INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Acad. Sci. USA 82 :8624-8628 et Lewin, page 1017).
Les événements de recombinaison qui conduisent au rapprochement des segments V, D et J-C sont catalysés par une multitude de protéines, comprenant RAG-1 et RAG-2 qui reconnaissent des séquences nonamères et heptamères présentes aux extrémités de recombinaison des séquences de gènes V, D et J-C. En fonction de l'orientation de ces séquences nonamères/heptamères, la recombinaison a pour résultat une inversion ou une délétion. Les deux types d'événements ont pour résultat une modification du schéma de fragments de digestion par des enzymes de restriction de l'ADN génomique. En outre, un événement de délétion n'a pas obligatoirement pour résultat une perte totale du fragement excisé. En variante, les extrémités du fragment excisé sont rejointes pour produire un ADN circulaire qui reste dans la cellule (Okazaki et al., 1987, Cell 49:477-85 ; David et al., 1991, J. Exp. Med. 173:743-6 ; Livak et Schatz, 1996, Mol. Cell Biol. 16 :609-18 ; et al., 1993, Annu Rev Immunol. 11:361-84). Chaque segment de gène comporte bien entendu deux allèles puisque les cellules ont un complément chromosomique diploïde.
Dans l'état de lignée germinale normal, les gènes Css1 et Css2 sont arrangés de la manière représentée sur la figure 1, Toyonaga et al., 1985. Un produit de digestion par restriction de l'ADN génomique avec EcoRI engendre deux bandes correspondantes détectables par la sonde utilisée dans l'expérience (la sonde est un fragment d'ADN marqué dérivé de Cpl qui s'hybride également à Cp2 en raison d'un haut degré d'homologie de séquence) : (i) une bande de 12 kb contenant la séquence Css1 ; et (ii) une bande de 4 kb contenant la séquence Css2. Cette configuration de lignée germinale est constatée dans des cellules immatures indifférenciées (voie A de la figure 18). Cette configuration de lignée germinale est également parfaitement illustrée par la voie 3 (2 heures avec
l'anticorps CR3/43) de la figure 18, donnant un motif identique à celui de la voie A.
A l'état différencié, les deux allèles des gènes Css1 et Css2 subissent un réarrangement de telle sorte qu'il n'existe plus un fragement de 12 kb au niveau du locus Css1 ou un fragment de 4 kb au niveau du locus Css2. En fait, aucun fragment hybridant dérivé du locus Css1 n'est présent sur le gel (cela est dû à la délétion de la séquence hybridante provenant des deux allèles Css1 en résultat de la recombinaison). Comme pour le locus Css2, il existe réellement à présent deux bandes principales corrrespondant à des "allèles" différents résultant de réarrangements sur les deux chromosomes. La plus grande bande, qui a une dimension inférieure à 4 kb, correspond à un fragment d'un des deux allèles réarrangés. La bande la plus petite est un fragment de l'autre allèle réarrangé. La bande secondaire intermédiaire est probablement dérivée d'un clone secondaire de cellules Daudi avec un réarrangement différent - en conséquence, elle est présente en une quantité sous-molaire pour chaque allèle. Néanmoins, l'état de réarrangement est observé très nettement dans la voie 1 où les deux bandes principales sont nettement visibles.
Deux heures avec l'anticorps témoin négatif (TAL.1B5) qui se lie à la chaîne a de MHC-DR ont effectivement pour résultat la perte de la bande supérieure, tandis que la bande inférieure a une intensité similaire à celle des cellules non traitées dans la voie 1 (voir la voie 2). Une explication possible de ce phénomène consiste en la différenciation des cellules, ayant en outre pour résultat un événement de recombinaison supplémentaire au niveau du locus Css2 d'un allèle, qui conduit à la perte des séquences Css2. Cela est totalement en accord avec les phénomènes connus.
