INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
On rajoute alors l'oxyde de vinylcyclohexène fraîchement distillé à raison de 57g (0,459 moles) et on porte la température de réaction à 80 C pendant trois heures et on rajoute 40 mg du complexe du platine pendant la dernière heure.
On laisse revenir à température ambiante . Le taux de conversion des motifs SiH est de 98,3%. On chauffe à 100 C et on rajoute 40 mg de complexe du platine supplémentaire puis on laisse à 100 C pendant trois heures. Le taux de conversion des motifs SiH est de 99,8 %. On soutire la masse réactionnelle dans un ballon de 500 ml (360,2 g) et on rajoute 0,3g de 2,2 thiodiéthanol puis on fait le vide et on entraîne sous balayage d'argon le toluène à 97 C dans la masse réactionnelle et 30 à 40 C en tête de colonne. Après avoir arrêté le vide et refroidi à 40 C on rajoute 1,47g de polyvinylpyridine (Reillex) et 1,53g d'eau oxygénée (Prolabo).
On chauffe à 80 C pendant deux heures et on rajoute 4,72g de sulfate de magnésium à la masse réactionnelle. On effectue alors une filtration sur carton de l'huile obtenue décolorée et le rendement massique total de la synthèse est de 86% soit 272 g.
La viscosité de l'huile est de 55 mm2/s.
La masse moléculaire moyenne en nombre est d'environ 1300 déterminée par gel perméation chromatographie.
5. Expression des différents promoteurs dans le tabac après transformation stable.
5. 1. Transformation stable dans le tabac.
La transformation du tabac (Nicotiana tabacum L., cultivar PBD6) a été réalisé en infectant des disques foliaires isolés de plantes de tabac âgées de 6 semaines par les agrobactéries recombinantes selon la méthode décrite par Horsch et al. (1985).
Tout au long de la transformation, les boîtes de Pétri ont été incubées en chambre de culture dans les conditions suivantes : température de 24 C, photopériode de 16 h nuit/ 8 h jour, intensité lumineuse de 200 pnol photons.m-2.sec-1 , et hormis pour l'étape initiale de coculture, l'ensemble des étapes de callogénèse, de régénération et d'enracinement a été réalisé sur divers milieux sélectifs supplémentés en Augmentin (400 mg/1) et Kanamycine # (200 ou 100 mg/ml) ; Les différentes étapes et les milieux utilisés sont les suivants : - une étape de coculture de trois jours, lors de laquelle les agrobactéries infectent les cellules végétales, sur milieu de coculture MS30 solide (milieu de base MS (Murashige et Skoog, 1962) additionné de vitamines (Gamborg et al., 1968) 4,4 g/1 (Sigma, M0404), Saccharose 30 g/l, agar 8 g/1 (Merck), pH 5,7) supplémenté en Benzyl Amino Purine à 1 mg/1 et Acide Indole-3 Acétique à 0,1 mg/1 .
- une étape de formation des bourgeons de deux fois 2 semaines en chambre de culture sur milieu de régénération MS20 solide (Sels et vitamines MS 4,4 g/1 (Sigma, M0404), Saccharose 20 g/1, , agar 8 g/1 (Merck), pH 5,7), supplémenté en Benzyl Amino Purine à 1 mg/1,
Acide Indole-3 Acétique à 0,1 mg/1, Augmentin * à 400 mg/1 et Kanamycine a 200 mg/1.
- une étape de développement et d'enracinement de 3 semaines en chambre de culture sur milieu de développement MS20 solide supplémenté en Augmentin à 400 mg/1 et Kanamycine à 100 mg/1.
- une étape de repiquage en pots de verre en chambre de culture sur milieu de développement MS20 solide supplémenté en Augmentin * à 400 mg/1 et Kanamycine # à 100 mg/1.
5. 2. Mesure et comparaison de l'activité P-glucuronidase dans les plantes de tabac.
L'activité P-glucuronidase a été mesurée sur des échantillons de plantes transgéniques de première génération, prélevés 2 semaines après leur acclimatation en serre. Pour chaque plante, trois échantillons de feuille ont été prélevés, sur une feuille "âgée" (située au rang foliaire basal), sur une feuille mature (située au rang foliaire médian), et sur une feuille jeune (située à l'apex).
Chaque échantillon a été broyé dans l'azote liquide dans un mortier puis la poudre a été resuspendue dans du tampon d'extraction (Tris Phosphate 25 mM pH 7,8, Dithiothréitol 2 mM, acide 1,2-diaminocyclohexane, N,N,N',N'-tétracétique 2 mM, glycérol 10 %, Triton X100 1 %) à raison d'1 ml de tampon pour 200 mg de tissu. Le mélange a été homogénéisé puis incubé pendant 15 min dans la glace avant d'être clarifié par centrifugation pendant 5 min à 16060 g.
