INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le carbone méthylique porté par l'amine en C20 apparalt à 34.0 ppm, celui porté par l'amine en C3, à 34,7 ppm pour la cyclobuxine et 35.8 ppm pour la cyclovirobuxine D.
La présence d'une fonction hydroxyle sur le carbone 16 est confirmé par le déplacement chimique du proton H16 qui apparaît sous forme dun multiplet à 4,10 ppm et celui du carbone 16 à 78,8 ppm.
Parmi les autres signaux communs aux deux molécules, il est facilc de repérer ceux du pruton H19 (multiplct à 2,49 ppm). des protons méthyliques en C21 (doublet à 1,09 ppm, J = 6,5 Hz), en C18 et C32 (singulet à 0.96 et 1,1 1 ppm).
Ce qui signe nettement la différence entre les deux molécules, c'est le déplacement chimique des protons éthyléniques pour la cyclobuxine D (singulet large à 4.80 et 4.57 ppm) et des piotons méthyléniques pour la cyclovirobuxine D (singulet à 0,74 et 0,94 ppm).
Les déplacements chimiques des carbones 3 et 5 étant également modifiés (63,9 et 44,9 ppm pour la cyclobuxine D contre 68,8 et 48,8 ppm pour la cyclovirobuxine D) de même que celui du proton H3 (doublet dédoublé à 2,88 ppm. J1 = 10 Hz et J2 = 3 Hz, pour la cyclobuxine D contre 1,95 ppm pour la cyclovirobuxine D).
Les spectres de corrélation (Cosy, X-H. HMBC) confirment ces structures.
Buxamine E
Les spectres présentent une très grande similitude avec ceux de la buxamine G puisqu'il n'y a qu'un groupement méthyle dc différence.
Sur le spectre de masse, l'ion moléculaire apparaît à m/z 384 ct les ions ont une différence de masse dc 14 avec ceux observés pour la buxamine G.
Cyclobuxouhylline M
L'ion moléculaire apparaissant à m/z 369, révèle que ce composé est un alcaloïde monobasique (nombre impair d'atomes d'azote).
Sur le spectre de masse, sc retrouvent les ions caractéristiques des groupements méthylamino- substituant le carbone 3 : les ions M-15 (m/z 354; 11) et à m/z 70 (48), m/z 58 (9), m/z 57 (100) et m/z 44 (10).
Egalement caractéristique de cc composé, l'ion M-43 (m/z 326, 6)* RMN Le déplacement des protons H19 qui apparaissent sous forme de doublet à 0,38 et 0,63 ppm (J =4Hz), révèle la présence d'un groupement cyclopropyle et permet dc rattacher ce composé au groupe des 9ss,19-cyclo-5-α-pregnanes.
Lc proton H20 apparaît sous forme d'un quadruplet (J = 7.5 Hz), par couplagc avec les protons méthyliques en C21. d 6 55 ppm (dérivé rrans) ou 5.71 ppm (dérivé cis). Les protons méthyliques en C21 apparaissant sous forme d'un doublet (J = 7,5 Hz) à 1,82 ppm (dérivé trans) ou 20,9 ppm (dérivé cis).
Les autres protons méthyliques. en C18, C30, C31 ct C32, ont des déplacements chimiques de 0.76. 0,94, 0,95 et 1.32 ppm à à l'exception de ceux du groupement méthyle porté par l'azote en C3 et qui apparaissent à 2,44 ppm sous forme d'un singulet Sur le spccue de RMN 13C, Ic carbone 16. porteur de la fonction cétone, apparaît à 207 ppm.
Selon une caractéristique du moteur à combustion interne objet de l'invention, l'élément obturateur est formé par un boisseau.
: On comprendra mieux les buts, aspects et avantages de la présente invention, d'après la description donnée ci-après d'un mode de réalisation de l'invention, donné à titre d'exemple non limitatif, en se référant au dessin annexé, dans lequel la figure 1 est une vue schématique partielle en coupe d'une culasse pour moteur à combustion interne selon l'invention.
