INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Pour aller plus loin dans les possibilités de recyclage des éléments naturels au service de l'agriculture biologique et de l'environnement, I'invention a prévu la fabrication d'une autre gamme d'engrais biologique rétenteur d'eau, moins chère et à la portée de chaque commune agricole, comme le montrent les exemples 69 et 70.
Exemple 69: Fabrication de substances hydrophiles enrichies en boue de station d'épuration.
A la sortie de la boue dans une station d'épuration, on installe cinq réservoirs de transit présentant chacun une sortie de contrôle, le premier d'une capacité de 10000 litres chargé de boue, le deuxième d'une capacité de 1000 litres chargé en substance hydrophile et par exemple en polymère BARBARY PLANTE, le troisième d'une capacité de 3000 litres chargé d'un ou de plusieurs éléments d'engrais ou de produits de complément, le quatrième d'une capacité de 1000 litres chargé d'un produit désodorisant, et le cinquième réservoir d'une capacité de 1000 litres chargé de sciure de bois. Dans un mélangeur en forme de canal couvert dans lequel se trouve une vis sans fin, on verse successivement et régulièrement: la boue à raison de 10000 litres/heure, la substance hydrophile à raison de 100 kg/heure, le produit de complément comme de la potasse ou du phosphate, selon les besoins des cultures pour lesquelles le produit fini est destiné à raison de 500 kg/heure, un produit désodorisant à raison de 1 kg/heure et de sciure de bois à raison de 500 kg/heure. On recueille à la sortie du mélangeur le produit fini à l'état gommeux dans un réservoir à trompe pour l'emballage dans des sacs en plastique étanches de 50 litres chacun. On obtient 1111 litres de produit de substance hydrophile enrichie.
Cet exemple est susceptible d'être réalisé avec des pourcentages de compositions différentes en fonction de la qualité de la boue ou du sol à cultiver, des cultures ou de l'ensemble de ces données. II est également susceptible d'être réalisé avec la gamme de substance hydrophile de l'exemple 6 et avec tout autre produit fertilisant comme le fumier ou les déchets végétaux et animaux.
Exemple 70: Fabrication de substances hydrophiles enrichies en lisier désodorisant.
Dans un grand réservoir à fourche de mélange de contenance de 20000 litres, on verse 10000 litres d'eau. On fait tourner le mélangeur et on verse graduellement une quantité de lisier à raison de 5000 litres/heure et pendant une heure, c'est-à-dire un total de 5000 litres. On verse ensuite sur le mélange un produit désodorisant à raison de 15 litres, puis on continue à tourner le mélangeur jusqu'à son déchargement complet dans un canal de mélange semblable à celui de l'exemple précédent. A partir de quatre autre mélangeurs semblables à l'exemple 69, chargés respectivement de substance hydrophile, produit de complément, désodorisant et sciure de bois, on verse successivement et régulièrement, le lisier à raison de 15000 litres/heure, la substance hydrophile à raison de 150 litres/heure, le produit du complément de P205 ou K2O selon les besoins à raison de 100 kg/heure, le produit désodorisant à raison de 5 kg /heure et la sciure de bois à raison de 500 kg/heure. On dispose le produit sortant du canal dans un réservoir à trompe, pour emballer le produit fini dans des sacs en plastique hermétiques de 25 ou 50 litres chacun. On obtient ainsi 1670 kg de substance hydrophile enrichie avec du lisier.
Cet exemple est susceptible d'être réalisé avec une variété de composition différente de lisier ou fumier, produits hydrophiles en fonction du besoin final de chaque culture, ainsi qu'avec tout autre type de substance hydrophile et sans engrais de complément.
PRODUITS PHYTOSANITAIRES SELON L'INVENTION~' Afin d'augmenter l'efficacité des produits de traitement des plantes d'une part et réduire la pollution causée par l'usage de tels produits, I'invention a prévu la création d'une série de produits phytosanitaires hydrophiles selon les exemples 71 à92.
Exemple 71: Fabrication d'un fongicide hydrophile.
