INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
* la figure 3 montre une vue en plan du dispositif selon l'invention. * la figure 4 montre une vue de coté du dispositif selon l'invention. * la figure 5 montre le porte outil associé au dispositif la figure 6 montre le dispositif installé dans une mallette. Exposé détaillé de modes de réalisation La figure 2 montre les moyens de positionnement et de maintien de l'objet, par rapport au dispositif. Le dispositif est monté sur une base (202) qui constitue le corps du dispositif. Cette base sur laquelle tous les organes du dispositif sont montés, peut être installée dans une mallette portable, afin de faciliter son transport, ou peut se présenter sous la forme d'un outil manuel , relié â une mallette par un cordon souple, ou plus simplement sous la forme d'un outil manuel autonome, comme une pince par exemple.
Sur la base (202), une platine amovible (205) est montée. Sur cette platine amovible (205), on trouve des appuis de référence (203) . La forme de la platine amovible, la forme et le nombre de ses appuis de référence, leur position, sont déterminés en fonction de la forme de l'objet (200) et de la position choisie (201) de la micro-cavité à réaliser dans l'objet (200) . On trouve également sur cette platine, les moyens de fixation (204) qui assurent la liaison mécanique entre la platine (205) et l'objet (200). Ainsi, un même dispositif selon l'invention, peut recevoir différentes platines amovibles (205) chacune étant adaptée à son propre objet (200).
La figure 3 montre une vue de dessus du dispositif selon l'invention. Au dessus de la base (202) et de la platine (205), on trouve un support (300) qui supporte un porte outils (301) . Le support (300) permet de positionner le porte outil (301) en position de travail, afin de procéder sur la surface de l'objet (200) aux opérations nécessaires à l'installation de la puce électronique , ou d'éloigner le porte outil de sa position de travail, afin de sélectionner l'outil pour la prochaine opération . Le support (300) est donc monté sur la base (202) afin de pouvoir se rapprocher ou s'éloigner de la surface de l'objet (200). Dans l'illustration donnée par la figure 4, ce mouvement de rapprochement et d'éloignement du support (300) par rapport à la surface de l'objet (200), s'effectue par simple pivotement autour d'un axe (402). La position de travail illustrée. sur la figure 4 du support du porte outil (301) est donnée par une butée (403), connues de l'homme de l'art. Tout autre moyen de rapprochement du support (300) par rapport à l'objet (200) peuvent également être employés, comme par exemple un déplacement linéaire vertical.
Il est bien entendu possible de choisir d'autres types d'outils qui puissent remplir les taches décrites ci-après, selon les procédés de l'invention. ---Montage de l'objet (200) sur sa platine (205) en contact avec les appuis de référence. --- Maintien de l'objet (200) en position pendant toute la durée des opérations.
--- Formation par poinçonnage ou usinage d'une micro-cavité dans la surface de l'objet (200), de dimension légèrement supérieure à celle de la puce électronique, c'est à dire comprise entre quelques millimètres carrés, et une portion de millimètre carré et de profondeur égale à quelques dixièmes de millimètre, à un millimètre. La forme de la micro-cavité est soit circulaire, soit carré ou rectangulaire, selon l'outil utilisé pour la former.
--- Dépose au fond de la cavité d'une goutte de colle de maintien temporaire de la puce électronique.
--- Mise en place au fond de la micro-cavité d'une puce électronique , à partir d'un magasin et d'un distributeur de puce électronique.
--- Contrôle de présence, de fonctionnement de la puce électronique par une tête de lecture comportant une bobine d'excitation reliée à une électronique de contrôle . Si le contrôle est satisfaisant, alors la suite des opérations sont engagées, si non, l'objet (200) est retiré, nettoyé puis réintroduit sur la platine (205) --- Polymérisation de la colle temporaire, par lumière ultraviolette, ou par chauffage, selon le type de colle temporaire choisie.
--- Distribution d'une goutte de résine d'enrobage --- Pénétration de la goutte de résine d'enrobage dans la cavité par agitation ultrasonique.
--- Polymérisation par ultraviolet ou par la chaleur de la résine d'enrobage.
