INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Les compositions pharmaceutiques renfermant les complexes de dérivés anilides à chaîne polycarbonée et de cyclodextrines, plus particulièrement de dérivés dodecylthio-phenylacetanilides tel le (S) -2', 3', 5'-trimethyl-4'-hydroxy-a-dodecylthio-phenylacetanilide (F 12511) ou ses dérivés apparentés et de cyclodextrines, plus précisément d'a-, p, y-cyclodextrines et leurs dérivés tels les dérivés hydroxypropyl, sulfobutyl éther ou méthylés font également partie de l'invention Elles sont plus particulièrement destinées à être administrées par voie orale ou par voie parentérale Elles se présentent alors respectivement sous la forme de comprimés, de gélules et de poudre en --- 0--sachets, de lyophilisats ou de solutions, prêtes à l'emploi ou à reconstituer extemporanément.
Elles permettent le traitement des dyslipidémies, telle l'hypercholestérolémie, et la prévention de l'athérosclérose.
Leur mode d'action s'explique essentiellement par l'inhibition de l'enzyme Acyl Cholestérol Acyl Transférase ou ACAT.
La présente invention concerne de nouveaux polynucléotides comportant des polymorphismes de type SNP fonctionnel dans la séquence nucléotidique du gène érythropoïétine (EPO) ainsi que de nouveaux polypeptides codés par ces polynucléotides et leurs utilisations thérapeutiques.
ART ANTERIEUR Le gène humain codant pour l'érythropoïétine (EPO) est décrit dans la publication de Jacobs, K. et al.,"Isolation and characterization of genomic and cDNA clones of human erythropoietin" ; Nature 313 (6005), 806- 810 (1985).
La séquence nucléotidique de ce gène est accessible sous le numéro d'accès X02158 dans la base de données GenBank.
Cette protéine est connue pour agir sur la prolifération, la différenciation et la maturation des cellules souches de l'érythropoïèse en érythrocytes.
L'EPO est également connue pour agir en tant que facteur autocrine dans certaines cellules érythroleucémiques et pour être un facteur mitogène et un chémo-attractant pour les cellules endothéliales.
Cette doublure de custode inférieure 4 forme avec le flan de panneau latéral 2 un corps creux (C) d'ouverture (0) délimité également d'une part par le passage de roue arrière 6 et la doublure d'aile arrière et d'autre part par la jonction 51 avec le longeron latéral 5.
Pour pouvoir obtenir un niveau de confort acoustique dans l'habitacle à l'arrière du véhicule sensiblement équivalent à celui de l'avant isolé acoustiquement de l'extérieur, il est nécessaire d'empêcher les bruits aérodynamiques des roulements de la roue de se propager du passage de roue 5 dans l'habitacle du véhicule.
Pour atteindre cet objectif, l'opérateur vient placer et coincer tout d'abord dans la partie 21 du flan de panneau 2 dégagée et accesible facilement depuis l'intérieur de la caisse, un bloc de mousse de taille adéquate obtenu par moulage ou découpage dont les caractéristiques sont par ailleurs connues pour cette application.
Puis, il vient mettre en regard de l'ouverture (0) un sac souple 7 rempli de
flocons de mousse 71 d'un volume sensiblement égal au volume du corps creux (C), tel que montré à la figure 2, puis vient déverser ces mêmes flocons dans le corps creux.
Les flocons utilisés sont des chutes de mousse en matériau alvéolaire de type absorbant polyuréthane de polyester. Leur forme est aléatoire et leur taille comprise entre 8 et 8000mm\ Des essais d'absorption acoustique ont été effectués autour du corps creux de manière à vérifier si l'isolation acoustique ainsi réalisée était suffisante pour empêcher les bruits générés dans le passage de roue arrière 6 de circuler dans le corps creux et ainsi de remonter dans l'habitacle du véhicule.
Il a été ainsi constaté qu'aussi bien les médiums que les hautes fréquences induites par les bruits étaient complètement absorbées par les flocons selon l'invention dans toutes les parties autour du passage de roue. L'isolation acoustique est ainsi assurée tout en ne nécessitant ni contrôle de positionnement, ni remise en place éventuelle d'un bloc de mousse moulé selon la forme complexe du corps creux (C).
