INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
1. Brancher l'appareil comme suit SORTIES ENTREES DU A B C D E F G BANC D'ESSAI ORIFICES DE L'ORGANE 4 1 2 c*) (*) les numéros correspondant à la numérotation normalisée des orifices entrées sorties de l'organe. 2. Déclencher EV3 (signal 7çl pour obtenir une pression donnée (par exemple 9 bar) à l'entrée 1 de la valve (sortie C).
Selon un second aspect, le nécessaire ou kit de détection est caractérisé en ce que les sondes oligonucléotides comprennent un marqueur détectable.
Selon un mode de réalisation particulier du kit de détection décrit cidessus, un tel kit comprendra une pluralité de sondes oligonucléotidiques conformes à l'invention qui pourront être utilisées pour détecter des séquences cibles d'intérêt du gène AtGCS1 ou encore détecter des mutations dans les régions codantes du gène AtGCS1, plus particulièrement dans l'acide nucléique de séquence SEQ ID N 2 où un acide nucléique de séquence complémentaire.
Les amorces nucléotidiques selon l'invention peuvent être utilisées pour amplifier un fragment nucléotidique quelconque (ADNg, ADNc, ARNm) de AtGCS1, et plus particulièrement tout ou partie d'un acide nucléique de séquence SEQ ID N 2.
Un autre objet de l'invention concerne un procédé pour l'amplification d'un acide nucléique du gène AtGCS1, et plus
particulièrement un acide nucléique de séquence SEQ ID N 2 ou un fragment ou encore un acide nucléique de séquence complémentaire à ce dernier, contenu dans un échantillon, ledit procédé comprenant les étapes consistant à : a) mettre en contact l'échantillon dans lequel la présence de l'acide nucléique cible est suspectée avec un couple d'amorces nucléotidiques selon l'invention ; b) réaliser au moins un cycle d'amplification de l'acide nucléique contenu dans l'échantillon; c) détecter de l'acide nucléique éventuellement amplifié.
Selon le procédé d'amplification ci-dessus, on réalise au moins un cycle d'amplification de l'acide nucléique contenu dans l'échantillon préalablement à la détection de l'acide nucléique éventuellement amplifié, de préférence au moins 10, et de manière tout à fait préférée au moins 20, cycles d'amplification.
Pour mettre en oeuvre le procédé d'amplification ci-dessus, on aura avantageusement recours à l'une quelconque des amorces nucléotidiques précédemment décrites dont la position d'hybridation est localisée respectivement du côté 5' et du côté 3' de la région de l'acide nucléique cible de AtGCSI dont l'amplification est recherchée, en présence des réactifs nécessaires à la réaction d'amplification .
L'invention a en outre pour objet un nécessaire ou kit pour l'amplification d'un acide nucléique du gène AtGCS1 (ADNg, ADNc ou ARNm) selon l'invention, et plus particulièrement tout ou partie d'un acide nucléique de séquence SEQ ID N 2, ledit nécessaire ou kit comprenant: a) un couple d'amorces nucléotidiques conformes à l'invention; b) le cas échéant, les réactifs nécessaires à la réaction d'amplification.
Un tel nécessaire ou kit d'amplification comprendra avantageusement au moins une paire d'amorces nucléotidiques telle que précédemment décrites dont la position d'hybridation est localisée respectivement du côté 5' et du coté 3' de l'acide nucléique cible du gène AtGCS1 dont l'amplification est recherchée.
Selon un mode de réalisation préféré, des amorces selon l'invention comprennent tout ou partie d'un polynucléotide choisi parmi des séquences nucléotidiques SEQ ID N 3 et SEQ ID N 4.
L'invention a également trait à des procédés destinés à inhiber ou bloquer l'expression du gène AtGCS1 dans les cellules de tissus de plantes, en vue de la production de protéines glycosylées par des glycannes non allergènes, par des techniques appropriées bien connues de l'homme du métier.
