INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Les gènes de sélection sont par exemple, le gène de résistance à la génétycine pour le premier acide nucléique et le gène de résistance à l'hygromycine pour le second acide nucléique.
Le procédé de l'invention est adapté à tout type de culture primaire, notamment, de cellules de veinules post capillaires de tissus lymphoïdes, de capillaires de tissus non lymphoïdes et de vaisseaux.
Mais le procédé de l'invention est tout particulièrement adapté aux cellules humaines de préférence établies à partir de tissus inflammés ou provenant de sujets atteints de cancer.
Une forme de mise en oeuvre préférée du procédé de l'invention consiste à réaliser la transfection de l'étape (b) après un temps court après mise en culture primaire avec un premier acide nucléique contenant un fragment immortalisant de l'oncogène T de SV40, avantageusement associé à un gène de sélection, et la seconde transfection avec un second acide nucléique contenant un fragment immortalisant de l'oncogène ras (10), avantageusement associé à un gène de sélection.
Cette mise en oeuvre du procédé de l'invention permet tout particulièrement d'obtenir des lignées de cellules endothéliales immortalisées ne présentant pas le phénomène de crise et en conséquence dont la durée de vie est remarquable.
De plus les lignées de cellules endothéliales immortalisées présentent une stabilité phénotypique accrue par rapport aux cellules mises en culture primaire qui perdent rapidement leurs antigènes de surface.
L'invention concerne aussi les lignées de cellules endothéliales immortalisées de mammifère et de préférence humaine susceptibles d'être obtenues par le procédé ci-dessus.
L'invention a également pour objet un modèle d'étude et de diagnostic de l'adhérence intercellulaire caractérisé en ce qu'il comprend au moins une lignée cellulaire endothéliale selon l'invention. Le modèle de l'invention permet l'étude des phénomènes invasifs et plus particulièrement :
- des métastases, comme la prédiction de la localisation de métastases ou l'estimation du caractère invasif d'une tumeur, - de l'inflammation en phase aiguë et dans les pathologies chroniques, comme le recrutement des leucocytes ou le chimiotactisme, - du passage de la barrière hémato-céphalée, - de l'angiogénèse tumorale et des rejets de greffe, - des infections par des agents pathogènes et/ou des cellules déjà infectées.
Le modèle de l'invention est utile pour l'étude des phénomènes ci-dessus et donc aussi pour le criblage de substances utile pour le traitement et/ou la prévention des maladies impliquant des phénomènes d'adhérence intercellulaire, tels que les cancers, les inflammations ou les infections virales.
Le modèle de l'invention peut être mis en oeuvre selon des méthodes très diverses, comme celle utilisée pour l'adhérence des cellules normales ou transformées dans les conditions de flux (11), consistant à faire pousser les cellules des lignées cellulaires endothéliales de l'invention dans un flux établi par le dessin d'une chambre de flux, où la pression et le débit du flux sont contrôlés par un ensemble de pompes de précision. Un système de caméra et d'analyse d'images permet d'estimer le mouvement et la vitesse de passage des cellules ainsi que la force de l'interaction. Il est ainsi possible d'évaluer très facilement l'effet de substances injectées dans le flux sur l'interaction entre cellules circulantes et cellules endothéliales mais aussi sur l'état biologique des cellules endothéliales, comme l'activation des molécules de surface.
Une autre technique susceptible d'être mise en oeuvre conformément au modèle de l'invention consiste à estimer l'adhérence cellulaire par cytométrie en flux (12). Cette technique est basée sur une étape d'adhérence statique et fournit des renseignements différents et complémentaires de la technique précédente, comme : la caractérisation phénotypique des populations cellulaires adhérentes, en particulier l'identification des antigènes caractéristiques des cellules circulantes ayant adhéré, la mesure des molécules induites à la surface des deux types cellulaires.
Ces techniques peuvent ouvrir la voie au développement de molécules jouant un rôle inhibiteur dans chacune étape de l'invasion cellulaire.
