INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Cette rotation simultanée du cylindre 1 entraîne aussi la redescente simultanée du piston 3, qui est indexé par ses picots 47 dans les fentes hélicoïdales 22 du tube interne 1A du tambour 1.
Dès que le piston 3 arrive en contact avec les trois pièces d'arrêt basculantes 3, la partie cônique précitée 38 de ce piston vient, par coopération avec les rampes conjuguées 37 de ces pièces basculantes 3, faire basculer ces trois pièces 3 vers l'arrière, contre la force de rappel des ressorts 32, ce qui libère l'assise 36, 60 du clapet 2A sur son siège d'ouverture. Le clapet 2A retombe alors et vient obstruer l'orifice d'évacuation d'eau 16, ce qui est rendu possible par le fait que, en raison de cette rotation, le picot 55 est parvenu, en fin de parcours, en face de la première saignée 52 (figure 4) de la rondelle 5 1.
Le flotteur 5, et donc le niveau d'eau, ne sont alors descendus que d'une hauteur correspondante à la descente du piston 3, et donc proportionnelle à l'angle initial (graduation "8") de rotation du bouton 7. Le volume d'eau évacué par l'orifice de vidange 16 est donc lui-aussi limité à une portion du niveau total d'eau de la cuve 8, cette portion étant déterminée par cet angle de rotation. Dans cet exemple ou cet angle correspond à la graduation "8" et si la graduation "10" correspond à une remontée du piston 3 pour laquelle la totalité de l'eau de la cuve est évacuée lorsqu'on soulève alors la tirette 2, on n'aura finalement évacué que les huit dixièmes du volume d'eau total de la cuve.
La cuve se remplit alors à nouveau, puisque le robinet 10 est ouvert, et le flotteur 5 remonte, cette fois-ci sans faire tourner le cylindre 1 puisque ses picots internes 26, 27 suivent alors le chemin vertical des rainures verticales 25C (figure 9A) du tube extérieur 1B.
quent la lame de scie n'est que partiellement pourvue de dents,
il peut être particulièrement avantageux, du fait de la lon-
gueur de fonctionnement nettement augmentée, d'utiliser la lame
dans des scies sauteuses oscillantes, les zones sans dents pou-
vant prendre appui sur un guide ou un rouleau articulé de la
Suivant d'autres caractéristiques de l'invention: - la deuxième extrémité de serrage est identique à la première extrémité de serrage,; - la série de dents de scie est au moins 10% plus longue que sur les lames de scies sauteuses habituelles; - le dos de la lame de scie porte une série de dents de scie; - une série de dents de scie consiste en deux séries, disposées en particulier par moitié, voisines l'une de l'autre, avec chacune des profils de dents de scie différents; - les séries de profils de dents différents sont prévus dans le cas du serrage de l'une des extrémités de serrage dans une scie sauteuse, de façon que la zone proche de la machine pour un premier produit à découper, par exemple en métal, et que
la zone éloignée de la machine corresponde à un deuxième pro-
duit à découper, par exemple en bois; - la lame de scie possède un point central destiné à la rupture o l'on peut la rompre en parties égales, en particulier par pliage; - la lame de scie est constituée de façon symétrique de tous les côtés; - les deux séries de dents présentent une région dorsale sans dents à proximité respectivement d'une extrémité de serrage, zone qui sert d'appui par rapport à un guide ou à un galet
oscillant de la scie sauteuse.
Dessins La présente invention sera décrite ci-après plus en détail à partir de plusieurs modes de réalisation représentés
sur les dessins annexés, dans lesquels:35 - la figure 1 montre une lame de scie sauteuse selon l'inven-
tion, avec une série de dents asymétriques allant de bout en bout, - la figure 2 montre une lame de scie sauteuse avec des groupes de dents qui coupent régulièrement en poussant et en tirant, - la figure 3 montre une lame de scie sauteuse avec une série de dents de scie consistant en deux séries de dents ayant des profils différents, voisines, disposées par moitié, - la figure 4 montre une lame de scie sauteuse avec deux séries de dents de scie disposées des deux côtés opposés, séries qui consistent respectivement chacune en deux séries voisines
l'une de l'autre, par moitié, de dents ayant des profils dif-
férents, et - la figure 5 montre une lame de scie sauteuse avec une double extrémité de serrage, comprenant deux séries de dents de scie opposées avec des zones d'appui sans dent pour le guidage sur
un rouleau articulé.
