INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
C'est pourquoi les Inventeurs se sont donnés pour but de pourvoir à un ensemble de peptides aptes à désensibiliser la grande majorité des sujets allergiques au venin d'abeille.
Un tel ensemble de peptides a pour propriété d'être efficace chez un grand nombre de sujets, alors que les peptides de l'Art antérieur sont actifs chez un
sujet allergique mais peuvent être totalement inefficaces pour un autre sujet parce que ce dernier ne reconnaît pas l'allergène par les mêmes déterminants.
Pour ce faire, les Inventeurs ont défini une relation entre les séquences peptidiques de l'allergène majeur du venin d'abeille (API ml) et des molé- cules du CMH de classe II, notamment les allèles du gène HLA-DRB 1, prépondérants dans les populations caucasiennes. Cette relation permet, de manière inattendue, de définir des molécules de désensibilisation et de traitement préventif de l'allergie au venin d'abeille qui tiennent compte du polymorphisme du CMH de classe II, notamment des molécules HLA-DR, et qui de par leur grande spécificité, induisent une meilleure désensibilisation qui se traduit par un risque significativement diminué des accidents (chocs) en cours de désensibilisation. Ceci représente un atout supplé- mentaire pour l'utilisation de tels peptides à titre préventif.
Les molécules du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) de classe II (HLA II chez l'homme) sont des hétérodimères exprimés sur les cellules + présentatrices et présentent aux lymphocytes T CD4 les épitopes T des antigènes. Ces molécules sont capables de lier un répertoire important de peptides ayant des séquences très différentes, ce qui leur permet de présenter aux cellules T plusieurs peptides par antigène.
Il existe quatre types différents de molécules du CMH II par indi- vidu (2 HLA-DR, 1 HLA-DQ et 1 HLA-DP). La molécule HLA-DR dont la chaîne ss est codée par le gène DRB est la plus exprimée. On répertorie, actuellement plus de 200 allèles différents pour DRB1, qui définissent différents antigènes ou types, comme résumé dans le Tableau 1 ci-après.
Tableau 1: Molécules exprimées par différents allèles HLADRB1
Antigène Allèle Alias DR1 DRB1*0101 DR1 DR2 DRB 1 * 1501 DR2w2b DR3 DRB 1*0301 DR3wl7 DR4 DRB 1 *0401 DR4w4 DRB 1*0405 DR4w 15 DR7 DRB 1*0701 DR7 DR8 DRB 1 *0802 DR8w2 DR9 DRB 1 *0901 DR9 DR11 DRB1*1101 DR5wll DR12 DRB 1 * 1201 DR5wl2 DR13 DRBI*1301 DRB 1 * 1302 DR6wl9
Chaque allèle possède ses propres propriétés de liaison. Il lie donc un répertoire de peptides qui lui est propre et qui diffère de celui d'un autre allèle, même sur un même antigène. La spécificité large des molécules HLA II et l'existence de plusieurs isoformes et d'un polymorphisme important font que de nombreux fragments différents de l'antigène peuvent être présentés aux lymphocytes T.
Les fréquences de chaque allèle ne sont pas identiques et varient d'une population à l'autre (35) : - l'allèle DRB 1 * 1304 représente à lui seul 25,4 % des allèles de la population sénégalaise contre 0 % en Allemagne et au Japon.
- l'allèle DRB 1 *0301 est observé avec une fréquence de 10 % chez les sénégalais et les allemands mais seulement à 0,4 % chez les japonais.
