INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Que la boucle rigide appartienne ou non à un manchon de pied de pale, il est avantageux qu'un tel manchon entoure le pied de chaque pale et soit solidaire de ce dernier, de sorte que le levier de pas puisse être, sur chaque pale, en saillie latérale sur ce manchon, d'un côté de l'axe de pas, tandis qu'une ferrure de reprise d'un amortisseur de traînée, appelé encore adaptateur de fréquence ou contrefiche de rappel élastique avec amortissement incorporé en traînée, est en saillie latérale sur ce manchon, de l'autre côté de l'axe de pas de la pale correspondante, pour une liaison interpale des amortisseurs de traînée, en particulier dans le cas d'un rotor principal, ou pour une liaison conventionnelle de chaque amortisseur de traînée entre le pied d'une pale et le moyeu, en particulier sur un rotor arrière.
Dans les deux cas, le rotor comprend avantageusement également, pour chaque pale, un dispositif à butées de battement à appuis directs de butées interne, du côté du mât, et externe, du côté opposé au mât, qui sont montées sur le pied de pale, et avantageusement fixées ou montées mobiles (escamotables en vol sous l'effet de la force centrifuge) sur un manchon de pied de pale, contre respectivement des butées interne et externe montées, également fixes ou escamotables en vol, sur le moyeu, pour limiter respectivement les battements négatifs et positifs de la pale, les butées de battement interne et externe du moyeu étant disposées sur les bords radiaux externes, par rapport à l'axe du rotor, des plateaux respectivement interne et externe du moyeu, dans les parties desdits plateaux entre lesquelles sont logés lesdits moyens de retenue et d'articulation des pales au moyeu.
N-Benzoyl-O-Acétylbuxadiénine E
Masse L'ion moléculaire est à m/z 546 (8), ce composé est donc un alcaloïde dibasique.
L'ion à m/z 503 (11) résulte de la perte d'un groupement diméthylamino sur le carbone 3 ou le carbone 20.
L'ion à m/z 105 (50) est caractéristique d'un groupement benzoyle (C6H5CO+).
Ce qui permet de placer ce groupement benzoyle (azote en C3 ou en C20), c'est l'ion à m/z l 148 qui correspond à l'ion C6H5CONHCHCH3+.C Cet ion n'apparaît que si le groupement benzoyle est fixé sur l'azote porté par le carbone 20.
Les deux protons H11 et H19 apparaissent respectivement sous forme d'un singulet élargi à 5,52 ppm et d'un singulet à 5.91 ppm et indiquent que ce composé à un structure dc nor-19homo-B-%-α-pregnane.
Les protons aromatiques sont aisément repérables: doublet à 7.72 ppm (J = 7 Hz) pour les protons en orrho, triplet à 7,40 ppm (J = 7 Hz) pour les proton en mera et doublct à 7,46 ppm (J = 7 Hz) pour le proton en para.
Le proton porté par l'azote apparat sous forme d'un doublet à 6.37 ppm (J = 8 Hz) et le proton H20 sous forme d'un mutiplet.à
Sept alcaloïdes majoritaires ont été isolés, pur ou en mélange, de Buxus sempervirens.
Il s'agit de quatre alcaloïdes de type 9ss,19-cyclo-5-a-pregnane, la cycloprotobuxine D, la cyclobuxine D, la cyclovirobuxine D et la cyclobuxophylline M, et de trois alcaloïdes de type nor-19-homo-B-5-a-pregnane, la buxamine G, la buxamine E et la N-benzoyl-Oacétylbuxadiénine E.
Parmi ces composés, seule la cyclobuxophylline M est un alcaloïde monobasique, les autres étant des alcaloïdes dibasiques.
Si certains de ces alcaloïdes, comme la buxamine E, la cyclobuxine D ou lacyclovirobuxine D, sont d'après les données bibliographiques tenus comme étant majoritaires, d'autres, comme la cyclobuxophylline M et la N-benzoyl-O-acétylbuxadiénine E ne semblaient pas apparaître comme des composés importants.
