INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le MIE principal 38 se trouve dans un autre noeud principal 42 du réseau de transmission 2 comme on le voit sur la figure 5.
L'aiguilleur optique principal 40 est relié au MIE 38 et adapté aux quatre longueurs d'onde X 2, B3 et B4.
De plus l'aiguilleur optique principal 22 est relié à deux extrémités des fibres F1 et F2 tandis que l'autre aiguilleur optique principal 40 est relié aux deux autres extrémités des fibres F1 et F2 de façon que les informations aux longueurs d'onde X 2, B3 et B4 provenant du réseau de transmission 2 puissent circuler de l'aiguilleur optique principal 22 à l'aiguilleur optique principal 40 en passant par la fibre F1 et également de l'aiguilleur optique principal 40 à l'aiguilleur optique principal 22 en passant par la fibre F2.
L'intérêt du réseau en anneau conforme à l'invention de la figure 5 réside dans le fait que lorsque le MIE 6 est en panne les usagers du réseau en anneau conforme à l'invention peuvent tout de même recevoir leurs informations par l'intermédiaire du MIE 38.
La paroi transvcrsale 31 de la chambre active 3 est traversec par un tuyau 33 qui communiquc avec l'intérieur dc cette chambre sauf, bien entendu, dans les "couloirs" délimités par les manchons 6.
Bien que cela n'ait pas été représenté sur les figures, la tubulure 25 est raccordée à une pompe à vide, tandis que le tuyau 33 est raccordé à une source dc fluide sous pression tel que dc l'air comprimé.
Nous allons maintenant expliqucr comment on procèdc au prélèvement d'une couche d'article au moyen du dispositif de la présente invention.
Préalablement, on précisera que la plaque 4 a des dimensions suffisantes pour qu'elle puisse s'appliquer contre l'ensemble des articles à prélever. Par ailleurs, le nombre et la répartition des orifices 40, et corrélativement des manchons 6, est détermi née dc telle manière qu'au moins l'un de ces orifices vienne à l'aplomb de la cavité d'un article à prélever.
Dans la situation représentée à la figure 3, on a par exemple affaire à une couche de boîtes de conserves identiques de 66,2 mm de diamètre, rangées en quinconce.
Dans ce cas, la plaque 4 comporte 1 794 orifices 40 distants deux à deux de 30mm, de sorte qu'au moins deux de ces orifices se trouvent à l'aplomb de la face supérieure concave F des boîtes. Pour faciliter la lecture de cette figure, la plaque 4 n'a pas été représentée ; seuls les orifices 40 sont dessinés.
A la figure 2 est représentée une couche C d'articles A de hauteur sensiblement constante, ces articles étant constitués de boîtes de conserves fermées par un couvercle, avec une face supérieure F concave et un pourtour P légèrement surélevé, qui correspond à la zone de scellement du couvercle de la boîte. Dans la situation représentée ici, on a fait figurer seulement six boîtes Al à A6, mais il est bien évident que dans la pratiquc, une couche est constituée d'un nombre ncttement supérieur de boîtes.
On note que les boîtes A1 et A4 sont légèrement décalées en hauteur. Ce phénomène s'explique par le fait que la couche C de boîtes est normalement en place sur une palette, ce qui signifie qu'ellc repose sur d'autres couches identiques. Par consequent, le défaut d'alignement d'une boîte dans une couche inférieure peut se répercuter au niveau de la couche C en question. Malgré ce décalagc, le dispositif conforme à l'invention va permettrc de prélever l'ensemble de la couche sans que certaines de ces boîtes, par exemple les boîtes Al et A4, nc restent sur la palette ou ne se détachent du dispositif en cours de prélèvement.
Dans une première étape, on amènc le dispositif à l'aplomb dc la couche C de boîtes, de manière à ce que la plaque 4 vienne en contact avec les faces supérieures F dcs boîtes Al à A6, et plus précisément avec leur pourtour P. Lors de cette opération, la pompe à vide ct la source d'alimentation en air comprimé sont désactivées.
