INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le Cassissier (Ribes nigrum), appartenant à la famille des Saxifragacées, est un arbrisseau indigène dont les feuilles et les bourgeons sont employés en médecine populaire. Spontané dans l'est de la France, il est souvent cultivé dans les autres
ADS Ans E a ADS ADS E a ADS ADS E a ADS Ads2 E a
2 Ester mixte de cellulose : 57,8 55,3 2,6 1,1 17 17 0,5 1 18 18 0,6 1 43 43 0 1 Kétoprofen + a-phényl propionique DS=1+0,55 exemple 26 Naproxénate (S(+)) de cellulose 88,5 88,7 0,4 1 9,8 10,1 0,5 1,04 2 1,4 0,2 1,47 1,3 1,1 0,2 1,3
DS=2,8 (pyridine/NEts/DMAP)
Exemple le 27 Naproxénate (RS) de cellulose 86,7 85 4,4 1,14 62,9 63,7 1,5 1,04 5 5 0,3 1 62 62 1,8 1
DS=2,6 (pyridine/NEt3/DMAP)
Exemple le 28 Naproxénate (S(+)) d' amylose 62 61 1,2 1,04 33 33 0,5 1 29 29 0,3 1 78 78 0,7 1 DS=2,3 (pyridine/NEt3/DMAP) Exemple 33 111111 III
ESTER TESTE BENZOINE BASE DE TRÔGER Trans STILBENE OXYDE ALCOOL DE PIRKLE l' FLUE 2!ELUE a 1"elle 2' ELUE a 1 ELUE 2!ELUE CL lm ELUE 2!ELUE a
CHIRALCEL OD S (+) R (-) 1,58 (+) (-) 1,32 SS (-) 1,68 (-) (+) 2,59 Hexane/2-propanol 90/10 CHIRALCEL OJ R(-) S (+) 1,23 (+) (-) 3,8 RR (+) 1,17 (-) (+) 1,14
Hexane/2-propanoi 90/10
CHIRALPAKAS S (+) R (-) 1,9 (+) (-) 2,38 RR (+) SS(-)1,28 (-) (+) 1,88
Hexane/2- o 0190/10
COUCHE MONOATOMIQUE ET MONOCRISTALLINE DE GRANDE TAILLE, EN CARBONE DE TYPE DIAMANT, ET PROCÉDÉ DE FABRICATION DE CETTE COUCHE DESCRIPTION DOMAINE TECHNIQUE La présente invention concerne une couche monoatomique et monocristalline en carbone de type diamant, ainsi qu'un procédé de fabrication de cette couche.
ÉTAT DE LA TECHNIQUE ANTÉRIEURE Le diamant existe à l'état naturel mais est très rare et coûteux. De plus, les diamants naturels disponibles ont des dimensions relativement faibles, ce qui limite leur emploi dans l'industrie, leur principal débouché restant la joaillerie.
Ceci a conduit à rechercher des procédés de fabrication artificielle du diamant.
En effet, le diamant est, de très loin, le meilleur semiconducteur possible pour l'industrie électronique. Il surclasse le silicium et les composés semiconducteurs III-V d'au moins quatre ordres de grandeur en termes de facteur de qualité (en particulier en ce qui concerne l'électronique rapide, les grandes puissances et les hautes températures).
Si on désigne par : une alcoxyamine, Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, y6, Z étant définis plus loin, le radical carboné Z# peut être généré par différentes méthodes décrites dans la littérature : décomposition d'un composé azoïque, abstraction d'un atome d'hydrogène sur un substrat approprié, addition d'un radical sur une oléfine. Le radical Z* peut également être généré à partir d'un composé organométallique comme un organomagnésien Z-MgX tel que décrit par Hawker C. J. et coll. dans Macromolécules 1996,29, 5245- 5254 ou à partir d'un dérivé halogéné Z-X en présence d'un système organométallique comme CuX/bipyridine (X = Cl ou Br) selon une réaction
de type ATRA (Atom Transfer Radical Addition) tel que décrit par Dorota Greszta et coll. dans Macromolécules 1996,29, 7661-7670.
