INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'augmentation des risques infectieux par des produits dérivés du sang humain (hépatites, H.I.V) rend nécessaire la mise au point d'un transporteur artificiel d'oxygène comme substitut à la transfusion sanguine.
Des techniques mettant en oeuvre les ADN recombinants ont été proposées pour produire les chaînes protéiques de la globine.
Les premières techniques mises en oeuvre avaient essentiellement pour but de faire synthétiser dans E.
coli, les chaînes alpha et bêta séparément (Nagai et Thogen-Sen, 1987), impliquant des procédés lourds d'expression séparée de chacune des chaînes. Ces procédés pouvaient difficilement être exploités à l'échelle industrielle.
Plus récemment, l'expression d'hémoglobine recombinante soluble et fonctionnelle a été mise au point dans E. coli (Hoffman et al., 1990, P.N..A.S., 87, 8521-8525) et Saccharomyces cerevisiae (Wagenbach et al., 1991, Biotechnology, 9, 57-61). Chacun de ces systèmes présente avantages et inconvénients. En effet, les taux d'expression les plus élevés sont obtenus dans E. coli qui présente néanmoins le désavantage de produire des endotoxines et de ne pas cliver les méthionines NH2-terminales contrairement a Saccharomyces cerevisiae. Dans la levure, les rendements de synthèse d'hémoglobine sont faibles (3 à 5%), comparés aux 10-15% obtenus dans E. coli. Ceci limite actuellement l'utilisation de la levure dans le cadre d'un projet de développement industriel.
L'utilisation de cellules animales en culture ou d'animaux transgéniques comme hôtes de production a également été réalisée (Swanson et al., Bio/Technology, Mai 1992, 10, page 55). Ces techniques ne paraissent pas exploitables actuellement en raison des faibles taux d'expression et les risques de contaminations virales et par des prions.
Le problème technique que se propose de résoudre la présente invention est de produire des protéines héminiques, et notamment l'hémoglobine et ses dérivés, en grande quantité à des coûts faibles, sans risque de contaminations virales ou sub-virales. Les inventeurs ont apporté une solution à ce problème en utilisant comme hôte pour la transformation et la production, des cellules végétales.
Diverses équipes se sont déjà intéressées à la production de protéines recombinantes de mammifères dans les cellules végétales ou dans des plantes transgéniques. Par exemple, l'expression spécifique dans les graines de colza, de la leu-enképhaline a été obtenue avec des niveaux d'expression d'environ 0,1% (Vanderkerckhove et al., Biotechnology, 1989, 7, 929-932).
On peut dire qu'une image est formée sensiblement dans un plan mais cependant, la surface de formation d'image est quelque peu incurvée. Par conséquent, si le point focal est en une position sur une ligne qui passe par le centre de la lentille de Fresnel 18, une valeur de FTM au niveau d'une position périphérique peut être réduite. Dans la table mentionnée ci-avant, les valeurs de FTM pour les angles (AEP) de 10 à 30 degrés sont obtenues lorsque le point focal est en une position sur une ligne qui passe par le centre de la lentille de Fresnel 18 mais la valeur de FTM pour l'angle (AEP) de 40 degrés est obtenue lorsque le point focal est réglé de telle sorte qu'une valeur de FTM au centre de la lentille de Fresnel 18 soit identique à une valeur de FTM à la position périphérique la plus externe de la lentille de Fresnel 18.
La table qui suit représente le résultat d'un test concernant la puissance de résolution FTM obtenue lorsque la surface plane 18a est sur le côté d'incidence de la lumière et que la surface configurée 18b est sur le côté d'émergence de la lumière et les autres conditions sont similaires à celles de l'exemple mentionné ci-avant. Ce résultat doit être comparé à une puissance de résolution FTM obtenue lorsque la surface configurée 18b est sur le côté d'incidence de la lumière et que la surface plane 18a est sur le côté d'émergence de la lumière.
