INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
25) Genestier L, Prigent A-F, Paillot R, Quemeneur L, Durand I, Banchereau J, Revillard JP et Bonnefoy-Bérard N (1998). Caspase-dependant ceramide Production in FAS-and HLA Class I-mediated Peripheral T Cell Apoptosis. J. Biol. Chem. 273 : 5060-5066 26) Gluzman Y, Reichl H et Solnick D (1982) in Eukaryotic Viral Vectors (Gluzman Y, ed) pp 187-192, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York 27) Graham FL, Smiley J, Russel WC et Nairn R (1977). Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5. J. Gen. Virol. 36 : 59-74 28) Grange JD (1995). La rétinopathie diabétique. Paris, Milan, Barcelone : Masson : 632 29) Hammes HP, Martin S, Federlin K, Geisen K et Brownlee M (1991). Aminoguanidine Treatment inhibits the Development of Experimental Diabetic Retinopathy. Proc.
Natl., Acad.. 9ci. USA 88 : 11555-11558 30) Hangai M, Tanihara H, Honda Y et Kaneda Y (1998). In Vivo delivery of phosphorothioate oligonucleotides into the murine retina. Arch. Ophthalmol.
A2. Modèle murin de tumeurs xénoqéniques Les souris utilisées sont de type SCID (Severe Combined IMMUNO Deficience). Il s'agit plus précisément de souris C. B. 17 Scid/scid fournies par l'animalerie de l'Institut Pasteur de Lille. Ces souris présentent une mutation autosomal récessive au niveau de leur système de recombinaison (Blunt., 1995). Cette mutation a pour conséquence la production d'immunoglobulines et de récepteurs de cellules T (TcR) et B 5BcR) non fonctionnels. De ce fait, elles ne possèdent pas de lymphocytes T et B fonctionnels ; ces souris tolèrent donc le non-soi et représentent un modèle de choix pour le développement de tumeurs xénogéniques. Les souris SCID utilisées sont des souris mâles et jeunes puisque âgées de 3 à 5 semaines. Pour chacune d'entre-elles, une injection intra-péritonéale d'anticorps anti-ascialo GM-1 (100 Zug par souris dilué dans 200 pt de RPMI) est réalisée 24 heures avant l'injection des différentes lignées cellulaires. Il s'agit d'anticorps polyclonaux de lapin (Wako Pure Chemical Industries, Ltd) dirigés spécifiquement contre l'antigène asialo GM-1 exprimé par les cellules NK. Des travaux ont montré que l'utilisation de ces anticorps dans des modèles murins permet de neutraliser l'effet cytotoxique de cellules NK et de favoriser la greffe tumorale (Mather G et al. (1994).
Quatre lots de souris (10 à 15 souris par groupe) anesthésiées à l'éther, sont ensuite injectés, par voie sous-cutanée au niveau du dos.
Chaque souris reçoit 1 million de cellules diluées dans 200 pl de RPMI. L'injection de ces cellules définit le premier jour de l'expérience (Jo). Pour chaque souris, une surveillance macroscopique du point d'injection à la recherche de l'apparition d'une éventuelle tumeur ainsi qu'une mesure du poids corporel sont réalisées de façon hebdomadaire. A partir de la 5ème semaine, les souris sont saignées (environ 500 ut par souris), une fois par semaine, afin de doser les taux sériques de ESM-1 par un test ELISA (BECHARD D et aL, 2000). Pour chaque souris, un examen anatomopathologique est réalisé.
B. RESULTATS
B. l. 1nduction de tumeurs chez la souris par la protéine ESM-1 givcosvlée.
Des cellules HEK ont été transfectées par un vecteur possédant un insert contenant l'ADNc codant pour la protéine ESM-1 sauvage glycosylée, désignée ESMIWT. Les cellules HEK sont injectées par voie sous-cutanée à des souris SCID âgées de 5 semaines. Chaque souris reçoit préalablement une injection d'anticorps anti-asialo GN-1 par voie intrapéritonéale.
On a analysé le pourcentage de tumeurs ayant un volume supérieur à 1 cm3 observé chez les souris à la huitième semaine suivant l'injection des cellules HEK transfectées.
Les résultats sont représentés sur la figure 7.
