INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'insert intermédiaire 6, qui est introduit avec l'implant tibial 4 et avec l'implant astragalien 5 au moyen de l'instrument ancillaire 2, est généralement un insert d'essai. Lorsque l'ensemble prothétique formé des constituants 4, 5, 6 est introduit dans l'espace de logement, et lorsque les implants tibial 4 et astragalien 5 sont ancrés dans l'os correspondant 101, 102, au moyen des vis d'ancrage, l'assemblage réversible entre l'instrument ancillaire 2 et les implants 4, 5 est démonté par dévissage des vis d'assemblage 11. L'insert intermédiaire est alors retiré. il présente à cet effet des trous taraudés 66 pour sa préhension par un instrument fileté adapté. Ensuite le manipulateur introduit dans l'interstice existant alors entre l'implant tibial 4 et l'implant astragalien 5 ancrés, l'insert intermédiaire définitif. Le système de remplacement selon 1 invention prévoit un ensemble d'inserts intermédiaires d'épaisseurs différentes mais présentant tous les mêmes surfaces de congruence 63, 64.
Ainsi, le manipulateur peut choisir à volonté l'épaisseur de l'insert définitif qui est introduit après la mise en place des implants 4, 5, ce qui autorise la mise en tension idéale des éléments ligamentaires latéraux de l'articulation.
L'opération de découpe de l'espace de logement de la prothèse 3 est illustrée à la figure 14. Elle s'effectue au moyen du guide de coupe 7 représenté plus précisément à la figure 13.
L'utilisateur a auparavant préparé cette découpe, selon des techniques classiquement connues - en adaptant un viseur externe sur le tibia, et un guide-broche sur le viseur, - puis en fixant des broches 15, 16 dans le tibia et l'astragale, ces broches étant positionnées les unes par rapport aux autres grâce au guide-broche, - et en retirant le guide-broche et le viseur externe.
Le guide de coupe 7 est installé devant l'extrémité inférieure du tibia 101 et le dôme de l'astragale 102.
L'invention concerne aussi un nécessaire ou kit pour la mise en oeuvre du procédé décrit ci-dessus, destiné à la détection de la présence d'une bactérie du complexe Mycobacterium tuberculosis dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants a) Une sonde oligonucléotidique selon l'invention; b) Les réactifs nécessaires à la mise en oeuvre d'une réaction d'hybridation; c) Le cas échéant, un couple d'amorces selon l'invention ainsi que les réactifs nécessaires à une réaction d'amplification de l'ADN (ADN génomique, ADN plasmidique ou ADNc) d'une bactérie du complexe Mycobacterium tuberculosis.
L'invention a aussi pour objet un kit ou nécessaire pour la détection de la présence d'une bactérie du complexe Mycobacterium tuberculosis dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants a) Une sonde oligonucléotidique, dite sonde de capture, selon l'invention; b) Une sonde oligonucléotidique, dite sonde de révélation, telle que décrite précédemment. c) Le cas échéant, un couple d'amorces selon l'invention ainsi que les réactifs nécessaires à une réaction d'amplification de l'ADN d'une bactérie du complexe Mycobacterium tuberculosis.
L'invention concerne encore un kit ou nécessaire pour l'amplification de l'ADN d'une bactérie du complexe Mycobacterium tuberculosis présent dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants a) Un couple de fragments d'acide nucléique amorces selon l'invention; b) Les réactifs nécessaires pour effectuer une réaction d'amplification d'ADN; c) Eventuellement un composant permettant de vérifier la séquence du fragment amplifié, plus particulièrement une sonde oligonucléotidique telle que décrite précédemment.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaissent dans les exemples et les figures suivants FIGURES Figure 1: Carte du cosmide pHC 79, construit à partir du plasmide pBR322. II possède les séquences cos du phage lambda, permettant l'empaquetage d'un insert d'ADN d'une taille de 30 à 40 kb. Il possède deux gènes de résistance aux antibiotiques : un gène de résistance à l'ampicilline et un gène de résistance à la tétracycline, porteur d'un site de restriction unique pour l'endonucléase SalI.
