INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Finalement, c'est en jouant sur les compositions des polymères et sur les conditions opératoires que les inventeurs ont pu isoler ces particules structurées de très petite taille qui sont à la base de PAA et qui présentent, de manière tout à fait surprenante et inattendue, une capacité de chargement Ta à l'insuline qui peut être jusqu'à trois fois supérieure à celle propre aux particules selon le WO 96/29991.
La structure des polymères PAA et la nature des acides aminés, sont choisies de telle façon que :
# les chaînes de polymères se structurent spontanément sous forme de particules (PV) de petite taille, # les particules forment une suspension colloïdale stable dans l'eau et en milieu physiologique, # les PV s'associent avec des protéines ou autres PA en milieu aqueux, par un mécanisme spontané et non dénaturant pour la protéine, # les PV libèrent les PA en milieu physiologique et, plus précisément, in vivo ; la cinétique de libération est fonction de la nature du polymère PAA précurseur des PV.
Ainsi, en jouant sur la structure particulière du PAA, on peut contrôler les phénomènes d'association et de libération du PA sur le plan cinétique et quantitatif.
Il est du mérite de la demanderesse d'avoir choisi, à titre de matériau constitutif des PV, une composition particulière de polyaminoacides qui sont amphiphiles et qui, donc, possèdent des propriétés des PV en PAA, à savoir : .possibilité de former spontanément des suspensions colloïdales de PV compatibles avec le pH des milieux physiologiques rencontrés dans les applications thérapeutiques visées ; *association spontanée des PA avec des PV en l'absence d'autre agent que l'eau qui leur sert de solvant et qui, dans le cas des protéines, n'est pas dénaturant ; *possibilité de libérer le PA du complexe d'association PA-PV, dans des conditions physiologiques, avec des profils pharmacocinétique et pharmacodynamique, qui laissent présager des utilisations intéressantes dans le domaine thérapeutique (vectorisation PA). et qui, par ailleurs, présentent de nouvelles propriétés qui sont : # filtrabilité avec seuil de coupure inférieur ou égal à 0,2 m à des fins de stérilisation, #biodégradibilité améliorée, *aptitude à l'injection optimisée, Ces nouvelles propriétés ont pu être obtenues grâce aux fonctions techniques primaires des PV qui sont la petite taille nanométrique et le fort taux de chargement.
Les résultats des tests histochimiques effectués sur les feuilles de tabac transformées par les constructions pMRT1125 (PrHMWG-Dx5 (SEQ.ID01) ) , pMRT1130, pMRT1131, pMRT11@3, pMRT1134, pMRT1135, pMRT1136, pMRT1137, pM?Tl138 et pMRT1092 (PrD35S du CaMV, témoin positif) rapportés sur la figure V, ont permis de classer les promoteurs étudiés dans quatre catégories. Sur les feuilles bombardées avec la construction pMRT1125 (FrHMWG-Dx5 (SEQ.ID01) ) aucun spot bleu n'a été observé. Les feuilles bombardées avec les constructions part1133, pMRT34, pMRTH36 et pMRTll37 présentent en moyenne uri nombre de points bleus compris entre 50 et 100. Les feuilles transformées par les constructions pMRT1135, pMRT1138 et pMRT1139 (résultat non montré), présentent un nombre important de points bleus, équivalent à celui observé sur les feuilles bombardées avec la construction de référence pMRT1092 (PrD35S da CaMV). Enfin, Les feuilles bombardées par les constructions pMRT1130 et pMn113, présentent un nombre de spots bleus diffus et intenses, beaucoup plus élevé que les feuilles bombardées par la construction de référence pMRT1092 (PrD35S du CaMV).
A la lumière de ces résultats, plusieurs informations essentielles peuvent être dégagées : - les séquences activatrices as-1 et as-2 du CaMV 35S dérégulent l'activité du promoteur HMWG-Dx5 (SEQ.1DC1) dans les feuilles de tabac, - les séquences activatrices as-1 et as-2 du CaMV 35S agissent
CIL synergie avec des motifs cis-I.é'J.JlClt~'c:.l::3 présents dans le promoteur HMWG-Dx5 (SEQ.IDC1) . La boîte G like semble être l'un des éléments clés de ce contrôle combinat cire . Les boîtes GATA, en association avec la boîte G like et les séquences activatrices as-1 et as-2 du CaMV 35S, sont peut être responsables de l'activité très élevée de MPrll30 (S=Q,TDC) et MPrll31 (SEQ.IDC6) , la dupli cation de la séquence activatrice as-2 du CaMV 35S ne confère pas un effet additif positif notable, - les poîtes céréales , en association avec les séquences activatrices as-1 et as-2 du CaMV 35S, semblent conférer un effet transcriptionnel négatif dans les feuilles de tabac.
