INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Selon une autre modalité de l'invention, ledit moyen de renfort de ladite partie basse (11, 65) peut tre un renfort bas (67), adhérant sur tout ou partie de la face intérieure de ladite partie basse (11, 65), et au moins le long de ladite ligne d'affaiblissement basse (44) et parallelement à cette dernière, ledit renfort bas (67) pouvant comprendre, sur tout ou partie de sa surface, une couche adhésive activable destinée à faire adhérer ledit renfort bas (67) audit goulot.
La figure 12b illustre cette modalité ladite partie basse (65) du développé (6) comprend un renfort (67) sur une hauteur H3 et une couche adhésive activable (66), au-dessus du renfort (67), et de hauteur H,, avec H3 > Hl.
Comme illustré à la figure 14a, la totalité dudit renfort bas (67) peut comprendre une couche activable et former une bandelette (68) circulaire, d'une largeur au moins égale à 2 mm, et de préférence égale au moins à 5 mm, et pouvant s'étendre sur la totalité de la hauteur de ladite partie basse (11), et située sur le bord supérieur de ladite partie basse (11), le long de ladite ligne d'affaiblissement basse (44) et parallèlement à cette dernière.
Les coiffes selon l'invention peuvent aussi comprendre un renfort haut (47), par adjonction complémentaire d'un matériau de renfort sur tout ou partie de la face intérieure de ladite partie haute (10) et typiquement de ladite bandelette d'ouverture (45), et au moins le long de ladite ligne d'affaiblissement basse (44)-et parallèlement à cette dernière, ledit renfort haut n'adhérant pas audit goulot.
Les figures 12a à 13b et 14b illustrent cette modalité.
Typiquement, ledit renfort bas (47) ou haut (48) peut tre formé soit par une feuille mince ou bandelette de renfort, typiquement en matière plastique, de préférence en PET ou PP, ou en papier, ou en AI, soit par une couche ou un cordon de matière plastique, résine, hot-melt, vernis ou peinture.
La fonction évidente dudit renfort est d'augmenter localement les caractéristiques mécaniques du matériau constituant la coiffe proprement dite, là où une-telle amélioration des propriétés est nécessaire pour atteindre les objectifs de l'invention.
II va de soi que plus le renfort présente des caractéristiques mécaniques élevées, plus sa largeur ou son épaisseur peuvent tre faibles.
Ledit renfort peut tre obtenu par application, en couche mince ou sous forme de cordon, de matières plastiques, résines, vernis ou peintures, d'une épaisseur au moins égale à 20m dans le cas d'une couche mince, d'une épaisseur d'au moins 50 pm dans le cas d'un cordon, de largeur typiquement inférieure à 5 mm.
Un autre objet de l'invention réside dans des anticorps ou fragments d'anticorps polyclonaux ou monoclonaux dirigés contre un polypeptide tel que défini ci-avant. De tels anticorps peuvent être générés par des méthodes connues de l'homme du métier. En particulier ces anticorps peuvent être préparés par immunisation d'un animal contre un polypeptide dont la séquence est choisie parmi les séquences SEQ ID N 8 ou SEQ ID N 26 ou les séquences polypeptidiques SEQ ID N 23 ou SEQ ID N 9 ou tout fragment ou dérivé de celles-ci, puis prélèvement du
sang et isolement des anticorps. Ces anticorps peuvent également être générés par préparation d'hybridomes selon les techniques connues de l'homme de l'art.
L'invention a également pour objet des anticorps simple chaîne ScFv dérivés des anticorps monoclonaux définis ci-avant. De tel anticorps simple chaîne peuvent être obtenus selon les techniques décrites dans les brevet US 4,946,778, US 5,132,405 et US 5,476,786.
Les anticorps ou fragments d'anticorps selon l'invention peuvent notamment être utilisés pour inhiber et/ ou révéler l'interaction entre la p53 et les polypeptides tels que définis ci-avant.