Dans une seconde étape, on met en route la source d'air comprimé, de sorte que la chambre active 3 sc trouve occupée par dc l'air sous pression AC (voir figure 2). Cette surpression par rapport à la pression atmosphérique est dc l'ordre de quelqucs milliers dc Pascal. Elle est suffisante pour déformer localement la plaque 4 dc manière à ce qu'ellc vienne s'appliquer intimcment contre le pourtour P des boîtes, mêmc dans les zones où il y a décalage en hauteur entre deux boîtes voisines. C'est particulièrement le cas entre les boîtes A1 et A2, les boîtes A3 ct A4, et les boîtes A4 et As.
De cette manière, on est assuré que la face supérieure F des boîtes délimite avec la face inférieure de la plaque 4, un espace ou cavité E strictement étanche.
Lorsque cette manoeuvre est réalisée, il suffit alors de mettre en route la pompe à vide qui équipe le dispositif. Ce faisant, I'air qui se trouve initialement dans les petits espaces précités E est aspiré, comme le montrent les flèches V à la figure 2. Ainsi, on créc à l'aide d'une seule ct même plaque 4 autant de surfaces unitaires formant ventouses qu'il y a de boîtes à prélever.
Le demandeur s'est aperçu que cc dispositif permet de prélever l'ensemble de la couche de boîtes, sans qu'aucune d'entre elles nc reste sur la palette ou ne se détache en cours de prélèvemcnt.
A titre indicatif et pour une couche de 400 boîtes dc diamètre égale à 66,2mm rangées en quinconce, la pression d'air comprimé au sein de la chambre active vane entre 30 et 50 grammes par cm 2 (environ 3 000 à 5 000 Pa), tandis que le vide sc situe entre 150 et 200 grammes de pression absolue (environ 15 000 à 20 ()00 Pa).
On a représenté aux figures 4 à 9 une machine utilisant un dispositif conforme à l'invention, dans plusieurs positions qui correspondent globalement à la préhension d'une couche d'articles sur une palette jusqu'à son dépôt sur des moyens d'évacuation constitués par un tapis roulant.
La machine en question comprend un châssis métallique 7 formé d'un cadre horizontal 70 reposant sur des pieds 71. Bien que cela ne soit pas visible sur les figures, ce cadre affecte en vue de dessus une forme rectangulaire, l'espace situé à l'intérieur de ce cadre étant strictement vide.
Rf: 0.2 (1-3-97 = NH4OH-MeOH-CH2Cl2) Masse (DCI, NH3) : 495 (MH+) EXEMPLE 3 Le fumarate dc la 5-[3-chloro-2-(4-méthylpipérazin-1-yl)phénylamino]-1-(4 cyano-4-phénylpipéridin-1-yl)pentan-1-one (3) 3A : La 5-bromo-1-(4-cyano-4-phénylpipéridin-1-yl)pentan-1-one A (2. 1 g; 11.3 mmole) est dissous dans le dichlorométhane (23 ml) en présence de trièthylamine (2.35 ml; 17 mmole) sous atmosphère d'azote. La solution est refroidie à 0 C puis le chlorure de 5-bromopentanoyle (1.8 ml; 13.5 mmole) est ajouté. La réaction est immédiate. La solution est diluée dans du dichlorométhane lavée avec une solution demi-saturée en bicarbonate de sodium et séchée sur sulfate de magnésium. Le dérivé 3A est purifié par chromatographie-éclair avec un mélange 15-95 (NH4OH-MeOH-CH2Cl2).
Masse obtenue: 3.58 g (90 %) IH-RMN (200 MHz ; dmso-d6) 5 : 7.7-7.2 (m, 51-I); 4.60 (brd, 11-1); 4.07 (brd, 1H); 3.56 (t, 2H, 6.7Hz);3.29 (brt, 1H); 2.80 (brt, 1H); 2.41 (t, 2H, 6.7Hz); 2.3-1.5 (m, 8H).
