INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'invention concerne également une méthode d'analyse pour déterminer la susceptibilité d'un virus VIH à un composé inhibiteur de fusion ciblant la protéine gp41 du VIH-1, consistant à effectuer l'amplification de l'étape (b) soit avec la paire d'amorces SEQ ID No : 13 ,
SEQ ID No : 14 suivie d'une deuxième amplification avec la paire d'amorces SEQ ID No : 15 SEQ ID No : 16, soit avec la paire d'amorces SEQ ID No : 17 SEQ ID No : 18 suivie d'une deuxième amplification avec la paire d'amorces SEQ ID No : 18 , SEQ ID No : 16, à ajouter ou non ledit composé inhibiteur de fusion, éventuellement à des concentrations différentes, durant la culture de l'hôte cellulaire obtenu à l'étape (e), avant l'étape (f) et comprenant à l'étape (g) la comparaison de l'expression du gène marqueur avec et sans composé inhibiteur de fusion ciblant la gp41 du VIH-1.
L'invention concerne également une méthode d'analyse pour déterminer la susceptibilité d'un virus VIH à l'action inhibitrice des anticorps, consistant à effectuer l'amplification de l'étape (b) avec la paire d'amorces SEQ ID No : 17 SEQ ID No : 18 suivie d'une deuxième amplification avec la paire d'amorces SEQ ID No : 18 , SEQ ID No : 16, à ajouter ou non lesdits
anticorps durant l'étape (e) de culture, éventuellement à des concentrations différentes et comprenant à l'étape (g) la comparaison de l'expression du gène marqueur avec et sans anticorps.
L'invention concerne également une méthode d'analyse pour déterminer le tropisme d'un virus VIH pour un récepteur cellulaire, consistant à effectuer l'amplification de l'étape (b) avec la paire d'amorces SEQ ID No : 17 SEQ ID No : 18 suivie d'une deuxième amplification avec la paire d'amorces SEQ ID No : 18 , SEQ ID No : 16, à effectuer l'infection de l'étape (f) avec les particules virales obtenues à l'étape (e) sur deux hôtes cellulaires distincts et comprenant à l'étape (g) la comparaison de l'expression du gène marqueur par chacun des deux hôtes cellulaires distincts.
L'invention concerne également une méthode d'analyse pour déterminer la susceptibilité d'un virus VIH à un composé inhibiteur ciblant les corécepteurs du VIH-1, consistant à effectuer l'amplification de l'étape (b) avec la paire d'amorces SEQ ID No : 17 SEQ ID No : 18 suivie d'une deuxième amplification avec la paire d'amorces SEQ ID No : 18 , SEQ ID No : 16, à ajouter ou non ledit composé inhibiteur ciblant les corécepteurs du VIH-1, éventuellement à des concentrations différentes, durant l'étape (e) de culture, l'infection de l'étape (f)
étant effectuée sur deux hôtes cellulaires distincts et comprenant à l'étape (g) la comparaison de l'expression du gène marqueur par chacun des deux hôtes cellulaires distincts.
L'invention concerne également une méthode d'analyse pour déterminer le tropisme d'un virus VIH pour un récepteur cellulaire, consistant à effectuer l'amplification de l'étape (b) avec la paire d'amorces SEQ ID No : 19 et SEQ ID No : 20, suivie d'une deuxième amplification avec la paire d'amorces SEQ ID No : 21 et SEQ ID No : 22, à infecter à l'étape (f) deux hôtes cellulaires distincts avec les particules virales obtenues à l'étape (e) et comprenant à l'étape (g) la comparaison de l'expression du gène marqueur par chacun des deux hôtes cellulaires distincts.
L'invention concerne également une méthode d'analyse pour déterminer l'infectivité ou la capacité réplicative d'un virus VIH consistant à comparer à l'étape (g) l'expression du gène marqueur par le second hôte cellulaire infecté avec les particules virales obtenues en appliquant les étapes (a) à (f) à un échantillon biologique d'un patient, et l'expression du gène marqueur par le même second hôte cellulaire infecté avec des particules virales de référence obtenues en appliquant les étapes (a) à (f) à un échantillon contenant un virus de référence.
