INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Selon un autre aspect, l'invention concerne aussi un procédé de détection d'un acide nucléique, de séquences nucléotidiques déterminées, ou de séquences nucléotidiques structurellement apparentées à une séquence nucléotidique déterminée, dans une collection de cellules hôtes recombinantes selon l'invention, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: - mettre en contact la collection de cellules hôtes recombinantes avec une sonde hybridant avec la séquence nucléotidique déterminée ou
hybridant avec une séquence nucléotidique structurellement apparentée à la séquence nucléotidique déterminée ; - détecter l'hybride éventuellement formé entre la sonde et les acides nucléiques compris dans les vecteurs de la collection.
Pour effectuer le criblage d'une banque d'ADN selon l'invention en vue de détecter la présence d'une séquence nucléotidique codant pour un polypeptide capable de dégrader le lindane, on a détecté les clones recombinants d'intérêt par leur phénotype correspondant à leur capacité à dégrader le lindane. Dans ce but, les clones isolés et/ou des ensembles de clones de la banque d'ADN préparée ont été mis en culture dans un milieu de culture en présence de lindane et la dégradation du lindane a été observée par la formation d'un halo trouble dans l'environnement immédiat des cellules.
L'invention concerne aussi un procédé pour identifier la production d'un composé d'intérêt par une ou plusieurs cellules hôtes recombinantes dans une collection de cellules hôtes recombinantes selon l'invention, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: - culture des cellules hôtes recombinantes de la collection dans un milieu de culture approprié ; - détection du composé d'intérêt dans le surnageant de culture ou dans le lysat cellulaire d'une ou plusieurs des cellules recombinantes cultivées.
L'invention a en outre pour objet un procédé pour sélectionner une cellule hôte recombinante produisant un composé d'intérêt dans une collection de cellules hôtes recombinantes selon l'invention, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: - culture des cellules hôtes recombinantes de la collection dans un milieu de culture approprié ; - détection du composé d'intérêt dans le surnageant de culture ou dans le lysat cellulaire d'une ou plusieurs des cellules hôtes recombinantes cultivées; - sélection des cellules hôtes recombinantes produisant le composé d'intérêt.
L'invention concerne encore un procédé pour la production d'un composé d'intérêt caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: - cultiver une cellule hôte recombinante sélectionnée selon le procédé décrit ci-dessus; - récupérer et, le cas échéant, purifier, le composé produit par ladite cellule hôte recombinante.
L'invention est également relative à un composé d'intérêt caractérisé en ce qu'il est obtenu selon le procédé ci-dessus décrit.
Un composé d'intérêt selon l'invention peut consister en un polykétide produit grâce à l'expression d'au moins une séquence nucléotidique comprenant une séquence choisie parmi les séquences SEQ ID N 33 à 44 et SEQ ID N 30 à 32.
L'invention concerne encore une composition comprenant un polykétide produit grâce à l'expression d'au moins une séquence nucléotidique comprenant une séquence choisie parmi les séquences SEQ ID N 33 à SEQ ID N 44 et SEQ ID N 30 à SEQ ID N 32.
Un polykétide produit grâce à l'expression d'au moins une séquence nucléotidique ci-dessus est préférentiellement le produit de l'activité de plusieurs séquences codantes incluses au sein d'un opéron fonctionnel dont les produits de traduction sont les différentes enzymes nécessaires à la synthèse d'un polykétide, l'une des séquences ci-dessus étant comprise et exprimée dans ledit opéron. Un tel opéron comprenant une séquence d'acide nucléique selon l'invention codant pour une polykétide synthase peut être construit par exemple selon l'enseignement de Borchert et al. (1992).
L'invention est encore relative à une composition pharmaceutique comprenant une quantité pharmacologiquement active d'un polykétide selon l'invention, le cas échéant en association avec un véhicule pharmaceutiquement compatible.
Cette demande PCT cite également d'autres cellules hôtes appropriées telles que Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, Serratia, Schigella ou encore des souches du type bacillus telles que B. subtilis et B. licheniformis ainsi que les bactéries du genre Pseudomonas, Streptomyces ou Actinomyces.
Le brevet US N 5,824,485 cite en particulier la souche de Streptomyces lividans TK66 ou encore des cellules de levure telles que celles de Saccharomyces pombe.
5. Caractérisation de gènes d'intérêt dans des banques d'ADN provenant d'un échantillon de l'environnement.
La demande PCT N WO 99/20.799 décrit une identification du phénotype de différents clones appartenant à la banque d'ADN de B. cereus, respectivement un clone produisant de l'hémolysine, un clone hydrolysant l'esculine ou encore un clone produisant un pigment orange.
