INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Pour la préparation d'anticorps monoclonaux, on peut utiliser des méthodes usuelles de production d'anticorps, à partir de lignées cellulaires, telles que la technique des hybridomes (Kohler et al., Nature (1975) 256 : 495- 497), la technique des trimes, la technique des hybridomes de cellules B humaines (Kozbor et al., Immunology Today (1983) 4 : 72) et la technique des hybridomes EBV (Cole et al., MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, pp. 77-96, Alan R. Liss, 1985).
Les techniques de production d'anticorps simple-chaîne telles que décrites, par exemple, dans le brevet US No 4,946, 778 peuvent être également utilisées.
Agents interagissant avec le polypeptide de l'invention La présente invention a également pour objet un procédé d'identification d'un agent activateur ou inhibiteur d'un polypeptide conforme à l'invention, comprenant : a) la préparation d'un vecteur recombinant comprenant un polynucléotide conforme à l'invention comportant au moins un polymorphisme de type SNP codant selon l'invention, b) la préparation de cellules hôtes comprenant un vecteur recombinant selon a), c) la mise en présence de cellules hôtes selon b) avec un agent à tester, et b) la détermination de l'effet activateur ou inhibiteur généré par l'agent à tester.
L'étape d) du procédé ci-dessus peut être mise en oeuvre en utilisant un agent à tester marqué directement ou indirectement. Elle peut aussi comprendre un test de compétition, en utilisant un agent marqué ou non et un agent compétiteur marqué.
La présente invention a aussi pour objet une méthode pour l'identification d'un agent activé ou inhibé par un polypeptide conforme à l'invention, comprenant : a) la préparation d'un vecteur recombinant comprenant un polynucléotide conforme à l'invention comportant au moins un polymorphisme de type SNP codant selon l'invention, b) la préparation de cellules hôtes comprenant un vecteur recombinant selon a), c) la mise en présence de cellules hôtes selon b) avec un agent à tester, et b) la détermination de l'effet activateur ou inhibiteur généré par l'agent à tester.
Détection de maladies La présente invention a aussi pour objet un procédé de détection de l'expression d'un polypeptide de séquence d'acides aminés ID SEQ ? 2 (ou un polypeptide comportant les acides aminés compris entre 24 et 189 de la séquence d'acides aminés ID SEQ N'2) codé par un polynucléotide conforme à l'invention et/ou d'un polypeptide conforme à l'invention, comprenant : a) la détection de la présence ou de l'absence d'un polynucléotide selon l'invention dans le génome du sujet, et/ou b) la détermination de la concentration d'un polypeptide selon l'invention chez un sujet.
Enfin l'invention a également pour objet les colorants diazoïques dicationiques de formule (1) telle que définie précédemment.
COMPOSITION POUR LA TEINTURE DES FIBRES KERATINIQUES COMPRENANT UN COLORANT DIAZOÏQUE DICATIONIQUE PARTICULIER L'invention a pour objet une composition pour la teinture des fibres kératiniques, en particulier des cheveux humains, contenant un colorant diazoïque dicationique particulier, ainsi que le procédé de teinture des fibres kératiniques mettant en oeuvre une telle composition. L'invention a aussi pour objet des colorants dicationiques diazoïques nouveaux.
Ce procédé de coloration d'oxydation consiste à appliquer sur les fibres kératiniques, des bases d'oxydation ou un mélange de bases d'oxydation et de coupleurs avec un agent oxydant, par exemple de l'eau oxygénée, à laisser pauser, puis à rincer les fibres. Les colorations qui en résultent sont permanentes, puissantes, et résistantes aux agents extérieurs, notamment à la lumière, aux intempéries, aux lavages, à la transpiration et aux frottements. Généralement appliquées à pH basique, il permet d'obtenir une teinture et simultanément un éclaircissement de la fibre qui se traduit en pratique par la possibilité d'obtenir une coloration finale plus claire que la couleur d'origine. En outre, l'éclaircissement de la fibre a pour effet avantageux d'engendrer une couleur unie dans le cas des cheveux gris, et dans le cas de cheveux naturellement pigmentés, de faire ressortir la couleur, c'est à dire de la rendre plus visible.
