INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Pour cet effet, l'invention propose un principe actif à partir d'éléments à structure peptidique ayant un faible poids moléculaire.
Les unités peptidiques purifiées ainsi apportées accélèrent l'assimilation cellulaire et vitalisent la peau.
Une peau ainsi nourrie, revitalisée permet notamment de lutter contre le vieillissement tissulaire donc de combler les rides.
On connaît un procédé de fabrication d'un hydrolysat de protéines riches en di-et tri-peptides pour la nutrition artificielle et utilisées en diététique.
Ce procédé consiste à soumettre une protéine du blanc d'oeuf ou de la caséine, à l'action simultanée ou successive d'enzymes, en l'occurrence une protéase bactérienne utilisable en milieu neutre, une protéase bactérienne utilisable en milieu alcalin et une enzyme pancréatique d'origine animale.
Dans la présente demande, il convient d'obtenir un hydrolysat de protéines avec une fraction à faible poids moléculaire pour être absorbée par la peau.
Dans l'art antérieur, comme il s'agit d'alimentation artificielle, le poids moléculaire n'est pas une contrainte et les produits obtenus par ces procédés ne permettraient aucunement une application à la cosmétologie.
L'invention est maintenant décrite en détail, tant dans ses étapes du procédé d'obtention que dans la caractérisation du produit obtenu et à travers des compositions cosmétiques adaptées.
Les différentes figures représentent : - figure 1, une courbe de distribution des fractions peptidiques obtenues.
- figure 2, tableau des résultats sur la prolifération de fibroblastes au cours du temps, - figure 3, tableau des résultats sur la prolifération de fibroblastes comparée à d'autres compositions, - figure 4, tableau des résultats de récupération cellulaire après un stress UV, - figure 5, tableau des résultats de l'activité stimulante du principe actif, - figures 6A et 6B, des tableaux de résultats de pression partielle d'oxygène et de dioxyde de carbone, - figures 7A et 7B, des tableaux de résultats d'analyses sur volontaires concernant l'oxygénation tissulaire, et - figure 8, tableau récapitulant les améliorations vis-à-vis des rides.
1/PROCEDE D'EXTRACTION D'UN PRINCIPE ACTIF A PARTIR DE RIZ Le produit selon l'invention dont on souhaite obtenir un concentrat constituant le principe actif selon l'invention, est du riz, notamment la variété Orysa Sativa. Le procédé consiste à réaliser la succession des étapes suivantes : - solubilisation d'un concentré de protéines de riz dans l'eau, notamment la variété Orysa Sativa, à raison d'au moins 5% en poids.
- hydrolyses successives de cette suspension en présence d'une- protéase stomacale d'origine animale utilisable en milieu acide, - concentration de la fraction active en petits peptides de masse moléculaire inférieure à 1 400 daltons, - filtration stérilisante pour atteindre une flore mésophile totale inférieure à 100 germes/g, et une absence de levures et de moisissures.
On réalise une courbe représentée sur la figure 1 sur une colonne commercialisée sous la dénomination Superdex Peptide. On utilise une solution tampon phosphate 0,02 mole additionnée de 0,25 mole NaCI et on travaille à pH 7,2.
Le débit sur la colonne est de 0,25 ml/mn et se traduit sur papier par 0,25 cm/mn.
Sur cette figure, les abscisses représentent la valeur mp du filtre Tamra (ddGTP) et les ordonnées représentent la valeur mp du filtre R-110 (ddATP).
En haut à droite, le groupe hétérozygote GA contient 1 individu.
En bas à droite, le groupe homozygote GG contient 232 individu.
En bas à gauche, le groupe d'individus contient 7 blancs et 6 individus non génotypés.
La Figure 12 représente le résultat du génotypage du polymorphisme de type SNP a1294c dans une population d'individus.
Sur cette figure, les abscisses représentent la valeur mp du filtre Tamra (ddATP) et les ordonnées représentent la valeur mp du filtre R-110 (ddCTP).
En haut à droite, le groupe hétérozygote AC contient 2 individus.
En bas à droite, le groupe homozygote AA contient 236 individus. En bas à gauche, le groupe d'individus contient 7 blancs et 1 individu non génotypé.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Définitions On entend par"séquence nucléotidique du gène sauvage de référence", la séquence nucléotidique ID SEQ ? 1 du gène IFNa-7 humain.
