INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
C'est dans cette configuration fermée que le dispositif de l'invention est conditionné, transporté, puis manipulé par l'utilisateur (en l'occurrence l'apiculteur dans la forme de réalisation décrite) jusqu'à la mise en place.
Les quantités relatives de phase organique et de phase aqueuse sont choisies de telle manière que la phase organique représente 20 à 60 % en volume par rapport à la phase aqueuse.
De préférence, après la filtration, la suspension obtenue est lyophilisée en présence d'un ou plusieurs agents cryoprotecteurs.
L'agent cryoprotecteur constitue 5 à 20 % (poids/volume) de la suspension soumise à la lyophilisation.
La solution destinée à la lyophilisation comprend certains additifs comme des composés non ioniques, par exemple un agent cryoprotecteur ou un agent destiné à ajuster l'isotonicité de la solution finale à injecter. Ces agents peuvent être choisis parmi des sucres (glucose, mannitol, sorbitol, saccharose par exemple), des polymères (par exemple dextran (dextran 1500, dextran 40000) polyvinylpyrrolidones injectables, polyéthylèneglycol ...], des acides aminés (par exemple le glycocolle), ou tout autre agent pouvant exercer cette fonction.
Les nanoparticules selon l'invention sont particulièrement intéressantes du fait de leur stabilité. Cette stabilité permet notamment d'obtenir un lyophilisat de bonne qualité dont la remise en solution et/ou en suspension, au cours de l'utilisation, est améliorée et pour lequel la suspension reconstituée contient des particules de diamètre voisin de celui des nanoparticules initiales.
Cette technique est particulièrement intéressante du fait qu'elle ouvre la voie à la préparation à l'échelle industrielle de suspensions nanoparticulaires stabilisées et décontaminées, éventuellement chargées de principes actifs ce qui n'était pas possible jusqu'alors.
En outre les nanoparticules stabilisées selon l'invention présentent un avantage considérable dans le cas de certains principes actifs comme par exemple les agents anticancéreux de la classe des taxoïdes.
Elles permettent en effet d'accroître l'activité du produit par comparaison à des formulations classiques comme notamment les formulations à base de mélange polysorbate/éthanol.
La présente invention concerne également les compositions pharmaceutiques constituées des nanoparticules selon l'invention, éventuellement en association avec un ou plusieurs excipients ou adjuvants compatibles et pharmaceutiquement acceptables. Ces compositions sont de préférence des compositions injectables.
L'administration par voie parentérale comprend les administrations intraveineuse, intrapéritonéale, intramusculaire ou sous-cutanée.
Plus particulièrement préférée est l'administration intrapéritonéale ou intraveineuse.
Les compositions peuvent contenir au moins 0,01 % de produit thérapeutiquement actif. La quantité de produit actif dans une composition est telle qu'une posologie convenable puisse être prescrite. De préférence, les compositions sont préparées de telle façon qu'une dose unitaire contienne de 0,01 à 1000 mg environ de produit actif pour l'administration par voie parentérale.
Chez l'homme, les doses sont généralement comprises entre 0,01 et 200 mg/kg. Par voie intraveineuse, les doses sont généralement comprises entre 0,1 et 50 mg/kg, de préférence entre 0,1 et 8 mg/kg. Il est entendu que, pour choisir le dosage le plus approprié, devront être pris en compte la voie d'administration, le poids du malade, son état de santé général, son âge et tous les facteurs qui peuvent influer sur l'efficacité du traitement.
PBD6) sont cultivées in vitro sur le milieu de base de Murashige et Skoog (1962) additionne des vitamines de Gamborg et al. (1968, Sigma référence M0404), de saccharose à 20g/L et d'agar (Merck) à 8g/L. Le pH du milieu est ajusté à 5,8 avec une solution de potasse avant autoclavage à 120'C pendant 20 min. Les plantules de tabac sont repiquées par bouture des entre-noeuds tous les 30 jours sur ce milieu de multiplication MS20.
Toutes les cultures in vitro sont réalisées en enceinte climatisée, dans les conditions définies cidessous - Intensité lumineuse de 30ssE m-2 S-1 ; photopériode de 16h - Thermopériode de 26 C le jour, 24"C la nuit.
La technique de transformation utilisée est dérivée de celle de Horsch et al. (1985).