Préférentiellement, on peut utiliser un polynucléotide complémentaire comportant au moins un polymorphisme de type SNP codant tel que défini précédemment.
PARTIE EXPERIMENTAL Exemple 1 : Modélisation d'une protéine codée par un polynucléotide de séquence nucléotidique comportant un polymorphisme de type SNP q1033a. t1166c, q1181a ou a1294c et de la protéine codée par la séquence nucléotidique du qène sauvage de référence Dans une première étape la structure tridimensionnelle de IFNa-7 a été construite à partir de celle de IFNa-2 dont la structure est disponible dans la base de données PDB (code DTF) et ce en utilisant le logiciel Modeler (MSI, San Diego, CA).
Le fragment polypeptidique mature a ensuite été modifié de façon à reproduire la mutation V10A, D95N, L 1121, V129L, F139S, R144K ou K182Q.
Dans chaque cas, 50000 étapes ont été calculées à 300 K,
terminées par 300 étapes d'équilibration.
Le résultat de cette modélisation est visualisé sur les Figures 1,2, 3,4, 5, 6,7 et 8.
Exemple 2 : Génotypaqe des polymorphismes de type SNP q1033a, t1166c. q1181a ou a1294c dans une population d'individus Le génotypage de SNPs est basé sur le principe du miniséquençage dont le produit est détecté par une lecture de fluorescence polarisée. La technique consiste en un miniséquençage fluorescent (Technologie FP-TDI ou Fluorescence Polarization Template-direct Dyeterminator Incorporation).
Le miniséquençage consiste à allonger un oligonucléotide amorce, placé juste en amont du site du polymorphisme de type SNP, par des didéoxynucléotides fluoromarqués à l'aide d'une enzyme polymérase. Le produit résultant de cet allongement est directement analysé par une lecture de fluorescence polarisée.
Le génotypage requiert 5 étapes : 1) Amplification par PCR 2) Purification du produit de PCR par digestion enzymatique 3) Elongation de l'oligonucléotide amorce 4) Lecture 5) Interprétation de la lecture Les étapes de génotypage 1 et 2 sont réalisées de manière identique pour chacun des polymorphismes de type SNP g1033a, t1166c, g1181a et a1294c Les étapes 3,4 et 5 sont spécifiques a chacun de ces polymorphismes.
1) L'amplification PCR de la séquence nucléotidique du gène IFNa-7 est effectuée à partir d'ADN génomique provenant de 239 d'individus
d'origine ethniques diverses Ces ADNs génomiques ont été fournis par l'Institut Coriell aux Etats-Unis.
L'ADN génomique issu de chacun des individus constitue un échantillon.
La séquence nucléotidique de ce gène est accessible sous le numéro d'accès X02960 dans la base de données GenBank.
Les interférons alpha humains (IFNa) sont connus pour leurs effets anti-prolifératifs cellulaires et leurs implications dans les réponses antivirales et anti-parasitaires.
Les IFNa sont également connus pour réduire l'expression des récepteurs de l'EGF dans les carcinomes rénaux, pour inhiber l'expression de certains gènes mitochondriaux, pour inhiber la prolifération des fibroblastes, des monocytes et des lymphocytes B et pour bloquer la synthèse des anticorps par les lymphocytes B.
Les IFNa sont également connus pour induire l'expression d'antigènes spécifiques de tumeurs à la surface de cellules tumorales et également pour induire la transcription des gènes placés sous le contrôle de régions promotrices de type ISRE (Interferon-Stimulated Response Element) en agissant sur les facteurs de transcription spécifiques de ces ISRE.
Il a été observé par ailleurs une immunisation dirigée contre les INFa chez des patients atteints de certaines formes de pathologies autoimmunes ou d'infections virales généralisées ainsi que dans certains cancers.
