INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La composition énantiomérique de cet acide a été déterminée par HPLC chirale sur une colonne Chiralcel OD-H (250*4 mm, 5 m, DAICEL japon) avec comme conditions d'analyse: hexaneLPrOHlCF3COOH : 98/1,95/0,05, 0,75 ml/min, # = 230 nm. On obtient 2 pics à Rt = 12,27 min (62 %) et Rt = 14,55min (38 %). La littérature indique que le 1er pic correspond à la forme R (-).
Exemple 7 Méthode pour l'identification de modulateurs de l'activité de la protéine selon l'invention Le vecteur d'expression de l'exemple 5 (soit pour IIP-1, soit pour IIP-10,10 g/106 cellules) est transféré dans des cellules NIH 3T3 par des méthodes classiques connues dans la technique (Sambrook et coll. ). On identifie les cellules qui ont capté le vecteur grâce à leur aptitude à croître en présence de la sélection ou dans des conditions sélectives (0,4 mg/ml de G418). Les cellules qui expriment l'ADN codant pour IIP produisent de l'ARN qui est détecté par analyse northern blot, comme décrit dans l'exemple 5. Ou encore, les cellules exprimant la protéine sont identifiées par identification de la protéine par analyse western blot, à l'aide des anticorps décrits dans l'exemple 4. Les cellules qui expriment la protéine à partir du vecteur d'expression manifestent une morphologie modifiée et/ou des propriétés de croissance accrues.
Les cellules qui expriment la protéine et manifestent une ou plusieurs des propriétés modifiées décrites plus haut sont cultivées avec ou sans un composé modulateur supposé. Par criblage de banques chimiques et de banques naturelles, on peut identifier ces composés à l'aide d'essais cellulaires à haut rendement contrôlant la croissance cellulaire [essais de prolifération cellulaire utilisant comme substrats chromogènes les sels de tétrazolium WST-1, MTT ou XTT, ou un essai ELISA de détection de
mort cellulaire utilisant la bromodésoxy-uridine (BrdU); voir Boehringer Mannheim GmbH, Apoptosis and Cell Proliferation, 2e édition, 1998, p. 70-84].
Le composé modulateur provoquera un accroissement ou une diminution de la réponse cellulaire à l'activité de la protéine IIP et sera soit un activateur, soit un inhibiteur de la fonction du récepteur d'IGF, respectivement.
Ou encore, on ajoute des modulateurs supposés à des cultures de cellules tumorales, et les cellules manifestent une morphologie modifiée et/ou manifestent des propriétés de croissance réduite ou accrue. On ajoute aux cellules un composé modulateur supposé, avec ou sans protéine IIP, et on mesure la réponse cellulaire par observation directe des caractéristiques morphologiques des cellules, et/ou on contrôle les cellules quant à leur propriété de croissance. Le composé modulateur provoquera un accroissement ou une diminution de la réponse cellulaire à la protéine IIP et sera soit un activateur, soit un inhibiteur, respectivement, de l'activité du récepteur d' IGF-1 .
Il doit être bien entendu que la description qui précède n'a été donnée qu'à titre illustratif et non limitatif et que toutes variantes ou modifications peuvent y être apportées sans sortir pour autant du cadre général de la présente invention, tel que défini dans les revendications ci-annexées.
Références Altschul, S. F., et al., J. Mol. Biol. 215 (1990) 403-410 Altschul, S. F., et al., Nucleic Acids Res. 25 (1997) 3389-3402 Ausubel I., Frederick M., Current Protocols in Mol. Biol. (1992), John Wiley and Sons, New York Bates et al., Br. J. Cancer 72 (1995) 1189-1193 Behrens, J., et al., Nature 382 (1996) 638-642 Behrens, J., et al., Science 280 (1998) 596-599 Boehringer Mannheim GmbH, Apoptosis and Cell Proliferation, 2e édition, 1998, pp.