Une des méthodes les plus utilisées pour la préparation des alcoxyamines (I) est la méthode mettant en jeu la réaction ATRA.
Cette méthode consiste à transférer un atome ou un groupe d'atomes sur une autre molécule en présence d'un système organométallique CuX/bipyridine, en milieu solvant selon le schéma :
De préférence, X dans le système organométallique représente un atome de brome.
Le mode opératoire généralement utilisé consiste à mettre en solution le système organométallique tel que CuBr/bipyridine dans un solvant organique de préférence aromatique tel que le benzène ou le toluène, puis à introduire dans la solution le composé ZX et le nitroxyde (II).
Cette façon d'opérer présente l'inconvénient majeur de nécessiter des durées de réactions longues, rédhibitoires pour une préparation industrielle d'alcoxyamines ou d'utiliser un large excès d'un des réactifs.
De plus, le système organométallique utilisé met en jeu des ligands coûteux (bipyridine ou dérivés).
En outre, l'élimination du métal résiduel des produits obtenus est difficile, nécessitant des opérations coûteuses de purification telles que le passage des produits sur colonne de silice.
Ainsi, par exemple Matyjaszewski K. et coll. dans la demande de brevet internationale WO 98/40415 obtiennent le 1-(2,2,6,6-
tétraméthylpipéridinyloxy)-1-phényléthane avec un rendement de 69 % après purification par chromatographie sur colonne en faisant réagir pendant 2 heures à 90 C le TEMPO et le (1-bromoéthyl)benzène selon un rapport molaire TEMPO/(1-bromoéthyl)benzène égal à 2 (soit un excès molaire de TEMPO égal à 100 %), en présence d'un système organométallique [4,4'-di(5-nonyl)2,2'-bipyridine/ Cu (OTf)2/Cu ].
On a maintenant trouvé un procédé de préparation d'alcoxyamines de formule : à partir de nitroxydes : ledit procédé consistant à faire réagir ledit nitroxyde (Il) avec un composé halogénocarboné ZX dans lequel X représente un atome de chlore, de brome ou d'iode, en milieu solvant organique non miscible à l'eau, en présence d'un système organométallique MA (L)n (III) dans lequel : M représente un métal tel que Cu, Ag, Au, A représente un atome d'halogène, un groupement carboxylate ou un groupement triflate, L représente un ligand du métal M, n vaut 1, 2 ou 3, selon le schéma :
ledit procédé étant caractérisé en ce qu'il consiste à effectuer les étapes suivantes : a) on mélange sous agitation dans un solvant organique, un sel métallique MA, le ligand L, le composé halogéno-carboné ZX et le nitroxyde (II) selon un rapport molaire ZX/ nitroxyde (II) allant de 1 à 1,4, b) on maintient le milieu réactionnel sous agitation à une température comprise entre 20 C et 90 C jusqu'à disparition complète du nitroxyde (II), c) on récupère la phase organique qui est lavée avec de l'eau, puis d) on isole l'alcoxyamine (1) par évaporation du solvant organique sous pression réduite.
De préférence, M représente Cu ; représente un halogène tel que CI ou Br, un groupement carboxylate tel qu'acétate ou un groupement triflate et X représente un atome de chlore ou un atome de brome.
Selon la présente invention, le ligand L du métal M du système organométallique (III) est choisi parmi les composés représentés par la formule générale (IV) : dans laquelle R1, R2, R3 et R4, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, linéaire ou ramifié ayant un nombre d'atomes de carbone allant de 1 à 10 et, de préférence allant de 1 à 4, R5 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, ayant un nombre d'atome de carbone allant de 1 à 10 et, de préférence, allant de 1 à 4, un reste dans lequel R6 et R7 ont les mêmes significations que R5, ou bien encore au moins deux des radicaux R1, R2, R3, R4 et R5 peuvent être liés entre eux pour former un cycle ; m, p et q, identiques ou différents,
représentent des nombres entiers allant de 1 à 4 et, de préférence, égaux à 2, x allant de 0 à 4.
