INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La description qui va suivre en regard des dessins annexés donnés à titre d'exemples non limitatifs, permettra de mieux comprendre l'invention, les caractéristiques qu'elle présente et les avantages qu'elle est susceptible de procurer Figure 1 est une vue en perspective éclatée montrant l'ensemble des éléments constituant la machine à sertir suivant la présente invention.
Figure 2 est une vue en perspective illustrant la machine à sertir suivant la présente invention.
Figures 3 et 4 sont des vues montrant en détail les moyens de commande pour la réception du système d'outillage amovible suivant la présente invention.
Figures 5 et 6 sont des vues en perspectives représentant le système d'outillage amovible constitué d'une cassette interchangeable pour la machine à sertir suivant le présente invention.
d'un précipité blanc dû à la libération de la chaine B de l'insuline après réduction de ses ponts disulfures.
Une solution mère d'insuline (Sigma) est préparée à une concentration de 10 mg/ml (1,67 mM) en diluant 50 mg d'insuline dans 4 ml de tampon TrisHCl 0,05 M pH = 8, puis en ajustant le pH une première fois à 2 ou 3 avec HC1 1 M et une deuxième fois à 8 avec NaOH 1 M. Le volume est alors ajusté à 5 ml avec de l'eau bidistillée.
La solution d'insuline doit être parfaitement claire avant d'être stockée à -20 C. Une solution d'insuline à 1 mg/ml (0,167 mM) est alors préparée extemporanément dans du tampon phosphate 0,1 M, 2 mM EDTA à partir de la solution mère d'insuline. Puis 450 l de cette solution sont mélangés dans une cuve spectrophotométrique avec l'échantillon à tester dans un volume final de 600 l. La réaction démarre dès l'ajout de 2 l de 100 mM DTT.
L'ensemble est mélangé vigoureusement puis la cuve est placée dans le spectrophotomètre. Le moment où apparaît la précipitation, défini par l'augmentation de l'absorbance à 650 nm (A650nm) de 0,02 au-dessus de la ligne de base, et le taux de précipitation à 650 nm, défini comme l'augmentation maximale de l'absorbance à 650 nm pendant l'intervalle de temps d'une minute (#A650nm x min-1) pour des absorbances comprises entre 0 et 1, sont alors déterminés.
16) Immunogénicité des hybrides.
Les surnageants ont été préparés comme décrit ci-dessus. Les bactéries vivantes recombinantes sont préparées de la même manière avant chaque série d'inoculation : après centrifugation du tapis bactérien (5 min, 1600 g), le culot bactérien est repris dans du PBS.
Les bactéries sont énumérées sur milieu sélectif MacConkey lactose gélosé avant immunisation des animaux. a) Production d'anticorps chez les lapins.
Un lapin de race néo-zélandaise âgé d'environ 11 semaines est utilisé pour chaque type d'antigène. Les protocoles d'inoculation sont déterminés selon la nature de cet antigène. Ainsi, chaque lapin reçoit soit 500 l de surnageant en présence d'adjuvant incomplet de Freund (v/v) par voie intra-dermique aux jours Jo, J21, J28 et J35, soit quatre injections à une semaine d'intervalle d'une suspension de 5.108 bactéries vivantes (= 500 l) par voie intra-veineuse. La récupération du sang s'effectue par section de la veine jugulaire dix jours après le dernier rappel. b) Production d'anticorps chez les souris et test de protection.
- Voie intra-péritonéale : 200 l d'une suspension contenant 2 à 4.108 bactéries vivantes diluées dans du tampon PBS ou 200 l de surnageant sont inoculés à des groupes de 5 souris non consanguines Swiss OF1 (If fa Credo, France) âgées de huit à douze semaines aux jours Jo,
J2 et J14. Le sérum de chaque souris est collecté individuellement une semaine après le dernier rappel par ponction intra-cardiaque sous anesthésie générale (Vétranquil + Imalgène, Rhône Mérieux).
- Voie orale : des groupes de quatre souris femelles, privées d'eau pendant au moins 5 h, reçoivent un inoculum de 1010 bactéries vivantes en présence de 3 % NaHC03 aux jours Jo, J1, J2 avant d'être accouplées au jour J14 puis réimmunisées aux ours J28, J29, J30. Après la mise bas, le sang, l'intestin entier et les fécès sont prélevés.
