INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le plasmide binaire pMRT1180 a été obtenu par insertion de la cassette d'expression MPr1138 (SEQ.ID12) /uidA- I V2;'term-ros dans le site EcoRI du plasmide binaire pMRT'1118, décrit dans la section 4.1 de l'exemple 4, excepté que la cassette d'expression a été isolée à partir du plasmide pMRT1138 (décrit dans la section 3.4 de l'exemple 3).
Le plasmide résultant. a été appelé îRT ; 80 et a été transféré dans la souche 'tit'OW'tE-'Y'1 1T Lulr,....::faciens LBA4 4 04 selon le protocole décrit précédemment t en section 4.1 de l'exemple 4 . Le clone d'agrobactérie obtenu a été appelé A1180.
4. 5. Construction du plasmide binaire pMRT1181.
Le plasmide binaire pMRTII''!l a été obtenu par insertion de la cassette d'expression Merl1339 (SEQ.1D13 / ui dA- IV2 / term- nos dans le site EcoRI du plasmide Dina i re pMRT1118, décrit dans la section 4.1 de l'exemple 4), excepté que la cassette d'expression a été isolée à partir du plasmide pt-'IRT1139 (décrit. dans la section 3.9 de l'exemple 3).
Le plasmide résultant a été appelé pMRT1181 et a été transféré dans la souche d'Agrobacterium tumefaciens LBA4404 selon le protocole décrit précédemment en section 4. 1 de l'exemple 4. Le clone d'agrobactérie obtenu a été appelé A1181.
Bradford M. (1976). A rapid and sensitive nethod for the détection of microgram quantities of proteins utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biocherr.. 72, 248-254.
Fenoll C., Schwarz J.J., Black D.M., Schneider M. and Howell S.H. (1990). The intergenic region of maize streak virus contains a GC-rich element that activâtes rightward transcription and binds maize nuclear factors. PMB 15, 865-877.
Guérineau et Mullineaux (1993). In Plant molecular biolcgy labfax, Croy R.R.D. (Ed.), BioS Scientific Pu:sters, Blackvrell Scientific Publications.
Jefferson R.A., Burgess S.M. et Hirsh D :1986:. r-glacur.nidase as a gène-fusion marker. Proc. Nat. Acad. Se'.. USA, 83, 8447-8451.
Jefferson R.A. , Kavanagh T.A. et Bevan M.W. (1987). GUS fusions f6-glucuronidase as a sensitive and versatile gène fusion marker in higher plants. EMBO J. 6, 39C1-3907. Hclsters M., Dewaele D., Depicker A., Messenf ~. , Van Montage M. et Schell J. (1978). Transfection and transformation of Agrobacterium tumefaciens. Mol. Gen. Genet . 136, 11-187.
Horsch R.Es., Fry J.E., Hoffmann N.L., Eiho'.tz L., ?c>]eL:3 2.G. et Fraley R.T. (1985). A simple and général rreth;d for transferring genes into plants. Science 227, 129-1231.
Kay R., Chan A. , Daly M. et McPherson J. (1987:. Duplication of CaMV 35S promoter séquences créâtes a strong enhancer for plant genes. Science 236, 1299-1302.
Lam E., Benfey P. N., Gilmartin P. M., Fang 5. X. et Chua M. H. (1989). Site-specific mutations alter in vitro factor binding and change promoter expression pattern in fansgenic plants.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 7890-7894.
Lam E. et Chua N. H. (1989). ASF-2 : a factcr that binds to the cauliflower mosaic virus 35S promoter and a conservée! GATA motifin Cab promoters. Plant Cell, 1, 1147-1156.
Leckie L., Devoto A. et De Lorenzo G. (1994). Normalisation of GUS by LUC activity from the same cell extract reduces transformation variability. Biotechniques 17, 52-56.
Murashige T. et Skoog F. (1962). A revised médium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol.
Reina M. , Ponte I., Guillén P., Boronat A. et Palau J . Séquence analysis of a genomic clone encoding a Zc2 protein from Zea mays W64 A. Nucleic Acids Research 18, 6426.
Torrent 1" Alvarez I., Geli M. I . , Da 1 col 1. et Ludevid D. (1997). Lysine-rich modified g-zein accurru7ate in protein bodies of transiently transformed maize endosperms. Plant Mol. Bicl. 34,139-149.