L'invention concerne également une méthode d'analyse pour déterminer la virulence d'un virus VIH consistant à effectuer l'amplification de l'étape (b) soit avec la paire d'amorces SEQ ID No : 13 , SEQ ID No : 14 suivie d'une deuxième amplification avec la paire d'amorces SEQ ID No : 15 SEQ ID No : 16, soit avec la paire d'amorces SEQ ID No : 17 SEQ ID No : 18 suivie d'une deuxième amplification avec la paire d'amorces SEQ ID No : 18 , SEQ ID No : 16, et à mesurer, lors de l'infection de l'étape (f), l'effect cytopathogène produit sur le second hôte cellulaire.
Avantageusement l'effet cytopathogène produit lors de l'infection de l'étape (f) sur le second hôte
Il a également été proposé d'incorporer certains additifs pour réduire la tendance au grillage. Ainsi, l'utilisation d'hydroperoxydes organiques comme inhibiteurs de grillage pour des compositions à base de polyéthylène réticulées par un peroxyde a été décrite dans le brevet britannique GB 1 535 039. L'utilisation des monomères vinyliques a fait l'objet du brevet US 3 954 907. L'utilisation de nitrites a été décrite dans le brevet US 3 202 648. Le brevet US 3 335 124 décrit l'utilisation d'amines aromatiques, de composés phénoliques, de composés mercaptothiazoles, de sulfures, d'hydroquinones et de composés dithiocarbamates de dialkyl.
Tout récemment l'emploi du 2,2, 6, 6-tétraméthylpipéridinyloxy (TEMPO) et du 4-hydroxy-2, 2, 6, 6 - tétraméthylpipéridinyloxy (4-hydroxy TEMPO) a fait l'objet d'une demande de brevet japonais JP 11-49865.
L'emploi des additifs de l'état de la technique cité précédemment pour allonger le temps de résistance au grillage a toutefois un effet néfaste sur le temps de durcissement et/ou la densité de réticulation finale. Il conduit à une diminution de la productivité et/ou des propriétés du produit final.
La présente invention supprime les inconvénients de l'état de la technique car elle permet d'améliorer la résistance au grillage, la densité de réticulation sans que cela ait un impact négatif sur la durée de réticulation.
Ceci est atteint en utilisant une famille de nitroxydes particuliers comme additif.
Un premier objet de la présente invention est donc une composition retardant le grillage comprenant un nitroxyde (N) renfermant au moins une insaturation. Comme nitroxyde (N), on peut utiliser par exemple ceux représentés par les formules suivantes :
dans lesquelles au moins un des substituants R'i, R'2, R1, R2, R3, R4, Rs, Re, R7, R8, Rg et Rio possède au moins une insaturation réactive vis-à-vis d'addition radicalaire. Les substituants restants pouvant être identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène, un atome d'halogène tel que le fluor, le chlore, le brome ou l'iode, un groupement hydrocarboné linéaire, ramifié ou cyclique, saturé tels qu'un radical alkyle, un groupement aromatique, substitué ou non, un groupement cyano-CN, un groupement amide-CONRRa, un groupement ester-COOR, un groupement alcoxyle-OR, un groupement phosphonate-PO (OR) (ORa), un groupement hydroxy-OH ou un groupement acide tel que-COOH ou-PO (OH) 2 ou S03H. R et Ra identiques ou différents peuvent représenter un atome d'hydrogène, un groupement alkyle linéaire, ramifié ou cyclique ayant un nombre de carbone allant de 1 à 20, un groupement phényle-éventuellement substitué.
Les substituants possédant au moins une insaturation peuvent chacun représenter notamment un groupement hydrocarboné linéaire, ramifié ou cyclique insaturé ou un groupement acrylate, méthacrylate, acrylamide et méthacrylamide. Lorsque plusieurs insaturations sont présentes sur le même groupement celles-ci peuvent être conjuguées, comme par exemple dans un groupement butadiényle ou non conjuguées.
Lorsque les formules précitées comportent en plus d'au moins un substituant possédant au moins une insaturation, un groupement hydroxy et/ou un groupement acide, le groupement hydroxy et/ou le groupement acide est de préférence représenté par Rs, Re, R7. Ra, Rg et Rio.
La présente invention a également pour objet une composition de réticulation (C) retardant le grillage comprenant un nitroxyde (N) et un initiateur de radicaux libres choisi dans le groupe constitué des peroxydes organiques, des composés azoïques et de leurs mélanges.
