INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Tableau 1 Fines particules minérales/Fines Diamètre de Valeur K particules de résine particules à 10% Test de (rapport en poids) moyen (pm) (N/mm2) sensualité Sensation dure Exemple 1 98/2 5,9 13940 et sèche Sensation dure Exemple 2 95/5 5 , 9 5600 et légèrement sèche Sensation souple Exemple 3 90/10 5,8 2630 et roulante Souple et s'étalant Exemple 4 50/50 5,4 1410 uniformément Très souple, légère sensation Exemple 5 20/80 5,3 960 d'incongruité Sensation très Témoin 1 Silice 5,9 19 500 dure et sèche Très souple, aucune Témoin 2 Polyuréthane 5,3 650 sensation d'incongruité Exemples 6 à 10 Comme fines particules de résine, on utilise une dispersion aqueuse (du type à auto-émulsion, teneur en extrait sec 40 % en poids, et diamètre de particules 90 nm) de copolymère styrène-butadiène ayant une température de transition vitreuse de 58 C, un allongement en traction de 310 % et un module de 100 % de 2100 N/cm2, mesurés avec une épaisseur de film de 30 pm, et comme fines particules minérales, on utilise un sol d'oxyde de titane ayant un diamètre de particules de 60 nm (produit par C.C.I.C., Sunveil PW-6030 , teneur en extrait sec 30 % et contenant de la silice en une proportion de 13 dans l'extrait sec). On mélange le sol d'oxyde de titane et la dispersion aqueuse de copolymère styrène butadiène de façon que le rapport de mélange en poids oxyde de titane/ copolymère styrène -butadiène soit de 98/2 (Exemple 6), de 95/5 (Exemple 7), de 90/10 (Exemple 8), de 50/50 (Exemple 9), ou de 20/80 (Exemple 10), et on ajoute une quantité spécifiée d'eau, de façon que la teneur en extrait sec soit de 20 %. On pulvérise le liquide préparé comme décrit ci-dessus dans une atmosphère sèche ayant une humidité de 5 % et une température de 70 C, et on recueille la poudre. On observe les particules composites sphériques résultantes avec un microscope électronique du type à balayage, et on observe la sphéricité substantielle. On mesure les diamètres de 200 particules, et les diamètres de particules moyens sont tels que présentés dans le Tableau 2. Le Tableau 2 présente également les valeurs K à 10 % mesurées et les résultats de la détermination de sensualité quand les particules sont étalées sur la peau humaine. La valeur K à 10 % varie en association avec le changement du rapport de mélange du dioxyde de titane et du copolymère styrène-butadiène, et également la sensation tactile change progressivement d'une dureté à une douceur. Par comparaison avec les particules de silice/ polyuréthane obtenues dans l'Exemple 1, l'achromaticité générale est supérieure. Quand on disperse l'échantillon ayant une proportion de mélange de dioxyde de titane de 50 % dans du glycérol, de façon que la concentration soit de 1 %, et que l'on mesure le facteur de transmission au spectrophotomètre (produit par Hitachi, modèle U-2000), il est confirmé que le facteur de transmission diminue pour une longueur d'onde de 350 nm ou moins et que la préparation a un effet d'écran au rayonnement ultraviolet.
Témoin 3 On utilise uniquement le même sol d'oxyde de titane que celui utilisé dans l'Exemple 6, et on ajoute de l'eau de façon que la concentration de silice soit ajustée à 20 % en poids, et on réalise la pulvérisation, le séchage et le chauffage dans les mêmes conditions que celles de l'Exemple 6. Le diamètre de particules moyen, la valeur K à 10 %, et le résultat du test de sensualité sont présentés dans le Tableau 2.
Témoin 4 On utilise uniquement la dispersion aqueuse du même copolymère styrène-butadiène que celui utilisé dans l'Exemple 6, on ajoute de l'eau à la dispersion de façon que la teneur en extrait sec soit de 20 %, et on réalise la pulvérisation, le séchage et le chauffage dans les mêmes conditions que celles de l'Exemple 6. Le diamètre de particules moyen, la valeur K à 10 %, et le résultat du test de sensualité sont présentés dans le Tableau 2.
