INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
A. Raskin, G. Diaz, K Joho, W. T. McAllister, J. Mol. Biol. 228, 506 (1992)).
La T7 ARN polymérase a été cristallisée et sa structure déterminée à une résolution de 3,3 Â (R. Sousa, Y. J. Chung, J. P. Rose, B. -C. Wang, Nature 364, 593 (1993)). A partir de cette étude structurale, des alignements de séquences (K. E. Joho, L. B. Gross, N. J.
McGraw, C. Raskin, W. T. McAllister, J. Mol. Biol. 215, 31 (1990), S. Mungat B. M. Steinberg, L. B. Taichman, J. Miro. 66, 3220 (1992), W. T. McAllister, C. A. Raskin, Molec. Microbiol. 10, 1 (1993)) et des études de mutagenèse (D. Patra, E. M. Lafer, R. Sousa, J. Mol.
Biol. 224, 307 (1992), L. Gross, W-J. Chen, W. T. McAllister, J. Mol. Biol. 228, 1(1992)), il a été possible de corréler les éléments fonctionnels de l'enzyme T7 aux éléments structuraux. La T7 ARN polymérase peut être divisée en deux domaines fonctionnels: un domaine de reconnaissance du promoteur et un domaine catalytique (R. Sousa, Y. J. Chung, J. P. Rose, B. -C.
Wang, Nature 364, 593 (1993), W. T. McAllister, Cell. Molec. Biol. Res. 39, 385 (1993)).
L'asparagine 748 a été montrée comme interagissant avec les nucléotides - 10 et -11 dans la séquence promoteur, une interaction montrée comme responsable de la spécificité de promoteur (C.A. Raskin, G. Diaz, K. Joho, W.T. McAllister, J. Mol. Biol. 228, 506 (1922)). ll a été évoqué la possibilité qu'une interaction de type sigma entre la T7 polymérase et son promoteur puisse exister dans le système du bacténophage. En effet, une séquence de type sigma, correspondant à la région 2.4 de sigma, i.e. la région de sigma interagissant avec la "Pribnow box" ( séquence TATAATG reconnue par le facteur de transcription sigma 70 d'E. coli) (C. Waldburger, T. Gardella, R. Wong, M.M.Susskind, J Mol. Biol. 215, 267 (1990); D.A. Siegele, J.C. Hu, W.A. Walter, C.A. Gloses, J. Mol. Biol. 206, 591 (1989)), existe dans la région N-terminal de la T7 ARN polymérase entre les acides aminés 137 et 157 (L. Gross, W J. Chen, W.T. McAUister, J. Mol. Biol. 228, 1 (1992)). D'autre part, bien qu'aucune fonction n'ait pu lui être attribuée, la région 230 à 250 présente des homologies de séquence avec le répresseur X de E. coli (McGraw, N.J., Bailey, J.N., Cleaves, G.R., Dembinski, D.R., Gocke, C.R., Joliffe, L.K., MacWright, R.S. and McAllister, W.T. Nucleic Acids Res. 13, 6753 (1985)).
Le domaine catalytique consiste en une poche résultant de la mise à proximité de plusieurs régions dispersées sur la structure primaire (R Sousa, Y.J. Chung, J.P. Rose, B. C. Wang, Nature 364, 593 (1993), W.T. McAl1ister, C.A. Raskin, Molec. Microbiol. 10, 1 (1993); D. Moras, Nature 364, 572 (1993)). Cette poche contient notamment plusieurs motifs conservés parmi lesquels les motifs A et C sont les mieux conservés chez les polymérases (Poch, O., Sauvaget, I., Delarue, M. and Tordo, N. EMBO J. 8, 3867 (1989); Delarue, M., Poch, O., Tordo, N. and Moras, D. Protein Engineering 3, 461 (1990); W.T. McAllister, C.A. Raskin, Molec. Microbiol. 10, 1 (1993)). Un troisième mot, le motif B, est conservé chez les ARN et ADN polymérases ADN dépendantes, tandis qu'un motif B' différent (aussi bien pour la séquence que pour la structure apparente) existe chez les ARN et ADN polymérases ADN dépendantes (Poch, O., Sauvaget, I., Delarue, M. and Tordo, N. EMBO J. 8, 3867 (1989); Delarue, M., Poch, O., Tordo, N. and Moras, D. Protein Engineering 3, 461 (1990); L.A. Kohlstaedt, J. Wang, J.M. Friedman, P.A. Rice, T.A. Steitz, Science 256, 1783 (1992); W.T. McAllister, C.A. Raskin, Molec. Microbiol. 10, 1(1993)).
