INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Suivant le procédé de compression, il est choisi une syntaxe d'information telle que dans l'exemple qui suit Ensemble d'information= Liste d'info = (code Qualificatif) (Code Fin de Chaîne) I Information = Base > I Elémént de Base = (Code de Substitution) (Code d'équivalence) I (Caractère Imprimable) Dans cet exemple: (code Qualificatif) = Valeur comprise entre 01HEX et FEHEX (Code Fin de Chaîne) = Valeur egale à 00HEX (Code de Substitution)= Valeur égale à 01HEX (Code d'équivalence) = Valeur comprise entre 01HEX et FEHEX; (Caractère Imprimable) = Valeur comprise entre 20HEX et FEMEX.
Le caractère "I" correspond au "ou" logique, et "" au vide épsilon.
Rappelons ici que le procédé de compression, qui suit par exemple un algorithme, permet de réaliser une substitution de motifs contenus dans la table de conversion statique, par une désignation courte codifiée dite aussi code de substitution.
Dès qu'une occurence est localisée, la substitution est effectuée.
Suivant une mise en oeuvre du procédé de compression, les étapes de premier niveau sont suivies d'étapes de deuxième niveau.
Dans ces étapes, une désignation courte codifiée sous une forme numérique comportant un nombre de caractères inférieur à celui de chaque motif à compresser est consignée dans une table de conversion dynamique et non pas statique, comme dans la compression de premier niveau.
En synthèse, la compression deuxième de niveau comprend les étapes prévoyant de - localisation d'une chaîne d'au moins trois caractères dont l'occurence est supérieure à"n", ici initialement égal à deux, dans l'ensemble d'informations à compresser écriture de chaque chaîne localisée dans la table de conversion dynamique dans le dispositif - attribution d'un code de substitution ou désignation courte à chaque chaîne écrite dans la table - substitution dans l'ensemble d'informations à compresser de la chaîne par la désignation courte correspondante - réitération de ces étapes jusqu'à substitution de toutes les chaînes de caractères de l'ensemble d'informations à compresser ; et - Enregistrement de la table dynamique sur le support tel que carte à puce.
Comme dans le premier niveau de compression, la première désignation courte comporte par exemple le code de substitution 1, et la suivante 2, etc.
Des délimitateurs de fonction sont prévus en tête d'un motif substitué, par exemple"Ox02HEx".
d'axe x-x et focalisé sur le filament.
Cette zone 43 permet de renforcer le flux lumineux au point de mesure réglementaire situé sur l'axe x-x, sachant que l'étalement horizontal et vertical réalisé par la partie frontale 31 du ballon peut amener à
sacrifier trop de lumière selon l'axe x-x.
La figure 4 illustre une quatrième forme de réalisation de l'invention, qui s'apparente à la forme de réalisation de la figure 1. On observe toutefois que la surface réfléchissante 41, qui travaille en coopération avec une fenêtre 35 s'étendant vers l'avant (par rapport à la direction générale d'émission) pratiquement jusqu'à la paroi frontale, a pour objet d'engendrer une partie secondaire de faisceau essentiellement concentrée selon une inclinaison donnée, par exemple pour renforcer la lumière en un point de mesure réglementaire décalé par rapport à l'axe principal x-x. On observe également que l'inclinaison moyenne du rayonnement réfléchi par la surface 41 est sensiblement parallèle à la face latérale oblique du ballon 30, au niveau de laquelle la fenêtre 35 est pratiquée, de telle sorte que cette face latérale
n'occulte pas ce rayonnement réfléchi.
Enfin la figure 5 illustre une cinquième forme de réalisation de l'invention, dans laquelle une partie de faisceau secondaire est engendrée en profitant des aménagements optiques 31a prévus sur la paroi frontale 31. Plus précisément, on comprend que les différents pavés déviateurs 31a, du fait de la courbure de la paroi 31 et de leurs inclinaisons variables, définissent entre eux des surfaces de dépouille 31b. En ajustant convenablement l'inclinaison de ces surfaces de dépouille par rapport à la position du filament 13, on peut faire en sorte qu'elles dévient la lumière par réfraction, avec une inclinaison très importante vers l'extérieur par
rapport à l'axe principal x-x.
