INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Exemple 4 : On prépare, de la même manière qu'à l'exemple 1, une série de 16 oligonucléotides dont les séquences sont les suivantes : Seq Id 1 : 5' TTAGTTATTAGTTATTAGTT 3' Seq Id 2 : 5' TTAGTTATTAGTTTTTAGTT 3' Seq Id 3 : 5' TTAGTTATTAGTTCTTAGTT 3' Seq Id 4 : 5' TTAGTTATTAGTTGTTAGTT 3' Seq Id 55' TTAGTTTTTAGTTATTAGTT 3' Seq Id 6 : 5' TTAGTTTTTAGTTTTTAGTT 3' Seq Id 7 : 5' TTAGTTTTTAGTTCTTAGTT 3' Seq Id 8 : 5' TTAGTTTTTAGTTGTTAGTT 3' Seq Id 9 : 5' TTAGTTCTTAGTTATTAGTT 3' Seq Id 10 : 5' TTAGTTCTTAGTTTTTAGTT 3' Seq Id 115' TTAGTTCTTAGTTCTTAGTT 3' Seq Id 12 5' TTAGTTCTTAGTTGTTAGTT 3' Seq Id 13 . 5' TTAGTTGTTAGTTATTAGTT 3' Seq Id 14 : 5' TTAGTTGTTAGTTTTTAGTT 3' Seq Id 15 5' TTAGTTGTTAGTTCTTAGTT 3' Seq Id 165' TTAGTTGTTAGTTGTTAGTT 3' Ces oligonucléotides sont de type phosphorothiate sur toute leur longueur
Exemple 5 : On évalue la capacité qu'ont les oligonucléotides préparés à l'exemple 4 d'induire la prolifération des lymphocytes humains grâce à un test de lymphoprolifération tel que celui décrit à l'exemple 2. De la même façon qu'à l'exemple 2, la concentration en oligonucléotide par puits est 2 M, et les témoins sont constitués par le milieu seul, l'oligonucléotide A15(S) ainsi que l'oligonucléotide 3Db(S).
Les résultats obtenus, exprimés en Coups par Minute, sont représentés à la Figure 7 qui montre que tous les oligonucléotides selon l'invention sont capables d'induire la prolifération des lymphocytes et que de particulièrement bons résultats sont obtenus lorsque les séquences des oligonucléotides sont celles identifiées par les Seq Id 9 à 12, i e lorsque la Cytosine sépare les 2 premiers motifs TTN,N2TT de l'oligonucléotide Exemple 6 ' On évalue la capacité qu'ont les oligonucléotides préparés à l'exemple 4 d'induire l'expression des marqueurs d'activation CD25 et CD86 des lymphocytes B. Cette évaluation est effectuée grâce au test décrit à l'exemple 3 Les résultats obtenus avec les oligonucléotides préparés selon l'exemple 4 sont représentés sur les Figures 8 et 9 qui illustrent les pourcentages de cellules B (CD20+) qui expriment également le marqueur CD25 (Figure 8) ou le marqueur CD86 (Figure 9).
Les résultats obtenus dans ce test confirment ceux obtenus dans le test de lymphoprolifération: tous les oligonucléotides selon l'invention induisent l'expression de marqueurs d'activation des lymphocytes B humains, de particulièrement bons résultats sont obtenus lorsque les 2 premiers motifs TTN1N2TT de l'oligonucléotide sont séparés par une Cytosine.
Exemple 7 : On évalue la capacité qu'ont les oligonucléotides selon la présente invention à induire la sécrétion de cytokines.
Pour cette évaluation, on isole des lymphocytes à partir du sang périphérique d'un donneur, en procédant à une centrifugation sur un gradient de Ficoll. Ces lymphocytes sont ajustés à 2.106 cellules / ml dans du milieu de culture (milieu AIM V + streptomycine + penicilline).
Les plaques 96 puits ELISPOT (fond plat en nitrocellulose) sont pré-incubées la veille avec une solution d'anticorps de capture de cytokines (IL-10 ou IFNy suivant le test réalisé ), puis saturées avec du milieu de culture.
