INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
soit un radical A3 dans lequel R37 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou aralkyle, T représente un radical -(CH2)m- avec m = 1 ou 2 ; soit un radical A4 dans lequel R38 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle, -(CH2)q-NR39R40 ou aralkyle, le groupement aryle étant éventuellement substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi : OH, alkyle, halogène, nitro, alkoxy ou -NR39R40, R39 et R40 représentent, indépendamment, un atome d'hydrogène, un radical alkyle ou un groupe -COR41, ou bien R39 et R40 forment ensemble avec l'atome d'azote un hétérocycle éventuellement substitué, R41 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle, alkoxy ou NR42R43, R42 et R43 représentent, indépendamment, un atome d'hydrogène ou un radical alkyle, ou bien R42 et R43 forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils sont rattachés un hétérocycle éventuellement substitué, T représentant un radical -(CH2)m- avec m = 1 ou 2, q étant un entier compris entre 2 et 6 ;
En pratique, le décalage successif de ces points d'injection et de soutirage se fait à l'aide d'une vanne rotative ou plus finement d'un ensemble de vannes tout ou rien convenablement commandées. Ce décalage circulaire, effectué à chaque période, des différents débits liquides d'entrée-sortie dans un sens donné, revient à simuler un déplacement de l'adsorbant solide dans l'autre sens.
Les principaux débits liquides d'entrée sont les suivants : le débit de charge QF et le débit d'éluant QEl. Les débits de sortie sont le débitd'extrait et le débit de raffinat. L'un au moins de ces flux (raffinat, éluant, extrait) est prélevé ou introduit sous contrôle de pression. Le débit de raffinat QRaf est égal à la somme des débits d'entrée QF et El moins le débit d'extrait QEx. A ces débits contrôlés s'ajoute un débit de recyclage QRec. Les emplacements respectifs des quatre flux autour des lits, définissent ainsi quatre zones distinctes.
Parmi les procédés connus, on peut citer le procédé EluxylTM décrit notamment dans les brevets suivants: EP 415. 822 (US 5,114,590) ou FR 2. 762.793 (US 5,902,486).
La détermination des paramètres nécessaires au fonctionnement d'une boucle de séparation est difficile car les variables intervenant dans le processus sont nombreuses.
Pour une concentration d'alimentation donnée, on peut trouver ces débits de manière empirique mais la solution optimale se trouve dans une zone restreinte d'un espace à quatre dimensions (trois débits liquides et soit le débit de solide dans le cas d'un lit mobile vrai, soit la période de permutation T dans le cas d'un lit mobile simulé, le débit de raffinat se déduisant des autres débits), qui ne peut être atteinte par tâtonnements qu'après un temps considérable, sans que l'on soit certain d'être au point optimal.
Afin de trouver les conditions optimales pour piloter ou dimensionner un système de séparation à lit mobile vrai (LMV) ou simulés (LMS), il est bien préférable de trouver un modèle représentatif du processus de séparation, prenant en compte les phénomènes d'adsorption, le transfert de matière et les
propriétés de l'écoulement du fluide à travers la phase solide poreuse et de remplacer l'approche empirique lourde par des simulations. Cette voie d'approche par simulation peut cependant se révéler tout aussi lourde si elle n'est pas bien conduite.
En général on optimise les procédés selon une optimisation statique, par la technique connue d'essai et erreur. On part d'un jeu de données, (des débits par exemple) choisi a priori. On fait une simulation jusqu'à obtenir un régime stabilisé (d'où le terme statique), et l'on enregistre les performances obtenues.
Après une légère modification d'une donnée d'entrée, on refait une simulation pour mesurer la sensibilité des performances à cette modification. On itère sur toutes les données pour déterminer pareillement leurs influences respectives sur l'évolution des performances. On modifie alors les données d'entrée dans le sens d'une amélioration des performances.
