INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
IV). L'expression conférée par ces 2 promoteurs est identique.
L'obtention de MPrl096 par délétion des fragments SphI-SpeI portant la boîte "nosE like" et SpeI-Spel de MPR1097, portant une région de la séquence enhancer de petE prom (Fig. IV), ne semble pas affecter le taux d'expression. Dans le promoteur MPrl096, la présence de la boîte "G", précédée de 31 pb de la séquence enhancer de petE et distante de 122 pb de la boîte "CAAT", permet d'augmenter le taux d'expression engendré par MPrl098 d'un facteur 2,5. Il est à noter que dans le cas de MPrll43, la présence de la boîte "G" précédée de 28 pb de la séquence enhancer de petE et distante de 36 pb de la boîte "CAAT", ne permet pas d'accroître le taux d'expression obtenu avec MPrl098. Il semblerait que la distance entre les boîtes "G" et "CAAT" influence le taux d'expression.
- la classe 4 renferme le promoteur petE (Fig. IV) qui sert de référence.
- la classe 5 contient le promoteur MPrlllO (Fig. IV). La fusion des boîtes as-2 et as-1 en amont du promoteur MPrll43 générant le promoteur MPrlllO permet d'augmenter considérablement le taux
d'expression qui est bien plus élevé que celui obtenu avec le promoteur petE (facteur 1,4). Il apparaît que les boîtes "G", "as-1" et "as-2" agissent en synergie positive sur le taux d'expression.
De manière générale, L'alliage selon l'invention peut être utilisé pour fabriquer des filières en sortie de four ou de feeder pour la production de matériaux à partir d'une composition vitrifiable. II peut s'agir, comme mentionné plus haut, de la production de fils de verre dits textile utilisés dans le renforcement, mais aussi de la production de fibres minérales de type fibres de verre ou fibres de roche utilisées usuellement pour l'isolation thermique ou acoustique.
Cela comprend également le verre d'emballage dit verre creux du type flacon, bouteille.
En dehors de l'industrie verrière, les alliages selon l'invention peuvent s'appliquer à la fabrication d'articles très divers, lorsque ceux-ci doivent présenter une résistance élevée en milieu oxydant et/ou corrosif, en particulier à haute température, par exemple pour réaliser des pièces de four de traitement thermique, des résistances électriques chauffantes ou bien dans l'aviation pour des éléments de turbine.
De manière générale, ces alliages peuvent servir à réaliser tout type de pièces en alliage réfractaire servant au fonctionnement ou à l'exploitation de four de traitement thermique à haute température (au-delà de 1 1000C). II peut ainsi s'agir par exemple de pales de ventilateur chaud, de support de cuisson, de matériel d'enfournement... Ils peuvent aussi servir à réaliser tout type de résistance chauffante destinée à fonctionner en atmosphère chaude oxydante, et à réaliser des éléments de turbine, entrant dans des moteurs de véhicule terrestre, maritime ou aérien ou dans tout autre application ne visant pas des véhicules, par exemple dans des centrales.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront des exemples suivants qui illustrent l'invention de façon non limitative, ainsi que des dessins annexés sur lesquels - la figure 1 représente la comparaison des propriétés en oxydation isotherme d'un premier alliage selon l'invention et d'un alliage comparatif ne renfermant pas d'oxyde de chrome en dispersion interne - la figure 2 représente la comparaison des propriétés en oxydation isotherme d'un second alliage selon l'invention et d'un alliage comparatif ne renfermant pas d'oxyde de chrome en dispersion interne.
- la figure 3 représente la comparaison des propriétés en oxydation isotherme de trois autres alliages selon l'invention et d'un alliage comparatif ne renfermant pas d'oxyde de chrome en dispersion interne.
Exemple 1 On prépare un alliage à base de chrome-molybdène-tungstène selon l'invention en modifiant une matrice Cr - Mo - W de la composition suivante (en % en poids) Cr 24 % Mo 37,5 % W 37,5 % Pd 1 % par l'ajout de particules de Cr203 à raison de 5 % en volume environ.
La composition pondérale de l'alliage est la suivante (en % en poids) Cr 23,4 % Mo 36,6 % W 36,6 % Pd 1,0 % Cr203 2,4 % Le molybdène sous forme de poudre de granulométrie 2-4 um, et le tungstène en poudre de granulométrie 1-2 um, sont tout d'abord soumis à un recuit sous hydrogène pendant 1 heure à 9000C pour réduire l'oxyde à la surface des grains métalliques. Ils sont ensuite mélangés au chrome en poudre de granulométrie 1 jim, au palladium de granulométrie 1-1,5 ,um et à l'oxyde de chrome finement divisé, et broyés longuement dans un mortier en agate pour obtenir un mélange de composition homogène avec une répartition fine et uniforme des particules de Cr203.
