INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La composition obtenue dans cet exemple est susceptible d'être améliorée par l'incorporation de 100 g de bactéries de production d'azote et la fermentation dans un réservoir pendant 30 à 60 jours.
La majorité des cultures nécessite une nutrition complète par l'usage d'engrais complexe NPK d'origine chimique, et compte tenu des problèmes de pollutions engendrées par un tel usage chaque jour, et afin de pallier a un tel problème, I'invention a prévu la fabrication d'une gamme d'engrais complexe NPK hydrophile d'origine biologique c'est-à-dire végétale et organique selon les exemples 66, 67 et 68.
Exemple66: Fabrication d'engrais NPK organique par mélange à sec.
Dans un mélangeur d'une capacité de 300 litres, on verse 50 kg de substance hydrophile d'origine végétale issue de l'exemple 3 et 49 kg d'un engrais organique d'une contenance en NPK 4.5.9 du type engrais légumes-fruits commercialisé par VILMORIN, 1 kg de stimulant de croissance comme l'hormone distribuée sous la dénomination ROOTONE de CFPI (voir exemple 58). On mélange l'ensemble pendant 15 minutes afin d'obtenir un mélange homogène. On obtient ainsi 100 kg d'engrais biologique NPK organique rétenteur d'eau à l'état sec.
Cet exemple est également susceptible d'être réalisé par association d'engrais chimiques simples ou complexes, d'engrais NPK d'origine chimique ou par mélange de 24 kg de NPK 4.5.9 organique et NPK 15.1.5.15 chimique, 1,8 kg de produit apte à développer les racines comme par exemple le TRANSPLANTONE (voir exemple 50 pour sa composition) et 200 g d'oligoéléments, le tout mélangé à sec avec 45 kg de substance hydrophile et 3 kg de sable.
Exemple 67: Fabrication d'engrais NPK organique à l'état sec.
CONCENTRATION (millimoles/litres) 1 initiale finale MSAM 1000 845 NH4CI 1000 0,6 Le tableau 4 suivant indique les concentrations en sel et en MSAM au cours de l'essai, ainsi que le bilan massique pour le MSAM.
Compartiment MSAM Compartiment sel (diluat) (concentrat) Concentration en NH4Cl (millimoles/litre) - initiale 1000 93,5 - finale 0,6 835 Concentration en MSAM (millimoles/litre) -initiale 1000 0 finale - finale 845 22 Bilan massique pour le MSAM (en g) - masse initiale 92,5 0 - masse finale 75,2 2,6 Le MSAM est bien retenu dans le compartiment diluat, les pertes par diffusion passive s'élevant à environ 3,3 % en poids. Le rendement observé est donc de 96,7 % en poids.
Cet exemple montre que l'emploi de membranes plus sélectives (à structure polymérique plus resserrée) permet d'abaisser le niveau de perte en MSAM de 8,4 à 3,3 %.
UTILISATION D'ELICITINES POUR LE TRANSPORT DE LIPIDES L'invention est relative à l'utilisation de protéines de la famille des élicitines pour la fixation et le transport de molécules lipidiques.
Les élicitines sont des protéines extracellulaires, qui ont été mises en évidence chez certaines espèces de champignons phytopathogènes de la classe des Oomycètes [cf. revue par P. RICCI, induction of the Hypersensitive Response and Systemic Acquired Resistance by Fungal Proteins : the Case of Elicitins , parue dans Plant-Microbes Interactions, Volume 3, édité par G.
STACEY et N.T. KEEN, (éditions CHAPMAN et HALL) pp. 5375, (1997)]. il a été montré que des élicitines, lorsqu'elles étaient inoculées à une plante hôte, jouaient un rôle essentiel dans l'induction d'une réaction d'hypersensibilité se manifestant par - la formation de lésions nécrotiques localisées, situées non seulement au point d'inoculation, mais également au niveau de territoires foliaires distants de celui-ci ; et/ou - l'activation chez la plante de mécanismes de défense conduisant à l'acquisition d'une résistance systémique à large spectre.
L'activité inductrice peut varier selon le type d'élicitine, et selon la plante concernée.
