INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
De préférence, selon l'invention, dans la formule (1), - R1 et R2, indépendamment l'un de l'autre, désignent hydrogène, (C1-C4) alkyl substitué par hydroxyl ou (C1-C4) alcoxy et plus particulièrement encore désignent hydrogène ou méthyle, - Z désigne un radical alkyle en C2-CS linéaire ou ramifié ou cyclique, éventuellement substitué par un hydroxy, alcoxy, halogène, la chaîne dudit radical étant éventuellement interrompue par un groupe -0- ou -NR1- ; un radical 1, 4-phényl, un radical 1, 4-naphtyl éventuellement substitué par un alkyle, alcoxy, halogène ; Z pouvant formé avec R1, R2 et les 2 atomes d'azote, un cycle pipérazine, - Z désigne préférentiellement un radical phényl non substitué, un radical phényl ou naphtyl substitué par 1 ou 2 radicaux méthyl ou méthoxy, un radical pipérazine par liaison avec R-), R et les 2 atomes d'azote, un radical (C2-C4) alkylène non subsitué ou substitué par un ou 2 hydroxyl, -X désigne un groupement de formule (b).
De préférence, selon l'invention, dans la formule (II), - Z1 désigne un radical alkyle en C2-CS linéaire ou ramifié ou cyclique, éventuellement substitué par un hydroxy, alcoxy, halogène, la chaîne dudit radical étant éventuellement interrompue par un groupe -0- ou -NR1- ; un cycle pipérazine formé avec R1, R2 et les deux atomes d'azote, - Z1 désigne préférentiellement un radical (C2-C6) alkylène non substitué ou substitué par un ou plusieurs hydroxyl, un cycle pipérazine formé avec R-j, R et les deux atomes d'azote ; et plus particulièrement encore un radical (C2-C4) alkylène non substitué, - R3 et R4 désignent méthyl ou éthyl, et R5 et R6 désignent hydrogène, méthyl, ou méthoxy.
La séquence nucléotidique ID SEQ NO1 du gène IFNa-21 humain sauvage de référence comporte une séquence codante de 570 nucléotides, du nucléotide 670 (codon start) au nucléotide 1239 (codon stop).
Le gène IFN a-21 humain sauvage de référence code pour une protéine immature de 189 acides aminés, correspondant à la séquence d'acides aminés ID SEQ NO2, qui sera convertit en protéine mature de 166 acides aminés (de l'acide aminé 24 à 189), par clivage du peptide signal qui comprend les 23 premiers acides aminés.
Chacun des polymorphismes de type SNP de l'invention : c973a, g1011c, t1049a, t1155a et a1204g, entraînent des modifications de la protéine codée par la séquence nucléotidique du gène IFNa-21.
Ces modifications dans la séquence d'acides aminés sont les suivantes : 1) Le polymorphisme de type SNP c973a entraîne une mutation de l'acide aminé glutamin (Q) en position 102 dans la protéine immature du gène IFNa-21, correspondant à la séquence d'acides aminés ID SEQ NO2, en lysine (K) et en position 79 de la protéine mature.
Dans la description de la présente invention, on appellera indifféremment Q79K et Q 1 02K la mutation codée par ce polymorphisme de type SNP de l'invention selon que l'on se réfère respectivement à la protéine mature ou à la protéine immature.
2) Le polymorphisme de type SNP g1011c entraîne une mutation de l'acide aminé glutamin (Q) en position 114 dans la protéine immature du gène IFNa-21, correspondant à la séquence d'acides aminés ID SEQ NO2, en histidine (H) et en position 91 de la protéine mature.
Dans la description de la présente invention, on appellera indifféremment Q91H et Q114H la mutation codée par ce polymorphisme de type SNP de l'invention selon que l'on se réfère respectivement à la protéine mature ou à la protéine immature.