Vingt-quatre heures avec l'anticorps témoin négatif se révèlent rétablir les trois bandes observées dans les cellules non traitées (voir la voie 4). Cependant, les
bandes migrent effectivement à une position inférieure à celle des bandes observées dans la voie 2. La manière dont cela se produit n'a pas été nettement établie. Une explication possible consiste en la réintégration de séquences éliminées par délétion, en conséquence avec le modèle de formation de boucle - excision - réintégration (Malissen et al., 1986, Nature 319 :28-32). aucun résultat constaté avec l'anticorps TAL.1B5 au bout de 2 heures ou de 24 heures n'indique un réarrangement en le motif de lignée germinale. Les voies 2 et 4 représentent réellement un témoin négatif - l'anticorps contre la chaîne a n'a pas pour résultat le rétablissement des séquences de la lignée germinale.
A l'opposé, les résultats obtenus avec un anticorps monoclonal (CR3/43) contre la chaîne ss de MHC-DR au bout de deux heures mettent en évidence un motif de bandes qui correspond à la configuration de la lignée germinale, à savoir une bande de 12 kb et une bande de 4 kb (comparer la voie 3 avec la voie A) . En d'autres termes, ces résultats montrent que le motif de restriction de lignée germinale au niveau des locus Css1 et Css2 a été rétabli pour tous les allèles.
La présente invention concerne aussi de façon plus générale les séquences nucléotidiques issues de SEQ ID NI 1 à SEQ ID NI 11 et codant pour un polypeptide de L. innocua, telles qu'elles peuvent être isolées à partir de SEQ ID NI làSEQIDN ll.
De plus, les séquences nucléotidiques caractérisées en ce qu'elles comprennent une séquence nucléotidique choisie parmi : a) une séquence nucléotidique codant pour un polypeptide, choisie parmi les séquences SEQ ID Nui 12 à SEQ ID ? 689 et SEQ ID ? 2053 à SEQ ID ? 2056 ; b) une séquence nucléotidique comportant au moins 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% d'identité avec une séquence nucléotidique codant pour un polypeptide, choisie parmi les séquences SEQ ID ? 12 à SEQ ID NI 689 et SEQ ID Nui 2053 à SEQ ID ? 2056 ;
c) une séquence nucléotidique s'hybridant dans des conditions de forte stringence avec une séquence nucléotidique codant pour un polypeptide, choisie parmi les séquences SEQ ID NO 12 à SEQ ID N 689 et SEQ ID NO 2053 à SEQ ID NO 2056 ; d) une séquence nucléotidique complémentaire ou d'ARN correspondant à une séquence telle que définie en a), b) ou c) ; e) une séquence nucléotidique d'un fragment représentatif d'une séquence telle que définie en a), b), c) ou d) ; et f) une séquence telle que définie en a), b), c), d) ou e) modifiée, sont également des objets de l'invention.
La présente invention concerne également une séquence nucléotidique de Listeria monocytogenes sérotype 4b caractérisée en ce qu'elle correspond à SEQ ID NO 1068 à 2041.
La présente invention concerne également une séquence nucléotidique de Listeria innocua caractérisée en ce qu'elle est choisie parmi : a) une séquence nucléotidique comportant au moins 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% d'identité avec SEQ ID No 1068 à SEQ ID NO 2041 ; b) une séquence nucléotidique hybridant dans des conditions de forte stringence avec SEQ ID NO 1068 à SEQ ID N 2041 ; c) une séquence nucléotidique complémentaire de SEQ ID NO 1 ou complémentaire d'une séquence nucléotidique telle que définie en a), ou b), ou une séquence nucléotidique de l'ARN correspondant à l'une des séquences a) ou b) ; d) une séquence nucléotidique d'un fragment représentatif de SEQ ID NO 1068 à SEQ ID N 2041, ou d'un fragment représentatif d'une séquence nucléotidique telle que définie en a), b) ou c) ; e) une séquence nucléotidique comprenant une séquence telle que définie en a), b), c) ou d) ; et f) une séquence nucléotidique telle que définie en a), b), c), d) ou e) modifiée.
