INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La polymérisation est conduite pendant une durée suffisante pour permettre la polymérisation sensiblement complète des monomères. En d'autres termes, la polymérisation est normalement conduite jusqu'à ce que des taux élevés de conversion aient été atteints. La polymérisation est ensuite terminée par l'addition d'un halogénure d'étain et d'un halogénure de silicium. L'halogénure d'étain et l'halogénure de silicium sont ajoutés en continu dans les cas où un couplage asymétrique est souhaité. Cette addition continue d'agent de couplage à l'étain et de l'agent de couplage au silicium est normalement effectuée dans une zone réactionnelle séparée de la zone dans laquelle a lieu la majeure partie de la polymérisation. En d'autres termes, l'agent de couplage à l'étain et l'agent de couplage au silicium ne sont normalement ajoutés qu'après avoir atteint un taux de conversion élevé. Par exemple, l'agent de couplage à l'étain et l'agent de couplage au silicium ne sont normalement ajoutés qu'après avoir atteint un taux de conversion des monomères supérieur à environ 90 pour cent.
Il est habituellement préférable que le taux de conversion des monomères atteigne au moins environ 95 pour cent avant l'addition de l'agent de couplage à l'étain et de l'agent de couplage au silicium. En règle générale, il est très préférable que le taux de conversion des monomères dépasse
environ 98 pour cent avant l'addition des agents de couplage. Les agents de couplage sont normalement ajoutés dans un récipient réactionnel séparé après que le taux de conversion souhaité a été atteint. Les agents de couplage peuvent être ajoutés en solution dans un hydrocarbure, par exemple le cyclohexane, au mélange de polymérisation, en exerçant une action de mélange convenable pour assurer la répartition et la réaction.
L'agent de couplage à l'étain est normalement un tétrahalogénure d'étain tel que le tétrachlorure d'étain, le tétrabromure d'étain, le tétrafluorure d'étain ou le tétraiodure d'étain. Cependant, on peut aussi utiliser facultativement des trihalogénures d'étain. Les polymères couplés avec des trihalogénures d'étain ont un maximum de trois branches, ce qui les distingue évidemment des polymères couplés avec des tétrahalogénures d'étain qui ont un maximum de quatre branches. Pour obtenir un degré supérieur de formation de branches, on préfère normalement les tétrahalogénures d'étain. En règle générale, le tétrachlorure d'étain est le plus apprécié.
L'agent de couplage au silicium est normalement un tétrahalogénure de silicium tel que le tétrachlorure de silicium, le tétrabromure de silicium, le tétrafluorure de silicium ou le tétraiodure de silicium. Cependant, on peut aussi utiliser facultativement des trihalogénures de silicium. Les polymères couplés avec des trihalogénures de silicium ont un maximum de trois branches, ce qui les distingue évidemment des polymères couplés avec des tétrahalogénures de silicium qui ont un maximum de quatre branches. Pour obtenir un degré supérieur de formation de branches, on préfère normalement les tétrahalogénures de silicium. En règle générale, le tétrachlorure de silicium est le plus apprécié.
Le rapport molaire de l' halogénure d'étain à l'halogénure de silicium utilisés dans le couplage du polymère caoutchouteux est normalement compris entre 20 :80 95:5.
Le rapport molaire de l'halogénure d'étain à l'halogénure de . silicium utilisés dans le couplage du polymère caoutchouteux est plus couramment compris entre 40 :60 90 :10. rapport molaire de l'halogénure d'étain à l'halogénure de silicium utilisés dans le couplage du polymère caoutchouteux est de préférence compris entre 60 :40 85 :15. rapport molaire de l'halogénure d'étain à l'halogénure de silicium utilisés dans le couplage du polymère caoutchouteux est très préféra- blement compris entre 65 :35 80:20.
