INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Ainsi, la protéine chimérique n'altère ni la fonctionnalité de la protéine d'enveloppe sauvage ni la fixation sur le récepteur viral. Elle n'altère pas non plus les événements qui suivent la fixation de la particule virale sur le récepteur au regard de l'efficacité de la transduction. Par opposition, les vecteurs rétroviraux présentant des protéines d'enveloppe chimérique de type écotrope ou de type aviaire montrent au moins une diminution de deux logarythmes du titre des virus même pour des virus présentant une protéine d'enveloppe de type sauvage.
Pour caractériser en outre les propriétés d'infection des particules virales à enveloppe chimérique, on a effectué la transduction de deux types différents de cellules exprimant le récepteur c-met de l'HGF. Dans une première série d'expériences, on réalise la transduction de cellules Madin-Darby de reins de chiens (MDCK) portant les récepteurs de rétrovirus amphotropes avec des virus de type sauvage ou des virus présentant une enveloppe chimérique. Les infections réalisées à partir de surnageant de cultures contenant ces particules virales permettent d'obtenir une augmentation significative de l'efficacité de la transduction. Pour confirmer que cette augmentation d'efficacité de transduction n'est pas liée à la variabilité du titre de virus présent dans les surnageants, l'efficacité relative de l'infection est estimée en normalisant le nombre de colonies par boîte avec le titre de virus déterminé pour les fibroblastes NIH3T3). Les rétrovirus recombinants présentant les protéines HGF-TM ou HGF-TMc ont un pouvoir infectieux deux fois plus grand que les virus de type sauvage.
Plante transgénique Il s'agit d'une plante dans le génome de laquelle est incorporé d'une manière stable un ADN recombinant.
ADN recombinant Toute molécule formée par réunion de segments d'ADN provenant de différentes sources, et produite par utilisation de la technologie de recombinaison de l'ADN.
Technologie de recombinaison de l'ADN (ou technologie de l'ADN recombinant) : Il s'agit de la technologie qui produit l'ADN recombinant in vitro et transfère l'ADN recombinant dans des cellules où il peut être exprimé ou multiplié (voir Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Ed. Juo, CRC Press, Boca Raton (1996)), par exemple le transfert de l'ADN dans un ou plusieurs protoplastes ou cellules sous différentes formes, et notamment par exemple (1) l'ADN nu sous des formes circulaires, linéaires ou supertorsadées, (2) l'ADN contenu dans les nucléosomes ou les chromosomes ou les noyaux ou leurs parties, (3) l'ADN complexé ou associé à d'autres molécules, (4) l'ADN enfermé dans les liposomes, les sphéroplastes, les cellules ou les protoplastes, ou (5) l'ADN transféré à partir d'organismes autres que l'organisme hôte (par exemple Agrobacterium tumefaciens). Ces procédés, ainsi que d'autres procédés pour introduire l'ADN recombinant dans des cellules, sont connus dans la technique et peuvent être utilisés pour produire les cellules transgéniques ou les plantes transgéniques de la présente invention.
La technologie de l'ADN recombinant comprend aussi les procédés de recombinaison homologues décrits dans Treco et al., WO 94/12650, et Treco et al., WO 95/31560, qui peuvent appliquer à une activité croissante de peroxydase dans une monocotylédone. Il devrait en résulter une augmentation du nombre de copies des séquences codant la peroxydase à l'intérieur de la plante.
L'insertion initiale de l'ADN recombinant dans le génome de la plante RO n'est pas définie comme étant réalisée par les méthodes traditionnelles de sélection végétale, mais plutôt par des méthodes techniques décrites dans l'invention. Après l'insertion initiale, les descendants transgéniques peuvent se multiplier par utilisation des techniques de sélection essentiellement traditionnelles.
Gène chimère Il s'agit d'une molécule d'ADN contenant au moins deux parties hétérologues, par exemple des parties qui dérivent de séquences d'ADN préexistantes qui ne sont pas associées dans leurs états préexistants, ces séquences ayant été de préférence générées par utilisation de la technologie de l'ADN recombinant.
Cassette d'expression Il s'agit d'une molécule d'ADN comprenant un promoteur et un terminateur entre lesquels peut être insérée une séquence codante.
Séquence codante Il s'agit d'une molécule d'ADN qui, quand elle est transcrite et traduite, conduit à la formation d'un polypeptide ou d'une protéine.
