INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Cette approche vise à obtenir des séquences d'ADN rétrotranscrites à partir de l'ARN supposé rétroviral dans l'isolat, en utilisant l'activité transcriptase inverse présente dans ce même isolat. Cette activité transcriptase inverse ne peut théoriquement fonctionner qu'en présence d'un ARN rétroviral, lié à un ARNt amorce ou hybridé à des brins courts d'ADN déjà rétro-transcrits dans les particules rétrovirales (16). Ainsi l'obtention de séquences rétrovirales spécifiques dans un matériel contaminé par des acides nucléiques cellulaires, a été optimisée selon ces auteurs grâce à l'amplification enzymatique spécifique des portions d'ARN viraux par une activité transcriptase inverse virale. Les auteurs ont pour cela, déterminé les conditions physico-chimiques particulières dans lesquelles cette activité enzymatique de transcription inverse sur des ARN contenus dans des virions pouvait être effective in vitro. Ces conditions correspondent à la description technique des protocoles présentés ci-dessous (réaction de RT endogène, purification, clonage et séquençage).
L'approche moléculaire a consisté à utiliser une préparation de virion concentré, mais non purifié, obtenu à partir des surnageants de culture de la lignée PLI-2 préparés selon la méthode suivante : les surnageants de culture sont collectés deux fois par semaine, pré-centrifugés à 10 000 trs/min pendant 30 minutes pour éliminer les débris cellulaires, et ensuite, congelés à -800C ou utilisés tels quels pour les étapes suivantes.
Les surnageants frais ou décongelés sont centrifugés sur un coussin de PBS-glycérol 30% à 100 000g (ou 30 000 trs/min dans un rotor LKB-HITACHI de type 45 T) pendant 2h à 40C. Après élimination du surnageant, le culot sédimenté est repris dans un petit volume de PBS et constitue la fraction de virion concentré, mais non purifié. Cet échantillon viral concentré mais non purifié a été utilisé pour effectuer une réaction dite de transcription inverse endogène, telle que décrite ci-après.
L'analyse discriminante sur les banques de données informatiques des séquences clonées à partir des fragments d'ADN présents dans le mélange réactionnel a permis de mettre en évidence une séquence de type rétroviral. Le clone correspondant PSJ17 a été entièrement séquencé et la séquence obtenue, présentée dans la figure 6 et identifiée apr SEQ ID N"9, a été analysée à l'aide du logiciel "Geneworkss" sur les banques de données actualisées "Genebank". L'analyse des banques de données n'a pas permis de trouver de séquence identique déjà décrite. Seule une homologie partielle a pu être retrouvée avec certains éléments rétroviraux connus.L'homologie relative la plus intéressante concerne un rétrovirus endogène dénommé ERV-9, ou HSERV-9, selon les références (18).
EXEMPLE 4 : AMPLIFICATION PCR DE LA SEQUENCE NUCLEIQUE CONTENUE ENTRE LA REGION 5' DEFINIE PAR LE CLONE "POL MSRV-1B" ET LA REGION 3' DEFINIE PAR LE CLONE PSJ17.
Cinq oligonucléotides, M001, M002-A, M003-BCD, P004 et P005, ont été définis pour amplifier de l'ARN provenant de virions purifiés POL-2. Des réactions de contrôle ont été effectuées de manière à contrôler la présence de contaminants (réaction sur de l'eau).
L'amplification consiste en une étape de RT-PCR selon le protocole décrit dans l'Exemple 2, suivie d'une PCR "nichée" selon le protocole PCR décrit dans le document EP-A-0 569 272. Dans le premier cycle RT-PCR, les amorces M001 et P004 ou P005 sont utilisées. Dans le deuxième cycle PCR, les amorces M002-A ou M003-BCD, et l'amorce POO4 sont utilisées.Les amorces sont positionnées comme suit M002-A M003-BCD M001 ~~~ P004 P005 ARN POL-2 pol MSRV-1B PSJ17 Leur composition est amorce M001: GGTCITICCICAIGG (SEQ ID NO 20) amorce M002-A: TTAGGGATAGCCCTCATCTCT (SEQ ID NO 21) amorce M003-BCD: TCAGGGATAGCCCCCATCTAT(SEQ ID NO 22) amorce P004: AACCCTTTGCCACTACATCAATTT (SEQ ID NO 23) amorce P005: GCGTAAGGACTCCTAGAGCTATT (SEQ ID NO 24) Le produit d'amplification "nichée" obtenu et dénommé M003-P004 est présenté dans la figure 7, et correspond à la séquence SEQ ID NO 8.
