INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Les résultats sont exprimés en moyenne géométrique de titres calculée à partir des différents titres obtenus à partir de chaque souris de chaque groupe.
Il - Résultats a) Désassemblage - réassemblage des VLPs de papillomavirus Les VLPs d'HPV-16 ont été produites dans des cellules d'insectes Sf21 en utilisant un baculovirus recombinant.
Les VLPs ont été purifiées par ultracentrifugation en sucrose, puis en gradient de CsCl (Le Cann et al., 1994).
Les fractions du gradient de CsCl contenant les VLPs ont été regroupées, diluées dans du PBS puis ultracentrifugées.
Le culot est ensuite resuspendu dans un tampon contenant EGTA et DTT et incubé à température ambiante pendant 30 mn. Dans ces conditions, les VLPs sont complètement désagrégées en structures ressemblant aux capsomères.
L'ADN plasmidique est alors ajouté et la préparation est diluée dans un tampon contenant une forte concentration en calcium et du DMSO 1 % de manière à reformer les VLPs. Environ 75 % des protéines L1 semblent se réassembler en VLPs dans ces conditions. b) Transfert in vitro d'ADN plasmidique par l'intermediaire des VLPs de papillomavirus Les cellules Hela ont été étudiées pour leur sensibilité aux VLPspGreenLantern. La fluorescence de la protéine GFP, produite dans les cellules transfectées a été analysée par cytométrie en flux. 70 % des cellules Hela transfectées par le plasmide pGreenLantern encapsidé dans les VLPs sont fluorescentes (Tableau 1).
En comparaison, aucune cellule fluorescente n'a été trouvée lorsque les cellules sont incubées avec l'ADN plasmidique seul, ou avec le plasmide et la protéine L1 assemblée en capsomères, et 40 % des cellules sont fluorescentes lorsqu'elles sont traitées avec le plasmide pGreenLantern et la lipofectamine8.
La spécificité du transfert par les VLPs a de plus été démontrée par le fait que des anticorps anti-VLPs d'HPV-16 bloquent complétement le transfert de gènes et que le traitement par la Benzonase n'affecte pas le transfert. Les capsomères libres ne peuvent pas agir en tant que vecteurs pour le transfert de gènes. De plus, aucun transfert de gène n'a pu être identifié avec 0,5 ,ug de VLPs-pGreenLantern lorsque les cellules Hela ont été incubées avec 10 ,ug (excès de 20 fois) de VLPs d'HPV-16 vides (Tableau 1).
Tableau 1: Transfert du gène de la GFP par les pseudo-particules virales de VPH-16 mise en évidence et spécificité
Cellules Hela traitées avec % cellules fluorescentes 5 ,ag de VLP-pGreenLantern 70 % 5 ,ug de VLP-pGreenLantern + Benzonasee 70 % 5 yg de VLP-pGreenLantern + AC anti-VLPs d'HPV-16 0 % 5 yg de capsomères + pGreenLantern 0 % pGreenLantern + LipofectamineB 40 % pGreenLantern 0% Le transfert de l'ADN de pCMV-ssgal a également été étudié.
Les techniques et méthodes de sélection sont connues, et on pourra se référer par exemple à Welsh J.R., Fundamentals of Plant Genetics and Breeding, John Wiley & Sons, NY (1981) ; Crop Breeding, Wood D.R. (Ed.) American Society of Agronomy Madison, Wisconsin (1983) ; Mayo O., The Theory of Plant Breeding, Second Edition, Clarendon Press, Oxford (1987) ; Singh D.P., Breeding for Resistance to Disease and Insect Pests, Springer-Verlag, NY (1986) ; and Wricke and Weber, Quantitative Genetics and Selection Plant Breeding, Walter de Gruyter and Co., Berlin (1986).
