INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
10. 4. Obtention de pMRT1212 Le plasmide pMRT1212 (8987 pb) diffère de pMRT1206 par le remplacement du gène nptII par le gène bar.
Pour ce faire, le fragment vecteur pMRT1206 a été obtenu par digestion par Bsu36I de 2 ug de pMRT1206, purification à l'aide du kit Concert Rapid PCR Purification System , reprise dans 50 l de H2O et digestion par AatII. La digestion par Bsu36I et AatII a permis de déléter le vecteur du fragment correspondant à partie Pnos nptII Tnos LB . Le fragment vecteur digéré a ensuite été soumis à l'électrophorèse sur gel d'agarose à 1%, purifié à l'aide du kit Concert Rapid PCR Purification System , et repris dans 98 l de H2O. Puis, ce fragment vecteur digéré et traité a été déphosphorylé par 50 unités de phosphatase alcaline d'intestin de veau (New England Biolabs) dans un milieu réactionnel final de 120 l en présence de 12 l de tampon 3 x 10 (New England Biolabs) à 37 C pendant 1 heure, purifié à l'aide du kit Concert Rapid PCR Purification System , et repris dans 50 l de HO.
Les fragments ADN insert correspondant à partie Pnos bar Tnos LB (1,2 kpb), ont été obtenus par digestion par Bsu36I
de 2 pg de pMRT1202, purification à l'aide du kit Concert Rapid PCR Purification System, reprise dans 40 l de H2O, digestion par AatII, isolement par électrophorèse sur gel d'agarose à 1 %, purification à l'aide du kit Concert Rapid PCR Purification System, et reprise dans 50 l de H2O.
La ligation par réaction PCR a été réalisée comme décrite précédemment en 7, avec 100 ng de plasmide pMRT1206 digéré déphosphorylé et 50 ng de fragments ADN insert digérés.
Les bactéries, Escherichia coli DH5a rendues préalablement compétentes, ont été transformées. L'ADN plasmidique des clones obtenus, sélectionnés sur milieu LB supplémenté en kanamycine (50 mg/1), a été extrait selon la méthode de la lyse alcaline et vérifié par digestions enzymatiques et séquençage. Le plasmide résultant a été appelé pMRT1212. Il est représenté en figure 22 et sa séquence complète SEQ. ID22 est donnée dans le listage de séquences.
11. Evaluation des vecteurs synthétiques produits dans les bactéries Le rendement en quantité de plasmides obtenus à partir des bactéries Escherichia coli souche DH5a a été déterminé.
I Plasmides synthétiques non binaires Des précultures des bactéries recombinantes possédant les plasmides pMRT1105, pMRT1106 ou pMRT1105-ori ColEl ont été réalisées à partir de 500 ml de chacun des "glycérol-stock" respectifs dans 10 ml de milieu LB supplémenté en kanamycine à 50 mg/1, à 37 C pendant 16 heures. Puis, 500 ml de chacune des précultures ont été ensemencés dans 100 ml de LB supplémenté en kanamycine à 50 mg/1 à 37 C pendant 23 heures. Pour pMRT1106, deux cultures ont été effectuées, l'une sans ajout de chloramphénicol et l'autre avec ajout de chloramphénicol 40 mg/1 après 7 heures de culture. Les cultures ont ensuite été centrifugées à 5000 g pendant 10 min. Les ADN plasmidiques ont été extraits à l'aide de "QIAFilter Plasmid Midi kit" (QIAGEN) selon les recommandations du fabricant et dosés au spectrophotomètre. Les quantités de plasmides obtenus sont
dosées à 10 mg, 50,6 mg, 86,2 mg et 9,8 mg respectivement pour pMRT1105, pMRT1106, pMRT1106 traité au chloramphénicol et pMRT1105 ori ColEl (plasmide pMRT1105 dans lequel ori ColEl a été insérée en orientation inverse de celle de pMRT1106). Ces résultats montrent que les plasmides synthétiques se répliquent dans Escherichia coli., la présence de l'origine de réplication "ori ColEl" dans la bonne orientation (site NdeI de "ori ColEl" proche de "ori RK2") permet d'augmenter le rendement d'un facteur 5 tandis qu'aucun effet n'est mis en évidence pour l'orientation inverse de "ori ColEl", le traitement au chloramphénicol apporte un facteur 1,6 supplémentaire.
