INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Ensuite, les cellules sélectionnées positivement sont isolées, clonées et injectées dans des blastocystes de souris de 3,5 jours, comme cela est décrit par BRADLEY (1987, Production and Analysis of Chimaeric mice. tn : E. J. ROBERTSON (Ed., teratocarcinomas and embryonic stem cells : A practical approach. IRL press, Oxford, page 113). Des blastocystes sont ensuite introduits dans un animal hôte femelle et le développement de l'embryon est poursuivi jusqu'au terme.
Selon une alternative, des cellules de type ES sélectionnées positivement sont mises en contact avec des embryons de 2,5 jours à un stade 8-16 cellules (morulae) comme décrit par WOOD et al. (1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 90 : 4582-4585) ou par NAGY et al. (1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 90 : 8424- 8428), les cellules ES étant internalisées afin de coloniser extensivement le blastocyste, y compris les cellules donnant naissance à la lignée germinale.
Les descendants sont ensuite testés afin de déterminer ceux qui ont intégré la construction polynucléotidique (le transgène).
L'invention a donc également pour objet un animal transgénique non humain dont les cellules somatiques et/ou germinales ont été transformées par un acide nucléique ou une construction polynucléotidique selon l'invention.
L'invention a également trait à des cellules hôtes recombinantes obtenues à partir d'un animal transgénique tel que décrit ci-dessus. Des lignées de cellules recombinantes provenant d'un animal transgénique selon l'invention peuvent être établies en culture à long terme à partir de n'importe quel tissu d'un tel animal transgénique, par exemple par transfection des cultures de cellules primaires avec des vecteurs exprimant des oncogènes tels que le grand antigène T de SV40, tel que décrit par exemple par CHOU (1989, Mol. Endocrinol. Volt. 3 : 1511-1514) et SCHAY et al. (1991, Biochem. Biophys. Acta, vol. 1072 : 1-7).
L'invention est également relative à un procédé pour le criblage in vivo d'une molécule ou d'une substance candidate modulant l'activité d'un acide nucléique régulateur selon l'invention, comportant les étapes consistant à (a) administrer la substance ou la molécule candidate à un animal transgénique tel que défini ci-dessus, (b) détecter le niveau d'expression d'un polynucléotide rapporteur d'intérêt placé sous le contrôle de l'acide nucléique régulateur, (c) comparer les résultats obtenus au (b) avec les résultats obtenus chez un animal transgénique n'ayant pas reçu la substance ou la molécule candidate.
L'invention est en outre relative à un procédé de criblage in vivo d'une substance ou molécule modulant la transcription d'un polynucléotide d'intérêt constitutif d'un acide nucléique régulateur selon l'invention, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à (a) administrer la substance ou molécule candidate à un mammifère transgénique non humain tel que défini ci-dessus, (b) détecter l'expression du polynucléotide d'intérêt chez le mammifère transgénique tel que traité à l'étape (a), et (c) comparer les résultats de détection de l'étape (b) avec les résultats observés chez un mammifère transgénique non humain n'ayant pas reçu la substance ou molécule candidate.
Par exemple un polynucléotide présent à l'état naturel dans une plante ou un animal n'est pas isolé. Le même polynucléotide séparé des acides nucléiques adjacents au sein desquels il est naturellement inséré dans le génome de la plante ou l'animal est considéré comme"isolé".
Un tel polynucléotide peut être inclus dans un vecteur eVou un tel polynucléotide peut être inclus dans une composition et demeurer néanmoins à l'état isolé du fait que le vecteur ou la composition ne constitue pas son environnement naturel.
Le terme"purifié"ne nécessite pas que le matériel soit présent sous une forme de pureté absolue, exclusive de la présence d'autres composés. Il s'agit plutôt d'une définition relative.
Un polynucléotide est à l'état"purifié"après purification du matériel de départ ou du matériel naturel d'au moins un ordre de grandeur, de préférence 2 ou 3 et préférentiellement 4 ou 5 ordres de grandeur.
