INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Ce procédé de stabilisation permet d'abaisser considérablement la teneur en eau, aussi bien dans le milieu réactionnel que dans la zone flash, ce qui constitue un avantage non négligeable sur le plan économique puisque cela permet de limiter les coûts dans l'étape de récupération ultérieure du produit fon-né. Cette stabilisation du catalyseur a ainsi permis de définir les conditions d'un procédé perfectionné de préparation d'acide acétique et/ou d'acétate de méthyle incluant le perfectionnement destiné à stabiliser le catalyseur et selon lequel on utilise, en outre, une teneur particulièrement réduite en eau.
Ainsi donc, selon un deuxième aspect, l'invention concerne un procédé complet de fabrication d'acide acétique et/ou d'acétate de méthyle, dans des conditions satisfaisantes à la fois en ce qui concerne la stabilisation du catalyseur et la concentration en eau, ce qui constitue un double avantage sur le plan économique par rapport aux procédés existant à l'heure actuelle.
Plus précisément, selon le premier aspect ci-dessus, l'invention concerne un procédé pour améliorer la stabilité et/ou éviter la désactivation du catalyseur dans les procédés de fabrication d'acide acétique et/ou d'acétate de méthyle selon lesquels on réalise, dans une première étape, dite étape réactionnelle, en phase liquide, en présence de monoxyde de carbone et d'un système catalytique comprenant au moins un promoteur halogéné et au moins un composé catalytique à base d'iridium, au moins une réaction d'isomérisation du formiate de méthyle et, dans une deuxième étape, dite étape flash, la vaporisation partielle du milieu réactionnel issu de la première étape dans un séparateur dit séparateur flash. Un tel procédé consiste à maintenir dans la fraction liquide non vaporisée issue dudit séparateur flash une teneur globale en acide formique et en formiate de méthyle au moins égale à 1 % en poids de ladite fraction liquide, de préférence comprise entre 1 et 50 %, de préférence entre 1 et 30 %, en poids par rapport à ladite fraction liquide.
L'invention concerne également, selon le deuxième aspect ci-dessus, un procédé complet de fabrication d'acide acétique et/ou d'acétate de méthyle comprenant une première étape, dite étape réactionnelle, au cours de laquelle on réalise en phase liquide, en présence de monoxyde de carbone et d'un système catalytique comprenant au moins un promoteur halogéné et au moins un composé catalytique à base d'iridium, au moins une réaction d'isomérisation du formiate de méthyle, et une deuxième étape, dite étape flash de vaporisation partielle du milieu réactionnel issu de la première étape dans un séparateur dit séparateur flash. Selon ce procédé, on maintient dans la fraction liquide non vaporisée issue dudit séparateur flash une teneur globale en acide formique et en formiate de méthyle au moins égale à 1 % en poids de ladite fraction liquide.
Selon ce procédé, la teneur en eau dans la fraction liquide issue du flash sera avantageusement maintenue inférieure à 5 %, de préférence inférieure à 2 %, de préférence encore inférieure à 0,5 % en poids par rapport à ladite fraction liquide issue du flash.
Le procédé de stabilisation et de maintien de l'activité du catalyseur exposé ci-dessus aussi bien que le procédé complet de fabrication d'acide acétique et/ou d'acétate de méthyle concernent l'un et l'autre des procédés de fabrication d'acide acétique et/ou d'acétate de méthyle dans lesquels la réaction mise en oeuvre dans l'étape réactionnelle comprend nécessairement une réaction en phase liquide d'isomérisation du formiate de méthyle en présence de monoxyde de carbone et d'un système catalytique comprenant au moins un promoteur halogéné et au moins un composé catalytique à base d'iridium. Toutefois, selon une variante avantageuse de chacun des deux aspects de l'invention, cette réaction d'isomérisation du formiate de méthyle est réalisée simultanément avec une réaction de carbonylation du méthanol, cette carbonylation du méthanol pouvant être mise en évidence par la consommation du monoxyde de carbone introduit dans l'étape réactionnelle.
