INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
demande européenne EP 99402552, et par Werstuck et al. (Science 282 (1998) 296-298) et présentent une activité autocatalytique de préférence en présence d'un ligand. Ainsi, par insertion d'une séquence aptamère, le transcrit inhibiteur acquiert une activité autocatalytique, qui peut être activée en présence d'un ligand spécifique, lorsque l'on souhaite rétablir une activité de transcrit d'intérêt. La séquence nucléotidique de l'aptamère qui est utilisée pour inhiber le transcrit inhibiteur peut être toute séquence codant pour un ARN ayant une activité autocatalytique ligand-dépendant. Il s'agit par exemple des ribozymes à tête de marteau, des ribozymes du virus de l'hépatite delta, des ribozymes VS Neurospora, des ribozymes en tête d'épingles, des introns du groupe 1 et II, et de la RNAse P, ou toute séquence dérivée fonctionnelle artificiellement obtenue (Clouet-d'Orval et al., Biochemistry 34 (1995)11186-11190 ; Olive et al.., EMBO J 14 (1995) 3247-3251 ; Rogers et al., J. Mol Biol 259 (1996) 916-925). La taille de la séquence aptamère peut varier selon sa nature et son origine, mais est de préférence comprise entre 20 et 200 pb. La localisation de l'insertion des séquences aptamères est généralement déterminée à l'aide de logiciels de bioinformatique tels que " RNA fold " afin d'assurer une stabilité ainsi qu'une activité de clivage optimales en fonction de l'environnement et de la conformation (Zuker M, Method Mol Biol 25 (1994) 267-94 ;Stage- Zimmermann TK, RNA 4 (1998) 875-889).
L'inhibition du transcrit inhibiteur peut enfin être réalisée par l'intermédiaire d'un ribozyme agissant en trans qui, du fait de sa spécificité de séquence pour une partie du transcrit inhibiteur, est capable de reconnaître et de s'hybrider avec le transcrit inhibiteur, et ainsi de le dégrader. De préférence, le ribozyme trans se présente sous la forme d'un ribozyme allostérique, c'est à dire qu'il présente une activité catalytique ligand-dépendante, qui est notamment activée en présence d'un ligand. De tels ribozymes allostériques sont bien connus de l'homme du métier et sont
notamment décrits par Soukup et al., Structure 7 (1999) 783-791 et dans W094/13791.
Les ligands activateurs utilisés sont par exemple des acides nucléiques, des protéines, des polysaccharides ou des sucres, ou encore toutes molécules organiques ou inorganiques capables de se fixer sur la séquence aptamère du transcrit inhibiteur ou sur une séquence du ribozyme allostérique par un mécanisme de reconnaissance moléculaire, et ainsi d'activer l'activité catalytique (Famulok M, Curr Opin Struc Biol 9 (1999) 324-329). Ceux-ci sont bien connus de l'homme du métier et sont notamment décrits entre autres par Cowan et al. (Nucleic Acids Res.
28 (15)(2000)2935-2942) et par Werstuck et al. (Science, 282 (1998), 296- 298). A titre d'exemples, on peut citer les antibiotiques, tels que la doxycycline, la pefloxacine, la tobramycine, la kanamycine, les colorants tels que les colorants Hoechst H33258 et H33342, des mononucléotides tels que le FMN (flavine mononucléotide), l'ATP, l'AMPc, les drogues telles que la theophylline, les adjuvants, et les substituts.
Selon ce mode de réalisation, le transgène d'intérêt est placé sous le contrôle d'un promoteur constitutif fonctionnel dans le tissu ou les cellules cibles, de mammifères et de préférence humaines. Le promoteur constitutif conduisant l'expression de transcrit d'intérêt est de préférence tissu- spécifique.
La présente invention a pour objet la souche de Lactobacillus sakei RV332, qui a été déposée selon le traité de Budapest, le 15 mars 2000, auprès de la C. N. C. M.
(Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 28 rue du Docteur Roux, 75724 Paris CEDEX 15, France), sous le numéro 1-2398.
