INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
On utilise alors, d'une manière générale, des moyens de génération d'une pression sinusoïdale dont la fréquence se situe dans la bande passante estimée du capteur. On fait communiquer ce dernier avec une enceinte fermée et l'on comprime l'air contenu dans cette enceinte au moyen d'un piston qui est animé d'un mouvement alternatif par l'intermédiaire de moyens électromécaniques.
L'amplitude de la pression ainsi engendrée n'est pas aussi précise que l'amplitude de la pression statique engendrée en vue du calibrage d'un capteur de pression absolue car la sensibilité aux variations de pression atmosphérique et aux variations de température n'est plus négligeable pour des fréquences inférieures à 1 Hz.
De plus, il est très difficile de connaître précisément le rapport du volume déplacé par le piston au volume de l'ensemble formé par le dispositif de calibrage et le capteur au repos.
Il est donc difficile de connaître précisément la pression appliquée.
En outre, les masses des éléments mécaniques en mouvement sont susceptibles de limiter, dans le domaine des hautes fréquences, la bande passante de ce genre de dispositif de calibrage.
Les techniques que l'on vient de rappeler ne permettent pas de caractériser complètement, avec la précision requise, un capteur de pression infrasonore.
EXPOSÉ DE L'INVENTION Un but de la présente l'invention est de remédier aux inconvénients précédents et de proposer un dispositif de calibrage qui soit valable tant pour un capteur de pression absolue que pour un capteur de pression différentielle.
L'invention vise en particulier à vérifier la réponse dynamique d'un capteur de pression (absolue ou différentielle), ce capteur étant destiné à la mesure des ondes infrasonores en mesurant la fonction de transfert de ce capteur dans une gamme de fréquence allant de 0, 001 Hz à 100 Hz.
De façon précise, la présente invention a pour objet un dispositif de calibrage d'un capteur de pression, ce dispositif étant caractérisé en ce qu'il comprend des moyens de mesure prévus pour appliquer à ce capteur une pression de référence qui varie en fonction du temps et dont toutes les composantes spectrales couvrant une gamme de fréquence prédéfinie sont excitées simultanément avec une même amplitude et un déphasage nul, ou un retard constant, les unes par rapport aux autres.
Le dispositif objet de l'invention peut être prévu pour le calibrage d'un capteur de pression absolue ou pour le calibrage d'un capteur de pression différentielle.
Ce capteur est par exemple destiné à la mesure d'ondes infrasonores. Dans ce cas, la gamme de
fréquence prédéfinie va, de préférence, de 0, 001 Hz à 100 Hz.
Selon un mode de réalisation préféré du dispositif objet de l'invention, les moyens de mesure comprennent : une première enceinte destinée à être reliée au capteur de pression, une membrane ayant des première et deuxième faces, la première enceinte étant obturée par l'intermédiaire de la première face, un moteur électrodynamique destiné à déplacer la membrane pour engendrer la pression de référence dans la première enceinte, et des moyens de commande destinés à appliquer au moteur électrodynamique un signal électrique du genre pseudo-aléatoire, dont l'amplitude est connue et qui est déclenché de façon synchrone.
1) La modélisation bio-informatique permet d'observer que la mutation Q102K sur la protéine mutée mature entraîne un déplacement de l'hélice dite A de l'IFNa-21 naturel due à des perturbations de liaisons hydrogène, comme il est observé sur les Figures 1 et 2.
En effet, les liaisons hydrogènes de l'oxygène de la chaîne latérale de Q102 avec le résidu acide de E106 et avec l'hélice dite C de l'IFNa- 21 naturel disparaissent dans la protéine mutée K102.
Ainsi, la protéine mutée possède une conformation tridimensionnelle très différente de la protéine codée par le gène sauvage de IFNa-21 de référence.
La modélisation bio-informatique permet ainsi de prévoir que la présence de la lysine en position 102 entraîne une modification significative de la structure et de la fonction de l'IFNa-21.
2) La modélisation bio-informatique permet d'observer que la mutation 0114H sur la protéine mutée mature entraîne un déplacement de l'hélice dite C au niveau du point de mutation, comme il est observé sur les Figures 3 et 4.
