INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
et à la formation de produits dits de glycoxydation comme la carboxyméthyllysine (CML), soit à la formation de dicarbonyles comme la 3-désoxyglucosone. Ces dicarbonyles, très réactifs, vont à leur tour réagir avec des amines de protéines, et propager ainsi la réaction de Maillard, en formant des ponts intra et intermoléculaires dans certaines protéines à durée de vie longue (Thornalley, 1999).
D'autres voies de synthèse des AGE, outre le glucose ont été proposées récemment.
Le méthylglyoxal, formé par la fragmentation des trioses phosphates et l'oxydation de l'acétone dans le foie (grâce à des monooxygénases), est un autre dicarbonyle dont la concentration sanguine est augmentée chez les diabétiques (Mc Lellan et al., 1994) et qui, in vitro, dans des conditions physiologiques de pH et de température, est capable de modifier de manière irréversible, notamment les résidus arginine de protéines (Lo et al., 1994). De plus, les AGE de protéines formés après réaction avec le méthylglyoxal sont décrits comme des produits majeurs observés lors du diabète (Degenhardt et al, 1998). La formation d'AGE de protéines intracellulaires après réaction avec le méthylglyoxal, plus réactif que le glucose dans la réaction de Maillard, semble être une voie de formation majoritaire dans les cellules (Nishikawa et al., 2000, Shinohara et al, 1998).
Dans les microvaisseaux rétiniens, une accumulation de produits d'Amadori, précurseurs d'AGE (Schalkwijk et al, 1999), ainsi qu'une accumulation d'AGE a été mise en évidence grâce à des anticorps anti-AGE (ou anti-Amadori), au niveau de la membrane basale des péricytes et des cellules endothéliales (Stitt et al., 1997). Plusieurs études réalisées in vitro suggèrent que les AGE pourraient être impliqués dans le dysfonctionnement vasculaire rétinien. Les AGE modifient en effet la
prolifération des deux types cellulaires, ils inhibent en particulier la croissance des péricytes (Chibber et al., 1997 ; Ruggiero-Lopez et al., 1997, Yamagishi et al, 1995).
Les AGE extracellulaires sont capables de se lier à des récepteurs membranaires spécifiques et d'induire des réponses cellulaires variées. Des travaux ont montré qu'il y a colocalisation des AGE et des récepteurs aux AGE dans les microvaisseaux rétiniens de rats diabétiques (Stitt et al, 1997, Soulis et al, 1997). Ces récepteurs ont été identifiés sur plusieurs types cellulaires, dont les péricytes (Chibber et al, 1997, Yamagishi et al, 1995, Stitt et al, 1997, Thornalley, 1998) et différents types de récepteurs ont été isolés : p60, p90 (Yang et al., 1991), RAGE (Receptor for AGE), qui est un récepteur de la superfamille des immunoglobulines (Neeper et al, 1992) complexé à la lactoferrine (Schmidt et al, 1992) et la galectine 3 (Vlassara et al., 1995). RAGE, le récepteur le mieux caractérisé et qui est présent sur les péricytes (Yamagishi et al, 1995, Brett et al, 1993), après avoir fixé un AGE, induit un stress oxydant intracellulaire (Yan et al., 1994) et l'activation du facteur de transcription NF-KB (Yan et al., 1994) ainsi que de l'activation de p21 ras et de la MAP (Mitogen Activated Proteinkinase (Lander et al., 1997) dans les cellules endothéliales de veine de cordon ombilical. L'activation du facteur de transcription NF-KB dans ces cellules peut être inhibée par divers antioxydants comme l'acide lipoïque (Bierhaus et al., 1997), les enzymes antioxydantes (Yan et al., 1994).
