INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La surface supérieure de l'organe 4 comporte des moyens 14 de guidage en translation de cette sonde 6.
La direction F2 est perpendiculaire à la direction F1.
On voit également sur la figure 1 un moteur 15 permettant la translation de la sonde 6 sur l'organe de compression 4.
Ce moteur 15 est un moteur pas à pas permettant à la sonde 6 d'occuper des positions régulièrement espacées les unes des autres suivant la direction F2.
Le dispositif de la figure 1 comprend aussi des moyens 16 de commande du moteur 15.
Le dispositif de la figure 1 comprend en outre des moyens 18 de commande et d'imagerie qui sont destinés à exciter la sonde ultrasonore 6 par des signaux électriques pour que cette sonde émette des ultrasons et à former des images ultrasonores à partir des signaux électriques fournis par cette sonde lorsqu'elle détecte des ultrasons.
Le dispositif de la figure 1 comprend aussi des moyens 20 de traitement des images formées par les moyens 18 ainsi que des moyens 22 d'affichage des informations fournies par les moyens de traitement 20.
Toutefois, l'encollage des fils peut également être utilisé avec des fils formés par une ou plusieurs fibres synthétiques continues, notamment dans le but d'augmenter leur résistance.
L'encollage est réalisé en imprégnant les fils de chaîne avec un produit d'encollage dont la composition doit être soigneusement déterminée pour à la fois obtenir un effet de "gainage" suffisant des fils de chaîne sans pour autant trop les rigidifier, et également pour permettre une élimination complète du produit d'encollage après le tissage, par dissolution dans un produit de désencollage.
Afin de vérifier si la composition du produit d'encollage est optimale ou non pour les fils de chaîne considérés, et éventuellement afin de corriger cette composition, il est donc indispensable de contrôler la qualité de l'encollage réalisé sur les fils de chaîne.
Ce contrôle est généralement réalisé en découpant une frange de la nappe de fils de chaîne correspondant à l'extrémité finale de cette nappe. Cette frange est généralement découpée sur ses deux bords, éventuellement en son centre, et sur une longueur de fil de 1 mètre à 1,50 mètre.
Une partie des fils ainsi prélevée est alors soumise à divers tests, tels que - mesure de pilosité, c'est-à-dire mesure de la longueur des fibres dépassant du fil, - mesure de la résistance en traction, - et mesure de la résistance à l'abrasion.
Mais les tests ainsi réalisés ne sont que faiblement représentatifs de l'efficacité de l'encollage.
En effet - ces tests concernent une petite longueur de fil, de sorte qu'ils ne permettent pas d'avoir une idée globale de la qualité du fil encollé sur la longueur de l'ensouple finale, - et ces tests sont réalisés sur la partie finale de la nappe de fils de chaîne, qui est passée dans l'encolleuse tout à fait à la fin de son fonctionnement, de sorte que cette partie de la nappe de fils n'a pas été encollée dans des conditions de régime permanent de l'encolleuse.
La présente invention a notamment pour but de pallier ces inconvénients.
A cet effet, selon l'invention, un procédé du genre en question est essentiellement caractérisé en ce qu'on prélève le fil à renvider parmi les fils de la nappe au voisinage de la sortie du séchoir de l'encolleuse, en ce qu'on enroule ce fil au voisinage de l'ensouple finale, sur une périphérie d'une bobine cylindrique selon un bobinage croisé en faisant tourner la bobine pour que sa périphérie qui reçoit ledit fil présente une vitesse circonférentielle instantanée V1 comprise entre 0,99O.VO et O,999.VO, de préférence entre 0,991.VO et 0,998.VO.
Grâce à ces dispositions, on peut prélever un fil encollé au sein de la nappe de fils de chaîne, sur toute la longueur de cette nappe de fils.
De cette façon, on dispose d'un fil encollé de grande longueur, identique au fil enroulé sur l'ensouple finale, et permettant de réaliser un contrôle de la qualité de l'encollage sur de grandes longueurs, et en des portions du fil qui ont été encollées alors que l'encolleuse fonctionnait en régime permanent.
Grâce au fait que le fil encolle est enroulé sur une bobine cylindrique dont la vitesse circonférentielle est légèrement inférieure à la vitesse linéaire de la nappe de fils, la tension du fil encollé est relâchée par rapport à la tension des fils enroulés sur l'ensouple finale.