Plusieurs liaisons hydrogènes et ponts salins apparaissent, entre autres, entre les chaînes latérales des acides aminés H114 et D99, occasionnant une rigidification de l'hélice.
Ainsi, la protéine mutée possède une conformation tridimensionnelle différente de la protéine codée par le gène sauvage de IFNa-21 de référence.
La modélisation bio-informatique permet ainsi de prévoir que la présence de l'histidine en position 114 entraîne une modification significative de la structure et de la fonction de l'IFNa-21.
3) La modélisation bio-informatique permet d'observer que la mutation V127D sur la protéine mutée mature entraîne des modifications structurales de l'hélice A au niveau du point de mutation, comme il est observé sur les Figures 5 et 6.
Il a été observé que ces modifications spatiales affectent des résidus impliqués dans la liaison de IFNa-21 à son récepteur.
La modélisation bio-informatique permet ainsi de prévoir que la présence de l'acide aspartique en position 127 entraîne une modification significative de la conformation tridimensionnelle et de la fonction de NFNa-21.
4) La modélisation bio-informatique permet d'observer que la mutation C162stop entraîne un arrêt prématuré de la traduction de la protéine avec pour conséquence la disparition d'un fragment polypeptidique qui participe à la dernière hélice, dite hélice E, de l'IFNa-21 naturel, comme il est observé sur la Figure 7.
L'hélice E est primordiale pour l'accrochage de FNa-21 à son récepteur.
L'absence de cette hélice E dans la protéine mutée-entraîne un mauvais repliement de la protéine mutée et induit ainsi une modification de la conformation tridimensionnelle dans laquelle le coeur hydrophobe de cette protéine se trouve en contact avec le milieu extérieur hydrophile.
La protéine doit ainsi modifier sa conformation tridimensionnelle de façon à couvrir son coeur hydrophobe par des résidus hydrophiles, pour éviter le contact avec milieu extérieur hydrophile.
L'invention vise également un procédé de teinture directe des fibres kératiniques humaines et en particulier des cheveux, consistant à appliquer sur les fibres une composition contenant, dans un milieu approprié pour la teinture, au moins un colorant direct et au moins un composé dicationique de formules (1), () i), ( !))), ( ! V).
L'invention vise aussi un procédé de teinture directe éclaircissante des fibres kératiniques humaines et en particulier des cheveux, consistant à appliquer sur les fibres un mélange extemporané d'une composition contenant, dans un milieu approprié pour la teinture, au moins un colorant direct et au moins un composé dicationique de formules (1), (II), (III), (IV) et d'une composition contenant au moins un agent oxydant.
L'invention a également pour objet un dispositif pour la teinture directe éclaircissante des fibres kératiniques humaines et en particulier des cheveux, ou"kit"de teinture, qui comprend un premier compartiment renfermant, dans un milieu approprié pour la teinture, au moins un colorant direct et au moins un composé dicationique de formules (1), (II), (ici), (IV) et un deuxième compartiment renfermant un agent oxydant.
