INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
A titre illustratif, un polypeptide antagoniste de la protéine ESM-1 peut être préparé par la technique en solution homogène décrite par HOBEN WEIL (1974) ou encore la technique de synthèse en phase solide décrite par MERRIFIELD (1965a ; 1965b) et MERRIFIELD 1965b.
Un polypeptide antagoniste de la protéine ESM-1 selon l'invention peut être aussi préparé par recombinaison génétique.
Pour produire un polypeptide antagoniste de la protéine ESM-1 tel que défini ci-dessus, on peut mettre en oeuvre un procédé comprenant les étapes de : a) insérer un acide nucléique codant pour le polypeptide antagoniste de la protéine ESM-1 dans un vecteur d'expression approprié ; b) cultiver, dans un milieu de culture approprié, une cellule hôte préalablement transformée ou transfectée avec le vecteur d'expression recombinante de l'étape a) ; c) récupérer le milieu de culture conditionné ou loser la cellule hôte, par exemple par sonication ou par choc osmotique ; d) séparer et purifier à partir dudit milieu de culture ou encore à partir des Iysats cellulaires obtenus à l'étape c), ledit polypeptide antagoniste ; e) le cas échéant, caractériser le polypeptide antagoniste recombinant ainsi produit.
Les polypeptides antagonistes selon l'invention peuvent être caractérisés par fixation sur une colonne de chromatographie d'immunoaffinité sur laquelle les anticorps dirigés contre ce polypeptide ou contre un fragment de ce dernier ont été préalablement immobilisés.
Selon un autre aspect, un polypeptide antagoniste de ESM-1 peut- être purifié par passage sur une série appropriée de colonnes de chromatographie, selon les méthodes connues de l'homme de l'art est décrit par exemple dans AUSUBEL F. et al. (1989).
COMPOSES ANTAGONISTES DE LA PROTEINE ESM-1 DU TYPE OLIGONUCLEOTIDE ANTISENS.
Une autre famille préférée de composés antagonistes de la protéine ESM-1 visant à réduire la biodisponibilité de la protéine ESM-1 sécrétée chez des patients à risque ou chez des patients ayant déjà développé des tumeurs sont des composés capables d'inhiber ou de bloquer l'expression du gène codant pour ESM-1 chez l'homme.
De tels composés antagonistes de la protéine ESM-1 peuvent être des polynucléotides antisens.
Pour la mise en ceuvre du procédé conforme à l'invention, on peut notamment utiliser des gènes ou combinaisons de gènes issus de la souche CNCM 1-2398, ou des gènes ou combinaisons de gènes homologues issus de toute autre souche de Lactobacillus sakei, ou des gènes ou combinaison de gènes homologues issus de Lactococcus lactis.
Pour déterminer le gène ou la combinaison de gènes le plus approprié, on peut au préalable effectuer, comme indiqué ci-dessus, la détection de la présence, chez la souche à transformer, d'un ou plusieurs des gènes laca, lacb, lacC, lacD, lacF, lacE, et lacG, et éventuellement des gènes lacR et/ou lacX, et effectuer la transformation avec une molécule d'acide nucléique comprenant le ou les gènes manquants.
Des méthodes de transformation de Lactobacillus sakei et des vecteurs convenant à la mise en oeuvre de ces méthodes sont connus en eux-mêmes (cf. par exemple AXELSSONN et al., FEMS Microbiol. Lett., 168,137-143, 1998 ; BERTHIER et al., Microbiology, 142,1273-1279, 1996 ; LANGELLA et al., FEMS Microbiol. Lett., 139,51-56, 1996 ; Demande PCT EP/00/03099 au nom de l'INRA).
Dans le cadre de la mise en ceuvre de la présente invention, on choisira avantageusement un vecteur intégratif, permettant d'insérer la séquence choisie dans le chromosome bactérien, et ainsi d'obtenir des transformants stables. On peut par exemple utiliser le vecteur pRV300, décrit par LELOUP et al. [Appl. Environm. Microbiol., 63,2117-2123, (1997)].
L'insertion dans le chromosome bactérien peut s'effectuer par exemple en utilisant les séquences d'insertion flanquant l'amas lacRABCDFEGX, ou bien par recombinaison homologue ; dans ce dernier cas on l'effectuera de préférence au niveau d'un gène ou d'une région nonessentiels de Lactobacillus sakei, par exemple au niveau de l'opéron lacLM, comme décrit dans la Demande PCT/EPOO/03099 citée ci-dessus, ou bien au niveau de la région du chromosome de Lactobacillus sakei homologue à celle dans laquelle l'amas lacRABCDFEGX est inséré dans la souche RV332.
