INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
On exposera ce fonctionnement en prenant pour exemple un balayage horizontal de vecteurs de déplacement verticaux trai tés en parallèle par le module 12 à partir du vecteur [-(n + 1) ; -(n + 1)]. On notera toutefois que l'invention s'applique quelle que soit la direction traitée en parallèle par le module 12 et quel que soit l'ordre (balayage ou autre) dans lequel sont examinés les vecteurs de mouvement.
Dans l'exemple représenté aux figures 4 et 5, on commence par initialiser (bloc 40) la position horizontale x à la valeur -(n + 1). On effectue alors (bloc 41) la détermination en parallèle des distorsions A(x, y) pour toutes les positions verticales du macrobloc dans la fenêtre de référence au moyen du module 12, c'est-à-dire pour -(n + 1) > y > n.
Cette détermination est classique et on pourra se référer, par exemple, à la demande de brevet français n0 94/05338 dont le contenu est incorporé par référence. Toutefois, une caractéristique de la présente invention est de permettre, dans certains cas qui seront exposés par la suite en relation avec la figure 5, d'interrompre cette détermination pour passer à la position horizontale suivante (flèche 42).
Si le calcul de la distorsion du macrobloc complet est mené à son terme, on détermine au moyen du module 16 la distorsion minimale parmi les 2(n + 1) valeurs obtenues. Par exemple, on initialise un compteur de position verticale y (bloc 43) à la valeur -(n + 1) puis on compare A(x, y) par rapport à une valeur de distorsion minimale Amin (bloc 44). Si A(x, y) Amin doit avoir été initialisée. Pour ce faire, la valeur Amin est, de préférence, initialisée à la valeur de distorsion pour un déplacement nul calculée précédemment (bloc 31, figure 3).
On incrémente ensuite le compteur associé à la position horizontale (bloc 48) et on réitère les étapes 41, 43, 44, 45, 46, 47, 48 tant que toutes les positions horizontales n'ont pas été examinées, c'est-à-dire tant que x tt n (bloc 49). On dispose alors, dans le module 16, de coordonnées [x, y] correspondant au vecteur de déplacement V(k) pour lequel la distorsion A(k) = Amin (bloc 50).
Une caractéristique de la présente invention est de prévoir un arrêt (bloc 51) du traitement d'un macrobloc si la valeur Amin modifiée à l'étape 45 est inférieure ou égale à un seuil S1 prédéterminé. Ce seuil est, par exemple, fixé à une valeur pour laquelle l'économie de longueur de message à transmettre serait négligeable si l'on poursuivait la recherche pour trouver une distorsion encore inférieure. Un avantage de cette caractéristique est qu'elle interrompt le traitement dès que l'on a trouvé un vecteur de mouvement pour lequel la distorsion est acceptable. Toutefois, cette interruption 51 ne sera, de préférence, pas mise en oeuvre pour des phases d'estimation de mouvement à partir de macroblocs et de fenêtres de référence décimés.
En effet, dans un tel cas, les valeurs exploitées correspondent à des valeurs moyennes sur plusieurs pixels. Ainsi, cette étape 51 sera, dans 1' exemple représenté à la figure 3, mise en oeuvre à l'étape 39 et pas à l'étape 38.
L'avantage de cette caractéristique est particulièrement sensible dans un mode de mise en oeuvre où l'examen des vecteurs de mouvement est effectué dans un ordre croissant depuis un vecteur de mouvement nul. En effet, dans un tel cas, on arrête la détermination du mouvement dès que la distorsion est acceptable du point de vue de la longueur du message à transmettre et cet arrêt se produit pour un vecteur de mouvement minimal, c'està-dire dont le codage à longueur variable requiert une longueur de message minimale.
Une telle organisation de l'exploration de la fenêtre de référence est, par exemple, effectuée en modifiant la détermination des adresses de lecture par le transcodeur 26 (figure 1) pour les positions horizontales et en interprétant les résultats de distorsion dans le module 16 à partir de la position centrale du vecteur vertical de distorsion délivré par le module 12.
La figure 5 illustre une autre caractéristique de la présente invention mise en oeuvre pendant le calcul des distorsions pour différentes positions verticales avec une même position horizontale. Cette figure détaille le bloc 41 de la figure 4.