Vancanneyt G., Schmidt R., O'Connor-Sanchez A., Willmitzer L. et Rocha-Sosa M. (1990). Construction of an in;.ron-C,)Ltaini:'(J marker gène : Splicing of the intron in transgenic plants and its use in monitoring early events in Ag.c . :-eri ar,-rrediared plant t ransformation . Mol. Gen. Genet . 220, 245-250.
De préférence, la longueur axiale des organes de fixation est supérieure à la dimension axiale de l'espace intervertébral, de sorte que chacun desdits organes de fixation est formé d'au moins deux parties d'organe de fixation implantées successivement, lesdites au moins deux parties d'organe de fixation s'interconnectant, notamment par encliquetage.
De préférence, ledit élément intermédiaire comporte au moins un élément mobile et/ou déformable permettant un déplacement relatif entre lesdits premier et second éléments rigides, pour former une articulation discale artificielle.
De préférence, ledit au moins un élément mobile et/ou déformable définit une viscoélasticité, de préférence réglable.
Avantageusement, ladite viscoélasticité est réglable après l'implantation du fixateur, notamment par des moyens télécommandables depuis l'extérieur.
Selon une forme de réalisation de l'invention, ledit au moins un élément mobile et/ou déformable comprend un soufflet rempli de liquide, notamment d'huile de silicone.
Avantageusement, il est prévu au moins deux soufflets séparés l'un de l'autre, chaque soufflet étant rempli avec une quantité déterminée respective de liquide, notamment d'huile de silicone.
En variante, il est prévu au moins deux soufflets reliés l'un à l'autre, notamment par l'intermédiaire d'une valve, de sorte que le liquide peut passer d'un soufflet à l'autre, et vice-versa.
Avantageusement, ledit au moins un soufflet est rempli de liquide avant, pendant et/ou après l'implantation du fixateur, la quantité de liquide pouvant être modifiée à tout moment après l'implantation du fixateur.
Avantageusement, ledit fixateur est implanté dans l'espace intervertébral et fixé aux vertèbres par la voie vertébrale postérieure classique.
Avantageusement, la forme et/ou les dimensions, notamment axiales, du fixateur sont adaptées pendant l'implantation aux dimensions, notamment axiales, de l'espace intervertébral.
Avantageusement, ledit fixateur est adapté à augmenter les dimensions axiales de l'espace intervertébral à la hauteur maximale souhaitable.
La présente invention a aussi pour objet un système de fixateur vertébral, comprenant au moins deux fixateurs vertébraux tels que définis ci-dessus.
De préférence, un espace vertébral respectif comporte au moins deux fixateurs vertébraux.
Avantageusement, lesdits au moins deux fixateurs vertébraux ont une forme extérieure complémentaire, de sorte qu'après leur implantation, ils forment un ensemble géométriquement cohérent pouvant remplir environ la totalité de l'espace intervertébral.
Eventuellement, on dispose des fixateurs vertébraux dans au moins deux espaces intervertébraux, notamment adjacents.
Selon une variante de réalisation avantageuse de l'invention, lesdits fixateurs vertébraux sont reliés à un arrangement de fixateurs postérieur implanté sur la partie postérieure de la colonne vertébrale.
Lesdits oligomères copolyesters peuvent être obtenus par les procédés usuels de préparation des polyesters par voie fondue, voie solvant ou voie interfaciale, procédés faisant intervenir des réactions : . d'estérification de diacides et de diols et polycondensation . de transestérification de diesters et de diols et polycondensation . d'autocondensation d'hydroxyacides . de Schotten-Baumann par mise en oeuvre de diols et de chlorures d'acide et polycondensation . de polymérisation de lactones en contrôlant la teneur minimum en motifs de formule (I) pour lesquels A représente un groupement 1,4-phénylène et n est égal à 1, semblables par les rapports stoechiométriques initiaux des différents monomères et par la maîtrise des réactions secondaires.
