INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
5. 3 poly(benzyl glutamate)ioo-propyl-poly(acide lactique)30 : Le Ncarboxyanhydride de L-glutamate de benzyle (33g, 125,4mmol) fourni par Flamel Technologies est pesé et introduit en boîte à gants sous atmosphère d'azote dans un ballon préalablement flammé. Le polylactide déprotégé (2,9g, l,33mmol) est solubilisé dans du dichlorométhane fraîchement distillé (165ml) puis introduit par canule. Le milieu réactionnel est placé sous agitation magnétique pendant trois heures à température ambiante. Le solvant est évaporé au rotavapor puis le polymère est séché sous vide primaire. Rendement : 93%. Caractérisations : RMN 'H (TFA d) : # = 1,55 ppm (m, 6H, CH3), 1,95 ppm (m, 2H, CH2CH2C=O), 2,35 ppm (m, 2H, CH2CH2C=O), 4,60 ppm (m, 1H, O=CCHNH), 5,0ppm (m, 2H, CH), 5,25 ppm (m, 2H, CH2Ph), 7,10 ppm (m, 5H, Ph). RMN 13C (DMSO d6) : 8 = 17 ppm (CH3), 27 ppm (CHCH2C00), 30 ppm (CH2CHgCOO), 52 ppm
Les vecteurs habituellement décrits ne portent pas les séquences codant la nouvelle protéine SD'. Cette protéine, jouant un rôle dans la réplication virale, elle constitue un nouveau moyen d'améliorer les titres obtenus avec les vecteurs dérivés des MLV et ceci quelle que soit l'étape du cycle viral où elle intervient (précoce ou tardive).
L'invention a donc aussi pour un acide nucléique isolé constituant un vecteur pour transférer un gène dans une cellule hôte. Plus particulièrement, l'invention concerne un vecteur ou un ensemble de vecteurs pour la préparation de lignée d'encapsidation permettant la synthèse de particules virales et de virus portant un gène d'intérêt. La séquence d'acide nucléique codant la protéine SD' est apportée soit en cis directement dans le vecteur portant le gène d'intérêt, soit en trans lors de l'élaboration stable ou transitoire de la lignée d'encapsidation.
Un vecteur selon l'invention pour la préparation de lignées d'encapsidation comprend une séquence d'acide nucléique codant une protéine SD' d'un MLV, défini précédemment, avec son codon d'initiation, une séquence d'encapsidation Psi en 5', et un signal d'arrêt de la transcription en 3' de ladite séquence codant une protéine SD'. Le vecteur comprend en 5' de la séquence Psi un promoteur comme un promoteur CMV.
Le signal d'arrêt de la transcription est un site de polyadénylation comme une longue répétition terminale (LTR) de type U3RU5. Le vecteur peut aussi contenir des séquences d'intégration att ( attachment
site ou IR pour inverted repeat ) dans des LTR en 5' et 3' de la séquence d'acide nucléique codant une protéine SD'.
Un vecteur ci-dessus est utilisé pour la préparation de lignées d'encapsidation stables ou transitoires produisant des particules virales exprimant un gène d'intérêt.
Dans une première forme de mise en #uvre, la séquence d'acide nucléique codant la protéine SD' est apportée par un vecteur ci-dessus en trans.
Dans le cas de la préparation d'une lignée d'encapsidation stable, une lignée d'encapsidation exprimant les protéines gag, pol et env est transfectée par le vecteur comprenant la séquence d'acide nucléique codant la protéine SD' ci-dessus et un vecteur viral délété des séquences codant les protéines gag, pol et env, et portant le gène d'intérêt, une séquence Psi et de part et d'autre de ceux-ci une LTR.
Dans le cas de la préparation d'une lignée d'encapsidation transitoire, une lignée d'encapsidation est transfectée par les vecteurs suivants : - le vecteur ci-dessus comprenant la séquence d'acide nucléique codant une protéine SD', - un vecteur ci-dessus portant le gène d'intérêt, - un vecteur exprimant les protéines gag et pol, et - un vecteur exprimant la protéine env.
