INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Les surnageants contenant les hybrides ClpG-STh sont chauffés pendant 5 min à 100 C dans du tampon Laemmli, avant d'être déposés sur un gel de polyacrylamide à 15 % en conditions dénaturantes. Une échelle de marqueurs SDS-PAGE colorée (Low Range, Biorad) permet de suivre la migration au cours de l'électrophorèse. Le gel, une membrane de nitrocellulose 0,2 um (Biorad Trans Blot) et deux papiers filtre (Biorad) sont incubés pendant 15 min dans du tampon de transfert en présence de méthanol 15 %. Le gel est
déposé sur la membrane et l'ensemble est mis en sandwich entre les deux papiers filtre. Les protéines sont alors transférées sur la membrane de nitrocellulose par électrotransfert semi-sec (SemiPhor TE 70, Hoeffer Scientific Instruments) pendant 1 h sous une intensité de 1 mA/cm2. La membrane est ensuite saturée pendant 1 h dans du tampon de blocage et incubée pendant une nuit avec le premier anticorps spécifique dilué au 1/500 dans du tampon TBS, 0,1 % Tween 20. La membrane est colorée selon la procédure décrite pour l'immunodétection in situ sur colonies. Afin d'amplifier la réponse, un anticorps secondaire spécifique couplé à la biotine (Sigma) (dilution au 1/1000) a été utilisé. Dans ce cas, après incubation pendant 1 h, la membrane est lavée trois fois pendant 5 min dans du tampon TBS, 0,05 % Tween 20 et incubée pendant 30 min avec une dilution au 1/100 de streptavidine conjuguée à la péroxydaxe (250 ug/ml, Sigma) dans du tampon TBS, 0,05 % Tween 20. Après trois nouveaux lavages de 5 min chacun, la réaction est arrêtée par rinçage de la membrane dans plusieurs bains d'eau distillée.
9) ELISA.
Des plaques de microtitration 96 puits (Immulon 2, Dynatech) ont été recouvertes par 100 ul/puits d'anticorps ou d'antigènes dilués dans du tampon carbonate 50 mM (pH = 9,6) et incubés pendant une nuit à 4 C. Après aspiration du contenu des puits, 10 ul de tampon de
saturation sont déposés et les plaques sont à nouveau incubées pendant une nuit à 4 C. Après trois lavages avec du PBS, 0,05 % Tween 20 et deux lavages avec du PBS, les plaques sont utilisées immédiatement ou conservées à - 20 C. Trois types de test ELISA ont été réalisés : - ELISA "classique" : la quantification des protéines hybrides présentes dans les surnageants obtenus à partir de cultures bactériennes en milieu LB gélosé est déterminée par dépôt de différentes dilutions des extraits dans du tampon anticorps sur des plaques recouvertes d'un antisérum de lapin anti-ClpG. Parallèlement, afin d'établir une courbe étalon, différentes concentrations de protéines ClpG ont également été déposées. Les plaques sont alors incubées pendant 2 h à 37 C, lavées deux fois avec du tampon PBS, 0,05 % Tween 20 et une fois avec du tampon PBS.
Après l'addition de 100 l par puits d'un antisérum de souris anti-ClpG et une incubation de 90 min à 37 C suivie de plusieurs lavages, 100 l d'IgG de chèvre anti-IgG de souris couplées à la péroxydase et diluées au 1/1000 sont alors ajoutés. Après une incubation de 2 h à 37 C et plusieurs lavages, 100 l par puits d'une solution de coloration préparée extemporanément sont ajoutés. Les plaques sont ensuite placées à l'obscurité à température ambiante pendant 20 min avant la lecture des résultats à une absorbance de 405 nm sur un lecteur Dynatech MR 5000.
Pour mesurer les réactions non spécifiques, les absorbances à 405 nm obtenues avec le surnageant de la souche DH5[alpha]
(pDSPH524) sont déduites des valeurs obtenues avec les hybrides ClpG-STh.
