INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La puce de la présente invention peut comprendre toutes les, sondes représentant toutes les combinaisons possibles compte tenu du nombre et du type de bases constituant la séquence variable selon la présente invention ou seulement une partie de ces sondes. Il suffit, selon la présente invention, que la matrice de sondes comprenne les sondes capables de s'hybrider spécifiquement aux différents fragments de la collection, ou même à une partie seulement desdits fragments, pourvu que l'empreinte génétique formée à partir de la collection de fragments permette d'identifier l'organisme duquel a été extrait l'ADN ou un caractère génétique, ou marqueur, déterminé.
Cette réduction du nombre de sondes sur la puce permet de diminuer le prix de fabrication de la puce, pour un organisme donné, tout en gardant son efficacité pour identifier ledit organisme.
En effet, selon la présente invention, après fabrication d'une première empreinte génétique d'un organisme déterminé avec un enzyme de restriction déterminée, sur une puce selon la présente invention comportant toutes les combinaisons possibles de la partie variable des sondes, avantageusement, le nombre de sondes présentes sur la puce peut être
judicieusement réduit pour la fabrication d'autres puces destinées à fabriquer des empreintes du même organisme, à partir de la même enzyme de restriction déterminée, à celles nécessaires et suffisantes pour l'identification dudit l'organisme.
De la même manière, le nombre de sondes peut être réduit sur une puce de la présente invention pour l'identification d'une caractéristique génétique détectable, à celles nécessaires et suffisantes pour l'identification de ladite caractéristique. Il peut s'agir par exemple des caractéristiques génétiques permettant d'identifier le sexe, la race, la variété, l'espèce etc. d'un individu ou d'un produit dérivé issu de cet individu à partir de son ADN. Ces caractéristiques génétiques sont appelées aussi marqueurs. Par détectable, on entend détectable avec la puce de la présente invention, en rapport ou non à des caractéristiques directement détectables sur l'organisme visuellement, et/ou par une analyse biochimique etc.
La puce de la présente invention est donc universelle lorsqu'elle comprend toutes les combinaisons possibles de la partie variable de ses sondes car elle permet de former une empreinte génétique spécifique à partir de l'ADN de n'importe quel organisme.
La puce de la présente invention est spécifique d'un organisme lorsque le nombre de sondes pour la détection a été réduit pour ne garder que celles qui sont nécessaires et suffisantes pour identifier ledit organisme.
Bien entendu aussi, certaines combinaisons possibles peuvent être éliminées en raison de déviations par rapport aux conditions d'hybridation standard exposées ci-dessous sur la puce de la présente invention. C'est le cas par exemple pour les combinaisons trop riches en A/T ou en C/G. Ce problème est connu par l'homme du métier C'est la combinaison de la partie variable des sondes de la puce et de la matrice ordonnée des sondes qui va permettre de former une empreinte spécifique d'un organisme. En effet la partie variable permet une hybridation spécifique avec les différentes séquences internes des différents fragments de la collection, et du fait de la disposition en matrice ordonnée des différentes sonde une véritable empreinte génétique de l'organisme peut être révélée.
Par matrice ordonnée de sondes, on entend dans la présente une matrice constituée de sondes disposées de manière déterminée en regard de leur partie de séquence variable, et reproductible à l'identique afin de pouvoir reproduire la même matrice avec la même disposition déterminée des sondes en regard de leur partie variable. Par matrice, on entend toute disposition géométrique ou non des sondes sur le support pourvu que la matrice permette de distinguer les sondes hybridées des sondes non hybridées sur ce support lorsque la puce est utilisée pour fabriquer une empreinte génétique. Il peut s'agir, à titre d'exemple, d'une matrice à m colonnes et à p lignes, m et p étant des nombres entiers, d'une matrice formée d'une
disposition des sondes en escargot ou suivant des cercles concentriques, etc.
