INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
paraffine-sulfonates ; les alkyl(C6-C24) sulfosuccinates, les alkyl(C6-C24) éthersulfosuccinates, les alkyl(C6-C24) amidesulfosuccinates ; les alkyl(C6-C24) sulfoacétates ; les acyl(C6-C24) sarcosinates et les acyl(C6-C24) glutamates. On peut également utiliser les esters d'alkyl(C6-C24)polyglycosides carboxyliques tels que les alkylglucoside citrates, les alkylpolyglycoside tartrate et les alkylpolyglycoside sulfosuccinates., les alkylsulfosuccinamates ; les acyliséthionates et les N-acyltaurates, le radical alkyle ou acyle de tous ces différents composés comportant de préférence de 12 à 20 atomes de carbone, et le radical aryle désignant de préférence un groupement phényle ou benzyle.
(ii) Tensioactif(s) non ioniaue(s) : Les agents tensioactifs non-ioniques sont, eux aussi, des composés bien connus en soi (voir notamment à cet égard "Handbook of Surfactants" par M. R. PORTER, éditions Blackie & Son (Glasgow and London), 1991, pp 116-178) et leur nature ne revêt pas, dans le cadre de la présente invention, de caractère critique. Ainsi, ils peuvent être notamment choisis parmi (liste non limitative) les alcools, les alpha-diols, les alkylphénols polyéthoxylés, polypropoxylés, ayant une chaîne grasse comportant par exemple 8 à 18 atomes de carbone, le nombre de groupements oxyde d'éthylène ou oxyde de propylène pouvant aller notamment de 2 à 50. On peut également citer les copolymères d'oxyde d'éthylène et de propylène, les condensats d'oxyde d'éthylène et de propylène sur des alcools gras ; les amides gras polyéthoxylés ayant de préférence de 2 à 30 moles d'oxyde
d'éthylène, les amides gras polyglycérolés comportant en moyenne 1 à 5 groupements glycérol et en particulier 1,5 à 4 ; les esters d'acides gras du sorbitan oxyéthylénés ayant de 2 à 30 moles d'oxyde d'éthylène ; les esters d'acides gras du sucrose, les esters d'acides gras du polyéthylèneglycol, les alkylpolyglycosides, les dérivés de N-alkyl glucamine, les oxydes d'amines tels que les oxydes d'alkyl (C10-C14) amines ou les oxydes de Nacylaminopropylmorpholine. On notera que les alkylpolyglycosides constituent des tensio-actifs non-ioniques rentrant particulièrement bien dans le cadre de la présente invention.
Le filtrat est concentré.
On obtient ainsi le produit attendu sous forme de cristaux blancs (Rdt = 80 %).
Analyses: CCM : Rf = 0,45 dans CH2Cl2/AcOEt = 7:3 IR : dans CHC13 3458 cm-1 Absorption NH 1711cm-1 Absorption C=O 1598, 1507 et 1479 cm-1 Bande Amide II + Absorptions du noyau aromatique RMN : dans CDC13
1.98ppm (4H, multiplet) 4.04ppm (4H, triplet) ..#- 3.32ppm (4H, quadruplet) H 3.90ppm (singulet) 0 O N O 1 .E 1.44ppm (18H, singulet) 7.17ppm (2H, doublet) 0ÏY V; 6.63ppm (1 H, triplet) 0 4.73ppm (2H, singulet large) SM : en EI 70eV et introduction directe, dans MeOH 482+ = M+ 426+ = M±tBu+H (57+ = tBu+) 408+ = M±OtBu-H 382+ - M±COOtBu+H 309+ = M±COOtBu-OtBu+H Stade 3 : produit 6
On saponifie la fonction ester du produit 5 obtenu au stade 2 ci-dessus pour obtenir le produit 6 dans les conditions classiques ou comme suit.