d'acide nucléique liée. On doit comprendre que la séquence du promoteur inclut également des séquences transcrites entre le site de démarrage de la transcription et le codon de démarrage de la traduction ; - "cassette d'expression" signifie des séquences nucléotidiques capables de diriger l'expression d'une séquence d'acide nucléique, ou d'un gène, codant pour un polypeptide à produire dans un organisme hôte compatible avec de telles séquences. De telles cassettes incluent au moins un promoteur et un signal de terminaison de la transcription, et optionnellement d'autres facteurs nécessaires ou utiles à l'expression ; - "vecteur" signifie des systèmes d'expression, par exemple des projectiles enrobés d'ADN, des véhicules de transit à base d'acides nucléiques, des molécules d'acide nucléique adaptées pour livrer de l'acide nucléique, et de l'ADN circulaire autoréplicant autonome, par exemple plasmides, cosmides, phagemides, etc. Si un micro-organisme ou une culture cellulaire recombinant est décrit comme hôte d'un "vecteur d'expression", ceci inclut de l'ADN circulaire extrachromosomique (tel que par exemple de l'ADN mitochondrial ou chloroplastique), de l'ADN ayant été intégré au(x) chromosome(s) hôte(s), le vecteur pouvant être soit répliqué de manière stable par les cellules pendant la mitose en tant que structure autonome, intégré au génome de l'hôte, soit maintenu dans le noyau ou le cytoplasme de l'hôte ; - "plasmide" signifie une molécule d'ADN circulaire autonome capable de réplication dans une cellule, et comprend à la fois les plasmides dits "d'expression" et les plasmides dits "de non-expression". Si un micro-organisme ou culture cellulaire recombinante est décrit comme hôte d'un plasmide "d'expression", ceci comprend à la fois des molécules d'ADN circulaires extrachromosomiques et de l'ADN ayant été intégré au(x) chromosome(s) hôte(s). Si le plasmide est maintenu par une cellule hôte, le plasmide est soit répliqué de manière stable par les cellules pendant la mitose en tant que structure
autonome, soit intégré au génome de l'hôte ; - "séquence hétérologue" ou "séquence d'acide nucléique hétérologue" signifie une séquence provenant d'une source, ou d'une espèce, étrangère à son environnement, ou si elle provient du même environnement, a été modifiée par rapport à sa forme originale. La modification de la séquence d'acide nucléique peut avoir lieu par exemple par traitement de l'acide nucléique avec une enzyme de restriction pour générer un fragment d'acide nucléique capable d'être lié de manière opérationnelle à un promoteur. La modification peut également avoir lieu par le biais de techniques comme la mutagenèse dirigée ; - "boîte" signifie une séquence d'acide nucléique à laquelle une fonction régulatrice est imputée ; - "like" signifie que la boîte et/ou la séquence d'acide nucléique à laquelle ce terme est associé, comporte une certaine identité de séquence ou un consensus avec une boîte et/ou une séquence d'acide nucléique connue dite de référence, de préférence une identité de séquence d'au moins 50%, de manière plus préférée une identité de séquence d'au moins 75%, et plus particulièrement une identité de séquence d'au moins 90% avec la séquence de référence. Le pourcentage d'identité de séquence est calculée sur la base d'une fenêtre de comparaison d'au moins 6 bases nucléotidiques. La détermination d'une fenêtre de comparaison peut être effectuée en utilisant des algorithmes d'alignement de séquences pour déterminer une homologie avec une séquence de référence, par exemple l'algorithme d'homologie locale, l'algorithme d'alignement d'homologie, et l'algorithme de recherche de similitude, ces algorithmes existant également sous forme informatique, connus sous les noms GAP, BESTFIT, FASTA et TFASTA. Le pourcentage d'identité de séquence est obtenue en comparant la séquence de référence avec la boîte et/ou la séquence d'acide nucléique ; - "située" signifie la position sur une séquence d'acide nucléique d'un élément identifié, tel qu'une "boîte", un site de restriction, ou un codon ayant une fonction particulière. La
position qui est donnée par un chiffre se réfère à la position du début de l'élément dans la séquence d'acide nucléique, dans le sens de la lecture de cette dernière, c'est-à-dire dans le sens 5'->3' ; - "plante transgénique" signifie une plante ayant été obtenue par des techniques de manipulation génétique, et couvre les plantes entières obtenues, leur progéniture, ainsi que les organes végétaux, par exemple les racines, les tiges et les feuilles, obtenus par ces techniques. Les plantes transgéniques selon la présente invention peuvent avoir différents niveau de ploïdie, et peuvent notamment être polyploïde, diploïde, et haploïde ; - "propagule" signifie un amas ou une association de cellules végétales, structuré(e) ou non, permettant la régénération d'une plante entière, par exemples des explants, des cals, des tiges, des feuilles, des racines, des boutures, et même des semences.
