INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La solubilité du fumarate 2- (E)-butènedioate du composé (lR,3S,4R)-3-[(2'- {N,N-diméthylamino }-éthyl)]-l, 7,7-tri-[méthyl]-bicyclo[2.2.1 ]heptane-2-one de formule V est à peu près identique avec celui du fumarate du composé désiré
La présente invention consiste à employer deux tuiles spéciales, l'une correspondant à une tuile de courant et l'autre correspondant à une tuile de couvert, mais en leur conférant à leur partie supérieure une forme telle que les tuiles à emboîtement à double ondulation concave-convexe puissent venir s'y emboîter et que l'étanchéité du toit soit assurée.
La présente invention concerne donc deux tuiles de toit l'une de courant et l'autre de couvert, caractérisées par le fait que la tuile de courant (10) comporte à son extrémité supérieure des moyens de calage (5a, 5b, 5c) du dessous de la partie concave et de la partie d'emboîtement de la tuile double canal (30) venant se placer au-dessus , ainsi que des moyens d'étanchéité (6, 7) destinés à coopérer avec ceux de ladite tuile double canal (30) ; et que la tuile de couvert (20) a une forme générale sensiblement identique à celle d'une tuile ancienne, mais comporte, à son extrémité supérieure des moyens d'étanchéité (21, 22) contre lesquels viendra en appui la tuile double canal (30) située au-dessus. Les tuiles particulières selon la présente invention peuvent également comporter tout ou partie des dispositions suivantes
a). La tuile de courant comporte en outre des moyens de calage sur un liteau.
b). La tuile de courant comporte à son extrémité inférieure, un bourrelet reproduisant en épaisseur l'esthétique d'une tuile canal ancienne et constituant un larmier.
c). Les moyens de calage de la tuile de courant sur le liteau, comportent deux tenons venant s'accrocher sur le côté du liteau et deux cales planes assurant son appui horizontal sur le dessus du liteau.
d). Les tenons d'accrochage ont une épaisseur et une forme facilitant l'empilement les unes sur les autres des tuiles de courant lors de la fabrication.
e). Les tuiles de courant comportent en plus à environ mi-longueur, deux butées latérales qui facilitent leur empilement.
f). Les tuiles de courant comportent sur le côté, dans la zone recouverte par la tuile de couvert adjacente, un trou qui permet de la fixer au liteau.
g). Chaque tuile de courant comporte, à sa partie supérieure et sur le côté, un bossage permettant à la fois par son côté le calage de la partie concave (ou cornet) de la tuile double canal venant se placer au-dessus et par sa face supérieure le calage de la tuile de couvert.
h). La tuile de courant comporte à sa partie supérieure des nervures d'étanchéité et d'emboîtement destinées à recevoir les nervures correspondantes de la tuile double canal située au-dessus.
i). Le profil de la tuile de courant est légèrement tronconique, de manière voisine de celui d'une tuile canal ancienne, de façon à correspondre à la forme de la partie concave de la tuile double canal, qui vient s'emboîter dessus à son extrémité.
j). Le profil de la tuile de couvert est légèrement tronconique, de manière voisine de celui d'une tuile canal ancienne, de façon à correspondre à la forme de la partie convexe de la tuile double canal, qui vient s'emboîter dessus. k). La tuile de couvert comporte à son extrémité supérieure, des nervures d'étanchéité et d'emboîtement destinées à recevoir les nervures correspondantes de la tuile double canal venant se placer au-dessus.
1). La tuile de couvert comporte un trou de fixation situé dans son plan médian au voisinage des nervures d'étanchéité.
A titre d'exemple, non limitatif, et pour faciliter la compréhension de l'invention, on a représenté aux dessins annexés
- Figure 1 une vue en perspective de 3/4 par dessus d'un modèle de réalisation d'une tuile de courant selon l'invention.
- Figure 2 une vue en bout de la tuile de la figure 1.
Analyse pour la formule brute C20H21NO#C4H4O4 (417,55) Calculé: C % = 69,03 % ; H % = 8,45 % ; N % = 3,35 % ; Trouvé : C%=69,16%; H%=8,52%; N%=3,32%.
