INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La plaque a été saturée pendant une heure à la température du laboratoire avec un volume de 200 ut/puits de tampon PBS contenant 0, 1% de sérum albumine bovine et 5mM de EDTA, puis lavée deux fois avec un tampon ELISA (le tampon PBS ci-dessus additionné de 0,1% de Tween 20).
Les puits ont été lavés trois fois avec un tampon ELISA puis incubés pendant 1 heure à la température du laboratoire avec un second anticorps monoclonal dirigé contre ESM-1, l'anticorps MEC15 (CNCM NOI- 2572) à la concentration de 0, 1ug/ml dans 100 ul de tampon par puits.
Après trois lavages, on a ajouté un anticorps monoclonal de rat biotinylé dirigé contre les IgG1 de souris (commercialisé par
PHARMINGEN) dilué dans un tampon ELISA et laissé incuber ce second anticorps pendant une heure.
Après trois lavages dans le tampon ELISA, les puits ont été incubés avec un conjugué de streptavidine-peroxydase à la dilution 1 : 10. 000 v/v (commercialisé par la Société ZYMED).
Après 30 minutes d'incubation avec le conjugué streptavidine- peroxydase, on réalise trois lavages de chaque puits dans un tampon ELISA puis deux lavages dans un tampon PBS.
Le conjugué streptavidine-peroxydase est révélé avec le substrat TMB commercialisé par la Société SIGMA (Saint-Louis, MO, USA) en présence de 255 ! JI de H202 pendant 30'.
La réaction de révélation est stoppée par l'addition d'un volume de 100 de H2S04 2N.
La concentration de la protéine ESM-1 plasmatique ou sérique est calculée à partir des mesures de densité optique et exprimée en nanogrammes par ml.
B. RESULTATS On a mesuré la concentration de protéine ESM-1 circulante dans le sérum de différents patients porteurs d'un cancer broncho-pulmonaire à différents stades de développement, respectivement au stade 1, Il, IIIA, IIIB et IV selon la classification internationale TNM qui est définie ci-après : T = taille de la tumeur (T1 : 3 cm.
N = nodule ganglionnaire (NO si non envahi ; N1 si envahi).
2) L'induction d'un stress oxydant par les AGEméthylglyoxal dans les péricytes rétiniens en culture.
3) Les voies de production des céramides et des DAG activées dans les péricytes rétiniens en réponse aux AGE-méthylglyoxal.
4) L'implication des caspases.
Il sera fait référence dans ce qui suite aux dessins en annexe dans lesquels : La figure 1 représente le schéma d'un capillaire rétinien.
La figure 2 représente la voie de Maillard.
La figure 3 représente le marquage au 32p des céramides et des DAG.
La figure 4 représente l'effet des AGEméthylglyoxal sur l'apoptose des péricytes rétiniens de boeuf.
La figure 5 représente l'effet des AGEméthylglyoxal sur la production de céramides et de DAG dans les péricytes rétiniens de boeuf.
La figure 6 représente l'effet de la Na-acétyl- L-Cystéine sur l'apoptose induite des BRP par les AGEméthylglyoxal.
La figure 7 représente l'effet de la Na-acétyl- L-Cystéine sur la production de céramides et de DAG dans les BRP induite par les AGE-méthylglyoxal.
La figure 8 représente les effets de divers antioxydants sur l'apoptose des péricytes en réponse aux AGE-méthylglyoxal.
La figure 9 représente l'effet de la fumonisine Bl sur l'apoptose des péricytes induite par les AGEméthylglyoxal.
La figure 10 représente l'effet de la désipramine sur l'apoptose des péricytes induite par les AGE-méthylglyoxal.
La figure 11 représente l'effet de la désipramine sur la production stimulée de céramides et de DAG dans les BRP induites par les AGE-méthylglyoxal.
La figure 12 représente la voie de production des céramides et des DAG dans les péricytes envisagée sur la base de l'invention.
La figure 13 représente l'effet du D609 sur l'apoptose des péricytes induite par les AGE-méthylglyoxal après deux passages.
La figure 7A représente un filet mâle 11 de forme trapézoïdale globalement similaire à celui de la figure 4A.
