INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'invention concerne également des cellules hôtes comprenant au moins une séquence nucléique ou au moins un vecteur de l'invention. Plus particulièrement elle35 concerne des cellules procaryotes, des cellules de levure et des cellules animales, en particulier des cellules de mammifère, transformées par au moins un vecteur tel que décrit précédemment. Un autre objet de l'invention est une composition pharmaceutique ou médicament, comprenant à titre de principe actif au moins une séquence nucléique, un vecteur ou une cellule hôte de l'invention. Il s'agit notamment d'une composition vaccinale, utilisable dans le cadre d'une immunothérapie par transfert de gène. L'administration à un patient d'un tel médicament permet10 en particulier d'induire une réponse immunitaire reposant sur l'activation des lymphocytes cytotoxiques par les peptides codés par lesdites séquences nucléiques. Selon un cas avantageux, un tel médicament est notamment destiné au traitement des cancers gastriques et du colon.15 En vue de son administration à l'homme ou l'animal, une telle composition comprend un support acceptable du point de vue pharmaceutique. L'invention concerne donc aussi l'utilisation d'une séquence nucléique, d'un vecteur, ou d'une cellule hôte telle que définie précédemment pour la préparation d'un médicament destiné au traitement à but préventif, curatif ou vaccinal du corps humain ou animal, et plus particulièrement destiné à un traitement par thérapie génique, des cancers gastriques et du colon.25 Le médicament peut être administré sous forme injectable, notamment par voie intramusculaire,
intratrachéale, intratumorale, intragastrisque, intrapéritonéale, épidermique, intraveineuse, intraartérielle, par inhalation, par instillation, par30 aérosolisation, par voie topique ou par voie orale.
Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'un peptide de l'invention pour la
préparation d'une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique, notamment une composition vaccinale dont35 l'administration à un patient est capable d'induire une réponse immunitaire caractérisée par une réponse CTL.
31), peptide de contrôle positif et peptide de contrôle négatif.
[ peptide de contrôle positif * peptide de contrôle négatif + peptide de SEQ ID NO: 21 La figure 7 représente l'effet de la durée d'incubation du peptide de SEQ ID NO: 21, sur son association avec les molécules HLA-B27, la détection correspondant à une lecture à 340/460 nm à l'aide d'un5 cytofluorimètre et étant exprimée en unité de fluorescence U.F; la légende de la figure est la suivante: * peptide de contrôle positif * peptide de contrôle négatif * peptide de SEQ ID NO: 21 Exemple 1: Détection de l'association entre les peptides et les molécules d'histocompatibilité 1) Matériel - Sources de molécules d'histocompatibilité
Elles sont actuellement de deux types principaux: les cellules mutantes et les molécules d'histo-
La présente invention comprend des champignons qui contiennent -glucane utilisés pour le remède brut mentionné ci-dessus.
La présente invention est une méthode d'évaluation de l'efficacité du remède brut pour évaluer l'efficacité de l'effet anti-tumoral présenté par le remède brut contenant des polysaccharides ayant une activité anti-tumorale sans effectuer de test clinique, cette méthode consistant à ajouter le remède brut à un système qui forme un peroxyde de lipide par exposition aux rayons ultraviolets d'un acide gras insaturé, tel que l'acide docosahexaénoïque, et à évaluer et espérer que l'effet du traitement de renforcement de l'activité anti-tumorale par administration interne du remède brut mentionné ci-dessus soit important, lorsque l'augmentation de la quantité du peroxyde de lipide mentionné ci-dessus ainsi formé, basée sur une importante augmentation de la concentration du remède brut mentionné ci-dessus, est importante.
La présente invention comprend l'une ou l'autre
des méthodes de renforcement de l'activité anti-tumorale mentionnée ci-dessus appliquée au remède brut mentionné ci-dessus.
Le présent inventeur a conduit diverses études sur une substance inhibitrice anti-oxygène actif dans les remèdes chinois et, à travers ces études, il a confirmé que l'oxygène actif ou les peroxydes de lipides procurent des effets remarquables sur un corps humain et que ces substances participent à la rupture de tissus dans le corps humain, d'où il résulte qu'elles deviennent la cause de l'apparition de diverses maladies infectieuses.
