INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
et notamment un groupement de structure J2 suivante : structure J2 dans laquelle, R31 et R32, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène , un radical alkyle en C1-C4, un radical phényle; CH, Y désigne le radical -CO- ou le radical C = ; n = 0 ou 1, avec, lorsque n désigne 1, U désigne le radical -CO- .
Dans les structures (I) à (IV) définies ci-dessus le groupement alkyle ou alcoxy en C1-C4 désigne de préférence méthyle, éthyle, butyle, méthoxy, éthoxy.
Les colorants directs cationiques de formules (1), (II), (III) et (III') utilisables dans les compositions tinctoriales conformes à l'invention, sont des composés connus et sont décrits par exemple dans les demandes de brevets WO 95/01772, WO 95/15144 et EP-A-0 714 954. Ceux de formule (IV) utilisables dans les compositions tinctoriales conformes à l'invention, sont des composés connus et sont décrits par exemple dans les demandes de brevets FR-2189006, FR- 2285851 et FR-2140205 et ses certificats d'addition.
Parmi les colorants directs cationiques de formule (1) utilisables dans les compositions tinctoriales conformes à l'invention, on peut plus particulièrement citer les composés répondant aux structures (11) à (152) suivantes :
Le chapitre C est consacré au procédé d'enrichissement selon l'invention par hydrolyse des esters des exemples 1 à 34, les exemples 42 et 43 étant plus particulièrement relatifs à la variante comprenant l'étape de déracémisation du procédé d'enrichissement (exemples 35 à 62).
Le chapitre D concerne l'évaluation chromatographique des esters synthétisés et utilisés à titre de phase stationnaire chirale Cette évaluation chromatographique d'esters de cellulose conformes à l'invention est réalisée par la méthode "microbatch", dans un éluant hexane/2-propanol 99/1, effectuée sur 4 racémates (Benzoïne, Base de Trôger, Trans Stilbène Oxyde, Alcool de Pirkle) de la série du Professeur OKAMOTO.
PREAMBULE Le schéma réactionnel général est le suivant :
A - SYNTHESES DES CHLORURES D'ACIDES : PRECURSEURS - ACIDES OU DERIVES (I) SYNTHESE DU CHLORURE DE L'ACIDE a-PHENYL PROPI01VIQUE : Dans un ballon bicol de 250 ml, muni d'un réfrigérant surmonté d'une garde à chlorure de calcium et d'une ampoule à addition, sont introduits : 3,50 g (M = 150 g ; 24 mmol) d'acide a-phényl propionique et 100 ml de CH2Cl2. Le mélange est agité à température ambiante. On additionne alors goutte à goutte 17,5 ml (10 éq. ) de chlorure de thionyle (M = 119 g) fraîchement distillé. Après addition, le mélange est porté au reflux du CH2Cl2 pendant 2 h. Après évaporation du mélange réactionnel sous pression réduite, 3,91 g (M = 168,5g ; 23,3 mmol) de chlorure d'acide a-phényl propionique sont obtenus sous forme d'un solide jaune clair, soit un rendement de 96 %.
RMN'H (CDC13, 200 MHz) # (ppm) : 1,48(d, 3H, J = 7,0 Hz, a-CH3) ; 4,00 (q, 1H, J = 7,0 Hz, a-CH) ; 7,13-7,30 (m, 5H aromatiques).
SYNTHESE DUCHLORURE DE L'ACIDE Gi P-CHLOROPHENYL PROPIONIQUE : Le mode opératoire est identique à celui de la synthèse du chlorure de l'acide aphénylpropionique. En partant de 4,54g (M = 184,5g, 24,6 mmol) d'acide a-(pchlorophényl) propionique et 17,9 ml (10 éq) de chlorure de thionyle, on obient 5,00g (M = 203 g, 24,6 mmol) de chlorure d'acide a-(p-chlorophényl) propionique, soit un rendement de 100 %.
