INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'association d'un tronçon bs-zur à un guide planaire puis à une fibre mono-coeur dont les propriétés optiques sont complémentaires permet de fabriquer un composant optique sans équivalent dans une seule des technologies.
Le dispositif conforme à l'invention correspond à une solution hybride entre les composants tout-fibre et planaires, dans laquelle chaque élément du composant hybride (fibre bi-coeur, guide d'onde planaire, fibre mono-coeur) remplit une fonction bien délimitée spatialement (suivant l'axe optique), de manière à obtenir des propriétés reproductibles pour le composant final. L'utilisation de propriétés complémentaires dans les tronçons fibre bs-zur et planaire permet en outre de corriger les défauts propres à chaque technologie.
Selon une caractéristique avantageuse de l'invention, l'échange de puissance dans la zone d'échange du tronçon de fibre bs-zur peut se faire par fusion-étirage de deux coeurs pour fabriquer un coupleur, ou par des processus d'Optique Non Linéaire entre les deux coeurs.
La figure 4 correspond à la représentation d'un MIE sur fibre bs-zur 100, raccordé à deux puces 120,120'portant des guides d'onde, elles-mêmes raccordées à des fibres mono-coeurs 130,140, 130', 140'. Dans ce dispositif préférentiel, l'embout des fibres mono-et bs-zur est férulé. Le dispositif est placé dans un boîtier de protection.
La figure 5 représente une puce optique intégrant une fonction de couplage entre deux guides d'onde. Typiquement un tel coupleur peut coupler les voies entrantes (sortantes) distantes de quelques dizaines de microns et coupler les voies sortantes (entrantes) à des fibres mono-coeurs.
La figure 6 représente une puce optique intégrant une fonction d'amplification, à l'aide d'un laser de pompe par exemple, les guides d'onde étant dopés pour rendre le milieu amplificateur. Le milieu peut être atténuateur sélectivement pour certaines longueurs d'onde pour effectuer un filtre égalisateur par exemple.
La figure 7 représente une puce optique intégrant une fonction (de type Y) de diviseur ou concentrateur selon le sens de propagation de la lumière.
DESCRIPTION D'UN MODE DE REALISATION PARTICULIER DE L'INVENTION.
Dans le cas de la réalisation d'un Multiplexeur à Insertion Extraction (MIE), la fonction optique 102 à base de fibre bs-zur 100 comporte deux réseaux de Bragg identiques photo-inscrits respectivement sur chaque coeur 10,20. De part et d'autre de ces réseaux de Bragg, des coupleurs 50/50 sont réalisés conférant la structure d'un interféromètre de type Mach-Zehnder. L'avantage de la fibre bs-zur réside dans le fait que les deux cecurs 10,20 sont contenus dans la même gaine, ce qui assure une différence de chemin optique minimale entre les bras du MachZehnder.
Les paramètres géométriques de la fibre 100 adaptée à cette réalisation sont par exemple : d 42um, d2 1 lOum (Figures 1 et 2). Le principe de fonctionnement de cette partie du composant est présentée dans le document [4]. Les portions de fibre bs-zur 100 pourront être ou non au moins partiellement dépourvues du revêtement de protection (par exemple pour la photo-inscription).
La présente invention propose d'utiliser une technologie hybride. La fibre bs-zur 100 est connectée à un (ou des) guide (s) obtenu (s) par technologie planaire, préférentiellement par échange d'ions sur verre. Chaque guide planaire 120 comporte deux guides optiques 122,124 distants de dl à une extrémité puis écartant pour atteindre une distance d2 à l'autre extrémité afin de permettre la connexion à des fibres mono-coeur 130,140. Les paramètres opto-goémétriques du guide 120 sont calculés afin d'adapter les tailles des modes des différents guides à connecter.
Les différents raccordements, fibre bs-zur 100/puce 120 et fibre monocoeur 130, 140 nécessitent des solutions technologiques adaptées par exemple à base de férules ou autres éléments favorisant la connexion.
Par ailleurs, pour une application sur le terrain, le dispositif doit également être inséré dans un conditionnement de protection.