--- Si besoin, contrôle final de fonctionnement de la puce électronique en utilisant le même outil (3014) que précédemment. La figure 6 montre le dispositif selon l'invention installé dans sa mallette de transport. On retrouve la platine (205) qui permet le positionnement de l'objet (200), montée sur la base (202) , le porte outil (301), dont le magasin distributeur de puce électronique est en position sur la figure. Dans sa version automatique, on trouve sous le support (300) un vérin (600) qui commande la levée ou la mise en position de travail, du support (300), ainsi que la butée (403). On trouve également tous les moyens de commande (601) des automatismes de montée et de descente du support (300), de la rotation du porte outil (301), de la commande de chaque outil, de l'électronique de contrôle, avec un écran plat (603). L'ensemble des câbles de liaison, de fibre optiques, de tubes souples pour la colle ou la résine, sont reliés à partir de la mallette, jusqu'aux outils, par des boucles (602) flexibles afin de permettre au porte outil, et au support de bouger selon les besoins.
Par ailleurs, l'acide nucléique peut également comporter, en particulier en amont du gène d'intérêt thérapeutique, une séquence signal dirigeant le produit thérapeutique synthétisé dans les voies de sécrétion de la cellule cible. Cette séquence
signal peut être la séquence signal naturelle du produit thérapeutique, mais il peut également s'agir de toute autre séquence signal fonctionnelle, ou d'une séquence signal artificielle. L'acide nucléique peut également comporter une séquence signal dirigeant le produit thérapeutique synthétisé vers un compartiment particulier de la cellule.
Les compositions selon l'invention peuvent être formulées en vue d'administrations par voie topique, cutanée, orale, rectale, vaginale, parentérale, intranasale, intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, intraoculaire, transdermique, intratrachéale, intrapéritonéale, etc... De préférence, les compositions de l'invention contiennent un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une formulation injectable, notamment pour une injection directe au niveau de l'organe désiré, pour une administration par voie topique (sur peau et/ou muqueuse) ou pour une administration par aérosolisation. Il peut s'agir en particulier de solutions stériles, isotoniques, ou de compositions sèches, notamment lyophilisées, qui, par addition selon le cas d'eau stérilisée ou de sérum physiologique, permettent la constitution de solutés injectables.
Les doses d'acides nucléiques utilisées pour l'injection ainsi que le nombre d'administrations peuvent être adaptées en fonction de différents paramètres, et notamment en fonction du mode d'administration utilisé, de la pathologie concernée, du gène à exprimer, ou encore de la durée du traitement recherchée. En ce qui concerne plus particulièrement le mode d'administration, il peut s'agir soit d'une injection directe dans les tissus, par exemple au niveau des tumeurs, ou dans les voies circulatoires, soit d'un traitement de cellules en culture suivi de leur réimplantation in vivo, par injection ou greffe. Les tissus concernés dans le cadre de la présente invention sont par exemple les muscles, la peau, le cerveau, les poumons, le foie, la rate, la moelle osseuse, le thymus, le coeur, la lymphe, le sang, les os, les cartilages, le pancréas, les reins, la vessie, l'estomac, les intestins, les testicules, les ovaires, le rectum, le système nerveux, les yeux, les glandes, les tissus conjonctifs, etc...
L'invention a également pour objet l'utilisation des dérivés d'oligobenzimidazole tels que définis ci-avant pour le transfert de d'acides nucléiques dans les cellules in vitro, in vivo ou ex vivo. Plus précisément, la présente invention a
pour objet l'utilisation des composés tels que définis ci-avant pour la préparation d'un médicament pour le transfert d'acide nucléique dans des cellules. L'acide nucléique contenu dans ledit médicament code un produit protéique ou nucléique, ou constitue ledit produit nucléique, apte à corriger des maladies in vivo ou ex vivo dans lesquelles ledit produit protéique ou nucléique intervient.