Pour chaque position horizontale x (bloc 51), on initialise un compteur de positions horizontales i (bloc 52) et un compteur de positions verticales j (bloc 53) des pixels du macrobloc MB(k, t) devant être lu dans la mémoire 4. On effectue alors, de façon classique, un calcul (bloc 54) de la distorsion A(x, y, j) prenant en compte, pour chaque opérateur du module 12, la valeur de distorsion A(x, y, j-1) calculée avec le pixel précédent du macrobloc courant, le pixel courant PC(i, j) et le pixel PC(x, y) de la fenêtre de référence associé à la position verticale j courante. L'adressage des mémoires 4 et 5 en lecture peut être effectué de façon classique et on obtient, à l'issue de l'étape 54, des valeurs intermédiaires A(x, y, j) de distorsion pour j - (n + 1) tt y tt j + n.
On effectue alors, selon la présente invention, une comparaison (bloc 55) de ces valeurs intermédiaires par rapport à la distorsion minimale Amin. Si toutes ces valeurs intermédiaires sont supérieures ou égales à Amin, on passe au calcul des distorsions pour le vecteur vertical suivant, c'est-à-dire pour la position horizontale x suivante, sans qu'il soit nécessaire de terminer le calcul des distorsions pour le vecteur vertical courant.
Un avantage de cette caractéristique de l'invention est qu'elle permet d'interrompre le calcul, effectué au moyen du module 12 pour une position horizontale donnée dans la fenêtre de référence, dès que tous les résultats individuels des opérateurs sont supérieurs à une valeur de distorsion minimale précédemment trouvée pour un autre vecteur de mouvement.
On a vu que la porte 3 des figures est une porte à
trajectoire "louvoyante-coulissante".
En se reportant aux figures 4 et 5, on remarque que dans les positions fermées et ouvertes, les vantaux 4 sont sensiblement étendus suivant la direction longitudinale L. Depuis sa position ouverte, chaque vantail 4 est
guidé suivant une flèche F ou F', vers sa position fermée.
On appelle bord avant 7 d'un vantail 4 celui qui est situé à l'avant du vantail dans le sens du mouvement de
fermeture F ou F'.
Il se trouve sensiblement au centre longitudinal
pour une porte 3 double.
Ensuite, le vantail 4 suit une trajectoire d'emboîtement dans la baie 5, proche d'un déplacement de
translation curviligne vers l'intérieur.
A l'issue de cet emboîtement, le vantail 4 est dans un plan parallèle aux directions d'élévation E et longitudinale L, entre un montant d'élévation 8 et un montant d'élévation 10 de la baie 5, opposés suivant la
Les vantaux 4 sont ainsi insérés dans la baie 5, en l'obturant. Un dispositif 11 dit opérateur de porte, est prévu
sur la porte 3 du véhicule ferroviaire 1.
Le dispositif 11 comporte notamment: - des moyens d'ancrage 12 destinés au montage de la porte 3 sur la paroi 2; - une poutre 17 de suspension des vantaux 4; - des moyens de guidage linéaire transversal 13 permettant de guider les vantaux 4 à leur emboîtement de fermeture et déboîtement d'ouverture; - des moyens 14 de guidage longitudinal des vantaux 4; - des moyens de motorisation des vantaux 4, sur les figures le moteur électrique 6; - des moyens 15 de verrouillage en rotation prévus pour permettre ou empêcher le déplacement transversal de la poutre de suspension 17; et des moyens 16 de transmission longitudinale de
Les séquences consensus -10 et -35 sont soulignées par un double trait. Le site d'initiation de la transcription est encadré.
La comparaison de la séquence en acides aminés de la protéine CspB avec des séquences disponibles dans les banques de données révèle une similitude avec les protéines connues de la famille CspA. La similitude la plus importante a été relevée avec, dans l'ordre la protéine CspL de Listeria monocytogenes (72W), les protéines CspB et CspC de Bacillus subtilis (60 et 69%) et les protéines CspA et CspC de Escherichia coli (60 et 62t respectivement).
EXEMPLE 3 : ANALYSE DE LA TRANSCRIPTION DU GENE cspB.
