INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Un procédé de détection de faibles quantités de mycobactéries, appartenant au complexe tuberculosis, par amplification génique et hybridation directement sur des échantillons biologiques a été mis au point. Ledit procédé utilise la séquence d'insertion IS611() (Brevet européen EP 0 490 951 B1). Thierry et al. ont décrit en 1990 une séquence spécifique du complexe Mycobacterium tuberculosis et nommée IS 6110. Certains auteurs ont proposé d'amplifier spécifiquement l'ADN provenant de Mycobacterium en utilisant des amorces nucléiques dans une méthode d'amplification, telle que la réaction de polymérase en chaîne (I > CR). Patcl et al. ont décrit en 1990 I'utilisation de plusieurs amorces nucléiques choisis à partir d'une séquence connue en tant que sonde dans l'identification de M. tuberculosis. Cependant, la longueur des fragments obtenue en utilisant ces amorces était différente dc la longueur théorique attendue et plusieurs fragments de taille variable étaient obtenus. De plus, les auteurs ont observé l'absence d'hybridation des produits amplifiés avec le plasmide ayant servi à déterminer les amorces. Ces résultats indiquent que ces amorces ne seraient pas appropriées dans la détection de la présence de M tuberculosis dans un échantillon biologique et confirment la nature critique du choix des amorces. La même année, J.L. Guesdon et D. Thierry ont décrit une méthode de détection dc M. Iziherculosis, de grande sensibilité, par amplification d'un fragment d'ADN de M tuberculosis localisc au sein de la séquence 1S6110 (Brevet européen EP 461 045) à l'aide d'amorces générant des fragments d'ADN amplifié de longueur constante, même lorsque le choix des amorces conduisait à l'amplification de fragments longs (de l'ordre de 1000 à 1500 bases) où le risque d'interruption de la polymérisation est élevée en raison des effets de la structure secondaire de la séquence. D'autres amorces spécifiques de la séquence IS6110 sont décrites dans le brevet européen N EP-0490 951.
Les inventeurs ont montré que certains isolats cliniques de Mycobacterium tuberculosis étaient exempts de la séquence d'insertion IS6110 et ne pouvaient donc être détectés à l'aide des oligonucléotides spécifiques de cette séquence. L'absence de la séquence IS6110 chez certaines souches de M tuberculosis peut conduire ainsi à des résultats de diagnostic faussement négatifs. Parmi les isolats ne contenant pas la séquence IS6110, peuvent être cités les souches 729, 761, 808, 327 et 50, de M. tuberculosis, qui constituent des isolats cliniques plus partiuclièrement décrits ci-après dans les exemples. Ces résultats confirment une observation similaire faite par Yuen et al. en 1993. L'impossibilité de détecter ces souches pathogènes potentiellement présentes dans un échantillon biologique prélevé sur tin patient est ainsi susceptible de conduire à des difficultés de diagnostic et à la sélection de souches exemptes de la séquence IS6110..
En conséquence, les inventeurs se sont attachés à rechercher des séquences communes aux différentes souches de mycobactéries appartenant au complexe de AJycobacterizrn tuberculosis et qui ne comportent pas les inconvénients des séquences de l'art antérieur. En particulier, les inventeurs ont recherché des séquences qui peuvent être retrouvées dans toutes les mycobactéries appartenant au complexe tuberculosis, y compris chez les souches qui ne contiennent pas la séquence IS 6110.
Les inventeurs ont ainsi caractérisé un polynucléotide constitué par une séquence de nuclotides présente chez toutes les souches testées de mycobactéries appartenant au complexe de Mycobacterium tzzherczxlosi.vs y compris chez les souches qui ne contiennent pas la séquence IS6110. Cette séquence de nucléotides contient un cadre ouvert dc lecture (ORF) codant pour un polypeptide de 27 kD. De plus, des signaux de régulation de l'expression de la séquence codante ont été identifiés en amont et en aval de cette dernière.
Ainsi, I'invention concerne un polynucléotide de 2805 paires de bases, spécifique du complexe de tuberculosis. Ce polynucléotide inclut la séquence correspondant à un gène de structure appelé p27, qui code pour une protéine de poids moléculaire d'environ 27 kDa, apprécié avec une marge d'erreur de 10%.
