INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Il peut être prévu, dans le module d'éclairage projecteur 1000, un élément élastique de pression ici non représenté, tel qu'un ressort à lame, entre le conduit de lumière et la première partie plane de la pièce référence. Cet élément élastique de pression peut être placé entre la face interne de la partie haute de la première partie plane de la pièce de référence, et la surface supérieure de la lame transparente la plus courte 1110. Il participe au maintien par compression des lames transparentes contre la première partie plane horizontale de la pièce de référence.
Par ailleurs, comme le montre plus particulièrement la figure 5, le projecteur 1000 comporte une pièce avant de montage 1400 qui comporte deux plaques horizontales 1410, 1420 disposées parallèlement en regard l'une de l'autre et solidarisées entre elles par des montants verticaux. Des pattes de montage 1430 s'étendent à partir des montants verticaux de la pièce de montage avant 1400 et sont fixées sur la pièce de référence 1200, à chacune de ses extrémités. Les faces internes en regard des plaques de base 1410, 1420 de la pièce avant de montage 1400 comportent des rainures formant glissières pour le montage des lentilles de Fresnel 1111a, 1121a, 1122a, 1131a. Les rainures prévues pour le montage des lentilles de Fresnel présentent une certaine orientation par rapport à la direction d'éclairement E, et sont positionnées par rapport à la deuxième partie plane verticale de la pièce de référence, de façon que les lentilles de Fresnel montées dans ces rainures, la partie avant de montage étant fixée à la pièce de référence, coopèrent optiquement avec les facettes de réflexion obliques des lames transparentes montées en appui contre la pièce de référence, pour projeter dans la direction d'éclairement une image correspondant auxdites facettes.
Pour la réalisation d'un faisceau de coupure, il peut être prévu dans le projecteur 1000, des caches disposés sur le trajet de certains faisceaux élémentaires d'au moins certaines facettes de réflexion, entre la face avant des lames transparentes considérées et les éléments dioptriques associés, lesdits caches étant solidaires de la pièce avant de montage fixée sur la pièce de référence dans une position déterminée par rapport à celle-ci.
Grâce à son réseau réticulé, un copolymère selon l'invention peut être utilisé pour une libération prolongée du principe actif. La présente invention a donc également pour objet l'utilisation d'une composition pharmaceutique selon l'invention pour une libération contrôlée du ou des principes actifs qu'elle contient.
De telles compositions peuvent également posséder d'autres caractéristiques qui dépendent éventuellement des caractéristiques des polymères de départ telles que la bioadhésion. Ainsi, une composition pharmaceutique selon l'invention peut également être utilisée en tant que système pharmaceutique bioadhésif. La présente invention a donc
également pour objet l'utilisation d'une composition pharmaceutique selon l'invention en tant que système bioadhésif.
Des compositions telles définies ci-dessus dans lesquelles le polysaccharide est dégradable par la flore du colon, peuvent également être utilisée en tant que système à libération spécifique au niveau du colon par action de la flore microbienne. Le concept de la libération spécifique au niveau du colon par action de la flore microbienne, est basé sur la propriété du colon de posséder une flore microbienne très abondante qui, de plus, a la potentialité de métaboliser des substances faiblement ou non dégradées par la partie haute du tube digestif. De telles compositions sont particulièrement adaptées pour véhiculer des principes actifs destinés au traitement des maladies du colon, ce qui permet d'augmenter leur efficacité et de diminuer leurs effets secondaires. Parmi ces principes actifs figurent les stéroides telles que la dexamethasone et l'hydrocortisone, les anti-inflammatoires non stéroidiens tels que l'acide 5-aminosalicylique, les antinéoplasiques tels que le methotrexate, le tamoxifène, les antispasmodiques et les agents chimiothérapiques. De telles compositions sont particulièrement adaptées également pour véhiculer des principes actifs qui sont absorbés de façon plus efficace au niveau du colon tels que les stérol des ou la xanthine. Leur administration directe au niveau du colon permet d'augmenter leur efficacité. De telles compositions sont particulièrement adaptées également pour véhiculer des principes actifs qui sont dégradés dans les parties hautes du tube digestif. Parmi ces principes actifs, on peut citer les peptides et les protéines d'origine naturelle ou de synthèse ainsi que les fragments pharmacologiquement actifs tels que les vaccins oraux, l'insuline, les peptides contraceptifs, les peptides activateurs du plasminogène, les peptides de croissance et autres peptides participant aux régulations hormonales.
