INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La diminution de l'activité GUS dans les racines au cours du développement est illustrée en figure 6, pour le transformant initial (a) et deux transformants caractéristiques (b et c). Pour le transformant initial, l'activité dans les feuilles n'est pas détectable. Pour le transformant 6-1, elle est faiblement détectable, et le rapport activité GUS racine/feuille est le même que pour le transformant initial. Pour le transformant 2b par contre, l'activité GUS dans les feuilles est plus élevée, et le rapport racine/feuille est nettement diminué.
Jour 12 Jour 19 Jour 26 Jour 33 Transfor- racine feuille rapport racine/ racine feuille rapport racine feuille rapport racine feuille rapport mant feuille racine/feuille racine/feuille racine/ feuille ACC6H 4.06 0,02 4,19 0,09 47 1,55 0,05 31 12,07 0,19 11 ACC6T3 4.39 0,02 3,98 0,09 44 1,3 0,04 33 2,44 0,25 10 6i 16,42 0,05 12 0,25 48 4,93 0,12 41 8,74 0,57 15 6h 25,87 1,39 19 4,94 0,17 29 4 0,27 15 4,64 0,32 15 6.1 32,05 1,01 32 22 0,6 37 7,9 0,56 14 10,3 0,51 20 6. 3 40,61 1,84 22 7,75 0,45 17 21,68 0,73 30 3,97 0,34 12 6. 2 48,87 1,61 30 6,49 0,17 38 22,01 1,01 22 4,55 0,79 6 6a 6,93 0,14 50 1,4 0,01 140 1 0,27 25 1,48 0,07 21 6b 8,62 0,73 12 5,43 0,78 7 2,35 0,26 9 2,63 0,19 14 2b 33,02 4,91 7 4,93 1,31 4 3,69 1,3 3 2,8 0,77 4 6k 107,93 11,57 9 32,3 3,09 10 11,74 3,65 3 6,6 1,75 4 WS -0,06 0,33 0,1 0,07 -0,01 0 -0,04 0,01 TABLEAU 1
Cys Lys Asp Asp Val Asn Arg Leu Cys Ser 20 25 7 525 ADN Homo sapiens CDS (1)..(525) 7 cga gag aag gag aac agc aag agg gag gag gag gag cag cag gag ggg 48 Arg Glu Lys Glu Asn Ser Lys Arg Glu Glu Glu Glu Gln Gln Glu Gly 1 5 10 15 ggc ttc gcg tcc ccc agg acg ggc aag ggc aag tgg aag cgg aag tcg 96 Gly Phe Ala Ser Pro Arg Thr Gly Lys Gly Lys Trp Lys Arg Lys Ser 20 25 30 gca gga ggt ggc ccg agc agg gcc ggg tcc ccg cgc cgg aca tcc aag 144 Ala Gly Gly Gly Pro Ser Arg Ala Gly Ser Pro Arg Arg Thr Ser Lys 35 40 45 aaa ace aag gtg gag ccc tac agt ctc acg gcc cag cag agc agc ctc 192 Lys Thr Lys Val Glu Pro Tyr Ser Leu Thr Ala Gln Gln Ser Ser Leu 50 55 60 atc aga gag gac aag agc aac gcc aag ctg tgg aat gag gtc ctg gcg 240 Ile Arg Glu Asp Lys Ser Asn Ala Lys Leu Trp Asn Glu Val Leu Ala 65 70 75 80 tca ctc aag gac cgg ccg gcg agc ggc agc ccg ttc cag ttg ttc ctg 288 Ser Leu Lys Asp Arg Pro Ala Ser Gly Ser Pro Phe Gln Leu Phe Leu 85 90 95 agt aaa gtg gag gag acg ttc cag tgt atc tgc tgt cag gag ctg gtg 336 Ser Lys Val Glu Glu Thr Phe Gln Cys Ile Cys Cys Gln Glu Leu Val 100 105 110 ttc cgg ccc atc acg ace gtg tgc cag cac aac gtg tgc aag gac tgc 384 Phe Arg Pro Ile Thr Thr Val Cys Gln His Asn Val Cys Lys Asp Cys 115 120 125 ctg gac aga tcc ttt cgg gca cag gtg ttc agc tgc cet gcc tgc cgc 432 Leu Asp Arg Ser Phe Arg Ala Gln Val Phe Ser Cys Pro Ala Cys Arg 130 135 140 tac gac ctg ggc cgc agc tat gcc atg cag gtg aac cag cet ctg cag 480 Tyr Asp Leu Gly Arg Ser Tyr Ala Met Gln Val Asn Gln Pro Leu Gln 145 150 155 160 ace gtc ctc aac cag ctc ttc ccc ggc tac ggc aat ggc cgg tga 525 Thr Val Leu Asn Gln Leu Phe Pro Gly Tyr Gly Asn Gly Arg 165 170 175 8 174