Les souriceaux nouveau-nés âgés de trois jours sont alors éprouvés avec de la toxine pour évaluer la protection vaccinale. Pour cela, chaque portée de souriceaux est divisée en deux groupes. Le premier groupe reçoit 12,5 ng (1,6 U) de toxine STp purifiée (Calbiochem) et le deuxième groupe, 2 U de surnageants contenant les hybrides homologues produits par les bactéries recombinantes qui ont été utilisées durant l'immunisation primaire. c) Préparation des extraits et détection des anticorps anti-ClpG et anti-STa.
- Sérum : le sang immun est incubé pendant au moins 4 h à 37 C puis centrifugé pendant 10 min à 3000 g.
Le sérum est conservé à - 20 C.
- Contenu intestinal : l'intestin entier est ligaturé à une extrémité, puis 200 l de tampon de lavage sont introduits par l'autre extrémité. Après ligature de cette dernière, et par pression légère le long de
l'intestin, le tampon est transféré plusieurs fois d'une extrémité à l'autre. Le contenu intestinal est récupéré, centrifugé (10 min, 16000 g) et le surnageant est conservé à - 20 C.
Dans la présente description le terme "(C1-C4)Alk" désigne un radical monovalent d'un hydrocarbure en C1-C4 saturé à chaîne droite ou ramifiée.
Les sels des composés de formule (I) selon la présente invention comprennent aussi bien les sels d'addition avec des acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables tels que le chlorhydrate, le bromohydrate, le sulfate, l'hydrogénosulfate, le dihydrogénophosphate, le citrate, le maléate, le tartrate, le fumarate, le gluconate, le méthanesulfonate, le 2-naphtalènesulfonate, etc., que les sels d'addition qui permettent une séparation ou une cristallisation convenable des composés de formule (I), tels que
le picrate, l'oxalate ou les sels d'addition avec des acides optiquement actifs, par exemple les acides camphosulfoniques et les acides mandéliques ou mandéliques substitués Les stéréoisomères optiquement purs, ainsi que les mélanges d'isomères des composés de formule (I), dus aux carbones asymétriques ou au groupe sulfinyle dans la signification de Ri, dans une proportion quelconque, font partie de la présente invention.
Des composés préférés de la présente invention comprennent les composés de formule (I) où X représente N et le groupe NHR2 est dans la position 5 de la pyridine.
D'autres composés préférés sont ceux où le groupe (C1-C4)Alk est un groupe méthyle ou éthyle.
D'autres composés préférés encore sont ceux où n et m sont zéro.
Les composés de formule (I) peuvent être préparés en traitant un composé de formule (II) dans laquelle R1 est tel qu'indiqué ci-dessus, P' est un groupe protecteur et L est un groupe de formule (a) ou (b) où Gp est un groupe partant tel que le tosylate, le mésylate ou un halogène, avec une amine de formule (III) dans laquelle n, m, R2 et X sont tels que définis ci-dessus, en clivant le groupe P' selon les méthodes usuelles et éventuellement transformant le composé de formule (I) ainsi obtenu en l'un de ses sels.
Plus particulièrement, la réaction entre les composés de formule (II) et (III) est réalisée dans un solvant organique, tel qu'un alcool inférieur comme le méthanol, l'éthanol et l'isopropanol; le diméthylsulfoxyde; un éther linéaire ou cyclique; un amide comme le diméthylformamide ou le diméthylacétamide; en utilisant des
quantités au moins équimoléculaires des réactifs, éventuellement en faible excès d'amine.
La température de la réaction est comprise entre la température ambiante et la température de reflux du solvant choisi, de préférence inférieure à 180 C Comme groupes protecteurs P', on peut utiliser les groupes protecteurs usuels pour les groupes hydroxy tels que par exemple le méthoxyéthoxyméthyle (MEM), le benzyle, le benzoyle ou les silyléthers tels que par exemple le tertbutyldiméthylsilyléther (TBDMS).