PARTIE EXPÉRIMENTALE Synthèse des copolymères non réticulés Exemple 1 :synthèse d'un copolymère chondroitine sulfate -co- acide polyméthacrylique Dans un erlen bouché, sont dissout à 40 C 250 mg de chondroitine sulfate (CS) dans 50 ml d'une solution de HN03 0,2 M préalablement dégazée. On y ajoute 3,625 ml d'une solution d'ions cérium (de concentration 8.10 mole/litre dans HNO3 0,2 M préalablement dégazée) et 2,5 ml d'acide méthacrylique. La réaction s'effectue à 40 C pendant environ 50 minutes sous agitation. Après refroidissement, le pH est ramené à 7
avec de la soude. Une solution de citrate 1 M est ajoutée. Le milieu final est alors filtré sur une membrane de taille de pore 10 kilo-dalton par diafiltration tangentielle. L'analyse du copolymère purifié peut être effectuée sur la solution ainsi obtenue ou après une étape de lyophilisation.
La masse moléculaire du copolymère est évaluée par chromatographie par perméation de gel en phase aqueuse (milieu NaCl 0,2 N). Les colonnes sont étalonnées avec des standards de dextrane de masse moléculaires comprises entre 40 000 et 400 000.
Les masses sont exprimées en masse moléculaires moyennes en masse (Mw) et masse moléculaire au pic du chromatogramme, représentant la majorité de la population macromoléculaire (Mp).
L'indice de polydispersité (Ip) représentant la dispersion des masses sur l'ensemble du copolymère.
Copolymère 1 : Mw = 170 000 Mp = 78 000 Ip = 5.38 Le nombre des groupements carboxyles présents est déterminé par dosage conductimétrique. La solution de copolymère à doser est préalablement éluée sur une résine échangeuse d'ions de type sulfonique (DOWEX 50Wx8). Cette étape préparative permet d'obtenir les copolymères sous forme acide et de doser distinctement toutes les acidités sulfates et carboxylates d'origine polysaccharidique ainsi que les acidités carboxylates d'origine polycarboxylique non saccharidique. La neutralisation de la solution par la soude 0,1 N est ensuite suivie par conductimétrie. Les résultats sont exprimés en méqNaOH (mg de NaOH/g de copolymères).
Copolymère 1 : - 1,39.10+2 meqNaOH (PMA+CS), - 8,94.10+1 meqNaOH (PMA) ; - 5,08.10+1 meqNaOH (CS).
Le spectre RMN-13C du copolymère (PMA+CS) comprend les pics caractéristiques de la CS et du PMA, à savoir respectivement le massif entre 51 et 105 ppm correspondant aux carbones portés par les glucuroniques et galactosamine, le pic caractéristique du N-acétyl centré à 175 ppm, et les signaux correspondant aux méthyles (19,2 ppm) et aux
carboxyles (186,4 ppm) de l'acide polyméthacrylique. Mais ce spectre comprend également les signaux qui n'appartiennent à aucune des deux entités (119,8 et 181,4 ppm) et que l'on attribue aux liaisons entre la CS et le PMA. Cette analyse met en évidence la polymérisation de l'acide méthacrylique sur la CS.
Il a maintenant été trouvé que l'association de riluzole et de gabapentine ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables permet d'augmenter la survie des motoneurones d'une manière plus importante que le riluzole seul ou la gabapentine seule.
L'effet de l'association a été étudié sur la mort cellulaire de motoneurones purifiés de rat induite par des sérums de patients atteints de sclérose latérale amyotrophique.
Des motoneurones purifiés préparés à partir de moelle épinière d'embryons de rat de 14 jours de gestation sont cultivés en présence de concentrations optimales de BrainDerived Neurotrophic Factor (BDNF) recombinant, un des principaux facteurs neurotrophique de survie des motoneurones. 22 heures après, le riluzole et la gabapentine sont ajoutés aux motoneurones soit seuls soit en association. Après encore 2 heures, des dilutions de sérums dialysés de patients atteints de SLA sont ajoutés. Le jour suivant le nombre de motoneurones survivants est évalué par comptage direct au microscope à contraste de phase.
