INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le plasmide obtenu, appelé pMRTl207, a été transféré comme décrit en section 4.1 de l'exemple 4, dans la souche d'llgrobacterium tumefaciens LBA4404-pSB1, laquelle dérive de la souche d'Agrotlacterium tumefaciens LBA4404 suite à l'intégration du plasmide pSBl (Demande de brevet FH 9?1 '. 112 Lon publiée,' selon le protocole décrit précédemment pour l'obtention de A1177. L'ADN plasmidique des clones obtenus, sélectionnés sur milieu 2YT supplémenté en rifampicine (50 mg/1), en Kanamycine (50 mq/1) et en tétracycline (5 mg/1) a été extraie selon la méthode de lyse alcaline, modifiée en ajoutant du lysozyme (25 mg/ml) dans le tampon de. resuspension des cellules. L'ADN plasmidique a été analysé par digestions enzymatiques et le clone d'agrobactérie obtenu a été appelé A1207, Exemple 6.
Mesure et comparaison de l'activité des différents promoteurs en expression transitoire dans le maïs et le tabac.
6. 1 Préparation des extraits végétaux.
Selon un autre mode de réalisation, les compositions de la présente invention peuvent en outre contenir un élément de ciblage permettant d'orienter le transfert de l'acide nucléique. Cet élément de ciblage peut être un élément de ciblage extracellulaire permettant d'orienter le transfert de l'ADN vers certains, types cellulaires ou certains tissus souhaités (cellules tumorales, cellules hépatiques, cellules hématopoiétiques...). Il peut également s'agir d'un élément de ciblage intracellulaire permettant d'orienter le transfert de l'acide nucléique vers certains compartiments cellulaires privilégiés (mitochondries, noyau etc...).
Parmi les éléments de ciblage utilisables dans le cadre de l'invention, on peut citer les sucres, les peptides, les protéines, les oligonucléotides, les lipides, les neuromédiateurs, les hormones, les vitamines ou leurs dérivés. Préférentiellement, il s'agit de sucres, de peptides ou de protéines tels que des anticorps ou des fragments d'anticorps, des ligands de récepteurs cellulaires ou des fragments de ceux-ci, des récepteurs ou des fragments de récepteurs, etc... En particulier, il peut s'agir de ligands de récepteurs de facteurs de croissance, de récepteurs de cytokines, de récepteurs de type lectines cellulaires, ou de ligands à séquence RGD avec une affinité pour les récepteurs de protéines d'adhésion comme les intégrines. On peut également citer les récepteurs de la transferrine, des HDL et des LDL, ou le transporteur du folate. L'élément de ciblage peut également être un sucre permettant de cibler des lectines tels que les récepteurs aux asialoglycoprotéines ou aux syalydés tel que le sialyl Lewis X, ou encore un fragment Fab d'anticorps, ou un anticorps simple chaîne (ScFv).
Les quantités respectives de chaque composant peuvent être ajustées aisément par l'homme du métier en fonction du dérivé d'oligobenzimidazole utilisé, de l'acide
nucléique, du ou des adjuvants et des applications recherchées (notamment du type de cellules à transfecter).
On entend au sens de l'invention par "acide nucléique" les acides désoxyribonucléiques double brin, formant une double hélice qui comprend un petit sillon et un grand sillon. Il peut s'agir de séquences naturelles ou artificielles, et notamment d'ADN génomique (ADNg), d'ADN complémentaire (ADNc), de séquences hybrides ou de séquences synthétiques ou semi-synthétiques. Ces acides nucléiques peuvent être d'origine humaine, animale, végétale, bactérienne, virale, etc...
Ils peuvent être obtenus par toute technique connue de l'homme du métier, et notamment par criblage de banques, par synthèse chimique, ou encore par des méthodes mixtes incluant la modification chimique ou enzymatique de séquences obtenues par criblage de banques. Ils peuvent être modifiés chimiquement.
Selon un mode de réalisation particulier, les acides nucléiques sont constitués par des vecteurs, en particulier des vecteurs d'expression, des vecteurs recombinants, des plasmides, des épisomes etc... Lesdits vecteurs comprennent une séquence codante et tous les éléments nécessaires à l'expression de ladite séquence codante, notamment des éléments de régulation de l'expression de l'acide nucléique à insérer, tels que des promoteurs et des séquences activatrices ( enhancers ) ou des séquences d'initiation et d'arrêt de la transcription appropriées, mais aussi d'autres éléments comme par exemple des séquences codant pour une origine de réplication fonctionnelle ou non, des gènes marqueurs, des régions de liaison à d'autres composants cellulaires, des séquences signal, des séquences de polyadénylation etc...
