INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La présente invention fournit également une préparation associant un polypeptide originaire d'un papillomavirus et une molécule immunostimulatrice. Un des avantages d'une telle composition est qu'elle combine l'immunité spécifique induite par les antigènes viraux et l'immunité aspécifique induite par la molécule immunostimulatrice et destinée à renforcer la réponse spécifique.
Le but de la présente invention est de mettre à la disposition du public des compositions pharmaceutiques permettant le traitement des infections à HPV et plus particulièrement les pathologies graves telles que le cancer du col de l'utérus, d'une efficacité améliorée par rapport aux compositions de l'art antérieur.
C'est pourquoi la présente invention a pour objet une composition pharmaceutique destinée au traitement ou à la prévention d'une infection ou tumeur à papillomavirus qui comprend à titre d'agents thérapeutiques: (1) au moins un polypeptide originaire de la région précoce d'un papillomavirus et au moins un polypeptide originaire de la région tardive d'un papillomavirus, (2) au moins un polypeptide originaire de la région précoce d'un papillomavirus, au moins un polypeptide originaire de la région tardive d'un papillomavirus et au moins un polypeptide ayant une activité immunostimulatrice, ou (3) au moins un polypeptide originaire d'une région précoce ou tardive d'un papillomavirus et au moins un polypeptide ayant une activité immunostimulatrice.
D'une manière générale, le terme polypeptide fait référence à tout ou partie du polypeptide natif, à un polypeptide chimère résultant de la fusion de séquences d'origines différentes ou à un variant caractérisé par au moins une mutation (délétion, insertion et/ou substitution) d'un acide aminé. De manière plus particulière, un polypeptide en usage dans le cadre de la présente invention a notamment une séquence en acides aminés dont le degré de similarité avec la séquence de la protéine native est supérieur à 75 %, avantageusement, supérieur à 85 % et, de préférence, supérieur à 95 %. Le degré de similarité peut être aisément calculé à l'aide d'un programme ordinateur approprié ou en alignant les séquences de manière à obtenir le degré maximal d'homologie et en comptabilisant le nombre de positions dans lesquelles les acides aminés des deux séquences se retrouvent à l'identique par rapport au nombre total de positions. La séquence des génomes de HPV-16 et de HPV-18 est divulguée dans Genebank aux numéros d'accession K02718 et X05015 respectivement.
Comme rappelé précédemment, le génome des virus de la famille des papillomavirus, en particulier BPV et HPV, code pour au moins 8 polypeptides, deux polypeptides tardifs Li et L2 composant la capside virale et 6 polypeptides précoces (El, E2, E4, E5, E6 et E7) impliqués dans la régulation, le maintien du génome viral et la transformation des cellules infectées.
II est important de noter que dans tous les exemples de réalisation qui seront cités ci-après, les moyens de réglage sont généralement disposés au niveau du talon ou du plan d'appui du talon, mais il est bien entendu qu'ils pourraient être disposés au niveau de l'appui plantaire lui-même.
Selon l'exemple de réalisation représenté sur la figure 2, les moyens de réglage sont disposés au niveau du plan d'appui du talon T et sont constitués par une poche d'air 31 gonflable à volonté, disposée entre le fond de coque 10/semelle externe 6 et la semelle interne 30.
Dans ce cas, L'angle d'inclinaison a ayant pour effet de relever le talon du patineur est obtenu par gonflage de la poche d'air 31, pour un type de patinage donné évoqué ci-dessus, un autre type de patinage pouvant être obtenu par dégonflage de cette poche 31.
Selon une variante de réalisation représentée sur la figure 3, les moyens de réglage sont disposés au niveau du talon T et sont constitués par un organe de manoeuvre externe 41 agissant dans un sens sensiblement vertical, interposé entre un point fixe 42 de la coque 10 sur lequel il prend appui et un prolongement 43 de la semelle interne 40 saillant vers l'extérieur de la coque 10, ladite semelle 40 s'articulant autour d'un point d'articulation fixe 44 situé sensiblement au niveau de l'axe d'articulation des métatarses.
