INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Dans l'exemple représenté aux figures 9 et 10, le composant intercalaire 28b est réalisé au moyen de deux films 33 souples, en forme ruban, collés ou adhérisés l'un contre l'autre sauf en certains emplacements régulièrement répartis longitudinalement où l'un des films 33 forme des poches 34 fermées par l'autre film et renfermant de 1 air ou autre gaz. Le procédé pour réaliser un tel constituant intercalaire est similaire à celui qu'on emploie pour réaliser les films d'emballage présentant des "bulles" de
rembourrage destinées à protéger l'objet emballé contre les chocs pendant le transport. Dans l'exemple représenté à la figure 11, l'enveloppe 28c est un simple film tubulaire continu souple. Par rapport aux réalisations de figures 7 à 10, ce film tubulaire est plus économique mais a l'inconvénient de ne pas hermétiquement emprisonner l'air ou autre gaz. D'autre part une crevaison du film tubulaire affecte une grande longueur de l'article en cours de production.
Les réalisations des figures 7 à 10 sont avantageuses car les chapelets 28a ou 28b sont positivement entraînés avec l'article en cours de production. Il en va de même du mode de réalisation de la figure 11. Les billes 28 nécessitent au contraire une surveillance pour le bon remplissage de chaque couloir 23. Elles peuvent par contre être avantageuses pour donner à l'article une meilleure resistance à la compression dans le sens de son épaisseur.
Les figures 4, 5 et 6 illustrent le fonctionnement du dispositif de la figure 1 avec les différents types d'enveloppes 28c, 28a, 28b, 28 à partir de la gauche de chaque figure, respectivement. Ceci est purement illustratif. En pratique on utilisera général le même type d'enveloppes dans tous les couloirs 23 pour une production donnée.
L'exemple des figures 12 et 13 ne sera décrit que pour ses différences par rapport à celui figures 1 à 11. Le bâti 1 comporte des moyens 6a pour supporter une troisième bobine de nappe 7a délivrant une troisième nappe 8a. Il y a deux tables à lamelles 2a disposées parallèlement l'une à l'autre avec entre elles un intervalle servant au guidage de la nappe 8a. Il y a deux arrivées distinctes 35 de constituants intercalaires pour placer des constituants intercalaires entre la nappe centrale 8a et chacune des deux nappes extérieures 8, respectivement. Les aiguilles 19, en position de penétration maximale peuvent atteindre la nappe 8 extérieure opposée ou au contraire, de préférence, n'atteindre que la nappe centrale 8a. En pratique, le mode de réalisation a trois nappes qui vient d'être décrit sert notamment à réaliser des articles de relativement grande épaisseur sans avoir besoin de donner aux aiguilles une course de mouvement correspondant à toute l'épaisseur du produit.
L'exemple des figures 14 à 17 ne sera décrit que pour ses différences par rapport à celui des figures 1 à 4. Plusieurs modifications, essentiellement indépendantes les unes des autres sont représentées.
D'une part, dans la machine de la figure 14, l'article avance dans un plan horizontal au cours de sa production. Le mouvement de -et-vient 24 des aiguilles est donc vertical.
Par ailleurs, dans cette réalisation, il y a deux types de couloirs 23 et 23a. Les couloirs 23, de plus grande dimension, sont comme dans la réalisation précédente destinés à l'introduction des constituants intercalaires 28. Les couloirs 23a sont occupés par des buses d'injection de résine 36 sont alimentées à partir d'un réservoir 37 (figure 14) et d'une pompe 38 et débouchent entre les deux nappes 8 au-delà de l'extrémité aval de la table 2 (figure 17).
