INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'inoculation est réalisé à l'aide de fragments mycéliens d'une préculture ou d'une solution de spores à 2 x 105 spores/ml.
Au bout de 24 h., les pelotes mycéliennes de 0,5 à 1 mm de diamètre environ sont formées et le débit d'air est réduit à 20 l/h.
Au bout de 48 h A) Le milieu est supplémenté stérilement par un mélange phospholipidique comprenant de l'alcool vératrylique (AVe).
Composition du mélange - Ave 1,05 g - Source de phospholipide 0,25 g B) Le bullage d'air est remplacé par du bullage d'oxygène pur à un débit de 20 l/h.
Les résultats obtenus dans ces conditions avec la souche MIC 390 sont - activité MnP maximum : 3600 U/l - activité LiP maximum : 162 U/l.
La présente invention est relative aux feux de véhicules, notamment
automobiles, présentant des glaces à
catadioptre(s), et en particulier aux feux multifonctions.
Classiquement, une glace à catadioptre(s) présente une pluralité de bandes parallèles d'éléments catadioptriques en saillie par rapport à sa face intérieure, ainsi qu'une pluralité de bandes transparentes
intercalées entre ces bandes d'éléments catadioptriques.
Ces différentes bandes sont généralement horizontales.
Dans le présent texte, on entend par éléments catadioptriques non seulement les optiques élémentaires de rétroréflexion, tels que des trièdres formant prisme à réflexion totale, mais également les éléments qui, sans remplir la fonction catadioptrique, présentent un aspect général similaire à ces optiques élémentaires. De tels éléments d'aspect général similaire à celui des optiques élémentaires de rétroréflexion ont une fonction esthétique. Ils confèrent un aspect extérieur homogène aux glaces sur lesquelles les fonctions de rétroréflexion sont limitées à certaines régions de la glace uniquement. Des glaces de feux de signalisation à éléments catadioptriques esthétiques ont notamment été décrites dans la demande de
brevet FR-2.589.983.
L'extrait végétal ainsi obtenu est prêt à l'emploi et peut être conservé à 4 C.
EXEMPLE 2 : MISE EN EVIDENCE DES PROPRIETES THERAPEUTIQUES D'UN EXTRAIT VEGETAL CONFORME A L'INVENTION 1. Expérimentations in vitro La capacité d'un extrait végétal conforme à l'Invention à stimuler la cytotoxicité des monocytes vis-à vis des cellules tumorales, a été mise en évidence in vitro selon un protocole consistant à cultiver des cellules tumorales en présence de monocytes, et en l'absence ou en présence d'une dilution de l'extrait végétal à tester, puis en déterminant le pourcentage de cellules tumorales survivantes.
Ce test a été réalisé avec deux types de cellules tumorales d'une part, des cellules de carcinome ovarien humain résistantes aux anthracyclines (SKVLB) et d'autre part, des cellules de carcinome ovarien sensibles aux anthracyclines (SKOV3).
Les cellules tumorales ont été cultivées dans des plaques de 96 puits, à raison de 5000 cellules par puits, dans 100 Rl d'un milieu de culture à base de RPMI 1640 comprenant - 10% de sérum bovin foetal, - 100 Rg/ml de pénicilline, et - 100 Rg/ml de streptomycine, en présence de monocytes selon des rapports en volumes cellules tumorales/monocytes égaux respectivement à 1:1,2 1:2,5 ; 1:5 et 1:10, et en l'absence (contrôle) ou en la présence d'une dilution au 1/100 d'un extrait végétal obtenu selon le protocole décrit à l'exemple 1.
Les cultures ont été maintenues dans une chambre d'incubation en présence d'une teneur en CO2 égale à 5% et à une température de 37'C C pendant 72 heures. Puis, les puits ont été lavés avec du milieu de culture pour éliminer les monocytes et le nombre de cellules tumorales survivantes a été déterminé au moyen d'un test MTT (3-[4,5 diméthylthiazol-2-yl] -2, 5-diphényltétrazolium bromide), classiquement utilisé dans les tests de cytotoxicité.