On procède enfin au frittage sous charge des poudres par pressage uniaxial à chaud dans un four presse de marque LILLIPUT de la Société ECM, comprenant un élément chauffant en graphite, un groupe hydraulique qui permet par l'intermédiaire d'un piston d'imposer une charge maximale de 10 000 DaN au centre du four, ainsi qu'une station de vide primaire et une station d'alimentation en gaz neutre (argon).
Le mélange de poudres est d'abord compacté en une pastille de 15 mm de diamètre dans la matrice en graphite, en comprimant la poudre à température ambiante sous une charge d'environ 100 kg.
Ensuite a lieu le frittage proprement dit dans les conditions suivantes - montée en température à faible vitesse (10 à 15 C/min) et par paliers jusqu'à 1 2000C sous vide primaire dynamique et sous charge de 5 MPa - puis mise en place d'un balayage d'argon et poursuite de la montée en température à faible vitesse, avec un palier long (60 min environ) à 13700C sous charge de 27 MPa et un autre palier long (120 min environ) à 14200C toujours sous 27 MPa de charge haut de température de 14200C à la température ambiante sous charge nulle et balayage d'argon.
Après le frittage, on peut procéder à un recuit d'une part pour diminuer les contraintes résiduelles qui ont pu apparaître au cours du refroidissement et d'autre part pour améliorer, si besoin est, I'homogénéité de l'alliage. Des conditions avantageuses de recuit sont les suivantes - montée en température jusqu'à 13700C, puis palier de 2 h à 13700C sous balayage d'hydrogène ; - puis montée jusqu'à 14200C et palier de 24 h à 14200C sous balayage d'argon - refroidissement à la température ambiante.
L'alliage obtenu est observé en microscopie optique, microscopie électronique à balayage (MEB) et microanalyse à la sonde de Castaing, suivant les techniques habituelles.
Le résultat de la synthèse est un alliage homogène avec une taille de grains de l'ordre de 50 um, les grains de Cr203 de quelques microns de large étant répartis uniformément aux joints de grains de l'alliage. On vérifie que le volume occupé par les grains de Cr203 représente environ 5 % du volume de l'alliage.
Les propriétés en oxydation à haute température de l'alliage sont évaluées par thermogravimétrie où l'on mesure la prise de masse d'un échantillon d'alliage (indicatrice de la quantité d'oxyde formée) en fonction du temps dans une enceinte chauffée à 1 3000 C. Les conditions générales sont les suivantes - montée en palier isotherme à îO0C/min - durée du palier isotherme de 100 heures à 13000C - descente à la température ambiante à îO0C/min avec un balayage du four par un débit d'air synthétique sec de 1 ,5 I/h.
Les résultats sont représentés sur le graphe de la figure 1 en termes de prise de masse (en mg/cm2) par unité de temps (en heures).
On procède ensuite au frittage sous charge des poudres par pressage uniaxial à chaud dans le four presse de l'exemple 1 d'une pastille de 15 mm de diamètre de poudre comprimée à température ambiante sous une charge d'environ 100 kg.
Le frittage proprement dit est effectué avec un palier long (60 min environ) à 1000C sous charge de 27 MPa et un autre palier long (120 min environ) à 1 1000C toujours sous 27 MPa de charge.
Comme dans les exemples précédents, on vérifie par microscopie que l'alliage obtenu est homogène et que les grains de Cr203 de quelques microns de large sont répartis uniformément aux joints de grains de l'alliage. On vérifie que le volume occupé par les grains de Cr203 représente environ 5 % du volume de l'alliage.
Les propriétés en oxydation à haute température de l'alliage sont évaluées par thermogravimétrie à 1 300 OC dans les conditions énoncées plus haut, pendant une centaine d'heures, et représentées graphiquement par le thermogramme 3 de la figure 3.
La constante K de la cinétique d'oxydation parabolique est de l'ordre de 2,6.10-10 g2.cm-4.s-1.
