INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
cgttccaacc acgtcttcaa agcaagtgga ttgatgtgat atctccactg acgtaaggga 5820 tgacgcacaa tcccactatc cttcgcaaga cccttcctct atataaggaa gttcatttca 5880 tttggagagg acacgctgaa atcaccagtc tctctctaca aatcggatcc atgagcccag 5940 aacgacgccc ggccgacatc cgccgtgcca ccgaggcgga catgccggcg gtctgcacca 6000 tcgtcaacca ctacatcgag acaagcacgg tcaacttccg taccgagccg caggaaccgc 6060 aggagtggac ggacgacctc gtccgtctgc gggagcgcta tccctggctc gtcgccgagg 6120 tggacggcga ggtcgccggc atcgcctacg cgggcccctg gaaggcacgc aacgcctacg 6180 actggacggc cgagtcgacc gtgtacgtct ccccccgcca ccagcggacg ggactgggct 6240 ccacgctcta cacccacctg ctgaagtccc tggaggcaca gggcttcaag agcgtggtcg 6300 ctgtcatcgg gctgcccaac gacccgagcg tgcgcatgca cgaggcgctc ggatatgccc 6360 cccgcggcat gctgcgggcg gccggcttca agcacgggaa ctggcatgac gtgggtttct 6420 ggcagctgga cttcagcctg ccggtaccgc cccgtccggt cctgcccgtc accgagatct 6480 gatctcacgc gtctaggatc cgatggatcc cccgatgagc taagctagct atatcatcaa 6540 tttatgtatt acacataata tcgcactcag tctttcatct acggcaatgt accagctgat 6600 ataatcagtt attgaaatat ttctgaattt aaacttgcat caataaattt atgtttttgc 6660 ttggactata atacctgact tgttatttta tcaataaata tttaaactat atttctttca 6720 agatgggaat taacatctac aaattgcctt ttcttatcga ccatgtacat caagcttatc 6780 gataccgtcg gctattggta ataggacact gggattcgtc ttggacaact ttccttctca 6840 tctaagcgta gacaaccctc aactggaaac gggccggact ccagggcgtg tgccaggtgc 6900 ccacggaata gttttggcca gacccttgaa aatccgattc agtacaatcg attgccctca 6960 tttttacgtt ggcatatatc ctgccaaaca gccaacaacg cgcgtgcggt gaataggaaa 7020 gcgtttgagt tgcttgctca tatcgtgacg gttgacagca caggttgacc gcttgatgat 7080 tcgtacgagc cgccaaacat tggctgtcgt aatgatatac catgtcagaa cagcaatccg 7140 atggggcgga aagcattatc ttaatgcaca cggaaatggc gcgtcggtgg gtggaataca 7200 ccgacataga ggccgtaagt tctgcatggt catcgtcgga aaggtggcag caggcgcacg 7260 gctgtggcct cttgctcttt cagcgtgaaa tgcgtgttga aagaataatc gaagagagcg 7320 tccgctcgac accttcaatt atgccgattt gatcgatgaa ctgatcgagc tctgaaatcg 7380 aaggggcttc gataatcgca atcaaatcaa aagtgccact cacagaatga agagcgataa 7440 cggccgtgac cttcccaagg gaggccgtca cctgtgaaag cgccttcgta atggtgatca 7500 gaatatgggc tcgaaccaag ctcgagacct cgaggggggg cccggtaccc aattcgccct 7560 atagtgagtc gtattacaat tcactggccg tcgttttac 7599
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES: F. M. AUSUBEL, R. BRENT, R.E. KINGSTON, D. D. MOORE, J.G.
SEIDMAN, J. A. SMITH, K. STRUHL ; Current Protocols in Molecular Biology published by Wiley Interscience.
# BASTOLA, D.R., PETHE, V. V. and WINICOV, 1. (1998). Alfin 1 , a novel zinc finger protein in alfalfa roots that binds to promoter elements in the sait inducible MSPRP2 gène, Plant. Mol. Biol. 38, 1123-1135).
Les intégrines sont des glycoprotéines de surface constituées de deux sous-unités a et P. Ces intégrines sont spécifiques en fonction du type cellulaire qui les expriment. Les cellules en culture expriment notamment les intégrines a23,, a.33, et a5(3,.
Les intégrines a23,, exprimées par les kératinocytes et les fibroblastes représentent des récepteurs cellulaires pour les collagènes de type IV ainsi que la fibronectine. Ces intégrines jouent un rôle important dans le maintien de l'organisation spatiale de la jonction dermo-épidermique et dans ses phénomènes de réparation/cicatrisation.
