INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
F = 164 - 166"C (hexane - acétate d'éthyle) Analyse centésimale: C15H15BrN206S2 (M = 463,32) C% H% Br% N% calculé 38,88 3,26 17,25 6,05 13,84 trouvé 39,07 3,38 17,00 5,93 13,70 IR : v = 3258, 1594, 1568, 1471, 1393, 1342, 1166, 1148, 1088, 1069, 740, 632, 609 cm-1 RMN 1H (DMSO de) : = 2,64 (6H,s) ; 6,62 (2H, s échangeable par CF3COOD); 7,14 (2H,s) ; 7,99 (4H,s); 11,34 (1H, s échangeable parCF3COOD).
Exemple 13 (méthode A1) 3-Bromo-N-[3,5-diméthyl-4-[(nitnométhyl)sulfonyl]phényl] benzènesulfonamide Le composé du titre est obtenu en opérant comme dans l'exemple 12 en utilisant 3,8 g (14,9 mmoles) de chlorure de 3-bromobenzènesulfonyle.
Durée du reflux: 40 h Rendement: 0,8 g (18 %) F = 156 - 158 C (hexane - acétate d'éthyle) Analyse centésimale: C15H15BrN2O6S2 (M = 463,32) C% H% Br% N% calculé 38,88 3,26 17,25 6,05 trouvé 39,17 3,45 17,00 5,91 IR: v = 3237, 1594, 1565, 1483, 1397, 1358, 1340, 1181, 1167, 1148, 1071, 885, 679, 635, 605 cm-' RMN 'H (DMSO de): = 2,64 (6H,s); 6,62 (2H, s échangeable par CF3COOD); 7,15 (2H,s) ; 7,70 - 7,75 (1H,m) ; 8,04- 8,07 (2H,m); 8,18-8,19(1H,m); 11,33 (1 H, s échangeable par CF3COOD).
ExemPle 14 (méthode A2) N-[3,5-Diméthyl-4-[(nitrométhyl)sulfonyl]phényl]-2-(trifluornméthyl) benzènesulfonamide Le composé du titre est obtenu en opérant comme dans l'exemple 6 à partir d'une solution de 2,0 g (8,19 mmoles) de 3,5-diméthyl-4-[(nitrométhyl)sulfonyl] aniline dans 38 ml de tétrahydrofurane, de 1,32 ml (16,3 mmoles) de pyridine et de 3,0 g (12,3 mmoles) de chlorure de 2-(trifluorométhyl) benzènesulfonyle.
Durée du chauffage à 40 C: 8 h Rendement: 0,7 g (19 %) F = 171 - 1730C (hexane - acétate d'éthyle) Analyse centésimale: C1eH15F3N2O0S2 (M = 452,42) C% H% F% N% S% calculé 42,47 3,34 12,60 6,19 14,17 trouvé 42,61 3,35 12,32 6,21 14,55 IR: v = 3370, 3028, 2954, 1596, 1562, 1405, 1348, 1340, 1307, 1180, 1166, 1149, 1122 cmr RMN 'H (DMSO d6) : â = 2,42 (6H,s) ; 6,41 (2H, s échangeable par CF3COOD) 6,93 (2H,s); 7,82 - 7,91 (2H,m); 7,96 - 8,01 (1H,m); 8,17 - 8,20 (1H,m); 11,38 (1 H, s échangeable par CF3COOD).
Exemple 15 (méthode A2) N-[3,5-Diméthyl-4-[(nitrométhyl)sulfonyl]phényl]-2-naphtalènesulfonamide A une solution maintenue sous atmosphère d'azote de 2,0 g (8,19 mmoles) de 3,5-diméthyl-4-[(nitrométhyl)sulfonyl] aniline dans 40 ml de tétrahydrofurane anhydre, sont ajoutés successivement 1,3 ml (16,1 mmoles) de pyridine séchée sur potasse et 2,8 g (12,4 mmoles) de chlorure de 2-naphtalènesulfonyle. Le milieu réactionnel est agité pendant 6 h à température ambiante, puis est abandonné pendant 2 jours avant d'être jeté dans 200 ml d'eau. Le mélange est amené à pH 1 par de l'acide chlorhydrique dilué et est extrait 2 fois au chlorure de méthylène. Les extraits organiques rassemblés sont lavés 2 fois à l'eau, séchés sur sulfate de sodium et concentrés à sec sous pression réduite.