Dans les tissus du corps humain, une enzyme appelée SOD (superoxyde dismutase) existe pour protéger les tissus du corps humain d'un tel oxygène actif et pour éliminer l'oxygène actif. La quantité de la SOD diminue avec l'âge et l'oxygène actif ne peut plus être enlevé du corps. Sa diminution est particulièrement remarquable à partir de l'âge de 40 ans, l'oxygène actif prélevé dans le corps ne peut plus être suffisamment éliminé et on a démontré ces dernières années qu'il devient la cause de divers types de maladies chez les adultes.
Par ailleurs, lorsqu'une quantité excessive d'oxygène actif est formée dans le corps par une stimulation chronique ou aiguë ou par une substance chimique, etc., l'oxygène actif ne peut pas être suffisamment éliminé par la quantité de SOD existant dans le corps depuis le commencement, de telle sorte que la personne souffre de diverses maladies.
Ainsi, en ce qui concerne les diverses maladies causées par un enlèvement insuffisant de l'oxygène actif dû à un manque de SOD, on a considéré que l'on pouvait résoudre ce manque de SOD par un traitement d'administration de SOD. Toutefois, dans un tel traite-
ment, on peut constater les effets dans le cas d'une médecine d'injection, mais on ne peut constater aucun effet remarquable dans le cas d'une médecine interne de telle sorte que les effets d'un tel traitement n'ont pas encore été prouvés.
En ce qui concerne le fait que les effets d'une médecine interne ne sont pas manifestés, le présent inventeur a constaté que la SOD était instable dans le suc gastrique et que le poids moléculaire de SOD est égal ou supérieur à 30 000 ; la raison en est qu'elle n'est pas absorbée telle quelle par les organes de la digestion. Par ailleurs, il a constaté qu'il existait une limite en ce que la SOD agit seulement sur les peroxydes (02-) parmi les quatre types d'oxygène actif existants.
Le présent inventeur a recherché une substance pouvant enlever un excès d'oxygène actif dans le corps humain et qui soit capable d'être administré par voie interne ; comme résultat, il a trouvé une composition qui contient une huile végétale obtenue à partir de plantes grillées, laquelle huile est ajoutée à une substance obtenue en grillant des graines de plantes ou leurs germes dans des conditions appropriées, laquelle composition est ensuite soumise à fermentation en ajoutant des micro-organismes, cette composition pouvant être ensuite utilisée comme agent d'enlèvement de l'oxygène actif efficace en usage interne (voir brevet japonais n 2 125 887).
Dans les graines de plantes et leurs germes mentionnés ci-dessus, il existe intrinsèquement des substances anti-oxygène actif de faible poids moléculaire, telles que flavonoïdes, polyphénols, tannin, tocophérol, vitamine B2, etc. Le présent inventeur a trouvé que de telles substances anti-oxygène actif de faible poids moléculaire se lient chimiquement mutuel-
lement ou avec un autre composant, génèrent un composé moléculaire ou forment un complexe compliqué ou un composé macromoléculaire par adsorption ou inclusion ; lorsqu'elles sont ingérées dans un tel état, on ne peut pas obtenir l'action de suppression anti-oxygène actif attendue d'une substance anti-oxygène actif en l'état d'un faible poids moléculaire.
Même lorsqu'il y a ingestion dans un tel état, beaucoup de personnes ne peuvent actuellement pas digérer une substance anti-oxygène actif de faible poids moléculaire par le suc gastrique, de telle sorte qu'on ne peut pas obtenir l'action de suppression anti-oxygène actif. Le présent inventeur a développé ce point dans "Food Industry", volume 35, n 14, "Development and Improvement of DDS, SOD-like Function Foods from Natural Plants and Seeds and Their Pharmacological and Biochemical Consideration".
Le présent inventeur a étudié l'utilisation effective de la substance anti-oxygène actif mentionnée ci-dessus contenue dans les graines de plantes ou leurs germes pour traiter ou prévenir des maladies et la manière d'activer les substances anti-oxygène actif dans l'état ci-dessus.