Selon d'autres caractéristiques avantageuses et non limritatives du projecteur selon l'invention -6- - la glace de protection du projecteur est munie d'un dispositif d'adaptation tel que décrit plus haut
- la glace de protection est non déviatrice ou faiblement déviatrice.
remnient de la description qui va maintenant être faite d'un exemple de réalisation donné à titre
non limitatif en référence aux dessins annexés sur lesquels: - la Figure 1 représente en vue schématique un projecteur, ainsi que le faisceau de croisement émis par un tel projecteur - la Figure 2 représente en vue schématique le projecteur de la Figure I équipé du I o dispositif selon la présente invention, ainsi que le faisceau résultant - la Figure 3 représente une vue de face de la glace de protection du projecteur de la Figure I dans un premier mode de réalisation - la Figure 4 représente une vue en perspective un dispositif d'adaptation selon un premier mode de réalisation de la présente invention - les Figures 5A, 5B et 5C représentent la trace d'un faisceau lumineux sur un écran disposé à distance et perpendiculairement à l'axe d'un projecteur respectivement avant adaptation du faisceau lumineux, et avec adaptation du faisceau lumineux selon un premier et un deuxième mode de réalisation de la présente invention;
- la Figure 6 représente une vue en perspective d'une variante de réalisation du dis-
2() positif d'adaptation de la Figure 4
- les Figure 7A, 7B et 7C représentent des vues en coupe de profils de stries utilisa-
bles dans le dispositif d'adaptation selon la présente invention - la Figure 8 représente une vue en perspective d'un dispositif d'adaptation selon un deuxième mode de réalisation de la présente invention - la Figure 9 représente une vue en perspective d'un dispositif d'adaptation selon une variante du deuxième mode de réalisation de la présente invention - la Figure 10 représente une vue par l'arrière d'un miroir réflecteur d'un projecteur clans une deuxième application de la présente invention - la Figure 11 représente schématiquement la projection sur un écran du faisceau lumineux qui est produit par le réflecteur de la Figure 10 en l'absence de glace de protection et de dispositif d'adaptation -7 - - les Figures 12A et 12B représentent une vue de face des glaces des projecteurs
droit et gauche respectivement d'un véhicule automobile dans la deuxième appli-
cation, munies chacune d'un dispositif d'adaptation selon la présente invention
- les Figures 13A et 13B représentent une vue en plan à échelle agrandie des dispo-
sitifs d'adaptation destinés à équiper les glaces des Figures 12A et 12B respective- ment
- les Figures 14A et 14B représentent une vue en plan des gabarits de pose des dis-
positifs d'adaptation sur les glaces des Figures 12A et 12B respectivement - la Figure 15 représente une vue en perspective d'un dispositif d'adaptation selon un troisième mode de réalisation de la présente invention - la Figure 16 représente une vue en plan du dispositif d'adaptation de la Figure 15
- la Figure 17 représente une vue en coupe verticale d'un miroir réflecteur d'un pro-
Des protéines ou d'autres molécules de toute nature capables de se fixer sur la protéine ESM-1, ou un fragment polypeptidique de cette protéine, peuvent être sélectionnées en utilisant des colonnes d'affinité sur lesquelles ont été immobilisées la protéine ESM-1 ou un fragment de cette dernière, par exemple en utilisant des techniques classiques, incluant un couplage chimique de la protéine ESM-1 ou d'un fragment de cette dernière à la matrice d'une colonne telle que de l'agarose, ou de l'AffiGelo.
Une solution contenant le composé candidat à tester est mis en contact avec le support chromatographique sur lequel est immobilisée la protéine ESM-1 ou un fragment peptidique de celle-ci. Les composés retenus sur la colonne d'affinité sont sélectionnés positivement.
D. COMPOSES CANDIDATS SELECTIONNES PAR DES TECHNIQUES DE BIOCAPTEURS OPTIQUES Un composé candidat antagoniste de la protéine ESM-1 peut également être sélectionné en utilisant un biocapteur optique tel que décrit par EDWARDS et LEATHERBARROW (1997). Cette technique permet la détection d'interactions entre des molécules en temps réel sans nécessiter l'utilisation de molécules marquées. Cette technique est basée sur la résonance de surface du plasmon (SPR pour Surface Plasmon Resonance ). Brièvement, le composé candidat à tester est fixé sur une surface, telle qu'une matrice de carboxyméthyldextran. Un rayon lumineux est dirigé sur l'extrémité de la surface qui ne contient pas l'échantillon à tester et est réfléchi par cette surface. Le phénomène SPR provoque une réduction d'intensité de la lumière réfléchie avec une association spécifique entre l'angle de la lumière réfléchie et la longueur d'onde du rayon lumineux. La fixation du composé candidat provoque un changement dans l'indice de réfraction de la surface, le changement d'indice de réfraction étant détecté comme une modification du signal SPR.