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Les résultats de ces colorations histochimiques sont présentés Fig. V. L'activité promotrice des différentes constructions a été évaluée par le nombre de points bleus révélés sur chaque feuille après deux bombardements totalisant 2 g d'ADN portant le gène rapporteur GUS.
Deux catégories de promoteurs ont été identifiées. Les feuilles bombardées avec les promoteurs MPrlll6 et MPrll46 présentent en moyenne un nombre de points bleus très importants supérieurs à 150 (Fig. V) comparable au nombre de points bleus obtenus en bombardant les feuilles dans les mêmes conditions et avec la même
quantité de plasmide contrôle pMRT1092. Les feuilles bombardées par le promoteurs MPrlll7 et MPr1147 présentent un nombre de points bleus compris en moyenne entre 50 et 150 (Fig. V).
En conclusion, les promoteurs chimériques Mprlll6 et MPrll46 permettent d'obtenir une expression de la P-glucuronidase à un niveau supérieur ou égal à celle obtenue à l'aide du promoteur constitutif fort de référence D35S prom.
4. 5. Quantification de l'expression de la p-glucuronidase par les différents promoteurs, par dosage enzymatique au luminomètre.
Les demi-feuilles congelées ont été broyées dans un mortier, puis la poudre a été mise à décongeler dans du tampon d'extraction (Tris Phosphate 25 mM pH 7,8, Dithiothréitol 2 mM, acide 1,2-diaminocyclohexane, N,N,N',N'-tétracétique 2 mM, glycérol 10 %, Triton X100 1 %) à raison de 1 ml de tampon pour 200 mg de tissu. Le mélange a été homogénéisé puis incubé pendant 15 min dans la glace avant d'être clarifié par centrifugation pendant 5 min à 16060 g.
L'activité GUS a été mesurée sur 20 (il d'extrait brut clarifié de feuille à l'aide du kit de détection "GUS-Light chemiluminescent reporter gene assay" (Tropix Inc., Bedford, USA) selon les recommandations du fournisseur. La mesure de l'émission de lumière a été effectuée à l'aide d'un luminomètre Lumat LB 9507 (EGG-Berthold, Bad Wildbad, Allemagne).
L'activité luciférase a été mesurée sur 20 (il d'extrait brut de feuille à l'aide du kit de détection "Luciférase assay system" (Promega Corp., Madison, USA) selon les recommandations du fournisseur. La mesure de l'émission de lumière a été effectuée à l'aide du luminomètre Lumat LB 9507.
Les résultats sont rapportés Fig. VI. Pour chaque essai (une feuille bombardée = un extrait brut), le rapport entre l'activité ss-glucuronidase et l'activité luciférase mesurées au luminomètre, a été calculé. La moyenne des différents essais pour une construction donnée et l'erreur standard à la moyenne ont été déterminées. Les résultats obtenus montrent que : Les promoteurs MPrlll6 et MPrll46 (Fig. IV) semblent augmenter
sensiblement l'expression du promoteur double 35S du CaMV de référence (MPrl092, Fig. II). Le promoteur MPrll46 diffère du promoteur MPrlll6 par l'insertion d'une duplication de la boîte "as-2" précédant la boîte "as-1" du promoteur 35S du CaMV localisée entre la boîte "as-1 like" du promoteur du CoYMV et l'élément spécifique des tissus verts du promoteur du CsVMV. Cette insertion d'éléments du promoteur 35S du CaMV dans MPrll46 semble augmenter faiblement le taux d'expression moyen par rapport au promoteur MPrlll6 (4,5 %). Ces éléments semblent impliqués dans une synergie positif dans une telle combinaison.
Les promoteurs MPrlll6 et MPrlll7 (Fig. IV) ne diffèrent que par l'ajout d'un boîte "as-1 like" du promoteur de CoYMV dans MPrlll7.
L'expression moyenne conférée par le promoteur MPrlll7 est sensiblement inférieure à celle obtenue avec MPrlll6 (22 %). Ce résultat suggère que l'élément "as-1 like" du CoYMV localisé en 5' du promoteur chimérique jouerait un rôle répresseur de l'activité promotrice.
