INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
A, identiques ou différents, représentent un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 6 atomes de carbone, de préférence 2 ou 3 atomes de carbone ou un groupe hydroxyalkyl de 1 à 4 atomes de carbone ; R4, R5, R6, identiques ou différents, représentent un groupe alkyle ayant de 1 à 18 atomes de carbone ou un radical benzyle et de préférence un groupe alkyle ayant de 1 à 6 atomes de carbone ; R-) et R2, identiques ou différents, représentent hydrogène ou un groupe alkyle ayant de 1 à 6 atomes de carbone et de préférence méthyle ou éthyle ; X désigne un anion dérivé d'un acide minéral ou organique tel qu'un anion méthosulfate ou un halogénure tel que chlorure ou bromure.
Ainsi, parmi ces polymères de la famille (1), on peut citer : - les copolymères d'acrylamide et de diméthylaminoéthyl méthacrylate quaternisé au sulfate de diméthyle ou avec un hologénure de diméthyle, tel que celui vendu sous la dénomination HERCOFLOC par la société HERCULES, - les copolymères d'acrylamide et de chlorure de méthacryloyloxyéthyltriméthylammonium décrits par exemple dans la demande de brevet EP-A-080976 et vendus sous la dénomination BINA QUAT P 100 par la société CIBA GEIGY, - le copolymère d'acrylamide et de méthosulfate de méthacryloyloxyéthyltriméthyl- ammonium vendu sous la dénomination RETEN par la société HERCULES, - les copolymères vinylpyrrolidone/acrylate ou méthacrylate de dialkylaminoalkyle quaternisés ou non, tels que les produits vendus sous la dénomination"GAFQUAT" par la société ISP comme par exemple "GAFQUAT 734" ou "GAFQUAT 755" ou bien les produits dénommés"COPOLYMER 845,958 et 937". Ces polymères sont décrits en détail dans les brevets français 2.077. 143 et 2.393. 573, - les terpolymères méthacrylate de diméthyl amino éthyle/vinylcaprolactame/ vinylpyrrolidone tel que le produit vendu sous la dénomination GAFFIX VC 713 par la société ISP,
(6) Les polyaminoamides solubles dans l'eau préparés en particulier par polycondensation d'un composé acide avec une polyamine ; ces polyaminoamide peuvent être réticulés par une épihalohydrine, un diépoxyde, un dianhydride, un dianhydride non saturé, un dérivé bis-insaturé, une bis-halohydrine, un bis-azétidinium, une bis-haloacyldiamine, un bis-halogénure d'alkyle ou encore par un oligomère résultant de la réaction d'un composé bifonctionnel réactif vis-à-vis d'une bishalohydrine, d'un bis-azétidinium, d'une bis-haloacyldiamine, d'un bis-halogénure d'alkyle, d'une épilhalohydrine, d'un diépoxyde ou d'un dérivé bis-insaturé ; l'agent réticulant étant utilisé dans des proportions allant de 0,025 à 0,35 mole par groupement amine du polyaminoamide ; ces polyaminoamide peuvent être alcoylés ou s'ils comportent une ou plusieurs fonctions amines tertiaires, quaternisées. De tels polymères sont notamment décrits dans les brevets français 2. 252.840 et 2.368. 508.
Une fois rincées en PBS, les cellules ont été ensemencées, à raison de 2,4. 106 cellules/ml, dans une flasque avec 20 ml de milieu MEM a complet en présence d'IL3 porcin (2 ng/ml) et de SCF porcin (80 ng/ml).
Culture des cellules Les flasques sont placées à l'étuve à 37 C en présence de C02 (à 5%).
Les cellules sont changées de milieu toutes les semaines par ensemencement, à raison de 106 cellules/ml, dans du milieu MEM a complet en présence d'IL3 porcin (2 ng/ml) et de SCF porcin (80 ng/ml).
Des échantillons sont prélevés à intervalles réguliers pour effectuer une numération cellulaire. Après cytocentrifugation et coloration au bleu de toluidine, le pourcentage de mastocytes est obtenu par comptage au microscope.
Les résultats sont rapportés dans le tableau I ci-après.
