INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le récepteur peut être rendu fluorescent grâce à une protéine fluorescente, par exemple une protéine issue de la méduse Aequorea victoria dont le gène correspondant a été séquence, cloné (Prasher et al., 1992) et optimisé pour une bonne expression chez les eucaryotes supérieurs (Cormack et al., 1996). Il peut être fusionné avec le gène codant pour une autre protéine, notamment un récepteur couplé à une protéine G (Galzi & Alix, 1997 ; Weill et al., 1999 ; Vollmer et al., 1999 ; Valenzuela et al., 2001) pour permettre l'expression d'une protéine réceptrice fluorescente. La combinaison de la protéine réceptrice fluorescente avec l'un de ses ligands fluorescents permet la formation d'un complexe récepteur-ligand non covalent qui est détecté par transfert d'énergie de fluorescence (Galzi & Alix, 1997 ; Vollmer et al., 1999 ; Valenzuela et al., 2001) et dont on peut mesurer la cinétique de formation et de dissociation (Palanché et al., 2001 ; et al., 2001).
L'un des buts de l'invention est de fournir un procédé simple à mettre en #uvre, rapide, sensible, permettant d'effectuer des mesures quantitatives des interactions entre un récepteur et un ligand marqueur du site du ligand endogène, et permettant de détecter la présence d'un éventuel effecteur allostérique.
Un autre but de l'invention est de permettre des mesures en temps réel des interactions d'un ligand marqueur du site du ligand endogène avec son récepteur, permettant de détecter la présence d'un éventuel effecteur allostérique.
Un autre but de l'invention est de permettre une mesure en temps résolu de la cinétique d'association et de dissociation d'un ligand fluorescent, marqueur du site du ligand endogène, avec son récepteur, et de détecter la présence d'un éventuel effecteur allostérique.
Un autre but de l'invention est de permettre la détection de l'interaction entre un récepteur et son ligand endogène par transfert d' énergie de fluorescence dans des gammes de concentrations de ligand endogène fluorescent considérablement plus étendues (du nanomolaire au micromolaire) que lorsqu'on utilise un radioligand (domaine du nanomolaire). Ainsi, la présente invention permet de détecter par transfert d'énergie un plus grand nombre d'états conformationnels du récepteur, ce qui facilite grandement l'identification et l'interprétation des effets d'agents modulateurs supposés.
L'un des buts de l'invention est de fournir une mesure expérimentale des constantes de vitesse d'association et de dissociation d'un ligand fluorescent, marqueur
du site du ligand endogène, avec son récepteur, en permettant la détection de la présence d'un éventuel effecteur allostérique.
L'invention a également pour but de fournir un procédé de détection d'un effecteur allostérique d'un récepteur, généralisable à de nombreuses protéines réceptrices et à leurs ligands.
L'invention a également pour but de fournir un procédé de détection d'un effecteur allostérique d'un récepteur, automatisable, ne nécessitant ni la purification du récepteur, ni celle du ligand.
L'invention a également pour but de fournir un procédé de détection d'un effecteur allostérique d'un récepteur, non polluant puisqu'il n'utilise pas de radioactivité, économique puisqu'il utilise de la lumière visible et peut être mis en #uvre sur des équipements existants.