La demanderesse de la présente invention a pris une approche différente de celle du déposant de la demande PCT discutée préalablement. En effet, la demanderesse de la présente invention a réussi, et ce de manière surprenante, à produire des promoteurs chimériques permettant de satisfaire au besoin décrit précédemment, et notamment permettant d'augmenter le taux d'expression d'un gène ou d'une séquence d'acide nucléique, codant pour un polypeptide à produire, dans une cellule hôte, et notamment une cellule végétale, par rapport aux promoteurs existants les plus couramment utilisés. Par ailleurs, la demanderesse a réussi en même temps à produire une gamme de promoteurs de manière à pouvoir choisir celui qu'il convient d'utiliser selon l'application envisagée et l'environnement de sa mise en oeuvre, et ainsi de pouvoir contrôler en quelque sorte le taux d'expression d'un gène à exprimer codant pour un polypeptide à produire.
Par conséquent, un objet de la présente invention est un promoteur chimérique d'expression comprenant au moins une
séquence d'acide nucléique dérivée d'un promoteur du gène de la plastocyanine de pois.
De préférence, le promoteur chimérique comprend au moins une séquence d'acide nucléique dérivée du promoteur petE du gène de la plastocyanine de pois dont la séquence est identifiée sous le numéro SEQ. ID01. De manière plus préférée, la séquence d'acide nucléique dérivée du promoteur petE consiste en l'une quelconque des séquences identifiée sous les numéros SEQ. ID02, SEQ.ID03, SEQ. ID04, SEQ. ID05, SEQ. ID06, SEQ. ID07, SEQ. ID08, SEQ. ID09, SEQ. ID10 et SEQ.ID11.
En outre, la demanderesse a constaté qu'il était possible de construire des promoteurs, et notamment des promoteurs végétaux, ayant une activité promotrice intéressante, tout en présentant un minimum de boîtes régulatrices, à savoir au moins une boîte "G", une boîte "CAAT" et une boîte "TATA", à condition toutefois que la boîte "G" soit située en amont d'au moins une de ces boîtes, c'est-à-dire en 5', et que cette boîte "G" soit située de manière préférentielle à une certaine distance en amont des autres boîtes. Ainsi, un autre objet de la présente invention est un promoteur chimérique d'expression comprenant une boîte "G" liée de manière opérationnelle en amont d'au moins une boîte "CAAT", une boîte "TATA" ou un site d'initiation (+1) de la transcription. De préférence, la boîte "G" est située en amont de la boîte CAAT. Plus préférentiellement, la boîte "G" est située entre - 225 et-65 par rapport au site d'initiation (+1).
Encore plus préférentiellement, la boîte "G" est située entre - 201 et - 115 par rapport au site d'initiation (+1). Dans des modes d'exécution les plus préférés, la boîte "G" est située soit à - 201, soit à - 115, par rapport au site d'initiation (+1 ) .
Avantageusement, la boîte "G" est d'origine végétale.
Préférentiellement, la boîte "G" est obtenue à partir d'un promoteur du gène de la plastocyanine de pois. Plus préférentiellement encore, la boîte "G" est obtenue à partir du promoteur petE du gène de la plastocyanine de pois.
Selon un mode d'exécution préféré des promoteurs selon la présente invention, ceux-ci comprennent en outre une boîte "nos E like" liée de manière opérationnelle en amont de la boîte "G".
Selon un autre mode d'exécution préféré de l'invention, les promoteurs comprennent en outre au moins une boîte "asl like" liée de manière opérationnelle en amont de la boîte "G".
Selon encore un autre mode préféré de l'invention, les promoteurs comprennent au moins une boîte "asl" liée de manière opérationnelle en amont de la boîte "G".
D'une manière particulièrement préférée, les promoteurs selon l'invention comprennent en outre au moins une boîte "as2" liée de manière opérationnelle en amont de la boîte "G".
Enfin, les promoteurs chimériques selon la présente invention commprennent avantageusement au moins une séquence d'acide nucléique choisie parmi le groupe consistant en SEQ. ID02, SEQ. ID03, SEQ. ID04, SEQ. ID05, SEQ. ID06, SEQ. ID07, SEQ. ID08, SEQ. ID09, SEQ.ID10, SEQ.ID11.