Aux fins de la présente description, l'expression"séquence nudéotidique" peut être employée pour désigner indifféremment un polynucléotide ou un acide nucléique. L'expression"séquence nucléotidique"englobe le matériel de génétique lui-même et n'est donc pas restreinte à l'information concernant sa séquence.
Les termes"acide nucléique","polynucléotide","oligonucléotide"ou encore"séquence nucléotidique"englobent des séquences d'ARN, d'ADN, d'ADNc
ou encore des séquences hybrides ARN/ADN de plus d'un nucléotide, indifféremment sous la forme simple chaîne ou sous la forme de duplex.
Le terme"nucléotide"désigne à la fois les nucléotides naturels (A, T, G, C) ainsi que des nucléotides modifiés qui comprennent au moins une modification telle que (1) un analogue d'une purine, (2) un analogue d'une pyrimidine, ou (3) un sucre analogue, des exemples de tels nucléotides modifiés étant décrits par exemple dans la demande PCT N WO 95/04 064.
Aux fins de la présente invention, un premier polynucléotide est considéré comme étant"complémentaire"d'un second polynucléotide lorsque chaque base du premier nucléotide est appariée à la base complémentaire du second polynucléotide dont l'orientation est inversée. Les bases complémentaires sont A et T (ouAetU), ou Cet G.
Par"variant"d'un acide nucléique selon l'invention, on entendra un acide nucléique qui diffère d'une ou plusieurs bases par rapport au polynucléotide de référence. Un acide nucléique variant peut être d'origine naturelle, tel qu'un variant allélique retrouvé naturellement, ou peut être aussi un variant non naturel obtenu par exemple par des techniques de mutagenèse.
En général, les différences entre l'acide nucléique de référence et l'acide nucléique variant sont réduites de telle sorte que les séquences nucléotidiques de l'acide nucléique de référence et de l'acide nucléique variant sont très proches et, dans de nombreuses régions, identiques. Les modifications de nucléotides présentes dans un acide nucléique variant peuvent être silencieuses, ce qui signifie qu'elles n'altèrent pas les séquences d'aminoacides codées par ledit acide nucléique variant.
Cependant, les changements de nucléotides dans un acide nucléique variant peuvent aussi produire des substitutions, additions, délétions dans le polypeptide codé par l'acide nucléique variant par rapport aux peptides codés par l'acide nucléique de référence. En outre, de telles modifications de nucléotides dans les régions codantes peuvent produire des substitutions, conservatives ou non conservatives dans la séquence d'aminoacides.
De préférence, les acides nucléiques variants selon l'invention codent pour des polypeptides qui conservent sensiblement la même fonction ou activité biologique que le polypeptide de l'acide nucléique de référence ou encore la
capacité à être reconnus par des anticorps dirigés contre les polypeptides codés par l'acide nucléique initial.
Certains acides nucléiques variants coderont ainsi pour des formes mutées des polypeptides dont l'étude systématique permettra de déduire des relations structure activité des protéines en question. La connaissance de ces variants par rapport à la maladie étudiée est fondamentale puisqu'elle permet de comprendre la cause moléculaire de la pathologie.
On entendra par"fragment"un acide nucléique de référence selon l'invention, une séquence nucléotidique de longueur réduite par rapport à l'acide nucléique de référence et comprenant, sur la partie commune, une séquence en nucléotides identique à l'acide nucléique de référence.
Cette installation comporte des éléments communs à la figure 2 et aux figures 4 et 5.
De manière simplifiée, la figure 6 est structurellement semblable à la figure 4, à l'exception de la colonne CI qui a été remplacée par un ballon de séparation VI, et de l'échangeur E2 qui a été supprimé, du fait de l'absence de rebouilleur lors de l'utilisation d'un ballon de séparation. Le flux de GNL détendu 2 est alors directement introduit dans le ballon séparateur Vl pour être séparé en une première fraction de tête 3 et en une première fraction de pied 4.