En l'occurrence, L'organe de manoeuvre 41 est constitué par un bouton moleté se prolongeant par une vis de réglage 45 coopérant en vissage avec un trou fileté du prolongement 43.
Selon l'exemple de réalisation représentée à la figure 4, les moyens de réglage sont disposés au niveau du talon T de la coque 10 et sont constitués par une cale 51 formant un coin, interposée entre le fond de coque 10 et la semelle inteme 50, ladite cale 51 étant susceptible d'être actionnée dans un sens longitudinal par l'intermédiaire d'un organe de manoeuvre 52 traversant une partie arrière de la coque 10 et prenant appui sur celle-ci, pour la variation de hauteur du plan d'appui du talon T.
Egalement, dans ce cas, L'organe de manoeuvre 52 est constitué par une vis coopérant avec un trou fileté correspondant de la coque 10. Egalement, on notera comme cela est visible sur le dessin de la figure 4 que la semelle interne 50 comporte dans une partie correspondant à la cale 51 une partie inclinée 53 de pente identique à la pente du coin 51.
Selon une variante de réalisation représentée sur la figure 5, les moyens de réglage sont disposés au niveau du plan d'appui du talon T et sont constitués par un parallélogramme déformable 61 interposé entre le fond de coque 10 et la semelle interne 60, ledit parallélogramme étant actionné depuis l'extérieur de la coque par un organe de manoeuvre 62 traversant une partie arrière de celle-ci.
Le parallélogramme déformable 61 est constitué par quatre bras articulés entre eux, la liaison des deux bras supérieurs étant en liaison avec la semelle 60 alors que les deux bras inférieurs sont en liaison avec le fond de coque 10.
Dans ce cas comme dans le cas précédent de la figure 3, le point d'articulation de la semelle inteme 60 est constitué par l'axe d'articulation 63 disposé sur le fond de coque 10 et définissant le plan d'appui plantaire P.
Selon une variante de réalisation représentée à la figure 6, les moyens de réglage sont disposés au niveau du plan d'appui du talon T et sont constitués par deux éléments 71A et 71B en forme de coins, actionnés en déplacement transversal l'un vers l'autre, par l'intermédiaire d'un organe de manoeuvre 72 traversant latéralement la coque 10, lesdits coins 71A et 71B agissant simultanément sur une partie inférieure de la semelle interne 70 de section correspondante.
Egalement, dans ce cas, L'organe de manoeuvre 72 est une vis actionnée par un bouton de commande, la partie filetée de cette vis ayant des pas contraires afin de provoquer le rapprochement ou l'éloignement simultané des coins 71A et 71 B.
Selon l'exemple de réalisation de la figure 7, les moyens de réglage sont disposés au niveau du talon T et sont constitués par une came rotative 81 disposée sur le fond de la coque 10 et actionnée depuis l'extérieur par un organe de manoeuvre 82 de manière à être mise en contact progressif avec une rampe correspondante 83 ménagée sous la semelle inteme 80.
Selon l'exemple de la figure 8, les moyens de réglage sont disposés au niveau du talon T et sont constitués par un organe de poussée verticale 91 traversant le fond de coque 10 et actionné depuis l'extérieur par un élément de manoeuvre 92 de manière à agir sur la semelle inteme 90 sous laquelle il prend appui.
L'élément de manoeuvre 90 est également constitué par un bouton de commande se prolongeant par un axe fileté traversant un trou fileté correspondant du fond de coque 10.
Selon l'exemple de réalisation représenté sur les figures 9 et 10, les moyens de réglage sont disposés au niveau de la zone du talon et sont constitués par une pluralité de plots 101, de hauteur choisie, interposés entre le fond de la coque 10 et des logements correspondants 102 ménagés sous la semelle interne 100 dans lesquels ils se positionnent, l'utilisation de plots 101 de différentes hauteurs permet de régler la hauteur du plan d'appui du talon T.
