INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
EFFETS DE PROTECTION ANTI-PATHOGENIQUE DES PEPTAIBOLS 1-Effets à l'encontre des fusarioses du melon La pulvérisation de peptaibols formulés sur des plantes de melon de sept jours et inoculés de Fusarium oxysporum fsp metonis quatre jours avant, permet d'obtenir certains résultats.
Parallèlement, un lot de plantules a vu ses feuilles pulvérisées avec de l'eau.
Dix jours après l'inoculation, les symptômes apparaissent uniquement chez les plants inoculés traités avec de l'eau. Trois semaines après l'infection, les jeunes plants infectés se dessèchent et meurent.
Les plants inoculés et traités avec le peptaibol ne présentent pas de symptômes avant six semaines et continuent ensuite à se développer normalement.
Ces résultats expriment clairement le pouvoir éliciteur du peptaibol sur la résistance des plants de melon vis-à-vis du Fusarium sp.
orifice de sortie 44 dans la face inférieure 20 de la culasse.
L'orifice de sortie 44 du conduit d'échappement 42 est destiné à être obturé par une soupape d'échappement 46 qui présente, par exemple, un diamètre supérieur au diamètre de la soupape
d'admission 36.
Comme on peut le voir sur la figure 1, le piston 16 comporte, dans sa face supérieure 50, un évidement concave 52 (aussi appelé bol) qui, en vue de dessus, présente une forme sensiblement circulaire. L'évidement 52 est excentré par rapport à I'axe A1 du cylindre. En effet, il est intéressant que l'injecteur et l'évidement 52 soient agencés de telle sorte que l'axe d'injection de carburant par l'injecteur arrive de manière à peu près tangentielle à la surface latérale de l'évidement 52, vers l'intérieur
Cependant, ces dispositifs provoquent une perte de charge qui pénalise fortement la perméabilité du conduit d'admission 24, notamment lorsque le moteur fonctionne à forte charge. En effet, les turbulences formées dans le conduit d'admission 24 diminuent
l'écoulement des gaz.
De façon à favoriser le mouvement de swirl sans pénaliser 0o la perméabilité du système d'admission, I'invention propose qu'une zone avant 60 de la paroi intérieure du tronçon aval 28 du conduit d'admission 24 comporte une nervure 62 qui s'étend dans un plan P correspondant sensiblement à une section transversale
du conduit 24 dans la zone correspondante.
La nervure 62 permet de favoriser un mouvement de swirl important des gaz admis dans la chambre de combustion 22 sans diminuer, de façon importante, la perméabilité du système d'admission. Elle permet d'améliorer le guidage du flux de gaz
lors de son entrée dans la chambre 22.
En effet, la nervure 62 modifie l'angle incident du flux de gaz par rapport à la paroi cylindrique de la chambre de combustion 22, ce qui augmente le mouvement tourbillonnaire de
Dans un premier mode de réalisation, la présente invention concerne un virus recombinant défectif comprenant un acide nucléique régulateur selon l'invention et une séquence d'ADNc codant pour une protéine ABCA7 impliquée dans le transport et le métabolisme du cholestérol. Dans un autre mode de
réalisation préféré de l'invention, la séquence d'ADN est une séquence d'ADNg. La séquence d'ADNc codant pour la protéine ABCA7, et utilisable dans un vecteur selon l'invention est avantageusement la séquence SEQ ID ? 8.
Les vecteurs de l'invention peuvent être préparés à partir de différents types de virus. Préférentiellement, on utilise des vecteurs dérivés des adénovirus, des virus adéno-associés (AAV), des virus de l'herpès (HSV) ou des rétrovirus. Il est tout particulièrement avantageux d'utiliser un adénovirus, pour une administration directe ou pour la modification ex vivo de cellules destinées à être implantées, ou un rétrovirus, pour l'implantation de cellules productrices.