Une préculture d'Agrobacterium tumefaciens souche LBA4404 contenant les plasmides pBIOC46 ou pBIOC47 ou pBIOC49 ou pBIOC53 ou pBIOC59 est réalisée durant 48h à 28oC sous agitation, dans du milieu LB additionné des antibiotiques adéquats (rifampicine et tétracycline). La préculture est ensuite diluée au 50ème dans le même milieu et cultivée dans les mêmes conditions. Après une nuit, la culture est centrifugée (10 min, 3000 g), les bactéries sont reprises dans un volume équivalent de milieu MS30 (30g/L saccharose) liquide et cette suspension est diluée au 10ème.
Des explants d'environ lcm2 sont découpés à partir des feuilles des plantules décrites ci-dessus.
Ils sont ensuite mis au contact de la suspension bactérienne pendant lh, puis séchés rapidement sur papier filtre et placés sur un milieu de coculture (MS30 solide).
Après 2 jours, les explants sont transférés en boîtes de Pétri sur le milieu de régénération MS30, contenant un agent sélectif, la kanamycine (200mg/L), un bactériostatique, l'augmentin (400mg/L) et les hormones nécessaires à l'induction de bourgeons (BAP, lmg/L et ANA, 0,lmg/L). Un repiquage des explants est effectué sur le même milieu après 2 semaines de culture. Après 2 nouvelles semaines, les bourgeons sont repiqués en boîtes de Pétri sur le milieu de développement composé du milieu MS20 additionné de kanamycine et d'augmentin. Après 15 jours, les bourgeons sont repiqués en pots sur le même milieu dont la concentration en kanamycine a été diminuée de moitié. L'enracinement prend environ 20 jours, au terme desquels les plantules peuvent être clonées par bouture d'entre-noeuds in vitro ou sorties en serre.
EXTRACTION ET PURIFICATION PARTIELLES DE PROTéINES RECOMEINANTES A PARTIR DE FEUILLES DE TABAC Cinquante grammes de feuilles de tabac (poids frais) transformées sont broyés dans l'azote liquide puis mis à agiter durant 15min à 4"C dans 300ml de tampon tris-HCl 50mM pH 8 additionné d'EDTA lmM, de ss-mercaptoéthanol lmM et de polyvinylpyrrolidone (PVP, 10g/300ml). Le broyat est filtré sur miracloth puis centrifugé pendant 20min à 4"C à 10000 g. Le surnageant est à nouveau filtré sur miracloth. Les protéines sont alors précipitées durant 12 h à 4'C par une solution de sulfate d'ammonium à saturation.Après centrifugation 20 min à 10000 g, le culot est repris dans du tampon tris-HCl 50mM pH 8 additionné de DTT lmM et d'EDTA lmM et dialysé 2 fois 12 heures contre ce même tampon. Après dialyse, le rétentat est centrifugé puis filtré sur miracloth. Un dosage de protéines est également effectué selon la technique de Bradford (1976).
Première étape de purification : Equilibration en tampon phosphate l0mM pH 6,7-EDTA 1 mM par passage sur une résine Sephadex G25 puis dépôt sur une résine échangeuse d'ions (CM cellulose) équilibrée en tampon phosphate 10 mM pH 6,7 EDTA 1 mM. Lavage par 4 volumes de ce même tampon puis élution par un gradient linéaire de Na2HPO4 10 mM pH 6,7 EDTA 1 mM à Na2HPO4 100 mN pH 6,7 EDTA 1 mM.
Deuxième étape de purification : Equilibration en tampon Tris-HCl 10 mM pH 8,4-EDTA 1 mM par passage sur une résine Sephadex G25 puis dépôt sur une résine échangeuse d'ions DEAE-Sephacel équilibrée en tampon Tris-HCl 10 mM pH 8,4 EDTA 1 mM. Lavage par 4 volumes de ce même tampon puis élution par un tampon KH2PO4 20 mM pH 7,4. Les conditions de pH et de force ionique peuvent être modifiées selon la nature du variant d'hémoglobine.
Détection de l'hemoqlobine L'hémoglobine (Hb) se détecte grâce à son chromophore, l'hème, qui lui donne sa couleur caractéristique. A faible concentration et en présence d'autre chromophore ou molécule qui diffuse la lumière, le signal dû à l'Hb peut être masqué. Ce problème peut être surmonté grâce à une technique dynamique permettant de détecter la présence de l'Hb dans un système complexe.