NOUVEAU PROCEDE DE PURIFICATION PAR AFFINITE La présente invention porte sur un nouveau procédé de production et de purification par chromatographie d'affinité de protéines produites par expression d'un acide nucléique recombinant dans une cellule hôte.
Des méthodes et des produits pour produire et/ou purifier des molécules polypeptidiques produites par des techniques de recombinaison génétique ont été développés par de nombreux auteurs.
Les techniques de production de protéines recombinantes par génie génétique sont maintenant largement développées. En bref, des fragments d'ADN codant pour une protéine sont intégrés dans un vecteur ou un plasmide porteur des séquences régulatrices appropriées à leur expression dans un micro-organisme hôte. Les protéines d'intérêt recherchées sont ensuite isolées à partir du milieu de culture ou d'un lysat cellulaire par des techniques de purification. Les techniques de purification sont toujours basées sur une discrimination entre la protéine ou le polypeptide que l'on cherche à purifier d'avec les autres composants du lysat cellulaire ou du surnageant de culture. Ces techniques sont basées, soit sur une différence de poids moléculaire qui autorise une séparation par dialyse, gradient de centrifugation, chromatographie liquide de filtration etc., soit sur une différence de point isoélectrique qui permet une précipitation différentielle ou encore une séparation basée sur des propriétés ioniques différentes comme l'électrophorèse, la chromatographie d'échange d'ions etc. peut également être utilisée. Malheureusement, l'utilisation de ces techniques permet rarement d'avoir à la fois un rendement de purification et un degré de pureté acceptables, pour des molécules d'intérêt thérapeutique.
La chromatographie d'affinité est une technique largement employée dans la purification des molécules biologiques. Elle est basée sur une interaction spécifique entre la molécule que l'on cherche à purifier
et un ligand fixé sur un support. Néanmoins, l'utilisation de procédés industriels faisant appel à la chromatographie d'affinité passe par la mise au point de supports d'affinités "universels", c'est-à-dire utilisables pour purifier un large spectre de molécules ou macromolécules.
L'utilisation du génie génétique pour fusionner des séquences peptidiques ("molecular tags") à des protéines recombinantes en vue de faciliter leur détection et/ou leur purification a connu un grand développement depuis une dizaine d'années. Ces motifs de reconnaissance qui jouent le rôle de véritables étiquettes intramoléculaires se retrouvent généralement aux extrémités amino- ou carboxy-terminales de la protéine de fusion. D'une manière générale, l'introduction d'une séquence de clivage protéolytique (par exemple la séquence reconnue par le facteur Xa ou encore la séquence de clivage de l'entérokinase) entre la protéine d'intérêt et l'étiquette permet d'éliminer celle-ci après purification de la protéine de fusion. La caractéristique commune à toutes ces étiquettes est leur capacité à fixer de manière spécifique un ligand pouvant être greffé à une phase solide - comme par exemple un support chromatographique - sans modification significative des paramètres de la fixation. Sur base de leur longueur, on peut classer ces étiquettes en deux grands types: les étiquettes protéiques qui correspondent à une protéine ou à un domaine fonctionnel de celle-ci (le poids moléculaire de telles étiquettes étant généralement supérieur à 20 kDa), et les étiquettes peptidiques qui sont souvent composées d'une dizaine d'acides aminés et dont le poids moléculaire est inférieur à 2 kDa. Il faut cependant observer que des peptides un peu plus longs peuvent être utilisés comme c'est la cas pour le peptide fixant la calmoduline et dont le poids moléculaire est de 4 kDa.
Deux systèmes d'expression en fusion basés sur des étiquettes protéiques sont aujourd'hui largement utilisés en biotechnologies. Il s'agit des systèmes fusionnant la protéine d'intérêt avec la glutathion S-
transférase (GST) de Schistosoma japonicum (systèmes commercialisés par Pharmacia) et des systèmes réalisant ces fusions avec la protéine colibacillaire fixatrice du maltose encore appelée MBP pour MaltoseBinding Protein (systèmes commercialisés par New England BioLabs).
