INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
100 g de de la poudre de racine ont été placés dans un flacon conique de 2 litres. 1200 ml de méthanol ont été ajoutés et le flacon a été agité pendant deux heures puis laissé une nuit au réfrigérateur. Après filtration sous vide, une extraction supplémentaire a été pratiquée avec 600 ml de méthanol sur le culot solide séché. Les deux filtrats ont été rassemblés et évaporés avec un évaporateur rotatif (4 OOC) sous vide partiel. L'extrait concentré a été finalement dissous dans 25 ml de méthanol, dont 5 ml ont été utilisés pour les essais biologiques grossiers.
b) Fractionnement.
L'extrait méthanolique (20 ml) a été suspendu dans 40 ml d'eau et partagé dans du dichlorométhane (2 fois 60 ml). La fraction non polaire, où l'activité a été mise en évidence, a ensuite été chromatographiée sur une colonne de gel de silice (40 cm x 2,5 cm). 80 g de gel de silice, dont les particules ont une taille comprise entre 0,063 et 0,125 mm (120-130 mesh ATSM), ont été conditionnées dans du dichlorométhane. Pour l'élution, la fraction a été soumise à une chromatographie avec un gradient de dichlorométhane jusqu'à un mélange dichlorométhane/acétate d'éthyle/méthanol (0/60/40, v/v), à un débit de 3 ml/mn (Matériel Waters : formeur de gradient modèle 600). Soixante tubes (18 mm x 180 mm) contenant 16 ml chacun, ont été collectés. Tous les tubes ont été soumis à un contrôle par une chromatographie en couche mince (CCM) (Polygram sil G/W 254, épaisseur de couche 0,25 mm, Macherey-Nagel), élués avec un mélange héxane/acétate d'éthyle (30/70, v/v), et observés sous lumière W à 254 nm puis rassemblés en 11 fractions. L'activité insecticide à été montrée dans les fractions No. 3, 4, 9 et 10.
On obtient ainsi des guides qui sont 'caractérisés par des sections de dopage quasicirculaires et par un mode conforme à celui d'une fibre monomode (il y a optimisation du recouvrement modal) et qui présentent des atténuations linéiques beaucoup plus faibles du fait de la disparition de la diffusion de surface.
Ces atténuations sont typiquement inférieures à 0,1 dB/cm.
On considère maintenant la fabrication d'un dispositif du genre de celui de la figure 1 sur un substrat en silicium.
Les technologies sio2 sur Si (couches guidantes en SiO2, SiON et Si3N4) sont également parfaitement adaptées à la réalisation d'un tel dispositif.
Les techniques utilisées dans ce cas sont fondées sur un dépôt en phase en vapeur (essentiellement un dépôt chimique en phase vapeur) ou un dépôt par hydrolyse à la flamme et une gravure ionique réactive pour la réalisation des motifs.
En ce qui concerne le dépôt en phase vapeur, on consultera les documents (15) et (16).
En ce qui concerne le dépôt par hydrolyse à la flamme, on consultera le document (17).
Considérons l'exemple de la technique de fabrication des guides en silice sur silicium.
A ce sujet on se reportera au document (15).
Dans ce cas, le substrat optique est une couche de silice d'épaisseur suffisante pour isoler la lumière du silicium (épaisseur de 6 um pour une longueur d'onde de 0,8 pm et de 12 um pour une longueur 'd'onde voisine de 1,3 um ou de 1,55 um).
La couche guidante est par exemple une couche de silice dopée au phosphore, dont l'épaisseur est de l'ordre de 2 um à 5 um suivant la longueur d'onde, et la couche de recouvrement, ou superstrat, est équivalente au substrat, du point de vue de l'indice optique, et a une épaisseur de l'ordre de 6 pm à 10 um.
Un avantage important de l'optique intégrée sur silicium est la possibilité de graver simultanément des rainures en forme de U ou en forme de V pour le positionnement de fibres optiques monomodes.
A ce sujet on consultera les documents (15), (18) et (19) Un autre avantage de l'optique intégrée sur silicium réside dans le contrôle de la pente des flancs de gravure pour limiter les réflexions parasites à l'extrémité des guides optiques, réflexions parasites qui sont cause de diaphonie.
On considère maintenant la réalisation des réseaux de Bragg de démultiplexage.
