INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le premier exemple d'article d'écriture 1 illustre à la figure 1 comporte un corps 2 de forme globalement cylindrique ayant une cloison intérieure 3 délimitant, vers l'arrière, un réservoir 4 pour l'encre liquide Cette cloison 3 est percée d'une ouverture 6, laquelle est obturée par une pointe d'écriture 7 dont l'extrémité arrière 7a débouche dans le réservoir 4 dont l'extrémité avant 7b débouche en dehors du corps 2 de article 1 et forme la tête d'écriture dudit article. Dans l'exemple illustré, l'article 1 comporte également un réservoir tampon 8 qui est disposé dans le compartiment avant 9 du corps 2 autour de la pointe 7. Ce réservoir tampon qui est en contact avec la pointe 7 a pour fonction d'absorber temporairement l'excès d'encre qui est susceptible d'être transféré dans la pointe 7 en cas de variation des conditions d'utilisation de l'article 1, notamment en cas d'augmentation de température de l'air dans le réservoir 4. L'encre absorbée par le réservoir tampon 8 est ensuite restituée à la pointe 7 lorsque les conditions sont redevenues normales. Un tel article d'écriture 1 est notamment connu par le document EP.516.538.
L'extrémité 7b de la pointe 7, extrémité qui fait office de tête d'écriture, est en saillie par rapport la partie avant 2a du corps 2 de l'article 1. Dans l'exemple illustré, cette partie avant a une forme globalement tronconique et est terminée par un embout 10, cylindrique, ayant un évidement central pour le passage de l'extrémité 7b de la pointe 7 et également un orifice latéral 11 pour la circulation d'air depuis l'extérieur vers l'intérieur du compartiment 9.
L'article 1 est également équipé d'un capuchon 12 qui vient s'emboîter sur l'embout 10 pour recouvrir hermétiquement la tête d'écriture de l'article. Ce capuchon 12 a une double fonction, à savoir de protéger la tête d'écriture 7b contre les chocs et d'éviter le séchage de l'encre contenue dans ladite tête d'écriture, séchage qui pourrait s'avérer rédhibitoire s'il provoquait le colmatage de la tête 7b par les composants contenus dans l'encre 5. Il est connu que pour éviter ce risque de colmatage, on ajoute dans l'encre 5 un agent retardateur de séchage, permettant d'augmenter la durée pendant laquelle la tête d'écriture 7b peut rester découverte, sans protection du capuchon 12, sans que cela soit rédhibitoire pour l'utilisation ultérieure de l'article 1. Cette durée est communément dénommée cap off time . L'encre liquide 5 contenant à l'état solubilisé ou de dispersion ledit agent retardateur, diffuse dans la structure poreuse et capillaire de la pointe 7 jusqu'à la tête d'écriture 7b qui est en saillie par rapport à l'embout 10 du corps 2. En cas de 'our prolongé de la tête 7b à l'air libre, le solvant de l'encre qui se trouve superficiellement en periphérie de la tête 7b s'évapore. Lors de cette évaporation, l'agent retardateur, qui reste en place, forme une peau ou un film à l'interface entre l'air extérieur et le solvant. Cette peau ou ce film limite manière conséquente l'évaporation du solvant, ce qui a pour effet d'augmenter le cap off time . Ce film a une très faible résistance mécanique de sorte qu'il s'élimine de lui-même, par frottement contre le support, lors d'une nouvelle utilisation de 'article 1.
Selon la caractéristique de la présente invention, un agent retardateur de séchage est inclus dans la pointe d'écriture 7 en sorte que l'encre 5 se charge de l'agent contenu dans la pointe d'écriture lors de son transfert depuis le réservoir 4 jusqu'à la tête d'écriture 7b. La formation de la peau ou du film au niveau de la tête d'écriture 7b, améliorant le cap off time , est bien sûr identique à ce a été décrit précédemment.