Les résultats obtenus sont illustrés dans le Tableau 1 ciaprès. Ils sont exprimés en pourcentages d'activité cytotoxique, lesquels ont été calculés selon la formule DOt - DO x 100 DOt dans laquelle DOt est la densité optique des puits avant incubation en présence des monocytes tandis que DO est la densité optique après incubation en présence des monocytes.
Pourcentages d'activité cytotoxique Rapport cellules cellules SKVLB I Cellules SKOV3 cibles/monocytes v:v contrôle extrait contrôle extrait 1:1,2 6,2 21,9 2,8 13,1 1:2,5 14,3 31,6 4,0 16,2 1:5 26,6 34,7 6,6 12,0 1:10 26,6 48,5 21,6 46,3 Ce tableau 1 montre que l'activité cytotoxique des monocytes à l'égard de cellules tumorales telles que des cellules de carcinome est significativement augmentée lorque ces monocytes sont mis en présence d'une dilution d'un extrait végétal conforme à l'Invention.
2. Expérimentations in vivo chez l'animal a) Exsérimentation 1 L'activité antitumorale d'un extrait végétal conforme à l'Invention et obtenu selon le protocole décrit à l'exemple 1, a été testée chez 16 souris Balb/c ayant un poids moyen compris entre 18 et 20 g et ayant été soumises à une double injection, sous-cutanée d'une part et intrapéritonéale d'autre part, de 0,1 ml d'une suspension contenant 107 cellules issues d'un myélome Sp2/o.
Parmi ces 16 souris - 7 souris n'ont reçu aucun traitement afin de constituer un groupe contrôle - 5 souris (groupe 1) ont reçu dès le 2ème jour suivant l'injection des cellules tumorales, une dose quotidienne d'extrait végétal égale à 1,6 ml (soit 4 x 0,4 ml par jour), tandis que - 4 souris (groupe 2) n'ont été traitées avec l'extrait végétal conforme à l'Invention qu'à partir du 26ème jour suivant cette injection.
Les résultats de ce test ont été les suivants - les 7 souris du groupe contrôle sont toutes décédées entre les 37ème et 40ème jours suivant l'injection des cellules tumorales - les souris du groupe 1 n'ont pas développé de tumeurs visibles. Trois d'entre elles sont toutefois mortes : la première, au 30ème jour, pour des raisons inexpliquées ; la seconde, au 39ème jour, en présentant une petite tumeur de 3 mm de diamètre et la troisième, au 48ème jour, également avec une tumeur de petite taille. Les 2 autres souris étaient vivantes et en parfaite santé au 50ème jour suivant l'injection des cellules tumorales.
- les 4 souris du groupe 2 ont toutes développé une tumeur atteignant au 26ème jour une taille respectivement égale à 27x30, 10x24, 14x17 et 12x18 mm.
L'administration de l'extrait conforme à l'Invention à compter du 26ème jour a permis d'obtenir un arrêt de la croissance de ces tumeurs. Trois souris sont toutefois mortes aux 41ème et 49ème jours. La 4ème était vivante au 50ème jour de l'expérimentation et montrait une tumeur de même taille qu'au 26ème jour, témoignant d'un arrêt de la croissance de celle-ci.
Ces résultats mettent en évidence qu'un extrait végétal conforme à l'Invention permet de retarder, voire de prévenir le développement de tumeurs lorsqu'il est administré par voie orale à des souris immédiatement après l'inoculation de cellules tumorales, tandis qu'il permet de stopper la croissance des tumeurs lorsqu'il est administré, également per os, alors que celles-ci sont déjà formées.
b) Excérimentation 2 50 souris Balb/c ont été soumises à une injection unique et sous-cutanée de 0,1 ml d'une suspension contenant 107 cellules issues d'un myélome murin.
20 d'entre elles n'ont reçu aucun traitement afin de constituer un groupe contrôle.
4- Transfection de lignées d'encapsidation Psi-CRIP et infection de fibroblastes Le plasmide pFOCH29-Néo a été introduit dans la lignée d'encasidation amphotrope psi-CRIP décrite par Danos et al. (1988) par transfection utilisant la précipitation au phosphate de calcium selon la procédure standard, sans ADN carrier ; 10 microgrammes de plasmide ont été déposés sur une boîte de culture de 35mm de diamètre où 5.104 cellules ont été plantées la veille.
