INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Les changements de la peau dus au vieillissement intrinsèque sont la conséquence d'une sénescence génétiquement programmée où interviennent des facteurs endogènes. Ce vieillissement intrinsèque provoque notamment un ralentissement du renouvellement des cellules de
la peau, ce qui se traduit essentiellement par l'apparition d'altérations cliniques telles que la réduction du tissu adipeux sous-cutané et l'apparition de fines rides ou ridules, et par des changements histopathologiques tels qu'une augmentation du nombre et de l'épaisseur des fibres élastiques, une perte de fibres verticales de la membrane du tissu élastique, et la présence de grands fibroblastes irréguliers dans les cellules de ce tissu élastique.
Au contraire, le vieillissement extrinsèque entraîne des altérations cliniques telles que des rides épaisses et la formation d'une peau molle et/ou tannée, et des changements histopathologiques tels qu'une excessive accumulation de matière élastique dans le derme supérieur et une dégénérescence des fibres de collagène.
Les dégradations protéolytiques observées lors du processus de desquamation seraient induites par des protéases synthétisées par le stratum corneum, en particulier l'enzyme apparentée à la chymotrypsine du stratum corneum (SCCE). H a été par ailleurs montré que des glycosidases d'origine Iysosomiale sont externalisées au cours de la différenciation terminale de l'épiderme (Nemanic et al., J. of Invest. Dermat., 1983,81 : 28- 33). Néanmoins, la caractérisation des substrats de ces glycosidases au niveau du stratum corneum n'a que peu progressé et le rôle biologique de ces glycosidases n'a pas été clairement élucidé.
Il a été observé que la présence de résidus saccharidiques sur les protéines protège les structures desmosomales et les glycoprotéines des cornéosomes d'une dégradation protéolytique induite artificiellement par l'addition de protéases (Walsh et Chapman (1990), Arch Dermatol Res 282 : 304-310).
L'invention est également relative à des vecteurs recombinants de clonage et/ou d'expression comprenant un acide nucléique selon l'invention ainsi qu'à des cellules hôtes transformées par un acide nucléique ou un vecteur recombinant de l'invention, en particulier des cellules hôtes d'origine végétale.
L'invention a également pour objet une plante transformée par un acide nucléique ou un vecteur recombinant tel que défini ci-dessus ainsi que leurs procédés d'obtention.
L'invention a également trait à un polypeptide codé par un acide nucléique selon l'invention.
DESCRIPTION DE L'ETAT DE LA TECHNIQUE Les angiospermes, ou plantes à fleurs, se caractérisent par leur mode de reproduction sexué par double fécondation. Deux gamètes mâles sont transportés par le tube pollinique et pénètrent dans l'ovule, puis dans le sac embryonnaire. Tandis que l'un va féconder l'oosphère pour donner un embryon diploïde, l'autre s'unit aux deux noyaux polaires de la cellule centrale, permettant ainsi la formation d'un deuxième organisme, celui-ci triploïde, appelé albumen ou embryon accessoire. Pendant la phase précoce de développement, de 0 à 12 JAP tour après pollinisation), après un développement syncitial, l'albumen se cellularise, et des territoires cellulaires se différencient au sein de cet organisme principalement en quatre zones.
L'une de ces zones est l'albumen amylacé, qui à maturité occupe environ les deux tiers du volume du grain et est un lieu de stockage des différentes substances de réserve dont l'amidon. Une seconde zone principale est la couche à aleurone, constituée des cellules à la périphérie de l'albumen et qui synthétise des enzymes hydrolytiques essentielles lors de la mobilisation des réserves nécessaires à la germination. Une troisième zone principale est la zone ESR ( embryo surrounding region ) qui entoure l'embryon, puis se limite au pourtour du suspenseur à partir de sept JAP et est formée de
petites cellules au cytoplasme dense qui serait impliqué dans le transfert de métabolites vers l'embryon.
