INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Si les oligonucléotides d'une même paire présentent par contre des températures propres d' annelage très distantes (e.g. 490C et 560C), la réaction d'hybridation au récepteur cible est préférentiellement conduite à la plus basse des deux températures (e. g. 490C ou 500C), ce qui permet de maintenir la reconnaissance de sa cible nucléotidique par l'oligonucléotide dont la température propre d'annelage est la plus basse. Dans cette situation, une diminution de spécificité peut toutefois intervenir il peut être observé que certaines paires d'oligonucléotides parviennent, dans de telles conditions de température, à s'hybrider au récepteur-contrepartie du récepteur cible. Une manière de remédier à cette perte de spécificité consiste à augmenter la longueur de l'oligonucléotide dont la température propre d'annelage est la plus basse, sans faire perdre à la paire d'oligonucléotides considérée sa spécificité.
3. Amplification en chaîne par polymérase après transcription enzymatique inverse (PT-PCR).
5 ug d'ARN totaux sont transcrits en ADNc par incubation avec une transcriptase inverse (PT) à l'aide du kit First Strand DNA-Ready to go (Pharmacia). 10 ul d'ADNc sur les 33 ul obtenus sont mis en contact avec les paires d'oligonucléotides C et D qui servent alors d'amorces (cf. tableau 1): 10 ul de produit issu de RT; Tampon PCR 10X 10 l; MgCl2 50mM; dXTP 10 mM; Oligonucléotides 3' à 10 uM: 5 l; Oligonucléotide 5' 10 M : 5 l; Taq polymérase 0,5 ul; H2O : qsp 100 ul. L'amplification par PCR (DNA engine PTC 200, MJ Research, Massachussets) est réalisée en suivant les étapes suivantes - étape n 1 (dénaturation initiale) : 5 min à 94 C, - étape n02 : 35 cycles comprenant a) dénaturation 1 min à 940C b) annelage 1 min à 550C pour la paire C et 50 0C pour la paire D d'oligonucléotides, c) extension 1 min à 72"C, - étape n 3: (extension finale) 1 min à 720 C.
La durée de l'extension 2c peut être augmentée si le fragment à amplifier a une grande taille (e.g. supérieure à 1000-1400pb environ).
La température de l'étape d'annelage 2b dépend de la paire d'oligonucléotides utilisés comme amorces (cf. point 2. ciavant). Elle correspond à une température consensus entre les températures propres d' annelage de chacun des deux oligonucléotides faisant paire (température moyenne ou température la plus basse des deux). Cette température est généralement comprise entre 450C et 700 C, préférentiellement entre 500C et 650C.
10 ul des produits issus de l'amplification par RT-PCR sont résolus par electrophorèse sur gel d'agarose à 2 a en parallèle avec des marqueurs de poids moléculaires (M).
Les résultats sont illustrés sur les figures 1A et 1 1B La figure 1 illustre l'amplification par PCR après PT (transcription enzymatique inverse) des séquences codantes pour p58.2 et p50.2 de cellules NK humaines.
En figure 1A est illustrée le résultat de la résolution électrophorétique des produits issus de l'amplification par RT-PCR après mise en contact de la paire d'amorces D selon l'invention (cf. tableau 1) avec les populations ADNc de cellules NK humaines phénotypées p50.2+ et p58.2+ (piste +) à l' aide de l' anticorps GL183, ou avec les populations ADNc de cellules NK humaines phénotypées p50.2- et p58.2- (piste -) à l' aide de ce même anticorps GL183. En piste M, sont résolus des marqueurs de poids moléculaire.
En figure 1 B, est illustrée le résultat de la résolution électrophorétique des produits issus de l'amplification par RT-PCR après mise en contact de la paire d' amorces C selon l'invention (cf. tableau 1) avec les populations ADNc de cellules NK humaines phénotypées p50.2+ et p58.2+ (piste +) à l' aide de l' anticorps GL183, ou avec les populations ADNc de cellules NK humaines phénotypées p50.2- et p58.2- (piste -) à l'aide de ce même anticorps GL183. En piste M, sont résolus des marqueurs de poids moléculaire.
