INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Une délétion hors phase de 304 pb a été introduite dans l'ORF9 du nucléotide 10881 au nucléotide 11184 de la séquence de la figure 2 en sous-clonant le fragment SacI-KpnI (1,1 kb) du plasmide pK23avec le fragment EcoRI-KpnI (1,7 kb) du plasmide pEco2 obtenu à l'exemple 1 dans le plasmide pORTl ci-dessus préalablement digéré avec les enzymes de restriction SacI et EcoRI. Le plasmide d'intégration pCIlA ainsi obtenu (figure 8C) a été ensuite transféré dans la souche E. coli DH5aMRC, puis utilisé pour transformer Sac. erythraea.
EXEMPLE 9 : construction d'une souche Sac. erythraea eryCII# (CII62).
Une souche dans laquelle le gène eryCII porte une délétion interne telle que celle introduite dans le plasmide
pCII obtenu à l'exemple 8 a été préparée par transformation des protoplastes de Sac. erythraea avec le plasmide pCIlA.
La préparation des protoplastes, le processus d'intégration et la sélection des mutants ayant le phénotype eryont été réalisés comme à l'exemple 3.
L'amplification par PCR a été effectuée en utilisant l'oligonucléotide ayant la séquence suivante C2-S GGAATTCATGACCACGACCGATC (SEQ ID N 34) correspondant au brin complémentaire de la région d'ADN de la fin du gène eryAIII située de la position 20258 à la position 20280 de la séquence déposée dans la base EMBL sous la référence X62569 et décrite par Bevitt et al., 1992 et l'oligonucléotide ayant la séquence suivante C2-R CGCTCCAGGTGCAATGCCGGGTGCAGGC (SEQ ID N 35) correspondant à la séquence située de la position 10558 à la position 10585 de la séquence de la figure 2 permettant d'encadrer par amplification PCR la région portant la délétion interne à l'ORF9. L'analyse par amplification par PCR a permis de détecter une bande d'environ 760 pb dans la souche sauvage et une bande d'environ 460 pb dans le mutant CII62 de façon identique au signal obtenu avec pCIlA. Les résultats montrés à la figure 16 confirment que la délétion d'environ 400 pb détectée par l'analyse Southern est identique à celle portée par le plasmide pCIlA (304 pb).
La souche recombinante ainsi obtenue, désignée CII62, a
été ensuite cultivée pour identifier les métabolites produits par la souche.
EXEMPLE 10 : de la souche CII62 et identifi- cation des métabolites secondaires produits.
L'un des autres aspects de l'invention est de proposer de nouvelles urées, cycliques ou non.
Dans sa généralité, l'invention a pour objet l'utilisation d'isocyanates obtenus à partir de dérivés d'acides aminés pour la préparation et éventuellement l'isolation de carbamates activés stables.
Par "dérivé d'acides aminés", on désigne des acides aminés (alpha-, beta-, gamma-, delta-aminé, ou autre) dont la fonction amine primaire ou secondaire peut être protégée par un groupement choisi pour donner une fonction amine tertiaire, uréthane, amide, urée, nitro ou phtalimide.
Par "carbamate activé", on désigne un carbamate capable de réagir avec des amines primaires ou secondaires ou des alcools en présence ou non d'une base dans un solvant organique et généralement à température ambiante.
Par "carbamate stable", on désigne un carbamate stable puisqu'il est isolable, purifiable et peut-être stocké (de préférence à 4 C) pour une période d'au moins 3 mois sans dégradation notable. La stabilité peut être mesurée par exemple par le test suivant : HPLC ou chromatographie sur couche mince.
Par "isolation", on entend le processus de séparation du produit désiré de 1 'ensemble des impuretés présentes dans le mélange réactionnel (celles ci pouvant être par exemple : un excès d'un des réactifs utilisés pour faire la réaction, urée symétrique, l'amine obtenue par réarrangement de l'isocyanate en présence d'eau) et
la récupération du produit ainsi purifié sous une forme lui permettant d'être stocké (à 4 C de préférence) pour une longue période (plusieurs mois, au moins 3 mois) sans conduire à une décomposition notable.