Le fait que la matrice de sondes soit ordonnée conformément à la présente invention permet de pouvoir confronter différentes empreintes génétiques, fabriquées avec la puce de la présente invention, à partir de différents extraits d'ADN, préparés avec une enzyme de restriction identique pour ces différents extraits, et de conclure objectivement à l'identité ou à la non-identité des empreintes. Le procédé de fabrication des empreintes de la présente invention est exposé ci-dessous.
Chaque fragment d'ADN de la collection'de fragments ayant sa sonde complémentaire sur la puce de la présente invention, la mise en présence de la collection de fragments avec la puce comportant sa matrice ordonnée de sonde, dans des conditions adéquates pour une hybridation, fournit donc une empreinte génétique spécifique dudit organisme.
Les inventeurs ont noté qu'une puce universelle selon la présente invention avec une matrice de 10000 sondes ou plots suffit pour garantir une identification individuelle fiable. Avec une telle puce, il est possible d'analyser selon la présente invention en une seule expérimentation plusieurs centaines de marqueurs polymorphes chez n'importe qu'elle espèce.
La présente invention fournit également un procédé de fabrication d'une empreinte génétique d'un organisme comprenant les étapes suivantes :
extraction de l'ADN bicaténaire dudit organisme, détermination de la concentration de l'ADN bicaténaire extrait et si nécessaire dilution de l'ADN extrait à une concentration de 1 à 20 ng/pl, digestion de l'ADN extrait avant ou après dilution au moyen d'au moins une enzyme de restriction ayant un site de restriction déterminé de manière à obtenir des fragments bicaténaires comprenant un reste de séquence dudit site de restriction, et, contiguë audit reste de séquence, une séquence interne propre à chaque fragment ; éventuellement ligation d'un oligonucléotide adaptateur bicaténaire à séquence déterminée aux extrémités des fragments bicaténaires obtenus par digestion dudit ADN pour obtenir des fragments bicaténaires adaptés, amplification des fragments bicaténaires, éventuellement liés à l'oligonucléotide adaptateur bicaténaire, par une réaction de polymérisation en chaîne au moyen d'une amorce complémentaire audit reste de séquence dudit site de restriction et éventuellement à l'oligonucléotide adaptateur bicaténaire, marquage des fragments bicaténaires, éventuellement liés à l'oligonucléotide adaptateur bicaténaire, pendant ou après leur amplification, au moyen d'un marqueur, dénaturation des fragments bicaténaires marqués, éventuellement liés à l'oligonucléotide adaptateur bicaténaire, de manière à obtenir une collection de fragments monocaténaires de l'ADN
Si en revanche, à l'issue du test 703, le nosd local considère qu'il a reçu toutes les informations nécessaires, il détermine (705) le numéro d'identification du ncnd cible, en fonction des informations reçues.
Le nond local vérifie ensuite (706) la validité du numéro déterminé au cours de l'étape référencée 705. En effet, le numéro de noad déterminé peut ne correspondre à aucun des numéros de nords du réseau connus du ncnd local et affectés par l'utilisateur au cours du procédé de la figure 6. Dans ce cas, si le numéro n'est pas valide, le ncnd local envoie une notification d'erreur 707, de façon à informer l'utilisateur d'un problème.
Si le numéro déterminé est considéré comme valide, le ncnd local est dans l'attente (708) de la réception du numéro d'identification du connecteur (physique, ainsi qu'illustré en relation avec la figure 7, ou logique ainsi qu'illustré en relation avec la figure 8) auquel est relié le terminal que l'utilisateur veut sélectionner.
Après réception de données complémentaires, le ncnd local vérifie (709) que ces données sont ou non complètes. Si le ncnd local est encore dans l'attente de données, il mémorise (710) les données déjà reçues dans la RAM 95, et repasse dans l'état référencé 708 d'attente de réception de données complémentaires. Sinon, le ncnd local détermine (711) le numéro du connecteur auquel est connecté le terminal à sélectionner, en fonction des données reçues.
Le nond local teste ensuite (712) la validité du numéro de connecteur qu'il a déterminé. En effet, le numéro de connecteur déterminé au cours de l'étape référencée 711 peut ne correspondre à aucun des numéros de connecteurs du réseau de l'invention. Dans ce cas, ou si le numéro n'est pas valide pour toute autre raison, le ncad local envoie (714) une notification d'erreur à l'utilisateur, de façon à lui signaler ce dysfonctionnement (par un signal sonore, un message d'erreur sur un écran,...).
