INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
On ajoute 0,2 ml d'acide acétique glacial et 10 g de bioxyde de manganèse et agite 24 heures à température ambiante.
Le milieu réactionnel est filtré, l'oxyde de manganese lavé à l'acétate d'éthyle, le filtrat lavé à l'eau et la phase organique est séchée puis évaporée à sec.
On purifie sur silice avec le mélange éluant cyclohexane 7/acétate d'éthyle 3 et obtient 1,2 g de produit attendu (cristaux jaunes).
STADE 4 : 2,2-diphenyl-7-amino-1,3-benzodioxole-5-carboxylate de méthyle On introduit 1,3 g de produit obtenu au stade 3 cidessus dans 60 ml de tétrahydrofuranne, ajoute 0,1 g de palladium à 18 % sur charbon activé et hydrogène 2 heures sous 600 mbar de pression.
On purifie sur silice avec le mélange éluant cyclohexane 7/ acétate d'éthyle 3 et obtient 1,1 g de produit attendu (gomme blanche) ANALYSES IR CHCl3 (cl 1) =C-NH2 3430-3390 -O 1713 NH2 + Aromatique 1649-1609-1586-1508 STADE 5 : 2,2-diphenyl-7-(benzoylamino)-1,3-benzodioxole-5- carboxylate de méthyle On introduit 0,4 g du produit obtenu au stade 4 cidessus dans 15 ml de tétrahydrofuranne anhydre, ajoute 0,25 ml de pyridine et 0,15 ml de chlorure de benzoyle et agite une nuit à température ambiante.
On verse dans 100 ml d'eau, la phase aqueuse est neutralisée par une solution d'acide chlorhydrique 2N, puis est extraite avec trois fois 50 ml d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée avec 100 ml d'eau, séchée et évaporée à sec.
On purifie sur silice avec le mélange éluant cyclohexanne 7/acétate d'éthyle 3 et obtient 0,5 g de produit attendu.
ANALYSES IR CHCl3 (cm-l) Peu ou pas de =C-NH2 --C-NH 3430 -O 1716-1685 Aromatique + amide II 1639-1619-1602-1580-1536-1496 EXEMPLE 98 : 3,4-dihydroxy-5-(benzoylamino)-benzoate de méthyle On procède comme à l'exemple 2 à partir de 0,7 g de produit de l'exemple 97 dans 100 ml d'un mélange acide acétique 80/eau 20.
On chauffe au reflux pendant 4 heures.
La solution est versée dans 300 ml d'eau, on extrait avec trois fois 100 ml d'éther isopropylique et la phase organique est lavée à l'eau, séchée et évaporée à sec.
Après chromatographie sur silice avec le mélange éluant cyclohexane 5/acétate d'éthyle 5, puis purification par recristallisation dans 10 ml d'acétate d'éthyle et 5 ml de cyclohexane, on obtient 0,21 g de produit attendu (cristaux blancs) F = 2110C.
ANALYSES IR NUJOL (cm-l) Absorption OH/NH - 3420 + absorption générale -C=O - 1675 Aromatique + amide II 1610-1580-1550-1510-1488 EXEMPLE 99 : 2,2-diphényl-7-(((4-méthylphéyl)sulfonyl)oxy)- 1,3-benzodioxole-5-carbothioate de O-méthyle On introduit 4,5 g du produit de l'exemple 23 dans 45 ml de toluène anhydre et ajoute progressivement 18 g de réactif de Lawesson pendant 8 jours de reflux.
Le milieu réactionnel est versé dans 150 ml d'eau. La phase aqueuse est extraite avec trois fois 50 ml d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée à l'eau et séchée.
Les polypeptides de l'invention peuvent être obtenus par expression dans un hôte cellulaire d'une séquence nucléotidique telle que décrite ci-dessus, par synthèse chimique, sur la base des séquences SEQ ID n"l ou SEQ ID n"2, SEQ ID N"3, SEQ ID N" 4, SEQ ID N" 5 en utilisant les techniques connues de l'homme du métier, ou par combinaison de ces techniques.
