INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
A titre d'exemple, on mentionnera les possibilités de substitutions susceptible d'être cffectuées sans qu'il en résulte une modification approfondie dc l'immunogènicité des peptides modifiés correspondants, les remplacements, par exemple, de la leucinc par la valine ou l'isoleucine, de l'acide aspartique par l'acide glutamique. de la glutamine par l'asparagine, de l'arginine par la lysine etc., les substitutions inverses étant naturellement envisageables dans les mêmes conditions.
L'invention concerne aussi un acide nucléique caractérisé en ce qu'il code pour un polypeptide de séquence SEQ ID N"3 ou un polypeptide homologue au polypeptide de séquence SEQ ID N" 3 ou encore un fragment de ces derniers, tel que définis ci-dessus.
La séquence de P27 présente des homologies de séquence avec une protéine de 408 acides aminés, riche en sérine (Serine- Rich Antigen), de M. Ieprae, désignée Sra (Vega Lopez et al., 1993). Il a ainsi été déterminé, d'une part que l'homologie entre la séquence de P27 et la séquence de Sra de Aq: leprae est restreinte aux 207 premiers acides aminés Nterminaux et d'autre part que le pourcentage d'homologie entre P27 et la protéine Sra (P.M. estimé : 42,5 KD) est de 34% sur ces 207 acides aminés (Fig. 4). La protéine Sra de M leprae présente elle-même un faible degré d'homologie avec un antigène hypothétique de 51 kD de M rlaberculosis décrit par Shinnick en 1987, en particulier dans la région N-terminale. Alors que la protéine Sra de Ad: leprae possède 30% de sérine dans une région centrale, la protéine P27 ne possède que 5% de sérine mais possède en revanche 12% d'alanine. En conséquence, la protéine P27 selon l'invention ne peut être assimilée à un membre de la famille des protéines riches en sérine du type de la protéine Sra de AI. Ieprae.
Le point isoélectrique théorique de la protéine P27 a été déterminé grâce au logiciel Isoelectric (commercialisé Par Genetics Computer Group, Inc., 575 Science Drive, Madison, Wisconsin, 53711,USA). Il est de 4,59 (Fig. 3), ce qui permet de classer P27 parmi les protéines acides.
L'invention vise aussi des fragments nucléotidiques complémentaires des précédents, ainsi que des fragments modifiés par rapport aux précédents, par enlèvement ou addition de nucléotide(s) dans un proportion d'environ 15% par rapport à la longueur des fragments cidessus et/ou modifiés au niveau de la nature des nucléotides, dês lors que les fragments nucléotidiques modifiés conservent une capacité d'hybridation avec la séquence d'ADN de II. tuberculosis, analogue à celle que présentent les fragments correspondants non modifiés, dans les conditions de stringence définies ci-dessus.
Avantageusement, un fragment nucléotidique répondant à la définition précédente aura au moins 8 nucléotides, de préférence au moins 12 nucléotides, et encore plus préférentiellement au moins 20 nucléotides consécutifs de la SEQ ID N0 I.
Ces fragments peuvent être mis en oeuvre en tant in'amorces pour la réalisation de réactions d'amplification, ou en tant que sondes.
Les séquences SEQ ID N"1 et SEQ ID N"2 ou les fragments obtenus à partir de ces séquences peuvent ainsi être utilisés pour sélectionner des amorces nucléotidiques, notamment pour la technique PCR.
Cette technique nécessite le choix de paires d'oligonucléotides encadrant le fragment qui doit être amplifié. On peut, par exemple, se référer à la technique décrite dans le brevet américain U.S. N" 4 683 202. Ces amorces oligodésoxyribonucléotidiques ou oligoribonucléotidiques ont avantageusement une longueur d'au moins 8 nucléotides, de préférence d'au moins 12 nucléotides, et encore plus préférentiellement au moins 20 nucléotides. On préférera en particulier des amorces d'une longueur comprise entre 8 et 30 et de préférence 12 et 22 nucléotides. L'une des deux amorces est complémentaires du brin (+) [amorce aller] de la matrice et l'autre amorce est complémentaire du brin (-) [amorce retour].
