INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
En conséquence, en recherchant la présence des marqueurs consistant en les antigènes énumérés ci-dessus, il est possible d'identifier certains types de cellules (par exemple pour déterminer si une cellule est ou non une cellule indifférenciée ou une cellule différenciée) et la spécialisation de ce type cellulaire (par exemple pour déterminer si cette cellule est un lymphocyte T ou un lymphocyte B).
Les cellules indifférenciées peuvent comprendre n'importe quels constituants qui sont concernés par la présentation, la capture ou la reconnaissance d'antigènes.
De préférence, la cellule indifférenciée est une cellule du CMH de catégorie I+ et/ou de catégorie II+.
La cellule plus engagée peut comprendre n'importe quels constituants qui sont concernés par la présentation, la capture ou la reconnaissance d'antigènes. De préférence, la cellule plus engagée est une cellule du CMH de catégorie 1+ et/ou de catégorie II+.
La cellule plus engagée consiste en n'importe quelle cellule dérivée ou pouvant être dérivée d'une cellule indifférenciée. Ainsi, dans une forme de réalisation préférée, la cellule plus engagée est également une cellule indifférenciée. En conséquence, à titre d'exemple, la cellule indifférenciée plus engagée peut être une cellule souche lymphoïde ou une cellule souche myéloïde, et la cellule indifférenciée est une cellule souche pluripotente.
Dans une autre forme de réalisation préférée, la cellule plus engagée est une cellule différenciée, telle qu'une cellule CFC-T, une cellule CFC-B, une cellule CFCeosin., une cellule CFC-Bas, une cellule CFC-GM, une cellule CFC-MEG, une cellule BFC-E, une cellule CFC-E, un lymphocyte T, un lymphocyte B, une cellule éosinophile, une cellule basophile, une cellule neutrophile, un monocyte, un mégacaryocyte ou un érythrocyte et la cellule
indifférenciée est une cellule souche myéloïde, une cellule souche lymphoïde ou une cellule souche pluripotente.
Si la cellule plus engagée est une cellule différenciée, alors la cellule différenciée est de préférence un lymphocyte B (activé ou non activé), un lymphocyte T (activé ou non activé), une cellule provenant de la lignée des monocytes macrophages, une cellule nucléée capable d'exprimer des antigènes de catégorie I ou de catégorie II, une cellule qui peut être soumise à l'induction de l'expression d'antigènes de catégorie I ou de catégorie II ou une cellule énucléée (c'est-à-dire une cellule qui ne contient pas de noyau - telle qu'un globule rouge).
Dans d'autres formes de réalisation préférées, la cellule différenciée est n'importe quelle cellule choisie parmi un groupe de cellules comprenant des lymphocytes granulaires volumineux, des lymphocytes nuls et des cellules tueuses naturelles, chacun exprimant les récepteurs de surface cellulaire CD56 et/ou CD16.
La cellule différenciée peut même être formée par nucléation d'une cellule énucléée.
III. Agents L'agent enrôle de manière fonctionnelle la cellule plus engagée afin de provoquer la rétrodifférenciation de cette cellule en une cellule indifférenciée. A cet égard, l'agent pour la rétrodifférenciation de la cellule plus engagée en la cellule indifférenciée peut agir par enrôlement direct ou enrôlement indirect avec la cellule plus engagée.
L'agent peut agir au niveau intracellulaire à l'intérieur de la cellule plus engagée. Cependant, de préférence, l'agent agit au niveau extracellulaire de la cellule plus engagée.
Un exemple d'enrôlement direct est celui dans lequel la cellule plus engagée comporte au moins un récepteur de ' surface cellulaire sur sa surface, tel qu'une chaîne P
ayant des régions homologues (régions qui sont présentes couramment avec la même séquence ou une séquence similaire) telles que celles qui peuvent être présentes sur les lymphocytes B, et dans lequel l'agent enrôle directement le récepteur de surface cellulaire. Un autre exemple est celui dans lequel la cellule plus engagée comporte un récepteur de surface cellulaire sur sa surface tel qu'une chaîne a ayant des régions homologues telles que celles qui peuvent être présentes sur les lymphocytes T, et dans lequel l'agent enrôle directement le récepteur de surface cellulaire.