Dans un ballon de 100 mL, le produit 5 obtenu au stade 2 cidessus (2,26 g, 4,68 mmol) est solubilisé dans 24 mL d'EtOH. NaOH-2N (4,68 mL, 9,36 mmol, 2 eq) est ajouté. On chauffe à 40 C pendant la nuit. L'éthanol est évaporé. Le milieu est acidifié par 4,68 ml d'HCl-2N, puis extrait par AcOEt, et enfin lavé avec de l'eau et de l'eau salée. La phase organique est séchée sur MgS04, filtrée et concentrée.
On obtient ainsi le produit attendu sous forme de cristaux
blancs. (Rendement = 98 %).
Analyses: CCM : Rf = 0 , 2 0 dans CH2C12/ MeOH = 9:1 IR : dans CHC13 3458 cm-1 Absorptions NH/OH 1702 cm-1 Absorption C=O 1597 et 1507 cm-1 Bande Amide II + Absorptions du noyau aromatique SM : en ElecroSpray 70eV, dans MeOH 469+ = [M+H] + 413+ = [M-tBu+H]+ 357+ - [M-2tBu+2H]+ 313+ = [357±CO2]+ + Stade 4 : produit 7
Dans un ballon de 30 mL, le produit 5 obtenu au stade 2 ci-dessus (0,501 g, 1,04 mmol) est solubilisé dans 5 mL d'AcOEt. Une solution de HCl-AcOEt (6M, 3,47 mL, 20,81 mmol, 20 eq) est introduite au goutte à goutte et à 0 C. On laisse agiter sous azote. Après 3 heures de réaction, le solvant est évaporé (Rendement = Q). On obtient ainsi le produit attendu sous forme de cristaux blancs.
Analyses: CCM : Rf = 0,24 dans CH2Cl2/ MeOH = 8:2 IR : dans le nujol 3458 cm-1 Absorptions NH/OH 1720 et 1710 cm-1 Absorptions C=0 1598,1575, 1528 et 1510 cm-1 Absorption NH2 + Absorptions du noyau aromatique SM : en ElecroSpray 70eV, dans MeOH
283+ = [M+H] 253+ = [MH-NH2CH2] + 226+ = [MN-NH2(CH2)3+H]+ + Stade 5 : produit 8
Produit8 Dans un ballon de 250 mL, le produit 3 obtenu au stade 3 de la préparation décrite ci-dessus (1,11 g, 3,54 mmol) est solubilisé dans 100mL de CH2C12 anhydre, sous azote. Le produit 6 (1,82 g, 3,89 mmol, 1,1 eq) puis le BOP (1,72 g, 3,89 mmol, 1,1 eq) et le DIEA (1,23 mL, 7,08 mmol, 2 eq) sont ajoutés. On agite sous atmosphère d'azote. Après une nuit, le milieu réactionnel est repris dans CH2C12, puis lavé avec de l'eau, avec NaHC03 et de l'eau salée et la phase organique est
concentrée. Le produit est cristallisé dans 200 mL d'AcOEt.
(Rendement = 93 %) On obtient ainsi le produit attendu sous forme de cristaux rouges.
Analyses : CCM : Rf = 0,71 dans CH2Cl2/MeOH = 9:1 IR : dans le nujol Absorption NH 1683 et 1678 cm-1 Absorptions C=O 1640,1600 et 1516 cm-1 Bande Amide II + Absorptions du noyau aromatique + Système conjugué + Absorption N02 RMN : dans le DMSO SM : en Elecrospray 70eV et dans MeOH 764+ - [M+H] Stade 6 : produit 9 On procède à la déprotection des groupements Boc du Produit 8 obtenu au stade 5 ci-dessus en procédant comme au stade 4 ci-dessus pour obtenir le produit 7.
- les gommes de guar non ioniques chimiquement modifiées ou non modifiées.
Les gommes de guar non-ioniques modifiées utilisables selon l'invention sont de préférence modifiées par des groupements hydroxyalkyle en Cl-C 6 On peut mentionner à titre d'exemple, les groupements hydroxyméthyle, hydroxyéthyle, hydroxypropyle et hydroxybutyle.
