INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
XML est un exemple typique d'un tel langage de balisage. XML présente l'avantage d'être largement utilisé dans le monde Internet. Un autre avantage de XML est d'offrir un certain nombre d'outils, notamment un outil appelé XSL, qui permet de définir des transformations applicables à des documents XML. La définition d'une transformation se fait par l'intermédiaire d'une feuille de style XSL. Dans une transformation XSL, un processeur XSL lit un document XML et une feuille de style XSL pour générer un autre document, par exemple un document XML. XML et XSL se prêtent donc particulièrement bien à la mise en oeuvre de l'invention.
Dans la suite de la description, et afin de donner des exemples concrets, on utilise le langage XML pour générer des documents qui décrivent des fichiers au format JPEG2000. Ceci n'est pas
r restrictif. On peut utiliser un autre type de langage de balisage et d'autres formats progressifs de fichiers.
La norme JPEG 2000 est décrite dans le document ISO/IEC FCD15444-1 intitulé JPEG 2000 Final Draft International Standard .
Les principales étapes du codage JPEG 2000 sont les suivantes : a) une étape optionnelle de transformation de l'image d'entrée pour obtenir une représentation de l'image dans l'espace Y-Cr-Cb, où Y est la composante de luminance, Cr la composante de chrominance Rouge et Cb la composante de chrominance bleue ; b) une étape de transformation en odelettes des composantes de l'image c) une étape de quantification des coefficients obtenus ; d) une étape de codage ; e) une étape d'insertion des données obtenues dans un flux binaire ( bit stream en anglais) selon un certain schéma de progressivité.
Lorsque l'image à coder est très grande, une étape préliminaire permet de la diviser en plusieurs tuiles qui sont codées indépendamment les unes des autres. Dans la suite de la description, pour la simplicité de l'exposé, on se limitera au cas où l'image se compose d'une seule tuile. Ceci n'est pas restrictif.
JPEG 2000 prévoit l'utilisation de quatre schémas élémentaires de progressivité : par résolution, par qualité, par localisation spatiale et par composante. JPEG2000 propose aussi cinq combinaisons de ces schémas élémentaires. Chaque schéma de progressivité correspond à une manière spécifique d'ordonner les données dans le flux binaire.
Le flux binaire comporte des entêtes de paquets et des paquets qui contiennent les données utiles résultant du codage. Chaque paquet de données utiles correspond à une composante (i), une couche CD, un niveau de résolution (k), et une localisation de partition (m). Le flux binaire est construit en utilisant quatre boucles. L'ordre des boucles détermine le schéma de progressivité utilisé.
Pour un flux binaire ayant une progressivité par composantes, l'ordre des quatre boucles est par exemple le suivant : pour chaque composante, pour chaque résolution, pour chaque couche, pour chaque localisation de partition, écriture du paquet dans le flux binaire.
Dans la suite de la description on se limitera au cas d'une progressivité par composantes, mais l'invention est applicable à tout type de progressivité.
Conformément à la terminologie JPEG2000, toutes les informations relatives à une image sont regroupées dans un flux de code (ou codestream en anglais). Le flux de code comporte un entête principal, un ou plusieurs entêtes de tuiles suivis chacun d'un flux binaire, et il se termine par un marqueur de fin. L'entête principal et les entêtes de tuiles sont organisés en marqueurs et segments de marqueurs. Finalement, le flux de code est lui même contenu dans un fichier binaire.
Les dessins annexés donnés à titre d'exemple non limitatif dans leurs exécutions illustrent l'invention.
- La figure 1 représente, en perspective, une barre fixe à montants lisses et haubanages en potences, aux bas de chaque montant.
La figure 2 représente, en perspective, une barre fixe combinée à des éléments sur chaque i montant vertical, et haubans enveloppés dans des fourreaux.
- La figure 3 représente, en perspective, une barre fixe combinée, dont les éléments sont orientables par l'intermédiaire de brides cardans. à serrage rapide.
