INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Des caractéristiques secondaires, et les avantages de l'invention ressortiront d'ailleurs de la description qui va suivre, en référence aux dessins annexés dans lesquels: La figure 1 est une coupe, passant par l'axe, d'un volant double amortisseur selon l'invention, équipé d'un embrayage; La figure 2 est une vue en plan, partiellement arrachée, suivant la flèche II de la figure 1; La figure 3 est une coupe suivant la surface III-III de la figure 1; La figure 4 est une coupe suivant la ligne IV-IV de la figure 1; La figure 5 est une courbe du couple transmis en fonction du décalage angulaire entre les éléments de volant, correspondant au profil du segment de chemin de billes représenté figure 4; Les figures 6 et 7 sont des vues d'une variante de volant double amortisseur, correspondant respectivement aux figures 1 et 2; Les figures 8A et 8B sont des vues partielles d'une autre variante de l'invention, avec le moyen élastique de sollicitation du second flasque respectivement comprimé et détendu; Les figures 9A et 9B sont des vues analogues à celles des figures 8A et 8B, d'encore une autre variante de l'invention; Les figures 1 0A et 1 0B sont des vues analogues à celles des figures 8A et 8B et 9A et 9B d'une variante de l'invention avec une butée à billes qui assure la coaxialité des deux éléments de volant.
Selon le mode de réalisation choisi et représenté aux figures 1 à 4, le volant double amortisseur comporte un élément de volant primaire 1 dans son ensemble, fixé en bout d'un vilebrequin la de moteur d'un véhicule automobile, un élément de volant secondaire 2 dans son ensemble, constituant plateau de réaction d'un embrayage monté en tête d'un système de transmission du véhicule, un moyen d'attelage 3 dans son ensemble, intercalé entre les éléments de volant primaire et secondaire et plus particulièrement objet de l'invention, et un moyen amortisseur à friction 4, disposé en parallèle avec le moyen d'attelage 3. L'embrayage, ici classique, comprend un disque de friction 5, disposé entre le plateau de réaction pris dans l'élément de volant secondaire 2 et un plateau de pression 6 et monté coulissant axialement et solidarisé en rotation sur un arbre d'entrée du système de transmission (boîte de vitesses) Sa. L'embrayage comprend encore un diaphragme à élasticité axiale 7 pris entre le plateau de pression 6 et une butée d'embrayage 9 centrée sur l'arbre 5a, dont le déplacement axial permet le débrayage par annulation de la poussée du diaphragme 7 sur le plateau de pression 6, ainsi qu'un couvercle 8 fixé sur l'élément de volant secondaire 2. La plateau de pression 6 est lié en rotation au couvercle, avec une liberté de déplacement axial, par l'intermédiaire de languettes souples (non référencées), dont l'une est visible à la figure 2.
Le moyen amortisseur à friction 4 comprend une série de patins circulaires, fixés par leur centre avec jeu axial sur un premier flasque 31 par l'intermédiaire de rivets à tête fraisée, une rondelle Belleville étant insérée entre le premier flasque et le patin, de façon que ce dernier soit en appui sur l'élément de volant secondaire 2 avec une force déterminée, correspondant à l'amortissement voulu.
Le moyen d'attelage 3 comprend une pluralité de billes 30, la pluralité étant ici de 6, insérées entre le premier flasque 31 solidaire de l'élément de volant primaire 1, et un second flasque 32 solidarisé en rotation à l'élément de volant secondaire 2, mais avec une liberté de déplacement axial. Cette solidarisation est obtenue en reliant le second flasque 32 à l'élément de volant secondaire 2, et plus précisément ici à un rebord périphérique externe cylindrique 8a du couvercle 8 de l'embrayage, par des languettes souples 32a (Figure 3) étendues sensiblement circonférentiellement. Les languettes 32a s'étendent radialement au dessus des languettes souples liant en rotation, de manière précitée, le plateau de pression 6 au couvercle 8. Le second flasque 32 est sollicité vers le premier flasque 31 par un moyen à élasticité axiale 33, constitué de deux rondelles Belleville (tronconiques) 33a et 33b, accolées par leurs petites bases, tandis que leur grandes bases portent respectivement sur le second flasque 32 et un circlip 33c engagé dans une gorge intérieure du rebord 8a du couvercle 8 d'embrayage. La poussée en réaction des rondelles Belleville 33a, 33b est reportée sur l'élément de volant secondaire 2 par une butée à billes 34.
