INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Par contraste à l'IKBa, où la lysine double est située à environ 15 acides aminés dans la direction du site Nterminal de la protéine, on a dans la NIM1 une lysine double située à environ 40 acides aminés vers ltextrémité C-terminale. De plus, il existe un degré élevé d'homologie entre la NIM1 et l'IicBa dans la région carboxyterminale à haute teneur en sérine/thréonine, ce qui s'est avéré être important au niveau du taux de renouvellement basal (Sun et al., Mol. Cell. Biol. 16, 1058-1065 (1996)). Selon la présente invention, et sur la base de l'analyse de l'homologie structurale et de la présence d'éléments dont on sait qu'ils sont importants pour la fonction de l'IicBa, on s'attend à ce que la NIM1 fonctionne comme l'IKBa, puisqu'elle a des effets analogues sur la régulation des gènes végétaux.
Les végétaux contenant le gène NIMl de type sauvage, après traitement avec des produits chimiques inducteurs, doivent comporter une quantité plus importante du produit génique NIMl (homologue de 1'IKB), ou une phosphorylation moins importante du produit génique NiMi (homologue de 1'IKB). Selon ce modèle, le résultat est que l'homologue NF-KB du végétal est maintenu à l'extérieur du noyau, et les réponses en expression du gène de la SAR et en résistance peuvent se produire. Dans les plants mutants niml, un gène NIMl non fonctionnel produit est présent. En conséquence, selon ce modèle, l'homologue du NF-KB est libre d'aller jusqu'au noyau et de réprimer la résistance et l'expression du gène de la SAR.
D'une manière compatible avec cette idée, des cellules animales traitées par l'acide salicylique présentent une stabilité/abondance accrue de l'IKBet une réduction du NF-KB actif dans le noyau (Kopp et Ghosh, 1994). On connaît des mutations de 1'IKB qui agissent comme super répresseurs ou dominant-négatifs (Britta-Mareen Traenckner et al., EMBO 14:2876-2883 (1995) ; Brown et al., Science 267:1485-1488 (1996) ; Brockman et al., Molecular and Cellular Biology 15:2809-2818 (1995) ; Wang et al., Science 274:784-787 (1996)). Ces formes mutantes de l'IKB se fixent au NF-KB mais ne sont pas phosphorylées ou ubiquitinisées, de sorte qu'elles ne sont pas dégradées. Le NF-KB reste fixé à l'IKB et ne peut se déplacer pour pénétrer dans le noyau.
Formes modifiées du gène NIMl Compte tenu de ce qui précède, la présente invention concerne des formes modifiées du NIMl, qui jouent le rôle de régulateurs dominant-négatifs de la voie de transduction du signal SAR. Les plantes transformées par ces formes dominant-négatifs du NIMl possèdent le phénotype opposé en tant que plantes mutantes niml, en ce sens que les végétaux transformés par des formes modifiées du NIMl présentent une expression constitutive du gène de la SAR, et donc un phénotype CIM. En raison de la position que le gène NIMl conserve dans la voie de transduction du signal de la SAR, on s'attend à ce qu'un certain nombre de modifications du gène, au-delà de celles qui sont spécifiquement décrites dans l'invention, apparaissent dans l'expression constitutive des gènes de la SAR, et donc un phénotype CIM.
(1989). On pourra aussi se reporter au brevet US NO 5 625 136, qui est incorporé ici à titre de référence dans sa totalité. I1 est bien entendu que le procédé de transformation va dépendre de la cellule végétale à transformer.
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Voir aussi le brevet US N" 5 639 949, incorporé ici à titre de référence dans sa totalité.
Les bactéries du genre Agrobacterium peuvent être utilisées pour transformer les cellules végétales. Les espèces appropriées de cette bactérie comprennent Agrobacterium tumefaciens et Agrobacterium rhizogens. Agrobacterium tumefaciens (c'est-à-dire les souches BAC404 ou EHA1OS) est particulièrement utile en raison de son aptitude bien connue à transformer les végétaux.
Elle a notamment pour objet un kit de dosage tel que défini cidessus, caractérisé en ce qu'il comprend les réactifs correspondant à l'une des modalités i), ii), iii);et iiii) précédemment définies.
Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre des kits cidessus décrits, on utilise les conditions indiquées ci-dessus comme avantageuses pour le procédé.
La présente demande a enfin pour objet un procédé de mesure ou de détection d'un seuil d'un analyte mettant en jeu un procédé d'étalonnage ou un kit ci-dessus.
PARTIE EXPERIMENTALE Exemple 1 - Préparation des réactifs A- Obtention des microsphères de différentes catégories.