Un exemple d'enrôlement indirect est celui dans lequel la cellule plus engagée comporte au moins deux récepteurs de surface cellulaire sur sa surface et l'enrôlement de l'agent avec un des récepteurs influe sur l'autre récepteur qui induit alors la rétrodifférenciation de la cellule plus engagée.
L'agent pour la rétrodifférenciation de la cellule plus engagée en une cellule indifférenciée peut être un composé chimique ou une composition. Cependant, de préférence, l'agent est capable d'enrôler un récepteur de surface cellulaire sur la surface de la cellule plus engagée. Ainsi, dans une forme de réalisation préférée, l'agent enrôle de manière fonctionnelle un récepteur présent sur la surface de la cellule plus engagée récepteur qui peut être exprimé par la cellule plus engagée, tel qu'un récepteur qui est capable d'être exprimé par la cellule plus engagée.
Selon ce procédé, on applique sur les fibres, à une température d'application comprise entre la température ambiante et 80 C, au moins une composition tinctoriale prête à l'emploi telle que définie précédemment, pendant un temps suffisant pour développer la coloration désirée. De façon préférentielle, les fibres sont ensuite rincées, on éventuellement lavées au shampooing, puis séchées.
Selon une forme de réalisation particulière de l'invention, le procédé comporte une étape préliminaire consistant à stocker sous forme séparée, d'une part, une composition comprenant, dans un milieu approprié pour la teinture, au moins une 1-(4-aminophényl)-pyrrolidine de formule (1) telle que définie précédemment, et d'autre part, une composition renfermant, dans un milieu approprié pour la teinture, au moins une enzyme de type oxydo-réductase à 2 électrons ou à 4
électrons ou peroxydase, puis à procéder à leur mélange au moment de l'emploi avant d'appliquer ce mélange sur les fibres kératiniques.
Un autre objet de l'invention est un dispositif de teinture à plusieurs compartiments ou "kit" de teinture ou tout autre système de conditionnement à plusieurs compartiments dont au moins un premier compartiment renferme la composition (A) telle que définie ci-dessus et au moins un second compartiment renferme la composition (B) telle que définie ci-dessus. Ces dispositifs peuvent être équipés d'un moyen permettant de délivrer sur les cheveux le mélange souhaité, tel que les dispositifs décrits dans le brevet FR-2 586 913 au nom de la demanderesse.
EXEMPLE 1 On a comparé une composition de teinture A prête à l'emploi selon l'invention, contenant comme précurseur de colorant d'oxydation le dichlorhydrate de 1-(4aminophényl)-pyrrolidine, comme coupleur le dichlorhydrate de 1-sshydroxyéthyloxy-2,4-diaminobenzène et comme oxydant de l'uricase (oxydase à 2 électrons) à une composition B de l'art antérieur contenant comme précurseur de colorant d'oxydation le sulfate de N,N-bis(p-hydroxyéthyl)-paraphénylènediamine.
L'invention concerne aussi une paire d'amorces susceptible d'être mise en oeuvre à l'étape (d) de la méthode et de séquence SEQ ID No.3 et SEQ ID No.4 dans la liste de séquences en annexe.
L'invention s'applique à une paire d'amorces susceptible d'être mise en oeuvre à l'étape (e) de la méthode et de séquence SEQ ID No.4 et SEQ ID No.6 ou de séquence SEQ ID No.4 et SEQ ID No.7 dans la liste de séquences en annexe.
L'invention concerne également une sonde susceptible d'être mise en oeuvre aux étapes (d) et (e) de la méthode et de séquence SEQ ID No.5 dans la liste de séquences en annexe.
La méthode de l'invention trouve donc de nombreuses applications comme bien entendu - l'étude de la dynamique de l'émergence de mutations dans des populations virales, par exemple, au cours de traitements antiviraux, - l'évolution des populations de virus mutés lors des interruptions pharmaceutiques, - l'appréciation plus précise de la réponse ou de l'échec des traitements antiviraux conduisant à des décisions thérapeutiques plus efficaces. L'invention concerne aussi un kit pour la mise en oeuvre la méthode de l'invention. Un tel kit caractérisé en ce qu'il comprend les réactifs suivants - une paire d'amorces encadrant le segment susceptible de porter une mutation, - une paire d'amorces hautement conservées discriminant pas les séquences mutées et non mutées, - une paire d'amorces spécifiques des séquences mutées, - une sonde conjuguée à ses extrémités 5' et 3', respectivement, avec un colorant fluorescent reporteur et un composé réduction d'intensité de fluorescence, spécifique des produits d'amplification des étapes (c) et (d) de la méthode selon l'invention, - un séquence d'acide nucléique portant mutation pour la préparation d'un standard par amplification PCR avec la paire d'amorces encadrant le segment susceptible de porter une mutation, - les produits et réactifs nécessaires pour réaliser les différentes amplifications par PCR.
