INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Selon d'autres caractéristiques de rinvention: - chaque volant motorisé d'entraînement est entraiînt par l'intermédiaire d'un réducteur à arbre creux, - les deux volants motorisés d'entraînement sont alimentés électriquement par une alimentation à convertisseur de fréquence, de manière à commander la vitesse de chaque moteur par une fréquence commune, - chaque volant est monté équilibré sur deux paliers symétriques, de manière à éviter toute transmission d'effort radial sur leur entraînement respectif, - un volant motorisé est monté sur l'ensemble mobile avec interposition d'un bras anti- rotation muni d'un dispositif de mesure de couple résistant, en vue de contrôler la vitesse de descente de l'ensemble mobile de travail - les moyens de motorisation sont montés de part et d'autre du plan vertical passant par le ruban de scie,
3 2789919
- un volant motorisé est déplaçable avec ses moyens de motorisation par rapport à la structure porteuse de l'ensemble mobile de travail selon une direction correspondant à la mise sous tension du ruban de scie, - chaque volant motorisé comporte un moyen d'entraînement intermédiaire claveté sur une extrémité dépassante de l'arbre du volant correspondant, - chaque moyen d'entraînement intermédiaire est par exemple un réducteur à arbre tubulaire apte à être enfilé directement sur l'extrémité d'arbre de volant munie d'une clavette de solidarisation en rotation, - chaque moyen d'entraînement intermédiaire comporte un élément de
solidarisation à un bout dépassant de l'arbre à l'aide d'un moyen démontable.
titre d'exemple non limitatif en référence aux dessins annexés dans lesquels: - la figure 1 représente schématiquement une vue en perspective d'un dispositif selon l'invention, - la figure 2 représente schématiquement une vue partielle en coupe selon un
plan vertical II-II de la figure 1 d'un volant motorisé de dispositif selon l'invention.
En référence à la figure 1, un dispositif de sciage des métaux selon l'invention comporte un ensemble mobile de travail 1 supporté par au moins un support 2 solidaire d'une base 3. Le support 2 et la base 3 sont liés rigidement entre eux pour
constituer un bâti de dispositif.
Samulski et al., 1989. J. Virol., 63 : 3822-3828.
Schubert, D., J. Harris, C.E. Devins and S. Heineman. (1974). Characterization of a unique muscle cell line. J. Cell Biol. 61, 398-413, Seidel, U., and Arnold, H. H., 1989. Identification of the functional promoter régions in the human gene encoding the myosin alkali light chains MLC 1 and MLC3 of fast skeletal muscle. J. Biol. Chem. 264: 16109-16117.
Shield M.A. et al., 1996. E-Box sites and a proximal regulatory region of the muscle creatine kinase gene differentially regulate expression in diverse skeletal muscles and cardiac muscle of transgenic mice. Mol. and Cell. Biol., 16(9) :5058-5068.
Sorensen et al., 1995. Purification and characterization of a low molecular mass T-cell antigen secreted byM. tuberculosis. Infect. immun., 63(5) : 1710-1717.
Szakiel G et al., 1995. Trends Microbiol , 1995, 3 (6) : 213-217.
Tacson et al., 1996. Nature Medicine, 2(8)888-892.
Van der Hocven, F., Zakany, J., and Douboulc, D., 1996. Gene transpositions in the HoxD complex reveal a hierarchy of regulatory controls Cell 85: 1025-1035.
Yaffë D., O. Saxel, 1997. Serial pasaging and différentiation of myogenic cells isolated from dystrophic mouse muscle. Nature 270,725-727.
Zammit, P. S. and Buckingham, M., 1997. Non-isotopic whole mount in situ hybridisation of mRNA in intact mouse embryos. Multimedia Methods in Molecular Biology on CD-ROM. 1st Edition. Ed. T. Partridge and D. Rickwood, Chapman and Hall, London.
Zhu, L., Lyons, G. E., Juhasz, 0., Joya, J. E., Hardeman, E. C., and Wade, R., 1995.
Developmental regulation of troponin 1 isoform genes in striated muscles of transgenic mice. Dev. Biol. 169 : 487-503.