Le clivage de ces groupes protecteurs est effectué selon les méthodes habituelles pour le groupe protecteur choisi ; dansle cas du groupe benzyle, par exemple, par hydrogénation en présence d'un catalyseur tel que le Pd/C dans un solvant convenable ou par hydrolyse à l'aide d'un acide tel que le l'acide trifluoroacétique, selon la reactivité du groupe Ri présent ; dans le cas du MEM ou du TBDMS on peut également utiliser un acide tel que l'acide trifluoroacétique; dans le cas du benzoyle on peut faire une réaction de transesterification avec un alcanol en milieu basique.
Les époxydes de formule (II) sont des composés connus en littérature ou bien ils peuvent être préparés par des procédés analogues à ceux décrits dans la littérature.
Certains époxydes de formule (II) sont par exemple décrits dans WO 96/04233 et dans US 4,396,629.
Les amines de formule (III) sont des composés nouveaux et constituent un autre aspect de la présente invention.
Ces amines peuvent être préparées par réaction des composés de formule (IV) dans laquelle P" est un groupe protecteur tel tert-butoxycarbonyl et le carbobenzyloxy et X est tel que définis ci-dessus, avec un radical CI-R2 où R2 est tel que décrit précédemment, dans un solvant convenable, tel que par exemple la pyridine, le diméthylformamide ou le diméthylsulfoxide et par élimination du groupe P" par hydrogénation ou traitement en milieu acide tel que l'acide chlorhydrique dans l'éthyle acétate ou dans l'éthanol, Les amines de départ de formule (IV) peuvent être préparées par réaction des pyridines convenables de formule (V)
où Hal représente un halogène et X, R2 et m sont tels que définis ci-dessus, avec une pipéridine de formule (VI) ci-dessous où n est tel que défini ci-dessus et P" représente un groupe protecteur, dans un solvant organique en présence d'une base.
Le procédé de criblage ci-dessus peut comporter en outre une étape supplémentaire f) au cours de laquelle la séquence nucléotidique et/ou
la séquence en acides aminés de l'acide nucléique proie induisant l'expression du marqueur détectable est caractérisée.
L'invention concerne aussi un kit ou nécessaire pour le criblage d'une substance candidate se fixant sur un polypeptide selon l'invention, et tout particulièrement le polypeptide RRS1-R ou RRS1-S, ledit kit ou nécessaire comprenant : a) un premier acide nucléique codant pour une protéine de fusion comprenant une partie du polypeptide d'intérêt fusionné au domaine de liaison à l'ADN d'une protéine transactivatrice telle que Gal4, b) le cas échéant, un second acide nucléique comprenant une séquence nucléotidique codant pour un marqueur détectable, placé sous le contrôle d'une séquence de régulation reconnue par la protéine transactivatrice telle que Gal4; c) un troisième acide nucléique codant pour une protéine de fusion comprenant la substance candidate fusionnée au domaine de transcription d'une protéine transactivatrice telle que Gal4 L'invention concerne aussi une substance capable de se fixer sur un polypeptide de l'invention, préférentiellement sur le polypeptide RRS1-R ou RRS1-S, cette substance étant caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être obtenue par un procédé de criblage tel que défini ci-dessus.
* Une technique de criblage ayant recours à un système de type double hybride peut être aisément réalisée par l'homme du métier, notamment conformément à l'enseignement de l'exemple 8.
Comme déjà décrit précédemment, un polypeptide selon l'invention comprend plusieurs domaines de liaison aux nucléotides à la fois dans sa partie N-terminale et dans sa partie C-terminale. Les séquences nucléotidiques auxquelles se lient ces différents domaines de liaison aux nucléotides revêtent donc une importance déterminante dans les mécanismes de résistance des plantes à différents pathogènes, et plus particulièrement à R solanacearum.
L'isolement et la caractérisation des polypeptides de résistance aux pathogènes végétaux selon l'invention permet désormais à l'homme du métier de déterminer ces séquences nucléotidiques impliquées dans l'induction d'un phénotype de résistance aux pathogènes chez une plante L'invention a également trait à un procédé de criblage d'un acide nucléique interagissant avec un polypeptide selon l'invention, ledit procédé de criblage comprenant les étapes de a) obtenir une population statistique d'acides nucléiques de 20 à 50 nucléotides de longueur, b) mettre en contact la population d'acides nucléiques de l'étape a) avec un polypeptide selon l'invention; c) caractériser l'acide nucléique ou la pluralité d'acides nucléiques interagissant avec ledit polypeptide.
