INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
(vi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : SEQ ID N" : 14 ACUCAGCCAC UGGAUUUAAG CAGAGUUCAA AAGCCCUUCA GCGGCCAGUA CGAUCUGACU 60
ESCALIER ARTICULE L'invention se rapporte à un escalier articulé du type comportant une série de marches, ainsi que deux mains courantes et deux limons parallèles entre eux.
Des escaliers articulés ont déjà été proposés, en particulier pour relier les quais des ports à des appontements flottants ou embarcations situés en contrebas.
Ainsi, on décrit dans le document FR-A-2 195 999 un dispositif à pente variable qui peut être utilisé comme escalier pour accéder d'un quai à un bateau.
Le dispositif comprend sur chacun de ses côtés une paire de longerons parallèles qui supportent des marches. Chaque marche est articulée autour d'un axe horizontal transversal sur les longerons avant et repose sur un barreau transversal reliant les longerons arrières.
Les deux paires de longerons se comportent comme des parallélogrammes articulés et les marches restent horizontales quelle que soit l'inclinaison des longerons.
Ainsi, quand le dispositif est incliné, il s'apparente à un escalier. Lorsqu'il est en position horizontale, il fait office de passerelle.
Cependant, cette structure ne permet pas de relever le dispositif au-dessus du niveau de la plate-forme du quai ; il peut seulement occuper soit une position horizontale, soit des positions basses.
On peut également envisager de donner un profil légèrement conique aux faces externe 11 et interne 12 respectives des lèvres intérieure 9 et extérieure 10, avec éventuellement un profil conique correspondant sur la partie supérieure de la face interne 13 de la paroi cylindrique intérieure 2 et sur la partie supérieure de la face externe 14 de la paroi cylindrique extérieure 3. Mais selon une variante préférentielle de l'invention, les lèvres intérieure 9 et extérieure 10 du couvercle 7 sont munies d'un filetage respectivement sur leur face extérieure 11 et intérieure 12. Bien entendu, les parois cylindriques concentriques 2 et 3 sont munies d'un filetage correspondant respectivement, sur la partie supérieure de leur face interne 13 et externe 14.
Cette disposition particulière des filetages permet de faire en sorte que le produit, contenu dans la chambre périphérique 6 ne vienne jamais en contact avec lesdits filetages, évitant de façon particulièrement avantageuse, l'encrassement desdits filetages par le produit, ce qui ne manquerait pas de se manifester si l'un ou les deux filetages étaient disposés à l'intérieur de la chambre périphérique 6. Un tel filetage double permet donc d'assurer à la fois une parfaite étanchéité, et d'assurer le caractère réutilisable du récipient 1 puisque le vissage et le dévissage du couvercle 7 ne sera pas gêné par un éventuel encrassement des filets. Il est bien clair que l'on peut ne réaliser qu'un seul filetage, interne ou externe, la rigidité du couvercle 7 devant alors être suffisante pour assurer la fermeture au niveau de la lèvre 9,10 non filetée.Celle-ci adoptera alors un profil conique venant s'emboîter dans un profil conique correspondant prévu sur la partie supérieure de la face interne 13 de la paroi cylindrique intérieure 2, ou le cas échéant sur la partie supérieure de la face externe 14 de la paroi cylindrique extérieure 3.
Enfin, selon une autre variante préférentielle, permettant d'améliorer encore l'étanchéité, on a prévu de disposer à l'extrémité de chacune des deux parois cylindriques concentriques 2 et 3 ou sur les parties correspondantes de la face inférieure 8 du couvercle 7 des moyens d'étanchéité. Ces moyens d'étanchéité peuvent consister par exemple en des joints d'étanchéité 15 rapportés dans des rainures prévues respectivement contre la face interne 12 de la lèvre extérieure 10 et contre la face externe 11 de la lèvre intérieure 9 sur la face inférieure 8 du couvercle 7. On peut également envisager de réaliser de telles rainures dans l'épaisseur des parois cylindriques concentriques 2 et 3 à condition toutefois que celles-ci soient suffisamment épaisses.
