INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Selon un mode de réalisation particulier de la tête magnétique intégrée objet de l'invention, les pièces polaires sont contenues entre deux plans parallèles de la structure en couche mince, cette structure comprenant au moins entre ces deux plans parallèles de part et d'autre des pièces polaires dans le sens de défilement du support d'enregistrement
magnétique, un matériau plus résistant à l'usure que le silicium.
La présente invention a aussi pour objet une tête magnétique intégrée comprenant une structure en couche mince, cette structure en couche mince contenant, dans la tranche de la structure constituant la face de lecture et/ou d'écriture de la tête magnétique, deux pièces polaires séparées par un entrefer et en alignement longitudinal, ces pièces polaires étant contenues, dans le sens transversal par rapport à la structure, entre deux plans parallèles de la structure en couche mince, cette tête magnétique étant caractérisée en ce qu'elle comprend, au moins dans cette tranche, entre les deux plans parallèles, de part et d'autre des pièces polaires séparées par l'entrefer, un premier matériau RI plus résistant à l'usure, ce premier matériau étant par exemple plus dur que le matériau du caisson, afin de renforcer la résistance à l'usure de la face de lecture et/ou d'écriture (référence 17 sur la figure 2).
Dans l'invention, l'entrefer peut être droit, c'est à dire sans azimut, mais cet entrefer est de préférence azimuté, c'est-à-dire incliné, pour les raisons mentionnées plus haut.
De préférence, la tête magnétique objet de l'invention comprend en outre deux couches d'un deuxième matériau R2 résistant à l'usure, ce deuxième matériau étant par exemple plus dur que le silicium, et les deux couches encadrent la structure en couche mince, pour renforcer davantage la résistance à l'usure de la face de lecture et/ou d'écriture.
La combinaison des matériaux R1 et R2 pourra être choisie afin de conserver un rayon transversal à la face 17, suffisamment petit pour assurer le meilleur contact des pôles au voisinage de l'entrefer en évitant le phénomène d'aplatissement inhérent à l'usure des têtes (on pourra, par exemple, choisir R1 plus résistant à l'usure que R2).
Le choix du deuxième matériaux pourra être fait par rapport au matériau ayant la référence 70 sur la figure 15 des dessins annexés, pour contrôler le rayon transversal de la tête pendant le processus d'usure.
La tête magnétique objet de l'invention peut comprendre également un élément en forme de couche contenant des circuits complémentaires de la tête magnétique, entre la stucture en couche mince et l'une des deux couches du deuxième matériau résistant à l'usure.
Le système de recherche quel qu'il soit est qualifié de système de base étant entendu qu'il peut ne reposer que sur une opération d'analyse linguistique permettant d'extraire au moins une réponse à une question posée en langue naturelle par un utilisateur utilisant pour ce faire des mots clés.
On considère en outre selon l'invention que le système est capable de construire la question sous la forme d'un patron de recherche : argument 1, relation, argument 2.
Par exemple à la question Qui a tué Kennedy ? , le patron le plus simple a la forme meurtrier a tué Kennedy.
Ce patron permet alors grâce au moteur de recherche du système d'extraire la réponse X dans la phase trouvée dans un ou plusieurs documents trouvés à l'issue de la recherche X a tué Kennedy .
Ce système de recherche de base porte la référence 1 sur la figure 1. Il est couplé à travers un réseau de communication R à une ou plusieurs bases de données 3.
Il peut s'agir bien entendu du WEB dans le cas où le réseau est Internet.
Le système comporte en outre un dispositif d'enrichissement automatique des ressources linguistiques 2. Ce dispositif effectue des opérations d'apprentissage de re-formulations pour obtenir de manière automatique un ensemble de formulations sémantiques équivalentes à une première formulation d'une relation entre deux arguments.
Le processus global s'inspire des méthodes dites de bootstrapping qui permettent de modéliser des classes d'exemples similaires à partir d'un ensemble d'exemples limité.
L'apprentissage fait suite à l'initialisation d'une acquisition (bloc 1, figure 1).