Sommairement et à titre d'exemple, on utilise environ 0,01 à 4,5 milliéquivalents d'agent de couplage à l'étain (halogénure d'étain et halogénure de silicium) pour 100 grammes du polymère caoutchouteux. Il est normalement préférable d'utiliser environ 0,01 à environ 1,5 milli- équivalent de l'agent de couplage pour 100 grammes de polymère afin d'obtenir la viscosité Mooney souhaitée. Des quantités plus grandes ont tendance à entraîner la production de polymères contenant des groupes terminaux réactifs ou un couplage insuffisant. Une quantité considérée comme optimale pour le maximum de formation de branches est de 1 équivalent d'agent de couplage à l'étain par équivalent de lithium. Par exemple, si l'on utilise un mélange de tétrahalogénure d'étain et de tétrahalogénure de silicium comme agent de couplage, il faut utiliser 1 mole de l'agent de couplage pour 4 moles d'extrémités vivantes lithiées.
Dans les cas où l'on utilise un mélange de trihalogénure d'étain et de trihalogénure de silicium comme agent de couplage, il est optimal d'employer 1 mole de l'agent de couplage pour 3 moles d'extrémités vivantes lithiées.
L'agent de couplage peut être ajouté en solution dans un hydrocarbure (par exemple dans le cyclohexane) au mélange de polymérisation contenu dans le réacteur en exerçant une action de mélange convenable pour assurer la répartition et la réaction.
Lorsque le couplage est terminé, une alkyl-1,2- éthylènediamine tertiaire chélatrice ou un sel métallique
d'un alcool cyclique peut facultativement être ajouté au ciment de polymère pour stabiliser le polymère caoutchouteux couplé. Les amines tertiaires chélatrices qui peuvent être utilisées sont normalement des alkyldiamines chélatrices ayant la formule structurale : dans laquelle n représente un nombre entier de 1 à environ 6, A représente un groupe alkylène contenant 1 à environ 1 2 3 4 6 atomes de carbone et R , R , R et R peuvent être identiques ou différents et représentent des groupes alkyle contenant 1 à environ 6 atomes de carbone. Le groupe alkylène A répond à la formule -(CH2)m- où m est un nombre entier de 1 à environ 6. Le groupe alkylène contient habituellement 1 à 4 atomes de carbone (m est de 1 à 4) et de préférence contient 2 atomes de carbone. Dans la plupart des cas, n est un nombre entier de 1 à environ 3, et de 1 2 3 4 préférence n est 1. Il est préférable que R ,R , R et R représentent des groupes alkyle contenant 1 à 3 atomes 1 2 3 4 de carbone. Dans la plupart des cas, R , R , R et R repré- sentent des groupes méthyle.
Le succès de l'opération est vérifié en effectuant une ligation du vecteur sur lui-même avant et après traitement à l'enzyme de Klenow. A quantité d'ADN testé identique, on obtient 3000 clones avant traitement et 60 après traitement.
Préparation de l'ADN (taille comprise entre 100 et 300kb).
Mise en bouts francs de l'ADN.
L'ADN est mis en bouts francs par élimination des séquences 3' sortantes et remplissage des séquences 5' sortantes. Cette opération est faites avec : enzyme de Klenow, T4 polymérase, les 4 nucléotides triphosphates.
Préparation des extrémités.Exemple Hindlll L'addition de l'ADN sur le vecteur se fait au moyen d'oligo-nucléotides reconnaissant la séquence Hindlll modifiée du vecteur. Ils contiennent des sites de restriction rares pour permettre les clonages ultérieurs (Swal ; Notl). cette technique est dérivée de celle de : Elledge SJ, Mulligan JT, Ramer SW, Spottswood M, Davis RW. Proc Natl Acad Sci U S A 1991 Mar 1;88(5):1731-5 Deux oligonucléotides complémentaires sont utilisés : Oligo 1 : 5'-GCTTATTTAAATATTAATGCGGCCGCCCGGG-3' (SEQ ID N 25) Oligo 2 : 5'-CCCGGGCGGCCGCATTAATATTTAAATA-3' (SEQ ID N 26) Ils sont phosphorylés en 5' par la polynucléotide kinase de T4 en présence d'ATP, après leur hybridation. Cette étape de phosphorylation peut être éliminée en utilisant les oligo-nucléotides déjà phosphorylés.
La ligation de cet adaptateur double brin avec l'ADN à insérer dans un vecteur est faite par la ligase de T4 en présence d'un très grand excès d'adaptateur (1000 molécules d'adaptateur pour une molécule d'ADN à insérer), en 15 heures à 14 C.