A la figure 7A, on observe que l'injection de cellules HEK témoins n'induit pas l'apparition de tumeurs chez la souris. En revanche, les cellules HEK transfectées avec un ADN codant pour la protéine ESM-1 glycosylée induisent de nombreuses tumeurs macroscopiquement visibles, dont approximativement 95% d'entre elles ont un volume tumoral supérieur à 1 3 cm.
La figure 7B illustre la cinétique d'apparition des tumeurs chez des souris qui ont reçu les cellules HEK transfectées avec un ADN codant pour la protéine ESM-1 glycosylée. On peut observer que le volume tumoral moyen, exprimé en cm3, croît continuellement dès la quatrième semaine suivant l'injection des cellules HEK transfectées.
Les résultats expérimentaux présentés à la figure 7 démontrent clairement que la protéine ESM-1 glycosylée a une activité pro-tumorale.
On a également mesuré les taux sériques de protéine ESM-1 chez des souris ayant reçu les cellules HEK témoins et chez les souris ayant reçu les cellules HEK transfectées par l'ADNc codant pour la protéine ESM- 1.
Les résultats sont représentés sur la figure 8.
Les résultats illustrés à la figure 8A montrent que la protéine ESM- 1 n'est pas retrouvée dans les sérums des souris ayant reçu les cellules HEK témoins. Au contraire, un taux sérique de 40 à 50 nanogrammes par ml est retrouvé chez les souris ayant reçu les cellules HEK transfectées
avec l'ADNc codant pour la protéine ESM-1 à la huitième semaine suivant l'injection des cellules.
On a aussi analysé la cinétique des taux sériques de ESM-1 chez les souris ayant reçu la cellule HEK transfectée exprimant la protéine ESM- 1 glycosylée (ESM/WT).
Sur les fig.1 à fig.9C, on comprendra que la conformation du profil des parois de l'élément dans son plan de repos indiffère quant à la portée de l'invention ; par exemple et selon diverses variantes, les parois sont des parois parallélépipédiques comportant un profil rectangulaire (fig.1 à fig.3, sont des parois dont le profil s'étend suivant plusieurs orientations concourantes dans le plan de repos, telles que comportant un profil en dièdre (fig.4 à fig.6) ou globalement en U (fig.7 et fig.8) pour former des éléments d'angle
ou d'ouverture, ou encore sont des parois en demi-lune évidée (fig.9) pour former des éléments de poteau. On comprendra que selon l'une quelconque de ces diverses variantes, la règle relative aux diverses dimensions (L1 à L6 du profil des parois dans le plan P de repos de l'élément est notamment appliquée, grâce à quoi une telle diversité de profils peut être aisément mise en ceuvre pour la construction d'une paroi de bâtiment.
On relèvera que dans le cas où l'élément de l'invention constitue un organe de soutien participant de la paroi du bâtiment, tel un élément de poutre 37 (fig. 9C), un élément de linteau 39 (fig.9B), ou un appui de fenêtre 40 (fig.9 et 19), les parois 42 et 44 le composant sont de préférence reliées l'une à l'autre de manière à former un ensemble monobloc. Dans ce cas, les caractéristiques propres d'un tel élément résident principalement dans la liaison monobloc entre les deux parois 42 et 44 par l'intermédiaire d'une entretoise 46 ménagée à l'un de leur bord, et dans la présence des organes d'emboîtement 50 et 50' susceptibles de coopérer avec les organes d'emboîtement 22 ménagés sur les organes de jonction par aboutement, tels que 8 et 10. La règle susvisée relative aux dimensions des parois 2,2' ou 4,4' et des organes de jonction par aboutement 8,10 est le cas échéant appliquée, au moins en ce qui concerne leur longueur L.
La présente invention est relative à un procédé de mise en tension d'un hauban à torons multiples.
Les haubans à torons multiples peuvent être utilisés dans toutes sortes d'ouvrages de génie civil, notamment pour supporter des éléments structurels de grande portée (tabliers de ponts, couvertures de stade) ou pour assurer la stabilité de structures élancées (tours hertziennes, par exemple).
