INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'invention concerne également l'utilisation de plantes, fragments de plantes, cellules de plantes, ou semences transformés selon l'invention, pour l'obtention d'un (ou plusieurs) polypeptide(s) recombinant(s) selon l'invention, tels que la LGC recombinante, ou ses polypeptides dérivés tels que définis cidessus, notamment par mise en oeuvre d'un des procédés susmentionnés de l'invention, lesdits polypeptides recombinants étant sous forme essentiellement pure ou contenus dans des extraits végétaux à activité enzymatique tels que définis ci-dessus.
L'invention a également pour objet l'utilisation, dans le domaine de l'alimentation, de plantes, fragments de plantes, cellules végétales, ou semences à activité enzymatique selon l'invention, ou d'extraits végétaux à activité enzymatique tels que définis ci-dessus, ou encore de polypeptides recombinants selon l'invention, tels que la LGC recombinante, ou ses polypeptides dérivés tels que définis ci-dessus.
L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation en tant qu'aliments des plantes, fragments de plantes, cellules de plantes, ou semences à activité enzymatique selon l'invention.
A ce titre l'invention a plus particulièrement pour objet tout aliment constitué d'une plante à activité enzymatique telle que décrite ci-dessus, ou de fragments de cette plante, ou encore de semences issues de cette dernière, et susceptible(s) de présenter un caractère comestible chez l'Homme.
L'invention vise également toute composition alimentaire contenant une (ou plusieurs) plante(s) à activité enzymatique telle(s) que décrite(s) dessus, et/ou des fragments de cette (ces) plante(s), et/ou un (ou plusieurs) extrait(s) végétal (végétaux) à activité enzymatique tel(s) que décrit(s) dessus, et/ou un (ou plusieurs) polypeptide(s) recombinant(s) de l'invention, le cas échéant en association avec un (ou plusieurs) autre(s) composé(s) comestible(s).
Avantageusement, les plantes ou fragments de plantes, contenus dans la composition alimentaire susmentionnée, se présentent sous forme de broyats.
Les aliments selon l'invention, encore désignés aliments fonctionnels, ou les compositions alimentaires selon l'invention sont plus particulièrement destinés à faciliter l'absorption des graisses animales ou végétales ingérées par un individu sain ou atteint d'une ou plusieurs pathologies affectant ou non le taux de production de lipase gastrique et/ou pancréatique. A ce titre, les aliments ou compositions alimentaires de l'invention, sont avantageusement utilisés en tant que compléments nutritionnels.
L'invention a également pour objet l'utilisation de plantes, de fragments de plantes, cellules végétales, ou semences à activité enzymatique selon l'invention, ou d'extraits végétaux à activité enzymatique tels que définis cidessus, ou encore de polypeptides recombinants selon l'invention, tels que la LGC recombinante, ou ses polypeptides dérivés tels que définis ci-dessus, pour l'obtention de médicaments (ou compositions pharmaceutiques) destinés à faciliter l'absorption des graisses animales ou végétales ingérées par un individu sain ou atteint d'une ou plusieurs pathologies affectant ou non le taux de production de lipase gastrique et/ou pancréatique.
Notamment, de telles compositions pharmaceutiques sont avantageusement utilisées chez les individus subissant un traitement médical altérant le mécanisme d'absorption des graisses, ou encore chez les personnes âgées.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont aussi plus particulièrement destinées au traitement des pathologies liées à l'insuffisance de lipases (notamment de lipase(s) gastrique et/ou pancréatique) dans l'organisme, et plus particulièrement de pathologies telles que la mucoviscidose, et l'insuffisance pancréatique exocrine.
L'invention a plus particulièrement pour objet toute composition pharmaceutique comprenant un (ou plusieurs) extrait(s) végétal (végétaux) à activité enzymatique(s) décrit(s) ci-dessus, et/ou un (ou plusieurs) polypeptide(s) recombinant(s) selon l'invention, le cas échéant en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
L'invention a plus particulièrement pour objet toute composition pharmaceutique susmentionnée contenant de la LGC recombinante, et/ou le polypeptide (A54) et/ou le polypeptide (A4), sous forme essentiellement pure ou sous forme d'extraits enzymatiques tels que décrits ci-dessus.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont de préférence administrables par voie orale, et se présentent notamment sous forme de gélules, de comprimés ou de poudres à diluer.
