INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Sur les 6 plasmides séquences, un seul présente 3 mutations alors que pour les 5 autres, la reverse transcriptase de HIV-1a incorporé jusqu'à 4 nucléotides incorrects sur le même brin Tous les mésappariements sur le premier site sont des G, ceux sur les sites suivants sont majoritairement des G aussi, avec des C mais jamais de U Les mésappariements sont de type T :G sont également présents des mésappariements de type T :C avec une fréquence d'apparition plus faible (17 contre 6 en considérant tous les mésappariements quelque soit leur position) Mais tous les sites où ont lieu l'incorporation de nucléotides incorrects ne sont pas égaux vis-à-vis du type de mésappariements engendrés par la reverse transcriptase de HIV-1 au niveau de la 1ere misincorporation, sur les 6 plasmides mutés, T G est l'unique mèsappariement observé, alors qu'au niveau de la 2ème misincorporation T. C est aussi fréquent que T G Sur le 3ème et 4ème site de misincorporation, G est introduit préférentiellement par rapport à la base C avec respectivement 4 T:G contre 2 T C et 4 T:G contre 1 T C Aucune base U n'est incorporée pour former le mésappariement T.U.
5.2.3. Conclusion Lors de l'étude des mutants obtenus lors de la réaction moins A en présence des substrats naturels de la reverse transcriptase de HIV-1, les erreurs engendrées sont des substitutions de type transition, la purine A étant préférentiellement substituée par la purine G quand le dGTP est présent dans le milieu réactionnel.
Rappelons que G peut s'apparier à T en appariement "Wobble".
L'appariement G. T, représentée figure 4. 9, ne possède pas une géométrie de type Watson-Crick (Hunter et Kennard, 1987). La paire de base G T n'induit que très peu de perturbations locales de l'hélice et la conformation globale du duplexe est peu affectée La paire GT donne lieu à des structures d'hydratation complexes (voir figure 4. 9) qui permettent de stabiliser l'appariement et l'insertion de cette paire dans la double hélice La prépondérance de la substitution G peut donc s'expliquer facilement par la stabilité de la paire de base GT.
La paire hétéropyrimidine T :C été décrite dans deux configurations symétriques seulement, la paire T :T dansla configuration symétrique et assymétrique (Donohue et Trueblood, 1960) C'est seulement dans cette dernière configuration que les positions des liens glycosyles de la paire T:T sont compatibles avec son insertion dans la double hélice. La même observation vaut pour l'une des paires T. C Les énergies d'interaction entre ces bases sont dans l'ordre T:G T.C>T T (Kudritskaya et Danilov, 1976), soit l'ordre de préférence d'incorporation en face de T (matrice) que nous observons Au niveau du premier site de mutation, la substitution par G est systématique Elle est favorisée sur les autres sites. Les deux premiers sites de mutation possèdent la même séquence locale. Une possibilité pour expliquer la présence du C au second site, mais pas au premier pourrait être trouvée dans le glissement du brin néosynthétisé, facilité par la misincorporation au niveau du premier site (fig 4.10) Mais au niveau des trois autres sites de mutation, la substitution par G ne peut êtreexpliquée par un tel glissement En présence de dGTP, dCTP et dTTP, l'ordre de préférence de substitution aux quatre sites est G C T lors de la polymérisation catalysée par la reverse transcriptase de HIV-1en l'absence de dATP.
L'analyse des plasmides mutés se limite aux quatre premiers T (matrice)
rencontrés par les enzymes Dans le cas de la reverse transcriptase de HIV-1, on observe sur le gel d'autoradiographie des extensions bien au-delà. Pour vérifier si les élongations arrêtées sont définitivement terminées ou pausent en restant actives, nous avons refait l'expérience moins A, mais au lieu de stopper la réaction après 30 min à 37 C, le dATP manquant à la concentration finale de 500 M est additionné au mélange réactionnel et la réaction est stoppée 30 min. plus tard avec 1/3 (v/v) de solution stop. Dans ces conditions, au niveau de tous les brins stoppés à une position donnée, l'élongation reprend Les complexes arrêtés sont donc toujours actifs.
