INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Dans l'application principalement visée par l'invention, le quatrième seuil est supérieur au troisième. De préférence, le corps plat est traversé par une entretoise assurant le maintien des obturateurs sur le corps plat, cette entretoise comprenant par exemple un organe central de contention axiale, et au moins deux cales annulaires formant butées, enfilées sur l'organe central.
L'un au moins des premier et troisième obturateurs est avantageusement constitué par un diaphragme sensiblement plan présentant une élasticité intrinsèque qui le maintient dans son plan, alors que l'un au moins des deuxième et quatrième obturateurs est avantageusement appliqué sur le corps plat par un ressort précontraint correspondant, prenant appui sur l'entretoise, ce ressort étant par exemple conformé en étoile et présentant des branches arquées.
Le corps plat peut être conformé en disque et l'un au moins des obturateurs peut être conformé en disque ou en couronne circulaire.
Les premier et deuxième obturateurs présentent de préférence des premier et deuxième diamètres extérieurs respectifs, dont le deuxième est supérieur au premier, le deuxième obturateur pouvant en outre être disposé entre le premier obturateur et le corps plat.
Dans un mode de réalisation compact de l'invention, les premier et troisième obturateurs présentent respectivement des perçages en regard des troisième et première séries d'orifices, le deuxième obturateur présente des perçages en regard des première, troisième et quatrième séries d'orifices, et le quatrième obturateur présente des perçages en regard des première, deuxième et troisième séries d'orifices.
De préférence, chacune des première et troisième séries d'orifices occupe une surface du corps plat d'aire inférieure à l'aire de la surface du corps plat qu'occupe chacune des deuxième et quatrième séries d'orifices.
Le dispositif d'amortissement de l'invention peut avantageusement être traversé par au moins un orifice de fuite permettant une communication permanente des premier et deuxième volumes l'un avec l'autre.
Dans une deuxième étape, 10-2 mol d'hémisuccinate de cholestéryle dans 50 cm3 de CH2Cl2 à température ambiante et sous agitation pendant 20 heures, sont traités par 3#10-2 mol de chlorure d'oxalyle. Ceci conduit au chlorure de succinoyle correspondant avec un rendement de 96%, après élimination du chlorure de méthylène puis de (COCl)2 en excès sous vide.
Le dichlorhydrate en léger excès (2,25 équivalents) est mis dans un creuset en porcelaine et fondu sur plaque électrique. Le chlorure de succinoyle (1 éq. ) est ajouté par petites portions. Le mélange pâteux est remué à l'agitateur jusqu'à la fin du dégagement de HCI. Après refroidissement, le solide jaune paille obtenu est concassé puis repris 2 heures au reflux avec 50 cm3 de THF. Le dichlorohydrate en excès et le trichlorhydrate de diéthylène triamine formés, insolubles dans THF, sont enlevés par filtration. Après concentration du filtrat à environ 5 cm3, l'addition de CH30H absolu relargue le BAES-Chol qui, après filtration est repris successivement par une nouvelle portion de THF puis d'alcool. On recueille finalement 0,70 g (rendement 55%) de BAEC-Chol à partir initialement de 1 g de chlorure de succinoyle. La bande IR du groupement C=O (pastille KBr) est à 1651,8 cm-1 pour la fonction amide et à 1734,1 cm-1 pour la fonction ester.
Exemple 7 : Synthèse du lipide monocationique TAP-lithocholamide.
La synthèse du TAP-lithocholamide a été effectuée selon le schéma de la Figure 4. A 9,5 g (2,5#10-2 mol) d'acide lithocholique (> 99%, Fluka) dans 100 cm3 de THF anhydre (99,9%, Aldrich), on ajoute goutte à goutte à la température du laboratoire, 2,55 g de triéthylamine (99+%, Aldrich) dans 20 cm3 de THF, puis 2,72 g de chloroformate d'éthyle (>98%, Fluka). Le chlorhydrate de triéthylamine est séparé de la solution éthérée d'anhydride mixte par filtration. Après addition de 2,55 g de N,Ndiméthylpropylène diamine (99+%, Aldrich) dans le filtrat précédent, le mélange est mis 24 heures sous agitation mécanique, à température ambiante. Après refroidissement (0 C), on isole par filtration le lipide sous sa forme amine tertiaire. Le solide obtenu est repris dans 100 cm3 de THF et 10,5 g (7,5#10-2 mol) de ICH3 (99,5 %, Aldrich), et maintenu pendant 3 heures à 50 C. On recueille finalement 13,7 g (91%) de TAPlithocholamide. L'analyse par spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier (IRTF) en phase solide avec KBr donne (-CO-N) à 1658,9 cm-1 et (-NH- ) à 3378 cm-1.
