INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La composition pharmaceutique pour l'administration par voie nasale de l'invention peut contenir également tout véhicule pharmaceutiquement compatible avec les BVSM et/ou l'agent actif, ainsi qu'éventuellement un agent de perméabilisation de la muqueuse nasale. Ces compositions peuvent se présenter sous toute forme adaptée à l'administration par voie nasale comme des crèmes, des gels, de sprays, des poudres coatées ou non sur un support, etc....
Dans la composition pharmaceutique pour l'administration par voie nasale de l'invention, le principe actif est un agent thérapeutique ou de diagnostic.
A titre, d'agent thérapeutique, on peut citer ceux choisis parmi : les analgésiques, anesthésiques, antalgiques, antispasmodiques, antiparkinsoniens, antiépileptiques, antimigraineux, ou tout autre agent utile dans le traitement des maladies neurodégénératives, psychiatriques ou du trouble du comportement, anticancéreux, antiviraux, antiprions, antibiotiques, ou encore des agents actifs comme des facteurs de croissance, des acides nucléiques, des vitamines, des hormones, etc....
A titre, d'agent de diagnostic, on peut citer ceux choisis parmi : les anticorps et molécules permettant de cibler des récepteurs du CNS, les agents d'imagerie médicale utilisés en IRM, scintigraphie, PET, ultrason.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent aussi comprendre un ou plusieurs agents perméabilisant la muqueuse nasale, du type de ceux définis précédemment.
L'invention concerne enfin un procédé de préparation d'une composition pharmaceutique pour l'administration nasale d'un agent actif à délivrer au SNC, ladite composition comprenant ledit principe actif et une quantité efficace d'une particule de polymère hydrophile, portant ou non des ligands ioniques et éventuellement recouverte d'une couche de composés amphiphiles consistant à mélanger le principe actif et une quantité inférieure et avantageusement très inférieure, en poids, de particules par rapport au dit principe actif. On préfère plus particulièrement, dans le procédé de l'invention, mélanger le principe actif et les particules dans un rapport, en poids, d'au moins 5 parties d'agent actif pour une partie de particule, et avantageusement d'au moins 10 parties d'agent actif pour une partie de particule.
D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent concernant la disponibilité des BVSM dans la cavité nasale, leur toxicité, leur préparation et leur utilisation dans des compositions pharmaceutiques pour l'administration par voie nasale d'agents actifs, et se référant aux dessins en annexe dans lesquels - La figure 1 montre le temps de résidence de BVSM light cationiques marqués à l'indium 111 dans la cavité nasale humaine en pourcentage de la dose administrée et en fonction du temps.
- La figure 2 représente une comparaison de l'effet de l'administration de 500 ug de morphine par voie nasale, seule ou en présence de BVSM Light cationique à différentes doses: 0,2 ug, 2 ug, 10 ug.
- La figure 3 représente une comparaison de l'effet de l'administration de 500 ug de morphine par voie nasale, seule ou en présence de BVSM Light cationique à la dose de 2 ug.
- La figure 4 représente une comparaison de l'effet de l'administration de 500 ug de morphine par voie nasale, seule ou en présence de 0,2 pg de BVSM NSP cationique.
1-4 : Transformation cellulaire par le milieu de ligation La souche DH5a est une souche déficiente en protéine RecAl, ce qui ne favorise pas les recombinaisons et réarrangements de l'ADN au sein de la cellule (notamment, les plasmides restent sous forme monomère tandis que les délétions sont évitées, page 4-13 Maniatis).
La souche est transformée par 10 l du mélange de ligation selon une variante de la méthode d'Hanahan ( J.
Mol. Biol. 166,557, 1983) conduisant à une efficacité de 107 colonies/ug d'ADN. La sélection des cellules contenant le recombinant se fait sur milieu LB avec une concentration de 200ug/ml d'ampicilline, et des boîtes de Pétri recouvertes de 200ul d'X-gal en solution dans le DMF.
1-5 : Concentration en histones Une première valeur de la concentration en histones a été déterminée en calculant la quantité du mélange naturel d'histones supposée nécessaire à la formation d'un nucléosome toutes les 200 paires de base, et en choisissant délibérément de ne prendre qu'une partie de la quantité de protéine ainsi déterminée (le quart dans cet exemple) pour éviter la saturation du fragment en protéine.