- La figure 4 représente, en perspective, une barre verticale lisse à haubanages en potences.
- La figure 5 représente, en perspective, la barre verticale avec un élément, fixé par bride croisillon et un autre élément fixé à son extrémité.
- La figure 6 représente, en perspective, un élément A s'apparentant au cheval d'arçon (24) et en B un élément (25) fixé sur le socle en potences du dispositif ; - La figure 7 représente divers éléments de formes non limitatives, s'adaptant à l'un ou à l'autre agrès.
En référence à ces dessins, Fig. 1 à 6, l'une des caractéristiques de ces agrès concerne l'haubanage (1) fixé plus bas en potences (2) sur chaque montant (3), contrairement à l'haubanage des barres fixes classiques. Cet haubanage- par câbles ou tiges rigides, au besoin croisés (4), bien arrimé au sol (5), évite toute torsion parasite des montants lisses, prévus pour une utilisation nouvelle.
Ces montants robustes, sont encastrés au sol (6) afin d'éviter tout glissement de leur base.
Ainsi, ce dispositif dégage la partie supérieure des montants (7), permettant aux gymnastes de nouvelles figures.
Par mesure de sécurité, des fourreaux souples (8) couvrent ces haubans.
La figure 2 montre les possibilités de ce dispositif qui caractérise ces agrès. Chaque montant (3) de cette barre fixe combinée (9) supporte un élément (10) et (11) de forme adéquate, qui peuvent s'orienter dans tous les sens et de haut en bas, maintenus par l'intermédiaire d'une bride robuste (12).
Chaque bride verrouille son élément, une fois sa position déterminée par le gymnaste.
L'élément (10) par exemple, sera verrouillé à la perpendiculaire de la barre fixe (9) et l'élément (11) en ligne à celle-ci. Concernant l'élément (11), il pourra comporter, par exemple, une sorte de demi-sphère, non limitative dans sa forme et sa grosseur.
La figure 3 est caractérisée en ce que les éléments (13) et (14) peuvent être positionnés immédiatement, grâce à leur attache rapide bride cardan (15) surdimensionnées, à vis de serrage moletée (16) et verrous de sécurité (non visible). Toutes les brides pourront bénéficier d'un système à serrage rapide, en fonction de leur forme respective, et comporteront des repères chiffrés, à lettres, à crantages ou autres, permettant un réglage précis du système.
Chaque extrémité de ces éléments, comporteront éventuellement un embout de sécurité (17).
ce dispositif étant caractérisé en ce que l'objectif d'observation est un objectif catadioptrique et en ce que les moyens d'éclairage comprennent en outre des moyens de réflexion de la lumière fournie par la source vers l'échantillon, ces moyens de réflexion étant disposés entre l'objectif d'observation et le support.
Selon un mode de réalisation préféré du dispositif objet de l'invention, l'objectif catadiotrique comprend : - un miroir parabolique prévu pour capter puis réfléchir une lumière émise par l'échantillon lorsque ce dernier reçoit la lumière émise par la source, et - un miroir auxiliaire qui est placé au foyer du miroir parabolique et prévu pour capter la lumière réfléchie par ce miroir parabolique et réfléchir cette lumière vers les moyens d'acquisition, les moyens de réflexion de la lumière fournie par la source étant disposés entre le miroir auxiliaire et le support.
De préférence, les moyens d'éclairage comprennent en outre des moyens de mise en forme de la lumière émise par la source.
Cette source est de préférence un laser.
Selon un mode de réalisation particulier du dispositif objet de l'invention, les moyens d'éclairage comprennent une pluralité de sources, aptes à émettre des lumières de longueurs d'onde différentes, et des moyens d'activation de l'une quelconque de ces sources.
Les moyens d'acquisition peuvent comprendre une caméra à dispositif à transfert de charges, ou caméra CCD.
De préférence, le dispositif objet de l'invention comprend en outre des moyens de filtrage disposés entre l'objectif catadioptrique et les moyens d'acquisition et prévus pour ne laisser passer que la lumière émise par l'échantillon lorsque celui-ci est éclairé.