Les différentes séquences nucléotidiques de l'invention peuvent être d'origine artificielle ou non.
I1 peut s'agir de séquences d'ADN ou d'ARN, obtenues par exemple par criblage de banques d'ADN au moyen des sondes élaborées sur la base de la séquence SEQ ID n" 6 ou SEQ ID n" 7, SEQ ID n" 8, SEQ ID n" 9, SEQ ID n" 10. De telles banques peuvent être préparées par des techniques classiques de biologie moléculaire connues de l'homme de l'art.
Les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent également être préparées par synthèse chimique, ou encore par des méthodes mixtes incluant la modification chimique ou enzymatique de séquences obtenues par criblage de banques.
Les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent être utilisées pour la production des polypeptides tels que définis précédemment. La séquence nucléotidique utilisée dans ce cas sera alors placée sous le contrôle de signaux permettant son expression dans un hôte cellulaire. L'hôte cellulaire utilisé, peut être choisi parmi des systèmes procaryotes, comme les bactéries ou eucaryotes, comme par exemple les cellules d'insecte ou les levures ou tout autre système avantageusement disponible dans le commerce. Les signaux contrôlant l'expression des polypeptides sont choisis en fonction de l'hôte cellulaire utilisé. A cet effet, les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent être insérées dans des vecteurs à réplication autonome au sein de l'hôte choisi, ou des vecteurs intégratifs de l'hôte choisi.De tels vecteurs seront préparés selon les méthodes couramment utilisées par l'homme de métier, et les clones en résultant peuvent être introduits dans un hôte approprié par des méthodes standard telles que l'électroporation.
Les vecteurs d'expression contenant au moins l'une des séquences nucléotidiques définies ci-dessus soumise au contrôle de signaux appropriés pour l'expression de ladite séquence nucléotidique, font également partie de la présente invention.
Avantageusement, les séquences nucléotidiques de l'invention peuvent être insérées dans le vecteur Lorist 6 (15,16) pour former un cosmide adapté à la transformation de la bactérie E. coli.
Selon un mode de réalisation particulier, le vecteur d'expression est le cosmide B 1770 constitué de la séquence SEQ ID n" 6 insérée dans le vecteur Lorist 6. Ce cosmide, contenu dans la bactérie E. coli NM 554 a été déposé auprès de la CNCM sous le numéro I 1602.
L'invention vise également les cellules hôtes transfectées par ces vecteurs d'expression. Ces cellules recombinantes peuvent être obtenues par introduction d'une séquence nucléotidique insérée dans un vecteur tel que définis ci-dessus, puis culture desdites cellules dans des conditions permettant la réplication et/ou l'expression de la séquence nucléotidique de l'invention.
Les cellules utilisées pour les transfections correspondent avantageusement à celles mentionnées ci-dessus.
Selon un mode de réalisation avantageux, les cellules utilisées seront des cellules de E. coli, en particulier des cellules de la souche E. coli NM 554.
Les cellules ainsi obtenues contenant une séquence nucléotidique codant pour un polypeptide précurseur peuvent être utilisées pour étudier la capacité de différents produits à agir au niveau l'épissage protéique. Plus précisément, ces cellules peuvent être utilisées pour étudier les produits d'expression des séquences nucléotidiques définies ci-dessus en présence de différents composés susceptibles d'altérer la maturation de cesdits produits d'expression.
Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation des polypeptides comprenant dans leur enchaînement d'acides aminés une séquence d'ADN gyrase bactérienne dans laquelle est contenue une séquence d'intéine, et de toute séquence nucléotidique codante de cesdits polypeptides pour la fabrication de nouveaux composés antibiotiques ou antifongiques, agissant au niveau des mécanismes contrôlant l'épissage protéique.
