INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
sélectivement maintenues en milieu HAT puis clonées par dilution limite comme décrit par Wands et al. (Gastroentérology 80 :225-232 (1981 )). Les cellules d'hybridomes obtenues après une telle sélection sont testées afin d'identifier les clones sécrétant des anticorps capables de se fixer au polypeptide.
D'autre part, d'autres anticorps capables de se fixer au polypeptide peuvent être produits selon une procédure en 2 étapes utilisant des anticorps anti-idiotypique une telle méthode est fondée sur le fait que les anticorps sont eux-mêmes des antigènes et en conséquence il est possible d'obtenir un anticorps reconnaissant un autre anticorps. Selon cette méthode, les anticorps spécifiques de la protéine sont utilisés pour immuniser un animal, préférentiellement une souris. Les splénocytes de cet animal sont ensuite utilisés pour produire des cellules hybridomes, et ces dernières sont criblées pour identifier les clones qui produisent un anticorps dont la capacité à se fixer au complexe protéine-anticorps spécifique peut-être bloqué par le polypeptide. Ces anticorps peuvent être utilisés pour immuniser un animal afin d'induire la formation en plus grande quantité d'anticorps spécifiques de la protéine.
Il serait apprécié que Fab et F(ab')2 et les autres fragments des anticorps de la présente invention puissent être utilisés selon les méthodes décrites ici. De tels fragments sont typiquement produits par clivage protéolytique à l'aide d'enzymes telles que la Papaïne (pour produire les fragments Fab) ou la Pepsine (pour produire les fragments F(ab')2). Sinon, les fragments sécrètes reconnaissant la protéine peuvent être produits en appliquant la technologie de l'ADN recombinant ou de la chimie de synthèse.
Pour l'utilisation in vivo d'anticorps chez l'homme il serait préférable d'utiliser des anticorps monoclonaux chimériques " humanisés". De tels anticorps peuvent être produits en utilisant des constructions génétiques dérivés de cellules d'hybridomes produisant les
anticorps monoclonaux décrits ci-dessus. Les méthodes pour produire les anticorps chimériques sont connus par l'homme de l'art. (Pour revue, voir : Morrison, Science 229 :1202 (1985); Oi et al., Biotechnique 4 :214 (1986); Cabilly et al., US patent n 4,816,567 ; Taniguchi et al., EP 171496; Morrison et al., EP 173494; Neuberger et al., WO 8601533; Robinson et al., WO 8702671 ; Boulianne et al ; Nature 312 :643 (1984) ; Neuberger et al., Nature 314 : 268(1985)).
Exemple 7 : Correction du phénotype cellulaire de la maladie de Tangier La maladie de Tangier est caractérisée par un catabolisme accéléré des particules lipoprotéiques de haute densité (HDL) et une accumulation de cholestérol dans les tissus. Notamment, les fibroblastes de peau des patients atteints de la maladie de Tangier ont une capacité réduite à éliminer leur contenu en cholestérol par le processus d'efflux de cholestérol assuré par l'apolipoprotéine A-I (apoA-I), protéine majeure des HDL (Francis et al., 1995). Cette caractéristique correspondant à une perte de fonction est aussi retrouvée dans d'autres cellules fibroblastiques de patients atteints de déficit familial en HDL (Marcil et al., 1999).
La correction du phénotype des fibroblastes de Tangier peutêtre assurée par la transfection des ADNc complets correspondant aux séquences proposées, dans lesdites cellules. L'ADNc est inséré dans un vecteur d'expression qui est ensuite transfecté selon les méthodes décrites cidessous : 1. Préparation des cultures fibroblastiques de sujets normaux et de sujets atteints de la maladie de Tangier
Les fibroblastes primaires de peau humaine sont obtenus par la mise en culture de biopsie de peau provenant de l'avant bras. Ces biopsies sont effectuées sur des patients atteints de la maladie de Tangier ayant les particularités cliniques et biochimiques des homozygotes , c'est à dire des amygdales oranges, des concentrations plasmatiques d'apoA-1 et de cholestérol-HDL inférieur au Sème percentile. Les lignées de fibroblastes normaux sont obtenus chez l'American Type Culture Collection (Rockville, MD). Les fibroblastes sont cultivés dans un milieu EMMEM (Eagle-modified minimium essential médium ; GIBCO) complété par 10% de sérum de veau foetal, de la glutamine à 2 mM, 100 Ullml de pénicilline et 100 g/ml de steptomycine (milieu désigné par EMMEM10). En vue de la réalisation de l'étude de l'efflux de cholestérol, ces cellules sont pré-chargées en cholestérol par incubation de 24 heures avec 50 g/ml de cholestérol dans le milieu décrit ci-dessus sans sérum de veau mais contenant 2 mg/ml d'albumine bovine (BSA, fraction V).
