INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Exemple 4 : Impact de l'amplification du gène mal E sur la production de L-lysine en fermenteur, lors de fermentations à teneur initiale en glucose réduite.
Les conditions générales de fermentation sont les mêmes que pour l'exemple 3 hormis la teneur initiale en glucose dans le milieu FM4 qui est réduite à 75 g/1 de manière à permettre une croissance plus rapide.
L'évolution de la densité optique est indiquée à la figure 7. On constate que dans ces conditions la croissance est plus rapide que précédemment Après 69H les fermenteurs sont arrêtés et analysés Les résultats des expériences en doublon sont les suivants (tableau V): Tableau V : Production de L-lysine en fermentations à teneur réduite en glucose (résultats à 69H).
Souche D.O. 660nm Lys HCl g/l Lys HCl g Rendement g/g ATCC21253 (pCGL 243) 42,6 +/-1,7 28,3 +/-0,8 33,6 +/-0,8 18,5% +/-0,5 (Témoin) ATCC21253
(pMF22) 43,0+/-1,7 30,2+/-0,8 36,0+/-0,8 19,5% +/-0,5
(Ptrc-malE) La souche ATCC21253 (pMF22) permet une production de L-lysine majorée de 7% Le rendement est augmenté de 1 point ce qui correspond à une amélioration relative de 5%
La stabilité plasmidique dans les souches transformées a été vérifiée. A l'issue de la fermentation, un prélèvement a été effectué, étalé sur milieu non sélectif (BHI) puis repiqué sur milieu sélectif (BHI contenant 25mg /l de kanamycine) et non sélectif (BHI). Un nombre équivalent de clones a poussé à la fois sur les deux milieux.
Les plasmides pCGL243 et pMF22 sont maintenus de manière stable dans les souches étudiées.
Mesure de l'activité enzyme malique.
.Des prélèvements ont été effectués à 24 H lors des fermentations réalisées ci-dessus pour la mesure de d'activité de l'enzyme malique.
Préparation des extraits Un prélèvement de 20 ml est effectué après 24H d'incubation, la DO étant alors voisine de 80. La suspension cellulaire est centrifugée 15 min à 3500 g et à 4 C. Le culot est lavé 2 fois dans du tampon Tris,HCl 100 mM pH 7,5, contenant 100 mM de KCI, 10 mM de MgCl2.
L'infection par le virus VIH-1-BRU est réalisé par incubation de la culture cellulaire MT4 durant 1 heure à 37 C en présence de ce virus. Après l'infection, les cellules sont lavées dans une solution tampon, centrifugées puis remises en culture dans le même milieu que celui décrit précédemment. La formation des cellules multinucléées géantes apparaît dès 48 heures et la majorité des cellules a fusionné en syncitia au 4ème jour. Cette culture va servir de témoin. Une même culture cellulaire est mise à incuber à 37 C en présence de différentes concentrations du composé à tester dès que l'infection a été réalisée. Le nombre de syncitia est évalué microscopiquement à partir du Sème jour après l'infection.
Par référence à la culture témoin, on peut déterminer la concentration du composé qui permet d'inhiber de 50% la réplication virale (EC5o).
Par ailleurs, la détermination de la cytotoxicité permet de connaître l'action des composés à tester sur la biologie des cellules saines et leur aptitude à ne pas interférer avec le développement de ces cellules si ces dernières ne sont pas infectées par le virus. La cytotoxicité du composé à tester est mesurée par incubation de la même lignée cellulaire MT4 saine à 37 C sous une atmosphère à 5% de CO2 seule ou en présence du composé à tester.
Après incubation, les cellules sont mises en suspension et des échantillons sont prélevés et mélangés au Bleu Trypan pour déterminer la dose correspondant à l'inhibition de 50% de la prolifération cellulaire (CC50).
On peut ainsi déterminer l'Index de Sélectivité (SI) qui est le rapport CC50 / EC50 d'une molécule donnée, sachant qu'il doit être supérieur à 500 pour que la molécule soit cliniquement intéressante.