Figure 2 : Carte du plasmide pMT05 contenant la SEQ ID N0 1 et la SEQ ID N 2. L'extrémité 5' de la SEQ ID N 1 est localisée au nucléotide suivant immédiatement le dernier nucléotide de la séquence IS6110, représentée par la boîte IS6110 sur cette figure, et l'extrémité 3' de la SEQ ID N 1 est localisée en aval de la séquence de p27 représentée par la boîte p27 sur cette figure. La SEQ ID N 2 correspond à la boîte désignée p27 sur la figure.
Figure 3 : Comparaison des séquences en acides aminés de la protéine Sra de M. leprae et de la protéine P27 de M. tuberculosis.
EXEMPLES Exemple 1: Construction de la banque génomique M. tuberculosis L'ADN génomique de M. tuberculosis H37rv est digéré partiellement par l'cndonucléase de restriction SalI en faisant agir 0,03 U d'enzyme par tig d'ADN pendant I heure à 37 C dans le tampon composé de 100 mM de NaCI 50 mM de MgC12, 1 mM de dithiothréitol. L'ADN génomique ainsi digéré est séparé par electrophorèse sur gel d'agarose à 0.6%. les fragments entre 30 et 40 kb electroélués et précipités en éthanol après extraction au phénol/chloroforme (1/1).
Le vecteur est le cosmide pHC79. Il est digéré de la même manière et déphosphorylé pour éviter toute autoligation.
La ligation s'effectue en mélangeant 1,5 g de vecteur et 3 g de fragments d'ADN 30/40 kb (soit un rapport molaire vecteur/insert de 1/2), la réaction est laissée à 140C pendant 18h après avoir ajouté 5 U de T4 DNA ligase dans un tampon composé de 0,066 mM de TRIS-HCI pH 7,5, 5 mM de MgC12, 1 mM de dithiothréitol et 1 mM d'ATP.
Les cosmides recombinés sont encapsidés in vitro et utilisés pour transformer les bactéries (HB101). Les bactéries transformées sont incubées 1h à 37 C en milieu LB puis étalées sur milieu sélectif Agar contenant 50 llg/ml d'Ampicilline. Les colonies résistantes à l'Ampicilline sont toutes testées pour leur sensibilité à la Tétracycline, en effet le fragment d'ADN 30/40 kb est inséré dans le vecteur de manière à inactiver le gène de résistance à la tetracycline (Tet) et à conserver le gène de résistance à l'ampicilline (Amp).
Exemple 2 : Criblage de la banque et détermination de la séquence Il est effectué une mini préparation d'ADN sur les 455 premières colonies de bactéries transformées résistantes à l'ampicilline (Ampr) et sensibles à la tetracycline (tets) selon la technique de lyse alcaline. Ces ADN sont testés par PCR en utilisant les amorces SRAI: GCC CGA GAT CAA CTC CAC CC et SRA2: ACA TCT G CGT AGT CGG CC dont les séquences avaient été déterminées préalablement dans le laboratoire. Six clones cosmidiques présentent un fragment d'amplification en quantité importante et dont la taille est celle attendue (410 pb). Chacun de ces clones est repiqué sur milieu solide LB + ampicilline 50 ptg/ml et les colonies bien individualisées sont repiquées sur une boîte ordonnée. Il est effectué une mini-préparation des 4 premières colonies recombinantes de chacun des clones.
Les ADN de ces mini-préparations sont soumis à une PCR avec les amorces SRAI/SRA2 et testés en gel d'agarose. Six sous-clones sont sélectionnés et conservés en glycérol à -80 C.
L'ADN de chacun des 6 sous-clones sélectionnés est hydrolysé individuellement par 7 enzymes de restriction, soumis à une électrophorèse et transféré selon la méthode de Southern puis hybridé avec le fragment de PCR SRAI/SRA2. Ce fragment a été préalablement purifié par une chromatographie (FPLC) suivie d'une électrophorèse, d'une électruélution et d'un marquage au 32P par multipriming.
C'est l'enzyme de restriction Pst I qui est retenue car une seule bande dont la taille est estimée à environ 7-7,4 kb hybride avec la sonde SRAI/SRA2.
