INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Pour inscrire une entrée dans le tableau de plan à la place du curseur, l'utilisateur appuie sur un des boutons 904 à savoir X, O, (X),/O/,/X/, Xd et T. Si le curseur est sur un sous-article, ou sur une étape, il ne se passe rien. Les diverses vannes dans le plan sont indiquées par des chiffres décimaux, celle indiquée par .0 étant la plus importante.
L'activation du bouton DEPLACER 906 permet de déplacer la vanne mise en valeur dans le diagramme de connexion. On active ensuite les flèches pour déplacer la vanne à l'endroit désiré; ensuite, l'utilisateur appuie sur le bouton ESC 908. Les autres boutons ne fonctionnent pas pendant que l'opération DEPLACER est en cours (bouton DEPLACER mis en valeur).
Si le curseur de plan pointe sur un sous-article, et s'il y a moins de 15 sous-articles dans le plan, une nouvelle ligne de sous-articles sera créée dans le plan quand le bouton INSERER 910 est activé. Si une ligne de sous-article a été effacée précédemment, elle remplira automatiquement cette ligne insérée. Si le curseur est sur un chiffre d'étape et s'il y a moins de 15 étapes, une nouvelle colonne d'étape sera ouverte.
Si le curseur de plan est sur un sous-article quand le bouton EFFACER 912 est activé, la ligne entière de ce sous-article sera effacée, et les lignes se trouvant en dessous se déplaceront vers le haut. Une insertion peut être utilisée pour restaurer une ligne de sous-article incorrectement effacée. Si le curseur est sur un numéro d'étape, cette colonne d'étape va être effacée et toute colonne se trouvant sur la droite se décalera.
L'ensemble est incubé à 37 C et trois lavages en PBS additionné de 1% de Tween 20 sont effectués. Les plaques sont recouvertes d'anticorps anti-IgG humaines couplés à la biotine (CALTAG), à raison de 100 Zl/puits d'une dilution 1/10 000 faite dans du PBS additionné de 1% de sérum de veau et 0,1% de Tween 20, pendant une heure à 37 C. Après trois nouveaux lavages, les plaques sont incubées en présence du conjugué streptavidine/ phosphatase alcaline (dilution 1/10 000, CALTAG) puis révélées par le substrat p-nitrophényl-phosphate (lmg/ml, SIGMA) dilué en tampon alcalin (9 volumes de solution NaCl 3M et 1 volume de tampon Tris-HCl 1M pH 9,6). La densité optique de chaque puits est mesurée par spectrophotométrie à 405 nm.Les surnageants des puits positifs aux dilutions virales les plus fortes sont recueillis et conservés.
L'isolement d'un clone viral recombinant exprimant la chaîne légère et la chaîne lourde est assuré par deux autres séries d'infections en plaques de 96 puits et recherche de l'anticorps par ELISA, suivies d'un clonage par la technique des plages de lyse. Le virus sélectionné a été baptisé Acl0HRh-33LRh (313).
13tle 4 : Production et xwrification d 1 'anticorps onocl0Ml recalibinsnt r-IgG-D7C2 a) Culture et purification Le virus sélectionné Acl0HRh-33LRh (313) est multiplié sur cellules d'insectes Sf9 en milieu TGV2 (2% de sérum de veau foetal). La concentration d'anticorps produit et sécrété est évaluée par ELISA ; elle est d'environ 3 mg/l.
Une fraction du surnageant viral obtenu est concentrée 10 fois à l'aide de concentrateurs CENTRIPREP 30 (AMICON), à une vitesse de rotation de 1800 tours par minute. Ce concentré est directement utilisé pour les tests d'activité biologique in vitro. La concentration d'anticorps recombinant est évaluée à 30 mg/l dans le concentré.