Le résidu solide obtenu est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant: chlorure de méthylène) pour donner 3,0 g (84 %) de N-[3,5-diméthyl-4[(nitrométhyl)sulfonyl]phényl-2-naphtalènesulfonamide.
F = 208 - 215"C (acétate d'éthyle) - décomposition vers 215"C Analyse centésimale: C,9H18N2OS2 (M = 434,47) C% H% N% S% calculé 52,52 4,18 6,45 14,76 trouvé 52,62 4,29 6,45 14,42 IR: v = 3230, 1557, 1340, 1180, 1163, 1148, 1072, 659, 641 cm-' RMN 'H (DMSO d6) : = 2,54 (6H,s) ; 6,50 (2H, s échangeable par CF3COOD); 7,13 (2H,s); 7,76 - 7,81 (2H,m) ; 7,91 - 7,95 (1H,m); 8,10 - 8,33 (3H,m); 8,77 8,78 (1H,m); 11,30 (1H, s échangeable parCF3COOD).
Exemple 16 (méthode A2) N-[3,5-Diméthyl-4-[(nitrométhyl)sulfonyl]phényl](2-nitrophényl) méthanesulfonamide Le composé du titre est obtenu en opérant comme dans l'exemple 15 en utilisant 2,9 g (12,3 mmoles) de chlorure de (2-nitrophényl)méthanesulfonyle.
Durée de l'agitation à température ambiante: 26 h Rendement: 2,6 g (72 %) F = 189 - 190 C (hexane-acétate d'éthyle) Analyse centésimale: C,H17N308S2 (M = 443,44) C% H% N% S% calculé 43,33 3,86 9,48 14,46 trouvé 43,67 3,82 9,60 14,32 IR: v = 3243, 1596, 1562, 1531, 1487, 1399, 1361, 1336, 1313, 1160, 1147, 1140, 902,869,632 cm ' RMN 1H (DMSO d6) : 6 = 2,58 (6H, s); 5,21 (2H,s) ; 6,56 (2H, s échangeable par CF3COOD) ; 6,98 (2H,s) ; 7,61 - 7,64 (1H,m); 7,70 - 7,80 (2H,m) ; 8,10 - 8,13 (1H,m); 10,83 (1H, s échangeable par CF3COOD).
Exemple 17 (méthode A2) 2-Bromo-N-[3,5-diméthyl-4-[(nitrométhyl)sulfonyl]phényl]benzéne- sulfonamide Le composé du titre est obtenu en opérant comme dans l'exemple 15 en utilisant 2,5 g (9,78 mmoles) de chlorure de 2-bromobenzènesulfonyle.
Le milieu réactionnel est agité 20 h à température ambiante avant l'addition de 0,6 g (2,35 mmoles) supplémentaire de chlorure de 2-bromobenzènesulfonyle et la poursuite de l'agitation pendant 4 h à température ambiante.
Rendement: 1,6 g (42 %) F = 140 - 142 C (hexane-acétate d'éthyle) Analyse centésimale: C15H15BrN2O0S2 (M = 463,32) C % H % Br% N % calculé 38,88 3,26 17,25 6,05 trouvé 39,07 3,15 17,25 6,05 IR: v = 3295, 3041, 2969, 1595, 1562, 1478, 1337, 1192, 1188, 1144, 1071, 632, 601 cm-1 RMN 'H (DMSO d6) : 6 = 2,54 (6H,s) ; 6,54 (2H,s échangeable par CF3COOD) 7,03 (2H,s); 7,66- 7,77 (2H,m) ; 7,93 - 7,96 (1 H,m) ; 8,33 - 8,37 (1H,m); 11,53 (1 H, s échangeable par CF3COOD).