Les élicitines ont d'abord été identifiées chez plusieurs espèces du genre Phytophthora. Des protéines étroitement apparentées, à la fois sur le plan structurel et sur le plan fonctionnel, ont ensuite été mises en évidence chez Pythium vexans [HUET et al., Molecular Plants/Microbes Interactions, 8:2, pp. 302-310 (1995)] . Les caractéristiques communes entre les élicitines de Phytophthora et les protéines similaires de Pythîum, définissent une famille de protéines, qui sera dénommée ci-après famille des élicitines .
Cette famille regroupe des petites protéines très hydrosolubles, d'environ 10 kDa, qui, sous leur forme mature sécrétée, sont constituées d'une seule chaîne polypeptidique d'environ une centaine d'acides aminés, riche en résidus hydrophobes et contenant 6 résidus cystéine, formant 3 ponts disulfure intramoléculaires, qui confèrent à la protéine une structure tertiaire globulaire.
On entend ici par riche en résidus hydrophobes une protéine où ces résidus hydrophobes (dans lesquels on inclut également les résidus cystéine engagés dans des ponts disulfure, et les résidus tyrosine) représentent au moins 50% environ du total des résidus acides aminés, les acides aminés apolaires représentant au moins 40 du total des acides aminés.
Chez les protéines de la famille des élicitines, ces résidus hydrophobes représentent généralement entre 50 et 60W environ du total des résidus acides aminés, et les acides acides aminés apolaires représentent entre 40 et 50k environ du total des résidus acides aminés.
Parmi les élicitines isolées à partir de champignons du genre Phytophthora, on distingue des élicitines acides (ou a-élicitines), dont le pI est compris entre 3 et 5, telles que la capsicéine et la parasiticéine, isolées respectivement de Phytophthora capsici et de Phytophthora parasitîca, et des élicitines basiques (p-élicitines), dont le pI est compris entre 7 et 9, telles que la cryptogéine de Phytophthora cryptogea et la cinnamomine de Phytophthora cinnamome. Les élicitines qui ont été identifiées chez Pythium vexans ont un pI comparable à celui des a-élicitines de Phytophthora.
Des expérimentations effectuées chez le tabac ont montré que les élicitines basiques des Phytophthora sont actives à des concentrations 50 à 100 fois plus faibles, en ce qui concerne l'induction de nécroses distales, que les élicitines acides. Les élicitines acides de Pythium vexans ont une activité qui apparaît supérieure à celle des élicitines acides des Phytophthora (HUET et al., publication précitée).
Le mode d'action proposé des élicitines implique la liaison à un récepteur membranaire spécifique, qui, par l'intermédiaire de la phosphorylation de protéines, et d'un réseau de seconds messagers, entraîne une cascade d'événements provoquant la destruction localisée de cellules, et parallèlement, l'induction de mécanismes de résistance.
L. Langer, R. and Rosenberg, R. D. (1992) Nature 359, 67-70.
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Les moyens de verrouillage et de motorisation forment une unité modulaire installée sur le rail 34 externe de glissière 27, à une extrémité longitudinale du
dispositif 10.
Il comprend le moteur 11, ici électrique, un couplage entre le moteur et les moyens de transmission
longitudinale 13, ainsi que les moyens de verrouillage 14.
Dans le cas du moteur électrique 11, le déclencheur est un moteur électrique à aimant permanent et à courant
continu.
Le couplage entre le moteur 11 et les moyens de transmission 13 prévoit que la vis sans fin 23 est connectée au moteur par l'intermédiaire d'un couplage élastique monté sur la sortie 12. Cela permet d'obtenir une
liaison mécanique positive.
Notons que le verrouillage dans le cas évidemment d'un vantail 4 unique, est obtenu en évitant le mouvement
de coulissement de ce vantail 4, du côté du moteur 11.
Dans le cas d'une porte 3 double, le vantail 4 opposé au moteur 11 est verrouillé par l'intermédiaire de la conjugaison et donc de la vis sans fin 23 des moyens de
transmission longitudinale 13.
Les moyens de verrouillage 14 comprennent évidemment le doigt 16 de verrouillage relié au stator du moteur 11, qui est articulé et sollicité par un ressort 44
représenté sur la figure 4, en renvoi.