2. Etude de l'efflux de cholestérol Les fibroblastes pré-chargés en cholestérol à confluence sur des plaques à 24 puits sont incubés dans le milieu EMMEM10 et 1 Ci/ml de 1,2-3H- cholestérol (50 Ci/mmol; Dupont ; Wilmington, DE) durant 48 heures.
Environ 100 000 coups par minute sont obtenus par puits ou 1000 coups par minutepar g de protéine cellulaire. Les cellules sont lavées trois fois avec du milieu EMMEM/BSA, et incubées avec ce milieu durant 24 heures avant de transfecter le gène d'intérêt et de démarrer l'efflux par ajout de 10 g/ml de protéoliposome contenant l'apoA-1 en milieu EMMEM/BSA. Ces protéoliposomes sont préparés par sonication de phosphatidylcholine et d'apoA-1 humaine purifiée (Jonas, 1986). La transfection cellulaire s'effectue par la technique de précipitation de phosphate de calcium (Sambrook et al., 1989). Après la période d'efflux, en général 20 heures, le milieu est collecté, centrifugé (1000 g, 5 min), et la radioactivité déterminée
par comptage en scintillation liquide. La radioactivité résiduelle dans les cellules est aussi déterminée sur la nuit après extraction des lipides dans l'isopropanol. Le pourcentage d'efflux est calculé en divisant la radioactivité mesurée dans le surnageant par la somme des radioactivités mesurées, dans le surnageant et l'extrait cellulaire.Un contrôle interne est réalisé par transfection d'un gène marqueur et l'incubation sur 24 heures avec un milieu EMMEM/BSA sans protéoliposome contenant l'apoA-1.
L'efflux de cholestérol cellulaire à partir de fibroblastes normaux et transfectés par une gène témoin correspondent à 6~2% alors que celui obtenu à partir de fibroblastes atteints de la maladie de Tangier et transfectés par ce gène témoin est inférieur à 1%. En revanche la transfection des fibroblastes atteints de la maladie de Tangier par un plasmide correspondant aux gènes proposés dans ce dossier permettrait de restaurer la capacité de ces cellules à éliminer leur excès de cholestérol à un niveau correspondant à celui de fibroblastes normaux.
Exemple 8 : Isolement des clones génomiques correspondantà un polynucléotide L'isolement des clones génomiques correspondant à un transcrit est réalisé par criblage de la banque de BAC d'ADN génomique humain (par exemple celle fournie par Mel Simon, CalTech., ref : Kim et al. Genomics (1996), 34:213-218)) par PCR avec des amorces spécifiques de la séquence d'ADNc correspondant aux séquences des transcrits SEQ ID N 1à SEQ ID N 55 selon l'invention, selon la méthode décrite dans l'Exemple 1.
Exemple 9 :Détermination de polymorphisme/mutation de l'un des gènes correspondant aux transcrits selon l'invention
De plus, les puits quantiques sont tels que le spectre de gain de la zone active contienne la longueur d'onde du mode de la microcavité, qui a son tour se trouve dans une plage où l'on a une variation d'indice lors de l'injection de porteurs.
On peut donc obtenir une émission de lumière tout en faisant varier le mode de résonance de la microcavité. S' il s'agit d'une émission laser, on a un VCSEL accordable en longueur d'onde et, s'il s'agit simplement d'une émission spontanée, on a une diode électro-luminescente (LED) accordable.
Les puits quantiques de la zone active peuvent éventuellement être entourés de barrières fines et élevées pour augmenter le confinement et empêcher la fuite des porteurs qui induisent l'émission laser.