II est important que les amorces ne possèdent pas de structure secondaire ou de séquence complémentaire l'une de l'autre. D'autre part, la longueur et la séquence de chaque amorce doivent être choisies de manière à ce que les amorces ne s'hybrident pas avec d'autres acides nucléiques provenant de cellules procaryotes ou eucaryotes, en particulier avec les acides nucléiques provenant de mycobactéries n'appartenant pas au complexe de tuberculosis ni avec lADN ou l'ARN humain pouvant éventuellement contaminer l'échantillon biologique.
Les auteurs de la présente invention ont vérifiés par calcul et expérimentalement que le fait de passer d'un disque (figure 3A) à une calotte sphérique (figure 3B et figure 3C) permet de diminuer l'erreur relative tH/H sur la hauteur H et l'erreur relative th/h sur la hauteur h par rapport à l'épaisseur E.
En d'autres termes, l'erreur relative tH/H est inférieure à hE/E.
De même, l'erreur relative Ah/h est inférieure hE/E.
Ceci est mis à profit pour diminuer l'incertitude sur la hauteur des composants optiques après hybridation et donc de réduire encore l'erreur de positionnement relatif entre ces composants optiques.
La figure 4 montre encore l'alignement optique des composants optiques 22 et 24 de la figure 2 sur le substrat 21.
Dans l'exemple de la figure 4, le composant 22 est une diode laser et le composant 24 est un diviseur.
On a en plus fixé sur la surface plane S du substrat 21 un circuit électronique de commande 56 également par l'intermédiaire de microbilles de soudure 58.
Chaque microbille est fixée d'un côté à un plot d'accrochage 60 situé sur la surface plane S et de l'autre côté à un autre plot d'accrochage 62 situé sur la face du circuit 56 qui se trouve en regard de cette surface plane S.
Ce circuit électronique 56 peut être assemblé par les technologies standard d'interconnexion des composants électroniques.
Seul le composant purement optique 24 et le composant optoélectronique 22 nécessitent un alignement optique précis.
On voit également sur la figure 4 diverses pistes d'interconnexion 64 destinées aux interconnexions électriques des composants qui nécessitent de telles interconnexions, par l'intermédiaire des microbilles (qui sont conductrices).
Les figures SA, 5B, 5C, 5D et 5E illustrent schématiquement diverses étapes d'un procédé d'assemblage de composants optiques conformément à l'invention.
Il s'agit des deux composants optiques 22 et 24 de la figure 2 que l'on cherche a aligner optiquement sur la surface plane S du support 21.
Comme on l'a vu plus haut, le composant 22 est fixé à la surface plane du substrat 21 par l'intermédiaire de microbilles de soudure 30.
Chaque microbille 30 est fixée d'un côté à un plot d'accrochage 32 formé sur la surface plane du substrat 21 et de l'autre côté à un autre plot d'accrochage 34 dont est pourvue la surface du composant 22 qui se trouve en regard de cette surface du substrat 21.
De même, chaque microbille de soudure 36 du composant 24 est fixée d'un côté à un plot d'accrochage 38 formé sur la surface plane de substrat 21 et de l'autre côté à un autre plot d'accrochage 40 formé sur la surface du composant 24 qui est située en regard de cette surface plane du substrat 21.
NO-SAB NO-SAB NO-Cys- NO-Cys-G No-Tyr- NO-Tyr-G NO-Tryp délipidée SAB -SAB SAB -5AB -G-SAB (,02 0 0,03 0,10 0,02 0,11 0,11 t 0,02 + 0,04 t 0,03 t 0,02 + 0,02 t 0,01 3) Discussion.
Les résultats obtenus montrent: - Une différence de signaux immunologiques entre les sérums contrôles et ceux de souris parasitées.
- Des différences entre les groupes de souris parasitées ainsi qu'entre les différents épitopes utilisés. Ceci pourrait être dû au type de couplage qui joue un rôle dans la présentation de l'épitope nitrosylé couplé à une protéine par une liaison peptidique (carbodiimide) ou par une liaison de type "amine primaire" - Ces données confirment l'implication de NO dans ces parasitoses, qu on peut résumer comme le résultat d'une activation des macrophages en présence des parasites suivie d'une expression de la iNOS qui libère NO en grande quantité pendant des heures, voire des jours. NO va donc exercer son effet cytostatique ou cytotoxique sur les parasites en se fixant sur leurs cibles protéiques et/ou au niveau des cellules du soi, formant ainsi des néoépitopes nitrosylés différents. Ces antigènes vont stimuler le système immunitaire qui va produire des anticorps dirigés contre ces épitopes nitrosylés.