La figure 1' présente une variante de réalisation d'un dispositif selon l'invention. Le dispositif comporte trois récipients (31 à 33) de réactifs et d'échantillons reliés à un tuyau séparateur (35) enroulé en spiral. Des robinets ou vannes automatiques ouvrent ou ferment le débit de chacun des récipients (31 à 33) vers le tuyau séparateur (35). Ce tuyau séparateur est placé dans un gradient de champ magnétique engendré par des aimants permanents (36) disposés en étoile, en sens radial alterné. L'extrémité aval du tuyau séparateur (35) débouche d'une part dans un tuyau de recueil (37) et d'autre part dans un tuyau d'évacuation (38). Des vannes ou robinets sont prévus sur chacun de ces tuyaux pour commander l'écoulement sous vers un récipient de rejet (39), sous vers des moyens d'analyse formés par un système de receuil sur filtre (40), par un récipient de recueil (41) ou par un détecteur de flux de particules (42).
La figure 2 représente une vue en coupe d'un segment de tubulure. Sous l'effet des forces de Bernoulli, les particules ont tendance à se concentrer dans le centre du flux, où la vitesse est la plus importante. Sous l'effet des flux magnétiques, les billes paramagnétiques (10) plus légères et moins volumineuses que les particules non marquées (11) que les cellules marquées (12) sont très rapidement attirées vers la paroi (13) de la tubulure.
La trajectoire des cellules non marquées (11) n'est pas perturbée par les flux magnétiques et celles-ci restent donc dans le centre du flux où elles sont rapidement entraînées vers la sortie.
Les cellules (12) marquées se retrouvent dans la dernière partie de la tubulure (2).
Eventuellement, la tubulure peut être réalisée par deux segments de section croissante, la première servant à retenir les billes excédentaires, et la seconde à retenir les cellules marquées.
Les figures 3 et 4 représentent des vues respectivement en coupe médiane et en coupe transversale d'une variante de réalisation.
La tubulure (2) est formée par une rainure (14) réalisée dans une plaque de matière plastique (15).
Elle débouche d'une part sur l'un des bord latéraux pour permettre le raccordement à une tubulure de liaison avec le réceptacle (1) d'alimentation, et d'autre part avec un orifice transversal (16) traversant la plaque (15) permettant l'évacuation des fluides. Le dispositif est formé de deux plaques symétriques (15, 15') et sont raccordées de manière à définir entre elles la tubulure de circulation du liquide. Elles présentent sur les surfaces extérieures des logements pour les aimants (17).
La figure 5 représente une vue d'une deuxième variante de réalisation mettant en oeuvre une pompe péristatique. Dans cette variante, la progression des liquides n'est pas conditionnée par la gravité, mais par une pompe péristatique.
Le dispositif est constitué par un élément tubulaire (22) formant une boucle séparatrice. L'une des extrémités aspire l'échantillon traité comme dans les exemples précédents. L'élément tubulaire (22) est disposé dans le champs d'aimants permanents (24 à 28) orientés perpendiculairement à la direction de déplacement du liquide, en sens alternés. L'élément tubulaire (22) est jetable, ce qui évite toute contamination de ses parois intérieures.
Cet élément tubulaire (22) est raccordé au tube d'aspiration d'une pompe péristaltique (29) de type connu. Les déchets sont recueillis dans un tube d'essai (30) à la sortie de la pompe (29). La circulation du fluide à l'intérieur du tube est de préférence continu, avec une vitesse de l'ordre de 1 cm par seconde. La circulation en continu évite la formation d'adhésions cellulaires sur la paroi du tube de séparation.
