INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
- Un site de clonage encadré par deux promoteurs identiques, comme celui de la T7 ARN polymérase, ou de tout autre promoteur fort d'ARN polymérase, tel que Qss, T3, SP6, etc..., et flanqués de part et d'autre du terminateur de la même ARN polymérase. Une telle construction permet de transcrire un fragment d'ADN inséré dans le site de clonage, quel que soit son sens d'insertion. La probabilité de trouver un bon clone est donc multipliée par deux. La taille moyenne d'un gène procaryote est d'environ 1000 pb. En utilisant des fragments de 5000 pb environ pour générer la banque, il est fort probable d'obtenir des clones portant des gènes complets, avec leur propre site de fixation du ribosome (ou RBS pour Ribosome Binding Site). Avec ce système de double promoteur, le gène est situé au pire à 2000 bases du début de l'ARNm, ce qui permet une expression efficace de la protéine correspondante par le procédé de l'invention (comme rapporté dans la partie expérimentale ci-après sur l'activité -lactamase).
- Eventuellement des séquences spécifiques de part et d'autre des terminateurs, servant de sites d'hybridation pour une amplification par PCR du fragment d'acide nucléique porté par le vecteur.
- Un gène de sélection constitué par un gène de tRNA (4) . Eventuellement, en parallèle, un gène de résistance à un antibiotique (ou un autre type de gène de sélection) est inséré dans le site de clonage. Cette sélection antibiotique n'est utilisée que pour l'amplification préparative du vecteur de clonage. En effet, lors de l'insertion de chacun desdits fragments de l'étape (b), un fragment d'ADN se substitue à ce gène de résistance. Ce système présente l'avantage de ne pas dépendre d'une sélection antibiotique, qui pose des problèmes de contamination et de dégradation de l'antibiotique, et permet d'obtenir un vecteur recombinant ne possédant pas d'autre ORF que celle éventuellement introduite par le fragment hétérologue.
D'autre part, il permet d'évaluer très rapidement le taux de clones négatifs, en pratiquant un étalement parallèle d'une fraction de la banque sur milieu minimum et sur milieu contenant l'antibiotique de sélection.
Le procédé de l'invention est remarquable en ce qu'il permet de rechercher des propriétés de nouveaux acides nucléiques et/ou des nouvelles activités protéiques dans des prélèvements bruts. En effet, il évite d'isoler chaque microorganisme présent dans ce prélèvement. L'isolement des microorganismes contenus dans un prélèvement est connu pour donner des résultats limités, car seulement quelques pour cent de la diversité des microorganismes présents sont récupérés.
En outre, le procédé de l'invention offre un gain de temps considérable. La méthode de l'invention permet de réaliser un meilleur résultat, puisque la biodiversité criblée est de l'ordre de 100%, dans un délai de 5 à 10
jours. Alors que les méthodes de l'art antérieur permettent d'isoler de l'ordre de 5% de la biodiversité présente dans un prélèvement en plusieurs semaines voir plusieurs mois, et autant de temps est nécessaire pour cribler ces souches en vue de détecter une activité protéique testée. Le procédé de l'invention est également avantageux pour rechercher de nouvelles activités protéiques dans un germe ou une cellule donnée. Selon le procédé de l'invention, une banque génomique ou d'ADNc peut être facilement préparée et criblée. Outre sa rapidité, le procédé de l'invention permet de s'affranchir de la physiologie cellulaire. Il est ainsi possible de détecter les activités protéiques sans avoir à résoudre des problèmes de culture et d'états physiologiques. Ce procédé trouvera toute son utilité dans l'identification d'activités protéiques à intérêt industriel à partir d'organismes extrêmophiles isolés, ou encore d'un prélèvement brut desdits organismes.
Enfin, le procédé de l'invention trouve un intérêt dans le domaine de la génomique. De par sa conception, il permet d'identifier de nouveaux gènes sans passer par le séquençage, car il permet de passer directement de l'ADN d'une cellule à la détection des propriétés des protéines qui peuvent être exprimées.
Appliqué à la totalité de l'ADN génomique d'un organisme, le procédé du CEPIV permet d'accéder à la caractérisation du phénotype total de cet organisme, ce qui introduit la notion de "phénomique".
D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront des exemples de réalisation de l'invention qui suivent et qui se réfèrent aux dessins en annexe dans lesquels :
Lesdits polyorganosiloxanes à fonction ester de formule (I) peuvent être combinés avec les composés gélifiants ou épaississants comme les cires ou les milieux cireux décrits précédemment.