Le brevet US-A-5 783 116 décrit plus spécifiquement des naphtopyranes de structure générale suivante :
Le brevet US-A-5 811 034 revendique notamment la structure générale ci-dessous :
Ces composés prétendent satisfaire au cahier des charges défini supra. En réalité, si ces composés ont bien une ou plusieurs des propriétés de base recherchées, telles qu'une transmission élevée en absence d'ultraviolets et une forte colorabilité sous irradiation solaire, tous les composés décrits à ce jour n'ont pas la combinaison complète des propriétés recherchées, nécessaire à la production d'articles satisfaisants. En particulier, aucun de ces composés n'est intrinsèquement gris ou marron et la nécessité d'utiliser un photochrome complémentaire pour l'obtention de l'une de ces deux teintes subsiste.
Dans ce contexte, il est du mérite des inventeurs de s'être intéressés à ce type de dérivés comme base de développement de nouveaux photochromes et de proposer une nouvelle famille de molécules possédant des propriétés photochromiques particulièrement avantageuses.
Ainsi, la présente invention concerne, selon un premier de ses aspects, des composés de formule (I) ou (II) dans laquelle : # X est un oxygène ou NR6, R6 représentant un hydrogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié qui comporte de 1 à 12 atomes de carbone, un groupe cycloalkyle qui comporte de 3 à 12 atomes de carbone, un groupe aryle ou hétéroaryle qui comporte dans sa structure de base respectivement 6 à 24 atomes de carbone ou 4 à
24 atomes de carbone et au moins un hétéroatome choisi parmi le soufre, l'oxygène et l'azote ; ladite structure de base étant éventuellement substituée par au moins un substituant choisi parmi un alkyle linéaire ou ramifié qui comporte 1 à 12 atomes de carbone, un alcoxy linéaire ou ramifié qui comporte 1 à 12 atomes de carbone, un halogène ou un hydroxy ; # R4 et R5, identiques ou différents, représentent indépendamment un hydrogène, un hydroxy ou un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, qui comporte 1 à 6 atomes de carbone, ou forment ensemble un groupe oxo (=0) ; # R1 et R2, identiques ou différents, représentent indépendamment : - l'hydrogène, - un groupe alkyle linéaire ou ramifié qui comporte de 1 à 12 atomes de carbone, - un groupe cycloalkyle qui comporte de 3 à 12 atomes de carbone, - un groupe aryle ou hétéroaryle qui comporte dans sa structure de base respectivement 6 à 24 atomes de carbone ou 4 à 24 atomes de carbone et au moins un hétéroatome choisi parmi le soufre, l'oxygène et l'azote ; ladite structure de base étant éventuellement substituée par au moins un substituant choisi parmi l'ensemble des substitutants donnés ci-après : + un halogène et notamment le fluor, le chlore et le brome, + un hydroxy, + un groupe alkyle linéaire ou ramifié qui comporte de 1 à 12 atomes de carbone, + un groupe alcoxy linéaire ou ramifié qui comporte de 1 à 12 atomes de carbone, + un groupe halogénoalkyle ou halogénoalcoxy correspondant respectivement aux groupes (C1-C12) alkyle ou alcoxy ci- dessus, substitués par au moins un atome d'halogène, et notamment un groupe fluoroalkyle de ce type, + un groupe phénoxy ou naphthoxy éventuellement substitué par au moins un groupe alkyle ou alcoxy linéaire ou ramifié qui comporte de 1 à 12 atomes de carbone,
+ un groupe alcényle linéaire ou ramifié qui comporte de 2 à 12 atomes de carbone et notamment le groupe vinyle ou le groupe allyle, + un groupe -NH2, + un groupe-NHR, R représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié qui comporte de 1 à 6 atomes de carbone, ou un phényle éventuellement substitué par au moins un alkyle linéaire ou ramifié qui comporte de 1 à 6 atomes de carbone, + un groupe :