Si en revanche le numéro de connecteur déterminé est valide, le terminal que l'utilisateur souhaite sélectionner est donc identifié de manière unique au sein du réseau, à partir du numéro du ncnd cible déterminé au cours de l'étape référencée 705 et du numéro de connecteur déterminé au cours de l'étape
référencée 711. Le nrnd local établit alors (713) un chemin de contrôle entre le terminal sélectionné (encore appelé terminal cible) et le nond local, de façon que tous les signaux infrarouges reçus par la suite puissent être routés, si nécessaire, au travers du réseau audiovisuel domestique de l'invention, jusqu'au terminal cible. L'établissement d'un tel chemin de contrôle peut consister par exemple en une information de routage, contenue dans l'en- tête des paquets de signaux audiovisuels, et qui est utilisée pour atteindre le terminal cible, ainsi que décrit par la suite en relation avec la figure 11.
La figure 10 décrit plus précisément la structure des paquets asynchrones, utilisés pour le transport des signaux infrarouges entre les équipements du réseau audiovisuel domestique de l'invention.
Une telle structure de paquet 801 est conforme à la norme"IEEE Std 1394- 1995, Standard for a High Performance Serial Bus". Elle permet notamment d'atteindre n'importe quel nond du réseau, même s'il est situé derrière un pont 1394.1.
Ainsi, dans le cadre de l'utilisation de signaux de télécommande ayant fait l'objet d'un apprentissage, lorsqu'un nrnd local émet, à destination d'un ncud cible (auquel est connecté un terminal sélectionné par un utilisateur), un paquet spécifique indiquant au nond cible qu'il doit émettre une commande infrarouge vers le terminal cible, le champ data-payload 802 comprend une donnée d'identification de la commande infrarouge correspondante.
On présente désormais, en relation avec la figure 11, les informations qui doivent être mémorisées dans le cadre de l'invention, pour permettre le routage d'un paquet au travers du réseau audiovisuel domestique.
Ces informations sont mémorisées, dans chacun des ncuds du réseau, sous la forme d'une table 901, regroupant des données d'adresse et de routage spécifiques à chacun des ncuds du réseau.
Ainsi, les identifiants uniques attribués par l'utilisateur à chacun des nords, au cours du processus de la figure 6, sont mémorisés dans le champ référencé 903, appelé"Id logique unique". Ces"Id logique unique"903 sont stockés, en liaison avec le champ référencé 904 qui sera décrit par la suite, dans la mémoire flash 86, de façon à perdurer au-delà de toute mise hors tension du réseau.
Après qu'un"Id. logique unique"903 a été attribué à un nrnd du réseau, cet identifiant doit être communiqué à tous les autres nords du réseau, en utilisant par exemple un mécanisme de diffusion de message, de façon que chacun des nords du réseau puisse mettre àjour sa table 901.
Les composés selon l'invention ont la capacité de permettre, lorsqu'ils sont administrés particulièrement de façon topique sur la peau ou les muqueuses, la prévention ou l'amélioration, notamment l'atténuation ou la disparition, des manifestations de sécheresse cutanée.
Dans le cadre de l'invention, les composés peptidiques peuvent être utilisés pour l'application sur la peau saine, soumise ou pouvant être soumise à l'influence d'agents tels que des agents climatiques et de ce fait susceptible de manifester des signes de sécheresse cutanée notamment transitoire.
Dans d'autres cas particuliers, les composés peptidiques de l'invention peuvent être appliqués sur la peau lorsqu'elle présente des signes cliniques de déficit de la barrière cutanée, par exemple liés à l'activité d'un agent pathologique.
Le tripeptide KPV correspond aux trois acides aminés C-terminaux de l'hormone stimulatrice des mélanocytes de type a (a-MSH), ou Mélanotropine.