Ainsi, malgré les variations brusques de la vitesse instantanée de la nappe de fils de chaîne, dues au fonctionnement automatique de l'encolleuse, le fil encollé qui est renvidé sur la bobine ne subit aucune détérioration, et surtout aucune casse pendant le renvidage, même s'il s'agit d'un fil très fin, et ce sur toute la longueur de la nappe de fils de chaîne.
De cette façon, les caractéristiques du fil encollé renvidé sur la bobine ne sont pas modifiées du fait du renvidage, de sorte que, d'une part, les contrôles de qualité ultérieurs auxquels pourra être soumis ce fil seront fiables, et d'autre part, le fonctionnement de l'encolleuse n'est pas perturbé par le renvidage, du fait de l'absence de casse du fil renvidé.
La présente invention a également pour objet un dispositif pour renvider un fil textile encollé de grande longueur en sortie d'une encolleuse industrielle qui est conçue pour encoller une nappe de fils de chaîne provenant d'au moins une ensouple primaire, pour sécher cette nappe de fils puis l'enrouler sur une ensouple finale avec une vitesse linéaire instantanée VO, ce dispositif étant caractérisé en ce qu'il comporte une bobine cylindrique de révolution qui présente une périphérie sur laquelle s'en- roule le fil encollé, des moyens d'entraînement de la bobine pour faire tourner ladite périphérie de cette bobine avec une vitesse circonférentielle instantanée V1 comprise entre 0,990.VO et 0,999.VO, notamment entre 0,991.VO et 0,998.VO, et des moyens de guidage du fil pour réaliser un bobinage croisé du fil lors de la rotation de la bobine.
Dans des modes de réalisation préférés de ce dispositif, on a recours en outre à l'une et/ou à l'autre des dispositions suivantes - le dispositif est destiné à être utilisé dans une encolleuse comportant au moins un cylindre de détour sur lequel passe la nappe de fils juste en amont de l'ensouple finale, ce cylindre de détour étant entraîné en rotation avec une vitesse circonférentielle égale à la vitesse linéaire instantanée VO d'enroulement de la nappe de fils sur l'ensouple finale, et les moyens d'entraînement de la bobine comportent un galet rotatif qui est mobile autour d'un axe destiné à être disposé parallèlement au cylindre de détour, ce galet rotatif étant destiné à être entraîné en rotation par friction par le cylindre de détour, le galet présentant un diamètre DO et étant solidaire d'un tambour d'entraînement coaxial qui présente un diamètre D1 compris entre 0,990.VO et 0,999.VO, notamment entre 0,991.VO et 0,998.vu, la bobine étant rotative autour d'un axe parallèle à l'axe de rotation du galet, et la périphérie de cette bobine qui reçoit le fil encollé étant entraînée par friction par le tambour d'entraînement : cette disposition permet une réalisation simple et fiable des moyens d'entraîné nement de la bobine - le tambour présente au moins une rainure périphérique qui est destinée à recevoir le fil encollé et qui constitue lesdits moyens de guidage de ce fil pour réaliser un bobinage croisé - la bobine est mobile verticalement et est disposée au-dessus du tambour d'entraînement, cette bobine s'appuyant sur le tambour d'entraînement sous l'effet de son propre poids et étant en outre sollicitée vers le haut par des moyens élastiques qui diminuent l'appui de la bobine sur le tambour d'entraînement.
Selon une variante d'exécution, la paroi d'étanchéité est constituée par une paroi en matériau souple dont la bordure inférieure comprend des moyens élastiques, tandis que dans une autre variante préférée elle est en matériau biextensible tel que du Néoprène.
Selon l'une des application de l'invention le vêtement est un pantalon dont chacune des jambes comprend à son extrémité inférieure la partie d'étanchéité.
Selon une disposition particulière, la paroi d'étanchéité comprend une saillie centrale avant qui s'étend jusqu'au niveau du genou.
Ainsi, ladite paroi d'étanchéité s'étend latéralement depuis la saillie centrale vers l'arrière et vers le bas pour rejoindre la fente longitudinale de l'enveloppe extérieure à laquelle ladite paroi est fixée par ses bordures latérales.
Selon une disposition avantageuse, la bordure supérieure de la paroi d'étanchéité est reliée à une doublure interne par l'intermédiaire d'une bande intermédiaire en matériau extensible.