Outre ces composés, les compositions de protections solaire peuvent comporter les émollients classiquement utilisés en cosmétique, des parfums, des colorants, des pigments ou des laques, des conservateurs, des composés actifs contre l'oxydation ou les radicaux libres, des agents hydratants de la peau et de l'eau.
Lesdits polyorganosiloxanes à fonction ester de formule (I) peuvent être également utilisés dans des compositions cosmétiques de maquillage pour leur conférer une propriété anti-transfert.
Les compositions de maquililage à effet anti-transfert peuvent également contenir des solvants volatils, de basse viscosité comme les isoparaffines contenant de 8 à 20 atomes de carbone, ou leurs mélanges, ainsi que des silicones non volatils comme les polydiméthylsiloxanes cycliques ou linéaires.
Ces compositions de maquillage peuvent également contenir des cires silicones, dont le point de fusion est au moins supérieur à 25"C. La fonction de ces cires consiste à gélifier la phase organique de la composition. A titre d'exemples de cires silicones appropriées, on peut citer le lauroyl triméthylolpropane siloxy silicate, l'isostéaryltriméthylolpropane siloxy silicate, les alkyl C6-C30 polydiméthylsiloxanes, les cires silicones à fonction ester comme la béhénic ester diméthicone commercialisée par la société Rhône-Poulenc.
Les compositions de maquillage peuvent aussi contenir d'autres cires dont le point de fusion est généralement de l'ordre de 35 à 120"C comme les cires synthétiques, la cérésine, les paraffines, l'okozérite, la cire de carnauba, la candelilla wax, le beurre de cacao, ou leur mélange. Les compositions de maquillage peuvent aussi contenir des poudres ou plus généralement des matières sèches dont la taille de particules se situe généralement entre 0,02 et 50 microns. Ces poudres peuvent être colorées ou non (poudre blanche). A titre d'exemple, on peut citer l'oxychlorure de bismuth, le mica et mica titane, la silice éventuellement fonctionnalisée, les polymères synthétiques comme le Téflon, les polyacrylates, les polyéthylènes ou le Nylon, le silicate d'alumine, les bentonites, la cellulose, les dérivés de magnésium comme l'aluminosilicate, l'oxyde, le carbonate, I'hydroxyde, les montmorillonites, le talc, le stéarate de zinc, I'oxyde de titane, l'oxyde de cérium, ou leurs mélanges. Ces différents produits peuvent avoir été modifiés en surface par des huiles minérales ou des huiles silicones afin d'améliorer leur compatibilité en milieu hydrophobe.
On peut également trouver des pigments organiques ou minéraux. Les pigments organiques sont généralement de nature aromatiques comme les azo, indigoid, triphénylméthane, anthraquinone, et xanthine et sont repris sous les dénominations D & C et FD & C. Les pigments inorganiques sont généralement des sels métalliques insolubles d'additifs colorants.
D'une manière générale, le rapport pondéral pigment / poudre est compris entre 1 / 20 et 20/ 1 selon le type de formulation de maquillage. Selon le type de formulation, la quantité de pigment variera de façon générale entre 5 et 50% du total de la composition cosmétique. De même, la quantité de poudre pourra varier d'environ 10 à 20% du poids de la composition.
La composition de maquillage peut également contenir des huiles, préférentiellement des mélanges d'huiles de viscosité différentes. On peut utiliser des huiles de viscosité comprise entre 5 et 100 mPa.s à 25"C. A titre d'exemple, on pourra utiliser des huiles comme l'isotridécyl isonononoate, le cétyl stéarate, I'isodécyl néopentanoate, le coco dicaprylatelcaprate, l'isododécanol, ou leurs mélanges. On pourra également utiliser des huiles de viscosité comprise entre 200 et 1000000 mPa.s à 25"C comme par exemple l'huile de ricin, les dérivés de lanoline, I'huile de coprah, des triglycérides, I'huile de colza, la trihydroxystéarine, l'huile de gremes de blé, le cholestérol, ou leurs mélanges.
Ces huiles pourront d'une manière générale constituer de 1-20% du total de la formulation de maquillage.
On pourra également employer d'autres ingrédients comme des conservateurs, des agents antioxydants, des actifs conventionnellement utilisés comme des vitamines ou leurs dérivés.
