisseurs analogique-numérique. Cela est fait en quelques étapes: D'abord les valeurs de puissance sont déterminées à partir des valeurs de tension ; l'on utilise une procédure de linéarisation, on peut aussi prendre en compte les constantes de linéarisation. Ensuite les parties réelle et imaginaire du vecteur qui représente le rapport complexe des signaux appliqués aux accès d'entrée 3,4 sont déterminées à partie des valeurs de puissance et des constantes de calibrage de la jonction. Finalement l'argument du vecteur est calculé, ce qui donne la différence de phase entre les signaux d'entrée du réflectomètre 15. On pourrait donc considérer que le détecteur de phase comprend un circuit interférométrique, référencé 15 sur la figure et un circuit de calcul de la différence de phase à partir des puissances aux accès de sortie du circuit interférométrique; sur la figure, ce circuit de calcul comprendrait les chaînes 16-24 et le circuit 26.
Le circuit de traitement numérique 13 réalise aussi la fonction du filtre correcteur de la boucle, comme symbolisé par la référence 27 sur la figure. Le filtre est calculé suivant les procédés classiques connus pour les boucles à verrouillage de phase.
Le circuit 13 peut-être un microprocesseur, un processeur numérique de signaux, un circuit numérique particulier en logique discrète, un circuit numérique particulier en logique intégré ou un circuit numérique particulier en logique configurable. Quand ces circuits sont programmables par logiciel, qui est le cas des deux premiers, le système peut se reconfigurer facilement sans augmentation de la complexité. Néanmoins le mode d'exécution en série d'un logiciel implique des performances inférieures par rapport aux circuits numériques, car dans ces derniers, les calculs peuvent être effectués de façon parallèle.
Le convertisseur numérique-analogique 28 transforme en tension le mot binaire proportionnel à la différence de phase filtrée des signaux appliqués aux accès d'entrée du circuit interférométrique 15. Cette valeur de tension représente le signal de commande de l'oscillateur commandé en tension 25. Il est choisi pour que sa plage dynamique corresponde à la plage d'accrochage de l'oscillateur. Sa résolution doit être aussi compatible avec la résolution souhaitée de phase et fréquence.
Le dispositif de la figure 1 fonctionne, dans le principe, comme une boucle à verrouillage de phase classique et fournit donc en sortie de l'oscillateur un signal à une fréquence égale à celle du signal de référence. Par rapport aux solutions de l'état de la technique, l'utilisation d'un circuit interférométrique pour la détection de phase a l'avantage de fournir un signal linéairement proportionnel à l'erreur de phase dans une plage de 2# et de reporter la complexité des circuits analogiques aux circuits
numériques. Dans le mode de réalisation de la figure 1, le dispositif présente en outre l'avantage d'être facilement reconfigurable.
A un dispositif tel qui celui de l'invention, il peut être nécessaire d'ajouter une boucle de verrouillage de fréquence pour garantir l'accrochage en fréquence selon les signaux de référence. Ces signaux peuvent provenir d'une source commune ou de deux sources indépendantes.
Un circuit moniteur d'accrochage en fréquence peut être additionné au dispositif, fournissant ainsi, une valeur de mesure de l'accrochage de la boucle qui servira au choix des paramètres du filtre correcteur. Ce circuit peut être aussi utile pour un réglage approximatif de la fréquence (pré-syntonie) lorsqu'il n'est pas verrouillé en fréquence. Ce réglage approximatif de pré-syntonisation est faite en balayant le signal à l'entrée du VCO jusqu'a ce que la boucle se trouve dans sa plage de capture en fréquence.
Un dispositif comme celui proposé peut résoudre les problèmes de mauvais accrochage en fréquence, optimiser la bande passante des boucles et permettre de choisir le meilleur compromis entre bruit de phase et temps de capture en reconfigurant dynamiquement les paramètres du filtre correcteur.
Un tel dispositif peut être appliqué à la démodulation cohérente et à la synchronisation des circuits de communication sans fils.
Le schéma électrique de la Figure 2 représente une réalisation du dispositif de l' invention.
applications agricoles, industrielles , génie ou travaux publics :intégré à un contenant plus volumineux et plus solide ,muni d'une sangle cousue fcnrant cUv p-ncciQ Ho levsce ?r?c+66 '- cpc modes de liaison résultants d'aménagements du sac : ,-.~ 1-.i f-,. -.4-,,.