La loi qui en dérive est la suivante : (C) = 1. 2 10-11 mg de mélange d'histones / ng d'ADN/ pb du recombinant Cette loi a été appliquée à la complexation du fragment le plus long, c'est-à-dire fR4 dans le cas
présent. La complexation a été suivie par gel de retardement dans un gel à 0.4% d'agarose, en présence de la concentration déterminée et deux autres concentrations l'encadrant à 50% et 200% (Figure 1).
La loi réajustée à partir de ces gels et qui a été employée par la suite est très proche de la valeur calculée : (C) = 1. 5 10-11 mg du mélange d'histones /ng d'ADN/ pb de recombinant Chaque ligation a été effectuée en présence de 3 concentrations de protéine, la quantité dérivant de cette loi, et deux quantités l'encadrant à 50% et 200%.
Sur ces gels, on a : - Voie 1 : Fragment fR4 sans protéines (excepté dans le gel correspondant à l'essai 4), - Voie 2 : Fragment fR4 + 0,025 g de protéine, - Voie 3 : Fragment fR4 + 0,05 g de protéine, - Voie 4 : Fragment fR4 + 0,1 g de protéine, - Voie 5 : Fragment fR4 + 0,2 g de protéine (essai 4) Pour 500 ng de fragment fR4, 0,025 ug , 0,05 ug et 0,1 ug du mélange d'histone remplissent les conditions.
Les ligations se déroulent aux trois concentrations corespondantes.
1-6 : Vérification de l'absence de remaniements de séquence
Les premiers tests pour l'obtention d'un recombinant dont la séquence n'a pas subi de réarrangements est la résistance à l'ampicilline conférée à la cellule et sa capacité à exprimer la b-galactosidase (colonies bleues en présence d'X-gal) Une vérification supplémentaire est effectuée par digestion enzymatique. Ainsi, la coupure par EcoRI d'un recombinant R4-LZ correctement lié et refermé, doit résulter en 6 fragments de taille respective : 4172,3076, 2875,2021, 393 et 283pb.
Ces résultats sont illustrés par la figure 2, dans laquelle : - Voie 1 : marqueur #x174/HaeIII - Voie 2 : marqueur 1Kb - Voie 3,5, 7 : recombinants sans coupure - Voie 4,6, 8 : digestion de ces mêmes recombinants par EcoRI 1-7 : Autres tests préliminaires La transformation d'E. coli a été effectuée avec le mélange de ligation ne contenant qu'un seul des deux fragments, en présence ou absence d'histones, pour confirmer la pureté électrophorétique des fragments et l' absence de refermeture au sein de la cellule. Un gel de retardement a été effectué sur le fragment fR4 avant chaque ligation avec ce fragment pour monitorer la complexation de l'ADN par la protéine. La séparation se fait sur gel d'agarose standard de 0.4%. Ce gel est effectué dans les mêmes conditions que les expériences de ligation, dans 20ul déposés sur gel et est repris dans la figure 4, dans laquelle :
- Voie 1 : mélange de ligation (recombinant R4-LZ) sans histones (fragments fR4-8159pb- et fLZ-3875pb)fléchés) - Voie 2 : mélange de ligation en présence de 0,025 g d'histones - Voie 3 : mélange de ligation en présence de 0,05 g d'histones - Voie 4 : recombinant R4-LZ purifié - Voie 5 : marqueur 1Kb (Gibco BRL) - Voie 6 : marqueur #x174RF/HaeIII (Gibco BRL) II : Résultats Les 13 premiers essais ont été réalisés en se fondant sur la quantité de protéine déterminée par gel de retardement à partir de la complexation du seul fragment fR4, au lieu de la loi résultant de ces expériences. Or, la taille (8159pb) du fragment fR4, ne représente que les 2/3 de la taille totale du recombinant. En employant cette valeur pour les ligations, la loi n'est suivie qu'aux deux tiers (loi aux 2/3). Les essais les plus récents, qui sont aussi les plus performants ont été réalisés en tenant compte de la quantité de protéine (1/3 de plus) qu'il fallait ajouter pour complexer l'ensemble du vecteur et de l'insert de la même manière que le seul fragment.
La présence d'inserts lacZ a été testée par la capacité de la colonie sélectionnée, à hydrolyser le composé X-gal (coloration bleue) et par l'obtention d'un profil correct de coupure enzymatique (test EcoRI) comme détaillé dans la légende de figure 2.