Cette méthode repose sur des spectres différentiels correspondant à une transition entre deux formes de l'Hb et sur les propriétés de photodissociation des ligands comme Ot et CO (Gibson, 1956 ; Mardenet et al., 1994). La probabilité de dissociation est plus forte pour le CO, donc ce ligand est utilisé de préférence. La préparation des échantillons s'effectue en anaérobiose.
L'équipement expérimental se compose de deux sources de lumières : la première est une source pulsée (laser) qui dissocie les ligands, et la deuxième est une lampe continue qui permet d'observer la recombinaison des ligands, grâce à un changement de l'intensité de lumière transmise (figures 4, 5 et 6).
La photodissociation est efficace dans tout le domaine spectral visible ; notre système consiste en un laser YAG dont les impulsions ont une durée de 10 ns à 532 mm. La détection est plus sensible dans la bande de Soret (416 nm) ; nous avons choisi 436 nm proche de l'absorption maximale de la forme désoxy. Les changements d'intensité transmise se produisent tout d'abord dans un temps de l'ordre de la nanoseconde (phase géminée) puis se poursuivent en quelques millisecondes (phase bimoléculaire). Nous nous intéressons particulièrement à cette seconde phase qui reflète les transitions allostériques de lBHb (figures 5 et 6). Les études cinétiques, rapides et réversibles, permettent d'obtenir de nombreuses données et donc une indication fiable de l'état de l'Hb quant à son fonctionnement normal, physiologique.
La préparation des échantillons est réalisée comme décrite ci-après. Les feuilles de tabac (20 g) sont broyées dans de l'azote liquide, puis le broyat est mélangé à 60 ml de la solution d'extraction (Tris-HCl 25 mM pH7,5, p-mercaptoéthanol 10 mM, EDTA 1 mM). L'homogénat est centrifugé à 10 000g à 4 C pendant 15 minutes. Le surnageant contenant les protéines solubles est prélevé. Le dosage des protéines est effectué selon la technique de Bradford (1976). A 1 ml d'extrait de protéines végétales (1 mg/ml), 32 1 et 3.2 1 d'une solution d'hémoglobine humaine concentrée (3.13 mg/ml) sont ajoutés pour obtenir respectivement des solutions contenant 100%, 10% et 1% d'hémoglobine par rapport aux protéines totales.
Les résultats obtenus sont les suivants Les cinétiques des échantillons équilibrés sous 0.1 atm CO pour trois concentrations en Hb : 100%, 10% et 1% des protéines totales présentes dans l'extrait à raison de 1 mg/ml ont été mesurées. Les courbes sont biphasiques, semblables à celles de l'Hb seule, et présentant une vitesse normale (de l'ordre de 1000/s) pour la phase rapide (figure 5). Les cinétiques sont similaires pour les deux concentrations, à l'exception de l'augmentation du bruit (signal) prévisible à faible concentration. Aucun signal n'a été observé pour l'extrait végétal en absence d'Hb, dans les mêmes conditions. Nous pouvons conclure que la cinétique de recombinaison du CO à l'HbA dans un extrait de feuilles de tabac est normale.
Ce fragment inclut la totalité de la fenêtre de lecture droite. La séquence en acides aminés déduite pour le premier cadre de lecture est indiquée sous la séquence nucléotidique. Le codon d'initiation de la VP2 (ACG) est en position 670, celui de la VP3 (G) est en position 829.
Le premier codon stop (TAA) se termine au nucléotide 2433.
Figure 3 : Organisation du génome (brin de polarité positive) dans les 3 cadres de lecture, dans la portion correspondant environ aux unités 44 à 91 de la carte de restriction.
Figure 4 : Alignement des séquences en acides aminés des protéines de capside du DPV et de parvovirus de mammiferes.
Les séquences suivantes étaient disponibles dans la banque de données SWISS-PROT 26 (08- 93): COAT PAVBO (Parvovirus bovin BPV, souche non mentionnée) COAT PAVHB (Parvovirus humain B19, souche AU) COAT ADVG (Parvovirus de la maladie aléoutienne du vison ADV, souche G) COAT PAVPN (Parvovirus porcin PPV, souche NADL-2) COAT PAVC7 (Parvovirus canin CPV, souche 780929) COAT MUMIV (Parvovirus murin MVM, souche prototype) Les références de la séquence AAV2 utilisée sont mentionnées dans la description détaillée de l'invention, en matériel et méthode.