Les alcaloïdes totaux (A, B et fraction alcaloïdique de C) représentent environ 1 % de la drogue traitée mais aucun des composés identifiés ne semblent dépasser 2 % du total des alcaloïdes.
Malgré tout, la buxamine G et la cyclobuxophylline M semblent un peu plus importants que les autres. Ce sont d'ailleurs les alcaloïdes qui ont présenté le moins de difficultés pour leur isolement.
Au vu des plaques de chromatographie sur couche mince, il apparaît qu'il existe un très grand nombre d'alcaloïdes dans le Buxus sempervirens. Toutefois, il serait possible d'isoler l ou 2 nouveaux alcaloïdes importants.
Les médicaments préparés en mettant en oeuvres des extraits enrichis de Buxus sempervirens selon l'invention peuvent être utilisés pour la prévention du rejet de greffon dans des greffes d'organes et de tissus, ainsi que pour le traitement de rejet après greffe de moelle osseuse.
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On refroidit à () C puis on ajoute à une température intërieure ou egale à 5 C 1(),6 g de NaNO2 en solution dans 40 ml d'eau. Après 5 minutes, on ajoute une solution à 50C de SnCl2, 2H2O dans 75 ml d'HCl concentré puis on laisse 2 heures et demie à 0 C. On filtre, lave le précipité formé avec le mininum d'eau à 5 C. puis on le solubilise dans 5()0 ml d'eau à 5 C. On ajoute à 10 C, 9,5 ml d'acide pyruvique.dans 50 ml d'eau. Après une nuit au réfrigérateur, le précipité formé est filtré puis repris dans 12() ml de benzène. On sèche sur Na2SO4 puis concentre pour obtenir 11 g de composé attendu.
B) Ester éthylique de l'acide 2-[(4-éthylphényl)hydrazono]propionique.
On chauffe à reflux pendant 2 heures 11 g du composé de l'étape précédente, dans 100 ml d'éthanol absolu et 6 ml d'H2SO4. On concentre au tiers, puis on verse sur de l'eau glacée, extrait à l'éther, lave par Na2CO3. sèche sur Na2SO4 et concentre. Le précipité formé est repris au pentane puis filtré pour donner 7,9 g du composé attendu.
C) Ester éthylique de l'acide 5-éthylindole-2-carboxylique.
On chauffe 9,6 g d'acide p-toluènesulfonique dans 100 ml de benzène au retlux puis on ajoute avec précaution 7,9 g du composé de l'étape précédente et on chauffe une heure et demie à reflux. On filtre l'insoluble, puis la solution benzènique est lavée par NaHCO3 en solution saturée; séchée puis concentrée. Le résidu précipite dans le pentane. On obtient 5,4 g du produit attendu.
D) Acide 5-éthylindole-2-carboxylique.
On chauffe pendant 3 heures à retlux 5,4 g du composé de l'étape précédente dans 50 ml d'éthanol et 4 ml d'eau contenant 3,4 g de KOH.
On concentre le milieu, reprend le résidu à l'eau, lave à l'éther, acidifie la phase aqueuse par addition d'HCI concentre puis on filtre le précipité formé pour obtenir 3,95 g du composé attendu.
E) Ester benzylique de l'acide 5-éthylindole-2-carboxylique.
Dans 3() ml de DMF on mélange 4 g du composé de l'étape précédente, 3.14 ml de DBU et 2,75 ml de bromure de benzyle et on laisse 48 heures sous agitation à TA. On verse le milieu sur 300 ml d'eau à 5 C: filtre le précipité formé puis on le lave à l'eau à 5 C puis au pentane. On reprend ce précipité par 300 ml d'acétate d'éthyle, sèche sur Na2SO4 et concentre pour obtenir 4,93 g du composé attendu.
F) Ester henzylique de l'acide (5-éthyl-1-tert- butoxycarbonylméthyl)indole-2-carboxylique.