Colorant direct dicationique Les colorants directs dicationiques selon la présente invention sont choisis parmi ceux de formules (1), (II), (III) ou (IV) suivantes : formules (1) ou (II) dans lesquelles : - A et Al, indépendamment l'un de l'autre désignent un radical de formule (a) suivante -Z désigne un radical aliphatique ou aromatique,
- Z1 désigne un radical alkyle, - R1 et R2, indépendamment l'un de l'autre, désignent un atome d'hydrogène, ou un radical (C1-C4) alkyl, ou (C1-C4) alkyl substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, un radical hydroxyl, carboxyl, cyano, un radical (C1-C4) alcoxy, un radical (C1-C4) alcoxy substitué par un ou plusieurs radicaux hydroxyl, ou (C1-C4) alcoxy, un radical amino, alkylamino, dialkylamino, aminocarbonyl, phényl, phénoxy ou phénylaminocarbonyl, dans lequel le radical phényl est non substitué ou substitué par un radical (C1-C4) alkyl, (C1- C4) alcoxy ou phénoxy, ou encore R1 et R2 forment ensemble, avec les deux atomes d'azote qui les portent et le radical Z, un cycle pipérazinique, -X est un radical de pontage choisi parmi :-CO- ;-CO-CH-CH-CO- ;-CO-CO- ; 1,4dicarbonylphényl ; -CH2-CH2- ; ou une triazine de formules (b) ou (c) suivantes : dans lesquelles : Y et Y1, indépendamment l'un de l'autre désignent un atome d'halogène, ou un radical hydroxyl, ou amino, ou monoalkylamino, ou dialkylamino, ou 1-pipéridino, ou morpholino, ou 1-pipérazino, le radical pipérazino étant non substitué, ou substitué sur l'atome d'azote non attaché au cycle triazine par un radical (C1-C4) alkyl, lesdits radicaux alkyls étant non substitués ou substitués par hydroxyl, amino, mono- (C1-C4) alkylamino ou di- (C1- C4) alkylamino, - Z désigne un radical (C2-C8) alkylène ou forme, avec les deux atomes d'azote adjacents et les radicaux R1 et R2, un cycle pipérazinique,
- dans le radical de formule (a), - Rg et R4, indépendamment l'un de l'autre, désignent un atome d'hydrogène, ou un radical (C1-C4)alkyl, ou (C1-C4)alkyl substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, un radical hydroxyl, carboxyl, cyano, un radical (C1-C4) alcoxy, un radical (C1-C4) alcoxy substitué par un radical hydroxyl ou (C1-C4) alcoxy, un radical amino, alkylamino, dialkylamino, aminocarbonyl, phényl, phénoxy ou phénylaminocarbonyl, dans lequel le radical phényl est non substitué ou substitué par un radical (C1-C4)alkyl, (C1-C4)alcoxy ou phénoxy, - R5 et R6, indépendamment l'un de l'autre, désignent un atome d'hydrogène, un radical (C1-C4) alkyl ou (C1-C4) alcoxy éventuellement substitués par un radical hydroxyl, carboxyl, halogène, cyano, (C1-C4) alcoxy éventuellement substitué par un radical hydroxyl ou (C1-C4)alcoxy, un radical amino, alkylamino, dialkylamino, aminocarbonyl, phényl, phénoxy ou phénylaminocarbonyl, dans lequel le radical phényl est non substitué ou substitué par un radical (C1-C4)alkyl, (C1-C4)alcoxy ou phénoxy, - désigne un anion.
De préférence, selon l'invention, dans la formule (1), - R1 et R2, indépendamment l'un de l'autre, désignent hydrogène, (C1-C4) alkyl substitué par hydroxyl ou (C1-C4) alcoxy et plus particulièrement encore désignent hydrogène ou méthyle, -Z désigne un radical alkyle en C2-CS linéaire ou ramifié ou cyclique, éventuellement substitué par un hydroxy, alcoxy, halogène, la chaîne dudit radical étant éventuellement interrompue par un groupe -0- ou -NR1- ; un radical 1, 4-phényl, un radical 1, 4-naphtyl éventuellement substitué par un alkyle, alcoxy, halogène ; Z pouvant formé avec R-, R et les 2 atomes d'azote, un cycle pipérazine, -Z désigne préférentiellement un radical phényl non substitué, un radical phényl ou naphtyl substitué par 1 ou 2 radicaux méthyl ou méthoxy, un radical pipérazine par liaison avec R-), R et les 2 atomes d'azote, un radical (C2-C4) alkylène non subsitué ou substitué par un ou 2 hydroxyl, -X désigne un groupement de formule (b).
