INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
On sait obtenir des poils de fourrure de relativement grande longueur en mettant en oeuvre la technique de tissage dite double pièces. Selon cette technique on tisse deux portions tissées formant deux fonds parallèles avec une multiplicité de fils liés aux deux fonds et perpendiculaires à ceux-ci. Dans certaines utilisations, les fils liaisonnant les deux fonds constituent les entretoises en sorte que l'on obtient un tissu tridimensionnel. Dans son application à la fourrure, les fils de liaison entre les deux 'fonds sont coupés et l'on obtient deux bandes tissées comportant sur une face une multiplicité de fils coupés formant les poils de la fourrure. Il est donc ainsi possible d'ajuster la longueur des poils de fourrure en régulant d'une part l'écartement entre les deux fonds et d'autre part l'emplacement de la coupe par rapport à un fond déterminé.
De préférence la hauteur des poils est d'au moins vingt millimètres.
Bien sûr les fils constitutifs des poils de la fourrure sont choisis en fonction de l'application au pinceau , notamment leur tenue à l'eau ou au solvant , leur résilience , leur capacité d'absorption et de restitution de la peinture.
De préférence les fils constitutifs des poils de la fourrure sont des fils synthétiques par exemple de polyester, polyamide, polypropylène mais peuvent également être des fils naturels de laine, coton, mohair utilisés seuls ou en mélange. Les titrages de ces fils vont de 80 dtex à 3060 dtex en simple comme en retors, en filés de fibres comme en continu multifilamentaires. Selon l'invention c'est la portion tissée ou tricotée , formant le fond de la fourrure, qui sert à la fixation des poils sur l'extrémité du manche, transversalement à ladite extrémité. Pour cette fixation , il est possible de mettre en oeuvre tout type de moyens que ce soit par collage , par thermofusion localisée ou totale , par la mise en oeuvre de dispositifs mécaniques de coincement ou d'emboîtement.
Selon une première version, à utilisation unique , la portion tissée ou tricotée de la fourrure est fixée de manière définitive sur l'extrémité du manche. Dans une seconde version , il est prévu de pouvoir , sans préjudice, retirer ladite portion et de la remplacer par une portion non-usagée ayant une longueur de poils différente ou ayant des propriétés différentes...
Dans ce cas, selon l'invention, on propose un kit à peindre composé a) d'un manche ayant une extrémité transverale, b) d'une pluralité de bandes textiles , de type fourrure, ayant un fond tissé ou tricoté comportant des poils sur une face et , c) des moyens de fixation de la portion tissée ou tricotée sur l'extrémité transversale du manche.
La présente invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui va être faite de deux exemples de réalisation d'un pinceau dont les poils sont constitués par les poils d'une bande tissée ou tricotée de type fourrure, illustrés par le dessin annexé dans lequel - La figure 1 est une représentation schématique en coupe d'un premier exemple de pinceau à usage unique et, - La figure 2 est une représentation schématique en perspective d'un second exemple de réalisation d'un pinceau à portion poils amovibles et , - La figure 3 est une représentation des différents constituants du pinceau de la figure 2.
on pourra néanmoins se référer à la méthode décrite dans les exemples. Parmi les cellules utilisables pour la production de ces protéines recombinantes, il faut citer bien entendu les cellules bactériennes (Olins P. O. et Lee S C., 1993, Recent advances in heterologous gene expression in E. coli. Curr. Op. Biotechnology, 4 : 520-525), mais également les cellules de levure (Buckholz R. G., 1993, Yeast Systems for the Expression of Heterologous Gene Products. Curr. Op. Biotechnology, 4 : 538-542), de même que les cellules animales, en particulier les cultures de cellules de mammifère (Edwards C. P. et Aruffo A., 1993, Current applications of COS cell based transient expression systems.
Curr. Op. Biotechnology, 4 : 558-563) mais également les cellules d'insectes dans lesquelles on peut utiliser des procédés mettant en oeuvre par exemple des baculovirus (Luckow V. A., 1993, Baculovirus systems for the expression of human gene products.
Curr. Op. Biotechnology, 4 : 564-572).
De manière tout à fait préférée, le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie est choisi parmi un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp A, et plus préférentiellement parmi un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp A de Klebsellia pneumoniae.