L'excès d'adaptateur est éliminé par électrophorèse sur un gel d'agarose et les molécules d'intérêt sont récupérées du gel par hydrolyse de celui-ci par de l'agarase ou par électroélution.
Ligation vecteur- ADN .
La ligation se fait à 14 C sur 15 heures avec 10 molécules de vecteur pour une molécule d'insert.
La souche réceptrice est la souche DH10B. La transformation se fait par électroporation. Pour exprimer la résistance à la tétracycline, les transformants sont incubés à 37 C pendant 1 heure en milieu sans antibiotique. La sélection des clones se fait par culture pendant une nuit , sur milieu gélosé LB additionné de tétracycline à 5 g.ml-1.
Exemple 11 : CONJUGAISON CLONE A CLONE ENTRE E. COLI ET STREPTOMYCES CONJUGAISON ENTRE E coLI SOUCHE S17.1 CONTENANT PPM803 ET STREPTOMYCES LIVIDANS TK 21 Introduction Il est possible d'effectuer des conjugaisons entre E. coli et Streptomyces (Mazodier et al, 1989). L'adaptation de cette méthode en développant une technique dite en goutte où l'on mélange 10 l d'une culture de E. coli contenant un vecteur recombinant à une goutte de S. lividans récepteur consiste à réaliser une transformation de clone à clone en s'assurant qu'à la fin de l'opération toute la banque construite dans E. coli est introduite dans S. lividans. Une transformation en vrac amènerait obligatoirement à une multiplication des clones de Streptomyces transformants afin d'être
pratiquement sûr que la banque dans E. coli est complètement représentée dans S. lividans.
De plus cette méthode est facilement automatisable.
Essais préliminaires Conjugaison entre E. coli souche S17. 1 contenant le vecteur pOSV303 et S. lividans TK21.
Dans ces conditions, on mélange 6 x 106cellules de E. coli avec 2 x 106 spores pré-germées de S. lividans dans un volume final de 20 l.
La présente invention concerne donc un procédé de transmission de données sur porteuses multiples d'un émetteur à un récepteur, ledit procédé consistant, côté émetteur, à coder de binaire à signal les données à transmettre de manière à former des signaux de modulation, à moduler une pluralité de sous-porteuses avec lesdits signaux de manière à former des symboles, dits symboles OFDM, puis à émettre, sur ledit canal entre ledit émetteur et ledit récepteur, lesdits symboles OFDM à une cadence qui est liée à une fréquence d'échantillonnage dite fréquence d'échantillonnage émetteur, et, côté récepteur, à déterminer, à partir d'un signal d'horloge à une fréquence liée à une fréquence d'échantillonnage dite fréquence d'échantillonnage récepteur, une fenêtre d'analyse du signal reçu de l'émetteur de manière à former un bloc d'échantillons, à estimer lesdits signaux de modulation émis par démodulation desdites sous-porteuses pour ledit bloc d'échantillons considéré.
Selon une caractéristique essentielle de l'invention, ladite étape d'estimation est prévue pour corriger les changements de la position de la fenêtre d'analyse par rapport audit signal émis.
Avantageusement, ladite étape d'estimation consiste à démoduler lesdites sous- porteuses pour ledit bloc d'échantillons considéré puis à corriger les effets du canal de transmission entre l'émetteur et récepteur, ladite étape de correction des changement de la position de la fenêtre d'analyse consistant à estimer la différence de phase entre deux symboles OFDM consécutifs et à utiliser cette différence de phase lors de ladite correction des effets du canal transmission entre l'émetteur et le récepteur.
Pour estimer la différence phase entre deux symboles OFDM consécutifs, on estimera avantageusement le taux du décalage de la fréquence d'échantillonnage du récepteur par rapport à celle l'émetteur, efE (fR _ fE ladite différence de phase entre deux symboles OFDM consécutifs étant alors égale à: ,6k,,, 2 ir k ô T, / T,, où T, est la longueur totale du symbole considéré et T,, sa partie utile, k l'indice de la sous-porteuse considérée et n l'index du symbole OFDM considéré.