EXEMPLE 5 : AMPLIFICATION ET CLONAGE D'UNE PORTION DU GENOME RETROVIRAL MSRV-1 A L'AIDE D'UNE SEQUENCE DEJA IDENTIFIEE, DANS UN ECHANTILLON DE VIRUS PURIFIE AU PIC D'ACTIVITE TRANSCRIPTASE INVERSE Une technique PCR dérivée de la technique publiée par Frohman (19) a été utilisée. La technique dérivée permet, à l'aide d'une amorce spécifique en 3' du génome à amplifier, d'élonguer la séquence vers la région 5' du génome à analyser. Cette variante technique est décrite dans la documentation de la firme "Clontech Laboratories Inc., (Palo-Alto California, USA) fournie avec son produit "5'-AmpliFINDERTM RACE Kit", qui a été utilisé sur une fraction de virion purifié comme décrit précédemment.
Les amorces 3' spécifiques utilisées dans le protocole du kit pour la synthèse du cDNA et l'amplification PCR sont respectivement complémentaires aux séquences MSRV-1 suivantes cDNA : TCATCCATGTACCGAAGG (SEQ ID N025) amplification : ATGGGGTTCCCAAGTTCCCT (SEQ ID N026) Les produits issus de la PCR ont été purifiés après purification sur gel d'agarose selon les méthodes conventionnelles (17), puis resuspendus dans 10 ml d'eau distillée. Une des propriétés de la polymérase Taq consistant à ajouter une adénine à l'extémité 3' de chacun des deux brins d'ADN, l'ADN obtenu a été directement inséré dans un plamide à l'aide du kit TA CloningTM (British Biotechnology).Les 2 41 de solution d'ADN ont été mélangés avec 5 41 d'eau distillée stérile, 1 41 d'un tampon de ligation 10 fois concentré "10X LIGATION BUFFER", 2 41 de "pCRTM VECTOR" (25 ng/ml) et 1 41 de "TA DNA LIGASE". Ce mélange a été incubé une nuit à 12"C.
Les étapes suivantes ont été réalisées conformément au instructions du kit TA Cloninge (British Biotechnology). A la fin de la procédure, les colonies blanches de bactéries recombinantes (white) ont été repiquées pour être cultivées et permettre l'extraction des plasmides incorporés selon la procédure dite de "miniprep" (17). La préparation de plasmide de chaque colonie recombinante a été coupée par une enzyme de restriction appropriée et analysée sur gel d'agarose. Les plasmides possédant un insert détecté sous lumière UV après marquage du gel au bromure d'éthidium, ont été sélectionnés pour le séquençage de l'insert, après hybridation avec une amorce complémentaire du promoteur Sp6 présent sur le plasmide de clonage du TA Cloning Kits.La réaction préalable au séquençage a ensuite été effectuée selon la méthode préconisée pour l'utilisation du kit de séquençage "Prism ready reaction kit dye deoxyterminator cycle sequencing kit" (Applied Biosystems, ref. 401384) et le séquençage automatique a été réalisé avec l'appareil "Automatic Sequencer, modèle 373 A" Applied Biosystems selon les instructions du fabricant.
Traditionnellement, les images photographiques, les dessins, les peintures, documents et analogues sont observés à l'intérieur ou dehors, avec un éclairage naturel ou éclairés par des spots. Ces éclairages produisent des brillances sur les images, ce qui altère notablement les conditions d'observation. Ces images n'étant pas protégées, elles sont soumises aux possibilités de détérioration ou vol lorsqu'il s'agit d'exposition en public, ainsi qu'aux détériorations dues au rayonnement ultra-violet et aux intempéries.
I1 comporte en effet, selon une première caractéristique, un tube de visée présentant un orifice à partir duquel on observe le document placé à l'intérieur de ce bottier, à l'opposé de cet orifice, sur une plaque support. Ce tube, de forme pyramidale tronquée, est peint en noir mat à l'intérieur.
I1 comporte, selon une seconde caractéristique, une partie servant à l'éclairage uniformément réparti sur le document, constituée de plaques diffusantes neutres, du genre "Altuglass" orientées d'une façon partir lière. En effet, elles constituent une autre pyramide tronquée dont la base est dans le plan de la base du tube de visée et dont les angles au soset sont supérieurs aux angles au sommet respectif du tube de visée.
