INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Par"animal transgénique"au sens de l'invention, on entend un animal non humain, de préférence un mammifère, dans lequel une ou plusieurs cellules contiennent un acide nucléique hétérologue introduit grâce à l'intervention humaine, tel que par des techniques de transgénèse bien connues de l'homme du métier. L'acide nucléique hétérologue est introduit directement ou indirectement dans la cellule ou le précurseur de la cellule, par manipulation génétique telle que microinjection ou infection par un virus recombinant. L'acide nucléique hétérologue peut
être intégré dans le chromosome, ou peut se présenter sous la forme d'ADN se répliquant de manière extra-chromosomique. ACIDE NUCLEIQUE REGULATEUR DU GENE ABCA7 A partir de banques de vecteurs de type BAC préparées à partir de matériel génomique humain et murin, les inventeurs ont réussi à isoler un acide nucléique régulateur des gènes ABCA7 humain et murin.
Les inventeurs ont déterminé par une analyse comparative des séquences génomiques humaines et murines, un acide nucléique régulateur comprenant particulièrement deux modules de régulation conservés chez l'homme et la souris.
Les inventeurs ont donc déterminé que l'acide nucléique régulateur de la transcription du gène ABCA7, lorsqu'il est défini de la manière la plus large, est constitué d'un polynucléotide comprenant, de l'extrémité 5'vers l'extrémité 3' : - une région non transcrite d'environ 1,2 kb localisée en amont du site d'initiation de la transcription du gène ABCA7, et - la séquence partielle du premier exon du gène ABCA7.
Dans sa définition la plus générale, l'acide nucléique régulateur de la transcription du gène ABCA7 comprend l'ensemble des régions nucléotidiques telles que définies ci-dessus et est identifié dans la séquence SEQ ID N 1 selon l'invention.
Ainsi, un premier objet de l'invention consiste en un acide nucléique comprenant un polynucléotide ayant au moins 20 nucléotides consécutifs de la séquence nucléotidique SEQ ID Nol, ou un acide nucléique de séquence complémentaire.
La région d'environ 1, 1 Kb localisée en amont du site d'initiation de la transcription du gène ABCA7, et comprenant le promoteur de base et de multiples éléments régulateurs de la transcription est comprise également dans la séquence identifiée comme la SEQ ID ? 2 selon l'invention.
Plus précisément, le nucléotide en position 1 de la séquence SEQ ID ? 2 est le nucléotide en position-1111, par rapport au site d'initiation de la transcription du gène ABCA7.
Selon un second aspect, l'invention est relative à un acide nucléique comprenant un polynucléotide ayant au moins 20 nucléotides consécutifs de la
séquence nucléotidique SEQ ID NO2, ou un acide nucléique de séquence complémentaire.
Comme déjà précisé ci-dessus, l'acide nucléique régulateur de la transcription du gène ABCA7 de séquence SEQ ID N 1 comprend, outre une région 5'régulatrice non transcrite, également la partie 5'du premier exon du gène ABCA7 humain.
La séquence partielle du premier exon du gène ABCA7 est définie comme la séquence SEQ ID ? 3.
Selon un troisième aspect, l'invention est relative à un acide nucléique comprenant un polynucléotide ayant au moins 20 nucléotides consécutifs de séquence nucléotidique SEQ ID ? 3 ou un acide nucléique de séquence complémentaire.
Par ailleurs, le module de contrôle 107 contrôle l'unité de commutation 108, au moyen de signaux de contrôle ctrl 4, afin de transférer des données de l'unité de commutation vers l'unité de mémorisation 106 par l'intermédiaire d'un bus de données 113, et inversement.
L'unité de commutation 108 est connectée au moyen d'interface 104 par l'intermédiaire d'un bus de données 114 et de signaux de contrôle curls.
L'unité d'ordonnancement des paquets de données 109, notée également SAR (connue en terminologie anglo-saxonne sous le terme de "Segmentation And Reassembling"), informe le module de contrôle 107 du ou des prochains paquets de données à transmettre, par l'intermédiaire de signaux de contrôle ctrl6.
En outre, l'unité d'ordonnancement 109 vérifie la réception des paquets de données, et gère l'allocation et la libération de zones mémoires (connues en terminologie anglo-saxonne sous le terme de"buffers") de l'unité de mémorisation 106.
