INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Parmi les exemples variés de gènes rapporteurs, il y a le gène CAT (chloramphenicol acetyl transferase) (Alton et Vapnek, 1979), la luciferase, et d'autres systèmes de détection enzymatiques telles que la beta-galactosidase, la luciférase bactérienne, la phosphatase alcaline, etc. Le produit du gène rapporteur est détecté par une activité intrinsèque associée avec ce produit. par exemple, le gène rapporteur peut coder le produit d'un gène avec une activité détectable par la couleur, la fluorescence, ou la luminescence. Le niveau d'expression du gène rapporteur est alors comparé au niveau d'expression dans la même cellule en l'absence du composé testé. La moindre différence statistique ou d'un autre ordre indique que le composé a d'une manière ou d'une autre altéré l'activité de la ligase.
Conformément à la présente invention, il a été mis en évidence une synergie d'activité anti-inflammatoire du lactamide et du glycyrrhétinate de zinc et/ou du glycyrrhétinate de stéaryl et/ou de glycyrrhétinate d'ammonium. Cette synergie a été objectivée à la suite d'une évaluation sur la production de prostaglandine 6KFla par le kératynocyte humain.
Le kératinocyte est la cellule la plus représentée au niveau de l'épiderme.
En réponse à de nombreux facteurs extra-cellulaires présents dans son environnement, il libère divers médiateurs biologiquement actifs, notamment les prostaglandines et les leucotriènes qui jouent un rôle important dans l'initiation et la modulation des réactions inflammatoires cutanées et qui interviennent également dans la régulation de la réponse immune.
Le kératinocyte se révèle être un bon modèle d'étude en pharmacologie cutanée ; ce modèle cellulaire permet de déterminer, in vitro, les capacités de diverses molécules à moduler la production de ces médiateurs issus du métabolisme de l'acide arachidonique.
Dans cette étude, on s'est intéressé en particulier à une prostaglandine, la PG6KFla, métabolite stable de la prostacycline, qui est un des métabolites majeurs produits par le kératinocyte stimulé, et représentatif de la modulation de la production des métabolites de l'acide arachidonique issus de la voie de la cyclo-oxygénase.
Sur ce modèle, on a évalué l'activité du glycyrrhétinate de zinc en association avec le lactamide sur la production de PG6KFla induite chez le kératinocyte par un stimulant de la cascade de l'acide arachidonique, le ionophore calcique A23187.
On a réalisé ensuite la même étude en évaluant l'activité du stéaryl glycyrrhétinate en association avec le lactamide.
Le protocole mis en oeuvre est le suivant : La suspension de kératinocytes humains HaCaT dans le RPMI 10% SVF est distribuée dans les plaques 6 puits (lx106 cellules/2ml/puits) et incubée pendant 16 heures à 37 C dans une atmosphère à 5% C02. Les kératinocytes sont alors rincés avec du PBS pour éliminer les cellules non-adhérentes puis exposés aux produits à tester inclus dans du RPMI sans SVF (qui pourrait interférer dans le dosage).
Le lactamide MEA est directement solubilisé dans le RPMI sans SVF à une concentration de 10mg/ml.
Le glycyrrhétinate de zinc est préparé dans l'éthanol absolu à 100 mg/ml puis repris dans le RPMI sans SVF à 10 mg/ml.
Le stéaryl glycyrrhétinate est préparé dans le DMSO à 1000 g/ l puis repris dans le RPMI sans SVF à 10mg/ml.
Le glycyrrhétinate d'ammonium est préparé dans l'éthanol absolu à 100 mg/ml puis repris dans le RPMI sans SVF à 25 mg/ml.
Pour chaque lot, 3 puits sont réalisés. Les cellules sont incubées pendant 1 heure avec les produits à tester puis le ionophore calcique A23187, est ajouté pendant 5 heures à la concentration 5 M.
Les milieux de culture de chacun des puits sont ensuite récupérés, centrifugés à 3000 tr/mn et conservés à-80 C.
