INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La détermination de la susceptibilité d'un virus VIH à un inhibiteur de transcriptase inverse est effectuée de la manière suivante : des cellules 293 T sont transfectées avec 7, 5 ug de plasmide pSRT linéarisé par NruI, 0, 1 ug du plasmide pVSV-G et 0, 5 et 1 ug du produit issu de la réaction PCR de la transcription inverse de VIH. Le précipité de transfection est retiré des cellules après 18 heures d'incubation et du milieu de croissance frais est ajouté. Après 24 heures de culture, le surnageant est clarifié par centrifugation (500 g, 15 minutes) et transféré sur des cellules indicatrices P4 lesquelles ont été pré-incubées avec des dilutions sériées d'un inhibiteur de la transcriptase inverse, dans de puits triplicatas, durant quatre heures. La gamme de concentrations d'inhibiteur utilisée varie selon les composés. Le signal produit par l'activation du gène marqueur a été développé avec du CPRG durant 48 heures, comme pour l'analyse de la susceptibilité à un inhibiteur
Les conditions de transfert sont optimisées au moyen d'un test en échiquier. La variation du ratio du plasmide/produit issu de PCR ne modifie significativement la quantité de p24 ou de transcriptase inverse produites ou la vitesse de réaction avec CPRG. Etant donné que le plasmide circulaire, pVSV-G semble être extrêmement toxique pour les cellules 293T, la quantité de celui-ci a été réduite de 3 ig à 0, 1 ug dans le mélange de transfection, conduisant à des rendements élevés en p24 ( > 20 ng/ml comparé à 9,8 ng/ml).
Les gammes de concentration d'inhibiteur utilisées sont choisies en fonction de la toxicité cellulaire de chaque composé et du ratio IC50/IC90 pour la susceptibilité des isolats résistants (Tableau 1). Par exemple, comme 11 indice ICso pour l'abacavir pour les cellules P4 est d'environ 250 uM alors que l'indice IC50 pour ce composé pour la souche native du virus est d'environ 3 uM, la détection de la résistance est limitée par la toxicité. Une gamme de quatre dilutions en série, commençant à 200 uM a été utilisée pour l'abacavir, permettant la détection de jusqu'à 60 fois plus de résistance.
D'autre part, puisque la toxicité de l'AZT pour les cellules P4 est élevée ( > 300 uM) alors que 11 indice ICso est considérablement inférieur, une gamme plus large de dilutions a été utilisée (dilution en série 1/10 à partir de 5 uM) de manière a permettre la détection de niveaux élevés de résistance (jusqu'à 100 fois).
Pour la transcriptase inverse RVA, l'indice ICgQ est utilisé plutôt que l'indice IC90 car la détection de l'indice IC90 pour les virus résistants pourrait demander des niveaux de composé toxiques pour la plupart d'inhibiteurs de transcriptase inverse.
Selon un autre mode de réalisation d'une construction d'acides nucléiques de l'invention, on utilise des promoteurs connus pour diriger l'expression de la séquence d'acide nucléique fusionnée de façon constitutive ou tissu spécifique (graine) ou stade développement.
A titre d'exemple, on peut citer : a) des promoteurs constitutifs : - le promoteur 35S du virus de la mosaïque du chou-fleur, ou le promoteur 19S ou avantageusement le promoteur constitutif double 35S (pd35S), décrits dans l'article de Kay et al., 1987 ; - le promoteur actine du riz suivi de l'intron actine de riz (pAR-IAR) contenu dans le plasmide pAct1-F4 décrit par Mc Elroy et al., 1991 ; - le promoteur constitutif EF-1a du gène codant pour le facteur d'élongation végétale décrit dans la demande PCT n WO 90/02172 ou encore dans l'article de AXELOS et al. (1989) ; - le superpromoteur chimérique PSP (NI et al., 1995) constitué de la fusion de trois copies de l'élément d'activité transcriptionnelle du promoteur du gène de la octopin synthase de Agrobacterium tumefaciens et de l'élément d'activation de la transcription du
promoteur du gène de la mannopin synthase de Agrobacterium tumefaciens ; et le promoteur ubiquitine du tournesol (BINET et al., 1991) ; le promoteur de l'ubiquitine 1 de maïs (CHRISTENSEN et al., 1996).
