INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Un quatrième objet selon l'invention concerne un ARNm anti-sens transcrit à partir de la séquence d'ADN selon le second objet de l'invention, comprenant des nucléotides qui sont complémentaires de la totalité ou d'une partie des nucléotides constituant l'ARNm natif, et capables de s'apparier avec ledit ARNm.
Par " ARNm anti-sens ", on entend une séquence d'ARN qui est complémentaire d'une séquence de bases d'un ARNm correspondant, complémentaire dans le sens que chaque base (ou la majorité des bases) dans la séquence anti-sens (se lisant dans le sens 3' vers 5') est capable de s'apparier avec la base correspondante (G avec C, A avec U) dans la séquence d'ARNm se lisant dans le sens 5' vers 3'.
Un cinquième objet selon l'invention concerne une protéine ayant l'activité de l'enzyme OTBC décrite par SEQ ID N 2, ou toute protéine modifiée deladite enzyme OTBC, particulièrement par addition et/ou suppression et/ou substitution d'un ou plusieurs acides aminés, ou tout fragment provenant de l'enzyme OTBC ou d'une séquence modifiée de l'enzyme, ledit fragment ou séquence modifiée présentant une activité enzymatique équivalente à celle de l'enzyme OTBC.
Les résultats de ccm (figure 17) montrent que la souche CII62 accumule préférentiellement du 3-a-mycarosyl érythronolide B ainsi que de petites quantités d'érythronolide B comme attendu d'un mutant eryC.
La séquence eryCII présente une forte homologie avec des gènes impliqués dans les voies de biosynthèse de la daunosamine (DnrQ, 38 % d'identité au niveau protéique, Otten et al., 1995) et du mycaminose (protéine codée par l'ORF1*, 40 % d'identité au niveau protéique, Gandecha et al., 1997) qui ont également besoin de transférer un groupement céto en position 3 à partir d'un carbone adjacent.
Des cosmides contenant la région eryAI-eryK du cluster de gènes ery tel que le cosmide Cos6B, ont été isolés par screening d'une banque d'ADN génomique de Sac. erythraea dans le vecteur cosmidique pWE15 (Stratagene) en utilisant comme sonde un fragment d'ADN de 13,2 kb comprenant la totalité du gène eryAI et correspondant à la région d'ADN comprise entre le site NcoI situé à la position 44382 de la séquence de la figure 3 et le site NcoI situé à la position 392 de la séquence X62569 (Bevitt et al., 1992). La sonde a été préparée de la façon suivante : Dans un premier temps, le fragment NcoI de 13,2 kb a été isolé à partir du plasmide pBK25 décrit par Bevitt et al., 1992 et sous-cloné dans le site SmaI de pUC18 après remplissage des extrémités NcoI avec le fragment de Klenow. A partir du plasmide pNC012 ainsi généré, le fragment de 13,2 kb a été isolé par digestion avec
l'enzyme de restriction NcoI.
Le cosmide cos6B ainsi obtenu a été digéré par l'enzyme de restriction NcoI et les fragments résultants de 2,8 kb et 6,1 kb ont été clonés dans le site NcoI du vecteur Litmus28 générant respectivement les plasmides pNC028 et pNC062 montrés à la figure 5B.
Le plasmide pNC028 a été séquence par génération de sous-clones en utilisant l'exonucléase III selon le protocole du fournisseur de la trousse Erase-a-Base Kit (Promega) en digérant par les enzymes de restriction respectivement SacI/XbaI et NsiI/BamHI pour la direction inverse. La séquence a été complétée en utilisant comme amorces les oligonucléotides synthétiques ayant les séquences suivantes 644 GATCACGCTCTTCGAGCGGCAG (SEQ ID N 36) 645 GAACTCGGTGGAGTCGATGTC (SEQ ID N 37) et 650 GTTGTCGATCAAGACCCGCAC (SEQ ID N 38) Pour le séquençage du plasmide pNC062, des matrices ont été générées par sonication de l'ADN selon Bankier et al.