Selon une autre variante avantageuse, le procédé de stabilisation et de maintien de l'activité du catalyseur de la présente invention est réalisé en contrôlant la teneur en eau dans la fraction liquide issue du flash. Cette teneur est avantageusement maintenue inférieure à 5 % en poids et de préférence inférieure à 2 % en poids par rapport à ladite fraction liquide issue du flash.
Il est même possible, comme exposé précédemment, d'obtenir des résultats tout à fait avantageux de stabilité du catalyseur en maintenant des teneurs en eau inférieures à 0,5 % en poids dans la fraction liquide issue du flash. Ceci constitue, comme exposé précédemment, un avantage considérable par rapport aux procédés de l'art antérieur.
Selon une variante particulièrement avantageuse de l'invention, le procédé de fabrication d'acide acétique et/ou d'acétate de méthyle met en oeuvre, outre la première étape dite étape réactionnelle et la deuxième étape dite étape flash, une troisième étape dite étape de purification et récupération de l'acide acétique et/ou de l'acétate de méthyle de la fraction vaporisée issue de l'étape de vaporisation partielle.
Lors de cette étape, l'acide acétique et/ou l'acétate de méthyle sont séparés des composés légers tels que l'eau, l'acide formique par différents moyens connus de l'homme de l'art, Selon une variante tout particulièrement avantageuse de l'invention, on sépare l'acide formique de l'acide acétique par distillation réactive en injectant du méthanol dans la partie inférieure de la colonne à distiller, et en soutirant l'acide acétique punifié en pied de colonne et le mélange méthanol et formiate de méthyle en tête de colonne.
Dans la description qui va suivre, on s'attachera à définir des conditions particulièrement avantageuses aussi bien dans le milieu réactionnel que dans le milieu liquide issu du flash, conditions qui s'appliquent aussi bien au procédé de stabilisation et/ou de maintien de l'activité du catalyseur qu'au procédé complet de fabrication de l'acide acétique et/ou de l'acétate de méthyle.
Dans la description qui va suivre et, sauf indication contraire, on désignera par la "réaction", l'ensemble des réactions se produisant dans la zone réactionnelle, étant bien entendu que cette notion recouvre les réactions d'isomérisation et éventuellement de carbonylation ainsi que tous les équilibres qui se produisent dans la zone réactionnelle.
Ainsi, en particulier, par température de réaction on entendra la température imposée lors de l'étape réactionnelle.
La réaction est en général mise en oeuvre à une température comprise entre 150 et 250'C. Plus particulièrement la température de réaction est comprise entre 175 et 2 1 O'C. De préférence, elle est comprise entre 175 et _10O'C.
La pression totale sous laquelle est conduite la réaction est en général supérieure à la pression atmosphérique. Plus particulièrement elle est avantageusement inférieure à 200.105 Pa et, de préférence, inférieure ou égale à 50.105 Pa. Les pressions sont exprimées en Pascal absolus, et sont mesurées à chaud, c'est-à-dire dans les conditions de température de la réaction.
La pression partielle de monoxyde de carbone est maintenue de préférence entre O#5.IO5 et 15. 1 0' Pa.
La capacité de migrer est également la même pour les deux lignées cellulaires H460M et H460MGFP.
4. Adhésion Les cellules sont ensemencées à 1.105 cellules.ml-1 dans une plaque à 6 puits de 35 mm de diamètre. Après 2h à 37 C, les cellules non attachées sont éliminées par deux lavages en PBS. Les cellules sont ensuite fixées et colorées comme décrit précédemment pour le test d'invasion puis dénombrées.
On n'observe pas de différence significative entre les deux lignées cellulaires H460M et H460MGFP quant à leurs propriétés d'adhérence.
5. Conclusion Les données ci-dessus indiquent que la machinerie cellulaire responsable de l'adhérence, du chimiotactisme et de l'invasion, n'est pas altérée par l'expression de la GFP (Figure 3).
III. Etude in vivo L'étude in vivo a pour but de mimer la formation de métastases pulmonaires spontanées.
Afin de tester la capacité des cellules H460MGFP à produire des métastases fluorescentes spontanées, ces cellules sont injectées chez des souris nude par voie souscutanée.
