INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
* les fragments dont l'acide aminé N-terminal correspond à celui situé à l'une des positions 405 à 433 de la figure 6, et l'acide aminé C-terminal correspond à celui situé à l'une des positions 488 à 505 de la figure 6, * le fragment de 101 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 405 et 505 de la figure 6, à savoir le peptide SEQ ID NO 58 suivant : Ser Lys Ala Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Glu Gly Ala Gin Leu Lys Lys Val Glu Gin Asn Ser Arg Pro Val Ser Cys Ser Gly Arg Asp Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Gin Gly Ile Gin Leu Lys Ser Val Thr Asp Ala Pro Glu Ser Thr Pro Pro Ala Pro Ala Pro Thr Ser Gly Ile Val Gly Ala Leu Met Glu Val Met Gin Lys Arg Ser Lys Ala Ile His Ser Ser Asp Glu Asp Glu Asp Glu Asp Asp Asp Glu Asp Phe Glu Asp Asp Asp Glu Trp Glu Asp * le fragment de 84 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 405 et 488 de la figure 6, à savoir le peptide SEQ ID NO 60 suivant : Ser Lys Ala Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Glu Gly Ala Gin Leu Lys Lys Val Glu Gin Asn Ser Arg Pro Val Ser Cys Ser Gly Arg Asp Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Gin Gly Ile Gin Leu Lys Ser Val Thr Asp Ala Pro Glu Ser Thr Pro Pro Ala Pro Ala Pro Thr Ser Gly Ile Val Gly Ala Leu Met Glu Val Met Gin Lys Arg Ser Lys Ala Ile His Ser Ser Asp Glu Asp * le fragment de 73 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 433 et 488 de la figure 6, à savoir le peptide SEQ ID NO 62 suivant : Gly Arg Asp Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Gin Gly Ile Gin Leu Lys Ser Val Thr Asp Ala Pro Glu Ser Thr Pro Pro Ala Pro Ala Pro Thr Ser Gly Ile Val Gly Ala Leu Met Glu Val Met Gin Lys Arg Ser Lys Ala Ile His Ser Ser Asp Glu Asp Glu Asp Glu Asp Asp Asp Glu Asp Phe Glu Asp Asp Asp Glu Trp Glu Asp * le fragment de 56 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 433 et 488 de la figure 6, à savoir le peptide SEQ ID NO 64 suivant : Gly Arg Asp Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Gin Gly Ile Gin Leu Lys Ser Val Thr Asp Ala Pro Glu Ser Thr Pro Pro Ala Pro Ala Pro Thr Ser Gly Ile Val Gly Ala Leu Met Glu Val Met Gin Lys Arg Ser Lys Ala Ile His Ser Ser Asp Glu Asp # les fragments des protéines de la famille WASP de micro-organismes, tels que : - les fragment de la protéine Lasl7 de Saccharomyces cerevisiae, eux-mêmes choisis parmi : * ceux comprenant : . le domaine d'homologie avec la verproline délimité par les acides aminés situés aux positions 447 et 466 de la séquence peptidique SEQ ID NO 66 de la protéine Las 17 représentée sur la figure 7, ou une séquence peptidique dérivée du domaine susmentionné telle que définie ci-dessus,
. et le domaine d'homologie avec la cofiline délimité par les acides aminés situés aux positions 607 et 624 de la séquence peptidique SEQ ID NO 66 de la protéine Las 17 représentée sur la figure 7, ou une séquence peptidique dérivée du domaine susmentionné telle que définie ci-dessus, * les fragments dont l'acide aminé N-terminal correspond à celui situé à l'une des positions 422 à 447 de la figure 7, et l'acide aminé C-terminal correspond à celui situé à l'une des positions 624 à 633 de la figure 7, * le fragment de 212 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 422 et 633 de la figure 7, à savoir le peptide SEQ ID NO 68 suivant : Ser Asn Met Ser Ser