Il existe de nombreuses stratégies pour conduire le calcul des sensibilités et déterminer la façon de modifier les données. Mais toutes présentent plus ou moins les mêmes inconvénients. Elles nécessitent de nombreuses simulations, donc un temps de calcul non négligeable. Elles sont aveugles et ne tirent pas profit d'une connaissance que l'on pourrait avoir a priori. Elles trouvent une solution si elles sont initialisées près de cette solution mais divergent la plupart du temps si elles sont initialisées trop loin de la solution recherchée. De plus, elles peuvent tomber dans un minimum local et n'en plus sortir.
Le procédé selon l'invention Le procédé selon l'invention s'applique à un système de séparation du type à lit mobile simulé (LMS) comprenant une série de lits contenant de la
matière solide adsorbante, répartis en plusieurs zones délimitées par des points d'injection d'une charge et d'un éluant et des points de soutirage d'un extrait et d'un raffinat, des moyens d'injection de fluides, des moyens d'extraction de fluides, des moyens de permutation des points d'injection et des points d'extraction, et des moyens de mesure de variables opératoires. Le procédé permet de déterminer rapidement les débits de fluides injectés et les débits de fluides soutirés optimaux pour obtenir un degré de pureté (P) et un rendement d'extraction (R) fixés pour au moins un constituant dans l'extrait (Ex).
Il comporte une simulation unique de type dynamique avec une succession d'étapes de rectification des débits de fluides à intervalles de temps de durée limitée, comprenant chacune, à l'issue de chaque intervalle de temps (T) : - une comparaison des degrés de pureté et des rendements respectifs obtenus résultant de situations issues d'étapes de simulation sur un intervalle de temps déterminé (#t) où des rectifications sont appliquées à au moins un débit avec ceux d'une situation de référence issue d'une étape de simulation sans rectification de débit, sur le même intervalle de temps ; - une sélection des rectifications de débit minimisant la quantité d'impuretés convergeant vers le point de soutirage de l'extrait, tant que le degré de pureté fixé n'est pas atteint ; et - une sélection des rectifications de débit minimisant la quantité du dit constituant convergeant vers le point de soutirage du raffinat, tant que le rendement fixé n'est pas atteint.
Le procédé peut comporter en outre une maximisation du degré de pureté ou du rendement quand ces deux paramètres dépassent simultanément les valeurs fixées.
Selon un premier mode de mise en #uvre, à l'issue de chacune des étapes, on compare à la situation de référence, une première situation où l'on modifie le débit de recyclage et une deuxième situation où l'on modifie le débit de l'extrait.
Selon un deuxième mode de mise en oeuvre, à l'issue de chacune des étapes, on compare à la situation de référence, une première situation où l'on modifie de la même quantité le débit de recyclage et le débit d'extrait et une deuxième situation où l'on diminue le débit de l'extrait tout en gardant constant le débit de recyclage.
Pour la protéolyse ménagée, on utilisera une protéase à serine, telle que la trypsine ou 1a chymotrypsine ; l'action de la protéase doit se limiter à la dégradation de protéines non-histones du noyau, et de protéines du cytosquelette entourant le noyau, et ne doit pas conduire à la lyse des noyaux. Généralement on utilisera des concentrations de protéase très faibles. Par exemple, dans le cas d'une protéolyse effectuée sur des cellules entières (en même temps que la perméabilisation ou consécutivement à celle-ci), on peut utiliser des concentrations de trypsine de l'ordre de 1 à 10 U/ml dans le mélange d'incubation des cellules, pour une durée d'incubation variant de 1 à 10 min. à 37 C. Dans le cas du traitement de noyaux isolés, les doses de protéase et les temps d'incubation devront être encore réduits.
En outre, la trypsine possède un effet direct d'activation sur des ADN polymérases dans les cellules qui sont en phase Gl ou GO lors du traitement (BROWN et al., Exp. Cell Res., 104, 207-213, l977). Ceci permettrait de faciliter la reprise du cycle cellulaire des noyaux qui se trouvent en phase GO/Gl lors de leur incorporation dans un cytoplasme receveur en interphase.