Nombre de recombinants R4-LZ (12034pb) obtenus à partir des ligations en présence du mélange d'histones : Essai 1 2 3 4 4' 5 6 (- protéine) 0 0 0 0 0 0 (+ protéine) N bre total 3,0,0 0,0,1 2,0,0 1,4,0,0 7,3,0,0 0,0,1 0,0,0 AvecinsertlacZ 3,0,0 0,0,1 0,0,0 0,0,0,0 0,2,0,0 0,0,1 0,0,0 Essai 7 8 9 10 11 11' (- protéine) 0 0 0 0 0 0 (+ protéine) N bre total 0,0,0 0,0,0 0,1,0 3,5,3 0,3,2 1,1,0 Avec insert 0,0,0 0,0,0 0,1,0 1,1,0 0,3,2 0,0,0 Essai 12 12' 12" 12'" 13 (-protéine) 1(sans insert) 0 (+protéine) N bre total 1,2,2 1,2,2 4,3,3 1,3,1 0,0,0 Avec insert 0,2,1 1,0,0 3,2,1 0,2,1 Essai 14 15 (- protéine) 0 0 (+protéine) Nbre total 11,8,2 0,1,0 Avec insert 9,2,2 0,1,0 i)- Essais 1-6, 9-13 : loi aux 2/3 - Essai 4 et 4' : 4 quantités de protéine ont été testée ; 50,100, 200, 400%
- Essai 7 : quantité de protéine 3 fois plus forte (150,300, 600%) - Essai 8 : quantité de protéine 10 fois plus forte (500,1000, 2000%) (pour compenser un éventuel défaut de complexation due à une concentration en ADN plus faible) - Essais 14 et: 15 : loi exacte ii) Effet du stockage et de la congélation de la protéine : - Essai 2 : dilution de la protéine à partir d'une solution-stock de 100mg/ml dans le tampon de dilution contenant 50% de glycérol, conservée à -20 C, pour tester l'effet du stockage. Pour tous les autres essais, la solution de protéine a été fraîchement préparée à partir de la poudre lyophilisée. iii) Quantité d'ADN - Essais 1-5, 9-14 :fragment fR4 : 370ng fragment fLZ : 190ng (quantités équimoléculaires de vecteur et d'insert, 10 l de milieu de ligation) - Essais 6, 7 et 15 :fragment fR4 150ng fragment fLZ 75ng (quantités équimoléculaires 2. 5 fois plus faibles, lOul) - Essai 8 : fragment fR4 :150ng fragment fLZ : 190ng (3 fois plus de molécules fLZ que de molécules fR4, 10 l)
Le cas qui associe les deux problèmes est le démarrage à froid. c'est un des cas les plus durs 1'allumage en effet, les premiers cycles se font en remplissage total (donc pression forte, pour une mme avance), en plus l'avance est faible pour ne pas inverser le sens de rotation moteur, et la température est basse (car le moteur n'a pas encore tourné), enfin la richesse dans le cylindre est souvent très basse avec un mouillage importante. La chaleur part des gaz chauds qui viennent de bruler, jusqu'à des températures de 2500 C.
Le flux de chaleur pénètre par toutes les surfaces en contact avec ces gaz chauds, en particulier les pièces qui saillent comme les électrodes, le bec de céramique, et éventuellement le bord du culot.
Les points les plus chauds sont donc les bouts les plus éloignés thermiquement de la culasse, comme les extrémités des électrodes (qui peuvent atteindre 750 à 800 C), mais plus encore, le bord de la céramique (qui est un peu moins conductrice que les métaux) et qui peut atteindre 800 à 900 C. Lorsque le moteur est à puissance maximale, les parois du cylindre dépassent rarement 350 C. La température du gaz ne dépend que de la position du piston. Au moment 1'allumage, elle varie de 150 à 420 C.
L'étincelle a une phase de formation très rapide (avec des vitesses de l'ordre de plusieurs milliers de km/s). L'aérodynamique n'a alors pas d'effets directs sur l'allure de l'étincelle qui va suivre les lignes de champs les plus courtes. Cependant, une fois formée, elle est entraînée par l'air qui l'environne. En effet, les ions du canal conducteur ont des vitesse de diffusion faible devant les vitesse d'écoulement local (1 a 50 m/s). Si les turbulences sont faible, le champ de vitesse autour des électrodes est à peu prés constant, 1'étincelle se déforme en arc de cercle, puis en fer à cheval, elle s'allonge beaucoup (une dizaine de fois l'écartement), et s'éloigne des électrodes s'il n'y a pas de cisaillement. Prenant en compte les contraintes brièvement décrites ci-dessus l'ajout, d'une capsule soudée au culot de la bougie va éliminer une partie importante. des problèmes évoqués La bougie d'allumage pour système à double allumage décrite dans la présente invention a été inventée pour éliminer les substances nocives des gaz d'échappement du moteur.
