INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
De préférence, lesdites amorces et/ou sondes et/ou polypeptides et/ou anticorps selon la présente invention utilisés dans les procédés et/ou kits ou nécessaires selon la présente invention sont choisis parmi les amorces et/ou sondes et/ou polypeptides et/ou anticorps spécifiques de l'espèce Listeria innocua ou monocytogenes 4b. De manière préférée, ces éléments sont choisis parmi les séquences nucléotidiques codant pour une protéine sécrétée, parmi les polypeptides sécrétés, ou parmi les anticorps dirigés contre des polypeptides sécrétés de Listeria innocua ou monocytogenes 4b.
La présente invention a également pour objet les souches de Listeria innocua ou monocytogenes 4b et/ou de microorganismes associés contenant une ou plusieurs mutation (s) dans une séquence nucléotidique selon l'invention, en particulier une séquence ORF, ou leurs éléments régulateurs (en particulier promoteurs).
On préfère, selon la présente invention, les souches de Listeria innocua ou monocytogenes 4b présentant une ou plusieurs mutation (s) dans les séquences nucléotidiques codant pour des polypeptides impliqués dans la machinerie cellulaire, en particulier la sécrétion, le métabolisme intermédiaire central, le métabolisme énergétique, les processus de synthèse des acides aminés, de transcription et de traduction, de synthèse des polypeptides.
Lesdites mutations peuvent mener à une inactivation du gène, ou en particulier lorsqu'elles sont situées dans les éléments régulateurs dudit gène, à une surexpression de celui-ci.
L'invention concerne en outre l'utilisation d'une séquence nucléotidique selon l'invention, d'un polypeptide selon l'invention, d'un anticorps selon l'invention, d'une cellule selon l'invention, et/ou d'un animal transformé selon l'invention, pour la sélection de composé organique ou inorganique capable de moduler, de réguler, d'induire ou d'inhiber l'expression de gènes, et/ou de modifier la réplication cellulaire de cellules eucaryotes ou procaryotes ou capables d'induire, d'inhiber ou d'aggraver les pathologies liées à une infection par Listeria innocua ou monocytogenes 4b ou un de ses micro-organismes associés.
L'invention comprend également une méthode de sélection de composés capables de se lier à un polypeptide ou un de ses fragments selon l'invention, capables de se lier à une séquence nucléotidique selon l'invention, ou capable de reconnaître un anticorps selon la revendication, et/ou capables de moduler, de réguler, d'induire ou d'inhiber l'expression de gènes, et/ou de modifier la croissance ou la réplication cellulaire de cellules eucaryotes ou procaryotes, ou capables d'induire, d'inhiber ou d'aggraver chez un organisme animal ou humain les pathologies liées à une infection par Listeria, par exemple par L. monocytogenes 4b, ou un de ses micro-organismes associés, caractérisée en ce qu'elle comprend les étapes suivantes : a) mise en contact dudit composé avec ledit polypeptide, ladite séquence nucléotidique, avec une cellule transformée selon l'invention et/ou administration dudit composé à un animal transformé selon l'invention ; b) détermination de la capacité dudit composé à se lier avec ledit polypeptide ou ladite séquence nucléotidique, ou de moduler, de réguler, d'induire ou d'inhiber l'expression de gènes, ou de moduler la croissance ou la réplication cellulaire, ou d'induire, d'inhiber ou d'aggraver chez ledit animal transformé les pathologies liées à une infection par Listeria, par exemple L. monocytogenes 4b ou un de ses micro-organismes associés.
Les cellules et/ou les animaux transformés selon l'invention, pourront avantageusement servir de modèle et être utilisés dans des procédés pour étudier, identifier et/ou sélectionner des composés susceptibles d'être responsables de
pathologies induites ou aggravées par Listeria monocytogenes, ou susceptibles de prévenir et/ou de traiter ces pathologies. En particulier, les cellules hôtes transformées, notamment les bactéries de la famille des Listeria dont la transformation par un vecteur selon l'invention peut par exemple accroître ou inhiber son pouvoir infectieux, ou moduler les pathologies habituellement induites ou aggravées par l'infection, pourront être utilisées pour infecter des animaux dont on suivra l'apparition des pathologies. Ces animaux non transformés, infectés par exemple avec des bactéries Listeria transformées, pourront servir de modèle d'étude. De la même manière, les animaux transformés selon l'invention pourront être utilisés dans des procédés de sélection de composés susceptibles de prévenir et/ou de traiter les maladies dues à Listeria. Lesdits procédés utilisant lesdites cellules transformées et/ou animaux transformés, font partie de l'invention.