L'absence de modification des profils de misincorporation en remplaçant le dTTP par le dUTP était prévisible, puisque nous avons observé en l'absence du dATP une seule incorporation d'un T en face d'un T (matrice). La paire T :T a été décrite (Donohue. et Trueblood, 1960) mais semble peu stable (Kudritskaya et Danilov V.L, 1976).
Le dITP réduit le taux d'erreur observé avec le dGTP au niveau du premier site de misinsertion de près de 50% au bout de 45 min. d'incubation. La misincorporation en présence de dITP serait donc plus difficile qu'en présence de dGTP En l'absence de dATP et dGTP, la purine I ne s'apparie à T que dans trois cas, contre 8 appariements T:C et un T:T. Les trois T:I apparaissent d'ailleurs face au premier T-135 (matrice) Nous n'avons pas trouvé de référence sur l'énergie de la paire T I, mais les taux d'insertions que nous observons sont en faveur du classement T C T:I T.T.
L'étude de la fidélité de la reverse transcriptase de HIV-1, effectuée en l'absence d'un des 3 nucléotides, a montré que le taux d'erreur de l'élongation à partir de ppt est plus fort par rapport à la polymérisation à partir de pbs. L'étude, en accord avec celles de Perrino et al., 1989 ; Yu et Goodman, 1992, montre que la reverse transcriptase étend les mésappariements plus facilement qu'elle ne les forme L'absence de bande de forte terminaison au niveau des sites de misincorporation au-delà du 1er mésappariement suggère que les paires de bases mal appariées n'affectent que peu la poursuite de la polymérisation avec la reverse transcriptase de HIV-1 Dans certains cas, en particulier avec l'amorce ppt, les mésappariements dans le brin néosynthétisé, semblent même favoriser les erreurs suivantes L'étude des mutants obtenus en l'absence de dATP lors de la polymérisation catalysée par la reverse transcriptase de HIV-1indique que les types d'erreur induits par
RESUME DE L'INVENTION La présente invention a été réalisée pour résoudre les problèmes tels que ceux qui sont mentionnés ci- dessus et son but consiste à fournir un démarreur qui soit capable de faire venir en prise le pignon avec la couronne dentée plus en douceur qu'auparavant, de façon à ce que le pignon vienne en prise avec la couronne dentée d'une excellente manière, en diminuant l'usure des engrenages et ainsi, en prolongeant la durée de vie desdits engrenages.
Un autre but consiste à fournir un démarreur qui soit capable de faire venir en prise plus en douceur le pignon avec la couronne dentée, en diminuant la taille du démarreur.
Dans le démarreur de la présente invention, des moyens élastiques et des moyens de transmission sont prévus entre la circonférence interne du piston et la circonférence externe de l'arbre de sortie et les moyens de transmission sont adaptés pour venir en contact avec l'extrémité arrière de la bague de poussée pour transmettre une force élastique des moyens élastiques à la bague de poussée, caractérisé en ce que des moyens de pression sont solidement fixés à la circonférence interne du côté arrière du piston pour pousser les moyens élastiques et déplacer.llembrayage à roue libre vers la couronne dentée par l'intermédiaire des moyens élastiques, des moyens de transmission et de la bague de poussée, les moyens de pression étant agencés en outre pour provoquer la venue en prise du pignon avec la couronne dentée par la force élastique des moyens élastiques lorsque le haut et le bas du pignon sont en accord avec ceux de la couronne dentée lorsque la surface d'extrémité du pignon est en contact avec la surface d'extrémité de la couronne dentée.
Des moyens de déplacement d'arbre de contact sont prévus pour déplacer l'arbre de contact dans une direction apte à amener le contact mobile à venir en contact avec le contact fixe lorsque le piston est attiré et déplacé pendant un certain temps par la bobine d'excitation.
