INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'invention vise en outre les cellules hôtes transfectées, de manière transitoire ou stable, par ces vecteurs d'expression. Ces cellules peuvent être obtenues par l'introduction dans des cellules hôtes, procaryotes ou eucaryotes, d'une séquence nucléotidique insérée dans un vecteur tel que défini ci-dessus, puis la mise en culture desdites cellules dans des conditions permettant la réplication et/ou l'expression de la séquence nucléotidique transfectée.
Les cellules hôtes selon l'invention sont utilisables dans un procédé de production de peptide recombinant possédant l'activité biologique de la sorbine, ledit procédé comprenant les étapes consistant à : i) insérer une séquence nucléotidique telle que définie précédemment dans un vecteur d'expression, ladite séquence nucléotidique étant liée de manière opérante avec des éléments permettant la régulation de son expression ; ii) transformer une cellule hôte avec le vecteur ainsi obtenu ; iii) cultiver ladite cellule hôte dans des conditions permettant l'expression de ladite séquence nucléotidique ; iv) recueillir le peptide recombinant exprimé ; v) éventuellement purifier ledit peptide ; vi) éventuellement procéder à une amidation du peptide produit (dans le cas où la cellule hôte est une cellule procaryote).
L'étude des propriétés biologiques de la sorbine a mis en évidence son effet avantageux sur l'absorption de l'eau, des électrolytes et des nutriments par les muqueuses, en particulier les muqueuses digestives.
Les auteurs de l'invention ont montré que la séquence active de ce peptide est spécifique de certains tissus, le duodénum, le jéjunum chez le porc, s'étendant à l'iléon et au côlon chez l'homme ainsi qu'à certaines régions du système nerveux central et périphérique.
La présence de la sorbine dans des tissus divers attribue à ce peptide et à ses fragments, un rôle dans le transport cellulaire des électrolytes, et en particulier du chlore à tous les niveaux et en particulier du tractus digestif et du système nerveux central. Au niveau du système nerveux central, il intervient dans les troubles du comportement liés en particulier à un déséquilibre ionique.
Ces propriétés avantageuses s'accompagnent d'une grande innocuité.
L'invention vise donc des compositions pharmaceutiques comprenant une quantité efficace d'au moins un peptide possédant l'activité
biologique de la sorbine tel que défini précédemment, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Une composition pharmaceutique selon l'invention peut être notamment administrée par voie orale, parentérale, intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, percutanée ou par administration intra-nasale.
La préparation des compositions pharmaceutiques qui contiennent des principes actifs dissous ou dispersés dans ces dernières, est bien connue de l'homme du métier. Généralement, ces compositions sont préparées sous la forme de solutions ou de suspensions injectables. Cependant, elles peuvent aussi être sous des formes solides appropriées pour préparer des solutions, ou des suspensions extemporanément. Les préparations peuvent aussi être émulsifiées.
Les modes d'administration, les posologies et les formes galéniques des compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être déterminés de manière usuelle par l'homme du métier, notamment selon les critères généralement pris en compte pour l'établissement d'un traitement thérapeutique adapté à un patient, comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient, la gravité de son état général, la tolérance au traitement, et les effets secondaires constatés, etc.
Les compositions pharmaceutiques de l'invention comprenant un peptide possédant l'activité biologique de la sorbine, ainsi que les compositions pharmaceutiques comprenant un acide nucléique codant pour un tel peptide, sont particulièrement utiles dans : le traitement des diarrhées infectieuses et des toxicoses aiguës du nourrisson par l'effet bénéfique d'une augmentation de l'absorption de l'eau et des électrolytes, le traitement adjuvant de la réanimation parentérale lors de la réinduction de l'alimentation entérale, au cours de maladies infectieuses, d'interventions chirurgicales, en particulier sur la sphère digestive, le traitement de certaines malabsorptions chroniques par augmentation de l'absorption des glucides et des aminoacides liée à l'augmentation de l'absorption de l'eau et des électrolyses,
le traitement de certains troubles électrolytiques et notamment ceux de la mucoviscidose, caractérisés par un trouble de la réabsorption des électrolytes au niveau des glandes sudoripares, salivaires, bronchiques, de l'intestin et du pancréas, le traitement des obésités et des surcharges hydriques par les dérivés substitués des polypeptides et peptides de l'invention qui suppriment l'absorption de l'eau, des électrolytes et des nutriments.