Propagation de propriétés génétiques, introduites dans des graines transgéniques et des plantes transgéni ques, et maintien dans les plantes descendantes Les propriétés génétiques introduites par génie génétique dans des graines et plantes transgéniques, décrites ci-dessus, sont transmises par reproduction sexuées ou croissance végétative, et peuvent donc se maintenir et se propager chez les descendants. D'une manière générale, ce maintien et cette propagation utilisent des méthodes agricoles connues, développées pour s'adapter aux besoins particuliers tels que le travail du sol, l'ensemencement ou la récolte. On peut aussi appliquer des procédés spécialisés, tels que l'hydroponique ou les technologies en serre. Comme la plante en cours de croissance est vulnérable à une attaque et à des lésions provoquées par les insectes ou les infections, ainsi qu'à la concurrence par les mauvaises herbes, des mesures sont prises pour maîtriser les mauvaises herbes, les maladies des végétaux, les insectes, les nématodes et d'autres conditions indésirables, dans le but d'améliorer le rendement. Elles comprennent les mesures mécaniques telles que le travail du sol ou l'élimination des mauvaises herbes et des plantes infectées, ainsi que l'application de produits phytosanitaires tels que les herbicides, les fongicides, les gaméticides, les nématicides, les régulateurs de croissance, les agents de mûrissement et les insecticides.
L'utilisation des propriétés génétiques avantageuses des plantes et graines transgéniques selon l'invention peut en outre être mise en oeuvre dans la sélection végétale, dont l'objectif est la mise au point de plantes ayant des propriétés améliorées, telles que la tolérance vis-à-vis des ravageurs, des herbicides ou des contraintes, une meilleure valeur nutritionnelle, un rendement accru, ou une structure améliorée, conduisant à des pertes plus faibles dues à la verse ou à la rupture. Les différentes étapes de la sélection sont caractérisées par une intervention humaine parfaitement définie, comme la sélection des lignées à croiser, l'orientation de la pollination des lignées parentales, ou la sélection de descendants appropriés. Selon les propriétés souhaitées, on utilisera différentes techniques de sélection. Les techniques appropriées sont bien connues et comprennent mais sans limitation l'hybridation, l'inbreeding, le recroisement, la sélection multilignée, le mélange des variétés, l'hybridation interspécifique, les techniques aneuploïdes, etc. Les techniques d'hybridation comprennent aussi la stérilisation des plantes pour donner des plantes stériles mâles ou femelles par des moyens mécaniques, chimiques ou biochimiques. La pollination croisée d'une plante stérile mâle avec le pollen d'une lignée différente garantit que le génome de la plante, stérile mâle mais stérile femelle, va présenter uniformément les propriétés des deux lignées parentales. Ainsi, les semences et plantes transgéniques selon la présente invention peuvent être utilisées pour la sélection de lignées végétales améliorées, qui par exemple vont augmenter le rendement des procédés classiques tels qu'un traitement par un herbicide ou un pesticide, ou encore vont permettre d'omettre ces techniques, du fait de leurs propriétés génétiques modifiées. Ou bien encore, on pourra obtenir de nouvelles cultures, présentant une tolérance améliorée aux contraintes, et qui, en raison de leur "équipement" génétique optimisé, donneront un produit récolté de qualité meilleure que les produits qui n'ont pas été à même de supporter les conditions indésirables comparables de développement.
Dans la production des semences, la qualité de la germination et l'uniformité des semences représentent des caractéristiques essentielles des produits, tandis que la qualité de germination et l'uniformité des semences récoltées et commercialisées par l'exploitant agricole ne présente pas d'importance. Comme il est difficile de maintenir une plante exempte des semences d'autres plantes et mauvaises herbes, et pour maîtriser les maladies transmises par les semences et produire des semences présentant une bonne germination, des pratiques de production de semences très étendues et parfaitement définies ont été mises au point par les producteurs de semences, qui ont acquis l'expérience nécessaire dans le domaine de la croissance, du conditionnement et de la commercialisation des semences pures. Ainsi, il est de pratique courante pour les agriculteurs d'acheter des semences certifiées, satisfaisant à des normes de qualité spécifiques, au lieu d'utiliser des semences récoltées dans leurs propres cultures. Le matériel de propagation qu'il faut utiliser en tant que semence est habituellement traité avec un enrobage protecteur comprenant des herbicides, des insecticides, des fongicides, des bactéricides, des nématicides, des molluscicides ou leurs mélanges. Les enrobages protecteurs habituellement utilisés comprennent des composés tels que le captan, la carboxine, le thirame (TMTD@), le méthalaxyl (Apron@), et le pirimiphos-méthyl (Actellic@). Si cela se révèle souhaitable, ces composés sont formulés avec d'autres supports, tensioactifs ou adjuvants favorisant l'application, couramment utlisés dans la technique de la formulation pour assurer une protection contre les dommages provoqués par les ravageurs bactériens, fongiques ou animaux. Les enrobages protecteurs peuvent être appliqués par imprégnation, sur le matériel de propagation, d'une formulation liquide, ou par enrobage à l'aide d'une formulation combinée humide ou sèche. On peut aussi faire appel à d'autres techniques d'application, par exemple le traitement direct des bourgeons ou du fruit.