AGENCEMENT D'UN RADIATEUR POUR MOTEUR A COMBUSIION INTERNE DANS UN COMPARTIMENT AVANT DE VEEIICULE AUTOMOBILE L'invention concerne l'agencement d'un radiateur pour moteur à combustion interne dans un compartiment avant de véhicule automobile limité longitudinalement par un profilé transversal pare-chocs et dans lequel ledit radiateur est associé à un motoventilateur et à un carénage desdits motoventilateur et radiateur.
La publication FR-A-2 591 954 décrit un radiateur porté par les longerons avant du véhicule.
Un tel agencement nécessite la création de zones de fixation supplémentaires sur les longerons. Un jeu doit être réalisé entre le radiateur et le profilé parechocs afin de pouvoir accepter un déplacement dudit profilé sans détérioration dudit radiateur, lors d'un choc d'intensité limité du véhicule contre un obstacle.
De plus lors de l'assemblage du véhicule sur une chaîne de montage, un tel agencement rend difficile la préparation sous la forme d'un module prGassemblé avec d'autres éléments en parallèle de ladite chaîne de montage et par conséquent augmente le coût de l'outillage et des interventions manuelles, celles-ci étant effectuées directement dans le flux de ladite chaîne de montage.
La publication FR-A-2 336 268 décrit un radiateur porté par une traverse supérieure et une traverse inférieure constituées par des profilés de formes et de position adaptés au radiateur reçu.
Un tel agencement nécessite un ensemble de traverses qui doit être dimensionné de façon à faire face à l'accroissement de l'importance des contraintes mécaniques, d'encombrement et de position, limitant ainsi la possibilité d'optimiser un gain de place dans le compartiment moteur et de faire évoluer le style du bloc avant dudit véhicule.
De plus un jeu est nécessaire entre lesdites traverses ou ledit radiateur et le profilé parechocs afin de ne pas déformer les traverses lors de chocs de faible intensité du véhicule contre un obstacle.
Afin de remédier à ces inconvénients, l'invention a pour objet un agencement de radiateur dans un véhicule automobile permettant d'éliminer le jeu entre le profilé parechocs et ledit radiateur sans pour autant augmenter le risque de détérioration dudit radiateur lors de choc de faible intensité du véhicule contre un obstacle.
L'invention a également pour objet un agencement permettant un gain de place dans le compartiment moteur par une meilleure intégration de l'ensemble radiateur et motoventilateur.
L'invention a également pour objet un agencement qui permet d'avoir une plus grande liberté de style du bloc avant du véhicule.
Selon l'invention le radiateur est porté par le profilé parechocs.
Selon une autre caractéristique de l'invention le radiateur et le profilé parechocs sont liés par des éléments élastiques.
Selon une autre caractéristique de l'invention le radiateur est porté par le carénage ce dernier étant solidaire du profilé parechocs.
La présente invention s'avère particulièrement avantageuse lorsqu'il s'agit de préparer un vecteur viral recombinant d'au moins 20 kb et, de manière tout à fait préférée, d'au moins 30 kb et plus particulièrement d'un vecteur ayant un génome d'une longueur de 80 à 120% de celle du génome du virus sauvage correspondant, notamment de 90 à 110% et, de préférence, de 95 à 105%.
Selon un autre mode de réalisation, un procédé selon l'invention peut également être employé pour insérer au moins deux fragments d'ADN au sein du génome viral, par recombinaison intermoléculaire entre (i) un premier fragment d'ADN comprenant tout ou partie dudit génome du virus parental, (ii) un second fragment d'ADN comprenant une première partie de ladite séquence d'ADN exogène munie à son extrémité 5' de ladite séquences flanquantes A et (iii) un troisième fragment d'ADN comprenant une deuxième partie de ladite séquence d'ADN exogène munie à son extrémité 3' de ladite séquences flanquantes B lesdits seconds et troisièmes fragments d'ADN comportant une séquence homologue se recouvrant à leurs extrémités 5' et 3' respectives.A titre indicatif, ces séquences homologues entre les seconds et troisièmes fragments d'ADN répondent aux mêmes critères d'homologie et de longueur que les séquences A et B. Ce mode de réalisation spécifique est particulièrement avantageux pour le clonage des séquences exogènes de grande taille.