La présente invention repose sur la découverte que certaines ARN polymérases ADN-dépendantes mutées sont capables, à la différence de l'enzyme sauvage correspondante, de transcrire un ARN simple brin en présence d'un promoteur ADN bicaténaire et/ou d'effectuer l'élongation d'amorces de taille adéquate sur une matrice ARN en l'absence de promoteur. De plus, ces enzymes mutantes sont peu capables ou incapables (i) de transcrire de l'ADN simple ou double brin en présence d'un promoteur ADN bicaténaire, et (11) effectuer l'élongation d'amorces sur matrice ADN. Elles sont donc préférentiellement ou strictement ARNdépendantes.
L'invention a donc pour objet une ARN polymérase capable de transcrire un segment polynucléotidique d'intérêt de séquence quelconque contenu dans une matrice polynucléotidique, en synthétisant, en présence de ladite matrice, un produit de transcription contenant une séquence d'ARN complémentaire de la séquence dudit segment polynucléotidique d'intérêt, caractérisée par le fait qu'elle est capable de synthétiser ledit produit de transcription avec un meilleur rendement lorsque ladite séquence d'intérêt contenue dans la matrice est constituée d'ARN que lorsque ladite séquence d'intérêt contenue dans la matrice est constituée d'ADN.
Invention a notamment pour objet une ARN polymérase telle que définie cidessus, caractérisée par le fait que le rapport, exprimé en %, du rendement en produit de transcription de la matrice ARN au rendement en produit de transcription de la matrice ADN est supérieur à 70 %, notamment supérieur à 85 %, et en particulier supérieur à 95 %.
Dans la présente demande, le terme "transcrire" désigne l'action de synthétiser un brin d'ARN en présence d'une matrice polynucléotidique et de ribonucléosides triphosphates, dans un milieu réactionnel approprié et dans des conditions permettant à l'activité catalytique de l'ARN polymérase utilisée de s'exercer. Les conditions (autres que celles concernant la nature de la matrice polynucléotidique) qui conviennent pour l'activité catalytique des ARN polymérases de l'invention sont généralement les mêmes que celles qui conviennent pour l'enzyme sauvage dont elles délivent, et ces conditions peuvent, le cas échéant être déterminées par de simples expériences de routine. Les termes "transcrire" et "transcription" font plus précisément référence à la synthèse d'un brin d'ARN complémentaire d'une matrice polynucléotidique présente dans le milieu réactionnel. La transcription peut être effectués sous la dépendance d'un promoteur qui peut être le promoteur naturel de l'ARN polymérase sauvage dont dérive l'ARN polymérase mutée, ou un promoteur modifié; voir par exemple le brevet FR-2.714.062. Le promoteur, comme cela est connu, est situé, sur la matrice, en amont de la séquence à transcrire. La séquence d'intérêt peut être une séquence commençant au site d'initiation de la transcription, pour le promoteur considéré, ou bien elle peut être située en aval de ce site d'initiation.
La transcription peut également être effectuée sans promoteur, par élongation d'une amorce hybridée sur la matrice, avec synthèse d'un brin d'ARN complémentaire de la matrice.
Dans la définition de l'ARN polymérase de l'invention donnée ci-dessus, on appelle "produit de transcription" le brin contenant l'ARN néosynthétisé, ce dernier contenant la séquence attendue.
Le "rendement" de la transcription est le rapport molaire de la quantité de produit de transcription à la quantité de matrice polynucléotidique présente à l'origine. Ce rendement peut être facilement déterminé par l'expérience, en introduisant dans le milieu réactionnel une quantité déterminée de la matrice polynucléotidique. Pour la comparaison des rendements obtenus avec une matrice d'ADN et une matrice d'ARN, il faut évidemment que les conditions autres que celles de la nature de la matrice soient comparables.
