INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La présente Invention a également pour objet un dilueur de sperme susceptible d'être obtenu par le procédé conforme à l'invention.
La présente Invention a également pour objet des préparations du sperme en vue de l'insémination artificielle, caractérisée en ce que ledit sperme est dilué dans un dilueur conforme à l'invention.
La mise en oeuvre d'un dilueur de l'Invention améliore nettement la conservation du sperme, par rapport aux dilueurs à base de lait utilisées dans l'art antérieur.
Le sperme préparé en utilisant un dilueur conforme à l'Invention peut être conservé à des températures positives, comprises entre 40C et 200C, et avantageusement aux environs de 150C. La température de conservation optimale dépend également de l'espèce considérée. Chez le cheval, par exemple, la mise en oeuvre d'un dilueur conforme à l'invention permet de conserver le sperme à 150C en conditions aérobies, et d'obtenir une durée de conservation et un taux de fertilité supérieurs à ceux obtenus avec les dilueurs de l'art antérieur. Cette conservation à 150C permet d'éviter l'effet de choc thermique intervenant habituellement lors du refroidissement du sperme.
La présente Invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples non-limitatifs de préparation d'un dilueur conforme à l'Invention, et de son utilisation chez le cheval.
EXEMPLE 1 - PREPARATION D'UN DILUEUR CONFORME A L'INVENTION 1) Fractionnement du lait Le fractionnement des composants du lait écrémé cru est effectué par microfiltration sur membrane, [PIERRE et al. Lait (72) 461-474, (1992)] qui permet de séparer le microfiltrat (ou petit lait) du phosphocaséinate natif (caséines sous la forme micellaire qu'elles ont dans le lait). La ss-lactoglobuline est obtenue à partir du microfiltrat, selon le protocole décrit par MAUBOIS et al. [Bull. IDF, 212, 154-159, (1987)] Les étapes de ce fractionnement sont schématisées sur la Figure 1 en annexe.
2) Milieu de base Le milieu de base utilisé est le milieu HGLL, dont la composition est la suivante 0,140 g de CaCl2 0,40 g de KCl 0,06 g de KH2PO4 0,2 g de MgSO4, 7H2O 8 g de NaCl 0,35 g de NaHCO3 4,76 g d'Hepes 13,5 g de glucose 45 g de lactose eau distillée qsp 0,5 litres on ajoute à ce milieu de l'amphotéricine B, de la pénicilline, et de la gentamicine, pour parvenir à des concentrations finales dans le milieu de base respectives de 0,5 Ag/l, 500 UI/ml, et 100 Ag/ml.
Ledit milieu de base est ensuite stérilisé par filtration sur une membrane dont le diamètre des pores est de 0,22 Am.
3) Préparation d'un dilueur à base de phosphocaséinate natif (dilueur PPCN).
On ajoute à 0,5 litres d'eau, à une température de 600C, et sous agitation forte, 27 y de phosphocaséinate natif ; on poursuit l'agitation jusqu'à dissolution complète, et obtention d'une solution d'aspect laiteux. Cette solution est ensuite soumise à un traitement UHT (1453C, 2 secondes), puis mélangée à 0,5 litres de milieu de base obtenu comme décrit en 2) ci-dessus. Si nécessaire, le pH du mélange est ajusté à une valeur de 7,1. Le mélange est ensuite conditionné de façon aseptique.
4) Préparation d'un dilueur à base dess-lactoglobuline.
On ajoute à 0,5 litres de milieu de base obtenu comme décrit en 2) ci-dessus, 0,5 litres d'une solution de P-lactoglobuline à 80 g/l, préalablement stérilisée par filtration sur une membrane dont le diamètre des pores est de 0,22 Am. Si nécessaire, le pH du mélange est ajusté à une valeur de 7,1. Le mélange est conditionné de façon aseptique.
EXEMPLE 2 : EFFET DES DIFFERENTES FRACTIONS DU LAIT SUR LA MOBILITE DES SPERMATOZOIDES IN VITRO Différentes fractions du lait, à savoir le phosphocaséinate natif, et la -lactoglobuline mentionnés ci-dessus, et également l'a-lactalbumine, et le résidu d'ultrafiltration ont été testées. Ces fractions sont additionnées au dilueur de base HGLL. A titre de témoins, on a utilisé du HGLL additionné de 1% de BSA (Bovine Serum Albumine, Sigma A7906), du lait UHT du commerce, et du dilueur INP < A 82 (Palmer, 1984).