Pro Pro Pro Pro Pro Val Thr Thr Phe Asn Thr Leu Thr Pro Gin Met Thr Ala Ala Thr Gly Gin Pro Ala Val Pro Leu Pro Gin Asn Thr Gin Ala Pro Ser Gin Ala Thr Asn Val Pro Val Ala Pro Pro Pro Pro Pro Ala Ser Leu Gly Gin Ser Gin Ile Pro Gin Ser Ala Pro Ser Ala Pro Ile Pro Pro Thr Leu Pro Ser Thr Thr Ser Ala Ala Pro Pro Pro Pro Pro Ala Phe Leu Thr Gin Gin Pro Gin Ser Gly Gly Ala Pro Ala Pro Pro Pro Pro Pro Gin Met Pro Ala Thr Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Phe Ala Glu Thr Thr Gly Asp Ala Gly Arg Asp Ala Leu Leu Ala Ser Ile Arg Gly Ala Gly Gly Ile Gly Ala Leu Arg Lys Val Asp Lys Ser Gin Leu Asp Lys Pro Ser Val Leu Leu Gin Glu Ala Arg Gly Glu Ser Ala Ser Pro Pro Ala Ala Ala Gly Asn Gly Gly Thr Pro Gly Gly Pro Pro Ala Ser Leu Ala Asp Ala Leu Ala Ala Ala Leu Asn Lys Arg Lys Thr Lys Val Gly Ala His Asp Asp Met Asp Asn Gly Asp Asp Trp * le fragment de 203 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 422 et 624 de la figure 7, à savoir le peptide SEQ ID NO 70 suivant : Ser Asn Met Ser Ser Pro Pro Pro Pro Pro Val Thr Thr Phe Asn Thr Leu Thr Pro Gin Met Thr Ala Ala Thr Gly Gin Pro Ala Val Pro Leu Pro Gin Asn Thr Gin Ala Pro Ser Gin Ala Thr Asn Val Pro Val Ala Pro Pro Pro Pro Pro Ala Ser Leu Gly Gin Ser Gin Ile Pro Gin Ser Ala Pro Ser Ala Pro Ile Pro Pro Thr Leu Pro Ser Thr Thr Ser Ala Ala Pro Pro Pro Pro Pro Ala Phe Leu Thr Gin Gin Pro Gin Ser Gly Gly Ala Pro Ala Pro Pro Pro Pro Pro Gin Met Pro Ala Thr Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Phe Ala Glu Thr Thr Gly Asp Ala Gly Arg Asp Ala Leu Leu Ala Ser Ile Arg Gly Ala Gly Gly Ile Gly Ala Leu Arg Lys Val Asp Lys Ser Gin Leu Asp Lys Pro Ser Val Leu Leu Gin Glu Ala Arg Gly Glu Ser Ala Ser Pro Pro Ala Ala Ala Gly Asn Gly Gly Thr Pro Gly Gly Pro Pro Ala Ser Leu Ala Asp Ala Leu Ala Ala Ala Leu Asn Lys Arg Lys Thr Lys Val Gly Ala His * le fragment de 187 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 447 et 633 de la figure 7, à savoir le peptide SEQ ID NO 72 suivant : Gly Gin Pro Ala Val Pro Leu Pro Gin Asn Thr Gin Ala Pro Ser Gin Ala Thr Asn Val Pro Val Ala Pro Pro Pro Pro Pro Ala Ser Leu Gly Gin Ser Gin Ile Pro Gin Ser Ala Pro Ser Ala Pro Ile Pro Pro Thr Leu Pro Ser Thr Thr Ser Ala Ala Pro Pro Pro Pro Pro Ala Phe Leu Thr Gin Gin Pro Gin Ser Gly Gly Ala Pro Ala Pro Pro Pro Pro Pro Gin Met Pro Ala Thr Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Phe Ala Glu Thr
donnant une efficacité de 2,6 10 cellules transformées par g d'ADN. De plus comme la cotransformation de la levure par deux plasmides différents réduit cette efficacité, nous avons préféré utiliser une levure préalablement transformée par le plasmide pLex9-Parkine (135-290). Cette souche L40 pLex9-Parkine (135-290) de phénotype His-, Lys-, Leu-, Adé- a été transformée par 50u.g d'ADN plasmidique de la banque de fusion. Cette quantité d'ADN nous a permis d'obtenir après estimation 1,3 107 cellules transformées, ce qui correspond à un nombre légèrement supérieur au nombre de plasmides indépendants qui constituent la banque. D'après ce résultat nous pouvons penser que la quasi totalité des plasmides de la banque a servi à transformer les levures. La sélection des cellules transformées, capables de reconstituer un transactivateur fonctionnel, a été faite sur un milieu YNB supplémenté avec 2,5 mM 3-amino-1,2,4-triazole et 620 mg/1 de CSM (Bio101) ne contenant pas d'histidine de leucine et de tryptophane.