Un autre aspect de la présente invention consiste à mettre à disposition de nouvelles méthodes agricoles, telles que les méthodes présentées à titre d'exemples cidessus, qui sont caractérisées par l'utilisation de plantes transgéniques, de matériel végétal transgénique ou de semences transgéniques selon la présente invention.
Les semences peuvent être mises à disposition dans un sac, un récipient ou un contenant, constitué d'un matériau d'emballage approprié, le sac ou le contenant pouvant être fermés pour y enfermer les semences. Le sac, le contenant ou le récipient peuvent être conçus pour une conservation à court terme ou à long terme, ou les deux, des semences. On peut citer à titre d'exemples de matériaux d'emballage appropriés le papier, tel que le papier kraft, les plastiques rigides ou pliables, ou d'autres matériaux polymères, le verre ou les métaux. Il est souhaitable que le sac, le contenant ou le récipient soit constitué de plusieurs couches de matériaux d'emballage, d'un type identique ou de types différents. Dans une forme de réalisation, le sac, le contenant ou le récipient est prévu de façon à exclure ou limiter que l'eau ou l'humidité n'entre en contact avec les semences. Dans un exemple, le sac, le récipient ou le contenant est hermétiquement fermé, par exemple thermoscellé, pour empêcher la pénétration de l'eau ou de l'humidité. Dans une autre forme de réalisation, des matériaux absorbant l'eau sont disposés entre des couches du matériau d'emballage, ou contigus à ces couches. Dans encore une autre forme de réalisation, le sac, le contenant ou le récipient, ou encore le matériau d'emballage dont ils sont constitués, sont traités pour limiter, supprimer ou prévenir les maladies, les contaminations ou d'autres effets indésirables du stockage ou du transport des semences. Un exemple d'un tel traitement est représenté par la stérilisation, par exemple par un moyen chimique ou par exposition à un rayonnement. La présente invention englobe un sac du commerce comprenant des semences d'une plante transgénique comprenant au moins une forme modifiée d'une protéine NIM1, ou encore une protéine NIM1 qui est exprimée dans ladite plante transformée à des niveaux plus élevés que dans une plante de type sauvage, en même temps qu'un support approprié, avec des instructions portées sur l'étiquette concernant leur utilisation, de façon à conférer aux végétaux une résistance à un large spectre de maladies.
Résistance aux maladies L'évaluation de la résistance aux maladies est réalisée par des méthodes connues dans la technique. Par exemple, il convient de se référer à Uknes et al. (1993), Molecular Plant Microbe Interaction 6 : 680-685 ; Gorlach et al. (1996) Plant Cell 8 : 629-643 ; Alexander et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 : 7327-7331.