La production de prostaglandine 6KFla pour chacun des essais est mesurée par Kit Elisa EUROMEDEX.
Les lots suivants ont été réalisés : - Lot témoin - Lot témoin stimulé A23187 5 M - Lactamide MEA 5001lg/m1 + A23187 5uM - Glycyrrhétinate de zinc 10 l1g/ml + A23187 5 M - Lactamide MEA 500 g/ml/Glycyrrhétinate de zinc lOg/ml + A23187 5 M - Stéaryl glycyrrhétinate 50ug/ml + A23187 5 M - Lactamide MEA 500}. tg/ml/Stéaryl glycyrrhétinate 50}. tg/ml + A23187 5uM - Glycyrrhétinate d'ammonium 25 l1g/ml + A23187 5uM - Lactamide MEA 500 ug/ml/Glycyrrhétinate d'ammonium 25}. tg/ml + A23187 5uM.
Échantillon % de Souche Contrôle lysée récupération 841 880 E. aerogenes 100 802 925 261 82 Ps. aeruginosa 31 215 66 105 126 Staph. aureus 125 94 122 729 1129 P. mirabilis 139 906 1151 608 820 S. typhymurium 133 600 787 Serratia marcescens 1848 1826 102 1775 1860 1103 1512 C. amycolatum 156 1167 2035 72 79 K. pneumonia 99 82 73 4039 4873 P. fluorescens 125 3951 5105 3074 1848 Streptococcus bovis 64 2939 1978 10218 9888 Y. enterocolitica 99 10321 10526
Ces résultats sont illustrés sur la figure 6 en annexe.
La plupart des souches ne sont pas affectées par la solution de lyse : les pourcentages de récupération sont cohérents avec les prévisions prédéfinies, entre 95 et 115%, sauf pour Ps. aeruginosa et Bacillus cereus.
Exemple 2 : Effet de la formulation de la solution de lyse sur les bactéries ensemencées dans des plaquettes.
De manière à simuler une contamination, deux souches ont été adaptées à la croissance dans des concentrés plaquettaires.
Méthode - Les souches Bacillus cereus et Staph. aureus ont été ensemencées dans des plaquettes dans des tubes de 50 ml en utilisant une concentration de 105 cellules dans 20 ml de plaquettes.
Ces tubes de 50 ml sont conservés dans l'incubateur de plaquettes à 22 C durant plusieurs jours, - Un millilitre de plaquettes ensemencées est dilué avec 9 ml de la solution de lyse, - La lyse est effectuée durant 15 minutes à température ambiante, - 100 il de l'échantillon sont filtrés sur une membrane CB047, - Les bactéries sont marquées avec un substrat stéarique comme indiquée en annexe 1, - La membrane est balayée avec l'Analyseur.
Les résultats du dénombrement des bactéries après la lyse sont illustrés dans le tableau 7 ci-dessous.
Contrôle Lysés Bacillus cereus 16 14 24 27 bactéries/ml 2, OE+06 2, lE+06 Staph. aureus 1966 1885 2046 1901 bactéries/ml 2, OE+08 1,9E+08
Les bactéries ont été ensemencées à une concentration initiale de 5 103 cellules/ml et sont détectées plusieurs jours plus tard à des concentrations de l'ordre de 106 à 109 cellules/ml.
Il en résulte des ces expériences, que les bactéries qui se sont développées dans les plaquettes n'ont pas été affectées par la solution de lyse.
Exemple 3 : Effet de la formulation de la composition de lyse sur les globules rouges.
Méthode - Un millilitre de globules rouges est dilué dans 9 ml de solution de lyse ou 9 ml de PBS (contrôle).
- la lyse est effectuée durant 15 minutes à température ambiante - les échantillons lysés ou non son analysés à l'aide d'un compteur cellulaire.
La figure 8 montre les résultats obtenus sur la préparation de globules rouges lysée par rapport à une préparation de globules rouges non lysée.