Par gène de structure aux fins de la présente invention, on entend un polynucléotide codant pour une protéine, un polypeptide ou encore un fragment de ces derniers, ledit polynucléotide ne comprenant que la séquence correspondant au cadre ouvert de lecture (ORF), ce qui exclut les séquences du côté 5' du cadre ouvert de lecture (ORF) qui dirigent l'initiation de la transcription.
On entend par polynucléotide ou acide nucléique, selon la présente invention, aussi bien Un ADN double brin, un ADN simple brin que des produits de transcription desdits ADN.
Par polynucléotide de séquence complémentaire. on entend tout ADN dont les nucléotides sont complémentaires de ceux de la SEQ ID N l ou d'une partie de la SEQ ID Nol, et dont l'orientation est inversée.
Une hybridation dans des conditions de forte stringence signifie que les conditions de température et de force ionique sont choisies de telle manière qu'elles permettent le maintien dc l'hybridation entre deux fragments d'ADN complémentaires.
A titre illustratif, des conditions de stringence de l'étape d'hybridation aux fins de définir les fragments polynucléotidiques décrits ci-dessus, sont avantageusement les suivantes l'hybridation est réalisée à une température préférentielle dc 65 C, en présence de tampon 6 x SSC, 5 x de solution de Denhardt, 0,5% SDS et 100 tig/ml d'ADN dc sperme de saumon.
1 x SSC correspond à 0,15 M NaCI et 0,05M citrate de Na et une solution de I x Denhardt correspond à 0,02% Ficoll, 0,02% de polyvinylpyrrolidone et 0,02% de sérum albumine bovine.
Les étapes de lavage peuvent, par exemple, être les suivantes - deux lavages de 5 min, préférentiellement à 65 C, dans un tampon 2 x SSC et 0,1% SDS; - un lavage de 30 min, préférentiellement à 65 C, dans un tampon 2 x SSC et 0,1% SDS; - un lavage de 10 min, préférentiellement à 65 C, dans un tampon de 1 x SSC et 0,1% SDS.
L'invention concerne également un polynucléotide comprenant le cadre ouvert de lecture codant pour un polypeptide d'un poids moléculaire de l'ordre de 27 kD. Selon un mode de réalisation préféré dudit polynucléotide, il est constitué d'une séquence présentant un cadre de lecture ouvert (ORF) qui comporte à son extrémité 5' le codon ATG, et à son extrémité 3' le codon TGA.
Selon une modalité avantageuse de cette disposition, ledit polynucléotide comprend les nucléotides 934-1665 du polynucléotide de séquence SEQ ID N l et les fragments de celui-ci, ainsi que les séquences qui présentent au moins 80 % d'homologie avec ledit polynucléotide ou lesdits fragments. Par pourcentage d'homologie au sens de la présente invention, on entend un pourcentage d'identité entre les bases des deux polynucléotides homologues, ce pourcentage étant purement statistique et les difïérences entre les deux polynucléotides étant réparties au hasard et sur toute leur longueur.
EXEMPLE 5 PREPARATION D'UNE COMPOSITION SELON L'INVENTION SIMILAIRE A L'EXEMPLE 2, AVEC VARIATION DU RAPPORT DES POURCENTAGES MOLAIRES 2ETHYLHEXANOL/UNILIN(8)425.
On opère comme dans l'exemple 2 en utilisant les mêmes réactifs mais selon des quantités différentes. Ainsi, on introduit - 100 ml d'heptane (solvant), - 87,3 g (0,190 mole) d'Unilin8425, - 2,8 g (0,022 mole) de 2-éthylhexanol, Soit un rapport des pourcentages molaires 2-éthylhexanol/Unilin8 425 de 10/90, - 53,6 g (0,546 mole) d'anhydride maléique, - 109,5 g (0,440 mole) d'oxyde de dibutylétain.
On introduit, comme dans l'exemple 2, 64 g de Valfor()100 après la distillation sous pression résuite de l'heptane et de l'eau formée.
On obtient environ 315 g de la composition soit un rendement pondéral voisin de 100 %. Le pourcentage pondéral d'étain de la composition ainsi obtenue est de 16,6 %. Le spectre infra-rouge présente des bandes d'absorption similaires à celles de la composition de l'exemple 2.