- le promoteur de l'ubiquitine 1 de maïs (Christensen et al., 1996) b) des promoteurs spécifiques : - des promoteurs spécifiques des graines (Datla, R. et al., 1997), notamment les promoteurs de la napine (EP 255 378), de la phaseoline (Riggs et al., 1989). , de la glutenine, de l'héliantinine (WO 92/17580), de l'albumine (WO 98/45460), de l'oléosine (WO 98/45461), de l'ATS1 ou de l'ATS3 (WO 99/20775).
- des promoteurs Esr tels que décrits dans la demande PCT/FROO/02596 qui permettent une expression à la fois spécifique à l'interface entre l'embryon et l'albumen et précoce au cours du développement de l'albumen.
- le promoteur du gène Vp1 décrit par Mc Carty et al. (1989).
Les acides nucléiques régulateurs ci-dessus peuvent être utilisés pour surexprimer le polynucléotide codant pour le polypeptide ISUM2A ou encore un fragment du polypeptide ISUM2A, en particulier lorsque l'obtention de plantes possédant des graines à gros embryons riches en huile est recherchée.
Ainsi, l'invention concerne aussi un acide nucléique codant pour un polypeptide ISUM2A ou pour un fragment d'un polypeptide ISUM2A tel que défini ci-dessus et comprenant un polynucléotide régulateur régulant la transcription et/ou la traduction de la séquence codante, dans lequel le polynucléotide régulateur permet un haut niveau de transcription de l'ARNm correspondant et/ou un haut niveau de traduction du polypeptide correspondant dans l'organisme hôte, y compris cellule hôte ou plante, dans lequel il est exprimé.
L'invention est également relative à l'utilisation d'un acide nucléique tel que défini ci-dessus, d'un vecteur recombinant comprenant cet acide nucléique ou encore d'une cellule hôte transfectée ou transformée avec cet
acide nucléique pour l'obtention d'une plante transformée susceptible de produire des graines riches en huile.
Dans un mode de réalisation préférée, on recherche une expression contrôlée du polynucléotide codant pour le polypeptide ISUM2A, tout particulièrement lorsque la production de graines à développement de germe affecté est recherchée.
Comme indiqué précédemment, un défaut dans l'expression du gène isum2A provoque la production de graines sans germe, ces graines n'étant pas fertiles et ne permettant pas la multiplication des plantes mutées dans le gène isum2A.
De plus, l'expression du gène isum2A semble nécessaire à une croissance normale de la plante avant la pollinisation.
La pollinisation est le moment où le pollen mature entre en contact avec une soie réceptive.
Il en résulte que l'obtention d'une production de graines à développement de germe affecté par une plante implique : a) une expression normale d'au moins une copie fonctionnelle d'un acide nucléique codant pour un polypeptide ISUM2A depuis le stade de germination de la graine jusqu'à la pollinisation de la plante ; et b) une absence de la transcription ou de la traduction de cet acide nucléique dès la pollinisation de la plante, afin de produire des graines affectées dans le développement du germe.
L'absence de transcription ou de traduction de l'acide nucléique codant pour un polypeptide ISUM2A dès le stade de la pollinisation affecte ou bloque le développement de l'embryon de la graine afin d'aboutir à l'objectif recherché.
- (V) les copolymères comportant parmi leurs monomères un acide carboxylique à insaturation a, ss-monoéthylénique et un ester d'acide carboxylique à insaturation a, Pmonoéthylénique et d'un alcool gras oxyalkyléné.
A titre d'exemple de ce type de composé-on peut citer l'ACULYN 22@ vendu par la société ROHM et HAAS, qui est un terpolymère acide méthacrylique/acrylate d'éthyle/méthacrylate de stéaryle oxyalkyléné.
Polymères associatifs de type cationique On peut citer parmi eux : - (1) les polyuréthanes associatifs cationiques dont la famille a été décrite par la demanderesse dans la demande de brevet français NO-0009609 ; elle peut être représentée par la formule générale (la) suivante : dans laquelle : R et R', identiques ou différents, représentent un groupement hydrophobe ou un atome d'hydrogène ; X et X', identiques ou différents, représentent un groupement comportant une fonction amine portant ou non un groupement hydrophobe, ou encore le groupement L" ; L, L'et L", identiques ou différents, représentent un groupement dérivé d'un diisocyanate ; P et P', identiques ou différents, représentent un groupement comportant une fonction amine portant ou non un groupement hydrophobe ; Y représente un groupement hydrophile ; r est un nombre entier compris entre 1 et 100, de préférence entre 1 et 50 et en particulier entre 1 et 25, n, m, et p valent chacun indépendamment des autres entre 0 et 1000 ; la molécule contenant au moins une fonction amine protonée ou quaternisée et au moins un groupement hydrophobe.