Figure 8: Simulation d'histogrammes dans le cas de l'hybridation d'un BAC (125 kb) sur un point de cassure: (a) fragments de 35 et 90 kb ; (b) fragments de 50 et 75 kb ; (c) fragments de 60 et 65 kb, (d) situation témoin ; (e) histogramme réel d'un contig de clones cosmidiques hybridés sur de l'ADN génomique humain (longueur du contig : environ 77,5 pm, soit 155 kb). L'axe des abscisses représente la taille des fragments en microns. L'axe des ordonnées représente le nombre de fragments continus de sondes hybridées.
Figure 9: illustration du principe de la cartographie sans codage couleur. Chaque ligne représente le positionnement possible du nouveau sous-clone cartographié par rapport à celui avec lequel il est hybridé. L'orientation des deux premiers clones est arbitraire.
A chaque étape, deux positions de part et d'autre de l'ancien clone utilisé sont possibles pour le nouveau clone hybridé.
Figure 10: illustration du principe de la cartographie avec codage couleur.
A chaque hybridation, les mêmes sous-clones sont hybridés, donnant lieu à un même motif (canevas) d'hybridation si l'on fait abstraction de l'information de couleur. Les deux palettes de couleur utilisées permettent de repérer sans ambiguïté chacun des sousclones (principe du codage).
Figure 11 : De l'ADN génomique total de levure contenant un chromosome artificiel (YAC774G4) a été peigné sur des surfaces traitées. Des cosmides appartenant à deux contigs voisins séparés par un intervalle inconnu ont été hybridés deux par deux de façon à pouvoir reconstituer une carte précise de leur disposition. Parmi les cosmides utilisés, lF11 contient la majeure partie de la séquence du gène de la calpaine 3 dont les mutations sont responsables de la myopathie des ceintures de type 2A.
La figure montre des images caractéristiques de chaque hybridation (un cosmide étant hybridé et révélé en rouge, à gauche, I'autre en vert, à droite) ainsi que la carte reconstituée à partir des mesures, à environ 3 kb près. L'échelle est donnée par la barre de 20 kb. Cette expérience a notamment permis de corriger une carte de la région obtenue à l'aide de STSs (Richard et al., 1995, Mammalian Genome, 6, 754-756) et d'obtenir l'orientation chromosomale du gène.
Figure 12.: De 1'ADN génomique total humain a été peigné sur des surfaces traitées.
Des cosmides appartenant à 3 contigs voisins de la région du chromosome 9 contenant le gène (non cloné) de la "Tuberous Sclerosis 1" (TSC 1) ont été hybridés deux par deux et révélés en 2 couleurs différentes afin de mesurer la taille des intervalles séparant ces contigs. La figure montre 3 images caractéristiques de chacune des ces mesures donnant les distances entre cosmides avec une précision de 1,5 à 3 kb pour 50 à 80 mesures. Le code des cosmides utilisés est indiqué, ainsi que le contig auquel ils appartiennent (entre parenthèses). La couleur verte est représentée en blanc et la couleur rouge en gris.
MATERIEL ET METHODES Méthode des histogrammes Le schéma de la figure la présente un certain nombre de situations dans le cas d'une sonde recouvrant totalement la région cherchée du génome (région contenant toute séquence génomique dont la modification entraîne l'apparition de la pathologie). De préférence, la sonde recouvre une partie du génome non impliqué dans la cassure, c'est-à-dire de part et d'autre de la délétion par exemple.
Les histogrammes théoriques correspondants (dans l'hypothèse où l'ADN génomique peigné est intact, ce qui est naturellement peu réaliste, et qui sera discuté dans la suite) sont présentés sur le schéma de la figure lb. La figure lc représente les résultats bruts avant extraction de la contribution de l'allèle normal. Des situations similaires sont représentées dans le cas où le clone utilisé ne recouvre pas totalement le gène (ou la région du génome) recherché(e) sur les schémas des figures 2a et 3a.
Dans la suite, on utilisera indifféremment l'expression "cette région de génome" (sous-entendu impliquée dans la pathologie) ou "le gène", dans la mesure où la technique ne permet pas de déterminer à proprement parler un gène, mais une région du génome subissant des altérations (se traduisant par un "point de cassure").
