INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
I1 s'agira d'un circuit intégré en silicium, éventuel lement "encapsulé" ; la puce électronique avec ses plots d'entrée et de sortie d'alimentation sera associez à une antenne filaire (de quelques mm en ultrason et de quelques cm en HF) Ce circuit sera conçu de manière à pouvoir intégrer un autre système (pile) Le besoin de disposer d'une pile sur mesure pour le capteur lui-même sera examiné ; en effet, le capteur, à l'instar d'une télévision, devra être en permanence en position "veille" pour pouvoir être activé lorsqu'on le souhaite ; cependant la possibilité d'avoir un capteur "passif" sera examinée car moins consommateur d'énergie.
4d'une mini pile au lithium (ou oxyde d'argent) fonctionnant sous 2 à 3 volts; on étudiera la possibilité de disposer d'une pile à électrolyte gélifié avec support en plastique souple afin de rendre le système moins pénalisant en terme de poids.
Cette pile devra être suffisament puissante pour assurer la fonction "veille" du capteur(puce correspondant à la fonction microphone en ultra son) et surtout la réémission non directionnelle d'une onde vers la télécommande Nota : pour des raisons de complexité technique, l'ides d'une "téléalimentation" sera a priori écartée (système où l'énergie est uniquement apportée par l'onde émise par la télécommande... ce qui supprimerait tout besoin pour la pastille de dis poser d'une source d'énergie, à savoir d'une pile).
5.2.2) Aspect physique de la pastille (forme) A titre d'exemple non limitatif, cette pastille aura un volume d'environ 100 mm3 la forme de cette pastille dépendra des objets à réfé rencer et ne peut être définitivement arrêtée ; mais d'une manière générale, s il s'agit de s clé, collier d'animaux, objets divers,la pastille sera collée avec un adhésif double face (style vignette auto) sur l'objet référencé lunettes : la pastille de forme allongée (barrette) -sera fixée sur l'extrémité aplatie d'une des bran ches ou au-dessus de cette extrémité ; l'utilisateur ne percevra absolument pas la pré sence de cette pastille qui sera donc derrière son oreille.
On étudiera deux autres moyens de fixation . fabrication d'une pastille en forme de coussinet (cf. boucle d'oreille) que l'on enfilera sur le bout d'une des branches.
Le flan 20 comprend une suite de quatre volets rectangulaires 2, 3, 4 et 5, un premier ensemble 8 de rabats, à savoir deux doubles rabats 10 et deux simples rabats 11' destinés à former le fond de la caisse, et un second ensemble 21 de rabats rectangulaires (en traits mixtes sur la figure) destiné à former le couvercle de la caisse, de façon connue en elle-même.
Dans ce mode de réalisation les rabats simples 11' sont de la même dimension transversale que les doubles volets ce qui permet par exemple d'avoir une triple épaisseur de carton sur la totalité du fond lorsque la caisse est formée, les doubles lignes de pliage 14 de deux doubles rabats opposés, une fois les seconds rabats repliés et collés sur les premiers rabats, étant jointives lors de la formation de la caisse, tout comme les bords libres d'extrémité 22 des rabats 11' après formation de la caisse.
Les bordures 17 des feuilles plastique s'étendent avantageusement sensiblement jusqu'aux doubles Lige de pliage.
Dans un mode de réalisation, les bordures comportent des ouvertures, par exemple .,enslblemellt en face du milieu du premier rabat, réparties longitudinalement le long dudit rabat, par exemple trois ouvertures oblongues ou circulaires, de 3 à 5 cm de diamètre.
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, la bordure ne va pas jusqu'à la double ligne de pliage 15, mais laisse au contraire un espace d'extrémité 17', sans film, ce qui permet le collage carton sur carton du second rabat sur le premier rabat après repliage de façon à insérer le film plastique dans le double rabat ainsi formé.