Exemple 18 (méthode A2) N-[3,5-Diméthyl4-[(nitrométhyl)sulfonyl]phényl]-4-(méthylsulfonyl)benzène- sulfonamide A une solution maintenue sous atmosphère d'azote, de 1,6 g (6,55 mmoles) de 3,5-diméthyl-4-[(nitrométhyl)sulfonyl]aniline dans 50 ml de tétrahydrofurane anhydre, sont ajoutés successivement 1,31 ml (16,2 mmoles) de pyridine séchée sur potasse et 2,5 g (9,82 mmoles) de chlorure de 4(méthylsulfonyi)benzènesulfonyle. Le milieu réactionnel est agité pendant 2 jours à température ambiante avant d'être jeté dans 200 ml d'eau. Le mélange obtenu est amené à pH 3 par addition d'acide chlorhydrique 1N, puis est extrait par 3 fois 200 ml d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques rassemblés sont lavés à l'eau, séchés sur sulfate de sodium et concentrés à sec sous pression réduite. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant: chlorure de méthylène/acétate d'éthyle : 2/1) et recristallisation dans un mélange d'hexane et d'acétate d'éthyle pour donner 0,78 g (26 %) de N-[3,5- diméthyl-4-[(nitrométhyi)sulfonyl]phényl]-4-(méthylsulfonyl)benzènesuifonamide.
- Détermination de l'isotvpie des Ac monoclonaux Droduits : En utilisant un Kit de détection des Ig de souris (Mouse monoclonal antibody, isotyping kit, Sigma), il a été possible de déterminer l'isotypie du clone obtenu: Ig G 2b.
3) Conclusion.
L'analyse des caractéristiques immunochimiques des Ac des souris antiNO-Cys-G conjuguée a montré que: - la partie immunodominante reconnue par les Ac est toujours l'épitope NO; - une légère différence structurale entre i , immunogène et ses analogues structuraux est prise en compte par les sites Ac, confirmant le pouvoir discriminateur élevé de ces immunoglobulines.
Ces Ac monoclonaux ont une haute avidité et spécificité; ces caractéristiques immunochimiques ainsi que la reconnaissance de la NO-SAB permettent leur utilisation dans des modèles biologiques bien définis.
V - DÉTECTION D'ANTIGÈNES NITROSYLÉS ET RÔLE PROTECTEUR DES ANTICORPS MONOCLONAUX.
Lors de la réponse immune, l'apparition de molécules effectrices très réactives (dérivés de loxygène, dérivés de l'azote,...) est susceptible de modifier t'antigénicité des éléments reconnus par cette répondre. Ainsi, les antigènes portés par les microorganismes contre lesquels l'organisme élabore une réponse immune de type Thl avec production de dérivés de l'azote, peuvent aboutir à des derivés nitrosylés et nitrés. Ces antigènes nitrosylés peuvent donc entraîner la synthèse d'anticorps, leur présence et leur rôle éventuel sont donc à étudier. Le fait que les dérivés nitrés soient de bons immunogènes relativement bien connus (Kofler et au. 1992; Maeji et al., 1992; Yuhasz et al., 1995), et existence avérée d'anticorps anti-nitrotyrosine (Beckman t al. 1994a) nous ont amenés à postuler l'existence de tels anticorps in vivo .
Les Inventeurs ont donc recherché, dans un premier temps, la présence d'antigènes nitrosylés sur les cibles parasitaires, par une technique immunocytochimique, on utilisant des anticorps anti-nitroso-cystéine (poly- et monoclonaux) et anti nitroso-tyrosine (polyclonaux). Dans Iin deuxième temps, ces antigènes nitrosylés ayant été détectés, ils ont recherché la présence des anticorps correspondants dans le sérum des animaux trypanosomés. Les trypanosomes représentent une cible privilégiée du NO.