I1 comporte, selon une troisième caractéristique, une plaque située entre les deux parties décrites précédemment, dont le rôle est d'éliminer les reflets, et qui est peinte en noir mat sur sa face tournée vers le document.
Selon les modes particuliers de réalisation - La longueur du bottier d'éclairage (hauteur de la pyramide tronquée) peut varier par rapport à la longueur du tube de visée.
- La surface anti-reflet de la plaque située entre les deux pyramides, ainsi que la surface intérieure du tube de visée, qui dans le mode le plus simple de réalisation peuvent être peintes en noir mat, pourront être revêtues d'un support dentelé éliminant mieux les reflets.
- On pourra adjoindre des lampes d'éclairage du genre tube luminescent ou analogue afin d'obtenir un éclairement constant des documents, en intensité lumineuse, ainsi qu'en nature de lumière.
- On pourra également adjoindre sur la plaque anti-reflet, près du tube de visée, dans un évidement prévu à cet effet, une plaque diffusante, ainsi qu'un compte-fils articulé sur cette plaque Après disposition d'une diapositive entre le compte-fils et la plaque diffusante et d'un tirage ou d'un essai de tirage photographique dans l'appareil, on pourra facilement, par un déplacement de l'oeil du compte-fils au tube de visée, contrôler le tirage ou déterminer les corrections à apporter au prochain tirage photographique. Cette version est plus particulièrement destinée aux laboratoires photographiques.
- On pourra adjoindre, sur le côté, une autre pyramide tronquée de m & e angle au sommet et égal à l'angle de champ de l'objectif photographique utilisé. Ce système placé sur un support permettant de pointer précisément sur le sujet photographié permettra, par un léger déplacement de l'oeil, de comparer le champ photographié à la photographie réalisée.
Inversement, on pourra, par ce moyen, présenter au public l'impact visuel d'un futur aménagement architectural ou autre.
Les dessins annexés illustrent l'invention : La figure 1 représente une vue en perspective du dispositif selon l'in vention.
La figure 2 représente une coupe de ce dispositif.
La figure 3 représente en coupe une variante, avec éclairage incorporé.
La figure 4 représente en coupe, la variante particulièrement destinée à contrôler les tirages photographiques d'après diapositives.
La figure 5 représente en perspective la lunette "équi-photographique" permettant de comparer une image vue du lieu où elle est installée à la réalité présente.
Ces moyens d'examen 24 sont montés sur le support tournant 8 et comprennent une autre source 26 de rayons X et, à l'opposé de cette source 26 par rapport à l'axe X de rotation du support, des moyens 28 de détection des rayons X émis par cette source 26.
Dans le cas de la tomographie (imagerie bidimensionnelle), les moyens de détection 28 comprennent un détecteur unidimensionnel.
Dans le cas de l'imagerie tridimensionnelle de type morphomètre ou de type RMN, ces moyens 28 comprennent un détecteur bidimensionnel.
L'axe des moyens d'examen 24 (axe du faisceau de rayons X émis par la source 26) porte la référence Z sur la figure 1.
Dans l'exemple représenté sur la figure 1, cet axe Z est perpendiculaire aux axes X et Y et rencontre l'axe X au même point que l'axe Y.
On peut aussi adopter un angle quelconque entre l'axe Z et l'axe Y.
Dans le cas de l'imagerie tridimensionnelle de type morphomètre, cet angle peut même être nul en "superposant" la source 26 et la source constituée par l'accélérateur 2 et la cible associée 3.
Ceci sera expliqué de façon plus détaillée dans la description de la figure 6.
Mais on indique dès maintenant que, dans ce cas, on n'utilise que les moyens 12 pour détecter l'un et l'autre faisceaux et que les moyens de détection 28 sont supprimés.
En revenant au cas représenté sur la figure 1, les moyens de détection 12 permettent de contrôler le faisceau de rayons X qui est engendré par la cible 3 pour voir si ce faisceau (faisceau de thérapie) atteint le patient 10 au bon endroit et avec la bonne dose.
Les moyens de détection 28 sont destinés à observer soigneusement la zone du patient que l'on traite, en fournissant une image de haute définition et de haut contraste de cette zone.
On voit également sur la figure 1 des moyens 30 de commande de l'appareil et de traitement des signaux fournis par les moyens de détection 12 et 28.
