INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Ainsi, des Ac antinitrotyrosine permettent la détection de la nitrotyrosine, dont l'apparition est liée à la présence de peroxynitrite (Van Der Vliet et al. , 1994; Irchiropoulos et Al-Mehdi, 1995; Crow, 1996) . Cet Ac permet donc de connaître les situations où le peroxynitrite est synthétisé et de détecter les cibles de l'affection. La nitrotyrosine a été visualisée en utilisant des techniques immunologiques au niveau des vaisseaux coronaires lors d'une athérosclérose (Beckman et aI. 1994a) . De plus, chez les malades atteints de la PR, elle a été détectée dans les liquides synoviaux (Farrell (-t- al. 1992). Mais, malgré une corrélation entre nitration et évolution pathologique, il reste à rechercher -;i la nitration des tyrosines au niveau des protéines provoque les lésions primaires qui déclenchent l'inflammation, ou si elle est secondaire aux processus inflammatoires. En fait, le péroxynitrite réagit de façon :implexe avec je avec les différentes molécules biologiques entraînant l'hydroxylation, la fragmentation de 1'ADN, l'oxydation des centres fer-soufre des protéines, etc. et surtout la formation de la nitrotyrosine qui constitue la race la plus marquante de peroxynitrite. Cette nitrotyrosine ainsi formée, induit des lésions tissulaires via plusieurs mécanismes (Beckman et al., 1994a) : 1) altération de la phosphorylation de la tyrosine; 2) altération des fonctions protéiques par introduction de charges négatives sur les sites hydrophobes de la tyrosine, ce qui pourrait altérer la conformation protéique; 3) initiation de processus autoimmuns par la présence des nitrophénols telle que la nitrotyrosine, reconnue très antigénique (Kofler et al., 1992; Maeji et al. , 1992; Mizutani et al., 1995; Yuhasz et al., 1995).
A partir de ces données montrant le rôle de nitrotyrosine dans des processus inflammatoires et destructifs, il est possible de déduire que les Ac dirigés contre les différents éléments dérivés du NO peuvent également permettre leur caractérisation et la connaissance de leur propriétés. Citons par exemple, le rôle bien connu des thiols, des S-nitrosothiols et de la Snitrosoalbumine dans la vasodilatation in vivo et in vitro (Stamler et al., 1992c, d; Keaney et al., 1993; Simon et al., 1993). Grâce aux Ac anti-NO-Cys, une fonction immunitaire portée par l'albumine a pu être établie. Rappelons ici que la NO-SAB peut servir de réservoir de NO dans le plasma, à partir duquel NO peut être transporté vers le milieu intracellulaire par un mécanisme de transnitrosylation. Après son transport, NO a accès à ses cibles intracellulaires telles que la guanylate cyclase ou les hémoprotéines, ce qui résulte en une activité physiologique qui peut devenir pathologique en cas d'altération au niveau de la transnitrosylation.
La forme NOSAB formée à partir d'une source biologique (macrophages) a été largement utilisé, mais, dans un premier temps, d'autres molécules nitrosylées (;ynthétisées à pH acide à partir d'un donneur de NO ont c;té utilisé. Ceci a permis de développer des Ac poty- et monoclonaux. Dans un deuxième temps, la présence des molécules nitrosylées a été détectée en utilisant ces Ac.
Ces dérivés nitrosylés étaient synthétisés dans des co-cultures: macrophages activés / SAB ou macrophages activées / SAB / parasites. La détection a été réalisée non seulement par la technique immunoenzymatique mais aussi par la révélation du rôle cytotoxique de NO sur des parasites extracellulaires. Cet effet de NO est amplifié lors de la présence de la protéine porteuse, la SAB, et a été neutralisé en présence des Anticorps de l'invention.
Les macrophages activés produisent NO, mais peuvent aussi produire d'autres dérivés oxygénés tels que HOCl (De Violet et al., 1984; Vincendeau et al., 1989), H2O2 (Vincendeau et al., 1981), et surtout 02-0 La question posée est de savoir si la présence de cet anion est nécessaire à la formation de l'albumine nitrosylée.