A. Essai de résistance à Phytophthora parasitaca (jambe noire) Les essais de résistance à Phytophthora parasitica, le micro-organisme qui est à l'origine de la jambe noire, sont réalisés sur des plants de 6 semaines, cultivés comme décrit dans Alexander et al., Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 90 : 7327-7331. Les plants sont arrosés, jusqu'à égouttage, puis on les ensemence en appliquant 10 ml d'une suspension de sporanges (300 sporanges par ml) sur le sol. Les plants inoculés sont conservés dans une serre maintenue à une température de 23 à 25"C pendant le jour et de 20 à 220C pendant la nuit. Les essais utilisent en tant que barème de flétrissement les notes suivantes : 0 = aucun symptôme ; 1 = aucun symptôme ; 1 = quelques signes de flétrissement, avec turgescence réduite ; 2 = symptômes nets de flétrissement, mais ni putréfaction, ni rabougrissement ; 3 = symptômes nets de flétrissement avec rabougrissement, mais aucun signe de pourriture de la tige ; 4 = fort flétrissement, avec une pourriture visible de la tige et quelques dommages au système radi culaire ; 5 = comme 4, mais les plants sont proches de la mort ou sont morts, avec une forte réduction du système radiculaire. Tous les essais sont notés à l'aveugle, sur des plants disposés selon un modèle aléatoire.
B. Essai de résistance à Pseudomonas syringae On injecte la souche N" 551 de Pseudomonas syringae pv. tabaci dans les deux feuilles inférieures de plusieurs plants de 6 à 7 semaines à une concentration de 106 ou 3.106/ml dans du H20. A chaque instant, on évalue six plants individuels. Les plants infectés par Pseudomonas tabaci sont notés sur une échelle de gravité de la maladie à 5 points, à savoir : 5 = 100 % de mortalité des tissus, 0 = aucun symptôme. On procède à un test t (LSD) sur les évaluations effectuées chaque jour, et les regroupements sont indiqués après la note moyenne. Les valeurs qui suivent la même lettre le jour de l'évaluation ne présentent pas une différence statistiquement significative.
C. Essai de résistance à Cercospora nicotianae On pulvérise jusqu'à ruissellement imminent sur la surface des feuilles une suspension de spores de Cercospora nicotianae (ATCC NO 18366) (100 000 à 150 000 spores par ml). Les plants sont maintenus dans une atmosphère à 100 % d'humidité pendant 5 jours. Puis les plants reçoivent un brouillard d'eau 5 à 10 fois par jour. A chaque instant, on évalue 6 plants individuels. Cercospora nicotianae est noté en pourcentage d'aire foliaire présentant les symptômes de base de la maladie. On procède à un test t (LSD) sur les évaluations effectuées chaque jour, et les regroupements sont indiqués après la note moyenne. Les valeurs qui suivent la même lettre le jour de l'évaluation ne présentent pas une différence statistiquement significative.
D. Essai de résistance à Peronospora parasitica On procède à des essais portant sur la résistance à Peronospora parasitica sur des plants, comme décrit dans Uknes et al. (1993). Les plants reçoivent une inoculation par un isolat compatible de P. parasitica par pulvérisation d'une suspension de conidies (environ 5.104 spores par ml). Les plants inoculés sont incubés dans des conditions humides à 17"C dans une chambre de croissance avec un cycle de 14 heures de jour et 10 heures de nuit. On étudie la présence de conidiophores en examinant les plants 3 à 14 et de préférence 7 à 12 jours après l'inoculation. En outre, plusieurs plants de chaque traitement sont sélectionnés au hasard et colorés avec du bleu de lactophénol-trypan (Keogh et al., Trans. Br. Mycol. Soc.
74 : 329-333 (1980)) pour permettre un examen au microscope.
L'invention sera mieux comprise en regard des exemples ci-après et des dessins annexés, sur lesquels La Figure 1 présente l'effet d'inducteurs chimiques sur l'induction de l'expression du gène de la SAR dans des plantes de type sauvage et niml. L'induction chimique de gènes de la SAR est diminuée dans les plantes niml. On applique de l'eau, du SA, de 1'INA ou du BTH aux plantes de type sauvage (WT) et niml. Au bout de 3 jours, on prépare un ARN à partir de ces plantes, et on en détermine l'expression du PR-1, du PR-2 et du PR-5.
