INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Ces cartes à puces sont, pour la plupart, interrogeables à partir d'un lecteur de cartes à puces.
Cependant, afin de permettre l'utilisation de ces cartes à puces à grande échelle, il existe des cartes d'authentification de type mixte, c'est-à-dire des cartes d'authentification qui comportent une puce pouvant être lue directement à partir d'un lecteur de cartes à puces, comme c'est classiquement le cas, ou bien à partir d'un terminal téléphonique.
Ce terminal téléphonique peut être un simple téléphone à fréquence vocale ou à numérotation décimale, ces types de téléphones constituant de nos jours la majorité des téléphones.
Les cartes d'authentification de type "mixte" (appelées "cartes mixtes") comportent donc une puce qui peut être lue directement par le lecteur de cartes à puces ; ils comportent, d'autre part, des moyens de couplage acoustique qui permettent d'utiliser une puce (qui peut être la même que la puce interrogeable par le lecteur ou une autre puce située également sur la carte) à partir d'un combiné téléphonique.
Puisque cette carte d'authentification est susceptible d'être lue par un lecteur de cartes à puces, il est donc nécessaire qu'elle ait une taille standard, c'est-à-dire la taille définie par les normes ISO et en particulier les normes ISO-7810 et 7816, qui définissent l'interface entre une carte à puce et un lecteur de cartes selon tous ses aspects, à savoir physiques, électriques, logiques, etc.
Les cartes d'authentification mixtes respectent donc rigoureusement ces normes ISO.
Par ailleurs, la carte d'authentification mixte doit pouvoir émettre des séquences DTMF, c'est-à-dire, en termes anglosaxons, Dual Tone Multi Frequency.
Sur la figure 1, on a représenté schématiquement une telle carte d'authentification mixte, qui porte la référence 1. La référence 2 représente la puce dans laquelle sont mémorisées les informations permettant l'authentification par le serveur interrogé.
Cette puce peut être lue soit par un lecteur de cartes soit à partir des moyens de couplage acoustique.
Dans certaines cartes mixtes, il y a deux puces : l'une est destinée à être lue par le lecteur de cartes, l'autre par les moyens de couplage acoustique.
C'est une carte mixte à une seule puce qui est représentée sur la figure 1.
On a également représenté sur cette figure 1, en pointillés, le vibreur acoustique 4 qui se trouve sur la face arrière de la carte d'authentification 1, la face comportant la puce 2 étant considérée comme la face avant de la carte. C'est ce vibreur acoustique 4 ("buzzer", en terme anglosaxon) qui assure le couplage acoustique entre la carte 1 et le combiné téléphonique, non représenté sur la figure par mesure de simplification.
Ce vibreur acoustique 4 est commandé par l'utilisateur à partir des moyens de déclenchement 6. Plus précisément, ces moyens de déclenchement consistent, d'une part, en un bouton de marche/arrêt 8 qui assure la mise en fonctionnement de ce vibreur acoustique 4 ; ces moyens de déclenchement consistent, d'autre part, en un bouton d'authentification 10 par lequel l'utilisateur peut déclencher l'authentification de sa carte. Lorsque l'utilisateur appuie sur ce bouton d'authentification 10, cela met en fonctionnement la puce 2 qui délivre alors les informations qu'elle contient. Ces moyens de déclenchement 6 comprennent, en outre, un clavier, par exemple de douze touches comme représenté sur la figure 1, qui permet à l'utilisateur, par exemple de taper un numéro de code personnel.
Dans son mode d'utilisation avec un lecteur de cartes à puces, c'est-à-dire pour une lecture avec contact, la carte d'authentification mixte est insérée dans le lecteur. Dans ce cas, seule la puce (c'est-à-dire le module de contact ISO-7816) est utilisée. Dans ce cas, le lecteur de cartes à puces est couplé à un téléphone et la transmission entre la carte et le serveur auquel on désire accéder est effectuée sur une liaison filaire, ce qui constitue un mode de transmission bien maîtrisé. Le taux d'erreur dû à la transmission est donc, dans ce cas, négligeable.