La figure 3 montre une variante 1' du flan de la figure 1, avec cinq volets rectangulaires, le volet d'extrémité 5 et la languette 7 étant remplacés par deux demi-volets 5' propres à se chevaucher lors de la formation de la caisse et comprenant deux demirabats 11".
Ici le bord d'extrémité 15' de chacun des rabats comprend, également et par exemple, au moins un tenon, par exemple deux tenons rectangulaires 23 de 1 à 2 cm de longueur et de 1 à 2 mm de largeur, agencés pour venir s'encliqueter dans des orifices de forme complémentaire 24 ménagés; riiveau de t: -emior ligne de pliage 9 sur une partie au. tii-, l'épaisseur du volet correspondant, en venant ainsi coincer le film dans lesdits orifices, pertiiet t atr ce fait un meilleur blocage.
La figure 4 montre une variante 1" du flan de @@ figure 1, dans laquelle les doubles rabats 25 sont deux parties, à savoir un premier rabat 26 solidaire du reste du flan par les lignes de pliage 9, et second rabat 27 désolidarisé et propre à être collé sur le premier rabat, en prenant la bordure 17 des feuilles 16 en sandwich entre lesdits rabats.
Les bords libres d'extrémité 28 des doubles rabats sont alors constitués par le bord situé du côté du flan sur la figure 2 et sont agencés pour venir sensiblement coïncider avec la ligne de pliage 9 du premier rabat.
On a représenté en perspective sur les figures 5, 6 et 7 la demi-caisse 30 et/ou la caisse 31 obtenue avec le flan 1 de la figure 1.
Plus précisément les figures 5, 6 et 7 montrent une demi-caisse 30 de conditionnement en carton ondulé comprenant une ceinture latérale 32 formée de quatre parois verticales correspondant aux volets 2, 3, 4 et 5.
La demi-caisse 30 comprend un fond horizontal 33 solidarisé avec la ceinture 32 via les premières lignes de pliage 9 et deux feuilles 16 en un matériau plastique thermo-rétractable destiné à l'emballage et au maintien en place d'une charge 34.
La deml-caisse 30 comprend les deux doubles rabats 10 formant la partie inférieure du fond.
Ils sont jointifs au niveau de leurs arêtes extérieures formés par les doubles lignes de pliage 14, leur bord d'extrémité libre 15 coïncidant avec les premières lignes de pliage 9.
Chaque double rabat enserre la bordure d' extrémité 17 de la feuille 16 correspondante avec laquelle il est collé des deux côtés, les feuilles s'échappant respectivement à partir des bords libres d'extrémité 15 sensiblement en contact avec la première ligne de pliage pour s'étendre depuis lesdits bords sur une longueur suffisante pour se recouvrir l'une l'autre en enveloppant totalement la charge et bloquer ladite charge par rétraction thermique du film contre le fond 33.
Les rabats 11 sont par ailleurs collés sur le dessus des doubles rabats 10 permettant encore de mieux bloquer les bordures 17 en sandwich à l'intérieur de chaque double rabat.
Le problème des réparations par pièces boulonnées est supprimé car les pièces peuvent être fixées aisément et directement sur le panneau.
Selon une variante de l'invention, on peut noter que dans certains cas, plutôt que de prévoir une poutre intermédiaire, les poutres circonférentielles peuvent s'écarter l'une de l'autre, c'est-à-dire être des poutres 57 curvilignes dans le plan déjà courbe du panneau, voir sur la figure 7. Ceci permet aussi de contourner certains obstacles dans certains cas simples.
En variante des poutres 57 curvilignes, les poutres peuvent aussi être chacune à section variable le long de leur axe longitudinal, c'est-à-dire, plus épaisse de part et d'autre à proximité du point de courbure. Ceci permet de répondre à des contraintes plus importantes en ces points.
Dans les différents cas évoqués ci-avant, la hauteur des poutres axiales est avantageusement mais non nécessairement supérieure à celle des poutres circonférentielles pour faciliter le drapage. Les dimensions définitives sont données par le calcul.