Selon un mode de réalisation préférentiel de l'invention, cette composition cosmétique ou dermopharmaceutique comportera à titre d'agent actif présentant une activité activatrice de la lipolyse, des effets tenseurs, des propriétés d'amélioration de l'éclat du teint et/ou des propriétés adoucissantes, au moins un extrait d'une plante du genre Cecropia, préférentiellement Cecropia obtusa et/ou Cecropia peltata.
La présente invention concerne par ailleurs une composition cosmétique ou dermopharmaceutique à usage topique pour les muqueuses et/ou
les phanères, caractérisée en ce qu'elle comporte, à titre d'agent tenseur, d'agent actif entraînant une amélioration de l'éclat du teint et/ou d'agent actif adoucissant, seul ou associé à au moins un autre agent actif, au moins un extrait d'une plante du genre Cecropia.
Conformément à une caractéristique de l'invention, les différentes compositions cosmétiques précitées contiennent avantageusement en tant qu'agent actif unique ou associé à d'autres agents actifs, entre 0,001 % et 20 % en poids, préférentiellement entre 0,1 % et 3 % en poids, d'un extrait ou d'un mélange d'extraits de plantes du genre Cecropia, en particulier Cecropia obtusa et/ou Cecropia peltata.
L'extrait formant agent actif peut être employé sous toute forme galénique utilisable en cosmétique telles que les émulsions (H/E et E/H), lotions, laits, gels, hydrogels, crèmes, pommades, savons, bâtonnets, produits à pulvériser, lotions capillaires et shampooings.
En outre, l'extrait formant agent actif peut être incorporé dans un ou plusieurs vecteurs cosmétiques notamment un ou plusieurs vecteurs choisis dans le groupe formé par les liposomes, les macro-micro- ou nanocapsules, les macromicro ou nano-particules et les autres formes analogues connues.
Afin d'illustrer de manière non limitative des modes de réalisation possibles de produits ou de compositions cosmétiques conformes à l'invention, on indiquera ci-après différentes formulations de compositions cosmétiques contenant un ou plusieurs extraits de plantes du genre Cecropia.
Exemple 1 Un produit cosmétique sous forme de crème amincissante pour le corps conforme à l'invention pourra, par exemple, présenter une composition pondérale constituée à partir des fractions A, B et C suivantes : Fraction A - Stéarate de glycérol et cétéareth 20 et Cétéareth 10 et palmitate cétylique 5,0 % - Alcool cétostéarylique 2,0 % - Oléate de décyle 3,0 % - Huile de paraffine 3,0 % - Beurre de karité 3,0 % Fraction B - Glycérine 3,0 % - Protéines de froment hydrolysées 0,5 %
- Extrait éthanolique de Cecropia selon l'exemple 5 de procédé 2,0% - Eau 78,3 % Fraction C - Parfum 0,2 % Le procédé de fabrication consistera à préparer séparément les fractions A et B sous agitation à 80 C, à ajouter la fraction A dans la fraction B sous agitation turbine, puis à laisser refroidir le mélange à température ambiante et enfin à ajouter la fraction C.
Exemple 2 Un produit cosmétique sous forme de gel amincissant pour le corps conforme à l'invention pourra, par exemple, présenter une composition pondérale constituée à partir des fractions A, B, C, D, E et F suivantes : Fraction A - Eau distillée 49,95 % - Elastab 50J (Laboratoires Sérobiologiques) 0,5 % - Carrageenan 0,1% Fraction B - Carbomer 0,35 % - Eau distillée 31,95 % Fraction C - Propylène glycol 2,00 % - Diméthicone copolyol 3,00 % Fraction D - Triéthanolamine 20 % en solution aqueuse 2,1% Fraction E - Kathon CG (de la société Rohm et Haas) 0,05 % Fraction F - Extrait éthanol 50 % de Cecropia selon l'exemple 3 de procédé 1,00 % - Eau distillée 9,00 % Le procédé de fabrication du gel précité consiste essentiellement à préparer séparément les fractions A et B à 75 C sous agitation turbine, puis à les refroidir à température ambiante, à préparer ensuite la fraction F par dispersion de l'extrait dans 10 fois son poids d'eau et à ajouter la fraction à successivement les fractions B, C, D, E et F à température ambiante et sous agitation turbine et, enfin, à poursuivre l'agitation planétaire jusqu'à homogénéisation.