Age de la Cellules de Mastocytes % Cellules de foie % Mastocytes Culture en jours moelle osseuse 106/ml 106/ml 5 0,7 0 3 0 12 0, 5 rares 0,6 70 19 0,9 5 0,4 80 26 0,4 30 0, 4 80 33 0,5 70 0, 3 80 40 0, 7 80 0, 3 80 47 0, 3 80 0,4 80 54 0, 6 90 0, 4 90 60 1, 3 100 0, 6 90 67 1, 100 1J 100 74 1 100 0,8 100 82 1,8 100 1, 1 100 89 1 100 0,8 100 90 1 100 0, 7 100 97--1, 3 100 104 ; - 0, 9 100
La cinétique des cultures, quelle que soit leur provenance tissulaire, révèle qu'après une période de 60 jours (moelle osseuse) et de 67 jours (foie foetal) la population cellulaire subit un accroissement sensible, notamment pour les cellules d'origine médullaire. Cet accroissement correspond au passage d'une culture mixte à une population homogène 100% de mastocytes.
Ces cellules demeurent capables de se multiplier après congélation/décongélation.
A ce jour, après 714 jours de culture les mastocytes sont viables et continuent de se multiplier.
Caractérisation des cellules Les mastocytes sont mis en évidence par coloration au bleu de toluidine et coloration de May Grünwald et Giemsa. L'héparine et l'histamine des granulations sont révélées par coloration au sulfate de berbérine et au bleu alcian-safranine.
Les mastocytes en culture apparaissent arrondis avec un rapport nucléo-cytoplasmique élevé. Le noyau est arrondi, le plus souvent central ou excentré non segmenté ; dans le cytoplasme les granulations sont nombreuses, de couleur violet foncé à rouge ; le nombre et la taille des granulations varient : elles sont petites et peu nombreuses dans les cellules considérées comme immatures ; elles sont nombreuses et volumineuses dans les cellules considérées comme matures.
Après coloration au sulfate de berbérine, on observe au microscope à fluorescence des granulations colorées dans le cytoplasme des mastocytes, correspondant aux granules contenant de l'héparine. La quantité d'héparine apparaît variable d'une cellule à l'autre ; cette variation peut être en relation avec le stade de maturation des cellules.
Après coloration au bleu alcian-safranine, les grains d'héparine sont colorés en rouge par la safranine et les grains d'histamine en bleu par le bleu alcian. On observe dans certaines cellules un fort marquage de l'héparine, comme dans le cas de la coloration par la berbérine.
La caractérisation morphologique a été complétée par une observation en microscopie électronique.
Les mastocytes de porc observés sont des cellules de grande taille (16 um). Ils ont un gros noyau clair, souvent excentré, à contour régulier, avec une chromatine légèrement marginée. Dans le noyau, on observe un à deux nucléoles volumineux en position centrale. Le cytoplasme est assez abondant, il contient des ribosomes, de nombreuses mitochondries volumineuses, et de nombreuses granulations.
polyaminoamide compris entre 0, 5 : 1 et 1, 8 : 1. De tels polymères sont notamment décrits dans les brevets américains 3.227. 615 et 2.961. 347.
Des polymères de ce type sont en particulier commercialisés sous la dénomination "Hercosett 57"par la société Hercules Inc. ou bien sous la dénomination de"PD 170" ou"Delsette 101"par la société Hercules dans le cas du copolymère d'acide adipique/époxypropyi/diéthylène-triamine.
(9) Les cyclopolymères d'alkyl diallyl amine ou de dialkyl diallyl ammonium tels que les homopolymères ou copolymères comportant comme constituant principal de la chaîne des motifs répondant aux formules (V) ou (VI) : formules dans lesquelles k et t sont égaux à 0 ou 1, la somme k + t étant égale à 1 ; Rg désigne un atome d'hydrogène ou un radical méthyle ; R7 et Rg, indépendamment l'un de l'autre, désignent un groupement alkyle ayant de 1 à 22 atomes de carbone, un groupement hydroxyalkyl dans lequel le groupement alkyle a de préférence 1 à 5 atomes de carbone, un groupement amidoalkyle inférieur (C1-C4), ou R7 et Rg peuvent désigner conjointement avec l'atome d'azote auquel ils sont rattachés, des groupement hétérocycliques, tels que pipéridinyle ou morpholinyl ; R7 et Rg indépendamment l'un de l'autre désignent de préférence un groupement alkyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone ; Y- est un anion tel que bromure, chlorure, acétate, borate, citrate, tartrate, bisulfate, bisulfite, sulfate, phosphate. Ces polymères sont notamment décrits dans le brevet français 2. 080. 759 et dans son certificat d'addition 2.190. 406.