LISTE DE SEQUENCES INSTITUT PASTEUR CASSETTE DE REGULATION DE L'EXPRESSION D'UN ACIDE NUCLEIQUE HETEROLOGUE DANS UNE CELLULE EUCARYOTE, EN PARTICULIER MUSCULAIRE D18141 4 Patentln Vers. 2.0 1 798 ADN Souris 1 gatcttaggg aagaaataaa aacgtatttc cctatgggtc agcatcagta atgtcttttg 60 tctgttacat tgtctatact gtgggagaac acagcagctg aaatggaatg gagaaacgtt 120 gaggggtaaa ggctggaact ctccccatag cgacattttg aagtgtatat aactgaacaa 180 gggtctttgc aaagtatcac acagtttgca aagaaagaca cgcctttacc gactaaaatg 240 tgaaaactgc ttttcatcta aagataatta aatctgtgcc agacgaggag accataaagt 300 gacagggctg gatttagccc ttgacctttc agttctgcaa atgaaacccc tggcaagttg 360 tctgtagaag tcattccata attgcccagc cttaagcacc acctgacggg tgggaattgt 420 gggaagggtt atatttagtc tgctgagact gcacattctt ctcttccaac tgagcggcct 480 tttgtatgaa gataggatgt cacctacttt actccttcat caatgctacc acttctgttt 540 tctcgcccaa ccagaatccc gacaacaaaa cccgctgtat aaaagtatca gtggcttcag 600 aatatgctag ttaaatttta aatcatgtgg gtgataagtc catttgttct agtcagaaac 660 taataatagt gacttgaagc tagggaggaa aggtttctct tggaacattt ttccttctgt 720 ccttgggagt gagctgtttc ttagctactg tgcgcgccca acagtgtatt atctccagct 780 cataaaaatc cagtcgac 798 2 257 ADN Souris
2 gataacttca gcacactgtc atgggaccta accttattaa attaccatgt gtgaagcgtc 60 cataactcaa gtaacagcag gtgcaaaaat ggagctgcag gcagaagagt ggtagtcatt 120 tttacaaatc cccaccagct ggcgaaacaa caggtgccta attcctcagc ttttaaaaat 180 aacttttaaa aagcctgtgc tgcataagca aatattttca agtttgtttt taaaccatct 240 tcaagttacc ttggtca 257 3 3403 ADN Souris 3 aagcttgcat gcctgcaggt acctttcctc tctggattag ctatagttta ctatttcttg 60 tgtcaactgg tatgtttaca cttatatttt gattttcagt aggtaaagaa aaagctaagc 120 ttttattgtt gatatgttaa agatttagag aaatactagg atgaagtagt ttaacagttt 180 cttagcactt tatggctcct attttaatag taacaacaaa ccttaatgtg atatctaagt 240 ggttaaaaat agcttattca caaataaatt ggagtttggt gctgactttg tagttttttc 300 acaagttttt atacaaattt atcatgtttc ctatgtatac aaggccacca catctttcca 360 tctgaaaaaa aaagatgcaa tatgaagatt atcattatgt acaatgaggc aactcaatgg 420 agtatttaca gttaccagct tcactaaaga tatatgctag ctctcaataa tgattaggca 480 attcagattt agggctacaa atacatagat acaatttcat caaatctaat ggcacaaata 540 ccaattacaa aatttcactg taatgactca aagcatttct aatctctctg ttaacattca 600 ccaataacct ttcaaaatat catatttcca atcatgttaa aaacatgaag acacatttac 660 ataggtgcta ctacctttaa aaaattatta tttgtcattt agagagatca aggtcctagg 720 agatattttc acaatttaaa ctttgagtca aaatgatata ctatttaata ttgtgattag 780 cacctaataa tcacacaaat agcggctagt attgtgatgt tttcatatgt ccacgtaatt 840 atgtattttg aagaggtggt gcatacttag ctgttcattt ctctagaacg gtaagagcgt 900 aagttgaaaa tactgagcaa gacacacttc ctgcttttta tgagtaactt ccctaaggac 960 acatgcagaa gtcacaattc acctcacatc ttctttattc ctttgagcta gggcaagtgt 1020 gtcgagagtg ataaccccca tgtatgaact ccagtgaaca ctctaaaact gatctttccc 1080 ccaagccatg gcagcttttc tgttttcaga taagctgcta taaaagccca tcgccggcaa 1140 ttcccttaca cctttaatgt cgaagtacta ttttgcacgc ctagagccta cttagtatta 