Ce nouveau pied de parasol et cette technique devraient présenter plusieurs avantages.
La SIMPLICITE Une majorité gens (sans avoir fait de hautes études) sont capables de comprendre comment utiliser ce parasol (appuyer et tourner) La FACILITE Une femme, enfant de douze ans, une personne âgée devraient pouvoir sans effort physique important installer le parasol (le plus souvent c'est 'homme qui s'occupe de cette tâche).
La RAPIDITE Le vissage dans le sable doit permettre une fixation dans le sable plus rapide et sans énervement.
L'EFFICACITE Un gain minimum d'enfoncement de 10 centimètres doit assurer meilleure résistance à l'arrachement par le vent.
MODE REALISATION N'étant pas un professionnel des matériaux modernes, j'avance quelques pistes avec beaucoup de réserves et précautions.
Un artisan professionnel ou une entreprise spécialisée doivent pouvoir après études essais et erreurs mouler des vis solides et résistantes ; il en est de meure pour la poignée avec une possibilité technique que je propose : fabriquer la poignée en 2 parties rigoureusement symétriques dans le sens de la longueur. Au montage coller les 2 parties sur le tube l'une contre l'autre. Les dessins de la poignée (figures 7et8) peuvent donner un petit aperçu de l'idée générale.
Cette INVENTION est susceptible d'APPLICATION INDUSTRIELLE de la façon suivante.
Un société spécialisée dans les matières plastiques ou autres (de préférence avec gros potentiel de production), une telle société peut très bien fabriquer des KITS PIEDS DE PARASOLS (vis + poignée) à monter par les fabricants de pieds parasols. Les pieds de parasols ainsi fabriqués peuvent être vendus séparément (pour les vacanciers possédant déjà un parasol et ne souhaitant acquérir que le pied) ou associés classiquement avec le parasol. Vente en grandes surfaces et magasins spécialisés. Une bonne publicité peut lancer le produit à l'approche des vacances d'été.
On peut même imaginer un jour si le produit est sûr que les compagnies d'assurance le conseillent fortement à leurs adhérents pour éviter les accidents dus aux parasols qui s'envolent et dont la pointe peut blesser les estivants tranquillement allongés sur la plage.
La présente invention concerne un pied de parasol qui se visse dans le sable des plages. Plus exactement, il s'agit d'une amélioration du pied de parasol classique utilisé l'été à la plage.
Un pied de parasol de plage classique est constitué d'un tube métallique creux le plus souvent blanc, terminé à l'extrémité inférieure par une pointe légèrement arrondie et à l'extrémité supérieure par un dispositif de serrage permettant de fixer le mât du parasol à la hauteur souhaitée. La pointe s'enfonçant dans le sable est soit métallique prolongeant le tube creux soit en matière plastique solidement fixée en bout de tube.
Ce type de pied de parasol pose deux problèmes et n'est donc pas tout à fait satisfaisant ; un enfoncement mal aisé dans le sable et une mauvaise résistance à l'arrachement par les sautes de vent.
Tout utilisateur de parasol à la plage a pu constater qu'il est assez difficile d'enfoncer le tube dans le sable, qu'il faut tourner dans tous les sens, parfois creuser, faire un effort physique pour un résultat médiocre qui souvent n'empêche pas l'arrachement par le vent ; tout vacancier a pu voir le vent arracher les parasols et les faire voler sur la plage parmi les estivants avec risques de blessures dues à la pointe. Quand il y a des sautes de vent l'été sur la plage, finie la tranquillité, la détente et le farniente. Beaucoup de vacanciers ferment le parasol, d'autres préfèrent tenir le parasol et ceux qui sont dans l'eau surveillent pour voir si le vent ne va pas arracher léur parasol... Bref tout le monde est sur le qui vive.
L'INVENTION consiste en un dispositif vissant permettant un enfoncement plus FACILE et plus PROFOND pour mieux résister à l'arrachement par le vent.