La présence de sorbine dans les fibres nerveuses pourrait permettre de qualifier la sorbine de peptide neurocrine. La co-localisation de la sorbine avec des hormones et des neurotransmetteurs comme la sérotonine corrobore l'hypothèse d'un facteur peptidique neurocrine.
La forme plus complète est : =0+0-+0+0+.- +2.+3-+2- +3-+3- Les coefficients aij des différentes formes quadratiques sont des constantes ou des combinaisons linéaires des grandeurs disponibles N, C, EGR, AA. Leur calcul sera détaillé dans la suite de la description.
Pour des applications au contrôle moteur en temps réel, il est préférable de limiter les calculs tout en maintenant une bonne précision des résultats.
La description sera poursuivie en prenant pour exemple la forme quadratique suivante qui est satisfaisante tant du point de vue de la complexité des calculs que de la précision de l'estimation obtenue : Pest = aoo + a,o. f B + a,2. fB.B + al3.f(J.8+ aZ3.B.8 Le mode de calcul des coefficients aij de la forme quadratique Pest va maintenant être décrit.
Dans une phase initiale réalisée en laboratoire, la pression dans un cylindre d'un moteur à combustion interne du type considéré est mesurée expérimentalement à partir d'un capteur adapté monté sur le moteur. Plusieurs mesures de la pression sont effectuées en modifiant les grandeurs disponibles représentatives du fonctionnement du moteur, à savoir le régime N, charge C, la recirculation des gaz EGR, l'avance à l'allumage ou à l'injection AA.
Les coefficients aoo, a,o , a,1, au, a2i sont obtenus par minimisation de l'erreur quadratique #2 entre la pression mesurée P et la pression esti- mée Peu . L'erreur quadratique est définie par eze - Pest (a,, 2 En particulier, pour tous les indices i et j prenant les valeurs discrètes {0,1,2,3} correspondantes au coefficient considéré, on cherche à annuler la dérivée de l'erreur par rapport au coefficient aij, c'est-à-dire : ##2/@ = 0. Ceci conduit à résoudre, pour chaque cylindre et pour chaque #aij condition de fonctionnement étudiée expérimentalement, le système suivant:
où désigne l'opérateur mathématique donnant la valeur moyenne.
Les valeurs des coefficients aij sont ainsi calculées à partir des mesures expérimentales obtenues en modifiant les grandeurs disponibles N ; EGR, AA, représentatives du fonctionnement du moteur.
A partir des valeurs calculées pour les coefficients aij, une loi linéaire est établie pour estimer les coefficients a,, sous la forme d'une combinaison linéaire des grandeurs disponibles représentatives du fonctionnement du moteur : al} est =6, !/0 +6 V! .A+6 '72 .C+6,, 3 .FG+A V4 ./L4.
En variante, une loi d'ordre supérieur est utilisée.
Les coefficients b,, sont obtenus également par minimisation de l'erreur quadratique entre les coefficients aij calculés, et les coefficients aij est estimés d'après la combinaison linéaire.
La valeur de chacun des coefficients aij de la forme quadratique Pest s'exprime ainsi directement comme une combinaison linéaire des grandeurs disponibles représentatives du fonctionnement du moteur.
L'expression de la pression Pest est donnée ci-après pour l'exemple choisi en remplaçant chacun des coefficients aij de la forme quadratique par la forme linéaire qui le représente en fonction des grandeurs disponibles représentatives du fonctionnement du moteur, et en réordonnant l'expression en fonction des grandeurs disponibles représentatives de fonctionnement du moteur. Pest s'exprime ainsi sous la forme :
Cette expression permet d'obtenir la pression P dans les cylindres en tout point de la plage de validité des grandeurs disponibles représentatives du fonctionnement du moteur, tout en s'affranchissant du besoin de capteur de pression.
