INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
En outre, le circuit intégré ne nécessite aucune fibre optique de connexion et peut avoir une configuration de faible encombrement.
Un autre circuit optique intégré selon la présente invention comprend un modulateur de phase ayant un trajet optique formé d'un matériau ayant un effet électrooptique et dans lequel se propage un signal lumineux, et un organe source de tension de modulation de phase qui applique une tension prédéterminée à une section du trajet optique afin qu'il assure la modulation de phase du signal lumineux qui se propage, un brouilleur de polarisation ayant un trajet optique formé d'un matériau ayant un effet électrooptique et dans lequel se propage un signal lumineux, et un organe source de tension qui applique une tension à une section déterminée du trajet optique pour la variation de la phase du signal lumineux qui se propage dans cette section, et un premier rotateur du plan de polarisation qui raccorde une extrémité de sortie du modulateur de phase à une extrémité d'entrée du brouilleur de polarisation, qui fait tourner la polarisation du signal lumineux qui se propage dans le trajet optique du modulateur de phase et qui transmet un signal lumineux à un état de polarisation dans lequel le signal a des composantes dans deux directions. En outre, le circuit optique intégré peut comprendre une électrode qui applique une tension en commun au modulateur de phase et au brouilleur de polarisation.
Dans le circuit optique intégré ayant cette configuration, un signal lumineux tombant sur le trajet optique du modulateur de phase se propage d'abord dans le trajet optique pour la modulation de phase par l'organe source de tension de modulation de phase. Une polarisation du signal lumineux qui a été soumis à la modulation de phase tourne sous l'action du premier rotateur du plan de polarisation, si bien que le signal lumineux est mis à un état de polarisation qui comporte des composantes dans deux directions. Le brouillage polarisé est réalisé par l'organe source de tension par propagation du signal lumineux dans le trajet optique du brouilleur de polarisation.
Grâce au circuit optique intégré de configuration simple mettant en oeuvre ce brouilleur classique de polarisation, il est possible d'effectuer une modulation de phase et un brouillage de polarisation collectivement et facilement, d'améliorer la caractéristique de transmission, de réduire le coût et de réaliser un système de transmission optique afin qu'il ait un faible encombrement.
Un antigène viral, tel que défini ci-dessus, sera préférentiellement une protéine de surface ou d'enveloppe d'un virus de l'hépatite, par exemple la protéine de surface de l'hépatite B sous l'une de ses formes S, S-préS1, S-préS2 ou S-préS2-préS1 ou encore une protéine d'un virus de l'hépatite A, ou d'une hépatite non-A, non-B, tel qu'un virus de l'hépatite C, E ou delta.
Plus particulièrement, un antigène viral tel que défini ci-dessus sera tout ou partie de l'une des glycoprotéines codées par le génome du virus HIV-1 (brevets GB 8324800, EP 84401834 ou EP 85905513) ou du virus HIV-2 (EP 87400151), et en particulier tout ou partie d'une protéine sélectionnée parmi gag, pol, nef ou env de HIV-1 ou de HIV-2.
Les procédés de synthèse des molécules hybrides englobent les méthodes utilisées en génie génétique pour construire des ADN hybrides codant pour les séquences protéiques ou peptidiques recherchées. On pourra, par exemple, se référer avantageusement à la technique d'obtention de gènes codant pour des protéines de fusion décrite par Minton en 1984
De préférence, I'échantillon biologique est constitué par un fluide, par exemple un sérum humain ou animal.
Toute procédure classique peut être mise en oeuvre pour réaliser une telle détection.
A titre d'exemple, une méthode préférée met en jeu des processus immunoenzymatiques selon la technique ELISA, ou immunofluorescents, ou radioimmunologiques (RIA) ou équivalent.
Ainsi, l'invention concerne également le polypeptide P27 ou tout fragment de celui-ci, marqué à l'aide d'un marqueur adéquat du type enzymatique, fluorescent, radioactif etc.