La posologie journalière chez l'homme est avantageusement d'environ 200 mg à environ 1000 mg, répartis de préférence au moment des repas principaux, lorsque lesdites compositions pharmaceutiques contiennent des extraits enzymatiques tels que décrits ci-dessus, et d'environ 100 mg à environ 500 mg, lorsque lesdites compositions pharmaceutiques contiennent des polypeptides recombinants selon l'invention sous forme essentiellement pure.
Dans la variante de réalisation de la figure 8, la couche de polyuréthanne 20 est placée non pas sur la roue dentée comme dans la figure 6, mais sur le côté de l'écrou 5c faisant face à la roue dentée 3c, qui est identique à la roue dentée 3a. Il est loisible de prévoir sur l'écrou 5c une couche de polyuréthanne 20 sur la face gauche venant en butée contre la roue dentée 3c, et une autre couche de polyuréthanne 21 sur la face droite, de façon à réaliser un amortissement aux deux extrémités de la course de l'écrou.
Ainsi les chocs, qui se produisent en bout de course de l'écrou, sont amortis à la fois au niveau de la butée de fin de course par les couches de polyuréthanne 19 ou 20, et 21, et au niveau des dents de l'engrenage par le polyuréthanne moulé ou injecté dans la zone intermédiaire de la roue dentée 3b ou 3c.
ELECTROVALVE PROPORTIONNELLE DE REGULATION DE DEBIT POUR CIRCUIT HYDRAULIQUE La présente invention concerne les électrovalves proportionnelles de régulation de débit pour circuits hydrauliques.
De telles électrovalves sont connues et utilisées depuis longtemps dans de nombreux circuits hydrauliques, de façon à obtenir un débit proportionnel à un signal de commande.
Les électrovalves connues de ce type comprennent généralement un distributeur à tiroir coulissant dans un alésage dans lequel sont formées des gorges annulaires. Des portées formées à la surface du tiroir définissent avec les gorges de l'alésage des passages pour un fluide. Selon la position du tiroir dans l'alésage, la section de ces passages varie, et il est ainsi possible de contrôler le débit de fluide fourni par l'électrovalve en commandant la position du tiroir.
On connaît par exemple du document US-A-4 014 509 une électrovalve de ce type, dans laquelle le tiroir distributeur est intercalé entre deux ressorts agissant sur chaque extrémité du tiroir dans des chambres où règne une pression réduite par rapport à la pression d'une source de fluide sous haute pression.
La pression dans ces chambres d'extrémité peut être contrôlée par deux électrovalves proportionnelles, de sorte que le tiroir distributeur se déplace depuis sa position centrale neutre en fonction de la différence des pressions régnant dans ces chambres.
Cette électrovalve présente les inconvénients connus des distributeurs à tiroir, à savoir un usinage très précis, et donc coûteux, des portées et des gorges, et une inertie relativement élevée du tiroir distributeur interdisant des variations rapides de débit. Elle fonctionne en centre ouvert , c'est à dire que, même au repos, le fluide en provenance de la source de fluide sous haute pression traverse l'électrovalve et retourne au réservoir d'où il est soutiré par la source de fluide. Il en résulte une consommation d'énergie importante par la source de fluide, et un échauffement important du fluide lui-même. D'autre part, elle nécessite que les ressorts d'extrémité soient très rigoureusement appariés pour assurer le centrage exact du tiroir distributeur.
De plus, elle présente un encombrement important du fait qu'elle est formée d'une partie purement électrique avec le bobinage électrique, les pièces polaires et un noyau magnétique mobile, et d'une partie purement hydraulique avec le tiroir distributeur coulissant dans un alésage formé dans un corps comportant différents conduits. Le noyau magnétique mobile n'agissant pas sur le tiroir, mais sur un clapet pour régler la pression dans une des chambres d'extrémité, il s'ensuit que la position du tiroir distributeur, et par conséquent le débit de fluide fourni par cette électrovalve, ne peuvent être réglés avec toute la précision désire.