R' et R", identiques ou différents, représentant indépendamment un groupe alkyle linéaire ou ramifié qui comporte de 1 à 6 atomes de carbone, un phényle éventuellement substitué par au moins un alkyle linéaire ou ramifié qui comporte 1 à 6 atomes de carbone ou représentant ensemble avec l'atome d'azote auquel ils sont liés un cycle de 5 à 7 chaînons qui peut comporter au moins un autre hétéroatome choisi parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, ledit azote étant éventuellement substitué par un groupe R"', groupe alkyle linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 6 atomes de carbone, + un groupe méthacryloyle ou un groupe acryloyle, - un groupe aralkyle ou hétéroaralkyle, dont le groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comporte de 1 à 4 atomes de carbone et dont la partie aryle ou hétéroaryle répond à la même définition que celle donnée supra pour le groupe aryle ou hétéroaryle ; ou lesdits deux substituants R1 et R2 forment ensemble un groupement adamantyle, norbornyle, fluorénylidène, di(C1-C6)- alkylanthracénylidène ou spiro(C5-C6)cycloalkylanthra-cénylidène ; ledit groupement étant éventuellement substitué par au moins un des substituants listés ci-dessus pour RI, R2 : groupe aryle ou hétéroaryle ; # R3, identiques ou différents, représentent, indépendamment :
- un halogène, et notamment le fluor, le chlore ou le brome, - un hydroxy, - un groupe alkyle linéaire ou ramifié qui comporte de 1 à 12 atomes de carbone (avantageusement de 1 à 6 atomes de carbone), - un groupe cycloalkyle qui comporte de 3 à 12 atomes de carbone, - un groupe alcoxy linéaire ou ramifié qui comporte de 1 à 12 atomes de carbone (avantageusement de 1 à 6 atomes de carbone), - un groupe halogénoalkyle, halogénocycloalkyle, halogénoalcoxy correspondant respectivement aux groupes alkyle, cycloalkyle, alcoxy ci-dessus, substitués par au moins un atome d'halogène, notamment choisi parmi le fluor, le chlore et le brome, - un groupe aryle ou hétéroaryle répondant à la même définition que celle donnée supra pour R,, R2 - un groupe aralkyle ou hétéroaralkyle, le groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 4 atomes de carbone et les groupes aryle et hétéroaryle répondant aux mêmes définitions que celles données supra pour R1, R2, - un groupe phénoxy ou naphthoxy éventuellement substitué par au moins un groupe alkyle ou alcoxy linéaire ou ramifié qui comporte de 1 à 12 atomes de carbone, - un groupe amine ou amide : -NH2, -NHR, -CONH2, -CONHR,
R, R', R" répondant respectivement à leurs définitions données supra pour les substituants aminés des valeurs R1, R2 : aryle ou hétéroaryle, - un groupe -OCOR7ou -COOR7, R7représentant un groupe alkyle droit ou ramifié comportant de 1 à 6 atomes de carbone ou un groupe cycloalkyle comportant de 3 à 6 atomes de carbone ou un groupe phényle, éventuellement substitué par au moins un des substituants listés ci-dessus pour les valeurs de R1, R2 : aryle ou hétéroaryle ;
au moins deux des groupements R3, adjacents, forment ensemble un groupe cyclique aromatique ou non, à un noyau ou deux noyaux annelés, qui peut comporter au moins un hétéroatome choisi dans le groupe comprenant : l'oxygène, le soufre ou l'azote ; ou ces noyaux, indépendamment aromatique ou non-aromatique de 5 à 7 chaînons, pouvant comporter au moins un substituant choisi parmi un groupe tel que défini plus haut, à titre de substituant, de la structure de base du groupe aryle ou heteroaryle représentant R1 ou R2, $# m est un entier de 0 à 4.
Les composés de l'invention - naphtopyranes de formule (I) ou (II)possèdent une forte colorabilité, associée à une cinétique de décoloration adaptée aux applications visées. Les couleurs, facilement accessibles, varient de l'orange au violet.
Parmi lesdits composés de l'invention, on a ceux qui répondent à la formule (I) ou (II) dans laquelle : # X est un oxygène. Parmi ceux-ci, on préfère tout particulièrement les deux sous-familles ci-après : celle des composés de formule (I) ou (II) dans laquelle donc X = 0 et R4 et R5 forment ensemble un groupe oxo et celle des composés de formule (I) ou (II) dans laquelle donc X = 0 et R4 et R5 sont des hydrogènes ; # X est un groupe NR6. Parmi ceux-ci, on préfère tout particulièrement les trois sous-familles ci-après : celle des composés de formule (I) ou (II) dans laquelle donc X = NR6 et R4 et R5 forment ensemble un groupe oxo, celle des composés de formule (I) ou (II) dans laquelle donc X = NR6 et R4 et R5 sont des hydrogènes et celle des composés de formule (I) ou (II) dans laquelle donc X = NR6 et R4 est un hydrogène, tandis que R5 est un hydroxy.