26 2768683
Lignée Prolifération Lignée Prolifération Lignée Prolifération de P. de P. de P parasitica parasitica parasitica D7-2 Négative 52 + 90 + 3 + 53 + 91 + 9 + 54 +/- 92 + 11 + 56 + 93 + 12 + 57 + 94 + 13 + 58 + 95 + 14 59 96 + 17 + 60 + 97 + 18 + 61 + 98 +/ 19 + 62 + 100 +/ 20 + 63 + 101 21 + 64 + 102 | +/ 22 + 66 + 103 + 23 + 67 + 104 + 24 + 68 + 106 + 25 + 69 + 107 + 28 + 70 + 108 + 29 ~ + 71 + 114 + 31 + 72 + 115 + 32 | + 73 + 118 + 33 + 74 Négative 119 + 34 ~ + 75 + 122 + 35 ~ + 77 + 123 + 36 + 78 + 124 + 38 + 79 + 125 + 39 + 80 +/- 126 + 42 + 81 + 128 + 43 + 82 + 129 + 46 + 83 + 130 + 47 + 84 + | D5-1 + 48 + 85 + 2 + 49 + 86 + 4 + 50 + 87 + 6 51 + 89 + E1-1 Négative Les plants sont traités par l'isolat Emwa de P. parasitica et notés 10 jours plus tard.
+ : Prolifération fongique normale +/- : Prolifération fongique inférieure à la normale - : Aucune prolifération fongique visible.
Exemple 19 : Expression du NIMi provoquée par le 35S Des plantes qui expriment d'une manière constitutive le gène NIMl sont de même produites par transformation de plants de type sauvage Ws ou Col, à l'aide du fragment génomique d'Arabidopsis BamHI-HindIII (Figure 6) cloné dans pSGCG0i transformé dans la souche d'Agrobacterium GV3101 (pMP90, Koncz et Schell 1986, Mol. Gen. Genet. 204 : 383-396). Dans un autre produit de synthèse, l'ADNc du NIMl complet est cloné dans le site EcoRI de pCGN1761 ENX (Comai et al., 1990, Plant Mol. Biol. 15, 373-381). On obtient à partir du plasmide ainsi obtenu un fragment XbaI contenant un promoteur 35S du CaMV renforcé, l'ADNc de NIMl dans l'orientation correcte permettant la transcription, et un 3'-terminateur de tml. Ce fragment est cloné dans le vecteur binaire pCIB200 et transformé dans GV3101. Des plants Ws ou Col sont soumis comme décrit cidessus à une infiltration par chacune de ces souches transformées. La semence obtenue est récoltée et placée sur une plaque de gélose GM contenant 50 mg/ml de kanamycine. Les plantules survivantes sont transférées sur le sol et soumises à des essais.
Exemple 20 : Expression du NIMl provoquée par le 35S autre forme de réalisation Un fragment génomique d'Arabidopsis BamHI/HindIII (Figure 6, bases 1249-5655) contenant le promoteur de NIMl, le gène et la séquence aval clonée dans pSGCG01, est soumis à une digestion par l'endonucléase de restriction PstI, et les extrémités sont rendues franches avec la polymérase de T4. Le fragment est en outre soumis à une digestion par l'endonucléase de restriction SpeI, pour donner un fragment de 2262 pb. L'ADNc du NIMl cloné dans le site EcoRI de pCGN1761ENX (voir ci-dessus) est digéré par l'endonucléase de restriction NotI, et les extrémités sont rendues franches par la polymérase de T4.
Le fragment est en outre soumis à une digestion par l'endonucléase de restriction SpeI. Le fragment de NIMl génomique de 2262 pb obtenu ci-dessus est ligaturé avec le vecteur pCGN1761ENX contenant 91 pb de l'ADNc du NIMl.
La cassette de transformation comprend le promoteur du 35S, et le terminateur du tml est libéré du pCGN1761ENX par digestion partielle par l'enzyme de restriction XbaI, et ligaturé dans le site XbaI du pCIB200 déphosphorylé.
Le plasmide résultant est transformé dans GV3101, et les plants Ws ou Col sont soumis à une infiltration comme décrit ci-dessus. Les semences sont placées sur une plaque, et les plantules survivantes sont sélectionnées comme décrit ci-dessus.