Dans le système GST, après purification de la protéine hybride (ou chimérique) sur matrice chromatographique portant du glutathion immobilisé (par exemple glutathion-sépharose), l'étiquette GST peut être enlevée par traitement enzymatique à la thrombine, au facteur Xa, ou à la protéase PreScission TMsuivant le type de vecteur qui fut utilisé pour le clonage. Cette technologie qui au premier regard peut apparaître très séduisante, comporte néanmoins des facteurs limitants qui peuvent s'avérer rédhibitoires dans certaines applications. Il y a tout d'abord la taille de l'étiquette qui est de 26 kDa et qui peut parfois fortement modifier la structure de la protéine d'intérêt, imposant donc un traitement protéolytique afin de s'en débarrasser. Il est aussi possible que la protéine de fusion fixe mal le gel de glutathion-sépharose car la protéine d'intérêt modifie la structure de l'étiquette GST. Il fut aussi observé que des protéines de fusion GST fixent trop fortement la résine de glutathion et nécessitent la présence de détergents pour leur élution.
Dans le système MBP, la taille de l'étiquette MBP est encore plus élevée puisqu'elle est d'environ 40 kDa (3). Pour de très nombreuses applications (études structurales, immunisations, tests d'activités biologiques...), le clivage de l'étiquette MBP portée par la protéine de fusion s'avère donc être une nécessité. Après purification sur résine d'amylose (4), la protéine de fusion est soumise à une digestion au facteur Xa. Celui-ci coupe après l'arginine dans une séquence Ile-Glu-Gly-Arg située entre l'étiquette MBP et la protéine d'intérêt. L'expérience montre qu'une digestion optimale au facteur Xa ne répond que très rarement aux conditions décrites dans le protocole standard proposé par New England
BioLabs, et doit donc être optimisée pour chaque protéine de fusion. Par ailleurs, des clivages à l'intérieur de la séquence de la protéine d'intérêt peuvent être observés.
En ce qui concerne les étiquettes peptidiques, trois systèmes sont aujourd'hui essentiellement utilisés : a) Le système poly-histidine (par exemple le Système QIAexpress développé par Qiagen et greffant 6 histidines à la protéine d'intérêt) qui permet la purification de la protéine de fusion sur résine de nickel chélaté.
Sa principale caractéristique est son étiquette limitée à 6 histidines qui fixent fortement les métaux de transition divalents comme le Ni++. En conséquence, la technique de chromatographie d'affinité sur métal immobilisé (IMAC) est idéale pour purifier les protéines de fusion portant pareille étiquette. L'élution de la protéine de fusion est réalisée avec un tampon de compétition contenant de l'imidazole (5). Comme l'étiquette est de très petite taille, son clivage ne s'avère pas nécessaire pour un certain nombre d'applications de la protéine hybride purifiée. L'utilisation de ce type d'étiquette a montré que les rendements de purification sur IMAC Ni++ sont sensiblement augmentés lorsque la chromatographie est réalisée en conditions dénaturantes. Par ailleurs, des corps d'inclusions sont souvent observés dans le colibacille exprimant des protéines recombinantes portant le motif poly-histidine. b) Le système FLAG (Sigma) est basé sur l'octapeptide Asp-TyrLys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys dont le caractère très hydrophile est sensé réduire les interactions hydrophobes qui sont une cause majeure de précipitation cytoplasmique des protéines recombinantes produites chez le colibacille. Différents anticorps monoclonaux ont été dirigés contre le motif FLAG. Ceux-ci permettent de purifier par affinité la protéine hybride et de la tracer sans avoir à fabriquer au préalable un anticorps spécifique de la protéine d'intérêt. La société SIGMA qui commercialise le système FLAG a