Un procédé selon l'invention peut être mis en oeuvre dans toute cellule procaryote et notamment dans une bactérie dérivée d'une souche d'Escherichia coli. Mais, on préfère tout particulièrement employer une souche recBC sbcBC comme par exemple les souches CES200, CES201, W5449 et BJ5183 (Hanahan, 1983, J.
Mol. Biol., 166, 557-580).
Une procédure typique d'un procédé selon l'invention comprend les étapes suivantes (a) on co-introduit ou on introduit de manière séparée dans une cellule procaryote un premier fragment d'ADN et (ii) un second fragment d'ADN tels que définis précédemment, (b) on cultive la cellule procaryote obtenue à l'étape (a) dans des conditions appropriées pour permettre la génération du vecteur viral recombinant par recombinaison intermoléculaire, et (c) on récupère le vecteur viral recombinant.
Dans le cadre d'un procédé selon l'invention, les quantités de premiers et seconds fragments d'ADN peuvent varier. On préfère employer une concentration 10 fois plus importante de second fragment par rapport au premier. L'introduction des fragments d'ADN dans une cellule procaryote et la récupération du vecteur de ces mêmes cellules sont réalisées selon les techniques générales de génie génétique et de clonage moléculaire détaillées dans Maniatis et al. (1989, Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY).
La présente invention concerne également un procédé pour préparer une particule virale infectieuse contenant un vecteur viral recombinant obtenu en mettant en oeuvre un procédé selon l'invention, selon lequel (a) on introduit ledit vecteur viral recombinant dans une cellule mammifère pour générer une cellule de mammifère transfectée, (b) on cultive ladite cellule de mammifère transfectée dans des conditions appropriées pour permettre la production de ladite particule virale, et (c) on récupère ladite particule virale de la culture cellulaire obtenue à l'étape (b).
Les cellules peuvent être transfectées selon les techniques standards bien connues de l'homme du métier. On peut citer notamment la technique au phosphate de calcium, la technique au DEAE dextran, l'électroporation, les méthodes basées sur les chocs osmotiques. la microinjection ou les méthodes basées sur l'emploi de liposomes. Selon un mode de réalisation préféré, la cellule mammifère est avantageusement une cellule de complémentation et notamment la cellule 293 dans le cadre d'un vecteur dérivant d'un adénovirus. Les particules virales peuvent être récupérées du surnageant de culture, mais également des cellules selon les protocoles conventionnels.
La présente invention couvre également l'usage d'une particule virale infectieuse ou d'un vecteur viral recombinant préparé selon un procédé selon l'invention, pour le traitement thérapeutique ou chirurgical du corps humain et notamment par thérapie génique. Un procédé selon l'invention est plus particulièrement destiné au traitement préventif ou curatif de maladies telles que les maladies génétiques (hémophilie; thalassémies, emphysème, maladie de Gaucher, mucoviscidose, myopathie de Duchêne ou de Becker...) les cancers, les maladies virales (SIDA., infections herpétiques ou dues au cytomégalovirus ou au papillomavirus).Aux fins de la présente invention, les vecteurs et particules virales préparés par un procédé selon l'invention peuvent être introduits soit in vitre dans une cellule hôte prélevée du patient, soit directement in vivo dans l'organisme à traiter. De préférence, la cellule hôte est une cellule humaine et, de manière préférée une cellule pulmonaire, fibroblastique, musculaire, hépatique, lymphocytaire ou une cellule de la lignée hématopolétique.
La présente invention vise également à une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'une particule virale infectieuse ou d'un vecteur viral recombinant préparé selon un procédé selon l'invention, en association avec un véhicule acceptable d'un point de vue pharmaceutique. Une telle composition pharmaceutique peut être préparée selon les techniques communément en usage et administrée par toute voie d'administration connue, par exemple par voie systémique (notamment intraveineuse, intrapéritonéale, intramusculaire sous-cutanée ou intracranienne) ou par aérosolisation ou instillation intrapulmonaire.