On sait que chez Escherichia col i, seulement certains des gènes de la famille CspA sont inductibles par le froid. Pour déterminer si le gène cspB de L. lactis appartenait à cette catégorie, le niveau de transcription de cspB à la suite d'un choc par le froid, ainsi que la taille du transcrit ont été étudiés.
Des bactéries Lactococcus lactis subsp.
cremoris AM2 ont été cultivées sur du milieu M17 en présence de lactose à 300C jusqu'à une densité optique (650 nm) de 1. La culture a alors été répartie en trois portions différentes qui ont été incubées à 150C, 100C ou 50C. Les ARN totaux de ces cultures ont été isolés au bout de 30 minutes, ou de 60 minutes selon le protocole décrit par ANBA et al. [J. Bact. 177, p. 3818-3823, (1995)].
Un transfert de Northern a été effectué, et la détection a été faite en utilisant une sonde oligonucléotidique complémentaire d'une région nonconservée de la séquence nucléotidique du gène cspB (séquence 236-254, figure 2).
A chaque température, un seul transcrit a été détecté, dont la taille est d'environ 0,28 kb. Ce transcrit est présent à 300C, et sa quantité augmente quand la température décroît, indiquant que cspB est inductible par le froid. Après 1 heure à 1SOC, on observe une multiplication par 10 de la transcription, tandis que pour les températures plus basses (100C ou 50C), l'induction après une heure est moins importante.
L'extrémité 5' des ARNm de cspB produits après le choc thermique à 150C a été cartographiée, et comparée à celle de l'ARNm de cspB produit à 300C. Deux sites d'initiation de la transcription, localisés à 86 pb et 85 pb en amont du codon d'initiation ont été trouvés dans les deux cas. Il apparaît donc que les régions -35 et -10 les plus en amont sont fonctionnelles dans les deux cas.
EXEMPLE 4 : EXPRESSION D'UN GENE RAPPORTEUR SOUS CONTROLE DU PROMOTEUR DU GENE cspB.
Un fragment de 200 pb, comprenant 182 pb en amont du cadre ouvert de lecture, et les 18 pb codant pour les 6 premiers résidus de la protéine CspB a été amplifié par PCR en utilisant les amorces suivantes Amorce P5 : I1 s'agit d'un oligonucléotide de 28 nucléotides de long, dont la séquence est la suivante 5' -TCCCCCGGGATAGTTGCTTTCCTAACAG-3' (la séquence soulignée correspond à un site SmaI) Amorce P6 Il s'agit d'un oligonucléotide de 27 nucléotides de long, dont la séquence est la suivante 5' -TCCCCCGGGTACAGTTCCTTTTGTCAT-3' (la séquence soulignée représente un site SmaI) L'amorce P5 correspond à la séquence 1-19 de la séquence nucléotidique représentée sur la figure 2 et l'amorce P6 correspond au complémentaire de la séquence 182-200 de la même séquence de la figure 2.
Le produit d'amplification a été traité par SmaI, et ligaturé dans le plasmide pMC1871 linéarisé avec SmaI.
Le mélange de ligation a été utilisé pour transformer des bactéries E. coli HB101 (supE44 hsdS20 recA13 ara-14 proA2 lacYl galK2 rpsL20 xyl-5 mtl-l) . Les transformants ont été sélectionnés sur plaque d'agar LB, contenant 10 Ag/ml de tétracycline, et de 5-bromo-4chloro-3-indolyl-ss-D-galactoside (X-gal). Les clones contenant la construction dans la bonne orientation donnent des colonies colorées en bleu clair.
Le produit de fusion du promoteur cspB et de la séquence codant pour la ss-galactosidase, dénommé cspBlacZ est un fragment de 3315 bp. Ce fragment a été excisé par digestion PstI, et cloné dans le site PstI d'un plasmide de lactocoque dénommé pILnew. Ce plasmide a été converti en plasmide à faible nombre de copies en retirant un fragment KpnI de 22 pb inséré à l'intérieur du gène copF, régulateur du nombre de copies du plasmide.
Le plasmide résultant, dénommé pTIL65, a été introduit par électroporation dans la souche dépourvue de plasmides L. lactis subsp. cremoris MG1363, pour produire la souche TIL146.