1200 tcttggtctg tagactgagc cataaagtgt tggacaggga agcttggttt tagtaagaac 1260 ttagcaacaa caacaagata caaatgatgt gtcagtttcc ttgcttgcta agaatttcag 1320 aaataaaata tacaatagtc agtctctgta aagaaaatgg gagagaaggt tgtcctcaaa 1380 caaatgctag gagcgaaggg ggggagatag aaagggaggc gccaaaccat tctcactttt 1440 tttaagctta gattataccc ctgctaatac tgattataaa gactattctt taatggcgat 1500 ttgggaacct gatcaggttg ccatgtgggt gtatcctaag aaatacccag agcactcaat 1560
gccttttcaa gacctcagaa ctttaccata aggggccaag aattggagag tgttctttct 1620 ataacagtta ctatttcaaa cttcaaccca gtcgcatcca tgaagttcca ttaataccca 1680 gtcttgctga ctagacactt gcaaggtcca taattatata tcagaagccc gagccctaga 1740 tgaccccaag ttttccacga gcaaagaaat gtcttaagga ggacagttgc agggaacatc 1800 tcagagataa agaccataaa agtactgaca ggcttcagtc tcaccagggc tgttcacgtc 1860 tagatgctgg tttcctaaaa atagccccag ggtacatgtc tctctttccc tttgccctaa 1920 gaaagctaaa gaactcctcc aggaggagtg gcaactgccc tgtgaaatct gatgctagat 1980 atgaggtcag tttgcccaga aataaaagga agccagagag aggttaagac tccactcagg 2040 gattggagct gccttcagtt tatcctccag ctccactgct gtttcgcagc ctagaactcc 2100 atcatggtgg gtcctacaag acaacgacga tatgtcattt ataggaagag acagttaggc 2160 aacaggagca gccaggcaga caaggaatag gatggaggac agaacctatt taacacaagg 2220 tttttggaac ctactattgg tttctatgag ctagatagaa gaaattactt ggaactgtgc 2280 accagatgga aaaattcgtc ttttttctca gagcaggcgt ttgtgcttca ccagcttttg 2340 ttatatcatg caagattcat ctaaatttag aagggggata aaagtgcaac tatagtgttg 2400 ctttaaaata gaattcagtg ataaccagta gctaaagtta agcaaactgc ctctgattct 2460 tcagtgtcat atactagtat aaaattacgt taattagaca gaaagacttt taaagggtgg 2520 tttttatatg taattttatt tgcagtttta aatgtatacc ttatctgaca tatgctaaat 2580 atagacagct atggcatttt tctaggagtg ttctttctgt ttagaatttt ttaatatttt 2640 acatggttaa gatatagaga aaggatttcc aagttatctt tcgcccaatt tagattttat 2700 gctcctaggt tctaaaattt ccctcgacac cacctcttcc tgtgccattg tacctacctg 2760 gttccctaaa ggcctcagag caaagagcac tctttctgtc aatgcatttt gaaagtcctc 2820 tctttctctc tctctcttgc caccacagtc cttcagtgct gaccagattg ccggtaagtg 2880 actgagcagc tctaccctag gaagagctct gtctgtcttt gagatttccc taactccaca 2940 gcatgttcct ttgtgactca gactgttcgt gcctatgcca tgcctgaact cagaataagt 3000 gggctgactc ctggagctta ttctgaagag aactcgagga atgagctgga cgtgctcata 3060 aatcaggaca cttgtttctg gttaaaatat tctttatgat taatttcttt ccaacagatc 3120 gagttctcta aggagcaaca ggagggtaag tttaaaagct gtagccattc atatgtgcgg 3180 actcagaggt gacaagtgag aaaaccaagt cccttgggat gagctaagtg ctgtctaatt 3240 atccacactg gtgctgctac cctaaatata aattgctttc aatcactcta aatataaacc 3300 tgcataactg aagcccttgg ttagagtcag taatcaaagc tttaaggaaa ttaaaattag 3360 agctttaata agtccttata gccactgatt tccaaataag atg 3403 4 1960 ADN Souris
