INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
# une étape de purification, permettant la séparation entre les acides nucléiques et les autres constituants cellulaires relargués dans l'étape de lyse. Cette étape permet généralement de concentrer les acides nucléiques, et peut être adapté à la purification d'ADN ou d'ARN. A titre d'exemple, on peut utiliser des particules magnétiques éventuellement revêtues d'oligonucléotides, par adsorption ou covalence (voir à ce sujet les brevets US 4,672,040 et US 5,750,338), et ainsi purifier les acides nucléiques qui se sont fixés sur ces particules magnétiques, par une étape de lavage. Cette étape de purification des acides nucléiques est particulièrement intéressante si l'on souhaite amplifier ultérieurement lesdits acides nucléiques. Un mode de réalisation particulièrement intéressant de ces particules magnétiques est décrit dans les demandes de brevet : et WO-A-99/35500. Un autre exemple intéressant de méthode de purification des acides nucléiques est l'utilisation de silice soit sous forme de colonne, soit sous forme de particules inertes (Boom R. et al., J. Clin. Microbiol., 1990, n 28(3), p. 495-503) ou magnétiques (Merck: MagPrep Silica, Promega: MagneSil Paramagnetic particles). D'autres méthodes très répandues reposent sur des résines échangeuses d'ions en colonne ou en format particulaire paramagnétique (Whatman: DEAE-Magarose) (Levison PR et al., J. Chromatography, 1998, p. 337-344). Une autre méthode très pertinente mais non exclusive pour l'invention est celle de l'adsorption sur support d'oxyde métallique (société Xtrana : matrice Xtra-Bind).
Lorsque l'on souhaite extraire spécifiquement l'ADN d'un échantillon biologique, on peut notamment réaliser une extraction par du phénol, du chloroforme et de l'alcool pour éliminer les protéines et précipiter l'ADN avec de l'éthanol 100%. L'ADN peut alors être culoté par centrifugation, lavé et remis en solution .
Lorsque l'on souhaite extraire spécifiquement les ARN d'un échantillon biologique, on peut notamment réaliser une extraction par du phénol, du chloroforme et de l'alcool pour éliminer les protéines et précipiter les ARN
avec de l'éthanol 100%. Les ARN peuvent alors être culoté par centrifugation, lavé et remis en solution.
Au sens de la présente invention, on entend par réactif spécifique, un réactif qui, lorsqu'il est mis en contact du matériel biologique tel que défini précédemment, se lie avec le matériel spécifique dudit gène cible. A titre indicatif, lorsque le réactif spécifique et le matériel biologique sont d'origine nucléique, la mise en contact du réactif spécifique et du matériel biologique permet l'hybridation du réactif spécifique avec le matériel spécifique du gène cible. Par hybridation, on entend le processus au cours duquel, dans des conditions appropriées, deux fragments nucléotidiques se lient avec des liaisons hydrogènes stables et spécifiques pour former un complexe double brin. Ces liaisons hydrogènes se forment entre les bases complémentaires Adénine (A) et thymine (T) (ou uracile (U)) (on parle de liaison A-T) ou entre les bases complémentaires Guanine (G) et cytosine (C) (on parle de liaison G-C).
L'hybridation de deux fragments nucléotidiques peut être totale (on parle alors de fragments nucléotidiques ou de séquences complémentaires), c'est à dire que le complexe double brin obtenu lors de cette hybridation comprend uniquement des liaisons A-T et des liaisons C-G. Cette hybridation peut être partielle (on parle alors de fragments nucléotidiques ou de séquences suffisamment complémentaires), c'est à dire que le complexe double brin obtenu comprend des liaisons A-T et des liaisons C-G permettant de former le complexe double brin, mais également des bases non liées à une base complémentaire. L'hybridation entre deux fragments nucléotidiques dépend des conditions opératoires qui sont utilisées, et notamment de la stringence.
Selon un premier mode de réalisation de l'invention, le procédé de coloration avec effet éclaircissant des fibres est mis en oeuvre avec une composition ne comprenant pas d'agent oxydant.
Selon un deuxième mode de réalisation de l'invention, le procédé de coloration avec effet éclaircissant des fibres est mis en #uvre avec une composition comprenant un agent oxydant.