Les composés susceptibles d'être sélectionnés peuvent être des composés organiques tels que des polypeptides ou hydrates de carbone ou tous autres composés organiques ou inorganiques déjà connus, ou des composés organiques nouveaux élaborés à partir de techniques de modélisation moléculaire et obtenus par synthèse chimique ou biochimique, ces techniques étant connues de l'homme de l'art.
Afin de déterminer si ESM-1 était maturée comme une molécule sécrétée, comme cela a été suggéré par la présence d'une séquence d'aminoacides N-terminale prédite comme un peptide signal, la protéine ESM-1 a été purifiée à partir de la lignée cellulaire 293-ESM.
La séquence N-terminale de la forme de 50 kD a indiqué que le peptide signal de 19 acides aminés était clivé au site prédit, résultant en un polypeptide ESM-1 mature de 165 acides aminés commençant au résidu tryptophane en position 20 de la séquence SEQ ID N'l, la séquence Nterminale étant WSNNYAVD-P .
ESM-1 a été immunoprécipité à partir des surnageants de cultures cellulaires des cellules HUVEC, SV1,293-ESM et CHO-ESM, puis analysés par immuno-empreinte.
Dans les surnageants des cellules HUVEC, il a été montré précédemment que ESM-1 migrait sous la forme d'une bande diffuse à environ 50 kD.
Une bande similaire en taille a été observée avec les surnageants des cellules SV1,293-ESM et CHO-ESM (figure 1A).
Le poids moléculaire retrouvé est plus important que le poids moléculaire prédit. Ce résultat a suggéré que la forme sécrétée de ESM-1 avait subi des modifications post-traductionnelles. Le fait que la protéine ESM-1 purifiée était mieux colorée sur le gel SDS-PAGE avec le bleu alcian qu'avec le bleu de coomassie a suggéré que ESM-1 était glycosylée (figures 1 B, 1 C) plutôt que oligomérisée au travers de pont disulfure, du fait
que des conditions réductrices ne modifient pas le poids moléculaire apparent de ESM-1.
B. 2. Le résidu sérine en position 137 (SEQ ID NO1) est le site de 0glycosylation de ESM-1.
Une analyse par ordinateur des sites de glycosylation potentielle a permis d'identifier trois sites putatifs de O-glycosylation, respectivement pour la sérine en position 16, sur la thréonine en position 120 et sur la sérine en position 127, mais aucun site de N-glycosylation.
Le résidu thréonine en position 120 et le résidu sérine en position 137 ont été mutés et remplacés par un résidu alanin.
Ces mutants ont été exprimés de manière transitoire dans les cellules 293.
La protéine ESM-1 a ensuite été immunoprécipitée à partir des Iysats cellulaires et des surnageants de culture, et analysés par immunoempreinte.
La protéine ESM/T120A migre à 50 kD, à une position similaire au poids moléculaire apparent de la forme sauvage de ESM-1 (ESMIWT), comme cela est montré à la figure 2A.
Au contraire, la protéine ESM/S137A migre à 22 kD correspondant à la forme intra-cellulaire de ESM-1 (figure 2A), un poids moléculaire compatible avec le poids moléculaire prédit de ESM-1.
Les immunoprécipitations réalisées à partir des cellules COS et CHO transfectées transitoirement ont donné les mêmes résultats, indiquant que seul le résidu sérine en position 137 constituait un site de glycoconjuguaison dans tous les modèles cellulaires étudiés.
Afin de déterminer la longueur du glycosaminoglycane (GAG) de ESM-1, le corps peptidique de ESM-1 a été complètement digéré par la protéinase K.