L'invention qui vient d'être décrite permet très avantageusement d'isoler acoustiquement un corps creux dont l'accès est très difficile.
En particulier, dans le cas d'une partie de caisse de véhicule automobile, l'opérateur ne risque pas de se blesser en intoduisant sa main à travers l'ouverture dont les bords en tôle bruts de découpe sont coupants.
De plus, la mise en oeuvre du procédé est aisé et ne nécessite aucun aménagement particulier le long de la ligne d'assemblage du véhicule.
Enfin, le coût des flocons est extrêmement faible car ils sont issus de chutes.
Il va de soi que différentes variantes et améliorations peuvent être apportées sans pour autant sortir du cadre de l'invention.
Ainsi, le sac livré aux opérateurs pour mettre en oeuvre le procédé peuvent être améliorés pour faciliter sa préhension et son ouverture.
De même, au lieu d'être conditionnés dans un sac souple, les flocons selon l'invention peuvent tout aussi être déversés dans le corps creux par l'intermédiaire de moyens adaptés pour insuffler des morceaux de mousse.
un arbre, un rideau, une fleur.
DISPOSITIF D'ÉCLAI^GE OU DE SIGNALISATION
Dans les conditions indiquées ci-dessus, les chondrocytes se multiplient et synthétisent simultanément une matrice importante qui s'accumule autour des cellules et remplace ou recouvre progressivement l'hydrogel de chitosane. Il est d'ailleurs possible de suivre la formation de ce néo-tissu cartilagineux en fonction du temps de culture. Au stade précoce de la culture, les cellules chondrogéniques adhèrent à l'hydrogel sans jamais le pénétrer, elles secrètent des protéines matricielles du type collagène et protéoglycanes qui s'accumulent autour des cellules et qui forment une couche plus dense le long de l'hydrogel, entre les cellules et l'hydrogel qui conserve son aspect initial. Lorsque la culture se poursuit, notamment pendant de quatre à six semaines, les cellules chondrogéniques se multiplient à partir des cellules bordant l'hydrogel et les protéines matricielles continuent à s'accumuler. La structure de l'hydrogel se modifie, devenant de plus lâche et prenant progressivement des colorations qui sont spécifiques des protéines collagéniques et des protéo-glycanes. On obtient en fin de culture un bloc de tissu néo-formé constitué de plusieurs colonies de cellules organisées en rangées plus ou moins parallèles et présentant un gradient de maturation cellulaire qui est orienté depuis la zone de jonction des cellules avec l'hydrogel vers sa périphérie. En analysant ce bloc de néo-tissu en histologie, on constate que son aspect morphologique est proche d'un tissu cartilagineux normal. Une analyse moléculaire par RT-PCR a été réalisée après cinq semaines de culture, pour l'expression des collagènes 1 et Il, agrécane, biglycane et
décorine. Les ARN messagers de collagène Il, d'agrécane, de biglycane et de décorine sont exprimés alors que ceux du collagène 1 ne sont pas détectables. Au niveau protéique, la synthèse de protéoglycane a été étudiée après incorporation du soufre 35. Les protéoglycanes ont été extraits du néo-tissu par le chlorure de guanidine 4M, purifiés et analysés par chromatographie sur colonne de sépharose 2B. Les profils d'elution obtenus montrent que les cellules ont synthétisé et secrété des protéo-glycanes qui se sont regroupés dans la matrice sous formre d'agrégats de haut poids moléculaire, avec un profil similaire à ceux synthétisés et secrétés in vivo.
La mise en culture des cellules a été réalisée dans les mêmes conditions que ci-dessus et on a procédé aux mêmes constatations en ce qui concerne la formation d'un néo-tissu cartilagineux. Les colonies cellulaires qui se sont formés soit à partir des cellules en contact avec la face extérieure de la première et de la troisième couche d'hydrogel soit à partir des cellules étalées entre deux couches d'hydrogel présentent tous un gradient morphologique similaire à celui qui a été décrit ci-dessus. Les couches d'hydrogel, intercalées entre les nappes de cellules, ont disparu et sont remplacées par une structure fibrillaire très alcyanophile dont l'épaisseur correspond environ à la superposition de deux à trois couches de cellules. On comprend que
cette dernière variante mettant en oeuvre une superposition de couches d'hydrogel de chitosane et de cellules chondrogéniques permet d'obtenir très facilement un néo-tissu cartilagineux de plus grande dimension.