La présente invention englobe également des molécules d'intérêt biologique, obtenues à partir de ladite souche. Il s'agit en particulier de molécules d'acide nucléique utilisables pour la transformation génétique de bactéries lactiques, et plus particulièrement : - de molécules d'acide nucléique comprenant au moins un gène de l'amas lacRABCDFEGX de la souche RV332, et notamment au moins un gène impliqué dans le catabolisme du lactose par la voie des phosphotransférases, choisi parmi le gène lacR, le gène lacA, le gène lack, le gène lacC, le gène lacD, le gène lacF, le gène lacE, et le gène lacG, du plasmide pRV500, ou de molécules d'acide nucléiques comprenant au moins un fragment dudit plasmide, et notamment de molécules d'acide nucléiques comprenant le système de réplication dudit plasmide, ou de molécules d'acide nucléique comprenant au moins un gène dudit plasmide choisi parmi hsdM, hsdS ou hsdR.
Selon un mode de réalisation préféré d'une molécule d'acide nucléique conforme à l'invention, ledit gène impliqué dans le catabolisme du lactose par la voie des phosphotransférases, est choisi parmi le gène lacA, le gène lack, le gène lacC, le gène lacD, le gène lacF, le gène lacE et le gène lacG.
Avantageusement une molécule d'acide nucléique conforme à l'invention comprend plusieurs gènes de l'amas ac. RABCDFEGX ; il peut s'agir à titre d'exemples nonlimitatifs : - d'une molécule d'acide nucléique comprenant au moins l'ensemble des gènes permettant le métabolisme du lactose par la voie des phosphotransférases ; d'une molécule d'acide nucléique comprenant l'ensemble des gènes lacABCDFE ; - d'une molécule d'acide nucléique comprenant au moins la combinaison de gènes lacAB, et permettant ainsi l'expression d'une galactose 6-P isomérase ; - d'une molécule d'acide nucléique comprenant au moins la combinaison de gènes lacCD, et permettant ainsi l'expression des enzymes de la voie du tagatose 6-P ; - d'une molécule d'acide nucléique comprenant au moins la combinaison de gènes lacEF, et permettant ainsi l'expression des enzymes spécifiques EIIBCLac et EIIA Lac de transport du lactose.
Eventuellement, une molécule d'acide nucléique conforme à l'invention peut également comprendre le gène de régulation lacR, ainsi que le gène lacX.
Des molécules d'acide nucléique conformes à l'invention, contenant au moins un gène impliqué dans le catabolisme du lactose par la voie des phosphotransférases, peuvent être utilisées notamment pour la transformation génétique de bactéries lactiques, notamment de lactobacilles, tels que Lactobacillus casei, Lactobacillus delbrueckii (subsp. delbrueckii ou bulgaricus), Lactobacillus curvatus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus zeae, Lactobacillus helveticus, etc... et en particulier de Lactobacillus sakei, afin de leur conférer la
capacité d'utiliser le lactose par la voie des phosphotransférases.
La présente invention fournit également des moyens de sélection de souches de Lactobacillus sakei capables d'utiliser le lactose par la voie des phosphotransférases.
En particulier la présente invention a pour objet un procédé de sélection d'une souche de Lactobacillus sakei capable de métaboliser le lactose par la voie des phosphotransférases, caractérisé en ce qu'il comprend la détection de la présence, chez les souches de Lactobacillus sakei à tester, de gènes lacA, lack, lacC, lacD, lacF, lacE, et lacG, présentant respectivement au moins 90% d'identité avec les gènes lacA, lacke, lacC, lacD, lacF, lacE, et lacG, de la souche CNCM 1-2398, et la sélection d'une souche comprenant l'ensemble desdits gènes. Eventuellement, le procédé conforme à l'invention peut en outre comprendre la détection de la présence des gènes lacR et lacX.
Le procédé conforme à l'invention peut en particulier être mis en ceuvre en utilisant, pour la détection de la présence des gènes lacA, lack, lacC, lacD, lacF, lacE, et lacG, et éventuellement des gènes lacR et lacX, des sondes d'acide nucléique dérivées des gènes correspondants de la souche CNCM 1-2398, ou bien des sondes d'acide nucléique dérivées des gènes homologues de Lactococcus lactis.
Alternativement, on peut détecter l'expression des protéines codées par ces gènes, par exemple à l'aide d'anticorps dirigés contre celles-ci ou contre leurs homologues de Lactococcus lactis.