Ces coefficients bij @ sont déterminés pour le moteur étudié à partir d'une mesure expérimentale de la pression dans les cylindres, et ils sont mis en mémoire dans les moyens 22. Les moyens de calcul 14 peuvent alors être mis en #uvre sur des moteurs de production du même type pour estimer la valeur de la pression.
L'estimation de la pression P se fait alors directement à partir l'évaluation de la forme quadratique en fonction des mesures de la vitesse angulaire # du vilebrequin et des grandeurs disponibles représentatives de fonctionnement du moteur.
En outre, et avantageusement, la valeur du coefficient "polytropique" # intervenant dans la valeur représentative de la position fe, est calculée de façon à minimiser l'erreur entre la pression mesurée expérimentalement et la pression estimée d'après la forme quadratique pour différentes conditions expérimentales. La valeur de #est est alors estimée directement d'après les grandeurs disponibles représentatives du fonctionnement du moteur par un polynome sous la forme : xes, =co +c,N+c2N2 +c3.C+c4.EGR+cSAA Les coefficients co,c,,c2,c3,c,c5 sont obtenus par minimisation de l'erreur entre le coefficient calculée et le coefficient estimé #est.
La précipitation du solide est réalisée dans un montage en continu décrit précédemment Le réacteur est alimenté avec un pied de cuve de 0,5 # d'eau permutée
préalablement ajusté à pH 10,5. L'électrode est asservie à une pompe régulatrice de pH dont la consigne est fixée à pH 10,5.
Les deux flacons d'alimentation contiennent d'une part la solution de sels de cérium précédemment décrite et d'autre part, une solution d'ammoniaque 6N . Le débit de la solution d'acétate de cérium est fixé à 500 ml/h et le débit d'ammoniaque est asservie à la régulation de pH.
Le précipité est récupéré par centrifugation (12 mn à 3000 tr/mn) . La teneur en oxyde est déterminée par perte au feu . teneur en oxydes égale à environ 16,5 % Le précipité est alors remis en suspension dans de l'eau permutée à 50g/1 en oxyde 2/ Transfert en phase organique.
340 ml de la suspension aqueuse précédemment décrite sont introduites dans un réacteur double enveloppe de 2 litres équipé d'un bain thermostaté On additionne à température ambiante et sous agitation, une phase organique contenant 134,1 g d'isopar et 18,9 g d'acide isostéarique (AIS) préalablement dissous La vitesse d'agitation étant fixée à 150 tr/mn, l'ensemble réactionnel est porté à 88 C et maintenu à cette température pendant 4 heures.
Après arrêt de l'agitation, on observe une phase supérieure organique brune, récupérée après transfert et séparation dans une ampoule à décanter. Cette phase organique est mise à centrifuger à 4500 tr/mn pendant 10 mn, puis filtrée sur membrane hydrophobe.
La concentration de la phase colloïdale organique, déterminée après évaporation de l'isopar et calcination à 1000 C est égale à 6,58 % en oxydes L'observation en MET haute résolution montre qu'au moins 90 % des particules sont monocristallines. Ledites particules présentent un dso de 3 nm. On a également constaté que les partaicules avaient une taille comprise entre 2 et 4 nm Exemple 5 : Solution colloïdale organique de CeO2 élaborée à partir d'un mélange d'acétate de cérium (III) et de ZrO(NO3)2 La préparation de la solution colloïdale organique d'oxyde de cérium comporte deux étapes: 1/formation d'un précipité solide en phase aqueuse ; 2/ transfert en phase organique.
1/ Obtention d'un précipité solide en phase aqueuse.
A 236,7 g d'acétate de cérium (III) hydraté à 49,29% en Ce02, commercialisé par la société Rhodia Terres Rares, on additionne 20,3 ml d'acide acétique de la société
Prolabo, à 100% et 1356ml d'eau permutée. On additionne ensuite 150 ml d'HN03 concentré de la société Prolabo, et 60,3 ml de solution de ZrO(NO3)2 commercialisé par Anan Kasei (23,32% en Zr02, et d = 1,49).
