INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
l'électronique reste désactivée La version commutateur de verrou NF est avantageuse dans le cas où la carte à puce est rarement retirée de l'équipement électronique (par exemple dans le cas d'un téléphone cellulaire, GSM, etc.).
En cas d'altération dans le temps des performances du commutateur (qui est rarement actionné), le fonctionnement de l'appareil n'est pas arrêté. Le commutateur de fin de course de pivotement est en sécurité pour assurer la protection de l'électronique de l'équipement au moment de l'ouverture du connecteur, même si le commutateur de verrou ne fonctionne plus.
Lors de la remise de la carte dans le connecteur et lors du verrouillage à nouveau du verrou, il y aura eu un cycle complet " ouverture / fermeture " du commutateur de verrou à lame : l'effet autonettoyant de ce cycle a toutes les chances de remettre " en état " le commutateur de verrou et l'électronique de l'équipement sera activée sans que l'opérateur se soit aperçu d'une dégradation du commutateur de verrou sous l'effet du vieillissement du commutateur à lame rarement utilisé.
Si une panne du commutateur de verrou survenait, nous avons vu qu'il n'y avait pas de danger pour l'électronique grâce au commutateur fin de course. Par contre, une panne du commutateur fin de course mettrait en cause la sécurité de l'électronique de l'équipement. Il est alors envisageable de sécuriser ce cas de figure défavorable, car l'électronique de l'équipement est capable de détecter la présence de la carte à puce par les contacts signaux (mais, sans commutateur, elle est incapable de prévoir à l'avance l'ouverture de ceux-ci).
Si le commutateur de fin de course de pivotement est du type NO, une éventuelle panne de celui-ci sera immédiatement détectée " en position carte en appui sur les contacts " par l'électronique de l'équipement, car le commutateur de type NO doit être fermé lorsque les contacts signaux sont établis. Si une panne du commutateur fin de course est détectée pendant le fonctionnement, c'est-à-dire pendant la période pendant laquelle la carte est correctement installée et le verrou correctement verrouillé, l'électronique peut simplement enregistrer cette information et laisser l'électronique " activée " jusqu'à la prochaine impulsion front " montant " du commutateur de verrou de type NF, c'est-à-dire au premier déverrouillage, et la réactivation de l'électronique sera ensuite interdite par le fait que le commutateur fin de course " donnera l'information " pas de présence carte " (on se retrouve alors dans une configuration équivalente à celle évoquée au point 1.1.1.
Si le commutateur de fin de course de pivotement est du type NF, une éventuelle panne de celui-ci sera immédiatement détectée en position " sans carte " ou " carte non en appui sur les contacts ", car le commutateur de type NF doit être fermé lorsque les contacts signaux ne sont pas établis. Si une panne du commutateur fin de course survenait pendant le fonctionnement, c'est-à-dire pendant la période pendant laquelle la carte est correctement installée et le verrou correctement verrouillé, l'électronique ne percevrait pas la panne et elle resterait actionnée jusqu'à la prochaine impulsion front " montant " du commutateur de verrou NF, c'est-à-dire au premier déverrouillage : c'est à partir de ce moment qu'il y a danger.
Deux hypothèses se présentent alors L'opérateur relâche l'appui sur le couvercle déjà déverrouillé. Le couvercle pivote vers son ouverture angulaire ; le commutateur de verrou s'ouvre et comme le commutateur fin de course, en panne, lit par erreur " présence carte ", et on se retrouve dans la configuration évoquée au point 1.2 .2 qui, sans précaution supplémentaire, donnerait l'ordre de réactiver l'électronique avec le risque de la détériorer.
La précaution supplémentaire préconisée pour éviter ce risque, consiste à imposer que l'activation de l'électronique ne se fasse que lorsque le front descendant " de fermeture du verrou est immédiatement précédé, dans un délai fixé de quelques secondes par exemple, d'un front " descendant " (ouverture) du commutateur de type NF de fin de course.