La présente invention concerne un procédé de mise en évidence d'un effecteur allostérique d'un récepteur, par détermination de la variation : - de la cinétique de dissociation et/ou d'association du complexe formé entre le susdit récepteur et l'un de ses ligands en présence dudit effecteur allostérique, par rapport à la cinétique de dissociation et/ou d'association du complexe formé entre ledit récepteur et ledit ligand, en l'absence dudit effecteur, - et/ou de l'amplitude de la liaison formée entre le susdit récepteur et l'un de ses ligands en présence dudit effecteur allostérique, par rapport à l' amplitude de la liaison formée entre ledit récepteur et ledit ligand, en l'absence dudit effecteur, ledit récepteur et ledit ligand étant impliqués dans au moins une réponse biologique dans des conditions physiologiques appropriées, et l'effecteur allostérique étant capable de moduler au moins l'une des réponses, ledit récepteur étant marqué par une protéine fluorescente choisie parmi les protéines fluorescentes issues ou dérivées de protéines autofluorescentes de cnidaires, dont le coefficient d'extinction moléculaire est supérieur à environ 14000M-1.cm-1et le rendement quantique de fluorescence est supérieur à environ 0,38, ledit ligand étant marqué par un marqueur constitué : - soit par une molécule susceptible d'absorber la lumière émise par la protéine fluorescente, - soit par une substance fluorescente,
lesdites déterminations de variation de cinétique de dissociation et/ou d'association et de variation d'amplitude étant effectuées par transfert d'énergie de fluorescence : # entre la protéine fluorescente susmentionnée et la susdite substance fluorescente, la substance fluorescente étant telle que soit elle est excitable à la longueur d'onde d'émission de la protéine fluorescente susmentionnée, soit elle émet à la longueur d'excitation de la protéine fluorescente susmentionnée, ou # entre la protéine fluorescente susmentionnée et la susdite molécule susceptible d'absorber la lumière émise par la protéine fluorescente.
Comme exemples de supports solides utilisables pour la formulation de compositions selon l'invention, on peut mentionner les silicates naturels ou synthétiques, les résines, les cires, les poudres fines ou les granules d'argile, notamment d'argile kaolinique, de terre de diatomées, de bentonite ou d'argile acide, l'oxyde de silicium hydraté synthétique, les talcs, les céramiques, d'autres minéraux dont la séricite, le quartz, le soufre, le charbon actif, le carbonate de calcium, la silice hydratée, ou encore les engrais industriels comme le sulfate d'ammonium, le phosphate d'ammonium, le nitrate d'ammonium, l'urée ou le chlorure d'ammonium.
Comme exemples de supports liquides utilisables pour la formulation de compositions selon l'invention, on peut mentionner l'eau, les alcools et notamment le méthanol ou l'éthanol, les cétones et notamment l'acétone, la méthyléthylcétone ou la cyclohéxanone, les fractions de pétrole, les hydrocarbures aromatiques dont le benzène, le toluène, le xylène, l'éthylbenzène ou le méthylnaphtalène, les hydrocarbures non aromatiques dont l'hexane, le cyclohexane, le kérosène ou le gazole, le gaz liquéfié, les esters dont l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle, les nitriles dont l'acétonitrile et l'isobutyronitrile, les éthers dont l'éther diisopropylique ou le dioxanne, les amides dont le N,N-diméthylformamide ou le N,Ndiméthylacétamide, les hydrocarbures halogénées dont le dichlorométhane, le trichloroéthane ou le tétrachlorure de carbone, le diméthylsulfoxyde, les huiles végétales dont l'huile de soja ou l'huile de coton.
La présence d'au moins un agent tensioactif est généralement appropriée lorsque au moins une des matières actives et/ou le support inerte ne sont pas solubles, notamment dans l'eau, dans le cas où l'agent vecteur de l'application est l'eau. L'agent tensioactif peut être un agent émulsionnant, dispersant ou mouillant de type ionique ou non ionique.
On peut, par exemple, citer des sels d'acides polyacryliques, des sels d'acides lignosulfoniques, des sels d'acides phénolsulfoniques ou naphtalènesulfoniques, des polycondensats d'oxyde d'éthylène sur des alcools gras ou sur des acides gras ou sur des amines grasses, des phénols substitués, notamment des alkylphénols ou des arylphénols, des sels d'esters d'acides sulfosucciniques, des dérivés de la taurine,
notamment des alkyltaurates, des esters phosphoriques d'alcools ou de phénols polyoxyéthylés ; on peut tout particulièrement citer les sels d'alkylsulfonates, les alkylarylsulfonates, les éthers alkylaryliques, leurs dérivés polyoxyéthyléniques, les polyéthylèneglycoléthers, les esters de polyalcools, les dérivés de sucres, alcools et autres.