Un tel procédé de détection par biocapteur optique peut permettre également de sélectionner les composés candidats qui entrent en compétition avec un autre ligand pour la fixation sur la protéine ESM-1 ou un fragment peptidique de ce dernier.
Par exemple, un composé candidat antagoniste de la protéine ESM-1 englobe les composés capables d'inhiber la fixation d'un anticorps anti-ESM-1 sur la protéine ESM-1, d'inhiber la fixation du facteur HGF-SF ou encore des facteurs FGF-2 et FGF-7 sur la protéine ESM-1 ou un fragment peptidique de cette dernière.
Ainsi, selon encore un autre aspect, l'invention a trait à un procédé de sélection d'un composé antagoniste de la protéine ESM-1 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
a) mettre en contact la protéine ESM-1 ou un fragment peptidique de cette dernière en présence de : (i) un composé antagoniste de la protéine ESM-1 se fixant sur la protéine ESM-1 ; et (ii) un composé candidat à tester ; b) dans une étape séparée de l'étape a), mais éventuellement simultanée à cette dernière, mettre en contact la protéine ESM-1 ou un fragment peptidique de cette dernière avec un composé antagoniste de la protéine ESM-1 se fixant sur la protéine ESM-1 ; c) détecter la quantité respective du composé antagoniste de la protéine ESM-1 fixée à l'issue de chacune des étapes a) et b) ; et d) sélectionner le composé candidat qui entre en compétition avec le composé antagoniste pour la fixation sur la protéine ESM-1.
De préférence, un composé antagoniste de ESM-1 pour la mise en oeuvre du procédé de sélection ci-dessus est un anticorps anti-ESM-1 ou encore un composé antagoniste peptidique tel que défini ci-avant dans la présente description.
Dans un premier mode de réalisation particulier d'un procédé pour sélectionner un composé antagoniste de ESM-1 à partir d'un composé candidat, ledit procédé comprend les étapes suivantes : 1) sélectionner, parmi les composés candidats, les composés qui se fixent sur la protéine ESM-1 ou sur un fragment peptidique de cette protéine ; 2) administrer un composé sélectionné à l'étape 1) à un animal et déterminer la capacité de ce composé à inhiber, chez cet animal, le développement de tumeurs induites par la protéine ESM-1 ; 3) sélectionner les composés inhibiteurs du développement des tumeurs déterminéas à l'étape 2) comme des composés antagonistes de la protéine ESM-1.
L'étape 1) consiste préférentiellement en la mise en oeuvre d'un procédé de sélection d'un composé candidat se fixant sur la protéine ESM- 1 ou sur un fragment de celle-ci, choisi parmi les procédés détaillés dans la présente description.
L'étape 2) consiste préférentiellement en la mise en oeuvre d'un procédé de sélection d'un composé candidat in vivo tel que détaillé dans la description.
Composition pharmaceutique de l'invention.
Un autre objet de l'invention consiste en une composition pharmaceutique pour le traitement et/ou la prévention d'un cancer comprenant un composé antagoniste de la protéine ESM-1.
Composition pharmaceutique comprenant un composé antagoniste du type anticorps ou du type peptide selon l'invention.
Selon un premier aspect, une composition pharmaceutique selon l'invention comprend une quantité thérapeutiquement efficace d'un anticorps anti-ESM-1 ou d'un composé antagoniste peptidique dérivé de ESM-1, en association avec un ou plusieurs véhicules pharmaceutiquement compatibles. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention incluent celles adaptées pour une administration topique, orale, rectale, nasale ou parentérale (y compris intramusculaire, souscutanée et intraveineuse) ou encore sous une forme adaptée pour une administration par inhalation ou insufflation. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être présentées sous forme d'unités de dosage et peuvent être préparées par toute méthode bien connue de l'homme du métier du domaine de la galénique pharmaceutique.
Toutes les méthodes comprennent une étape consistant à associer le composé agoniste constituant le principe actif de la composition avec un véhicule liquide ou un véhicule solide finement divisé et, si nécessaire, mettre en forme le produit, par exemple sous forme de comprimés ou de gélules.