A l'issue de cette sélection, de nombreux clones avec un phénotype His+ ont été obtenus. Sur ces transformants un test d'activité P-galactosidase a été effectué afin de valider par l'expression de l'autre gène rapporteur, LacZ, ce nombre de clones obtenus. 115 clones présentaient le double phénotype His+, p-Gal+ pouvant correspondre à une interaction protéine-protéine.
EXEMPLE 3 : DES PLASMIDES DE LA BANQUE DANS LES CLONES SELECTIONNES.
Afin d'identifier les protéines pouvant interagir avec la région centrale de la Parkine, les plasmides de la banque de fusion contenus dans les levures sélectionnées lors du criblage double hybride ont été extraits. Pour pouvoir en obtenir en grande quantité, cet isolement nécessite au préalable une transformation d'E.coli par un extrait d'ADN des souches de levures positives. Comme le plasmide de la banque contenu dans cet extrait est un plasmide navette levure/E.coli il peut facilement se répliquer chez la bactérie. Le plasmide de la banque a été sélectionné par
complémentation de la bactérie HB101auxotrophe pour la leucine sur milieu dépourvu de leucine.
Les ADN plasmidiques des colonies bactériennes obtenues après transformation par des extraits d'ADN de levures ont été analysés par digestion avec des enzymes de restriction et séparation des fragments d'ADN sur gel d'agarose.
Parmi les 115 clones analysés, un clone contenant un plasmide de la banque présentant un profil différent des autres a été obtenu. Ce plasmide, appelé pGADLyl 1 lb, a été plus précisément étudié.
EXEMPLE 4 : DE LA SEQUENCE DE L'INSERT CONTENU DANS LE PLASMIDE IDENTIFIE.
Le séquençage de l'insert contenu dans le plasmide identifié a été réalisé dans un premier temps à partir de l'oligonucléotide SEQ ID N 7 complémentaire de la séquence de GAL4TA à proximité du site EcoRI d'insertion de la banque de cDNA de lymphocytes. Puis dans un deuxième temps à partir des oligonucléotides SEQ ID N 8 à SEQ ID N 11, correspondant à la séquence de l'insert obtenue au cours de la progression du séquençage. La séquence obtenue est présentée sur la séquence SEQ ID NO1. La protéine ainsi identifiée a été désignée PAP1(Parkin-Associated Protein 1).
La comparaison de la séquence de cet insert avec les séquences contenues dans les banques de données GENBank et EMBL (European Molecular Biology Lab) a montré une homologie de 25%, au niveau protéique, avec différents membres de la famille des Synaptotagmines. Les Synaptotagmines font partie d'une famille de protéines membranaires codées par au moins onze gènes différents exprimés dans le cerveau et autres tissus. Elles contiennent un domaine transmembranaire unique et deux domaines régulés par le calcium appelés C2. C'est dans ce domaine que l'on trouve l'homologie entre les Synaptotagmines et la protéine PAP 1. Aucune autre homologie significative n'a été observée.
EXEMPLE 5 : ANALYSE DE LA SPECIFICITE D'INTERACTION ENTRE LA REGION CENTRALE DE LA PARKINE ET LA PROTEINE PAPI.