Les oligomères copolyesters téréphtaliques utilisés selon l'invention peuvent être préparés par estérification et/ou transestérification / polycondensation d'une composition monomère à base : - d'acide, anhydride ou diester téréphtalique (Tp) - d'acide, anhydride ou diester sulfoisophtalique (Slp) - éventuellement d'acide, anhydride ou diester isophtalique (Ip) - et d'éthylène glycol (EG) selon des quantités relatives correspondant à : * un rapport molaire (Slp) / [(Tp)+(Slp)+(lp)] d'au moins 7/100, de préférence d'au moins 10/100, tout particulièrement de 10/100 à 25/100 * un rapport molaire (Ip) / [(Tp)+(Slp)+(lp)] de 20/100 au plus, de préférence de 5/100 au plus * un rapport molaire (EG) / [(Tp)+(Slp)+(Ip)] de 2/1 à 3/1. en présence d'un catalyseur d'estérification et/ou transestérification et d'un limiteur de d'éthérification.
Lorsque tous les monomères "diacides" sont mis en oeuvre sous la forme de diesters, l'opération de transestérification (interéchange) entre ces monomères "diacides" et l'éthylène glycol est effectuée à une température supérieure ou égale à 130 C, de préférence de l'ordre 140 à 220 C et tout particulièrement de l'ordre de 180 à 220 C ; à cette température le méthanol (cas préférentiel des diesters méthyliques) formé est éliminé du milieu réactionnel de préférence par distillation.
Cette opération d'interéchange est réalisée en présence d'un catalyseur de transestérification métallique et d'un limiteur d'éthérification. Ledit catalyseur est de préférence un carboxylate métallique, tel que l'acétate de manganèse, l'acétate de zinc, l'acétate de cobalt ou l'acétate de calcium, ou d'un titanate organique ou minéral, tel que le titanate de butyle, le titanate de nitrilo-2,2',2"-triéthyle (ou aminotriéthanolate de titane jouant en outre le rôle de limiteur d'éthérification) ou le titanate de calcium. Les catalyseurs préférés sont les titanates organiques ; ils sont mis en oeuvre en quantités de l'ordre d'au moins 0,001% en poids exprimé en titane, de préférence de l'ordre de 0,002% à 0,02% en poids de titane par rapport au poids de réactifs présents.
L'agent limiteur d'éthérification peut être un composé basique tel que les amines
aliphatiques ou aromatiques (triéthanolamine, carbonate de guanidine, diméthylaniline, naphtylamine ...) ou un hydroxyde ou acétate de métaux alcalins ou alcalino-terreux (acétate de sodium, potassium, benzoate de sodium ...). Il est mis en oeuvre généralement en quantité de l'ordre de 0,001% à 0,05% par rapport au poids de réactifs présents.
La présente invention concerne un procédé et une machine de taille sélective et automatique d'une vigne selon une taille de type Guyot.
En viticulture, de nombreuses opérations sont canisées en particuliers les vendanges.
Toutefois, la taille d'une vigne est une opéra tion manuelle longue et pénible même si elle est facilitée par l'utilisation de sécateurs pneumatiques ou électriques.
L'opération de taille s'effectue après une taille qui peut se faire automatiquement à l'aide de ci sailles rotatives, coupant tous les sarments au-dessus d'une certaine hauteur, en morceaux de dimensions plus ou moins grands, pour faciliter leur dégénérescence sur le sol et évi ter que morceaux ne risquent d'encombrer des installa tions de traitement d'eau en cas de fortes pluies.
La taille proprement dite, traditionnelle, par exemple taille Guyot, consiste à sélectionner, parmi les différents sarments d'une branche de cep de vigne, le sarment le plus apte pour la production de l'année suivante. Cette sélection est faite par le vigneron en fonction de critères qui ne sont pas à développer ici.
Tous les autres sarments non sélectionnés sont alors coupés ainsi que la branche, au-delà du sarment sélec tionné ; enfin le sarment sélectionné est fixé au fil de fer horizontal de palissage.
A partir de ce sarment unique, qui remplace l'ancienne branche, il se formera en cours d'année de nou veaux sarments.
Un procédé de taille automatique, quoique non évident, consisterait à couper la branche au-delà du premier sarment et à conserver systématiquement le premier sarment à la base de la branche pour la production de l'année suivante. Mais une telle coupe, quoique non évidente à exécuter automa tiquement, ne permettrait pas de tenir compte des particula rités sarments de chaque cep et un tel choix automatique et systématique du premier sarment ne pourrait aboutir qu'à des résultats médiocres. présente invention a pour but de remédier à ces inconvénients et se propose de développer un procédé et une machine taille sélective et automatique d'une vigne, notamment selon la taille Guyot, avec des moyens soient d'une réalisation et d'une mise en oeuvre particulièrement simples.
cet effet l'invention concerne un procédé de taille sélective et automatique, caractérisé en ce - on sélectionne le sarment à conserver et on le protège au moins au niveau de sa base jusqu'à la branche qui porte, - on coupe sans distinction tous les sarments à leur base, au-dessus la branche, le sarment sélectionné étant pro tégé de la coupe, - on dégage sarment protégé.