Exemple 1 Hydrosilylation Dans un réacteur de 5000 1 sous azote équipé d'un dispositif de refroidissement par double-enveloppe et d'un condenseur, on introduit à température ambiante (20-25"C) 1360 kg d'alcool allylique (soit environ 23448 moles) et 232 g de catalyseur de Karstedt, complexe de Pt"0" dans le divinyltétraméthylsiloxane à 10 9G de platine.
La masse réactionnelle est portée à reflux de l'alcool allylique (T éb = 97"C) et on introduit en 3 heures 2086 kg (soit 9676 moles de motifs SiH) d'une huile de formule suivante: Me3SiO (SiMe20) 9 (SiMeHO) 4 SiMe3 On laisse la réaction se poursuivre à 103"C pendant 4h30. La teneur en motifs SiH dosée par gazométrie est inférieure à 7.1 3 mole/Kg.
Les volatils sont éliminés à pression atmosphérique pendant 1 h à une température de 120"C puis pendant 3 heures à une température de 120"C sous 20 mbar. On procède ensuite à un entrainement des volatils résiduels par de l'azote (2 h, 1 200C, 40 mbars).
On recueille 3642 Kg d'une huile trouble.
III/ un pseudopeptide (peptide contenant une ou plusieurs liaisons pseudopeptidique) (surB 2/ -CONHRb 3/ -COOH 4/ -OH, ORb 5/-NHRb 6/-NH2 7/ -NH (CO)Rb 8/ -aryle, dont la structure cyclique contient de 5 à 20 atomes de carbone 9/ halogène 10/ carbonyle de 1 à 10 atomes de carbone, 11/ nitrile 12/ guanidine un groupement aryle, dont la structure cyclique contient de 5 à 20 atomes de carbone un halogène -COORb -C ONHRb -CONH2 -CH2COORb
-CH2CONHRb -CH2CONH2 Rb représentant un groupe alkyle de 1 à 20 atomes de carbone, ou un groupe aryle dont la structure du cycle contient de 5 à 20 atomes de carbone, - -#k[*]- sont indépendamment soit des liaisons peptidiques CO-NH soit des liaisons de nature chimique différentes choisies notamment dans la liste ci-dessous : -#k[*]- = -CH2CH2 ; -CH (Fk)=CH(Fk')- ; -CH2NH- ; -NHCO-; -NHCONH- ; - COCH2-; -CH(OH)CH2 - ; -CH(OH)CH2NH-; -CH2-; -CH(Fk )-; -CH20-; -CH2- NHCONH- ; CH(Fk)NHCONFk'- ; CH2-CONH-; CH(Fk)CONH-; CH(Fk)CH(F'k)CONH- Fk et F'k représentant, indépendamment l'un de l'autre, un hydrogène, un halogène, un groupe alkyle de 1 à 20 atomes de carbone, ou un groupe aryle dont la structure du cycle contient de 5 à 20 atomes de carbone, IV/ un résidu d'amino acide ou un enchaînement de résidus d'amino acides : (sur BE-)-C(Z' 1 )(Z", )-CO-N(ZZ)-...-CO-N(Zk)-C(Z'k)(Z"k)-CO-N(Zk+1 )-... CON(Zm)-C(Z' m)(Z" m)-CO-( sur NY') - m est un nombre entier supérieur ou égal à 1 de préférence de 1 à 50, de préférence de 1 à 10, - Zk, Z'k, et Z"k sont définis comme précédemment.
V/ un oligomère d'urée défini de la façon suivante :
- u est un nombre entier supérieur ou égal à 1, de préférence de 1 à 50, et de préférence de 1 à 10, - q est un nombre entier supérieur ou égal à 1, de préférence de 1 à 50, et de préférence de 1 à 10, - j est un paramètre entier supérieur compris de 2 à u+1, - r est un paramètre entier supérieur ou égal à 1 prenant toutes les valeurs comprises de 1 à q-1.
- arj et a'rj , représentés par un trait pointillé, sont des liaisons covalentes qui peuvent être simples (s), ou doubles (d), brj et brj-1 , représentés par un trait pointillé, sont des liaisons covalentes qui peuvent être simples (s), double (d) ou triples (t) sont réserve que : *bqet bqu+1 sont toujours des liaisons simples (s) *si b = d alors, ar et j+1 = S' a' j et a'rj+1= 0 ; b- et bri+1 = s *si bl = t alors, a et af'+l = 0; a' et a'rj+1= 0 ; brl-l et bt1 = s *si a/ = d alors, brjlet bri = s certaines de ces liaisons pouvant également faire partie de noyaux aromatiques, Zr, Zrj, Z'rj ont les significations indiquées à propos de R1, R', R" tels que définis ci-dessus.