Différentes catégories de microsphères sont obtenues à partir de microsphères homogènes en taille (5,5 um) et présentant des fonctions amines libres (-NH2) en surface (Dyno particles, Lillestrôm, Norvège). Elles sont lavées et mises en suspension dans un tampon phosphate 0,5 moles/l, pH 6,5. Trois aliquotes identiques de ces microsphères sont préparées. Chaque aliquote est incubée avec un mélange défini de biotine-n-hydroxysuccinimide (biotine-NHS) et de fluorescéine-N-hydroxysuccinimide (fluorescéine-NHS) pendant 2 heures à température ambiante et sous agitation. Les 3 mélanges différents comprennent respectivement 0 moles, 7,87 x 1010 moles et 3,15 x 10-9 moles de fluorescéine-NHS pour 10 mg de microsphères, la quantité de biotine-NHS restant constante (0,575 x 104 moles).
Les microsphères biotinylées et fluorescentes sont ensuite lavées plusieurs fois dans le même tampon et conservées à 4"C à l'abri de la lumière.
Les trois catégories sont dénommées respectivement, microsphères de calibration (pas de fluorescéine en surface), microsphères de dosage N" 1 incubées avec 7,87.1010 moles de fluorescéine-NHS et microsphères de dosage N" 2 incubées avec 3,15.10-9 moles de fluorescéine-NHS.
Obtention de microsphères avidinées.
Les microsphères de calibration et les microsphères de dosage N" 1 et 2 sont incubées séparément avec une solution de streptavidine à 250 pg pour 10 mg de microsphères en tampon phosphate 8 mmoles/l, azoture de sodium 10 mmoles/l, pH 7,2 pendant 18 heures à 4"C et sous agitation. Après 3 lavages dans un tampon phosphate 8 mmoles/l, Ig/l d'albumine bovine (BSA), 10 mmoles/l azoture de sodium pH 7,2 (tampon phosphate-BSA), la solution de microsphères avidinées est conservée, pour une utilisation ultérieure, dans ce même tampon.
Obtention du conjugué 2,4-dinitrophenyl-BSA-biotine.
Le conjugué 2,4-dinitrophenyl-BSA-biotine, (DNP-BSA-biotine) est obtenu en faisant réagir d'abord de la biotine-n-hydroxysuccinimide sur de la BSA diluée en tampon borate 20 mmoles/l, NaCI 50 mmoles/l, pH 8,5 (tampon borate) avec un rapport 1 mole de BSA pour 5,6 moles de biotine-NHS puis après avoir séparé la biotine n'ayant pas réagi, en incubant, en tampon borate, de l'acide 6-(2,4-dinitrophenyl)aminohexanoïque succinimidyl ester (Molecular Probes Europe, Hollande) (DNP-NHS) à un rapport de 1 mole de BSA biotinylée pour 10 moles de DNP-NHS. Le DNP-NHS n'ayant pas réagi est éliminé.
Obtention de microsphères de calibration.
La solution de microsphères de calibration avidinées, est divisée en 4 aliquotes. Chaque aliquote est incubée pendant 18 heures à 4"C sous agitation avec une quantité donnée de conjugué DNP-BSA-biotine dilué en tampon phosphate-BSA. La première sous-catégorie de microsphères (Cal.l) est incubée sans DNP-BSA-biotine. La deuxième sous-catégorie (Cal.2) est obtenue en incubant 0,062 ug/ml de conjugué DNP-BSA-biotine, la troisième, (Cal.3) 0,25 ,ug/ml et la quatrième (Cal.4.), 0,6 uglml. A l'issue de l'incubation, les microsphères sont lavées plusieurs fois en tampon phosphate 50 mmoles/l pH 7,2 puis une solution de diméthylsubérate (0,2 immoles par mg de microsphères) est ajoutée à chaque catégorie de microsphères de calibration.
Après une heure de réaction à température ambiante, les 4 solutions de microsphères de calibration sont lavées en tampon phosphate-BSA puis diluées dans ce même tampon à 4,106 microsphères par ml et mélangées à parties égales.
Obtention du traceur de calibration.
Un anticorps monoclonal anti-DNP (clone ne134, Immunotech, France) est conjugué à la phycoérythrine en utilisant un réactif hétérobifonctionnel de type sulfo-SMCC (Pierce Chemical, Oud-Bejerland, Hollande) selon les instructions données par le fabricant du réactif. Le produit de la réaction est purifié par chromatographie d'exclusion sur une colonne de type R 10/60 (Pharmacia, Uppsala, Suède). Les fractions, montrant la double activité de reconnaissance du motif DNP et d'émission de fluorescence, caractéristique de la phycoérythrine, sont sélectionnées et mélangées ensemble. On évitera de sélectionner les fractions éluées les premières de manière à ne pas utiliser les polymères de haut poids moléculaires dans la solution de traceur.
