INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Dans ce cas, la sortie évaluée Zp est multipliée par une fonction de pondération non linéaire al(X, X^) après avoir été multipliée par la pondération de fréquence Ws (S), l'entrée de commande "u" est multipliée par une fonction de pondération non linéaire a2(X, X^) après avoir été multipliée par la pondération de fréquence Wu(S). Ces fonctions de pondération non linéaires al(X, X^), et a2(X, X^) présentent des caractéristiques indiquées par des formules (91) et (92) présentées ci-dessous.
Ceci rend possible de concevoir un système de commande en vue de restreindre le gain L2 de façon plus marquée. Comme décrit cidessus, X^ représente une valeur d'état comprenant partiellement une valeur estimée. a1(X,X^) > 0, a2(X,X^) > 0 ...(91) al(O, 0)=a2(0, 0) = ...(92) Une expression de l'espace d'état de ce système, de même qu'une expression de l'espace d'état de la pondération de fréquence Ws(S) par laquelle la sortie évaluée Zp est multipliée, et une expression de l'espace d'état de la pondération de fréquence Wu(S) par laquelle l'entrée de commande "u" est multipliée, est représentée selon les formules (93) à (97) présentées ci-dessous, comme c'est le cas avec le système de commande à contre-réaction mentionné précédemment.
Xp' =ApXp+BplWl +Bp2(Xp)u ...(93) Xw' =AwXw +BwZp ...(94) Zw=CwXw +DwZp ...(95) Xu'=AuXu+Bu u ...(96)
Zu=CuXu +Du u ...(97) La variable d'état Xw, la fonction évaluée Zw et les matrices de constantes Aw, Bw, Cw et Dw sont les mêmes que dans le cas du système de commande à contre-réaction d'état mentionné précédemment .
Cependant, une expression d'espace d'état de la modélisation généralisée dans ce système de commande à contre-réaction non linéaire à sortie Hoo est indiquée par les formules (98) à (101) présentées ci-dessous.
Comme dans les cas avec dITP et c7dGTP nous avons répertorié pour la reverse transcriptase de HIV, dans le tableau 3. 3, les sites présentant des différences dans leur taux de terminaison avec dATP et c7dATP, alors qu'ils ne sont ni localisés ni sur une position d'incorporation ni d'extension de l'analogue Avec la reverse transcriptase de HIV-1, des variations de l'intensité de la terminaison sont observées sur des sites non impliquées dans l'extension ou dans l'incorporation de c7dATP, ces variations sont probablement dues à la différence de la séquence du brin néosynthétisé possédant des c7dAMPs au lieu des dAMPs (voir tableau 3 3) qui modifieraient l'interaction des RTs avec le complexe réactionnel et donc soit augmenterait ou diminuerait le fréquence de dissociation.
3.5. Récapitulatif de l'influence des analogues de bases sur la terminaison Chaque analogue de base induit des modifications dans la polymérisation catalysée par la reverse transcriptase de HIV-1 et le fragment de klenow. Un fait intéressant dans ce chapitre est l'influence de ces analogues sur des sites non impliqués dans l'incorporation ou l'extension de base modifiée, à l'exception de U. Or tous ces sites qui présentent une variation dans leur taux de terminaison, ont la particularité d'être précédés de l'incorporation de bases modifiées sur le brin polymérisé, à l'exception du fragment de klenow avec c7dATP. Les variations des taux de terminaison au niveau des premières bases polymérisées en présence de c7dATP pourraient s'expliquer par l'activité exonucléasique 3'#5' du KF.