11.2. Plasmides binaires synthétiques.
Les plasmides binaires synthétiques pMRT1118 et pMRT1119 sont évalués par rapport aux témoins pBinl9 et pBIOC4. Le plasmide pBIOC4 diffère de pGA492 (An,1986) par la délétion de la quasi-totalité de la séquence codante du gène cat de pGA492 et par la conversion du site HindIII en site EcoRI. Il a été obtenu par double digestion par SacI et ScaI suivi de l'action de l'enzyme T4 DNA polymérase (New England Biolabs) et ligation du plasmide modifié (20 ng) dans un milieu réactionnel de 10 ul en présence de 1 l de tampon T4 DNA ligase x 10 (Amersham), 2,5 unités de T4 DNA ligase (Amersham) à 14 C pendant 16 heures. Les bactéries, Escherichia coli souche DH5[alpha], rendues préalablement compétentes, ont été transformées (Hanahan, 1983). L'ADN plasmidique des clones obtenus sélectionnés sur tétracycline à 12 mg/1, a été extrait selon la méthode de la lyse alcaline (Birnboim et Doly, 1979) et analysé par digestions enzymatiques.
Puis, le site HindIII de l'ADN plasmidique du clone retenu a été modifié en un site EcoRI à l'aide d'un adaptateur HindIII-EcoRI phosphorylé (Stratagene). Pour ce faire, 500 ng d'ADN plasmidique du clone retenu ont été digérés par HindIII, déphosphorylés par l'enzyme phosphatase alcaline d'intestin de veau (Boehringer Mannheim) selon les recommandations du fabricant et coprécipités en présence de 1500 ng d'ADN adaptateur HindIII-EcoRI, 0,1 volume d'acétate de sodium 3M pH 4,8 et 2,5 volumes d'éthanol absolu à - 80 C pendant 30 min.
Après centrifugation à 12000 g pendant 30 min., l'ADN précipité
a été lavé à l'éthanol 70 %, séché, repris dans 8 l de H2O, porté à 65 C pendant 10 min., puis ligaturé comme décrit précédemment. Après inactivation de la T4 DNA ligase à 65 C pendant 10 min., le mélange réactionnel de ligation a été digéré par EcoRI, purifié par électrophorèse sur gel d'agarose à 0,8 %, électroélué, précipité à l'éthanol absolu, centrifugé à 12000 g pendant 30 min., lavé à l'éthanol 70 %, séché, puis, ligaturé et introduit dans Escherichia coli souche DH5a, et traité comme décrit précédemment.
Des précultures des bactéries recombinantes possédant les plasmides cités ci-dessus, ont été réalisées à partir de 500 ml de chacun des "glycérol-stock" respectifs dans 10 ml de milieu LB supplémenté en kanamycine à 50 mg/1 excepté pour pBIOC4 sélectionné sur tétracycline à 12 mg/1, à 37 C pendant 16 heures. Puis, 250 ml de chacune des précultures ont été ensemencés dans 100 ml de LB supplémenté en l'antibiotique adéquat à 37 C pendant 23 heures. Les cultures ont ensuite été centrifugées à 5000 g pendant 10 min. Les ADN plasmidiques ont été extraits à l'aide de "QIAFilter Plasmid Midi kit" (QIAGEN) selon les recommandations du fabricant et dosés au spectrophotomètre. Les quantités de plasmides obtenus sont dosés à 94,2 mg, 113 mg, 37,2 mg et 45,6 mg respectivement pour pMRT1118, pMRT1119, pBinl9 et pBIOC4.
Un tel dispositif est assez complexe au niveau de sa réalisation et ne permet pas un ajustement continu de l'écartement des deux parois.
