INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Une expérimentation conduite par les présents inventeurs sera décrite, à l'aide du système optique illustré en figure 1, dans lequel une caméra à radiation infrarouge (par exemple le modèle TH-5401 disponible auprès de NEC Sanei-Kabushiki Kaisha, au Japon) est employée en tant que détecteur d'images 32, et les demi miroirs 14,24 sont des demi miroirs pour une radiation infrarouge qui reflètent 30 % d'une radiation incidente et transmettent 30 % de la radiation incidente. Les miroirs 20,22 sont des miroirs plans BK7 en aluminium et le premier filtre 34 permet la transmission à travers d'une radiation possédant une longueur d'onde de 3, 75 p. m et une demi largeur de 140 nm, alors que le deuxième filtre 36 permet la transmission à travers une radiation possédant une longueur d'onde de 5,00 um et une demi largeur de 100 nm. Le corps de l'objet 12 utilisé dans l'expérience est un substrat d'alumine (50 x 50 x 0,8 mm) dont la surface est couverte localement par une peinture noire cuite au four dont l'émissivité est différente de celle du substrat d'alumine. Ce corps d'objet 12 a été placé dans une partie centrale d'un four de chauffage et la température à l'intérieur du four a été élevée de la température ambiante jusqu'à 700 oC au taux de 10 C/minute. La répartition de la température de surface du substrat d'alumine a été mesurée lorsque la température à l'intérieur du four a atteint 500 oC au cours de la hausse jusqu'à 700 C. L'expérience dans les conditions décrites ci-dessus a indiqué une répartition égale de la température du substrat d'alumine sur la totalité de la surface, sans tenir compte de la peinture noire cuite au four qui couvre localement la surface du substrat d'alumine et qui possède une émissivité différente de celle du substrat d'alumine. L'expérience a indiqué une
erreur de reproduction de 2 C des mesures répétées dans une partie centrale de l'écran d'affichage du dispositif d'affichage 42.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION La présente demande est relative à des gènes qui peuvent être exprimés chez E. coli, à une méthode pour leur obtention, à des promoteurs adaptés à leur expression, à des plasmides et des origines de réplication adaptés à leur transformation bactérienne, ainsi qu'aux applications biotechnologiques et médicales de ces produits. Chacun de ces produits présente la caractéristique particulière d'être entièrement dépourvu de CpG, tout en ayant conservé leur fonctionnalité. La présente demande fournit également une souche E. coli optimisée pour la réplication de tels plasmides, cette souche présentant elle-aussi la caractéristique particulière de permettre la réplication stable de ces plasmides et du matériel génétique qu'ils transportent, sans altérer leur
fonction et sans pour autant induire de méthylation au niveau des sites CC (A/T) GG. Un des concepts communs liant les différents aspects de l'invention est donc de fournir des moyens de transfection donnant accès à du matériel nucléotidique qui évite la méthylation au niveau des cytosines tout en conservant ses propriétés fonctionnelles. A la connaissance de la Demanderesse, il s'agit de la première description de tels moyens.
La création de plasmides d'E. coli dépourvus de CpG demande obligatoirement de disposer de gènes fonctionnels qui ne renferment pas de CpG. Ainsi, la sélection des bactéries transformées par un ADN plasmidique recombiné fait intervenir un gène dont la protéine confère un avantage dominant à la bactérie. Le plus souvent, le marqueur sélectif est apporté par un gène de résistance 1 à un antibiotique actif sur la bactérie E. coli. L'analyse des séquences des gènes de résistance dans leur grande variété utilisés chez E. coli montre que sans aucune exception tous renferment des 1 CpG, bien souvent en nombre très élevé pour les gènes de résistance trouvant leur origine chez les Streptomyces producteurs de l'antibiotique de sélection. De même, il est nécessaire de disposer de gènes rapporteurs qui soient sans CpG tout en restant fonctionnels.
Or, une analyse de plusieurs centaines de gènes chromosomiques et plasmidiques de la bactérie 1 E. coli dont les séquences bien caractérisées sont disponibles dans plusieurs banques de données révèlent que tous les gènes sans exception dont la taille est supérieure à 250 pb sont constitués par les 16 dinucléotides.