Selon une première variante de ces procédés de coloration conformes à l'invention, on applique sur les fibres, et notamment les cheveux, au moins une composition telle que définie précédemment, pendant un temps suffisant pour développer la coloration et l'éclaircissement désirés, après quoi on rince, on lave éventuellement au shampooing, on rince à nouveau et on sèche.
Selon une troisième variante de procédé de coloration conforme à l'invention, le procédé de coloration comporte une étape préliminaire consistant à stocker sous forme séparée, d'une part, une composition selon l'invention et, d'autre part, une composition comprenant, dans un milieu cosmétiquement acceptable, au moins un agent oxydant, puis à procéder à leur mélange au moment de l'emploi avant d'appliquer ce mélange sur les fibres kératiniques, et notamment les cheveux, pendant un temps suffisant pour développer la coloration désirée, après quoi on rince les fibres, on les lave éventuellement au shampooing, on les rince à nouveau et on les sèche.
Il est à noter que la composition selon l'invention, si elle est utilisée pour traiter des fibres kératiniques, telles que des cheveux châtains par exemple, permet d'atteindre les résultats suivants : Si l'on mesure la réflectance des cheveux lorsqu'on les irradie avec de la lumière visible dans la gamme de longueurs d'onde allant de 400 à 700 nanomètres, et que l'on compare les courbes de réflectance en fonction de la longueur d'onde, des cheveux traités avec la composition de l'invention et des cheveux non traités, on constate que la courbe de réflectance correspondant aux cheveux traités, dans une gamme de longueur d'onde allant de 500 à 700 nanomètres, est supérieure à celle correspondant aux cheveux non traités.
Cela signifie que, dans la gamme de longueur d'onde allant de 500 à 700 nanomètres, et de préférence de 540 à 700 nanomètres, il existe au moins une plage où la courbe de réflectance correspondant aux cheveux traités est supérieure à la courbe de réflectance
correspondant aux cheveux non traités. On entend par "supérieure", un écart d'au moins 0,05% de réflectance, et de préférence d'au moins 0,1%.
La présente invention se rapporte au domaine de la chi-5 mie thérapeutique.
Elle a plus particulièrement pour objet de nouvelles compositions pharmaceutiques destinées à traiter la xérostomie par voiebucco-pharyngée.
Elle a spécifiquement pour objet de nouvelles composi- tions pharmaceutiques destinées à lutter contre l'hyposialie caractérisées en ce qu'elles contiennent une huile végétale associée ou mélangée à un ou plusieurs excipients ou véhicules appropriés pour la sphère bucco-pharyngée.
L'hyposialie, et en particulier la xérostomie, est un trou- ble de la sécrétion des cellules glandulaires exocrines, qui entraîne la sécheresse de la sphère buccale. Un des symptômes les mieux caractérisés de l'hyposialie est le syndrome de Sjôgren qui est du à l'infiltration de cellules inflammatoires dans les acini des glandes exocrines et au-tour du conduit excrétoire. Il en résulte une destruction et une atrophie des acini, et des cellules épithéliales du conduit. Les symptômes typique de cette maladie consistent en un état de sécheresse générale des muqueuses, et en particulier de sécheresse du conduit respiratoire qui conduit à des infections des poumons et parfois à d'autres perturbations graves comme la pneumonie.
Une autre manifestation de l'hyposialie réside dans la difficulté de la mastication et surtout de la déglutition.
L'hyposialie du fait d'une diminution de la sécrétion salivaire provoque la sécheresse des lèvres et de la cavité buccale. Elle cause également une sensation de soif, de la xérose de la tunique mu- queuse de la bouche, de l'urticaire et de la dyspepsie.
Une autre conséquence de l'hyposialie consiste dans le fait que chez les sujets présentant le syndrome de la bouche sèche, les aliments inévitablement demeurent dans la cavité buccale sans être déglutis et peuvent entraîner des caries dentaires.
On connaît une multiplicité de facteurs étiologiques qui ont été considérés comme responsables du syndrome de la bouche sèche. Par exemple, les facteurs systémiques comprennent: - les maladies fébriles, la déshydratation, les endocrinopathies (myxoedèmes, maladie de Basedow, le diabète), les troubles du métabolisme (diabète, urémie, cirrhose hépatique), les carences en vitamines A, les carences en vitamines B, o les maladies auto-immunes comme le syndrome de Sjôgren, la sclérodermie progressive, etc..., les anémies de privation, les saignements - et surtout le vieillissement.