Des techniques de mutagenèse basées sur l'utilisation d'un transposon codant pour l'enzyme pho A ont permis subséquemment d'isoler des clones mutés et de caractériser les séquences responsables des phénotypes observés.
L'article de STEIN et al. (1996) précité décrit l'utilisation d'amorces spécifiques de l'ADN ribosomal afin d'amplifier l'ADN inséré dans les vecteurs hébergés par certains clones d'une banque d'ADN génomique d'Archaebactéries de plancton marin et l'identification de plusieurs séquences codantes dans l'ADN ainsi amplifié.
L'article de BORSCHERT S. et al., (1992) décrit le criblage d'une banque d'ADN génomique de Bacillus subtilis à l'aide de couples d'amorces hybridant avec des régions conservées de peptide synthétases connues afin d'identifier un ou plusieurs gènes correspondant dans le génome de Bacillus subtilis.
Cette technique a permis de détecter un fragment d'ADN chromosomique d'environ 26 kb portant une partie de l'opéron de biosynthèse de la surfactine.
L'article de KAH-TONG S. et al.(1997) décrit le criblage d'une banque d'ADN provenant du sol à l'aide d'amorces hybridant avec des séquences conservées de l'opéron responsable de la voie de biosynthèse des polykétides de type Il et montre l'identification, au sein de cette banque d'ADN, de séquences apparentées au gène PKS-p. Cet article décrit aussi la construction de cassettes d'expression hybrides dans lesquelles la séquence de la sous-unité PKS-, retrouvée naturellement dans l'opéron responsable de la biosynthèse des polykétides, a été remplacée par différentes séquences apparentées retrouvées dans la banque d'ADN.
De même, l'article de HONG-FU et al. , (1995) décrit la construction de cassettes d'expression contenant les différentes phases de lecture ouverte de l'opéron responsable de la biosynthèse des polykétides, les différentes cassettes d'expression ayant été construites artificiellement en combinant les phases de lecture ouverte qui ne sont pas retrouvées ensemble naturellement dans le génome de Streptomyces coelicolor. Cet article montre que la combinaison, dans les cassettes d'expression artificielles, de cadres de lecture ouvert originaires de différentes souches bactériennes permet la production de polykétides ayant différentes caractéristiques structurales et des activités antibiotiques plus ou moins grandes vis-à-vis de Bacillus subtilis et Bacillus cereus.
Les polykétides font partie d'une grande famille de produits naturels de structure variable et possédant une grande diversité d'activités biologiques. Font partie des polykétides par exemple, les tétracyclines et l'érythromycine (antibiotiques), le FK506 (immunosuppresseur), la doxorubicine (agent anti-cancéreux), la monensine (un agent coccidiostatique) ainsi que l'avermectine (un agent antiparasitaire).
Ces molécules sont synthétisées grâce à des enzymes multifonctionnelles appelées polykétides synthases, qui catalysent des cycles de condensation répétés entre des acyl thioesters (en général des acétyl, propionyl, malonyl ou méthylmalonyl thioesters). Chaque cycle de condensation aboutit à la formation, sur une chaîne croissante carbonée,
d'un groupe ss-kéto qui peut ensuite subir, le cas échéant, une ou plusieurs séries d'étapes réductrices.
Compte-tenu de l'intérêt clinique important des polykétides, leur mécanisme commun de biosynthèse ainsi que le haut degré de conservation observé entre les groupes de gènes codant pour les polykétides synthases, il s'est développé un intérêt accru pour le développement de nouveaux polykétides par génie génétique.
De nouveaux polykétides artificiels ont ainsi été produits par génie génétique, tels que la méderrhodine A ou la dihydrogranatirhodine. La grande majorité des molécules nouvelles de polykétides obtenues par génie génétique sont très différentes, du point de vue structural, des polykétides correspondants naturels.
De l'état de la technique, il ressort ainsi qu'il existe un besoin d'obtention de nouveaux polykétides d'intérêt et tout particulièrement de polykétides d'intérêt thérapeutique présentant notamment, par rapport à leurs homologues naturels, un niveau accru d'activité antibiotique ou encore un spectre d'activité antibiotique différent, soit plus large que celui des polykétides connus, soit au contraire plus sélectif.