Par contre, dans le mode de fonctionnement qui consiste à utiliser un terminal téléphonique, tel que les publiphoness (marque déposée), où les téléphones particuliers à fréquences vocales ou à numérotation décimale, l'utilisateur doit tout d'abord établir une communication téléphonique normale avec le serveur auprès duquel il veut être authentifié. Pour cela, l'utilisateur décroche le combiné, prend la ligne, effectue le numéro du serveur et attend un signal de la part du serveur. A la réception de ce signal, l'utilisateur effectue l'authentification avec sa carte.Pour cela, il applique sa carte sur le combiné téléphonique en veillant à bien positionner le vibreur acoustique 4 contre le microphone du combiné téléphonique, puis il met la carte en fonctionnement, en appuyant sur le bouton de marche/arrêt 8, puis déclenche l'authentification en appuyant sur le bouton d'authentification 10.
Dans le cas de la vectorologie non virale, ce sont des plasmides d'origine bactérienne qui sont mis en oeuvre. Les plasmides généralement utilisés en thérapie génique portent (i) une origine de réplication, (ii) un gène marqueur tel qu'un gène de résistance à un antibiotique (kanamycine, ampicilline...) et (iii) un ou plusieurs transgènes avec des séquences nécessaires à leur expression (enhanceur(s), promoteur(s), séquences de polyadénylation...).
Toutefois, la technologie actuellement disponible ne donne pas entière satisfaction.
D'une part, il demeure un risque de dissémination dans l'organisme. C'est ainsi qu'une bactérie présente dans l'organisme peut, à une fréquence faible, recevoir ce plasmide. Ceci a d'autant plus de chances de se passer qu'il s'agit d'un traitement de thérapie génique in vivo dans lequel l'ADN peut être disséminé dans l'organisme du patient et peut se trouver au contact de bactéries qui infectent ce patient ou bien de bactéries de la flore commensale. Si la bactérie receveuse du plasmide est une entérobactérie, telle quE coli ce plasmide peut se répliquer. Un tel événement conduit alors à la dissémination du gène thérapeutique.Dans la mesure où les gènes thérapeutiques utilisés dans des traitements de thérapie génique peuvent coder par exemple pour une lymphokine, un facteur de croissance, un antioncogène, ou une protéine dont la fonction fait défaut chez l'hôte et permet donc de corriger un défaut génétique, la dissémination de certains de ces gènes pourrait avoir des effets imprévisibles et préoccupants (par exemple si une bactérie pathogène acquérait le gène d'un facteur de croissance humain).
D'autre part, les plasmides utilisés généralement en thérapie génique non virale possèdent aussi un marqueur de résistance à un antibiotique (ampicilline, kanamycine...). La bactérie acquérant un tel plasmide a donc un avantage sélectif indéniable puisque tout traitement antibiothérapique, utilisant un antibiotique de la même famille que celui sélectionnant le gène de résistance du plasmide, va conduire à la sélection du plasmide en question. A cet égard, I'ampicilline fait partie des ss- lactames qui est la famille d'antibiotiques les plus utilisés au monde. L'utilisation de marqueurs de sélection chez la bactéries qui ne soient pas des gènes de résistance à des antibiotique serait donc particulièrement avantageuse. Elle éviterait la sélection de bactéries ayant pu recevoir un plasmide portant un tel marqueur.
Il est donc particulièrement important de chercher à limiter au maximum la dissémination des gènes thérapeutiques et des gènes de résistance.
La présente invention a précisément pour objet de proposer de de nouvelles molécules d'ADN, utilisables en thérapie génique, ne se répliquant que dans des cellules pouvant complémenter certaines fonctions de ces vecteurs non viraux.
L'invention concerne également une méthode particulièrement efficace pour la préparation de ces molécules d'ADN.