Dans les trypanosomoses, on constate, en effet une augmentation considérable du nombre et de l'activité des macrophages. Le rôle cytostatique in vitro et l'induction de la NO-synthase constatée dans les macrophages de souris infestées indiquent que le NO pourrait être impliqué dans les mécanismes effecteurs contre les parasites. De plus, les trypanosomes circulant chez leur hôte définitif (forme trypomastigote) ont une mitochondrie non fonctionnelle, leur énergie dépendant de la glycolyse. Ils représentent donc des cibles de NO beaucoup moins complexes que les autres agents pathogènes ou les cellules tumorales, d'où l'intérêt de leur étude.
Si l'effet cytostatique du NO sur le trypanosome naturel des souris (T. musculi) et sur les trypanosomes du croupe brucei (T. b. gambiense, T. b. rhodesiense, T. b.
brucei), responsables des trypanosomoses humaines et animales a été bien établi in vitre, in vivo l'effet du NO est beaucoup plus complexe. NO en effet participe aux mécanismes d'immunosuppression en inhibant la transformation et la multiplication des lymphocytes, et de plus il induit l'apoptose. Le rôle immunosuppresseur de NO est important dans les trypanosomoses du fait de la quantité importante du NO produit. C'est pourquoi, il est difficile avec les anticorps polyclonaux et monoclonaux d'appréhender l'étude des molécules nitrosylées et d'un effet éventuellement protecteur lié à l'injection de ces anticorps. Dans un troisième temps, un rôle éventuel de des anticorps poly- et monoclonaux de l'invention, in vivo donc été recherché dans des modèles expérimentaux moins complexes, où le rôle délétère du NO à déjà été fortement incriminé.
A - Approche immunocytochimique.
Des macrophages péritonéaux provenant de souris activées par le BCG (source de NO), et des trypanosomes mis en co-culture, ont été utilisés. La souche parasitaire utilisée est T. brucei gambiense (T. b. gambiense souche: "Féo" ITMAP/ 1893). Ces parasites ont été entretenus après injection par voie (IP) (5 x 103/souris) à des souris normales (Noireau et al., 1989).
Les trypanosomes ont été cultivés dans des boîtes de Pétri (35 mm) (Falcon Plastics) à 2 x 106 parasites/ml/boîte dans le milieu de culture Mc Coy 5A modifié (GIBCO) supplémenté avec 100 U/ml pénicilline, 100 g/ml streptomycine, 25 mM Hepes, 2 mM sodium pyruvate, 0,2 mM L-Cystéine en présence de macrophages péritonéaux activés ou non (Albright et Albright 1980; Hirumi et Hirumi 1989; Vincendeau et al., 1985; Oka et al., 1988).
Le NMMA a été ajouté dans certaines boîtes à une dilution finale de 0,5 mM. Après 12 h, la survie des parasites est évaluée dans les puits en présence des macrophages normaux ou activés, avec ou sans NMMA. La SAB délipidée a été ajoutée dans le milieu de culture à 4 mg/ml comme porteur de NO. Le surnageant contenant les parasites est récupéré après 12 h pour réaliser une fixation des parasites en vue du test immunocytochimique.
- La fixation des trypanosomes est réalisée sur des lames dégraissées par des solvants organiques (Ether-Alcool) . La fixation la plus appropriée à ce protocole est réalisée par cytocentrifugation (Shandon Elliott cytospin) à 100g pendant 10 min. Après fixation, les lames sont séchées, puis après une étape de saturation par le tampon TBS-SAB (1 g/l) les différents anticorps primaires sont ajoutés. L'incubation a lieu pendant 1 h dans une chambre humide à la température ambiante (Harlow et Lane, 1988) . L'anticorps monoclonal anti-NO-Cys-G (surnaqeant) a été utilisé au 1/50; le sérum de souris normale utilisé à la même dilution; les anti-sérums polyctonaux (lapin "T" et "C") et un sérum de lapin non immunisé ont été employés à une dilution finale de 1/10000 pour comparer leurs marquages avec celui de l'anticorps monoclonal. Le tampon seul a été utilisé sur quelques lames comme contrôle négatif.