Résultat Les EC50, CC50 et SI de composés conjugués conformes à l'invention sont rapportés dans le tableau suivant :
EC50 CC50 SI
ILC50 (Ftm)
(M) ( M) HO-C(O)-CH2-C(O)-OAZT 2 0,01 > 50 > 5000
HO-C(O)-(CHz)z-C(O)-OAZT 3 0,01 > 50 > 5000 HO-C(O)-(CH2)3-C(O)-OAZT 4 0,007 > 50 > 7143 HO-C(O(CH2)4-C(O)-OAZT 5 0,03 > 50 > 1667 HO-C(O)-(CH2)5-C(O)-OAZT 6 0,01 > 50 > 5000 HO-C(O)-(CH2)eC(O)-OAZT 7 0,07 > 50 > 714 HO-C(O)-(CHz)iz-C(O)-OAZT 8 0,03 > 50 > 1667 HO-C(O)-O-C(OOAZT 9 0,01 > 50 > 5000 HO-C(O)-(CH2)3-NH-C(O)-OAZT19 0,1 > 50 > 5000
HO-C(O)-(CH2)3-C(O)-OAZT 21 0,005 > 50 > 10000 AZT 0,05 > 100 > 2000
HO-C(O>(CH2)2-C(O)-Od4T10 0,05 50 100 HO-C(O(CHz)a-C(O)-Od4T 11 0,5 > 50 > 1000 HO-C(0)-(CH2)6-C(0)-Od4T12 0,05 50 1000 d4T 0,1 > 50 > 500 HO-C(0)-(CH2)rC(O)-OddI 13 0,05 > 50 > 1000
ddl 0,01 >50 >500
EC50 : concentration requise pour inhiber 50% de la formation de syncitia sur les cellules MT4 CC50 : concentration requise pour induire de 50% la lyse de cellules MT4 non infectées.
SI : index de sélectivité = CC50 / EC 50.
CONCLUSION Les dérivés dicarboxyliques de molécules nucléosidiques antivirales manifestent par rapport à la molécule de base une augmentation de l'activité antivirale et une amélioration de l'indice thérapeutique SI.
La sélection d'un septième bouton (307) de la barre (30) d'outils provoque l'émission d'une requête par le gestionnaire (12) du site vers la base (11 ) de données. Cette requête est une requête d'interrogation et est traitée par la base (11) de données pour collecter les informations relatives à l'activation et à la désactivation de fonctions particulières du dispositif (100 1 à 100 n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles sélectionné. Ces informations sont, par exemple, collectées dans au moins un des troisièmes tableaux (1103, fig. 6B et 6C) de la base de données (11) Une fois ces informations collectées, la base (11) de données répond à la requête du gestionnaire (12) du site qui construit alors un dixième écran (1010) représenté figure 2J et comprenant une pluralité de zones (1011. 1 à 1011. 5) de saisie indiquant l'activation ou la désactivation d'une fonction particulière du dispositif
(100. 1 à 100.n, fig. 1) de reproduction d'informations audiovisuelles Une première fonction consiste à autoriser ou non l'utilisation d'une télécommande pour faire fonctionner le dispositif (100. 1 à 100 n, fig. 1) de reproduction d'informations audiovisuelles. Une deuxième fonction consiste à autoriser ou non le saut de la chanson qui est en cours de reproduction Une troisième fonction consiste à autoriser ou non la répétition successive d'une même chanson. Une quatrième fonction consiste à autoriser ou non l'utilisation de crédits gratuits sur le dispositif (100. 1 à 100 n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles.