La quatrième zone principale consiste en la zone de transfert qui permet le passage de nutriments depuis les tissus maternels jusqu'à l'albumen et l'embryon en développement.
C'est lors de la phase précoce du développement que se mettent en place les structures majeures qui constitueront le futur grain. Or, très peu de gènes spécifiques de cette phase sont connus, et leur fonction n'a pas été déterminée.
La zone de transfert est l'endroit clef qui préside au contrôle de la quantité et/ou de la qualité des métabolites qui transitent de la plante mère vers le grain.
Il existe un besoin dans l'état de la technique de disposer de séquences régulatrices s'exprimant de manière prépondérante, ou même de manière exclusive, dans la zone de transfert, qui puissent être intégrées dans des cassettes d'expression comprenant de telles séquences régulatrices contrôlant l'expression d'un gène d'intérêt, afin de modifier qualitativement ou quantitativement le contenu en métabolites de l'albumen du grain, en vue de l'obtention de grains matures, en particulier de céréales, ayant des caractéristiques de constitution améliorées, par exemple nutritives ou industrielles.
Il existe également un besoin dans l'état de la technique d'identifier des protéines exprimées spécifiquement dans la zone de transfert pendant la formation de l'albumen, qui sont susceptibles d'être impliquées dans le passage de nutriments de la plante mère vers l'albumen en développement, et dont une modulation de l'expression permettrait de contrôler la qualité ou la quantité de nutriments présente dans l'albumen du grain mature.
A la connaissance du demandeur, seules quelques protéines ont. été décrites dans l'état de la technique comme étant exprimées de manière prépondérante dans la zone de transfert du grain. L'article de HUEROS et al.
(1999a) concerne l'étude de l'expression du gène BETL1 de maïs et divulgue qu'une séquence de 985 bp localisée en amont du gène BETL 1 a peut contrôler l'expression d'un gène rapporteur dans des plants de maïs transgéniques. Toutefois, la séquence nucléotidique du promoteur du gène BETL1 a n'est pas décrite dans cet article.
L'article de HUEROS et al. (1995) décrit la protéine BETL1 ayant une séquence de 85 acides aminés de longueur, ainsi que la séquence nucléotidique codant pour cette protéine et montre l'expression du gène BETL1 dans les cellules de transfert de l'endosperme du maïs. Cet article divulgue la séquence de l'ARN messager qui constitue le produit de transcription du gène BETL1 mais ne décrit aucune séquence génomique de ce gène.
L'article de HUEROS et al. (1999b) présente la séquence en acides aminés des protéines BETL-2, BETL-3 et BETL-4 qui sont également exprimés principalement dans la zone de transfert du grain. Cet article décrit également de courtes séquences nucléotidiques partielles localisées en amont de ces gènes susceptibles d'intervenir dans la régulation de leur expression dans la plante. Toutefois, aucune séquence complète d'un promoteur fonctionnel n'est décrite.
Le demandeur s'est attaché à identifier et caractériser de nouveaux gènes exprimés spécifiquement dans les cellules de la zone de transfert du grain, tout particulièrement pendant le développement de l'albumen, dans le but d'identifier : a) des séquences régulatrices spécifiquement exprimées dans la zone de transfert du grain qui peuvent être utilisées pour contrôler l'expression de séquences d'intérêt, préférentiellement de séquences codant pour des protéines, par exemple des enzymes, des protéines impliquées dans la défense de la plante vis-à-vis de stress externes tels que des pathogènes, des protéines signal intervenant dans la communication entre la plante mère et l'albumen ou l'embryon ou encore entre l'albumen et l'embryon, des protéines marqueurs (luciférase, GUS, GFP, etc...) des protéines cytotoxiques (Barnase, toxine diphtérique, etc. ). Parmi les enzymes, on peut citer celles permettant de modifier la quantité ou la qualité des métabolites transférés de la plante mère vers l'albumen en développement afin d'obtenir des grains matures ayant des caractéristiques, notamment nutritives ou industrielles améliorées. b) des séquences codant pour des protéines qui sont naturellement exprimées dans la zone de transfert du grain et qui sont susceptibles d'être impliquées dans le transfert de métabolites de la plante mère vers l'albumen en développement ou encore dans la défense des plantes contre des
Le virus fortement résistant DIM présente une augmentation de la valeur de l'IC50 de 80 fois par rapport à T5A1 et de plus de 100 fois par rapport a LAI.