Le remplacement de la colonne Cl par le ballon V1 ne modifie pas le déroulement des étapes du procédé tel qu'il a été décrit pour la figure 5. En revanche, du fait d'une moins bonne performance de séparation du ballon V1 par rapport à la colonne Cl, le GNL réfrigéré 4 contiendra normalement plus d'azote dans le cas de l'utilisation d'un dispositif conforme à la figure 6 que dans le cas de l'utilisation d'un dispositif conforme à la figure 5. Bien entendu, le GNL 1 utilisé dans les deux cas est identique physiquement et chimiquement et contient au moins un peu d'azote.
En se rapportant à la figure 7, l'installation représentée est destinée à traiter, à l'aide d'un dispositif conforme au procédé de l'invention, un gaz naturel liquéfié 1, de préférence pauvre en azote, pour l'obtention d'une part, d'un gaz naturel liquéfié refroidi 4, et d'autre part, d'un gaz combustible comprimé 5.
Cette installation comporte des éléments communs à la figure 2 et aux figures 4,5 et 6.
De manière simplifiée, la figure 7 est structurellement semblable à la figure 5, à l'exception de la colonne Cl qui a été remplacée par un ballon séparateur Vl, et de l'échangeur E2 qui a été supprimé, du fait de l'absence de rebouilleur lors de l'utilisation d'un ballon de séparation. Le flux de GNL détendu 2 est
alors directement introduit dans le ballon séparateur V2 pour être séparé en une deuxième fraction de tête 12 et en une deuxième fraction de pied 13.
La deuxième fraction de tête 12 est réchauffée dans un échangeur El puis est introduite dans un compresseur Kl à un étage à moyenne pression 14, intermédiaire entre un étage basse pression 15 et un étage à moyenne pression 11, de la même façon que décrit pour la figure 5.
Le remplacement de la colonne Cl par le ballon V1 ne modifie pas le déroulement des étapes du procédé tel qu'il a été décrit pour la figure 5. En revanche, du fait d'une moins bonne performance de séparation du ballon V1 par rapport à la colonne Cl, le GNL réfrigéré 4 contiendra normalement plus d'azote dans le cas de l'utilisation d'un dispositif conforme à la figure 6 que dans le cas de l'utilisation d'un dispositif conforme à la figure 5. Bien entendu, afin de permettre une bonne comparaison, le GNL 1 utilisé dans les deux cas est identique physiquement et chimiquement.
Afin de permettre une appréciation concrète des performances d'une installation fonctionnant selon un procédé conforme à l'invention, des exemple chiffrés sont maintenant présentés, aux fins d'illustration et non de limitation.
Ces exemples sont donnés sur la base de deux gaz naturels différents A et B dont la composition est donnée ci-après dans le tableau 1 :
Composant Gaz naturel A Gaz naturel B Composition Composition Composition Composition molaire (%) massique molaire (%) massique (%) (%) Azote 0, 100 0, 155 3, 960 6, 127 Méthane 91, 400 81, 378 88, 075 78, 039 Ethane 4, 500 7, 510 5, 360 8, 902 Propane 2, 500 6, 118 1, 845 4, 493 i-Butane 0, 600 1, 935 0, 290 0, 931 n-Butane 0, 900 2, 903 0, 470 1, 509 Total 100,000 100,000 100,000 100,000 Tableau 1 Ces gaz sont volontairement exempts d'hydrocarbures en CS et supérieurs, afin de ne pas alourdir les calculs.
Les autres conditions opératoires sont identiques et conformes à ce qui suit (les chiffres de référence se rapportent à la fig. 1) : - Température du gaz naturel humide 100 : 37 C - Pression du gaz naturel humide 100 : 54 bar - Pré-refroidissement par le réfrigérant 113 avant séchage : 23 C - Température du gaz sec après passage dans l'enceinte 116 : 23, SOC - Pression du gaz sec : 51 bar - Température d'eau de refroidissement : 300C - Température en sortie d'échangeur à eau : 37 C - Température de condensation du propane : 47 C - Rendement des compresseurs centrifuges Kl, K2 et K3 : 82 % - Rendement de la turbine de détente X2 : 85 % - Rendement du compresseur axial XK1 : 86 % - Puissance sur une ligne d'arbre GE6 : 31570 kW - Puissance sur une ligne d'arbre GE7 : 63140 kW - Puissance sur une ligne d'arbre GE5D : 24000 kW
La puissance sur une ligne d'arbre représente la puissance disponible sur un arbre de turbine à gaz Général Electric de référence GE5D, GE6 et GE7. Des turbines de ce type sont couplées aux compresseurs Kl, K2 et K3 représentés sur les figures 1-7.