La présente invention démontre qu'il est malgré tout possible de construire des gènes fonctionnels chez E. coli qui soient dépourvus de CpG. Les inventeurs ont en effet mis au point une méthode pour l'obtention de gènes dépourvus de CpG tout en étant exprimables chez E. coli.
Cette méthode est basée sur la synthèse d'un enchaînement polynucléotidique en suivant l'enchaînement d'acides aminés d'une protéine qui peut être exprimée chez E. coli, en affectant à chaque acide aminé un codon nucléotidique choisi parmi ceux qui, selon le code génétique, et en tenant compte de la dégénérescence de ce code, correspondent à cet acide aminé, mais en éliminant de ce choix : i. tous les codons contenant un CpG dans leur séquence : sont concernés les codons ACG (Thr), CCG (Pro), GCG (Ala), TCG (Ser), CGA (Arg), CGC (Arg), CGG (Arg) et CGT ( Arg), 0
ii. les codons dont les fréquences sont faibles dans les protéines d'origine humaine sont éliminés : sont concernés les codons ATA (Ile), CTA (Leu), GTA (Val) et TTA (Leu), et iii. les codons finissant par un C quand le codon qui le suit directement commence par un G.
L'ensemble des codons possibles correspond donc à l'ensemble suivant : GCA (Ala), GCC (Ala), GCT (Ala), AGA (Arg), AGG (Arg), AAC (Asn), AAT (Asn), GAC (Asp), GAT (Asp), TGC (Cys), ), TGT (Cys), CAA (ein), CAG (Gln), GAA (Glu), GAG (Glu), GGA (Gly), GGC (Gly), GGG (Gly), GGT (Gly), CAC (His), CAT (His), ATC ( Ile), ATT (Ile), CTC (Leu), CTG (Leu), CTT (Leu), TTG (Leu), AAA (Lys), AAG (Lys), TTC (Phe), TTT (Phe), CCA (Pro), CCC (Pro), CCT (Pro), TCA (Ser), TCC (Ser), TCT ( Ser), AGC (Ser), AGT (Ser), ACA (Thr), ACC (Thr), ACT (Thr), TAC (Tyr), TAT (Tyr), GTC (Val) GTG (Val), GTT (Val), auquel il faut bien entendu appliquer la règle iii. ci-dessus.
De manière préférentielle, ledit choix de codon se fera également de manière à éviter des 1 structures non favorables pour l'ARN messager, comme la présence de séquences d'épissage, de séquences répétées directes ou inversées, des structures en épingle à cheveux ou de signaux de Z : D polyadénylation.
Le nombre et la variété de taille des gènes synthétisés par cette méthode sont illustrés dans les exemples ci-dessous qui montrent qu'il est ainsi possible de concevoir la synthèse de gènes entièrement dépourvus de CpG qui n'en reste pas moins fonctionnels chez E. coli.
Comme protéine de référence, on peut choisir toute protéine qui peut être exprimée par E. coli, par exemple une protéine codée par un gène de résistance à un antibiotique tel que les gènes de résistance à la zéocine (phléomycine), à l'hygromycine, à la blasticidine, à la puromycine, ou une protéine codée par un gène rapporteur tel que lacZ.
ZD La présente demande vise une telle méthode d'obtention de gènes dépourvus de CpG exprimables chez E. coli, ainsi que tout gène d'au moins 250 pb qui est susceptible d'être obtenu par cette méthode. Plus particulièrement, la présente demande vise : tout gène dont la séquence comprend la séquence SEQ ID ? 1 de la position 3 à la position 374 (Figure 1), la séquence SEQ ID ? 3 de la position 3 à la position Z-P 1025 (Figure 3), la séquence SEQ ID ? 5 de la position 3 à la position 422
(Figure 5), la séquence SEQ ID ? 7 de la position 3 à la position 599 (Figure 7), ainsi que toute utilisation de ces gènes en tant que marqueurs de sélection, et tout gène dont la séquence comprend la séquence SEQ ID ? 9 de la position 3 à la position 3056 (cf. Figure 9), ainsi que toute utilisation de ce gène en tant que gène rapporteur.