70-84 Burfeind et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93 (1996) 7263-7268 Büttner et al., Mol. Cell. Biol. Il (1991) 3573-3583 Cabral, J. H., et al., Nature 382 (1996) 649-652 Chomcszynski et Sacchi, Anal. Biochem. 162 (1987) 156-159 Chowdhury, K., et al., Mech. Dev. 39 (1992) 129-142 Cooke, M. P., et Perlmutter, R. M., New Biol. 1 (1989) 66-74 Base de données EMBL n AF089818 et AF061263 Denny, P., et Ashworth, A., Gene 106 (1991) 221-227 DeVries, L., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) 12340-12345 Dey, R. B., et al., Mol. Endocrinol. 10 (1996) 631-641 EP-A 0 063 879 EP-A 0 128 018 EP-A 0 173 251 EP-A 0 200 362 Feinberg, A.P., et Vogelstein, B., Anal. Biochem. 137 (1984) 266-267 Fields, S., et Song, O., Nature 340 (1989) 245-246 Goulding, M. D., et al., EMBO J. 10 (1991) 1135-1147 Hames, B. D., Higgins, S.G., Nucleic acid hybridisation - a practical approach (1985) IRL Press, Oxford, Angleterre Harrington et al., EMBO J. 13 (1994) 3286-3295 He, W., et al., J. Biol. Chem. 271 (1996) 11641-11645 Kalebic et al., Cancer Res. 54 (1994) 5531-5534 Kaleko et al., Mol. Cell. Biol. 10 (1990) 464-473 Lamothe, B., et al., FEBS Lett. 373 (1995) 51-55 Lehmann, J.M., et al., Nucleic Acids Res. 18 (1990) 1048) Margolis, B. L., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 ( 1992) 8894-8898
Morrione et al., J. Virol. 69 (1995) 5300-5303 Morrione, A., et al., Cancer Res. 56 (1996) 3165-3167 Needleman et Wunsch, J. Biol. Chem. 48 (1970) 443-453 PCR - A Practical Approach (1991), publ. M.J. McPherson, P. Quirke, G.R. Taylor, IRL Press Pearson, W. R., Methods in Enzymology 183 (1990) 63-68, Academic Press, San Diego, US Ponting, C.P., et al., BioEssays 19 (1997) 469-479 Prager et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 (1994) 2181-2185 PRC Protocols - A Guide to Methods and Applications (1990), publ. M.A. Innis, D. H.
Gelfand, J.J. Sninsky, T.J. White, Académie Press Inc.
Quinn et al., J. Biol. Chem. 271 (1996) 11477-11483 Resnicoff et al., Cancer Res. 54 (1994) 2218-2222 Resnicoff et al., Cancer Res. 54 (1994) 4848-4850 Resnicoff et al., Cancer Res. 55 (1995) 2463-2469 Resnicoff et al., Cancer Res. 55 (1995) 3739-3741 Riedel, H., et al., J. Biochem. 122 (1997) 1105-1113 Rocchi, S., et al., Endocrinology 137 (1996) 4944-4952 Rogler et al., J. Biol. Chem. 269 (1994) 13779-13784 Rousset, R., et al., Oncogene 16 (1998) 643-654 Sambrook et al., Molecular Cloning: A laboratory manual (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA Sell et al., Cancer Res. 55 (1995) 303-305 Sell et al., Mol. Cell. Biol. 14 (1994) 3604-3612 Sell et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 11217-11221 Singleton et al., Cancer Res. 56 (1996) 4522-4529 Smith et Waterman, Adv. Appl. Math. 2 (1981) 482-489 Tartare-Decker, S., et al., Endocrinology 137 (1996) 1019-1024 Tartare-Deckert, S., et al., J. Biol. Chem. 270 (1995) 23456-23460 Trojan et al., Science 259 (1993) 94-97 Ullrich, A., et al., EMBO J. 5 (1986) 2503-2512 USP 2915082 Wahl, G. M., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76 (1979) 3683-3687 Wang, J., et Riedel, H., J. Biol. Chem. 273 (1998) 3136-3139 Weidner, M., et al., Nature 384 (1996) 173-176 WO 97/27296
