INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
De cette manière, on peut réaliser le dispositif de sortie en une seule pièce obtenue par moulage d'une matière plastique, le moulage pouvant être réalisé à l'aide d'un moule relativement simple et peu onéreux.
Egalement, par une telle structure, on laisse accessible la surface externe du goulot pour tenir le conteneur lors de l'étape d'introduction du bouchon. En outre, on réduit la quantité de matière nécessaire pour la réalisation du dispositif, pour une section donnée de l'ouverture du conteneur.
L'invention prévoit un conteneur à paroi étanche souple, ayant un orifice de sortie obturé par un dispositif de sortie tel que défini cidessus.
L'invention prévoit également l'application d'un tel conteneur à l'insémination artificielle des animaux.
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Un autre polypeptide de fusion selon l'invention comprendra un récepteur protéique constitué du fragment scFv de l'anticorps monoclonal produit par l'hybridome -clone 4 - ou encore des anticorps monoclonaux décrits par Cavaillon et al. (1996) ou par Marty et al. (194).
Dans un autre mode de réalisation du polypeptide de fusion selon l'invention, le récepteur protéique est un antigène, par exemple un antigène bactérien, viral ou fongique, si le ligand que l'on cherche à détecter est un anticorps, par exemple un anticorps généralement retrouvé chez des patients affectés d'une pathologie telle qu'une infection bactérienne ou virale ou encore un désordre immunitaire tel qu'une maladie auto-immune.
Plus particulièrement un antigène constitutif du récepteur protéique contenu dans un polypeptide de fusion selon l'invention peut être choisi parmi les antigènes suivants a) tout ou partie de l'une des glycoprotéines codées par le génome d'un virus de type HIV, notamment HIV-1 (brevets GP 8324800, EP 84401834, ou EP 85905513j ou du virus HIV-2 (EP 87400151), et en particulier tout ou partie d'une protéine sélectionnée parmi gag, pol, nef ou env., préférentiellement de la glycoprotéine d'enveloppe d'un virus de type HIV, et de manière tout à fait préférée de tout ou partie de la boucle V3 de la glycoprotéine d'enveloppe b) un antigène de surface de l'hépatite B (brevet FR 79 21811), sous l'une de ses formes S, S-préSl, S-préS2 ou S-préS2-préSl ; ou encore une protéine d'un virus de l'hépatite A, ou d'une hépatite non-A, non-B, telle que dérivée d'un virus de l'hépatite C, E ou delta. c) un antigène mycobactérien, en particulier originaire de M. tuberculosis, comprenant tout ou partie d'une protéine choisie parmi les protéines suivantes : la protéine 45/47kD (PCT/FR 92/00508 ; PCT/FR 96/00166), la protéine LIP-DTH (PCT/FR 93/00268), la protéine P27 (FR 97 00100 du 08/0S11997), la protéine ESAT-6 (Harhoe et al., 1996 ; Sorensen et al., 1995) ou encore le polypeptide LHP codé par un polynucléotide situé, sur le génome de M. tuberculosis, en aval des signaux de régulation de ESAT-6 et en amont de la séquence codant ESAT-6.
Sont également considérés comme des récepteurs protéiques au sens de la présente invention des protéines inhibitrices d'enzymes, telles qe les inhibiteurs d'enzymes impliquées dans la coagulation sanguine (par exemple inhibiteur de l'activateur tissulaire du plasminogène ou tPA).
Entrent également dans la définition ci-dessus des enzymes inactivées, de préférence des enzymes inactivées conservant une affinité pour leur substrat, telles que les enzymes ayant pour substrat l'enképhaline.
Constituent également des récepteurs protéiques selon l'invention, des lectines ou parties de lectines, par exemple les lectines de type C animales telles que la Mannose-Binding-Protein (MBP) ou encore des molécules d'adhésion cellulaire, des récepteurs d'endocytose et des protéines de la matrice extracellulaire comme les sélectines (p. ex. selectine E), les récepteurs des asialoglycoprotéines, ou des récepteurs macrophagiques (Spiess, 1990). Parmi les lectines d'intérêt figurent aussi la IX/X-binding protein qui se lie aux facteurs IX(a) et X(a) (Atoda 1989, 1991, 1994) , la botrocétine (Fujimura 1991 ; Usami 1993) et la bitiscetine (Hamako 1996) qui induisent la liaison du facteur von Willebrand aux plaquettes, la GPIb-binding protein (Fujimura 1995, Kawasaki 1996), l'agkicétine (Chen 1995), l'alboaggrégine B (Yoshida 1993, Usami, 1996), la tokaracétine (Kawasaki 1995), la flavocétine A et B (Taniuchi 1995) et i'échicétine (Peng 1993., 1994, 1995) qui se lient à la glycoprotéine Ib, la convulxine qui active les plaquettes (Polgar 1997) et la bothrojaracine qui inhibe la thrombine (Zingali 1993).