Exemple 55 Le (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5- difluorophényl)-N-(tétrahydrofuran-2-ylméthyl)-acétamide peut être préparé
de la manière suivante : A une solution de 50 mg de chlorhydrate de l'acide (RS)-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-(3,5-difluorophényl)- acétique dans 2cm3 de dichlorométhane anhydre, à une température voisine de 20 C, sont ajoutés successivement 0,013 cm3 de tétrahydrofurfurylamine, 29 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide, 0,028 cm3 de triéthylamine et 1,5 mg d'hydrate d'hydroxybenzotriazole. La solution obtenue est agitée à une température voisine de 20 C pendant environ 12 heures. Le milieu réactionnel est déposé sur une cartouche Varian (6 cm3) garnie avec 3 g de silice fine (0,040-0,063 mm), conditionnée puis éluée au dichlorométhane à l'aide d'une pompe Duramat en recueillant des fractions de 2 cm3. Les fractions 3 à 8 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 40 C. On obtient ainsi 27 mg de 2(RS)-2- {1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5-difluorophényl)-N- (tétrahydrofuran-2-ylméthyl)-acétamide sous forme d'une solide blanc [Spectre de R.M.N 1H (300 MHz, CDC13, # en ppm) : de1,65 à 1,95 (mt : 4H); 2,64 (mt : 1 H); 2,89 (dd, J = 7,5 et 5,5 Hz : 1 H); de 3,00 à 3,20 (mt : 3H); de 3,30 à 3,60 (mt : 2H); 3,58 (d, J = 10,5 Hz : 1 H); de 3,65 à 3,95 (mt : 3H); 4,25 (s : 1 H); 5,81 (mt : 1 H); 6,68 (tt, J = 9 et 2,5 Hz : 1 H); 6,82 (mt : 2H); de 7,15 à 7,35 (mt : 8H)].
Exemple 56 Le (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5- difluorophényl)-N-(2-morpholin-4-yl-éthyl)-acétamide peut être préparé de la manière suivante : A une solution de 50 mg de chlorhydrate de l'acide (RS) - {1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-(3,5-difluorophényl)-acétique dans 2 cm3 de dichlorométhane anhydre, à une température voisine de 20 C, sont ajoutés successivement 0,016 cm3 d'aminoéthylmorpholine, 29 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide, 0,028 cm3 de triéthylamine et 1,5 mg d'hydrate d'hydroxybenzotriazole. La solution obtenue est agitée à une température voisine de 20 C pendant environ 12 heures. Le
milieu réactionnel est déposé sur une cartouche Varian (6 cm3) garnie avec 3 g de silice fine (0,040-0,063 mm), conditionnée au dichlorométhane à l'aide d'une pompe Duramat, éluée successivement avec un mélange dichlorométhane-acétate d'éthyle (70-30 en volumes) en recueillant des fractions de 2 cm3 pour les fractions 1 à 12, puis avec un mélange dichlorométhane-méthanol (98-2 en volumes) en recueillant des fractions de 2 cm3 pour les fractions 12 à 27. Les fractions 13 à 27 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 40 C. On obtient ainsi 34 mg de (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5- difluorophényl)-N-(2-morpholin-4-yl-éthyl)-acétamide sous forme d'une meringue blanche [Spectre de R.M.N 1H (300 MHz, CDC13, 8 en ppm) : 2,33 (t large, J = 5 Hz : 2,38 (t, J = 7 Hz : 2H); 2,65 (mt : 1 H); de 2,85 à 3,20 (mt : 3H); 3,25 (q large, J = 7 Hz : 2H); 3,43 (mt : 1 H); 3,57 (t, J = 5 Hz : 3,61 (d, J = 10,5 Hz : 1 H); 4,26 (s : 1 H); 5,98 (mf : 1 H); 6,70 (tt, J = 9 et 2,5 Hz : 1 H); 6,83 (mt : 2H); de 7,15 à 7,35 (mt : 8H)].