On peut également utiliser comme vecteur un plasmide réplicatif capable de se maintenir de façon stable chez Lactobacillus sakei ; la présente invention fournit également de nouveaux plasmides utilisables en particulier dans ce but. Il s'agit du plasmide pRV500 et des dérivés de celui-ci comprenant son système de réplication.
On entend par système de réplication du plasmide pRV500, un fragment d'acide nucléique comprenant : - l'origine de réplication de pRV500, - le gène repA de pRV500 ou une séquence codant pour une protéine présentant au moins 70% d'identité, de préférence au moins 80% d'identité, et de manière tout à fait préférée au moins 90% d'identité avec la protéine RepA codée par ledit gène, - le gène repB de pRV500 ou une séquence codant pour une protéine présentant au moins 70% d'identité, de préférence au moins 80% d'identité, et de manière tout à fait préférée au moins 90% d'identité avec la protéine RepB codée par ledit gène.
La présente invention a en conséquence également pour objet un plasmide, capable de se répliquer chez Lactobacillus sakei, choisi parmi : - le plasmide pRV500, de la souche CNCM 1-2398 ; - un plasmide comprenant au moins le système de réplication dudit plasmide pRV500.
Les plasmides conformes à l'invention ont un système de réplication type théta, et permettent l'insertion de grandes séquences d'acide nucléique, notamment plusieurs gènes contigus ou un opéron complet. Ils sont donc particulièrement intéressants dans le cadre de la mise en ceuvre de la présente invention pour l'obtention de souches transformées de Lactobacillus sakei capables d'assimiler le lactose, mais également pour l'introduction et le maintien de tout autre gène ou ensemble de gènes d'intérêt chez Lactobacillus sakei.
Ils peuvent également être utilisés nonseulement chez Lactobacillus sakei mais également chez d'autres espèces de bactéries lactiques, par exemple des lactocoques tels que Lactococcus lactis, Lactococcus cremoris, etc., et avantageusement chez des lactobacilles, Des molécules d'acide nucléique conformes à l'invention, tels que Lactobacillus casei, Lactobacillus delbrueckii (subsp. delbrueckii ou bulgaricus), Lactobacillus curvatus, Lactobacillus plantarum,
Lactobacillus fermentum, Lactobacillus zeae, Lactobacillus helveticus, etc.
Ils peuvent aussi être utilisés pour l'obtention de vecteurs navettes capables de se répliquer chez Escherichia coli.
La présente invention a également pour objet des plasmides dérivés des plasmides conformes à l'invention définis ci-dessus, et notamment des plasmides à réplication conditionnelle.
On définit ici comme plasmide à réplication conditionnelle un plasmide dont la réplication ne s'effectue que dans certaines conditions (par exemple de température, de pH, de concentration en sels minéraux, de présence dans le milieu de culture d'un composé particulier, etc. ), par exemple du fait qu'une ou plusieurs séquence (s) dudit plasmide intervenant dans sa réplication (notamment l'origine de réplication et/ou les gènes repA et/ou repB) porte (nt) une mutation conditionnelle, ou bien du fait qu'une ou plusieurs des protéines intervenant dans la réplication sont placées sous contrôle d'un promoteur inductible.
La transformation peut ainsi être effectuée en deux étapes : dans la première, les bactéries sont cultivées dans des conditions permettant la réplication du plasmide, ce qui permet une première sélection de celles dans lesquelles il s'est répliqué ; dans la seconde, les bactéries sont cultivées dans des conditions ne permettant pas la réplication du plasmide, ce qui permet de sélectionner celles dans lesquelles les séquences du plasmide sont intégrées au chromosome. Ce système permet de découpler la transformation et la recombinaison, rendant possible la modification de souches faiblement transformables.
Des exemples de plasmides à réplication conditionnelle sont par exemple les plasmides de la famille pGhost [BISWAS et al., J. Bacteriol., 175,3628-3635, (1993) ; Demande PCT WO 93/18164 ; MAGUIN et al., J.
