INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Un fil 37 pourvu d'une cosse est saisi au moyen d'une paire de pinces d'insertion avant 40 et d'une paire de pinces d'insertion arrière 41. En premier lieu, dans une première action d'insertion, la partie d'extrémité avant d'une cosse 38 est insérée dans le boîtier de connecteur 32 par les pinces d'insertion avant 40. Ensuite, dans une seconde action d'insertion, les pinces d'insertion avant 40 sont ouvertes et les pinces d'insertion arrière 41 poussent la partie de fil 39 vers l'avant de façon à insérer la cosse entière dans le boîtier de connecteur 32.Lorsque l'extrémité avant de la cosse vient en butée sur l'extrémité arrière du boîtier de connecteur 32 ou s accroche sur un crevé élastique 42 de blocage de cosse situé à l'intérieur du boîtier de connecteur, ce qui produit un excès de force (environ 2,5-3 kgf) s'exerçant sur le boîtier de connecteur 39 dans le sens d'insertion, le vérin pneumatique 36 se rétracte de façon à permettre au boîtier de connecteur 32 de s'échapper vers l'avant, ce qui empêche une rupture de la cosse 38 et du boîtier de connecteur 32.
Toutefois, la structure classique exposée ci-dessus a pour inconvénient qu'il est nécessaire de fixer la pression d'application du vérin pneumatique 36, c'est-à-dire la valeur de surcharge, en fonction de la taille de la cosse 38 et de la partie de fil 39, ce qui est fastidieux.
RESUME DE L'INVENTION Un but de la présente invention est de fournir des moyens d'insertion de cosse qui puissent empêcher d'une manière fiable un endommagement de la cosse et du boîtier de connecteur en cas de défaillance de la seconde étape d'insertion de la cosse, sans exiger que la valeur de surcharge, par exemple la pression d'application du vérin pneumatique, soit modifiée en fonction de la taille de la cosse et du fil.
Conformément à la présente invention, pour atteindre ce but, il est prévu un premier procédé d'insertion de cosses et un second procédé d'insertion de cosses.
Bien que le système de recombinase Crelox constitue un système de choix pour le vecteur rétroviral de l'invention, d'autres systèmes de recombinase peuvent également être utilisés. A titre d'exemples non limitatifs, les systèmes de recombinaison suivants sont utilisables : le système de levure FLP (dit Flip ) et le système bactérien R.
Les vecteurs rétroviraux de l'invention foumissent donc un moyen de transfert efficace d'ADN dans des cellules hôtes. L'intégration provirale est précise et ne provoque pas de réarrangement chromosomique. La conception des vecteurs duplicateurs partait du principe que la transposition du gène dans la LTR5', à l'extérieur de l'unité transcriptionelle rétrovirale, améliore son expression.
Bien que la présence du signal d'encapsidation rende possible la génération d'un virus compétent pour la réplication par recombinaison entre les séquences du rétrovirus et du provirus endogènes, que la présence de PPT et d'autres éléments en cis rendent la transposition possible et que la présence des séquences PBS puisse avoir des effets négatifs sur l'expression du transgène, tous ces évènements sont très improbables lorsqu'on utilise un vecteur rétroviral selon l'invention puisque toutes ces séquences virales sont délétées.
Le système des sLTR est un concept nouveau dans la construction des rétroéléments en général. II existe de nombreux rétrovirus dont le spectre d'hôte de la particule présente un intérêt mais pour lesquels la conception de vecteurs nécessite la présence de certaines séquences ds ou trans actives différentes de celles qui ont été citées précédemment qui permettent un assemblage correct du virion et lui permettent d'être infectieux, comme par exemple les virus humains VIH, HTLV ou le virus de chèvre CAEV. Une fois intégrés, les éléments cis ou trans régulateurs deviennent inutiles pour le gène transduit mais ont des effets pathogènes pour la cellule et augmentent significativement les probabilités de la résurgence d'un virus sauvage.La nécessité de ce type de séquence pour ce type de rétrovirus les rend pratiquement inutilisables pour un usage en tant que vecteurs. L'application du système sLTR de la présente invention pour ces rétrovirus permet d'envisager avec plus de sécurité et plus de fiabilité transcriptionnelles un usage comme véteurs pour la transduction de gènes.