Gène: Région chromosomique discrète, comprenant une séquence d'ADN régulatrice responsable de la régulation de l'expression, c'est-à-dire de la transcription et de la transduction, et une séquence codante qui est transcrite et traduite pour donner un polypeptide ou une protéine distincts.
La présente invention décrit l'identification, l'isolement et la caractérisation du gène NIAI, qui code une protéine mise en jeu dans la cascade de transduction du signal sensible aux inducteurs biologiques et chimiques, qui conduit à la résistance systémique acquise dans les végétaux.
En conséquence, la présente invention décrit une molécule d'ADN isolée (gène NIT1), qui code une protéine NIM1 mise en jeu dans la cascade de transduction du signal conduisant à la résistance systémique acquise dans les végétaux.
Dans le cadre de la présente invention, on décrit une molécule d'ADN qui code la protéine NIM1 qui s'hybride dans les conditions suivantes pour donner le BAC-04, dépôt ATCC NO 97543 : hybridation dans BSA à 1 % ; NaPO4 520 mM, pH 7,2 ; laurylsulfate de sodium à 7 % EDTA 1 mM ; chlorure de sodium 250 mM à 550C pendant 18 à 24 heures, et lavage dans 6XSSC pendant 15 minutes (X3), 3XSSC pendant 15 minutes (X1) à 550C. Dans une forme de réalisation particulièrement préférée, le gène NIM1 se trouve à l'intérieur du cosmide D7, dépôt ATCC NO 97736.
Le gène NIMi décrit dans l'invention peut être isolé d'une dicotylédone telle qu'Arabidopsis, le tabac, le concombre ou la tomate. Ou bien encore, le gène NIM1 peut être isolé d'une monocotylédone telle que le maïs, le blé ou 1 'orge.
On décrit en outre une protéine NIM1 codée, comprenant la séquences d'acides aminés SEQ ID NO:3. L'invention décrit en outre la séquence codant le gène NIM1, qui s 'hybride dans les conditions suivantes à la séquence codante SEQ ID NO:2 Hybridation dans du BSA à 1 % ; NaPO4 520 mM, pH 7,2 ; laurylsulfate de sodium à 7 % ; EDTA 1 mM ; chlorure de sodium 250 mM à 550C pendant 18 à 24 heures, et lavage dans 6XSSC pendant 15 minutes (X3), 3XSSC pendant 15 minutes (X1) à 550C. Dans une forme de réalisation, particulièrement préférée, la séquence codant le gène NIMi comprend la séquence codante SEQ ID NO:2.
La présente invention décrit aussi un gène chimère comprenant un promoteur actif dans les végétaux lié par liaison opérationnelle à une séquence codante du gène NIM1, un vecteur recombinant comprenant un tel gène chimère, où le vecteur est capable de subir une transformation stable dans un hôte, ainsi qu'un hôte transformé dans des conditions stables à l'aide d'un tel vecteur. De préférence, l'hôte est un végétal tel que l'une des cultures suivantes, importantes d'un point de vue agronomique ; riz, blé, orge, seigle, maïs, pomme de terre, carotte, patate douce, betterave à sucre, haricot, pois, chicorée, laitue, chou, chou-fleur, broccoli, navet, radis, épinard, asperge, oignon, ail, aubergine, poivre, céleri, carotte, courge, potiron, courgette, concombre, pomme, poire, coing, melon, prune, cerise, pêche, nectarine, abricot, fraise, raisin, framboise, mûre, ananas, avocat, papaye, mangue, banane, soja, tabac, tomate, sorgho et canne à sucre.
Dans une forme de réalisation particulièrement préférée, la protéine NIM1 est exprimée dans un végétal transformé, en des niveaux plus importants que dans une plante de type sauvage.
La solution initiale contient en outre au moins un composé B tel que défini précédemment. A titre d'exemples non limitatifs de composés B entrant dans le cadre de la présente invention, on peut citer notamment: - les acides hydroxypolycarboxyliques, et plus particulièrement les acides hydroxydi- ou hydroxytricarboxyliques tels que l'acide citrique, I'acide maléique et l'acide tartrique.
