INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Figure 7: La figure 7 est une photographie illustrant les niveaux de coloration révélés par un test colorimétrique et mesurés sur des colonies transférées sur filtre nylon. Après transformation de la souche S. cerevisiae par le plasmide pLGY (A) et pLGYm (B) ; les transformant ont été repiqués et mis à croître sur milieu glucose et répliqués sur filtre. Les filtres contenant les colonies ont été transférés durant un temps déterminé sur un milieu contenant ou non des doses sublétales d'eau oxygénée ou de diamide.
Figure 8 : La figure 8 est une illustration d'un exemple de mise en oeuvre d'un procédé de l'invention pour le criblage de protéines ou de polypeptide dont la répartition nucléo-cytoplasmique est contrôlée en réponse à un stimulus spécifique.
A. Matériels et méthodes A.1 Milieux, plasmides et souches Dans les expériences décrites plus loin, les milieux de culture utilisés sont les milieux complets (YPD) ou minimum synthétique glucose (YNB) (24).
Les souches S. cerevisiae utilisées sont la souche S. cerevisiae YPH98 (27), contenant le plasmide pUASlexA-lacZ portant la cassette constituée du gène lacZ sous contrôle d'un promoteur et d'une ou plusieurs séquences de fixation de la protéine LexA, et la souche isogénique portant la délétion yap1#-1 (yap1 ::LEU2) encore appelée Ayapl.
Le plasmide pLEXADBD-GAL4AD (vecteur d'expression) déposé le 13 Juillet 2000 à la CNCM sous le n I-2519 a été construit par l'insertion de la séquence codant le domaine Gal4AD (acide aminé 767 à 880) au site de clonage du vecteur pGilda-LexADBD commercialisé par Clontech. La figure 1 présente un schéma dudit plasmide.
A. 2 Dosage B-qalactosidase Milieu Solide : Les souches de levure ont été mises en culture en milieu minimum liquide additionné des acides aminés nécessaires à sa croissance et contenant du glucose. Ces levures ont ensuite été étalées sur milieu solide identique au milieu liquide pour obtenir une densité d'environ une centaine de colonies par boîte de pétri de 10 cm de diamètre. Après 36 heures à 30 C, les colonies sont transférées par adsorption sur un filtre nylon. Ce filtre est déposé sur le même type de milieu solide que décrit précédemment (colonie dirigée vers le haut) additionné ou non d'une dose de 1 mM d'H202 ou de 0,5 mM de cadmium. Après 8 heures dans ces conditions, les filtres sont plongés dans l'azote liquide (pour perméabiliser les levures) puis déposés (colonie dirigée vers le haut sur un papier Wattman imbibé d'une solution 100 mM tampon phosphate, 10 mM KCI, 10 mM MgS04 et contenant 1 mM de 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-ss-Dgalactopyranoside (X-gal) (substrat de la ss-galactosidase)). Les colonies sont placées à 30 C durant 4 heures afin de révéler la coloration.
Milieu liquide : Les souches de levure sont mises en culture à 30 C dans 20 ml de milieu liquide minimum additionné avec les acides aminés nécessaires à sa croissance et au maintien des plasmides et contenant du glucose. A la densité optique de 0,3, les souches cultivées ont été ou non mises en présence d'une dose sublétale d' H202 (0,2 mM), de diamide (1 mM) ou des deux éléments combinés (0,2 mM d' H2O2 + 1 mM de diamide).
Au temps t=2 heures 0,6 mM d' H202 et 2 mM de diamide ou les deux combinés (0,6 mM d' H202 + 2 mM de diamide) sont ajoutés au milieu de culture. Au temps t=4 heures, les cultures sont arrêtées et centrifugées. Les culots sont congelés à -80 C. Les protéines sont extraites de la façon suivante : les culots sont repris dans 200 l de tampon (0,1 mM Tris-HCI (pH 7,5), 0,2 M NaCI, 0,01 M ss-mercaptoéthanol, 20% glycérol et 5 mM EDTA. Les tubes sont plongés dans l'azote liquide puis décongelés à 30 C.