- ELISA "double sandwich" : les surnageants obtenus à partir de cultures bactériennes réalisées en milieu LB gélosé sont dilués dans du tampon anticorps et répartis sur des plaques recouvertes par l'anticorps monoclonal 11C anti-STa (8 ug/puits). Les plaques sont incubées pendant 2 h à 37 C, puis lavées. L'anticorps antiClpG dilué au 1/500 dans du tampon anticorps est alors déposé à raison de 100 l par puits. Après incubation pendant 90 min à 37 C et plusieurs lavages, 100 l d'IgG de chèvre anti-IgG de lapin couplées à la péroxydase et diluées au 1/1000 sont ajoutés. Après une incubation de 2 h à 37 C et après plusieurs lavages, la coloration des plaques est effectuée selon la procédure décrite ci-dessus.
L'utilisation du surnageant de la souche DH5a (pEH524) permet de mesurer les réactions aspécifiques.
- ELISA "compétition" : le kit E. coli ST EIA (Oxoid) incluant une plaque de 96 puits recouverts par la toxine synthétique STp est utilisé pour détecter la présence de toxines STa dans les extraits protéiques et pour quantifier les hybrides. Ce kit repose sur une réaction compétitive entre la toxine fixée sur la plaque et la toxine exogène contenue dans les échantillons en présence d'une quantité d'anticorps anti-STa donnée. Les extraits protéiques dilués dans du tampon PBS sont répartis à raison de 100 l par puits. Un surnageant bactérien
fourni par le kit sert de contrôle positif. Différentes quantités connues de toxine STp purifiée (Calbiochem) sont également déposées pour établir une courbe étalon. Une solution d'anticorps monoclonal anti-STa incluse dans le kit (10 l) est ajoutée dans chaque puits. Après une incubation de 90 min à 37 C, les plaques sont alors lavées deux fois avec du tampon PBS, 0,05 % Tween 20 et une fois avec du tampon PBS. Cent l d'une solution de substrat incluse dans le kit est alors ajoutée dans chaque puits et les plaques sont placées pendant 30 min à l'abri de la lumière. La réaction colorimétrique est quantifiée par la lecture de l'absorbance à 490 nm, après l'addition d'acide sulfurique 1,5 N.
10) Adhésion in vitro sur cultures cellulaires.
Les cellules Caco-2 sont des cellules dérivées de carcinome de côlon humain. Elles conservent les caractéristiques des entérocytes de l'intestin grêle lorsqu'elles sont différenciées. Cette lignée de cellules exprime le récepteur de ClpG et celui de la STa (GC-C). Les cellules Intestine-407 (Flow Laboratories Inc. ), dérivées de jéjunum et d'iléon embryonnaire humain, expriment aussi le récepteur de ClpG. Les cellules Intestine-407 et Caco-2 sont cultivées sous une pression partielle de 5 % de CO2 à 37 C, dans des flacons (boîtes Falcon 3084, Becton Dickinson Lalware, Oxnard, Calif. ) contenant respectivement 25 ml de milieu minimum de Eagle modifié (MEM) et 25 ml de
milieu minimum de Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) (Flow Laboratories Inc.). Les milieux sont supplémentés avec 10 % à 20 % de sérum de veau foetal (SVF), 1 % d'acides aminés non essentiels, 200 u/l de pénicilline et 50 mg/1 de streptomycine. Après confluence, les cellules sont lavées deux fois avec du PBS sans Ca2+ ni Mg2+ puis trypsinisées pendant 5 min à 37 C. Les cellules, ainsi récupérées, sont rapidement diluées dans 20 ml de milieu de culture, puis centrifugées pendant 5 min à 1200 g. Le culot est repris avec 4 ml de milieu de culture. Après comptage sur cellule de Malassez, une boîte Falcon 24 puits (Becton Dickinson Lalware, Oxnard, Calif. ), avec une lamelle au fond de chaque puits, est ensemencée avec 1 ml de milieu de culture contenant 2.105 à 4.105 cellules par puits. Les cellules Intestine-407 sont utilisées à confluence alors que les cellules Caco-2 sont utilisées 15 jours après, délai nécessaire à leur différentiation. Avant le test d'adhésion, les cellules sont lavées une fois avec du PBS (pH = 7,2) sans Ca2' ni Mg2+. Une suspension de 108 bactéries/ml de milieu de culture contenant 1 % (poids/volume) de D-mannose est ajoutée à la culture de cellules et l'ensemble est incubé pendant 3 h à 37 C. Après trois lavages au PBS, les cellules sont fixées pendant 10 min dans le méthanol et colorées pendant 20 min avec une solution de Giemsa 20 %. Les lamelles sont alors collées sur une lame, cellules Caco-2 vers le haut, et cellules Intestine-407 entre lame et lamelle. Après séchage pendant
1 h à température ambiante, les lames sont examinées au microscope photonique à l'objectif x 100, en immersion.