(v) La viabilité du sang peut également être déterminée automatiquement ; des méthodes convenables comprennent l'utilisation d'iodure de propidium et de la cytométrie de flux ou l'utilisation de bleu Trypan et d'un hémocytomètre après la lyse des globules rouges en utilisant une solution de chlorure d'ammonium.
(vi) L'anticorps CR3/43,est ajouté à un échantillon du sang entier dans la chambre du dispositif, à une concentration finale de 1 à 3 l/106 cellules (par exemple, si la numération de WBC est égale à 50X109/1, alors 50 ul d'anticorps monoclonal CR3/43, à une concentration en IgG de souris de 159 pg/ml, doivent être ajoutés par ml de sang) .
(vii) Mélanger le sang et l'anticorps énergiquement en utilisant une pale dans la chambre du dispositif et laisser le mélange pendant une période de temps prédéterminée, non inférieure à 2 heures, à température ambiante, de préférence à une température comprise dans l'intervalle de 18 C à 37 C, dans la chambre d'incubation.
(viii) Analyser les cellules sanguines par cytométrie de flux, des analyses clonales, une culture de longue durée et/ou une analyse PCT 0 heure, 2 heures, 6 heures et
24 heures après l'addition des Acm en utilisant les moyens de dépistage du dispositif.
Note : En raison de l'agrégation homotypique des lymphocytes B et de la formation de cellules adhérentes au fond du tube à essai, induites par le Acm CR3/43, mélanger énergiquement et échantillonner les cellules en utilisant des embouts de pipettes à large orifice avant l'analyse.
Afin d'obtenir une population uniforme de cellules pendant toute l'analyse, diviser l'échantillon de sang en portions aliquotes distinctes dans une pluralité de chambres avant le traitement avec CR3/43.
PREPARATION POUR L'ANALYSE DE CELLULES SOUCHES PRODUITES EN TRAITANT DES LYMPHOCYTES B EN CULTURE AVEC L'ANTICORPS MONOCLONAL CR3/43 Les cellules souches produites au moyen des procédés de la présente invention peuvent être évaluées à un certain nombre de points de temps, par exemple toutes les 2 heures, 7 heures ou 24 heures, chaque jour, tous les 7 jours ou des périodes plus longues (des mois, après alimentation chaque semaine des cellules avec du milieu de culture de longue durée). Un ou plusieurs puits de traitement et un ou plusieurs puits témoins peuvent être analysés à chaque point de temps, les puits de traitement et puits témoins restants étant analysés ensuite à des périodes de temps successives.
Cette évaluation peut également être effectuée automatiquement par des moyens de dépistage incorporés au dispositif de la présente invention.
(i) Prélever doucement la couche non adhérente en utilisant une pipette à large orifice et dissocier les amas de cellules par aspiration répétée à travers une pipette à large orifice pour obtenir une suspension monocellulaire.
(ii) Utiliser un racleur de cellules pour racler la couche adhérente et dissocier doucement les amas de
cellules pour obtenir une suspension monocellulaire par aspiration répétée à travers une pipette à large orifice.
(iii) En variante, traiter à la trypsine la couche adhérente tout d'abord par rinçage avec du HBSS et ensuite par introduction de 2 ml d'une solution à 0,25 % de trypsine dans chaque puits, et mettre en incubation à 37 C pendant 10 minutes.
(iv) Déranger doucement les amas de cellules par aspiration répétée dans une pipette à large orifice.
(v) Au bout de 10 minutes, mettre en incubation avec 20 % de SVF à une concentration finale pour inactiver la trypsine.
(vi) Les cellules cultivées obtenues en (ii) ou (v) ci-dessus peuvent être réunies pour chaque type (c'est-àdire cellules traitées et cellules non traitées) à chaque point de temps et centrifugées à 400 x g pendant 10 minutes.
perpendiculaire au deuxième écran 24.
De préférence, l'angle que forme le premier écran 22 avec l'axe principal X'-X d'émission de la source 20 sera choisi, en fonction du matériau constituant cet écran 22, pour que les rayons lumineux issus directement de la source 20 subissent une réflexion totale sur
l'écran 22, et l'angle entre le deuxième écran 24 et l'axe principal X'-X sera choisi, en fonc-
tion du matériau constituant cet écran 24, pour que les rayons lumineux issus directement de
la source 20 puissent pénétrer dans l'écran 22. D'autre part, les rayons lumineux qui pour-
raient, après des réflexions multiples, traverser l'écran 22, transparent, seraient alors reçus par
le miroir 60 et renvoyés vers l'écran 22. On est donc bien assuré que la totalité du flux lumi-
neux émis par la source 20 sera transmis par le deuxième écran 24.