WO 89/06698 WO 95/14772 Yokouchi, M., et al., Oncogene 15 (1998) 7-15
LISTE DES SEQUENCES DEMANDERESSE : HOFFMANN-LA ROCHE AG TITRE DE LA DEMANDE : entrant en inter- action avec le récepteur d'IGF-1 (IIP), acides nucléiques codant pour ces protéines et leur utili- sation Cas 20273 n EP 98122992.5 03.12.1998 NOMBRE DE SEQUENCES : LOGICIEL: PatentIn Release version 2.0 >210> NUMERO DE LA SEQUENCE : LONGUEUR : TYPE DE MOLECULE : ORGANISME : sapiens DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID n 1 gaaacccaca ggaggcaacc acactagttt agatcttctg gtgaccccac ttctcgctgc 60 tcatgccgct gggactgggg cggcggaaaa aggcgccccc tctagtggaa aatgaggagg 120 ctgagccagg ccgtggaggg ctgggcgtgg gggagccagg gcctctgggc ggaggtgggt 180 cggggnnccc ccaaatgggc ttncnccccc ctcccccagc cctgcggccc cgcctcgtgt 240 tccacaccca gctggcccat ggcagtccca ctggccgcat cgagggcttc accaacgtca 300 aggagctgta tggcaagatc gccgaggcct tccgcctgcc aactgccgag gtgatgttct 360 gcaccctgaa cacccacaaa gtggacatgg acaagctcct ggggggccag atcgggctgg 420 aggacttcat cttcgcccac gtgaaggggc agcgcaagga ggtggaggtg ttcaagtcgg 480 aggatgcact cgggctcacc atcacggaca acggggctgg ctacgccttc atcaagcgca 540 tcaaggaggg cagcgtgatc gaccacatcc acctcatcag cgtgggcgac atgatcgagg 600 ccattaacgg gcagagcctg ctgggctgcc ggcactacga ggtggcccgg ctgctcaagg 660 agctgccccg aggccgtacc ttcacgctga agctcacgga gcctcgcaag gccttcgaca 720 tgatcagcca gcgttcagcg ggtggccgcc ctggctctgg cccacaactg ggcactggcc 780 gagggaccct gcggctccga tcccggggcc ccgccacggt ggaggatctg ccctctgcct 840 ttgaagagaa ggccattgag aaggtggatg acctgctgga gagttacatg ggtatcaggg 900 acacggagct ggcagccacc atggtggagc tgggaaagga caaaaggaac ccggatgagc 960 tggccgaggc cctggacgaa cggctgggtg actttgcctt ccctgacgag ttcgtctttg 1020 acgtctgggg cgccattggg gacgccaagg tcggccgcta ctaggactgc ccccggaccc 1080 tgcgatgatg acccgggcgc aacctggtgg gggcccccag cagggacact gacgtcagga 1140 cccgagcctc cagcctgagc ctagctcagc agcccaagga cgatggtgag gggaggtggg 1200 gccaggcccc ctgccccgct ccactcggta ccatcccctc cctggttccc agtctggccg 1260 gggtccccgg cccccctgtg ccctgttccc cacctacctc agctgggtca ggcacaggga 1320 ggggagggat cagccaaatt gggcggccac ccccgcctcc accactttcc accatcagct 1380 gccaaactgg tccctctgtc tccctggggc cttgggttct gtttgggggt catgaccttc 1440 ctagtttcct gacgcaggga atacagggga gagggttgtc cttcccccca gcaaatgcaa 1500 taatgccctc acccctcctg agaggagccc cctccctgtg gagcctgtta cctccgcatt 1560 tgacacgagt ctgctgtgaa ccccgcaacc tcctccccac ctcccatctc tccttccagg 1620 cccatccctg gcccagagca ggagggaggg agggacgatg gcggtgggtt tttgtatctg 1680 aatttgctgt cttgaacata aagaatc 1707
NUMERO DE LA SEQUENCE : LONGUEUR: 333 TYPE DE MOLECULE : ORGANISME : sapiens DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID n 2 Met Pro Leu Gly Leu Gly Arg Arg Lys Lys Ala Pro-Pro Leu Val Glu 1 5 10 15 Asn Glu Glu Ala Glu Pro Gly Arg Gly Gly Leu Gly Val Gly Glu Pro 20 25 30 Gly Pro Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Xaa Pro Gln Met Gly Xaa Xaa 35 40 45 Pro Pro Pro Pro Ala Leu Arg Pro Arg Leu Val Phe His Thr Gln Leu 50 55 60 Ala His Gly Ser Pro Thr Gly Arg Ile Glu Gly Phe Thr Asn Val Lys 65 70 75 80 Glu Leu Tyr Gly Lys Ile Ala Glu Ala Phe Arg Leu Pro Thr Ala Glu 85 90 95 Val Met Phe Cys Thr Leu Asn Thr His Lys Val Asp Met Asp Lys Leu 