Le promoteur MPrll47 (Fig. IV) diffère du promoteur MPrlll7 par l'insertion des boîtes "as-1" et "as-2" entre les éléments "as-1 like" du promoteur du CoYMV et l'élément spécifique des tissus verts du promoteur du CsVMV. L'ajout de ces boîtes en interaction avec les autres éléments semblent conduire à une diminution significative et considérable du taux d'expression moyen par rapport à MPrlll7 (43 %). L'association de ces éléments semble favoriser une synergie négative. Néanmoins, l'expression la plus faible conférée par le promoteur MPrll47 ne diffère que de 51 % de celle obtenue avec le promoteur MPrl092. Cet effet négatif pourrait être expliqué, dans le cas de ce promoteur chimérique, par une compétition vis à vis des éléments trans-activateurs ou bien par un encombrement stérique de ces facteurs sur le promoteur, diminuant son activité.
En conclusion, les promoteurs chimériques MPrlll6 et MPrll46 semblent engendrer une expression moyenne du gène rapporteur GUS au niveau des feuilles de tabac, sensiblement meilleure que celle obtenue avec MPrl092. Celui-ci étant communément rapporté dans la littérature comme étant le promoteur chimérique le plus fort (de
l'ordre de 10 fois supérieur au promoteur constitutif fort CaMV p35S (Kay et al., 1987), utilisé en routine en transgénèse MPrlll6 et MPrll46 peuvent être classés parmi les promoteurs chimériques les plus fort décrit a ce jour.
Il s'agit du fragment fR4 de 8159 pb déjà décrit.
Essai 1 Essai 2 (- protéine) 0 0 (+ protéine) 5, 1, 9 0, 0, 0 L'essai 2 a été effectué avec 150ng de fragment fR4 au lieu de 370ng pour l'essai 1 et 10 l de milieu de ligation. La protéine a été solubilisée en présence de glycérol dans l'essai 1, sans glycérol dans l'essai 2.
EXEMPLE 2 LIGATION EN PRESENCE D'HISTONES ISOLEES ET CLONAGE DU RECOMBINANT DE 12034 pb A PARTIR D'E. COLI.
Les deux histones qui ont été employées sont l'histone Hl de thymus de veau (type III-SS, ref. H4524, Sigma) et l'histone H2b de thymus de veau (type VII-S, ref.
H4255, Sigma).
La loi qui a été calculée pour Hl, l'a été sur la base d'une quantité équivalente en moles à la quantité présente dans le mélange naturel, c'està-dire 6 fois moins (masse moléculaire du mélange M=130 268, masse moléculaire de la protéine Hl M= 21 500). Cette loi a été testée par gel de retardement (Figure le) - Exemple 2a : ligation en présence d'histone Hl Nombre de recombinants obtenus : Essai 1 2 3 4 5 (-protéine) 1(ss insert) 0 0 0 0 (+protéine) Nbretotal 1,2,4 2,0,0 0,0,0 0,0,0 0,0,0 Avecinsert 0,1,1 0,0,0 0,0,0 0,0,0 0,0,0 - Essais 1, 2, 3 : quantité d'histone Hl équivalente en moles à la quantité d'histone Hl présente dans le mélange (essais 1 et 2, loi aux 2/3, essai 3 : loi exacte) - Essais 4 et 5 : quantité d'histones Hl équivalente en moles à la quantité totale d'histones présente dans le mélange naturel, en remplacement des autres histones
Essai 5 : quantité d'ADN 5 fois moins importante que dans les autres essais - Essai 1 et: 2 : Glycérol ajouté au tampon de dilution de l'histone Hl - Essais 3 : sans glycérol ajouté.
L'histone Hl n'accroît pas l'efficacité du clonage aussi clairement que le mélange naturel d'histones, dans les mêmes conditions.
- Exemple 2b : ligation en présence de l'histone H2b Dans ce cas, la protéine (M = 13 774) représente le dixième du mélange (M = 130 268), et la loi devient : (C) = 1. 5 10-12 mg H2b /ng ADN/pb de recombinant Nombre de recombinants obtenus : Essai 1' 2' 3' 4 4' (- protéine) 1 0 0 5(sansinsert) (+ protéine) Nbretotal 1,1,2 5,1,0 25,0,0 26,5,7 12,18,9 Avecinsert 0,0,0 2,0,0 15,0,0 13,3,3 4,6,2 - Essais 4,4', 3' : sans glycérol, loi exacte - Essais l'et 2' . avec glycérol, loi aux 2/3 Les essais 1', 2' et 3' ont été réalisés en parallèle aux essais 1,2 et 3 effectués en présence de la protéine Hl (même préparation d'ADN, de tampon, et de boites de culture) et en parallèle à l'essai 14 avec le mélange d'histones).
Contrairement à l'histone Hl, l'histone H2b accroît à elle-seule l'efficacité de clonage.