Exemple 57 Le (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5- difluorophényl)-N-(1-éthylpyrrolidin-2-ylméthyl)- acétamide peut être préparé de la manière suivante : A une solution de 50 mg de chlorhydrate de l'acide (RS)-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-(3,5-difluorophényl)- acétique dans 2 cm3 de dichlorométhane anhydre, à une température voisine de 20 C, sont ajoutés successivement 0,018 cm3 d'aminométhyléthylpyrrolidine, 29 mg de chlorhydrate de 1-(3- diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide, 0,028 cm3 de triéthylamine et 1,5 mg d'hydrate d'hydroxybenzotriazole. La solution obtenue est agitée à une température voisine de 20 C pendant environ 12 heures. Le milieu réactionnel est déposé sur une cartouche Varian (de 12 mm de diamètre) garnie avec 4 cm3 de silice (0,060-0,200 mm) conditionnée au dichlorométhane à l'aide d'un appareil à vide, élution au dichlorométhane
entre 0 et 6 cm3 puis avec un mélange dichlorométhane-méthanol (95-5 en volumes). Les fractions contenant le produit cherché sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 40 C pendant 2 heures. La pâte jaune ainsi obtenue est reprise par 2 cm3 d'acétate d'éthyle, puis par 2 cm3 d'eau distillée. Après agitation, le mélange est congelé, la phase organique est concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 40 C. Le résidu obtenu est repris par 2 cm3 d'oxyde de di-isopropyle puis est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 40 C. On obtient ainsi 38 mg de (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5-difluorophényl)-N- (1-éthylpyrrolidin-2-ylméthyl)-acétamide sous forme d'une meringue blanche [Spectre de R.M.N 1H (300 MHz, CDC13 avec ajout de quelques gouttes de CD3COOD d4, # en ppm) : et 1,17 (2t, J = 7,5 Hz : 3H en totalité); de 1,60 à 2,00 (mt : 4H);de 2,50 à 2,95-de 3,10 à 3,85 (mts : 11 H); de 3,95 à 4,10 (mt : 1 H); 4,10 et 4,14 (2d, J = 10,5 Hz : 1 H en totalité); 5,18 et 5,25 (2s larges : 1 H en totalité); 6,66 (mt : 1 H); de 6,80 à 7,00 (mt : 2H); de 7,15 à 7,45 (mt : 8H) ].
Exemple 58 Le (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5- difluorophényl)-N- isobutylacétamide peut être préparé de la manière suivante : A une solution de 50 mg de chlorhydrate de l'acide (RS)-{1-[bis-(4- chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-(3,5-difluorophényl)-acétique dans 2 cm3 de dichlorométhane anhydre, à une température voisine de 20 C, sont ajoutés successivement 0,012 cm3 d'isobuthylamine, 29 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide, 0,028 cm3 de triéthylamine et 1,5 mg d'hydrate d'hydroxybenzotriazole. La solution obtenue est agitée à une température voisine de 20 C pendant environ 12 heures. Le milieu réactionnel est déposé sur une cartouche Varian (de 12 mm de diamètre) garnie avec 5 cm3 de silice (0,060-0,200 mm) conditionnée au dichlorométhane à l'aide d'un appareil à vide, élution au dichlorométhane
entre 0 et 6 cm3 puis avec un mélange dichlorométhane-acétate d'éthyle (95- 5 en volumes). Les fractions ne contenant que le produit cherché sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 40 C. On obtient ainsi 40 mg de (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2- (3,5-difluorophényl)-N- isobutylacétamide sous forme d'une meringue blanche [Spectre de R.M.N 1H (300 MHz, (CD3)2SO d6, # en ppm) : 0,75 (d, J = 7,5 Hz : 6H); 1,62 (mt : 1 H); 2,61 (mt : 1 H); de 2,70 à 2,95 (mt : 3H); 3,03 (mt : 2H); 3,22 (t large, J = 7 Hz : 1 H); 3,83 (d, J = 10,5 Hz : 1 H); 4,45 (s : 1 H); 7,00 (mt : 2H); 7,08 (tt, J = 9 et 2,5 Hz : 1 H); de 7,25 à 7,45 (mt : 8H); 8,11 (t, J = 6 Hz : 1 H)].