Ces gommes de guar sont bien connues de l'état de la technique et peuvent par exemple être préparées en faisant réagir des oxydes d'alcènes correspondants, tels que par exemple des oxydes de propylène, avec la gomme de guar de façon à obtenir une gomme de guar modifiée par des groupements hydroxypropyle.
De telles gommes de guar non-ioniques éventuellement modifiées par des groupements hydroxyalkyle sont par exemple vendues sous les dénominations commerciales JAGUAR HP8, JAGUAR HP60 et JAGUAR HP120, JAGUAR DC 293 et JAGUAR HP 105 par la société MEYHALL, ou sous la dénomination GALACTASOL 4H4FD2 par la société AQUALON.
Les radicaux alkyle des polymères non ioniques ont de 1 à 6 atomes de carbone sauf mention contraire.
Les polymère non ionique qui conviennent tout particulièrement pour la réalisation des compositions conformes à l'invention sont ceux choisis parmi * les copolymères de vinyllactame tels que les copolymères de vinylpyrrolidone et d'acétate de vinyle et les copolymères vinylpyrrolidone/ acétate de vinyle/ propionate de vinyle
* la polyvinylcaprolactame LUVISKOL PLUS (BASF) * les homopolymères d'acétate de vinyle tels que APPRETAN EM (HOECHST) ou RHODOPAS A 012 (RHONE POULENC) * les polyalkyloxazolines tels que PEOX 50 000 et PEOX 500 000 (DOW CHEMICAL) * les copolymères d'acétate de vinyle et d'ester acrylique tels que le RHODOPAS AD 310 (RHONE POULENC) * les copolymères d'acétate de vinyle et d'éthylène tels que APPRETAN TV (HOECHST) * les copolymères d'acétate de vinyle et d'ester maléique tels que APPRETA}; MB EXTRA (HOECHST) * les homopolymères d'acrylates d'alkyle et les homopolymères de métacrylates d'alkyle tels que LUHYDRAN A 848 S (BASF) * les copolymères d'esters acryliques tels que PRIMAL AC-261 K (ROHM & HAAS), ACRONAL 601 (BASF) ou APPRETAN N 9213 (HOECHST) * les copolymères d'acrylonitrile et d'un monomère non-ionique tels que CJ 0601 B (ROHM & HAAS) * les polyuréthanes tels que ACRYSOL RM 1020 ou ACRYSOL RM 2020 (ROHM & HAAS) * les copolymères d'acrylate d'alkyle et d'uréthane tels que 8538-33 (NATIONAL STARCH) * les polyamides tels que ESTAPOR LO 11(RHONE POULENC) Selon l'invention, on peut également utiliser les polymères fixants de type siliconés greffés comprenant une portion polysiloxane et une portion constituée d'une chaîne organique non-siliconée, l'une des deux portions constituant la chaîne principale du polymère l'autre étant greffée sur la dite chaîne principale Ces polymères sont par exemple décrits dans les demandes de brevet EP-A-0 412 704, EP-A-0 412 707, EP-A-0 640 105 et WO 95/00578, EP-A-0582 152 et WO 93/23009 et les brevets US 4,693,935, US 4,728,571 et US 4,972,037. Ces polymères sont de préférence anioniques ou non ioniques
De tels polymères sont par exemple les copolymères susceptibles d'être obtenus par polymérisation radicalaire à partir du mélange de monomères constitué par : a) 50 à 90% en poids d'acrylate de tertiobutyle , b) 0 à 40% en poids d'acide acrylique ; c) 5 à 40% en poids de macromère siliconé de formule - avec v étant un nombre allant de 5 à 700 , les pourcentages en poids étant calculés par rapport au poids total des monomères D'autres exemples de polymères siliconés greffés sont notamment des polydiméthylsiloxanes (PDMS) sur lesquels sont greffés, par l'intermédiaire d'un chaînon de raccordement de type thiopropylène, des motifs polymères mixtes du type acide poly(méth)acrylique et du type poly(méth)acrylate d'alkyle et des polydiméthylsiloxanes (PDMS) sur lesquels sont greffés, par l'intermédiaire d'un chaînon de raccordement de type thiopropylène, des motifs polymères du type poly (méth)acrylate On peut aussi utiliser, comme polymères fixants, des polyuréthannes fonctionnalisés ou non, siliconés ou non Selon l'invention, le ou les polymères fixants peuvent représenter de 0,1 % à 10 % en poids, de préférence de 0,5 % à 5% en poids par rapport au poids total de la composition finale Les agents bénéfiques selon l'invention sont choisis, de préférence, parmi les polymères cationiques, les tensioactifs cationiques, les céramides et leurs dérivés, les huiles végétales, minérales ou de synthèse, les alcools ou les esters gras, les cires minérales, animales, végétales ou de synthèse et les silicones.