Exemple 4 : Etude de la fidélité de la reverse transcriptase de HIV-1 en présence des analogues de base Pour comprendre le rôle des trois dNTP présents impliqués dans la misincorporation suite à l'absence du quatrième dNTP, le dGTP ou/et le dCTP ont été respectivement remplacés par le dITP et le dUTP dans la réaction moins A Le dITP a été choisi car 1 peut s'apparier avec T et donc suppléer l'absence de A, et dUTP a été choisi pour évaluer l'effet que l'absence du méthyle d'un T peut avoir sur la fidélité d'incorporation de la paire voisine. Pour cette raison nous nous intéressons non seulement aux sites et taux de misincorporations, mais à la cinétique avec laquelle ces misincorporations se font. Les conditions les plus propres à l'absence de fidélité de la HIV-RT ont été retenues : utilisation de la matrice + env (amorce ppt) et absence de dATP (données non montrées) Après hybridation de l'amorce ppt marquée à l'extrémité 5' (1 pmole) avec la matrice + env (2 pmoles) , la reverse transcriptase de HIV-1 à la concentration finale de 0,1U/ l est ajoutée Des fractions équivalentes (1/4 du mélange) sont additionnées de solutions contenant dCTP, dGTP, dCTP (témoin), dCTP, dITP, dTTP ou dCTP, dGTP, dUTP ou dCTP, dITP, dUTP à la concentration finale de 500 M chacun Des aliquotes de 1/4 du volume réactionnel sont prélevés au bout de 1 min, 2,5 min, 5 min et 10 min et la réaction est stoppée par 1 mM EDTA (concentration finale). Après dénaturation à 92 C pendant 5 min, les produits des réactions sont déposés sur gel d'acrylamide 13%
dénaturant 8M urée.
Dans les conditions de l'expérience (concentration d'enzyme 0,1U/ l), en l'absence de dATP mais en présence des 3 autres dNTPs normaux, les pauses majoritaires sont localisées en amont des résidus T sur la matrice (figure 4 1), mais tous ces sites n'ont pas des capacités d'arrêt identiques Au niveau de la deuxième misincorporation, l'enzyme pause très peu aussi bien en amont de T-130 (matrice) que sur T-130, alors qu'au niveau de T-135 et T-125 (matrice), l'enzyme pause majoritairement en amont des bases et peu sur l'extrémité mal appariée.
En remplaçant le dTTP par le dUTP, le profil des pauses est peu changé (figure 4. 2), bien qu'une augmentation du taux de terminaison soit visible par rapport à la réaction avec le dTTP.
En remplaçant le dGTP par le dITP, la pause devant le T-135(matrice) n'est plus détectable , alors qu'une pause apparait face au A -134 (figure 4.3), cela bien que le dTTP soit présent La terminaison devant T-130 (matrice) diminue fortement d'intensité Le changement simultané de dTTP et de dGTP par dUTP et dITP ne modifie pas de façon significative les profils des pauses par rapport à la réaction avec dITP, mais augmente l'intensité des pauses.
La figure 4. 4 représente la variation du taux de misincorporation devant T-135 (matrice), le premier site de misincorporation, en fonction du temps et de l'analogue de base utilisé.
En présence de dCTP, dGTP et dTTP, le taux d'erreur au niveau de la première misincorporation face à T-135augmente de 33% à 78% au bout de 10 min d'incubation, ce pourcentage reste ensuite constant (80% d'erreur au bout de 30 min). L'échange de dTTP par dUTP conduit à une translation de la courbe, le taux d'erreur grimpe de 5% à 65% après 10 min d'incubation (après 45 min, ce pourcentage tend vers 77%, expériences non présentées) Le remplacement de dGTP par dITP, ou de dGTP et dTTP par dITP et dUTP, induisent une augmentation respective des taux d'erreur de 0 à 40 et de 0 à 20% , après 10 min d'élongation ; des valeurs proches sont également observées au bout de 45 min (données non présentées). Il semble donc y avoir deux effets: un effet cinétique, lié à l'incorporation ralentie de l'analogue dITP, et un moindre taux d'erreur en présence de cette base Ceci s'explique par la substitution du dITP au dATP absent
Exemple 5 : des misappariements Pour mieux comprendre les mécanismes qui régissent l'incorporation de nucléotides incorrects insérés lors des réactions "moins ", plusieurs "mutants" obtenus avec la reverse transcriptase de HIV-1 ont été séquences L'étude a été limitée au cas de "moins A", car les séquences mutées sont facilement identifiables par restriction.
5. 1. En présence des bases "naturelles" Les différents mutants sont générés au cours de la réaction "moins A" avec la matrice + env, et l'amorce ppt. Matrice/amorce marquée (0,5 pmole), reverse transcriptase (0,04 U/ l) et les 3 dNTPs (500 M final) ont été incubés 30 mn à 37 C, puis le dATP (500 M final) a été ajouté et l'incubation poursuivie 30 mn à 37 C. La réaction est alors stoppée par ajout d'EDTA à la concentration de 10mM finale. Les produits de réaction sont récupérés après précipitation alcoolique, digérés par l'enzyme Sac I. Après dénaturation à 90 C pendant 3 mn, le produit est déposé sur gel d'acrylamide 10% dénaturant. Après migration et mise en autoradiographie, les bandes de 200 bases sont récupérées sur le gel, puis purifiés Ces fragments sont amplifiés par PCR (15 cycles), coupés par Mlu I et Bam H I et insérés dans pBluescript SK + ppt par ligation avec la T4 ADN ligase puis transformation avec XL 1 Blue.