Le gonflement du noyau peut être induit par un traitement à l'aide d'au moins un composé polyanionique, tel que l'héparine, le dextrane sulfate, ou les acides poiyaspartiques de poids moléculaire élevé (>20 000), comme décrit par KRAEMER et COFFEY, (Biochim. Biophys. Acta., 224, 568-578, 1970).
Le traitement est effectué, après la protéolyse ou simultanément à celle-ci, par incubation des noyaux ou des cellules les contenant en présence du polyanion, jusqu'à ce qu'un gonflement du noyau soit observé. Par exemple, dans le cas des cellules entières perméabilisées on peut utiliser entre 50 et 200 @Lg de polyanion par ml de milieu d'incubation, pour une incubation de 30 à 60 min à température ambiante (15 à 25 C).
A l'issue de ce traitement, on effectue le transfert du noyau dans le cytoplasme receveur.
Le transfert des noyaux traités conformément à l'invention peut être effectué quel que soit le stade du cycle cellulaire des cellules donneuses et quel que soit l'état du cytoplasme receveur. Dans le cas de fusion des noyaux avec des ovocytes receveurs en métaphase II (20 à 25 h après le début de la maturation), il faudra réaliser une activation des embryons reconstitués, par exemple, par un procédé d'activation chimique tel qu'il a été décrit par LIU et al. [Mol. Reprod. Dev., 49, 298-307, (l998)], ou par toute autre méthode.
I1 est toutefois particulièrement intéressant d'utiliser des cytoplasmes receveurs préalablement préparés de façon à les amener en interphase.
On définit comme cytoplasme receveur en interphase un cytoplasme dans lequel le taux de MPF est inférieur à celui auquel il induit la dégradation de la membrane nucléaire et la condensation de la chromatine.
Ce cytoplasme peut notamment être obtenu à partir d'un ovocyte maturé in vivo ou in vitro. Le matériel chromosomique est retiré par micromanipulation alors que l' ovocyte est bloqué au stade métaphase II. Le cytoplasme résultant est ensuite traité pour réduire i' activité MPF. Il peut par exemple être préparé par une méthode de vieillissement in vitro et de refroidissement avant la fusion [CHESNE et al., C. R. Acad. Sci., 316, 487-491, (1993)]. I1 est également possible d'obtenir le même résultat à l'aide de drogues inhibant les synthèses protéiques (cycloheximide) ou de drogues inhibant les phosphorylations (6-DMAP) ou d'un mélange des 2 drogues. Dans ce cas, l'état d'interphase est généralement obtenu en 1 à 4 h d'incubation.
La reconstitution de l'embryon peut être effectuée, dans le cas de noyaux isolés, par micro- injection. I1 est toutefois particulièrement avantageux d'utiliser directement des cellules traitées pour les fusionner avec les cytoplasmes receveurs. Dans ce cas la fusion est de préférence, réalisée par choc électrique, ou par toute autre méthode. I1 n'est pas nécessaire d'opérer dans des conditions destinées à induire l'activation du cytoplasme receveur.
Les embryons reconstitués sont directement cultivés in vitro sans autre activation après la fusion ; jusqu'à leur développement au stade blastocyste.
Les noyaux donneurs ne subissent pas de destruction de leur membrane nucléaire, ni de condensation de la chromatine (PCC) avant la première division qui intervient après la fusion.
Lorsque les embryons ont atteint le stade blastocyte, ils sont ensuite transférés dans des femelles receveuses, selon les techniques classiques connues en elles-mêmes.
La méthode conforme à l'invention permet d'une part d'améliorer la reprogrammation des noyaux transférés en permettant l'accès des facteurs cytoplasmiques à 'La chromatine grâce à une action enzymatique modérée avant la fusion, et d'autre part de favoriser le maintien d'une ploidie correcte des cellules embryonnaires en minimisant la condensation de la chromatine et en empêchant sa dispersion lors du remodelage du noyau introduit dans le cytoplasme receveur. Cette modification dans les étapes initiales des relations entre le noyau et le cytoplasme permet de favoriser le développement à terme des embryons reconstitués à partir de noyaux de cellules somatiques différenciées, et ce quelle que soit la phase du cycle cellulaire dans laquelle se trouvent ces cellules. Elle peut s'appliquer à différentes espèces de mammifères ; elle est toutefois plus particulièrement adaptée à la reconstitution d'embryons de mammifères ongulés, notamment de ruminants, et en particulier d'ovins, de bovins, de caprins ou de porcins.