Conformément à la figure 1, la culasse référencée 1 est celle d'un moteur à combustion interne multicylindre à injection indirecte de carburant de type multipoint. Seuls ont été figurés les éléments de la culasse 1 permettant la compréhension de l'invention.
Sur la figure 1, on voit un conduit d'admission 2 s'étendant transversalement à travers la culasse 1 entre une face latérale de cette dernière et une chambre de combustion 3 définie entre la face inférieure de la culasse 1 et le carter moteur, non figuré, s'étendant sous la culasse 1.
Le conduit d'admission 2 débouche dans la chambre de combustion 3 par un orifice d'admission 5 que vient classiquement obturer une soupape à tige 4. La tête évasée de la soupape 4 repose en appui contre un siège rapporté, monté fretté dans la culasse 1, entourant l'orifice 5.
Un injecteur de carburant 6 est logé dans un alésage correspondant de la culasse 1 débouchant dans= le conduit 2 à proximité de la soupape d'admission, de sorte que le jet de carburant issu du nez de l'injecteur 6 soit dirigé vers l'orifice d'admission 5.
Une vanne rotative 7 de type boisseau, pilotée selon les conditions de fonctionnement du moteur par des moyens appropriés non figurés, commande le débit des gaz d'admission. La vanne 7 est montée dans un évidement correspondant cylindrique 8 ménagé à travers la culasse 1 et débouchant dans la partie inférieure du conduit d'admission 2.
Cette vanne 7 a pour objet de modifier en position active d'obturation l'aérodynamique du conduit 2 de façon à générer un mouvement de rotation ordonné approprié de la charge dans la chambre de combustion 3 de type Tumble (tourbillon d'axe perpendiculaire à l'axe du cylindre). La vanne et son logement sont conformés pour que celle-ci épouse la forme du conduit 2 en position de repos de façon à n'engendrer alors aucune perte de charge.
Pour éviter toute accumulation de carburant dans l'évidement 8 lorsque la vanne 7 est manoeuvrée en position active, un canal relie le fond de celui-ci au conduit d'admission 2 au voisinage de l'orifice d'admission 5. Un tel canal est réalisé simplement selon l'exemple illustré par un perçage droit 9. Le carburant recueilli dans l'évidement 8 peut ainsi s'écouler en continue non seulement par gravité lorsque le perçage est incliné vers l'orifice d'admission 5 comme cela est figuré, mais également par aspiration grâce au débit d'air traversant le perçage 9 lors de l'ouverture de la soupape d'admission 4.
Pour éviter que le jet d'air à la sortie du perçage 9 ne vienne contrarier le mouvement aérodynamique créé par la vanne 7, la direction du perçage 9 est adaptée en conséquence. En particulier le perçage est incliné latéralement de façon à ne pas diriger son jet sur la tige de la soupape.
Ainsi la présente invention n'est pas limitée au seul élément obturateur 7 du type boisseau décrit conformément à la figure 1, mais elle concerne également tous les types d'éléments obturateurs qu'ils soient rotatifs ou coulissant, du moment qu'ils viennent se loger dans un évidement 8 débouchant dans la partie inférieure du conduit d'admission 2 et que cet évidement 8 soit susceptible d'accumuler du carburant.
De même, l'invention concerne tous les types de moteurs, qu'ils soient à allumage commandé ou à allumage par compression, et à injection directe ou injection indirecte.
AGENCEMENT DE CONDUCTEUR EN PARTICULIER POUR LIGNE ELECTRIQUE A ISOLATION GAZEUSE.
La présente invention se rapporte à un agencement de conducteur en particulier pour ligne électrique à isolation gazeuse.
Par promoteur approprié on entend tout promoteur fonctionnel dans la cellule-hôte destinée à héberger la cassette d'expression.
Une cassette d'expression conforme à l'invention peut également comprendre en outre une ou plusieurs séquence(s) d'acide nucléique permettant d'améliorer la sécrétion de la penaeidine ou de son fragment par la cellule-hôte, par exemple une séquence codant pour un peptide signal. La séquence d'acide nucléique codant pour le peptide signal est placée à l'extrémité 5' de la séquence d'acide nucléique codant pour la penaeidine ou son fragment.