La présente invention vise à remédier à ces inconvénients en présentant un dispositif simplifié d'une grille de cuisson à parois articulées permettant un ajustement continu de l'écartement desdites parois, tout en permettant de maintenir fermement l'écartement souhaité lors de la cuisson.
La présente invention est atteinte à l'aide d'une grille de cuisson comportant au moins deux parois reliées entre elles par des moyens d'articulation permettant de les positionner sensiblement parallèle l'une à l'autre, caractérisée en ce que les moyens d'articulation entre les parois sont constitués d'une part de deux traverses fixées sur l'une des parois de la grille, perpendiculairement à celle-ci, et d'autre part de deux crochets fixés sur l'autre grille en présentant une inclinaison d'un angle a par rapport au plan défini par ladite grille, lesdites traverses étant susceptibles de coulisser dans les crochets uniquement lorsque les deux grilles sont inclinées l'une de l'autre d'un angle sensiblement égal à a. Ainsi, par des gestes simples, il est possible d'ajuster l'écartement entre les parois de la grille et de bloquer les parois dans cette position.
Selon l'invention, l'angle a est compris entre 20 et 40 , de préférence 30 , cette valeur permettant un verrouillage et un déverrouillage rapide par action sur les bords des parois opposés aux crochets et aux traverses.
Selon l'invention, le jeu entre les traverses et les crochets est inférieur à 1 mm et de préférence inférieur à 0,5 mm, permettant un blocage rapide des deux parois. Préférentiellement, la grille de cuisson comporte un dispositif de verrouillage constitué d'une tige comportant des encoches, ladite tige étant maintenue en rotation sur l'une des parois de la grille et susceptible de coopérer avec l'autre paroi afin de maintenir celle-ci entre deux encoches.
Ce dispositif permet de maintenir bloquées les deux parois l'une vers l'autre, les différentes encoches permettant de s'adapter à l'épaisseur de la préparation.
Selon une variante de réalisation de ce dispositif, les encoches sont réalisées par une torsade de la tige, permettant de réduire les coûts de fabrication. Avantageusement, la grille de cuisson comporte une poignée de préhension, orientée sensiblement perpendiculairement à l'une des parois, afin de faciliter le transport de la grille.
Selon une variante de réalisation, la poignée de préhension est montée en rotation sur l'une des parois de la grille, la tige étant couplée à ladite poignée, de sorte que le verrouillage des deux parois par la tige induise une quasi- perpendicularité entre ladite poignée et les parois.
La présente invention sera mieux comprise à l'aide de la description qui va suivre, en référence aux figures annexées, données à titre d'exemple non limitatif, parmi lesquelles - la figure 1 montre la grille dans une position où les deux parois sont dans une position de coulissement, - les figures 2a et 2b présentent un détail les moyens d'articulation, selon une des versions de réalisation, la figure 2a dans une vue de profil et la figure 2b dans une vue selon la coupe A-A de la figure 2a, - la figure 3 représente la grille en position verrouillée, - la figure 4 présente une variante de réalisation de l'agencement de la tige de verrouillage et de la poignée. La figure 1 présente une grille 1 composée de deux parois (10, 20), chacune des parois (10, 20) étant composée d'une armature périphérique (12, 22), de bords d'appui (18, 28) destinés au maintien de la grille sur l'appareil de cuisson. Par ailleurs, des tiges transversales de maintien (14, 24) permettent à la préparation 4 d'être localisée à l'intérieur de l'espace défini par les deux parois, tout en permettant d'exposer ladite préparation à une source de chaleur en vue de sa cuisson.
Les moyens d'articulation sont composés de deux éléments situés sur chacune des parois et constitués, d'une part, sur la paroi 10, de deux traverses 16 fixées sur l'armature périphérique 12 de ladite paroi, perpendiculairement à celle-ci, les deux traverses étant orientées dans le même sens, et d'autre part, sur la paroi 22, de deux crochets 26.
Les crochets 26 sont localisés sur l'armature 22, écartés l'un de l'autre de la même distance que sont écartées les traverses 16 afin que lesdites traverses soient susceptibles de coulisser à l'intérieur des crochets.