Ainsi, le procédé extrêmement simple selon l'invention consiste à sélectionner le sarment à conserver parmi les sarments d'un cep et à protéger ce sarment puis à couper systematiquement tous les sarments sans prendre de précaution particulière, la protection entourant le sarment sélectionné interdisant sa coupe. Une fois cette coupe systé matique réalisée, on dégage le sarment protégé et on termine la taille manière manuelle, comme cela a été indiqué ci- dessus, en coupant la branche au-delà du sarment.
Cette taille automatique permet de sélectionner le sarment le plus approprié pour la production de l'année suivante, au choix de l'opérateur qui effectue la taille. En d'autres termes, ce procédé évite de couper systématiquement et de manière non sélective les sarments si bien ce pro cédé est pratiquement équivalent à un procédé de taille ma nuelle tout en permettant des rendements considerablement plus importants et une grande facilité de travail puisque l'opérateur se limite à sélectionner à vue le sarment qu'il veut retenir.
L'invention concerne également une machine de taille sélective et automatique d'une vigne, notamment pour une taille Guyot, en particulier selon le procédé défini ci- dessus, cette machine circulant le long d'une rangée de ceps ou enjambant la rangée à tailler définissant la ligne de taille. Selon l'invention, cette machine est caractérisée par A) un dispositif protecteur comportant * un ensemble d'organes protecteurs mobiles entre une po sition escamotée et une position active dans laquelle l'organe protecteur est placé autour d'un sarment sélec tionné et * un sélecteur pour commander la mise en place de organe protecteur au passage sur le sarment sélectionné et le point enlèvement en aval de la coupe, pour enlever l'organe de protection du cep qui vient d'être taillé, B) un dispositif de coupe comprenant au moins deux sécateurs rotatifs * installes de part et,d'autre de la ligne de taille, * escamotables élastiquement dans la direction transver sale, * réglables en hauteur pour la hauteur de coupe, - chacun des sécateurs étant muni d'un disque coupe entraîné en rotation et d'un disque protecteur libre en rotation ou entraîné par un moteur avec un limiteur de couple, à doigts définissant des ouvertures radia les de section variable entre l'entrée périphérique de l'ouverture et le fond, - ce disque protecteur débordant d'une distance réglable par rapport au contour du disque de coupe dans la zone de coupe.
La machine selon l'invention permet, au cours d'un seul passage le long de la ligne de ceps à tailler, d'effectuer la piétaille en découpant les extrémités sar ments en morceaux plus ou moins grands avec un ou plusieurs sécateurs rotatifs ou une pile de sécateurs rotatifs puis, en aval de ce dispositif de piétaille, un dispositif protecteur qui protège de manière sélective le sarment sélectionné par l'opérateur, et enfin le dispositif de coupe qui coupe systé matiquement tous les sarments. Tant la piétaille que coupe proprement dite sont possibles dans le cas de vignes palis sées jusqu'à une certaine hauteur sans que les fils fer du palissage ou les poteaux ne gênent cette opération. La pré- taille se fait en dessous du fil de fer supérieur et la taille proprement dite se fait légèrement au-dessus du fil de fer auquel a été fixé le sarment sélectionné de l'année pré cédente et devenu la branche du cep de la récolte passée.
Il suffit au début d'un travail de coupe, de ré gler la hauteur du dispositif de coupe pour que cette coupe se fasse de préférence aussi près que possible la branche qui, ayant suivi le fil de fer, est en général relativement horizontale. L'écartement des doigts de l'étoile, définis sent les ouvertures radiales, est de préférence choisi pour que l'entrée soit légèrement inférieure à la section de l'organe protecteur pour que celui-ci ne puisse etre atteint par le disque rotatif du sécateur. I1 est également possible de régler le dépassement du disque de protection pour que même si l'organe protecteur pénètre dans l'intervalle entre deux doigts, il ne risque pas d'être atteint par le disque de coupe ; comme sarment sélectionné est à l'intérieur de cet organe protecteur, il ne risque pas non plus d'être coupé ou entaillé par le disque de coupe.