DISPOSITIF DE SCIAGE DES METAUX PAR RUBAN DE SCIE
L'invention est relative à un dispositif pour le sciage des métaux par ruban de scie, du type comportant un ensemble mobile de travail comprenant le ruban de scie et son dispositif d'entraînement, un moyen pour avancer les métaux en barres sous ledit ensemble mobile en vue de leur sciage, et un moyen d'évacuation des copeaux
Le document EP 313.429 AI décrit une machine à scier à ruban comportant, en regard de l'emplacement prévu pour la pièce à scier, un ensemble mobile de travail qui comprend le ruban de scie et son dispositif d'entraînement. La vitesse de déplacement de l'ensemble mobile en direction de la pièce à scier est freinée par un circuit hydraulique comportant un clapet susceptible de limiter ou d'interrompre l'écoulement du débit. Un organe de commande prévu en regard de ce clapet est associé au moyen d'actionnement du volant d'entraînement du ruban de scie, de façon à agir sur le clapet du circuit hydraulique de freinage lors dun accroissement de la résistance s'opposant au couple d'entraîmnement du ruban de scie. Un accroissement de cette résistance provoque ainsi une limitation du débit d'&écoulement dans le circuit hydraulique de freinage et par suite une réduction de la vitesse de déplacement de
l'ensemble mobile de travail.
Le procédé selon l'invention présente l'avantage d'être réalisé avec des ligands disponibles dans le commerce. La réaction entre le nitroxyde (II) et le composé halogénocarboné ZX est rapide. L'élimination du métal M du système organométallique MAa(L)n réalisée par de simples lavages à l'eau est particulièrement facile à mettre en oeuvre.
Le procédé selon l'invention permet d'obtenir des alcoxyamines exemptes quasiment de métal M.
,Les alcoxyamines obtenues selon le procédé de l'invention, la teneur en métal M est inférieure à 10 ppm.
En outre, les rendements en alcoxyamine sont élevés.
Le procédé selon l'invention s'applique tout particulièrement à la préparation des alcoxyamines de formule : à partir de nitroxydes de formule : dans les formules desquelles les groupes Y1 à Y6, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un radical alkyle, linéaire ou ramifié, ayant un nombre d'atomes de carbone allant de 1 à 10, un radical cycloalkyle ayant un nombre d'atomes de carbone allant de 3 à 20, un atome d'halogène, un radical cyano, un radical phényle, un radical hydroxyalkyle ayant un nombre d'atomes de carbone allant de 1 à 4, un radical dialcoxyphosphonyle, diphénoxyphosphonyle, un radical alcoxycarbonyle, alcoxycarbonylalkyle, ou bien 2 ou plus des groupes Y1 à Y6 peuvent être liés avec l'atome de carbone qui les porte pour former des structures cycliques, lesquelles peuvent comprendre une ou plusieurs fonctions extracycliques, choisis parmi : HO-, CH3C(O)-, CH30-, H2N-CH3C(O)NH-, (CH3)2N-; ou bien encore peuvent comprendre 1 ou plusieurs hétéroatomes extra- ou intracyliques tels que 0, N ;