PRT Homo sapiens 8 Arg Glu Lys Glu Asn Ser Lys Arg Glu Glu Glu Glu Gln Gln Glu Gly 1 5 10 15 Gly Phe Ala Ser Pro Arg Thr Gly Lys Gly Lys Trp Lys Arg Lys Ser - 20 25 30 Ala Gly Gly Gly Pro Ser Arg Ala Gly Ser Pro Arg Arg Thr Ser Lys 35 40 45 Lys Thr Lys Val Glu Pro Tyr Ser Leu Thr Ala Gln Gln Ser Ser Leu 50 55 60 Ile Arg Glu Asp Lys Ser Asn Ala Lys Leu Trp Asn Glu Val Leu Ala 65 70 75 80 Ser Leu Lys Asp Arg Pro Ala Ser Gly Ser Pro Phe Gln Leu Phe Leu 85 90 95 Ser Lys Val Glu Glu Thr Phe Gln Cys Ile Cys Cys Gln Glu Leu Val 100 105 110 Phe Arg Pro Ile Thr Thr Val Cys Gln His Asn Val Cys Lys Asp Cys 115 120 125 Leu Asp Arg Ser Phe Arg Ala Gln Val Phe Ser Cys Pro Ala Cys Arg 130 135 140 Tyr Asp Leu Gly Arg Ser Tyr Ala Met Gln Val Asn Gln Pro Leu Gln 145 150 155 160 Thr Val Leu Asn Gln Leu Phe Pro Gly Tyr Gly Asn Gly Arg 165 170 9 324 ADN Homo sapiens 9 atgtggatcc aggttcggac catggatggg aggcagaccc acacggtgga ctcgctgtcc 60 aggctgacca aggtggagga gctgaggcgg aagatccagg agctgttcca cgtggagcca 120 ggcctgcaga ggctgttcta caggggcaaa cagatggagg acggccatac cctcttcgac 180 tacgaggtcc gcctgaatga caccatccag ctcctggtcc gccagagcct cgtgctcccc 240 cacagcacca aggagcggga ctccgagctc tccgacaccg actccggctg ctgcctgggc 300 cagagtgagt cagacaagtc ctcc 324 10 495 ADN Homo sapiens
10 gaggacatgt gggatgagac ggaattgggg ctgtacaagg tcaatgagta cgtcgatgct 60 cgggacacga acatgggggc gtggtttgag gcgcaggtgg tcagggtgac gcggaaggcc 120 ccctcccggg acgagccctg cagctccacg tccaggccgg cgctggagga ggacgtcatt 180 taccacgtga aatacgacga ctacccggag aacggcgtgg tccagatgaa ctccagggac 240 gtccgagcgc gcgcccgcac catcatcaag tggcaggacc tggaggtggg ccaggtggtc 300 atgctcaact acaaccccga caaccccaag gagcggggct tctggtacga cgcggagatc 360 tccaggaagc gcgagaccag gacggcgcgg gaactctacg ccaacgtggt gctgggggat 420 gattctctga acgactgtcg gatcatcttc gtggacgaag tcttcaagat tgagcggccg 480 ggtgaaggga gcccc 495 11 915 ADN Homo sapiens 11 gtctgcgcct gccacctgtg cgggggccgg caggaccccg acaagcagct catgtgcgat 60 gagtgcgaca tggccttcca catctactgc ctggacccgc ccctcagcag tgttcccagc 120 gaggacgagt ggtactgccc tgagtgccgg aatgatgcca gcgaggtggt actggcggga 180 gagcggctga gagagagcaa gaagaatgcg aagatggcct cggccacatc gtcctcacag 240 cgggactggg gcaagggcat ggcctgtgtg ggccgcacca aggaatgtac catcgtcccg 300 tccaaccact acggacccat cccggggatc cccgtgggca ccatgtggcg gttccgagtc 360 caggtcagcg agtcgggtgt ccatcggccc cacgtggctg gcatccatgg ccggagcaac 420 gacggatcgt actccctagt cctggcgggg ggctatgagg atgatgtgga ccatgggaat 480 tttttcacat acacgggtag tggtggtcga gatctttccg gcaacaagag gaccgcggaa 540 cagtcttgtg atcagaaact caccaacacc aacagggcgc tggctctcaa ctgctttgct 600 cccatcaatg accaagaagg ggccgaggcc aaggactggc ggtcggggaa gccggtcagg 660 gtggtgcgca atgtcaaggg tggcaagaat agcaagtacg cccccgctga gggcaaccgc 720 tacgatggca tctacaaggt tgtgaaatac tggcccgaga aggggaagtc cgggtttctc 780 gtgtggcgct accttctgcg gagggacgat gatgagcctg gcccttggac gaaggagggg 840 aaggaccgga tcaagaagct ggggctgacc atgcagtatc cagaaggcta cctggaagcc 900 ctggccaacc gagag 915