Ce filet est forme adaptée à être vissé dans le filet femelle 12 de la figure 6A. Comme dans le cas de la figure 6A, les zones de raccordement 41, 51 côté flanc d'engagement sont à simple rayon (voir figure 6D et 6E) tandis que celles 21 et 31 du côté flanc porteur sont à rayons multiples.
La zone 21 raccordement tangentiel de fond de filet (figure 7C) est semblable à celle 21 de figure 4A sauf que l'angle E étant nul, il n'est pas besoin d'arc de cercle secondaire pour raccorder l'arc de cercle principal 23 au fond filet 19 : la zone 21 est donc tout à fait le pendant de la zone 22 de la figure 6B ; notamment l'angle D vaut +30 .
La zone 31 raccordement de sommet de filet (figure 7B) est semblable et fait le pendant de la zone 32 de la figure 6C.
La figure 8A représente le filet mâle 11 de la figure 7A et le filet femelle 12 de la figure 6A une fois les éléments filetés 1, 2 assemblés par vissage pour constituer le joint fileté tubulaire 100 de la figure 1. Les filets 11, 12 de la figure 8A sont du type interférent comme ceux la figure 5A seuls les sommets de filet femelles 20 sont en contact sous pression contact avec les fonds de filet mâle 19, ainsi que les flancs porteurs mâles et femelles 13,14.
Les figures 8B et 8C montrent la disposition relative des zones de raccordement à rayons multiples 21, 32, 31, 22 assemblées. Du fait de la modification du raccordement en sommet de filet, les flancs porteurs mâles et femelles 13, 14 peuvent porter une plus grande surface que dans le cas de la figure 5A et peuvent donc supporter de plus fortes charges statiques en traction.
En outre, éléments filetés mâles et femelles ayant été tous deux modifiés, la tenue en fatigue l'assemblage n'est pas limitée par la tenue en fatigue de l'élément fileté non modifié comme dans le cas de la figure 5A.
Par contre, ce type de joint fileté nécessite d'approvisionner des éléments mâles et femelles du type modifié à profil anti-fatigue.
La figure 9A représente un filet femelle 12 de forme triangulaire d'un élément fileté tubulaire femelle 2 de la figure 1.
Le filet femelle 12 comprend - sommet de filet S2 - fond de filet F2 - flanc porteur 14 faisant un angle A avec la normale à l'axe de l'élément fileté 2 - un flanc d'engagement 16 faisant un angle B avec la normale à l'axe de l'élément fileté 2.
Les angles A et B sont tous deux égaux à 30 comme dans la spécification API 5B.
La définition du flanc porteur et du flanc d'engagement est la même que celle donnée plus haut. Le filetage 4 étant conique, la ligne joignant les sommets de filets et celle joignant les fonds de filet fait un angle C avec l'axe de l'élément filet.
Les flancs 14, 16 sont raccordés au sommet S2 et au fond F2 de filet par des zones de raccordement tangentielles 22, 32, 42, 52.
Les zones 32, 42 de sommet de filet sont symétriques l'une de l'autre par rapport à la normale à l'axe de l'élément fileté passant par le sommet S2 ; elles sont constituées d'un simple arc de cercle de rayon r25 : voir figure 9C.
Les zones 22, 52 de fond de filet ne sont pas symétriques l'une de l'autre rapport à la normale à l'axe de l'élément fileté passant par le fond F2 ; elles sont contre à rayons multiples : voir figure 9B.
La zone 22 comprend un arc de cercle principal 24 de rayon rP2 qui est tangent en F2 à la droite support de fond de filet. Le cercle support de l'arc 24 coupe en PRF2 la droite support du flanc porteur 14.
Ce dispositif comprend l'inducteur 32 qui est alimenté par la source de courant alternatif 34 ainsi que deux capteurs de champ magnétique 52 et 54 qui sont respectivement disposés aux niveaux 48 et 50 et prévus pour détecter la différentielle partielle, selon l'axe de l'inducteur, de la composante radiale du champ magnétique.
Plus précisément, dans l'exemple de la figure 2, ces capteurs 52 et 54 sont disposés entre l'inducteur 32 et le creuset 24 et chacun de ces capteurs comprend un couple de bobines identiques, montées de façon différentielle (en opposition) et disposées l'une au-dessus de l'autre, les axes de ces deux bobines étant sensiblement horizontaux et parallèles.