AEP ( ) FTM % 2 (1 p/mm) 4 (1 p/mm) 10 95,8 84,0 12 ~ 90,8 ~ ~ 65,0 13 86,9 55,4 14 ~ 81,6 41,5 15 76,1 28,8 20 26,6 5,5 Conformément à une estimation obtenue en observant l'écran, il a été trouvé qu'une image produite est bonne lorsqu'une valeur de FTM est supérieure à 50% moyennant pour condition 4 (1 p/mm).Par conséquent, dans ce test comparatif, on peut dire qu'un angle (AEP) égal ou inférieur à 13 degrés est satisfaisant mais que la courbure de la lentille de Fresnel est limitée à cette valeur.
Les inventeurs ont en outre tenté d'analyser la raison pour laquelle la puissance de résolution FTM est réduite lorsque la surface plane 18a est sur le côté d'incidence de la lumière et que la surface configurée 18b est sur le côté d'émergence de la lumière.
Comme représenté sur la figure 7, il a été trouvé que la distance focale de la lentille de Fresnel 18 devient plus courte lorsque la position est déplacée depuis le centre de la lentille de Fresnel 18 jusqu'à sa périphérie, et qu'une surface de formation d'image est distordue par rapport à l'écran 22 comme représenté par la ligne en pointillés F. Sur la figure 7, le réseau 16 d'éléments laissant passer la lumière de façon convergente 1 6a et la lentille de Fresnel 18 sont représentés mais la lentille de Fresnel 18 est agencée de telle sorte que la surface configurée 18b soit sur le côté d'émergence de la lumière.
Lors de l'analyse de la surface de formation d'image distordue, L'angle (AIM) entre les faisceaux lumineux 30 et 31 qui sont inclinés par rapport au faisceau lumineux principal sur l'un et l'autre côtés du faisceau lumineux principal pour des angles identiques par rapport au faisceau lumineux principal est noté. L'angle (AIM) entre les faisceaux lumineux 30 et 31 devient plus petit lorsque la lumière est amenée à arriver en incidence sur la lentille de Fresnel 18 et l'angle (AIM) devient plus grand lorsque la lumière émerge depuis la lentille de Fresnel 18, indépendamment de la surface qui est sur le côté d'incidence de la lumière.Cette tendance est plus forte lorsque l'angle entre la lumière incidente ou fusionnée et la surface d'incidence ou d'émergence devient plus important, c'est-à-dire que cette tendance est plus forte par rapport à la surface configurée 18b.
Par conséquent, L'angle (AIM) entre les faisceaux lumineux 30 et 31 devient plus grand dans l'agencement pour lequel la lumière émerge depuis la surface configurée 18b et une image est formée à une certaine distance de l'écran 22 lorsque l'angle (AIM) devient plus important, le résultat étant que la puissance de résolution FTM est réduite. L'angle (AIM) ne devient pas si important dans l'agencement dans lequel la lumière émerge depuis la surface plane 18a et dans ce cas, il est possible de former une image sur l'écran 22.
La figure 10 représente les détails de la lentille de Fresnel 18 de la figure 1. Comme décrit ci-avant, la lentille de Fresnel 18 comporte la surface plane 18a et la surface configurée 18b munie de nervures périodiques concentriques 19.
Chacune des nervures 19 inclut une crête plane 19a s'étendant de façon générale parallèlement à la surface plane 18a et une surface inclinée 19b s'étendant depuis la crête plane 19a en direction de la surface plane 18a. Une surface secondaire 19c qui est perpendiculaire à la surface plane 18a sur la figure 10 est agencée sur le côté opposé de la crête plane 19a par rapport à la surface inclinée 19b. Une couche d'ombrage 19d est prévue sur la crête plane 19a de chacune des nervures 19. La couche d'ombrage 1 9d peut être aisément formée par impression puisque la crête plane 19a est parallèle à la surface plane 18a.
La figure 1 1 représente une lentille de Fresnel classique 18 comportant des nervures 19. Il est bien entendu que la crête plane 19a de la figure 10 est formée en coupant l'apex de la nervure 19 de la figure 10. Dans la lentille de Fresnel classique 18 représentée sur la figure 10, se pose un problème constitué par le fait qu'un faisceau parasite induit un fantôme.