Les virus selon l'invention sont défectifs, c'est-à-dire qu'ils sont incapables de se répliquer de façon autonome dans la cellule cible. Généralement, le génome des virus défectifs utilisés dans le cadre de la présente invention est donc dépourvu au moins des séquences nécessaires à la réplication dudit virus dans la cellule infectée. Ces régions peuvent être soit éliminées (en tout ou en partie), soit rendues non-fonctionnelles, soit substituées par d'autres séquences et notamment par la séquence nucléique codant pour la protéine ABCA7. Préférentiellement, le virus défectif conserve néanmoins les séquences de son génome qui sont nécessaires à l'encapsidation des particules virale.
S'agissant plus particulièrement d'adénovirus, différents sérotypes, dont la structure et les propriétés varient quelque peu, ont été caractérisés. Parmi ces sérotypes, on préfère utiliser dans le cadre de la présente invention les adénovirus humains de type 2 ou 5 (Ad 2 ou Ad 5) ou les adénovirus d'origine animale (voir demande WO 94/26914). Parmi les adénovirus d'origine animale utilisables dans le cadre de la présente invention on peut citer les adénovirus d'origine canine, bovine, murine, (exemple : Mast, Beard et al., Virology 75 (1990) 81), ovine, porcine, aviaire ou encore simienne (exemple : SAV). De préférence, l'adénovirus d'origine animale est un adénovirus canin, plus préférentiellement un adénovirus CAV2 [souche Manhattan ou A26/61 (ATCC VR-800) par exemple]. De préférence, on utilise dans le cadre de l'invention des adénovirus d'origine humaine ou canine ou mixte.
Préférentiellement, les adénovirus défectifs de l'invention comprennent les ITR, une séquence permettant l'encapsidation et la séquence codant pour la protéine ABCA7 placée sous le contrôle d'un acide nucléique selon l'invention. Avantageusement, dans le génome des adénovirus de l'invention, la région E1 au moins est rendue non fonctionnelle. Encore plus préférentiellement, dans le génome des adénovirus de
l'invention, le gène E1 et au moins l'un des gènes E2, E4, L1-L5 sont non fonctionnels. Le gène viral considéré peut être rendu non fonctionnel par toute technique connue de l'homme du métier, et notamment par suppression totale, substitution, délétion partielle, ou addition d'une ou plusieurs bases dans le ou les gènes considérés. De telles modifications peuvent être obtenues in vitro (sur de l'ADN isolé) ou in situ, par exemple, au moyens des techniques du génie génétique, ou encore par traitement au moyen d'agents mutagènes. D'autres régions peuvent également être modifiées, et notamment la région E3 (WO 95/02697), E2 (WO 94/28938), E4 (WO 94/28152, WO 94/12649, WO 95/02697) et L5 (WO 95/02697).
Selon un mode préféré de mise en oeuvre, l'adénovirus selon l'invention comprend une délétion dans les régions E1 et E4 et la séquence codant pour ABCA7 est insérée au niveau de la région E1 inactivée. Selon un autre mode de réalisation préféré, il comprend une délétion dans la région E1 au niveau de laquelle sont insérés la région E4 et la séquence codant pour ABCA7 (Demande de brevet Français FR 94 13355).
Les adénovirus recombinants défectifs selon l'invention peuvent être préparés par toute technique connue de l'homme du métier (Levrero et al., Gene (1991) 101 : 195, EP 185 573 ; Graham, EMBO J. (1984) 3 : 2917). En particulier, ils peuvent être préparés par recombinaison homologue entre un adénovirus et un plasmide portant entre autre la séquence d'ADN codant pour la protéine ABCA7. La recombinaison homologue se produit après co-transfection desdits adénovirus et plasmide dans une lignée cellulaire appropriée. La lignée cellulaire utilisée doit de préférence (i) être transformable par lesdits éléments, et (ii), comporter les séquences capables de complémenter la partie du génome de l'adénovirus défectif, de préférence sous forme intégrée pour éviter les risques de recombinaison. A titre d'exemple de lignée, on peut mentionner la lignée de rein embryonnaire humain 293 (Graham et al., J. Gen. Viral. (1977) 36 : 59) qui contient notamment, intégrée dans son génome, la partie gauche du génome d'un adénovirus Ad5 (12 %) ou des lignées capables de complémenter les fonctions E1 et E4 telles que décrites notamment dans les demandes n WO 94/26914 et WO 95/02697.
