INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La détection de la sélectine P conduit à une première distinction entre cellules endothéliales d'origines différentes. La sélectine P n'a pas pu être détectée à l'intérieur de cellules provenant de ganglions périphériques et des poumons alors qu'elle est détectée dans les cellules issues de l'appendice (type muqueuse) et d'autres cellules (micro)vasculaires telles que les HIMEC, HSMEC et ECV304 (témoins). Ces données sont récapitulées dans le tableau 1 ci-dessus.
Tableau 1 : Marqueurs généraux des cellules endothéliales tels que détectés après perméabilisation.
vWf ACE CD62E CD62P HPLNEC. B3 + + + HPLNEC.2S1R1 + + + HOMEC.J6B + + +HPLNEC.Mel + + + HAPEC.S1 + + + + HLMEC + + +HIMEC-1 + + + + HSMEC-1 + + + + ECV304 + + + +
2) Ligands de cellules endothéliales microvasculaires pour la détection des molécules d'adhérence.
Deux anticorps monoclonaux spécifiques d'antigènes à large distribution intervenant comme ligands pour la molécule d'adhérence de la sélectine L : anti-CD34 (voir Lasky, 1995 et Whelan, 1996) comme ligand de la sélectine L et anti-CDl5s (sialyl-Lewis X) (Skurk et al., 1994) comme épitope des ligands de la sélectine L, ont été testés en immunofluorescence indirecte sur nos lignées de cellules endothéliales.
L'un et l'autre expriment des schémas de liaison similaires, dont les données établies par cytométrie de flux sont présentées sur les figures 4 et 5. Trois lignées cellulaires, à savoir HPLNEC.B3, HPLNEC.2S1R1 et HOMEC.J6B, réagissent positivement avec les deux anticorps. Les six autres lignées sont négatives vis-àvis de l'anticorps anti-CD34. On observe une faible positivité pour les HLMEC, HPLNEC.Mel et HSMEC-1 colorées avec l'anticorps anti-CDl5s, les trois lignées restantes étant négatives.
3) Expression des adressines endothéliales spécifiques au site.
La réactivité de lignées a été étuduée vis- à-vis des anticorps monoclonaux dirigés contre les antigènes membranaires appelés adressines. Les données correspondantes sont présentées sur les figures 6 à 9.
La réactivité de l'anticorps PNAd JG1 (adressine de ganglion périphérique, anticorps JG1) vis- à-vis des différentes lignées est présentée sur la figure 6. Le schéma de liaison est similaire à celui obtenu avec les anticorps anti-CD34 et anti-CD15s : seules les lignées HPLNEC.B3, HPLNEC.2S1R1 et HOMEC.J6B sont nettement positives dans la réaction avec cet anticorps qui a été dirigé pour détecter une molécule d'adressine typique d'un ganglion périphérique humain.
Cette série a ensuite été comparée au schéma de marquage obtenu avec l'anticorps MECA 79 (Michie et al., 1993) et l'anticorps MECA 367 (Streeter et al., 1988). Ils ont été dirigés pour le typage d'adressines de souris spécifiquement pour des ganglions périphériques (GlyCAM- 1) (Michie et al., 1993) et pour des organes lymphoïdes de muqueuses (MadCAM-1) (Streeter et al., 1988) mais leur expression est dépendante du micro-environnement (Denis et al., 1996) ; ils présentent des réactions croisées dans le système humain.
Après incubation avec l'anticorps monoclonal dirigé contre l'adressine de ganglion périphérique MECA 79 (figure 7), une sous-population de cellules s'est révélée positive dans les lignées HPLNEC. B3, HOMEC.J6B, HPLNEC.2S1R1 et pulmonaire. La population de cellules positives la plus importante est trouvée dans HPLNEC.B3, environ 50 %, et dans HOMEC. J6B, 40 %. Les lignées HPLNEC.2S1R1 et HLMEC présentent environ 25 à 30 % de cellules positives. Les cinq autres lignées sont négatives dans cette réaction.
Enfin, la liaison de l'anticorps monoclonal dirigé contre l'adressine de muqueuse de souris MadCAM-1 (Nakache et al., 1989), appelée MECA 367, a été évaluée. Comme le montre la figure 8, les mêmes quatre lignées se sont révélées positives comme dans les expériences précédentes. Dans le cas de cet anticorps, les histogrammes sont nettement bimodaux, avec une proportion de cellules qui n'expriment pas l'antigène et une proportion de HPLNEC. B3 (75 %) fortement positive.