En référence aux substituants R1 et R2, on préfère ceux qui répondent à la formule (I) ou (II) dans laquelle : # R1 et R2, sont identiques ou différents et représentent indépendamment des groupes aryles ou hétéroaryles éventuellement substitués dont la structure de base est choisie dans le groupe comprenant les groupements phényle, naphtyle, biphényle,
pyridyle, furyle, benzofuryle, dibenzofuryle, N-(C1-C6)alkylcarbazole, thiényle, benzothiényle, dibenzothiényle et julolidinyle ; R1 et/ou R2 représentant, avantageusement, un groupe phényle substitué en para ; ou RI et R2 forment ensemble un groupe adamantyle ou norbomyle.
L'air échantillonné grâce à la pompe 17 est ainsi admis sur les deux capteurs 15 et 16, soit directement, soit après passage au travers la cartouche 12 comme illustré sur la figure 4. Des séquences de 5 minutes sont choisies.
Les signaux bruts délivrés par ces capteurs et 16 sont échantillonnés après stabilisation, de la manière suivante voie 1 (air ambiant) => capteur 16 => mesure de H20 ambiant, voie 2 (cartouche) =* capteur 15 =* mesure de CO ambiant I débarrassé des COV piégés) (voie 1-voie 2) =* mesure des COV piégés. Les phases d'échantillonnage des signaux sont illustrées par la figure 5 présentant une évolution typique des signaux au cours d' essai.
Mesure du C02 La mesure est effectuée à l'aide du capteur . Ce capteur infrarouge, débarrassé de boîtier de protection, est intégré sans modification du dispositif. Ce capteur présente une bonne linéarité de réponse dans sa gamme de mesure (0 à 2 ppm), et une bonne sensibilité.
Pour effectuer le traitement signaux de sortie des capteurs, on considère les courbes de calibrage suivantes Dioxyde d'azote (NO2)/capteur 20 La courbe de calibrage est du type [N02] = aE,nl ou : [N02] représente la concentration exprimée en ppb E représente le signal du capteur (en Volts). Teneur pondérale en eau (H20)/capteur 16 "voie 1" L'équation de la courbe de calibrage du capteur 16 est du type H20en ppm = b. (E-Eo)2+C. (E-Eo) +d où . E représente la tension brute délivrée par le capteur (en Volts) et Eo représente la tension de base du capteur. Monoxyde carbone (CO)/capteur 15 "voie 2" L'équation de la courbe de calibrage du capteur vis-à-vis du CO est un polynome du second degré du type COen ppm=e . L E-EO-E (H20) l 2+f . [ E-Eo-E (H20) 1 +g où E représente la tension brute délivrée le capteur 0 (en Volts), E0 représente la tension de base du capteur , E(H20) représente la correction de l'influence de la teneur en eau sur le capteur 15, à partir la teneur delivrée par le capteur 16.
Formaldéhyde et composés organiques volatils exprimés en "équivalents formaldéhyde"/capteur 15 "voie 1 - voie 2" Parmi les COV majeurs de l'air ambiant pollué, la cartouche 12 arrête quantitativement les composés et familles de composés suivants - formaldéhyde et autres aldéhydes, - cétones (acétone...), - alcools (méthanol, éthanol...), - composés benzéniques.
Tous ces composés ont une toxicité reconnue et le capteur 15 leur présente des sensibilités comparables. Parmi ces polluants, le formaldéhyde s'avère majoritaire à l'intérieur des locaux et c'est l'ensemble de ces COV "indésirables" qui est exprimé en "équivalents formaldéhyde".
Le CO (et les alcanes) présent dans l'air à des teneurs qui peuvent atteindre plusieurs ppm, n'est pas arrêté par la cartouche 12.
Le C0, toxique, est mesuré lors de la séquence correspondant à la voie 2. La mesure du CO intègre la présence éventuelle d'alcanes. En cas de présence de ces composés, la mesure se fait par excès ; ceci constitue un atout en permettant au dispositif de réagir à la présence de méthane en cas fuite de gaz naturel par exemple.
Pour chaque palier de réponse les moyennes en voie 1 et en voie 2 sont calculées éliminant les phases de stabilisation (1 minute environ avant et après chaque commutation).