La présente invention a également pour objet un procédé d'obtention d'une souche de Lactobacillus sakei capable de métaboliser le lactose par la voie des phosphotransférases, caractérisé en ce qu'il comprend la transformation de Lactobacillus sakei par au moins une séquence d'acide nucléique choisie parmi : - une séquence d'acide nucléique présentant au moins 90% d'identité avec le gène lacA de la souche
- une séquence d'acide nucléique présentant au moins 90% d'identité avec le gène lacB de la souche CNCM 1-2398 ; - une séquence d'acide nucléique présentant au moins 90% d'identité avec le gène lacC de la souche CNCM 1-2398 ; - une séquence d'acide nucléique présentant au moins 90% d'identité avec le gène lacD de la souche CNCM 1-2398 ; - une séquence d'acide nucléique présentant au moins 90% d'identité avec le gène lacF de la souche CNCM 1-2398 ; - une séquence d'acide nucléique présentant au moins 90% d'identité avec le gène lacE de la souche CNCM 1-2398 ; - une séquence d'acide nucléique présentant au moins 90% d'identité avec le gène lacG de la souche CNCM 1-2398.
Selon un mode de mise en ceuvre préféré du procédé conforme à l'invention, il comprend en outre la transformation de ladite souche avec une séquence d'acide nucléique présentant au moins 90% d'identité avec le gène lacR de la souche CNCM 1-2398, et/ou avec une séquence d'acide nucléique présentant au moins 90% d'identité avec le gène lacX de la souche CNCM 1-2398.
Le pourcentage d'identité d'une séquence avec une séquence de référence est défini ici comme le pourcentage de résidus de cette séquence qui sont identiques avec ceux de la séquence de référence sur un alignement des 2 séquences assurant une correspondance maximale entre les positions des résidus.
Les anticorps selon la présente invention sont également utilisables afin de détecter une expression d'un gène de Listeria innocua ou monocytogenes 4b ou de microorganismes associés. En effet, la présence du produit d'expression d'un gène reconnu par un anticorps spécifique dudit produit d'expression peut être détectée par la présence d'un complexe antigène-anticorps formé après la mise en contact de la souche de Listeria innocua ou monocytogenes 4b ou du microorganisme associé avec un anticorps selon l'invention. La souche bactérienne utilisée peut avoir été préparée , c'est-à-dire centrifugée, lysée, placée dans un réactif approprié pour la constitution du milieu propice à la réaction immunologique. En particulier, on préfère un procédé de détection de l'expression dans le gène, correspondant à un Western blot, pouvant être effectué après une électrophorèse sur gel de polyacrylamide d'un lysat de la souche bactérienne, en présence ou en l'absence de conditions réductrices (SDS-PAGE). Après migration et séparation des protéines sur le gel de polyacrylamide, on transfère lesdites protéines sur une membrane appropriée (par exemple en nylon) et on détecte la présence de la protéine ou du polypeptide d'intérêt, par mise en contact de ladite membrane avec un anticorps selon l'invention.
Ainsi, la présente invention comprend également les kits ou nécessaires pour la mise en oeuvre d'un procédé tel que décrit (de détection de l'expression d'un gène de Listeria innocua ou monocytogenes 4b ou d'un microorganisme associé, ou pour la détection et/ou l'identification de bactéries appartenant à l'espèce Listeria innocua ou monocytogenes 4b ou un microorganisme associé), comprenant les éléments suivants : a) un anticorps polyclonal ou monoclonal selon l'invention ; b) éventuellement, les réactifs pour la constitution du milieu propice à la réaction immunologique ; c) éventuellement, les réactifs permettant la mise en évidence des complexes antigène-anticorps produits par la réaction immunologique.
Les polypeptides et les anticorps selon l'invention peuvent avantageusement être immobilisés sur un support, notamment une puce à protéines. Une telle puce à protéines est un objet de l'invention, et peut également contenir au moins un polypeptide d'un microorganisme autre que Listeria innocua ou monocytogenes 4b ou un anticorps dirigé contre un composé d'un microorganisme autre que Listeria innocua ou monocytogenes 4b.