Cette proportion de cellules fortement marquées est légèrement moindre (65 %) pour la lignée HOMEC.J6B et elle descend jusqu'à 20 % pour HPLNEC.2S1R1 et HLMEC.
Les cellules HAPEC.S1 présentent un seul marquage homogène par le MECA 367. La totalité de la population réagit positivement, ce qui démontre clairement qu'il s'agit de cellules endothéliales de type muqueuses. Les autres lignées sont négatives, c'est-à-dire que les adressines de ganglion ne sont pas détectables dans les lignées HPLNEC.Mel, HIMEC, HSMEC et ECV.
Le ou les colorants directs synthétiques selon l'invention et/ou le ou les colorant: naturels représentent de 0,001 à 20% en poids environ du poids total de la composition et encore plus préférentiellement de 0,005 à 10% en poids environ.
De préférence, les compositions de l'invention contiennent au moins un coupleur.
Parmi ces coupleurs, on peut notamment citer les métaphénylènediamines, les méta-aminophénols, les métadiphénols et les coupleurs hétérocycliques tels que par exemple les dérivés indoliques, les dérivés indoliniques, les dérivés de benzimidazole, les dérivés de benzomorpholine, les dérivés de sésamol, les dérivés pyridiniques, pyrimidiniques et pyrazoliques, et leurs sels d'addition avec un acide.
Ces coupleurs sont plus particulièrement choisis parmi le 2-méthyl-5-aminophénol, le 5-N-(p-hydroxyéthyl)-amino2-méthyl-phénol, le 3-amino-phénol, le 1,3-dihydroxy-benzène, le 1,3-dihydroxy-2-méthyl-benzène, le 4-chloro- 1,3-dihydroxy-benzène, le 2,4-diamino-1-(ss-hydroxyéthyloxy)-benzène, le 2-amino 4-(ss-hydroxyéthylamino)-1-méthoxy-benzène, le 1,3-diamino-benzène, le 1,3-bis-(2,4-diaminophénoxy)-propane, le sésamol, le 1-amino-2-méthoxy- 4,5-méthylènedioxy-benzène, l'a-naphtol, le 2-méthyl-1-naphtol, le 6-hydroxy indole, le 4-hydroxyindole, le 4-hydroxy-N-méthyl-indole, la 6-hydroxy-indoline, la 2,6-dihydroxy-4-méthyl-pyridine, la 1-H-3-méthyl-pyrazole-5-one, la 1-phényl- 3-méthyl-pyrazole-5-one, et leurs sels d'addition avec un acide.
La composition tinctoriale conforme à l'invention peut, en outre, renfermer au moins une base d'oxydation additionnelle différente des dérivés substitués de paraphénylènediamine de formule (I) et/ou au moins un colorant direct différent de ceux de la présente invention.
Parmi les bases d'oxydation additionnelles utilisables selon l'invention, on peut citer la paraphénylènediamine, la paratoluylènediamine, la 2-hydroxyéthyl- paraphénylènediamine, la 1-N,N-bis(2-hydroxyéthyl)-paraphénylènediamine, les para-aminophénols tels que le 3-méthyl-4-aminophénol et le 4-aminophénol, les orthophénylènes diamines, les orthoaminophénols, les bases doubles, les bases hétérocycliques comme les pyrimidines telles que la 2,4,5,6-tétraaminopyrimidine ou comme les pyrazoles tel que le 1-(2-hydroxyéthyl)-4,5-diamino-pyrazole.
Le milieu de la composition approprié pour la teinture est de préférence un milieu aqueux constitué par de l'eau et peut avantageusement contenir des solvants organiques acceptables sur le plan cosmétique, dont plus particulièrement, des alcools tels que l'alcool éthylique, l'alcool isopropylique, l'alcool benzylique, et l'alcool phényléthylique, ou des glycols ou éthers de glycol tels que, par exemple, les éthers monométhylique, monoéthylique et monobutylique d'éthylèneglycol, le propylèneglycol ou ses éthers tels que, par exemple, le monométhyléther de propylèneglycol, le butylèneglycol, le dipropylèneglycol ainsi que les alkyléthers de diéthylèneglycol comme par exemple, le monoéthyléther ou le monobutyléther du diéthylèneglycol, dans des concentrations comprises entre environ 1 et 40% et, de préférence, entre environ 2 et 10% en poids par rapport au poids total de la composition.