EXEMPLE 6 PREPARATION DUNE COMPOSITION SELON L'INVENTION SIMILAIRE A L'EXEMPLE 2, AVEC VARIATION DU RAPPORT DES POURCENTAGES MOLAIRES ETHVLHEXANoL/UNILINB425.
On opère comme dans l'exemple 2 en utilisant les mêmes réactifs mais selon des quantités différentes. Ainsi, on introduit - 100 ml d'hexane (solvant), - 70,2 g (0,153 mole) d'Unilin8425, - 19,9 g (0,153 mole) de 2-éthylhexanol, Soit un rapport des pourcentages molaires 2-éthylhexanol/Unilin 425 de 50/50, - 53,6 g (0,546 mole) d'anhydride maléique, - 109,5 g (0,440 mole) d'oxyde de dibutylétain.
On introduit, comme dans l'exemple 2, 64 g de ValforB100 après la distillation sous pression réduite de l'heptane et de l'eau formée.
On obtient environ 314 g de la composition soit un rendement pondéral voisin de 100 %. Le pourcentage pondéral d'étain de la composition ainsi obtenue est de 16,6 %. Le spectre infra-rouge présente des bandes d'absorption similaires à celles de la composition de l'exemple 2.
EXEMPLE 7 PREPARATION D'UNE COMPOSITION SELON L'INVENTION, UTILISANT L'UNILIN 550 EN REMPLACEMENT DE L'UNILIN(!)425.
On opère comme dans l'exemple 2 en utilisant les réactifs selon les quantités suivantes - 100 ml d'heptane (solvant), - 82,5 g (0,150 mole) d'Unilin8550, - 8,2 g (0,063 mole) de 2-éthylhexanol, Soit un rapport des pourcentages molaires 2-éthylhexanol/Unilin8 550 de 30/70, - 53,6 g (0,546 mole) d'anhydride maléique, - 109,5 g (0,440 mole) d'oxyde de dibutylétain.
On introduit, comme dans l'exemple 2, 64 g de ValforB100 après ia distillation sous pression réduite de l'heptane et de l'eau formée.
On obtient environ 31 5 g de la compostion soit un rendement pondéral voisin de 100 %. Le pourcentage pondéral d'étain de la composition ainsi obtenue est de 16,6 %. Le spectre infra-rouge présente des bandes d'absorption similaires à celles de la composition de l'exemple 2.
Il Préparation des compositions de PVC, ci-après désignées par formulations PVC, contenant les compositons de maléates d'organoétain précédemment préparées et évalutation des propriétés stabilisantes et rhéologiques desdites compositions de maléates d'organoétain.
ON PREPARE LES FORMULATIONS PVC SELON LES CONDITIONS OPERATOIRES SUIVANTES (LES QUANTITES DES MATIERES UTILISEES SONT EXPRIMEES EN POIDS) On introduit dans un mélangeur rapide Henschel muni d'une double enveloppe, avec une vitesse d'agitation de 3 800 tours/minute - 100 parties de résine PVC (Lacovyl S 110 P).
Fabrication de l'hvdrolysat végétal: Prendre 500 kg de graines d'orge vulgaire.
Dans une serre ou une enceinte humide fermée (la saturation en vapeur d'eau est souhaitable), chauffée à 25"C, éclairée selon un rythme nychtéméral de 10 heures de nuit pour 14 heures de jour, on réalise la germination des graines. Sur une table de germination, composée d'un plateau disposant d'un géotextile de type inerte (bidim), on dépose les graines sur le géotextile. Une irrigation adaptée est réalisée. On veillera à ce que de l'air ambiant puisse circuler dans l'enceinte pour permettre les apports d'oxygène nécessaires à la germination et à la croissance des jeunes pousses.
Lorsque les graines germent, et avant formation des feuilles, on collecte graines et jeunes pousses que l'on broie très finement pour les faire passer au travers d'un tamis de 2/10 de mm.
Cette pâte est mélangée à un complément d'eau propre pour obtenir une quantité de 200 litres de mélange que l'on laissera s'hydrolyser naturellement pendant 48 heures dans une enceinte froide à 4"C.
Processus d'hydrolysat utilisé Le mélange à hydrolyser est maintenu dans une enceinte fermée à basse température, brassé lentement grâce à un agitateur à pales qui évite les stratifications dans la masse du produit. Cet agitateur à pales est placé dans l'axe vertical, les pales se situant en partie basse de l'enceinte, permettant, avec une forme en hélice, de faire remonter le liquide de fond vers la surface. Les vitesses ascensionnelles seront de l'ordre de 0,5 cm minute.