Dans une seconde forme de mise en #uvre, la séquence d'acide nucléique codant la protéine SD' est apportée par un vecteur selon l'invention ci-dessus en cis. Il s'agit alors d'un vecteur bicistronique comprenant à la fois la séquence d'acide nucléique codant la protéine SD' et le gène d'intérêt. Un tel vecteur est
un vecteur viral tronqué comprenant dans le sens 5' vers 3' une LTR, une séquence d'encapsidation Psi, le gène d'intérêt avec son codon d'initiation, une séquence IRES, la séquence d'acide nucléique codant la protéine SD' avec son codon d'initiation et une LTR. Comme précédemment, ce vecteur bicistronique peut être utilisée pour transfecter une lignée d'encapsidation stable ou transitoire.
Dans le cas de la préparation d'une lignée d'encapsidation stable, une lignée d'encapsidation exprimant les protéines gag, pol et env est transfectée par le vecteur cistronique ci-dessus.
Dans le cas de la préparation d'une lignée d'encapsidation transitoire, une lignée d'encapsidation est transfectée par les vecteurs suivants : - le vecteur bicistronique ci-dessus, - un vecteur exprimant les protéines gag et pol, et - un vecteur exprimant la protéine env.
Ces vecteurs sont donc préferentiellement dérivés de virus, tout préférentiellement dérivés de MLV ou de lentivirus.
L'invention concerne aussi les procédés de préparation des lignées d'encapsidation stables ou transitoires mettant en #uvre les vecteurs ci-dessus ainsi que les lignées obtenues. L'invention concerne encore les particules virales et les virus issus de ces lignées d'encapsidation comprenant une séquence d'acide nucléique codant une protéine SD', ainsi que les cellules hôtes contenant ces particules virales ou virus.
Ces particules virales, virus et cellules comprenant une séquence d'acide nucléique codant une protéine SD' et un gène d'intérêt constituent des principes actifs de compositions pharmaceutiques pour la thérapie génique somatique.
Dans un deuxième temps, un routeur 2i, 2j, utilise, par exemple, le protocole Hello pour connaître ses différents voisins. Un routeur d'un réseau
envoie donc des messages Hello à tous ses voisins qui sont directement joignables en un bond IP et reçoit, en retour, les messages Hello de ces voisins. Si le routeur est connecté à un réseau radio et à un réseau Ethernet, ses voisins sont tous les routeurs joignables directement à travers le réseau radio et à travers le réseau Ethernet. Sur les réseaux à diffusion et les liaisons point-à-point, le routeur détecte ses voisins, par exemple de manière dynamique, en envoyant des messages Hello, à l'adresse multicast All Ospf/ Routeurs. Sur les autres réseaux, une configuration manuelle est par exemple utilisée pour permettre cette découverte. Pour les réseaux à diffusion, le protocole Hello permet aussi l'élection du routeur désigné, RD ou 3i.
Une fois terminée l'étape de découverte des voisins, un routeur du réseau essaye d'établir des relations d'adjacence avec ses nouveaux voisins. Les bases de données des routeurs et une partie de ses voisins, en l'occurrence ses voisins qui lui sont adjacents, sont alors synchronisées entre paires de routeurs adjacents. Les relations d'adjacence sont notamment utilisées dans le processus de diffusion du protocole pour réduire le flux d'information à travers le réseau. Pour un réseau à diffusion, c'est le routeur désigné qui détermine les différentes relations d'adjacence.
Un routeur envoie périodiquement, par exemple, des messages Hello pour garder sa connectivité avec ses voisins. Il transmet aussi, périodiquement, l'état de sa base de données aux autres routeurs de la zone à travers des LSA. Ces messages sont aussi diffusés lors du changement de l'état de la base de données du routeur. Les LSA sont par exemple diffusés à travers la zone CBLS à laquelle le routeur appartient, grâce à un algorithme de diffusion qui assure que tous les routeurs de la zone possèdent la même base de données. Une fois la base de données mise à jour, les routeurs calculent l'arbre de plus court chemin puis remplissent leur table de routage.