En conclusion, le promoteur D35S du CaMV étant communément rapporté dans la littérature comme étant un promoteur chimérique apportant une augmentation de l'activité promotrice du gène rapporteur GUS de l'ordre de 8 à 12 fois supérieure à celle apportée par le promoteur 35S du CaMV (Kay et al., 1987), les promoteurs MPrll35 ,SEQ.;J9) , MPrll3Ï (SEQ.ID12) , MPrll39 (SEQ.ID13) , MPrll30 (SEQ.ID05) et MPrll31 (SEQ. ID06) sont certainement les promoteurs chimériques, actifs dans les feuilles de tabac, les plus forts décrit à ce jour.
Les promoteurs MPrll33 (SEQ.ID07) , MPrll34 (SEQ.IDC8) , MPrll36 (SFQ.IDIO) et MPrll37 (SEQ.IDU) , plus faiblement actifs dans les feuilles de tabac présente également un intérêt, dans la mesure où ils peuvent diriger l'expression de gènes de résistance pour permettre la sélection des plantes transgéniques, au même titre que les promoteurs de type "nos" par exemple.
6.5. Quantification de l'activité des différents promoteurs dans l'albumen de maïs par dosage luminométrique de l'expression de la B-glucuronidase.
Les albumens précédemment transformés par biolistique ont été congelés à l'azote liquide et broyées à l'aide d' une tige de verre montée sur une perceuse. La poudre a ensuite été décongelée dans du tampon d'extraction (Tris Phosphate 25 mM pH 7,8, Dithiothréitol 2 mM, acide
1, -aiamiru:.;clohexane, t;, , N' , N'-tétracétiqe 2 [[2
L'activité GUS rez,, été mesurée sur 10 pi n ' extrait crut clarifié, à l'aide du kit de détection "GUS-Lignt chemiluminescent reporter gene assay" (Tropix Inc., Bedford, USA) selon les recommandations du fournisseur. La mesure de l'émission de lumière a été effectuée par un luminomètre Lumat LB 9507 (EGG-Berthold, Bad Wildbad, Allemagne).
En parallèle, l'activité luciférase a été mesurée sur 10 ul d'extrait brut clarifié, à l'aide du kit de détection "Luciférase assay system" (Promega Corp., Madison, USA) selon les recommandations du fournisseur. La mesure de l'émission de lumière a été effectuée à l'aide du luminomètre Lumat L3 9507 placé en chambre froide à 4 C.
Les résultats sont rapportés en Fig. VI et VII. Pour chaque essai (trois demi albumens = un extrait brut), le rapport entre l'activité -glucuronidase et l'activité luciférase mesurées au luminomètre, a été calculé. La moyenne d'au moins 5 essais indépendants par construction et l'erreur standard à la moyenne ont été déterminées.
Pour analyser l'effet des différentes modifications apportées à chacun des promoteurs décrits dans ce brevet, lesdits promoteurs ont été répartis en deux groupes distincts.