# Pour le capteur 15 on a - Voie 2 (piégeage) . 0,5 [moyenne (t0+7 à t0+9)+moyenne(t0+17 à t0+19)] (moyenne des signaux séquences "voie 2" précédant et suivant une séquence "voie 1") - Voie 1 (passage direct) . moyenne (t0+12 à t0+14) # Pour le capteur 16 on a - Voie 2 (piégeage) : 0,5 x [moyenne (to+7 à t0+9) +moyenne (to+17 à to+19) ] (moyenne signaux des séquences "voie 2" précédant et suivant une séquence "voie 1") - Voie 1 (passage direct) : moyenne (to+12 à t0+14) L'influence des variations de teneur en sur le capteur 15 est corrigée très simplement en affectant l'écart des signaux "voie 1-voie 2" mesuré sur le capteur 16 d'un coefficient S représentant le rapport sensibilités respectives à l'eau de ces deux capteurs, c'est-à-dire le rapport des pentes des deux courbes de réponse dans un domaine d'humidité allant 5000 à 25000 ppm.
Les réponses des capteurs 15 et 16 (tensions brutes différentielles en volts) dans les domaines des teneurs en eau extrêmes rencontrées en air extérieur est donnée dans le tableau 1 en fin de description. L'équation de la courbe de variation (assimilée à une droite) de ce rapport en fonction de la teneur en eau est : Coefficient S = 2.10-5[H20] Les variations de teneurs en eau au niveau du capteur 15, en aval de la cartouche 12, sont comprises entre 0 et + 6000 ppm ; un rapport fixe de 1,67 est donc retenu entre les tensions brutes délivrées par les capteurs 15 et 16 pour une même teneur en eau.
La valeur de 1,67 correspondant à l'écart maximal teneur en eau est retenue préférentiellement à un coefficient moyen, car elle permet une meilleure adéquation de correction dans 1a mesure où, seuls les écarts élevés ont une incidence notable sur les résultats. On obtient ainsi après correction de réponse à la teneur en eau du capteur 15 COV (en mg/m3 de HCHO) = K1 x /(0(V1-V2) 2620-1, 67 x 4 (V1 V2 ) 2180 ) où K1 est la pente de la réponse du capteur 15 aux Si le second terme permet de corriger réponse à l'eau du capteur 15, la différence "voie 1- voie 2" du premier terme permet de corriger la réponse de capteur au CO non piégé par la cartouche 12 de s'affranchir d'éventuelles dérives de zéro du capteur 15 dans le temps.
Un calibrage est réalisé par injection et vaporisation de quantités connues de HCHO en solution aqueuse à 37% ; le tableau 2 en fin de description fournit les valeurs des signaux après traitement décrit ci-dessus. La courbe de calibration est une droite dans un domaine de concentration compris entre 0 et 6 mg/m3. Dioxyde de carbone/capteur 21 L'équation de la courbe de calibrage est C02 en ppm = a x E + b dans laquelle E représente le signal exprimé en volts ( 10 V pour 0-2000 ppm).
ETABLISSEMENT D'UN INDICE DE QUALITE DE L'AIR Diverses approches pour l'établissement d'un tel indice peuvent être envisagées ; une solution consiste à comparer la teneur mesurée de chacun composés sélectionnés : H20, C0, N02, HCHO, C02 à différents seuils comme dans la grille du tableau 3.
r Les niveaux de concentration susceptibles d'être atteints par chacune de ces teneurs sont répartis en 10 classes établies à partir soit de seuils réglementaires lorsqu'ils existent, soit de recommandations de l'Organisation mondiale de la Sante pour protection de la santé et constituent chacun indice élémentaire.
L'indice global est représenté par l'indice le plus grand des indices élémentaires correspondants à chacun des composés sélectionnés.
- HIMEC-1 : Cellules endothéliales microvasculaires isolées à partir d'un intestin normal (isolées et envoyées à notre attention sous la forme de cultures primaires par G. Haraldsen, Institut de Pathologie, Rikshospitalet, Oslo, Norvège, Haraldsen et al., 1996).
- HSMEC : Cellules endothéliales microvasculaires isolées à partir de peau (fournies sous la forme d'une lignée immortalisée de vecteurs pSVT par E. W. Ades, National Center for Infectious Diseases, Atlanta, USA, Ades et; al., 1992 ; Bosse et al., 1993).
Reclonées ainsi que décrit ci-dessus.