Méthodes Composés La solution mère de riluzole utilisée dans ce test est préparée de la manière suivante : 5 mg de riluzole sont ajoutés à 0,105 ml d'une solution d'acide chlorhydrique (1M). La solution est agitée puis on ajoute 2,1 ml d'eau bidistillée.
La solution mère de gabapentine est préparée directement par dissolution de 17,1 mg de gabapentine dans 1 ml d'eau bidistillée.
Les solutions ainsi obtenues peuvent être conservées à 4 C pendant 24 heures maximum.
Toutes les dilutions sont préparées extemporanément dans le milieu de culture complet, immédiatement avant le traitement des cellules.
Purification des motoneurones Des embryons de rats de 14 jours de gestation (Charles River, France) sont récupérés après sacrification de la mère, sous anesthésie au COz, par élongation cervicale. Ces
embryons sont placés en tampon phosphate ( phosphate-buffered saline , PBS) exempt de calcium et de magnésium (Life Technologies).
Une population homogène de motoneurones purifiés est obtenue en utilisant les méthodes décrites par HENDERSON et coll [Henderson, C. E., Bloch-Gallego, E., and Camu, W. (1995). Purified embryonic motoneurons. In Nerve cell culture : a practical approach (J. Cohen and G. Wilkin, Eds. ), pp. 69-81. Oxford University Press, London. ] et ARCE et coll. [Arce, V., Garces, A., de Bovis, B., Filippi, P., Henderson, C., Pettmann, B., and deLapeyrière, O. (1999). Cardiotrophin-1 requires LIFRbeta to promote survival of mouse motoneurons purified by a novel technique. J Neurosci Res 55,119-126]. Sauf mention contraire, la composition des milieux utilisés est identique à celle indiqué dans ces références. Des moelles épinières d'embryons de rat de 14 jours de gestation sont disséqués dans du PBS stérile et les moitiés ventrales de chaque moelle contenant les motoneurones sont sous-disséquées. Elles sont ensuite coupées en petits morceaux à l'aide d'un scalpel et traitées avec de la trypsine (0,25%, poids/volume) dans un milieu F10 exempt de calcium et de magnésium (Life Technologies). Après 15 minutes, la trypsine est remplacée par un milieu de culture complet L15 sans bicarbonate (commercialisé par Life Technologies, Inc. ) et les neurones spinaux sont dissociés par une série de triturations de plus en plus fortes. La trypsine et les débris cellulaires sont séparés par centrifugation à travers une couche d'albumine sérique de boeuf ( bovine sérum albumin , BSA) à 4%. La première étape de purification s'effectue sur un gradient de 6,8% de métrizamide. La fraction de faible densité contenant les motoneurones est centrifugée sur une couche de BSA et ensuite repurifiée par immuno-sélection à l'aide d'une colonne magnétique (Miltenyi Biotech Inc). A cette fin, les cellules sont remises en suspension dans 50 l de PBS + 0,5 % de BSA mélangé à 50 l de l'anticorps 192 qui reconnaît le récepteur neurotrophine de faible affinité p75NTR spécifiquement exprimé par les motoneurones à ce stade de développement. Après incubation à 4 C pendant 10 minutes, les motoneurones sont centrifugés sur BSA. Les cellules sont mises à nouveau en suspension dans 80 l de PBS + 0,5 % de BSA et 20 l de perles magnétiques
greffées en surface avec des anticorps de lapin anti-souris, puis incubées à 4 C pendant 15 minutes. Les cellules sont ensuite recentrifugées sur BSA et passées dans une colonne magnétique. Les cellules éluées sont de gros neurones ; à 90% de ceux-ci pouvant être montrés par immunomarquage comme exprimant la protéine Islet-1, un marqueur spécifique des motoneurones.
Culture des motoneurones Les motoneurones purifiés sont ensemencés à une densité de 1000 motoneurones par puits dans des puits de 16 mm préalablement enduits de polyornithine-laminine. Le milieu de culture est le milieu Neurobasal complémenté avec le complément B27 (Life Technologies) et 2 % de sérum de cheval mais sans antibiotique, le volume total étant de 0,5 ml. Les motoneurones sont ensemencés en présence de facteur neurotrophique BDNF (lng/ml; Sigma) et laissés en sédimentation pendant 22 heures pendant lesquelles elles s'attachent au support et développement des neurites. Le riluzole (3.10 5M) et la gabapentine (10-5M) sont ajoutés soit séparément soit en association dans des séries de 4 puits. Deux heures plus tard, un sérum dialysé de patient atteints de SLA est ajouté aux puits. Les motoneurones sont ensuite cultivés pendant 1 jour à 37,2 C avant évaluation de leur survie.