Enfin, la présente invention a également pour objet l'usage d'une particule virale infectieuse ou d'un vecteur viral recombinant préparé selon un procédé selon l'invention, pour l'expression d'une séquence d'ADN d'intérêt dans un système cellulaire.
La présente invention est plus complètement décrite en référence aux figures suivantes et à l'aide des exemples suivants.
La Figure 1 est une représentation schématique du génome de l'adénovirus humain de type 5 (représenté en unités arbitraires de 0 à 100), indiquant l'emplacement des différents gènes.
La Figure 2 illustre un procédé de recombinaison intermoléculaire entre deux fragments d'ADN. les séquences plasmidiques sont représentées par un trait fin, les séquences virales par un trait gras et la séquence exogène par une boite hachurée.
EXEMPLES Les exemples suivants n'illustrent qu'un mode de réalisation de la présente invention.
Les constructions décrites ci-après sont réalisées selon les techniques générales de génie génétique et de biologie moléculaire détaillées dans Maniatis et al (1989, supra). En ce qui concerne les étapes d'amplification par PCR, on applique le protocole tel que décrit dans PCR Protocols-A guide to methods and applications (1990, ed Innis, Gelfand, Sninsky et White, Academic Press Inc.). Les cellules sont transfectées par les méthodes conventionnelles et sont cultivées selon les recommandations du fournisseur. Les fragments insérés dans les différentes constructions décrites ci-après sont indiqués précisément selon leur position dans le génome de l'Ad5 telle que divulguée dans la banque de données Genebank sour la référence M73260.
On part d'une émulsion aqueuse de la poudre de polymère filmogène insoluble dans l'eau obtenue par polymérisation en émulsion telle que définie précédemment. Ce type d'émulsion est communément appelée latex. De préférence, on part d'une émulsion présentant un extrait sec (polymère filmogène + tensio-actif non ionique + composé hydrosoluble + tensio-actif supplémentaire + agent anti-mottant) compris entre 10 et 70 % en poids, encore plus préférentiellement entre 40 et 60 %.
On ajoute à cette émulsion aqueuse les autres composants de la composition pulvérulente: tensio-actif non ionique, composé hydrosoluble, éventuellement le tensioactif supplémentaire. Les teneurs respectives des divers constituants sont choisies de telle sorte que les compositions pulvérulentes séchées présentent la composition définie auparavant.
L'eau de cette émulsion est ensuite éliminée et le produit obtenu pulvérisé pour obtenir une poudre. Les étapes d'élimination de l'eau de l'émulsion de latex et d'obtention d'une poudre peuvent être séparées ou concomitantes. Ainsi, on peut utiliser un procédé de congélation, suivie d'une étape de sublimation, ou de lyophilisation, de séchage ou de séchage par atomisation (pulvérisation - séchage).
Le séchage par atomisation est le procédé préféré car il permet d'obtenir directement la poudre à la granulométrie désirée sans passer nécessairement par l'étape de broyage. La granulométrie de la poudre est généralement inférieure à 500 clam.
Le séchage par atomisation peut s'effectuer de manière habituelle dans tout appareil connu tel que par exemple une tour d'atomisation associant une pulvérisation réalisée par une buse ou une turbine avec un courant de gaz chaud.
La température d'entrée du gaz chaud (en général de l'air), en tête de colonne, est de préférence comprise entre 100 et 115"C et la température de sortie est de préférence comprise entre 55 et 65"C.
La charge minérale peut être ajoutée à l'émulsion aqueuse de polymère de départ.
Tout ou partie de la charge minérale peut également être introduite lors de l'étape de pulvérisation dans le procédé de séchage par atomisation. Il est possible enfin d'ajouter la charge minérale directement à la composition pulvérulente finale.