Une observation dumatériau oxydé par micorscopie électronique à balayage en mode à électrons rétrodiffusés montre la présence d'une couche superficielle d'oxyde de chrome adhérente à l'alliage très régulière et parfaitement compacte d'une épaisseur de 50 ,um environ.
Les propriétés de cet alliage en présence d'un milieu corrosif constitué par du verre fondu sont caractérisées dans un essai électrochimique consistant à mesurer le potentiel de passivation de l'alliage plongé dans un bain de verre fondu à la température de 9500C. Les mesures sont réalisées grâce à un montage à 3 électrodes : une électrode de travail en l'alliage 3, une contreélectrode en platine et une électrode de référence en zircone. L'électrode de travail est une électrode tournante permettant d'améliorer le renouvellement de verre autour de l'électrode et de simuler l'érosion exercée sur le matériau en service.
Dans les conditions de l'essai, la courbe intensité-potentiel de l'alliage 3 présente un pic de passivation pour un potentiel de l'ordre de -1,1 mV avec une intensité de courant de passivation d'environ 5,0 mA/cm2. L'intensité du pic de passivation est indicatrice de l'inverse de la capacité de l'alliage à former et à entretenir sa couche protectrice de Cr203 superficielle.
Exemple comparatif 3 On prépare dans les conditions de l'exemple 3 un alliage comparatif 3, qui ne comporte pas d'oxyde de chrome en dispersion interne. Sa composition est celle de la matrice utilisée ci-dessus, à savoir Ni 70 % Cr 30 % Cet alliage est soumis au même test de thermogravimétrie à 1 3000C et ses performances sont illustrées par le thermogramme 3comp sur la figure 3.
La prise de masse de l'alliage comparatif 3 est bien plus importante que celles de l'alliage 3, indiquant une moins bonne résistance à l'oxydation. La constante Kp de la cinétique d'oxydation parabolique de l'alliage comparatif 3 est de l'ordre de 3,9.10.10 g2. cm~4. s~1.
L'observation du matériau oxydé par microscopie électronique à balayage montre des différences de structure de la couche de Cr203 superficielle par rapport à celle observée sur l'alliages 3, la couche étant moins compacte et présentant de nombreuses fissures.
Les propriétés de cet alliage en présence d'un milieu corrosif constitué par du verre fondu sont caractérisées par les mesures électrochimiques décrites dans l'exemple 3.
Dans les mêmes conditions d'essai, la courbe intensité-potentiel de l'alliage comparatif 3 présente un pic de passivation pour le même potentiel de l'ordre de -1,1 mV avec une intensité de courant de passivation d'environ 6,3 mA/cm2. L'intensité du pic de passivation est indicatrice de l'inverse de la capacité de l'alliage à former et à entretenir sa couche protectrice de Cr203 superficielle.
La comparaison des résultats montre que la présence de Cr203 interne dans l'alliage 3 abaisse de facon remarquable l'intensité du pic de passivation de l'alliage, de sorte que sa passivation dans le verre est facilitée par rapport à l'alliage comparatif 3. C'est au moins en partie grâce à cette facilité de passivation que l'alliage 3 est capable de réparer les fissures (et éventuellement les déchirures) qui se créent dans la couche superficielle de passivation et ainsi d'entretenir à sa surface une couche d'oxyde plus compacte et plus étanche aux espèces réactives.
Exemple 4 On prépare comme à l'exemple 3 un autre alliage à base de nickelchrome selon l'invention en modifiant la même matrice Ni-Cr par l'ajout de particules de Cr2O3 à raison de 1 % en volume environ.
La composition pondérale de l'alliage est la suivante (en % en poids) Ni 69,5 % Cr 29,8 % Cr203 0,6 % Les propriétés en oxydation de l'alliage 4 sont évaluées par thermogravimétrie à 1 300 OC dans les mêmes conditions et représentées graphiquement par le thermogramme 4 de la figure 3.
nécessaires au remplacement de la lampe défectueuse.
La présente invention vise à pallier ces inconvénients de l'état de la technique et à proposer un nouveau dispositif d'éclairage ou de signalisation qui ne nécessite en arrière de lui aucun espace libre pour une opération de remplacement de lampe, dont l'encombrement en particulier suivant la direction d'émission lumineuse soit réduit, dont le nombre de pièces intervenant dans la fabrication puisse être réduit, dont certaines pièces puissent en outre être simplifiées, et enfin qui permette
à l'uilisateur un remplacement de lampe plus aisé.