18 Asn Lys Ala Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Glu Gly Ala Gin Leu Lys 1 5 10 15 Lys Val Glu Gin Asn Ser Arg Pro Val Ser Cys Ser Gly Arg Asp Ala 20 25 30 Leu Leu Asp Gin Ile Arg Gin Gly Ile Gin Leu Lys Ser Val Ala Asp 35 40 45 Gly Gin Glu Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ser Gly Ile Val 50 55 60 Gly Ala Leu Met Glu Val Met Gin Lys Arg Ser Lys Ala Ile His Ser 65 70 75 80 Ser Asp Glu Asp Glu Asp Glu Asp Asp Glu Glu Asp Phe Glu Asp Asp 85 90 95 Asp Glu Trp Glu Asp 100 19 252 ADN Séquence artificielle Description de la séquence artificielle : de la protéine N-WASP humaine CDS (1)..(252) 19 aac aaa gca gct ctt tta gat caa att aga gag ggt gct cag cta aaa 48 Asn Lys Ala Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Glu Gly Ala Gin Leu Lys 1 5 10 15 aaa gtg gag cag aac agt cgg cca gtg tcc tgc tct gga cga gat gca 96 Lys Val Glu Gin Asn Ser Arg Pro Val Ser Cys Ser Gly Arg Asp Ala 20 25 30 ctg tta gac cag ata cga cag ggt atc caa cta aaa tct gtg gct gat 144 Leu Leu Asp Gin Ile Arg Gin Gly Ile Gin Leu Lys Ser Val Ala Asp 35 40 45 ggc caa gag tct aca cca cca aca cet gca ccc act tca gga att gtg 192 Gly Gin Glu Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ser Gly Ile Val 50 55 60 ggt gca tta atg gaa gtg atg cag aaa agg agc aaa gcc att cat tct 240 Gly Ala Leu Met Glu Val Met Gin Lys Arg Ser Lys Ala Ile His Ser 65 70 75 80 tca gat gaa gat 252 Ser Asp Glu Asp
20 84 PRT Séquence artificielle Description de la séquence artificielle : de la protéine N-WASP humaine 20 Asn Lys Ala Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Glu Gly Ala Gin Leu Lys 1 5 10 15 Lys Val Glu Gin Asn Ser Arg Pro Val Ser Cys Ser Gly Arg Asp Ala 20 25 30 Leu Leu Asp Gin Ile Arg Gin Gly Ile Gin Leu Lys Ser Val Ala Asp 35 40 45 Gly Gin Glu Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ser Gly Ile Val 50 55 60 Gly Ala Leu Met Glu Val Met Gin Lys Arg Ser Lys Ala Ile His Ser 65 70 75 80 Ser Asp Glu Asp 21 219 ADN Séquence artificielle Description de la séquence artificielle : de la protéine N-WASP humaine CDS (1)..(219) 21 gga cga gat gca ctg tta gac cag ata cga cag ggt atc caa cta aaa 48 Gly Arg Asp Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Gin Gly Ile Gin Leu Lys 1 5 10 15 tct gtg gct gat ggc caa gag tct aca cca cca aca cct gca ccc act 96 Ser Val Ala Asp Gly Gin Glu Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 20 25 30 tca gga att gtg ggt gca tta atg gaa gtg atg cag aaa agg agc aaa 144 Ser Gly Ile Val Gly Ala Leu Met Glu Val Met Gin Lys Arg Ser Lys 35 40 45 gcc att cat tct tca gat gaa gat gaa gat gaa gat gat gaa gaa gat 192 Ala Ile His Ser Ser Asp Glu Asp Glu Asp Glu Asp Asp Glu Glu Asp 50 55 60