De la qualité des ancrages et donc des liaisons à la jonction dermo- épidermique dépend l'état de surface de la peau.
En effet, si la jonction dermo-épidermique est forte, avec des plis assurant une excellente cohésion entre derme et épiderme, la peau est faiblement ridée, tandis que tout relâchement dû à une synthèse en plus faible quantité des molécules d'ancrage provoque un aplanissement de l'interface avec une perte de fermeté et de régularité de la surface de la peau.
Aussi la présente invention a pour but de proposer un principe actif qui permet de lutter contre les effets du vieillissement cutané par une action en profondeur, en stimulant la synthèse des molécules d'ancrage telles que les intégrines, la fibronectine et les collagènes IV et VII, ce qui favorise le maintien de la cohésion dermo-épidermique et la réparation tissulaire. De ce fait, la profondeur des rides diminue et le microrelief de la peau est lissé. L'invention a aussi pour objet le procédé d'extraction ainsi que les traitements cosmétiques qui consiste à appliquer ce principe actif dans une composition cosmétique.
Les différents tableaux de résultats et les vues au microscope sont indiqués dans les figures qui représentent - figure 1, évaluation de l'expression des ARN messagers des molécules d'ancrage par rapport à un témoin, - figure 2, évaluation de l'expression des intégrines, - figure 3, effets du principe actif sur la migration des fibroblastes - figures 4A,4B et 4C, vues au microscope des effets du principe actif sur la migration des fibroblastes - figure 5, résultats concernant la complexité du microrelief - figure 6, résultats concernant la complexité de la surface, - figure 7, résultats de l'évolution de la profondeur des rides, et - figure 8, résultats de l'évolution du volume des rides.
Le principe actif selon la présente invention est maintenant décrit en commençant par son procédé d'extraction et ses caractéristiques, en montrant les effets obtenus sur les différents mécanismes intervenant à la jonction dermo-épidermique.
Le procédé d'extraction du principe actif selon la présente invention consiste à utiliser de la levure du type Saccharomyces Cerevisiae Ce procédé comprend les étapes suivantes - solubilisation des levures en milieu aqueux légèrement basique à raison d'au moins 20% avec éventuellement l'ajout d'un alcool afin de favoriser la solubilisation des levures, - hydrolyse des protéines en milieu basique, - agitation de 8 à 52 heures, - première filtration afin de séparer les phases soluble et insoluble, - lavage contre eau afin de purifier la fraction active, - concentrations et filtrations successives afin d'augmenter la fraction active, et - filtration stérilisante. Le principe actif ainsi obtenu est caractérisé par les paramètres analytiques suivants - Taux de matière sèche : compris entre 10 g/1 et 200 g/1 plus particulièrement entre 10 et 100 g/1, principalement entre 20 et 50 g/1. Ce taux est obtenu par passage à l'étuve à 105 C jusqu'à obtention d'un poids constant - Sucres totaux : compris entre 10 g/1 et 100 g/1, plus particulièrement entre 10 et 70 g/1, principalement entre 20 et 50 g/1.
La détermination des sucres totaux est réalisée selon la méthode de DUBOIS. On ajoute au principe actif 400 NI de phénol à 5% et 2000 NI d'acide sulfurique.
La densité optique de la solution est ensuite lue au spectrophotomètre à 490 nm. On effectue le même expérience avec une gamme étalon allant de 25 à 100 Ng/ml d'une solution mannose, glucose et galactose - pH compris entre 4 et 10, plus particulièrement 6 à 7. Ce paramètre est mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante.
1 / EVALUATION DE L'EXPRESSION DES ARN MESSAGERS DES MOLECULES D'ANCRAGE L'action du principe actif obtenu est étudiée sur des cultures de fibroblastes humains.
On incube ces fibroblastes pendant 72 heures à 37 C dans une atmosphère contenant 5% de C02, ceci en présence du produit.
A la fin de l'incubation, les cellules sont récupérées et les ARN totaux sont extraits. Les ARN ont été reverses-transcripts et les ADN complémentaires obtenus ont été analysés par la technique polymérase chaîne.
Parallèlement, les ARNm de la 0-actine sont également analysés dans les mêmes conditions expérimentales à titre de témoin. On mesure l'intensité des bandes des amplicons sur des gels d'agarose, à l'aide d'un analyseur d'images.
