INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
De manière préférée, les pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazoles sont choisis parmi les 2-méthyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 2-éthyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 2-isopropyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4triazole, 2-phényl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 2,6-diméthyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-méthyl-2-éthyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-méthyl-2-isopropyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6méthyl-2-phényl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-carboxy-2-méthyl pyrazolo-[l,5-b] 1,2,4-triazole, 6-carboxy-2-éthyl pyrazolo-[l,5-b] 1,2,4-triazole, 6-carboxy-2-isopropyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-carboxy-2-phényl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-phényl-2-méthyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-phényl-2-éthyl pyrazolo-[l,5-b] 1,2,4-triazole, 6-phényl-2-isopropyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6phényl-2-phényl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-amino-2-méthyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6- amino-2-éthyl pyrazolo-[1,5-b]
1,2,4-triazole, 6- amino-2-isopropyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6- amino-2-phényl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-éthylthio-2-méthyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-éthylthio-2-éthyl pyrazolo-[l,5-b] 1,2,4-triazole, 6- éthylthio-2-isopropyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-éthylthio-2-phényl pyrazolo-[l,5-b] 1,2,4-triazole, 6-éthoxy-2- méthyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-éthoxy-2-éthyl pyrazolo-[1,5- b] 1,2,4-triazole, 6- éthoxy-2-isopropyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4- triazole, 6-éthoxy-2-phényl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-méthyl- 2-(2'-aminoéthyl) pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-carboxy-2-(2'- aminoéthyl) pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-phényl-2-(2'- aminoéthyl) pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 6-éthylthio-2-(2'- aminoéthyl) pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 2-(2'-aminoéthyl) pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 2-(2'-hydroxyéthyl) pyrazolo-[l,5-b] 1,2,4-triazole, 6-méthyl-2-(2'-hydroxyéthyl) pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4- triazole, 6-éthylthio-2-(2'-hydroxyéthyl) pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4- triazole, 6-carboxy-2-(2'-hydroxyéthyl) pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4- triazole, 6-phényl-2-(2'-hydroxyéthyl) pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 7-chloro-2,6-diméthyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole, 7-bromo-2,6- diméthyl pyrazolo-[1,5-b] 1,2,4-triazole et leurs sels d'addition avec un acide.
De manière préférée, les pyrazolo- [3,2-c] sont choisis parmi les 3-méthylpyrazolo- [3,2-c] 3- méthylsulfinyl-6-phényl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 3- éthylpyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 3-isopropylpyrazolo-[3,2-c] 1,2,4- triazole, 3-phénylpyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 3- (2'aminoéthyl)pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 3- (2'hydroxyéthyl)pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-méthyl-3-éthyl- pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 3,6-diméthylpyrazolo-[3,2-c] 1,2,4- triazole, 6-méthyl-3-isopropyl-pyrazolo- [3,2-c] 6- méthyl-3-phényl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-méthyl-3- (2'aminoéthyl)-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-méthyl-3- (2'hydroxyéthyl)-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-méthyl-3- méthylthio-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-phényl-3-méthyl- pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-phényl-3-éthyl-pyrazolo-[3,2-c]
1,2,4-triazole, 6-isopropyl-3-éthyl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6phényl-3-isopropyl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6- phényl-3phényl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-phényl-3-(2'aminoéthyl)pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-phényl-3-(2'hydroxyéthyl)-pyrazolo- [3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-phényl-3-méthylthio-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4triazole, 6-éthylthio-3-méthyl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6- éthylthio-3-éthyl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-éthylthio-3isopropyl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-éthylthio-3-phénylpyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-éthylthio-3-(2'-aminoéthyl)pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-éthylthio-3-(2'-hydroxyéthyl)pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-trifluorométhyl-3-méthylthiopyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-trifluorométhyl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole,/ 6-carboxy-3-méthyl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6carboxy-3-éthyl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-carboxy-3isopropyl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-carboxy-3-phénylpyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-carboxy-3-(2'aminoéthyl)-pyrazolo- [3,2-c] 1,2,4-triazole, 6-carboxy-3-(2'hydroxyéthyl)-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 7-chloro-3,6-diméthyl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole, 7-méthoxycarbonyl-3,6-diméthyl-pyrazolo-[3,2-c] 1,2,4-triazole et leurs sels d'addition avec un acide.