ttt gag gat gat gat gag tgg gaa gac 219 Phe Glu Asp Asp Asp Glu Trp Glu Asp 65 70 22 73 PRT Séquence artificielle Description de la séquence artificielle : de la protéine N-WASP humaine 22 Gly Arg Asp Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Gin Gly Ile Gin Leu Lys 1 5 10 15 Ser Val Ala Asp Gly Gin Glu Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 20 25 30 Ser Gly Ile Val Gly Ala Leu Met Glu Val Met Gin Lys Arg Ser Lys 35 40 45 Ala Ile His Ser Ser Asp Glu Asp Glu Asp Glu Asp Asp Glu Glu Asp 50 55 60 Phe Glu Asp Asp Asp Glu Trp Glu Asp 65 70 23 168 ADN Séquence artificielle Description de la séquence artificielle : de la protéine N-WASP humaine CDS (1)..(168) 23 gga cga gat gca ctg tta gac cag ata cga cag ggt atc caa cta aaa 48 Gly Arg Asp Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Gin Gly Ile Gin Leu Lys 1 5 10 15 tct gtg gct gat ggc caa gag tct aca cca cca aca cct gca ccc act 96 Ser Val Ala Asp Gly Gin Glu Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 20 25 30 tca gga att gtg ggt gca tta atg gaa gtg atg cag aaa agg agc aaa 144 Ser Gly Ile Val Gly Ala Leu Met Glu Val Met Gin Lys Arg Ser Lys 35 40 45 gcc att cat tct tca gat gaa gat 168 Ala Ile His Ser Ser Asp Glu Asp 50 55
24 56 PRT Séquence artificielle Description de la séquence artificielle : de la protéine N-WASP humaine 24 Gly Arg Asp Ala Leu Leu Asp Gin Ile Arg Gin Gly Ile Gin Leu Lys 1 5 10 15 Ser Val Ala Asp Gly Gin Glu Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 20 25 30 Ser Gly Ile Val Gly Ala Leu Met Glu Val Met Gin Lys Arg Ser Lys 35 40 45 Ala Ile His Ser Ser Asp Glu Asp 50 55 25 1758 ADN Homo sapiens CDS (1)..(1677) 25 atg ccg cta gtg aaa aga aac atc gat cet agg cac ttg tgc cac aca 48 Met Pro Leu Val Lys Arg Asn Ile Asp Pro Arg His Leu Cys His Thr 1 5 10 15 gca ctg cct aga ggc att aag aat gaa ctg gaa tgt gta acc aat att 96 Ala Leu Pro Arg Gly Ile Lys Asn Glu Leu Glu Cys Val Thr Asn Ile 20 25 30 tcc ttg gca aat ata att aga caa cta agt age cta agt aaa tat gct 144 Ser Leu Ala Asn Ile Ile Arg Gin Leu Ser Ser Leu Ser Lys Tyr Ala 35 40 45 gaa gat ata ttt gga gaa tta ttc aat gaa gca cat agt ttt tcc ttc 192 Glu Asp Ile Phe Gly Glu Leu Phe Asn Glu Ala His Ser Phe Ser Phe 50 55 60 aga gtc aac tca ttg caa gaa cgt gtg gac cgt tta tct gtt agt gtt 240 Arg Val Asn Ser Leu Gin Glu Arg Val Asp Arg Leu Ser Val Ser Val 65 70 75 80 aca cag ctt gat cca aag gaa gaa gaa ttg tct ttg caa gat ata aca 288 Thr Gin Leu Asp Pro Lys Glu Glu Glu Leu Ser Leu Gin Asp Ile Thr 85 90 95 atg agg aaa gct ttc cga agt tct aca att caa gac cag cag ctt ttc 336 Met Arg Lys Ala Phe Arg Ser Ser Thr Ile Gin Asp Gin Gin Leu Phe 100 105 110