Cette séquence est accessible dans la GenBank sous le numéro d'accès X02960 et décrite dans les publications suivantes : - Olopade, O. 1. ; Bohlander, S. K. ; Pomykala, H. ; Maltepe, E. ; Van Melle, E. ; Le Beau, M. M. ; Diaz, M. O. :"Mapping of the shortest region of overlap of deletions of the short arm of chromosome 9 associated with human neoplasia." ; Genomics 14 : 437-443,1992.
- Henco K, Brosius J, Fujisawa A, Fujisawa JI, Haynes JR, Hochstadt J, Kovacic T, Pasek M, Schambock A, Schmid J, et al. :"Structural relationship of human interferon alpha genes and pseudogenes." ; J Mol Biol 1985 Sep 20 ; 185 (2) : 227-60.
- Ullrich A, Gray A, Goeddel DV, Dull TJ :"Nucleotide sequence of a portion of human chromosome 9 containing a leukocyte interferon gene cluster."; J Mol.
Biol. 1982 Apr 15 ; 156 (3) : 467-86.
On entend par "protéine IFNa-7 naturelle" la protéine mature codée par la séquence nucléotidique du gène sauvage de référence de FNa- 7. La protéine immature de l'IFNa-7 naturelle correspond à la séquence peptidique ID SEQ ? 2.
Le terme polynucléotide inclut, par exemple, un ADN simple brin ou double brin, un ADN composé d'un mélange d'une ou plusieurs région (s) simple brin et d'une ou plusieurs région (s) double brins, un ARN simple brin ou double brin et un ARN composé d'un mélange d'une ou plusieurs région (s)
L'initiateur témoin formé par l'alvéole 2 soudée à l'embase 3 est disposé dans un boîtier 13 formé d'au moins deux coquilles 13a et 13b. Une coquille inférieure 13b réalisée en matière plastique, par exemple en polycarbonate, est traversée par les broches 4a et 4b.
Une coquille supérieure 13a entoure l'alvéole 2 et elle est réalisée en un matériau transparent, par exemple dans une matière plastique telle un polycarbonate. Cette coquille 13a constitue ainsi un moyen permettant la visualisation du fonctionnement de l'initiateur. Les coquilles inférieure et supérieure sont soudées l'une à l'autre par exemple par ultrasons.
Le dispositif témoin de fonctionnement 1 selon l'invention est relié par un connecteur 14 (représenté ici schématiquement en pointillés) à une ligne de mise à feu 15, elle même raccordée à un dispositif de tir 16.
Afin de tester le dispositif de tir 16 ainsi que la ligne de mise à feu 15 on remplacera l'initiateur pyrotechnique (non représenté) qui est destiné à être raccordé à cette ligne 15 par un dispositif témoin 1 selon l'invention. Ce dernier aura avantageusement même forme et même encombrement qu'un initiateur normal.
Lorsque le dispositif de tir 16 commande la mise à feu, la composition pyrotechnique 9 se trouve initiée. Elle a une masse suffisamment réduite pour que son initiation ne puisse pas provoquer la destruction des coquilles 13a et 13b du boîtier 13. Cependant l'épaisseur du paillet 11 (réalisé par exemple en étain de 0,1 mm d'épaisseur) est suffisamment réduite pour que la surpression provoquée par l'initiation de la composition pyrotechnique 9 provoque la rupture du paillet et la dispersion du colorant 12 à l'intérieur de la cavité 17 délimitée par la coquille supérieure 13a du boîtier 13.
Cette initiation ne provoque aucun bruit et aucun choc.
L'initiateur témoin de fonctionnement peut donc être installé sur une ligne à tester sans risques qui imposeraient des
précautions particulières. Le colorant recouvre après initiation la surface interne de la coquille supérieure 13a qui, du fait de sa transparence, aura extérieurement la couleur du colorant 12.
Différentes variantes sont possibles sans sortir du cadre de l'invention. Il est ainsi possible de concevoir un dispositif témoin comportant un moyen de visualisation de structure différente. On pourra par exemple avoir une coquille supérieure 13a opaque partout sauf au niveau d'au moins une fenêtre transparente.