De manière préférée, les pyrazolotétrazoles sont choisis parmi les pyrazolo-[5,l-e] tétrazole, 6-méthyl pyrazolo-[5,1-e] tétrazole, 6phényl pyrazolo-[5,l-e] tétrazole, 6-carboxy pyrazolo-[5,l-e] tétrazole, 7-chloro-6-méthyl pyrazolo-[5,1-e] tétrazole et leurs sels d'addition avec un acide.
De manière préférée, les pyrazolo-[1,5-a] imidazoles sont choisis parmi les pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 2-méthyl pyrazolo-[1,5- a] imidazole, 2-phényl pyrazolo-[1,5-a] imidazole, pyrazolo-[1,5-a] benzimidazole, 6-méthyl pyrazolo-[l,5-a] imidazole, 2,6-diméthyl pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 6-méthyl-2-phényl-pyrazolo-[l,5-a] imidazole, 6-méthyl -pyrazolo-[1,5-a] benzimidazole, 6-phényl pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 6-phényl-2-méthyl pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 2,6-diphényl-pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 6-phényl - pyrazolo-[1,5-a] benzimidazole, 6-carboxy-pyrazolo-[1,5-a] imidazole,
6- carboxy-2-méthyl pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 6 carboxy-2-phényl- pyrazolo-[l,5-a] imidazole, 6- carboxy -pyrazolo-[l,5-a] benzimidazole, 6-éthoxy pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 6-éthoxy-2méthyl pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 6-éthoxy 2-phényl-pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 6- trifluorométhyl-pyrazolo-[1,5-a] benzimidazole, 6-amino pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 6-amino-2-méthyl pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 6-amino -2-phényl-pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 6-amino - pyrazolo-[1,5-a] benzimidazole, 6-éthylthio pyrazolo-[l,5-a] imidazole, 6-éthylthio-2-méthyl pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 6- éthylthio-2-phényl-pyrazolo-[1,5-a] imidazole, 7-chloro-6-méthyl- pyrazolo-[l,5-a] imidazole, 7-chloro-6-méthyl-pyrazolo-[l,5-a] benzimidazole et leurs sels d'addition avec un acide.
De manière préférée, les pyrazolo-[5,1-e] pyrazoles sont choisis parmi le 8-amino-4-méthyl-pyrazolo-[5,1-e] pyrazole, le 8- amino-5-chloro-4-méthyl-pyrazolo-[5,l-e] pyrazole et leurs sels d'addition avec un acide.
De manière préférée, les pyrazolo-[5,1-e] 1,2,3-triazoles sont choisis parmi les 5-méthylpyrazolo-[5,1-e] 1,2,3-triazole, 5-méthyl-6- chloro-pyrazolo-[5,1-e] 1,2,3-triazole, 5-phénylpyrazolo-[5,1-e] 1,2,3triazole et leurs sels d'addition avec un acide.
Ces pyrazolo azoles sont décrits dans la demande de brevet WO 97/35551, le passage de cette demande de l'art antérieur consacré aux pyrazolo azoles et à leur synthèse est incorporé dans la présente demande par référence.
A titre de pyrrolo azoles utilisés dans les compositions selon la présente demande, on peut citer les pyrrolo-[1,2-b] 1,2,4 triazoles, pyrrolo-[2,1-c] 1,2,4 triazoles, pyrrolo-[1,2-c] imidazoles, pyrrolo- [1,2-e] tétrazoles, pyrrolo-[l,2-a] pyrroles, pyrrolo-[1,2-a] imidazoles, pyrrolo-[1,2-c] 1,2,3 triazoles.