La présente invention concerne de nouveaux polynucléotides comportant des polymorphismes de type SNP fonctionnels dans la séquence nucléotidique du gène IFNa-21 ainsi que de nouveaux polypeptides codés par ces polynucléotides et leurs utilisations thérapeutiques.
ART ANTERIEUR Le gène de l'interféron alpha-21, ci après IFNa-21 est décrit dans les publications : - Goeddel, D. V., Leung, D. W ;"The structure of eight distinct cloned human leukocyte interferon cDNAs" ; Nature 290 (5801), 20-26 (1981), et - Olopade 01., Bohlander SK. ; "Mapping of the shortest région of overlap of deletions of the short arm of chromosome 9 associated with human neoplasia" ; Genomics 14 (2), 437-443 (1992).
La séquence nucléotidique de ce gène est accessible dans la section HTG de la base de donnée GenBank sous le numéro d'accès AC009445.
La séquence de l'ARN messager de l'lFNa-21 est mentionné dans la base de données du NCBI, sous le code d'accès NM~002175.
L'IFNa-21 est un gène ayant une homologie structurelle et fonctionnelle proche des interférons alpha humains (I'IFNa), en particulier de l'lFNa-2.
Les IFNa sont connus pour inhiber l'expression de plusieurs autres cytokines au niveau des cellules hématopoïétiques souches, ainsi que la prolifération cellulaire de certaines tumeurs cancéreuses ou non.
Les IFNa sont également connus pour réduire l'expression des récepteurs à l'EGF dans les carcinomes rénaux, pour inhiber l'expression de
certains gènes mitochondriaux, pour inhiber la prolifération des fibroblastes, des monocytes et des lymphocytes B, notamment in vitro et pour bloquer la synthèse des anticorps dans les lymphocytes B.
La détection d'un polynucléotide et/ou la détermination de la concentration d'un polypeptide selon l'invention peut permettre de savoir si un sujet est atteint ou risque d'être atteint ou, au contraire, présente une résistance partielle au développement d'une maladie, d'une indisposition ou d'un dérèglement tels que définis précédemment, relatifs à l'expression d'un polypeptide de l'invention.
Préférentiellement, dans l'étape a) du procédé de détection mentionné ci-dessus, on va détecter la présence ou l'absence d'un polynucléotide comportant au moins un polymorphisme de type SNP codant tel que défini précédemment.
La détection du polynucléotide peut être réalisé à partir d'échantillons biologiques du sujet à étudier, tels que des cellules, du sang, de l'urine, de la salive, ou à partir d'une biopsie ou d'une autopsie du sujet à étudier. L'ADN génomique peut être utilisé directement pour la détection ou après à une amplification par PCR, par exemple. L'ARN ou l'ADNc peuvent également être utilisés de façon similaire.
La comparaison des séquences nucléotidiques peut être effectuée par séquençage par des méthodes d'hybridation de l'ADN, par différence de
mobilité des fragments d'ADN sur gel d'électrophorèse avec ou sans agents dénaturants ou par différence de températures de fusion. Voir Myers et aL, Science (1985) 230 : 1242. De telles modifications dans la structure de la séquence nucléotidique en un point précis peuvent également être révélées par des essais de protection aux nucléases, telles que l'ARNase et la nucléase Sl ou encore par des agents chimiques de clivage. Voir Cotton et al., Proc. Nat.
De nombreuses méthodes bien connues de l'homme du métier peuvent être utilisées pour déterminer l'expression d'un polynucléotide de l'invention et pour identifier la variabilité génétique de ce polynucléotide. Voir Chee et aL, Science (1996), Vol 274, pp 610-613.