Le virus partiellement résistant NL4.3 est caractérisé par une augmentation de l'IC50 de 10 fois par rapport à T5A1 et de 12,5 fois par rapport a LAI.
V. 2- Inhibiteur RPR103611 L'augmentation de l'ICSO du virus résistant LAI-L91H (Labrosse B. et al. J Virol. 2000 vol 74 pages 2142-2150) vis-à-vis de cet inhibiteur a été mésurée.
Pour le virus LAI-L91H, l'augmentation de l'IC50 par rapport à LAI et à T5A1 est supérieure à 100 fois.
VI- Optimisation de la méthode d'analyse pour déterminer la CAPACITE NEUTRALISANTE des virus VIH.
Les recombinaisons obtenues en utilisant pour l'amplification de l'étape (b) une paire d'amorces NEU- A : 5'TAGAAAGAGCAGAAGACAGTGGCAATG3' (SEQ ID No : et FuB : 5' GGTGGTAGCTGAAGAGGCACAGG3' (SEQ ID No : suivie d'une deuxième amplification, avec les amorces: NEU-C : 5'GTGGGTCACAGTCTATTATGGGG3' (SEQ ID No : et un mélange des amorces FuD1 :5'TCTGTCTCTCTCTCCACCTTCTTCTT3' (SEQ ID No : et FuD2 :5'TCTGTCTTGCTCTCCACCTTCTTCTT3' (SEQ ID No : sont également très efficaces.
En effet, lors des contrôles de production virale, il s'est avéré que pour obtenir une production virale satisfaisante il suffit généralement de 10-50 ng de produit de PCR, utilisé dans l'étape de recombinaison.
Une production virale correspondante à 50-400 ng/ml de p24 après transfection est obtenue. Pour l'infection des cellules cible, entre 0,5 et 5 ng p24/ puit (plaques 96 puits) sont utilisés. L'augmentation de la densité optique obtenue après infection de cellules cible est linéaire si l'infection est conduite dans ces conditions
A L'APPROCHE DU NOUVEAU MILLENAIRE, DES MAISONS, DES IMMEUBLES, DES PATES DE MAISONS OU D'IMMEUBLES SITUES DANS LES ZONES INONDABLES, RESISTANTS A L'ASSAUT PUISSANT DES EAUX LORS DES CRUES, RESTENT POURTANT VULNERABLES A L'INFILTRATION DE L'EAU PAR LES PORTES, LES FENETRES LES FISSURES MURALES AINSI QUE LES INFILTRATIONS PAR CAPILLARITE (SOUS-SOL).
LES DEGATS SUBIS SONT ALORS IMMENSES LES RISQUES AUSSI. C'EST AINSI QUE LES VIES HUMAINES SONT EMPORTEES. LES INTERIEURS SONT SACCAGES, SALIS, DETRUITS, HUMIDIFIES ET ENVASES.
LE NOUVEAU PAYSAGE IMMOBILIER DOIT INTEGRER LA NOTION DE CATASTROPHES NATURELLES DANS SA CONCEPTION. LE PRESENT DISPOSITIF EMPECHE L'INFILTRATION DES EAUX, PAR LES DIFFERENTES OUVERTURES DE LA MAISON ET PAR CAPILLARITE SI NECESSAIRE.