L'opérateur verrouille à nouveau le verrou sans avoir relâché l'appui sur le couvercle. Bien que dans cette configuration, il n'y ait pas de risque, l'électronique de l'équipement ne sera pas réactivée du fait de la précaution supplémentaire (puisque le front " descendant " du commutateur verrou n'aura pas été immédiatement précédé d'un front " descendant " du commutateur fin de course).
La version commutateur de verrou de type NO est préférée dans les cas d'applications pour lesquelles la sécurité est prioritaire (par exemple pour les équipements de transactions financières..) et pour lesquelles aucun risque, si minime soit-il, n'est acceptable par l'équipementier.
Les résultats présentés dans le tableau 2 indiquent que les niveaux d'activité de la glycérol déshydratase et de la 1,3-propanediol déshydrogénase exprimées dans la souche de Clostridium acetobutylicum transformée par le plasmide pSPD5 sont bien supérieurs (respectivement 7,8 et 4,3 fois supérieurs) aux niveaux d'activité glycérol déshydratase et 1,3-propanediol déshydrogénase exprimés par la souche de Clostridium butyricum produisant naturellement ces enzymes.
Comme contrôle, une souche de Clostridium acétobutylicum transformée avec le plasmide pIMPI ne contenant pas les régions codant pour la glycérol déshydratase et la 1,3-propanediol déshydrogénase ne produit pas de quantité détectable de ces deux enzymes, ce qui montre clairement que l'activité observée chez la souche transformée par le plasmide pSPD5 est uniquement due à l'expression de l'opéron 1,3-propanediol selon l'invention.
Les résultats présentés dans le tableau 2 démontrent clairement l'intérêt de transformer une souche de micro-organisme ne produisant pas naturellement la glycérol déshydratase et la 1,3-propanediol déshydrogénase selon l'invention avec un vecteur recombinant tel que le vecteur pSPD5 car il est possible dans ce
cas, par exemple par l'emploi de promoteurs appropriés, d'obtenir des niveaux d'expression qui ne sont jamais atteints naturellement.
Exemple 8 Expression des gènes de l'opéron 1,3 propanediol chez Saccharomyces cerevisiae cultivée sur glycérol.
Les parties codantes des gènes orf11, orf12 et dhaT ont été individuellement amplifiées par PCR en introduisant au niveau des amorces un site Apal en partie 5' et Smal en partie 3'. Chaque gène a ensuite était introduit, grâce aux deux sites précédants, dans le vecteur pYGK (CROUX et SOUCAILLE, 1999) permettant de construire une cassette d'expression sous le contrôle du promoteur du gène PGK et du terminateur du gène CYCI. Les trois gènes dans leur cassette d'expression ont ensuite été sortis du vecteur par digestion NotISacll et introduit dans trois vecteurs centromériques de la famille pRS31X qui différent par la nature de leur marqueur de sélection (his3, trp1, ura3). Chacun des trois plasmides a ensuite était introduit dans la souche de S. cerevisiae YPH500 (ura3 lys2 ade2 trp1 his3 leu2) et sélectionné par complémentation de trois des auxotrophies de cette souche.
CROUX et SOUCAILLE, 1999, Non publié.
EXEMPLE 9: Expression de l'opéron 1,3-propanediol dans Clostridium acetobutylicum DG1 [pSPD5] cultivé sur glucose La souche Clostridium acetobutylicum DG1 transformée par le plasmide pSPD5 comme décrit dans la partie Matériels et Méthodes a été cultivée en présence de glucose comme seule source carbonée et différents paramètres ont été suivis au cours de la fermentation.
Les résultats sont représentés sur la figure 10.
Les résultats de la figure 10 montrent une synthèse, quoique faible (0,3 g/l) de 1,3-propanediol, alors que la totalité du glucose a été consommée. Cette production, due à la présence d'une faible concentration en glycérol intracellulaire chez Clostridium acetobutylicum DG1 [pSPD5] démontre toutefois la faisabilité d'un procédé de conversion directe du glucose en 1,3-propanediol dans une souche portant les gènes revendiqués par la présente invention.
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES: # Gelis, C. et al., 1999 - Non publié.