La présente invention a donc pour objet de proposer une électrovalve de régulation de débit qui permette un réglage très précis du débit de fluide et dont le fonctionnement soit fiable en toutes circonstances. Elle doit de plus avoir un encombrement réduit, et être de fabrication aisée pour en réduire le coût.
Dans ce but, I'invention propose une électrovalve de régulation de débit pour un circuit hydraulique, comportant un bobinage électrique coopérant avec un noyau magnétique mobile sous l'effet d'une force d'actionnement par un champ magnétique créé par le bobinage électrique, et un élément de régulation de débit entre une chambre d'entrée reliée par un conduit d'entrée à au moins un générateur de fluide sous haute pression et une chambre de sortie reliée par un conduit de sortie à un circuit utilisateur.
Selon la présente invention, I'élément de régulation de débit comporte un orifice calibré provoquant une perte de charge entre la chambre d'entrée et la chambre de sortie exerçant sur l'élément de régulation de débit une force d'origine hydraulique opposée à la force d'actionnement.
L'invention sera mieux comprise, et d'autres buts, caractéristiques et avantages de celle ci apparaîtront plus clairement à la lecture de la description qui suit d'un mode de réalisation préféré, donné à titre d'exemple non limitatif et en référence au dessin annexé sur lequel - La Figure 1 représente schématiquement en coupe un mode de réalisation d'une électrovalve conforme à la présente invention, et - La Figure 2 représente schématiquement un circuit hydraulique mettant en oeuvre l'électrovalve de la Figure 1.
L'électrovalve représentée sur la Figure 1, et désignée dans son ensemble par la référence A, comporte un bobinage électrique 10 susceptible de faire circuler un flux magnétique dans deux pièces polaires 12 et 14. Le bobinage 10 est situé dans un volume délimité extérieurement par une carcasse cylindrique en matériau magnétique 16 et intérieurement par un manchon cylindrique en matériau amagnétique 18, des joints assurant l'étanchéité entre le manchon 18 et chacune des pièces polaires 12 et 14.
Ainsi assemblées, les pièces polaires 12 et 14 définissent un alésage interne commun 20, dans lequel coulisse, par l'intermédiaire d'un manchon fin 21 en matériau amagnétique, un noyau magnétique 22, par exemple en acier doux ou très doux, soumis au flux magnétique circulant dans les pièces polaires 12 et 14 et dans la carcasse 16 de façon à former un circuit magnétique pratiquement fermé.
La pièce polaire 14 est conformée de façon à ce que l'électrovalve A ait un fonctionnement du type proportionnel. De façon plus précise, on sait que le bobinage des électrovalves de ce type présente la caractéristique essentielle de pouvoir fournir un effort sensiblement constant pour un courant déterminé dans une plage de déplacement appréciable du noyau magnétique 22, de l'ordre de plusieurs millimètres. Cette caractéristique est mise à profit dans la présente invention pour assurer la fonction recherchée de modulation de débit par la modulation du courant électrique circulant dans le bobinage 10.
Les virus à ADN qui forment la base des vecteurs viraux de l'invention sont choisis parmi tous les virus à ADN double brin capable d'infecter des cellules animales et de préférence de vertébrés. On peut citer comme exemple les virus herpétiques, les adénovirus et les pox-virus.
Parmi la famille des virus herpétiques (Herpesviridae), il peut s'agir d'alphaherpesvirinae, betaherpesvirinae ou gammaherpesvirinae.
Les virus herpétiques préférés peuvent être d'origine humaine ou animale, par exemple HSV-1, HSV-2, le virus cytomégalique humain (HCMV), les virus humains HHV-6 et HHV-7, le virus d'Epstein-Barr, le virus Varicella Zoster (VZV), ou le virus de la pseudorage porcine (PRV).