La présente invention a également pour objet l'utilisation d'un polynucléotide conforme à l'invention pour effectuer un diagnostic génétique d'une maladie ou d'une résistance à une maladie liée à la présence, chez un ou plusieurs individus de la population humaine, de l'allèle mutant codé par un polymorphisme de type SNP fonctionnel conforme à l'invention.
Ces maladies peuvent être des dérèglements et/ou des maladies humaines, tels que les différents cancers comme, par exemple, les carcinomes, les mélanomes, les lymphomes, les myélomes, les tumeurs cancéreuses ou non, les leucémies et les cancers du foie, du cou, de la tête et des reins, les maladies cardiovasculaires, les maladies métaboliques telles que celles qui ne sont pas liées au système immunitaire comme, par exemple, l'obésité, les maladies infectieuses en particulier virales comme les hépatites B et C et le SIDA, les pneumonies, les colites ulcératives, les maladies du système nerveux central comme, par exemple, la maladie d'Alzheimer, la schizophrénie et la dépression, le rejet de greffe de tissus ou d'organes, la cicatrisation de blessures, l'anémie en particulier chez les patients dialysés, les allergies, l'asthme, les scléroses multiples, l'ostéoporose, le psoriasis, l'arthrite rhumatoïde, la maladie de Crohn, les maladies et les désordres auto-immuns,
les verrues génitales ou vénériennes, les désordres gastro-intestinaux ou encore les désordres liés aux traitements par chimiothérapie.
La détermination de la concentration d'un polypeptide selon l'invention, dans l'étape b), peut également aider au diagnostic d'une maladie, d'une indisposition ou un dérèglement ou, au contraire, la résistance à une maladie, une indisposition ou un dérèglement chez un sujet en prélevant un échantillon dérivé de ce sujet.
Consécutivement à l'étape b), on peut comparer la concentration déterminée en polypeptide conforme à l'invention avec la concentration en protéine IFNoe-7 naturelle habituellement rencontrée chez un sujet.
L'homme du métier peut identifier le seuil au-dessus ou en dessous duquel apparaît la sensibilité ou, au contraire, la résistance à la maladie, l'indisposition ou le dérèglement évoqué ci-dessus, à l'aide des publications de l'art antérieur ou par des tests ou des essais conventionnels, comme ceux qui sont mentionnés précédemment.
Les figures 3A et 3B montrent ainsi que le pourtour quasicylindrique du capot 30 de l'enceinte est entaillé par de fines ouvertures 31,32, 33,..., 36,37, 38 formant des fentes tracées axialement, ces fentes ayant la particularité de ne pas s'enfoncer suivant un plan radial, mais suivant une direction oblique par
rapport à la direction radiale ; à la limite les ouvertures 31 à 38 peuvent être quasiment tangentielles à la partie circulaire du capot 30.
De façon avantageuse, la partie centrale du hublot 39 peut être masquée par une pièce centrale 39'fixée au capot 30 par des branches radiales en forme d'aster comme le montre la figure 2B.
Les figures 4A et 4B montrent que la cage 40 du dispositif est réalisée de préférence à partir de fils ou de tiges métalliques semi-rigides 41 à 48.
En pratique, la vitesse de rotation de la cage est relativement faible, voire très faible, puisqu'elle est de l'ordre d'un dixième de tour par heure à dix tours par heure, en tous cas inférieure à un tour par minute.
De façon avantageuse, ces vitesses permettent aux phénomènes de dégradation recherchés de s'établir étant donné que les cycles circadiens et les périodes de pluies sont du même ordre de grandeur.
La norme ISO 4892.3 suggère ainsi des cycles d'exposition sèche de 8 heures alternant avec des cycles d'exposition à la condensation de 4 heures.
L'intérêt du dispositif est de pouvoir faire varier les facteurs de dégradations que sont l'exposition au flux d'air de 11 enceinte et l'immersion dans le liquide de la cuve sur de grandes latitudes, ce qui permet avantageusement de comparer et de corréler les résultats de vieillissement artificiel accéléré avec des résultats de vieillissement naturel et de valider des protocoles d'essais pertinents. Ce n'est pas l'objet de la présente de définir ces protocoles qui doivent faire l'objet d'études et de normes pour l'homme de l'art.