L'opérateur peut modifier le statut de chaque fonction en modifiant l'affichage des zones (1011.1à 1011 5) de saisie. Le dixième écran (1010) comprend également une zone (1013) provoquant l'annulation des modifications réalisées et une zone de sélection (1012) qui provoque la validation des modifications réalisées et l'envoi d'une requête de modification par le gestionnaire du site (12) vers la base (11) de données. La réception de cette requête par la base (12) de données provoque la mise à jour des informations relatives au statut des fonctions particulières du dispositif (100 1 à 100 n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles et également, la création d'un fichier, par la base (11) de données, contenant les informations de mise à jour. Ce fichier ou les informations qu'il contient, sont mémorisés et destinés à être téléchargés sur le dispositif (100 1 à 100.n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles concerné par la mise à jour dès que ce dernier établira une communication téléphonique avec le serveur central (10) Le téléchargement de ce fichier ou des informations sur le dispositif (100. 1 à 100.n, fig. 1) de reproduction d'informations audiovisuelles provoque la mise à jour des statuts des fonctions particulières du dispositif (100 1 à 100 n, fig. 1) de reproduction d'informations audiovisuelles conformément au choix de l'opérateur. Les informations correspondant à ce fichier sont, par exemple, contenues dans l'une des tables du dixième ensemble de tableaux (1110, fig. 5) de la base de données (11) Lors de la prochaine communication du dispositif (100. 1 à 100.n, fig. 1) de reproduction d'informations
audiovisuelles avec le serveur (11), ce dernier vérifie dans les tables du dixième ensemble de tableaux (1110, fig. 6F), si des instructions sont destinées au dispositif (100. 1 à 100.n, fig. 1) de reproduction d'informations audiovisuelles concerné. Si tel est le cas, le serveur (10) construit un fichier de commandes à partir des informations contenues dans une table du dixième ensemble de tableaux (1110, fig. 6C) correspondant, puis le serveur (10) télécharge ce fichier vers le dispositif (100. 1 à 100.n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles concerné La sélection d'un huitième bouton (308) de la barre d'outils (300) provoque l'affichage d'un onzième écran (non représenté) par le gestionnaire (12) du site Ce onzième écran comprend une pluralité de fenêtres permettant à l'opérateur de définir une configuration de base pour tout ou partie des dispositifs (100. 1 à 100.n) de reproduction d'informations audiovisuelles sélectionnés Les différentes zones permettent, notamment de définir le type d'interface graphique qui sera affiché sur les systèmes (100.1à 100 n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles, ainsi que les paramètres de fonctionnement qui seront installés par défaut sur les systèmes (100 1 à 100 n, fig 1 ) de reproduction d'informations audiovisuelles sélectionnés, tels que les heures de disponibilité du modem du dispositif (100 1 à 100.n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles pour procéder à des communications entre le dispositif (100. 1 à 100 n, fig. 1) de reproduction d'informations audiovisuelles et le serveur (10). Le onzième écran comprend également une zone de sélection provoquant la validation des informations saisies sur le onzième écran et déclenche la construction puis l'envoi d'une requête par le gestionnaire (12) du site, vers la base (12) de données Cette requête comporte toutes les informations saisies par l'opérateur sur le onzième écran. Le traitement de cette requête par la base de données (11) provoque la création d'un fichier de mise à jour. Ce fichier ou les informations qu'il contient, sont mémorisés et destinés à être téléchargés sur les systèmes (100.1à 100 n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles concernés par la mise à jour dès que ce dernier établira une communication téléphonique avec le
serveur central (10). De même, ce fichier ou les informations seront téléchargées sur un nouveau dispositif (100 1 à 100 n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles géré par l'opérateur dès la première communication du dispositif (100. 1 à 100.n, fig. 1) de reproduction d'informations audiovisuelles au serveur (10) central. Le téléchargement de ce fichier ou des informations sur un dispositif (100. 1 à 100 n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles provoque la mise à jour de sa configuration et de ses paramètres de fonctionnement conformément à la configuration définie par l'opérateur par l'intermédiaire du onzième écran Les informations correspondant à ce fichier sont contenues, par exemple, dans l'un des dixièmes tableaux (1110, fig. 6F) de la base de données (11) Lors de la prochaine communication du dispositif (100.1à 100 n, fig. 1) de reproduction d'informations audiovisuelles avec le serveur (11), ce dernier vérifie dans les dixièmes tableaux (1110, fig. 5), si des instructions sont destinées au dispositif (100 1 à 100 n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles Si tel est le cas, le serveur (10) construit un fichier de commandes à partir des informations contenues dans les dixièmes tableaux (1110, fig 6C) correspondants, puis le serveur (10) télécharge ce fichier vers le dispositif (100 1 à 100 n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles Lorsque l'opérateur sélectionne plusieurs systèmes (100.1à 100 n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles lors de l'affichage du premier écran (200), soit l'affichage des écrans précédemment décrits est réalisé pour chaque dispositif (100. 1 à 100.n, fig. 1) de reproduction d'informations audiovisuelles de la sélection, soit les opérations de mise à jour sont prises en compte pour tous les systèmes (100. 1 à 100.n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles de la sélection Le choix entre l'une ou l'autre des possibilités est réalisé, par exemple, par l'affichage d'écrans supplémentaires (non représentés) invitant l'opérateur après chaque validation à indiquer le ou les numéros des dispositifs (100. 1 à 100.n) de reproduction d'informations audiovisuelles auxquels doivent s'appliquer les mises à jour qui viennent d'être validées
D'une manière générale, les opérations de gestion des dispositifs (100. 1 à 100 n) de reproduction d'informations audiovisuelles ou de visualisation des informations relatives à l'utilisation des dispositifs (100 1 à 100 n) de reproduction d'informations audiovisuelles, réalisées par l'intermédiaire des différents écrans affichés par le gestionnaire (12) du site " Internet " correspondent au moins aux opérations de gestion et de visualisation disponibles sur chaque dispositif (100. 1 à 100 n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles.