O2C ou un autre derivé de l'oxygène (H202, 3OCl) peut être l'élément réagissant avec NO. Il est connu on effet que les neutrophiles et les macrophages murins roduisent simultanément NO et H202 ainsi que d'autres espèces réactives oxygènées qui participent à la cytotoxicité (Pacelli et al., 1995).
Il est en effet connu que les dérivés de l'azote et de l'oxygène peuvent également interagir pour former ciels dérivés ayant différentes fonctions. La neutralisation de ces fonctions par un blocage sélectif de telle ou telle molécule peut se révéler très instructive. De plus, il convient de remarquer que, lors de l'utilisation d'un donneur chimique de NO (NaNO2), un pH acide était nécessaire pour réaliser la nitrosylation. Par contre, dans le milieu de culture le pH est neutre. Nous pouvons répondre à cette question en tenant compte des données de P;haritonov qui montre qu'une nitrosylation peut avoir lieu n vitro, en milieu oxygéné et à pH 7 par le biais de N203 (haritonov et al., 1995), même si cette nitrosylation est moins importante que celle de la Cys ou le Glutathione, par exemple. Mais, pour répondre à cette question, il faudra mettre en oeuvre des piégeurs de dérivés oxygénés tels que SOD, catalase, taurine, qui permettront d'étudier ta nitrosylation in vitro, à pH neutre.
La nitrosylation de la SAB in vitro et l'effet cytotoxique correspondant, incitent à éclaircir un point important concernant les expérimentations réalisées dans des conditions légèrement différentes - Dans les premières conditions, les trypanosomes et la SAB ont été incubés ensemble. Les macrophages activés vont produire NO, mais aussi de nombreux autres radicaux libres. Ainsi, des dérivés oxygénés, toxiques ou non, seront formés. Ceci nous permet de postuler que, pendant l'incubation, ces dérivés pourraient agir "en compétition" avec NO sur les trypanosomes pour masquer et/ou interférer avec son effet toxique.
- D'où l'intérêt des secondes conditions expérimentales où la SAB a été placée en présence de macrophages activés pour être nitrosylée. Puis, la NOSAB formée a été transférée dans des milieux de co-cultures parasites / macrophages normaux qui ne produisent pas ou très peu des radicaux libres. Dans ces conditions, on peut admettre que l'effet de la NO-SAB ajoutée dans ces cultures, pauvres en radicaux libres, est dû à NO et non pas à d'autres dérivés oxygénés.
- Les résultats obtenus au cours de ces expérimentations ont été confirmés en utilisant un Ac anti-SAB. Lors de l'utilisation de cet antisérum, l'effet trypanocide de la NO-SAB a persisté dans les premières et les deuxièmes conditions. Ceci indique que l'effet neutralisant, observé en présence des Ac "T" ou "C", est propre à ces derniers malgré leur caractère polyclonal.
Il convient aussi d'ajouter que les secondes conditions ont permis également de montrer l'absence d'un effet "stimulateur" ou "inhibiteur" des complexes immuns qui pourraient être formés au niveau des macrophages. En effet, l'utilisation des macrophages normaux (n'exprimant pas la iNOS) , en présence des Ac polyclonaux, des trypanosomes, et du surnageant contenant la SAB nitrosylée, a montré des résultats équivalents à ceux obtenus selon les premières conditions. Ceci montrent que quelque soit l'influence de complexes immuns au niveau des macrophages activés, la production de NO à partir de ces cellules (exprimant la iNOS) n'a pas été modifiée. Ainsi, nous déduisons que selon ces deux conditions, l'effet cytotoxique de NO sur les T. musculi est dû particulièrement à la formation de la NO-SAB. Celle-ci a donc exercé cet effet soit par la libération de NO qui s'est fixé sur ses cibles, soit par un mécanisme d'échange de NO entre la SAB et les acides aminés ou les protéines parasitaires.