L'invention concerne en outre une méthode de transfert d'acides nucléiques dans les cellules comprenant une première étape au cours de laquelle l'acide nucléique est mis en contact avec au moins un dérivé d'oligobenzimidazole selon l'invention et éventuellement avec un ou des adjuvants et/ou un ou plusieurs véhicules physiologiquement compatible pour former un complexe, et une seconde étape consistant à mettre le complexe ainsi formé en contact des cellules.
La mise en contact des cellules avec le complexe peut être réalisée par incubation des cellules avec ledit complexe (pour des utilisations in vitro ou ex vivo), ou par injection ou aérosolisation du complexe dans un organisme (pour des utilisations in vivo). L'incubation est réalisée de préférence en présence de par exemple de 0,01à 1000 g d'acide nucléique pour 106 cellules. Pour une administration in vivo, des doses d'acide nucléique allant de 10-4 à 10 mg peuvent par exemple être utilisées.
Les dérivés d'oligobenzimidazole selon l'invention sont utilisables pour le transfert d'acides nucléiques dans des cellules primaires ou dans des lignées établies. Il peut s'agir de cellules fibroblastiques, musculaires, nerveuses (neurones, astrocytes, cellules gliales), hépatiques, hématopoiétiques (lymphocytes, CD34, dendritiques, etc...), épithéliales etc..., sous forme différenciée ou pluripotente (précurseurs).
Enfin, les utilisations des compositions selon l'invention peuvent concerner aussi bien l'homme que tout animal tel que les ovins, les bovins, les animaux domestiques (chien, chat etc...), les chevaux, les poissons etc...
Outre les dispositions qui précèdent, la présente invention comprend également d'autres caractéristiques et avantages qui ressortiront des exemples et figures
qui suivent, et qui doivent être considérés comme illustrant l'invention sans en limiter la portée. Notamment, la demanderesse propose à titre non-limitatif divers protocoles opératoires ainsi que des intermédiaires réactionnels susceptibles d'être mis en oeuvre pour préparer les agents de transfert de formule générale (I). Bien entendu, il est à la portée de l'homme du métier de s'inspirer de ces protocoles ou produits intermédiaires pour mettre au point des procédés analogues en vue de conduire à ces mêmes composés.
FIGURES Fiure 1 : Structure des dérivés d'oligobenzimidazole (1) et (2) dont la préparation est exposée dans les exemples 1 et 2.
Figure 2 : Signal d'émission de fluorescence à 450 nm de complexes ADN/dérivé (1) (courbe pleine) et du dérivé (1) seul (courbe en pointillés) en fonction de quantités croissantes de dérivé (1) en nmol/ g d'ADN. La concentration en ADN est de 50 g/ml.
Figure 3 : Signal d'émission de fluorescence à 450 nm de complexes ADN/dérivé (2) (courbe pleine) et du dérivé (2) seul (courbe en pointillés) en fonction de quantités croissantes de dérivé (2) en nmol/ g d'ADN. La concentration en ADN est de 50 g/ml.
Figure 4 : Gel d'agarose d'un plasmide d'ADN complexé avec les dérivés (1) et (2), à différentes concentrations de dérivé exprimées en nmol de produit par g d'ADN.
Les résultats obtenus sont mentionnés dans le tableau suivant :
Sérum SLA 0% 0,1% 0,1% 0,1% 0,1% Riluzole (M) 0 0 3.15-5 0 3.15-5 Gabapentine 10-5 Gabapentine (M) 0 0 0 10-5 10-5 Nombre de motoneurones (par expérience et par 13 3 7 6 12 diamètre de puits) 26 4 9 5 19 19 0 4 5 18 36 4 9 9 17 33 2 11 2 18 33 4 7 9 14 25 5 6 1 23 32 2 7 3 21 Moyenne 27,1 3,0 7,5 5,0 17,8 (SEM) 2,8 ~0,6 0,8* 1,1* 1,3** * p=0,0003 ** p<00001 Le BDNF (lng/ml) est ajouté dans toutes les expériences comme mentionné dans la technique générale.