Selon un tel procédé, il est d'abord préparé, par exemple par synthèse chimique directe, des acides nucléiques de 20 à 50 nucléotides de longueur, et de préférence de 20 à 30 nucléotides de longueur dont la séquence nucléotidique est statistique, chacun des acides nucléiques synthétisés étant en outre lié covalemment, à leur extrémité 5' ou 3', à une séquence nucléotidique unique et connue.
Les acides nucléiques formant une population statistique d'acides nucléiques décrits plus haut sont ensuite mis en contact avec un polypeptide selon l'invention, ledit polypeptide pouvant avoir été préalablement immobilisé sur un support.
Après une étape permettant d'éliminer les acides nucléiques n'ayant pas interagi avec le polypeptide selon l'invention, les complexes polypeptides/acides nucléiques sont mis en contact avec une amorce oligonucléotidique hybridant spécifiquement, dans des conditions d'hybridation déterminées, avec la séquence nucléotidique unique et connue commune à l'ensemble des acides nucléiques de la population statistique ciavant, puis il est procédé à au moins un cycle d'amplification à l'aide de l'amorce hybridant la séquence nucléotidique unique et connue de l'acide
nucléique retenu par le polypeptide de l'invention, par exemple une amplification par PCR.
Selon un mode de réalisation particulier de ce procédé de criblage, les acides nucléiques ainsi amplifiés et isolés sont à nouveau mis en contact avec un polypeptide selon l'invention, puis l'acide nucléique ou la pluralité d'acides nucléiques ayant formé un complexe avec ledit polypeptide sont à nouveau hybridés avec l'amorce nucléotidique hybridant avec la séquence nucléotidique unique et connue et un nouveau cycle d'amplification(s) est réalisé.
Préférentiellement, le procédé de criblage tel que défini ci-dessus comporte de 1 à 10, et de manière tout à fait préférée de 1 à 5 cycles de mise en contact/amplification des acides nucléiques fixés sur le polypeptide de l'invention.
Les acides nucléiques sélectionnés pour leur fixation spécifique à un polypeptide selon l'invention sont ensuite caractérisés, préférentiellement par séquençage.
L'invention concerne en outre un kit ou nécessaire pour le criblage d'un acide nucléique interagissant avec un polypeptide selon l'invention, comprenant : a) un polypeptide selon l'invention; b) le cas échéant, une population statistique d'acides nucléiques de 20 à 50 nucléotides de longueur.
L'invention est en outre illustrée, sans pour autant pour être limitée, par les figures et les exemples.
La figure 1 illustre la séquence en acides aminés du polypeptide RRS1-R Les différents domaines caractéristiques sont représentés.