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, on utilise un support apte à recevoir une pluralité d'échantillons et les moyens de déplacement relatif sont prévus pour disposer successivement ces échantillons sur l'axe d'observation, de façon à observer séquentiellement ces échantillons.
Ce support est par exemple une plaque de micro-titration comprenant une pluralité de puits dans lesquels sont respectivement placés les échantillons.
Dans ce cas, le dispositif peut comprendre en outre des moyens de positionnement automatique de puits sur l'axe d'observation.
Ces moyens de positionnement comprennent, par exemple, une photodiode à quatre quadrants.
Le dispositif objet de l'invention peut comprendre en outre des moyens de traitement de chaque image acquise par les moyens d'acquisition.
Dans le cas où le support est une plaque de micro-titration, le traitement comprend, de préférence, une étape de segmentation d'image et une étape de calcul de paramètres pour chaque puits.
nullement limitatif, en faisant référence aux dessins annexés sur lesquels : 'la figure 1 est une vue schématique d'un dispositif connu, permettant l'observation d'échantillons, et a déjà été décrite, 'la figure 2 est une vue en perspective schématique d'un mode de réalisation particulier du dispositif objet de l'invention, 'la figure 3 est une vue schématique de différents moyens optiques faisant partie du dispositif de la figure 2, * la figure 4 illustre schématiquement et partiellement un autre dispositif conforme à l'invention, utilisant des lasers de longueurs d'onde différentes, et 'la figure 5 est une vue schématique et partielle d'un autre dispositif conforme à l'invention, utilisant une photodiode à quatre quadrants.
EXPOSÉ DÉTAILLÉ DE MODES DE RÉALISATION PARTICULIERS On décrit maintenant un exemple du dispositif objet de l'invention en faisant référence aux figures 2 et 3.
ArpTYI ATION nu 1m-rnSANF Le chitosane est ensuite réacétylé pour obtenir le degré d'acétylation désiré. Cette réacétylation est réalisée par réaction de la fonction amine avec l'anhydride acétique en milieu hydro-alcoolique. Le rapport entre le nombre des fonctions amines et le nombre de molécules d'anhydride présent en solution détermine le degré d'acétylation du chitosane produit. Pour un chitosane ayant un degré d'acétylation donné, on met en oeuvre une solution hydro-alcoolique qui comprend, outre le chitosane, de l'eau, du 1, 2-propandiol et la quantité nécessaire d'acide acétique pour avoir une quantité stoechiométrique par rapport aux fonctions amines du chitosane.
Dans un exemple précis de réalisation, la solution hydro-alcoolique comprenait 3g de chitosane, 323 g d'eau et de 272 g de 1,2propandiol. Le mélange acétylant comprend l'anhydride acétique et du propandiol. Par exemple pour 62,38 g de propandiol, le
mélange comprenait 1, 26ml d'anhydride acétique pour obtenir un degré d'acétylation du chitosane de 50% et 1, 62ml d'anhydride acétique pour obtenir un degré d'acétylation de 60%.
EORMAIION n (= l'HynROGl=1 PHYSIQI 11= nF rHITOSANF Cette formation nécessite le passage d'un état liquide à un état de gel. Ce passage correspond à une situation antérieure (état liquide) où les interactions hydrophiles dominent à une situation postérieure (état d'hydrogel) où les interactions hydrophobes deviennent suffisamment fortes pour qu'il n'y ait plus dissolution sans toutefois être assez fortes pour provoquer la complète précipitation du polymère. Le mode de préparation préféré, selon l'invention, part d'une solution initiale de chitosane. Si nécessaire, selon le degré d'acétylation, il s'agira d'une solution acide, le c hitosane étant mis en solution dans de l'acide chlorhydrique en quantité stoechiométrique avec les groupements amines du chitosane. Après dissolution complète du chitosane, un certain volume de 1,2 propandiol est ajouté goutte à goutte à la solution qui est ensuite dégazée sous vide pendant une durée d'environ une heure. La solution est ensuite versée dans un récipient permettant d'avoir un grand rapport surface libre sur volume et est mise en étuve à 45 C pendant le temps nécessaire à sa prise en gel. Ainsi la formation de l'hydrogel de chitosane est obtenue par un processus physico-chimique.