Quantification de la survie des motoneurones Les plaques de culture sont retirées de l'incubateur. Les puits contenant les motoneurones sont remplis complètement avec du milieu L15 (Life Technologies) tiède. Leur couvercle est ensuite remis en place de manière à former un ménisque horizontal permettant l'observation de la surface entière du milieu de culture sous optiques à contraste de phase. Pour chaque puits, le nombre total de motoneurones est compté le long de 2 diamètres orthogonaux (x et y) du champ du microscope.
Compte-tenu du fait que la présence de sérum humain change la morphologie des motoneurones mêmes survivants, toutes les cellules portant des neurites et attachées au support de culture sont considérées comme étant en vie.
Analyse des données Les valeurs de survie (c'est à dire le nombre de motoneurones par diamètre de puit) sont calculées comme la moyenne SEM de 8 mesures pour 4 puits indépendants dans chaque expérience.
Les analyses statistiques sont effectuées en utilisant le test de Student (t-test).
bis-(2-hydroxyé~hyl)-amide de l'acide indirubine-5- sulfonique On opère comme décrit pour l'indirubine. En partant de 400 mg de bis-(2-hydroxyéthyl) amide de l'acide isatine-5sulfonique bis-(2-hydroxyéthyl) amide (1,27 mmole) et 167 mg d'indoxyl acétate (0,953 mmole),on obtient 355 mg (86,7 %) de l'amide mentionné ci-dessus sous forme de poudre violette, Rf - 0,51 (méthanol/ acétate d'éthyle 1/20 v/v): 1H-RMN (DMSO-d6) 5 3, 20 (t, J = 6, 5, 2 -N-CHz) , 3, 56 (m, 2 - CH20-), 4,84 (t, J = 5,5, 2 -OH), 7,09-7,05 (m, C7H et C5'H), 7,72-7,68 (m, C6H et C4'), 7,45 (d, J= 8,0, C7'H), 7,61 (m, C6'), 9,26 (s, C4H), 11,18 (s) et 11,32 (s) (N1H et Nl'H); 13C-RMN (DMSO-d6) 8 51,32 (t, J= 135,0, 2-NH- CH2), 60,01 (t, J= 141, 0, 2 -CH-OH) , 104, 31 (s, C3) , 109,48 (d, J = 165,3, C7) , 113,62 (d, J = 168,5, C7'), 118,91 (s, C3a'), 121,69 (s, C3a), 121,79 (d, J = 164,0, C5'), 122,88 (d, J = 162,4, C6), 124,64 (d, J = 162,7, C4'), 127, 98 (d, J = 165, 2, C4), 131, 51 (s, C5 ) , 137, 32 (d, J = 160,1 Hz,C6'), 139,61 (s, C7a'), 143,59 (s, C7a), 152,48 (s, C2'), 170,81 (s, C2), 188,87 (s, C3'); MS m/e 429 (M+, 9), 369 (22), 365 (22), 355 (63), 261 (31), 43 (100). Anal. (C20H19N3O6S) C, H, N. méthylamide de l'acide indirubine-5-sulfonique On opère comme décrit ci-dessus pour l'indirubine. En partant de 380 mg du méthylamide de l'acide isatine-5sulfonique (1,58 mmole) et de 227 mg d'indoxylacétate (1, 30 mmole), on obtient 370 mg (80,1 %) de l'amide ci-dessus sous forme d'une poudre violette, Rf = 0,72 (acétate d' éthyle) : 'H-RMN (DMSO-d6) 5 2,46 (d, J= 5, 0, CH3) , 7,05- 7,09 (m, C7H et C5'H), 7,32 (q, NH-CH3) , 7,45 (d, J= 8,3, C7'H), 7,61 (m, C6'H), 7,67-7,71 (m, C6H et C4'), 9,27 (s, C4H), 11,18 (s) et 11,30 (s) (N1H et Nl'H); 13C-RMN (DMSOd6) # 28,65 (q, J = 13 8,7, CH3) , 104,48 (s, C3) , 109,41 (d, J= 165,7, C7), 113,58 (d, J= 165,7, C7'), 118,90
(s, C3a'), 121,42 (s, C3a), 121,73 (d, J = 171,0, C5'), 123, 13 (d, J = 164, 5, C6) , 124, 50 (d, J = 159, 8, C4' ) , 127,61 (d, J = 165, 7, C4),131,93 (s, C5) , 137, 28 (d, J= 160, 6, C6'), 139, 43 (s, C7a'), 143, 36 (s, C7a) , 152, 45 (s, C2'), 170,85 (s, C2), 188,68 (s, C3'); MS m/e 255 (M+, 15), 263 (18), 262 (100) , 261 (7). Anal. ( C 17 H uN J 0 4 S ) C, H, N.