Je précise immédiatement que ce dispositif ne permettra jamais de résister aux cyclones ouragans tornades ou même a des vents très forts (il n'est pas conçu pour), pas plus que le dispositif vissant ne permettra de forer pour chercher du pétrole.
L'amélioration technique inventive concerne deux points. Une VIS à l'extrémité inférieure.
Etape 4: 3-[ 9(S)- benzoylamino -6,10-dioxo- 1,2,3,4,7,8,9,10- octahydro -6H-pyridazino[1,2a][1,2]diazepine-1(S)-carboxamide]-5-méthyl-1-benzoyloxyhexane-2-one a) 3-[ 9(S)- benzoylamino -6,10-dioxo-1,2,3,4,7,8,9,10octahydro -6H-pyridazino[1,2-a][1,2]diazepine-1(S)- carboxamide]-5-méthyl-1-bromo-hexane-2-one 219mg (0.38mmole) en solution dans 2ml de CH2C12 sont traitées à 0 C sous azote avec 0.2ml de solution d'HBr(37)/AcOH 30/70. Après 1/2heure de réaction à O C le mélange est versé dans 20ml de solution saturée de NaHC03. Le
mélange est extrait par 2X10ml d'AcOEt. Les phases organiques sont lavées à l'eau (20ml), séchées sur MgS04 et concentrées sous vide. On isole 203mg(rdt=94%) de bromocétone sous forme d'une mousse jaunâtre.
MS : M+H+ 535 RMN H1 (CDC13) (300MHz) : 0.97(6H ;d ;2CH3),1.67(1H ;m ;CH), 1.51-1.69(2H,2m ; 2H), 1.66(2H ;m ;CH2), 1.94 (2H ;m ;CH2), 1. 88 àl.98 et 2. 12 à 2.90(2H ;2m ; CH2), 2. 40 et 3. 16 à 3.47(2H ; dd et m ;CH2), 3.01-4.61(2H ;2m ; CH2), 4.57(1H ;t ; CH), 5.16(1H ;m ; CH) ; 7.00(1H ;d ;NH), 4.05 (2H ;AB;CH2), 7.47(2H ;td ; 2H aromatique en méta), 7.53(1H ; m ; H aromatique en para), 7.82(2H ; dd ; 2H aromatique en para). b): 3-[ 9(S)- benzoylamino -6,10-dioxo-1,2,3,4,7,8,9,10- octahydro -6H-pyridazino[1,2-a][1,2]diazepine-1(S)carboxamide] -5-méthyl-1-benzoyloxy-hexane-2-one A une solution de 50mg de bromocétone (0.093mmole) obtenue précédemment dans 0.6ml de DMF est additionné llmg de KF (0. 186 mmole ; 2équi. ) suivi de 13.7mg d'acide benzoique. La réaction est laissée une nuit sous agitation à TA. Le mélange réactionnel est versé dans 10ml de solution saturée de NaHC03 et extrait par 2X5ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques rassemblées sont lavées à l'eau (10ml), séchées sur MgS04 et concentrées sous vide. On obtient 42mg de résine