De telles méthodes comprennent par exemple les étapes suivantes - dépôt de quantités déterminées d'une composition polypeptidique selon l'invention dans les puits d'une plaque de microtitration, - introduction dans lesdits puits de dilutions croissantes du sérum devant être analysé, - incubation de la microplaque, - introduction dans les puits de la plaque de microtitration d'anticorps marqués dirigés contre des immunoglobulines humaines ou animales, le marquage de ces anticorps ayant été réalisé à l'aide d'une enzyme sélectionnée parmi celles qui sont capables d'hydrolyser un substrat en modifiant l'absorption des radiations de ce dernier, au moins à une longueur d'onde déterminée, par exemple à 550 nm, -détection, en comparaison avec un témoin de contrôle, de la quantité de substrat hydrolysé.
L'invention concerne également un nécessaire ou kit pour le diagnostic in vitro d'une infection par une mycobactérie appartenant au complexe de tuberculosis, comprenant: - le polypeptide P27 ou un fragment antigénique de celui-ci, - les réactifs pour la constitution du milieu propice à la réaction immunologique, -les réactifs permettant la détection des complexes antigène-anticorps produits par la réaction immunologique, ces réactifs peuvent également porter un marqueur, ou être susceptibles d'être reconnus à leur tour par un réactif marqué, plus particulièrement dans le cas où le polypeptide p27, ou le fragment antigénique de ce dernier, n'est pas marqué, - le cas échéant, un échantillon biologique de référence (témoin négatif) dépourvu d'anticorps reconnus par le polypeptide P27 ou le fragment antigénique de celui-ci, - le cas échéant, un échantillon biologique de référence (témoin positif) contenant une quantité prédéterminée d'anticorps reconnus par le polypeptide P27 ou le fragment antigénique de celui-ci .
Le polypeptide P27 selon l'invention permet de préparer des anticorps monoclonaux ou polyclonaux caractérisés en ce qu'ils reconnaissent spécifiquement le polypeptide P27 ou un fragment peptidique de P27. Les anticorps monoclonaux pourront avantageusement etre préparés à partir d'hybridomes selon la technique décrite par Kohler et Milstein en 1975. Les anticorps polyclonaux pourront être préparés, par exemple par immunisation dun animal, en particulier une souris, avec un polypeptide selon l'invention associé à un adjuvant de la réponse immunitaire, puis purification des anticorps spécifiques contenus dans le sérum des animaux immunisés sur une colonne d'affinité sur laquelle a préalablement été fixé le polypeptide ayant servi d'antigène. Les anticorps polyclonaux selon l'invention peuvent aussi être préparés par purification sur une colonne d'affinité, sur laquelle a préalablement été immobilisé le polypeptide P27 ou un fragment de celui-ci, des anticorps contenus dans le sérum de patients infectés par une mycobactérie appartenant au complexe de tuberculosis.
L'invention vise en conséquence un procédé pour la détection spécifique de la présence d'un antigène d'une bactérie du complexe Mycohrrcterium tuberculosis dans un Schantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes a) Mise en contact de l'échantillon biologique (tissu ou fluide biologique) prélevé chez un individu avec un anticorps dirigé contre le polypeptide P27, dans des conditions permettant une réaction immunologique in vitro entre lesdits anticorps et les polypeptides spécifiques des mycobactéries du complexe de tuberculosis éventuellement présents dans l'échantillon biologique, b) Mise en évidence du complexe antigène-anticorps forme.
Entre également dans le cadre de l'invention, un nécessaire ou kit pour le diagnostic in vitro sur un échantillon biologique, de la présence de souches de mycobactéries appartenant au complexe de Mycobacterium tuberculosis, par exemple M lulierculosis, caractérisé en ce qu'il comprend - un anticorps polyclonal ou monoclonal ci-dessus décrit, le cas échéant marqué; - le cas échéant, un réactif pour la constitution du milieu propice à la réalisation de la réaction immunologique; - un réactif permettant la détection des complexes antigène-anticorps produits par la réaction immunologique, ce réactif pouvant également porter un marqueur, ou être susceptible d'être reconnu à son tour par un réactif marqué, plus particulièrement dans le cas où l'anticorps monoclonal ou polyclonal sus-mentionné n'est pas marqué.