RMN 1H (CDC13, 200 MHz) # (ppm) : 1,58 (d, 3H, J = 7,0 Hz, a-CH3) , 4,10 (q, 1H, J =7,0 Hz, a-CH) ; 7,21 (dd, 2H aromatiques, J=8,8 Hz et J=2,2 Hz) ; (dd, 2H aromatiques, J = 8,6 Hz et J = 2,0 Hz).
SYNTHESE DU CHLORURE DE KÉTOPROFEN (ACIDE (2-[3-BENZOYLPHÉNYL] PROPIONIQUE) : Le mode opératoire est identique à celui de la synthèse du chlorure de l'acide aphényl propionique. En partant de 4,69g (M = 254,3g, 18,4 mmol) de kétoprofen et 13,4 ml (10 éq. ) de chlorure de thionyle, on obient 5,26g (M = 272,8g, 18,2 mmol) de chlorure de kétoprofen, soit un rendement de 99 %.
RMN 'H (CDCl3, 200 MHz) # (ppm) : 1,62 (d, 3H, J = 7,0 Hz, a-CH3), 4,20 (q, 1H, J= 7,0 Hz, a-CH) ; (m, 5H aromatiques) ; 7,71-7,83 (m, 4H aromatiques).
SYNTHESE DUCHLORURE DEL'ACIDE a-(3,5-DIMETHYLPHENYL) PROPIONIQUE : Le mode opératoire est identique à celui de la synthèse du chlorure de l'acide a- phényl propionique. En partant de 2,32g (M = 178 g, 13 mmol) d'acide a-(3,5diméthylphényl) propionique et 9,5 ml (10 éq.) de chlorure de thionyle, on obient 2,53g (M = 196,5g, 12,9 mmol) de chlorure d'acide a-(3,5-diméthylphényl) propionique, soit un rendement de 99 %.
RMN 1H (CDC13, 200 MHz) # (ppm).
SYNTHESE DUCHLORURE DEL'ACIDE a-(P-METHYLPHENYL) PROPIONIQUE : Le mode opératoire est identique à celui de la synthèse du chlorure de l'acide a- phényl propionique. En partant de 1,725g (M = 164g, 10,5 mmol) d'acide a-(pméthylphényl) propionique et 7,7 ml (10 éq. ) de chlorure de thionyle, on obient 1,92g (M = 182,5g, 10,5 mmol) de chlorure d'acide a-(p-méthylphényl) propionique, soit un rendement de 100 %.
RMN 1H (CDCI3, 200 MHz) # (ppm) : 1,49 (d, 3H, J = 7,0 Hz, a-CH3) ; (s, 3H, p-CH3) ; 4,00 (q, 1H, J = 7,0 Hz, a-CH) ; 7,10 (s, 4H aromatiques).
SYNTHESE DUCHLORURE DEL'ACIDE a-(2-THIOPHENYL) PROPIONIQUE : Le mode opératoire est identique à celui de la synthèse du chlorure de l'acide [alpha]- phényl propionique. En partant de 1,515g (M = 156g, 9,7 mmol) d'acide a-thiényl propionique et 7,1 ml (10 éq.) de chlorure de thionyle, on obient 1,6g (M = 174,5g, 9,2 mmol) de chlorure d'acide a-thiényl propionique, soit un rendement de 95 %.
RMN 'H (CDCl3, 200 MHz) 8 (ppm) : 1,68 (d, 3H, J = 7,2 Hz, a-CH3) ; 4,38 (q, 1H, J = 7,2 Hz, a-CH) ; 7,26-7,30 (m, 2H aromatiques) ; 7,52 (dd, 1H aromatique, J = 4,9 Hz et J = 1,5 Hz).
SYNTHESE DU CHLORURE D'IBUPROFEN (ACIDE a-METHYL-4-[2- METHYLPROPYLIPHENYL ACETIQUE) : Le mode opératoire est identique à celui de la synthèse du chlorure de l'acide aphényl propionique. En partant de 5 g (M = 206 g, 24 mmol) d'ibuprofen (acide améthyl-4-[2-méthylpropyl]phényl acétique) et 17,5 ml (10 éq. ) de chlorure de thionyle, on obient 5,2g (M = 224,5g, 23,2 mmol) de chlorure d'ibuprofen, soit un rendement de 97 %.