Exemple 59 Le (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5- difluorophényl)-N,N-diméthylacétamide peut être préparé de la manière suivante : A une solution de 50 mg de chlorhydrate de l'acide (RS)-{1-[bis-(4chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-(3,5-difluorophényl)-acétique dans 2 cm3 de dichlorométhane anhydre, à une température voisine de 20 C, sont ajoutés successivement 0,060 cm3 de diméthylamine en solution 2M dans le tétrahydrofuranne, 29 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3- éthylcarbodiimide, 0,028 cm3 de triéthylamine et 1,5 mg d'hydrate d'hydroxybenzotriazole. La solution obtenue est agitée à une température voisine de 20 C pendant environ 12 heures. Le milieu réactionnel est déposé sur une cartouche Varian (de 12 mm de diamètre) garnie avec 4,4 cm3 de silice (0,060-0,200 mm) conditionnée au dichlorométhane à l'aide d'un appareil à vide, élution au dichlorométhane entre 0 et 6 cm3 puis avec un mélange dichlorométhane-acétate d'éthyle (95-5 en volumes). Les fractions ne contenant que le produit cherché sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 40 C. On obtient ainsi 13 mg de (RS)-2-{1-[bis- (4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5-difluorophényl)-N,N- diméthylacétamide sous forme d'une poudre blanche [Spectre de R.M.N 1H
(300 MHz, CDC13, # en ppm) : 2,70 à 2,80 (mt : 2H); 2,92 (s : 3H); 2,95 (s : 3H); de 3,00 à 3,15 (mt : 2H); 3,38 (t large, J = 7,5 Hz : 1H); 3,96 (d, J = 10 Hz : 1 H); 4,26 (s : 1 H); 6,69 (tt, J = 9 et 2,5 Hz : 1 H);6,81 (mt : 2H); de 7,20 à 7,35 (mt : 8H) ].
Exemple 60 Le (RS)-2-{ 1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5- difluorophényl)-N-benzylacétamide peut être préparé de la manière suivante : A une solution de 50 mg de chlorhydrate de l'acide (RS) -{1-[bis-(4- chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-(3,5-difluorophényl)-acétique dans 2 cm3 de dichlorométhane anhydre, à une température voisine de 20 C, sont ajoutés successivement 0,013 cm3 de benzylamine, 29 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide, 0,028 cm3 de triéthylamine et 1,5 mg d'hydrate d'hydroxybenzotriazole. La solution obtenue est agitée à une température voisine de 20 C pendant environ 12 heures. Le milieu réactionnel est déposé sur une cartouche Varian (de 12 mm de diamètre) garnie avec 4,4 cm3 de silice (0,060-0,200 mm) conditionnée au dichlorométhane à l'aide d'un appareil à vide, élution au dichlorométhane entre 0 et 6 cm3 puis avec un mélange dichlorométhane-acétate d'éthyle (95- 5 en volumes). Les fractions ne contenant que le produit cherché sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 40 C. On obtient ainsi 37 mg de (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2- (3,5-difluorophényl)-N-benzylacétamide sous forme de cristaux blancs [Spectre de R.M.N 1H (300 MHz, CDC13, # en ppm) : 2,67(mt : 1 H); 2,93 (mt : 1 H); 3,11 (mt : 2H); 3,43 (t large, J = 7,5 Hz : H); 3,62 (d, J = 10,5 Hz : 1 H); 4,26 (s : 1 H); 4,38 (mt : 2H); 5,71 (mt : 1 H); 6,71 (t large, J = 9 Hz : 1 H); 6,83 (mt : 2H); de 7,10 à 7,40 (mt : 13H) ].