Sur le trajet du rayonnement ainsi dévié peut être interposée une surface réfléchissante 44 apte à réfléchir ce rayonnement pour qu'il participe utilement au faisceau de signalisation émis. Le cas de figure concret de la figure 5 illustre le cas o la partie secondaire de faisceau ainsi engendrée présente une déviation latérale importante, pour compléter le faisceau principal dans les
régions de fort étalement horizontal.
Lorsqu'il est également prévu de ce côté du ballon une surface récupératrice 41 telle que décrite plus haut, la surface 44 se place avantageusement, comme illustré,
dans le prolongement de cette surface 41.
Bien entendu, la présente invention n'est nullement limitée aux formes de réalisation décrites et représentées, mais l'homme du métier saura y apporter
En particulier, le moyen pour colorer la lumière émise par la lampe peut, en variante, être constitué par tout filtre ou analogue interposé entre le bulbe de la
lampe et la fenêtre de sortie de lumière 31.
En outre, les diverses formes de réalisation décrites ci-dessus pour engendrer une partie complémentaire de faisceau de signalisation peuvent être utilisées isolément ou selon toute combinaison
Les lipopeptides formant les micelles selon la présente invention peuvent être fabriqués par tout procédé adéquat connu de l'homme du métier. Ils peuvent en particulier être obtenus par les méthodes Boc-benzyle ou Fmoc-tertiobutyle, en particulier comme décrits dans la demande FR-90 15 870, dont le contenu est intégré par référence à la présente demande L'introduction de la chaîne lipidique peut être réalisée en phase solide, après déprotection sélective de la ou les fonction(s) concernées, comme décrit dans l'article de DEPREZ et al. (1996 , Vaccine, volume 14, n"5,375-382). La chaîne lipidique peut être introduite sur la fonction -NH2 d'une lysine protégée sur la fonction a-N H2 par un groupe F-moc. La Fmoc lys (Palm) obtenue peut être ensuite utilisée en synthèse en phase solide pour élaborer le lipopeptide.
Les micelles et micro-agrégats selon la présente invention peuvent être obtenus en dispersant chaque lipopeptide dans une solution d'acide acétique concentrée à environ 80% puis en mélangeant les solutions ainsi obtenues.
La qualité de la dissolution, c'est à dire la dispersion effective à l'état moléculaire de chaque lipopeptide avant la préparation du mélange est vérifiée par la méthode de résonance magnétique nucléaire en deux dimensions (RMN2D). La résolution du signal obtenu lors d'expériences en deux dimensions homonucléaires dans un champ de 600 Mhz confirme la dispersion complète, au stade moléculaire, des lipopeptides en solution. La limpidité du mélange n'est pas un critère suffisant : en particulier, la reprise des lipopeptides par du DMSO ou un mélange DMSO/eau ne permet pas, dans la plupart des cas, d'obtenir cet état de dispersion, ce qui explique l'inefficacité du mélange étudié par VITIELLO ET al. (1995, précédemment cité). La dissolution par des mélanges acide acétique/eau plus dilués en acide acétique ne permet pas non plus de préparer dans tous les cas un mélange de micro-agrégats ou micelles mixtes comportant une proportion statistique de chaque constituant du mélange au stade du microvolume.
Dans ces deux cas, même en présence d'un mélange apparemment limpide, la filtration stérilisante sur membrane de 0,22 pm est soit impossible, soit irrégulière, avec des rendements de filtration différents selon les constituants, ce qui signifie qu'à l'échelle d'une particule de cette taille, la représentation de chacun des constituants du mélange n'est pas obtenue.