Pour les déterminations de K, les concentrations de xylanase et de substrat précités ont été utilisées. Ces concentrations ont été associées aux concentrations suivantes d'extrait d'inhibiteur dans l'analyse : 0,2, 5, 10,25, 50 et 100 l dans l'analyse. En utilisant des l d'inhibiteur et non une concentration molaire de l'inhibiteur, K1 est exprimé en l d'inhibiteur.
RESUME En résumé, la présente invention propose, en autres : a. L'isolement d'un inhibiteur d'endo-ss-1,4-xylanase endogène à partir de farine de blé. b. La caractérisation d'un inhibiteur d'endo--1,4- xylanase endogène isolée à partir de farine de blé. c. La caractérisation de l'effet d'un inhibiteur d'endo- P-1,4-xyalanse endogène sur différentes xylanases. d. Un moyen pour sélectionner des xylanases non soumises à un effet néfaste par un inhibiteur d'endo-ss-1,4-xylanase endogène. e. Un moyen de sélectionner des xylanases non soumises à un effet néfaste d'inhibiteurs d'endo-ss-1,4-xylanase.
f. Des xylanases qui donnent une pâte présentant un volume avantageux et un caractère collant acceptable, comparativement à des pâtes comprenant des xylanases fongiques. g. Une méthode pour sélectionner des xylanases et/ou provoquer leur mutation en utilisant un inhibiteur d'endo- P-l,4-xylanase endogène, et l'utilisation de ces xylanases ou de leurs mutants dans la production de pâtes. h. Un produit alimentaire préparé avec les xylanases de la présente invention.
DEPÔTS Les échantillons suivants ont été déposés conformément au Traité de Budapest chez le dépositaire reconnu The National Collections of industrial and Marine Bacteria Limited (NCIMB), 23 St. Machar Drive, Aberdeen, Royaume Uni, AB2 1RY, le 22 décembre 1998 : DH5a::pCR2.1~BS xylanase numéro NCIMB : NCIMB 40999 BL21 (DE3) :: pET24A~XM1 numéro NCIMB : NCIMB 41000 BL21 (DE3) :: pET24A~XM3 numéro NCIMB : NCIMB 41001 DH5[alpha]::p CR2.1~BS xylanase comprend une xylanase de type sauvage.
La BL21(DE3)::pET24A XM1 comprend une xylanase XM1.
La BL21 (DE3) :: pET24A~XM3 comprend une xylanase XM3.
La présente invention comprend également des séquences pouvant être dérivées et/ou exprimées à partir de ces échantillons déposés et des formes de réalisation les comprenant.
INTRODUCTION AU PARAGRAPHE DES EXEMPLES ET AUX FIGURES La présente invention est décrite maintenant, à titre d'exemples seulement, par référence aux dessins annexés sur lesquels :
la figure 1 représente un graphique ; la figure 2 représente un graphique ; la figure 3 représente un graphique ; la figure 4 représente un graphique ; la figure 5 représente un graphique ; la figure 6 représente un graphique ; la figure 7 représente un graphique ; la figure 8 représente un graphique ; la figure 9 représente un graphique ; la figure 10 représente un graphique ; la figure 11 représente l'image consistant en le résultant d'une expérience de SDS PAGE ; la figure 12 représente un graphique ; la figure 13 représente un graphique ; la figure 14 représente un graphique ; la figure 15 représente un graphique ; la figure 16 représente un graphique ; la figure 17 représente une image consistant en un résultat d'une expérience de IEF ; la figure 18 représente un graphique ; la figure 19 représente un graphique ; la figure 20 représente un graphique ; la figure 21 représente un graphique ; la figure 22 représente un graphique ; la figure 23 représente un graphique ; la figure 24 représente un graphique ; la figure 25 représente un graphique ; la figure 26 représente un graphique ; la figure 27 représente un graphique ; la figure 28 représente un graphique ; la figure 29 représente un graphique ; la figure 30 représente un graphique ; et la figure 31 représente un graphique.
