INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le dispositif-client 30 du dispositif de configuration selon l'invention permet de mettre en oeuvre dans la station cliente un procédé d'obtention d'un profil de configuration, ce profil de configuration étant déterminé selon un procédé mis en oeuvre dans le dispositif-serveur 40 et qui sera décrit plus loin en relation avec la figure 5.
Conformément à l'invention, ce procédé comprend une étape de génération et d'envoi à la station serveur d'une requête de configuration d'un périphérique de traitement de documents, la requête contenant une donnée d'identification d'utilisateur et une donnée d'identification de périphérique. Dans le cadre du mode de réalisation décrit et illustré ici, le périphérique est une imprimante. L'étape susmentionnée va maintenant être détaillée.
Dans la figure 4, initialement, un utilisateur 5 fait une demande d'impression d'un document (étape 400 dans la figure 4) par exemple depuis une application de traitement de documents électroniques telle qu'un logiciel de traitement de texte. A l'étape suivante (402) l'application à partir de laquelle la demande d'impression est formulée, ou bien l'unité d'affichage 32, offre à l'utilisateur un choix d'imprimantes pour effectuer l'impression. L'utilisateur choisit alors une imprimante identifiée par une donnée d'identification (I).
A l'étape 404 l'utilisateur effectue à l'écran, au travers d'une fenêtre de dialogue affichée par l'unité d'affichage 32, une demande de configuration pour obtenir le profil de configuration qui s'applique à l'imprimante sélectionnée. La demande de configuration est transmise par l'unité d'affichage à l'unité de demande de configuration 36 qui est chargée de générer la requête de configuration.
A cet effet, l'unité 36 commence par obtenir la donnée d'identification (U) de l'utilisateur (étape 406) en lisant cette donnée dans la mémoire d'identité utilisateur 34.
II est à noter que dans la figure 4, donnée à titre d'exemple, la demande de configuration (404) fait suite à une demande d'impression (400)
d'un document utilisé dans une application. Cependant, selon l'invention, l'utilisateur a également la possibilité de faire une demande de configuration pour obtenir le profil de configuration auquel il a droit pour un périphérique donné, sans pour autant faire une demande d'impression de document. Dans ce cas, l'étape 404 est directement exécutée.
A l'étape suivante (408) l'unité de demande de configuration 36 détermine l'identité (S) du serveur responsable de la gestion de l'imprimante sélectionnée par l'utilisateur. L'identité du serveur, par exemple son adresse réseau, est obtenue par exemple par consultation d'une table stockée dans une mémoire de la station cliente, ladite table contenant pour chaque imprimante accessible sur le réseau l'identité du serveur qui est responsable.
A l'étape suivante (410) l'unité de demande de configuration génère la requête de configuration contenant la donnée d'identification d'utilisateur (U) et la donnée d'identification d'imprimante (I) ; puis envoie cette requête via le réseau à la station serveur (S).
Conformément à l'invention, le procédé d'obtention d'un profil de configuration comprend une étape de réception, dans la station serveur, d'un profil de configuration du périphérique en réponse à la requête de configuration.
En effet, après avoir envoyé la requête de configuration, l'unité de mise à jour de configuration 38 se met alors dans un état d'attente (étape 412) de la réponse de la station serveur à la requête de configuration.
Le traitement de la requête de configuration par la station serveur sera décrit plus loin en liaison avec la figure 5.
Toujours à la figure 4, lorsque l'unité de mise à jour de configuration 38 de la station cliente reçoit la réponse de la station serveur à la demande de configuration, une étape de test (414) est accomplie, au cours de laquelle on teste la réponse du serveur.
Si aucun profil n'est disponible, cela peut être le cas par exemple lorsque l'imprimante sélectionnée par l'utilisateur n'est pas autorisée pour celui- ci, ou bien lorsque l'utilisateur n'est pas enregistré dans le serveur (table 46), ce qui est le cas si l'utilisateur n'a pas souscrit d'abonnement.