On distribue ensuite 100 l de cellules dans les plaques ELISPOT, soit 2.105 cellules par puits, puis on ajoute 100 l d'une solution 4 M en oligonucléotides à tester, produits selon l'exemple 4 (1 seul type d'oligonucléotide par puits) afin d'obtenir une concentration finale 2 M. Le test est réalisé avec les oligonucléotides ayant les séquences décrites sous Seq Id 9, Seq Id 10, Seq Id 11 et Seq Id 12.
Les plaques sont incubées à 37 C, sous atmosphère à 5% de CO2. Au bout de 72 heures d'incubation, les cellules sont éliminées par lavage en présence de détergent (Tween 1 %) et les cytokines fixées sur les anticorps de capture sont révélées par l'addition successive d'anticorps de détection biotynylés (anti-IL- 10 ou anti-IFNy suivant le test réalisé), de streptavidine-HRP, et du substrat AEC Les spots (1 spot correspondant à 1 cellule sécrétrice de cytokine) sont compté à l'aide d'un compteur automatique. Les résultats sont exprimés en nombre de spots (nombre de cellules sécrétrices) par million de cellules.
Les résultats obtenus pour chacun des oligonucléotides testés sont représentés sur les figures 10 et 11, qui indiquent, pour chaque oligonucléotide testé le nombre de cellules sécrétrices de cytokines par million de cellules
totales , on remarque que tous les oligonucléotides selon l'invention ont un résultat nettement supérieur au résultat obtenu avec le milieu seul ou le témoin négatif A15(S), ce qui signifie qu'ils sont tous capables d'induire la sécrétion de cytokines, notamment d'IL 10 et d'Interféron y.
LISTE DE SEQUENCES PASTEUR MERIEUX SERUMS & VACCINS OLIGONUCLEOTIDE IMMUNOSTIMULANT PM9908FR 16 Patentln Ver 2. 1 1 20 ADN Séquence artificielle Description de la séquence artificielle: oligonucleotide 1 ttagttatta gttattagtt 20 2 20 ADN Séquence artificielle Description de la séquence artificielle: oligonucleotide 2 ttagttatta gtttttagtt 20 3 20 ADN Séquence artificielle Description de la séquence artificielle- oligonucleotide 3 ttagttatta gttcttagtt 20
La plupart des tests de l'art antérieur pour évaluer l'activité immunostimulante des oligonucléotides proposés, sont effectués soit in vitro sur des cellules
animales (essentiellement des cellules murines), soit in vivo sur des souris. Cependant, les différences existant entre le système immunitaire de la souris et celui de l'être humain, ont conduit à des différences entre les résultats obtenus sur des cellules murines et ceux obtenus sur des cellules humaines.
Or l'industrie pharmaceutique a un grand besoin d'immunostimulants pouvant être administrés à l'homme, notamment dans le domaine des vaccins.
La présente invention a donc pour but de proposer des oligonucléotides capables de stimuler des cellules du système immunitaire de l'être humain.
Pour atteindre ce but, l'invention a pour objet un oligonucléotide capable de stimuler des cellules humaines du système immunitaire caractérisé en ce qu'il comprend au moins une séquence 5' T T N1 N2 T T 3' dans laquelle T est la Thymine, et N1 et N2 peuvent chacun représenter l'Adénine, la Thymine, la Cytosine ou la Guanine, et en ce qu'il est dépourvu de dinucléotide CG dans lequel la Cytosine C n'est pas méthylée.
L'invention a également pour objet l'utilisation d'un tel oligonucléotide pour la fabrication d'un médicament.
Selon une caractéristique de l'invention, l'oligonucléotide comprend de 6 à 100 nucléotides.
Selon une caractéristique particulière, l'oligonucléotide selon l'invention est caractérisé en ce que Ni représente l'Adénine et en ce que N2 représente la Guanine.
Selon une autre caractéristique, l'oligonucléotide selon l'invention est caractérisé en ce que le motif 5' T T N1 N2 T T 3' est répété au moins 1 fois.
Selon une autre caractéristique, l'oligonucléotide selon l'invention est caractérisé en ce que le motif 5' T T N1 N2 T T 3' est répété 2 fois.
Selon une autre caractéristique, l'oligonucléotide selon l'invention est caractérisé en ce que les motifs répétés 5' T T Ni N2 T T 3' sont séparés par un nucléotide N3 qui peut être à chaque fois identique ou différent et qui peut représenter A, C, T ou G.
