INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La délétion du gène YAP1 entraîne chez la levure une hypersensibilité au stress oxydatif (H202, diamide, cadmium...). Il a été par ailleurs montré que la régulation de Yap1 est essentiellement fondée sur le changement de la localisation cellulaire de la protéine. En particulier, en absence de stress, Yap1 est principalement localisée dans le cytoplasme et au moment du stress, sa localisation change (on parle de translocation) pour devenir essentiellement nucléaire. Cette propriété lui est conférée par l'existence de deux domaines appelés NLS (signal de localisation nucléaire, d'après la nomenclature anglaise Nuclear Localisation Signal) et NES (signal d'export nucléaire, d'après la nomenclature anglaise Nuclear Export Signal) qui lui permettent respectivement d'être importée au noyau en présence de stress et réexportée vers le cytoplasme en absence de stress.
Les facteurs de transcription peuvent déclencher l'expression d'un gène, et donc la synthèse d'une protéine, ou l'inhiber. Leur structure est composé de différents motifs, appelés domaines, qui, outre les domaines NLS ou NES, comporte un domaine de liaison à l'ADN. Une fois liés, les
facteurs de transcription peuvent interagir pour le contrôle de l'expression des gènes.
L'identification et la caractérisation des protéines dont la localisation nucléo-cytoplasmique est dépendante de facteurs environnementaux extracellulaires ou même intracellulaires, la quantification éventuelle de ces mouvements représente une nouvelle approche, notamment : - pour identifier des molécules susceptibles d'activer ou d'inhiber cette translocation, y compris en présence d'un stimulus spécifique, pour cribler les domaines de ces protéines impliquées dans la translocation, pour identifier des protéines à fonction encore inconnue, utilisables comme marqueurs moléculaires pour le diagnostic, pour développer des tests biologiques, biosensors , indicateurs de la présence de molécules toxiques dans un environnement donné.
La présente invention a pour objet le développement d'un outil apte aux identifications et caractérisations ci-dessus, et permettant d'étudier de façon systématique les translocations nucléo-cytoplasmiques. Un tel outil permet d'étudier des phénomènes de régulation cellulaire qui échappent actuellement aux outils basés sur l'hybridation d'acides nucléiques (puces à ADN) ou sur la visualisation quantitative des protéines (électrophorèse bidimensionnelle).
Certaines constructions ont déjà été décrites pour localiser les protéines dans les compartiments cellulaires, mais aucune ne propose d'identifier et de quantifier les protéines dont la translocation nucléocytoplasmique est une réponse à un stress ou un stimulus spécifique. A titre d'exemple, on peut citer :
a) une méthode développée pour l'étude de l'activation transcriptionnelle des différentes protéines homologues Yap1 à Yap5 de la levure en présence d'H202 ou de cadmium (11). Pour ce faire, des fusions ont été réalisées entre les protéines Yap1 à Yap5 et le domaine LexADBD, responsable de la fixation à une séquence d'ADN spécifique : UAS lexA (15). Cet outil permet de tester, par l'expression d'un gène rapporteur placé sous contrôle d'un promoteur fixant la protéine lexA, le niveau d'activation transcriptionnelle des activateurs Yap1 à Yap5 en réponse à un stimulus spécifique, indépendamment de la régulation éventuelle de leur domaine de fixation. Cette méthode permet donc d'identifier les séquences activatrices régulées par des stimuli spécifiques mais ne permet pas d'identifier sélectivement des séquences responsables de la translocation nucléo- cytoplasmique en réponse à un stimulus spécifique. En outre cette méthode ne peut s'appliquer à des protéines qui ne sont pas des activateurs de la transcription. b) Des méthodes de criblage systématique de séquences de localisation nucléaire (NLS) ont été décrites par