Parmi les colorants directs benzéniques utilisables selon l'invention, on peut citer de manière non limitative les composés suivants : - 1,4-diamino-2-nitrobenzène, - 1-amino-2 nitro-4-B- hydroxyéthylaminobenzène - l-amino-2 nitro-4-bis(|3-hydroxyéthyl)-aminobenzène - l,4-Bis(B -hydroxyéthylamino)-2-nitrobenzène - 1-f3-hydroxyéthylamino-2-nitro-4-bis-(5-hydroxyéthylamino)- benzène -1-13-hydroxyéthylamino-2-nitro-4-aminobenzène - l-P-hydroxyéthylamino-2-nitro-4-(éthyl)(B-hydroxyéthyl)aminobenzène - 1-amino-3-méthyl-4-(3-hydroxyéthylamino-6-nitrobenzène - l-amino-2-nitro-4--hydroxyéthylamino-5-chlorobenzène ' - 1,2-Diamino-4-nitrobenzène - 1 -amino-2- P-hydroxyéthylamino - 5 -nitrobenzène - 1,2 -Bis- (P-hy droxyéthyl amino)-4 -nitrobenzène - l-amino-2-tris-(hydroxyméthyl)-méthylamino-5-nitrobenzène - l-Hydroxy-2-amino-5-nitrobenzène - 1-Hydroxy-2-amino-4-nitrobenzène - l-Hydroxy-3-nitro-4-aminobenzène - 1-Hydroxy-2-amino-4,6-dinitrobenzène - 1-(3-hydroxyéthyloxy-2-P-hydroxyéthylamino-5-nitrobenzène - 1 -Méthoxy-2- -hydroxyéthylamino-5 -nitrobenzène - l-P-hydroxyéthyloxy-3-méthylamino-4-nitrobenzène - 1- ,y-dihydroxypropyloxy-3-méthylamino-4-nitrobenzène - l-p-hydroxyéthylamino-4-P,Y-dihydroxypropyloxy-2-nitrobenzène - l-P,Y-dihydroxypropylamino-4-trifluorométhyl-2-nitrobenzène - 1-(3-hydroxyéthylamino-4-trifluorométhyl-2-nitrobenzène - l-P-hydroxyéthylamino-3-méthyl-2-nitrobenzène - l-P-aminoéthylamino-5-méthoxy-2-nitrobenzène
- 1-Hydroxy-2-chloro-6-éthylamino-4-nitrobenzène - 1-Hydroxy-2-chloro-6-amino-4-nitrobenzène - 1-Hydroxy-6-bis-((3-hydroxyéthyl)-amino-3-nitrobenzène - 1-(3-hydroxyéthylamino-2-nitrobenzène - l-Hydroxy-4-P-hydroxyéthylamino-3-nitrobenzène.
On peut également citer parmi les colorants directs azoïques les colorants suivants, décrits dans le COLOUR INDEX INTERNATIONAL 3e édition : -Disperse Red 17 -Acid Yellow 9 -Acid Black 1 -Basic Red 22 -Basic Red 76 -Basic Yellow 57 -Basic Brown 16 -Acid Yellow 36 -Acid Orange 7 -Acid Red 33 -Acid Red 35 -Basic Brown 17 -Acid Yellow 23 -Acid Orange 24
-Disperse Black 9. On peut aussi citer le 1-(4'-aminodiphénylazo)-2-méthyl-4bis-(3- hydroxyéthyl) aminobenzène et l'acide 4-hydroxy-3-(2- méthoxyphénylazo)- 1 -naphtalène sulfonique.
Parmi les colorants directs quinoniques on peut citer les colorants suivants : -Disperse Red 15 -Solvent Violet 13 -Acid Violet 43 -Disperse Violet 1 -Disperse Violet 4 -Disperse Blue 1 -Disperse Violet 8 -Disperse Blue 3 -Disperse Red 11 -Acid Blue 62 -Disperse Blue 7 -Basic Blue 22 -Disperse Violet 15 -Basic Blue 99 ainsi que les composés suivants : -l-N-méthylmorpholiniumpropylamino-4-hydroxyanthraquinone -1-Aminopropylamino-4-méthylaminoanthraquinone -1-Aminopropylaminoanthraquinone -5-3-hydroxyéthyl-1,4-diaminoanthraquinone -2-Aminoéthylaminoanthraquinone -1,4-Bis-((3,y-dihydroxypropylamino)-anthraquinone.