jaune pâle (rdt=78%) SM : MH+577 ; MNa+599 RMN-H1 . 0.97(6H ;d ;2CH3), 1.71(1H ;m ;CH), 1. 52- 1.75(2H ;2m ;CH2), 4.82(1H ;m ;CHNH), 6.27(1H ;d ;CHNH), 2.40-3.19 (2H ;2m ;CH2), 3.02-4.60(2H ;2m;CH2),1.50 à 2.20(2H ;m ;CH2), 5.03(2H ;AB J=17Hz ;COCH20), 5.17(2H ;m ;2CH), 7.00(1H;d ;CONHCH), 7. 40 à 7.65(6H ;m ; 6H aromatiques), 7. 81 et 8.09(4H ;dd ;2X2H aromatiques en ortho du CO) Exemple 2: 3-[9(S)- (2-furanoyl)amino -6,10-dioxo- 1,2,3,4,7,8,9,10- octahydro -6H-pyridazino[1,2a][1,2]diazepine-1(S)-carboxamide]-5-méthyl-1-(2,6dichlorobenzoyloxy-hexane-2-one On procède à partir du produit obtenu au stade b) de l'étape 3 de l'exemple 1 comme suit : A 11.6 mg(0.022 mmole) de 3 (S) - 9(S)-(2-furanoyl)amino - 6,10-dioxo-1,2,3,4,7,8,9,10- octahydro -6H-pyridazino[1,2- a][1,2]diazepine-1(S)-carboxamide]-5-méthyl-1-bromo-hexane-2- one en solution dans 0. 35 ml de DMF est additionné llmg de résine diméthylaminométhylpolystyrène (0.044mmole ; 2équi. ) La réaction est laissée une nuit sous agitation. Le mélange est filtré sur verre fritté et la résine lavé 2 fois avec 2ml de CH2C12. Après évaporation intensive sous vide on isole 9 mg de produit attendu (rdt=82) LC-MS (pureté >80%) MH+ 636
Exemple 3 : 3(S)-[ [ 9 (S) - (2-furanoyl) amino -6,10-dioxo- 1,2,3,4,7,8,9,10- octahydro -6H-pyridazino[1,2a] [1, 2] diazepine-1 (S) -carboxamide] -4- (4-hydroxyphényl) -1- (2,6-dichlorobenzoyloxy)-butane-2-one Stade 1 : 3 (S) - [ 9 (S) - (2-furanoyl) amino -6,10-dioxo- 1,2,3,4,7,8,9,10- octahydro -6H-pyridazino[1,2a][1,2]diazepine-1(S)-carboxamide]-4-(4-terbutyloxyphényl) 1- (2,6-dichlorobenzoyloxy)-butane-2-one On procède comme à l'étape 1 de l'exemple 1 en utilisant à la place du composé de formule (VI): la Leu-fmoc, un autre composé de formule (VI) : la fmoc-TYR(OtBu) en même quantité.
Puis on opère dans les mêmes conditions réactionnelles que pour les étapes 2 à 4 de l'exemple 1 et obtient ainsi le produit attendu.
Stade 2 : 3(S)-[ [ 9 (S) - (2-furanoyl) amino -6,10-dioxo- 1,2,3,4,7,8,9,10- octahydro -6H-pyridazino[1,2a][1,2]diazepine-1(S)-carboxamide]-4-(4-hydroxyphényl)-1- (2,6-dichlorobenzoyloxy)-butane-2-one
16mg (0. 022 mmole) du produit obtenu ci-dessus au stade 1 en solution dans 0. 25 ml de CH2C12 sont traités par 0.25ml d'acide trifluoroacétique La réaction est laissée une heure sous agitation à TA. Le solvant est évaporé à sec. On isole 14. 4 mg de produit attendu (rdt=95%) LC-MS (pureté >80%) MH+ 686 EXEMPLE 4: COMPOSITION PHARMACEUTIQUE : On a préparé des comprimés répondant à la formule suivante : Produit de l'exemple 1 0,2 g Excipient pour un comprimé terminé à lg (détail de l'excipient : lactose, talc, amidon, stéarate de magnésium)..
L'invention se rapporte à l'élimination des métaux lourds contenus dans les liquides.