Les résultats sont exprimés en pourcentage d'expression de l'ARN étudié pour chaque essai par rapport au témoin selon le ratio suivant %ARNm/témoin = (R.E./R.T.) x 100 R.E. = Intensité de la bande ARNm de la protéine testée / Intensité de la bande ARNm de la (3-actine R.T. = Intensité de la bande ARNm de la protéine témoin / Intensité de la bande ARNm de la P-actine On obtient les résultats récapitulés dans le tableau de la figure 1, obtenus avec 2% de principe actif. On constate une augmentation de l'expression des ARNm des collagènes IV et VII et de la fibronectine dans les cultures de fibroblastes humains.
On constate que le principe actif induit la sécrétion de protéines d'ancrage de la jonction dermo-épidermique, notamment les collagènes IV et VII ainsi que la fibronectine.
Un autre bus d'adresses et de données 40 relie l'unité de calcul 12 aux éléments qui viennent d'être décrits.
Par ailleurs, comme indiqué précédemment, l'ordinateur 42 de la figure 3b comporte la même structure que celle de l'ordinateur 11 de la figure 3a.
Ainsi, l'ordinateur 42 comporte une unité de calcul CPU 44, un moyen de stockage permanent 46 (ROM) qui contient notamment les différentes instructions des algorithmes représentés aux figures 5a, 5b et 7 à 10 et un moyen de stockage temporaire 48 (RAM) qui contient plusieurs registres dénommés "C "Cref"# "C mes", "Crefmax" et "CorrectCrefmax" et dont la refinite fonction sera décrite ultérieurement.
Les trois éléments 44, 46 et 48 précités communiquent au moyen de bus d'adresses et de données respectifs notés 50, 52, 54.
L'ordinateur 42 comporte également un écran 56, un clavier 58, un disque dur 60, un lecteur de disquettes 62 apte à recevoir une disquette 64, une carte d'entrée-sortie 66 connectée à un microphone 68 et une interface de communication 70 permettant de relier ledit ordinateur au réseau 10.
L'interface réseau 70 peut recevoir, par exemple, par l'intermédiaire du réseau les instructions d'un programme informatique permettant la mise en oeuvre de tout ou partie du procédé selon l'invention.
De telles instructions peuvent également être contenues dans le lecteur de disquettes dans un lecteur de CD-ROM non représenté.
Un autre bus d'adresses et de données 72 relie l'unité de calcul 44 aux éléments qui viennent d'être décrits. On va maintenant s'intéresser à la description du procédé de contrôle de la synchronisation entre les noeuds Ni-1 et Ni selon un mode de réalisation de l'invention.
Dans ce mode de réalisation de l'invention, on considère que le noeud "racine" Ni-1 constitue une référence pour le noeud Ni.
II convient toutefois de noter que la description qui va suivre n'est nullement limitée à ce mode de réalisation et que la mise en ceuvre d'un autre mode de réalisation dans lequel le noeud Ni constitue une référence pour le noeud Ni-1 est à la portée de l'homme de l'art.
Les registres dénommés "CREFINIT ", "CREF", "CMES", "CREFMAX" et "CorrectCREFMAx" contiennent des valeurs comptées en nombre d'impulsions d'horloge. Dans la suite de l'exposé, les notations suivantes seront utilisées - On notera CREF le registre contenant le nombre d'impulsions d'horloge de référence alors que CREF désigne le registre contenant cette valeur. Dans le mode de réalisation choisi la valeur CREF est égale à la valeur C;_ qui désigne le nombre d'impulsions d'horloge du noeud Ni-1 .
- CMEs désigne le nombre d'impulsions d'horloge de mesure contenues dans le registre "CMES". La valeur CMEs est égale à la valeur C; qui désigne le nombre d'impulsions d'horloge du noeud N; dans le mode de réalisation décrit.
- La valeur CREFMAX contenue dans le registre "CREFMAx" représente la valeur maximale qui force le registre "CREF" à revenir à la valeur 0 .
- La valeur CINIT (;) représente la valeur d'initialisation qui est calculée en fonction de la valeur C;_, et des différentes fréquences d'horloge F; et F;_, des horloges internes respectives des naeuds N; et Ni-1.
La valeur CINIT(;_,)est mémorisée dans le registre "C@efnit' II convient de noter que cette valeur correspond à la dérive entre les horloges des noeuds Ni et Ni-1 à l'origine.
- La valeur CorrectCREFMAX mémorisée dans le registre "CorrectCREFMAx" est utilisée pour savoir si une correction (étape de synchronisation) est en cours au niveau d'un noeud. La valeur NB_ITER_INIT représente le nombre d'itérations utilisées pour obtenir une moyenne de la valeur CINIT(i).