L'hyposialie peut également être provoquée par l'administration de certains médicaments, comme les parasympathomimétiques. Ces effets, provoqués par l'atropine, l'hyoscine ou la scopolamine, sont bien connus.
Des facteurs locaux peuvent affecter la salivation comme par exemple une atrophie des glandes salivaire, des séquelles de radio- thérapie du maxillaire ou une malformation des maxillaires.
Normalement, un sujet en bonne santé produit de 1 à 1,5 litre de salive chaque jour par l'intermédiaire d'une paire de glandes salivaires principales, gauche et droite, formées de trois parties: glandes parotides, glandes sub-mandibulaires, et glandes sublinguales.
La qualité de la salive produite par ces différentes glandes peut varier sensiblement et il en résulte des variations de viscosité liées 30 à une teneur en eau variable.
La composition de la salive est variable selon son origine, et son degré de fluidité dépend des glandes salivaires qui la sécrète.
Par contre, l'effet des parasympathomimétiques est global en ce qu'il supprime toute forme de salivation.
L'absence de salivation est un symptôme très pénible qui empêche sensiblement les possibilités d'élocution et surtout les possibilités de déglutition sans absorber en même temps des volumes importants de liquide.
Jusqu'ici, le traitement de la xérostomie a été d'utiliser des acides gras comme l'acide linoléique, l'acide arachidonique, l'acide alphalinolénique, l'acide eicosa pentaenoïque ou l'acide docosahexanoïque. Ceci laisse penser que le facteur important de leur activité réside ans le taux de transformation en prostaglandine du type I (PG1), de type II (PG2) ou en leucotriènes (LT1) ou (LT5).
1H-NMR (DMSO-d6) 8 1.58 (s, 4H) ; (m, 4H) ; 3.58-3.78 (m, 2H) ; 4.16-4.20 (m, 1H) ; 4.58 (d, 2H) ; 4.88 (t, 1H) ; 7. 08-7.25 (m, 5H) Intermédiaire 12 : Préparé à partir de 2-amino-3-(4-chloro-phenyl)-propan-1- ol selon la méthode Bl.
1H-NMR (DMSO-d6) 8 1. 58 (s, 4H) ; (m, 4H) ; 3. 75 (m, 2H) ; 4. 00-4.14 (m, 1H) ; (d, 2H) ; 4. 90 (t, 1H) ; 7. 10 (d, 2H) ; (d, 2H) Intermédiaire 13 : Préparé à partir de 2-amino-3-(lH-indol-3-yl)-propan-1-ol selon la méthode Bl.
1H-NMR (DMSO-d,) 8 1. 61 (s, 4H) ; 3. 59-3.86 (m, 4H) ; 4. 26 (m, 2H) ; (m, 1H) ; 4. 65 (d, 2H) ; (m, 3H) ; (d, 1H) ; 7. 48 (d, 1H) ; (s, 1H) Intermédiaire 14 : Préparé à partir de 2-amino-2-methyl-propan-1-ol selon la méthode Bl.
1H-NMR (DMSO-d6) 8 1.39 (s, 6H) ; 1.60 (s, 4H) ; (s, 2H) ; 3. 61 (d, 2H) ; (m, 3H) Intermédiaire 15 : Préparé à partir de 3-amino-2,2-dimethyl-propan-1-ol selon la méthode Bl.
1H-NMR (DMSO-d,) 8 0. 73 (s, 6H) ; 1. 65 (m, 4H) ; (m, 6H) ; (t, 1H) ; 4. 68 (s, 2H) Intermédiaire 16 : Préparé à partir de 3-amino-3-phenyl-propan-1-ol selon la méthode Bl.
1H-NMR (DMSO-d6) 8 1. 62 (s, 4H) ; 2. 16-2.46 (m, 2H) ; (t, 2H) ; (m, 2H) ; (t, 1H) ; (s, 2H) ; 5. 23- 5. 28 (m ; 1H) ; 7. 25-7.31 (m, 5H) Intermédiaire 17 : Préparé à partir de 2-amino-5-hydroxy-pentanoic acid methyl ester (voir ci-dessous) selon la méthode Bl.