Dans encore un autre mode de réalisation du polypeptide de fusion selon l'invention, le récepteur protéique est du type avidine ou streptavidine, par exemple dans le cas où le polypeptide de fusion est utilisé pour un marquage indirect d'une substance utilisée comme premier révélateur de la présence d'une molécule recherchée dans un échantillon, ce premier révélateur étant conjugué à une molécule de type biotine. La propriété de la biotine à lier simultanément. plusieurs molécules d'avidine permet une amplification du signal visualisable et constitue ainsi un mode de réalisation avantageux d'un polypeptide de fusion selon l'invention.
Dans le cas où le premier révélateur est conjugué à une molécule de avidine ou streptavidine, c'est le polypeptide de fusion selon l'invention qui contiendra une région peptidique correspondant à une molécule de type biotine.
Dans un autre mode de réalisation du polypeptide de fusion selon l'invention, le récepteur protéique est représenté par un analogue non métabolisé d'un substrat enzymatique, si l'on recherche par exemple la présence d'une enzyme particulière dans un échantillon.
Le procédé selon l'invention permet, en outre, la construction de banques de ScFv en fusion avec l'AChE, en utilisant notamment les sites de clonage SfiI et NotI qui sont les sites les plus utilisés pour la construction de banques de cDNA. Ceci permet un criblage rapide des anticorps clonés.
Le récepteur protéique du polypeptide de fusion selon l'invention peut aussi être constitué par un peptide dérivé d'une banque de peptides aléatoires, utiles notamment dans la recherche d'épitopes. Des techniques de réalisation de banques de peptides aléatoires utilisables dans le cadre de la présente invention sont par exemple la technique utilisant des phages recombinants décrite par Parmley et Smith en 1988.
De préférence, le polypeptide de fusion selon l'invention comprend l'acétylchoiinestérase monomérique, ou le variant biologiquement actif de celle-ci, placé du côté N-terminal afin d'éviter tout encombrement stérique de nature à réduire l'accessibilité du site catalytique de l'enzyme pour son substrat et ainsi affecter la cinétique enzymatique.
Le polypeptide de fusion selon l'invention peut en outre contenir d'autres fragments polypeptidiques placés indifféremment à l'extrémité N-terminale, à l'extrémité Cterminale ou encore entre le premier polypeptide AChE et le polypeptide récepteur protéique tel que défini ci-dessus.
De tels fragments polypeptidiques peuvent revêtir des natures fonctionnelles diverses. I1 peut s'agir, par exemple, d'un fragment peptidique reconnu par un anticorps déterminé, ce fragment peptidique étant alors utile pour détecter et/ou s'assurer de la bonne structure du polypeptide de fusion lors de sa préparation. I1 peut s'agir également d'un ou de plusieurs fragrnents peptidiques utilisés comme peptides de liaison entre les différents domaines fonctionnels du polypeptide de fusion selon l'invention et qui peuvent s'avérer nécessaires pour maintenir l'intégrité conformationelle, et en conséquence l'intégrité fonctionnelle, de l'AChE monomérique et du récepteur protéique constitutifs dudit polypeptide de fusion.
I1 peut aussi s'agir d'un fragment peptidique portant un ou plusieurs sites de reconnaissance par des enzymes protéolytiques, telles que la trypsine, la chymotrypsine etc. Dans ce cas, le site de reconnaissance pour l'enzyme protéolytique sera choisi préférentiellement de telle manière que ce site soit unique dans le polypeptide de fusion, de telle sorte que l'action de l'enzyme protéolytique résulte dans tous- les cas en l'obtention de deux fragments polypeptidiques de longueur et de structure définies. Dans ce mode de réalisation particulier du polypeptide de fusion selon l'invention, l'action de l'enzyme protyéolytique conduit notamment à l'obtention de la partie peptidique contenant le récepteur protéique sous une forme libre et purifiable par les différentes techniques de purification de protéines bien connues de l'homme du métier.