100 105 110 Leu Gly Gly Gln Ile Gly Leu Glu Asp Phe Ile Phe Ala His Val Lys 115 120 125 Gly Gln Arg Lys Glu Val Glu Val Phe Lys Ser Glu Asp Ala Leu Gly 130 135 140 Leu Thr Ile Thr Asp Asn Gly Ala Gly Tyr Ala Phe Ile Lys Arg Ile 145 150 155 160 Lys Glu Gly Ser Val Ile Asp His Ile His Leu Ile Ser Val Gly Asp 165 170 175 Met IleGlu Ala Ile Asn Gly Gln Ser Leu Leu Gly Cys Arg His Tyr 180 185 190 Glu Val Ala Arg Leu Leu Lys Glu Leu Pro Arg Gly Arg Thr Phe Thr 195 200 205 Leu Lys Leu Thr Glu Pro Arg Lys Ala Phe Asp Met Ile Ser Gln Arg 210 215 220 Ser Ala Gly Gly Arg Pro Gly Ser Gly Pro Gln Leu Gly Thr Gly Arg 225 230 235 240 Gly Thr Leu Arg Leu Arg Ser Arg Gly Pro Ala Thr Val Glu Asp Leu 245 250 255
Pro Ser Ala Phe Glu Glu Lys Ala Ile Glu Lys Val Asp Asp Leu Leu 260 265 270 Glu Ser Tyr Met Gly Ile Arg Asp Thr Glu Leu Ala Ala Thr Met Val 275 280 285 Glu Leu Gly Lys Asp Lys Arg Asn Pro Asp Glu Leu Ala Glu Ala Leu 290 295 300 Asp Glu Arg Leu Gly Asp Phe Ala Phe Pro Asp Glu Phe Val Phe Asp 305 310 315 320 Val Trp Gly Ala Ile Gly Asp Ala Lys Val Gly Arg Tyr 325 330 NUMERO DE LA SEQUENCE : LONGUEUR : TYPE DE MOLECULE : ORGANISME : sapiens DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID n 3 gccgaggaag gagaaggggc taaaccttgg agagtggatg gctcaaagga ttctcagatc 60 acacctcggg aggatcatgg gcaggagagc ctgttggcag ggctccacgg aacgcatcca 120 ccaaagacaa ggcagaaagt cactgcccaa gccggaggcc ccggggatcc catgcttttt 180 tcaagcccag agacagatga gaagcttttt atatgtgcgc agtgtggcaa aaccttcaac 240 aatacctcca acctgagaac gcaccagcgg atccacactg gcgagaagcc ctacatgtgt 300 tccgagtgtg gcaagagttt ctcccggagc tccaaccgca tccggcacga gcgcatccac 360 ctggaagana agcactctga 380 NUMERO DE LA SEQUENCE : LONGUEUR : TYPE DE MOLECULE : ORGANISME: Homo sapiens DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID n 4 Ala Glu Glu Gly Glu Gly Ala Lys Pro Trp Arg Val Asp Gly Ser Lys 1 10 15 Asp Ser Gin Ile Thr Pro Arg Glu Asp His Gly Gln Glu Ser Leu Leu 20 25 30 Ala Gly Leu His Gly Thr His Pro Pro Lys Thr Arg Gln Lys Val Thr 35 40 45 Ala Gln Ala Gly Gly Pro Gly Asp Pro Met Leu Phe Ser Ser Pro Glu 50 55 60 Thr Asp Glu Lys Leu Phe Ile Cys Ala Gln Cys Gly Lys Thr Phe Asn 65 70 75 80
Asn Thr Ser Asn Leu Arg Thr His Gln Arg Ile His Thr Gly Glu Lys 85 90 95 Pro Tyr Met Cys Ser Glu Cys Gly Lys Ser Phe Ser Arg Ser Ser Asn 100 105 110 Arg Ile Arg His Glu Arg Ile His Leu Glu Xaa Lys His Ser 115 120 125 NUMERO DE LA SEQUENCE : LONGUEUR : TYPE DE MOLECULE : ORGANISME : sapiens DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID n 5 atgtcgagac cccggaagag gctggctggg acttctggtt cagacaaggg actatcagga 60 aaacgcacca aaactgagaa ctcaggtgag gcattagcta aagtggagga ctccaaccct 120 cagaagactt cagccactaa aaactgtttg aagaatctaa gcagccactg gctgatgaag 180 tcagagccag agagccgcct agagaaaggt gtagatgtga agttcagcat tgaggatctc 240 aaagcacagc ccaaacagac aacatgctgg gatggtgttc gtaactacca ggctcggaac 300 ttccttagag ccatgaagct gggagaagaa gccttcttct accatagcaa ctgcaaagag 360 ccaggcatcg caggactcat gaagatcgtg aaagaggctt acccagacca cacacagttt 420 gagaaaaaca atccccatta tgacccatct agcaaagagg acaaccctaa gtggtccatg 480 gtggatgtac agtttgttcg gatgatgaaa cgtttcattc ccctggctga gctcaaatcc 540 tatcatcaag ctcacaaagc tactggtggc cccttaaaaa atatggttct