Ces résultats démontrent que : a - le sérum de malade atteint de SLA induit la mort de 89% des motoneurones même en présence de support neurotrophique, laissant donc 11 % de neurones survivants. b - lorsque le milieu est traité avec du riluzole seul, la survie des motoneurones est de 19% c - lorsque le milieu est traité avec la gabapentine seule, la survie des motoneurones est de 8% d - lorsque le milieu est traité avec l'association de riluzole et de gabapentine, la survie des motoneurones est de 61%, mettant ainsi en évidence une synergie entre les deux molècules.
Le riluzole peut être préparé selon la méthode décrite dans le brevet US4370338.
La gabapentine peut être préparée selon la méthode décrite dans les brevets FR2294697 et US4024175.
Comme sels pharmaceutiquement acceptables du riluzole et de la gabapentine, peuvent être notamment cités les sels d'addition avec les acides minéraux tels que chlorhydrate, sulfate, nitrate, phosphate ou organiques tels que acétate, propionate, succinate, oxalate, benzoate, fumarate, maléate, méthançsulfonate, iséthionate, théophilline-acétate, salicylate, phénolphtalinate, méthylène-bis-B-oxynaphtoate ou des dérivés de substitution de ces dérivés.
L'association peut être employée par voie orale, parentérale ou rectale soit simultanément soit séparément soit de manière étalée dans le temps.
La présente invention concerne également les compositions pharmaceutiques comprenant l'association de riluzole et de gabapentine ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables à l'état pur ou sous forme d'une association avec un ou plusieurs diluants et/ou adjuvants compatibles et pharmaceutiquement acceptables
et/ou éventuellement en association avec un autre produit pharmaceutiquement compatible et physiologiquement actif.
Comme compositions solides pour administration orale, peuvent être utilisés des comprimés, des pilules, des poudres (capsules de gélatine, cachets) ou des granulés. Dans ces compositions, les principes actifs sont mélangés à un ou plusieurs diluants inertes, tels que amidon, cellulose, saccharose, lactose ou silice, sous courant d'argon.
Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un ou plusieurs lubrifiants tels que le stéarate de magnésium ou le talc, un colorant, un enrobage (dragées) ou un vernis.
Comme compositions liquides pour administration orale, on peut utiliser des solutions, des suspensions, des émulsions, des sirops et des élixirs pharmaceutiquement acceptables contenant des diluants inertes tels que l'eau, l'éthanol, le glycérol, les huiles végétales ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édulcorants, épaississants, aromatisants ou stabilisants.
rectales qui contiennent, outre le produit actif, des excipients tels que le beurre de cacao. des glycérides semisynthétiques ou des polyéthylèneglycols.
La présente invention conceme également l'utilisation de t'association de riluzole et de gabapentine ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables pour la préparation d'un médicament utile pour la prévention et/ou le traitement des maladies motoneuronales et, notamment, de la sclérose latérale amyotrophique, de l'amyotrophie spinale progressive, de l'amyotrophic spinale infantile ou de la sclérose latérale primaire.
La présente invention concerne également la méthode de prévention et/ou de traitement des patients atteints de maladies motoneuronales et, notamment, de la sclérose latérale amyotrophique, de l'amyotrophie spinale progressive, de l'amyotrophie spinale infantile ou de la sclérose latérale primaire qui consiste à administrer au patient une association de riluzole et de gabapentine ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables soit simultanément soit séparément soit de manière étalec dans le temps.
De manière connue, la copolymérisation se déroule à une température comprise entre 20 et 120 C, à pression atmosphérique et en présence d'un initiateur aminé, e.g. : NH3.
D'autres paramètres expérimentaux, comme la concentration en NCA et/ou polymère dans le solvant polaire non aromatique (de préférence le NMP), et/ou la concentration ou la nature du cosolvant protique, lors de la synthèse, seront ajustés selon les effets désirés et connus de l'homme de l'art.
L'hydrolyse acide (étape 2) est réalisée à l'aide d'eau et d'au moins un acide minéral, tel l'aide phosphorique ou chlorhydrique - ce dernier étant préféré - et/ou un acide organique, tel l'acide TriFluoroAcétique (TFA), l'acide acétique, l'acide dichloroacétique, ou les acides organosulfoniques.