Il a ainsi trouvé que, en chauffant et en grillant des graines ou germes de plantes dans des conditions moyennes, la substance anti-oxygène actif contenue dans les graines de plantes ou leurs germes est partiellement libérée du complexe mentionné cidessus pour former une substance originale de faible poids moléculaire ou est partiellement activée en générant un groupe fonctionnel actif dû à un changement chimique. En effectuant ces traitements, l'action antioxygène actif est renforcée de façon significative par rapport à cette action avant grillage.
Bien entendu l'homme du métier veillera à choisir ce ou ces éventuels adjuvants complémentaires, et/ou leur quantité, de manière telle que les propriétés avantageuses de la composition selon l'invention ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées par l'adjonction envisagée.
Les compositions selon l'invention sont par exemple des lotions, des laits ou des crèmes pour le soin de la peau ou des cheveux; des crèmes, des lotions ou des laits démaquillants; des bases de fond de teint; des lotions, des laits ou des crèmes antisolaires ou après-soleil; des lotions, des laits ou des crèmes de bronzage artificiel; des crèmes ou des mousses de rasage; des lotions après rasage; des compositions d'hygiène corporelle telles que des sticks ou des crèmes déodorants; des shampooings; des produits capillaires pour le maintien de la coiffure ou la mise en forme des cheveux tels que des gels de coiffage; des produits de coloration des cheveux; des rouges à lèvres; des mascaras ou eye-liners éventuellement traitants; des Vernis à ongles ou des soins des ongles.
Les exemples 1 à 8 décrivent la préparation des composés de départ de formule (II).
Les exemples 9 à 16 décrivent la préparation des gels selon l'invention.
Les gels obtenus ont été caractérisés par observation macroscopique et microscopique en lumière polarisée, et par diffraction des rayons X.
Les résultats de ces analyses étaient respectivement . comportement isotrope et absence de cristaux.
Exemple 1 : Polymère branché polyéthylèneimine de poids moléculaire moyen PM=2000 possédant 4 fonctions SH en moyenne par motif A 50 grammes de solution aqueuse à 50% de polyéthylèneimine de poids moléculaire moyen PM=2000 commercialisée par la société BASF sous la dénomination LUPASOL G35, on ajoute à température ambiante 4,33 ml de ythiobutyrolactone (soit 50 mmoles, 4 équivalents molaires calculés par rapport au monomère) sous atmosphère inerte à température ambiante. Le milieu, initialement hétérogène, devient rapidement homogène (environ 30 minutes).
Après 4 heures sous agitation, on ne détecte plus de y-thiobutyrolactone dans le milieu. La phase aqueuse donne une réaction positive après révélation par le nitroprussiate de sodium. On constate ainsi que certaines des fonctions amines primaires initiales sont sous forme de -NH-CO-(CH2)3-SH.
On dilue cette phase aqueuse par de l'eau qsp 100 ml.
La teneur en matière active de cette phase aqueuse est de 30, 1 1 g/100 ml, soit 0,5 mol. en thiol et 0, 125 M en polymère thiolé. Le pH est de 10,3.
Masse molaire du produit synthétisé: 2408,64 g.mol1 Exemple 2: Polymère branché polyéthylèneimine de poids moléculaire moyen PM=2000 possédant 10 fonctions SH en moyenne par motif A 30 grammes de solution aqueuse à 50% de polyéthylèneimine de poids moléculaire moyen PM=2000 commercialisée par la société BASF sous la dénomination LUPASOL G35, on ajoute à température ambiante 6,5 ml de ythiobutyrolactone (soit 10 équivalents molaires calculés par rapport au monomère) sous atmosphère inerte à température ambiante. Le milieu, initialement hétérogène, devient rapidement homogène (environ 30 minutes). Après 24 heures sous agitation, on ne détecte plus de y-thiQbutyrolactone dans le milieu.
La phase aqueuse donne une réaction positive après révélation par le nitroprussiate de sodium.