'-U.c.:#,>Ct 1 .,ande t -LG -ci.ÇUll G U-L-t= C'=:J11LU-L :;:;-..L\....J.a....L.- ..La. L:a..llGe,d. -La. ~a. G'll 1.... . p 'Jlm. ~ permanents cousus ou rivés:côté extérieur des sangles, à proximité de l'ouverture du sac ouver'-ure J '~L .-- pontets extérieurs obtenus par une discontinuité de la liaison sac /sangle puis on verrouille la bande; 9-10.a.2 :=>la bande est initialement verrouillée puis on enveloppe le contenant, possédant des cordelettes ou lanières, fixées aux sangles ou au sac au niveau des pontets ,dont les extrémités .-- sont nouables pour emprisonner la bande .-- sont fermables par des systèmes de fermeture plus évolués pour enserrer la bande ( : double boucle autoagrippant, boucle passante,boucle perforante , crochets sur liens légèrement élastiques ou non etc...) 9-10.a.3 :=>la bande est d'autant plus solidaire du contenant lorsque les points d'ancrage sont plus nombreux sur la circonférence du sac pour cela : .-- on place par couture .rivetage ou ±h'Y'""""Ol l "r<2 des renforts ou u~....LLvltJoliQlJe , des L 11.1- .L L... munis de deux lumières formant passant
-les renforts possèdent Une lanière ou cordelette avant des extrémités , munies ou non de fermetures évoluées ,réunissables pour enlacer la bande 9-10.b.1 :=> la bande introduite à l'intérieur du contenant et le maintenant ouvert par Á"'.-±-±6 7,,e - "~,l~,-'A dars au élasticité , se met en place dans au moins un pontet, présent côté interne ; puis elle est solidarisée #\ - o o civ-à -*~ r\i "* ~?i r* o '"! r y 'o' sac arès oace ,cu feretue l~4 '~i l~iw . '-i #-A. "~## mode plus évolué, d'une série de lanières ou cordelettes intérieures ; 9-10.c.1 :=> la bande peut s'initroduire alternativement par devant et par --1........,.....,,,-. -".-..............1-.--, -,.-...., -. r 1- r T""; ,, l.......t 1;:::: .1.. L ..L e J.. 1;;::: L.Ll e \ el U........110...11 d.. -L.L 10 .J.....L e corps du contenant :si ce dernier est muni de rentes oblongues disposées sur la circonférence supérieure du sac ; circonférence supérieure ou sac en effet beaucoup de sacs possèdent déjà des orifices en partie supérieure permettant la mise en place 'un lien de fermeture ; la forme et la taille est adaptée de façon à concilier les fonctions de. fermeture ultime et de maintient du sac et d'enlacement après introduction de la bande; 9-10. d :=> la bande possède des rivets en relief ,ces derniers peuvent s'introduire directement ou après rabat dans les trous renforcés ou munis d'oeillets, placés généralement en séries, destinés à la fermeture ultime du sac, dans sa continuité ou par des pans de matière rabattables
o 10 e :=> ia bande , renforcée Par construction dispose de deux nervures longitudinales autorisant l'emploi d'un lien légèrement élastique pour mieux maintenir le sac et empêcher son glissement après boudinage et enchevêtrement ; 9-10. f :=> la bande obtient la meilleure liaison avec un contenant muni d'un ensemble de. doubles lumières permanentes ,ou sécables le Long d'une ligne verticale .'L.) 't- .~. C G1~1~ elles sont placées du côté OlivrSDL C. 1J'.= eL o. aULe ces SGnç6S r,ii .r.i r.l-i;- avec es iTn''.'-' des patelettes de renfort ,faisant ainsi fonction de pontets /accessibles indifféremment de l'intérieur ou de l'extérieur ; les lanières ou cordelettes , fixées que d'un côté , sont suffisamment longues pour se positionner en intérieur ou en extérieur en se glissant de part ou d'autre de la fente ; leurs extrémités pourvues ou non de fermetures plus évoluées maintiennent la bande ou contribuent à refermer le sac ; le sac peut posséder, pour cette mission ,un lien spécifique passant dans les lumières ou dans une série d'orifices supplémentaire : renforcés ou munis d'oeillets: dans le corps du sac ou disposés dans des rabats de fermeture - L'augmentation de l'épaisseur globale permet. la réalisation des pressions, ou des
boutonnières, mâles ou femelles légèrement u.roÜ.:..oil:J~ i..7, ma-j-eS OU j-emi.ej-es ...LC1:::CL .......l.LGl...lL.. saillantes pour réaliser des Formes verrouillantes, couplées à des OPV, déclenchables ou semipermanentes, réglant la dimension de l'objet en phase de précontrainte .
- On admet des gravures en relief.
Les dessins annexés -. 1 1 -. -, .-, 4- v- # 4- 1 f A -~, , ±-!,-.,-..