1. Les souris Les animaux utilisés pour ces expériences sont des souris femelles Swiss homozygotes nulnu âgées de 5 à 7 semaines. Ces animaux sont maintenus sous conditions stériles durant tout le temps de l'expérience.
2. Injection et dénombrement des métastases 200 l de milieu RPMI 1640 contenant 5.106 cellules H460MGFP sont injectées de façon sous-cutanée dans chaque flanc des souris Swiss. A des temps variables, les souris sont sacrifiées puis autopsiées. Les tumeurs primaires sont excisées puis pesées. Les poumons sont récupérés, lavés en PBS, puis aplatis entre deux lames de verre liées entre elles par du film adhésif. L'épaisseur du poumon entre celles-ci est inférieure à 1 mm.
Les métastases sont dénombrées sous microscope inversé à fluorescence (Axiovert 10, Zeiss) équipé d'un filtre FITC (Fluorescein Isothiocyanate).
Le nombre total de métastases est obtenu en observant la totalité du poumon.
Après deux semaines, on observe, sous microscope à fluorescence, des micrométastases chez 100% des animaux, présentes au niveau des nodules lymphatiques (données non montrées) et du tissu pulmonaire (Figure 4). Par contre, au même moment, aucune métastase n'a pu être observée sous lumière blanche des mêmes organes. Les autres organes ne présentent pas de métastases fluorescentes. Ces données montrent la capacité de colonisation sélective du poumon par les cellules H460MGFP chez les souris nude.
3. Cinétique de formation des métastases pulmonaires La cinétique de formation des micro- et macrométastases pulmonaires, est illustrée par la Figure 5.
Seules deux semaines ont été nécessaires pour observer des métastases fluorescentes chez 100% des animaux. Par contre, le temps nécessaire pour détecter des métastases sous lumière blanche chez 50 % des animaux varie entre 33 et 42 jours pour les lignées cellulaires H460 et H460MGFP respectivement (Figure Sa). De plus, le nombre de métastases fluorescentes détectables augmente fortement après 35 jours, tandis que le nombre de métastases qui pourraient être détectées sous lumière blanche augmente lentement durant ce temps pour les deux lignées cellulaires (Figure 5b). L'étendue comparative des métastases obtenues sous lumière blanche ou UV illustre l'intérêt de l'expression de la GFP pour déterminer le nombre de métastases. Après 49 jours, le nombre et la taille des macrométastases pourrait gêner la détermination du nombre total de métastases fluorescentes (Tableau 1).
IV Conclusion On n'observe aucune altération significative des caractéristiques morphologiques et biologiques, telles que la prolifération, le chimiotactisme, l'adhésion et l'invasion cellulaire, pour la lignée cellulaire H460MGFP comparée à la lignée H460M. La lignée H460MGFP sélectionnée, conserve sa capacité de former des métastases pulmonaires, et permet la détection précoce de micrométastases exclusivement dans le poumon, ce qui montre une affinité spéciale de ces cellules pour l'endothélium pulmonaire. La fluorescence de la GFP ne requiert aucune préparation et peut être visualisée dans les tissus frais sans interférence avec la GFP endogène. La quantité significative de métastases fluorescentes pulmonaires obtenues en utilisant le modèle selon l'invention, démontre in vivo que la lignée cellulaire H460MGFP est stable à long terme vis-à-vis de la GFP, et montre que sa capacité à former des métastases pulmonaires n'a pas été modifiée.
L'utilisation de la GFP augmente considérablement la capacité à détecter des métastases pulmonaires au niveau microscopique. Le modèle selon l'invention permet de détecter les micrométastases pulmonaires chez 100% des animaux après deux semaines suivant l'injection de H460MGFP aux dits animaux.
Le modèle selon l'invention permet donc d'étudier facilement les cinétiques de formation des métastases pulmonaires, et représente ainsi une méthode in vivo rapide, reproductible et facile à utiliser pour détecter la variation du nombre de métastases.
Chargement du gel de polyacrylamide.
Les tubes sont chauffés à 80 C, puis placés immédiatement dans la glace. Le gel est chargé avec des dépôts de 2 à 4 l par puits. On laisse migrer 1,20 à 3 heures pour des fragments de 100 pb, à 1450 volts.