Un autre objet de la présente invention concerne un procédé d'identification de composés capables de se lier aux polypeptides selon l'invention. La mise en évidence et/ou l'isolement de ces composés, peut-être réalisée selon les étapes suivantes : - on met en contact une molécule ou un mélange contenant différentes molécules, éventuellement non-identifiées, avec un polypeptide de l'invention dans des conditions permettant l'interaction entre ledit polypeptide et ladite molécule dans le cas où celle-ci posséderait une affinité pour ledit polypeptide, et, - on détecte et/ou isole les molécules liées au dit polypeptide de l'invention.
Selon un mode particulier, un tel procédé permet d'identifier des molécules capables de s'opposer ou de bloquer l'activité de stimulation de la croissance cellulaire des polypeptides selon l'invention et notamment de la protéine MBP1 humaine ou Fibuline 2 ou des fragments dérivés de ces protéines. Ces molécules sont également susceptibles de présenter des propriétés anti-cancéreuses et de s'opposer à la fonction d'oncogènes immortalisants que présentent MBP1ou les polypeptides
dérivés de MBP1qui coopèrent avec la forme activée de la protéine Ras pour la transformation cellulaire.
A cet égard, un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'un ligand identifié et/ou obtenu selon le procédé décrit ci-avant comme médicament. De tels ligands sont en effet susceptibles de traiter certaines affections impliquant un dysfonctionnement du cycle cellulaire et notamment les cancers.
Un autre objet de la présente invention concerne un procédé d'identification de composés capables de moduler ou d'inhiber totalement ou partiellement l'interaction entre les formes mutées oncogènes de p53 et les polypeptides selon l'invention.
La mise en évidence et/ou l'isolement de modulateurs ou de ligands capables de moduler ou d'inhiber totalement ou partiellement l'interaction entre les formes mutées oncogènes de p53 et les polypeptides selon l'invention, peut-être réalisée selon les étapes suivantes : - on réalise la liaison d'une forme mutée de p53 ou d'un fragment de celle-ci à un polypeptide selon l'invention ; il peut s'agir des formes mutées de p53 telles que H 175, G281, W248, ou A 143 ou d'un fragment de celles-ci, il s'agit préférentiellement de la forme H 175 ou encore de la forme G281.
- on ajoute un composé à tester pour sa capacité à inhiber la liaison entre la forme mutée de p53 et les polypeptides selon l'invention ; - on détermine si la forme mutée de p53 ou les polypeptides selon l'invention sont déplacés de la liaison ou empêchés de se lier ; - on détecte et/ou isole les composés qui empêchent ou qui gênent la liaison entre la forme mutée de p53 et les polypeptides selon l'invention.
Dans un mode particulier, ce procédé de l'invention est adapté à la mise en évidence et/ou l'isolement d'agonistes et d'antagonistes de l'interaction entre les formes mutées de p53 et les polypeptides de l'invention. Toujours selon un mode particulier, l'invention fournit un procédé d'identification de molécules capables de bloquer l'interaction entre les formes mutées de p53 et la protéine MBP1humaine ou fibuline 2 humaine. Un tel procédé permet d'identifier des molécules capables de s'opposer aux effets de l'action des polypeptides selon l'invention avec les formes mutées de p53. En particulier de tels composés sont susceptibles de prévenir la coopération oncogénique entre la protéine MBP1 et les formes mutantes oncogéniques de p53 telle notamment H175.
A cet égard, un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'un ligand ou d'un modulateur identifié et/ou obtenu selon le procédé décrit ci-avant comme médicament. De tels ligands ou modulateurs sont en effet susceptibles de traiter certaines affections impliquant un dysfonctionnement du cycle cellulaire et notamment des cancers.
L'invention fournit également des composés non peptidiques ou non exclusivement peptidiques utilisables pharmaceutiquement. Il est en effet possible, à partir des motifs protéiques actifs décrits dans la présente demande, de réaliser des molécules inhibitrices de l'interaction de MBP1 ou de la fibuline2 avec les formes mutées oncogéniques de p53, ces molécules étant non exclusivement peptidiques et compatibles avec une utilisation pharmaceutique. A cet égard, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide de l'invention tel que décrit ci-avant pour la préparation de molécules non-peptidiques, ou non exclusivement peptidiques, actives pharmacologiquement, par détermination des éléments structuraux de ce polypeptide qui sont importants pour son activité et reproduction de ces éléments par des structures non-peptidiques ou non exclusivement peptidiques. L'invention a aussi pour objet des compositions pharmaceutiques comprenant une ou plusieurs molécules ainsi préparées.