On entend par séquence codante un gène d'intérêt thérapeutique placé en phase avec des séquences de régulation, par exemple un ou plusieurs promoteurs et un terminateur transcriptionnel actifs dans les cellules cibles.
Au sens de l'invention, on entend par gène d'intérêt thérapeutique notamment tout gène codant pour un produit protéique ayant un effet thérapeutique. Le produit protéique ainsi codé peut être notamment une protéine ou un peptide. Ce produit
protéique peut être exogène homologue ou endogène vis-à-vis de la cellule cible, c'est- à-dire un produit qui est normalement exprimé dans la cellule cible lorsque celle-ci ne présente aucune pathologie. Dans ce cas, l'expression d'une protéine permet par exemple de pallier une expression insuffisante dans la cellule ou l'expression d'une protéine inactive ou faiblement active en raison d'une modification, ou encore de surexprimer ladite protéine. Le gène d'intérêt thérapeutique peut aussi coder pour un mutant d'une protéine cellulaire, ayant une stabilité accrue, une activité modifiée, etc...
Le produit protéique peut également être hétérologue vis-à-vis de la cellule cible. Dans ce cas, une protéine exprimée peut par exemple compléter ou apporter une activité déficiente dans la cellule, lui permettant de lutter contre une pathologie, ou stimuler une réponse immunitaire.
Parmi les produits thérapeutiques au sens de la présente invention, on peut citer plus particulièrement les enzymes, les dérivés sanguins, les hormones, les lymphokines : interleukines, interférons, TNF, etc... (FR 92/03120), les facteurs de croissance, les neurotransmetteurs ou leurs précurseurs ou enzymes de synthèse, les facteurs trophiques (BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGF, bFGF, NT3, NT5, HARP/pléiotrophine, etc...), les apolipoprotéines (ApoAI, ApoAIV, ApoE, etc..., FR 93/05125), la dystrophine ou une minidystrophine (FR 91/11947), la protéine CFTR associée à la mucoviscidose, les gènes suppresseurs de tumeurs (p53, Rb, RaplA, DCC, k-rev, etc..., FR 93/04745), les gènes codant pour des facteurs impliqués dans la coagulation (Facteurs VII, VIII, IX), les gènes intervenant dans la réparation de l'ADN, les gènes suicides (thymidine kinase, cytosine déaminase), les gènes de l'hémoglobine ou d'autres transporteurs protéiques, les enzymes du métabolisme, catabolisme etc...
L'acide nucléique d'intérêt thérapeutique peut également être un gène ou une séquence antisens, dont l'expression dans la cellule cible permet de contrôler l'expression de gènes ou la transcription d'ARNm cellulaires. De telles séquences peuvent, par exemple, être transcrites dans la cellule cible en ARN complémentaires d'ARNm cellulaires et bloquer ainsi leur traduction en protéine, selon la technique
décrite dans le brevet EP 140 308. Les gènes thérapeutiques comprennent également les séquences codant pour des ribozymes, qui sont capables de détruire sélectivement des ARN cibles (EP 321 201).
Comme indiqué plus haut, l'acide nucléique peut également comporter un ou plusieurs gènes codant pour un peptide antigénique capable de générer chez l'homme ou l'animal une réponse immunitaire. Dans ce mode particulier de mise en oeuvre, l'invention permet la réalisation soit de vaccins soit de traitements immunothérapeutiques appliqués à l'homme ou à l'animal, notamment contre des micro-organismes, des virus ou des cancers. Il peut s'agir notamment de peptides antigéniques spécifiques du virus d'Epstein Barr, du virus HIV, du virus de l'hépatite B (EP 185 573), du virus de la pseudo-rage, du "syncitia forming virus", d'autres virus ou encore de peptides antigéniques spécifiques de tumeurs (EP 259 212).