Selon une caractéristique particulière, l'oligonucléotide selon l'invention est caractérisé en ce que le nucléotide N3 séparant les 2 premiers motifs T T N1 N2 T T lus lorsque la séquence est orientée 5'#3' représente la Cytosine.
Selon une autre caractéristique, l'oligonucléotide selon l'invention est caractérisé en ce qu'il comprend la séquence 5' TTAGTTCTTAGTTN3TTAGTT 3', dans laquelle A représente l'Adénine, T la Thymine, G la Guanine, et C la Cytosine, et dans laquelle N3 peut signifier A, T, C ou G Selon une autre caractéristique, l'oligonucléotide selon l'invention est capable d'induire la prolifération des lymphocytes humains.
Selon une autre caractéristique, l'oligonucléotide selon l'invention est capable d'accroître l'expression des marqueurs d'activation CD25 et CD86 des lymphocytes B humains.
Selon une autre caractéristique, l'oligonucléotide selon l'invention est capable d'induire la sécrétion de cytokines, en particulier l'IL 10 et l'Interféron [gamma].
L'invention a également pour objet un adjuvant vaccinal caractérisé en ce qu'il comprend au moins un oligonucléotide capable de stimuler des cellules humaines du système immunitaire possédant au moins une séquence 5' T T N1 N2 T T 3' dans laquelle T est la Thymine et, N1 et N2 peuvent chacun représenter l'Adénine, la Thymine, la Cytosine ou la Guanine, l'oligonucléotide étant dépourvu de séquence dinucléotidique CG dans laquelle la Cytosine C ne serait pas méthylée.
de transfert d'une interface, procédé d'élaboration d'une requête informatique d'activation et procédé d'activation d'une fonction sur un ordinateur distant.
La présente invention concerne également un ordinateur comprenant un dispositif d'exécution à distance, et/ou un dispositif d'activation d'une fonction sur un ordinateur local et/ou un dispositif de transfert d'une interface, et/ou un dispositif d'élaboration d'une requête informatique d'activation et/ou un dispositif d'activation d'une fonction sur un ordinateur distant conformes à l'invention.
Elle vise également un réseau de communication informatique comportant un dispositif d'exécution à distance et/ou un dispositif d'activation d'une fonction sur un ordinateur local et/ou un dispositif de transfert d'une interface sur un réseau et/ou un dispositif d'élaboration d'une requête informatique d'activation et/ou un dispositif d'activation d'une fonction sur un ordinateur distant conformes à l'invention.
La présente invention vise en outre un programme d'ordinateur stocké sur un moyen de stockage ou de support d'informations, éventuellement amovible, incorporé ou non dans un ordinateur, comprenant des portions de code logiciel ou des instructions de programme adaptées à mettre en #uvre les étapes du procédé d'exécution à distance et/ou les étapes du procédé de l'activation d'une fonction sur un ordinateur local et/ou les étapes du procédé de transfert d'une interface et/ou les étapes du procédé d'élaboration d'une requête informatique d'activation et/ou les étapes du procédé d'activation d'une fonction sur un ordinateur distant conformes à l'invention, lorsque ledit programme d'ordinateur est chargé dans un ordinateur.
Aux dessins annexés, donnés à titre d'exemples non limitatifs :
- la figure 1 illustre schématiquement des réseaux de communication adaptés à mettre en #uvre la présente invention ; - la figure 2 est un graphe illustrant schématiquement un système d'objets distribués ; - la figure 3 est un diagramme bloc illustrant un ordinateur adapté à mettre en #uvre l'invention ; - la figure 4 est un diagramme illustrant la traduction directe et inverse d'un objet informatique, d'un langage de programmation vers un langage de communication ; - la figure 5 est un diagramme bloc illustrant deux ordinateurs adaptés à mettre en #uvre la présente invention ; - la figure 6 est une représentation schématique d'un espace mémoire adapté à mémoriser une table d'associations d'objets ; - la figure 7 est un algorithme illustrant la traduction d'un objet informatique ; - la figure 8 est une représentation schématique d'un espace mémoire adapté à mémoriser une table d'associations d'interfaces ; - la figure 9 est un algorithme illustrant un procédé d'activation d'une fonction sur un ordinateur local conforme à un premier mode de réalisation de l'invention ; - la figure 10 est un algorithme illustrant un procédé de transfert d'une interface conforme au premier mode de réalisation de l'invention ; - la figure 11 est un algorithme illustrant un procédé d'élaboration d'une requête informatique d'activation conforme à un second mode de réalisation de l'invention ; et - la figure 12 est un algorithme illustrant un procédé d'activation d'une fonction sur un ordinateur distant conforme au second mode de réalisation de l'invention.