Ueki et al. (12) ou encore par Rhee et al. (13). Elles consistent en la construction d'un plasmide permettant l'expression dans la levure, sous le contrôle d'un promoteur à expression forte (promoteur du gène ADH1), d'une protéine de fusion contenant le domaine de liaison à l'ADN lexA (lexADBD), le domaine d'activation transcriptionnelle de Gal4 (Gal4AD) et la séquence polypeptidique X à cribler. Ce plasmide est introduit dans une levure contenant la séquence d'un gène rapporteur ou de sélection placé sous le contrôle de séquences promotrices contenant le site de fixation du domaine de liaison à l'ADN de lexA. Dans Ueki et al., le plasmide code également une
séquence NES. De fait, celle-ci gêne l'observation d'une translocation en réponse à un stimulus ou à un stress. Cette méthode est limitée, puisqu'elle permet uniquement de recenser la localisation des protéines, et plus particulièrement d'isoler les protéines dont la localisation est nucléaire. Dans Rhee et al., une séquence favorisant la localisation nucléaire de lexA a été identifiée et mutée. Ainsi, l'expression du gène de sélection ou du gène rapporteur, sous contrôle de l'activateur transcriptionnel artificiel lexADBD-Gal4AD-X, n'est possible que si X code au moins pour un domaine de localisation nucléaire et ne contient pas de domaine affectant la stabilité de la protéine. Néanmoins, l'utilisation d'un promoteur fort pour l'expression de la protéine de fusion lexADBD-Gal4AD-X ne permet pas de détecter des variations sensibles ou transitoires de la répartition nucléo- cytoplasmique. Enfin, il n'est ni décrit, ni suggéré dans ces documents des procédés permettant l'identification des stimuli spécifiques auxquels ces domaines de régulation sont sensibles, ainsi que des procédés permettant l'identification de produits agissant sur la fonction régulatrice de ces domaines.
La présente invention vise tout d'abord à fournir un outil permettant d'étudier la mobilisation des protéines vers le noyau ou vers le cytoplasme en réponse à un changement de conditions environnementales, en application d'une substance ou sous l'effet d'un stress.
Le principe de l'invention repose sur la construction d'un vecteur d'expression porteur d'une séquence nucléotidique codant une protéine directement ou indirectement susceptible d'activer ou d'inhiber la transcription d'un gène rapporteur ou d'un gène de sélection présent dans la cellule hôte, soit au niveau de son génome, soit sous forme de plasmide.
3 - Résolution des équations On se place dans l'hypothèse d'un moteur à quatre cylindres, avec deux cylindres riches et deux cylindres pauvres. Supposons que l'on puisse exprimer le rendement de richesse sous forme d'un polynôme du second ordre : #R = a. R2 + b. R +c On a alors : Cmoyen = (Ci + C2 ) /2 (a) ss = (Cl - C2) / Cmoyen (b) Cl = K # #av1 # #R1 # M1 (C) avec #R1 = a. R12 + b. R1 +(d) C2 = K # #av2 # #R2 # M2 (e) avec #R2 = a. R22 + b. R2 + c (f) Rcata = (M1 x R1 + M2 x R2) (M1 + M2) (g) De (a) et (b) on déduit : C1 = Cmoyen ( 1 + ss/2) (h) et C2 = Cmoyen ( 1 - ss/2) (i) De (h) et (c), on déduit Ml, masse d'air introduite dans chaque cylindre pauvre : # M1 Cmoyen(1+ P/2) / ( K x #av1 x #R1) (h) et (i)=> Ci / C2 = (1 + P/2) / (1 - ss/2) (j) (c) et (e) ≤>
Cl/C2 = (#av1 x #R1) /#av2 x Ml/M2 x 1/#R2 (k) (j)et(k) # Ml/M2 = r)av2 x #R2/ (#av1 x #R1) x (1+ ss/2) / (1- ss/2) vi 1 - fl/2 MJM2 r)R2 /a avec r/av2 1 +,9/2 ( 1 ) et enfin de (1) , (g) & (f) on tire : la.(P,ceta - R1J . ..2 +[b.Rcnta - R1-a].R2 +[c .Rcata - R1+a.Rcnta]=0 d'où on peut déduire la consigne de richesse des cylindres riches R2.
L'équation (e) permet alors de connaître M2, masse d'air à introduire dans les cylindres riches.
Les figures 8 à 12 permettent d'illustrer les résultats pouvant être obtenus par les diverses stratégies envisagées conformément à l'invention, comparativement à des stratégies de répartition de richesse appliquées à un moteur à arbre à came.