Après avoir obtenu ces résultats chez les animaux et en raison du rôle éventuel de NO dans l'effet cytostatique et cytotoxique sur les parasites intra et extracellulaires, les Inventeurs ont étudié chez des malades atteints de pathologies parasitaires différentes (trypanosomose, toxoplasmose, amibiase, hydatidose, paludisme) l'évolution des signaux immunologiques contre des épitopes nitrosylés. Les résulats obtenus ont montré une différence significative entre les sérums des malades atteints de trypanosomose ou de paludisme et ceux d'autres patients et témoins. Pour les premiers, les meilleurs signaux immunologiques ont été obtenus sur les épi topes NO-Tyr-G et NO-Tryp-G. En revanche, pour les autres, les signaux immunologiques ont été très faibles même sur ces deux épîtopes. Les tests ont été effectués sur 20 sérums de chaque pathologie.
C - Rôle protecteur des anticorps monoclonaux dans l'encéphalite autoimmune et l'arthrite inflammatoire oxperimentales 1) Encéphalite autoimmune expérimentale.
Le modèle de l'encéphalite autoimmune rj-,périmentale (EAE), a pour objectif de reproduire la démyélintsation observée dans la sclérose en plaques (,EP). . C'est une pathologie démyélinisante du système nerveux central (SNC) affectant la substance blanche. La myéline, gaîne protectrice de fibres nerveuses est la cible du processus pathologique. La dégradation de cette-ci est responsable de l'apparition des plaques.
Lorigine de la SEP est très certainement multifactorielle: génétique, environnement, autoimmunité et stress émotionnel (Antel et Cashman, 1991; Poser, 1992; Talbot, 1995). Cependant, l'étiopathogénîe exacte demeure inconnue. Plusieurs anomalies de la réponse immune à médiation cellulaire et humorale ont été décrites (Brochet et Orgogozo, 1987; Olsson, 1995). Des hypothèses ont été formulées concernant les réponses autoimmunes qui ont été trouvées pendant la maladie. Elles provoqueraient une augmentation de la production de NO par les macrophages/microglies, les cellules musculaires lisses et/ou l'endothélium du SNC. Deux mécanismes dans la destruction cellulaire due au NO ont été proposés (Sherman et al., 1992): - Cytotoxicité directe par NO.
- Lésions dues à la formation de péroxynitrite à partir de l'anion superoxyde et NO.
D'autres travaux ont indiqué le rôle de NO dans la SEP (Offner at al., 1989; Villas et al., 1991; oprowski at al., 1993; Van Dam et al., 1995; Weinberg et al., 1994), et la présence des auto-Ac contre l'épitope NOCys-G chez des malades (Boullerne et al., 1995).
Pour confirmer toutes ces données postulant le role de NO dans la SEP et surtout dans l'EAE, le modèle a été induit chez des rattes Lewis en les immunisant avec un peptide encéphalitogène de la protéine basique de la myéline (PBM) de cobaye supplémenté en Mycobacterium tubercuiesis dans de l'adjuvant. L'objectif de cette approche est de montrer l'implication du NO dans la création de néoépitopes donc dans la symptomatologie de la maladie, par le blocage de ces épitopes par nos Ac monoclonaux qui pourront avoir un rôle préventif. En parallèle, l'évolution des réponses immunes contre des néoantigènes nitrosylés et nitrés dans les sérums des rattes a été étudiée.
Des modèles d'EAE chez la rate Lewis ont été proposés par différentes équipes (Panitch et Ciccone, 1981; Feurer et al., 1985; Levine, 1986; Polman et al., 1988) . Selon ces auteurs, ce modèle induit a comme avantage essentiel une incidence élevée des rechutes et une remarquable prédictibilité.