Le routage inter zone
Dans le cas d'un routeur inter zone, ce dernier résume la topologie des zones auxquelles il est connecté à l'exception de la zone Backbone. Ce résumé est alors transmis au Backbone qui le diffuse vers les autres routeurs inter zone du SA. Chaque routeur inter zone reçoit donc les messages de tous les autres routeurs inter zone du SA. Un routeur inter zone possède donc les informations sur la topologie complète du Backbone et un résumé de la topologie des autres zones. A partir de ces informations de topologie, le routeur calcule les chemins relatifs à toutes les destinations inter zone. Ces informations permettent à chaque routeur interne de router les paquets à destination des autres zones.
Le routage inter SA Pour les routeurs qui possèdent des informations à propos des autres systèmes autonomes, ils peuvent les diffuser à travers le SA. Ces informations obtenues, soit statiquement, soit grâce à un EPG (abréviation de Exterior Gateway Protocol) sont diffusées telles quelles à travers le SA.
Dans cet exemple de réalisation, les réseaux représentés font partie du même SA.
Pour que ces informations puissent être utilisées sur les routeurs du SA, la connaissance des routeurs externes est demandée. Pour cette raison, les routeurs inter zone diffusent aussi l'emplacement des routeurs externes.
Les messages Pour fonctionner, le protocole mis en #uvre dans le procédé selon l'invention utilise par exemple quatre types de message. Ces messages sont envoyés directement en IP par exemple. Il est aussi possible d'utiliser la fragmentation IP. Tous les messages CBLS partagent, par exemple, un entête commun de 20 octets.
Les quatre types de message peuvent être les suivants :
Type Nom Fonction 1 Hello Découverte des voisins et maintenance de la connectivité 2 Link State Request Demande de chargement de la base de données 3 Link State Update Mise à jour de la base de données 4 Link State Ack Acquittement d'une mise à jour > Les messages Hello sont utilisés lors de la découverte des voisins et de l'élection du RD (routeur désigné). Ils servent aussi à maintenir l'état de connectivité entre les voisins.
> Les messages Link State Request sont utilisés lors de la synchronisation des bases de données entre deux routeurs adjacents.
> Les messages Link State Update et Link State Ack servent à l'implémentation du processus fiable d'inondation décrit ci-après.
Le protocole Hello Ce protocole est utilisé dans l'étape de la découverte des voisins, de la maintenance des relations entre voisins, de l'assurance de la bidirectionnalité des liaisons et de l'élection du routeur désigné.
Un message Hello contient par exemple : > La liste des voisins dont le routeur a la connaissance pour permettre de juger de la bidirectionalité de la connexion, > La priorité du routeur qui est nécessaire pour l'élection du routeur désigné, > L'identificateur du routeur désigné et du routeur de secours auxquels le routeur est rattaché, > Les différentes constantes du protocole CBLS selon l'invention. Ces constantes sont par exemple les suivantes : Hello Interval, Router Dead Interval, Retransmission Interval, Sequence Interval, Request Interval.
SPECS (SDL Performance Evaluation of Concurrent Systems) [Butow M., Mestern M., Schapiro C., Kritzinger P. S., Performance Modeling from Formal Specifications , FORTE-PST y' 96, Kaiserslautern, Germany, October 1996] permet de modéliser les ressources (les machines) par des blocs SDL et les tâches s'exécutant sur une machine par des processus à l'intérieur d'un même bloc.
Les processus dans des blocs différents s'exécutent de manière concurrente, alors que les processus du même bloc s'exécutent dans un mode multitâche. Des délais de canaux et des caractéristiques de fiabilité peuvent être ajoutés. Le modèle s'exécute sur une machine virtuelle qui est dérivée du modèle SDL.
SPEET (SDL Performance Evaluation Tool) [M.
Steppler, M. Lott, "SPEET - SDL Performance Evaluation Tool", in A. Cavalli, A. Sarma (Ed. ), SDL'97 - Time for Testing, Proceeding of the 8th SDL Forum, Elsevier, 1997.] a pour objectif principal l'analyse de performances de systèmes spécifiés en SDL s'exécutant dans un environnement temps-réel. Les systèmes peuvent être simulés ou exécutés sur des émulateurs de matériels existants (Intel, Motorola# et Siemens).