L'ARN polymérase de l'invention est capable de transcrire une matrice polylibonucléotidique de séquence quelconque, et elle se distingue en cela de la Qss-réplicase. Elle transcrit préférentiellement ou exclusivement une matrice d'ARN, et elle se distingue en cela des ARN polymérases ADN-dépendantes de phage connues.
Après mise en place du ligament par toute technique opératoire connue, les parties libres (L1) et (L2) du ligament sont croisées au niveau de l'espace séparant les apophyses épineuses après avoir passé une partie du ligament au travers de l'une des ouvertures (lal) pour constituer une boucle en forme de huit (B).A ce stade opératoire, il convient d'exercer sur chacune des parties croisées (L1) et (L2) du ligament, un effort de traction (T1) et (T2) pour assurer une mise en tension du ligament qui aura pour effet de resserrer la boucle au niveau des apophyses épineuses et simultanément de resserrer les ouvertures (lal) pour assurer, d'une manière concomitante, le blocage en position de la boucle, la partie correspondante du ligament étant coincée dans ladite ouverture (lal). Pour exercer sur chacune des parties de la boucle, les deux efforts de traction (T1) et (T2),.on utilise une pince spéciale (P) du type de celle illustrée figure 6.
Cette pince (P) présente deux branches articulées (3) et (4) dont chaque extrémité est recourbée en constituant un bec (3a) (4a). Chacun des becs (3a) (4a) reçoit une platine support (3b) (4b) sur laquelle est monté un système excentrique conformé pour assurer le blocage par effet de coincement des parties croisées du ligament. Pour chacune des branches, le système excentrique comprend une roue dentée (5) montée tournante par rapport à un axe excentré (6) solidaire de la platine support correspondante. Chacune des roues (5) est assujettie à un organe de manoeuvre (7) pour être déplacées circulairement. L'excentration est déterminée de sorte que sous un effet de rotation de la roue dentée (5), cette dernière se rapproche ou s'éloigne des flasques verticaux du bec recourbé de la branche correspondante recevant la platine support.
Très sensiblement en alignement avec chacun des systèmes excentriques (5) (6) de manière sensiblement parallèle au bec recourbé de chacune des branches, chaque platine support (3c) (4c) reçoit un doigt d'indexation (8) pour créer un effet de coincement de la partie correspondante du ligament. On note également que les extrémités de chacun des becs recourbés des branches (3) et (4) présentent une échancrure (3c) (4c) destinée à coopérer avec les parties correspondantes du ligament. A noter également que les branches de la pince sont convenablement profilées et articulées par rapport à un axe (11), de sorte que sous un effet de resserrement de chacune des branches, à l'encontre d'une lame ressort (12) ou autre, les becs préhenseurs ont tendance à s'écarter l'un de l'autre.
A l'opposé de ces becs, les branches (3) et (4) de la pince présentent un système de crémaillère débrayable (9) (10) apte à assurer le blocage en position de la pince au fur et à mesure du resserrement des branches, correspondant à l'écartement des becs préhenseurs (3a) (4a) pour la mise en tension du ligament comme indiqué ci-aprés.
Le ligament étant donc mis en place dans les conditions indiquées précédemment, par rapport aux apophyses épineuses, et après formation de la boucle en huit en passant l'une des parties du ligament au travers de l'ouverture, l'opérateur amène les échancrures (3c) (4c) des becs préhenseurs au niveau des deux parties correspondantes du ligament (L1) (L2). Le système excentrique (5) (6) étant en position d'éloignement par rapport aux flasques des becs, l'opérateur engage chacune des parties du ligament entre le doigt d'indexation (8) et la roue dentée (5) en le positionnant du côté des flasques de chacun des becs (3a) (4a) (figure 7). En agissant ensuite sur le système excentrique, sous un effet de rotation des roues dentées (5) au moyen de l'organe de manoeuvre (7), chaque roue a tendance à se rapprocher du flasque de chacun des becs, créant de manière concomitante, un effet de coincement de chacune des parties considérées (L1 (L2) du ligament (figure 8).