L'invention a encore pour objet toute composition pharmaceutique comprenant comme principe actif au moins un ligand obtenu selon l'un et/ou l'autre des procédés décrit ci-avant, et/ou au moins un anticorps ou fragment d'anticorps, et/ou un oligonucléotide antisens, et/ou un composé non exclusivement peptidiques tels que décrits ci-avant.
Les compositions selon l'invention peuvent être utilisées pour moduler l'interaction des formes mutées oncogènes de p53 avec les polypeptides MBP 1 ou Fibuline 2 et de ce fait peuvent être utilisées pour moduler la prolifération de certain type cellulaires. Plus particulièrement ces compositions pharmaceutiques sont destinées au traitement des maladies impliquant un dysfonctionnement du cycle cellulaire et notamment au traitement des cancers. Il s'agit en particulier des cancers associés à la présence de mutants oncogéniques de p53.
La fibre optique 9 transporte sensiblement sans pertes, c'est-à-dire, sans émission transversale par rapport à la direction longitudinale de la fibre optique 9, le feu clignotant émis par la diode LED ou par la rangée de diodes LED 8, et ceci jusqu'à une extrémité de sortie de la lumière 13, située du côté
opposé à la diode LED 8, de la fibre optique 9.
L'extrémité de sortie de la lumière 13 de la fibre optique 9 est traitée, du point de vue optique, de façon que se forme la zone d'émission désirée 7. L'extrémité de sortie de la lumière 13 de la fibre optique 9 y forme l'ouverture de sortie de la lumière 6 du boîtier 2 du miroir. Sur la face extérieure, située à l'intérieur du contour extérieur du boîtier 2 du miroir, de la fibre optique 9, est appliqué un film lumineux 14 qui comme la fibre optique 9 - s'étend sensiblement le long de la totalité de la face avant 10, dans le sens de la marche
4, du boîtier.
En un endroit non représenté, le film lumineux 14 est alimenté en énergie électrique avec laquelle il peut être excité pour devenir lumineux pour émettre un feu clignotant vers l'avant dans le sens de la marche et transversalement par rapport à la direction de la marche 4. De préférence l'activation du film lumineux 14 se fait en synchronisme avec l'activation de la diode LED 8 pour produire un feu commun clignotant en coïncidence. Le feu clignotant répétitif obtenu de cette façon présente donc d'une part la zone d'émission 7, formée par la fibre optique 9 et sensiblement orientée en sens opposé au sens de la marche 4, l'intensité lumineuse du feu clignotant pouvant dans cette zone d'émission 7 remplir, sans autre mesure, les exigences légales. Le feu clignotant répétitif présente en outre la zone lumineuse formée par le film lumineux 14 et émettant vers l'avant, dans le sens de la marche 4, et latéralement. Le film lumineux 14 y produit sur la totalité de sa surface une émission lumineuse homogène, c'est-à-dire une intensité lumineuse à peu près égale
sur toute la surface d'émission.
Sur la face extérieure du film lumineux 14, est appliqué un écran 15 par lequel le film lumineux 14 est protégé en particulier à l'égard des salissures et des dommages ou analogues. L'écran 15 y opère simultanément une protection de la fibre optique 9. En plus de la fonction de protection de l'écran 15, celui peut également servir à modifier la lumière émise par le film lumineux 14, l'écran 15 étant alors équipé d'une
optique appropriée.