Ainsi, I'invention à également pour objet une séquence nucléotidique isolée codant pour le polypeptide de l'invention ou toutes séquences nucléotidiques naturelles ou synthétiques contenant la dite séquence.
Particulièrement l'invention a pour objet un fragment isolé d'acide désoxyribonucléique comprenant au moins la séquence nucléotidique codante suivante: 1 ATG GGC TCG TCT CGG GCA CCC TGG ATG GGG CGT GTG GGT GGG CAC 46 GGG ATG ATG GCA CTG CTG CTG GCT GGT CTC CTC CTG CCA GGG ACC 91 TTG GCT AAG AGC ATT GGC ACC TTC TCA GAC CCC TGT AAG GAC CCC 136 ACG CGT ATC ACC TCC CCT AAC GAC CCC TGC CTC ACT GGG AAG GGT 181 GAC TCC AGC GGC TTC AGT AGC TAC AGT GGC TCC AGC AGT TCT GGC 226 AGC TCC ATT TCC AGT GCC AGA AGC TCT GGT GGT GGC TCC AGT GGT 271 AGC TCC AGC GGA TCC AGC ATT GCC CAG GGT GGT TCT GCA GGA TCT 316 TTT AAG CCA GGA ACG GGG TAT TCC CAG GTC AGC TAC TCC TCC GGA 361 TCT GGC TCT AGT CTA CAA GGT GCA TCC GGT TCC TCC CAG CTG GGG 406 AGC AGC AGC TCT CAC TCG GGA AGC AGC GGC TCT CAC TCG GGA AGC 451 AGC AGC TCT CAT TCG AGC AGC AGC AGC AGC TTT CAG TTC AGC AGC 496 AGC AGC TTC CAA GTA GGG AAT GGC TCT GCT CTG CCA ACC AAT GAC 541 AAC TCT TAC CGC GGA ATA CTA AAC CCT TCC CAG CCT GGA CAA AGC 586 TCT TCC TCT TCC CAA ACC TCT GGG GTA TCC AGC AGT GGC CAA AGC 631 GTC AGC TCC AAC CAG CGT CCC TGT AGT TCG GAC ATC CCC GAC TCT 676 CCC TGC AGT GGA GGG CCC ATC GTC TCG CAC TCT GGC CCC TAC ATC 721 CCC AGC TCC CAC TCT GTG TCA GGG GGT CAG AGG CCT GTG GTG GTG 766 GTG GTG GAC CAG CAC GGT TCT GGT GCC CCT GGA GTG GTT CAA GGT 811 CCC CCC TGT AGC AAT GGT GGC CTT CCA GGC AAG CCC TGT CCC CCA 856 ATC ACC TCT GTA GAC AAA TCC TAT GGT GGC TAC GAG GTG GTG GGT 901 GGC TCC TCT GAC AGT TAT CTG GTT CCA GGC ATG ACC TAC AGT AAG 946 GGT AAA ATC TAT CCT GTG GGC TAC TTC ACC AAA GAG AAC CCT GTG 991 AAA GGC TCT CCA GGG GTC CCT TCC TTT GCA GCT GGG CCC CCC ATC 1036 TCT GAG GGC AAA TAC TTC TCC AGC AAC CCC ATC ATC CCC AGC CAG 1081 TCG GCA GCT TCC TCG GCC ATT GCG TTC CAG CCA GTG GGG ACT GGT 1126 GGG GTC CAG CTC TGT GGA GGC GGC TCC ACG GGC TCC AAG GGA CCC 1171 TGC TCT CCC TCC AGT TCT CGA GTC CCC AGC AGT TCT AGC ATT TCC 1216 AGC AGC GCC GGT TCA CCC TAC CAT CCC TGC GGC AGT GCT TCC CAG 1261 AGC CCC TGC TCC CCA CCA GGC ACC GGC TCC TTC AGC AGC AGC TCC 1306 AGT TCC CAA TCG AGT GGC AAA ATC ATC CTT CAG CCT TGT GGC AGC 1351 AAG TCC AGC TCT TCT GGT CAC CCT TGC ATG TCT GTC TCC TCC TTG 1396 ACA CTG ACT GGG GGC CCC GAT GGC TCT CCC CAT CCT GAT CCC TCC 1441 GCT GGT GCC AAG CCC TGT GGC TCC AGC AGT GCT GGA AAG ATC CCC 1486 TGC CGC TCC ATC CGG GAT ATC CTA GCC CAA GTG AAG CCT CTG GGG 1531 CCC CAG CTA GCT GAC CCT GAA GTT TTC CTA CCC CAA GGA GAG TTA 1576 CTC GAC AGT CCA TAA L'invention a également pour objet une composition cosmétique ou pharmaceutique comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins ladite séquence d'acides désoxyribonucléiques, ou une séquence d'acides ribonucléiques sens ou antisens correspondants. Plus particulièrement ladite composition est destinée à renforcer ou diminuer la cohésion intercornéocytaire.