Les signaux de contrôle ctrl7 échangés entre le moyen d'interfaçage 104 et le module de contrôle 107 comprennent notamment les signaux d'horloges régénérés à partir de la réception des paquets 1355 sur chacun des trois ports du moyen d'interfaçage 104.
Un quartz à 49,152Mhz (non représenté) est connecté à la fois au moyen 104 pour l'émission des paquets 1355 et au module de contrôle 107
qui génère un signal d'horloge à 24, 576 MHz +/-100 ppm, d'une part, pour l'unité d'ordonnancement des paquets de données 109, afin de cadencer l'émission des paquets 1355 et, d'autre part pour le moyen d'interfaçage 103, afin de cadencer l'émission des paquets 1394.
La figure 3 présente un synoptique détaillé du moyen de contrôle de flux de données 105, de l'interface 104 illustrés en regard de la figure 2, ainsi que leurs interconnexions.
Quelques détails sur l'interface série 104 permettent de comprendre comment des paquets sont multiplexés sur le bus de données 114.
L'interface série 104 comprend notamment : un moyen de contrôle de FIFO 120 décrit précédemment en regard de la figure 2 ; trois FIFOs d'entrée 121 (InPortO~FIFO), 122 (InPortlFIFO) et 123 (InPort2FIFO) ; un multiplexeur 127 ; et des FIFO de sorties 124 (OutPortO~FIFO), 125 (OutPortlFIFO) et 126 (OutPort2~FIFO).
Les FIFO 121,122 etl23 sont utilisées pour la mémorisation de paquets entrants, alors que les FIFO 124 à 126 sont utilisées pour la mémorisation des paquets sortants.
Une paire de FIFO est reliée à chaque port de l'interface 104 IEEE 1355. Ainsi, par exemple : les FIFO 121 et 124 sont utilisées pour le port 0 ; les FIFO 122 et 125 pour le port 1 ; et les FIFO 123 et 126 pour le port 2.
Le bus de données 114, illustré en regard de la figure 2 se décompose en deux bus sur la figure 3 : un bus 44 7M3//77 : OJ de réception des données destinées à l'unité de commutation 108 et transmises par l'interface 104 ; et
un bus 41 TxDO [17 : 07 d'émission des données à partir de l'unité de commutation 108, vers l'interface 104.
Après leur écriture dans l'une des FIFO d'entrée 121,122 et 123, les paquets entrants sont multiplexés à travers le multiplexeur 127 avant d'être renvoyés vers l'unité de commutation 108 à travers le bus 44.
Les données sortantes de l'unité de commutation 108 sont émises à travers le bus de données 41 pour être stockées dans l'une des FIFO de sortie 124,125 ou 126.
Une amorce ou une sonde nucléotidique selon l'invention peut être préparée par toute méthode adaptée bien connue de l'homme du métier, y compris par clonage et action d'enzymes de restriction ou encore par synthèse chimique directe selon des techniques telles que la méthode au phosphodiester de Narang et al., (Methods Enzymol (1979) 68 : 90-98) ou de Brown et al. (Methods Enzymol (1979) 68 : 109-151), la méthode aux diéthylphosphoramidites de Beaucage et al.
(Tetrahedron Lett (1980) 22 : 1859-1862) ou encore la technique sur support solide décrite dans le brevet EP 0 707 592.
Chacun des acides nucléiques selon l'invention, y compris les sondes et amorces oligonucléotidiques décrites ci-dessus, peut être marqué, si désiré, en incorporant un marqueur détectable par des moyens spectroscopiques, photochimiques, biochimiques, immunochimiques ou encore chimiques.
Par exemple, de tels marqueurs peuvent consister en des isotopes radioactifs (32P, 33P, 3H, 35S), des molécules fluorescentes (5-bromodéoxyuridine, fluorescéine, acétylaminofluorène, digoxigénine) ou encore des ligands tels que la biotine.
Le marquage des sondes est réalisé de préférence par incorporation de molécules marquées au sein des polynucléotides par extension d'amorces, ou bien par rajout sur les extrémités 5'ou 3'ou encore par nick translation".