B. Etude in vivo EXEMPLE 19 : Expérience de la mierodialyse chez le rat Les rats sont anesthésiés au pentobarbital (60 mg/kg i.p.). Ils sont placés dans un appareil stéréotaxique de Kopf et le guide de la canule est implanté dans le cortex frontal cingulé suivant les coordonnées décrites comme suit dans l'atlas de Paxinos et Watson (1982) : AP = + 2,2 ; L= 0,6 ; DV = - 0,2. Les rats sont mis en cage séparément et ne sont utilisés en dialyse que 5 jours plus tard. Le jour de la dialyse la sonde est descendue lentement et maintenue dans sa position. La sonde est perfusée à un débit de 1 l/mn avec une solution de 147,2 mM de NaCl, 4 mM de KCI et 2,3 mM de CaCl2 amené à pH 7,3 avec un tampon phosphate (0,1 M). Deux heures après l'implantation, les échantillons sont collectés toutes les 20 minutes pendant 4 heures. Trois échantillons de base sont collectés avant l'administration des produits à tester. Les rats sont laissés dans leur cage individuelle pendant toute l'expérience. A la fin de l'expérience, les rats sont décapités et le cerveau prélevé est congelé dans l'isopentane. Des sections d'une épaisseur de 100 m sont coupées et colorées avec du cresyl violet, ce qui permet la vérification de l'emplacement des sondes. La quantification simultanée de dopamine, norépinéphrine et sérotonine est effectuée de la façon suivante : 20 l d'échantillon de dialyse sont dilués avec 20 l de phase mobile (NaH2P04 : 75 mM, EDTA : 20 M, sodium 1-decanesulfonate : 1 mM, méthanol : %, triethylamine : 0,01%, pH : 5,70) et 33 l d'échantillons sont analysés par HPLC avec une colonne en phase inverse thermostatée à 45 C et quantifiés par l'intermédiaire d'un détecteur coulométrique. Le potentiel de la première électrode du détecteur est fixée à - 90 mV (réduction) et la seconde à + 280 mV (oxydation). La phase mobile est injectée avec une pompe à un débit de 2 ml/mn. Les limites de sensibilité pour la dopamine, la norépinéphrine et la sérotonine sont de 0,55 fmole par échantillon. Tous les produits de l'invention sont injectés par voie sous-cutanée dans un volume de 1,0 ml/kg. Les produits sont dissous dans de l'eau distillée additionnée de quelques gouttes d'acide lactique si nécessaire.
Résultats : A titre d'exemple et pour illustrer l'activité des produits de l'invention, le composé de l'exemple 5, administré à la dose de 10 mg/kg, par voie sous-cutanée, augmente le niveau de sérotonine de : 250 15 %, celui de la noradrénaline de 500 13 % et celui de la dopamine 400 50 % (% maximal de l'effet par rapport au niveau basal défini comme le 0 %).
EXEMPLE 20 : Test d'enfouissement des billes chez la souris Ce test permet d'évaluer la capacité d'agents pharmacologiques à inhiber le comportement spontané d'enfouissement de billes chez la souris, cette inhibition étant prédictive d'action antidépressive et/ou anti-impulsive. Des souris mâles de souche NMRI (Iffa-Credo, l'Arbresle, France), pesant 20-25 g le jour de l'expérience, sont placées individuellement dans des boîtes en Macrolon (30 x 18 x 19 cm) contenant 5 cm de sciure et recouvertes par une plaque en plexiglass perforée. Vingt-quatre billes en verre "#il-de-chat" sont réparties régulièrement sur la sciure à la périphérie de la boîte. Au terme de 30 minutes d'exploration libre, les animaux sont retirés de la boîte et le nombre de billes enfouies est comptabilisé.
Résultats : A titre d'exemple, le tableau montre l'effet d'un produit de l'invention, en comparaison avec celui de la fluoxétine, un antidépresseur de référence.
Exemple Enfouissement des billes chez la souris DI50 Fluoxétine 8,03 5 0,6 DI50 = dose inhibitriceso Les doses sont exprimées en mg/kg s.c.