A titre d'exemple non limitatif de polyholosides on peut mentionner les celluloses et dérivés de cellulose (carboxy méthyl cellulose), les carraghenannes ; parmi les polyholosides fortement dépolymérisés, on peut citer le dextran, l'amidon, la gomme xanthane et les galactomannanes tels que le guar ou la caroube, ces polysaccharides présentant de préférence un point de fusion supérieur à 100 C et une solubilité dans l'eau comprise entre 5 et 500g/l.
Parmi les acides aminés (AA), on peut mentionner les acides monoaminés monocarboxylés ou dicarboxylés, les acides diaminés monocarboxylés et leurs dérivés hydrosolubles.
De préférence les acides aminés (AA) possèdent une chaîne latérale avec des propriétés acido-basiques ; ils sont choisis notamment parmi l'arginine, la lysine, l'histidine, les acides aspartique, glutamique, hydroxyglutamique ; ils peuvent également se présenter sous la forme de dérivés, de préférence hydrosolubles ; il peut s'agir par exemple des sels des sodium, potassium ou ammonium, comme les glutamate, aspartate ou hydroxyglutamate de sodium.
En ce qui concerne les agents tensioactifs (TA) susceptibles de constituer la matrice (M), la description des phases isotrope fluide et cristal liquide rigide de type hexagonale ou cubique est donnée dans l'ouvrage de R.G. LAUGHLIN intitulé "The AQUEOUS PHASE BEHAVIOR OF SURFACTANTS" - ACADEMIC PRESS - 1994. Leur identification par diffusion de rayonnements (X et neutrons) est décrite dans l'ouvrage de V. LUZZATI intitulé "BIOLOGICAL MEMBRANES, PHYSICAL FACT AND FUNCTION" - ACADEMIC PRESS - 1968.
Plus particulièrement, la phase cristal liquide rigide est stable jusqu'à une température au moins égale à 55 C. La phase isotrope fluide peut être coulée, tandis que la phase cristal liquide rigide ne le peut pas.
Parmi les agents tensioactifs (TA), on peut mentionner les tensioactifs glycolipidiques ioniques, notamment les dérivés des acides uroniques (acides galacturonique, glucuronique, D-mannuronique, L-iduronique, L-guluronique ...), présentant une chaîne hydrocarbonée substituée ou non, saturée ou non saturée comportant de 6 à 24 atomes de carbone et préférentiellement de 8 à 16
atomes de carbone, ou leurs sels. Ce type de produits est décrit notamment dans la demande de brevet EP 532 370.
D'autres exemples d'agent tensioactif (TA) sont des tensio-actifs amphotères tels que les dérivés amphotères des alkyl polyamines comme l'amphionic XL, le Mirataine H2C-HA commercialisés par Rhône Poulenc ainsi que l'Ampholac 7T/X@ et l'Ampholac 7C/X@ commercialisés par Berol Nobel.
Parmi les silicates de métal alcalin ou alcalino-terreux (Sil), on peut citer notamment ceux présentant un rapport molaire Si02/M20 de 1,6 à 3,5 avec M représentant un atome de sodium ou de potassium.
Parmi les phosphates de métal alcalin ou alcalino-terreux (Phos), on peut citer notamment l'hexamétaphosphate de sodium.
L'additif préformulé selon l'invention comprend en outre à l'interface matrice (M) / polymère (P) au moins un agent tensioactif (S) non-ionique, anionique, cationique ou amphotère.