Afin d'inhiber ou de bloquer l'expression du gène AtGCS1 chez une plante, l'homme du métier pourra notamment recourir à l'utilisation de polynucléotides antisens, ou encore à des techniques de co-suppression.
Ainsi, l'invention concerne aussi un polynucléotide antisens capable de cibler spécifiquement une région déterminée du gène AtGCSI et plus particulièrement à une région déterminée de la séquence nucléotidique SEQ ID N 2,capable d'inhiber ou de bloquer sa transcription et/ou sa traduction.
Un tel polynucléotide répond à la définition générale des sondes et des amorces selon l'invention.
Selon un premier aspect, un polynucléotide antisens selon l'invention hybride avec une séquence correspondant à une séquence localisée dans une région de l'extrémité 5' de l'ARN messager du gène AtGCS1, et de manière tout à fait préférée à proximité du codon d'initiation de la traduction (ATG) du gène AtGCS1.
Pour construire un tel polynucléotide antisens, l'homme du métier pourra avantageusement se référer à la séquence de l'ADNc du gène AtGCS1 référencée comme la séquence nucléotidique SEQ ID N 2.
On pourra à ce titre se référer au document US-A-4 339 536 enseignant l'utilisation de tridécane comme matière première de départ. Cette technique résulte des progrès effectués dans la séparation des n-alcanes par tamis moléculaire, et elles permettent en particulier d'obtenir de l'acide brassylique par fermentation de n- tridécane par une souche de Candida tropicalis, avec un rendement de fermentation compris entre 90 et 95 % en poids, mais avec un coût de matière première qui est tel que l'acide brassylique produit est pratiquement exclusivement réservé à la production de musc T (ester éthylèneglycolique de l'acide brassylique). On pourra également se référer aux articles publiés dans la revue The journal of biological chemistry - Vol. 273, pages 32528 à 32534, Décembre 1998, et dans la revue BIOTECHNOLOGY-Volume 10, pages 894 à 898, Août 1992, pour expliquer les voies métaboliques conduisant à la transformation des n-alcanes et des acides gras en acides #-o dicarboxyliques.
On sait que l'hydroxylation en position w des acides gras saturés ou insaturés est assurée par une monooxygénase à cytochrome P450, cette hydroxylation conduisant à un w-hydroxyacide étant suivie de deux déshydrogénations aboutissant à la fonction carboxylique en position
Le processus se déroule comme suit CH:,- (CH.) n COOH hydroxylase ) HO-CHZ- (CH,) "-COOH alcool déshydrogénase ) OCH (CH,) "-COOH Aldéhyde déshydrogénase @ HOOC- (CH,) R-COOH . On a en effet constaté que de nombreuses souches de bactéries et levures sont capables de produire des acides a-ci dicarboxyliques, de telles souches étant isolées ou obtenues par mutagénèse aux rayons X, aux rayons ultraviolets, ou aux agents mutagéniques. Les articles précités décrivent en détail différents travaux de biologie moléculaire qui ont pu être menés, conduisant à l'amplification des gênes codant respectivement pour la cytochrome P450 mono-oxygénase, et la NADPH oxydo-réductase. I1 s'agit de gênes codant pour les deux composants du système hydroxylasique qui est généralement reconnu comme étant l'étape limitante de l'oxydation primaire des substrats n-alcanes et acides monocarboxyliques.
L'invention a pour objet de concevoir un nouveau procédé de production d'acides a-w dicarboxyliques qui soit plus économique que les procédés actuels utilisant des acides gras ou des hydrocarbures purs comme matière première, et qui soit également capable d'obtenir des acides a-CO dicarboxyliques insaturés, lesquels sont pratiquement introuvables sur le marché actuel, alors qu'ils sont susceptibles d'apporter des propriétés fonctionnelles nouvelles dans les polymères et les additifs.
Conformément à l'invention, le procédé de production d'acides a-ci dicarboxyliques est remarquable par le fait qu'on utilise comme matière première un mélange d'esters méthyliques obtenu par méthanolyse d'huiles ou de graisses, ledit mélange sous forme liquide étant transformé par fermentation en acides a-o dicarboxyliques.