Selon la technique antérieure, les conditions opératoires de fabrication de l'article étaient particulièrement délicates du fait que la préparation de l'encre comportant l'agent retardateur de séchage nécessitait de travailler dans des conditions limites de solubilité ou de dispersion,le plus souvent avec chauffage de l'encre lors de l'assemblage de l'article. Grâce l'invention, ces difficultés disparaissent, l'encre étant exempte d'agent retardateur, ou contenant une teneur en agent retardateur de séchage inférieure à sa limite de solubilité ou de dispersion à température ambiante.
On comprend que l'agent retardateur qui est inclus dans la pointe d'écriture doit pouvoir être entraîné par l'encre qui diffuse par capillarité dans ladite pointe selon certaines conditions. La première condition est que la concentration en agent retardateur dans l'encre qui arrive au niveau de la tête d'écriture 7b doit être suffisante pour qu'il puisse se former une peau ou un film lors de l'évaporation du solvant. La seconde condition est que l'entraînement par l'encre de l'agent retardateur doit être suffisamment faible, en proportion, pour que l'effet recherché puisse être observé pendant toute la durée de vie de l'article c'est-à-dire tant qu'il reste de l'encre liquide 5 dans le réservoir 4.
Pour obtenir une quantité importante d'agent retardateur, inclus dans la pointe 7, on met en oeuvre un procédé de fabrication qui consiste à imprégner, en continu, un élément longiforme de grande capillarité, par exemple un jonc de fibre acrylique 13, par un bain d'imprégnation 14 concentré en agent retardateur de séchage, puis à sécher le jonc imprégné 13', avant de le tronçonner et de l'usiner pour obtenir la pointe d'écriture 7. Sur la figure 3 on a représenté très schématiquement les deux phases d'imprégnation et de séchage mises en oeuvre successivement sur le trajet du jonc 13 grâce à une tête d'imprégnation 15 et un four de sechage 16. I1 peut s'agir de tout type de séchage, par conduction , convection ou micro-ondes.
La tête d'imprégnation 15 est constituée d'un réservoir 17 contenant le bain d'imprégnation 14. Les deux parois verticales 18, 18' en regard l'une de l'autre du réservoir 17 sont percées de deux ouvertures 19, 19' exactement conformées comme la section transversale du jonc 13. Chaque ouverture 19, 19' est prolongée vers l'extérieur par un épaulement 20, 20', notamment annulaire lorsque la section transversale du jonc est circulaire.
La mise en oeuvre du procédé se fait en introduisant le jonc 13 à travers les épaulements 20, 20' les ouvertures 19, 19' de la tête d'imprégnation 15 et à travers les ouvertures 21, 21' du four de séchage 16.
Le jonc est tracté en continu à travers la tête d'imprégnation 15 et le four de séchage 16. La dimension des ouvertures 19 19' et des épaulements 20 20' est ajustée à la section transversale du jonc 13 de manière à ce que le jonc 13 forme lui-même, avec la paroi intérieure des épaulements 20, 20', un joint d'étanchéité, empêchant la sortie directe du bain d'imprégnation 14.
Lors du déplacement continu du jonc 13 a travers la tête d'imprégnation 15, le bain d'imprégnation 14 diffuse naturellement à travers les pores capillaires du jonc 13. Cette diffusion doit se faire de telle sorte qu'au niveau de l'ouverture d'entrée 2 du four de séchage 16, le bain d'imprégnation 14 a diffusé dans toute la section transversale du jonc 13' imprégné Après passage dans le four 16, le solvant du bain d'imprégnation 14 est éliminé de sorte que l'agent retardateur se retrouve inclus de manière sensiblement homogène dans toute la section transversale du jonc 13" sortant du four 16. Ce jonc 13" est ensuite tronçonné et usiné pour former la pointe d'écriture 7.