Les exemples 10 et 11 montrent que le réacteur selon l'invention permet d'obtenir des taux de conversion et des concentrations en H202 élevés lorsqu'on utilise un mélange oxygène-azote (10 % à 20 lo) au lieu d'oxygène pur.
L'utilisation d'air (exemple 12 et 13) donne encore des résultats intéressants.
Les exemples 14 et 15 montrent également avec un autre rapport H2/02 que le passage de 2 turbines à 3 turbines permet d'augmenter le taux de conversion en hydrogène et de diminuer la concentration en H2 dans la phase gazeuse continue du réacteur.
CATALYSEUR METALLIQUE SUPPORTE, SA PREPARATION ET SES APPLICATIONS DANS LA FABRICATION DIRECTE DU PEROXYDE D'HYDROGENE La présente invention concerne un catalyseur métallique supporté, apte à la fabrication directe du peroxyde d'hydrogène à partir d'hydrogène et d'oxygène. Elle a également pour objet le procédé de fabrication dudit catalyseur ainsi que le procédé de fabrication du peroxyde d'hydrogène mettant en oeuvre ledit catalyseur.
La faible productivité du procédé de fabrication catalytique du peroxyde d'hydrogène directement à partir d'hydrogène et d'oxygène est un frein à son développement. Des tentatives pour améliorer cette productivité sont nombreuses. On peut citer notamment US 3 336 112, US 3 361 533, US 4 007 526, US 4 009 252, US 4 279 883 et US 4 335 092. Ces études sont principalement basées sur le concept général, à savoir la stabilisation du peroxyde d'hydrogène à l'aide d'agent séquestrant ou d'inhibiteur de décomposition.
D'autres voies pour améliorer la productivité en peroxyde d'hydrogène du procédé direct ont également été explorées. Ainsi, le brevet US 4 379 778 divulgue un procédé de fabrication directe du peroxyde d'hydrogène à partir d'hydrogène et d'oxygène dans un milieu aqueux comprenant des inhibiteurs de décomposition, en présence d'un catalyseur palladium-charbon préalablement traité avec un aldéhyde ou une cétone et, de préférence, prétraité également avec une solution diluée d'acide chlorhydrique.
L'emploi d'un bromure dans le milieu aqueux réactionnel du procédé direct de fabrication de peroxyde d'hydrogène est décrit dans le brevet US 4 772 458.
Enfin, les brevets US 5 128 114 et US 5 352 645 décrivent une méthode de préparation des catalyseurs à base de palladium ou platine- palladium supporté sur des microsphères uniformes, non-agglomérées et poreuses de silice, résistant à l'attrition grâce à l'utilisation de citrate d'ammonium ou d'urée comme additif et aptes à la fabrication directe du peroxyde d'hydrogène. L'exemple 12 du brevet US 5 128 114 décrit la préparation en deux étapes d'un catalyseur supporté contenant environ 0,05 % en poids de platine et 1 % en poids de palladium sur des microsphères poreuses de silice. Le support est d'abord préparé par atomisation d'un mélange de silice Ludox AS 40 et d'urée, puis calciné à 650 C sous azote. Ce support est ensuite ajouté à une solution de Pt et Pd, préalablement préparée par dissolution de H2PtCIs et PdC12 dans l'eau, portée à une température comprise entre 60 et 70 C et acidifiée par de l'HCI concentré jusqu'à l'obtention d'un pH d'environ 1,2. Le mélange résultant est agité, puis atomisé et enfin, la poudre obtenue est réduite sous courant d'hydrogène à 300 C.
La préparation du catalyseur supporté suivant l'exemple 15 du brevet US 5 352 645 est similaire à celle décrite à l'exemple 12 du brevet US 5 128 114 avec toutefois une différence. En effet, le mélange résultant, au lieu d'être atomisé, est séché sous vide à 100'C pendant toute une nuit, puis le solide séché est réduit sous courant d'hydrogène à 100 C. Des cristallites métalliques de l'ordre de 30 à 50 Â ont ainsi été obtenues.
La Société déposante a mis au point un catalyseur supporté à base d'au moins un métal choisi dans le groupe M formé de palladium, platine, ruthénium, rhodium, d'iridium, d'osmium, d'holmium et d'or et, en particulier, un catalyseur bimétallique supporté. Le catalyseur bimétallique supporté est en général constitué d'un métal du groupe M majoritaire et d'un métal du groupe M minoritaire. Le métal majoritaire représente environ 0,1 à 10 % en poids du catalyseur et de préférence entre 0,5 à 1 en poids. Le métal minoritaire représente environ 0,001 à 0,1 % en poids du catalyseur et de préférence entre 0,01 et 0,05 %.