Pendant un intervalle d'appel actif, le point d'accès doit répéter le message dans les blocs suivants jusqu'à ce qu'il soit correctement confirmé. Le point d'accès est sûr que le périphérique continuera d'écouter tant que les interférences du four à micro-ondes subsisteront.
Un périphérique ayant des données à transmettre peut être en conflit avec un bloc quelconque de conflit d'accès disponible.
Deux compteurs régissent le mode DRX. NP202 et NA204. NP202 définit le nombre maximal de salves AB erronées consécutives qu'un périphérique peut recevoir.
Si NP202 est dépassé, le périphérique doit tenter de se resynchroniser avec le système. NA204 définit le nombre maximal d'intervalles d'appel consécutifs pendant lesquels un périphérique accuse réception d'un appel qu'un point d'accès doit tolérer. Si NA204 est dépassé, la déclaration du périphérique est annulée par le point d'accès.
Un périphérique en mode DRX doit périodiquement être redéclaré au point d'accès pour garantir que la déclaration n'a pas été annulée par inadvertance. La période de redéclaration fait partie de l'élément d'information en mode d'attente défini au paragraphe 3.3.5.5.15. Le paragraphe 3.4.3 Redéclaration des périphériques décrit le processus de redéclaration.
Mode interrogation Le mode interrogation est essentiellement un transfert isochrone à débit inférieur, qui est unidirectionnel, du périphérique au point d'accès et contient l'attribution d'une salve par période. La période est appelée période d'interrogation. A chaque unité sont attribués une durée entre les intervalles d'interrogation et un décalage de trame auquel débute l'intervalle d'interrogation. L'unité doit transmettre correctement une salve par intervalle d'interrogation. Si le périphérique n'a pas de données à transmettre, il envoie un message de commande nul. Ensuite, l'unité peut interrompre la réception jusqu'au prochain intervalle d'interrogation et économiser de l'énergie.
En mode interrogation, au périphérique est attribué un intervalle d'interrogation se produisant toutes les N trames à un décalage de trame prédéterminé, commençant au bloc M. Le périphérique doit commencer à contrôler le champ d'attribution des blocs en commençant à la trame N, bloc M, jusqu'à ce qu'il transmette un bloc sur la liaison montante ou jusqu'à qu'une période de trame expire. Pendant un intervalle d'interrogation inactif, le point d'accès attribue un bloc sur la liaison montante au périphérique avant qu'une période de trame expire.
Pendant un intervalle d'interrogation actif, le point d'accès doit transmettre un message sur la liaison descendante au périphérique avant d'attribuer un bloc sur la liaison montante.
Un périphérique ayant des données à transmettre doit attendre jusqu'à l'intervalle d'interrogation suivant.
Deux compteurs régissent le mode interrogation.
NP203 et NA203. NP203 définit le nombre maximal d'intervalles d'interrogation consécutifs pendant lesquels un périphérique ne reçoit pas de bloc sur la liaison montante attribué à sa connexion de commande sur la liaison montante. Si NP203 est dépassé, le périphérique doit tenter de se redéclarer au système.
NA203 définit le nombre maximal d'intervalles d'interrogation consécutifs pendant lesquels un périphérique ne répond pas à une attribution de bloc sur la liaison montante. Si NA203 est dépassé, la déclaration du périphérique est annulée par le point d'accès.
Messagerie Le périphérique communique avec DMF au point d'accès par l'intermédiaire de la connexion de commande.
La connexion de commande a toujours pour adresse l'adresse de base et la sous-adresse zéro sur les liaisons montante et descendante, voir le paragraphe 3.3.1.1. Un message de commande sur la liaison montante peut être envoyé dans un bloc de conflit d'accès, un bloc d'interrogation quelconque disponible ou être adressé directement au bloc de commande, alors qu'un message sur la liaison descendante peut être envoyé pendant un appel ou pendant une autre période durant laquelle on sait que le périphérique écoute. Tous les messages de commande utilisent l'en-tête étendu de connexion de commande, décrit au paragraphe 3.3.1.2, ainsi que l'en-tête de message de commande, décrit au paragraphe 3.3.5.1. Tous les messages de commande sont asynchrones par nature et sont transmis par un transfert asynchrone.