On prend un mélangeur d'une capacité de 250 litres, dans lequel on verse 97 kg de substance hydrophile d'origine végétale issue de l'exemple 6 ou toute autre substance hydrophile telle que le polymère BARBARY PLANTE. On fait tourner le mélangeur, pendant que le mélangeur tourne, on verse d'une manière contrôlée pendant 10 minutes 3 kg de fongicide tel que TACHIGAREN (voir exemple 50 pour sa composition) sur la substance hydrophile. On mélange l'ensemble pendant 20 minutes afin que le fongicide soit complètement absorbé par la substance hydrophile. On obtient ainsi 100 kg de produit fini prêt à l'emballage.
Exemple72: Fabrication d'un produit de complexe phytosanitaire à l'état gommeux Afin de réduire le coût de fabrication des produits phytosanitaires hydrophiles, conserver l'efficacité des agents actifs et multiplier le pouvoir contre plusieurs maladies ou parasites agricoles, I'invention a prévu la possibilité de fabrication d'une gamme de produits phytosanitaires multi-actions à l'état gommeux.
En effet l'actuel système de signalisation visuelle fixe n'est pas toujours fiable, surtout par temps de brouillard et de pluie, lorsque la visibilité est moindre.
Le dispositif de cette invention permet de palier au manque d'efficacité du système visuel de signalisation fixe des feux stop. L'emploi d'un 3ème feu stop clignotant capte plus sûrement l'attention et la vigilance du conducteur suivant le véhicule ainsi équipé.
Ce système de clignotant est commandé par le dispositif de freinage principal du véhicule agissant sur les feux stop. Cet appareil de clignotant est constitué par un générateur d'impulsions électroniques (en 12 ou 24 volts) coupant par intermittence l'arrivée du courant (dispositif analogue à une centrale de clignotant) . Ce principe fonctionne pendant toute la durée du freinage.
Les dessins annexes illustrent l'invention.
La figure 1/2 représente la coupe arrière d'un véhicule muni d'un 3ème feu de stop avec schéma de connexion, La figure 2/2 représente en coupe le schéma du générateur d'impulsion. Le branchement représenté sur ce dessin est un dispositif comportant un boîtier qui comprend - en 1 l'arrivée d'un signal positif du stop principal, - en 2 l'entrée du négatif, - en 3 la sortie positive de la commande du feu central clignotant, - en 4 la sortie négative du feu stop clignotant, - en 5 et 6 les résistances RA de 47 K, - en 7 une résistance RB de 100 K, - en 8 un condensateur CI de 0.1 UF, - en 9 un circuit intégré de NE 555, - en 10 un condensateur C2 de 1 UF, en 11 une résistance RL de 4.7 K, - en 12 un raccord négatif de T2N 3055.
Ce générateur d'impulsions aura les dimensions, non limitatives, de 3 cm pour la largeur sur 2 cm de hauteur et 5 cm de longueur.
Ce générateur d'impulsions est destiné à tous types de véhicules.
MAITRE-CYLINDRE TANDEM COMPACT A SORTIE PRIMAIRE DECALEE La présente invention concerne un maître-cylindre tandem hydraulique comprenant: - un corps percé d'un alésage longitudinal délimité par une paroi au moins partiellement cylindrique dont une première extrémité forme une ouverture, et dont une seconde extrémité est fermée par un fond, les première et seconde extrémités étant séparées par une distance sur laquelle sont définies des première et seconde sections de longueur contigües l'une à l'autre, et ce corps présentant une partie supérieure dans laquelle sont percées des première et seconde entrées pour un fluide hydraulique à basse pression; - des pistons primaire et secondaire, de forme cylindrique, susceptibles de coulisser respectivement dans les première et seconde sections de longueur, - une chambre de pression primaire, définie dans la première section de longueur entre les pistons primaire et secondaire, cette chambre renfermant au moins un premier ressort exerçant entre les pistons une première force élastique qui tend à écarter ces pistons l'un de l'autre; - une chambre de pression secondaire, définie dans la seconde section de longueur entre le piston secondaire et le fond, cette chambre renfermant au moins un second ressort exerçant entre le piston secondaire et le fond une seconde force élastique dans un sens qui tend à écarter ce piston secondaire du fond, - au moins quatre coupelles d'étanchéité, rendues solidaires du corps et comprenant des premières coupelles amont et aval fermant la chambre primaire et enserrant le piston primaire, et des secondes coupelles amont et aval enserrant le piston secondaire et séparant de façon étanche les chambres de pression primaire et secondaire, chaque coupelle aval étant plus proche du fond du corps que la coupelle amont qui enserre le même piston; - un premier canal de réalimentation reliant la première entrée de fluide à un premier volume intermédiaire situé entre les premières coupelles amont et aval, un second canal de réalimentation reliant la seconde entrée de fluide à un second volume intermédiaire situé entre les secondes coupelles amont et aval; et - des premier et second orifices situés dans la partie supérieure du corps, communiquant respectivement avec les chambres de pression primaire et secondaire et constituant les sorties respectives de ces chambres, le premier orifice se situant dans la seconde section de longueur et entre la première coupelle aval et la seconde coupelle amont.