Comme métal majoritaire, le palladium et l'or sont avantageusement choisis.
Comme métal minoritaire, le platine et l'holmium sont avantageusement choisis.
Le catalyseur bimétallique supporté particulièrement préféré est constitué de palladium comme métal majoritaire et du platine comme métal minoritaire. La présente invention vise également un catalyseur plurimétallique supporté constitué d'un métal du groupe M majoritaire et de plusieurs métaux du groupe M minoritaires. Le catalyseur plurimétallique supporté préféré comprend le palladium, comme métal majoritaire, le platine et au moins un métal du groupe M, comme métaux minoritaires.
La teneur en métal majoritaire dans le catalyseur plurimétallique supporté est pratiquement identique à celle du catalyseur bimétallique et, chaque métal minoritaire peut être présent dans le catalyseur en quantité représentant environ 0,001 à 0,1 % en poids du catalyseur et de préférence entre environ 0,01 et 0,05 %.
La présente invention fourni, en outre, un catalyseur monométallique supporté avec, de préférence, le platine ou l'or comme constituant métallique du groupe M. La teneur en constituant métallique est en général compris entre 0,1 et 10 % en poids du catalyseur et de préférence compris entre 0,5 et 1 % en poids.
Le catalyseur métallique supporté selon l'invention est, de préférence, caractérisé par des amas de métal ou métaux cristallisé(s) de taille comprise entre 0,1 et 20 pm et, de préférence, comprise entre 1 et 10 ,um.
Les conditions convenables d'hybridation peuvent par exemple être adaptées selon l'enseignement contenu dans l'ouvrage de Hames et Higgins (1985, Nucleic Acid Hybridization : Apractical approach , Hames and Higgins Ed., IRL Press, Oxford), ou encore dans l'ouvrage de Sambrook et al. (1989) précité.
L'invention concerne également un acide nucléique comprenant un polynucléotide promoteur tel que défini ci-avant, caractérisé en ce qu'il comprend en outre une séquence nucléotidique d'intérêt fonctionnellement associée au promoteur végétal et dont l'expression est recherchée dans les cellules de la racine d'une plante.
Un acide nucléique répondant à une telle définition est par exemple l'acide nucléique de séquence nucléotidique SEQ ID N 2 comprenant la séquence du gène gus placé sous le contrôle du promoteur de séquence nucléotidique SEQ ID N 1.
De manière avantageuse, un tel acide nucléique comprendra une séquence nucléotidique d'intérêt choisie parmi les séquences codantes de gène interagissant avec des parasites ou des pathogènes tels que les nématodes ou les champignons, comme par exemple les séquences codantes de glucanase, ladite séquence nucléotidique d'intérêt étant placée sous le contrôle d'un polynucléotide promoteur selon l'invention.
Il peut également s'agir de séquences d'endochitinases telles que celles décrites dans le brevet européen n EP 493,581 ou encore de séquences de gènes agissant sur la teneur en sucre de la plante.
A titre d'exemple, les séquences codantes de gènes d'intérêt assurant la protection d'une plante contre d'autres conditions de stress pourront être avantageusement placées sous le contrôle d'un polynucléotide promoteur selon l'invention.
Stress hydrique ou salin: # gène arsk1 (Hwang, I. et al. ; 1995); # CDNA pA9 (Winicov, I., Deutch S. E. 1994); # CDNA Alfin 1 (Bastola, DR étal. 1998).
D'autres séquences codantes pourraient être utilisées sous le contrôle du promoteur selon l'invention, pour agir sur la teneur en saccharose de la betterave à sucre : gèneBvSPS1 (Hesse H. et al., 1995), ou surexprimer un gène déjà exprimé physiologiquement comme les gènes de transporteurs de nitrate NRT1 ou NRT2 ( Crawford, N.M. et al. ,1998, Leah R et al , 1991) L'invention est en outre relative à des fragments nucléotidiques comprenant 10 à 2000 nucléotides consécutifs d'un acide nucléique selon l'invention, en particulier d'un acide nucléique possédant au moins 80% d'identité en nucléotide avec la séquence SEQ ID N 1 ou encore un acide nucléique hybridant, dans des conditions d'hybridation de forte stringence, avec la séquence nucléotidique SEQ ID N 1, ou d'un acide nucléique de séquence complémentaire.