La composition selon l'invention peut encore contenir une quantité efficace d'autres agents, par ailleurs antérieurement connus en coloration d'oxydation, tels que divers adjuvants usuels comme des séquestrants tel que l'EDTA et l'acide étidronique, des filtres UV, des cires, des silicones volatiles ou non, cycliques ou linéaires ou ramifiées, organomodifiées (notamment par des groupements amines) ou non, des conservateurs, des céramides, des pseudocéramides, des huiles végétales, minérales ou de synthèse, les vitamines ou provitamines comme
le panthénol, des opacifiants, des agents épaississants tels que les acides polyacryliques réticulés ou les hydroxyalkylcelluloses etc....
Ladite composition peut également contenir des agents réducteurs ou antioxydants. Ceux-ci peuvent être choisis en particulier parmi le sulfite de sodium, l'acide thioglycolique, l'acide thiolactique, le bisulfite de sodium, l'acide déhydroascorbique, l'hydroquinone, la 2-méthyl-hydroquinone, la ter-butyl- hydroquinone et l'acide homogentisique, et ils sont alors généralement présents dans des quantités allant d'environ 0,05 à 1,5% en poids par rapport au poids total de la composition.
De préférence, la composition de l'invention contient au moins un tensioactif nonionique, anionique, cationique ou amphotère dans la proportion d'environ 0,1 à 20% en poids.
La composition selon l'invention contient de préférence au moins un polymère substantif cationique ou amphotère dans la proportion d'environ 0,05 à 10% en poids.
DISPOSITIF D'ANALYSE ÉLÉMENTAIRE PAR SPECTROMÉTRIE ÉMISSION OPTIQUE SUR PLASMA PRODUIT PAR LASER DESCRIPTION DOMAINE TECHNIQUE La présente invention concerne un dispositif d'analyse élémentaire par SEOPPL, c'est-à- dire spectrométrie d'émission optique sur plasma produit par laser, technique qui se pratique en atmosphère naturelle.
Elle s'applique notamment au controle et à la caractérisation in situ d'échantillons de pièces à analyser.
Elle trouve en particulier une application dans le domaine de l'industrie nucléaire, pour le controle de matériaux radioactifs.
L'invention s'applique tout particulièrement à la cartographie de pastilles du combustible appelé MOX (pour "Mixed Oxide"). ÉTAT DE LA TECHNIQUE ANTÉRIEURE On connaît déjà un procédé 'analyse élémentaire par spectrométrie d'émission optique sur plasma produit par laser en présence d'argon par le document suivant auquel on se reportera [1] 0654663A (invention de N. Andre, P. Mauchien et A. Semerok) - voir aussi FR 2712697A et US 83634. La technique divulguée par ce document ne permet pas de contrôler les pastilles combustible MOX avec une résolution suffisante et avec des cadences suffisamment élevées. On rappelle que le combustible. MOX utilisé dans les réacteurs nucléaires, sous forme de pastilles MOX frittées, contient un mélange d'oxydes de plutonium (Pu02) e t d'uranium (U02) .
Le contrôle de la fabrication de ces pastilles est une étape essentielle pour vérifier les spécifications nécessaires à leur utilisation, en particulier celles qui sont relatives à 'homogénéité du mélange Pu02/U02.
Il est nécessaire de disposer d'une technique de contrôle permettant la mesure de la distribution de la concentration de l'uranium et du plutonium dans les pastilles et répondant cahier des charges procédé de fabrication dont les points essentiels sont donnés ci-après.
Cette technique doit pouvoir décrire quantitativement des objets dont le diamètre moyen vaut 10 um. afin de décrire de façon précise un objet de diamètre donné, on peut montrer qu'il est nécessaire de disposer d'une sonde de résolution spatiale 3 fois inférieure. Ceci entraîne, dans le cas d'une application aux pastilles MOX, que la tai du point de mesure doit avoir un diamètre d'environ 3 um.