D'une manière légèrement plus détaillée : Figure 1 - caractère collant en fonction des xylanases, de la dose et du temps de repos.
Figure 2- caractère collant en fonction des xylanases, de la dose et du temps de repos.
Figure 3 - chromatographie de filtration sur gel d'un échantillon de 75 ml d'extrait d'inhibiteur. Colonne : Superdex G-25F de 500 ml, débit : 10 ml/min, volume de fraction : 30 ml.
Figure 4 - chromatographie d'échange de cations d'un échantillon de 240 ml d'extrait d'inhibiteur filtré sur gel. Colonne : Sepharose SP de 50 ml, débit : 50 ml/min, volume de fraction : 10 ml.
Figure 5 - chromatographie HIC d'un échantillon de 147 ml d'extrait d'inhibiteur ayant subi un échange d'ions, additonné de (NH4)2SO4 à une concentration de 1, 0M.
Colonne : phényle HIC de 10 ml, débit : 2,0 ml/min, volume de fraction : 2,5 ml.
Figure 6 - chromatographie préparative de filtration sur gel d'un échantillon de 2 ml d'inhibiteur concentré.
Le treuil 1 comporte un deuxième arbre 10 pour la commande du premier arbre 7 et destiné à être entraîné en rotation
par une manivelle ou analogue.
Le deuxième arbre 10 est monté tournant par rapport au
boîtier 2 autour d'un deuxième axe de rotation 11.
Le deuxième axe 11 n'est pas parallèle au premier axe 9.
Dans la réalisation représentée, le deuxième axe 11 est orthogonal au premier axe 9 et est par exemple longitudinal. Les faces frontale et arrière 3, 4 comportent des trous de passages respectivement 12, 13 pour le deuxième arbre 10,
par exemple renforcés par des bagues en bronze.
Le deuxième arbre 10 est mobile en translation suivant le
deuxième axe 11 de rotation.
Des première et deuxième parties d'engrenage 14, 15 sont fixées respectivement sur les premier et deuxième arbres 7, , entre les faces frontale et arrière 3, 4 et
transversales 5, 6.
Les première et deuxième parties d'engrenage 14, 15 sont du
type à roue dentée tangente et vis sans fin.
Dans la réalisation représentée, la première partie d'engrenage 14 comporte une roue dentée, tandis que la
deuxième partie d'engrenage 15 comporte une vis sans fin.
Dans une autre réalisation, non représentée, la première partie d'engrenage 14 comporte une vis sans fin et la
La teneur en matière active de cette phase aqueuse est de 39,16 g/100 ml soit 1,386 mol. en thiol et le pH est de 10,15. Le polymère ainsi obtenu peut être utilisé tel quel en solution aqueuse.
Masse molaire moyenne du produit synthétisé: 3132,95 g.mol1 Exemple 9 : Préparation de gels aqueux à partir de poly(éthylèneimine) thiolée selon l'exemple 1 a) Gels aqueux 11simples A partir de la solution à 30,11 g/100 ml préparée dans l'exemple 1, on réalise diverses solutions par dilution à l'eau et/ou acidification par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique.
Solution pH Concentration en Concentration en polymère thiolé thiol 1 10,3 0, 125 M 0,500 mol/l 30,11 g/100ml 2 9,0 0, 102 M 0,408 mol/l 24,56 g/100 mi On oxyde quelques millilitres des solutions 1 et 2 par la quantité théorique d'eau oxygénée à 6% additionnée (soit 0,5 fois le nombre de fonctions thiols à oxyder en disulfure), sous vive agitation.
Les solutions 1 et 2 conduisent instantanément à des gels incolores transparents assez durs. b) Gels aqueux renfermant un piqment minéral phosphorescent A partir de la solution 1 préparée précédemment, on prépare divers échantillons renfermant du sulfure de zinc dopé par du cuivre et commercialisé sous le nom GREEN LBY 2330 (RN=[6861 1-70-1]) selon le tableau ci-dessous:
Solution % de pigment 3 2 4 5 5 10 Le % de pigment est calculé en poids par rapport au poids de polymère thiolé.