Z est un reste de formule dans laquelle W1, W2 et W3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un radical alkyle, linéaire ou ramifié, ayant un nombre d'atomes de carbone allant de 1 à 10 , un radical phényle, un radical benzyle, un radical cyano, un radical cycloalkyle ayant un nombre d'atomes de carbone allant de 3 à 12 ; unradical -(CH2)r C(O)OW4 dans lequel W4 représente un alkyle, linéaire ou ramifié, ayant un nombre d'atomes de carbone allant de 1 à 6 , r = 0 à 6 ; X représente un atome de chlore, de brome ou d'iode, A titre d'illustration de nitroxydes (II) utilisables selon la présente invention, on citera : - le 2,2,5,5 tétraméthyl-1-pyrrolidinyloxy (généralement commercialisé sous la marque PROXYL) ; - le 3-carboxy-2,2,5,5-tétraméthyl-pyrrolidinyloxy (communément appelé 3-carboxy PROXYL) ; - le 2,2,6,6-tétraméthyl-1-pipéridinyloxy (communément appelé TEMPO) ; - le 4-hydroxy-2,2,6,6-tétraméthyl-1-pipéridinyloxy (communément appelé le 4-hydroxy-TEMPO) ; - le 4-méthoxy-2,2,6,6-tétraméthyl-1-pipéridinyloxy (communément appelé le 4-méthoxy-TEMPO) ; - le 4-oxo-2,2,6,6-tétraméthyl-1-pipéridinyloxy (communément appelé le 4-oxo-TEMPO) ; - le 4-amino-2,2,6,6-tétraméthyl-1-pipéridinyloxy (communément appelé le 4-amino-TEMPO) ; - le 4-acétamido-2,2,6,6-tétraméthyl-1-pipéridinyloxy (communément appelé le 4-acétamido-TEMPO) ; - le N-tertiobutyl-1-phényl-2-méthylpropyl nitroxyde, - le N-(2-hydroxyméthylpropyl)-1-phényl-2-méthylpropylnitroxyde), - le N-tertiobutyl-1-diéthylphosphono-2,2-diméthyl-propylnitroxyde, - le N-tertiobutyl-1-dibenzylphosphono-2,2diméthylpropylnitroxyde, - le N-tertiobutyl-1-di(2,2,2-trifluoroéthyl)phosphono-2,2diméthylpropylnitroxyde, - le N-tertiobuty)-[(1 -diéthylphosphono)-2-méthylpropyl]nitroxyde,
- le N-(1 -m6thyléthyl)-l -cyclohexyl-1 -(diéthyl-phosphono)nitroxyde, - le N-(1-phénylbenzyl)-[(1-diéthylphosphono)-1-méthyléthyl] nitroxyde : - le N-phényl-1-diéthylphosphono-2,2-diméthylpropylnitroxyde, - le N-phényl-1-diéthylphosphono-1-méthyléthylnitroxyde, - le N-( -phényl2-méthylpropyl)-1 -diéthylphosphonméthyléthylnitroxyde, - le bis-1-oxyl-2,2,6,6-tétraméthylpipéridine-4-yl)sébaçate commercialisé sous la marque "CXA 5415" par la Société CIBA SPEC.
CHEM.
A titre d'illustration de composés ZX utilisables, on citera les composés de formule C6H5CH2Br, (CH3) 2C(CN)Br, CH30C(O)C(CH3)2Br, CH30C(0)CH(CH3)Br, C6F13I.
Les alcoxyamines de formule (I) obtenues selon le procédé de la présente invention peuvent être utilisées pour la polymérisation et la copolymérisation de tout monomère présentant une double liaison carbone-carbone susceptible de polymériser par voie radicalaire. La polymérisation ou la copolymérisation est réalisée dans les conditions habituelles connues de l'homme du métier compte tenu du ou des monomères considérés. Les monomères considérés peuvent être un monomère vinylaromatique (styrène, styrènes substitués), un diène, un monomère acrylique ou méthacrylique. Le monomère peut également être le chlorure de vinyle, le difluorure de vinylidène ou l'acrylonitrile.
EXEMPLES REMARQUES GENERALES Les essais ont été réalisés sous atmosphère de gaz inerte (argon ou azote) en employant des techniques de Schlenk (standard) Le 1-bromoéthylbenzène et le N-tertiobutyl-1-diéthylphosphono- 2,2-diméthylpropylnitroxyde (DEPN) sont préalablement dégazés.
Les solvants utilisés sont le toluène qui est préalablement distillé sous argon sur sodium-benzophénone et CH2CI2.