La présente invention sera nettement décrite en référence aux exemples suivants non limitatifs et qui font référence aux figures suivantes: - la figure lA représente la structure du plasmide pMloxPL; - la figure 1 B représente la structure du provirus MloxPL résultant de l'infection du rétrovirus MloxPL; - la figure 1C représente un provirus après la recombinaison induite par cre utilisant les deux sites loxP à l'intérieur des LTR; - la figure 1D représente une analyse par - la figure I E présente une analyse par - la figure 2A représente la structure et l'analyse moléculaire du provirus MloxPL résultant de l'infection du rétrovirus MloxPL et de la recombinaison induite par Cre utilisant les deux sites loxP à l'intérieur des LTR; - la figure 2B représente les résultats d'une analyse par Southem blot de l'ADN cellulaire provenant de fibroblastes NIH 3T3 Cre.l infectés par MloxPL avec digestion par l'endonuclease de restriction Bcll ; - la figure 2C représente les résultats d'une analyse par Southern blot de l'ADN cellulaire provenant de fibroblastes NIH 3T3 Cre.1 infectés par MloxPL avec digestion par les endonucleases ECORV; - la figure 3A représente la structure du plasmide pMCreloxPL;; - la figure 3B représente un diagramme du 3' sLTR de quelques réalisations préférentielles du vecteur rétroviral de l'invention; - la figure 3C représente les résultats d'une analyse par Southem blot. de l'ADN cellulaire provenant de fibroblastes NIH 3T3 infectées par MCreloxPL par digestion par l'endonuclease de restriction Bcil; - la figure 3D représente les résultats d'une analyse par Southem blot, de I'ADN cellulaire provenant de fibroblastes NIH 3T3 infectées par MCreloxPL par digestion par l'endonuclease de restriction EcoRV;; - la figure 3E représente les résultats d'une analyse par Southem blot. de l'ADN cellulaire provenant de fibroblastes NIH 3T3 infectées par MCreloxPL par digestion par l'endonuclease de restriction Kpnl; - la figure 4 représente un schéma du mécanisme de la génération de sTLR avec le vecteur rétroviral McreloxPL.
EXEMPLES Nomenclature La nomenclature des différents vecteurs et des différentes cellules a été établie comme suit: le p désigne le vecteur plasmidique (par exemple, pMloxPL); les noms avec un T2 (déposée le 10/3/1993 à l'ECAC sous le numéro 93031002) désignent la lignée cellulaire du virus sauvage auxiliaire 2 transfectée avec ce vecteur (par exemple, 'P2-MloxPL); les noms sans p désignent les virus produits par les cellules du virus sauvage auxiliaire (par exemple, MloxPL) ; le nom d'une lignée cellulaire suivi du nom du virus indique que la lignée cellulaire contient un provirus résultant d'une infection (par exemple, NlH3T3MloxPL).
Culture et sélection des cellules Les lignées cellulaires établies NIH 3T3 (fibroblastes de souris) et v 2 (lignée cellulaire d'encapsidation du rétrovirus écotrope de la souris) sont référencées dans (7) et (13). Elles sont cultivées dans un DMEM (milieu de Eagle modifié par Dulbecco) à teneur élevée en glucose (4,5 gA) complété avec du sérum de veau foetal à 5 %. Les cellules sont incubées à 370C dans une atmosphère humidifiée, contenant 12% de CO2. Du G41 8 est ajouté dans le milieu approprié à une concentration de 600 mg/ml. Le clonage de colonies résistant au G41 8 a été réalisé par pipettage de colonies individuelles et isolation dans une boîte de culture distincte.Le clonage des cellules infectées est réalisé par dilution limitante 48 heures après l'infection.
Transfection. infection. coloration des cellules et analvse des acides nucléiques par "Southem blot" Des précipitations par phosphate de calcium ont été effectuées comme décrit dans (12). Le surnageant contenant le virus a été utilisé pour infecter des cellules NIH 3T3 en présence de 5 ,ug/ml de polybrène, comme décrit précédemment dans (37). Des hybridations par "Southem blot" ont été préparées par le procédé en référence (6). L'activité ss- galactosidase a été mise en évidence par coloration au Xgal, comme décrit précédemment dans (38).