4 aagcttagat tatacccctg ctaatactga ttataaagac tattctttaa tggcgatttg 60 ggaacctgat caggttgcca tgtgggtgta tcctaagaaa tacccagagc actcaatgcc 120 ttttcaagac ctcagaactt taccataagg ggccaagaat tggagagtgt tctttctata 180 acagttacta tttcaaactt caacccagtc gcatccatga agttccatta atacccagtc 240 ttgctgacta gacacttgca aggtccataa ttatatatca gaagcccgag ccctagatga 300 ccccaagttt tccacgagca aagaaatgtc ttaaggagga cagttgcagg gaacatctca 360 gagataaaga ccataaaagt actgacaggc ttcagtctca ccagggctgt tcacgtctag 420 atgctggttt cctaaaaata gccccagggt acatgtctct ctttcccttt gccctaagaa 480 agctaaagaa ctcctccagg aggagtggca actgccctgt gaaatctgat gctagatatg 540 aggtcagttt gcccagaaat aaaaggaagc cagagagagg ttaagactcc actcagggat 600 tggagctgcc ttcagtttat cctccagctc cactgctgtt tcgcagccta gaactccatc 660 atggtgggtc ctacaagaca acgacgatat gtcatttata ggaagagaca gttaggcaac 720 aggagcagcc aggcagacaa ggaataggat ggaggacaga acctatttaa cacaaggttt 780 ttggaaccta ctattggttt ctatgagcta gatagaagaa attacttgga actgtgcacc 840 agatggaaaa attcgtcttt tttctcagag caggcgtttg tgcttcacca gcttttgtta 900 tatcatgcaa gattcatcta aatttagaag ggggataaaa gtgcaactat agtgttgctt 960 taaaatagaa ttcagtgata accagtagct aaagttaagc aaactgcctc tgattcttca 1020 gtgtcatata ctagtataaa attacgttaa ttagacagaa agacttttaa agggtggttt 1080 ttatatgtaa ttttatttgc agttttaaat gtatacctta tctgacatat gctaaatata 1140 gacagctatg gcatttttct aggagtgttc tttctgttta gaatttttta atattttaca 1200 tggttaagat atagagaaag gatttccaag ttatctttcg cccaatttag attttatgct 1260 cctaggttct aaaatttccc tcgacaccac ctcttcctgt gccattgtac ctacctggtt 1320 ccctaaaggc ctcagagcaa agagcactct ttctgtcaat gcattttgaa agtcctctct 1380 ttctctctct ctcttgccac cacagtcctt cagtgctgac cagattgccg gtaagtgact 1440 gagcagctct accctaggaa gagctctgtc tgtctttgag atttccctaa ctccacagca 1500 tgttcctttg tgactcagac tgttcgtgcc tatgccatgc ctgaactcag aataagtggg 1560 ctgactcctg gagcttattc tgaagagaac tcgaggaatg agctggacgt gctcataaat 1620 caggacactt gtttctggtt aaaatattct ttatgattaa tttctttcca acagatcgag 1680 ttctctaagg agcaacagga gggtaagttt aaaagctgta gccattcata tgtgcggact 1740 cagaggtgac aagtgagaaa accaagtccc ttgggatgag ctaagtgctg tctaattatc 1800 cacactggtg ctgctaccct aaatataaat tgctttcaat cactctaaat ataaacctgc 1860 ataactgaag cccttggtta gagtcagtaa tcaaagcttt aaggaaatta aaattagagc 1920 tttaataagt ccttatagcc actgatttcc aaataagatg 1960
Composition aqueuse, notamment sous forme de gel, à base de H2O2, acides et ions métalliques, procédé de préparation notamment quand lesdits ions sont Ag2+ et utilisation dans le domaine de la désinfection et/ou du traitement de surface Domaine de l'invention La présente invention concerne en tant que produit industriel nouveau une composition aqueuse, notamment sous forme de gel, à base de H202, d'acides et d'ions de Agn, Ag, Vv, Nbv, Tav, Mo, 5 Com, Inill ou T1III, Elle concerne également un procédé de préparation, notamment quand lesdits ions sont Ag2+, et l'utilisation de cette composition dans le domaine de la désinfection, de l'hygiène et/ou de la dépollution, d'une part, et dans le domaine du traitement de surface (en particulier le nettoyage, le décapage et/ou la passivation), d'autre part.