Une famille préférée de polyuréthanes associatifs cationiques est celle correspondant à la formule (la) décrite ci-dessus et dans laquelle : R et R'représentent tous les deux indépendamment un groupement hydrophobe, X, X'représentent chacun un groupe L", n et p valent entre 1 et 1000 et L, L', L", P, P', Y et m ont la signification indiquée ci-dessus.
Le fait que n et p valent 0 signifie que ces polymères ne comportent pas de motifs dérivés d'un monomère à fonction amine, incorporé dans le polymère lors de la polycondensation. Les fonctions amine protonées de ces polyuréthanes résultent de l'hydrolyse de fonctions isocyanate, en excès, en bout de chaîne, suivie de l'alkylation des fonctions amine primaire formées par des agents d'alkylation à groupe hydrophobe, c'est-à-dire des composés de type RQ ou R'Q, dans lequel R et R'sont tels que définis plus haut et Q désigne un groupe partant tel qu'un halogénure, un sulfate etc.
RMN' (DO), ≈(ppm) : 18, 95 (2C, C-6) ; 65, 85 (d, J1-P 163, 7 Hz, 2C, C-1) ; 76,77 (d, J3-p 11, 3 Hz, 2C, C-3) ; 113,67 (2C, C-5) ; 142,45 (2C, C-4).
SM FAB > 0 m/z (GT) : 395 [M-3NH4+4Ht.
- Exemple 112 : a, ss-(4-Méthyl-2oxa-pent-4-ényl)-pyrophosphonate de diammonium (101) :
Rdt=18% Rf=0, 60 (5 : 5, ammoniaque 27% : isopropanol) RMN tH (D2O), 5 (ppm) : 1, 62 (s, 6H, H-6) ; 3, 55-3, 61 (d, J, -p 8, 3 Hz, 2H, H- 1) ; 3, 93 (s, 4H, H-3) : 4, 85-4, 93 (m, 4H, H-5).
RMN P (D : O), 8 (ppm) : 9, 9.
RMN 13C (D20), 8 (ppm) : 19, 10 (2C, C-6) ; 65, 98 (d, Ji. p 164, 0 Hz, 2C, C-l) ; 76, 81 (d, J3-P Il, 3 Hz, 2C, C-3) ; 113, 62 (2C, C-5) ; 142, 45 (2C, C-4).
SM FAB > 0 m/z (GT) : 315 [M-2N14+3Ht Exemple 113 : Activation de la prolifération des lymphocytes T du sang périphérique humain Les lymphocytes du sang périphérique humain (PBMC) sont isolés du sang de donneurs par centrifugation sur Ficoll-Hypaque. Ils sont ensuite mis en culture dans des plaques de 96 puits à raison de 2. 106 cellules/ml dans 200 ni de milieu RPMI 1640 (Gibco) contenant 10% de sérum foetal de veau ou de sérum humain AB, 20 mM de Glutamine, 10mM Hepes, ImM de pyruvate de sodium, 10 g/ml de pénicilline-streptomycine. On ajoute ensuite les molécules à tester à des concentrations finales allant de 0, 001 M à 500 u. M. Chaque condition est réalisée en triplicat. Les molécules sont diluées dans du tampon phosphate isotonique (PBS). Les cellules sont ensuite incubées à 37 C-5% C02 pendant 4 jours. La prolifération cellulaire est ensuite déterminée par la mesure de l'incorporation de thymidine 3H (H- TdR). Pour cela, on ajoute 0, 5 uCi de 3H-TdR par culture. Après 24h, les cellules sont récupérées sur un Cell Harvester (Packard Instruments) et la radiaoctivité incorporée
dans du matériele de haut poids moléculaire est comptée à l'aide d'un compteur RackBéta (Packard).
Les index de stimulation sont évalués comme suit : (cpm/culture en présence de la molécule)- (cpm/culture sans molécule) x 100 Index (cpm) =------------------------------ cpm/culture sans molécule Dans toutes les expériences l'isoprényl pyrophosphate (IPP) est choisi comme référence. Les résultats sont exposés sur la Figure 1, qui représente l'index de prolifération en fonction de chaque molécule pour les différentes concentrations testées. Sur cette figure, on observe que les molécules MI : (E) l-pyrophosphono-4- méthylpenta-l, 3-diène, M2 : (E) I-pyrophosphono-penta-l, 3-diène, M3 : (E) 1- pyrophosphono-buta-l, 3-diène, M4 : 5-pyrophosphono-2-méthylpent-2-ène, M, : a. y- di-[ 4-méthylpent-4-ényl]-triphosphonate, M6 : 5-pyrophosphono-2-méthylpentène, M7 : 5-triphosphono-2-méthylpentène sont plus efficaces que l'IPP pour induire la prolifération des lymphocytes T.