Les ligands utilisés sont : - la N,N,N',N',N"-pentaméthyldiéthylènetriamine désignée ci- après par PMDETA, - la tris(2-pyridylméthyl)amine désignée ci-après par TPA, - la bipyridine désignée ci-après par BIPY.
Les alcoxyamines obtenues ont été caractérisées par RMN du 1 H, 13C et 31 P, et par analyse élémentaire.
Les teneurs en cuivre résiduel ont été déterminées par la technique de spectroscopie d'émission atomique à plasma avec détection par spectrométrie de masse désignée ci-après ICP-MS (Inductively Coupled Plasma - Mass Spectrometry).
Témoin 0,004 0,02 0,04 0,2 0,4 24776 20526 13689 11000 7617 6853 22516 19597 6710 10406 6072 4933 23779 20144 13148 11349 7824 6467 23690 20089* 11182* 10918* 7171* 6084* +/- +/- +/- +/- +/- +/- 1133 467 3883 477 957 1016 100 % 85 55 48 33 27 Temps d'incubation = 24 heures
Témoin 0,004 0,02 0,04 0,2 0,4 31653 12655 2583 2378 524 1154 29536 11531 1487 1442 484 467 29745 13008 2657 2713 693 927 30311 12398* 2242* 2178* 567* 849* +/- +/- +/- +/- +/- +/.
1167 771 655 659 111 350 100 % 41 7 7 2 3
Les résultats sont exprimés en unité de fluorescence/échantillon En gras : moyenne et écart type * : moyenne significativement différente du groupe témoin (p En conclusion, dans les conditions expérimentâtes retenues, l'extrait protéique testé entre 0,004 et 0,4 % (p/v), présentait une activité anti- gélatinase/collagénase dose-dépendante. On note notamment un excellent rapport effet/dose/temps des peptides de lupin par rapport à la collagénase aspécifique : à 24 heures par exemple, 0,04 % inhibe 93 % de l'activité gélatinolytique de la collagénase de Clostridium, à 2 heures : 52 %..
D'autres essais avec le même extrait peptidique ont été effectués à des concentrations de 0,01 ; 0,05 ; 0,1 ; 0,5 et 1 % (p/v) et les résultats sont indiqués au tableau 3 ci-dessous ainsi que sur la figure annexée. Cette figure représente la cinétique d'inhibition de la collagénase aspécifique - Influence de la concentration en extrait peptidique. En ordonnée activité de la gélatinolytique (%), en abscisse temps d'incubation (h).
Temps Concentration en extrait A (% p/v)/Activité d'incubation (h) gélatinolytique en (%) 0,01 0,05 0,1 0,5 1 1 89 75 73 73 57 2 85 55 48 33 27 4 79 38 29 14 12 6 69 27 21 8 9 24 41 7 7 2 3
Dans les conditions expérimentales retenues, l'extrait peptidique testé entre 0. 01 et 0. 5 % (p/v), présente une activité anti-gélatinase et collagénase dose dépendante et temps dépendante.
Dans tous les essais, la 1,10-phénanthroline inhibiteur aspécifique a été utilisée comme produit anti MMP de référence Les résultats obtenus étaient conformes à ceux qui étaient attendus et validaient les essais
IV - Activité anti-collagénase spécifique des peptides de lupin - extrait A- sur modèle organotypique humain Le vieillissement cutané se caractérise, entre autre, par une modification des propriétés mécaniques cutanées de la peau, consécutive à une dégradation des fibres collagéniques du derme et d'autres macroprotéines. Cette dégradation met en jeu des collagénases endogènes (Grymes, R.A., Kronberger A and Bauer E. A. Collagenases in disease - In Connective Tissue Diseases of the skin Eds. Lapière C.M. and Krieg T., 1993, 69-85). G. Fischer et J. Voorhees Pathiophysiology of prématuré skin aging induced by ultraviolet light et Molecular mechanisms of photoaging and its prevention by retinoic acid : ultraviolet irradiation induces MAP kinase signal transduction cascades that induce A-1-regulated matrix metalloproteinases that degrade human skin in vivo ).