Détection de LacZ nar PCR La PCR est effectuée sur 1 pg d'ADN cellulaire génomique dans une réaction de 40 pl (Tris-HCI 50 mM (pH9), 150 pglml d'albumine de sérum bovin, (NH4)20S4 16 mM, MgCl2 7 mM, 250 pM pour chaque dNTP, 1,25 U Taq DNApol (USB), 0,078 U Vent(exo+) DNApol (N.E. Biolabs)).
Des amorces ont été ajoutées à une concentration finale de 0,25 pM (pour 20 mères). La réaction de la PCR a été chauffée à 80 "C pendant 5 minutes avant le début. 35 cycles (94"C, 55 min.; 59"C, 30 s; 70"C, 3 min.
30 s) avec les amorces suivantes 5' GCATC GAGCTGGGTAATAAGCGTTGGCAAT-3' et 5' GACACCAGAC CAATGGTAATGGTAGCGAC-3' pour la détection de LacZ et 5'-GGACTGGGTGGCTTCCMCTCCCAGACAC-3' et 5'-AGCTTCTCATTGCTGCGCGCCAGGTTCAGG-3' pour la détection du RAP-SYN endogène de souris, comme témoin interne. Les produits de réaction de la PCR ont été analysés par électrophorèse sur gel.
Exemole 1 - Construction du vecteur rétroviral DMloxPL et transfection de lignées cellulaires a) Construction du vecteur DMIoxPL pMloxPL résulte du plasmide pG-MPL (décrit dans Choulika et al, 1995), dans lequel le site de reconnaissance loxP est inséré à l'intérieur du site Nco I dans un adaptateur de liaison (5' CATGCATATAACTTC GTATAGCATACATTATAC GAAGTTATC -3' et 5' CATGGATMCTTCGTATMTGTATGCTTATCGMGTTATATG-3'), au lieu du site l-Sce I. La séquence du site loxP a été vérifiée par séquençage de l'ADN.
Le rétrovirus utilisé est illustré dans la Fig. la. pMloxPL est construit à partir d'un provirus de leucémie murine de Moloney défectif (dépourvu du gène gag, pol et env) en insérant la séquence codant pour PhleoLacZ dans la région U3 de la LTR de droite à la place des séquences d'activation à distance. 5' issu du gène PhleoLacZ a été positionné entre le site accepteur d'épissage du gène env de MoMuLV et un site loxP long de 32 pb issu du bactériophage PI. Dans les cellules infectées, ce type de virus a la LTR qui contient le gène activée par un promoteur cellulaire flanquant par piégeage du promoteur.
b) Transfection de lignées cellulaires avec le Dlasmide oMloxPL Les lignées cellulaires produisant le virus ont été générées en transfectant le plasmide pMloxPL avec le plasmide de sélection pUSVneo dans la lignée cellulaire du virus sauvage auxiliaire T2 qui exprime le virus sauvage auxiliaire écotrope défectif en encapsidation. Après sélection pour G418 (néomycine), des clones individuels sélectionnés sur leur activité p- galactosidase ont été testés pour titrer le virus. La titration a été effectuée en clonant des cellules NIH 3T3 immédiatement après infection par dilution limitante, et en détectant la présence du provirus contenant LacZ par PCR.
Les lignées cellulaires productrices 2MloxPL. 1 et 'f'2-MloxPL.2 ont montré un titre sur la lignée cellulaire NIH3T3 de respectivement 2,5 x 1 et 5 x 104 (Tableau 1). La titration des unités formant colonie bleue par millilitre (BCFU/ml) du sumageant viral de T2-MloxPL.1 et T2-MloxPL.2 est respectivement de 3 et 6, ce qui correspond à un rapport approximatif 4 de 1 colonie bleue sur 10 intégrations. Comme nous l'avons décrit précédemment, ces provirus fonctionnent comme des pièges à promoteur, 4 et seulement une intégration sur 10 exprime le gène rapporteur dans la ligne cellulaire fibroblastique NIH3T3.