D'autre part, une fraction (50 ml) de surnageant viral est déposée sur une colonne de chromatographie de protéine A (gel SEPRACOR) préalablement équilibrée avec du PBS, afin de purifier l'IgGl recombinante. Après deux rinçages successifs de la colonne avec du PBS et une solution citrate/acide citrique 0,1M pH5, l'immunoglobuline est éluée avec une solution citrate/acide citrique 0,1M pH3. L'élution est suivie en mesurant la DO à 280 nm. Enfin, les fractions recueillies sont neutralisées à pH7 avec une solution de Tris-HCl pH8 et conservées à 4 C. La solution d'anticorps purifié est testée pour l'activité biologique parallèlement à la solution concentrée.
b) Contrôle de l'assemblage et de la taille des chaînes d'immunoalobuline La qualité de l'anticorps produit par le virus recombinant Ac 10HRh-33LRh(313) a été contrôlée par migration électrophorétique dans un gel SDS-PAGE 12,5% en utilisant comme témoin une IgGX humaine monoclonale du commerce (SIGNA). Cette expérience a montré que l'anticorps humain non réduit migre au même niveau que l'anticorps humain témoin. Après réduction par le dithiotréitol (DTT), on observe l'apparition de deux sous-unités correspondant aux chaînes lourdes et légères, et migrant au même niveau que les chaînes de l'anticorps humain contrôle traité de la même façon.
Pour confirmer ces résultats, les protéines ont été transférées sur une membrane de nitrocellulose, et les chaînes lourde et légère ont été détectées par des anticorps spécifiques anti-IgG ou anti- humaines.
Izele 5 : Activité biologique de 1 'anticorps monocloul recoibinant r-IgG-D7C2 L'activité biologique de l'anticorps recombinant a été mesurée en utilisant le surnageant de culture des cellules d'insectes productrices de r-IgG D7C2, concentré 10 fois. Les mesures ont été effectuées par rapport à un anticorps recombinant (IgGl,) "nonpertinent" (irrelevant) dirigé contre une protéine autre que l'antigène Rhésus (contrôle négatif) et produit dans les mêmes conditions en cellules d'insectes, et par rapport à l'anticorps monoclonal parental humain IgM-D7C2 (IgM,).
L'activité biologique de l'anticorps recombinant r-IgG-D7C2 a été évaluée 1 Par des tests d'agglutination en tubes, avec le surnageant des cultures de cellules d'insectes concentré 10 fois (30g/ml) et un panel de globules rouges humains papaïnés Rh-positif (Rl/r, Rl/Rl, R2/R2, Ro/r), et Rh-négatif (r/r) (G.N.R.G.S.).
50 1 de surnageant de culture concentré, contenant r-IgG-D7C2, et 50 111 de la suspension à 2% de globules rouges ont été incubés pendant 45 minutes à 37 les agglutinations sont appréciées de + à +++ selon l'intensité de la réaction.
Les résultats figurent dans le Tableau I cidessous.
GLOBULES ROUGES Rl/r Rl/Rl R2/R2 Ro/r r/r PAPAINES INTENSITE + ~ +++ ++ = Le titre de l'anticorps recombinant r-IgG D7C2, estimé en incubant le surnageant avec un pool de globules rouges Rl/r, traité à la papaïne, pendant une heure à 37 C est de 1/512ème.
2 Par un test d'ADCC * Cellules effectrices (lymphocytes humains): La couche mononuclée est récupérée à partir du sang périphérique hépariné et séparé sur gradient de Ficoll Hypaque. Les cellules sont incubées à 37, pendant une nuit, dans une boîte de culture cellulaire en plastique (pour supprimer les monocytes) avec 1% de sérum de veau foetal ; les cellules non adhérentes sont ensuite récupérées et utilisées pour le test de cytotoxicité à raison de 8 x 106 cellules/ml.
* Cellules cibles (globules rouges) - Le sang veineux de donneurs normaux, de groupe Rl/Rl (Rhésus positif) et de groupe r/r (Rhésus négatif), est prélevé sur citrate, puis les globules sont mis en suspension à 2% dans du NaCl et papaïnés.