Les séquences ADV-G, MVM (p) ont été modifiées comme décrit en matériel et méthode. Les acides aminés figurant en caractères gras montrent une identité avec ceux du DPV. Les motifs d'aa très conservés au sein des parvovirus sont encadrés, de même que la région riche en glycine chez les parvovirus des mammiferes.
Figure 5 : Alignement de la séquence en acides aminés des protéines de capside du DPV et du parvovirus de l'oie Ce dernier représenté sous rabrévation "GOOSEPAR", correspond à la souche SHM 319 (ATCC). La séquence prise en compte est celle publiée par Brown et coll.(1995), arrêtée à acide aminé 674. Celui précède un signal d'arrêt dont l'existence est remise en cause par ces mêmes auteurs. La séquence du DPV est désignée dans cette figure sous l'abréviation "DPVlP".
Figure 6 : Analyse par Western-blot des protéines recombinantes de DPV à l'aide d'un antisérum spécifique du DPV A) Lysat total de cellules 519 infectées par le baculovirus sauvage AcMNPV (ligne 2) et le baculovirus recombinant AcDPVl 14 (ligne 3); marqueur de poids moléculaire (ligne 1) B) Virions purifiés sur gradient de CsCI (ligne 2); marqueur de poids moléculaire (ligne 1).
Figure 7 : Etude en immunofluorescence : (A) de cellules Sf9 infectées par le baculovirus recombinant (AcDPV114), (B) de cellules infectées par du baculovirus sauvage (AcMNPV).
Figure 8 : Morphologie en microscopie électronique des capsides vides recombinantes de DPV (A) et des particules virales de DPV purifiées sur gradient de chlorure de césium (B).
L'échelle représente 100 nm.
Tableau 1 : Anticorps spécifiques du DPV chez des canards inoculés avec le baculovirus recombinant (AcDPV1 14) en adjuvant huileux.
ll n'a pas été détecté d'anticorps, que ce soit par ELISA ou par séroneutralisation (SN), chez les canards ayant reçu le baculovirus sauvage en adjuvant huileux.
Les canards contact ne présentaient pas d'anticorps ELISA (SN non réalisée).
Il n'a pas été retrouvé d'anticorps ELISA (SN non réalisée) lors du contrôle pratiqué juste avant la 1 ère inoculation (contrôle A).
(1) moyenne d'au moins 3 répétitions; (écart-type).
13 360 40 5.0 0 0
14 { 360 40 6.2 16 154
j 360 40 8.5 { 205! 201
16 360 60 5.0 0 0
17 360 60 6.2 105 177
13 360 60 8.5 225 224
19 412 20 5.0 0 0
412 20 6.2 SS 165
21 412 20 8.52 Il 207
22 412 40 5.0 0 0
23 412 40 6.2!7S 198
24 412 40 S., 195
24 412 j 40 8.5 222 f 195
412 60 5.0 0 0
26 412 60 6.2 I1S 177
27 412 60 8.5 21,0 193
Dans l'exemple de réalisation représenté sur les figures 1 à 3, chaque organe flexible de transmission d'effort d'écrasement 5 est constitué par un profilé enroulé en hélice continue autour de la conduite centrale 2 et présente des faces latérales de section transversale en forme d'arc de cercle, conformes pour épouser sensiblement la forme de la surface externe des conduites périphériques adjacentes en ménageant un jeu annulaire j avec ces dernières.
En variante, les organes flexibles de transmission d'effort d'écrasement 5 peuvent être extrudés en un seul bloc de matière autour des conduites périphériques sensibles à l'écrasement et/ou à la traction, ces dernières ayant été au préalable enduites d'un lubrifiant pour permettre un glissement axial entre les organes flexibles de transmission d'effort d'écrasement 5 et lesdites conduites périphériques lorsque la canalisation est mise en flexion, comme cela sera précisé dans la suite.
Le jeu annulaire j confère aux conduites périphériques sensibles à la traction et/ou à l'écrasement une possibilité de glissement axial relativement aux organes flexibles de transmission d'effort d'écrasement 5 adjacents et constitue ainsi un moyen de glissement permettant d'éviter l'apparition, lorsque la canalisation 1 est mise en flexion, de contraintes de traction excessives provoquées par des effets de frottement entre les conduites périphériques et les organes de transmission d'effort d'écrasement 5 dans les portions des conduites périphériques se trouvant dans la région de la canalisation située du côté radialement externe par rapport à la concavité de la canalisation 1 incurvée, donc d'éviter un endommagement des conduites périphériques sensibles à la traction et/ou à l'écrasement.