Afin de pouvoir accepter un grand nombre de périphériques différents, fonctionnant sur un bus HF interne, et en tenant compte du fait que tous les périphériques n ont pas les mêmes capacités, un concept de régulation du débit des messages de commande est prévu sur la connexion de commande. Les périphériques capables de transmettre les messages de commande à un débit maximal du système de 1 Mops peuvent utiliser un transfert asynchrone direct pour transmettre les messages de commande plus longs, contenant plusieurs blocs. Ces messages de commande doivent être ordonnancés sous forme de transfert asynchrone à plusieurs segments. Les périphériques ayant des capacités de traitement inférieures peuvent choisir une régulation du débit des messages de commande. Dans ce cas, ces périphériques divisent les messages de commande longs en plusieurs transferts à segment unique, chaque transfert transportant un bloc du message de commande multibloc.
Les différents segments uniques peuvent être reconstitués en utilisant les informations de séquence contenues dans l'en-tête du message de commande.
mentaire, la lumière émise par la source lumineuse. Le ré-
flecteur complémentaire est prévu à côté du réflecteur et présente une forme parabolique de sorte que le faisceau de lumière complémentaire qu'il réfléchit arrive sensiblement parallèlement à l'axe optique du réflecteur complémentaire,
cet axe coïncidant au moins approximativement avec l'axe op-
tique du réflecteur. Le faisceau lumineux complémentaire tra-
verse une vitre transparente qui porte la lentille et est
dispersé horizontalement par l'élément optique de la vitre.
Le faisceau de lumière complémentaire donne une distribution
de l'intensité lumineuse d'éclairage qui se combine à la dis-
tribution de l'intensité lumineuse d'éclairage générée par le faisceau lumineux sortant de la lentille. Lorsqu'on considère
le projecteur, la source lumineuse étant branchée, il appa-
raît non seulement la lentille traversée par le faisceau lu-
mineux proprement dit mais également le réflecteur complémen-
taire de sorte que globalement on éclaire une surface plus grande que la surface de la lentille et le projecteur est perçu de manière subjective comme non éblouissant.5 L'inconvénient de ce projecteur est que pour générer le fais-
ceau de lumière complémentaire dispersé horizontalement, il faut la vitre avec les éléments optiques, ce qui se traduit par une mise en oeuvre de moyens de fabrication et de montage plus importants pour le projecteur. De plus, au niveau des éléments optiques, la vitre n'est pas totalement transparente de sorte que le projecteur ne donne pas un aspect uniforme
lorsque la source lumineuse est coupée.
Les colonnes de séparation utilisées sont géneralement des colonnes classiques, de préférence de type Amberlite XAD4 ou Amberlite XAD7.
Cette étape d'extraction est de façon avantageuse réalisée en faisant circuler en boucle les milieux de culture et les solutions de rinçage sur les colonnes de séparation.
L'invention va être décrite plus en détail en relation avec l'exemple de synthèse suivant.
Exemple a - Initiation et culture des racines de Datura innoxia Mill.
Des graines stérilisées de Datura innoxia Mill. sont mises à germer in vitro puis transformées génétiquement par inoculation d'une suspension d'Agrobacterium rhizogenes sur des disques foliaires ou par piqûres dans les tiges des plantules comme décrit dans la thèse précitée Ducrocq C.
1994. Les racines transformées sont transférées sur un milieu solide puis liquide en présence d'un agent bacteriostatique (Claforan ) afin d'éliminer définitivement les agrobactéries encore présentes dans les explants.
On obtient des racines se développant sous la forme d'un chevelu qui est régulièrement scindé en plusieurs fractions servant d'inoculum à de nouvelles cultures.
On place 10 g de matière fraîche de racines dans un bioréacteur d'une capacité totale de 2 litres contenant le milieu de culture B5 (Gamborg 1968).