Dans la plupart des cas, les compositions pulvérulentes selon l'invention sont totalement redispersables dans l'eau à température ambiante par simple agitation. Par totalement redispersables, on entend une poudre conforme à l'invention qui après addition d'une quantité adaptée d'eau permet d'obtenir un pseudo-latex dont la granulométrie des particules est sensiblement identique à la granulométrie des particules de latex présentes dans l'émulsion de départ.
L'invention conceme également le pseudo-latex obtenu par redispersion dans l'eau d'une composition pulvérulente telle que définie précédemment.
Enfin, I'invention conceme l'utilisation des compositions pulvérulentes décrites cidessus dans l'industrie du bâtiment comme additifs aux mélanges de liants minéraux hydrauliques pour la réalisation d'enduits de protection et de décoration, des mortierscolles et des cimentscolles destinés à la pose de carrelages et de revêtements de sols.
Elles s'avèrent particulièrement bien adaptées à la préparation de produits en poudre prêts à l'emploi à base de ciment ainsi que de plâtre.
Les compositions pulvérulentes de l'invention ou les pseudo-latex en dérivant sont utilisables en outre dans tous les autres domaines d'application des latex, plus particulièrement dans le domaine des adhésifs, du couchage du papier et des peintures.
Les compositions pulvérulentes selon l'invention peuvent comporter en outre les additifs usuels, en particulier des biocides, des microbiostats, des bactériostatiques, et des antimousses silicones et organiques.
EXEMPLES Exemple 1 Dans un mélangeur, on prépare l'émulsion suivante: Composition % en poids latex styrène/butadiène (*) 80 nonyl phénol éthoxylé avec 10 motifs OE (") 1,2 acide polyacrylique (** )(Mw = 2000) 8,8 eau 10 (*) le latex styrène/butadiène présente un extrait sec de 50 % en poids. II est obtenu par polymérisation en émulsion d'un mélange pondéral de 58 % de styrène et 42 % de butadiène. La granulométrie moyenne des particules de polymère mesurée à l'aide d'un granulomètre BROOKHAVENX est de 0,12 pm. Sa surface est faiblement carboxylée: il présente une charge de surface égale à 30 microéquivalents de fonction C00H / g de polymère.
(1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 3828-3832; Gluckman, E., Devergie, A., Thierry, D., Eperou-Bourdeau, H., Traineau, R., Gerrota, J., Brossard, Y., Van Nifterik, J., & Benbunan, M. (1992) Bone Marrow Transplant. 9, 116 117).
Purification de cellules SBA-CD34+ Des cellules mononucléaires sont obtenues comme décrit précédemment (Hatzfeld, J., Li, M.-L., Brown, E. L., Sookdeo, H., Levesque, J.-P., O'Toole, T., Gurney, C., Clarck, S.C., & Hatzfeld, A. (1991) J. Exp. Med.
174, 925-929. Très brièvement après l'isolation de cellules mononucléaires sur du Ficoll Hypaque, les cellules SBA- (cellules qui ne s'agglutinent pas en présence d'agglutinine de soja) sont purifiées en éliminant les cellules attachées à l'agglutinine de soja immobilisé de façon covalente en utilisant la procédure AIS, (procédure mise au point par la firme Applied Immune Sciences). (BSA CELLector Flasks, Applied Immune Sciences Inc. Santa Clara, CA). La sélection positive de CD34+ est obtenue avec des bouteilles de polystyrène revêtues d'anticorps monoclonaux CD34 ICH3 (CD34 CELLector Flasks, AIS), lavées un nombre suffisant de fois (jusqu'à 10 fois) avec une solution saline tamponnée de phosphate Dulbecco, contenant 0,25% d'EDTA pour assurer l'élimination des cellules non-attachées et faiblement attachées (CD34+faible) comme observé sur le microscope inversé (Hatzfeld J., Batard P., Cardoso A.A., Li M.-L., et Hatzfeld A. Purification and in vitro assay of early human hematopoietic progenitors. 205-221. Dans Culture of Hematopoiectic Cells.
Freshney R.I., Pragnell I.B., Freshney M.G., 1994).