Le pH du mélange après mise sous agitation est de 0,5. On ajuste à 2000 ml par 181,2 g d'eau permutée.
La précipitation du solide est réalisée dans un montage en continu décrit précédemment. Le réacteur est alimenté avec un pied de cuve de 0,5 1 d'eau permutée préalablement ajusté à pH 10,5. L'électrode est asservie à une pompe régulatrice de pH dont la consigne est fixée à pH 10,5.
Les deux flacons d'alimentation contiennent d'une part la solution de sels de cérium précédemment décrite et d'autre part, une solution d'ammoniaque 6N Le débit de la solution d'acétate de cérium est fixé à 500 ml/h et le débit d'ammoniaque est asservie à la régulation de pH Le précipité est récupéré par centrifugation ( 12 mn à 3000 tr/mn) . La teneur en oxyde est déterminée par perte au feu : teneur en oxydes égale à environ 21 % Le précipité est alors remis en suspension dans de l'eau permutée à 50g/l en oxyde.
2/ Transfert en phase organique.
325 ml de la suspension aqueuse précédemment décrite sont introduites dans un réacteur double enveloppe de 2,0 litres équipé d'un bain thermostaté On additionne à température ambiante et sous agitation, une phase organique contenant 165,5 g d'Isopar et 17 g d'acide isostéarique (AIS) préalablement dissous.
La vitesse d'agitation étant fixée à 150 tr/mn, l'ensemble réactionnel est porté à 88 C et maintenu à cette température pendant 4 heures.
De plus, la présence d'un grand verre dépoli permet de bien juger l'image, et de faire la mise au point très rapidement, avec une extrme précision.
La procédure habituelle pour un photographe équipé d'un tel matériel consiste à : viser-observer-cadrer son sujet sur le dépoli, procéder aux divers mouvements des montants avant-arrière, effectuer la mise au point finale sur le dépoli, fermer l'obturateur (ou non), régler le diaphragme, puis : introduire le chassis argentique (ou le dos numérique), exposer (ou numériser) l'image, enfin ôter le chassis (ou le dos), rouvrir l'obturateur (ou non), afin de voir à nouveau son sujet sur le dépoli et passer à la photo suivante.
Pendant que ces chassis (ou dos) sont en place (dans ou sur le montant T2), l'image du sujet n'est bien entendu plus visible sur le dépoli, puisque le chassis (ou le dos) est intercalé entre l'objectif et l'oeil du photographe.
II existe déjà des dos numériques de type scanner mais il faut les introduire dans le montant (T2) de la chambre photographique comme les chassis pour films traditionnels, et les retirer après chaque photo pour voir à nouveau l'image sur le dépoli, car ces dos sont opaques.
D'autres dos numériques fixés sur glissière doivent tre déplacés manuellement pour prendre la place du dépoli mais dans ce cas, il s'agit de deux entités bien distinctes : verre dépoli d'origine de la chambre, et dos numérique supplémentaire, indépendant.
II existe aussi des matériels numériques permettant de voir l'image du sujet sur un écran-moniteur informatique avant sa numérisation : il ne s'agit pas d'une vision directe sur dépoli, mais plutôt d'un système de type reprise-video couplé au système de capture proprement dit. Ces systèmes obligent donc l'opérateur à regarder un écran-moniteur décaté, et non pas l'image de son sujet directement sur le dépoli, ce qui est beaucoup moins pratique et moins intuitif.
De plus l'image alnsi vue sur écran-moniteur n'est qu'une interprétation video, sujette aux artefacts.
D'autres dos numériques nécessitent aussi l'utilisation d'objectifs spéciaux, tourelles avec filtres colorés, obturateurs spécifiques, ou autres accessoires nouveaux et complexes que le photographe ne possède pas à l'origine : d'où un coût très é ! évé d'investissement. D'autant que ces accessoires ne sont pas du tout indispensables en mode photo argentique.