Exemple 114 : Expansion des lymphocytes Vy9N82 Afin de vérifier la sélectivité à l'égard des lymphocytes Vy9/V82 du pouvoir activateur des molécules, les PBMC, cultivés dans les conditions décrites ci-dessus ont été analysés après 5 jours de culture en présence des différentes molécules par immunofluorescence en cytométrie de flux. Pour cela, les cellules sont récupérées, lavées dans du PBS puis incubées en présence d'anticorps monoclonal anti-CD3 humain conjugué à la fluoresceine (FITC, FL1) et d'anti-Vy9 humain couplé à la biotine puis révévlé avec le conjugué Streptavidine-phycoerythrine (ST-PE, FL2). Les marquages sont réalisés par incubation 30 minutes avec 0,5 u. g de chaque anticorps par million de cellules. L'analyse est effectuée après lavage sur un cytofluorimètre analyseur-trieur de cellules FACScalibur-SORT (Becton Dickinson. Moutain View, CA). Les résultats sont exploités à l'aide du logiciel Cellquest.
* Les résultats sont exposés sur les Figures 2 (A à L).
La figure 2A donne le profil (taille FSC et granulosité SSC) des cellules étudiées. La Figure 2B montre un PBMC frais avant mise en culture. La figure 2C montre un PBMC frais après 5 jours en culture. Les figures 2D à 2L montrent un PBMC après 5 jours en culture en présence de la molécule testée.
Figure 2D : phytohémagglutinine A (PHA) 1 g/ml Figure 2E : isoprénylpyrophosphate (IPP) 1 uM Figure 2F : (E) 1-pyrophosphono-4-méthylpenta-1,3-diène 100 M Figure 2G :(E) 1-pyrophosphono-penta-1,3-diène 100 M Figure 2H : (E) 1-pyrophosphono-buta-1,3-diène 100 M Figure 21 : 5-pyrophosphono-2-méthylpent-2-ène lOOuM Figure 2J : a, γ-di-[4-méthylpent-4-ényl]-triphosphonate 100 M Figure 2K : 5-pyrophosphono-2-méthylpentène lOOuM Figure 2L : 5-triphosphono-2-méthylpentène 1OOnM Sur la Figure 2B, le pourcentage de cellules T Vy9N2 dans le sang périphérique de donneurs sain est de l'ordre de 2% avant culture (1-5% selon les individus) parmi les lymphocytes totaux définis dans la fenêtre d'analyse RI (Figure 2A).
Les figures 2C et 2D montrent qu'il n'y a pas d'enrichissement en cellules T Vy9/V82 dans les cultures témoins non stimulées ou dans les cultures stimulées par un activateur polyclonal non-sélectif, la phytohémagglutinine A (PHA) (Figure 2D). En ravanche, une forte augmentation de la population des cellules T Vy9N2 est observée dans les cultures stimulées par l'IPP ou par les molécules selon l'invention : (E) l-pyrophosphono-4-méthylpenta-l, 3-diène, (E) I-pyrophosphono-penta-l, 3-diène, (E) l-pyrophosphono-buta-l, 3-diène, 5-pyrophosphono-2-méthylpent-2-ène, a, y-di- [4-méthylpent-4-ényl]-triphosphonate, 5-pyrophosphono-2-méthylpentène, 5triphosphono-2-méthylpentène. Ces observations montrent que ces molécules induisent sélectivement la prolifération des lymphocytes T Vy9N2.
Cette conclusion est confirmée par le fait que dans certaines expériences, les cellules ont été cultivées pendant 3 semaines en présence de l'une ou l'autre des
différentes molécules et de 20U/ml d'interleukine 2 (IL2). Dans ces conditions la totalité des cellules récupérées après culture correspondait à des cellules T CD3+ Vy9/V82+.