La lampe pour véhicule de ce mode de réalisation peut être utilisée par exemple comme feu de position, notamment comme lampe arrière d'automobile et analogue, et cette lampe est realisée à l'aide du réflecteur 1 et de la glace représentés sur la figure 1.
réflecteur 1 est réalisé afin qu'il s'étende directions approximativement perpendiculaires à 1, optique Ax qui est préréglé par rapport à la direction longitudinale du véhicule sur lequel la lampe doit être montée et à la direction de projection de la lumière de lampe, et il est formé avec une configuration presque rectangulaire lorsqu'il est vu dans la direction de l'axe . Le réflecteur 1 a une partie 10 de réflecteur dont une surface opposée à la glace 3, en face de celle-ci suivant l'axe optique Ax, est une surface l0a destinée à réfléchir la lumière, et une partie 12 de rebord destinée à assurer le positionnement et la fixation sur la glace 3 qui a une structure telle qu'elle entoure la surface réfléchissante 10a. Une ampoule B de source de lumière est insérée à l'entrée 11 de source de lumière percée en position presque centrale dans la partie 10 de réflecteur et est fixée par rapport au réflecteur 1 afin que le point d'éclairement F correspondant trouve en position prédéterminée (position de source de lumière) sur l'axe optique Ax. La glace 3 est réglée en direction presque perpendiculaire à l'axe optique Ax. Il faut noter dans le présent mémoire que le mode de réalisation considéré est un exemple de diverses conditions, notamment de forme périphérique pour la configuration presque rectangulaire du réflecteur 1 (forme du contour de la partie de rebord 12), l'angle de réglage de la glace 3 par rapport à 'axe optique Ax, l'emplacement de l'ampoule B de la source lumineuse, etc. De manière générale, ces conditions sont déterminées de façon convenable d'après les contraintes de forme imposées par la carrosserie, y compris le volume et la forme de la partie de logement de lampe de la carrosserie, et la configuration continue de la surface externe de la lampe (surface externe de la glace) par rapport aux autres parties de carrosserie. Il n'existe aucune restriction particulière applicable au procédé particulier de production de la surface réfléchissante 10a du réflecteur 1, et le mode de réalisation décrit dans la suite peut s'appliquer à des lampes ayant des réflecteurs formés par divers procédés de production.
Sur la figure 1, le réflecteur 1 et la glace 3 formant la lampe pour véhicule sont représentés à l'état démonté, et la forme de la surface réfléchissante 10a est indiquée par arrachement partiel des parties supérieure et droite (sur la figure) de la partie 12 de rebord du réflecteur 1. Sur cette figure 1 cependant, l'ensemble des éléments 14 de la surface réfléchissante (figure 2) formant la surface réfléchissante 10a ne sont pas représentés et la forme de la surface est schématiquement indiquée par la surface formée librement 20 qui constitue la forme de référence de la surface réflé chissante 10a. Huit lignes en trait interrompu formées sur la surface formée librement 20 constituent des lignes de référence de surface 22, à 22, qui sont utilisées pour la création et le réglage de la surface formée librement 20.
La surface formée librement 20 est une surface courbe utilisée pour la détermination de la forme de la surface réfléchissante, constituant une surface destinée à spécifier la configuration fondamentale de la surface réfléchissante 10a. La configuration fondamentale n'est pas un simple paraboloïde de révolution, mais la surface formée librement est sélectionnée sous forme d'une surface courbe corres pondant aux contraintes de forme et correspondant aussi à certaines conditions, par exemple une condition selon laquelle les exitances lumineuses (décrites dans la suite) des parties respectives de la surface courbe ont des valeurs comprises dans une plage prédéterminée. Plus précisément, la surface formée librement 20 a une structure qui remplit la condition d'uniformité de lumière, parmi les conditions fonctionnelles, et la condition de forme mince, parmi les contraintes de forme imposées par la carrosserie.
La surface réfléchissante l0a est formée par affecta tion de plusieurs éléments 14 de surface réfléchissante (tronçons individuels de la forme rectangulaire de la figure 2) à des segments respectifs obtenus par division de la surface formée librement 20 de la forme de base en un motif d'ensemble tel que représenté sur la figure 2. Sur la figure 2, l'un des éléments 14 de surface réfléchissante est hachuré afin que sa surface apparaisse clairement. Dans ce mode de réalisation, la surface réfléchissante l0a a une construction formée de la structure des segments divisée à des intervalles fixes dans la direction de l'axe X et dans la direction de l'axe Y qui sont perpendiculaires l'un à l'autre, si bien que les formes des segments correspondants aux éléments respectifs 14 de surface réfléchissante sont les mêmes et sont rectangulaires lorsqu'ils sont vus dans la direction de l'axe Z.