- . - ....- 1 --- "-''-''.1''''''''' '-""-'..&....tU ..&....t...... A.Ì.&.",V..L..IU '-'..(""1......."""J.",.a.'lu..a.:..t.J SELON L'INVENTION POUR LE TRANSFERT D'ACIDES NUCLEIQUES.
Exemple 8 : Utilisation du dérivé monocationique TMAEC-Chol.
Les essais de transfection décrits selon ce qui suit sont effectués avec le TMAECChol préparé selon le protocole décrit dans l'exemple 1. a) Préparation des liposomes : Un mélange de lipide cationique TMAEC-Chol et de lipide (ou colipide) neutre : la dioléolylphosphatidyl éthanolamine (DOPE), dans un rapport pondéral 1 :1, est dissous dans le chloroforme, puis évaporé sous vide à l'évaporateur rotatif. Le film mince obtenu est séché pendant encore au moins 5 heures avant d'être réhydraté par de l'eau stérile. Le chlorure de méthylène peut être utilisé à la place du chloroforme.
La concentration finale en lipide cationique est de 1 mg/mL, soit 1,55 mM.
Le mélange est soumis à un vortex pendant 2 minutes puis soniqué pendant 30 minutes de façon intermittente à l'aide d'un sonificateur Bransonic, modèle 1210. Une solution claire est obtenue. La solution est centrifugée pendant 15 mn avec une vitesse de 12000 g. Le surnageant est prélevé et, si nécessaire, filtré sur un filtre Millipore de 0,22 m de diamètre de pore et le filtrat est stocké à 4 C. Les liposomes sont caractérisés en taille par un appareil de diffusion dynamique de la lumière. La distribution en nombre indique un mode unique avec un diamètre moyen de 124 nm.
Le même protocole de préparation est applicable au BAEC-Chol. b) Oligonucléotides et plasmides : Les oligonucléotides utilisés, de longueur variable de 12 à 28 mers, sont fournis sous forme lyophilisée par Genosys (Grande Bretagne) ou Eurogentec (Belgique). Afin de visualiser leur internalisation, certains oligonucléotides sont marqués par de la fluorescéine en postion 5'. Les oligonucléotides sont dissous dans de l'eau stérile à la concentration de 3 nM en nucléotide.
Les plasmides utilisés sont des plasmides pCMV-P portant un gène reporter codant pour la P-galactosidase (Clonetech), ou pGL2-luc portant un gène reporter codant pour la luciférase (Proméga). Les plasmides ont été amplifiés suivant le protocole standard. Ils sont stockés dans un tampon Tris-EDTA (acide éthylènediamine tétraacétique), pH = 8 à la concentration 1 mg/mL.
c) Cultures cellulaires : Les cellules utilisées sont des cellules adhérentes, d'origine cancéreuse (MCF7, A549, U373MG) ou non (3T3), ou des cellules en suspension (CEM, U937). Les cellules sont cultivées suivant les conditions standards pour chaque type. Le milieu DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) est utilisé pour les cellules adhérentes MCF7, A549, U373MG, 3T3 et le milieu RPMI 1640 (Roswell Park Memorial Institute) pour les cellules en suspension CEM et U937. Les milieux contiennent 10% de sérum de veau foetal (SVF) et des antibiotiques pénicilline-streptomycine. d) Protocole de transfection in vitro : Pour les cellules adhérentes, la veille du jour de transfection, les cellules sont ensemencées (5x10 cellules par puits dans des plaques Falcon à 6 puits ou 5x10 cellules par puits d'une lame Labtek (Nunc) à 4 puits). Ainsi le jour de transfection les cellules sont confluentes à 60-70%.
Une quantité d'ADN (plasmide ou oligonucléotide) de 1 g et la quantité choisie de liposomes cationiques TMAEC-Chol ont été séparément diluées dans 10 L d'eau stérile et légèrement vortexées puis mélangées.
Après 15 minutes, le mélange est dilué dans 1 mL de milieu OptiMEM (Gibco) sans sérum. Les cellules sont lavées avec le milieu sans sérum puis le mélange dans l'OptiMEM est ajouté aux cellules. Après 6 heures d'incubation à 37 C, dans une atmosphère contenant 5% de C02, l'OptiMEM est retiré, remplacé par 1 mL de milieu de culture contenant 10% de sérum. Les cellules continuent à être incubées pendant le temps voulu. Dans les essais pour tester la capacité de transfection en présence de sérum, 1 mL de milieu contenant la teneur désiré en sérum est utilisé à la place d'OptiMEM.