Un maître-cylindre de ce type est connu dans l'art antérieur, tel que représenté par exemple par le document de brevet EP- 0 387 012.
Le maître-cylindre décrit dans ce document, a priori conçu pour présenter une compacité axiale satisfaisante, utilise en revanche, à l'intérieur du corps, une cartouche cylindrique qui conduit nécessairement à une augmentation non négligeable du diamétre externe du maître-cylindre.
Par ailleurs, dans la mesure où l'arrangement interne de ce maître-cylindre est conçu de manière telle que la cartouche se trouve à distance du piston primaire, ce dernier est par construction privé de guidage efficace, de sorte que toute poussée oblique lors de l'actionnement du maître-cylindre risque de provoquer le blocage du piston primaire dans l'alésage.
Dans ce contexte, la présente invention a pour but d'obvier aux invonvénients précités.
A cette fin, le maître-cylindre selon l'invention, par ailleurs conforme à la définition qui en est donnée dans le préambule ci-dessus, est essentiellement caractérisé en ce que les pistons primaire et secondaire sont guidés par la paroi de l'alésage, avec laquelle ils sont en contact, et en ce que le corps est en outre percé d'un premier passage longitudinal reliant la première coupelle aval, la seconde coupelle amont et le premier orifice, et communiquant avec la chambre de pression primaire par au moins un premier passage radial situé entre les première et seconde sections de longueur.
Dans un mode de réalisation adapté à une fabrication en grande série, le fond peut comprendre une pièce d'obturation rapportée sur le corps et recevant à coulissement le piston secondaire, cette pièce d'obturation pouvant alors être percée d'un second passage longitudinal mettant la seconde coupelle aval en communication avec le second orifice, et d'un second passage radial mettant le second orifice en communication avec la chambre de pression secondaire.
La réalimentation de la chambre de pression primaire peut être accélérée en dotant le maîtrecylindre d'un raccord cylindrique de réalimentation inséré dans le premier canal de réalimentation et traversant la première coupelle aval pour atteindre directement le premier volume intermédiaire.
Par ailleurs, il peut être avantageux de prévoir qu'une pièce de guidage, portant la première coupelle amont, soit montée sur la première extrémité de la paroi pour optimiser le guidage du piston primaire.
De plus, dans le cas d'un système d'amplification tel que défini ci-dessus, avec amorces, on s'affranchit de la nécessité de reconnaître le promoteur spécifique de l'enzyme, ce qui induisait dans des méthodes d'amplification telles que la Nasba ou la TMA des définitions d'amorces particulièrement complexes. Vis-à-vis d'autres systèmes utilisant des ARNpARNd telle que la Qss réplicase, ce système présente l'avantage d'être un système d'amplification de cible et non de sonde, réduisant les risques de faux positifs générés par les bruits de fond fréquents dans les méthodes d'amplification de sonde en outre, il ne requiert pas la présence d'une structure complexe de reconnaissance par l'enzyme.
EXEMPLES Exemple 1: Construction du gène de la T7 ARN polvmérase sous forme modulaire; expres sion et purification de la T7 ARN polymérase.