Selon un mode de réalisation avantageux, l'invention concerne l'utilisation d'isocyanates ou de carbamates activés stables définis ci-dessus, pour la préparation d'urées substituées, cycliques ou non, notamment d'oligomères d'urées, cycliques ou non, ou pour la préparation de peptides ou de pseudopeptides contenant des motifs urées, cycliques ou non.
L'expression "oligomères d'urée" désigne un enchaînement successif de motifs reliés entre eux par des liaisons urée (au moins deux) Par exemple : NH2-CHRI-CHR'l-NH-CO-NH-CHR2-CHR'2-NH-CO-NH-CHR3- CHR'3-CONH2 Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, les composés répondent à la formule I dans laquelle - n est un nombre entier supérieur ou égal à 1, de préférence de 1 à 50, de préférence de 1 à 10, - i est un nombre entier variant de 2 à n+ 1, - a, et a',, représentées par un trait pointillé, sont des liaisons covalentes qui peuvent être simples (s), ou doubles (d), b, et b,~, , représentées par un trait pointillé, sont des liaisons covalentes qui peuvent être simples (s), double (d) ou triples (t), sous réserve que : *b, et bn+1 sont toujours des liaisons simples (s), *si b, = d alors, a, et a+1 = s ; a', et a',+, = 0 ; b.., et b,+, = s *si b, = t alors, a, et a,+, = 0; a', et a',,, = 0 ; b,., et b,+, = s *si a, = d alors, bi-1 et b, = s,
certaines de ces liaisons a,, a',, b,-, pouvant également faire partie de noyaux aromatiques, - GP est un groupe protecteur choisi parmi : *uréthane (GP = ROCO), de préférence Boc (R = C(CH3)3), Fmoc (fluorenylmetoxycarbonyl), benzyloxycarbonyl (R = CH2Ph), allyloxycarbonyl (R = -CH2CH=CH;), *acyle (GP = RCO), de préférence R = CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, C(CH3)3, phényl, benzyl, allyl, aryl, *alkyle (GP = R), de préférence R = trityl, CH3, CH2CH3, CH(CH3)2' C(CH3)3, benzyl, allyl, *aryl, notamment phényl, *urée (GP = RNHCO), de préférence R = H, CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, C(CH3)3, phényl, benzyl, allyl, *phtalimide (RI = 0) * O2 (correspond à un groupement nitro comme forme masquée de l'amine), R1 = # - les groupes R,, R,, R', et R peuvent représenter chacun et indépendamment les uns des autres : un hydrogène, un halogène, la chaîne latérale d'un acide aminé choisi parmi les acides aminés naturels ou non naturels, un groupe alkyle (C1-C20), non substitué ou substitué par un ou plusieurs substituants parmi lesquels :
1/ -COORa 2/ -CONHR, 3/ -COOH 4/ -OH 5/ -ORa 6/-NHR 7/-NH2 8/-NH(CO)Ra 9/ aryle, dont la structure du cycle contient de 5 à 20 atomes de carbone 10/ halogène 11/ carbonyle, de 1 à 10 atomes de carbone, 12/ nitrile 13/ guanidine 14/ nitro un groupement aryle dont la structure du cycle contient de 5 à 20 atomes de carbone un groupement alkoxy ORa un groupement NH2 un groupement OH -COORa -CONHR, -CONH2 -CH2COORa -CH.CONHR, -CH2CONH2 Ra représentant un groupe alkyle de 1 à 20 atomes de carbone, ou un groupe aryle dont la structure du cycle contient de 5 à 20 atomes de carbone, - le groupe X représente un groupe conférant au composé de formule 1 une structure de carbamate activé, choisi notamment parmi les phénols, éventuellement