On agite les échantillons au vortex puis sous ultrasons puis on oxyde quelques millilitres de solution par la quantité théorique d'eau oxygénée à 6% additionnée (soit 0,5 fois le nombre de fonctions thiols à oxyder en disulfure) sous vive agitation (vortex).
Dans ces conditions, les solutions 3, 4 et 5 conduisent instantanément à des gels jaunes très pales assez durs et phosphorescents dans toute la masse du gel. La phosphorescence est d'autant plus intense que la quantité de pigment est importante. Toutes les particules de pigment sont réparties uniformément dans la masse du gel.
Exemple 10 Préparation de ciels aqueux à partir de poly(éthylèneimine) thiolée selon l'exemple 2 a) Gels aqueux"simples" A partir de la solution à 22,66 g/100 ml préparée à l'exemple 2, on réalise diverses solutions par dilution à l'eau et/ou acidification par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique.
Solution pH Concentration en Concentration en polymère thiolé thiol 6 9,6 0,075 M 0,750 mol/l 22,6 g/100 ml 7 8,9 69,70 mM 0,697 mol/l 21,06 g/100 ml 8 8,0 63,56 mM 0,635 mol/l 19,20 g/100 ml 9 7,0 59,71 mM 0,597 mol/l 18,04 g/100 ml 10 5,95 57,16 mM 0,571 mol/l 17, 27 g/100 ml On oxyde quelques millilitres des solutions 6 à 10 par la quantité théorique d'eau oxygénée à 6% additionnée sous vive agitation.
Les solutions 6 à 10 conduisent instantanément à des gels.
Les solutions 6 et 7 conduisent à des gels blancs opaques.
Les gels 8, 9 et 10 sont limpides incolores transparents. Les solutions aqueuses 6 à 10 peuvent être diluées par de l'eau selon les indications du tableau ci-dessous:
Solution pH avant Concentration en Concentration en dilution ol polymère thiolé thiol 11 9,6 0,03 M 0,300 mol/l 9,06 g/100 ml 12 8,9 34,85mM 0,349 molli 10,53 g/100 ml 13 8,0 42,37 mM 0,423 molli 12,80 g/100 ml 14 7,0 39,80 mM 0,380 mol/l 12,03 g/100 ml 14 bis 7,0 33,17 mM 0,332 mol/l 10,02 9/100 ml 15 5,95 38,10 mM 0,381 mol/l 11,51 g/100ml On oxyde quelques millilitres de solution par la quantité théorique d'eau oxygénée à 6% additionnée sous vive agitation.
La solution Il conduit instantanément à un gel un peu opaque blanchâtre.
Chaîne latérale: ce terme générique désigne un ester formé entre l'une des fonctions hydroxylées et un acide carboxylique comportant au moins 3 atomes de carbone présentant un alcool généralement tertiaire en a et un substituant hydrophobe en o de la fonction carboxyle.
Adaptation prnpres aux céphalotaxanes, de la nomenclature empirique additive et soustractive: Des préfixes de nomenclature vulgaire sont courament employés dans la littérature pour désigner des variations structurales de la chaîne latérales des harringtonines (voir exemples dans le tableau du schéma 1). La chaîne de référence est celle de l'harringtonine dans la formule 3b, n = 2, R = H, R7 = H, R6 = 2-hydroxyisopropyl.
Homo: 1 carbone supplémentaire.
Bishomo: 2 carbones supplémentaires.
Nor: 1 carbone de moins que la chacune.
Iso: le méthylène de la chaine latérale secondaire est porteur d'un hydroxyle en lieu et place du carbonejuxtaterminal.
Désoxy l'hydroxyle du carbone juxtaterminal est remplacé par un hydrogène.
Anhydro: les deux hydroxyles tertiaires perdent une molécule d'eau pour donner l'hétérocycle oxygéné saturé correspondant. néo: R6 devient un.phényle au lieu d'un 2-hydroxyisopropyl.
HPLC: Chromatographie Liquide à Haute Performance.
RMN: Résonance Magnétique Nucléaire.
La présente invention sera illustrée de façon non limitative par les exemples suivants.