3) Le polymorphisme de type SNP t1049a entraîne une mutation de l'acide aminé valine (V) en position 127 dans la protéine immature du gène IFNa-21, correspondant à la séquence d'acides aminés ID SEQ NO2, en acide aspartique (D) et en position 104 de la protéine mature.
Dans la description de la présente invention, on appellera indifféremment V104D et V127D la mutation codée par ce polymorphisme de type SNP de l'invention selon que l'on se réfère respectivement à la protéine mature ou à la protéine immature.
4) Le polymorphisme de type SNP t1155a entraîne une mutation de l'acide aminé cystéine en position 162 dans la protéine immature du gène IFNa-21, correspondant à la séquence d'acides aminés ID SEQ NO2, en codon stop et en position 139 de la protéine mature.
Dans la description de la présente invention, on appellera indifféremment C139stop et C162stop la mutation codée par ce polymorphisme
de type SNP de l'invention selon que l'on se réfère respectivement-à la protéine mature ou à la protéine immature.
5) Le polymorphisme de type SNP a1204g entraîne une mutation de l'acide aminé lysine (K) en position 179 dans la protéine immature du gène 1 FNa-21, correspondant à la séquence d'acides aminés D. SEQ N 2, en glutamate (E) et en position 156 de la protéine mature.
Dans la description de la présente invention, on appellera indifféremment K156E et K179E la mutation codée par ce polymorphisme de type SNP de l'invention selon que l'on se réfère respectivement à la protéine mature ou à la protéine immature.
Les polypeptides conformes à l'invention comportant l'un au moins des polymorphismes de type SNP décrit ci-dessus entraînent des modifications de la conformation spatiale ceux par rapport au polypeptide de l'IFNa-21 naturel.
selon la présente invention. Le collagène peut être préparé à différentes concentrations selon le type de cellules cibles en culture. Il s'agit préférentiellement de collagène de type 1, d'origine naturelle, synthétique ou semi-synthétique. Le collagène (ou les autres constituants de la matrice biologique) peut être d'une espèce différente de celle des cellules cultivées. A titre d'exemple, du collagène de type 1 de tendon de queue de rat peut être déposé sur la membrane.
Avantageusement, la matrice biologique comprend en outre différentes molécules de la matrice extra-cellulaire et/ou une lame basale reconstituée et/ou des cellules exerçant un rôle trophique sur les cellules cibles ou l'organe cible et/ou les neurones et/ou des cellules exerçant un rôle trophique sur les prolongements nerveux.
Ainsi, outre le collagène, la matrice biologique peut contenir différents facteurs et molécules de la matrice extra cellulaire. Ces facteurs peuvent être, par exemple, du collagène de type IV, de la laminine, de la fibronectine et/ou de la ténacine et/ou tout autre type de molécules permettant une bonne adhésion et survie des cellules cibles ou de l'organe cible et des neurones au sein de la matrice cellulaire. Ces facteurs peuvent se présenter sous forme de lame basale reconstituée extraite d'une tumeur, comme par exemple la tumeur EHS (Kleiman et Col, 1986). La lame basale reconstituée comprend ainsi toute substance issue de la tumeur EHS et/ou tout produit issu de cette tumeur et commercialisé tels que le Matrigelo (Becton Dickinson, France). Selon une variante particulière, la matrice biologique comprend un mélange de collagène, notamment de type 1, et une lame basale reconstituée extraite de la tumeur EHS de souris.
La matrice biologique peut également contenir des cellules exerçant un rôle trophique sur les cellules cibles ou l'organe cible et/ou les neurones.
Les cellules permettant ainsi d'augmenter la survie ou la prolifération des cellules cibles ou des neurones, peuvent être rajoutées dans la matrice biologique, par exemple dans le collagène. Il s'agit, par exemple, des cellules fibroblastiques ou des astrocytes. De même, des oligodendrocytes ou des cellules de Schwann,
peuvent être incorporées dans la matrice biologique, par exemple dans le collagène. Ces cellules favorisent en effet la pousse des axones en formant autour d'eux une gaine de myéline.