La mise en évidence de la formnation de dérivés nitrosylés in vitro par les tests immunoenzymatiques, ou par l'effet cytotoxique a conduit à rechercher les sites de fixation de NO au niveau de ces parasites. Cette recherche a débuté par l'utilisation de la technique immmunocytochimique : - Les meilleurs résultats étaient obtenus avec les macrophages activés. Les Ac poly et monoclonaux ont servi comme outils de marquage des sites de fixation de NO au niveau des parasites. Ces résultats ont été très reproductibles, ce qui n'était pas le cas lors de 1utilisation de NaNO2 ou de NO-SAB synthétisés chimiquement. Avec ces molécules, la demi-vie des trypanosomes ne dépassait pas 10 min et leur forme n'était pas conservée. Nous avons expliqué ce fait par la présence d'excès de NO libéré par ces donneurs chimiques, qui avaient une action intense sur les parasites se traduisant par leur lyse.
- L'utilisation de contrôles a donné des marquages faibles ou une absence totale d'immunoréacivité.
Ceci a confirmé la positivité des marquages obtenus en présence des macrophages activés (sans NMMA) avec les Ac poly et monoclonaux utilisés comme Ac primaires.
Ces Ac spécifiques des épitopes nitrosylés, ont montré la présence d'au moins des résidus cystéines et tyrosines nitrosylés. Ceux-ci ont été reconnus par leur Ac correspondant. Cette immunoréactivité pourrait être expliquée soit par la fixation de la SAB nitrosylée à la surface parasitaire, soit par des mécanismes de transnitrosylation entre cette molécules et les antigènes parasitaires portant un résidu thiol. Leur nitrosylation pourrait donc être à l'origine de l'effet cytostatique médié par la NO-SAB. En effet, des nombreuses études ont mis en évidence le rôle de NO dans la modulation de l'activité de certaines protéines en se fixant sur leur residu thiol (Stamler et al., 1994) ce qui permet la régulation de certains mécanismes cellulaires. Parmi celles-ci nous citons la guanylate cyclase soluble (Stamler et al., 1992a); le récepteur NMDA (Lipton et al.
1993); protéine kinase C (Gopalakrishna et al., 1994 > ; le p21raS (Lander et al., 1995); GADPH (Mohr et al., 1996) ainsi que le facteur de transcription OxyR (Hausladen et at., 1996). La transnitrosylation de NO à partir de la SAB des thiols des molécules biologiques, dépend de la réactivité de ces molécules, de celle de la SAB ainsi que de la stabilité de S-nitrosothiol formé (Scharfstein et al. , 1994). Donc, pour identifier ces molécules nitrosylées détectées au niveau des trypanosomes, des expérimentations par immunoempreintes utilisant le gaz NO ou le NaNO2 pour la nitrosylation des protéines parasitaires sont envisageables. Ces expérimentations autorisent la détection de sites protéiques ayant été accessibles au phénomène de nitrosylation in vitre. Les résultats obtenus sont très préliminaires et peu satisfaisants. En effet, la nitrosylation selon des conditions bien déterminées pourrait entraîner une meilleure accessibilité aux Ac correspondants. Notons que cette hypothèse a déjà été citée pour des dérivés nitrés ((rot, 1996) L'optimisation de ce protocole peut être obtenue en utilisant les macrophages activés comme donneurs du NO.
On envoie cette quantité au mélangeur final afin qu'elle soit mélangée avec les produits précédents.
Dans un sixième mélangeur identique aux mélangeurs précédents, on verse 2,5 litres d'eau, puis on verse successivement: 0,5 litre d'un insecticide du type PROTECTION TOTAL V, dont la composition est décrite dans l'exemple 50.
On fait toumer le sixième mélangeur avec l'ensemble d'eau et des différentes charges pendant 20 minutes afin d'avoir une solution homogène. Puis on verse 1 0g d'un colorant par exemple rose1 et on laisse tourner ce mélangeur pendant 5 minutes afin que la solution obtienne la couleur rose. Puis on verse 10 kg de polymère BARBARY PLANTE dans la solution, et on laisse l'ensemble se mélanger pendant 20 minutes encore, afin que la solution soit complètement absorbée par le polymère BARBARY PLANTE.