Dans le contexte législatif actuel en matière d'environnement, les problèmes liés aux rejets d'éléments toxiques par les sites industriels d'une part et à la qualité des eaux potables d'autre part, se posent avec une acuité croissante. Ainsi, la loi française n 92. 646 du 13 juillet 1992 stipule, que les installations d'élimination des déchets ne seront autorisées à accueillir à partir du 1er juillet 2002, que des déchets qui ne seront plus susceptibles d'être traités pour réduire leur caractère polluant ou dangereux dans les conditions techniques et économiques du moment. Comme les métaux lourds ne jouent aucun rôle biologique et du fait de leur abondance naturelle modérée, la réponse des êtres vivants à leur surcharge, est passive, par accumulation ou tout au plus, non spécifique. Les plantes et certains mammifères synthétisent des métallothionéines, protéines de faible masse molaire (< 6 kDa) riches en résidus cystéine. Chez l'homme, l'intoxication chronique par le plomb, le saturnisme, et d'une manière plus générale, par le mercure et le cadmium, qui présentent des propriétés chimiques voisines à celles du plomb, se manifeste par des troubles rénaux, gastro-intestinaux et nerveux, par de l'anémie et par un retard du développement chez l'enfant. Cette toxicité est liée à l'interférence des métaux lourds dans le métabolisme du zinc et du calcium et à l'impossibilité de les éliminer du corps humain, d'où leur accumulation dans le foie, les reins, le cerveau et les os. C'est pourquoi, la conception de nouveaux matériaux capables de séquestrer et soustraire les métaux lourds d'effluents aqueux ou de fluides biologiques présente un intérêt considérable. Les propriétés de coordination spécifiques de ligands organiques ont été mises à profit pour complexer efficacement et sélectivement les cations ciblés par un procédé d'épuration (A.T. Yordanov. D.M. Roundhill, Coord. Chem. Rev. (1998), 170, 93). Deux approches ont été essayées. Il s'agit de l'extraction liquidelliquide et de la séparation solide/liquide. Pour l'extraction liquide/liquide, l'extractant doit posséder des propriétés à la fois amphiphiles, tout en préservant une lipophilie élevée afin de minimiser les pertes de ligands en phase aqueuse.
Plusieurs ligands N-monofonctionnalisés dérivés du cyclame portant une chaîne alkyle en C16-C20 ont déjà été préparés et les constantes de formation des
complexes ML 2+ {(3mm = [MmL1Hh]I([M]m[L]'[Htn ont été déterminées pour les cations Pb 2+ (log 1-'110 A = 9-10), Zn 2+ (log 10 = 11-13) et Cu 2+ (log p110 = 17-20). Elles traduisent un accroissement de la sélectivité en faveur des cations de rayon ionique élevé par rapport au cyclame (D. B. Puranik, A. Singh. E.L. Chang, Coord. Chem. 1996, 39, 321). Des dérivés N-fonctionnalisés de tétraazamacrocycles à 16 et 18 atomes ont aussi été préparés (F.R. Muller. H. Handel; Tetrahedron Lett. 9 982, 23, 2769).
Les ligands lipophiles ont été mis en #uvre à la fois dans un procédé d'extraction liquidelliquide et solide/liquide par imprégnation sur une résine polyacrylique fortement hydratée du type XAD-7 (F.R. Muller, H. Handel, R. Guglielmetti. Helv. Chim. Acta 1983, 66, 1525 :L. Percelay, P. Appriou. H. Handel, Analusis 1988, 16. 450). Toutefois, la solubilité des extractants en phase aqueuse entraîne une perte non négligeable de ces derniers, ce qui rend malaisées l'utilisation, la récupération et la régénération des ligands imprégnés. Des ligands ont aussi été greffés sur une matrice solide organique, le copolymère divinylbenzène/4-vinylbenzène C-substitué par le 1,4,8,11,14-pentathio cycloheptadécane, avec lequel on a obtenu des taux d'extraction du mercure(il) supérieurs à 99 %, à pH environ égal à 3.6.(T.F. Baumann, J. G Reynolds, G. A. Fox, Chem. Commun.
1998, 1637). Les calixarènes fonctionnalisés immobilisés sur un polymère organique et destinés à piéger les métaux lourds, constituent un autre exemple (K. Ohto, Y. Tanaka, K. Inoue, Chem. Lett. 1997, 647). Comme exemples de support minéraux, il y a les gels de silice. L'isatine et la ninhydrine supportées sur gel de silice, ont révélé des capacités de fixation du cadmium et du plomb de l'ordre 0.15- 0. 25 mmol g-1 à pH environ égal à 5 (E. M. Soliman, Anal. Lett. 1998, 31, 299).