L'ensemble des situations représentées sur les schémas précédents donne une idée de la différence attendue entre une situation où la sonde clonée utilisée s'hybride sur une région du génome d'un individu sain qui est modifiée dans le cas d'un individu malade.
Dans tous les cas présentés (sauf celui d'une translocation de tout ou partie du gène contenant la totalité du clone - cf schéma 3a (c3)), I'histogramme (théorique) se distingue de l'histogramme "normal": - soit par la présence d'un seul pic mais situé à une valeur différente de la longueur du clone (supérieure - cas (d2) par exemple, ou inférieure - cas (b')).
- soit par la présence de deux pics ou davantage.
nombreuses modifications sans sortir du cadre de celle-ci.
L'invention pourra être un dispositif de signalisation.
La présente invention a pour objet un procédé, des sondes et des kits pour déterminer le génotype HLA DQ bêta (DQB) d'un individu.
Les procédés, sondes et kits de l'invention se rapportent plus particulièrement à la détection des gènes polymorphes HLA DQB i. Ces procédé, sondes et kits de l'invention sont notamment applicables au typage HLA en transplantation, au diagnostic médical, à la médecine légale, mais la présence ou l'absence d'allèles EA DQBI peut également servir comme indicateur de la sensibilité à certaines maladies, telles que le diabète insulino-dépendant.
Le système HLA (antigène des lymphocytes humains) est codé par le complexe d'histocompatibilité majeur chez l'homme. Il constitue une contrainte très importante au cours des transplantations d'organes entre les individus en effectuant une distinction entre le soi et le non soi. Les antigènes du système WA ont donc été utilisés dans des procédés de typage pour déterminer les caractéristiques entre donneur et receveur lors de transplantations d'organes, ainsi que la prédisposition d'un individu à certaines maladies.
D'un point de vue génétique, le système HLA est bien caractérisé et consiste en un ensemble de loci plus ou moins polymorphes situés dans un intervalle d'environ 2 centimorgans sur le bras court du chromosome 6. Trois loci dans ce système (HLA-A, B et C) codent pour une classe d'allo-antigènes exprimés de façon co-dominante (Classe I). Une autre région (HLA-D) qui contient en fait plusieurs gènes code pour une seconde classe d'allo-antigènes exprimés de façon co-dominante avec un degré important de polymorphisme (Classe II).
Plusieurs autres loci qui contrôlent notamment les composants C 2, C 4 et le facteur Bf de la cascade du complément appartiennent également au système HLA (Classe III). Le succès des greffes d'organes dépend dans une grande mesure de l'identité HLA (Classes I et II) entre receveur et donneur. En conséquence, le typage fILA doit être le plus exact possible. Ce besoin concerne principalement les transplantations de reins et les greffes de moelle osseuse. Dans le cadre de la greffe de moelle osseuse, l'identité parfaite au niveau des antigènes HLA Classe II représente un facteur déterminant pour le succès de la greffe, c'est à dire pour éviter un rejet du greffon ou le développement d'une maladie greffon-contre-hôte.
Le polymorphisme des produits d'expression des gènes de la région HLA-D était défini habituellement par des techniques sérologiques basées sur l'analyse par des allo-antisera des produits des gènes HLA exprimés à la surface des cellules. Cependant, même dans les meilleures conditions, un grand nombre d'allèles existants ne sont pas détectables par ces techniques sérologiques.
Les polymorphismes au niveau du locus HLA DQBI ont été détectés en utilisant des réactifs de typage sérologique qui définissent les spécificités DQ wl, 2, 3 et 4 (WHO Nomenclature Committee, 1990). La spécificité DQ wl a été ensuite subdivisée en sous-types sérologiques DQ wS et 6, et DQ w3 a été subdivisée en DQ w7, 8 et 9. Cependant, avec les techniques de sérotypage utilisées en routine, seulement les spécificités DQ wl, DQ w2 et DQ w3 peuvent être distinguées.