Pour obtenir un hydrogel qui ne soit pas soluble dans l'eau à des pH de l'ordre de 6 ou 7, on réalise une neutralisation de l'hydrogel ainsi obtenu par passage pendant environ une heure en milieu basique, par exemple de la soude 0,1 molaire.
La diminution du nombre de charges positives dues à l'augmentation du pH favorise les interactions hydrophobes et donc la stabilité du gel. On procède ensuite à un lavage de l'hydrogel pour éliminer l'alcool et obtenir un pH d'environ 7. C'est cet hydrogel de
chitosane, lavé, qui sera mis en oeuvre pour la mise en culture des cellules chondrogéniques.
Il est à noter que la prise en gel correspond à un rapport solution aqueuse/1-2 propandiol déterminé, rapport qui dépend du degré d'acétylation du chitosane. De plus, la gélification s'accompagnant d'une perte en eau, il importe que les conditions opératoires favorisent cette évaporation de l'eau.
Plusieurs types de récipients peuvent être utilisés lors de la gélification, que ce soit des boîtes de pétri, des boîtes multi-puits ou encore des inserts spécialement conçus pour être logés dans les puits de boîtes multi-puits. Par exemple on met en oeuvre une plaque de 24 puits équipés d'inserts, chaque insert étant constitué d'un cône en plastique dont le fond est formé d'une membrane perméable au liquide de nutrition et qui est agencé pour être déposé dans chaque puits sans en toucher le fond.
M)SF EN CUtTIRF Les cellules chondrogéniques peuvent être des chondrocytes autologues ou des cellules précurseurs de chondrocytes préparées, in vitro, à partir de cellules souches pluripotentes.
Quel que soit le récipient utilisé pour la formation de l'hydrogel, l'hydrogel obtenu se présente sous la forme d'un bloc visco-élastique et translucide, dont la capacité et la résistance dépendent notamment de la concentration en chitosane de la solution initiale. De préférence, cette concentration est de 0,5 à 4%. Pour la mise en culture des cellules chondrogéniques, il est tout d'abord nécessaire d'augmenter la surface de mise en contact entre l'hydrogel de chitosane et lesdites cellules. Pour cela selon une première variante, le bloc d'hydrogel de chitosane est découpé en petits fragments dont les dimensions extérieures sont de l'ordre de quelques millimètres. Ces fragments sont disposés dans les puits d'une
plaque multi-puits ou éventuellement dans les inserts équipant une telle plaque. Les cellules chondrogéniques sont introduites sous forme de suspension et mélangées délicatement aux fragments d'hydrogel.
L'ensemble est recouvert d'un milieu de culture approprié. On constate que les cellules chondrogéniques adhèrent spontanément à la surface extérieure des fragments d'hydrogel et ne tombent pas dans le fond des puits. La mise en culture est effectué en mettant les plaques ainsi garnies dans une atmosphère de 10% de C02 à 37 C. Le milieu de nutrition est renouvelé deux fois par semaine. La culture se poursuit pendant un temps variable qui peut aller de 2 à 6 semaines selon la taille souhaitée pour le néo-tissu cartilagineux qui se forme au contact de l'hydrogel de chitosane.
Il faut choisir une proportion ou ratio : nombre de cellules/fragment de l'hydrogel de chitosane de façon à éviter le plus possible que certaines cellules ne tombent au fond du puits. Dans un exemple précis de réalisation, on a placé 5. 105 cellules chondrogéniques pour une trentaine de fragments d'hydrogel de chitosane par insert ou 1 à 3. 106 cellules chondrogéniques pour une centaine de fragments d'hydrogel de chitosane par puits, non équipé d'insert.