I1 est souhaitable que le jeu j entre une conduite périphérique sensible à la traction et/ou à l'écrasement, de diamètre externe d, et l'organe de transmission d'effort adjacent 5 vérifie la relation 0,6 > j/d ) 0,03 avantageusement 0,3 > j/d 5 0,05 Bien entendu, on ne sort pas du cadre de l'invention en modifiant le nombre de conduites périphériques présentes dans l'espace annulaire entre la conduite centrale 2 et l'enveloppe 8, ou la structure de cette dernière.
L'enveloppe 8 est réalisée dans l'exemple de réalisation décrit par extrusion d'une matière plastique.
En variante, l'enveloppe 8 pourrait être réalisée au moyen d'un ruban en matériau plastique thermorétractable enroulé autour des conduites périphériques et des organes flexibles de transmission d'effort d'écrasement ou au moyen d'un ruban adhésif, en veillant toutefois à ne pas gêner le glissement relatif des conduites périphériques sensibles à la traction et/ou à l'écrasement et des organes flexibles de transmission d'effort d'écrasement.
Le rayon externe r de l'élément central 2 est,dans l'exemple de réalisation décrit en référence aux figures 1 à 3, supérieur à 50 mm, et peut atteindre ou dépasser 100 mm.
Le rayon externe R de la canalisation 1 peut atteindre jusqu'au triple du rayon r de l'élément flexible central 2.
On a représenté sur les figures 4 et 5 une canalisation flexible 1' à conduites multiples conforme à un deuxième exemple de réalisation de l'invention. Cette canalisation 1' differe de la canalisation flexible 1 precédemment décrite notamment par le fait que les organes flexibles de transmission d'effort d'écrasement sont plus nombreux, ce qui permet de mieux répartir le jeu latéral dans l'espace annulaire compris entre la conduite centrale 2 et la surface interne de l'enveloppe 8.
L'augmentation du nombre des organes de transmission d'effort d'écrasement s'accompagne d'une diminution de leur largeur c, donc d'une meilleure déformabilité en torsion de chacun des organes flexibles de transmission d'effort d'écrasement.
Dans l'exemple de réalisation décrit, deux conduites périphériques 3 adjacentes sont séparées par deux organes flexibles de transmission d'effort d'écrasement 5a ménageant chacun avec la conduite périphérique adjacente un jeu j comme décrit précédemment, et ménageant de plus entre eux un jeu w.
Dans l'exemple de réalisation des figures 4 et 5, les conduites périphériques et les organes flexibles de transmission d'effort d'écrasement 5a, qui sont constitués par des profilés, sont enroulés autour de la conduite centrale 2 selon des segment s en hélice avec inversion de l'angle d'hélice du type "S-Z".
On a décrit de façon schématique en référence aux figures 6 à 9 le principe d'un tel enroulement.
L'enroulement du type "S-Z" comporte une succession de motifs d'enroulement identiques se répétant avec périodicité et comportant chacun d'une part des segments enroulés en hélice avec un angle d'hélice constant dans un sens positif (Al, B1; A'1,B'1) et des segments enroulés en hélice avec un angle d'hélice constant dans le sens négatif (B2,A2;B'2,A'2 non représenté) et, d'autre part, des segments d'inversion de sens enroulement assurant la variation progressive de l'angle d'enroulement entre lesdits segments d'angle d'hélice constant (B1,B2;B'1,B'2).
Les figures 6 et 7 correspondent à un enroulement dans lequel on effectue un peu moins d'un tour dans un sens puis dans l'autre. Plus précisément, entre les points d'inversion de sens d'enroulement, de positions axiales xl et x2, on enroule dans un sens sur une course angulaire égale à 320', puis entre les positions axiales x2, x3, on enroule en sens inverse sur la même course angulaire.
Les figures 8 et 9 correspondent à un enroulement dans lequel on enroule chaque conduite périphérique ou organe flexible 5 d'un tour complet plus 320 dans un sens d'enroulement entre les points d'inversion de sens de positions axiales x'l et x2 puis on enroule d'un tour complet plus 320' dans l'autre sens entre les points de positions axiales x'2 et x3 (non illustré sur les figures).