Comme cela l'a en effet été mentionné précédemment, l'inhibition de l'épissage protéique et l'accumulation du polypeptide précurseur en résultant, peuvent avoir des conséquences létales du fait d'une carence en protéine mature indispensable. Par exemple, dans les cas de 1'ADN polymérase ou de la sous-unité A de 1'ADN gyrase, la perte de l'une de ces deux activités essentielles résulterait en une sévère inhibition de la croissance cellulaire et en fin de compte en une mort cellulaire. Dans le cas d'un organisme pathogène, la possibilité d'inhiber ou de contrôler l'épissage protéique constituerait donc un progrès thérapeutique impor tant. L'un des moyens permettant d'atteindre cet objectif, consiste à utiliser des leurres ou des "substrats suicides" pour la réaction d'épissage protéique, capables de bloquer l'excision de l'intéine ou d'empêcher la ligature normale des deux extéines.De tels inhibiteurs peuvent être constitués par des peptides ayant la même séquence ou une séquence similaire à celle des zones de jonction intéine-extéine. Compte tenu de la conservation des séquences en acides aminés de ces zones particulières, ces peptides pourraient avoir un spectre d'activité étendu en inhibant la maturation de plusieurs protéines non reliées fonctionnellement, et donc, leur effet toxique au niveau de la cellule cible serait d'autant plus accru.
Inversement, un effet plus spécifique peut être obtenu par des composés constitués par des peptides présentant une similitude de séquence avec un polypeptide précurseur particulier. Ces composés constituant alors un "leurre" pour les mécanismes normalement sollicités dans l'épissage protéique, leur utilisation pourrait résulter en une inhibition hautement spécifique sans répercussion sur d'autres événements d'épissage protéique dans la cellule. L'avantage dans ce cas d'une telle spécificité serait de ne pas avoir d'effets potentiellement contraires au niveau de l'hôte et de réduire fortement le risque de l'émergence d'une résistance généralisée, comme cela est vu parfois avec des antibiotiques à large spectre.
L'invention fournit des moyens pour fabriquer des produits altérant la maturation de protéines indispensables au développement d'agents infectieux par l'altération de l'épissage protéique des précurseurs polypeptidiques de ces protéines, par l'utilisation des polypeptides selon l'invention.
On obtient la "lame en la moulant dans une position écartée du corps telle celle représentée FIG 3 en trait mixte car il ne serait pas possible de la mouler dans sa situation de fonctionnement mais cela est aussi nécessaire pour la bonne marche du système et il faut bien calculer la forme à implanter dans le moule afin qu'après moulage et après mise en situation FIG 3 obtenir une force latente suffisante pour chacune de ses "branches".Ainsi le dispositif dans sa position d'attente FIG 2 toute la "lame" par une réaction de "la branche principale" 8(A B) reviendra toujours à sa position initiale en butée contre la paroi 6D et la réaction de "la branche secondaire" 8(C) faire fermer par "l'obturateur" 8D la sortie et dans son action garder une trajectoire relativement rectiligne par la rotation et l'allongement de la "première branche" due à sa forme et sa flexion ainsi que la force latente de la deuxième branche qui par sa prédisposition la fait s'ouvrir.Pour maintenir la lame en situation de distribution on clippe cet élément c'est à dire le faire plus grand que le passage autorisé et le forcer lors de sa première mise en place en bénéficiant de l'élasticité par sa matière , par sa minceur , le système comme cela est intégrable dans l'étui en carton en état de marche sans risque de mal façon Les différentes figures (9 10 11) en perspective représentent la configuration de la description faite sans la boîte en carton , la FIG 9 représente la pièce moulée du dispositif en situation de moulage , la FIG 10 la représente en situation d'attente de distribution , la FIG 11 la représente en action Le fonctionnement du système enfermé par cet exemple dans une boîte en carton et ayant des objets dans sa "réserve" se réalise de la manière suivante , en tenant la boîte verticalement enserrée entre deux doigts l'index et le pouce, les objets sont attirés par gravitation vers le bas ils sont par l'intermédiaire de la "rampe" et la "goulotte" canalisés vers la partie transitoire du système , le premier objet est naturellement à l'intérieur de la "chambre" en appui sur 8(D) avec le majeur il suffit d'appuyer sur le "coude" de la "lame" pour que celle-ci permette par flexion dans un mouvement rotatif une trajectoire contrôlée rapide et continuelle faisant qu'il laisse passer l'objet tout en barrant le passage vers la chambre à l'objet suivant . L'objet libéré passe "le trou de sortie". En relâchant la pression sur le "coude" la "lame" revient à sa situation de départ limitée dans son recul et en butée contre la cloison 6(D) , 8(F) laissant libre l'entrée de la "chambre" ou du "couloir" 4 et 8(D) obturant "le trou de sortie" . Un nouvel objet pénètre dans la "chambre".