Le moyen d'allumage 5 pourra également être de nature différente. On pourra remplacer par exemple le pont semi conducteur par un fil chaud ou un fil explosé.
Le dispositif selon l'invention peut également être installé à demeure dans un système pour visualiser le changement d'état de celui ci. Il suffit pour cela de définir le système tel que le changement d'état à surveiller provoque également l'initiation du dispositif 1.
On pourra également utiliser le dispositif selon l'invention pour animer des maquettes de présentation de dispositifs de sécurité notamment pour l'automobile.
La nature du colorant pourra être modifiée en fonction des besoins. On pourra adopter différentes couleurs pour visualiser des fonctionnements différents. On pourra aussi utiliser un colorant luminescent qui sera visible dans l'obscurité.
i La présente invention concerne d'une facon générale
les projecteurs de véhicules automobiles.
Il existe à l'heure actuelle deux grandes familles de tels projecteurs. La première famille, celles des projecteurs appelés ici " du genre parabolique ", comprend les projecteurs dont le faisceau est engendré principalement par une source de petites dimensions montée dans un miroir qui projette les rayons sur la route pour former le faisceau souhaité. La glace du projecteur intervient le cas échéant, en étant munie de prismes, stries, etc. pour modeler le faisceau, et en particulier pour l'étaler en largeur. Cette famille inclut ici les projecteurs dits à surface libre ou encore à " Surface Complexe >> (marque déposée), ayant pour aptitude dengendrer directement un faisceau délimité par
De même, le polymorphisme de type SNP silencieux a1212g ne modifie pas l'acide aminé leucine (L) en position 159 sur la séquence d'acides aminés ID SEQ N02.
Un génotypage des polynucléotides conformes à l'invention peut être effectué de façon à déterminer la fréquence allélique de ces polynucléotides dans une population. Un exemple de génotypage est donné, ciaprès, dans la partie expérimentale.
La détermination de la fonctionnalité des polypeptides de l'invention peut également être effectuée par un test de leur activité biologique.
A cet égard, on peut mesurer, par exemple, l'effet anti-prolifératif sur la lignée cellulaire de Daudi de polypeptides conformes à l'invention en comparaison avec la protéine IFNa-7 naturelle. Des exemples de tests fonctionnels sont donnés ci-après dans la partie expérimentale.
L'invention a aussi pour objet l'utilisation de polynucléotides et de polypeptides conformes à l'invention ainsi que de molécules thérapeutiques obtenues et/ou identifiées à partir de ces polynucléotides et polypeptides, notamment pour la prévention et le traitement de certains dérèglements et/ou maladies humaines.
La Figure 1 représente la modélisation de la protéine codée conforme à l'invention comportant le polymorphisme de type SNP g1033a et de la protéine IFNa-7 naturelle.
Le ruban noir des Figures 1 et 2 représente la structure de la protéine IFNa-7 naturelle.
Le ruban blanc des Figures 1 et 2 représente la structure de la protéine IFNa-7 mutée (D72N).
La Figure 3 représente la modélisation de la protéine codée conforme à l'invention comportant le polymorphisme de type SNP t1166c et de la protéine IFNa-7 naturelle.
La Figure 4 représente la modélisation de la partie supérieure de chacune des protéines représentées sur la Figure 3.
Le ruban noir des Figures 3 et 4 représente la structure de la protéine IFNa-7 naturelle.
Le ruban blanc des Figures 3 et 4 représente la structure de la protéine IFNa-7 mutée (F116S).
La Figure 5 représente la modélisation de la protéine codée conforme à l'invention comportant le polymorphisme de type SNP g1181 a et de la protéine IFNa-7 naturelle.
La Figure 6 représente la modélisation de la partie centrale de chacune des protéines représentées sur la Figure 5.
Le ruban noir des Figures 5 et 6 représente la structure de la protéine IFNa-7 naturelle.
BIPHOSPHOLES PONTES ET METALLOCENES PREPARES A PARTIR DE CEUX-CI La présente invention a pour objet de nouveaux catalyseurs pour la polymérisation des oléfines.
On connaît des catalyseurs à base de métallocènes. Dans ces complexes organométalliques, un atome de métal est pris en sandwich entre deux ligands de cyclopentadiényle. La synthèse, structure et les propriétés de ces complexes est décrite par exemple dans Nicholas J. Long, Metallocenes , édité par Blackwell Science, 1998.