- ECV304 : Lignée cellulaire d'endothélium de cordon ombilical transformée spontanément in vitro, fournie par le Dr J. Fantini (Ingénierie des Protéines, URA 1455 CNRS, Marseille).
Cette lignée cellulaire a été obtenue à partir d'un nouveau-né japonais de sexe féminin par le Dr K.
Takahashi (In Vitro 26,265, 1990) et déposé à la collection ECACC sous le numéro 92091712.
- HspEC : Cellules endothéliales de rate enflammée.
- HLiMEC : Cellules endothéliales provenant de microvaisseaux de foie enflammé.
HBrMEC Cellules endothéliales microvasculaires de cerveau humain provenant d'un patient atteint d'une tumeur.
II - RESULTATS.
1) Caractéristiques générales des lignées de cellules endothéliales.
Des marqueurs généraux pour les cellules endothéliales ont été évalués en premier. Les composés suivants ont été choisis comme marqueur spécifique pour les cellules endothéliales : (i) l'antigène de von Willebrand, (ii) l'enzyme de conversion de l'angiotensine et enfin (iii) la sélectine E intracellulaire.
Les résultats des lignées de sélection avec les marqueurs précités sont présentés sur les figures 1 à 3. La figure 1 illustre le marquage de cellules perméabilisées avec l'anticorps spécifique anti-facteur de von Willebrand. Toutes les lignées ont été marquées avec l'anticorps, la moyenne allant de 12 pour les cellules HPLNEC.Mel à marquage minimal à 37 pour les cellules HOMEC.J6B à marquage maximal. Etant donné que les témoins sont inférieurs à 10 (en général de 3 à 4), toutes les lignées sont classées positives.
Certaines lignées présentent un marquage informe, par exemple HPLNEC.2S1R1, HPLNEC. Mel, HIMEC-1, HSMEC-1 et
HAPEC.S1 tandis que d'autres présentent un schéma de marquage bimodal, comme par exemple HPLNEC.B3, HLMEC-1 et surtout ECV304 (témoin).
La figure 2 présente les données de marquage des lignées cellulaires avec un anticorps polyclonal anti-ACE. Comme dans l'exemple précédent, toutes les lignées cellulaires sont positives, avec des valeur moyennes de FL1 allant de 55 pour les cellules HPLNEC.Mel à marquage minimal à 190 pour les cellules HOMEC.6JB à marquage maximal. Les graphiques montrent que toutes les cellules ont été marquées positivement dans n'importe laquelle des lignées analysées pour rechercher l'enzyme de conversion de l'angiotensine.
En se basant alors sur les entrelaceurs verrou définis plus haut pour les sous colonnes Al1l2, on suppose ici qu'un entrelaceur verrou identique Z#Z* est utilisé pour toutes les sous-colonnes. Dans ce cas l'entrelaceur global est tel que le turbocode correspondant contient en assez grand nombre des séquences de très faible poids. En effet, avec g(x)=1+x2+x3, f1(x) = 1 +x++)(3 et f2(x)=1+x+x3 tels que considérés plus haut, un polynôme de la forme a(x)=x7'.g(x) vérifie a*(x) =x7j.g(x), pour un certain j. En conséquence, le poids de Hamming correspondant à la séquence encodée (a, b, c) est seulement de 10, ce qui est une valeur assez faible.
On définit ici la notion de portée sp(a) et de portée totale fsp(a) pour des trinômes a(x) =xi + xj + Xk avec i< j < k par les valeurs suivantes : sp(a)=k-i, et fsp(a) = spray + sp(a*).
A la suite de l'action d'un entrelaceur verrou sur chacune des souscolonnes Al1l2 on obtient une matrice A*. Comme chaque sous-colonne Al1l2 permutée par un entrelaceur verrou conserve jusqu'à présent la même position relative dans A* que dans A, cette matrice A* est encore représentée par le même tableau, par exemple celui donné à la figure 5, que la matrice A.
Dans le but d'éviter certaines séquences codées de faible poids comme celles de poids 10 mentionnées ci-dessus, on va aussi modifier la matrice A* obtenue jusqu'à présent en permutant entre elles les sous-colonnes d'une même colonne.
On peut alors montrer sur des exemples que toutes les permutations permutant entre elles les sous-colonnes de chaque colonne ne sont pas équivalentes en terme de distance minimale du turbocode obtenu.