Exemple 21 : Evaluation du phénotype CIM dans le niveau élevé d'expression de transformants du NIMl On récolte une feuille de chaque transformant primaire, on isole l'ARN (Verwoerd et al., 1989, Nuc Acid Res, 2362), et on en détermine l'expression constitutive du PR-1 et l'expression du NIMl par analyse par transfert d'ARN (Uknes et al., 1992). Chaque transformant fait llobjet d'une évaluation d'une réponse de résistance renforcée aux maladies, qui est le signe d'une analyse de l'expression constitutive de la SAR (Uknes et al., 1992).
On prépare des suspensions de conidies de 5-10.104 spores par ml provenant de deux isolats de P. parasitica compatibles, Emwa et Noco (c'est-à-dire que ces souches fongiques créent une maladie sur les plants respectivement Ws-O et Col-O de type sauvage), et les transformants reçoivent une pulvérisation de l'isolat approprié, en fonction de l'écotype du transformant. Les plants inocu lés sont incubés en présence d'une humidité élevée pendant 7 jours. On évalue le taux de maladie des plantes le jour 7, et on récolte une feuille unique pour analyse par transfert d'ARN en utilisant une sonde qui représente un moyen permettant de mesurer l'infection fongique.
Les transformants qui présentent un phénotype CIM sont menés jusqu'à la génération F1, et les plantes homozygotes sont identifiées. Les transformants sont soumis à une bactérie d'essais de résistance aux maladies. On procède à une infection fongique par Noco et Emwa, et on colore les feuilles avec du bleu de lactophénol pour identifier la présence d'hyphes fongiques, comme décrit dans Dietrich et al. (1994). Les transformants sont infectés par la bactérie pathogène Pseudomonas syringae DC3000 pour évaluer le spectre de résistance, qui est manifeste comme décrit dans Uknes et al. (1993). Les plants non infectés font l'objet d'une évaluation du SA libre et du SA conjugué au glucose, et les feuilles sont colorées au bleu de lactophénol pour évaluer la présence de lésions microscopiques. Les plants résistants sont soumis à un croisement sexué avec des mutants SAR tels que NahG et ndrl, pour établir la relation épistatique du phénotype de résistance à celui d'autres mutants, et pour évaluer comment ces mutants dominant-négatifs du NIMl peuvent influencer la boucle de rétroaction dépendant du SA.
Exemple 22 : Niveau élevé d'expression du NIMl dans les plantes de culture Les produits de synthèse conférant un phénotype CIM aux plants Col-O et Ws-0, et d'autres végétaux, sont transformés dans des plantes de culture pour évaluation.
Bien que le gène NIMl puisse être inséré dans toute cellule végétale entrant dans ces larges catégories, il est particulièrement utile dans les cellules végétales des plantes de culture, telles que les cultures suivantes riz, blé, orge, seigle, maïs, pomme de terre, carotte, patate douce, betterave à sucre, haricot, pois, chicorée, laitue, chou, chou-fleur, broccoli, navet, radis, épinard, asperge, oignon, ail, aubergine, poivre, céleri, carotte, courge, potiron, courgette, concombre, pomme, poire, coing, melon, prune, cerise, pêche, nectarine, abricot, fraise, raisin, framboise, mûre, ananas, avocat, papaye, mangue, banane, soja, tabac, tomate, sorgho et canne à sucre. Les transformants font l'objet d'une évaluation de leur résistance améliorée aux maladies. Dans une forme de réalisation préférée de l'invention, l'expression du gène NIM1 correspond à un niveau qui est au moins deux fois supérieur au niveau d'expression du gène NLMl des plants de type sauvage, et qui de préférence est 10 fois supérieur au niveau d'expression du type sauvage.