- le cas échéant, des réactifs pour effectuer la lyse des cellules de l'échantillon testé.
Un autre objet de la présente invention concerne une composition immunogène, caractérisée en ce qu'elle comprend le polypeptide P27 ou encore un ou plusieurs fragments antigéniques de celui-ci.
Une autre composition immunogène selon l'invention est caractérisé en ce qu'elle comprend un ou plusieurs polypeptides ou fragments de polypeptides selon l'invention et/ou une ou plusieurs protéines hybrides conformes à l'invention.
Selon un mode de réalisation avantageux, la composition immunogène ci-dessus définie est constitutive d'un vaccin, lorsqu'elle est présentée en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable et éventuellement un ou plusieurs adjuvants de l'immunité tels que l'alun ou un représentant de la famille des muramyl peptides ou encore l'adjuvant incomplet de Freund.
Comme dans les essais précédents, on mesure l'absorbance des milieux en fonction du temps, et on calcule, pour la partie linéairc de l'évolution de l'absorbancc, le pourcentage d'inhibition IL de la 5'-lipoxygénase.
2.5 Inhibition de la phosphodiestérase (PDE) Le principe de ce test est basé sur l'hydrolyse de la 3',5'-adénosine monophosphate cylcique (AMPÇ) en adénosine monophosphate (AMP). La formation d'AMP est mesurée par analyse HPLC.
- solution d'AMPC (substrat) à 0,25% dans le tampon 80 Ill - solvant, sans ou avec effecteur à 0,5% 80 ijl - tampon Tris-HCl 480 A ce milieu, on ajoute extemporanément 160 Fl de PDE à 0,5 U/ml dans le tampon Tris-HCl.
Au temps t = 5 minutes, on mesure la quantité d'AMP formée en calculant la surface d'intégration du pic de l'AMP sur le chromatogramme fourni par l'appareil HPLC (KONTION S.A.).
On peut alors estimer le taux d'inhibition dc la PDE IA par l'effecteur suivant la formule: SAMPb - SAMPe IA = X 100 SAMPb dans laquelle SAMPb représente la surface d'intégration du pic de l'AMP pour l'activité basale de l'enzyme (sans cffectcur) et SAMPe représente la surface d'intégration du pic de l'AMP pour l'activité dc l'enzyme cn présence de l'effecteur.
Les résultats obtenus figurent en Tableau I ci-après.
2.6 Inhibition de la tyrosinase Le principe de ce test cst basé sur la formation dc dopachrome à partir de la L-tyrosine, par l'action dc la tyrosinase.
Il est rappelé que la L-tyrosinc, cn présence de tyrosinase et d'oxygène, s'oxyde en L-DOPA qui s'oxyde à son tour, encore par l'action de la tyrosinase, cn dopaquinone. Celle-ci se cyclise alors en cyclodopa, qui s'oxyde en dopachrome, précurseur de mélanines et qui absorbe la lumière à la longueur d'onde de 480nm.
tyrosinase tyrosinase L-tyrosine b L-DOPA > dopachrome (X =480 nm)
V mélanines La formation de dopachrome peut donc être suivie par spectrophotométrie.
Pour cette méthode, on pourra se reporter en particulier aux publications de S.H. Pomerantz. Arch. Biochem. Biophys. (1974) 160 73-82, ou de J. Barber, J. Invest. Dermatol. (1984) 83 145-149.
La composition du milieu réactionnel est indiquée ci-dessous. Les solutions des réactifs sont réalisées dans du tampon phosphate 0,0) M à pH 6,9.
- solution de L-tyrosine (ler substrat) à 1 mM dans le tampon 333 Fl - solution de L-DOPA (2ème substrat) à 1 mM dans le tampon 333 tII - solvant, sans ou avec effecteur à 0,5% 333 > 1 A ce milieu réactionnel, on ajoute extemporanément 33 Fl de solution de tyrosinase à la concentration de 2400 U/ml dans le tampon phosphate.