substitués par au moins un nitro ou au moins un halogène, ou les dérivés d'hydroxylamine, et plus particulièrement choisi parmi les composés suivants : - N-hydroxysuccinimide - phénol - pentafluorophénol - pentachlorophénol - p-nitrophénol - 2 ,4-dinitrophénol - 2,4,5-trichlorophénol - 2,4-dichloro-6-nitrophénol - hydroxy-1,2,3-benzotriazole - l-oxo-2-hydroxydihydrobenzotriazine (HODhbt) - 7-aza-l-hydroxybenzotriazole (HOAt) - 4-aza-1-hydroxybenzotriazole (4-HOAt) le composé de formule (I) possédant la propriété suivante : - si un ou plusieurs carbones asymétriques sont présents dans la formules (I), alors leur configuration peut être et de façon indépendante soit R (rectus) soit S (sinister), - les groupes R1, R', R" peuvent être également définis sur la base de cyclisations intramoléculaires qui sont les suivantes : 1/ cyclisation entre R1 et R" 2/ cyclisation entre R1 ou R'i et R1+kc (ou kc est un entier positif, de préférence compris de 1 à 3) 3/ cyclisation entre R1 et R' ou R'i avec de préférence i =1, 2,3 ou 4. sous réserve que le composé de formule (I) soit différent des composés suivants dans lesquels : - n=2, GP=Boc, R, = isobutyle, R2=R'2=R3=R'3=H, X = 4-nitrophénol - n=2, GP=Boc, R, = benzyle, R2=R'2=R3=R'3=H, X = 4-nitrophénol - n=2, GP=Boc, R, = CH.-p-COr-Bu, RZ=R'Z=R3=R',=H, X = 4- nitrophénol
- n=2, GP=Boc, R, = H, R2=R'2=R3=R'3=H, X = 4-nitrophénol.
La première liaison blet la dernière bn+1 liées chacune à un atome d'azote sont toujours des liaisons simples : *bi et bn+1 sont toujours des liaisons simples (s).
Si une liaison bi est double, cela implique que les liaisons adjacente bi-1, bi+1, ai et ai+1 sont des liaisons simples et que les liaisons a'i et a'i+1 n'existent pas : *si b, = d alors, a, et a,+, = s ; a', et a',,, = 0 ; b,-, et b,+i = s Si une liaison bi est triple, cela implique que les liaisons adjacente bi-1, bi+1 sont des liaisons simples et que les liaisons ai, a'i, ai+1et a'i+11 n'existent pas : *si b, = t alors, a, et al+1 = 0; a', et a',+, = 0 ; bl-1 et b,+i = s Si une liaison ai est double, cela implique que les liaisons adjacentes bi-1 et bi sont des liaisons simples et que la liaison a'i n'existe pas.
*si a, = d alors, bi-1 et b, = s.
Une quantité d'approximativement 4 g de pâte est placée dans la cellule de détermination d'adhésivité du caractère collant de la pâte. Un échantillon de pâte de 4 mm est extrudé pour parvenir à une extrusion uniforme.
Puis 5 mesures sont effectuées suivant le protocole de Stable Micro Systems (étude d'application TA-XT2 pour la mesure du caractère collant de la pâte). En résumé, un échantillon de pâte de 1 mm est extrudé. La sonde (sonde cylindrique en Perspex de 25 mm), connectée au système TAXT2, est pressée dans la pâte extrudée à une force de référence. La sonde est soulevée et l'adhérence entre la pâte et la sonde est notée. Les réglages suivants du système TA-XT2 ont été utilisés : Option : Essai d'adhérence Vitesse avant essai : 2,0 mm/s Vitesse d'essai : 2,0 mm/s Vitesse après essai : 10,0 mm/s Distance : 15 mm Force : 40 g Temps : 0,1 s Type de déclencheur : Auto-5 g Vitesse d'acquisition des données : 400 pps Les résultats d'essai qui ont été enregistrés consistent en la force maximale, c'est-à-dire la force requise pour soulever la sonde de la pâte extrudée. Le terme distance désigne la distance de fixation de la pâte
à la sonde. Le terme aire désigne l'aire au-dessous de la courbe obtenue.
Le caractère collant de la pâte dépend de la qualité de la farine utilisée et de la formulation. En conséquence, une pâte non collante est une pâte différant par son caractère collant de 100 % à 200 % (valeur relative) comparativement à une pâte de référence, sans la xylanase ou ayant de préférence moins de 70 (valeur relative) du caractère collant obtenu avec une xylanase fongique du commerce (c'est-à-dire Pentopan mono BG, Novo Nordisk) lors de l'administration en des quantités provoquant la même augmentation de volume dans un essai de cuisson au four.