La lumière clignotante que l'on peut obtenir, avec le feu clignotant répétitif proposé, dans le miroir rétroviseur extérieur 1 conforme à l'invention est visible très loin vers l'arrière par rapport au sens de marche 4 et nettement reconnaissable latéralement et vers l'avant, ce qui accroît la sécurité avec laquelle un véhicule, équipé du miroir rétroviseur extérieur 1 conforme à l'invention, se déplace dans la circulation routière. La figure 2 fait nettement voir que le film lumineux 14, avec l'écran 15 qui y est appliqué, s'étend, par rapport au sens de la marche 4 du véhicule, essentiellement le long de toute la face extérieure avant 10 du boîtier 2 du miroir. Par rapport à l'axe vertical, la zone de la face avant 10 du boîtier 2 du miroir couverte par le film lumineux 14 n'occupe qu'environ un quart ou un tiers de la totalité de la face extérieure, par exemple en son milieu. De cette façon, le film lumineux 14 forme pour le feu clignotant
une zone d'émission en forme de bande ou de ruban.
Selon la figure 2, l'extrémité de sortie de la lumière 13 de la fibre optique 9 disposée sous le film lumineux 14 est de forme convexe pour élargir verticalement vers le haut et vers le bas la zone d'émission 7 sensiblement orientée en sens opposé au
sens de la marche 4.
Grâce à une forme de réalisation appropriée d'une zone d'extrémité 16, opposée à l'extrémité de sortie de la lumière 13, du film lumineux 14 ou de l'écran 15, on peut, du point de vue esthétique, adapter la surface d'émission à la forme aérodynamique du miroir rétroviseur extérieur 1. La fibre optique 9 y prend de préférence la même forme à l'endroit o elle traverse la
fenêtre 11.
La présente invention a pour objet un lève-vitre de porte de véhicule, du
type comprenant un rail de guidage d'un curseur de support de la vitre pouvant être entraîné par un câble, ainsi que des moyens de fixation du
La structure du polymère PAA, la nature des acides aminés Asp et Glu et les radicaux hydrophobes sont choisis de telle façon que les PV encapsulent des protéines, ou autres PA, en milieu aqueux par un mécanisme spontané et non dénaturant pour les protéines.
La structure du polymère PAA, la nature des acides aminés Asp et Glu et les radicaux hydrophobes sont choisis de telle façon que les PV libèrent les PA en milieu physiologique et, plus précisément, in vivo, la cinétique de libération étant une fonction de la nature du polymère et des PV qu'il est susceptible de former.
Sans que cela ne soit limitatif, cette sélection vise, plus spécifiquement, des PAA dont la chaîne principale se compose d'AAr identiques entre eux. La structure primaire des PAA peut être du type ordonné, séquentiel alterné (PAA blocs) ou du type désordonné, séquentiel aléatoire (PAA statistique). Selon une caractéristique préférée de l'invention, les PAA sont des polymères contenant jusqu'à environ 1 000 AAr et, de préférence, jusqu'à environ 500 AAr et, plus préférentiellement encore, jusqu'à environ 200 AAr.
Les groupements hydrophobes R0 participent à l'agrégation des chaînes polymères, qui est au coeur de la formation des PV. Suivant une disposition préférée de l'invention, ces groupements R0 sont identiques ou différents entre eux et sont sélectionnés dans le groupe comprenant : (i) les alkyles, les acyles ou les alcényles linéaires ou ramifiés, de préférence linéaires en C1-C20 et, plus préférentiellement encore, en C2-C18 ;
(ii) les groupements hydrocarbonés contenant un ou plusieurs hétéroatomes, de préférence ceux contenant de l'oxygène et/ou du soufre et, plus préférentiellement encore, ceux de formule suivante : dans laquelle : - les radicaux RI sont identiques ou différents entre eux et correspondent à l'hydrogène ou à un radical répondant à la même définition que celle donnée supra au point (i), - q = 1 à 100 , (iii) les aryles, les aralkyles ou les alkylaryles, de préférence les aryles ; (iv) les dérivés naturels hydrophobes, de préférence le cholestérol, les phosphatidylcholines et les diacylglycérols.
Par "groupements hydrocarbonés", on entend au sens de la présente invention, des groupements comprenant notamment des atomes d'hydrogène et de carbone De préférence, les groupements R0 sont sélectionnés dans le groupe de radicaux suivants : méthyle, éthyle, propyle, docédyle, hexadécyle, octadécyle.