De moulage une lamelle en équerre ou épaisseur peut être ajoutée vers l'intérieur dessus la partie de la "lame" 8D ayant pour avantage d'éloigner l'objet de la sortie NOTA: La forme de la lame incurvée 8A afin de donner une course de la seconde partie le plus rectiligne possible aide à mettre en oeuvre le système en prévoyant facilement tous les paramètres mais il serait possible de laisser la lame avoir un déplacement rotatif en adaptant toutes les parties concomitantes Une autre solution du dispositif selon l'invention peut être adoptée et illustrée dans leur deux situations déterminantes par les FIG (12 13 15) et FIG (16 17 19).Le dispositif est semblable au précédant dans son ensemble mais au lieu de mettre "la lamelle" 8(E F) FIG 7 sur le bord gauche de l'ouverture P elle est mise FIG 18 sur le bord droit , la cloison 6C descend plus vers le bas , "la chambre" offre son ouverture plus latéralement par son recouvrement avec la cloison 6B , le profil de la "glissière" 2C est d'abord en pente douce pour monter jusqu'à la cloison 6C , il faut une distance entre 8F et 8D calculée afin qu'en fin de course C FIG 17 8F obstrue l'entrée de "la chambre" , le volume 5 contient la trajectoire maximum que va faire l'extrémité 8D "La lame" est en situation de travailler une fois que son extrémité est à l'intérieur du corps FIG 13 forcée à sa première mise en place comme précédemment La "lame" est moulée dans la situation en traits mixtes FIG 14 afin de pouvoir la mouler mais aussi obtenir une force latente par ses "branches" provoquée par sa position de distribution matérialisé en trait plein et contraignant par élasticité celles-ci . La forme de la "lame", par ses "branches" est calculée en combinaison avec sa force latente et la "glissière" 2C, pour avoir lors de son action en un premier temps une trajectoire relativement parallèle et ensuite remonter plus vite.Entre le plan de l'élément 8(F) et celui 8(E) il y a un plan faisant chanfrein il est bénéfique pour distribuer les gélules car dans l'action le point d'équilibre de la gélule est plus vite dépassé et elle tombe plus vite , on pourrait l'agrandir tel qu'il est beaucoup plus.
Une autre possibilité de réalisation de l'invention FIG (23 24 26) adoptant le même principe de distribution que l'une ou l'autre des deux solutions ci-avant évoquées consiste telle la FIG 23 faire une deuxième paroi identique à la première mais dans la symétrie de l'axe de l'étui, la lame serait telle la FIG 25, cette solution serait avantageuse pour le cas de grosse section de boîte en carton afin de pouvoir centrer la distribution . Pour obtenir cette solution et pouvoir mouler cette pièce verticalement , le moule bénéficie d'une technique permettant le démoulage des parties creuses normalement et de l'extérieur par des tiroirs.
Une extension à l'exemple précédant est la figure 30 où toute la boite est en une seule pièce y compris le couvercle rattaché au corps par un film charnière , elle serait moulée couvercle ouvert.
Dans le même genre telle la FIG 32 le corps est complètement le réceptacle et il a comme couvercle sur film charnière une de ses grandes faces , l'outillage serait moins onéreux que celui d'avant Une possibilité est à travers la FIG 31 de faire du "corps" un contenant , cette solution serait avantageuse pour le conditionnement manuel.