Selon l'invention, les agents bénéfiques peuvent être choisis parmi les huiles de synthèses telles que les poly-oléfines, les huiles minérales, les huiles végétales, les huiles fluorées ou perfluorées, les cires naturelles ou synthétiques, les silicones, les polymères cationiques, les composés de type céramide, les tensioactifs cationiques, les amines grasses, les acides gras gras et leurs dérivés, les alcools gras et leurs dérivés ainsi que les mélanges de ces différents composés.
Les agents bénéfiques préférés selon l'invention sont les polymères cationiques et les silicones.
Les huiles de synthèse sont notamment les polyoléfines en particulier les poly-aoléfines et plus particulièrement .
On utilise de préférence les oligomères d'isobutylène de poids moléculaire inférieur à 1000 et leurs mélange avec des polyisobutylènes de poids moléculaire supérieur à 1000 et de préférence compris entre 1000 et 15000 A titre d'exemples de poly-a-oléfines utilisables dans le cadre de la présente invention, on peut plus particulièrement mentionner les polyisobutènes vendus sous le nom de PERMETHYL 99 A, 101 A , 102 A , 104 A (n=16) et 106 A (n-38) par la Société PRESPERSE Inc, ou bien encore les produits vendus sous le nom de ARLAMOL HD (n=3) par la Société ICI (n désignant le degré de polymérisation), - de type polydécène, hydrogéné ou non.
Les huiles minérales pouvant être utilisées dans les compositions de l'invention sont choisies préférentiellement dans le groupe formé par - les hydrocarbures, tels que l'hexadécane et l'huile de paraffine , Les huiles animales ou végétales sont choisies préférentiellement dans le groupe formé par les huiles de tournesol, de mais, de soja, d'avocat, de jojoba, de courge, de
- Détection de la sélectine E et P : Des cellules endothéliales détachées à la collagénase sont fixées et perméabilisées pendant 60 minutes dans du paraformaldéhyde à 1,0 % (m/V) et une solution de saponine à 0,1 % (m/V) dans du PBSc à la température ambiante. Après un lavage soigneux avec du PBSc, les cellules sont incubées pendant 1 heure à 37 C avec de l'anticorps monoclonal de rat anti-CD62E 4D10 (IgG2a, Immunotech, Marseille, France) dilué au 1/10 dans du PBSc-SAB. Comme témoin idiotypique, on utilise de l'IgG2a de rat (Rockland, Gilbertsville, PA, USA).
Après incubation et lavage, les cellules sont exposées pendant 30 minutes à 4 C à l'anticorps de chèvre antirat marqué au FTC (fragment Fab) (Cappel, Durham, Royaume-Uni) dilué au 1/100 dans du PBSc-SAB.
Pour le marquage de la sélectine P, des cellules fixées et perméabilisées avec l'anticorps antiGMP 140 humaine CLB-Thromb./6 (IgGl de souris, Immunotech) sont utilisées à la concentration de 10 ug/ml avec un témoin isotypique approprié. Le deuxième réactif est un anticorps de rat anti-immunoglobuline de souris marqué au FTC (fragment Fab, Becton Dickinson, Grenoble, France) dilué au 1/100 dans du PBSc-SAB.
b) Marqueurs de cellules endothéliales exprimés par les lignées de cellules endothéliales humaines : marqueurs spécifiques au site.