Comme illustré figure 2 la presse mobile 4 comporte à l'intérieur d'un boîtier (ou capot ou coffret) 31, monté sur un chariot 16 mobile, ledit vérin 30 hydropneumatique muni d'électrovannes 32 d'alimentation en fluide, et peut comporter, comme illustré sur cette figure, un automate 33 ou un dispositif séquenceur ou de contrôle et de commande de fonctionnement de ladite presse.
Comme illustré sur cette figure, on voit que le chariot 16 faisant partie de la presse mobile 4 est équipé dans sa partie inférieure de patins (ou paliers) 23 coulissant ou susceptible de rouler sur des rails 17A et 17B fixés solidement et rigidement sur le chassis 7 par l'intermédiaire d'entretoises 18 formant support desdits rails.
Lesdits rails 17A et 17B s'étendent selon des axes respectifs 25 et 26 parallèles à l'axe XX longitudinal du convoyeur 5.
Une vis sans fin 19 est également prévue, dont l'axe longitudinal 27 est parallèle auxdits axes 25, 26, XX, qui est susceptible de coopérer avec un écrou 22 fixé sous la face inférieure du chariot 16 afin qu'une rotation de la vis sans fin 19 selon son axe 27 entraîne un déplacement selon ledit axe 27 de ladite presse mobile 4, lui permettant de venir se positionner en regard d'un outil de sertissage 1 qu'elle doit actionner.
Par référence à la figure 3, on voit que la presse mobile selon l'invention comporte un actionneur de type vérin hydraulique 30 permettant de commander l'actionnement du poinçon de l'outil, lequel vérin est doté d'un circuit d'alimentation en énergie pneumatique délivré par une source 47 grace à une alimentation à pression constante et à débit contrôlé du vérin hydraulique ou hydropneumatique.
Un séquenceur ou automate 33 permet de commander l'alimentation en fluide hydraulique du vérin 30 de façon à engendrer un effort de l'outil (poinçon) sur la cosse à sertir, selon un cycle de travail (ou de déplacement selon l'axe ZZ) déterminé.
Le vérin 30 hydropneumatique peut être par exemple un vérin fabriqué par la société allemande PRESSO TECHNIK GmbH, commercialisée en France par la Société DIMA FLUID, 92600 ASNIERES.
Un capteur d'effort de sertissage, par exemple de type piezoélectrique, peut être intégré à la chape montée à l'extrémité de la tige du vérin de la presse mobile ; ce capteur, monté sensiblement affleurant, est mis en contact avec une face du nez du porte poinçon de l'outil de sertissage, lorsque la presse mobile coïncide avec cet outil, de manière à ce que l'effort de sertissage exercé par la presse sur l'outil de sertissage, qui est tranmis audit nez par ladite chape, soit mesuré par ce capteur.
Le vérin 30 est alimenté par des distributeurs ou électrovannes 32A et 32B qui sont raccordés à une source d'air comprimé 47, et qui peuvent distribuer l'air comprimé respectivement aux chambres 46 et 55 qui sont séparées par un piston 54, ou bien relier ces chambres à l'échappement, en fonction de signaux de commande délivrés par l'automate 33 par l'intermédiaire de liaisons électriques 57.
Le fonctionnement est le suivant - les distributeurs de mise en oeuvre 32A et 32B sont actionnés, de sorte que l'air comprimé pénètre dans la chambre 46 pendant que la chambre 55 est reliée à l'échappement - le piston 54 se déplace alors à grande vitesse en développant un effort réduit, jusqu a ce que l'on vienne au contact de la cosse à sertir.
La résistance créée par la cosse à sertir provoque le déclenchement (l'ouverture) de la valve de séquence 98 ; de l'air comprimé passe alors de la chambre 46 à la chambre 41 ; le piston amplificateur 42 pénètre alors avec son plongeur 44 à travers le joint haute pression 97 qui sépare la chambre haute pression 61 du compensateur d'huile 45 et assure l'étanchéité jusqu'à une pression de l'ordre de 400 bars par exemple ; cette haute pression d'huile régnant dans la chambre 61 agit sur la face haute pression du piston 54 et déplace celui-ci vers le bas, sur une course pouvant atteindre 24 mm par exemple.