Il peut observé que les paires d'oligonucléotides C et D selon l'invention permettent de reconnaître respectivement un phénotype, respectivement, p58.2+ et p50.2+, en reconnaissant un fragment de, respectivement, 653 pb et 533pb. La méthode selon l'invention permet donc de discriminer entre un phénotype p58.2+ (récepteur KIR, à fonction inhibitrice) et un phénotype p50.2+ (récepteur KAR contrepartie de 58.2, à fonction activatrice), ce qui n' était jusqu' à présent pas réalisable sous séquençage.
Exemple 2 : Documentation du répertoire génétique (potentiel) NKR/contreparties de NKR d'une population de splénocytes de souris transgéniques p50.2+ (PCR).
1 - Préparation des ADN Des préparations ADN ont été réalisées à partir de splénocytes de souris transgéniques p50.2+. La technique immunologique ne permet pas de déterminer si de tels splénocytes sont p50.2+ (récepteur KAR, activateur) ou p58.2+ (récepteur KIR, inhibiteur, ou bien encore p50.2+ et p58.2+). Des splénocytes de souris non transgéniques (p50.2-) servent de témoins négatifs.
Extraction Cette étape est réalisée comme décrit en exemple 1. Les ADN étant contenus dans la phase organique inférieure, c' est ici cette phase qui est récupérée après avoir éliminé la phase aqueuse et un peu d'interface.
Précipitation On ajoute 30 ul ul méthanol à 100% et on laisse reposer 5 minutes à température ambiante. Après centrifugation pendant 5 minutes à 40C (2 000g), on jette le surnageant et on lave le culot avec 100 ul de citrate de sodium 0,1M dans de l'méthanol à 10%. On laisse 30 minutes à température ambiante en mélangeant de temps en temps. On centrifuge pendant 5 minutes à 40C (2 000g). On répète ce lavage une seconde fois.
préservateur ) eau distillée 5,0 On dissout le composant actif, le tampon, I'arôme, le colorant et le préservateur dans une partie de l'eau et on ajoute la glycérine. On chauffe le restant de l'eau à 800C et on y dissout le saccharose puis on refroidit. On combine les deux solutions, on règle le volume et on mélange. Le sirop obtenu est clarifié par filtration.
On prépare une suspension du composant actif dans le Witepsol H 15 et on l'introduit dans une machine appropriée avec moules à suppositoires de 1 g.
Cartouches pour inhalation g/cartouche composant actif micronisé 1 ,0 lactose Codex 39,0 Le composant actif est micronisé dans un broyeur à énergie de fluide et mis à l'état de fines particules avant mélange avec du lactose pour comprimés dans un mélangeur à haute énergie. Le mélange pulvérulent est introduit en capsules de gélatine dure n"3 sur une machine à encapsuler appropriée. Le contenu des cartouches est administré à l'aide d'un inhalateur à poudre.
Aérosol sous pression à valve doseuse mg/dose pour I boite composant actif micronisé 0,500 120 mg acide oléique Codex 0,050 12 mg trichlorofluorométhane pour usage pharmaceutique 22,25 5,34 g dichlorodifluorométhane pour usage pharmaceutique 60,90 14,62 g Le composant actif est micronisé dans un broyeur à énergie de fluide et mis à l'état de fines particules.
On mélange l'acide oléique avec le trichlorofluorométhane à une température de 10-150C et on introduit dans la solution à l'aide d'un mélangeur à haut effet de cisaillement le médicament micronisé. La suspension est introduite en quantité mesurée dans des boîtes aérosol en aluminium sur lesquelles on fixe des valves doseuses appropriées délivrant une dose de 85 mg de la suspension ; le dichlorodifluorométhane est introduit dans les boites par injection au travers des valves.
La présente invention concerne un système de lève-vitre électrique, notamment pour véhicule automobile, et plus spécifiquement un système de lève-vitre électrique équipé d'un dispositif anti-pincement.