De façon plus particulière, la présente invention a également pour objet les séquences nucléotidiques caractérisées en ce qu'elles sont issues de SEQ ID NO 1068 à SEQ ID N 2041 et en ce qu'elles codent pour un polypeptide, choisies parmi les séquences SEQ ID NO 690 à SEQ ID NO 1067 et SEQ ID NO 2049 à SEQ ID N 2052. La présente invention concerne aussi de façon plus générale les séquences nucléotidiques issues de SEQ ID N 1068 à 2041, et codant pour un polypeptide de L. monocytogenes, telles qu'elles peuvent être isolées à partir de SEQ ID NO 690 à 1067 et SEQ ID NO 2049 à SEQ ID NO 2052.
De plus, les séquences nucléotidiques caractérisées en ce qu'elles comprennent une séquence nucléotidique choisie parmi : a) une séquence nucléotidique codant pour un polypeptide, choisie parmi les séquences SEQ ID NO 690 à SEQ ID N 1067 ; b) une séquence nucléotidique comportant au moins 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% d'identité avec une séquence nucléotidique codant pour un polypeptide, choisie parmi les séquences SEQ ID N 690 à SEQ ID NO 1067 ; c) une séquence nucléotidique s'hybridant dans des conditions de forte stringence avec une séquence nucléotidique codant pour un polypeptide, choisie parmi les séquences SEQ ID N 690 à SEQ ID N 1067 ; d) une séquence nucléotidique complémentaire ou d'ARN correspondant à une séquence telle que définie en a), b) ou c) ; e) une séquence nucléotidique d'un fragment représentatif d'une séquence telle que définie en a), b), c) ou d) ; et f) une séquence telle que définie en a), b), c), d) ou e) modifiée, sont également des objets de l'invention.
Par acide nucléique, séquence nucléique ou d'acide nucléique, polynucléotide, oligonucléotide, séquence de polynucléotide, séquence nucléotidique, termes qui seront employés indifféremment dans la présente description, on entend désigner un enchaînement précis de nucléotides, modifiés ou non, permettant de définir un fragment ou une région d'un acide nucléique,
comportant ou non des nucléotides non naturels, et pouvant correspondre aussi bien à un ADN double brin, un ADN simple brin qu'à des produits de transcription desdits ADNs. Ainsi, les séquences nucléiques selon l'invention englobent également les PNA (Peptid Nucleic Acid).
Il doit être compris que la présente invention ne concerne pas les séquences nucléotidiques dans leur environnement chromosomique naturel, c'est-à-dire à l'état naturel. Il s'agit de séquences qui ont été isolées et/ou purifiées, c'est-à-dire qu'elles ont été prélevées directement ou indirectement, par exemple par copie, leur environnement ayant été au moins partiellement modifié. On entend ainsi également désigner les acides nucléiques obtenus par synthèse chimique.
Par pourcentage d'identité entre deux séquences d'acides nucléiques ou d'acides aminés au sens de la présente invention, on entend désigner un pourcentage de nucléotides ou de résidus d'acides aminés identiques entre les deux séquences à comparer, obtenu après le meilleur alignement, ce pourcentage étant purement statistique et les différences entre les deux séquences étant réparties au hasard et sur toute leur longueur. On entend désigner par"meilleur alignement"ou "alignement optimal", l'alignement pour lequel le pourcentage d'identité déterminé comme ci-après est le plus élevé. Les comparaisons de séquences entre deux séquences d'acides nucléiques ou d'acides aminés sont traditionnellement réalisées en comparant ces séquences après les avoir alignées de manière optimale, ladite comparaison étant réalisée par segment ou par fenêtre de comparaison pour identifier et comparer les régions locales de similarité de séquence. L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé, outre manuellement, au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Smith et Waterman (1981, Ad.