Ajoutons aussi que la largeur déployée de la paroi d'étanchéité est inférieure à la largeur déployée de l'enveloppe extérieure, et que les moyens de fermeture de la fente peuvent être constitués par une fermeture du type à glissière.
Bien entendu, l'invention peut trouver application dans d'autres types de vêtements comme, par exemple, un anorak.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention se dégageront de la description qui va suivre en regard des dessins annexés qui ne sont donnés qutà titre d'exemples non limitatifs.
Les figures 1 à 12 illustrent une première application de l'invention qui est un pantalon.
Les figures 1 à 9 représentent un premier mode de réalisation La figure 1 est une vue de face.
La figure 3 est une vue latérale.
Les figures 4 et 5 sont des vues arrières de la partie inférieure d'une jambe du pantalon, dans sa position ouverte, figure 4, et dans sa position fermée, figure 5.
Les figures 6 et 7 sont des vues en coupe à plus grande échelle selon (AA) des figures 2 et 3, la figure 6 montrant le pantalon avec la fente longitudinale fermée par la fermeture à glissière, tandis que la figure 7 le représente en position ouverte, le curseur de la fermeture à glissière ayant été remonté.
La figure 8 est une vue en coupe selon (BB).
La figure 9 représente la partie d'étanchéité dans une vue en perspective.
119 128 0
Contre-exemple 2 214 0,5%
235 144 202
Exemple 152 0,1 %
157 121 195
Tableau 3: Test des substances au MTT Produit P P [L] [L-P] Contre-exemple 1 94 0,5 %
83 123 4
Contre-exemple 2 239 0,5 %
274 168 202
Exemple 157 0,1 %
158 118 194
8 2723848
Le fait que les fibroblastes se multiplient, in vitro, dans des quantités raisonnables en présence d'extrait de farine de maïs notamment aqueux encapsulé permet de dire que cet extrait sera bien supporté par les cellules et/ou tissus de la peau et qu'il aura une activité de régénération des cellules et/ou des tissus de la peau Ainsi, I'extrait de farine de maïs, encapsulé va pouvoir avantageusement remplacer les extraits d'animaux (extraits placentaires notamment) jusqu'à ce jour
utilisés dans les compositions destinées à lutter et/ou prévenir le vieillissement.
0o On donne ci-après des exemples de formulation conformes à l'invention destinés à la régénération des tissus et/ des cellules cutanés. Dans ces exemples les vésicules sont obtenues comme décrites précédemment et introduites dans
l'émulsion et/ou le gel à la fin de la fabrication, sous homogénéisation.
distance interréticulaire (A) 15,5 52 10,5 62 9,7 100 5,2 42 4,7 52
Exemple 14 En opérant comme à l'exemple 10 mais à partir de 70 mg de pristinamycine IIB et de 75 mg de dés(44-diméthylamino) 4s-fluoro 4-éthyl pristinamycine IA (titrant 75%) et après 3 heures 45 minutes d'agitation, on obtient 57 mg de l'association cocristallisée de 2 molécules de pristinamycine IIB et de une molécule de dés(4#- diméthylamino) 4-fluoro 4méthyl pristinamycine IA sous forme de cristaux blancs fondant à 184 C, titrant environ 53% en pristinamycine IIB et 47% en dés(44-diméthylamino) 4E-fluoro 4#-mé- thyl pristinamycine IA.
distance interréticulaire (A) 15,8 100 10,3 71 5,9 54 5,2 88 5,0 50
PREPARATION DES COMPOSANTFS fln cRotlPv B : Exemple A 45-chloro pristinamycine 1A On place dans un ballon 8 g de pristinamycine IA dans 80 cm3 d'acétonitrile puis on ajoute 1,39 g de N-chlorosuccinimide. Le mélange est chauffé au reflux pendant 16 heures 30 minutes puis on ajoute 0,12 g de N-chlorosuccinimide et on poursuit le reflux 3 heures. Le mélange réactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 300C. Le solide obtenu est repris par 50 cm3 de dichlorométhane et 60 cm3 d'eau distillée additionnée de chlorure de sodium, la phase aqueuse est décantée puis la phase organique lavée par 50 cm3 d'eau distillée saturée en chlorure de sodium. La phase organique est décantée, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à 300C pour donner un solide jaune qui est recristallisé dans 100 cm3 de propanol-1 au reflux puis une deuxième fois dans 50 cm3 de propanol-1 au reflux.