Pour lutter contre les signes de vieillissement de la peau, des produits présentant une activité anti-collagénase sont envisageables.
L'activité anti-collagénase d'un produit à l'essai peut être étudiée in vitro dans un modèle organotypique de peau humaine. Le principe du test est le suivant : une application de collagénase purifiée sur la coupe s'accompagne d'une dégradation des fibres de collagène endogènes Les fibres de collagène sont ensuite colorées par le trichrome de Masson. La digestion des fibres de collagène endogènes par la collagénase purifiée est évaluée qualitativement par observation morphologique et quantitativement par analyse d'images. Un produit présentant une activité anti-collagénase préservera partiellement ou totalement l'intégrité des fibres de collagène mises en présence de l'enzyme.
Les produits à l'essai ont été conservés à +4 C jusqu'au moment de leur utilisation.
Trois dilutions ont été testées : 0,01 ; 0,1et 1 % (v/v) Le phosphoramidon, utilisé comme produit de référence, provenait de chez SIGMA La collagénase purifiée (type III, fraction A) provenait de chez SIGMA.
Le milieu d'incubation des coupes de peau humaine, appelé par la suite "véhicule", était le tampon Tris HCI 0,15M, pH 7,5 contenant 0,01M de chlorure de calcium
Les réactifs, de qualité analytique, provenaient de chez CARLO ERBA, GIBCO ou SIGMA, sauf indication contraire.
Chaque condition expérimentale a été réalisée en triplicate
MMP-9 Les dilutions des produits à l'essai ou du produit de référence ont été incubées avec la DQ-gélatine, diluée à 25 p g/ml, et la MMP-9, diluée à 0,25 tc,,/ml, pendant 24 heures à 37 C.
Un témoin, correspondant au mélange MMP-9 + DQ-gélatin , a été incubé en parallèle.
Pour chaque condition expérimentale, des échantillons, appelés par la suite échantillons sans enzyme , ont été incubés en présence de DQ-gélatine et en absence de MMP-9. Ces échantillons permettaient de mesurer l'interférence des produits à l'essai avec la méthode d'évaluation des effets (fluorimétrie) Chaque condition expérimentale a été réalisée en triplicate.
Après 24 heures, le signal correspondant à la dégradation de la DQ-gélatine a été mesurée en fluorimétrie (Excitation : 485 nm et émission : 595 nm). Pour chaque échantillon, la valeur obtenue pour les 'échantillons sans enzyme' a été soustraite.
Les groupes de données (groupe témoin et groupes traités) ont été comparés par une analyse de la variance à un facteur (ANOVA 1, p<0,05), suivie par un test de Dunnett.
Les résultats sont indiqués ci-dessous : V.1- Activité anti-MMP-2
Extrait peptidique Témoin Activité MMP-2 (en %) (1)/ Concentration (% v/v) en solution d'extrait peptidique à 10 % en poids 0.01 0.1 1 C 100 119 111 43 A 100 152 151 68 B 100 110 98 77 (1 )Activité exprimée par rapport au groupe témoin en absence d'inhibiteur de la MMP-2
Conclusion - La solution à 10 % en poids d'extrait de lupin C, testée à 0,01et 0,1 % (v/v) ne présente pas d'activité anti-MMP-2. Testée à 1 % (v/v), elle inhibe la MMP-2 de 57 %.
- La solution à 10 % en poids d'extrait de lupin A, testée à 0,01à 0,1% (v/v) ne présente pas d'activité anti-MMP-2. Testée à 1 % (v/v), elle inhibe la MMP-2 de 32 %.
- la solution à 10 % en poids d'extrait B, testée à 1 % inhibe à 23 % MMP-2.
- La phénanthroline, testée à 8 et 80 g/ml, inhibe de 32 et 73 % respectivement l'activité de la MMP-2. Ce résultat qui était attendu valide l'essai.
V.2 - Activité anti-MMP-9