On envoie le mélange dans un séchoir à air chaud soufflé à 20"C jusqu'à ce que la quantité d'eau retenue dans le mélange soit abaissée à 5 %. On obtient ainsi 11, 500 kg environ de la sixième partie du produit composant de l'invention. On envoie cette quantité dans le mélangeur final afin qu'elle soit mélangée avec les précédents composants.
Dans un septième mélangeur d'une capacité de 100 litres, on verse 2,5 litres d'eau, puis 0,5 litre d'un produit odorant répulsif du type de celui commercialisé sous la dénomination FICELLE REPULSIF par VILMORIN (voir exemple 50), puis on fait tourner le mélangeur pendant 5 minutes et on verse sur la solution 10 kg de polymère BARBARY PLANTE. On mélange l'ensemble pendant 20 minutes, puis on envoie le mélange dans un séchoir à air chaud soufflé à 30"C jusqu'à ce que l'humidité retenue dans le mélange soit abaissée à 5%. On obtient ainsi 11 kg environ de produit du septième groupe composant du produit complexe du présent exemple.
Dans un huitième mélangeur final d'une capacité de 500 litres, qui se trouve activé dès l'instant qu'il commence à recevoir les granulés du premier groupe1 on verse une quantité de 5,644 kg d'un engrais granulé à action retardée, c'est dire à relâchement ralenti; on laisse l'ensemble se mélanger pendant 20 minutes. On obtient ainsi une quantité de 100 kg du produit de l'invention en forme de granulés de plusieurs couleurs à l'état sec, qui seront conditionnés dans un emballage hermétique.
La qualité du produit fabriqué selon cet exemple a l'avantage de faciliter la distribution dans les champs agricoles par les distributeurs mécaniques des engrais ou les semoirs.
Selon un développement de l'invention on peut avantageusement mélanger à l'hydrogel polymère proprement dit, une certaine quantité de sciure de bois ou de sable.
Les exemples 50 et 51 sont susceptibles de modifications afin la composition issue de ces exemples soit réalisée en forme de poudre soluble dans l'eau à partir d'un liant qui remplace le support hydrophile.
Exemple 52: Essais d'utilisation On a réalisé des essais sur plusieurs espèces végétales avec le produit G1 de l'état de la technique comparé avec le produit G2 issu de l'exemple 50 de la présente invention à savoir: A - Expérimentation menée sur des gazons situés sur des carrés de référence à Jeddah en Arabie-Saoudite, irrigués avec une eau saline sur substrat fortement salin, sur une superficie de l'ordre de 6000 m2, ensemencés 18 jours avant le prélèvement dont le résultat est le suivant: Culture de gazon avec G1 en comparaison avec G2 en liaison avec un peatmus (conditionneur du sol). e Peat-mus seul : croissance du gazon irrégulière, peu importante et discontinue; e G1 sur peat-mus à raison de 60 g de Gl/m2: croissance régulière dense, mais avec une hauteur de plante de 10 cm, avec couverture moins continue; G2 sur peat-mus à raison de 60 g /m2 : croissance importante, régulière, dense, hauteur de plante de l'ordre de 25cm avec couverture continue; après 18 jours de croissance sur les parcelles ou les mélanges avec G2, il a été nécessaire de procéder à une coupe importante du gazon compte tenu de la hauteur atteinte par la croissance foliaire. La qualité du gazon cultivé avec G2, quant à ses caractéristiques végétales sont exceptionnelles compte tenu de la présence d'une irrigation avec de l'eau salinisée à raison de 16 ohms de conductivité électrique à 25"C. La charge dominante est constituée de NaCI, avec cependant une petite charge résiduelle en CaCI.
La température moyenne de l'eau distribuée est de 14"C. L'irrigation est réalisée le matin à l'aide de canons aspersoirs. La durée d'insolation moyenne est de 11 heures avec seulement 7 heures sous un soleil d'une hauteur supérieure à 30 angulaire. Les besoins en eau du témoin ont été satisfaits directement par irrigation. Cependant, la réduction de 50% de l'irrigation sur les parcelles traitées avec G1 ou G2 n'a pas semblé provoquer de difficultés de croissance. Dans cette expérimentation l'aspect le plus positif est celui du gazon cultivé avec G2, c'est-à-dire avec le produit de la présente invention.