Cependant ces crochets sont inclinés d'un angle a par rapport au plan défini par la paroi portant ces crochets, comme le montre la figure 2a. Ainsi, ce n'est que dans cette position et autour de cette position, compte tenu du jeu entre les traverses 16 et les crochets 26, que les deux parois peuvent coulisser l'une vers l'autre.
La figure 3 montre le coulissement d'une traverse 16 dans un crochet 26. Le jeu est représenté par la différence D2 - D1, où D1 est en terme général l'épaisseur de la traverse, cette dernière n'étant pas forcément cylindrique comme dans l'exemple proposé, et où D2 est le diamètre interne du crochet 26. Ce jeu permet à la grille d'être introduite selon une incertitude autour de l'angle a.
A partir de cette position où les traverses 16 sont engagées dans les crochets 26, lorsque la grille 20 est redressée vers la grille 10, c'est à dire lorsque l'angle a diminue, les crochets vont venir buter contre les traverses et bloquer ainsi le coulissement des traverses dans les crochets. En jouant essentiellement sur la flexibilité de l'armature et des tiges transversales de maintien, la paroi 20 peut être amenée sensiblement perpendiculaire à la paroi 10.
Selon le matériau utilisé, il sera préférable de réduire le jeu entre les traverses et les crochets, afin de diminuer l'angle a. Une valeur typique mais non limitative du jeu entre les traverses et les crochets est inférieur au millimètre et de préférence inférieur à 0,5 mm, pour un angle a voisin de 30 .
II est ainsi possible d'obtenir un écartement désiré entre les parois, par coulissement des deux parois orientées l'une par rapport à l'autre d'un angle a, puis de bloquer cet écartement par redressement de la paroi 20 vers la paroi 10. Les facteurs de coulissement et de blocage sont fonction de différents paramètres, que sont - le jeu D2 - D1 déjà évoqué, - la longueur du bras de levier - le coefficient de frottement entre les traverses et les crochets.
La pile des types est initialement vide, le pointeur de pile est égal à zéro, et les types de registres sont initialisés avec les types des paramètres du sous-programme illustrant le fait que la machine virtuelle passe les paramètres de ce sous-programme dans ces registres. Les types de registres alloués par le sousprogramme sont initialisés aux types de données # illustrant le fait que la machine virtuelle initialise ces registres à zéro au début de l'exécution du sousprogramme .
Ensuite, une ou plusieurs passes de vérification sur les instructions et sur chaque instruction courante Ii du sous-programme sont effectuées.
A la fin de la passe de vérification mise en #uvre ou d'une succession de passes par exemple, le processus de vérification détermine si les types de registres contenus dans le tableau des types de registres représentés au tableau Tl de l'annexe ont changé pendant la passe de vérification. En l'absence de changement, la vérification est terminée et un code de succès est renvoyé au programme principal, lequel permet d'envoyer l'accusé de réception positif à l'étape 105 du protocole de gestion représenté en figure 2.
En présence d'une modification du tableau des types de registres précité, le processus de vérification
réitère la passe de vérification jusqu'à ce que les types de registres contenus dans le tableau des types de registres soit stable.
Le déroulement proprement dit d'une passe de vérification effectuée une ou plusieurs fois jusqu'à la stabilité du tableau des types de registres sera maintenant décrit en liaison avec les figures 3c à 3j.
Pour chaque instruction courante Ii, les vérifications suivantes sont effectuées : En liaison avec la figure 3a à l'étape 201, le processus de vérification détermine si l'instruction courante Ii est la cible d'une instruction de branchement, d'appel de sous-routine ou d'un gestionnaire d'exception, ainsi que mentionné précédemment. Cette vérification s'effectue par examen des instructions de branchement contenues dans le code du sous-programme et des gestionnaires d'exceptions associés à ce sous-programme.