Cette microhétérogénéité compromet l'immunogénicité du mélange, puisqu'elle compromet la capture et la présentation simultanée de tous les constituants par une seule cellule présentatrice d'antigène (CPA), dans le cas d'épitopes CTL et HTL présents sur des lipopeptides distincts.
La présente invention est illustrée, sans pour autant être limitée, par les exemples qui suivent.
La figure 1 représente la structure chimique de la résine de type KNORR-MBHA.
Les figures 2 et 3 représentent des spectres de résonance magnétique nucléaire en deux dimensions (RMN 2D), respectivement d'un lipopeptide seul (lipopeptide ENV), et d'un mélange de lipopeptides.
La figure 4 illustre la réponse auxiliaire de huit macaques immunisés avec un mélange de lipopeptides.
Les figures 5A à 5F illustrent la réponse cytotoxique du macaque n 109.
Les figures 6A à 6D illustrent la réponse cytotoxique du macaque n 129.
Les figures 7A et 7B illustrent la réponse cytotoxique du macaque n 127.
Les figures 8, 9, 10 et Il illustrent respectivement les réponses cytotoxiques des macaques Nos 102,105,120 et 125.
EXEMPLE 1 : PréParation de micelles ou micro-agrégats selon l'invention: 1-description des lipopeptides employés dans le mélange nom formules: poids moléculaire NEF 66 VGFPVTPQVPLRPMTYKAAVDLSHFLKEKGGLK(Pam)-NH2 3862,77 NEF 117 TQGYFPDWQNYTPGPGVRYPLTFGWCYKLVP K(Pam)-NH2 4017,754 NEF 182 EWRFDSRLAFHHVARELHPEYFKN K(Pam)-NH2 3451,04 GAG 183 DLNTMLNTVGGHQAAMQMLKETINEEAAEWDR K(Pam)-NH2 3983,65 GAG 253 NPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILD K(Pam)-NH2 4063,05 ENV TRPNNNTRKSIHIGPGRAFYATGEIIGDIRQAH K(Pam)-NH2 4027,69 épitopes CTL représentés RPNNNTRKSI HLA-B27 TQGYFPDWQNY HLA-B62 PPIPVGEIY HLA-B35 YFPDWQNYT HLA-B17, B35 KRWIILGLNK HLA-B27 TPGPGVRYPL HLA-B7 LGLNKIVRMY HLA-B62 RYPLTFGW HLA-B27.2 QVPLRPMTYK HLA-A3, A11, B27.2 YPLTFGWC HLA-B18 VPLRPMTY HLA-B35 AFHHVAREL HLA-B52 AVDLSHFL HLA-B62 FLKEKGGL HLA-B8 AVDLSHFLK HLA-A11 L'ensemble des épitopes représentés permettait d'espérer l'induction de réponses CTL chez une importante proportion de la population humaine, à condition de pouvoir bénéficier de l'effet auxiliaire des épitopes HTL non-définis, mais très probablement présents pour de simples raisons statistiques dans l'un quelconque des lipopeptides à condition toutefois de réunir tous les épitopes, et donc, tous les peptides constituants du mélange dans chaque micro-unité de volume.
2- Svnthèse L'approche phase solide a été choisie, en utilisant la stratégie Fmoc pour la protection de la fonction a-amine, et t Bu pour la protection des chaînes latérales. Le protocole utilisé est un protocole standard basé sur les méthodes de synthèse décrites par ATHERTON (Solid-Phase synthesis, a practical approach. IRL press, 1989) et FIELDS et NOBLE (Int. J. Pept.
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Par contre, lorsque ces molécules proviennent des seuls extraits végétaux actuellement disponibles, sous forme liquide ou pulvérisée, le formulateur rencontre de sérieux problèmes techniques en terme d'incorporation et même de
stabilité dans les produits cosmétiques finaux.
L'invention décrite dans ce brevet réside dans la découverte que, contrairement aux autres extraits végétaux qui, comme le nôtre, contiennent les molécules recherchées précédemment citées, l'extrait végétal réalisé à partir du café vert, présente une consistance physique incorporable directement dans toutes les
compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques.