Concernant les virus adéno-associés (AAV), il s'agit de virus à ADN de taille relativement réduite, qui s'intègrent dans le génome des cellules qu'ils infectent, de
manière stable et site-spécifique. Ils sont capables d'infecter un large spectre de cellules, sans induire d'effet sur la croissance, la morphologie ou la différenciation cellulaires. Par ailleurs, ils ne semblent pas impliqués dans des pathologies chez l'homme. Le génome des AAV a été cloné, séquencé et caractérisé. Il comprend environ 4700 bases, et contient à chaque extrémité une région répétée inversée (ITR) de 145 bases environ, servant d'origine de réplication pour le virus. Le reste du génome est divisé en 2 régions essentielles portant les fonctions d'encapsidation : la partie gauche du génome, qui contient le gène rep impliqué dans la réplication virale et l'expression des gènes viraux ; la partie droite du génome, qui contient le gène cap codant pour les protéines de capside du virus.
L'utilisation de vecteurs dérivés des AAV pour le transfert de gènes in vitro et in vivo a été décrite dans la littérature (voir notamment WO 91/18088 ; WO 93/09239 ; US 4,797, 368, US 5,139, 941, EP 488 528). Ces documents décrivent différentes constructions dérivées des AAV, dans lesquelles les gènes rep eVou cap sont délétés et remplacés par un gène d'intérêt, et leur utilisation pour transférer in vitro (sur cellules en culture) ou in vivo (directement dans un organisme) ledit gène d'intérêt. Toutefois, aucun de ces documents ne décrit ni ne suggère l'utilisation d'un AAV recombinant pour le transfert et l'expression in vivo ou ex vivo d'une protéine ABCA7, ni les avantages d'un tel transfert. Les AAV recombinants défectifs selon l'invention peuvent être préparés par co-transfection, dans une lignée cellulaire infectée par un virus auxiliaire humain (par exemple un adénovirus), d'un plasmide contenant la séquence codant pour la protéine ABCA7 bordée de deux régions répétées inversées (ITR) d'AAV, et d'un plasmide portant les gènes d'encapsidation (gènes rep et cap) d'AAV. Les AAV recombinants produits sont ensuite purifiés par des techniques classiques.
Concernant les virus de l'herpès et les rétrovirus, la construction de vecteurs recombinants a été largement décrite dans la littérature : voir notamment Breakfield et al., (New Biologist 3 (1991) 203) ; EP 453242, EP 178220, Bernstein et al. (Genet.
Eng. 7 (1985) 235) ; McCormick, (BioTechnology 3 (1985) 689), etc.
En particulier, les rétrovirus sont des virus intégratifs, infectant les cellules en division. Le génome des rétrovirus comprend essentiellement deux LTR, une séquence d'encapsidation et trois régions codantes (gag, pol et env). Dans les vecteurs recombinants dérivés des rétrovirus, les gènes gag, pol et env sont généralement délétés, en tout ou en partie, et remplacés par une séquence d'acide
Une fois que le polynucléotide a été introduit dans la cellule hôte, il peut être intégré de manière stable dans le génome de la cellule. L'intégration peut être réalisée à un endroit précis du génome, par recombinaison homologue, ou peut être intégré au hasard. Dans certains modes de réalisation, le polynucléotide peut être maintenu de manière stable dans la cellule hôte sous la forme d'un fragment d'épisome, l'épisome comprenant des séquences permettant le maintien et la réplication de ce dernier, soit de manière indépendante, soit de manière synchronisée avec le cycle cellulaire.
Selon un mode de réalisation particulier, une méthode pour introduire un polynucléotide selon l'invention dans une cellule hôte, en particulier une cellule hôte provenant d'un mammifère, in vivo, comprend une étape au cours de laquelle on introduit une préparation comprenant un vecteur d'expression pharmaceutiquement compatible et un polynucléotide"nu"selon l'invention, placé sous le contrôle de
séquences de régulation appropriées, par injection locale au niveau du tissus choisi, par exemple un tissu musculaire lisse, le polynucléotide"nu"étant absorbé par les cellules de ce tissu.