La présente invention concerne un nouveau promoteur végétal capable de diriger l'expression d'une séquence nucléotidique d'intérêt dans les cellules de la racine d'une plante, ainsi que des vecteurs recombinants contenant un tel promoteur, de préférence associée à une séquence nucléotidique dont l'expression est recherchée dans les cellules constitutives des racines de plantes.
Dans les années récentes, les applications industrielles rendues possibles par les transformations des plantes à l'aide du génie génétique ont été croissantes.
De nombreux gènes d'origine procaryote ou eucaryote (d'animaux ou de plantes), codant spécifiquement pour des protéines conférant de nouvelles propriétés agronomiques, ont été isolés et transférés chez les plantes par génie génétique Dans un grand nombre de cas, les gènes qui ont été introduits dans des plantes constituent des séquences chimères, associant des éléments régulateurs d'origines différentes.
Ainsi, le gène codant pour une protéine d'intérêt est souvent placé sous le contrôle d'un promoteur constitutif fort permettant à ladite protéine d'être exprimée dans la totalité de la plante.
A titre d'exemple, le promoteur du transcrit 35S du virus de la mosaïque du chou-fleur (35S CaMV) a été largement utilisé dans des constructions de gènes chimères pour l'expression de protéines d'intérêt chez les plantes.
Désormais, pour un grand nombre d'applications, il n'est pas nécessaire que la protéine d'intérêt conférant la propriété agronomique recherchée présente une expression distribuée dans la totalité des organes et/ou des types cellulaires de la plante transformée.
Très précocement, la recherche d'une expression plus spécifique du gène d'intérêt a été entreprise et a conduit, par exemple, à l'identification de promoteurs spécifiques de tissus ou d'organes.
En particulier, un promoteur dirigeant l'expression d'un polynucléotide d'intérêt de façon à la fois forte et ciblée dans la racine permettrait de nombreuses applications que l'on peut classer comme suit .
(i) défense contre les pathogènes à point d'entrée racinaire, telles que des bactéries, des champignons, des nématodes ou des insectes.
(ii) résistance au stress (froid, stress hydrique, stress salin); (iii) amélioration de la qualité (exemple: augmenter la teneur en saccharose dans la betterave à sucre); (iv) nutrition (exemple: exprimer un gène de transporteur des nitrates).
Comme déjà indiqué plus haut, les promoteurs décrits dans l'état de la technique ne permettent pas l'expression d'un polynucléotide d'intérêt dans l'ensemble des couches cellulaires de la racine y compris toutes les assises.