EXEMPLE 21 : Composition pharmaceutique : comprimés Formule de préparation pour 1000 comprimés dosés à 5 mg Composé de l'exemple 5 ...................................................................................5 g Hydroxypropylméthylcellulose ........................................................................5 g Amidon de blé ................................................................................................10 g Lactose..........................................................................................................100 g Stéarate de Magnésium.....................................................................................2 g
La présente invention concerne de nouveaux dérivés de cyclobuta-indole carboxamide, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
Les composés de la présente invention sont utiles dans le traitement des maladies du système nerveux central telles que l'anxiété, les attaques de panique, les troubles obsessionnels compulsifs, les phobies, les troubles impulsifs, l'abus de drogue, les troubles de la cognition, les psychoses, les dépressions et les troubles de l'humeur.
De nombreux dérivés polycycliques et hétérocycliques contenant une fonction urée ont été décrits dans la littérature comme étant des antagonistes de divers récepteurs sérotoninergiques, leur conférant ainsi une utilité pour le traitement des maladies du système nerveux central. C'est le cas plus particulièrement des demandes de brevets WO 95/29177, WO 96/23783 et WO 98/47868. Le brevet US 5,514,690 décrit, quant à lui, des dérivés d'aminocarbonylquinoline ou indoline et les revendique pour leur propriété d'activation des pompes à potassium.
Les composés de la présente invention, outre le fait qu'ils soient nouveaux, se sont révélés très actifs pour le traitement des maladies du système nerveux central, et plus particulièrement ont démontrés une forte activité dans le test de conflit de Vogel chez le rat, ainsi que dans le test d'enfouissement de billes chez la souris. Les résultats obtenus dans le premier test permettent de proposer l'utilisation des composés de l'invention dans le traitement des phénomènes cliniques liés à l'anxiété, et ceux obtenus dans le second test démontrent le fort potentiel thérapeutique des composés de l'invention dans le traitement des maladies liées aux troubles de l'humeur.
Plus particulièrement, la présente invention concerne les composés de formule (I) :
dans laquelle : n représente un entier compris entre 0 et 6, R1 représente un groupement choisi parmi hydrogène, hydroxy, cyano, alkoxy (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, alkoxycarbonyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, carboxy, aminocarbonyle (la partie amino étant éventuellement substituée par un ou deux groupements, identiques ou différents, choisis parmi alkyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, aryle et arylalkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié), et NR4R5 dans lequel R4 et R5, identiques ou différents, représentent un groupement choisi parmi alkyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, aryle, arylalkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, hétéroaryle, hétéroarylalkyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, cycloalkyle, cycloalkylalkyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, alkényle (C2-C6) linéaire ou ramifié, et alkynyle (C2-C6) linéaire ou ramifié, R2 représente un groupement choisi parmi atome d'hydrogène, groupement alkyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, hydroxyméthyle, groupement de formule ')(2) et -U-V-W HO dans lesquels : * T représente un groupement cycloalkyle (C3-C12) monocyclique ou polycyclique, dont l'un des atomes de carbone du cycloalkyle peut éventuellement être remplacé par un groupement choisi parmi atome d'oxygène, atome de sélénium, groupement de formule S(O)p dans laquelle p représente un entier compris entre 0 et 2 inclus, et groupement de formule SiR6R7 dans laquelle R6 et R7, identiques ou différents, représentent un groupement alkyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, * U représente une liaison ou un groupement méthylène, *V représente une liaison, un atome d'oxygène ou un groupement S(O)q dans lequel q est un entier compris entre 0 et 2 inclus, * W représente un groupement choisi parmi aryle, arylalkyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, cycloalkyle, et cycloalkylalkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, R3 représente un groupement choisi parmi atome d'hydrogène, groupement alkyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, aryle, et hétéroaryle, leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
Par groupement aryle, on comprend un groupement choisi parmi phényle, biphényle, naphtyle, dihydronaphtyle, tétrahydronaphtyle, indanyle, indényle, et benzocyclobutyle, chacun de ces groupements étant éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements, identiques ou différents, choisis parmi atomes d'halogène, groupements alkyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, hydroxy, alkoxy (C1-C6) linéaire ou ramifié, nitro, cyano, trihalogénoalkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, amino, monoalkylamino, dialkylamino (C1-C6) linéaire ou ramifié, trihalogénoalkoxy (C1-C6) linéaire ou ramifié, aminoalkyl(C1-C6)aminocarbonyle (les atomes d'azote de chacune des parties amino étant éventuellement substitués par des groupements alkyle (Ci-Ce) linéaires ou ramifiés, identiques ou différents), pyridinyle et pyridinyloxy.