La présente invention s'applique en général aux réseaux de communication informatique.
Elle s'applique particulièrement bien aux réseaux de communication de grande étendue dans lesquels un très grand nombre de serveurs informatiques sont reliés entre eux.
Un tel réseau peut être à titre d'exemple le réseau de communication planétaire, tel que le réseau Internet, bâti au-dessus d'un protocole de communication qui permet aux ordinateurs connectés au réseau de communication d'échanger des documents.
Un tel réseau Internet est illustré par exemple à la figure 1.
Dans cet exemple, et à titre non limitatif, trois réseaux informatiques R1, R2 et R3 sont des réseaux du type Ethernet, connectés entre eux par exemple par l'intermédiaire d'un réseau Internet.
Chaque réseau R1, R2 et R3 comporte un ou plusieurs ordinateurs.
Ici, à titre d'exemple, le réseau R1 comporte deux ordinateurs C1, C2 ; le réseau R2 comporte un seul ordinateur C3 ; le réseau R3 comporte trois ordinateurs C4, C5 et C6.
Chacun de ces ordinateurs C1, C2, C3, C4, C5, C6 est donc capable d'envoyer et de recevoir des données de l'un des quelconques autres ordinateurs.
L'interconnexion optique de la figure 2 est destinée à relier deux circuits électroniques intégrés 18 et 20 l'un à l'autre. Cette interconnexion optique comprend un circuit optique 22 formé sur un substrat 24 et comprenant un guide d'onde optique 26 ainsi que deux composants optoélectroniques 28 et 30 qui sont optiquement couplés respectivement aux deux extrémités du guide d'onde optique 26 et sont respectivement associés aux circuits 18 et 20.
Le circuit optique 22 est relié à ces circuits 18 et 20 par l'intermédiaire des composants 28 et 30, ces liaisons étant purement électriques et réalisées à partir par exemple de microbilles 32 et 34 faites d'un matériau fusible, par exemple l'indium. D'autres techniques existent en particulier l'utilisation de polymères à conduction anisotrope. L'espace que l'on voit sur la figure 2 entre les microbilles et le circuit optique n'existe bien entendu pas ; cet espace a été laissé sur la figure 2 pour mieux comparer cette dernière à la figure 1. On suppose que le circuit 18 est destiné à envoyer des informations au circuit 20. Dans ce cas, le composant 28 est un convertisseur électronique-optique, par exemple une diode laser, qui convertit les signaux électriques qu'elle reçoit de la part du circuit 18 par l'intermédiaire des microbilles 32, en signaux optiques. Ces derniers sont alors transmis par l'intermédiaire du guide 26 au composant 30 qui, dans ce cas, est un convertisseur opto-électrique, par exemple une photodiode. Cette dernière reconvertit ces signaux optiques en signaux électriques qui sont alors reçus par le circuit 20, par l'intermédiaire des microbilles 34. Dans le cas où le circuit 20 est destiné à envoyer des informations au circuit 18, on utilise en tant que composant 30 un convertisseur électronique- optique et en tant que composant 28 un convertisseur opto-électrique. Les informations émises par le circuit 20 sous forme de signaux électriques sont alors reçues par le circuit 18 après avoir été converties en signaux optiques par le composant 30 puis à nouveau en signaux électriques par le composant 28.
Dans le cas où les circuits 18 et 20 sont destinés à échanger des informations l'un avec l'autre, le circuit 18 envoyant alors des informations au circuit 20 et inversement, on utilise des composants 28 et 30 ayant la double fonction de convertisseur électronique-optique et de convertisseur opto- électrique. On peut aussi prévoir des liaisons descendantes et d'autres montantes .
L'hybridation des composants 28 et 30 à leurs circuits respectifs 18 et 20, par exemple par l'intermédiaire des microbilles 32 et 34, nécessite une précision de positionnement inférieure à celle que nécessite le positionnement du circuit optique 14 de la figure 1 par rapport aux composants 6 et 10.