La figure 4 illustre un conditionnement type comportant la fonction optique à base de fibre bs-zur 100 capsulée en extrémité par des férules (ici circulaires) 110,112. L'ensemble repose sur un support adapté 160. Ces férules polies 110,112 sont collées aux puces 120,120'formant les composants planaires. De l'autre côté des puces 120,120'on retrouve des fibres 130,140, 130', 140'dans des férules raccordées aux puces 120,120'.
L'ensemble peut encore être placé dans un boîtier de protection (la moitié seulement a été représentée sur la figure 4 par souci de clarté) duquel sortent les fibres mono-coeur 130,140, 130', 140'dans une gaine de protection.
VARIANTES.
Le dispositif conforme à la présente invention peut faire l'objet de nombreuses variantes. Certaines de ces variantes sont évoquées ci-dessous.
. Nombre de fibres mono-coeur en entrée/sortie.
Le mode de réalisation préférentiel illustré sur la figure 4 et précédemment décrit comporte deux entrées et deux sorties sur fibres mono-coeurs 130,140, 130', 140'. A cet égard, la présente invention peut connaître au moins deux variantes : deux entrées-une sortie ou une entrée-deux sorties.
Des amorces de séquençage peuvent être construites afin d'hybrider avec une région déterminée de la séquence SEQ ID ? 1. De telles amorces de séquençage sont construites préférentiellement de manière à amplifier des fragments d'environ 300 à environ 500 nucléotides de la séquence SEQ ID D ? 1 ou d'une séquence complémentaire.
Les fragments amplifiés, par exemple par la méthode PCR, sont ensuite séquencés et la séquence obtenue est comparée à la séquence de référence SEQ ID D ? 1 afin de déterminer si une ou plusieurs délétions, additions ou substitutions de nucléotides sont retrouvées dans la séquence amplifiée à partir de l'ADN contenu dans l'échantillon biologique provenant du sujet testé.
L'invention concerne donc encore un procédé de détection d'une altération de la transcription du gène ABCA7 chez un sujet, comportant les étapes suivantes : a) séquençage d'un fragment d'acide nucléique amplifiable à l'aide d'au moins une amorce nucléotidique hybridant avec la séquence SEQ ID N 1 ou SEQ ID N 2 selon l'invention ; b) aligner la séquence obtenue en a) avec la séquence SEQ ID ? 1 ou la SEQ ID D ? 2 ; c) déterminer la présence d'une ou plusieurs délétions, additions ou substitutions d'au moins un nucléotide dans la séquence du fragment d'acide nucléique, par rapport à la séquence SEQ ID N 1 ou SEQ ID ? 2 de référence.
En outre, font également partie de l'invention des sondes oligonucléotidiques hybridant avec une région de la séquence SEQ ID D ? 1 ou de la séquence SEQ ID ? 2 dans laquelle une altération dans la séquence a été déterminée lors de la mise en oeuvre du procédé de détection décrit ci-dessus.
De manière alternative, font aussi partie de l'invention des sondes oligonucléotidiques hybridant spécifiquement avec une région correspondante de la séquence SEQ ID N 1 ou de la séquence SEQ ID N 2, pour laquelle une ou plusieurs délétions, additions ou substitutions d'au moins un nucléotide a été déterminée chez un sujet.
De telles sondes oligonucléotidiques constituent des moyens de détection d'altérations dans la séquence régulatrice du gène ABCA7 et donc également des moyens de détection d'une prédisposition au développement d'une pathologie liée à un déficit dans le métabolisme des lipides ou à dysfonctionnement au niveau des processus impliquant le système immunitaire et l'inflammation.
L'invention a donc encore pour objet un kit ou nécessaire de détection d'une altération de la transcription du gène ABCA7 chez un sujet, comprenant : a) une ou plusieurs amorces hybridant avec une région de la séquence SEQ ID N'l ou de la séquence SEQ ID ? 2 ;
b) le cas échéant, les moyens nécessaires à la réalisation d'une réaction d'amplification.
L'invention a encore pour objet un kit ou nécessaire pour la détection d'une altération de la transcription du gène ABCA7 chez un sujet, comprenant : a) une ou plusieurs sondes oligonucléotidiques telles que définies cidessus ; b) le cas échéant, les réactifs nécessaires à la réalisation d'une réaction d'hybridation.