Il est connu que les IFNa sont impliqués dans différents dérèglements et/ou maladies humaines, tels que les différents cancers comme, par exemple, les carcinomes, les mélanomes, les lymphomes, les myélomes, les tumeurs cancéreuses ou non, les leucémies et les cancers du foie, du cou, de la tête et des reins, les maladies cardiovasculaires, les maladies métaboliques telles que celles qui ne sont pas liées au système immunitaire comme, par exemple, l'obésité, les maladies infectieuses en particulier les infections virales comme les hépatites B et C et le SIDA, les pneumonies, les colites ulcératives, les maladies du système nerveux central comme, par exemple, la maladie d'Alzheimer, la schizophrénie et la dépression, le rejet de greffe de tissus ou d'organes, la cicatrisation de blessures, l'anémie en particulier chez les patients dialysés, les allergies, l'asthme, les scléroses multiples, l'ostéoporose, le psoriasis, l'arthrite rhumatoïde, la maladie de Crohn, les maladies et les désordres auto-immuns, les désordres gastro-intestinaux ou encore les désordres liés aux traitements par chimiothérapie.
Les IFNa sont particulièrement utilisés pour le traitement des hépatites chroniques B et C, des leucémies telles que la leucémie à tricholeucocytes et la leucémie myéloïde chronique, des myélomes multiples,
des lymphomes folliculaires, de tumeurs carcinoïdes, de mélanomes malins, de carcinomes rénaux métastasés ainsi que des tumeurs qui apparaissent à la suite d'un déficit immunitaire, tel que le sarcome de Kaposi dans le cas du SIDA.
Les IFNa sont reconnus par la FDA (Food and Drug Administration) pour le traitement des verrues génitales ou vénériennes.
Toutefois, les interférons alpha (IFNU) présentent de nombreux effets secondaires lorsqu'ils sont employés dans des compositions pharmaceutiques, tels que des réactions d'hypersensibilité aiguë (urticaire, broncho-constriction, choc anaphylactique, etc. ), des arythmies cardiaques, des hypotensions artérielles, des crises d'épilepsie, des troubles des fonctions thyroïdiennes ou des syndromes pseudo-grippaux (fièvres, sueurs, myalgies).
La demanderesse a trouvé de nouveaux polypeptides et nouveaux polynucléotides analogues à FNa-7, pouvant avoir une fonctionnalité différente de la protéine IFNa-7 naturelle.
Ces nouveaux polypeptides et polynucléotides peuvent notamment être utilisés pour traiter ou prévenir les dérèglements ou maladies mentionnés précédemment et éviter tout ou partie des inconvénients qui leurs sont liés.
L'INVENTION L'invention a pour premier objet de nouveaux polynucléotides qui diffèrent de la séquence nucléotidique du gène sauvage de référence de l'IFNa- 7, en ce qu'ils comportent un ou plusieurs polymorphismes de type SNP (Single Nucleotide Polymorphism) fonctionnels.
La séquence nucléotidique ID SEQ N01 du gène IFNa-7 humain sauvage de référence est composée de 1983 nucléotides et comporte une séquence codante de 570 nucléotides, du nucléotide 751 (codon start) au nucléotide 1320 (codon stop).
La demanderesse a identifié 14 polymorphismes de type SNP fonctionnels dans la séquence nucléotidique du gène sauvage de référence de l'IFNa-7.
FIXATION HAUTE : Cube, (2) dans lequel on a creusé une cavité, (4) pour y recevoir un tube (8) fixé au plafond par une vis chevillée (1) et un serre câble avec sa vis de serrage. (7). Cette cavité sera prolongé par un petit trou (5) qui servira au passage du câble (6). De part et d'autre, du cube sera percé et taraudé un passage pour des vis de blocage (3) qui serviront de fixation de cette partie haute sur le tube fixé au plafond.
FIXATION BASSE : Cube (9) dans lequel une cavité (10) est creusée, pour y recevoir un ressort de compression (11), un serre câble avec sa vis de serrage. (12) La cavité sera prolongée par un trou (16) pour le passage du câble (6) et un tube (14) qui sera fixer au sol à l'aide d'une vis chevillée. (15).
Dans le bas de la cavité et de part et d'autre sera percé et taraudé, un orifice pour passage de deux vis de fixation (13-13B) qui serviront de blocage du socle (9) sur la partie fixe.