Arrêt de l'électrophorèse, exposition et révélation par autoradiographie. a) Arrêt de l'électrophorèse.
Les électrodes sont débranchées, le tampon de migration est éliminé et les plaques de verre contenant le gel séquence sont retirées. Le gel est récupéré et une feuille de papier Watman# 3M est disposée sur celui-ci en tapotant pour bien le faire adhérer et le gel fixé sur le papier est déposé sur une feuille de film plastique (Cellofray) pour le protéger. Le gel séquence est mis à sécher 2 heures à 80 C sous vide.
b) Exposition du gel sur un film autoradiographique.
Après séchage, le Cellofray# est retiré et un film autoradiographique (Hyper film-MP#, Amersham) est appliqué. Puis l'ensemble est disposé dans une cassette (munie d'un écran intensificateur) pour une exposition de une nuit à plusieurs jours à -80 C, car les films sont plus sensibles dans le froid. c) Révélation du film autoradiographique.
La révélation se fait à la lumière rouge et consiste à passer le film autoradiographique dans différents bains : - 2 min. dans le révélateur dilué au 1/5 (ILFORD 2000 RT), - rinçage dans l'eau, - 5 min. dans le fixateur dilué au 1/5 (ILFORD 2000 RT), - 15 min. de rinçage à l'eau courante, - séchage et lecture du film.
Préparation et marquage des sondes.
Marquage d'une sonde.
Pour détecter la présence d'une séquence complémentaire, par hybridation, au sein d'un mélange de fragments d'ADN, les sondes d'ADN dénaturées, sont marquées radioactivement au [alpha]32P-dCTP (dans les conditions préconisées par le fournisseur), par la technique d'amorçage multiple ("random priming"). Les sondes obtenues ont une activité spécifique de 0,2 à 1.109 cmp. g-1.
On dénature 2 min. à 80 C, 30 ng de fragments d'ADNc pur (sonde) dans un volume final de 45 l d'eau distillée stérile et on met le tout directement dans la glace.
- On introduit ensuite les 45 l de sonde dénaturée dans un lyophilisât (Kit Rediprime DNA , USB) contenant : - le tampon de la polymérase Klenow,
- les dNTP (moins le dCTP), - les amorces octanucléotidiques de synthèse, - la polymérase Klenow, et on rajoute 5 l de radioactivité [alpha]32P-dCTP. On incube 10 min. au bain-marie 37 C pour la polymérisation selon le principe del'amorçage multiple ("random priming").
Hybridation moléculaire des sondes marquées avec une membrane.
Northern blot et Southern blot.
Le Northem blot est une technique permettant de détecter un transcrit au sein d'un mélange complexe. La taille de l'ARN peut être déterminée par le degré de sa migration dans le gel et son abondance par l'intensité de la bande (ou signal). Cette méthode est très utilisée pour étudier les anomalies de la transcription d'un gène. Elle se réalise en plusieurs étapes: - transfert du profil électrophorétique sur une membrane de Nylon, - préhybridation, - hybridation, - lavage, - révélation par autoradiographie.
On peut intégrer aussi différents types de poudres au cours de la réalisation pour plomber le tube ou obtenir une réaction chimique avec l'eau qui donne un effet dynamique à la mouche réalisée avec ce tube.
Cette technique de réalisation avec les principes de base énoncés précédemment pourra évoluer au cours du temps.
La présente invention concerne un mécanisme de repliage automatique de roues destiné à équiper un chariot conçu pour le transport de marchandises, permettant d'introduire ce chariot directement avec sa marchandise dans un véhicule automobile sans recourir à son déchargement avant la phase d'introduction.
L'invention est caractérisée par la conception du mécanisme de repliage des roues suivant des bras articulés en forme de parallélogramme.
Au préalable avant l'introduction du chariot (1) dans le véhicule automobile, il est nécessaire de dévérouiller manuellement les mécanismes en tirant sur le levier (2) afin de libérer la fonction repliage des roues.
Les systèmes de dévérouillage et de vérouillage des mécanismes étant de conception courante, ils ne feront l'objet d'aucune originalité, ils ne sont pas traités ni décrits et ne font l'objet d'aucune revendication.