5-iodoisatine On opère comme décrit par Roedig, Mueller E. (Hrsg.), Methoden der organishen Chemie (Houbeyn-Weyl), Stuttgart, Georg Thieme Verlag 1960,5/4,586, et Borsche et al Chem.Ber.1924, 1770-1775, Rf - 0,60 (acétone/éther de pétrole 40-70 1/1 v/v) ; PF 262 C: 'H-RMN (DMSO-d6) 8 6,75 (d, J = 8, 3, C7H), 7, 75 (s, C4H) , 7, 78 (d, J = 8,2, C6H) , Il,09 (b, N1H); 13C-RMN (DMSO-d6) # 85,39 (s, C5) , 114,59 (d, J= 167, 1, C7),119,89 (d, J= 7,2, C3a), 132,38 (d, J--170, 3 , C4), 145, 76 (d, J = 167, 1, C6) , 145, 76 (d, J = 167,1, C6), 149,95 (b, C7a), 158,66 (s, C2), 183,06 (s, C3) ; MS m/e 262 (M+, 100) , 234 (43). diméthylamide de l'acide isatine-5-sulfonique On opère comme décrit par Haller, brevet DE 715760,1938, Rf - 0,18 (acétate d'éthyle/hexane 1 /1 v/v): 1H-RMN (DMSO-d6) # 2, 62 (s, 2 CH3) , 7,12 (d, J 8,2, C7H) , 7, 71 (s, C4H) , 7, 94 (d, J = 8,2, C6H) , Il,47.(s, N1H) ; 13C-RMN (DMSO-de) # 182,89 (s, C3), 159,37 (s, C2), 153,60 (s, C7a), 136,98 (d, J = 167,32, C6), 128,62 (s, C5) , 123,27 (d, J = 169,2, C4), 118,05 (s, C3a), 112,68 (d, J= 169,2, C7), 37,48 (q, J= 140,1, 2 CH3) . Anal. (C10H10N2O4S) C, H, N. bis-(2-hydroxyéthyl)-amide de l' acide isatine-5-sulfonique On opère comme décrit par Haller ci-dessus en partant de 526 mg de bis-(2-hydroxyéhyl)-amine (5,00 mmole) et de 1,00 g de 3,3-dichloro-2-oxo-2.3-dihydroindol-5-sulfonyle ( voir
Haller ci-dessus) (3,34 mmole). Le précipité qui se forme est huileux et boueux. On décante le surnageant, puis on mélange le précipité et le surnageant avec 5 ml d'eau. On porte à reflux 2 h. En refroidissant, on obtient un précipité de cristaux rouge. Rendement : mg (45,3 %), Rf 0,51 (méthanol/acétate d'éthyle 1/20 v/v): 1H-RMN (DMSOd6) # 2,78 (t, J = 6,2, 2 -N-CH-) , 3,38 (t, J = 6,2, 2-CH2- 0-),7,08 (d, J = 8,2, C7), 7,78 (s, C4), 7,96 (d, J= 8,2, C6), 11,43 (s, N1H) ; 13C-RMN (DMSO-d6) # 50, 73 (t, J = 138,8,2 -N-CH2-), 59,64 (t, J = 141,7, 2 -CH20H-),112,57 (d, J = 168, 6, C7) , 117, 91 (s, C3a) , 122, 78 (d, J= 169, 3, C4), 133,29 (s, C5), 136,44 (d, J= 166,4, C6) , 153,28 (s, C7a), 159,37 (s, C2),182,95 (s, C3) . Anal. ( C12H14N2O6S) C, H, N.