Les molécules d'ADN revendiquées ont pour avantage d'éliminer les risques liés à une dissémination du plasmide, tels que (1) la réplication et la dissémination, pouvant entraîner une surexpression non contrôlée du gène thérapeutique, (2) la dissémination et l'expression de gènes de résistance. L'information génétique contenue dans les molécules d'ADN selon l'invention comprend en effet le(s) gène(s) thérapeutique(s) et les signaux de régulation de son (leur) expression, une origine de réplication conditionnelle fonctionnelle limitant très fortement le spectre d'hôte cellulaire de ce plasmide, un marqueur de sélection de taille réduite de préférence différent d'un gène conférant la résistance à un antibiotique et le cas échéant, un fragment d'ADN permettant la résolution de multimères de plasmide.La probabilité que ces molécules (et donc l'information génétique qu'elles contiennent) soient transférées à un microorganisme, et maintenues de manière stable, est très limitée.
Enfin les vecteurs selon l'invention, également désignées miniplasmides en raison de leur structure circulaire, de leur taille réduite et de leur forme superenroulée, présentent les avantages supplémentaires suivants: En raison de leur taille réduite par rapport aux plasmides dérivés de ColEl classiquement utilisés, les molécules d'ADN selon l'invention ont potentiellement une meilleure biodisponibilité in vivo. En particulier, elles présentent des capacités de pénétration et de distribution cellulaires améliorées. Ainsi il est reconnu que le coefficient de diffusion dans les tissus est inversement proportionnel au poids moléculaire (Jain, 1987). De même, au niveau cellulaire, les molécules de haut poids moléculaire ont une moins bonne perméabilité à travers la membrane plasmique. En outre, pour le passage du plasmide au noyau, indispensable à son expression, le poids moléculaire élevé est également un inconvénient, les pores nucléaires imposant une limite de taille pour la diffusion vers le noyau (Landford et al 1986). La réduction de la taille des parties non-thérapeutiques de la molécule d'ADN (origine de réplication et gène de sélection notamment) selon l'invention permet également de diminuer la taille des molécules d'ADN. La partie permettant la réplication et la sélection de ce plasmide chez la bactérie (1,1 kb) est diminuée par un facteur 3, en comptant par exemple 3 kb pour l'origine de réplication et le marqueur de résistance partie vecteur.Cette diminution (i) de poids moléculaire et (ii) de charge négative, confère aux molécules de l'invention des capacités améliorées de diffusion et de biodisponibilité tissulaires, cellulaires et nucléaires.
Plus précisément, la présente invention concerne une molécule d'ADN sous forme circulaire, utile en thérapie génique, comprenant au moins une séquence nucléique d'intérêt, caractérisée en ce que la région permettant sa réplication comprend une origine de réplication dont la fonctionnalité dans une cellule hôte requiert la présence d'au moins une protéine spécifique et étrangère à ladite cellule hôte.
Cette molécule d'ADN peut se présenter sous forme mono ou double brin et avantageusement possède une forme superenroulée.
Au sens de la présente invention, les cellules hôtes mise en oeuvre peuvent être de diverses origines. I1 peut s'agir de cellules eucaryotes ou procaryotes. Selon un mode de réalisation privilégié de l'invention, il s'agit de cellules procaryotes.
Classiquement, la réplication des plasmides bactériens nécessite la présence d'au moins une protéine codée par l'hôte cellulaire de type ARN polymérase, Rnase, ADN polymérase.... Pour les raisons déjà exposées précédemment, on ne peut totalement s'affranchir, avec ce type de réplication, d'éventuels risques de dissémination dans l'organisme traité. Avantageusement, la fonctionnalité de l'origine de réplication de la molécule d'ADN selon l'invention exige la présence d'une protéine spécifique et étrangère à la cellule hôte. Cette caractéristique a pour intérêt de réduire le spectre d'hôte du plasmide revendiqué à des souches spécifiques exprimant cette protéine initiatrice. La molécule d'ADN, mise au point dans le cadre de la présente invention, possède donc avantageusement une origine de réplication dite conditionnelle.
