INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Exemple 2 Réaction d'estérification La production à pression atmosphérique d'une gamme d'esters de la famille des butyrates et des acétates, d'une longueur de chaîne carbonée maximale de 9 carbones a été effectuée par utilisation de lipase.
De manière connue en soi, la composition élastomère silicone peut encore être additionnée de divers additifs classiques comme par exemple des charges ou des colorants.
Pour améliorer la stabilité au stockage des compositions selon l'invention et pour fournir aux utilisateurs une forme commerciale aisément manipulable, il est prévu un système à au moins deux composants A et B comportant les composés (I) à (III) et éventuellement (V) ainsi que le catalyseur (Vl) des compositions telles que définies cidesssus, chacun de ces deux composants A et B étant exempt de mélange de (I) + (Il) ettou (III) avec du catalyseur (Vl). Ledit catalyseur (Vl) est, de préférence, exclusivement contenu dans l'un des composants A ou B du système.
Les microsphères (IV) peuvent être présentes dans l'une ou les deux parties A et B. On peut aussi les ajouter après mélange des parties A et B ensemble.
Pour simplifier l'utilisation, il est préférable de proposer un système bi-composant dont les proportions A: B sont comprises entre 100 : 2 à 10 et 2 à 10:100 parties en poids environ.
S'agissant de la préparation du gel, on peut préciser que la réticulation de la composition en gel intervient à la température ambiante ou après chauffage à des températures comprises entre 80 et 1800 C par exemple. Dans ce contexte, les durées de réticulation nécessaires sont, par exemple, comprises entre quelques min et 1 heure 30 min.
Ces conditions sont de manière générale compatibles avec l'utilisation de microsphères expansables in situ. Toutefois, en fonction des caractéristiques des microsphères et de la composition silicone, I'on pourra choisir une température et une durée de chauffage compatibles avec une expansion convenable des microsphéres avant le durcissement du silicone. De manière préférée, les conditions opératoires peuvent être : chauffage entre 80 et 1800 C, en particulier entre 100 et 1600 C, pendant de 1 à 5 minutes, en particulier de 1 à 3 minutes.
Le gel adhésif réticulé obtenu à partir de la composition décrite cidessus et les produits conformés ainsi produits forment des objets à part entière de la présente invention.
L'invention a aussi pour objet l'utilisation du système ou du gel, pour la réalisation de prothèses, e.g. prothèses mammaires externes, de garnitures de matelas, coussins, sièges et analogues, de semelles ou inserts pour chaussures.
La présente invention va être maintenant décrite plus en détail à l'aide de modes de réalisation non limitatifs.
EXEMPLE: 1) Liste des matières premières utilisées: a) partie A: POS I : huile polydiméthylsiloxane bloquée à chacune des extrémités des chaînes par un motif (cl3)2 ViSiO05, de viscosité 60 000 mPa.s et contenant environ 0,003 fonction vinyle dans 100 g d'huile, soit environ 0,08 % en poids de fonction vinyle.
POS V (diluant du POS 1): huile polydiméthylsiloxane a,etriméthylsiloxy, de viscosité 100 mPa.s Ingrédient VI: platine zéro complexé par du divinyltétraméthyldisiloxane : on engage une solution dans le divinyltétraméthyldisiloxane d'un complexe du platine à environ il % en poids de platine zéro ligandé par du divinyltétraméthyldisiloxane: les quantités de ce catalyseur sont exprimées en ppm de Pt métal apporté par la solution. b) partie B: POS I ; voir partie A POS V : voir partie A POS III (allongueur): huile polydiméthylsiloxane bloquée à chacune des extrémités des chaînes par un motif (CH3)2 HSiOo.5, ayant une viscosité de 20 mPa.s et contenant environ 0,2 fonction SiH dans 100 g d'huile, soit environ 0,2 % en poids de H.
POS Il (réticulant): huile poly(diméthyl) (hydrogénométhyl)siloxane bloquée à chacune des extrémités des chaînes par un motif (CH3)2 HSiOo.5, ayant une viscosité de 300 mPa.s et contenant environ 0,17 fonction SiH dans 100 g d'huile, soit environ 0,17 % en poids de H. c) Microsphères (IV) : distribuées par la Société UCB-Chemicals, sous le nom de Microsphères Organiques DUALITE . Ces microsphères ont typiquement les caractéristiques suivantes - densité : 0,13 kg/l - dimensions : de 25 à 70 ijm - nature : polyacrylonitrile, chlorure de polyvinylidène - parois : 0,2 pm Ces microsphéres sont en plus recouvertes d'une couche de carbonate de calcium qui évite les possibilités de réagglomération.