Le polypeptide de fusion selon l'invention peut être le résultat d'un couplage chimique entre l'AChE monomérique et le récepteur protéique. De manière générale, pour lier par une liaison de covalence les différents polypeptides constitutifs du polypeptide de fusion selon l'invention, on fait réagir l'un des groupements réactifs libres de l'AChE monomérique, tel que l'un des groupements lysyle, tyrosyle, histydyle, tryptophanyle ou glutamyle avec un groupement réactif porté par le récepteur protéique, par exemple avec une fonction acide, une fonction amine, une fonction phénol, une fonction hydroxyle ou une fonction cétone. Ceci peut être effectué en particulier par des réactions de couplage couramment utilisées, au moyen de réactifs tels que les carbodiimides, le glutaraldéhyde, la benzidine, les anhydrides mixtes ou encore l'acide para-aminophénylacétique. On aura notamment recours à des techniques classiques de couplage entre deux protéines bien connues de l'homme du métier, telles que le couplage avec le réactif hétérobifonctionnel N-succinimidyl-4-(N-maleimido-methyl) cyclohexane-l-carboxylate (McLaughlin et ai., 1987 Caruelle et al., 1988 ; Grassi et al., 1989).
Parmi les systèmes d'expression selon l'invention, on préfère ceux caractérisés en ce qu'ils sont inductibles dans les plantes par un stress biotique ou abiotique.
Parmi lesdits stress biotiques selon l'invention, on préfère en particulier les stress biotiques engendrés par l'attaque d'un parasite sensible aux stilbènes tel qu'un virus, une bactérie, une levure, un champignon, notamment Botrytis cinerea ou Plasmopora viticole.
Parmi lesdits stress abiotiques selon l'invention, on préfère en particulier les stress abiotiques engendrés par une blessure mécanique, telle que celle causée notamment par un insecte ou par un phénomène physique tel que le vent ou le gel.
La présente invention a également pour objet des cellules végétales transformées par un système ou un vecteur selon l'invention. Avantageusement, lesdites cellules végétales sont des cellules de vigne.
La présente invention concerne également des procédés permettant de transformer des cellules végétales à l'aide d'un procédé microbiologique incluant les systèmes ou les vecteurs selon la présente invention.
L'invention concerne en outre des procédés d'obtention de plantes exprimant un (ou plusieurs) gène(s) de stilbène synthase, caractérisés en ce qu'on transforme des cellules végétales desdites plantes à l'aide d'un système ou d'un vecteur selon l'invention, on sélectionne les cellules exprimant ledit ou lesdits gène(s) et l'on régénère une plante à partir de ces cellules.
Parmi les méthodes de transformation les plus utilisées, il faut citer notamment les méthodes mettant en oeuvre Agrobacterium, qu'il s'agisse d'Agrobacterium tumefaciens ou Agrobacterium rhizogenes, de biolistique ou toutes autres techniques (électroporation, etc.).
Ces méthodes sont connues (REAM, W., 1989 NEGRETIU, I. et GHARTI-CHHETRI, G.B., 1991 ; CASSE-DELBART, F., 1996 ; STANFORD, J.C., 1990) et elles ne seront pas décrites de nouveau en détail.
La technologie, partant notamment de systèmes plasmidiques, permet d'effectuer une première transformation d'une souche de bactéries compétentes, en général E. ccli, ce qui permet de cloner et de contrôler la structure des plasmides. La souche est ensuite utilisée pour transférer les plasmides recombinants dans des souches d'agrobactéries qui seront ensuite utilisées pour transformer les cellules végétales.
Les plantes comportant un système d'expression ou des cellules selon l'invention font partie de l'invention.
Font également partie de l'invention, les plantes obtenues par la mise en oeuvre des procédés selon 1' invention.
Enfin, l'invention concerne les plantes selon l'invention, caractérisées en ce qu'il s'agit de plantes d'intérêt agronomique, notamment la vigne.
D'autres caractéristiques et avantages des constructions et des procédés selon la présente invention pourront être mis en évidence dans les exemples qui vont suivre.
Légendes des Figures Figures 1 et 1 bis Schéma général représentant les différentes étapes de la méthode d'isolement du promoteur inductible PMs PR10-1 correspondant à la séquence IND S1.
Figure 2 : Présentation des divers clones isolés et correspondant au Southern blot, hybridé avec les parties 5' et 3' de 1'ADNc-PR7, délimitées par un site Bam HI (B) interne, détecté dans cet ADNc.
Sites de restriction : E = Eco RI, B = Bam HI.
Les valeurs du composant sont les suivantes. L1=4,81 L2=4,27 uH, C1=0,551 uF, C2=0,212 uF. En utilisant la transformation ci-dessus pour la rétroaction de sortie, les valeurs L1, C1 sont remplacées par L1=13,89 uH et C1=0,3816 uF.