D L'expression d'un gène plasmidique nécessite également de disposer de promoteurs adaptés à la cellule hébergeant le plasmide. La connaissance complète du génome d'Ecoli depuis quelques années a facilité l'étude de différents éléments non codants présentant des fonctions particulières. Les résultats des travaux portant sur la nature des promoteurs d'E. coli sont continuellement mis à jour et rendus publics sur le site PromEC accessible par internet (http : //bioinfo. md. huji. ac. il/marg/promec). Une analyse des 471 promoteurs bien définis de la base-75 à +25 par rapport au point +1 d'initiation de la transcription révèle que seulement 6 d'entre eux ne possèdent pas de CpG. L'addition de chacun des 6 promoteurs synthétisés chimiquement et placés en amont du gène lacZ codant pour la ss-galactosidase d'E. coli s'est révélée négative pour la révélation de l'activité de ce gène rapporteur. Le manque de forte homologie avec les séquences consensus des boîtes canoniques-10 et-35 suggère que la force de 1 1 ces promoteurs est faible et alternativement que ceux-ci pourraient être régulés par des conditions d'induction à définir pour chacun d'entre eux. Une analyse des promoteurs bien caractérisés d'E. coli a révélé qu'une dizaine seulement ne renfermaient pas de CpG au niveau des boîtes spécifiques de reconnaissance par la RNA polymérase. Une recherche bibliographique a en outre révélé que ces promoteurs étaient tous de nature inductible par divers stimuli, une situation parfois voulue mais le plus souvent délaissée pour un caractère constitutif de l'expression. Les inventeurs ont quant à eux réussi, par assemblage aléatoire PCR de fragments présentant des courtes séquences consensus dépourvues de CpG puisées parmi plusieurs promoteurs forts, à mettre au point des promoteurs inédits qui sont adaptés à l'expression de gènes sans CpG chez E. coli, et qui présentent l'avantage particulier d'être des promoteurs constitutifs très forts et d'être entièrement dépourvus de CpG. L'exemple 6 ci-dessous illustre la construction du promoteur inédit EM2K par cette technologie. La présente demande vise plus particulièrement tout promoteur dont la séquence comprend la séquence SEQ ID No. 11 (cf. Figure 11).
Les terminateurs caractérisés de transcription chez E. coli sont formés par des séquences courtes dont plusieurs ne possèdent pas de CpG, et les inventeurs ont pu vérifier que de tels terminateurs assurent effectivement leur fonction lorsqu'ils sont associés chez E. coli à un promoteur et un gène sans CpG selon l'invention.
La présente demande vise ainsi toute unité transcriptionnelle qui comprend au moins un gène 1 : 1 sans CpG selon l'invention, et au moins un promoteur sans CpG selon l'invention. Une telle unité transcriptionnelle peut en outre comprendre au moins un terminateur sans CpG. L'invention fournit ainsi, pour la première fois, un ensemble nucléotidique qui est entièrement dépourvu de CpG, et qui peut néanmoins être exprimé chez E. coli en y assurant ses fonctions normales.
Dans un mode préféré de mise en oeuvre de la présente invention, la température du lit catalytique est maintenue entre 900 et 1300 C. Plus la température est élevée, plus la formation de CO est favorisée par rapport à celle de C02, ce qui a pour effet d'accroître l'efficacité globale des étapes ultérieures de conversion du gaz de synthèse, telles que la conversion Fischer Tropsch ou la production de méthanol.
Dans un mode préféré de mise en oeuvre de l'invention, en vue de permettre l'auto-allumage de la réaction, les gaz sont préchauffés entre 400 et 650 C avant l'entrée sur le lit catalytique.
Les hydrocarbures permettant la formation de gaz de synthèse sont choisis parmi l'essence, les condensats de gaz de gisement, et les hydrocarbures comprenant de 1 à 3 atomes de carbone, le méthane étant préféré.
Tel que décrit précédemment, le procédé selon l'invention peut être mis en oeuvre dans les unités ATR existantes.
Des exemples vont être décrits ci-après pour illustrer l'invention, sans toutefois en limiter la portée.