Ces moyens de traitement 30 comprennent - des moyens 32 de commande de l'accélérateur 2, - des moyens 34 de commande de la rotation du support tournant 8, - des moyens 36 de commande de la source 26 de rayons X, - des moyens 38 de commande du collimateur 6, destinés à faire varier l'ouverture de ce collimateur, - des moyens 40 de reconstruction d'images qui reçoivent les signaux fournis par les moyens de détection 12 et 28, par l'intermédiaire d'un système d'acquisition de signaux 42, et - des moyens de traitement de données 44 qui sont reliés aux moyens 32, 34, 36, 38 et 40 et qui sont munis d'un système à mémoire de masse 46 ainsi que de moyens de visualisation 48 permettant d'observer les images reconstruites.
On précise que les moyens de détection 12 et 28 peuvent être des détecteurs courbes ou des détecteurs plans (au prix de corrections aisées de calcul dans ce dernier cas).
On voit de façon plus détaillée sur la figure 2 la source de rayons X que comprend l'appareil de la figure 1.
Cette source de rayons X, de grande énergie, comprend l'accélérateur d'électrons 2 et la cible 3 qui produit les rayons X lorsqu'elle est frappée par les électrons émis par l'accélérateur 2.
Dans la mesure où la voie de transmission optique est caractéristique de la dépendance de la longueur d'onde, les sources lumineuses de la première à la mième sont commandées par l'unité de commande de la puissance. Plus précisément, la voie de transmission optique comprend en général une fibre optique, une pluralité d'amplificateurs optiques, ou similaire. En conséquence, la voie de transmission optique a une caractéristique de gain / de perte qui est différente pour chaque longueur d'onde. L'unité de commande de la puissance comprend des photodétecteurs du premier au mième et des circuits de commande de sortie du premier au m-ième. Chacun des photodétecteurs du premier au mième peut être une photodiode.
Connectés aux sources lumineuses de la première à la m-ième, les photodétecteurs du premier au m-ième détectent les niveaux de puissance contrôlables de la lumière originale dans les signaux lumineux vers l'arrière du premier au m-ième afin de produire des signaux ayant le niveau de puissance de la lumière détectée du premier au m-iême, indicatifs des niveaux de puissance contrôlables de la lumière originale du premier au m-ième, respectivement. Connectés aux photodétecteurs du premier au m-ième et aux sources lumineuses de la première à la m-ième, les circuits de commande de sortie du premier au m-ième ont des niveaux de sortie ascendants préalablement prédéterminés du premier au m-ième pour les sources lumineuses de la première à la m-ième, la caractéristique de la dépendance de la longueur d'onde étant prise en compte dans la voie de transmission optique.En réponse aux signaux ayant le niveau de puissance de la lumière détectée du premier au m-ième, les circuits de commande de sortie du premier au m-ième contrôlent les sources lumineuses de la première à la m-ième afin de maintenir les niveaux de sortie du premier au m-ième.
Le récepteur de lumière comprend un démultiplexeur optique et des unités de réception de la lumière de la première à la m-ième. Connecté à l'autre extrémité de la voie de transmission optique, le démultiplexeur démultiplexe le signal lumineux reçu en des signaux lumineux démultiplexés du premier au m-ième, respectivement. Les signaux lumineux démultiplexés du premier au m-ième ont les niveaux de puissance de la lumière reçue du premier au m-ième, respectivement.
Connectées au démultiplexeur optique en commun et aux bornes de sortie de la première à la m-ième, les unités de réception de la lumière de la première à la m-ième reçoivent les signaux lumineux démultiplexés ascendants du premier au m-ième pour convertir les signaux lumineux démultiplexés du premier au m-ième en des signaux de données de sortie du premier au m-ième qui sont émis par les bornes de sortie de la première à la m-ième, respectivement.
Dans le système de transmission à multiplexage par répartition en longueur d'onde classique susmentionné, on suppose qu'une longueur d'onde caractéristique de la voie de transmission optique est déterminée. Cependant, la longueur d'onde caractéristique de la voie de transmission optique change en fait avec le temps. En conséquence, une dégradation du rapport signal/bruit se produit dans le signal lumineux reçu.
Un objet de la présente invention est en conséquence de fournir un système de transmission à multiplexage par répartition en longueur d'onde qui est capable de maintenir une pluralité de niveaux de puissance de la lumière reçue de signaux lumineux démultiplexés à un niveau de puissance prédéterminé bien qu'une longueur d'onde caractéristique d'une voie de transmission optique change.
Un autre objet de la présente invention est de fournir une récepteur de lumière destiné à être utilisé dans le système de transmission à multiplexage par répartition en longueur d'onde du type décrit.