- les acides (polyhydroxy)monocarboxyliques, comme par exemple l'acide glucoheptonique et l'acide gluconique, - les acides poly(hydroxycarboxyliques), comme par exemple l'acide tartrique, - les monoacides dicarboxyliques et leurs amides correspondantes, comme par exemple l'acide aspartique, I'asparagine et l'acide glutamique, - les aminoacides monocarboxyliques, hydroxylés ou non, comme par exemple la lysine, la sérine et la thréonine, - l'aminotriphosphonate de méthylène, l'éthylènediaminotétraphosphonate de méthylène, le triéthylènetétraaminohexaphosphonate de méthylène, le tétraéthylènepentaaminoheptaphosphonate de méthylène, le pentaéthylènehexaaminooctaphosphonate de méthylène, - le dipposphonate de méthylène; de 1,1' éthylène; de 1,2 éthylène; de 1,1' propylène; de 1,3 propylène; de 1,6 hexaméthylène; le 2,4 dihydroxypentaméthylène - 2,4 diphosphonate; le 2,5 dihydroxyhexaméthylène - 2,5 disphosphonate; le 2,3 dihydroxybutylène - 2,3 diphosphonate ; le 1 hydroxybenzyle - 1,1' diphosphonate; le 1 aminoéthylène 1-1' diphosphonate; I'hydroxyméthylène diphosphonate ; le 1 hydroxyéthylène 1,1' diphosphonate; le 1 hydroxypropylène 1-1' diphosphonate; le 1 hydroxybutylène 1-1' diphosphonate; le 1 hydroxyhexaméthylène -1,1' diphosphonate.
Comme déjà indiqué, il est également possible d'utiliser à titre de composé B tous les sels des acides précités. En particulier, ces sels sont soit des sels alcalins, et plus particulièrement des sels de sodium. soit des sels d'ammonium.
Ces composés peuvent être choisis aussi parmi l'acide sulfurique et les sulfates d'ammonium, de potassium.
De préférence, les composés B tels que définis ci-dessus sont des composés hydrocarbonés de type aliphatique. Dans ce cas, la longueur de la chaine principale hydrocarbonée n'excède pas de préférence 15 atomes de carbone, et plus ,préférentiellement 10 atomes de carbone.
La quantité de composé B n'est pas critique. D'une manière générale, la concentration molaire du composé B par rapport à celle du composé du titane A est comprise entre 0,2 et 10 % et de préférence entre 1 et 5 %.
Enfin la solution de départ comprend des germes de dioxyde de titane utilisés d'une manière spécifique.
Ainsi, les germes de dioxyde de titane utilisés dans la présente invention doivent présenter tout d'abord une taille inférieure à 8 nm, mesurée par diffraction X. De préférence, on utilise des germes de dioxyde de titane présentant une taille comprise entre 3 et 5 nm.
Ensuite, le rapport pondéral du dioxyde de titane présent dans les germes sur le titane présent dans le milieu d'hydrolyse avant introduction des germes - c'est-à-dire apporté par le composé du titane A - et exprimé en TiO2 est compris entre 0,01 et 3 %.
Ce rapport peut être préférentiellement compris entre 0,05 et 1,5 %. La réunion de ces deux conditions sur les germes (taille et rapport pondéral) associée au procédé tel que décrit précédemment permet de contrôler précisément la taille finale des particules de dioxyde de titane en associant à un taux de germes une taille de particule. On peut ainsi obtenir des particules dont la taille varie entre 5 et 100 nm.
On utilise des germes de dioxyde de titane sous forme anatase de manière à induire la précipitation du dioxyde de titane sous forme anatase. Généralement, du fait de leur petite taille, ces germes se présentent plutôt sous la forme d'anatase mal cristallisé. Les germes se présentent habituellement sous la forme d'une suspension aqueuse constituée de dioxyde de titane. Ils peuvent être généralement obtenus de manière connue par un procédé de neutralisation d'un sel de titane par une base.
L'étape suivante consiste à réaliser l'hydrolyse de cette solution de départ par tout moyen connu de l'homme du métier et en général par chauffage. Dans ce dernier cas, I'hydrolyse peut de préférence être effectuée à une température supérieure ou égale à 70"C. On peut aussi travailler dans un premier temps à une température inférieure à la température d'ébullition du milieu puis maintenir le milieu d'hydrolyse en palier à la température d'ébullition.
Une fois l'hydrolyse réalisée, les particules de dioxyde de titane obtenues sont récupérées par séparation du solide précipité des eaux mères avant d'être redispersées dans un milieu liquide aqueux de manière à obtenir une dispersion de dioxyde de titane.
Ce milieu liquide peut être acide ou basique.