Afin de déterminer la spécificité d'interaction entre le fragment correspondant à la protéine PAP1et la région centrale de la Parkine, un test d'interaction spécifique deux hybrides avec d'autres protéines non relevantes a été réalisé. Pour réaliser ce test nous avons transformé la souche L40 par les plasmides de contrôle plex9-cAPP ou pLex9-HaRasVa112 à la place du plasmide pLex9-Parkin (135-290) codant respectivement pour le domaine cytoplasmique de l'APP ou la protéine HaRasVall2 fusionnés au domaine le liaison à l'ADN de LexA et par le plasmide isolé lors du criblage de la banque deux hybrides. Un test d'activité P-Gal sur les cellules transformées par les différents plasmides a été effectué afin de déterminer une interaction protéine-protéine. D'après le résultat du test, seules les levures transformées par le plasmide isolé lors du criblage de la banque deux hybrides et par le plasmide pLex9-Parkine (135-290) présentaient une activité ss-Gal+ montrant ainsi une interaction entre la région centrale de la Parkine et la protéine PAPI. Cette interaction s'avère donc être spécifique puisque ce fragment de PAP1 ne semble pas interagir avec les protéines cAPP ou HaRasVa112.
Ces résultats montrent donc l'existence d'une protéine nouvelle, désignée PAP1, capable d'interagir de manière spécifique avec la Parkine. Cette protéine, apparentée aux synaptotagmines, ne présente aucune homologie significative avec des protéines connues, et peut être utilisée dans des applications thérapeutiques ou diagnostiques, pour la production d'anticorps, de sondes ou peptides ou encore pour le criblage de molécules actives.
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Abbas, N. et al. (1999). A wide variety of mutations in the parkin gene are responsible for autosomal recessive parkinsonism in Europe. Hum Mol Genet.
8, 567-574.
Bartel, P.L. et al. (1993). D.A Hartley Ed, Oxford University press, 153 Chung, CT. et al. (1989). One-step preparation of competent Escherichia coli: transformation andstorage of bacterial cells in the same solution. Proc. Natl.
Elle a également pour objet toute composition pharmaceutique comprenant comme principe actif une molécule chimique capable d'augmenter ou de diminuer l'interaction entre la protéine PAP1et la Parkine.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être utilisées pour moduler l'activité de la protéine Parkine et de ce fait maintenir la survie des neurones dopaminergiques. Plus particulièrement, ces compositions pharmaceutiques sont destinées à moduler l'interaction entre la protéine PAP1 et la Parkine. Il s'agit plus préférentiellement de compositions pharmaceutiques destinées au traitement de maladies du système nerveux central comme par exemple la maladie de Parkinson.
L'invention a encore pour objet l'utilisation des molécules décrites ci-avant pour moduler l'activité de la Parkine ou le typage de maladies du système nerveux
central. En particulier, l'invention concerne l'utilisation de ces molécules pour moduler au moins partiellement l'activité de la Parkine.
L'invention concerne également un procédé pour le criblage ou la caractérisation de molécules actives sur la fonction de la parkine, comprenant la sélection de molécules capables de lier la séquence SEQ ID NO : 2 ou la séquence SEQ ID NO : 4, ou un fragment (ou dérivé) de celles-ci. Le procédé comprend avantageusement la mise en contact, in vitro, de la ou des molécules test avec un polypeptide comprenant la séquence SEQ ID NO : 2 ou la séquence SEQ ID NO : 4, ou un fragment (ou dérivé) de celles-ci, et la sélection de molécules capables de lier la séquence SEQ ID NO : 2 (notamment la région comprise entre les résidus 1 et 344) ou la séquence SEQ ID NO : 4. Les molécules testées peuvent être de nature variée (peptide, nucléique, lipide, sucre, etc., ou des mélanges de telles molécules, par exemple des bibliothèques combinatoires, etc. ). Comme indiqué ci-avant, les molécules ainsi identifiées peuvent être utilisées pour moduler l'activité de la protéine Parkine, et représentent des agents thérapeutiques potentiels pour le traitement de pathologies neurodégénératives.
D'autres avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture des exemples et figure qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs.
LEGENDES DE LA FIGURE : Figure 1 : du vecteur pLex9-Parkine (135-290) MATERIELS ET TECHNIQUES MIS EN OEUVRE 1) Souches de levure:
La souche L40 du genre S.cerevisiae (Mata, his3D200, trpl-901, leu2-3,112, ade2, LYS2:: (lexAop)4-HIS3, URA3::(lexAop)8-LacZ, GAL4, GAL80) a été utilisée pour vérifier les interactions protéine-protéine quand l'un des partenaires protéiques est fusionné à la protéine LexA. Cette dernière est capable de reconnaître l'élément de réponse LexA contrôlant l'expression des gènes rapporteurs LacZ et His3.