Par exemple, le gène arsk1 d'A. thaliana (Hwang et al., 1995) est exprimé spécifiquement dans la racine, mais son expression est limitée aux couches externes de la racine (épiderme, endoderme, cortex) c'est-à-dire les cellules impliquées dans l'absorption d'eau. L'expression est très faible dans le système vasculaire. Le profil d'expression de ce gène évoque un rôle dans le stress hydrique. De fait, l'expression de ce gène est inductible par un stress hydrique (exposition des racines à l'air, ou traitement des racines par l'ABA ou NaCI), et diminue fortement lorsque les racines sont réhydratées.
Un autre exemple illustratif est le mutant scarecrow d'A. thaliana (Malamy et al. 1997) qui est affecté dans l'organisation radiale de la racine : les couches de l'endoderme et du cortex ne s'individualisent pas et restent fusionnées en une couche mutante possédant des caractéristiques de l'endoderme et du cortex Le gène scarecrow affecté par la mutation est exprimé dans l'endoderme, les cellules initiales de l'endoderme, et parfois dans le centre quiescent de la racine.
L'invention a plus particulièrement pour objet, un procédé désinfection tel que défini précédemment, dans lequel l'étape de nettoyage dudit matériel, est précédée d'une étape de pré-traitement.
Par étape de pré-traitement, on indique une étape dont le but consiste à faciliter les étapes ultérieures en empêchant par exemple les salissures de sécher, par exemple en irriguant immédiatement après la fin de leur utilisation, le canal de l'instrument médical en comportant, par une solution détergente et éventuellement bactéricide et/ou en l'immergeant dans ladite solution.
L'invention a plus particulièrement pour objet, un procédé de désinfection, tel que défini précédemment, dans lequel l'étape de mise en contact dudit matériel avec ladite solution est suivie d'une étape de rinçage puis, si nécessaire, d'une étape de séchage.
L'étape de rinçage final a pour objectif d'éliminer tout résidu de produit tout en évitant les re-contaminations ; ceci implique l'utilisation d'une eau adaptée à
cette exigence qui, selon le niveau de risque, sera stérile ou filtrée ; le séchage est nécessaire lorsque le dispositif n'est pas immédiatement réutilisé.
Il est bien entendu que la présente invention inclut aussi le procédé de désinfection de plusieurs matériels médico-chirurgicaux ou dentisterie à la fois.
Dans le cas du trempage manuel, la solution utilisée est une solution prête à l'emploi ; elle comprend donc les constituants dans les proportions indiquées précédemment. 10 à 20 litres de cette solution sont versés dans un bac de trempage et le matériel à désinfecter y est complètement immergé. Le procédé est mis en #uvre à température ambiante, soit environ entre 15 et 35 C, généralement autour de 20 à 25 C, et le trempage dure de 20 minutes à 1 heure, suivant le risque infectieux.
L'invention a notamment pour objet un procédé tel que défini précédemment dans lequel la solution désinfectante mise en #uvre comprend de l'acide acétique à une concentration supérieure à 1% et inférieure ou égale à 10% en poids et, plus particulièrement, supérieure ou égale à 2% et inférieure à 5% en poids.
Selon une première variante particulière du procédé tel que défini précédemment, la solution désinfectante mise en #uvre, comprend plus de 2% en poids et moins de 5% en poids de peroxyde d'hydrogène, plus particulièrement, au moins 0,10% en poids et au plus 0,20% en poids et, préférentiellement, au plus 0,15% en poids d'acide peracétique.
La solution aqueuse d'acide peracétique mise en #uvre, comprend éventuellement en outre, un ou plusieurs additifs choisis notamment parmi les agents tensioactifs non ioniques, les oxydes d'amines, les inhibiteurs de corrosion, les agents stabilisants, les acides forts, les colorants ou les parfums.