On mesure alors la cinétique de la formation de dopachrome par l'absorption d'une lumière monochromatique de longueur d'onde 480nm au moyen d'un spectrophotomètre Uvikon 941 (KONTION S.A.), ce qui permet de calculer, pour la partie linéaire de l'évolution de l'absorbanee en fonction du temps, le pourcentage d'inhibition IT dc la tyrosinase suivant la formule ci-dessous: A AbB/mn - A AbE/mn IT = A AbB/mn X 100 dans laquelle tAbB/mn est la différence d'absorbance par minute du milieu réactionnel pour l'activité basale de l'enzyme (sans effecteur), et tAbE/mn, la différence d'absorbance du milieu réactionnel pour l'essai avec effecteur.
Les colorations des deux formulations PVC extrudées témoignent de l'efficacité des compositions de maléates d'organoétain obtenues selon la présente invention, pour prévenir la dégradation thermique du PVC durant sa mise en oeuvre. On montre également que ces compositions de maléates d'organoétain permettent de conserver un niveau élevé de point Vicat, conforme aux exigences de l'application.
On réalise un test de stabilité thermique dynamique sur trois autres formulations PVC préparées comme les formulations PVC 1 et 2.
On désigne ci-après - Formulation PVC 3, une formulation contenant la composition de maléates d'organoétain de l'exemple 5 - Formulation PVC 4, une formulation contenant la composition de maléates d'organoétain de l'exemple 2 - Formulation PVC 5,une formulation contenant la composition de maiéates d'organoétain de l'exemple 6.
Ce test de stabilité thermique dynamique permet de mettre en évidence l'effet stabilisant remarquable apporté par les compositions décrites, variant par le rapport molaire des espèces RA et R1A de bas et haut poids moléculaire.
150 g des formulations PVC 3, 4 et 5 sont évaluées à l'aide d'un malaxeur à cylindre COLLIN, dont les rouleaux sont portés à 2000 C. Les vitesses de rotation des deux cylindres sont respectivement réglées à 20tr/min et 24 tr/min de manière à gélifier puis travailler la matière entre les cylindres en apportant un travail mécanique de friction. L'écartement entre les cylindres est réglé à 0,7 mm.
Les indices de jaune (Yl, norme ASTM E313) mesurés sur chaque échantillon prélevé, ainsi que le temps de dégradation correspondant au noircissement total sont présentés dans le tableau 4.
Formulation PVC 3 Formulation PVC 4 Formulation PVC 5 VI (2 min) 5,7 5,4 4,8 Yl (4 min) 8,4 7,4 7,3 VI (6 min) 10,0 8,9 9,1 VI (8 min) 11,8 10,0 10,2 VI (10 min) 13,4 11,5 11,9 VI (12 min) 15,2 13,0 12,7 Vl(l5min) 18,5 15,7 15,3 VI (20 min) 27,3 23,4 21,3 VI (25 min) 33,9 32,3 30,5 VI (30 min) 38,6 37,0 36,1 Dégradation 45 45 50 totale (min)
TABLEAU 4 III EVALUATION DES PROPRIETES FINALES DE PROFILES RIGIDES EN PVC FORMES A PARTIR DE FORMULATIONS PVC CONTENANT LES COMPOSITIONS DE MALEATES D ORGANOETAIN.
Afin de mettre en évidence les propriétés finales des profilés rigides stabilisés thermiquement par les compositions de maléates d'organoétain décrites dans l'invention, on a extrudé, parallèlement à la formulation PVC 4 et à la formulation PVC 6 (formulation PVC contenant la composition de maléates d'organoétain de l'exemple 7), une formulation PVC rigide stabilisée à l'aide de sels de plomb. Ce système stabilisant, bien connu de l'homme du métier, représente une référence dont l'efficacité est prouvée par son utilisation extensive par les transformateurs de profilés rigides.