Le ressort de compression fera traction vers le bas en agissant sur le serre câble.
(Le diamètre du ressort étant légèrement inférieur au diamètre du serre câble).
Pour tendre le câble, il suffit de le couper à la dimension approximative de 15 m/m de marge et d'appuyer sur le socle qui compressera le ressort, et de bloquer les vis de part et d'autre du socle sur la partie fixe.
PARTIE CENTRALE : Pince double de support (17), percée verticalement pour le passage du câble (21). Un deuxième perçage sera effectué horizontalement dans l'axe du passage du câble et taraudé pour y recevoir la vis de blocage (20) de cette pièce sur le câble. Ces pièces seront usinées d'une rainure (19) de l'épaisseur de la pochette (22), le tout percé pour recevoir une vis de relieur (18) pour le maintien de la pochette, qui s'emboîtera dans la rainure du support et par la pression du vissage les deux parois de la rainure bloqueront la pochette. Cette pièce peut-être simple, (24) pour les extrémités de la structure ou double (l7) pour la partie centrale, soit double vissage et double pochette qui seront toutes usinées d'une encoche (23) qui permettra de les emboîter dans la rainure des pinces, munies de vis de relieur qui sous la pression du serrage, les parois de la rainure bloqueront la pochette.
CONNECTEUR ELECTRIQUE DE PUISSANCE POUR ELEMENTS MOBILES ARTICULES ENTRE EUX La présente invention concerne un connecteur électrique à contact sans frottement entre deux éléments mobiles l'un par rapport à l'autre.
On connaît des connecteurs électriques comportant deux structures réalisant une connexion électrique entre deux éléments mobiles articulés l'un à l'autre autour d'un axe, une première structure comportant un élément de contact et la deuxième structure comportant une surface de contact apte à coopérer avec l'élément de contact pour établir la connexion électrique, les deux structures étant mobiles l'une par rapport à l'autre autour du même axe de rotation que les éléments mobiles. De tels connecteurs rotatifs sont utilisés dans les treuils, les moteurs à courant continu, dans les charnières de lampe, d'ordinateur portable, de panneaux solaires...
La mise en rotation des deux éléments mobiles et donc celle des structures assurant la connexion électrique entraîne la génération de frottements entre l'élément de contact et la surface de contact, ce qui pose des problèmes, en particulier quand les connecteurs sont utilisés dans les satellites artificiels.
En effet, quand un satellite est en état d'apesanteur, chacun de ses mouvements doit générer le minimum de frottement afin de limiter la consommation d'énergie nécessaire pour vaincre ces frottements. Or, les connecteurs électriques actuellement utilisés, notamment ceux permettant la connexion électrique des panneaux solaires simultanée au déploiement de ces panneaux, génèrent des frottements important qui
perturbent le déploiement, nécessitent un couple d'entraînement élevé et consomment de l'énergie. De ce fait, le moteur d'entraînement et la batterie utilisée pour alimenter celui-ci pour permettre le déploiement des panneaux solaires sont dimensionnés de façon à tenir compte de cette surpuissance et surconsommation, ce qui implique l'embarquement d'un moteur et d'une batterie volumineux et lourds.
Pour éviter ce problème, certains panneaux solaires sont alors connectés par des câbles, mais ceux-ci sont encombrants et lourds et, soit nécessitent une intervention extérieure pour être raccordés, soit sont installés à demeure et ne peuvent plus être déconnectés.
Le problème posé est de réaliser un connecteur électrique à contact entre deux éléments mobiles entre eux, générant un minimum de frottement pendant le mouvement des deux éléments, dont les éléments permettant d'établir la connexion électrique ne génèrent aucun frottement pendant ce mouvement, qui soit de réalisation simple et permettant une connexion sans intervention extérieure.
Le connecteur électrique selon la présente invention est du type défini précédemment et est caractérisé en ce que la première structure comporte un mécanisme à gâchette dont le déclenchement est apte à faire passer l'élément de contact d'une position de repos dégagée de la surface de contact à une position de contact avec celle-ci, la deuxième structure comportant un organe de déclenchement apte à déclencher le mécanisme à gâchette uniquement quand les deux structures sont dans leur position de connexion.