Le groupe I (Fig. VI) est constitué des promoteurs qui permettent de réaliser une dissection fonctionnelle détaillée du promoteur HMWG-Dx5 (SEQ.ID01) et le groupe II (Fig. VII) renferme les promoteurs qui permettent de déterminer l'effet des divers éléments cis-activateurs étudiés dans ce brevet, en association avec le promoteur HMWG-Dx5 (SEQ.TL.01) . le groupe T renferme les promoteurs Marli28, M?rll27 (SEQ.ID03) , MPrll26 (SEQ.ID02) , h'Pr119î ;E%.ID16) , MPrll99 (SEQ.ID17) , MPrl216 (SEQ. ID21) , MPr121@ ;SEQ.ID22) , le promoteur de référence HMWG-Dx5 (SEQ.ID01) et la construction
,À référence pMRT11414 tC~'IT,, L:. négatif), laquelle est dépourvue de séquence promotrice (Fig. VI). Les résultats des dosages luminométriques permettent de dégager plusieurs constatations : les délétions progressives de la région 5' du promoteur HMWG-Dx5 (SEQ.ID01) entraîne une diminution progressive de l'activité relative moyenne conférée par ces promoteurs. La séquence promotrice entière de PrHM;G-Da5 (SEQ.ID01) de 417 pb semble donc nécessaire peur permettre une activité maximale du promoteur HMWG-Dx5 (SEQ.L1Jl) . - la faible différence d'activité enregistrée entre les promoteur MPR1128 (SEQ.1D04) et PrHMWG-Jx:S (SEQ.ID01) montre que la séquence située en amont du nucléotide -238 ne contient pas les éléments cis-activateurs majeurs, responsables de l'activité du promoteur HMWG-Dx5 (SEQ.ID01) . la diminution significative d'activité entre les promoteurs MPR1128 (SEQ.ID04) et MPrll27 (SEQ.ID03) laisse suggérer que la séquence située en amont du nucléotide -205, laquelle renferme une boîte G like, joue un rôle capital pour l'activité du promoteur HMWG-Dx5 (SEQ. ID07 ) .
- la faible différence d'activité enregistrée entre les promoteur MPrll27 (SEQ.ID03) et MPrl126 ;SEQ.IG21 ne permet pas de conclure quant au rôle réel de 1' élément enhancer.
- l'activité très faible du promoteur M?rll97 (SEQ.ID16) , mais supérieure à celle obtenue avec la construction pMRT1144 qui ne contient pas de promoteur, indique que la séquence minimale de 96 pb de PrHMWG-Dx5 (SEQ.ID01) confère un niveau de transcription de base.
Eventuellement, on peut prévoir un arrangement différent pour visser la dernière partie d'organe de fixation, notamment pour effectuer un vissage complet de l'organe de fixation 30. En effet, en se référant notamment à la figure 7, de par la dimension axiale non nulle des pignons 50, il peut être difficile voir impossible de faire complètement entrer l'organe de fixation 30 dans la vertèbre. Pour éliminer la hauteur Ah se projetant dans l'espace intervertébral V, on peut utiliser un dispositif tel que représenté sur la figure 8. Ce dispositif comporte un élément de vissage 80 pouvant coopérer de manière amovible avec le bout arrière de la dernière partie d'organe de fixation 30b. Cet élément de vissage 80 est de préférence réalisé de manière similaire à l'organe de fixation 30, avec des nervures externes 81 pour coopérer avec l'arrangement de pignons 50, et est monté sur l'insert 35.
L'interconnexion entre l'élément de vissage 80 et l'organe de fixation 30 peut être réalisé via des dentelures, comme représenté sur la figure 8, mais d'autres moyens appropriés sont envisageables. Après vissage complet de l'organe de fixation 30, on retire l'élément de vissage 80. En variante, on pourrait aussi utiliser un système de nervure/rainure (non représenté), l'une étant prévue sur la dernière partie de vis et l'autre sur la tige de vissage. Bien entendu, tout autre système approprié permettant de réaliser un tel vissage est envisageable.
Bien entendu, l'invention ne se limite pas aux moyens de vissage décrits ci-dessus, et le vissage des organes de fixation 30 peut être réalisé par tous moyens mécaniques et/ou hydrauliques appropriés. En particulier, la tige de vissage mécanique pourvue de pignons et actionnée par le chirurgien peut être remplacée par un organe hydraulique connectée à des moyens adaptés à transformer les forces exercées par ledit organe hydraulique en une force de vissage axiale des organes de fixation.
En référence aux figures 10 et 11, l'extrémité avant de l'organe de fixation 30, ou de la première partie d'organe de fixation 30a lorsque plusieurs parties d'organe de fixation sont prévues, peut comporter une pointe 33 et être filetée à l'extérieur. Avantageusement, on peut aussi prévoir une forme cylindrique 34 comportant sur l'arête frontale des dents 36 pour creuser l'os lors du vissage, à la manière d'un trépan. Ceci facilite le vissage puisque la matière osseuse est éliminée vers l'intérieur de l'organe de fixation, alors que dans le cas d'un filetage externe, la matière osseuse est comprimée, ce qui crée des forces de compression. De plus, l'absence de filet externe permet de pourvoir les organes de fixation
uniquement avec les nervures longitudinales externes 31, qui assurent une parfaite fixation dans la vertèbre, et facilitent une éventuelle explantation des organes de fixation.