Parmi les agents tensioactifs non-ioniques, on peut citer notamment les dérivés polyoxyalkylénés comme - les alcools gras éthoxylés ou éthoxy-propoxylés - les triglycérides éthoxylés ou éthoxy-propoxylés - les acides gras éthoxylés ou éthoxy-propoxylés - les esters de sorbitan éthoxylés ou éthoxy-propoxylés - les amines grasses éthoxylées ou éthoxy-propoxylées - les di(phényl-1 éthyl) phénols éthoxylés ou éthoxy-propoxylés - les tri(phényl-1 éthyl) phénols éthoxylés ou éthoxy-propoxylés - les alkyls phénols éthoxylés ou éthoxy-propoxylés Le nombre de motifs oxyéthylène (OE) et/ou oxypropylène (OP) de ces tensio-actifs non ioniques varie habituellement de 2 à 100 selon la HLB (balance hydrophilie/lipophilie) souhaitée. Plus particulièrement, le nombre de motifs OE et/ou OP se situe entre 5 et 50.
Les triglycérides éthoxylés ou éthoxy-propoxylés peuvent être des triglycérides d'origine végétale ou animale (tels que le saindoux, le suif, l'huile
d'arachide, l'huile de beurre, l'huile de graine de coton, l'huile de lin, l'huile d'olive, l'huile de poisson, l'huile de palme, l'huile de pépin de raisin, l'huile de soja, l'huile de ricin, l'huile de colza, l'huile de coprah, l'huile de noix de coco et sont de préférence éthoxylés.
(ii) Tensioactif (s) non ionique (s) : Les agents tensioactifs non-ioniques sont, eux aussi, des composés bien connus en soi (voir notamment à cet égard"Handbook of Surfactants"par M. R. PORTER, éditions Blackie & Son (Glasgow and London), 1991, pp 116-178) et leur nature ne revet pas, dans le cadre de la présente invention, de caractère critique. Ainsi, ils peuvent être notamment choisis parmi (liste non limitative) les alcools, les alpha-diols, les alkylphénols polyéthoxylés, polypropoxylés, ayant une chaîne grasse comportant par exemple 8 à 18 atomes de carbone, le nombre de groupements oxyde d'éthylène ou oxyde de propylène pouvant aller notamment de 2 à 50. On peut également citer les copolymères d'oxyde d'éthylène et de propylène, les condensats d'oxyde d'éthylène et de propylène sur des alcools gras ; les amides gras polyéthoxylés ayant de préférence de 2 à 30 moles d'oxyde d'éthylène, les amides gras polyglycérolés comportant en moyenne 1 à 5 groupements glycérol et en particulier 1,5 à 4 ; les amines grasses polyéthoxylées ayant de préférence 2 à 30 moles d'oxyde d'éthylène ; les esters d'acides gras du sorbitan oxyéthylénés ayant de 2 à 30 moles d'oxyde d'éthylène ; les esters d'acides gras du sucrose, les esters d'acides gras du polyéthylèneglycol, les alkylpolyglycosides, les dérivés de N-alkyl glucamin, les oxydes d'amines tels que les oxydes d'alkyl (C10-C14) amines ou les oxydes de N-acylaminopropylmorpholine.
Parmi les dérivés d'amines, on peut citer les produits vendus sous la dénomination MIRANOL, tels que décrits dans les brevets US-2 528 378 et US-2 781 354 et classés
dans le dictionnaire CTFA, 3ème édition, 1982, sous les dénominations Amphocarboxyglycinates et Amphocarboxypropionates de structures respectives : R34 -CONHCH2CH2 -N (R35) (R36) (CH2COO-) dans laquelle : R34 désigne un radical alkyle d'un acide R34-COOH présent dans l'huile de coprah hydrolysée, un radical heptyl, nonyle ou undécyle, R35 désigne un groupement bêta-hydroxyéthyle et R36 un groupement carboxyméthyle ; et R34'-CONHCH2CH2-N (B) (C) dans laquelle : B représente-CHCHOX', C représente- (CH) -Y', avec z = 1 ou 2, X'désigne ! e groupement-CHCH-COOH ou un atome d'hydrogène Y'désigne-COOH ou le radical -CH2 - CH OH - S03H R34'désigne un radical alkyle d'un acide R37-COOH présent dans l'huile de coprah ou dans l'huile de lin hydrolysée, un radical alkyle, notamment en C7, C9, C11 ou C13, un radical alkyle en C17 et sa forme iso, un radical C17 insaturé.
trialkylbenzylammonium, de trialkylhydroxyalkyl-ammonium ou d'alkylpyridinium ; les dérivés d'imidazoline ; ou les oxydes d'amines à caractère cationique.