La présente invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples non-limitatifs de mise en ceuvre du procédé conforme à l'invention pour la reconstitution d'embryons bovins. EXEMPLE 1: Préparation. des cellules et reconstitution des embryons. Les cellules donneuses sont obtenues à partir de cultures de cellules foetales de peau ou de muscle, ou de cultures de biopsie d'oreille d'animaux adultes (cellules de peau) préparées comme décrit par VIGNON et al., (C. R. Acad. Sci. Paris, 321, 735-745, 1998). Dans ces conditions, on obtient des cellules différenciées, de type fibroblaste.
Les boîtes de cellules sont vidées du milieu de culture, rincées par du tampon PBS et remplies d'un milieu dit de perméabilisation dont la composition est la suivante : solution saline équilibrée de HANKS sans calcium et sans magnésium, contenant 0,5 ug/ml de trypsine, et 20 à 30 ug/ml de lysolécithine dans le cas des cellules fcetales de peau et 15 à 20 ug/ml de lysolécithine dans le cas des cellules de peau d'animaux adultes. Après une incubation de 5 min à 37 C, les boîtes sont vidées du milieu d'incubation. Pour stopper la perméabilisation et la protéolyse, les boîtes sont immédiatement rincées avec une solution tampon (solution saline équilibrée de HANKS sans calcium et sans magnés.um)contenant 0,5% de sérum de veau fcetal ou de sérum albumine bovine.
M : 17% en mole D : 26% en mole T : 57% en mole.
(2) Emulsion de dilaurate de dioctylétain à 37,5% en poids dans l'eau préparée en utilisant de l'alcool polyvinylique en tant que tensioactif.
(3) Mélange de 15% d'eau et de 85% d'alcool isotridécylique éthoxylé par 8 à 9 moles d'oxyde d'éthylène par mole d'alcool isotridécylique.
(4) Solution aqueuse contenant 23% en poids de silane.
La composition lubrifiante du tableau 1 a été préparée en deux étapes.
Etape 1 Un mélange composé du polydiméthylsiloxane non réactif de faible viscosité, de la résine MDT-OH, du méthyltriéthoxysilane, du tensioactif et d'une partie d'eau distillée (selon un rapport eau/tensioactif de 1,2) est homogénéisé au préalable sous agitation modérée pendant 15 minutes à température ambiante.
Le mélange ainsi obtenu est traité par broyage jusqu'à inversion de phase, à l'aide d'un broyeur Moritz, pour passer d'une phase fluide eau/huile à une phase épaisse huile/eau.
La dilution de la phase épaisse obtenue est réalisée sous agitation moyenne en 40 minutes, à l'aide d'une quantité d'eau distillée déterminée pour obtenir une émulsion dont la matière sèche est de 50%. L'agent bactéricide et l'agent antioxydant sont ajoutés pendant la dilution. Le silane (g) et le catalyseur sont ajoutés en fin de dilution, une homogénéisation sous agitation modérée est réalisée pendant 10 minutes, suivie d'une filtration.
Etape 2 La quantité d'eau restante est chargée dans un récipient séparé, on y ajoute le biocide, l'antimousse, l'agent mouillant et on agite le contenu de ce récipient pendant 10 minutes. La gomme xanthane et un autre agent mouillant sont chargés dans un autre récipient, mélangés pendant 10 minutes sous
agitation vive, puis ajoutés au récipient contenant l'eau, le biocide et l'antimousse. Le mélange ainsi réalisé est ajouté à l'émulsion réalisée à l'étape 1. On agite encore, à vitesse modérée, pendant 30 minutes.