L'a-MSH est un peptide naturel connu ayant 13 résidus d'acides aminés.
Ce peptide fut décrit initialement comme produit par la glande pituitaire, mais le cerveau en général, le sang, la peau et d'autres tissus sont capables de produire une activité a-MSH.
En particulier, il a été montré que les kératinocytes de l'épiderme sont une source d'a-MSH.
L'a-MSH (1-13) est connue pour ses activités antipyrétique, antiinflammatoire et propigmentante. Ce neuropeptide est connu pour inhiber l'inflammation induite par des cytokines ou d'autres médiateurs de l'inflammation, ainsi que par des produits à effet irritant.
Le signal antipyrétique de l'a-MSH, ainsi que son activité antiinflammatoire, réside dans sa séquence carboxy-terminale et peut être mimé par le tripeptide 11-13 carboxy-terminal (L) Lys (L) Pro (L) Val.
Ainsi, les brevets US 5028592 et US 5,157, 023 visent à protéger l'utilisation du tripeptide dans un procédé de traitement anti-inflammatoire et antipyrétique.
En cosmétologie, des propriétés anti-sensibilisantes et anti-inflammatoires du peptide KPV ont été décrites (demandes de brevets EP-A-1092427, et EP-A-0764444), ainsi que l'utilisation de dérivés de l'a-MSH pour stimuler la pousse des cheveux (brevet EP-A-759292).
Les inventeurs ont étudié l'expression de plusieurs gènes dans des kératinocytes et des fibroblastes, en réponse à un peptide de synthèse KPV. Les résultats, présentés à l'exemple 1, montrent une augmentation de la transcription des gènes codant pour deux enzymes clés impliquées dans la synthèse des lipides épidermiques et la constitution de la fonction barrière cutanée dans les kératinocytes, en réponse à ce peptide. Il s'agit de l'enzyme HMG-CoA réductase et de la Fatty Acid Synthase (FAS), impliquées dans la synthèse du cholestérol et des acides gras, respectivement.
Harris et a/. ont montré que le niveau d'ARN messagers pour ces deux enzymes augmentait de façon significative dans la peau après une rupture de la barrière cutanée par tape stripping ou par traitement à l'acétone.
De plus, ces auteurs ont montré qu'une restauration artificielle de la fonction barrière empêchait l'augmentation des niveaux d'ARNm de ces
enzymes, ce qui indique un lien spécifique entre certains besoins de la fonction barrière et l'augmentation du niveau de ces ARNm (Harris et al., J.
Invest. Dermatol. Décembre 1997, n 109 (6) : p. 783-7).
Cependant, la commutation de tels obturateurs n'est pas très rapide, ce qui est particulièrement gênant lorsqu'on utilise deux ou plus de deux sources lumineuses.
D'autres problèmes se posent dans ces appareils optiques, à savoir ceux de la régulation de l'intensité lumineuse des sources utilisées et de la surveillance ("monitoring") de l'état de fonctionnement de ces sources, tout particulièrement lorsqu'il s'agit de lasers, ainsi que les problèmes de sécurité occulaire inhérents à l'utilisation de lasers.
EXPOSÉ DE L'INVENTION La présente invention a pour but de résoudre les problèmes précédents.
Pour ce faire, l'invention utilise un ou une pluralité de modulateurs acousto-optiques, selon qu'une ou une pluralité de sources lumineuses sont utilisées.
En effet, lorsqu'un modulateur acousto-optique reçoit un faisceau lumineux, il est capable de fournir un faisceau diffracté d'ordre +1 (ou d'ordre-1), mais seulement lorsqu'il est activé. Ce modulateur acousto-optique peut donc servir d'obturateur vis-à-vis de l'appareil optique auquel est destiné le faisceau lumineux.
De plus, le faisceau d'ordre 0, qui est constamment fourni par le modulateur acousto-optique, peut être utilisé en tant que faisceau de référence pour la régulation de l'intensité lumineuse de la source qui émet le faisceau reçu par le modulateur et pour la surveillance de l'état de fonctionnement de
cette source, c'est à dire pour savoir si cette dernière est allumée ou éteinte ou si oui ou non l'appareil optique reçoit le faisceau diffracté d'ordre +1 (ou d'ordre-1).