Dans un autre mode de réalisation préféré de l'invention, le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie comprend, de préférence est constitué par, un peptide dont la séquence est choisie parmi les séquences suivantes : a) la séquence d'acides aminés de séquence SEQ ID NO 2 ; b) la séquence d'acides aminés d'une séquence présentant une homologie d'au moins 80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et 99 % avec la séquence SEQ ID ? 2 ; et c) la séquence d'acides aminés d'un fragment d'au moins 5 acides aminés, de préférence d'au moins 8,10, 15,20, 25,30, 40,45 et 50 acides aminés consécutifs d'une séquence telle que définie en a).
Par séquence d'acide nucléique ou d'acides aminés présentant une homologie d'au moins 80 % après alignement optimal avec une séquence d'acide nucléique ou d'acides aminés déterminée, on entend désigner une séquence qui après alignement optimal avec ladite séquence déterminée présente un pourcentage d'identité d'au moins 80 % avec ladite séquence déterminée.
Par pourcentage d'identité entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés au sens de la présente invention, on entend désigner un pourcentage de nucléotides ou de résidus d'acides aminés identiques entre les deux séquences à comparer, obtenu après le meilleur alignement, ce pourcentage étant purement statistique et les différences entre les deux séquences étant réparties au hasard et sur toute leur longueur. Les comparaisons de séquences entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés sont traditionnellement réalisées en comparant ces séquences après les avoir alignées de manière optimale, ladite comparaison étant réalisée par segment ou par fenêtre de comparaison pour identifier et comparer les régions locales de similarité de séquence. L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé, outre manuellement, au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Smith et Waterman (Ad. App. Math., 2 : 482,1981), au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Neddleman et Wunsch (J. Mol. Biol., 48 : 443,1970), au moyen de la méthode de recherche de similarité de Pearson et Lipman (Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 85 : 2444, 1988), au moyen de logiciels informatiques utilisant ces algorithmes (GAP, BESTFIT, FASTA et TFASTA dans le Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI, ou encore par les logiciels de comparaison BLAST N ou BLAST P).
Par exemple, on pourra utiliser le programme BLAST, BLAST 2 sequences , disponible sur le site http : //www. ncbi. nlm. nih. gov/gorf7bl2. html, les paramètres utilisés étant ceux donnés par défaut (en particulier pour les paramètres open gap penaltie : 5,
et extension gap penaltie : 2 ; la matrice choisie étant par exemple la matrice BLOSUM 62 proposée par le programme), le pourcentage d'identité entre les deux séquences à comparer étant calculé directement par le programme.
Parmi lesdites séquences présentant une homologie d'au moins 80 % avec la séquence OmpA de référence, on préfère les séquences de, ou codant pour des, peptides capables d'induire une réponse immunitaire dirigée spécifiquement contre l'antigène ou haptène qui lui est associée, telle que l'induction d'une réponse immunitaire mesurée au moyen des techniques standards décrites dans les exemples ci-après.
La présente invention concerne aussi une composition selon l'invention, caractérisée en ce que la composition pharmaceutique comprend une construction nucléique codant pour ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie ou une cellule hôte transformée capable d'exprimer ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie.
L'invention a également pour objet la composition selon l'invention, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique comprend en outre, un antigène, immunogène ou haptène.
Par immunogène, antigène ou haptène spécifique d'un agent infectieux ou d'une cellule tumorale , on entend désigner en particulier tout composé exprimé par un agent infectieux, tel qu'un virus, une bactérie, une levure, un champignon ou un parasite, par une cellule tumorale, ou un de leurs analogues structuraux, qui seul ou en association avec un adjuvant ou porteur est capable d'induire une réponse immunitaire spécifique dudit agent infectieux ou de ladite cellule tumorale.
On entend également désigner par"immunogène, antigène ou haptène"dans la présente description un composé présentant une analogie structurale avec ledit antigène ou haptène capable d'induire une réponse immunologique dirigée contre ledit antigène ou haptène dans un organisme préalablement immunisé avec ledit composé analogue.
Ledit antigène ou haptène peut notamment être choisi parmi les protéines, les glycopeptides, les lipopeptides, les polysaccharides, les oligosaccharides, les acides nucléiques et les lipides.
Pour assurer le transport de ce réservoir par hélicoptére celui est pourvu d'un anneau qui sont reliés les quatre cables, les dits cables sont attache aux quatre points d'attache au niveau du réservoir.
Un voyant est sur le coffret pour signaler la soupape fermée.
Le moyen pour l'alimentation d'eau sera assurés par camions citernes, pompes au bord de riviéres, ou piscines.
En réference à ces dessins, le fonctionnement est le suivant.
Preparation du remplissage du réservoir (1) d'eau, Un place libre et horizontale.
Verifier l'état general du réservoir (1).