6-lodoisatine On opère comme décrit par Marvel et al , Organic Syntheses, Coll. Vol.l, 2nd ed.; Gilman,H Ed.; Wiley& Sons : York, 1941,327-330, en utilisant 1,50 g de 2-hydroxyimino-N-(3iodophényl)- acétamide (5,17 mmole) et 3,9 ml d'acide sulfurique concentré. Après filtration, le produit brut, formé d'un mélange de 4-et 6-iodoisatine et de sousproduits, est purifié selon Sadler, J. Org.Chem. 1956,21, 169-170 et Holt et al, Proc.R.Soc. London B 1958,148, 481- 494. On obtient 216 mg (15,0 %) de cristaux orange ; 255- 258 C; Rf = 0,76 (acétate d'éthyle/hexane 1/1 v/v): 1H-RMN (DMSO-d6) # 7,25 (m, C4H et C7H), 7,45 (d, J= 7,6, C5H), 11,07 (s, N1H); 13C-RMN (DMSO-d6) 5 107,28 (d, J= 10,4, C6) , 117, 41 (s, C3a), 120, 83 (d, J = 170, 3, C7 ) , 125, 84 (d, J= 173,7, C4 ) , 131, 82 (d, J = 167,9, C5) , 151, 30 (s, C7a), 159, 35 (s, C2),183,79 (s, C3) . Anal. (C8H4INO2) C, H, N. isoindigo On opère comme décrit par Wahl et al,Compte rendus hebdomadaires des séances de l'académie des sciences, 1909, 716-19 et 4(5), 1039-43:Rf = 0,67 (acétate d'éthyle/hexane
1/1 v/v) : 'H-RMN (DMSO-d6) 8 6, 85 (d, J= 7, 7, C7H et C7'H), 6, 97 (pt, C5'H et C5'H), 7, 34 (pt, C6H et C6'H), 9, 07 (d, J= 8,0, C4H et C4'H), 10,90 (s, N1H et Nl'H); 13C-RMN (DMSO-d6) 109,42 (d, J = 162,5, C7 et C7'), 121,04 (d, J= 161,2, C5 et C5'), 121,58 (s, C3a et C3a'), 129,21 (d, J= 166,5, C6 et C6'), 132, 52 (d, J= 159, 9, C4 et C4' ) , 133,24 (s, C3 et C3'), 143,98 (s, C7a et C7a'), 168,88 (s, C2 et C2'); MS m/e 262 (M+, 100), 234 (85), 205 (18). Anal.
(C16H12N2O2) C, H, N.
2,2'-bisindole On opère comme décrit parBergman et al, Tetrahedron 1995, 51 (19), 563-42,Rf = 0,82 (UV, acétate d'éthyle/hexane 1/1) : GC/MS Rt= 14,1 min, m/e 232 (M+, 100) ; #max, (éthanol) 221 (4,78), 271 (4,00), 333 (4,80), 351 (4, 79) . Anal.
(C16H12N2) C, H, N.
3,3'-diphényl-2.2'-bisindole On opère comme décrit par Fürstner et al, An gewandte Chemie, 1995,107 (6), 725-8. La recristallisation à partir d'acétate d'éthyle/ éther de pétrole (40-70) 115 v/v conduit à des cristaux incolores (55.8 %), Rf - 0,50 (UV, acétate d'éthyle/ éther de petrole (40-70) 115 v/v): GC/MS Rt= 19, 0 min, m/e 384 (M+, 100) . isatin-5-sulfonamide On refroidit au préalable une solution aqueuse à 25 % d'ammoniaque (5,0 ml) à 0-5 C avant d'ajouter un échantillon de 0,50 g de chlorure de 3,3-dichloro-2-oxo- 2,3-dihydroindol-5-sulfonyle ( voir Haller ci-dessus), (1,7 mmole), par portions, en agitant et en refroidissant à nouveau. Après 2h, on ajoute une petite quantité de glace pilée et 20 % d'acide chlorhydrique jusqu'à réaction acide du mélange. Le solvant est éliminé sous vide et le résidu orange est séché sur KOH. La poudre jaune obtenue est extraite 3 fois avec 35 ml d'acétone. L' acétone est éliminée sous vide, ce qui conduit à 140 mg (36,4 %) de poudre orange, Rf= 0,73 (acétate d'éthyle): 1H-RMN (DMSO-
d@) 8 7, 05 (d, J = 8,2, C7) , 7. 41 (s, NH), 7, 85 (s, C4), 7, 98 (d, J = 8,2, C6) , Il,39 (s, N1H) ; 13C-RMN (DMSO-dJ # 112,12 (d, J= 168,3, C7), 117,73 (s, C3a), 121,67 (d, J= 166,8, C4) , 134, 97 (d, J= 165,4, C6) , 138,36 (s, C5) , 152,56 (s, C7a), 159,50 (s, C2), 184,22 (s, C3); MS m/e 226 (M+, 28) , 198 (100) .