Ces moyens permettent en principe d'enlever la partie haute (10) de la coiffe (1) et de laisser la partie basse (11) sur la bouteille. La figure 6 est une vue de côté d'une coiffe conique (1) selon une modalité de l'invention.
La figure 9 représente ce qui est obtenu en fin d'ouverture facile de ladite coiffe, la partie haute (10) de la coiffe comprenant la tte (5) restée solidaire de la bandelette d'ouverture (46).
La figure 10 est une vue, en coupe, du goulot (7) d'une bouteille (2) montrant ce qui est obtenu après enlèvement de la partie haute de la coiffe (10), avec un muselet (3) coiffant un bouchon (8) et le maintenant en position grâce à un fil de serrage (30) passant sous la bague de verrerie (20) du goulot de la bouteille, et avec une partie basse (11) de la coiffe (1) maintenue en place sur le goulot (7).
La figure 11 est une vue de dessus d'un développé (6) (face intérieure) de la jupe conique (4) de la coiffe, formé à partir du matériau en film ou feuille, généralement imprimé ou décoré sur la face externe, servant à la fabrication de ladite coiffe, et présentant -deux lignes d'affaiblissement haute (43) et basse (44), se terminant par des encoches (460,461) le long de la bordure axiale 60 qui sera la bordure supérieure après roulage dudit développé, et une languette (46) guillochée, la ligne d'affaiblissement basse (44) délimitant une partie haute (69) et une partie basse (65) de hauteur H", -un filet d'adhésif (63) placé le long de l'autre bordure axiale (61), -un rebord supérieur (64) auquel est fixée la tte de la capsule.
-une fraction de ladite partie basse (65) recouverte sur sa surface intérieure d'une couche annulaire d'adhésif (66), activable lors de la pose de la coiffe sur le goulot, représentée sur la figure 11-et sur les figures suivantes-par des hachures verticales.
Les figures 12a à 15b sont analogues à la figure 11 et représentent des modalités de I'invention.
Sur ces figures, les couches d'adhésif sur la partie basse (66) sont représentées par des hachures verticales, les couches de renfort (67) sont représentées par des hachures horizontales, et la superposition d'un renfort et d'une couche d'adhésif (68) est représentée par des hachures croisées.
Ainsi Partie haute (69) Partie basse (65) figure 12a renfort (47) de hauteur H2 couche adhésive (66) de hauteur Hl figure 12b cordon de renfort (48) couche adhésive (66) de hauteur H, sur renfort cotte (67) de hauteur H, figure 13a renfort (47) de hauteur H2 couche adhésive (66) de hauteur H avec H2 = L figure 13a renfort (47) de hauteur H2 couche adhésive (66) de hauteur H croissante figure 14a pas de renfort renfort adhésif (68) de hauteur H, figure 14b cordon de renfort (48) renfort collé (67) de hauteur H 3 figure 15a pas de renfort couche adhésive (66) de hauteur H, figure 15b pas de renfort renfort cotte (67) de hauteur H3=H" Sur les figures 15a et 1 Sb, la ligne d'affaiblissement haute (430) est partielle de manière à rendre la tte (5) solidaire de la bandelette d'ouverture (45), comme illustré à la figure 9.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Selon l'invention, ladite partie basse (11) peut comprendre, sur tout ou partie de sa face intérieure, comme moyen de fixation, une couche de colle ou adhésif activable formant une partie encollée (66) de hauteur H, adhérant, typiquement après activation, audit goulot, de manière à pouvoir empiler les coiffes lors de leur fabrication et jusqu'à leur pose sur les goulots de bouteilles, sans risque de voir les coiffes adhérer les unes aux autres.
La hauteur Hi, comptée à partir de la ligne d'affaiblissement basse (44), doit tre suffisante, et typiquement au moins égale à 2 mm, pour que ladite partie basse (11) résiste et ne soit pas décollée lors de l'arrachement de ladite bandelette d'ouverture.
Selon le cas, ladite colle ou adhésif peut comprendre une couche complexe formée d'une couche adhérant au verre et d'une couche adhérant au matériau constituant la surface intérieure de ladite coiffe, typiquement I'aluminium, le papier ou une couche de matière plastique ou de vernis.