Une capsule en forme de"LT fig. lN (ll), dont le volume intérieur forme une chambre d'allumage fig. I N (8), est prévue afin d'améliorer 1'allumage.
La capsule (1 I) comporte deux orifices fig. 2 N (9) a et (9) b de façon a ce que la chambre d'allumage (8) puisse communiquer avec la chambre de combustion principale du moteur.
La surface intérieur de la capsule est traversée par deux barrettes fig. 2 N (6) et (7) qui sont positionnées à 90 I'une de l'autre. L'angle de coupure de ces barrettes se trouve exactement sous l'électrode central fig. I N (4), et forme l'électrode de terre. L'intervalle d'étincelle fig. 1 N (12) est défini par la surface de bout de l'électrode centrale (4) et la surface de croisement des barrettes. fig. IN (6) et (7).
La barrette transversale fig. 2 N (6) a pour fonction de constituer un obstacle en vue de canaliser le flux du mélange de combustion formé d'essence et d'air contenu dans le cylindre traversant la capsule en forme de"U'. Le mélange ainsi dirigé frétant la surface de fond antérieure de la capsule et des barrettes récupère partiellement la chaleur stockée par la capsule et les barrettes lors de la combustion précédente et augmente sa température avant son passage entre les électrodes.
Pour améliorer les turbulences favorables au réchauffement du mélange de combustion la hauteur de barrette fig. 3 N (6) diminue progressivement jusqu'au milieu.
L'augmentation de la température du mélange combustible près de ltélectrode facilite 1'allumage surtout dans les cas d'utilisation d'un mélange pauvre, ou mal préparé. Selon le moteur et le mélange utilisés on peut multiplier le nombre de barrettes de façon à augmenter la récupération thermique.
Dans le cas où la bougie n'est pas placée au centre de la chambre de combustion il faut prévoir les orifices qui dirigent la projection de la flamme parallèlement à la surface du piston, dans un angle différent de 180 (voir dessin N 4).
Le nombre des orifices et leur taille dans la capsule doivent tre limités afin de garder la puissance de projection de flamme, déjà constituée. Pour les nouveaux types de chambre de combustion et de pistons il faut sélectionner la largeur des orifices et l'angle favorable pendant des essais spécifiques. L'angle de projection de la flamme est surtout très important pour le moteur à deux temps.
Il est possible d'équiper la capsule avec une seule barrette fig. I N (6) ou (7) en fonction des performances préexistantes des moteurs, Pour diminuer la tension appliquée aux électrodes, il est prévu de laisser un espace libre à l'intersection des barrettes fig. l N (7) et (6) d'un mm maximum pour constituer un canon électronique où un canon à ions fig. IN (1) Le diamètre du trou du canon est à déterminer en fonction de 1'alliage composant la barrette afin de palier l'oxydation des parois On peut égaiement substituer au trou, une barrette fendue en son milieu de quelques dixièmes de millimètre (fig. 5).
La barrette horizontale fig. l N (6) traverse la barrette transversale fig. IN (7) exactement au dessus de l'électrode centrale fig. l (4). La barrette horizontale peut remplir la fonction supplémentaire d'électrode de terre, au cas où l'arc est déplacé par le courant du mélange combustible.
Les cavités constituées sont remplies par le combustible autour de l'électrode centrale et au fond intérieur de la capsule, combustible qui brute en seconde phase permettant d'obtenir une vitesse accrue du mélange allumé au moment de la sortie de la capsule. La propagation de la flamme dans la chambre de combustion a tendance à brûler d'abord près de la surface du cylindre. Cette forme de combustion permet de créer des turbulences qu'on ne peut obtenir dans un moteur à bas régime en raison des géométries de la chambre de combustion et du piston.
L'invention est un procédé de production simultanée d'une décharge à étincelles, et la projection dirigée de flammes créant deux ou plusieurs foyers de combustion indépendants générés par une seule bougie d'allumage.