La teneur en matière active de cette phase aqueuse est de 22,66 g/100 ml, soit 0,75 mol. en thiol et 0,075 M en polymère thiolé. Le pH est de 9,6.
Masse molaire du produit synthétisé: 3021,6 g.moll Exemple 3: Polymère branché polyéthylèneimine de poids moléculaire moyen PM=1 0000 possédant 50 fonctions SH en moyenne par motif On dilue 11,30 grammes de polyéthylèneimine 99% de poids moléculaire moyen PM=10000 commercialisée par la société POLYSCIENCES par 11,30 ml d'eau, puis on ajoute à température ambiante 4,9 ml de y-thiobutyrolactone (soit 50 équivalents molaires calculés par rapport au monomère) sous atmosphère inerte à température ambiante. Le milieu, initialement hétérogène, devient rapidement homogène (environ 30 minutes). Après 20 heures sous agitation, on ne détecte plus de y-thiobutyrolactone dans le milieu. La phase aqueuse donne une réaction positive après révélation par le nitroprussiate de sodium. La masse molaire du produit synthétisé est de 15108 g.mol' On dilue cette phase aqueuse par de l'eau qsp 100 ml et on ajuste le pH à 6,7 par ajout d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique.
Les cellules CHO, déficientes en dihydrofolate réductase, sont transfectées avec un plasmide contenant la région codant pour le récepteur AT2 humain (Bedecs et al., Biochem. J. 1997, 325, 449-454).
Le clone sélectionné, CHO-hAT2, exprimant 100 fmol de récepteur AT2/mg de protéine, est cultivé sur milieu HAMF12 complémenté avec du sérum de veau f#tal à 10 % et utilisé entre les passages 10 et 30.
Ce clone a lui même été transfecté avec les plasmides pCDNA3-MYC-ATIPsouris-court ou pCDNA3-ATIPsouris-long décrits à l'exemple 3. La sélection des clones exprimant, de manière stable, la protéine ATIP (forme courte ou forme longue) s'est faite en milieu sélectif contenant 800 g/ml de G418. Les lysats cellulaires, correspondant aux différents clones sélectionnés, ont été soumis à un SDS-PAGE suivi d'une immuno-empreinte et
celui-ci a été incubé avec l'anticorps polyclonal anti-ATIP. Les résultats obtenus indiquent que différents clones exprimant des taux différents d'ATIP souris court, ont pu être obtenus.
EXEMPLE 5 : Production d'anticorps polyclonaux dirigés contre la séquence SEQ ID NO:6.
Afin de progresser dans la caractérisation de ce clone, la production d'anticorps polyclonaux dirigés contre le domaine ATIP a été entreprise.
Pour cela, un vecteur codant pour une protéine correspondant à ce domaine fusionné à six résidus histidine a été construit.
La séquence suivante : GGA TCC-SEQ NO:5-TAG-TGA-ATT est insérée dans le plasmide pRSETA, tel que défini ci-dessus.
Dans cet insert, la SEQ ID NO:5 ne comprend pas le premier CAT.
Le plasmide obtenu est exprimé dans la souche d'E. coli BL 21 (DE3) (F- ompT- rB- ms-) contenant le bactériophage DE3 qui porte un fragment d'ADN contenant le gène lacI, le promoteur lacUV5, le début du gène lacZ et le gène codant pour la T7 ARN polymérase. Ce fragment est introduit dans le gène int.
En présence de DE3, seul le promoteur lacUV5, inductible par IPTG dirige la transcription de la T7 ARN polymérase.
L'addition de 0,4 mM d'IPTG à une culture de cellules BL21 (DE3) induit la production de T7 ARN polymérase qui, à son tour, entraîne la transcription de l'ADN cible du plasmide pRSETA (permettant la traduction de la protéine se liant au récepteur AT2).
La protéine obtenue (17 kDa) est purifiée sur colonne de Nickel (Ni-NTA, QuiAexpressionist 07/97, Quiagen), grâce à l'affinité de ses six résidus histidine pour le nickel. La protéine obtenue est ensuite injectée à des lapins pour obtenir des anticorps polyclonaux dirigés contre la protéine
ATIP. Les saignées obtenues présentent un très bon titre.