PROTOCOLE 3 PROTOCOLE D'ANALYSE D'INHIBITEUR (Analyse d'inhibiteur) Pour détecter l'inhibiteur au cours de l'isolement et de la caractérisation, l'analyse suivante est utilisée.
100 l de fraction d'inhibition, 250 l de solution de xylanase (contenant 12 TXU/ml) et 650 l d'un tampon (tampon à l'acide citrique 0,1M - hydrogénophosphate disodique 0,2 M à pH 5,0) sont mélangés. Le mélange est thermostaté pendant 5 minutes à 40,0 C . Au temps égal à 5 minutes, une tablette de xylazyme est ajoutée. Au temps égal à 15 minutes, la réaction est interrompue en ajoutant 10 ml de Tris à 2 %. Le mélange réactionnel est centrifugé (3500 g, 10 minutes, température ambiante) et le surnageant est soumis à la mesure à 590 nm. L'inhibition est calculée par l'activité résiduelle comparativement au témoin à blanc. Le témoin à blanc est préparé de la même manière, sauf que le volume de 100 l d'inhibiteur est remplacé par 100 l de tampon (tampon à l'acide citrique 0,1M - hydrogénophosphate disodique 0,2 M, à pH 5,0). A titre d'exemple, il est possible de considérer que XM-1 a un haut degré de résistance à l'inhibiteur (voir la figure
20). Il est possible de considérer que XM-2 et XM-3 ont un degré moyen de résistance à l'inhibiteur (voir figure 20).
PROTOCOLE 4 PROTOCOLE D'ANALYSE DE GLUCANASE I (Activité d'endo-ss-1,4-glucanase) Des échantillons de glucanase sont dilués dans du tampon à l'acétate de sodium - acide citrique 0,1M à pH 5,0 pour parvenir à une DO d'approximativement 0,7 dans l'analyse finale. Trois dilutions de l'échantillon et un étalon interne ayant une activité définie sont thermostatées pendant 5 minutes à 40 C. Au temps égal à 5 minutes, une tablette de glucazyme (substrat consistant en un glucane réticulé coloré) est ajoutée à la solution enzymatique. Au temps égal à 15 minutes, la réaction est interrompue en ajoutant 10 ml de Tris à 2 %. Le mélange réactionnel est centrifugé et la DO du surnageant est mesurée à 590 nm. En prenant en considération les dilutions et la quantité de glucanase, l'activité (BGU, unités de bêta-glucanase) de l'échantillon peut être calculée par rapport à l'échantillon de référence.
PROTOCOLE 5 PROTOCOLE D'ANALYSE D'INHIBITEUR II (Analyse cinétique de l'inhibiteur) Pour étudier la cinétique sur l'inhibiteur, on a utilisé un substrat soluble (Azo-xylan, Megazyme). Une solution à 2 % (en poids/volume) du subtrat a été préparée, suivant le protocole du fabricant, dans du NaPi 20 mM, à pH 6,0. L'analyse a été effectuée en préchauffant le substrat, la xylanase et l'inhibiteur à 40 C pendant 5 minutes.
Pour une caractérisation préliminaire de l'inhibiteur, la xylanase utilisée est diluée à 40 TXU/ml.
Pour les déterminations de K;, les xylanases sont diluées à approximativement 40 TXU/ml.
0,5 ml de substrat, 0,1 ml de xylanase et 0,1 ml d'inhibiteur ont été mélangés au temps égal à 0 minute à
une température de 40 C. Au temps égal à 125 minutes, la réaction a été interrompue en ajoutant 2 ml d'éthanol (à 95 %), puis en ajoutant le mélange par tourbillonnement pendant 10 secondes. Le substrat non hydrolysé précipité a été séparé par centrifugation (3500 g, 10 minutes, température ambiante). La DO dans le surnageant a été mesurée par rapport à de l'eau, à 590 nm.
Un témoin à blanc a été préparé de la même manière.
La seule modification était le remplacement de l'inhibiteur par une solution de NaPi 20 mM à pH 6,0.