La matrice complexe empêche tout contact physique entre les corps des cellules mais permet le passage des prolongements nerveux.
L'invention propose donc des tissus et cellules cibles innervés par les prolongements nerveux des cellules nerveuses.
Cellules cibles Les cellules cibles des neurones sont les cellules susceptibles d'être innervées.
Ces cellules doivent pouvoir être isolées et purifiées et doivent pouvoir se développer ou survivre en culture dans un milieu approprié.
Les cellules cibles peuvent être des cellules humaines ou animales, progénitrices ou différenciées. Elles peuvent être isolées à partir de prélèvements sains issus d'êtres humains ou de tout autre animal. Elles peuvent provenir également de prélèvements pathologiques.
La population de cellules cibles peut comprendre des cellules de plusieurs types différents, pour reconstituer des structures complexes telles que des organes. L'organe lui-même peut être une cible directe. On entend alors par organe, toute structure tissulaire organisée pouvant être innervée.
Il peut s'agir par exemple de kératinocytes et de mélanocytes si l'objectif est de reconstituer des épidermes pigmentés ou de cellules musculaires et de cellules fibroblastiques s'il s'agit de favoriser la formation de myotubes, ou d'explants de tissus.
Ces cellules peuvent être issues de tissu normaux ou pathologiques, de tissus adultes, d'embryons ou encore de cellules souches (on appelle cellule souche toute cellule pluripotente d'origine embryonnaire ou adulte animale ou humaine ayant une potentialité de se différencier en une cellule adulte). Il peut s'agir par exemple de cellules provenant de l'épiderme, comme les kératinocytes ou les
mélanocytes et les cellules de Langerhans ; de cellules provenant de prélèvements de derme, comme les fibroblastes et par exemple les cellules fibroblastiques 3T3, de prélèvements d'hypoderme, comme les adipocytes ou de prélèvement de muscles striés, comme les cellules satellites ou de muscles lisses, comme les cellules musculaires lisses de l'intestin, ou encore de cellules musculaires cardiaques. Il peut également s'agir de cellules nerveuses provenant d'une structure différente des neurones se développant dans le deuxième compartiment.
Les cellules cibles peuvent être ensemencées soit sous forme dissociée, soit sous forme d'explants (on appelle explant toute tranche d'une structure tissulaire organisée ainsi découpée et mise en culture), soit sous forme d'organes reconstitués ou d'agrégats.
C'est par exemple le cas des polyéthers polyuréthanes non-ioniques à chaîne grasse comme : -l'ACULYN 44 et l'ACULYN 46 de la société ROHM & HAAS [l'ACULYN 46 est un polycondensat de polyéthylèneglycol à 150 ou 180 moles d'oxyde d'éthylène, d'alcool stéarylique et de méthylène bis(4-cyclohexyl-isocyanate) (SMDI), à 15% en poids dans une matrice de maltodextrine (4%) et d'eau (81%); l'ACULYN 44 est un polycondensat de polyéthylèneglycol à 150 ou 180 moles d'oxyde d'éthylène, d'alcool décylique et de méthylène bis(4-cyclohexylisocyanate) (SMDI), à 35% en poids dans un mélange de propylèneglycol (39%) et d'eau (26%)]; -le produit DW 1206B de chez ROHM & HAAS à chaîne alkyle en C20 et à liaison uréthanne, proposé à 20 % en matière sèche dans l'eau; -les produits Rhéolate 255, Rhéolate 278 et Rhéolate 244 vendus par la société RHEOX, ou les produits DW 1206F et DW 1206J proposés par la société ROHM & HAAS
Parmi les polymères amphiphiles comportant au moins une chaîne grasse et de type amphotère, on peut citer notamment ceux décrits et préparés dans la demande de brevet W09844012, et plus particulièrement les copolymères acide acrylique/chlorure de (méth)acrylamidopropyl triméthyl ammonium/ méthacrylate de stéaryle Parmi les polymères amphiphiles comportant au moins une chaîne grasse et de type cationique, on peut citer notamment : -ceux choisis parmi les dérivés de cellulose quaternisée, dont en particulier, - les celluloses quaternisées modifiées par des groupements comportant au moins une chaîne grasse, tels que les groupes alkyle, arylalkyle, alkylaryle comportant au moins 8 atomes de carbone, ou des mélanges de ceux-ci, - les hydroxyéthylcelluloses quaternisées modifiées par des groupements comportant au moins une chaîne grasse, tels que les groupes alkyle, arylalkyle, alkylaryle comportant au moins 8 atomes de carbone, ou des mélanges de ceux-ci.