App. Math. 2 : 482), au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Neddleman et Wunsch (1970, J. Mol. Biol. 48 : 443), au moyen de la méthode de recherche de similarité de Pearson et Lipman (1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 : 2444), au moyen de logiciels informatiques utilisant ces algorithmes (GAP, BESTFIT, BLAST P, BLAST N, FASTA et TFASTA dans le Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI). Afin d'obtenir l'alignement optimal, on utilise de préférence le programme BLAST, avec la matrice BLOSUM 62 On peut également utiliser les matrices PAM ou PAM250.
Le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acides nucléiques ou d'acides aminés est déterminé en comparant ces deux séquences alignées de manière optimale, la séquence d'acides nucléiques ou d'acides aminés à comparer pouvant comprendre des additions ou des délétions par rapport à la séquence de référence pour un alignement optimal entre ces deux séquences. Le pourcentage d'identité est calculé en déterminant le nombre de positions identiques pour lesquelles le nucléotide ou le résidu d'acide aminé est identique dans les deux séquences, en divisant ce nombre de positions identiques par le nombre total de positions comparées et en multipliant le résultat obtenu par 100 pour obtenir le pourcentage d'identité entre ces deux séquences.
Par séquences nucléiques présentant un pourcentage d'identité d'au moins 75%, de préférence 80%, 85% ou 90%, de façon plus préférée 95% voire 98%, après alignement optimal avec une séquence de référence, on entend désigner les séquences nucléiques présentant, par rapport à la séquence nucléique de référence, certaines modifications comme en particulier une délétion, une troncation, un allongement, une fusion chimérique et/ou une substitution, notamment ponctuelle, et dont la séquence nucléique présente au moins 75%, de préférence 80%, 85%, 90%, 95% ou 98%, d'identité après alignement optimal avec la séquence nucléique de référence. Il s'agit de préférence de séquences dont les séquences complémentaires sont susceptibles de s'hybrider spécifiquement avec les séquences de référence. De préférence, les conditions d'hybridation spécifiques ou de forte stringence seront telles qu'elles assurent au moins 75 %, de préférence 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% d'identité après alignement optimal entre l'une des deux séquences et sa séquence complémentaire.
Une hybridation dans des conditions de forte stringence signifie que les conditions de température et de force ionique sont choisies de telle manière qu'elles permettent le maintien de l'hybridation entre deux fragments d'ADN complémentaires. A titre illustratif, des conditions de forte stringence de l'étape d'hybridation aux fins de définir les fragments polynucléotidiques décrits ci-dessus, sont avantageusement les suivantes
L'hybridation ADN-ADN ou ADN-ARN est réalisée en deux étapes : (1) préhybridation à 42 C pendant 3 heures en tampon phosphate (20 mM, pH 7, 5) contenant 5 x SSC (1 x SSC correspond à une solution 0, 15 M NaCI + 0, 015 M citrate de sodium), 50 % de formamide, 7 % de sodium dodécyl sulfate (SDS), 10 x Denhardt's, 5 % de dextran sulfate et 1 % d'ADN de sperme de saumon ; (2) hybridation proprement dite pendant 20 heures à une température dépendant de la taille de la sonde (i. e. : 42OC, pour une sonde de taille > 100 nucléotides) suivie de 2 lavages de 20 minutes à 20 C en 2 x SSC + 2 % SDS, 1 lavage de 20 minutes à 20 C en 0, 1 x SSC + 0, 1 % SDS. Le dernier lavage est pratiqué en 0, 1 x SSC + 0, 1 % SDS pendant 30 minutes à 60 C pour une sonde de taille > 100 nucléotides. Les conditions d'hybridation de forte stringence décrites ci-dessus pour un polynucléotide de taille définie, peuvent être adaptées par l'homme du métier pour des oligonucléotides de taille plus grande ou plus petite, selon l'enseignement de Sambrook et al., (1989, Molecular cloning : a laboratory manual. 2" Ed. Cold Spring Harbor).