- Marquage au chrome Cr51 20 x 106 globules rouges papaïnés sont incubés à 37- pendant une heure avec 200Ci de Cr51, lavés 4 fois et resuspendus dans du NaCl à 9 pour mille.
En outre, il se pose un problème particulier lors de l'incorporation d'additifs à une émulsion huile-dans-eau pour l'administration parentérale. Il est considéré que, pour l'efficacité, les propriétés antimicrobiennes de n'importe quel conservateur doivent être exercées dans la phase aqueuse. Ainsi, un conservateur ayant des propriétés lipophiles incorporé aux doses d'utilisation classique ne serait pas efficace car, bien qu'il existerait un certain partage entre les phases, une quantité insuffisante de substance serait présente dans la phase aqueuse. L'augmentation de la quantité totale d'un tel conservateur aurait pour résultat des teneurs excessivement fortes de conservateur dans la phase lipidique, conduisant au minimum à des problèmes de toxicité.
D'autre part, l'addition d'un conservateur ayant des propriétés hydrophiles, par exemple d'une substance ionique, pose également des problèmes. L'addition d'une substance ionique à une émulsion huile-dans-eau tend à déstabiliser l'émulsion. Avec une plus forte charge ionique (c'est-à-dire une plus forte concentration de substance ionique), la charge électrique stabilisante (potentiel Zeta) des gouttelettes d'huile peut varier. Ces modifications de la charge électrique augmentent la probabilité de collisions des gouttelettes et augmentent l'instabilité physique de l'émul- sion.
La Demanderesse a étudié la possibilité d'ajouter un agent choisi parmi un certain nombre d'agents antimicrobiens à l'émulsion huile-dans-eau. Un tel agent devrait ne présenter aucun effet néfaste notable sur la stabilité physique et chimique de l'émulsion. En outre, un tel agent devrait manifester l'activité antimicrobienne recherchée.
Il a été trouvé qu'un certain nombre d'agents potentiels provoquent une instabilité de l'émulsion. D'autres agents potentiels ont été incapables de fournir le degré d'activité antimicrobienne recherché. En outre, on a recherché un agent permettant d'obtenir ces degrés d'activité à une concentration aussi faible que possible afin de réduire au minimum le potentiel d'instabilité physique et de réduire au minimum les problèmes d'inocuité.
Après des efforts importants prenant en considération les conservateurs connus consistant en acétate phénylmercurique, nitrate phénylmercurique, alcool benzylique, chlorobutanol, chlorocrésol et phénol et l'étude des conservateurs connus consistant en métabisulfite de sodium, sulfite de sodium, méthylhydroxybenzoate de sodium et propylhydroxybenzoate de sodium, on a été incapable de trouver un conservateur répondant aux impératifs précités. On a étudié alors l'utilisation possible d'autres agents qui pourraient avoir l'action recherchée. On a trouvé de manière inattendue que l'édétate, qui n'est pas considéré comme un agent antimicrobien à large spectre, était le seul agent répondant aux critères précités. De la manière indiquée précédemment, l'édatate sous forme du sel de sodium est mentionné dans le brevet du Royaume-Uni NO 1 472 793 au nom de la Demanderesse comme étant un agent possible de séquestration des ions métalliques. L'édétate de sodium est inclus dans deux des nombreux exemples contenant du Cremophor mentionnés dans ce brevet.
En conséquence, la présente invention propose une composition pharmaceutique stérile pour l'administration parentérale, qui comprend une émulsion huile-dans-eau dans laquelle du propofol, seul ou dissous dans un solvant non miscible à l'eau, est émulsionné avec de l'eau et stabilisé au moyen d'un tensioactif, et qui comprend en outre une quantité d'édétate suffisante pour empêcher une croissance notable des micro-organismes pendant au moins 24 heures (dans le cas d'une contamination extrinsèque accidentelle).