Exemple I Préparation du 2-méthoxycarbonylméthyl-2-hydroxy-6-méthylhept-5énoate d'éthvle ou 6-désoxy-5, 6-désh vdrohomoharrinatonate d'éth vie: 10) Préparation de l'oxalate intermédiaire A une suspension de magnésium (2,32 g; 95,5 mmol)(activé par quelques cristaux d'iode) dans le tétrahydrofurane anhydre (75 ml), on ajoute goutte à goutte du 5-bromo-2-methyl-pent-2-ène (15,6 g; 95,6 mmol). Au cours de l'addition on constate un vif échauffement jusqu'à reflux du milieu réactionnel.
On maintien le reflux jusqu'à consommation quasi totale du magnésium, puis on dilue le milieu réactionnel avec du tétrahydrofurane anhydre (150 ml). On additionne le magnésien ainsi obtenu en 20 minutes à une solution agitée à -78 C d'oxalate de diéthyle (10,8 ml; 80 mmol) dans le tétrahydrofurane anhydre (75 ml). On maintient l'agitation à -78 C j 5"C durant 30 minutes puis on laisse remonter la température à -10 C en 1,5 heures. On ajoute une solution de chlorure d'ammonium 1/2 saturée (300 ml). La phase organique séparée est à nouveau lavée avec une solution de chlorure d'ammonium 1/2 saturée (300 ml) puis concentrée sous pression réduite. Chaque phase aqueuse est contreextraite par de l'éther diéthylique (2 x 300 ml). Le concentré et les 2 phases éthérées sont rassemblés, lavés avec une solution de chlorure de sodium saturée (300 ml), séchés sur sulfate de magnésium, puis concentrés sous pression réduite. On distille le produit brut (15 g) au four boule à boule, on obtient ainsi un liquide incolore (10,3 g; 70 %). L' a-cétoester intermédiaire obtenu présente les caractéristiques suivantes:
IR (ATR) (cm-1): 2790 ;2916; 1725; 1068.
RMN 1H 400 MHz (CDCl3)( # ppm, J Hz): 5.08 (1H, t, J = 7.2, HC=); 4.32 (2H, q, J = 7.1, OCH2); 2.86 (2H, t, J = 7.2, CH2CO); 2.32 (2H, q, J = 7.2, CH2-C=); 1.68 (3H, s, CH3); 1.62 (3H, s, CH3); 1.37 (3H, t, J = 7.1, OCH2CH3).
2 ) Préparation du composé cité en titre A une solution agitée à -78 C de bis-(triméthylsilylamide) de lithium commerciale (7,5 ml; 1 M dans le tétrahydrofurane; 7,5 mmol) dans du tétrahydrofurane anhydre (7,5 ml), on ajoute en 1 minute de l'acétate de méthyle anhydre (0,6 ml; 7,5 mmol), et on laisse se poursuivre la réaction 20 minutes à -78 i 5 C. La solution d'acétate de méthyle lithié ainsi obtenue est additionnée en 5 minutes à une solution agitée à -78 C de 2-oxo-6-méthylhept- 5-enoate d'éthyle préparé cidessus (480 mg; 2.6 mmol) dans du tétrahydrofurane anhydre (10 ml). On laisse la réaction se poursuivre 30 minutes à -78 i 5 C. Après contrôle par CCM, on retire le bain réfrigérant et on ajoute une solution de chlorure d'ammonium 1t2 saturée (10 ml). La phase organique séparée est à nouveau lavée avec une solution de chlorure d'ammonium 1/2 saturée (10 ml) puis concentrée sous pression réduite.
I1 s'agit de particules comprenant de l'intérieur vers l'extérieur - un noyau central hydrophile non liquide constitué d'une matrice de polysaccharides ou d'oligosaccharides naturellement ou chimiquement réticulés, pouvant être modifiés par des groupements ioniques divers; - un couche d'acides gras greffés par des liaisons covalentes au noyau; - une ou plusieurs couches lipidiques constituées notamment de phospholipides.