Elle a été cultivée sur les milieux de culture suivants:.
Milieu YPD complet : -Extrait de levures (10 g/1) (Difco) -Bactopeptone (20 g/1) (Difco) -Glucose (20 g/1) (Merck) Ce milieu a été rendu solide par addition de 20 g/1 d'agar (Difco).
Milieu YNB minimum : -Yeast Nitrogen Base (sans acides aminés) (6,7 g/1) (Difco) - Glucose (20 g/1) (Merck) Ce milieu peut être rendu solide par addition de 20 g/1 d'agar (Difco). Il peut également être supplémenté en acides aminés et/ou en 3-amino-l,2,4-triazole par addition de milieux CSM [CSM-Leu, -Trp, -His (620 mg/1), CSM-Trp (740 mg/1) ou CSM-Leu, -Trp (640 mg/l)(Biol01)] et/ou de 3-amino-l,2,4-triazole 2,5 mM.
2) Souches de bactéries: La souche TG1 d'Escherichia coli, de génotype supE, hsdA5, thi, A(lac- proAB), F'[tra D36 pro A+B+ lacIq lacZAM15], a été employée pour la construction de plasmides, comme moyen d'amplification et d'isolement de plasmides recombinants utilisés. Elle a été cultivée sur le milieu suivant : Milieu LB: -NaCI (5 g/1) (Prolabo) -Bactotryptone (10 g/1) (Difco) -Extrait de levure (5 g/1) (Difco) Ce milieu est rendu solide par addition de 15 g/1 d'agar (Difco).
L'ampicilline a été utilisée à 100 ug/ml, cet antibiotique sert à sélectionner les bactéries ayant reçu les plasmides portant comme marqueur le gène de résistance à cet antibiotique.
La souche HB101 d'Escherichia coli de génotype supE44, aral4, galK2, lacYl, A(gpt-proA)62, rpsL20(Strr), xyl-5, mtl-l, recA13, A(mcrC-mrr), HsdS (r m ) a été employée comme moyen d'amplification et d'isolement de plasmides provenant de la banque d'ADNc de lymphocyte humain.
On obtient ainsi le produit attendu 21b sous forme de cristaux violets.
Analyses RMN1H . dans CDC13, delta en ppm : 8,20(18H,m) : H mobiles 8,35(2H,d) : 7,92 (2H,d) : H aromatiques (02N-Ph-N) 7,29(2H,s) : 7,26 (4H,s) : 7,23 (2H,s) : H aromatiques 7,85(2H,d) : 7,01 (2H,d) : 6,97 (2H,s) : H aromatiques 6,88(2H,d) : 7,87 (2H,d) : H aromatiques (N-Ph-N) 5,20-5,40(4H,m) . -NH-CO- 4,12-4,01(24H,m) : -PH-0-CH2-CH2 3,70-3,40(10H,m) : -PH-N-CH2-CH2- + -CH2-CH2-NH-CO 3,56(2H,m) : -CH2-CH3
3,00(18H,m) : -CH2-CH2-NH2 1,85-2,20 (24H,m) : -CH2-CH2-CH2- 1,18 (3H,t) : -CH3-CH2- SM(EI,70ev) : (M+2H) 2+ - [804] + Stade 7 : produit 21c On procède comme au stade 12 de l'exemple 1 en utilisant le produit 21b obtenu au stade 6 ci-dessus que l'on fait réagir avec le produit 14 obtenu au stade 11 de l'exemple 1.
Dans un ballon de 20ml, on met 114 mg de produit 21 b obtenu au stade 6 ci-dessus dans 4 ml de CH2C12 anhydre. On introduit alors 226 mg de BOP (9,9 eq) ainsi que 100 mg de produit 14 obtenu au stade 11 de l'exemple 1 (0,052 mmol) puis 244 microl de DIEA (27 eq). On traite la réaction au bout de 3 heures en évaporant à sec. On chromatographie tout d'abord sur Sephadex LH 20 dans CH2Cl2/MeOH : 95/5 puis sur silice avec pour éluant CH2Cl2/MeOH : 97/3 en augmentant la polarité de l'éluant jusqu'à CH2Cl2/MeOH : 95/5. On obtient ainsi le produit attendu (Rdt 30 %).