Les billes 30, maintenues à espacements régulier par une cage 30a, sont prises entre deux rainures 36 et 37, pratiquées respectivement dans les flasques premier 31 et second 32, et formant conjointement un chemin de roulement des billes 30 circulaire, centré sur l'axe du volant, comprenant une pluralité de segments tels que 38, égale à la pluralité de billes 30, soit 6, de façons qu'à chaque bille 30 corresponde un segment 38.
Les segments 38, comme on le voit mieux sur la figure 4, présentent une profondeur maximale à leur centre 38a qui diminue de façon monotone et symétriquement vers leurs extrémités 38b et 38c. I1 va de soi que, au montage du volant, les éléments de volant primaire 1 et secondaire 2 sont orientés de telle façon que les centres des segments des rainures 36 et 37 soient face à face, et que les billes 30 soient au centre 3 8a de leurs segments 38 de chemin respectifs, là où la profondeur est maximale, ce qui définit une origine du débattement angulaire. On comprend que, si un couple est transmis de l'élément de volant primaire 1 à l'élément de volant secondaire 2, ce couple tendra à décaler angulairement ces éléments, ce qui entrainera un roulement des billes 30 dans les segments 38 d'un angle moitié du décalage angulaire des rainures 36 et 37, ce qui réduit la profondeur du segment à l'emplacement de la bille 30, et en conséquence augmente de façon complémentaire l'écart entre les flasques 31 et 32. Le second flasque s'écarte du premier en restant parallèle à lui même en raison de l'identité de forme des segments 38 des chemins de roulement des billes 30. En s'écartant du premier flasque 31, le second flasque comprime l'empilement des rondelles Belleville 33a et 33b, tandis que la butée à billes 34 transmet la poussée de réaction sur le premier flasque 31 à l'élément de volant secondaire 2. Ainsi la compression du moyen à élasticité axiale crée un couple de rappel entre les éléments de volant 1 et 2. Grâce aux billes 30, ce couple de rappel du moyen d'attelage 30 est réversible.
La figure 5 montre le couple de rappel (égal au couple transmis au couple d'amortissement près) en fonction du décalage angulaire entre les éléments de volant 1 et 2, pour un volant typique. On voit que ce décalage angulaire peut atteindre 60 de part et d'autre de l'origine, pour un couple transmis de 200 Nm. De plus, les deux branches de la courbe, de part et d'autre de l'origine, présentent une faible pente jusqu'à un angle de 35 environ (17 Nm), puis un coude vers 40 , pour au-delà présenter une pente relativement abrupte. I1 en résulte que, pour de faibles couples transmis, la raideur du moyen d'attelage 3 est faible et la fréquence de coupure du filtre équivalent basse, ce qui est favorable pour le filtrage à bas régime, tandis que, à fort couple transmis et donc haut régime, avec la transmission couplée, la raideur est élevée, ce qui, compte tenu de l'inertie de la transmission, n'a pas de conséquence défavorable sur le filtrage.
La variante représentée aux figures 6 et 7 présente dans son ensemble la même structure que le volant double amortisseur des figures 1 à 5. Toutefois, l'élément de volant secondaire 2 comporte à sa périphérie externe une jante 2a qui remplace le rebord 8a de couvercle 8 d'embrayage,et dans laquelle est ménagée une gorge pour le circlip 33c. Cette disposition présente l'avantage que l'embrayage peut être séparé du volant double amortisseur sans démontage de celui-ci. En outre, le module d'inertie de l'élément de volant secondaire est augmenté en raison de la contribution de la jante 2a, épaisse et de grand rayon, ce qui améliore le filtrage, notamment lorsque la transmission est au point mort. De plus, on peut utiliser un couvercle 8 du type standard équipant un mécanisme d'embrayage classique.
La variante présentée aux figures 8A (couple transmis élevé) et 8B (couple transmis nul) possède une structure différente. Le volant double amortisseur comporte un élément de volant primaire 101 constitué essentiellement d'un premier flasque 131, un élément de volant secondaire 102 monté coaxial sur l'élément primaire par l'intermédiaire d'un roulement à billes à double cage oblique 134. Un second flasque 132 est monté entre les éléments de volant primaire 101 et secondaire 102, solidarisé en rotation à ce dernier par un ensemble 132a de cannelures pratiquées dans un moyeu saillant de l'élément secondaire vers l'élément primaire, et d'indentations pratiquées dans un orifice central du second flasque 132. Il est formé ainsi une liaison du type tenons-mortaises, des dents ménagées à la périphérie interne du flasque 132 pénétrant dans des rainures dudit moyeu et vice-versa. Des rainures 136 et 137 pratiquées respectivement dans les premier (131) et second (132) flasques constituent un chemin de roulement pour des billes, avec des segments à profondeur variable comme il a été décrit à propos des figures 1 à 4. Une rondelle Belleville 133 est interposée entre l'élément de volant secondaire 102, contre lequel elle porte par sa petite base, et le second flasque 132, contre lequel elle porte par sa grande base.