L'invention concerne un kit pour la détection et/ou la quantification de variants minoritaires du portant la mutation de résistance aux antirétroviraux V82A ou L90M dans la séquence de la protéase qui comprend les réactifs suivants - la paire d'amorces encadrant le segment susceptible de porter une mutation de séquence SEQ ID No.l et SEQ ID No.2 dans la liste de séquences en annexe, - la paire d'amorces hautement conservées ne discriminant pas les séquences mutées et non mutées de séquence SEQ ID No.3 et SEQ ID No.4 dans la liste de séquences en annexe, - la paire d'amorces spécifiques des séquences portant la mutation V82A de séquence SEQ ID No.4 et SEQ ID No.6 dans la liste de séquences en annexe et la paire d'amorces spécifiques des séquences portant mutation L90M de séquence SEQ ID No.4 et SEQ ID No.7 dans la liste de séquences annexe, - la sonde conjuguée à ses extremités 5' et 3', respectivement, avec un colorant fluorescent reporteur et un composé réduction d'intensité de fluorescence de séquence SEQ ID No.5 dans la liste de séquences en annexe.
D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront des exemples qui suivent et qui font référence aux figures suivantes - la figure 1 présente la quantification par PCR séquence-sélective des populations virales exprimant la mutation de résistance L90M. L'ARN est extrait des échantillons cliniques et les ARN correspondant au gène de la protéase ont été amplifiés par RT-PCR. Les produits d'amplification ont été dilués et la quantité d'ADN présent a été quantifiée par PCR en temps réel réalisée en utilisant la paire d'amorces non séquence- sélectives F3/R1 de séquence SEQ ID No.3 et SEQ ID No.4 dans la liste de séquences en annexe (A). Pour tous les échantillons, la quantité d'ADN présent est déterminé grâce à une courbe standard obtenue à partir de dilutions d'ADN provenant de l'amplification d'un plasmide contenant la séquence de la protéase de pNL4-3 dans lequel la mutation L90M a été introduite par mutation dirigée 0). La même quantité d'ADNc est amplifiée dans des réactions parallèles en utilisant une paire d'amorces séquence-selectives M2-L90M/R1 de séquence SEQ ID No.4 et SEQ ID No.7 dans la liste de séquences en annexe (B). Les échantillons obtenus à partir de patients non traités (#) se superposent avec la courbe obtenue avec de l'ADN standard contenant la séquence sauvage ([:] -n), alors que les échantillons obtenus à partir de patients en échec de traitement thérapeutique dont le génotypage a montré qu'ils présentent des virus exprimant de multiples mutations de résistance parmi lesquelles L90M (#) correspondent à la courbe obtenue avec de l'ADN standard contenant la mutation L90M (0-0). Les échantillons contenant 41 % de séquences mutées (1) ou 3 % de séquences mutées (Y) ce qui a été montré par analyse des clones dérivés réactions PCR parallèles donnent des résultats intermédiaires proches des valeurs prédites (lignes brisées). I1 faut noter que les échantillons contenant moins de 0,1 % de séquences mutées peuvent être distinguées des échant' ons contenant uniquement des virus sauvages.
- la figure 2 présente 1 cinétiques de conversion de virus mutées en virus sauvages suite à des interruptions structurées de traitement. Le plasma provient de 5 patients différents aux temps indiques avant et après l'IT le pourcentage de séquences virales exprimant les mutations de résistance V82A (#) et L90M est déterminé par séquence-sélective. Les valeurs dans la zone ombragée ( U ) sont sous la limite de detection ( < 1 pour V82A et < 0,05 % pour L90M). charge virale plasmatique (O) est déterminée par Monitor (Roche). Par un génotypage standard, tous les patients présentent la mutation V82A et les patients 1, 4 et 5 ont mutation L90M avant 'IT. Les mutations V82A et L90M sont indétectables par génotypage standard à 3, 4, 2 et 2 mois respectivement pour patients 1, 2, 3 et 5. Les flèches indiquent le moment ' une thérapie antirétrovirale est reprise.