En outre, le temps de commutation du modulateur acousto-optique est beaucoup plus court que celui d'un obturateur mécanique-il est de l'ordre de quelques microsecondes-ce qui est particulièrement intéressant lorsqu'on utilise deux sources lumineuses ou plus.
De façon précise, la présente invention a pour objet un procédé de prélèvement d'une partie d'au moins un faisceau de lumière fourni par une source de lumière, ce faisceau étant destiné à être utilisé dans un appareil optique, ce procédé étant caractérisé en ce que : on place au moins un modulateur acoustooptique sur le trajet du faisceau de lumière, ce modulateur fournissant ainsi un faisceau d'ordre 0, - on active ce modulateur acousto-optique pour qu'il fournisse aussi un faisceau d'ordre +1 (c'est-à-dire d'ordre +1 ou d'ordre-1), et on envoie ce faisceau diffracté d'ordre +1 dans l'appareil optique, ce dernier ne recevant donc pas ce faisceau diffracté d'ordre 1 lorsque le modulateur acousto-optique n'est pas activé, ce modulateur acousto-optique formant ainsi un obturateur de faisceau vis-à-vis de l'appareil optique.
Selon un mode de mise en oeuvre particulier du procédé objet de l'invention, on utilise le faisceau d'ordre 0 en tant que faisceau de référence pour surveiller l'état de fonctionnement de la source de
lumière ou pour corriger ce fonctionnement, en particulier pour corriger l'intensité du faisceau de lumière.
Selon un autre mode de mise en oeuvre particulier, l'appareil optique est destiné à effectuer des mesures et l'on utilise le faisceau d'ordre 0 en tant que faisceau de référence pour corriger ces mesures.
La source de lumière peut être un laser, le faisceau de lumière étant alors un faisceau laser.
La présente invention concerne aussi'un dispositif de prélèvement d'une partie d'au moins un faisceau de lumière founi par une source de lumière, ce faisceau étant destiné à être utilisé dans un appareil optique, ce dispositif étant caractérisé en ce qu'il comprend : - au moins un modulateur acousto-optique prévu pour recevoir ce faisceau de lumière, ce modulateur acousto-optique fournissant ainsi un faisceau d'ordre 0, et des moyens d'activation de ce modulateur acousto-optique pour qu'il fournisse aussi un faisceau diffracté d'ordre 1, l'appareil optique étant destiné à recevoir ce faisceau diffracté d'ordre +1 et ne recevant donc pas ce dernier lorsque le modulateur acousto-optique n'est pas activé, ce modulateur acousto-optique formant ainsi un obturateur de faisceau vis-à-vis de l'appareil optique.
Selon un mode de réalisation préféré du dispositif objet de l'invention, ce dispositif comprend en outre au moins un photodétecteur prévu pour recevoir
le faisceau d'ordre 0, ce dernier formant un faisceau de référence, et pour fournir un signal représentatif de ce faisceau de référence, ce signal étant utilisé pour surveiller l'état de fonctionnement de la source de lumière ou pour corriger ce fonctionnement, en particulier pour corriger l'intensité du faisceau de lumière, ou pour corriger des mesures susceptibles d'être effectuées au moyen de l'appareil optique.
Les boîtes localisées au-dessous de la séquence peptidique représentent les trois exons dérivés du gène isum2A retrouvés dans la lignée de maïs A188.
La boîte désignée RL35 domain correspond à la partie du polypeptide ISUM2A possédant une homologie avec des protéines du chloroplaste.
La figure 4 illustre la structure en exons et introns du gène isum2A, les boîtes représentant les exons du gène. La base A du codon ATG est le nucléotide en position 51 du premier exon et la base T du codon TGA d'arrêt de la traduction et le nucléotide en position 76 du troisième exon.