3B: la N-tetbutoxycarbonyl-5-[3-chloro-2-(4-méthylpiperérazin-1yl)phénylamino]-1-(4-cyano-4-phénylpipéridin-1-yl)pentant-1-one La N-tertbutoxycarbonyl-3-chloro-2-(4-méthylpipérazin- 1 -yl)aniline (475 mg; 1.45 mmole) est dissoute dans du DMF (6 ml) à 0 C en présence d'hydrure de sodium (60% dans l'huile; 138 mg; 1.7 mmole) sous atmosphère d'azote. Une solution de 3A (615 mg; 1.75 mmole) dans le DMF (5 ml) est ajoutée goutte à goutte. Le mélange réactionnel est agité 24 heures à température ambiante puis neutralisé avec quelques gouttes d'eau. Le solvant est évaporé. Le résidu huileux est repris dans de l'acétate d'éthyle et lavé deux fois avec de l'eau. La solution est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée. Le dérivé 3B est purifié par chromatographie- éclair avec un mélange d'éluants (1-7-93 = NH4OH-MeOH-CH2Cl2) Masse obtenue : 718 mg (83 %) 1H-RMN (200 Mllz, dmso-d6) 5 : 8.41 (imp); 7.65-7.2 (m, 7H); 7.12 (t, 1H, 8Hz); 7.08(imp); 4.61 (brd, 1H); 4.06 (brs, 1H); 4.1-3.7 (m, 1H); 3.5-2.6 (m, 7H); 2.90 et 2.74 (s, dmf); 2.38 (bs, 6H); 2.25-1.7 (m, 7H); 1.65-1.2 (m, 13H).
Masse (DCI, NH3) : 594 (MH+) 3: Le dérivé 3 est préparé selon la méthode utilisée pour 2B à partir des réactifs suivants: 3B (683 mg ; 1.1 mmole) ; acide trifluoroacétique (5.2 ml) dans le dichlorométhane (31 ml). Le dérivé 3 est purifié par chromatographie-éclair avec un mélange 1-3-97 (NH4OH-MeOH-CH2Cl2).
Masse obtenue: 363 mg (64 %) Ce composé est dissous dans le méthanol et traité avec de l'acide tilmarique pour donner le fumarate correspondant.
1H-RMN (200 MHz, dmso-d6) #: 7.65-7.3 (m, 5H); 6.97 (t, 1H, 8Hz); 6.59 (s, fumarate); 6.50(t, 2H, 7Hz); 5.62 (brs, 1H); 4.62 (brd, 1H); 4.09 (brs, 11-1); 3.55 (brt, 2H); 3.3 (brt, 1H); 3.11 (brs, 2H); 3.0-2.7 (m, 3H); 2.62 (brd, 2H); 2.6-2.3 (m, 71-I); 2.25-1.7 (m, 4H); 1.60 (brs, 4H).
Analvse élémentaire: C28H36C1N5O ; C4H4O4; 0.07 1120 Calculée: C = 62.99 ; H = 6.61; N = 11.48 Trouvée: C = 63.27 ; H = 6.61 ; N = 11.36 IR (KBr): 3700-2400, 1716, 1680, 1588 Rf: 0.4 (1-5-95 = NH4OH-MeOH-CH2C12) Masse (DCI, NH3) : 494 (MH+) EXEMPLE 4 Le fumarate de la 1-(4-cyano-4-phénylpipéridin-1-yl)-5-[2-(4-méthylpipérazin- 1-yl)phénoxy]pentan-1-one (4) 4: I.e dérivé 4 est préparé selon la méthode utilisée pour 3B à partir des réactifs suivants: 3A (1.36 g ; 3.9 mmole) ; DMF (19 ml); NaH (50%, 187 mg, 3.9 mmole); 2-(4-méthylpipérazin-1-yl)phénol (Brevet Français n 9408981 , 500 mg, 2.6 mmole). Le dérivé 4 est isolé sous forme de base libre après purification par chromatographie-éclair avec un mélange d'éluants 1-5-95 (NH4OH-MeOH- CH2Cl2).
Masse obtenue: 889 mg (74 %) Ce composé est dissous dans le méthanol et traité avec de l'acide fumarique pour donner le fumarate correspondant.
1H-RMN (200 MHz, dmso-d6) # : 7.6-7.25 (m, 5H); 7.0-6.8 (m, 4H); 4.62 (brd, 1H); 4.10 (brd, 1H); 2.97 (brt, 211); 3.31 (brt, 1H); 3.02 (brs, 4H); 2.82 (brt, 1H); 2.64 (brs, 4H); 2.50(brt, 2H); 2.34 (s, 3H); 2.3-1.6 (m, 8H).