I. Matériel et méthodes . I-1. Patients .
Le sang périphérique a été obtenu à partir de patients infectés par le VIH avant et suite l'interruption de toute thérapie antirétrovirale et plasma a été conserve à -80 C. Tous les patients donné leur consentement avant de suivre l'IT. I-2. Préparation de l'ADNc viral .
Le plasma (0,5 à 1 ml) a éte centrifugé à 23,500xg pendant une heure à 4 C et l'ARN été extrait à partir du culot et élué dans 60 -p1 d'eau. Quinze p1 d'ARN ont éte utilisés pour la RT-PCR (Titan One Tube RT-PCR kit, Boehringer Mannheim) selon les instructions du fournisseur et en utilisant à la concentration finale de 0,4 pM les amorces ProtF1 (5'-CTTTAGCTTCCCTCAGATCACTC) et ProtR1 (5'- CCTGGCTTTAATTTTACTGGTACA) respectivement SEQ ID No.1 et SEQ ID No.2 dans la liste de séquences en annexe. Les conditions de la RT-PCR sont les suivantes : dénaturation à 94 C pendant 30 sec, hybridation à 52 C pendant 30 sec, extension à 68 C pendant 45 sec ; 40 cycles.
I-3. Quantification des populations virales contenant des mutations de résistance en utilisant la PCR en temps réel .
Les mutations de résistance V82A (GTC -> GCC) et L90M (TTG ---> ATG) ont été introduites dans le plasmide pNL4-3 mutagenèse dirigée comme déjà décrit Petit et a1.
(1999, J. Virol., vol. 73, pages 5079-88) et vérifiées par séquençage. L'ADN plasmidique des plasmides sauvage, V82A et L90M a été ensuite amplifié par PCR en utilisant la paire d'amorces ProtFl/ProtR1. Les produits de cette amplification ont été utilisés comme standard, afin de s'assurer que les échantillons (ADNc viral) et les standards utilisés pour la en temps réel se trouvent dans la même forme.
Pour quantifier la proportion de séquences exprimant la mutation V82A, les produits obtenus par RT-PCR été dilués dans un tampon Tris à 10 mM au pH de 7,4 contenant de l'EDTA à 0,1 mM et de l'ADN de sperme de hareng à 100 ng/ml (Sigma) (habituellement 10-4 -10-6) et des aliquotes de 10 u1 ont été ajoutés aux réactions de PCR permettant l'amplification non-sélective de toutes les séquences virales ou l'amplification préférentielle des séquences contenant la mutation V82A. Pour 'amplification non-sélective, les conditions de réaction sont, dans un volume total de 50 u1, du tampon Taqman 1X, MgC12 à 3 mM, chaque dNTP à 200 nM, chaque amorce à nM F3 (5'- GGTACAGTATTAGTAGGACCTACA) et R1 (5'- TGGTACAGTTTCAATAGGACTAAT), la sonde TaqMan a 50 nM [5'-(6- Fam)CTCAGATTGGTTGCACTTTAAATTTTCC(Tamra)(phosphate)], l'uracil-n-glycosylase à 0,5U et la Taq polymérase AmpliTaq Gold à 1,25 U. Les amorces F3, R1 et sonde TaqMan correspondent respectivement aux séquences SEQ ID No.3, SEQ ID No.4 et SEQ ID No.5 dans la liste de séquences en annexe. Pour 'amplification préférentielle de V82A les conditions sont identiques, exceptée l'amorce F3 remplacee par l'amorce M2-V82A (5'-TATTAGTAGGACCTACACCAGC ; SEQ ID No.6 dans la liste de séquences en annexe). Les réactifs le matériel ont ' ' fournis par Perkin-Elmer, les oligonucléotides ont été synthétisés par Genset. Les échantillons été évalués par en temps réel (Heid et a1., 1996, Genome Res., vol. 6, pages 986-94 ; Gibson et al., 1996, Genome ., vol. 6, pages -1001) en utilisant le système de Perkin-Elmer 7700 Sequence Detection System (PE Applied Biosystems) en utilisant les paramètres de cycles suivants : 50 C x 2 min ; 95 C x 10 min ; suivie de 40 cycles à 95 C x sec et 50 C x 1 min. Le nombre de cycles nécessaire pour atteindre la fluorescence seuil (Cs) est déterminé et quantité de séquences initialement présentes est calculée par extrapolation sur la courbe standard. Les mêmes dilutions de standard (produits d'amplification produits via le plasmide V82A) sont utilisées pour à la fois les amplifications non- sélective et sélective de V82A. Le pourcentage de séquences virales est calculé selon la formule : % de séquences mutées _ [quantité de séquences mutées dans l'échantillon)/(quantité totale de séquences dans l'échantillon)] x 100. Pour quantifier la proportion de séquences exprimant la mutation L90M, des techniques analogues sont utilisées, exceptée l'amorce M2-V82A remplacée par l'amorce M2-L90M (5'-AACATAATTGGAAGAAATCAGA ; SEQ ID No.7 dans la liste de séquences en annexe). Des dilutions des produits d'amplification générés à partir du plasmide L90M sont utilisées pour réaliser courbe standard.