L'invention concerne un article en une matière fragile, en particulier en verre, en vitrocéramique ou en céramique, à dilatation dynamique réduite, qui est monté dans un cadre en matière plastique, des procédés de préparation de ces articles et leur utilisation.
Des articles en forme de plaques en matière fragile, en particulier des plaques de verre ou de vitrocéramique, sont utilisés dans de nombreux domaines industriels et domestiques. Des exemples typiques sont des tables de cuisson en vitrocéramique, des plaques pour appareils à griller, des portes de fours à microondes, des tablettes de réfrigérateurs ou des plaques de revêtement pour congélateurs.
Pour protéger les bords des articles et pour faciliter leur manipulation, on entoure les plaques de matière fragile d'un cadre. Ces cadres sont en général constitués de matériaux qui présentent un coefficient de dilatation thermique différent de celui de la matière fragile. Les grandes différences des coefficients de dilatation thermique entraînent des problèmes, en particulier dans les applications dans lesquelles l'article est soumis à de fortes variations de température, comme dans le cas par exemple d'une surface de cuisson en vitrocéramique. De plus, il faut penser lors de la fabrication de l'article au fait que, malgré la différence de dilatation, en particulier pour les surfaces de cuisson en vitrocéramique, il faut assurer un assemblage étanche permanent entre la plaque et le cadre pendant toute la durée d'utilisation.
Pour fixer des plaques en verre, en vitrocéramique ou en une autre matière fragile dans un cadre de matière plastique ou de métal, on peut utiliser par exemple des colles à élasticité permanente (par exemple des colles à base de silicone ou analogue). Ces colles sont en mesure de compenser les différences de dilatation thermique en maintenant l'étanchéité.
Cette technique a quelques inconvénients. Ainsi, la colle nécessite par exemple un certain temps pour durcir. Dans le cas où on monte la plaque dans le cadre directement sur le lieu de fabrication, cela entraîne des cycles de fabrication très longs.
On connaît en outre des procédés de montage dits à sec, dans lesquels on serre les plaques de verre ou de vitrocéramique entre des pièces d'étanchéité à élasticité permanente. Ces pièces intermédiaires à élasticité permanente sont indispensables d'une part pour que, sous l'effet d'une contrainte mécanique, il ne puisse pas y avoir de contact direct entre la matière fragile et le cadre qui entraînerait une lésion de la surface et donc la cassure. D'autre part cette pièce intermédiaire compense les irrégularités de la surface plane et les différences de dilatation
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L'avantage du mode de réalisation mettant en couvre un réflecteur est qu'il permet de récupérer une plus grande partie du flux lumineux issu de la source lumineuse, une partie des rayons émis par la source 20 dans le demi-plan opposé à la plaque 40 étant récupérée et redirigée vers ladite plaque pour participer utilement au faisceau lumineux selon l'axe optique X. Dans une variante de l'invention représentée sur la figure 5 et mettant en oeuvre une esthétique particulière des zones L1 à L4, ces zones ne sont pas totalement lisses mais comportent des cylindres de grand rayon. Dans cette variante qui constitue une alternative en terme de style, les zones L1 à L4 demeurent optiquement neutres (le rayon des cylindres étant choisi suffisamment grand pour que la déviation des rayons lumineux lors de leur passage au travers desdits cylindres soit négligeable), et permettent ainsi de conserver un aspect de profondeur à une partie de la
surface du feu.
Les zones striées Si à S5 du feu des figures 1 et 2 s'étendent selon la direction verticale Z. Il est bien évident que l'invention n'est pas limitée à cette configuration spécifique. En particulier, les zones striées d'une part, et optiquement neutres d'autre part, peuvent former sur la surface de la plaque des motifs géométriques quelconques, tels que des bandes droites ou courbes, en fonction de l'effet esthétique recherché, le choix de la disposition des zones optiquement neutres déterminant la forme et l'aspect des zones du boîtier du feu visibles à travers la glace de fermeture et la plaque optique. Dans le cas d'un feu dans lequel l'essentiel de la lumière issue de la source lumineuse doit être dirigé vers les zones striées, I'homme du métier adaptera la géométrie des stries des faces interne et externe de la bonnette 30 en fonction de la répartition des zones lisses et striées sur la
plaque 40.
Enfin, selon l'invention la plaque optique 40 peut également faire office de glace de fermeture du feu, et des moyens peuvent être prévus pour assurer un étalement en largeur et en hauteur, en fonction des
règlements, de la lumière émanant de la plaque 40.