# Hames BD and Higgins SJ, 1985, "Nucleic acid hybridization : a practical approach", Hames and Higgins Ed., IRL Press, Oxford.
# Harris, L. M. et al., 1999 - Non publié.
# Houbenweyl, 1974, in Methode der Organischen Chemie, E. Wunsch Ed., Volume 15-1 et 15-11, # Inoue et al., 1990, Gene, 96,23-28.
# Kohler G. and Milstein C., 1975, Nature, 256 : 495.# Lee S. Y. et al., 1992, Biotech Lett., 14 : 427-432.
# Léger OJ, et al., 1997, Hum Antibodies, 8(1): 3-16 # Maguin E. et al., 1992, J. Bacteriol., 174 : 5633-5638.
Par micrométastases , on désigne plus particulièrement des métastases invisibles à l'oeil nu.
Par macrométastases , on désigne plus particulièrement des métastases visibles à l'#il nu.
Dans ce qui suit, on désigne de façon avantageuse, par micrométastases les métastases ayant des tailles variant d'environ 1 à 1000 cellules, et par macrométastases les métastases ayant des tailles variant d'environ 1000 à plusieurs milliers de cellules.
Par métastases pulmonaires , on désigne les métastases présentes au niveau du poumon. Cependant, les métastases d'origine pulmonaire peuvent également être présentes au niveau d'autres organes tels que le foie, les intestins, le c#ur etc....
Par métastases pulmonaires spontanées , on entend les métastases qui se forment spontanément dans le poumon après injection chez un animal, de la lignée cellulaire de carcinome pulmonaire humain.
Les métastases pulmonaires spontanées sont fluorescentes car la lignée cellulaire de carcinome pulmonaire humain transfectée par la protéine fluorescente les produisant, est stable pour ladite protéine.
De même, il est possible de détecter une seule micrométastase présente chez l'animal, car la lignée cellulaire de carcinome pulmonaire humain transfectée par la protéine fluorescente, est stable pour ladite protéine et la quantité présente de ladite protéine est suffisante pour la détection d'une seule micrométastase.
Par l'expression pour cribler de façon précoce des médicaments actifs sur des métastases pulmonaires , il faut comprendre que le temps nécessaire à l'étude de l'effet d'un médicament sur la formation et la détection des métastases pulmonaires spontanées, varie d'environ 13 à environ 28 jours, ce qui représente un temps relativement court.
Ainsi selon l'invention, il sera possible de détecter, après injection à un animal de la lignée cellulaire telle que définie ci-dessus :
- quelques métastases pulmonaires dès le treizième jour après l'injection, - de 9 à 107 métastases pulmonaires dès le vingtième jour après l'injection, et notamment dès le vingt huitième jour.
A titre d'exemple, selon les travaux de YANG et al. précédemment cités [6], étudiant la lignée cellulaire de carcinome pulmonaire humain NCI-H460 transfectée par le gène de la GFP : - il est impossible de détecter des métastases dans les 15jours qui suivent l'injection, - il est nécessaire de recourir à une implantation orthotopique 28 jours après l'injection, - le temps minimum nécessaire à l'étude de l'effet d'un médicament sur la formation et la détection des métastases pulmonaires spontanées, est d'environ 41 jours après injection de ladite lignée cellulaire chez un animal.
Selon un mode de réalisation avantageux, la lignée cellulaire selon l'invention, de carcinome pulmonaire humain, notamment dérivée de la lignée cellulaire NCI-H460, présente les propriétés suivantes : - elle exprime de façon constitutive une protéine fluorescente, - elle est stable pour ladite protéine, - elle est capable de produire, après injection chez un animal et sans implantation orthotopique, un nombre de métastases pulmonaires spontanées fluorescentes variant d'environ 1 à environ 700, en un temps relativement court, variant d'environ 2 à environ 7 semaines après ladite injection chez l'animal, - elle exprime la protéine fluorescente en quantité suffisante pour qu'une seule micrométastase présente chez ledit animal soit détectable.