Comme on l'a vu dans l'étape d'initialisation d'une acquisition les termes principaux de la question sont extraits pour construire une requête destinée au moteur de recherche standard prenant la forme d'une suite de mots clés ou d'une chaîne de texte unique : Question : Qui a tué Kennedy ? Mots clés : tué, Kennedy .
La question est soumise à une analyse linguistique permettant de construire un patron de recherche pour la réponse ; le patron qui est ensuite recherché permet d'extraire la réponse.
Lorsque la réponse est connue, on utilise à nouveau les données des bases de données ou du WEB pour retrouver des relations liant la réponse (X) et l'argument 2 (Kennedy) par une requête contenant ces deux arguments : X, Kennedy.
On utilise d'autre part un opérateur de proximité pour contrôler la distance entre les arguments et s'affranchir d'insertions apportant une complexité syntaxique. Cet opérateur permet un contrôle de
distance entre les arguments en nombre de mots (1,2, 3,...).
Les phrases solutions : X, meurtrier de Kennedy...
Le meurtrier de Kennedy, X....
BrijR 721 (ICI) 2,4 VolpoR S72 (Croda) 2,6 Prostéaryl-15 (Croda) 8,0 Cire d'abeille 0,5 AbilR ZP 2434 (Goldschmidt) 3,0 Propylène glycol 3,0 Carbopol'941 (B. F. Goodrich) 0,25 Triéthanolamine 0,25 Extrait d'Olea europaea 10,0 Extrait de Larrea divaricata 5.0 Osmocide (Sederma) 10,0 Eau, conservateurs, parfums qsp 100 g Exemple 4 : Lotion nettoyante Ethanol 1.0 Propylène glycol 2.0 Abif B8851 (Goldschmidt) 0.5 Eumulgin L (Henkel) 0.6 Acide oléanolique 0,05 Eau, conservateurs, parfum qsp 100 g Exemple 5 : Inhibition de la Sa-réductase-dosage enematique-in vitro Principe et réalisation du test (adaptation selon Zy et Zu-1998) : La testostérone est métabolisée de façon irréversible par la 5a-réductase en 5déhydrotestostérone (5-DHT) en présence de son cofacteur NADPH. La réaction est suivie, à 37 C, par la mesure, au moyen d'un spectrophotomètre, de la baisse de densité optique du milieu réactionnel à 340 nm, à la suite de la consommation de NADPH en NADP.
Le test consiste donc à mettre en présence de la testostérone, du NADPH et le produit à tester ou de son solvant seul (pour réaliser la réaction témoin).
Après 3 minutes d'attente pour équilibrer le système, la densité optique d'origine du système est mesurée puis, la réaction est déclenché par l'ajout de l'enzyme 5aréductase. Au bout de 10 minutes, une seconde mesure de la densité optique finale est réalisée. La différence entre les deux mesures correspond à la quantité de NADPH consommée, quantité proportionnelle à la quantité de testostérone transformée en 5-DHT.
L'acide oléanolique et l'acide nordihydroguaiarétique ont été testés à différentes concentrations, seuls ou en association.
Résultats : le tableau suivant montre les pourcentages d'inhibitions (moyenne SEM) observés au cours de cinq essais indépendants.
Produit testé [c] % d'inhibition 0, 01% 16, 7% 1, 1 Acide oléanolique 0, 03 % 31, 7 % 2, 9 0, 1% 56, 3% 2, 6 0, 01 2, 1% 1, 6 NDGA 0, 04 % 3, 7 % 2, 6 0,1 % 3,0 % ~ 1,9 Acide oléanolique 0,03 % + acide nordihydroguaiarétique 0,04 5 68,3 % ~ 3,1 Ces résultats démontrent clairement que l'acide oléanolique présente une forte activité inhibitrice de la l'enzyme 5a-réductase puisqu'on observe dans nos conditions une inhibition de 56% à seulement 0,1%. De plus, cet effet est spécifique puisqu'il est dépendant de la concentration.
L'acide nordihydroguaiarétique utilisé seul ne présente aucune activité sur ce test.