En effet, la nature de l'adhésif doit tre adaptée à la nature des matériaux en présence, comme cela est connu de l'homme du métier.
Ladite colle ou adhésif est activable à t'eau, par chauffage ou par pression.
Selon une modalité de l'invention, comme illustré notamment à la figure 6, la coiffe (1) peut comprendre : a) deux lignes d'affaiblissement portées sur ladite jupe et typiquement parallèles, avec une ligne dite basse (44) située au niveau ou au-dessous de ladite bague de verrerie (20), et une ligne dite haute (43) espacée vers le haut de la ligne dite basse d'une distance L, lignes d'affaiblissement (43,44) qui délimitent une bandelette d'ouverture (45) de largeur L, constante ou non, avec L allant de 0,5 à 4 cm, b) une languette de préhension (46), positionnée selon une génératrice dudit cône, située entre lesdites deux lignes d'affaiblissement (43,44) et solidaire de ladite bandelette d'ouverture (45), ladite languette (46) comprenant un moyen pour orienter automatiquement t'effort de déchirement lors de l'ouverture de ladite coiffe vers les dites deux lignes d'affaiblissement, de manière à effectuer une ouverture facile de ladite coiffe, assurant l'intégrité de la partie basse restante (I I) de ladite coiffe située au-dessous de ladite ligne basse (44), et dégageant ledit muselet (3) au cas ou celui-ci serait présent.
Dans chacune des soupapes de décharge 7 des figures 6B à 6D également, les lignes de liaison 700c peuvent être formées de manière à se rapprocher aussi près que possible de la partie en pointillés de manière à se conformer plus exactement la théorie des poutres à contrainte uniforme. Dans ce cas, la force d'ouverture de soupape peut être réduite.
La poutre à contrainte uniforme peut supprimer la résistance excessive de manière à réduire la quantité de matériau et le poids de la soupape en maintenant la résistance appropriée.
Dans les exemples illustrés, on a examiné la relation entre le premier diamètre et le second diamètre. De façon alternative, les premier et second diamètres peuvent être conçus de manière efficace par rapport au diamètre de l'orifice de décharge 6. Par exemple, lorsque le diamètre de l'orifice de décharge 6 est grand, l'exemple de la figure 6A est appliqué et le gradient de la partie droite 700cl1 est déterminé de manière à réduire la rigidité. Le gradient de la partie droite 700cl peut être ajusté en
augmentant ou en diminuant le premier diamètre.
Dans chacune des soupapes de décharge 7 des figures 6A à 6D, la partie de liaison 7c comporte une partie étroite plus étroite que les parties de support et de fermeture 7a et 7b. Autrement dit, la partie de liaison a une largeur qui diminue progressivement à partir de chacune des parties de support et de fermeture 7a et 7b.
Avec référence aux figures 5A et 5B, on décrira à présent le fonctionnement de la soupape de décharge 7.
La soupape de décharge 7 ainsi que le dispositif de retenue 80 sont fixés à la paroi d'extrémité de base 501 de l'élément d'hélice fixe 5 au moyen du boulon 801. Lorsque le compresseur effectue la rotation à faible vitesse, la soupape de décharge 7 est ouverte et fermée de manière répétée, comme on le voit sur la figure 5A. Lorsque la vitesse de rotation est augmentée, la soupape est actionnée de la manière illustrée sur la figure 5B. Lors de la rotation à grande vitesse, avant la fermeture de la soupape à la fin d'un premier cycle, la décharge dans un cycle suivant est commencée comme on le voit sur la figure. Ainsi, lors de la rotation à grande vitesse, la soupape est déplacée dans une plage représentée par les traits en pointillés sur la figure.
Dans la présente invention, la rigidité de la soupape est réduite, de sorte que l'état de fonctionnement illustré sur la figure 5A passe à l'état de fonctionnement illustré sur la figure 5B à une vitesse de rotation inférieure en comparaison de la soupape existante. Par conséquent, la force d'ouverture de soupape pour ouvrir la soupape de décharge 7 est réduite.