-Acid blue 9 -Basic Violet 3 -Basic Violet 14 -Basic Blue 7 -Acid Violet 49 -Basic Blue 26 -Acid Blue 7 Parmi les colorants indoaminiques utilisables selon l'invention, on peut citer les composés suivants : - 2-(3-hydroxyéthlyamino-5-[bis-((3-4'-hydroxyéthyl)amino]anilino- 1,4-benzoquinone - 2-p-hydroxyéthylamino-5-(2'-méthoxy-4'-amino)anilino-1,4- benzoquinone - 3-N(2'-Chloro-4'-hydroxy)phényl-acétylamino-6-méthoxy-1,4- benzoquinone imine - 3-N(3'-Chloro-4'-méthylamino)phényl-uréido-6-méthyl-1,4- benzoquinone imine - 3-[4'-N-(Ethyl,carbamylméthyl)-amino]-phényl-uréido-6-méthyl-1,4- benzoquinone imine Parmi les colorants directs naturels utilisables selon l'invention, on peut citer la lawsone, la juglone, l'alizarine, la purpurine, l'acide carminique, l'acide kermésique, la purpurogalline, le protocatéchaldéhyde, l'indigo, l'isatine, la curcumine, la spinulosine, l'apigénidine. On peut également utiliser les extraits ou décoctions contenant ces colorants naturels et notamment les cataplasmes ou extraits à base de henné.
méthacrylate quaternisé par le chlorure de méthyle, l'homo ou la copolymérisation étant suivie d'une réticulation par un composé à insaturation oléfinique, en particulier le méthylène bis acrylamide. On peut plus particulièrement utiliser un copolymère réticulé acrylamide/chlorure de méthacryloyloxyéthyl triméthylammonium (20/80 en poids) sous forme de dispersion contenant 50 % en poids dudit copolymère dans de l'huile minérale. Cette dispersion est commercialisée sous le nom de " SALCARE# SC 92 " par la Société ALLIED COLLOIDS. On peut également utiliser un homopolymère réticulé du chlorure de méthacryloyloxyéthyl triméthylammonium contenant environ 50 % en poids de l'homopolymère dans de l'huile minérale ou dans un ester liquide. Ces dispersions sont commercialisées sous les noms de " SALCARE SC 95 " et " SALCARE# SC 96 " par la Société ALLIED COLLOIDS.
De l'autre côté de son pivot, le bras de commande 33 est relié au bras 36 de désactivation des moyens de blocage.
En actionnant le levier 40 dans le sens horaire, l'opérateur désactive les moyens de blocage en rétractant le bras 36 et active les moyens d'arrêt en évitant l'escamotage systématique de la butée 21.
Dans le sens trigonométrique, le bras de commande 33 entraîne, par l'intermédiaire du bras de désactivation 35, la butée 21 en position escamotée mais amène le trou de blocage 38 sur la trajectoire de rotation du loquet 37 pour activer le mode de distribution.
On constate aisément que l'enchaînement des phases ainsi présenté est effectué avantageusement et préférentiellement de façon mécanique assurant une grande fiabilité du dispositif de l'invention et réduisant le coût de fonctionnement et de conception.
REFERENCES 1. Palette la plus basse 2a, 2b. Palettes empilées 3. Bâti 4a, 4b. Glissières 5a, 5b. Guides transversaux 6. Motorisation 7a, 7b. Bras 8a, 8b. Surfaces d'appui des bras 9a, 9b. Support de bras 10. Organe pivotant 11. Roue dentée 12a, 12b. Crémaillères 13. Roue dentée de montée 14. Pignon de montée 15. Chaîne de montée 16. Roue dentée de descente 17. Pignon de descente 18. Chaîne de descente 19. Pignon de renvoi 20. Arbre moteur 21. Butée 22. Corps de guidage 23. Doigt 24. Trou oblong 25. Zone d'appui 26. Gâchette 27. Pivot 28. Ressort 29. Zone de pression 30. U 31. Protubérance 32. Roulement d'application
33. Bras de commande 34. Pan incliné 35. Bras de désactivation 36. Bras de désactivation 37. Loquet 38. Trou de blocage 39. Butée fin de course 40. Levier 41. Axe médian 42. Zone de levée
La présente invention concerne de nouvelles polyamines ou polyamides perfluoroalkylées, alcolipophobes, exemptes de groupement sulfone ou sulfonyle (S02), capables de réagir avec les amines, les polyamines, les polypeptides issus des protéïnes et les polysaccharides.