B - Expérimentations sur les choux: Dans ces trois carrés de 4 mètres carrés chacun, en terre très salinisée, on a planté des semis de choux verts qui pourtant présentent une forte résistance au sel. La salinité se manifeste par des florissances de sel tapissant la surface du sol aux alentours et sur les carrés concernés. Le substrat présente une texture argilo-sableuse ,caractéristique des sols très salinisés. L'eau d'irrigation est quant à elle fortement salinisée en NaCI pour des valeurs atteignant 18 ohms de conductivité électrique à 25"C. Dans ce contexte, rien ne pousse naturellement: e Carré 1, témoin; rien n'a poussé; e Carré 2 avec G1 à raison de 40 g: poussée faible; e Carré 3 avec G2 à raison de 40 g : toute la ligne de plantes a poussé donnant des plantes solides et bien constituées.
Ces expériences ont été réalisées en Arabie Saoudite et montre que le concept du produit de la présente invention constitue une solution particulièrement satisfaisante pour résoudre le problème lié aux contraintes du milieu salin.
D'autres expériences dont nous parlerons plus loin ont été réalisées dans des sites de référence et sous contrôle et montre les autres solutions apportées par le produit de la présente invention aux différents problèmes de l'agriculture.
Exemple 53: Fabrication de polymère enrichi en NPK 4 actions à l'état gommeux.
Afin d'améliorer la qualité et le coût de fabrication du produit de l'invention à partir de quelques composants cités dans l'exemple 50, on procède à une fabrication à froid comme suit: Dans un premier mélangeur de contenance de 2000 litres, on verse 130 litres d'eau, puis 140 kg de NPK 18.18.18 avec oligoéléments (ALGOSPEED), dont la composition en matières nutritives est décrite dans l'exemple 50).
Une mémoire morte ROM 113 conserve le système d'exploitation du microprocesseur 116 et permet de charger automatiquement, dans la zone exécution de la mémoire RAM 114, le programme conservé dans une mémoire effaçable et programmable 112. Ladite mémoire 112, de type connu sous le nom de flash EPROM, conserve le programme illustré en figure 24, qui organise le fonctionnement du dispositif ainsi que les registres RIGHT~UGI 492 et RIGHT~PAI 493 qui contiennent respectivement la liste des groupes d'utilisateurs UG auxquels appartient le récepteur ainsi que l'adresse personnelle PA du récepteur.
La figure 23 représente schématiquement le circuit électronique de l"'ETTD" d'émission 102: - le scanner 101 est connecté, par l'intermédiaire d'un connecteur SCSI non représenté, au contrôleur SCSI 120, qui symbolise la carte d'interface du scanner IX-30F, commercialisé par la société CANON sous la référence Sl-30, et qui fournit un signal numérique représentatif de l'image à transmettre, ici de L'image de la page 100, qui est temporairement stocké dans la zone "REGISTRES" d'une mémoire RAM 123. Un contrôleur IDE permet de connecter une unité de stockage qui conserve, d'une part, le programme qui organise le fonctionnement, illustré en en figure 25, de l"'ETTD" 102 ainsi que les identificateurs des groupes d'utilisateurs UG, et l'adresse personnelle PA de tous les récepteurs connus de l'émetteur, et, d'autre part, le système d'exploitation d'un microprocesseur 125; - le microprocesseur 125 commande le fonctionnement des autres composants de l'ETTD d'émission 102 par l'intermédiaire d'un bus 124 - une mémoire morte ROM 122 conserve le système de base du microprocesseur 125 - la mémoire vive 123 conserve, d'une part, dans la zone "REGISTRES", les variables, et, d'autre part, le système d'exploitation, le programme et les constantes préalablement chargés dynamiquement dans la zone "EXECUTION" depuis l'unité de stockage - un connecteur V24 127 est l'interface physique entre un contrôleur de liaison série 129 et l'ETCD d'émission 103 et un connecteur V24 128 est l'interface physique entre le contrôleur de liaison série 129 et l'ETCD de réception 108. Le contrôleur de liaison série 129 est relié, d'une part, aux connecteurs de liaison série 127 et 128, et, d'autre part, au bus processeur 124. Le contrôleur de liaison série 129, d'une part, permet au microprocesseur d'émettre le train binaire à diffuser et, d'autre part, avertit le microprocesseur 125 de la réception du train binaire en cours de diffusion, destiné au contrôle de qualité, par l'intermédiaire du contrôleur d'interruption 126. Le microprocesseur 125 peut alors accéder, par le bus processeur 124 aux registres du contrôleur de liaison série 129 afin de traiter, d'une part, les données à émettre et, d'autre part, les données reçues grâce aux différents dispositifs d'émission situés dans la mémoire vive RAM 123, zone "EXECUTION"; - le contrôleur d'interruption 126, de type connu, organise les interruptions du microprocesseur 125 en ce qui concerne notamment les échanges avec les différents contrôleurs ; et - de plus, I'ETTD d'émission 102 est équipé de tous les périphériques d'interface de type clavier et écran, bien connus de l'homme du métier et non décrits ici.