TIL146 a été cultivée en milieu M17 comprenant 0,5W de glucose et 10 zg/ml d'érythromycine à une température de 300C, jusqu'à une densité optique (650 nm) de 1. La culture a alors été répartie en 3 portions qui ont été transférées respectivement à des températures de 150C, 100C ou 50C comme décrit à l'exemple 3 ci-dessus.
Sur la figure 1, on a représenté le dispositif avec un châssis 1 0, déplaçable dans ce mode de réalisation grâce à un jeu de roues. Ce châssis supporte des moyens 1 2 de support et d'immobilisation d'une cordée 14 avec des coupelles 16, des doigts 18 portés par un bâti 20 et prévus pour coopérer par accrochage temporaire avec les bords de chacune des coupelles 16 de la cordée 14.
Le châssis supporte aussi des moyens 22 pour générer un mouvement relatif de translation entre le bâti 20 portant les doigts 18 et les moyens 12 de support et d'immobilisation.
Les moyens 1 2 de support et d'immobilisation des fourchettes 24 de support et d'immobilisation prévues pour être glissées entre certaines des coupelles 16 de la cordée.
Les moyens 22 pour générer un mouvement relatif de translation entre le bâti 20 portant les doigts 18 et les moyens 1 2 de support et d'immobilisation comprennent deux chaînes 26, parallèles, en boucle fermée qui sont tendues chacune entre deux paires de couronnes 28, 29, I'une 28 étant motrice, grâce à un motoréducteur qui n'est pas visible pour la clarté du dessin. Les couronnes d'une même paire sont solidaires en rotation l'une de l'autre.
Comme cela est encore plus visible sur la figure 3, le bâti 20 portant les doigts 18 est solidaire des chaînes 26 afin de suivre les déplacements desdites chaînes le long de la boucle.
Le bâti 20, dans le mode de réalisation particulier et préférentiel, est un anneau 30, muni d'une fente 32 pour laisser passer les fourchettes.
Ainsi que montré sur la figure 4, L'anneau 30 comprend des doigts 14 qui sont orientés radialement pour venir faire saillie dans l'espace intérieur de l'anneau.
Dans le mode particulier représenté, l'anneau porte deux jeux 34 et 36 de doigts, les doigts 14 du jeu 34 étant réglables en translation le long d'un axe radial grâce à des moyens 38 de réglage, en l'occurrence, une vis manoeuvrable manuellement, chaque doigt étant reçu à coulissement dans un trou 40, radial.
L'anneau du bâti 20 est monté libre en pivotement autour d'un axe 42, avec un débattement angulaire limité. Cet axe 42 est matérialisé par deux demi-arbres 44, solidaires de deux points diamétralement opposés de l'anneau 30, et orientés suivant un diamètre dudit anneau en sorte de permettre une auto-orientation de cet anneau par rapport à l'axe longitudinal de la cordée, comme cela sera expliqué par la suite, en détail, dans la description du fonctionnement.
Dans le mode de réalisation retenu, on constate que le dispositif comprend deux bâtis 20 supports de doigts, disposés à égale distance l'un de l'autre, les bâti étant équipés tous les deux des mêmes types de doigts, en même nombre et réglés en saillie de la même façon.
Le dispositif est complété par un bac 46 de récupération des naissains, situé en partie inférieure du châssis 10. Ce bac peut avantageusement être remplacé par un convoyeur à tapis si le débit ou les besoins l'exigent pour l'alimentation d'une ensacheuse par exemple.
Un tableau 48 de commande permet à l'opérateur de mettre en marche le dispositif et surtout de l'arrêter en cas de problème.
Un système 50 de lavage est également prévu sur ce dispositif. II comprend une alimentation 52 en eau, connectée à un ensemble de pompage de mer, généralement extérieur audit dispositif qui assure une aspersion dirigée de cette eau de mer vers les différents composants mobiles et vers la cordée.
Le fonctionnement du dispositif selon l'invention est maintenant décrit en regard des figures prises indifféremment en fonction de la meilleure lisibilité.
L'opérateur dépose une cordée à traiter sur les fourchettes 24 des moyens de support et d'immobilisation 12.