Cette procédure donne de façon routinière une pureté de 95% (+ 3%) de cellules CD34. Les cellules isolées CD34+SBA- sont ensuite détachées par une incubation de 2 heures à 37"C dans du milieu d'Iscove modifié par Dubelcco (IMDM) additionné de sérum de veau foetal à 10% (FCS) ou dans du milieu StemGEM* du CNRS (milieu sans sérum). Le détachement des cellules doit être complet, étant donné que ces cellules qui expriment une quantité élevée d'antigènes CD34 représentent les progéniteurs les plus immatures et sont les plus difficiles à détacher.
Composition des medlas Les milieux de préstimulation et de transfert avec ou sans coculture sont des milieux StemGEM* avec ou sans sérum (CNRS Centre National de la Recherche Scientifique UPR 272 Villejuif France).
Procede de transductlon La lignée de cellules NB16, une lignée de cellules (Danos O., et Mulligan R.C.: "Safe and efficient generation of recombinant retroviruses with amphotropic and ecotropic host ranges". Proc. Natl. Acad. Sci., USA 85: 6460-6464, 1988) qui exprime la p-galactosidase d'E. coli (Strair, R. K., Towle, M., & Smith, B. R.
(1990) Nucleic Acids Res. 18, 474762) est fournie par J.M. Heard et O.
Danos. Ces cellules sont mises en culture dans du milieu DMEM additionné de 10% FCS de nouveau né enrichi en fer (Hyclone). Cette lignée cellulaire produit un surnageant avec un titre viral habituel de 1 à 5.105 unités/ml. Les cellules enrichies en CD34 + sont préstimulées pendant des temps variés (50 000 cellules de CD34+ dans 0.5 ml). Elles sont ensuite mises en coculture pendant 40 h sur 40% de cellules NB16 confluentes dans du milieu StemGEM* (CNRS) additionné de polybrène à 8 Crl/ml à 370C avec 5% de CO2 dans une atmosphère humidifiée saturée. Les cellules de CD34+ sont ensuite doucement détachées, concentrées et testées pour des essais clonogéniques.
Essals clonogeniques dans la méthylcellulose.
Les cellules de CD34+ sont cultivées à raison de 300400 cellules/ml selon une modification d'un essai de colonie mixte de Fauser et Messner (Hatzfeld, J., Li, M.-L., Brown, E. L., Sookdeo, H., Levesque, J.-P., O'Toole, T., Gurney, C., Clarck, S.C., & Hatzfeld, A. (1991) J. Exp. Med.
174, 925-929; Fauser, A. A., & Messner, H. A. (1979) Blood 53, 1023).
Toutes les cultures sont faites au moins en double.
Coloration des colonies transduites.
Après une incubation de 14 à 21 jours à 37"C dans une atmosphère humidifée saturée, les colonies sont comptées et classifiées comme décrit de façon antérieure (Zhou, Y.-Q., Stanley, E. R., Clark, S. C., Hatzfeld, J., Levesque, J.-P., Federici, C., Watt, S. M., & Hatzfeld, A. (1988) Blood 72, 1870-1874). Elles sont ensuite colorées par la même méthode histochimique que celle utilisée pour évaluer le titre en surnageant, avec X-Gal comme substrat (MacGregor, G. R., Nolan, G. P., Fiering, S., Roederer, M., & Herzenberg, L. A. (1991) Methods Mol. Biol. 7, 217-235) à l'exception que la solution de coloration (1 ml/boîte de Petri) est deux fois plus concentrée que pour les cellules adhérentes. La réaction de coloration est effectuée toute la nuit.
Analvse statistique.
Ls bornes émettrices comportent un socle, scellé au sol, et un boîtie émetteur d'un signal modulé ajustable,transmettant l'information de vitesse limitée, dans un champ étroit, mais comportant une information liée au sens de circulation par rapport au bord de la route où la borne est implantée: par exemple, sur une section de route nationale (90 km/h), borne à l'entrée d'un village , avec une vitesse limitée ) 50 km:h.
La borne peut également être incorporée à un panneau de signalisation routière ( panneau signalant la vitesse limite, ou panneau signalant le nom du village traversé).