INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Ces dérivés ont un faible indice de réfraction, à savoir environ 1,4, et sont solubles dans certains composés perfluorés tels que le GALDEN HT11OQ de la société MONTEDISON.
Le système silice polymérique - T2494 obtenu, est inerte aux acides forts et bases fortes et aux solvants organiques usuels. La couche est parfaitement hydrophobe et très peu mouillable à l'éthanol. Elle résiste au test sévère de la norme militaire US-MIL-C-0675C et peut être très facilement nettoyée.
Du fait de sa très faible épaisseur (par exemple quelques nanométres c'est-à-dire une dizaine de nm), la couche d'hydrophobe ne perturbe pas les propriétés optiques de la couche à faible indice, par exemple de la couche de silice polymèrique.
Le procédé de dépôt des couches successives du matériau antireflet va maintenant être décrit dans le cas d'un traitement de réticulation, densification thermique.
De façon avantageuse, mais facultative, on procède tout d'abord à un nettoyage-décapage minutieux du substrat par exemple à l'aide d'une solution d'acide fluorhydrique dilué à 1 %, puis le substrat est rincé abondamment à l'eau désionisée. Il est ensuite dégraissé au savon optique, rincé à nouveau à l'eau distillée et séché à l'éthanol.
Une telle étape de nettoyage a une durée par exemple d'environ 5 minutes.
L'étape suivante consiste à appliquer sur le substrat nettoyé la couche à indice de réfraction moyen, par exemple, à partir d'une solution de précurseur donnant une couche de Ta205-SiC2, en particulier une solution TaCl5-Si(OEt)4/EtOH, par exemple, dans les proportions respectives 80/20 exprimés en oxyde.
Cette couche est appliquée uniformément sur le substrat, par exemple soit par trempage-retrait (dip-coating), soit par enduction centrifuge, à une vitesse de 10 cm/min environ à 1000 t/min. environ, soit par enduction laminaire. Les deux dernières méthodes sont préférables car elles ne nécessitent que très peu de solution traitante. Toutefois, on pourra également utiliser d'autres techniques de dépôt. Ce type de dépôt en solution présente l'avantage de permettre le revêtement de surfaces relativement grandes avec des solutions traitantes très pures et de faible viscosité.
Ce dépôt est suivi éventuellement (c'est-à-dire que cette étape peut être omise) d'une étape de réticulation-densification thermique par cuisson dans les conditions déjà citées plus haut, de préférence à une température de 1500C et pendant une durée de 30 minutes. La cuisson peut être réalisée dans tout appareil adéquat, tel que étuve, etc. et le mode de chauffage peut être tout mode de chauffage convenant à un tel but : par exemple, par infrarouge, etc.
On effectue ensuite un nettoyage, décapage de la même manière que précédemment, puis l'on procède au dépôt de la couche à indice de réfraction élevée qui peut être préparée à partir de l'une quelconque des solutions (1) ou (2) de précurseur de Ta205, déjà décrites plus haut, de préférence avec la solution TaCl2(OEt)3/EtOH-NH3, puis l'on procède éventuellement à la cuisson (réticulation-densification thermique) de cette couche de la même manière que précédemment.
On procède, de la même façon que cela est décrit plus haut, à un nouveau nettoyage-décapage de la couche déposée, puis on réalise le dépôt de la couche à faible indice de réfraction à partir, par exemple, d'une solution de SiO2 polymérique ou de toute autre solution contenant un précurseur adéquat pour une telle couche à une concentration, de préférence, de 2 à 5 % en oxyde Six2.
On procède ensuite éventuellement à la cuisson (réticulation-densification thermique) de la couche, par exemple, de silice polymérique, ainsi obtenue dans les mêmes conditions que précédemment.
Puis, on applique, éventuellement, de préférence, par exemple, par pulvérisation, sur la dernière couche faible indice déposée, un agent hydrophobe, de préférence, de type silane fluoré, tel que décrit plus haut, par exemple, le composé T2494 . L'agent hydrophobe est généralement dilué dans un solvant perfluoré, tel que le GALDEN Ho1100 de MONTEDISON à, par exemple, 2 % en masse et appliqué à chaud à une température généralement voisine de 100"C, de préférence, par pulvérisation.
On effectue alors un dernier traitement thermique de cuisson, de préférence, à une température de 1500C et pendant une durée de 15 minutes, suite à quoi, l'excès d'agent hydrophobe, tel que le T2494 est éliminé, par exemple, à l'aide d'un chiffon imprégné d'éthanol.