Après refroidissement, filtration des cristaux et séchage sous pression réduite (135 Pa) à 500C on obtient 3g de 4-chloro pristinamycine IA sous forme de cristaux beige clair fondant à 2200C.
Spectre de R.M.N. du proton (300 MHz, CDCl3, 6 en ppm): 0,58 (dd, J=16 et 6 Hz, 1H, 5 2) 0,91 (t, J=7,5 Hz, 3H: CH3 2 y), de 1,05 à 1,35 (mt, 2H: 3 ss2 et 3 Y2), 1,32 (d, J=7,5 Hz, 3H: CH3 1 y), de 1,50 à 1,85 (mt, 3H: 3 y1 et CH2 2 ss), 2,03 (mt, 1H, 3 ss1), 2,17 (mt, 1H, 5 #), 2,39 (d large, J=16 Hz, 1H: 5 61), 2,44 (d, J=16 Hz, 1H: 5 1), 2,77 (s, 6H: N(CH3 )2 4), 2,85 (dt, J=13,5 et 4,5 Hz, 1H: 5 e2), 2,97 (dd, J=12 et 5 Hz, 1H: 4 ss2), 3,23 (s, 3H: NCH3 4), 3,35 (t, J=12 Hz, 1H: 4 ss1), 3,30 et 3,58 (2 mts, 1H chacun= CH2 3 b), 4,57 (dd, J=8 et 7,5 Hz, 1H, 3 a), 4,76 (dd large, J=13,5 et 8 Hz, 1H: 5 1), 4,85 (mt, 1H: 2a), 4,90 (dd, J=10 et 1,5 Hz, 1H: la), 5,25 (dd, J=12 et 5 Hz, 1H: 4 a), 5,31 (d large, 5=6 Hz, 1H: 5 a), 5,86 (d, J=9,5 Hz, 1H: 6 a), 5,90 (mt, 1H: 1ss), 6,50 (d, J=10 Hz, 1H: NH 2), 6,97 (d, J=8 Hz, 1H: H 5 de 1' aromatique en 4), 7,08 (dd, J=8 et2 Hz, 1H: H 6 de 1' aromatique en 4), de 7,15 à 7,40 (mt, 6H: H Aromatiques 6 et H 2 de 1' aromatique en 4), 7,43 (dd, 5=8,5 et 2 Hz, 1H: 1' H4), 7,52 (dd, J=8,5 et 4,5 Hz, 1H: 1' H5), 7,83 (dd, J =4,5 et 2 Hz, 1H: 1' H6), 8,38 (d, J=10 Hz, 1H: NH 1), 8,73 (d, J=9,5 Hz, 1H: NH 6), 11,65 (s, 1H: OH).
Exemple B 4#-bromo pristinamycine IA On place dans un ballon 30 g de pristinamycine IA dans 300 cm3 de dichlorométhane puis on ajoute 6,85 g de N-bromosuccinimide. Le mélange est agité à température ambiante pendant 29 heures puis concentré à sec sous pression réduite. Le solide obtenu est agité dans 400 cm3 d'éther diéthylique, filtré puis lavé par 2 fois 100 cm3 d'éther diéthylique. Après filtration le solide est trituré pendant 45 minutes dans 400 cm3 d'eau distillée, filtré puis lavé par 2 fois 150 cm3 d'eau. Le solide obtenu est séché puis recristallisé dans 1600 cm3 d'éthanol au reflux. Après refroidissement, filtration des cristaux et séchage sous pression réduite (135 Pa) à 500C on obtient 23,2 g de 4#-bromo pristinamycine IA sous forme de cristaux blancs fondant à 2200C.