La conformation du roulement à double cage 134 lui confère la capacité de résister à des contraintes axiales, et son montage entre les éléments de volant primaire 101 et secondaire 102 assure son blocage axial, de sorte que la poussée en réaction de de la rondelle Belleville 133 est supportée par le roulement 134, qui fait office ici de butée axiale.
La variante représentée aux figures 9A et 9B est très semblable à celle des figures 8A et 8B, la différence résidant dans le fait que la rondelle Belleville 133 porte par sa grande base sur l'élément de volant secondaire 102, et par sa petite base sur le second flasque 132.
Le polynucléotide de séquence SEQ ID N 2 a été dénommé p27 par les inventeurs et comprend notamment les sites de restriction suivants : Alul, BamHI, Bstl, EcoRII, HaeIII, Sali. SalI.
Tableau I : Sites de restriction de la SEQ ID N01
Enzyme Positions de coupure de l'enzyme de restriction sur la SEQ ID N01 Alul 265 ; 550 1048 1201 1996 2333 | 2788 BamHI 1441 2716 Bstl 1441 2716 Dral 331 EcoRII 319 768 817 1020 1325 1475 2241 EcoRV 1910 HaeIII(l) 6 420 624 680 710 793 823 990 1002 1013 1040 Haelll(2) 1346 1457 1475 1567 1749 1869 1943 2130 2302 2322 2337 l-laeIIl(3) 2385 2580 2610 2655 Kpnl 2005 PstI 2805 Pvul 2467 2515 2781 Sacl 2790 Sacll 348 675 2700 2727 SalI 1423 1989 A titre illustratif, des fragments préférés du polynucléotide de séquence SEQ ID N 1 selon l'invention sont les fragments suivants - le fragment obtenu en faisant agir les enzymes de restrictions Dral et EcoRV, coupant respectivement aux nucléotides nt 331 et nt 1910 de la séquence SEQ ID N"1; - le fragment obtenu en faisant agir les enzymes de restriction Dral ct KpnI, coupant respectivement aux nucléotides nt 331 et nt 2005 de la séquence SEQ ID N0 1.
Les fragments ci-dessus comprennent tous les deux la totalité du cadre ouvert de lecture codant pour la protéine P27.
Pour les conditions de mise en oeuvre des enzymes de restriction dans le but d'obtenir des fragments nucléotidiques des polynucléotides selon l'invention, on se référera avantageusement à l'ouvrage de Sambrook de 1989.
L'invention concerne ainsi un polynucléotide caractérisé en ce qu'il est choisi parmi a) un polynucléotide comprenant au moins 8 nucléotides consécutifs de 1 'enchaînement de nucléotides (SEQ ID N 2) suivant ATGCCCAATTTCTGGGCGTTGCCGCCCGAGATCAACTCCACCCGGATATATCTCGGCCCGGGT TCTGGCCCGATACTGGCCGCCGCCCAGGGATGGAACGCTCTGGCCAGTGAGCTGGAAAAGACG AAGGTGGGGTTGCAGTCAGCGCTCGACACGTTGCTGGAGTCGTATAGGGGTCAGTCGTCGCAG GCTTTGATACAGCAGACCTTGCCGTATGTGCAGTGGCTGACCACGACCGCCGAGCACGCCCAT AAGACCGCGATCCAGCTCACGGCAGCGGCGAACGCCTACGAGCAGGCTAGAGCGGCGATGGTG CCGCCGGCGATGGTGCGCGCGAACCGCGTGCAGACCACAGTGTTGAAGGCAATCAACTGGTTC GGGCAATTCTCCACCAGGATCGCCGACAAGGAGGCCGACTACGAACAGATGTGGTTCCAAGAC GCGCTAGTGATGGAGAACTATTGGGAAGCCGTGCAAGAGGCGATACAGTCGACGTCGCATTTT GAGGATCCACCGGAGATGGCCGACGACTACGACGAGGCCTGGATGCTCAACACCGTGTTCGAC TATCACAACGAGAACGCAAAAGAGGAGGTCATCCATCTCGTGCCCGACGTGAACAAGGAGAGG GGGCCCATCGAACTCGTAACCAAGGTAGACAAAGAGGGGACCATCAGACTCGTCTACGATGGG GAGCCCACGTTTTCATACAAGGAACATCCTAAGTTTTGA b) un polynucléotide dont la séquence est complémentaire de la séquence du polynucléotide défini en a); c) un polynucléotide hybridant dans des conditions de forte stringence avec le polynucléotide défini en a) ou avec le polynucléotide défini en b).