Le gène de la T7 ARN polymérase a été construit sous firme modulaire, en tenant compte des régions d'homologie avec les autres polymérases ainsi que des fonctions associées à certains domaines de la T7 ARN polymérase. n a été divisé en 10 régions ou cassettes (Figure la-A), chaque région étant délimitée par des sites de restriction uniques dans le vecteur de clonage. Six cassettes sont en caractéristiques en ce qu'elles contiennent respectivement un domaine ayant une similarité avec une partie du facteur sigma d'E.coli, un domaine ayant une homologie avec le répresseur lambda d'E.coli, un domaine impliqué dans la spécificité de promoteur des polymérases phagiques, les motifs A et C conservés chez les polymérases matrices dépendantes et le motif B conservé chez les polymérases ADN-dépendantes. Chaque région est amplifiée par PCR (F. M. Ausubel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J. G. Seidman, et al, Current Protocols in Molecular Biology (Current Protocols, 1993)) (Figure la-B 1) à partir du gène sauvage (gène 1) en utilisant des amorces définies comme suit: (i) ces amorces contiennent des mutations silencieuses permettant l'introduction de sites de restriction délimitant les cassettes; (ii) l'amorce située en position 3' d'une région et l'amorce située en position 5' de la région contiguë sont partiellement chevauchantes. Les produits d'amplification contigus sont mélangés et réamplifiés en utilisant les amorces externes (Figure la-B 1). Les 5 fragments générés sont clonés dans le vecteur PARTI (Invitrogen) (Figure la-B2). A partir des 5 fragments clonés, le gène de la T7 ARN polymérase est reconstruit de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3', par des sous-clonages successifs dans le vecteur de clonage pGNEX (Figure la-B3). Ce vecteur est dérivé du plasmide pGEM- 1 (Promega) dans lequel le polylinker est remplacé par un adaptateur contenant les sites de restriction NcoI-EcoRI-XbaI. Le gène modulaire de la T7 ARN polymérase (T7 ARN pol) ainsi obtenu contient 17 sites uniques de clonage dans le pGNEX dont 1 1 sites nouvellement introduits (Figure la-C). Ce gène est ensuite sous-cloné dans le vecteur d'expression pMR (Figure lb). Ce vecteur, dérivé du vecteur pMH (V. Cheynet, B. Verrier, F.
Mallet, Protein expression andpurification 4, 367 (1993)), contient le promoteur fort tac régulé par IPTG (isopropyl-bêta-D-tiiiogalactopyranoside), un court minicistron entouré de 2 sites de liaison des ribosomes constituant un contexte efficace pour l'initiation de la traduction et une queue polyhistidine fusionnée à l'extrémité N-telTminale de la protéine exprimée permettant sa purification par chromatograpllie d'affinité pour un ion métallique. Le gène codant pour le répresseur laclq permettant un meilleur contrôle de l'expression est également présent dans pMR.
Ce vecteur d'expression est transformé selon les méthodes classiques (F. M. Ausubel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J. G. Seidman, et al, Current Protocols in Molecular Biology (Current Protocols, 1993)) dans la souche bactérienne E.coli BL21. Une préculture est utilisée pour inoculer 30 ml de milieu de culture. L'expression des protéines est induite par 1PTG pendant 4 h à 37"C dès que la densité optique à 600 nm de la culture atteint 0,6. La T7 ARN pol ainsi exprimée représente 30 % des protéines bactériennes totales (Figure Ic). Elle est ensuite extraite des bactéries par lyse (sonication) en présence d'un détergent. A partir de la fraction d'extraction soluble, la T7 ARN pol est purifiée par chromatographie d'affinité pour l'ion Co2+ et éluée par un gradient d'imidazole. Elle est analysée sur un gel SDS-PAGE et visualisée par coloration au bleu de Coomassie (Figure Ic). L'absence de produits de dégradation est vérifiée par Western Blot avec un anticorps polyclonal anti T7 ARN pol produit chez le cobaye et un anticorps monoclonal anti MRGSH6 commercial (Qiagen). L'absence d'activités parasites endonucléase, exonucléases et RNase est vérifiée selon le protocole décrit par He et al (B. A. He, M. Rong, D. L. Lyakhov, H. Gartenstein, G. Diaz, et al, Protein Expr Purif 9, 142 (1997)). A partir de 20 ml de culture, 700 à 800 g d'enzymes, de pureté supérieure à 95 %, sont obtenus de manière reproductible. Le rendement de purification est de 75 %.