Les plasmides mutés sont facilement sélectionnés car ils n'ont plus le site de restriction reconnu par l'enzyme Nco I (voir figure 4.5). De plus l'absence de digestion enzymatique avec Sph 1 implique une double mutation.
Avec la reverse transcriptase de HIV-I, sur les 48 plasmides isolés et analysés sur gel d'agarose avec les enzymes de restriction Nco 1 et Sph I, 33 plasmides ont été mutés à au moins deux sites puisqu'aucun n'est digéré ni par Nco I, ni par Sph I Aucun plasmide ne possédant qu'une mutation n'a été isolé Pour déterminer les types de mutation induites par l'absence de dATP dans le milieu réactionnel lors de la polymérisation catalysée par la reverse transcriptase de HIV-1, certains plasmides ont été séquences. Les séquences mutées sont représentées dans la figure 4. 6. Nous n'avons représenté qu'une partie de la séquence étudiée, le reste de la séquence ne présente pas de mutation On constate que dans les conditions de notre étude, et pour les séquences
analysées, les erreurs forcées dues à l'absence de dATP dans le milieu ne donne lieu ni à délétion, ni à insertion, mais uniquement à des substitutions de base Lors de la première misincorporation G est incorporé de façon exclusive à la place de A sur les 10 plasmides mutés avec la reverse transcriptase de HIV-1, alors que pour les autres positions, bien que le G remplace A préférentiellement, des pyrimidines sont également présentes, en particulier C.
On remarque que la première et deuxième misincorporation s'opère dans un contexte matriciel proche identique (3' GTAC5') mais peut générer des substitutions différentes. Cela implique que le type d'erreur engendrée par la reverse transcriptase de HIV-1 serait affecté par des différences de séquence distante du site de mutation . L'erreur engendrée T.dGTP ne peut être expliquée par un glissement de l'amorce ou de la matrice ; aussi cette erreur est probablement engendrée par l'incorporation directe du nucléotide incorrect. En revanche, l'erreur T.dCTP sur le second site pourrait s'expliquer par un tel glissement sur plus d'une base.
5.2. Etude en présence d'analogues de bases La réaction de polymérisation a été effectuée en l'absence de dATP, comme pour la réaction en présence de bases "naturelles", mais le dGTP a été remplacé par le dITP ou le dTTP par le dUTP. Après 30 min à 37 C en présence de la reverse transcriptase de HIV-1et de 3 des 4 bases, la matrice/amorce marquée est purifiée sur colonne Sephadex G50, de manière à éliminer les nucléotides qui n'ont pas été incorporés et en particulier le dITP et le dUTP qui modifierait le site de restriction Sac I. Puis l'élongation est poursuivie pendant 30 min à 37 C en présence des 4 dNTPs naturels à la concentration finale de 500 M et de l'enzyme (0,05U/ l). Après précipitation alcoolique et digestion avec l'enzyme de restriction Sac I et récupération de la bande de 200 bases, une PCR est effectuée dans les mêmes conditions que pour la réaction en présence des bases "naturelles".
Gène GS910331.
Acide(s) nucléique(s) Il a été isolé selon l'invention un ARN messager correspondant à un transcrit du gène désigné ici sous le n GS910331.
La séquence nucléique de l'ADNc correspondant à ce transcrit constitue la séquence SEQ ID N 2.
La séquence SEQ ID N 2 a une longueur de 1246 nucléotides.
Les analyses d'expression du transcrit de séquence SEQ ID N 2 ont été réalisées par RT PCR, comme décrit dans l'Exemple 1. Ces analyses effectuées à partir d'ARN polyA+de différents tissus ont permis de montrer que le gène GS310331 était exprimé dans le cerveau foetal.