Pour cela, on prépare une formulation PVC 7 selon le mode opératoire utilisé pour préparer les formulations PVC 1 à 6 excepté que l'on remplace les 3,5 parties de composition de maléates d'organoétain par une combinaison de 3,5 parties de phosphite dibasique de plomb (2Pb0, PbHP03,1/2H20) et de 0,5 partie de stéarate dibasique de plomb (2Pb0, Pb(OOCC17H35)2).
Un test de stabilité thermique dynamique permet de mettre en évidence l'effet stabilisant remarquable apporté par les compositions décrites 150 g des formulations PVC 4, 6 et 7 sont évaluées à l'aide d'un malaxeur à cylindre COLLIN selon le mode opératoire décrit précédemment (évaluation des formulations PVC 3, 4 et 5 - tableau 4-). Les indices de jaune (Yl, norme ASTM E313) mesurés sur chaque échantillon prélevé sont présentés dans le tableau 5.
Formulation PVC 4 Formulation PVC 6 Formulation PVC 7 (référence) YI (2 min) 5,1 5,6 5,4 YI (4 min) 7,5 8,6 7,7 YI (6 min) 9,3 10,8 8,7 VI (8 min) 10,7 12,2 9,2 YI (10 min) 12,0 13,3 9,6 YI (15 min) 15,0 17,0 11,0 TABLEAU 5 Les trois formulations PVC 4, 6 et 7 ont également été transformées sur une extrudeuse industrielle REIFENHAÜSER BT65 équipée d'une filière en T pour profilés fenêtres.
Les paramètres relevés lors de l'extrusion sont présentés dans le tableau 6.
Formulation PVC 4 Formulation PVC 6 Formulation PVC 7 (référence) Profil de température ( C) dans le fourreau zone 1 180 180 170 zone 2 180 185 175 zone 3 180 180 170 zone 4 180 180 175 dans la filière zone 8 185 185 185 zone9 190 190 190 Température de vis (OC) 140 140 140 Vitesse des vis (tr/min) 25 25 25 Couverture des vis oui oui oui Température masse (OC) 190 181 187 Ampérage 7,3 5,7 7,5 Débit (kg/h) 62,8 58,6 59,8 TABLEAU 6 Les paramètres relevés lors de l'extrusion montrent que le comportement de la formulation PVC 4 (contenant la composition de l'exemple 2 obtenue avec l'Unilin(D425) est très proche de celui de la formulation PVC 7 (contenant le système de stabilisation au plomb).
En revanche, la formulation PVC 6 (contenant la composition de l'exemple 7 obtenu avec l'Unilin550) a un comportement rhéologique significativement différent, mettant une nouvelle fois en évidence l'effet lubrifiant des alcools de haut poids moléculaire. Cette formulation nécessiterait une optimisation de la lubrification afin d'obtenir un comportement rhéologique similaire à celui de la formulation PVC 7 au plomb.
RMN-1H (DMSO): 0,86(t, 3H); 1,50(m, 6H); 1,84(m, 2H); 2,50(m, 4H); 2,58 (s, 3H); 3,05 (d, 1H); 3,45 (d, 1H); 4,04 (m, 2H); 5,32 (s, 2H); 5,51 (dd, 2H); 6,10 (s, 1H); 7,37 (s, 1H); 8,20 (s, 1H); 8,42 (s, 1H).
RMN-C13 (DMSO): 9,11; 21,24; 24,70; 26,50; 37,20; 43,23 ; 51,43 ; 55,10; 57,21; 62,09 ; 73,99 ; 98,05 ; 100,38 ; 123,44 ; 127,10 ; 129,12 ; 130,59 135,89 ; 136,91; 140,99 ; 145,31; 148,50 ; 153,52 ; 156,51; 159,85 ; 172,73.
IR (KBr) : 1601; 1654; 1728; 3436.