Atténuation =
Pour une fréquence de commutation de 800 hKz, l'atténuation de la fréquence de commutation est de 69,7 dB. Le signal de fréquence de commutation rms à l'entrée du filtre est environ de Vin/4 . Le signal en courant continu moyen est de Vin/2. Ainsi, il y a une séparation supplémentaire de 6 dB entre le signal souhaité et la fréquence de commutation à l'entrée du filtre. Ceci amène la puissance de fréquence de commutation à 75,7 dB, ce qui répond à l'exigence de 71,5 dB. Tout rapport d'atténuation d'alimentation de puissance (PSRR) de l'amplification de puissance RF supprime en outre la fréquence de commutation.
Lors de la mise en oeuvre de la commande, les dérivées du premier et deuxième ordre sont calculées en temps discret en utilisant des formules de dérivation numérique. Bien qu'il existe des formules d'ordre supérieur, pour une taille de mot limitée, la meilleure performance est atteinte en utilisant des formules plus simples. Puisque les données d'enveloppe successives sont disponibles, les dérivées peuvent être évaluées en utilisant à la fois les données présentes et passées.
Un retard est introduit en conséquence et peut être décalé si on retarde les données en bande de base < I,Q), ce qui introduit le même retard dans le chemin de signal RF.
Si on établit k égal à l'unité et si on combine les variables de référence et de précompensation, cela simplifie l'analyse. En combinant les tensions de précompensation et de référence, on peut additionner les calculs en bande de base pour donner une variable unique. Dans une mise en oeuvre numérique, ceci réduit le nombre de convertisseurs numérique-analogique de deux à un.
Si on passe des équations temporelles continues aux équations temporelles discrètes, on obtient l'équation suivante
Ces résultats peuvent être évalués en tant que coefficients temporels discrets de la façon suivante, Les valeurs des coefficients temporels discrets sont alors évaluées pour le filtre donné.
Vcont = z2VrIn - 11 + zlVr(n) + z0Vr(n + 1) (35)
I1 s'agit d'une transformation nulle. Pour le filtre de sortie donné, les coefficients temporels discrets sont les suivants : z0 = 2,806674 ; zl = - 2,716652 ; z2 = 0,909979.
Considérons le cas simplifié où Vref est utilisé à la place de Vcont.
En exprimant Vsw en termes de VOU, on obtient l'expression suivante
Les coefficients 1,a,b,c,d correspondent au polynôme de Legendre modifié. Toutefois, ils peuvent être exprimés sous la forme du polynôme de Legendre original de la façon suivante.
A partir de l'analyse précédente, on sait que les coefficients l,a/2, b/2, c/2, d/2 correspondent au polynôme de Legendre non modifié. Du fait de l'action de l'alimentation à découpage, la valeur de Sig est entraînée pour atteindre une quantité faible comprise entre zéro et un. Ceci implique que la fonction intégrée soit entraînée jusqu'à zéro. Ainsi, la sortie Vout doit être égale à une version filtrée de Vr.
Ainsi, la réponse du système est commandée jusqu'à arriver à une version filtrée de la tension de référence. Le filtre de Legendre original présente une fréquence à 3 dB de 160 kHz. Ceci permet à l'enveloppe de rester inchangée. Toutefois, tout bruit dû à un échantillonnage à 400 kHz est supprimé. Il y a une différence de fréquence de plus d'un octave, de sorte que l'on s'attend à une suppression de 24 dB du bruit de 400 kHz.
Pour l'Asservissement et la précompensation, considérons un convertisseur survolteur ayant un filtre à quatre pôles. Une différence clé par rapport au convertisseur de compensation est que l'inductance Ll se trouve du côté source du commutateur. Ainsi, le fractionnement possède l'inductance de sortie, le condensateur de sortie et la charge du côté passif du fractionnement. L'autre condensateur, 1' inductance d'entrée et le commutateur forment le fractionnement qui est directement commandé. Le système de commande consiste ici à commander la tension au niveau du condensateur d'entrée C1 pour qu'elle atteigne la valeur souhaitée. Ceci fait en sorte que la tension de sortie au niveau du condensateur C2 suive la tension de référence. Le courant idéal circulant dans l'inductance L1 est différent de celui qui apparaît dans le cas du convertisseur de compensation. Le courant circulant dans L1 n'est que partiellement transféré à C1. Le courant restant est coupé et mis à la masse. I1 est possible d'obtenir une valeur approchée de ce courant en définissant un rapport de survoltage de tension moyen (k). Le rapport de transfert de tension détermine également approximativement la perte de puissance négligeant le rapport de transfert de courant dans le convertisseur.