La figure 13 illustre très schématiquement des moyens pouvant être utilisés pour réaliser une explantation des organes de fixation 30, également par voie rachidienne postérieure. Ces moyens d'explantation comprennent avantageusement un élément d'explantation 90 similaire à l'élément de vissage 80 décrit ci-dessus. Cet élément 90 comporte des moyens de prise 91, tel que des dents, qui peuvent coopérer avec le bord postérieur 39 de l'organe de fixation 30 pour solidariser axialement ces deux éléments.
Lorsque l'élément écarteur 200, représenté sur la figure 12, est ensuite écarté, l'élément d'explantation 90, fixé audit écarteur 200, entraîne axialement l'organe de fixation 30 hors de la vertèbre. Divers moyens de prise 91 sont envisageables, par exemple des crochets ou similaire Si nécessaire, notamment dans les cas pathologiques très graves, on peut réaliser le fixateur de l'invention de manière substantiellement rigide, sans prévoir d'articulation artificielle. Dans ce cas on peut se passer d'éléments mobiles et/ou déformables. On peut aussi utiliser les soufflets similaires à ceux du premier mode de réalisation ci-dessus, en les remplissant avec une quantité de liquide ne permettant aucun mouvement.
Eventuellement, on peut prévoir des moyens de blocage mécanique. Avantageusement, lorsque cela est cliniquement souhaitable, on peut alors diminuer cette quantité de liquide après un certain temps, et redonner au fixateur sa fonction articulaire.
En référence à la figure 14, le fixateur F peut être réalisé de manière monobloc c'est à dire que les deux plaques 10, 11 et les soufflets 25 (non visibles) sont introduits ensemble dans l'espace intervertébral V. Les plaques 10, 11 comportent alors avantageusement des parois latérales 12 pourvues d'ouvertures 13 pour le passage de la tige de vissage 40 (ou du tube de guidage 200).
On prévoit généralement deux fixateurs F dans chaque espace intervertébral V. Dans ce cas, chacun des deux fixateurs est implanté par les voies postérieures droite et gauche classiques, à travers un canal environ radial respectif réalisé de chaque côté de la colonne vertébrale. L'implantation des fixateurs de l'invention est alors réalisée par les mêmes voies que les cages de l'art antérieur susmentionnées.
En référence aux figures 14 et 15, les deux fixateurs F ont avantageusement une forme complémentaire de sorte qu'après leur mise en place, ils puissent former un ensemble géométriquement cohérent, tel qu'une pièce monobloc (fig. 15). Eventuellement, on peut prévoir plus de deux fixateurs dans chaque espace intervertébral, par exemple quatre.
On peut également prévoir des fixateurs FI, F2, F3 dans plusieurs espaces intervertébraux différents, notamment des espaces intervertébraux adjacents, comme représenté sur la figure 17, qui sera décrite plus en détail ci-après.
Le ou les éléments mobiles et/ou déformables de l'élément intermédiaire peuvent être réalisés autrement que sous la forme de soufflets. Ainsi, comme représenté schématiquement sur la figure 16, on peut utiliser des surfaces courbes complémentaires (convexes ou concaves) 25a, 25b pouvant glisser l'une sur l'autre dans un espace de glissement. Il est aussi envisageable d'interposer une sphère mobile entre deux surfaces courbes. Eventuellement, on peut introduire une viscoélasticité, en prévoyant par exemple un liquide dans l'espace de glissement. Cette viscoélasticité pourrait être variée en reliant l'espace de glissement à une chambre d'expansion/dilatation pour le liquide ou tout autre élément élastique. Cette variation de viscoélasticité pourrait être contrôlable, par exemple télécommandable, depuis l'extérieur. On peut aussi envisager de réaliser les éléments mobiles et/ou déformables en un matériau compressible, les caractéristiques de compression du matériau pouvant être prédéterminées et/ou réglables.