Si la colorimétrie du feu 50 est obtenue par la coloration du matériau du premier écran 22, la couleur du faisceau émergeant du dispositif 10 lorsque les sources lumineuses 20 sont allumées et que la lampe 51 est éteinte sera influencée par la couleur du premier écran 22. Si
on désire que les fonctions du feu 50 et du dispositif 10 aient des couleurs différentes, il suffi-
ra que la couleur du faisceau du feu 50 soit obtenue par le bulbe 53, un écran intermédiaire 54,
ou une teinte portée par la face du premier écran 22 tournée vers la lampe 51.
De cette manière, lorsque seules les sources lumineuses 20 sont allumées, un flux lu-
mineux sera émis au travers du deuxième écran 24 dans la direction Z, comme on l'a vu plus haut, la couleur de ce flux étant fixée par celle des sources 20. Lorsque seule la lampe 51 est allumée, le flux lumineux réfléchi par le miroir 60 sera également émis au travers du deuxième écran 24 dans la direction Z, la couleur de ce flux étant fixée par le bulbe 23 ou un écran intermédiaire 54. Il en résulte que les fonctions du feu 50 et du dispositif pourront être
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parfaitement différenciées par leur couleur ou leur intensité lumineuse. L'intensité lumineuse émise par la lampe 51 sera supérieure à celle de la ou des sources lumineuses 20, de façon à ce que, lorsque les sources lumineuses 20 et 52 sont allumées simultanément, le flux lumineux total réponde aux exigences photométriques réglementaires pour la fonction remplie par le feu
Le matériau purifié est exempt d'endotoxines, comme en témoigne les résultats du test de Iysat de limulus amebocyte (BlOwhitaker).
A. 5 Immunoprécipitation, immuno-empreinte et séquençage.
La taille des différentes formes de ESM-1 a été déterminée par immunoprécipitation et immuno-emprente à partir des surnageants de cultures cellulaires et des ysats cellulaires. Les cellules ont été Iysées dans un tampon contenant 0,5% de NP40, un cocktail d'anti-protéases (Boehringer Mannheim, Allemagne) dans du PBS pendant 30 minutes à 4 C en agitation.
Puis, les Iysats ont été centrifugés à 10. 000g pendant 15 min afin d'obtenir des Iysats cellulaires clarifiés.
Les surnageants de culture ont été filtrés sur un filtre ayant un diamètre de pore de 0,45 mm.
1 ug de l'anticorps monoclonal ESM-1 produit par la lignée d'hybridome MEP19 ou 1 ug d'anticorps monoclonal anti-ICAM-1 (clone 164B) a été ajouté au Iysat clarifié ou au surnageant de culture cellulaire et incubé pendant une nuit à 4 C sous agitation.
50 ut d'une immunoglobulin anti-souris conjugué à des billes d'agarose (sigma) ont été ajoutés à 4 C pendant 90 min, avant centrifugation et de lavage avec un tampon de lyse et de lavage dans du PBS.
Les billes ont été resuspendues dans 20 et 40 ut de tampon SDSPAGE pendant 5 min, centrifugées, et les surnageants ont été analysés.
Les échantillons ont été soumis à une électrophorèse sur gel SDS-PAGE, puis transférés sur une membrane de nitrocellulose selon des procédures standard.
Après une étape de blocage, les membranes ont été incubées pendant une heure avec un anticorps monoclonal ESM-1 produit par la lignée d'hybridome MEP14 à 1 ut, lavées puis incubées pendant 1 heure
avec un anticorps secondaire anti-Fc de souris conjugué à la peroxydase de raifort ( Horse Radish peroxydase ) (commercialisé par la Société SIGMA). On a réalisé plusieurs lavages avant révélation en utilisant le kit de détection ECL commercialisé par la Société Amersham.
Pour l'analyse de la séquence d'aminoacides, la protéine ESM-1 purifiée a été soumise à une électrophorèse sur un gel SDS-PAGE, puis électrotransférée sur une membrane de difluorure de polyvinylidène (PVDF) commercialisée par la Société MILLIPORE, puis colorée à l'aide de 0, 1% de bleu de coomassie. La bande protéine a 50 kD a été excisée de la membrane et la séquence N-terminale a été effectuée par dégradation d'EDMAN automatisée sur un séquenceur de protéine du type ABI 473A.
