INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Conformément à l'invention, l'une au moins des liaisons (celle 15a de la figure 1) est agencée sous forme d'un actionneur actif (par exemple ressort pneumatique) propre à modifier, sous l'action de moyens de commande (non montrés), la distance entre l'extrémité du bras 14 de la barre de torsion 12 et la cabine 5.
L'autre liaison 15b peut être, de façon simple, une biellette rigide, ou bien un autre actionneur commandé en relation avec la commande de l'actionneur 15a. Bien entendu, les positions respectives de l'actionneur 15a et de la biellette 15b peuvent être interverties.
L'actionneur 15a est donc à même de faire pivoter la cabine 5 autour de l'axe 7 des moyens de fixation 6, et ainsi de modifier la position angulaire longitudinale de la cabine 5 par rapport au châssis 1 en donnant à cette position angulaire toute valeur souhaitée par l'utilisateur. En particulier, si le véhicule se déplace sur un terrain incliné (montée ou descente), il est possible de commander l'actionneur 15a de manière que la cabine 5 demeure longitudinalement horizontale.
Bien entendu, la barre de torsion 12 peut être disposée en position inversée, en étant fixée sous la cabine 5 avec les extrémités de ses bras reliées par les liaisons 15a, 15b au châssis.
La commande de l'actionneur 15a peut être manuelle, le conducteur du véhicule ayant à sa disposition un organe d'actionnement (bouton, poignée) permettant d'assurer cette commande à distance.
La commande de l'actionneur 15a peut également être automatique, en prévoyant dans la cabine 5 un capteur de référence de position (horizontale ou verticale)
fournissant un signal de référence à un asservissement commandant l'actionneur.
Bien que de tels moyens ne soient pas illustrés à la figure 1 de la présente demande, la barre de torsion 12 peut être fonctionnellement associée à des moyens amortisseurs comme illustré à la figure 7 du document FRA-2 749 265.
Bien que l'agencement qui vient d'être décrit constitue l'agencement de base conforme à l'invention, les dispositions de l'invention trouveront leur intérêt optimum si elles sont combinées avec des moyens de suspension élastique principaux interposés entre le châssis 1 et la cabine 5 conformément aux enseignements du document FR-A-2 749 265.
sur un vecteur nucléotidique de levure à faible nombre de copies pour donner respectivement les plasmides recombinants pLGY, pLGYm et pLG.
Elles ont été introduites dans une souche de levure contenant la construction promoteur UASlexA (pUASlexA fusionné au gène rapporteur lacZ codant pour la ss-galactosidase) (figure 2D). Afin de vérifier que la triple fusion lexA, Gal4, Yap1 n'altérait pas la fonction de cette dernière protéine Yap1, la construction obtenue a été testée pour la complémentation d'une souche de levure délétée pour la fonction Yap1 (#yap1) en réalisant l'expérience suivante : Les trois constructions pLGY, pLGYm et pLG (figure 4) ont été introduites dans une souche de levure #yap1, puis la souche #yap1 a été soumise à un stress pour tester l'hypersensibilité à l'H202 de la souche. Les résultats montrent que la fusion LGY supprime l'hypersensibilité à l'eau oxygénée de la souche #yap1. Ceci montre que la fusion LGY n'altère pas les propriétés de la protéine Yap1 en réponse au stress oxydatif. A l'aide de la construction LGY, il devrait donc être possible d'évaluer le contrôle de la translocation nucléo-cytoplasmique de la protéine de fusion LGY en fonction d'un stimulus spécifique, en l'occurrence un stress oxydatif. Afin de confirmer cette hypothèse, l'expérience suivante a été établie. Les souches de levure sauvage contenant le plasmides pUASlexA-lacZ et respectivement les plasmides pLG, pLGY, pLGYm ont été cultivées en milieu liquide contenant du glucose. La culture des cellules en milieu glucose permet une expression faible des constructions LG, LGY et LGYm. En phase exponentielle et à la densité optique (DO) de 0,3, les différentes souches ont été soumises à un stress ou non avec des doses sublétales d'eau oxygénée, de diamide, ou d'eau oxygénée et de diamide combinés. Il a été observé : - qu'en présence ou en absence de stress, l'expression du gène rapporteur ss-galactosidase est la même pour les souches comprenant la construction LG ou n'en contenant pas. La protéine LG, ne possédant pas de séquence d'adressage au noyau, est localisée dans le
cytoplasme et n'active pas l'expression du gène rapporteur. En revanche, pour une construction LG contenant une séquence NLS d'adressage au noyau, il a été mesuré une très forte activité ss-galactosidase ; - qu'en l'absence de stress, l'expression du gène rapporteur ss-galactosidase est la même pour les souches contenant la construction LG ou LGY (figure 5) ; - que, pour la souche contenant la construction LGY et en présence d'un stress eau oxygénée, diamide, ou eau oxygénée-diamide combinés, il est observé une nette augmentation de l'activité ss-galactosidase (figure 5) ; - qu'en l'absence de stress, la protéine chimérique LGYm active l'expression du gène rapporteur (figure 6).