Les bobines du capteur 52 (respectivement 54) ont les références 56 et 58 (respectivement 60 et 62) et l'axe de ce capteur, axe qui est dans le plan défini par les axes de ces deux bobines, parallèle à ces axes et équidistant de ces derniers, rencontre l'axe x du creuset 24 et correspond au niveau bas (respectivement haut) du verre fondu dans le creuset.
Le dispositif de la figure 2 comprend aussi un amplificateur opérationnel 64 (respectivement 66) dont les deux entrées-pont respectivement connectées aux deux bornes de l'ensemble des bobines 56-58 (respectivement 60-62) comme on le voit sur la figure 2.
Le dispositif comprend en outre : des moyens de démodulation synchrone 68 (respectivement 70) dont l'entrée signal est reliée à la sortie de l'amplificateur opérationnel 64 (respectivement 66) et dont l'entrée référence est reliée à la source 34, - des moyens électroniques 72 (respectivement 74) de détection de passage par zéro ou de changement de signe des signaux fournis par les moyens de démodulation, l'entrée de ces moyens électroniques 72 (respectivement 74) étant respectivement reliée à la sortie des moyens de démodulation 68 (respectivement 70), et - des moyens de signalisation 76 qui reçoivent en entrée les signaux fournis par les moyens électroniques 72 et 74 qui fournissent un signal lors du passage par zéro ou du changement de signe.
Pour chaque niveau 48 ou 50, la démodulation synchrone s'effectue sensiblement en quadrature (déphasage de n/2) par rapport au courant inducteur.
La référence de démodulation provient d'un point de capture du courant circulant dans l'inducteur.
On précise que la forme de chacune des bobines (identiques) 56 et 58 dépend de la précision de la détection ainsi que de la sensibilité et de la stabilité de la mesure et qu'il en est de même pour les bobines 60 et 62.
Le montage différentiel des bobines 56 et 58 (respectivement 60 et 62) permet d'obtenir la
dérivée partielle selon l'axe x de la composante radiale du champ magnétique.
L'introduction du signal récupéré à la sortie des moyens de démodulation 68 (respectivement 70) dans les moyens électroniques 72 (respectivement 74) permet d'obtenir le déclenchement, grâce aux moyens de signalisation 76, d'un signal d'alarme lors du passage du niveau de verre fondu devant le capteur 52 (respectivement 54).
Dans un autre mode de réalisation particulier, qui est schématiquement et partiellement illustré par la figure 3, les capteurs 52 et 54 ne sont plus dans l'espace compris entre l'inducteur 32 et le creuset 24 : ils sont disposés dans une canne 78 c'est- à-dire un tube fermé à sa partie inférieure.
Cette canne est électriquement isolante (par exemple en alumine ou en céramique), refroidie si nécessaire (par des moyens non représentés) et disposée verticalement dans le creuset 24, entre la paroi interne de ce dernier et l'axe, de sorte qu'elle plonge dans le verre fondu 22 à travers la couche 42.
Les dimensions de la canne 78 et des bobines 56,58, 60 et 62 sont adaptées en fonction des contraintes mécaniques et thermiques.
De préférence, la canne 78 est disposée à une distance R de l'axe x du creuset à laquelle la composante radiale du champ magnétique est maximale.
Pour déterminer cette distance R, on utilise par exemple la méthode suivante : On calcule le champ magnétique H à l'intérieur du creuset, à l'aide, par exemple, d'un
Les signaux de sortie de chacun des 32 codeurs à priorité enregistrée 21 sont envoyés au codeur à retardement 22, qui comporte 97 bornes d'entrée, 10-196, et 9 bornes de sortie 00-08. Les 8 bits du signal TIME_STAMP sont délivrés par les bornes de sortie 00-07 du codeur à retardement 22. Le signal de sortie délivré par la porte ET 23 est transféré au signal EDGE FLAG qui apparaît sur la borne de sortie 08 du codeur à retardement 22.