Dix étalons ont été utilisés au total, avec un minimum de 6 étalons (1 éjaculat par étalon) pour chaque test. Après la récolte, le sperme filtré sur de la gaze est dilué, pour obtenir une concentration de 20 x 106 spermatozoides/ml, dans les différents milieux à tester, puis stocké en conditions aérobies à 15 0C ou à 370C (0,5 ml de sperme dilué dans des tubes de 5 ml), ou anaérobies à 4 0C (5 ml de sperme dilué dans des tubes de 5 ml). Les durées de conservation ont varié entre 6 et 96 heures en fonction de la température et de la qualité des dilueurs utilisés afin que les observations soient réalisées à un moment où les dilueurs puissent être discriminés. Avant l'analyse, les échantillons sont réchauffés 10 minutes à 37nC. La qualité de la conservation du sperme est évaluée par analyse automatisée de la mobilité des spermatozoïdes (Hamilton Thorn Motility Analyser, Hamilton Thorn Research, Danvers, NIA, USA), en retenant comme critère le pourcentage de spermatozoïdes rapides c'est à dire ayant une vitesse supérieure à 30 Wm/sec.
Les résultats sont illustrés par le Tableau I ci-après TABLEAU I
Fractions HGLL HGLL HGLL ultrafiltrat de lait + + + + phosphocaséinate natif ss-lactoglobuline a- BSA (27g/l) (40 gli) lactalbumine (10 g/l) (1,2 11) témoins \ 40C 96h 15"C 96h 4"C 48h 1S"C 48h 370C 6h 15"C 48h ss 31% 43% 52% 35% 24% 135S, * * * ns * * HG'LL+lOfin BSA 16% l 18% 40Li0 51% BG, 31% 478 ns * Lriit UJIT @0'7, 30L7o 4C/o 31% 4367c 52% 35%' INRA 82 47'77 21 C7! Les résultats obtenus avec les dilueurs témoin sont indiqués en italique.
Le taux d'insaponifiable de l'huile d'Argan est en moyenne de 1 %. La composition varie suivant les auteurs. Les études les plus récentes décrivent 37 % d'hydrocarbures et de carotènes. 7,5 % de tocophérols, 20 % de stérols et d'alcools triterpéniques, 6 % de xanthophylles et 9,5 % de constituants divers.
Les molécules les plus actives sont les tocophérols qui présentent des activités anti-radicalaires très fortes, mais également les stérols. Les derniers régulent la perméabilité et la fluidité des membranes cellulaires et ainsi, tous les échanges existants entre la cellule et le monde extérieur, c'est-à-dire son environnement direct. Tout en étant moins importantes que celles des tocophérols, les stérols présentent également des propriétés antiradicalaires.
La partie protéique : les tourteaux d'Argan sont composés essentiellement de protéines, 25 à 35 % selon les provenances du tourteau, de lipides résiduels non extractibles : 20 à 27 % d'eau dont la teneur varie selon l'état de séchage de 5 à 25 %, de polysaccharides 15 à 25 % dont 2 à 5 % de cellulose, de cendres 2 à 5 % et d'oligo-éléments comme le phosphore, calcium, potassium et sodium.
Les protéines sont les molécules les plus abondantes. En quantité de protéines, les tourteaux d'Argan sont comparables à ceux de soja ou d'arachide. Les populations locales utilisent ces tourteaux pour l'alimentation animale. Aucun cas de toxicité due à leur composition chimique n'a été remarqué. Les protéines d'Argan peuvent être extraites par des solvants aqueux, alcalins ou neutres, mais les protéines en solution ne sont pas stables et précipitent. De plus, elles sont dénuées de propriétés biologiques, à part, bien sûr, leur aspect nutritionnel. Afin de les solubiliser, ces protéines peuvent subir une hydrolyse chimique ou enzymatique. Cette dernière est préférée car plus spécifique et moins dénaturante.