L'autre intérêt essentiel du dispositif perfectionné selon l'invention, est de permettre non seulement de reproduire, mais surtout d'additionner et de combiner divers facteurs de dégradation connus qui habituellement font l'objet d'expérimentation séparées.
Ainsi, comme le montre la suite de la figure 8A, l'alternance d'exposition sèche photonique et d'immersion des échantillons peut être suivie d'une autre alternance d'exposition sèche dans l'obscurité et d'immersion.
Mais surtout, comme représenté dans le détail en figure 8A, on peut constater que lors des phases d'immersion, l'exposition photonique continue. les deux facteurs de dégradation connus, l'humidité et l'éclairement sont donc combinés simultanément.
En effet, les rayonnements U. V. émis par la lampe à arc traversent l'eau quasiment sans absorption.
Par suite, lorsque les échantillons sont dans la cuve, sous une profondeur d'eau P, ils sontinuent à être exposés aux rayonnements photoniques de la source centrale, en particulier aux rayonnements ultra-violets.
Or, il est connu que certains mécanismes de dégradation recquiérent la présence simultanée de plusieurs facteurs pour se perpétuer.
Selon les modèles connus en effet, les mécanismes de dégradation des polymères comportent une étape d'initiation dans laquelle intervient l'énergie lumineuse des photons UV.
Mais, pour que le mécanisme s'enchaîne et se perpétue, il faut que la réaction d'initiation soit immédiatement suivie de réactions de propagation qui font intervenir l'oxygène. L'oxygène est en particulier fourni par l'eau sous forme d'oxygène dissous.
*Ces réactions de propagation s'achèvent par des réactions de terminaison où intervient la possibilité de réticulation entre des chaînes de polymères.
Ce sont les réactions de réticulation qui affectent le plus la couleur, l'aspect et les propriétés des polymères. Ces réactions sont donc recherchées lors des campagnes de tests.
En absence d'eau et d'oxygène, l'étape d'initiation s'amorce sans conséquence et les réactions de propagation ne s'enchainent pas. Le mécanisme de dégradation reste alors en sommeil.
Avec le dispositif perfectionné selon l'invention, on peut ainsi de façon essentielle combiner une exposition aux rayonnements photoniques avec une immersion dans l'eau et faire surgir ces mécanismes de dégradation.
Il est donc particulièrement avantageux de pouvoir combiner une exposition aux rayonnements photoniques avec une exposition à l'immersion.
L'eau apparait ainsi comme un activateur d'oxygène. C'est pourquoi les tests normalisés prévoient des phases d'exposition à l'humidité généralement effectué par condensation ou aspergé par des gicleurs selon les dispositifs de l'état de la technique.
Les normes ISO-4892 préscrivent d'utiliser de l'eau pure.
Cette disposition correspond aux possibilités des dispositifs connus puisque le fonctionnement des gicleurs recquiert d'utiliser de l'eau ne contenant pas d'impuretés et que la condensation se forme également avec de l'eau pure.
Contrairement à cet usage, le dispositif selon l'invention offre la possibilité de tester des milieux liquides qui accélérent avantageusement les phénomènes de dégradation.
Ainsi, de façon inusitée, il est prévu, selon l'invention, de procéder à des protocoles d'essai dans lesquels le liquide peut être de l'eau contenant de l'oxygéne dissous, ou un liquide contenant de l'eau oxygénée.
L'invention permet ainsi de tester l'exposition des echantillons non seulement à l'eau pure mais à d'autres liquides.
Il est préférable de ne pas utiliser de l'eau oxygénée noncoupée, ni de grande concentration d'eau oxygénée. L'eau oxygénée est un activateur excessivement puissant qui risquerait de faire apparaitre des phénomènes de dégradation inobservé dans la réalité.
Ainsi, comme schématisé au milieu de la figure 8C, la phase d'immersion se fait dans un bain d'eau contenant une proportion d'eau oxygénée.