Les amplifications non-sélectives et sélectives sont toujours réalisées en même temps. Toutes les réactions sont réalisées en double et la moyenne des deux valeurs est utilisée pour les calculs. Bien que les réactions réalisées en utilisant les amorces M2-V82A et M2-L90M amplifient des séquences contenant les mutations correspondantes plus efficacement que les séquences sauvages, des produits d'amplification résultant de l'amplification des séquences sauvages sont générés. Lorsque des échantillons contenant uniquement des séquences sauvages sont analysés comme décrit ci-dessus, les résultats indiquent la présence apparente de 0,6 ,2% (moyenne DS, n = 10) de séquences mutées en utilisant le système V82A et de 0,01 0,02% (moyenne DS, n = 10) séquences mutées en utilisant le système L90M. Basée sur ces résultats, la limite de sensibilité a été définie comme la moyenne + 2 DS de ces valeurs soit 1% pour V82A et 0,05% pour L90M.
I-4. Evaluation des produits PCR clonés .
La protéine Cdc25C pourrait être fusionnée avec des systèmes aussi variés que : 1. Le résidu de six histidines reconnu par l'anticorps anti-motif six histidine (Katsafanas, G. C. et Moss, B., Virology (1999), 258 : 469-479) ; 2. Le résidu de neuf acides aminés de Hemagglutinine d'Influenza reconnu par l'anticorps 3F10 (Robert, I. et Quirin-Stricker, C., J. Mol. Neurosci. (1998), 11 : 243-251) ; 3. Le résidu de 11 acides aminés du virus de stomatite vésiculaire reconnu par l'anticorps P5D4 (Le Maout, S., et coll., Proc. Natl. Acad. Sei. US. A. (1997), 94 : 13329-13334) ; 4. Le résidu de 6 acides aminés de la protéine de capside du virus bovin papilloma (AU1) reconnu par l'anticorps anti-AUl (Le Maout, S., et coll., Proc. Natl. Acad Sei. US. A. (1997), 94 : 13329-13334) ; 5. Le résidu de 12 acides aminés de la chaîne lourde de la protéine C reconnu par l'anticorps HPC4 (Rezaie, A. R., et coll., Protein Expr. Purif. (1992), 3 : 453-460) ; 6. La protéine C-myc reconnue par l'anticorps 9E10 (Bae, S. H., et coll., J. Biol.
Chem. (1999), 274 : 14624-14631) ; 7. La protéine bêta galactosidase affine pour l'amino-phényl bêta D thiogalactopyranoside (Germino, J. et Bastia, D., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.
(1984), 81 : 4692-4696) ; 8. La protéine Gluthation S transférase reconnue par l'anticorps anti-GST (Carr, S., et coll., Vaccine (1999), 18 : 153-159), 9. La biotin-carboxylase carrier affine pour l'avidine (Germino, F. J. et Moskowitz, N. K., Methodç Enzymol. (1999), 303 : 422-450) ; 10. La protéine Intein affine pour la chitine (voir Chong, S., et coll., Gene (1997), 192 : 271-281 ; Carr, S., et coll., Vaccine (1999), 18 : 153-159) ; 11. La protéine liant le maltose affine pour l'amylose (Ahaded, A., et coll., Prep.
Biochem. Biotechnol. (1999), 29 : 163-176,1999).