Les fragments d'acides nucléiques dérivés de l'une quelconque des séquences nucléotidiques SEQ ID NO 1-6 sont donc utiles pour la détection de la présence d'au moins une copie d'une séquence nucléotidique régulatrice du gène ABCA7 ou encore d'un fragment ou d'un variant (contenant une mutation ou un polymorphisme) de cette dernière dans un échantillon.
Les sondes ou les amorces nucléotidiques selon l'invention comprennent au moins 8 nucléotides consécutifs d'un acide nucléique choisi dans le groupe constitué des séquences SEQ ID NO 1-5, ou d'un acide nucléique de séquence complémentaire.
De préférence, des sondes ou amorces nucléotidiques selon l'invention auront une longueur de 10,12, 15,18 ou 20 à 25,35, 40,50, 70,80, 100,200, 500, 1000,1500 nucléotides consécutifs d'un acide nucléique selon l'invention, en particulier un acide nucléique de séquence nucléotidique choisie parmi les séquences SEQ ID NO 1-5.
Alternativement, une sonde ou une amorce nucléotidique selon l'invention consistera et/ou comprendra les fragments d'une longueur de 12,15, 18,20, 25,35, 40,50, 100,200, 500,1000, 1500 nucléotides consécutifs d'un acide nucléique selon l'invention, plus particulièrement d'un acide nucléique choisi parmi les séquences SEQ ID NO1-5, ou d'un acide nucléique de séquence complémentaire.
La définition d'une sonde et d'une amorce nucléotidique selon l'invention englobe donc des oligonucléotides qui hybrident, dans les conditions d'hybridation de forte stringence définies ci-avant, avec un acide nucléique choisi parmi les séquences SEQ ID NO 1-5,6 ou 8 ou avec une séquence complémentaire de ces derniers.
Des exemples d'amorces et de couples d'amorces permettant d'amplifier différentes régions du gène ABCA7 sont représentés ci-dessous.
Il s'agit par exemple du couple d'amorces représenté par l'amorce de séquence SEQ ID ? 9 : AGCCAGCAACGCAATCCTCC et l'amorce de séquence SEQ ID ? 10 : CGCACCATGTCAATGAGCCC.
De préférence, lorsque l'agent oxydant est de l'eau oxygénée, la composition oxydante selon l'invention contient au moins un agent stabilisant de l'eau oxygénée. Dans les compositions associant l'eau oxygénée et les polymères amphiphiles de la présente invention, des résultats particulièrement avantageux ont été obtenus en utilisant au moins un agent stabilisant choisi parmi les pyrophosphates des métaux alcalins ou alcalinoterreux, les stannates des métaux alcalins ou alcalino-terreux, la phénacétine ou les sels d'acides et d'oxyquinoléine, comme le sulfate d'oxyquinoléine. De manière plus avantageuse encore, on utilise au moins un stannate en association ou non à au moins un pyrophosphate.
Dans les compositions oxydantes selon l'invention, la concentration en agents stabilisants de l'eau oxygénée peut varier de 0, 0001 % à 5% en poids et de préférence de 0,01 à 2% en poids par rapport au poids total des compositions oxydantes.
Dans les compositions oxydantes selon l'invention la concentration en agents oxydants varie de 0,1 à 25% en poids par rapport au poids total de la composition.
De préférence, selon l'invention, le rapport des concentrations du ou des polymère (s) amphiphile (s) selon l'invention aux agents oxydants est compris entre 0,001 et 10, les quantités desdits polymères et oxydants étant exprimées en matières actives (peroxyde d'hydrogène pour l'eau oxygénée). Plus préférentiellement encore, ce rapport est compris entre 0,01 et 5 et plus particulièrement encore entre 0,02 et 1.
dans lesquelles : R3, identiques ou différents, désignent un atome d'hydrogène ou un radical CH3 ; A, identiques ou différents, représentent un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 6 atomes de carbone, de préférence 2 ou 3 atomes de carbone ou un groupe hydroxyalkyl de 1 à 4 atomes de carbone ; R4, Rg, R6, identiques ou différents, représentent un groupe alkyle ayant de 1 à 18 atomes de carbone ou un radical benzyle et de préférence un groupe alkyle ayant de 1 à 6 atomes de carbone ; R1 et R2, identiques ou différents, représentent hydrogène ou un groupe alkyle ayant de 1 à 6 atomes de carbone et de préférence méthyle ou éthyle ; X désigne un anion dérivé d'un acide minéral ou organique tel qu'un anion méthosulfate ou un halogénure tel que chlorure ou bromure.