(1987) en utilisant pUC18 comme vecteur. La séquence a été complétée en utilisant comme amorces les oligonucléotides synthétiques ayant les séquences suivantes : 646 CATCGTCAAGGAGTTCGACGGT (SEQ ID N 39) 647 TGCGCAGGTCCATGTTCACCACGTT (SEQ ID N 40) 648 GCTACGCCCTGGAGAGCCTG (SEQ ID N 41) 649 GTCGCGGTCGGAGAGCACGAC (SEQ ID N 42) et 874 GCCAGCTCGGCGACGTCCATC (SEQ ID N 43).
De plus, un fragment ClaI-NcoI de 0,9 kb, contenant le début de la séquence du gène eryAI et la partie 5' de l'ORF13, a été cloné dans pUC18. Ce fragment a été préparé de la façon suivante : Le plasmide pBK6-12 représenté à la figure 5B a d'abord été généré par sous-clonage dans le phagmide pTZ18R du fragment KpnI de 4,5 kb isolé à partir du plasmide pBK25 décrit par Bevitt et al., 1992. Le sous-clone
pCN9 a ensuite été généré par sous-clonage du fragment ClaINcoI de 0,9 kb isolé à partir du plasmide pBK6-12 dans le site SmaI de pUC19, après remplissage des extrémités à l'aide du fragment de Klenow. Le plasmide pCN9 ainsi obtenu (figure 5B) a été séquence. Des matrices ont été générées par sonication de l'ADN selon Bankier et al. (1987) en utilisant pUC18 comme vecteur. La séquence a été complétée en utilisant comme amorce l'oligonucléotide ayant la séquence suivante : 875 CGACGAGGTCGTGCATCAG (SEQ ID N 44).
Le séquençage de l'ADN est réalisé par la méthode de Sanger (1977) en utilisant un séquenceur automatisé sur les matrices d'ADN double brin avec le séquenceur Applied Biosystem 373 A. L'assemblage des données de séquence a été réalisé avec le logiciel SAP (Staden, 1984). Les séquences ont été analysées en utilisant le logiciel GCG (Devereux, 1984) .
Les séquences nucléotidiques obtenues ont permis d'établir la séquence nucléotidique de 8160 bp de la figure 3 (séquence de SEQ ID N 6) dans laquelle sept ORFs (13-19) ont été identifiées respectivement du nucléotide 43841 au nucléotide 44806, du nucléotide 44809 au nucléotide 46053, du nucléotide 46109 au nucléotide 46819, du nucléotide 46907 au nucléotide 48436, du nucléotide 48436 au nucléotide 49638, du nucléotide 49679 au nucléotide 51145 et du nucléotide 51177 au nucléotide 51755 (numérotés dans la figure 3 à partir du site BamHI situé à l'extrémité 5' du gène ermE) (respectivement séquence de SEQ ID N 6 du nucléotide 242 au nucléotide 1207, du nucléotide 1210 au nucléotide 2454, du nucléotide 2510 au nucléotide 3220, du nucléotide 3308 au nucléotide 4837, du nucléotide 4837 au nucléotide 6039, du nucléotide 6080 au nucléotide 7546 et du nucléotide 7578 au nucléotide 8156) et correspondant respectivement aux gènes eryBIV, eryBV, eryCVI, eryBVI, eryCIV, eryCV et eryBVII, selon Liu et Thorson (1994) dont les caractérisations fonctionnelles n'avaient pas encore été identifiées. Les sept ORFs (13-19) sont dans la même direction, la lecture se faisant à partir de la région 5' du gène eryAI.
Des échantillons de E. coli XLl-blue contenant la région
codante des ORFs ci-dessus ont été déposés à la CNCM le 16 juillet 1997 : - le plasmide pBK6-12 comprenant la séquence codante pour l'ORF13 et pour une partie de l'ORF14 sous le numéro 1-1898 - le plasmide pNC028 comprenant la séquence codante pour les ORFs 14 et 15 ainsi que pour une partie des ORFs 13 et 16 sous le numéro 1-1901 et - le plasmide pNC062 comprenant la séquence codante pour les ORFs 17,18 et 19 ainsi que pour une partie de l'ORF16 sous le numéro 1-1900.