2) Constitution de la composition sous forme bicomposante testée: PARTIEA PARTIE B POSI 50* 49,1 POS V 50 50,0 POS 11 - 0,855 POS 111 - 0,045 Cata VI 30 ppm Pt (* parties en poids) La réticulation de la composition s'effectue après mélange des 2 parties A et B dans un rapport 50/50 en poids.
# r1 = nb de fonction SiH du POS III X 100 nb de fonction SiH des POS II + III 0,000045 = x100=5,8% 0,000775 nb de fonction SiH des POS II + III # r2 = nb de fonction Vi du POS I 0,000775 = = 0,52 0,00149 3) Préparation de compositions a) Composition 1: - 500 g de partie A (densité 1,1) sont placés dans un récipient hémisphérique, en innox; à l'aide d'un agitateur hémisphérique, non raclant, tournant à une vitesse de 30 tr/min, on introduit, en 5 min, 59 g de microsphères. L'agitation est maintenue pendant 10 min à 25"C.
- I'opération est reproduite avec la partie B - on mélange ensuite 250 g de chacune des deux parties A et B chargées, c'est à-dire contenant 50 %, en volume, de microsphères. La réticulation est: 24 h à 25C C. b) Composition 2 On procède comme précédemment, mais en diluant les parties A et B avec 1 partie de POS (\/) pour 1 partie de partie A, respectivement B (parties en poids).
4) Résultats Des essais comparatifs ont été réalisés avec les compositions 1 et 2 et à titre de témoin des compositions équivalentes mais sans microsphères.
La phospholipase A2 (PLA2) est une enzyme produite par les cellules au niveau membranaire. Elle prédomine dans les ccllulcs lices aux phénomènes d'inflammation, telles que les mastocytes. Par son action, elle libère l'acide arachidonique lié aux phospholipides membranaires. Cet acide se métabolise ensuite en différents médiateurs lipidiqucs dc l'inflammation et de l'allergie, tels que les leucotriènes et les prostaglandincs.
La 5'-lipoxygénase, désignée ci-après par "lipoxygénase", est, comme la PLA2, une enzyme membranaire. Elle intervient dans la "cascade de l'inflammation" en aval de la libération de l'acide arachidonique par la PLA2, dans la conversion de cct acide en leucotriènes, médiateurs de l'inflammation.
La 3',5'-AMPc-phosphodiestérase, désignée ci-après "phosphodiestérase" ou "PDE", est l'enzyme qui transforme l'AMPe, second messager qui intervient dans le contrôlc du métabolismc ccllulairc, cn AMP inactif. L'inhibition de la PDE par un agent inhibitcur permet en conséqucnce de maintenir un taux intracellulaire élevé d'AMPc, ce qui a pour effet notamment d'activer les protéines kinases A, et, par ce processus, permet de favoriser la dégradation des lipides.
La tyrosinase est l'enzyme clé de la synthèse de la mélanine et donc du métabolisme dc la pigmentation cutanée. En cosmétique, son inhibition, par des agents appropriés, trouve des applications dans le traitement local des hyperpigmentations cutanées, telles que les tâches pigmentaires de sénescence.
Ainsi, il a été mis en évidence par les inventeurs, que, grâce à leur action inhibitrice sur les enzymes précitées, les extraits de la plante Terminalia catappa en particulier Barringtonia asiatica, présentaient un grand intérêt en cosmétique et en thérapeutique.
En effet, par la découverte de l'activité des extraits de la plante Terminalia catappa, inhibant l'action d'enzymes, l'invention fournit différentes solutions dans le domaine de la cosmétique et de la thérapeutique, notamment de la dermatologie. S'agissant de l'inhibition de la phospholipase A2 d'une part et de la lipoxygénase d'autre part, les compositions selon l'invention agissent ainsi doublement dans le processus de formation des médiateurs de l'allergie cutanée et de l'inflammation, en limitant ou cn bloquant ce processus.