Les structures de l'ADN des provirus MloxPL intégrés sont schématisées à la figure 1 b. Dans les figures du présent texte, les positions des LTR et des sites de restriction Bcll et les tailles des fragments sont indiquées (x indique le fragment Bdl de taille aléatoire du bras gauche et y le fragment Bcll de taille aléatoire du bras droit. P indique une sonde LacZ radiomarquée au 32p. Ces structures ont ensuite été analysées par hybridation par "Southem blot" dans 6 clones NIH 3T3 indépendants. Les résultats de cette analyse sont présentés à la figure Id.
Un autre document, le brevet européen FR9102643 concerne un bloqueur permettant d'obtenir a volonté un blocage momentané de la corde d'assurance du grimpeur. I1 est constitué d'une pièce travaillant en association avec un descendeur, reliée par un moyen d'accrochage au mousqueton lié au baudrier, présentant à l'autre extrémité une encoche pour la corde sortant du descendeur, de dimension telle que la distance est inférieure à la distance D existant entre l'oeilleton et la base de la grande boucle du descendeur, et qui empêche en position active, le défilement de la corde suivant F.
Le brevet français FR9008034 décrit un dispositif formé par un corps monobloc plan comportant un trou principal de passage de corde, un trou secondaire, et un levier de manoeuvre se raccordant à la périphérie du trou principal de passage de corde. Le trou principal comporte une portion de contour à profil rectiligne, oblique par rapport à l'axe principal (I-I) du descendeur. Le levier comporte une zone de raccordement généralement rectiligne d'axe (II-II) orientée d'un angle (D) supérieur a 70 degrés environ.
Le creux à la base du levier est à l'opposé'de l'axe principal (I-I) par rapport à la portion de contour rectiligne. Un mousqueton peut être passé dans un trou de sécurité et sur la corde. On obtient un freinage très progressif et une meilleure sécurité.
Les dispositifs de l'art antérieur sont relativement complexes à fabriquer et présentent l'inconvénient de provoquer dans certains cas le blocage intempestif de la corde, ce qui peut nuire à la sécurité de l'utilisateur.
A cet effet, le dispositif selon l'invention comporte une flasque et un ensemble de poulies pour le passage de la corde et le blocage de ladite corde en cas de chute. Le dispositif comporte en outre un cadre ouvert vers le bas et muni à sa face supérieure d'un anneau d'attache, le dispositif comportant une platine pivotante supportant à chaque extrémité une poulie, la corde venant du grimpeur passant par la face ouverte du cadre, puis sur une première poulie amont, puis sur la poulie aval avant de repasser par la face ouverte du cadre, ledit cadre présentant à la surface intérieure de sa face supérieure un moyen propre à bloquer la corde en regard de la poulie aval, la platine pivotante étant mobile entre une position de repos dans laquelle la corde peut se déplacer librement sur les deux poulies et une position de blocage dans laquelle la poulie aval se rapproche de la face supérieure du cadre.
Avantageusement, le cadre comporte en outre une roue libre positionnée en regard de la roue libre amont.
Selon un mode de réalisation particulier, le cadre comporte en outre une roue libre réglable disposée entre la face ouverte et la roue aval.
Selon une variante, la roue libre réglable peut être déplacée parallèlement à la face ouverte, le positionnement étant déterminé en fonction du poids du grimpeur.
L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui suit, faisant référence aux dessins annexés où - la figure 1 représente une vue en coupe longitudinale d'une première variante du dispositif, - la figure 2 représente une vue en coupe transversale d'une première variante du dispositif, - la figure 3 représente une vue en coupe longitudinale d'une deuxième variante de réalisation du dispositif, - la figure 4 représente une vue en coupe longitudinale d'une troisième variante du dispositif.
La figure 1 représente une vue en coupe longitudinale du dispositif selon l'invention. Il est constitué par un cadre (1) métallique rigide, présentant à sa partie supérieure un anneau d'accrochage (2).
Le cadre (1) est formé par une tôle d'acier pliée présentant une section en "U", ouverte à la face inférieure (3). Ce cadre (1) est muni d'une platine pivotante (4) montée sur un axe (5) transversal. Cette platine pivotante (5) supporte une poulie aval (6) et une poulie amont (7).