LE DISPOSITIF COMPREND 3 PARTIES 1 - UNE BACHE CIRCULAIRE ET SANS FOND, EN MATIERE ET DE FORME QUELCONQUES, ETANCHE, IMPUTRESCIBLE, IMPERMEABLE, INDECHIRABLE, SOUPLE, ETIRABLE, RESISTANT, LARGE VERS LE BAS AFIN D'EVITER TOUTE PRESSION D'EAU ET, LA BACHE EST PLUS LARGE QUE LE PERIMETRE DE L'OUVRAGE A PROTEGER LA BACHE DOIT RECOUVRIR TOTALEMENT LA HAUTEUR DES MURS TELS QUE DES CAVES, DES GARAGES ET OU DU REZ-DE-CHAUSSEE DANS SA PARTIE BASSE, LA BACHE EST MUNIE DES MOYENS D'ARRIMAGE ET DE STABILISATION DANS SA PARTIE HAUTE, LA BACHE EST MUNIE DES MOYENS DE CONNEXION. n - UN MURET EST CONCU AUTOUR DE LA MAISON PLUS OU MOINS PRES DES MURS CE MURET EST EN 2 PARTIES SUPERPOSEES. LA PARTIE INFERIEURE ET LA PARTIE SUPERIEURE ONT UNE PROFONDEUR QUELCONQUE IL EST POSSIBLE SELON LA CONFIGURATION DE LA MAISON A PROTEGER ET DES ASPERITES AUTOUR DE CETTE DERNIER, D'ENVISAGER UN MURET SOUS TERRE, OU EN ESCALIERS OU ENCORE UNE EXCAVATION OU ENCORE UNE TRANCHE DE FORME, DE NIVEAU ET DE PROFONDEURS DIFFERENTS LE MURET CHANGE DE SA PREMIERE NATURE m - DES MOYENS TECHNIQUES SONT INSTALLES DANS DE COIN DES MURS EXTERIEURS DE L'OUVRAGE A PROTEGER LA PREMIER PARTIE DU DISPOSITIF : - LA BACHE EST EN UNE SEULE PIECE FERMEE SUR ELLE-MEME ET SANS FOND QUI PASSE AUTOUR DES FONDATIONS OU DES MURS ELLE EST DESTINEE A PROTEGER L'OUVRAGE DES INFILTRATIONS D'EAU PAR LES PORTES, LES FISSURES MURALES ET LES FENETRES. ELLE RECOUVRE LA MAISON DE MANIERE ETANCHE DU NIVEAU DU SOL JUSQU'A UNE CERTAINE HAUTEUR.
ELLE COMPORTE BEAUCOUP DE MOUS VERS LE BAS AFIN DE LA RENDRE MALLEABLE PAR L'EAU LA BACHE A UNE FORME ET DES DIMENSIONS QUELCONQUES ELLE EST CONSTITUEE D'UNE DOUBLURE DANS SA PARTIE HAUTE ET BASSE (AVEC DES MOYENS DE CONNEXION ET DE STABILISATIONS).
SELON LA CONFIGURATION DE L'OUVRAGE A PROTEGER OU PAR NECESSITE, ON ENVISAGERA OU NON LES ELASTIQUES AUTOUR DE LA POCHE ET ENTRE LA PARTIE HAUTE ET LA PARTIE BASSE DE LA BACHE.
LA SECONDE PARTIE DU DISPOSITIF : - LE MURET CONCU AUTOUR DE L'OUVRAGE ET LE PLUS PRES POSSIBLE DES FONDATIONS A UNE PROFONDEUR QUELCONQUE. ELLE A UNE LARGEUR QUELCONQUE ET ELLE EST EN 2 PARTIES SUPERPOSEES LE MURET EPOUSE LES CONTOURS DE L'OUVRAGE A PROTEGER OU PEUT ADOPTER DES CONTOURS PLUS PRATIQUES AUTOUR DE L'OUVRAGE VOIRE CHANGER DE NATURE AFIN D'ADAPTER LE CONCEPT A CHAQUE OUVRAGE : PAR EXEMPLE DEVENIR UNE TRANCHEE AVEC LES MEMES PRINCIPES QUE LE MURET LUI-MEME C'EST-A-DIRE RECOUVRIR DE BETON LE BAS DE LA BACHE ET SERVIR D'ESPACE DE RANGEMENT POUR LE RESTE DE LA BACHE.