On conçoit que le système selon l'invention facilite toutes les opérations de gestion et de configuration réalisées par les opérateurs sur les systèmes (100. 1 à 100.n, fig. 1) de reproduction d'informations audiovisuelles.
En effet, l'exécution de ces opérations ne nécessite plus le déplacement de l'opérateur sur le lieu d'implantation de chaque dispositif (100 1 à 100 n, fig 1) de reproduction d'informations audiovisuelles. De même, lorsqu'un opérateur gère plusieurs systèmes (100. 1 à 100.n, fig. 1) de reproduction d'informations audiovisuelles simultanément, il peut réaliser en une seule manipulation la reconfiguration de tout ou partie des dispositifs (100.1à 100.n) de reproduction d'informations audiovisuelles.
Il est clair que d'autres modifications à la portée de l'homme de métier entrent dans le cadre de l'invention.
PROCEDES ET DISPOSITIFS POUR SUBSTITUER UNE VOIX SYNTHETISEE DYNAMIQUEMENT A DES VOCABULAIRES IDENTIFIES AUTOMATIQUEMENT Champ de l'Invention La présente invention concerne de façon générale le traitement des signaux audio et, de façon plus particulière, des procédés et un dispositif pour effectuer une reconnaissance dynamique et une édition de parties d'un signal audio, contenant un ou plusieurs mots associés à un ou plusieurs vocabulaires sélectionnés, par utilisation des techniques de reconnaissance vocale et d'édition audio, respectivement.
Arrière-plan de l'Invention Du fait de la réglementation officielle concernant les ondes hertziennes, les radiodiffuseurs doivent fréquemment préprojeter ou préfiltrer les films et d'autres produits de distraction pour savoir si la teneur est acceptable, par exemple si l'on y trouve des blasphèmes, de l'argot, des insinuations ou insultes raciales ou autres, un langage de caractère sexuel ou violent, etc. Fréquemment, les radio-diffuseurs "occultent par un bîpe" un tel terme lexical, c'est à dire transmettre un son bruyant simultanément au, ou à la place du mot ou des mots inacceptable (s) , si bien que le mot ou les mots ne sont pas entendus par un auditeur. Lorsqu'il s'agit de transmission en direct, on utilise fréquemment des délais pour permettre au radiodiffuseur d'occulter le matériau inacceptable avant de le transmettre. Une autre approche consiste à assourdir complètement le son. D'autres techniques comprennent des pistes sonores alternatives d'enregistrement instantané utilisant la voie d'origine des acteurs, ou même utilisant de nouveaux acteurs pour pratiquer un doublage vocal.