- Antiaène encéphalitogène Il a été administré aux animaux le peptide synthétique encéphalitogène (Peninsula laboratories) de poids moléculaire 1730 daltons dont la séquence reproduit celle du fragment de la PBM de cobaye entre les acides aminés 68-84 dont la structure chimique est la suivante: Tyr-Gly-Ser-Leu-Pro-Gln-Lys-Ser-Gln-Arg-Ser-Gln-Asp-Glu-Asn 69 75 80 83 - Animaux.
Le travail a été réalisé sur des rat tes Lewis, (IFFA CREDO), génétiquement susceptibles à l'EAE. Les rattes étaient réparties en lots homogènes d'âge compris entre 6 à 7 semaines. Trois groupes de rattes Lewis (poids moyen: 200 g) ont été constitués. Chaque animal a reçu par voie sous-cutanée dans les coussinets plantaires de chaque patte arrière 0,05 ml d'une émulsion d'adjuvant complet de Freund (ACP H37Ra, DIFCO) contenant: 100 \ig du peptide 68-84 de PBM de cobaye dans 0,05 ml de NaCl 0,9 %, plus 0,05 ml d'ACF supplémenté par de 1 mg Mycobacterium tuberculosis (DIFCO).
Groupe "Témoin" il est constitué de 7 rattes.
La figure 8A représente le schéma de construction du plasmide pCII.
La figure 8B représente une carte de restriction du plasmide pORT1.
La figure 8C représente une carte de restriction du plasmide pCII.
La figure 9A représente le schéma de construction du plasmide pBIV.
La figure 9B représente une carte de restriction du plasmide pBIV.
La figure 10A représente le schéma de construction du plasmide pBV.
La figure 10B représente une carte de restriction du plasmide pBV.
La figure IlA représente le schéma de construction du plasmide pPSTI.
La figure llB représente une carte de restriction du plasmide pPSTI.
La figure 12A représente le schéma de construction du plasmide pXhoI.
La figure 12B représente une carte de restriction du plasmide pXhoI.
La figure 13A représente le schéma de construction du plasmide pCIVd.
La figure 13B représente une carte de restriction du plasmide pCIVA.
La figure 14A représente le schéma de construction du plasmide pCVA.
La figure 14B représente une carte de restriction du plasmide pCVA.
La figure 15 représente l'analyse par Southern blot des souches mutantes BII92, CIII68, CII62, BIV87, BV88, CIV89 et CV90, comparativement à la souche sauvage "red variant" notée Wt. Pour chaque mutant, l'enzyme de restriction utilisée est indiquée en-dessous de chaque blot et la taille des bandes détectées devant chaque blot est estimée par rapport aux marqueurs de poids moléculaire XHindIII et XBstEII (non détectables par auto-radiographie).
- STAMLER J. S., SIMON D., JARAKI O., OSBORNE J.
A. FRANCIS S., MULLINS M., SINGEL D., AND LASCALZO J.
1992d. Proc. Acad. Natl. Sci. USA. 89, 8087-8091.
- STAMLER J. 1994. Cell. 78, 931-936.
- STEFANOVIC-RACIC M., STADLER J., GEORGESCU H.
I. AND EVANS C. H 1992. (abstract). Trans. Orthop. Res.
Soc. 17, 228.
- STEFANOVIC-RACIC M., STADLER J., AND EVANS C.
H. 1993.Arthritis Rheum. 36, 1036-1043.
- STERNBERG J. M., MABOTT N. A. SUTHERLAND I.
A., AND LIEW F. Y. 1994. INFECT. IMMUN. 62, 2135 - STERNBERG J. M., AND MABOTT N. A. 1996. Eur.
J. Immunol. 26, 539-543.
- STUEHR D. J., AND MARLETTA M. A. 1985. Proc.
Natl. Acad. Sci. USA. 82, 7738-7742.
- STUEHR D. J., AND MARLETTA M. A. 1987a. J.
Immunol. 139, 518-525.
Le test 275 détermine si la valeur du contenu du registre REG~FLUX 504 est égale à 'O', ou non. Si le test est positif, le test 281 est exécuté, sinon le test 276 est exécuté.
Le test 276 est positif si la trame courante en écriture dans FIFO~TRX 506 est soit de type FCD, soit de type TAL. Si le résultat du test 276 est positif, l'opération 278 est exécutée, sinon le test 277 est exécuté.