Le même protocole est utilisé pour les transfections témoins utilisant le DC-Chol synthétisé suivant la méthode de Gao et Huang (1991) [3] . Concernant les transfections utilisant la lipofectine, les complexes sont obtenus selon le protocole recommandé par le fabricant. e) Evaluation du niveau de transfection : La méthode d'évaluation du niveau de transfection consiste à détecter la ssgalactosidase par le réactif AMPGD (3-(4-méthoxyspiro(l,2-dioxetane-3,2'- tri cyclo(3.3. 1. I)décane)-4-yl)phényl- P-D -galactopyranoside (Tropix). En présence de P-galactosidase, l'AMPGD à pH > 9, conduit à l'adamantanone et à l'anion méthyl
permet d'effectuer la mesure [15].
La valve de commutation peut être reliée à toute partie du système de canalisa tion d'air entre la chambre pneumatique de travail et la source de dépression. Par exemple, le système de canalisation d'air est indépendant d'une unité de montage comprenant les premier et deuxième éléments de montage et le corps élastique qui relie élastiquement le premier et le deuxième éléments de montage, et la valve de commutation est reliée à une partie du système de canalisation d'air, cette partie étant distante de l'unité de montage.
En outre, la structure de la valve de régulation de pression prévue dans le dispositif actif d'amortissement des vibrations du présent mode de réalisation de l'invention n'est pas particulièrement limitée. Il peut s'avérer préférable d'utiliser une valve de régulation de pression du type à entraînement direct dont le clapet de valve est sollicité par un ressort de compression hélicoïdal, dans un sens prédéterminé, pour fermer de façon étanche aux fluides la valve, et est ouvert et fermé en fonction de l'équilibre entre la force de la pression d'air appliquée au clapet de valve (propor tionnel à la différence de pression entre les pressions négative et atmosphérique qui sont appliquées au clapet) et d'une force de sollicitation du ressort de compression hélicoïdal, et une modification de cette valve de régulation de pression du type à entraînement direct qui comprend en outre une vis réglable pour régler la valeur de la compression du ressort de compression hélicoïdal pour régler le niveau de pression négative prédéterminé du ressort de compression hélicoïdal, par exemple. En variante, il est préférable d'utiliser une valve de régulation de pression du type à pilote, qui comporte un organe pilote et régule le niveau de pression négative prédé terminé avec une haute précision, en utilisant une pression secondaire du dispositif pilote. A ce sujet, le nombre de valves de régulation de pression n'est pas particuliè rement limité. La valve de régulation de pression peut être disposée soit sur une partie, soit, en variante, sur une pluralité de parties de la zone à application de pression négative. Selon un deuxième mode de réalisation préféré de la présente invention se rapportant au premier mode de réalisation de l'invention, la valve de régulation de pression est reliée à une partie de la zone à application de pression négative entre la valve de commutation et la chambre pneumatique de travail ou la source de dépres sion. Cet agencement est efficace pour empêcher ou réduire l'influence négative exercée sur la source de dépression de la pression négative introduite par la valve de régulation de pression, pour éviter une réduction indésirable du niveau de la valeur absolue de la pression négative dans la source de dépression. De manière correspondante, il permet d'éviter une influence indésirable de cette réduction du niveau de pression négative de la source de dépression sur d'autres équipements ou dispositifs reliés à la source de dépression.
Dans un troisième mode de réalisation préféré de la présente invention se rapportant au premier ou au deuxième mode de réalisation de l'invention, le système à canalisation d'air comprend en outre un passage de communication d'atmosphère qui est relié à la valve de régulation de pression, afin de relier l'atmosphère à la zone d'application de pression négative, par la valve de régulation de pression, et un conduit atmosphérique relié à la valve de commutation pour connecter la zone à régulation de pression négative à l'atmosphère, le passage de communication avec l'atmosphère est relié au conduit atmosphérique, pour de cette manière relier l'atmos phère à la valve de régulation de pression, en passant par ledit conduit atmosphéri que.
Comme décrit ci-dessus, lorsque le niveau de pression négative dans la région à application de pression négative est supérieur au niveau de pression négative prédéterminé, la valve de régulation de pression est actionnée, c'est-à-dire est ouverte, pour relier l'atmosphère dans la zone à application de pression négative, par le passage de communication d'atmosphère. Dans ce cas, le passage de communica tion d'atmosphère tend à produire du bruit du fait de l'écoulement d'air qui le traverse à vitesse relativement élevée. Dans ce mode de réalisation préféré, cependant, le passage de communication d'atmosphère est relié au conduit atmosphérique, de sorte que l'atmosphère est introduite dans la zone à application de pression négative, de façon sûre en passant par le conduit atmosphérique. Le conduit atmosphérique, dans ce cas, fonctionne comme un modérateur ou un silencieux, en assurant une réduction du bruit avec une structure très simple.