Les éléments chimiques qui doivent être mesurés quantitativement à cette échelle sont l'uranium et le plutonium. 1 La technique doit permettre la réalisation de cartographies en deux dimensions de pastilles de natures différentes : d'une part les pastilles crues (avant passage dans un four), qui sont fragiles poreuses, et d'autre part les pastilles frittées (après passage dans le four). Les contraintes des mesures sur ces deux genres d'échantillons sont très differentes. # La préparation des pastilles à analyser doit être minime de façon à être compatible avec un suivi ligne d'un procédé de fabrication industriel Les mesures doivent pouvoir être effectuées de façon déportée pour éviter la contamination de l'appareillage de mesure.
1 Le nombre de pastilles à contrôler pour une campagne s'effectuant sur une journée doit être de plusieurs unités pour satisfaire les besoins contrôle, la surface minimale d'examen étant environ égale à 1 mm2 par pastille.
En outre il est souhaitable que technique employée ne génère pas d'effluents liquides radioactifs, que la partie nucléarisée de cette technique soit minime de façon à limiter interventions en zone contrôlée et que l'appareillage de mesure permette l'analyse d'échantillons radioactifs sans nécessiter de préparation particulière.
On connaît trois techniques principales permettant de contrôler l'homogénéité des pastilles MOX.
Les deux premières permettent de former l'image de la surface d'une telle pastille. Il s'agit de l'autoradiographie alpha qui consiste à mesurer l'émission de particules alpha par cette pastille, et de l'attaque métallographique qui est un examen microscopique d'une section de la pastille ayant subi un traitement acide (qui conduit à une attaque différenciée entre Pu02 et ).
La troisième permet de faire une microanalyse quantitative de surface et utilise une microsonde électronique pour analyser l'émission de rayonnement X induite par un bombardement électronique de la pastille.
L'autoradiographie alpha ne permet d'obtenir qu'une image qualitative des éléments émetteurs de particules alpha. Cette technique détecte ainsi, sans discrimination, l'ensemble des émetteurs alpha comme par exemple le plutonium et l'américium.
La résolution cette technique est de l'ordre de 40 um, valeur insuffisante vis-à-vis des performances requises (quelques micromètres).
Ainsi l'autoradiographie alpha ne répond- elle que très partiellement au cahier des charges du contrôle des pastilles de combustible MOX.
- les copolymère vinylpyrrolidone / méthacrylamidopropyl dimethylamine commercialisés notamment sous la dénomination STYLEZE CC 10 par ISP, - et les copolymères vinylpyrrolidone / méthacrylamide de diméthylaminopropyle quaternisés tel que le produit vendu sous la dénomination "GAFQUAT HS 100" par la société ISP .
(6) Les polyaminoamides solubles dans l'eau préparés en particulier par polycondensation d'un composé acide avec une polyamine ; ces polyaminoamides peuvent être réticulés par une épihalohydrine, un diépoxyde, un dianhydride, un dianhydride non saturé, un dérivé bis-insaturé, une bishalohydrine, un bis-azétidinium, une bis-haloacyldiamine, un bis-halogénure d'alkyle ou encore par un oligomère résultant de la réaction d'un composé bifonctionnel réactif vis-à-vis d'une bis-halohydrine, d'un bis-azétidinium, d'une bis-haloacyldiamine, d'un bis-halogénure d'alkyle, d'une épilhalohydrine, d'un diépoxyde ou d'un dérivé bis-insaturé ; l'agent réticulant étant utilisé dans des proportions allant de 0,025 à 0,35 mole par groupement amine du polyaminoamide ; ces polyaminoamides peuvent être alcoylés ou s'ils comportent une ou plusieurs fonctions amines tertiaires, quaternisées. De tels polymères sont notamment décrits dans les brevets français 2. 252.840 et 2. 368.508 .