Conformément à l'invention, chaque groupement hydrophobe R est attaché à la chaîne principale par une liaison covalente clivable, de préférence par hydrolyse chimique et/ou enzymatique, ladite liaison étant plus spécialement de type ester ou amide.
Avantageusement, la fraction de monomères AAr porteurs de groupements hydrophobes représente une proportion supérieure ou égale à 3%, de préférence comprise entre 3-70 % et, plus préférentiellement encore, entre 13 et 60 %.
En pratique, les PAA constitutifs des PV de la suspension selon l'invention sont, par exemple: * des polymères à base de glutamate : - poly(glutamate de sodium)-bloc-(glutamate de méthyle), - poly(glutamate de sodium)-bloc-(glutamate d'éthyle), - poly(glutamate de sodium)-bloc-(glutamate de propyle), - poly(glutamate de sodium)-bloc-(glutamate de octadécyl), - poly(glutamate de sodium)-bloc-(glutamate de benzyle), - poly(glutamate de sodium)-co-(glutamate de méthyle),
- poly(glutamate de sodium)-co-(glutamate d'éthyle), - poly(glutamate de sodium)-co-(glutamate de propyle), - poly(glutamate de sodium)-co-(glutamate de dodécyle), - poly(glutamate de sodium)-bloc-(glutamate de octadécyle), * des polymères à base d'aspartate : - poly(aspartate de sodium)-bloc-(aspartate de méthyle), - poly(aspartate de sodium)-bloc-(aspartate d'éthyle), - poly(aspartate de sodium)-bloc-(aspartate de propyle), - poly(aspartate de sodium)-bloc-(aspartate d'octadécyl), - poly(aspartate de sodium)-bloc-(aspartate de benzyle).
Avantageusement, les particules PV de taille moyenne comprise entre 0,01 m et 0,5 m, de préférence entre 0,01 et 0,2 m. Au sens de l'invention, on entend, par taille ou granulométrie moyenne, la moyenne arithmétique des diamètres en volume [D4,3] établis par diffraction laser et le diamètre de giration mesuré par diffusion élastique de la lumière.
L'un des atouts de l'invention est d'être parvenu à un très bon contrôle de la granulométrie moyenne des ces entités matricielles et de leur répartition granulométrique. Ce contrôle passe par l'atteinte de tailles de particules extrêmement réduites, de l'ordre de quelques nanomètres et de très faible polydispersité, sachant qu'il est possible d'augmenter la taille de ces nanoparticules par agrégation.
Le contrôle de la taille PV s'opère par l'intermédiaire de la composition en AAr et R0 des polyaminoacides mais aussi, pour une même composition, par le choix d'une structure bloc et du procédé d'obtention.
Selon une alternative quant à la taille des PV de la suspension selon l'invention, lesdites particules de vectorisation PV sont agrégées afin d'obtenir de nouvelles particules de taille supérieure.
Le matériau PAA constitutif des PV selon l'invention est, de préférence, un homopolymère ou un copolymère dont l'AAr = Asp et/ou Glu et qui a été rendu amphiphile en modifiant le caractère hydrophile de cet AAr par apport de chaînes latérales hydrophobes R0 sur une fraction des AAr. Cette amphiphilie acquise permet de réunir au moins trois propriétés nouvelles et surprenantes : 1. la première est la possibilité de former spontanément des suspensions colloïdales de PV compatibles avec le pH des milieux physiologiques rencontrés dans les applications thérapeutiques visées ; 2. la deuxième est l'association spontanée des PV avec des PA en l'absence d'autre agent que l'eau qui leur sert de solvant, qui, dans le cas des protéines, n'est pas dénaturant ;
3. la troisième est la possibilité de libérer le PA du complexe d'association PA-PV, dans les conditions physiologiques, avec des profils pharmacocinétique et pharmacodynamique, qui permettent d'envisager des utilisations dans le domaine thérapeutique.