Dans chacune des figures 8 à 11, on a représenté sur la gauche les paramètres des cylindres riches, et sur la droite les paramètres correspondants des cylindres pauvres.
La figure 8 illustre la masse d'air introduite dans chaque cylindre.
La figure 9 illustre la masse d'essence introduite dans chaque cylindre.
La figure 10 illustre le couple délivré par chaque cylindre.
La figure 11 illustre les consignes de richesse pour chaque cylindre.
La figure 12 illustre la quantité de CO globale envoyée sur le catalyseur du pot d'échappement.
Dans chaque ensemble de barres : - la première barre (Ref) à partir de la gauche correspond à un fonctionnement de référence d'un moteur avec arbre à came.
- la deuxième barre correspond à une configuration n 1, avec une stratégie de répartition de richesses sur un moteur avec arbre à came, obtenue par une adaptation à chaque cylindre de la durée d'injection. la troisième barre (2) correspond à une configuration n 2, également avec une stratégie de répartition de richesses sur un moteur avec arbre à came, mais avec cette fois une adaptation à chaque cylindre de la durée d'injection et une dégradation du rendement d'avance à l'allumage des cylindres riches pour obtenir un couple sensiblement identique sur les quatre cylindres. la quatrième barre correspond à une configuration n 3, dans le cas d'un moteur à soupapes commandées de manière indépendante, dans laquelle on impose les paramètres suivants en entrée :
- Même objectif de couple moyen que dans les configurations précédentes.
- Même objectif de richesse vue par le catalyseur.
- Même richesse des cylindres pauvres.
- Pas de dégradation des rendements d'avance des cylindres riches et pauvres.
Le noyau aromatique de la tyrosine autorise un radiomarquage direct à 1''3lI et éventuellement à l'211At.
Cependant, les Inventeurs ont mis en évidence que le couplage d'un BCA, complexant des radionucléides, sur la chaîne Gly-Gly-Gly entraîne une interaction non désirable entre l'histamine et le BCA. En effet les pKa proches de l'amine terminale de la glycine et de l'histamine ne permettent pas d'introduire une sélectivité de couplage. A ce jour, seuls le 188Re et le 99mTc ont pu être fixés sur le peptide AG 8-0 (schéma 3) avec une sélectivité de marquage non satisfaisante en ce qui concerne le'Re, résultant en une instabilité in-vivo non négligeable.
La présente invention découle de la mise en évidence par les Inventeurs du fait qu'il est possible d'obtenir de nouveaux composés stables comportant à la fois un hétéropeptide bivalent du type HSGL, et un ou plusieurs BCA capables de complexer des radionucléides (avantageusement de grandes tailles), si le ou les BCA en question sont séparés par un cycle, notamment par le cycle phényle dans le cas du peptide 740 et de son dérivé AG 8-0 susmentionnés.
Un des buts de la présente invention est de fournir de nouveaux composés pour la radiothérapie, ou de diagnostic in vitro de pathologies telles que les cancers, notamment par radioimmunoscintigraphie, ou de traitement des déchets radioactifs, ou de dosage ou de purification de radionucléides ou de métaux.