Au bout de 48 heures de brassage lent et froid, on collectera par centrifugation l'hydrolysat que l'on pourra stocker en enceinte froide, soit utiliser directement dans le mélange final.
Les restes du gâteau provenant de la filtration seront intégrés dans la fabrication du mélange final.
Fabrication du fertilisant: Prendre une cuve fermée de 1200 litres, résistant une pression interne de 4 bars, et équipée d'une purge de gaz à cette pression, équipée d'un robinet de vidange. Cette cuve sera équipée d'une porte avant d'évacuation, équipée d'un joint haute pression.
Mélanger le broyat végétal suractivé en azote gazeux, avec la pâte d'os de bovins, avec le broyat de résidus de poissons. Brasser le tout dans un pétrin, avec 350 kg d'amidon naturel de froment biologique et les reste du gâteau provenant de la filtration de lthydrolysat.
L'ensemble sera progressivement enrichi avec 50 kg de sang de bovin séché additionnée de 200 litres de liquide d'hydrolysat végétal.
La pâte en phase semi-liquide sera versée dans la cuve fermée.
L'ensemble sera ensemencé de 1500 grs de Nitrobacters et de Pseudomonas provenant d'un fermenteur, et de 15 kilogrammes de Rhizobium provenant de racines de Pisum maritimum récoltées en fin de saison, lavées et broyées finement.
L'appareillage sera clos, et maintenu à température de 29"C (plus ou moins 1"C) pendant 37 jours. On vérifiera que la pression interne ne dépassera pas 4 bars. En cas de dépassement, on purgera automatiquement.
L'ensemble sera agité par une circulation lente d'azote gazeux injecté par des pipes en base de cuve, et collecté en sommet de cuve. Cette circulation sera réalisée en injectant 250 litres heure d'azote gazeux à 2 bars, azote qui sera collecté par une pompe à gaz et réinjecté immédiatement dans la circulation. Ce mélange gazeux se déchargera progressivement en oxygène, au fur et à mesure de sa consommation pendant la réaction aérobie, et se chargera progressivement en H2S et autres gaz de type CH4 provenant de la fermentation.
Ce mélange gazeux devra rester totalement exempt d'oxygène, à l'abri de toute flamme ou point d'élévation thermique risquant de le faire exploser.
On arretera la réaction en faisant monter la température de l'enceinte à 40"C pendant 3 jours.
L'extrémité du vilebrequin 1, destinée à être raccordée à la transmission non figurée d'un véhicule, se termine par un plateau 2 venant de fonderie avec le vilebrequin 1 et s'étendant perpendiculairement à l'axe de ce dernier. Ce plateau 2 sert au centrage et à l'accouplement en rotation d'un volant d'inertie 3.
Le plateau 2 présente plusieurs taraudages 4 (sept dans l'exemple illustré) usinés parallèlement à l'axe du vilebrequin et irrégulièrement repartis sur un même diamètre, les entraxes de trous évoluent le long du diamètre.
L'emploi des taraudages 4 d'entraxes différents permet d'opérer simplement le détrompage du volant 3 lors de son montage sur le vilebrequin 1.
Ces trous taraudés 4 qui servent à l'assemblage du volant 3 sur le plateau 2 par des vis de fixation 9, sont agencés autour d'un épaulement annulaire 5 en saillie axiale qui est destiné à venir s'emboîter dans un alésage 6 correspondant du volant d'inertie 3 pour opérer le centrage de ce dernier.
Le volant d'inertie 3 présente classiquement une première couronne dentée 7 destinée à engrener avec le pignon non figuré du démarreur ainsi qu'une seconde couronne dentée 8, qui dans l'exemple illustré est montée frettée à la périphérie du volant 3. La seconde couronne 8 est plus particulièrement destinée à servir de cible pour un capteur de position angulaire non figuré, monté fixe sur le bâti du moteur. Cette seconde couronne 8 coopère, lorsqu'elle est rapportée sur le volant 3, avec un dispositif de détrompage non figuré, tel qu'un pion de centrage, qui assure le positionnement précis de sa ou ses dents longues sur le volant 3.