Selon une version permettant la déconnexion électrique, la première structure comporte un élément de réarmement, mobile entre une position sortie et une
L'amplification PCR est réalisée à partir des amorces suivantes : ID SEQ NO 3 et ID SEQ NO 4.
Ces séquences nucléotidiques permettent d'amplifier un fragment d'une longueur de 669 nucléotides, du nucléotide 711 au nucléotide 1379 dans la séquence nucléotidique ID SEQ N 1.
Le volume réactionnel total mis en oeuvre pour l'amplification PCR est de 5 ul par échantillon.
Ce volume réactionnel est composé par les réactifs indiqués dans le tableau suivant :
Fournisseur Référence Réactif Conc. Vol. par Conc. initiale tube ( l) finale Life Technologie Livré avec Taq Tampon (X) 10 0, 5 1 Life Technologie Livré avec Taq aq MgS04 (mM) 50 0,2 2 AP Biotech 27-2035-03 dNTPs (mM) 10 0, 1 0, 2 Sur demande Amorce F ( M) 10 0, 1 0,2 # D SEQ NO 3 Sur demande Amorce R ( M) 10 0, 1 0,2 ID SEQ NO 4 Life Technologie ogie 11304-029 Taq platinium 5U/ l 0,02 0 1 U/ réaction H20 Qsp 5 u !, 98 ADN 2, 5 ng/ ! 25ng/ (échantillon) réaction Volume total 5 ul
Ces réactifs sont distribués dans une plaque PCR noire à 384 puits fournie par ABGene (ref : TF-0384-k). La plaque est scellée, centrifugée puis placée dans un thermocycleur pour plaque 384 (Tetrad de MJ Research) et subit l'incubation suivante : Cycles de PCR : 1 min à 94 C, suivi de 36 cycles composés de 3 étapes (15 sec. à 94 C, 30 sec. à 560 C, 1 min. à 68 C).
2) L'amplifiat PCR est ensuite purifié à l'aide de deux enzymes : la phosphatase alcaline de crevette (ou Shrimp Alkaline Phosphatase SAP) et l'exonucléase 1 (Exo 1). La première de ces enzymes permet la déphosphorylation des dNTPs non incorporés au cours de l'amplification PCR, tandis que la seconde élimine les résidus simple brin d'ADN, en particulier les amorces non utilisées au cours de la PCR.
Cette digestion se fait par addition dans chaque puits de la plaque PCR d'un mélange réactionnel de 5 1-11 par échantillon.
Ce mélange réactionnel est composé des réactifs suivants :
Fournisseur Référence Réactif Conc. Vol. par Conc. initiale tube ( l) finale 0,5/ AP Biotech E70092X SAP 1 U/ l 0,5 réaction 1/ AP Biotech 070072Z Exol 10 U/ l 0,1 réaction réaction AP Biotech Fourni Tampon 10 0, 5 1 avec SAP SAP (X) H20 Qsp 5 ul 3,9 PCR 5 L amplifiat Vol total 10 1-11
Une fois remplie, la plaque est scellée, centrifugée puis placée dans un thermocycleur pour plaque 384 puits (Tetrad de MJ Research) et subit l'incubation suivante : Digestion SAP-EXO : 45 min à 37 C, 15 min à 800 C.
L'étape d'élongation ou de miniséquençage est ensuite réalisée sur ce produit de PCR digéré, par addition d'un mélange réactionnel de 5 uL par échantillon préparé.
Le miniséquençage 3) et les étapes de lecture 4) et d'interprétation de lecture 5) sont spécifique à chaque polymorphisme de type SNP g1033a, t1166c, g1181a et a1294c Toutes ces étapes sont décrites ci-après pour chacun de ces polymorphismes.