Les demandes de brevet internationales PCT publiées sous les Numéros WO 94/23701, WO 94/20078 et WO 96/06638 décrivent ces Biovecteurs, leur fabrication, leur association à divers principes actifs et leur utilisation pour la préparation de compositions pharmaceutiques.
Le savoir faire dont dispose aujourd'hui la Demanderesse sur la préparation des BVSM lui permet de disposer d'une gamme étendue de type de BVSM. Ces BVSM sont formés d'un polymère hydrophile réticulé, préférentiellement des polysaccharides, sous forme de gel nanoparticulaire, ces BVSM sont dits de type PSC (ou NPS en français).
Ce polymère peut éventuellement porter des ligands ioniques positifs, BVSM dit cationique, ou négatifs, BVSM dit anionique. Ce polymère chargé ou non est optionellement recouvert d'une couche de composés amphiphiles, préférentiellement des phospholipides, BVSM dit de type Light décrit dans la demande de brevet PCT W09420078.
La taille des BVSM est comprise entre 20 et 200 nm, préférentiellement entre 50 et 100 nm et plus préférentiellement entre 60 et 80 nm.
Les BVSM sont stérilisables par filtration et leur association aux principes actifs se fait sur les BVSM complètement fabriqués (Major & Al Biochem. & Biophys. Acta (1997),1327,32-40). Ceci permet de travailler les molécules biologiques, particulièrement fragiles, dans des conditions optimales.
Les BVSM protègent les molécules biologiques de la dégradation (Prieur R. et al. Vaccins (1996) Vol 14, N06 pp. 511-520 Combination of hCMV recombinant IE1 protein with 80 nm cationic biovectors : protection from proteolysis and potentiation of presentation to CD4) et ont montré qu'ils augmentaient l'activité biologique de peptides et de protéines comme des enzymes, des antigènes, etc ...
Les BVSM sont connus pour être utilisés comme transporteurs de substances actives, par exemple peptides, antigènes ou oligonucléotides. Dans cette utilisation, il y a formation d'un réel complexe entre le biovecteur et la substance active, comme des interactions ioniques entre le noyau cationique du BVSM et l'oligonucléotide anionique. I1 y a donc formation d'un conjugué ionique stable dans un milieu biologique.
Dans ce type de préparation, le rapport oligonucléotide /BVSM est de 5 à 10 % et le rendement d'association mesuré est supérieur à 90 %. De même, la demande de brevet français publiée sous le numéro 2 723 849 décrit que l'augmentation d'immunogénicité n'est pas obtenue avec un simple mélange antigène/BVSM, sans interaction préalable de l'antigène et du vecteur particulaire.
L'antigène est là aussi associé au vecteur particulaire par des liaisons ioniques et/ou hydrophobes. Pour obtenir ce résultat, on incube par exemple 1 mg de proteïne GST-e4 pour 10 mg de BVSM, ce qui permet d'obtenir des taux d'association moyens de 90 % quel que soit le type de BVSM utilisé (Prieur R. et al. Vaccins (1996) Vol 14, N06 pp 511-520).
La Demanderesse a maintenant découvert que les BVSM sont particulièrement adaptés pour l'administration nasale et ont un temps de rétention prolongé au niveau de la muqueuse nasale lorsqu'ils sont administrés sous forme de spray chez l'animal et chez l'homme. Un tel résultat est tout à fait exceptionnel pour une formulation liquide, d'autant que la présence des BVSM est encore significative après 12 et détectable jusqu'à 24 heures.
Cette adhésivité aux muqueuses a été mise à profit pour l'administration par voie mucosale de substances actives, notamment des antigènes, associées dans des formulations à des BVSM. Dans ces formulations, les quantités de BVSM utilisées sont adaptées à la quantité de substance active que l'on veut délivrer, la formulation consistant en l'association de la (des) substance(s) active(s) aux BVSM, celui-ci jouant le rôle dun transporteur.
Par ailleurs, les BVSM ne présentent pas de toxicité par administration nasale, l'épithelium de la muqueuse, en particulier le mouvement ciliaire et les tight junctions, est intact après des applications chroniques pendant un mois.
curseur à la vitre.