Sur ce dessin : la Figure 1 montre une vue partielle en perspective d'un siège de véhicule selon l'invention, prise obliquement de l'arrière, selon le premier exemple de réalisation ; la Figure 2 montre une vue partielle en perspective, représentée en partie découpée, d'un dossier selon le premier exemple de réalisation ; la Figure 3 montre un schéma de principe du mode de fonctionnement d'un appuie-tête selon le premier exemple de réalisation ; la Figure 4 montre une vue partielle en perspective, représentée en partie découpée, du dossier selon le deuxième exemple de réalisation ; et la Figure 5 montre un schéma de principe du mode de fonctionnement de l'appuie-tête selon le deuxième exemple de réalisation.
Dans le premier exemple de réalisation, un siège de véhicule 1, constitué par un siège avant, pour une voiture de sport, est muni d'un dossier 3 qui comprend, comme structure, une coque de support 5 munie d'un cadre de support métallique intégré 7. Le dossier 3 est
capitonné et recouvert d'une façon connue en soi. A son extrémité supérieure, le cadre de support 7 présente un support de base 9 qui y est relié rigidement, le long duquel une structure d'appuie-tête 10 d'un appuie-tête 12 est montée coulissante. L'appuie-tête 12 est capitonné et recouvert de la même façon que le reste du dossier 3, l'appuie-tête 12 étant certes séparé structurellement mais formant visuellement une partie intégrante du dossier 3.
Sur la face arrière de l'appuie-tête 12, est intégré, à son bord supérieur, un levier de déverrouillage 14, monté mobile, accessible pour l'utilisateur c'est-à-dire encastré dans une niche de prise. Le levier de déverrouillage 14 est en liaison effective, par l'intermédiaire d'une première transmission à câble 16, avec un verrou 18 chargé par ressort, qui est lui-même monté à l'extrémité inférieure de la structure 10 de l'appuie-tête. Selon la position de l'appuie-tête 12, le verrou 18 coopère, de préférence par action de force, avec une encoche supérieure 21, de forme correspondante, du support de base 9, ou avec une encoche inférieure 23 qui est de même configuration. Entre le support de base 9 et la structure 10 de l'appuie-tête, est disposé un ressort 24 qui est tendu avec une force qui varie selon la position de l'appuie-tête 12. Des butées non représentées ont pour effet que la structure 10 de l'appuie-tête ne s'échappe pas du support de base 9.
La structure 10 de l'appuie-tête est en liaison effective, au moyen d'un mécanisme de renvoi 25, constitué de préférence par une tringlerie et monté sur le support de base 9, avec une deuxième transmission à câble 27, par exemple une transmission à câble Bowden, avec laquelle la fonction de dégagement de basculement de deux ferrures 29 du dossier peut être déclenchée. Au moyen des ferrures de dossier 29 disposées sur les deux côtés du siège 1 du véhicule, le dossier 3 est relié à une partie assise du
siège 1 du véhicule, peut être réglé en inclinaison par rapport à cette partie et peut être dégagé vers l'avant par basculement pour faciliter l'accès à la banquette arrière.
Dans la position d'utilisation du siège 1 de véhicule, la structure d'appuie-tête 10 est en extension et elle est verrouillée au moyen de l'encoche supérieure 21, c'est-à-dire que l'appuie-tête 12 se trouve dans sa position haute. Pour le passage à la position dégagée du siège 1 du véhicule par basculement, l'utilisateur actionne le levier de déverrouillage 14 situé sur le côté arrière de l'appuie-tête 12 et muni d'une manette et, dans ce mouvement, du fait de la disposition du levier de déverrouillage 14, il prend appui par la paume de la main sur le bord supérieur de l'appuietête 12. Sous cet effet, le verrou 18 est extrait de l'encoche supérieure 21 par l'intermédiaire de la première transmission à câble 16. Maintenant, sous l'effet de la force d'appui de la main, l'appuie-tête 12 est repoussé vers le bas, c'est-à-dire escamoté. Pour cela, l'utilisateur n'a pas à modifier la position de sa main.