Certains systèmes de lêve-vitre électrique connus pour véhicule automobile comportent une chaîne cinématique reliant la vitre à un moteur électrique, ce dernier produisant un couple pour entraîner la vitre dans un mouvement de monte et baisse et maintenant ce couple pendant quelques fractions de seconde en fin de course de fermeture de la vitre pour solliciter celle-ci en butée contre la glissière supérieure du cadre de fenêtre, afin d'assurer une fermeture correcte de la vitre, et d'éviter tout problème d'étanchéité a l'eau, d'étanchéité à l'air pour éliminer les bruits aérodynamiques, et de descente intempestive de la vitre lorsque l'on claque la portière.
Toutefois, cette mise en butée de la vitre en fin de course de fermeture engendre des contraintes dans toute la chaîne cinématique du leve-vitre, ce qui peut provoquer une déformation des éléments constitutifs de la chaîne cinématique lorsque la vitre reste longtemps dans cette position sans être utilisée. Une telle déformation peut provoquer l'apparition d'efforts parasites lors de l'actionnement ultérieur du lève-vitre et conduire à une usure prématurée et donc à une panne du système.
En particulier, lorsque la chaîne cinématique comporte une roue dentée en plastique engrènant avec une vis sans fin entraînée par le moteur électrique, la roue en plastique peut fluer sous l'effet des contraintes et donner naissance à une excentricité provoquant un effort anormal lors du fonctionnement ultérieur du mécanisme de monte et baisse du lève-vitre.
Ce problème est d'autant plus sensible si le système lève-vitre est équipé d'un dispositif anti-pincement pour éviter qu'une personne se fasse pincer la main ou la tête entre la vitre et son cadre lors de la montée automatique de la vitre. Un tel système anti-pincement arrête la montée de la vitre et abaisse celle-ci lorsque la chaîne cinématique est mise en contrainte, notamment sous l'effet du pincement d'une partie du corps de l'utilisateur. Bien entendu, ce dispositif est déconnecté ou inhibé en toute fin de course de fermeture de la vitre pour permettre sa mise en butée.
Dans ce cas, l'effort parasite résultant d'une déformation éventuelle de la chaîne cinématique serait alors interprété par le dispositif anti-pincement comme un effort de pincement, ce qui provoquerait sa mise en action intempestive et le blocage de la vitre en position basse ouverte.
L'invention a donc pour but d'éliminer les inconvénients précités et de proposer un système lève-vitre électrique qui libère la chaîne cinématique des contraintes de déformation en fin de course de fermeture de la vitre sans altérer la fermeture correcte de celle-ci tant du point de vue de son étanchéité à l'air et à l'eau que de sa tenue en cas de claquage de la portière.
L'invention a également pour but de proposer un système lève-vitre électrique qui empêche, le cas échéant, la mise en action intempestive d'un dispositif anti-pincement.
Bien entendu, le problème de déformation de la chaîne cinématique pourrait également se poser si la vitre était sollicitée en butée en fin de course d'ouverture.
L'invention à pour objet de remédier à cet inconvénient en prévoyant de ne pas munir les lecteurs de circuits de sécurité. De ce fait la gestion de ces lecteurs va être complètement supprimée. Il n'y en a plus du tout. Pour néanmoins conserver le confort de sécurité apporté par le système de cumul associé à un certificat, il est prévu de maintenir un tel système.
Cependant, dans l'invention, la paramétrisation des algorithmes de chiffrement ne sera plus effectuée par une clé privée secrète contenue dans le circuit de sécurité, lui-même contenu dans le lecteur, mais par une clé privée secrète contenue dans une mémoire de la carte à puce du client. On montrera ainsi qu'on peut s'affranchir totalement de la nécessité d'avoir un circuit SAM dans le lecteur. En pratique, l'exécution des algorithmes de chiffrement sera même réalisée dans la carte. Cependant cette exécution pourrait être réalisée dans le lecteur, par un microprocesseur de ce lecteur, sous réserve que ce lecteur reçoive, de la carte, la clé privée secrète de chiffrement.