Le réglage du centre de rotation du disque par rapport au centre du disque sélecteur ou disque de protec tion, se fait en fonction de ces différentes données géomé triques.
Ce disque en forme d'étoile évite également que le disque rotatif n'attaque les poteaux du palissage.
La première séquence, w[0] est obtenue par : - une autocorrélation cyclique égale à 0,1, ou t (la séquence 0 décalée ne coïncide avec elle-même non décalée qu'en 0 ou 1 point) telle que :
En fait, c'est la même définition que pour m = 1.
Les séquences suivantes, w[1...n-m] sont obtenues par - une autocorrélation cyclique égale à 0 ou t pour des décalages multiples de m (la séquence i décalée d'un multiple de m ne coïncide jamais avec elle-même non décalée) telle que : pour tout i = 1...n-m : - par une intercorrélation cyclique égale à 0 ou 1 avec la séquence w[0] (la séquence i décalée ou non ne coïncide avec la séquence 0 qu'en 0 ou 1 point) telle que : pour tout i = 1...n-m :
- et par une intercorrélation cyclique avec les séquences w[1..n-m] égale à 0 ou 1 pour des décalages multiples de m (la séquence i décalée ou non d'un multiple de m ne coïncide avec la séquence j qu'en 0 ou 1 point) telle que : pour toute paire {i, j} où i = 1...n-m et j = 1...n-m sont différents :
L'algorithme de calcul des séquences w est le même que précédemment. Seuls changent les critères d'autocorrélation et d'intercorrélation, celles-ci n'étant à vérifier que sur P points au lieu de M.
Les colonnes de la matrice A sont alors les vecteurs w permutés circulairement avec un pas égal à 1 ou m telles que : - Sous-matrice M x M à gauche de A : A[ligne][colonne] = w[0][(ligne - colonne) modulo M] Avec : ligne = 0...M-1 colonne = O...M -1 - Sous-matrices M x P suivantes (en nombre égal à n - m) pour k = m...n-1 : A[ligne][colonne] = w[k - m + 1][(ligne - m (colonne - k P)) modulo M] Avec : ligne = O...M-1 colonne = kP...(k + 1)P - 1 Ainsi, chaque ligne de A comporte exactement m = t valeurs non nulles dans ses M premières colonnes, puis 1 valeur non nulle dans chacun des n - m paquets de P colonnes successives, soit un total de n ou tr.
Un exemple de matrice A, obtenu selon la deuxième variante du procédé selon l'invention est montré à la figure 5 pour un code LDPC(75,30, t=3, tr=5) de redondance 5 / 2 (n = 5, m = 3) avec P = 15. On constate sur le tableau de la figure 5 que: w[0][i] = 1 pour i = 0, 1, 3 w[1][i] = 1 pour i = 0, 4, 8 w[2][i] = 1 pour i = 0, 5,10
Le procédé selon l'invention qui vient d'être décrit sous ses deux variantes conduit directement à un algorithme de codage de symboles de redondance Yi et de symboles d'information Xi très simple.
Pour cela, il suffit de considérer que les symboles de redondance Yi sont les M premiers symboles d'un mot de code, et les symboles libres Xi (information) sont les N - M derniers.
Les équations que doivent vérifier tout mot de code peuvent donc être réécrites sous la forme : ou encore : avec
Le procédé consiste alors à calculer dans un premier temps les M quantités Zm de la matrice de passage, et ensuite les symboles de redondance :
A titre d'exemple, pour le code LDPC(75,50) les quantités Zm sont calculés par le système d'équation défini par le tableau de la figure 6 qui, après résolution, se transforme en le tableau des symboles de redondance de la figure 7.
La matrice B d'élément générique Bij est l'inverse de la partie gauche AM (de dimension M x M) de la matrice A. Elle a une forme très simple : par construction, toutes ses colonnes sont des permutations circulaires de la séquence w[0][O..M-1] : Aij = w[0][(i - j) modulo M] , i=O...M-1, j=O...M-1
La matrice B comporte alors M lignes qui sont des permutations circulaires d'une ligne unique b[O...M-1], à savoir : Bij = b[(j - i) modulo M] B étant l'inverse de Am, les coefficients b sont définis par :
Par exemple, pour le code LDPC(75,50), les coefficients de redondance Ym sont calculés par le système d'équations défini par le tableau de la figure 8 qui après résolution se transforme en le tableau de la figure 9.