Ces anticorps purifiés sur colonne de GST-ATIP, après passage sur colonne de GST seul (afin d'éliminer les éventuels anticorps spécifiques de GST et de ne retenir sur la colonne de GST-ATIP que les anticorps spécifiques de ATIPsouris-court) peuvent être utilisés avec succès pour immuno-précipiter et révéler en immuno-empreinte MYC-ATIPsouris-court à partir de cellules COS transfectées de façon transitoire. De plus cet anticorps purifié révèle également en immuno-empreinte la protéine ATIPsouris-long contenue dans des lysats de cellules COS transitoirement transfectées avec le plasmide pCDNA3-ATIPsouris-long.
La protéine ATIPsouris-long transfectée est visualisée après SDS-PAGE et immuno-empreinte avec un anticorps anti-ATIP, sous la forme de deux polypeptides de poids moléculaires apparents de 50 et 45 kDa.
La direction d'analyse d'une onde peut donc être modifiée simplement en modifiant la direction de polarisation de l'onde de référence ou de manière symétrique en modifiant la direction de polarisation de l'onde issue de l'objet.
Selon une version de l'invention, la direction d'analyse est modifiée par variation de la direction de polarisation de l'onde de référence ou de l'onde issue de l'objet.
Selon une version de l'invention, la polarisation de l'onde de référence ou de l'onde issue de l'objet est modifiée par un dispositif comportant: - un séparateur de faisceau séparant le faisceau en deux faisceaux A et B - une lame d'onde LA disposée sur le trajet du faisceau et une lame d'onde LB disposée sur le trajet du faisceau B, l'angle entre les axes neutres de ces deux lames d'onde étant de 45 degrés.
La direction de polarisation du faisceau ayant traversé de la lame d'onde LA se déduit alors de la direction de polarisation du faisceau ayant traversé la lame d'onde LB par une rotation dont l'angle est l'angle entre les axes neutres des lames d'onde LA et LB. Si cet angle est de 45 degrés, les faisceaux issus des lames LA et LB auront toujours des polarisations orthogonales, quelque soit la direction de polarisation du faisceau incident.
Les deux faisceaux A et B peuvent ensuite être réunis par un dispositifde superposition après avoir traversé des obturateurs, comme dans le cas du dispositifdécrit en 3.11.4. Ceci présente le désavantage de nécessiter l'utilisation d'obturateurs en un point de la trajectoire du faisceau ou la direction du faisceau est variable et ou le faisceau ne peut donc pas être focalisé sur un point fixe.
Selon une version de l'invention, les deux faisceaux A et B sont séparément superposés au faisceau issu de l'objet (s'ils constituent l'onde de référence) ou à l'onde de référence (s'ils sont issus de l'objet). Les figures d'interférence correspondant à chaque direction de polarisation sont alors formées sur deux surfaces de réception distinctes.
Que les images planes en fréquences correspondant à chaque polarisation soient obtenues sur des surfaces de réception distinctes ou sur la même surface de réception, il se crée alors un déphasage entre ces images qui doit être compensé. Selon une version de l'invention, les lames d'onde sont positionnées de manière à ce que les faisceaux de référence et d'éclairage parvenant à une surface de réception aient des directions de polarisation différentes, de préférence à 45 degrés l'une de l'autre. Dans ces conditions, la partie de l'onde issue de l'objet qui comprend des fréquences voisines de l'onde d'éclairage est détectée sur les deux surfaces de réception et peut être utilisée pour calculer ladite différence de phase.
3. 12. Système de suppression de l'éclairage direct L'onde d'éclairage est généralement beaucoup plus intense que l'onde diffractée. Elle peut saturer les capteurs ou réduire considérablement le rapport signal sur bruit du système en rendant nécessaire une acquisition à un niveau élevé. La suppression de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage pendant la phase d'acquisition ou pendant une partie de la phase d'acquisition améliore nettement les performances du système. Dans un plan de fréquence, la partie non diffractée de l'onde d'éclairage a une image ponctuelle et peut être supprimée en plaçant sur ce point un élément absorbant. Selon une version de l'invention, le système comprend donc un dispositifde suppression dela partie non diffractée de l'onde d'éclairage, placé dans un plan de fréquence, et absorbant le faisceau sur une zone réduite autour du point correspondant à cette onde d'éclairage.