Bien qu'une chaîne perfluorée soit considérée comme inerte, il semble qu'associée à un groupement sulfonyle (S02), elle conduise à des molécules suspectées nocives d'un point de vue biologique. Pour cette raison la Société 3M a abandonné la production de fluorure de perfluoroalkyl sulfonyle (RFS02F) obtenu par méthode éléctrochimique ; en conséquence les seules matières premières disponibles sur le marché pour la fabrication des tensioactifs fluorés sont celles obtenues par télomérisation du tétrafluoroéthylène, à savoir RFI et RFC2H4I.
La substitution de l'atome d'iode porté par une chaîne fluorée au moyen d'un nucléophile n'est pas une réaction très courante et lorsqu'elle a lieu, elle ne conduit pas à de bons rendements en raison du caractère trop peu polarisé de la liaison carbone iode. La substitution de l'atome d'iode porté par l'atome de carbone situé en (3 d'une chaîne perfluorée au moyen d'un nucléophile est aussi réputée difficile. En effet, l'effet électroattracteur de la chaîne perfluorée provoque l'apparition d'une réaction secondaire d'élimination d'acide iodhydrique qui conduit à des taux d'alcène variant en fonction du nucléophile utilisé. À titre d'exemple l'utilisation d'amines avec RFC2H4I en quantité équimolaire conduit à des taux importants d'alcène (RFCH=CH2) et par conséquent à de mauvais rendements. Pour cette raison, certains fabricants de tensioactifs fluorés font intervenir dans le procédé une étape de sulfonation permettant de minimiser la réaction secondaire d'élimination ; cependant celle-ci est délicate et coûteuse à mettre en #uvre, de plus l'effet électroattracteur de la chaîne perfluorée étant perceptible comme nous venons de le voir, l'introduction d'un groupement sulfonyle (S02) peut être suspecté néfaste pour l'environnement.
Les mêmes auteurs ont déjà proposé des produits perfluoroalkylés alcolipophobes (EP 0636150). Ces produits ont donné de très bons résultats dans l'utilisation des mousses extinctrices pour feux de liquides polaires et d'hydrocarbures, mais certains d'entre eux
contiennent un ou plusieurs groupements sulfonyle (S02) qui semblent aujourd'hui indésirables.
Les brevets EP 0390905 et EP 0386187 des mêmes auteurs proposent respectivement des polyamides et des polyamines perfluoroalkylées réactives, pouvant réagir avec les protéïnes hydrolysées et les polysaccharides; ainsi leur application dans le domaine des mousses extinctrices donne d'excellents résultats. Il faut cependant remarquer que ces fluorotensides contiennent également un ou plusieurs groupements sulfonyle (S02).
Nous avons donc cherché à remédier à cet inconvénient, tout en gardant la qualité des produits et la mise en #uvre avantageuse de leur fabrication. En effet, le procédé une cuve (one-pot reaction) utilisé respecte l'environnement dans la mesure où il ne produit aucun déchet, sous-produit ou solvant à retraiter. Les sous-produits éventuellement produits sont transformés au cours du procédé et condensés au produit principal, ainsi tout excès de matière première est digéré , sans produire de déchet.