Les compositions insecticides selon l'invention peuvent également contenir toute sorte d'autres ingrédients ou agents tels que, par exemple, des colloïdes protecteurs, des adhésifs, des agents épaississants, des agents thixotropes, des agents de pénétration, des agents stabilisants dont le phosphate acide d'isopropyle, le 2,6-ditert-butyl-4-méthylphénol, le 2-tert-butyl-4-méthoxyphénol et le 3-tert-butyl-4méthoxyphénol, des huiles végétales ou minérales, des acides gras ou leurs esters, des agents séquestrants, des agents dispersants dont la caséine, la gélatine, des saccharides et notamment la poudre d'amidon, la gomme arabique, certains dérivés de la cellulose ou l'acide alginique, des dérivés de la lignine, la bentonite, des polymères synthétiques solubles dans l'eau, notamment l'alcool polyvinylique, la polyvinylpyrrolidone, les acides polyacryliques, etc., ainsi que d'autres matières actives connues pour leurs propriétés pesticides, notamment insecticides ou fongicides ; ou pour leurs propriétés favorisant la croissance des plantes, notamment des engrais ; ou pour leurs propriétés régulatrices de la croissance des plantes ou des insectes.
Plus généralement le composé insecticide peut être associé à tous les additifs solides ou liquides correspondant aux techniques habituelles de la mise en formulation, particulièrement la mise en formulation de produits ou compositions destinées à des usages ou à des utilisations en agriculture ou en hygiène publique.
Ainsi, les compositions selon l'invention peuvent prendre la forme d'assez nombreuses formulations parmi lesquelles on peut citer les solutions huileuses, les concentrés émulsionnables, les poudres mouillables, les formulations fluides et notamment les suspensions aqueuses ou les émulsions aqueuses, les granulés, les poudres, les aérosols, les formulations pour nébulisation notamment les formulations pour brumisation, les formulations à très bas volume, les pâtes, les émulsions, les suspensions concentrées, de même que d'éventuels mélanges, associations ou combinaisons de ces différentes formes.
Le plus souvent, pour les formulations de type poudres pour poudrage ou dispersion, la teneur en composé insecticide peut aller jusqu'à 100% ; de même, pour les formulations sous forme de granulés, notamment ceux obtenus par extrusion, par compactage, par imprégnation d'un support granulé, par granulation à partir d'une poudre, la teneur en composé insecticide dans ces granulés est le plus souvent comprise entre 0,5 et 80%.
Les compositions insecticides selon l'invention, dites compositions concentrées, comprenant un composé insecticide qui sont sous forme de concentrés émulsionnables ou solubles comprennent le plus souvent de 25 à 100% de matières actives, les émulsions ou solutions prêtes à l'application contenant, quant à elles, de 0,00001à 20% de matières actives.
Selon une réalisation, la matière active A est combinée le cas échéant à au moins une autre matière active ou composé insecticide issue de Photorhabdus luminescens ou d'autres microorganismes.
En plus du solvant, les concentrés émulsionnables peuvent contenir, lorsque c'est nécessaire, 2 à 20% d'additifs appropriés tels les agents stabilisants, les agents tensioactifs, les agents de pénétration, les inhibiteurs de corrosion, les colorants ou les adhésifs précédemment cités.
Les compositions insecticides selon l'invention sous forme de suspensions concentrées, également applicables en pulvérisation, sont préparées de manière à obtenir un produit fluide, stable, ne se déposant pas ; elles contiennent habituellement de 2 à 75% de matière active, de 0,5 à 15% d'agents tensioactifs, de 0,1 à 10% d'agents thixotropes, de 0 à 10% d'additifs appropriés, comme des agents anti-mousse, des agents inhibiteurs de corrosion, des agents stabilisants, des agents de pénétration et des adhésifs ; et, comme support, de l'eau ou un liquide organique dans lequel la, ou les, matière active est peu ou pas soluble, ou encore des mélanges de plusieurs de ces solvants, organiques ou non.
Certaines matières organiques solides ou des sels minéraux peuvent être dissous dans le support pour freiner ou interdire la sédimentation ; ou bien encore de telles matières peuvent être employées comme agents antigels pour l'eau.
Les compositions insecticides selon l' invention qui prennent la forme de poudres mouillables ou à pulvériser sont habituellement préparées de sorte qu'elles contiennent de 20 à 95% de matières actives.