Les buts, caractéristiques et avantages ci-dessus de la présente invention ainsi que d'autres, deviendront plus évidents d'après la description suivante effectuée conjointement avec les dessins annexés.
BREVE DESCRIPTION DES DESSINS La figure 1 est une vue en coupe montrant la structure d'un démarreur selon un premier mode de réalisation de la présente invention ; la figure 2 est une vue en coupe destinée à expliquer le fonctionnement du démarreur selon le premier mode de réalisation ; la figure 3 est une vue en coupe d'un mécanisme de réduction ; la figure 4 est une vue en coupe d'un embrayage à roue libre ; la figure 5 est une vue en perspective d'un arbre de sortie ; les f igures 6 (a) et 6 (b) sont des vues en perspective de l'embrayage à roue libre ; la figure 7 est une vue en perspective d'un piston et d'une plaque de transfert ; la figure 8 est une vue en coupe montrant un autre mode de réalisation de la présente invention la figure 9 est une vue en coupe montrant un exemple d'un démarreur classique ; et la figure 10 est une vue agrandie d'une partie de la figure 9.
DESCRIPTION DES MODES DE REALISATION PREFERES Un premier mode de réalisation d'un démarreur selon la présente invention va être décrit ci-dessous en se référant aux dessins annexés.
La figure 1 est une vue en coupe montrant la structure d'un démarreur dans le premier mode de réalisation.
Dans le premier mode de réalisation, le démarreur est recouvert par des éléments formant paroi externe tels qu'un support avant 20, un support central 30 et un support arrière 40 et il présente un aspect externe sensiblement en forme de balle. Une partie desdits éléments présente une ouverture dans laquelle une couronne dentée 50 est située.
Dans le démarreur, sont agencés un moteur à courant continu M et un arbre de sortie 1 qui est entraÎné par ce moteur à courant continu M. Autour de l'arbre de sortie 1, un commutateur électromagnétique en forme d'anneau 2, un embrayage à roue libre 3 est un piston (noyau mobile 4) sont agencés.
En d'autres termes, le démarreur selon le premier mode de réalisation est un démarreur du type coaxial avec le commutateur électromagnétique 2, l'embrayage à roue libre 3 et le piston 4, agencés de manière coaxiale sur l'arbre de sortie 1.
La structure du démarreur selon ce premier mode de réalisation va être décrite ci-dessous en détail.
Sur la figure 1, la partie de gauche est une partie de moteur à courant continu X, la partie droite est une partie fonctionnelle Y et le côté supérieur de la partie centrale est une chambre de contact Z. Le côté du moteur électrique de la figure 1 est appelé arrière et le côté de la couronne dentée est appelé avant dans l'explication suivante.
Comme cela est bien connu, le moteur à courant continu M comprend une armature 12, une culasse 13 qui recouvre cette armature 12, un pâle magnétique fixe 13a disposé à l'intérieur de la culasse 13, un collecteur 14, des balais 15 et un arbre 16. L'armature 12 est un noyau d'armature avec une bobine d'armature enroulée autour de celui-ci. Le côté avant de l'arbre 16 pénètre dans l'espace cylindrique du collecteur cylindrique 14 et est raccordé à un mécanisme de réduction 18.
La bobine d'armature est connectée au commutateur 14. Le moteur à courant continu M est disponible dans les types à 2 pâles, 4 pôles et 6 pôles, en fonction du nombre de pôles magnétiques fixes. En prenant par exemple le cas de l'utilisation d'un moteur à courant continu à 6 pâles comme exemple, un total de 6 unités de pôles magnétiques fixes 13a sont prévues en agençant alternativement un pâle N et un pôle S. Les balais 15 maintenus en contact avec le collecteur 14 sont agencés sur la circonférence du collecteur 14. l5a est un ressort qui pousse le balai 15 contre le collectateur 14. l5h est un support de balai.