Ils sont stimulés par des générateurs de trafics et sont interconnectés par des liens de transmission correspondant à des canaux physiques. Les utilisateurs peuvent définir facilement des sondes à l'intérieur de
la description formelle et introduire des indications de charge.
Les approches de [E. Heck, "Performance Evaluation of Formally Specified Systems - the intégration of SDL with HIT", doctoral Thesis, University of Dortmund, Krehl Verlag, 1996.] et de [Martins J., A system Engineering Methodology Integrating performance evaluation and Formal Spécification , PhD Thesis, l'Ecole polytechnique fédérale de Lausanne, Avril 1996] introduisent un cadre conceptuel (HIT) visant une synthèse des techniques de description formelle et d'évaluation de performance où les propriétés issues de ces deux mondes seraient préservées. Un outil transforme un modèle SDL en un modèle HIT possédant une structure hiérarchique pertinente pour l'étude de performances. Une traduction (manuelle pour l'instant) a également été proposée vers un modèle OPNET, ce qui permet de bénéficier de simulateurs performants.
QUEST [M. Diefenbruch, "Fonctional and Quantitative Vérification of Time-and resource Extended SDL Systems with Model-checking ", in : K Irmscher, (Ed. ), Proceeding of Messung, Modellierung und Bewertung van Rechen-und Kommunikationssyste,nen, Freiberg, Germany, VDE-Verlag, 1997] est basé sur un langage, QSDL (Queueing SDL), qui est' une extension du langage SDL. En ajoutant des annotations indiquant les machines qui fournissent des services, des disciplines de service, la gestion des files d'attente dans le modèle SDL, le modèle QSDL permet d'évaluer par simulation la performance du système correspondant
spécifié en SDL. Il permet également de valider et de vérifier un système SDL temporisé par model checking.
DO-IT Toolbox [A. Mitschele-Thiel and B.
MUlier-Clostermann, Performance Engineering of SDIJMSC systems , Journal on Computer Networks and ISDN Systems, Elsevier, 1998] effectue l'évaluation de performance de systèmes spécifiés en MSC et en SDL. Son originalité est de partir des MSC qui sont disponibles très tôt dans le cycle de vie, en y ajoutant des annotations de charge et précisant les ressources disponibles pour des exécutions spécifiques du système.
Il fournit une technique simple d'évaluation de performance pour l'analyse de goulots d'étranglement et l'optimisation d'implémentations, à partir d'hypothèses de temps de service déterministes.
EaSy-Sim [C. Schaffer and R. Raschhofer, A.
Simma, "EaSy-Sim A Tcol Environnement for the design of Comnplex, Real-Time systems", Proceeding International Conférence on computer Aided Systemns technologies, Innsbruck, Springer-Verlag, 1995] est un couplage entre l'environnement GEODE pour SDL et le simulateur SES/Workbench. L'environnement SDL est utilisé pour la vérification et la validation fonctionnelle, alors que SES/Workbench modélise la partie non fonctionnelle pour évaluer la performance. Le couplage est implémenté par des échanges de messages entre le code exécutable de l'application obtenu par GEODE et le simulateur SES/Workbench. Cet outil peut s'appliquer à une spécification MSC dans lequel des exigences de temps de réponse sont ajoutées pour des systèmes temps réel [C.
Schaffer "MSC/RT : Real-Time extension to Message
Sequence Charts(MSC), Internal Report TR 140-96, Institut fûr Systemwissenschaften, Johannes kepler universitât Linz, 1996].