Art antérieur L'art antérieur le plus proche est constitué par le document de brevet WO-A-96/18301. Avant la publication de ce document, on avait déjà proposé dans le passé des compositions aqueuses désinfectantes contenant, les unes du peroxyde d'hydrogène et un mélange acide carboxylique/ peracide carboxylique du type RC02H/RC03H (où R est CH3 ou CH3CH2) (voir en particulier à cet effet EP-A-0370850, EP-A-0193416, EP-B- 0087343, FR-A-2321301 et FR-A-2321302), et les autres du peroxyde d'hydrogène et des ions Ag+ (voir notamment à cet effet US-A-3035698 et GB-A-2189394), dans chaque cas lesdites compositions aqueuses désinfectantes étant stabilisées par un acide fort (essentiellement H3PO4).
Ces compositions aqueuses désinfectantes antérieures, à savoir (i) celles du type H202 + RC02H/RC03H + H3PO4 et (ii) celles du type H2O2 + Ag+ + H3P04, sont insuffisantes eu égard à leur absence d'efficacité sur plusieurs souches de bactéries et de moisissures, et en particulier sur les souches de Penicillium verrucosum.
Une technique plus récente et nettement plus efficace (notamment vis-à-vis des dites souches de Penicillium verrucosum qui étaient résistantes aux deux types sus-visés de compositions aqueuses désinfec-
tantes) a été décrite dans WO-A-96/18301 précité. Selon WO-A-96/18301, la technique préconisée fait appel à une composition aqueuse désinfectante, d'hygiène et dépolluante, qui comprend dans de l'eau : (A) H2O2, (B) un mélange RCOzH/RC03H (où R est CH3 ou CH3CH2), (C) un composant d'argent en tant que source d'ions Ag+, et (D) un agent stabilisant (principalement H3P04), le tableau IX de WO-A-96/18301 mettant en évidence la synergie de la composition aqueuse contenant les composants A+B+C+D. par rapport aux compositions aqueuses contenant les composants A+B+D et A+C+D.
Il se trouve que la solution aqueuse de A+B+C+D selon WO-A-96/18301 n'agit pas assez rapidement quand il s'agit d'inhiber ou mieux de détruire les microorganismes, tels que les bactéries, les moisissures, les virus et les algues microscopiques, en particulier en fragilisant leur paroi, notamment par dégradation de leur biofilm, en perforant leur paroi ou encore en empêchant leur pénétration dans les cellules de l'organisme ou en protégeant lesdites cellules de leurs toxines.
Par ailleurs, les modalités opératoires décrites dans GB-A-2189394 en ce qui concerne la préparation de la solution aqueuse concentrée en argent (i.e. le composant C ci-dessus) en présence de H3P04, d'une part, et celle de la solution aqueuse résultante concentrée en argent et en peroxyde d'hydrogène et stabilisée (i.e. la solution aqueuse contenant A+C+D), d'autre part, ne conduisent pas à la production d'ions Ag2+ ni à celle d'ions Ag3+.
En effet GB-A-2189394, qui préconise un procédé comprenant : - le mélange d'un acide minéral fort (pH 60 C, le rapport molaire acide minéral fort/composant argent étant supérieur ou égal à 1/1 ; - le refroidissement du mélange résultant à une température de 25-30 C et l'ajout d'un acide organique stabilisant avec éventuellement de la gélatine ; et, - l'incorporation de H2O2 dans le mélange résultant, cite (voir page 1 lignes 46-50) des composés d'argent (I) qui fournissent en
milieu acide fort des ions Ag+, il s'agit de sels d'argent (I) et d'un sel complexe d'argent (I) à savoir AgNaCl2, d'une part, et des composés d'argent (II) et (III) qui ne sont solubles qu'en milieu basique, il s'agit d'oxydes d'argent (II) et (III) qui en milieu acide fort donnent principalement de l'argent métallique in fine, d'autre part.
Plus précisément, les oxydes d'argent (I), (II) et (III) donnent lieu, en milieu acide, aux réactions suivantes, où s désigne un produit solide : ( 1 ) Ag20(s) + 2H+ + 2e 2Ag(s) + H20 (2) 2AgO(s) + 2H+ + 2e # Ag20(s) + H2O (3) Ag203(s) + 2H+ + 2e # 2AgO(s) + H2O Comme la mise en contact direct (i.e. sans stabilisant acide fort) de H202 et d'un composant d'argent est susceptible de provoquer une explosion, il faut mettre en #uvre un procédé différent de celui préconisé par GB-A-2189394 pour obtenir les ions Ag2+ utiles selon la présente invention.