L'hydrolyse enzymatique est menée en mettant en contact les protéines fraîchement extraites par un solvant aqueux ou tout simplement encore à l'état du tourteau dans l'eau avec une protéase. Cette enzyme hydrolyse alors les protéines en peptides de poids moléculaires inférieurs à 20,000 daltons.
Ces peptides sont alors solubles dans l'eau et donc récupérés après une séparation solide/liquide dans la phase aqueuse. Ils sont biologiquement actifs comme le démontrent les travaux relatés ci-après.
Pris isolément, l'huile et les peptides d'Argan possèdent des activités antivieillissement qui ont pu être quantifiées tant en culture de cellules, qu'en pharmacologie animale et en clinique humaine.
L'huile intervient sur les principaux paramètres du vieillissement que sont: - la diminution de l'activité cellulaire, - la perturbation des échanges cellulaires et l'accumulation de toxines, - la diminution de la qualité du ciment intercellulaire, - la diminution des apports nutritifs au niveau cellulaire.
1) Activité proliférative conduisant à une relance de l'activité cellulaire L'activité stimulante de l'huile enrichie à une concentration de 0,003 % a été mise en évidence sur culture de fibroblastes (lignée L 929) en utilisant la méthode au XTT décrite ultérieurement plus en détails.
2) Activité anti-radicalaire Elle a été évaluée in vitro par le test au DPPH. La concentration inhibitrice d'huile nécessaire pour diminuer de moitié le taux de radicaux libres (CI 50) obtenue est de 1,3 mg/ml.
3) Effet restructurant et hydratant 1l a été objectivé sur animaux carencés en AGE Le traitement de ces animaux par l'huile d'Argan diminue rapidement la perspiration chez l'animal carencé en AGE et ceci pendant une longue durée (activité dès le 4ème jour d'application). Il s'agit d'une réelle reconstitution de l'intégrité du stratum cornéum, car une huile de paraffine s'avère inactive sur ce modèle.
Cet effet hydratant a été confirmé en clinique humaine.
4) Effet nutritif L'huile d'Argan a des propriétés émollientes dues à sa qualité d'huile.
Cependant, son action se différencie nettement de celle d'un émollient classique par sa composition particulière (acides gras insaturés, etc).
Les peptides interviennent essentiellement sur les troubles du vieillissement liés à des altérations du métabolisme cellulaire : chute de la consommation d'oxygène, diminution de la synthèse de collagène, etc.
1) Activité proliférative Elle a été évaluée sur plusieurs lignées cellulaires par la méthode du XTT (avec lecture à To + 48 h).
La figure 18 illustre les différentes étapes, de l'évaluation de la i-iéme ligne de l'inverse, exécutées après le test 618 de la figure 20.
II s'agit de calculer la valeur des éléments de la i ième ligne du tableau à 2 dimensions P(x) 551. Cela correspond également au remplissage du tableau Pi(x) 560. Préalablement, les registres REG~DIM 558 et A(x) 555 doivent avoir été affectés.
Le test 572 détermine ensuite si 'j' est strictement inférieure à 'DIM', ou non. Si le résultat du test 572 est positif, I'opération 573 est exécutée.
Au cours de l'opération 573 - le j+1 ième élément du tableau Pi(x) 560 prend la valeur du j ième élément du tableau Pi(x) 560 - la valeur du registre k 548 prend la valeur du registre j 547 - la valeur du registre REG~ZERO 549 prend la valeur du j iéme élément du tableau A(x) 555 si 'j' est strictement inférieure à 'i' et sinon, la valeur du registre REG~ZERO 549 prend la valeur du j+1 ième éléments du tableau A(x) 555.
Au cours de l'opération 575 - le contenu du k ième élément du tableau Pi(x) 560 est remplacé par la valeur de l'exposant de sa représentation algorithmique grâce à la table de conversion TAB~TOEXP 542, - la valeur du k ième élément du tableau Pi(x) 560 est alors additionnée avec la valeur du contenu du registre REG~ZERO 549 selon la règle d'addition et de soustraction des exposants des représentations logarithmiques de deux éléments du champ de Galois 614 exposée en annexe, - la valeur du résultat est remplacée par la valeur de sa représentation binaire correspondante, grâce à la table de conversion TAB~TOBYT 543 et - on applique à ce résultat un OU exclusif, bit à bit, avec la valeur du k-1 ième élément du tableau Pi(x) 560. Le résultat final est stocké dans le k ième élément du registre Pi(x) 560.