Pour estimer la différence de phase entre deux symboles consécutifs, on pourra également prendre en compte la décision de décalage a de la position de ladite fenêtre d'analyse délivrée par une unité de repositionnement de fenêtre, ladite différence de phase entre deux symboles consécutifs étant alors égale à: fik, n 2 7r k Ô T, / T,, + a T où T est la durée d'un échantillon et a est la valeur de décision de décalage exprimée en nombre d'échantillons.
Pour estimer la différence de phase entre deux symboles consécutifs, on pourra encore prendre en compte uniquement la décision de décalage de la position de ladite fenêtre d'analyse délivrée par une unité de repositionnernent de fenêtre, ladite différence de phase entre deux symboles consécutifs étant alors égale à: flk, , = 2 z k a TIT,, où T est la durée d'un échantillon et a la valeur de décision de décalage exprimée en nombre d'échantillons.
Les caractéristiques de l'invention mentionnées ci-dessus, ainsi que d'autres, apparaîÎtront plus clairement à la lecture de la description suivante d'un exemple de réalisation d'un récepteur qui met en #uvre le procédé décrit ci-dessus, ladite description étant faite en relation avec les dessins joints, parmi lesquels : La Fig. 1 est un schéma synoptique d'un exemple de réalisation d'un système de transmission de données sur porteuses multiples, La Fig. 2 montre la structure d'un symbole OFDM, La Fig. 3 est un schéma synoptique général d'un recepteur d'un système de transmission de données sur porteuses multiples qui est spécialement destiné à la mise en #uvre du procédé de la présente invention, et Les Figs. 4a et 4b sont respectivement des schémas synoptiques de trois unités d'estimation selon des modes de réalisation dépendant codage binaire à signal effectué coté émetteur.
Le récepteur 20 représenté à la Fig. 3 comporte, à l'instar de celui qui est représenté à la Fig. 1, une unité de conversion analogique numérique 21, une unité de démodulation 22, par exemple sous la forme d'une unité de calcul de transformée de Fourrier, unité d'estimation 23, une unité de désentrelacement 24 et une unité de décodage 25.
Les unités de démodulation 22 et d'estimation 23 sont synchronisées au moyen d'une base de temps qui leur délivre un signal à une fréquence d'échantillonnage dite fréquence d'échantillonnage récepteur.
Le récepteur 20 comporte encore une unité 28 prévue pour déterminer, à partir d'un signal d'horloge délivré par une base de temps (non représentée) et à une fR # fréquence qui est liée à la fréquence d'échantillonnage récepteur une fenêtre F d'analyse du signal délivré par l'unité 21. Cette fenêtre d'analyse F est délivrée à l'unité de démodulation 22 de manière à former un bloc d'échantillons sur lequel est appliquée la démodulation, Selon la présente invention, l'unité d'estimation 23 réalise la démodulation du signal reçu en corrigeant, non seulement l'effet du canal de transmission 30, mais aussi le déphasage qui est lié à la position de la fenêtre d'analyse F et sa dérive.
Pour ce faire, le récepteur 20 de la Fig. 3 comporte une unité 29 qui, sur la base, soit du signal reçu par le récepteur 20, soit du signal en sortie de l'unité de démodulation 22, délivre une estimation de l'écart .5f, de la ftéquence d'échantillonnage récepteur fR par rapport à la fréquence d'échantillonnage émetteur fIE - L'unité 29 peut procéder de différentes manières selon que la fréquence d'échantillonnage récepteur f,' est asservie ou non à la fréquence de détection de porteusefo du tuner de réception.
Dans le premier cas, l'unité 29 incorpore une unité de contrôle automatique de fréquence (CAF) (non représentée) qui estime l'écart ë5fo entre la fréquence de porteuse du tuner d'émission f,,' et la fréquence f,,' de détection de porteuse courante du tuner de réception et qui en déduit une estimation de l'erreur âf, en utilisant la relation : Par exemple, l'unité de contrôle automatique de fréquence CAF procède à une analyse, en réception, d'un symbole connu émis périodiquement en début de chaque trame et de là donner une estimation du décalage de la fréquence porteuse '5fo.