Cependant aucune de ces approches classiques n'est de nature automatique ou bien fonctionne sans surveillance. C'est à dire que, dans les cas où l'on occulte ou lorsque l'on assourdit, un radiodiffuseur doit activement participer au processus de filtrage durant les transmissions ou les émissions en direct, en surveillant le matériau à transmettre puis en prenant une certaine disposition pour lancer l'occultation ou l'assourdissement lorsqu'il entend un terme lexical inacceptable. De façon désavantageuse, l'approche demande d'avoir une supervision humaine immédiate et une réponse manuelle lorsqu'un tel matériau est détecté. Si la personne est momentanément distraite ou simplement ne fait pas suffisamment attention, le matériau inacceptable, qui autrement aurait été "occulté", peut être vraiment transmis. En outre, la création d'une piste sonore alternative avec des doublages vocaux doit également être surveillée et n'est pas non plus automatique. Egalement, aucune de ces approches classiques n'est en mesure de fonctionner de façon satisfaite en temps réel. Les délais utilisés lorsque l'on a des émissions en direct sont de l'ordre de plusieurs secondes ou plus.
Des efforts ont été tentés pour développer des produits qui visent à permettre à des parents de contrôler automatiquement le terme lexical qu'ils considèrent être inaproprié pour leurs enfants. Un logiciel de blocage destiné à internet et ce que l'on appelle les "V-chip" constituent des exemples de tels produits. Cependant, ces produits sont tous à base de texte et, par conséquent, ne fournissent pas, parmi d'autres choses, une détection et/ou une édition automatique d'un terme lexical inacceptable d'après les signaux vocaux.
Par conséquent, il serait souhaitable de disposer de procédés et dispositifs permettant une détection et une édition automatiques et non surveillée d'un terme lexical inacceptable, contenu dans un signal vocal d'entrée tel que, par exemple, un signal vocal lié à une transmission d'émission.
Résumé de l'Invention La présente invention fournit des procédés et dispositifs permettant la détection et l'édition automatiques et non surveillées d'un terme lexical sélectionné contenu dans un signal vocal d'entrée. Le terme lexical peut être un terme lexical inacceptable tel que, par exemple, des blasphèmes, de l'argot, des injures, des insinuations ou insultes raciales ou autres, un langage de caractère sexuel ou violent, etc. Le terme lexical inacceptable peut être défini par des standards de termes lexicaux, qui émanent des autorités officielles. Selon un aspect large de l'invention, un procédé de traitement dynamique d'un signal vocal comprend premièrement la détection automatique du fait qu'une partie du signal vocal comprend un terme lexical associé à un ou plusieurs vocabulaires de termes lexicaux. La partie du signal vocal est ensuite éditée automatiquement lorsqu'un tel terme lexical est détecté, d'une manière telle que le terme lexical détecté ne soit pas perceptible de façon audible. Une détection automatique peut être effectuée en utilisant des techniques de reconnaissance vocale et, de préférence, en utilisant les techniques de retouche de mots bien connues. I1 doit être évident que le terme "signal vocal" ou "signal audio", tel qu'utilisé, ici est destiné à comprendre de façon génèrale une ou plusieurs formes d'un terme lexical audio, par exemple, mais sans se limiter à des paroles prononcées, associées à un discours individuels, des dialogues, de la musique, de la vidéo, etc.
Selon un premier mode de réalisation l'étape d'édition automatique comprend le remplacement automatique de la partie du signal vocal contenant le terme lexical, par une partie de signal vocal modifiée, ayant au moins un paramètre vocal (par exemple associé à une excitation de la zone vocale, un filtre de zone vocale, etc.) qui soit une modification d'au moins un paramètre vocal dans la partie du signal vocal contenant le terme lexical. Selon un deuxième mode de réalisation de l'invention, l'étape d'édition automatique inclus l'assourdissement automatique de la partie du signal vocal contenant le terme lexical. Selon un troisième mode de réalisation de l'invention, l'étape d'édition automatique comprend le remplacement automatique de la partie de signal vocal contenant le terme lexical par un signal acoustique (par exemple, un bîpe).
Les extraits protéiques sont obtenus par cassage des bactéries pendant 5min avec Ig de billes de verre (50 m de diamètre) traitées à l'HCI Les protéines cytosolubles sont récupérées dans le surnageant par centrifugation pendant 15min à 13000rpm.
Le dosage des protéines est effectué par la méthode de Lowry et al. (1951) en utilisant l'albumine de sérum bovin comme standard. Le dosage de l'activité enzymatique de l'enzyme malique est réalisé par la méthode de Mori et Shiio (1987) Le dosage de l'activité enzymatique de la glutamate deshydrogénase est réalisé par la méthode de Meers et al .(1970).