La Figure 2 présente l'expression du gène du PR-1 dans des plantes WS-O et niml infectées par un microorganisme pathogène. L'induction du micro-organisme pathogène du PR-1 diminue dans les plantes niml. Des plantes de type sauvage (WT) et niml reçoivent par pulvérisation une inoculation par la race Emwa de P. parasitica. Des échantillons sont recueillis 1 dans des mutants nimi et des plantes de type sauvage après infection par un micro-organisme pathogène ou traitement chimique. Les plantes contenant les allèles niml à savoir niml-l, -2, -3, -4, -5 et -6, et les plantes Ws-O (Ws) sont traitées avec de l'eau (C), du SA, de 1'INA ou du BTH 3 jours avant isolement de 1'ARN. L'échantillon Emwa est constitué d'un ARN isolé des plantes 14 jours après l'inoculation par l'isolat Emwa de P. parasitica.
Les transferts sont hybridés par utilisation en tant que sonde d'un ADNc du PR-1 d'Arabidopsis (Uknes et al., 1992).
L'ouverture de l'interrupteur de flux 138 est symbolisée par un signal FLUX OFF et, la fermeture de l'interrupteur de flux 138, par un signal FLUX ON.
Le moyen de synchronisation de trame et de contrôle de flux 139 est illustré par l'organigramme de la figure 31. Le moyen de synchronisation de trame et de contrôle de flux 139 est capable d'extraire les symboles de protocole, les trames correctement transmises (opération 271), tout en éliminant les répétitions, opération 272, et de commander le fonctionnement de l'interrupteur de flux 138, conformément aux règles suivantes - sur réception d'une trame de type SPI, premiers symboles de protocole, la fermeture de l'interrupteur de flux 138 est commandée, opération 274, symbolisée par le signal FLUX~ON et - I'ouverture de l'interrupteur de flux 138 est commandée, opération 282, symbolisée par le signal FLUX OFF sur réception d'une trame de type DCN, deuxièmes symboles de protocole.
Lorsque l'interrupteur de flux 138 est en position fermée, la trame reçue est stockée dans la zone mémoire FIFO~BLOC 503, opération 278, si il s'agit d'une trame de type FCD (indiquant des symboles d'information primaire) ou TAL (indiquant des symboles d'adresse), et sinon dans la zone mémoire FIFOIRX 506, opération 280.
Le fonctionnement du moyen de contrôle de communication en réception 137 se poursuit chaque fois que FIFO TRX 506 contient au moins un élément à traiter. Le moyen de contrôle de communication en réception 137 vérifie le bon séquencement des différentes étapes de la méthode de transmission des données pour en extraire l'information diffusée, stockée dans les zones mémoire FIFO MSG 505 ou FIFO~BLOC 503.
Le moyen de sélection des documents 134 est illustré par les organigrammes des figures 32 et 33. Il permet, en particulier, de ne transmettre au moyen de décodage 630, que les symboles d'information primaire qui sont associés à une adresse présente dans l'une des mémoires 492 et 493. Le fonctionnement du moyen de sélection des documents 134 se poursuit chaque fois que FIFO~MSG 505 contient au moins un élément à traiter. Le moyen de sélection des documents 134 vérifie l'accès à l'information diffusée, stockée dans les zones de mémoire FIFO MSG 505 ou FIFO~BLOC 503 et, en conséquence, stocke, d'une part, les commandes reçues dans la zone mémoire FIFO~CMD 508 et, d'autre part, le contrôle des pages reçues dans FIFO~DATA 507 et, sinon, ouvre l'interrupteur de flux 138, opération 319, symbolisée par le signal FLUX~OFF. Le moyen de sélection des documents 134 active un moyen de décodage 630 par l'intermédiaire du signal DEC~RQ, signal qui symbolise l'appel à la mise en oeuvre du moyen de décodage 630 afin de restituer le contenu des trames de type TAL corrompues lors de la transmission parmi l'ensemble des trames de type TAL, reçues et stockées dans la zone mémoire FIFO~BLOC 503.