Les silices modifiées par des polyéthers macrocycliques azotés N-substitués ont montré des capacités d'extraction sélectives du plomb et du mercure (J. S. Brads- haw, R.M. Izatt, Acc. Chem. Res. 1997. 30. 338). De nombreux gels de silice mo- difiés par des ligands polyazamacrocycliques ont aussi été synthétisés (R. Guilard. H. Chollet. P. Guiberteau. P. Cocolios, WO 96/11056 : Gros. F. Denat, S. Brandès, H. Chollet. R. Guilard, J. Chem. Soc. Dalton Trans. 1996. 1209). Récemment, une nouvelle classe de matériaux nanoporeux, ont été préparés. Ils sont obtenus par gélification d'un tétraalcoxysilane en présence d'un agent ten-
sioactif structurant. Les co-gels du 3-mercaptopropyltriméthoxysilane à un taux de 2,3-9 % et du tétraéthoxysilane, contenant 1,3 mmol g-1 de groupes R-SH (surface spécifique : 1063 m2 g-1 ; diamètre moyen des pores : 14,8 A) fixent sélectivement l'ion Ho2' en milieu neutre (0,59 mmol g-1) ; après traitement d'une solution aqueuse neutre par cet extractant, le seuil de contamination en mercure résiduel est inférieur à 10 ppb ; contre, il ne présente qu'une très faible affinité vis-à- vis du cadmium, du plomb ou du zinc. (J. Brown, L. Mercier. T. J. Pinnavaia, Chem. Commun. 1999, 69).
L'observation de la cartographie suffit donc pour déterminer si un plot d'oligonucléotide est hybridé ou non.
Les histogrammes des figures 7a et 7b en annexe représentent le nombre de pixels de la cartographie (axe des ordonnées) pour une intensité de signal donnée (axe des abscisses), à deux échelles différentes pour les ordonnées. On voit clairement apparaître trois modes, correspondant à l'absorption du fond, des oligonucléotides non hybridés, et des oligonucléotides hybridés. Ces modes sont bien séparés ce qui permet d'utiliser des méthodes de traitement d'image permettant de reconnaître automatiquement les plots hybridés ou non. Un simple seuillage permet par exemple de ne conserver que les plots hybridés et quelques points absorbants aisément distingués des plots de mesure.
Exemple 4 : Test diagnostique Une partie importante de la composante génétique de la susceptibilité à la polyarthrite rhumatoïde a pu être associée aux gènes HLA-DRB, codant pour la chaîne b des molécules HLA-DR impliquées dans la présentation des peptides aux lymphocytes T, fonction pivot au c#ur des mécanismes de régulation de la réponse immunitaire.
Il a été montré plus précisément que la présence d'une séquence particulière de cinq acides aminés, correspondant aux positions 70 à 74 de la troisième
région hypervariable des molécules HLA-DRbl, était retrouvée pour différents allèles rapportés comme étant associés à la polyarthrite rhumatoïde. L'implication de cet épitope partagé correspondant aux séquences QKRAA ou QRRAA ou RRRAA (code à une lettre des acides aminés) est désormais bien documentée.
Toutefois, si ce groupe d'allèles DRB1*04 est effectivement associé à la polyarthrite rhumatoïde, tous les allèles actuellement connus (DRB1*0401 à DRB1*0427) ne sont pas forcément associés à cette maladie. Il peut en résulter que si l'on se limite à un typage du groupe d'allèles DRB1*04, en fonction des allèles présents, on pourra obtenir, outre de vrais positifs ou de vrais négatifs, des faux positifs qui vont alarmer inutilement le médecin et le patient.
Dans le cas d'une technique de biologie moléculaire (analyse des allèles DRB1 : résultats rendus selon la nomenclature DRB1*01 à DRB1*10), le clinicien s'intéresse essentiellement à la présence d'allèle (s) DRB1*04.
En cas de résultats suggérant une prédisposition à la maladie, un deuxième test est généralement pratiqué, utilisant une technique de biologie moléculaire dite de haute résolution dite de sous-typage du DR4, pour préciser l'allèle DRB1*04 (DRB1*0401 à 0427 selon la nomenclature officielle en 1998), seuls les allèles DRB1*0401, 0404,0405 et 0408 étant rapportés comme étant associés à la maladie.
Extraction L'extraction est effectuée par des produits commerciaux évoqués précédemment, tels que QIAmp Blood Kit (Marque déposée) de QIAGEN S. A.