Deux figures sont annexées en relation avec l'Exemple 3 : La figure 1 représente une courbe d'oxydation partielle du méthane sur le catalyseur à base d'alumine (Ci) dans les conditions de l'Exemple 3 ; La figure 2 représente une courbe d'oxydation partielle du méthane sur le catalyseur à base de SiC (C2) dans les conditions de l'Exemple 3.
EXEMPLE 1 Le présent exemple vise à montrer l'efficacité des supports catalytiques à base de carbures de silicium de surface spécifique BET inférieure à 100 m2/g et, plus particulièrement, comprise entre 15 et 80 m2jg.
Un échantillon de 10 g de carbure de silicium (SiC) de surface spécifique BET à 40 m2/g est utilisé dans le présent exemple. Il a été préalablement imprégné par une solution de nitrate de nickel permettant le dépôt de 2,6 g de sel sur le SiC pour obtenir une teneur finale en nickel de 5% en poids par rapport au catalyseur final. Le catalyseur imprégné est séché sous air à 100 C, puis calciné à 300 C sous air sec.
Dans un microréacteur, on introduit 2 g de catalyseur à base de SiC, puis on purge l'atmosphère du réacteur sous courant d'air à température ambiante. La pression du réacteur est ensuite montée jusqu'à 5x105 Pa sous un mélange de méthane et d'air de rapport molaire égal à 2,6, tandis que la température du lit catalytique est de 900 C. La vitesse de circulation du mélange gazeux est ajustée pour
un temps de contact de 3 secondes, le mélange en sortie de réacteur étant analysé en ligne par chromatographie en phase gazeuse.
Les résultats de conversion et les rapports molaires Ha/CO sont donnés dans le Tableau Ici-après.
Temps de réaction Conversion HC/CO Rapport molaire H2/CO (h) (% en poids) 1 75, 0 2, 2 2 74, 2 2, 1 3 74, 6 2, 1 4 75, 8 2, 0 24 75, 1 2, 1 48 75, 4 2, 1 72 73, 8 2, 0 96 75, 7 2, 1
Ces résultats sont conformes à ce qui était attendu, soit un rapport molaire H2/CO d'environ 2 et une conversion de plus de 70%.
Lorsqu'on opère avec un temps de contact plus faible, 0,5 seconde, les résultats sont comparables.
Cette identité des résultats confirme l'intérêt du procédé qui permet une mise en oeuvre plus aisée de l'oxydation catalytique partielle, avec un lit catalytique unique, du méthane ou de tout autre condensat.
autres pour différentes puces de circuit intégré issues d'une fabrication donnée.
Généralement, l'identifiant numérique du circuit intégré est fourni à l'extérieur du circuit après avoir été le cas échéant codé ou brouillé pour être transmis vers un système distant. Ce dernier exploite le mot qu'il reçoit, généralement sans avoir à connaître l'identifiant.
Un exemple d'application de l'invention concerne le domaine des cartes à puce utilisées pour des transactions financières à partir d'unités de compte prépayées ou non, que la transmission soit avec ou sans contact avec le lecteur de carte à puce.
Un autre exemple d'application concerne les systèmes de transmission de données utilisant un décodeur personnalisé côté utilisateur. Dans un tel cas, le décodeur peut comprendre un circuit d'authentification exploitant un identifiant issu d'un réseau de paramètres physiques d'un circuit intégré qu'il contient. Par analogie avec les lecteurs de carte à puce utilisés dans les systèmes de paiement, cela revient au même que si l'on combine un lecteur avec sa carte à puce chez l'utilisateur, l'authentification restant faite par un système différent du lecteur.
Un inconvénient du recours à un identifiant d'un circuit intégré issu d'un réseau de paramètres physiques est lié à son caractère individuel et immuable.
Ainsi, dans le cas où l'identifiant ou un mot numérique (quantité d'authentification ou clé de chiffrement) contenant cet identifiant parvient à être piraté par un fraudeur, il n'existe plus d'autres solutions que de changer le circuit intégré. En effet, à partir du moment où l'on suspecte que l'identifiant a été piraté, il est souhaitable dans les applications sécurisées de ne plus utiliser cet identifiant. Ce phénomène est généralement connu sous le nom de révocation d'une clé de chiffrement ou d'un authentifiant, ou plus généralement d'une quantité secrète.