Les virus herpétiques sont particulièrement préférés en raison de leur grande taille (génome de 120 à 200 Kb environ) permettant l'inclusion de séquences hétérologues de taille importante. De plus, leur spectre d'hôtes cellulaire est très large.
Certains virus de cette famille sont neurotropes, permettant l'infection de cellules nerveuses, tissus que ne peuvent atteindre le rétrovirus. Cette propriété est donc particulièrement avantageuse dans la thérapie génique de maladies nerveuses du CNS.
D'autres membres de la famille des virus herpétiques sont lymphotropes. Ces virus peuvent être rendus défectifs par la délétion ou l'inactivation d'au moins un gène essentiel tel le gène IE3 chez HSV-1 ou leurs homologues chez d'autres virus herpétiques.
Les adénovirus, par exemple ceux du groupe C ou autres, peuvent également être utilisés. Ces virus ont une taille moins importante que celles des virus herpétiques (un génome d'environ 35 à 40 Kb). Ils ont un tropisme naturel pour l'épithélium respiratoire, la cornée et le tractus digestif Ces virus peuvent être rendus défectifs par la délétion de tout ou partie des gènes régulateurs E1A et E1B.
Les poxvirus peuvent également être mis en oeuvre dans la construction de vecteurs viraux selon l'invention. Ces virus ont une taille génomique d'environ 120 à 300 Kb. Ils ont un spectre de cellules hôtes large. Parmi cette famille de virus, le virus de la vaccine est préféré.
Selon l'invention, le vecteur viral comprend dans son génome, outre les séquences propres au virus à ADN décrit ci-dessus, des séquences d'origine rétrovirale c'est-à-dire un "composant rétroviral" qui comprend en particulier, au moins une unité de transcription rétrovirale.
Dans le contexte de l'invention, l'expression "unité de transcription rétrovirale" signifie une séquence d'ADN, comprenant un premier élément constitué des séquences régulatrices nécessaires à la transcription et un deuxième élément constitué d'au moins une séquence à transcrire, l'un ou l'autre de ces éléments étant au moins en partie d'origine rétrovirale. De préférence, l'élément d'origine rétrovirale correspond soit à la partie du génome rétroviral agissant en cis, soit à la partie du génome rétroviral agissant en trans pour l'accomplissement du cycle rétroviral.
Plus particulièrement, l'une des unités de transcription rétrovirale (dit "unité de transcription transcomplémentante") comporte des séquences codant pour les protéines Gag, Pol et/ou Env sous le contrôle de séquences régulatrices fonctionnelles dans la cellule eucaryote. Il est possible d'introduire des variantes des gènes gag, pol et env, ces variantes comportant des substitutions, délétions ou insertions de nucléotides par rapport aux gènes sauvages, à condition que les fonctions essentielles des protéines soient maintenues. Ces fonctions sont les suivantes gag code pour le précurseur des protéines de capside ; pol donne lieu à la transcriptase inverse et à une enzyme impliquée dans l'intégration provirale et env code pour le précurseur de la glycoprotéine d'enveloppe.
Il est possible d'inclure le gène env sur une unité de transcription indépendante de celle contenant gag et pol. Cette unité de transcription indépendante peut elle-même être incluse dans la même molécule d'ADN et par conséquent dans le même vecteur viral, ou peut en revanche être incluse dans un vecteur viral séparé.
Les séquences régulatrices mises en oeuvre dans l'unité de transcription transcomplémentante comprennent des séquences d'initiation et de terminaison de transcription, fonctionnelles dans la cellule hôte. Ces séquences peuvent être d'origine animale ou virale. Comme promoteur, on peut citer des promoteurs fort et constitutif, par exemple le promoteur HCMV, le promoteur du gène herpétique Ive3, ou celui de la thymidine kinase herpétique. On peut également avoir recours à des promoteurs spécifiques de tissus ou à des promoteurs inductibles. Comme exemple de promoteur spécifique de tissu, on peut citer le promoteur du préproenképhaline, le promoteur de l'énolase-neurospécifique, et les promoteurs de n'importe quel gène s'exprimant dans un tissu particulier.Comme exemple de promoteur inductible, on peut citer les promoteurs des protéines de choc thermique, etc..