Des compositions pour l'utilisation in vitro et in vivo comprenant des polynucléotides"nus"sont par exemples décrites dans la demande PCT ? WO 95/11307 ainsi que dans les articles de Tacson et al. (Nature Med. (1996) 2 (8), 888- 892) et de Huygen et al., (Nat. Med. (1996) 2 (8), 893-898).
Selon un mode de réalisation spécifique de l'invention, il est fourni une composition pour la production in vivo d'une protéine d'intérêt. Cette composition comprend un polynucléotide codant pour le polypeptide d'intérêt placé sous le contrôle d'une séquence régulatrice selon l'invention, en solution dans un vecteur physiologiquement acceptable.
La quantité de vecteur qui est injectée à l'organisme hôte choisi varie selon le site de l'injection. A titre indicatif, il peut être injecté entre environ 0, 1 et environ 100 ug de la construction polynucléotidique séquence régulatrice/séquence codante dans le corps d'un animal.
Lorsque l'acide nucléique régulateur selon l'invention est localisé, sur la construction polynucléotidique (ou vecteur), de telle manière à contrôler la transcription d'une séquence comprenant un cadre de lecture ouvert codant la protéine ABCA7, le vecteur est injecté de préférence dans le corps d'un patient susceptible de développer une maladie liée à un déficit en protéine ABCA7.
En conséquence, l'invention concerne également une composition pharmaceutique destinée à la prévention ou au traitement de sujets affectés d'un dysfonctionnement de la protéine ABCA7, comprenant un acide nucléique régulateur selon l'invention et un polynucléotide d'intérêt codant pour la protéine ABCA7, en association avec un ou plusieurs excipients physiologiquement compatibles.
Avantageusement, une telle composition comprendra l'acide nucléique régulateur défini par l'une des séquences SEQ ID D ? 1 ou 2, et SEQ ID D ? 4 ou 5, ou un fragment biologiquement actif de cet acide nucléique régulateur.
L'invention a en outre pour objet une composition pharmaceutique destinée à la prévention ou au traitement de sujets affectés d'un dysfonctionnement dans le métabolisme des lipides, comprenant un vecteur recombinant tel que défini ci-
dessus, en association avec un ou plusieurs excipients physiologiquement compatibles.
L'invention a également pour objet une composition pharmaceutique destinée à la prévention ou au traitement de sujets affectés d'un dysfonctionnement des processus impliquant le système immunitaire et l'inflammation, comprenant un vecteur recombinant tel que défini ci-dessus, en association avec un ou plusieurs excipients physiologiquement compatibles.
L'invention est également relative à l'utilisation d'une construction polynucléotidique conforme à l'invention et comprenant un acide nucléique régulateur du gène ABCA7 ainsi qu'une séquence codant pour la protéine ABCA7, pour la fabrication d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de sujets affectés d'un dysfonctionnement du métabolisme des lipides ou d'un problème d'origine immunologique ou encore d'origine inflammatoire.
L'invention a également trait à l'utilisation d'un vecteur recombinant selon l'invention, comprenant, outre un acide nucléique régulateur de l'invention, un acide nucléique codant pour la protéine ABCA7, pour la fabrication d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de sujets affectés d'un dysfonctionnement des processus impliquant le système immunitaire et l'inflammation.
Vecteurs utiles dans des procédés de thérapie génique somatique et compositions contenant de tels vecteurs La présente invention concerne aussi une nouvelle approche thérapeutique pour le traitement et/ou la prévention des pathologies liées au métabolisme des lipides ainsi que pour le traitement et/ou la prévention des pathologies liées au dysfonctionnement des mécanismes de médiation Iymphocytaire de l'inflammation.
Elle propose une solution avantageuse aux inconvénients de l'art antérieur, en démontrant la possibilité de traiter les pathologies, notamment des pathologies liées à un dysfonctionnement du métabolisme des lipides dans les tissus myélolymphatiques, par la thérapie génique, par le transfert et l'expression in vivo d'une construction polynucléotidique comprenant, outre un acide nucléique régulateur selon l'invention, une séquence codant pour une protéine ABCA7 qui est fortement présumée comme étant impliquée dans le transport et/ou le métabolisme des lipides.