Les boîtes situées au-dessous de la structure du gène isum2A représentent les différents clones d'ADN génomique utilisés dans les exemples. Les boîtes situées au-dessus de la structure du gène isum2A représentent les différents clones d'ADNc utilisés dans les exemples.
La figure 5 illustre une carte du plasmide pRDP5.
La figure 6 illustre la carte du plasmide pTRE commercialisé par la Société CLONTECH LABORATORIES Inc. et dont la structure est accessible dans la base des données GENBANK sous le numéro d'accès U89931.
La figure 7 illustre la carte du plasmide pDM302 décrit par CAO et al. (1992).
La figure 8 illustre la carte du plasmide pTet-Off commercialisé par la Société CLONTECH (référence catalogue année 2000 : K1620-A).
La figure 9 illustre la carte du plasmide pRDP4.
La figure 10 illustre la carte du plasmide pTA7001 décrit par AOYAMA et al. (1997).
La figure 11 illustre la carte du plasmide pRDP2.
La figure 12 illustre la carte du plasmide pRDP3.
La figure 13 illustre le principe de fonctionnement du système d'expression Il résumé dans le tableau 3 et objet de l'exemple 2.
La figure 13A illustre l'expression constitutive du polypeptide ISUM2A sous l'effet de l'activation du promoteur contenant la séquence TRE par l'activateur tTA, qui est lui-même exprimé de manière constitutive.
La figure 13B illustre la répression de la synthèse du polypeptide ISUM2A lorsque l'activateur tTA est mis en contact avec la tétracycline, qui le désactive et l'empêche d'activer le promoteur contenant la séquence TRE.
La figure 14 illustre un schéma de fonctionnement d'un système d'expression 1 résumé dans le tableau 3 et objet de l'exemple 3.
(1990, J. Exp. Med., 171 : 115-127).
Pour prévenir ou traiter les allergies, surtout les allergies graves, les superimmunogènes composites de l'invention induisent simultanément : a) une réaction immunitaire cellulaire par l'activation de cellules T auxiliaires et une réaction immunitaire humorale, par l'induction d'anticorps spécifiques de la structure antigénique pathogène allergène constitutive de la particule allergénique. b) une réaction immunitaire humorale, par l'induction de la production d'anticorps neutralisants ou bloquants spécifiques d'une protéine circulante locale du stroma anormalement produite, principalement le facteur cytokinique IL4 synthétisé notamment par les lymphocytes T de type Th2. La surproduction d'IL4, qui est un co-stimulus de la production d'lgE par les lymphocytes B, est également immunotoxique en ce qu'elle induit des réponses immunitaires pathogènes, de type inflammatoire allergique.
L'invention a pour objet l'utilisation d'un superimmunogène composite comprenant deux polypeptides immunogènes distincts physiquement liés l'un à l'autre, les deux polypeptides consistant respectivement en : (a) un premier polypeptide immunogène induisant une réaction immunitaire cellulaire, ou une réaction immunitaire cellulaire et humorale, à l'encontre d'une structure antigénique pathogène cellulaire, microbienne ou articulaire inerte ou vivante ; (b) un second polypeptide immunogène induisant la production d'anticorps neutralisants ou bloquants à l'encontre d'une protéine circulante locale du stroma choisie parmi un facteur cytokinique ou un facteur de régulation cellulaire à propriétés immunotoxiques ou angiogéniques, ce facteur pouvant être soit produit par les cellules cancéreuses, les cellules
infectées par un virus ou les cellules stromales, y compris les lymphocytes T et les cellules présentant l'antigène (APC), soit induit par les structures articulaires pathogènes, notamment allergéniques.
Le superimmunogène composite utilisé selon l'invention est dit bifonctionnel car les deux polypeptides (a) et (b), qui sont les deux parties essentielles qui le constituent, permettent l'induction simultanée d'une réaction immunitaire dirigée contre deux cibles distinctes, respectivement la structure antigénique pathogène et la protéine circulante locale du stroma.
Toutefois, un superimmunogène composite bifonctionnel selon l'invention peut comprendre dans sa structure une pluralité de copies respectivement d'un polypeptide (a) et/ou d'un polypeptide (b).