Exemple 61 Le (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5- difluorophényl)-N-cyclohéxylméthylacétamide peut être préparé de la manière suivante : A une solution de 50 mg de chlorhydrate de l'acide{1-[bis- (4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-(3,5-difluorophényl)-acétique dans 2cm3 de dichlorométhane anhydre, à une température voisine de 20 C, sont ajoutés successivement 0,016 cm3 d'aminométhylcyclohéxane, 29 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide, 0,028 cm3 de triéthylamine et 1,5 mg d'hydrate d'hydroxybenzotriazole. La solution obtenue est agitée à une température voisine de 20 C pendant environ 12 heures. Le milieu réactionnel est déposé sur une cartouche Varian (6 cm3) garnie avec 3 g de silice fine (0,040-0,063 mm), conditionnée puis éluée au dichlorométhane à l'aide d'une pompe Duramat en recueillant des fractions de 2 cm3. Les fractions 2 à 3 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 40 C. On obtient ainsi 49 mg de (RS)-2-{1-[bis-(4- chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5-difluorophényl)-N-cyclohéxylméthyl- acétamide sous forme d'une meringue blanche [Spectre de R.M.N 1H (300 MHz, CDC13, 8 en ppm) : 0,75 à 1,75 (mt : 11 H); 2,65 (mt : 1 H); de 2,85 à 3,15 (mt : 5H); 3,42 (t large, J = 7,5 Hz : 1 H); 3,57 (d, J = 10,5 Hz : 1 H); 4,27 (s : 1 H); 5,40 (mt : 1 H); 6,71 (t large, J = 9 Hz : 1 H); 6,83 (mt : 2H); de 7,15 à 7,40 (mt : 8H) ].
Exemple 62 Le (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5difluorophényl)-N-[3-(2-oxo-pyrrolidin-1-yl)-propyl]-acétamide peut être préparé de la manière suivante : A une solution de 50 mg de chlorhydrate de l'acide (RS)-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-(3,5-difluorophényl)- acétique dans 2cm3 de dichlorométhane anhydre, à une température voisine de 20 C, sont ajoutés successivement 0,017 cm3 d'aminopropylpyrrolidinone, 29 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide,
0,028 cm3 de triéthylamine et 1,5 mg d'hydrate d'hydroxybenzotriazole. La solution obtenue est agitée à une température voisine de 20 C pendant environ 12 heures. Le milieu réactionnel est déposé sur une cartouche Varian (6 cm3) garnie avec 3 g de silice fine (0,040-0,063 mm), conditionnée puis éluée au dichlorométhane à l'aide d'une pompe Duramat en recueillant des fractions de 2 cm3. Les fractions 4 à 12 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 40 C. On obtient ainsi 35 mg de (RS)-2-{1- [bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5-difluorophényl)-N-[3-(2-oxo- pyrrolidin-1-yl)-propyl]-acétamide sous forme d'une meringue blanche [Spectre de R.M.N 1H (300 MHz, CDCI3, 8 en ppm) : 1,50 à 1,65 (mt : 2H); 2,04 (mt : 2H); 2,43 (t, J = 8 Hz : 2,64 (mt : 1 H); 2,88 (dd, J = 7,5 et 5,5 Hz : 1 H); de 3,00 à 3,30 (mt : 6H); de 3,30 à 3,45 (mt : 3H); 3,64 (d, J = 10,5 Hz : 1 H); 4,27 (s : 1 H); 6,67 (tt, J = 9 et 2,5 Hz : 1H); 6,90 (mt : 2H); 7,15 (t, J = 6 Hz : H); de 7,20 à 7,35 (mt : 8H) ].