Selon un quatrième mode de réalisation préféré de l'invention selon l'un quelconque des premier à troisième modes de réalisation de l'invention, le dispositif actif d'amortissement des vibrations comprend en outre : un silencieux qui est disposé dans le passage de communication de l'atmosphère. Dans cet agencement, le silencieux fonctionne pour éliminer ou pour réduire le bruit provoqué par le passage de l'air en provenance de l'atmosphère dans la valve de régulation de pression, lors de l'actionnement de la valve de régulation de pression, ce qui entraîne une élimination efficace du problème posé par le bruit.
Selon un cinquième mode de réalisation préféré de l'invention, selon l'un quelconque des premier à quatrième modes de réalisation de l'invention, la valve de régulation de pression est incorporée à demeure dans la valve de commutation. Une telle structure monolithique des valves de régulation de pression et de commutation permet leur installation sur le système de canalisation d'air avec une structure d'une grande simplicité, d'une grande efficacité au niveau de l'assemblage et en utilisant l'espace de façon optimale.
Selon un sixième mode de réalisation préféré de l'invention, selon l'un quelconque des premier à cinquième modes de réalisation de l'invention, le premier et le deuxième élément de montage et le corps élastique qui relie élastiquement le premier et le deuxième éléments de montage constituent une unité de montage, et le système de canalisation d'air est indépendant de l'unité de montage, tandis que la valve de régulation de pression est incorporée à demeure dans l'unité de montage, ou bien que la valve de communication est reliée à une partie du système de canalisation distante de l'unité de montage.
Une telle structure monolithique de l'unité de montage et de la valve de régula tion de pression permet son installation sur le système de canalisation d'air avec une grande simplicité de structure, une grande efficacité dans l'assemblage et en utilisant l'espace de façon optimale. Le présent mode de réalisation de l'invention peut être applicable à tout amortisseur de vibrations classique équipé de la valve de commu tation, par le seul fait d'incorporer à demeure la valve de régulation de pression dans l'amortisseur, sans devoir agrandir ou compliquer la structure de la valve de commutation, comme dans le cas dans lequel la valve de régulation de pression est incorporée dans la valve de commutation.
Dans un septième mode de réalisation préféré de l'invention selon l'un quelconque des premier à sixième modes de réalisation de l'invention, la source de dépression est constituée par la pression négative générée dans un système d'admis sion d'air appartenant à un moteur à combustion interne qui adopte sélectivement un mode de combustion en charge stratifiée et un mode de combustion stoechiométrique, pour son actionnement par combustion de carburant.
Cet agencement permet d'avoir une régulation efficace de la pression négative dans la zone à application de pression négative, pendant l'actionnement en combus tion stoechiométrique du moteur à combustion interne, dans lequel le niveau (la valeur absolue) de la pression négative dans la source de dépression est relativement haut. Ainsi, le dispositif actif d'amortissement des vibrations selon le mode de réali- cation actuellement préféré de l'invention permet d'éliminer ou d'empêcher le problème classiquement subi de la détérioration de la vibration à amortir du fait de l'application d'une force oscillante excessivement grande dans la chambre pneuma tique de travail, ceci étant provoqué par le fait que la pression négative, telle que générée dans le mode de combustion stoechiométrique du moteur à combustion est excessivement élevée.
Par exemple, le dispositif actif d'amortissement des vibrations selon le présent mode de réalisation de l'invention permet d'avoir un effet d'amortissement souhaité, même dans le cas dans lequel l'amortisseur de vibrations est accordé, de manière à manifester son effet d'amortissement des vibrations de la vibration générée dans l'actionnement en combustion à charge stratifiée du moteur où la valeur absolue de la pression négative de source de dépression est de faible valeur, étant donné que la pression atmosphérique relativement élevée est réduite à l'admission dans l'action- nement en combustion stoechiométrique du moteur par l'étranglement du papillon des gaz qui constitue alors une valve de régulation de pression. Ainsi, le dispositif actif d'amortissement des vibrations du mode de réalisation actuellement préféré de l'invention est en mesure de manifester son effet à la fois par rapport aux vibrations générées dans l'actionnement en combustion stoechiométrique et par rapport à la vibration générée dans l'actionnement en combustion à charge stratifiée. II est à noter que le niveau prédéterminé de pression négative utilisé pour l'actionnement de la valve de régulation de pression peut être fixé à un niveau de pression négative au moins inférieur à celui de l'actionnement en combustion stoechiométrique du moteur, niveau qui est préférablement fixé à un niveau de pression négative sensiblement égal ou inférieur à celui qui est atteint dans l'actionnement en combustion à charge stratifiée du moteur.