Par groupement hétéroaryle, on comprend un système monocyclique aromatique ou bicyclique dont l'un des cycles est aromatique, l'autre cycle étant aromatique ou partiellement hydrogéné, de 5 à 12 chaînons, contenant un, deux ou trois hétéroatomes, identiques ou différents, choisis parmi oxygène, azote et soufre, chacun de ces groupements étant éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements choisis parmi les substituants décrits pour le groupement aryle précédemment défini.
Par groupement cycloalkyle, on comprend un système mono- ou polycyclique, de 3 à 12 chaînons, contenant éventuellement une ou plusieurs insaturations, celles-ci ne conférant pas de caractère aromatique audit système cyclique.
portante, à l'aide d'éléments répartiteurs et d'écrans de redressement vers une direction géné-
rale d'émission, comme décrit par exemple dans le document FR-A-2 776 595.
On voit sur la Figure 3 que plusieurs sources lumineuses 20 sont régulièrement répar-
ties le long d'une " ligne d'émission " Y'-Y, parallèle à l'arête 26 formée par la jonction entre les deux écrans 22 et 24. Chaque source lumineuse 20 contribue ainsi, dans son plan de source individuel, tel que défini plus haut, au flux lumineux total émis par l'écran 24. Un tel flux est émis dans une direction moyenne Z'-Z, autour d'un axe perpendiculaire au deuxième écran 24, c'est à dire faisant un angle d'environ 80 avec l'axe X'-X. On a également représenté sur la Figure 3 la glace 12 du retour latéral 10 ainsi que la partie de socle ou de boîtier 14 qui y sont adjacentes. On voit donc bien que la fonction feu de rappel latéral selon la présente invention peut être très facilement implantée dans le volume réduit entre la glace 12 et la partie de socle
ou de boîtier 14, habituellement inutilisable, ainsi qu'on l'a représenté sur la Figure 1.
En fonction du volume disponible, ou de l'effet ou de l'aspect souhaité, les écrans 22 et 24 pourront avoir une forme autre que rectangulaire, ainsi qu'on l'a représenté sur la Figure
4. On a représenté sur cette Figure un dispositif d'éclairage, comportant par exemple des pro-
jecteurs P et P', le projecteur P' étant représenté partiellement. On voit sur cette Figure que la glace 12 et la partie de boîtier 14 adjacente permettent de loger une fonction de rappel latéral selon la présente invention. Cette fonction de rappel émet dans une direction moyenne Z'-Z,
sensiblement perpendiculaire à l'axe longitudinal du véhicule, lui-même sensiblement paral-
lèle à l'axe Y'-Y. L'extrémité 28 des écrans 22 et 24 éloignée des sources lumineuses 20 est
-8- 2815589
-8 - conformée d'une part pour pouvoir être reçue dans l'espace entre le boîtier 14 et la glace 12,
et d'autre part pour avoir une esthétique prédéterminée.
De même, en fonction du volume disponible, ou de l'effet ou de l'aspect souhaité, les
écrans 22 et 24 pourront avoir une forme autre que plane, et pourront être légèrement incur-
vés.
éléments réflecteurs 14As sont formés dans les segments.
Chaque élément réflecteur 14As a une surface convexe courbe correspondant à un paraboloïde dont l'axe central est constitué par l'axe optique Ax et dont le foyer se trouve à l'emplacement du filament 12a sur l'axe optique Ax. Chaque élément réflecteur 14As est destiné à renvoyer la lumière du filament 12a par diffusion dans des angles prédéterminés, en
directions verticale et horizontale autour d'un axe paral-
lèle à l'axe optique Ax.