De préférence, de tels fragments auront une longueur de 10,12, 15, 18 ou 20 à 25, 35, 40, 50, 70,80, 100, 200, 500, 1000,1500 ou 2000 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide promoteur selon l'invention ou consistant en des fragments d'une longueur de 12,15, 18,20, 25,35, 40, 50,70, 80, 100, 200, 500, 1000,1500 ou 2000 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide promoteur selon l'invention.
De tels fragments nucléotidiques pourront avantageusement être mis en oeuvre en tant que sondes ou amorces nucléotidiques aux fins de détection ou d'amplification de la totalité ou d'une partie d'une séquence à activité promoteur spécifique des racines de plantes selon l'invention.
Selon encore un autre aspect, l'invention concerne un vecteur recombinant de clonage et/ou d'expression comprenant un polynucléotide promoteur selon l'invention. Un tel vecteur recombinant comprendra avantageusement une séquence nucléotidique d'intérêt placée sous le contrôle dudit promoteur végétal.
Des vecteurs pouvant être utilisés aux fins de la présente invention sont notamment les suivants : # vecteur pBIN19 (Bevan et al., 1984, Nucleic Acids Research, vol.
12 : 8711-8721, commercialisé par la Société CLONTECH , Palo Alto, Californie, USA); # vecteur 101 (Jefferson , 1987, Plant Molecular Biology Reporter, vol.5: 387-405, commercialisé par la Société CLONTECH); # vecteur pB1221 (Jefferson, 1987, Plant Molecular Biology Reporter, vol.5: 387-405, commercialisé par la Société CLONTECH); # vecteur pBI121 (Jefferson, 1987, Plant Molecular Biology Reporter, vol.5: 387-405, commercialisé par la Société CLONTECH).
# vecteur pEGFP (Cormack, B.P. et al. 1996 ; Yang T.T. et al., 1996), commercialisé par la Société Clontech.
Un vecteur recombinant préféré selon l'invention est par exemple le vecteur recombinant contenu dans la souche d'E. Coli déposée à la
Collection Nationale de Culture de Micro-Organismes (CNCM) le 25 Mai 1999 sous le n d'accès 1-2218.
L'expression spécifique du gène gus a été mise en évidence par des expériences de Northern blot sur des ARN totaux extraits de transformants homozygotes pour l'insertion.
Les résultats d'une expérience de Northern blot sont représentés à la figure 5.
Un transcrit d'environ 2 kb est mis en évidence sur les ARN de racine et n'est pas détectable sur les ARN des parties aériennes (figure 5) Les ARN totaux ont été extraits de racines et de parties aériennes de la lignée transformée selon la méthode décrite par Heim et al. (1993, Planta, vol. 191: 3.494, 3501).
En vue de mettre en évidence un éventuel transcrit endogène correspondant au promoteur, des gels de Northern ont été réalisés sur des
ARN totaux extraits de plantes non transformées, et hybridées avec le fragment génomique de 4,413 kb (SEQ ID N 3) qui contient environ 2,2 kb en aval du promoteur.
Aucun transcrit n'a été détecté avec cette sonde.
En outre, deux banques d'ADNc d'Arabidopsis thaliana indépendantes (une banque d'ADNc de racines et une banque d'ADNc de plantes entières) ont été criblées avec cette même sonde de 4,413 kb.
A nouveau, les résultats ont été négatifs et aucun ADNc correspondant au promoteur n'a été trouvé.
Enfin, aucune phase codante n'a pu être mise en évidence en aval du promoteur en utilisant les logiciels classiques de prédiction.
Logiciels Net Plant Gene et Net Gene 2 : S.M. Hebsgaard et al.(1996).
Brunak S. et al. (1991).
Logiciel Genscan : Burge, C. et al. (1997) ; Burge, C. B. (1998).
La séquence de 4,413 kb (SEQ ID N 3) est très riche en bases A et T (68% de A et de T) et comporte 67 motifs ATG, 20 motifs CAAT, 38 motifs TATA, 9 motifs TATAAT et 2 boîtes Cr.
Les résultats obtenus indiquent qu'aucun transcrit n'est décelable en aval du promoteur étudié. Il s'agirait donc d'un promoteur cryptique.
EXEMPLE 3 : en évidence de l'activité promotrice.
L'activité promotrice a été démontrée en réalisant une retransformation in planta d'Arabidopsis thaliana (écotype WS) par ce promoteur de 2,2 kb placé en amont du gène rapporteur gus.