-ceux choisis dans la famille des polyuréthanes associatifs cationiques décrite par la demanderesse dans la demande de brevet français n -0009609; elle peut être représentée par la formule générale (XIX) suivante : dans laquelle : R et R', identiques ou différents, représentent un groupement hydrophobe ou un atome d'hydrogène ; X et X', identiques ou différents, représentent un groupement comportant une amine tertiaire ou quaternaire portant ou non un groupement hydrophobe, ou encore le groupement L" ; L, L' et L", identiques ou différents, représentent un groupement dérivé d'un diisocyanate ; P et P', identiques ou différents, représentent un groupement comportant une amine tertiaire ou quaternaire portant ou non un groupement hydrophobe ; Y représente un groupement hydrophile ; n, m, et p valent chacun indépendamment des autres entre 0 et 1000 ; la molécule contenant au moins une fonction amine tertiaire ou quaternaire et au moins un groupement hydrophobe.
- Principe actif 5,0% - Eau qsp 100% 6/ACTIVITE PHOTOPROTECTRICE DU PRINCIPE ACTIF Activité anti-radicalaire : Les tests sont conduits sur des cultures cellulaires de kératinocytes humains afin de déterminer si le principe actif présente une action protectrice vis-à-vis des radiations UVA et UVB.
A cet effet, les cellules sont soumises à une irradiation avec une intensité de 5 à 20 joules/cm2 pour les UV A et de 0,05 à 0,40 joules/cm2 pour les UVB, préférentiellement 9 joules/cm2 pour les UVA et 0,17 joules/cm2 pour les UVB.
On mesure ensuite la viabilité cellulaire de ces kératinocytes par une mesure de densité optique suite à une coloration au M. T. T, ledit colorant n'étant susceptible d'être absorbé que par les cellules vivantes.
Les résultats sont regroupés dans le tableau de la figure 5.
On constate une forte activité anti-radicalaire, bien supérieure à celle obtenue avec le modèle polyphénolique, vis-à-vis des radicaux libres UVA et UVB induits. Cet effet est dose-dépendant.
Activité anti-apoptose : L'étude est conduite sur des explants de peau et montre l'activité photoprotectrice du principe actif selon l'invention vis-à-vis de l'apparition des cellules épidermiques"coup de soleil"ou dites"sunburn cells".
Ces cellules présentent des lésions de l'ADN et les caractéristiques des cellules en apoptose, avec notamment un cytoplasme éosinophile.
Après irradiation aux UVB, on assure un comptage des cellules"coup de soleil"au microscope, après coloration des coupes histologiques des explants.
On obtient les résultats mentionnés dans le tableau de la figure 6.
Le principe actif présente une forte activité protectrice et limite fortement l'apparition de cellules"coup de soleil".
Activité anti-irritante : Une telle activité peut être avantageusement mesurée par dosage du taux d'interleukine-1 a libérées dans un milieu de culture de kératinocytes humains soumis à un stress oxydatif provoqué par les rayons UVA + UVB.