Polymères substantifs cationiques : Au sens de la présente invention, l'expression"polymère cationique"désigne tout polymère contenant des groupements cationiques et/ou des groupements ionisables en groupements cationiques.
Les polymères cationiques utilisables conformément à la présente invention peuvent être choisis parmi tous ceux déja connus en soi comme améliorant les propriétés cosmétiques des cheveux, à savoir notamment ceux. décrits dans la demande de brevet EP-A-337 354 et dans les brevets français FR-2 270 846,2 383 660,2 598 611, 2 470 596 et 2 519 863. Les polymères cationiques préférés sont choisis parmi ceux qui contiennent des motifs comportant des groupements amine primaire, secondaire, tertiaire et/ou quaternaire pouvant, soit faire partie de la chaîne principale polymère, soit être portés par un substituant latéral directement relié à celle-ci.
Ce sont des produits connus. Ils sont notamment décrits dans les brevets français n 2 505 348 ou 2 542 997. Parmi lesdits polymères, on peut citer : (1) Les homopolymères ou copolymères dérivés d'esters ou d'amides acryliques ou méthacryliques et comportant au moins un des motifs de formules (1), (II), (Ni) ou (IV) suivantes : dans lesquelles : R3, identiques ou différents, désignent un atome d'hydrogène ou un radical CH3 ;
3. 012 ETAPE DE PROGRAMME - VALIDATION D'HORAIRE DE VERROUILLAGE / DEVERROUILLAGE AUTOMATIQUE
Description Unité Plage Horaire automatique validé P121pude Nombre de chiffres d'argument - 4 PIM p 0 = carte mère, 1 = PIM Périphérique u 1 (carte mère), 1-4 (périphériques) Porte d 1-2 Validation/ Invalidation e 0 = invalidation 1 = validation Réponse p12 ee pude [niveau = gestionnaire] 3. 012.1 ETAPE DE PROGRAMME - VERIFICATION DE VALIDATION D'HORAIRE DE VERROUILLAGE / DEVERROUILLAGE AUTOMATIQUE
Description Unité Plage Horaire automatique validé P12 pud PIM p 0 = carte mère, 1 = PIM Périphérique u 1 (carte mère), 1-4 (périphériques) Réponse p12 ee pude Porte d 1-2 Validation/ Invalidation e 0 = invalidation 1 = validation [niveau = observation~seulement] 3. 014 ETAPE DE PROGRAMME - FIXATION DE L'ANNULATION HORAIRE AUTOMATIQUE POUR AUJOURD'HUI
Description Unité Plage Horaire automatique annulé P141pude pour aujourd'hui Nombre de chiffres d'argument - 4 PIM p 0 = carte mère, 1 = PIM Périphérique u 1 (carte mère), 1-4 (périphériques) Porte d 1-2 Annuler/ ne pas annuler e 0 = ne pas annuler 1 = annuler Réponse p14 ee pude [niveau = gestionnaire]
3. 014.1 ETAPE DE PROGRAMME - VERIFICATION D'ANNULATION D'HORAIRE AUTOMATIQUE POUR AUJOURD'HUI
Description Unité Plage Horaire automatique annulé P14 pud pour aujourd'hui z~~~~~~ Réponse p14 ee pude PIM p 0 = carte mère, 1 = PIM Périphérique u 1 (carte mère), 1-4 (périphériques) Porte d 1-2 e Annuler/ ne pas annuler 1 = annuler [niveau = observation~seulement] 3. 015 ETAPE DE PROGRAMME - VALIDATION DE BIPS D'ACCES ACCORDE
Description Unité Plage Bips validés P151T Nombre de chiffres d'argument = 1 Type de bips T 0= valider tous les bips 1 = valider les bips de temps de conversation, invalider les bips d'accès accordé 2 = valider les bips d'accès accordé, invalider les bips de temps de conversation 3 = invalider tous les bips Réponse p15 ee T [niveau = gestionnaire]
3. 015.1 ETAPE DE PROGRAMME - VERIFICATION DES BIPS D'ACCES ACCORDE