On rappelle que cette tête de rotor comprend un mât-moyeu tubulaire monobloc 1, dont la partie inférieure sensiblement cylindrique forme un mât 2 avec une base 4 destinée à être liée en rotation à une boîte de transmission principale de l'hélicoptère, pour l'entraînement du rotor en rotation autour de l'axe A du mât-moyeu 1. Ce dernier comporte également une partie supérieure formant moyeu 3, qui prolonge le mât 2 et présente une forme générale extérieure sensiblement tronconique et évasée du côté opposé au mât 2 jusqu' à un anneau de renforcement 5, qui constitue l'extrémité supérieure libre surépaissie localement et périphériquement du moyeu 3. Des ouvertures 6 radiales (par rapport à l'axe A), identiques et en nombre égal au nombre des
pales du rotor, sont pratiquées dans la portion de moyeu 3 qui est directement adjacente à l'anneau 5 et sont régulièrement réparties en direction circonférentielle sur le pourtour de cette portion de moyeu 3. Chaque ouverture 6 a une forme sensiblement en demi-lune ou en haricot très arrondi, dont la concavité générale est tournée vers l'anneau 5, qui entoure l'ouverture de l'extrémité supérieure du moyeu 3. Cet anneau 5, dont la forme en plan (voir figure 2) est celle d'un polygone pseudo-régulier, à petits côtés 5a égaux, bombés et convexes alternés avec de grands côtés 5b égaux, rectilignes et en nombre égal au nombre des pales du rotor, est renforcé par une ceinture 5c composite dans une gorge périphérique dans l'anneau 5. Chacune des ouvertures 6 est pratiquée dans le moyeu 3 directement sous l'un respectivement des petits côtés 5a de l'anneau 5, ces petits côtés 5a convexes correspondant aux portions de l'anneau 5 sur lesquelles sont retenues des butées sphériques lamifiées 8, logées dans l'ouverture de l'extrémité supérieure du moyeu 3 et constituant des organes de retenue et d'articulation des pales 7 sur le mât moyeu 1.
Chaque butée lamifiée sphérique 8 est appliquée contre la face interne de l'anneau 5 et fixée contre ce dernier par son armature radiale externe 9 conformée en étrier chevauchant l'anneau 5 au niveau d'une ouverture 6, tandis que son armature radiale interne 11, solidaire de la partie centrale lamifiée 10 du côté opposé à l'armature externe 9, est fixée par boulonnage en entretoises entre les deux branches 13 et 14 d'une chape radiale interne d'un
organe de liaison 12, appelé manchon, reliant une pale 7 au moyeu 3 par l'intermédiaire de la butée lamifiée sphérique 8 correspondante. Dans ce montage, la branche inférieure 13 de la chape radiale interne 13-14 du manchon 12 traverse l'ouverture 6 correspondante.
Dans la forme simple de réalisation des figures 1 et 2, le manchon radial de liaison 12 comprend deux plaques radiales disposées sensiblement l'une au-dessus de l'autre, la plaque inférieure réalisant les branches inférieures 13 et 15 et la plaque supérieure réalisant les branches supérieures 14 et 16 des chapes respectivement interne et externe du manchon 12, et ces deux plaques sont entretoisées par l'armature interne 11 de la butée 8, et, à l'extérieur de l'anneau 5, par une entretoise 18 sur laquelle les deux plaques sont boulonnées, et qui supporte en saillie latéralement un levier de pas 19 pour la commande du pas de la pale 7 correspondante.
L'amortissement en traînée de chaque masse battante constituée par une pale 7 et son manchon 12 de liaison au moyeu 3, et le rappel élastique de cette masse battante sur son axe neutre sont assurés par un organe externe au mât-moyeu 1 et disposé latéralement entre l'anneau 5 du moyeu 3 et cette masse battante. Cet organe, appelé amortisseur de traînée, contrefiche de rappel élastique en traînée à amortissement incorporé ou même adaptateur de fréquence, est un organe 20 agencé comme un amortisseur hydraulique particulier, dont la structure et le mode de fonctionnement sont décrits ci-après en référence aux figures 3 à 6.
L'amortisseur de traînée 20 est accouplé par une rotule 21 à son extrémité interne dans une chape d'attache 22 rapportée sur une saillie radiale vers l'extérieur de l'anneau 5, sensiblement au niveau du milieu du grand côté 5b de cet anneau 5 qui s'étend entre le manchon 12 de la pale 7 considérée et le manchon 12 d'une pale 7 voisine du rotor.
A son extrémité externe, l'amortisseur 20 est accouplé par une rotule 23 dans une chape formée entre deux ferrures 24 qui sont chacune d'une seule pièce avec l'une des deux plaques inférieure et supérieure du manchon de liaison 12, chaque ferrure 24 s'étendant à la fois radialement vers l'extérieur et vers le bord de fuite de la pale 7 correspondante, à partir de l'extrémité radiale externe de la plaque inférieure ou supérieure correspondante.