> II y a une forte synergie entre les effets lorsque les deux produits sont utilisés en association puisque l'inhibition observée (68 %) est largement supérieure à
la somme des effets individuels observés sur le même test aux mêmes concentrations puisque la somme des effets atteint seulement 35.4 %.
Exemple 6 : Inhibition de la 5a-réductase - détermination HPLC - in vitro Principe et réalisation du test : le bût de cet essai était de confirmer le résultat précédent mais au moyen d'un moyen analytique HPLC. En effet, contrairement à la 5-DHT, la testostérone absorbe la lumière à la longueur d'onde utilisée (245 nm). La diminution de la surface du pic de testostérone (qui se caractérise dans nos conditions opératoires avec un temps de rétention de 26 minutes) traduit la baisse de cette molécule dans le milieu étudié, et donc reflète l'activité de la 5a-réductase.
Le même type de protocole que dans l'exemple précédent est utilisé mais au lieu de lire les différentes densités optiques, les milieux réactionnels sont analysés par HPLC.
Produit testé le] % d'inhibition 0, 01 % 10, 9 % + 1, 4 Acide oléanolique 0, 03 % 25,6 % f 2,0 (obtenu à partir de feuille d'olivier) 0,1 % 47,7 % ~ 3,8 0,01 1,2 % ~ 0,4 acide nordihydroguaiarétique 0,04% 1,0 % ~ 0,9 (obtenu à partir de L. divaricata) 0,1 % 0,9 % 0, 7 Acide oléanolique 0, 03 % +Acide nordihydroguaiarétique 0, 04% 61, 8% 4, 2 Ces résultats démontrent clairement que : > Les effets observés dans cet exemple sont fortement superposables à ceux obtenus dans l'exemple précédent, ce qui confirme l'hypothèse de départ, > L'acide oléanolique présente une forte activité inhibitrice de la l'enzyme 5a. - réductase puisqu'on observe dans nos conditions une inhibition de 48% à seulement 0, 1%. L'acide nordihydroguaiarétique utilisé seul ne présente aucune activité sur ce test.
Il y a une synergie évidente entre les effets lorsque les deux produits sont utilisés en association puisque l'inhibition observée (61,8%) est largement supérieure à la somme des effets individuels observés sur le même test aux mêmes concentrations puisque la somme des effets atteint seulement 26,6 %.
Exemple 7 : Effet anti-inflammatoire-in vitro Principe et réalisation du test : il est possible d'estimer un niveau d'inflammation par la détermination de la quantité de médiateurs tels que prostaglandines, leucotriènes ou interleukines.
Dans cet exemple, nous avons choisi le dosage de l'interleukine 6 (IL-6) sur des fibroblastes (FH) et sur des kératinocytes (KH) humains normaux en culture, après irradiations par les UV-B.
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES [1] - Langer R. et Folkman. J., Polymers for the sustained release of proteins and other macromolecules, 1976, Nature, 263, p. 797-800.
[2] - Saltzman W., Langer R., Transport rates of proteins in porous materials with known microgeometry, 1989, Biophysique Journal, 55, p. 163-171.
[3]-Cohen S. et al., Controlled delivery systems for proteins based on poly (lactic/glycolic acid) microspheres, 1991, Pharm. Research 8, p. 713-720.
[4] - Ertl. HC. et al., Poly (DL-lactide-co-glycolide) microspheres as carriers for peptide vaccines, 1996, Vaccine, 14, p. 879-885.
(5] - Eldridge J., et al. Biodegradable and biocompatible poly (DL-lactide-co-glycolide) microspheres as an adjuvant for staphylococcal enterotoxin B toxoid which enhances the level oftoxin-neutralizing antibodies, 1991, Immunology, 59, p. 2978-2986.
[6]-Lima SL, et al. Immunization by subcutaneous implants of polyester-polyurethane sponges coupled with antigen., Brazil Journal of Medical Biology Research 1999,32, (4), p. 443-447.
[7]-Davis S., Polymeric microspheres as drug carriers, Biomaterials, 1988,9, p. 111-116.
[8]-Fauk W, et al., An immunocolloid method for the electron microscope, Immunochemistry, 1971,8, p. 1081-1083.