L'invention confère surtout l'avantage de dissocier le positionnement des ferrures et des organes accessoires mais néanmoins nécessaires que sont les portes, trappes et autres grilles.
Dans le cas des aéronefs, la localisation des ferrures est imposée par l'avionneur et un autre avantage qui résulte du procédé et du panneau selon l'invention avec le réseau de poutres, est la possibilité de respecter ces emplacements tout en autorisant aussi le positionnement des portes, trappes ou grilles là où il convient dans le panneau, sans que le positionnement des ferrures et les reprises des efforts correspondants limitent les choix. Cette possibilité rend la conception plus souple et permet dans certains cas de résoudre des problèmes de localisation qui ne trouvaient pas de solution.
On constate grâce aux poutres axiales que cela ne pose aucun problème et que les poutres circonférentielles n'ont pas à être alignées avec les ferrures.
De plus, même en cas de rupture d'une des ferrures, les efforts sont reportés et répartis grâce à la poutre axiale qui les supporte.
Ceci est l'essence même de la présente invention.
POUDRE COLORÉE OBTENUE PAR UN TRAITEMENT CHIMIQUE Domaine technique de l'invention La présente invention a pour objet de nouvelles poudres colorées formant un "système" de couleurs naturelles couvrant la totalité du spectre visible et offrant une énorme variété de teintes, de tons et de reflets depuis le blanc jusqu'au noir en passant par toutes les couleurs de l'arc-en-ciel.
Une liste détaillée de toutes les poudres transformées et de tous les matériaux colorés qui ont pu ainsi être préparés est donnée dans le Tableau ci-joint en annexe. Dans ce Tableau, les poudres transformées et les matériaux colorés sont numérotés 1 à 1 667 et sont classés en fonction de leurs couleurs et de leurs tonalités, selon l'ordre suivant : blanc (incluant blanc, ivoire et crème), lilas, violet, bleu, vert, jaune, orangé, rose, rouge, beige, brun, gris et noir.
IR (KBr) 1454; 1522; 1603; 1653; 1743; 2970; 3394.
Exemple 46 : 5-éthyl-9,10-difluoro-4,5-dihydro-5-hydroxy-12-(4-méthyl pipérazinométhyl-1H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b] quinoléine-3,15(4H,13H)-dione On applique à la 3,4-difluoroaniline la procédure décrite par les exemples 30.a., 30.b. et 30.c. pour donner du 2-chloro-4-chlorométhyl-6,7-difluoro-3-quinoléinecarboxylate d'éthyle qui est traité selon la procédure de l'exemple 30.d., puis réduit selon la méthode de l'exemple 30.e. en quinoléineméthanol correspondant. Ce dernier est couplé au composé (M) comme décrit dans l'étape il j. de l'exemple 11. Le produit de couplage résultant est cyclisé selon la procédure de l'étape 1 l.k. On obtient un solide jaune, p.f. > 250 C.
RMN-1H (CDCl3 + CD3OCD): 0,99 (t, 3H); 2,00 (q, 2H); 2,32 (s, 3H); 3,24 (d, 1H); 3,37 (s, 1H); 3,42 (d, 1H); 4,04 (s, 2H); 5,37 (s, 2H); 5,43 (d, 1H); 5,64 (d, 1H); 7,56 (s, 1H); 7,84 (dd, 1H); 8,22 (dd, 1H).
RMN-C13 (CDCl3 + CD30D): 7,87; 36,11; 42,16; 45,33; 52,67; 54,52; 56,47 ; 61,97 ; 73,26 ; 101,17; 110,81; 115,49; 122,93 ; 128,63 ; 139,83 144,28 ; 146,40 ; 149,27 ; 151,27 ; 151,64 ; 152,31; 153,82 ; 156,50 ; 159,71; 172,56.
IR (KBr) : 1607; 1656; 1732; 2795; 3411.