Les polymères de la famille (1) peuvent contenir en outre un ou plusieurs motifs dérivant de comonomères pouvant être choisis dans la famille des acrylamides, méthacrylamides, diacétones acrylamides, acrylamide et méthacrylamides substitués sur l'azote par des
Enfin l'invention a également pour objet l'utilisation de la thiénylcyclohexylamine telle que définie ci-dessus, pour la préparation d'un médicament susceptible de prévenir les hyperalgies et/ou allodynies induites par un analgésique opiacé. En effet, comme cela est présenté dans la partie expérimentale (cf. phase 2), le traitement par le fentanyl, analgésique opiacé très largement utilisé en milieu hospitalier à l'occasion d'actes chirurgicaux, induit une allodynie pendant plusieurs jours. Cette allodynie est totalement prévenue par la thiénylcyclohexylamine selon l'invention : une seule injection (30 minutes avant l'analgésique) même à la dose de 0,1 mg/kg qui ne provoque pas per se d'effet analgésique à cette dose, prévient totalement cette allodynie de plusieurs jours. Par ailleurs, la thiénylcyclohexylamine testée ne présente pas d'effet psychomoteur aux doses efficaces de 0,1 et 0,3 mg ! kg. De préférence, la thiénylcyclohexylamine est administrée avant la substance opiacée. De préférence également, la thiénylcyclohexylamine est administrée à une dose inférieure à 5 mg/kg, et très préférentiellement à une dose inférieure à 0,2 mg/kg.
PARTIE EXPÉRIMENTALE : Etude pharmacologique Il s'agit d'étudier chez le rat, les effets de la 1-[ cis-2-méthyl- 1- (2-thiényl) cyclohexyl]pipéridine (gacyclidine), sur les effets analgésiques immédiats du fentanyl mais aussi sur les effets facilitateurs de la douleur (hyperalgie) induits par l'administration de cet analgésique opiacé réalisé en plusieurs bolus par voie veineuse de manière à se rapprocher de son utilisation en clinique chirurgicale humaine.
Toutes les expériences sont réalisées sur des rats Sprague-Dawley d'un poids de 350-400 g ; chaque phase expérimentale est réalisée selon un schéma similaire : chaque phase expérimentale est réalisée sur 6 groupes de 12 rats dont un lot d'animaux témoins. Le test de mesure du seuil nociceptif retenu est le Test de Randall-Seltto modifié selon Kayser et al. (1990) (Kayser V., Basbaum A. I. et Guilbaud G., Deafferentation in the rat increase mechanical nociceptive threshold in the innervated limbs ; Brain research
(1999), 508, 329-332), utilisant un stimulus mécanique d'intensité croissante (exprimée en grammes), la réponse évoquée retenue étant le cri de l'animal.
Le schéma général d'une phase expérimentale est le suivant : - arrivage et stabulation des animaux : 4 jours ; - préparation des animaux leur permettant de se familiariser avec l'expérimentateur et les conditions et mesures expérimentales afin d'éviter tout biais de mesure pouvant être induit par le stress : 14 jours ; - préparation et mise en place des cathéters : 9 jours ; - repos post-opératoire (avec traitement antibiotique) et détermination de la stabilité des mesures expérimentales (seuil nociceptif de base) : 4 jours ; - tests de réponse aux différents principes actifs : 9 jours. Les 3 doses retenues de gacyclidine : 0,1, 0,3 et 1 mg/kg, sont injectées par voie veineuse à l'aide du cathéter posé dans une veine jugulaire.
L'ensemble des résultats est analysé selon un test ANOVA.
Phase 1 : Etude des effets propres de la gacyclidine sur le seuil nociceptif chez le rat.
Protocole-Phase 1 3 séries expérimentales comprenant chacune 2 lots d'animaux de 12 rats sont constituées.
10 série expérimentale : 10 lot : les animaux reçoivent une injection de sérum physiologique.
2'lot : les animaux reçoivent une dose de 0,1 mg/kg de gacyclidine.
20 série expérimentale : l'lot : les animaux reçoivent une injection de sérum physiologique.