L'émulsion obtenue est caractérisée par une granulométrie moyenne de 0,388 m et une proportion de matière sèche (60 min, 120 C) de 48,8% en poids.
EXEMPLE 2 Cet exemple illustre une composition lubrifiante identique à celle de l'exemple 1 mais préparée à partir d'un constituant (a) plus visqueux, à savoir un polydiméthylsiloxane linéaire à terminaison (CH3)3SiO1/2 de viscosité dynamique égale à 1 Pa. s à 25 C.
L'émulsion obtenue est caractérisée par une granulométrie moyenne de 0,402 m et une proportion de matière sèche (60 min, 120 C) de 48,5% en poids.
EXEMPLE 3 Cet exemple illustre une composition lubrifiante semblable à celle de l'exemple 1 mais comprenant en outre un polymère filmogène en dispersion aqueuse (latex styrène-acrylique).
La formulation de cette composition est donnée dans le tableau 2.
Selon une deuxième méthode, on effectue l'association du PA aux particules par mise en présence d'un PA à l'état solide avec la suspension colloïdale de particules. Le PA solide peut être, par exemple, sous forme de lyophilisat, de précipité, de poudre ou autre.
Selon une troisième méthode, on met en présence le solide pulvérulent (PAA), tel que décrit supra en tant que produit et par ses caractéristiques d'obtention, avec une phase liquide (aqueuse ou non) contenant le PA.
Selon une quatrième méthode, on met en présence le solide pulvérulent, tel que décrit supra en tant que produit et par ses caractéristiques d'obtention, avec le PA sous forme solide. On disperse ensuite ce mélange de solides, dans une phase liquide, de préférence une solution aqueuse.
Dans toutes ces méthodes, le PA utilisé peut être sous forme pure ou préformulée.
Compte tenu de la taille nanométrique des particules, la suspension peut être filtrée sur des filtres de stérilisation, ce qui permet d'obtenir, aisément et à moindre coût, des liquides médicamenteux injectables stériles. Le fait de pouvoir, grâce à l'invention, contrôler la taille des particules et atteindre des valeurs de Dh entre 25 et 100 nm, est un atout important.
La présente invention vise, également, de nouveaux produits intermédiaires du procédé décrit cidessus, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par des copolymères PAA précurseurs de particules.
Selon un autre de ses aspects, l'invention concerne une suspension et/ou un solide pulvérulent, tels que définis ci-dessus et/ou tels qu'obtenus par le procédé présenté supra, cette suspension et ce solide comprenant au moins un principe actif, choisi, de préférence, parmi : # les vaccins # les protéines et/ou les peptides, parmi lesquels les plus préférentiellement retenus sont : les hémoglobines, les cytochromes, les albumines, les interférons, les antigènes, les anticorps, l'érythropoïétine, l'insuline, les hormones de croissance, les facteurs VIII et IX, les interleukines ou leurs mélanges, les facteurs stimulants de l'hématopoïèse, # les polysaccharides, l'héparine étant plus particulièrement sélectionnée, # les acides nucléiques et, préférablement, les oligonucléotides d'ARN et/ou d'ADN, # des molécules non petido-protéiques appartenant à diverses classes de chimiothérapie anticancéreuses et, en particulier, les anthracyclines et les taxoïdes.
# et leurs mélanges L'invention vise, également, une suspension et/ou le solide pulvérulent chargé (s) PA nutritionnel, phytosanitaire ou cosmétique Enfin, l'invention concerne une spécialité pharmaceutique, nutritionnelle, phytosanitaire ou cosmétique, caractérisée en ce qu'elle comporte une suspension et/ou du solide pulvérulent chargé(s) en PA et tels que définis ci-dessus.
Selon un autre de ses objets, l'invention vise, également, l'utilisation de ces PV (en suspension ou sous forme solide) chargées en PA, pour la fabrication de médicaments du type systèmes à libération contrôlée de PA.