Exemple 47 : 5-éthyl-9,10-difluoro-4,5-dihydro-5-hydroxy- 12-pipéridinométhyl-lH- oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoléine 3,15(4H,13H)-dione On applique à la 3,4-difluoroaniline la procédure décrite par les exemples 30.a., 30.b. et 30.c. pour donner du 2-chloro-4-chlorométhyl-6,7-difluoro-3-quinoléinecarboxylate d'éthyle qui est traité selon la procédure de l'exemple 30.d., en utilisant la pipéridine au lieu de la N-méthylpipérazine, puis réduit selon la méthode de l'exemple 30.e. en quinoléineméthanol correspondant. Ce dernier est couplé au composé (M) comme décrit dans l'étape 11.j. de l'exemple 11. Le produit de couplage résultant est cyclisé selon la procédure de l'étape 11.k. On obtient un solide vert clair, p.f. 266-268 C.
RMN-IH (DMSO): 0.86 (t, 3H); 1,42-1,49 (m, 6H); 1,85 (q, 2H); 2,47 (m, 4H); 3,06 (d, 1H); 3,48 (d, 1H); 4,00 (q, 2H); 5,31 (s, 2H); 5,46 (dd, 2H); 6,04 (s, 1H); 7,37 (s, 1H); 8,14 (m, 1H); 8,46 (m, 1H).
RMN-C13 (DMSO): 8,43 ; 24,01; 25,8 ; 36,52 ; 42,56 ; 50,60; 54,29 ; 56,91; 61,41; 73,30 ; 99,81; 111,86 ; 115,67 ; 122,94 ; 130,10 ; 140,66 ; 144,49 ; 146,12 ; 153,18 ; 155,86; 159,14; 172,03.
IR (KBr) : 1258; 1452; 1517 ; 1607 ; 1661; 1731; 2950; 3480.
Exemple 48 : 5-éthyl-9,10-difluoro-4,5-dihydro-5-hydroxy 12-diméthylamino-méthyl-1H oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b] quinoléine 3,15(4H,13H)-dione On applique à la 3,4-difluoroaniline la procédure décrite par les exemples 30.a., 30.b. et 30.c. pour donner du 2-chloro-4-chlorométhyl-6,7-difluoro-3-quinoléinecarboxylate d'éthyle qui est traité selon la procédure de exemple 30.d., en utilisant la diméthylamine au lieu de la N-méthylpipérazine, puis réduit selon la méthode de l'exemple 30.e. en quinoléineméthanol correspondant. Ce dernier est couplé au composé (M) comme décrit dans l'étape 11.j. de l'exemple 11. Le produit de couplage résultant est cyclisé selon la procédure de l'étape 1 1.k. On obtient un solide beige clair, p.f. > 270 C.
RMN-1H (DMSO): 0,86 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 2,25 (s, 6H); 3,08 (d, 1H); 3,47 (d, 1H); 3,95 (q, 2H); 5,28 (s, 2H); 5,46 (dd, 2H); 6,06 (s, 1H); 7,37 (s, 1H); 8,14 (s, 1H); 8,42 (s, 1H).
RMN-C13 (DMSO): 8,42; 14,06; 33,36; 45,44; 50,57; 61,40; 65,14; 72,05 72,93 ; 73,30; 99,82; 99,95 ; 115,78 ; 115,85 ; 122,96; 125,01; 130,08 140,56; 144,54; 146,16; 155,86; 159,19; 172,03.
IR (KBr) : 1516; 1613 ; 1654; 1731; 3450.