Le clone J411 est sélectionné, une maxi-préparation est réalisée suivie d'une hydrolyse préparative de J41 i par Pst I, le produit digéré est mis à migrer dans un gel d'agarose à 1,2%, la bande dont la taille est alors estimée à 7-7,4 kb est découpée puis électroéluée, le fragment électroélué est contrôlé sur gel d'agarose à 0,8%, la taille de ce fragment est estimée à environ 6 kb.
Ce fragment a été cloné dans un vecteur pUC18, le plasmide recombiné est utilisé pour transformer des bactéries E. coli TGI. Les colonies des bactéries TG1 transformées ont été ordonnées sur boîte LB + ampicilline et 24 mini-préparations ont été réalisées pour contrôler la présence de l'insert. Le clone J411/Pst I/8 est retenu et cultivé pour préparer une grande quantité de plasmide recombiné, celui-ci est dénommé pMT0S. La souche contenant le plasmide pMTOS est dénommée TGMTOS et déposée à la C. N. C. M. le 19 novembre 1996 sous le numéro I-1786.
La sélection ou la non sélection de la fonction de changement automatique de cassette conformément à un message affiché sur l'élément d'affichage 121 montré à la fig. 4 est également réglée et stockée sous le code de réglage 149. Par exemple, si la donnée du code 149 est "0", il désigne "NON SELECTION" et, même lorsque du papier est placé dans le guide d'alimentation manuelle de papier 42, le message "Y A T'IL LIEU DE CHANGER DE L'ALIMENTATION MANUELLE AU CHANGEMENT AUTOMATIQUE DE CASSETTE ?" montré en (B) à la fig. 4 n'est pas affiché.
En outre, dans le code de réglage 21, le "0" pour NON ou le "1" pour OUI de la fonction de changement automatique de cassette est réglé et stocké.
Dans le code de réglage 148, "0" correspondant au jugement non automatique concernant le OUI ou le NON de la fonction de changement automatique de cassette et "1" correspondant au jugement automatique sont réglés et stockés.
On décrit maintenant l'opération de copie de la machine à copier présentant une réalisation de ce type en se référant aux organigrammes montrés à la fig. 6 et à la fig. 7.
Après que divers réglages ont été effectués par l'intermédiaire du panneau de fonctionnement 120 et que la touche de démarrage 125 a été pressée pour démarrer l'opération de copie, l'unité de traitement principale 100 juge tout d'abord si c'est le mode de jugement automatique pour le OUI/NON de la fonction de changement automatique de cassette en vérifiant une valeur du code de réglage 148 stocké dans la partie de mémoire rémanente 140 de la RAM 104 (ST1).
Si c'est le mode de jugement automatique (le code de réglage 148 = 1), L'unité de traitement principale 100 vérifie si la copie est une copie double face (ST2), une copie de page continue (ST3), une copie de 2 dans 1 (ST4), une copie utilisant un triage (ST5), une copie en mode de couverture (ST6) ou une copie en mode d'insertion de feuilles (ST7), et si le mode est l'un des modes cidessus, l'unité de traitement principale 100 règle un indicateur NON de fonction de changement automatique de cassette dans la partie de mémoire non rémanente 104b de la RAM 104 (ST8). Le mode "copie de page continue" de l'opération ST3 est le mode permettant de copier de manière continue deux pages mises sur le plateau porte-documents 5 en ouvrant les deux pages d'un livre à copier. Le mode "copie 2 dans 1" de l'opération ST4 est le mode pour copier simultanément, sur un seul côté d'une feuille de papier, des images correspondantes se trouvant sur deux feuilles d'un document. Le mode "copie en mode de couverture" de l'opération ST6 est le mode dans lequel on prépare deux cassettes de papier, ou un moyen d'alimentation manuelle de papier et une cassette de papier de même dimension, et l'un de ceux-ci (ou l'une des cassettes) est un moyen d'alimentation de papier particulier tel qu'un papier épais pour une couverture, et un document équivalant à une couverture est copié sur ce papier particulier. Le mode "copie en mode d'insertion de feuilles" de l'opération ST7 est le mode dans lequel on prépare deux cassettes de papier, ou un moyen d'alimentation manuelle de papier et une cassette de papier de même dimension, et l'un de ceux-ci (ou l'une de ces cassettes) est un moyen d'alimentation de papier spécial tel qu'une feuille de couleur permettant une insertion, et les documents que l'on désire insérer séparément entre de nombreuses autres feuilles blanches sont copiés sur un papier spécial.