Les cellules psi-Crip ont été cultivées en milieu de Dulbecco modifié Eagle (DMEM, Gibco-BRL) additionné de 10% de sérum de veau nouveau-né (HyClone). Deux jours après la transfection les cellules ont ététrypsinées, diluées au 1/20 ème et mises sous sélection, en présence de Généticine à la concentration finale de 1 milligramme (mg) par Millilitre (ml) de milieu de culture. Les colonies apparues après 12 jours ont été prélevées et réimplantées sur des boîtes de culture de 24 puits, à raison d'un clone par puits.
Le surnageant de culture de cellules d'un puits parvenu à confluence a été prélevé, filtré sur 0,45 Am pour éliminer les cellules en suspension et utilisé pour infecter des fibroblastes murins (NIH3T3) plantés de façon identique sur des boîtes de culture de 24 puits, en présence de polybrène à la concentration de 8 pg/ml. Les NIH3T3 ont été cultivées en DMEM additionné de 10% de sérum de veau foetal (SVF). L'intégration virale a été analysée par PCR sur un lysat de NIH3T3 parvenues à confluence.
5- Réaction en chaîne de la Polymêrase (Polymerase Chain Reaction ou PCR) Le surnageant du lysat des NIH3T3 confluentes sur un puits de boîte de culture de 24 puits a été recueilli dans 100 p1 dont 10 ul ont été utilisés dans la réaction de PCR, qui est pratiquée dans le tampon suivant : tampon de PCR 10X standard incluant 25mM de MgCl2 (Perkin-Elmer/Roche MS) ; 100 nanogrammes (ng) de chaque amorce ; 2ul de dNTPs 10mM (mélange équimolaire de chaque dNTP à la concentration initiale de 10 mM, soit 2,5mM chacun) ; 2 unités de Taq Polymèrase clonée (Perkin-Elmer/Roche MS) pour 40 cycles, une seule unité pour 25 cycles ; pour un volume final de 50p1.
Deux couples d'amorces ont été utilisés.
Les séquences des oligonucléotides utilisés sont 1") - pour le premier couple 5' CTGCTGACGGGAGAAGAAAAAC-3' / 5' CCCGCTCAGAAGAACTCGTC-3' ; - pour le second couple 5'GACGAGTTCTTCTGAGCGGG-3' / 5' GATCTGAACTTCTCTATTGTTG-3' La taille des séquences amplifiées est pour le premier couple, Fin-gag/deux tiers proximaux gène NéoR : 900 pb ; et pour le second couple, tiers distal gène NéoR/ moitié proximale du LTR 3': 610 pb.
Dénaturation 5 min à 94 C ; 40 cycles sur GeneAmpPCR 9600 avec dénaturation 30" à 94'C annealing 15" à 55 C et élongation 30" à 72 C ; suivis d'une étape terminale d'élongation de 10 min.
Les échantillons (15ul sur 50ul) ont été déposés sur gel d'agarose à 1,2% (Seakem, FMC) et ont été soumis à une électrophorèse horizontale de 45 min à 80 volts ; la détection du signal reposant sur l'analyse de l'intensité de fluorescence en bromure d'éthidium (BET).
6- Détermination des titres infectieux Chacun des clones ayant été testé pour sa capacité à infecter des NIH3T3 a été amplifié et éventuellement congelé dans l'attente de l'analyse par PCR de l'efficacité d'infection.
Après PCR deux clones principaux ont été retenus et amplifiés afin d'infecter des NIH3T3 selon une procédure standard.
lml de surnageant de culture de 16 heures sur une boîte de 35mm de diamètre de chaque clone producteur a été prélevé à confluence, filtré sur 0,45um afin d'éliminer les cellules productrices en suspension. Le surnageant a été mis en contact avec les cellules NIH3T3 à 50% de confluence sur une boîte de culture de même diamètre (35mm), en présence de polybrène à la concentration de 8ug/ml de milieu. Les cellules ont été incubées pendant 2H30 environ, à 37 C ; une agitation a été pratiquée chaque demi-heure. Trois volumes de milieu frais ont été ajoutés après 2H30.