On dissout 4,93 g du composé de l'étape précédente dans 40 ml de DMF, on ajoute par portions 0,78 g d'hydrure de sodium à 60 % dans l'huile puis on chauffe 30 minutes à 60 C. On laisse refroidir et l'on ajoute goutte à goutte 3,1 ml d'ester tert-butylique d'acide bromoacétique. Après une nuit à TA, on évapore le DMF, on extrait à l'éther, lave à l'eau, sèche sur Na2SO4, puis on chromatographie le résidu sur silice en éluant par DCM/pentane (6()/40 ; v/v) pour obtenir 5,2 g du composé attendu.
G) Acide 5-éthyl-1-(tert-butoxycarbonylméthyl)indole-2-carboxylique.
On hydrogène à température et pression ambiantes 5,2 g du composé de l'étape précédente dans 100 ml d'éthanol et 120 ml d'acétate d'éthyle en présence de 520 mg de Pd/C à 10 %. On filtre le catalyseur. lave à l'acétate d'éthyle puis concentre à sec pour obtenir 4 g du composé attendu.
PREPARATION 2.9 Acide 1 - efl-butoxycarbonylméthyl)-5-trifl uorométhyli ndole-2- carboxylique.
A) Ester éthylique de l'acide trifluorométhyl)phénylhydrazono]propionique.
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La présente invention concerne un nouveau polysaccharide, microorganisme et procédé pour son obtention, composition le contenant et application.
On sait que les populations microbiennes constituent un large réservoir pour la mise en oeuvre de nouvelles molécules. La description des bactéries présentes dans les rhizosphères de plantes céréalières a d'abord permis de mettre en évidence des espèces fixatrices d'azote pour la plupart associées aux racines de blé, tournesol, riz et maïs. L'isolement de ces espèces a nécessité la mise au point de méthodes d'isolement spécifiques : le modèle spermosphère permettant de sélectionner les bactéries les plus adaptées à la rhizosphère et l'immunopiégeage utilisant les anticorps spécifiques de certaines espèces. Ces bactéries sont aussi impliquées dans les mécanismes d'attachement et de colonisation des racines.
Depuis plusieurs années, les recherches se sont focalisées sur la capacité de la plupart des bactéries, présentes à la surface des racines et dans la rhizosphère, à produire des exopolysaccharides (EPS). II a largement été démontré que ces polymères jouent un rôle dans la colonisation des racines par les bactéries et l'agrégation des sols autour des racines.
Une solution d'oligonucléotide (antisens de 15 mer) à 2,5 mg/ml en eau est lentement ajoutée (5ss1/ml toutes les heures) à une solution de NPS cationiques à 1 mg/ml maintenue à 450C sous agitation magnétique.
Ainsi, le rapport Oligonucléotide/NPS est de 5% (p/p).
Après le dernier ajout d'oligonucléotide la préparation est incubée 1 heure sous agitation magnétique à 450C.
La concentration en oligonucléotides libres est déterminée par spectrophotométrie après ultrafiltration des préparations. De même, afin de déterminer la stabilité du complexe vis à vis de la force ionique, la préparation est incubée en PBS (10 mM NaH:PO4/Na: > HPO4, NaCl 130 mM, KCl 2 mM, pH 7.4). Après cette incubation ( 30 min. à 37"C), les oligonucléotides libres et associés au NPS sont séparés par ultrafiltration et la concentration est déterminée par spectrophotométrie.
a) Effet de la charpie des NPS cationioues.
La table 4 ci-dessous résume les résultats d'association obtenus pour différentes charges des NPS cationiques (0,6; 0,9 et 1,6 mEq/g) et montre l'influence de charge des NPS cationiques sur les rendements d'association et la stabilité en PBS des complexes oligonucléotide-NPS.
0,6 mEq/g 0,9 mEq/g 1,6 mEq/g (n=9) I (n=2) (n=9) Rdt D'association (%) 61,8 + 11,5 80,2 89,7 + 12,4 + 6,0 ODN libre après PBS (%) 73 + 14 78 + 8 46 + 9 Les résultats obtenus indiquent qu'il existe une relation étroite entre la charge des NPS et la qualité des conjugués NPS-oligonucléotide mesurée par les rendements d'association et leurs stabilités après incubation en PBS.
b) Effet du taux de réticulation.