L'absence désirée de groupement SO2 dans la molécule des polyamines ou polyamides perfluoroalkylés selon l'invention nous a conduits à abandonner l'utilisation d'une perfluoroalkylsulfonamide de formule générale: RFSO2-NR-1-[(CH2)m- NR2-]nR3, pour l'utilisation d'une perfluoroalkylamine ou d'une perfluoroalkyl thiourée de formule générale: RF-A-NRl-((CH2)n.,- NR2-n R3 Avec : A = -CH2CHI-CH2-NH-CS- lorsque R2 et R3 = groupements alkyle mineur identiques, -CH=CH-CH2-NH-CS- lorsque R2 et R3 = groupements alkyle mineur identiques, -CH2CHI-CH2-, -CH=CH-CH2-, -CH2CHI-CH2-O-CH2-CH(OH)-CH2-, - CH=CH-CH20-CH2-CH(OH)-CH2-, -CH=CH-CH2 NR1-CH2-CH(OH)-CH2-, -CH=CHCH2 NH-CH2-CO2- ; RI = H ; R2 et R3 = groupements alkyle mineur identiques ou (H et/ou -CH2COOM )/Néant;
n = un nombre de 1 à 4 lorsque R2 et R3 = H, 1 lorsque R2 et R3 = groupements alkyle mineur identiques; m = 2 lorsque R2 et R3 = H, 2 ou 3 lorsque R2 et R3 = groupements alkyle mineur identiques.
Pour préparer les perfluoroalkylamines ou les perfluoroalkyl thiourées selon l'invention, nous avons d'abord cherché des diamines ou polyamines adéquates. Le brevet PCT-WO 00/43438 propose un aminoacide diaminé comme la lysine. Ce brevet décrit l'obtention d'un polycondensat de poids moléculaire élevé à partir de la lysine, et qui contient deux chaînes perfluoroalkyle ou plus. Par ailleurs le brevet EP-0955-327-172 préconise l'utilisation de polyamines de haut poids moléculaire comme matière première.
obtenu en utilisant PCR prep (Promega) puis on l'a digéré avec les enzymes de restriction Sse8387I et XbaI. On a ajouté le mélange réactionnel à une solution de phénol/chloroforme et on l'a mélangé pour terminer la réaction. Après avoir centrifugé le mélange réactionnel, on a recueilli la couche supérieure et on a recueilli les ADN par précipitation à l'éthanol et on les a séparés sur un gel d'agarose à 0,8 % pour recueillir un fragment d'ADN d'environ 0,1 kpb.
On a ligaturé le produit de digestion du vecteur pRStac et le fragment de région du gène dapA* préparé comme décrit ci-dessus en utilisant la trousse de ligature d'ADN DNA Ligation Kit Ver. 2 (Takara Shuzo). On a utilisé cette solution de réaction de ligature pour transformer Escherichia coli (cellules compétentes de E co/iJM109, Takara Shuzo). On a étalé les cellules sur du milieu gélosé LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on a incubé pendant une nuit à 37 C. On a inoculé chacune des colonies apparaissant sur le milieu gélose à du milieu liquide LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on les a cultivées à 37 C pendant 8 h sous agitation. On a extrait l'ADN plasmidique de chaque bouillon de culture par le procédé alcali-SDS et on a confirmé la structure de chaque plasmide par digestion avec des enzymes de restriction et détermination de la séquence nucléotidique pour obtenir le plasmide pRSdapA. Dans ce plasmide, le gène dapA* était positionné de telle manière que sa direction de transcription était la même que celle du promoteur tac.
(5) Construction d'un plasmide contenant les gènes lysE24et dapA*.
Pour évaluer l'effet de la combinaison des gènes lysE24 et dapA*, on a construit un plasmide consistant en le plasmide pRSIysE dans lequel le gène dapA* était inséré, selon le schéma montré sur la figure 2.
On a digéré le plasmide pRSIysE24 préparé en (3) ci-dessus avec l'enzyme de restriction SapI et on a rendu franches les extrémités du produit en utilisant la trousse DNA Blunting Kit (Takara Shuzo). De plus, on a digéré le plasmide pRSdapA préparé en (4) ci-dessus avec les enzymes de restriction EcoRI et SapI, et on a séparé un fragment d'environ 1 kpb contenant le promoteur tac et la région dapA* sur un gel d'agarose à 0,8 % et on l'a recueilli en utilisant EASY TRAP Ver. 2 (Takara Shuzo). On a muni ce fragment d'extrémités franches de la manière décrite ci-dessus
et on l'a ligaturé au produit de digestion de pRSIysE24 mentionné cidessus au moyen de la trousse de ligature d'ADN DNA Ligation Kit Ver. 2 (Takara Shuzo).