Le polynucléotide de séquence SEQ ID N 1 comprend les signaux de régulation et/ou d'expression du gène de structure p27, situés respectivement du côté 5' et 3' et à proximité de ce gène.
Par comparaison avec les séquences connues, et plus particulièrement avec les séquences qui ont été déterminées chez les mycobactéries, les séquences des signaux de transcription et de traduction du gène p27 ont été déterminés. IL s'agit des séquences suivantes - une séquence de type Shine-Dalgarno de fixation au ribosome est la séquence suivante, allant du nucléotide en position nt 919 au nucléotide en position nt 925 de la SEQ ID N 1 : 5'-AGGGAGT-3'.
- la boîte -10 du promoteur du gène p27 est la séquence suivante, allant du nucléotide en position nt 802 au nucléotide en position nt 807 de la SEQ ID N l: : 5'-GAAATT-3' - la boîte -35 du promoteur du gène p27 peut être constituée par l'une des séquneces suivantes la séquence allant du nucléotide en position nt 776 au nucléotide en position nt 781 de la SEQ ID N 1 : 5'-AAGCCG-3'. la séquence allant du nucléotide en position nt 783 au nucléotide en position nt 788 de la SEQ ID N 1 : 5'-TCGGGC-3' - Une séquence terminateur de la transcription ayant une structure de type dyad symetry est la séquence suivante, allant du nucléotide en position nt 1909 au nucléotide en position nt 1959 de la SEQ ID N01 5' TATCGCCTAACACCCGGCTCCCGTACTCCCGTGGCCGATGTGATTATTGAT La présente invention concerne ainsi un acide nucléique caractérisé en ce qu'il comprend les signaux de régulation et/ou d'expression naturels de la protéine de 27 kD de M. tuberculosis, localisés à proximité de la SEQ ID N 2, du côté 5' et du côté 3' de la SEQ ID N 2.
Avantageusement, un tel polynucléotide contiendra au moins une séquence comprenant l'enchaînement de nucléotides allant du nucléotide en position nt 776 au nucléotide nt 1665 du polynucléotide de séquence SEQ ID N"1.
De manière générale, I'invention a également pour objet un fragment nucléotidique caractérisé en ce qu'il est capable de s'hybrider dans des conditions stringentes avec une séquence telle que définie ci-dessus.
La présente invention a également pour objet un polypeptide issu d'une mycobactérie, caractérisé en ce qu'il est présent uniquement chez les mycobactéries appartenant au complexe de Mycobacterium tuberculosis, qu'il possède un poids moléculaire d'environ 27 kilodaltons et un point isoélectrique situé dans l'intervalle pI= 4,5 +/- 1,5.
En outre, le polypeptide mycobactérien selon l'invention possède la composition suivante en acides aminés Tableau Il : Composition
S=Ser 1 I 4,527 T=Thr 17 6,996 V=Val 15 6,173 W=Trp 7 2,881 Y=Tyr 10 4,115 Z=Glx o 0 La présente invention a aussi pour objet un polypeptide dc 27 kD désigné P27, de M tuberculosis, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi a) un polypeptide dont la séquence comprend l'enchaînement d'acides aminés SEQ ID N 3 suivant M PNFWALPPEWSTRIYLGPGSGPILAAAQGWNALASELEKTKVGLQSALDTLLES YR GQSSQALIQQTLPYVQWLTTTAEHAHKTAIQLTAAANAYEQARAAMVPPAMVRAN RVQTTVLKAINWFGQFSTRIADKEADYEQMWFQDALVMENYWEAVQEAIQSTSHFE DPPEMADDYDEAWMLNTVFDYHNENAKEEVIHLVPDVNKERGPIELVIKVDKEGTI RLVYDGEPTFSYKEHPKF b) un fragment d'au moins 10 acides aminés du polypeptide défini en a), ledit fragment étant capable d'être reconnu par des anticorps dirigés contre le polypeptide P27 KD. c) un polypeptide comportant, par rapport au polypeptide défini en a) ou b) au moins une modification par délétion, addition ou substitution d'un acide aminé ledit polypeptide modifié étant capable d'être reconnu par des anticorps dirigés contre le polypeptide P27 KD.