Détection des principales adressines vasculaires : Pour détecter les adressines membranaires, des cellules endothéliales sont détachées par traitement à la collagénase pendant 5 à 10 minutes à 37 C suivi d'un lavage soigneux avec du PBSc-SAB contenant 0,01 % (m/V) de NaN3. Ensuite, les cellules endothéliales sont incubées pendant 45 minutes à 37 C avec des anticorps monoclonaux, aimablement fournis par le Dr E. G. Butcher (Stanford, CA, USA) : MECA 79, HECA 452 (IgM de rat), MECA 367, PNAd JG1 (IgG2a de rat), et des témoins isotypiques de rat correspondants, c'est-à-dire des IgM de rat (Immunotech) et des IgG2a de rat (Sigma).
Ensuite, les cellules sont incubées avec une solution de paraformaldéhyde à 1 % (m/V) dans du PBSc pendant 15 minutes à la température ambiante, puis lavées avec de l'urée 0,2 mM dans du PBSc avant d'être incubées pendant 30 minutes à 4 C avec le deuxième réactif, c'est-à-dire un anticorps de chèvre anti-immunoglobuline de rat marqué au FTC (fragment Fab, Cappel) dilué au 1/100 dans du PBSc-SAB.
De manière similaire, une coloration membranaire des cellules endothéliales est effectuée en utilisant un anticorps anti-CD34 (IgGl de souris, Immunotech) et anti-CD15s (anti-sialyl-Lewis X, IgM de souris fourni par Becton Dickinson) ainsi qu'un anticorps anti-CD54 (ICAM-1) (IgGl de souris, Novocastra Laboratories, Newcastle/ Tyne, Royaume-Uni), un anticorps anti-CD43 (leucosialine) (IgG2 de souris fourni par R&D Systems, Abingdon, Royaume-Uni) et un anticorps monoclonal anti-antigène Ll (Ebeling et al., 1996) (IgGl de souris, aimablement fourni par le Dr P.
Altevogt du Centre de Cancérologie Allemand, Heidelberg,
Allemagne). Des témoins sont réalisés en incubant en parallèle des cellules testées en présence des immunoglobulines normales IgG ou IgM de souris (R&D Systems). Le deuxième réactif utilisé est un anticorps de rat anti-immunoglobuline de souris marqué au FTC (fragment Fab, Becton Dickinson) dilué au 1/100 dans du PBSc-SAB.
- Analyse par cytométrie de flux.
Après coloration, les cellules sont lavées une fois avec du PBSc-SAB et analysées par cytométrie de flux au moyen d'un FACS 440 ou d'un FACSort (Becton Dickinson, Sunnyvale, CA, USA). Cinq mille cellules sont mesurées (avec déclenchement par diffusion directe et latérale). Les résultats sont présentés sous la forme d'histogrammes avec en abscisses les valeurs de fluorescence moyennes correspondant à Fl-1 et en ordonnées le nombre de cellules pour une fluorescence donnée. Les tranches moyennes d'intensité de fluorescence sont calculées en utilisant PC Lysis ou le logiciel CellQuest (Becton Dickinson), respectivement. Les valeurs de tranches de fluorescence moyennes pour les cellules témoins appropriées sont fixées en dessous de 10 (généralement à une valeur de 3 à 4). Sur les histogrammes présentés, une seule expérience typique est décrite sur un total de cinq. c) Origine des lignées de cellules endothéliales humaines établies dans l'étude : HPLNEC. B3 Cellules endothéliales provenant d'un ganglion cervical (périphérique) d'un patient présentant un lymphome de Hodgkin.
- HPLNEC.2S1R1 : Cellules endothéliales provenant d'un ganglion inguinal d'un patient présentant un lymphome de type non hodgkinien.
HOMEC.J6B Cellules endothéliales microvasculaires provenant d'un épanchement pleural d'une patiente présentant un carcinome des ovaires.