Les puces à protéines ou filtres à haute densité contenant des protéines selon l'invention peuvent être construits de la même manière que les puces à ADN selon l'invention. En pratique, on peut effectuer la synthèse des polypeptides directement fixés sur la puce à protéines, ou effectuer une synthèse ex situ suivie d'une étape de fixation sur ladite puce du polypeptide synthétisé. Cette dernière méthode est préférable, lorsque l'on désire fixer des protéines de taille importante sur le support, ces protéines étant avantageusement préparées par génie génétique. Toutefois, si l'on ne désire fixer que des peptides sur le support de ladite puce, il peut être plus intéressant de procéder à la synthèse desdits peptides directement in situ.
Les puces à protéines selon l'invention peuvent être avantageusement utilisées dans des kits ou nécessaires pour la détection et/ou l'identification de bactéries associées à l'espèce Listeria innocua ou monocytogenes 4b ou à un microorganisme, ou de façon plus générale dans des kits ou nécessaires pour la détection et/ou l'identification de microorganismes. Lorsque l'on fixe les
polypeptides selon l'invention sur les puces à ADN, on recherche la présence d'anticorps dans les échantillons testés, la fixation d'un anticorps selon l'invention sur le support de la puce à protéines permettant l'identification de la protéine dont ledit anticorps est spécifique.
De préférence, on fixe un anticorps selon l'invention sur le support de la puce à protéines, et on détecte la présence de l'antigène correspondant, spécifique de Listeria innocua ou monocytogenes 4b ou d'un microorganisme associé.
Une puce à protéines ci-dessus décrite peut être utilisée pour la détection de produits de gènes, pour établir un profil d'expression desdits gènes, en complément d'une puce à ADN selon l'invention.
Les puces à protéines selon l'invention sont également extrêmement utiles pour les expériences de protéomique, qui étudie les interactions entre les différentes protéines d'un microorganisme donné. De façon simplifiée, on fixe des peptides représentatifs des différentes protéines d'un organisme sur un support. Puis, on met ledit support en contact avec des protéines marquées, et après une étape optionnelle de rinçage, on détecte des interactions entre lesdites protéines marquées et les peptides fixés sur la puce à protéines.
Ainsi, les puces à protéines comprenant une séquence polypeptidique selon l'invention ou un anticorps selon l'invention sont objet de l'invention, ainsi que les kits ou nécessaires les contenant.
La présente invention couvre également un procédé de détection et/ou d'identification de bactéries appartenant à l'espèce Listeria innocua ou monocytogenes 4b ou à un microorganisme associé dans un échantillon biologique, qui met en oeuvre une séquence nucléotidique selon l'invention.
Il doit être entendu que le terme échantillon biologique concerne dans la présente invention les échantillons prélevés à partir d'un organisme vivant (en particulier sang, tissus, organes ou autres prélevés à partir d'un mammifère) ou un échantillon contenant du matériel biologique, c'est-à-dire de l'ADN ou de l'ARN Un tel échantillon biologique comprend aussi les compositions alimentaires contenant des bactéries (par exemple les fromages, les produits laitiers), mais également des compositions alimentaires contenant des levures (bières, pains) ou autres. Le terme échantillon biologique concerne aussi les bactéries isolées à partir de ces prélèvements ou compositions alimentaires.
Le procédé de détection et/ou d'identification mettant en oeuvre les séquences nucléotidiques selon l'invention peut être de diverse nature.
On préfère un procédé comportant les étapes suivantes : a) éventuellement, isolement de l'ADN à partir de l'échantillon biologique à analyser, ou obtention d'un ADNc à partir de l'ARN de l'échantillon biologique ; b) amplification spécifique de l'ADN de bactéries appartenant à l'espèce Listeria innocua ou monocytogenes 4b ou à un micro-organisme associé à l'aide d'au moins une amorce selon l'invention ; c) mise en évidence des produits d'amplification.
Ce procédé est basé sur l'amplification spécifique de l'ADN, en particulier par une réaction d'amplification en chaîne.
On préfère également un procédé comprenant les étapes suivantes : a) mise en contact d'une sonde nucléotidique selon l'invention avec un échantillon biologique, l'acide nucléique contenu dans l'échantillon biologique ayant, le cas échéant, préalablement été rendu accessible à l'hybridation, dans des conditions permettant l'hybridation de la sonde à l'acide nucléique d'une bactérie appartenant à l'espèce Listeria innocua ou monocytogenes 4b ou à un micro-organisme associé ; b) mise en évidence de l'hybride éventuellement formé entre la sonde nucléotidique et l'ADN de l'échantillon biologique.