Le dosage du taux d'Interleukine-1 a libérées dans le surnageant de culture de kératinocytes soumis à des UVA et UVB est réalisé par la méthode ELISA. Les valeurs sont données en pug/ !.
La comparaison est de nouveau effectuée avec un mélange modèle polyphénolique.
Le principe actif selon la présente invention provoque une diminution du taux d'interleukine-1 a.
Les résultats sont mentionnés dans le tableau de la figure 7.
Cet effet est également dose-dépendant.
Les IFNa sont aussi connus pour induire l'expression d'antigènes spécifiques de tumeurs à la surface de cellules tumorales et également pour induire les gènes placés sous le contrôle de régions promotrices de type ISRE (Interferon-Stimulated Response Element) en agissant sur les facteurs de transcription spécifiques de ces ISRE.
Il est connu que les IFNa sont impliqués dans différents dérèglements et/ou maladies humaines, tels que les différents cancers comme, par exemple, les carcinomes, les mélanomes, les lymphomes, les myélomes, les leucémies et les cancers du foie, du cou, de la tête et des reins, les maladies cardiovasculaires, les maladies métaboliques telles que celles qui ne sont pas liées au système immunitaire comme, par exemple, l'obésité, les maladies infectieuses en particulier les infections virales comme les hépatites B et C et le SIDA, les pneumonies, les colites ulcératives, les maladies du système nerveux central comme, par exemple, la schizophrénie et la dépression, le rejet de greffe de tissus ou d'organes, la cicatrisation de blessures, l'anémie en particulier chez les patients dialysés, les allergies, l'asthme, les scléroses multiples, l'ostéoporose, le psoriasis, l'arthrite rhumatoïde, la maladie de Crohn, les maladies et les désordres auto-immuns, les désordres gastro-intestinaux ou encore les désordres liés aux traitements par chimiothérapie.
Les IFNa sont particulièrement utilisés pour le traitement des hépatites chroniques B et C, des leucémies telles que la leucémie à trichloroleucocytes et la leucémie myéloïde chronique, des myélomes multiples, des lymphomes folliculaires, de tumeurs carcinoïdes, de mélanomes malins, de carcinomes rénaux métastasés ainsi que des tumeurs qui apparaissent à la suite d'un déficit immunitaire, tel que le sarcome de Kaposi dans le cas du SIDA.
Il est également connus que les IFNa sont aussi efficaces contre les tumeurs cancéreuses ou non. Les IFNa sont reconnus par la FDA (Food
and Drug Administration) pour le traitement des verrues génitales ou vénériennes.
Plus particulièrement, l'IFNa-21 a pût être localisé par hybridation in situ dans des cerveaux de patients atteints de la maladie de Parkinson ou de la maladie d'Alzheimer.
Les cellules microgliales expriment en grande quantité l'IFNa-21, par rapport aux autres cellules.
Chez les patients atteints de maladie d'Alzheimer, la présence de l'IFNa-21 a pût être démontrée dans des neurones des lobes pariétaux, suggérant ainsi que l'IFNa-21 pourrait être impliqué dans le développement de cette pathologie (Voir Kawaguchi N, Yamada T, Yoshiyama Y. No To Shinkei.
1997 Jan. ; 49 (1) : 69-73).
Toutefois, FNa-21, comme les IFNa de manière générale, présentent de nombreux effets secondaires lorsqu'ils sont employés dans des compositions pharmaceutiques, tels que des réactions d'hypersensibilité aiguë (urticaire, broncho-constriction, choc anaphylactique, etc. ), des arythmies cardiaques, des hypotensions artérielles, des crises d'épilepsie, des troubles des fonctions thyroïdiennes ou des syndromes pseudo-grippaux (fièvres, sueurs, myalgies).
La demanderesse a trouvé de nouveaux polypeptides et nouveaux polynucléotides analogues à ''IFNa-21, ayant une fonctionnalité différente de dna-21 naturel, pouvant être utilisés notamment pour traiter ou prévenir les dérèglements ou maladies mentionnés précédemment et éviter tout ou partie des inconvénients qui leurs sont liés.