On observe à la fréquence souhaitée (dite fréquence de calage) une augmentation ponctuelle de l'amortissement, caractérisé par le déphasage entre le signal d'excitation (vibration du GMP) et le signal de réception (effort injecté dans la caisse du véhicule). Ceci est accompagné d'une variation de la raideur dynamique, elle-même caractérisée par le module (valeur absolue) du rapport entre les amplitudes de ces deux signaux (K = F/ X) : cette variation correspond à une diminution dans une bande de fréquences inférieures à la fréquence de calage, suivie par une brusque augmentation autour de cette fréquence et d'un plateau stable aux fréquences supérieures.
Pour répondre à cet objectif de comportement dynamique haute fréquence, l'invention concerne selon son acception la plus générale une articulation hydroélastique à comportement dynamique haute fréquence, destinée à être interposé entre un premier élément [la structure de caisse par exemple] et un deuxième élément [un pain porteur de liaison avec le châssis du véhicule par exemple], comprenant une armature extérieure rigide destinée à être solidarisée avec l'un desdits éléments, et une armature intérieure rigide destinée à être solidarisée avec l'autre desdits éléments, ainsi qu'un corps en élastomère reliant entre elles les armatures intérieure et extérieure pour former une chambre de travail et communiquant avec au moins une chambre d'expansion, une armature intermédiaire évidée étant noyée dans la masse d'élastomère, caractérisée en ce que l'armature intermédiaire est formée de deux flasques annulaires reliées par au moins deux entretoises latérales, la masse en élastomère présente deux pains porteurs pleins assurant la liaison entre lesdites entretoises latérales et l'armature intérieure et formant entre lesdits pains porteurs une chambre de travail en forme de voûte s'ouvrant vers la périphérie, ainsi qu'au moins une membrane annulaire s'étendant entre les deux entretoises principales, du côté opposé à la chambre de travail, lesdites entretoises de l'armature intermédiaire et l'armature extérieure délimitant deux canaux de liaison accordés en fréquence assurant la circulation d'un fluide entre la chambre de travail et au moins une chambre d'expansion périphérique.
L'intérêt principal d'une telle articulation est d'abaisser la raideur dynamique dans une bande de fréquences inférieures à la fréquence de calage et d'améliorer par la même le filtrage des vibrations du Groupe Motopropulseur (typiquement le bourdonnement moteur et/ou les médiums) sans diminuer la raideur statique
nécessaire au maintien des deux organes à relier. On peut alors obtenir une raideur dynamique inférieure à la raideur statique de l'articulation.
Selon une variante préférée, l'armature intermédiaire présente une troisième entretoise centrale disposée à l'opposé de la chambre de travail, la masse en élastomère formant deux membranes périphériques s'étendant entre ladite entretoise centrale et chacune des entretoises principales encadrant la chambre de travail.
Avantageusement, la chambre de travail présente une zone intérieure en forme de segment de tore creux à section sensiblement semi-circulaire, prolongée par une partie évasée.
De préférence, les flasques annulaires de l'armature intermédiaire présentent, sur les deux entretoises principales une nervure radiale de renfort.
Selon une variante, l'armature intermédiaire présente une butée de limitation en détente disposée à l'opposé de la chambre de travail.
Selon une autre variante, l'armature intermédiaire présente une butée de limitation en attaque disposée dans la chambre de travail.
Selon un mode de réalisation préféré, l'armature intérieure présente une section trapézoïdale dont la petite base est du côté de la chambre de travail.
De préférence, la masse en élastomère recouvre les surfaces extérieures des flasques de l'armature intermédiaire.
Selon un mode de mise en oeuvre préféré, l'armature extérieure présente avant assemblage de l'articulation un collet battu.
La présente invention sera mieux comprise à la lecture de la description d'un exemple non limitatif de réalisation qui suit, se référant aux dessins annexés où :
- la figure 1 représente une vue d'ensemble d'une articulation selon l'invention ; - la figure 2 représente une vue en perspective de l'armature intermédiaire ; - la figure 3 représente une vue en perspective de l'armature intérieure ; - la figure 4 représente une vue en perspective de l'armature extérieure ; - la figure 5 représente une vue selon un plan de coupe axial, passant par le milieu de la chambre de travail ; - la figure 6 représente une vue selon un plan de coupe transversal ; - la figure 7 représente une vue éclatée de l'articulation.