Le deuxième exemple est schématiquement illustré par la figure 10 et concerne une diode à
émission par la tranche. On inclut la zone active ZA dans une structure de type SCH c'est-à-dire une hétérostructure à confinement séparé ( separate confinement hétérostructure ) où les barrières entourant la zone active contiennent un SR-P. Les puits quantiques de la zone active forment l'état fondamental de toute la structure. Le spectre de gain de la zone active se trouve dans une plage où la variation d'indice optique est importante lors de l'injection de porteurs.
Dans ce cas, lors de l'injection de porteurs, la diode émet sur plusieurs modes inclus dans la plage du spectre de gain et, en même temps, la longueur d'onde de ces modes se déplace en fonction de la densité de porteurs injectés.
Dans un troisième exemple, la cavité accordable est utilisée en tant que modulateur de Fabry-Pérot. Dans ce cas, l'espaceur ( spacer ) est constitué d'un SR-P et il n'y a pas de zone active.
Lors de l'injection de porteurs, ceux-ci induisent une variation de la résonance de la cavité comme on l'a décrit plus haut.
Contrairement aux diodes émettrices de lumière, le modulateur est capable de fonctionner quelle que soit la durée de vie des porteurs dans le SR-P. Cette durée de vie est seulement fixée par le temps de réponse qu'on souhaite donner au modulateur.
Il convient cependant de remarquer que le temps de réponse est directement lié à la densité d'excitation : plus le modulateur est sensible, plus il est lent, et réciproquement.
Que ce soit dans le cas d'une cavité émettrice de lumière ou d'un modulateur optique, l'injection de porteurs peut se faire aussi bien optiquement qu'électriquement. Dans le premier cas, on injecte des porteurs dans la structure au moyen d'un laser de pompe. Dans le deuxième cas, l'un des miroirs est dopé N et l'autre est dopé P et, pour injecter les porteurs, on polarise la diode ainsi formée en direct.
Dans un autre exemple, on couple deux cavités. La première émet de la lumière accordable et la deuxième, dont l'espaceur ( spacer ) est formé uniquement d'un SR-P sans zone active, résonne à une ou plusieurs longueurs d'onde accordables et module l'émission lumineuse de la première. On a deux courants de commande, un pour chaque cavité.
En variante, la première cavité est une cavité à résonance accordable et la deuxième est une cavité simple, sans SR-P ni zone active qui résonne à une ou plusieurs longueurs d'onde fixes. L'émission de lumière de la première cavité peut alors être commandée pour se trouver soit à la même longueur d'onde que la résonance de la deuxième cavité (état passant ), soit à une autre longueur d'onde (état nonpassant ). Dans les deux cas décrits, on un système simple de modulation de lumière, susceptible de fonctionner au-delà de 1 GHz.
On donne maintenant des exemples plus spécifiques de l'invention.
Une caractéristique très intéressante de l'invention est qu'elle peut être mise en #uvre avec n'importe quelle famille de semiconducteurs. On choisit
cette famille en fonction de l'application visée, de la longueur d'onde désirée et de la technique de fabrication disponible.
sur des gels de polyacrylamide à 6%. Dans les expériences de compétition, la quantité indiquée d'oligonucléotides non marqués est ajoutée au mixte réactionnel 10 min avant l'addition de protéines. Pour examiner les propriétés de liaison de l'ICBP90 à la boite ICB2, le même protocole est utilisé à la différence que l'oligonucléotide marqué contient seulement une copie de la séquence CCAAT telle que décrite ci-dessous: ICB2:5'-ATAAAGGCAAGCTACGATTGGTTCTTCTGGACGGAGAC-3' 5'-GTCTCCGTCCAGAAGAACCAATCGTAGCTTGCCTTTTAT-3' La spécificité de liaison est étudiée en utilisant un nucléotide non marqué contenant une boite GC du promoteur du gène de la topoisomérase II[alpha] humaine : 5'-GAATTCGAGGGTAAAGGGGCGGGGTTGAGGCAGATGCCA-3' 5'-TGGCATCTGCCTCAACCCCGCCCCTTTACCCTCGAATTC-3'.
Ces expériences de retard de migration sur gel d'acrylamide, nous ont permis de mettre en évidence que la nouvelle protéine humaine de 59 kDa est capable de lier une séquence d'ADN de type ICB, et ce de manière spécifique. Nous avons appelé cette protéine ICBP-59 (pour Inverted CCAAT Box Binding Protein of 59 kDa).