On a utilisé cette solution de réaction de ligature pour transformer Escherichia coli (cellules compétentes de E coli JM109, Takara Shuzo). On a étalé les cellules sur du milieu gélose LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on les a incubées pendant une nuit à 37 C.
On a inoculé chacune des colonies apparaissant sur le milieu gélose à du milieu liquide LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on les a cultivées à 37 C pendant 8 h sous agitation. On a extrait l'ADN plasmidique de chaque bouillon de culture par le procédé alcali-SDS et on a confirmé la structure de chaque plasmide par digestion avec des enzymes de restriction et détermination de la séquence nucléotidique pour obtenir le plasmide pRSIysEdapA. Dans ce plasmide, le gène lysE24 et le gène dapA* étaient positionnés de telle manière que leurs directions de transcription étaient identiques.
On a appelé AJ13832 la souche de E coli JM109 transformée avec le plasmide pRSIysEdapA, et on a déposé cette souche auprès du National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, International Patent Organism Depositary le 4 juin 2001 et elle s'est vue attribuer le numéro de dépôt FERM P-18371. Puis, le dépôt a été transformé en un dépôt international conformément au Traité de Budapest le 13 mai 2002, sous le numéro de dépôt FERM BP-8042.
(6) Construction du plasmide pBBR-lysEdapA qui peut coexister avec le vecteur pRS On a préparé le plasmide pBBR-lysEdapA à partir de pRSIysEdapA.
On sait que le plasmide pBBR1 peut se répliquer dans la souche de Methylophilus methylotrophus AS1 et qu'il peut coexister avec le vecteur pRS (Canadian Journal of Microbiology, 43.197 (1997) ; MoBiTec GmbH, Lotzestrasse 22a 37083 Gottingen Germany, peut être obtenu auprès de Funakoshi). Tout d'abord, on a digéré pBBR1 avec DraI et on a ajouté à une solution de phénol/chloroforme, et on a mélangé pour terminer la réaction. Après avoir centrifugé le mélange réactionnel, on a recueilli la couche supérieure, on a recueilli les ADN par précipitation à
l'éthanol et on les a séparés sur un gel d'agarose à 0,8 % pour recueillir un fragment d'ADN d'environ 5,3 kpb.
Puis, on a digéré avec EcoRI et BglII, le plasmide pRSIysEdapA construit en (5) ci-dessus et on l'a ajouté à une solution de phénol/chloroforme, et on a mélangé pour terminer la réaction. Après avoir centrifugé le mélange réactionnel, on a recueilli la couche supérieure, on a recueilli les ADN par précipitation à l'éthanol et on les a séparés sur un gel d'agarose à 0,8 % pour recueillir un fragment d'ADN d'environ 2,0 kpb contenant les gènes lysE24 et dapA.
On a ligaturé le produit de digestion du vecteur pBBR1 et le fragment d'ADN contenant les régions des gènes lysE24 et dapA préparé comme décrit ci-dessus en utilisant la trousse de ligature d'ADN DNA Ligation Kit Ver. 2 (Takara Shuzo). On a utilisé cette solution de réaction de ligature pour transformer Escherichia coli (cellules compétentes de E coli JM109, Takara Shuzo). On a étalé les cellules sur du milieu gélosé LB contenant 20 mg/L de kanamycine et on les a incubées pendant une nuit à 37 C. On a inoculé chacune des colonies apparaissant sur le milieu gélose à du milieu liquide LB contenant 20 mg/L de streptomycine et on les a cultivées à 37 C pendant 8 h sous agitation. On a extrait l'ADN plasmidique de chaque bouillon de culture par le procédé alcali-SDS, et on a confirmé la structure de chaque plasmide par digestion avec des enzymes de restriction et détermination de la séquence nucléotidique pour obtenir pBBR-lysEdapA.