développé une famille de vecteurs d'expression pour différents hôtes: bactéries, levures, cellules de mammifères. L'expression de la protéine hybride peut être cytoplasmique ou extracellulaire suivant qu'il y ait ou non un peptide signal dans la construction. La purification d'une protéine hybride à motif FLAG s'effectue par chromatographie d'affinité en utilisant une matrice d'agarose sur laquelle ont été fixés de manière covalente des anticorps anti-FLAG dont la réactivité est dépendante du calcium. L'élution s'effectue donc avec un tampon contenant de l'EDTA ou de l'EGTA qui est un chélateur plus spécifique du calcium. Si la protéine d'intérêt est une métallo-protéine ou si son activité dépend de la présence d'ions métalliques, l'agent chélateur utilisé lors de l'élution devra dans un premier temps être enlevé avant que le métal indispensable à l'activité biologique de la protéine ne soit renouvelé. Alternativement, une élution avec du peptide FLAG libre pourra être envisagée. Le gel d'affinité ne peut être utilisé au maximum qu'une dizaine de fois. Au-delà, des pertes significatives de capacité sont observées. Vu le caractère fragile des anticorps anti-FLAG fixés sur ce gel, celui-ci ne peut pas être lavé (sanitization) avec des agents dénaturants comme l'urée, ou des tampons dont le pH serait inférieur à 5. Ces traitements seraient cependant intéressants pour s'assurer de la complétion de l'élution. En conséquence, il est recommandé de ne pas purifier plusieurs protéines hybrides sur un même gel et ce, de manière à éviter toute contamination. Ces considérations sont des limites à la technique FLAG. c) Un système basé sur la fusion à la protéine d'intérêt d'un peptide de 4 kDa qui fixe la calmoduline (ou CBP pour Calmodulin-Binding Peptide) est développé par Stratagene. Dans cette optique, des vecteurs d'expression ont été développés pour le colibacille et la levure (S. pombe).
La purification des protéines hybrides se fait sur une matrice portant de la calmoduline immobilisée. La fixation a lieu dans un tampon neutre et l'élution nécessite la présence de 2 mM EGTA. L'étiquette portant le
(ii) Tensioactif (s) non ionique(s) :
Les agents tensioactifs non-ioniques sont, eux aussi, des composés bien connus en soi (voir notamment à cet égard "Handbook of Surfactants" par M R. PORTER, éditions Blackie & Son (Glasgow and London), 1991, pp 116-178) et leur nature ne revêt pas, dans le cadre de la présente invention, de caractère critique. Ainsi, ils peuvent être notamment choisis parmi (liste non limitative) les alcools, les alpha-diols, les alkylphénols ou les acides gras polyéthoxylés, polypropoxylés ou polyglycérolés, ayant une chaîne grasse comportant par exemple 8 à 18 atomes de carbone, le nombre de groupements oxyde d'éthylène ou oxyde de propylène pouvant aller notamment de 2 à 50 et le nombre de groupements glycérol pouvant aller notamment de 2 à 30. On peut également citer les copolymères d'oxyde d'éthylène et de propylène, les condensats d'oxyde d'éthylène et de propylène sur des alcools gras ; les amides gras polyéthoxylés ayant de préférence de 2 à 30 moles d'oxyde d'éthylène, les amides gras polyglycérolés comportant en moyenne 1 à 5 groupements glycérol et en particulier 1,5 à 4 ; les amines grasses polyéthoxylées ayant de préférence 2 à 30 moles d'oxyde d'éthylène ; les esters d'acides gras du sorbitan oxyéthylénés ayant de 2 à 30 moles d'oxyde d'éthylène ; les esters d'acides gras du sucrose, les esters d'acides gras du polyéthylèneglycol, les alkylpolyglycosides, les dérivés de N-alkyl glucamine, les oxydes d'amines tels que les oxydes d'alkyl (C10 - C14) amines ou les oxydes de N-acylaminopropylmorpholine. On notera que les alkylpolyglycosides constituent des tensioactifs non-ioniques rentrant particulièrement bien dans le cadre de la présente invention.