L'invention a donc pour objet un procédé de certification d'une information dans un lecteur, caractérisé en ce que - on stocke dans une carte à puce un couple de clefs de chiffrement associées, clef privée de la carte et clef publique de la carte, - on transmet à la carte à puce un certificat précédent correspondant à une information précédente, et une clef publique précédente, - on retrouve, de préférence dans la carte, une image de l'information précédente par un algorithme de chiffrement du certificat précédent en utilisant la clef publique précédente, - on vérifie que l'image de l'information est cohérente, - on calcule une nouvelle information sur la base de l'information précédente et d'une information de transaction, - on calcule un nouveau certificat, de préférence dans la carte, par un algorithme de chiffrement de la nouvelle information paramètre et par la clef secrète de la carte, et on obtient le nouveau certificat correspondant à la nouvelle information, - et on mémorise dans le lecteur le nouveau certificat correspondant à la nouvelle information, et la clef publique de la carte.
On rappelle qu'à partir de deux clés associées on peut signer, c'est-à-dire chiffrer, des données avec une clé (par exemple une clé privée) et les déchiffrer avec la clé associée (par exemple une clé publique) ou vice-versa. Par ailleurs, des clés associées ne peuvent être trouvées, l'une à partir de l'autre, que dans un seul sens: une clé privée pouvant engendrer une clé publique. Dans le cas d'algorithmes de type DES, on parle de clés mères et de clés filles, une clé mère pouvant avoir plusieurs filles.
Le principe de l'invention est donc de stocker dans un terminal un certificat, CERTIFICAT 0, relatif à un montant et à une clé publique CPO. La clé publique CPO correspond à une clé privée CSO avec laquelle le certificat CERTIFICAT O a été élaboré de manière sécurisée (dans la carte). Cette clé publique CPO est la clé publique d'une carte avec laquelle on a effectué une transaction précédente. D'une transaction à l'autre, la clé publique enregistrée dans le terminal peut changer. Dans l'invention, à chaque transaction, on stocke une autre clé publique dans le terminal. La clé publique stockée correspond à la clé privée avec laquelle le dernier certificat a été calculé. Il découle de cette solution qu'une carte peut vérifier que le cumul, CUMUL 0, stocké dans un terminal correspond bien au CERTIFICAT 0 stocké dans ce terminal puisque on peut le retrouver, dans la carte de préférence, avec la clé publique (clé publique du CERTIFICAT O) stockée elle aussi dans le terminal.
L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui suit et à l'examen des figures qui l'accompagnent. Celles-ci ne sont données qu'à titre indicatif et nullement limitatif de l'invention. Les figures montrent: - figure 1: un système avec une carte à puce et un lecteur utilisables pour mettre en oeuvre le procédé de l'invention; - figure 2 et figure 3: les principales étapes de deux algorithmes préférées, montrant les différentes étapes du procédé de l'invention; - figures 4a à 4e: des représentations schématiques d'opérations effectuées dans les circuits électroniques de la carte et/ou du lecteur.
La figure 1 montre une carte à puce 1 comprenant un circuit électronique, une puce 2. La carte 1 est destinée à entrer en relation avec un lecteur 3. Le lecteur 3 est lui-même doté de moyens pour entrer en relation avec un service central 4, le service informatique d'une banque par exemple, périodiquement.
Les relations entre le lecteur 3 et le service 4 de la banque sont de type connu et n'interviennent pas dans l'invention. Le circuit électronique 2 de la carte à puce comporte un microprocesseur 5 en relation par un bus 6 avec une mémoire programme 7, une mémoire à accès aléatoire 8 comportant notamment un ensemble de registres 9 à 13. Le bus 6 est encore en relation avec une mémoire non volatile 14 et une interface de connexion représentée par un connecteur 15. La mémoire programme 7 et la mémoire non volatile 14 seront, par exemple, constituée à base de cellules mémoires de type EPROM ou EEPROM , ou du type mémoire à accès aléatoire sauvegardée, alors que la mémoire 8 va comporter un ensemble de mémoires statiques ou dynamiques volatiles.
La mémoire 8 n'est cependant pas nécessairement volatile. Le lecteur 3 comporte un connecteur 16 destiné à venir au contact du connecteur 15 de la carte à puce 1 quand celle-ci est engagée dans le lecteur. Le lecteur 3 comporte également, de préférence, un microprocesseur 17 en relation par un bus 18 avec une mémoire programme 19 et une mémoire de données 20. De préférence, la mémoire 19 et la mémoire 20 sont non volatiles.