Dans le substrat de chaque composant optoélectronique, les entailles sont formées de façon précise, avec une largeur L (figure 1C) prédéfinie, de telle manière que la distance entre deux coins en vis- à-vis, à chaque intersection de deux entailles, soit très légèrement supérieure au diamètre D de la fibre optique 28 que l'on veut insérer dans le logement formé par cette intersection, comme on le voit sur la figure 1C où la référence 30 représente le coeur de la fibre.
On choisit donc une largeur L très légèrement supérieure à D/v2 avec de préférence : D-L2 2 um.
La figure 1D montre des fibres optiques 32, 34 et 36 dont les extrémités sont respectivement introduites (ou en cours d'introduction) dans les
logements 22, 24 et 26, pour être optiquement couplées aux zones actives correspondant à ces logements.
L'axe X de chaque logement coïncide alors sensiblement avec l'axe du coeur 30 de l'extrémité de la fibre correspondante.
Une couche de colle 38, disposée à la e périphérie de chaque fibre, permet de maintenir l'extrémité de cette fibre dans le logement correspondant.
On donne maintenant, à titre purement indicatif et nullement limitatif un exemple correspondant aux figures 1A à 1D.
Dans cet exemple, on utilise une plaque en silicium de 200 mm de diamètre pour y donner des circuits de commande de 5 mm x 5 mm, chacun de ces circuits étant destiné à commander un circuit de détection.
On hybride sur cette plaque environ mille circuits de détection en AsGa que l'on enrobe de résine selon la technique appelée underfill .
Chaque circuit de détection comporte dix VCSEL espacés les uns des autres de 250 um et constitue, après hybridation, un circuit optoélectronique de 1 mm x 3 mm.
On entaille la surface d'arséniure de gallium qui dépasse de la résine sur une profondeur environ égale à 200 um avec une scie dont la lame a une largeur L de 90 um et de telle manière que les intersections des entailles formées (qui sont horizontales et verticales en vue de dessus) soient en regard des VCSEL.
L'alignement se fait, comme on l'a vu, sur des marques formées sur le silicium.
La distance D entre deux coins opposés de chaque intersection est égale à 90J2 c'est-à-dire 127 um.
On découpe ensuite chaque circuit de commande muni de son circuit optoélectronique hybridé.
Ensuite, on insère et l'on colle l'extrémité d'une fibre optique dans chaque logement formé sur ce circuit optoélectronique, par l'intersection de deux entailles, avec une précision d'alignement meilleure que 2 um par rapport au VECSEL sous-jacent. Le diamètre de la fibre optique est égal à 125 um + 1 um.
En revenant aux figures 1A à 1D, on précise que les logements formés ont la même fonction que les trous de guidage dont il est question dans le document [2] : ils servent également à guider des extrémités de fibres optiques.
La figure 2 illustre les courbes des effets dose réponse obtenues pour deux patients versus l'AZT et
le 3TC, avant et après le traitement avec des inhibiteurs de la transcriptase inverse.
Les courbes montrent l'inhibition de l'infection par un virus recombinant des cellules P4 traitées soit avec la zidovuidine (AZT,panels A et C) ou la lamivudine (3TC, panels B et D), selon la technique décrite plus loin, dans le paragraphe matériel et méthodes. Pour le patient I, les échantillons ont été testés à 0 (#), 9 (#) et 18 ( ) mois après le traitement, et pour le patient 2 à 0 (#) et 27 (#) mois après le traitement.
La figure 3 est un schéma des premières étapes (a et b) d'une mise en oeuvre particulière de la méthode de l'invention. Le schéma illustre les étapes d'extraction (a) et d'amplification (b) des séquences de transcriptase inverse extraites du plasma d'un patient par RT PCR de la méthode de l'invention ainsi que les schémas de constructions du plasmide pRVA/RT utilisé ultérieurement à l'étape (d).