Lorsque cet indicateur NON est réglé, l'unité de traitement principale 100 ne change pas la cassette de papier même lorsqu'il n'y a plus de papier. II affiche, sur l'élément d'affichage 121, un message demandant une alimentation de papier et met à l'arrêt le corps principal 1 de la machine à copier. Lorsque cet indicateur NON est remis à l'état initial, l'unité de traitement principale 100 recherche une cassette de papier contenant la même dimension de papier que le papier qui n'y s'y trouve plus et, s'il en existe, il utilise cette cassette de papier pour la cassette de papier suivante.
Dans le mode ci-dessus, bien qu'il soit considéré qu'il existe clairement un problème lorsqu'un type de papier est changé par la fonction de changement automatique de cassette, sur la base de cette supposition, un mode de réglage (code 148) a été prévu pour le jugement automatique sur le OUI/NON de la fonction de changement automatique de cassette.
En outre, lorsque l'indicateur NON de fonction de changement automatique de cassette est réglé, la valeur de la donnée devient "1" et, lorsqu'il est remis à l'état initial, la valeur de la donnée devient "0" En outre, dans l'opération ST1, si le mode n'est pas le mode de réglage automatique (code de réglage 148 = 0), un processus de vérification de la fonction OUI/NON du changement de cassette automatique est effectué dans un autre code de jugement (ST9).
On décrit maintenant le fonction de l'opération ST9 en se référant à l'organigramme montré à la FIG. 7.
Tout d'abord, L'unité de traitement principale 100 juge que toutes les cassettes de papier sont permises ou interdites pour le changement automatique à partir d'une valeur réglée dans le code de réglage 21 stocké dans la partie de mémoire rémanente 104a de la RAM 104 (ST21). Lorsque cela est permis dans le jugement de l'opération ST21, à partir d'une valeur réglée dans le code 151, il est jugé si le changement de cassette automatique n'est interdit que pour la cassette de grande capacité 47 (ST22) et, si cela est interdit, procède à l'opération ST28.
Lorsque cela est permis dans l'opération ST22, à partir d'une valeur réglée dans le code de réglage 152, il est jugé si le changement automatique de cassette n'est interdit que pour la quatrième cassette de papier 43 (ST23) et, si cela est interdit, procède à l'opération ST28.
Lorsque cela est permis dans l'opération ST23, à partir d'une valeur réglée dans le code de réglage 154, il est jugé si le changement automatique de cassette n'est interdit que pour la première cassette de papier 30a du support d'alimentation de papier 90 (ST24) et, si cela est interdit, procède à l'opération ST28.
Lorsque cela est permis dans l'opération ST24, à partir d'une valeur réglée dans le code de régale 155, il est jugé si le changement automatique de cassette n'est interdit que pour la seconde cassette de papier 30a du support d'alimentation de papier 90 (ST25) et, si cela est interdit, procède à l'opération ST28.
Lorsque cela est permis dans l'opération ST25, à partir d'une valeur réglée dans le code de réglage 156, il est jugé si le changement automatique de cassette n'est interdit que pour la troisième cassette de papier 30c du support d'alimentation de papier 90 (ST26) et, si cela est interdit, il procède à l'opération ST28.
Lorsque cela est permis à l'opération ST26, à partir d'une valeur réglée dans le code de réglage 150, il est jugé si le changement automatique de cassette n'est interdit que pour l'alimentation de papier à partir du guide d'alimentation manuelle de papier 42 (ST27) et, si cela est interdit, procède à l'opération ST28, et si cela est permis, remet à l'état initial l'indicateur NON de changement automatique de cassette dans la partie de mémoire non rémanente 194 de la RAM 104 (ST30).
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1 1. i . 6,7-éthylènedioxy-2-iodo-3-quinoléine-méthanol (N) Les procédures décrites par Meth-Cohn et ses collaborateurs, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, p. 1520 (1981); Meth -Cohn, J. Chem. Soc. Perkin Trans I, p. 2509 (1981); et Nakasimhan et ses collaborateurs, J. Am. Chem. Soc. 112, p. 4431 (1990), sont employées. De la 3,4-éthylènedioxyacétanilide (22 g, 113 mmol) est ajoutée au réactif de Vilsmeyer obtenu par addition goutte à goutte d'oxychlorure de phosphoryle (71 ml, 0,77 mol) à de la diméthylformamide anhydre (23 ml, 0,28 mol), refroidie avec un bain eau / glace et agitée pendant encore 0,5 heure sous atmosphère d'argon.