Dans le cas de médicaments, il peut s'agir, par exemple de ceux administrables, de préférence par voie orale, nasale, vaginale, oculaire, sous-cutanée, intraveineuse, intramusculaire, intradermique, intrapéritonéale, intracérébrale ou parentérale.
Les applications cosmétiques envisageables sont, par exemple, les compositions comprenant un PA associé aux PV selon l'invention et applicables par voie transdermique.
Les produits phytosanitaires concernés peuvent être, par exemple, des herbicides, des pesticides, des insecticides, des fongicides, etc...
Les exemples qui suivent permettront de mieux comprendre l'invention dans ses différents aspects produit/procédé/application. Ces exemples illustrent la préparation de particules de polyaminoacides chargés ou non en principes actifs, de même qu'ils présentent les caractéristiques de structure et les propriétés de ces particules.
LEGENDES DES FIGURES Fig. 1 : Nanoparticules correspondant à un copolymère bloc la : leucine 50/Glutamate 50 obtenues selon l'enseignement du brevet WO 96/29991.
Fig. 2 : obtenues avec le copolymère bloc selon la présente invention (exemple 2) . On notera que la barre ne représente plus ici que 50 nm.
Fig 3 Evolution de la concentration en glucose (moyenne en % basal sur 4 chiens) après injection d'une formulation de PV chargée en insuline à raison de 2 Ul/kg.
Les monomères de formule (VI) de la présente invention sont choisis, de préférence, dans le groupe constitué des acrylates ou méthacrylate d'alkyle en C12-C22 et plus particulièrement en C16-C18.
L'agent de réticulation ou de branchement est de préférence choisi parmi le N, N'méthylène bis-acrylamide, le chlorure de triallyl méthyl ammonium, le méthacrylate d'allyle, le n-méthylolacrylamide, les diméthacrylate de polyéthylène glycols, le diméthacrylate d'éthylène glycol, le diméthacrylate de diéthylène glycol, le diméthacrylate de 1,6-hexanediol et l'allylsucrose.
Le rapport du nombre de charges cationiques/charges anioniques dans ces polymères amphotères est de préférence égal à environ 1.
Les poids moléculaires moyen en poids des polymères amphotères associatifs, présentent une masse moléculaire moyenne en poids supérieure à 500, de préférence comprise entre 10000 et 10000000 et encore plus préférentiellement entre 100000 et 8000000.
De préférence les polymères amphotères associatifs de l'invention contiennent de 1 à 99 moles % , plus préférentiellement de 20 à 95 moles% et encore plus préférentiellement de 25 à 75 moles % de composé (s) deformule (IVa) ou (IVb). Ils contiennent aussi de préférence de 1 à 80 moles %, plus préférentiellement de 5 à 80 moles% et encore plus préférentiellement de 25 à 75 moles% de composé (s) formule (V). La teneur en composé (s) de formule (VI) est de préférence comprise entre 0,1 et 70 moles%, plus préférentiellement entre 1 à 50 moles% et encore plus préférentiellement entre 1 à 10 moles%. L'agent de réticulation ou de branchement lorsqu'il est présent est de préférence compris entre 0,0001 et 1 mole% et plus préférentiellement encore entre 0,0001 et 0,1 mole%.
De préférence le rapport molaire entre le ou les composés de formules (IVa) ou (IVb) et le ou les composés de formule (V) varie de 20 : 80 à 95 : 5 et plus préférentiellement de 25 : 75 à 75 : Les polymères amphotères associatifs selon l'invention sont par exemple décrits dans la demande de brevet W09844012.
Les polymères amphotères particulièrement préférés selon l'invention sont choisis parmi les copolymères acide acrylique/chlorure d'acrylamidopropyltriméthylammonium/ méthacrylate de stéaryle.
Les polymères conformes à l'invention sont généralement présents dans les compositions antisolaires selon l'invention à une concentration (exprimée en matière active MA) comprise entre 0,01 et 10 % en poids, et de préférence entre 0,1 et 5 % en poids, par rapport au poids total de la composition.