-Afin de s'assurer que le fragment porté par pMF12 porte bien le gène malle dans son intégralité, un dosage de l'activité de l'enzyme malique a été réalisé dans les extraits protéiques issus de cultures des clones de E. coli XH11 (pif12) comme décrit plus haut, ainsi qu'avec de l'enzyme malique purifiée de foie de poulet qui a servi de témoin positif (Tableau Il) Le dosage de la glutamate deshydrogénase a servi de standard interne d'intégrité des extraits enzymatiques (non reporté) Tableau II : spécifiques en nmol/min/mg protéines chez E.coli
Souches Activité spécifique enzyme malique
E.coli XHll 0,86 E.coli XH11 (pMFl2) 126,9
Enzyme malique de poulet 23 166 II ressort de ces dosages que le fragment porté par pMF12 contient bien le gène fonctionnel malE de C. glutamicum ATCC17965 et que celui-ci s'exprime chez E. coli XH11sous contrôle de son propre promoteur.
Exemple 2 : Expression du gène malE chez C gllltamicum 2.1 -Construction d'un vecteur d'expression du gène malE. Afin de surexprimer le gène malE de C. glutamicum de manière constitutive, la phase ouverte de lecture du gène malE, déduite de la séquence nucléotidique, a été placée sous le contrôle du promoteur hybride Ptrc. Il a été montré que ce promoteur s'exprime de manière constitutive chez C. glutamicum (Delaunay et al., 1998). Cette fusion a été ensuite placée sur le vecteur navette E. colilcoryliebacteriiim pCGL243 (Reyes et al , 1991).
Dans un premier temps une amplification par PCR, selon les conditions décrites plus haut (exemplel), a été réalisée avec l'ADN de C. gliitamiciim ATCC 17965 servant de matrice et les oligonucléotides EM5 et EM6 servant d'amorces. oligonucléotide EM5 5' GGCTAAATGTCATGACCATCGACC 3' (SEQ ID n 5) oligonucléotide EM6 : 5' GTTTGATTTAAAGGTCTGGTCTCG 3' (SEQ ID n 6) L'oligonucléotide EM5 correspond à la séquence chevauchant le codon ATG d'initiation de la traduction de malE, il est modifié de sorte à créer un site de restriction Rca I (TCATGA) au niveau du codon ATG L'oligonucléotide EM6 correspond à la séquence en aval du terminateur probable du gène malE et contient un site de restriction DraI (TTTAAA) Le fragment d'ADN obtenu, coupé par les enzymes Réal et DraI, a été ligaturé dans le vecteur pKK388-1 (Clontech) préalablement coupé par les enzymes de restriction NcoI et SmaI. Cette construction donne naissance au plasmide pMF 21(Fig 4) dans lequel la phase ouverte de lecture du gène malE est placée sous le contrôle du promoteur Ptrc Enfin, le fragment d'ADN Sali, comprenant l'intégralité de la fusion Ptrc-malE, a été isolé de pMF21 et introduit au site Sali du vecteur navette pCGL243, donnant ainsi naissance à pMF22 (Fig 5).
2-2 Surexpression du gène malE chez C. glutamicum 2262 Le plasmide pMF22 a été introduit dans la souche de C. glutamicum 2262 par électroporation (Bonamy et al., 1990).
Pour effectuer les dosages enzymatiques, les cellules sont récoltées en phase stationnaire de croissance en milieu BMCG (Liebl et al., 1989), additionné de lactate de sodium 2%w/v comme source de carbone.
Le culot bactérien de 25ml de culture (D0570 13,5) est lavé deux fois en KCl 0,2%, repris par 1ml de tampon TrisTricarballylate 100mM pH7,8.
Les extraits protéiques sont obtenus par cassage des bactéries pendant 2x5min (1800 vibrations/min avec Ig de billes de verre (106 um de diamètre) traitées à l'HCI. Les protéines cytosolubles sont récupérées dans le surnageant par centrifugation pendant 15mnà 13000rpm.