Accessoirement, comme l'eau oxygénée peut se décomposer sous l'effet des UV, on peut se servir du cache 67 de protection contre l'insolation pour protéger le bain de liquide contenant l'eau oxygénée dontre le rayonnement UV.
Dans la pratique, la décomposition de l'eau oxygénée ne s'observe pas.
Il y a donc avantage à cumuler en une seule phase, une exposition combinée à l'immersion dans l'eau partiellement oxygénée et aux rayonnements photoniques, pour observer les phénomènes de dégradations précités.
Enfi, de façon avantageuse, le procédé de test perfectionné selon l'invention prévoit avantageusement des protocoles d'essais dans lesquels le liquide est de l'eau acidulée.
Ce protocole permet avantageusement de reproduire l'exposition climatique aux pluies acides.
Le procédé permet encore d'effectuer des protocoles d'essais dans lesquels le liquide est de l'eau chargée de particules.
Ces dispositions permettent de tester l'interaction de matériaux solides intervenant dans les phénomènes de dégradation.
Le polymorphisme de type SNP c1084a entraîne une mutation de l'acide aminé leucine (L) en position 112 dans la protéine immature du gène IFNa-7, correspondant à la séquence d'acides aminés ID SEQ N'2, en isoleucine (1) et en position 89 de la protéine mature. Dans la description de la présente invention, on appellera indifféremment L891 et L1121 la mutation codée par ce polymorphisme de type SNP selon que l'on se réfère respectivement à la protéine mature ou à la protéine immature.
Le polymorphisme de type SNP g1135t entraîne une mutation de l'acide aminé VALINE (V) en position 129 dans la protéine immature du gène IFNa-7, correspondant à la séquence d'acides aminés ID SEQ N'2, en leucine (L) et en position 106 de la protéine mature. Dans la description de la présente invention, on appellera indifféremment V106L et V129L la mutation codée par ce polymorphisme de type SNP selon que l'on se réfère respectivement à la protéine mature ou à la protéine immature.
Le polymorphisme de type SNP t1166c entraîne une mutation de l'acide aminé phénylalanine (F) en position 139 dans la protéine immature du gène IFNa-7, correspondant à la séquence d'acides aminés ID SEQ N'2, en sérine (S) et en position 116 de la protéine mature. Dans la description de la présente invention, on appellera indifféremment F116S et F139S la mutation codée par ce polymorphisme de type SNP selon que l'on se réfère respectivement à la protéine mature ou à la protéine immature.
Le polymorphisme de type SNP g1181a entraîne une mutation de l'acide aminé arginine (R) en position 144 dans la protéine immature du gène IFNa-7, correspondant à la séquence d'acides aminés ID SEQ N'2, en lysine
(K) et en position 121 de la protéine mature. Dans la description de la présente invention, on appellera indifféremment R121K et R144K la mutation codée par ce polymorphisme de type SNP selon que l'on se réfère respectivement à la protéine mature ou à la protéine immature.
Le polymorphisme de type SNP a1294c entraîne une mutation de l'acide aminé lysine (K) en position 182 dans la protéine immature du gène IFNa-7, correspondant à la séquence d'acides aminés ID SEQ N'2, en glutamin (Q) et en position 159 de la protéine mature. Dans la description de la présente invention, on appellera indifféremment K159Q et K182Q la mutation codée par ce polymorphisme de type SNP selon que l'on se réfère respectivement à la protéine mature ou à la protéine immature.
Les polymorphismes de type SNP D95N, F139S, R144K et K182Q entraînent des modifications significatives de la conformation spatiale des polypeptides conformes à l'invention par rapport au polypeptide codé par la séquence nucléotidique du gène sauvage de référence IFNa-7.
La modélisation bio-informatique permet d'observer que la mutation D72N sur la protéine mutée mature entraîne une modification structurale de la courte hélice (T70-A75) dans laquelle se trouve l'acide aminé acide aspartique 72. La boucle entre les hélices D et E avec le résidu Tyr136 en face de l'acide aspartique 72 est également modifiée.
Ainsi, la protéine mutée possède une conformation tridimensionnelle différente de la protéine IFNa-7 naturelle.