L'origine de réplication conditionnelle mise en oeuvre selon la présente invention peut provenir de plasmides ou bactériophages, partageant les caractéristiques suivantes: ils contiennent dans leur origine de réplication des séquences répétées, ou itérons et ils codent pour au moins une protéine initiatrice de la réplication (Rep) qui leur est spécifique.A titre d'exemple, on peut citer les systèmes de réplication conditionnelle des plasmides et bactériophages suivants:
plasmide ou bactériophage protéine initiatrice spicifrque RK2 (Stalker et au 1981) TrfA R1 (Ryder et al., 1981) RepA pSC101 (Vocke and Bastia,1983) RepA F (Murotsu et al.. 1981) protéine E Rts1 (Itoh et al., 1982,1987) RepA RSF1010 (Miao et al., 1995) RepC P1 (Abeles et aL. 1984) RepA P4 (Flensburg and Calendar,1987) protéine alpha lambda (Moore et aL 1981) protéine O phi 82 (Moore etal. 1981) protéine O de phi 82 phi 80 protéine O de phi 80 Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, l'origine de réplication mise en oeuvre dans les molécules d'ADN revendiquées est issue d'un plasmide naturel d'E. coli appelé R6K.
Les fonctions de réplication de R6K sont regroupées dans un fragment d'ADN de 5,5 kpb (figure 1) comprenant 3 origines de réplication ci, sset y (y et ss assurant 90% de la réplication) et un opéron codant pour les protéines initiatrices de réplication n et la protéine Bis. L'information génétique minimale nécessaire au maintien de ce plasmide à son nombre de copies caractéristique (15 copies par génome) est contenue dans deux éléments : les 400 pdb de 1' ori y et le gène pir, dont le produit est la protéine initiatrice n.
Le dispositif selon l'invention est constitué par un châssis comportant principalement trois parties - un manchon (1) pour l'introduction des produits à déchiqueter, - une partie (2) comportant les couteaux et contre-couteaux, - une partie (3) présentant un tiroir pour la réception des déchets après déchiquetage.
La partie centrale (2) présente un arbre (4) supportant un ensemble de lames (5) formé par des supports (6) s'orientant radialement par rapport à l'arbre (4), et deux couteaux parallèles (7, 8) fixés par un boulonnage sur ces supports (6).
Les lames (5) sont réparties tout le long de l'arbre (4), et sont décalées angulairement de manière régulière tout le long de l'arbre (4). La partie centrale (2) comporte par ailleurs des contre-couteaux (9) disposés perpendiculairement au plan formé par l'arbre (4) et les lames (5).
La figure (2) représente une vue de face du dispositif. L'arbre (4) est entraîné par un moteur tournant à une vitesse de l'ordre de cinquante tours par minute, soit une vitesse lente par rapport au dispositif de l'état de la technique. Le moteur (10) est un moteur électrique ou un moteur hydraulique dont le sens de rotation peut être inversé de façon à dégager des déchets bloquant les lames.
Le manchon d'introduction (1) présente une section transversale sensiblement constante entre l'ouverture d'alimentation (11) et la face (12) s'ouvrant sur l'ensemble des lames rotatives. L'ouverture d'alimentation (11) et la face (12) sont sensiblement perpendiculaire, le manchon s'étendant sur environ un quart de cylindre.
Les contre-couteaux (9) présentent une forme trapézoïdale. La grande base est orientée vers le haut, en direction des couteaux, alors que la petite base est constituée par la face opposée.
De préférence, la largeur de la grande base est sensiblement égale à la largeur des lames (5). Ce mode de réalisation permet d'assurer une découpe régulière des objets qui sont introduits dans le dispositif.
La figure 3 représente une vue en détail d'une lame du dispositif suivant l'invention. La lame est constituée par un support (6) et deux couteaux (7, 8).