Les mémoires programmes 7 et 19 comportent les programmes exécutables par les microprocesseurs 5 et 17 respectivement pour effectuer entre autres les opérations conformes au procédé de l'invention d'une part, et pour assurer par ailleurs périodiquement le transfert des informations contenues dans la mémoire 20 au service 4 de la banque d'autre part. A l'initialisation du procédé, le centre serveur 4 peut avoir téléchargé dans les lecteurs 3 un certificat correspondant à un cumul égal à zéro et résultant d'un algorithme de chiffrement (RSA par exemple) effectué sur ce cumul zéro avec une clé privée initiale d'une carte fictive. La clé publique correspondant à ce cumul zéro est aussi téléchargée dans les lecteurs 3. Cette clé privée de certification est conservée par le centre serveur 4 (qui est l'émetteur de la carte) tandis que la clé publique de certification correspondante est téléchargée dans les terminaux.
Le procédé de l'invention implique qu'on stocke dans le circuit 2 de la carte 1, notamment dans la mémoire non volatile 14, un couple de clés de chiffrement associées: une clé privée, CSl pour la carte 1, et une clé publique, CPl pour la carte 1 également. Par ailleurs, on stocke dans la mémoire 20 du lecteur, de préférence d'une manière non volatile au cas où il y aurait une coupure de courant, un certificat précédent CERTIFICAT 0, une clé publique CPO relative à une carte à puce précédente avec laquelle le certificat mémorisé, CERTIFICAT O, a été constitué.
On va décrire une solution préférée dans laquelle le CUMUL 0 est lui-même également stocké dans le lecteur 3. Cependant, comme on le verra par la suite, compte tenu de la certification qui est une redondance du cumul, on pourrait même éviter d'avoir à stocker ce cumul lui-même. Pour l'instant on admettra qu'un cumul CUMUL 0, relatif à une transaction précédente, est également stocké dans la mémoire 20.
Dans une première opération, étape 21, figure 2 ou 3, on met en oeuvre un protocole d'entrée en relation de la carte 1 avec le lecteur 3. Ce protocole est préliminaire à l'invention, il est de type connu et, en ce qui concerne l'invention, il ne nécessite aucune particularité. D'une manière habituelle cependant, ce protocole de reconnaissance et d'entrée en relation, comportera l'obligation pour l'acheteur de composer son code secret sur un clavier du lecteur de manière à ce que le code secret puisse être vérifié par ce lecteur.
Une première étape du procédé, étape 22, figure 2, comporte l'envoi par le lecteur 3 à la carte 1 du dernier état de cumul mémorisé dans ce lecteur. En pratique, le lecteur envoie donc le CERTIFICAT O, la clé publique CPO du CERTIFICAT O et, de préférence, le CUMUL O à la carte 1. La carte 1 reçoit au cours d'une étape 23 ces éléments, et le programme contenu dans la mémoire 7 provoque le stockage du cumul CUMUL 0 dans le registre 9 de cumul, du certificat CERTIFICAT 0 dans le registre 10 de certificat et de la clé publique CPO du certificat CERTIFICAT 0 dans le registre 1l de la mémoire 8.
Selon l'invention, la carte va premièrement se livrer à une opération de vérification de la cohérence du lecteur. Elle vérifie en fait la cohérence des informations: structure ou format des certificats, après chiffrement de ce certificat en utilisant la clé publique. La carte teste en quelque sorte le fait que le lecteur ne soit pas un lecteur falsifié ou frauduleux ou que les informations n'aient pas été manipulées. Dans ce but, d'une manière préférée, on calcule dans la carte, opération 24, une image du cumul CUMUL 0, appelé ici CUMUL O'. La figure 4a montre fonctionnellement le principe de l'étape 24. Cette étape consiste à chiffrer le certificat CERTIFICAT O (disponible maintenant dans le registre 10) par un algorithme de type retenu dans le système, par exemple ici, pour être simple, un algorithme de type RSA. La mise en oeuvre de l'algorithme est effectuée par utilisation de la clé publique CPO disponible maintenant dans le registre 11.