L'expression "émulsion huile-dans-eau" désigne un système biphasique distinct qui est en équilibre et qui, en effet, dans sa totalité, est stable du point de vue cinétique et instable du point de vue thermodynamique. Cela s'oppose totalement à une formulation micellaire, par exemple avec du Cremophor EL, qui est thermodynamiquement stable.
Le terme "édétate" désigne l'acide éthylènediaminetétra-acétique (EDTA) et ses dérivés, par exemple le dérivé disodique connu sous le nom d'édétate disodique. En général, les édétates convenables de la présente invention sont les sels ayant une plus faible affinité pour l'EDTA que les sels formés avec le calcium. Des dérivés particuliers pour une utilisation dans la présente invention comprennent l'édétate trisodique, l'édétate tétrasodique et l'édétate disodique de calcium.La nature de l'édétate n'est pas déterminante, sous réserve que cet édétate permette d'empêcher la croissance notable de micro-organismes pendant au moins 24 heures dans le cas d'une contamination extrinsèque accidentelle (par exemple une augmentation par un facteur non supérieur à 10 après une faible contamination extrinsèque, par exemple à une valeur de 10 - 103 unités formant des colonies, à des températures comprises dans l'intervalle de 20 à 250C) . Comme permet de le constater le paragraphe expérimental, l'édétate de sodium et de calcium présente certains avantages par rapport à d'autres additifs mais l'édétate disodique est exceptionnel. En conséquence, l'édétate est de préférence l'édétate disodique.
Habituellement, l'édétate est présent dans les compositions de la présente invention en une concentration molaire (par rapport à l'EDTA sous forme d'acide libre) comprise dans l'intervalle de 3 x 10-5 à 9 x 10-4 . L'édétate est présent avantageusement à une concentration comprise dans l'intervalle de 3 x 10-5 à 7,5 x 10-4, par exemple dans l'intervalle de 5 x 10-5 à 5 x 10-4, mieux encore dans l'intervalle de 1,5 x 10-4 à 3,0 x 10-4 et de préférence à une concentration égale à environ 1,5 x Une composition de la présente invention comprend habituellement 0,1 à 5 %, en poids, de propofol.La composition comprend 1 à 2 W en poids de propofol et en particulier environ 1 W ou environ 2 W.
Le propofol, seul ou dissous dans un solvant non miscible à l'eau, est émulsionné avec de l'eau au moyen de tensioactif. Il est préféré que le propofol soit dissous dans un solvant non miscible à l'eau avant émulsionnement.
Le solvant non miscible à l'eau est présent convenablement en une quantité qui peut aller jusqu 30 k en poids de la composition, plus convenablement en une quantité de 5 à 25 %, de préférence de 10 à 20 %, et en particulier en une quantité d'environ 10 Une large gamme de solvants non miscibles à l'eau peut être utilisée dans les compositions de la formulation.
Habituellement, le solvant non miscible à l'eau est une huile végétale, par exemple l'huile de soja, l'huile de carthame, l'huile de graines de cotonnier, l'huile de maïs, l'huile de tournesol, l'huile d'arachide, l'huile de ricin ou l'huile d'olive. L'huile végétale est de préférence l'huile de soja.
En variante, le solvant non miscible à l'eau est un ester d'un acide gras à chaîne moyenne ou longue, par exemple un mono-, di- ou triglycéride ; ou bien est une substance modifiée chimiquement ou synthétisée telle que l'oléate d'éthyle, le myristate d'isopropyle, le palmitate d'iso- propyle, un ester de glycérol ou une polyoxy-huile de ricin hydrogénée. A titre de variante supplémentaire, le solvant non miscible à l'eau peut être une huile d'origine marine, par exemple l'huile de foie de morue ou une autre huile extraite d'un poisson. Des solvants convenables comprennent également des huiles fractionnées, par exemple l'huile de coprah fractionnée ou l'huile de soja modifiée. En outre, les compositions de la présente invention peuvent comprendre un mélange de deux ou plus de deux des solvants précités non miscibles à l'eau.
