INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
- Les gènes associés avec des maladies du métabolisme des graisses et des acides gras, comme par exemple lipoprotéine lipase, apolipoprotéine C-II, apolipoprotéine E, d'autres apolipoprotéines, lécithine cholestérolacyltransférase, récepteur des LDL, stérol hydroxylase du foie, " acide phytanique " a-hydroxylase.
- Les gènes associés avec des déficiences lysosomales, comme par exemple a-L-iduronidase lysosomale, iduronate sulfatase lysosomale, héparan N-sulfatase lysosomale, N-acétayl-a-D-glucosaminidase lysosomale, acétyl-CoA : a-glucosamine N-acétyltransférase lysosomale, N- acétyl-a-D-glucosamine 6-sulfatase lysosomale, galactosamine 6-sulfate sulfatase lysosomale, ss-galactosidase lysosomale, arylsulfatase B lysosomale, ss-glucuronidase lysosomale, N-acétylglucosaminyl- phosphotransférase, a-D-mannosidase lysosomale, a-neuraminidase lysosomale, aspartylglycosaminidase lysosomale, a-L-fucosidase lysosomale, lipase acide lysosomale, céramidase acide lysosomale, sphingomyelinase lysosomale, glucocérébrosidase lysosomale et galactocérébrosidase lysosomale, galactosylcéramidase lysosomale, arylsulfatase A lysosomale, a-galactosidase A, ss-galactosidase acide lysosomale, chaîne a de l'hexosaminidase A lysosomale.
On peut également citer, de façon non restrictive, les gènes associés avec des maladies du métabolisme des stéroïdes et des lipides, les gènes associés avec des maladies du métabolisme des purines et des pyrimidines, les gènes associés à des maladies du métabolisme de la porphyrine et de l'hème, les gènes associés à des maladies du métabolisme du tissu conjonctif, des et des os ainsi que les gènes associés avec des maladies du sang et des organes hématopoïétiques, des muscles (myopathie), du système nerveux (maladies neurodégénératives) ou de l'appareil circulatoire (traitement des ischémies et de la sténose par exemple) et les gènes impliqués dans les maladies génétiques mitochondriales.
La présente invention se rapporte également à l'utilisation de l'association telle que précédemment décrite pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de certaines anomalies ou déficiences
génétiques, telles que par exemple les maladies génétiques mitochondriales, l'hémophilie, et la p-thalassémie.
En outre, elle a pour objet l'utilisation de l'association selon l'invention pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention de certaines maladies telles que par exemple l'ischémie, la sténose, les myopathies, les maladies neurodégénératives, les maladies du métabolisme telles que les maladies lysosomales, les maladies inflammatoires telles que la polyarthrite rhumatoïdes, les troubles hormonaux tels que le diabète, les maladies cardiovasculaires telles que l'hypertension, les hyperlipidémies telles que l'obésité.
La présente invention a encore pour objet l'utilisation de l'association telle que précédemment décrite pour la préparation d'un médicament anticancéreux, ou pour la préparation de vaccins, par exemple ADN antitumoral.
Les nombreux exemples qui précèdent et ceux qui suivent illustrent l'étendue potentielle du champ d'application de la présente invention.
Un autre aspect de la présente invention se rapporte à des animaux transgéniques qui expriment un transgène d'intérêt codant pour ou transcrit d'intérêt ainsi qu'un transgène inhibiteur codant pour un transcrit inhibiteur spécifique du transcrit d'intérêt dans un ou plusieurs types cellulaires. Les méthodes de génération d'animaux transgéniques particulièrement de souris transgéniques, sont maintenant bien connues de l'homme du métier, et sont notamment décrites par Hogan et al. (1986) A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York, Cold Spring Harbor Laboratory.
Selon la présente invention, les acides nucléiques précédemment décrits sont transférés dans des ovocytes fertilisés non humains par microinjection, en implantant l'ovocyte chez une femelle porteuse, afin que celui-ci se développe. Généralement, les acides nucléiques sont intégrés
dans le génome de la cellule à partir de laquelle l'animal transgénique se développe et restent dans le génome de l'animal adulte, de sorte qu'une expression du transgène d'intérêt et du transgène inhibiteur dans une ou plusieurs cellules ou tissus de l'animal transgénique peut être observée. Les animaux transgéniques portant les séquences nucléiques du transgène d'intérêt et du transgène inhibiteur peuvent être également être croisés à d'autres animaux transgéniques portant d'autres transgènes.