Comme on l'a vu plus haut, ces réseaux peuvent être photo-gravés ou photo-inscrits.
Des réseaux photo-inscrits à périodes variables sont décrits dans les documents (26) et (27).
Lorsque le moyen de distribution de la composition selon l'invention est un dispositif aérosol, la valeur maximum de contrainte de cisaillement C1 est de préférence inférieure ou égale à 200 Pa.
II est entendu selon ci-dessus et ci-après que les différentes valeurs de viscosité et de contrainte sont mesurées une fois le gel formé. Avant d'effectuer les mesures de viscosité et de profil rhéologique du gel, il convient de s'assurer que le gel soit bien formé et stable. II convient donc d'attendre au moins 24 heures après la préparation du gel.
De manière préférentielle, les chutes de viscosité induites par le cisaillement sur le gel ne sont pas immédiatement réversibles, c'est à dire que le matériau ne se casse pas sous forte contrainte et reste homogène lorsqu'il a atteint sa viscosité la plus faible.
Le matériau gélifiant hydrophile selon l'invention est constitué par tout matériau gélifiant susceptible de former un gel ou une composition ayant l'apparence d'un gel et présentant le profil rhéologique selon l'invention.
Selon un mode de réalisation préférentiel de l'invention, le matériau gélifiant hydrophile est un polymère gélifiant hydrophile. Des polymères gélifiants hydrophiles utiles selon l'invention sont en particulier des polyesters sulfonés de masse moléculaire en poids inférieure à 20 000, de préférence inférieure à 15 000.
De tels polymères peuvent être plus particulièrement des oligomères copolyesters terephtaliques hydrosolubles ou hydrodispersables comprenant essentiellement des motifs répétitifs dicarboxylates de formule (I): [-Co-A-Co-o-(CH,-CH,),-] (I) dans laquelle A représente un groupement 1,4-phénylène, sulfo-1,3-phénylène et éventuellement 1 ,3-phénylène, n va de 1 à 4, au moins 35 % en mole desdits motifs de formule (I) étant des motifs de formule (I) pour lesquels A représente un groupement 1,4-phényléne et n est égal à I, au moins 7 % en mole desdits motifs de formule (I) étant des motifs de formule (I) pour lesquels A représente un groupement sulfo-I 3-phénylène, la masse moléculaire en poids desdits oligomères copolyesters étant inférieure à 20 000, de préférence inférieure à 15 000.
De manière préférentielle, au moins 40 % en mole, plus préférentiellement entre 40 et 90 % en mole des motifs de formule (I) sont des motifs de formule (I) pour lesquels A représente un groupement 1,4-phénylène et n est égal à 1.
De préférence, au moins 10 % en mole, plus préférentiellement entre 10 % et 25 % en mole des motifs de formule (I) sont des motifs de formule (I) pour lesquels A représente un groupement sulfo-1 3-phénylène.
Les extrémités des chaînes desdits oligomères copolyesters peuvent être semblables ou différentes et représentées essentiellement par les groupements de formule (I'): -CO-A-CO-O-(CH2-CH2)n-OH (I') dans laquelle A et n sont définis ci-dessus.
Lesdits oligomères peuvent également présenter en extrêmités de chaîne, et ce en quantités mineures des groupements de formules -A-CO-OH -A-CO-OR formules dans lesquelles est définie ci-dessus et R représente un groupement alkyle en C1-C4.
Lorsque A représente un groupement sulfo-I 3-phénylène, il s'agit plus particulièrement d'un sulfonate de métaux alcalins, notamment sodium ou potassium, ou d'un sulfonate d'ammonium ou de mono-, di-, tri- ou tétraalkylammonium inférieur. Par alkylammonium inférieur, on entend de préférence selon l'invention un ammonium dont le ou les radicaux alkyles sont des alkyles inférieurs, de préférence en C,-C6. De manière préférentielle, il s'agit d'un sulfonate de sodium.
L'oligomère copolyester peut comprendre éventuellement jusqu'à 20 % en mole, de préférence jusqu'à 5 % en mole de motifs de formule (I) pour lesquels A représente un groupement 1,3-phénylène.
Selon un mode de réalisation préférentiel de l'invention, I'oligomère copolyester ci-dessus a une masse moléculaire en poids comprise entre 5 000 et 14 000, plus préférentiellement comprise entre 8 000 et 10 000.