(2-hydroxyéthyl)-amide de l'acide isatine-5-sulfonique On opère selon Haller ci-dessus, en partant de 295 mg de 2aminoéthanol (4,83 mmole, 0,300 ml), 5,1 ml d'éthanol et 0,900 mg de chlorure 3.3-dichloro-2-oxo-2,3-dihydroindol-5- sulfonyl (Haller) (3,01 mmole). Après 30 min d'agitation, on ajoute à nouveau 0,100 ml de 2-aminoéthanol, et 15 min plus tard 20 g de glace pilée et 0,900 ml d'acide chlorhydrique à 20 %. En réchauffant à la température ambiante, on obtient une masse huileuse qui se dépose au fond du récipient. On laisse décanter le surnageant et le solvant restant est éliminé sous vide. L'huile jaune obtenue est portée à reflux dans l'eau.pendant 2 h. En refroidissant, la solution orange obtenue précipite 374 mg (45,8 %) de cristaux jaune, Rf = 0,52 (méthanol /acétate d'éthyle 1/20 v/v): 1H-RMN (DMSO-d6) # 2,73- 2,82 (m,N-CH2-), 3,38 (t, J = 6.1 1 Hz, -CH-0-) 7, 07 (d, J = 7, 6, C7), 7,66 (t, J = 5,7 Hz,-SO2-NH-) , 7,81 (s, C4), 7,96 (d, J= 8,4, C6) , 11,42 (s, NI H) . méthylamide de l'acide isatine-5-sulfonique On opère selon Haller ci-dessus, en partant de 0,572 ml d'une solution aqueuse à 40 % de méthylamine (6,62 mmole), 5,6 ml d'éthanol et 1,00 g de chlorure de 3,3-dichloro-2oxo-2,3-dihydroindol-5-sulfonyle (Haller) (3,34 mmole). Le précipité qui se forme est éliminé par filtration et on porte à reflux dans l'eau pendant 2 h. Par refroidissement, la solution précipite (cristaux jaune). Rendement : 420 mg (52,3 %), Rf = 0,29 (acétate d'éthyle/hexane 2/1 v/v): 1HRMN (DMSO-d6) # 2,41 (d, J= 5,0, CH3), 7,08 (d, J= 8,3,
C7), 7,48 (q, J= 5,0, NH2) , 7,77 (s, C4) , 7,95 (d, J= 8, 3, C6) , Il,42 (s, N1H) ; 13C-RMN (DMSO-d,) 5 28,52 (q, J= 139,2, CH3), 112,40 (d, J= 168,9, C7), 118,04 (s, C3a), 122,48 (d, J= 169,2, C4), 133,13 (s, C5) , 136,15 (d, J= 166,0, C6) , 153,44 (s, C7a), 159,44 (s, C2), 183,04 (s, C3).
2-hydroxyimino-N-(3-iodophényl)-acétamide On opère comme décrit par Marvel et Hiers ci-dessus et on purifie le produit obtenu en procédant selon Holt and Sadler ci-dessus ; PF 152-154 C; Rf = 0,29 (acétate d' éthyle /hexane 1/1 v/v) : 1H-RMN (DMSO-ds) 8 7,12 (pt, J = 8,1, C5'H), 7,44 (pt, J = 7,9, C4'H ou C6'H), 7,63 (s, C2H), 7,65 (pt, J= 8,2, C4'H ou C6'H), 8,16 (Pt, J = 1,7, C2'H), 10,27 (s, NH) , 12,27 (s, C2NOH) ; 13C-RMN (DMSO-d6) # 94,69 (d, J = 11,7, C3'), 119,32 (d, J = 165,7, C6'), 128,22 (d, J = 168,0, C2' ) , 130,95 (d, J = 162,8, C5) , 132, 57 (d, J = 168,1, C4'), 140, 06 (s, CI'), 144, 05 (d, J = 171,5, C2), 160,67 (s, Cl).