(9) Les cyclopolymères d'alkyl diallyl amine ou de dialkyl diallyl ammonium tels que les homopolymères ou copolymères comportant comme constituant principal de la chaîne des motifs répondant aux formules (V) ou (VI) : formules dans lesquelles k et t sont égaux à 0 ou 1, la somme k + t étant égale à 1 ; Rg désigne un atome d'hydrogène ou un radical méthyle ; R7 et R8, indépendamment l'un de l'autre, désignent un groupement alkyle ayant de 1 à 22
atomes de carbone, un groupement hydroxyalkyle dans lequel le groupement alkyle a de préférence 1 à 5 atomes de carbone, un groupement amidoalkyle inférieur (C1-C4), ou R7 et R8 peuvent désigner conjointement avec l'atome d'azote auquel ils sont rattachés, des groupement hétérocycliques, tels que pipéridinyle ou morpholinyle ; R7 et R8 indépendamment l'un de l'autre désignent de préférence un groupement alkyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone ; Y- est un anion tel que bromure, chlorure, acétate, borate, citrate, tartrate, bisulfate, bisulfite, sulfate, phosphate. Ces polymères sont notamment décrits dans le brevet français 2. 080.759 et dans son certificat d'addition 2.190.406.
(10) Le polymère de diammonium quaternaire contenant des motifs récurrents répondant à la formule : formule (VII) dans laquelle : R10, R11, R12 et R13, identiques ou différents, représentent des radicaux aliphatiques, alicycliques, ou arylaliphatiques contenant de 1 à 20 atomes de carbone ou des radicaux hydroxyalkylaliphatiques inférieurs, ou bien R10, R11, R12 et R13, ensemble ou séparément, constituent avec les atomes d'azote auxquels ils sont rattachés des hétérocycles contenant éventuellement un second hétéroatome autre que l'azote ou bien R10, R11, R12 et R13 représentent un radical alkyle en Ci-Ce linéaire ou ramifié substitué par un groupement nitrile, ester, acyle, amide ou -CO-O- R14-D ou -CO-NH- R14-D où R14 est un alkylène et D un groupement ammonium quaternaire ;
Ce gène est exprimé dans un grand nombre de tissus et notamment dans la substance noire. Il existe plusieurs transcrits correspondant à ce gène qui proviennent d'épissages alternatifs différents (Kitada et al., 1998 ; Sunada et al., 1998). Dans le cerveau, on trouve deux types d'ARN messagers dont un est dépourvu de la partie correspondant à l'exon 5. Dans les leucocytes, des ARN messagers de la Parkine ne contenant pas la région codant pour les exons 3,4 et 5 ont été identifiés. Le plus long des ARN messagers de la Parkine, présent dans le cerveau, contient 2960 bases et code pour une protéine de 465 acides aminés.
Cette protéine a une faible homologie dans sa partie N-terminale avec l'ubiquitine. Sa moitié C-terminale contient deux motifs ring finger séparés par un domaine IBR (In Between Ring) correspondant à une région riche en cystéine
pouvant lier des métaux comme les domaines zing finger (Morett, 1999). Par immunocytochimie, il a été montré que la Parkine est localisée dans le cytoplasme et l'appareil de Golgi de neurones de la substance noire qui contiennent de la mélanine (Shimura et al., 1999). De plus, cette protéine est présente dans certains corps de Lewy de Parkinsoniens. La fonction cellulaire de la Parkine n'est pas encore démontrée, mais elle pourrait jouer un rôle de transporteur dans les vésicules synaptiques, dans la maturation ou dégradation des protéines et dans le contrôle de la croissance, de la différenciation ou du développement cellulaire. Dans les formes autosomiques récessives juvéniles, la Parkine est absente, confirmant ainsi que la perte de cette fonction est responsable de la maladie.
L'élucidation du rôle exact de la protéine Parkine dans le processus de dégénérescence des neurones dopaminergiques constitue donc un enjeu majeur pour la compréhension et l'approche thérapeutique de la maladie de Parkinson et plus généralement des maladies du système nerveux central.
La présente invention réside dans l'identification d'un partenaire de la parkine, interagissant avec cette protéine dans des conditions physiologiques. Ce partenaire représente une nouvelle cible pharmacologique pour la fabrication ou la recherche de composés capables de moduler l'activité de la parkine, notamment son activité sur la dégénérescence des neurones dopaminergiques et/ou le développement de pathologies nerveuses. Cette protéine, les anticorps, .les acides nucléiques correspondant ainsi que les sondes ou amorces spécifiques, sont également utilisables pour la détection ou le dosage des protéines dans des échantillons biologiques, notamment des échantillons de tissu nerveux. Ces protéines ou acides nucléiques sont également utilisables dans des approches thérapeutiques, pour moduler l'activité de la parkine, ainsi que tout composé selon l'invention, capables de moduler l'interaction entre la parkine et les polypeptides de l'invention.