Dans ce cas, on avertit l'utilisateur (étape 418), par exemple en affichant à l'écran un message expliquant les raisons du défaut de profil de configuration applicable. Dans ce cas le processus mis oeuvre dans la station- cliente se termine là.
Dans le cas contraire, conformément à l'invention, le procédé d'obtention d'un profil de configuration comporte une étape d'affichage du profil reçu et une étape de modification de la configuration courante associée au profil de configuration.
Les techniques de mutagenèse peuvent être séparées en deux grands groupes : la mutagenèse aléatoire d'une part, et la mutagenèse dirigée d'autre part.
La mutagenèse aléatoire vise à introduire des substitutions de nature et de position aléatoire dans un fragment d'ADN. Historiquement, la mutagenèse aléatoire était réalisée au moyen de procédés chimiques altérant la structure de l'ADN. Plus récemment, l'amplification d'une molécule en utilisant une polymérase dans des conditions particulières a souvent remplacé les procédés chimiques. Ces conditions particulières sont caractérisées en ce qu'elles altèrent les capacités de l'enzyme à répliquer fidèlement l'ADN. Celle-ci introduit au fil des cycles des mutations, c'est-à-dire des différences par rapport à la séquence
initiale. À la fin de la réaction, un grand nombre de copies de la molécule initiale sont obtenues, chacune de ces molécules comportant des mutations différentes. Ces molécules sont présentes sous forme d'une banque, c'est-à- dire d'un mélange de molécules de nature différente (différant par la nature et la position de leurs mutations).
La mutagenèse dirigée vise à introduire une ou quelques mutations (substitutions, mais aussi délétions ou insertions) de nature et de position connue dans un fragment d'ADN. Un oligonucléotide est utilisé pour introduire cette mutation. Cet oligonucléotide est classiquement constitué d'une vingtaine de bases. La séquence de cet oligonucléotide est homologue en tout point à la séquence ciblée sur le fragment d'ADN à l'exception d'une ou de quelques positions localisées dans sa partie médiane.
Cet oligonucléotide est ensuite utilisé pour amorcer une réaction de réplication (ou d'amplification, c'est-à-dire de multiples réplications) en utilisant le fragment d'ADN comme matrice. La séquence nouvellement synthétisée contient la modification recherchée.
Les premières techniques de mutagenèse dirigée étaient basées sur l'amplification du seul fragment d'ADN d'intérêt (sous la forme d'un fragment d'ADN linéaire), qui devait ensuite être introduit dans un plasmide. Ces techniques étaient fastidieuses et devaient être adaptées à chaque système d'étude.
Plus récemment, l'oligonucléotide mutant a été utilisé pour répliquer directement le plasmide contenant le fragment d'ADN d'intérêt. Le nombre de manipulations à réaliser est ainsi minimisé.
La réalisation pratique de la mutagenèse dirigée est cependant loin d'être simple. Se pose notamment le problème de l'isolement des molécules ayant incorporé la mutation par rapport aux molécules ne l'ayant pas incorporée. La seule réplication d'un fragment d'ADN circulaire (correspondant au cas classique d'un gène cloné dans un plasmide) au moyen d'un oligonucléotide mutant ne
permet pas, en l'absence de système de sélection, d'observer un taux de mutagenèse détectable. L'ADN synthétisé in vitro pouvant être distingué de l'ADN synthétisé dans des bactéries sur le critère de son contenu en bases méthylées, un système de criblage basé sur ce critère a été mis au point et généralisé. Il s'agit d'utiliser l'enzyme DpnI, spécifique de sites présents sur l'ADN méthylé mais pas sur l'ADN non méthylé (Lacks et al., 1980, Methods in Enzymology, 65 :138). Les molécules n'ayant pas subi de réplication in vitro sont ainsi éliminées. Mais même en utilisant ce système de criblage de mutants, l'efficacité de la réaction de mutagenèse reste faible et voisine de 5% seulement de molécules mutantes.