L'opération est répétée deux fois. 30 l de la suspension est utilisée pour le dosage p-galactosidase et au temps t=0 minute sont ajoutés 3 ml de MgCl2 0. 1 mM, 4. 5 M p-mercaptoéthanol, 3 l de MUG (4-méthyl-umbelliféryl-p-Dgalactoside) 100 mM et 264 l de tampon phosphate de sodium 0,1 M pH 7,5. La réaction est arrêtée à différents temps avec 500 (il de Na2CO3 1M. La lecture du dosage est réalisée au fluorimètre avec comme longueur d'onde d'excitation 365 nm et d'émission 455 nm.
B. Résultats Exemple 1 Validation du procédé de criblage La protéine Yap1 a été utilisée pour explorer la validité du procédé de criblage des domaines polypeptidiques impliqués dans le contrôle de la translocation nucléo-cytoplasmique en réponse à un stimulus spécifique.
Pour cela, une fusion a été réalisée entre lexADBD (DNA Binding Domain, ayant la propriété de se fixer à une séquence d'ADN spécifique : UASlexA), Gal4AD (Activating Domain, ayant la propriété de recruter la polymérase) et Yap1. La construction obtenue est nommée LGY (figure 2A). LexA et Gal4 ne contiennent aucune séquence d'adressage au noyau ; ainsi, la localisation nucléo-cytoplasmique de la fusion est dictée uniquement par le domaine impliqué dans le contrôle de la translocation nucléo-cytoplasmique portée par la protéine Yap1. Une construction analogue a été réalisée avec lexA, Gal4 et Yap1 muté au site de translocation nucléo-cytoplasmique (NES). Cette construction obtenue est nommée LGYm (figure 2B). Cette dernière construction permet de tester l'effet d'une localisation constitutive au noyau de la protéine LGYm sur l'expression du gène rapporteur lacZ (voir plus bas). Une construction exprimant seulement la protéine lexA-Gal4 a été réalisée et nommée LG (figure 2C).
L'ensemble de ces constructions LGY, LGYm et LG a été placé sous le contrôle d'un promoteur inductible au galactose et répressible au glucose et
L'invention a encore pour objet une semence d'une plante transformée telle que définie ci-avant ou encore un fruit d'une telle plante transgénique.
L'invention a encore pour objet toute partie d'une plante transformée telle que définie ci-dessus, et à titre non limitatif les feuilles, les racines ou les tiges.
L'invention concerne aussi un procédé pour induire ou augmenter la résistance d'une plante à l'agression par un pathogène, caractérisé en ce qu'il comprend une étape selon laquelle on met en contact ladite plante avec le polypeptide AKIN11, ou une composition comprenant, à titre de composé actif, le polypeptide AKIN 11.
L'invention a aussi pour objet une composition pour induire ou augmenter la résistance d'une plante à un pathogène, ladite composition comprenant une quantité efficace du polypeptide AKIN11 à titre de principe actif.
SONDES ET AMORCES SELON L'INVENTION L'invention est également relative à l'utilisation de sondes et d'amorces hybridant avec l'ADN génomique ou l'ADNc du gène akin11 pour détecter un caractère de résistance à l'agression par un pathogène chez une plante. En d'autres termes, l'invention vise aussi l'utilisation d'un acide nucléique de akin11 comme marqueur moléculaire d'un phénotype de résistance à un pathogène chez une plante.
Les acides nucléiques selon l'invention, et en particulier les séquences nucléotidiques SEQ ID NO1, 2,4 et 5, leurs fragments d'au moins 12 nucléotides, ainsi que les acides nucléiques de séquence complémentaire, sont utiles pour la détection de la présence d'au moins une copie d'une séquence nucléotidique du gène amin11 ou encore d'un fragment ou d'un variant allélique de cette dernière dans un échantillon.