Etant donné que l'on cherche à avoir une quantité importante d'agent retardateur de séchage inclus dans la pointe d'écriture pour obtenir l'effet desiré pendant toute la vie de l'article , il est souhaitable d'utiliser un bain d'imprégnation qui soit concentré voire très concentré en agent retardateur de séchage. Cependant l'augmentation de la concentration peut , du fait de l'augmentation corrélative de la viscosité du bain, empêcher la diffusion dudit bain dans les conditions précitées . Il convient donc de déterminer la concentration adéquate du bain en agent retardateur de séchage pour obtenir la diffusion dans toute la section transversale du jonc à l'entrée du four, quitte effectuer plusieurs opérations successives d'imprégnation et de séchage pour obtenir finalement la quantité souhaitable d'agent inclus dans l'élement longiforme qui constituera, après tronçonnage et usinage, la pointe d'écriture.
Le solvant du bain d'imprégnation est choisi pour que la concentration adéquate précitée en agent retardateur soit la plus élevée possible . Par contre l'agent retardateur doit avoir une solubilité limitée et contrôlée dans le solvant de l'encre. C'est dans ces conditions que l'on peut obtenir d'une part, une concentration importante de l'agent retardateur dans la pointe d'écriture et d'autre part, un emport limité et continu dudit agent par l'encre diffusant dans la pointe d'écriture lors de l'utilisation de l'article Parmi les agents retardateurs de séchage correspondant à cette variante préférée, on a mis en oeuvre les composés suivants :cétyl stéarate, cétyl palmitate, stéaryl stéarate, myristate de Myristile et surtout l'ester de sorbitan.
Il est donné à titre indicatif et non limitatif un exemple de composition de l'encre et de composition du bain d'imprégnation mettant en oeuvre l'ester de sorbitan (monostéarate de sorbitan).
Homo sapiens 53 atctccctcg tctatagccg gtatgg 26 54 27 ADN Homo sapiens 54 gatcaggctt ccgggtccta gccagtc 27 55 27 ADN Homo sapiens 55 agtgatgtca acatgcgccc aagtacc 27 56 26 ADN Homo sapiens 56 aaccttcaaa cgtgctcagg gctctg 26 57 26
ADN Homo sapiens 57 acatctccag gttcttggtt ccaccc 26 58 29 ADN Homo sapiens 58 gtcgacatga ccaattgtga aaaggatga 29 59 27 ADN Homo sapiens 59 gtcgaccttg tcttgcagtg atgagag 27 60 23 ADN Homo sapiens 60 ctattccatg gaggaggaag tgg 23
61 24 ADN Homo sapiens 61 ttagtcgacg aagaagaaac atag 24
PROMOTEURS SYNTHÉTIQUES ET CHIMÉRIQUES, CASSETTES D'EXPRESSION, PLASMIDES, VECTEURS, PLANTES ET SEMENCES TRANSGÉNIQUES LES CONTENANT ET LEUR MÉTHODE D'OBTENTION.
De manière générale, les promoteurs d'expression sont connus dans le domaine de la biotechnologie et de la manipulation génétique. S'agissant plus particulièrement de la biotechnologie végétale, le taux d'expression d'un gène codant pour un polypeptide à produire dans une cellule hôte est souvenu dépendant du promoteur utilisé. Les différents promoteurs utilisés couramment sont souvent limités à des applications ou des tissus particuliers, en raison de leur spécificité tissulaire ou puissance d'expression. On peut, par exemple, citer le promoteur 35S du virus de la mosaïque du chou-fleur comme un promoteur relativement fort, comparé par exemple au promoteur provenant du gène nos, ces deux promoteurs étant plus particulièrement utilisés dans le domaine de la biotechnologie végétale. Il existe donc un besoin pour de nouveaux promoteurs permettant de pallier les inconvénients de la mise en oeuvre des promoteurs actuels.