A. 6 Digestion du corps peptidique de ESM-1 par la protéinase K Afin de déterminer la taille du glycosaminoglycane, la protéine ESM-1 purifiée a été digérée avec la protéinase K avec un rapport enzyme : ESM-1 égal à 1 : 50 (poids : poids) dans un tampon Tris 10mM, pH8, en présence ou en absence de 0,1% SDS à 56 C pendant 3 heures. Une quantité 10 supérieure de sérum albumine bovine (BSA) à la protéine ESM- 1 a été digérée par la protéinase K afin de vérifier sa dégradation complète. Les échantillons ont été analysés sur un gel de 12 % SDS-PAGE, suivi par une coloration au bleu de coomassie et au bleu alcian.
A. 7 Digestion de ESM-1 par les chondroïtinases ABC. B, AC et C Afin d'analyser la nature de la substitution de glycosaminoglycane, la protéine ESM-1 purifiée a été digérée avec plusieurs chondroïtinases : chondroïtinases ABC (0, 5 unité/mg dans un tampon 100 mM TrisHCI, pH 8, 30 mM d'acétate de sodium, pH 5, 2 à 37 C pendant 45 min), chondroïtinase B (200 unités/mg dans un tampon 20 mM Tris-HCI, 50 mM Nacl, 4 mM Ca12, 0,01% BSA, pH 7, 5 à 25 C pendant deux heures), des chondroïtinase AC (une unité par ml dans un tampon 250 mM Tris Hcl, 75 mM acétate de sodium, pH 7,3 à 37 C pendant deux heures) des chondroïtinases C (80-120 unités/ml dans un tampon 50 mM Tris HCI, pH
8 à 25 C pendant 3 heures). Les échantillons ont été analysés par immunoempreinte.
A. 8 Activité anti-coaqulante.
le boîtier du dispositif d'éclairage ou de signalisation, alors visible derrière la glace de protec-
tion, pour qu'il ait l'aspect désiré.
Un exemple de dispositif d'éclairage et/ou de signalisation comportant une partie for-
mant retour latéral dans laquelle la glace de protection n'a pas de fonction optique est donné par le document FR-B-2 732 932, qui s'attache à résoudre le problème de faire affleurer aussi bien que possible la surface du retour latéral du dispositif de signalisation au niveau de celle
de la carrosserie, lors du montage de ce type de dispositif de signalisation sur la carrosserie.
positif d'éclairage ou de signalisation dont l'encombrement, en particulier l'épaisseur, soit faible de manière à permettre facilement son implantation dans les espaces d'un véhicule o le
volume est réduit et o on désire néanmoins disposer d'une fonction d'éclairage, de signalisa-
tion ou de rappel latéral, un tel dispositif d'éclairage ou de signalisation devant en outre être simple à assembler dans ces espaces de volume réduit, être fiable dans son fonctionnement, les performances photométriques répondant à la réglementation en vigueur, un tel dispositif
devant en outre être peu onéreux.
La présente invention a donc pour objet un dispositif d'éclairage ou de signalisation pour véhicule automobile, comportant au moins une source de lumière, un réflecteur et une
plaque de diffusion de la lumière.
Selon la présente invention, le réflecteur et la plaque de diffusion de la lumière sont
constitués d'éléments sensiblement plans faisant entre eux un angle faible et non nul et déli-
mitant entre eux un volume sensiblement prismatique.
La figure 2 donne les résultats de cytotoxicité obtenus pour les souris immunisées par l'ALVAC-IE1 et restimulés in vitro soit par la vaccine-IE1, soit par la formulation IEl-pp65/BVSM, soit par la chimère soluble.
La figure 3 donne les résultats de cytotoxicité obtenus pour les souris immunisées par l'ALVAC-pp65 et re- stimulés in vitro soit par la vaccine-pp65, soit par la formulation IEl-pp65/BVSM, soit par la chimère soluble.
Les résultats rassemblés dans le tableau 2 cidessous montrent l'apport des BVSM sur la stimulation des CTL in-vitro avec une lyse spécifique anti IE1 de 39.9% lorsque les splénocytes sont restimulés in vitro par la formulation IEl-pp65/BVSM, 11,7% par la protéine chimère soluble et 34.9% par la vaccine-IE1. (figure 1).