ESI-MS m/z 298 [M+H]+ 2-Amino-5-hydroxy-pentanoic acid methyl ester
Ce composé a été préparé par déprotection à l'hydrogène du 2-benzyloxycarbonylamino-5-hydroxy-pentanoic acid methyl ester (voir ci-dessous).
2-benzyloxycarbonylamino-5-hydroxy-pentanoic acid methyl ester Ce composé a été préparé par réduction du 2- benzyloxycarbonylamino-pentanedioic acid 1-methyl ester (Z- Glu-OMe) commercial selon une méthode décrite (Ref 7).
Intermédiaire 18 : Préparé à partir de (4-aminomethyl-phenyl)-methanol (cf. ci-dessous) selon la méthode Bl.
1H-NMR (DMSO-d6) # 1.64 (s, 4H) ; (s, 2H) ; (m, 4H) ; 4. 72 (s, 2H) ; (t, 1H) ; (d, 2H) ; (d, 2H) (4-Aminomethyl-phenyl)-methanol Ce composé a été préparé à partir de 4-cyanobenzaldéhyde par réduction à l'hydrure de lithium et d'aluminium selon une méthode décrite (Ref 8).
Intermédiaire 19 : Préparé à partir de (3-aminomethyl-phenyl)-methanol (décrit ci-dessous) selon la méthode Bl.
1H-NMR (DMSO-d6) 8 1. 65 (s, 4H) ; (s, 2H) ; (m, 4H) ; 4. 73 (s, 2H) ; (m, 1H) ; (m, 4H) (3-Aminomethyl-phenyl)-methanol Ce composé a été préparé à partir de 3-cyanobenzaldéhyde par réduction à l'hydrure de lithium et d'aluminium selon une méthode décrite (Ref 8).
Intermédiaire 20 : Préparé à partir de (2-aminomethyl-phenyl)-methanol (décrit ci-dessous) selon la méthode Bl.
1H-NMR (DMSO-d6) 8 1.67 (s, 4H) ; (s, 2H) ; (s, 4H) ; 4. 76 (s, 2H) ; (t, 1H) ; 6. 97-7.38 (m, 4H)
(2-Aminomethyl-phenyl)-methanol Ce composé a été préparé à partir de 2-cyanobenzaldéhyde par réduction à l'hydrure de lithium et d'aluminium selon une méthode décrite (Ref 8).
A cette fin, on prévoit deux plages de variation de tension, chacune correspondant à une fenêtre de mesure respective, à savoir : - une qui recouvre la fenêtre de spécification de la tension VTvierge, et - une qui recouvre la fenêtre de spécification de la tension VTeff.
Les plages susmentionnées sont représentées à la figure 10, qui représente l'évolution du courant de drain ID (en ordonnée) d'un transistor FGT contre la
tension appliquée à sa grille de commande Vcg (en abscisse) . On note que, tant pour la tension VTviergeque pour la tension VTeff, la plage de mesure dépasse suffisamment les limites de la plage de tolérance prévue par la spécification, afin de permettre d'analyser des cellules nettement en dehors de cette dernière.
L'évolution de la tension Vcg sur les plages de mesure est obtenue par programmation de valeurs incrémentales successives de Vcg au moyen du générateur de tensions programmable 44, la sortie 56 de ce dernier étant routé vers la grille de commande du transistor FGT de la cellule à analyser. Il est ainsi possible d'extraire avec précision les tensions de seuil vierge VTvierge et effacement VTeff pour une valeur constante du courant de lecture Ilect. : ces tensions correspondent à la tension Vcg à laquelle le courant de drain ID est égal au courant de lecture Ilect, fixé par l'amplificateur de lecture.
Pour les deux fenêtres de mesure, la valeur de tension de seuil respective Vierge et VTeff est donnée par la valeur de la tension Vcg de commande de grille lorsque l'amplificateur de lecture 12 commute.