Les figures 6, 6 et 6" représentent une vue partielle d'une variante de réalisation. Les aimants forment une cage d'écureuil (32) constitué par une pluralité de barreaux magnétiques (33 à 40) aimantés radialement en sens alterné. Cette structure permet de positionner un ou plusieurs éléments tubulaires (22), et de traiter en parallèle plusieurs échantillons.
L'utilisation d'un tel dispositif est la suivante - on immerge l'extrémité libre (23) du tuyau séparateur (22) dans l'échantillon qui a reçu au préalable les particules paramagnétiques.
- on met en action la pompe (29) qui va faire passer les particules magnétiques et les cellules dans la boucle séparatrice disposée dans le champ magnétique. Les particules magnétiques et les rosettes constituées par les cellules marquées vont s'arrêter dans cette boucle tandis que les autres cellules vont s'évacuer. Pour procéder ainsi à une purge cellulaire, notamment dans un but thérapeutique, consistant à éliminer les cellules marquées afin de ne recueillir que les cellules non marquées, il est préférable de remplacer la pompe péristaltique par un autre moyen d'aspiration, par exemple une seringue aspirante ou une source de dépression, afin d'éviter l'écrasement des cellules non marquées.
Ce mode de réalisation présente plusieurs avantages - il permet de traiter en parallèle un grand nombre d'échantillons, - il permet d'automatiser la gestion des étapes, - il permet de traiter de très grand volumes - il évite les volumes morts en amont de la zone de traitement de l'élément tubulaire. En effet, après le passage de l'échantillon, on peut éliminer le tube est passer les réactifs à partir de récipients non contaminés. Le risque de récupérer des cellules non spécifiques est très réduit. Par ailleurs, on peut alors faire plonger tous les tuyaux dans le même récipient réactif, ce qui simplifie les manipulations.
La séparation des cellules marquées et des particules magnétiques non fixées après la mise en oeuvre d'un système de traitement selon l'une des variantes précédentes s'effectue avantageusement au moyen d'un dispositif de filtration dont un exemple de réalisation est décrit en figure 7.
Leur partie active est leur partie, ou tranche, avant 34, c'est-à-dire celle qui regarde vers la tirette 2.
Cette partie active 34 se décompose, de bas en haut, en quatre parties successives, dont les deux premières coopèrent avec le clapet 2A pour le maintenir en sa position d'ouverture et dont les deux dernières coopèrent avec le piston 3 pour entraîner le basculement vers l'arrière de ces pièces d'arrêt 4 et par suite la libération et donc la fermeture de ce clapet 2A. Ce sont Une première partie 35 (figure 12C) sensiblement verticale avec toutefois une légère inclinaison, "en cône étroit et à pointe dirigée vers le haut", c'est-à-dire à inclinaison vers le bas et vers l'arrière (figures 1 et 2), qui ne s'oppose pas vraiment au soulèvement, par l'usager, du clapet 2A mais qui permet d'aider à la fermeture et au maintien en position de fermeture, de ce clapet 2A.
Une deuxième partie 36 (figure 12C) , formant une encoche d'assise à angle droit, ou palier horizontal, qui coopère avec une encoche conjuguée 60 (figure 1 OA) du clapet 2A pour maintenir, selon Figure 2, le clapet 2A en position d'ouverture.
Une troisième partie 37 (figure 12C) à inclinaison "en cône évasé à pointe dirigée vers le bas", c'est-à-dire à forte inclinaison vers le haut et vers l'arrière, qui coopère avec une partie tronconique conjugée 38 (figure 11B) du relativement lourd piston 3 pour en conséquence faire basculer la pièce d'arrêt 4 (et les deux autres) vers l'arrière à partir de la position de la figure 2 et par suite entraîner (figure 1) la libération et donc la fermeture du clapet 2A.
Une quatième partie, sensiblement horizontale, 39 (figure 12C) sur laquelle vient finalement reposer (figure 1) le piston 3 lorsque le clapet 2A est refermé.