En référence à la figure 17, on peut relier les fixateurs intervertébraux F de l'invention avec un arrangement de fixateurs postérieurs, par exemple du type mobile réglable, tel que divulgué dans les documents EP-0 820 731 et FR-98 05549, en particulier en ce qui concerne le fonctionnement de ces arrangements postérieurs. Dans ce cas, on réalise avantageusement cette liaison en connectant l'arrangement des fixateurs postérieurs 300 aux organes de fixation 30 des fixateurs intervertébraux F, par exemple au moyen de tiges 310. Si plusieurs espaces intervertébraux V adjacents de la colonne vertébrale comportent des fixateurs FI, F2, F3, la liaison avec l'arrangement postérieur 300 est de préférence réalisée uniquement au niveau des organes de fixation 30'et 30"disposés respectivement dans les vertèbres Vsup et Vinf axialement les plus éloignées les unes des autres, comme représenté sur la figure 17. En l'occurrence, dans l'exemple représenté, Vinf correspond au sacrum et Vsup correspond à la vertèbre lombaire L3.
Avantageusement, lorsque des fixateurs intervertébraux FI et F2 sont implantés dans deux espaces intervertébraux adjacents, on peut prévoir que les organes de fixation 30 prévus dans la vertèbre séparant lesdits deux espaces intervertébraux adjacents agissent en tant qu'organes de fixation communs pour les deux fixateurs FI et F2. Dans ce cas, ces organes de fixation peuvent être implantés partiellement à travers les deux espaces intervertébraux, ou entièrement à travers un seul de ces espaces intervertébraux. Ce dernier cas est notamment illustré sur la figure 9, dans laquelle la
totalité de l'organe de fixation 30 est implantée dans la vertèbre V2 par l'espace intervertébral V, jusqu'à ce que la première partie d'organe de fixation 30a débouche dans l'espace intervertébral adjacent V'.
A partir de ces comprimés, on a préparé des solutions aqueuses à 5 g/1 et à 10 g/1. Les pH de ces solutions sont mentionnées dans le tableau 4 ci-dessous :
pH des solutions aqueuses Comprimé I Comprimé II 5 g/litre 3,3 3,3 10 g/litre 3,2 3,3
Parallèlement, on a mesuré la teneur de ces comprimés en monoperoxyphtalate de magnésium après un stockage à 20 C pendant un mois, trois mois et douze mois. Ces teneurs sont mentionnées sur le tableau 5 ci-dessous : Tableau 5
Temps (mois) Comprimé I Comprimé II 1 23,1 24,03 3 ' 22,15 23, 67 12 21,13 22,55
Les courbes représentant les variations de la teneur des comprimés I et II en monoperoxyphtalate de magnésium (MMPP) en fonction du temps sont représentées sur la figure 1.
Ces tests ont permis de constater que ces variations sont inférieures à 10 % après un stockage d'un an, ce qui prouve une stabilité satisfaisante.
Selon une autre caractéristique de l'invention, la composition se présente sous la forme d'une poudre renfermant en proportions pondérales : - 18 à 35 % de monoperoxyphtalate de magnésium, - 5 à 25 % de cumène sulfonate et/ou de dodécylbenzène- sulfonate de sodium, - 12 à 25 % d'acide borique, - 10 à 18 % de bisulfate de sodium, et - 18 à 35 % de sulfate de sodium anhydre.
Pour vérifier la stabilité dans le temps de la concentration en monoperoxyphtalate de magnésium de poudres correspondant à cette formulation, on a préparé la poudre I de composition suivante :
- monoperoxyphtalate de magnésium 30 % - cumène sulfonate de sodium 15 % - acide borique 15 % - bisulfate de sodium 15 % - sulfate de sodium anhydre 25 %.
On a ensuite mesuré la concentration de cette poudre en monoperoxyphtalate de magnésium après un stockage de longue durée d'une part, à température ambiante (T.A.) et, d'autre part, à 37 C.
Les résultats obtenus sont rassemblés dans le tableau 6 ci-dessous : Tableau 6
Jours T.A. 37 C 28 29,48 28,35 108 30,00 29,17 137 28,97 28, 62 254 28,92 28,00 596 28,26 27,22
Par ailleurs, la figure 2 représente les variations de la concentration en monoperoxyphtalate de magnésium (MMPP) de cette poudre I en fonction du temps.