L'arbre de sortie 1 est entraîné par le moteur à courant continu M comme décrit ci-dessus.
- Dénaturer 7 à 10 mn à 95 C.
- Incuber à 65 C pendant 2 à 5 heures.
3- HYBRIDATION : - Oter le mix de pré hybridation.
- Mélanger 40 l ADN sperme de saumon + 40 l ADN placentaire humain ; dénaturer 5 mn à 96 C, puis plonger dans la glace.
- Ajouter dans le tube d'hybridation 4 ml de mix formamide, le mélange des deux ADN et la sonde marquée/ADN Cot # dénaturée.
- Incuber 15 à 20 heures à 42 C, avec rotation.
4- Lavages : - Un lavage à température ambiante dans du SSC 2X, pour rincer.
- 2 fois 5 minutes à température ambiante SSC 2X et SDS 0,1% à 65 C.
- 2 fois 15 minutes à 65 C SSC 1X et SDS 0,1 % à 65 C.
Après hybridation et lavage, le blot est analysé après une nuit d'exposition au contact d'un écran au phosphore révélé à l'aide du Storm (Molecular Dynamics, Sunnyvale, CA).
Exemple 2 : Obtention de fragments d'ADNc complets correspondant aux transcrits selon l'invention Différentes approches peuvent être utilisées pour isoler l'ADNc correspondant à un des clones particulier parmi les séquences SEQ ID N 1 à SEQ ID N 55.
Par exemple un clone complet peut être directement isolé par hybridation en criblant une banque d'ADNc au moyen d'une sonde polynucléotidique spécifique de la séquence du gène d'intérêt.
En particulier une sonde spécifique de 30-40 nucléotides est synthétisée en utilisant un synthétiseur de marque Applied Biosystem/Perkin Elmer selon la séquence choisie.
L'oligonucléotide obtenu est radiomarqué, par exemple au 32P-[gamma]- ATP en utilisant la T4 polynucléotide kinase et est purifié selon les méthodes usuelles (e. g. Maniatis et al. Molecular cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring, NY 1982 ou encore F.Ausubel et al .
(Current Protocols in Molecular Biology, J.Wiley and Sons Eds, 1999).
La banque de clones contenant l'ADNc que l'on veut cribler est étalée sur milieu de culture en boîte de Pétri (1.5% agar) contenant les antibiotiques appropriés selon les méthodes usuelles citées ci dessus (F.Ausubel et al.).
Le résultat diffère selon le choix de l'opérateur: A) Le fonctionnement de l'opérateur Union est défini par les définitions suivantes : # a- L'opérateur Union ne peut s'appliquer que sur la classe finale X de la requête, # b- les classes cibles de l'union doivent appartenir à la même classe que la classe source, # c- le résultat de l'opération est l'union des instances qui sont résultats de la classe X et des instances des classes compatibles avec les instances de la classe source (classe finale X), # d- et il n'y a pas de contrôle de duplication d'instances pour le résultat. B) Le fonctionnement de l'opérateur Différence est défini par les définitions suivantes # a- L'opérateur Différence ne peut s'appliquer que sur la classe finale X de la requête, # b- les classes cibles de cet opérateur doivent appartenir à la même classe que la classe source, # c- le résultat de l'opération est la différence de noms DN entre les instances qui sont résultats de la classe finale et entre les instances compatibles des classes cibles. C) Le fonctionnement de l'opérateur Intersection est défini par les définitions suivantes : # a- Cet opérateur ne peut s'appliquer que sur la classe finale X de la requête, # b- les classes cibles de cet opérateur doivent appartenir à la même classe que la classe source, # c- le résultat de l'opération est l'intersection de noms DN entre les instances qui sont résultats de la classe finale et entre les instances compatibles des classes cibles.
NotelD est un attribut de nommage DN défini précédemment. Dans l'exemple illustré, Le terme ID est une valeur numérique. Concrètement, dans l'exemple illustré, la requête R4 peut être construite conformément à cette suite d'étapes.