Le circuit electrique, branchement du cable de connexion de la batterie à la prise du coffret (27).
Pour fermer la soupape (5), manipuler le bouton (26) de commande (22), le voyant qui s'allume est signe que la soupape (5) est fermée.
Remplissage du réservoir (1) quand il est plein le niveau (34) qui se trouve sur le couvercle du coffret (27) apparait.
Le remplissage du réservoir (1) est fait par le moyen de camions citernes, pompes au bord de riviéres, Accrocher les quatre cables (37) qui sont au niveau du réservoir Le bouton (26) de commande doit être avec le responsable du du r"servoir (1) qui va au l'intérieur de l'hélicoptére pour ouvrir et fermer la soupape (5), sur le sinistre.
De l'hélicoptère descend le cable de suspension pour accrocher l'anneau (38) des cables qui vont aux quatre points de attache au niveau du réservoir (1).
Les 6 planches annexes illustrent l'invention.
La figure 1 represente une vue d'ensemble.
La figure 2 représente la télécomnande.
La figure 3 représente le réservoir et ccffret.
La figure 4 représente les limiteurs et curseur.
Dans une forme de réalisation de l'invention, ledit antigène, immunogène ou haptène dérive d'un virus, d'une bactérie, d'un parasite ou d'un champignon.
Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, ledit antigène, immunogène ou haptène comprend au moins un peptide dérivé de micro-organisme responsable de pathologies des voies aériennes choisi parmi le VRS (virus syncytial respiratoire), le para influenza virus (PIV), l'influenza virus, les hantavirus, les streptocoques, les pneumocoques, haemophilus influenza type b, les rhinovirus, les coronovirus et les méningocoques.
Dans un mode de réalisation encore plus préféré de l'invention, ledit antigène, immunogène ou haptène comprend au moins un fragment de la protéine G du virus respiratoire syncytial de type A ou B, notamment humain.
Dans une autre forme de réalisation de l'invention, ledit antigène, immunogène ou haptène est associé ou spécifique d'une cellule tumorale.
Parmi les cancers dont les tumeurs expriment un antigène tumoral associé pouvant être prévenus ou traités par les utilisations selon la présente invention, on peut citer en particulier, mais sans s'y limiter : * le cancer du sein, du poumon, du colon, et le carcinome gastrique (Kawashima et al., 1999, Cancer Res., 59 : 431-5) ; * le mésothéliome, l'ostéosarcome, les cancers du cerveau (Xie et al., 1999, J. Natl.
Cancer. Inst., 91 : 169-75) ; * le mélanome (Zheuten et al., 1998, Bratilsl. Lek. Listy, 99 : 426-34) ; * l'adénome cystique du pancréas (Hammel et al., 1998, Eur. J. gastroenterol. Hepatol., 10 : 345-8) ; * le cancer colorectal (Ogura et al., 1998, Anticancer Res., 18 : 3669-75) ; 'le carcinome des cellules rénales (Jantzer et al., 1998, Cancer Res., 58 : 3078-86) ; et 'le cancer de l'ovaire et du cervix (Sonoda et al., 1996, Cancer., 77 : 1501-9).
La présente invention a aussi pour objet une composition selon l'invention, caractérisée en ce que ledit antigène, immunogène ou haptène est couplé ou mélangé au peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie.
L'invention comprend également l'utilisation selon l'invention, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène est couplé par liaison covalente, notamment par couplage chimique, avec ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie.
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, il est introduit un ou plusieurs éléments de liaison ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp, ou l'un de ses fragments, et/ou dans ledit antigène ou haptène pour faciliter le couplage chimique, de préférence, ledit élément de liaison introduit est un acide aminé.
Selon l'invention, il est possible d'introduire un ou plusieurs éléments de liaison, notamment des acides aminés pour faciliter les réactions de couplage entre le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, et ledit immunogène, antigène ou haptène. Le couplage covalent entre le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie et ledit immunogène, antigène ou haptène selon l'invention peut être réalisé à l'extrémité N-ou C-terminale dudit peptide. Les réactifs bifonctionnels permettant ce couplage seront déterminés en fonction de l'extrémité dudit peptide choisie pour effectuer le couplage et de la nature dudit immunogène, antigène ou haptène à coupler.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'utilisation selon l'invention est caractérisée en ce que le couplage entre ledit immunogène, antigène ou haptène et ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie est réalisé par recombinaison génétique, lorsque ledit immunogène, antigène ou haptène est de nature peptidique.