Analyses CCM : Rf = 0,3 dans CH2C12/MeOH = 95/5 SM (FAB) : MH+ [3463,1]+ + Stade 8 : dendrimère b On procède comme au stade 13 de l'exemple 1 en utilisant le produit 21c obtenu au stade 7 ci-dessus.
Dans un ballon de 5 ml, on solubilise 58 mg de produit 21 c obtenu au stade 7 ci-dessus (0,016 mmol) dans 2 ml de MeOH/CH2C12 : 6/4. On introduit alors 41,5 mg de K2C03 (2 eq).
On maintient l'agitation pendant 3 heures. On extrait avec CH2C12 puis on lave à l'eau. On filtre ensuite sur iéna le précipité rouge qui se forme à l'interface entre le CH2C12 et l'eau. On obtient ainsi le produit attendu.
Analyses CCM : Rf = 0,47 dans CH2C12/MeOH = 8/2 RMN1H . dans DMSO, delta en ppm : 8,31(2H,dl) : 7,91 (2H,dl) : H aromatiques (02N-Ph-N) 7,83(2H,dl) : 6,96 (2H,dl) : H aromatiques (N-Ph-N) 7,30-6,80(44H,m) : H aromatiques 4,49-4,30(36H,m) : -PH-CH2-0- + CO-CH2-0-
3,90-4,10(24H,m) : -PH-O-CH2-CH2 3,60-3,30(31H,m) : -PH-N-CH2-CH2- ±CH2-CH2-NH-CO ±CH2-CH3 1,75-2,08 (24H,m) : -CH2-CH2-CH2- 1,15 (3H,t) : -CH3-CH2Exemple 4 : Synthèse divergente du dendrimère c (figure 9) Stade 1 : produit 22
On opère comme au stade 9 de l'exemple 1 en utilisant le produit 21 au lieu du produit 9 et le produit 6 au lieu du produit 11. On utilise ainsi BOP (0,98 g, 1 eq), DIEA (0,38 ml, 1 eq) et 50 ml de CH3CN. On chauffe à 80 et on ajoute 40 ml de DMF. Le milieu est extrait par CH2CL2, la phase organique est lavée par de l'eau, NaHC03 et l'eau salée, séchée sur MgS04, filtrée et concentrée. Les cristaux sont chromatographiés dans CH2Cl2/MeOH = 95 :5. obtenue est reprise dans AcOEt, lavée par de l'eau, NaOH, NH4Cl et l'eau salée. On sèche sur MgS04, on filtre et on concentre.
On obtient ainsi le produit 22 attendu sous sorme de cristaux rouge. (Rdt = 50 %) Analyses : CCM : Rf = 0,50 dans CH2C12/MeOH = 9:1 IR : dans CHC13 3448 cm-1 Absorption NH 1708 et 1653 cm-1 Absorptions C=O 1515 et 1595 cm-1 Bande Amide II + Absorptions du noyau aromatique + Absorption N02 RMN : dans CDC13 Stade 2 : produit 23 On procède à la déprotection des groupements Boc du Produit 22 obtenu au stade 1 ci-dessus pour obtenir le produit 23 en procédant comme au stade 4 de l'exemple 1 pour obtenir le produit 7. On utilise 100 eq HCl (Rdt = Q).
On obtient ainsi le produit 23 attendu sous forme de
cristaux violets.
Stade 3 : produit 24
On procède comme au stade 12 de l'exemple 1 en faisant réagir le produit 23 obtenu au stade 2 ci-dessus avec le produit 14 obtenu au stade 11 de l'exemple 1.
On obtient ainsi le produit 24 attendu sous forme de cristaux rouges (Rdt = 65 %).