Des exemples de marquage non radioactifs de fragments d'acides nucléiques sont décrits notamment dans le brevet français n FR 78 109 75 ou encore dans les articles de Urdea et al. (Nucleic Acid Res (1988) 11 : 4937-4957) ou Sanchez-pescador et al. (J Clin Mircrobiol (1988) 26 (10) 1934-1938).
De manière avantageuse, les sondes selon l'invention peuvent avoir des caractéristiques structurelles de nature à permettre une amplification du signal, telles que les sondes décrites par Urdea et al. (Mol. Cell. Biol., (1991) 6 : 716-718), ou encore dans le brevet européen nO EP-0 225 807 (CHIRON).
Les sondes oligonucléotides selon l'invention peuvent être utilisées notamment dans des hybridations de type Southern à l'ADN génomique ou bien de type northern à l'ARN.
En conséquence, la présente invention concerne également un procédé de détection de la présence d'un acide nucléique tel que décrit ci-avant dans un échantillon, ladite méthode comprenant les étapes consistant à : 1) mettre en contact une ou plusieurs sondes nucléotidiques selon l'invention avec l'échantillon à tester ; 2) détecter le complexe éventuellement formé entre la ou les sondes et l'acide nucléique présent dans l'échantillon.
L'invention concerne en outre un nécessaire ou kit pour la détection de la présence d'un acide nucléique selon l'invention dans un échantillon, ledit nécessaire comprenant : a) une ou plusieurs sondes nucléotidiques telles que décrites ci-dessus ; b) le cas échéant, les réactifs nécessaires à la réaction d'hybridation.
À titre d'illustration, le pourcentage d'identité de séquence pourra être effectué à l'aide du logiciel BLAST (versions BLAST 1.4. 9 de mars 1996, BLAST 2.0. 4 de février 1998 et BLAST 2.0. 6 de septembre 1998), en utilisant exclusivement les paramètres par défaut (Altschul et al, J. Mol. Bist., (1990) 215 : 403-410 ; Altschul et al, Nucleic Acids Res. (1997) 25 : 3389-3402). Blast recherche des séquences similaires/homologues à une séquence"requête"de référence, à l'aide de l'algorithme d'Altschul et al. (Supra). La séquence requête et les bases de données utilisées peuvent être peptidiques ou nucléiques, toute combinaison étant possible.
Par"conditions d'hybridation de forte stringence"au sens de la présente invention, on entendra les conditions suivantes : 1-Compétition des membranes et PRE HYBRIDATION :
- Mélanger : 40 l ADN sperme de saumon (1 Omg/ml) + 40 l ADN placentaire humain (10mg/ml) - Dénaturer 5 mn à 96 C, puis plonger dans la glace le mélange. - Oter le tampon SSC 2X et verser 4 ml de mix formamide dans le tube d'hybridation contenant les membranes.
- Ajouter le mélange des deux ADNs dénaturés.
2-Compétition de la sonde marquée : - Ajouter à la sonde marquée et purifiée 10 à 50 pl ADN Cot 1, selon la quantité d'hybridations non spécifiques.
3-Hybridation : - Oter le mix de pré hybridation. - Mélanger 40 ul ADN sperme de saumon + 40 l ADN placentaire humain ; dénaturer 5 mn à 96 C, puis plonger dans la glace. - Ajouter dans le tube d'hybridation 4 ml de mix formamide, le mélange des deux ADN et la sonde marquée/ADN Cot 1 dénaturée. - Incuber 15 à 20 heures à 42 C, avec rotation.
4-Lavaqes : - Un lavage à température ambiante dans du SSC 2X, pour rincer.
- 2 fois 5 minutes à température ambiante SSC 2X et SDS 0, 1%.
- 2 fois 15 minutes SSC 0, 1X et SDS 0, 1% à 65 C.
Les conditions d'hybridation décrites plus haut sont adaptées à l'hybridation dans des conditions de forte stringence, d'une molécule d'acide nucléique d'une longueur variable de 20 nucléotides à plusieurs centaines de nucléotides.
On rappelle que le moyen de contrôle de flux de données 105 comprend notamment : le module de contrôle 107 ; l'unité de commutation 108 ; et l'unité de mémorisation à double port ou DPRAM 106.
Le signal de contrôle CMJ, illustré en regard de la figure 2 se décompose en trois signaux sur la figure 3 : un signal de contrôle 51 ; un signal de contrôle 43 TxFIFOfM[O : 2/ ; et un signal de contrôle 42 WriteTXFIFO U : 2].