Au cours de l'opération 579, le contenu du registre REG~VAL 550 est initialisé à la valeur du contenu du DIM iéme élément du tableau Pi(x) 560 et j' est initialisée à 'DIM'.
Au cours de l'opération 581 - le contenu du registre REG~VAL 550 est remplacé par la valeur de l'exposant de sa représentation algorithmique grâce à la table de conversion TAB~TOEXP 542; - la valeur du i ième élément du tableau A(x) 555 est alors additionnée avec la valeur du contenu du registre REG~VAL 550 selon la règle d'addition et de soustraction des exposants des représentations logarithmiques de deux éléments du champ de Galois 614 exposée en annexe - la valeur du résultat est remplacée par la valeur de sa représentation binaire correspondante grâce à la table de conversion TAB~TOBYT 543 - on applique à ce résultat un OU exclusif, bit à bit, avec la valeur du j-1 iéme élément du tableau Pi(x) 560 et - le résultat final est stocké dans le registre REG~VAL 550.
Selon l'invention, le verre 1 est équipé d'au moins une attache 7 qui est constituée par une pièce élastique en forme de U formant pince, dont l'âme centrale 8 est destinée à chevaucher le chant 6 du verre 1 et dont les deux branches latérales 9 et 10, bordant l'âme centrale 8, sont destinées à venir s'appuyer respectivement sur les faces 4 et 5 du verre pour les serrer élastiquement et assurer ainsi le montage élastique ferme de l'attache 7 sur le verre.
Au repos, c'est-à-dire lorsque l'attache 7 n'est pas montée sur le verre 1, la plus courte distance entre les branches 9 et 10 du U est plus faible que l'épaisseur du verre de sorte que, lors du montage de l'attache sur le verre, les branches 9 et 10 sont écartées élastiquement pour assurer leur fonction de pince.
L'attache 7 est en toute matière appropriée, par exemple en métal, et notamment en acier à ressort, mais il n'est pas exclu d'utiliser une autre matière convenable, par exemple une matière plastique présentant des propriétés mécaniques satisfaisantes quant à sa résistance et à son élasticité.
Notamment suivant la forme que l'on donne à l'âme centrale 8 du U, celle-ci est en contact avec le chant 6 du verre, ou sans contact avec lui.
On peut donner à l'attache 7 toute forme appropriée en section droite, notamment pour des raisons d'esthétique, pour autant qu'elle puisse assurer sa fonction de pince sans dégrader mécaniquement le verre 1.
Une forme de base peut consister en un U dont l'âme et les branches latérales sont planes.
Dans l'exemple représenté, la branche intérieure ou postérieure 9, c'est-à-dire celle qui appuie sur la face postérieure 4 du verre, est plane tandis que la branche extérieure ou antérieure 10, coopérant avec la face antérieure 5 du verre, présente, en section droite, une forme convexe dont la concavité est tournée vers la face 5 ; toutefois, pour faciliter le montage de l'attache sur le verre, l'extrémité libre 10a de la branche 10 présente une concavité inversée définissant une rampe de glissement sur la face 5, lors du montage de l'attache sur le verre 1, cette rampe facilitant l'écartement des branches 9 et 10 lors du montage et évitant de rayer le verre.
En variante, l'extrémité libre 9a de la branche 9, quelle que soit la forme de celle-ci, pourrait, dans le même but, comporter une telle rampe.
L'attache 7 selon l'invention est destinée à être solidaire d'au moins un autre élément de l'article de lunetterie, en étant, selon le cas, d'une seule pièce avec celui-ci ou rapportée sur lui, de manière fixe ou réglable.
Ainsi, pour exemple, sur la Figure 2, chaque verre 1 des lunettes 2 porte deux attaches 7 qui sont montées aux extrémités de la partie supérieure du chant 6.