Par ailleurs, elles contiennent habituellement, outre un support solide, de 0 à 5% d'un agent mouillant, de 3 à 10% d'un agent dispersant, et, le cas échéant, de 0 à 10% d'un ou plusieurs agents stabilisants et/ou autres additifs, comme des agents de pénétration, des adhésifs, ou des agents anti-mottants, colorants, etc.
En ce qui concerne les sucres : On sait que la présence de fibres dans une denrée alimentaire va avoir deux effets sur l'assimilation des glucides : - D'une part, les fibres insolubles vont former un réseau dans lesquels les glucides seront beaucoup plus difficilement accessibles aux enzymes digestives. Ils seront ainsi découpés et assimilés sur un laps de temps très long.
- Les fibres solubles (pectines, gommes) , vont créer un gel qui va tapisser l'épithélium (la paroi) de l'intestin ce qui va retarder l'absorption des glucides en créant un effet barrière .
BIBLIOGRAPHIE : Lia A, Hallmans G, Sandberg A-S et al: Oat S-glucan increases bile acid excrétion and a fiber-rich barley fraction increases cholesterol excrétion in ileostomy subjects. Am J Clin Nutr 1995 ; 1245-1251 Burley VJ, Blundell JE : fiber and the pattern of energy
intake. In Kritchevsky D, Bonfield C (eds): Dietary Fiber in Health and Disease. Eagen Press, St Paul, Minnesota, 1995 : 256 Nelson LH, Tucker LA: Diet composition related to body fat in a multivariate study of 203 men. J Am Diet Assoc 1996 ; 96 : 771-777 Poppitt SD, Prentice AM : density and its role in the control of food intake: evidence from metabolic and community studies. Appetite 1996 ; 153-174 Holt SH, Miller JC, Petocz P et al : satiety index of common foods. Eur J Clin Nutr 1995 ; 675-690 Il faut y rajouter du chrome, des éléments riches en chrome tels que : la levure de bière, Saccharomyces cerevesiae, la spiruline, Spirulina, (toutes deux riches en vitamines B, intervenant dans le catabolisme des graisses et des sucres), le galega, Galega officinalis, ou la cosse de haricot, Phaseolus vulgaris, tous deux riches en chrome et dont les pouvoirs hypoglycémiant et diurétique sont démontrés. D'autres oligoéléments, le zinc, le nickel, le cobalt ont une action reconnue sur le comportement alimentaire.
GIMNEMA SYLVESTRE Gur-ma signifie en Indien destructeur de sucre , c'est le nom donné aux feuilles de Gymnema Sylvestre, plante commune de l'Inde. Cette plante aurait cette fameuse propriété anti-sucre , elle supprimerait le goût sucré et bloquerait partiellement l'absorption des sucres au niveau de l'intestin Et enfin le péricarpe du fruit du GUTTIER, condiment indien qui contient de l'acide hydroxycitrique. Ce principe actif est étudié depuis trente ans aux Etats-Unis, dans les problèmes de surcharge pondérale. Il permet une perte de poids notable, sans effet secondaire. Les mécanismes d'action sont divers : inhibition de l'enzyme responsable de la lipogenèse, action au niveau de la production de l'acétyle Coenzyme A avec
diminution de la production des acides gras, effet coupe-faim, stimulation de la thermogenèse.
Outil de coupe hélicoïdale sélective La présente invention concerne un outil de coupe hélicoïdale sélective d'une enveloppe cylindrique en matière plastique, en particulier en matériau polymère monocouche ou multicouche, gaînant un support pouvant être lui-même constitué par une ou plusieurs couches, ledit outil comprenant un corps agencé pour pouvoir être entraîné en pivotement autour de l'axe de ladite enveloppe cylindrique et portant une lame de coupe montée à coulissement et comportant au moins une arête tranchante disposée selon un angle non nul par rapport à un plan transversal de l'enveloppe cylindrique.
Un tel outil est bien connu pour le dévêtissement de tubes, le dégarnissage de câbles électriques, etc.
L'angle d'attaque de l'arête tranchante détermine le pas d'avance au cours de la rotation de l'outil autour du support à dénuder.