Les mutations ponctuelles sont créées par PCR séquentielle (F. M. Ausubel, R Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J. G. Seidman, et al, Current Protocols in Molecular Biology (Current Protocols, 1993)) (ou double PCR), de la même façon qu'avaient été introduits les sites de restriction: les amorces internes contiennent la mutation à introduire; les amorces externes encadrent la région à muter et contiennent les sites de restriction délimitant cette région dans le gène modulaire. Cette cassette ainsi mutée est ensuite clonée dans le gène modulaire. Des oligonucléotides synthétiques peuvent également remplacer une cassette complète.
Légende des figures de l'exemple 1: Figure la : illustre la stratégie d'amplification pour la construction du gène modulaire de la T7 ARN polymérase. (A): Division du gène de la T7 ARN polymérase (flèches verticales) par rapport aux régions d'intérêt. Les régions notées de I à 6 sont: 1, homologie avec une partie du facteur sigma d'E. coli 2, homologie avec le répresseur lambda d'E.coli ; 3, motif A; 4, motif B ; 5, spécificité de promoteur des polymérases phagiques; 6, motif C. (B) : (1) Position des amorces contenant les mutations silencieuses pour la création des sites de restriction (); Nc, NcoI; Bc, Bcll; H, Hindi!!; Sc, Sacs; P, PstI; Bg, Bglll; Nd, NdeI; Xo, XhoI; C, Clal, , SI, Sali ; Xb, XbaI. L'extension par PCR chevauchante conduit à 5 fragments contenant 3 sites de restriction (Fl à F5). Sub-cloning signifie: sous-clonage. (2) Chaque frag ment ainsi généré (FI à F5) est cloné dans le vecteur pCRIl. E, EcoRl. (3) Reconstruction du gène modulaire de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3', en utilisant à chaque étape le site de restriction commun à 2 fragments et le site de restriction EcoRI du vecteur pCRII et du vecteur de clonage pGNEX; le site de restriction Xbal commun au dernier fragment et au vecteur pGNEX est utilisé pour le dernier sous-clonage. (C) Structure du gène modulaire de la T7 ARN polymérase et position des sites de restriction uniques dans le vecteur pGNEX déjà existants (en bas) et créés par mutagénèse (en haut).
Figure lb : illustre la structure du vecteur d'expression pMR contenant le gène modulaire de la T7 ARN polymérase. Ptac: promoteur tac (boîte noire); RBS1-MC-RBS2, minicistron entouré de 2 sites de liaison des ribosomes (flèche blanche); (His)6T7RNAPcas, gène modulaire de la T7 ARN polymérase (flèche grise); rrnB T1 T2, terminateurs de transcription forts (boîte avec pointillés); bla, gène de résistance à l'ampicilline (flèche noire); pMBl ori/M132 ori-, origines de réplication (fine boîte blanche); lacis, gène codant pour le répresseur lacis (flèche rayée); certains sites de restriction sont indiqués, dont les nouveaux sites introduits par mutagénèse (soulignés).
Figure lc: montre les profils électrophorétiques obtenus permettant l'analyse de l'expression et de la purification de la T7 ARN polymérase. Les lysats bactériens sont préparés à partir de imi prélevés dans 30 ml de culture pour contrôler l'expression de la T7 ARN polymérase en présence (+) ou absence (-) d'IPTG. La T7 ARN polymérases est extraite à partir de 20 ml de la même culture. La fraction soluble est chargée sur la colonne de purification (piste L) et la T7 ARN polymérase est éluée (piste E) par un gradient d'imidazole. M, marqueur de poids moléculaire. Les protéines sont visualisées sur un gel 10 % SDS-PAGE par coloration au bleu de Coomassie. La flèche indique la position de la T7 ARN polymérase.
Exemple 2 : Transcnption de matrices ARN et ADN par la T7 ARN polymérase mutée R627A dans un contexte promoteur dépendant.
Les systèmes matriciels utilisés dans cet exemple sont présentés schématiquement figure 2a. Le système de transcription ADN simple brin comprend un brin matrice (a) de 50 bases de séquence 3'AI IATGCTGAGTGATATCCCAACCGGCGTCACAAGTGAGTACCAATACCG5' et hybhdé des positions - 17 à + 1 au brin promoteur non-matrice (b) de séquence 5'TAATACGACTCACTATAG 3'(bloqué à son extrémité 3'). Le système de transcription ADN double brin comprend le brin matrice (a) hybridé au brin non matrice (c) de séquence 5'TAATACGACTCACTATAGGGTTGGCCGCAGTGTTCACTCATGGTTATGGC3'.