3.1) Polymorphisme de type SNP g1033a L'étape d'élongation ou de miniséquençage est ensuite réalisée comme indiqué dans le tableau suivant :
Fournisseur Référence Réactif Conc. Conc. initiale ( l) finale Propre Tampon Elongation l 5 1 1 préparation (X) Life Amorce Miniseq Life 10 0,5 1 Sur demande ( M) Technologies A ou B AP Biotech 27-2051 ddNTPs2 ( M) 2,5 025 0,125 (61,71, 81)-01 2 non marqués de chaque de chaque ddNTPs2 ( M) Nel 472/5 2,5 0,125 NEN 2 marqués 0,25 et Nel 492/5 de chaque de chaque 0,4 U/ AP Biotech E79000Z Thermo-sequenase 3,2 U/ l 0,125 réaction H2O Qsp 5 l 3,125 PCR digérée 10 ut Vol total 15 ul Le tampon élongation : Le tampon élongation 5X est composé de Tris-HCI pH 9 à 250 mM, de KCI à 250 mM, de NaCI à 25 mM, de MgCI2 à 10 mM et de glycérol à 40 %.
2 ddNTPs : Pour les ddNTPs, un mélange des 4 bases est réalisé en fonction du polymorphisme étudié. Seulement les 2 bases d'intérêts (C/T) composant le polymorphisme de type SNP fonctionnel portent un marquage, soit en Tamra, soit en R110. Le mélange de ddNTPs est composé de : - 2, 5 uM de ddATP non marqué, - 2, 5 uM de ddGTP non marqué, - 2, 5 pM de ddTTP (1, 875 uM de ddTTP non marqué et 0, 625 uM ddTTP marqué au Tamra), - 2, 5 pM de ddCTP (1, 875 uM de ddCTP non marqué et 0, 625 pM de ddCTP marqué au R110).
Médicaments et traitements des maladies La présente invention a aussi pour objet un médicament renfermant, à titre de principe actif, un polypeptide conforme à l'invention.
L'invention concerne encore l'utilisation d'un polypeptide conforme à l'invention, pour la fabrication d'un médicament destinée à la prévention ou au traitement de différents dérèglements et/ou maladies humaines, tels que les
différents cancers comme, par exemple, les carcinomes, les mélanomes, les lymphomes, les myélomes, les tumeurs cancéreuses ou non, les leucémies et les cancers du foie, du cou, de la tête et des reins, les maladies cardiovasculaires, les maladies métaboliques telles que celles qui ne sont pas liées au système immunitaire comme, par exemple, l'obésité, les maladies infectieuses en particulier virales comme les hépatites B et C et le SIDA, les pneumonies, les colites ulcératives, les maladies du système nerveux central comme, par exemple, la maladie d'Alzheimer, la schizophrénie et la dépression, le rejet de greffe de tissus ou d'organes, la cicatrisation de blessures, l'anémie en particulier chez les patients dialysés, les allergies, l'asthme, les scléroses multiples, l'ostéoporose, le psoriasis, l'arthrite rhumatoïde, la maladie de Crohn, les maladies et les désordres auto-immuns, les verrues génitales ou vénériennes, les désordres gastro-intestinaux ou encore les désordres liés aux traitements par chimiothérapie.
Préférentiellement, un polypeptide conforme à l'invention peut être utilisé pour la fabrication d'un médicament destinée à la prévention ou au traitement de différents dérèglements et/ou maladies humaines, tels que les hépatites chroniques B et C, les leucémies telles que la leucémie à tricholeucocytes et la leucémie myéloïde chronique, les myélomes multiples, des lymphomes folliculaires, les tumeurs carcinoïdes, les mélanomes malins, les carcinomes rénaux métastasés, la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson ainsi que les tumeurs qui apparaissent à la suite d'un déficit immunitaire, tel que le sarcome de Kaposi dans le cas du SIDA.
C'est pourquoi la présente invention a aussi pour objet un médicament contenant, à titre de principe actif un polynucléotide conforme à l'invention comportant au moins un polymorphisme de type SNP codant défini précédemment, un vecteur recombinant défini précédemment, une cellule hôte
définie précédemment, un anticorps défini précédemment et/ou un agent activateur et/ou inhibiteur d'un polypeptide conforme à l'invention.