Le volant d'inertie 3 présente par ailleurs, des trous de passage cylindriques 10 pour les vis de fixation 9, ces trous de passage sont usinés axialement autour de l'alésage central 6 de façon à pouvoir être positionné en correspondance avec les taraudages 4.
La fixation du volant d'inertie 3 sur le vilebrequin 1, est donc opérée au moyen de vis 9 identiques traversant les trous de passage 10 du volant 3 et venant se serrer dans les taraudages 4 du plateau 2.
En se reportant plus particulièrement à la figure 3, on voit que chaque vis est du type comportant une tête 90 par exemple hexagonale destinée à venir bloquer le volant contre le plateau du vilebrequin, la tête 90 se prolongeant par une tige cylindrique 91 filetée. Le filetage peut être réalisé sur toute la longueur de la tige 91 y compris dans la partie 93 sous la tête qui est destinée à venir se loger dans un trou de passage 10 du volant d'inertie 3, ou bien encore se limiter à l'extrémité 92 opposée à la tête, la partie 93 sous la tête étant alors parfaitement lisse.
La partie 93 sous la tête des vis 9 est de préférence usinée avec la meilleure précision possible, par exemple de façon que l'intervalle de tolérance sur le diamètre de la tige soit inférieur à 0,1 mm.
Selon l'invention, le calage angulaire du volant d'inertie 3 sur le vilebrequin 1, est obtenu par la simple mise en butée du volant 3 contre l'une des vis 9. La partie sous la tête de cette vis référencée 9' définit donc une surface d'appui dont la position sert de repère de positionnement angulaire du volant d'inertie 3 par rapport au vilebrequin 1.
Pour ce faire, l'un des trous de passage 10, le trou référencé 10' sur la figure 2, est usiné avec un diamètre nominal sensiblement inférieur à celui des autres trous de passages.
Ainsi, pour une vis de diamètre 9 mm, le diamètre du trou 10' est de 9,3 mm tandis que les autres trous 10 ont un diamètre de 9,5 mm. Le trou 10' est de préférence usiné avec la meilleure précision possible, par exemple de façon que l'intervalle de tolérance sur le diamètre soit inférieur à 0,05 mm.
La dimension du trou 10' est adapté de façon que le jeu radial entre la vis 9' venant se loger dans le trou 10' et ce dernier, soit très sensiblement inférieur aux jeux des autres vis 9 dans leurs trous respectifs 10.
Aussi, lors de la simple mise en place des vis 9 dans les perçages 10 puis dans les taraudages corespondants 4, le volant d'inertie 3 ne peut plus pivoter par rapport au plateau 2, que du seul jeu existant entre le diamètre nominal de l'orifice 10' et celui de la vis 9' logée dans ce dernier. Par conséquent, la rotation du volant 3 par rapport au vilebrequin 1 conduit le volant 3 à venir en butée contre la vis 9'.
Il suffit donc de ne serrer les vis 9 qu'après avoir fait pivoter le volant 3 dans le sens normal de rotation du vilebrequin 1, flèche S de la figure 2, par rapport au plateau 2 jusqu'à mettre le corps de la vis 9' en butée contre la paroi intérieure du trou de passage 10' pour obtenir un calage angulaire extrêmement précis.
Cette précision résulte de la suppression totale des jeux entre le diamètre des vis 9 et des trou 10, puisque le volant est en butée. La précision est encore améliorée par la précision de l'usinage du trou 10' et de la partie sous tête des vis 9.
L'invention est relative à une méthode de diagnostic non-invasive des encéphalopathies subaiguës spongiformes transmissibles (ESST).
Les ESST constituent à l'heure actuelle un problème majeur de santé publique. Afin de prévenir leur développement il est en particulier nécessaire de disposer d'outils permettant un diagnostic fiable, et le plus précoce possible.
La tremblante du mouton est une ESST dont les symptômes cliniques sont connus de longue date, et qui a fait l'objet de nombreux travaux ; à ce titre, elle peut être considérée comme un modèle pour l'étude des ESST.
La tremblante se manifeste par une longue période d'incubation asymptomatique, suivie d'une phase clinique de courte durée, où se manifestent les symptômes d'une atteinte neurologique (altérations comportementales, prurit, atteinte de la coordination motrice). Le diagnostic précoce est extrêmement difficile à établir, car il n'est pas possible de mettre en oeuvre les méthodes immunologiques classiquement utilisées pour d'autres maladies infectieuses, du fait qu'aucune réponse immunitaire spécifique de l'agent infectieux n'a pu être mise en évidence [SCHREUDER,. Vet. Quart., 16, 174-192, (1994)].