Chaque attache extérieure 7 porte une branche de lunettes 11, par l'intermédiaire d'une charnière 12, tandis que les attaches intérieures 7 portent fixement un pont 13 de liaison des deux verres.
De manière non représentée, les attaches intérieures 7 peuvent également porter des plaquettes nasales ou, en variante, des plaquettes peuvent être portées par deux autres attaches selon l'invention.
Comme montré sur la Figure 3, chaque verre 1 de l'adaptateur solaire amovible 3 porte deux attaches 7. Chaque verre 1 a été préalablement découpé, ou choisi identique, à la forme du verre 1 qui lui correspond sur la paire de lunettes 2, lorsque les verres ne sont pas encerclés, ou à la forme du cercle qui lui correspond sur la paire de lunettes dans le cas particulier où les verres de celle-ci sont enchâssés dans une monture à cercles.
Chacune des quatre attaches 7 porte solidairement une patte 14 pour le montage amovible de l'adaptateur 3 sur une paire de lunettes telle que celle qui est représentée sur la Figure 2.
A partir du dos de l'âme 8 de l'attache 7, chaque patte 14 s'étend d'abord perpendiculairement aux branches 9 et 10 de l'attache, puis elle est coudée à environ 90 degrés à l'intérieur du contour du verre de l'adaptateur pour pouvoir venir chevaucher le chant 6 du verre 1 correspondant de la paire de lunettes 2 en s'accrochant sur ce verre, dans l'exemple représenté sur la Figure 2, ou pour pouvoir venir chevaucher le cercle correspondant d'une paire de lunettes à monture, dans l'autre cas où les verres des lunettes sont enchâssés dans des cercles.
Dans l'implantation représentée sur la Figure 3, adaptable à tous les types de lunettes, chaque verre 1 de l'adaptateur comporte une attache 7 à l'extrémité extérieure du bord inférieur du verre et une attache 7 à l'extrémité extérieure du bord supérieur du verre.
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Un coupleur optique 12 est inséré dans la fibre 2 et optiquement relié à la diode laser 10 par une fibre optique 14 de manière que la lumière de pompage optique émise par cette diode laser 10 puisse être injectée dans la fibre 2 par l'intermédiaire de la fibre 14 et du coupleur optique 12.
Dans l'exemple représenté sur la figure 1, la lumière de pompage optique se propage dans le même sens que le signal optique à amplifier, le coupleur optique 12 étant placé du côté de l'isolateur optique 4.
Ainsi, le signal lumineux que l'on veut amplifier traverse successivement l'isolateur optique 4, le coupleur optique 12, la fibre dopée 2 et l'isolateur optique 6 d'où il sort amplifié.
Conformément à l'invention, on utilise la lumière émise autour de la fibre dopée 2 pour la régulation du gain de l'amplificateur.
Lorsqu'un ion de Terre Rare est excité par la lumière de pompage optique, il se désexcite en rayonnant de la lumière dans tout l'espace.
Dans la fibre optique 2, la lumière émise par cet ion dans un angle, dont la valeur est inférieure à un certain angle-limite, reste dans le coeur de la fibre.
La lumière émise au-delà de cet anglelimite sort de la fibre.
C'est ce qu'on appelle la fluorescence transverse.
Le confinement des ions excités dans le coeur de la fibre permet d'obtenir un gain avec une puissance de pompage optique raisonnable.
La puissance de la lumière de fluorescence émise dans tout l'espace est proportionnelle au nombre d'ions excités.
Ce nombre d'ions excités est lui-même une fonction linéaire du gain dans la fibre 2.
Conformément à l'invention, on récupère une partie de la lumière de fluorescence transverse dans une bande de fluorescence déterminée pour réguler le gain de l'amplificateur dans cette bande de fluorescence.
Pour ce faire, l'amplificateur conforme à l'invention, schématiquement représenté sur la figure 1, comprend aussi un moyen de détection de lumière, comme par exemple une photodiode 16, qui est sensible dans la bande de fluorescence de l'amplificateur.
La face d'entrée de cette diode 16 est placée contre la fibre optique 2.
Dans l'exemple représenté sur la figure 1, la fibre 2 fait une seule boucle ou spire 18 et la face d'entrée de la photodiode 16 est maintenue par des moyens non représentés contre cette spire 18 de sorte que la face d'entrée de la photodiode 16 est en contact avec un point A de cette spire 18.