Les conjugués issus d'un couplage entre l'immunogène, antigène ou haptène et ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, peuvent être préparés par recombinaison génétique. La protéine chimérique ou hybride (le conjugué) peut être produite par des techniques d'ADN recombinant par insertion ou addition à la séquence d'ADN codant pour ledit peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, d'une séquence codant pour ledit immunogène, antigène ou haptène de nature protéique.
Les procédés de synthèse des molécules hybrides englobent les méthodes utilisées en génie génétique pour construire des polynucléotides hybrides codant pour les séquences polypeptidiques recherchées. On pourra, par exemple, se référer avantageusement à la technique d'obtention de gènes codant pour des protéines de
fusion décrite par D. V Goeddel (Gene expression technology, Methods in Enzymology, vol. 185, 3-187, 1990).
Ainsi, la présente invention concerne aussi une composition pharmaceutique qui comprend une construction nucléique codant pour ladite protéine hybride, ou qui comprend un vecteur contenant une construction nucléique codant pour ladite protéine hybride ou une cellule hôte transformée contenant ladite construction nucléique capable d'exprimer ladite protéine hybride Les compositions selon l'invention peuvent contenir en outre un adjuvant. Ce dernier peut notamment être choisi parmi le MPL-A ( MonoPhosphoryl Lipid A ), le Quil-A (adjuvant dérivé de saponine), l'ISCOM ( ImmunoStimulaing COMplex ), le Diméthyl Dioctadécyl Ammonium sous forme de bromure (DDAB) ou de chlorure (DDAC), les CpG (oligodésoxynucléotides contenant un motif spécifique centré sur un dinucléotide CpG), la Leif (antigène protéique dérivée de Leishmania capable de stimuler les cellules PBMC et présentatrices d'antigène, et de produire une réaction cytokine de type Th-1), la CT (Toxine Cholérique), la LT ( heat Labil Toxin ) et les versions détoxifiées de la CT ou la LT.
Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, la composition pharmaceutique selon l'invention ne contient pas d'adjuvant autre que le peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie.
Dans un mode de réalisation encore plus préféré de l'invention ladite composition pharmaceutique selon l'invention ne contient pas de détergent.
Au sens de la présente invention, le milieu pharmaceutiquement acceptable est le milieu dans lequel les composés de l'invention sont administrés, préférentiellement un milieu injectable chez l'homme. Il peut être constitué d'eau, d'une solution aqueuse saline ou d'une solution aqueuse à base de dextrose et/ou de glycérol.
L'invention comprend également une composition selon l'invention, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique est véhiculée sous une forme permettant d'améliorer sa stabilité et/ou son immunogénicité ; ainsi, elle peut être véhiculée sous forme de liposomes, virosomes, nanosphères, microsphères ou microcapsules.
La présente invention concerne encore une protéine du domaine périplasmique d'une Omp d'entérobactérie choisie parmi les protéines de séquence suivantes :
a) la protéine de séquence SEQ ID ? 2 ; b) une protéine de séquence présentant une homologie d'au moins 80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et 99 % avec la séquence SEQ ID ? 2 ; c) une protéine d'au moins 5 acides aminés, de préférence d'au moins 8, 10, 15, 20,25, 30,40, 45,50, 75 et 100 acides aminés consécutifs du domaine périplasmique de séquence SEQ ID ? 2 et présentant une activité immunogénique, notamment comme protéine porteuse et/ou comme adjuvant.
La présente invention concerne encore une construction nucléique, notamment de type ADN, codant pour le domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie de séquence SEQ ID NO 2, ses séquences homologues ou ses fragments tels que ci-avant définis en b) et c).
La présente invention concerne notamment une construction nucléique, caractérisée en ce que l'acide nucléique codant pour le peptide provenant du domaine périplasmique est choisi parmi les acides nucléiques de séquence suivante : a) l'acide nucléique de séquence SEQ ID ? 1 ; b) un acide nucléique de séquence présentant une homologie d'au moins 80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et 99 % avec la séquence SEQ ID ? 1 ; et c) un acide nucléique dont la séquence est constituée de la séquence d'un fragment d'au moins 15 nucléotides, de préférence 24,30, 45,60, 75,90, 105,120, 135,150, 225 et 300 nucléotides consécutifs de la séquence SEQ ID ? 1 et dont le peptide codé par ledit fragment présente une activité immunogénique, notamment comme protéine porteuse et/ou comme adjuvant.