De préférence, selon l'invention, dans la formule (II), - Z1 désigne un radical alkyle en C2-CS linéaire ou ramifié ou cyclique, éventuellement substitué par un hydroxy, alcoxy, halogène, la chaîne dudit radical étant éventuellement
interrompue par un groupe -0- ou -NR1- ; un cycle pipérazine formé avec R1, R2 et les deux atomes d'azote, - Z1 désigne préférentiellement un radical (C2-C6) alkylène non substitué ou substitué par un ou plusieurs hydroxyl, un cycle pipérazine formé avec R, R et les deux atomes d'azote ; et plus particulièrement encore un radical (C2-C4)alkylène non substitué, - R3 et R4 désignent méthyl ou éthyl, et R5 et R6 désignent hydrogène, méthyl, ou méthoxy. formule (III) dans laquelle, -le nombre de charges cationiques est de deux, - X'et Y', indépendamment l'un de l'autre, désignent hydrogène, halogène, (C1-C4)alkyl, (C1-C4) alcoxy, (C1-C4) alkylcarbonylamino, arylcarbonylamino, uréido, ou aryluréido, - R'1 désigne hydrogène, un radical alkyl ou aryl substitués, un radical alkyl ou aryl non substitués, ou la même désignation que R'2 - R'2 est un radical de formule (d) suivante : dans laquelle : -B désigne un radical alkylène linéaire ou ramifié, - R'6 désigne hydrogène ou alkyl substitué ou non substitué, -R'7 et R's, indépendamment l'un de l'autre désignent alkyl substitué ou non substitué,
- R'g et R'7, ensemble avec l'azote, forment un cycle à 5, 6, ou 7 chaînons, substitué ou non substitué, pouvant contenir d'autres hétéroatomes, ou bien R'6 et R'7 et R'g forment ensemble un cycle pyridinium, - R'3 désigne hydrogène, ha) ogène, (Ci-Catky), (C-Caicoxy, - W est un radical de formule (e) suivante :
ou bien-CO-NR'g-Bi-NR'g-CO-, et dans lesquels R'g désigne, hydrogène, (C2-C4) alkylène non substitué ou substitué, le radical alkylène étant linéaire ou ramifié et pouvant être interrompu par un ou plusieurs groupements choisis parmi :-NR'9-,-O-,-S-.
De préférence, selon l'invention, dans la formule (III), B désigne éthylène, n-propylène, isopropylène ou n-butylène, K désigne un composé de couplage choisi parmi ceux de formule (f), (g) ou (h) suivantes
COCULTURE DE NEURONES AVEC DES CELLULES CIBLES EN CHAMBRE BICOMPARTIMENTEE La présente invention se rapporte aux domaines techniques de la biologie, de la biotechnologie, de la biochimie, de la toxicologie, de la pharmacologie et de la cosmétologie. Ses applications concernent notamment les domaines de la santé humaine et animale. Plus particulièrement, l'invention décrit de nouvelles méthodes qui permettent de déterminer la toxicité ou au contraire l'effet thérapeutique ou cosmétique de composés tests, ainsi que des outils et kits pour la mise en oeuvre de ces méthodes. L'invention décrit ainsi une chambre de culture comportant deux compartiments séparés par une cloison perméable imprégnée d'une matrice biologique et permettant la mise en culture de part et d'autre de la cloison de cellules nerveuses et de cellules cibles, ainsi que des procédés de préparation d'une telle chambre. L'invention décrit également des méthodes de reconstitution de tissus biologiques à partir des cellules qui les composent, en particulier de tissus biologiques reconstitués comprenant au moins deux types cellulaires, l'un d'entre eux étant des cellules nerveuses. L'invention est particulièrement utile dans l'industrie pharmaceutique ou cosmétique, pour l'étude des tissus et l'analyse du profil toxique ou bénéfique de molécules à court, moyen ou long terme, qui pourront entrer en développement pharmaceutique et/ou dans des compositions pharmaceutiques ou cosmétiques.
Les cultures cellulaires, pour qu'elles soient de bons outils susceptibles de remplacer ou diminuer l'expérimentation animale, se doivent de reproduire le plus fidèlement possible l'organisation observée in vivo, en particulier l'organisation tridimensionnelle. Jusqu'à ce jour, les cocultures de cellules nerveuses avec des cellules cibles comme les cellules musculaires striées, les cellules épithéliales, les kératinocytes ou les entérocytes se faisaient soit directement en contact sur le même support de culture, soit par l'intermédiaire d'inserts de culture séparant les deux populations cellulaires et empêchant tout
contact physique entre les cellules. Or, in vivo, les corps cellulaires des neurones se trouvent toujours séparés des cellules cibles telles que les kératinocytes, autres cellules épithéliales, cellules musculaires etc., et/ou cellules autres que les cellules du système nerveux, par une matrice complexe à travers laquelle elles projettent leurs dendrites.