Elle a également pour objet l'utilisation desdites séquences d'acides désoxyribonucléiques pour la production du polypeptide de l'invention ou d'un acide ribonucléique correspondant par toute technique connue comme par exemple la synthèse in vitro, à partir de milieux reconstitués ou la synthèse par des organismes.
L'invention a également pour objet l'utilisation du polypeptide de l'invention ou de ses fragments de protéolyse, et de tout peptide synthétique déduit de sa séquence, pour préparer ou purifier, éventuellement à partir d'épiderme, toute molécule, structurale ou fonctionnelle, susceptible de se lier spécifiquement audit polypeptide purifié ou auxdits fragments de protéolyse purifiés ou audit peptide synthétique. Cette molécule peut notamment correspondre à d'autres protéines structurales spécifiques des cornéodesmosomes et diverses enzymes de la couche cornée, de type "protéases", "glycosidases" ou "phosphatases".
L'invention a également pour objet l'utilisation du polypeptide de l'invention ou de ses fragments de protéolyse et de tout peptide synthétique déduit de sa séquence, pour préparer des antisérums et anticorps monoclonaux spécifiques, visant notamment à purifier cette protéine et ses fragments. Par extension, I'invention a également pour objet toute utilisation de ladite séquence pour produire des anticorps ou fragments d'anticorps recombinants, quel que soit le système biologique utilisé pour produire ces derniers.
Quelle que soit leur nature, les compositions de l'invention peuvent être ingérées, injectées ou appliquées sur la peau (sur toute zone cutanée du corps) ou les muqueuses (buccale, jugale, gingivale, génitale, conjonctivale, ...).
De préférence, les compositions de l'invention sont appliquées sur la peau ou les muqueuses.
Selon le mode d'administration, les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées.
Pour une application topique sur la peau, la composition peut avoir la forme notamment de solution aqueuse ou huileuse ou de dispersion du type lotion ou sérum, d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), ou de suspensions ou émulsions de consistance molle du type crème ou gel aqueux ou anhydres, ou encore de microcapsules ou microparticules, ou de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique ou de mousses ou encore sous forme de compositions pour aérosol comprenant également un agent propulseur sous pression. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles.
Ces compositions constituent notamment des crèmes de nettoyage, de protection, de traitement ou de soin pour le visage, pour les mains, pour les pieds, pour les grands plis anatomiques ou pour le corps (par exemple crèmes de jour, crèmes de nuit, crèmes démaquillantes, crèmes de fond de teint, crèmes anti-solaires), des fonds de teint fluides, des laits de démaquillage, des laits corporels de protection ou de soin, des laits anti-solaires, des lotions, gels ou mousses pour le soin de la peau, comme des lotions de nettoyage, des lotions anti-solaires, des lotions de bronzage artificiel, des compositions pour le bain, des compositions désodorisantes comprenant un agent bactéricide, des gels ou lotions aprèsrasage, des crèmes épilatoires, des compositions contre les piqûres d'insectes, des compositions anti-douleur, des compositions pour traiter certaines maladies de la peau comme l'eczéma, la rosasée, le psoriasis, les lichens, les prurits sévères.
La composition selon l'invention peut aussi être une composition pour les soins du cuir chevelu, et notamment un shampooing, une lotion de mise en plis, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant, une composition de teintures (notamment teintures d'oxydation) éventuellement sous forme de shampooings colorants, des lotions restructurantes pour les cheveux, une composition de permanente (notamment une composition pour le premier temps d'une permanente), une lotion ou un gel antichute, un shampooing antiparasitaire, etc.
Cette configuration est également valable dans le cas de plusieurs cordons rectilignes.
La répartition de la brasure sur le composant et le substrat peut être nécessaire pour atteindre un gros volume de brasure impossible à faire tenir sur un seul cordon segmenté.
On a considéré précédemment l'assemblage d'un substrat et d'un composant par l'intermédiaire d'un cordon de brasure et de billes de brasures placées de part et d'autre du cordon.
Cependant on peut également réaliser un assemblage conforme à l'invention au moyen d'un seul cordon de brasure en maintenant, par des micromanipulateurs appropriés, le composant dans la bonne position par rapport au substrat jusqu'à ce que la brasure soit solide.