Une forme de surface réfléchissante de base de l'élément 14 est déterminée pour chacun des segments à l'état divisé, comme dicrit précédemment. Les formes des surfaces réfléchissantes de base sont déterminées comme étant des paraboloïdes de révolution créés avec dis tances focales respectives différentes, l'axe optique Ax constituant l'axe central et le point d'éclairement F (position de la source lumineuse) étant un foyer. Les distances focales des paraboloides de révolution des éléments respectifs 14 de surface réfléchissante sont déter minées d'après le point d'éclairement F et l'axe optique Ax et d'après les positions des éléments 14 de surface réfléchissante sur la surface formée librement 20 afin que la lumière provenant du point d'éclairement F soit refléchie dans la direction de l'axe optique Ax.
En outre, la forme de la surface réfléchissante de chaque élement 14 est réglée comme région de réflexion diffuse obtenue par déformation de la totalité ou d'une partie de forme du paraboloïde de révolution afin qu'il donne des possibilités prédéterminées de diffusion de lumière. possibilités de diffusion de lumière désignent les possibilités de diffusion de la lumière émise par la lampe, sous forme de lumière parallèle dans la direction de l'axe optique, mais sous forme de lumière qui s'étale dans une plage angulaire prédéterminée, le long de laxe optique.
Lorsque la surface réfléchissante l0a est réalisée des éléments 14 de surface réfléchissante obtenus par division de la surface formée librement 20 de la forme de base en un ensemble de segments et lorsque chaque élément 14 de surface réfléchissante a les possibilités de diffusion de lumière décrites précédemment, il est possible d'appliquer la glace 3 de nature transparente et de faible possibilité de diffu sion de lumière à la glace qui transmet de la lumière depuis la surface réfléchissante l0a vers l'extérieur de la lampe. Plus précisément, chacun des éléments 14 de surface réflé chissante est formé avec une structure correspondant à la condition de diffusivité de lumière, parmi les conditions fonctionnelles, et aux conditions d'aspect et d'impression de profondeur, relatives aux contraintes d'aspect fixées par la carrosserie. Lorsque la surface réfléchissante est construite par formation des éléments 14 sur la surface formée libre ment 20 comme décrit précédemment, la lampe efficacement réalisée afin qu'elle remplisse toutes les conditions fixées pour cette lampe de véhicule, c'est - dire toutes les conditions d'unifo=ité et de diffusivi de lumière, au point de vue fonctionnel, de réduction de profondeur, au point de vue de la forme, et de transparence, au point de vue de l'aspect.
On décrit maintenant les conditions particulières de construction de la lampe précitée pour véhicule, avec le procédé détermination de la surface réfléchissante du réflecteur Le procédé de détermination de forme de la surface réfléchissante l0a du réflecteur 1 utilisé dans la lampe pour véhicule selon l'invention comporte les étapes suivantes : une étape 100 de réglage de conditions, une étape 101 de réglage des lignes initiales de référence, une étape 102 de création de lignes de référence de surface, une étape 103 de création de la surface formée librement, et une étape 104 de détermination de la surface réfléchissante, comme l'indique l'ordinogramme de la figure 3.
Etape de réczlacie des conditions (étape 100) Diverses conditions nécessaires à la détermination de la forme sont d'abord établies pour la détermination de la forme de la surface réfléchissante ou du réflecteur utilisé dans la lampe pour véhicule.
Les conditions réglées sont par exemple la position de l'ampoule B de la source lumineuse et position de son point d'éclairement F (position de la source lumineuse), l'axe optique Ax qui est un axe passant la position de la source lumineuse et qui spécifie la direction dans laquelle lumière de la source lumineuse est réfléchie par la surf ace réfléchissante afin qu'elle soit émise par la lampe, D'autres conditions peuvent être établies ou désignées le cas échéant. Par exemple, une distribution de lumière émise par la source lumineuse peut aussi être réalisée comme condition sous forme d'une distribution correspondant à la structure du filament de l'ampoule B de la source lumineuse utilisée en pratique. En plus de ces conditions établies, les contraintes de forme imposées par la carrosserie et d'autres conditions sont fixées au préalable à la lampe ou au réflecteur.
Etalpe de réglage des lignes initiales de référence (étape 101) L'étape suivante est l'étape de réglage des lignes initiales de référence comme base pour les lignes de référence de surface 22, à 22, (voir figures 1 et 2) pour la création de la surface formée librement 20 qui est la forme de base de la surface réfléchissante 10a, c'est-à-dire comme condition initiale de détermination de la surface réflé chissante 10a.