Le clapet 2A constitue la partie inférieure de la tirette 2, qui sera ellemême décrite en détails ci-après. Il reçoit, comme mentionné précédemment, le joint d'étanchéité 12, et sa partie supérieure 40 (figures 1 0A et 10D) forme un élargissement annulaire qui comporte l'encoche annulaire 60.
Le piston 3 est un corps massif (figure 11A et 11B) qui est mobile en translation verticale et coulissement le long de la partie tubulaire centrale 2B de la tirette 2 mais qui est immobilisé en rotation par le fait que son orifice central 41, par lequel il coulisse le long de la partie médiane tubulaire de la tirette 2, possède deux méplats 42, 43 respectivement conjugués de deux méplats correspondants 44 45 (figure 10D) du tube 2B.
Le piston 3 possède, comme indiqué précédemment, une partie tronconique 38 qui lui permet d'ouvrir les trois arrêts basculants 4. Trois évidements 46 (figure 11A) autorisent un libre passage de l'eau sans perte de charge substantielle. Trois picots radiaux 47 sont introduits dans les fentes inclinées 22 du tube 1A, de sorte que la rotation, dans un sens ou dans l'autre, du tambour 1 entraîne la montée ou la descente du piston j.
La tirette 2 comporte, de bas en haut (figure 1 et 10A à 10D) Le clapet précité 2A, avec ses trois axes 21, de blocage en rotation par rapport au tambour 1 et de centrage, de la tirette 2.
Sa partie centrale principale 2B, qui est tubulaire, donc creuse, et ouverte en haut comme en bas pour laisser librement passer, ce qui est très classique en soi, I'eau de trop plein en cas de débordement de la cuve dû à un fonctionnement défectueux du robinet 10. Pour ce faire, l'extrémité libre supérieure (voir figure 1) du tube 2B arrive, lorsque le clapet 2A est fermé comme en figure 1, légèrement au dessus du niveau maximal normal de l'eau dans la cuve 8.
Une partie supérieure 2C, constituée par une tige pleine, à section circulaire, dont la partie supérieure dépasse (figures 1 et 2) du couvercle 1 1 de la cuve 8, et dont la partie inférieure s'élargit pour former les deux dents 48, 49 d'une fourchette de maintien du tube 2B. Classiquement, ces deux dents, laissent entre elles un libre passage 50 (figure 5) pour l'eau de trop plein.
La tige 2C est solidaire d'une rondelle 51, qui possède, sur une portion de sa circonférence, une série de cannelures formées par des saignées axiales 52, au nombre de onze saignées dans l'exemple décrit ici. Leur rôle sera expliqué ci-après.
En outre, en haut de la tige 2C, cette dernière est gravée d'une saignée semi-circulaire et circonférentielle 53 (figures 1 OA et IOB) La partie supérieure 2C et sa rondelle partiellement cannelée 51, passent à travers une rondelle 6 de réglage de volume d'eau, qui passe elle-même à travers le couvercle 11 et qui est fixée sur le flasque supérieur 18 du tambour 1 par deux vis 54. Cette rondelle 6 coopère avec un orifice central conjugué du couvercle 11 pour constituer le pallier supérieur de roulement du tambour 1.
Un picot radial 55 (figure 1) est prévu dans l'orifice central de la rondelle 6. Il coopère avec la rondelle cannelée 51, en ce sens que, ne pouvant pénétrer dans une des saignées 52 (figureslOB et 1) que quand il est aligné verticalement avec celle-ci, sa position dans la rondelle 6 est ajustée pour que l'on ne puisse en conséquence soulever la tirette 2 que lorsque les deux doigts internes 26, 27 (figure 13A ) d'indexage du flotteur 5 dans le tube externe 1B se trouvent respectivement en face d'une rainure d'indexage descendante 25B (figure 9A) de la surface extérieure de ce tube.