Comme animaux transgéniques ainsi produits, on peut citer par exemple une souris, une chèvre, un mouton, un cochon, une vache ou tout autre animal domestique. De tels animaux transgéniques ont un phénotype semblable aux animaux sauvages, toutefois le transgène ou transcrit d'intérêt est restauré lorsque l'on administre à l'animal un agent externe répresseur du transcrit inhibiteur et/ou d'un agent activateur de l'activité du transcrit d'intérêt.
Ces animaux transgéniques sont utilisés pour simuler la physiopathologie de certaines maladies humaines ou animales et constituent donc des modèles expérimentaux des maladies humaines ou animales. Par exemple, chez un animal hôte, le transgène d'intérêt susceptible d'être impliqué dans une pathologie peut être cointroduit avec son transgène inhibiteur spécifique, sans provoquer l'apparition d'un phénotype particulier. L'expression du transgène d'intérêt étudié peut ensuite être modulée par l'administration d'un agent externe répresseur du transcrit inhibiteur, et/ou d'un agent externe activateur du transcrit d'intérêt, afin de déterminer la relation qui existe entre l'expression de ce gène et l'apparition d'un phénotype pathologique. Une telle approche présente un certain avantage sur la technique usuelle d'invalidation ( knock out) puisque les animaux transgéniques selon la présente invention permettent non seulement une inactivation totale d'un transgène d'intérêt, mais également réversible ainsi que la possibilité de réguler son expression de manière plus efficace.
Un dernier aspect de la présente invention se rapporte à des cellules végétales et des plantes transgéniques comprenant dans leur génome un acide nucléique comprenant la séquence d'un transgène d'intérêt codant pour un transcrit d'intérêt et un acide nucléique comprenant la séquence d'un transgène inhibiteur codant pour un transcrit inhibiteur spécifique du transcrit d'intérêt. Ces plantes peuvent être obtenues par les techniques habituelles de transgénèse végétale. Des plasmides portant les acides nucléiques codant pour le transgène ou le transcrit d'intérêt et pour le transcrit inhibiteur placés sous le contrôle de promoteurs de transcription naturellement fonctionnels chez les plantes sont introduits par exemple dans une souche d'Agrobacterium tumefaciens. La transformation des plantes peut être ensuite réalisée en utilisant les protocoles de transformation et de régénération standard (Deblaere et al., Nucleic Acid Research 13 (1985) 4777-4788 ; Dinant et al., European Journal of Plant Pathology 104 (1998) 377-382).
On peut utiliser des promoteurs constitutifs tels que par exemple le promoteur 35S du virus de la mosaïque du choux-fleurs (CaMV) (Odell et al., Nature 313 (1985) 810-812). Pour diriger l'expression du transcrit d'intérêt, on peut utiliser des promoteurs inductibles, tels que les promoteurs inductibles par les glucocorticoïdes qui est activé entre autres par la dexaméthasone (Aoyama et al., Plant J. 11 (1997) 605-612 ; et al., Gène Expression in Plants (1999) 44-59), le système inductible par l'éthanol (Caddick et al., Nat Biotechnol, 16 (1998) 177-180), les systèmes d'activation transcriptionnel par les hormones stéroïdiennes telles que le p- estradiol (Bruce et al., Plant Cell 12 (2000) 65-80). Alternativement, on utilise un système transcriptionnel inductible à l'ecdysone tel que décrit par Martinez et al. (Plant J, 19 (1999) 97-106) qui fonctionne avec un activateur hybride contenant les séquences de transactivation de récepteur des glucocorticoïdes (GR) et de VP16, le domaine de liaison à l'ADN du GR, et
(i) l'un et/ou l'autre des réactifs de départ à partir desquels sont préparés les POS multifonctionnels, lorsque le taux de transformation desdits réactifs n'est pas complet ; et/ou (ii) le (ou les) produit(s) issus (s) d'une modification complète ou incomplète du squelette silicone du (ou des) réactif (s) dedépart ; et/ou (iii) le (ou les) produit(s) issu (s) d'une modification du squelette silicone du POS multifonctionnel souhaité, réalisée par une réaction de condensation, une réaction d'hydrolyse et de condensation et/ou une réaction de redistribution.