La séquence d'acide nucléique codant pour le peptide signal peut être une séquence codant pour un peptide signal de penaeidine, ou bien une séquence codant pour un peptide signal hétérologue. On choisira une séquence qui comprend à l'extrémité C-terminale un site de protéolyse capable d'être reconnu par une signal-peptidase de la cellule hôte destinée à héberger la cassette d'expression.
L'Invention a également pour objet - des vecteurs recombinants caractérisés en ce qu'ils comprennent au moins un acide nucléique conforme à l'invention, et en particulier des vecteurs comprenant une cassette d'expression telle que définie ci-dessus.
- des cellules procaryotes ou eucaryotes transformées par une cassette d'expression selon l'invention. Il peut s'agir de cellules maintenues en culture, ou de cellules faisant partie d'un organisme pluricellulaire, animal ou plante. La cassette d'expression présente dans la cellule transformée peut être soit incorporée dans l'ADN chromosomique de ladite cellule, soit être portée par un vecteur extrachromosomique.
L'invention a également pour objet un procédé de production d'une penaeidine ou d'un fragment de celleci, caractérisé en ce qu'il comprend l'expression de ladite penaidine ou dudit fragment, dans au moins une cellule transformée conforme à l'invention.
Les peptides conformes à l'invention peuvent être exprimés dans des cultures de cellules transformées en utilisant des techniques similaires à celles utilisées pour des peptides antimicrobiens de l'art antérieur, par exemple dans des cellules d'insecte, comme décrit par HELLERS et al. [Eur. J. Biochem. 199, pp. 435-439, (1991)] pour les cécropines, ou dans la levure, comme décrit par REICHHART et al. [Invertebrate Reproduction and Development, 21, pp. 15-24, (1992)].
Ils peuvent également être exprimés dans des animaux ou des plantes transgéniques, pour augmenter la résistance de ceux-ci aux infections, comme décrit par exemple par JAYNES et al., [Plant Science, 89, pp. 43-53 (1993)] dans le cas de peptides analogues de la cécropine B, exprimés dans des plants de tabac transgénique, ou par NORELLI et al. [Euphytica, 77, pp. 123-128 (1994)] pour des plants de pommiers transgéniques exprimant le gène de 1' attacine-E.
Les peptides conformes à l'invention sont utilisables en particulier pour l'obtention de produits et en particulier de médicaments anti-infectieux, par exemple anti-bactériens ou fongicides.
De tels produits trouvent leur application pour la prévention et le traitement de différentes maladies microbiennes, dans des secteurs très variés, en particulier dans les domaines de la santé et de l'agriculture, et dans celui de l'aquaculture, pour limiter le développement de maladies infectieuses dans les élevages.
La présente invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de purification des peptides antimicrobiens conformes à l'invention, et de leur caractérisation.
EXEMPLE 1 : ISOLATION DE PEPTIDES ANTI-MICROBIENS A PARTIR DE LA CREVETTE PENAEUS VANNAMEI.
225 ml d'hémolymphe ont été obtenus à partir de 500 crevettes, par prélèvement à partir du sinus central, situé à la base du premier segment abdominal. Le prélèvement a été effectué en présence de tampon anticoagulant (10% citrate de sodium pH 7, additionné de 200 pM de phénylthiourée et 40 pg/ml d'aprotinine.
L'hémolymphe a alors été centrifugée à 700g pendant 15 minutes à 40C pour éliminer les cellules sanguines. Le plasma et les hémocytes sont conservés séparément à -700C jusqu'à utilisation.
1.1 Préparation des fractions de l'hémolymphe par extraction acide a)Plasma : Le plasma est dilué avec de l'eau déminéralisée (1 volume de plasma pour 1 volume d'eau), et à ce mélange sont ajoutés 0,1 % (v/v) d'acide trifluoroacétique. Le pH a été amené à 3,9 à l'aide HCl 1M dans un bain refroidi à la glace, sous agitation douce pendant 1 heure. Deux centrifugations successives à 8000g et à 40C ont été effectuées afin de clarifier le surnageant qui est conservé sur la glace à 40 jusqu'à utilisation.
b)Hémocytes Cytosol Après décongélation, les hémocytes sont homogénéisés à l'aide d'un appareil DOUNCE (maximum 152 pt, minimum 76 p) dans du tampon Tris 50 mM pH 8,7 contenant 50 mM de NaCl. Après centrifugation (8000g 20 mn 40C), le surnageant (fraction cytosol) est acidifié à un pH de 3,6 par addition de 1M HC1 et conservé à 40C.