Comme on le voit sur les figures 14A et 4, la rondelle de règlage 6 possède des graduations, ici de O à 10, qui coopèrent avec un repère 56 du couvercle 1 1 pour règler le volume d'eau évacué par la chasse, par exemple litre par litre ou même quart de litre par quart de litre.
Enfin, un bouton, ou poignée, de manutention 7 vient coiffer la partie supérieure de la tige 2C. Une vis à téton radiale 57 pénètre dans la gorge semicirculaire 53 de la tige 2C, ce qui bloque en translation ce bouton de préhension 7 par rapport à la tirette 2. En revanche, cette gorge 53 permet au bouton 7 de tourner librement, sur au total environ un demi-tour seulement, par rapport à cette tirette 2.
Afin de démontrer l'incorporation des enveloppes chimères dans les particules rétrovirales, les surnageants des lignées cellulaires TELCeB6 transfectées par les différentes enveloppes ont été soumis à une ultracentrifugation et les culots de particules virales ont été récupérés. Ces culots ont été analysés par immunoblots pour leur expression de produits du gène gag (CAp30) et des protéines d'enveloppes (Figure 5 pour la plupart des enveloppes de la série AMO, non montré pour les autres enveloppes chimères).
Dans le but de comparer l'efficacité d'incorporation virale entre les diverses enveloppes chimères, des quantités identiques de particules virales (déterminées par le marquage des protéines gag à l'aide d'un anticorps anti-CAp30) ont été déposées sur les gels.
Les protéines SU ont pu être mises en évidence pour tous les mutants, à la taille attendue mais à un taux légèrement inférieur à celui observé pour les enveloppes sauvages. Dans le cas des enveloppes AMOG2X et AMOG3X seulement, l'efficacité d'incorporation est sensiblement plus faible par rapport aux enveloppes sauvages. Comme attendu, aucune expression d'enveloppe n'est observée dans les culots de surnageants TELacZ (n'exprimant pas de protéines gag et pol) transfectées par les différentes enveloppes. Ces résultats démontrent que les protéines SU chimères sont associées aux particules rétrovirales.
Liaison des enveloppes aux récepteurs.
Des cellules humaines exprimant les récepteurs Ram-1 et/ou de l'EGF ont été utilisées pour cette étude. Ces cellules sont incubées en présence de préparation virales et la liaison des enveloppes virales sur le récepteur cible est déterminé par analyse au FACS à l'aide d'anticorps dirigés contre la SU (Figure 6B). Comme attendu, aucune liaison n'est observée dans le cas des virus exprimant des enveloppe écotropes MO sur les diverses cellules humaines (non montré), alors que les virus présentant des enveloppes chimères ciblant Ram-l sont capables de se lier aux cellules TE671 avec une efficacité similaire à celle observée pour les virus exprimant des enveloppes amphotropes non modifiées.
Toutes les enveloppes ciblant Ram-l, dérivées de AMO, sont capables de se lier aux cellules TE671 avec une efficacité similaire. Cette liaison peut être inhibée après compétition par du fragment AS208 (le domaine purifié de reconnaissance de Ram-1) (2), ce qui suggère que cette reconnaissance est spécifique (résultats non présentés).
Les enveloppes ciblant EGFR (série EMO) sont par ailleurs capables de se lier aux cellules A431, sur exprimant EGFR (Figure 6A). Cette liaison semble spécifique puisqu'une pré-incubation des cellules A431 en présence d'EGF (induisant l'endocytose des EGFR) inhibe cette liaison (non montré).
Coopération Ram- 1 et Rec- 1 dans l'infection.