Une tentative de combler ce besoin a été rapportée dans la demande de brevet PCT, publiée sous le numéro : 1C 97; 200r, qui décrit l'augmentation du taux d'expression géiqes, en utilisant des "enhancers", (c'est-à-dire ayant un effet positif sur l'activité d'un promoteur), dans des promoteurs connus. Les séquences nucléotidiques des "enhancers" sont riches en bases et T, la quantité totale de ces bases constituant plus de 5C% de la séquence nucléotidique de "l'enhancer". En particulier, les déposants de cette demande préconisent l'utilisation d'une zone "enhancer" provenant du promoteur de la plasrocyanine du pois. Les expressions utilisées dans la description et les
revendications ont la signification suivante : - "acide nucléique" signifie ADN ou ARN ; "séquence d'acide nucléique" signifie un oligomère ou polymère, simple ou double brin, de bases nuclèo'idiques lues à partir de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3', et comprend des plasmides autoréplicants, des gènes, des polymères d'ADN, ou d'ARM, infectieux ou non, et de l'ADN, ou l'ARN, fonctionner ou non-fonctionnel. Dans la notation nuciéof Ldique utilisée dans la présente demande, sauf mention particulière, l'extrémité gauche d' une séquence nucléotidique simple brin est l'extrémité 5' ; - "séquence d'acide nucléique dérivée" signifie que la séquence dérive directement ou indirectement de la séquence à laquelle il est fait référence, par exemple par substitution, délétion, addition, mutation, fragmentation, et/ou synthèse d'un ou plusieurs nucléotides ; - "promoteur" ou "séquence d'acide nucléique promotrice" signifie une région d'acide nucléique en amont du codon de démarrage de la traduction et qui est impliquée dans la reconnaissance et la liaison de l'ARN polynérase et d'autres protéines pour la transcription ; - "promoteur végétal" est un promoteur capable d'initier la transcription dans des cellules végétales ; - "promoteur constitutif" est un promoteur capable d'exprimer des séquences d'acides nucléiques liées de manière opérationnelle audit promoteur, dans tous ou pratiquement tous les tissus de l'organisme hôte pendant tout le développement dudit organisme ; - "promoteur tissulaire spécifique" est an promoteur capable d'exprimer de manière sélective, des séquences d'acides nucléiques liées de manière opérationnelle audit promoteur, dans certains tissus spécifiques de l'organisme hôte ; - "liées de manière opérationnelle" eu "1-ée de manière fonctionnelle" signifie la liaison d'une séquence d'acide nucléique, par exemple un promoteur eu une boîte régulatrice ou fonctionnelle, à une autre séquence d'acide nucléique, par exemple une autre boîte régulatrice ou fonctionnelle, ou un gène
à exprimer qui code pour une protéine à produire, de telle sorte que les séquences exercent leur fonctions primaires dans une cellule, un génome, un vecteur ou une cassette l'expression dans lesquels elles auraient été introduites, c'esr a dire qu'elles soient opérationnelles dans de tels environnements. Or. doit comprendre également que dans le cas d'un promoteur, la séquence du promoteur inclut également des séquences transcrites entre le site de démarrage de la transcription et le codon de démarrage de la traduction ; - "cassette a ' expression" signifie des séquences :1ucéot idLpes capables de diriger l'expression d'une séquence d'acide nucléique, ou d'un gène, codant pour un polypeptide à produire dans un organisme hôte compatible avec de telles séquences. De telles cassettes incluent au moins un promoteur et un signal de terminaison de la transcription, et optionnellement d'autres facteurs nécessaires ou utiles à l'expression ; - "vecteur" signifie des systèmes d'expression, par exemple des projectiles enrobés d'ADN, des véhicules de transit à base d'acides nucléiques, des molécules d'acioe nucléique adaptées pour livrer de l'acide nucléique, et de 'AD1 circulaire autoréplicant autonome, par exemple plasmides, cosmides, phagemides, etc. Si un micro-organisme ou une culture cellulaire recombinant est décrit comme hôte d'un "vecteur a ' expression", ceci inclut de i'ADN circulaire extrachromosomique (tel que par exemple de l'ADN mitochondrial ou