Les proportions eau/acide-exprimées en parties en poids- dans une phase aqueuse acide d'hydrolyse sont, avantageusement : .de 60/1 à 2/1, # de préférence 40/1 à 2/1, # et, plus préférentiellement encore, 20/1 à 2/1.
Les proportions phase aqueuse acide d'hydrolyselNMP - exprimées en parties en poids - sont, avantageusement : .de 5/100 à 200/100 # de préférence, 10/100 à 100/100 # et, plus préférentiellement encore, de 20/100 à 80/100.
D'autres paramètres, comme la concentration en polymère, la température du mélange réactionnel, le mode d'ajout de la phase aqueuse acide d'hydrolyse, l'emploi de pression réduite, la durée de la réaction, etc... ; sont ajustés selon les effets désirés et bien connus de l'homme de l'art.
La neutralisation (étape 3) s'opère, en pratique, par exemple à l'aide de soude.
On élimine ensuite le sel formé à l'issue de la neutralisation, ainsi que le solvant, par tout traitement de séparation physique approprié, par exemple par diafiltration (dialyse) (étape 4), filtration, modification pH, chromatographie...
Cela conduit à une suspension aqueuse de particules structurées qui peut être concentrée, par exemple par distillation ou tout autre moyen physique convenable : ultrafiltration, centrifugation.
Pour séparer, à l'étape 6, les particules de leur milieu liquide de suspension, on élimine, éventuellement, la phase aqueuse, par exemple par séchage (e. g. à l'étuve), par lyophilisation ou tout autre moyen physique convenable : ultrafiltration, centrifugation. On récupère, à l'issue de cette étape 6, un solide pulvérulent, de couleur blanche.
Selon une variante, l'étape de concentration peut être réalisée par un traitement chimique, tel qu'un abaissement du pH, qui transforme en acide la partie hydrophile des monomères glutamates, ce qui les rend insolubles dans. l'eau. Ces intermédiaires PAA acides peuvent être filtrés, lavés et séchés. Lesdits intermédiaires acides peuvent être neutralisés avec une base chimique dans une étape ultérieure afin d'obtenir une suspension de particules.
Il est à noter que la mise en #uvre des étapes 1, 2, 3, 4 et éventuellement 5 du procédé ci-dessus correspondant à une préparation d'une suspension colloïdale de particules submicroniques et à fort taux de chargement avec les PA.
Lors de cette préparation de suspension colloïdale, les PAA amphiphiles poly(AAO)(AAI) de l'étape 2 sont placés dans un milieu aqueux dans lequel au moins une partie des AAI est soluble et au moins une partie des AAO est insoluble. Les PAA existent sous forme de nanoparticules dans ce milieu aqueux.
Une alternative pour préparer la suspension de PV selon l'invention consiste à mettre en présence le solide pulvérulent, tel que décrit ci-dessus et en tant que produit et par son procédé d'obtention, avec un milieu aqueux, non solvant des AAO.
Pour effectuer l'association d'un ou plusieurs PA aux particules, il est possible de mettre en #uvre plusieurs méthodes conformément à l'invention. Des exemples, non limitatifs, de ces méthodes sont énumérés ci-après.
Selon une première méthode, on effectue l'association de PA aux particules par mise en présence d'une phase liquide (aqueuse ou non) contenant le PA avec la suspension colloïdale de particules.
MMPP (ppm)- - - 1000 1500 1500 1500 Cumène sulfonate de sodium (ppm) 1500- 1500- - 1500Ac. Malique (ppm)- 3000 3000- - - 3000 Chute du titre viral (ex- 0,33 2,6 3,7 4,22 4,22 primé en Log) 0,33 2,6 3,7 4,22 4,22 Tableau # @~~~~~~ MMPP (ppm) 1000 1000 1000 1000 1000 1000 Cumène sulfonate de sodium (ppm) 500 1000- - 500 1000 Acide malique- - 1000 2000 1000 2000 Chute du titre viral (exprimé en Log) 3,55 3,45 3,17 3,67 3,63 3,63
Les résultats comparatifs à 1 000 et 1 500 ppm de monoperoxyphtalate de magnésium révèlent une potentialisation de l'activité virucide intrinsèque de cette molécule ; en effet l'association de celle-ci avec le cumène sulfonate de sodium et/ou l'acide malique, permet d'obtenir la réduction du titre viral supérieure à 3 Log exigée par les normes pour obtenir une homologation pour une concentration de 1 000 ppm en monoperoxyphtalate de magnésium, rejoignant ainsi les doses efficaces en bactéricidie.