Le matériau antireflet selon l'invention, préparé par un traitement à basse température, satisfait de manière surprenante à l'ensemble des exigences mentionnées plus haut, liées à ses propriétés optiques, à ses résistances mécaniques et chimiques.
Selon une première variante du procédé selon l'invention, suite au dépôt de la couche à indice de réfraction élevée à base de Ta205, et à la cuisson de la couche, on effectue le nettoyage-décapage de cette couche, comme déjà décrit, puis on laisse s'écouler une certaine durée, par exemple, de 1 à 24 heures, de préférence, 12 heures, avant d'effectuer un second décapage de la couche à base de Ta2O5 et de déposer la couche à faible indice de réfraction, par exemple, en silice polymérique.
Les insectes examinés ont été sélectionnés aléatoirement afin de démontrer les diverses activités susceptibles de se produire et de démontrer les différences d'activité entre les deux composés naturels et d'autres composés du commerce. Les essais biologiques montrent que les deux composés présentent une activité variable selon les insectes. Ils sont actifs sur A. gossypii, M. persicae et D. melanogaster mais aucune activité n'a été mesurée sur S. littoralis et S. granarius. Ceci pourrait indiquer que les diterpènes de type daphnane présentent une certaine spécificité et donc pourraient réduire les risques vis-à-vis d'organismes favorables qui semblent avoir un rôle éventuel dans les programmes de protection intégrée d'insectes. Ceci pourrait être attesté par le fait que les deux composés sont des produits naturels et, en conséquence, pourraient être dégradés plus rapidement dans l'environnement que d'autres pesticides conventionnels.
Les études déjà réalisées avec l'extrait méthanolique de cette racine de plante ont permis de montrer une activité contre les leucémies lymphocytaire p-388 (5) et d'autres maladies (14). La toxicité de cet extrait à été examinée chez la souris, le rat, le lapin, le chien, et l'iléum ou le coeur isolé de lapin (14).
Les auteurs ayant rapportés ces études de toxicité aiguë chez les souris ont estimé la valeur de la DLso respectivement à 27,1 et 330 mg/kg après des administrations orale et intrapéritonéale. Dans les études de toxicité chronique réalisées chez des rats alimentés avec cet extrait pendant 6 mois, ils n'ont observé aucun signe clinique de toxicité et aucune grave lésion n'a été détectée lors des examens postmortem, ce qui permet de conclure que cet extrait à une dose de 2 mg/kg per os n'est pas toxique chez les souris, les rats et les lapins. Ces résultats supportent l'intérêt des composés de l'invention, car il est nécessaire de disposer de nouveaux insecticides ciblés, biodégradables et tolérés par l'environnement.
LISTE DES RÉFÉRENCES 1 - METCALF, R.L. 1989. Insect resistance to insecticides. Pestic. Sci 26, 333-358 2 - MAVITUNA, F. 1992. Application of plant biotechnology in industry and agriculture. In Recente advances in biotechnology. Klumer Academic publishers, Netherland. pp.209-226.
3 - BENNER, J.P. 1993. Pesticidal compounds from higher plants. Pestic. Sci 39, 95-102.
4 - BORRIS, R.P. 1982. Antileukemic principles of Gnidia Kraussiana Meisn. and chemical and microbial transformations of uleine. Dissertation Abstracts International 42 (9),3684.
5 - BORRIS, R.P. and CORDELL G.A. 1984.
Studies of the Thymelaeaceae. II. Antineoplastic principles of Gnidia kraussiana.J.Nat. Prod. 47(2), 270278.
6 - OHIGASHI, H. KATSUMATA, K.KAWAZU, K.KOSHIMIZU and T. MITSUI.1974. A priscidal constituent of excoecarcia agallocha. Agr. Bio. Chem. 38(5), 10931095.
7 - KUPCHAN, S. M., J.G. SWEENY, R.L.
BAXTER, T. MURAE, V.A. ZIMMERLY and B.R. SICKLES. 1975.
Gnididin, Gniditrin, and Gnidicin, novel potent antileukemic diterpenoid esters from Gnidia lamprantha.
J. Am. Chem. Soc. 97, 672-673.
8 - JOLAD, S.D., J.J. HOFFMANN, B.N.