Préférentiellement, l'acide nucléique comprend également des séquences permettant l'expression du gène d'intérêt thérapeutique et/ou du gène codant pour le peptide antigénique dans la cellule ou l'organe désiré. Il peut s'agir des séquences qui sont naturellement responsables de l'expression du gène considéré lorsque ces séquences sont susceptibles de fonctionner dans la cellule infectée. Il peut également s'agir de séquences d'origine différente (responsables de l'expression d'autres protéines, ou même synthétiques). Notamment, il peut s'agir de séquences promotrices de gènes eucaryotes ou viraux. Par exemple, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome de la cellule que l'on désire infecter. De même, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome d'un virus. A cet égard, on peut citer par exemple les promoteurs des gènes E1A, MLP, CMV, RSV, etc... En outre, ces séquences d'expression peuvent être modifiées par addition de séquences d'activation, de régulation, etc... Il peut aussi s'agir de promoteur, inductible ou répressible.
domaine technique concerné par la présente inven tion est celui de la formation en ligne. Le propre d'une forma tion en ligne, notamment au moyen d'un réseau de communication informatique, par exemple du type Internet, est que 1 utilisa teur doit suivre en direct et non sous forme différée le cours diffusé. Une formation "en ligne" implique que l'utilisateur suive sur un écran les données textes qu'il reçoit. L'écran peut être du écran de micro-ordinateur personnel, écran de poste de télévision ou écran de téléphone mobile (pages WAP ...). problème qu'il convient de résoudre est mainte nir l'attention de l'utilisateur pendant qu'il lit un texte. est connu des procédés et des systèmes formation en ligne. première solution proposée consiste a considérer le service de formation en ligne comme un service postal. L'in formation habituellement acheminée par correspondance postale (cours par correspondance) est diffusée par un réseau de commu nication informatique. Les utilisateurs impriment et utilisent ensuite le cours sur papier comme s'ils l'avaient reçu par la poste. Tout au plus trouve-t-on dans ce ;ype d'enseignement, un certain tutorat et des questionnaires en ligne.
deuxième solution proposée consiste à segmenter le texte. Cette solution n'est pas satisfaisante. En effet, dans le cas où texte transmis est long et complet, l'utilisateur imprime progressivement, thème par thème, l'information en ligne indexée. 1 obtient finalement un livre et se retrouve dans la même situation que dans le cas d'un cours par correspondance. Dans le cas où, pour remédier à cet inconvénient, le texte transmis est court (quelques lignes), l'information contenue est alors tellement succincte qu'aucune formation n'est plus possi ble : l'information ne passe pas. L'invention permet d'arriver à une formation de qua lité en s appuyant sur le suivi réel d'un processus complet formation : découverte d'un concept, explication, compréhension apprentissage, mémorisation, appropriation, vérification. Elle concerne un procédé de formation en ligne notamment au moyen d'un réseau de communication informatique type Internet, destiné à soutenir l'attention des utilisateurs suivant formation. La formation est composée d'informations diffusées vers les utilisateurs au moyen d'équipements informatiques com portant organes de commande, des écrans de visualisation, des haut-parleurs ou des écouteurs. De tels équipements infor matiques peuvent être par exemple constitués par des ordinateurs personnels des équipements de télévision, des téléphones mobiles, organiseurs. Les équipements informatiques sont connectés via réseau de communication informatique à au moins un serveur. Les informations sont portées à la connaissance utilisateurs, d'une part, de manière visuelle au moyen des écrans, notamment sous la forme de texte et/ou de figures et/'ou de tableaux, d'autre part, de manière audio au moyen des haut parleurs ou des écouteurs. Le procédé selon l'invention comprend plusieurs étapes.
Il comprend l'étape de structurer de manière concomi tante la diffusion des informations en conjuguant des phases de lecture sur les écrans et des phases d'écoute des haut-parleurs. Les phases de lecture et d'écoute sont prédéterminées par le serveur, et/ou commandées par l'utilisateur au moyen des organes de commande interagissant avec des zones actives, notamment des icônes, apparaissant sur l'écran de visualisation. Le procédé selon l'invention comprend en outre l'étape d'entrecouper phases de lecture et d'écoute permettant d'ac quérir la connaissance des informations, par des exercices de mémorisation échange de questions et de réponses entre l'équipement informatique actionné par l'utilisateur et le serveur. Il comprend en outre l'étape d'évaluer les connaissan ces acquises un processus de calcul d'une note suite à un échange de questions et de réponses entre l'équipement infor matique actionne l'u@ilisateur et le serveur. Il comprend en outre l'étape de produire sur un support aisément transportable un résumé des connaissances acquises. De préférence, pour structurer de manière concomitante la diffusion des informations en conjuguant des phases de lec ture sur les écrans et des phases d'écoute des haut-parleurs, le serveur diffuse les informations sous la forme de données numé riques composant un cours comprenant au moins un sommaire, une ou plusieurs sections d'apprentissage. De préférence, les sections d'apprentissage comportent des titres et cas échéant des sous-titres. Le sommaire com prend des libellés générés automatiquement à partir des titres et des sous-titres des sections d'apprentissage. Les libellés sont liés par des liens hypertextes avec le titre et les sous titres correspondants. Ainsi l'utilisateur peut accéder rapidement à 1a partie de la section d'apprentissage qu'il souhaite étudier.