C'est la première fois que l'on met en oeuvre une biotransformation des mélanges d'esters méthyliques obtenus par méthanolyse des huiles ou corps gras en acides (x-co dicarboxyliques. L'utilisation d'un mélange d'esters méthyliques comme matière première apparaît extrêmement séduisante en terme de coût de production dans la mesure oû le prix de la matière première semble être du même ordre de grandeur que le prix de la matière première fossile. La biotransformation des esters méthyliques est facilitée par le fait que leur point de fusion est inférieur à ceux des acides gras correspondants, leur utilisation sous forme liquide en fermentation étant alors favorisée.
On sait que les huiles et les graisses, également appelées corps gras ou matières grasses, appartiennent à un ensemble complexe de composés organiques naturels, qui sont les lipides. Les huiles se distinguent des graisses par leur consistance à température normale . les huiles sont liquides, tandis que les graisses sont pâteuses ou solides. En outre, les huiles et graisses sont solubles dans de nombreux solvants organiques. En règle générale, la solubilité des huiles est plus grande que celle des graisses. Les huiles et graisses sont des esters d'acides gras et de glycérol, appelés glycérides, accompagnés de constituants mineurs qui forment l'insaponifiable. Les glycérides représentent 98 à 99 du poids, et l'insaponifiable 1 à 2 s seulement. Les acides gras forment à peu près 95 % de la masse des glycérides. En général, on classe ces acides gras en trois catégories, à savoir les saturés, les monoinsaturés (une double liaison), et les polyinsaturés (plusieurs doubles liaisons). A quelques exceptions près, les acides gras ont une chaîne droite et un nombre pair d'atomes de carbone. Dans les acides gras éthyléniques, les doubles liaisons sont toujours cis. Celles-ci sont séparées par un groupe méthylène dans les polyinsaturés. Le point de fusion des acides gras explique l'état physique des huiles et des graisses. Les graisses comportent enfin une forte proportion de composés saturés, alors que les huiles sont riches en mono-et polyinsaturés.
Ainsi que cela a été dit plus haut, on utilise comme matière première, dans le procédé selon l'invention, un mélange d'esters méthyliques obtenu par méthanolyse d'huiles ou de graisses.
I1 convient de rappeler que la méthanolyse d'un corps gras, dans le méthanol en présence d'un catalyseur, fournit les esters méthyliques et le glycérol. La réaction est alors du type (R-C00), C, HS + 3CH,OH -> 3R-COOCH, + C,Hs (OH), I1 s'agit d'une réaction d'estérification classique. Les corps gras utilisés pour la production d'esters méthyliques doivent en l'espèce être peu acides, et l'on utilisera de préférence des huiles industrielles spéciales (ricin, lin, colza, etc...), du suif et des huiles de poisson, ou encore des huiles lauriques (coprah, palmiste).
Les esters méthyliques s'imposent peu à peu comme grands intermédiaires oléochimiques. Ceci amène à penser que les esters remplaceront à l'avenir de plus en plus les acides, ceci pour les raisons suivantes - le stockage des esters est plus facile que celui des acides gras, et leur conservation est meilleure ; - leur point de fusion étant plus bas, ils sont liquides la plupart du temps, ce qui facilite leur utilisation ; - leur fractionnement par distillation est plus efficace ; - les esters sont moins corrosifs que les acides vis-à-vis des installations en acier non oxydable ; - le coût énergétique de production des esters est moindre, et le procédé est amorti par la récupération du glycérol, qui est plus aisée par méthanolyse que par hydrolyse.
L'invention met clairement en évidence le fait que les modifications des acides gras sous forme d'esters méthyliques, par des méthodes microbiologiques, peuvent constituer une alternative très importante aux techniques pétrochimiques pour la production des acides a-(O dicarboxyliques saturés ou insaturés, compte tenu du fait que les biotransformations respectent les doubles liaisons. La transformation d'esters méthyliques en acides #-w dicarboxyliques par des méthodes microbiologiques peut ainsi constituer une alternative très séduisante à l'utilisation de matières premières fossiles.