L'absence de solution à la révocation d'une clé ou quantité secrète basée sur l'utilisation d'un réseau de paramètres physiques d'un circuit intégré limite actuellement l'utilisation de ces identifiants qui sont pour le reste très avantageux.
La présente invention vise à pallier les inconvénients connus de l'utilisation d'un identifiant numérique issu d'un réseau de paramètres physiques dans un circuit intégré.
L'invention vise, plus particulièrement, à permettre la révocation d'une quantité ou clé secrète basée sur un identifiant issu d'un réseau de paramètres physiques sans pour autant qu'il soit nécessaire de changer le circuit intégré concerné.
On pourrait penser multiplier le nombre de réseaux de paramètres physiques pour multiplier le nombre d'identifiants numériques possibles en cas de révocation. Une telle solution présente toutefois l'inconvénient d'être encombrante dans le circuit intégré. De plus, le nombre d'identifiants possibles reste très limité.
En outre, on peut rechercher une taille de quantité secrète qui soit supérieure à la taille du mot issu du réseau de paramètres physiques.
Un autre objet de la présente invention est de proposer une solution qui ne supprime pas le caractère individuel de l'identifiant du circuit intégré au moyen d'un réseau de paramètres physiques.
L'invention vise également à proposer une solution qui soit compatible avec la miniaturisation des circuits intégrés.
L'invention vise également à proposer une solution qui soit transparente côté système d'exploitation de la quantité secrète, c'est-à-dire qui ne nécessite pas que celui-ci connaisse les moyens utilisés pour rendre plus sûre la quantité secrète.
Pour atteindre ces objets et d'autres, la présente invention prévoit un procédé de génération d'une quantité
secrète à partir d'un identifiant d'un circuit intégré, consistant à combiner un premier mot numérique issu d'un réseau de paramètres physiques avec un deuxième mot stocké dans un élément de mémoire non volatile.
Pour mettre en oeuvre l'invention, une mémoire non volatile 10 prévue pour enregistrer les programmes à exécuter sous la commande d'un microcontrôleur 12, est divisée en plusieurs parties ou zones 14,16 et 18, chaque partie étant affectée à une certaine- catégorie de programmes.
Par exemple, la partie 14, appelée"BOOT"contient le programme de démarrage après une remise à zéro ; la partie 16, appelée"APPLI", contient le ou les
programmes applicatifs ; la partie 18, appelée "SHADOW", contient le ou les programmes que le développeur souhaite interdire à une lecture autre que celle ayant pour but d'exécuter un code d'instruction.
En plus de la mémoire 10, il peut y avoir d'autres mémoires 20, appelées"AUTRES", qui sont, elles aussi, sous le contrôle du microcontrôleur 12.
Le schéma de la figure 1 montre quatre cas d'adressage des mémoires 10 et 20.
Dans le premier cas A, le compteur de programme (flèche 22) du microcontrôleur 12 pointe une adresse de la partie"SHADOW"18 de manière à lire le contenu à l'adresse pointée pour exécution. Cette partie 18 et les autres parties 14,16 et 20 ne sont pas protégées en lecture.
Dans le deuxième cas B, le compteur de programme pointe une adresse de la partie"APPLI"16. La partie"SHADOW" 18 est seule à être protégée en lecture (zone hachurée).
Dans le troisième cas C, le compteur de programme pointe une adresse de la partie"AUTRES"20. Ici également, seule la partie"SHADOW"18 est protégée en lecture.
Dans le quatrième cas D, le compteur de programme pointe une adresse de la partie"BOOT"14. Seule la partie"SHADOW"18 est protégée en lecture.
La partie"BOOT"14 est la partie sans laquelle le microcontrôleur 12 ne peut démarrer.
La partie"SHADOW"18 contient les programmes qu'un premier utilisateur de la carte écrit pour-mettre en oeuvre les programmes applicatifs.
La partie"APPLI"16 contient les programmes applicatifs qu'un deuxième utilisateur de la carte écrit.
Or, il peut être important que le deuxième utilisateur, ou utilisateur en second, ne puisse pas avoir accès en lecture aux programmes contenus dans la partie"SHADOW" 18 de manière à empêcher un piratage ou une fraude.