gat cgc aag act ttg cet att cca tta cag gag acg tac gat gtt tgt 384 Asp Arg Lys Thr Leu Pro Ile Pro Leu Gin Glu Thr Tyr Asp Val Cys 115 120 125 gaa cag cet cca cet ctc aat ata ctc act cet tat aga gat gat ggt 432 Glu Gin Pro Pro Pro Leu Asn Ile Leu Thr Pro Tyr Arg Asp Asp Gly 130 135 140 aaa gaa ggt ctg aag ttt tat acc aat cet tcg tat ttc ttt gat cta 480 Lys Glu Gly Leu Lys Phe Tyr Thr Asn Pro Ser Tyr Phe Phe Asp Leu 145 150 155 160 tgg aaa gaa aaa atg ttg caa gat aca gag gat aag agg aag gaa aag 528 Trp Lys Glu Lys Met Leu Gin Asp Thr Glu Asp Lys Arg Lys Glu Lys 165 170 175 agg aag cag aag cag aaa aat cta gat cgt cet cat gaa cca gaa aaa 576 Arg Lys Gin Lys Gin Lys Asn Leu Asp Arg Pro His Glu Pro Glu Lys 180 185 190 gtg cca aga gca cet cat gac agg cgg cga gaa tgg cag aag ctg gcc 624 Val Pro Arg Ala Pro His Asp Arg Arg Arg Glu Trp Gin Lys Leu Ala 195 200 205 caa ggt cca gag ctg gct gaa gat gat gct aat ctc tta cat aag cat 672 Gin Gly Pro Glu Leu Ala Glu Asp Asp Ala Asn Leu Leu His Lys His 210 215 220 att gaa gtt gct aat ggc cca gcc tct cat ttt gaa aca aga cet cag 720 Ile Glu Val Ala Asn Gly Pro Ala Ser His Phe Glu Thr Arg Pro Gin 225 230 235 240 aca tac gtg gat cat atg gat gga tct tac tca ctt tct gcc ttg cca 768 Thr Tyr Val Asp His Met Asp Gly Ser Tyr Ser Leu Ser Ala Leu Pro 245 250 255 ttt agt cag atg agt gag ctt ctg act aga gct gag gaa agg gta tta 816 Phe Ser Gin Met Ser Glu Leu Leu Thr Arg Ala Glu Glu Arg Val Leu 260 265 270 gtc aga cca cat gaa cca cet cca cet cca cca atg cat gga gca gga 864 Val Arg Pro His Glu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Met His Gly Ala Gly 275 280 285 gat gca aaa ccg ata ccc acc tgt atc agt tct gct aca ggt ttg ata 912 Asp Ala Lys Pro Ile Pro Thr Cys Ile Ser Ser Ala Thr Gly Leu Ile 290 295 300 gaa aat cgc cet cag tca cca gct aca ggc aga aca cet gtg ttt gtg 960 Glu Asn Arg Pro Gin Ser Pro Ala Thr Gly Arg Thr Pro Val Phe Val 305 310 315 320 agc ccc act ccc cca cet cet cca cca cet ctt cca tct gcc ttg tca 1008 Ser Pro Thr Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro Ser Ala Leu Ser 325 330 335 act tcc tca tta aga gct tca atg act tca act cet ccc cet cca gta 1056 Thr Ser Ser Leu Arg Ala Ser Met Thr Ser Thr Pro Pro Pro Pro Val 340 345 350
cet ccc cca cet cca cet cca gcc act gct ttg caa gct cca gca gta 1104 Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ala Thr Ala Leu Gin Ala Pro Ala Val 355 360 365 cca cca cet cca gct cet ctt cag att gcc cet gga gtt ctt cac cca 1152 Pro Pro Pro Pro Ala Pro Leu Gin Ile Ala Pro Gly Val Leu His Pro 370 375 380 gct cet cet cca att gca cet cet cta gta cag ccc tct cca cca gta 1200 Ala Pro Pro Pro Ile Ala Pro Pro Leu Val Gin Pro Ser Pro Pro Val 385 390 395 400 gct aga gct gcc cca gta tgt gag act gta cca gtt cat cca ctc cca 1248 Ala Arg Ala Ala Pro Val Cys Glu Thr Val Pro Val His Pro Leu Pro 405 410 415 caa ggt gaa gtt cag ggg ctg cet cca ccc cca cca ccg cet cet ctg 1296 Gin Gly Glu Val Gin Gly Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Leu 