2'lot : les animaux reçoivent une dose de 0,3 mg/kg de gacyclidine.
30 série expérimentale : l'loft les animaux reçoivent une injection de sérum physiologique.
2'lot les animaux reçoivent une dose de 1 mg/kg de gacyclidine.
L'ensemble des animaux des 3 séries expérimentales est préparé au cours d'une même phase. Le jour d'administration de la gacyclidine (ou du sérum physiologique) pour chaque série est décalé seulement de 3 jours afin de suivre l'évolution du seuil nociceptif pendant plusieurs jours suivant l'administration des substances pharmaceutiques. La mesure du seuil nociceptif est réalisée pendant au moins 4 heures après injection de gacyclidine, à raison d'une mesure toutes les 30 minutes puis de manière quotidienne pendant au moins une semaine.
alkyles inférieurs (Cl-C4), des acides acryliques ou méthacryliques ou leurs esters, des vinyllactames tels que la vinylpyrrolidone ou le vinylcaprolactame, des esters vinyliques.
Ainsi, parmi ces polymères de la famille (1), on peut citer : - les copolymères d'acrylamide et de diméthylaminoéthyl méthacrylate quaternisé au sulfate de diméthyle ou avec un hologénure de diméthyle, tel que celui vendu sous la dénomination HERCOFLOC par la société HERCULES, - les copolymères d'acrylamide et de chlorure de méthacryloyloxyéthyltriméthyl- ammonium décrits par exemple dans la demande de brevet EP-A-080976 et vendus sous la dénomination BINA QUAT P 100 par la société CIBA GEIGY, - le copolymère d'acrylamide et de méthosulfate de méthacryloyloxyéthyltriméthylammonium vendu sous la dénomination RETEN par la société HERCULES, - les copolymères vinylpyrrolidone/acrylate ou méthacrylate de dialkylaminoalkyle quaternisés ou non, tels que les produits vendus sous la dénomination"GAFQUAT"par la société ISP comme par exemple"GAFQUAT 734"ou"GAFQUAT 755"ou bien les produits dénommés"COPOLYMER 845,958 et 937". Ces polymères sont décrits en détail dans les brevets français 2.077. 143 et 2.393. 573, - les terpolymères méthacrylate de diméthyl amino éthyle/vinylcaprolactame/ vinylpyrrolidone tel que le produit vendu sous la dénomination GAFFIX VC 713 par la société ISP, - les copolymère vinylpyrrolidone/méthacrylamidopropyl dimethylamine commercialisés notamment sous la dénomination STYLEZE CC 10 par ISP, - et les copolymères vinylpyrrolidone/méthacrylamide de diméthylaminopropyle quaternisés tel que le produit vendu sous la dénomination"GAFQUAT HS 100"par la société ISP.
(3) Les dérivés de cellulose cationiques tels que les copolymères de cellulose ou les dérivés de cellulose greffés avec un monomère hydrosoluble d'ammonium quaternaire, et
décrits notamment dans le brevet US 4 131 576, tels que les hydroxyalkyl celluloses, comme les hydroxyméthyl-, hydroxyéthyl-ou hydroxypropyl celluloses greffées notamment avec un sel de méthacryloyléthyl triméthylammonium, de méthacrylmidopropyl triméthylammonium, de diméthyl-diallylammonium.
(7) Les dérivés de polyaminoamide résultant de la condensation de polyalcoylènes polyamines avec des acides polycarboxyliques suivie d'une alcoylation par des agents
bifonctionnels. On peut citer par exemple les polymères acide adipiquediacoylaminohydroxyalcoyldialoylène triamine dans lesquels le radical alcoyle comporte de 1 à 4 atomes de carbone et désigne de préférence méthyle, éthyle, propyle. De tels polymères sont notamment décrits dans le brevet français 1.583. 363.
Selon un mode de réalisation particulier du kit de détection décrit ci-dessus, un tel kit comprendra une pluralité de sondes oligonucléotidiques conformes à l'invention qui pourront être utilisées pour détecter des séquences cibles d'intérêt ou alternativement détecter des mutations dans les régions codantes ou les régions non codantes des acides nucléiques selon l'invention, plus particulièrement des acides nucléiques de séquences SEQ ID NO 1-5,6 et 8 ou les acides nucléiques de séquence complémentaire.