Le mélange résultant est chauffé à 75" C pendant 16 heures. Après refroidissement à la température ambiante, le mélange réactionnel est ajouté à un mélange de glace et d'eau (300 ml) et extrait avec du dichlorométhane (5 x 200 ml). Les extraits organiques combinés sont séchés sur sulfate de sodium, filtrés et concentrés. Le résidu solide est mis en suspension dans du dichlorométhane (20 ml), filtré et séché sous pression réduite, ce qui donne 10 g (35 %) de 2-chloro-6,7-éthylènedioxyquinoléine-3-carbaldéhyde sous forme d'un solide jaune, p.f. 222-224 C. Cet intermédiaire est traité avec de l'iodure de sodium (30 g, 0,2 mol) et de l'acide chlorhydrique concentré (1 ,5 mi) dans de l'acétonitrile au reflux (150 ml) pendant 24 heures. Après refroidissement à la température ambiante, le solvant est éliminé sous pression réduite et le résidu est repris dans du tétrahydrofuranne aqueux à 50 % (200 ml), filtré, lavé avec du tétrahydrofuranne et séché sous pression réduite, ce qui donne 12 g de 6,7-éthylènedioxy-2-iodoquinoléine-3-carbaldéhyde sous forme d'un solide jaune, p.f. 155-157 C. L'intermédiaire ci-dessus est traité avec du borohydrure de sodium (2 g, 52 mmol) dans le méthanol (200 ml) à la température ambiante pendant 0,5 heure. Le solvant est éliminé sous pression réduite et le résidu est repris dans l'eau et filtré. Le solide résultant est séché sous pression réduite en présence de pentoxyde de phosphore, ce qui donne 1 1 g de (6,7-éthylènedioxy-2-iodoquinoléine-3-yl)-méthanol sous forme d'un solide jaune, p.f. 178-180 C. il j. S-éthyl-8-(6,7-éthylènedioxy-2-iodo-3-quinoléineméthyl)- i,5-dihydro-S-hydroxy-oxepino [3,4-c] pyridine 3,9(4H,8H) dione (O) On ajoute goutte à goutte pendant 5 minutes de l'azodicarboxylate de diéthyle (570 ,ul, 3,6 mmol) à une solution de 5-éthyl-1,5-dihydro-5-hydroxy-oxepino [3,4-c] pyridine 3,9(4H,8H)-dione (400 mg, 1,79 mmol), du composé obtenu à l'étape précédente 1 1.i.
(770 mg, 2,23 mmol) et de triphénylphosphine (934 mg, 3,58 mmol) dans un mélange THF/DMSO anhydre (8/1 v/v, 45 ml) et on agite le mélange résultant sous argon à la température ambiante pendant 16 heures. Le mélange réactionnel est ensuite concentré sous pression réduite et le résidu est dissous dans du chloroforme (100 ml). La solution résultante est lavée avec de la saumure (4 x 50 ml), séchée sur sulfate de sodium et évaporée. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne (SiO2, CH2Cl2/MeOH: 99/1 à 98/2), ce qui donne 650 mg (66 %) du produit (O) sous forme d'un solide blanc, p.f. 165-167 C.
11. k. 8-éthyl-2,3,8,9-tétrahydro-8-hydroxy-iOH,12H-[i,4] dioxino [2,3-g] oxepino [3',4':6,7] indolizino [1,2-b] quinoléine-10,13 (15H)-dione De la 5-éthyl-8-(6,7-éthylènedioxy-2-iodoquinoléine-3-yl)méthyl-4,5-dihydro5-hydroxy-(lH,3H)oxopino [3,4-c] pyridine-3-dione (600 mg, 1,1 mmol), du bromure de tétrabutyl-ammonium (352 mg, 1,1 mmol), de l'acétate de sodium (359 mg, 4,4 mmol) et de l'acétate de palladium II (98 mg, 0,43 mmol) sont dissous dans de l'acétonitrile anhydre (40 ml) et chauffés à 90 C sous argon pendant 16 heures. Après refroidissement à la température ambiante, un précipité blanc est séparé de la solution rougeâtre. Ce précipité est filtré et séché sous pression réduite. Le produit brut est mis en suspension dans l'eau, filtré et séché sous pression réduite sur du pentoxyde de phosphore, ce qui donne 250 mg du composé recherché sous forme d'un solide jaune clair, p.f. > 250 C.