De plus, une analyse de l'expression du transcrit par Northern blot, à l'aide respectivement des sondes de séquences SEQ ID N 56 et 57, a révélé la présence de transcrits dans le blot commercialisé par la Société Clontech (Ref. N 7759-1).
La taille des transcrits détectés avec la sonde de séquence SEQ ID N 56 est respectivement de 1,65 kb dans le foie et le c#ur et de 1,4 kb dans le cerveau.
La taille des transcrits détectés avec la sonde de séquence SEQ ID N 57 est respectivement de 1,65 kb et 2,4 kb dans le c#ur et de 1,65 kb dans le foie.
Gène GS914554 Acide(s) nucléique(s) Il a été isolé selon l'invention un ARN messager correspondant à un transcrit du gène désigné ici sous le n GS94554.
La séquence nucléique de l'ADNc correspondant à ce transcrit constitue la séquence SEQ ID N 3.
La séquence SEQ ID N 3 a une longueur de 1479 nucléotides.
Les analyses d'expression du transcrit de séquence SEQ ID N 3 ont été réalisées par RT PCR, comme décrit dans l'Exemple 1. Ces analyses effectuées à partir d'ARN polyA+de différents tissus ont permis de montrer que le gène GS94554 était exprimé dans le cerveau foetal, le placenta et le foie.
De plus, une analyse de l'expression du transcrit par Northern blot, selon le protocole décrit de l'Exemple 1, à l'aide respectivement de la sonde de séquence SEQ ID N 58, a révélé la présence de transcrits dans le blot commercialisé par la Société Clontech (Ref. N 7759-1).
La partie fonctionnelle Y comprend le mécanisme de réduction 18, l'arbre de sortie 1, le commutateur électromécanique 2, l'embrayage à roue libre 3 et le piston 4.
17 est un élément d'engrenage interne. Cet élément comprend une première portion tubulaire l7a qui est ajustée sur la circonférence externe de l'arbre de sortie 1 par l'intermédiaire d'un palier ly, une portion formant plaque inférieure en forme de disque creux l7b qui s'étend dans la direction perpendiculaire à la circonférence externe de l'arbre de sortie 1 à partir de la première portion tubulaire l7a et une deuxième portion tubulaire 17c comportant un engrenage interne 18c sur sa circonférence interne.
Le mécanisme de réduction 18 comprend l'engrenage interne 18c de l'élément d'engrenage interne 17, un planétaire 18a disposé sur l'arbre 16, une pluralité de satellites l8b agencés autour de ce planétaire l8a et venant en prise avec ledit planétaire l8a et avec l'engrenage interne 18c, et des broches 1P se projetant depuis une bride 1F de l'arbre de sortie 1, insérée entre le groupe de satellites l8b et la plaque inférieure l7b de l'élément d'engrenage interne 17, chaque broche 1P raccordant l'un des satellites l8b à la bride 1F de l'arbre de sortie 1. En outre, la force de rotation de chaque satellite l8b est transmise à chaque broche 1P par l'intermédiaire d'un palier lz.
Une gorge ronde lh est formée au centre de la bride 1F de l'arbre de sortie 1 et l'extrémité avant de l'arbre 16 est supportée de manière rotative par l'intermédiaire d'un palier lx disposé dans ladite gorge ronde lh. En conséquence, comme représenté sur la vue en coupe de la figure 3, lorsque les satellites 18b se déplacent autour du planétaire l8a, la force de rotation de l'arbre 16 est réduite et transmise à l'arbre de sortie 1 par les broches 1P.
Des cannelures hélicoïdales la sont formées sur une partie centrale de la circonférence externe de l'arbre de sortie 1. Sur la circonférence externe de la partie où sont formées ces cannelures hélicoïdales la, l'embrayage à roue libre 3 est agencé de façon qu'une portion tubulaire 3a d'une bague de poussée 3A y corresponde. En outre, sur la surface interne de la portion tubulaire 3a de la bague de poussée 3A, des cannelures hélicoïdales 3x sont formées pour venir en prise avec les cannelures hélicoïdales la. C'est-à-dire que l'embrayage à roue libre 3 est raccordé par cannelures à l'arbre de sortie 1.
Le commutateur électromagnétique 2 est agencé sur la circonférence externe de la portion tubulaire 3a de la bague de poussée 3A.