Les compositions cosmétiques, notamment de maquillage telles que les rouges à lèvres, les fonds de teint, les produits de maquillage du corps, les anticernes, les fards à paupières ou les poudres, comprennent généralement des corps gras tels que des huiles et/ou des cires, et une phase particulaire généralement composée de charges et de pigments. Elles peuvent ainsi se présenter sous la forme d'un gel anhydre, sous forme de stick ou bâton ou sous forme de pâte souple, comme par exemple certains fonds de teint, fards à paupières ou rouges à lèvres Elles peu- vent également se présenter sous la forme d'une poudre, qui peut être par exem- ple libre, compactée ou pressée. Les compositions de maquillage peuvent égale- ment comprendre de l'eau ou une phase hydrophile, et se présenter alors notam- ment sous forme d'émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile, émulsion multiple, notamment lorsqu'il s'agit d'un fond de teint, de crème teintée, de crème de soin ou d'un produit solaire.
Ces compositions, lorsqu'elles sont appliquées sur la peau, les muqueuses ou les semi-muqueuses, présentent l'inconvénient de transférer. On entend par là que la composition est susceptible de se déposer, au moins en partie, sur certains sup- ports avec lesquels elle est mise en contact, tels que, par exemple, un verre, un vêtement ou la peau.
En se déposant, ladite composition laisse une trace sur ledit support. Il s'en suit donc une persistance médiocre de la composition sur la peau ou les muqueuses, d'où la nécessité de renouveler régulièrement son application.
Par ailleurs, l'apparition de traces inacceptables sur certains vêtements et notam- ment sur les cols de chemisier peut écarter certaines femmes de l'utilisation de ce type de maquillage.
Un autre inconvénient de ces compositions réside dans le problème de migration.
On a en effet constaté que certaines compositions avaient tendance à se propager à l'intérieur des ridules et/ou des rides de la peau, dans le cas des fonds de teint; dans les ridules qui entourent les lèvres, dans le cas des rouges à lèvres; dans les plis de la paupière, dans le cas des fards à paupières. On a également constaté, dans le cas notamment des fards à paupières, l'apparition de stries dans le ma- quillage, générées par les mouvements des paupières.
Tous ces phénomènes engendrent un effet inesthétique que l'on souhaite bien évidemment éviter.
Depuis plusieurs années, de nombreux cosméticiens se sont intéressés aux com- positions cosmétiques, notamment de rouges à lèvres ou de fonds de teint 'sans
transfert'. Ainsi, les produits de maquillage dits 'sans transfert' actuels sont sou- vent obtenus par formation d'un film de polymères par évaporation d'un solvant Or, la formulation de molécules complexes tels que les polymères dans des pro- duits de maquillage n'est pas aisée et n'est pas toujours souhaitable en ce qui concerne le toucher, la texture du produit et son confort.
Il est également connu que la présence d'huiles volatiles au sein de ces produits de maquillage améliore leurs propriétés 'sans transfert'. On peut associer à ces huiles volatiles des composés siliconés.
Toutefois, si on sait maintenant que l'association d'huiles volatiles avec certains composés siliconés permet d'obtenir un résultat 'sans transfert' satisfaisant, elle présente néanmoins l'inconvénient de conduire, après évaporation des volatils, à un film dont le confort n'est pas optimal, notamment parce qu'il n'est pas possible d'ajouter d'huiles autres que siliconées dans ces compositions tout en conservant une qualité de 'sans transfert' correcte. En effet, les huiles hydrocarbonées, qui sont connues pour apporter notamment du confort à une composition cosmétique, ont comme inconvénient d'augmenter le transfert d'une telle composition Il en résulte que les produits de maquillage actuels dits 'sans transfert' sont sou- vent peu confortables après séchage et présentent souvent un fiim sec non hy- dratant.
Il subsiste donc le besoin de produits, notamment de maquillage, qui transfèrent peu ou pas du tout (c'est-à-dire de produits 'sans transfert') tout en possédant de bonnes propriétés cosmétiques, notamment des propriétés de glissant à l'application, ainsi que des qualités de douceur, d'hydratation et de confort après maquillage.
Or, la Demanderesse a trouvé de manière surprenante qu'en combinant de façon particulière deux compositions cosmétiques, chacune de ces deux compositions étant connue en soi, il était possible de réaliser un produit de maquillage 'sans transfert' comprenant des huiles non volatiles.