Pour des expériences cinétiques avec- une concentration réduite du substrat, les concentrations de substrat suivantes ont été réalisées par dilution dans une solution de NaPi 20 mM à pH 6,0 : 2 %, 1 %, 0,5 % % et 0,25 % d'azo-xylan soluble (en poids/volume).
Le treuil 1 comporte des moyens 26 pour éloigner la joue de blocage 17 de la garniture de blocage 18 à l'encontre du
Les moyens 26 d'éloignement comprennent un troisième arbre 27 monté tournant par rapport au boîtier autour d'un
troisième axe 28 de rotation.
Le troisième axe 28 est transversal au deuxième axe 11.
Dans la réalisation représentée, le troisième axe 28 est transversal. Le troisième arbre 27 est destiné à être entraîné en
rotation par une manivelle ou analogue.
Une came 29 est prévue sur le troisième arbre 27.
La came 29 est apte à être appliquée à la partie extrême arrière 30 du deuxième arbre 10, en aval suivant le sens
La came 29 est apte à déplacer par rotation autour du troisième axe 28 le deuxième arbre 10 à l'encontre du sens déterminé 16 pour permettre le dévidement du tambour 8 sous
la traction du câble.
Dans la réalisation représentée, la came 29 comporte une tête de vis fixée transversalement de manière traversante au troisième axe 28 sur la périphérie du troisième arbre 27. Dans une autre réalisation, non représentée, la came 29 comporte une bille, montée tournante dans un logement ménagé, par exemple au foret, dans la surface latérale du
troisième arbre 27.
Le troisième arbre 27 est monté tournant dans l'une des faces transversales droite et gauche 5, 6, par exemple dans la face transversale gauche 6 et dans une autre face
transversale 32 prévue entre les faces 5, 6.
tour, élément 40 qui est représenté à la figure 1 et à la fi-
gure 2 selon un premier exemple de réalisation. L'élément 40 entoure la lentille 16 sur tout son pourtour et est réalisé dans une matière qui laisse passer la lumière, telle que par
exemple une matière plastique ou du verre. L'élément 40 pré-
sente, dans sa zone centrale, une ouverture 41 dans laquelle est disposée la lentille 16. La lentille 16 et l'élément 40 peuvent être aussi constitués d'un seul tenant. L'élément 40 est au moins localement, mais de préférence sur toute son étendue, constitué sous la forme d'une lentille de Fresnel,
et présente dans ce cas plusieurs profils optiques 42 concen-
triques, de forme annulaire. Les profils optiques 42 peuvent être disposés, comme on l'a représenté sur les figures 1 et 2, sur le côté de l'élément 40 qui est tourné en sens opposé au sens 14 de sortie de la lumière, ou aussi sur le côté de
l'élément 40 qui est tourné dans le sens de sortie de la lu-
mière. Les profils optiques 42 sont par exemple constitués en forme de crans et la lumière qui passe à travers l'élément 40 est déviée par ces profils en direction de l'axe optique 11 pour être de cette façon concentrée. L'élément 40 est disposé
mière 12, et qui ne peut pas être captée par le réflecteur
, de même que la lumière qui est émise par la source de lu-
mière additionnelle 36, passe à travers cet élément. Les pro-
fils optiques 42 peuvent être constitués par exemple d'une manière telle que la lumière émise par les sources de lumière
12 et 36, après son passage à travers ces profils est dirigée au moins à peu près parallèlement à l'axe optique 11.
Dans le cas du premier exemple de réalisation les profils optiques 42, en forme d'anneaux, comme on les a re- présentés à la figure 2, sont disposés de façon à peu près concentrique à l'autre source de lumière 36 sur l'élément 40,
et pour s'étendre sur tout l'élément 40. L'élément 40 pré-
Les canaux 3b sont séparés les uns des autres par des parois radiales 4b et sont délimités vers l'extérieur par une paroi tubulaire circulaire 5b.
Trois parois 4b constituent le prolongement des parois radiales 4a.
Le support monolithe 1 comporte un troisième ensemble de canaux 3c dont les sections présentent la forme générale de secteurs annulaires trapézoïdaux à angles arrondis.
Les sections des canaux 3c sont disposées suivant une rangée circulaire à la périphérie des sections des canaux 3b et dans une disposition rayonnante avec les canaux 3b.