F. Autres utilisations générales des plantes comportant le phénotype nim Exemple 23 : Utilisation de mutants nim dans l'évaluation des maladies On provoque des mutants nim avec différents microorganismes pathogènes, et ces mutants se révèlent développer des lésions plus grandes, plus vite que les plants de type sauvage. Ce phénotype est appelé UDS (c'est-àdire sensibilité universelle aux maladies) et est le résultat de mutants qui ne peuvent exprimer les gènes de la SAR, pour assurer la défense des végétaux contre les micro-organismes pathogènes. Le phénotype UDS des mutants nim les rend utiles en tant que plantes témoins pour l'évaluation des symptômes des maladies dans les lignées expérimentales dans le cadre des essais de pathogénèse sur champ, où le phénotype de résistance naturelle de ce que l'on appelle les lignées de type sauvage peut varier (c'est-à-dire différents micro-organismes pathogènes, avec différents pathotypes du même micro-organisme patho gène). Ainsi, sur champ, où l'infection naturelle par les micro-organismes pathogènes se fonde sur une évaluation de la résistance de lignées expérimentales, l'incorporation, dans l'expérience, de lignées mutantes nim de la plante de culture appropriée devrait permettre une évaluation du niveau vrai et du spectre de pression des micro-organismes pathogènes, sans les variations inhérentes à l'utilisation de lignées non expérimentales.
Exemple 24 : Evaluation de l'utilité des transgènes à des fins de résistance aux maladies On utilise des mutants nim en tant que plantes hôtes pour transformer des transgènes et faciliter leur évaluation dans le cadre d'une utilisation dans la résistance aux maladies. Par exemple, une lignée mutante nim d'Arabidopsis, caractérisée par son phénotype UDS, est utilisée pour des transformations ultérieures avec des gènes candidats de résistance à la maladie, ce qui permet une évaluation de la contribution d'un gène individuel à la résistance contre le niveau de base des plants mutants nim UDS.
Exemple 25 : Les mutants nim, un outil permettant de comprendre les interactions plante-microorganisme pathogène Les mutants nim peuvent être utilisés pour comprendre les interactions plantes-microorganismes pathogènes, et en particulier pour comprendre les processus utilisés par le micro-organisme pathogène pour envahir les cellules végétales. La raison en est que les mutants nim ne montent pas une réponse à une attaque par les microorganismes pathogènes, et le développement non restreint du micro-organisme pathogène est un scénario idéal permettant d'étudier son interaction biologique avec l'hôte.
Présente une importance encore plus grande l'observation selon laquelle un mutant nim hôte peut être sensible aux micro-organismes pathogènes qui normalement ne sont pas associés à cet hôte particulier, mais plutôt sont associés à un autre différent. Par exemple, un mutant nim d'Arabidopsis, tel que niml-l, -2, -3, -4, -5 ou -6, est provoqué par un certain nombre de micro-organismes pathogènes qui normalement n'affectent que le tabac, et se révèle être sensible. Ainsi, la mutation nim provoquant le phénotype UDS conduit à une modification de la sensibilité à une certaine gamme de micro-organismes pathogènes, ce qui présente une grande utilité dans l'analyse moléculaire, génétique et biochimique de 1 'interaction hôte-pathogène.
Ensuite, on prélève 500 ml du mélange en suspension. Ces 500 ml sont introduits dans le bol BRITT sous agitation avec une pale de type hélice et muni d'une grille de 600 jim.
La vitesse d'agitation est fixée en fonction du cisaillement désiré et on agite pendant 30 secondes.
L'amidon est ajouté suivi d'une agitation pendant 30 secondes. On introduit alors la silice (dans les tests comprenant ce produit). Puis on agite pendant 30 secondes.
Finalement, on soutire 100 ml du mélange par gravité.
Formulations préparées
Formulation A Formulation B Formulation C Fibres de papier: 70% feuillus-30% résineux 100 parts 100 parts 100 pans (Indice Shopper-Riepler = 30 45 SR) Charge: Carbonate de calcium Calopake F 20 parts 20 parts 20 parts Amidon cationique Hi CAT 168 0,8% 0,8% 0,896 secffibres secîtibres secffibres 0,2% Silice précipitée A / / sec/fibres Silice colloïdale B / 0,2% sectfibres ii) Filtration Les 100 ml prélevés sont ensuite filtrés sur BÜCHNER avec des filtres WHATMANN n"42 (filtres sans cendre, préalablement séchés 1 h à 105"C puis pesés à + 0,00019).
Le résidu de filtration est ensuite enlevé avec précaution, séché 1 heure à 105"C puis refroidi au dessiccateur et pesé (+ 0,0001). Ceci permet le calcul du taux de rétention global.