Un autre objet de l'invention est une composition réticulable (A) comprenant un polymère thermoplastique et/ou polymère élastomère pouvant être réticulés au moyen d'un peroxyde ou d'un composé azoïque, un nitroxyde (N) et un initiateur de radicaux libres choisi dans le groupe constitué des peroxydes organiques, des composés azoïques et de leurs mélanges.
La présente invention fournit également un procédé de réticulation d'une composition réticulable comprenant un polymère thermoplastique et/ou
un polymère élastomère pouvant être réticulés au moyen d'un peroxyde ou d'un composé azoïque dans lequel on mélange ledit polymère avec un initiateur de radicaux libres, choisi dans le groupe constitué des peroxydes organiques, des composés azoïques et de leurs mélanges, en présence d'un nitroxyde (N).
La présente invention fournit également des objets moulés ou des extrudés tels que fils câbles électriques obtenus à partir d'une composition réticulable (A).
Selon la présente invention on utilise de préférence un nitroxyde (N) de formule (III) dans laquelle : - Ri, R2, R3, R4 pouvant être identiques ou différents représentent un radical méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, sec-butyle ou tertiobutyle, - Rs, Re, R7, R8, Rg représentent chacun un atome d'hydrogène et - Rio représente un groupement hydrocarboné linéaire, ramifié ou cyclique insaturé, un groupement acrylate, acrylamide, méthacrylate ou méthacrylamide.
On peut citer à titre d'exemple : - l'acrylate de - 2, 2, 6, 6 tétraéthyl -4- pipéridinyl -oxy - le méthacrylate de - 2, 2, 6, 6 tétraéthyl-4-pipéridinyl-oxy On préfère utiliser, en particulier, un nitroxyde (N) renfermant une insaturation représenté par la formule (IV) : dans laquelle X représente un groupement bivalent-OC (O)-, -NRbC (O)-,-P (O) (ORb) O- avec Rb ayant la même signification que R et n est un nombre entier pouvant varier de 1 à 20 et de préférence de 1 à 10. La position de l'insaturation sur le groupement CnH2n-i est indifférente mais on préfère les insaturations situées soit en position 1 par rapport à X soit en position terminale.
glycoprotéine d'enveloppe VSV-G dans les cellules transfectées est assuré par le plasmide pVSV qui contient la séquence codante vsv-g sous le contrôle d'un promoteur CMV.
1.4 - Cultures cellulaires.
Des cellules HeLa, 293 T et P4 sont cultivées dans du milieu DMEM supplémenté avec 10% de sérum de veau f#tal (SVF), 50 UI/ml de pénicilline et 50 m/ml de streptomycine. Les cellules P4 son des cellules Hela-CD4, LTR-LacZ dans lesquelles l'expression de la betagalactosidase est strictement inductible par la protéine Tat transactivateur du VIH, permettant par conséquent, une quantification précise de l'infectivité ou de la capacité réplicative des virus VIH-I basée sur un cycle unique de réplication (Charneau, P., Mirambeau, G., Roux, P., Paulous, S., Buc, H. and Clavel, F. (1994) HIV-1 reverse transcription. A termination step at the center of the genome". J Mol Biol 241 (5), Les cellules P4 sont cultivées en présence de 500 g/ml de geneticine.
II. - Détermination de la susceptibilité d'un virus VIH à un inhibiteur de Transcription inverse.
(RTI) .
La détermination de la susceptibilité d'un virus VIH à un inhibiteur de transcriptase inverse est effectuée de la manière suivante : cellules 293 T sont transfectées avec 7,5 g de plasmide pSRT linéarisé par NruI, 0,1 g du plasmide pVSV-G et 0,5 et 1 g du produit issu de la réaction PCR de la transcription inverse de VIH. Le précipité de transfection est retiré des cellules après 18 heures d'incubation et du milieu de croissance frais est ajouté. Après 24 heures de culture, le
surnageant est clarifié par centrifugation (500 g, 15 minutes) et transféré sur des cellules indicatrices P4 lesquelles ont été pré-incubées avec des dilutions sériées d'un inhibiteur de la transcriptase inverse, dans de puits triplicatas, durant quatre heures. La gamme de concentrations d'inhibiteur utilisée varie selon les composés. Le signal produit par l'activation du gène marqueur a été développé avec du CPRG durant 48 heures, comme pour l'analyse de la susceptibilité à un inhibiteur de transcriptase inverse et l'indice IC50 a été calculé en utilisant l'équation d'effet médian.