C'est-à-dire que si une lumière S arrive en incidence sur la surface inclinée 19b en une position proche de la surface 19c, la lumière S est réfléchie par la surface secondaire 19c et elle voit son parcours modifié suivant une direction non contrôlée pour ainsi induire un fantôme. La couche d'ombrage 19d est prévue pour résoudre ce problème.
Comme on peut le comprendre au vu de la figure 8, la forme ou la pente des nervures 19 varie en fonction des positions des nervures 19 et il est préférable que les crêtes planes 19d présentent des largeurs variables en fonction des positions des nervures 19.
Comme représenté sur la figure 12, la surface 19c peut être inclinée par rapport à la surface plane 18a pour une raison de fabrication de la lentille de Fresnel 18. Comme il apparaît, la surface inclinée principale 19b agencée sur un côté de la crête plane 19a est conçue de telle sorte qu'une lumière arrive essentiellement en incidence sur le corps de la lentille de Fresnel 18 depuis la surface inclinée principale 19b, et la surface inclinée secondaire 19c est agencée sur l'autre côté de la crête plane 19a par rapport à la surface inclinée principale 19b.
De préférence, la largeur de la crête plane 19a est déterminée par la relation suivante: tg r tg #2 d = p tg (90 - #1) + tg r x [1 - t] g r] (1) où d est la largeur de la crête plane, p est le pas des nervures, r est l'angle d'un rayon lumineux principal qui est amené à arriver en incidence sur le corps depuis la surface inclinée principale par rapport à l'axe, Oi est l'angle que forme la surface inclinée principale par rapport à la surface plane et O2 est l'angle que forme la surface inclinée secondaire par rapport à l'axe.
Les figures 13, 17 et 18 représentent le dispositif d'affichage à cristaux liquides modifié 10 qui inclut quatre jeux constitués par les panneaux d'affichage à cristaux liquides 12, par les réseaux 16 d'éléments laissant passer la lumière de façon convergente 16a et par les lentilles de Fresnel 18, et un écran 22. Les quatre jeux sont agencés dans les parties de quart respectives dans une région rectangulaire. L'écran 22 présente une aire d'affichage totale quatre fois supérieure à une aire d'affichage prédéterminée 22p nécessaire pour recevoir une image provenant d'un jeu constitué par le panneau d'affichage à cristaux liquides 12, par le réseau 16 d'éléments laissant passer la lumière de façon convergente et par la lentille de Fresnel 18.
C'est-à-dire que l'écran 22 présente une aire d'affichage prédéterminée 22p pour chacun des panneaux d'affichage à cristaux liquides 12.
Au sens de la présente invention, on entend par promoteur inductible tout promoteur dont l'activité est initiée par la présence d'un agent chimique et/ou biologique extérieur, agent qui, dans le cadre de la présente invention présente en outre une toxicité réduite voire nulle. Par "extérieur", il est entendu que l'agent chimique et/ou biologique n'existe pas naturellement dans les cellules traitées avec l'adénovirus revendiqué.
A titre de promoteurs inductibles susceptibles d'être mis en oeuvre selon la présente invention, on peut notamment citer les promoteurs classiques tels que ceux répondant à des métaux lourds (CRC Boca Raton, FL (1991),167-220; Brinster et al.
Nature (1982), 296, 39-42), à des chocs thermiques, à des hormones, ( Lee et al.
P.N.A.S. USA (1988), 85, 1204-1208; (1981), 294, 228-232; Klock et al. Nature (1987), 329, 734-736; Israel & Kaufman, Nucleic Acids Res. (1989), 17, 2589-2604) ou à des agents chimiques de type glucose, lactose, galactose ou antibiotiques.
Tout récemment, il a été décrit un promoteur inductible par la tétracycline particulièrement avantageux dans le cadre de la présente invention.