Exemple 63 Le (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2-(3,5- difluorophényl)-N-acétyl(4-méthylpipérazine) peut être préparé de la manière suivante : A une solution de 50 mg de chlorhydrate de l'acide (RS)-{1-[bis-(4- chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-(3,5-difluorophényl)-acétique dans 2 cm3 de dichlorométhane anhydre, à une température voisine de 20 C, sont ajoutés successivement 0,013 cm3 de N-méthylpipérazine, 29 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide, 0,028 cm3 de triéthylamine et 1,5 mg d'hydrate d'hydroxybenzotriazole. La solution obtenue est agitée à une température voisine de 20 C pendant environ 12 heures. Le milieu réactionnel est déposé sur une cartouche Varian (6 cm3) garnie avec 3 g de silice fine (0,040-0,063 mm), conditionnée au dichlorométhane à l'aide d'une pompe Duramat, éluée avec un mélange dichlorométhane-éthanol (98- 02 en volumes) en recueillant des fractions de 2 cm3. Les fractions 10 à 24 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 40 C. On
obtient ainsi 39 mg de (RS)-2-{1-[bis-(4-chlorophényl)méthyl]-azétidin-3-yl}-2- (3,5-difluorophényl)-N-acétyl(4-méthylpipérazine)sous forme d'une meringue blanche [Spectre de R.M.N 1H (300 MHz, CDC13, # en ppm) : 1,83(mt : 1 H); de 2,10 à 2,45 (mt : 3H); 2,21 (s : 3H); 2,74 (mt : 2H); de 2,95 à 3,15 (mt : 2H); de 3,30 à 3,55 (mt : 4H); 3,73 (mt : 1 H); 3,93 (d, J = 10 Hz : 1 H); 4,25 (s : 1 H); 6,69 (tt, J = 9 et 2,5 Hz : 1 H); 6,78 (mt : 2H); de 7,15 à 7,35 (mt : 8H) ].
L'invention concerne aussi l'utilisation d'un acide nucléique antisens, ou d'un acide nucléique homopurine ou homopyrimidine selon l'invention pour inhiber ou pour bloquer l'expression du gène codant pour la protéine RRS1-R ou RRS1-S.
De manière préférée, les utilisations ci-dessus sont caractérisées en ce qu'il s'agit d'une expression in vivo chez une plante transformée avec un tel acide nucléique.
Comme déjà mentionné précédemment, le gène RRS1-R code pour un polypeptide de 1378 acides aminés de longueur.
En outre, le polypeptide RRS1-R présente les caractéristiques structurales définies précédemment dans la description, à savoir la présence caractéristique de domaines fonctionnels retrouvés en combinaison pour la première fois dans la séquence en acides aminés d'un polypeptide, ce qui
confère à la protéine RRS1-R la qualité de premier membre connu d'une nouvelle classe de protéines définie de la manière la plus générale comme des protéines comprenant a) une partie N-terminale comprenant au moins une séquence d'acides aminés riche en leucine et au moins un site de liaison aux nucléotides, et b) une partie C-terminale comprenant un domaine de liaison à l'ADN comprenant la séquence d'acides aminés WRKYGQK .
Le polypeptide RRS1-R est référencé comme la séquence SEQ ID N 9.
Comme déjà rappelé, le demandeur a montré que des mutations dans la séquence d'acides aminés du polypeptide RRS1-R pouvaient conduire à une protéine dépourvue de l'activité biologique de la protéine sauvage RRS1-R, l'expression de la protéine mutée chez une plante ne permettant plus d'observer de phénotype de résistance à certains pathogènes, tels que R. solanacearum. Un polypeptide représentatif des polypeptides mutés de RRS1-R altérés dans leur fonction biologique est le polypeptide RRS1-S dont la séquence d'acides aminés est référencée comme la séquence SEQ ID N 10.
Selon un autre aspect l'invention concerne également un polypeptide codé par un acide nucléique du gène RRS1-R ou du gène RRS1-S, et de préférence un polypeptide comprenant au moins 5 acides aminés consécutifs d'une protéine choisie parmi RRS1-R et RRS1-S.
De préférence, un tel polypeptide comprend au moins 10,15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90,100, 150,200, 250,300, 350,400, 450,500, 600,700, 1200 acides aminés consécutifs du polypeptide RRS1-R de séquence en acides aminés SEQ ID N 9 ou du polypeptide RRS1-S de séquence en acides aminés SEQ ID N 10.