Elle propose à cet effet un dispositif d'éclairage ou de signalisation de véhicule automobile, comportant un boîtier dont une ouverture frontale est fermée par une glacé et abritant un ensemble optique comprenant un miroir et une lampe montée de façon amovible dans le miroir, caractérisé en ce qu'il comporte des moyens de montage de la glace sur le boîtier tels que ladite glace puisse être déplacée par rapport au boîtier pour dégager ladite ouverture frontale, et en ce que l'ensemble optique est capable d'adopter une position dans laquelle la lampe peut être extraite du miroir à travers ladite
ouverture frontale.
Des aspects préférés, mais non limitatifs, du dispositif selon l'invention sont les suivants: - le miroir est monté de façon essentiellement fixe dans le boîtier, et la lampe est apte à être montée dans
le miroir par l'avant de ce dernier.
- la lampe est une lampe de type standard montée sur un porte-lampe apte à être monté dans le miroir par
l'avant.
- le dispositif comprend en outre un cache de lampe monté sur le miroir en venant se placer au voisinage de la lampe, et il est prévu des moyens pour escamoter ledit cache. - le cache est monté de façon articulée sur le miroir. - la lampe est apte à être montée dans le miroir par l'arrière de celui-ci, et le miroir es: monté de
façon déplaçable dans le boîtier.
- le miroir est monté de façon pivotante sur le boîtier, de manière à pouvoir exposer sa face arrière au
niveau de ladite ouverture frontale.
- le miroir est monté pivotant par sa région
inférieure sur une région inférieure du boîtier.
- le miroir est fixé sur le boîtier de façon séparable. - le miroir est fixé à la glace, et le déplacement de la glace est apte à amener l'ensemble optique dans une
volumes d'éthanol absolu à -80 C pendant 30 min, puis centrifugé à 12000 g pendant 30 min, lavé à l'éthanol 70 %, séché, resuspendu dans l'eau. Puis, il a été déphosphorylé pendant 1 h à 37 C à l'aide de 10 unités de phosphatase alcaline d'intestin de veau (Boehringer Mannheim) selon les recommandations du fabricant, déprotéinisé par extraction avec un volume de phénol, puis un volume de phénol : chloroforme : alcool isoamylique (25: 24:1 v/v/v) et enfin un volume de chloroforme : alcool isoamylique (24:1 v/v), précipité en présence de 1/10 volume d'acétate de sodium 3M pH 4,8 et de 2,5 volumes d'éthanol absolu à -80 C pendant 30 min puis centrifugé à 12000 g pendant 30 min, lavé à l'éthanol 70 %, séché puis resuspendu dans l'eau. Le plasmide résultant a été appelé pGA492DPem2.
En parallèle, le promoteur petE (818 pb) qui correspond au promoteur du gène de la plastocyanine de pois, a été obtenu à partir du plasmide pKHn2 par digestion par NcoI pendant 1 h à 37 C. Le fragment promoteur de 828 pb a été isolé sur gel d'agarose 0,8 %, électroélué, précipité en présence de 1/10 volume d'acétate de sodium 3M pH 4,8 et de 2,5 volumes d'éthanol absolu à -80 C pendant 30 min, centrifugé à 12000 g pendant 30 min, lavé à l'éthanol 70 %, séché, resuspendu dans l'eau, puis soumis à l'action de 5 unités de nucléase Mung Bean (New England Biolabs) pendant 30 min à 30 C selon les recommandations du fabriquant, déprotéinisé par extraction avec un volume de phénol, puis un volume de phénol : chloroforme : alcool isoamylique (25: 24:1 v/v/v) et enfin un volume de chloroforme : alcool isoamylique (24: 1 v/v), précipité en présence de 1/10 volume d'acétate de sodium 3M pH 4,8 et de 2,5 volumes d'éthanol absolu à -80 C pendant 30 min puis centrifugé à 12000 g pendant 30 min, lavé à l'éthanol 70 %, séché puis resuspendu dans l'eau. Ce fragment promoteur a été inséré dans le plasmide pGA492DPem2, décrit ci-dessus, en présence de 1,0 l du tampon ADN ligase T4 10X (Amersham) et de 2,5 unités d'ADN ligase T4 (Amersham) à 14 C pendant 16 h. Des bactéries Escherichia coli DH5a, rendues préalablement compétentes, ont
été transformées. L'ADN plasmidique des clones obtenus, sélectionnés sur milieu LB supplémenté en tétracycline (12 mg/1), a été extrait selon la méthode de la lyse alcaline et analysé par digestions enzymatiques. Le plasmide résultant a été appelé pGA492-petE prom.