L'INVENTION L'invention a pour principal objet de nouveaux polynucléotides qui diffèrent de la séquence nucléotidique du gène sauvage de référence de HFNa- 21, en ce qu'ils comportent un ou plusieurs polymorphismes de type SNP (Single Nucleotide Polymorphism) fonctionnels.
La demanderesse a en effet découvert 5 polymorphismes de type SNP fonctionnels dans la séquence nucléotidique du gène sauvage de
référence de l'IFNa-21, correspondant à la séquence nucléotidique ID SEQ ? 1.
La séquence nucléotidique ID SEQ NO1 comporte 2001 nucléotides.
Ces 5 polymorphismes de type SNP fonctionnels. sont présentés ci-dessous : 1) Le nucléotide cytosine (c) en position 973 de la séquence nucléotidique ID SEQ NO 1 du gène sauvage de référence IFN a-21 est muté en adénine (a).
Parmi les dérivés pyrimidiniques, on peut citer les composés décrits par exemple dans les brevets DE 2 359 399 ; JP 88-169 571 ; JP 05 163 124 ; EP 0 770 375 ou demande de brevet WO 96/15765 comme la 2,4, 5,6-tétra-aminopyrimidine, la 4-hydroxy 2,5, 6-triaminopyrimidine, la 2-hydroxy 4,5, 6-triaminopyrimidine, la 2,4-dihydroxy 5,6-diaminopyrimidine, la 2,5, 6-triaminopyrimidine, et les dérivés pyrazolo-pyrimidiniques tels ceux mentionnés dans la demande de brevet FR-A-2 750 048 et parmi lesquels on peut citer la pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidine-3, 7-diamine ; la 2,5diméthyl pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidine-3, 7-diamine ; la pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidine-3, 5diamine ; la 2, 7-diméthyl pyrazolo-[1,5-a]-pyrimidine-3, 5-diamine ; le 3-amino pyrazol- [1, 5-a]-pyrimidin-7-ol ; le 3-amino pyrazolo- [1, 5-a]-pyrimidin-5-ol ; le 2- (3-amino pyrazolo- [1, 5-a]-pyrimidin-7-ylamino)-éthanol, le 2- (7-amino pyrazolo- [1, 5-a]-pyrimidin- 3-ylamino)-éthanol, le 2- [ (3-amino-pyrazolo [1, 5-a] pyrimidin-7-yl)- (2-hydroxy-éthyl)-
amino]-éthanol, le 2- [ (7-amino-pyrazolo [1, 5-a] pyrimidin-3-yl)- (2-hydroxy-éthyl)-amino]- éthanol, la 5, 6-diméthyl pyrazolo-[1, 5-a]-pyrimidine-3, 7-diamine, la 2, 6-diméthyl pyrazolo-[1, 5-a]-pyrimidine-3, 7-diamine, la 2, 5, N 7, N 7-tetraméthyl pyrazolo-[1, 5-a]pyrimidine-3, 7-diamine, la 3-amino-5-méthyl-7-imidazolylpropylamino pyrazolo-[1, 5-a]- pyrimidine et leurs sels d'addition avec un acide et leurs formes tautomères, lorsqu'il existe un équilibre tautomérique.