Le test 277 est positif si la trame courante en écriture dans FIFO~TRX 506 est de type RCP. Si le résultat du test 277 est positif, I'opération 279 est exécutée avant l'opération 280, sinon l'étape 280 est directement exécutée.
L'opération 279 consiste à valider en écriture FIFO~BLOC 503 indiquant la réception achevée d'un bloc de données 670 illustré en figure 36.
* L'opération 280 consiste à valider en écriture FIFO~TRX 506 indiquant la réception achevée d'une trame telle que celle illustrée en figure 3.
Le test 281, qui succède aux opérations 278 ou 280, ou à un résultat positif du test 275, est lui-même positif si la trame courante en écriture dans FIFO~TRX 506 est de type DCN. Si le test est positif, l'opération 282 est exécutée avant de retourner à l'opération 271, sinon ce retour est directement réalisé.
Le test 241 détermine si le champ FCF2 5 de la trame courante en écriture dans FIFO~MSG 505 est de type ERA ou non. Si le résultat du test 241 est positif, l'opération 244 est exécutée. Sinon le test 242 est exécuté. Le test 242 détermine si le champ FCF2 5 de la trame courante en écriture dans FIFO~MSG 505 est de type UGI ou non. Si le résultat du test 242 est positif, I'opération 244 est exécutée. Sinon et le test 243 est exécuté.
L'opération 246 consiste, d'une part, à positionner à la valeur 'O' tous les symboles des lignes du bloc de données 670 courant dans FIFO~BLOC 503, dont le bit représentatif, dans le registre courant de position dans FIFO~BLOC 503 est à 'O'. D'autre part, les positions des lignes, comprises entre celle indiquée par le contenu du onzième octet et celle indiquée par le contenu du douzième octet du champ LIF 28 de la trame courante en écriture dans FIFO~MSG 505, sont mémorisées comme correctement reçues dans le registre courant de position dans FIFO~BLOC 503 (mise à '1' du bit représentatif de la position de ces lignes).
Ainsi, la dispersion de polarisation n'est autorisée que dans une section lumineuse qui est actif après que le signal lumineux a traversé le rotateur du plan de polarisation et il est donc possible d'obtenir un brouilleur de polarisation de configuration simple et qui permet difficilement la dispersion de polarisation.
Le premier rotateur du plan de polarisation peut avoir une configuration telle qu'il ajuste l'angle relatif de l'onde polarisée entre les signaux lumineux à un angle d'environ 900. En outre, le premier rotateur du plan de polarisation peut comprendre un premier rotateur placé dans l'un des premier et second trajets optiques entre la section et le premier coupleur, et le premier rotateur fait tourner la polarisation du signal lumineux d'environ 900, ou il comprend un second et un troisième rotateur placés dans le premier trajet optique et le second trajet optique entre ladite section et le coupleur, l'un des second et troisième rotateurs faisant tourner la polarisation du signal lumineux d'environ 450 alors que l'autre fait tourner la polarisation du signal lumineux d'environ -450.
Ainsi, les états de polarisation des signaux lumineux qui sont passés dans le premier et le second trajet optique sont ajustés par le premier rotateur du plan de polarisation afin que l'angle relatif de polarisation soit d'environ 900.
Lorsqu'un rotateur est monté dans chacun des premier et second trajets optiques en particulier, l'influence produite par l'insertion du rotateur du plan de polarisation est approximativement la même dans les deux trajets optiques, si bien qu'il est possible d'améliorer les performances de transmission du signal lumineux combine.
Le premier organe source de tension peut avoir une configuration telle qu'il applique des tensions ayant des phases inverses auxdites sections formées dans le premier trajet optique et le second trajet optique respectivement.
Comme les phases des signaux lumineux qui se propagent dans le premier et le second trajet optique varient en sens différents sous la commande du premier organe source de tension, les amplitudes des tensions appliquées sont réduites si bien qu'il est possible de réduire la consommation d'énergie.