Ce faible taux de mutants est notamment dû au fait qu'à l'issue de la réaction de mutagenèse dirigée, les molécules circulaires sont introduites dans des bactéries contenant un système de réparation de l'ADN qui élimine une grande partie des mutations si celles-ci ne sont portées que par l'un des brins d'ADN.
De nombreux systèmes ont été proposés pour tenter d'améliorer l'efficacité de ces techniques de mutagenèse. Ces techniques nécessitent le plus souvent un second oligonucléotide permettant d'améliorer la fréquence des molécules mutantes avant criblage (Brevet EP 96942905 ; Brevet WO 9935281). D'autres systèmes utilisent également un second oligonucléotide permettant un système de criblage particulier et parfois plus efficace (Brevet EP 0938552, Catalogue Clontech 2000, page 45). Enfin d'autres systèmes utilisent des souches bactériennes particulières, ces systèmes ayant pour objet de minimiser la déperdition de rendement due à l'activité réparatrice des bactéries (Brevet US 4,873,192 ; Brevet EP 0938552).
Enfin, la plupart des techniques existantes permettent d'intégrer simultanément plusieurs oligonucléotides dans une séquence d'ADN. En règle générale, jusqu'à trois oligonucléotides ont pu être introduits simultanément en différents lieux du fragment à muter
(Brevet WO 9935281 ; Brevet EP 0938552). Un article fait même référence à l'obtention de molécules ayant simultanément intégré jusqu'à sept oligonucléotides en une seule étape (Perlak et al., 1990, Nucleic Acid Research, 18 :7457).
La notion de banque n'est pas, dans la technique selon l'art antérieur, adaptée pour caractériser les produits obtenus à l'issue d'une réaction de mutagenèse dirigée. En effet, dans la grande majorité des cas, un seul produit est obtenu à l'issue de la réaction, contenant une seule mutation. Dans les cas où plusieurs mutations sont introduites simultanément au moyen de plusieurs oligonucléotides (Brevet WO 9935281 ; Perlak et al., 1990, Nucleic Acid Research, 18 :7457), les seuls produits recherchés sont ceux ayant incorporé la totalité des mutations, et la technique tend à être optimisée dans l'objectif de maximiser la fréquence de ces produits. Les produits n'ayant incorporé qu'une petite fraction des mutations sont minimisés et sont dans ces rapports considérés comme des produits secondaires. La mutagenèse peut avoir pour but le gain ou la perte d'une activité.
Le gain d'une activité, ou plus fréquemment sa simple amélioration, est particulièrement intéressante dans les domaines de l'enzymologie ou de l'association ligand/ récepteur. Ainsi, pouvoir disposer d'une enzyme d'activité améliorée peut permettre de réduire les coûts de procédés industriels utilisant ces enzymes. De même, l'affinité de la liaison entre un ligand et son récepteur peut être améliorée grâce à quelques mutations localisées au niveau du site de reconnaissance de l'un par l'autre.
La recherche de ces améliorations d'activité est souvent désignée de façon générique par évolution moléculaire . Il s'agit de simuler l'évolution lors de réactions in vitro, en introduisant des mutations dans un fragment d'ADN et en sélectionnant ceux ayant des activités
Les termes " acide nucléique ", " polynucléotide ", " oligonucléotide " ou encore " séquence nucléotidique englobent des séquences d'ARN, d'ADN , d'ADNc ou encore des séquences hybrides ARN/ADN de plus d'un nucléotide, indifféremment sous la forme simple chaîne ou sous la forme de duplex.
Aux fins de la présente invention, un premier polynucléotide est considéré comme étant " complémentaire " d'un second polynucléotide lorsque chaque base du premier nucléotide est appariée à la base complémentaire du second polynucléotide dont l'orientation est inversée.
Les bases complémentaires sont A et T (ou A et U), ou C et G.
L'invention concerne également un acide nucléique comprenant au moins 20 nucléotides consécutifs de l'ADNc de séquence nucléotidique SEQ ID N 2 codant pour la glucosidase # végétale selon l'invention ou un acide nucléique de séquence complémentaire.