Le propofol, seul ou dissous dans un solvant non miscible à l'eau, est émulsionné au moyen d'un tensioactif.
Des tensioactifs convenables comprennent des tensioactifss non ioniques synthétiques, par exemple des éthers et esters éthoxylés et des copolymères séquencés polypropylène-polyéthylène, ainsi que des phosphatides, par exemple des phosphatides naturels tels que les phosphatides d'oeuf et de soja et des phosphatides modifiés ou transformés par synthèse (par exemple préparés par fractionnement physique et/ou chromatographie) ou leurs mélanges. Les tensioactifs préférés sont les phosphatides d'oeuf et de soja.
La composition de la présente invention est formulée convenablement de manière à être au pH physiologiquement neutre, habituellement dans l'intervalle de 6,0 à 8,5, si nécessaire au moyen d'une substance alcaline telle que l'hydroxyde de sodium.
Les vérins autoporteurs étant en pression de chaque côté du comble, et les opérations de renfort en bois effectuées, ainsi peut on couper les fiches et contre-fiches.
b) Nous plaçons entre les deux vérins, une série de solives IPE tous les 600 mm. Ces solives réglables par leur système d'équerre, reprennent le futur plancher autoporté.
FIGURE1:REPRESENTE UNE PERSPECTIVE DE L'ASSEMBLAGE DU DISPOSITIF DU VERIN AVEC SA PARTIE BASSE (2), SA PARTIE HAUTE (8). SES TIRANS (3, 5, 7), LES TROUS D'ASSEMBLAGES FIGURE 2 REPRESENTE UNE VUE DE FACE DE L'ASSEMBLAGE DU VERIN AVEC SA PARTIE BASSE (2), SA PARTIE HAUTE (8), SES TIRANS (3, 5, 7), LES TROUS D'ASSEMBLAGES (6) FIGURE 3: REPRESENTE UNE PARTIE D'UN VERIN FINI ET PLACE DANS UN COMBLE. L'ASSEMBLAGE PARTIE BASSE PARTIE HAUTE.
LES TIRANS, LES PLAQUES (OREILLES) SOUDES (9-18) SUR LA PARTIE HAUTE FIXEE SUR LES ARBALETRIERS (1-10) DU COMBLE, LE SYSTEME D'EQUERRE (14-15) ET SES SOLIVES (16) POUR REPRENDRE LE FUTUR PLANCHER.
FIGURE 4. REPRESENTE UNE VUE DE COTE DE L'ENSEMBLE DU VERIN DANS UN COMBLE DIT NON AMENAGEABLE (FERME AMERICAINE).
FIGURE @ REPRESENTE UNE VUE DE COTE DES PLAQUES (OREILLES) SOUDEES SUR LA PARTIE HAUTE DU VERIN ET FIXEE SUR L'ARBALETRIER FIGURE 7: REPRESENTE UNE WE DE FACE DE L'ELEMENT PERMETTANT D'ADAPTER LE SYSTEME DANS SON ENTIER AUX CHARPENTES DU TYPE "CROUPE" OU "JOUEE" FIGURE 8: REPRESENTE UNE VUE DE COTE DE LA FIGURE FIGURE 9: REPRESENTE EN PERSPECTIVE LA PIECE METALLIQUE (22) PERMETTANT DE SCELLER DANS LES PIGNONS EN TOUTE SECURITE.
FIGURE 10: REPRESENTE UNE VUE DE FACE D'UN POTEAU COULE EN BETON ARME (21) OU D'UN PROCEDE METALLIQUE TYPE HEB (20) OERMETTANT D'INSTALLER CE VERIN SUR UN PIGNON DE MAISON NON PORTEUR.