La quantité de milieu de culture est augmentée progressivement par tiers jusqu'à 1,5 1., de telle sorte qu'il y ait toujours environ la moitié du chevelu hors du milieu liquide. Les racines puisent l'oxygène dans l'air et les éléments nutritifs dans le milieu de culture. La croissance conduit à une production exponentielle de biomasse racinaire qui atteint le stade final de croissance exponentielle après environ 21 jours et donne environ 200 à 250 g de matière fraîche.
A ce stade, les racines ont accumulé des alcaloïdes tropaniques, en particulier l'hyoscyamine et leur métabolisme énergétique est encore en activité.
b - Cycles de permeabilisation excrétion - récupération synthèse de métabolites.
Le milieu de culture est conservé ou évacue et renouvelé. On ajoute au milieu de culture 45 ml de Tween 20 et 1,5 mmole de phénylalanine.
On laisse incuber entre 15 et 24 h et on soutire le milieu contenant les alcaloïdes que l'on fait circuler sur des colonnes XAD4 afin de retenir les alcaloïdes. Puis on e élimine le milieu contenant le Tween 20 . On fait circuler sur les racines un milieu de rinçage contenant un mélange d'eau et de saccharose à pH 5,8. On fait circuler plusieurs fois sur les colonnes XAD4 le milieu de rinçage afin de récupérer la totalité des alcaloïdes qui sont encore excrétés par les racines pendant environ 3 à 4 heures.
Ensuite, les colonnes sont éluées afin de récupérer les differents alcaloïdes tropaniques qui sont séparés de façon classique.
Après 21 jours de croissance et 1 jour de perméabilisation / excretion, on récupère l'équivalent du contenu racinaire initial soit 0,5 g d'hyoscyamine pour 100 g de matière sèche.
1,5 1 de milieu de culture est à nouveau introduit dans le bioréacteur, les racines sont maintenues sur ce milieu pendant 4 à 8 jours afin de synthétiser à nouveau des alcaloïdes tropaniques.
A titre d'exemple, le réseau de transmission 2 est un réseau en anneau HNS de niveau STM-1 ou STM-4.
Au niveau d'un noeud principal de ce réseau de transmission (noeud 4 de la figure 4 ou noeuds 4 et 42 de la figure 5) on fait appel à la fonctionnalité extraction et diffusion ( drop and continue ) du MIE qui se trouve dans ce noeud principal.
En ce qui concerne la figure 5, les informations destinées au premier noeud N1 du réseau conforme à i invention (correspondant au premier usager) sont aiguillées d'une part dans le MIE 6 à la fois sur une carte affluent (AF1) et d'autre part sur l'interface de ligne de ce MIE 6 d'où elles sont transmises jusqu'au noeud principal 42 où elles sont aiguillées sur une autre carte affluent (AF2).
La même démarche est adoptée pour les autres noeuds, N2, N3 et N4 du réseau en anneau conforme à l'invention.
Le double raccordement sur l'anneau principal 2 protège, comme on l'a vu plus haut, contre les pannes de MIE et l'on assure la protection en 1+1 de l'anneau conforme à l'invention.
On dispose de MIE dont la capacité est de huit alvéoles affluents ce qui permet de raccorder huit noeuds.
Chaque carte affluent dans un MIE est équipée d'un émetteur-récepteur optique dont la longueur d'onde correspond au noeud associé.
Il est à noter que les aiguilleurs optiques Al, A2, A3 et A4 ainsi que les fibres de raccordement FR1 et FR2 sont des composants passifs qui assurent le routage des longueurs d'onde sur le réseau en anneau conforme à l'invention.
Les signaux transmis sont des agrégats STM1 ou STM-4 mais la trame peut contenir des signaux de nature différente (par exemple VC12 ou ATM) Le premier client correspondant au noeud N1 peut par exemple être raccordé au débit STM-1 sous la longueur d'onde hl grâce aux cartes affluents mais le remplissage de la trame dépend du débit utilisé.