Ces résultats démontrent que l'augmentation de l'activité ss-galactosidase est clairement dépendante du contrôle de la localisation nucléocytoplasmique des protéines chimériques LGY ou LGYm. De plus, les fusions n'ont pas altéré la fonction du facteur de transcription lexA-Gal4, ni celle de Yap1, en particulier le domaine de Yap1 codant un domaine polypeptidique impliqué dans le contrôle nucléo-cytoplasmique en réponse à un stress spécifique. Le système semble donc opérationnel pour quantifier de manière précise les mouvements de Yap1 entre le cytoplasme et le noyau et, de manière plus générale, les mouvements d'une protéine en fonction d'un stimulus spécifique Exempte 2 : Exemple de mise en oeuvre du procédé de criblage de séquences nucléotidiques codant des protéines ou polypeptides dont la répartition nucléo-cytoplasmique est contrôlée en réponse à un stimulus spécifique.
Il est possible de recenser par un criblage exhaustif les effecteurs de la réponse à un stimulus spécifique dont l'activation repose sur une régulation de la translocation nucléo-cytoplasmique. Ce criblage est réalisé grâce à l'élaboration d'une banque d'ADN. Plusieurs millions de transformants indépendants sont testés séparément par l'étalement du résultat de la transformation sur boîte de pétri contenant un milieu solide 2. 5% agar. Les clones transformants sont mis à croître sur milieu contenant aussi le substrat chromogénique de la P-galactosidase, X-gal, ce qui permet de mesurer directement par un test de coloration simple sur boîte, l'activité ss-galactosidase des colonies étalées. Afin de valider la possibilité de cribler les clones par un test de coloration sur boîte reflétant les niveaux d'expression du gène rapporteur lacZ, l'expérience suivante a été réalisée Les clones contenant respectivement les constructions LGY ou LGYm ont été cultivés et étalés sur boîte de pétri. Les colonies isolés sont transférées sur un filtre préalablement déposé sur un milieu contenant de l'eau oxygénée ou du diamide (figure 7A). Les résultats de cette expérience sont les suivants : l'apparition d'une coloration bleue des colonies (révélant une expression de la protéine ss-galactosidase) est observée avec la construction LGY uniquement en présence de stress. Pour une souche transformée avec la construction LGYm, il est aussi observé une expression du gène rapporteur en l'absence de stress (figure 7B). Les résultats sont donc fidèles à ceux qui avaient été obtenus en milieu liquide et montrent qu'il est tout à fait envisageable de cribler une banque d'ADN pour recenser les facteurs susceptibles de transiter du cytoplasme au noyau durant un stimulus spécifique ou inversement du noyau vers le cytoplasme. Plus précisément, le criblage est réalisé de la manière suivante : a) Comme présentée dans la figure 8, à la place du gène YAP1, une banque d'ADN génomique de levure ou une banque d'ADN complémentaire de plantes ou de mammifères, est ajoutée en
fusion avec les tag HA et c-myc, utilisés pour l'immuno- localisation, et la GFP utilisée pour la localisation par fluorescence et la construction LG. b) Les colonies transformant sont mises en contact sur milieu solide puis répliquées sur deux boites c) Sur une boite, un stimulus spécifique est appliqué, sur l'autre boite, aucun stimulus n'est appliqué. d) A l'aide de la construction pUASlexA-LEU2, contenant le gène d'auxotrophie à la leucine (figure 8), il est possible de sélectionner, dans un premier temps, trois types de protéine (sur le critère de croissance ou non de la levure) : - celles dont la localisation est toujours nucléaire, mais neutre au niveau de l'activation ou de la répression de la transcription (type a) ; - celles dont la localisation est toujours nucléaire, mais bloquant ou activant la transcription en fonction d'un stimulus spécifique (malgré la présence de Gal4AD) (type ss) ; - celles dont la localisation change entre le cytoplasme et le noyau sous l'effet d'un stimulus spécifique (type #). e) A l'aide la construction du gène rapporteur pUASlexA-lacZ (figure 8), il est possible d'éliminer sur le critère de la coloration blanche ou bleue les protéines de type a. En effet, pour cette catégorie de protéine, avec ou sans stimulus, les colonies sont toujours bleues, alors que, pour les protéines de types p ou #, la coloration des colonies est modifiée sous l'effet du stimulus spécifique.