chloroplastique ; , de l'ADN ayant été intégré au(x) chromosome(s) hôte(s), le vecteur pouvant être soit répliqué de manière stable par les cellules pendant la mitose en Tant que structure autonome, intégré au génome de l'hôte, soit maintenu dans le n0aU .' le cytoplasme de l'hôte ; "plasmide" signifie une molécule d'AD circulaire autonome capable de réplication dans une cellule, et comprend à la fois les plasmides dits "d'expression" et les pl6sn: >?s dits "de non-expression". Si un micro-organisme ou culture cellulaire recombinante est décrit comme hôte d'un plasmide "a1 expression", ceci comprend à la fois des molécules d'ADN circulaires
extrachromosomiques et de !'ad ayant été ].r.Lei:e au(x) chromosome (, s ) hôte (s). Si le plasmide est maintenu par une cellule hôte, le plasmide est soit répliqué de manière stable par les cellules pendant la mitose en tant que structure autonome, soit intégré au génome de l'hôte ; - "séquence hétérologue" ou "séquence d'acide rucléique hétérologue" signifie une séquence provenant d'une source, nu d'une espèce, étrangère à son environnement, ou si elle provient du même environnement, a été modifiée par rapport à sa forme originale. La modification de la séquence d'acide nucléique peut avoir lieu par exemple par traitement de J'acide nucléique avec une enzyme de restriction pour générer un fragment d'acide nucléique capable d'être lié de manière opérationnelle à un promoteur. La modification peut également avoir lieu par le biais de techniques comme la mutagenèse dirigée ; - "boîte" signifie une séquence d'acide nucléique à laquelle une fonction régulatrice est imputée ; - "like" signifie que la boîte et/ou la séquence d'acide nucléique à laquelle ce terme est associé, comporte une certaine identité de séquence ou un consensus avec une ooiue et/ou une séquence d'acide nucléique connue dite de référence, de préférence une identité de séquence d'au moins 50%, de manière plus préférée une identité de séquence d'au moins 75%, et plus particulièrement une identité de séquence d'au moins 90% avec la séquence de référence. Le pourcentage d'identité de séquence est calculée sur la base d'une fenêtre de comparaison d'au moins 6 bases nucléotidiques. La déterminat ion d'une fenêtre de comparaison peut être effectuée en utilisant des algorithmes d'alignement de séquences pour déterminer une homologue avec une séquence de référence, par exemple l'algorithme d'homologie locale, l'algorithme d' alignement d'homologie, et l'algorithme de recherche de similitude, ces algorithmes existant également sous forme informatique, connus sous les noms i-2-.P, BESTFTT, FASTA et TFASTA. Le pourcentage d'identité de séquence est obtenue en comparant la séquence de référence avec la boite et/ou la séquence d'acide nucléique ;
- "diluée" signifie a position sur une séquence d'acidenucléique d'un élément Identifié, tel qu'une "11u5..::ell, un site de restriction, ou un codon ayant une fonction particulière. La position qui est donnée par un chiffre se réfère à la p.'sitl-r. du début de l'élément dans la séquence d'acide nucléique, saut mention particulière, dans le sens de la lecture de cette dernière, c'est-à-dire dans le sens 5'->3' ; boite "Prolamine-like", "P-box", "motif endosperme", "2J:v1", ou "ÉJémenr 300" signifie un motif ou élément régulateur CL. fonctionnel codant pour des protéines de réserve de nombreuses céréales, et impliqué dans le mécanisme régulateur commun médiane l'expression coordonnée des gènes reines durant le développement de l'albumen de maïs ; - boite "G-like" signifie un motif core ACGT, dont la contribution fonctionnelle à la régulation cranscriptionneJle n' a été définie dans peu de cas, mais qui semble être nécessaire pour une expression maximale d'un promoteur ; - boîte "enhancer" signifie des séquences d'ADH régulatrices qui peuvent agir en cis à distance, indépendamment de leur orientation et en amont ou en aval de leur promoteur cible, et qui peuvent généralement être composés de multiples motifs courts liant une combinaison de facteurs rans pour éventuellement conférer inductibilité, spécificité tissuiaire ou une amélioration générale de l'activité a'un p nageur ; boîte "GATA" signifie