On va maintenant décrire plus en détail des modes de mise en oeuvre particuliers du procédé de production d'acides a-w dicarboxyliques selon l'invention, et mentionner quelques exemples à titre illustratif.
Ainsi que cela a été dit plus haut, le procédé de l'invention est remarquable par le fait que l'on utilise comme matière première un mélange d'esters méthyliques obtenu par méthanolyse d'huiles ou de graisses, ledit mélange sous forme liquide étant transformé par fermentation en acides a-#D dicarboxyliques.
On pourra en particulier prévoir que le mélange d'esters méthyliques utilisé est obtenu par méthanolyse d'huiles ou de graisses au moins partiellement (totalement ou partiellement) hydrogénées, ou qui proviennent d'organismes génétiquement modifiés (OGM).
En outre, la fermentation comporte de préférence une étape initiale de croissance du micro-organisme au pH optimum de croissance de la souche utilisée pour la fermentation, soit plus précisément un pH allant de 3 à 5 pour les levures et champignons et de 6 à 7 pour les bactéries, cette étape initiale de croissance étant suivie d'une étape de biotransformation des esters méthyliques qui est quant à elle effectuée à un pH essentiellement compris entre 7 et 8,5.
On pourra prévoir que la souche utilisée pour la fermentation croît sur un co-substrat en présence des esters méthyliques destinés à la production d'acides a-co dicarboxyliques. Ce co-substrat pourra par exemple être choisi dans le groupe comportant le glucose, le saccharose, le glycérol, ou toute autre source de carbone et d'énergie, simple ou en mélange, utilisable par la souche concernée pour la croissance de ladite souche.
La ligne pleine à la Fig. 27 représente la quantite de particules (G) qui peut être oxydé et enlevé sans produire de flamme lumineuse par temps unitaire. À la Fig. 27, l'abscisse représente la température (TF) de l'appareil catalytique. Ici, la Fig. 27 représente le cas où le temps unitaire de une seconde, c'est-à-dire la quantité de particules (G ) qui peut être oxydé et enlevé par seconde. Toutefois, toute durée telle qu'une minute, dix minutes ou analogues peut être choi sie comme temps unitaire. Par exemple, dans le cas où dix mi nutes est utilisé comme temps unitaire, la quantité de parti cules (G ) qui peut être oxydée et enlevée par temps unitaire représente la quantité des particules (G) qui peut être oxy dée et enlevée toutes les dix minutes. Également dans ce cas, la quantité de particules (G ) qui peut être oxydée et enle vée sans produire de flamme lumineuse augmente associée à une augmentation de la température de l'appareil catalytique 70, comme cela est représenté à la Fig. 27. La quantité de parti cules émises depuis la chambre de combustion par temps uni taire est appelée quantité de particules émises (M). Lorsque la quantité de particules émises (M) est plus petite que la quantité de particules (G ) qui peut être oxydée et enlevée, par exemple, la quantité de particules émises (M) par seconde est plus petite que la quantité de particules (G) qui peut etre oxydée et enlevée par seconde ou la quantité de particu les émises (M) toutes les dix minutes est plus petite que la quantité des particules (G) qui peut être oxydée et enlevée toutes les dix minutes, c'est-à-dire dans la zone (I ) de la . 27, les particules émises depuis la chambre de combus- tion sont toutes oxydées et enlevées sans produire de flamme lumineuse successivement sur l'appareil catalytique 70 pen dant le court instant précédemment mentionné.
Par ailleurs, lorsque la quantité des particules émises (M) est plus grande que la quantité des particules qui peu vent être oxydées et enlevées (G), c'est-à-dire dans la ré gion (II) de la Fig. 27, la quantité d'oxygène actif est in suffisante pour que toutes les particules soient oxydées et enlevées successivement. Les Fig. 28 (A) à (C) illustrent la manière d'oxyder les particules dans un tel cas.