L'extrémité de la lame (6) opposée à l'arbre (4) présente un double biseau en forme de "M". Cette extrémité présente de ce fait deux bords tranchants (13, 14) séparés par un sillon central (15). Les deux pentes (16, 17) forment un angle de l'ordre de 45%. La lame est symétrique par rapport à l'arbre (4). L'arbre (4) présente avantageusement une section non-cylindrique, par exemple une section hexagonale de manière à assurer le positionnement angulaire de chacune des lames équipant ledit arbre (4). Sur les bords latéraux du support (6) sont fixés les couteaux (7, 8). Ces couteaux (7, 8) sont constitués par des plaques en acier présentant également une section en "M" pour former deux bords tranchant (18, 19) séparé par un sillon central (20). Les deux faces (21, 22) présentent des angles de l'ordre de 45% par rapport au plan traversant le sillon central (20). La liaison entre les supports (6) et les couteaux (7, 8) s'effectue à l'aide de boulons (22, 23, 24, 25) permettant le remplacement facile en cas d'usure. Les couteaux (7, 8) sont tous identiques, et sont montés de manière symétrique par rapport au plan médian du support (6) de façon à permettre un fonctionnement dans les deux sens.
L'invention est décrite dans ce qui précède à titre d'exemple non-limitatif. Il est bien entendu qu'un homme de métier sera à même de réaliser différentes variantes sans pour autant sortir du cadre de l'invention.
OUTIL A BRANCHES ARTICULEES REGLABLES La présente invention conceme un outil à branches articulées comportant un dispositif de réglage de l'écartement relatif des branches.
L'invention trouve une application particulièrement avantageuse dans le domaine des pinces à ouveltures variables, notamment de type multiprise.
D'une manière générale, une pince est constituée de deux leviers retenus par un axe solidaire d'un des leviers et monté tournant dans le s deuxième.
L'état de la technique correspondant aux pinces à mâchoires réglables comprend un premier type d'outil, constitué de deux branches reliées par un axe d'articulation mobile dans une ouverture oblongue ménagée dans l'une d'elles. Cette ouverture comporte une succession de crans qui coopèrent avec l'axe d'articulation de manière à offrir plusieurs positions d'utilisation à la branche pivotant autour de cet axe, par simple déplacement dudit axe dans ladite ouverture. Selon la configuration adoptée, les crans sont répartis sur l'un ou sur les deux grands côtés de l'ouverture et l'axe est pourvu d'un ou deux méplats.
Ce type de dispositif présente toutefois l'inconvénient d'engendrer une usure rapide au niveau des différentes parties en contact. En effet, la section de l'axe d'articulation n'étant pas circulaire de part la présence du ou des méplats, celui-ci ne travaille pas sur toute sa surface et les différentes contraintes mécaniques ne sont supportées que par les parties cylindriques directement en contact avec les crans. De plus, des difficultés d'enclenchement sulviennent fréquemment lors du réglage de l'écartement des branches en raison de la nécessité de positionner précisément l'axe d'articulation non cylindrique par rapport à la succession de crans portée par l'ouverture oblongue.Des phénomènes de coincements font également partie des inconvénients relatifs à l'utilisation d'un tel dispositif.
Le second type de pince à ouverture variable de l'état de la technique reprend une constitution générale sensiblement identique à celle précédemment décrite, à l'exception du système de réglage à crémaillère qui est remplacé par un système d'articulation à secteurs dans lequel, schématiquement, une nervure courbe ménagée sur une branche coopère avec des rainures de formes complémentaires disposées sur la surface coulissante de l'autre branche. On retrouve également avec ce système les problèmes d'enclenchement et de coincement rencontrés avec l'autre type de pince, même s'ils sont ici d'origine différente en raison de la nature particulière du dispositif d'articulation réglable.
Le substituant à introduire peut être sous forme de dérivé halogèné tel que notamment un chlorure ou bromure d'alkyle, d'aryle, d'arylalkyle d'alkylsulfonyle ou d'arylsulfonyle tels que définis ci-dessus par le radical A-sulfonyl : on peut citer à titre d'exemple le chlorure de tosyle et le bromure de benzyle ou ceux utilisés dans les exemples décrits ci-après.