Elle peut également utiliser deux symboles connus consécutifs, émis en début de salve et mesurer pour chaque porteuse le déphasage entre les deux symboles reçus. Elle peut encore utiliser des "pilotes continus" : certaines porteuses fixes dans la trame émettent continûment des valeurs connues. Ces pilotes continus correspondent à un "peigne" de fréquence. La recherche en réception de la position de ce peigne donne une première estimation grossière du décalage de ftéquence de porteuse 8fo. Une estimation plus fine est ensuite obtenue en mesurant la valeur du déphasage entre deux symboles OFDM reçus consécutifs, pour les porteuses de ce peigne.
Dans le second cas, l'unité 29 détermine directement l'écart t5f, entre la ftéquence d'echantillonnage récepteur et la fréquence d'échantillonnage émetteur à partir des données reçues.
Par exemple, à partir de l'estimation de la position temporelle de la fenêtre d'analyse t, rapport aux données utiles du nième symbole OFDM, l'unité 29 moyenne les variations (t, - t,-,) entre deux symboles consécutifs de cette position temporelle puis détermine l'estimation ôf, du décalage de ftéquence d'échantillonnage âf, au moyen la relation suivante : où 1', - t,-, représente une moyenne des variations de position de fenêtre d'analyse entre symboles consécutifs.
Une autre possibilité peut consister à utiliser les différences de phase à la réception (qui varient selon les porteuses considérées) entre deux symboles connus consécutifs. Ces déphasages sont en effet directement liés à l'écart âf, entre la fréquence d'échantillonnage récepteur f#R . courante et la f réquence d'échantillonnage émetteur eH et permettent ainsi de l'estimer.
En résumé, il s'avère que les compositions cosmétiques actuelles contenant des polymères cationiques, ne donnent pas complètement satisfaction.
La demanderesse a maintenant découvert que l'association d'un copolymère siliconé défini ci-dessous de viscosité comprise entre 106 et 100.106 mPa.s avec des polymères cationiques permet de remédier à ces inconvénients.
Ainsi, à la suite d'importantes recherches menées sur la question, il a maintenant été trouvé par la Demanderesse qu'en introduisant d'un copolymère siliconé défini cidessous de viscosité comprise entre 106 et 100.106 mPa.s dans les compositions en particulier capillaires de l'art antérieur à base de polymères cationiques, il est possible de limiter, voire supprimer, les problèmes généralement liés à l'emploi de telles compositions, à savoir en particulier l'alourdissement (toucher chargé lors d'applications répétées), le manque de lissage et de douceur des cheveux, tout en conservant les autres propriétés cosmétiques avantageuses qui sont attachés aux compositions à base d'agents conditionneurs.
Ainsi, selon la présente invention, il est maintenant proposé de nouvelles compositions cosmétiques, comprenant, dans un milieu cosmétiquement acceptable, au moins un copolymère siliconé défini ci-dessous de viscosité comprise entre 106 et 100.106 mPa.s et au moins un polymère cationique.
Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'un copolymère siliconé défini cidessous de viscosité comprise entre 106 et 100.106 mPa s dans, ou pour la fabrication d'une composition cosmétique comprenant un polymère cationique.
Le copolymère siliconé résulte de la réaction d'addition, en présence d'un catalyseur, d'au moins : - (a) un polysiloxane de formule (I):
dans laquelle : R1 désigne un groupement susceptible de réagir par réaction d'addition de chaîne tel que par exemple un atome d'hydrogène, un groupe aliphatique en C2-C6 ayant une insaturation éthylénique notamment vinyl, allyl ou héxényl, Les groupements R2 de la formule (I) peuvent représenter notamment des groupements alkyle, cycloalkyle, aryle, alkylaryle ou hydroxyle, et peuvent comporter en outre, des groupements fonctionnels tels qu'éthers, amines, carboxyles, hydroxyles, thiols, esters, sulfonates, sulfates.
Plus particulièrement R2 désigne méthyle. r n est un entier tel que le polysiloxane de formule (1) ait de préférence une viscosité cinématique comprise entre 1 et 1.106 mm2/s..n varie notamment de 5 à 5000.