Comme agents tensioactifs non ioniques, on désigne dans la présente demande de brevet, ceux décrits dans la demande de brevet européen publiée sous le numéro EP 0 873 687, plus particulièrement, les produits commerciaux suivants : le GENAPOLT"" 2822, le GENAPOLT"" 2908, le GENAPOL# 2908D, le GENAPOL# 2909, le TRITON# DF12, le TRITON# DF16, le TRITONTM CF10, le DOWFAXT"" 20B102, l'AKYPO# RO 90, le SYNPERONIC# LF RA 30 ou le
SIMULSOLTM NW 900, l' AKYPO LF2 ou l' AKYPO LF4. Ces produits, disponibles dans le commerce ont la composition chimique suivante :
nom commercial composition chimique GENAPOLTM 2822 Mélange d'alcools alkoxylés en C10, Ci2, C14 (50E, 40P) GENAPOLTM 2908D Mélange d'alcools alkoxylés en C11, C,3, C15 (6 à 70E, 30P) GENAPOLTM 2909 Mélange d'alcools alkoxylés en C12, C14 (50E, 30P) TRITONTM DF12 Ethers benzyliques d'alcools alkoxylés en C8, C10 (20E, 50P) TRITONTM DF16 Mélange d'alcools alkoxylés en C8, C10 (60E, 30P) TRITONTM CF10 Ether benzylique d'alcools éthoxylés en C8 (160E) AKYPOTM RO 90 Mélange d'éthers carboxyliques éthoxylés en C16 C18 (9 OE) DOWFAXTM 20B102 SIMULSOLTM NW Mélange d'alcools alkoxylés (x OE, y OP) 900 AKYPO LF2 Ether carboxylique éthoxylé en C8 (8 OE) AKYPO LF4 Mélange d'éthers carboxyliques éthoxylés en Ce, C8 (7 OE) Comme agents tensioactifs non-ioniques, on préfère ceux correspondant à la formule (I) suivante - R1-O- [CH(R2)-CH(R3)-O]n-R4 (I) dans laquelle Ri représente un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé comprenant de 5 à 31 atomes de carbones, R2 et R3 représentent indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un radical alkyle comprenant 1 ou 2 atomes de carbone, R4 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 4 atomes de carbone ou un radical benzyle, et n représente un nombre entier compris entre 1 et 50 et de préférence inférieur à 20.
Par radical hydrocarboné linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 5 à 31 atomes de carbone, on désigne pour Ri dans la formule (1) telle
que définie précédemment notamment les radicaux alkyles ou les radicaux alkènyle. R1 représente plus particulièrement un radical choisi parmi les radicaux hexyle, heptyle, octyle, nonyle, décyle, undécyle, undécènyle, dodécyle, tridécyle, tetradécyle, pentadécyle, hexadécyle, heptadécyle, octadécyle, octadécènyle, octadécatriènyle, octadécadiènyle, eicosanyle ou béhènyle. lesdits radicaux étant linéaires ou ramifiés. Selon un aspect particulier de la présente invention, Ri représente un radical choisi de préférence parmi les radicaux alkyles linéaires ou ramifiés comportant de 8 à 18 atomes de carbone.
Par radical alkyle comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, on désigne pour R4 dans la formule (I) telle que définie précédemment, les radicaux méthyle, éthyle, propyle ou butyle, linéaires ou ramifiés.