On réalise ainsi des produits de maquillage qui, non seulement sont 'sans trans- fert' mais qui possèdent également de bonnes propriétés cosmétiques, en particu- lier de confort et d'hydratation.
L'invention a donc pour objet un procédé pour améliorer les propriétés 'sans transfert' et la tenue d'une composition A comprenant au moins une phase grasse dont la partie non volatile a des paramètres de solubilité de Hansen 5, spa, 5ha, comprenant les étapes suivantes : - 1 ) dans une première étape, on applique sur la peau et/ou les muqueuses et/ou les semi-muqueuses une base cosmétique B comprenant au moins une phase grasse dont la partie non volatile a des paramètres de solubilité de Hansen 50b, 5p, 5hb, B étant choisie de telle façon que la distance d(A-B) séparant A de B dans l'espace des paramètres de solubilité de Hansen vérifie la relation suivante :
d(A-B) > 3 J1/2cm-3/2, dans laquelle : - 2 ) dans une deuxième étape, on applique sur la base B la composition A La présente invention a encore pour objet un procédé de maquillage, en particulier de la peau et/ou des muqueuses et/ou des semi-muqueuses, comprenant les éta- pes suivantes : - 1 ) dans une première étape, on applique sur la peau et/ou les muqueu- ses et/ou les semi-muqueuses une base cosmétique B comprenant au moins une phase grasse dont la partie non volatile a des paramètres de solubilité de Hansen @ Ua ' CP, # 3 J1/2cm-3/2, dans laquelle : La composition A appliquée sur la base cosmétique B selon le procédé ci-dessus présente l'avantage de transférer très peu, voire pas du tout, tout en conservant ses propriétés de confort et d'hydratation. Elle peut également ne pas comprendre de polymère du tout : la composition est alors particulièrement confortable.
L'enrichissement est possible, d'une part, du fait des différences d'affinité de chacune des deux formes énantiomères du motif ester introduit vis à vis de chaque type (primaire ou secondaires) de sites hydroxylés et, d'autre part, du fait des différences de sensibilité vis à vis de l'hydrolyse de ces différents sites estérifiés.
Suivant une variante du procédé d'enrichissement selon l'invention, on prévoit, avant l'hydrolyse -2- stricto sensu, une étape -lbis- de déracémisation des esters chiraux de l'invention, de préférence au moyen d'une base azotée.
Une telle déracémisation, qui a pour effet d'améliorer la relaxation du polymère, est particulièrement intéressante dans l'optique de générer, préférentiellement, une configuration donnée du centre stéréogénique introduit, de façon à pouvoir récupérer, après hydrolyse, des mélanges d'acides optiquement enrichis.
Selon cette variante, le procédé d'enrichissement comprend les étapes essentielles suivantes : -1- utilisation d'acides ou dérivés sous forme racémique ou énantiométriquement pure, comme produits de départ, pour préparer les esters tels que définis supra ou les esters tels qu'obtenus par le procédé lui aussi présenté ci-avant ; -lbis- déracémisation, de préférence à l'aide d'une base azotée, plus préférentiellement encore sélectionnée dans le groupe comprenant le diisopropylamidure de lithium et la triéthylamine ; cette déracémisation permettant, d'une part, la relaxation du composé polyhydroxylé estérifié et permettant, d'autre part, à chaque motif ester d'adopter la configuration absolue énergiquement la plus stable ; -2- hydrolyse totale ou partielle des motifs esters, de préférence à l'aide d'une base forte, plus préférentiellement encore à l'aide d'une base forte sélectionnée parmi les hydroxydes de métaux alcalins, (LiOH étant tout spécialement sélectionné), de façon à libérer majoritairement l'un des deux énantiomères du précurseur-acide ou dérivé (Il) de départ.
Outre ce procédé d'enrichissement chiral, la présente invention vise également, en tant que tel, un moyen d'enrichissement chiral pour la mise en #uvre du
susdit procédé, ce moyen étant caractérisé en ce qu'il comprend les esters tels que définis supra et/ou les esters obtenus par le procédé.