Pour être plus précis, sont compris dans la portée de l'invention les composés organosiliciques qui comprennent des POS multifonctionnels, choisis dans la famille des POS conformes à la formule (1), qui sont essentiellement linéaires et possèdent la formule moyenne suivante : (III) dans laquelle : (1') les symboles T1 sont choisis parmi les motifs HO1/2 et R1O1/2, où le radical R1 est tel que défini ci-avant ; (2') les symboles T2, identiques ou différents des symboles T1, sont choisis parmi les motifs H01/2. R1Oi/2 et le motif (R2)3Si0112 , où les radical R1 et RZ sont tels que définis ci-avant aux points (2) et (1) concernant la formule (I) ; (3') les symboles R2, X et Y sont tels que définis ci-avant aux points (1), (3) et (2) concernant la formule (1) ; (4') les symboles R6 sont choisis parmi les radicaux répondant aux définitions de R2, X et Y; (5') les symboles m, n, p, q, r, s et t représentent chacun des nombres entiers ou fractionnaires qui répondent aux conditions cumulatives suivantes : # m et t sont l'un et l'autre des nombres toujours différents de zéro dont la somme est égale à 2 + s, # n se situe dans l'intervalle allant de 0 à 100, # p se situe dans l'intervalle allant de 0 à 100, # q se situe dans l'intervalle allant de 0 à 100, ' r se situe dans l'intervalle allant de 0 à 100,
# s se situe dans l'intervalle allant de 0 à 75, # quand n = 0, p est toujours un nombre différent de zéro et quand p = 0, n est toujours un nombre différent de zéro, # la somme n + p + q + r + s +t donnant le nombre total d'atomes de silicium se situe dans l'intervalle allant de 2 à 250, # le rapport 100 s / (n + p + q + r + s + t) donnant le taux de motifs "T" est 5 à 30 et, de préférence, à 20, # le rapport 100 (m + p + r + s [quand R6 = Y].+ t)/(n+p+q+r+s+t) donnant le taux de fonctions Y (apportée par les motifs représentés par les symboles T1, T2et Y) est 1 et, de préférence, va de 4 à 100, # le rapport 100 (n + p + s [quand R6 = X]) / (n + p + q + r + s + t) donnant le taux de fonctions X est >1 et, de préférence, va de 2 à 100.
Comme composés organosiliciques qui sont préférentiellement visés, on peut citer :eux comprenant les oligomères et les polymères POS/1 essentiellement linéaires qui répondent à la formule (III) dans laquelle (on parlera alors, en abrégé, dans ce qui suit, de polymères POS/1 de type imide) : (1") les symboles T1 sont définis comme indiqué ci-avant au point (1') ; (2") les symboles T2, sont définis comme indiqué ci-avant au point (2') ; (3") les symboles R2 , X et Y sont définis comme indiqué ci-avant aux points (3') ; (4") les symboles R6 sont définis comme indiqué ci-avant au point (4') ; (5") les symboles m, n, p, q, r, s et t répondent aux conditions cumulatives suivantes : # m+t=2+s, # n se situe dans l'intervalle allant de 0 à 50, # p se situe dans l'intervalle allant de 0 à 20, # quand n = 0, p est au moins égale à 1 et quand p = 0, n est au moins égal à 1, # q se situe dans l'intervalle allant de 0 à 48, # r se situe dans l'intervalle allant de 0 à 10, # s se situe dans l'intervalle allant de 0 à 1, # la somme n + p + q + r + s +t donnant le nombre total d'atomes de silicium se situe dans l'intervalle allant de 2 à 50, # le rapport 100 s / (n + p + q + r + s + t) donnant le taux de motifs "T" est # à 10, #le rapport 100 (m + p + r + s [quand R8 = Y] + t)/ (n+p+q+r+s+t)donnantle taux de fonctions Y (apportée par les motifs représentés par les symboles T1, T2et Y) va de 4 à 100 et mieux de 10 à 100, # le rapport 100 (n + p + s [quand R6 = X] ) / (n + p + q + r + s + t) donnant le taux de fonctions X va de 10 à 100, et mieux de 20 à 100.