Ainsi, les sondes selon l'invention immobilisées sur un support peuvent être ordonnées en matrices telles que les"puces à ADN". De telles matrices ordonnées ont été en particulier décrites dans le brevet US ? 5,143, 854, dans les demandes PCT ? WO 90/150 70 et 92/10092.
Des matrices supports sur lesquelles des sondes oligonucléotidiques ont été immobilisées à une haute densité sont par exemple décrites dans les brevets US N'5, 412,087 et dans la demande PCT N WO 95/11995.
Les amorces nucléotidiques selon l'invention peuvent être utilisées pour amplifier l'un quelconque des acides nucléiques selon l'invention, et plus particulièrement tout ou partie d'un acide nucléique de séquences SEQ ID NO 1-5, ou encore un variant de celui-ci.
Un autre objet de l'invention concerne un procédé pour l'amplification d'un acide nucléique selon l'invention, et plus particulièrement un acide nucléique de séquences SEQ ID NO 1-5 ou un fragment ou un variant de celui-ci contenu dans un échantillon, ledit procédé comprenant les étapes consistant à : a) mettre en contact l'échantillon, dans lequel la présence de l'acide nucléique cible est suspectée, avec une paire d'amorces nucléotidiques dont la position d'hybridation est localisée respectivement du côté 5'et du côté 3'de la région de l'acide nucléique cible dont l'amplification est recherchée, en présence des réactifs nécessaires à la réaction d'amplification ; et b) détecter des acides nucléiques amplifiés.
Pour mettre en oeuvre le procédé d'amplification tel que défini ci-dessus, on aura avantageusement recours à l'une quelconque des amorces nucléotidiques décrites ci-avant.
L'invention a en outre pour objet un nécessaire ou kit pour l'amplification d'un acide nucléique selon l'invention, et plus particulièrement tout ou partie d'un acide nucléique de séquences SEQ ID NO 1-5 ledit nécessaire ou kit comprenant : a) un couple d'amorces nucléotidiques conformes à l'invention, dont la position d'hybridation est localisée respectivement du côté 5'et du côté 3'de l'acide nucléique cible dont l'amplification est recherchée ; b) le cas échéant, les réactifs nécessaires à la réaction d'amplification.
L'invention est en outre illustrée, sans pour autant être limitée, par les figures et les exemples ci-après.
La figure 1 est une représentation schématique des sites de facteurs de transcription retrouvés chez l'homme et la souris au sein de la région promotrice des gènes ABCA7.
La figure 2 illustre la séquence SEQ ID N 1 et la position de chacun des motifs caractéristiques de fixation à différents facteurs de transcription est représentée en caractères gras, la désignation du facteur de transcription spécifique de la séquence correspondante étant indiquée au-dessus de la séquence nucléotidique.
La figure 3 illustre la séquence SEQ ID N 4 et la position de chacun des motifs caractéristiques de fixation à différents facteurs de transcription est représentée en caractères gras, la désignation du facteur de transcription spécifique de la séquence correspondante étant indiquée au-dessus de la séquence nucléotidique.
La figure 4 illustre le pattern d'expression du gène ABCA7 humain sur des northern blots de différents tissus adultes et fcataux (Clontech) hybridés avec un amplimère réalisé avec les amorces SEQ ID ? 9 et 10 (tableau 4).
La figure 5 illustre le pattern d'expression du gène ABCA7 murin sur un northern blot de différents tissus adultes hybridés avec un amplimère réalisé avec des amorces spécifiques du transcrit murin. EXEMPLES : EXEMPLE 1 : Détermination de l'extrémité 5'du cDNA de ABCA7 Une amplification de l'extrémité du mRNA par RT-PCR (RACE) a été réalisée en utilisant le kit d'amplification SMART RACE cDNA (Clontech, Palo Alto, CA). Des ARNm (polyA) extraits à partir des tissus humains de la rate ont été utilisés comme matrice pour produire une banque de cDNA 5'SMART selon les instructions du constructeur. Les amorces de première amplification et les amorces internes ont été choisies à partir de la séquence cDNA. Les amplifications réalisées avec les amorces internes d'amplification PCR ont été clonés. Des clones spécifiques ont été