La présente invention a donc pour objet un polypeptide isolé dénommé ICBP90 (inverted CCAAT box binding protein) de séquence d'acides aminés SEQ ID N 2. Cette séquence comprend : a) un domaine ubiquitine comprenant la séquence d'acides aminés 1 à 75 de la séquence SEQ ID N 2 ; b) un domaine doigt de zinc de type C4HC3 comprenant la séquence d'acides aminés 310 à 366 de la séquence SEQ ID N 2 et un domaine "doigt de zinc" de type C3HC4 comprenant la séquence d'acides aminés 724 à 763 de la séquence ID n 2 ; c) un domaine leucine zipper putatif comprenant la séquence d'acides aminés 58 à 80 de la séquence SEQ ID N 2 ; d) deux domaines de localisation nucléaire potentiels comprenant les séquences d'acides aminés 581 à 600 et 648 à 670 de la séquence SEQ ID N 2 ; e) un site de phosphorylation par une tyrosine kinase comprenant la séquence d'acides aminés 452 à 458 de la séquence SEQ ID N 2 ; des sites de phosphorylation par une protéine kinase cAMP/cGMP dépendante comprenant les séquences d'acides aminés 246 à 249,295 à 298 et 648 à 651 de la séquence SEQ ID N 2 ; g) des sites de phosphorylation par une caséine kinase II comprenant la séquence d'acides aminés 23 à 26,57 à 60,91 à 94,109 à 112, 165 à 168, 265 à 268,354 à 357 et 669 à 672 de la séquence SEQ ID N 2 ; h) des sites de phosphorylation par une protéine kinase C comprenant la séquence d'acides aminés 82 à 84,104 à 106, 160 à 162,173 à 175,251 à 253,301 à 303,380 à 382,393 à 395,504 à 506,529 à 531,625 à 627 et 639 à 641 de la séquence SEQ ID N 2 .
La présente invention porte également sur un polypeptide isolé caractérisé en ce qu'il comprend un polypeptide choisi parmi :
a) un polypeptide de séquence SEQ ID N 2, SEQ ID N 4, SEQ ID N 6 ou SEQ ID N 8 ; b) un polypeptide variant de polypeptide de séquences d'acides aminés défini en a) ; c) un polypeptide homologue au polypeptide défini en a) ou b) et comportant au moins 80 % d'homologie, de préférence 90 % avec ledit polypeptide de a) ; d) un fragment d'au moins 5 acides aminés consécutifs d'un polypeptide défini en a), b) ou c) ; e) un fragment biologiquement actif d'un polypeptide défini en a), b) ou c).
Il doit être compris que l'invention concerne les polypeptides obtenus par purification à partir de sources naturelles, ou bien obtenues par recombinaison génétique, ou encore par synthèse chimique et pouvant alors comporter des acides aminés non naturels.
On entendra par polypeptide variant l'ensemble des polypeptides mutés pouvant exister naturellement, en particulier chez l'être humain, et qui correspondent notamment à des troncatures, substitutions, délétions et/ou additions de résidus d'amino-acides. Les polypeptides homologues selon l'invention conserve au moins un domaine choisi parmi le domaine de liaison à l'ADN et/ou le domaine d'interaction avec une autre protéine.
Par polypeptide homologue, on entendra désigner les polypeptides présentant, par rapport au polypeptide naturel ICBP90, certaines modifications comme en particulier une délétion, addition ou substitution d'au moins un acide aminé, une troncature, un allongement et/ou une fusion chimérique. Parmi les polypeptides homologues, on préfère ceux dont la séquence d'acides aminés présente au moins 80 % d'homologie, de préférence 90 %, de manière préférée 95 %, et de manière encore préférée 97 % d'homologie avec les séquences d'acides aminés des polypeptides selon l'invention. Dans le cas d'une
substitution, un ou plusieurs acides aminés consécutifs ou non consécutifs, sont remplacés par des acides aminés équivalents .
L'expression acide aminé équivalent vise ici à désigner tout acide aminé susceptible d'être substitué à l'un des acides aminés de la structure de base sans cependant modifier les caractéristiques ou propriétés fonctionnelles essentielles, comme leurs activités biologiques, des polypeptides correspondants telles que l'induction in vivo d'anticorps capables de reconnaître le polypeptide dont la séquence d'acides aminés est comprise dans la séquence d'acides aminés SEQ ID N 2, ou l'un de ses fragments ci-dessus définis et notamment la séquence d'acides aminés SEQ ID N 4, SEQ ID N 6 et SEQ ID N 8 . Ces acides aminés équivalents peuvent être déterminés soit en s'appuyant sur leur homologie de structure avec les acides aminés auxquels ils se substituent, soit sur les résultats des essais d'activité biologique croisée auxquels les différents polypeptides sont susceptibles de donner lieu. A titre d'exemple, on mentionnera les possibilités de substitutions susceptibles d'être effectuées sans qu'il en résulte une modification approfondie des activités biologiques des polypeptides modifiés correspondants, les remplacements, par exemple, de la leucine par la valine ou l'isoleucine, de l'acide aspartique par l'acide glutamique, de la glutamine par l'asparagine, de l'arginine par la lysine etc., les substitutions inverses étant naturellement envisageables dans les mêmes conditions.