L'articulation selon l'invention est composée : d'une armature extérieure (1) d'une armature intérieure (2) d'une armature intermédiaire (3) d'une masse en élastomère (4).
Le corps (10) de l'articulation est constitué d'une armature intermédiaire (3) réalisée en aluminium moulé ou suivant tout autre moyen de fabrication (tôle emboutie, pliée et soudée, moulage thermoplastique...) et d'une armature intérieure (2) pouvant être généralement en aluminium moulé ou extrudé.
Cette structure 36 comprend un barreau-laser 38 qui est pompé par un ensemble de diodes lasers 40 fonctionnant de façon continue. Néanmoins il peut être avantageux de choisir un laser différent des autres pour créer la première impulsion dite"prépulse".
Chaque laser est monté en oscillateur, sans amplificateur de lumière.
Chaque laser est formé dans une cavité délimitée par un premier miroir hautement réfléchissant 42 et par un deuxième miroir 44 qui est partiellement réfléchissant pour laisser passer le faisceau lumineux engendré par le laser.
Cette cavité est prévue pour permettre à ce faisceau d'avoir une faible divergence, comprise entre 1,2 et 10 fois la limite de diffraction, pour une faible longueur de cavité, de façon à obtenir aussi des impulsions lumineuses de courte durée, entre 5ns et 100ns.
On utilise deux lentilles divergentes 46 et 48 que l'on dispose entre les miroirs 42 et 44, de part et d'autre du barreau-laser 38.
Les distances entre les composants optiques sont ajustées de façon à ce que les différentes lentilles présentes dans la cavité donnent un diamètre du mode fondamental de la cavité 1,5 à 10 fois plus petit que le diamètre du barreau amplificateur ou barreau-laser. Pour cet ajustement on tient compte des focales thermiques comme sait le faire l'homme du métier.
La structure de pompage 36 comprend par exemple une tête double avec pompage homogène et compensation de biréfringence par rotation de 900 de la polarisation.
Le diamètre du barreau-laser 38 peut être compris entre 3 mm et 6 mm.
Ces caractéristiques sont utiles pour ne pas détériorer les performances de la cavité-laser, surtout lorsque la puissance moyenne est forte.
Pour rendre chaque laser impulsionnel, on dispose dans la cavité de ce laser des moyens de déclenchement, par exemple des moyens acousto-optiques.
Dans l'exemple de la figure 4, on utilise deux déflecteurs acousto-optiques 50 et 52 qui sont
commandés par les moyens de commande 18 et disposés dans l'espace délimité par les lentilles divergentes 46 et 48, de part et d'autre du barreau-laser 38.
On utilise ces deux déflecteurs acoustooptiques 50 et 52 pour bloquer la cavité avec des gains correspondant à des puissances moyennes comprises entre 150 W et 600 W.
Les moyens de commande 18 permettent la variation et la stabilité de la source EUV selon les besoins de la microlithographie ainsi que la synchronisation des lasers 2,4 et 6.
La fréquence de récurrence est de 10 kHz pour chacun des 8 lasers puisque ceux-ci ne forment qu'un seul groupe et que chaque impulsion est une impulsion composite, c'est-à-dire une impulsion constituée d'une préimpulsion suivie des sept autres impulsions élémentaires.
Les moyens de commande 18 comprennent des moyens (non représentés) de génération des courants d'alimentation des diodes-lasers de pompage 40 ainsi que des moyens (non représentés) de génération de courants de radio-fréquence modulée, destinés à commander chaque couple de déflecteurs acousto-optiques 50 et 52.
Au cours de l'opération 14, l'utilisateur accède à l'application interne 110 en sélectionnant son adresse Internet. Au cours de l'opération 15, l'application Internet 110 télécharge une routine applicative certifiée dans le poste utilisateur destinataire 200.