Une comparaison entre la soupape existante et celle de la présente invention est donnée sur le tableau 1. La soupape existante est fermée de manière répétée comme on le voit sur la figure 5A lorsque la vitesse de rotation du compresseur à spirales est de 2000 t/mn ou inférieure. Dans la présente invention, la soupape est mise dans l'état de fonctionnement illustré sur la figure 5B lorsque la vitesse de rotation atteint 2000 t/mn.
Tableau 1 Vitesse de rotation du compresseur à 1000 2000 3000 4000 spirales (t/mn) Structure de soupape existante X X 0 0 Soupape de la présente invention X O 0 0
X : soupape ouverte et fermée à chaque cycle (figure 5A) O : soupape continûment ouverte (figure 6B).
A partir du tableau 1, on comprend que la soupape de décharge 7 est facilement ouverte dans la présente invention par rapport à la variation de la vitesse de rotation du compresseur. Par conséquent, la force d'ouverture de soupape est réduite, réduisant la consommation de puissance du compresseur.
La soupape de décharge 7 est essentielle afin d'éviter le reflux du fluide bien qu'il soit préféré, du point de vue du rendement du compresseur, que la soupape de décharge 7 ne soit pas prévue. En tenant compte de ce qui précède, la présente invention modifie la structure de la soupape.
Avec la structure mentionnée ci-dessus, la force d'ouverture de soupape peut être réduite. De plus, selon la théorie des poutres à contrainte uniforme, la distribution de la contrainte de flexion est généralement uniforme et une utilisation peu économique du matériau est évitée. Ainsi, une forme correcte et efficace est réalisée. La force d'ouverture de soupape est réduite en réduisant la rigidité de la soupape sans entraîner de diminution de contrainte importante. En conséquence, la consommation de puissance de l'appareil pour fluide de type à spirales, tel que le compresseur à spirales, peut être réduite. De plus, il est possible de réaliser la structure de soupape dans laquelle la fatigue du matériau résultant de la répétition de l'application de la charge est répartie de manière uniforme sans la concentration de contrainte au niveau d'une partie spécifique. Ainsi, la durée de vie de la soupape est prolongée.
Spécifiquement, on forme la partie droite s'étendant depuis la partie fixe de la soupape, de façon que la contrainte de flexion soit uniforme ou
sensiblement uniforme. Par conséquent, la rigidité est minimisée et la distribution de la contrainte est sensiblement uniforme. Ainsi, la quantité de matériau inutile peut être réduite. La différence de diamètre entre la partie de fermeture de la soupape et l'orifice de décharge est minimisée afin de réduire la résistance de contact. Ceci contribue à la réduction de la force d'ouverture de soupape.
Encore un autre objet de la présente invention, est une cassette d'expression comprenant au moins une séquence d'acide nucléique dérivée d'un promoteur du gène de la plastocyanine de pois, liée de manière opérationnelle à une séquence d'acide nucléique à exprimer codant pour un polypeptide à produire, elle même liée à une séquence d'acide nucléique de terminaison de transcription.
De préférence, cette cassette d'expression comprend au moins une séquence d'acide nucléique dérivée du promoteur petE du gène de la plastocyanine de pois dont la séquence est identifiée sous le numéro SEQ.ID01. Encore plus préférentiellement, la cassette d'expression comprend au moins une séquence d'acide nucléique dérivée du promoteur petE choisi dans le groupe consistant en les séquences identifiées sous les numéros SEQ. ID02, SEQ.ID03, SEQ. ID04, SEQ. ID05, SEQ. ID06, SEQ. ID07, SEQ. ID08, SEQ. ID09, SEQ.ID10, et SEQ.ID11.
Un autre objet de la présente invention est une séquence d'acide nucléique promotrice isolée, caractérisée en ce qu'elle correspond à une séquence dérivée de la séquence identifiée sous
le numéro SEQ.ID01. De manière préférentielle, la séquence d'acide nucléique promotrice isolée correspond à une séquence choisie parmi le groupe consistant en les séquences identifiées sous les numéros SEQ.ID02,SEQ.ID03, SEQ. ID04, SEQ. ID05, SEQ. ID06, SEQ.ID07, SEQ. ID08, SEQ. ID09, SEQ.ID10, et SEQ.ID11.