Exemple 54 : 12-(4-benzylpipérazinométhyl)-5-éthyl-9-fluoro 4,5-dihydro-5-hydroxy-lH oxepino[3',4' :6,7]indolizino[1,2-b]quinoléine- 3,15(4H,13H)-dione On applique à la 4-fluoroaniline la procédure décrite par les exemples 30.a., 30.b. et 30.c. pour donner du 2-chloro-4-chlorométhyl-6-fluoro-3-quinoléinecarboxylate d'éthyle qui est traité selon la procédure de l'exemple 30.d., en utilisant la N-benzylpipérazine au lieu de la N-méthylpipérazine, puis réduit selon la méthode de l'exemple 30.e. en quinoléineméthanol correspondant. Ce dernier est couplé au composé (M) comme décrit dans l'étape il j. de l'exemple 11. Le produit de couplage résultant est cyclisé selon la procédure de l'étape 11.k. On obtient un solide blanc, p.f. 262 C.
RMN-1H (DMSO): 0,87 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 2,37 (s, 4H); 2,37 (s, 4H); 3.07 (d, 1H); 3,45 (s, 2H); 3,47 (d, 1H); 4,08 (q, 2H); 5,32 (s, 2H); 5,46 (dd, 2H); 6,03 (s, 1H); 7,35 (m, 5H); 7,38 (s, 1H); 7,77 (m, 1H); 8,20 (m, 2H).
RMN-C13 (DMSO): 8,41; 36,49 ; 42,53 ; 50,65 ; 52,82; 53,03 ; 55,95 ; 61,41; 62,14; 72,3 ; 99,55 ; 109,31; 120,14 ; 120,40; 122,70; 127,05 ; 128,32 128,55; 128,96; 130,40; 138,42; 139,65; 144,66; 145,83, 152,15; 155,89 159,15; 161,57; 172,02.
IR (KBr) : 740; 834; 1071; 1193; 1220; 1288; 1360; 1451; 1516; 1592; 1655; 1749; 2813; 2950; 3434.
Exemple 55 : 12-(4-benzylpipérazinométhyl)-5-éthyl-9-fluoro 4,5-dihydro-5-hydroxy-l0-méthyl-1H- oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b] quinoléine 3,15(4H,13H)-dione On applique à la 3-fluoro-4-méthylaniline la procédure décrite par les exemples 30.a., 30.b. et 30.c. pour donner du 2-chloro-4-chlorométhyl-7-fluoro-6-méthyl3-quinoléinecarboxylate d'éthyle qui est traité selon la procédure de l'exemple 30.d., en utilisant la N-benzylpipérazine au lieu de la N-méthylpipérazine, puis réduit selon la méthode de l'exemple 30.e. en quinoléineméthanol correspondant. Ce dernier est couplé au composé (M) comme décrit dans l'étape 11.j. de l'exemple 11. Le produit de couplage résultant est cyclisé selon la procédure de l'étape 1 1.k. On obtient un solide beige clair, p.f. 259 C.
RMN-1H (DMSO): 0,86 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 2,38 (m, 4H); 2,50 (s, 4H); 3,06 (d, 1H); 3,36 (s, 3H); 3,46 (s, 2H); 3,47 (d, 1H); 4,07 (q, 2H); 5,29 (s, 2H); 5,46 (dd, 2H); 6,02 (s, 1H); 7,23-7,35 (m, 6H); 7,8 (d, 1H); 8,35 (d, 1H).
RMN-C13 (DMSO): 8,40 ; 15,45 ; 36,47 ; 42,54 ; 50,7 ; 52,84 ; 53,13 ; 55,81; 61,4 ; 62,14 ; 73,29 ; 99,57 ; 112,45 ; 122,61; 124,73 ; 127,05 ; 128,32 128,96; 138,45 ; 139,81; 1444,68; 152,63 ; 155,85 ; 159,15; 172,02.
IR (KBr) :1013 ; 1069; 1169; 1241; 1266; 1475 ; 1577; 1594; 1655 ; 1744.