La transduction des vecteurs rétroviraux pseudotypés par les diverses enveloppes ciblantes a été mesurée sur des cellules exprimant différents types de récepteurs: des cellules humaines TE671 exprimant les récepteurs EGF et Ram1; des cellules 3T3 exprimant les récepteurs EGF murins, Rec-1 et Ram-l; des cellules CEAR13 exprimant Rec-1 et Ram-l; des cellules CERD9 exprimant seulement Rec-1. Les titrations ont été effectuées comme précédemment décrit (6). Comme attendu, il a été montré que les virus pseudotypés par des enveloppes écotropes MO n'étaient pas capables d'infecter les cellules TE671, mais permettaient l'infection de cellules murines 3T3, CEAR13 et Cerd9 (avec des titres de l'ordre de 107 lacZ i.u./ml). Réciproquement, les virus portant les enveloppes amphotropes A sont capables d'infecter les cellules murines 3T3, CEAR13 et TE671 (avec des titres de l'ordre de l'ordre de 107 lacZ i.u./ml).
Les virus présentant des enveloppes chimères AMO sont capables d'infecter les cellules TE671 à un titre de 4.103 lacZ i.u./ml (Tableau 1). En comparaison; malgré une efficacité de liaison au récepteur similaire (Figure 6B), les titres obtenus avec les enveloppes sauvages sont 10 000 fois plus élevés. De façon surprenante, les virus exprimant des enveloppes AMOPRO, malgré une bonne efficacité de liaison, se sont avérés incapables d'infecter les cellules humaines TE671. Comparés aux titres obtenus pour les enveloppes AMO (Tableau 1), les autres types d'espaceurs insérés dans les enveloppes de la série AMO permettent une augmentation des titres de 30 fois (pour AMOAPRO) à plus de 100 fois (pour AMOlFx) permettant d'atteindre des titres de 4.105 lacZ i.u./ml. Il est démontré que ces infections ont lieu via le récepteur ciblé Ram-1.
Ceci a été mis en évidence par un test d'interférence sur des cellules cibles infectées chroniquement par du virus MLV-A. Ces cellules deviennent spécifiquement réfractaires à une infection par des virus portant les enveloppes ciblants Ram-l (résultats non montrés).Les virus portant les enveloppes chimères dans lesquelles le domaine de liaison à Ram-l a été séparé de la SU de MoMLV par différents espaceurs s'avèrent très infectieux sur cellules 3T3.
Comparé aux titres obtenus pour les enveloppes AMO, une augmentation de 200 (pour AMOPRO) à plus de 1000 fois (pour AMOlFx) des titres viraux a été mesurée (Tableau 1).
L'infection des 3T3 s'effectue via Rec-1 ou via Ram-l (Tableau 1). Ceci peut être démontré par des tests d'interférence effectués sur des cellules 3T3 infectées chroniquement soit par MLV-A (bloquant Ram-l) soit par MoMLV (bloquant Rec-1). Les virus exprimant les enveloppes AMO semblent être capables d'infecter les 3T3 indifféremment selon que l'un ou l'autre, ou les deux, récepteurs Rec-1 et Ram-1 sont disponibles sur la cellule cible.
Comparativement à ces virus AMO, les particules virales contenant les autres enveloppes capables de cibler Ram-i sont bien moins capables d'infecter les 3T3 quand seulement un des deux récepteurs est disponible. Par exemple, quand 100 particules (selon le titre déterminé sur 3T3 intactes) contenant les enveloppes AMOFx sont utilisées pour infecter des 3T3 interférentes, 4 virus sont capables d'infecter les cellules si seulement Rec-1 est disponible et 2 virus sont capables d'infecter les cellules si seulement Ram-l est disponible. Ceci indique une perte considérable de l'infectivité (plus de 94% des virus ne sont pas infectieux) quand un seul récepteur est disponible comparé à quand les deux récepteurs le sont. Ceci suggère également que les deux récepteurs Ram-l et Rec-1 coopèrent dans l'infection des 3T3. Il apparaît que ce phénomène de coopération est encore nettement plus marqué dans le cas des virus portant les enveloppes AMOPRO. Ces derniers virus peuvent difficilement infecter les 3T3 quand seul Rec-1 est disponible et ne peuvent pas du tout les infecter quand seul Ram-l est disponible. Cependant quand Rec-1 et Ram-1 sont tout deux disponibles, I'infection est possible et des titres de l'ordre de 6x104 lacZ i.u./ml peuvent être obtenus (Tableau 1).