*Parmi les polymères définis ci-dessus, on peut citer plus particulièrement l'homopolymère de chlorure de diméthyidiallylammonium vendu sous la dénomination "Merquat 100"par la société Calgon (et ses homologues de faible masse moléculaire moyenne en poids) et les copolymères de chlorure de diallyldiméthylammonium et d'acrylamide commercialisés sous la dénomination"MERQUAT 550".
(10) Le polymère de diammonium quaternaire contenant des motifs récurrents répondant à la formule : formule (VII) dans laquelle : Rlo, Rll, R12 et R13, identiques ou différents, représentent des radicaux aliphatiques, alicycliques, ou arylaliphatiques contenant de 1 à 20 atomes de carbone ou des radicaux hydroxyalkylaliphatiques inférieurs, ou bien R10, R Rl' R12 et R13, ensemble ou séparément, constituent avec les atomes d'azote auxquels ils sont rattachés des hétérocycles contenant éventuellement un second hétéroatome autre que l'azote ou bien R10, R11, R12 et R13 représentent un radical alkyle en C1-C6 linéaire ou ramifié substitué par un groupement nitrile, ester, acyle, amide ou-CO-0- R14-D ou -CO-NH- R14-D où R14 est un alkylène et D un groupement ammonium quaternaire ; A 1 et B 1 représentent des groupements polyméthyléniques contenant de 2 à 20 atomes de carbone pouvant être linéaires ou ramifiés, saturés ou insaturés, et pouvant contenir, liés à ou intercalés dans la chaîne principale, un ou plusieurs cycles aromatiques, ou un ou plusieurs atomes d'oxygène, de soufre ou des groupements sulfoxyde, sulfone, disulfure, amino, alkylamino, hydroxyle, ammonium quaternaire, uréido, amide ou ester, et X- désigne un anion dérivé d'un acide minéral ou organique ; Al, Rlo et R12 peuvent former avec les deux atomes d'azote auxquels ils sont rattachés un cycle pipérazinique ; en outre si A 1 désigne un radical alkylène ou hydroxyalkylène linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, 81 peut également désigner un groupement-(CH2)n-CO-D-OC-(CH2)n- dans lequel D désigne : a) un reste de glycol de formule : -O-Z-O-, où Z désigne un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié ou un groupement répondant à l'une des formules suivantes :
- (CH2-CH2-0) x-CH2-CH2- - [CH2-CH (CH3)-0] y-CH2-CH (CH3)- où x et y désignent un nombre entier de 1 à 4, représentant un degré de polymérisation défini et unique ou un nombre quelconque de 1 à 4 représentant un degré de polymérisation moyen ; b) un reste de diamine bis-secondaire tel qu'un dérivé de pipérazine ; c) un reste de diamine bis-primaire de formule :-NH-Y-NH-, où Y désigne un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié, ou bien le radical bivalent - CH2-CH2-S-S-CH2-CH2- ; d) un groupement uréylène de formule :-NH-CO-NH-.
Des polymères de ce type sont notamment décrits dans les brevets français 2.320. 330, 2.270. 846,2. 316.271, 2.336. 434 et 2.413. 907 et les brevets US 2.273. 780, 2.375. 853, 2.388. 614,2. 454.547, 3.206. 462,2. 261.002, 2.271. 378,3. 874.870, 4.001. 432, 3.929. 990,3. 966.904, 4.005. 193,4. 025.617, 4.025. 627,4. 025.653, 4.026. 945 et 4.027. 020.
On peut utiliser plus particulièrement les polymères qui sont constitués de motifs récurrents répondant à la formule (VIII) suivante : dans laquelle R101 R111 R12 et R13 identiques ou différents, désignent un radical alkyle ou hydroxyalkyl ayant de 1 à 4 atomes de carbone environ, n et p sont des nombres entiers variant de 2 à 20 environ et, X- est un anion dérivé d'un acide minéral ou organique.
dans laquelle p désigne un nombre entier variant de 1 à 6 environ, D peut être nul ou peut représenter un groupement- (CH) r-CO-dans iequei r désigne un nombre égal à 4 ou à 7, X-est un anion ; De tels polymères peuvent être préparés selon les procédés décrits dans les brevets U. S. A. n 4 157 388, 4 702 906, 4 719 282. Ils sont notamment décrits dans la demande de brevet EP-A-122 324.