Description Unité Plage Bips validés ~~~~ P15 T
Réponse plsieelTI ~~~~~~~~~~~~
T 0= valider tous les bips 1 = valider les bips de temps de conversation, invalider les bips d'accès accordé 2 = valider les bips d'accès accordé, invalider les bips de temps de conversation 3 = invalider tous les bips [niveau = observation~seulement] 3. 016 ETAPE DE PROGRAMME - FIXATION DE LA LONGUEUR D'APPEL DE RESIDENT
Description Unité Plage Longueur d'appel pl6t[t] Nombre de chiffres d'argument = 3 Temps de conversation t 10-255 Réponse p16 ee t [niveau = vendeur] 3. 016.1 ETAPE DE PROGRAMME - VERIFICATION DE LONGUEUR D'APPEL DE RESIDENT
Description Unité Plage [niveau = observation~seulement]
3.017 ETAPE DE PROGRAMME - FIXATION DE TYPE DE NUMEROTATION
Description Unité Plage Appel utilisant la P171d numérotation multifréquence ou par impulsions
Nombre de chiffres d'argument = 1 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
On connaît en particulier des films radiographiques à haute résolution que l'on utilise en
contrôle non destructif. Mais ces films ne fournissent qu'une image analogique d'un objet.
On connaît de plus des détecteurs de rayonnements ionisants comprenant une lame métallique qui est faite en un matériau de section efficace ( cross section ) élevée vis-à-vis du rayonnement incident.
On utilise par exemple un métal de numéro atomique au moins égal à 73 pour la détection de photons X ou y et un métal de numéro atomique très faible, généralement inférieur à 14, pour la détection de neutrons, d'autres matériaux, tels que le gadolinium, étant également utilisables pour la détection des neutrons.
Cette lame métallique est plongée dans un mélange gazeux ionisable qui est traversé par des fils électriquement conducteurs, très espacés les uns des autres, pour constituer ainsi une chambre à fils.
Le principe d'un tel détecteur connu est donné ci-après.
Un photon X ou y de haute énergie crée par effet Compton ou par effet de création de paires un ou deux photo-électrons dans la lame du détecteur et les met en mouvement rapide (avec une énergie cinétique de l'ordre de celle du photon X ou y incident). Ce ou ces photo-électrons ionisent alors certaines molécules du gaz qui est contenu dans la chambre à fils.
Les électrons arrachés aux molécules de gaz sous l'effet de cette ionisation sont collectés à l'aide d'un champ électrique et rendus ainsi
détectables grâce à l'avalanche qui se produit dans une mince couche de gaz entourant les fils du détecteur.
Les inconvénients d'une chambre à fils, pour ce qui concerne l'amplification et la lecture, sont donnés ci-après : - On doit utiliser le détecteur en mode de comptage, ce qui limite le débit de dose acceptable par ce détecteur et oblige à utiliser une source continue de rayons X, comportant par exemple un accélérateur électrostatique qui est moins compact que les LINAC actuels, à ondes de haute fréquence, et nécessite donc une protection radiologique plus coûteuse : il est nécessaire d'utiliser plusieurs mètres cubes de béton pour cette protection.
- L'avalanche mentionné plus haut a lieu autour des fils très espacés de la chambre, ce qui dégrade la résolution spatiale du détecteur.
- Il faut tendre ces fils, ce qui engendre des tensions mécaniques très importantes et il serait rédhibitoire de tendre cent fois plus de fils.