De préférence, les sections d'appren@issage comportent pages comprenant elles-mêmes des zones visuelles des textes explicatifs. Les zones visuelles comportent notamment des ets multimédias. Les objets multimédias, notamment ani ions audio et/ou des animations visuelles sont soit incor porés au texte explicatif lors de l'affichage de celui-ci le serveur, soit appelés par l'utilisateur au moyen de liens hyper textes, notamment par un clic sur une icône ou sur une zone ivable appropriée figurant dans le texte explicatif ou dans la zone visuelle. Ainsi, l'utilisateur a son attention soutenue puis qu'en même temps qu'il lit le texte sur l'écran de visualisa t' , il peut suivre une animation audio et/ou visuelle. De préférence, les sections d'apprentissage comportent outre une page contenant un questionnaire de mémorisation comprenant une liste de questions. Chaque question est associée à un bouton réponse destiné à être actionné par l'utilisateur. Le serveur renvoie, vers l'équipement informatique de l' 'lisa teur, d'une part une information indiquant s'il s'agit d'une bonne réponse ou d'une mauvaise réponse, d'autre part expli ion complémentaire. Ainsi, la mémorisation des connaissances appri par 'utilisateur est renforcée. De préférence, pour évaluer les connaissances acquises un processus de calcul d'une note suite à un échange de questions et de réponses entre l'équipement informat' ac ionné par l'utilisateur et le serveur, le cours comprend en outre une section réservée à un questionnaire d'évaluation. De préférence, le calcul est effectué par le serveur qui rassemble les réponses aux questions du questionnaire d'éva luation et retourne un résultat graphique synthétique des notes obtenues par l'utilisateur. De préférence, pour produire sur un support aisément transportable un résumé des connaissances acquises, le cours comprend en outre une section réservée à l'accès à des infor-
mations synthétiques, susceptibles d'être imprimées sur un sup port, notamment un support-papier et/ou susceptibles 'être chargées sur un objet électronique nomade tel qu'un organiseur electronique ou un téléphone mobile WAP. De préférence, pour charger les informations synthé iques, l'utilisateur clique sur une icône ou une zone activable associée au libellé explicatif de ce que contient les informa tions synthétiques. L'invention concerne également un système de formation ligne, notamment au moyen d'un réseau de communication infor matique de type Internet. Le système est destiné à maintenir 'attention des utilisateurs suivant la formation. Le système comporte un serveur. Le système comporte en outre des équipements informa tiques, tels que par exemple des ordinateurs personnels des equipements de télévision, des téléphones mobiles, des organiseurs. Les équipements informatiques comportent chacun des organes de commande, un écran de visualisation, et au moins un haut-parleur ou un écouteur. Les équipements informatiques sont connectés via le réseau de communication informatique au serveur. La formation est composée d'informations diffusées par serveur vers les équipements informatiques des utilisateurs via le réseau de communication informatique. Les informations sont portées à la connaissance des utilisateurs d'une part de manière visuelle au moyen des écrans, notamment sous la forme de texte et/ou de figures et/ou de tableaux, d'autre part de manière audio au moyen des haut parleurs ou des écouteurs. Le système comprend en outre des moyens de traitement et de diffusion pour structurer de manière concomitante dif fusion des informations en conjuguant des phases de lecture sur les écrans et des phases d'écoute des haut-parleurs. Les phases de lecture et d'écoute sont prédéterminées par le serveur et/ou
commandées par l'utilisateur au moyen des organes commande interagissant avec des icônes ou des zones actives apparaissant sur l'écran de visualisation. Le système comprend en outre des moyens vérifica tion de l'acquisition des connaissances. Les moyens de vérifica tion de l'acquisition des connaissances comportent des moyens d'affichage pour afficher sur l'écran des questions en rapport avec informations diffusées. Les moyens de vérification de l'acquisition des connaissances comportent en outre des moyens de calcul pour controler les réponses aux questions apportées par les utilisa teurs moyen des organes de commande. Ainsi, il est possible de compléter les informations transmises par des explications complémentaires en fonction des réponses apportées. Le système comprend en outre des moyens d'évaluation pour evaluer les connaissances acquises. Les moyens d'évaluation comprennent des moyens de calcul pour calculer une note suite à un échange de questions et de réponses entre