Les composés de type (VIII) sont des composés cycliques obtenus à partir des composés de type (III) ou (IV) et par réaction intra moléculaire avec une amine libérée après élimination d'une protection temporaire.
Un groupe avantageux de composés de formule (VIII) est constitué par ceux dans lesquels 1 # n # 4, et notamment les composés suivants pour lesquels h, v, t, p, m, et q sont compris de 1 à 10 et de préférence de 1 à 5, et plus particulièrement les composés suivants :
dans lesquelles R' et R2ont les significations indiquées ci-dessus et dans lesquelles Z 11, Z] 2, Z2l, Z2', Z3' et Z32 ont les significations indiquées à propos de ZrJ Dans les composés de formule (III), (IV), (V), (Vbis), (VI) et (VII), le groupe aryle est avantageusement choisi parmi : 1/ phényle 2/ naphtyle 3/ indényle 4/ thiophényle 5/ benzothiophényle 6/ furanyle 7/ benzofuranyle 8/ pyridyl 9/ indolyle 10/ pyrollyle
ou le groupe aryle non-substituté ou substitué avec 1 à 6 substituants choisi notamment parmi : 1/ alkyle de 1 à 10 atomes de carbone 2/ halogène 3/alkoxy de 1 à 10 atomes de carbone 4/ hydroxyle 5/ amine de 1 à 10 atomes de carbone 6/ ester de 1 à 10 atomes de carbone 7/ nitrile 8/ aryle, dont la structure du cycle contient de 5 à 20 atomes de carbone 9/ nitro 10/ urée de 1 à 10 atomes de carbone 11/amide de 1 à 10 atomes de carbone 12/guanidine Les composés de formule (I) (II), (III), (IV), (V) ou (Vbis) peuvent être préparés selon le procédé suivant, à partir respectivement : - des composés de formule (IX) (pour les composés de formule (I) et (II)) - des composés de formule (X) (pour les composés de formule (III) et (IV)
- des composés de formule (XI) (pour les composés de formule (V) et (Vbis)) comprenant a) une étape de transformation de l'acide (IX) ou (X) ou XI en acyl azide correspondant (XII) ou (XIII) ou (XIV) respectivement, par exemple, par traitement de l'anhydride mixte (formé par réaction de l'acide IX, X ou XI avec du chloroformiate d'éthyle ou d'isobutyle en présence d'une amine tertiaire telle que la NMM (N-méthylmorpholine), la DIEA (di-isopropyléthylamine),
ou encore Et3N dans le THF (tétrahydrofurane) à -15 ) avec une solution d'azide de sodium, (b) une étape de transformation de l'acyle azide (XII) ou (XIII) ou (XIV) par réarrangement de Curtius en isocyanate correspondant (II) ou (IV) ou (Vbis) respectivement, par exemple en chauffant une solution de l'acyle azide dans un solvant approprié, notamment le toluène ou xylène (par exemple à 65 C), la formation de l'isocyanate pouvant être suivie par observation du dégagement gazeux dans le ballon, la fin du dégagement gazeux signifiant la complétion du réarrangement de Curtius, (c) une étape de traitement de l'isocyanate (II), (IV) ou (V bis), de préférence non isolé, celui-ci se retrouvant en solution, par exemple dans le toluène chaud (65 par exemple), avec l'un des dérivés de la liste suivante : - N-hydroxysuccinimide - phénol - pentafluorophénol - pentachlorophénol - p-nitrophénol - 2 ,4-dinitrophénol - 2,4,5-trichlorophénol - 2,4-dichloro-6-nitrophénol - hydroxy-l,2,3-benzotriazole - imidazole - tetrazole - l-oxo-2-hydroxydihydrobenzotriazine (HODhbt) - 7-aza-l-hydroxybenzotriazole (HOAt) - 4-aza-l-hydroxybenzotriazole (4-HOAt) (permettant d'obtenir un synthon pré-activé) et éventuellement une base telle que la pyridine, pour obtenir un carbamate de formule (I), III ou (V), lequel est ensuite avantageusement isolé, de préférence par cristallisation ou par purification, notamment
sur colonne de silice, ou par HPLC ou par lavage aqueux, acide ou basique après dissolution dans un solvant organique.