Les autres objets de la présente invention deviendront évidents au fur et à mesure de la description.
En décrivant le fond d'un aspect de la présente invention, il est possible de comprendre qu'un système de transmission à multiplexage par répartition en longueur d'onde comprend un émetteur de lumière, un récepteur de lumière, et une voie de transmission optique pour connecter l'émetteur de lumière et le récepteur de lumière. La voie de transmission optique est caractéristique de la dépendance de la longueur d'onde. L'émetteur de lumière comprend des sources lumineuses de la première à la m-ième pour émettre des signaux lumineux du premier au m-ième ayant les niveaux de puissance contrôlables de la lumière originale du premier au m-ième, respectivement, où m représente un nombre entier positif qui n'est pas inférieur à deux.
Les signaux lumineux du premier au m-ième ont des longueurs d'onde de la première à la m-ième qui sont différentes les unes des autres.
Connecté aux sources lumineuses de l'émetteur de la première à la m-ième et à une extrémité de la voie de transmission optique, un multiplexeur optique multiplexe les signaux lumineux originaux du premier au m-ième en un signal lumineux multiplexé. La voie de transmission optique transmet le signal lumineux multiplexé en tant que signal de transmission lumineux à partir de l'émetteur de lumière jusqu'au récepteur de lumière. Le récepteur de lumière reçoit le signal de transmission lumineux en tant que signal lumineux reçu.
Le récepteur de lumière comprend un démultiplexeur optique connecté à l'autre extrémité de la voie de transmission optique. Le démultiplexeur optique démultiplexe le signal lumineux reçu en signaux lumineux démultiplexés du premier au m-ième, comme répliques des signaux lumineux originaux du premier au m-ième, respectivement. Les signaux lumineux démultiplexés du premier au m-ième ont les niveau de puissance de la lumière reçue du premier au m-ième, respectivement. Connectées au démultiplexeur optique, les unités de réception de la lumière de la première à la m-ième reçoivent les signaux lumineux démultiplexés du premier au m-ième, respectivement.
Selon l'aspect susmentionné de la présente invention, le système de transmission à multiplexage par répartition en longueur d'onde expliqué ci-dessus comprend des moyens de réaction pour le connecter au récepteur de lumière et à l'émetteur de lumière. Le récepteur de lumière comprend en outre des moyens de détection du niveau de puissance connectés au démultiplexeur optique.Les moyens de détection du niveau de puissance détectent les niveaux de puissance de la lumière reçue du premier au m-ième des signaux lumineux démultiplexés du premier au m-ième afin de produire des signaux ayant le niveau de puissance de la lumière détectée du premier au m-ième indicatifs des niveaux de puissance de la lumière reçue du premier au m-ieme. Connectés aux moyens de détection du niveau de puissance et à une extrémité des moyens de réaction, les moyens de sortie des niveaux de puissance émettent, en réponse aux signaux ayant le niveau de puissance de la lumière détectée du premier au m-ième, des signaux ayant le niveau de la puissance de sortie de la lumière correspondant aux signaux ayant le niveau de puissance de la lumière détectée du premier au m-ième à l'extrémité des moyens de réaction.Les moyens de réaction transmettent en conséquence le signal ayant le niveau de la puissance de sortie de la lumière en tant que signal ayant le niveau de puissance de la lumière de transmission à partir du récepteur de lumière depuis l'émetteur de lumière. L'émetteur de lumière comprend en outre des moyens d'entrée du niveau de puissance connectés à l'autre extrémité des moyens de réaction.
Les moyens d'entrée du niveau de réaction entrent le signal ayant le niveau de puissance de la lumière de transmission depuis les moyens de réaction afin de produire des signaux ayant le niveau de puissance de la lumière d'entrée du premier au m-ième comme répliques des signaux ayant le niveau de puissance de la lumière détectée du premier au m-ième, respectivement.
Connectés aux moyens d'entrée du niveau de puissance et aux sources lumineuses de l'émetteur de la première à la m-ième, les moyens de commande de la puissance contrôlent, en réponse aux signaux ayant le niveau de puissance de la lumière d'entrée du premier au m-ième, les sources lumineuses de la première à la m-ième pour changer les niveaux de puissance contrôlables de la lumière originale des signaux lumineux originaux du premier au m-ième de telle sorte que les signaux lumineux démultiplexés du premier au m-ième aient les niveaux de puissance de la lumière reçue du premier au m-ième, chacun d'eux devenant un niveau de puissance de la lumière prédéterminé.