f) A l'aide de la GFP (Green Fluorescent Protein), et des tags HA, c- myc, dans la construction originale (figure 8), il est possible de distinguer les deux catégories de protéines p et #. En effet, il est possible d'observer par microscopie optique la localisation de la fusion et de faire la distinction entre une protéine dont la localisation cellulaire change sous l'effet du stimulus de celles dont la localisation est toujours nucléaire.
Exemple 3 : Exemple d'un procédé pour l'identification de résidus spécifiquement impliqués dans le contrôle de la translocation nucléo-cytoplasmique en réponse à un stimulus spécifique d'une protéine donnée Pour illustrer le procédé de l'invention permettant d'identifier des résidus spécifiquement impliqués dans le contrôle de la translocation nucléo-cytoplasmique en réponse à un stimulus spécifique d'une protéine donnée, l'exemple qui suit présente la mise en oeuvre du procédé dans le cas de la protéine Yap1. Dans le cas de la protéine Yap1, il a été montré que la partie C-terminale de cette protéine est nécessaire mais non suffisante pour conserver le mode de régulation par translocation nucléocytoplasmique. La protéine Yap1 p est fusionnée avec le facteur de transcription lexA-Gal4 pour former la protéine de fusion LGY. Les résultats présentés dans les exemples 1 et 2 ont montré que l'expression du gène rapporteur lacZ sous contrôle de la protéine LGY était dépendante de l'application d'un stress oxydatif.
La séquence nucléotidique portant la séquence codant la protéine Yap1 est mutagénisée par mutagenèse aléatoire. La mutagenèse aléatoire est réalisée par PCR dans des conditions augmentant la probabilité d'erreurs de la polymérase. Les produits de PCR comportant potentiellement des mutations sont ensuite insérés dans le vecteur pLG pour réaliser une banque de plasmides pLGY potentiellement mutés au niveau de la séquence codant pour la protéine Yap1. Cette banque de
plasmide est introduite dans la souche de Saccharomyces cerevisiae contenant la cassette rapporteur pUASlexA-lacZ. Les clones transformants sont ensuite étalés sur milieu solide de croissance sans X-gal. Les clones sont ensuite repiqués et répliqués sur milieu contenant du X-gal avec ou sans agent stressant. Les clones dont la coloration reste bleue en présence ou en absence de stress sont sélectionnés, ils contiennent une mutation affectant la fonction de régulation en réponse à un agent stressant. Les clones dont la coloration bleue sur milieu avec agent stressant est plus intense que le niveau de coloration du clone exprimant la protéine LGY sauvage sont aussi sélectionnés. Ils permettent d'identifier des mutations augmentant le phénomène de translocation en réponse à un agent stressant. Les mutations sont caractérisées par l'extraction des plasmides de levure des clones sélectionnés et le séquençage de la région mutagénisée.
Ainsi, ce procédé de criblage simple à mettre en oeuvre, permet d'identifier de manière précise les acides aminés d'une protéine donnée spécifiquement impliqués dans le contrôle de la translocation nucléocytoplasmique en réponse à un stimulus. Il permet aussi de construire des séquences artificielles optimisées en fonction de l'intensité de contrôle de la translocation souhaitée.