L'inhibition de la phosphodiesterasc (PDE) conduit à une action amincissante, anti -inflammatoire et anti-vicillisscment des compositions de l'invention. L'inhibition de la tyrosinase leur confère un effet dépigmentant de la peau.
D'autrcs avantages de l'invention apparaissent au vu de la description et des excmplcs qui suivent.
Ainsi, selon l'une de ses caractéristiques essentielles, l'invention concerne des compositions cosmétiques contenant un extrait de la plante Terminalia catappa en présence d'un véhicule cosmétiquement acceptable.
L'extrait est avantageusement obtenu par macération de la partie de plante dans un solvant ou un mélangc de solvants, suivie d'une filtration. Le solvant de la solution obtenue peut cotre au besoin évaporé pour obtenir l'extrait sec.
Dc préférence, l'évaporation sera réalisée sous pression réduite.
A titre de solvants avantageusement utilisés, on citera - l'eau - des solvants chlorés, notamment le dichlorométhane - les éthers, tels que l'éther méthylique ou diisopropylique - l'acétone - les esters en C2 à C8 tels que l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle - des alcools en C1 à C6, tels que le méthanol, l'éthanol et l'isopropanol - des polyols en C2 à C6, tels que le propylèneglycol ou le glycérol.
On pourra également obtenir l'extrait de la plante par la technique dite de l'extraction au dioxyde de carbone supercritique.
Les résistances électriques 4 sont reliées à un boîtier 8 de commande de l'appareil, également connecté à une sonde 9 de température extérieure au carter 1 disposée sur l'un des flancs de l'appareil en partie basse à l'abri du rayonnement des éléments 2, 5 et 6.
Le boîtier 8 est logé dans un capot métallique 10 à l'intérieur du carter 1, I'accès au boîtier 8 se faisant en partie haute arrière de l'appareil.
En 11, en partie inférieure du carter 1, sont représentées des ouïes d'entrées d'air frais.
L'appareil représenté est destiné à être fixé à une paroi à l'aide d'un dosseret approprié.
Un tel appareil est susceptible de combiner trois modes de diffusion, dans le local où il est installé, de la chaleur engendrée par le système électrique résistant 4, à savoir une diffusion par convection naturelle, une diffusion par rayonnement et une restitution d'une chaleur stockée.
La diffusion par convection est assurée par l'air se trouvant dans l'espace entre les éléments 5 et 6, là où se trouvent les résistances chauffantes 4. Dans un tel couloir vertical, I'air frais aspiré par les ouïes 1 1 est chauffé, monte et s'échappe par la grille 3. Ce processus est accéléré par les ondulations en regard de l'élément diffuseur 5 qui font office de cheminées.
L'intervalle entre les éléments 5 et 6 est relativement étroit et peut se réduire à l'espace juste nécessaire à l'agencement des résistances 4, alors en contact avec lesdits éléments 5, 6.
La diffusion par rayonnement est le fait de l'élément diffuseur 5 associé à la façade avant métallique 2.
Le diffuseur 5, en tôle d'aluminium ou en tôle d'acier aluminé, peut recevoir sur l'une et/ou l'autre de ses surfaces un traitement de surface mécanique (projection d'un gravité par exemple) pour modifier les capacités émissives ou de rayonnement et privilégier le rayonnement par rapport à la convection, ou l'inverse.
La façade avant 2 peut recevoir un semblable traitement, aux mêmes fins. Les ondulations de cette façade peuvent avoir différents profils.
L'intervalle entre le diffuseur 5 et la façade 2 est par exemple de l'ordre d'une douzaine de millimètres.
L'effet de restitution calorifique est assuré par les briques de fonte 6.
Les cannelures ou ondulations prévues en 7 sur la face externe de l'accumulateur 6, ainsi que sur la façade avant 2 contribuent à accroître les effets de convection de l'air réchauffé à l'intérieur du carter et au contact de la façade avant.
L'épaisseur de l'accumulateur 6 est déterminé notamment en fonction de la capacité de stockage désirée.
Avantageusement, afin d'éviter un échauffement trop important de la façade arrière du carter 1, une plaque métallique déflectrice (non représentée) est interposée entre l'accumulateur 6 et ladite façade arrière, à quelques millimètres de cette dernière et à un vingtaine de millimètres dudit accumulateur 6.