Ce promoteur, dit promoteur inductible à la tétracycline, comprend un promoteur minimal lié opérationnellement à un ou plusieurs opérateur(s) de la tétracycline. C'est la liaison aux séquences opérateurs de la tétracycline, d'une protéine dite "activateur de transcription", liaison qui ne s'établit qu'en présence de tétracycline ou un de ses analogues, qui permet l'activation du promoteur minimal et donc la transcription du ou des gènes viraux associés.
En ce qui concerne plus particulièrement la protéine dite activateur de transcription, elle se caractérise donc par son aptitude à se lier, en présence de tétracycline, aux séquences opérateurs du promoteur inductible par la tétracycline et sa capacité à activer le promoteur minimal. Plus préférentiellement, il s'agit d'une protéine constituée de deux polypeptides, un premier polypeptide qui se lie aux séquences tet opérateur, en présence de tétracycline ou d'un analogue de celle-ci, et un second polypeptide dont la fonction est plus spécifiquement d'activer ladite transcription. Le premier polypeptide de la protéine dite activateur de transcription est un répresseur de la tétracycline muté de manière à manifester un comportement inverse à celui d'un répresseur sauvage c'est à dire qu'il ne se lie aux séquences tet opérateurs qu'en présence et non en absence de tétracycline.Quant au second polypeptide, il s'agit préférentiellement du domaine d'activation de la protéine 16 du Virus Herpes Simplex.
Dans le cas où le promoteur inductible utilisé est par exemple inductible au glucose ou galactose, on peut envisager de mettre en oeuvre un activateur de transcription construit sur ce modèle c.a.d. par exemple Glu-VP16 ou Gal4-VPî6.
Selon un mode préféré de l'invention, le promoteur inductible mis en oeuvre est un promoteur inductible à la tétracycline ou un de ses analogues tel que décrit cidessus.
Au sens de la présente invention, un promoteur inductible par la tétracycline comprend un promoteur minimal lié opérationnellement à une séquence dite de régulation comprenant au moins un opérateur de la tétracycline "tet opérateur" ou de l'un de ses analogues.
Par analogue de la tétracycline, on entend couvrir tout composé présentant des homologies structurales avec la tétracycline et étant capable de se lier à son récepteur lié au domaine de transactivation de la protéine dite activateur de trancription présentée ci-dessus, avec un Ka d'au moins environ 106 M-l A titre d'analogues susceptibles d'être utilisés selon la présente invention on peut notamment citer la doxycycline, la chlorotétracycline et l'anhydrotétracycline.
Par promoteur minimal, on entend désigner toute séquence promotrice qui seule n'est pas capable d'assurer efficacement la transcription de la séquence d'ADN qui lui est associée. L'activité d'un tel promoteur s'avère totalement dépendante de la liaison de la protéine activateur de transcription à la séquence dite de régulation, en présence de tétracycline. En fait, ce promoteur minimal a surtout pour fonction d'orienter la transcription. Dans cette perspective, il est de préférence situé en amont de la séquence virale de manière à former avec elle une séquence nucléotidique continue.
Ce promoteur minimal peut dériver du promoteur immédiatement précoce du Cytomégalovirus humain et plus préférentiellement est compris entre les nucléotides +75 à -53 ou +75 à -31. Toutefois, il est également possible d'employer selon l'invention un promoteur minimal dérivant d'un promoteur conventionnel comme par exemple celui activant la transcription du gène codant pour la thymidine kinase.
Un promoteur conventionnel peut également être rendu minimal par le biais d'une ou plusieurs mutations génétiques qui le rendent incapable d'assurer seul efficacement la transcription du gène qui lui est associé. Il peut également être mis en oeuvre dans le cadre de la présente invention, un promoteur minimal dérivant directement du promoteur naturellement responsable de l'expression du gène viral considéré. On peut également envisager l'utilisation d'un promoteur dit "TATA-less" tel que décrit par E. MARTINEZ et al. ( EMBO Journal , (1994), 13, N013, 31153126) de manière à obtenir un bruit de fond le plus basal possible dans la situation non induite.