420 425 430 cet cca cet ggc att cga cca tca tca cet gtc aca gtt aca gct ctt 1344 Pro Pro Pro Gly Ile Arg Pro Ser Ser Pro Val Thr Val Thr Ala Leu 435 440 445 gct cat cet ccc tct ggg cta cat cca act cca tct act gcc cca ggt 1392 Ala His Pro Pro Ser Gly Leu His Pro Thr Pro Ser Thr Ala Pro Gly 450 455 460 ccc cat gtt cca tta atg cet cca tct cet cca tca caa gtt ata cet 1440 Pro His Val Pro Leu Met Pro Pro Ser Pro Pro Ser Gin Val Ile Pro 465 470 475 480 gct tct gag cca aag cgc cat cca tca acc cta cet gta atc agt gat 1488 Ala Ser Glu Pro Lys Arg His Pro Ser Thr Leu Pro Val Ile Ser Asp 485 490 495 gcc agg agt gtg cta ctg gaa gca ata cga aaa ggt att cag cta cgc 1536 Ala Arg Ser Val Leu Leu Glu Ala Ile Arg Lys Gly Ile Gin Leu Arg 500 505 510 aaa gta gaa gag cag cgt gaa cag gaa gct aag cat gaa cgc att gaa 1584 Lys Val Glu Glu Gin Arg Glu Gin Glu Ala Lys His Glu Arg Ile Glu 515 520 525 aac gat gtt gcc acc atc ctg tct cgc cgt att gct gtt gaa tat agt 1632 Asn Asp Val Ala Thr Ile Leu Ser Arg Arg Ile Ala Val Glu Tyr Ser 530 535 540 gat tcg gaa gat gat tca gaa ttt gat gaa gta gat tgg ttg gag 1677 Asp Ser Glu Asp Asp Ser Glu Phe Asp Glu Val Asp Trp Leu Glu 545 550 555 taagaaaaat gcattgataa atattacaaa actgaatgca aatgtccttt gtggtgcttg 1737 ttccttgaaa atgtttggtc a 1758 26 559 PRT Homo sapiens
26 Met Pro Leu Val Lys Arg Asn Ile Asp Pro Arg His Leu Cys His Thr 1 5 10 15 Ala Leu Pro Arg Gly Ile Lys Asn Glu Leu Glu Cys Val Thr Asn Ile 20 25 30 Ser Leu Ala Asn Ile Ile Arg Gin Leu Ser Ser Leu Ser Lys Tyr Ala 35 40 45 Glu Asp Ile Phe Gly Glu Leu Phe Asn Glu Ala His Ser Phe Ser Phe 50 55 60 Arg Val Asn Ser Leu Gin Glu Arg Val Asp Arg Leu Ser Val Ser Val 65- 70 75 80 Thr Gin Leu Asp Pro Lys Glu Glu Glu Leu Ser Leu Gin Asp Ile Thr 85 90 95 Met Arg Lys Ala Phe Arg Ser Ser Thr Ile Gin Asp Gin Gin Leu Phe 100 105 110 Asp Arg Lys Thr Leu Pro Ile Pro Leu Gin Glu Thr Tyr Asp Val Cys 115 120 125 Glu Gin Pro Pro Pro Leu Asn Ile Leu Thr Pro Tyr Arg Asp Asp Gly 130 135 140 Lys Glu Gly Leu Lys Phe Tyr Thr Asn Pro Ser Tyr Phe Phe Asp Leu 145 150 155 160 Trp Lys Glu Lys Met Leu Gin Asp Thr Glu Asp Lys Arg Lys Glu Lys 165 170 175 Arg Lys Gin Lys Gin Lys Asn Leu Asp Arg Pro His Glu Pro Glu Lys 180 185 190 Val Pro Arg Ala Pro His Asp Arg Arg Arg Glu Trp Gin Lys Leu Ala 195 200 205 Gin Gly Pro Glu Leu Ala Glu Asp Asp Ala Asn Leu Leu His Lys His 210 215 220 Ile Glu Val Ala Asn Gly Pro Ala Ser His Phe Glu Thr Arg Pro Gln 225 230 235 240 Thr Tyr Val Asp His Met Asp Gly Ser Tyr Ser Leu Ser Ala Leu Pro 245 250 255 Phe Ser Gin Met Ser Glu Leu Leu Thr Arg Ala Glu Glu Arg Val Leu 260 265 270 Val Arg Pro His Glu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Met His Gly Ala Gly 275 280 285 Asp Ala Lys Pro Ile Pro Thr Cys Ile Ser Ser Ala Thr Gly Leu Ile 290 295 300 Glu Asn Arg Pro Gin Ser Pro Ala Thr Gly Arg Thr Pro Val Phe Val 305 310 315 320