Quoi qu'il en soit, dans ces types d'ouvrages de génie civil, il convient de tendre les torons d'un hauban a) de manière à ce que, d'une part, la force de tension totale d'un hauban se répartisse de façon uniforme entre tous les torons constitutifs, et ce pour éviter toute surtension dangereuse de certains d'entre eux, conduisant notamment à des risques de rupture par fatigue, b) mais aussi, de façon à ce que, d'autre part, le hauban, considéré dans son ensemble, soit réglé à un niveau aussi proche que possible du niveau théorique prévu lors de la conception de l'ouvrage.
FR 2 652 866 décrit un procédé de mise en tension d'un hauban à torons multiples, permettant d'assurer une répartition uniforme de la tension entre l'ensemble des torons (point a, ci-dessus). Dans ce procédé, on commence par mettre en place et tendre 1e premier toron, dit toron témoin, que l'on ancre alors en le munissant d'une cellule de mesure, qui permettra de connaître la force de tension dans ce toron témoin à tout instant de l'opération d'installation du hauban. Puis on place et tend progressivement un second toron que l'on vient ancrer au moment précis où l'on obtient l'égalité entre sa tension et celle qui prévaut alors dans le toron témoin. On procède de la même manière pour le troisième toron : on l'introduit
dans le hauban, puis on le tend progressivement jusqu'au moment où sa tension et celle du toron témoin deviennent identiques. Et ainsi de suite jusqu'à ce que le dernier toron soit tendu et ancré. Puis on détend le toron témoin, on démonte la cellule de mesure et on le tend à nouveau à la valeur de tension mesurée en dernier par la cellule.
Par conséquent, à chaque fois qu'un nouveau toron est introduit dans le hauban, sa tension est calée sur celle du toron témoin ; les deux tensions, identiques au moment de l'ancrage de ce nouveau toron, demeurent égales en variant par la suite de la même manière lorsque la position relative des ancrages évolue a) soit, sous l'effet de l'augmentation progressive de la tension du hauban au fur et à mesure de la mise en place des torons, b) soit, sous l'effet d'une charge extérieure appliquée à la structure.
Ce procédé, connu sous le nom de procédé d'iso- tension, permet donc de mettre en place l'ensemble des torons d'un hauban en garantissant a priori une répartition uniforme de la force totale du hauban entre tous les torons.
I1 présente toutefois plusieurs inconvénients.
Tout d'abord, l'égalité des tensions du nouveau toron et du toron témoin ne continue à être satisfaite dans le temps que si les deux torons étaient à la même température au moment de l'ancrage du nouveau toron. L'expérience montre que ce n'est pas toujours le cas : le toron témoin contenu dans une gaine exposée au soleil peut présenter une température supérieure de quelques dizaines de degrés à celle du nouveau toron en cours de pose. Après uniformisation des températures, on observe alors une dispersion entre les valeurs des tensions de chaque toron
pouvant dépasser les 10%. D'où, parfois la nécessité d'une opération de retension, en utilisant le procédé décrit, pour uniformiser les valeurs des tensions des torons, et par conséquent un travail supplémentaire.
Par ailleurs, si le procédé connu permet d'imposer une tension identique à tous les torons au moment de la mise en place du hauban, le problème de régler un hauban conformément aux spécifications imposées par les études de conception de l'ouvrage demeure, lui, en dehors du champ d'application de ce procédé connu.
Une approche envisageable pourrait consister à calculer, à partir des caractéristiques de raideur de la structure sur laquelle est fixé le hauban, la tension à appliquer au premier toron, pour que le hauban atteigne, en fin d'opération de mise en place des torons, une force de tension totale donnée. Cependant, l'expérience montre que cette façon de faire manque de précision, compte tenu des incertitudes affectant le chargement réel du premier toron telles que les conditions réelles de contact de la gaine, la présence de tubes d'extrémité temporairement supportés par le toron, et autres. Dans la pratique, on pallie cette difficulté en procédant en deux étapes - dans un premier temps, on met en place les torons comme indiqué précédemment pour atteindre une fraction de la tension définitive (de 60 à 90 %, suivant les projets), - dans un second temps, on évalue par des moyens appropriés l'allongement à imposer à l'ensemble des torons pour atteindre le niveau de réglage définitif, ce calcul donnant des résultats fiables, puisque l'on peut raisonnablement estimer que le poids de la gaine est uniformément réparti entre tous les torons ; on impose alors en général la valeur calculée de
l'allongement au toron témoin, les autres torons étant alors retendus en utilisant le procédé d'iso-tension. I1 est évident que ce double processus complique singulièrement le travail, et donc le coût, liés à l'opération de mise en place et de réglage d'un hauban.