(14) Les polymères réticulés de sels de méthacryioytoxyatkyC-C) triatkyi (C- C4) ammonium tels que les polymères obtenus par homopolymérisation du diméthylaminoéthylméthacrylate quaternisé par le chlorure de méthyle, ou par copolymérisation de l'acrylamide avec le diméthylaminoéthylméthacrylate quaternisé par le chlorure de méthyle, l'homo ou la copolymérisation étant suivie d'une réticulation par un composé à insaturation oléfinique, en particulier le méthylène bis acrylamide.
De manière surprenante, il est aussi montré selon l'invention que toutes les bactéries, Archae bacterie et virus possédant dans leur génome une copie d'un gène thyX ne possèdent pas simultanément le gène thyA, antérieurement connu comme le seul gène capable d'assurer la synthèse du dTMP. Ces organismes possédant le gène thyX en l'absence du gène thyA ne comprennent pas non plus de copie du gène tdk codant la thymidine kinase requise pour l'incorporation intracellulaire de thymidine exogène qui est ensuite convertie dans la cellule en dTMP, à l'exception notable de la bactérie Mycobacterium tuberculosis. La présence simultanée des gènes
thyA et thyX chez M. tuberculosis est probablement due à un événement de transfert de gène.
L'exclusion mutuelle des gènes thyA et thyX dans le génome des organismes mentionnés ci-dessus montre clairement que thyX supplée la fonction thymidylate synthase qui n'est plus assurée en l'absence de thyA.
De plus, seul le gène thyA est systématiquement absent du génome des bactéries possédant le gène thyX, alors que d'autres gènes impliqués dans le métabolisme des nucléotides sont indifféremment présents ou absents dans le génome de ces organismes.
Il est aussi montré selon l'invention que les bactéries déficientes en thyA et dans lesquelles est présent le gène thyX sont, pour la plupart, des bactéries pathogènes pour les mammifères. On peut citer notamment Campylobacter jejuni qui provoque des intoxications alimentaires, Helicobacter pylori qui est un agent causal des ulcères, Rickettsia prowazekii qui est un agent causal du typhus, Borrelia burgdorferi qui est impliqué dans la maladie de Lyme, Treponema pallidum qui est l'agent causal de la syphilis, les bactéries du genre Chlamydiae qui sont des pathogènes intracellulaires obligatoires ainsi que des virus à ADN eucaryotes tels que le Chorella virus.
Toutes les protéines appartenant à la famille THYX possédant une activité thymidylate synthase nouvellement identifiée selon l'invention possèdent en commun les caractéristiques structurales et fonctionnelles indiquées ci-dessous : Caractéristiques structurales : a) Les gènes thyX codent, tous sans exception, pour un polypeptide THYX comprenant la séquence d'acides minés suivante : X1HR (X) 7S, dans laquelle : - X1 représente l'acide aminé R (Arginine ou Arg) ou K (Lysine ou Lys), et - (X) y est une chaîne de sept acides aminés consécutifs dans laquelle chaque X représente, indépendamment l'un de l'autre, l'un quelconque des 20 acides aminés naturels, De préférence, X1 représente l'acide aminé R.
X1 représente K, notamment pour le polypeptide THYX codé par le génome du Roseophage S101. b) Comme le montre clairement l'alignement des séquences d'acides aminés de protéines THYX d'origines diverses représenté à la figure 1, les polypeptides THYX possèdent un résidu d'acide aminé sérine conservé. De plus, les résultats des expériences de mutagenèse réalisés sur le gène thyX de Helicobacter pylori, présentés dans les exemples, montrent que l'acide aminé conservé sérine est indispensable à l'activité catalytique du polypeptide THYX, puisque le remplacement du résidu sérine respectivement par un résidu cystéine ou par un résidu alanine aboutit à la production d'un polypeptide qui est incapable de complémenter la déficience en polypeptide THYA dans la souche de E. coliX de 2913. (JA). c) Les polypeptides THYX ne possèdent pas de résidus d'acides aminés cystéines conservés dans leurs séquences, contrairement aux polypeptides codés par les gènes thyA, dans lesquels le résidu cystéine conservé a un rôle essentiel nucléophile dans la réaction de méthylation catalysée par les polypeptides THYA. d) En utilisant le logiciel BLAST (version 2.0) avec les paramètres par défaut, puis le module Psi-BLAST pour réaliser des cycles itératifs de recherche d'homologie avec la séquence du polypeptide THYX de H. Pylori comme appât , aucune séquence cible de thymidylate synthase thyA n'a été sélectionnée, ce qui montre l'absence d'homologie entre les gènes thya et thyX.