Cette cordée est donc fixe par rapport au bâti 10. L'opérateur met en marche les chaînes 26 équipées d'un bâti 20 au moins pour faire déplacer ce bâti le long de l'axe longitudinal de la cordée 14.
En outre, on peut aussi utiliser pour isoler les homologues des marqueurs de séquence exprimée (EST) identifiés par analogie avec le gène NIMl, tels que les marqueurs EST du riz décrits ci-dessus. Les marqueurs EST peuvent être particulièrement utiles pour isoler les homologues du NIMl à partir d'autres monocotylédones.
On peut aussi obtenir les homologues par une amplification en chaîne par polymérase PAR. Dans cette méthode, on procède à des comparaisons entre des homologues connus (par exemple le riz et Arabidopsis) . On utilise alors pour fabriquer des amorces pour amplification PCR des régions présentant une grande similitude ou identité entre les acides aminés et 1'ADN. Une fois qu'une région appropriée est identifiée, on prépare des amorces pour cette région, avec différentes substitutions sur la troisième position du codon. La réaction PCR est réalisée à partir d'ADNc ou d'ADN génomique dans différentes conditions standard. Quand une bande apparaît, on la clone, et/ou on la séquence pour déterminer s'il s'agit d'un homologue du NDMl.
Un niveau élevé d'expression du NIMl confère aux végétaux une résistance aux maladies La présente invention concerne aussi la production de plantes transgéniques qui expriment des niveaux du gène NIMl supérieurs à ceux du type sauvage, ou encore leurs variants fonctionnels et mutants, de sorte qu'ils présentent une résistance à un large spectre de maladie.
Dans une forme de réalisation préférée de l'invention, l'expression du gène NIMl correspond à un niveau qui est au moins deux fois supérieur au niveau d'expression du gène NIMl des végétaux de type sauvage, et qui de préférence est 10 fois supérieur au niveau d'expression du type sauvage. Le niveau élevé d'expression du gène NIMl simule les effets des composés inducteurs, en ce sens qu'il donne naissance à des végétaux présentant un phénotype d'immunité constitutive (CIM).
Plusieurs procédés sont décrits pour produire des végétaux qui surexpriment le gène NIMl et donc possèdent un phénotype CIM. Un premier procédé consiste à sélec tionner des plantes transformées qui ont un niveau élevé d'expression du NSMl, et donc un phénotype CIM en raison de l'effet du site d'insertion. Le Tableau 6 présente les résultats de l'essai de différents transformants pour ce qui est de leur résistance à une infection fongique.
Comme il ressort du tableau, un certain nombre de transformants présentent une prolifération fongique inférieure à la normale, et plusieurs d'entre eux ne présentent pas du tout de prolifération fongique visible. On prépare l'ARN à partir d'échantillons prélevés, et on l'analyse comme décrit dans Delaney et al., 1995. Les transferts sont hybridés sur la sonde génique PR-1 d'Arabidopsis par (Uknes et al., 1992). Trois lignées présentent une induction précoce de l'expression du gène du PR-1, en ce sens que l'ARNm du PR-1 est manifeste 24 ou 48 heures après le traitement fongique. Ces trois lignées présentent ellesaussi une résistance à l'infection fongique.
De plus, des procédés sont décrits, qui permettent de synthétiser des vecteurs de transformation de végétaux, comprenant un promoteur constitutif à activité végétale, par exemple le promoteur 35S du CaMV, lié par liaison opérationnelle à une région codante qui code une protéine NIM1 active. Des niveaux élevés de la protéine NIM1 active produisent le même effet de résistance aux maladies que l'induction chimique avec des produits chimiques inducteurs tels que le BTH, l'INA et le SA.