La figure 4 est une coupe par un plan parallèle à l'axe optique Ax, contenant ligne initiale de référence 21 de la forme de la lampe obtenue dans l'étape 101 (différente de la forme de la lampe produite en réalité), permettant la description du procède de réglage des lignes initiales de référence 21.
Pour la création la surface formée librement 20, n lignes (n est égal à 2 ou plus) sont réglées comme lignes initiales de référence ayant des premières extrémités à une position prédéterminée sur l'axe optique Ax, passant par le centre (la position de la source lumineuse ou le point d'éclairement F) de l'ampoule B de la source lumineuse, et s'étendant ensuite radialement. Chacune des lignes initiales 21 de référence est creee sous forme d'une courbe dans un plan contenant l'axe optique Ax, comme représenté sur la f igure 4, et le nombre les directions radiales des lignes de référence utilisées pour la détermination de la forme sont déterminées d'après les contraintes de forme imposées à chaque lampe et d'après d'autres conditions de réali sation.
Par exemple, dans mode de réalisation illustré par les figures 1 et 2, n si bien que la surface formée librement 20 est créée avec au total huit lignes de réfé rence de surface : deux lignes de référence de surface 22, (ascendante) et 225 (descendante) s'étendant dans la direction de l'axe Y depuis l'axe optique deux lignes de référence de surface 223 (vers la droite et 22, (vers la gauche) s'étendant dans la direction de 1 axe X, et quatre lignes de référence de surface 22, (remontant obliquement vers la droite) , 22, (descendant obliquement vers la droite) , 22, (descendant obliquement vers la gauche et 22, (remontant obliquement vers la gauche) s'étendant diagonale. En conséquence, les huit lignes initiales référence sont réglees comme conditions initiales correspondantes. Cepen dant les extrémités autres que les premières extrémités qui sont du côté de l'axe optique Ax ne doivent pas toujours se trouver dans la région périphérique de la lampe, mais la longueur de chaque ligne initiale de référence peut être déterminée dans une plage préférée pour création de la surface formée librement 20.
Chaque ligne initiale de référence est déterminée par les positions du point initial du côté de l'axe optique Ax et du point final de l'autre côté, et d'après la condition selon laquelle les exitances lumineuses M des parties respectives sur la ligne initiale de référence 21 sont constantes sur chaque ligne de référence.
On utilisera plus particulièrement les dérivés d'acide naphtalène dicarboxylique à terminaisons glycols et alcools vendus sous la dénomination commerciale HALLBRITE TQ par la société C.P. HALL.
Les dérivés d'acide naphtalène mono- ou polycarboxylique conformes à l'invention sont généralement présents dans les compositions selon l'invention à une concentration totale comprise entre 0,1 et 20 % en poids environ, et de préférence entre 0,5 et 10 % en poids environ, par rapport au poids total de la composition.
Les monomères à fonction acide carboxylique sont choisis en particulier parmi l'acide acrylique, l'acide méthacrylique ainsi que leurs sels. Leurs esters sont choisis en général parmi ceux d'acide (meth)acrylique et alcools en C1-C30 Leurs amides sont choisis en général parmi ceux d'acide (meth)acrylique et d'amines en C1-C30 et plus particulièrement le méthacrylamide et/ou l'acrylamide Les monomères cationiques du type ester ou amide sont choisis de préférence parmi le (méth)acrylate d'ammonium, les dialkylaminoalkyl-(meth)acrylates, en particulier, le diméthylamino-éthylmethacrylate ; les dialkyl-aminoalkyl-(meth)acrylamides ainsi que leurs sels quaternaires ou acides ; les radicaux alkyle étant, de préférence, en C1-C4 Les polymères réticulés non-associatifs de l'invention comprennent au moins un agent de réticulation à polyinsaturation éthylénique qui est choisi, de préférence, parmi le divinylbenzène ; le tétraallyloxyéthane ; l'éther diallylique ; les éthers polyallyliques polyglycéryliques ; les éthers allyliques d'alcools de la série du sucre comme l'érythrytol, le pentaérythrytol, l'arabitol, le sorbitol ou le glucose ; le méthylène-bis-acrylamide, l'éthylèneglycol di-(méthyl)acrylate, le di-(meth)acrylamide, le cyano-méthylacrylate, le vinyloxyéthyl-(meth)acrylate ou leurs sels métalliques.
Parmi les homopolymères ou copolymères non-associatifs réticulés d'au moins un monomère à insaturation éthylénique cationique du type ester ou amide, on peut utiliser en particulier - (1) les homopolymères d'acrylate d'ammonium ou les copolymères d'acrylate d'ammonium et d'acrylamide tels que le produit vendu sous le nom BOZEPOL C