Le piston 4 est agencé sur la circonférence externe de l'arbre de sortie 1, du côté de la bride 1F. L'embrayage à roue libre 3 comprend la bague de poussée 3A qui est formée de la portion tubulaire 3a comportant les cannelures hélicoïdales 3x formées sur sa surface interne pour venir en prise avec les cannelures hélicoïdales la qui sont formées sur une partie centrale de la circonférence externe de l'arbre de sortie 1, d'une portion de bride 3b qui est disposée du côté avant de cette portion tubulaire 3a et devient le fond de came d'une came à rouleaux décrite ultérieurement, une came à rouleaux 3c intercalée entre la portion de bride 3b de cette bague de poussée 3A et une rondelle 3e, un pignon 3P, un embrayage interne 3y constitué d'une portion tubulaire à la base du pignon 3P, des rouleaux d'embrayage 3r et des ressorts 3s qui sont agencés dans des gorges 3t formées sur la came à rouleaux 3c (figure 4) et un couvercle d'embrayage 3w qui recouvre l'extérieur de la portion de bride 3b de la bague de poussée 3A, la came à rouleaux 3c et la rondelle 3e.
La bague de poussée 3A et la came à rouleaux 3c constituent un embrayage externe 3B.
L'embrayage à roue libre 3 agit comme un embrayage dit unidirectionnel. La vue en coupe de l'embrayage à roue libre est représentée sur la figure 4. En plusieurs points sur la circonférence interne de la came à rouleaux 3c, des gorges 3t sont disposées de manière à former un espace étroit et un espace large avec la circonférence externe de l'embrayage interne 3y. Un rouleau d'embrayage 3r est agencé dans chacune de ces gorges 3t. 3s est un ressort destiné à pousser le rouleau d'embrayage 3r vers l'espace étroit de la gorge 3t.
Lorsque l'arbre de sortie 1 est entraîné par le moteur à courant continu M, la came à rouleaux 3c est mise en rotation, le rouleau d'embrayage 3r de l'embrayage externe 3B vient en prise avec l'embrayage interne 3y et le pignon 3P tourne et vient en prise avec la couronne dentée 50. Puis, lorsque le pignon 3P est tourné en même temps que la couronne dentée 50, le rouleau d'embrayage 3r se déplace vers l'espace large de la gorge 3t, l'embrayage externe 3B et l'embrayage interne 3y sont désengagés et l'embrayage à roue libre 3 protège l'énergie transmise du moteur.
Le commutateur électromagnétique 2 comprend une bobine d'excitation 2a, un boîtier de commutateur 2b destiné à recouvrir la bobine d'excitation 2a et un noyau 2c et il est agencé sur le côté arrière de la position de l'embrayage à roue libre 3. Le noyau 2c comporte une surface de disque de forme creuse opposée à la portion de bride 3b de la bague de poussée 3A et est réalisé comme un corps en forme d'anneau agencé de façon à pénétrer sur la circonférence externe de la portion tubulaire 3a de la bague de poussée 3A. Le noyau 2c comporte également une portion se projetant en forme d'anneau 2t qui s'étend vers l'arrière du côté de la portion tubulaire 3a de la bague de poussée 3A.
Le piston 4 est fait d'un corps tubulaire qui est agencé d'une manière mobile entre la circonférence interne du boîtier de commutateur 2b et la portion tubulaire 3a de la bague de poussée 3A. L'extrémité avant 4t opposée à la portion se projetant en forme d'anneau 2t est formée selon une forme correspondant à la forme de la portion se projetant en forme d'anneau 2t.
Une plaque en forme d'anneau Sa est fixée à la circonférence interne, du côté d'extrémité arrière, du piston 4.
De plus, une plaque en forme d'anneau Sb est également disposée sur le côté d'extrémité arrière de la portion tubulaire 3a de la bague de poussée 3A de l'embrayage à roue libre 3.
Entre ces plaques Sa, Sb, un ressort hélicoïdal 6 est agencé en tant que moyens élastiques.
C'est-à-dire que les plaques Sa, Sb et le ressort hélicoïdal 6 sont disposés entre la circonférence interne du piston 4 et la circonférence externe de l'arbre de sortie 1.
L'invention concerne aussi un polypeptide comprenant des modifications d'acides aminés de 1,2, 3,4, 5,10 à 20 substitutions, additions ou délétions d'un acide aminé par rapport à la séquence en acides aminés d'un polypeptide de séquences SEQ ID N 76 à SEQ ID N 101, ou encore d'un fragment ou d'un variant de ce dernier.