Les débits de gaz naturel à liquéfier seront choisis de façon à saturer les puissances disponibles sur les lignes d'arbre. Les trois cas suivants sont envisagés (pour un procédé de liquéfaction décrit en figure 1) : - Utilisation pour l'entraînement d'une turbine GE6 et d'une turbine GE7, ce qui correspond à un débit de GNL produit à-160 C d'environ 3 millions de tonnes par an.
- Utilisation pour l'entraînement de deux turbines GE7, ce qui correspond à un débit de GNL produit à-160 C d'environ 4 millions de tonnes par an.
La SLA comprend une hétérogénéité clinique évolutive qui laisse à penser à une hétérogénéité biologique.
La polyarthrite rhumatoïde (PR), anciennement appelée polyarthrite chronique évolutive, est une maladie inflammatoire polyarticulaire chronique responsable de dégâts ostéocartilagineux
entraînant une impotence fonctionnelle douloureuse par déformation et ankylose.
C'est donc une maladie potentiellement sévère qui cause un handicap important chez plus de la moitié des patients, 10 ans après le début des symptômes, et réduit de plusieurs années leur espérance de vie.
Sa prévalence en France serait d'environ 1 % : c'est le rhumatisme inflammatoire chronique le plus fréquent. Il touche 7000 nouveaux individus par an, atteignant plus souvent la femme encore jeune.
La Spondylarthrite (SPR) est une affection rhumatismale chronique se manifestant par une atteinte au niveau lombo-sacré entraînant une ankylose progressive. Cette affection immunologique et inflammatoire est liée à une surexpression de l'antigène d'histocompatibilité B27 (retrouvé dans 90% des cas).
L'importance de ces maladies tant au niveau du nombre de personnes touchées qu'au niveau de coût pour la santé publique, n'est donc pas négligeable.
A ce jour, il n'existe pas de test biologique pour évaluer le stade et/ou prévoir l'évolution de ces maladies. Seul un examen clinique, éventuellement complété par des examens complémentaires, permet de poser le diagnostic de ces maladies.
Il existe donc un réel besoin de pouvoir disposer d'un test diagnostique évolutif spécifique, susceptible de pallier aux insuffisances de la clinique.
Le Demandeur a mis en évidence que l'occurrence des maladies neurodégénératives était associée à des modifications antigéniques, intégrées par les cellules immunocompétentes, se traduisant par la production d'anticorps circulants d'isotypie A et/ou M. Ces anticorps sont dirigés contre les antigènes indiqués dans le Tableau 1 ci-après, montrant les modifications antigéniques et les facteurs bactériens participant à la chronicité de ces maladies :
Antigènes Origine Isotypie de l'anticorps Acides gras (acides palmitique, composés endogènes oléique, myristique) liés par liaison amide Farnésyl Cystéine M Phosphatidylinositol Acétylcholine Acide Azélaïque composé endogène modifié (liaison M amide) Résidu produit très réactif sur Malondialdéhyde des constituants M endogènes NO-Cystéine constituants endogènes NO-Tyrosine modifiés Par #NO et NO-Tryptophane EOR (espèces M NO-Histidine oxygénées réactives) NO2-Tyrosine NO-Phénylalanine NO-Arginine NO-Asparagine NO-Méthionine NO-Créatine NO-Serum Albumin Bovine antigènes bactériens 3 (lag3) Hafnia alvei Aou M antigènes bactériens 5 (Ig5) Pseudomonas Aou M aeruginosa antigènes bactériens 12 (Ig12) Morganella morganii A ou M antigènes bactériens 13 (Ig 13) Proteus mirabilis A ou M antigènes bactériens 16 (Ig 16) Pseudomonas putida A ou M antigènes bactériens 17 (lg17) Citrobacter diversus A ou M antigènes bactériens 19 (Ig 19) Klebsiella A ou M pneumoniae
La détection de ces anticorps peut donc rentrer dans le cadre d'un diagnostic général des maladies neurodégénératives, et dans le suivi de ces maladies.