Le processus d' extraction de la valeur de VTvierge ou de VTeff pour le contrôle une cellule donnée 16 s'opère par les étapes suivantes : l.i) sélectionner la cellule individuelle devant faire l'objet d'un contrôle, par adressage sur ses lignes BL et WL correspondantes ; si on prévoit de lecture en parallèle de cellules, chacune sera associée à son amplificateur de respectif l.ii) fixer le courant de lecture de l'amplificateur de lecture 12 à une valeur nominale Ilect.
l.iii) remplir le registre à décalage 66 (figure 9) de valeurs logiques 0. De la sorte, chacune des M sorties EPV1 à EPVM est initialement à l'état 0. Ces sorties, reliées chacune aux deux grilles de commande des transistors 62 et 64 de leur commutateur respectif 54-1 à 54-M, bloquent ces derniers (les maintiennent ouvert) de par leur valeur logique 0. Aucune sortie 50-1 à 50-M de générateur de tension 48-1 à 48-M n'est donc présente à la sortie commune 56 qui produit la tension Vcg ; l.iv) aiguiller, via les circuits de routage, la sortie commune 56 du générateur de tensions vers la grille CG du transistor FGT de la cellule 16 considérée 1.v) introduire un bit logique 1 dans le premier étage EV1 du registre à décalage 66, via l'entrée EVser. Ce bit positionne la sortie parallèle correspondante EPV1 de cet étage à l'état logique 1.
Cette sortie EPV1, qui est reliée aux grilles des transistors 62 et 64 du commutateur 54-1, rend ce dernier passant par son état logique 1. La sortie de la tension 1. VREF du générateur 48-1 passe alors sur la sortie commune 56. Les autres commutateurs restent bloqués ; l.vi) déterminer si la sortie de l'amplificateur de lecture 12 bascule de l'état logique 1 à l'état logique 0 ; l.vii) s'il n'y a pas de basculement d'état logique constaté à l'étape l.vi), décaler le bit logique 1 vers l'étage suivant EV2 et faire revenir l'étage EV1 à l'état 0 (en introduisant un bit 0 à l'entrée du registre avant le décalage). De la sorte, et de manière analogue, c'est le commutateur 54-2 qui devient l'unique commutateur passant ; il transmet la tension 2.VREF de son générateur 50-2 sur la sortie commune 56 ;
l.viii) déterminer si la sortie de l'amplificateur de lecture 12 bascule l'état logique 0 à l'état logique 1.
Tant qu'il n'y a pas de basculement d'état logique, on répète en boucle les étapes l.vii) et l.viii), celles-ci prenant la forme plus générale, en commençant par l'étape l.viii) de : l.viii') décaler le bit logique 1 vers l'étage suivant EVk+1, faire revenir l'étage EVk à l'état 0, de sorte que le commutateur 54-k+l devienne l'unique commutateur passant et produise la tension (k+1). VREF sur la sortie commune 56, où k prend des valeurs successives à partir de 1, et retourner à l'étape l.vi' l.vii') déterminer si la sortie de l'amplificateur de lecture 12 bascule de l'état logique 1 à l'état logique 0 : s'il n'y a pas de basculement, incrémenter k d'une unité, et retourner à l'étape l.viii') ; - s'il y a basculement, identifier la valeur k et produire en sortie sa valeur numérique sous forme binaire.
Avantageusement, cette forme binaire s'obtient directement à partir de la sortie SVser du registre à décalage 66, par exemple en analysant son contenu : la position du bit 1 indique directement le coefficient correspondant k dans la relation VTvierge - k. VREF ou VTeff k.VREF (bien entendu, les valeurs de k seront spécifiques à chaque tension de seuil évalué). Elle peut aussi s'obtenir en décomptant, à partir du moment de basculement, le nombre p de décalages nécessaires pour que le bit 1 apparaisse à cette sortie, le coefficient de VREF étant dans ce cas (M-p). D'autres approches sont bien entendu possibles.
La sortie de SVser du registre à décalage 66 peut être dirigée vers un terminal de la mémoire 110 accessible en mode test, selon des techniques connues.
Ce processus d'extraction de valeur de tension de seuil est appliqué pour la cellule vierge (donnant VTvierge) et pour cette même cellule à l'état programmé en effacement (donnant VTeff) .
Ainsi, on obtient en sortie de la mémoire 110 une donnée numérique qui indique chacune des tensions de seuil VTvierge et VTeff en termes de coefficient respectif de la valeur incrémentale élémentaire VREF.