Lors de l'escamotage de l'appuie-tête 12, la structure 10 de l'appuie-tête qui est guidée sur le support de base 9 est repoussée le long du support de base 9 et, dans ce mouvement, le ressort 24 est tendu jusqu'à ce que l'appuie-tête 12 atteigne la position extrême inférieure et que le verrou 18 entre dans l'encoche inférieure 23. Par ailleurs, lors de l'escamotage de l'appuie-tête 12 sur le côté avant, le capitonnage de cet appuie-tête glisse sur le capitonnage du dossier 3.
Lors de l'escamotage de l'appuie-tête 12, la deuxième transmission à câble 27 est en même temps tirée par l'intermédiaire du mécanisme de renvoi 25 et, sous cet effet, les ferrures 29 du dossier sont déverrouillées. Le dossier 3 peut être maintenant basculé vers l'avant. Ici
aussi, l'utilisateur n'a pas à modifier la position de sa main. Lorsque le dossier 3 est basculé en sens inverse, au moment où l'on atteint la position d'utilisation, un accouplement non représenté a pour effet que le verrou 18 est extrait de l'encoche inférieure 23 et que le ressort 24 peut mettre l'appuie-tête 12 en extension vers le haut pour qu'il prenne sa position de départ.
Le deuxième exemple de réalisation ressemble au premier exemple de réalisation à de nombreux égards, c'est pourquoi les éléments identiques et de même fonction portent des références majorées de 100. Le cadre 107 du dossier 103 est ici aussi muni d'un support de base 109 sur lequel est montée coulissante une structure d'appuietête 110 appartenant à un appuie-tête 112. Le levier de déverrouillage 114 est disposé latéralement à l'appuietête 112 et il est en liaison effective, par l'intermédiaire d'un mécanisme de renvoi articulé 125, avec la structure 110 de l'appuie-tête et avec une transmission à câble 127 destinée au déverrouillage des ferrures du dossier.
Lorsqu'on actionne le levier de déverrouillage 114, la structure 110 de l'appuie-tête est en même temps attirée vers le bas, c'est-à-dire que l'appuie-tête 112 est escamoté. Un élément élastique, dont l'action inverse sa direction lors de l'escamotage et de la mise en extension de l'appuie-tête 112, par exemple un ressort lame ou un ressort hélicoïdal à flambage peut apporter une assistance. Lors de l'escamotage de l'appuie-tête 12, sous l'action du mécanisme de renvoi 125, la transmission à câble 127 qui y est reliée est actionnée en même temps, de sorte que le dossier 103 est déverrouillé et qu'il peut être basculé vers l'avant.
Après le basculement en sens inverse, l'appuie-tête 112 est de nouveau mis en extension et le levier de déverrouillage 114 prend sa position de départ. Dans la
variante de réalisation, de même que dans le premier exemple de réalisation, il est prévu un ressort qui assiste la mise en extension, ainsi qu'un verrouillage approprié.
La modélisation bio-informatique permet ainsi de prévoir que la présence de l'acide aminé sérine en position 116 entraîne une modification significative de la structure et de la fonction de la protéine IFNa-7 naturelle.
La modélisation bio-informatique permet d'observer que la mutation R121K sur la protéine mutée mature entraîne une légère perturbation dans la conformation de l'hélice D.
L'orientation des chaînes latérales des acides aminés LU18, K122, Q125 et F124 est modifiée.
De plus, Il a été montré dans l'IFNa-2 que le résidu R121 (équivalent au R120 dans la séquence de l'IFN-a7) aurait une importance dans l'activité antivirale des interférons (Voir Weber H, Valenzuela D, Lujber G,
Gubler M, Weissmann C. ;"Single amino acid changes that render human IFN alpha 2 biologically active on mouse cells". (1987) EMBO J. 6 : 591-598.).
La modélisation bio-informatique permet ainsi de prévoir que la présence de l'acide aminé lysine en position 121 entraîne une modification significative de la structure et de la fonction de la protéine IFNa-7 naturelle.
La modélisation bio-informatique permet d'observer que la mutation K 1590 sur la protéine mutée mature entraîne une perturbation de la boucle située après l'hélice E, vraisemblablement jusqu'à l'extrémité Cterminale.
La boucle située juste avant l'hélice B est également modifiée au niveau du résidu Q149.