On utiltse plus particulièrement les sels d'ammonium de formule (VII) dans laquelle : - R15 désigne un radical méthyle ou éthyle, - x et y sont égaux à 1 ; - z est égal à 0 ou 1 ; - n, p et r sont égaux à 2 ; - R 16 est choisi parmi : 0 Il - le radical R19 C- - les radicaux méthyle, éthyle ou hydrocarbonés en C14-C22 - l'atome d'hydrogène ;
- R17, R19 et R21, identiques ou différents, sont choisis parmi les radicaux hydrocarbonés en C7-C21, linéaires ou ramifiés, saturés ou insaturés ; - R 18 est choisi parmi : 0 Il - le radical R2jC- - l'atome d'hydrogène ; De tels composés sont par exemple commercialisés sous les dénominations DEHYQUART par la société HENKEL, STEPANQUAT par la société STEPAN, NOXAMIUM par la société CECA, REWOQUAT WE 18 par la société REWO-WITCO Parmi les sels d'ammonium quaternaire on préfère le chlorure de béhényltriméthylammonium, ou encore, le chlorure de stéaramidopropyldiméthyl (myristyl acétate) ammonium commercialisé sous la dénomination CERAPHYL 70 par la société VAN DYK, le Quaternium-27 ou le Quaternium-83 commercialisés par la société WITCO.
Le tensioactif cationique est généralement présent dans des concentrations allant de 0,1 à 10% en poids par rapport au poids total de la composition et de préférence de 0,5 à 7 % en poids et plus préférentiellement entre 1 et 5% en poids r La composition de l'invention peut également contenir au moins un additif choisi parmi les parfums, les agents nacrants, les conservateurs, les filtres solaires siliconés ou non, les vitamines, les provitamines, les polymères cationiques, amphotères, anioniques ou non ioniques, les protéines, les hydrolysats de protéine, l'acide méthyl-18 eicosanoique, les hydroxyacides, le panthénol, les silicones volatiles ou non volatiles, cycliques ou linéaires ou réticulés, modifiées ou non, les céramides, les pseudocéramides, , les huiles végétales, animales, minérales ou de synthèse et tout autre additif classiquement utilisé dans le domaine cosmétique qui n'affecte pas les propriétés des compositions selon l'invention.
Les compositions de l'invention peuvent également se présenter sous forme de compositions pour permanente, défrisage, coloration ou décoloration, ou encore sous
forme de compositions à rincer, à appliquer avant ou après une coloration, une décoloration, une permanente ou un défrisage ou encore entre les deux étapes d'une permanente ou d'un défrisage.
Plus précisément, l'invention porte sur des compositions cosmétiques adaptées à l'application capillaire.
L'extraction de cédrat peut par exemple être mise en oeuvre comme suit.
Les Cédrats sont extraits après broyage à l'aide d'un solvant polaire comme les alcools de C1 à Cq, l'acétone, l'eau ou des mélanges en toute proportion d'alcool de C1 à Cq -eau ou acétone-eau. Le rapport plante/solvant peut varier de 1/4 à 1/20 en masse. L'extraction peut se faire à des températures pouvant varier de la température ambiante à la température d'ébullition du solvant d'extraction utilisé. L'extraction peut se faire par décoction, lixiviation, sous agitation ou non, sa durée varie de 1 heure à 24 heures. Une fois l'extraction réalisée, les solutions sont filtrées ou essorées de façon à séparer les phases liquides des solides. Le marc peut être extrait une seconde fois dans les mêmes conditions préalablement décrites. Les solutions obtenues peuvent être évaporées sous pression réduite. La concentration peut être menée complètement, puis suivie d'une étape de séchage afin d'obtenir un extrait sec. Elle ne peut être que partielle. Dans ce cas, un solvant est alors rajouté au concentrat. Ce solvant peut être la glycérine, le propylène glycol ou le butylène glycol. Les teneurs en matières sèches de ces extraits liquides varient de 0,5 à 10 les rapports eau/solvant varient en toutes proportions. Les extraits sont filtrés, si nécessaire, de façon à obtenir une solution limpide.
Les extraits réalisés sont dosés pour leur teneur en hespéridine. Ce dosage est effectué par CLHP sur colonne de type C1$ avec un gradient de phase mobile composé d'eau, acétonitrile, acide trifluoro-acétique. Les teneurs en hespéridine varient selon les conditions d'extraction de 0,01 % à 0,5 % par rapport à la matière sèche, ce qui correspond aux teneurs recherchées dans le cadre de la présente invention.