Ser Pro Thr Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro Ser Ala Leu Ser 325 330 335 Thr Ser Ser Leu Arg Ala Ser Met Thr Ser Thr Pro Pro Pro Pro Val 340 345 350 Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ala Thr Ala Leu Gin Ala Pro Ala Val 355 360 365 Pro Pro Pro Pro Ala Pro Leu Gin Ile Ala Pro Gly Val Leu His Pro 370 375 380 Ala Pro Pro Pro Ile Ala Pro Pro Leu Val Gin Pro Ser Pro Pro Val 385 390 395 400 Ala Arg Ala Ala Pro Val Cys Glu Thr Val Pro Val His Pro Leu Pro 405 410 415 Gin Gly Glu Val Gin Gly Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Leu 420 425 430 Pro Pro Pro Gly Ile Arg Pro Ser Ser Pro Val Thr Val Thr Ala Leu 435 440 445 Ala His Pro Pro Ser Gly Leu His Pro Thr Pro Ser Thr Ala Pro Gly 450 455 460 Pro His Val Pro Leu Met Pro Pro Ser Pro Pro Ser Gin Val Ile Pro 465 470 475 480 Ala Ser Glu Pro Lys Arg His Pro Ser Thr Leu Pro Val Ile Ser Asp 485 490 495 Ala Arg Ser Val Leu Leu Glu Ala Ile Arg Lys Gly Ile Gin Leu Arg 500 505 510 Lys Val Glu Glu Gin Arg Glu Gin Glu Ala Lys His Glu Arg Ile Glu 515 520 525 Asn Asp Val Ala Thr Ile Leu Ser Arg Arg Ile Ala Val Glu Tyr Ser 530 535 540 Asp Ser Glu Asp Asp Ser Glu Phe Asp Glu Val Asp Trp Leu Glu 545 550 555 27 351 ADN Séquence artificielle Description de la séquence artificielle : de la protéine Scarl humaine CDS (1)..(351)
27 gtc aca gtt aca gct ctt gct cat cet ccc tct ggg cta cat cca act 48 Val Thr Val Thr Ala Leu Ala His Pro Pro Ser Gly Leu His Pro Thr 1 5 10 15 cca tct act gcc cca ggt ccc cat gtt cca tta atg cet cca tct cet 96 Pro Ser Thr Ala Pro Gly Pro His Val Pro Leu Met Pro Pro Ser Pro 20 25 30 cca tca caa gtt ata cet gct tct gag cca aag cgc cat cca tca acc 144 Pro Ser Gin Val Ile Pro Ala Ser Glu Pro Lys Arg His Pro Ser Thr 35 40 45 cta cet gta atc agt gat gcc agg agt gtg cta ctg gaa gca ata cga 192 Leu Pro Val Ile Ser Asp Ala Arg Ser Val Leu Leu Glu Ala Ile Arg 50 55 60 aaa ggt att cag cta cgc aaa gta gaa gag cag cgt gaa cag gaa gct 240 Lys Gly Ile Gin Leu Arg Lys Val Glu Glu Gin Arg Glu Gin Glu Ala 65 70 75 80 aag cat gaa cgc att gaa aac gat gtt gcc acc atc ctg tct cgc cgt 288 Lys His Glu Arg Ile Glu Asn Asp Val Ala Thr Ile Leu Ser Arg Arg 85 90 95 att gct gtt gaa tat agt gat tcg gaa gat gat tca gaa ttt gat gaa 336 Ile Ala Val Glu Tyr Ser Asp Ser Glu Asp Asp Ser Glu Phe Asp Glu 100 105 110 gta gat tgg ttg gag 351 Val Asp Trp Leu Glu 115 28 117 PRT Séquence artificielle Description de la séquence artificielle : de la protéine Scarl humaine 28 Val Thr Val Thr Ala Leu Ala His Pro Pro Ser Gly Leu His Pro Thr 1 5 10 15 Pro Ser Thr Ala Pro Gly Pro His Val Pro Leu Met Pro Pro Ser Pro 20 25 30 Pro Ser Gin Val Ile Pro Ala Ser Glu Pro Lys Arg His Pro Ser Thr 35 40 45 Leu Pro Val Ile Ser Asp Ala Arg Ser Val Leu Leu Glu Ala Ile Arg 50 55 60 Lys Gly Ile Gin Leu Arg Lys Val Glu Glu Gin Arg Glu Gin Glu Ala 65 70 75 80 Lys His Glu Arg Ile Glu Asn Asp Val Ala Thr Ile Leu Ser Arg Arg 85 90 95