Spectre de R.M.N. du proton (300 MHz, CDCl3, ô en ppm): 0,58 (dd, J=16 et 6 Hz, 1H, 5 ss2), 0,91 (t, J=7,5 Hz, 3F1: CH3 2 y), de 1,10 à 1,40 (mt, 2H: 3 ss2 et 3 γ2), 1,32 (d, J=7,5 Hz, 3H: CH3 1 y), de 1,50 à 1,85 (mt, 3H: 3 γ1 et CH2 2 ss), 2,03 (mt, 111, 3 ss1), 2,19 (mt, 1H, 5 #2), 2,39 (d large, J=16 Hz, 1H: 5 61), 2,44 (d, J=16 Hz, 1H: 5 ss1), 2,76 (s, 6H: N(CH3 )2 4), 2,83 (dt, J=13,5 et 4 Hz, 1H: 5 #2), 2,97 (dd, J=12,5 et 4,5 Hz, 1H: 4 ss2), 3,23 (s, 3H: NCH3 4), 3,30 et 3,57 (2 mts, 1H chacun: CH2 3 b), 3,33 (t, J=12,5 Hz, 1H: 4 ss1), 4,55 (dd, J=8 et 7,5 Hz, 1H, 3 a), 4,74 (dd large, J=13,5 et 8 Hz, 1H: 5 #1), 4,84 (mt, 1H: 2a), 4,92 (dd, J=10 et 2 Hz, 1H: la), 5,27 (dd, J=12,5 et 4,5 Hz, 1H: 4 a), 5,33 (d large, J=6 Hz, 1H: 5 a), 5,88( d, J=9,5 Hz, 1H: 6 a), 5,90 (mt, 1H: 1(3), 6,53 (d, J=10 Hz, 1H: NH 2), 7,00 (d, J=8 Hz, 1H: H 5 de l'aromatique en 4), 7,12 (dd, J=8 et 2 Hz, 1H: H 6 de 1' aromatique en 4), de 7,15 à 7,40 (mt, 5H: H Aromatiques 6), 7,43 (dd, J=8,5 et 2 Hz, 1H: 1' H4), 7,46 (d, J=2 Hz, 1H: H 2 de 1' aromatique en 4), 7,52 (dd, J=8,5 et 4,5 Hz, 1H: 1' H5), 7,87 (dd, J =4,5 et 2 Hz, 1H: 1' H6), 8,41 (d, J=10 Hz, 1H: NH 1), 8,74 (d, J=9,5 Hz, 1H: NH 6), 11,65 (s, 1H: OH).
Exemple C 4#-chloro pristinamycine 1B En opérant comme à l'exemple A mais à partir de 1,7 g de pristinamycine IB, de 320 mg de N-chlorosuccinimide dans 17 cm3 d'acétonitrile, on obtient après 1 heure 30 minutes de reflux puis concentration à sec du mélange réactionnel, 1,8 g d'un solide beige qui est purifié par chromatographie flash (éluant dichlorométhaneméthanol, 98/2) pour donner 1,2 g de 4#-chloro pristinamycine 1B sous forme d'un solide jaune pâle fondant à 1980C.
Spectre de R.M.N. du proton (400 MHz, CDCl3, 6 en ppm): 0,79 (dd, J=16 et 5,5 Hz, 1H, 5 ss2), 0,91 (t, J=7,5 Hz, 3H: CH3 2 y), 1,15 (mt, 1H: 3 ss2), de 1,25 à 1,40 (mt, 1H: 3 γ2), 1,34 (d, J=7,5 Hz, 3H: CH3 1 y), de 1,50 à 1,85 (mt, 3H: 3 γ1 et CH2 2 5), 2,03 (mt, 1H, 3 ss1), 2,23 (mt, 1H, 5 62), 2,40 (d large, J=16 Hz, 1H: 5 61), 2,47(d, J=16 Hz, 1H: 5 ss1), 2,85 (dt, J=13 et 4 Hz, 1H: 5 e2), de 2,85 à 2,90 (mt, 1H: 4 ss2) 2,88 (s, 3H: ArNCH3 4), 3,25 (s, 3H: NCH3 4), 3,28 et 3,58 (2 mts, 1H chacun: CH2 3 b), 3,31 (t, J=12 Hz, 1H: 4 ss1), 4,40 (mf, 1H: ArNH) , 4,57 (t, J=7,5 Hz, 1H, 3 a), 4,78 (dd large, J=13 et 8 Hz, 1H: 5 E1), 4,84 (mt, 1H: 2a) , 4,91 (d large, J=10 Hz, 1H: la), 5,23 (dd, J=12 et 5 Hz, 1H: 4 a), 5,36 (d large, J=5,5 Hz, 1H: 5 a), 5,89 (d, J=9,5 Hz, 1H: 6 a), 5,90 (mt, 1H: 1(3), 6,51 (d, J=10 Hz, 1H: NH 2), 6,55 (d, J=8 Hz, 1H: H 5 de 1' aromatique en 4), 7,0,2 (dd, J=8 et 2 Hz, 1H: H 6 de 1' aromatique en 4), 7,13 (d, J=2 Hz, 1H: H 2 de 1' aromatique en 4), de 7,15 à 7,40 (mt, 5H: H Aromatiques 6), 7,43 (d large, J=8,5 Hz, 1H: 1' H4), 7,52 (dd, J=8,5 et 4,5 Hz, 1H: 1' H5), 7,79 (d large, J =4,5 Hz, 1H: 1' H6), 8,40 (d, J=10 Hz, 1H: NH 1), 8,75 (d, J=9,5 Hz, 1H: NH 6), 11,63 (s, 1H: OH).