EXEMPLE 2 : CARACTERISATION DE LA PROTEINE ICBP90 2. 1. Synthèse d'anticorps Les anticorps monoclonaux de souris sont synthétisés dans notre Laboratoire par injection de la protéine ICBP-59 par les méthodes traditionnelles (Brou et al., 1993) ; la protéine a été au préalable purifiée par un système de fusion GST. Deux anticorps monoclonaux de 1RC1C- 10 et 1RC1H-12 ont été sélectionnés pour leur performance à détecter la protéine endogène correspondant à la protéine ICBP-59 à la fois dans des expériences de Western blotting et dans des expériences d'immunocytochimie. Avant utilisation, les anticorps sont purifiés sur colonne DEAE-cellulose (DE52, Whatmann) à partir des liquides d'ascites.
2. 2. Mise en évidence de la protéine endogène par Western Blotting Afin de détecter la protéine endogène correspondant à ICBP-59, nous avons dans un premier temps utilisé 1RC1C-10 en Western blot (0,4 g/ml d'anticorps monoclonal 1RC1C-10) sur des extraits nucléaires de.cellules HeLa en situation de prolifération et de confluence (Figure 1).
Les cellules COS-1 et HeLa sont cultivées tel que décrit précédemment (Brou et al., 1993 ; Gaub et al., 1998 ; Rochette-Egly et al., 1997). Les cellules MOLT-4 sont cultivées dans de l'air à 100% dans du RPMI -supplémenté par 10% de sérum de veau fetal. Les fibroblastes pulmonaires humains en culture primaire sont préparés et cultivés dans du DMEM/F12 tel que décrit précédemment (Kassel et al., 1998).
Des extraits nucléaires de cellules Jurkat ont été achetés chez Sigma alors que ceux de MOLT-4 et HL60 ont été préparés tel que décrit auparavant (Lavie et al., 1999). Les cellules HeLa en phase de croissance et les fibroblastes pulmonaires humains sont obtenus par déplétion de la culture en sérum pendant 30 h suivi par la réintroduction pendant 16 heures par 10% de sérum de veau fétal (v/v).
La prolifération est arrêtée lorsque la confluence atteint 60 à 70%. Les cellules arrêtées à confluence (confluence de 100%) sont obtenues de manière concomitante en omettant l'étape de déplétion en sérum. Pour ces deux types cellulaires, des lysats cellulaires bruts sont préparés en récoltant les cellules dans du PBS (phosphate buffer saline) suivi d'une étape de sonication. Pour les expériences d'immunotransfert des lysats de cellules totales et des extraits nucléaires sont chargés sur des gels de polyacrylamide SDS à 8% pour réaliser une électrophorèse en une dimension. Les protéines sont transférées sur des membranes de nitrocellulose bloquées avec un réactif de blocage 10% (Roche Molecular Biochemicals, Mannheim, Germany) et incubées avec l'anticorps monoclonal purifié (1RC1C-10) à la concentration de 0,5 g/ml. Un anticorps anti-souris de mouton couplé à la phosphatase alcaline (fragments Fab, Roche Molecular Biochemicals) est utilisé à une
dilution de 1/2 500. Des signaux sont détectés en utilisant le chlorure de 4-nitro blue tetrazolium/5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate comme substrat.
Ces expériences montrent que la protéine endogène présente un poids moléculaire apparent d'environ 97 kDa. En outre, on observe que les formes de la protéine varie en fonction de la nature tumorale ou non-tumorale des cellules ainsi que de l'état de confluence ou de prolifération des cellules. En effet, dans les pistes correspondant aux extraits de cellules HeLa, on observe une bande majeure à 97 kDa ; pour les cellules heLa en prolifération, des bandes supplémentaires de tailles inférieures à 97 kDa apparaissent (piste 2). Dans les fibroblastes pulmonaires humains à confluence, la protéine endogène n'est pas exprimée (piste 3) et apparaît lorsque les cellules se mettent à proliférer (piste 4). Ces observations suggèrent que la protéine endogène ICBP90 est un marqueur de prolifération cellulaire pour des cellules normales (fibroblastes) tandis que pour les cellules tumorales elle serait un marqueur quelque soit le stade cellulaire.
L'utilisation de l'anticorps monoclonal dans des expériences d'immunoprécipitation sur des extraits de protéines nucléaires, suivies d'un Western blot, conduit de la même manière à la mise en évidence d'une protéine de 97 kDa (Figure 2).