Fait également partie de l'invention l'utilisation de sondes et amorces nucléotidiques hybridant, dans des conditions d'hybridation de forte stringence, avec un acide nucléique choisi parmi les séquences SEQ ID NO1, 2,4 et 5.
Des sondes ou amorces réalisées à partir des séquences SEQ ID N 1 ou 2 sont utiles pour détecter la présence d'un caractère de résistance à un pathogène.
Des sondes ou amorces réalisées à partir des séquences SEQ ID ? 4 ou 5 sont utiles pour détecter la présence d'un caractère de sensibilité à un pathogène.
Par conditions d'hybridation de forte stringence, au sens de l'invention, on entend les conditions d'hybridation suivantes :
Préhybridation : mêmes conditions que pour l'hybridation durée : 1 nuit.
Hybridation : 5 x SSPE (0.9 M NaCI, 50 mM phosphate de sodium pH 7.7, 5 mM EDTA) 5 x Denhardt's (0.2% PVP, 0.2% Ficoll, 0.2% SAB) 100 ug/ml ADN de sperme de saumon 0.1% SDS durée : 1 nuit.
Lavages : 2 x SSC, 0. 1% SDS 10 min 65 C 1 x SSC, 0.1 % SDS 10 min 65 C 0.5 x SSC, 0.1 % SDS 10 min 65 C 0.1 x SSC, 0. 1% SDS 10 min 65 C.
Les paramètres définissant les conditions de stringence dépendent de la température à laquelle 50% des brins appariés se séparent (Tm).
Pour les séquences comprenant plus de 360 bases, Tm est définie par la relation : Tm= 81,5 + 0,41 (% G+C) +16,6 Log (concentration en cations)- 0,63 (% formamide)- (600/nombre de bases) (SAMBROOK et al., (1989), pages 9.54-9. 62).
Pour les séquences de longueur inférieure à 30 bases, Tm est définie par la relation : Tm= 4 (G+C) + 2 (A+T).
Bien que conservant une structure de champs de données semblable, les informations d'authentification de sceau électronique sécurisées constitutives du champ AS, ainsi que représenté en figure 2d, peuvent alors comprendre le numéro d'identification unique du système d'émission du timbre électronique constituant un sceau électronique IDN, le numéro de séquence d'émission de ce timbre par le système d'émission, champ SEQ, pour bien entendu constituer de même le numéro d'identification unique du sceau électronique U-N-T.
En ce qui concerne la valeur faciale du champ VF, celle-ci peut alors être remplacée avantageusement par la valeur vénale du service de scellement de document, cette valeur vénale étant notée VV et pouvant correspondre au prix payé par le client pour utiliser le service de
scellement de document par apposition du sceau électronique, objet de la présente invention, sur tout document considéré.
Ainsi que représenté de même en figure 2d, le champ relatif à la référence au service d'acheminement peut être conservé sous forme de champ ACH pour assurer l'acheminement de l'objet scellé.
Les champs relatifs à la date et aux données auxiliaires AUX peuvent être conservés de la même manière que dans le cas d'un timbre électronique d'affranchissement.
En ce qui concerne l'information caractérisant l'identité de l'expéditeur, et dans le cas plus spécifique de la figure 2d où le timbre électronique, objet de la présente invention, constitue un sceau électronique, le champ CEX permettant d'identifier l'expéditeur dans le cas du timbre électronique d'affranchissement peut alors avantageusement être remplacé par toute valeur certaine d'identification de l'expéditeur telle qu'un code spécifique introduit par ce dernier et connu du seul destinataire, où le cas échéant une signature électronique permettant d'authentifier l'origine de l'entité ou de la personne expéditeur de l'objet scellé. Pour cette raison, sur la figure 2d, le champ correspondant est noté SEX, ce champ étant réputé correspondre à une signature électronique de l'expéditeur.