La partie de paroi perpendiculaire 14B s'étend à toute la partie de bord périphérique externe de la partie de réflecteur 14A. A une surface interne de la partie de paroi perpendiculaire 14B, plusieurs éléments quasi-réflecteurs 14Bsl disposés dans la direction avant-arrière sont formés avec un pas régulier sur toute la longueur de la périphérie
de la partie de paroi perpendiculaire 14B.
Le panneau translucide 18 s'étend en direction prati-
quement horizontale, avec une forme en coupe longitudinale
pratiquement en L tournée vers l'avant. Le panneau trans-
lucide 18 est formé afin que, lorsque la lampe est observée depuis l'avant, une arête analogue à celle d'un toit à
arêtier apparaisse comme l'indique la figure 1.
Une surface tournée vers l'avant du panneau translucide 18 est semitransparente, grâce à un traitement par dépôt d'aluminium en phase vapeur sous vide ou analogue. Toute la
surface constitue une partie semi-transparente 18A.
Cette partie semi-transparente 18A a des surfaces inclinées d'un angle prédéterminé (environ 50 dans ce mode de réalisation) par rapport à la partie de paroi
perpendiculaire 14B.
Lorsque l'ampoule 12 de la source lumineuse de la lampe 10 du véhicule ne fonctionne pas, un oeil placé au point E sur l'axe optique Ax voit la lumière de la partie de paroi
perpendiculaire 14B réfléchie sur la partie semi-
transparente 18A parce que la lumière extérieure est ren-
voyée par la partie semi-transparente 18A comme indiqué sur la figure 2. En conséquence, comme l'indique la figure 4A,
la lampe 10 est vue sous forme d'un motif de bandes verti-
cales et horizontales qui sont les images réfléchies des éléments quasiréflecteurs 14Bsl formés à la surface interne
nement, la lumière de l'ampoule 12 est réfléchie par la
partie de réflecteur 14A et transmise par le panneau trans-
lucide 18. Au point E, la lampe 10 apparaît à l'oeil sous
forme d'un motif analogue à un réseau comprenant les élé-
ments réflecteurs 14As formant la partie de réflecteur 14A
comme indiqué sur la figure 4B.
Ainsi, dans ce mode de réalisation, l'aspect de la lampe n'est pas le même selon que la lampe est en fonction- nement ou non. De plus, lorsque la lampe ne fonctionne pas, la lumière de la surface interne de la partie de paroi perpendiculaire 14B ayant les éléments quasi-réflecteurs 14Bsl est réfléchie par la partie semi-transparente 18A. En conséquence, par rapport à la lampe classique de véhicule qui donne une réflexion blanchâtre d'une scène devant la glace translucide de la lampe, la lampe de ce mode de
Les rayons lumineux issus de la source lumineuse 20 et traversant directement l'ouverture 30 sont compris dans un angle solide, symétrique par rapport à l'axe X'-X, et dont
9 2815589
la valeur ne dépend que de l'étendue de la source 20 et de la distance E entre les extrémités 28
des écrans 22 et 24.
Les rayons lumineux incidents sur le premier ou le deuxième écrans 22 ou 24, qu'ils soient directement issus de la source lumineuse 20 ou qu'ils aient été préalablement réfléchis par le deuxième ou le premier écran 24 ou 22 respectivement, peuvent également être amenés à finalement traverser l'ouverture 30. Ils sont alors compris dans un angle solide ', également symétrique par rapport à l'axe X'-X, et plus grand que l'angle solide. La valeur de l'angle solide ' ne dépend que de l'étendue de la source 20 et des angles a et fl que forment les écrans
22 et 24 avec l'axe X'-X.
D'autre part, l'intensité lumineuse des rayons contenus dans l'angle solide, issus di-
rectement de la source 20, est supérieure à celle des rayons contenus dans l'angle solide ', qui
ont subi au moins une réflexion sur les écrans 22 et/ou 24.
Le deuxième mode de réalisation permet ainsi de remplir une deuxième fonction. En effet, il suffit d'orienter le dispositif pour que l'axe moyen d'émission X'-X soit orienté de
manière à être sensiblement parallèle à l'axe longitudinal du véhicule. Dans une telle configu-