(iii) Tensioactif (s) amphotère(s): Les agents tensioactifs amphotères, dont la nature ne revêt pas dans le cadre de la présente invention de caractère critique, peuvent être notamment (liste non limitative) des dérivés d'amines secondaires ou tertiaires aliphatiques, dans lesquels le radical aliphatique est une chaîne linéaire ou ramifiée comportant 8 à 22 atomes de carbone et contenant au moins un groupe anionique hydrosolubilisant (par exemple carboxylate, sulfonate, sulfate, phosphate ou phosphonate) ; peut citer encore les alkyl (Ca-C2o) bétaïnes, les sulfobétaïnes, les alkyl (C8-C20) amidoalkyl (C1-C6) bétaïnes ou les alkyl (Ce C20) amidoalkyl (C1-C6) sulfobétaïnes.
Parmi les dérivés d'amines, on peut citer les produits commercialisés sous les dénomination MIRANOL, tels que décrits dans les brevets US-2 528 378 et US-2 781 354 et de structures : R2 -CONHCH2CH2 -N(R3)(R4)(CH2COO-) (2)
dans laquelle : R2 désigne un radical alkyle dérivé d'un acide R2-COOH présent dans l'huile de coprah hydrolysée, un radical heptyle, nonyle ou undécyle, R3 désigne un groupement bêta-hydroxyéthyle et R4 un groupement carboxyméthyle ; et R5-CONHCH2CH2-N(B)(C) (3) dans laquelle : B représente -CH2CH20X', C représente -(CH2)z -Y', avec z = 1 ou 2, X' désigne le groupement -CH2CH2-COOH ou un atome d'hydrogène Y' désigne -COOH ou le radical -CH2 - CHOH - S03H R5 désigne un radical alkyle d'un acide R9 -COOH présent dans l'huile de coprah ou dans l'huile de lin hydrolysée, un radical alkyle, notamment en C7, C9, C11 ou C12, un radical alkyle en C17 et sa forme iso, un radical C17 insaturé.
Dans les compositions conformes à l'invention, on utilise de préférence des mélanges d'agents tensioactifs et en particulier des mélanges d'agents tensioactifs anioniques et des mélanges d'agents tensioactifs anioniques et d'agents tensioactifs amphotères ou non ioniques. Un mélange particulièrement préféré est un mélange constitué d'au moins un agent tensioactif anionique et d'au moins un agent tensioactif amphotère.
On utilise de préférence un agent tensioactif anionique choisi parmi les alkyl(C12-C14) sulfates de sodium, de triéthanolamine ou d'ammonium, les alkyl (C12-C14)éthersulfates de sodium, de triéthanolamine ou d'ammonium oxyéthylénés à 2,2 moles d'oxyde d'éthylène, le cocoyl iséthionate de sodium et l'alphaoléfine(C14-C16) sulfonate de sodium et leurs mélange avec : - soit un agent tensioactif amphotère tel que les dérivés d'amine dénommés disodiumcocoamphodipropionate ou sodiumcocoamphopropionate commercialisés
notamment par la société RHONE POULENC sous la dénomination commerciale "MIRANOL C2M CONC" en solution aqueuse à 38 % de matière active ou sous la dénomination MIRANOL C32 ; - soit un agent tensioactif amphotère de type zwittérionique tel que les alkylbétaïnes en particulier la cocobétaïne commercialisée sous la dénomination "DEHYTON AB 30" en solution aqueuse à 32 % de MA par la société HENKEL La composition de l'invention peut également contenir au moins un additif choisi parmi les épaississants, les parfums, les agents nacrants, les conservateurs, les filtres solaires siliconés ou non, les vitamines, les cires minérales, les polymères cationiques, anioniques ou non ioniques, les protéines, les hydrolysats de protéines, les acides gras à chaînes linéaires ou ramifiées en C16-C40 tels que l'acide méthyl-18 eicosanoique, les esters d'acide gras, les alcools gras, les hydroxyacides, les vitamines, le panthénol, les huiles animales, les huiles minérales, les tensioactifs cationiques et tout autre additif classiquement utilisé dans le domaine cosmétique qui n'affecte pas les propriétés des compositions selon l'invention.