HPLNEC. Mel Cellules endothéliales isolées à partir d'un ganglion iléal métastatique d'un patient présentant un mélanome malin.
- HAPEC.S1 : Cellules endothéliales provenant d'un échantillon chirurgical d'appendice enflammé.
- HLMEC : Cellules HS888Lu endothéliales provenant d'une région de tissu pulmonaire normal d'un patient présentant un ostéosarcome avec métastases en direction du poumon (acheté à la collection européenne ECACC : European Collection of Animal Cell Cultures, Salisbury, Royaume-Uni). Les cellules ont pu supporter environ 11 duplications avant de cesser (voir la référence : ATCC CCL 211). Etablie comme lignée cellulaire in vitro et clonée de la manière décrite cidessus.
Ensuite, à chaque sous colonne Al1l2 de 49 éléments ayant une valeur fixée de l2, on associe un même entrelaceur verrou 7 x 7 spécifié par un septuple h=[ho, h 1, h2 h3, ha h5, /le]- Le choix de l'entrelaceur verrou associé à chaque sous colonne est réalisé comme suit : On numérote de 0 à 6 les colonnes de A et A*, et on utilise les septuples suivants : h(1)=(06431 25), h(2)=(051 6243), h(3)=(0 4 5 2 3 6 1) h(4)=(0 3 2 5 4 16), h(5) =(0 2 6 1 5 3 4), h(6)=(0 1 3 4 6 5 2).
Chacun de ces septuples spécifie un entrelaceur verrou et le verrou spécifié par h(i) est utilisé pour permuter toutes les sous-colonnes de la colonne i(i=1,...,6) de A.
Pour la colonne d'indice 0, les sous-colonnes sont permutées en utilisant un des six septuples définis, par exemple h(1).
On a vu plus haut que ces septuples vérifient des conditions nécessaires pour que la portée globale d'une séquence simplifiée y(x) correspondant à une séquence homogène a(x) soit supérieure ou égale à 7 si le poids de Hamming de la séquence a(x) est égal à 2, et soit supérieur ou égal à 6 si le poids de Hamming de a(x) est égal à 4.
La raison pour laquelle on choisit des entrelaceurs verrou différents dans chaque colonne de A est la suivante. Si on ne le faisait pas, il serait possible de
choisir pour i fixé, un nombre j tel que la séquence a(x)=x(1+x')(I+x'+2+x'+3) soit entrelacée en a*(x)=x*{l-tx7J*)(J+x:'+x?) par un entrelaceur de type décrit par la figure 7. Dans ce cas, le poids de la séquence codée correspondante pourrait être strictement inférieur à 34.
Dans un autre exemple, les sous-colonnes ont une "longueur" de 117 éléments, et sont placées en matrices 13 x 9, devant être entrelacées par des entrelaceurs verrous 13 x 9. L'entrelaceur global permute alors 117 x 49 soit 5733 bits d'information.
Dans ce cas, pour i compris entre 1 et 12, on note h(i) le 9-uple suivant : h(i)=(O i 5i 7i 12i 8i11i 9i 3i) dont toutes les valeurs sont calculées modulo 13. Chaque tel 9-uple définit complètement un entrelaceur verrou (on rappelle qu'il donne par chacune de ses composantes l'amplitude de la rotation de chaque colonne d'une matrice à 9 colonnes) qui satisfait à une condition de portée globale fsp(y) > 9 pour toutes les séquences a de poids 2, et fsp(y) > 8 pour les séquences a de poids 4, ce qui permet d'espérer une distance minimale égale à 42 (voir figure 2). Pour cela, on utilisera par exemple des h(i) différents dans les 7 colonnes de A et on appliquera une permutation des colonnes entre elles du type de celle décrite par la figure 8.
On obtient ainsi un turbocode adapté à coder des séquences binaires de longueur 5733 et spécifié comme dit plus haut par g(x)=1+x2+x3, f1(x) = 1 +X+X2+X3 et f2(x)= 9+x+x3 .