La figure 24 décrit les flots de données entre les différents moyens composant I'ETTD de réception 106.
La mise en oeuvre des fonctions du mode de réalisation décrit et représenté est plus facilement réalisable grâce à l'utilisation d'un moniteur temps réel permettant la gestion de traitements multitâches, couplé avec les moyens illustrés en figure 24, résidant en mémoire RAM 114, dans la zone "EXECUTION". A titre d'exemple on nomme le moniteur temps réel "Real Time Craft", et celui-ci est fourni par la société GSI TECSI.
Les zones mémoires FIFO~MSG 505, FIFO~TRX 506, FIFO~DATA 507 et FIFO~CMD 508, localisées en mémoire RAM 114 dans la zone "REGISTRES", sont de type FIFO et manipulent des éléments permettant de stocker la plus longue des trames au format HDLC manipulée par le mode de réalisation décrit et représenté, telle que celle représentée figure 3, sans les identificateurs de début 1 et de fin de trame 8. La longueur maximale est de l'ordre de 300 octets.
Le registre REG~FLUX 504, localisé en mémoire RAM 114 dans la zone "REGISTRES", détermine la position de l'interrupteur de flux 138 - si la valeur du registre REG~FLUX 504 est '1', I'interrupteur de flux est en position fermée, et le flux de données est ouvert et - si la valeur du registre REG~FLUX 504 est '0', I'interrupteur de flux est en position ouverte, et le flux de données est fermé.
Le registre REG~ACCESS 502, localisé en mémoire RAM 114 dans la zone "REGISTRES", est utilisé pour valider des droits d'accès aux données diffusées.
Les registres RIGHT~UGI et RIGHT~PAI, localisés en Flash EPROM dans la zone "SAUVEGARDE", sont utilisés pour mémoriser respectivement la liste des groupes d'utilisateurs UG auxquels appartient le récepteur et l'adresse personnelle PA du récepteur.
En figure 24, les données sont physiquement reçues depuis le support de transmission par un ETCD de réception 108, piloté par un moyen de synchronisation de trame et de contrôle de flux 1 39 par l'intermédiaire d'une interface série normalisée de type V24, symbolisée par le flot de données RX V24.
Le moyen de synchronisation de trame et de contrôle de flux 139 est illustré par l'organigramme de la figure 31. Le moyen de synchronisation de trame et de contrôle de flux 139 est capable d'extraire les symboles de protocole, les trames correctement transmises (opération 271), tout en éliminant les répétitions, opération 272, et de commander le fonctionnement de l'interrupteur de flux 138, conformément aux règles suivantes - sur réception d'une trame de type SPI, premiers symboles de protocole, la fermeture de l'interrupteur de flux 138 est commandée, opération 274, symbolisée par le signal FLUX~ON et - I'ouverture de l'interrupteur de flux 138 est commandée, opération 282, symbolisée par le signal FLUX~OFF sur réception d'une trame de type DCN, deuxièmes symboles de protocole.