Le résidu ainsi séché sur filtre est ensuite calciné (selon la Norme Taux de cendres n" NFQ 03-047) pour donner le taux de rétention en charges du mélange.
iiii) Calculs et Résultats La rétention globale et la rétention en charges sont calculées à l'aide des formules suivantes: Rétention globale = (P1-(5*P2))*100 P1 P1 = Poids du mélange (charges+fibres) dans le prélèvement initial.
P2 = Poids du résidu du prélèvement de 100 ml filtré et séché.
o Rétention en charges = (P3-(5*P4100 P3 P3 = Poids de charges dans le prélèvement initial de 500 ml.
P4 = Poids du résidu du prélèvement de 100 ml filtré, séché, calciné.
Agent de rétention Vitesse d'agitation Rétention en charges Rétention globale (tr/mn) (wt % / taux de charges (wt % / poids total de introduit) solides dans la suspension) Formulation A 500 79 92 900 71 88 Formulation B 500 755 91 5 900 67 865 Formulation C 500 61,5 88 900 55 83 Exemple 2 Cet exemple montre la rétention chimique et le drainage calculé selon la méthode "Shopper-Riegler" avec les modifications suivantes: - Mesure de drainage = temps nécessaire au drainage de 600 ml de solution - Mesure de rétention globale = filtration des 600 ml et pesée du résidu, selon le même mode opératoire que pour la mesure au BRITT Jar.
i) Formulations utilisées
. Formulation A' Formulation B' Formulation C' Fibres de papier : 60% eucalyptus - 40% fibre longue sulfate 100 parts 100 parts 100 parts (Indice Shopper-Riegler = 24 SR) Charge: Carbonate de calcium OMYALITE 90 50 parts 50 parts 50 parts Amidon cationique Hi CAT 142 0,596 0,5% 0,5% sec'fibres secfliboes sec/fibres Guarcationique Jaguar G17 0,05% 0,05% 0,05% seclfibres sec/fibres sec/fibres 0,2% Silice précipitée A sectfibres Silice colloïdale B 0,2% sec/fibres La suspension est préparée comme dans l'exemple 1, avec une agitation de 15 mn après ajout de l'amidon, et ensuite ajout de guar cationique. Un temps d'agitation de 15 secondes est observé avant l'ajout éventuel de la silice A ou B.
Selon un mode de réalisation avantageux, cette composition comprend de 0,001 à 10 % en poids ct cn particulier dc 0,02 à 1 % en poids d'extrait sec de la plante par rapport au poids total de la composition finale.
Par ailleurs, les essais réalisés par les inventeurs ont clairement montré que, non seulement le rendement d'extraction était lié à la nature du solvant utilisé mais également l'activité enzymatique de l'extrait. Les exemples joints en annexe montrent clairement l'effet du choix du solvant sur l'activité enzymatique de l'extrait.
Les compositions selon l'invention peuvent être formulées selon toute forme acceptable pour leur emploi en cosmétologie. Il peut, en particulier, s'agir d'une composition sous forme appropriée pour une application topique, en particulier sous forme d'une crème ou d'un gel, en particulier d'une crème ou d'un gel pour le visagc, les mains, le buste ou le corps.
Selon un autre aspect, l'invention concerne l'utilisation de l'extrait de plante comme agent cosmétique, ledit agent étant incorporé dans une composition cosmétique tcllc que dcfinie précédemment.
Cet agent cosmétique sera notamment utilisé dans toutes les applications où l'on recherche, en particulier, à inhiber l'action et/ou dc la phospholipase A2 ct/ou de la lipoxygénase, et/ou dc la phosphodiestérase ct/ou de la tyrosinase.
Elles seront encore utilisées pour le soin des peaux sensibles, notamment en atténuant ou cn supprimant les phénomènes d'irritation, d'inflammations ou d'allergies qui se traduisent en général au niveau cutané par des rougeurs, des sensations dc brûlure ou de picotements.
Ainsi, les compositions cosmétiques de l'invention seront notamment utilisées pour toutes les applications cosmétiques où l'on cherche à inhiber l'activité des enzymes précitées.