Le terme animal utilisé selon l'invention, désigne des mammifères, notamment des souris, et notamment des souris athymiques immunodéficientes appelées souris nude (Swiss).
Les injections de cellules selon l'invention provenant de la lignée cellulaire de carcinome pulmonaire humain exprimant une protéine fluorescente, sont effectuées selon l'invention par voie sous-cutanée. De façon avantageuse selon l'invention, seules des injections par voie sous-cutanée sont nécessaires, lesdites cellules transfectées selon l'invention migrant de façon naturelle vers les poumons de l'animal.
Le nombre de métastases pulmonaires spontanées fluorescentes peut atteindre dans les valeurs supérieures, environ 400 à environ 700, ce qui correspond à un
nombre important de métastases par rapport aux nombres de métastases produites par les lignées cellulaires actuellement connues.
L'acide nucléique de séquence SEQ ID N 5 comprend les éléments fonctionnels caractéristiques suivants: a) un terminateur de transcription d'une région codante localisée en amont de l'opéron 1,3-propanediol dans le génome de Clostridium butyricum.
Ce motif terminateur de transcription possède une structure en épingle à cheveux centré sur le nucléotide en position 27 de la séquence SEQ ID N 5 (AG = - 25,2 kcal/mol) qui comprend une tige 19 pb, les deux brins de la tige étant constitués respectivement des nucléotides en positions 5 à 23 et des nucléotides en positions 30 à 48 de la séquence SEQ ID N 5, la boucle de la structure en épingle à cheveux étant constituée par les nucléotides en positions 24 à 29 de la séquence SEQ ID N 5.
Ce motif terminateur de transcription est suivi de la séquence ATTTT. b) Promoteur de l'opéron 1,3-propanediol.
Le promoteur de l'opéron 1,3-propanediol est localisé du nucléotide en position 100 au nucléotide en position 200 de la séquence SEQ ID N 5.
Ce promoteur comprend une boîte (-35) de séquence TAGATA localisée du nucléotide en position-142 au nucléotide en position 147 de la séquence SEQ ID N 5. Ce promoteur comprend également une boîte (-10) de séquence TATTAT localisée du nucléotide en position 164 au nucléotide en position 169 de la séquence SEQ ID N 5, la distance entre les boîtes-35 et les boîtes -10 étant de 16 pb. c) orf11(séquence codant pour la première sous-unité de la glycérol déshydrogénase.
Il s'agit d'une phase de lecture ouverte unique de 2. 361 pb codant pour le polypeptide ORF11de 787 acides aminés de séquence SEQ ID N 6.
Le codon d'initiation ATG est localisé du nucléotide en position 313 au nucléotide en position 315 de la séquence SEQ ID N 5. Le cadre ouvert de lecture se termine par un codon stop de séquence TAA localisée du nucléotide en position 2674 au nucléotide en position 2676 de la séquence SEQ ID N 5.
En outre, un site de fixation au ribosome de séquence GAGGAG précède le codon d'initiation et est localisé du nucléotide en position 302 au nucléotide en position 307 de la séquence SEQ ID N 5. d) orf12 (séquence codant pour la seconde sous-unité de la glycérol déshydrogénase). Il s'agit d'un cadre de lecture ouvert unique de 912 pb codant pour un polypeptide de 304 acides aminés de séquence SEQ ID N 7. Le codon d'initiation de séquence ATG est localisé du nucléotide en position 2704 au nucléotide en position 2706 de la séquence SEQ ID N 5. Le cadre de lecture ouvert s'achève par un codon stop de séquence TAA localisée entre les nucléotides en position 3616 et le nucléotide en position 3618 de la séquence SEQ ID N 5.
En outre, un site de fixation du ribosome de séquence AAGGGGA précède le codon d'initiation et est localisé du nucléotide en position 2689 au nucléotide en position 2695 de la séquence SEQ ID N 5. e) dhat (séquence codant pour la 1,3-propanediol déshydrogénase) .
Il s'agit d'une phase de lecture ouverte unique de 1155 pb codant pour un polypeptide de 385 acides aminés de séquence SEQ ID N 8.