La figure 4 est un schéma des étapes (c) à (g) d'une mise en oeuvre particulière de la méthode de l'invention. Ce schéma illustre l'étape (d) de cotransfection dans des cellules HeLa/293T des acides nucléiques amplifiés de l'étape (b), d'un premier plasmide p43xcsnAenv RT construit à partir d'un génome d'un virus VIH, ne comprenant pas un segment d'acide nucléique correspondant à tout ou partie de la séquence d'acide nucléique amplifiée à l'étape (b) ni un fragment
de la séquence d'acide nucléique codant pour la protéine d'enveloppe et un deuxième plasmide pVSV-G comportant la séquence codant pour la protéine d'enveloppe; l'étape (e) de culture permettant de produire des particules virale, l'étape (f) de transfection des particules virales obtenues à l'étape (e) dans des cellules P4, préalablement incubées en présence ou non de dilutions sériées de différents inhibiteurs de la transcriptase inverse, lesdites cellules indicatrices P4 comportant un système d'expression du gène codant pour l'enzyme betagalactosidase activable exclusivement par les séquences d'activation tat exprimées par le virus recombinant, et l'étape (g) de détection et/ou quantification de la betagalactosidase au moyen du substrat CPRG.
I- Matériel et méthodes I.1 - Amplification par réaction de polymérisation en chaîne (PCR).
L'ARN est isolé à partir du plasma des patients au moyen d'une trousse Roche Amplicor (Roche Diagnostics, 38242 Meylan Cedex, France), et les gènes d'intérêt sont isolés au moyen d'une transcriptase inverse et une réaction PCR subséquente.
L'amplification de la région codant pour la transcriptase inverse (RT) est effectuée au moyen des amorces externes MJ3 (5' AGT AGG ACC TAC ACC TGT CA 3' ) (Séquence SEQ ID No : 5 , en annexe) et RT-EXT (5' TTC CCA ATG CAT ATT GTG AG 3') (Séquence SEQ ID No : 6, en annexe) et des amorces internes A35 (5' TTG GTT GCA TAA ATT TTC CCA TTA GTC CTA TT 3') (Séquence SEQ ID No : 7 , en annexe) et RT-IN (5' TTC CCA ATG CAT ATT GTG AG 3')
(Séquence SEQ ID No : 8, en annexe) avec un cycle initial à 50 C (30 minutes) et à 94 C (2 minutes), suivi de 40 cycles à 94 C (30 secondes), 55 C (30 secondes) et 68 C (90 secondes) et une étape finale d'extension à 98 C durant 10 minutes. Ceci amplifie un produit de 1530 pb qui s'étend au-delà du codon 93 de la région codant de la protéase et au-delà du codon 503 de la région codant de la polymérase (pol).
1.2 - Génotypage Les séquences de nucléotides des régions codantes de la transcriptase inverse sont déterminées par séquençage automatique de la terminaison de la chaîne didéoxinucléotidique des produits de PCR bruts.
1.3 - Plasmides Les clones moléculaires du VIH-1 utilisés dans la méthode d'analyse dérivent de pNL4-3.
Les enzymes Ba I et SnaB I sont utilisées pour retirer la région codant pour la transcriptase inverse (entre les positions 2618 et 2872) et la linéarisation du plasmide résultant pSRT est effectuée au moyen de l'enzyme Nru I. L'expression de la
Cependant, ces logements ou guides d'alignement (sans paroi latérale) sont très différents de ces trous et sont également obtenus de façon très différente, ces trous résultant généralement d'une gravure ( etching ) d'un substrat en arséniure de gallium.
On peut bien entendu former les logements du composant optoélectronique 2 préalablement à l'hybridation de ce composant sur le circuit de commande 8 et l'on obtient encore un alignement précis par rapport aux zones actives 6.