Les signaux de contrôle 51, TxFIFOfMl : 27 42 et WriteTXFIFO[O : 2J 43 permettent au moyen de contrôle 120 de la FIFO de gérer le transfert des paquets de données entre l'unité de commutation 108 et l'interface 104 de liaison série, à travers les bus de données 44 et 41.
Le traitement des signaux de contrôle dans l'unité de commutation 108 sera décrit ultérieurement en regard de la figure 3.
Le signal Ctrl4, illustré en regard de la figure 2, entre l'unité de commutation 108 et le module de contrôle 107, se décompose en au moins quatre signaux sur la figure 3 : deux signaux de contrôle 53 et 54 ; un signal de contrôle IntRxTxEOP[l : OJ 45a ; un signal de données IntRx~TX[31 : OJ 45b.
Le signal 45b est un bus de données reliant les éléments 106, 107 et 108. Le module de contrôle lit les en-têtes paquets à partir de ce bus 45b.
Les signaux de contrôle 53, 54 et 45a permettent la gestion de transfert de données/M7X/7.'0/45b entre la mémoire double port 106 et l'unité de commutation 108.
Dans certains cas, notamment lors du traitement d'en-tête de paquet, les données du paquet sont envoyées au module de contrôle 107 plutôt qu'à l'unité de mémorisation 106 pour une analyse ultérieure.
Le bus de données 45b est représenté sur la figure 2 par le bus de données 113.
La figure 4 représente un schéma électronique du module de commutation 108 de la figure 2.
Le module de commutation 108 comprend notamment : un moyen 60 d'arbitrage ; un moyen 20 de génération de cycle ; des moyens chargés de la réception et de l'émission des données en provenance ou à destination de l'interface 104 (soient les données en provenance ou à destination d'un réseau commuté IEEE1355) ; des moyens chargés de la réception des données en provenance de la mémoire DPRAM 106 (soient les données en provenance d'un bus IEEE1394) ; et des moyens chargés de l'émission des données vers la mémoire DPRAM 106 (soient les données à destination d'un bus IEEE1394).
Les moyens chargés de la réception et de l'émission des données en provenance de ou vers l'interface 104 comprennent notamment : un moyen 18 de modification d'en-tête ; un moyen 19 d'analyse d'en-tête en réception ; deux mémoires volatiles 15 et 16 de réception agencées en PTpn. pt
un moyen 17 de contrôle des FIFOs de réception 15 et 16. Les moyens chargés de la réception des données en provenance de la mémoire DPRAM 106 comprennent notamment : quatre FIFOs d'entrée 9,10, 11 et 12 ; un moyen 130 de contrôle des FIFOs d'entrée ; un multiplexeur 50 ; et un moyen 13 d'analyse d'en-tête de transmission.
Les moyens chargés de l'émission des données vers la mémoire DPRAM 106 comprennent notamment : trois mémoires d'assemblage 22,23 ou 24 ; trois FIFOs de sortie 25,26 et 27 ; un moyen de contrôle 84 des FIFOs de sortie ; et un multiplexeur 28.
Ces éléments faisant partie du module de commutation 108 sont reliés par des éléments de liaisons décrits ci-après. On note néanmoins que la plupart des échanges se font autour du moyen 60 d'arbitrage avec utilisation de deux bus de données principaux, TxBus 70 et RxBux 80 dont les accès sont gérés par le moyen d'arbitrage 60.
L'utilisation des deux bus internes, les bus de transmission TxBus 70 et de réception RxBus 80, qui permettent de traiter les transferts de données entre les ports va maintenant être détaillée.
Le matériau de garnissage de l'espace intérieur des coquilles peut être avantageusement constitué par des matériaux de récupération ou recyclage,
par exemple des chutes de tissus, défibrées provenant de la confection de tiges de mules.
Le dessus de la coquille supérieure la est conformé (figure 4) en sorte de constituer un rebord intérieur 6 à faible distance de la paroi verticale de la coquille et délimitant une zone centrale sensiblement plane 7 et en léger creux par rapport audit rebord périphérique 6 en sorte de servir de logement de réception d'une première 8 comme illustré par la figure 5 qui représente une mule réalisée conformément à l'invention avec une semelle composite selon les figures 1 à 4, une première 8 et une tige 9.