III/ EFFETS DU PRINCIPE ACTIF EXTRAIT ET CARACTERISE POUR LUTTER CONTRE LE VIEILLISSEMENT CUTANE On montre par les expérimentations et essais suivants que le principe actif selon l'invention présente des activités lui permettant de lutter contre les trois facteurs ainsi qu'énoncés en préambule.
1 / Effet contre l'oxydation des protéines cellulaires L'étude consiste à évaluer l'activité protectrice du principe actif. Elle est conduite en mesurant le taux d'oxydation des protéines d'expiants soumis à une irradiation UVA + UVB.
Les expiants sont mis en contact avec les produits 2 heures avant l'irradiation et pendant l'irradiation. La concentration en principe actif est de 5 et 7%.
Les analyses sont effectuées 24 heures après irradiation.
Le protocole consiste à substituer le dinitrophénol sur les groupements --carbonyls qui sont caractéristiques des protéines oxydées. Puis le dinitrophénol est révélé à l'aide d'un anticorps anti dinitrophénol. La dérivatisation des groupements -carbonyls est obtenue avec une solution de couplage Oxyblot, commercialisée par la société américaine Oncor pendant 30 mn à 20 C.
Après neutralisation, les échantillons sont transférés Immobilon, commercialisé par la société française Polylabo.
Une fois la membrane saturée et incubée avec l'anti-corps anti- dinitrophénol puis conjuguée avec un anti-immunoglobuline de lapin- peroxydase, tous deux de la société Oncor, on révèle par chimiluminescence et on quantifie la densité des bandes des images saisies.
On dose également les protéines de chaque extrait.
L'étude montre qu'il existe des protéines naturellement oxydées car les témoins non irradiés présentent aussi des bandes protéiques entre 50 000 et 70 000 Daltons, ce qui correspond aux protéines oxydées. On se reporte à la figure 1 qui montre les résultats du film après chimiluminescence.
PM : Poids Moléculaire, A : Témoin non irradié, B : Témoin irradié, A' : témoin non irradié en contact avec le principe actif à 7%, C : Témoin irradié au contact du principe actif à 5 %, et D : Témoin irradié au contact du principe actif à 7 %.
L'expiant témoin irradié présente une oxydation beaucoup plus importante des protéines.
De plus, on note que l'oxydation est plus faible dans le des expiants irradiés mais mis au contact du principe actif selon la présente invention. De plus, cette diminution est proportionnelle à la concentration du principe actif.
On trouve les résultats dans le tableau de la figure 2.
2/ Effet contre les mutations induites par les rayonnement UV L'étude a pour but de mettre en évidence l'activité antimutagène du principe actif selon la présente invention vis à vis de mutations induites par des rayonnements UV. Le protocole prévoit de soumettre une suspension bactérienne de Salmonella typhimurium (TA 102) et d'Escherichia coli (WP2) à des rayonnements UVA/UVB ou UVC.
Ensuite une partie de ces suspensions irradiées est coulée boîte de Pétri avec deux types de milieu a/ milieu minimum gélosé pour estimer les colonies révertantes X b/ milieu nutritif gélosé pour estimation des colonies viables, y.
Après incubation, les colonies sont comptées au moyen appareil adapté.
r Dans le premier compartiment du kit, la teinture oxydante peut être une teinture d'oxydation classique, une teinture directe ou une teinture éclaircissant.
Ainsi, dans le premier compartiment du kit où l'on préconise d'utiliser une teinture oxydante telle que la teinture d'oxydation classique, on trouvera au moins une base d'oxydation de préférence choisie parmi la paraphénylène diamine et ses dérivés substitués sur une des fonctions amines et/ou sur le noyau benzénique, le paraaminophénol et ses dérivés substitués sur la fonctions amine et/ou sur le noyau benzénique, les bases doubles, les ortho-aminophénols, les orthophénylènediamines et les bases hétérocycliques.