Le codon d'initiation de séquence ATG est localisé du nucléotide en position 3678 au nucléotide en position 3680 de la séquence SEQ ID N 5 La phase de lecture ouverte se termine par un codon stop de séquence TAA localisé du nucléotide en position 4833 au nucléotide en position 4835 de la séquence SEQ ID N 5.
En outre, un site de fixation du ribosome de séquence AGGAGA précède le codon d'initiation et est localisé du nucléotide en position 3663 au nucléotide en position 3668 de la séquence SEQ ID N 5. f) Terminateur de transcription de l'opéron 1,3-propanediol.
Le terminateur de transcription de l'opéron 1,3-propanediol possède une structure en épingle à cheveux centrée sur le nucléotide en position 4933 de la séquence SEQ ID N 5 (AG =-27,4 kcal/mol) et comprend une tige de 22 pb constituée respectivement des nucléotides localisés en positions 4909 à 4930 de la séquence SEQ ID N 5 et des nucléotides localisés de la position 4936 à 4957 de la séquence SEQ ID N 5.
La boucle de l'épingle à cheveux est constituée de la séquence allant du nucléotide en position 4931 au nucléotide en position 4935 de la séquence SEQ ID N 5.
La structure en épingle à cheveux est suivie de la séquence TATTTTAATT.
Chacune des séquences fonctionnelles comprise dans l'opéron 1,3propanediol de séquence SEQ ID N 5, tel que décrit ci-dessus, peut être mise en oeuvre individuellement, par exemple par insertion dans un vecteur de clonage et/ou d'expression, qu'il s'agisse de l'une des régions codant pour un polypeptide de l'invention ou encore d'une région régulatrice (promoteur ou terminateur de transcription).
Le circuit imprimé 1 comprend une alarme sonore 12 pilotée par le microprocesseur 6.
II comprend encore des moyens électroniques 14, connectés au moteur d'essuie-glaces 15 du véhicule (pour ce qui concerne une implantation du dispositif avertisseur sur un véhicule automobile ou sur un poids lourd), qui permettent de détecter la mise en marche des essuie-glaces (c'est-à-dire de manière indirecte la présence de pluie) et d'envoyer l'information correspondante au microprocesseur 6.
Le microprocesseur 6, programmé en conséquence, a ainsi la possibilité de déclencher les feux de détresse du véhicule à partir d'un seuil de freinage diminué, en cas de pluie.
A côté du capteur d'inertie 5 et du microprocesseur 6, les différentes parties fonctionnelles du circuit imprimé décrites ci-dessus (ensemble régulateur/stabilisateur de tension 3, commandes de puissance 10, 11, alarme sonore 12 et ensemble de détection 14) sont constituées d'une association de composants électroniques classiques (résistances, diodes, condensateurs ... ), implantés de manière logique par le concepteur pour obtenir les fonctions décrites.
Un exemple de conception détaillé de ce dispositif avertisseur de freinage d'urgence est illustré sur la figure 2 ; sur cette figure les parties fonctionnelles qui viennent d'être décrites sont individualisées et repérées de manière identique.
Le circuit imprimé 1 comprend des sorties de connexion électrique qui permettent la liaison - de l'ensemble régulateur/stabilisateur de tension 3 avec la borne + 12 volts de la batterie 2 et avec la masse, - des moyens de détection 14 avec l'alimentation + 12 volts du moteur d'essuie-glaces 15 et - des commandes de puissance 10 et 11 respectivement avec les feux clignotants droit 8 et gauche 9.
Pour son implantation dans le véhicule, le circuit imprimé est avantageusement protégé par un capotage en forme de boîtier.
Une fois le circuit imprimé réalisé le microprocesseur 6 est programmé pour lui permettre de gérer les informations délivrées par le capteur d'inertie numérique à double sens 5 et, au cours de cette programmation, on réalise un calibrage du capteur d'inertie 5 pour s'exonérer des problèmes de tolérance en ce qui concerne la précision des valeurs numériques qu'il délivre et pour obtenir une grande précision de déclenchement. Ces opérations de programmation/calibrage sont réalisées au moyen d'un matériel spécifique illustré de manière fonctionnelle sur les figures 3 et 4. Ce matériel particulier comprend une embase 16 munie de moyens 18 qui permettent le positionnement du circuit imprimé 1 sur des plots 20 de programmation et de test, connectés à des moyens informatiques 22.