Un tel procédé de détection de ces anticorps dans un fluide biologique peut comprendre les étapes suivantes : - mise en contact dudit fluide avec chacun des antigènes suivants : Pal, Ole, Myr, Pl, MAD, Ach, FarCys, Aze, NO-Cys, NO-Tyr, NO-Trp, NO-His, NO2-Tyr, NO-Phe, NO-Arg, NO-Asn, NO-Met, NO-Cr, NO-SAB, Ig3, lag5, g12, g13Jg16, Ig17Jg19 et - mise en évidence des complexes éventuellement formés entre lesdits antigènes et les anticorps correspondants.
Comme cela est indiqué dans le Tableau 1, lorsqu'on détecte la présence d'un anticorps dirigé contre un antigène bactérien"Ig", cet anticorps peut être d'isotypie A et/ou d'isotypie M.
Les antigènes non-bactériens autre que la sérum albumin bovine éventuellement nitrosylée sont avantageusement conjugués.
Le réseau des cannelures peut par exemple être formé par le croisement à angle droit de deux séries de gorges sensiblement parallèles et régulièrement espacées.
La première couche 1 est formée, dans un mode de réalisation, par l'assemblage de dalles de polypropylène expansé poreux. De telles plaques sont par exemples commercialisées par la société JSP International sous la dénomination Porous Arpro . Ces plaques présentent les propriétés suivantes - densité (g11): 45; porosité (%): 30 ; - épaisseur: 10 à 30mm ; poids: 0.9 kg pour une épaisseur de 10mm et une surface de 2 m2, 2,7kg pour une épaisseur de 30mm et une surface de 2m2.
Nature du test Hauteur de Unités de Résultats pour plaques Porous Résultats pour plaques Porous chute (cm) test Arpro de 10mm d'épaisseur Arpro de 28mm d'épaisseur Valeur g 7 NIA 38 NIA 47 13 NIA 54 28 Vitesse de 7 MIS 0.52 rebond m/s 0.62 13 MIS 0.67 0.78 Déformation 7 mm 6 maximale 10 mm 7 mm 8 11,2 Tableau I- Tests physiques sur plaques de polypropylène Porous Arpro , conformités aux exigences des normes P90104 et P90112 (source fabricant). Propriétés physiques Méthode de test unités Produit testé: Produit testé Arpro X9702, Arpro X9702, 30g!1 40g!1 Résistance à la compression ISO 844 kPa DIN53421 Vitesse de test : 5mm/min A 25% de déformation 85 120 A 50 % de déformation 150 200 A 75% de déformation 390 530 Résistance à la flamme FMVSS 302 mm/min 75 70 1S03795 Epaisseur échantillon 12,5mm Compression 1S01856 % 9 10 22H/23 C/25% enfoncement Stabilisation: 24h Compression 1S053577 kPa 40 55 a Stauchhàrte Taille échantillon 60`60'30 Tableau Performances des plaques Arpro X9702, densités testées 30g!1, 40p11 (sources fabricant). La première couche 1 en polymère expansé est disposée en dessous de la couche 2 formée, dans un mode de mise en oeuvre, par un plancher en double nappe CTBH, ces nappes étant fixées entre elles par vissage.
Ainsi, exemple, une premier nappe 8 de dix millimètres d'épaisseur environ peut etre fixée à une seconde nappe 9 de dix à quinze millimètres d'épaisseur environ.
Ces nappes 8,9 peuvent être formées par l'assemblage de plaques bouvetées bord à bord, chaque plaque de la nappe supérieure étant fixée, à ses quatre angles, aux plaques sou jacentes de la nappe inférieure, la fixation étant assurée par des vis pénétrant dans des taraudages complémentaires, ou par tout autre moyen équivalent.