Les composés de formule VI, VII ou VIII peuvent être préparés selon le procédé comprenant la réaction de composés contenant des amines primaires ou secondaires avec l'un des produits de formule (I), (II), (III), (IV), (V) ou (Vbis) définis ci-dessus, par exemple dans un solvant tel que DMF, H2O /acétone, THF ou dichlorométhane avec ou sans l'adjonction d'une base telle que Et3N, DIEA, NMM, Na2CO3.
Figure 1 : La figure 1 correspond à la structure aux rayons X du carbamate I/g répondant à la formule suivante :
L'invention est illustrée ci-après par les exemples 1 et II, qui n'ont aucune valeur limitative.
Dans l'exemple 1, la réaction des dérivés O-succinimidyl-2-(tertButoxycarbonylamino)-ethylcarbamate avec des amines primaires aliphatiques ou aromatiques, des amines secondaires, ou bien des dérives d'acides a- ou (3-aminés, conduit rapidement aux dérivés d'urée ou aux oligomères d'urée attendus avec de bons rendements. Dans l'exemple 2, les dérivés O-succinimidyl-2-[(9H-fluoren-9ylmethoxy)carbonylamino]-ethylcarbamate utilisés de manière répétitive en phase solide permettent d'obtenir les pseudopeptides urée et les oligomères d'urée souhaités avec de bons rendements.
Un mode de réalisation de dispositif de codage de données 2 est représenté à la figure 3.
Le dispositif de codage 2 comporte un bus de données et d'adresses 20 auquel sont reliés: - une mémoire tampon d'entrée 21, également reliée à l'entrée 22 du dispositif, pour mémoriser de manière temporaire les données à coder, - une mémoire morte (ROM) 23 dans laquelle est mémorisé un algorithme de codage qui sera exposé dans la suite, - un contrôleur 24 pour mettre en oeuvre l'algorithme de codage, - une mémoire vive (RAM) 25 pour mémoriser dans des registres des paramètres modifiés au cours de l'exécution de l'algorithme de codage, et - une mémoire tampon de sortie 26, également reliée à la sortie 27 du dispositif.
L'algorithme de codage peut être mémorisé en totalité ou en partie dans tout moyen d'enregistrement capable de coopérer avec le contrôleur. Ce moyen d'enregistrement est intégré ou non au dispositif, et peut être amovible.
Par exemple, il peut comporter une bande magnétique, une disquette ou un CD-ROM (disque compact à mémoire figée).
Un mode de réalisation de dispositif de décodage de données 5 est représenté à la figure 4. le dispositif de décodage 5 comporte un bus de données et d'adresses 50 auquel sont reliés: - une mémoire tampon d'entrée 51, également reliée à l'entrée 52 du dispositif, pour mémoriser de manière temporaire les données à décoder, - une mémoire morte (ROM) 53 dans laquelle est mémorisé un algorithme de décodage qui sera exposé dans la suite, - un contrôleur 54 pour mettre en oeuvre l'algorithme de décodage, - une mémoire vive (RAM) 55 pour mémoriser dans des registres des paramètres modifiés au cours de l'exécution de l'algorithme de décodage, et - une mémoire tampon de sortie 56, également reliée à la sortie 57 du dispositif.
L'algorithme de décodage peut être mémorisé en totalité ou en partie dans tout moyen d'enregistrement capable de coopérer avec le contrôleur. Ce moyen d'enregistrement est intégré ou non au dispositif, et peut être amovible.
Le fonctionnement des dispositifs de codage 2 et de décodage 5 sera détaillé au cours de la description des différents modes de réalisation des algorithmes correspondants.
Selon le mode de réalisation choisi et représenté à la figure 5, I'invention s'applique au codage d'un ensemble de données représentatives de grandeurs physiques qui est une séquence d'images numériques f, à fN1 où N est un entier.
Une image quelconque fn dans la séquence, avec n compris entre 1 et N, est une image à niveau de gris, comportant à titre d'exemple 128x96 pixels à 256 niveaux.