Analyse élémentaire: C28H36N4O2; 0.85C4H4O4; 0.76 H2O Calculée: C = 66.35 H = 6.95 ; N = 9.60 Trouvée: C = 66.07 ; H = 7.04 ; N = 9.46 IR (KBr): 3415, 2932, 2871, 1710, 1637.
Masse (DCI, NH3) : 461 (MH+) Rf: 0.25 (1-5-95 = NH4OH-MeOH-CH2C12) EXEMPLE 5 Le fumaratc dc la 1-(4-cyano-4-phénylpipéridin-1-yl)-5-[3-méthyl-2-(4- méthylpipérazin-1-yl)phénoxy]pentan-1-one (5) 5: Le dérivé 5 est préparé selon la méthode utilisée pour 3B à partir des réactifs suivants: 3A (1.27 g; 3.6 mmole) ; DMF (15 ml); Nali (60%, 145 mg, 3.6 mmole); 3-méthyl-2-(4-méthylpipérazin-1-yl)phénol (Brever Français n 9512218, 500 mg, 2.4 mmole). Le dérivé 5 est isolé sous forme de base libre après purification par chromatographie-éclair avec un mélange d'éluants (1-3-97 = N114OH-MeOH- CH2Cl2).
Masse obtenue: 479 mg (41 %) Ce composé est dissous dans le méthanol et traité avec de l'acide filmarique pour donner le fumarate correspondant.
1H-RMN (200 MHz, dmso-d6) # : 7.6-7.3 (m, 5H); 6.99 (t, 1H, 8Hz); 6.79 (brt, 2H, 9Hz); 6.58 (s, fumarate); 4.62 (brd. 1H); 4.09 (brd, 1H); 3.95 (t, 2H, 6Hz); 3.7-3.1 (m, 2H); 3.0-2.5 (m, 4H); 2.47 (t, 2H, 6Hz); 2.38 (s, 3H); 2.25 (s, 3H); 2.5-1.5 (m.
12H).
Analyse élémentaire : C29H38N4O2 ; C4H4O4 ; 0.07 H2O Calculée: C = 67.10; H = 7.17; N = 9.48 Trouvée: C = 66.92 ; H = 7.18 ; N = 9.33 IR (KBr): 3200-2200, 1716, 1649, 1580 Masse (DCI, NH3) : 475 (MH+) Rf: 0.2 (1-4-96=NH4OH-MeOH-CH2Cl2) EXEMPLE 6 Lc fumaratc de la 1-(4-cyano-4-phénylpipéridin-1-yl)-6-[2-(4-méthylpipérazin 1-yl)phénoxyjhexan-1-one (6) 6A: La 6-bromo-1-(4-cyano-4-phéntylpipéridin-1-yl)hexan-1-one Le dérivé 6A est préparé selon la méthode utilisée pour 3A à partir des réactifs suivants: A (667 mg ; 3.6 mmole); triéthylamine (748 ml; 5.3 mmole); chlorure dc 6bromohexanoyle (657 ml; 4.3 mmole) dans le dichlorométhane (10ml). Le dérivé 6A est purifié par chromatographie-éclair avec un mélange 30-70 (EtOAc-EDP).
Masse obtenue: 1.21 g (93 %) 1H-RMN (200 MHz; dmso-d6) : 7.2-7.3 (m, 5H); 4.60 (brd, 1H); 4.07 (brd, @ 1-1); 3.53 (t, 2H, 6.7Hz); 3.28 (brt, 1H); 2.80 (brt, 114); 2.38 (t, 2H, 6.7Hz); 2.3-1.3 (m, 1011).
* p A 15 0C. après 96 heures de conservation, le pourcentage de spermatozoïdes rapides le plus élevé a été obtenu dans le dilueur HGLL + phosphocaséinate natif. Par contre à 40C, les résultats obtenus avec ce dilueur sont identiques à ceux obtenus avec le lait et inférieurs à ceux obtenus avec 1'INRA 82.
La ss - lac tog ss-lactoglobuline permet d'obtenir des résultats significativement supérieurs à ceux obtenus avec la BSA à 4 C ; par contre à lSC ces 2 protéines apportent une protection identique. L'α-lactalbumine et l'ultrafiltrat sont 2 fractions toxiques pour les spermatozoïdes.