TITRES INFECTIEUX VIRAUX Des dilutions successives du surnageant primaire ont été utilisées pour infecter des cellules NIH3T3 surnageant pur, dilué au I/lOème, au 1/1000ème et au 1/100 000ème. Deux jours après l'infection, les cellules ont été trypsinées passées au 1/20ème environ sur trois boîtes de culture de 100 mm de diamètre et mises sous sélection par addition de Généticine (lmg/ml) au surnageant.
Cette procédure expérimentale a été rendue plus stringente dans la mesure où : d'une part, la drogue est ajoutée très vite après l'infection ; et d'autre part, la mise en sélection directe sans trypsiner les cellules ne permet pas de multiplier artificiellement le nombre de colonies résultantes, les cellules filles issues d'une cellule infectée restant groupées et ne formant qu'une colonie unique in situ. A l'inverse, lorsque les cellules sont trypsinées, les cellules filles essaiment dans la boîte de culture réceptrice et forment des colonies artificiellement indépendantes qui, si elles sont dénombrées, multiplient artificiellement le titre.
SOUTHERN BLOT Deux jours après l'infection par du surnageant pur, les NIH3T3 ont été trypsinées, passées au 1/20ème environ sur trois boîtes de culture de 100 mm de diamètre, dont l'une est mise sous sélection par la généticine.
A confluence, 1'ADN génomique des cellules infectées par chacun des deux clones après ou sans sélection, est extrait puis quantifié.
L'ADN a été digéré par deux enzymes de restriction, PstI et KpnI afin de réaliser un Southern blot. Après contrôle de la qualité de la digestion et homogénéïsation de la quantité d'ADN déposée dans chaque puits, le transfert a été réalisé sur une membrane de Nylon Hybond N (Amersham). L'hybridation a été conduite avec une sonde incluant la totalité des séquences du LTR viral encadrées par 100 bases en amont et 100 bases en aval. La sonde a été marquée par extension d'amorce (Feinberg et Vogelstein, 1983, 1984) avec du dCTP marqué à l'alpha-32-P, à une activité spécifique de 5.108 cpm/g.
Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, l'extrait végétal est susceptible d'être obtenu, en outre, par une filtration.
La présente Invention a également pour objet un procédé de préparation d'un extrait végétal tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes - macération des parties aériennes, fraîches ou sèches, d'au moins trois plantes choisies parmi les genres Geranium, Plantago et Calendula dans un solvant approprié et, si nécessaire - filtration de l'extrait obtenu.
Selon un mode de mise en oeuvre préféré dudit procédé, les plantes sont choisies parmi les espèces Geranium robertanium, Plantago lanceolata et Calendula officinales.
Selon un mode de mise en oeuvre avantageux du procédé conforme à l'Invention, les feuilles desdites plantes sont mises à macérer dans de l'eau.
Selon une disposition avantageuse de ce mode de mise en oeuvre, les feuilles desdites plantes sont mises à macérer dans de l'eau à une température comprise entre 15 et 30'C et pendant une période de 3 à 15 jours.
Selon une autre disposition avantageuse de ce mode de mise en oeuvre, 300 à 400 grammes de feuilles fraîches de Geranium robertanium, 10 à 50 grammes de feuilles sèches de Plantago lanceolata et 10 à 50 grammes de feuilles sèches de Calendula officinales, sont mises à macérer dans 3 litres d'eau.
La présente Invention a également pour objet un extrait végétal tel que défini ci-avant, pour l'utilisation comme médicament dans le traitement des affections où une immunostimulation est recherchée et notamment, dans le traitement des pathologies tumorales malignes et bénignes.
En effet, les extraits végétaux conformes à l'Invention ont un effet stimulant sur l'activité cytotoxique des lymphocytes B et des monocytes. Des études expérimentales réalisées chez l'animal et des études cliniques montrent qu'une administration orale quotidienne de ces extraits permet d'obtenir en quelques semaines un arrêt de la croissance des tumeurs suivi d'une régression de celles-ci, aboutissant le plus souvent à une rémission de la pathologie tumorale.
La présente Invention a également pour objet un conjugué phytoprotéique comprenant un extrait végétal tel que défini ci-avant et de lla-foetoprotéine, cette dernière servant de substance de transport spécifique vers les cellules tumorales.