Exemple 2 : Les essais d'orientation selon l'exemple 1 ont été complétés par des essais réalisés sur l'ensemble des souches bactériennes et virales exigées dans le cadre d'une homologation et sur des .mélanges renfermant des excipients complémentaires (agents de stabilisation et auxiliaires de fabrication).
Les souches bactériennes devant être prises en considération dans le cadre d'une homologation sont les suivantes . Pseudomonas aeruginosa (CIP A 22), Escherichia coli (CIP 54 127), Staphylococcus aureus (CIP 53 154) et Enteroccocus hirae (CIP 58 55).
Les virus à prendre en considération à cet effet sont, quant à eux, le virus de la maladie de Talfan et le virus de l'hépatite canine contagieuse (H.C.C.).
Selon cet exemple, on a préparé deux mélanges ayant la composition suivante en proportion pondérale : Mélange A : - monoperoxyphtalate de magnésium 20 % - acide malique 20 % - cumène sulfonate de sodium 10 % - sulfate de sodium anhydre 20 % Mélange B : - monoperoxyphtalate de magnésium 30 % - cumène sulfonate de sodium 7,50 % - dodécyl benzènesulfonate de sodium 7,50 % - acide borique 15 % - bisulfate de sodium 15 % - sulfate de sodium anhydre 25 %.
Il est à noter que la composition du mélange B correspond à celle de la poudre II testée lors de l'étude de la stabilité des mélanges conformes à l'invention.
Les concentrations à partir desquelles le monoperoxyphtalate de magnésium présent au sein du mélange A peut être considéré comme bactéricide conformément à la norme NF T 72 171, sont mentionnées dans le tableau 11 ci-dessous : ~~~~ Tableau 11 ~~~ ~~~~~~~~~~~~
Souches bactériennes Eau dure 30 f Matières organiques Staphylococcus 0,1 % > 0,75 % aureus (200 ppm) (> 1500 ppm) Pseudomonas 0,05 % 0,5 % Aeruginosa (100 ppm) (1000 ppm) Escherichia co-li 0,025 % 0,5 % Escherichia coli (50 ppm) (1000 ppm) Enterococcus 0,025 % 0,5 % Hirae (50 ppm) (1000 ppm)
Les concentrations à partir desquelles le monoperoxyphtalate de magnésium présent au sein du mélange A peut être considéré comme virucide, conformément à la norme NF T 72 181, sont mentionnées dans le tableau 12 ci-dessous : Tableau 12
VIRUS Eau dure Matières organiques TALFAN 0,4 % 0,4 % TALFAN (800 ppm) (800 ppm) 0,4 % 0,75 % H.C.C.
(800 ppm) (1500 ppm)
Les concentrations à partir desquelles le monoperoxyphtalate de magnésium présent au sein du mélange B peut être considéré comme bactéricide conformément à la norme NF T 72 171, sont mentionnées dans le tableau 13 ci-dessous :
Eau dure 30 f Matières organiques Staphylococcus 0,05 % 0,75 % aureus (150 ppm) (2250 ppm) Pseudomonas aerugi- 0,05 % 0,5 % nosa (150 ppm) (1500 ppm) 0,025 % 0,5 % Escherichia Coli (75 ppm) (1500 ppm) 0,1 % 0,25 % Enterococcus hirae (300 ppm) ppm) (300 ppm) (750 ppm)
Les concentrations à partir desquelles le monoperoxyphtalate de magnésium présent au sein du mélange B peut être considéré comme virucide conformément à la norme NF T 72 181, sont mentionnées dans le tableau 14 ci-dessous : Tableau 14