Le pont hydrogène entre l'atome d'azote de la lysine 159 et l'atome d'oxygène du groupement carbonyle de la thréonine 156 (fin de l'hélice E avec boucle C-terminale) est supprimé.
Il est suspecté que lysine (K) en position 159 puisse affecter la fonction antivirale de la partie C-terminale des interférons (Voir Chang NT, Kung HF, Pestka S. ;"Synthesis of a human leukocyte interferon with a modified carboxy terminus in Escherichia coli. n Arch. Biochem. Biophys. (1983) 221 : 585-589).
La modélisation bio-informatique permet ainsi de prévoir que la présence de l'acide aminé glutamine (Q) en position 159 entraîne une modification significative de la structure et de la fonction de la protéine IFNa-7 naturelle.
Les polymorphismes de type SNP a559c, g580a, c667t, c682t, g1125a, g1161a et a1212g n'entraînent pas de modification de la protéine codée par la séquence nucléotidique du gène IFNa-7 au niveau de la séquence d'acides aminés ! D SEQ ? 2.
Les polymorphismes de type SNP a559c, g580a, c667t et c682t sont dits non codants.
Les polymorphismes de type SNP g1125a, g1161a et a1212g sont dits silencieux.
Ainsi, le polymorphisme de type SNP silencieux g1125a ne modifie pas l'acide aminé glutamine (Q) en position 125 sur la séquence d'acides aminés ! D SEQ ? 2.
Le polymorphisme de type SNP silencieux g1161a ne modifie pas l'acide aminé acide glutamique (E) en position 137 sur la séquence d'acides aminés ID SEQ ? 2.
Exemple 4 : Etude de la fonction biologique de l'IFNa-7 K159Q (K182Q) comparée à celle de FNa-7 naturelle a) Clonage des IFNa-7 matures naturelle et mutée (K159Q) dans le vecteur d'expression eukarvote pPicZa-topo : Les séquences nucléotidiques codant pour la protéine IFNa-7,
naturelle et mutée matures sont amplifiées par PCR.
Les amorces PCR permettant une telle amplification sont : - Amorce sens : 5'TGTGATCTGCCTCAGACCCAC 3' - Amorce antisens : 5'TCAATCCTTCCTCCTTAATCCTTTTT 3' Les produits PCR sont insérés dans le vecteur d'expression eukaryote pPicZa-TOPO sous le contrôle du promoteur hybride AOX1 poTM~ inductible par le méthanol (TOPO-cloning ; Invitrogen Corp.).
Ce vecteur permet l'expression hétérologue de protéines eucaryotes dans la levure Pichia pastors.
Après vérification de la séquence nucléotidique de la région du vecteur codant pour les protéines recombinantes, le vecteur est linéarisé par l'enzyme de restriction Pme1, la souche de levure P. pastors (Invitrogen) est transformée avec ces vecteurs d'expression recombinants. b) Expression hétérologue chez P. pastors et purification des protéines IFNa-7 naturelle et mutée K159Q : Deux pré-cultures saturantes de 50 ml de milieu BMGY (2% Peptone, 1% extrait de levure, 1,34% YNB, 1 % Glycérol, 100 mM phosphate de Potassium, 0,4 mg/Litre biotine pH 6,8) contenant un clone codant pour l'IFNa-7 naturelle ou celui codant pour l'IFNa-7 K159Q, ont été réalisées pendant 24 heures à 30 C à une agitation de 200 rotations par minute (rpm).
Grâce à la présence de la séquence peptide signal"facteur alpha" (alpha factor), en amont de la séquence codante, les protéines sont secrétées
par les levures dans le milieu de culture. Le facteur alpha est naturellement clivé lors de l'adressage.
Les fractions contenant la protéine de fusion sont injectées sur une colonne échangeuse d'anions (ResourceQ 6,0 mL, Pharmacia) préalablement équilibrée en tampon Tris 50 mM pH 8. L'élution des protéines est réalisée par le passage d'un gradient entre 0 et 1 M NaCI dans le tampon Tris 50 mM pH 8.
Le ruban blanc des Figures 5 et 6 représente la structure de la protéine IFNa-7 mutée (R121K).
La Figure 7 représente la modélisation de la protéine codée conforme à l'invention comportant le polymorphisme de type SNP a1294c et de la protéine IFNa-7 naturelle.