Les masses moléculaires en poids sont mesurées par chromatographie par perméation de gel dans le diméthylacétamide contenant 10-2 N de LiBr, à 100"C.
Les résultats sont exprimés en équivalents polystyrène.
Lesdits oligomères copolyesters peuvent être obtenus par les procédés usuels de préparation des polyesters par voie fondue, voie solvant ou voie interfaciale, procédés faisant intervenir des réactions d'estérification de diacides et de diols et polycondensation de transestérification de diesters et de diols et polycondensation d'autocondensation d'hydroxyacides de Schotten-Baumann par mise en oeuvre de diols et de chlorures d'acide et polycondensation de polymérisation de lactones en contrôlant la teneur minimum en motifs de formule (I) pour lesquels A représente un groupement 1,4-phénylène et n est égal à 1, semblables par les rapports stoechiométriques initiaux des différents monomères et par la maîtrise des réactions secondaires.
Le rôle cytotoxique de NO a également été interprété comme résultat de la formation de complexes fer-nitrosyls au niveau des enzymes du métabolisme oxydatif des cellules cibles (Stuehr et Nathan 1989; Stuehr et al., 1989).
En conclusion, une infection induit une stimulation des lymphocytes T via la présentation de l'antigène. Les cellules T sécrètent l'IFN-" en réponse à leur activation et une stimulation successive se maintient donc avec la présence persistante de l'antigène ou d'une réinfection. L'IFN-7 active alors les macrophages qui produisent d'autres cytokines comme le TNF-a et l'IL-t qui, en synergie avec L'IFN-7 peuvent stimuler les macrophages. L'activation macrophagique permet l'élimination de certaines cellules tumorales et de nombreux agents pathogènes. Parmi les différents mécanismes élaborés par les macrophages, un des plus efficaces est la synthèse de NO. La destruction des leishmanies et des schistosomes peut être complètement inhibée par le NMMA (James et Glaven, 1989; Green et al., 1990; Liew et al., 1990). Ceci semble indiquer que dans ces cas NO est nécessaire, et pourrait même être suffisant, pour expliquer le rôle microbicide des macrophages. NO est donc un élément indispensable de la défense de l'organisme.
Les travaux rapportés ci-après vise à mettre en évidence la forme sous laquelle NO est transporté pour agir au niveau de ses cibles. Afin de se rapprocher des conditions physiologiques, les Inventeurs ont utilisé une source biologique de NO (macrophages activés par le BCG), la SAB comme transporteur de NO et des trypanosomes extracellulaires. L'objectif est de détecter des épitopes nitrosylés formés in vitro possédant un rôle cytotoxique et d'obtenir leur blocage en utilisant nos anticorps polyclonaux anti-NO-Tyr et anti-NO-Cys conjuguées.
a) Prélèvement et culture des macrophaaes : Des macrophages péritonéaux provenant de souris Swiss préalablement infectées avec le BCG (Institut Pasteur) ou des macrophages normaux, ont été mis en culture à 1,5 x 106 cellules/ml/boîte de Pétri, pendant 8 h à 370C dans une étuve contenant 5% C02. Le milieu de culture utilisé est le HBSS (Hank's Balanced Salt (;olution, GIBCO). La culture a été effectuée en présence ce non de NMMA à 0,5 mM.
b) Détection de la formation des coniuqués-NO et Xe Dar Par le test ELISA : - Tests de compétition entre le conjugué nitrosylé formé dans le milieu de culture et les conjugués NOTyr-SAB ou NO-Cys-SAB néosynthétisés Les surnageants provenant des milieux de culture de macrophages activés contenant les conjugués nitrosylés (NO-Tyr-SAB ou NO-Cys-SAB), ont été incubés en présence de t'antisérum "T" ou "C" ulitisés à 1/20 000. Ces conjugués nitrosylés ont été formés à partir de NO produit par les macrophages et les conjugués Tyr-SAB ou Cys-SAB ajoutés dans le milieu. Après incubation ces surnageants ont ensuite servi comme Ac primaires pour le test ELISA. Ce dernier a été réalisé sur des plaques de microtitration adsorbées par les conjugués NO-Tyr-SAB ou NO-Cys-SAB. Le reste du test est identique à celui décrit précédemment.