II a été observé que les particules de dioxyde de titane issus d'un procédé de préparation dit en solution ou par voie humide, et notamment issues du procédé décrit ci-dessus avec hydrolyse à température d'environ 100 "C, présentent, de par leur porosité, un indice de réfraction plus faible que les particules de dioxyde de titane issus d'autres procédés. Cette propriété présente un grand intérêt lorsque les particules sont utilisées pour préparer un revêtement sur un substrat en verre, car le revêtement obtenu présente également un faible indice de réfraction. Cet avantage optique est important car une couche de fort indice de dioxyde de titane conduit à augmenter la réflexion lumineuse du verre porteur, donc à diminuer sa transmission lumineuse. Or, pour certaines applications, notamment dans le domaine des vitrages équipant des véhicules, il est indispensable d'avoir des niveaux de transmission lumineuse élevés (pour un pare-brise, une transmission lumineuse minimale de 75 % est nécessaire).
De préférence, les particules de la dispersion présentent une surface spécifique BET d'au moins 70 m2/g.
Le dispositif comporte une source de photons gamma d'activation indiquée avec la référence 10. La source de photons gamma comporte un accélérateur d'électrons 12 devant lequel est disposé d'une cible dite de "Bremsstrahlung" 14. La cible est généralement constituée d'un métal lourd. I1 s'agit par exemple d'une plaque de tantale d'une épaisseur de 1,95 mm ou une plaque de tungstène d'une épaisseur de 1,7 mm.
La cible convertit l'énergie des électrons de 15 à 16 MeV par exemple, provenant de l'accélérateur 12 en des photons gamma.
Les photons gamma, représentés par des flèches, sont dirigés vers un échantillon 16 ou un colis de matériau radioactif à analyser. L'échantillon contient des actinides qui, sous l'effet des photons, subissent une fission, et émettent des neutrons.
La référence 18 indique un bloc détecteur de neutrons placé au voisinage de l'échantillon 16 pour détecter les neutrons retardés émis par l'échantillon.
Le bloc détecteur 18 comporte plusieurs détecteurs, remplis d'hélium 3 et entourés par un modérateur en polyéthylène, par exemple. L'ensemble des détecteurs et du modérateur est recouvert d'une couche de cadmium ou d'un autre absorbant de neutrons thermiques. Cette couche sert essentiellement à diminuer les bruits de fond de mesure dus à des neutrons générés, par exemple, dans les murs avoisinants du local d'installation du dispositif (non représenté).
Les détecteurs du bloc 18 sont polarisés à partir d'une source de haute tension 20.
Le bloc détecteur 18 est relié à une chaine d'acquisition 22 comprenant pour l'essentiel un circuit convertisseur courant-tension 24, un circuit de mise en forme 26 et un discriminateur 28. Ainsi, les impulsions émanant du bloc détecteur sont amplifiées et mises en forme avant d'être dirigés vers une carte d'acquisition et de comptage 30 reliée à un analyseur 32.
La carte de comptage 30 et l'analyseur 32 font partie, par exemple, d'un micro-ordinateur 34.
Une flèche 36 indique une liaison entre l'accélérateur d'électrons 12 et la carte de comptage 30 afin de transmettre un signal de départ indiquant le début de l'irradiation de l'échantillon 18.
La figure 2 montre en coupe horizontale une installation pour la différenciation de l'uranium et du plutonium dans un colis de déchets radioactifs.
Le colis de déchets 116 est disposé dans une enceinte 150. Le colis est plus précisément placé au centre d'une zone de réception 152 entourée, par exemple, par sept blocs détecteurs de neutrons 118 uniformément répartis autour de cette zone.
L'enceinte 150 présente une ouverture à travers laquelle le colis peut être irradié par une source de photons gamma 110. La source comprend un accélérateur d'électrons 112 et une cible de Bremsstrahlung 114 du type déjà décrit en référence à la figure 1.
La chaîne d'acquisition et les moyens de traitement des signaux, de même que les sources d'alimentation des blocs détecteurs 118 ne sont pas représentés sur la figure 2 pour des raisons de simplification.
On peut noter que l'enceinte 150 a pour fonction de protéger le colis et les détecteurs de l'influence de neutrons générés à l'extérieur de la zone de réception 152, par exemple dans les murs du local d'installation et d'éventuels objets avoisinants.
L'enceinte 150 comporte un matériau modérateur.
Selon une réalisation particulière, tout ou partie des détecteurs de neutrons peuvent être inclus dans les parois de l'enceinte 150.