[9] - Hainfeld J, Gold cluster-labelled antibodies, Nature, 1988,333, p. 281-282.
[10]-Shibuya T. Y. et al., Anti-CD3/anti-CD28 bead stimulation overcomes CD3 unresponsiveness in patients with head and neck squamous cell carcinoma., Arch Otolaryngology Head Neck Surgery, 2000,126 (4), p. 473-479.
[11]-Olivier JC, et al., Indirect evidence that drug brain targeting using polysorbate 80coated polybutylcyanoacrylate nanoparticles is related to toxicity. Pharmaceutical Research, 1999, 16 (12), 1836-1842.
[12]-Hamada J, et al., Embolization with cellulose porous beads, II : Clinical trial. AJNR American Journal of Neuroradiology, 1996,17 (10), 1901-1906.
[13]-Retzinger GS, Dissemination of beads coated with trehalose 6, 6'-dimycolate : a possible role for coagulation in the dissemination process Experimental Molecular Pathology, 1987,46 (2), 190-198.
[14]-Yokel RA et al, Acute toxicity of latex microspheres, Toxicology Letter, 1981,9 (2), 165-170.
[15]-Noordzij JP et al., Tissue adhesive wound repair revisited, Journal of Emergency Medicine, 1994,12 (5), p. 645-649.
[16]-Quillen DA et al., Aerosol application of cyanoacrylate adhesive, J Refract Corneal Surg 1994,10 (2) p. 149-150.
Figure 16 : Etude de la linéarité du binding spécifique en fonction de la concentration protéique en présence d'ions cuivre Figure 17 : Effet/dose du Cuivre (cru2+) sur la liaison de l'AX à son (ses) site (s) de liaison Figure 18 : Mesure de la courbe de saturation et des paramètres Kd et Bmax en présence d'ions cuivre.
Figure 19 : Inhibition compétitive de XA marqué par XA non radioactif.
Détermination des IC 50 pour l'acide xanthurénique.
Figure 20 : Dose/effet du XA sur la réponse dopaminergique après injection locale dans le CPF.
Figure 21 : Evolution des taux de dopamine, DOPAC et HVA dans le CPF après application locale de 20 uM de XA.
Figure 22 : Effets de la présence de l'antagoniste NCS-486 sur la libération extracellulaire de dopamine après application locale de 20 uM de XA dans le CPF.
Figure 23 : Stratégie expérimentale dans les expériences de patch-clamp.
Figure 24 : Effet de l'acide xanthurénique sur les cellules NCB-20.
A. Traces types enregistrées à partir d'un fragment de membrane en conditions contrôle et pendant l'application de l'acide xanthurenique à une concentration de 20 uM. Le fragment de membrane était stimulé par une rampe de potentiel comme indiqué par le protocole illustré par la trace du bas. En présence de l'acide xanthurénique un grand courant sortant se développe aux potentiels positifs. La trace a été numérisée à une fréquence de 2 kHz.
B. Evolution du courant sortant moyen mesuré à un potentiel de 95 mV.
En présence de l'acide Xanthurénique ce courant est augmenté de manière considérable.
C. Relation courant-potentiel du courant active en présence de l'acide xanthurénique (après soustraction du courant obtenu en condition contrôle).
La courbe en trait continu est l'ajustement du modèle de Boltzmann à ce courant.
FIGURE 25. Pharmacologie de la réponse à l'acide xanthurénique.
Le courant membranaire mesuré aux potentiels de-80 et 80 mV est représenté en fonction du temps d'enregistrement. La période d'application des ligands du récepteur du xanthurénate est matérialisé par les traits
pleins : en haut et en bas respectivement pour le NCS-482 et le NCS-486 seuls et au milieu pour le mélange des deux aux concentrations indiquées.
EXEMPLE 1: On a préparé la composition de teinture directe suivante : (exprimée en grammes de matière active)
Colorant direct : Basic Blue 99............................................... 0,1 Silicone selon l'invention : DC2-8299@ de la société DOW CORNING.......................................................................... 2
Ethanol.............................................................................. 20
Gomme de guar hydroxypropylée : Jaguar HP60@ vendu par 1 AQUALON.........................................................................