Sont compris encore dans la portée de l'invention, les composés organosiliciques qui comprennent des POS multifonctionnels, choisis dans la famille des POS conformes à la formule (1), qui sont cydiques et possèdent la formule moyenne suivante : dans laquelle : (3"') les symboles R2, X et Y sont tels que définis ci-avant aux points (1), (3) et (2) concernant la formule (1) ; (5"') les symboles n', p', q' et r' représentent chacun des nombres entiers ou fractionnaires qui répondent aux conditions cumulatives suivantes : # n' se situe dans l'intervalle allant de 0 à 9, # p' se situe dans l'intervalle allant de 0 à 9, - quand n' = 0, p' est au moins égal à 1, # quand p'= 0, n' est au moins égal à 1 et r' est aussi au moins égal à 1, # q' se situe dans l'intervalle allant de 0 à 9, # r' se situe dans l'intervalle allant de 0 à 2, # la somme n' + p' + q' + r' se situe dans l'intervalle allant de 3 à 10, # le rapport 100 (p' + r') / (n' + p' + q' + r') donnant le taux de fonction Y va de 4 à 100, # le rapport 100 (n' + p') / (n' + p' + q' + r') donnant le taux de fonction X va de 10 à 100.
A noter que ces POS multifonctionnels cycliques peuvent être obtenus en mélange avec les POS multifonctionnels essentiellement linéaires de formule (III).
SECOND OBJET DE L'INVENTION Le second objet de la présente invention concerne les procédés grâce auxquels les composés organosiliciques selon l'invention, comprenant les POS multifonctionnels conformes aux formules (1), (III) et (III") données ci-avant, pouvent être préparés.
Ces procédés font intervenir notamment :
- une réaction d'hydrolyse et de condensation d'un dihalogénosilane ou d'un dialkoxysilane porteurs d'une fonction X, en présence éventuellement d'un dihalogénosilane ou d'un dialkoxysilane, une réaction de condensation entre un organosilane porteur d'une fonction X et d'au moins deux fonctions Y, et un POS linéaire [alpha],#-dihydroxylé, - une réaction de redistribution et d'équilibration entre un organosilane porteur d'une fonction X et d'au moins deux fonctions Y et/ou halogéno, et un organocyclosiloxane pouvant éventuellement porté une ou plusieurs fonctions Y dans la chaîne, une réaction de couplage entre un organosilane porteur d'une fonction X de formule (11/2) et d'au moins deux fonctions Y, et un polysilazane, - une réaction de couplage entre un POS précurseur, linéaire ou cyclique, porteur d'au moins une fonction Y et fonctionnalisé avec au moins un motif attaché à un atome de silicium notamment de type -alkylène (linéaire ou ramifié en C2 -C6)-OH, -alkylène (linéaire ou ramifié en C2 -C6)-NR6H ou -alkylène (linaire ou ramifié en C2 -Ce)- COOH, et un composé réactif capable de réagir avec le (ou les) motif (s) précité(s) pour donner naissance à la fonction X souhaitée.