On a alors les 2 règles de calcul suivantes - La règle 614 pour l'addition est: si la valeur i est égale à '255' alors la valeur k est dans tous les cas égale à '255', si la valeur j est égale à '255' alors la valeur k est dans tous les cas égale à '255', et sinon si la somme de la valeur i et de la valeur j est strictement inférieure à 255 alors la valeur k est égale à la somme de la valeur i et de la valeur j, Si la somme de la valeur i et de la valeur j est supérieure ou égale à 255 alors la valeur k est égale à la somme de la valeur i et de la valeur j à laquelle on retranche '255', - La règle 614 pour la soustraction est: si la valeur i est égale à '255' alors la valeur k est dans tous les cas égale à '255', si la valeur j est égale à '255' alors la valeur k est dans tous les cas invalide, et sinon si la valeur i est supérieure ou égale à la valeur j alors la valeur kest égale à la différence de la valeur iet de la valeurj, si la valeur i est strictement inférieure à la valeur j alors la valeur k est égale à '255' auquel on retranche la différence de la valeur i et de la valeur j, Description théorique du système Le procédé de correction d'erreur à redondance variable comporte les différentes étapes à mettre en oeuvre dans le système de correction d'erreur, moyen de codage / décodage, fonctionnant indifféremment au décodage, quelle que soit la redondance ou seuil de correction d'erreur définit pour le codage.
La mise en oeuvre d'un système de correction décrit ci-dessous et appelé dans le reste de la description "CID" est basée, d'une part, sur la théorie mathématique des corps de Galois, bien connu de l'homme du métier, et plus particulièrement ici, sur le corps GF(28) et ses opérations d'addition et de multiplication associées, les 256 éléments du corps pouvant être représentés sous leur forme binaire ou sous leur forme logarithmique équivalente, et, d'autre part, sur la manipulation d'une matrice de parité de dimension n x M, de type Vandermonde, bien connue de l'homme du métier. Le contenu de cette matrice de parité H, est explicité ci-dessous, avec une représentation logarithmique de ses éléments.
Rappelons brièvement les principes théoriques de base, bien connus de l'homme du métier: Principe de codage: - soit U,, le vecteur représentant les k symboles d'information primaire de la colonne i du bloc de données, - soit W,, le vecteur représentant les n-k symboles d'information de redondance de la colonne i du bloc de données. On a n-k Ecrivons la matrice Hk comme étant la juxtaposition de deux matrices H, et H,, où H1 représente les k premières colonne de Hk et H,, ses n-k dernières colonnes. On peut alors représenter la redondance de la manière suivante: W1T =-H1'-1.H1.U1T où W,' représente la transposée du vecteur W, et U, représente la transposée du vecteur U1.
Principe de décodage: - soit C,, le vecteur représentant l'ensemble des n symboles d'information de la colonne i du bloc de données, les symboles non correctement reçus ayant étant mis à zéro, leur position ayant été repérée lors de la réception du bloc de données, - soit R l'ensemble des IRI positions effacées préalablement repérées, - soit H la matrice construite à partir des IR( premières lignes de la matrice II, - soit H2 la sous-matrice de H contenant les IRl R colonnes selon la position des symboles effacés repérée dans l'ensemble R et - soit T, le vecteur représentant l'ensemble des R symboles d'information correspondant aux positions effacées.
On peut ainsi écrire: où 7;' représente la transposée du vecteur 25 et C', représente la transposée du vecteur C,.
L'intérêt de cette méthode repose sur la souplesse de l'algorithme d'inversion d'une matrice de type Vandermonde dont on rappelle ici quelques grands principes mis en oeuvre ici: - soit P une matrice de Vandermonde dont la représentation est:
Représentons (P)-1 de la manière suivante :
La Figure 4 est une coupe transversale, schématique, d'une fente au droit de laquelle est fixée un couvre-joint l'aide d'un système de fixation selon l'invention.
La Figure 5 montre une variante du système de fixation pour une fente située dans un angle.
La Figure 6 est une coupe transversale d'un couvre-joint selon l'invention.
La Figure 7, enfin, est une vue en perspective d'une partie d'un couvre-joint selon la Figure 6.
En se reportant aux dessins, notamment a la Figure 4, on peut voir un système de fixation F d'un objet constitué par un couvre-joint 1 au droit d'une fente 2 constituant, par exemple, un joint de dilatation.
Cette fente 2 est limitée par deux parois 3, 4 sensiblement parallèles.
Le système F comprend un dispositif d'attache A formé par une lame 5 en matière élastique, par exemple métallique, avantageusement en acier inoxydable.