Alkyl (C8-C10) polyglucoside en solution aqueuse à 60% de 8 matière active : Oramix CG110# vendu par SEPPIC ..................
2-amino-2-méthyl-1-propanol.........................q.s......... pH..... 7,5
Eau déminératisée.......................................q.s.p................ 100 On a appliquée cette composition sur des mèches de cheveux gris naturels à 90% de blancs pendant 30 minutes.
Les cheveux ont ensuite été rincés, lavés avec un shampooing standard, puis séchés.
On a obtenu une nuance bleue très résistante à plusieurs shampooings.
Par ailleurs, l'état cosmétique des fibres a été très satisfaisant.
EXEMPLE 2 On a préparé la teinture d'oxydation suivante : (exprimée en grammes de matière active) Paraphénylènediamine.......................................................... 0,108
2-méthyl-5-amino-phénol....................................................... 0,123 Silicone selon l'invention : DC2-8299@ de la société DOW
CORNING.......................................................................... 2 Ethanol............................................................................. 20
Alkyl (C8-C10) polyglucoside en solution aqueuse à 60% de matière active : Oramix CG110# vendu par SEPPIC.................. 3,6
Alcool benzylique................................................................ 2
On répète le mode opératoire de l'exemple 1 On obtient avec un rendement de 71 %, le réactif D qui répond à la formule suivante :
0 0 \\//10 Formule brute : 5 JiN/S-CF3 CHN, 0,5S2 cr Il0 1 Masse molaire : 73M 7 3 N 434, 2 g/mol 1/\\ 9 00 Aspect : Solide blanc Les analyses sont les suivantes : CCM Rf = 0,44 (éluant : AcOEt/hexane : 2/8 ; révélateur : vert de bromocrésol) RMN H 200 MHz, CDCl3 # (ppm) 1,17 (t, 3H, JH1-H2=7,34Hz, H1); 1,21-1,45 (m, 3H, Hcycle); 1,60- 1, 95 (m, 3H, Hr v 1, 95 (m, 3H, Hcvcle) ; 2, 15-2, 34 (m, 1 H, Hcvc, e) ; 2, 35-2, 59 (m, 1 H, Hcvc, e) ; 2, 61-2, 83 (m, 1 H, HJ ; 2, 84-3, 08 (m, 1 H, HJ ; 3, 62-3, 92 (m, 1 H, H4) ; 4, 18-4, 43 (m, 1 H, Ha) ; 5, 12 (d, 1H, 3JNH-H4=10Hz, NH) RMN C 50 MHz, CDCl3 # (ppm) 8,9 (C1); 24,4 (C6) ; 25,5 (C7) ; 29,3 (C5) ; 31, 9 (C2) ; 35,3 (C8) ; 54, 7 (C4) ; 66, 9 (C3) ; 119, 4 (q, JC-F=32lHz, C10) ; 119, 6 (q, Jc- F=322Hz, C9) ; 174, 4 (C1 1) IR Transmission, film (Csl) v (cm-1): 3304 ; 3055 ; ; 2948 ; 1740 ; 1444 ; 1396 ; 1266 ; 1233 ; 1203 ; 1135 ; 980 ; 740 ; 610 Pu 102-1 05C aD +20, 39 (c = 1, 02 ; CHCig) SM IC (NHs) (m/z) : 452 [M+NHJ----------------------------- Exemple 5 Dans cet exemple, on prépare le réactif E à savoir le (1S, 2S)-N-isobutyryl- 1,2-bis(trifluorométhanesulfonamido)cyclohexane à partir de (lS, 2S)-1, 2bis (trifluorométhanesulfonamido) cyclohexane et de chlorure de butyryle.
On répète le mode opératoire de l'exemple 1.