RMN-1H (DMSO): 0,91 (t, 3H); 1,87 (m, 2H); 3,08 (d, 1H); 3,51 (d, 1H); 4,45 (s, 4H); 5,19 (s, 2H); 5,47 (dd, 2H); 6,02 (se, 1H); 7,33 (s, 1H); 7,54 (s,1H); 7,55 (s, 1H); 8,43 (s, 1H).
RMN-C13 (DMSO): 8,43 ; 36,47 ; 42,54 ; 50,52 ; 61,43 ; 64,43 (2C) ; 73,31; 99,07; 112,27; 113,14; 122,00; 124,24; 128,18 ; 129,74; 144,59; 145,01; 145,33; 147,63; 150,88; 155,88; 159,23; 172,07.
Exemple 12 : I0-benzyloxy-5-éthyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-lH-oxepino [3',4':6,7]-indolizino [1,2-b]quinoléine-3,15 (4H,13H) dione 12.a. (6-benzyloxy-2-iodo-3-quinoléine)-méthanol Ce composé est préparé d'une manière analogue à celle indiquée dans l'étape 1 1.î. de l'exemple 11, mais en utilisant de la 4-benzyloxyacétanilide à la place de la 3,4-éthylènedioxyacétanilide. Une purification par chromatographie sur colonne de gel de silice et l'utilisation de dichlorométhane comme éluant sont nécessaires pour isoler (rendement 8 %) à une pureté suffisante, l'intermédiaire 6-benzyloxy-2chloroquinoléine-3-carbaldéhyde, p.f. 180-182 C. Ensuite, I'échange d'halogène donne le 6-benzyloxy-2-iodoquinoléine-3-carbaldéhyde, p.f. 155-157 C et une réduction subséquente au borohydrure de sodium donne le (6-benzyloxy2-iodoquinoléine-3-yl)-méthanol, p.f. 147-149 C.
12.b. 8-(6-benzyloxy-2-iodo-3-quinoléineméthyl)-1,5-dihydroxy 5-éthyl-5-hydroxy-oxepino [3,4-c] pyridine-3,9(4H, 8H)-dione Ce composé est préparé d'une manière analogue à celle indiquée dans l'étape 11.j. de l'exemple 11, mais en utilisant du (6-benzyloxy-2-iodoquinoléine-3-yl)-méthanol à la place du (6,7-éthylènedioxy-2-iodoquinoléine-3-yl)-méthanol. Ce composé se présente sous la forme d'un solide blanc, p.f. 197-199 C.
12.c. 10-benzyloxy-5-éthyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino [3',4':6,7]-indolizino [1,2-b]quinoléine-3,15 (4H,13H)-dione Ce composé est préparé d'une manière analogue à celle indiquée dans l'étape 11.k. de l'exemple 11, mais en utilisant la 8-(6-benzyloxy-2-iodo-3-quinoléineméthyl)-1,5- dihydroxy-5-éthyl-5-hydroxy-oxepino [3,4-c] pyridine-3,9(4H, 8H)-dione à la place de la 5-éthyl-8-(6,7-éthylènedioxy-2-iodoquinoléine-3-yl)méthyl-4,5-dihydro-5-hydroxy (1H, 3H)oxepino [3,4-c] pyridine-3-dione. Le composé recherché se présente sous forme d'un solide jaune clair, p.f
RMN-C13 (DMSO): 8,11; 34,75 ; 46,68 ; 50,35 ; 55,70; 69,97 ; 76,51; 99,45 107,78 ; 123,28 ; 127,64; 128,18 (2C) ; 128,26; 128,70 (2C) ; 129,33 ; 130,17 130,47; 130,57; 136,69; 142,79; 144,17; 150,93; 156,03; 157,19; 161,20.