La présente invention résulte plus particulièrement de la mise en évidence par la demanderesse d'une nouvelle protéine humaine, désignée PAPI (Parkine Associated Protein 1), interagissant avec la parkine. La protéine PAPI(séquence SEQ ID NO :1 ou 2) présente une certaine homologie avec les synaptotagmines et est capable d'interagir plus particulièrement avec la région centrale de la parkine (représentée sur la séquence SEQ ID NO : 3 ou 4).
La présente invention résulte également de l'identification et de la caractérisation de régions particulières de la protéine PAPI, impliquées dans la modulation de la fonction de la parkine. La mise en évidence de l'existence de cette protéine et de régions impliquées dans sa fonction permet notamment de préparer de nouveaux composés et/ou compositions utilisables comme agents pharmaceutiques et de développer des méthodes industrielles de criblage de tels composés.
Un premier objet de l'invention concerne donc des composés capables de moduler, au moins partiellement, l'interaction entre la protéine PAPI(ou ses homologues) et la parkine (notamment la parkine humaine), ou d'interférer au niveau de l'interaction entre ces protéines.
Un autre objet de l'invention réside dans la protéine PAP1, ses fragments, dérivés et homologues.
Un autre aspect de l'invention réside dans un acide nucléique codant la protéine PAP1, ses fragments, dérivés ou homologues, ainsi que tout vecteur comprenant un tel acide nucléique et toute cellule recombinante contenant un tel acide nucléique ou vecteur.
L'invention concerne aussi des anticorps capables de lier la protéine PAPI, ses fragments, dérivés et homologues, notamment des anticorps polyclonaux ou monoclonaux, plus préférentiellement des anticorps capables de lier la protéine PAPI et d'inhiber au moins partiellement son interaction avec la parkine.
Un autre aspect de l' invention concerne des sondes ou amorces nucléotidiques, spécifiques de PAP1, utilisables pour détecter ou amplifier le gène de pap1 ou une région de celui-ci dans tout échantillon biologique.
L'invention concerne encore des compositions pharmaceutiques, des méthodes de détection d'anomalies génétiques, des méthodes de production de polypeptides tels que définis ci-avant, ainsi que des méthodes de criblage ou de caractérisation de composés actifs.
Comme indiqué ci-avant, un premier aspect de l'invention réside dans un composé capable d'interférer, au moins partiellement, au niveau de l'interaction entre la protéine PAP1 (ou ses homologues) et la parkine.
Au sens de la présente invention, la dénomination protéine PAP1 désigne la protéine en soit ainsi que toutes ses formes homologues. Par forme homologue on entend désigner toutes protéines équivalentes à la protéine considérée, d'origine cellulaire diverse et notamment issue de cellules d'origine humaine, ou d'autres organismes, et possédant une activité de même type. De tels homologues comprennent également les variants naturels de la protéine PAPIde séquence SEQ ID N02, notamment les variants polymorphiques ou d'épissage. De tels homologues peuvent être obtenus par des expériences d'hybridation entre les acides nucléiques codant.(notamment l'acide nucléique de séquence SEQ ID NO :1). Au sens de l'invention, il suffit qu'une séquence de ce type présente un pourcentage d'identité significatif pour conduire à un comportement physiologique assimilable à celui de la protéine PAP 1 tel que revendiquée.
L'interférence d'un composé selon l'invention peut se manifester sous différents aspects. Ainsi, le composé peut-ralentir, inhiber ou stimuler, au moins partiellement, l'interaction entre la protéine PAP1ou l'une de ses formes homologues et la Parkine. Il s'agit préférentiellement de composés capables de moduler cette interaction in vitro, par exemple dans un système de type double-hybride ou dans tout système acellulaire de détection d'une interaction entre deux polypeptides. Les composés selon l'invention sont préférentiellement des composés capables de moduler au moins partiellement cette interaction, de préférence d'augmenter ou
En particulier, on peut utiliser des agents anti-jaunes tels que ceux décrits dans les brevets US 5442022, US 5545828, US 5702825 et US 5741831.
L'agent anti-jaune préféré est le 3-méthyl 2-butène 1-ol (MBOL).