On a représenté en 10 une couture de solidarisation des deux coquilles 1 a, 1 b.
C'est ainsi qu'en cas d'utilisation pour réaliser les coquilles 1 a, 1 b d'un matériau non soudable on pourrait néanmoins recourir à une solidarisation par soudage, solide et étanche, en rapportant et fixant sur le pourtour de chaque coquille un galon en PVC par exemple et en soudant entre eux en recouvrement lesdits galons.
A cet effet, l'invention a pour objet un procédé de fabrication d'articles chaussants à semelle souple compressible, caractérisé en ce qu'il consiste à réaliser tout d'abord une semelle composite par assemblage de deux coquilles en matériau souple, rapportées l'une sur l'autre et solidarisées sur leur pourtour périphérique, un matériau compressible étant emprisonné entre les deux coquilles, puis à rapporter sur la coquille supérieure et fixer par tous moyens appropriés une tige et éventuellement une première.
Grâce à une telle installation, il est ainsi possible de positionner le point de focalisation
du rayonnement issu de l'émetteur 14, et donc la discontinuité et le foyer de diffusion en ré-
sultant, en tout endroit prédéterminé à l'intérieur du matériau du composant 10, pour obtenir un composant d'optique ou de style comportant une disposition prédéterminée de foyers de diffusion de la lumière, selon deux ou trois dimensions, et procurant le résultat désiré dans un
dispositif d'éclairage ou de signalisation pour véhicule automobile.
-6- On a représenté sur la Figure 3 un projecteur pour véhicule automobile, comportant de façon classique dans un boîtier 24 une source lumineuse 26 coopérant avec un réflecteur 28 pour former un faisceau d'éclairage de route et/ou de croisement, une glace 30 fermant avec étanchéité le boîtier 24. Avantageusement, le réflecteur 28 est apte à engendrer par lui-même le faisceau lumineux réglementaire, de sorte que la glace 30 peut être lisse ou faiblement dé-
viatrice et n'assurer que le rôle de fermeture étanche du boîtier 24.
Conformément à la présente invention, la glace 30 est constituée d'un composant tel
que celui qui vient d'être décrit, et comporte des discontinuités 12 en des endroits prédétermi-
nés en fonction du rôle que l'on désire faire jouer à la lumière diffusée par ces foyers de diffu-
sion 12.
Par exemple, on désire que, lorsque le faisceau émis par le projecteur est un faisceau de croisement, c'est à dire un faisceau avec coupure supérieure pour ne pas éblouir les conducteurs venant en sens inverse, de la lumière soit quand même émise vers le haut pour éclairer par exemple les panneaux indicateurs de direction situés au-dessus de la chaussée sur
des portiques. Grâce à l'invention, ceci pourra être réalisé facilement en formant dans le com-
posant 10 constituant la glace 30 des foyers de diffusion 12 dans sa partie supérieure (en
considérant la Figure 3).
De cette manière, le faisceau de croisement engendré par le projecteur est pratique-
ment inchangé, et se propage sensiblement dans la direction de l'axe optique X'-X de ce der-
Lorsqu'ils sont adressés vers les deux bus, les morceaux de paquets sont adressés aux deux bus simultanément pour être stockés dans deux moyens de stockage simultanément.
De même, le moyen 17 de contrôle de FIFO de réception contrôle les opérations de stockage dans les deux mémoires 15 et 16.
Les mémoires 15 et 16 sont des mémoires à double port, découpées en trois zones indépendantes, chacune étant gérée comme une FIFO.
Les signaux synchrones sont gérés suivant un certain rythme correspondant à une succession de phases constituées de quatre cycles d'horloge.
Dans une phase à quatre cycles, au cours de chacun des trois premiers cycles d'horloge de la phase, on effectue à la fois une opération d'écriture et une opération en lecture vers deux adresses de chacune des RAM (mémoires volatiles) 15 ou 16. Ces adresses pointent respectivement : vers le dernier élément (queue) de l'une des FIFO dans chacune des RAM 15 et 16 ; et vers le premier élément (head) de l'une des FIFO dans chacune des RAM 15 et 16.