Nous avons également analysé les effets d'autres peptides modifiés ne présentant pas de spécificité vis-à-vis d'une caspase ou bien une spécificité modérée dépendant de l'accessibilité de l'enzyme et de la concentration intracellulaire de l'inhibiteur : - l'inhibiteur z-VAD-fmk qui inhibe un large spectre de caspases, incluant ainsi les caspases initiatrices et les caspases effectrices (Garcia-Calvo et al, 1998) ; - le peptide z-DEVD-fmk qui présente un effet inhibiteur des CPP32-like protéases, agissant principalement sur la caspase-3 effectrice (Nicholson et al, 1995) et de façon moins spécifique sur les caspases-6, 7,8, 10 (Fernandes-Alnemri et al, 1995) ; - le peptide z-AEVD-fmk qui est un inhibiteur de la caspase-10 initiatrice et de façon moins spécifique des caspases-8,9.
2) Effet des peptides inhibiteurs de caspases sur l'apoptose induite des péricytes.
La figure 16 rapporte l'effet des peptides inhibiteurs de caspases sur l'apoptose des péricytes induite par les AGE-méthylglyoxal. Les cellules ont été cultivées pendant deux passages (15 jours environ) en présence d'AGE-méthylglyoxal (ou de BSA-contrôle) et des peptides inhibiteurs z-VAD-fmk, z-DEVD-fmk, z-IETD-fmk, zAEVD-fmk, z-VDVAD-fmk et z-LEHD-fmk (50 uM). L'apoptose a été détectée et dosée par un marquage à l'annexine V, comme décrit dans la section Matériel et Méthodes. Les résultats exprimés en % d'inhibition de l'apoptose induite sont la moyenne de 6 expériences indépendantes pour z-VAD-fmk et zDEVD-fmk, de 4 expériences indépendantes pour z-LEHD-fmk et de 3 expériences indépendantes pour z-VDVAD-fmk, z-AEVD-fmk et z-IETD-fmk.
L'ajout de 50 uM de z-VAD-fmk, z-DEVD-fmk, zAEVD-fmk et z-LEHD-fmk dans le milieu de culture permet une inhibition quasi totale de l'apoptose des péricytes induite par les AGE-méthylglyoxal. Alors que le peptide z-IETD-fmk ne protège pas les cellules de l'apoptose, le peptide zVDVAD-fmk induit une inhibition partielle de l'apoptose induite par les AGE-méthylglyoxal (Figure 16).
3) Effet des peptides inhibiteurs de caspases sur la production stimulée des céramides et des DAG dans les péricytes rétiniens.
La figure 17 montre l'effet des peptides inhibiteurs de caspases z-VAD-FMK et z-DEVD-FMK (50 uM) sur la production stimulée de céramides et de DAG dans les BRP induites par les AGE-méthylglyoxal. Les céramides et les DAG ont été dosés comme décrit dans la section Matériel et Méthodes. Les résultats sont exprimés en % d'inhibition de la production stimulée et sont le résultat de 2 expériences indépendantes.
Les effets des inhibiteurs peptidiques sur la production des céramides et des DAG diffèrent : alors que la production stimulée des deux intermédiaires métaboliques n'est pas affectée dans les péricytes traités avec 50 uM de z-DEVD-fmk ou de z-LEHD-fmk, le peptide z-VAD-fmk bloque la surproduction des céramides et des DAG de 75% et 100% respectivement.
4) Conclusion.
L'effet protecteur du peptide z-VAD-fmk (inhibiteur à large spectre de caspases) sur l'apoptose des péricytes met en évidence l'activation de caspases dans la voie de transduction des signaux apoptotiques. Dans les péricytes cultivés avec ce peptide inhibiteur, la production de céramides et de DAG induite par les AGEméthylglyoxal est bloquée, ceci suggère ainsi l'implication
d'une caspase initiatrice (caspases-2,-8,-10), contrôlant la production des céramides et des DAG.