Parmi les dérivés pyrazoliques, on peut citer les composés décrits dans les brevets DE 3 843 892, DE 4 133 957 et demandes de brevet WO 94/08969, WO 94/08970, FR-A-2 733 749 et DE 195 43 988 comme le 4,5-diamino 1-méthyl pyrazol, le 4,5-diamino 1- (ss-hydroxyéthyl) pyrazole, le 3, 4-diamino pyrazol, le 4,5diamino 1- (4'-chlorobenzyl) pyrazole, le 4,5-diamino 1, 3-diméthyl pyrazole, le 4,5-diamino 3-méthyl 1-phényl pyrazole, le 4,5-diamino 1-méthyl 3-phényl pyrazole, le 4-amino 1, 3-diméthyl 5-hydrazino pyrazole, le 1-benzyl 4,5-diamino 3-méthyl pyrazole, le 4,5-diamino 3-tert-butyl 1-méthyl pyrazole, le 4,5-diamino 1-tert-butyl 3-méthyl pyrazole, le 4,5-diamino 1-(ss-hydroxyéthyl)3-émthyl pyrazole, le 4,5-diamino 1-éthyl 3méthyl pyrazole, le 4,5-diamino 1-éthyl 3-(4'-méthoxyphényl) pyrazole, le 4,5-diamino 1-éthyl 3-hydroxyméthyl pyrazole, le 4,5-diamino 3-hydroxyméthyl 1-méthyl pyrazole, le 4,5-diamino 3-hydroxyméthyl 1-isopropyl pyrazole, le 4,5-diamino 3-méthyl 1-isopropyl pyrazole, le 4-amino 5- (2'-aminoéthyl) amino 1, 3-diméthyl pyrazole, le 3, 4,5-triamino pyrazole, le 1-méthyl 3, 4,5-triamino pyrazole, le 3,5-diamino 1-méthyl 4méthylamino pyrazole, le 3,5-diamino 4- (j3-hydroxyéthyl) amino 1-méthyl pyrazole, et leurs sels d'addition avec un acide.
A titre d'exemple, on peut citer le 2-méthyl 5-aminophénol, le 5-N-(sshydroxyéthyl) amino 2-méthyl phénol, le 6-chloro-2-méthyl-5-aminophénol, le 3-amino phénol, le 1,3-dihydroxy benzène, le 1,3-dihydroxy 2-méthyl benzène, le 4-chloro 1,3dihydroxy benzène, le 2,4-diamino 1- ( & -hydroxyéthytoxy) benzène, le 2-amino 4-(sshydroxyéthylamino) 1-méthoxybenzène, le 1,3-diamino benzène, le 1, 3-bis- (2, 4-
diaminophénoxy) propane, la 3-uréido aniline, le 3-uréido 1-diméthylamino benzène, le sésamol, le 1-ss-hydroxyéthylamino-3, 4-méthylènedioxybenzène, l'a-naphtol, le 2 méthyl-1-naphtol, le 6-hydroxy indole, le 4-hydroxy indole, le 4-hydroxy N-méthyl indole, la 2-amino-3-hydroxy pyridine, la 6-hydroxy benzomorpholine la 3,5-diamino- 2,6-diméthoxypyridine, le 1-N- (H-hydroxyéthyt) amino-3, 4-méthylène dioxybenzène, le 2, 6-bis- (fl-hydroxyéthylamino) toluène et leurs sels d'addition avec un acide.
Le milieu approprié pour la teinture appelé aussi support de teinture est généralement constitué par de l'eau ou par un mélange d'eau et d'au moins un solvant organique pour solubiliser les composés qui ne seraient pas suffisamment solubles dans l'eau. A titre de solvant organique, on peut par exemple citer les alcanols inférieurs en Cl-C4, tels que l'éthanol et l'isopropanol ; les polyols et éthers de polyols comme le 2-butoxyéthanol, le propylèneglycol, le monométhyléther de propylèneglycol, le monoéthyléther et le monométhyléther du diéthylèneglycol, ainsi que les alcools aromatiques comme l'alcool benzylique ou le phénoxyéthanol, et leurs mélanges.
Le polynucléotide conforme à l'invention peut également comprendre des séquences nucléotidiques comme les séquences 5'et/ou 3' non-codantes, telles que, par exemple, des séquences transcrites, des séquences non-translatées, des séquences signal d'épissage, des séquences polyadénylées, des séquences de liaison avec des ribosomes ou encore des séquences qui stabilisent l'ARNm.