La figure 3 donne les résultats obtenus lorsque les NPS de l'exemple 2 sont utilisés dans le protocole d'association.
Ces résultats indiquent que pour la charge utilisée, 1,4 mEq/g, le taux de réticulation a peu d'influence sur les rendements d'association. A l'inverse l'augmentation du rapport épichlorhydrine/ unité de glucose permet d'améliorer progressivement la stabilité du complexe après incubation en PBS.
Ainsi, la synthèse du NPS optimal pour la formation des conjugués doit correspondre à un compromis entre la densité de charge du NPS et la réticulation du polysaccharide afin de maximaliser les qualités du conjugué oligonucléotide-biovecteur et à minimaliser la toxicité cellulaire de ceux-ci.
Exemple 7 : Obtention d'un protocole nonaqrévatif lors de la sréDaration des conjugués oliaonucleotide-biovecteurs.
Des biovecteurs préparés comme dans t'exemple 4 sont conjugués à des oligonucléotides (antisens de 18 -mères) en utilisant le protocole décrit dans l'exemple 6 avec un rapport Oligonucléotide/NPS de 10%. Cependant l'apport d'énergie est effectué suivant deux méthodes: Méthode 1 : Les oligonucléotides sont ajoutés à température ambiante dans un bain à ultrasons.
Méthode 2 : L'ajout des oligonucléotides est effectué sous agitation magnétique à 450C.
La méthode 1 aboutit à une agrégation des Biovecteurs, indiquant que les ultrasons ne sont pas suffisants pour dissocier les agrégats Biovecteurs/ oligonucléotide. A l'inverse, la méthode 2 aboutit à un protocole de conjugaison non-agrégatif permettant d'obtenir des suspensions homogènes.
A partir d'un spectre plat constant constitutif d'un signal de référence R(f), l'erreur E(f) pour chaque fenêtre du signal observé vérifie la relation (4) E(f) = R(f) - SX(f)W2(f)H(f).
Le filtre optimal vers lequel la fonction de transfert H(f) converge est celui qui permet de minimiser l'erreur quadratique moyenne, notée EQM dans chacune des bandes de fréquence f dans laquelle la décomposition en bandes de fréquence, décomposition spectrale, a été réalisée. L'erreur quadratique moyenne EQM(f) vérifie la relation (5) EQM(f) = E[E2(f)].
Compte tenu de quelques hypothèses largement vérifiées, spectre à long terme du signal de parole constant et fonction de transfert du canal téléphonique W(f) constant sur un large horizon, le filtre optimal est celui qui permet de minimiser l'expression donnée par la relation (6) EQM(f) = R2(f) + S7)W4( f)H2(f) - 2R(f)SX(f)W2(f)H(f) quelle que soit la valeur de f, c'est-à-dire dans l'ensemble des bandes de fréquences dans lequel le signal observé a été décomposé.
La minimisation de l'erreur quadratique moyenne EQM(f) donnée par la relation (6) précédente permet d'obtenir la fonction de transfert du filtre optimal Hopt(f), laquelle vérifie la relation (7) Hopt(f) = R(f)SX(f) 1 - Cte 1 Sx2(f) w2(f) W (f) Le filtre optimal ainsi obtenu permet de compenser l'effet du canal de transmission, c'est-à-dire de la communication téléphonique.
Par ailleurs, si l'on considère un signal de reference R(f) specifique, c'est-à-dire un signal de référence ayant la même puissance que le signal, l'expression E[R(f)SX(f)] tend alors à être égale à E[SÀ(f) et, dans ces conditions, le filtre optimal approche l'inverse du canal de transmission.
Déconvolution dans le domaine cepstral Par analogie, dans le domaine cepstral, la relation (3) précédente s'écrit selon la relation (8) = Cs(i) + CH() = Cx() + cw(i) + CH(i).