C'est-à-dire que dans le cas où la quantité d'oxygène actif manque pour oxyder toutes les particules, lorsque les particules 62 adhèrent à l'agent de libération d'oxygène ac tif 61, seule une partie des particules est oxydée, comme ce la est représenté à la Fig. 28 (A) et l'autre partie des par ticules qui n'a pas été oxydée suffisamment demeure sur la surface en amont des gaz d'échappement de l'appareil cataly tique. Lorsque l'état où la quantité d'oxygène actif est man quant se poursuit, une partie des particules qui n'a pas été oxydée demeure sur la surface en amont des gaz d'échappement de l'appareil catalytique successivement. Il s'ensuit que la surface en amont des gaz d'échappement de l'appareil cataly tique est recouverte de particules résiduelles 63, comme cela est représenté à la Fig. 28 (B).
Les particules résiduelles 63 sont progressivement transformées en matière carbonée qui peut difficilement être oxydée. En outre, lorsque la surface en amont des gaz d'échappement est recouverte des particules résiduelles 63, l'action du platine Pt pour oxyder NO et S02 et l'action de l'agent de libération d'oxygène actif 61 pour libérer l'oxy gène actif sont supprimées. Les particules résiduelles 63 peuvent être progressivement oxydées sur une période relati vement longue. Toutefois, comme cela est représenté à la Fig. 28 (C), d'autres particules 64 se déposent sur les particules résiduelles 63 les unes après les autres et lorsque les par ticules sont déposées de façon se stratifier, même si ce sont des particules facilement oxydées, ces particules ne peuvent pas être oxydées puisque ces particules sont séparées du platine Pt ou de l'agent de libération d'oxygène actif. En conséquence, d'autres particules se déposent successivement sur ces particules 64. C'est-à-dire que, lorsque l'état où la quantité de particules émises (M) est plus grande que la quantité de particules qui peut être oxydée et enlevée (G) se poursuit, les particules se déposent pour se stratifier sur l'appareil catalytique.
Ainsi, dans la région (I) de la Fig. 27, les particules sont oxydées et enlevées sans produire de flamme lumineuse pendant le court instant et dans la région (II) de la Fig. 27, les particules sont déposées pour se stratifier sur l'ap pareil catalytique. De ce fait, le dépôt des particules sur l'appareil catalytique peut être empêché si la relation entre la quantité de particules émises (M) et la quantité de parti cules qui peut être oxydée et enlevée (G ) se trouve dans la région (I). I1 s'ensuit qu'une perte de pression des gaz d'échappement dans l'appareil catalytique change difficile ment et est maintenue à une valeur de perte de pression mini male qui est presque constante. Ainsi, la diminution de puis sance de sortie du moteur peut être maintenue aussi faible que possible. Toutefois, ceci n'est pas toujours réalisé et les particules peuvent se déposer sur l'appareil catalytique si rien n'est fait.
Dans le présent mode de réalisation, pour empêcher le dépôt des particules sur l'appareil catalytique, l'unité de commande électronique 30 énoncée ci-dessus commande le corps de soupape 71a en conformité avec un second organigramme re présenté à la Fig. 29. Le présent organigramme est répété à chaque période prédéterminée. À une étape 201, détermine si un temps établi est établi pour commuter le corps de sou pape 71 a. Le temps établi est établi à chaque période prédé terminée ou distance de passage prédéterminé. Lorsque le ré sultat est négatif, le programme est arrêté. Toutefois, lors que le résultat est positif, le programme va une etape 202 et on détermine si une quantité actuelle de particules émises depuis le moteur, c'est-à-dire une quantité de particules émises (M) est plus grande qu'une quantité prédéterminée (M 1). La quantité des particules émises (M) peut être décidée à partir d'une table de correspondance sur la base de la charge du moteur et de la vitesse du moteur ou peut être mesuré en utilisant un capteur optique pour détecter optiquement une quantité de particules dans les gaz d'échappement. Dans la table de correspondance, les quantités des particules émises sont établies pour prendre en compte laquelle la combus tion à basse température ou de la combustion normale est ef fectuée dans le moteur diesel du présent mode de réalisation.