De manière générale, ce promoteur minimal est placé en amont de la séquence nucléotide dont il contrôle l'expression, en substitution ou non de son promoteur naturel. Le propre promoteur de la séquence nucléique peut en effet demeurer présent mais sous une forme inactivée ou rendue non fonctionnelle par différentes techniques connues de l'homme de l'art et notamment par suppression, délétion et/ou addition d'une ou plusieurs bases.
Selon un mode particulier de l'invention, le promoteur minimal dérive du promoteur minimal de la thymidine kinase du Virus Herpès Simplex ( Mc Knight et al.
D'autres caractéristiques et avantages apparaîtront à la lecture de la
description d'un exemple de dispositif selon l'invention, en référence aux
dessins dans lesquels - la figure 1 est une vue en coupe représentant une touche plate classique, - la figure 2 est une vue en coupe représentant un premier type de touche selon l'art antérieur, - la figure 3 est une vue en coupe selon la ligne III-II de la figure 2, - la figure 4 est une vue en coupe représentant un deuxième type de touche selon l'art antérieur, - la figure 5 est une vue en coupe représentant une variante de la touche de la figure 4, - la figure 6 est une vue en coupe représentant un troisième type de touche
selon l'art antérieur.
- la figure 7 est une vue en coupe selon la ligne VII-VII de la figure 6,
- la figure 8 est une vue en coupe représentant la touche selon l'invention.
La figure 1 représente une touche 1 plate basculant autour d'un axe la central qui comme on l'a déjà vu ne présente aucune sécurité contre un appui involontaire. En effet, un effort Fd,Fm appliqué respectivement à gauche, à droite de l'axe la sur la touche 1 provoquera respectivement la descente, la montée de la vitre. Etant donné que ladite touche 1 dépasse de la valeur D1 de la surface de la platine P. un appui involontaire sur le côté droit de la touche 1 est tout à fait possible. La profondeur P1 d'implantation de la touche 1, qui correspond à la cote entre l'axe la de basculement et le niveau supérieur de la platine est par ailleurs relativement modeste. Cette cote permet de comparer l'encombrement relatif d'un type de touche à axe central par rapport à un autre car l'encombrement du mécanisme de l'interrupteur situé en dessous dudit axe
est indépendant du type de touche.
Les figures 2 et 3 représentent une première solution selon l'art antérieur visant à améliorer la sécurité et dans laquelle une touche 2 du type de la touche 1 précédente est encastrée dans une cavité réalisée dans la paroi de la platine P. De manière à pouvoir procurer une bonne sécurité passive, la touche 2 doit être encastrée suffisamment profondément de manière à ne pas être touchée par une sphère S, matérialisant le genou d'un enfant et
roulant à la surface de la platine P comme il est représenté sur la figure 3.
Cet encastrement conduit à une profondeur P2 d'implantation de la touche 2 importante supérieure à la profondeur P1 de la touche 1 classique. La figure 4 représente une deuxième solution selon l'art antérieur dans laquelle une touche 3 basculant autour d'un axe 3a déporté situé à une des extrémités de ladite touche 3 est munie d'un ergot 3b incliné faisant sailli au centre de la surface de ladite touche 3. La descente sera alors provoquée par une pression Fd sur la touche 3 entraînant un basculement de cette dernière vers le bas autour de l'axe 3a alors que la remontée n'interviendra qu'à la suite d'un basculement de la touche 3 vers le haut, basculement obtenu en tirant sur l'ergot 3b avec une force Fm dirigée vers le haut. Aussi, un appui involontaire ne pourra jamais provoquer la remontée de la vitre. Cette solution est intéressante mais présente l'inconvénient d'utiliser un axe déporté. Or, les interrupteurs utilisés dans les lève-vitres sont toujours de technologie à axe central. Aussi, il est nécessaire, dans le cas d'un axe déporté, de prévoir un système de renvoi pour se ramener au cas de l'axe central, ce qui conduit à une profondeur d'implantation de la touche 3 là-aussi importante. On peut résoudre cet inconvénient avec la variante représentée sur la figure 5 dans laquelle une touche 4 possède un ergot 4b décalé par rapport à un axe central 4a de basculement de ladite touche 4. La partie de la touche 4 située à l'opposé de l'ergot 4b par rapport à l'axe 4a, est encastrée sous un prolongement de
la platine P. Cet encastrement entraîne une forme de platine P compliquée.