un motif ou élément régulateur ou fonctionnel qui peut être nécessaire pour l'activité de oeaucoup de promoteurs régulés par la lumière ; - boîte "asl" ou "activating séquence 1" signifie un motif ou élément régulateur ou fonctionnel provenant de préférence du promoteur 353 du CaMV (virus de la mosaïque de chou-fleur}, pouvant conférer une expression dans les racines et pouvant jouer un rôle plus complexe dans la régulation des promoteurs par interactions synergiques avec d'autres éléments cis-activateurs, et qui peut éventuellement être inaudible par l'acide salicylique ; - boîte "as2" ou "activating séquence 2", signifie @n motif ou
élément r0(jUd2Ur ou fonctionnel provenant de préférence du promoteur 353 du CaMV (virus de la mosaïque de chou-fleur), pouvant conférer une expression dans les tissus photosynthétiques, et pouvant présenter une activité d'activateur transcriptionel ; - boîte "céréale" signifie signifie un motif @ élément régulateur ou fonctionnel pouvant être impliquée dans l'expression spécifique dans les grains de bilé ; - boîte "GC-riche" signifie un motif ou élément régulateur ou fonctionnel riche en nucléotides G ou C, par exemple provenant d'un gémi ni virus ; - "plante transgénique" signifie une plante ayant été obtenue par des techniques de manipulation génétique, et couvre les plantes entières obtenues par de telles manipulations, les plantes régénérées intégrant dans leur génome, ou exprimant, de telles manipulations, leur progéniture, ainsi que les organes végétaux, par exemple les racines, les tiges et les feuilles, obtenus pac ces techniques. Les plantes transgéniques selon la présente invention peuvent avoir différents niveau de ploïdie, et peuvent notamment être polyploïde, diploïde, et haploïde ; "propagule" signifie un amas ou une association de cellules végétales, structuré(e) ou non, permettant la régénération d'une plante entière, par exemples des explants, des cals, des tiges, des feuilles, des raci nes, des boutures, et même des semences.
La demanderesse de la présente invention a pris une approche différente de celle du déposant de la demande PCT discutée préalablement. En effet, la demanderesse de la présente invention a réussi, et ce de manière surprenante, à produire des promoteurs chimériques permettant de satisfaire au besoin décrit précédemment, et notamment permettant d'augmenter le taux d'expression d'un gène ou d'une séquence d'acide nucléique, codant pour un polypeptide à produire, dans une cellule hôte, et notamment une cellule végétale, par rapport aux promoteurs existants les plus couramment utilisés. Par ailleurs, la demanderesse a réussi en même temps à produire une gamme complète de promoteurs de manière à pouvoir choisir celui qu'il
convient, L d' ù 1:.. i .L i s ers e l 0 l -' d P p.L i ,...; a 1:.. ion E.'I1'vSc.,:; 1 ' environnement de sa mise en oeuvre, et ainsi de pouvoir contrôler en quelque sorte le taux d'expression d'un gène à exprimer codant pour un polypeptide à produire. Un exemple d'application de ce principe serait d'utiliser un des promoteurs moins forts de l'invention pour diriger et/ou contrôler 1'expression d'une proté i ne ou enzyme, parexemple un agent de sélection dans une plante,par exemple, la résistance aux antibiotiques ou aux herbicides, ou une co-enzyme ou cofactcur nécessaire à l'assemblage d'une protéine plus importance, et d'utiliser un promoteur plus fort conformément à l'invention pour, par exemple, contrôler l'expression d'un polypeptide à effet thérapeutique.
Encore un autre avantage de la présente invention est que les promoteurs réalisés conformément à l'invention permettent à la fois une expression spécifique dans les grains, mais aussi une dérégulation pour promouvoir l'expression dans d'autres organes, par exemples, les feuilles, les tiges, et le système vasculaire végétal.
Par conséquent, un objet principal de la présente invention est un promoteur chimérique comprenant au moins une séquence d'acide nucléique dérivée d'un gène codant pour une glu'énine à haut poids moléculaire de blé, et de préférence une séquence d'acide nucléique dérivée du gène Dx5 ou D:1' de blé codant pour une gluténine à haut poids moléculaire de blé.