Cet outil de coupe connu présente divers inconvénients. En premier lieu, le pas d'avance est fixé par la construction de l'outil et ne peut être modifié. De plus, la séparation de la partie d'enveloppe découpée nécessite l'utilisation de moyens distincts pour former un bord net de la partie d'enveloppe non découpée.
La présente invention a pour but d'améliorer un outil du type cité à l'introduction pour pallier ces inconvénients.
A cet effet, l'outil selon l'invention est caractérisé par le fait que la lame de coupe est coulissante dans une platine montée sur ledit corps à pivotement autour d'un axe parallèle à la direction de coulissement de la lame de coupe.
Cette caractéristique permet donc de régler de manière simple l'angle d'attaque de l'arête tranchante de la lame de coupe, sans démontage et de manière précise.
De préférence, ladite platine est commandée par un écrou coopérant avec une vis montée oscillante autour d'un axe parallèle à la direction de coulissement de la lame de coupe, ledit écrou comportant une rainure périphérique coopérant avec le bord d'une ouverture de ladite platine.
L'invention sera bien comprise à la lecture de la description suivante d'un exemple de réalisation, en référence au dessin annexé dans lequel : la figure 1 est une vue schématique en perspective d'une partie d'un outil selon l'invention avec le corps portant la lame de coupe et la figure 2 est identique à la figure 1, le corps et la lame de coupe étant omis.
L'outil selon l'invention comprend un corps 1 agencé pour être entraîné en pivotement autour de l'axe d'un support (non représenté) gaîné par une enveloppe
L'invention concerne, selon un huitième aspect, l'utilisation d'un principe actif pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée à exercer une activité bactéricide et/ou fongicide sur les tissus traités, notamment pour le traitement et/ou la prévention de l'acné, des dermatoses bactériennes ou fongiques.
Avantageusement ladite composition, comprenant au moins un agent microbiocide et/ou microbiostatique, est notamment utilisable dans le domaine pharmaceutique, de façon à combiner l'action bactéricide des bêta-défensines cutanées avec l'action de ces agents, notamment pour le traitement des pathologies liées à une composante microbienne comme les
états pelliculaires, l'acné, le vitiligo, les dermatites et autres pathologies de la peau, des muqueuses, du cuir chevelu et des ongles, à composantes microbiennes.
Li'nvention concerne encore l'utilisation dudit principe actif, dans le domaine des tissus reconstruits, pour l'action bactéricide des béta-défensines cutanées dans la construction d'épidermes et de peaux reconstruites et dans le maintien en survie de biopsies cutanées.
Les inventeurs ont utilisé des méthodes d'analyses mettant en évidence la synthèse, directe ou indirecte, de molécule(s) pro-inflammatoire(s) ou de molécule(s) habituellement co-exprimée (s) lors de processus inflammatoire(s), de manière à pouvoir mettre en évidence la ou les réactions inflammatoire(s), d'irritation (s), ou d'intolérance(s). L'invention peut être mise en #uvre de manière différente pour mettre en évidence le ou les réactions inflammatoire(s), d'irritation(s), ou d'intolérance(s), par exemple en évaluant les sensations de picotements, de gênes, de tiraillements ressentis par les individus lors de l'application sur le tissu à traiter.
Selon encore une autre caractéristique avantageuse de l'invention applicable pour l'un quelconque de ces aspects, on sélectionne un principe actif qui est capable de stimuler l'expression, directe ou indirecte de bêta-défensine(s) humaine (s) de type 2 et/ou de type 3 et ne stimulant pas simultanément ou sensiblement pas la synthèse, directe ou indirecte, de molécules proinflammatoires ou de molécules habituellement co-exprimées lors de processus inflammatoire, par exemple une cytokine pro-inflammatoire ou au moins une cytokine habituellement co-exprimée lors de processus inflammatoire(s), telle que IL1, IL8, MIP3a.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION La méthode de la présente invention développée par les inventeurs permet de sélectionner par criblage puis d'identifier des principes actifs capables d'augmenter la quantité d'ARNm des défensines hBD2 et/ou hBD3 dans les cellules épidermiques, caractérisés en ce que lesdits principes actifs
n'entraînent pas ou sensiblement pas de réactions inflammatoire(s), d'irritation(s) ou d'intolérance(s).