En référence à la figure 2d, on comprend ainsi que tout objet scellé, c'est-à-dire sur lequel le sceau électronique, objet de la présente invention, est apposé, permet ainsi d'authentifier l'origine de l'apposition du
sceau électronique considéré avec un degré de certitude très élevé.
On indique en particulier que la valeur de signature électronique S peut alors être calculée sur l'ensemble des champs AS*, lesquels comportent alors obligatoirement le champ relatif au code d'identification de l'utilisateur habilité à apposer ce sceau électronique et en particulier à la signature électronique de ce dernier.
On comprend en particulier que le destinataire de l'objet scellé revêtu du sceau électronique, objet de la présente invention, peut alors procéder successivement à la vérification de la valeur de signature S sur habilitation de l'organisme prestataire de service de scellement de l'objet scellé, et bien entendu, dans les conditions habituelles de vérification de signature, à une vérification du code d'identification de l'utilisateur ou de la signature électronique de ce dernier. L'opération de calcul de signature électronique de l'expéditeur et de vérification de signature de cette signature électronique par le destinataire ne sera pas décrite en détail, car cette opération correspond à une opération connue de l'état de la technique en matière de calcul, respectivement de vérification de signature.
Enfin, dans le but de constituer un sceau électronique de scellement d'un document, tel qu'une missive ou un document contractuel par exemple, les informations d'authentification de sceau électronique sécurisées peuvent comporter en outre une valeur chiffrée représentative du contenu du document scellé. Ainsi que représenté sur la figure 2e précitée, la valeur chiffrée,
représentative du contenu du document scellé, peut être calculée à partir d'une fonction de hachage permettant de réduire tout contenu d'un document, tel qu'un document contractuel ou une missive, en une valeur condensée de format sensiblement fixe prédéterminé. De telles fonctions de hachage sont habituellement mises en oeuvre dans le cadre d'opérations de calcul de signature, respectivement de vérification de signature dans le cadre de l'algorithme RSA précédemment cité dans la description.
Dans ces conditions, lors de l'apposition du sceau électronique, l'utilisateur expéditeur du document calcule la valeur condensée précitée, notée HCONT. Cette valeur, représentative du contenu du document scellé, peut alors être associée, ainsi que représenté en figure 2e, de manière non limitative, aux informations d'affranchissement sécurisées, de suivi d'objet affranchi et de routage supportées par les champs AS, SU, ROUT précédemment mentionnés dans la description.
L'information condensée, relative au contenu du document, HCONT, peut alors avantageusement être concaténée par exemple à la valeur vénale du service de scellement VV, pour constituer un champ composite W-HCONT par exemple.
Lors de la production du timbre électronique constitutif d'un sceau électronique conforme à l'objet de la présente invention tel que représenté en figure 2e, la valeur de signature électronique S de l'ensemble des champs AS* est alors calculée compte tenu, non seulement de la signature électronique de l'expéditeur ou du code d'identification de l'utilisateur habilité à apposer le
sceau électronique, représenté par le champ SEX, mais également du champ composite VV-HCONT.
En sismologie, la localisation des tremblements de terre à partir des sismogrammes enregistrés sur un réseau sismique est omniprésente. Cependant, dans la majorité des cas, cette localisation est estimée en supposant que le milieu de propagation entre la source et les récepteurs sismiques est relativement simple : milieu à vitesse constante, milieu latéralement homogène mais à couches horizontales.... Dans de tels milieux, la description analytique de la propagation des ondes est relativement simple et permet de localiser le tremblement de terre à l'aide de méthodes inverses qui sont appliquées directement aux équations de propagation ou bien qui utilisent des processus d'itération.
En milieu de propagation complexe, ou 3D, il n'est actuellement pas possible d'inverser les équations de propagation des ondes sismiques. Il existe des méthodes itératives, mais d'une part celles-ci ne permettent pas d'évaluer la distribution des localisations possibles,
puisqu'elles ne donnent que la meilleure localisation, et d'autre part, elles peuvent être instables. Un but particulier de l'invention est de proposer un procédé de traitement qui permette d'évaluer avec une grande fiabilité une distribution de probabilités de localisation de l'épicentre d'un séisme, ce traitement pouvant toutefois être étendu de façon plus générale à la distribution de probabilités de toute source génératrice d'ondes.