FIGURE 6 REPRESENTE EN DETAIL UNE VUE DE COTE DU SYSTEME D'EQUERRE REGLABLE (14-15) REPRIS SUR LA PARTE BASSE DU VERIN OU VIENNENT SE FIXER LES SOLIVES (16).
DESCRIPTIF La présente invention concerne une gâche de verrou ou serrure, se transformant en alarme à l'ouverture du verrou.
Actuellement, le verrou n'a qu'un rôle de fermeture de porte et ne permet pas d'avertir si une personne étrangère essaie de pénétrer chez soi par effraction, soit en ouvrant le verrou, soit v disjoignant la porte à l'aide d'outils.
La gâche-alarme me selon l'invention, permet d'avertir si de la porte d'entrée de l'appartement ou pavillon.
La gâche-alarme comporte en effet selon une première caractéristique un boitier métallique ou plastique (pour ce deuxième cas, l'intérieur de la gâche sera renforcé par une tôle pliée de 3mm d'épaisseur offrant toute la sécurité d'une gâche traditionnelle) en forme de P de H 200mm X L 75mm X E 33mm, dans lequel un orifice permet l'introduction d'un bouton-contact pour mettre l'alarme sous tension. A l'intérieur de la gâche-alarme se trouvent un circuit imprimé avec un haut-parleur, une pile 9 volts et un contact mécanique ou Le contact s'effectue lorsqu'on ouvre le verrou, c'est le pêne en se déplaçant qui dégage le contact dans la gâche, et se faisant, met l'alarme en fonction. Cette gâche-alarme s'adapte à la place de toute gâche standard de verrous ou serrures.
1 ) FONCTIONNEMENT POUR SORTIR DE L'APPARTEMENT : On retire le bouton-contact, l'alarme est sous tension, rien ne se passe, on ouvre le verrou, le contact se met, à cet instant on a dix secondes pour sortir et refermer le verrou. L'alarme n'etant pas déclenchée, rien ne se passera Si l'on et plus de dix secondes pour refermer la porte, l'alarme se 2 ) FONCTIONNEMENT POUR RENTRER DANS L'APPARTEMENT : On ouvre le verrou, l'alarme se met sous tension, on ouvre 13 a dix secondes pour refermer le verrou. Moins de dix secondes, rien ne se passe, plus de dix secondes l'alarme se déclenche et seule l'introduction du bouton-contact dans son orifice permet son arrêt après une temporisation de sept à huit secondes environ.
30) EN CAS D'EFFRACTION : Le oleur ouvre le verrou de l'extérieur ou fracture la porte, au bout de dix secondes l'alarme se déclenche.
Si le voleur referme le verrou, l'alarme reste en fonction permanente jusqu'à l'introduction du bouton-contact dans son orifice.
DESCRIPTIF La présente invention concerne une gâche do verrou ou transformant en alarme à l'ouverture du verrou.
3ème étape : le floculat est peptisé par une solution de soude 0,1 mol.l ' jusqu'à pH 11. II se forme un sol stable entre pH 3 et 11. Le volume est ajusté à 50 cm3 et le pH à 7 par une solution diluée de HCI. Ce ferrofluide ADMS ([Fe] = 10.1 mol.l') est stable dans le temps et sert de solution mère pour ses applications ultérieures.
4ème étape : Avant couplage à la protéine-SPDP, 1 cm3 du ferrofluide précédent est additionné de 1cm3 d'une solution aqueuse de DTT à 10.2 mol.l ' vers pH9. On laisse incuber 1 heure, puis le mélange est floculé par addition de HCI 0,1 mol.l-' jusqu'à pH=2. Après centrifugation 10 minutes à 5000 Vmn le floculat est peptisé par une solution de PBS (0,1 mol.l ') et le pH est ajusté à 7,4. Cette séquence précipitation-peptisation est recommencée deux fois pour éliminer totalement l'excès de DTT et l'ADMS éventuellement libéré lors de la coupure des ponts disulfure.Lors de la dernière peptisation le volume de PBS est adapté à la concentration désirée pour le ferrofluide avant son couplage par incubation directe avec la protéine-SPDP.