L'invention est également relative à un polypeptide comprenant les séquences en acides aminés ayant au moins 40% d'identité en acides aminés avec la séquence du polypeptide RRS1-R SEQ ID N 9, avec la
séquence du polypeptide RRS1-S SEQ ID N 10, ou à un fragment peptidique de ces derniers Avantageusement, fait partie de l'invention un polypeptide ayant au moins 60%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 99% d'identité en acides aminés avec la séquence du polypeptide RRS1-R de SEQ ID N 9, avec la séquence du polypeptide RRS1-S SEQ ID N 10, ou un fragment peptidique de ces derniers.
De manière générale, les polypeptides selon l'invention se présentent sous une forme isolée ou purifiée.
L'invention est également relative à un procédé pour la production du polypeptide RRS1-R de séquence SEQ ID N 9, du polypeptide RRS1-S de séquence SEQ ID N 10 ou d'un fragment peptidique de ces derniers, la méthode comprenant les étapes : a) insérer un acide nucléique codant pour le polypeptide RRS1-R, RRS1-S ou un fragment peptidique de ces derniers, dans un vecteur approprié, b) cultiver, dans un milieu de culture approprié, une cellule hôte préalablement transformée ou transfectée avec le vecteur recombinant de l'étape a), c) récupérer le milieu de culture conditionné ou lysé la cellule hôte transformée, par exemple par sonication ou par choc cosmétique; d) séparer et purifier à partir du milieu de culture ou encore à partir des lysats cellulaires obtenus à l'étape c), ledit polypeptide; e) le cas échéant, caractériser le polypeptide recombinant produit.
Les peptides selon l'invention peuvent être caractérisés par fixation sur une colonne de chromatographie d'immunoaffinité sur laquelle les anticorps dirigés contre ces polypeptides où un fragment ou un variant de ces derniers ont été préalablement immobilisés.
Selon un autre aspect, un polypeptide recombinant selon l'invention peut être purifié par passage sur une colonne de chromatographie selon les méthodes connues de l'homme de l'art et décrites par exemple par AUSUBEL F et al. (1989) précité.
Un polypeptide selon l'invention peut être également préparé par les techniques classiques de synthèse chimique indifféremment en solution homogène ou en phase solide.
L'acide de départ (II) est nouveau et constitue un autre aspect de la présente invention, ses dérivés fonctionnels sont également nouveaux, notamment son chlorure d'acide et son ester alkylique en C1-C4.
L'acide de formule (II) peut être obtenu en suivant le schéma réactionnel ci-après :
L'acide de formule (II) peut également être préparé par action d'un dérivé de la benzylhydrazine de formule (IX) sur un composé de formule (V), selon le SCHEMA 2 ci-après.
SCHEMA 2 AcOH KOH/MeOH/H2O ou APTS # (Vin) ou LiOHMeOH/H # 0 ou APTS (VM) ou LiOH/MeOH/H20 1> (Ili) toluène En utilisant le procédé selon le SCHEMA 1, par action du dérivé d'halogènure de benzyle de formule (VII) sur le composé de formule (VI), il peut également se former un isomère de position du composé de formule (VIII), à savoir un composé de formule (XI) De même, en utilisant le procédé selon le SCHEMA 2, par action du dérivé de benzylhydrazine de formule (IX) dans laquelle w2 à w6 sont tels que définis ci-dessus pour (I), il peut également se former un isomère de position du composé de formule (VIII), à savoir un composé de formule (XI).
Pour obtenir l'acide de formule (II), on peut soit séparer les 2 isomères de formule (VIII) et (XI), soit effectuer l'hydrolyse du mélange des isomères (VIII) et (XI) pour préparer un mélange de l'acide de formule (II) et de son isomère de formule :
(XII) La séparation des isomères est effectuée par des méthodes classiques, par exemple par chromatographie ou par cristallisation.