Les quantités sont indiquées en pourcentage en poids sauf mention contraire.
Exemple 1 : Composition pour le nettoyage du visage et du corps ACULYN 330 de ROHM-HAAS 5 % M. A.
Decylglucoside (Plantacare 2000 UP de COGNIS, à 55 % de M. A. dans l'eau) 13 % M. A.
POLYQUATERNIUM-47 (MERQUAT 2001ob) de CALGON) 0,5 % M. A.
Glycérine 3 % Conservateurs qs Hydroxyde de sodium à 10 % qs pH Eau Qsp100 % Mode opératoire : on mélange l'eau, la glycérine, le tensioactif et les conservateurs à la température ambiante (environ 20 à 25 C). On ajoute l'Aculyn 33 et on homogénéise, puis on ajuste le pH à 5, 80 par addition d'hydroxyde de sodium à 10 %. Enfin on ajoute le polymère cationique et on homogénéise.
On obtient un gel translucide irisé de pH 5,80, dont les couleurs varient du bleu, vert, jaune, à orange en fonction de l'orientation. Ce gel a une viscosité après 10 minutes, mesurée au mobile 3 ou 4 (Rhéomat RM180 à la température ambiante, c'est-à-dire à environ 25OC, à 200 s'), de 12 poises (1,2 Pa. s), et il a une conductance mesurée au moyen du conductimètre type CD78 de TACUSSEL électronique à environ 25 C, de 5410 uQ'\ Exemple 2 : Composition pour le nettoyage du visage et du corps ACULYN 33@ de ROHM-HAAS 5 % M. A.
POLYQUATERNIUM-5 (MERQUAT 5 (D de NALCO) 0,5 % M. A.
Glycérine 3 % Conservateurs qs Hydroxyde de sodium à 10 % qs pH Eau Qsp100 % Le mode opératoire est le même que pour l'exemple 1.
On obtient un gel translucide irisé de pH 5,85, dont les couleurs varient du bleu, vert, jaune, à orange en fonction de l'orientation. Ce gel a une viscosité après 10 minutes, mesurée au mobile 3 ou 4 (Rhéomat RM180 à la température ambiante,
c'est-à-dire à environ 25 C, à 200 s-1), de 14 poises (1,4 Pa. s), et il a une conductance mesurée au moyen du conductimètre type CD78 de TACUSSEL électronique à environ 25 C, de 4886 #-1.
L'invention concerne un dispositif de groupage de moyens d'ouverture normalisés et d'outils de base destinés aux sapeurs pompiers.
Lorsque les pompiers doivent intervenir dans un sinistre, ils doivent notamment pouvoir intervenir dans les locaux ou armoires techniques et donc disposer des moyens d'ouverture normalisés correspondants : ils s'agit notamment d'un dispositif d'ouverture du premier type destiné à l'ouverture des postes d'incendie ou des accès aux voies pompiers ou des colonnes sèches, sans que cette liste soit limitative ; il comprend une poignée prolongée par une tige métallique dont l'extrémité est constituée d'un cylindre de révolution de guidage percé axialement par un cylindre de section triangulaire ; un dispositif d'ouverture du deuxième type, semblable à celui que nous venons de décrire mais plus petit, permet l'accès aux boîtiers d'ouverture des machineries d'ascenseur, aux gaines techniques, aux coffrets électriques et de gaz, sans que cette liste soit limitative ; il comporte à son extrémité un cylindre de révolution de petit diamètre percé par un cylindre de section triangulaire de plus petite section que celle du dispositif d'ouverture du premier type ; à ces dispositifs vient s'ajouter un dispositif d'ouverture du troisième type permettant d'ouvrir portes et fenêtres lorsqu'elles n'ont plus de poignées et qui comporte une poignée prolongée par une tige terminée par une pointe de forme pyramidale allongée de sections carré ; un dispositif d'ouverture du quatrième type destiné aux serrage des raccords des tuyaux sapeurs-pompiers qui comporte un poignée prolongée par une tige en quart de cercle terminé par une pointe trapézoïdale permettant de s'agripper aux raccords ; auquel on peut adjoindre des outils accessoires tels qu'un dispositif de coupe constitué par exemple d'une lame de couteau permettant notamment de couper les ceintures de sécurité dans les véhicules accidentés enfin on peut compléter cette panoplie d'outillage par un tournevis. Tous ces dispositifs se présentent généralement indépendamment les uns des autres et certains, comme le tournevis doivent être munis d'une protection spécifique pour qu'ils ne puissent pas blesser la personne qui les portes sur elle. Il parait indispensable de les regrouper. Il existe depuis longtemps des dispositifs de
regroupement d'outillage notamment en coutellerie ou l'on retrouve sur le même couteau en plus des lames, un poinçon, un tire bouchon, un décapsuleur, une paire de ciseaux, sans que cette liste soit limitative ; les outils sont de faible épaisseur et regroupés à chacune des extrémités sur un axe commun qui permet d'escamoter et de mettre en service par pivotement les outils indépendamment les uns des autres ; lors de leur mise en oeuvre, la plupart de ces outils fonctionnent normalement suivant un plan perpendiculaire à l'axe commun ; seul le tire-bouchon se positionne perpendiculairement au manche du couteau qui sert alors de poignée.