ETAT DE LA TECHNIQUE Un exemple de signal enregistré sur une station à trois composantes orthogonales, suite à la propagation des ondes sismiques engendrées par un micro-séisme, est illustré sur la figure 1.
Dans tout le présent texte, les terminologies de récepteur ou de station sont utilisées indifféremment pour désigner des capteurs sismiques à trois axes. Par ailleurs, un événement sismique ou microsismique ou bien un tremblement de terre ou encore un séisme sont ici synonymes.
Il a déjà été proposé des traitements permettant d'utiliser l'information des sismogrammes enregistrés par les différents récepteurs d'un réseau afin d'obtenir une distribution de la probabilité de répartition de l'épicentre sismique.
On pourra notamment à cet égard se référer aux articles et publications suivants : Lomax, A., 2000. http : //iapetus. unice. fr : 80/-lomax/nlloc.
Lomax, A., Virieux, J., Volant, P. & Berge, C., 2000. Probabilistic earthquake location in 3D and layered models. Introduction of a Metropolis-Gibbs method and comparison with linear locations, in Advances in Seismic Event Location. Kluwer, Amsterdam. Accepted, in press.
Nelson, G. D. & Vidale, J. E., 1990. Earthquake locations by 3D finite-difference travel times, Bull. Seis. Soc.
Am., 80 (2), 395-410.
Tarantola, A. & Valette, B., 1982. Inverse problems = quest for information, J. Geophys., 50,159-170.
Tarantola, A., 1987. Inverse problem theory. Elsevier, New-York.
Wittlinger, G., Herquel, G. & Nakache T., 1993.
Earthquake location in strongly heterogeneous media, Geophys. J. Int., 115,759-777.
Les traitements présentés dans ces différents articles et publications mettent en oeuvre une détermination à partir des temps d'arrivée des ondes aux récepteurs.
Ces temps d'arrivée pointés sont généralement ceux qui correspondent à l'onde première compressive P et à l'onde seconde de cisaillement S observées sur les sismogrammes enregistrés par les récepteurs sismiques, phases les plus
Compte tenu des quantités d'informations à inclure dans le timbre, c'est-à-dire dans l'image bidimensionnelle, et selon un aspect particulièrement avantageux du timbre électronique objet de la présente invention, le code à barre utilisé est un code à barre bidimensionnel. Parmi les codes à barre bidimensionnels susceptibles d'être utilisés, on indique que les codes à barre les plus courants sont par exemple le code PDF417, le code Asteck ou le code DataMatrix.
De manière plus spécifique, on indique que le code à barre bidimensionnel précité, lorsque ce code à barre utilisé est le code PDF417, peut être ramené à une
succession de lignes codées et, en définitive, à un code à barre monodimensionnel constitué par une succession de lignes mises bout à bout. On observe en particulier sur la figure 1 différents champs représentés dans la structure d'information précitée, lesquels seront explicités ultérieurement dans la description.
D'une manière générale, on indique que le timbre électronique objet de la présente invention, peut être configuré de manière à constituer un timbre électronique d'affranchissement postal par exemple. En outre, le timbre électronique objet de la présente invention peut également être configuré de manière à constituer un sceau électronique permettant de sceller tout document, tel qu'un document contractuel ou une missive par exemple.
Les éléments d'informations permettant de constituer la structure d'information codée et insérée dans l'image précitée seront tout d'abord décrits en liaison avec les figures 2a à 2c suivantes, dans le cas où le timbre électronique objet de l'invention est destiné à constituer un timbre électronique d'affranchissement postal.