Pour les mêmes raisons, les modalités opératoires décrites dans WO-A-96/18301 ne permettent pas l'oxydation en milieu acide de l'argent (I) en argent (II) selon la réaction : Ag+ # Ag2+ + e.
On sait aussi que le molybdène intervient chez l'homme et les animaux à sang chaud en tant que co-enzyme des enzymes détoxifiants localisés au niveau hépatique, tels que les xanthine oxydase, aldéhyde oxydase et sulfite oxydase. Mo est essentiel pour la transformation des bases puriques en acide urique, il favorise l'absorption intestinale du fer et la rétention du fluor dans l'organisme.
Dans le domaine du traitement des surfaces métalliques notamment pour les décaper et/ou les passiver, on sait que les moyens classiques oxydants, tels que l'acide chromique, les chromates et l'acide nitrique, sont considérés comme étant des produits nocifs pour l'environnement.
On connaît par ailleurs de US-A-4537778 une composition aqueuse pour bain de bouche ou rinçage buccal qui comprend 0,5-5 % en poids de H202, 3-15 % en poids d'éthanol, 0,5-2 % en poids d'un agent tensioactif non-ionique et hydrosoluble du type polyoxypropylèneglycol polyoxyéthyléné, 0,3-2 % en poids d'un agent tensioactif non-ionique et hydrosoluble du type monoester d'acide gras en C10-C18 avec du sorbitol
polyoxyéthyléné, un édulcorant et un parfum. Cette composition peut être amenée sous la forme d'une pâte ou d'un gel au moyen d'un épaississant ou respectivement d'un agent gélifiant. L'agent gélifiant proposé est une gomme (gomme xanthane, gomme guar), un interpolymère carboxylique décrit dans US-A-2798053 ou un polyol du type PLURONIC comportant 70 à 20 % de groupes hydrophobes et 30 à 80 % de groupes hydrophiles, l'agent gélifiant préféré étant le PLURONIC 127 (voir colonne 4, lignes 28-29, colonne 5 lignes 34 et 49, et colonne 6 lignes 5-6). Or il se trouve qu'un tel agent gélifiant, qui est du type polymère organique, est dégradé plus ou moins rapidement (au bout de quelques minutes à quelques jours) par les compositions oxydantes ayant un potentiel rédox élevé (notamment un potentiel rédox supérieur ou égal à 800 mV).
Enfin, l'art antérieur ne décrit ni ne suggère l'utilisation d'ions contenant un métal à un degré d'oxydation voisin (cas particulier de AgII) ou égal (cas de Agm, Vv, Nbv, Tav, Movi, Wvl, Cora, Inm et nID) à sa valeur maximale, dans une composition désinfectante ou de traitement de surface.
But de l'invention On veut pallier aux inconvénients précités de l'art antérieur, d'une part, et fournir une nouvelle solution technique efficace et inattendue de l'enseignement de l'art antérieur, d'autre part.
En présence de la séquence activatrice 3', le promoteur MLC3F de 2 kb (construction 3F-nlacZ-2E) a approximativement 2-3 fois l'activité d'une construction contenant le premier intron MLC1F/3F (construction 3F-nlacZ-9 ; Fig. 1b) Cependant,
dans les constructions contenant les deux séquences activatrices, dans lesquelles la séquence activatrice 3' de 260 pb est présente indifféremment du côté 5' ou du côté 3' de l'insert 3F-nlacZ-9 (constructions 3F- /acZ-C9 et 3f-nlacZ-9C), un accroissement de 7 fois de l'activité est observé, par rapport à l'activité des myotubcs C2/7 transfectés par 3P- lacZ-9 (Fig. 1b). Ce niveau d'activité est 2 fois supérieur à celui observé avec une construction contenant le promoteur MLC3F en présence de la séquence activatrice 3' seule, indiquant que même en culture la séquence activatrice intronique et la séquence activatrice 3' agissent de manière synergique pour augmenter la transcription du gène MLC3F ; effet beaucoup plus important in vivo.