Pour isoler la cassette d'expression "petE prom/uidA/nos term", 5 pg du plasmide pGA492-petE prom ont été digérés par PstI (site situé en 5' du promoteur du gène de la plastocyanine) et EcoRI (site localisé en 3' de la séquence terminatrice) pendant 1 h à 37 C, soumis à l'électrophorèse sur gel d'agarose 0,8%, et purifié sur colonne d'affinité Qiaquick (Qiagen, Hilden, Allemagne) selon les recommandations du fournisseur. Par ailleurs, 500 ng de plasmide pGEM3Z ont été digérés simultanément pendant 1 h à 37 C par EcoRI et PstI (sites de restriction présents dans le site de clonage multiple ou polylinker), soumis à l'électrophorèse sur gel d'agarose 0,8%, puis purifié sur colonne d'affinité Qiaquick.
La ligation a été réalisée avec 50 ng de vecteur pGEM3Z-PstI/EcoRI et 50 ng de la cassette d'expression "petE prom/uidA/nos term" pendant 1 nuit à 18 C dans un milieu réactionnel de 12 l en présence de 1,2 l du tampon ADN ligase T4 10X (New England Biolabs) et de 400 unités d'ADN ligase T4 (New England Biolabs). Des bactéries Escherichia coli DHSa, rendues préalablement compétentes, ont été transformées par le mélange réactionnel de ligation. l'ADN plasmidique des clones obtenus, sélectionnés sur milieu LB supplémenté en ampicilline (50 mg/1), a été extrait selon la méthode de lyse alcaline et a été analysé par digestions enzymatiques. Le plasmide obtenu a été appelé pGEM3Z-petE prom.
Cinq ug de plasmide pSCV1.2-GI ont été digérés pendant 1 h à 37 C par SnaBI (Site de restriction situé à la position +383 pb en aval du codon initiateur ATG du gène uidA) puis pendant 1 h à 65 C par BstBI (site localisé à la position +1285 pb). Le fragment de 902 pb a été isolé par électrophorèse sur gel d'agarose 1,0%, puis purifié sur colonne d'affinité Qiaquick.
La ligation a été réalisée avec 20 ng de vecteur pGEM3Z-petE prom BstBI/SnaBI et 80 ng du fragment de 902 pb BstBI/SnaBI, pendant 1 nuit à 18 C dans un milieu réactionnel de 10 l en présence de 1,0 l du tampon ADN ligase T4 10X (New England Biolabs) et 400 unités d'enzyme ADN ligase T4 (New England Biolabs). Des bactéries Escherichia coli DH5a, rendues préalablement compétentes, ont été transformées par la moitié du mélange réactionnel de ligation. l'ADN plasmidique des clones obtenus, sélectionnés sur milieu LB supplémenté en ampicilline (50 mg/1), a été extrait selon la méthode de lyse alcaline et a été analysé par digestions enzymatiques. Le plasmide obtenu a été appelé pGEM3Z-petE prom/IV2.
Afin d'insérer l'intron IV2 de 192 pb du gène de la patatine de pomme de terre dans la séquence codante uidA, une portion interne de ce gène (fragment SnaBI / BstBI de 710 pb dans pGEM3Z-petE prom) a été excisé puis remplacé par la séquence équivalente contenant l'intron IV2 (fragment SnaBI / BstBI de 902 pb). Pour ce faire, le plasmide pGEM3Z-petE prom a été digéré pendant 1 h à 37 C par SnaBI (site de restriction situé à la position +383 pb en aval du codon initiateur ATG du gène uidA) puis pendant 1 h à 65 C par BstBI (site localisé à la position +1093 pb). Le plasmide ainsi délété du fragment de 710 pb a été isolé par électrophorèse sur gel d'agarose 0,8%, puis purifié sur colonne d'affinité Qiaquick. Le fragment BstBI/SnaBI de 902 pb correspondant à la séquence de l'intron IV2 suivie de la séquence de uidA s'étendant de la position 383 à 1093 pb, a été isolé et purifié à partir du plasmide pSCV1.2-GI. Celui ci dérive du plasmide pSCVl.2 qui dérive lui-même du plasmide pSCVl construit par G.A. Edwards en 1990 selon les méthodes usuelles de clonage. Le plasmide binaire pSCVl.2 a été obtenu par clonage du fragment HindIII portant la cassette d'expression "35S prom/ nptII / nos term" (Fromm et al., 1986) au site HindIII de pSCVl.