En particulier, l'invention est relative à un acide nucléique comprenant la séquence nucléique SEQ ID N 2, ou un acide nucléique de séquence complémentaire.
L'invention a encore pour objet un acide nucléique possédant au moins 80% d'identité en nucléotides avec l'un des acides nucléiques suivants : a) un acide nucléique comprenant au moins 20 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide codant pour une glucosidase # ayant la séquence en acides aminés SEQ ID N 1, ou un acide nucléique de séquence complémentaire; b) un acide nucléique comprenant au moins 20 nucléotides consécutifs de la séquence nucléotide SEQ ID N 2, ou un acide nucléique de séquence complémentaire; c) un acide nucléique comprenant la séquence nucléotidique SEQ ID N 2, ou un acide nucléique de séquence complémentaire.
Selon l'invention, un premier acide nucléique ayant au moins 80% d'identité avec un second acide nucléique de référence, possédera au moins 85%, de préférence au moins 90%, 95%, 98%, 99%, 99,5% ou 99,8% d'identité en nucléotides avec ce second polynucléotide de référence, le pourcentage d'identité entre deux séquences étant déterminé comme décrit ci-après.
La partie de la séquence nucléotidique ou polypeptidique dans la fenêtre de comparaison peut ainsi comprendre des additions ou des délétions (par exemple des " gaps") par rapport à la séquence de référence (qui ne comprend pas ces additions ou ces délétions) de manière à obtenir un alignement optimal des deux séquences.
L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé de manière informatique à l'aide d'algorithmes connus contenus dans l'outil logiciel de la Société WISCONSIN GENETICS SOFTWARE PACKAGE, GENETICS COMPUTER GROUP (GCG), 575 Science Doctor, Madison, Wisconsin.
De manière tout à fait préférée, le pourcentage d'identité entre deux séquences est effectué à l'aide du logiciel BLAST (version BLAST 2. 06 de Septembre 1998), en utilisant exclusivement les paramètres par défaut (S.F.
ALTSCHUL et al., 1990); SF ALTSCHUL et al.,1997).
Chacun des acides nucléiques selon l'invention qui comprend tout ou partie de l'ARNm ou de l'ADNc correspondant aux produits de transcription du gène AtGCS1 codant pour une glucosidase 1 végétale peut être aisément obtenu par l'homme du métier qui en connaît sa séquence nucléotidique divulguée dans la présente description.
L'homme du métier peut également reproduire l'un quelconque des acides nucléiques selon l'invention en construisant, sur la base des séquences divulguées dans la présente description, des amorces oligonucléotidiques capables d'amplifier tout ou partie de ces acides nucléiques, par exemple en extrayant les ARN totaux à partir de différents tissus végétaux, puis en synthétisant les ADN complémentaires à l'aide d'une enzyme transcriptase inverse avant de réaliser plusieurs cycles d'amplification des ADNc obtenus à l'aide d'une ou plusieurs amorces hybridant spécifiquement avec les séquences cibles dont l'obtention est recherchée.
Pour cette catégorie, ulet u36 sont proches au sens où ils possèdent tous les deux les Contenus c4 et c12. Le système de Recommandation Collaborative fait donc les propositions telles qu'illustrées sur la figure 131, c8 étant suggéré de u36 à ul et cl étant suggéré de ulà u36.
Une fois obtenus ces 11 oligonucléotides reconstruits, homologues de 11 régions distinctes de la molécule CD4, mais portant la même mutation (changement en valine), par ailleurs orientés dans le même sens, le protocole était identique à celui exposé dans l'exemple 1.
Il était recherché une fréquence moyenne d'incorporation des oligonucléotides mutants d'environ 9% (1/11) dans cet exemple.
Exemple 3 : Amélioration d'un site actif par mutagenèse massive à saturation.