Les parties libres (L1) (L2) du ligament étant bloquées en translation par le système excentrique (5) (6), on conçoit qu'en écartant les becs (3a) (4a) de la pince sous un effet de resserrement des branches (3) et (4) de cette dernière, il y a une mise en tension du ligament au niveau de la boucle (B), provoquant le resserrement de la boucle autour des apophyses épineuses (Al) (A2). Au fur et à mesure de cette mise en tension, il en résulte un rétrécissement de chacune des ouvertures (lal), notamment de celle au travers de laquelle est engagée la partie correspondante du ligament, créant ainsi un effet d'autoblocage interdisant tout effet de glissement ou de desserrage de la boucle du ligament par rapport aux apophyses épineuses. Dans cette position de mise en tension, l'opérateur peut alors procéder à la fixation, par couture ou autre, des parties croisées (L1) (L2) du ligament, au niveau sensiblement de chacune des apophyses épineuses (figure 9).
Les avantages ressortent bien dans la description, en particulier on souligne: - La suppression de la cale évitant ainsi tout problème éventuel de migration.
- L'effet d'auto-serrage obtenu par la mise en tension du ligament et le blocage dans cette position.
- Le caractère atromatique du passage du ligament autour des épineuses grâce aux aiguilles.
MÉDICAMENT VETÉRINAIRE CONTENANT DE LA CHORIOGONADOTROPINE ÉQUINE MODIFIÉE POUR INDUIRE L'OVULATION CHEZ LA JUMENT ET STIMULER LA PRODUCTION DE TESTOSTÉRONE CHEZ L'ÉTALON L'invention concerne l'induction de l'ovulation chez la jument et la stimulation de la production de testostérone chez l'étalon.
Elle a plus particulièrement pour objet un médicament contenant, en tant que principe actif, au moins une choriogonadotropine équine modifiée sur sa partie glycannique.
Les choriogonadotropines sont des glycoprotéines qui sont synthétisées chez deux espèces, à savoir les primates dont l'homme, et les équidés. Ces choriogonadotropines s'appellent respectivement choriogonadotropine humaine (hCG) et choriogonadotropine équine (eCG) ou gonadotropine du sérum de jument gravide (Pregnant Mare Serum Gonadotropin : PMSG).
Dans les espèces autres que la sienne, la eCG présente une double activité d'hormone lutéinisante (LH) et d'hormone folliculostimulante (FSH). Cette caractéristique associée au fait que l'a eCG présente une demi-vie plus longue que celles de la LH et de la FSH explique son très grand intérêt zootechnique. De fait, son activité hormonale est utilisée dans le monde entier dans des traitements de synchronisation des chaleurs des femelles ainsi que dans des traitements d'induction de superovulation dans de nombreuses espèces.
Dans sa propre espèce, la eCG native présente une activité FSH nulle et une activité LH très faible qui est d'environ 4% de celle de la LH équine selon les travaux de F. Stewart et coll., J. Reprod. Fert., Suppl. 27 (1979), 431-440 et de F.
Guillou et coll., Biochem. et Biophys. Acta, 755 (1983) 229236. Jusqu présent elle n'a donc pu être utilisée dans sa propre espèce et chez la jument aucune ovulation n'a jamais été obtenue en utilisant de la eCG native.
Chez la jument, l'induction de l'ovulation est habituellement obtenue soit indirectement par implant de facteur libérant l'hormone lutéinisante (Luteinizing Hormone Releasing Factor RHLH) qui stimule le pic de eLH, soit directement avec un extrait hypophysaire équin contenant de la eLH, soit encore par injection de hCG.
Le mode de réalisation décrit et représenté permet donc le passage d'un protocole de télécopie de type connu, illustré en figure 1, à un protocole de télécopie dit "simplex", c'est-à-dire dont toutes les transmissions sont effectuées d'un émetteur vers plusieurs récepteurs, grâce aux modifications suivantes - suppression de tous les acquittements; - introduction de la trame SPI qui déclenche la fermeture d'un interrupteur de flux illustré en figure 24 dont le rôle est d'initialiser une procédure de diffusion et - déclenchement de l'ouverture de l'interrupteur de flux lors de la réception d'une trame DCN.