Ce test a permis de démontrer que les variations de cette concentration après un stockage de plus de 500 jours sont inférieures 10 %, ce qui correspond à un résultat satisfaisant.
On a vérifié cette stabilité en préparant un kilogramme de la poudre II ayant la composition suivante : - monoperoxyphtalate de magnésium 30 % - cumène sulfonate de sodium 7,50 % - dodécylbenzènesulfonate de sodium 7,50 % - acide borique 15 % - bisulfate de sodium 15 % - sulfate de sodium anhydre 25 %.
Le convertisseur numérique /analogique à exécution immédiate, objet de l'invention, trouve application à tout domaine d'électronique rapide, tel que l'électronique aéronautique et spatiale, la conversion de signaux audio- et/ou vidéonumériques par exemple.
Il sera mieux compris à la lecture de la description et à l'observation des dessins dans lesquels - la figure la représente, à titre d'exemple non limitatif, un premier exemple de réalisation du convertisseur numérique /analogique, objet de la présente invention ; - la figure lb représente, à titre d'exemple non limitatif, un deuxième exemple de réalisation du convertisseur numérique /analogique, objet de la présente invention.
Une description plus détaillée d'un convertisseur numérique/analogique autoprogrammable à exécution immédiate, conforme à l'objet de la présente invention, sera maintenant donnée en référence à la figure la dans un mode de réalisation non limitatif.
En référence à la figure précitée, on indique que le convertisseur numérique/analogique reçoit une valeur numérique à convertir, codée sur N bits, les bits de codage étant notés bo, pour le bit le moins significatif, à b.;_1 pour le bit le plus significatif, le bit courant étant noté b3. La tension analogique engendrée est désignée par VoUm. La valeur de cette tension analogique est, par définition, comprise entre la tension électrique d'alimentation Vcc et une tension de référence, notée VREF encore désignée par tension de masse.
Selon un aspect particulièrement remarquable du convertisseur numérique/analogique objet de la présente invention, celui-ci comprend des circuits 1 générateurs programmables d'un courant électrique image, noté Ii, proportionnel à la somme des valeurs actives de tensions électriques d'une suite de N tensions électriques constituant une progression géométrique de raison =,#. La suite des N tensions électriques forme une image analogique du poids des bits de codage de la valeur numérique à convertir entre le bit le plus significatif b"_, et le bit le moins significatif bo sur lesquels la valeur numérique à convertir est codée ou représentée. D'une manière générale, on indique que la suite des N tensions électriques constituant une progression géométrique de raison ;-# vérifie de préférence la relation (1) Vi = Vcc/2N-3 De la même manière, on indique que les valeurs actives correspondent aux valeurs de tensions électriques de la suite de tensions électriques en progression géométrique de raison 3,# pour lesquelles l'image analogique du poids des bits de la valeur numérique à convertir correspond à un bit de valeur 1. Compte tenu de la définition précédente, chaque .raleur active de tension électrique, notée Vx;, vérifie la relation (2) . Vx@ = b,. Vcc/2N-, . on comprend, en particulier, que les valeurs actives de tensions électriques, pour la valeur des bits b- égale à la valeur 1, sont égales à la valeur correspondante de l'image analogique du poids des bits représentée par la tension électrique correspondante de la suite des N tensions électriques constituant la progression géométrique, alors que, pour la valeur zéro@de ces bits, la valeur active correspondante est bien entendu égale à zéro.
En outre, ainsi que représenté en figure la, le convertisseur numérique /analogique, objet de l'invention, comprend des premiers circuits 2 correcteurs programmables recevant le courant électrique image Ii proportionnel à la somme des valeurs actives de tensions électriques précitées, ces premiers circuits 2 permettant d'engendrer une première tension analogique corrigée programmée, notée VA proportionnelle à la différence entre la tension d'alimentation Vcc et la somme pondérée des valeurs actives de tensions électriques de la suite de tensions électriques représentée par le courant électrique image Ii précité. Le terme de pondération de la somme pondérée est inversement proportionnel au nombre de bits a à la valeur 1 de la valeur numérique à convertir.