I1 a été proposé de diagnostiquer les ESST par la détection électrophysiologique des modifications fonctionnelles qu'elles induisent dans le système nerveux central [COURT and BERT, Pathol. Biol. 43, 25-42, (1995)] ; cependant cette approche n'est pas applicable pour un diagnostic de routine.
Les Inventeurs ont recherché une approche différente du diagnostic des ESST, et ont choisi d'étudier la possibilité de détecter des altérations éventuelles des fonctions neuroendocrines. Quelques observations faites antérieurement permettent en effet de supposer l'existence de telles altérations ; KIM et al.
[Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 189, 21-27, (1988)] ont observé une prise de poids chez la souris en phase préclinique de tremblante, et ont émis l'hypothèse qu'elle pourrait être due à l'effet de la maladie sur les surrénales, par l'intermédiaire de 1'ACTH dont la sécrétion par l'hypophyse est influencée par l'hypothalamus. Chez des hamsters infectés par la tremblante, CARP et al. [J Infect. Dis. 161, 462-466 (1990)], ont également observé une augmentation de la taille des surrénales, et YE et al. [Acta Neuropathol.
88, 44-54 (1994)] ont constaté une augmentation significative des neurones marqués par un anticorps anti CRF dans le noyau préoptique de l'hypothalamus. Chez l'homme, PORTALUPPI et al. [Hypertension, 23, 569-576, (1994)] ont observé une augmentation des concentrations de cortisol chez un patient atteint d'un autre type d'ESST, l'insomnie familiale fatale.
Les Inventeurs ont dans un premier temps vérifié si des altérations du fonctionnement de l'axe hypothalamo-hypophysaire pouvaient être observées de manière reproductible dans les cas d'ESST, et ont plus particulièrement recherché dans ce but d'éventuelles modifications de la fonction corticosurrénalienne chez des moutons atteints de tremblante par rapport aux moutons sains.
Une première étude préliminaire leur a permis de constater un niveau moyen de cortisolémie en moyenne 4 fois plus élevé dans une population de moutons atteints de tremblante, par rapport à une population témoin de moutons sains. Cependant, ils ont également constaté que cette augmentation de la cortisolémie ne se reflétait pas systématiquement au niveau individuel, le taux de cortisol pouvant varier de manière importante chez un même individu, selon les conditions de prélèvement. En effet, la sécrétion du cortisol est soumise à des fluctuations d'origine endogène (pulsatilité et rythme circadien des sécrétions) ou exogène (en particulier réponse au stress des manipulations).
De ce fait, le cortisol ne répond pas aux critères de spécificité et sensibilité exigés d'un marqueur diagnostique.
Les Inventeurs ont également observé une augmentation des concentrations plasmatiques de certains métabolites du cortisol, à savoir le 20ss-dihydrocortisol et la cortisone chez les moutons atteints de tremblante, et ont ainsi pu établir que ces métabolites, comme le cortisol, reflètent le niveau de l'activité corticotrope des brebis. Ils ont également constaté que la concentration de ces métabolites n'est pas soumise aux mêmes fluctuations brusques que celle du cortisol.
Ces métabolites constituent donc, contrairement au cortisol, un marqueur diagnostique fiable des altérations de la fonction corticosurrénalienne, et en particulier des dysfonctionnements liés aux ESST.
Les Inventeurs ont en outre constaté chez les moutons atteints de tremblante, une augmentation significative des concentrations urinaires de certains métabolites du cortisol, à savoir le 20ss-dihydrocortisol, la 20ss-dihydrocortisone et la cortisone. Le dosage de ces composés dans les urines peut donc également permettre le diagnostic de dysfonctionnements de la fonction corticosurrénalienne, en particulier de ceux liés aux ESST.
La présente invention concerne donc l'utilisation d'au moins un métabolite du cortisol, choisi dans le groupe constitué par le 20ss- dihydrocortisol, la 20ss-dihydrocortisone, et la cortisone comme marqueur spécifique pour le diagnostic in vitro d'un dysfonctionnement de la fonction surrénalienne induit par une ESST.