Le même protocole a été utilisé pour le surnageant provenant de milieux de culture de macrophages normaux (contrôle). Pour ce travail, 5 expériences ont été faites et une bonne reproductibilité a été obtenue avec t 'anti-NO-Cys.
- Détection de la nitrosylation des épitopes portés par la SAB en utilisant les Ac anti-NO-Tyr et anti-NO-Cys: Cette application a nécessité l'utilisation de la SAB délipidée (4 mg/ml) , pour éviter la lipopéroxydation (NO + 2- ) des acides gras adsorbés sur la SAB. Cette lipopéroxydation donne des composés entraînant des réactions non spécifiques. La protéine a été ajoutée dans le milieu de culture (HBSS) des macrophages activés ou non pendant 8 h. Les plaques de microtitration ont ensuite été adsorbées pendant 6 h par les surnageants provenant des milieux de culture des macrophages activés (contenant NO-SAB) des macrophages non activés ou du milieu de culture seul. Après saturation les Ac primaires "T" ou "C" ont été utilisés à la dilution de 1/1000.
Neutralisation de l'effet trypanestatique de NO-SAB La souche Partinico II de T. musculi a été utilisée. Les trypanosomes ont été purifiés par passage sur colonne de diéthyl aminoéthyl cellulose (Lanham, 1968) . Les trypanosomes ont été ensuite co-cultivés pendant 8 h en présence des macrophages de souris normales ou infestées par le BCG en milieu RPMI contenant la SAB délipidée (4 mg/ml). Les Ac polyclonaux (1/100) ou le NMMA (0,5 mM) ont été ajoutés dans quelques puits pour pouvoir comparer leurs effets inhibiteurs. Le sérum de lapin normal et un Ac polyclonal anti-SAB ont été utilisés comme contrôle à la même dilution que les antisérums "T" et "C".
Neutralisation du transfert de cet effet trvoanostatiaue : L'objectif de ce travail a été de confirmer l'effet trypanostatique de NO-SAB. Pour cela, le surnageant de cultures contenant de la SAB et des macrophages activés par le BCG en présence ou non de NMMA, est transféré après 8 h d'incubation, sur une co-culture de macrophages normaux /T. musculi selon les mêmes conditions. Les Ac polyclonaux "T", "C", le sérum de lapin normal ou l'anti SAB dilués au 1/100 sont appliqués avec le surnageant.
Par ces deux méthodes, les Inventeurs ont dans un premier temps, étudié l'effet cytostatique trypanostatique de la NO-SAB soit direct soit transféré.
Dans un second temps, ils ont comparé la neutralisation de cet effet par les Ac polyclonaux selon deux procédés légèrement différents. Le fait d'inhiber l'effet trypanostatîque par ces Ac selon ces deux conditions prouve d'une part la synthèse de NO et donc la formation de la NO-SAB et, d'autre part que c'est un effet à priori propre à la NO-SAB et non pas à d'autres dérivés oxygénés.
Mesure de la quantité de nitrite produit La production de NO est donnée par la formation du NO2 accumulé dans le milieu de culture en utilisant une réaction colorimétrique la méthode de Griess (Hageman et Reed, 1980; Lepoivre et al., 1989). Le réactif de Griess photosensible est obtenu en mélangeant volume à volume sulfanilamide (1% dans HCl 1,2 N; Sigma) et N-(1-naphtyl) éthylènediamine dihydrochlorate (3% dans l'eau; Sigma); un volume de 200 Fl de réactif est ajouté à 100 pl d'échantillon, incubé 30 minutes à l'obscurité, puis l'abserbance à 550 nm est mesurée à l'aide d'un lecteur de plaque. Une gamme étalon est réalisée pour chaque dosage en utilisant une solution de NaNO2.
a) Détection de la formation du conjugué NO-Cys-SAB dans le milieu de culture de macrophaaes Le NO produit in vitro par les macrophages activés par le BCG, induit la formation de NO-Cys-SAB à partir du conjugué Cys-SAB préalablement ajouté dans le milieu. Ce dernier joue le rôle d'une cible, de réservoir et d'une forme stable de NO produit. Le dérivé nitrosylé formé est détectable par les expériences de compétition.
En présence de NMMA, il a été noté une inhibition de la synthèse de NO et l'absence de signal.