III - Optimisation de la méthode d'analyse pour déterminer la susceptibilité d'un virus VIH aux inhibiteurs de transcriptase inverse.
Les conditions de transfert sont optimisées au moyen d'un test en échiquier. La variation du ratio du plasmide/produit issu de PCR ne modifie significativement la quantité de p24 ou de transcriptase inverse produites ou la vitesse de réaction avec CPRG. Etant donné que le plasmide circulaire, pVSV-G semble être extrêmement toxique pour les cellules 293T, la quantité de celui-ci a été réduite de 3 g à 0,1 g dans le mélange de transfection, conduisant à des rendements élevés en p24 (>20 ng/ml comparé à 9,8 ng/ml).
Les gammes de concentration d'inhibiteur utilisées sont choisies en fonction de la toxicité cellulaire de chaque composé et du ratio ICso/IC9o pour la susceptibilité des isolats résistants (Tableau 1). Par exemple, comme l'indice IC50 pour l'abacavir pour les cellules P4 est d'environ 250 M alors que l'indice IC50 pour ce composé pour la souche native du virus est d'environ 3 M, la détection de la résistance est limitée par la toxicité. Une gamme de quatre dilutions en série, commençant à 200 M a été utilisée pour l'abacavir, permettant la détection de jusqu'à 60 fois plus de résistance.
D'autre part, puisque la toxicité de l'AZT pour les cellules P4 est élevée (>300 M) alors que l'indice ICso est considérablement inférieur, une gamme
plus large de dilutions a été utilisée (dilution en série 1/10 à partir de 5 M) de manière a permettre la détection de niveaux élevés de résistance (jusqu'à 100 fois) .
Pour la transcriptase inverse RVA, l'indice IC50 est utilisé plutôt que l'indice IC90 car la détection de l'indice IC90 pour les virus résistants pourrait demander des niveaux de composé toxiques pour la plupart d'inhibiteurs de transcriptase inverse.
A titre d'exemple, on peut citer : - l'acrylate de 2, 2, 6, 6 tétraméthyl-4-pipéridinyl-oxy - le méthacrylate de 2,2, 6,6 tétraméthyl-4-pipéridinyl-oxy - l'acrylamide de 2,2, 6,6 tétraméthyl-4-pipéridinyl-oxy - le méthacrylamide de 2,2, 6,6 tétraméthyl -4- pipéridinyl -oxy Selon la présente invention, on peut employer comme initiateurs de radicaux libres, des composés azoïques et/ou des peroxydes organiques qui, par décomposition thermique, produisent des radicaux libres qui facilitent la réaction de durcissement/réticulation. Parmi les initiateurs de radicaux libres utilisés comme agents de réticulation, les peroxydes de dialkyle et les diperoxycétals sont préférés. On trouvera une description détaillée de ces composés dans Encyclopedia of Chemical Technology, 3ème édition, vol. 17, pages 27 à 90 (1982).
Parmi les peroxydes de dialkyle, les initiateurs préférés sont : peroxyde de dicumyle, peroxyde de di-t-butyle, peroxyde de t-butylcumyle, 2, 5-diméthyl-2, 5-di (t-butylperoxy) hexane, 2,5 diméthyl-2, 5-di (t-amylperoxy) - hexane, 2,5 diméthyl-2, 5-di (t-butylperoxy) hexyne-3,2, 5 diméthyl-2, 5-di (tamylperoxy) hexyne-3, a, a'-di [ (t-butyl-peroxy) isopropyl] benzène, peroxyde de di-t-amyle, 1,3, 5-tri [ (t-buty) peroxy) isopropyt] benzène, 1, 3-diméthyl-3- (t- butylperoxy)butanol, 1, 3-diméthyl-3- (t-amylperoxy) butanol et leurs mélanges.