Lorsque le résultat à l'étape 202 et négatif, par exem ple, dans des conditions de décélération du moteur, des conditions de ralenti du moteur, des conditions de faible charge du moteur ou d'une combustion à température basse, une quantité de particules dans les gaz d'échappement n'est pas importante, à l'étape 203, le corps de soupape est commu- té. C'est-à-dire que le côté amont et le côté aval de l'appa reil catalytique sont inversés. D'autre part, lorsque le ré sultat à l'étape 202 est négatif, une quantité de particules dans les gaz d'échappement est relativement importante et ainsi, à une étape 204, le corps de soupape 71a n'est pas commuté à ce moment. Par la suite, lorsque le résultat à l'étape 202 est positif, le corps de soupape 71a est commuté.
La Fig. 30 et une vue en coupe agrandie de la paroi de séparation 54 de l'appareil catalytique. Alors que le véhi- cule se déplace sur la période prédéterminée ou la distance de parcours prédéterminé, le fonctionnement du moteur dans la région (II) de la Fig. 27 peut être effectué. Ainsi, les par ticules entrent en collision avec et sont piégées par la sur face en amont des gaz d'échappement de la paroi de séparation 54 et la surface opposée des gaz d'échappement dans les pores dans celui-ci, c'est-à-dire une des surfaces de piégeage de la paroi de séparation 54 et sont oxydées et enlevées par l'oxygène actif libéré de l'agent de libération d'oxygène ac tif, mais les particules peuvent rester en cas d'oxydation insuffisante, comme cela est représenté à la Fig. 30 (A). À ce moment, la résistance à l'échappement de l'appareil cata lytique n'aura pas d'influence défavorable sur le déplacement du véhicule. Toutefois, si les particules se déposent beau coup plus, les problèmes dans lesquelles la puissance de sor tie du moteur chute considérablement et analogues se produi sent. À ce moment, le second organigramme inverse le côté amont et le côté aval de l'appareil catalytique si une quan tité de particules dans les gaz d'échappement n'est pas im portante. En conséquence, aucune particule ne se dépose de nouveau sur les particules résiduelles sur une des surfaces de piégeage de la paroi de séparation et, ainsi, les particu les résiduelles peuvent être progressivement oxydées et enle vées par l'oxygène actif libéré depuis l'une des surfaces de piégeage. De plus, en particulier, les particules résiduelles dans les pores dans la paroi de séparation sont facilement écrasées en pièces très fines par l'écoulement des gaz d'échappement dans la direction inverse, comme cela est re présenté à la Fig. 30 (B) et se déplacent principalement à travers les pores vers le côté aval.
En conséquence, la plus grande partie des particules écrasées en pièces très fines diffusent dans le pore dans la paroi de séparation et elles contactent directement l'agent de libération d'oxygène actif supporté sur la surface des po res et sont oxydées et enlevées. Ainsi, si l'agent de libéra tion d'oxygène actif est également supporté sur la surface des pores dans la paroi de séparation, les particules résiduelles peuvent être très facilement oxydées et enlevées. Sur l'autre surface de piégeage qui est maintenant sur le côté amont, lorsque l'écoulement des gaz d'échappement est inversé, c'est-à-dire que la surface en amont des gaz d'échappement de la paroi de séparation 54 et la surface opposée des gaz d'échappement dans les pores dans celui-ci auxquelles les gaz d'échappement heurtent principalement (du côté opposé des surfaces de piégeage), les particules dans les gaz d'échappement adhèrent maintenant à celles-ci et sont oxydées et enlevées par l'oxygène actif libéré de l'agent de libération d'oxygène actif. Dans cette oxydation, une partie de l'oxygène actif libéré depuis l'agent de libération d'oxygène actif sur l'autre surface de piégeage se déplace vers le côté aval avec les gaz d'échappement et il est amené oxyder et enlever les particules qui demeurent toujours sur une des surfaces de piégeage en dépit de l'écoulement inversé des gaz d'échappement.