Un tel polypeptide, tel que défini précédemment, est susceptible d'être reconnu spécifiquement par les anticorps présents dans le sérum de patients infectés par des mycobactéries appartenant au complexe de Mycobcaterium tz(herculosix.
Font ainsi partie de l'invention les fragments du polypeptide P27 de séquence ID N 3, qui peuvent être obtenus par clivage dudit polypeptide par une enzyme protéolytique, telle que la trypsine ou la chymotrypsine ou la collagénase, ou par un réactif chimique, tel que le bromure de cyanogène (CnBr) ou encore en plaçant le polypeptide P27 dans un environnement très acide, par exemple à pH 2,5. A ce titre des fragments peptidiques selon l'invention sont les fragments figurant à l'Annexe 2 de la description. Dans l'Annexe 2, figure une analyse, à l'aide du logiciel PepsortTM (commercialisé Par Genetics Computer Group, Inc., 575 Science Drive, Madison, Wisconsin, 53711,USA), des fragments peptidiques obtenus après coupure enzymatique ou chimique respectivement par la trypsine (Tryp.), la chvmotrypsine (Chymo), la clostripaine (Clos.= Trypsine ayant une lysine bloquée). le bromure de cyanogène (CnBr), l'lodobenzoate (IBzo), la protéase de Myxobacter (Myxo.), un milieu à pH 2,5 (pH2.5), la Proline endopeptidase (Proen.), la Protéase de Staphylocoque (Staph.), la trypsine dont les résidus Lysine sont bloqués (TrypK.), la Trypsine dont les résidus Arginine sont bloqués (TrypR).et l'Endoprotéinase Asp-N (AspN). Pour chacun des réactifs de coupure, les fragments peptidiques générés sont classés, dans l'ordre croissant, en ponction de leur poids moléculaire (Mol. Wt.) et la séquence peptidiquc de chacun des fragments peut être déduite du fait de l'indication, pour chacun des fragments, des positions respectives de l'acide aminé N-terminal et de l'acide aminé C-terminal, la numérotation étant conforme à celle du polypeptide P27 de séquence SEQ ID N 3. La colonne Chg correspond à la charge nette du fragment peptidique considéré, la colonne Aro indique le nombre d'acides aminés de type aromatique contenus dans ce fragment peptidique, les colonnes Acid et Base indiquent respectivement le nombre d'acides aminés acides ou basiques contenus dans ledit fragment peptidique, la colonne SuIf indique le nombre de résidus Cystéine dans le fragment peptidique et les colonnes Phil et Phob indiquent le nombre de résidus hydrophiles ou hydrophobes présents dans le fragment peptidique considéré.
Ainsi, l'hypertension ou d'autres troubles de la pression sanguine pourrait provenir d'une production anormale de NO. I1 s'avère maintenant que la réponse zasodilatatrice dépendante de l'endothélium est diminuée dans les modèles animaux d'hypertension, ainsi qu'en cas d'athérosclérose et de maladie coronarienne chez l'homme.
Rôle de NO dans le système nerveux Produit sous l'influence de la stimulation des récepteurs de type NMDA présynaptiques par le glutamate, et agissant par l'intermédiaire de l'augmentation du taux intraneuronal postsynaptique de GMPc (Green et al., 1991), NO exerce, aussi bien chez le murin que chez l'homme, une action de signal dans le système nerveux, non seulement central (Bredt et Snyder, 1989), mais aussi périphérique.
En neurophysiologie NO est maintenant considéré comme un messager biologique (Garthwaite, 1991) ou un messager rétrograde (Barinaga, 1991; Feldman et al., 1993) . I1 pourrait avoir un rôle dans la potentialisation a long terme (PLT) dans l'hippocampe. La PLT est un phénomène qui correspond à une augmentation particulière d l'efficacité de la transmission synaptique favorisant ainsi la mémorisation. Ceci indique une implication de la production de NO dans certaines formes d'apprentissages dependant de l'hippocampe (Bredt et Snyder, 1990; Bredt et al., 1991; Zhuo et al., 1993).