Dans les cocultures classiques, par exemple les cocultures d'explants de moelle épinière et de muscles striés (Askanas et al., 1975), les corps cellulaires des neurones qui se développent, sont directement en contact avec les autres types cellulaires, et baignent dans le même milieu ce qui peut perturber la physiologie des cellules.
Dans une coculture en insert où des neurones sensitifs sont placés dans le fond d'un puit de culture tandis que des kératinocytes sont cultivés dans des inserts, les cellules communiquent entre elles par l'intermédiaire de molécules chimiques qui circulent dans le milieu sans qu'il y ait de contact entre les prolongements neuronaux et les cellules cibles.
La présente invention propose pour la première fois des méthodes et outils pour la préparation de tissus reconstitués complexes, c'est-à-dire comprenant au moins deux types cellulaires, proche des conditions physiologiques, notamment des conditions physiologiques d'interaction entre lesdits types cellulaires.
L'invention décrit notamment des tissus biologiques reconstitués comprenant une population de cellules nerveuses et une population de cellules cibles, lesdites populations étant séparées par un filtre ou une membrane empêchant le contact des corps cellulaires mais permettant le passage des prolongements nerveux.
Cette invention a pour but de développer un modèle permettant de mettre en culture des cellules nerveuses et des cellules cibles séparées par une barrière physique imprégnée d'une matrice biologique.
Tissu reconstitué
La présente invention propose pour la première fois un tissu biologique reconstitué comprenant des cellules nerveuses et des cellules cibles séparées par une barrière physique comprenant elle-même une membrane traitée par une matrice biologique.
La membrane, filtre ou toile à bluter séparant les deux populations cellulaires peut être en nylon, en soie, en fibres, en métal, en polymère, en polycarbonate ou en tout autre matériel poreux compatible avec la culture de cellules. Les mailles du filtre peuvent avoir différentes tailles selon le tissu que l'on cherche à reconstituer.
Cette membrane ou filtre biocompatible, éventuellement d'origine synthétique ou naturelle, etc, correspond à tout support solide, rigide ou semi-rigide, plan ou non, éventuellement biodégradable, assurant une séparation physique des populations cellulaires.
Comme indiqué, la membrane est avantageusement traitée par une matrice biologique. La matrice biologique peut être définie comme une composition comprenant un ou plusieurs facteurs, généralement d'origine biologique, permettant ou favorisant une adhésion, croissance, organisation et/ou différenciation des cellules. Elle peut se présenter sous forme de suspension, pâte, gel, etc.
Le traitement de la membrane comprend essentiellement le dépôt de la matrice biologique à la surface de la membrane, de manière à imprégner celle-ci sur les deux faces, et à occuper l'espace des pores de la membrane. La matrice biologique peut-être déposée en une ou plusieurs fois, en une ou plusieurs couches. Elle forme généralement un film à la surface de la membrane dont l'épaisseur peut-être adaptée par l'homme du métier, mais est généralement inférieure à 1 mm de chaque côté. Typiquement, dans les chambres de culture de l'invention, on dépose par exemple de 10 à 100 nul de matrice biologique.
Un composant préféré de la matrice biologique est le collagène, notamment le collagène polymérisé.
Tout type de collagène pouvant assurer une bonne adhésion et un bon développement des cellules nerveuses et des cellules cibles, tout en assurant une barrière physique entre les 2 types cellulaires, est susceptible d'être utilisé
La particularité de l'armature de cage 40 des figures 1A à 2A est que le brin central 46 et le brin périphérique 42 de chaque tige recourbée 48 sont situées dans le même demi-espace délimité par le plan défini par les brins radiaux 44. Chaque tige recourbée 48 a donc une forme de crochet.
Par la suite, des tiges circulaires 41 et 43 sont fixées, notamment par soudure, sur les brins périphériques 42 des tiges recourbées 48 pour former l'armature de la cage circulaire 40. De même, des tiges circulaires de petit diamètre 45 et 47 peuvent être solidarisées avec les brins centraux 46 des tiges recourbées 48 pour achever la formation de l'armature et augmenter avantageusement la rigidité de la cage circulaire 40.