Premièrement, on Sélectionne avec la souris des classes cibles NOTE dans l'arbre de classes.
Deuxièmement, on sélectionne l'opérateur Union qui correspond à la requête R4 sur la classe Note subordonnée à la classe Inventaire. Troisièmement, on obtient le résultat de la requête R4. Le résultat est les instances Notel, Note2 et Note3 subordonnées à Vintance Quartz et les instances Note 1 et Note4 subordonnées à l'instance K.
Dans ce résultat, conformément aux fonctionnement de l'opérateur Union, deux instances du résultat ont le même nom DN (Notel) avec des noms FDN différents. En effet, le nom DN pour les instances résultats est Notel et les noms FDN respectifs pour les instances résultats sont FDN quartz / NotelD Notel FDN quartz / K/ NotelD Notel Compte tenu de ces définitions, dans l'exemple illustré, la requête R5 peut être construite.
Deuxièmement, on sélectionne l'opérateur Différence qui correspond à la requête R4 sur la classe Note subordonnée à la classe Inventaire. Troisièmement, on obtient le résultat de la requête R5. Le résultat est les instances Note2 et Note3 subordonnées à l'instance Quartz et l'instance Note4 subordonnées à l'instance K.
Le résultat de cette requête R5 montre que l'instance Notel n'est pas incluse dans le résultat car le nom DN des deux instances Notel dans l'arbre est le même.
Compte tenu des définitions, dans l'exemple illustré, la requête R6 peut être construite. Premièrement, on Sélectionne avec la souris des classes cibles NOTE dans l'arbre de classes.
Deuxièmement, on sélectionne l'opérateur Intersection qui correspond à la requête R6 sur la classe Note subordonnée à la classe Inventaire. Troisièmement, on obtient le résultat de la requête R6. Le résultat est l'instance Notel. En effet, l'instance Notel subordonnée à l'instance Quartz est la seule instance de la classe Note (classe finale) pour laquelle son nom DN figure dans les instances des autres classes Note indirectement subordonnées à l'instance Quartz. D'une manière générale, la deuxième solution a pour objet un procédé d'interrogation, dans un système informatique, par l'intermédiaire d'au moins une requête d'au moins un objet inclus dans au moins un arbre de contenance inclus dans au moins une machine se reposant sur le protocole de gestion de type CMIP, une requête consistant en une mise à jour ou en une consultation des objets de l'arbre de contenance, une requête incluant un contexte comprenant l'ensemble des paramètres (classes, attributs, opérateurs, variables, etc.) décrivant tous les éléments d'une requête, au moins un paramètre se reposant sur la règle de compatibilité entre instances limitant le traitement de la requête à un sous-ensemble d'instances d'une classe, caractérisé en ce qu'il consiste, à créer un opérateur propre à inhiber, sur une classe donnée, les règles de compatibilité sur instances de façon à traiter la requête sur l'ensemble des instances de la classe sur lesquelles porte la requête. La deuxième solution consiste, une fois les règles de compatibilité inhibées, à lire les attributs des instances sur lesquelles portent la requête, et en ce qu'il consiste à mémoriser ces valeurs dans une mémoire quelconque du système informatique.
Le procédé de la deuxième solution consiste, par exemple, au moment de l'exécution de la requête à prendre en compte ce nouvel opérateur et lors de l'exécution à traiter la requête avec les valeurs des attributs des instances lues au préalable sans utiliser les règles de compatibilité. L'exemple de réalisation qui précède montre que l'opérateur évalue toute variable externe référençant une variable VX d'une classe X de manière agrégée avec les valeurs de la variable VX calculées pour l'ensemble des instances lues sur la classe X. De même, l'opérateur évalue une variable de la classe X référençant un attribut avec une fonction d'agrégation avec les valeurs de l'attribut de l'ensemble des instances lues de la classe X. On a vu, par ailleurs, dans notre exemple d'illustration que si un filtre est défini sur la classe X, la règle de compatibilité des instances des autres classes par rapport à la classe X n'est pas appliquée et les instances des autres classes non compatibles avec les instances concernées de la classe X ne sont pas à éliminer. Enfin, on a vu que le procédé de la deuxième solution consiste à appliquer l'opérateur à une classe où sont définies des variables. Cette troisième solution offre un avantage certain en ce sens qu'elle donne la possibilité d'effectuer des unions, des différences et des intersections entre classes dans un environnement objet hiérarchique à l'image des clauses d'union et de différences du langage SQL.