Un schéma-bloc logique du codeur à retardement 22 est représenté sur la figure 9. Le codeur à retardement 22
comprend trente-deux portes OU à 3 entrées 2000-20031, un codeur à priorité de 32 bits à 5 bits 210, trois multi- plexeurs 220, trois registres à 1 bit 2300-2302 et un registre à 5 bits 240. Chaque porte OU 200i reçoit les signaux d'entrée provenant du codeur à priorité enregistrée 21i. Le signal de sortie de chaque porte OU 200 est appliqué à l'une différente des 32 bornes d'entrée du codeur à priorité 210. Les bornes de sortie du codeur à priorité 210 sont connectées aux bornes de sélection SO, S1, S2, S3, S4 de multiplexeurs 2200, 2201 et 2202, dont les bornes de sortie sont respectivement appliquées à des bornes de données D des registres 2300, 2301 et 2302. Les 5 bornes de sortie du codeur à priorité 210 sont appliquées aux bornes de données DO-D4 du registre à 5 bits 240. Les bornes de sortie Q du registre 2300, 2301 et 2302 envoient respectivement des signaux aux bornes de sortie 07, 06 et 05 du codeur à priorité 22. Les bornes de sortie du registre 240 envoient des signaux à des bornes de sortie 0O-04 du codeur à priorité 22. Le codeur à retardement 22 délivre le numéro d'indice et les signaux de sortie du codeur à priorité enregistrée 21 qui, conformément à ce qui a été décrit précédemment, est l'identifiant de l'instant d'arrivée de la transition dans le signal EDGE. Le numéro d'indice du codeur à priorité enregistrée 21 de l'identifiant est envoyé à des bornes de sortie 00-04 du décodeur à retardement 22, tandis que les signaux de sortie du codeur à priorité enregistrée de l'identifiant 21 sont envoyés aux bornes de sortie 05-07 du codeur à retardement 22. Des exemples du fonctionnement du codeur à retardement 22 vont être indiqués ci-après.
On suppose que chaque codeur à priorité enregistrée 211-214 code (c'est-à-dire génère) la valeur binaire "111" alors que chaque codeur à priorité enregistrée 215- 2132 code "000". Par conséquent, le codeur à retardement 22 délivre la valeur binaire "00100" - l'indice binaire du
codeur à priorité à indice maximum 21 possédant les signaux de sortie "111" - sur ses bornes de sortie 00-04. Les signaux de sortie binaires du codeur à priorité 214 - "111" - apparaissent au niveau des signaux de sortie 05-07 du codeur à retardement 22. Par conséquent, dans l'exemple indiqué précédemment, le signal TIME STAMP possède une valeur binaire égale à "00100111". Par conséquent, conformément à cet exemple, la transition dans le signal EDGE arrive une durée (39/256*période du signal CLK) avant l'apparition de la transition suivante du signal CLK. Avantageusement, comme cela est visible dans cet exemple, le convertisseur TDC 10 selon la présente invention enregistre l'instant d'arrivée d'une transition dans le signal EDGE avec une résolution égale à 1/256 de la période d'horloge. Pour un autre exemple, on suppose que le décodeur à priorité enregistrée 217 (non représenté sur la figure 1) code "100" tandis que chaque codeur à priorité enregistrée 21l-216 code "111" et que chaque codeur à priorité enregistrée 21g-2132 code "000". Par conséquent, le signal TIME STAMP possède une valeur binaire "00111101", dont les 5 bits de poids les plus significatifs possèdent une valeur binaire égale à 7 (c'est-à-dire l'indice du codeur à priorité 217), et dont les 3 bits de poids les moins significatifs affichent les signaux de sortie binaires du codeur à priorité enregistrée 217. Par conséquent, dans cet exemple, la transition dans le signal EDGE est arrivée, une durée (61/256*période du signal CLK) avant l'apparition de la transition suivante dans le signal CLK.
Bien que le signal TIME STAMP affiche l'instant d'arrivée d'une transition dans le signal EDGE, le signal EDGE-FLAG envoyé à la borne de sortie 08 du codeur à retardement 22 détecte l'apparition d'une transition dans le signal EDGE.
En référence à la figure 1, la porte ET 23 à 2
entrées reçoit le signal EDGE au niveau de sa borne d'entrée normale IO et le signal produit sur la borne de sortie 0 du tampon de retardement précis 1732 au niveau de sa borne d'entrée inverseuse Il. La porte ET 23 détecte l'apparition de transitions dans le signal' EDGE et envoie les transitions détectées à la borne d'entrée 196 du codeur à retardement 22, comme décrit précédemment.