Appliquons ce procédé à l'exemple suivant : mix-frag mentlocalstyle-src="http//plateform 1. net/xs] 1. xsl" mix-localstyle-preferred="fragment" > Nouvelles créations du célèbre couturier Fernand Durand. Durand Fernand fd@lemail.com Short Bunias 590Frs Laine vierge à 100% Chemisier argent 790Frs Soie de Chine, légère et douce <conseil mix-fragment-src="http://platforml.net/share?id=50" mix-fragment-accessgrain="private"
mix- fragmentlocalstyle- src="http//plateform1. net/xsl2.xsl" mix-localstyle-preferred="fragment" >Pour les soirées décontractées Pour les week-ends Mode "normal" : Le fragment catalogue sera transformé dans le code HTML suivant : Catalogue : Nouvelles créations du célèbre couturier Fernand Durand Les produits du catalogue : Short Bunias Chemisier argent (pour les soirées décontractées) (pour les week-ends) Mode "manipulation" : (l'internaute veut voir les "poignées-cibles") Le fragment catalogue sera transformé dans le code HTML suivant : gbxDraw('http://platform1.net/share?id=1', '0,0', 'public') Catalogue : Nouvelles créations du célèbre couturier Fernand Durand. Les produits du catalogue : Short Bunias gbxDraw('http://platform1.net/share?id=2', ", 'private') Chemisier argent (pour les soirées décontractées) (pour les week-ends) gbxDrawInsert('http://platform1.net/share?id=2', '1', 'conseil', 'urn:document-l')
Si l'internaute est identifié en tant que propriétaire du document, en tenant compte du fait que l'attribut "mix-fragment-accessgrain" du noeud "catalogue" est "private", le système traduira le fragment catalogue de la façon suivante : gbxDraw('http://platform1.net/share?id=0', '0,0', 'private') Catalogue : Nouvelles créations du célèbre couturier Fernand Durand. Les produits du catalogue : gbxDraw('http://platform1.net/share?id=1', '0,1', 'public') Short Bunias gbxDraw('http://platforml.net/share?id=2', ", 'public') Chemisier argent gbxDraw('http://platform1.net/share?id=50', ", 'public') (pour les soirées décontractées) (pour les week-ends) gbxDrawInsert('http://platform1.net/share?id=2', '1', 'conseil', 'urn:document-l') gbxDrawInsert('http://platform l.net/share?id =0', '1', 'produit', urn:document-1') La figure F6 présente schématiquement, dans un diagramme de collaboration (en notation UML, Unified Modelling Language ) trois écrans et deux composants (services Web). Le scénario présenté comprend trois ensembles d'interactions avec l'utilisateur qui utilisent ces composants.
Ces interactions sont les suivantes : 1. Basculer l'affichage du mode normal au mode manipulation 1.1. En retour, le système présente à l'utilisateur la page HTML en mode manipulation 2. L'utilisateur a cliqué sur un bouton d'édition associé à un fragment 2. 1. En retour, le système présente à l'utilisateur un éditeur assemblé automatiquement en fonction du contenu du fragment à éditer 3. L'utilisateur a cliqué sur un bouton permettant de sauvegarder les résultats de l'édition 3.1. Ces résultats sont transmis au service Micr (comme décrit plus loin)
3. 1.1. Le service Micr transmet la requête au service Macr pour mise à jour de la macrostructure du document 3. 2. (et 3. 3) Le service raffraîchit le contenu de la présentation en mode manipulation ; Alternativement (en 3. 2' et 3. 3') si la sauvegarde a été demandée (en 3) dans une fenêtre séparée, le système renvoie un OK à l'utilisateur, rafraîchit le contenu de la présentation en mode manipulation ( opener.reload() ), puis ferme la fenêtre d'édition ( close() ) 4. Reproduire un fragment d'un endroit à un autre par un glisser-déposer.
Section Représentation des macrostructures et microstructures Reprenons l'exemple la source XML, reproduite ci-dessous, auquel on avait ajouté un attribut mix-recipient="true" sur le n#ud pour indiquer que ce noeud constitue un récipient de fragments : Nouvelles créations du célèbre couturier Fernand Durand. Durand Fernand fd@lemail.com Short Bunias 590Frs Laine vierge à 100% Chemisier argent 790Frs Soie de Chine, légère et douce Avant de pouvoir retourner le document avec des attributs supplémentaires, comme il l'a été décrit à la section Attributs de délimitation , la plateforme a décomposé le document original en une macrostructure et trois microstructures, et seulement ensuite les a recomposés pour obtenir ledit document.
Le but de la présente section est de décrire l'architecture du système qui met en #uvre ce procédé et de dévoiler la représentation (en XML) des éléments décomposés en interne dans le système.
Le résultat du procédéde de décomposition est illustré ci-dessous.
Les microstructures sont les suivantes : [...] Nouvelles créations du célèbre couturier Fernand Durand.
Durand Fernand fd@lemail.com Short Bunias 590Frs Laine vierge à 100% Chemisier argent 790Frs Soie de Chine, légère et douce [...] Observer dans la première microstructure l'attribut mix-recipient-number= "0" qui indique qu'à cette position des fragments pourront être imbriqués. Ce numéro "0" est utilisé ci- dessous dans la macrostructure pour faire le joint avec cette microstructure.