Parmi les diperoxycétals, les initiateurs préférés sont 1,1-di (t-butylperoxy)-3, 3, 5-triméthylcyclohexane, 1,1-di (t-butylperoxy) cyclohexane, 4,4 di (t-amylperoxy) valérate de n-butyle, 3-3-di t-butylperoxy) butyrate d'éthyle, 2,2-di (t-amylperoxy) propane, 3,6, 6,9, 9 pentaméthyl-3- éthoxycarbonylméthyl-1, 2,4, 5,-tétraoxacyclononane, 4,4-bis (t- butylperoxy) valérate de n-butyle, 3,3 di (t-amylperoxy) butyrate d'éthyle et leurs mélanges.
Comme composés azoïques, on peut citer à titre d'exemple le 2,2' azobis (2-acétoxypropane), l'azobisisobutyronitrile, l'azodicarbamide, le 4,4' azobis acide cyanopentanoïque et le 2, 2' azobisméthylbutyronitrile.
Le peroxyde de dicumyle et l'α, a'di [ (t-butyl-peroxy) isopropyl] benzène sont particulièrement préférés.
Les polymères thermoplastiques et/ou élastomères pris en considération dans la présente invention peuvent être définis comme des polymères naturels ou synthétiques qui ont un caractère thermoplastique et/ou élastomère et qui peuvent être réticulés (durcis) sous l'action d'un agent de réticulation. Dans Rubber World, "Elastomer Crosslinking with Diperoxyketals", octobre 1983, pages 26-32, et dans Rubber and Plastic News,"Organic Peroxides for Rubber Crosslinking", 29 septembre 1980, pages 46-50, on décrit l'action de réticulation et des polymères réticulables.
Des polyoléfines qui conviennent à la présente invention sont décrites dans Modern Plastics Encyclopedia 89, pages 63-67,74-75. A titre d'exemple, on peut citer le polyéthylène linéaire de faible densité, le polyéthylène de faible densité, le polyéthylène de densité élevée, le polyéthylène chloré, les terpolymères d'éthylène-propylène-butadiène, les copolymères d'éthylèneacétate de vinyle, les copolymères d'éthylène propylène, le caoutchouc de silicone, le polyéthylène chlorosulfoné ou les fluoroélastomères.
On peut également citer les copolymères d'éthylène- (méth) acrylate de méthyle et les copolymères d'éthylène-méthacrylate de glycidyle.
Le rapport en poids de l'initiateur de radicaux libres au nitroxyde (N) dans la composition de réticulation (C) et dans la composition réticulable (A) est de préférence compris entre 1 et 50, et avantageusement compris entre 2 et 10.
Dans la composition réticulable (A) l'initiateur de radicaux libres représente de préférence entre 0,2 et 5 % en poids de la quantité de polymère et avantageusement entre 0,5 et 3 % en poids.
Outre les constituants précédemment cités, les compositions (A) et (C) peuvent comprendre des anti-oxydants, des stabilisants, des plastifiants et des charges inertes telles que la silice, l'argile ou le carbonate de calcium.
Selon le procédé de la présente invention, la température de réticulation peut être comprise entre 110 et 2200 C et de préférence entre 140 et 200 C.
La transformation des compositions réticulables en objets moulés ou extrudés peut être effectuée pendant ou après la réticulation.
PARTIE EXPERIMENTAL Dans ce qui suit, les abréviations suivantes sont utilisées : MH : la valeur maximale du couple obtenu à partir de la courbe enregistrée par le rhéomètre.
Cette valeur détermine la densité de réticulation.
Tgo : temps de durcissement, temps nécessaire pour atteindre 90 % du couple maximal à une température donnée.
cellulaire est mesuré au moyen des techniques de cytotoxicité telles que la mesure de l'induction de syncytia, de l'induction de l'apoptose ou par cytométrie de flux.
L'invention concerne également une méthode d'analyse pour déterminer la susceptibilité d'un virus VIH à l'hydroxyurée, consistant à ajouter ou non de l'hydroxyurée, éventuellement à des concentrations différentes, soit durant l'étape (e) de culture, soit au deuxième hôte cellulaire et à effectuer à l'étape (g) la comparaison de l'expression du gène marqueur avec et sans hydroxyurée.