D'une manière générale, dans ces deux solutions, du fait que la remontée de la vitre doit pouvoir être assurée uniquement en tirant sur l'ergot 3b,4b, celui-ci doit être suffisamment saillant à la surface de la touche 3,4. Or, un tel ergot 3b,4b présente un risque d'accrochage, par exemple par la bride d'un sac à mains. C'est pourquoi, la touche 3,4 doit être profondément encastrée, du côté de l'ergot 3b,4b tout en préservant un dégagement nécessaire à l'accès audit ergot 3b,4b. Il en résulte une forme de la platine P complexe et donc coûteuse, dont un exemple est donné sur
les figures 4 et 5.
Les figures 6 et 7 représentent une troisième solution selon l'art antérieur dans laquelle la touche 5 bascule autour d'un axe central Sa et est munie à l'aplomb dudit axe 5a d'un ergot vertical 5b. La touche 5 est implantée au fond d'un creux Sc réalisé à la surface de la platine P de manière à ce que l'ergot 5b soit accessible. Le basculement de l'ergot 5b par un effort horizontal dirigé d'un côté, Fd ou de l'autre, Fm provoquera respectivement le basculement de la touche 5 et par suite la descente, la montée de la vitre. La sécurité contre une manoeuvre involontaire résulte du fait que la profondeur du creux 5c est choisie suffisante pour qu'une sphère S de diamètre égal à celui d'un genou d'enfant et qui viendrait rouler dans ledit creux 5c repose sur les bords de ce dernier et n'entre pas en contact avec l'ergot 5b d'actionnement, comme il est représenté sur la figure 7. La profondeur d'implantation PS est importante en raison de la profondeur du creux 5c qui, d'autre part, doit être suffisamment large pour permettre le passage du doigt afin de tirer la touche par
l'intermédiaire de son ergot 5b.
Un masque 28 représenté à la figure 9 permet de reproduire très précisément les guides émetteurs de la tête optique de la figure 8. Le masque reproduit très exactement la géométrie des guides 18, 20 et 21 et des transitions adiabatiques 22. ll est terminé par une partie plane destinée à former le guide plan 27. Cette partie à une hauteur h telle que l'interférence des faisceaux 1 et 2 se réalise à l'extérieur du guide plan 27. Lors de la fabrication de la tête optique, le masque est disposé sur le substrat puis retiré après implantation des ions. Le substrat 12 est scié et poli dans la partie formant le guide plan 27 de manière à former la face 17 à une distance prédéterminée du volume de mesure 5. n est ainsi possible, à partir d'un même masque, de former des têtes optiques définissant des points de mesure à des distances différentes de la face 17.
Dans le mode de réalisation particulier représenté à la figure 10, le volume de mesure, au point P, est défini par l'intermédiaire de deux faisceaux convergents le et 2e qui se croisent au point P. Le volume de mesure peut ainsi être plus réduit que lors de l'utilisation de faisceaux parallèles des modes de réalisation précédemment décrits. A titre d'exemple, le volume de mesure peut avoir un diamètre de l'ordre de 100 micromètres avec des faisceaux parallèles et peut être de l'ordre de 20 à 30 micromètres avec des faisceaux convergents.
Chaque faisceau convergent, le ou 2e, est formé par un miroir courbe, respectivement 30 ou 31, dont le point focal est au point P, au centre du volume de mesure. Le faisceau lumineux sortant du guide 20 est réfléchi par le miroir courbe 30 de manière à former le faisceau convergent le passant par le point P. De même, le faisceau lumineux sortant du guide 21 est réfléchi par le miroir courbe 31 pour former le faisceau convergent 2e passant également par le point P. L'intersection des deux faisceaux au point P forme les franges d'interférence du volume de mesure.