Amplification Cette amplification concerne le locus HLA-DR, incluant la région de l'exon 2 qui correspond aux codons 5 à 94 selon la nomenclature officielle, des gènes HLA-DRB. Le tableau 1 ci-dessous décrit les amorces utilisées lors de l'amplification par PCR de ce locus précédemment décrit. Il donne également l'ensemble des conditions physico-chimiques permettant la réalisation de cette amplification.
Amorces - P1 (amorce 5'-DR) : CCG GAT CCT TCG TGT CCC CAC AGC ACG (5'>3') - P2 (amorce 3'-DR) : TCG CCG CTG CAC TGT GAA G (5'>3') Mélange - tampon 10X TEMAG (*) : 10 l réactionnel - dNTPs (20 mM) : 1 l (0. 2 mM final) - P1 (30 M) : 0. 8 l (0. 25 pM final) - P2 (30 M) : 0. 8 l (0. 25 M final) - AmpliTaq (5 U/l) : 0. 5 l (2. 5 U) - ADN : 100-500 ng - H2O : QSP 100 l Programme (5 min à 96 C) + 10 x (10 sec à 98 C + 30 sec à 65 C + 30 sec à d'amplification 72 C) + 30 x (20 sec à 96 C + 30 sec à 65"C + 30 sec à 72 C)
Tableau 1 : amplification simultanée de la région d'intérêt HLA-DR (*) : Tampon 10X TEMAG : 500 mM Tris-HCl pH 8.8 , 150 mM Sulfate Ammonium, 15 mM MgCl2, 500 uM EDTA, 0. 1 % gélatine
Dans cet exemple, la distance séparant les deux amorces Pl et P2 est choisie pour être suffisamment courte pour ne pas avoir à effectuer de clivage. Bien entendu, si les amplicons réalisés le nécessitent, cette fragmentation des acides nucléiques peut être effectuée selon les moyens et conditions exposés plus haut.
Préparation des supports fonctionnalisés Pour pouvoir réaliser une étude de prédisposition génétique à la polyarthrite rhumatoïde, il y a lieu d'utiliser un ensemble de réactions d'hybridation mettant en #uvre un jeu de sondes oligonucléotidiques permettant l'analyse précise d'allèles ou de groupes d'allèles HLA-DRB1 et HLA-B*27. Le tableau 2 décrit l'ensemble des sondes qui est utilisé pour la détection de ces deux maladies. Les indications qui sont données de la gauche vers la droite sont les suivantes : la référence de la sonde attribué dans la nomenclature HLA, - le numéro de la séquence attribué dans ce document, - le gène HLA concerné, - la séquence constituant cette sonde, et - la localisation des codons (trois nucléotides) sur les gènes HLA.
Sonde SEQ ID Gène Séquence (5'>3') Localisation NO HLA (codons) C + 1 DR TTC GAC AGC GAC GTG GGG 40-45 C - 2- TAT GAA ACT TAT GGG GAT AC - 4 3 DR GAT ACT TCT ATC ACC A 29-34 QK71 4 DR GAG CAG AAI CGG ICC 69-73 GAG CAG AAG CGG GCC IDE71 5 DR CTG GAA GAC GAI CGG 68-72 CTG GAA GAC GAG CGG E74 6 DR AGC AIA IGC IGG ICI AII 69-75 AGC AGA GGC GGG CCG AGG QR71 7 DR CAG AGG CGI GII ICI GTG 70-75 CAG AGG CGG GCC GCG GTG S57 8 DR GCC TAG CGC CGA GTA 55-60 1 11 DR TGG CAG CTT AAG TTT GAA 9-14 52 12 DR TAC TCT ACG TCT GAG T 10-15 2 13 DR CAG CCT AAG AGG GAG TG 10-15 7+9 14 DR IAG GTI GAC AIC GTG TGC 74-79 CAG GTG GAC ACC GTG TGC 10 15 DR GGA GGA GGT TAA GTT 8-13 8+12 16 DR CTC TAC GGG IGA GT 10-15 CTC TAC GGG TGA GT 3 19 DR CCG GGT GGA CAA CIA C 73-78 CCG GGT GGA CAA CTA C