Exemple 56 : 5-éthyl-9-fluoro-4,6-dihydro-5-hydroxy-10-méthyl 12-diméthylaminométhyl-1H oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b] quinoléine 3,15(4H,13H)-dione On applique à la 3-fluoro-4-méthylaniline la procédure décrite par les exemples 30.a., 30.b. et 30.c. pour donner du 2-chloro-4-chlorométhyl-7-fluoro-6-méthyl3-quinoléinecarboxylate d'éthyle qui est traité selon la procédure de l'exemple 30.d., en utilisant la diméthylamine au lieu de la N-méthylpipérazine, puis réduit selon la méthode de l'exemple 30.e. en quinoléineméthanol correspondant. Ce dernier est couplé au composé (M) comme décrit dans l'étape 11.j. de l'exemple 11. Le produit de couplage résultant est cyclisé selon la procédure de l'étape 11.k. On obtient un solide beige clair, p.f. 184-190 C.
RMN-1H (DMSO): 0,86 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 2,26 (s, 6H); 2,5 (s, 3H); 3.05 (d, 1H); 3,48 (d, 1H); 3,98 (q, 2H); 5,28 (s, 2H); 5,46 (dd, 2H); 6,06 (s, 1H); 7,37 (s, 1H); 7,84 (d, 1H) ; 8,35 (d, 1H).
RMN-C13 (DMSO): 8,45 ; 15,50 ; 36,52 ; 45,59 ; 50,62 ; 57,36 ; 61,43 ; 73,33 99,66; 112,29; 112,50; 122,67; 124,71; 126,99; 127,20; 127,44; 129,08; 140,16; 144,80; 148,82; 152,71; 155,89; 159,22; 160,75; 172,07.
IR (KBr) : 1448; 1595 ; 1653 ; 1749; 2950; 3438.
Exemple 57 : 5-éthyl-12-diéthylaminométhyl-9-fluoro-4,5-dihydro 5-hydroxy-10-méthyl-1H oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoléine 3,15(4H,13H)-dione On applique à la 3-fluoro-4-méthylaniline la procédure décrite par les exemples 30.a., 30.b. et 30.c. pour donner du 2-chloro-4-chlorométhyl-7-fluoro-6-méthyl 3-quinoléinecarboxylate d'éthyle qui est traité selon la procédure de l'exemple 30.d., en utilisant la diéthylamine au lieu de la N-méthylpipérazine, puis réduit selon la méthode de l'exemple 30.e. en quinoléineméthanol correspondant. Ce dernier est couplé au composé (M) comme décrit dans l'étape 11.j. de l'exemple 11. Le produit de couplage résultant est cyclisé selon la procédure de l'étape 1 1 k. On obtient un solide beige clair, p.f. > 270 C.
Insectes Application Mortalité (%) A. oss il pulvérisation 83,3 Contact 93 D. melanogaster Topique o Milieu 100 S. granarius topique 0 S. littoralis topique o Milieu o T. urticae Adulte o Oeufs 41,7 L'extrait brut présente une efficacité importante contre Aphis gossypii auquel il cause une mortalité de 83,3 % après 24 heures, contre Drosophila melanogaster avec 100 % de mortalité lorsqu'vil est incorporé au milieu et 93 % par contact, ainsi que visà-vis des oeufs de T. urticae avec un pourcentage de 41,7 %. Aucun effet n'a été observé contre S. littoralis et S. granarius.
2) Activité de fractions de l'extrait brut.
L'extr (fractions 3, 4, 9 et 10) présentant des activités insecticides significatives ont été obtenues. Après chromatographie sur une colonne sephadex LH-20, une activité a été mise en évidence dans la fraction 4.
Cette fraction a alors été soumise à une HPLC préparative en phase inverse dont le chromatogramme est représenté à la figure 1. Chaque pic a été collecté manuellement, concentré puis repris dans 2 ml de solvant. Les pics actifs sont ceux dont les temps de rétention sont de 28,84 et 53,90 minutes. Les deux fractions ont alors été soumises à une identification et des tests d'activité plus précis contre trois insectes A. gossypii, M. persicae et D. melanogaster.
3) Identification et caractérisation de l'Excoecariatoxine et de la Wikstrotoxine D.
L'analyse par spectrométrie de masse (MS et MS-MS) et spectrométrie RMN a révélé que ces deux composés actifs sont des diterpènes avec un squelette de type daphnane répondant à la formule ci-dessous