Plus précisément,on prépare les composé organosiliciques comprenant les POS multifonctionnels conformes aux formules (1), (III) et (III') par un procédé qui consiste par exemple (a) à hydrolyser en milieu aqueux un organosilane de formule : où les symboles R2et X [qui possède la formule (11/1)] ont les définitions déjà données ciavant, en opérant éventuellement en présence d'un organosilane de formule : Pareil procédé est bien adapté pour préparer des composés organosiliciques comprenant des POS multifonctionnels de formule (III) où les symboles T1 et T2 représentent, l'un et l'autre, le motif HO1/2 et où d'une part p = r = s = 0 et d'autre part q est soit égal à zéro [quand on hydrolyse le silane (IV) en absence du silane (V)], soit un nombre différent de zéro [quand on hydrolyse le silane (IV) en présence du silane (V)]. En ce qui concerne la
manière pratique de mettre en #uvre ce procédé, on se reportera pour plus de détails au contenu de FR-A-2.514.013 ; (b) à condenser, éventuellement en présence d'un catalyseur à base par exemple d'un carboxylate d'étain, un organosilane de formule : dans laquelle les symboles R1, R2 et X [qui possède la formule (II/1)] sont tels que définis ci-avant et d est un nombre choisi parmi 2 ou 3, avec un POS de formule : dans laquelle le symbole R2est tel que défini ci-avant et e est un nombre entier ou fractionnaire allant de 2 à 50. Pareil procédé est bien adapté pour préparer des composés organosiliciques comprenant des POS multifonctionnels de formule (III) où les symboles T1 et T2 résident dans un mélange de motifs HO1/2 avec des motifs R1O1/2 et où les symboles p, r et s peuvent être différents de zéro quand d = 3, tandis que, quelle que soit la valeur de d, q est différent de zéro. En ce qui concerne la manière pratique de mettre en #uvre ce procédé, on peut se reporter pour plus de détails au contenu de USA-3.755.351 ; (c) à réaliser une réaction de redistribution et équilibration, en présence d'un catalyseur approprié et d'eau, entre d'une part un organosilane de formule : dans laquelle le symbole R2et X [qui possède la formule (II/1)] sont tels que définis ciavant, le symbole Z est choisi parmi les radicaux hydroxyle, R'O et halogéno (comme par exemple le chlore) et f est un nombre choisi parmi 2 ou 3, et d'autre part un organocyclosiloxane de formule :
dans laquelle les symboles R2sont tels que définis ci-avant et g est un nombre allant de 3 à 8, et éventuellement un POS dihydroxylé de formule (VII). Pareil procédé est bien adapté pour préparer encore des composés organosiliciques comprenant des POS de formule (III) où les symboles T1 et T2 représentent les motifs HO1/2 et le symbole q est différent de zéro.
Les composés organosiliciques qui sont préférentiellement visés dans le cadre de l'invention sont ceux comprenant les polymères POS/1 de type imide. Un mode opératoire avantageux, pour préparer les composés organosiliciques comprenant les polymères POS/1 de type imide, correspond à un procédé (d) qui permet de préparer des composés comprenant des polymères POS/1 de type imide dans la formule (III) desquels le symbole q est égal à zéro et consiste à réaliser les étapes (d1) et (d2) suivantes : (d1) on fait réagir: - un organosilane de formule (VI) où le symbole X représente la fonction de formule (11/2), c'est-à-dire un organosilane de formule : - avec un disilazane de formule : (R2)3Si-NH-Si(R2)3 (XI) formules dans lesquelles les symboles R1, R2, R3. R4 et R5sont des radicaux répondant aux définitions données aux points (1) à (3) concernant la formule (I), et d est un nombre choisi parmi 2 ou 3,
- cette réaction étant effectuée en présence d'un catalyseur, supporté ou non sur une matière minérale (comme par exemple une matière siliceuse), à base d'au moins un acide de Lewis, en opérant à la pression atmosphérique et à une température se situant dans l'intervalle allant de la température ambiante (23 C) à 150 C, et, de préférence, allant de 60 C à 120*C ; (d2) on procède à la stabilisation du milieu réactionnel obtenu par traitement de ce dernier avec au moins un halogénosilane de formule (R2)3 Si-halogéno où le reste halogéno est choisi de préférence parmi un atome de chlore ou brome, en opérant en présence d'au moins une base organique non nucléophile et non réactive vis-à-vis de la fonction imide formée in situ au cours de l'étape (d1).
Le disilazane est utilisé en quantité au moins égale à 0,5 mole pour 1 mole d'organosilane de départ et, de préférence, allant de 1 à 5 moles pour 1 mole d'organosilane.
L'acide de Lewis préféré est le ZnCI2 et/ou ZnBr2 et/ou le Znl2. Il est utilisé en quantité au moins égale à 0,5 mole pour 1 mole d'organosilane et, de préférence, allant de 1 à 2 moles pour 1 mole d'organosilane.