La corde (8) éventuellement lestée par un poids (9), pénètre dans le dispositif par la face inférieure (3), passe sur la poulie aval (6), longe la face supérieure du cadre (1), puis passe sur la poulie amont (7) avant de ressortir par la face inférieure (3).
La face supérieure du cadre présente un élément de blocage (10), constitué par exemple par un caoutchouc dur ou tout autre matériau propre à empêcher le déplacement de la corde lorsqu'elle est pressée contre ledit élément par la poulie aval (6).
Lorsque le grimpeur lâche prise, la tension brusque s'exerçant sur la corde (8) se transmet à la poulie amont (7) qui provoque le basculement de la platine (4). Ce basculement se traduit par un rapprochement de la poulie aval (6) vers la surface supérieure du cadre (1), et par le coincement de la corde (8) entre la poulie aval (6) et l'élément de blocage (10).
Les figures 2 et 3 représentent une variante de réalisation dans laquelle le cadre (1) comporte un galet supplémentaire (11) disposé avant la poulie aval (6). Ce galet (11) est mobile latéralement et permet d'ajuster le déclenchement du blocage en fonction du poids de l'utilisateur.
La figure représente une vue en coupe longitudinale d'une troisième variante du dispositif.
Selon la position des repères et des vides associés, le code change. Ainsi pour une matrice comportant douze "bits", il existe 212 valeurs possibles pour le code, soit 4096 valeurs.
La matrice représentée à la figure 2 se distingue de celle de la figure 1 par le fait qu'elle comporte, intégrés en son sein, un certain nombre de couples de repères R l vides V qui sont seulement prévus pour permettre la détection du positionnement de la matnce.
Ces couples sont repérés à la figure 2 par les références R' et V'. Chaque repère R' est représenté sous la forme d'un petit carré noirci.
Pour permettre le repérage de la matrice, ces repères R' sont répartis selon une configuration qui ne présente ni axe de symétrie ni centre de symétrie. De cette façon on est assuré de retrouver le bon sens permettant une lecture correcte des "bits". Ils sont répartis de préférence sur les bords de la matrice.
Le nombre de repères R' permettant la détection du positionnement de la matrice est au moins égal à trois, mais peut être bien entendu bien supérieur.
Ces "bits" particuliers ne servent qu'au positionnement de la matrice et n'interviennent pas dans la formation du code numérique.
Ainsi, le code numérique attribué à la matrice de la figure 2 est dix neuf, qui se décompose de la manière suivante: 1 + 2 + 0 + 0 + 16 + 0 + 0 + 0. Dans cette matrice, il existe 28 valeurs possibles pour le code, soit 256.
On a représenté à la figure 3 et de manière schématique un lingot d'acier 1 qui porte sur l'une de ses faces une étiquette 2 qui y est fixée à l'aide d'un poinçon 3.
Cette étiquette porte un code 4 caractéristique du produit.
Selon une forme de réalisation non représentée, les repères R peuvent consister en des plages de matière, c'est-à-dire de petites surfaces d'un matériau différent de celui qui constitue l'article ou l'étiquette. Ces plages de matière peuvent présenter une couleur contrastée par rapport à celle de l'article ou être de nature magnétique, tandis que l'article ou l'étiquette est formée d'un matériau amagnétique.
Dans la variante de réalisation de la figure 4, le matériau 5 comporte une série de repères R1, R2, R3 qui consistent chacun en un trou T. Ce trou traverse l'épaisseur du matériau de sorte, comme le montre la partie droite de la figure, même si le matériau vient à être sectionné dans le sens de son épaisseur en deux parties 5A et 5 B, on retrouve un code identique sur chacune de ces deux parties.
Cela rend possible la mise en place du code sur l'article préalablement au traitements chimiques et/ou physiques qu'il va subir. Lorsque ces traitements sont effectués, on peut alors sectionner l'article en plusieurs parties, dans le sens de son épaisseur, tout en retrouvant sur chacune de ces parties le code initial.
Cela est particulièrement adapté à des produits tels que des cuirs, des peaux ou du bois.