Le système de transcription ARN simple brin est formé d'un brin hybride ADN des positions - 17 à -1 et ARN des positions +1 à +33 de séquence 3'ATTATGCTGAGTGATATCCCAACCGGCGUCACAAGUGAGUACCAAUACCG 5', hybridé au brin promoteur non-matrice (b). Les transcrits complets attendus sur les trois systèmes sont de 33 bases.
Les réactions sont faites dans 20 p1 d'un tampon dérivé de celui décrit par Milligan et col (J. F. Milligan, D. R Groebe, G. W. Witherell, O. C. Uhlenbeck, Nucleic Acids Res. 25, 8783 (1987)), à savoir Tris-HCl 40 mM, pH 8,1, spermidine lmM, PEG 8 % (g/V), triton 0,01 % (V/V), BSA 5 ,ug/100 l, 1 p1 (40 u) de RNAguard porcine (Pharmacia Biotech), UTP 12,5 uM, a 32P UTP 0,5 FuCi (Amersham, 10 mCi/ml 400Ci/mmol) 0,4 mM des trois ribonucléosides triphosphate A, G, C, Mg(OAc)2 6 mM. La concentration en matrice est fixée à 1011 copies de chaque brin dans 20 ,ul de réaction. La T7 ARN polymérase sauvage est utilisée à 0,5 RM (100 ng / 20 cri1), la T7 ARN polymérase mutée R627A à 3,65 ,uM (730 ng / 20 Cil). Avant d'ajouter les enzymes, les réactions sont dénaturées 5 minutes à 65"C dans un bloc chauffant puis ramenées progressivement à 37"C. Les réactions sont initiées par l'ajout des polymérases, incubées l heure à 37"C puis stoppées par ajout d'un volume égal de bleu formamide 2x (formamide 90 %, EDTA 25 mM, xylène cyanol 0,02 %, bleu de bromophénol 0,02 %) et dénaturées 5 minutes à 65"C. 20 ul de chaque réaction sont déposés sur gel dénaturant (20 % acrylamide, urée 7 M, TBE 1X), puis après migration le gel est autoradiographié à -70 C sur film Biomax MR (Kodak). Les résultats (profils d'électrophorèse) sont présentés figure 2b, et en particulier les résultats de transcription obtenus avec la T7 ARN polymérase mutée R627A (puits 1-3) et la T7 ARN polymérase sauvage (puits 4-6) , sur les matrices ARN simple brin (puits 1 et 4), ADN double brin (puits 2 et 5), et ADN simple brin (puits 3 et 6). La transcription sur ARN simple brin, détectée par la détection d'un transcrit complet de 33 bases, est possible en utilisant la T7 ARN polymérase mutée R627A (puits 1) et non l'enzyme sauvage (puits 4) qui produit par contre de nombreux transcrits abortifs. La T7 ARN polymérase mutée R627A présente une activité de transcription résiduelle sur ADN double brin (puits 2), caractérisée par la présence d'un transcrit majoritaire de taille inférieure au transcrit attendu, et la présence en faible quantité de produits abortifs. Sur ADN simple brin (puits 3), ce transcrit de taille anomale disparaît, alors que la quantité de produits abortifs augmente. A contralto, l'enzyme sauvage permet l'obtention de transcrits spécifiques en présence de matrices ADN (puits 5 et 6), cette enzyme présentant par ailleurs une meilleure activité de transcription sur la matrice ADN double brin (puits 5) que sur la matrice ADN simple brin (puits 6); pour ces deux matrices, l'enzyme sauvage induit la synthèse de nombreux transcrits abortifs. Ces résultats montrent que le remplacement de l'arginine 627 par une alanine confère à l'enzyme mutante la possibilité de synthétiser de l'ARN à partir d'une matrice ARN et induit la perte de capacité à synthétiser de l'ARN à partir d'une matrice ADN.
Exemple 3 : Extension d'amorces ARN sur des matrices ARN et ADN par la T7 ARN polvmé- rase mutée R627A.