Afin de délimiter les séquences du premier intron responsables de l'effet synergique observé, la séquence activatrice 3' a été placée du côté 3' dans des constructions contenant également la séquence activatrice intronique dans la position qu'elle occuppe initialement dans le génome par rapport au promoteur MLC3F (construction 3F-nlacZ-5E), ou juxtaposée au promoteur MLC3F de 2 kb (construction 3F-nlacZ-2IE). L'augmentation synergique a été observée dans les deux cas (Fig. 1 b), démontrant que l'effet observé en présence de la séquence activatrice 3' est médié par la séquence activatrice intronique de 800 pb au sein du premier intron.
De plus, l'effet synergique observé est indépendant de la distance entre les deux séquences activatrices puisque l'effet de synergie est observé indifféremment avec la séquence activatrice intronique localisée à-4,2 kb ou à-2 kb du site de début de transcription de MLC3F.
La synergie d'activité en présence des deux séquences activatrices n'est pas observée dans les myoblastes C2/7 ou dans la lignée de fibroblastes NIH 3T3, dans lesquels une construction contenant les deux séquences activatrices (construction 3F- nlacZ-2IE) est active seulement à des niveaux faibles, comparables aux niveaux d'activités du promoteur MLC3F seul (construction 3F-nlacZ-2 ; données non représentées). Une activité maximale du promoteur MLC3F dans des cellules en culture nécessite donc une interaction synergique spécifique des myotubes entre la séquence activatrice 3' et la séquence activatrice intronique.
La séquence activatrice intronique étant équidistante des promoteurs MLC1F et MLC3F (Fig. la), l'activité de la séquence activatrice intronique sur le promoteur amont MLC1F a-t-elle été recherchée. La séquence activatrice intronique et la séquence activatrice 3' activent toutes les deux une construction promoteur MLC1F-nlacZ de 1,6 kb, spécifiquement dans les myotubes (Fig. 2a). L'activité de la séquence activatrice 3' (construction IF-tilacZ-1.6E) est approximativement de 3 fois supérieure à celle de la
séquence activatrice intronique de 800 pb (construction \T-nlacZ-\.6\), bien que l'activité absolue du gène marqueur, par rapport à RSV/acZ soit inférieure que celle observée avec le promoteur MLC3F. Même lorsque les séquences activatrice 3' et intronique sont présentes toutes les deux (construction lF-///acZ-I.6EI), l'effet synergique sur le promoteur MLC3F n'est pas observé.
La séquence activatrice intronique de 800 pb a également été testée pour son activité sur la transcription d'un promoteur hétérologue, le promoteur de la thymidine kinase (TK) de HSV (virus de l'Herpès simplex), placé en amont du gène rapporteur CAT (Chloramphénicol acétyl transférase). La séquence activatrice intronique (I-TKCAT) augmente l'activité CAT approximativement de 10 fois par rapport à la construction TK-CAT. La séquence activatrice 3' (TK-CAT-E) augmente l'activité CAT approximativement de 90 à 100 fois par rapport à la construction TK-CAT (Fig. 2b ; Kelly et al., 1997). Lorsque les deux séquences activatrices sont présentes, une augmentation de l'activité CAT de l'ordre de 50 à 60 fois est observée, suggérant que les deux séquences activatrices n'agissent pas de manière synergique sur le promoteur TK.
En conclusion, alors que la séquence activatrice intronique de 800 pb est capable d'augmenter la transcription spécifique du muscle des promoteurs MLC3F, MLCIF et TK, cette séquence induit un effet synergique, en combinaison avec la séquence activatrice 3' seulement sur le promoteur MLC3F, suggérant que l'effet synergique entre les deux séquences activatrices du muscle nécessite des séquences agissant en cis contenues dans la région promotrice MLC3F de 2 kb.
Références Arnonc, M I., and Davidson, E. H., 1997. The hardwiring of dcvclopmcnt. organisation and function ofgcnornic rcgulatory systcms. Dcvclopmcnl 124.1851-1864.
Barton P.J.R. et al , 1989. Myosin light chain gène expression in dcvcloping and denervated foetal muscle in the mouse. Development, 107 : 819-824.
Barton, P. J., Harris, A. J., and Buckingham, M. E., 1989. Myosin light chain gène expression in developing and denervated fetal muscle in the mouse. Development 107: 819-824.
Beard et al., 1980, Virology, 75 : 81.