L'invention permet d'obtenir une protéine humaine Cdc25C recombinéc avec la protéine liant le maltose (MBP) qui conserve son activité phosphatase sans nécessiter la séparation avec la partie MBP, prévenant ainsi toute contamination avec des protéases.
Le haut niveau du taux d'expression de la protéine après induction permet un rendement de purification excellent et la préparation en quantité illimitée de l'enzyme.
La présente invention a tout d'abord pour objet une protéine de fusion entre la phosphatase Cdc25C humaine et la protéine liant le maltose (Maltose Binding Protein ou MBP), laquelle est caractérisée en ce qu'elle consiste en la séquence SEQ. ID no 1 (représentée plus loin).
L'invention a de plus pour objet la souche bactérienne JM 109 transfectée par le plasmide de séquence SEQ. ID no 5 (représentée plus loin). Ladite souche est utile à la préparation de la protéine Cdc25C.
L'invention concerne de plus un procédé de préparation de ladite protéine de fusion, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes successives suivantes : - culture de la souche bactérienne JM 109 transfectée par le plasmide de séquence SEQ. ID no 5 dans un milieu LB additionné d'ampicilline ; - induction de la synthèse de la protéine de fusion par ajout d'isopropylthiogalactoside ; - lyse des bactéries ; - purification de la protéine de fusion obtenue par chromatographie sur résine d'amylose-agarose et récupération des fractions contenant la protéine purifiée.
- ajout, à une solution de phosphate de 3-O-méthylfluorescéine, de la protéine de fusion telle qu'obtenue par le procédé de préparation décrit précédemment et d'un composé présumé être un modulateur de la protéine Cdc25C ; - détermination de la quantité de 3-0-méthylfluorescéine produite rapportée à la quantité initiale de phosphate de 3-0-méthylfluorescéine.
La détermination de la quantité de 3-0-méthylfluorescéine produite peut être réalisée, par exemple, par mesure de la densité optique de la solution, de l'absorbance liée à la 3-0-méthylfluorescéine à la longueur d'onde de 477 nm, ou bien encore par tluorimétrie en utilisant une excitation à la longueur d'onde de 475 nm et une lecture à la longueur d'onde de 510 nm.
Exemple 4.4: Suivi de l'activité relative SeAP circulante in vivo après injection du plasmide comprenant la séquence sens du gène SeAP (pXL3010), suivie d'une post-injection du plasmide comprenant la séquence du transcrit inhibiteur de type antisens du gène rapporteur SeAP (pSeAPantisens) 50 souris SCID femelles de 6 semaines, divisées en 5 groupes de 10 et sont traitées comme précédemment décrit aux Exemples 3. 2 et 3.3.
Les résultats présentés figure 8, montrent clairement et de manière reproductible qu'aucun effet d'inhibition ne peut être mis en évidence lorsque l'on procède en injectant dans un premier temps la séquence codant
pour le transcrit sens puis dans un deuxième temps pour le transcrit inhibiteur de type ARN antisens.
Exemple 4.5: Suivi de l'activité relative SeAP circulante in vivo après coinjection des plasmides pXL3010 et pSeAPantisens 50 souris SCID femelles de 6 semaines, divisées en 5 lots de 10 et sont traitées comme précédemment décrit aux Exemples 3. 2 et 3.3.
Les résultats, présentés à la figure 9, montrent bien que la coinjection de ces deux plasmides (lot 3) permet d'obtenir une expression très faible, voire nulle du gène rapporteur exogène SeAP, indiquant que le transcrit inhibiteur de type ARN antisens agit en inhibant fortement la transcription du gène rapporteur SeAP avec lequel il est coinjecté, et cela de manière constitutive sur une période de temps variable allant de 7 à 85 jours après la coinjection.
Les lots témoins 1, 2,4, et 5 qui correspondent à une injection du plasmide portant la séquence sens du gène rapporteur seul montrent une expression à des taux variables du gène pendant toute la période de l'évaluation.
EXEMPLE 5 : Fonctionnalité de l'inhibition du transcrit inhibiteur de type antisens lorsque celui-ci est placé sous le contrôle d'un promoteur répressible par la tétracycline, et mesure d'inhibition in vitro Exemple 5.1 : Fonctionnalité in vitro du promoteur répressible par la tétracycline Les expériences ont été réalisées sur cellules NIH 3T3, avec les gènes rapporteurs SeAP et Luciférase, ces deux gènes rapporteurs ayant été précédemment décrits.