Une fois connus les acides aminés prenant part directement au site actif d'une protéine, par exemple grâce à des données de mutagenèse massive telle que présentée dans les exemple précédents, ces acides aminés peuvent être
soumis à une mutagenèse massive à saturation, c'est-à-dire visant à introduire un grand nombre de codons différents en remplacement d'un codon particulier. Ainsi, 6 codons du gène codant pour la protéine agaB, enzyme impliquée dans la synthèse des sucres, étaient identifiés comme prenant part directement à l'activité de l'enzyme.
Six oligonucléotides centrés sur ces codons étaient synthétisés. De chaque côté, ils étaient totalement homologue à 9 bases de la séquence. Au niveau des deux premiers nucléotides des codons à muter, la séquence sauvage était remplacée par la séquence NN(figure 4). De cette façon, chacun des 6 codons pouvait être remplacé par différents codons spécifiques d'autres acides aminés.
Une fois obtenus ces oligonucléotides, la réaction de mutagenèse massive était identique à celle décrite dans l'exemple 1.
Il était recherché une fréquence moyenne d'incorporation des oligonucléotides mutants d'environ 17$ (1/6) dans cet exemple.
Ces molécules d'ADN plasmidique étaient destinées à être criblées de façon à mesurer une augmentation de l'activité de l'enzyme.
Cet exemple, bien que n'utilisant qu'un nombre réduit d'oligonucléotides mutants contenant des bases dégénérées, démontre la faisabilité de l'adaptation de la technique de l'invention à la mutagenèse de nature aléatoire (changement d'un codon en un grand nombre d'autres codons) mais de positions déterminées. Exemple 4 : Optimisation des codons d'un gène. Les gènes contiennent généralement des codons qui sont défavorables à l'expression des protéines pour lesquelles ils codent. Ces codons défavorables peuvent être vus comme un mécanisme de régulation de l'expression d'un gène. Ces codons défavorables sont relativement bien identifiés, et il peut être nécessaire de les modifier en un
codon plus favorable à l'expression de la protéine mais n'induisant pas de changement d'acide aminé.
En règle générale, environ 5 % des codons d'un gène sont défavorables, et limitent le niveau d'expression de la protéine correspondante. La modification de ces codons peut permettre d'obtenir de meilleurs niveaux d'expression du gène lors de la production in vitro de la protéine correspondante.
Pour autant, la modification simultanée de tous les codons ne permet pas d'obtenir cette amélioration de niveau d'expression, probablement à cause de la déstabilisation générale de la séquence par un trop grand nombre de modifications.
Les meilleurs niveaux d'expression sont le plus souvent obtenus lorsqu'une partie seulement des codons défavorables sont modifiés.
Dans ce cas, une banque de mutations portant sur ces codons défavorables peut être réalisée en utilisant la technique de l'invention, et les molécules mutantes présentant les meilleurs taux d'expression sont alors sélectionnées. Pour ce faire, un oligonucléotide mutant doit être synthétisé pour chaque codon défavorable, les mutations portées par ces oligonucléotides étant définies par le fait qu'elles changent un codon défavorable à l'expression en codon lui étant favorable, sans changer la séquence primaire de la protéine correspondante.
Dans ce contexte, la fréquence moyenne d'incorporation des oligonucléotides mutants peut être recherchée dans une fourchette relativement large, par exemple entre 1 et 20 ô. En effet, le nombre de mutations simultanées permettant d'obtenir le meilleur niveau d'expression n'est pas connu. Dans ce contexte, plusieurs banques correspondant à des fréquences d'incorporation différentes peuvent être réalisées.
Au début du processus de certification, on suppose que des données sont à transmettre de manière certifiée et signée depuis le poste utilisateur 100
jusqu'à la mémoire de stockage 130. L'utilisateur du poste utilisateur 100 se connecte au serveur de sécurité 120 pour lancer le processus de certification.