De préférence, suivant la forme de réalisation illustrée sur les figures 1A et 2A, la cage comporte des éléments circulaires 41 et 43 de diamètres différents pour constituer une armature multipositions pour les échantillons. Ainsi, des échantillons plans peuvent être positionnées parfaitement parallèle à l'axe H-H en les fixant aux éléments 41 de même diamètre ou bien en position
oblique par rapport à l'axe en les fixant d'un côté à un élément 41 de grand diamètre et d'un autre côté à un élément 43 de petit diamètre.
De façon avantageuse, cette armature multi-positions permet de disposer des échantillons de longueurs différentes sous des angles différents d'incidence de rayonnement et à des distances différentes de la source lumineuse, ce qui permet d'exposer des échantillons de longueurs différentes à la même puissance surfacique lumineuse.
Enfin, les brins centraux 46 de l'armature de la cage sont fixées par collage, par soudure, attaches ou tout autre moyen, sur une pièce en forme de rondelle 49 destinée à être solidaire du moyeu 50.
Une telle armature de cage en parapluie permet avantageusement de disposer des instruments 4 fixement au sein de la cage rotative.
Les instruments, de type capteurs ou actionneurs, sont fixés à la platine 3 de support fixe du dispositif et font saillie de la platine (parallèlement ou obliquement par rapport à l'axe H-H) pour s'engager au sein de la cage rotative 40 sans affecter la rotation.
Ainsi, il est prévu avantageusement de fixer une sonde de température 4 sur la platine 3, au-dessus de la lampe axiale 10, l'extrémité active de la sonde s'avançant entre la lampe 10 et les échantillons E sans empêcher alors la rotation de la cage en forme de parapluie.
Autre exemple (non-illustré), il est prévu de disposer une rampe d'aspersion d'eau en dessous et parallèlement à la lampe axiale 10 en la fixant à la platine 3 pour la relier à une arrivée d'eau.
De façon avantageuse, la rampe est ainsi immobilisée au sein de la cage rotative parallèlement au plan des échantillons E, qui sont alors aspergés régulièrement sur toute leur surface à chaque cycle de rotation.
En outre, selon une forme de réalisation améliorée illustrée sur les figures 4A, 4B et 4C, il est prévu que les brins centraux 46 des tiges recourbées 48 ne sont pas dirigés parallèlement à l'axe H-H, mais s'enroulent en hélices autour de l'axe H-H de la cage 40.
L'avantage d'une telle amélioration est d'éviter qu'une partie d'un échantillon soit plongée dans l'ombre projetée par un brin central 46 d'une tige recourbée 48. Le rayonnement électromagnétique de la lampe centrale atteint ainsi uniformément chaque échantillon, quelle que soit sa position à la périphérie de la cage.
Par ailleurs, il est prévu selon une option avantageuse que le dispositif selon l'invention comporte un réservoir d'eau baignant la portion inférieure de la cage rotative.
Un bassin 6 en forme de demi-lune peut ainsi être fixé au bas de la platine 3 du dispositif, la cage 40 étant plongée partiellement dans l'eau 6'remplissant le bassin 6.
Une telle disposition permet de tester la tenue des échantillons au vieillissement sous l'action combinée de l'humidité, de l'immersion dans l'eau et de rayonnements photoniques comme les ultraviolets, ce qui rassemble avantageusement la plupart des agents naturels de vieillissement.
En conséquence, la protéine mutée possède une conformation tridimensionnelle très différente de la protéine codée par le gène sauvage de IFNa-21 de référence.
La modélisation bio-informatique permet ainsi de prévoir que l'arrêt prématuré de la protéine en position 162 entraîne une modification significative de la structure et de la fonction de l'IFNa-21.
5) La modélisation bio-informatique permet d'observer que la mutation K179E sur la protéine mutée mature entraîne un dépliement de l'hélice E et une modification la forme de la boucle C-terminale, comme il est observé sur les Figures 8 et 9.
Cette mutation s'accompagne d'une augmentation du réseau de liaisons hydrogènes avec la création d'un pont salin entre E179 (E156 dans la protéine mature) et R184 (R161 dans la protéine mature).