Cependant, on risque alors d'aboutir aux inconvénients évoqués plus haut à propos de la fragilité des substrats en arséniure de gallium.
Les figures 2A à 2D, illustrent schématiquement une variante de l'exemple de l'invention, qui est illustré par les figures 1A à 1D.
Dans le cas du composant 39 des figures 2A à 2D, le substrat 4, sur la face inférieure duquel on a fait croître une couche épitaxiale 4a dans laquelle on a formé les zones actives 6, n'est pas transparent à la la lumière destinée à être émise ou détectée par ces zones actives.
On forme alors un trou 40 dans le substrat 4, en regard de chaque zone active 6, de manière à retirer le substrat résiduel et prolonger ainsi le logement correspondant à cette zone active jusqu'à la face inférieure du substrat 4 c'est-à-dire jusqu'à la couche épitaxiale 4a.
La taille de ce trou est supérieure au diamètre du coeur de la fibre optique correspondante mais inférieure à la taille du logement correspondant.
Les trous 40 peuvent être formés avant les entailles. Dans ce cas, chaque trou est formé à partir de la surface supérieure du substrat 4 jusqu'à la couche épitaxiale 4a.
En variante, on forme d'abord les entailles permettant d'obtenir les logements puis, au fond de chaque logement, on forme un trou 40, jusqu'à la couche épitaxiale 4a.
On peut réaliser collectivement ces trous 40 par exemple par gravure du substrat 4, de manière standard.
En se reportant à la figure 2C, il convient de noter que les trous n'ont pas à être formés avec précision en ce qui concerne leur diamètre car l'alignement de chaque fibre optique sur les quatre coins du logement correspondant est toujours permis par les entailles.
Dans l'exemple de la figure 3A, un substrat formant un support intermédiaire d'alignement 42, muni de fibres optiques, par exemple les trois fibres 32,34 et 36, est destiné à être aligné avec un composant optoélectronique 44 hybridé sur un circuit de commande 8 par exemple en silicium.
Ce composant optoélectronique 44 comporte des zones actives 6 formant par exemple des VCSEL. Il est hybridé au circuit de commande 8 par des microbilles de brasure 10.
Une résine 46 entoure le composant optoélectronique comme on le voit sur la figure 2A et s'étend aussi dans l'espace compris entre la face inférieure du composant optoélectronique 44 et le circuit de commande 8, autour des microbilles de brasure 10.
De plus, cette résine s'étend au-delà de la surface supérieure du composant optoélectronique 44 et définit ainsi avec cette face supérieure, un espace destiné à recevoir le support intermédiaire d'alignement 42.
Au sujet d'une telle structure (formée par le circuit de commande 8, le composant optoélectronique 44 et la résine 46), on se reportera au document [3].
Tout préférentiellement, l'amplification de l'étape (b) avec une paire d'amorces encadrant une séquence d'acide nucléique susceptible de porter au moins une mutation dans le gène codant pour la protéine d'enveloppe est effectuée avec une paire d'amorces : E00 : 5'TAGAAAGAGCAGAAGACAGTGGCAATGA3' (SEQ ID No : et ES8B : 5'CACTTCTCCAATTGTCCCTCA3' (SEQ ID No: 20) , suivie d'une deuxième étape d'amplification, avec la paire d'amorces: E20: 5'GGGCCACACATGCCTGTGTACCCACAG3' (SEQ ID No : 21) et E115 : 5'AGAAAAATTCCCCTCCACAATTAA3' (SEQ ID No : 22), pour obtenir un segment d'ADN de 938 paires de bases s'étendant des résidus 6426 à 7364 inclus et le vecteur de l'étape (c) est un vecteur retroviral délété de la région, codant pour les domaines allant de la boucle VI à la boucle V3 de l'enveloppe du VIH-1 s'étendant de 6617 à 7250 inclus et comporte un site de restriction unique NheI.