Selon une version de l'invention, ce dispositif est constitué par un modulateur spatial d'intensité commandé pour être passant en tout point sauf sur une zone limitée autour du point d'impact de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage. Cette version est mise en oeuvre dans le mode de réalisation 4.
Selon une autre version de l'invention, ce dispositif est constitué d'une vitre mobile en translation dans un plan de fréquence, un point noir absorbant placé sur la vitre ayant pour rôle d'arrêter le faisceau direct, la position de la vitre étant commandée pour faire coïncider ce point noir avec le point d'impact de la partie non diffractée de l'onde d'éclairage. Cette version est mise en oeuvre dans le mode de réalisation 5.
3. 13. Dispositif d'utilisation des modulateurs spatiaux.
Les modulateurs spatiaux utilisés en 3.10.2. ou en 3. 12. peuvent être en particulier des modulateurs binaires rapides fonctionnant par réflexion. Ils sont en général utilisés à l'aide d'un miroir semi-transparent polarisant, qui est un dispositif de forme cubique renvoyant les faisceaux incidents dans deux directions différentes en fonction de leur polarisation. Ce dispositif, de part son épaisseur, engendre une légère aberration qui élargit le point correspondant à une fréquence donnée, ce qui est préjudiciable à la qualité des images obtenues.
* Pour éviter l'utilisation de ce dispositif, on peut utiliser des faisceaux parvenant au modulateur sous un angle oblique. Les faisceaux incident et réfléchi sont alors séparés. Cependant, cette méthode déforme la répartition des fréquences générées. Pour éviter cette déformation, ledit angle oblique doit être faible.
Selon une version de l'invention, ce problème est résolu en utilisant un dispositif constitué d'un miroir à deux faces réfléchissantes orthogonales et d'une lentille traversée dans un sens par le faisceau dirigé vers le modulateur et dans l'autre sens par le faisceau réfléchi par le modulateur. Le faisceau incident est réfléchi par une face du miroir, traverse la lentille, est réfléchi par le modulateur, retraverse la lentille en sens inverse et est réfléchi par la seconde face du miroir, reprenant sa direction initiale. Les faisceaux incident et réfléchi peuvent se superposer partiellement sur la lentille mais sont séparés sur le miroir à deux faces. Afin d'obtenir cette séparation sur le miroir, tout en ayant un angle oblique aussi faible que possible, le miroir à deux faces doit être à peu près positionné dans un plan focal de la lentille et le modulateur doit être positionné dans l'autre plan focal de la lentille.
3. 14. Utilisation de plusieurs objectifs Les éventuelles limitations portant sur la direction de l'onde d'éclairage, caractérisée par son vecteur fréquence, influent sur les performances du système en raison du . Le maximum de précision est obtenu lorsque toutes les directions possibles sont utilisées. De même, il est souhaitable d'enregistrer l'onde diffractée par l'objet dans toutes les directions. Lorsqu'un seul objectif de microscope est utilisé, son ouverture limite les directions dans lesquelles on peut enregistrer l'onde diffractée par l'objet.
De même, si on n'éclaire l'objet que par un coté opposé à l'objectif, on limite les directions possibles des ondes d'éclairage. Selon une version avantageuse de l'invention on utilise plusieurs objectifs focalisés sur l'échantillon, qui permettent d'enregistrer l'onde issue de l'échantillon suivant d'avantage de directions.
Etape 31-Réglage en translation du doublet (5192)(5193)
FEGI est utilisé. Le fréquencemètre est positionné derrière (5193). La position conjointe de (5192) (5193) est réglée pour que FEGI ait une image ponctuelle sur le CCD du fréquencemètre.
Etape 32-Réglage en translation 3 axes des capteurs (5198) et (5201).