Exemple 49 : 9-chloro-5-éthyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-10-méthyl- 12-morpholino méthyl-1H oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoléine 3,15(4H,13H)-dione On applique à la 3-chloro-4-methylaniline la procédure décrite par les exemples 30.a., 30.b. et 30.c. pour donner du 2,7-dichloro-4-chlorométhyl-6-méthyl- 3-quinoléinecarboxylate d'éthyle qui est traité selon la procédure de l'exemple 30.d., en utilisant la morpholine au lieu de la N-méthylpipérazine, puis réduit selon la méthode de l'exemple 30.e. en quinoléineméthanol correspondant. Ce dernier est couplé au composé (M) comme décrit dans l'étape 11.j. de l'exemple 11. Le produit de couplage résultant est cyclisé selon la procédure de l'étape 1 1.k. On obtient un solide jaune, p.f. > 300 C.
RMN-1H (DMSO): 0,87 (t, 3H); 1,84 (q, 2H); 2,50 (s, 4H); 2,58 (s, 3H); 3,07 (d, 1H); 3,46 (d, 1H); 3,57 (s, 4H); 4,08 (dd, 2H); 5,30 (s, 2H); 5,51 (dd, 2H); 6,06 (s, 1H); 7,35 (s, 1H); 8,15 (s, 1H); 8,41 (s, 1H).
RMN-C13 (DMSO): 8,42 ; 20,57 ; 36,51; 42,55 ; 50,76; 53,46 ; 55,86 ; 61,42 66,42 ; 73,29 ; 99,73 ; 122,78 ; 128,40 ; 130,10 ; 135,31; 136,26 ; 139,36 144,61; 147,79 ; 152,81; 155,86; 159,16; 172,04.
Le système ClD utilise un support de données 699 tel qu'illustré en figure 15, comportant un moyen de contrôle e données 699, pour obtenir, en définitive, les symboles d'information reçues et générés 702.
L'intérêt du système ClD réside dans le fait que le moyen de décodage 630 n'a aucune connaissance a priori du nombre de symboles de redondance réellement calculés par le moyen de codage 615.
Les registres à contenu constant, localisés en mémoire ROM et illustrés en figure 16 sont les suivants - REG~N 540 contient la longueur du code 'n', utilisée pour le codage de la redondance colonne, mentionné ci-dessus. 'n' définit aussi le nombre maximal de lignes des blocs de données avant émission, bloc référencé 660, et après réception, bloc référencé 670, - REG~M 541 contient la valeur 'M' nombre maximal de lignes d'information de redondance que l'on peut calculer par bloc de données 660. C'est aussi le nombre maximal de lignes d'information effacées que l'on peut reconstruire par bloc de données 670, - TAB~TOEXP 542 est un tableau à 'n' éléments. Le k ième élément de ce tableau est la valeur décimale de l'exposant i de la représentation logarithmique du symbole (O (1)', dont la valeur décimale de la représentation binaire associée, est égale à k. Cette table permet de connaître la valeur décimale de l'exposant de la représentation logarithmique d'un symbole du corps de Galois (je(28), sachant la valeur décimale de sa représentation binaire, - TAB~TOBYT 543 est un tableau à 'n' éléments. Le k ième élément de ce tableau est la valeur décimale de la représentation binaire du symbole (X)A, Cette table permet de connaître la valeur décimale de la représentation binaire d'un symbole du corps de Galois C;F(28), sachant la valeur décimale de l'exposant de sa représentation logarithmique et - REG~ROMAX 544 registre mémoire dont la valeur du contenu indique le nombre maximum de symboles d'information par ligne du bloc de données avant émission 660 ou après réception 670. Les contenus des registres REG~ROMAX 544 et REG~N 540 définissent la taille maximale des blocs de données avant émission 660 et après réception 670.
Ces registres comportent aussi des registres à contenu variable, localisés en mémoire RAM et illustrés en figure 17, l'élément de base étant l'octet, qui permet aussi la représentation exacte d'un symbole - OMEGA 545 contient la valeur décimale de l'exposant i de la représentation logarithmique du symbole Cl)' représenté.