Ces résultats sont confirmés avec une lyse spécifique anti pp65 de 31,9%, 12,2% et 22,3% respectivement lorsque les splénocytes provenant d'animaux immunisés avec ALVAC-pp65 sont stimulés in vitro par la formulation IEl-pp65/BVSM, par la protéine chimère soluble et par la vaccine-pp65 (figure 2).
Restimulation in vitro 1 2 immunisation immunisations ALVAC-IE1 - Formulation IEl-pp65/BVSM 17,7% 39,9% - Chimère IEl-pp65 12,2% 11,7% - vaccine-IE1 20,5% 34,9% ALVAC-pp65 - Formulation IEl-pp65/BVSM 13,8% 31,9% - Chimère IEl-pp65 0% 12,2% - vaccine-pp65 13,6% 22,3%
Dans le tableau 2, les résultats de cytotoxicité sont obtenus pour les splénocytes provenant de souris immunisées 1 ou 2 fois par l'ALVAC-IE1 ou pp65 en fonction du mode de re-stimulation in vitro (ratio effecteurs/cibles 100/1). Les résultats présentés sont les pourcentages de lyse spécifique (delta pourcentage de lyse L929-vacc-IE1 ou L929-vacc-pp65/lyse L929-vacc-wt.) Ce tableau permet également de comparer les résultats obtenus lorsque les souris ont reçu une ou deux immunisations avec ALVAC-pp65 ou IE1. Dans tous les cas on obtient un meilleur pourcentage de lyse spécifique par une stimulation in vitro réalisée avec la formulation IE1pp65/BVSM ou la vaccine (IE1 ou pp65). Par contre, ce pourcentage reste faible lors de la stimulation avec la protéine chimère soluble IEl-pp65 seule.
Ces résultats montrent la capacité des formulations IEl-pp65/BVSM à permettre une présentation des épitopes de IE1 et de pp65 par les molécules du CMH de
classe I et donc la capacité de ces formulations à stimuler et à expandre in vitro des effecteurs T CD8+ spécifiques de IE1 et pp65 induits in vivo par l'ALVAC-IE1 et-pp65.
On peut également conclure de ces résultats que ces formulations IE1-pp65/BVSM permettent la stimulation in vitro des lymphocytes T CD8+ spécifiques de IE1 ou de pp65 de manière similaire à des systèmes vivant (vaccine IE1 ou pp65).
Exemple 4 : Stimulation in vivo de lymphocytes T CD8+ spécifiques de IE1 ou de pp65.
Une primo immunisation des souris CBA (souris femelles CBA (haplotype H-2K) (élevage Janvier) est réalisée par une administration par voie intrapéritonéale d'un mélange de deux poxvirus recombinants ALVAC-IE1 et ALVAC-pp65 (Virogenetics). La dose administrée en intrapéritonéal (IP) par souris est de IxIOpfu/souche diluée dans un volume final de 100ul par souris.
Deux rappels identiques in vivo par voie IP sont réalisés après la primo immunisation à J28 et J56 : - soit avec la protéine IE1-pp65 libre à raison de 100 g/souris ou de 20pg/souris dans un volume final de 100ul/souris, - soit avec la formulation IE1-pp65/BVSM : Les formulations sont des complexes formés par association de BVSM cationiques (type KY) et de l'antigène chimérique IE1-pp65 pour une administration IP, ces complexes sont en
suspension dans du PBS + 10% glycérol. Deux formulations sont utilisées. Pour la première, le rapport chimère/lipides est de 1/3 et chimère/NPS de 1/10. La dose est de 1OOug de protéine IEl-pp65 dans un volume final de 150ut par souris. Pour la seconde formulation, le rapport chimère/lipides est de 1/15 et chimère/NPS de 1/50. La dose est de 100 g de protéine IE1-pp65 dans un volume final de 100 l par souris, - soit avec les deux ALVAC recombinants (témoin positif), - soit avec du BVSM (témoin négatif). Celui-ci est administré à raison de lmg de BVSM (équivalent NPS) dans un volume final de 100 l par souris.
La réponse TCD8 est évaluée sur les splénocytes prélevés 15 jours après la dernière administration. Ce test de cytotoxicité par la technique de relargage de slur est réalisé comme décrit dans l'exemple précédent.
Aux deux concentrations testées, la N-acétyl-LCystéine protège les péricytes de l'apoptose induite par les AGE-Métylglyoxal.