L'algorithme représenté à la figure 5 comporte des étapes El à E6 qui réalisent le codage de la séquence d'images numériques. Le traitement est effectué image par image. Globalement, une image de la séquence est codée soit selon un premier mode de codage, en fonction d'une image de référence (codage inter-image), soit selon un second mode de codage, par rapport à ellemême (codage intra-image).
L'étape El est une initialisation à laquelle les images à coder sont chargées dans la mémoire du dispositif, et les paramètres de codage sont déterminés, tels que la taille des images, la taille des blocs à former, une fréquence de sélection, notamment. Le paramètre n est initialisé à 1, de manière à considérer tout d'abord la première image de la séquence.
L'étape suivante E2 est un test pour déterminer si l'image en cours de traitement doit être codée en mode inter-image ou en mode intra-image. Le test est réalisé sur la valeur de la fréquence de sélection et la valeur de l'indice n de l'image en cours de traitement. Par exemple, une image sur dix est à coder en mode intra-image, en commençant à la première image.
Si l'image doit être codée en mode inter-image, L'étape E2 est suivie de l'étape de codage E3, qui sera décrite dans la suite.
Si l'image doit être codée en mode intra-image, L'étape E2 est suivie de l'étape de codage E4, qui sera décrite dans la suite.
Les étapes E3 et E4 sont suivies de l'étape E5 qui est un test pour déterminer si l'image en cours de traitement est la dernière de la séquence.
En tenant compte de la carte de restriction montrée par Haydock et al. (1991), des sous-clones ont été dérivés du clone XSE5.5 par sous-clonage de fragments de restriction dans pUC19. Les plasmides pKB22, pBK44, pBIISB et pEco2 ont été ainsi générés selon la figure 5A de la façon suivante : A partir de l'ADN du clone XSE5.5 digéré par l'enzyme de restriction KpnI, les plasmides pK62 et pK66 ont été directement construits par sous-clonage du fragment KpnI de 5,8 kb dans pUC19, le plasmide pK66 correspondant au même fragment KpnI sous-cloné avec une orientation inversée de l'insert par rapport au vecteur. Le plasmide pKB22 contenant un insert de 2,9 kb a été ensuite dérivé du plasmide pK66 par excision du fragment BamHI-BglII (2,9 kb) couvrant l'ORF8 ainsi qu'une partie des ORFs 7 et 9 par digestion avec les enzymes de restriction BamHI et BglII. De la même façon, le plasmide pKB44 contenant un insert de 2,9 kb a été obtenu à partir du plasmide pK62 par excision du fragment BamHI-BglII (2,9 kb) couvrant le gène eryG correspondant aux ORFs 5 et 6 et le gène eryF correspondant à l'ORF4.
Le plasmide pBIISB a été dérivé du plasmide pBK44 par sous-clonage dans pUC19 du fragment SalI de 600 pb obtenu à partir du plasmide pBK44 digéré par l'enzyme de restriction SalI (figure 5A) .
Les sous-clones pKB22, pBK44, pBIISB et pEco2 ainsi obtenus ont été ensuite séquences. L'analyse a été faite sur des échantillons d'ADN plasmidique, préalablement purifié sur une colonne de Quiagen 100 (Quiagen), sur le séquenceur
automatique ABI prism 377. Les réactions de séquençage ont été réalisées par la méthode de Sanger (1977) en utilisant les amorces M13 conventionnelles ou des amorces synthétiques et des didésoxynucléosides triphosphate fluorescents et la polymérase Taq FS (Perkin Elmer) en présence de 5 % de diméthylsulfoxide, les amorces synthétiques utilisées ayant les séquences suivantes : C3R2 TCCTCGATGGAGACCTGCC (SEQ ID N 22) B2R1 GAGACCATGCCCAGGGAGT (SEQ ID N 23) C3S2 TCTGGGAGCCGCTCACCTT (SEQ ID N 24) C2R1 GACGAGGCCGAAGAGGTGG (SEQ ID N 25) C2S GCACACCGGAATGGATGCG (SEQ ID N 26) fullC3S CCGTCGAGCTCTGAGGTAA (SEQ ID N 27) fullC3R GCCCGAGCCGCACGTGCGT (SEQ ID N 28) et C4 TGCACGCGCTGCTGCCGACC (SEQ ID N 29).
L'assemblage des données de séquence a été réalisé avec le logiciel AutoassemblerTM pakage (Applied Biosystem). Les séquences ont été analysées en utilisant l'ensemble des logiciels GCG (Devereux 1984).