Des compositions de revêtement de surface particulièrement préférées dans le cadre de la présente invention, sont celles comprenant de l'ascididemine en association avec un produit de revêtement tel que déjà décrit ci-dessus, dans des proportions telles que le pourcentage en poids d'ascididemine est d'environ 1 % à environ 20 % par rapport au poids total desdites compositions.
L'invention a également pour objet tout procédé de prévention et/ou de traitement de milieux aqueux contre les salissures biologiques, notamment contre le développement de bactéries, des végétaux et des larves susmentionnées, sur les surfaces en contact avec ce milieu aqueux, caractérisé en ce qu'il est effectué par addition d'une composition antisalissures biologiques décrite ci-dessus, au milieu aqueux à traiter.
Le procédé susmentionné est plus particulièrement adapté à la prévention et/ou au traitement contre les salissures biologiques dans les installations à circulation d'eau fermée, dans lesquelles l'eau est recyclée en permanence.
Un autre moyen de lutter contre le développement des salissures biologiques dans ce type d'installation à circuit d'eau fermé, est de revêtir les surfaces en contact avec le milieu aqueux, avec une composition de revêtement selon l'invention, selon le procédé décrit ci-dessous.
L'invention a également pour objet tout procédé de prévention et/ou de traitement des surfaces immergées dans un milieu aqueux contre les salissures biologiques susmentionnées, notamment contre le développement sur ces surfaces de bactéries, microalgues et larves d'invertébrés, par revêtement desdites surfaces avec une composition de revêtement telle que décrite ci-dessus.
Parmi les principaux matériaux ou équipements d'eau douce ou d'eau de mer, susceptibles d'être traités dans le cadre de la présente invention, on peut citer notamment: - tout navire d'une manière générale, notamment tout type de bateaux, y compris les pétroliers, les sous-marins, etc...
- tuyaux, - plates-formes offshore, - toute structure immergée (ponts, etc...), - les installations aquacoles, notamment filets, bouées, etc...
- les capteurs sous-marins.
Avantageusement les composés de formule (I) de l'invention sont obtenus par mise en oeuvre du procédé suivant: - condensation du composé de formule (A) indiquée ci-dessous dans laquelle R1 et R2 sont tels que définis ci-dessus avec la 2-aminoacétophénone en présence de chlorure de calcium dans l'éthanol à 20"C pendant 24 heures, ce qui conduit à l'obtention du composé de formule (B) indiquée ci-dessous suivant le schéma réactionnel suivant:
o o R1 CH3GO CaCI2 R1 COGH (A) t dansEtOli EtOE R H2N 20C,24H M R2 NH - traitement du composé (B) ci-dessus par de l'acide sulfurique dans l'acide acétique (AcOH) à reflux pendant 10 minutes, ce qui conduit à l'obtention du composé de formule (C) indiquée ci-dessous:
- réaction du composé de formule (C) ci-dessus avec du N,N-diméthylformamide diéthylacétal de formule HC(OC2H5)2N(CH3)2 dans du diméthylformamide à 120"C pendant une heure, ce qui conduit au composé de formule (D) suivante:
- traitement du composé de formule (D) ci-dessus, par du chlorure d'ammonium NH4Cl dans l'acide acétique (AcOH) pendant 1 heure à reflux ce qui conduit au composé de formule (I) de l'invention suivante:
S'agissant du cas particulier de l'ascididemine, sa synthèse est décrite dans l'article de Bracher, 1989, et est effectuée selon le procédé décrit ci-dessus à l'aide du composé de formule (A)a susmentionnée dans laquelle R1 et R2 représentent ensemble un cycle pyridine, à savoir le composé de formule (A)a suivante:
L'invention sera davantage illustrée à l'aide de la description détaillée qui suit de l'activité antisalissures biologiques de l'ascididemine à titre d'exemple.