La méthode de criblage comprend notamment les étapes suivantes : Des cellules épithéliales humaines normales, de préférence des kératinocytes humains normaux, sont cultivées en monocouche en milieu défini sans sérum, la concentration en calcium étant comprise de préférence entre 0 et 100 mM, de préférence l,7mM. A un certain degré de confluence des cultures cellulaires, de préférence compris entre 75 et 95%, de préférence 80% les cellules sont mises en contact avec les principes actifs potentiels à cribler, pendant une durée comprise entre 6 et 48 h, de préférence pendant 16 h. Il peut être effectué en parallèle, la réalisation d'au moins un témoin non traité et d'au moins un témoin positif, de préférence sur la même plaque de culture, ce qui facilite la réalisation du criblage. Les témoins positifs sont le TNFa pour hBD2 et IFNy pour hBD3 et remplacent le principe actif potentiel à cribler ; avantageusement leurs concentrations sont comprises entre 1 et 500 ng/ml, de préférence 100 ng/ml. Après cette mise en contact, les surnageants sont collectés et les cellules peuvent être congelées à sec par exemple à -80 C après un rinçage au PBS (Phosphate Buffer Saline). Les ARN totaux sont extraits et dosés par spectrophotométrie, de préférence à 260 et 280 nm, puis la concentration de ces ARN totaux est de préférence diluée à une concentration comprise entre 2 et 50 ng/ml, de préférence 5 ng/ml. La RT- PCR qualitative est réalisée sur l'actine, hBD2 et hBD3. Les amorces sont issues de la littérature (pour hBD2 : HarderJ. et al., A peptide antibiotic from human skin. Nature 1997 ; 387 : 861 ; pour hBD3 et actine : HarderJ. et al., Isolation and characterization of human p-defensin-3, a novel human inducible peptide antibiotic. J Biol Chem 2001 ; 5707-5713) et sont :
- Actine sens : 5'-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3' (SEQ ID N 1) antisens : 5'-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3' (SEQ ID N 2) - hBD2 sens : 5'-CCAGCCATCAGCCATGAGGGT-3' (SEQ ID N 3) antisens : 5'-GGAGCCCTTTCTGAATCCGCA-3' (SEQ ID N 4) - hBD3 sens : 5'-AGCCTAGCAGCTATGAGGATC-3' (SEQ ID N 5) antisens : 5'-CTTCGGCAGCATTTTCGGCCA-3' (SEQ ID N 6) Les séquences des primers utilisées pour la RT-PCR peuvent être différentes de celles citées à condition de rester spécifiques des gènes étudiés (actine, hBD2 et hBD3).
La RT-PCR est réalisée de préférence sur une quantité d'ARNm initial de 10 à 100 ng, de manière préférée de 50 ng, dans un thermocycleur, éventuellement suivant un programme commun. Cette étape permet d'amplifier l'ARN initial.
Les paramètres de température et de temps de la RT-PCR peuvent évoluer en fonction des amorces ou du matériel utilisé (thermocycleur, fournisseur de kit RT-PCR...).
Après amplification, les produits sont mélangés et il est ajouté un tampon de charge et d'eau (2/3). La solution finale est déposée sur un gel précoulé d'agarose contenant un intercalant des acides nucléiques visualisable sous UV (comme le bromure d'éthidium par exemple), qui peut être à 2 %. Les échantillons migrent et les bandes sont visualisées sous UV en chambre noire et photographiées numériquement. Les photos des gels sont analysées par un logiciel de traitement d'images qui quantifie l'intensité des bandes. Le niveau basal d'expression des défensines (témoin non traité) n'étant pas détectable, les rapports d'intensité des bandes hBD2 /actine et hBD3/actine peuvent être comparés à ceux du témoin positif (traité par le TNFa pour hBD2 et l'TFN[gamma] pour hBD3) et indiquer une éventuelle stimulation de l'expression de la p-défensine considérée.