Par fragment biologiquement actif, on entendra désigner en particulier un fragment de séquence d'acides aminés de polypeptide selon l'invention présentant au moins une des caractéristiques ou propriétés fonctionnelles des polypeptides selon l'invention, notamment en ce que : (i) il est capable d'être reconnu par un anticorps spécifique d'un polypeptide selon l'invention ; (ii) il présente au moins l'un des domaines ou régions tels que définis ci-après ; (iii) il est capable de se lier à l'ADN et notamment aux boîtes CCAAT et/ou CCAAT inversée ; (iv) il est capable de moduler le taux d'expression du gène de la
topoisomérase lia ; (v) il est capable de moduler la prolifération cellulaire.
Par fragment de polypeptide, on entend désigner un polypeptide comportant au minimun 5 acides aminés, de préférence 7 acides aminés, de manière préférée 10 et de manière encore préférée 15 acides aminés. Les fragments de polypeptide selon l'invention obtenus par clivage dudit polypeptide par une enzyme protéolytique, par un réactif chimique, ou encore en plaçant ledit polypeptide dans un environnement très acide font également partie de l'invention.
Le polypeptide selon l'invention peut également s'associer à d'autres polypeptides par des interactions protéine-protéine. On entend désigner par interactions protéine-protéine, des associations mettant directement en contact au moins deux protéines. Ainsi, le polypeptide de l'invention peut se dimériser pour former des homodimères ou des hétérodimères, ou s'associer sous la forme d'homomultimères ou d'hétéromultimères. Le polypeptide selon l'invention peut également interagir avec un autre polypeptide pour exercer son action ; ainsi, le polypeptide selon l'invention peut posséder, en plus de son domaine de liaison à l'ADN, un domaine d'action sur la transcription qui exerce son action via des interactions protéine-protéine avec d'autres composants protéique de la machinerie transcriptionnelle. On entend désigner par composant protéique de la machinerie transcriptionnelle tous les facteurs de transcription nécessaires à la réalisation et à la régulation de la réaction de transcription.
Le polypeptide selon l'invention est caractérisé en ce qu'il est capable de se lier à une séquence d'ADN et en ce qu'il est comporte au moins un domaine de fixation à l'ADN sélectionné dans le groupe composé d'un domaine doigt de zinc (zinc-finger) et d'un domaine leucine zipper ;la séquence d'ADN sur laquelle se lie ledit polypeptide est une boite CCAAT, de préférence une une boite CCAAT inversée (inverted CCAAT box : ICB).
On entend désigner par liaison à une séquence d'ADN, une interaction spécifique entre le polypeptide de l'invention et une séquence d'ADN au moyen d'une série de liaisons faibles contractées entre les acides aminés de la protéine et les bases. Le polypeptide selon l'invention possède au moins un domaine de liaison à l'ADN qui contient au moins un des motifs protéiques connus susceptibles d'interagir avec l'ADN, c'est-à-dire la structure en doigt de gant à laquelle est associée un atome de zinc ( zinc-finger ), la structure hélice-tour-hélice, la structure hélice-boucle-hélice et la fermeture éclair à leucines ( leucine-zipper ).
Par motif en doigt de gant ( zinc-finger ), on entend désigner une séquence d'une vingtaine d'acides aminés ayant dans l'espace une forme de doigt de gant. Il en existe deux types : ceux qui contiennent quatre cystéines (C4) et ceux qui contiennent deux cystéines et deux histidines (C2H2). Ces acides aminés définissent la nature du doigt de gant et sont situés à sa base et un ion Zn++ est situé au centre du carré formé par ces quatre acides aminés. Le polypeptide selon l'invention possède potentiellement deux motifs de type C4.
Il - Kanamycin rescue
(Bouchez D., Vittorioso P., Courtial B., Camilleri C., 1996.