Il constitue un neurotransmetteur non cholinergique, non adrénergique, et médiateur de la relaxation du tube digestif (Desai et al., 1991); et participe aussi bien au contrôle neuronal du tonus vasculaire cérébral (Beckman, 1991), ou de l'érection (Rajfer et al. , 1992), qu'à celui de la sécrétion d'insuline par les cellules ss des îlots de Langerhans (Schmidt et al., 1992).
Par ailleurs, NO est impliqué dans des processus de destruction du cerveau, après des chocs aigus, tels que l'ischémie-hypoxie (Moncada et al., 1991; Snyder et Bredt, 1992; Choi, 1993). Le NO formé au cours de l'ischémie serait neurotoxique par plusieurs mécanismes. Le NO réagit avec les ions superoxydes pour former des peroxynitrites qui initient la peroxydation lipidique (Beckman, 1990). Le NO est capable de bloquer la respiration mitochondriale (Drapier et al. , 1988) et d'inhiber la synthèse d'ADN (Kwon et al., 1993) . En plus de ces effets cytotoxiques directs, NO exercerait un effet en favorisant la libération de glutamate survenant au cours de l'ischémis (Buisson et al., 1993) ce qui déclenche une entrée d'ions calcium qui se lient à la calmoduline, conduisant à l activation de la NOS. Le NO produit diffuse à travers les membranes cellulaires et parvient aux cellules cibles où il se lie à l'atome de fer du site actif de la quanylate cyclase soluble. Celle-ci produit alors le GMPc.
De plus, NO libéré peut agir au niveau pré-synaptique où il facilite la iibération de glutamate.
Cependant, il a été démontré in vitro que l'addition directe de NO ou de molécules libérant NO sur des cultures de neurones, bloque l'activation des récepteurs NMDA (Manzoni et al., 1992). Ces observations ont conduit les auteurs à suggérer que le NO endogène synthétisé par les neurones exerce une activité de r-étro-inhibition vis-à-vis des récepteurs NMDA. Ce rétro-contrôle s'exercerait en diminuant la fréquence d'ouverture des canaux associés aux récepteurs et par conséquent en réduisant l'influx calcique. Cet effet serait dû à un blocage par le NO du site modulateur du récepteur NMDA (Lipton et al., 1993).
- Rôle de NO dans le système immunitaire: Les premières études du NO ont surtout montré sa toxicité. On pensait autrefois que les nitrates excrétés par l'homme étaient uniquement d'origine alimentaire. Or t'équipe de Tannenbaum observa en 1981 que des individus et des rats qui consommaient peu de nitrates alimentaires excrétaient néanmoins de grandes quantités.
L'alimentation n'était donc pas la seule source de nltrates. En outre, un sujet atteint de diarrhée infectieuse excrétait beaucoup de nitrates urinaires: la Formation de ces nitrates semblait liée au processus inflammatoire. Plus récemment une équipe a observé que l'injection d'endotoxine bactérienne stimulait l'excrétion de nitrates chez le rat (Green et al., 1981; Snyder et Bredt,1992).
En effet, NO intervient dans la défense antitumorale, en particulier dans les mécanismes de cytotoxicité médiés par les macrophages (Stuehr et Marletta, 1985; Hibbs et al., 1987a, b; Drapier et al., 1988; Stuehr et Nathan,1989; Keller et al.,1990).
L'activation des macrophages péritonéaux murins, cluse se soit in vivo par des pathogènes à multiplication cellulaire tels que Mycobacterium bovis, ou in vitro par des cytokines en particulier l'interféron-gamma (1'IFN-y), les rend cytotoxiques pour les cellules tumorales cibles, les mécanismes de cytotoxicité mis en jeu ne passant pas par des processus de phagocytose. I1 a été démontré ensuite que ces macrophages activés expriment la iNOS et synthétisent du NO3 (Stuehr et Marletta, 1987a) et du NO2- en réponse à une stimulation par l'IFN-y, seul ou en combinaison avec le lipopolysaccharide (LPS) ou avec le tumor necrosis factor-alpha (TNF-a) (Stuehr et Marletta l987a,b; Ding et al., 1988). Ainsi, la cytotoxicité des macrophages activés contre des cellules tumorales a été établie (Hibbs et al., 198vu) comme dépendante de la concentration en L-arginine. Ces auteurs montrent aussi que les macrophages activés synthétisent la L-citrulline et le NO2- à partir de l'arginine et que le L-NMMA inhibe la synthèse de ces deux produits ainsi que l'expression de la cytotoxicité (Hibbs et al., 1987b).