2 0 De plus, notre invention réside dans la découverte que le mélange de cet extrait de café vert avec le beurre de karité permet d'obtenir non seulement une consistance physique encore plus facilement utilisable en galénique, mais également une stabilité encore plus grande des molécules recherchée et
précédemment citées.
Le beurre de café vert peut être obtenu selon le procédé suivant.
Les grains de café vert des espèces Coffea arabica L. ou Coffea canephora L. Pierre, cette dernière espèce correspondant à la variété robusta, sont broyés à sec selon les procédés standard permettant d'obtenir une poudre dont les grains font environ 2,0 mm. Cette poudre est alors soumise à une extraction éthanolique dans un rapport d'environ 30%/70% (poudre de café vert/éthanol) pendant environ 2 heures. Après filtration et/ou tamisage, l'extrait obtenu est décoloré par le charbon actif. Après élimination de ce dernier, l'extrait est concentré sous vide jusqu'à obtention d'une huile visqueuse, de couleur
variant du brun au brun vert.
Les analyses réalisées par chromatographie liquide haute performance (CLHP) démontrent la présence d'acides hydroxy-cinnamiques, notamment de
l'acide chlorogénique et de l'acide caféique, dans l'extrait obtenu.
Le beurre de karité, quant à lui est obtenu, à partir de noix de l'arbre à karité ou Butyrospermum parkii Kotschy, selon un procédé classique qui ne fait pas
partie de la présente invention.
En fonction du rendement de l'extraction du café vert en acide chlorogénique ou caféique, les concentrations respectives d'extrait de café vert et de beurre de karité sont ajustées pour obtenir une concentration finale d'environ 3,0% dans le beurre de café vert. La réalisation du beurre de café vert est donc effectuée par le mélange, à environ 70 C, d'environ 15 à 25% de l'extrait de café vert précédemment décrit avec environ 75 à 85% (p/p) du beurre de karité décrit ci-dessus. Le produit final obtenu est une pâte homogène de couleur brun clair, dont l'aspect fait penser au beurre et dont la fermeté est
fonction de la température.
Les solvants d'extraction cités ci-dessus ne sont pas limitatifs et peuvent être choisis parmi l'eau, le propylène glycol, le butylène glycol, la glycérine, le polyéthylène glycol, les éthers méthyliques et/ou éthyliques des diglycols, les polyols cycliques, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les alcools (méthanol,
Les rayons lumineux émis par la lampe 2 sont,
grâce à l'écran 4, concentrés dans les intervalles 9a.
Si l'écran 4 est incolore et la lampe 2 blanche,
la lumière traversant les intervalles 9a sera blanche.
Si on veut obtenir une lumière colorée, l'écran 4 ou la
Conformément à l'invention, la glace 7 est pourvue d'un prolongement 17 qui est destiné à s'étendre sur la paroi latérale du véhicule, l'écran 4 comportant
un prolongement 18 correspondant.
Le prolongement 17 de la glace 7 est réalisé de la même façon que ladite glace avec une série de barreaux parallèles 8 rouges qui sont solidaires, par leur face
tournée vers le prolongement 18 de l'écran 4, d'une épais-
seur 9 de matière plastique incolore, un intervalle incolore 9a étant ménagé entre chaque paire de barreaux 8.
Le prolongement 18 de l'écran 4 présente, sur la face 4a, une série de godrons convexes 5 et la
face 4b tournée vers la glace est plane.
Entre chaque godron 5, le prolongement 18
La Fmoc-Lys(Palm)-OH est couplée sur une résine de type KNORR-MBHA (figure 1). Après déprotection de la fonction alpha-amine, on couple le premier acide aminé (Fmoc-Leu-OH dans le cas de NEF 66 par exemple). L'agent de couplage a été le TBTU (3 eq) en présence de DIPEA (4.5 eq), en vérifiant les couplages par un test colorimétrique. Une acétylation systématique a été réalisée après qu'une réaction négative ait été obtenue à ce test, pour minimiser au maximum le risque d'obtenir des peptides à délétion. On répète cette succession d'opérations jusqu'à ce que tous les acides aminés constitutifs de la séquence aient été introduits.