- Ces fils sont susceptibles de se mettre à vibrer, ce qui nécessite l'utilisation d'un dispositif anti-vibratoire pour stabiliser le gain du détecteur.
De plus, avec un tel détecteur, la résolution spatiale selon une direction parallèle à un bord de la lame métallique, est fondamentalement limitée par le phénomène de parallaxe, dû à la propagation de photo-électrons primaires dans l'épaisseur de gaz située entre la lame et les fils, épaisseur qui permet la création d'un nombre suffisant d'ionisations dans le gaz afin de compter par avalanche
les particules détectées (par exemple des photons X ou des neutrons).
La résolution d'un tel détecteur est en outre limitée par la distance, de l'ordre de quelques centimètres, entre les fils qu'il comporte.
Les concentrations de XA retrodialysées ont été respectivement de 1 uM (cercles noirs), de 5 uM (carrés noirs) et de 20 uM (triangles noirs). L'application de XA se fait pendant une dialyse de 20 minutes. Les résultats sont exprimés en pourcentage de la libération moyenne de base pour la dopamine (8 fractions de 20 min avant la stimulation par le XA), Figure 20.
La plus faible concentration en XA (lut) ne modifie pas la libération de dopamine.
Par contre, la concentration de 5 uM (environ 1. 5 uM de XA dans le tissu cérébral selon les données du rendement in vitro) fait augmenter la libération extracellulaire de dopamine d'environ 250%. La dose de 20 uM (environ 6 uM dans le tissu) fait augmenter la dopamine à 400-450%.
Effets de l'application locale de 20 uM de XA dans le CPF sur les taux de dopamine, DOPAC et HVA.
Les résultats sont exprimés en pourcentage de dopamine libéré par rapport à la ligne de base (8 x 20 min de dialyse avant l'injection du XA), Figure 21. Les carrés noirs représentent la dopamine, les cercles noirs représentent le DOPAC et les carrés blancs représentent l'HVA. Dans ce cas, l'augmentation de dopamine est, comme précédement, de 400-450% du niveau basal après 20 minutes, mais les taux de DOPAC et d'HVA baissent légèrement au bout de 100 à 120 minutes.
. Effets de l'application locale de 20 pM de XA dans le CPF sur la libération extracellulaire de dopamine, en présence ou en absence de 20 uM de NCS-486.
Les résultats sont exprimés en pourcentage de la libération basale de dopamine (moyenne de 8 x 20 minutes fractions de dialysas avant le traitement avec XA (Figure 22). Application de 20 uM de XA pendant 20 minutes (cercles noirs), ou coinfusion de XA 20 uM + NCS 486 20 uM (carré blancs) ou application de 20 uM de NCS-486 seul (triangles blancs). On peut observer que le traitement avec NCS-486 seul ou NCS-486 + XA ne modifient pas la libération de dopamine, par contre XA seul augmente cette libération de 300% environ, 40 minutes environ après la stimulation.
6. ETUDES ELECTROPHYSIOLOGIQUES Enregistrements électrophysiologiques Les cellules de la lignée neuronale NCB-20 étaient enregistrées grâce à la technique du patch-clamp (Hamill et al., 1981) dans sa configuration dite cellule attachée. Les milieux d'enregistrements étaient conçus tel que seule l'activité des canaux cationiques aspécifiques et des canaux à chlorure se trouvant dans le fragment de membrane sous la pipette, pouvait être enregistrée de manière isolée.
Les courants spécifiques calciques, sodiques et potassiques étaient minimisés par substitution de la majorité des cations du milieu pipette, par un cation imperméant la N-methyl-D-glucamine (NMDG) ou blocage par du TEA (Tétra-Ethyl-Amonium). La substitution des cations perméants dans la pipette par la NMDG permettait aussi d'avoir les courants cationiques aspécifiques essentiellement dans le sens sortant la composante entrante étant minimisée. En outre, dans certaines expériences