Des simulations ont été réalisées dans le cas où on utilise un entrelaceur de longueur 2401 (premier exemple ci-dessus). Elles sont illustrées par la figure 9 qui donne pour quatre nombres différents d'itérations de décodage le taux d'erreur par bit (BER) en fonction du rapport signal sur bruit par bit (Eb/No exprimé en dB). On constate que le gain est très significatif pour des rapports signal/bruit déjà peu élevés, et que l'essentiel du gain est obtenu après 8 itérations.
Il est clair que par rapport aux entrelaceurs habituellement utilisés, l'entrelaceur proposé dans la présente invention offre l'avantage majeur de garantir le retour à zéro simultané des deux codeurs élémentaires tout en
garantissant une bonne distribution de distance du code, ce qui est un facteur intéressant lorsque le rapport signal sur bruit par bit Eb/No est élevé.
La description d'un mode particulier de réalisation du dispositif mettant en #uvre la présente invention va maintenant se poursuivre en regard des figures 10 à 14.
La figure 10 illustre schématiquement la constitution d'une station de réseau ou station de codage informatique, sous forme de schéma synoptique.
Cette station comporte un clavier 911, un écran 909, une source d'informations externe 910, un émetteur hertzien 906, conjointement reliés à un port d'entrée/sortie 903 d'une carte de traitement 901.
La carte de traitement 901 comporte, reliés entre eux par un bus d'adresses et de données 902 : - une unité centrale de traitement 900 ; - une mémoire vive RAM 904 ; - une mémoire non volatile 905 ; et - le port d'entrée/sortie 903.
l'importance de l'état inflammatoire pour obtenir des cultures en croissance. Il a ensuite été possible de mettre au point une méthode de transfection avec un plasmide contenant le gène T de SV40. Cette technique a été appliquée aux cellules endothéliales humaines en croissance et la phase de crise de croissance a été dépassée en réalisant une seconde transfection à l'aide d'un plasmide contenant l'oncogène ras.
L'invention concerne aussi un procédé de préparation d'une lignée immortalisée de cellules endothéliales de mammifère par transfection, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) on isole des cellules endothéliales en culture primaire dans un état inflammatoire dû à une réaction inflammatoire aiguë ou chronique ou à un état pathologique immun ou cancéreux, b) on transfecte les cellules de l'étape (a) en culture et en croissance active avec un premier acide nucléique comprenant au moins un fragment immortalisant d'un oncogène viral ou cellulaire avantageusement associé à au moins un gène de sélection, c) on transfecte les cellules de l'étape (b) en croissance avec un second acide nucléique comprenant au moins un fragment immortalisant d'un oncogène viral ou cellulaire différent du premier avantageusement associé à au moins un gène de sélection, d) on sélectionne les cellules transfectées par tout moyen approprié, comme des milieux de sélection correspondant aux gènes de sélection du premier et du second acides nucléiques, e) on isole et on clone les colonies doublement transformées.
Un second procédé de préparation d'une lignée immortalisée de cellules endothéliales de mammifère par transfection selon l'invention est caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) on isole des cellules endothéliales en culture primaire dans un état inflammatoire, b) on transfecte les cellules de l'étape (a) en culture et en croissance active avec un premier acide nucléique comprenant au moins un fragment immortalisant d'un oncogène viral ou cellulaire avantageusement associé à au moins un gène de sélection, c) on sélectionne les cellules transfectées à l'étape (b) par tout moyen approprié, comme des milieux de sélection correspondant au gène de sélection du premier acide nucléique, d) on transfecte les cellules de l'étape (c) en croissance avec un second acide nucléique comprenant au moins un fragment immortalisant d'un oncogène viral ou cellulaire différent du premier avantageusement associé à au moins un gène de sélection, e) on sélectionne les cellules transfectées à l'étape (d) par tout moyen approprié, comme des milieux de sélection correspondant au gène de sélection du second acide nucléique, f) on isole et on clone les colonies doublement transformées.