L'invention est également relative à un procédé pour la production de l'un des polypeptides de séquences SEQ ID N 39 à SEQ ID N 101 ou d'un fragment peptidique ou d'un variant de ce dernier, ladite méthode comprenant les étapes de : a) insérer un acide nucléique codant pour ledit polypeptide dans un vecteur approprié ; b) cultiver, dans un milieu de culture approprié, une cellule hôte préalablement transformée ou transfecter avec le vecteur recombinant de l'étape a) ; c) récupérer le milieu de culture conditionné ou lyser la cellule hôte, par exemple par sonication ou par choc osmotique ; d) séparer et purifier à partir dudit milieu de culture ou encore à partir des lysats cellulaires obtenus à l'étape c), ledit polypeptide ; e) le cas échéant, caractériser le polypeptide recombinant produit.
Les peptides selon l'invention peuvent être caractérisés par fixation sur une colonne de chromatographie d' immunoaffinité sur laquelle
les anticorps dirigés contre ce polypeptide ou contre un fragment ou un variant de ce dernier ont été préalablement immobilisés.
Selon un autre aspect, un polypeptide recombinant selon l'invention peut être purifié par passage sur une série appropriée de colonnes de chromatographie, selon les méthodes connues de l'homme de l'art et décrites par exemple dans F.Ausubel et al (1999).
Un polypeptide selon l'invention peut être également préparé par les techniques classiques de synthèse chimique indifféremment en solution homogène ou phase solide.
A titre illustratif, un polypeptide selon l'invention pourra être préparé par la technique ou en solution homogène décrite par HOUBENWEYL (1974) ou encore la technique de synthèse en phase solide décrite par MERRIFIELD (1965a; 1965b).
Font également partie de l'invention des polypeptides dits homologues " à l'un quelconque des polypeptides de séquences d'acides aminés SEQ ID N 76 à SEQ ID N 101, ou de leurs fragments ou variants.
De tels polypeptides homologues ont des séquences d'acides aminés possédant une ou plusieurs substitutions d'un acide aminé par un acide aminé équivalent, par rapport aux polypeptides de référence.
On entendra par acide aminé équivalent selon la présente invention, par exemple remplacement d'un résidu sous la forme L par un résidu sous la forme D ou encore le remplacement d'un acide glutamique (E) par un acide pyro-glutamique selon des techniques bien connues de l'homme du métier. A titre illustratif, la synthèse de peptide contenant au moins un résidu sous la forme D est décrite par KOCH (1977).
Selon un autre aspect, sont également considérés comme des acides aminés équivalents deux acides aminés appartenant à la même classe, c'est-à-dire deux acides aminés acide, basique, non polaire ou encore polaire non chargé.
Font également partis de l'invention des polypeptides comprenant au moins une liaison non peptidique telle qu'une liaison rétro-inverso (NHCO), une liaison carba (CH2CH2) ou encore une liaison cétométhylène (CO-CH2).
De préférence, les polypeptides selon l'invention comprenant une ou plusieurs additions, délétions, substitutions d'au moins un acide aminé conserveront leur capacité à être reconnus par des anticorps dirigés contre les polypeptides non modifiés.
Anticorps Les polypeptides selon l'invention, en particulier les polypeptides de séquences en acides aminés SEQ ID N 76 à SEQ ID N 101 ou les fragments et les variants de ces derniers ainsi que les peptides homologues peuvent être utilisés pour la préparation d'anticorps.
Par " anticorps " au sens de la présente invention, on entendra notamment des anticorps polyclonaux ou monoclonaux ou des fragments (par exemple les fragments F (ab)'2, Fab) ou encore tout polypeptide comprenant un domaine de l'anticorps initial reconnaissant le polypeptide ou le fragment de polypeptide cible selon l'invention .
Des anticorps monoclonaux peuvent être préparés à partir d'hybridomes selon la technique décrite par KOHLER et MILSTEIN (1975).
La présente invention concerne également des anticorps dirigés contre un polypeptide tel que décrit ci-dessus ou un fragment ou un variant de ce dernier, tels que produits dans la technique du trioma ou encore la technique d'hybridome décrite par KOZBOR et al. (1983).