Une possibilité quelque soit les exemples vus par les FIG (27 28 29) , est de pouvoir mettre la "réserve" de même épaisseur que la largeur de distribution ce qui supprime la "rampe" 2A Une "lamelle" faisant ressort peut être ajoutée sur la première branche afin si nécessaire de renforcer la force de réaction de la "lame" Une cloison en pente dans le volume 5 FIG (13 17) peut être ajoutée pour ci-besoin imposer une torsion à l'extrémité de la "lame" afin de faciliter le passage d'objet La description des dispositifs à travers toutes les solutions est volontairement restrictif par souci de clarté quant aux moyens mis en oeuvre pour arriver à ce résultat mais le dispositif selon l'invention peut avoir une lame rapportée par n'importe quel moyen (colle, rivetage, pincement etc..) Le dispositif par la pièce moulée peut-être de toutes matières présentant les caractéristiques et propriétés nécessaires au système, comme papier enduit, métal, plastique thermo-formé etc. Il peut être aussi par sa lame et son corps de deux natures différentes.
Une solution illustrée par les FIGURES (33 34 36) en position fermée et (37 38 40) en position ouverte offre la possibilité d'une sortie latérale, pour cela l'échancrure P sur la lame à été supprimé, l'obturateur 8D est maintenant situé verticalement sur l'extrémité de la lame face au trou de sortie fait lui même latéralement sur l'étui en carton, une diminution de la hauteur de la cloison 6E et ici d'une nervure de renfort permet le passage lors du fonctionnement de l'obturateur 8D, la cloison 2B vers la sortie de "la chambre" se termine par une pente afin d'orienter l'objet vers la sortie latéralement. La FIGURE 39 représente la lame en perspective , la FIGURE 35 la même lame avec en traits mixtes la lame en situation de moulage et en traits pleins la lame en position après imbrication dans "le corps". En actionnant la lame celle-ci se comporte comme dans le premier exemple décrit sauf que l'objet sort latéralement . Cette solution est avantageuse pour le cas d'un dispositif distribuant par sa réserve qu'une seule épaisseur d'objet permettant d'avoir une lame plus solide que dans l'exemple des FIGURES (27 28 29), il est avantageux aussi en faisant le dispositif en matière transparente afin de pouvoir observer si un objet est présent dans "la chambre" aidant par cela les utilisateurs à une utilisation du dispositif de manière intuitive et spontanée La description des dispositifs à travers toutes les solutions est volontairement restrictif par souci de clarté quant aux moyens mis en oeuvre pour arriver à ce résultat mais le dispositif selon l'invention peut avoir une lame rapportée par n'importe quel moyen (colle, rivetage, pincement etc..).
Le dispositif par la pièce moulée peut-être de toutes matières présentant les caractéristiques et propriétés nécessaires au système, comme papier enduit, métal, plastique thermo-formé etc..
L'invention concerne en général l'administration de médicaments par électrotransport, et plus particulièrement l'administration de médicaments par électrotransport transdermique. En particulier, l'invention concerne un procédé pour accroître le flux d'électrotransport de médicaments polypeptidiques en remplaçant certains acides aminés dans le polypeptide.
L'administration transdermique (c'est-à-dire à travers la peau) d'agents thérapeutiques (par exemple des médicaments) est une importante voie d'administration de médicaments. L'administration transdermique de médicaments évite la dégradation gastro-intestinale et le métabolisme hépatique. La plupart des systèmes d'administration transdermique de médicaments disponibles dans le commerce (par exemple des timbres cutanés à la nitroglycérine, la scopolamine, l'oestradiol, la testostérone) délivrent le médicament par diffusion passive. Le médicament se diffuse dans la peau du patient à partir d'un réservoir ménagé dans le timbre sous l'effet du gradient de concentration existant, c'est-à-dire que le médicament se diffuse en passant de la haute concentration dans le réservoir du timbre à la basse concentration dans le corps du patient.Le flux de médicament à travers la peau du patient est déterminé par un certain nombre de facteurs comprenant le coefficient de partage du médicament et ses caractéristiques de solubilité.