Les plaques de la nappe inférieure 8 peuvent être de dimensions, hors l'épaisseur, sensiblement identiques à celles de la nappe supérieure 9, et être décalées rapport à celles ci de sorte que les jointures des plaques de la nappe inferieure ne soient pas placées en regard des jointures des plaques de la nappe supérieure.
Le revetement 3 est par exemple une résine acrylique chargée en sable ou autre materiau équivalent.
Le tableau III ci dessous illustrent les résultats obtenus lors tests de l'athlète de Berlin/Stuttgart, pour une surface formée par une couche en dalles de polypropylène expansé, revêtue d'une couche 2 en plancher 22mm d'épaisseur, revêtue d'une couche de finition 3 en résine G7. Les essais ont étés conduits suivant les recommandations du guide ITF CS04101. Ils consistent essentiellement à mesurer le taux d'amortissement de la surface par comparaison à une surface de béton prise comme référence. Les conditions d'essais étaient les suivantes : température de l'air et de la surface à tester 23 C, humidité relative de l'air dans l'ambiance de test: 69%.
Echantillon testé Réduction de force % (résultats des trois essais) 45g/1 33131 1 31, moyenne : 31 45g11 ajouré 30129l29, moyenne : 29 60g!1 30 1 28128, moyenne : 28 ( 6091l ajouré l 24/23l23, moyenne : 23 Tableau III. La surface obtenue présente selon la classification du guide ITF CS 04I01, une capacité d'absorption dans le haut de la fourchette dite modérée .
Elément coffrage en tôle d'acier profilée pour la réalisation d'un plancher bacs métalliques collaborants.
La présente invention concerne un élément de coffrage en tôle d'acier profilée pour la réalisation d'un plancher à bacs métalliques collaborants réalises avec du beton armé coulé dans ledit coffrage. Le type de plancher coulé dans un coffrage composé d'un assemblage d'éléments profilés métalliques est réalisé dans le domaine du bâtiment, tels quhabitations, hôtels, hôpitaux, bâtiments industriels ou pour parkings.
multiples formes géométriques de profils avec différents dispositifs déformations locales dites embossages sont actuellement utilisés pour réaliser coffrages collaborants.
On entend par coffrage collaborant le fait que le coffrage reste à demeure et apporte au plancher construit ses propriétés mécaniques en traction et flexion de l'acier dans la conception générale d'un béton dit armé. Les proportions géométriques de la tôle et la disposition des embossages ont une grande influence sur la résistance du coffrage en phase de chantier, au moment du montage dudit coffrage, en phase de coulage et également sur l'efficacité de la collaboration entre les éléments de coffrage en acier associé au remplissage béton, après durcissement de celui-ci.
Du point de vue de la forme géométrique, on distingue essentiellement deux types de profils : - le profil dit ouverts dans lequel le profil oméga a une forme générale trapézoïdale ou rectangulaire.
- le profil dit fermés dans lequel le profil oméga a une forme générale en queue d'aronde.
Concernant les embossages, ils constituent des déformations localisées réalisées sur les surfaces planes du profilé lesdites déformations formant emboutis notamment du type, bouton rond, bouton ovale, nervure transversale crantage, chevron ou toute autre image.
- Incuber 15 à 20 heures à 42 C, avec rotation. 4-Lavages : - Un lavage à température ambiante dans du SSC 2X, pour rincer. - 2 fois 5 minutes à température ambiante SSC 2X et SDS 0,1%.
Les résultats présentés à la figure 5 montrent que le gène ABCA7 de souris est exprimé dans les tissus adultes. Une quantité plus élevée d'ARNm ABCA7 murin est détectée dans les tissus hématopoïétiques tels que la rate et le thymus, ce qui est cohérent avec l'expression de ABCA7 qui a été observée dans les lignées myélomonocytaires et Iymphocytaires. Aucune expression du gène ABCA7 n'a été détectée dans les lignées cellulaires fibroblastiques.
La figure 4 montre un pattern d'expression similaire du gène ABCA7 humain avec toutefois un fort signal d'hybridation dans le foie foetal. EXEMPLE 4 : Analvse du profil d'expression qénique pour les dvsfonctionnements dans le métabolisme des lipides, ou dans la signalisation de l'inflammation