La figure 11 illustre le principe de l'utilisation du registre à décalage 66 selon le processus venant d'être décrit, dans le cas de la détermination de la tension de seuil VTvierge pour une cellule donnée soumise à un test. Cette figure reprend la courbe de gauche de la figure 10, sur les mêmes axes. Elle indique en outre, par des lignes verticales de projection sur l'abscisse, les valeurs de tension d'entrée Vcg appliquées au transistor FGT. Celles-ci sont successivement de VREF, 2.VREF, 3.VREF jusqu'à atteindre 7.VREF. A cette valeur Vcg = 7.VREF, la valeur du courant ID traversant le transistor FGT dépasse le courant de lecture Ilect utilisé. (Plus précisément, la condition ID > Ilect à lieu pour une valeur de tension 6. VREF 0000 0010 0000 0000. Cette valeur, présentée à un point de la mémoire est chargée directement dans un registre d'un appareil de test ou de mesure. Celui-ci est programmé pour interpréter ce mot binaire comme codant la valeur 7, laquelle est interprétée comme le
En supposant qu'un homo-octamère a de grandes chances de présenter une certaine symétrie de liaison, le centre de la région protégée par la DNase 1 (le G en position 32 de la région intergénique ethA-R) semble scinder deux copies d'une longue répétition directe (T-C-A-A-C-G-t/a-a/g- A-T-G-T-C-G-A; SEQ ID N 26 et 27) qui comprend elle-même des répétitions inversées imparfaites (bases en italique, Figure 4A).
Lorsqu'un fragment de 37 pb (Figure 4A, IG-37) chevauchant ces deux répétitions directes était fixé sur la surface de la cellule Sensor chip, une
liaison coopérative d'en moyenne 4,5 molécules de His6-EthR par molécule d'ADN a été observée (Figure 4E).
Lorsqu'un fragment PCR de 36 pb (Figure 4A ; IG-36) chevauchant les deux répétitions inversées pratiquement parfaites (T-A-a/g-T-G-T-C-G-A) centrées sur la base 34 était utilisé, la liaison de His6-EthR était fortement réduite (Figure 4F).
B.6. Détermination du coefficient de Hill (nH) et du KD de l'interaction entre His6-EthR et la région intergénique ethA-R Afin d'évaluer l'affinité de His6-EthR pour la région intergénique ethA-R, des analyses de l'interaction à l'équilibre ont été effectuées. 100 RU du fragment d'ADN biotinylé de 106 pb mentionné ci-dessus (IG-106) ont été immobilisées sur une cellule Sensor Chip. Cette faible quantité d'ADN immobilisé a permis à la protéine d'atteindre un équilibre de liaison pour une plus large plage de concentrations de protéines (de 0,1 à 2 M) dans le volume maximal d'injection possible pour l'appareil BIAcore 2000'. Dans ces conditions, la capacité de la cellule Sensor Chip a été estimée à Rmax = 225 RU, ce qui correspond à la même stoechiométrie de 8 molécules His6-EthR que celle déduite des analyses SPR précédentes (voir paragraphe B.5). La saturation fractionnaire de l'ADN à l'équilibre Req/Rmax (où Req est la valeur de RU mesurée à l'équilibre) a été déterminée pour chaque concentration de protéines. La fonction de Hill (Fersht, 1985), a été reportée comme une fonction du log de [His6-EthR] (Figure 5). L'analyse de la partie linéaire de la fonction de Hill (de 0,2 à 0,8) par régression linéaire (R2= 0,9904) a fourni une constante de liaison globale à l'équilibre (Ko) de 146 nM et un coefficient de Hill (nH) de 3,46. La valeur de Ko représente une valeur moyenne pour les 8 sites de liaison. La valeur théorique maximale du coefficient de Hill est 8 et correspond au nombre de sites de liaison de His6-EthR. La valeur du coefficient de Hill de 3,46, supérieure à 1, indique une liaison coopérative de His6-EthR sur la sonde d'ADN (Fersht, 1985).
B.7. Nécessité de la présence de l'opérateur pour l'octomérisation de His 6-EthR Les expériences de SPR décrites ci-dessus (voir paragraphe B. 5) ont indiqué que EthR se lie de manière coopérative sous la forme d'un homooctamère à l'opérateur d'ethA.
Afin de déterminer si la multimérisation de EthR nécessite la présence de cette cible d'ADN, Hiss-EthR a été soumis à une chromatographie analytique d'exclusion de taille sur une colonne Superdex 200 HR 10/30 en présence d'un fragment PCR de 94 pb contenant la région intergénique ethA-R (voir matériels et méthodes, partie A supra).