Exemple 4 : Exemple de mise en #uvre du procédé de criblage de substances ou de stimuli spécifiques capables de bloquer ou de stimuler la translocation nucléo- cytoplasmique d'une protéine donnée Afin d'illustrer le procédé de criblages de substances selon l'invention, l'influence de trois stimuli sur la translocation nucléocytplasmique de la protéine Yap1 a été étudiée. Le plasmide pLGY a été introduit dans la souche S. cerevisiae YPH98 contenant la cassette rapporteur pUASlexA-lacZ. Un ou plusieurs clones transformants ont été
repiqués en milieu liquide et mis à croître séparément à 28 C. L'effet de l'application de trois stimuli différents a été testé séparément, un stimulus consistant à appliquer de l'H202, un stimulus consistant à appliquer un autre agent oxydant, le diamide et enfin un troisième stimulus consistant à appliquer une combinaison de diamide et d' H2O2. L'expression du gène rapporteur lacZ a été quantifiée par dosage ss-galactosidase en absence ou en présence des stimuli appliqués. Les résultats présentés dans la figure 5 montrent une expression induite du gène lacZ par l'eau oxygéné ou le diamide. De manière surprenante, les résultats montrent une expression du gène lacZ 4,5 fois plus forte en présence d'une combinaison des deux produits. Ainsi, cette expérience montrent qu'il est possible d'évaluer le contrôle de la translocation nucléo-cytoplasmique d'une protéine donnée et de quantifier les mouvements de protéines du cytoplasme vers le noyau ou du noyau vers le cytoplasme. Ils montrent aussi qu'il est envisageable de tester à grande échelle un grand nombre de molécules susceptibles d'agir en favorisant ou en empêchant la translocation de protéines d'intérêt et de quantifier l'importance du phénomène.
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ASSOCIATION D'HUILES ESSENTIELLES ET APPLICATIONS THERAPEUTIQUES La présente invention concerne une association d'huiles essentielles de plantes et son application thérapeutique, notamment dans le cas de pathologies cancéreuses, précancéreuses ou d'hépatites virales.
Cependant, un mode de réalisation industriel d'un tel dispositif se déduit facilement de ce schéma, la figure 4 en donnant un exemple représenté en coupe longitudinale.
Dans le mode de réalisation selon cette figure 4, le ressort 50 est disposé, par référence à la figure 1, à gauche du coulisseau 20. Le coulisseau 20 est représenté en fin de course, étant entendu que sa course a pu débuter au niveau du début 81 des deux crémaillères 32,62. En outre, chaque système cliquetcrémaillère 30,60 est constitué de deux systèmes cliquet-crémaillère décalés l'un de l'autre d'un demi-pas, ce qui permet d'obtenir des déplacements plus fins. Bien entendu, dans le but d'obtenir des pas de déplacements encore plus petits, il est possible de réaliser chaque système cliquet-crémaillère 30, 60 de pas Q par une pluralités de n systèmes cliquet-crémaillère décalés les uns des autres de plan.
D'une façon générale, comme illustré sur la figure 4, la tige de commande 40 et la pièce de maintien 10 comprennent chacune une partie cylindrique de révolution, l'une étant ajustée coulissante dans l'autre
De façon avantageuse, dans la pièce de maintien 10, seront montées en vis-à-vis, fixe, la crémaillère 32 et, mobile en translation, la crémaillère 62, la forme et la disposition relative de ces éléments participant alors en outre aux moyens schématiquement représentés en 41 pour monter la tige de commande 40 en translation par rapport à la pièce de maintien 10 suivant la seconde droite 42 parallèle à la direction donnée A. Dans ce cas, le coulisseau 20 et le ressort 50 sont avantageusement placés entre les deux crémaillères montées en vis-à- vis, cette disposition assurant le montage et le guidage en translation du coulisseau par rapport à la pièce de maintien 10.
Comme représenté sur la figure 4, il est prévu, d'une part des ouvertures oblongue 80'et circulaires 80"dans la pièce de maintien cylindrique 10 pour permettre les liaisons respectivement 21 et 11, et d'autre part des ouvertures circulaires 80"'dans la tige de commande 40 pour permettre la liaison 71 ainsi que leurs déplacements nécessaires au fonctionnement du dispositif.
Dans une réalisation préférentielle, de façon à pouvoir aisément connaître l'amplitude du déplacement de la tige de commande 40 par rapport à la pièce de maintien 10 et donc l'amplitude du déplacement de la seconde portion d'os 2 par rapport à la première 1, notamment quand un tel dispositif est implanté dans un organisme humain ou analogue, les deux systèmes cliquet-crémaillère 30,60 sont des systèmes à dents. En effet, chaque fois qu'un cliquet d'un système cliquet-crémaillère passe d'une dent à une autre, il émet une sorte de claquement. Chaque claquement entendu confirme un déplacement d'une amplitude égale à la distance entre deux dents consécutives.