Lorsque le signal EDGE est par exemple le siège d'une transition faisant passer du niveau bas au niveau haut, le signal à niveau haut - provoqué par la transition - est immédiatement envoyé à la borne d'entrée IO de la porte ET 23. Cependant, le signal à niveau haut doit se propager dans le trajet de retardement 16 ainsi que dans le tampon de retardement précis 1732 avant d'atteindre la borne d'entrée Il de la porte ET 23. Par conséquent, étant donné que la borne d'entrée inversée I1 de la porte ET 23 reçoit le signal à niveau haut au bout d'un intervalle de temps réglé par le retard dans le trajet de retardement 16 et dans le tampon de retardement 1732 alors que la borne d'entrée normale IO de la porte ET 23 reçoit le niveau haut avant cet intervalle de temps, le signal de sortie 0 de la porte ET 23 passe de 0 à 1, ce qui indique l'apparition d'une transition du niveau bas au niveau haut dans le signal EDGE. Lorsque la transition à niveau haut atteint éventuellement la borne Il de la porte ET 23, le signal de sortie de la porte ET 23 revient à 0.
Comme cela est visible sur la figure 1, le signal d'horloge CLK est appliqué aux bornes d'entrée d'horloge C de chacun des registres 18, des codeurs à priorité enregistrée 21 et du codeur à retardement 22.
Lors de la première transition faisant passer du niveau bas au niveau haut du signal CLK - à la suite d'une transition faisant passer du niveau bas au niveau haut dans le signal EDGE - les signaux présents au niveau des bits d'entrée de chaque registre 18 sont mémorisés et sont par
conséquent envoyés au codeur associé à priorité enregistrée 21 de ce registre 18.
Lors de la seconde transition faisant passer du niveau bas au niveau haut du signal CLK - à la suite de la transition du niveau bas au niveau haut dans le signal EDGE - les signaux codés par la logique combinatoire (c'est-à- dire la logique mettant en oeuvre la fonction de priorité) de chacun des codeurs à priorité enregistrée 21 sont mémorisés dans le registre à trois bits du codeur à priorité et sont ainsi envoyés aux bornes d'entrée IO-Ig5 du codeur à retardement 22. Avant l'apparition de la seconde transition dans le signal CLK, la porte ET 23 envoie la transition détectée dans le signal EDGE à la borne d'entrée 196 du codeur à retardement 22.
Lors de la troisième transition du signal CLK qui succède à la transition faisant passer du niveau bas au niveau haut dans le signal EDGE - le signal TIME STAMP à 8 bits et le signal EDGE FLAG sont envoyés respectivement aux bornes de sortie 03-07 et 08 du décodeur à retardement 22. En d'autres termes, lors de la troisième transition du signal CLK à la suite d'une transition faisant passer du niveau bas au niveau haut (ou du niveau haut au niveau bas) dans le signal EDGE, le signal EDGE FLAG détecte l'apparition de la transition dans le signal EDGE, et le signal TIME STAMP envoie l'instant d'arrivée de la transition détectée par rapport au signal CLK.
La figure 2 représente un schéma d'un étage de retardement approximatif connu 12 du type utilisé dans les trajets de retardement 13 et 16. Chaque étage de retardement 12 reçoit un couple de signaux différentiels au niveau de ses bornes d'entrée I et IN et produit un couple de signaux différentiels au niveau de ses bornes de sortie 0 et ON.