Pour choisir le dernier facteur premier pf-eon procède comme suit, en distinguant trois cas : (1)Casoùfe-1>m Dans le cas où f-e-1 > m, on choisit pf-econgru à 3 modulo 4. (2) Cas où f-e-1 = m Dans le cas où f-e-1 = ni, on calcule Proril,-,,,(g.) par rapport aux f-e-1 premiers facteurs premiers, de p, à p a si ProfÙr-e-I(gm) est plat, on choisit Pr-e-I tel qu'il soit
complémentaire de p, par rapport à gm , ' sinon, on procède comme il est ci-après stipulé.
On choisit parmi les m-1 nombres de bases de g, à gm-1 et toutes leurs combinaisons multiplicatives le nombre, ci-après dénommé g, tel que Profili(g) = Profilai) puis, on choisit ensuite pf tel que ProfHg) Profila).
(3) Cas où f e-1 On calcule Proiîlf~e.1(gf.e~1) par rapport aux f-e-1 premiers facteurs premiers, de pl à Pr-e-I, Deux cas sont alors à considérer. Selon l'un ou l'autre de ces deux cas, la première condition sera différente.
Si Profil f .1(gf-m) est plat, on choisit p tel qu'il satisfasse à la première condition d'être complémentaire de pl par rapport à g,,, (première condition selon le premier cas) sinon, on choisit parmi les f-e-1 nombres de bases de g, à gm-1 et toutes leurs combinaisons multiplicatives le nombre, ci- après dénommé g, tel que Profil(g) = Proflf 1(gf~e-,) puis, on choisit ensuite p tel qu'il satisfasse à la condition d'être tel que Profila (g) Profilf-e (g",), (première condition selon le deuxième cas) (3. 2) Deuxième condition On sélectionne parmi l'ensemble des derniers nombres de bases de gf-eà gm ceux dont le profil ProfHt-e-J(g} est plat puis, on choisit pre tel qu'il satisfasse à la condition d'être complémentaire de p1 par rapport à chacun des nombres de bases ainsi sélectionnés (deuxième condition).
Choix des e facteurs premiers congrus à 1 modulo 4 Pour produire les e facteurs premiers congrus à 1 modulo 4, on évalue chaque candidat facteur premier p , de pf-e à pf , en lui faisant subir les deux tests successifs suivants.
(1) Premier test On calcule le symbole de Legendre de chaque nombre de base g,,de g1 à gm , par rapport au facteur premier p candidat, #si le symbole de Legendre est égal à -l, on rejette le candidat p, # si le symbole de Legendre est égal à +1, on poursuit l'évaluation du candidat p en passant au nombre de base suivant puis, lorsque le dernier nombre de base a été pris en compte on passe au deuxième test, (2) Deuxième test, On calcule un nombre entier t tel que p-1 est divisible par 2t mais pas par 2+' puis, on calcule un entier s tel que s = (p-l+2t)/2M. On applique la clé ( s, p) à chaque valeur publique Gi pour obtenir un résultat r r= G; 9 mod p Si r est égal à g, ou - gi, on poursuit le deuxième test en passant à la valeur publique Gi+1 suivante.
Si r est différent de g, ou - Gi, on calcule un facteur u en appliquant l'algorithme ci-après spécifié pour un indice il allant de 1 à t-2.
L'algorithme met en oeuvre deux variables : w initialisée par r et jj = 2" prenant des valeurs allant de 2 à 21"2 , ainsi qu'un nombre b obtenu par l'application de la clé( (p-l)/2', p) à un résidu non quadratique de CG(p). L'algorithme consiste à répéter autant que nécessaire, la séquence suivante: #Etape 1 : on calcule w2/G, (mod p).
#Etape 2 : on élève le résultat à la puissance 2"'-'. Deux cas sont à considérer.
Premier cas Si on obtient +1 , on passe à la valeur publique Ci+, suivante et on poursuit le deuxième test pour cette valeur publique.
Deuxième cas.
Si on obtient -1, on calcule jj = 2" puis, on remplace w par w.b" (mod p).
Ensuite, on poursuit l'algorithme pour la valeur suivante de l'indice ii.
A l'issue de l'algorithme, la valeur figurant dans la variable jj permet de calculer un nombre entier u par la relation jj = 2t-u puis, on calcule l'expression t-u. Deux cas se présentent : # si t-u #si t-u z k, on continue l'évaluation du candidat p en passant à la valeur publique Gi+1 suivante puis, en poursuivant le deuxième test.