En outre, le circuit optique intégré selon l'invention est un circuit optique intégré mettant en oeuvre le brouilleur de polarisation décrit précédemment. Ce circuit optique intégré comprend un troisième trajet optique ayant une extrémité raccordée à une extrémité d'entrée du premier répartiteur du brouilleur de polarisation et une autre entrée destinée à la propagation d'un signal lumineux d'entrée vers le premier répartiteur et qui est formé d'un matériau ayant un effet électrooptique, et un premier organe source de tension de modulation de phase qui applique une tension prédéterminée à une section prédéterminée du troisième trajet optique pour l'exécution de la modulation de phase d'un signal lumineux qui se propage, le circuit optique intégré ayant une configuration qui permet le passage d'un signal lumineux à un état de polarisation linéaire qui comporte des composantes uniquement dans une direction par rapport au troisième trajet optique, qui exécute une modulation de phase et un brouillage de polarisation collectivement, et qui permet la sortie du signal lumineux du premier coupleur du brouilleur de polarisation.
Dans ce circuit optique intégré, un signal lumineux qui tombe sur le troisième trajet optique est d'abord soumis à une modulation de phase par le premier organe source de tension à modulation de phase tout en se propageant dans le troisième trajet optique. Le brouillage de polarisation du signal lumineux soumis à la modulation de phase est réalisé par propagation du signal lumineux dans le premier répartiteur, le premier et le second trajet optique et le premier coupleur.
Un autre circuit optique intégré est un circuit optique intégré comprenant le brouilleur de polarisation décrit précédemment, et le circuit optique intégré comprend un second répartiteur destiné à diviser un signal lumineux incident en deux signaux lumineux, un quatrième trajet optique formé d'un matériau ayant un effet électrooptique et dans lequel se propage l'un des signaux lumineux divisés par le second répartiteur, un cinquième trajet optique formé d'un matériau ayant un effet électrooptique et dans lequel se propage l'autre signal lumineux divisé par le second répartiteur, un premier organe source de tension de modulation d'intensité qui applique une tension prédéterminée à l'une au moins de sections prédéterminées du quatrième trajet optique et du cinquième trajet optique respectivement pour l'exécution d'une modulation de phase d'un signal lumineux qui se propage dans la section, et un second coupleur ayant une extrémité de sortie raccordée à une extrémité d'entrée du premier répartiteur du brouilleur de polarisation, qui combine les signaux lumineux qui se propagent dans le quatrième et dans le cinquième trajet optique, et qui transmet un signal lumineux combiné, le circuit optique intégré ayant une configuration qui permet le passage des signaux lumineux à un état de polarisation linéaire qui a des composantes uniquement dans une direction par rapport au quatrième trajet optique et au cinquième trajet optique, qui exécute collectivement une modulation d'intensité et un brouillage de polarisation, et qui permet la sortie du signal lumineux du premier coupleur du brouilleur de polarisation.
Dans ce circuit optique intégré, un signal lumineux tombant sur le second répartiteur est divisé en deux parties et se propage dans le quatrième et le cinquième trajet optique en étant soumis à une modulation de phase par le premier organe source de tension à modulation d'intensité et est combiné par le second coupleur de modulation d'intensité. Le brouillage de polarisation est réalisé par propagation du signal lumineux soumis à une modulation d'intensité dans le premier répartiteur, le premier et le second trajet optique et le premier coupleur.
Chacun des circuits optiques intégrés permet l'exécution de la modulation de phase et du brouillage de polarisation ou de la modulation d'intensité et du brouillage de polarisation collectivement et facilement avec un seul circuit optique intégré, et réduit la diffusion spectrale du signal lumineux créé par le brouillage de polarisation. En outre, le circuit optique intégré améliore le rapport signal-sur-bruit optique de la lumière de transmission puisqu'il a des points optiquement connectés en nombre inférieur au nombre de points optiquement connectés formés par connexion d'un brouilleur de polarisation à un modulateur de phase et un modulateur d'intensité respectivement.
En outre, le circuit optique intégré décrit précédemment ne nécessite aucun ajustement de phase dans une étape de connexion des unités constituantes, réduit le nombre d'éléments nécessaires, réduit le nombre d d'étapes de montage, par exemple de raccordement, et réduit la nécessité de l'utilisation d'éléments coûteux, si bien que le coût est réduit.