Caractéristiques fonctionnelles a) Un polypeptide THYX selon l'invention est capable de catalyser l'oxydation du méthylène tétrahydrofolate en tétrahydrofolate, ce qui est une caractéristique de l'activité catalytique du type thymidylate synthase, et montre que les polypeptides THYX appartiennent à la classe des enzymes de type thymidylate synthase. b) la croissance de microoganismes transformés par un gène thyX peut être inhibée par le trimethoprim, qui est un inhibiteur spécifique de la dihydrofolate réductase ;
c) un polypeptide THYX selon l'invention n'est catalytiquement actif qu'en présence d'un co-facteur du type flavine. On peut noter que les polypeptides codés par les gènes thyA, antérieurement connus comme les seuls gènes codant pour des enzymes du type thymidylate synthase, sont actifs sans requérir la présence de flavine ; Sont inclus dans les polypeptides appartenant à la famille de polypeptides THYX possédant des caractéristiques structurales et fonctionnelles définies ci-dessus les polypeptides THYX comprenant les séquences d'acides aminés SEQ ID N01 à SEQ ID N037.
Les polypeptides THYX de séquences SEQ ID n01 à SEQ ID n 37 ont été rendus accessibles au public notamment par leur publication dans les bases de données de séquences d'acides aminés.
L'invention a pour objet l'utilisation d'un polypeptide THYX comprenant la séquence d'acides aminés suivante : X1HR (X) 7S, dans laquelle : - X1 représente l'acide aminé R (Arginine ou Arg) ou K (Lysine ou Lys), et - (X) 7 est une chaîne de sept acides aminés consécutifs dans laquelle chaque X représente, indépendamment l'un de l'autre, l'un quelconque des 20 acides aminés naturels, dans un procédé de synthèse in vitro de la thymidine 5'-monophosphate (dTMP).
De préférence, l'acide aminé X1 représente l'acide aminé R.
Afin de réaliser la synthèse in vitro de dTMP à l'aide d'un polypeptide THYX selon l'invention, l'homme du métier peut notamment se référer aux exemples de la présente demande de brevet, dans lesquels l'activité thymidylate synthase du polypeptide THYX de Helicobacter pylori (SEQ ID N021) est mise en évidence dans des extraits cellulaires par la détection de la réaction d'oxydation du composé méthylène tétrahydrofolate.
De préférence, l'utilisation ci-dessus est caractérisée en ce que le polypeptide THYX est choisi parmi les polypeptides comprenant les séquences d'acides aminés SEQ ID N01 à SEQ ID ? 37.
Selon un autre aspect, l'utilisation ci-dessus est caractérisée en ce que le polypeptide THYX est choisi parmi les polypeptides consistant en les séquences d'acides aminés SEQ ID N01 à seq id ? 37.
Le polypeptide THYX de séquences en acides aminés SEQ ID ? 5 est codé par un gène provenant de l'organisme Dictyostelium discodideum qui a été décrit en 1989 par Dynes et Firtel, et désigné Thy1 par ces auteurs.
Elle est également relative à un vecteur de clonage et/ou d'expression comprenant un acide nucléique codant pour un polypeptide
THYX tel que défini dans la description à titre de gènes marqueurs de sélection d'un événement de transfection, de transformation ou de recombinaison génétique.
L'invention est en outre illustrée, sans pour autant être limitée, aux exemples suivants : EXEMPLES EXEMPLE 1 : Expression du polypeptide THYX de Helicobacter pylori dans E. coli.