Lorsque les circuits électroniques intégrés et le circuit optique sont formés à partir de silicium, matériau mal adapté à la réalisation de sources optiques à cause de son gap indirect, il convient alors d'utiliser des émetteurs de lumière hybridés au circuit optique et par exemple formés à partir d'un matériau semiconducteur à gap direct tel que GaAs. Pour cette hybridation, on peut utiliser toute technique classique d'assemblage comme l'adhérence, le collage ou la fusion métallique.
Dans ce cas, pour coupler optiquement l'émetteur de lumière avec le guide d'onde optique, on fait en sorte que ce guide d'onde optique contribue spécifiquement à l'émission lumineuse de cet émetteur. On réduit ainsi les contraintes de positionnement de l'émetteur par rapport au guide d'onde optique.
Pour ce faire, on réalise un laser dont la cavité comprend une partie du guide d'onde optique : on forme les miroirs de cette cavité sur ce guide d'onde optique et l'on introduit un milieu amplificateur laser dans le guide. Ceci est schématiquement illustré par l'exemple de la figure 3 où l'on voit un circuit intégré 36 destiné à envoyer des informations à un autre circuit intégré (non représenté) par l'intermédiaire d'un circuit optique 38 formé sur un substrat 40 et comprenant un guide d'onde optique 42 ainsi qu'un laser 44 qui constitue un convertisseur électro-optique.
Ce laser 44 est commandé par le circuit intégré 36 et relié à ce dernier par une liaison purement électrique réalisée à l'aide par exemple de microbilles 46 faites d'un matériau fusible.
Le laser 44 comprend une cavité résonante délimitée par deux miroirs 48 et 50, qui sont formés sur le guide d'onde optique 42, ainsi qu'un milieu amplificateur à semiconducteur 52 qui est placé au voisinage du guide par exemple dans un évidement 54 formé dans le circuit optique 38, à travers ce guide d'onde optique 42 et entre les deux miroirs 48 et 50.
Le laser de la figure 3 est muni d'électrodes (non représentées) destinées à l'excitation du milieu amplificateur. Ces électrodes sont reliées au circuit électronique intégré 36 par l'intermédiaire des microbilles.
L'espace 56 compris entre le milieu amplificateur et la paroi de l'évidement est de préférence rempli d'un matériau adaptateur d'indice par exemple fluide ou gel pour favoriser le couplage optique entre ce milieu amplificateur et le guide d'onde optique 42. Divers matériaux sont envisageables pour former le milieu amplificateur 52. On peut par exemple utiliser des matériaux semi-conducteurs à puits quantiques, du genre de ceux qui sont utilisés dans les VCSEL et comprennent plusieurs couches de confinement (puits). On peut faire en sorte que ces couches soient plus ou moins inclinées par rapport à la paroi de l'évidement 54 (figure 4) pour respecter une tolérance de positionnement et le gain recherché pour le laser. Ce gain dépend du coefficient de réflexion des miroirs qui délimitent la cavité du laser. Dans le cas de l'utilisation d'une technique d'Optique intégrée du genre silice sur silicium, il est avantageux d'utiliser des miroirs formés par des réseaux de diffraction de Bragg 58 et 60 (figure 4) que l'on photo-inscrit sur le guide d'onde optique 42. Au sujet de miroirs formés à partir de réseaux de Bragg on se reportera par exemple au document suivant A. Goyal et M. Muendel, Photonics Spectra, septembre 1998, pages 116 à 121.
Dans le cas où le guide d'onde optique est formé à partir d'un matériau ayant un grand indice optique, par exemple par une technique du genre silicium sur isolant, dans laquelle une couche de guidage de lumière en silicium est comprise entre deux couches de silice, les miroirs peuvent être des fentes 62 et 64 (figure 5) formées dans le circuit optique, à travers le guide d'onde optique 42 et perpendiculairement à ce dernier, de part et d'autre de l'évidement 54 dans lequel se trouve le milieu amplificateur 52. Les réflexions de la lumière ont alors lieu aux interfaces air-parois des fentes.