La présente invention a pour objet des composés de formule générale (I) , (CH2) L-V,-L, [U- (B) b- (Y) a-R-A- (CH2) m,-X (I) ' (CH2), 2-V2-L2 dans laquelle : - U représente un groupe comprenant au moins un agent chélatant capable de fixer au moins un radionucléide,
l - B représente un groupe de formule : dans laquelle b 1, et b2, indépendamment l'un de l'autre, représentent un nombre entier de 1 à 5, de préférence de 1 à 3, U représente un groupe comprenant au moins un agent chélatant tel que défini ci-dessus, identique ou différent du groupe U susmentionné, et R est tel que défini ci-après, - b représente 0 ou 1, - Y représente un chaînon métabolisable dans le foie ou dans les reins, tel que - (CH2-S-S-CH2)-,- (CH2-O-CH2)-,- (CH2) n-, n étant un nombre entier compris entre 1 et 12,- (CO-O)-, - a représente 0 ou 1, - R représente NH, NHCS, NHCOCH2, ou un groupe NHCO-W-CO dans lequel W représente- (CH2) p, p étant un nombre entier compris entre 1 et 12, ou W représente un groupe Y tel que défini ci-dessus, - A représente un cycle, aromatique ou non, le cas échéant substitué, notamment par un ou deux groupes hydroxyle, comprenant environ 5 à environ 10 atomes de carbone dans le cycle, et, le cas échéant environ 1 à 2 atomes d'azote, et/ou de soufre, et/ou d'oxygène dans le cycle, tel qu'un groupe phényle, furane, thiophène, pyrrole, naphtalène, quinoline, pyrimidine, ou quinolaxine, - m représente 0, ou un nombre entier compris entre 1 et 6, - k représente 0 ou 1, - X représente N ou CH lorsque k = 1, ou X représente NH ou CH2 lorsque k = 0, - nui et n2, indépendamment l'un de l'autre, représentent 0, ou un nombre entier compris entre 1 et 6, - V, et V2, indépendamment l'un de l'autre, représentent CO, NH, NH-CO, ou CONH, -L, et L2, identiques ou différents, représentent un motif, notamment un enchaînement hétéropeptidique, ou peptidique, capable de reconnaître spécifiquement des anticorps déterminés, et dont la partie proximale, à savoir celle située à proximité de V, ou de V respectivement, est, le cas échéant, substituée par un groupe de formule U- (B) t,- (Y) a-R-A- (CH2) m-, dans lequel U, B, b, Y, R, A, a, et m sont tels que définis cidessus,
J sous réserve que lorsque k représente 0, l'un au moins de LI ou L2, est substitué par un groupe susmentionné de formule U- (B) b- (Y) -R-A- (CH2) m-.
Avantageusement U dans les composés ci-dessus, représente un groupe comprenant au moins un agent chélatant capable de fixer au moins un radionucléide choisi parmi les suivants : Bi, Ac,'"At, 153Sm,'"Re, Re, Y, Ho, 'Lu, 99mTc, 111In, 131I.
De préférence, les composés définis ci-dessus, sont caractérisés en ce que U représente un groupe comprenant au moins un agent chélatant choisi parmi les familles de composés suivants : - les agents chélatants macrocycliques rigides, tels que les composés polyaza polyaminocarboxyliques et/ou polyaminophosphoniques, lesdits composés étant notamment choisis parmi ceux décrits dans A. Ouadi, et A Loussouarn.
- ou les agents chélatants macrocycliques semi-rigides, tels que les composés dérivés du trans-l, 2-cyclohexane polyaminocarboxylique et/ou polyamino phosphonique, lesdits composés étant notamment choisis parmi ceux décrits dans la demande internationale WO 00/24751, ou dans la demande de brevet européen no 98 402648. 4, - ou les salens du type N2S2, lesdits composés étant notamment choisis parmi ceux décrits dans TISATO F. et MAZZI U. J. (9), COULAIS Y. et CROS G. (10), COULAIS Y. et CROS G. (11), ADELAERE B. (12), ADELAERE B. et GUEMAS J. P.
(13), CHARBONNEL-JOBIC G. et GUEMAS J. P. .
Des composés particulièrement préférés dans le cadre de la présente invention sont caractérisés en ce que U représente un groupe de formule : dans laquelle : - R est tel que défini ci-dessus,
- zl, z2, z3 et z4, indépendamment les uns des autres, représentent un nombre entier de 1 à 5, de préférence de 1 à 3, - R, R2, R3 et R4, indépendamment les uns des autres, représentent-COOH, ou -PO (OH) 2, ou un groupe de formule : dans laquelle n5 représente un nombre entier de 1 à 5, de préférence de 1 à 3, R5 représente-COOH, ou-PO (OH) 2, et Y représente H ou un groupe- (CH2) n6-R6 dans lequel n6 représente un nombre entier de 1 à 5, de préférence de 1 à 3, et R6 représente - COOH or-PO (OH) 2, l'un au moins de RI, R2, R3 ou R4 représentant de préférence un groupe de formule : (CH2) n5-R5 - N/ Y y tel que défini ci-dessus.