Le gène NlMl est un homologue de 1'IKBa Le gène NIMl est un constituant clé de la voie de la résistance systémique acquise (SAR) des végétaux (Ryals et al., 1996). Le gène NMI est associé à l'activation de la SAR par inducteurs chimiques et biologiques, et, conjointement à ces inducteurs, est nécessaire pour la SAR et l'expression du gène de la SAR. L'emplacement du gène NIMl est déterminé par une analyse de biologie moléculaire du génome de végétaux mutants dont on sait qu'ils portent le gène NIMl mutant, ce qui confère aux plants hôtes une sensibilité extrême à une large gamme de microorganismes pathogènes et les rend inaptes à répondre aux micro-organismes pathogènes et aux inducteurs chimiques de la SAR. Le gène NIMl de type sauvage d'Arabidopsis a été cartographié et séquencé (SEQ ID NO:2). Le gène NIMl de type sauvage produit (SEQ ID NO:3) est mis en jeu dans la cascade de transduction de signaux conduisant tant qu'à la SAR qu'à la résistance aux maladies gène-pourgène dans Arabidopsis (Ryals et al., 1997). Une surexpression recombinante de la forme sauvage du NIMl donne naissance à des végétaux ayant un phénotype d'immunité constitutive (CIM), et donc confère une résistance aux maladies aux végétaux transgéniques. Des quantités accrues de la protéine NIM1 active produisent le même effet de résistance aux maladies que l'induction chimique avec des produits chimiques inducteurs tels que le BTH, l'INA et le SA.
La séquence du gène NIMl (SEQ ID NO:2) est utilisée dans les recherches BLAST, et les appariements sont identifiés sur la base d'une homologie d'un domaine relativement bien conservé dans la séquence du gène NIMl, par rapport aux domaines ankyrine que l'on trouve dans un certain nombre de protéines telles que les spectrines, les ankyrines, le NF-KB et IKB (Michaely et Bennett, Trends Cell Biol. 2, 127-129 (1992)). Cependant, au-delà du motif ankyrine, une analyse classique par ordinateur ne détecte pas d'autres fortes homologies, notamment une homologie vis-à-vis de l'IKBa. Malgré les résultats négatifs des programmes informatiques, on procède à des contrôles visuels par paires entre la protéine NIM1 (SEQ ID NO:3) et 70 protéines connues contenant de l'ankyrine, et on observe une similitude marquée avec les éléments de la classe IKBa des régulateurs de transcription (Baeuerle et Baltimore 1996 ; Balwin 1996). Comme on le voit sur la Figure 9, la protéine NIM1 (SEQ ID NO:3) partage une homologie significative avec les protéines IKBa de la souris, du rat et du porc (respectivement SEQ ID NO:18, 19 et 20).
La NIM1 contient de nombreux domaines structuraux importants de l'IKBa sur toute la longueur de la protéine, y compris des domaines ankyrine (indiqués par le soulignement en tirets de la Figure 9), 2 sérines aminoterminales (acides aminés 55 et 59 de la NIM1), une paire de lysines (acides aminés 99 et 100 de la NIM1) et un site C-terminal acide. Globalement, la NIM1 et l'IKBa partagent une identité au niveau de 30 % des résidus, et des remplacements conservateurs au niveau de 50 % des résidus. Ainsi, il y a homologie entre l'IKB et la NIM1 sur l'ensemble des protéines, avec une similitude globale de 80 %.
L'une des voies de fonctionnement de la protéine IKBa dans la transduction des signaux consiste à la fixer au facteur de transcription cytosolique NF-KB et à l'empêcher de pénétrer dans le noyau et de modifier la transcription des gènes cibles (Baeuerle et Baltimore, 1996 ; Baldwin, 1996). Les gènes cibles du NF-KB régulent (activent ou inhibent) plusieurs processus cellulaires, notamment les réponses antivirale, antimicrobienne et de mort cellulaire (Baeuerle et Baltimore, 1996). Quand la voie de transduction des signaux est activée, 1'IKBa est phosphorylé au niveau de deux résidus de sérine (acides aminés 32 et 36 de l'IKBa de la souris). Cela programme l'ubiquîtinisation au niveau d'une lysine double (acides aminés 21 et 22) de l'IKBa de la souris). Après ubiquitinisation, le complexe NF-KB/IKB est envoyé dans le protéosome, où l'IKBa se dégrade, et le NF-KB est libéré vers le noyau.
Les résidus de sérine phosphorylés, importants dans la fonction de la protéine I'cBa, sont conservés dans le NIM1, à l'intérieur d'un grand bloc contigu de séquences conservées, entre les acides aminés 35 et 84 (Figure 9).