Plus particulièrement il existe une pince universelle dont l'extrémité de chacun de ses manches comporte les outillages que l'on trouve dans un couteau et qui sont des outillages de faible épaisseur ; les outils qui sont répartis chacun des manches de la pince sont placés sur un axe qui permet leur escamotage ou leur mise en service.
Les quatre dispositifs d'ouvertures du premier deuxième troisième et quatrième type, sont des pièces métalliques de fonderie qui sont généralement en bronze ou en un métal équivalent.
Les résultats sont regroupés dans les figures 4, 5 et 6.
Dans le cas de HSP 32, on constate que le taux d'induction est amélioré par le traitement thermique (126 % pour un traitement thermique à 44 C).
Le taux d'induction est par contre fortement augmenté en présence du principe actif puisque l'on atteint 165 % dans le cas des kératinocytes sans aucun traitement thermique.
De même l'effet-dose montre que 3 % permet d'atteindre un maximum d'induction, ce qui montre la quantité limitée nécessaire pour que les effets du principe actif soient optimum.
L'invention couvre aussi une composition cosmétique qui inclut le principe actif selon la présente invention et qui permet d'augmenter la production de protéines de stress et lutter contre les effets des rayonnements ultraviolets. Cette composition comprend au moins le principe actif de la présente invention, ou une part du principe actif concentré ou séché, associé à toute forme galénique adaptée.
L'invention couvre aussi le procédé de production de protéines de stress, qui consiste à disposer préventivement sur la peau cette composition cosmétique à raison d'au moins 0,1 % de principe actif, préférentiellement de 1 à 5%.
COMPOSITION COSMETIQUE ET/ OU PHARMACEUTIQUE COMPRENANT UNE METALLOTHIONEINE Domaine de l'invention L'invention concerne une composition cosmétique et/ou pharmaceutique comprenant des protéines de type métallothionéine (MT), qui convient à la protection externe contre un contact avec les métaux lourds et/ou les rayonnements ultraviolets.
Etat de la technique La métallothionéine (MT) représente un ensemble de protéines à faible masse moléculaire, riches en cystéine, à même de lier les ions de métaux monovalents et trivalents tels que les ions des métaux lourds du groupe Ilb. Elles sont entre autres largement distribuées entre les espèces et plantes eucaryotes (Hamer DH, Ann. Revc. Biochem, 55:913-951, 1986; Dunn et al., Pro Soc Exp Biol Med 185:107-119, 1987) .
La demande ES 2087652 T3 (équivalente à EP 557042B) décrit l'utilisation d'une MT dans une préparation cosmétique ou pharmaceutique pour la protection externe des tissus humains ou animaux contre un contact par des métaux lourds. La MT à utiliser se présente de préférence sous sa forme apoprotéine, c'est-à-dire sous une forme dans laquelle la MT est dépourvue d'ions de métaux lourds liés (voir colonne 4, lignes 12-17).