A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet des composés tels que définis ci-dessus, caractérisés en ce que U représente un groupe de formule : dans laquelle R est tel que défini ci-dessus.
D'autres composés particulièrement préférés dans le cadre de la présente invention sont caractérisés en ce que U représente un groupe de formule :
dans laquelle : - R est tel que défini ci-dessus, - mO, ml, m2, et mn, indépendamment les uns des autres, représentent un nombre entier de 1 à 5, de préférence de 1 à 3, - al, et an, indépendamment l'un de l'autre, représentent un nombre entier de 1 à 5, de préférence de 1 à 3, - RI, et Rn, indépendamment l'un de l'autre, représentent-COOH, ou-PO (OH) 2, ou un groupe de formule : (CH2) n5-R5 -N y dans laquelle n5 représente un nombre entier de 1 à 5, de préférence de 1 à 3, R5 représente-COOH, ou-PO (OH) 2, et Y représente H ou un groupe- (CH) n-R dans lequel n6 représente un nombre entier de 1 à 5, de préférence de 1 à 3, et R6 représente - COOH or-PO (OH) 2, - XI, représente un nombre entier de 3 à 12, de préférence de 4 à 6.
Après ouverture du fût au bout de trois mois stockage, le solide est pris masse.
- Exemple 14 On opère comme décrit à l'exemple 13 sauf l'on ajoute 200 ppm de dodécysulfate de sodium à la place de triéthanolamine.
Au bout de trois mois de stockage, on observe à l'ouverture du fût que le produit est pris en masse.
NOUVEAUX COMPOSES ORGANOSILICIQUES COMPRENANT UN POLYORGANOSILOXANE MULTIFONCTIONNEL PORTEUR D'AU MOINS UNE DOUBLE LIAISON ETHYLENIQUE ACTIVEE DE TYPE IMIDE ET LEURS PROCEDES DE PREPARATION Le domaine de la présente invention est celui de nouveaux composés organosiliciques comprenant un polyorganosiloxane (en abrégé POS) multifonctionnel comportant, par molécule, et attachés à des atomes de silicium, d'une part au moins un radical hydroxyle et/ou au moins un radical alkoxyle et d'autre part au moins un groupe contenant une double liaison éthylénique activée consistant dans un groupe maléimide.
La présente invention concerne encore des procédés de fonctionnalisation permettant de conduire aux POS visés ci-dessus.
Les composés comprenant un POS multifonctionnel tel que visé ci-dessus, sont aptes à présenter des propriétés intéressantes, par exemple, comme agent de couplage (charge blanche-élastomère) dans les compositions de caoutchouc à base d'élastomère(s) isoprénique (s) comprenant une charge blanche à titre de charge renforçante.
Le principe de la multifonctionnalisation de POS est décrit, par exemple, dans le document WO-A-96/16125 au nom de la Demanderesse qui divulgue la préparation de POS multifonctionnels porteurs de motifs fonctionnels =Si-0- alkyle et de motifs fonctionnels #Si-W où W est notamment un groupe hydrocarboné en C2 - C30, un groupe alkényle simple, un groupe cycloaliphatique insaturé ou un groupe mercaptoalkyle.
Poursuivant des travaux dans le domaine de la multifonctionnalisation, la Demanderesse a maintenant trouvé, et c'est ce qui constitue le premier objet de l'invention, de nouveaux POS multifonctionnels porteurs, outre d'au moins un radical alkoxyle et/ou hydroxyle, d'au moins un groupe maléimide.
Le groupe maléimide s'avère être une fonction intéressante dans les processus chimiques au sein desquels interviennent notamment des réactions vis-à-vis d'espèces actives telles que par exemple un radical hydrocarboné C#, un radical mercaptoalkyle RS#, un anion mercaptoalkyle RS', et des réactions de cycloaddition (ènes" réactions).