Grâce à la biologie moléculaire, on sait maintenant qu'il existe un plus grand nombre de gènes HLA qu'on ne le supposait auparavant et, surtout, beaucoup plus d'allèles différents.
Cette diversité est maintenant caractérisée au niveau des séquences d'ADN des différents gènes et allèles. Les structures, séquences et polymorphismes connus dans la région HLA-D ont été répertoriés par TROWSDALE et ai, 1985. Immunol. Rev. 85 : 5-43.
L'analyse génotypique est une nouvelle approche permettant d'analyser la diversité du système HLA Classe II, et en particulier HLADQ, directement au niveau des gènes.
L'analyse génotypique est basée sur le principe de l'hybridation moléculaire et la première approche qui fut proposée est la technique dite "RFLP" qui consiste à fragmenter l'ADN par utilisation d'enzymes de restriction et à analyser la taille des fragments obtenus ; voir par exemple le brevet US 4 582 788.
L'approche RFLP est utilisable pour l'identification de 7 spécificités DQ. Cependant, l'analyse par RFLP ne permet de reconnaître que certaines des différences alléliques indétectables par la sérologie, et les possibilités offertes par cette technique sont limitées. En effet, un allèle est identifiable seulement si la mutation qui le caractérise est située dans le site de reconnaissance de l'enzyme de restriction utilisée et ainsi un grand nombre d'allèles ne sont pas reconnus par cette analyse. De plus, l'analyse RFLP met rarement en évidence une modification dans une séquence codante et ne fournit pas d'informations sur la nature exacte de la modification. Enfin, cette technique est longue et difficile à mettre en oeuvre.
Une autre technique d'analyse génotypique de HLA Classe II a été proposée, qui est la méthode dite "de typage par oligonucléotides" : grâce à la connaissance des séquences d'ADN des gènes HLA Classe II et en particulier des gènes DQ B, on utilise comme traceurs pour l'analyse du polymorphisme des oligonucléotides qui s'hybrident spécifiquement en un site donné de la séquence du gène. Ces oligonucléotides sont choisis de façon que leur hybridation ou leur absence d'hybridation fournisse le plus grand nombre possible d'informations et permette l'identification des différents allèles, sur la base de leurs différences de séquence. Toute différence de séquence, même celles portant sur un seul nucléotide, doit pouvoir être détectée.
Enfin la présente invention fournit une composition enzymatique comprenant plusieurs enzymes réunis afins de les faire agir ensemble et le cas échéant potentialiser leur synergie, par l'intermédiaire d'un complexe multimérique sur chacun desquels est couplé une enzyme différente.
La présente invention concerne des compositions comportant au moins un complexe multimérique présentant au moins un domaine d'interaction C/D de type II.
En particulier, une composition enzymatique selon l'invention peut comprendre deux enzymes réunies afin de les faire agir ensemble et le cas échéant potentialiser leur synergie, par l'intermédiaire d'un complexe selon l'invention comportant une première enzyme, et une seconde enzyme liée par interaction C/D de type II.
Dans une variante avantageuse de réalisation, ledit complexe comporte un polypeptide comprenant un domaine cohésine selon l'invention, couplé à un domaine dockerine de la protéine Cip A couplé à un premier enzyme, et un deuxième élément comprend un domaine dockerine d'une sous unité catalytique du complexe cellulolytique de Clostridium thermocellum couplé à une seconde enzyme, qui se liera au domaine cohésine.
Les complexes multimériques selon l'invention sont plus particulièrement utilisables lorsque lesdits complexes multimériques potentialisent la synergie des éléments des complexes, notamment lorsqu'il s'agit d'une composition enzymatique.
La présente invention concerne également un procédé de détection d'un antigène ou d'un anticorps par la mise en contact d'un complexe multimérique selon l'invention avec une solution contenant un anticorps ou un antigène d'intérêt et la révélation de la réaction entre le complexe multimérique et l'antigène ou l'anticorps.
La révélation peut se faire par marquage radioactif du complexe anticorps ou antigène ou par visualisation en utilisant des marquages non isotopiques, par exemple de type avidine - biotine ou tout autre marquage équivalent.