On obtient avec un rendement de 68 %, le réactif E qui répond à la formule suivante
- -------------------------------------------------------------------------- 00 \\//10 Formule brute : 5 FION, C,, H1F, N, 0, S2 0 : 0 1 Masse molaire : 1 : t 7 3 N 448, 23 g/mol S-cog \\ 9 Aspect : 0 0 00 Solide blanc Les analyses sont les suivantes : CCM Rf = 0, 64 (éluant : AcOEt/hexane : 2/8 ; révélateur : vert de bromocrésol) RMN 1H 300 MHz, CDOg ô (ppm) 1, 18 (d, 3H, aJH1-H2=8, 32Hz, H1) ; 1, 24 (d, 3H, aJH1-H2=6, 6Hz, H1) ; 1, 29-1, 43 (m, 3H, H, ye) ; 1, 74-1, 96 (m, 3H, Hcycle) ; 2, 19-2, 31 (m, 2H, Hcyc, e) ; 3, 22-3, 31 (qt, 1H, 2-H1=6, 57Hz, H2) ; 3, 61-3, 91 (m, 1H, HJ ; 4, 25-4, 61 (m, 1 H, Ha) ; 5, 09 (d, 1 H, 3JNH-H4=9, 1 Hz, NH) RMN 13C 75 MHz, CDCI, ô (ppm) 19, 8 (C1) ; 20, 3 (C1) ; 24, 3 (C6) ; 25, 4 (C7) ; 28, 9 (C5) ; 35, 8 (C8) ; 36, 7 (C2) ; 55, 7 (C4) ; 66, 2 (C3) ; 119, 4 (q, JC-F=321 Hz, C10) ; 120, 0 (q, Jc-F=322Hz, C9) ; 178, 4 (C11) IR Transmission, film (Csl) v (cm-1) : 3345 ; 3054 ; 2986 ; 1734 ; 1445 ; 1410 ; 1231 ; 1202 ; 1133 ; 939 ; 896 ; 767 ; 715 ; 696 ; 610 Pf 70-71OC aD +45, 96 (c = 1, 14 ; CHC) 3) SM IC (NHa) (m/z) : 466 [M+NHJ----------------------------Exemple 6 Dans cet exemple, on prépare le réactif F à savoir le (18, 28) -N-acétyl-1, 2bis (trifluorométhanesulfonamido) diphényléthane, à partir de (lS, 2S)-1, 2bis (trifluorométhanesulfonamido) -1, 2-diphényléthane et de chlorure d'acétyle.
On obtient avec un rendement de 82 %, le réactif F qui répond à la formule suivante :
Formule brute : 0 6 C, BH16F6N205S2 ! . S-CF3 4.,, NH Masse molaire : 0 518, 27 g/mol N1 3 Aspect : //\\ 5 Solide blanc 0 0 ,/-S-CF3 /'\\ 5 Solide blanc - O'Q s So) ideb) anc Les analyses sont les suivantes : CCM Rf = 0, 64 (éludant : AcOEt/hexane : 2/8 ; révélateur : vert de bromocrésol) RMN'H 300 MHz, CDCI, ô (ppm) 1, 18 (d, 3H, aJH1-H2=8, 32Hz, H1) ; 1, 24 (d, 3H, i-H2=6, 6Hz, H,) ; 1, 29-1, 43 (m, 3H, Hcvc, e) ; 1, 74-1, 96 (m, 3H, Hcvc, e) ; 2, 19-2, 31 (m, 2H, Hcvc, e) ; 3, 22-3, 31 (qt, 1 H, aJH2-H1=6, 57Hz, HJ ; 3, 61-3, 91 (m, 1 H, H4) ; 4, 25-4, 61 (m, 1 H, Ha) ; 5, 09 (d, 1 H, aJNH-H4=9, 1 Hz, NH) RMN 1aC 75 MHz, CDCla ô (ppm) 19, 8 (C1) ; 20, 3 (C1) ; 24, 3 (C6) ; 25, 4 (C7) ; 28, 9 (C5) ; 35, 8 (C8) ; 36, 7 (C2) ; 55, 7 (C4) ; 66, 2 (C3) ; 119, 4 (q, JC-F=321 Hz, C10) ; 120, 0 (q, JC-F=322Hz, C9) ; 178, 4 (C11) IR Transmission, film (Csl) v (cm-1) : 3345 ; 3054 ; 2986 ; 1734 ; 1445 ; 1410 ; 1231 ; 1202 ; 1133 ; 939 ; 896 ; 767 ; 715 ; 696 ; 610 Pf 70-71OC aD +45, 960 (c = 1, 14 ; CHCI,) SM IC (NHg) (m/z) : 466 [M+NHJ+ Exemple 7 Dans cet exemple, on prépare le réactif G à savoir le (18, 28) -N-acétyl-Nméthyl-1, 2-bis (trifluorométhanesulfonamido) cyclohexane par methylation du composé A obtenu selon l'exemple 1.