Cet imidazole (VIII) est alors soumise à l'action d'un triphényle de bismuth ((R)3Bi) en présence d'acétate de cuivre et de triéthylamine dans le dichlorométhane pour conduire à l'imidazole (IX).
Le proton en position 2 de cette imidazole (IX) est alors arraché au moyen de butyllithium dans le tétrahydrofurane à des températures comprises entre -78 et -100C. L'anion ainsi formé est piégé au moyen de diméthyldisulfure pour conduire au sulfure (X).
Le sulfure (X) est oxydé en sulfone (XI) par l'action de ltoxonee (peroxymonosulfate de potassium) en présence d'alumine humide.
La condensation de la sulfone (XI) avec un alcoolate de formule AO-, formé par action d'une base non nucléophile telle que l'hydrure de sodium sur l'alcool N-benzyl-4hydroxyméthylpipéridine (AOH), s'effectue dans le diméthylformamide à des températures comprises entre 20 et 1200C, pour conduire aux composés de formule (I).
Alternativement, les composés de formule (I) R4=H peuvent être modifiés pour conduire à d'autres dérivés de formule (I) comme indiqué dans le schéma 3.
Schéma 3
Les composés de formule (I) (R4=H) sont débenzylés par l'action du formiate d'ammonium dans le méthanol en présence d'une quantité catalytique de palladium sur charbon, pour conduire au dérivé (XII).
Les composés de formule (XII) peuvent alors être rebenzylés par action d'un halogénure de benzyle de formule (XV) en présence d'une amine acceptrice de proton ou d'une base minérale comme le carbonate de potassium, ou par amination réductrice au moyen d'un benzaldéhyde de formule (XVI) en présence d'acide chlorhydrique et de cyanoborohydrure de sodium dans le méthanol, pour conduire aux composés de formule (I) (R4wH).
Dans le cas où R4 est un groupement fonctionnel dérivatisable, il peut être éventuellement oxydé, réduit ou alkylé par des méthodes classiques connues de l'homme de 1' art.
La N-benzyl-4-hydroxyméthylpipéridine de formule (XIV) est obtenue suivant le schéma 4.
Schéma 4
L'isonipécotate d'éthyle est benzylé pour conduire à l'ester (XIII) qui est réduit par l'hydrure mixte de lithium et d'aluminium pour donner l'alcool (XIV), selon des méthodes connues de l'homme du métier.
Les exemples suivants illustrent les procédés et techniques mises en oeuvre pour la préparation de cette invention, sans toutefois limiter l'étendue de la revendication. Les microanalyses élémentaires et les spectres RMN et IR confirment les structures des composés obtenus.
Exemple 1 : 2-hydroxycyclohexanone On refroidit au bain de glace 9,8g (0,1 mol) d'oxyde de cyclohèxene oxyde dans 75 ml de diméthylsulfoxyde et additionne une solution de 9 ml (0,1 mol) d'acide triflique dans 25 ml de diméthylsulfoxyde en 30 minutes.
On laisse revenir à température ambiante et agite encore pendant 2 heures.
On ajoute 150 ml de dichlorométhane, refroidit à -780C et additionne en 30 minutes, 87 ml (0,5 mol) de diisopropyléthylamine.
L'invention concerne également l'installation pour la mise en oeuvre du procédé, laquelle installation comporte disposés les uns à la suite des autres: - un poste de chargement de la chaîne de traitement où les blocs de crevettes congelées sont déposés ou acheminés par tout moyen approprié; - un poste de décongélation des crevettes où cette opération s'effectue au moyen d'une immersion dans de l'eau qui circule à co-courant; - un poste de traitement pour stabiliser les crevettes au moyen d'un produit du genre métabisulfite avec lequel elles sont aspergées; - un poste de cuisson où les crevettes sont trempées dans un bain approprié qui circule à co-courant en circuit fermé; - un poste de lavage des crevettes cuites, par aspersion d'eau; - un poste de refroidissement où les crevettes sont trempées dans un bain de saumure, à contre-courant en circuit fermé; - un poste d'égouttage des crevettes avant leur conditionnement éventuel; les crevettes circulent du poste de chargement au poste d'égouttage, d'une manière continue au moyen d'un dispositif convoyeur, lequel convoyeur a une vitesse qui est déterminée en fonction des paramètres spécifiques des crevettes à traiter pour obtenir un temps de cuisson approprié, lesquels paramètres et la vitesse du convoyeur servent à régler la température de refroidissement des produits après cuisson et, en tenant compte en plus des paramètres de présentation des produits c'est-à-dire de la dimension et de la teneur en glace des blocs congelés, à déterminer la température du fluide de décongélation.