Les plots de programmation et de test 20, du type contacts à ressort, sont agencés en fonction de l'implantation des éléments électroniques sur le circuit imprimé et en particulier en fonction de l'implantation du microprocesseur 6. L'embase 16 est en outre articulée en 24 sur un socle principal 26 de manière à permettre son pivotement de 90 , entre deux butées de positionnement 28 et 30. Ce pivotement de 90 est adapté, en fonction de l'implantation du capteur 5 sur le circuit imprimé, pour permettre de placer la ligne active de ce capteur, soit horizontalement (figure 2), soit verticalement (figure 3).
La programmation du microprocesseur 6 est réalisée de manière à lui permettre d'enregistrer les valeurs successives Vn délivrées par le capteur d'inertie 5. Simultanément, le microprocesseur calcule la différence entre chaque valeur Vn et la valeur Vn - x qui a été délivrée par le capteur un laps de temps x auparavant (voir figure 5), ce laps de temps x prédéterminé pouvant être de l'ordre de quelques dixièmes de secondes ou de quelques secondes. Cette différence Vn - Vn-x est comparée à une valeur seuil A, définie à l'avance, correspondant à une valeur seuil de freinage, et le déclenchement simultané des feux clignotants droit et gauche 8, 9 est commandé dans le cas où la différence Vn - Vn-x est supérieure à cette valeur seuil A (Pour une automobile, cette valeur seuil A peut correspondre à une décélération de l'ordre de 0,5 à 1 g).
Les feux de détresse sont maintenus activés pendant un délai prédéterminé à partir de leur déclenchement, par exemple de l'ordre de quelques secondes. Les témoins lumineux du tableau de bord qui signalent le déclenchement des feux clignotants sont aussi activés ; pour compléter l'information du conducteur, l'alarme sonore 12 est déclenchée simultanément et de préférence pendant le même délai.
Comme on l'a vu précédemment, le microprocesseur 6 est aussi programmé pour déclencher les feux de détresse à partir d'un seuil de freinage diminué, en cas de pluie. Pour cela, les moyens de détection 14 informent le microprocesseur de la mise en marche des essuie-glaces du véhicule ; et de manière automatique, le microprocesseur prend alors en compte une valeur de seuil A' plus faible (par exemple de l'ordre de 5 % en moins).
Cette façon d'opérer permet d'obtenir un réétalonnage automatique et permanent du dispositif avertisseur de freinage d'urgence de manière, notamment, à ne pas avoir besoin de positionner le capteur 5 parfaitement horizontalement sur le véhicule, et de manière à ne pas tenir compte pour le déclenchement des feux de détresse, des dénivellations ou irrégularités du trajet.
Comme indiqué précédemment, la programmation du dispositif avertisseur de freinage d'urgence par les moyens informatiques 22 intègre aussi une opération de calibrage du capteur 5, réalisée en utilisant les possibilités de pivotement à 90 de l'embase 16.
En positionnant horizontalement la ligne active du capteur 5 (figure 2) on peut enregistrer la valeur numérique délivrée par ce capteur à 0 g (accélération nulle) ; son positionnement vertical (figure 3) permet l'enregistrement de la valeur numérique qu'il délivre pour une accélération de 1 g. Ces deux enregistrements permettent d'obtenir la valeur numérique pleine échelle du capteur considéré, entre 0 g et 1 g, et ainsi d'en déduire la valeur numérique correspondant à l'unité de l'échelle.
Cette valeur d'unité d'échelle est intégrée dans la programmation du microprocesseur de manière à assurer un déclenchement fiable et précis des feux de détresse, toujours pour une même valeur de décélération précise, ceci malgré l'existence de différences d'un capteur à l'autre en ce qui concerne la précision des valeurs numériques délivrées.