D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention apparaîtront à la lumière de la description détaillée qui va suivre. Cette description fait référence aux figures 1 à 6.
La figure 1 schématise la structure de complexe multimérique selon l'invention.
La figure 2 représente une carte de restriction de la région comprenant le gène sdbA, et construction de pCT1830, pCT1831 et pCT1832, codant pour SdbA-N, SdbA-C et SdbA, respectivement. E: EcoRI; K: Kpnl; P: PstI; Sa: Sali; Sc: Sac I; Sp: SphI; SCM: site de clonage multiple. Les positions des segments codant pour les diverses régions identifiées dans SdbA sont indiquées par des cadres de dessins différents. Les nombres se réfèrent à la séquence nucléotidique (figure 3). Les nucléotides qui ont été changés dans la séquence amplifiée par PCR sont indiqués en gras. L'ADN du vecteur POUR30 est indiqué par un trait mince. La
La figure 3 représente une séquence nucléotidique de la région codant pour le gène sdbA. Le site de liaison ribosomique supposé est souligné. Les diverses régions identifiées dans SdbA sont indiquées par des cadres de même dessin que sur la figure 2. SLR: site de liaison ribosomique.
La figure 4 représente l'alignement du domaine cohésine de SdbA et des domaines cohésine de OlpB et ORF2p (9). Les résidus qui sont identiques ou similaires à la majorité des séquences représentées sont indiqués sur un fond ombré. La numérotation des résidus commence avec des codons d'initiation supposés. Les aminoacides similaires sont: F, I, V, L et M; R et K; S et T; D et E; N et Q; et F, Y et W.
La figure 5 représente la similarité entre les résidus 264 à 275 de SdbA et d'un motif présent dans les protéines M de Streptococcus ovoBenes. M1: (numéro de dépôt GenBank x72752), M9 (24), PAM (3), M12 (26). Pour chaque protéine, la numérotation commence avec le codon d'initation supposé. Les résidus qui sont identiques ou similaires dans la majorité des séquences représentées sont indiqués sur un fond ombré. Les critères de similarité sont les mêmes que pour la figure 4.
La figure 6 représente l'alignement des segments répétés COOHterminaux de SdbA avec les séquences similaires d'autres protéines de suface cellulaire. OlpA: protéine A de couche externe de C. thermocellum (9); OlpB: protéine B de couche externe de C. thermocellum (9); Pul: pullulanase de T. thermosulfurinenes EM1 (20); Bsph: protéine de couche S de 13.
sohaericus (4). Pour chaque protéine, la numérotation commence au niveau du codon d'initiation supposé. Les résidus qui sont semblables ou identiques dans au moins huit segments sont indiqués sur fond ombré. Les critères de similarité sont les mêmes que pour la figure 4.
1. MATERIEL ET MéTHODES 1. Souches bactériennes. plasmides et conditions de culture Les souches bactériennes et les plasmides utilisés dans cette étude sont récapitulés dans le tableau 1. La souche TG1 d'Escherichia coli a été utilisée pour le clonage et le séquencage. Les protéines ont été produites dans E. coli M15 (pREP4).
Ce dispositif est destiné à la mesure optique de la vitesse d'un objet 2, par exemple un véhicule, mobile par rapport à une surface 4 comme par exemple le sol, suivant une trajectoire donnée, et se déplaçant dans le sens indiqué par la flèche F sur la figure 1.
Le dispositif, référencé 6, est fixé au véhicule 2.
Ce dispositif comprend un ou une pluralité de réseaux linéaires de photodétecteurs 8 ainsi que des moyens optiques 10 placés entre ce ou ces réseaux 8 et le sol 4.
Le dispositif 6 comprend aussi des moyens non représentés qui émettent de la lumière en direction du sol.
Celui-ci rétrodiffuse alors cette lumière.
Les moyens optiques 10 sont destinés à focaliser la lumière rétrodiffusée sur le ou les réseaux de photodétecteurs 8.