En variante, la face de la plaque de fonte 6 tournée vers les résistances 4 peut comporter des gorges (non représentées) pour y recevoir au moins partiellement lesdites résistances en sorte de privilégier la fonction accumulateur par rapport à la fonction convection, ou inversement.
En particulier, ces cassettes, bordées par des sites de restriction tuniques, sont caractérisées par le fait que chaque cassette comprend une région d'intérêt, notamment celles impliquées dans la reconnaissance de promoteur (région présentant une homologie avec le facteur G d'E.coli; région présentant une homologie avec le répresseur X d'E.coli; région conférant la spécificité de promoteur) et celles impliquées dans le site catalytique (motif A ; motif B ; motifC).
Pour la définition des motifs A, B et C, voir par exemple R. Sousa, TIBS 21, 186-190(1996).
Ces cassettes, dérivées du gène I de la T7 ARNpADNd, ont été obtenues à l'aide de techniques de biologie moléculaire conventionnelles (F. M. Ausubel, R Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J. G. Seidman, et al, Current Protocols in Molecular Biology (Current Protocols, 1993)), notamment la PCR, qui a permis d'introduire des sites de restriction par mutagenèse dirigée silencieuse, et le sous-clonage dans un vecteur de clonage.
Le gène modulaire ainsi obtenu est caractérisé par la présence de sites de restrictions bordant les cassettes, ces sites de restriction étant le site Nco I (-2,+4), Bcl 1(218,223), Hind 111(539,544), SacI (776,781), Pst(1587, 1592), BgllI (1811, 1816), NdeI (1865, 1870), XhoI (1951,1956), Clal (2305, 2310), SalI (2497, 2502), XbaI (2660, 2665); la position 1, en acides nucléiques, correspond a adénine du codon ATG initiateur et la position 2652 à la troisième base du codon terminateur TAA. Le site NdeI (2504, 2509) a été détruit. Toutes les mutations induisant ces sites de restriction sont silencieuses, excepté la mutation générant le site NcoI qui induit le remplacement de l'asparagine en position +2 par une glycine. La position 1, en acides aminés, correspond à la première méthionine, la position 883 correspond à l'alanine carboxy-terminale.
Le gène modulaire, cloné dans un vecteur de clonage pGNEX dérivé du pGEM-l dans lequel le polylinker a été remplacé par un adaptateur contenant les sites de restriction Nco I, EcoRI, XbaI , constitue le support de base des mutagénèses ultérieures. Ceci est rendu possible par le fait que chaque cassette contenant une région d'intérêt est bordée par des sites de restriction uniques dans le vecteur de clonage.
L'introduction de mutations non silencieuses, à l'aide de techniques de PCR, dans une ou plusieurs cassettes du gène modulaire précédemment défini, a conduit à des gènes codant pour des polymérases présentant une séquence en acides aminés qui diffère d'au moins un acide aminé par rapport à la T7 exprimée à partir du gène modulaire. On a préparé en particu lier des gênes mutants qui codent pour au moins un acide aminé modifié dans le motif B de l'enzyme sauvage, par exemple avec une alanine (A) à la place d'une arginine (R) en position 627 et/ou une alanine (A) à la place d'une sérine (S) en position 628 et/ou une alanine (A) à la place d'une lysine (K) en position 631 et/ou une alanine (A) à la place d'une arginine (R) en position 632 et/ou une alanine (A) à la place d'une tyrosine (Y) en position 639.
On a également obtenu des gènes mutants qui codent pour une polymérase dont la région 625VTRSVTKRSVMTLAYGSKEFGFRQQVLD652 comprenant le motif B a été remplacée en tout ou partie par la région homologue B' présente chez certaines polymérases ARN dépendantes, notamment celles des polymérases du virus de l'hépatite C (NCGYRRCRASGVLTTSCGNTLTCYI), et de l'intégrase 32 de levure (HNTTLGlPQGSVV SPILCNIFLDKL).