Dans un premier temps, nous avons vérifié si la caspase-8 initiatrice est l'enzyme activé en réponse aux AGE-Méthylglyoxal. Une incubation des cellules avec son inhibiteur spécifique z-IETD-fmk ne permet pas de bloquer l'apoptose. La caspase-8 ne semble donc pas être impliquée dans l'apoptose des péricytes.
Afin de définir si la caspase-2 initiatrice participe à la transduction du signal menant à l'apoptose, nous avons incubé les péricytes en présence du peptide inhibiteur z-VDVAD-fmk, spécifique de cette caspase. Le peptide z-VDVAD-fmk inhibe partiellement l'apoptose induite par, les AGE-méthylglyoxal, suggérant que la caspase-2 initiatrice semble être impliquée dans l'apoptose des péricytes.
Nous avons également analysé les effets du peptide z-AEVD-fmk, décrit comme un inhibiteur de la caspase-10 initiatrice et inhibiteur moins spécifique de la caspase-8 initiatrice et de la caspase-9 effectrice.
L'effet protecteur de ce peptide sur l'apoptose des péricytes suggère l'activation de la caspase-10 et/ou de la caspase-9, l'implication de la caspase-8 étant exclue par l'absence d'effet de z-IETD-fmk sur l'apoptose. Le peptide z-LEHD-fmk, inhibiteur décrit comme spécifique de la caspase-9 effectrice, a lui aussi un effet protecteur sur l'apoptose des péricytes, mais sans affecter la surproduction des DAG ou des céramides induite par les AGEméthylglyoxal. Ce résultat suggère que la caspase-9, bloquée par z-LEHD-fmk, intervient en aval de la production des DAG et des céramides.
Ainsi, les caspases-2,9 et 10 semblent participer à la transduction du signal apoptotique dans les péricytes rétiniens.
L'effet protecteur du peptide z-DEVD-fmk sur l'apoptose des péricytes suggère que les deux voies métaboliques proposées convergent vers une même caspase de la famille des CPP32-like protéases. Un traitement des péricytes avec ce peptide inhibiteur n'a pas affecté la surproduction des céramides et des DAG induite par les AGEméthylglyoxal. Ce résultat permet alors de conclure que la (les) caspase (s) bloquée (s) par z-DEVD-fmk intervient (nent) en aval des céramides et des DAG. D'autre part, l'inhibition de l'apoptose observée en présence de z-DEVDfmk ne semble pas être liée à l'inhibition des caspases-2, -8,-10 initiatrices puisque le niveau de production des céramides et des DAG n'a pas été affecté. De même, l'inhibition de l'apoptose par z-LEHD-fmk, spécifique de la caspase-9, ne semble pas liée à l'inhibition des caspases initiatrices, puisque le niveau de DAG et céramides n'a pas été affecté. Nous pouvons donc conclure que les deux voies métaboliques convergent bien vers deux caspases effectrices, la caspase 9 et la caspase-3, et peut-être la caspase 6 et 7 des CPP32-like protéases, intervenant dans la phase d'exécution de l'apoptose.
Les résultats sont représentés à la figure 8B.
On peut observer qu'une quantité détectable de protéine ESM-1 est retrouvée dans le sérum des souris dès la cinquième semaine suivant l'injection des cellules et que le taux sérique s'accroît rapidement et continuellement de la cinquième à la douzième semaine suivant l'injection des cellules.
Les résultats expérimentaux illustrés à la figure 8 montrent que les tumeurs qui se sont développées chez les souris ayant reçu les cellules HEK transfectées produisent la protéine ESM-1. De plus, la quantité de protéine ESM-1 produite dans la circulation suit la cinétique de développement des tumeurs chez les souris.
EXEMPLE 6 : Activité pro-tumoriqène de différentes formes de la protéine ESM-1.
A. MATERIELS ET METHODES Les matériels et méthodes utilisés dans cet exemple sont identiques à ceux décrits pour l'exemple X1.