1. Transformation de dicotylédones Les techniques de transformation des dicotylédones sont bien connues et comprennent les techniques faisant appel à Agrobacterium, et les techniques qui n'exigent pas Agrobacterium. Les techniques ne faisant pas appel à Agrobacterium mettent en jeu l'absorption d'un matériel génétique exogène directement par les protoplastes ou les cellules. Cette opération peut être réalisée par une absorption, médiée par le PEG ou une électroporation, par une libération médiée par un bombardement particulaire, ou par une microinjection. Des exemples de ces techniques sont décrits dans Paskowski et al., EMBO J 3:2717-2722 (1984), Potrykus et al., Mol. Gen. Genet. 199:169-177 (1985), Reich et al., Biotechnology 4:1001-1004 (1986), et Klein et al., Nature 327:70-73 (1987). Dans chaque cas, les cellules transformées sont régénérées en plantes totales par utilisation de procédés classiques bien connus dans la technique.
La transformation faisant appel à Agrobacterium est une technique préférée de transformation du dicotylédone, en raison de son rendement élevé de transformation et de sa grande utilité avec de nombreuses espèces différentes, qui peuvent être la luzerne et le peuplier. On peut citer en outre EP 0 317 511 (le coton), EP 0 249 432 (tomate, au nom de Calgene), WO 87/07299 (Brassica, au nom de Calgene), et le brevet US NO 4 795 855 (peuplier). La transformation par Agrobacterium met habituellement en jeu le transfert du vecteur binaire portant 1 'ADN étranger étudié (par exemple pCIB200 ou pCIB2001) vers une souche appropriée d'Agrobacterium, qui peut dépendre du complément des gènes vir portés par la souche d'Agrobacterium hâte, dans un plasmide Ti co-résidant, ou par voie chromosomique (par exemple la souche CIB542 pour le pCIB200 et le pCIB2001 (Uknes et al., Plant Cell 5:159-169 (1993)). Le transfert du vecteur binaire recombinant à Agrobacterium est réalisé par une procédure d'appariement triparental par utilisation d'un E. coli portant le vecteur binaire, recombinant, une souche de E. coli helper (assistante) qui porte un plasmide, par exemple pRK2013, et qui peut mobiliser le vecteur binaire recombinant à la souche cible d'Agrobacterium. Ou bien encore, le vecteur binaire recombinant peut être transféré à Agrobacterium par transformation d'ADN (Höfgen & Willmitzer, Nucl. Acids.
Res. 16 :9877 (1988)).
La transformation des espèces végétales cibles par Agrobacterium recombinant met en jeu habituellement la culture simultanée d'Agrobacterium avec des explants provenant du végétal, et suit les modes opératoires bien connus dans la technique. Le tissu transformé est régénéré sur un milieu sélectionnable portant le marqueur de résistance aux antibiotiques ou aux herbicides, qui est présent entre les bords de 1'ADN T du plasmide binaire.
Une autre approche à la transformation des cellules végétales à l'aide d'un gène met en jeu la propulsion de particules inertes ou biologiquement actives sur les tissus ou cellules végétales. Cette technique est décrite dans les brevets US NO 4 945 050, 5 036 006 et 5 100 792, tous au nom de Sanford et al. D'une manière générale, cette technique met en jeu la propulsion de particules inertes ou biologiquement actives vers les cellules, dans des conditions permettant la pénétration de la surface extérieure de la cellule, et conduisant à l'incorporation des particules dans le volume intérieur des cellules.
Quand on utilise des particules inertes, le vecteur peut être introduit dans la cellule par enrobage des particules avec le vecteur contenant le gène voulu. Ou bien encore, la cellule cible peut être entourée du vecteur, de sorte que le vecteur est transporté dans la cellule à la suite de la particule. On peut aussi propulser dans le tissu des cellules végétales des particules biologiquement actives (par exemple des cellules de levure séchées, des bactéries séchées ou un bactériophage, dont chacun contient 1'ADN que l'on introduire).