Ainsi que représenté sur la figure 2a, les informations précitées comprennent, pour constituer la structure d'information codée et insérée, des informations d'affranchissement sécurisées AS, des informations de suivi d'objet affranchi SU et enfin, des informations de routage d'objet affranchi ROUT. Sur la figure 2a précitée, les informations précédemment mentionnées sont représentées par les champs de données, supports de ces informations.
De préférence, ainsi que représenté de même en figure 2a, les informations d'affranchissement sécurisé et le champ AS comportent au moins, avantageusement, un numéro d'identification unique, noté IDN, du système d'émission du timbre électronique considéré, un numéro de séquence d'émission du timbre par ce système d'émission, introduit dans le champ SEQ, et enfin, la valeur faciale de l'affranchissement correspondant au champ de données VF par exemple.
En ce qui concerne le numéro d'identification unique du système d'émission du timbre électronique IDN, on indique que ce numéro peut correspondre à un numéro de machine de production de timbres électroniques conformes à l'objet de la présente invention, ce numéro de production étant établi et délivré par l'organisme ou l'entité habilité à commercialiser et à distribuer les timbres électroniques précités ou à concéder une telle commercialisation à des tiers habilités.
En ce qui concerne la valeur faciale de l'affranchissement supportée par le champ VF, cette valeur faciale, conformément à un aspect avantageux du timbre électronique objet de la présente invention, peut être exprimée en nombre d'unités postales de compte, par exemple. L'expression de la valeur faciale de l'affranchissement considéré en unités postales de compte permet de rationaliser la diffusion de timbres électroniques d'affranchissement, objets de la présente invention, indépendamment de la valeur proprement dite de chaque unité postale de compte exprimée en monnaie nationale.
En outre, ainsi que représenté en figure 2a, les informations d'affranchissement sécurisées comportent au moins une référence au service d'acheminement demandé, supportée par le champ ACH, le service d'acheminement pouvant être codé en fonction du service d'acheminement requis par l'utilisateur du timbre électronique objet de l'invention considérée, selon un acheminement normal, lent, requérant un suivi de l'objet acheminé revêtu du timbre électronique objet de l'invention, en recommandé, avec assurance ou autre.
En outre, ainsi que représenté sur la figure 2a, les informations d'affranchissement sécurisées peuvent avantageusement comporter une valeur de signature électronique de tout ou partie des informations d'affranchissement sécurisées.
Sur la figure 2a, on a représenté le champ global relatif aux informations d'affranchissement sécurisées AS comme constitué de la concaténation des champs précédemment cités. Dans ces conditions, la valeur de signature électronique S est obtenue par une opération de signature S de l'ensemble des champs constitutifs du champ relatif à l'information d'affranchissement sécurisée AS duquel est ôtée la valeur de signature proprement dite.
Dans ces conditions, on comprend que pour une opération de signature S, la valeur de signature électronique S est obtenue selon la relation symbolique : Dans cette relation, on indique que AS* correspond au champ AS relatif à l'information d'affranchissement
sécurisée, compte non tenu bien entendu de la valeur de signature S.
Dans ces conditions, l'ensemble des champs soumis à l'opération de signature AS* vérifie la relation :
On comprend que dans un processus opératoire de calcul de signature S, cette signature peut être calculée à partir des champs de numéro d'identification unique IDN, de séquence d'émission SEQ, de valeur faciale de l'affranchissement VF, de service d'acheminement ACH, plus d'autres champs susceptibles de constituer en fait les informations d'affranchissement sécurisées, la valeur de signature S après calcul étant alors concaténée à l'ensemble des champs précités pour constituer finalement le champ AS relatif aux informations d'affranchissement sécurisées précédemment cité. Le champ relatif à la valeur de signature électronique S peut alors être inséré entre le champ relatif à la référence au service d'acheminement demandé ACH et tout champ supplémentaire entrant dans la constitution du champ relatif aux informations d'affranchissement sécurisées. La position de concaténation du champ de la valeur de signature électronique S peut être quelconque parmi les champs précités.