Par ailleurs, on notera, du fait que les repères consistent en des trous, que la falsification du code devient très difficile à effectuer car il faut boucher un ou plusieurs trous du code et refaire un nombre de trous identiques en d'autres endroits, afin de générer un autre code. Le bouchage d'un trou sera facile à déceler du fait qu'on y aura rajouté de la matière. De plus, le trou refait aura difficilement le même aspect que les trous d'origine, car la matière qui entoure ces derniers aura subi des transformations physiques et/ou chimiques qui seront très difficiles à imiter au voisinage du ou des trou(s) falsifié(s).
La figure 5 représente de façon très schématique des moyens de lecture du code apposé sur un article.
Bien entendu, en fonction de la nature des repères R, ces moyens de lecture seront de nature différente. A titre d'exemple si les repères R consistent en des trous ou en des plages de matière de couleur contrastée par rapport à celle de l'article ou de l'étiquette, les moyens de lecture consistent par exemple en des moyens de lecture naturelle ou de vision artificielle. S'il s'agit de plages de matière magnétique, les moyens de lecture seront de type magnétique.
Puis, on prépare une sauce de couchage en mélangeant le système pigmentaire ainsi traité à un système liant composé de 11% de latex styrène/butadiène (exprimé en sec) et de 0,5% d'alcool polyvinylique.
La sauce de couchage ainsi obtenue - ci-après dénommée sauce 1 - présente un extrait sec d'environ 62%.
On détermine, pour cette sauce de couchage, deux indices de pseudoplasticité (I.P.P.) calculés selon les formules viscosité Brookfield 20 rpm I.P.P. 1 = viscosité 10 000 s-1 viscosité 10 000 s-l I.P.P. 2 = viscosité 40 000 s-l et on compare les valeurs obtenues avec les indices de pseudoplasticité d'une sauce de couchage témoin préparée dans les mêmes conditions, exception faite que le système pigmentaire n'a pas été traité conformément à 1 ' Invention.
Les résultats sont exprimés dans le Tableau 3 ci-après.
Sauces de I.P.P. 1 I.P.P. 2 couchage Témoin 32 2,1 Sauce 1 40 2,5 Ces résultats montrent qu'un traitement conforme à l'invention permet d'améliorer notablement la pseudoplasticité des sauces de couchage dans un très large domaine de variation de taux de cisaillement.
Exemple 1.4 : COUCHAGE DU PAPIER On compare les performances, en termes de lissé (lissé Bekk), de résistance à l'arrachage (IGT sec) et de mottling, de couches obtenues, dans des conditions de séchage standard et des conditions de séchage intense, en utilisant comme sauces de couchage, la sauce 1 et la sauce témoin de l'exemple 1.3 ci-avant.
Dans tous les cas, le couchage est effectué à 10 g/m2 sur support précouché.
Le mottling des couches obtenues est apprécié au cours de tests de laboratoire et de tests industriels et est exprimé par une note comprise entre 1 (tendance au mottling très faible à nulle) et 5 (tendance au mottling maximale).
Les résultats sont exprimés dans le Tableau 4 ci-après.
Performances Séchage standard Séchage intense des Témoin Sauce 1 Témoin Sauce 2 couches Lissé Bekk (s) 735 885 880 1060 IGT sec (cm/s) 175 > 200 155 > 200 Mottlina - tests laboratoire 4 2,5 3,5 1,5 - tests industriels 5 3,5 5 2,5 EXEMPLE 2 : TRAITEMENT DES FIBRES DE CELLULOSE On traite une pâte cellulosique chimique de type scandinave présentant un degré SR égal à 15 avant raffinage par l'adjonction de 2% d'une poudre de polyvinylpyrrolidone de bas poids moléculaire telle que celle commercialisée par la Société BASF sous la référence KOLLIDON 12 PF.
On.procède alors au raffinage de la pâte ainsi traitée jusqu'à l'obtention d'un degré SR égal à 50 puis à la fabrication d'une feuille de 65 g/m2.
Le problème "clé", lorsque les insectes sont déjà installés, consiste à pouvoir supprimer la termitière elle-même.