Exemple D 4e-bromo pristinamycine 1B En opérant comme à l'exemple B mais à partir de 2 g de pristinamycine IB, de 420 mg de N-bromosuccinimide dans 30 cm3 de dichlorométhane, on obtient après 1 heure 30 minutes d'agitation à température ambiante, puis concentration à sec du mélange réactionnel, 2,1 g d'un solide beige qui est purifié par chromatographie flash (éluant dichlorométhane-méthanol, 98/2) pour donner 1,7 g de 4E-bromo pristinamycine 1B sous forme d'un solide blanc fondant à 2200C.
Spectre de R.M.N. du proton (400 MHz, CDCl3, 6 en ppm): 0,80 (dd, J=16 et 5,5 Hz, 1H, 5 ss2) 0,90 (t, J=7,5 Hz, 3H: CH3 2 y), 1,13 (mt, 1H: 3 ss2) de 1,20 à 1,40 (mt, 1H: 3 Y2) 1,33 (d, J=7,5 Hz, 3H: CH3 1 y), de 1,50 à 1,85 (mt, 3H: 3 y1 et CH2 2 ss), 2,03 (mt, 1H, 3 ss1), 2,28 (mt, 1H, 5 #2), 2,40 (d large, J=16 Hz, 1H: 5 61), 2,46 (d, J=16 Hz, 1H: 5 ss1), 2,85 (dt, J=13 et 5 Hz, 1H: 5 e2), 2,88 (d, J=5,5 Hz, 3H: ArNCH3 4), 2,90 (dd, J=12 et 4 Hz, 1H: 4 ss2), 3,24 (s, 3H: NCH3 4), 3,30 et 3,58 (2 mts, 1H chacun: CH2 3 b), 3,31 (t, J=12 Hz, 1H: 4 ), , 4,41 (q, J=5,5 Hz, 1H: ArNH) , 4,57 (t, J=7,5 Hz, 1H, 3 a), 4,78 (dd large, J=13 et 8 Hz, 1H: 5 #1), 4,85 (mt, 1H: 2a), 4,91 (d large, J=10 Hz, 1H: la), 5,24 (dd, J=12 et 4 Hz, 1H: 4 a), 5,37 (d large, J=5,5 Hz, 1H: 5 a), 5,89 (d, J=9,5 Hz, 1H: 6 a), 5,90 (mt, 1H: 1(3), 6,51 (d, J=10 Hz, 1H: NH 2), 6,53 (d, J=8 Hz, 1H: H 5 de 1' aromatique en 4), 7,0,5 (dd, J=8 et 2 Hz, 1H: H 6 de 1' aromatique en 4), de 7,15 à 7,40 (mt, 6H: H Aromatiques 6 et H 2 de 1' aromatique en 4), 7,43 (d large, J=8,5 Hz, 1H: 1' H4), 7,48 (dd, J=8,5 et 5 Hz, 1H: 1' H5), 7,79 (d large, J =5 Hz, 1H: 1' H6), 8,40 (d, J=10 Hz, 1H: NH 1), 8,76 (d, J=9,5 Hz, 1H: NH 6), 11,63 (s, 1H: OH).
Exemple E 4E-allyl pristinamycine IA On place dans un tricol maintenu sous atmosphère d'azote 7,07 g d'acétate de sodium dans 100 cm3 d'eau distillée. La solution est portée au reflux puis on ajoute par une ampoule de coulée, une solution de 15,5 g de bromure de 4-N-allylammonio pristinamycine IA dans 100 cm3 d'eau distillée. Après 2 heures de réaction on ajoute 1 g d'acétate de sodium et le mélange est agité 22 heures au reflux.
Une nouvelle portion de 5 g d'acétate de sodium est ajoutée et la réaction poursuivie pendant 20 heures. Le précipité formé est filtré à chaud, rinçé par 2 fois 50 cm3 d'eau distillée puis séché sous pression réduite (2,75 kPa) pour donner 7 g d'un solide blanc qui est purifié par chromatographie flash (éluant : toluène, acétone 70/30) pour donner 4,6 g de 4E-allyl pristinamycine IA sous forme d'un solide blanc fondant à 160 C.