Dans un ballon tricol de 4 dm3litres, on met en suspension 519 g de silice "DNB-L-Phe-C11-C3 (silice)-O-Si(CH3)2 (CH2) 7CH3" dans 3000 cm3 de N,Ndiméthylformamide séché sur tamis moléculaire 4 . On ajoute 450 cm3 de triméthylsilylimidazole en 15 minutes, puis on agite pendant une nuit. La silice est séparée par filtration et est lavée successivement par 2 fois 1500 cm3 de tétrahydrofurane, 2 fois 1500 cm3 de méthanol, 2 fois 1500 cm3 d'acétone et 2 fois 1500 cm3 de dichlorométhane. Après séchage à une température de 600C sous pression réduite (2,7 kPa), on obtient 519 g de silice désignée par l'appellation "DONS GPhe-C 11-C3 (silice)-[O-Si(CH3)2(CH2)7CH3]-[O-Si(CH3)3]" sous forme d'une poudre jaune pâle dont la structure est confirmée par son spectre infra-rouge, et dont l'analyse élémentaire (trouvée) est: C % = 15,3, H % = 1,8, N % = 2,6 .
L'anhydride de l'acide N-tert.butoxycarbonyl-1 1-aminoundécanoique peut être préparé de la manière suivante: On dissout 30,1 g d'acide N-tert.butoxycarbonyl- il -aminoundécanoique dans 480 cm3 d'acétate d'éthyle. On refroidit cette solution à 5"C puis, en la maintenant à cette température, on ajoute en 10 minutes une solution de 10,63 g de 1,3-dicyclohexylcarbodiimide dans 120 cm3 d'acétate d'éthyle. On agite le mélange réactionnel pendant 1 heure à 5"C puis pendant 16 heures à une température voisine de 20"C. On sépare le précipité formé par filtration et le lave par 30 cm3 d'acétate d'éthyle. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 300C. Le solide obtenu est séché à 20"C sous pression réduite (2,7 kPa). On obtient ainsi, avec un rendement voisin de 100 to, 31 g d'anhydride de l'acide N-tert.butoxycarbonyl-11- am inoundécanoique.
L'acide N-tert. butoxycarbonyl- il -amino-undécanoique peut être préparé de selon J. Org. Chem., 41, 1350 (1976).
EXEMPLE 4 Isolement de l'énantiomere levogyre de l'acide 4.9 ethano-2-[2-(2- méthoxvDhénvl)woDènovll-9- (4-méthvlDhénvl)-2.3 .3a .4.9.9a-hexahydro 1H-benzo Iflisoindole-3a-carboxyllque- (3aRS .4SR.9SR.9aRS) 500 mg d'acide 4,9 -éthano-2- [2-(2-méthoxyphényl)propènoyl]-9- (4méthylphényl)-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo[f]isoindole-3a-carboxylique- (3aRS,4SR,9SR,9aRS) sont dédoublés sur une colonne de silice chirale, porteuse de greffons (3,5-dinitrobenzoyl) S-phénylalanine en éluant par un mélange dichlorométhane-isopropanol-n heptane (85-10-5 en volumes). En recueillant la première fraction éluée (temps de rétention 47 minutes), on obtient après concentration sous pression réduite 240 mg de l'énantiomère lévogyre dont les caractéristiques sont les suivantes: - point de fusion = 225 C - spectre de masse Etape B En opérant comme à l'exemple 2, mais à partir de 819 mg (1,65 mmol) de 4,9-éthano-2-[(2-méthoxyphényl)acétyl]-9- (4-méthylphényl) -2,3 ,3a,4,9,9a- hexahydro- 1 H-benzo[f]isoindole-3a-carboxylate de méthyle- (3aRS,4SR,9SR,9aRS), au reflux pendant 18 heures dans 17 cm3 d'une solution aqueuse normale d'hydroxyde de sodium et 17 cm3 de méthanol, on obtient, après recristallisation dans 25 cm3 d'oxyde de diisopropyle, 720 mg (74 %) d'acide 4,9-éthano-2-[(2méthoxyphényl)acétyl]-9-(4-méthylphényl)-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo [f]isoindole-3a-carboxylique-(3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme d'une poudre blanche dont les caractéristiques sont les suivantes: - point de fusion = 182" - spectre de R.M.N. 1H (400 MHz, DMSO d6, à une température de 423 K, 6 en ppm) 1,40 - 1,64 - 1,95 et 2,10 (4 mts, 1H chacun : CH2CH2) ; 2,41 (s, 3H ArCH3) de 3,30 à 3,65 (mt,6H: CH2 en 1 - NCOCH2Ar- 1H du CH2 en 3 et H en 9a) ; 3,48 (mt, 1H: H en 4); 3,75 (s, 3H : OCH3) ; 4,18 (d, J = 12,5 Hz, 1H : l'autre H du CH2 en 3); 6,46 (d large, J = 7,5 Hz, 1H : H en 8); 6,90 (t large, J = 7,5 Hz, 1H : H aromatique en para du OCH3) ; 6,96 (d large, J = 7,5 Hz, 1H: H aromatique en ortho du OCH3) ; de 7,00 à 7,35 (mt, 5H : H en 5 - H en 6 - H en 7 et H aromatiques en méta du OCH3) ; 7,30 (AB limite, 4H : H aromatiques en ortho et méta de l'aromatique en 9).