Le guidage du déplacement de la seconde portion d'os 2 sur la direction donnée à est assuré naturellement par sa liaison au coulisseau 20, lui-même guidé en translation par rapport à la pièce de maintien 10. Dans l'exemple de réalisation industrielle donné ci-avant, la paroi extérieure de la pièce cylindrique de révolution constituant la pièce de maintien 10 concourt également à la qualité de ce guidage quand le dispositif est placé dans le canal médullaire d'un os long.
Une autre possibilité consiste à placer le dispositif le long de l'os à la manière des plaques d'ostéosynthèse. Cette disposition sera nécessaire dans le cas d'une utilisation du dispositif pour reconstruire par exemple des os du crâne et pourra être préférée dans une pratique pédiatrique pour la reconstruction d'un os long en préservant les cartilages de croissance
Dans un mode de réalisation avantageux et sécurisant pour l'utilisation du dispositif de transport osseux selon l'invention, ce dernier comporte en outre des moyens 56 pour limiter le déplacement de la tige de commande 40 par rapport à la tige de maintien 10. Ces derniers moyens 56 peuvent être de tout type, par exemple constitués par un doigt solidaire de l'un des deux éléments 10 et 40 et monté en coopération avec par exemple une fourchette solidaire de l'autre élément, la distance entre les deux branches de la fourchette déterminant la course maximum du doigt, ou constitués comme illustré sur les figures 1 et 2 qui est un moyen équivalent à celui décrit ci-dessus. De tels moyens facilitent un contrôle précis du déplacement de la seconde portion d'os par rapport à la première, par exemple d'un millimètre en deux fois chaque jour.
Le dispositif selon l'invention dans son mode de réalisation selon la figure 1, fonctionne de la façon suivante décrite plus particulièrement par référence aux représentations schématiques selon les figures 2A à 2C.
Il est tout d'abord précisé que la pièce de maintien 10 est parfaitement solidarisée à la première portion d'os 1 et que le coulisseau 20 est parfaitement solidarisé à la seconde portion d'os 2, respectivement par les moyens 11 et 21 schématiquement représentés sur la figure 1, la distance séparant ces deux portions d'os 1 et 2 étant définie initialement par le praticien pour que, de façon connue, elle permette la formation d'un début de cal osseux entre ces deux portions d'os.
A partir d'un état donné de ce cal osseux, que l'on obtient en général après quatre à dix jours suivant le patient et le traitement qu'il suit éventuellement (chimiothérapie), le praticien peut décider de débuter l'éloignement de la seconde portion d'os 2 par rapport à la première portion d'os 1 pour forcer la croissance du cal osseux entre les deux portions d'os 1 et 2, ce cal osseux étant évoqué schématiquement en 82 sur la figure 4.
Pour ce faire, il active le dispositif à partir de sa configuration schématiquement illustrée sur la figure 2A en provoquant le déplacement de la tige de commande 40 dans le sens opposé au sens S pour, dans le cas de la réalisation illustrée, comprimer le ressort 50 d'une certaine longueur par exemple âx à partir de son état origine et l'amener à son état déformé instable. Dans le cas où le dispositif est associé à l'os long d'un membre d'un patient, ce déplacement correspond à un raccourcissement du membre et est facilement obtenu par
exemple sous l'effet du poids du corps du patient en lui demandant de se mettre en appui sur ce membre.
Dans le cas où le dispositif est implanté dans une jambe, il peut être en plus prévu, en association avec le dispositif selon l'invention, des moyens pour le bloquer de façon à ce que le patient puisse avoir une marche prudente entre deux périodes d'activation. Dans ce dernier cas, pour obtenir le déplacement de la tige de commande, il est nécessaire d'effectuer une action particulière préalable pour déverrouiller ces moyens de blocage, la manipulation du patient par le praticien ou une tierce personne pouvant alors être nécessaire.
Dans tous les cas, de par la configuration des systèmes cliquet-crémaillère 30,60 telle que définie auparavant, la tige de commande 40 peut se déplacer par rapport au coulisseau 20 qui, lors de ce déplacement de la tige de commande, demeure fixe par rapport à la pièce de maintien 10.