EXEMPLE 3 : EFFET D'UN DILUEUR CONFORME A L' INVENTION COMPRENANT DU PHOSPHOCASEINATE NATIF, SUR LA FERTILITE IN VIVO 1) Sperme conservé pendant 24 heures Quatre expériences utilisant du sperme conservé 24 heures ont été réalisées. Dans chacune de ces 4 expériences deux types de conditions de conservation du sperme ont été comparées - dans 1'INRA 82 ou le dilueur de Kenney à 40C, en conditions anaérobies dans des seringues de 20 ml ne contenant que 10 ml de sperme dilué (piston tiré à moitié) - dans le dilueur HGLL + phosphocaséinate natif conforme à l'invention, à 150C en conditions aérobies dans des seringues de 20 ml contenant 10 ml de sperme dilué et 10 ml d'air (piston tiré complètement).
La semence d'étalon est diluée à une concentration de 20 x 106 spermatozoïdes par ml. Les races des étalons, leur nombre, le nombre de cycles ont varié selon les expériences. Les conditions expérimentales sont résumées dans le tableau II ci-après.
N d'expérience 2 3 A 4 Animaux poneys chevaux de selle et lourds chevaux de sclle nombre d'étalons 2 3 4 4 nolllbrc de cycles X4 90 1 125 62 dilueur 4'DC INRA 82 dilucur de dilueur de dilueur de KENNEY KENNEY KENNEY Les ponettes et les juments ont été échographiées chaque jour à partir du premier jour des chaleurs et réparties au hasard dans les 2 lots. Dans l'expérience n01, les ponettes ont été inséminées une première fois quand le follicule dominant a atteint 33 mm. L'ovulation a été induite 24 heures après par une injection intraveineuse de 25 mg de C.E.G (crude equine gonadotrophin ou extrait hypophysaire équin total) et une seconde insémination a été réalisée 48 heures après la première, si l'ovulation n'était pas survenue. Dans les expériences n 2 à 4, les conditions ont été plus proches des conditions d'élevage : les juments ont été inséminées à partir du jour où le follicule dominant a atteint 33 mm, toutes les 48 heures jusqu'à ovulation.
Le tableau III ci-dessous reyroupe les résultats de ces 4 expériences, exprimés en pourcentage de femelles chez lesquelles le diagnostic de gestation est positif au 14eme jour après l'ovulation TABLEAU III
N i 2 3 4 Total (I' expérience 4 C 36% n =41 39% n =44 34'4 n 64 5X'S n 31 41%n = 171 n z"C 6()67 n = 43 50% n =46 47% n = 61 87% n = 31 57% n n = 175 Dans chaque expérience les doses conservées à 15"C avec le dilueur conforme à l'invention ont permis d'obtenir une fertilité par cycle supérieure à celle obtenue avec les doses conservées à 40C.
2) Sperme conservé pendant 72 heures Une expérience utilisant du sperme conservé 72 heures avant insémination a également été réalisée. Toutes les doses ont été préparées dans le dilueur HGLL + phosphocaséinate natif conforme à l'invention et ont été utilisées soit pour insémination immédiate, soit après conservation à 15 0C avec agitation constante.
Les ponettes ont été échographiées chaque jour à partir du premier jour des chaleurs et réparties au hasard dans les 2 lots. Cent deux cycles de ponettes ont été utilisés au total. Dans la première partie de l'expérience, toutes les ponettes ont été inséminées une seule fois, environ 7 heures avant l'ovulation induite par une injection intraveineuse de 25 my de C.E.G. Dans la seconde partie, les ponettes du lot "inséminations différées" ont été inséminées 2 fois : la première fois environ 12 heures avant l'ovulation induite et la seconde fois environ 4 heures après l'ovulation.
Les résultats (en pourcentage de femelles chez lesquelles le diaynostic de gestation est positif au 14eme jour après l'ovulation) sont illustrés par le tableau IV ci dessous TABLEAU IV
IA immédiate IA 72 heures première partie 65% n = 17 50% n=20 n = 2(1 seconde partie 70Ç, n = 33 47% n=32 n = 32 Total 68 % n = 50 AXt n = 52 Les résultats obtenus pour les 2 parties de l'expérience sont été identiques. On n'a pas observé d'effet du nombre d'inséminations et pas d'effet d'une seconde insémination post-ovulation très proche du moment de l'ovulation. Les pourcentages de fertilité par cycle sont de 48% obtenus après inséminations différées de 72 heures, et de 68% obtenus après inséminations immédiates.