La SEQ ID ? 2 correspond aux acides aminés 199 à 335 de l'OmpA de Klebsiella pneumoniae (OmpA dont la protéine de 335 acides aminés est dénommée également protéine P40). Ce fragment est dépourvu des 17 premiers acides aminés du domaine périplasmique (acides aminés 182 à 198 de ladite séquence de l'OmpA de Klebsiella pneumoniae, afin d'éliminer la zone dite charnière , qui présente une forte homologie avec la chaîne légère 1 de la myosine humaine.
L'utilisation d'un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie tel que défini ci-dessus comme porteur et/ou adjuvant dans un vaccin (ou pour la préparation d'un vaccin) constitue un autre objet de l'invention.
L'invention concerne encore l'utilisation d'un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie tel que défini ci-dessus pour la préparation d'un vaccin destiné au traitement prophylactique ou thérapeutique des infections virales, bactériennes, parasitaires ou fongiques ou pour la préparation d'un vaccin destiné au traitement prophylactique ou thérapeutique des cancers.
L'invention a encore pour objet l'utilisation d'un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie tel que défini ci-dessus pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à générer ou accroître une réponse immunitaire contre un agent infectieux ou une cellule tumorale.
Les légendes des figures et exemples qui suivent sont destinés à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée.
Légendes des figures Figures IA et IB : Etude de la réponse anti-G5 sérique après immunisation de souris BALB/c avec les conjugués P40-G5 et P40péri-G5 ( P40péri pour fragment du domaine périplasmique de la protéine P40).
Exemple 1 : Clonage du domaine périplasmique de la P40 Le gène codant pour la partie périplasmique a été obtenu par amplification par PCR à partir de l'ADN plasmidique codant pour rP40 en utilisant comme couple d'amorces : - l'oligonucléotide sens de séquence : 5'-GCGAATTCGTGGCTACCAAGCACTTCACC-3' (SEQ ID No. 3) ; et - l'oligonucléotide antisens de séquence : 5'-CGAAGCTTAGTGGTGGTGGTGGTGGTGTTCCGGAGCCGGAGCCG-3' (SEQ ID No. 4).
Le fragment ainsi amplifié correspondant à P40péri ( P40péri ou P40p pour fragment du domaine périplasmique de la protéine P40) et identifié par séquençage a été cloné dans un vecteur sous le contrôle du promoteur de l'opéron tryptophane, en amont de 9 acides aminés du peptide leader (MKAIFVLNA (SEQ ID No. 5)). La
séquence protéique de la partie périplasmique correspond aux acides aminés 182 à 335 de l'OmpA de Klebsiella pneumoniae Exemple 2 : Expression du domaine périplasmique de la P40 chez Escherichia coli La souche d'cnc coli ICONE 100 (Souche ICONE 100 telle que décrite dans la demande WO 99/53080 publiée le 15 Octobre 1999) transformée par le vecteur pvaLP40p est mise à cultiver une nuit à 37 C sous agitation dans 100 ml de TSB complémenté en extrait de levure, en tétracycline (8 ug/ml). Le lendemain une culture diluée à une concentration en biomasse équivalente à une densité optique D. O. = 1 pour une longueur d'onde de 580 nm est préparée dans du milieu TSB additionnée d'extrait de levure, de tétracycline et de tryptophane (100 ug/ml). Après 10 minutes de culture, l'expression de la protéine recombinante est induite par addition d'IAA (acide indole-3 acrylique) à 25 ug/ml dans le milieu. Environ 5 heures à 37 C après induction, les cellules sont récoltées par centrifugation.
De manière surprenante, il a été mis en évidence qu'un peptide provenant d'un domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, notamment une protéine
OmpA d'entérobactérie telle que la protéine P40 de Klebslella pneumoniae, répond à ces besoins.
La présente invention a ainsi pour objet l'utilisation du domaine périplasmique d'une protéine Omp d'entérobactérie, dépourvue de la partie membranaire, en tant que protéine porteuse et/ou adjuvante par voie systémique pour augmenter l'immunogénicité d'un antigène associé de manière covalente, soit conjuguée de manière chimique (notamment par l'intermédiaire de réactif de couplage), soit fusionnée (protéine chimérique exprimée par recombinaison génétique lorsque l'antigène associé est de nature protéique). Ce fragment périplasmique dépourvu du domaine membranaire de la protéine est actif en l'absence de détergent, contrairement à la protéine entière. Son activité est de plus équivalente à celle de la protéine entière utilisée en présence d'un détergent.
Dans la présente invention, on entendra désigner par le terme peptide également les polypeptides et les protéines, ces trois termes étant utilisés indifféremment, et par le terme Omp (pour Outer Membrane Protein ), les protéines de la membrane externe.