L'invention n'est pas limitée à l'interconnexion de deux circuits électroniques intégrés formés sur deux substrats différents (interconnexion inter-puce) comme on l'a représenté sur la figure 2. Elle s'applique également à l'interconnexion de deux circuits intégrés formés sur un même substrat (interconnexion intra-puce).
De plus, l'invention n'est pas limitée à l'interconnexion de deux circuits électroniques intégrés. Elle s'applique également à la connexion optique d'un circuit électronique intégré, au moyen d'un circuit optique formé sur un substrat et comprenant encore un guide d'onde optique ainsi qu'un composant optoélectronique qui est optiquement couplé à ce guide d'onde optique et qui est relié au circuit électronique intégré par l'intermédiaire d'une liaison purement électrique entre ce composant et ce circuit électronique intégré.
Lorsque le composant est par exemple un convertisseur électronique-optique, cela permet de convertir des signaux électriques émis par le circuit électronique intégré en signaux lumineux qui se propage alors dans le guide optique.
Inversement, en utilisant un convertisseur opto-électrique, cela permet à ce dernier de recevoir des signaux lumineux se propageant dans le guide d'onde optique et de les convertir en signaux électriques qui sont alors reçus par le circuit électronique intégré.
Cet effluent est envoyé dans la partie inférieure d'une colonne de lavage 2 et est mis en contact à contre courant avec un courant 3 de recyclage liquide d'un distillat C3+ (C3 C4) provenant d'une colonne de distillation régénération 22 décrite ci-dessous, selon un rapport molaire de débits effluent/C3' compris entre 0,01 et 0,10. En fond de ballon, on récupère par une ligne 4 les hydrocarbures les plus lourds contenant environ 0,5 % poids d'éthylène.
Un effluent de tete 5 de la colonne 2 est refroidi dans un échangeur de chaleur 6 et est introduit dans une colonne d'absorption 7 souvent appelée en anglais demethaniser. Un courant de recyclage d'un solvant, le toluène qui a été préalablement refroidi est mélangé à une phase gazeuse recueillie par une ligne 50 en tête de colonne 7.
La phase gazeuse contenant le solvant et en particulier de l'hydrogène et du méthane est refroidie (51) par du propène vers - 40 C et condensée dans un ballon de condensation (10) duquel on soutire une phase liquide enrichie en C2+ et contenant le solvant que l'on envoie en tant que reflux 52 dans la partie supérieure de la colonne d'absorption et une phase vapeur 11 riche en méthane et en hydrogène que l'on peut séparer ultérieurement. Le dit reflux est mis en contact à contre courant avec la charge d'absorption. En fond colonne d'absorption, on soutire une phase 12 en partie liquide contenant toluène enrichi en éthylène, éthane, acétylène, méthylacétylène, propadiène, propène et des hydrocarbures à au moins 4 atomes de carbone. Cette phase liquide est réchauffée dans un échangeur de chaleur 13 et envoyée dans réacteur 15 d'hydrogénation catalytique en présence d'hydrogène introduit par une ligne 14 dans la ligne 12. Sensiblement tout l'acétylène et du propadiène sont en général convertis en éthylène et propène respectivement. La majorité du méthylacétylène est également convertie. L'augmentation de température en raison de réaction exothermique en phase liquide n'excède pas en général environ degrés. L'effluent d'hydrogénation soutiré en tête du réacteur d'hydrogénation par une ligne est envoyé dans une première colonne de distillation 16 appelée en anglais deethanizer. On récupère en tête de colonne une phase gazeuse par une ligne 53 que l'on refroidit (54) à - 40 C environ par du propène et condense dans ballon de condensation 55, duquel on sépare une phase vapeur 18 contenant de l'hydrogène et en particulier celui en excès du réacteur d'hydrogénation et de l'éthylène entrainé en tête. La phase liquide séparée dans ballon 55 contenant de la fraction C2+ est renvoyée en tant que reflux en tête la première colonne 16. De celle-ci, on soutire latéralement à environ trois plateaux en dessous un mélange éthylène-éthane à plus de % poids d'éthylène et moins de 1 ppm (mole) de monooxyde de carbone acétylène par exemple.
La phase vapeur 18 non condensée du ballon de condensation 55 peut être recomprimée par un compresseur 31 et recyclée sous pression sous la ligne de reflux de l'absorbeur 7 par une ligne 32.