L'utilisateur pousse le chariot (1) à l'aide de la poignée vers l'intérieur du véhicule, le galet (3) prend contact avec le véhicule mais ne commande pas directement la levée de la roue (8) ,celle ci se faisant grâce à la combinaison des bras articulés (5) (6) et (7) reliés entre eux par des axes formant un ensemble de bras du type à parallélogramme ceci dans le but exclusif d'offrir une cinématique appropriée.
La figure 1 représente le chariot en butée contre le seuil du véhicule (4), la figure 2 montre le début de la mise en action des bras articulés assurant la levée des roues avant (8), la figure 3 illustre une autre étape de l'introduction du chariot dans le véhicule.
La même combinaison de bras articulés à parallélogramme est utilisée pour le repliage des roues arrières (10), le galet (11) en contact avec le véhicule commande la levée des bras articulés (12) (13) et (14), la figure 4 en est l'illustration.
Les bras du type à parallélogramme présentent l'avantage d'offrir le repliage des roues de façon automatique sans manipulation autre que de pousser manuellement sur la poignée du chariot après dévérouillage du système suivant le levier (2).
L'emploi de bras du type à parallélogramme permet d'obtenir non seulement la cinématique appropriée de repliage des roues mais offre l'avantage de ranger les roues dans la même surface occupée du chariot en vue de face, la figure 5 en est l'illustration, toutes les roues sont contenues à l'intérieur du périmètre constitué par le chariot, aucune partie du mécanisme ne sort de ce périmètre.
Il est à noter que la géométrie et la longueur des bras est différente suivant s'il s'agit des roues avant (8) ou des roues arrières (10) car elles sont en rapport avec la dimension des roues et leur position de repliage, et sont conçues de façon à accepter le montage de roues de grand diamètre à l'avant du chariot dans le but de garantir une bonne stabilité au roulage.
En position replié le chariot peut rouler à l'intérieur du véhicule par l'intermédiaire des roues (9) (8) et (10).
L'opération de déchargement du chariot du véhicule vers le sol s'effectue de la même manière à l'inverse de l'opération d'introduction, il suffit de tirer sur la poignée du chariot et vers l'arrière du véhicule.
Ce mécanisme à bras du type à parallélogramme offre la particularité de se replier sous un volume le plus réduit et compact possible, il présente l'avantage de ne pas pénaliser son rangement à l'interieur de la plus grande variété d'automobiles possible.
La présente invention concerne une potence de cycle, les différents éléments constituant cette potence, le réglage en longueur de cette potence, et un dispositif appelé adaptateur permettant la fixation d'un ou plusieurs accessoires tels que : prolongateur de cintre, éclairage, sacoches etc...
Les bactéries, Escherichia coli DH5a rendues préalablement compétentes, ont été transformées (Hanahan, 1983).
L'ADN plasmidique des clones obtenus, sélectionnés sur milieu LB supplémenté en kanamycine (50 mg/1), a été extrait selon la méthode de la lyse alcaline (Birnboim et Doly, 1979) et criblés par digestion par BglII. L'ADN plasmidique du clone retenu a été vérifié par digestions enzymatiques et par séquençage. Le plasmide résultant retenu a été appelé pMRT1122 (6016 pb) Il est représenté en figure 6 et sa séquence complète SEQ. ID06 est donnée dans le listage de séquences.
7. Synthèse de pMRT1155 Le plasmide pMRT1155 (6017 pb) diffère de pMRT1122 par la présence du site BspEI.
Pour ce faire, le fragment insert de 315 pb renfermant le site BspEI, a été obtenu par digestion de pMRT1121 par Bsu36I et PstI, électrophorèse sur gel d'agarose à 1,2 % dans du tampon TEB, purification à l'aide du kit "QIAquick Gel Extraction" et reprise dans 50 l de H20.