L'addition de marqueurs radioactifs peut être intéressante pour suivre la mise en place de l'implant par scintigraphie. A titre d'exemple, ce marqueur radioactif peut être un marqueur au Tc, par exemple du phosphate de technétium-99m.
On peut aussi ajouter aux biomatériaux des composés pharmaceutiques tels que des agents antibiotiques résistant à 100"C au moins, et des agents bactéricides, par exemple de l'argent.
Pour d'autres applications, on peut ajouter des additifs tels que des nylons ou du Kevlar en vue d'améliorer la résistance mécanique.
Après préparation du mélange de poudres comportant éventuellement de tels additifs, on soumet celui-ci à l'étape b) de compactage.
Le compactage est effectué à la température ambiante, par exemple, à une température de 15 à 30"C, sous une pression de 100 à 500 MPa, de préférence de 200 MPa, par exemple au moyen d'une presse hydraulique après avoir disposé le mélange dans un moule.
Dans l'étape suivante c), on soumet la pièce compactée à un traitement hydrothermal dans une enceinte étanche en présence d'un milieu aqueux porté à une température de 100 à 500"C, sous une pression qui correspond à la pression de vapeur d'eau à la température choisie.
Ce traitement permet d'obtenir une forme céramisée par réaction hydrothermale entre les constituants du mélange compactés. On peut obtenir ainsi des pièces d'une dureté exceptionnelle qui est assurée par le fait que se sont développés à l'intérieur du matériau massique des cristaux aciculaires d'apatite qui conditionnent le cohésion de ce matériau.
Le traitement hydrothermal peut être effectué de deux façons.
Ainsi, selon un premier mode de réalisation du traitement, on immerge totalement la pièce compactée dans le milieu aqueux de façon à ce qu'elle soit en contact avec l'eau à l'état liquide.
Selon un second mode de réalisation de ce traitement hydrothermal, utilisé de préférence pour des pièces compactées renfermant des composés solubles en milieu aqueux, on dispose la pièce compactée au-dessus du milieu liquide de sorte qu'elle n'est en contact qu'avec la vapeur d'eau produite dans l'enceinte étanche, sous l'effet de la température du traitement.
La température du traitement hydrothermal est située dans la gamme de 100 à 500"C, et la durée de ce traitement hydrothermal dépend en particulier de la température utilisée, celle-ci étant plus longue lorsque la température est plus faible. Généralement, la durée est d'au moins 8 heures et elle peut aller jusqu'à 60 heures.
De préférence, la température du traitement hydrothermal est de 150 à 250"C, et sa durée d'environ 48 heures.
Le milieu aqueux utilisé est généralement de l'eau déminéralisée, mais on peut aussi utiliser une solution aqueuse contenant des additifs appropriés.
Ainsi, on peut utiliser, comme milieu aqueux, une solution aqueuse de fluorure de sodium afin d'introduire dans la structure de l'hydroxyapatite des ions fluor, afin de diminuer la solubilité de l'hydroxyapatite.
Selon une variante de réalisation du procédé de l'invention, celui-ci comprend de plus une étape complémentaire d) de frittage de la pièce compactée qui a été soumise au traitement hydrothermal.
Ce frittage est effectuée à une température d'au moins 1 000"C, par exemple de 1 000 à 1 300"C.
Une borne de sortie s située, symétriquement à la borne d'entrée e, entre la borne N de la diode D2 et la sortie de l'interrupteur K2, assure la connexion avec la cellule résonante suivante.
Une de ces cellules de résonance est représentée sur la figure 3 et montre le fonctionnement de cette cellule dans une structure de hacheur-abaisseur.
On retrouve, sur cette figure 3, les composants de la cellule la de la figure 2, exceptés les moyens écrêteurs El et E2 qui n'ont aucune influence sur le fonctionnement général des cellules de résonance. Leur rôle est uniquement d'assurer une certaine limitation des tensions dans les cellules.
Pour expliquer le fonctionnement de cette cellule, on suppose que le courant de sortie du hacheur est constant et égal à Io. On suppose également que la tension d'entrée du hacheur est constante et égale à E.
Cette cellule de résonance reçoit donc en entrée une tension E et fournit en sortie un courant Io, schématisé sur la figure 3 par une source de courant.
En parallèle sur cette source de courant, est connectée une diode de roue libre Dri.