L'amplificateur optique de la figure 1 comprend aussi un amplificateur électronique 20 dont l'entrée est reliée à la sortie de la photodiode 16.
Plus particulièrement, l'invention a pour objet les produits décrits ci-après dans les exemples, et répondant aux formules suivantes: -5-éthyl-9,1 O-difluoro-4,5-dihydro-5-hydroxy- 12-(4-méthyl pipéridinométhyl)- H- oxepino[3',4':6,7]indolizino[ 1,2-b] quinoléine-3,15(4H,13H)-dione; -5-éthyl-12-diéthylaminométhyl-9-fluoro-4,5-dihydro-5-hydroxy-10-méthyl-1Hoxepino[3',4':6,7]indolizino[ 1,2-b]quinoléine-3, 15(4H, 13H)-dione; - 5-éthyl-9-fluoro-4,5-dihydro-5-hydroxy- 10-méthyl-12-(4-méthyl pipéridinométhyl)1H-oxepino[3',4' :6,7]indolizino[l 1,2-b] quinoléine-3,15(4H,13H)-dione; - 5-éthyl-9-fluoro-4,5-dihydro-5-hydroxy- 10-méthyl-12-pyrrolidinométhyl- 1H- oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoléine-3,15(4H,13H)-dione; - 9-chloro-5-éthyl-4,5-dihydro-5-hydroxy- 10-méthoxy-12-pipéridinométhyl- H- oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoléine-3,15(4H,13H)-dione hydrochlorure; - 5-éthyl4,5-dihydro-5-hydroxy- 10-méthoxy-12-(4-méthyl pipéridinométhyl)- H- oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b] quinoléine-3,15(4H,13H)-dione; - 9-chloro-5-éthyl4,5-dihydro-5-hydroxy- 1 0-méthyl- 1 2-(4-méthylpipéridino méthyl)1H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoléine-3,15(4H,13H)-dione; ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ces derniers.
Tel qu'il est utilisé ici, le terme inférieur en référence aux groupes alkyle, alkylthio et alkoxy désigne des groupes hydrocarbonés aliphatiques saturés, linéaires, ou ramifiés, comportant de 1 à 6 carbones, comme par exemple méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, t-butyle, méthylthio, éthylthio, méthoxy et éthoxy. En référence aux groupes alkényle ou alkynyle, le terme inférieur désigne des groupes comportant 2 à 6 atomes de carbone et une ou plusieurs doubles ou triples liaisons, comme par exemple les groupes vinyle, allyl, isopropényle, pentènyle, hexanyle, propènyle éthynyle, propynyle et butynyle. Le terme cycloalkyle désigne un cycle de 3 à 7 carbones, comme par exemple les groupes cyclopropyle, cyclobutyle, cyclopentyle ou cyclohexyle. Le terme aryl désigne un composé hydrocarboné mono-, di ou tricyclique avec au moins un cycle aromatique, chaque cycle contenant au maximum 7 chaînons, comme par exemple phényle, naphtyle, anthracyle, biphényle ou indényle . Le terme halo signifie chloro, bromo, iodo ou fluoro. Les radicaux correspondant aux expressions halo alkyle inférieur, cyano alkyle inférieur, nitro alkyle inférieur, amido alkyle inférieur, hydrazino alkyle inférieur, azido alkyle inférieur, aryle alkyle inférieur, hydroxy alkyle inférieur, alkoxy inférieur alkyle inférieur, alkylthio inférieur alkyle inférieur, et alkyle inférieur sulphonyle alkyle inférieur sont substitués, respectivement, par un à trois groupes halo, cyano, nitro, amido, hydrazino, azido, aryle, hydroxy, alkoxy inférieur, alkylthio inférieur ou sulphonyle inférieur. Le radical alkyle inférieur amino peut contenir un ou deux groupes aîkyle inférieur, et représenter par exemple NHCH3, NHCH2CH3, N(CH3)2, ou N(CH3)(CH2CH3). Des exemples de [N=X] comprennent les groupes pipéridinyle, morpholinyle, piperizinyle et imidazolyle.