cttcactcgc 600 cagagattat caatccagcc cctgacccag gaagagtttg attttgtttt gagcctggag 660 gaaaaggaac caagttaa 678 NUMERO DE LA SEQUENCE : LONGUEUR : TYPE DE MOLECULE : ORGANISME : Homosapiens DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID n 6 Met Ser Arg Pro Arg Lys Arg Leu Ala Gly Thr Ser Gly Ser Asp Lys 1 10 15 Gly Leu Ser Gly Lys Arg Thr Lys Thr Glu Asn Ser Gly Glu Ala Leu 20 25 30 Ala Lys Val Glu Asp Ser Asn Pro Gln Lys Thr Ser Ala Thr Lys Asn 35 40 45 Cys Leu Lys Asn Leu Ser Ser His Trp Leu Met Lys Ser Glu Pro Glu 50 55 60 Ser Arg Leu Glu Lys Gly Val Asp Val Lys Phe Ser Ile Glu Asp Leu 65 70 75 80 Lys Ala Gln Pro Lys Gln Thr Thr Cys Trp Asp Gly Val Arg Asn Tyr 85 90 95
souvent même les limites droite et gauche de l'ADN-T de plasmide Ti et de plasmide Ri, comme zones adjacentes des gènes introduits, peuvent être connectées. L'utilisation d'un ADN-T pour la transformation de cellules végétales a fait l'objet d'études approfondies et est décrite dans le document EP-A-120516 ; Hoekema dans : The Binary Plant Vector System Offset-drukkerij Kanters B. B., Alblasserdam, 1985, Chapitre V ; et al., Crit. Rev. Plant Sci., 4 :1-46 ; et An et al.,EMBO J. (1985) 4:277-284.
L'infection directe de tissus végétaux par Agrobacterium est une technique simple qui a été couramment utilisée et qui est décrite par Butcher D. N. et al. (1980), Tissue Culture Methods for Plant Pathologists, eds. : D. S. Ingrams et J. P. Helgeson, 203-208. Pour des enseignements supplémentaires sur ce sujet, voir Potrykus (Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol [1991] 42:205-225) et Christou (Agro-Food-Industry Hi-Tech mars/avril 1994, 17-27). Au moyen de cette technique, l'infection d'une plante peut être effectuée sur une certaine partie ou un certain tissu de la plante, c'est-à-dire sur une partie d'une feuille, d'une racine, d'une tige ou une autre partie de la plante.
Habituellement, avec l'infection directe de tissus végétaux par un Agrobacterium portant la séquence de nucléotides, une plante à infecter est blessée, par exemple en coupant la plante avec un rasoir ou en perforant la plante avec une aiguille ou en frottant la plante avec un abrasif. La lésion est ensuite soumise à l'inoculation de l'Agrobacterium. La plante ou partie de la plante ayant subi l'inoculation est ensuite cultivée sur un milieu de culture convenable, en la laissant se transformer en plantes matures.
Lorsque des cellules végétales sont construites, ces cellules peuvent être cultivées et maintenues par des méthodes de culture de tissus bien connues, par exemple en cultivant les cellules dans un milieu de culture
convenable auxquelles ont été fournis les facteurs de croissance nécessaires tels que des amino-acides, des hormones végétales, des vitamines, etc. La régénération des cellules transformées dans des plantes génétiquement modifiées peut être effectuée en utilisant des procédés connus pour la régénération de plantes à partir de cultures de cellules ou de tissus, par exemple en sélectionnant les pousses transformées au moyen d'un antiobitique et en soumettant ces pousses à une sousculture sur un milieu contenant les substances nutritives, hormones végétales, etc., appropriées.