Pour compléter le registre des applications des esters chiraux de polysaccharides selon l'invention, on rappellera qu'ils peuvent être utilisés comme support de chromatographie chirale pour la séparation des énantiomères. D'où il s'en suit que la présente invention concerne un support énantiosélectif de chromatographie chirale caractérisé en ce qu'il comprend les esters, tels que décrits supra, et/ou les esters obtenus par le procédé lui aussi décrit supra.
Les exemples qui suivent font apparaître les résultats avantageux obtenus à l'aide des esters selon l'invention, dans le cadre de leur évaluation chromatographique à titre de phase stationnaire chirale.
Il ressort notamment de ces exemples que les phases stationnaires chirales selon l'invention peuvent avoir des ordres d'élution inverses à ceux de phases stationnaires chirales commerciales.
Dans la mesure où les esters selon l'invention peuvent être constitués, en ce qui concerne leurs acides originels (II) donnant naissance aux précurseurs, de principes actifs médicamenteux chiraux, et compte tenu, par ailleurs, du procédé d'enrichissement selon l'invention qui permet par hydrolyse des esters, d'obtenir des acides optiquement purs, il est apparu tout à fait judicieux de réaliser des systèmes médicamenteux à libération prolongée et contrôlée de principes actifs, comprenant les esters selon l'invention.
Ainsi, la présente invention vise également un médicament caractérisé : - en ce qu'il comprend des esters, tels que définis supra, et/ou des esters obtenus par le procédé lui aussi défini supra, l'acide ou les acides précurseur (s) esters constituant le ou les principes actifs, - et en ce qu'il est apte à libérer, de manière prolongée et contrôlée, par hydrolyse, le ou les principes actifs.
En effet, l'hydrolyse selon des cinétiques différentes des esters de l'invention, permet de délivrer, de façon contrôlée et prolongée in vivo et in vitro, des principes actifs acides chiraux (par exemple de type anti-inflammatoire non stéroïdien) ayant une configuration chirale préférentielle. Or, on sait que les médicaments chiraux sont d'autant plus actifs qu'ils se présentent sous forme optiquement purifiée, d'où l'intérêt non contestable du médicament selon l'invention. Ce dernier a également l'avantage d'être particulièrement bien toléré puisque l'on sait que les composés polyhydroxylés
(de préférence les polysaccharides) qui constituent un support inerte pour les principes actifs chiraux, sont biocompatibles, biodégradables et non toxiques.
La présente invention sera mieux comprise à la lumière des exemples qui suivent, qui font également ressortir tous ses avantages et ses variantes de réalisation en termes de produits, de procédés et d'applications.
EXEMPLES Ces exemples comprennent, dans le chapitre A la synthèse des chlorures d'acide ou, autrement dit, des précurseurs-acides ou dérivés (I).
Le chapitre B est consacré aux synthèses des esters (exemples 1 à 34).
L'étape suivante E110 est un test pour déterminer si toutes les itérations ont été effectuées. S'il reste au moins une itération à effectuer, l'étape Eu 10 est suivie de l'étape El Il à laquelle le paramètre i est incrémenté de une unité, pour passer à l'itération suivante. L'étape El Il est suivie de l'étape El 03 précédemment décrite.
Ainsi, L'image p1 n est tout d'abord reconstruite, puis l'image p2nw et ainsi de suite, comme représenté à la figure 16, ce qui permet une construction progressive de l'image décodée, chaque itération permettant d'obtenir une image comportant plus de détails qu'à l'itération précédente.
Selon un autre mode de réalisation du procédé de codage en mode intra-image selon l'invention, la taille des blocs à coder diminue, et le nombre de blocs à coder augmente corrélativement, à chaque itération de codage, de manière à coder des détails de plus en plus fins.
Corrélativement, les blocs source ont également une taille qui diminue à chaque itération.
Dans un autre mode de réalisation de procédé de codage en mode inter-image selon l'invention, la taille des blocs à coder est déterminée de manière adaptative, en fonction de la quantité d'information présente dans les blocs à coder et en fonction du "mouvement" des blocs à coder par rapport à l'image de référence, c'est-à-dire des modifications entre les pixels du bloc à coder et les pixels des blocs source de l'image de référence.
Une image à coder est divisée en blocs, qui sont susceptibles d'être à leur tour divisés en sous-bloc de taille inférieure.