L'amortisseur de traînée 20 de la figure 2 est schématiquement représenté sur la figure 3, accouplé entre le moyeu 3, de masse Mm, par l'extrémité munie de la rotule 21 sur la figure 2, et la masse battante constituée de la pale 7 et du manchon 12, et de masse Mp, par la rotule 23 à son autre extrémité sur la figure 2.
L'amortisseur de traînée 20 comprend un corps tubulaire 25 cylindrique de section circulaire Sa, fermé à ses extrémités axiales par deux fonds 26 et 27, un piston 28 monté coulissant axialement dans le corps 25 et délimitant dans ce corps 25, et avec ce dernier et les fonds 26 et 27, deux chambres de travail 29 et 30 à volume variable en opposition, le piston 28 étant solidaire en mouvement d'une tige axiale 31 traversant de manière étanche non seulement le fond 26, pour être accouplée par son extrémité libre, externe au cylindre 20, sur la masse battante 7-12, mais également, dans cet exemple, l'autre fond 27 accouplé au moyeu 3. L'amortisseur 20 comprend également deux ressorts 32 identiques logés dans les chambres 29 et 30, et dont chacun prend appui, d' une part, contre l'un respectivement des fonds 26 et 27, et, d'autre part, contre l'une respectivement des deux faces opposées du piston 28, de sorte à solliciter l'ensemble tige 31-piston 28 de manière à rappeler cet ensemble vers une position neutre dans le corps 25, par appui des ressorts 32 sur ce corps fermé, et un canal de dérivation 33 relie en permanence les deux chambres 29 et 30, ce canal ayant une longueur Lc qui est très supérieure à sa section transversale constante sc, cette dernière étant elle-même très inférieure (d'environ un ordre de grandeur) à la section transversale constante Sa du corps 25, et un fluide, qui est une huile hydraulique, remplit les deux chambres 29 et 30 ainsi que le canal 33, et est laminé par un orifice de laminage calibré 34 annulaire entre le corps 25 et le piston 28, lorsque ce piston 28 est déplacé
axialement dans le corps 25 par les mouvements relatifs en traînée de la masse battante 7-12, liée à la tige 31, et du moyeu 3, lié au corps 25.
Dans le cas d'une excitation extérieure s'exerçant sur la masse battante 7-12, et représentée par la force Fe appliquée à cette masse battante sur la figure 3, si Fm est la force transmise au moyeu 3, au travers de l'amortisseur de traînée 20, et si xp et xm représentent les déplacements axiaux, par rapport à une origine commune sur l'axe de l'amortisseur 20, respectivement de la masse battante 7-12 et du moyeu 3, comme indiqué schématiquement sur la figure 3, l'application des théorèmes généraux de la mécanique donne, pour les deux masses Mp et Mm en translation, les relations (1 ) et (2) suivantes : pour la pale (1 ) : Fe-Fm = Mp#p, et pour le moyeu (2) : Fm = Mmxm , où x représente la dérivée seconde du déplacement par rapport au temps, c'est-à-dire l'accélération, de sorte que xp est l'accélération subie par la masse battante 7-12 et xm est l'accélération subie par le moyeu 3.
Des équations supplémentaires sont données en reliant les forces internes aux degrés de liberté du système. Par constitution de l'amortisseur 20, la force Fm transmise au moyeu 3 est la somme de la force élastique de rappel des ressorts 32 (dont chacun a une raideur k/2), des forces de pression transmises par le fluide présent dans le corps 25 de l'amortisseur 20 et de la force de frottement visqueux Fh. D'où la relation (3) : (3) Fm = - k(xm - xp) + Fh - c(xm - xp) où c représente le coefficient d'amortissement visqueux et x la dérivée première du déplacement par rapport au temps, c'est-à-dire la vitesse. De plus, on a la relation (4) : (4) Fh = - (P1 - P2) Sa, où P1 et P2 sont les pressions régnant respectivement dans les chambres 29 et 30. En considérant la masse de fluide en mouvement dans le canal de dérivation 33 et l'accélération de ce fluide (l'huile), on a également la relation (5) : (5) (P1-P2)sc = -Mfc#fc, où Mfc représente la masse de fluide en mouvement dans le canal 33, soit
Mfc = p Lc sc, où p est la masse volumique du fluide, et xfc est l'accélération du fluide déplacé dans le canal 33.