En référence à la figure 3c ouverte par l'étape 201, lorsque l'instruction courante Ii est la cible d'une instruction de branchement, cette condition étant réalisée par un test 300 désigné par Ii=CIB, ce branchement étant inconditionnel ou conditionnel, le processus de vérification s'assure que la pile des types est vide à ce point du sous-programme par un test 301. Sur réponse positive au test 301, le processus de vérification est poursuivi par une étape suite de contexte noté suite A.
Sur réponse négative au test 301, la pile des types n'étant pas vide, la vérification échoue et l'appliquette est rejetée. Cet échec est représentée par l'étape Echec.
En référence à la figure 3d ouverte par l'étape suite A, lorsque l'instruction courante Ii est la cible
d'un appel de sous-routine, cette condition étant réalisée par un test 304 Ii=CSR, le processus de vérification vérifie en un test 305 que l'instruction précédente Ii-1 ne continue pas en séquence. Cette vérification est réalisée par une étape de test 305 lorsque l'instruction précédente constitue un branchement inconditionnel, un retour de sous-routine ou une levée d'exception. Le test à l'étape 305 est noté ainsi : Ii-1 = IBinconditionnel, retour RSR ou levée L-EXCEPT.
Sur réponse négative au test 305, le processus de vérification échoue en une étape Echec. Au contraire, sur réponse positive au test 305, le processus de vérification réinitialise la pile des types de façon que celle-ci contienne exactement une entrée de type retaddr, adresse de retour de la sous-routine précitée. Si l'instruction courante Ii à l'étape 304 n'est pas la cible d'un appel de sous-routine, le processus de vérification est poursuivi dans le contexte à l'étape suite B.
En référence à la figure 3e, lorsque l'instruction courante Ii est la cible d'un gestionnaire d'exceptions, cette condition étant réalisée par un test 307 noté Ii = CEM, CEM désignant la cible d'un gestionnaire d'exceptions, cette condition est réalisée par l'intermédiaire d'un test 307, noté : I i=CEM .
Le processus, sur réponse positive au test 307 vérifie que l'instruction précédente constitue un branchement inconditionnel, un retour de sous-routine ou une levée d'exeptions par l'intermédiaire d'un test 305 noté : Ii-1=IBinconditionnel, retour RSR ou levée L-EXCEPT.
Sur réponse positive au test 305, le processus de vérification procède à une réactualisation de la pile des types, à une étape 308, par une entrée de types des exceptions, notée type EXCEPT, l'étape 308 étant suivie d'une étape de suite de contexte, suite C. Sur réponse négative au test 305, le processus de vérification échoue par l'étape notée Echec. Le fragment de programme est alors rejeté.
En référence à la figure 3f, lorsque l'instruction courante Il est la cible d'une pluralité de branchements incompatibles, cette condition est réalisée par un test 309, lequel est noté : Ii=XIB incompatibles les branchements incompatibles étant par exemple un branchement inconditionnel et un appel de sous-routine ou encore deux gestionnaires d'exceptions différents. Sur réponse positive au test 309, les branchements étant incompatibles, le processus de vérification échoue par une étape notée Echec et le fragment de programme est rejeté.
Sur réponse négative au test 309, le processus de vérification est poursuivi par une étape notée suite D. Le test 309 est ouvert par l'étape suite C précédemment mentionnée dans la description.
En référence à la figure 3g, lorsque l'instruction courante Ii n'est la cible d'aucun branchement, cette condition étant réalisée par un test 310 ouvert par la suite D précédemment mentionnée, ce test étant noté Ii 3? cibles de branchement, désignant le symbole d'existence, le processus de vérification continue sur réponse négative au test 310 par passage à une actualisation de la pile des
types à une étape 311, l'étape 311 et la réponse positive au test 310 étant suivies d'une étape de suite de contexte à l'étape 202, décrite précédemment dans la description en liaison avec la figure 3a.
Une description plus détaillée de l'étape de vérification de l'effet de l'instruction courante sur la pile des types à l'étape 202 précédemment citée sera maintenant donnée en liaison avec la figure 3h.
Selon la figure précitée, cette étape peut comporter au moins une étape 400 de vérification que la pile d'exécution des types contient au moins autant d'entrées que l'instruction courante comporte d'opérandes.