Dans un premier temps, on prépare une solution éthérée de diazométhane.
Dans un récipient en plastique de 50 mL muni d'un barreau aimanté avec agitation par agitateur magnétique, on charge : - 560 mg (3, 81 mmol) de 1-méthyl-3-nitro-nitrosoguanidine, - 660 mg (11, 76 mmol ; 3 éq.) de KOH, - 1 mL d'H2O, - 428 mg (1, 02 mmol ; 0, 25 éq.) du composé A,
- 10 + 20 mL de diéthyléther.
On commence par charger le précurseur de diazométhane (1-méthyl-3- nitro-nitrosoguanidine) et le diéthyléther.
Le mélange réactionnel est refroidi à une température de 00C à l'aide d'un bain de glace, puis on additionne goutte à goutte une solution aqueuse de KOH.
On observe instantanément un dégagement gazeux ainsi que la coloration de la phase éthérée (jaune).
Le mélange réactionnel est laissé sous agitation à 00C pendant dix minutes.
La solution éthérée de diazométhane ainsi préparée est ensuite coulée goutte à goutte dans un second récipient contenant une solution éthérée du composé A à 0OC.
Avantageusement le kit selon l'invention comprend : i) les paires d'amorces de séquences - SEQ ID No : 17 et SEQ ID No : 24 - SEQ ID No : 18 et SEQ ID No : 26 et SEQ ID No : 27
ii) un vecteur retroviral délété de toute la région codant pour la majorité de la sous-unité gpl20 et de la portion extracellulaire de la gp41 de l'enveloppe du VIH-1, s'étendant des résidus 6480 à 8263 inclus, et comportant un site de restriction unique Mull, iv) un premier hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH, v) un second hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH et comportant un gène marqueur activable uniquement par des particules virales, vi) les produits et réactifs nécessaires pour réaliser l'amplification par PCR, vii) les produits et réactifs permettant la détection du marqueur exprimé.
Les courbes montrent l'inhibition de l'infection par un virus recombinant des cellules P4
traitées soit avec la zidovuidine (AZT, panels A et C) ou la lamivudine (3TC, panels B et D), selon la technique décrite plus loin, dans le paragraphe matériel et méthodes. Pour le patient I, les échantillons ont été testés à 0 (+), 9 (e) et 18 (D) mois après le traitement, et, pour le patient 2, à 0 (+) et 27 (e) mois après le traitement.
La figure 4 est un schéma des étapes (c) à (g) d'une mise en oeuvre particulière de la méthode de l'invention. Ce schéma illustre l'étape (d) de cotransfection dans des cellules HeLa/293T des acides nucléiques amplifiés de l'étape (b), d'un premier plasmide p43xcsnAenv RT construit à partir d'un génome d'un virus VIH, ne comprenant pas un segment d'acide nucléique correspondant à tout ou partie de la séquence d'acide nucléique amplifiée à l'étape (b) ni un fragment de la séquence d'acide nucléique codant pour la protéine d'enveloppe et un deuxième plasmide pVSV-G comportant la séquence codant pour la protéine d'enveloppe ; l'étape (e) de culture permettant de produire des particules virale, l'étape (f) de transfection des particules virales obtenues à l'étape (e) dans des cellules P4, préalablement incubées en présence ou non de dilutions sériées de différents inhibiteurs de la transcriptase
inverse, lesdites cellules indicatrices P4 comportant un système d'expression du gène codant pour l'enzyme betagalactosidase activable exclusivement par les séquences d'activation tat exprimées par le virus recombinant, et l'étape (g) de détection et/ou quantification de la betagalactosidase au moyen du substrat CPRG.