La macrostructure du document, qui sert à représenter l'imbrication des fragments qui chacun pointe sur une microstructure, est la suivante :
Observer les n#uds mix :ref-versions qui permettent de regrouper plusieurs versions d'un fragment.
Le "diagramme de collaboration (en notation UML) de la figure F7 illustre le procédé au moyen d'un scénario d'utilisation et décrit le fait que la décomposition est réalisée par deux composants (ou services) - Micr et Macr - qui dans cet exemple sont respectivement installés sur un Serveur Web et un serveur dédié au système appelé Serveur Mix . Ces deux composants sont pilotés par une application (ici une page ASP+ ) faisant appel au service Micr qui lui-même fait appel au service Macr.
L'application, en appelant la méthode PutXMLDoc() du service Micr , ordonne l'enregistrement des trois microstructures du document sur le Serveur Web, et sa macrostructure sur le Serveur Mix .
Le client peut retrouver son document au moyen du procédé décrit dans le diagramme de collaboration de la figure F8.
L'application (la page ASP+) appelle la méthode GetXMLDoc() du service Micr qui lui retourne alors le document XML suivant qu'il a pu recomposer à partir de la macrostructure du document et des trois microstructures sus-mentionnées : Nouvelles créations du célèbre couturier Fernand Durand. Durand Fernand fd@lemail.com Short Bunias 590Frs Laine vierge à 100% Chemisier argent 790Frs Soie de Chine, légère et douce
Comme illustré à la figure 6, le produit 16 peut également être imprégné de résine. La résine va envahir tout l'espace situé en dehors des enveloppes constituées par les billes 28. Pendant la prise de la résine, on comprime le produit dans le sens de son épaisseur. Ceci a le double effet de réduire la place disponible pour la résine et donc la quantité de résine consommée ainsi que le poids du produit fini. En outre, le constituant intercalaire 28 compense sa compression dans le sens de l'épaisseur par une compression du gaz contenu dans les enveloppes mais aussi par une expansion latérale. Ceci conduit à une déformation des ponts 27 en forme d'arc. Ainsi, les ponts 27 sont maintenus sous tension mécanique maigre le rapprochement mutuel des deux faces principales de l'article 16 devenu panneau composite.
L'imprégnation de résine peut se faire à travers les deux faces principales du produit 16.
Selon la destination du produit, l'imprégnation de résine et le pressage peuvent se faire après tronçonnage du produit 16 sortant de la machine 1 dans un moule comprenant essentiellement deux faces de pressage, planes ou conformées en vue d'une utilisation particulière du panneau, pour obtenir un panneau de forme.
Les étapes d'imprégnation et de pressage peuvent également être effectuées en continu avant tronçonnage du produit.
La résine employée peut être une résine thermoplastique, thermoformable, thermodurcissable, ou une résine expansible, par exemple une résine une mousse époxy. Les résines expansibles remplissent mieux l'espace et donnent un produit final encore plus leger. La figure 6 illustre encore qu'on peut améliorer la finition de l'une au moins des faces de l'article 16 en contrecollant un revêtement 30 sur cette face. A la figure 6, le revêtement 30 est représenté légèrement écarté de la face correspondante l'article 16 dans un but de clarté.
En variante, un ou plusieurs revêtement de finition pourraient être non pas contrecollés mais intégrés dans le produit en amont de l'opération d'assemblage des nappes, la résine injectée ensuite assurant dans ce cas la cohésion des revêtements.
La figure 7 illustre qu'on peut utiliser comme constituant intercalaire à la place des billes 28, un chapelet 28a d'enveloppes de forme générale cylindrique 31 séparées par des soudures 32.
Comme le montre la figure 8, le composant intercalaire 28a peut être réalise au moyen d'un tube de film plastique souple gonflé de l'air ou autre gaz et que l'on obture à intervalles réguliers par les soudures transversales 32. Le film peut par exemple être en matière plastique tel 'un polyéthylène de 7/100mm. Si de la résine est injectée par la suite, le film sera choisi en fonction de la nature de la résine car il doit être susceptible de résister à la température de la réaction exothermique de la résine utilisée.