Après la synthèse, et déprotection du groupe Fmoc terminal, les peptides sont déprotégés et clivés par un mélange TFA/eau/DTT (NEF 66, ENV), TFA/eau/DTT/Ac-Trp-OH (GAG 183, GAG 253, NEF 117) ou TFAleau/EDT/Ac-Trp-OH (NEF 182).
Les peptides sont purifiés chacun sur une colonne Vydac C18 qui a été exclusivement utilisée à cet effet, à température ambiante, avec un système solvant eau-acétonitrile, en tampon perchlorate ou TFA.
Ils sont ensuite mis sous forme d'acétate par échange d'ions sur colonne Dowex SBR, puis lyophilisés dans de l'acide acétique à 40 %.
Chaque peptide provient d'un lot unique de synthèse et purification.
Aucune opération de recyclage de fractions de purification n'est pratiquée.
3 - Etudes de la solubilité des lipopeptides : 3-1) Utilisation de l'eau pure: Les peptides NEF66, NEF117, NEF182 et ENV ont pu être dissous dans l'eau pure, à des concentrations allant jusque 5 mg/ml. Le peptide NEF117 donne cependant une solution très légèrement opalescente. Les peptides GAG 182 et GAG 253 ne sont pas solubles dans ces conditions.
Le mélange des lipopeptides est cependant soluble dans l'eau pure, indiquant un rôle potentiellement solubilisant des lipopeptides hydrophiles vis-à-vis des peptides peu solubles.
3-2) Utilisation du DMSO: La mise en solution de lipopeptides est fréquemment réalisée à l'aide de solutions aqueuses de DMSO (diméthylsulfoxyde) . Ce solvant organique très puissant est en effet compatible après dilution avec la plupart des essais biologiques réalisés sur cellules ou chez l'animal, voire chez l'homme. L'utilisation de DMSO s'est avérée efficace pour une bonne reprise des peptides GAG 182 et GAG 253; les solutions obtenues ont ensuite pu être diluées par de l'eau pour atteindre une concentration finale de 1 mg/ml dans le DMSO à 20% dans l'eau; dans ces conditions, la plupart des peptides donnent des solutions claires, sauf GAG 183, pour lequel on obtient une suspension.
II est intéressant de souligner que même dans le cas de solutions claires, et malgré la compatibilité du DMSO avec les filtres Durapore, les solutions de lipopeptides dans le DMSO ne sont pas filtrables sur des filtres de porosité 0,22 pm , parce qu'elles imposent une pression incompatible avec la résistance mécanique des filtres. Cette observation indique la formation d'agrégats de taille supérieure à 0,22 um . Dans certains cas, on a même observé une impossibilité de filtration sur des filtres résistant aux solvants, d'une porosité de 1 um, en raison de la formation de gels (cette taille de filtre est en effet utilisée pour filtrer des solutions concentrées de lipopeptides avant purification par RP-HPLC).
3-3) Utilisation d'acide ascétique concentré à 25%: La mise en oeuvre de l'indispensable étape de filtration stérilisante nécessite donc l'emploi d'un solvant organique plus apte à dissocier les agrégats, compatible après dilution avec la lyophilisation, et non toxique à faible dose . L'acide acétique a été testé.
Dans un premier temps, une quantité minimale de ce solvant, a été mise en oeuvre qui est définie comme étant la quantité permettant l'obtention de solutions limpides à des concentrations de 5 mg/ml : pour les peptides GAG 183 et GAG 253, 25% d'acide acétique a été introduit; pour les autres peptides, une mise en solution dans l'eau pure a été réalisée.