De nombreuses recherches effectuées au cours de ces dernières années ont montré que de faibles apports en certaines vitamines et minéraux, ou un statut biologique précaire en ces micro-nutriments, pourraient constituer des facteurs de risque d'apparition de certaines maladies, telles le cancer, l'athérosclérose, la cataracte et le déclin du système immunitaire et des capacités cognitives (aujourd'hui appelées maladies dégénératives) (voir notamment HUGHES K, CHOO M, KUPERAN P, ONG CN, Aw TC. "Cardiovascular risk factors in relation to cigarette smoking : pop ulation- based survey among Asians in Singapore", Atherosclerosis, 1998;137:253-8 ; LORIA CM, KLAG MJ, CAULFIELD LE, WHELTON PK. "Vitamin C status and mortality in US adults", The American journal of clinical nutrition, 2000;72:139-45 ; SALONEN JT, SALONEN R, LAPPETELÂINEN R, MÂENPÂÂ PH, ALFTHAN G, PUSKA P. "Risk of cancer in relation to serum concentrations of selenium and vitamins A and E : case- control analysis of prospective data.", British medical journal 1985;290:417-20 ; SALONEN JT, ALFTHAN G, HUTTUNEN JK, PusKA P. "Association between sérum selenium and the risk of cancer", American journal of epidemiology 1984;120:342-9).
Les micronutriments les plus souvent associés aux maladies précitées sont les micronutriments antioxydants. Le mécanisme par lequel les antioxydants protègent l'organisme contre ces maladies est principalement leur action contre les radicaux libres et une restauration des fonctions du système immunitaire.
Les radicaux libres ont deux origines différentes. Ils peuvent provenir soit d'une source exogène, liée à l'environnement (polluants environnementaux, fumée de cigarette, rayonnements ionisants, prise de certains médicaments, anesthésiants et solvants industriels, ozone,...), soit d'une source endogène car, paradoxalement, l'organisme produit lui-même des radicaux libres lors des processus physiologiques normaux. En effet, l'organisme a un besoin impératif d'oxygène pour le fonctionnement de ses organes. Mais une très faible partie de l'oxygène que nous respirons aboutit, au niveau cellulaire, à la production de radicaux libres oxygénés. En permanence, au niveau de chaque mitochondrie, quelques pour cent de l'oxygène moléculaire O2 "échappent" à la réduction en eau et forment des radicaux superoxyde O2-0. D'autre part, ils sont également produits lors de l'activation des cellules immunitaires, car les radicaux libres jouent un rôle essentiel dans la destruction des bactéries et la défense de l'organisme.
Une production accrue ou non-contrôlée de radicaux libres entraîne des effets négatifs. Ces radicaux sont des espèces chimiques présentant un ou plusieurs électrons non appariés, qui sont donc très réactives car cherchant à s'apparier avec d'autres molécules. Ceci a pour conséquence de déstabiliser les molécules voisines et d'entraîner une réaction en chaîne aboutissant à des destructions au niveau cellulaire. Ainsi, par exemple, les produits engendrés peuvent modifier la structure physique des composants de la cellule comme les lipides, constituants essentiels des membranes cellulaires, les brins d'acide nucléique, altérer la fonction des protéines, et entraîner la glycation des sucres. Les radicaux libres oxygénés seraient ainsi responsables d'environ 10000 modifications de base au niveau de l'ADN par cellule et parjour .
L'attaque radicalaire des lipides entraîne une perte d'instauration des acides gras poly-insaturés membranaires, à l'origine d'une diminution de la fluidité des membranes.
De la même façon, l'oxydation de certaines lipoprotéines (les LDL notamment), est considérée comme une étape importante de l'athérogenèse.
L'oxydation des protéines entraîne une oxydation de groupements-thiol qui sont impliqués dans des nombreuses fonctions protéiques et enzymatiques. L'oxydation modifie également certains acides aminés, conduisant à la formation de groupements carbonyle qui s'accumulent avec l'âge. Une oxydation des protéines du cristallin est à l'origine de la cataracte.
L'oxydation des glucides intervient également au cours de la formation des produits terminaux de la glycation protéique (Advanced Glycosylated End products = AGE ). Les AGE s'accumulent au niveau des protéines à durée de vie longue, entraînant notamment une perte d'élasticité tissulaire, comme au niveau des vaisseaux sanguins et du cristallin et pourraient ainsi participer au vieillissement.
Les radicaux libres, en modifiant les acides nucléiques, dénaturent également l'ADN et entraînent des cassures chromosomiques. Ainsi, les réactions d'oxydation de l'ADN qui sont ubiquitaires sont impliquées dans la mutagénèse, la carcinogenèse, le vieillissement et la mortalité cellulaire L'organisme possède un système de défense antioxydante qui neutralise les radicaux libres oxygénés (espèces oxygénées réactives = EOR) après leur production. Il est aisé de concevoir qu'une partie d'une telle quantité de dommages échappe cependant aux systèmes de réparation, même les plus performants.