EXEMPLE 6 préparation de l'acide 4.9 e' thano9- (4-méthoxyphényl) -2-F (2-méthoxyphényl) acétyll-2.3.3aA.9.9a-hexahydro-îH benzo Ffiisomdole 3a carboxylique (3aRS.4SR.
EXEMPLE 7 Preparation de l'acide 4.9-ethano-2-[(2-methoxyphenyl)acetyll-9-(4methylsulfanyl- phênyl)-2.3 .3a.4.9.9a hexahydro 1H benzolflisoindole 3awarboxvllque (3aRS.4SR.
après purification par flash-chromatographie sur gel de silice (240-400 Mesh) en éluant par des mélanges cyclohexane-acétate d'éthyle (80-20 puis 70-30 en volumes), 182 mg (90 fio) de 4,9-éthano-2- [ (2-méthoxyphényl) acétyl] -9- (4-méthylsulfanyl- phényl) -2,3,3a,4,9,9a-hexahydro- 1 H-benzo[f]isoindole-3a-carboxylate de méthyle (3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme d'une poudre blanche dont les caractéristiques sont les suivantes: - point de fusion = 137"C.
- spectre de masse (IE): M/Z= 527 (M+) Etape E En opérant comme à l'exemple 2, mais à partir de 180 mg (0,34 mmol) de 4,9-éthano-2- [(2-méthoxyphényl) acétyl] -9- (4-méthylsulfanylphényl)-2,3,3a,4,9,9a- hexahydro i H-benzo[f]isoindole-3a-carboxylate de méthyle- (3aRS,4SR,9SR,9aRS), au reflux pendant dix-huit heures dans 3,7 cm3 d'une solution aqueuse normale d'hydroxyde de sodium et 3,7 cm3 de méthanol, on obtient, après recristallisation dans 5 cm3 d'oxyde de diisopropyle, 144 mg (81 to) d'acide 4,9éthano-2-[(2- méthoxyphényl)acétyl]-9- (4-méthylsulfanylphényl) -2,3,3a,4,9,9a-hexahydro- 1Hbenzo[f]isoindole-3a-carboxylique (3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme d'une poudre blanche dont les caractéristiques sont les suivantes: - point de fusion = 145"C - spectre de R.M.N. 1H (250 MHz, DMSO d6, à une température de 393 K, 6 en ppm) 1,40 - 1,63 - 1,92 et 2,10 (4 mts, 1H chacun : CH2CH2) ; 2,59 (s, 3H SCH3) ; de 3,30 à 3,70 (mt, 6H: CH2 en 1 - NCOCH2Ar - 1H du CH2 en 3 et H en 9a) ; 3,50 (mt, 1H : H en 4); 3,73 (s large, 3H : OCH3) ; 4,18 (d, J = 12,5 Hz, 1H l'autre H du CH2 en 3); 6,48 (d large, J = 7,5 Hz, 1H : H en 8); 6,92 (t large, J = 7,5 Hz, 1H : H aromatique en para du OCH3) ; 7,00 (d large, J = 7,5 Hz, 1H : H aromatique en ortho du OCH3) ; de 7,05 à 7,35 (mt, 5H : H en 5 - H en 6 - H en 7 et H aromatiques en méta du OCH3) ; 7,35 et 7.45 (2 d larges, J = 8 Hz, 2H chacun: H aromatiques en ortho et méta de l'aromatique en 9).
EXEMPLE 8 Préparation de l'acide 4.9 e'thano9- (4-fluorophényl) - 2- F (2-méthoxyphényl) acétyli - 2.3.3a.4.9.9a-henhydro-îH benzofflisoindole 3a-carboxylate de méthyle (3aRS.