L'invention a également pour objet un kit pour la mise en oeuvre d'une méthode d'analyse d'une caractéristique phénotypique des virus VIH présents dans un échantillon biologique d'un patient caractérisé en ce qu'il comprend : i) une paire d'amorces encadrant une séquence d'acide nucléique du génome viral susceptible de porter au moins une mutation, ii) un vecteur comprenant les parties d'un génome d'un virus VIH nécessaires à la réplication virale à l'exception du segment amplifié avec les amorces définies en (i) et du gène codant pour la protéine d'enveloppe, iii) un second vecteur comprenant un gène codant pour une protéine d'enveloppe,
iv) un premier hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH, v) un second hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH et comportant un gène marqueur activable uniquement à la suite de l'infection virale, vi) les produits et réactifs nécessaires pour réaliser l'amplification par PCR, vii) les produits et réactifs permettant la détection du marqueur exprimé.
Avantageusement le kit selon l'invention comprend : i) les paires d'amorces de séquences : - SEQ ID No : 5 et SEQ ID No : 7 - SEQ ID No : 6 et SEQ ID No : 8 ii) un vecteur retroviral délété de la région du cadre de lecture pol codant pour la transcriptase inverse du VIH-1, s'étendant des résidus 2618 à 2872 inclus, et comportant un site unique de restriction MluI, iii) un virus pseudotypé par un gène codant pour une protéine d'enveloppe, iv) un premier hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH, v) un second hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH et comportant un gène marqueur activable uniquement à la suite de l'infection virale, vi) les produits et réactifs nécessaires pour réaliser l'amplification par PCR, vii) les produits et réactifs permettant la détection du marqueur exprimé.
Avantageusement le kit selon l'invention comprend : i) les paires d'amorces de séquences : - SEQ ID No : 9 et SEQ ID No : 10 - SEQ ID No : 11 et SEQ ID No : 12 ii) un vecteur retroviral délété de toute la région du cadre de lecture pol codant pour l'intégrase du VIH-1 s'étendant des résidus 4228 à 5093 inclus et de la région codant pour l'enveloppe virale entre les positions 6343 et 7611 incluses,
iii) un virus pseudotypé par un gène codant pour une protéine d'enveloppe, iv) un premier hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH, v) un second hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH et comportant un gène marqueur activable uniquement à la suite de l'infection virale, vi) les produits et réactifs nécessaires pour réaliser l'amplification par PCR, vii) les produits et réactifs permettant la détection du marqueur exprimé.
Avantageusement le kit selon l'invention comprend : i) les paires d'amorces de séquences - SEQ ID No : 17 et SEQ ID No : 14 - SEQ ID No : 18 et SEQ ID No : 16 ii) un vecteur retroviral délété de toute la région codant pour la majorité de la sous-unité gp120 et de la portion extracellulaire de la gp41 de l'enveloppe du VIH-1, s'étendant des résidus 6480 à 8263 inclus, et comportant un site de restriction unique Mull, iv) un premier hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH, v) un second hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH et comportant un gène marqueur activable uniquement par des particules virales, vi) les produits et réactifs nécessaires pour réaliser l'amplification par PCR, vii) les produits et réactifs permettant la détection du marqueur exprimé.
Avantageusement le kit selon l'invention comprend : i) les paires d'amorces de séquences - SEQ ID No : 19 et SEQ ID No : 20 - SEQ ID No : 21 et SEQ ID No : 22 ii) un vecteur retroviral délété de la région, codant pour les domaines allant de la boucle VI à la boucle V3 de l'enveloppe du VIH-1 s'étendant de 6617 à 7250 inclus et comportant un site de restriction unique NheI, iv) un premier hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH,
v) un second hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH et comportant un gène marqueur activable uniquement à la suite de l'infection virale, vi) les produits et réactifs nécessaires pour réaliser l'amplification par PCR, vii) les produits et réactifs permettant la détection du marqueur exprimé.
Avantageusement le kit selon l'invention comprend : i) les paires d'amorces de séquences - SEQ ID No : 23 et SEQ ID No : 24 - SEQ ID No : 25 et SEQ ID No : 26 avec SEQ ID No : 27 ii) un vecteur retroviral délété de toute la région codant pour la portion extracellulaire de la sousunité gp41 de l'enveloppe du VIH-1, s'étendant des résidus 7745 à 8263 inclus, et comportant un site de restriction unique Mull, iv) un premier hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH, v) un second hôte cellulaire susceptible d'être infecté par un virus VIH et comportant un gène marqueur activable uniquement à la suite de l'infection virale, vi) les produits et réactifs nécessaires pour réaliser l'amplification par PCR, vii) les produits et réactifs permettant la détection du marqueur exprimé.