Le fragment vecteur pMRT1122 a été obtenu par digestion de pMRT1122 par Bsu36I et PstI, électrophorèse sur gel d'agarose à 1,2 % dans du tampon TEB, purification à l'aide du kit "QIAquick Gel Extraction" et reprise dans 50 l de H2O. Puis, pMRT1122 digéré a été déphosphorylé par 50 unités de phosphatase alcaline d'intestin de veau (New England Biolabs) dans un milieu réactionnel final de 120 l en présence de 12 l de tampon 3 x 10 (New England Biolabs) à 37 C pendant 1 heure, et purifié à l'aide du kit "QIAquick PCR Purification".
La ligation par réaction PCR a été réalisée avec 100 ng de plasmide pMRT1122 digéré déphosphorylé et 50 ng de fragments d'ADN digérés (315 pb) dans un milieu réactionnel de 10 l en présence de 1 l de tampon T4 DNA ligase x 10 (New England Biolabs) et de 400 unités d'enzyme T4 DNA ligase (New England Biolabs). Elle est constituée de 180 cycles composés de 2 étapes, l'une de 10 C pendant 30 sec. et l'autre de 30 C pendant 30 sec. dans un thermocycleur "GeneAmp PCR System 9700". Les bactéries, Escherichia coli DH5a ou SCS110 (déficiente en méthylases Dam et Dcm), rendues préalablement compétentes, ont été transformées (Hanahan, 1983). L'ADN plasmidique des clones obtenus, sélectionnés sur milieu LB supplémenté en kanamycine (50 mg/1), a été extrait selon la méthode de la lyse alcaline et vérifié par digestions enzymatiques et séquençage. Le plasmide résultant a été appelé pMRT1155 (Figure 7). Sa séquence complète SEQ. ID07 est donnée dans le listage de séquences.
8. Obtention de plasmides binaires de base comprenant la séquence "eP35S - T35S" 8. 1. Obtention de pMRT1205
Le plasmide pMRT1205 (7503 pb) comporte la cassette d'expression du gène nptII muté et une séquence "promoteur double 35S - terminateur 35S" (eP35S - T35S) pour le clonage de gènes d'intérêt. Il résulte du clonage du promoteur eP35S du virus de la mosaïque du chou-fleur (CaMV) dans pMRT1175. Le promoteur eP35S du CaMV correspond à une duplication des séquences activant la transcription situées en amont de l'élément TATA du promoteur 35S (Kay et al., 1987). Le plasmide pMRT1175 (6767 pb), quant à lui, résulte du clonage de T35S du virus de la mosaïque du chou-fleur dans pMRT1121. La séquence terminatrice de transcription, T35S du CaMV, correspond à la région en 3' non codante de la séquence du virus à ADN bicaténaire circulaire de la mosaïque du chou-fleur produisant le transcrit 35S (Franck et al., 1980).
8. 1.1. Obtention de pMRT1175 Le plasmide pMRT1175 résulte du clonage des fragments ADN insert EcoRI - XhoI correspondant au T35S aux sites EcoRI et XhoI du vecteur pMRT1121 produit à partir de la souche SCS110 d'Escherichia coli.
Le fragment vecteur pMRT1121 a été obtenu par digestion 7 pg de pMRT1121 par EcoRI et XhoI, purification à l'aide du kit "QIAquick PCR Purification" et reprise dans 50 l de H20. Puis, pMRT1121 digéré a été déphosphorylé par 50 unités de phosphatase alcaline d'intestin de veau (New England Biolabs) dans un milieu réactionnel final de 120 l en présence de 12 l de tampon 3 x 10 (New England Biolabs) à 37 C pendant 1 heure, et purifié à l'aide du kit "QIAquick PCR Purification" et repris dans 50 l de H20.
Les fragments ADN insert EcoRI - Xhol (757 pb) correspondant au T35S (750 pb) ont été obtenus par digestion par EcoRI et XhoI du plasmide pJIT163, qui dérive du plasmide pJIT60 (Guerineau et Mullineaux, 1993). Puis, ils ont été soumis à l'électrophorèse sur gel d'agarose à 1 % dans du tampon TEB, purifiés à l'aide du kit QIAquick Gel Extraction et repris dans 30 l de H20.
La ligation par réaction PCR a été réalisée comme décrite précédemment en 7, avec 80 ng de plasmide pMRT1121
digéré déphosphorylé et 80 ng de fragments ADN insert digérés.