De plus, la tenue mécanique est réalisée en deux ou trois points seulement correspondant aux trous et pourrait être améliorée.
Enfin, la réalisation des trous nécessite de la place dans le circuit entre les pistes, au détriment de la compacité.
La présente invention vise à améliorer encore cet agencement pour disposer d'un connecteur dont le dispositif de maintien des zones de sertissage est total avec des efforts répartis et linéaires. En outre, le dispositif présent, dont une description détaillée va suivre, est particulièrement avantageux en ce sens qu'il évite toute manipulation du circuit souple pour y faire des trous puisqu'il est au contraire monté tel quel.
La fabrication du connecteur lui-même est facilitée et la pose des circuits souples est également grandement simplifiée.
Selon la présente invention, le dispositif de maintien des zones de sertissage d'un circuit souple dans un connecteur électrique comprenant un corps muni d'une part de logements prévus pour recevoir des contacts avec des picots à sertir et d'autre part d'un volet mobile en rotation par rapport à ce corps autour d'un axe, se caractérise en ce qu'il comprend des moyens de bridage du circuit souple dans le corps comportant un couple languette/rainure en vis à vis, disposé parallèlement à l'axe de rotation du volet.
Selon un mode préférentiel de réalisation, la languette présente une section trapézoïdale en sorte de constituer avec la rainure une chicane en U ouvert.
La solution retenue consiste à disposer la languette sur le volet et à ménager la rainure dans le corps.
L'invention couvre aussi le connecteur électrique équipé de ce dispositif de maintien des zones de sertissage d'un circuit souple et il comprend de plus des moyens de verrouillage du volet lorsque la languette coopère avec la rainure, après que le circuit souple a été mis en place.
Selon une autre caractéristique, le volet est venu de moulage avec le corps et peut prendre trois positions principales : - une position ouverte de sortie de moulage avec une angulation d'environ 75 , - une position de livraison permettant l'insertion des contacts et l'insertion du circuit souple avec une angulation comprise entre 20 et 5 , et - une position de fermeture simultanément au sertissage du circuit souple avec une angulation nulle.
Afin d'illustrer cet agencement, un mode de réalisation préférentiel mais non limitatif est maintenant décrit en détail et en regard des dessins annexés qui montrent sur les différentes figures : - figure 1, une vue en perspective d'un module porte-contacts mâles en position de livraison avec son volet ouvert,
- figure 2, une vue en perspective d'un module porte-contacts femelles, avec son volet en position de pré-insertion du circuit souple, immédiatement avant montage, - figure 3A, une vue en élévation latérale du module porte-contacts de la figure 2, en sortie fabrication par moulage, - figure 3B, une vue en perspective montrant les détails de l'arrière du module, - figure 3C, , une vue en élévation latérale du même module porte- contacts, le volet ayant une degré d'ouverture limité correspondant à la position de livraison - figure 3D, une vue en élévation latérale du même module portecontacts que celui de la figure 3B, mais une fois le volet fermé et verrouillé, après sertissage des contacts, - figures 4A et 4B, des vues en coupe montrant les positions du circuit souple par rapport aux contacts avant et après le montage et le sertissage de ce circuit souple sur ces contacts, module pré-inséré dans un porte-module.
Sur la figure 1, le module 10 porte-contacts comprend un corps 12, venu de moulage et prévu pour être introduit dans un connecteur de profil conjugué.
Ce corps comprend une succession de logements 14 juxtaposés prévus pour recevoir des contacts 16 électriques de mêmes dimensions ou de dimensions variées, comme représenté.
De tels contacts sont des contacts mâles à fiche 18, figure 1 ou femelles à cage 20, figure 2. Dans les deux cas, la partie arrière de ces contacts se présente sous la forme d'une patte 22 munie de crevés 24 avec des picots 25 à sertir.
De façon connue, des moyens d'introduction et de rétention ménagés sur ces contacts permettent leur mise en place et l'immobilisation dans ces logements.
De la même façon, le corps 12 porte des moyens 26 d'encliquetage pour la connexion avec le connecteur de profil conjugué dans lequel il sera reçu.