Ces anciens dos numériques se limitent donc à la saisie d'une image via leurs capteurs, sans permettre sa visualisation directement à l'intérieur, ou au travers du dos.
PROBLEME TECHNIQUE POSE Aucun dos numérique existant ne permet au photographe de voir l'image d'un sujet directement à t'intérieur ou au travers dudit dos, ni de faire la mise au point sur un support de type dépoli à l'intérieur ou au travers dudit dos, sans I'aide d'un viseur additionnel, sans devoir ôter ledit dos du montant arrière de sa chambre photographique.
Les trois phases : mettre en place le dos numérique, numériser l'image, enfin ôter le dos, ont plusieurs défauts : -perte de temps évidente sur des séries de prises de vues (type catalogues, reproductions de documents...), -risque de détérioration du dos numérique maigre toutes précautions, à cause des manipulations repétées d'un matériel électronique de haute technologie, fragile, sensible aux chocs, -risque d'introduction de poussières ou corps étrangers à l'intérieur du dos lorsqu'il est manipulé. (Toute poussière mme minime sur un ou plusieurs capteurs dégradera la qualité de l'image numérique, un corps étranger pourra bloquer le mécanisme intérieur.) Comment permettre à un opérateur-photographe de faire de nombreuses photos rapidement avec sa chambre photographique, à I'aide d'un dos numérique de type scanner , sans devoir ôter, puis remettre en place ledit dos entre chaque photo, tout en conservant une parfaite visualisation de l'image sur un support de type verre dépoli, auquel il est si bien habitué ? Jusqu'à ce jour, il-n'existait pas de solution pratique évitant ces manipulations fastidieuses et risquées, réunissant les avantages de la technologie numérique à la facilité de visée-et de mise au point directement sur un support comparable à un verre dépoli, en un seul dispositif monobloc.
L'invention présentée ci-après permet de combler ces lacunes importantes, résoudre tous ces problèmes et pallier les défauts sus-énoncés.
L'invention concerne un nouveau genre de dos numérique, rapide, simple d'emploi, fiable, économique et productif.
Ce dos numérique sera, dans sa configuration principale, utilisé sur une chambre photographique avec la mme précision de vision et de mise au point de 1'image que sur le verre dépoli d'origine.
L'INVENTION L'invention étant susceptible de multiples déclinaisons, variantes et options, les configurations décrites ci-après et les dessins ci-annexés doivent etre compris comme illustratifs par nature, et non pas limitatifs.
L'invention nommée Dos Photographique Numérique à Vision Directe, intègre deux fonctions principales essentielles au sein du mme dispositif monobloc : -la Vision Directe d'une image, au travers d'une (ou plusieurs) zone (s) transparente (s), permettant sa mise au point grâce à un support matérialisant l'image, -la numérisation de l'image grâce à des capteurs photosensibles électroniques, puis sa transformation sous la forme d'un fichier informatique L'invention dans son principe générât est composée : voir Figures 2,3 et 4 Un boitier (1) à plusieurs faces, constituant le dos numérique, comportant deux rainures symétriques (10) situées sur deux faces latérales opposées permettant I'accrochage et le maintien en place dudit boitier sur une chambre photographique par le système (FIX) de type"Graflock", déjà bien connu.
En revanche, il contient une boîte TATA-like (AATTTAT, soulignée d'un double trait sur la figure 1) à -105 pb de l'ATG.
Il contient également une boîte GC (GGGCCGGG, soulignée en pointillés sur la figure 1) située à-84 pb de l'ATG du gène TaTrxh2. Les boites GC sont reconnues par des facteurs de transcription de type Spl (DYNAN et al. Nature 316,774-778, 1985), et interviennent dans l'expression constitutive des gènes. Des boîtes GC sont présentes dans tous les promoteurs connus de gènes de thiorédoxines.
Une séquence riche en adénine, interrompue par un résidu G (AAAAAAAGAAAAAAAAA, en caractères gras soulignés d'un trait simple sur la figure 1), est située à-227 pb de l'ATG du gène TaTrxh2 ; des séquences de ce type ont également été identifiées précédemment dans les promoteurs des gènes de thiorédoxine h de tabac et de riz.