De préférence, le ou les récipients de stockage mentionnés en (iii) et (xi) ci-dessus sont des poches de stockage, qui sont avantageusement jetables. Il est préférable que le récipient de stockage de (iii) soit différent du 'récipient de stockage de (xi), le premier étant un récipient de stockage d'entrée et le dernier étant un récipient de stockage de sortie.
De préférence, le moyen de transfert supplémentaire (v) comprend un réservoir d'agent afin de garantir qu'une quantité d'agent suffisante soit disponible à n'importe quel moment. Lorsque le moyen de transfert consiste en une
seringue, le réservoir peut être muni d'une seringue supplémentaire, de telle sorte que, lorsqu'une seringue devient vide, l'autre seringue commence à fournir l'agent.
De préférence, le moyen de régulation de concentration de dioxyde de carbone destiné à réguler la concentration de dioxyde de carbone dans la chambre comprend une valve, qui permet l'introduction d'une quantité prédéterminée de dioxyde de carbone à partir d'une bouteille de gaz. La quantité prédéterminée de dioxyde de carbone est calculée en utilisant le volume connu d'air dans la chambre, la tubulure et le récipient de stockage de sortie et le volume mesuré de la population cellulaire provenant du récipient de stockage d'entrée. De manière convenable, le dioxyde de carbone est introduit dans la chambre par un orifice qui est le même que celui servant à ajouter l'agent ; de cette manière, le dioxyde de carbone peut être utilisé pour purger la totalité de l'agent restant dans l'orifice et le dispositif environnant. Outre ce qui précède, le moyen de régulation de concentration de dioxyde de carbone peut comprendre en outre une poche d'air gonflable destinée à recevoir le volume supplémentaire d'air résultant de l'introduction d'une quantité supplémentaire de dioxyde de carbone dans le système. En variante, le récipient de stockage d'entrée, une fois vide, peut jouer le rôle de poche d'air. De préférence, du dioxyde de carbone est introduit pour produire une concentration finale de 5 % dans la chambre.
Le moyen de régulation de température (vii) peut comprendre convenablement un moyen de chauffage, moyen de chauffage qui peut être muni d'une plaque chauffante placée par exemple au-dessous de la chambre. En variante, le moyen de chauffage peut être muni d'une chemise de circulation d'eau chauffée située en position adjacente à la chambre ou à une partie de cette chambre. Il est nettement préféré que la température dans la chambre soit régulée dans l'intervalle d'environ 25 C à environ 37 C.
Le moyen de mélange (viii) comprend de préférence au moins une branche de pale, qui tourne lentement afin de mélanger la population cellulaire et l'agent dans la chambre. En variante, il est possible d'utiliser un agitateur magnétique. A titre de variante supplémentaire, la chambre peut être agitée mécaniquement, par exemple par agitation douce par secousses. Un avantage de l'utilisation d'un moyen de mélange comprenant au moins une branche de pale consiste en le fait que la branche peut être également conçue pour jouer le rôle de racleur au cours de la collecte des cellules, c'est-à-dire de telle sorte que, lorsque la branche tourne lentement, les cellules fixées à la surface de la chambre soient délogées doucement. De manière avantageuse, le moyen de mélange peut fonctionner pour effectuer un mouvement giratoire.
De préférence, le moyen d'évacuation (xi) comprend une pompe péristaltique. Avantageusement, le moyen d'évacuation aspire la population cellulaire, comprenant les cellules indifférenciées, à travers un orifice de sortie au fond de la chambre et dans le récipient de stockage de sortie par un moyen d'interconnexion tel que, par exemple, une tubulure.
En remplacement ou en plus du moyen d'évacuation, un agent séquestrant et/ou chélatant les ions libres, par exemple un anticoagulant tel que l'EDTA, peut être introduit dans la chambre avant l'évacuation d'une population de cellules hors de cette chambre.
L'introduction d'un tel agent séquestrant et/ou chélatant les ions dans la chambre provoque la dissociation des colonies de cellules souches en une suspension de cellules isolées et facilite donc l'évacuation des cellules de la chambre par un moyen de balayage.
Le moyen d'obturation hermétique (xii) comprend de préférence un dispositif de thermosoudage, dispositif de thermosoudage qui ferme le récipient de stockage de sortie en pressant ensemble deux parties du récipient ou deux