Enfin, un autre objet de la présente invention est une méthode d'obtention d'une plante transgénique, ou d'une propagule telles que définies précédemment, caractérisée en ce qu'elle comprend les étapes consistant à :
- transformer une cellule végétale avec un vecteur comprenant au moins un promoteur ou au moins une séquence d'acide nucléique promotrice telle que définie précédemment ; - sélectionner la cellule végétale ayant intégré le promoteur ou la séquence d'acide nucléique promotrice ; - propager la cellule végétale transformée et sélectionnée, soit en culture, soit par régénération de plantes entières chimériques ou transgéniques.
DESCRIPTION DES FIGURES L'invention sera mieux comprise par la description détaillée des différents modes de réalisation donnée ci-après à titre d'exemples non limitatifs, et en se référant au dessin en annexe, dans lequel : - les Figures I, II et III représentent de manière schématique des structures de constructions comparatives de référence, permettant de comparer les promoteurs chimériques décrits dans la présente demande. Dans la Figure I, il s'agit d'une construction contenant le gène rapporteur de la -glucuronidase dépourvue de toute séquence promotrice, et servant donc de contrôle négatif.
- la Figure II représente de manière schématique une construction contenant le gène de la -glucuronidase sous contrôle du promoteur CaMV double 35S, servant de contrôle de référence fort ; - la Figure III représente une construction servant de référence interne lors des expériences d'expression transitoire, et est composée du gène rapporteur luciférase sous contrôle du promoteur CaMV 35S.
- la Figure IV représente de manière schématique la structure des promoteurs chimériques selon l'invention dérivant du promoteur entier du gène de la plastocyanine de pois (petE prom), qui est également représenté. A partir du promoteur entier (petE prom), les promoteurs MPrl098, MPrl097 et MPrl096 ont été construits par digestions enzymatiques, alors que les promoteurs MPrll08, MPrllO9, MPrlllO, MPrllll et MPrlll2 ont été
obtenu par la technique de lb-PCR. Les promoteurs MPrll43 et MPrll53 ont été respectivement obtenus en délétant les éléments "as-2" et "as-1" de MPrllll, et en fusionant les éléments "as-1 like" et "nos enhancer like" de MPrll08 en amont de MPrll43.
L'ensemble des promoteurs a été cloné au niveau des sites PstI et BamHI dans le vecteur pMRT1144 afin d'obtenir une fusion transcriptionnelle avec le gène rapporteur uidA ; - la Figure V représente un graphique comparant l'activité promotrice relative des différentes constructions après expression transitoire dans des feuilles de tabac. Trois jours après bombardement les feuilles sont broyées puis l'extrait brut clarifié par centrifugation. L'activité ss-glucuronidase et l'activité luciférase sont mesurées par fluorimétrie sur un aliquote de l'extrait brut, puis le rapport activité GUS / activité LUC est déterminé. Les histogrammes correspondent à la moyenne des rapports pour une même construction +/- Erreur Standard à la Moyenne (SEM).
Dans ces différentes figures, certains termes et expressions ont les significations suivantes : - uidA = la séquence codant pour la ss-glucuronidase ; - IV2 = l'intron du gène de la patatine ; - nos term = le terminateur du gène de la nopaline synthase ; - 35S term = le terminateur de l'ARN 35S du CaMV ; - B = le site de restriction de l'endonucléase BamHI ; - E = le site de restriction de l'endonucléase EcoRI ; - H = le site de restriction de l'endonucléase HindIII ; - P = le site de restriction de l'endonucléase PstI ; - Sp = le site de restriction de l'endonucléase SphI ; - as-1 = la séquence activatrice 1 du promoteur CaMV 35S ; - as-2 = la séquence activatrice 2 du promoteur CaMV 35S ; - nos E = l'élément activateur du promoteur de la nopaline synthase ; - B = le site de restriction de l'endonucléase BamHI ; - D = le site de restriction de l'endonucléase DraIII : - H = le site de restriction de l'endonucléase HindIII ;
- P = le site de restriction de l'endonucléase PstI ; - S = le site de restriction de l'endonucléase SpeI ; - Sp = le site de restriction de l'endonucléase SphI ; - CAAT = la boîte "CAAT" ; - G = la boîte "G"; - TATA = la boîte "TATA" ; - +1 = le site d'initiation de la transcription ; - "like" signifie que la séquence n'est pas 100% identique à la séquence de référence.