l'équipement infor matique actionné par l'utilisateur et le serveur. Le système comprend en outre des moyens de reproduc tion pour reproduire sur un support aisément transportable un résume connaissances acquises. De préférence, le serveur comprend les moyens de trai tement et de diffusion pour structurer de manière concomitante la ' fusion des informations en conjuguant des phases de lec ture sur les écrans et des phases d'écoute des haut-parleurs. Les moyens de traitement et de diffusion comprennent des moyens pour diffuser les informations sous la forme de données numé riques composant un cours comprenant au moins : un sommaire et une ou plusieurs sections d'apprentissage. De préférence, les sections d'apprentissage comportent des titres et le cas échéant des sous-titres. Le système est tel qu'il comprend des moyens de traitement informatique pour géné rer automatiquement le sommaire à partir des titres et des sous-
titres sections d'apprentissage, pour lier par des liens hypertextes le titre et les sous-titres avec les parties des sections apprentissage correspondantes. Ainsi, l'utilisateur peut accéder rapidement à la partie section d'apprentissage qu'il souhaite étudi De préférence, les sections d'apprentissage comportent des pages comprenant elles-mêmes des zones visuelles des textes explicatifs. Les zones visuelles comportent notamment des objets multimédias. Les objets multimédias, notamment anima tions audio et/ou des animations visuelles, sont soit incorporés au texte explicatif lors de l'affichage de celui-ci ser veur, soit appelés par l'utilisateur au moyen de liens hyper textes, notamment par un clic sur une icône ou une zone acti vable appropriée figurant dans le texte explicatif ou dans la zone visuelle. Ainsi, l'utilisateur a son attention soutenue puis qu'en même temps qu'il lit le texte sur l'écran de visualisa tion, ' peut suivre une animation audio et/ou visuelle. De préférence, les sections d'apprentissage comportent en outre une page contenant un questionnaire de mémorisation comprenant une liste de questions à choix multiple. Chaque ques tion associée à un bouton réponse destiné à être actionné par l'utilisateur. Le serveur renvoie, vers l'équipement infor matique de l'utilisateur, d'une part une information indiquant s'il s'agit d'une bonne réponse ou d'une mauvaise réponse, d'autre part une explication complémentaire. Ainsi, la mémorisation des connaissances apprises par l'util' teur est renforcée. préférence, pour évaluer les connaissances acquises par processus de calcul d'une note suite à un échange de questions de réponses entre l'équipement informatique actionné l'utilisateur et le serveur, le cours comprend en outre une section réservée à un questionnaire d'évaluation. préférence, le serveur comprend des moyens de calcul pour rassembler les réponses aux questions du question-
naire d'évaluation, pour effectuer le calcul de note et pour retourner un résultat graphique synthétique des notes obtenues par 1 utilisateur. De préférence, pour produire sur un support aisément transportable un résumé des connaissances acquises, le cours comprend en outre une section réservée à l'accès à des infor mations synthétiques susceptibles d'être imprimées sur un sup port, notamment un support-papier et/ou susceptibles d'être chargees sur un objet électronique nomade tel qu un organiseur électronique ou un téléphone mobile WAP. De préférence, pour charger les informations synthé tiques, l'utilisateur clique sur une icône ou une zone activable associée au libellé explicatif de ce que contient les informa tions synthétiques. L'invention concerne également un serveur de formation en ligne destiné à maintenir l'attention des utilisateurs sui vant formation. Le serveur est connecté, via le réseau de communica tion informatique, à des équipements informatiques tels que par exemple des ordinateurs personnels, des équipements de télévi sion, téléphones mobiles, des organiseurs. équipements informatiques comportent chacun des organes de commande, un écran visualisation, et au moins un haut-parleur ou un écouteur. Le serveur comporte des moyens de diffusion pour dif fuser la formation composée d'informations vers les équipements informatiques des utilisateurs, via le réseau de communication informatique. Les informations sont portées à la connaissance des utilisateurs par le serveur d'une part de manière visuelle au moyen des écrans, notamment sous la forme de texte et/ou de figures et/ou de tableaux, d'autre part de manière audio au moyen des haut-parleurs ou écouteurs. Le serveur comprend en outre des moyens de traitement et de diffusion pour structurer de manière concomitante la dif fusion des informations en conjuguant des phases de lecture sur