Selon une disposition préférentielle de l'invention, I'installation comprend un automate qui prend en compte les données liées aux paramètres spécifiques des produits à traiter c'est-à-dire l'espèce et la taille des crevettes et les données concernant les paramètres liés à la présentation de ces produits congelés c'est-à-dire la taille des blocs et leur teneur en glace d'eau, lequel automate en fonction des données liées aux paramètres spécifiques des produits établit un temps de cuisson de ces derniers d'où il découle une vitesse d'avancement du convoyeur et, d'une part, une température de refroidissement et, d'autre part, en prenant en compte en plus les données liées à la présentation des produits congelés, il découle une température du fluide de décongélation.
Selon une disposition préférentielle de l'invention, le retour des fluides qui circulent dans les bacs des postes de traitement, s'effectue de façon gravitaire.
Selon une autre disposition de l'invention, les circuits aller de remplissage des bacs et les circuits retour des bacs de cuisson et de refroidissement, comportent des vannes du type système trois voies qui permettent de vidanger les circuits et d'isoler les générateurs et l'échangeur.
Selon une autre disposition de l'invention, le générateur de chaleur (chaudière) pour la cuisson et l'échangeur, ont des capacités d'accueil et de stockage des fluides correspondants qui permettent de les maintenir à température pendant les opérations de nettoyage etlou de désinfection des bacs notamment, de façon à réaliser des économies d'énergie.
Selon l'invention, I'installation peut aussi comporter des cuves complémentaires pour stocker plusieurs bains de cuisson correspondant à des recettes de cuisson différentes. Ces bains sont transférés dans les cuves de stockage au moyen de la pompe de mise en circulation du fluide, qui se situe en sortie de la chaudière et il retourne dans cette dernière par simple gravité par exemple avec un jeu de vannes appropriées.
Toujours selon l'invention, chacun des circuits de remplissage des bacs des fluides comporte des circuits d'introduction d'additifs de cuisson etlou de produits de traitement pour effectuer les opérations de nettoyage et de désinfection.
Selon une autre disposition de l'invention, le convoyeur peut être constitué d'un tapis sans fin sur lequel sont posés directement les produits, lequel tapis peut aussi être associé à des moyens de nettoyage du genre brosses mises en oeuvre de façon continue ou régulièrement lors des opérations de nettoyage.
Toujours selon l'invention, les crevettes peuvent être positionnées dans des paniers qui sont posés sur un convoyeur du genre tapis sans fin ou associés à un convoyeur aérien, suspendus à un rail.
Selon une autre disposition de l'invention, I'installation comporte un châssis formé de tubes qui constituent directement les conduits d'alimentation des différents bacs et des rampes d'aspersion, de façon à éviter la multiplication des tuyauteries de toute sorte.
L'invention sera encore détaillée à l'aide de la description suivante et du dessin annexé qui représente, de façon schématique, I'installation de traitement selon l'invention.
Cette installation de traitement comprend un poste de chargement 1 où les blocs de crevettes congelées sont acheminés par tout moyen approprié.
Les produits arrivent au poste de préparation 1, sous forme de blocs parallélépipédiques, comprenant essentiellement les crevettes et une certaine quantité de glace, selon les procédés de congélation. Cette quantité de glace varie entre une quantité très faible et près de 50 % du poids des blocs. Ils sont déplacés vers un poste de décongélation 2 qui comprend un bac 3 dans lequel circule un fluide qui est chauffé à une température appropriée au moyen d'un générateur de chaleur constitué d'une chaudière 4.