TIMMERMANN, K.H. SCHRAM, J.R. COLE, R.B.BATES, R.E.
KLENCK and M.S. TEMPESTA. 1983. Daphnane diterpenes from Wikstroemia monticola : Wikstrotoxins A-D, huratoxin, and excoecariatoxin. J. Nat. Prod.46(5),675-680.
Récemment, la production de NO a été indirectement mesurée sous forme de nitrites dans les serums et liquides synoviaux de patients atteints de PR ((,rabowski et al., 1996). Des taux élevés en nitrites chez les malades par comparaison aux témoins sains montrent le l-ole du NO comme possible agent médiateur dans les maladies rhumatismales.
En tenant compte des données bibliographiques indiquant le rôle de NO dans des maladies inflammatoires en particulier la polyarthrite rhumatoïde à adjuvant (ralenti et al., 1993; Oyanagui, 1994; Cannon et al., 1995), les Inventeurs ont étudié le modèle d'arthrite à adjuvant, afin de déterminer si les Ac monoclonaux dirigés contre la NO-Cys-G conjuguée sont capables d'inhiber 1 'effet de NO dans l'induction de cette pathologie, et de rechercher si les épi topes ou les dérivés responsables du développement de la PR seront apparentés à ceux d'EAE.
a) Matériel et méthodes.
- L'arthrite à adjuvant : L'ensemble des expérimentations est effectué sur la souche de rattes Lewis. Chaque animal a reçu par voie sous-cutanée dans les coussinets de chaque patte arrière 0,05 ml d'une émulsion d'ACF H37Ra contenant 0,05 ml de NaCl 0,9 %, plus 0,05 ml d'ACF supplémenté par 1 mg de Mycobacterium tuberculosis.
Des lots homogènes de rattes ont été constitués.
Ils ont été soumis aux mêmes conditions que celles utilisées pour le modèle d'EAE. Quatre groupes de 5 rattes, âgées de 7 semaines (poids moyen: 200 g) ont été constitués.
Groupe "Témoin" : chaque rate de ce groupe a reçu seulement l'émulsion indiquée ci-dessus.
Groupe de sérum non immun de souris "SNI" chaque rate a reçu l'émulsion, et après 4 jours une Injection par voie sous cutanée, de 5 mg/kg 'immunoglobulines (précipitées au sulfate d'ammonium) de souris normales. L'injection a été faite une fois par jour pendant deux jours.
Groupe "Aminognanidine" : chaque rate a reçu l'émulsion, et après 4 jours une injection, par voie sous-cutanée, de l'aminoguanidine (25 mg/kg) une fois par our pendant deux jours.
Groupe "Ac monoclonal" : chaque rate a reçu en plus de l'émulsion, et, après 4 jours, 5 mg/kg d'Ac monoclonal anti NO-Cys (précipité au sulfate d'ammonium) par voie sous-cutanée.
Evaluation clinique des symptômes arthritigues: Une attention particulière a été portée pour détecter t'atteinte articulaire arthritique. L'état onflammatoire des pattes a été apprécié de la façon ,suivante : oedème de la patte (ne gênant pas la marche); grosse patte; oedème de la patte gênant la marche ou patte "inflammatoire".
En se basant sur le score arthritique déjà cité {l dessus, il a été possible de suivre chez les rattes de ris 4 groupes l'évolution des signes cliniques au cours du temps pendant 40 jours après l'immunisation.
Test immunoenzymatigue Les Inventeurs ont recherché dans le sérum des rattes la présence d'Ac dirigés contre des épitopes nitrosylés ou nitrés qui peuvent apparaître in vivo au cours du développement de ce modèle. Nous avons donc testé la présence des signaux immunologiques sur les conjugués suivants N02-Tyr-SAB; NO-Tyr-SAB; Tyr-SAB; NO-Cys-SAB; Cys-SAB et la SAB-G pour les mêmes raisons citées dans le modèle précédent. Les conditions du test ELISA sont aussi les mêmes.
- Etude comparative des résultats cliniques Groupe "Témoin" et goupe "SNI" : Les rattes de ces deux groupes ont développé les signes typiques d'une arthrite articulaire qui se traduit par une apparition d'oedèmes au niveau des coussinets plantaires des pattes postérieures deux jours après l'immunisation; ces signes rhumatologiques ont évolué avec le temps, vers des grosses pattes avec ulcération purulente; après environ 10 jours,une difficulté à la marche; certaines rattes ont montré des déformations articulaires au niveau des pattes postérieures.