Le degré d'acétylation, compris entre 30 et 70%, mais de préférence entre 40 et 60% induit des conditions d'amphiphilie optimales favorables à l'établissement d'un environnement propice à la synthèse du néo-tissu cartilagineux. En effet, en augmentant le degré d'acétylation, on contribue à renforcer les interactions hydrophobes dues aux fonctions N-acétamides. Simultanément, on accroît aussi la cationicité des sites amine résiduels, renforçant par làmême leur caractère hydrophile et leur aptitude à créer des interactions électrostatiques. Toutes ces conditions sont favorables à l'établissement d'interactions avec les protéoglycanes de la matrice
extracellulaire néo-formés par les cellules chondrogéniques.
On voit sur la partie droite de la figure 1 le spectre reconstitué S avec, en abscisses, les longueurs d'onde ^ et, en ordonnées, les intensités lumineuses I.
Les figures 2 et 3 représentent des schémas-blocs optiques d'un micro-spectromètre constitué de six blocs, à savoir six microspectromètres élémentaires dont les références sont respectivements Mix et Mly, M2x et M2y et M3x et M3y, selon le mode de conception (4).
Ce mode de conception peut faire intervenir un séparateur en longueur d'onde 4 (par exemple, un phasar ayant une bande passante de 40 nm) et trois coupleurs à séparation de polarisation Cl, C2, C3 (voir la figure 2) qui utilisent de préférence des cristaux
biréfringents pour effectuer la séparation des polarisations car la diaphonie est alors faible.
Une autre solution (voir la figure 3) consiste à utiliser le séparateur en longueur d'onde 2 de la figure 1, trois coupleurs à séparation de puissance PI, P2, P3 et six polariseurs intégrés sur fibres, à savoir trois couples de polariseurs Px et Py, Px permettant une polarisation selon une direction x et Py selon une direction y perpendiculaire à x.
Dans les deux cas (figures 2 et 3), les fibres optiques de liaison entre les coupleurs à séparation de polarisation ou les polariseurs et les microspectromètres élémentaires sont des fibres à maintien de polarisation 6.
Le premier axe neutre de chaque fibre à maintien de polarisation 6 est placé parallèlement à la surface du substrat sur lequel est formé le microspectromètre associé (cette surface étant par exemple parallèle à la direction x).
Le deuxième axe neutre de cette fibre 6 est placé perpendiculairement à cette surface (et donc parallèlement à l'axe y dans l'exemple considéré).
A propos des figures 1 à 3, on précise que le signal lumineux devant être analysé par le microspectromètre lui parvient par une fibre optique d'entrée FE ; le séparateur en longueur d'onde 2 (respectivement 4) est relié aux microspectromètres élémentaires Ml, M2, M3 (respectivement aux coupleurs Cl, C2, C3 ou PI, P2, P3) par des fibres optiques fl, f2, f3 ; chacun des coupleurs Pi, P2, P3 est relié aux
deux polariseurs associés Px et Py par deux fibres optiques fx et fy.
Trois techniques possibles pour fabriquer un phasar utilisable dans l'invention sont : - la technique d'optique intégrée sur semiconducteur - ou la technique d'optique intégrée sur silicium ou la technique d'échange d'ions sur verre.
Nous ne considérerons que les techniques utilisant un substrat de silicium ou un substrat de verre.
Considérons d'abord un phasar fabriqué par une technique d'optique intrégrée sur silicium.
Les techniques du genre SiO2/Si (couches guidantes en Si02, SiON ou Si3N4) sont parfaitement adaptées à la fabrication d'un tel composant. Les procédés utilisés dans ce cas sont fondés sur un dépôt en phase vapeur (essentiellement un dépôt chimique en phase vapeur) ou une hydrolyse à la flamme et sur une gravure ionique réactive pour la réalisation des motifs.
Prenons l'exemple de la technique utilisant des guides de silice sur silicium. A ce sujet, on se reportera aux documents suivants : [4] S. Valette et al., Si-based integrated optics technologies, Solid State Tech., 1989, pages 69- 74 [5] S. Valette et al., Silicon-based integrated optics technology for optical sensor
applications, Sensors and Act. A, 1990, pages 1087- 1091.