Le candidat p est accepté comme facteur premier congru à 1 modulo 4 si à l'issue du deuxième test, pour toutes les m valeurs publiques G; , il n'a pas été rejeté.
- Synthèse des peptides Les peptides qui couvrent la séquence de l'allergène majeur du venin d'abeille (figure 1) ont été choisis à partir de la séquence déduite de celle de l'ADN complémentaire correspondant (36). Tous les peptides ont été synthétisés selon la stratégie Fmoc en synthèse parallèle sur phase solide, purifiés par HPLC et contrôlés par spectrométrie de masse (ES-MS).
. Purification des molécules HLA-DR Les molécules HLA-DR sont purifiées à partir de différentes lignées EBV homozygotes (52) par immunoaffinité. On peut notamment utiliser la méthode décrite dans Southwood et al. (52). Leur origine et les différents allèles qui les caractérisent sont décrits dans le Tableau IV.
Lignées Spécificités Allèles DRB Autres allèles DRB LG2 (52) HLA-DR1 DRB1*0101 HOM2 SCHU HLA-DR2 DRB 1*1501 DRB5*0101 MAT (52) HLA-DR3 DRB1*0301 DRB3*0101 STEILIN BOLETH HLA-DR4 DRB 1*0401 DRB4*0101 PREISS (52) PITOUT(52) HLA-DR7 DRB1*0701 DRB4*0101 SWEIG (52) HLA-DR11 DRB1*1101 DRB3*0202 HHKB (46) HLA-DR13 DRB1*1301 DRB3*0101
Les hybridomes sécréteurs d'un anticorps monomorphique spécifique des molécules HLA-DR est notamment celui décrit dans Southwood et al. (52) ou celui décrit dans Posch et al. (42). Les anticorps sont purifiés à partir de surnageants de culture sur des colonnes de Protéine A-Sépharose. Ces anticorps sont couplés sur des colonnes Sépharose 4B ou Protéine A-Sépharose pour la purification des molécules HLA-DR.
. Tests de liaison HLA-DR/peptides Les tests de liaison des peptides aux molécules HLA-DR sont des tests en compétition avec une révélation immuno-enzymatique, initialement mis au point par Hill sur la molécule HLA-DR (37). Ils sont effectués en plaques 96 puits, ce qui permet d'étudier dans la même expérience de nombreux échantillons. Brièvement, les molécules HLA-DR purifiées sont incubées avec un peptide biotinylé qui sert de traceur et différentes concentrations du peptide à tester.
Après 24 à 72 heures d'incubation, les échantillons sont neutralisés, puis 100 (il de chaque échantillon sont transférés sur une plaque ELISA préalablement sensibilisée par l'anticorps monomorphique spécifique des molécules HLA-DR. Les complexes molécules HLA-DR/peptides biotinylés, fixés au fond de la plaque par l'intermédiaire de l'anticorps monomorphique spécifique des molécules HLA-DR sont
révélés au moyen de conjugué streptavidine-phosphatase et d'un substrat fluorescent. L'activité de chaque peptide est caractérisée par la concentration de ce peptide qui inhibe 50% de la liaison du peptide biotinylé (IC50).
. Choix et optimisation des tests de liaison Choix des allèles Les allèles étudiés sont tous les allèles de la population française dont la fréquence dépasse les 5% de la population.
Il s'agit des allèles DRB1*0101, DRB1*0301, DRB1*0401, DRB 1 *0701, DRB 1 * 1101, DRB 1 *1301 et DRBI*1501 (Tableau 1). Ils représentent à eux seuls 53 à 82% des allèles des populations caucasiennes et font partie de différentes spécificités des séries HLA-DR.
Spécificité des tests Le choix des peptides biotinylés est l'élément déterminant de la spécificité du test. La plupart des cellules utilisées possèdent deux molécules HLA-DR différentes qui sont toutes les deux purifiées par un anticorps monomorphique spécifique des molécules HLA-DR et toutes les deux reconnues par le même anticorps. De manière à étudier sans ambiguïté la liaison d'un peptide à l'allèle DRB 1, il est nécessaire de s'assurer que le peptide biotinylé lie cet allèle et ne lie pas le produit de l'autre gène.
Dans ce but, un certain nombre de peptides, décrits dans le Tableau V, ont été utilisés.
Tableau V