Cependant, il existe des cas où le calcul est impossible.
La transformation du tabac (Nicotiana tabacum L., du cultivar PBD6) a été réalisée en infectant des disques foliaires
isolés à partir de plantâtes ce tabac in vitro âgées de 6 semaines par des agrobactéries recombirantes selon la méthode décrite par Horsch et al. (1985).
Toutes les cultures in vitro sont réalisées dans une enceinte climatisée dont l'intensité lumineuse est de 200 yE.m-2.s-l, la photopériode de 16 heures lanière b heures obscurité et, la température de 25 C. Hors mis pour l'étape initiale de coculture, les étapes de régénération, de développement et d'enracinement ont été réalisées sur divers milieux sélectifs supplémentés en bactériostatique, à savoir l'augmentin à 400 mg/l et en agent sélectif, à savoir la kanamycine à 200 ou 100 rli 1.
Les différen tes étapes et les milieux utilisés sont les suivants : - Après une préculture des agrobactéries dans 5 ml de milieu 2YT (bacto-tryptone 10 g/1, extrait de levure 5 g/l, NaCl 5 g/1, pH 7,2) supplémenté en CaCl~ 6 mM final et en antibiotiques adéquats à 28 C pendant 48 heures, une culture dans 10 ml de milieu 2YT supplémenté en CaC12 et antibiotiques est réalisée à 28 C pendant une nuit. La culture est ensuite centrifugée à 3000 g pendant 10 min. et les bactéries sont resuspendues dans 10 ml de MS30 liquide (M0404 à 4,4 g/1 commercialisé par SIGMA supplémenté en saccharose 30 g/1, pH 5,7).
- La coculture est réalisée en plaçant les explants foliaires découpés à partir des feuilles des plantules in vitro d'environ 1 cm au contact de la suspension d'agrcba;,tér:es diluée au z dans MS30 liquide pendant 20 min. Puis, les explants ainsi traités sont séchés rapidement sur papier filtre et placés sur un milieu de coculture (MC) solide (MS30, Benzyl Amino Purine (BAP) à 1 mg/1, Acide Indole-3 Acétique .:ANA) à 0,1 rr.g/ 1 , agar-agar à 8 g/1) pendant 48 heures dans l'enceinte climatisée.
- Les explants traités sont ensuite placés sur un milieu de régénération solide (MC solide, augmentin à 400 mg/l, kanamycine à 200 mg/1). Un repiquage des explants sur le même milieu est effectué après 2 semaines.
- Après 2 semaines, les bourgeons sont repiqués sur un milieu de
développement solide (M0404 à 4,4 g/1 commercialisé par SIGMA supplémenté en saccharose 20 g/l, pH 5, @ (MS20 liquide), augmentin à 400 mg/1, kanamycine à 100 mag/1, agar-agar à S g/1}.
- Après 2 semaines, les plantules transformées sont repiquées sur milieu d'enracinement solide identique au milieu de développement. L'enracinement dure 2 à 3 semaines, au terme duquel les plantules sont sorties au phytotron en pots Giffy pendant 10 jours (photopériode 16 heures lumière 8 heures obscurité, 23 C et 70% d'hygrométrie), puis, passées en serre.
7.3. Mesure de l'activité B-glucuronidase dans les plants de maïs et de tabac.
Pour mesurer l'activité B-gJu2uroniàase, les échantillons prélevés sur les plantes transgéniques ont été congelés à l'azote liquide et broyés à l'aide d'une tige de verre adaptée sur une perceuse. La poudre a ensuite été resuspendue dans du tampon d'extraction (Tris Phosphate 25 mM pH 7,8, Dithiothréitol 2 mM, acide L, 2-..iaminocyclohexane, N,N,N',N'-tétracétique 2 mM, glycérol 10 %, Triton X100 1 %) à raison de 1 ml de tampon pour 250 mg de tissu. Le mélange a été homogénéisé puis incubé pendant 1 h à 4 C avant d'être clarifié par centrifugation pendant 5 min à 16060 g.