Les bornes de base des transistors bipolaires 40, 41 sont couplées respectivement à des bornes I et IN. Les
- la source de lumière est disposée au voisinage de la grande base du volume prismatique dé-
limité par le réflecteur et la plaque de diffusion de la lumière;
- l'extrémité du réflecteur et l'extrémité de la plaque de diffusion de la lumière les plus éloi-
gnées de la grande base du volume prismatique sont jointives;
gnées de la grande base du volume prismatique sont distantes d'une longueur inférieure à la longueur de la grande base du volume prismatique; - la plaque de diffusion de la lumière est réalisée en un premier matériau transparent possédant
un premier indice de réfraction et dans laquelle sont noyées des inclusions en un second maté-
riau transparent possédant un second indice de réfraction différent du premier; - le réflecteur est réalisé sous forme de plaque transparente; des aménagements de déviation de la lumière sont formés sur la face du réflecteur la plus éloignée de la source de lumière;
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- la plaque transparente formant le réflecteur est traversée par la lumière issue d'une deuxième source de lumière; - la deuxième source de lumière coopère avec un miroir pour constituer un feu de véhicule;
-le réflecteur et la plaque de diffusion de la lumière sont disposés dans un boîtier, et le réflec-
teur est constitué par une portion du boîtier; - le réflecteur est réalisé sous forme de plaque en un premier matériau transparent possédant
riau transparent possédant un second indice de réfraction différent du premier; - une face de la plaque formant le réflecteur opposée à celle qui est dirigée vers la source de lumière est revêtue d'un matériau réfléchissant la lumière; - la source de lumière est constituée d'une pluralité de diodes électroluminescentes; - la source de lumière est constituée d'une pluralité d'ampoules à incandescence;
- la source de lumière est constituée d'un tube fluorescent.
De préférence, un polypeptide antagoniste de la protéine ESM-1 tel que défini ci-dessus possède au plus 11,12, 13,14, 15,16, 17,18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 acides aminés consécutifs de la séquence SEQ ID N 1 et au moins une substitution d'acides aminés, par rapport à la séquence SEQ ID n 1.
Un polypeptide antagoniste de la protéine ESM-1, tel que défini cidessus, comprend au plus 1,2, 3,4, 5,6, 7,8, 9 ou 10 substitutions d'un acide aminé, par rapport à la séquence SEQ ID N'l, le nombre de substitutions d'acides aminés étant adapté en fonction de la longueur du polypeptide, étant entendu que le nombre de substitutions d'acides aminés par rapport à la séquence SEQ ID N 1 dans un polypeptide antagoniste selon l'invention est d'au plus 25% des acides aminés compris dans la séquence de ce polypeptide antagoniste, de préférence au plus 20%, 15% et de manière préférée d'au plus 10% du nombre des acides aminés compris dans la séquence du polypeptide antagoniste de ESM-1.
De manière préférée, une substitution d'acides aminés, par rapport à la séquence SEQ ID N'l, dans un polypeptide antagoniste selon l'invention est une substitution dite non conservative . Par substitution non conservative , on entend la substitution d'un résidu d'acide aminé par un acide aminé d'une classe distincte.
Les acides aminés sont classiquement rangés selon les classes suivantes : - acides aminés non polaires (hydrophobes) : alanin, leucin, isoleucin, valine, proline, phénylalanine, tryptophane et méthionine ; - acides aminés contenant des cycles aromatiques : phénylalanine, tryptophane et tyrosine ; - acides aminés neutres polaires : glycine, sérine, thréonine, cystéine, tyrosine, asparagine et glutamin ; - acides aminés chargés positivement (basiques) : arginine, lysin et histidine) ; - acides aminés chargés négativement (acides) : acide aspartique et acide glutamique.
Un type de substitution d'acides aminés préféré pour la préparation d'un polypeptide antagoniste de la protéine ESM-1 selon l'invention est la substitution d'un acide aminé contenant un cycle aromatique par un acide aminé ne contenant pas de cycle aromatique.
De manière tout à fait préférée, un polypeptide antagoniste de la protéine ESM-1 selon l'invention comprend une substitution des résidus phénylalanines en positions 134 et 135 de la SEQ ID D ? 1 par deux résidus d'acides aminés, identiques ou différents, ne contenant pas de cycle aromatique.
Un tel polypeptide antagoniste de la protéine ESM-1 préféré est un polypeptide d'au moins 10 acides aminés consécutifs de la séquence SEQ ID N 1, telle que définie ci-dessus, dans lequel les résidus phénylalanine en positions 134 et 135 ont été remplacés par deux résidus alanin.
Selon un premier aspect, un polypeptide antagoniste de la protéine ESM-1 selon l'invention peut être préparé par les techniques classiques de synthèse chimique, indifféremment en solution homogène ou en phase solide.