La recherche de molécules antisalissures naturelles à partir d'organismes marins benthiques constitue une alternative très prometteuse à l'emploi des biocides inorganiques. Les invertébrés sessiles, en raison de leur mode de vie fixé, sont soumis à une pression de colonisation comparable à celle des structures immergées. Pourtant un grand nombre de ces organismes parviennent à maintenir leur surface corporelle propre (dépourvue d'épibiontes) grâce, notamment, à la production de métabolites secondaires assurant une fonction antisalissure.
1.3. - Descriptif détaillé L'illustration qui suit a pour objet la validation des propriétés antisalissures d'un alcaloïde marin, l'ascididemine, de formule
La souche CIV89 a été déposée à la CNCM le 16 juillet 1997 sous le numéro I-1905.
EXEMPLE 27 : construction du plasmide pCVA Un plasmide d'intégration, dénommé pCVA et portant une délétion dans le gène eryCV codant pour l'oRFî8, a été construit selon le schéma de la figure 14A de la façon suivante Le fragment BalI-BamHI (3,48 kb), obtenu à partir du plasmide pNCO62 préparé à l'exemple 11 par digestion avec les enzymes de restriction BalI et BamHI, a été sous-cloné dans les sites SmaI-BamHI du vecteur pUC19. Du plasmide résultant pBAB18 (figure 5B), le fragment interne ScaI (lkb) a été ensuite délété par digestion avec l'enzyme ScaI pour générer une délétion de 1044 pb du nucléotide 49998 au nucléotide 51041 de la séquence de la figure 3 dans l'ORFl8. Du plasmide pBABACV ainsi obtenu, le fragment portant la délétion a ensuite été réisolé à partir du polylinker de pUC19 par digestion avec les enzymes de restriction HindIII et EcoRI, puis sous-cloné dans le plasmide pUWL2l8. Le plasmide d'intégration pCVA ainsi obtenu (figure 14B) a été transféré dans la souche E. coli DHSaMRC, puis utilisé pour transformer Sac. erythraea.
EXEMPLE 28 : construction d'une souche Sac. erythraea eryCV (cl90) .
Une souche dans laquelle le gène eryCV porte une délétion interne telle que celle introduite dans le plasmide pCVA obtenu à l'exemple 27 a été préparée par transformation des protoplastes de Sac. erythraea avec le plasmide pCV.
De plus, la présence de la délétion attendue dans le chromosome (délétion de 1044 pb du nucléotide 49998 au nucléotide 51041) a été confirmée par analyse génomique par Southern blot ainsi que par PCR selon les conditions décrites à l'exemple 3.
Par hybridation Southern sur l'ADN génomique digéré par l'enzyme de restriction NcoI, en utilisant comme sonde l'oligonucléotide ayant la séquence suivante C5-R 5' AACGCCTCGTCCTGCAGCGGAGACACGAACA 3' correspondant au brin complémentaire de la région d'ADN située de la position 51229 à la position 51259 de la séquence de la figure 3, une bande de 6,2 kb à partir de la souche sauvage et une bande de 5,1 kb à partir du mutant CV90 ont été détectées. Les résultats montrés à la figure 15 indiquent chez le mutant la présence d'une délétion d'environ 1,1 kb dans cette région du chromosome.
L'amplification par PCR a été effectuée en utilisant l'oligonucléotide ayant la séquence suivante C5-S 5' TTCGCTCCCCGATGAACACAACTCGTA 3' correspondant à la région d'ADN située de la position 49668 à la position 49694 de la séquence de la figure 3 et l'oligonucléotide C5-R ayant la séquence indiquée ci-dessus, permettant d'encadrer par amplification PCR la région portant la délétion interne à l'oRFl8. L'analyse par amplification par PCR a permis de détecter une bande d'environ 1,6 kb dans la souche sauvage et une bande d'environ 500 pb dans le mutant CV90 de façon identique au signal obtenu avec le plasmide pCV. Les résultats montrés à la figure 16 confirment que la délétion d'environ 1,1 kb détectée par l'analyse Southern est identique à celle portée par le plasmide PCVA (1044 pb).