I Etat de la technique La présente invention concerne une installation
d'éclairage pour véhicule, comprenant:
- au moins une source lumineuse assurant une fonction lumi-
neuse, - au moins un réflecteur associé à cette source lumineuse et,
- au moins un élément de recouvrement associé à la source lu-
mineuse, élément qui cache au moins en partie, au moins une
source lumineuse.
On connaît une telle installation d'éclairage se-
lon le document DE 297 09 279. Cette installation d'éclairage est réalisée comme un feu et comporte une source lumineuse ainsi qu'un réflecteur associé à cette source. Un élément de
recouvrement est associé à cette source lumineuse pour recou-
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LISTAGE DE SEQUENCE PROMOTEURS CHIMERIQUES D'EXPRESSION, CASSETTES D'EXPRESSION, VECTEURS, PLANTES ET SEMENCES TRANSG NIQUES LES LES CONTENANT, ET METHODES DE LEUR OBTENTION Promoteur Chim,rique CoYMV/CsVMV 18 PatentIn Vers 2 0 1 243 ADN Artificial Sequence Fragment de 243 pb du promoteurde la r,gion inter g,nique du Commelina YellowMosaic Virus promoter (1) (243) Medberry, S L Lockhart, B E Olszewski, N E The Commelina Yellow Mottle Virus promoter is a strong promoter in vascular and reproductivetissues Plant Cet! 4 185-192 1992 1 JUSQU'A 243 1 atccgccgtc atcaatgacatcatcacagt actgaggagatgaatactta gccatgaagt 60 agcgtgcgaa tattacctat gcctttattc gcagcgttag tggcactgaa aggcataaag 120 tttgttcgtt cttatcaaaa acgaatcttatctttgtaac ttggttaccc ggtatgccgg 180 ttcccaagct ttatttcctt atttaagcac ttgtgtagta gcttagaaaa ccaacacaac 240
2 515 ADN Artificial Sequence Promoteur de la r, gion inter g,nique du Cassava Vein Mosaic Virus d'une s, quence de 515pb EMBL U59751 promoter (1) (515) Verdaguer, B.
Ainsi que le montrent les figures 1 et 2, les actionneurs 10a, 10b comprennent également un vérin 12a, 12b de recentrage à simple effet présentant un piston mobile 120a, 120b, ici intégré dans le corps 13a, 13b du vérin.
Chaque vérin 12a, 12b de recentrage comporte une chambre 121a, 121b relié à un circuit hydraulique de recentrage, non représenté sur les figures 1 et 2, indépendant du circuit principal correspondant. Lorsque la chambre 121a, 121b, est mise sous pression, le piston mobile 120a, 120b se déplace dans le corps 13a, 13b de la position de repos référencée 120 sur la figure 2 à un position extrme référencée 120'définie par la butée 15.
La course Cs du piston mobile 120 va sensiblement du fond 16 du corps 13 de vérin à la butée 15.
Bien entendu, de manière à ce qu'un des vérins de recentrage soit apte à amener la tige mobile de l'actionneur hydraulique correspondant dans une position de recentrage prédéterminée, il est prévu que les courses Csl et Cs2 respectives des pistons mobiles 120a, 120b soient telles que Csl+Cs2 = Cu.
Le fonctionnement de l'actionneur hydraulique de la figure 2 est le suivant.
Lorsque le circuit hydraulique de recentrage n'est pas alimenté, la chambre 121 n'est pas pressurisée. Dès la mise sous pression du circuit hydraulique principal, le piston mobile du vérin 12 de recentrage recule dans sa position de repos, référencée 120. La tige mobile 110 du vérin principal 11 peut alors parcourir sa course Cu complète sans tre perturbée par la présence du piston mobile 120. Lorsque le circuit de recentrage est alimenté, la pression dans la chambre 121 provoque le déplacement du piston mobile 120 qui vient en appui sur la tige mobile 110, si celle-ci est sortie, et exerce sur elle un effort qui l'amène dans sa position prédéterminée de recentrage définie par la mise en contact avec la butée 15 du piston mobile, alors référencé 120'. Si la tige mobile 110 est rentrée, le piston mobile 120 vient en appui sur la butée 15 sans entraîner la tige 110. Dans les deux cas, lorsque le piston 120 est sur la butée 15, la tige 110 ne peut sortir au-delà de la position prédéterminée de recentrage.
L'association de deux actionneurs 10a, 10b liés à la partie mobile 1 d'un mécanisme, comme représenté sur la figure 1, génère dans tous les cas, par complémentarité des effets produits par les actionneurs, un recentrage de ladite partie mobile 1. Ce recentrage est suivi d'un verrouillage de la tige mobile 110 en position de recentrage.