Cette étape de test 400 est notée : Nbep > NOpi où Nbep désigne le nombre d'entrées de la pile des types et NOpi désigne le nombre d'opérandes contenus dans l'instruction courante.
Sur réponse positive au test 400, ce test est suivi d'une étape 401a de dépilement de la pile des types et de vérification 401b que les types des entrées au sommet de la pile sont sous-types des types des opérandes de l'instruction courante précitée. A l'étape de test 401a, les types des opérandes de l'instruction i sont notés TOpi et les types des entrées au sommet de la pile sont notés Targs.
A l'étape 401b, la vérification correspond à une vérification de la relation de sous-typage Targs sous-type de TOpi.
Sur réponse négative au test 400 et au test 401b, le processus de vérification échoue, ce qui est illustré par l'accès à l'étape Echec. Au contraire sur réponse
positive au test 401b, le processus de vérification est poursuivi et consiste à effectuer : - Une étape de vérification de l'existence d'un espace mémoire suffisant sur la pile des types, pour procéder à l'empilement des résultats de l'instruction courante. Cette étape de vérification est réalisée par un test 402 noté : Esp-pile Esp-résultats où chaque membre de l'inégalité désigne l'espace mémoire correspondant.
Sur réponse négative au test 402, le processus de vérification échoue, ce qui est illustré par l'étape Echec. Au contraire, sur réponse positive au test 402, le processus de vérification procède alors à l'empilement des types de données attribuées aux résultats en une étape 403, l'empilement étant effectué sur la pile des types de données attribuée à ces résultats.
A titre d'exemple non limitatif, on indique que pour la mise en #uvre de la figure 3h de vérification de l'effet de l'instruction courante sur la pile des types, pour une instruction courante constituée par une instruction Java saload correspondant à la lecture d'un élément entier codé sur p = 16 bits dans un tableau d'entiers, ce tableau d'entiers étant défini par le tableau d'entiers et un indice entier dans ce tableau, et le résultat par l'entier lu à cet indice dans ce tableau, le processus de vérification s'assure que la pile des types contient au moins deux éléments, que les deux éléments au sommet de la pile des types sont sous-types de short[] respectivement short, procède au processus de
dépilement et ensuite au processus d'empilement du type de données short comme type du résultat.
En outre, en référence à la figure 3i, pour la mise en #uvre de l'étape de vérification de l'effet de l'instruction courante sur la pile des types, lorsque l'instruction courante Ii est une instruction de lecture, notée IR, d'un registre d'adresse n, cette condition étant réalisée par un test 404 noté Ii=IRn, sur réponse positive au test 404 précité, le processus de vérification consiste à vérifier le type de données du résultat de cette lecture, en une étape 405, par consultation de l'entrée n du tableau des types de registres, puis à déterminer l'effet de l'instruction courante Ii sur la pile des types par une opération 406a de dépilement des entrées de la pile correspondant aux opérandes de cette instruction courante et par empilement 406b du type de données de ce résultat. Les opérandes de l'instruction Ii sont notés OPi. Les étapes 406a et 406b sont suivies d'un retour à la suite de contexte suite F. Sur réponse négative au test 404, le processus de vérification est poursuivi par la suite de contexte suite F.
En référence à la figure 3j, lorsque l'instruction courante Ii est une instruction d'écriture, notée IW, d'un registre d'adresse n, cette condition étant réalisée par un test noté Il=IWm, le processus de vérification consiste, sur réponse positive au test 407, à déterminer en une étape 408 l'effet de l'instruction courante sur la pile des types et le type t de l'opérande écrit dans le registre d'adresse n, puis, en une étape 409, à remplacer l'entrée du type du tableau des types de registres à l'adresse n par le type immédiatement supérieur au type
précédemment stocké et au type t de l'opérande écrit dans le registre d'adresse n. L'étape 409 est suivie d'un retour à la suite de contexte suite 204. Sur réponse négative au test 407, le processus de vérification est poursuivi par une suite de contexte suite 204.