Dans chacun des secteurs de cylindres délimités par le prolongement de deux parois radiales 4a à 120 , sont disposés quatre canaux 3c, de sorte que le support monolithe 1 comporte douze canaux 3c.
L'ensemble du monolithe 1 comporte donc vingt-sept canaux 3 dont la surface peut tre recouverte par des membranes de filtration 3'.
Les canaux 3c sont séparés les uns des autres par des parois radiales 4c et délimités vers l'extérieur par une paroi tubulaire à section circulaire 5c constituant la paroi externe du support monolithe 1.
Les caractéristiques dimensionnelles du support monolithe 1, des canaux 3 et des parois 4 sont données par les paramètres dimensionnels qui seront définis ci-dessous et qui sont représentés sur la figure 1.
R = rayon externe du support monolithe, h = dimension maximale dans la direction radiale des sections des canaux 3a, g = dimension dans la direction radiale des sections des canaux 3b, d = dimension dans la direction radiale des sections des canaux 3c, e1 = épaisseur de la paroi 5c, e2 = épaisseur de la paroi 5b, e3 = épaisseur de la paroi 5a, f = épaisseur des parois radiales 4a, 4b et 4c.
Généralement, les parois radiales ont toutes une mme épaisseur mais les parois tubulaires coaxiales 5a, 5b et 5c peuvent présenter des épaisseurs différentes.
Le support monolithe représenté sur la figure 1 sera désigné comme support à profil KBZ ou par la simple référence KBZ.
Un tel support à profil KBZ peut présenter les caractéristiques dimensionnelles suivantes : R = 12, 50 mm ; h = 2, 69 mm ; g = 3, 94 mm ; d =2, 16 mm ; e1 =1, 35mm ; e2 = 0, 92 mm ; e3 = 0, 92 mm ; f = 0,92 mm.
On a effectué le calcul de la surface filtrante par unité de longueur d'un élément de filtration comportant le support monolithe 1 représenté sur la figure 1 et présentant les caractéristiques dimensionnelles indiquées cidessus.
La surface filtrante est constituée par la surface totale des parois de canaux par unité de longueur du support monolithe 1 dans la direction axiale 2.
Cette surface filtrante SF ramenée à la longueur L du monolithe est de 338,92 mm2/mm.
On a également calculé l'aire de la section d'écoulement d'un fluide dans l'élément de filtration comportant le support monolithe 1. Cette section est constituée par la somme des sections transversales des canaux.
#SM (ionspray) : m/z 270 (M+1)+ - Anal. calculé pour C15H11NO4: C, 66.91 ; 4.12 ; 5. 20. Trouvé : 66.80 ; 4.00 ; 5.40. EXEMPLE 4 : 5,7-Diméthoxy-3-(4-méthoxyphényl)-1,2-dihydro-2-quinolinethione (Composé 6)
Sous atmosphère inerte, 100 mg (0,32 mmol) de composé 1 sont solubilisés dans 15 ml de toluène (dissolution à chaud). 260 mg (0,64 mmol, 2 eq) de réactif de Lawesson sont additionnés au mélange réactionnel. La solution finale est agitée à reflux pendant 18 h. Après refroidissement, le toluène est évaporé. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant CH2CI2/AcOEt 9 :1) pour donner 81 mg (77%) du composé 6.
#PF 229-230 C (Et2O) #IR (KBr) 1636,1610, 1524 cm-1 .1H RMN (250 MHz, DMSO-d6): d 3,78 (s, 3H, OCH3), 3. 83 (s, 3H, OCH3), 3. 89 (s, 3H, OCH3), 6. 49 (d, 1 H, J = 1 9 Hz, HAr), 6. 79 (d, 1 H, J = 1. 9 Hz, HAr), 6. 92 (d, 2H, J = 8. 7 Hz, HAr), 7. 49 (d, 2H, J = 8. 7 Hz, HAr), 7. 78 (s, 1H, HAr). 13. 50 (s large, 1H, NH).
.13C RMN (62. 90 MHz, CDC13): d 55. 1, 55. 6, 56. 1, 90. 2, 95. 2, 108. 9, 112. 9 (2), 128. 2, 130.7 (2), 132. 0, 136. 3, 140. 9, 156. 4, 158. 5, 162. 5, 180. 5.