Ces résultats montrent que la fertilité obtenue après 72 heures de conservation du sperme à 150C dans le dilueur HGLL + phosphocaséinate natif est d'une qualité qui peut permettre son utilisation dans les élevages.
PROCÉDÉ DE SCULPTURE D'UN POLYèDRE REGULIER ET OBJET LUDIQUE DE DECORATION OBTENU A PARTIR DE CE PROCEDE La présente invention a trait au domaine de la décoration et concerne plus particulièrement un procédé de sculpture d'un matériau dur et noble permettant d'obtenir un objet ludique de décoration de concept original.
A cet effet, le demandeur a imaginé un procédé de sculpture d'un polyèdre régulier de base permettant d'obtenir deux éléments modulaires individuels distincts et imbriqués l'un dans l'autre.
Selon la caractéristique principale de l'invention, ce procédé consiste à usiner dans chacune des faces du polyèdre régulier une fenêtre polygonale selon une profondeur telle que l'intersection des plans de coupe internes des fenêtres définisse les faces d'un polyèdre intérieur formant un élément modulaire inténeur plein distinct imbriqué dans le polyèdre de base formant un deuxième élément modulaire extérieur creux avec l'évidement de ladite fenêtre sur chacune de ses faces.
- Souris immunisée dans les (CP) Après la troisième immunisation, il a été remarqué l'apparition de la réponse dirigée contre le NO-Cys-G-SAB, et l'absence de reconnaissance du Cys-G-SAR.
La figure 11 représente l'évolution au cours de l immunisation de la réponse en anticorps chez la souris immunisée dans les coussinets plantaires (CP). Le titre obtenu après cette immunisation étant insuffisant pour la caractérisation de l'Ac (DO < 0,5), une 4 ème immunisation a été effectuée pour améliorer le titre et l'avidité.
c) Caratérisation immunochimique des sérums immuns de souris - Etude de l'avidité et de la spécificité des réponses obtenues chez les deux souris injectées par deux voies d'immunisation différentes L'avidité et la spécificité de la réponse anti-NO-Cys-G-SAB ont été évaluées par rapport à l'immunogène et ses analogues structuraux, nitrosylés ou non.
Souris immunisée par voie (IP) La figure 12 représente l'avidité et la spécificité des anticorps anti-NO-Cys-G de la souris (IP).
s courbes de déplacement sont obtenues après des tests de compétitions en présence de l'anticorps et de chacun des conjugués indiqués. Après incubation de l'immunogène avec t'anti-NO-Cys-G-conjugué dilué au 1/8000 l'avidité de cet antisérum a été évaluée au demi-déplacement. Elle est de 1,1 x 10-8 M. Quand aux autres compétiteurs utilisés (Cys-G-SAB; NO-Cys-SAB; Cys-SAB; et la SAB-G) une reconnaissance très faible a été trouvée pour le Cys-SAB et la SAB-G avec respectivement une IC50 de 10-5 M et 5,6 x 10-6 M. Malgré ces réactivités croisées le NO-Cys-G-SAB est le conjugué le mieux reconnu.
Souris immunisée vOar voie (CP): La figure 13 représente l'avidité et la spécificité des anticorps anti-NO-Cys-G de la souris (CP).
Les courbes de déplacement sont obtenues après des tests de compétitions en présence de l'anticorps et de chacun des conjugués indiqués. Après la quatrième immunisation, les Inventeurs ont remarqué, dans le sérum de cette souris, une augmentation du titre (devenu 1/70 000) et de l'avidité de l'anti-NO-Cys-G-conjugué. L'avidité de 1'Ac est calculée à partir de la courbe de déplacement obtenue après incubation du sérum et de l'immunogène de la figure 13. Elle est égale à 4 x 10-9 M.
En ce qui concerne l'étude de la spécifité, les molécules utilisées (Cys-GSAB; NO-Cys-SAB; Cys-SAB et SAB-G) n'ont pas montré un déplacement des valeurs des DO ce qui signifie l'absence d'un accrochage non spécifique avec cet Ac au niveau de ces conjugués.