Aucune opération de lecture ou d'écriture vers les RAM 15 et 16 n'est effectuée au cours du quatrième cycle d'horloge dans une phase à quatre cycles.
Chaque opération de lecture effective de FIFO (définies lorsque le signal 32 de sortie Rxyread est activé durant un cycle et est suivi par un signal d'entrée AllData MgJ//activé durant un cycle, i correspondant à un numéro de la FIFO d'entrée) modifie l'adresse pointant sur l'en-tête de FIFO.
Des opérations effectives d'écriture de FIFO (basées sur le même mécanisme que les opérations de lecture, utilisant ici le signal 52 illustré en regard de la figure 4) modifient l'adresse pointant sur la queue de la FIFO.
Ainsi, durant trois cycles, chaque partie de FIFO correspondant à chacun des ports d'entrée est traitée : les opérations d'écriture de données par les moyens 18 de modification d'en-tête sont séquentiellement ar) rf* < : < : pf < : Vfr < : 1f < : nartip < : fnrrp < : nfttir) ar) tf < : 1 ft 1d rtiann f) f < : mnrfH) iY
de paquets entrant de chacun des ports d'entrée 121, 122 et 123 de l'interface 104.
D'une manière similaire, les données lues à partir des mémoires 15 et 16 sont traitées respectivement par les bus RxBus 80 et TxBus 70.
Le moyen 17 de contrôle de FIFO de réception est en charge de la lecture et de l'écriture effective des FIFO contenues dans les mémoires 15 et 16.
Le signal 52 de contrôle informe le moyen de modification d'entête 18 qu'une FIFO est pleine dans l'une des mémoires 15 ou 16 et qu'il y a aussi une requête d'écriture pour une FIFO dans l'une des mémoires 15 ou 16.
Le moyen de contrôle de FIFO de réception informe le module 60 d'arbitrage qu'une nouvelle donnée a été lue à partir de l'une des mémoires 15 ou 16 grâce au signal rx[0 :2]read 32.
Les mêmes données sont lues à chaque phase de quatre cycles lorsqu'elles ne sont pas lues de manière effective en les plaçant simplement, soit sur le bus RxBus, soit sur le bus TxBus, soit sur les deux, en fonction du routage du paquet.
Ainsi, les mêmes données sont présentées tous les quatre cycles, jusqu'à ce qu'elles aient été réellement lues par la ou les destinations.
Un acide régulateur de la transcription selon l'invention peut également être modifié et être rendu inductible par un composé particulier, par exemple en créant dans la séquence un site inductible par un composé thérapeutique donné.
Les modifications dans une séquence comprenant tout ou partie de la séquence SEQ ID ? 1 et comprenant le promoteur ou un élément régulateur peuvent être réalisées avec des méthodes bien connues de l'homme du métier, telle que la mutagenèse. L'activité du promoteur ou de l'élément régulateur modifié peut ensuite être testée, par exemple par clonage du promoteur modifié en amont d'un gène rapporteur, en transfectant la construction d'ADN résultante dans une cellule hôte et en mesurant le niveau d'expression du gène rapporteur dans la cellule hôte transfectée. L'activité du promoteur modifié peut également être analysée in vivo dans des animaux transgéniques. Il est également possible de construire des banques de fragments modifiés qui peuvent être criblées en utilisant des tests fonctionnels dans lesquels, par exemple, seuls les promoteurs ou les éléments régulateurs ayant l'activité désirée seront sélectionnés.
De tels essais peuvent être basés, par exemple sur l'utilisation de gènes rapporteurs conférant une résistance à des composés déterminés, par exemple à des antibiotiques. La sélection de cellules ayant une construction acide nucléique régulateur/gène rapporteur et contenant un promoteur ou un élément régulateur ayant la modification recherchée peut alors être isolée par culture des cellules hôtes
transformées avec une telle construction en présence du composé déterminé, par exemple de l'antibiotique déterminé.
Le gène rapporteur peut également coder pour toute protéine facilement détectable, par exemple une protéine optiquement détectable telle que la luciférase.
En conséquence, l'invention a également pour objet un acide nucléique comprenant : (a) un acide nucléique régulateur de la transcription telle que définie cidessus ; et (b) un polynucléotide d'intérêt codant pour un polypeptide ou un acide nucléique d'intérêt.