* Les ADNs comprenant le cadre de lecture ouvert codant pour le polypeptide THYX de Helicobacter pylori (souche 26.695) (séquence SEQ ID n 21) à été obtenue par amplification PCR à l'aide des amorces spécifiques de séquences SEQ ID N038 et SEQ ID N039 à partir du clone GHPEH26 publiquement accessible auprès de l'AMERICAN TYPE CULTURE COLLECTION sous le numéro d'accès n 628. 507.
L'ADN comprenant le cadre de lecture ouvert codant pour le polypeptide THYX de Pyrococcus. abyssi (souche ORSAY) (SEQ ID n 12) a été préparé par amplification PCR à l'aide d'amorces spécifiques de séquences SEQ ID N040 et SEQ ID ? 41 à partir de l'ADN chromosomique de H. pylori (HP 1533).
L'ADN comprenant le cadre de lecture ouvert codant pour le polypeptide THYX de Campylobacter jejuni (souche NCTC 11168) (SEQ ID N027) a été préparé par amplification PCR à l'aide d'amorces spécifiques de séquences SEQ ID ? 42 et SEQ ID N043 à partir de l'ADN génomique publiquement accessible auprès de l'ATCC (Aerican Culture Collection) sous le nO d'accès 7008199.
Les produits d'amplification PCR ont été clonés dans le vecteur pBAD TOPO TA activé par la topoisomérase-l, commercialisée par la Société Invitrogen, qui permet une expression strictement régulée du gène d'intérêt artificiellement inséré dans le vecteur, dans la bactérie E. coli.
Les clones de E. coli ont été caractérisés par séquençage des inserts d'ADN contenus dans le vecteur pBADTOPOTA.
Les poids moléculaires théoriques des polypeptides THYX de H. pylori (HP1533), de P. abyssi (PAB 0861) et de C. jejuni (NCTC 11168) y compris un activateur de traduction amino-terminal et des épitopes carboxyterminaux V5 et histidine, sont respectivement de 31,5 kDa, de 33,7 kDa et de 28 kDA.
Les résultats présentés dans la figure 2A montrent que l'expression du polypeptide THYX est induite en présence de 0,2% d'Arabinose dans le milieu de culture, comme cela a été détecté en utilisant des anticorps monoclonaux anti-V5 commercialisés par la Société Invitrogen et utilisés selon les recommandations du fabricant.
Puis on a testé la capacité des polypeptides THYX de H. pylori et de P. abyssi a permettre la croissance de la souche de Ecoli X2913 (Athya572), auxotrophe pour la thymidine, à se multiplier en l'absence de thymidine.
La capacité de croissance des souches de E. coli exprimant les polypeptides THYX de H. pylori et de P. abyssi a été déterminée après culture des cellules de Ecoli recombinantes pendant 3 à 4 jours en présence ou en l'absence d'une concentration de 0,2% d'Arabinose sur un milieu agar minimal M9 dépourvu de thymidine (Michaels et al., 1990).
Les résultats sont présentés dans la figure 2B.
Comme le montrent les résultats de la figure 2B, l'expression du gène thyX de H. pylori dans la souche de E. coli X2193 qui a été induite par l'Arabinose, a permis de complémenter cette souche de Ecoli initialement déficiente en activité thymidylate synthase et restaurer la prototrophie de cette souche de E. coli pour la thymidine.
En revanche, le gène thyX de P. abyssi, après induction par l'Arabinose, n'a pas permis de complémenter la souche de Econ X 2193, ce qui reflète l'incapacité d'une protéine hyperthermophile d'être fonctionnelle dans un hôte mésophile.
Les deux souches de Ecoli recombinantes étaient néanmoins capables de se multiplier dans un milieu agar minimal en présence de thymidine à la concentration finale de 50ug/ml.
Un moyen pour obtenir le report d'une couche mince comprenant des composants d'un substrat initial vers un support final est d'utiliser des techniques de collage et d'amincissement. En effet, on peut coller le substrat initial sur le support final, la partie couche mince du substrat initial étant adjacent au support final, puis éliminer la partie du substrat initial autre que la couche mince. Cette élimination peut se faire par polissage mécanique et/ou chimique. Le problème qui se pose alors est celui de l'obtention de l'amincissement requis. En effet, les épaisseurs de verre ne sont pas bien contrôlées (en épaisseur ou en homogénéité) et une élimination par
simple polissage ou rectification ne permet pas d'obtenir un film contenant des composants et qui soit uniforme et homogène.