Par comparaison de ces deux types d'anticorps polyclonaux dirigés contre le même épi tope (NO-Cys-G), ne différant que par la voie d'administration de l'immunogène, des valeurs de titre et d'avidité différentes ont été obtenues. En outre, chez la souris immunisée par voie CP la réponse a été plus précoce (au bout de 10-15 jours) (figure 11) et plus spécifique que chez la souris immunisée par voie IP. Pour cette dernière, (figure 10) la réponse immunitaire a été trouvée dans un délai bien reconnu pour cette voie d' immunisation classique et qui varie entre 20 et 30 jours.
d) Caractérisation des anticorps monoclonaux Le sang des souris choisies pour la réalisation de cette approche monoclonale a été récupéré au moment du prélèvement de la rate. Le signal sur le conjugué nitrosylé correspondant a été analysé.
Après 10 jours de culture en milieu sélectif, le rendement de la fusion (nombre de puits ayant un ou plusieurs clones) a été de 25 % pour la fusion des Iymphecytes de la souris immunisée en ([P). En revanche pour la fusion des lymphocytes à partir de la rate de souris immunisée dans les (CP), le rendement a été de 97 gn.
Tous les puits ont été testés et le rendement nombre de puits positifs après un test ELISA) voisin de Tous Tous les hybridomes séléctionnés ont reconnu llimmunogène. Le bruit de fond de la réponse (signal mmunologique sur le conjugué non nitrosylé/signal -nmunologique sur le conjugué nitrosylé) a été dans tous les cas inférieur à 10%.
Les clones qui reconnaissaient les différents conjugués n'ont pas été sélectionnés.
- Avidité des Ac monoclonaux anti-NO-Cys-G conluquée : Le surnageant contenant les anticorps monoclonaux anti NO-Cys-G a été dilué au 1/5, et le liquide d'ascites au 1/30 000. Ces dilutions ont été choisies pour donner une DO optimale - 1,0 à 492 nm. La ligure 14 rapporte l'avidité et la spécificité des Ac nnnoctonaux anti-NO-Cys-G. Les courbes sont obtenues après des s tests de compétition en présence de l'Ac et de chacun des conjugués indiqués. Ces tests de compétition réalisés n incubant l'immunogène NO-Cys-G-SAB en présence du surnageant, montrent une avidité de 4 x 10-9 M. Le liquide 'ascites utilisé au 1/30 000 a donné une avidité de 2,5 x 10-8 M. Cette différence dans l'avidité peut être due à la présence dans le liquide d'ascites prélevé à partir de souris, de facteurs, de protéines ou de complexes immuns qui inhibent les réponses spécifiques.
- Spécificité des Ac monoclonatLx anti-NO-Cvs-G coniuauée : La spécificité des Ac monoclonaux a été étudiée par incubation du surnageant de culture des hybridomes à une dilution finale de 1/5 avec des conjugués présentant une analogie structurale avec l'immunogène: Cys-G-SAB NO-Cys-SAB; Cys-SAB; NO-Tyr-G-SAB; Tyr-G-SAB; NO-Tyr-SAB; TyrSAB; et la SAB-G. Au demi-déplacement, un seul conjugué Cys-SAB a été reconnu avec une spécificité de 4 x 10-6 M (figure 14). Ces résultats montrent que le conjugué NO-Cys-G-SAB est le mieux reconnu par ces Ac monoclonaux.
Malgré l'absence de compétition avec la NO-SAB, les tests ELISA indirect ont montré que t'Ac monoclonal reconnaît la protéine nitrosylée. Le surnageant (1/5) et te liquide d'ascites (1/30 000) ont donné respectivement, des DO de 0,36 1 0,085 et 0,54 + 0,12. Les résultats représentent la moyenne et l'écart-type de trois expérimentations.
Une couche d'alumine d'épaisseur 80 nm et d'indice optique plus élevé que celui de la silice est généralement déposée au dessus de la zone gravée, afin d'augmenter l'efficacité de diffraction du réseau en concentrant le champ du mode fondamental sur la zone gravée.
La deuxième technique est la photoinscription.
A ce sujet, on consultera les documents (22) à (28) Dans le cas de la silice dopée au germanium, le procédé de fabrication du verre inclut un recuit qui rend le verre très peu photosensible en supprimant les défauts structurels.