Procédé de manipulation, dans un système informatique, d'objets d'un arbre de contenance.
La présente invention a pour objet un Procédé de manipulation, dans un système informatique, d'objets d'un arbre de contenance.
L'arbre de contenance est inclus dans un système de gestion. Le système informatique peut contenir plusieurs systèmes de gestion. Le terme gestion sera utilisé pour être conforme à la traduction Afnor (Association Française de NORmalisation) de Management . Egalement, le terme arbre de contenance sera utilisé comme traduction du terme MIB (Management Information Base) issu de la norme OSI (Open Systems Interconnection).
Un système informatique comprend une machine au plusieurs machines reliées au système de gestion par l'intermédiaire d'un réseau LAN (Local Area Network), WAN (Wide Area Network) ou INTERNET. Ce système peut être un système distribué ou non, hétérogène ou non.
Un système distribué est un environnement de système informatique qui fonctionne au moyen d'au moins deux systèmes d'exploitation identiques ou différents. Une machine est associée à un système d'exploitation. Une machine comprend au moins une ressource physique (par exemple des réseaux, des concentrateurs, des segments, etc) ou logique (par exemple une base de données, etc.).
Un tel marqueur détectable peut être radioactif ou non radioactif, par exemple fluorescent ou correspondre à un ligand pour un troisième partenaire utilisé pour la détection comme une molécule de biotine.
En conséquence, l'invention a également pour objet un procédé de criblage d'une molécule ou d'une substance candidate interagissant avec un polypeptide selon l' invention, ladite méthode comprenant les étapes de :
a) mettre en contact un polypeptide conforme à l'invention avec la substance ou molécule candidate à tester ; b) détecter les complexes éventuellement formés entre ledit polypeptide et ladite substance ou molécule candidate.
L'invention concerne également un nécessaire ou kit pour le criblage d'une molécule ou d'une substance candidate interagissant avec un polypeptide selon l'invention, ledit nécessaire comprenant : a) un polypeptide conforme à l'invention ; b) le cas échéant, des moyens nécessaires à la détection du complexe formé entre ledit polypeptide et la molécule ou substance candidate.
La présente invention est en outre illustrée, sans pour autant être limitée, par les exemples suivants : EXEMPLES Exemple 1 : Distribution tissulaire des transcrits selon l'invention Le profil d'expression des polynucleotides selon la présente invention est déterminé selon les protocoles d'analyse de Northern blot et de transcription inverse couplée à la PCR décrits notamment par Sambrook et al (ref. CSH Sambrook, J., Fritsch, E.F., and Maniatis, T. (1989). " Molecular Cloning : A Laboratory Manual, " 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY.).
Par exemple, dans le cas d'une analyse par transcription inverse, un couple d'amorces synthétisées à partir de l'une quelconque des séquences nucléotidiques des transcrits SEQ ID N 1 à SEQ ID N 55 est utilisé pour détecter l'ADNc correspondant.
La réaction de polymérase en chaîne (PCR) est réalisée sur des matrices d'ADNc correspondant à des ARNm polyA+ (Clontech) rétrotranscrits. La transcription inverse en ADNc est réalisée avec l'enzyme SUPERSCRIPT Il (GibcoBRL, Life Technologies) selon les conditions décrites par le fabricant.