On peut notamment citer : - (1) les paraphénylènediamines de formule (1) suivante et leurs sels d'addition avec un acide : dans laquelle : Ri représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle en C1-C4, monohydroxyalkyle en Ci-C4, polyhydroxyalkyle en C2-C4 alcoxy (Ci-C4) alkyle (Ci-C4), alkyle en Ci-C4 substitué par un groupement azoté, phényle ou 4'-aminophényle ;
r R2 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle en Ci-C4, monohydroxyalkyle en Ci-C4 ou polyhydroxyalkyle en C2-C4, alcoxy (C1-C4) alkyle (C1-C4) ou alkyle en Ci-C4 substitué par un groupement azoté ; R3 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène tel qu'un atome de chlore, un radical alkyle en Ci-C4, sulfo, carboxy, monohydroxyalkyle en C1-C4 ou hydroxyalcoxy en Ci-C4, acétylaminoalcoxy en Ci-C4, mésylaminoalcoxy en Ci-C4 ou carbamoylaminoalcoxy en Ci-C4, R4 représente un atome d'hydrogène, d'halogène ou un radical alkyle en Cl-C4 Ri et R2 peuvent également former avec l'atome d'azote qui les porte un hétérocycle azoté à 5 ou 6 chaînons éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements alkyle, hydroxy ou uréido.
Parmi les groupements azotés de la formule (1) ci-dessus, on peut citer notamment les radicaux amino, monoalkyl (CI-C4) amino, dialkyl (Ci-C4) amino, trialkyl (Ci-C4) amino, monohydroxya ! ky) (Ci-C4) amino, imidazolinium et ammonium.
Parmi les paraphénylènediamines de formule (1) ci-dessus, on peut plus particulièrement citer la paraphénylènediamine, la paratoluylènediamine, la 2-chloroparaphénylènediamine, la 2, 3-diméthyl-paraphénylènediamine, la 2, 6-diméthylparaphénylènediamine, la 2, 6-diéthyl-paraphénylènediamine, la 2, 5-dimethylparaphénylènediamine, la N, N-diméthyl-paraphénylènediamine, la N, N-diéthylparaphénylènediamine, la N, N-dipropyl-paraphénylènediamine, la 4-amino-N, N-diéthyl- 3-méthyl-aniline, la N, N-bis- (ss-hydroxyéthyl)-paraphénylènediamine, la 4-N, N-bis- (sshydroxyéthyl) amino-2-méthyl-aniline, la 4-N, N-bis- (P-hydroxyéthyl)-amino 2-chloroaniline, la 2-ss-hydroxyéthyl-paraphénylènediamine, la 2-fluoro-paraphénylènediamine, la 2-isopropyl-paraphénylènediamine, la N- (ss-hydroxypropyl)-paraphénylènediamine, la 2-hydroxyméthyl-paraphénylènediamine, la N, N-diméthyl-3-méthylparaphénylènediamine, la N, N- (éthyl, ss-hydroxyéthyl) -paraphénylènediamine, la N- ss, dihydroxypropyt)-paraphényiènediamine, ! a N- (4'-aminophény))-paraphény) ènediam ! ne, la N-phényl-paraphénylènediamine, la 2-ss-hydroxyéthyloxy-paraphénylènediamine, la 2-p-acétylaminoéthyloxy-paraphénylènediamine, la N- (ss-méthoxyéthyl)paraphénylènediamine, 2-méthyl-1-N-ss-hydroxyéthyl-paraphénylènediamine, et leurs sels d'addition avec un acide.
r-------------------------------------------------Parmi les paraphénylènediamines de formule (1) ci-dessus, on préfère tout particulièrement la paraphénylènediamine, la paratoluylènediamine, la 2-isopropylparaphény) ènediamine, ia 2-p-hydroxyéthy)-paraphényiènediamine,) a 2-p-hydroxyéthy) oxy-paraphény) ènediamine, ia 2, 6-diméthyl-paraphénylène-diamine, la 2, 6-diéthyl-paraphénylènediamine, la 2, 3-diméthyl-paraphénylènediamine, la N, N-bis- (ss-hydroxyéthyl)-paraphénylènediamine, la 2-chloro-paraphénylènediamine, et leurs sels d'addition avec un acide.
- (il) Selon l'invention, on entend par bases doubles, les composés comportant au moins deux noyaux aromatiques sur lesquels sont portés des groupements amino et/ou hydroxyle.