Les cellules d'hybridome sécrétant les anticorps monoclonaux anti-ESM-1 ont été obtenues par fusion, criblage et sous-clonage selon la technique décrite par BECHARD et al. (2000).
Quatre des hybridomes sélectionnés sont des isotypes IgG1, k respectivement les hybridomes désignés MEC4, MEC5, MEC15 et MEC36.
L'un des hybridomes est l'isotype IgM, k, t'hybridome MEC11.
EXEMPLE 4 : Préparation d'un composé antagoniste de la protéine ESM-1 du type polypeptide La mutagenèse dirigée a été réalisée avec le kit commercialisé par la Société STRATAGENE sous la référence Site-directed quick mutagenesis kit , qui a été utilisé selon les recommandations du fabricant.
Brièvement, un couple d'amorces aller et retour de séquences strictement complémentaire sont synthétisées, ces amorces comprenant les nucléotides codant pour le ou les acides aminés mutés, ou les nucléotides complémentaires, ces nucléotides étant localisés au centre de la séquence des amorces qui comprennent aussi environ 10 à 15 nucléotides consécutifs complémentaires de la séquence à amplifier à la fois en 5'et en 3'des nucléotides centraux.
Après amplification par PCR, les polynucléotides amplifiés codant pour la protéine ESM-1 mutée sont insérés dans le vecteur pCDNA3.
On a utilisé respectivement les couples d'amorces suivants : a) Pour la protéine ESM-1 F115A Amorce aller : 5'-GCC TGA AAT TCC CCG CCT TCC AAT ATT CAG-3' (SEQ ID Nu3).
Amorce retour : 5'-CTG AAT ATT GGA AGG CGG GGA ATT TCA GGC-3' (SEQ ID Nu4). b) Pour la protéine ESM-1 F116A Amorce aller : 5'-CCT GAA ATT CCC CTT CGC CCA ATA TTC AGT AAC C-3' (SEQ ID Nu5). Amorce retour : 5'-GGT TAC TGA ATA TTG CGC GAA GGG GAA TTT CAGT G-3' (SEQ ID Nu6).
c) Pour la protéine ESM-1 F115 F116A Amorce aller : 5'-CCT GAA ATT CGC CGC CGC CCA ATA TTC AGT AAC C-3' (SEQ ID Nu7).
Amorce retour : 5'-GGT TAC TGA ATA TTG GGC GGC GGG GM TTT CAG G-3'- (SEQ ID N 8).
EXEMPLE 5 : Activité pro-tumorigène de la protéine ESM-1 g ! ycosy) ée.
A. MATERIELS et METHODES A. 1. Lignées cellulaires : HEK T. HEK ESMIWT, HEK ESM/S137A, HEK ESM/69, HEK ESM/71, HEK ESM/73.
On a utilisé la lignée cellulaire nommée HEK ESM/WT transfectée de façon stable avec l'ADNc codant pour la forme sauvage de ESM-1 (ESM/WT). Quatre autres lignées cellulaires sont obtenues par transfection avec de l'ADNc codant pour des formes purifiées de ESM-1 obtenues par mutagenèse dirigée à partir de la forme sauvage. La première d'entre elle, appelée HEK ESM/S137A, exprime la protéine ESM-1 mutée, non glycosylée, où une alanine est substituée à la sérine 137, site majeur de 0- glycosylation. Les trois autres lignées exprimant une forme glycosylée de ESM-1 dont la partie protéique est mutée. II s'agit des lignées HEK ESM/F115A (remplacement de la phénylalanine en position 134, HEK ESM/71 (remplacement de la phénylalanine en position 135) et HEK ESM/F115A, F116A (double délétion remplacement 134-135).
Ainsi, six lignées cellules produisant différentes formes de ESM-1 sont utilisées : - HEK témoin, ne sécrétant pas de ESM-1 ; - Forme sauvage de ESM-1 : HEK ESM/WT ; - Forme déglycosylée de ESM-1 : HEK ESM/S137A ; - Formes glycosylées dont la partie protéique est mutée au niveau de la région 115-116 ; HEK-ESM/69, HEK-ESM/71, HEK ESM/73.
au cours du fonctionnement.