Au cours de l'opération 1, l'application Internet 110 télécharge une routine applicative certifiée dans le poste utilisateur 100. On observe que la routine applicative en question peut n'être téléchargée que dans le cas où une copie de cette routine n'est pas déjà implantée dans le poste utilisateur 100. Cette caractéristique particulière permet de rendre portable le procédé de certification objet de la présente invention, sans ralentir ce processus dans le cas où l'utilisateur met successivement en oeuvre le même poste utilisateur 100, pour plusieurs certifications de données. Au cours de l'opération 2, le générateur de certificats 180 génère un certificat jetable, par exemple sous la forme d'une clé privée conforme à la norme X509-V3. Par exemple, le certificat jetable est généré aléatoirement par le générateur 180.
Au cours de l'opération 3, le serveur de sécurité 170 transmet le certificat jetable au poste utilisateur 100. Au cours de l'opération 4, le poste utilisateur, et en oeuvre la routine applicative téléchargée au cours de l'opération 1 pour obtenir une trace des données à transmettre, appelé hash , trace qui dépend du certificat jetable généré au cours de l'opération 2 et qui permet la détection de toute modification ultérieure des données à transmettre.
Au cours de l'opération 5, les données à transmettre et la trace ou hash sont téléchargés
depuis le poste utilisateur 100 jusqu'à l'application Internet 110. Au cours de l'opération 6, l'intégrité des données à transmettre est vérifiée, en mettant en oeuvre la clé jetable générée au cours de l'opération 2 et la trace ou hash.
On observe qu'à la fin de l'opération 6, une copie des données à transmettre à été faite depuis le poste utilisateur 100 dans l'application Internet 110 et que cette copie est certifiée conforme à l'original grâce à la mise en oeuvre d'une clé jetable. Pour éviter que le certificat jetable soit réutilisé, au cours de l'opération 10, le certificat jetable est révoqué, c'est-à-dire qu'il devient inutilisable pour certifier des données.
Les opérations 7 et 8 correspondent à un exemple de signature pouvant être utilisé en combinaison avec les opérations 1 à 6 ci-dessus. Au cours de l'opération 7, un sceau secret est généré et transmis, par l'intermédiaire du deuxième réseau 140, au récepteur 150. Par exemple, le sceau secret est tiré aléatoirement. Selon des variantes, le sceau secret dépend des données à transmettre, de leur nombre, de leur contenu, de la date et de l'heure de la génération du sceau, et/ou d'un numéro de la session Internet au cours de laquelle les données sont transmises. Le lecteur pourra se référer à la demande de brevet PCT/FR98/02348 pour mieux connaître des exemples d'étapes mises en oeuvre au cours des opérations 7 et 8. Au cours de l'opération 8, l'utilisateur commun du poste utilisateur 100 et du récepteur 150 saisie le sceau secret et celui-ci est transmis à l'application Internet 110 où le sceau est vérifié.
A la fin de l'opération 8, les données transmises sont donc certifiées intègres et signées par l'utilisateur qui les transmet. L'opération 9 consiste à substituer une signature dite PKI (pour Public Key Infrastructure, soit infrastructure de clés publiques) à la signature effectuée au cours des opérations 7 et 8.
Au cours de l'opération 9, les données transmises sont signées avec la clé privée de l'utilisateur qui les a transmise (dit"signataire"des données).
Enfin, au cours de l'opération 11, les données transmises, certifiées et signées par clé privée sont transmises à la mémoire de stockage 130 avec une date de telle manière qu'elles sont horodatées, archivées et notarisées.
Dans une application de la présente invention à une remise en main propre des données transmises, un destinataire est, à la suite de l'opération 11, averti de la mise à sa disposition des données à transmettre et des opérations similaires aux opérations exposées ci-dessus sont mises en oeuvre pour effectuer une copie certifiée conforme sur le poste utilisateur du destinataire après avoir recueilli de sa part une signature. Par exemple, une signature telle qu'exposée dans la demande de brevet PCT/FR98/02348 peut, de nouveau être mise en oeuvre pour authentifier le destinataire.
PROCEDE ET DISPOSITIF DE CERTIFICATION La présente invention concerne un procédé et un dispositif de certification.
En particulier, la présente invention concerne la transmission de données en ligne, par exemple sur le réseau Internet.