En conclusion, ces deux groupes ne présentent pas de différence. Les scores cliniques chez la plupart de ces dix rattes sont passés aux scores 5, 6 et 7. Le sérum de souris non immunisée injecté 4 jours après l'administration de l'antigène, n'a pas eu d'effet sur l'aggravation de la maladie ni d'effet protecteur.
Les composés de l'invention possèdent également une activité anti-tumorale. Ils peuvent être utilisés pour le traitement des tumeurs, par exemple des tumeurs exprimant une topoisomérase, chez un patient par administration à ce dernier d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un composé de formule (I) ou (II). Des exemples de tumeurs ou de cancers comprcnnent les cancers de l'oesophage, de l'estomac, des intestins, du rectum, dc la cavité orale, du pharynx, du larynx, du poumon, du colon, du sein, du cervix uteri, du corpus endométrium, des ovaires, de la prostate, des testicules, de la vessie, des reins, du foie, du pancréas, des os, des tissus conjonctifs, de la peau, des yeux, du cerveau et du système nerveux central, ainsi que le cancer de la thyroïde, la leucémie, la maladie de Hodgkin, les lymphomes autres que ceux de Hodgkin, les myélomes multiples et autres.
Ils peuvent également être utilisés pour le traitement des infections parasitiques par l'inhibition des hémofagcllates (par exemple dans la trypanosomie ou les infections leiskmania) ou par inhibition de la plasmodie (commc par exemple dans la malaria), mais aussi le traitement des infections ou maladies virales.
Ces propriétés rendent les produits de formule (I) ou (II) aptes à une utilisation pharmaceutique. La présente demande a également pour objet, à titre de médicaments, les produits dc formule (I) ou (II) telles que définies ci-dessus, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) ou (II), ainsi que les compositions pharmaceutiques contenant, à titre de principe actif, l'un au moins des médicaments tels que définis ci-dessus.
L'invention conceme ainsi des compositions pharmaceutiques contenant un composé de l'invention ou un sel additif d'acide pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en association avec un support pharmaceutiquement acceptable suivant le mode d'administration choisie (par exemple orale, intraveineuse, intrapéritonéales, intramusculaires, trans-dermique ou sous-cutance). La composition pharmaceutique (par exemple thérapeutique) peut être sous forme solide, liquide, de liposome ou de micelles lipidiques.
La composition pharmaceutique peut être sous forme solide comme, par exemple, les poudres, pilules, granules, comprimés, liposomes, gélules ou suppositoires. La pilule, le comprimé ou la gélule peuvent être revêtus d'une substance capable de protéger la composition de l'action de l'acide gastrique ou des enzymes dans l'estomac du sujet pendant une période dc temps suffisante pour permettre à cette composition de passer non digérée dans l'intestin grêle de ce dernier. Le composé peut aussi être administré localement, par exemple à l'emplacement même de la tumeur. Le composé peut aussi être administré selon le processus de la libération prolongée (par exemple une composition à libération prolongée ou une pompe d'infusion). Les supports solides appropriés peuvent être, par exemple, le phosphate de calcium, le stéarate de magnésium, le carbonate de magnésium, le talc, les sucres, le lactose, la dextrine, l'amidon, la gélatine, la cellulose, la cellulose de méthyle, la cellulose carboxyméthyle de sodium, la polyvinylpyrrolidine et la cire. Les compositions phalmacoutiques contenant un composé de l'invention peuvent donc également se présenter sous forme liquide comme, par exemple, des solutions, des émulsions, des suspensions ou une formulation à libération prolongée. Les supports liquides appropriés peuvent être, par exemple, l'eau, les solvants organiques tels que le glycérol ou les glycols tel que le polyéthylène glycol, de même que Icurs mélanges, dans des proportions variées, dans l'eau.
L'invention a également pour objet l'utilisation des produits de formule (I) ou (II) telle que définie ci-dessus, pour la préparation de médicaments destinés à inhiber la topoisomèrase, et plus particulièrement la topoisomèrase de type I ou dc type II, de médicaments destinés à traiter les tumeurs, de médicaments destinés à traitcr les infections parasitiques, ainsi que de médicaments destinés traiter des infections ou maladies virales.