La revue de Part antérieur fait apparaître que les méthodes de synthèse permettant d'accéder aux fonctions maléimides sont variées. Cependant, la Demanderesse a constaté que les méthodes de synthèse habituellement proposées, quand on les applique à la chimie des silicones, peuvent ne pas offrir des rendements de fonctionnalisation satisfaisants dans le cas, qui est fréquent, où les conditions opératoires utilisées viennent modifier de façon importante le squelette silicone et minimiser d'autant, par voie de conséquence, la sélectivité de la méthode de synthèse ; on trouve ces
inconvénients pour les procédés décrits, notamment, dans les documents FR-A-2 295 959 et FR-A-2 308 126. Un autre objet de la présente invention est donc de fournir des procédés de préparation de POS porteurs de fonction(s) maléimide(s) qui sont aisés à mettre en oeuvre et procurant l'avantage indéniable de pouvoir conduire à des POS fonctionnalisés avec des sélectivités, des stabilités et des rendements se situant à un niveau d'excellence non encore atteintjusqu'ici.
PREMIER OBJET DE L'INVENTION En conséquence, la présente invention, prise dans son premier objet, concerne des composés organosiliciques qui comprennent des POS multifonctionnels contenant des motifs semblables ou différents de formule : dans laquelle : (1) les symboles R2, identiques ou différents, représentent chacun un groupe hydrocarboné monovalent choisi parmi un radical alkyle, linéaire ou ramifié, ayant de 1 à 6 atomes de carbones, un radical cycloalkyle ayant de 5 à 8 atomes de carbone, et un radical phényle ;de manière préférée, les symboles R2sont choisis parmi les radicaux : méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, n-pentyle, cyclohexyle et phényle ; de manière plus préférée, les symboles R2sont des radicaux méthyles ; (2) les symboles Y, identiques ou différents, représentent chacun une fonction hydroxyle ou alkoxyle R1O où R1 représente un radical alkyle, linéaire ou ramifié, ayant de 1 à 15 atomes de carbone ; de manière préférée, les symboles Y sont choisis parmi un radical hydroxyle et un radical alkoxyle, linéaire ou ramifié, ayant de 1 à 6 atomes de carbone ; de manière plus préférée, les symboles Y sont choisis parmi un radical hydroxyle et un radical alkoxyle, linéaire ou ramifié ayant de 1 à 3 atomes de carbone (c'est-à-dire méthoxyle, éthoxyle, propoxyle et/ou isopropoxyle) ; (3) les symboles X, identiques ou différents, représentent chacun une fonction portant une double liaison éthylénique activée, choisie parmi les radicaux ayant les formules (11/1), (II/2), (II/3) suivantes, et leurs mélanges :
avec les conditions selon lesquelles : - au moins une des fonctions X répond à la formule (II/1), - quand, le cas échéant, on a un mélange de fonction (s) de formule (11/1) avec des fonctions X de formules (11/2) et/ou (11/3), la fraction molaire de fonctions X de formules (11/2) et/ou (II/3) dans l'ensemble des fonctions X est en moyenne égale ou inférieure à 12 % en mole et, de préférence, à 5 % en mole, formules dans lesquelles : R3 est un radical divalent alkylène, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 15 atomes de carbone dont la valence libre est portée par un atome de carbone et est reliée à un atome de silicium, ledit radical R3pouvant être interrompu au sein de la chaîne alkylène par au moins un hétéroatome et en particulier par au moins un reste divalent choisi parmi -0-, -CO-, -CO-O-, -O-CO-, -COO-cyclohexylène (éventuellement substitué par un radical OH)-, -O-alkylène (linéaire ou ramifié en Cz- Ce, éventuellement substitué par un radical OH ou COOH)-, -O-CO-alkylène (linéaire ou ramifié en C2-C6, éventuellement substitué par un radical OH ou COOH)-, -CO-NH, -NH-CO-, -O-CO-NH-, -NH-alkylène (linéaire ou ramifié en C2-Ce)-CO-NH- ; R3 représente encore un radical divalent du type -phénylène(ortho, méta ou para)- alkylène (linéaire ou ramifié en CrCe)- ou du type -phénylène(ortho, méta ou para)- -0-alkylène (linéaire ou ramifié en CrCe)- : de manière préférée, le symbole R3 représente un radical alkylène qui répond aux formules suivantes : -(CH2)2-, -(CH2)3-, -(CH2)4-, -CH2-CH(CH3)-, -(CH2)rCH(CH3)-CHz-, -(CH2)3-0-(CH2)3-,