- SM (ionspray) : m/z 328 (M+1)+
-Anal. calculé pour C18H17N03S: C, 66.03 ; 5.23 ; 4. 28. Trouvé : 66.30 ; 5.30 ; 4.35.
EXEMPLE 5 : 5,7-Diméthoxy-3-(4-méthoxyphényl)-1-méthyl-1,2-dihydro-2- quinolinone (Composé 7)
Sous atmosphère d'azote, 600 mg (1,93 mmol) de composé 1 sont solubilisés dans 30 ml de N,N-diméthylformamide (DMF) anhydre. A 0 C, 93 mg (3,86 mmol, 2 eq) de NaH, préalablement lavés avec de l'éther de pétrole, sont additionnés par petites portions à la solution réactionnelle (réaction exothermique). Une solution d'iodure de méthyle (0,48 ml, 7,72 mmol, 4 eq) diluée dans 5 ml de DMF est ajoutée au milieu. La réaction est chauffée pendant 18 h à 90 C. Après refroidissement, de l'eau est versée sur le mélange réactionnel puis la solution est agitée pendant 15 min. Le solide obtenu est recueilli par filtration sur verre fntté puis rincé par de l'eau. Le solide est dissous dans le CH2CI2 et lavé par deux fois par de l'eau. La phase organique obtenue est séchée sur MgS04, puis évaporée sous pression réduite. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur colonne de silice (CH2CI2/AcOEt 8 :2) pour donner 408 mg (68%) de composé 7 et 157 mg (25%) de dérivé 7a.
Composé 7: #PF 125 C (AcOEt/EP) #IR (KBr) n 1635,1596, 1590,1514 cm-1 #1H RMN (250 MHz, CDC13): d 3. 73 (s, 3H, NCH3), 3. 83 (s, 3H, OCH3), 3. 91 (s, 6H, OCH3), 6. 30 (d, 1 H, J = 2. 0 Hz, HAr), 6. 37 (d, 1 H, J = 2. 0 Hz, HAr), 6. 94 (d, 2H, J = 7.5 Hz, HAr), 7. 67 (d, 2H, J = 7. 5 Hz, HAr), 8. 12 (s, 1 H, HAr).
.13C RMN (62. 90 MHz, CDCI3): d 30. 3, 55.3, 55.5, 55. 8, 90. 2, 92. 6, 106. 1, 113. 5 (2), 127. 0, 130. 0, 130. 1 (2), 130.2, 141. 7, 157. 6, 159. 1, 162.2(2).
#SM (ionspray) : m/z 326 (M+1)+ -Anal. calculé pour C19H19N04: C, 70.14 ; H, 5.89 ; 4. 30. Trouvé : 70.00 ; 5.73; N, 4.24.
Composé 7a: 2,5,7-Triméthoxy-3-(4-méthoxyphényl)quinoline #PF 106-107 C (AcOEt/EP) #IR (KBr) n 1621, 1515, 1265 cm-1 #1H RMN (250 MHz, CDCI3): d 3. 86 (s, 3H, OCH3), 3. 94 (s, 6H, OCH3), 4. 08 (s, 3H, OCH3), 6. 40 (d, 1 H, J = 1. 8 Hz, HAr), 6. 85 (d, 1 H, J = 1. 8 Hz, HAr), 6. 97 (d, 2H, J = 8.8 Hz, HAr), 7. 57 (d, 2H, J = 8. 8 Hz, HAr), 8. 26 (s, 1 H, HAr).
#13C RMN (62. 90 MHz, CDCI3): d 53.5, 55 3, 55. 5, 55. 6, 95. 9, 98 5, 112 8, 113. 6 (2), 122. 1, 129. 6, 130. 5 (2), 132.3, 147. 9, 156. 3, 158. 9, 160. 6, 161. 3.
#SM (ionspray): m/z 326 (M+1)+ -Anal. calculé pour C19H19NO4: C, 70.14 ; 5.89 ; 4. 30. Trouvé: C, 69.89 ; H, 5.81 ; N, 4.10.