Ile Ala Val Glu Tyr Ser Asp Ser Glu Asp Asp Ser Glu Phe Asp Glu 100 105 110 Val Asp Trp Leu Glu 115 29 312 ADN Séquence artificielle Description de la séquence artificielle : de la protéine Scarl humaine CDS (1)..(312) 29 gtc aca gtt aca gct ctt gct cat cct ccc tct ggg cta cat cca act 48 Val Thr Val Thr Ala Leu Ala His Pro Pro Ser Gly Leu His Pro Thr 1 5 10 15 cca tct act gcc cca ggt ccc cat gtt cca tta atg cct cca tct cct 96 Pro Ser Thr Ala Pro Gly Pro His Val Pro Leu Met Pro Pro Ser Pro 20 25 30 cca tca caa gtt ata cct gct tct gag cca aag cgc cat cca tca acc 144 Pro Ser Gin Val Ile Pro Ala Ser Glu Pro Lys Arg His Pro Ser Thr 35 40 45 cta cct gta atc agt gat gcc agg agt gtg cta ctg gaa gca ata cga 192 Leu Pro Val Ile Ser Asp Ala Arg Ser Val Leu Leu Glu Ala Ile Arg 50 55 60 aaa ggt att cag cta cgc aaa gta gaa gag cag cgt gaa cag gaa gct 240 Lys Gly Ile Gin Leu Arg Lys Val Glu Glu Gin Arg Glu Gin Glu Ala 65 70 75 80 aag cat gaa cgc att gaa aac gat gtt gcc accatc ctg tct cgc cgt 288 Lys His Glu Arg Ile Glu Asn Asp Val Ala Thr Ile Leu Ser Arg Arg 85 90 95 att gct gtt gaa tat agt gat tcg 312 Ile Ala Val Glu Tyr Ser Asp Ser 100 30 104 PRT Séquence artificielle Description de la séquence artificielle : de la protéine Scarl humaine 30 Val Thr Val Thr Ala Leu Ala His Pro Pro Ser Gly Leu His Pro Thr 1 5 10 15
Pro Ser Thr Ala Pro Gly Pro His Val Pro Leu Met Pro Pro Ser Pro 20 25 30 Pro Ser Gin Val Ile Pro Ala Ser Glu Pro Lys Arg His Pro Ser Thr 35 40 45 Leu Pro Val Ile Ser Asp Ala Arg Ser Val Leu Leu Glu Ala Ile Arg 50 55 60 Lys Gly Ile Gin Leu Arg Lys Val Glu Glu Gin Arg Glu Gin Glu Ala 65 70 75 80 Lys His Glu Arg Ile Glu Asn Asp Val Ala Thr Ile Leu Ser Arg Arg 85 90 95 Ile Ala Val Glu Tyr Ser Asp Ser 100 31 189 ADN Séquence artificielle Description de la séquence artificielle : de la protéine Scarl humaine CDS (1)..(189) 31 gcc agg agt gtg cta ctg gaa gca ata cga aaa ggt att cag cta cgc 48 Ala Arg Ser Val Leu Leu Glu Ala Ile Arg Lys Gly Ile Gin Leu Arg 1 5 10 15 aaa gta gaa gag cag cgt gaa cag gaa gct aag cat gaa cgc att gaa 96 Lys Val Glu Glu Gin Arg Glu Gin Glu Ala Lys His Glu Arg Ile Glu 20 25 30 aac gat gtt gcc acc atc ctg tct cgc cgt att gct gtt gaa tat agt 144 Asn Asp Val Ala Thr Ile Leu Ser Arg Arg Ile Ala Val Glu Tyr Ser 35 40 45 gat tcg gaa gat gat tca gaa ttt gat gaa gta gat tgg ttg gag 189 Asp Ser Glu Asp Asp Ser Glu Phe Asp Glu Val Asp Trp Leu Glu 50 55 60 32 63 PRT Séquence artificielle Description de la séquence artificielle : de la protéine Scarl humaine