On rappelle que la clé publique CPO relative à une carte 0 précédente, est associée à une clé privée CSO qui est inconnue. En effet, la clé privée CSO est contenue, de manière sécurisée, dans une carte 0 précédente à laquelle on n'a pas accès. La composition du certificat CERTIFICAT O par une carte précédente a consisté à chiffrer le CUMUL O par la clé privée CSO de manière à obtenir le certificat CERTIFICAT O.
Les moyens d'ancrage destinés au montage de la porte sur la paroi, comprennent deux platines d'appui, destinées à être placées contre et rigidement fixées à la
paroi et/ou à un plan horizontal du véhicule.
Une poutre de suspension du vantail est essentiellement constituée par un rail de moyens de guidage longitudinal, par exemple un rail de glissière télescopique, en "U" couché à concavité tournée transversalement vers l'intérieur de la porte. Des moyens de guidage transversal du vantail comprennent au moins un coulisseau rigidement fixé aux moyens d'ancrage d'une part et d'autre part à la poutre de suspension, par exemple ces moyens comportent deux coulisseaux cylindriques transversaux, dans le cas d'une
porte louvoyante coulissante.
Les moyens de motorisation comportent une
alimentation flexible ou analogues.
La poutre de suspension comporte des moyens d'assemblage d'éléments modulaires, aptes à conformer le dispositif opérateur à l'aide de constituants choisis,
selon la porte de destination.
Un autre objet de l'invention est une porte équipée, par exemple à un bord supérieur de sa baie, d'au moins un dispositif motorisé de verrouillage tel qu'évoqué
Cette porte est montée dans une paroi o est ménagée la baie, et dont sont rigidement solidaires des
moyens d'ancrage, par exemple par vissage.
Encore un autre objet de l'invention est un véhicule ferroviaire équipé d'au moins un dispositif et/ou
une porte tels qu'évoqués.
*11 2768683
Le protocole de lyse a été réalisé pendant deux minutes. Des cartes telles que décrites ci-dessus avec un diamètre de 30 cm (Vc = 2,8 ml/puits) ont été utilisées pour chaque essai. Le volume de la suspension bactérienne a été fixée à 700 p1 /puits et le volume de billes a varié de 90 à 510 pl/puits. Le coefficient a a varié de 1,4 à 7,8. Après l'étape de vortex, le pourcentage de lyse des échantillons recueillis a été analysé par mesure de densité optique à 550 nm, les acides nucléiques libérés ont été observés sur gel d'agarose et quantifiés par analyse Vidas.
La figure 5 indique le pourcentage de lyse obtenu en fonction du coefficient a. La lyse de S.epidermidis est efficace avec un contenant format "carte" pour des valeurs du coefficient inférieures ou égales à 2,1 : lorsque a est compris entre 1,4 et 2,1, le pourcentage de lyse est compris entre 45% et 75%. De préférence, la valeur optimale du coefficient devrait être inférieure à 1,4 car même pour des valeurs de a s'approchant de 1,4, les valeurs de pourcentage de lyse n'arrivent pas à un plateau. L'analyse sur gel d'agarose 0,88 du lysat montre que les profils de migration nucléiques libérés ne sont pas modifiés quelles que soient les valeurs de a. La quantité d'acide nucléique mesurée par analyse Vidas est directement corrélée au pourcentage de lyse.
Exemple 2 : influence du coefficient ss sur l'efficacité de la lyse par vortex - Tube Eppendorf Le protocole de lyse a été réalisé en présence d'un rapport constant entre le volume apparent de billes et le volume de l'échantillon liquide < a = Ve/Vb = 3,3) pendant 2 minutes. Le volume de la suspension bactérienne a varié entre 100 pl et 1 ml. Soit Ve, le volume de l'échantillon liquide et Vc, le volume utile ou disponible du contenant tel que Ve < Vc et Vc = Q.Ve avec Q étant un nombre réel positif supérieur à 0, le coefficient Q a varié de 1,5 à 15. Les expériences ont été réalisées en tube Eppendorf, soit Vc = 1,5ml. Après l'étape de vortex, les échantillons recueillis sont analysés par mesure de densité optique à 550 nm, les acides nucléiques dans le lysat sont observés sur gel d'agarose 0,8% et analysés par analyse Vidas.