Les solutions ont été soumises à une analyse par Résonnance Magnétique Nucléaire dans un champ de 600 Mhz. II a été constaté que, malgré l'apparente limpidité des solutions les lipopeptides de cette série, même les lipopeptides les plus hydrophiles, forment des agrégats de taille importante qui interdisent ce type d'étude, en l'absence de signaux résolus.
La mise en solution dans ces conditions ne permet pas la dispersion statistique, au stade moléculaire, de chacun des constituants, malgré l'apparente limpidité des solutions.
3-4) Utilisation d'acide acétique concentré à 80% : L'utilisation d'acide acétique concentré à 80%, a alors été testée.
Les peptides ont été mis en solution à une concentration de 1mM dans 1 ml d'acide acétique à 80% (correspondant à : NEF 66 : 3,86 mg/ml; NEF 117 4,02 mg/ml; NEF182 : 3,45 mg/ml;GAG 183 : 3,98 mg/ml; GAG 253 : 4,063 mg/ml; ENV : 4,027 mg/ml).
Ce principe physique est à la base du radar à ouverture synthétique, connu depuis la fin des années 50, et dont un historique est présenté dans [Curlander]. Les considérations exposées plus haut doivent cependant être adaptées au fait que dans le cas du radar, l'objet est une surface au sol. Le radar détermine une représentation de cette surface et non une représentation tridimensionnelle générale comme vu plus haut. Cependant, les principes de base et les limitations exposées plus haut restent valable. Un radar à ouverture synthétique comporte un émetteur qui dirige une onde cohérente vers l'objet, et un récepteur qui effectue une détection cohérente de l'onde provenant en retour de l'objet. L'émetteur et le récepteur sont en général fixes l'un par rapport à l'autre. L'ensemble émetteur-récepteur se déplace par rapport à l'objet observé, l'émetteur étant contrôlé pour viser en permanence une zone fixe de l'objet. A partir de l'onde cohérente reçue par l'ensemble émetteur-récepteur pour diverses positions de cet ensemble, une analyse numérique permet de générer une représentation de l'objet observé. Les données concernant les variations de position de l'ensemble émetteur-récepteur sont disponibles et sont utilisées pour corriger les variations du chemin parcouru par l'onde, qui induiraient en l'abscence de correction des déphasages rendant impossible la génération d'une image de l'objet observé. Le récepteur permet de recevoir des ondes en provenance de l'objet, caractérisées par leurs vecteurs d'onde fc. Les fréquences reçues par le récepteur sont limitées par l'ouverture du système formant l'image sur le récepteur ou par la taille du récepteur en l'abscence de système de formation d'images. L'onde parvenant à l'objet en provenance de l'émetteur est approximativement plane, de vecteur d'onde fe . Des algorithmes très divers peuvent être utilisés pour générer une image de l'objet à partir de l'onde reçue sur l'émetteur. Ils dépendent du type d'émetteur et de récepteur utilisés, du type d'image que l'on souhaite obtenir, et des moyens de calcul employés, qui sont en général très lourds.
Dans le domaine de l'optique, [Wolf] a proposé un principe consistant à détecter l'onde reçue sur deux surfaces de réception planes en vis-à-vis, l'objet observé étant entre les deux surfaces de réception et la fréquence d'éclairage fo étant variable. A partir de l'onde reçue sur les surfaces de réception pour un ensemble de fréquences d'éclairage fe , [Wolf] expose une méthode permettant de reconstituer la
représentation fréquentielle tridimensionnelle de l'objet, sur l'ensemble des fréquences fo pouvant être obtenues par la formule fo = fc-fe à partir d'une longueur d'onde d'éclairage donnée. La représentation spatiale de l'objet est obtenue par transformation de Fourier de sa représentation fréquentielle. [Wolf] a également déterminé la résolution maximale du système, qui correspond à une période maximale de Il 2 pour les composantes sinusoïdales de la représentation de l'objet, soit une période d'échantillonnage au sens de Nyquist de 4 , ce qui est une résolution nettement supérieure à celle des microscopes classiques.