2. Transformation de monocotylédones La transformation de la plupart des espèces de monocotylédones est maintenue devenue une technique de routine. Les techniques préférées comprennent le transfert direct du gène dans les protoplastes par utilisation de techniques par PEG ou électroporation, et le bombardement de particules dans le tissu du callus. Les transformations peuvent être réalisées avec une espèce d'ADN unique ou avec plusieurs espèces d'ADN (c'est-à-dire une cotransformation) , et ces deux techniques peuvent être utilisées dans la présente invention. La cotransformation peut présenter l'avantage d'éviter une synthèse complète du vecteur et de produire des plantes transgéniques comportant des sites non liés pour le gène recherché et le marqueur sélectionnable, ce qui permet d'éliminer le marqueur sélectionnable au cours des générations ultérieures, si cela se révélait souhaitable. Cependant, un inconvénient qu'il y a à utiliser une cotransformation réside dans la fréquence, inférieure à 100 %, avec laquelle des espèces d'ADN distinctes s'intègrent dans le génome (Schocher et al., Biotechnology 4 : 1093-1096 (1986)).
Les demandes de brevet EP 0 292 435 ([1280/1281] au nom de Ciba-Geigy), EP 0 392 225 (au nom de Ciba-Geigy) et WO 93/07278 (au nom de Ciba-Geigy) décrivent des techniques pour préparer le callus et des protoplastes à partir d'une lignée consanguine élite de maïs, la transformation de protoplastes par utilisation de PEG ou d'une électroporation, et la régénération de plants de maïs à partir des protoplastes transformés. Gordon-Kamm et al.
(Plant Cell 2 : 603-618 (1990)) et Fromm et al. (Biotechnology 8 : 833-839 (1990)) ont publié des techniques permettant de transformer la lignée de maïs dérivée de l'A188 par utilisation d'un bombardement de particules.
En outre, la demande WO 93/07278 (au nom de Ciba-Geigy) et Koziel et al. (Biotechnology 11 : 194-200 (1993)) décrivent des techniques pour la transformation de lignées consanguines élites de maïs par bombardement de particules. Cette technique utilise des embryons de maïs immatures ayant une longueur de 1,5 à 2,5 mm, excisés à partir d'un épi de maïs 14 à 15 jours après la pollinisation, et un dispositif de biolistique PDS-1000He pour le bombardement.
La transformation du riz peut aussi être réalisée par des techniques de transfert direct de gènes, utilisant des protoplastes ou un bombardement particulaire. La transformation utilisant les protoplastes est décrite pour les types Japonica et les types Indica (Zhang et al., P1.
Plus récemment, la transformation de monocotylédones a été décrite, qui utilise Agrobacterium. Voir la demande Wo 94/00977 et le brevet US N" 5 591 616, ces deux documents étant incorporés ici à titre de référence.
Sélection Le fragment génique isolé de la présente invention, ou encore les formes altérées du gène NIMl, peuvent être utilisées pour conférer une résistance aux maladies à une large gamme de cellules végétales, comprenant celles des gymnospermes, des monocotylédones et des dicotylédones.
Bien que le gène puisse être inséré dans une cellule végétale quelconque entrant dans les larges catégories ci-dessus, on peut l'utiliser en particulier dans les cellules des plantes de culture, notamment les plantes suivantes : riz, blé, orge, seigle, maïs, pomme de terre, carotte, patate douce, betterave à sucre, haricot, pois, chicorée, laitue, chou, chou-fleur, broccoli, navet, radis, épinard, asperge, oignon, ail, aubergine, poivre, céleri, carotte, courge, potiron, courgette, concombre, pomme, poire, coing, melon, prune, cerise, pêche, nectarine, abricot, fraise, raisin, framboise, mûre, ananas, avocat, papaye, mangue, banane, soja, tabac, tomate, sorgho et canne à sucre.