7. Canessa, C.M., Schild, L., Buell, G., Thorens, B., Gautschi, I., Horisberger, J.D. & Rossier, B.C. Nature 367, 463-467 (1994).
Febs ètt. 318, 95-99 (1993).
9. Lingueglia, E., Renard, S., Waldmann, R., Voilley, N., Champigny, G., Plass, H., Lazdunski, M. & Barbry, P. J. Biol. Chem. 269, 13736-13739 (1994).
& Lazdunski, M. I. Biol. Chem. 270, 27411-27414 (1995).
12. Driscoll, M. & Chalfie, M. Nature 349, 588-593 (1991).
13. Huang, M. & Chalfie, M. Nature 367, 467470 (1994).
- une méthode de diagnostic d'une ESST chez un mammifère, par la détection d'un dysfonctionnement de la fonction corticosurrénalienne induit par ladite ESST, laquelle méthode est caractérisée en ce qu'elle comprend la détection et/ou le dosage, dans un échantillon de l'urine dudit mammifère, d'au moins un métabolite du cortisol choisi dans le groupe constitué par le 20ss- dihydrocortisol, la 20Q-dihydrocortisone, et la cortisone.
Selon un mode de mise en oeuvre préféré de la présente invention ledit mammifère appartient à l'espèce ovine.
Dans le cadre de la mise en oeuvre de la présente invention, on peut utiliser, pour détecter et/ou doser le 20P-dihydrocortisol, la 20ss-dihydrocortisone ou la cortisone, dans le sang ou dans l'urine, n' importe quelle technique, connue en elle-même, de détection ou de dosage des corticoïdes ; il peut s'agir en particulier de techniques chromatographiques telles que celles décrites par exemple par DODDS et al. [J. Liqu.
Chromatogr.,18(9),1809-1820 (1995)], SCHONESCHOFER et al.
[J. Chromatogr., 380, 267-274, (1986)], ou bien de techniques de dosage immunologique, par exemple de type ELISA ou RIA [pour revue, cf. par exemple BURTIS et ASHWOOD, TIETZ TEXTBOOK OF CLINICAL CHEMISTRY, édité par W.B. SAUNDERS COMPANY, 7 Edition, pp 1822-1825].
La méthode conforme à la présente invention est simple et rapide à mettre en oeuvre, peut être aisément automatisée, et est donc particulièrement bien adaptée pour un diagnostic de masse.
La présente invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples non-limitatifs illustrant la mise en oeuvre de dosages plasmatiques ou urinaires du 20ss- dihydrocortisol, de la 20ss-dihydrocortisone, et de la cortisone, dans le cadre de la détection de la tremblante du mouton.
EXEMPLE 1 : COMPARAISON DES SECRETIONS DE CORTICOIDES DES BREBIS SAINES ET DES BREBIS EN PHASE TERMINALE DE TREMBLANTE.
Materiels et méthode Caractéristiques des animaux et critères d'inclusion L'expérimentation a été effectuée sur 5 brebis saines (groupe témoin), et 6 brebis en phase terminale de tremblante. Les caractéristiques des animaux sont indiquées dans le tableau I ci-dessous.
Statut pathologique Age (ans) Nombre Poids (kg) Saines Romanov 1-5 5 50-64 Romanov Tremblante x 2-3 2 41-48 Charollaise Tremblante Romanov 2-3 4 35-48 Les brebis saines ont été incluses sur la base d'une absence de signes cliniques évocateurs de tremblante. 6 mois après l'essai, aucune des brebis considérées comme saines au moment de l'inclusion n'était atteinte de signes évocateurs de la tremblante.
Le diagnostic de tremblante pour l'inclusion est fondé sur des critères cliniques (comportement anormal, ataxie, tremblements, prurit). Le diagnostic avait été établi chez ces brebis au moins 21 jours avant le début de l'expérience. La longévité des brebis cliniquement atteintes de tremblante est en moyenne de 2 à 6 mois. Les brebis qui ont participé à cet essai ont été considérées comme étant en phase terminale de tremblante. Le diagnostic clinique a été confirmé en fin d'essai après euthanasie des brebis atteintes de tremblante et examen histopathologique.
Conditions d'hébergement et de nourriture Les brebis ont été habituées aux conditions expérimentales pendant 4 jours avant le début de l'expérience.