En cas de rupture d'équilibre de cette balance entre composés anti-oxydants et pro-oxydants, par exemple lorsque le système de défense antioxydante se déplète ou devient insuffisant pour contrecarrer la production de radicaux libres, un déséquilibre appelé "stress oxydatif' s'installe, ayant pour conséquence des dommages importants au niveau cellulaire.
Le stress oxydatif est donc l'un des facteurs associés à la physiopathologie des maladies dégénératives.
Des apports insuffisants en vitamines et minéraux antioxydants seraient ainsi susceptibles de favoriser l'apparition du stress oxydatif. En effet, un faible statut en antioxydants diminue les capacités de défense de l'organisme contre les agressions des radicaux libres de l'oxygène et augmente le risque de développement de certains cancers, des maladies cardiovasculaires et d'autres maladies dégénératives.
Plusieurs points importants ressortent des études épidémiologiques :
# des apports alimentaires insuffisants, et/ou un statut biologique marginal en vitamines et en oligo-éléments anti-oxydants, sont associés à une plus forte incidence de pathologies dégénératives.
# chez les sujets ayant les apports alimentaires les plus élevés en antioxydants, les études d'observation mettent en évidence un effet protecteur contre le risque d'apparition de cancers ou de maladies cardiovasculaires.
# il a également été observé, lors des études épidémiologiques, qu'il existe une corrélation significative entre un faible statut en micronutriments antioxydants et le déclin cognitif des personnes âgées. Il a particulièrement été montré que les sujets avec un apport faible en ss- carotène et vitamine E étaient les sujets présentant le stress oxydatif le plus élevé (voir l'étude EVA : BERR C, RICHARD MJ, ROUSSEL AM, BONITHON KC. "Systemic oxidative stress and cognitive performance in the population-based EVA study". Etude du Vieillissement Artériel, Free radical biology & medicine 1998;24:1202-8). L'étude POLA (Delcourt C, Cristol JP, Tessier F, Léger CL, Descomps B, Papoz L. "Age-related macular degeneration and antioxidant status in the POLA study". POLA Study Group. Pathologies Oculaires Liées à l'Age. Archives.117:1384- 90) a montré une incidence plus faible des maladies oculaires en fonction du statut biologique en vitamines E, C et caroténoïdes.
6 Une autre spécification importante serait que les systèmes PV-PA puissent constituer d'excellents médicaments injectables. Cette aptitude améliorée de l'administration par injection - e. g. intraveineuse, sous-cutanée ou intramusculaire - injectabilité se caractérise par : (i) un volume injecté réduit (pour une dose thérapeutique donnée), (ii) une viscosité faible.
Ces deux propriétés sont satisfaites lorsque la dose thérapeutique de PA est associée à une quantité minimale de PV. En d'autres termes, les PV doivent avoir un fort taux de chargement en PA.
7 Le coût propre aux PV dans une préparation injectable doit être réduit et là encore il convient que les PV aient un fort taux de chargement en PA. En définitive, la faible taille et un fort taux de chargement sont des spécifications majeures recherchées pour les PV.
9 Pour la famille de PA hydrophiles et amphiphiles, en particulier les protéines, il conviendrait d'avoir des PV qui soient adaptés à cette famille de PA en termes de facilité d'association et de libération et en termes de caractère non dénaturant.
Les propositions techniques antérieures, décrites infra, ont tenté de satisfaire l'ensemble de ces spécifications. A titre d'illustration, on citera les propositions antérieures (a) à (j) : (a) Le brevet US-A-5 286 495 concerne un procédé d'encapsulation par vaporisation de protéines en phase aqueuse, à l'aide de matériaux ayant des charges opposées, à savoir : l'alginate (chargé négativement) et la polylysine (chargée positivement). Ce procédé de fabrication permet de produire des particules de taille supérieure à 35 m.