Des séquences bHLH (CANNTG), reconnues par des facteurs de transcription de la famille hélice/boucle/hélice, sont localisées à-206 pb et
-411 pb de l'ATG du gène TaTrxh2 ; elles sont représentées sur la figure 1 en lettres minuscules.
Des séquences bzip (ACGT, soulignées d'un trait simple sur la figure 1) reconnues par des facteurs de transcription de la famille des fermetures éclair à leucine (bZIP), sont localisées à-251 pb et-184 pb de l'ATG du gène TaTrxh2. Les protéines bZIP ont été décrites dans l'activation de l'expression de gènes codant des protéines de réserve du grain. Des motifs ACGT, ont également été décrits dans des séquences consensus ABRE (ABA-responsive element) des promoteurs de gènes dont l'expression est régulée par l'acide abscissique (ABA) (MUNDY et al., Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 87, 1406-1410, 1990).
Deux boîtes pyrimidine (CCTTTCTCT et TCTTTCTTC, encadrées sur la figure 1) sont respectivement localisées à-553 pb et-541 pb de l'ATG du gène TaTrxh2.
Les boîtes pyrimidine (CCTTTT) interviennent dans la régulation de l'expression par l'acide gibérellique, généralement en association avec des séquences GARE (GAresponsive element) (TAACAAA) (HUANG et al., Plant Mol.
Biol. 14,115-121, 1990), et des séquences 02S (opaque-2binding séquence) ou boîte I (TATCCAT) (GUBLER et al., Plant Cell 4,1435-1441, 1992 ; LANAHAN et al., Plant Cell, 4,203-211, 1992), avec lesquelles elles s'organisent en un complexe appelé GARC (GA-responsive complex) (BETHKE et al., Bot. 48,1337-1356, 1997).
Aucune séquence GARE ou 02S n'a été mise en évidence dans les 1111 pb en amont de l'ATG du gène Ta Trxh2.
Un motif TGTGTGAGCA (en caractères gras, et souligné d'un trait en pointillés sur la figure 1) est situé à-403 pb de l'ATG du gène TaTrxh2. Ce motif ne diffère que par la présence d'un résidu G supplémentaire, de la séquence consensus GCN4-like (TGTGTGACA) de la boîte albumen impliquée dans l'expression albumenspécifique de gènes de gluténines de blé (HAMMOND-KOSACK
et al., EMBO J. 12,545-554, 1993). Cependant, l'autre motif de la boîte albumen, dénommé EM (TGTAAAAGT), et dont la présence est également nécessaire pour l'expression albumen-spécifique (ALBANI et al., Plant Cell 9,171-184, 1997), n'a pas été mis en évidence dans les 1111 pb en amont de l'ATG du gène TaTrxh2.
Des diades trimériques CAA et TTG (en italique sur la figure 1) séparées par 10 bases, sont présentes respectivement à-107 pb et-97 pb de l'ATG du gène TaTrxh2. Ces motifs sont associés à une expression spécifique dans la couche à aleurone (THOMAS et al., Plant Cell 2,1171-1180, 1990).
EXEMPLE 3 : ANALYSE FONCTIONNELLE DU PROMOTEUR DU GÈNE TaTrxh2 .
La séquence de 1111 pb en 5' de l'ATG du gène TaTrxh2, ou différents fragments de cette séquence ont été clonés en amont de la séquence codante du gène rapporteur gus dans le vecteur pSPORTl-GUS. Le vecteur pSPORTl-GUS (DIGEON, 1997) contient la séquence codante du gène gus (P-glucuronidase d'E. coli) et le terminateur nos-ter du gène de la nopaline synthase, insérés au site EcoRI-HindIII du vecteur pSPORTl (GIBCO BRL).
L'invention a encore pour objet l'application d'un tel procédé à un transformateur pour la génération d'un code destiné à être enregistré dans une carte à puce.