Des enseignements supplémentaires sur la transformation de végétaux peuvent être trouvés dans le document EP-A-04449375.
Production du polypeptide Conformément à la présente invention, la production du polypeptide de la présente invention peut être effectuée en cultivant, par exemple, des hôtes d'expression consistant en micro-organismes, qui ont été transformés avec un ou plusieurs polynucléotides de la présente invention, dans un milieu classique de fermentation renfermant des substances nutritives. Le choix du milieu approprié peut être basé sur le choix des hôtes d'expression et/ou peut être basé sur les besoins de régulation du produit d'assemblage de l'expression. Ces milieux sont bien connus de l'homme de l'art. Si cela est désiré, le milieu peut contenir des constituants supplémentaires favorisant les hôtes d'expression transformés par rapport à d'autres micro-organismes potentiellement contaminants.
Anticorps La séquence d'amino-acides de la présente invention peut également être utilisée pour engendrer des anticorps par exemple en utilisant des techniques classiques contre la séquence d'amino-acides. Pour la production d'anticorps, divers hôtes, comprenant les chèvres, les
lapins, les rats, les souris, etc., peuvent être immunisés par injection de l'inhibiteur ou de n'importe laquelle de ces portions ou variantes ou bien de n'importe lequel des homologues, fragments ou dérivés, ou d'un oligopeptide qui conserve des propriétés immunogènes. En fonction de l'espèce hôte, divers adjuvants peuvent être utilisés pour accroître la réponse immunologique. Ces adjuvants comprennent, mais à titre non limitatif, l'adjuvant de Freund, des gels minéraux tels qu'un gel d'hydroxyde d'aluminium, et des substances tensio-actives telles que la lysolécithine, les Pluronic Polyols, des polyanions, des peptides, des émulsions huileuses, l'hémocyanine de patelle et le dinitrophénol. Le BCG (bacille de CalmetteGuerin) et Corynebacterium parvum sont des adjuvants humains potentiellement utiles qui peuvent être utilisés.
Des anticorps monoclonaux contre la séquence d'aminoacides peuvent même être préparés en utilisant n'importe quelle technique qui permet la production de molécules d'anticorps par des lignées cellulaires continues en culture. Ces techniques comprennent, mais à titre non limitatif, la technique de formation d'hybridome décrite initialement par Koehler et Milstein (1975 Nature 256:495- 497), la technique de formation d'hybridome de lymphocytes B humains (Kosbor et al (1983) Immunol Today 4:72 ; Cote et al (1983) Proc Natl Acad Sci 80 :2026-2030) la technique de formation d'hybridome de EBV (Cole et al (1985) Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R Liss Inc, pages 77-96). En outre, il est possible a'utiliser les techniques élaborées pour la production "d'anticorps chimères", l'épissage de gènes d'anticorps de souris à des gènes d'anticorps humains pour obtenir une molécule ayant une spécificité antigénique et une activité biologique appropriées (Morrison et al (1984) Proc Natl Acad Sci 81 :6851-6855 ; et al (1984) Nature 312- 604-608 ; Takeda et al (1985) Nature 314:452-454). En variante, les techniques décrites pour la production
d'anticorps à une seule chaîne (document US-A-4946779) peuvent être adaptées à la production d'anticorps à une seule chaîne spécifiques d'un inhibiteur.
Des anticorps peuvent également être produits en induisant la production in vivo dans la population de lymphocytes ou en sélectionnant des banques d'immunoglobulines recombinantes ou des gammes de réactifs de liaison hautement spécifiques de la manière décrite par Orlandi et al (1989, Proc Natl Acad Sci 86 :3833-3837) etWinter G et Milstein C (1991 ; Nature 349-293-299).