Dans cette relation, Cn(i), Cs(i), C(i), Cw(i) et CH(i) représentent respectivement le cepstre égalisé, le cepstre du signal observé, le cepstre du signal de parole propre, c'est-à-dire avant transmission par la ligne téléphonique ou le canal de transmission, la représentation cepstrale de l'effet de la ligne et du filtre egalisateur.
Compte tenu de la mise en oeuvre d'un cepstre constant R(i) comme référence, l'erreur E(i) pour chaque fenêtre du signal observé vérifie la relation (9) E(i) = R(i) - (Cx(i) + Cw(i) + Le filtre optimal vers lequel la fonction de transfert H(i) du filtre converge est celui qui permet de minimiser l'erreur quadratique moyenne EQM(i) dans chacune des quéfrences selon la relation (10) EQM(i) = E[E2(i)].
Compte tenu de certaines hypothèses semblables aux hypothèses prises en compte dans le domaine fréquentiel, ces hypothèses étant exprimées dans le domaine quéfrentiel, c'est-à-dire cepstre à long terme de parole constant, représentation cepstrale de l'effet de la ligne de transmission constante sur un large horizon, le filtre optimal est celui qui permet de minimiser l'erreur quadratique moyenne et qui en conséquence vérifie la relation (11) CHOpt(i) = R(i) - Cx(i) - Cw(i) = Cte - Cw(i).
Le filtrage optimal appliqué dans le domaine cepstral permet ainsi de compenser l'effet du canal de transmission.
Lorsqu'on choisit le cepstre de référence R(i) égal à la valeur moyenne du cepstre à long terme, notéQ(i), le filtrage optimal approche alors l'inverse du canal de transmission.
La comparaison de l'approche correspondant au processus d'égalisation aveugle conforme au procédé, objet de la présente invention, avec l'approche classique du filtrage passe-haut ou de la soustraction cepstrale montre en fait que du point de vue des performances de reconnaissance, ce mode opératoire égale sensiblement les performances des solutions de l'art antérieur et les dépasse parfois de manière significative sur certaines bases de données, ainsi qu'il sera décrit de manière plus détaillée ultérieurement dans la description.
En ce qui concerne l'étape 1000 de transformation du signal numérique observé / s,(t)J en un ensemble de vecteurs cepstraux, une description détaillée du processus de transformation proprement dit sera maintenant donnée en liaison avec la figure 2b.
Selon la figure précitée, l'étape de transformation 1000 consiste successivement à soumettre en une étape 1000a le signal de parole numérique {sn(t)) à une transformée fréquentielle délivrant un spectre de fréquences {Sn(f)} du signal de parole numérique i S(t)i sur l'horizon considéré.
On rappelle en effet que le signal numérique observésn(t)} est subdivisé en blocs successifs d'échantillons afin d'effectuer un traitement par blocs. La transformée fréquentielle utilisée peut par exemple être constituée par une transformée de Fourier rapide.
L'étape 1000a est elle-même suivie d'une étape 1000b consistant à soumettre le spectre de fréquences ( S,(f)J obtenu grâce à la transformée fréquentielle mise en oeuvre à l'étape 1000a à une décomposition en sous-bandes de fré quences, pour engendrer une pluralité de signaux en sousbandes de fréquences notée (V,(j)J . On indique que l'indice j désigne ici le rang de chaque sous-bande de fréquences considérée. D'une manière pratique, on indique que la décomposition en sous-bandes de fréquences réalisée à l'étape 1000b peut être mise en oeuvre au moyen d'un banc de filtres de fréquences adapté, le spectre du signal 1 S,(f)j pouvant par exemple être subdivisé en 24 bandes de fréquences adjacentes.
Le gel est dilué avec 8 litres d'eau déminéralisée et neutralisé à l'acide acétique glacial.
L'hydrogel obtenu est broyé par l'intermédiaire d'un homogénéisateur à haute pression (RANNIE Lab). La pression exercée est de 400 bars. A l'issue de cette étape, les matrices dispersées ont un diamètre moyen de 60 nm.