B. RESULTATS Les cellules HEK ont été transfectées respectivement par des vecteurs possédant un insert d'ADN codant respectivement pour la forme sauvage de ESM-1 (ESMNVT), une forme non glycosylée de ESM-1 (ESM/S137A) et une forme glycosylée de ESM-1 mutée au niveau des résidus phénylalanine en positions 134 et 135 qui ont été remplacés chacun par un résidu alanine (ESM/73). Les différentes cellules transfectées ont été injectées par voie sous-cutanée à des souris SCID
âgées de 5 semaines et ayant préalablement reçues des anticorps anti- asialo GM-1.
On a analysé le pourcentage de tumeurs macroscopiquement visible ayant un volume tumorale supérieur à 1 cm3 chez les différents lots de souris. Les résultats sont représentés à la figure 9A.
Les résultats de la figure 9A montrent que seule la protéine ESM-1 glycosylée est capable d'induire des tumeurs chez la souris. Ni la protéine ESM-1 non glycosylée, ni la protéine ESM-1 glycosylée mais mutée sur les résidus phénylalanine en positions 134 et 135 ne sont capables d'induire le développement de tumeurs chez les souris SCID.
On a également analysé le taux sérique de protéine ESM-1 circulante dans les différents lots de souris. Les résultats sont représentés à la figure 9B.
Les résultats de la figure 9B montrent que des taux détectables de protéine ESM-1 sérique ne peuvent être mesurés, à la huitième semaine suivant l'injection des cellules, que chez les souris ayant reçu les cellules HEK exprimant la protéine ESM-1 glycosylée (ESM/WT).
Ni les souris injectées avec des cellules exprimant la protéine ESM-1 non glycosylée (ESM/S137A), ni les souris ayant reçu les cellules HEK exprimant la protéine ESM-1 glycosylée et mutée HEK-ESM/F115A, F116A) ne produisent de protéine ESM-1.
L'ensemble des résultats présentés dans cet exemple confirme le pouvoir pro-tumorigène de la protéine ESM-1 glycosylée.
Les résultats montrent aussi que des formes non glycosylées de la protéine ESM-1 ou encore des formes mutées de la protéine ESM-1 peuvent se comporter comme des antagonistes de cette protéine et posséder un pouvoir préventif et/ou curatif à l'égard de pathologies cancéreuses.
EXEMPLE 7 : Dosage de la protéine ESM-1 circulante chez des patients atteints de cancers bronchopulmonaires à différents stades de développement.
A. Matériels et méthode.
Brève description des dessins Les figures 1 à 4 sont les diagrammes de flux schématiques des premier au quatrième modes de réalisation du procédé de la présente invention respectivement ; les figures 5 et 6 sont les diagrammes de flux schématiques lorsque le procédé proposé par la présente invention est conduit dans un régénérateur comprenant une première zone de combustion du coke possédant une épaisseur variable de lit de catalyseur ; la figure 7 est un diagramme représentant la variation de la surface spécifique du catalyseur en fonction du temps ; la figure 8 est un diagramme représentant la pression statique du gaz de régénération dans un profil de circulation de type Z centripète près du crible intérieur et du crible extérieur en fonction de la position axiale ; et la figure 9 est un diagramme représentant les pressions statiques du gaz de régénération dans un profil de circulation de type Z centrifuge près du crible intérieur et du crible extérieur en fonction de la position axiale. Description détaillée de l'invention le régénérateur comprend de bas en haut une première zone de combustion du coke, une deuxième zone de combustion du coke, une zone d'oxychloration, et une zone de calcination successives.
Les particules de catalyseur désactivees provenant de réacteurs à lit mobile entrent dans le régénérateur, et se déplacent lentement vers le bas sous l'effet de la gravité dans l'espace annulaire de la première zone de combustion du coke, où elles sont mises en contact avec le gaz de régénération provenant de la deuxième zone de combustion du coke, l'air sec fourni et un gaz inerte, et ensuite les particules catalyseur désactivées dont la plupart du coke est brûlé entrent dans la deuxième zone de combustion du coke et viennent en contact avec le gaz de régénération sec, et ensuite particules de catalyseur dont la petite quantité de coke restant est brûlé traversent successivement la zone d'oxychloration pour disperser les composants metalliques et fournir du chlore, et la zone de calcination pour sécher le catalyseur, et ensuite quittent le régénérateur, dans lequel ledit système de recupération comprend une étape de séchage.