- (b) et d'au moins un composé siliconé comprenant au moins un et au plus deux groupements susceptibles de réagir avec les groupements R1 du polysiloxane (a). l'un au moins des composés de type (a) ou (b) contient un groupe aliphatique en C2-C6 ayant une insaturation éthylénique.
De préférence, les copolymères siliconés sont notamment obtenus par réaction d'addition, en présence d'un catalyseur d'hydrosilylation (par exemple un catalyseur au platine), d'au moins : - (a) un alpha,oméga-di vinyl polydiméthylsiloxane, et - (b) d'un alpha,oméga-di hydrogéno polydiméthylsiloxane Le copolymère a généralement une viscosité dynamique, mesurée à la température d'environ 25 C et au taux de cisaillement de 0,01Hz pour une contrainte de 1500 Pa, comprise entre 106 et 100 106 mPa.s et de préférence comprise entre 5.106 mPa.s et 30.106 mPa.s Toutes les mesures de viscosités dynamiques données dans la présente demande ont été effectuées à une température d'environ 25 C, sur un Carri-Med CSL2-500.
La quantité d'ADN directement utilisable pour le clonage dans des vecteurs recombinants est également tributaire des étapes de purification subséquentes à son extraction.
Dans l'état de la technique, l'ADN extrait est ensuite purifié, par exemple par l'utilisation de polyvinylpolypyrrolidone, par une précipitation en présence d'acétate d'ammonium ou de potassium, par des centrifugations sur gradient de chlorure de césium, ou encore des techniques chromatographiques, notamment sur support d'hydroxyapatite, sur colonne échangeuse d'ions ou encore tamisage moléculaire ou par des techniques d'électrophorèse sur gel d'agarose.
Les techniques de purification d'ADN décrites antérieurement, surtout lorsque celles-ci sont combinées avec les techniques d'extraction d'ADN de l'environnement précitées, sont susceptibles de conduire à une co-purification de l'ADN avec des composés inhibiteurs provenant de l'échantillon initial qui sont difficiles à éliminer.
La co-extraction de composés inhibiteurs avec l'ADN nécessite la multiplication du nombre d'étapes de purification ce qui conduit à des pertes importantes de l'ADN initialement extrait et réduit simultanément la diversité du matériel génétique initialement contenu dans l'échantillon, ainsi que sa quantité.
Un autre but de l'invention a été de surmonter les inconvénients des protocoles de purification antérieurs et de mettre au point une étape de purification d'ADN permettant de maintenir de manière optimale la diversité de l'ADN de l'échantillon initial, d'une part, et, de favoriser quantitativement son obtention, d'autre part.
Tout particulièrement, les améliorations qualitatives et quantitatives à la purification d'ADN sont maximales lorsqu'elles font appel à une combinaison d'un procédé d'extraction direct de l'ADN selon l'invention et d'un procédé de purification ultérieur, comme cela sera décrit ci-après.
1. 2. Extraction indirecte d'ADN de l'environnement.
De telles techniques ont recours à une première étape de séparation des différents organismes de la microflore tellurique des autres constituants de l'échantillon de départ, préalablement à l'étape d'extraction de l'ADN proprement dite.
Dans l'état de la technique, la séparation préalable d'une fraction microbienne d'un échantillon de sol comprend le plus souvent une dispersion physique de l'échantillon par broyage de ce dernier en milieu liquide, par exemple en utilisant des dispositifs du type Waring Blender ou encore un mortier.
Il a également été décrit des dispersions chimiques, par exemple sur des résines échangeuses d'ions ou encore des dispersions à l'aide de détergents non spécifiques tels que le déoxycholate de sodium ou du polyéthylène glycol. Quel que soit le mode de dispersion, l'échantillon solide doit être mis en suspension dans de l'eau, du tampon phosphate ou une solution saline.
L'étape de dispersion physique ou chimique peut être suivie d'une centrifugation sur gradient de densité permettant la séparation des cellules contenues dans l'échantillon et des particules de ce dernier, étant entendu que les bactéries ont des densités inférieures à celles de la plupart des particules du sol.