Selon l'invention, cette partie "SHADOW" 18 est interdite en lecture sauf si l'adressage effectué par le microcontrôleur 12 dans la partie SHADOW correspond à une exécution d'instruction.
La figure 2 montre le principe de fonctionnement de l'invention.
A la mise en marche, le programme"BOOT"30 met la partie"SHADOW"18 dans l'état de protection en lecture 32.
Ces sources de courant sont de préférence disposées sur un substrat de n n silicium selon une répartition géographique déterminée de type matrice 2n x 2n, avec entrelacement pseudo-aléatoire.
Ladite répartition géographique déterminée, qui se traduit par un dessin ("Layout"en anglais) particulier sur le substrat de silicium, permet de réduire les erreurs dues aux variations des courants fournis par chaque source de courant résultant des imperfections du procédé de réalisation (erreurs dites "erreurs de matching"des sources de courant). A cet effet, on fait en sorte, d'une part d'éloigner au maximum les zones d'implantations respectives des 2i
sources de courant de courant élémentaires de chaque sous-source de courant SCi déterminée pour i compris entre 0 et n-1, et d'autre part d'éloigner au maximum les zones d'implantations respectives de chaque sous-source de courant élémentaire d'une source de courant élémentaire déterminée.
Le schéma de la figure 11 montre un exemple de telle répartition géographique des sources de courant. Sur cette figure, on considère l'exemple d'un convertisseur à quatre bits en entrée (n = 4). Les références du type "i-1. j- 1"désignent la zone d'implantation (ici sensiblement un rectangle) sur le substrat de silicium, de la j-ième sous-source de courant élémentaire de la i- ème source de courant élémentaire, pour i et j compris entre 0 et 15.
L'avantage procuré par une telle répartition géographique réside dans la faible distorsion de non-linéarité (aussi appelée "Integral Non-Linearity Error" ou INL, en anglais), qui se traduit par une réduction des raies parasites ("Spurious", en anglais) présentes dans le spectre du signal analogique en sortie du CNA.
En outre, l'entrelacement (ou brassage) pseudo-aléatoire des sources de courant permet encore de rejeter une partie de l'énergie de ces raies parasites en dehors de la bande passante. Ce but est atteint en modifiant périodiquement le bit de contrôle d'une source de courant par un autre bit de contrôle (ces bits de contrôle étant les données binaires stockées dans le registre précité). Les changements sont faits en suivant d'une loi pseudoaléatoire de longueur L. Certes, la périodicité de ces modifications est à l'origine de raies parasites dans le spectre du signal analogique en sortie du CNA, mais la valeur de L est choisie de manière que ces raies soient situées en dehors de la bande passante.
Le tableau de la figure 12 illustre le principe de cet entrelacement, toujours dans l'exemple d'un convertisseur à quatre bits en entrée (n = 4), et pour une périodicité égale à quatre (L = 4). Sur cette figure, on note CO à C15 les signaux de commande des seize sources de courants élémentaires, et on note InO à In15 les valeurs binaires d'entrée du CNA. La colonne la plus à gauche contient les valeurs InO à In15 affectées aux signaux CO à C15 à l'instant t = to. La deuxième colonne en partant de la gauche contient les valeurs InO à In15 affectées aux signaux CO à C15 à l'instant t = to + Ts, où Ts
désigne la période d'échantillonnage (Ts =1/Fs). La troisième colonne en partant de la gauche contient les valeurs nO à n15 affectées aux signaux CO à C15 à l'instant t = to + 2xTs. Enfin, la quatrième colonne en partant de la gauche contient les valeurs InO à In15 affectées aux signaux CO à C15 à l'instant t = to + 3xTs.
Les graphes des figures 13 et 14 montrent la courbe de la mise en forme du bruit de quantification, obtenue par un logiciel de simulation, respectivement sans et avec entrelacement des sources de courant. Comme on peut le voir, le bruit de quantification est plus fortement rejeté en dehors de la bande passante (à peu près 200 kHz autour de 1,2 MHz) grâce à l'entrelacement. On a mesuré que l'amélioration du SNR dans la bande passante qui résulte de cet entrelacement est de l'ordre de 2,3 dB (décibel).