Les produits de formules (V), (I3) et (I'3), telles que définies ci-dessus, ainsi obtenus, peuvent être, si désiré, hydrolysés en produit de formule (I1) telle que définie cidessus pour les produits de formule (I3) ou (131) par exemple dans un mélange d'acide acétique et d'eau puis chauffage au reflux ou dans l'acide chlorhydrique 6N à chaud, ou l'acide trifluoroacétique à température ambiante ou encore pour les produits de formule (I3) dans un solvant tel que le tétrahydrofuranne ou méthanol dans des conditions d'hydrogénation telles que par exemple en présence de palladium sur charbon activé.
L'hydrolyse notamment du produit de formule (V) peut encore être réalisée par un acide tel que l'acide chlorhydrique.
Le produit de formule (II) peut être salifié dans les conditions usuelles connues de l'homme du métier tel que notamment par de la soude ou de la potasse dans un solvant tel que par exemple l'éthanol, l'introduction d'un substituant sur le radical hydroxyle ainsi salifié peut être réalisé dans un solvant tel que par exemple le diméthylformamide par un dérivé halogène comme indiqué ci-dessus.
La réduction du produit de formule (VI) en produit de formule (I4) peut être réalisée dans les conditions usuelles connues de l'homme du métier telles que par exemple par hydrogénation en présence de palladium dans du tétrahydrofuranne ou de l'éthanol.
L'introduction d'un substituant sur le radical hydroxyle du composé de formule (I4) pour obtenir le produit de formule (Ig) peut être réalisée comme indiqué ci-dessus et l'introduction d'un substituant sur le radical amino du composé de formule (I4) pour obtenir le produit de formule (I6) peut être réalisée dans les mêmes conditions.
L'hydrolyse des produits de formules (in), (I5) et (I6) en produit de formule (I7) pour libérer le groupement hydroxyle peut être réalisé de façon usuelle dans un solvant tel que par exemple le dichloroéthane en présence de chlorure d'aluminium.
Les produits de formules (I1), (12), (13), (14), (in)' (I6) et (17) peuvent donner des produits de formule (IN) ou (ID), ou être transformés en d'autres produits de formule (IN) ou (ID) en étant soumis à une ou plusieurs des réactions a) à t) indiquées ci-dessus.
La liste suivante, non exhaustive, d'exemples de protection de fonctions réactives peut être citée - les groupements hydroxyle peuvent être protégés par exemple par les radicaux alkyle tels que tert-butyle, triméthylsilyle, tert-butyldiméthylsilyle, méthoxyméthyle, tétrahydropyrannyle, benzyle ou acétyle, - les groupements amino peuvent être protégés par exemple par les radicaux acétyle, trityle, benzyle, tert-butoxycarbonyle, phtalimido, - les groupements acyles tel que le groupement formyle peuvent être protégés par exemple sous forme de cétals ou de thiocétals cycliques ou non cycliques tels que le diméthyl ou diéthylcétal ou l'éthylène dioxycétal, ou le diéthylthiocétal ou ltéthylenedithiocetal, - les fonctions acide des produits décrits ci-dessus peuvent être, si désiré, amidifiées par une amine primaire ou secondaire par exemple dans du chlorure de méthylène en présence, par exemple, de chlorhydrate de l-éthyl-3-(diméthylaminopropyl) carbodiimide à la température ambiante - les fonctions acide peuvent être protégées par exemple sous forme d'esters formés avec les esters facilement clivables tels que les esters benzyliques ou ter-butyliques ou des esters connus dans la chimie des peptides.
Les réactions auxquelles les produits de formules (I1), (I2), (13) , (14) (I5), (16) et (I7), telles que définies cidessus peuvent être soumis, si désiré ou si nécessaire, peuvent être réalisées, par exemple, comme indiqué ci-apres.
c) la réaction de transformation de radical hydroxyalkyle en radical alkyle peut être réalisée de façon usuelle, notassent par halogénation puis réduction en présence par exemple d'hydrure de lithium et aluminium.