Ce genre de source lumineuse possède un large spectre mais sa durée de vie n'excède pas 200 à 300 heures.
Lorsqu'on dispose de marqueurs fluorescents classiques tels que la fluorescéine, les rhodamines ou les cynanines, il est préférable d'utiliser des lasers de faible puissance, de l'ordre de 10 mW à 50 mW, lasers dont la durée de vie est supérieure à 2000 heures.
La figure 1 illustre schématiquement un exemple d'un tel dispositif connu, destiné à l'observation d'échantillons 2 disposés dans les puits 4 d'une plaque de micro-titration 6 dont on voit le fond 8 ainsi que les parois 10 délimitant les puits.
Les échantillons sont excités par un rayonnement 12 issu d'un laser 14 et fournissent un rayonnement de fluorescence 16 à la suite de cette excitation.
Le fond de la plaque de micro-titration est transparent à la lumière issue du laser ainsi qu'à ce rayonnement de fluorescence.
La lumière issue du laser est mise en forme grâce à une optique appropriée 18 puis filtrée grâce à un filtre approprié 20.
La lumière ainsi filtrée est réfléchie, grâce à un miroir dichroïque 22, en direction de l'objectif 24 du microscope. Elle traverse cet objectif 24 qui la focalise sur l'échantillon étudié. On précise que les échantillons sont étudiés les uns à la suite des autres, la plaque de micro-titration étant pour ce faire disposée sur des moyens de déplacement appropriés, non représentés.
On voit aussi sur la figure 1 une caméra 26 qui est prévue pour capter l'image de l'échantillon étudié, grâce au rayonnement de fluorescence 16 émis par cet échantillon.
Ce rayonnement de fluorescence 16 traverse également l'objectif 24 du microscope puis le miroir dichroïque 22 (ce dernier étant apte à réfléchir le rayonnement 12 et à transmettre le rayonnement 16) et parvient à la caméra 26 après avoir traversé un autre filtre 28 prévu pour éliminer la lumière du laser susceptible de parvenir également à cette caméra.
Il convient de noter que l'utilisation du miroir dichroïque est rendue nécessaire, pour la séparation des rayonnements 12 et 16 (dont les longueurs d'onde respectives sont par exemple égales à 488 nm et à 520 nm), par l'existence d'un trajet commun à ces rayonnements.
Il convient également de noter que le filtre n'est pas parfait de sorte qu'une petite quantité de lumière parasite parvient toujours à la caméra.
On connaît aussi des dispositifs appelés fluorimètres . Ils utilisent soit des lasers soit
des lampes à large spectre que l'on filtre. Mais ces fluorimètres utilisent un photomultiplicateur pour détecter l'émission totale de fluorescence d'un puits étudié. Par conséquent, ils ne fournissent aucune image et ne peuvent donc être utilisés lorsqu'on veut en obtenir.
EXPOSÉ DE L'INVENTION La présente invention a pour objet un dispositif d'observation d'échantillons par fluorescence, qui est rapide et plus simple que le dispositif connu, représenté sur la figure 1.
A titre d'exemple, un dispositif conforme à l'invention est susceptible de former 384 images de fluorescence en 10 minutes environ.
De façon précise, la présente invention a pour objet un dispositif d'observation, par fluorescence, d'au moins un échantillon disposé sur un support, ce dispositif comprenant : - des moyens d'éclairage de l'échantillon, ces moyens d'éclairage comprenant au moins une source de lumière, - un objectif d'observation de l'échantillon suivant un axe d'observation, cet objectif d'observation étant prévu pour former une image de l'échantillon lorsque celui-ci est éclairé, - des moyens de déplacement relatif du support par rapport à l'objectif d'observation, pour disposer l'échantillon sur l'axe d'observation, et - des moyens d'acquisition de l'image formée par l'objectif d'observation,