La dose d'un composé selon la présente invention, à prévoir pour le traitement des maladies ou troubles mentionnés ci-dessus, varie suivant le mode d'administration, l'âge et le poids corporel du sujet à traiter ainsi que l'état de cc dernier, et il cn sera décidé en définitive par le médecin ou le vétérinaire traitant. Une telle quantité déterminée par le médecin ou le vétérinaire traitant est appelée ici "quantité thérapeutiquement efficace".
PARTIE EXPÉRIMENTALE: Préparation 1: 5-éthyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino [3',4':6,7] indolizine [1,2-b] quinoléine-3,15 (4H,13H)-dione 1.a. 4-éthyl-3,4-dihydroxy-lH-pyrano [3',4':6,7] indolizino [1,2-b] quinoléine-14 (4H,12H)-one On ajoute par portions du borohydrure de sodium (14 g, 37() mmol) à une suspension de (S)-(+)-camptothécine (14 g, 4() mmol, que l'on peut obtenir de différentes sources commerciales telles que Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, WI)), dans le méthanol (750 ml) et on chauffe doucement le mélange résultant jusqu'à 550 C afin d'obtenir une solution limpide que l'on agite ensuite pendant 16 heures à la température ambiante. Le solvant est ensuite évaporé sous pression réduite, le résidu est repris dans l'eau (250 ml), neutralisé par addition d'acide acétique (21 ml) et laissé au repos 2 heures à 40 C. La suspension résultante est filtrée et lavée successivement avec de l'eau froide, de l'acétone et du diéthyl éther, ce qui permet d'obtenir après séchage sous pression réduite le composé recherché sous forme d'un solide blanc, p.f. 2800 C.
1.b. 8-formyloxyméthyl-7-propionylindolizino [1,2-b] quinoléine 9 (1111)-one On ajoute goutte à goutte une solution de métapériodate de sodium (14 g, 65 mmol) dans l'eau (140 ml) à une suspension de 4-éthyl-3,4-dihydroxy-lH-pyrano [3', 4':6,7] indolizino [1,2-b] quinoléine-14 (4H,12H)-one (13,4 g, 38 mmol) dans de l'acide acétique glacial (720 ml) et on agite la solution résultante pendant une heure à température ambiante. Le mélange réactionnel est ensuite versé dans un mélange glace/eau (650 ml) et la suspension résultante est agitée pendant une demi-heure puis filtrée et lavée successivement avec de l'eau, de l'alcool isopropylique et du étherdiéthylique, ce qui permet d'obtenir, après séchage sous pression réduite, le composé recherché (11,5 g) sous forme d'un solide jaune pâle, p.f. > 200" C (d).
1.c. ss-éthyl-ss-hydroxy-ss-(8-hydroxyméthyl-9-oxo (11H)-indolizino [1,2-b] quinoléine-7-yl)-propionate de tert-butyle Une suspension de zinc (6,5 g, 1(N) mmol) agitée avec un agitateur magnétique dans du diéthyléther anhydre (50 ml) sous argon, est activée, par addition goutte à goutte de chlorotriméthylsilane (0,75 ml, 5,7 mmol). On agite encore 15 minutes à température ambiante puis on chauffe à reflux. Le bain de chauffage est ensuite enlevé et du bromoacétate de tert-butyle (15 ml, 100 mmol) est ajouté goutte à goutte à une vitesse assurant le maintien au reflux. Le chauffage exteme est remis et poursuivi pendant encore une heure. La solution éthérée résultante du réactif de Reformatsky est laissée à refroidir jusqu'à la température ambiante puis transférée au moyen d'une canule dans une suspension de 8-formyloxyméthyl-7-propionylindolizino [1,2-b] quinoléine-9 (I IH)- one (1,6 g, 4,7 mmol) dans du tétrahydrofuranne anhydre (40 ml) sous argon. Le mélange réactionnel est agité au reflux pendant une heure, puis laissé à refroidir jusqu'à la température ambiante, et la réaction est arrêtée par ajout de chlorure d'ammonium saturé (100 ml) et on extrait avec du chloroforme (3 x 100 ml). Les extraits chloroformiques combinés sont séchés sur sulfate de sodium, évaporés, et le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (1-2 % MeOH/CH2Cl2), ce qui permet d'obtenir 0,64 g du composé recherché (31 %) sous forme d'un solide jaune pâle, p.f. 146-149 C.