Un arbre de découpe, par exemple un arbre quaternaire, est associé à chaque image à coder. L'arbre quaternaire représente la découpe particulière de chaque image. Chaque image compressée hn comporte un ensemble de transformations (Tnm} et l'arbre quaternaire associé.
Chaque bloc est codé par une transformation entre un bloc considéré et des blocs source.
L'algorithme de décodage correspondant à ce mode de réalisation comporte la lecture de l'arbre quaternaire associé à l'image, notamment pour déterminer la taille et la position du bloc à reconstruire.
Un autre mode de réalisation de procédé de codage en mode interimage selon l'invention consiste globalement à rechercher tout d'abord, pour chaque bloc à coder, s'il peut être codé par mise en correspondance avec un bloc de l'image de référence. Si ce codage est possible, le bloc est codé par mise en correspondance de bloc (en Anglais : block matching) ; sinon, le bloc est codé au moyen d'une transformation déterminée comme dans le premier mode de réalisation.
Si le bloc est codé par mise en correspondance, la position relative du bloc de correspondance, dans l'image de référence gn.i, par rapport à la position du bloc à coder, dans l'image en cours de codage fn. c'est-à-dire le vecteur de mouvement, est mémorisée en mémoire 25. Un indicateur est également mémorisé, pour indiquer que le bloc considéré est codé par mise en correspondance de bloc. Cet indicateur est par exemple un bit supplémentaire mis à la valeur un. Le vecteur de mouvement et l'indicateur représentent l'information de codage du bloc.
Si le codage par mise en correspondance de bloc ne donne pas un résultat satisfaisant, le bloc est codé au moyen d'une transformation, comme précédemment décrit. L'indicateur In,m, par exemple le bit supplémentaire mis à la valeur zéro, est associé à la transformation Tn,m.
Le procédé de décodage correspondant à ce mode de réalisation de codage comporte un test pour déterminer si le bloc en cours de construction ARn.m a été codé par mise en correspondance de blocs. Le test consiste à analyser la valeur de l'indicateur.
Si le bloc a été codé par mise en correspondance de bloc, alors son décodage consiste à lire dans l'image de référence gon1 le bloc de correspondance qui est déterminé par le vecteur de mouvement et à recopier ce bloc en tant que bloc décodé Arum.
Sinon le décodage du bloc est analogue à celui précédemment décrit.
En variante, les deux modes de réalisation précédents sont combinés on essaie tout d'abord de coder les blocs par mise en correspondance de blocs, et ensuite, si ce premier codage n'est pas possible, au moyen d'une transformation ; les étapes de codage par détermination d'une transformation incluent alors la variation de la taille du bloc à coder en fonction d'un critère.
En conséquence, l'organisme transgénique de la présente invention consiste en un organisme comprenant une quelconque, ou des associations, des séquences de nucléotides codant pour la séquence d'amino-acides conforme à la présente invention, des produits d'assemblage conformes à la présente invention (y compris leurs associations), des vecteurs conformes à la présente invention, des plasmides conformes à la présente invention, des cellules conformes à la présente invention, des tissus conformes à la présente invention ou leurs produits. La cellule ou l'organisme transformé pourrait préparer des quantités acceptables du composé désiré qui serait aisément séparable de la cellule ou de l'organisme.
Transformation de cellules hôtes/organismes hôtes De la manière indiquée précédemment, l'organisme hôte peut être un organisme procaryotique ou eucaryotique. Des exemples d'hôtes procaryotiques convenables comprennent E.coli et Bacillus subtilis. Les enseignements sur la transformation d'hôtes procaryotiques sont bien établis dans ce domaine ; voir, par exemple, Sambrook et al (Molecular Cloning : A Laboratory Manual, 2ème édition, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press) et Ausubel et
al., Current Protocols in Molecular Biology (1995), John Wiley & Sons, Inc.
Si un hôte procaryotique est utilisé, alors la séquence de nucléotides peut nécessiter une modification convenable avant transformation - par exemple par élimination d'introns.
De la manière mentionnée ci-dessus, un organisme hôte apprécié appartient au genre Bacillus et consiste par exemple en Bacillus subtilis.