Ces additifs sont présents dans la composition selon l'invention dans des proportions pouvant aller de 0 à 20% en poids par rapport au poids total de la composition. La quantité précise de chaque additif est déterminée facilement par l'homme du métier selon sa nature et sa fonction.
Les compositions conformes à l'invention peuvent être plus particulièrement utilisées pour le lavage ou le traitement des matières kératiniques telles que les cheveux, la peau, les cils, les sourcils, les ongles, les lèvres, le cuir chevelu et plus particulièrement les cheveux.
En particulier, les compositions selon l'invention sont des compositions détergentes telles que des shampooings, des gels-douche et des bains moussants. Dans ce mode de réalisation de l'invention, les compositions comprennent une base lavante, généralement aqueuse.
Le ou les tensioactifs formant la base lavante peuvent être indifféremment choisis, seuls ou en mélanges, au sein des tensioactifs anioniques, amphotères, non ioniques et cationiques tels que définis ci-dessus.
La quantité et la qualité de la base lavante sont celles suffisantes pour conférer à la composition finale un pouvoir moussant et/ou détergent satisfaisant Ainsi, selon l'invention, la base lavante peut représenter de 4 % à 50 % en poids, de préférence de 6 % à 35 % en poids, et encore plus préférentiellement de 8 % à 25 % en poids, du poids total de la composition finale.
L'invention a encore pour objet un procédé de traitement des matières kératiniques telles que la peau ou les cheveux, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer sur les matières kératiniques une composition cosmétique telle que définie précédemment, puis à effectuer éventuellement un rinçage à l'eau.
Ainsi, ce procédé selon l'invention permet le maintien de la coiffure, le traitement, le soin ou le lavage ou le démaquillage de la peau, des cheveux ou de toute autre matière kératinique.
Les compositions de l'invention peuvent également se présenter sous forme d'aprèsshampooing à rincer ou non, de compositions pour permanente, défrisage, coloration ou décoloration des cheveux, ou encore sous forme de compositions à rincer, à appliquer avant ou après une coloration, une décoloration, une permanente ou un défrisage ou encore entre les deux étapes d'une permanente ou d'un défrisage.
Les compositions de l'invention peuvent encore se présenter sous la forme de compositions pour la peau, et en particulier sous la forme de solutions ou de gels pour le bain ou la douche ou de produits démaquillants.
Les compositions selon l'invention peuvent également se présenter sous forme de lotions aqueuses ou hydroalcooliques pour le soin de la peau et/ou des cheveux.
Les compositions cosmétiques selon l'invention peuvent se présenter sous forme de gel, de lait, de crème, d'émulsion, de lotion épaissie ou de mousse et être utilisées pour la peau, les ongles, les cils, les lèvres et plus particulièrement les cheveux.
Les compositions peuvent être conditionnées sous diverses formes notamment dans des vaporisateurs, des flacons pompe ou dans des récipients aérosols afin d'assurer une application de la composition sous forme vaporisée ou sous forme de mousse. De telles formes de conditionnement sont indiquées, par exemple, lorsqu'on souhaite obtenir un spray, une laque ou une mousse pour le traitement des cheveux.
Dans tout ce qui suit ou ce qui précède, les pourcentages exprimés sont en poids.
Dans les exemples, MA signifie matière active.
EXEMPLE1 On a préparé le shampooing de composition suivante :
Lauryléther sulfate de sodium (2,2 OE) 15g MA Cocoyl bétaïne en solution aqueuse à 30% 5g MA (DEHYTON AB 30 de HENKEL) 2,2,4,4,6,6,8-heptamethylnonane 1.5g MA (ISOHEXADECANE de BAYER) Terpolymère de chlorure de méthacrylamidopropyl 1g MA triméthyl ammonium, d'acide acrylique et de méthacrylate de stéaryle (49% / 49% / 2% molaire) Chlorure de Sodium 4g MA Conservateur q. s pH ajusté à 7 Eau q. s. p 100 g Les cheveux traités avec ce shampooing sont doux, lisses et se démêlent facilement.
EXEMPLE 2 On a préparé le shampooing de composition suivante :