Un tel conjugué peut être préparé selon les protocoles décrits dans la Demande Internationale publiée sous le n 94/19021.
La présente Invention a aussi pour objet un conjugué phytoprotéique, tel que précédemment défini, pour l'utilisation comme médicament dans le traitement des affections dans lequel une immunostimulation est recherchée tel que notamment, le traitement des pathologies tumorales.
La présente Invention a en outre pour objet une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre de principe actif, un extrait végétal ou un conjugué phytoprotéique tels que précédemment définis.
L'Invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre et qui se réfère à des exemples non-limitatifs de préparation et d'utilisation d'un extrait végétal conforme à l'Invention.
EXEMPLE 1: PREPARATION D'UN EXTRAIT VEGETAL CONFORME A L'INVENTION On introduit dans un récipient en verre - 360 grammes de feuilles fraîches de Geranium robertanium, - 25 grammes de feuilles sèches de Plantago lanceolata, - 25 grammes de feuilles sèches de Calendula officinales, et - 3 litres d'eau minérale.
Après avoir fermé hermétiquement le récipient, on laisse macérer les feuilles pendant 8 jours à température ambiante (environ 23 C), en procédant à une ou plusieurs agitations quotidiennes.
Au terme de la macération, le mélange est pressé et la solution aqueuse obtenue est soumise à une filtration sur un filtre de 0,22, puis à un contrôle bactériologique.
Avec cette méthode, la certification finale se fait par comparaison à l'oeil entre la zone à certifier et l'image restituée à partir du traitement du sceau.
Cette méthode peut paraître rudimentaire, mais l'expérience montre qu'elle est très pratique pour apprécier si les différences qui apparaissent entre la zone à certifier et l'image de certification peuvent être attribuées à des simples erreurs de transmission ou de traitement, qui apparaissent de manière tout à fait courante comme on peut le voir tous les jours dans les télécopies ordinaires, ou à des tentatives de falsification. En outre, ce système permettra dans une procédure contentieuse de fournir un document sur papier, plus probant aux yeux des parties et des juges que la simple indication d'une machine.
Il sera pourtant intéressant de procéder à un contrôle automatique lorsque les traitements décrits ci-dessus seront effectués directement sur le signal de réception du sceau. En effet, à ce moment là le CERTIFAX récepteur pourra renvoyer au CERTIFAX émetteur un accusé de réception comportant en outre des indications sur la validité du sceau ainsi que sur des différences éventuelles entre la zone à certifier et l'image de certification reconstituée à partir du sceau. Pour cela, on mémorisera tout d'abord la zone a certifier, qui sera repérée par son cadre, et on procédera à une comparaison avec l'image de certification, en formant par exemple un OU-exclusif.
Le masque étendu est découpé en éléments de base de n*n pixels (par exemple: 32*32). La zone certifiée est subdivisée en éléments de base dont les coordonnées sont calculées grâce aux repères constituants le cadre de la zone certifiée.
Une série d'opérations OU exclusif sont effectuées entre chaque élément du masque et plusieurs éléments de la zone certifiée dont les coordonnées évoluent autour des coordonnées idéales calculées. Cette évolution peut être assimilée à une spirale se développant autour de la position initiale et dont le rayon varie de 0 à 2 pixels. Le résultat de chaque opération est pesé selon une méthode dite de différenciation quadratique qui donne une valeur plus élevée aux pixels groupés qu'aux pixels isolés. Les coordonnées de l'élément ayant donné le résultat le plus faible sont stockées dans un tableau ainsi que le résultat associé.
Cette série d'opérations est répétée pour chaque élément de base du masque. A la fin de ce traitement on obtient un tableau de valeurs associées aux coordonnées idéales de chaque élément de base. Ce tableau sert de base à la détection et à la localisation des erreurs et des fraudes. Une erreur ou une fraude est détectée lorsque la valeur issue du traitement précédent dépasse le seuil d'erreur ou de fraude. Un marquage est alors appliqué sur la zone certifiée aux coordonnées associées à cette valeur. Le marquage consiste à apposer en surimpression une trame grise sur la zone certifiée. La densité de gris est fonction du type de détection: erreur = clair, fraude = foncé.