Les résultats obtenus en Western blot, aussi bien pour les extraits de protéines nucléaires que pour les immunoprécipitations, montrent que la protéine de 59 kDa isolée à l'aide du système simple hybride ne constitue qu'un fragment de la protéine endogène humaine correspondante, en l'occurrence le fragment C-terminal à partir du résidu D263. II nous a donc fallu entreprendre un nouveau criblage de banque d'ADNc.
2. 3. Analyse en Dot Blot d'ARN de multiples tissus humains Afin de choisir une banque nous donnant le plus de chance possible d'isoler la protéine complète, nous avons voulu identifier un
tissu humain exprimant l'ARN messager (ARNm) correspondant en quantité importante. A l'aide d'une sonde d'ADNc recouvrant une partie de la séquence de ICBP59 et marquée au 32P, nous avons testé l'expression de l'ARNm d'intérêt dans 50 tissus humains différents sur un dot blot d'ARN. Brièvement, une sonde longue de 678 paires de bases correspondant à la séquence en acides aminés 269 à 500 de ICBP90 a été synthétisée par PCR en utilisant de la Taq polymérase (Sigma, St Louis, MO, USA). La sonde marquée par random priming en utilisant du dCTP-a 32P est purifiée sur colonnes Sephadex G50 (Pharmacia, Uppsala, Suède).
Un dot blot d'ARN de multiples organes contenant de l'ARN poly(A)+ de 50 tissus humains différents est hybridé 20 heures dans des conditions de forte stringence dans un milieu ExpressHyb (Clontech) à 68 C avec une sonde marquée au 32P. Des lavages à haute stringence sont réalisés dans du 0,1 x SSC, 0,1% SDS à 68 C (De Vries et al., 1996).
Les réultats obtenus (figure 5) montrent que les tissus exprimant le plus fortement l'ARNm de la protéine ICBP-59 sont le thymus adulte et f#tal, ainsi que la moelle osseuse adulte et le foie foetal. Pour isoler la protéine entière, notre choix s'est donc porté sur une banque d'ADNc de thymus adulte.
2. 4. Criblage de la banque et clonage de ICBP90 Le criblage de la banque nous a permis d'obtenir plusieurs clones d'environ 4000 paires de bases (pb) comportant un cadre de lecture ouvert de 2379 pb (Fig. 6). Cette séquence code pour une protéine de 793 acides aminés (Fig. 7) dont le poids moléculaire théorique (calculé à partir de la séquence traduite) est de 89,758 kDa. Nous avons appelé cette protéine ICBP90 (pour Inverted CCAAT Box Binding Protein of 90 kDa) par analogie avec l'appellation utilisée pour la protéine initiale de 59 kDa.
4) Calculer le point P= h1G+ h2W. Si P=O, la signature n'est pas valide.
7) Obtenir le message m'1 à partir de f1 et vérifier que f1=R (m' 1) . Si oui, obtenir ml en concaténant au message m'1 les t octets de poids faible de l'entier i. La signature du message m est alors valide. Sinon, la signature n'est pas valide.
I1 est possible pour les sixièmes et septièmes procédés de diminuer les temps de calcul en effectuant des prétraitements. Ces prétraitements consistent à mettre en mémoire dans une table des couples d'entiers (u,i) tels que définis précédemment de telle sorte que ces entiers soient accessibles par la valeur de i modulo 28t.
Le huitième procédé de l'invention consiste en une modification du schéma de signature de Nyberg et Rueppel consistant à enlever t octets à l'entier c précédemment défini, t étant une variable entière. Le procédé de génération de signature comporte les 2 étapes suivantes: 1) Générer la signature du message m en utilisant le schéma de signature de Nyberg- Rueppel pour obtenir le couple d'entiers (c,d). 2) Calculer c', quotient entier de la division de l'entier c par 28t. La signature est le couple d'entiers (c',d).
Le procédé de vérification de signature prend en entrée le couple d'entiers (c',d) et comporte les 5 étapes suivantes: 1) Si d n'appartient pas à l'intervalle [0,r-1], la signature n'est pas valide.