L'unité de transcription "vecteur" comporte une séquence dite "hétérologue" sous le contrôle de séquences régulatrices de transcription, fonctionnelles dans la cellule eucaryote - une séquence d'origine rétrovirale permettant l'encapsidation du transcrit et sa rétrotranscription - au moins une partie des LTR 5' et 3' d'un rétrovirus, ladite partie conférant la capacité d'encapsidation, de rétrotranscription et d'intégration.
La séquence "hétérologue" comprise au sein de cette unité de transcription peut être toute séquence dont le transfert dans la cellule ou organisme cible est désiré. Il s'agit de toute séquence transcriptible codant pour une ou plusieurs protéine(s) ou pour une partie d'une protéine, ou qui donne lieu, après transcription, à une séquence complémentaire d'un produit de transcription endogène ou exogène à la cellule, par exemple complémentaire d'une séquence virale. La séquence hétérologue peut comprendre une ou plusieurs séquence(s) codante(s) ou non-codante(s), ou un mélange des deux. Elle peut être hétérologue ou homologue vis-à-vis de la cellule et hétérologue ou homologue vis-à-vis du vecteur. La séquence hétérologue peut aussi être désignée "transgène". La taille de la séquence hétérologue doit être compatible avec l'encapsidation des particules rétrovirales (environ 7 Kb).
La séquence hétérologue est souvent une séquence dont le produit de transcription ou de traduction exerce un effet thérapeutique dans une cellule ou dans un organisme. Comme exemple de séquences hétérologues, on peut citer un gène thérapeutique de maladie à caractère mono- ou multigénique, un gène codant pour une cytokine, un gène suicide, un gène suicide conditionnel, un gène à activité antivirale, un gène à activité antitumorale, un gène thérapeutique de maladie neurodégénérative, ou un gène marqueur.
Par ailleurs, après élimination des séquences artéfactuelles, il s'avère que les autres clones séquencés correspondent à des séquences de type MSRV-1 telles que décrites dans les exemples 1 à 3.
Après la vérification des séquences présentes dans ce matériel nucléique provenant de ces fractions purifiées contenant des particules infectantes dont au moins une partie est associée à une activité transcriptase inverse, le matériel nucléique restant a été utilisé pour effectuer une capture spécifique des acides nucléiques portant la séquence MSRV2 préalablement identifiée et décrite dans les exemples 1 à 3.
Dans une étape préalable, le matériel génétique portant la séquence MSRV2 a été amplifié par une technique PCR monodirectionnelle de 50 cycles à l'aide d'une seule amorce. Cette amorce est couplée à une molécule de biotine à son extrémité 3', permet l'amplification monodirectionnelle de 3' vers 5' et correspond à la séquence suivante SEQ ID NO 30 5' TAAAGATCTAGAATTCGGCTATAGGCGGCATCCGGCAACT 3' Ensuite, la capture a été effectuée en solution avec des billes magnétiques couplées à l'avidine (Dynabeads@;) selon les instructions du fabricant (Dynal) et, après une série de lavages à température ambiante permettant d'éliminer les acides nucléiques non couplés à une biotine, une PCR a été effectuée directement sur ces billes lavées avec une amorce spécifique en 3' et une amorce en 5' apportée par une solution d'oligonucléotide de 10 bases (10 mer) avec une séquence aléatoire.
L'amorce d'amplification spécifique orientée de 3' vers 5' correspond à la séquence identifiée par SEQ ID N013: 5' GCATCCGGCAACTGCACG 3' La PCR effectuée à 350C sur 40 cycles avec ces amorces a permis d'amplifier le matériel génétique spécifiquement biotinilé par la première étape de PCR et capturé sur les billes Dynabeads@. Après clonage avec le kit "TA cloning" de 1'ADN amplifié par cette seconde étape de PCR et séquençage des clones recombinants, selon les techniques décrites dans l'exemple 1, une séquence de 748 paires de bases a été obtenue. Cette séquence d'acides nucléiques SEQ ID N012 est présentée dans la figure 12.