La cassette d'expression "35S prom/ GUS-IV2/ 35S term" a été obtenue en digérant par HindIII pendant 1 h à 37 C le plasmide p35S GUS INT décrit par Vancanneyt et al. (1990). Le fragment
d'ADN correspondant à la cassette d'expression a été isolé sur gel d'agarose 0,8 %, électroélué puis précipité en présence de 1/10 volume d'acétate de sodium 3M pH 4,8 et de 2,5 volumes d'éthanol absolu à -80 C pendant 30 min puis, centrifugés à 12000 g pendant 30 min, lavé à l'éthanol 70 %, séché et resuspendu dans l'eau. Les extrémité 5' sortantes de ce fragment ont été rendues bouts-francs par l'action du fragment de Klenow de l'ADN polymérase I (New England Biolabs) pendant 30 min à 37 C selon les recommandations du fabriquant, et le fragment a été déprotéinisé par extraction avec un volume de phénol, puis un volume de phénol : chloroforme : alcool isoamylique (25:24:1 v/v/v) et enfin un volume de chloroforme : alcool isoamylique (24: 1 v/v), précipité en présence de 1/10 volume d'acétate de sodium 3M pH 4,8 et de 2,5 volumes d'éthanol absolu à -80 C pendant 30 min puis, centrifugé à 12000 g pendant 30 min, lavé à l'éthanol 70 %, séché et enfin ligaturé avec 20 ng de plasmide pSCVl.2 digéré par SmaI pendant 1 h à 25 C, en présence de 1,0 l du tampon ADN ligase T4 10X (Amersham) et 2,5 unités d'ADN ligase T4 (Amersham) à 14 C pendant 16 h. Des bactéries Escherichia coli DH5a, rendues préalablement compétentes, ont été transformées. L'ADN plasmidique des clones obtenus, sélectionnés sur milieu LB supplémenté en ampicilline (50 mg/1), a été extrait selon la méthode de la lyse alcaline et analysé par digestions enzymatiques.
Afin d'éliminer la séquence promotrice correspondant au fragment de 818 pb (petE) du plasmide pGEM3Z-petE prom/IV2, celui-ci a été digéré pendant 1 h à 37 C par BamHI puis, pendant 1 h à 37 C par PstI, isolé par électrophorèse sur gel d'agarose 0,8%, puis purifié sur colonne d'affinité Qiaquick. Les extrémités 5' sortantes de ce plasmide ont été rendues bouts-francs en utilisant l'ADN polymérase Pfu (Stratagene, La Jolla, USA) selon les recommandations du fournisseur. La ligation a été réalisée avec 10 ng de plasmide ainsi modifié pendant 1 nuit à 18 C dans un volume réactionnel de 12 l, en présence de 1,2 l du tampon ADN ligase T4 10X (New England Biolabs) et 400 unités d'enzyme
ADN ligase T4 (New England Biolabs). Des bactéries Escherichia coli DH5a, rendues préalablement compétentes, ont été transformées avec la moitié du milieu réactionnel de ligation. l'ADN plasmidique des clones obtenus, sélectionnés sur milieu LB supplémenté en ampicilline (50 mg/1), a été extrait selon la méthode de lyse alcaline, analysé par digestions enzymatiques, et vérifié par séquençage selon le procédé de Sanger et al.
(1977). Le plasmide obtenu a été appelé pMRT1144 (Fig. I).
1. 2. Construction du témoin positif MPr1092.
Afin de disposer d'une séquence promotrice de référence, le promoteur "double 35S" du virus de la mosaïque du choux fleur (CaMV D35S prom), a été placé en amont de la séquence uidA-IV2/nos term. Le plasmide pMRT1092 (Fig. II) résulte des étapes de clonage suivantes : Dans un premier temps, l'intron IV2 de 192 pb du gène de la patatine de pomme de terre a été inséré dans la séquence codante uidA à la position +383 pb comme décrit à la section 1. 1. Une quantité de 1 ug de plasmide pBI221 (Clontech, CA, USA) a été digérée pendant 1h30 à 37 C par SnaBI puis, pendant lh30 à 65 C par BstBI. Le plasmide délété d'un fragment de 710 pb a été isolé par électrophorèse sur gel d'agarose 0,8%, puis purifié sur colonne d'affinité Qiaquick.