2) Calculer le point P=d.G+c'* 281.W 3) Pour j allant de 0 à 28t-1, exécuter les étapes suivantes: 3) a) Si P=O, exécuter l'étape 3) d) 3)b) Associer au point P l'entier i et calculer l'entier f=c-i modulo r.
3)d) Remplacer P par P+W.
5) Si l'entier c=c'*28t+j n'appartient pas à l'intervalle [1,r-1], la signature n'est pas valide, sinon la signature est valide et le procédé est terminé.
Le neuvième procédé de l'invention est une modification du schéma de signature avec reconstitution partielle du message défini précédemment, qui consiste à enlever t octets de l'entier c défini précédemment, t étant une variable entière. Le procédé de génération de signature comprend les 2 étapes suivantes: 1) Générer la signature du message m, constitué de deux messages ml et m2, en utilisant le schéma de signature avec reconstitution partielle du message pour obtenir le couple d'entiers (c,d). 2) Calculer c', quotient entier de la division de l'entier c par 28t. La signature est le couple d'entiers (c',d). Le procédé de vérification de signature prend en entrée un couple d'entiers (c' d) et un message m2 et comprend les 8 étapes suivantes: 1) Si d n'appartient pas à l'intervalle [1,r-1], la signature n'est pas valide.
2) Calculer f2=H(m2) , où H est une fonction de hachage.
Les semiconducteurs utilisés peuvent être des semiconducteurs III-V ou II-VI avec des structures cristallines de type zincblende ou wurtzite. Les hétérostructures de type zincblende doivent être réalisées sur des substrats ayant des indices cristallographiques (n, l,m) élevés, avec nxlxmO, de manière à avoir des effets piézo-électriques. Pour une hétérostructure de type wurtzite, il suffit de former celle-ci suivant l'axe c du réseau cristallin de cette hétérostructure.
On peut par exemple utiliser : (i) des hétérostructures InGaAs/InGaAsP sur des substrats en InP, pour des dispositifs fonctionnant aux longueurs d'onde utilisées dans les télécommunications (1,3 um et 1,5 m), et compatibles avec la technologie relative à InP (ii) des hétérostructures GaInAsN/GaInAs sur des substrats en GaAs, comme alternative aux hétérostructures précédentes, pour des composants fonctionnant entre 1,3 m et 1,5 m (iii) des hétérostructures InGaAs/GaAlAs sur des substrats en GaAs, pour des composants fonctionnant entre 0,8 m et 1 m (iv) des hétérostructures du genre wurtzite InGaN/AlGaN sur des substrats en saphir, pour des composants fonctionnant entre 0,3 et 0,5 m (v) des hétérostructures CdHgTe/CdTe sur des substrats en CdZnTe, pour des composants
fonctionnant à des longueurs d'onde supérieures à 1,5 m.
Dans l'invention, il est aussi possible d'exploiter les effets de polarisation spontanée, par exemple ceux qui se produisent dans les systèmes à base de InGaN/GaN sur saphir, de manière à créer des champs électriques dans les couches de la structure SR-P. Le sens et l'amplitude des champs électriques peuvent être contrôlés par exemple en changeant les compositions des alliages à partir desquels les couches sont formées (voir le document [6]).
On considère maintenant un exemple d'hétérostructure sur un substrat en InP fonctionnant à la longueur d'onde de 1,55 m.
Il s'agit d'un exemple permettant d'obtenir un VCSEL accordable en longueur d'onde. La cavité résonante de ce dernier est épitaxiée de manière cohérente sur un substrat fait de InP (111). Les miroirs du VCSEL sont des réflecteurs de Bragg répartis, par exemple en GaAs/GaAlAs, et sont déposés de part et d'autre de la cavité par fusion de substrat ( wafer fusion ). A ce sujet, on se reportera au document [14].
Le SR-P du VCSEL est constitué de deux couches ayant la même bande interdite et des paramètres de maille tels que les champs piézo-électriques respectifs de ces couches aient la même intensité mais des sens opposés. Si l'on suppose que le coefficient piézo-électrique est constant pour les alliages constitutifs des couches du SR-P, de tels champs
peuvent être obtenus grâce à des contraintes de même valeur absolue mais de signes opposés.
En supposant que l'état de contrainte est défini par rapport au paramètre de maille du substrat en InP, on donne dans le tableau qui suit un exemple pour lequel cette condition est satisfaite.