Les gènes précédemment décrits ont été clonés dans un vecteur pMR résultant de la ligation du fragment SspI du pMal-c (Biolabs) contenant notamment le répresseur lacis, et du fragment SspI du pMH (V. Cheynet, B. Verrier, F. Mallet, Protein expression andpurification 4, 367 (1993)) contenant un minicistron permettant d'atteindre un haut niveau d'expression, ainsi qu'une séquence codant pour une queue poly-histidine fusionnée à rextrémité terminale du gène cloné (exemple 1, figure lb). L'expression des protéines recombinantes T7 RNAP dans la souche bactérienne BL21 représente jusqu'à 30 % des protéines totales de la bactérie. Les protéines solubilisées dans un tampon désoxycholate contenant une forte concentration saline sont déposées sur une colonne TALON (Clontech) permettant la purification spécifique par chélation avec l'ion de protéines présentant une queue polyhistidine. 130 à 2200 g de polymérases sont ainsi obtenus pour 20 ml de culture, avec une pureté supérieure à 95 % comme indiqué (i) par une coloration au bleu de Coomassie (exemple 1, figure lc), (ii) par une analyse en western blot avec un anticorps polyclonal de cobaye anti-T7 RNAP (bioMérieux) et un anticorps monoclonal de souris (Quiagen) anti-MRGSHHHHHH, (iii) par l'absence d'activité endonucléase, exonucléase simple brin et double brin, ribonucléase, comme déterminé essentiellement selon la méthode de He et al (B. A. He, M. Rong, D. L. Lyakhov, H. Gartenstein, G. Diaz, et al, Protein Expr Purif9, 142 (1997)). Ce résultat reflète les performances du couple hôte-vecteur pMR-BL21 et du procédé de purification vis-à-vis de la queue MRGSHHHMSVLE.
L'invention a également pour objet l'utilisation d'une ARN polymérase telle que définie précédemment, dans un procédé de transcription d'un segment polynucléotidique d'intérêt ayant une séquence quelconque, ledit segment, de type ARN, étant contenu dans une matrice polynucléotidique, en vue de synthétiser, en présence de ladite matrice, un produit de transcrip tion contenant une séquence d'ARN complémentaire de la séquence dudit segment polynucléotidique d'intérêt.
Selon un mode d'exécution particulier, on opère en présence d'une amorce oligonucléotidique contenant au moins 10 nucléotides, et le produit de transcription est celui qui résulte de l'élongation de ladite amorce. Les amorces sont notamment de type ARN. Elles contiennent, ou sont constituées par, une séquence complémentaire de la matrice.
Selon un autre mode d'exécution particulier, ladite utilisation est caractérisée par le fait que ladite matrice polynucléotidique comprend, en amont dudit segment polynucléotidique d'intérêt, un promoteur reconnu par ladite ARN polymérase, et que ledit produit de transcription est un ARN complémentaire d'une séquence de la matrice commençant en un site d'initiation de la transcription pour ledit promoteur.
Les ARN polymérases de l'invention peuvent être utilisées notamment en vue de réaliser (i) une amplification de cible ARN de façon isotherme, (ii) un séquençage direct d'ARN et (iii) la synthèse d'ARN d'intérêt particulier (par exemple des sondes, des ribozymes, etc.). En outre, des ARN polymérases de l'invention sont capables d'incorporer des bases modifiées dans le brin néosynthéthisé, ce qui facilite notamment la quantification ou l'utilisation dudit brin.
L'invention concerne notamment l'utilisation de ces enzymes recombinantes ainsi exprimées et purifiées dans une méthode de synthèse d'ARN à partir d'une matrice ARN, soit sous la dépendance d'un promoteur (exemple 2 figure 2), soit par élongation d'une amorce oligoribonucléotidique (exemple 3 figure 3).
Les enzymes ainsi purifiées ont été évaluées, dans un contexte promoteurdépendant, sur différentes matrices (exemple 2 figure 2) en particulier une matrice comportant un brin ARN simple brin. 11 a été montré qu'une valie entre 9 et 18 bases. Il a été montré qu'une polymérase mutée obtenue selon l'invention était capable de générer un transcrit spécifique de la bonne taille sur matrice ARN simple brin en présence d'une amorce ARN, et en palticulier en présence d'une amorce ARN de grande taille, alors que l'enzyme sauvage identiquement produite ne peut réaliser ce phénomène. De plus, une telle polymérase mutée est incapable d'effectuer l'élongation d'une amorce, en particulier une amorce ARN de petite taille, conduisant à un transcrit de bonne taille, à partir d'une matrice ADN simple brin, ceci la distinguant de l'enzyme sauvage.