Cette comparaison pourra se faire entre la zone a certifier telle quelle et le masque étendu, ou de manière plus intéressante entre le masque restitué mais non étendu et l'image de la zone à certifier soumise à l'action du masque. Ceci permettra en effet d'éviter un traitement inverse sur le masque, qui est plus susceptible d'amener des erreurs que le traitement direct sur l'image de la zone à certifier.
Le résultat de cette comparaison déterminera des zones suspectes, dont le nombre et la localisation seront soumis à des critères d'identification automatique, dont il existe des nombreuses réalisations. Le plus simple consiste à déterminer des seuils en nombre et en étendue et à déclarer falsifiés les documents dont les erreurs dépassent ces seuils.
Les plus élaborés consistent à utiliser des algorithmes de reconnaissance de forme pour tenter de reconnaître des indices de falsification.
Le résultat de ces comparaisons sera retransmis à l'émetteur avec l'accusé de réception. Il est également possible, mais nettement plus long, de retransmettre à l'émetteur la carte des défauts détectés.
L'invention concerne une machine de fenaison comportant un châssis longitudinal, qui peut être attelé de manière à pouvoir pivoter, au moyen d'une pièce d'attelage, à un véhicule tracteur et porte deux râteaux rotatifs relevables, et qui est supporté au sol par l'intermédiaire de roues orientables pouvant pivoter autour d'un axe vertical, les bras d'orientation des roues étant reliés à un organe de réglage qui transmet la variation d'angle entre la pièce d'attelage et le châssis longitudinal lors d'un braquage du véhicule tracteur, de telle sorte que les roues subissent un pivotement dirigé en sens opposé, vu en plan, au sens de pivotement de la pièce d'attelage.
La machine de fenaison tirée par un véhicule tracteur est reliée à ce dernier de telle sorte qu'elle puisse se déplacer en oscillant autour d'un axe de pivotement vertical présent sur une pièce d'attelage du tracteur et se comporte, par conséquent, comme une remorque normale à un essieu. En raison de la distance importante, conditionnée par le type de montage, entre les roues et le point d'attelage, le cercle de braquage pour l'attelage constitué par le tracteur et la machine remorquée est très grand, de sorte qu'à l'extrémité du champ, un pré-braquage important est nécessaire. Pour éviter cet inconvénient, il est usuel de réaliser les roues orientables.
Pour exécuter le braquage des roues, on utilise la variation d'angle entre l'axe longitudinal du tracteur et l'axe longitudinal de la machine et, à cet effet, dans la machine de fenaison du type indiqué plus haut, décrite dans le brevet européen 0 316 896 B1, tout comme dans le cas du brevet français FR 2401597, il est prévu un guidage à tiges articulées qui s'étend vers l'arrière et sert à contourner les éléments fonctionnels, tels que les bras pivotants du système cinématique de soulèvement, les arbres d'articulation pour le système d'entraînement, etc. Mais ceci requiert la mise en oeuvre de dispositions complexes du point de vue technique, telles que des cardans, des leviers de renvoi ou analogues.C'est pourquoi, compte tenu de ces difficultés, il a également déjà été proposé, dans la demande de brevet allemand N02 364 416, de remplacer les tiges articulées par des câbles de traction flexibles.
Toutefois, cette réalisation n'est pas non plus sans poser des problèmes car elle rend nécessaire un entretien permanent des câbles de traction, qui en outre ont tendance à subir des allongements et, par conséquent, à voir leur fonction altérée.
C'est pourquoi l'invention s'est fixée pour but de concevoir une machine de fenaison du type spécifié en introduction de telle manière qu'elle puisse être fabriquée plus simplement et à meilleur marché, sans nécessiter une maintenance compliquée.
Ce but est atteint conformément à l'invention grâce au fait que l'organe de réglage comprend un arbre rotatif monté parallèle au châssis longitudinal et qui,à l'extrémité avant, est relié selon une liaison de transmission, de préférence par l'intermédiaire d'un premier bras pivotant coudé, à la pièce d'attelage et, à l'extrémité arrière, est relié selon une liaison de transmission, de préférence au moyen d'un second bras pivotant coudé, par l'intermédiaire de tiges d'accouplement, aux bras d'orientation des roues.