ExemPle 2: Préparation du complexe ferrofluide-annexine 1) Le ferrofluide est traité à l'acide dimercaptosuccinique (ADMS) et réduit par le dithiothréitol à pH 9.2 et à température ordinaire (FFSH). Après floculation de FFSH à pH2 et centrifugation, le surnageant, contenant l'excès de DTT est éliminé, le floculat retenu par un aimant est lavé puis dispersé dans un tampon phosphate (PBS). Les groupements thiol du FFSH sont dosés par le réactif d'Ellman (acide 5,5'-dithio-bis(2nitrobenzoïque) (31), avec des modifications mineures pour éliminer l'interférence des particules de ferrofluides dans la lecture au spectrophotomètre.
2) On fait réagir une annexine, ici l'annexine recombinante V, avec du SPDP en milieu PBS, le SPDP étant en excès par rapport à l'annexite (2,5 moles de SPDP par mole d'annexine). Le SPDP est dissous dans un solvant anhydre, 1-methyl-2-pyrrolidone, puis ajouté à l'annexite en milieu acqueux; On laisse le mélange incuber à la température ambiante.
L'annexine-SPDP est obtenue, et le SPDP en excès est hydrolysé spontanément.
3) Différentes quantités d'annexine SPDP sont incubées avec les FFSH pendant 2 heures à température ambiante, le rapport optimal entre les deux composants étant déterminé expérimentalement par exemple par la mesure du changement de la mobilité électrophorétique des particules en solution en utilisant l'effet Doppler. Dans ce cas la mobilité électrophorétique du complexe Anx FF est comparée à celle des FFSH une autre méthode est la détermination de l'activité enzymatique ou d'une autre propriété fonctionnelle de l'effecteur, telle que son affinité pour un anticorps, ou la capacité de former un complexe d'affinité avec des anticorps d'un complexe peroxydase/protéine A immobilisé sur les particules, et la détermination de l'activité peroxydase. Une activité optimale est obtenue par la fixation de 1,5 à 2 pg d'annexine sur 1 ml de FFSH comme l'a montré l'utilisation des méthodes précitées.
4) L'ADMS qui n'a pas réagi avec l'effecteur ainsi que d'autres sites potentiellement réactifs sur les particules de ferrofluides sont masqués par saturation avec 1% de BSA (pour bovine serum albumine) dans 50 mM de tampon NaHCO3 et pH 9.6 pour donner les Anx FF. Dans certains cas d'autres protéines telle la sérum albumine humaine peuvent être plus appropriées. Une attention particulière est apportée afin d'éviter une floculation résultant d'un excès de saturation.
Exemple 3: couplage des Anx FF aux cellules Un mode de réalisation du couplage de Anx FF aux érythrocytes est de mélanger: - 30cul d'une suspension d'érythrocytes à 30%, - 30cul d'Anx FF, - 6 ,ul de Cas12 à 125 mM, - 7,5 ,ul de BSA à 4%, - 256 pI de tampon.
Le mélange réactionnel est incubé pendant 30mn à 37C" puis dilué avec 6ml de tampon TRIS additionné de BSA à 0,10/0 et de 5mM de DTT.
Exemple 4 : SéDaration des cellules retenues oar Anx FF des cellules non retenues Cette séparation est réalisée par un appareil automatique dont un exemple donné dans la figure 1 est le suivant: un tube en tygon est placé dans un champ magnétique et connecté à différents réservoirs via des électrovannes. Le champ électromagnétique est activé et le mélange réactionnel décrit dans l'exemple 3 ci-dessus est, après une incubation à 37"C, introduit dans le tube par l'activation de la vanne appropriée et traverse le champ magnétique avec un débit de 120 ml par heure, et l'effluant est collecté.