Cette séquence élonguée sera dénommée ensuite MSRV-2EL1.
La séquence inverse complémentaire de l'amorce SEQ ID N013 est présente à l'extrémité 3' et est encadrée sur la figure 12. En amont de cette amorce, on retrouve la séquence déjà identifiée dans les clones MSRV-2A et MSRV2B.
La traduction en acide aminés de cette séquence selon les 6 trames de lectures possibles est présentée dans la figure 13.
Un alignement de la séquence MSRV2-A (SEQ ID N010) sur la séquence MSRV-2EL1 (SEQ ID N012) est présenté dans la figure 14. On note que la séquence MSRV2A est rigoureusement identique à la séquence élonguée, hormis quelques différences dans la région correspondant aux amorces dégénérées utilisées pour obtenir MSRV-2A.
Cette région est soulignée dans cette figure ; par ailleurs, la région d'hybridation de l'amorce SEQ ID N013, (hormis la queue de clonage) est encadrée, celle de l'amorce SEQ ID N014 est présentée entre crochets. La séquence réelle du génome MSRV-2 dans cette région est vraisemblablement celle de MSRV-2EL1, où elle n'a pas été imposée par des amorces hybridées à basse stringence comme c'est le cas pour MSRV-2A (et MSRV-2B de même).
La séquence MSRV-2EL1 correspond donc à une nouvelle région séquencée du génome MSRV-2. Ceci a été vérifié à l'aide de nouvelles amorces PCR définies dans MSRV-2EL1 et MSRV-2A qui ont permis une amplification spécifique sur les acides nucléiques utilisés pour le clonage décrit dans cet exemple.
Les exemples suivants présentent différents résultats d'amplifications spécifiques MSRV2 qui confirment la relation avec la présence d'agent infectant correspondant dans les cultures cellulaires décrites, pour permettre l'isolement d'un virus de type LM7 (H. Perron et coll. Res. Virol. 1989; 140, 551-561) et, aussi, in vivo, chez les patients atteints de SEP.
Le résultat d'interrogation de la banque de donnée Genebank@, actualisée en août 1994, avec la séquence MSRV-2EL1 ne montre aucune homologie significative avec des séquences génétiques connues à ce jour. Cependant, l'interrogation des traductions possibles en acides aminés selon les 6 trames de lecture potentielles de cette séquence MSRV-2EL1, montre des homologies partielles avec des séquences bactériennes, virales ou cellulaires.
L'absence d'amplification PCR avec des amorces spécifiques sur de 1'ADN humain normal montre qu'il ne s'agit pas d'une séquence d'origine cellulaire. MSRV-2 est donc un agent infectant exogène à l'homme. Cependant, la nature dégénérée des mélanges d'amorces, utilisées selon des variantes de la technique décrite par Shih et coll., qui ont permis l'identification des premiers éléments de séquence dénommés MSRV-2A et MSRV-2B, peut avoir permis l'amplification imprévue d'un génome n'appartenant pas à un rétrovirus, ni même à un gène codant pour une ADNpolymérase ARN-dépendante. La co-détection quasisystématique de MSRV-1 dans les cultures provenant de SEP et exprimant une activité transcriptase inverse peut s'expliquer par une association pathologique entre deux agents différents dont l'un au moins est un rétrovirus (MSRV-1).
La détection chez les malades de ces deux types de séquences décrite dans les exemples suivants corrobore une association pathologique. Cependant un seul de ces éléments peut suffire à expliquer la pathologie induite dans la SEP.
EXEMPLE 8: DETECTION DE SEQUENCES SPECIFIQUES MSRV-2 DANS DIFFERENTS ECHANTILLONS DE CELLULES HUMAINES PROVENANT DE PATIENTS ATTEINTS DE SEP OU DE TEMOINS La séquence MSRV-2EL1 (SEQ ID N012) a permis de définir plusieurs couples d'amorces oligonucléotidiques utilisables pour l'amplification d'ADN ou d'ARN spécifiques par la technique PCR.