Les brebis, placées dans des cages à métabolisme dans un bâtiment ouvert, ont été soumises aux variations naturelles de la durée du jour. Elles ont été nourries avec du foin à volonté et des granulés et ont eu accès libre à l'eau.
A la fin de l'expérimentation les brebis du groupe tremblante ont été sacrifiées in extremis et ont subi un examen histopathologique conventionnel pour confirmer le diagnostic de tremblante.
Les brebis du groupe témoin n'ont pas été euthanasiées et ont été placées en observation clinique.
BERTINA et al., Nature, 1994, 36Q pages 64-68, de M. KALAFATIS et al., J. Biol. Chem., 1994, 269. pages 31869-31880, de H. DE RONDE et al., Thromb. Haemost., 1994, X, pages 880-886, de P.J. SVENSSON et al., N. Engl. J. Med., 1994, 330. pages 517-522, de B. DAHLBÀCK et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, M, pages 1004-1008 et de DAHLBÀCK et al., Proc. Natal. Acad. Sci. USA, 1994, 2L pages 1396-1400.
D'autres anomalies du facteur V peuvent être à l'origine de APC-R. Il se pourrait en particulier qu'un clivage à un moment inopportun en position 306 (i.e. 306Arg) de la séquence des aminoacides du facteur V et/ou Va soit l'une des autres causes possibles de APC-R.
La détermination de APC-R a été mise en oeuvre initialement (notamment selon un test APTT, KCCT ou analogue) pour apprécier l'existence d'un désordre thrombotique en comparant le temps de coagulation, qui est prolongé par addition de APC, d'un plasma témoin avec celui, qui est réduit en cas d'anomalie par rapport au précédent, d'un échantillon de plasma humain à tester additionné de APC.
Voir à cet effet : C.A. MITCHELL et al., N. Engi. J. Med., 1987, Ml, pages 1638-1642, L. AMER et al., Thromb. Res., 1990, SZ, pages 247-258 et B. DAHLBÀCK et al., Thromb. Haemost., 1991, , abstract 39, page 658.
Le seul nécessaire actuellement disponible sur le marché (il est commercialisé sous la dénomination de "COATEST APC-RESISTANCE" par la société dite CHROMOGENIX) met en oeuvre le procédé décrit dans la divulgation de B. DAHLBÀCK et al., Thromb. Haemost., 1991, 65, abstract 39, page 658, précitée et illustré dans WO-A-9310261 et l'article de B. DAHLBÀCK et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90. pages 10041008 précité. Ce procédé comprend le mélange d'un volume de plasma à tester ou de plasma témoin avec un volume de réactif APTT [PL + activateur de surface (silice, kaolin ou verre)], l'incubation pendant 4 minutes à 37"C, puis l'initiation de la coagulation au moyen d'un volume d'une solution de Cal2, d'une part, ou d'un volume d'une solution de CaCl2 et APC, d'autre part.
Ce procédé est insatisfaisant en ce sens que, sensible notamment à la présence du facteur VIII, d'héparine, de PS, des CAC et des VKA, il fournit trop de résultats faux négatifs et faux positifs. Des perfectionnements ont donc été proposés dans WO-A-9615457, WO-A-9604560 et EP-A-0711838.
WO-A-9615457 propose un procédé de détermination de APC-R dans lequel on met en contact le plasma à tester, un réactif procoagulant (ici le facteur tissulaire) et un PdfV, puis après incubation on initie la coagulation au moyen de Cas12 ou CaC12 + APC, la variation du temps de coagulation étant ensuite appréciée par rapport à un plasma témoin.
WO-A-9604560 vise une technique améliorée pour détecter APC R. Cette technique est fondée sur l'utilisation d'un réactif exogène activant spécifiquement le facteur V en Va, en complément d'une activation de la coagulation soit par la transformation XoXa, soit par la transformation prothrombineothrombine selon un mécanisme dépendant du facteur V.
WO-A-9604560 préconise notamment - en tant que réactif exogène, un venin de serpent tel que le venin de Naja nivea pour activer V en Va, et - pour l'activation complémentaire: soit RVV-X pour activer X en Xa, soit un venin (ou extrait de venin) de serpent, tel que les venins de Pseudonaja textilis, No te ch is scutatus ou Oxyuranus scutellatus, pour l'activation de la prothrombine en thrombine selon un mécanisme dépendant du facteur V.