Selon un huitième mode de réalisation préféré de la présente invention, selon l'un quelconque des premier à septième modes de l'invention, le présent dispositif actif d'amortissement des vibrations comprend en outre un organe de restriction et de régulation de pression, susceptible de fonctionner pour limiter l'actionnement de la valve de régulation de pression, en tant que de besoin.
Dans ce mode préféré de l'invention, l'organe de restriction et de régulation est susceptible de fonctionner pour inhiber l'actionnement de la valve de régulation de pression, de manière que la pression négative de la source de dépression puisse être appliquée directement à la chambre pneumatique de travail sans être régulée ni réglée par la valve.- de régulation de pression. En conséquence, le dispositif actif d'amortissement des vibrations peut générer une force oscillante relativement grande, en faisant fonctionner l'organe de restriction de régulation de pression en tant que de besoin pour appliquer à la chambre pneumatique de travail la pression négative élevée de la source de dépression.
Par exemple, l'amortisseur de vibrations du mode actuellement préféré de l'invention est de préférence utilisable avec le moteur à combustion interne indiqué ci-dessus qui a deux modes de combustion, précisément le mode de combustion stoechiométrique et le mode de combustion à charge stratifiée. Dans ce cas, l'organe de restriction de régulateur de pression est exploité durant l'actionnement à combus tion à charge stratifiée pour inhiber l'actionnement de la valve de régulation de pression, tandis que le niveau de pression négative prédéterminé, utilisé pour l'actionnement de la valve de régulation de pression, est fixé à un niveau de pression négative qui est inférieur au niveau de pression négative appliqué à la chambre pneumatique de travail durant l'actionnement à combustion à charge stratifiée du moteur. Ceci rend possible l'application d'une pression négative suffisamment élevée à la chambre pneumatique de travail pendant l'actionnement à combustion à charge stratifiée du moteur, dans lequel la pression négative relativement basse de la source de dépression est disponible, plutôt que pendant l'actionnement en combustion stoechiométnque du moteur dans lequel la pression négative relativement élevée de la source de dépression est disponible. En conséquence, le présent amortisseur de vibrations est en mesure de manifester un effet d'amortissement souhaité par rapport à une vibration de grande amplitude, dans l'actionnement en combustion à charge stratifiée du moteur, en appliquant directement à la chambre pneumatique de travail la pression négative disponible relativement faible de la source de dépression, sans procéder à une régulation au moyen de la valve de régulation de pression, et par rapport à la vibration de faible amplitude de la combustion à charge stratifiée du moteur par réduction de la pression négative disponible relativement élevée que l'on dans la source de dépression, au niveau de pression négative prédéterminé, au moyen de la valve de régulation de pression et par application à la chambre pneumatique de travail de la pression négative de valeur réduite.
Selon un neuvième mode préféré de la présente invention, selon l'un quelconque des premier à huitième modes de l'invention, le dispositif actif d'amortis sement des vibrations à actionnement pneumatique comprend en outre : une chambre de fluide, définie partiellement par le corps élastique, qui est disposée entre les premier et deuxième éléments de montage et qui est remplie d'un fluide incompressi ble ou peu compressible, et un élément mobile définissant partiellement la chambre de fluide, sur l'une des faces opposées de cette chambre de fluide, et la chambre pneumatique de travail, sur l'autre face opposée, distante de la chambre de fluide, l'élément mobile étant mis en oscillant par la variation périodique de la pression d'air intervenant dans la chambre pneumatique de travail, pour induire une variation de pression du fluide dans la chambre de fluide, afin de générer la force oscillante entre les premier et deuxième éléments de montage. L'élément mobile peut comprendre un élément élastique qui produit une force élastique pour ramener ledit élément mobile à sa position d'origine.
Dans cet agencement, une variation périodique de la pression d'air dans la chambre pneumatique de travail est transmise entre le premier et le deuxième élément de montage, via une variation de pression du fluide remplissant la chambre de fluide. Ceci permet d'avoir une génération efficace de la force oscillante agissant entre les premier et deuxième éléments de montage et qui est provoquée par l'écoulement de fluide dans la chambre de fluide, par exemple à la suite d'une réso nance du fluide, ce qui donne un effet d'amortissement des vibrations amélioré.
On va décrire en détail ci-dessous chacun des composants réactionnels après avoir expliqué tout d'abord la réaction catalysée par l'acide qui déroule dans la composition de résist selon l'invention.