Les parties variables des chaînes lourdes (VH) et légères (VL) sont amplifiées par ACP (amplification en chaîne par polymérase) à partir de lRg d'ADNc simple brin, en utilisant la Taq DNA polymérase.
Les produits d'amplification sont purifiés par électrophorèse sur gel d'agarose 1,2% pour les séparer des oligonucléotides ; la bande correspondant au produit recherché est excisée du gel, et l'ADN est élué par centrifugation (microcentrifugeuse SPIN-X, COSTAR, Cambridge, MA), puis extrait au phénol/chloroforme et précipité à l'éthanol, 1. Clonaae de la région variable de la chaîne légère in de K20 La transcription inverse a été réalisée en utilisant l'amorce VxlFOR *VxlFOR : 5'- GGT AGA TCT CAG CTT GGT CCC 3' Cette amorce est complémentaire de la séquence consensus à l'extrémité 3' de la région variable VK des gènes murins, et comporte un site BalII (souligné).
L'ADNc obtenu a été amplifié par ACP en utilisant d'une part l'amorce VxlFOR ci-dessus, et d'autre part l'amorce VxlBAC: *VxlBAC : 5'- GAC ATT CAGCTG ACC CAG TCT CCA -3' (site PvuII souligné).
Ces amorces ont été décrites par ORLANDI et al.[ Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 86, p 3833, (1989)].
Le produit d'amplification a été récupéré par électrophorèse sur gel d'agarose, extraction au phénol/chloroforme et précipitation à l'éthanol, puis digéré par PvuII et BalII, et le fragment obtenu a été cloné dans le phage M13VKPCR1 (ORLANDI et al., publication précitée), préalablement digéré par PvuII et BclI, pour donner le phage M13VKK20PCR1 (figure 1A).
2- Clonaae de la région variable de la chaîne lourde yl de K20 La transcription inverse sur l'ARN total extrait de l'hybridome producteur de K20 a été réalisée en utilisant l'amorce VHlFOR. Cette même amorce, et l'amorce VHlBAC ont par la suite servi à amplifier la région VH à partir de l'ADNc *VH1FOR : 5'-TGA GGA GAC GGT GAC CGT GGT CCC TTG GCC CCA G-3' (Site BstEII souligné).
*VHlBAC : 5'-AG GT(C/G) (A/C)A(A/G) CTG CAG (C/G) AG TC(A/T) GG-3' (Site PstI souligné).
Ces amorces ont été décrites par ORLANDI et al. (publication précitée).
Le produit d'amplification a été purifié comme décrit ci-dessus, puis digéré par BstEII et PstI, et le fragment obtenu a été cloné dans le phage M13VHPCR1 (ORLANDI et al., publication précitée), préalablement digéré par BstEII et PstI, pour donner le phage M13VHK20PCR1 La figure 1A représente les étapes du clonage des séquences VK et VH de K20. Les phages Mî3VKK20PCRl et M13VHK20PCR1 comprennent, outre les séquences de K20, un promoteur (P) de chaîne H d'Ig, et la séquence de tête (L) du gène VH V47 de souris.
La séquence nucléotidique des inserts K20 des phages M13VKK20PCR1 et M13VHK20PCR1 a été déterminée.
La séquence de l'insert codant pour la région variable VK de la chaîne légère de l'anticorps K20, et la séquence polypeptidique correspondante sont représentées à la figure 2 A.
La séquence de l'insert codant pour la région variable VH de la chaîne lourde de l'anticorps K20,et la séquence polypeptidique correspondante sont représentées à la figure 2 B.
Les emplacements des CDR, ainsi que ceux des amorces qui ont été utilisées, et ceux des sites de restriction ayant permis le clonage sont indiqués sur ces figures 2A et 2B.
Exemple 2. : Ruisation des parties variables de la chaîne lourde et de la chaîne légère de l'anticorps K2O.
La figure 1B représente les étapes de l'humanisation des régions variables VK et VH de K20.
au témoin non traité. L'absorbance est mesurée à 550 nm.
Pour effectuer ces tests, on a utilisé des fibroblastes décongelés de peau humaine provenant d'une femme âgée de 27 ans isolés précédemment par la
technique des explants.