La purification s'opère par des étapes successives de - microfiltration 0,45 Fm pour éliminer les particules de taille trop importante, et - diafiltration à volume constant pour éliminer les petites molécules (sels, fragments polysaccharidiques).
Enfin, les NPS sont concentrés, récupérés dans des flacons stériles et conservés à -200C.
(2) Svnthèse des biovecteurs.
Les noyaux polysaccharidiques cationiques décongelés sont dilués avec de l'eau osmosée dans un réceptacle en verre dans la proportion de lmg de NPS ,/lml d'eau. La dispersion est placée dans un premier temps sous agitation magnétique (5-10 minutes) puis homogénéisée (RANNIE Minilab) à 400 bars durant 3 minutes. La dispersion de NPS est placée dans un bainmarie à 800C.
Les lipides (exemple : mélange de lécithine de jaune d'oeuf/cholestérol), sous forme de poudre, sont pesés de telle sorte que la masse totale représente, par exemple 20% (w/w) de la masse des NPS. Les lipides constitutifs de la membrane sont mélangés et solubilisés avec 2 ml d'éthanol 95% (v/v) . Les lipides chargés représentent, par exemple, 5 t (w/w) des lipides totaux.
L 'homogénéisateur, est amené à une température de 600C minimum par circulation d'eau en circuit fermé.
Concomitamment, les NPS dispersés à 80"C sont soumis à une agitation magnétique et la solution éthanolique de lipide est injectée dans la dispersion de NPS.
L'eau de chauffage de circuit du l'homogénéisateur est évacuée et remplacée par la dispersion "NPS/lipides" à 800C. Cette nouvelle dispersion est homogénéisée à 450 bars pendant 25 minutes en circuit fermé à 600C minimum. A l'issue de cette étape, la préparation est introduite dans un ballon en verre puis soumise à basse pression à 60"C pour éliminer l'éthanol resté en solution. SI necessaire, les biovecteurs obtenus peuvent être concentrés par ultrafiltration, lyophilisation ou evaporation.
Les biovecteurs cationiques ainsi obtenus sont alors entreposés dans des conditions stériles après filtration sur 0,2 Hm.
Exemple 4 : Préparation de Biovecteur Supramoléculaire dit "SMBV-complet".
La préparation d'un SMBV-complet est celle décrite dans la demande de brevet européen No. 344 040, avec lécithine de jaune d'oeuf /cholestérol (80/20 p/p)rapport Lipide/NPS 100%.
Dans ce mode de réalisation, on prépare les Biovecteurs Supramoléculaires dit "NPS" de l'exemple 3, que l'on soumet à une étape d'acylation pour obtenir des NPS acylés. Après phospholipidation, on obtient les SMBV-complets.
Exemple 5 : Cytotoxicité des Noyaux Polvsaccharidisues cationiaues.
Un "montage à sec" est préparé avec 10 g de silice 60H.
150 fractions d'un volume de 6 ml sont recueillies L'alcaloïde principal de cette fraction est éluée majoritairement dans les fractions B47.97 à B47.113 (520 mg). Il apparaît que cet alcaloïde est la buxamine E en mélange avec la buxamine G.
Un autre alcaloïde, de structure indéterminée, est identifiée dans les fractions B47.81 à B47.85(60 mg).
Fractionneinent de C 15 g de la fraction A sont chromatographiés sur colonne ouverte de gel d'aluminc 90 (degré d'activité II-III, 70-230 mesh ASTM, Merck).
La colonne est constituée de 450 g d'alumine en suspension dans le dichlorométhane.
La fraction C est chromatographiée sur colonne de gel d'alumine 90 (degrc d'activité II-III. 70230 mesh ASTM, Merck).
La colonne est constituée de 4 kg d'alumine en suspension dans le cyclohexane. Un "montage à sec" est préparé avec 150 g de C ct 400 g d'alumine.
Les fractions, d'un volume de 400 mi, sont éluées par du cyclohexanc et des gradients de dichiorométhane (0 à 100%) puis de méthanol (0 à 100%).