PROTOCOLES PROTOCOLE 1 ANALYSE DE XYLANASE (Activité d'endo-ss-1,4-xylanse) Des échantillons de xylanase sont dilués dans un tampon à l'acide citrique (0,1M) - hydrogénophosphate disodique (0,2M) à pH 5,0, pour atteindre une DO d'approximativement 0,7 dans l'analyse finale. Trois dilutions de l'échantillon et un étalon interne ayant une activité définie sont thermostatées pendant 5 minutes à 40 C. Au temps égal à 5 minutes, une tablette de xylazyme (substrat consistant en xylane réticulé coloré) est ajoutée à la solution enzymatique. Au temps égal à 15 minutes, la réaction est interrompue en ajoutant 10 ml de Tris à 2 %. Le mélange réactionnel est centrifugé et la DO du surnageant est mesurée à 590 nm. En prenant en considération les dilutions et la quantité de xylanase, l'activité (TXU, unités de xylanase totales) de l'échantillon peut être calculée par rapport à l'échantillon de référence.
PROTOCOLE 2 PROTOCOLE DE DETERMINATION DU CARACTERE COLLANT Le caractère collant de la pâte est mesuré sur un système TA-XT2 (Stable Micro Systems) en utilisant une cellule de détermination du caractère collant de pâte SMS.
*Le protocole est une variante modifiée de la méthode
décrite par Chen et Hoseney (1995). Une pâte est préparée à partir de farine, de 2 % de NaCl et d'eau à 400 unités Brabender (BU) en utilisant un farinographe (méthode AACC 54-21). La farine et NaCl sont mélangés à sec pendant 1 minute. L'eau est ajoutée et la pâte est mélangée pendant un temps supplémentaire de 5 minutes. La pâte obtenue peut être laissée avantageusement au repos pendant 10,30 ou 45 minutes dans des récipients cloués hermétiquement à 30 C.
Relation to levodopa absorption and transport. (1984) N.
Engl. J. Med. 310:483-488), aminoacide neutre servant au traitement de la maladie de Parkinson, sont liées à des transporteurs spécifiques. Certains transporteurs, comme la glycoprotéine-P, sont bidirectionnels (Knudsen, G.M. et al. Kinetic analysis of the human BBB transport of lactate and its influence by hypercapnia. (1991) Cerebral Blood Flow Metab. 11:581-586) et limitent l'entrée de drogues vers le cerveau.
La BHE exclut en particulier l'entrée des protéines et d'un grand nombre de peptides du plasma, à tel point que le fluide interstitiel du cerveau contient moins de 0,5% des protéines plasmatiques. Ainsi, les travaux réalisés en neurobiotechnologie sur de nombreux composés hydrophiles et/ou à haut poids moléculaire ayant un très fort potentiel en thérapeutique comme les peptides, les canaux ioniques, les récepteurs neuronaux, les facteurs neurotrophiques et les déterminants génétiques sont à ce jour limités dans leurs applications médicales du fait de leur difficulté d'administration au SNC comme xénobiotiques Pour pallier ces inconvénients, il a été proposé de rendre liposoluble une molécule donnée par transformation chimique (lipidisation) . La lipidisation est utilisée pour la fabrication de pro-drogues, analogues liposolubles de composés pharmacologiques hydrophiles capables de traverser les membranes biologiques. Toutefois, la EHE refoule vers le sang ce type de composé et leur demi-vie est extrêmement courte.
Pour cela, on développe en parallèle de systèmes de séquestration tissulaires, voire d'inhibition de la glycoprotéine-P (Ikumi Tamai et al. Drug Delivery through the BBB, (1996) Advanced Drug Delivery Reviews 19:401-424). Les modifications chimiques apportées à la molécule sont délicates et peuvent compromettre l'affinité au récepteur responsable de l'activité biologique. La lipidisation n'est utilisable que pour les molécules de poids moléculaire relativement faible (inférieur à 1.000, voire 600-800) soit au mieux les tetra- peptides et penta-peptides (Pardridge, W.M.
Peptide lipidization and liposomes. In Peptide Drug Delivery to the Brain pp 129-140 (1991) Raven Press, New York).
Les liposomes de petite taille (25-50 nm) pourraient présenter un intérêt pour la délivrance de produits biologiquement actifs au niveau central. Mais les liposomes de taille plus élevée (0,3-2 um) sont piégés dans l'espace vasculaire cérébral et présentent donc des risques d'embolie. Toutefois, les liposomes sont instables dans le cerveau, notamment à cause de la présence de l'enzyme lecithine-transférase au niveau des membranes neuronales et des cellules gliales (Pardridge, W.M. Peptide lipidization and liposomes. In Peptide Drug Delivery to the Brain pp 140-148 (1991) Raven Press, New York.