L'invention permet notamment l'amplification de cible, mono enzymatique, isotherme et spécifique d'ARN, à l'aide d'amorces appropriées (l'une complémentaire de la matrice cible et l'autre complémentaire du transcrit de la cible).
Les avantages d'un tel système d'amplification d'ARN sont multiples. Vis-à-vis d'un système d'amplification de type RT-PCR monoenzyme (Tth) ou bi-enzyme (AMV-RT, Taq), les risques d'amplification d'ADN résiduels sont exclus. En outre, pour la détection d'ARN intracellulaires, ce système ne requiert pas le positionnement d'amorces chevauchant les sites d'épissages, stratégie couramment utilisée en RT-PCR afin d'éliminer les amplifications d'ADN résiduel. Vis-à-vis de systèmes d'amplification transcriptionnels de type Nasba ou Tma, ce système présente tout d'abord une simplification, puisqu'il utilise une seule enzyme au lieu de trois actMtés enzymatiques, et conserve l'avantage de ne pas amplifier 1'ADN, même si ce phénomène dans les techniques Nasba et TMA est moindre que dans les procédés dérivés de la PCR.
Selon une autre disposition de cet autre mode de réalisation particulièrement avantageux, ladite paire d'oligonucléotides 3' et 5' ayant pour récepteur cible un récepteur p50.2 correspond à un oligonucléotide 5' comprenant la SEQ ID n08, ou une séquence en dérivant, et un oligonucléotide 3' comprenant la SEQ ID n03, ou une séquence en dérivant.
Selon encore une autre disposition de cet autre mode de réalisation particulièrement avantageux, ladite paire d'oligonucléotides 3' et 5' ayant pour récepteur cible un récepteur p70.ACT correspond à un oligonucléotide 5' comprenant la SEQ ID n09, ou une séquence en dérivant, et un oligonucléotide 3' comprenant la SEQ ID n03, ou une séquence en dérivant.
Selon encore une autre disposition de cet autre mode de réalisation particulièrement avantageux, ladite paire d'oligonucléotides 3' et 5' ayant pour récepteur cible un récepteur p140.ACT correspond à un oligonucléotide 5' comprenant la SEQ ID ne15, ou une séquence en dérivant, et un oligonucléotide 3' comprenant la SEQ ID n03, ou une séquence en dérivant.
Selon encore un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, ladite (ou au moins une desdites) paire(s) d'oligonucléotides 3' et 5' ayant pour récepteur cible un récepteur NKG2 est choisie parmi le groupe de paires d'oligonucléotides 3' et 5' constitué par - un oligonucléotide 5' comprenant la séquence SEQ ID n016, ou une séquence en dérivant, et un oligonucléotide 3' comprenant la séquence SEQ ID ne17, ou une séquence en dérivant, - un oligonucléotide 5' comprenant la séquence SEQ ID ne18, ou une séquence en dérivant, et un oligonucléotide 3' comprenant la séquence SEQ ID ne17, ou une séquence en dérivant, - un oligonucléotide 5' comprenant la séquence SEQ ID ne19, ou une séquence en dérivant, et un oligonucléotide 3' comprenant la séquence SEQ ID ne17, ou une séquence en dérivant, - un oligonucléotide 5' comprenant la séquence SEQ ID ne20, ou une séquence en dérivant, et un oligonucléotide 3' comprenant la séquence SEQ ID n021, ou une séquence en dérivant.
Selon une première disposition de cet encore autre mode de réalisation particulièrement avantageux, ladite paire d'oligonucléotides 3' et 5' ayant pour récepteur cible un récepteur NKG2A (inhibiteur) correspond à un oligonucléotide 5' comprenant la SEQ ID ne16, ou une séquence en dérivant, et un oligonucléotide 3' comprenant la SEQ ID ne17, ou une séquence en dérivant.
Selon une deuxième disposition de cet encore autre mode de réalisation particulièrement avantageux, ladite paire d'oligonucléotides 3' et 5' ayant pour récepteur cible un récepteur NKG2B (inhibiteur) correspond à un oligonucléotide 5' comprenant la SEQ ID ne18, ou une séquence en dérivant, et un oligonucléotide 3' comprenant la SEQ ID ne17, ou une séquence en dérivant.