Le niveau élevé d'expression du gène NIMl et de ses mutants, nécessaire à l'expression constitutive des gènes de la SAR, en combinaison avec d'autres caractéristiques importantes pour la production et la qualité, peut être incorporé dans les lignées végétales par sélection. Ainsi, une autre forme de réalisation de la présente invention concerne un procédé de production de descendants transgéniques d'un végétal parent transgénique comprenant une molécule d'ADN isolée codant une forme modifiée d'une protéine NIM1 selon l'invention, qui consiste à transformer ledit végétal parent avec une molécule de vecteur recombinant selon l'invention, et à transférer la caractéristique aux descendants dudit végétal parent transgénique, en utilisant des techniques connues de sélection végétale.
La figure 6 est une vue en coupe partielle montrant la mise en place sur la semelle équipée des éléments d'ancrage d'une empreinte dentaire à l'intérieur de laquelle a été coulé un matériau de moulage.
La figure 7 est une vue correspondante à la figure 6 après démoulage.
La figure 8 est une vue correspondante à la figure 7, après réalisation des traits de scie, afin de fractionner un élément de travail.
La figure 9 est une vue correspondant à la figure 8 montrant l'extraction de l'élément de travail sélectionné.
La figure 10 est une vue en perspective de l'élément de travail sélectionné.
La figure 11 montre l'adaptation du dispositif à un appareil articulateur de tout type connu et approprié.
Selon une caractéristique à la base de l'invention, le dispositif pour l'élaboration d'un modèle dentaire comprend une semelle ou socle d'appui (1) présentant des agencements pour le montage d'une manière amovible d'une pluralité d'éléments d'ancrage (2) généralement connus sous le nom de pins.
Après mise en place des éléments d'ancrage (2) dans les agencements correspondants de la semelle, ces derniers apparaissent en débordement de la face (la) de cette semelle pour être noyés, comme il sera indiqué dans la suite de la description, dans un matériau de moulage (3) coulé dans une empreinte dentaire(4).
Les agencements de la semelle (l) pour le montage des éléments (lb) d'ancrage (2) sont constitués par des trous débouchants (lb) formés verticalement dans l'épaisseur de la semelle (1). Ces trous débouchant (lb) sont formés à intervalles réguliers ou non, sur la longueur de la semelle (1). A noter également que ces trous (lb), sont formés non seulement dans l'épaisseur de la semelle (1) mais également dans l'épaisseur de bossages cylindriques (lc) qui apparaissent en débordement de la face de dessous de ladite semelle, afin d'assurer un guidage et une stabilité verticale aux éléments d'ancrage (2) compte tenu de leur longueur et de leur faible dimension transversale.
Pour assurer le blocage en rotation et en translation des éléments d'ancrage (2) par rapport à la semelle, chaque trou (lb) présente du côté de la face (la) de la semelle (1), un chambrage d'appui et d'indexation (lal) coopérant avec une partie complémentaire (2a) sous forme d'un talon, formée en débordement latéral au niveau de l'extrémité supérieure des éléments d'ancrage (2) (figures 4 et 5). Le talon (2a) et le chambrage (lal) ont une forme générale rectangulaire dont l'une des extrémités peut être arrondie. De même, le trou (lb) peut être sur la totalité de sa hauteur, de section rectangulaire sans pour cela exclure d'autres sections, notamment cylindriques.
La partie débordante (2b) de chacun des éléments d'ancrage (2), située au-delà du talon (2a), constitue un pion cylindrique présentant périphériquement des aspérités de retenue afin d'améliorer son maintien par rapport au matériau de moulage (3).
A noter que la longueur de chacun des éléments d'ancrage (2) notamment la partie (2c) située sous le talon (2a) et destinée à être engagée dans le trou (lb) est de longueur déterminé afin de déborder du bossage ainsi correspondant (lc) pour être sollicitée et soumise à un appui digital si nécessaire afin de permettre l'extraction de la zone fractionnée comme il sera indiqué dans la suite de la description.
L'ensemble de la semelle (1) et des éléments d'ancrage (2) est réalisé en matériau plastique. Les éléments d'ancrage (2) peuvent être réunis par une barrette de liaison au moyen d'une zone détachable.