RMN-1H (CDC13) : (),93 (t, 3H); 1,37 (s, 9H); 1,99 (m, 2H); 2,97 (dd, 2H); 3,5 (se, 1H); 5,10 (s, 2H); 5,24 (s, 2H); 7.40 (s, 1H); 7,59 (t, 1H); 7,83 (t, 1H); 7,90 (d, 1H); 8,20 (d, 1H); 8,34 (s, 1H).
RMN-C13 (CDC13) : 8,18 ; 27,90 ; 34,59 ; 45,34 ; 49,91; 58,55 ; 77,39 ; 82,42 100,52; 127,67; 127,97; 128,10; 128,64; 129,44; 129,79; 130,42; 130,99; 142,86 ; 148,69 ; 152,75 ; 155,16 ; 162,38 ; 172,24.
IR (KBr) : 764; 1016; ; 1157 ; 158(); 1651; 1726.
1.d. 5-éthyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino [3'4':6,7]-indolizine [1,2-b] quinoléine-3,15 (4H,13H)-dione Du ss-éthyl-ss-hydroxy-ss-(8-hydroxyméthyl-9-oxo (11H)-indolizino-[1,2-b] quinoléine7-yl) propionate dc tert-butyle (1,45 g, 3,32 mmol) est dissous dans du dichlorométhane anhydre (25 ml) et traité avec une solution saturée de chlorure d'hydrogène dans le dichlorométhanc (100 ml). Le mélange résultant est maintenu à -20 C pendant 16 heures. Le précipité est filtré, lavé avec du méthanol et séché sous pression réduite, ce qui permet d'obtenir 662 mg (55 %) du composé recherché sous forme d'un solide jaune, p.f. > 300 C.
Comme démontré ci-après, le procédé selon l'invention est spécifique et efficace. Il fournit des coefficients de variation "intra-essais" inférieurs à 3 % et des coefficients de variation "inter-essais" inférieurs à 5 %. De plus, il est insensible aux taux de facteurs de la voie intrinsèque, à l'héparine normale (poids moléculaire moyen : 12000 daltons), aux héparines fractionnées de faible poids moléculaire, aux taux de PS, aux taux de facteur VIII, aux CAC, aux VKA et à la mutation 20210A de la prothrombine.
D'autres avantages et caractéristiques de l'invention seront mieux compris à la lecture qui va suivre d'exemples de réalisation et d'essais.
L'ensemble de ces éléments n'est pas limitatif mais est fourni à titre d'illustration.
Exemple I Obtention du plasma humain à tester Le prélèvement est effectué sur une solution de citrate trisodique 0,109 M, à raison de 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang.
L'échantillon est ensuite centrifugé à 3500 g pendant 15 minutes à 4"C. il est recommandé de faire une double centrifugation à 4"C afin d'éliminer la présence éventuelle de plaquettes dans l'échantillon. La séparation et le recueil du plasma doivent être réalisés le plus rapidement possible après le prélèvement.
Après décantation, le plasma peut être conservé à 2-8"C pendant 8 h, 15-19"C pendant 8 h, et -20 C pendant 1 mois.
En cas de décongélation. le plasma doit être décongelé à 37"C au bain-marie thermostaté pendant au moins 10 minutes puis homogénéisé avant utilisation. La recongélation d'un plasma est proscrite.
Exemple 2 Obtention du plasma témoin On procède comme indiqué à l'exemple 1.
Exemple 3 Préparation et conservation des réactifs - premier réactif (Rl) Ri est un plasma humain lyophilisé immunodéplété en facteur V et enrichi en PL. Le produit lyophilisé est transformé en composition aqueuse au moyen de 2 ml d'eau distillée. On homogénéise la solution résultante à la température ambiante (18-25"C) avant utilisation.
Cette solution est stable à 18-25"C pendant 6 h, 15-19"C dans l'automate vendu sous la nomenclature commerciale de "STA" par la société DIAGNOSTICA STAGO pendant 38 h, 2-8"C pendant 26 h, et -20 C pendant I mois.
- deuxième réactif (R2) R2 est le lyophilisat de CVH. Ce produit lyophilisé est transformé en composition aqueuse au moyen de 2 Inl d'eau distillée (pouvant contenir avantageusement 1 % v/v de PB). On homogénéise la composition résultante à la température ambiante (18-25"C) avant utilisation.
Cette composition est stable à 18-25"C pendant 6 h, 15-19"C dans l'automate "STA" pendant 38 h, 2-8"C pendant 26 h, et -20 C pendant I mois.