Ce type de système d'administration (c'est-à-dire un timbre) réalise un apport lent, mais réglé, du médicament au courant sanguin du patient. L'administration transdermique de médicaments est une voie d'administration particulièrement intéressante pour les médicaments ayant un indice thérapeutique étroit, une courte demi-vie et une activité puissante.
Malheureusement, de nombreux médicaments présentent des flux de diffusion transdermique qui sont trop faibles pour offrir une efficacité thérapeutique. C'est le cas notamment des médicaments de haut poids moléculaire tels que les polypeptides et les protéines. Pour accroître le flux transdermique de médicament, il a été employé une technique consistant à appliquer de faibles intensités de courant électrique à travers un réservoir de médicament en contact avec une surface corporelle du patient (par exemple la peau).
Cette technique a reçu plusieurs noms, y compris "ionophorèse" et plus récemment "électrotransport".
L'électrotransport est un processus par lequel le transport transdermique d'agents ou espèces thérapeutiques est réalisé en utilisant un courant électrique comme force motrice, c'est-à-dire par l'application d'un courant électrique au patient par l'intermédiaire d'un réservoir contenant l'agent. A ce titre, l'électrotransport est une technique mieux maîtrisable que l'administration transdermique passive de médicaments, car il est facile de régler l'amplitude, le programme et la polarité du courant électrique appliqué en utilisant des composants électriques courants. En général, le flux d'électrotransport d'un médicament peut varier d'une valeur inférieure de 50 % à une valeur supérieure de plusieurs ordres de grandeur au flux transdermique passif du même médicament.
Les dispositifs d'électrotransport actuellement connus comportent généralement au moins deux électrodes. Ces deux électrodes sont placées en contact électrique intime avec une certaine partie de la surface corporelle du patient (par exemple la peau). Une électrode, appelée l'électrode active ou donneuse, est l'électrode à partir de laquelle l'agent thérapeutique, le précurseur de médicament ou le médicament (par exemple ionique ou ionisable) est délivré à l'organisme par électrotransport. L'autre électrode, appelée contreélectrode ou électrode de retour, sert à fermer le circuit électrique à travers le corps. En association avec la surface du corps du patient qui est en contact avec les électrodes, le circuit est bouclé par connexion des électrodes à une source d'énergie électrique, par exemple une pile.
A titre d'exemple non limitatif, le système Géomicro constituant le calculateur spécialisé peut être constitué par un ordinateur central Microvax 2000 comportant une mémoire centrale de 4 méga-octets, un système de mémorisation par disque souple de 1,2 méga-octets et un disque dur de 110 méga-octets.
Le système est équipé outre différents programmes de traitement des données géophysiques d'un système de simulation d'acquisition de données géophysiques en trois dimensions ou en deux dimensions, ainsi que de représentations de grilles d'acquisition ou de profils d'acquisition sur des cartes géographiques correspondant au site sur lequel les positions des points doivent être implantées et/ou relevées.
D'une manière générale, le logiciel précité permet par exemple pour une grille d'acquisition de données géophysiques en trois, dimensions de représenter la position théorique des positions géophone et des points de tir puis suite à la détermination de ces positions théoriques, la position réelle des positions géophone et des points de tir réellement implantés.
Bien entendu, le calculateur spécialisé, correspondant au système Géomicro dans le cadre de la mise en oeuvre du procédé et du système objets de l'invention, peut alors être complété par un logiciel permettant la mise en oeuvre du procédé objet de l'invention, ainsi qu'il sera décrit en liaison avec la figure 6a partie A.
Sur la partie A de la figure 6 précitée, la fonction 1000 est réalisée à partir de programmes ou de sous programmes implantés directement dans le calculateur spécialisé constituant le système Géomicro.
La fonction d'initialisation géodésique peut ainsi comprendre, le choix de l'ellipsoïde de référence.