L'intérieur de la lampe du véhicule en arrière de la partie semiréfléchissante 22c peut être rendu invisible par l'action de réflexion de la lumière extérieure sur la partie semi-réfléchissante. L'intérieur de la lampe du véhicule, dans les cinq parties d'ouverture 22a, peut aussi être visible lorsque la lampe est éteinte. En conséquence, contrairement au cas d'une lampe classique de véhicule qui provoque une simple réflexion de la scène qui se trouve devant la lampe, sur la glace translucide et de manière blanchâtre, l'intérieur de la lampe dans les cinq parties
d'ouverture 22a est visible.
Dans ce mode de réalisation de l'invention, comme la lentille 34 formant condenseur est placée en arrière de chaque partie d'ouverture 22a, un dessin de lampe dans lequel un petit dôme translucide est disposé dans un dôme
qui paraît réfléchir la lumière extérieure est obtenu.
Ainsi, une sensation d'intégration du dessin est donnée par chacune des unités à lampe 12A et 12B. En outre, comme la surface de la partie cylindrique 22b du panneau translucide 22 a été soumise à un traitement semi-réfléchissant, un contraste accentué peut être obtenu entre les cinq lentilles
34 formant condenseur et les parties qui les entourent.
La lentille 34 formant condenseur paraît grossir cha-
cune des sources lumineuses 20A et 20B placées derrière la
lentille 34 formant condenseur. Cependant, les sources lumi-
neuses 20A et 20B peuvent être rendues moins visibles du fait de l'action diffusante de la lumière qui passe dans la
lentille 28 de diffusion qui est en position intermédiaire.
En outre, lorsque les quatre sources lumineuses 20A et B placées derrière les parties semi-réflêchissantes 22c sont allumées, chacune des unités à lampe 12A et 12B paraît lumineuse. La distribution de l'intensité lumineuse est imprévue d'après le dessin de la lampe de véhicule lorsque
la lampe est éteinte.
Plus précisément, comme l'intérieur de la lampe de véhicule n'est visible que par la partie d'ouverture 22a lorsque la lampe est éteinte, l'aspect est tel que seule la partie d'ouverture 22a paraît lumineuse, même lorsque la lampe est allumée. Cependant, non seulement la partie d'ouverture 22a mais aussi la partie semi-réfléchissante 22c paraissent en réalité lumineuses, et la distribution
d'intensité lumineuse a donc un effet imprévu.
L'invention a également pour objet l'utilisation d'une composition telle que définie précédemment pour obtenir un film déposé sur les matières kératiniques résistant à l'eau froide et/ou démaquillable à l'eau chaude.
L'invention a aussi pour objet un procédé cosmétique de démaquillage des matières kératiniques maquillées avec une composition telle que définie précédemment, comprenant au moins une étape de rinçage avec de l'eau chaude portée à une température supérieure ou égale à 35 C desdites matières kératiniques maquillées.
Par physiologiquement acceptable, il faut comprendre un milieu compatible avec les matières kératiniques, comme un milieu cosmétique.
La composition selon l'invention est apte à former un film à la température des matières kératiniques ayant une résistance (Rc) à l'eau chaude portée à 40 C inférieure ou égale à 15 minutes, et de préférence inférieure ou égale à 12 minutes et mieux inférieure ou égale à 10 minutes. Ainsi, le film se démaquille facilement à l'eau chaude, sans employer d'agent détergent comme les savons.
Le film obtenu avec la composition selon l'invention a également une résistance (Rf) à l'eau froide portée à 20 C telle que Rf - Rc > 8 minutes, et de préférence Rf - Rc # 10 minutes. En particulier, le film peut avoir une résistance à l'eau froide allant de 8 à 120 minutes. Le film présente ainsi une bonne résistance à l'eau froide.
La résistance à l'eau du film est mesurée selon le protocole du test défini ci-après avant les exemples.
Avantageusement, la composition selon l'invention contient peu, voire est exempte, d'agent émulsionnant (tensio-actif), notamment en une teneur inférieure à 0,5 % en poids, par rapport au poids total de la composition. La composition présente ainsi une bonne tenue à l'eau froide.