INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Selon ce mode de réalisation, chacun des doigts métalliques 6 de l'électrode 5 est relié à une électrode équipotentielle métallique 7 par l'intermédiaire d'un interrupteur 8. Selon l'invention, et comme cela sera précisé ultérieurement, chaque interrupteur 8 est commandable électriquement ou optiquement. L'électrode équipotentielle métallique 7 a préférentiellement une direction perpendiculaire à la direction définie par les doigts 6, mais d'autres configurations sont possibles. L'électrode 7 est reliée à une tension d'alimentation positive V. Ainsi, lorsque l'interrupteur reliant l'électrode équipotentielle 7 à un doigt 6 est à l'état passant, la tension V se trouve-t-elle appliquée audit doigt. Préférentiellement la largeur des doigts et la distance entre les doigts sont égales et de l'ordre du micron, voire du dixième de micron comme cela apparaîtra ultérieurement.Selon ce mode de réalisation, les doigts 6 sont électriquement reliés à la même tension V par groupes de N doigts voisins, deux ensembles de N doigts voisins électriquement reliés étant séparés par un ensemble de N-l doigts voisins électriquement isolés de toute tension de commande. Un exemple de ce second mode de réalisation est illustré aux figures 4a et 4b. Pour des raisons de commodités le nombre N a été choisi égal à 4. L'invention conceme cependant d'autres valeurs de N.
Sur la figure 4a, les ensembles de 4 doigts référencés El, E3 et E5 sont électriquement reliés à la même tension V et les ensembles de 4 doigts référencés E2 et E4 sont électriquement isolés de toute tension de commande. II s'en suit que les zones situées en-dessous de ensembles de doigts El, E3 et E5 présentent un coefficient x(2) de valeur maximale, alors que les zones situées en-dessous des ensembles E2 et E4 présentent un coefficient x(2) de valeur minimale, comme représenté en figure 4b.
L'avantage de ce mode de réalisation est de pouvoir commander la période spatiale d de la modulation des non-linéarités optiques du matériau non linéaire. II suffit pour cela de faire varier le nombre N d'électrodes voisines électriquement reliées. Avantageusement, les conditions de quasi-accord de phase sont alors vérifiées pour un ensemble de fréquences couvrant la bande 8/12 pm et au-delà.
La figure 5 représente une modification du schéma de principe représenté en figure 3.
Sur cette figure, chaque doigt 6 à une première extrémité reliée à une première électrode équipotentielle 7 par un premier interrupteur 8 et l'autre extrémité reliée à une seconde électrode équipotentielle 9 par un second interrupteur 10.
Les électrodes 7 et 9 sont préférentiellement parallèles entre elles et perpendiculaires à la direction définie par les doigts 6. La première électrode équipotentielle 7 est reliée à une tension positive Va et la deuxième électrode équipotentielle 9 à une tension négative Vb, les tensions Va et Vb étant prises par rapport à la tension de référence du contact ohmique C. De même que pour le circuit décrit en figure 3, les doigts 6 sont électriquement reliées à la même tension Va par groupes de N doigts voisins. Mais ici, les doigts 6 voisins situés entre deux ensembles de N doigts voisins électriquement reliés à la même tension Va sont électriquement reliés à la même tension Vb. Ainsi, si l'interrupteur 8 reliant l'extrémité d'un doigt 6 à l'électrode équipotentielle 7 est à l'état passant, I'interrupteur 10 reliant l'autre extrémité du même doigt 6 à l'électrode équipotentielle 9 est-il à l'état bloqué et réciproquement.
L'avantage de ce type de polarisation consiste en ce qu'aucun doigt 6 n'est à un potentiel flottant.
Les figures 6a, 6b et 6c représentent un premier mode de réalisation du dispositif de principe représenté en figure 3.
La figure 6a représente une vue de détail des modes de réalisation représentés aux figures 3 et 5.
Sur cette figure sont représentés trois doigts 6 voisins. Chaque interrupteur 8 est constitué par un transistor T commandé par tout moyen connu de l'homme de l'art de façon à être passant ou bloqué. De façon préférentielle, les transistors T sont du type à effet de champ. Chaque transistor a son drain relié à l'électrode équipotentielle 7, sa source reliée à un doigt 6 et sa grille reliée à un registre à décalage Il. Selon la tension appliquée à sa grille chaque transistor T est passant ou bloqué. Sur la figure 6a, seule une extrémité de chaque doigt 6 est représentée. II est évident que l'invention conceme aussi un dispositif tel que celui représenté en figure 5.
Chaque interrupteur 10 est alors un transistor T tel que mentionné cidessus.
La figure 6b représente un premier exemple de réalisation du circuit de la figure 6a.
L'étoposide possède des propriétés antitumorales pour traiter différentes formes de cancer, et en particulier le cancer du poumon à petites cellules et le cancer des testicules. L'étoposide comme le téniposide sont considérés comme des inhibiteurs de l'enzyme topoisomérase II liée à 11ADN.
La topoisomérase II est une enzyme nucléaire qui a la propriété de couper les deux brins de 1'ADN et de les ressouder. Son inhibition par l'étoposide passe par la formation et la stabilisation d'un complexe appelé complexe clivable où 1'ADN et l'enzyme sont liés par liaison covalente. Ce complexe (ADN-enzyme-drogue) stabilisé empêche ainsi 1'ADN de se relier et conduit par la suite à la mort cellulaire (DNA topoisomérase in cancer, Milan POTMESIL, Kurt M. KOHN, Oxford University Press 1991, p.230).
Il apparaît durant le traitement des patients par l'étoposide un certain nombre d'inconvénients comme avec la plupart des anticancéreux en termes d'effets secondaires indésirables, de mauvaise tolérance, ou même de toxicité reliés à la dose utilisée, comme par exemple, des désordres hématologiques (neutropénie, thrombocytopénie), cardiovasculaires comme l'hypotension, ou également des nausées, vomissements ou encore alopécie, et muscites à fortes doses. L'efficacité anticancéreuse de l'étoposide est donc limitée par ces effets secondaires.
Par ailleurs, il est montré que l'efficacité thérapeutique de l'étoposide est également limitée en termes de survie par augmentation des doses administrées chez la souris dans le modèle de la leucémie P 388 (voir tableau).
Il est par conséquent nécessaire de rechercher de nouveaux produits provoquant une meilleure survie, quelque soit la dose utilisée, par rapport à l'étoposide. De façon particulièrement inattendue, cette meilleure survie est observée avec les composés de la présente invention dans le test in vivo dans le modèle de la leucémie P388, et montre ainsi leur meilleure efficacité thérapeutique anticancéreuse. La présente invention concerne donc les dérivés triacylés d'éthylidène ou de thénylidène glucoside de déméthylépipodophyllotoxine de formule I dans laquelle R représente un groupement acyle de type phénoxy acétyle de formule R1OCH2CO dans laquelle R1 est un noyau phényle substitué par un ou plusieurs substituants X, X représentant un groupe formyle, acétyle, cyano ou trifluoroacétyle, en position ortho, méta ou para, et R' représente un groupe méthyle ou 2-thiényl, et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
D'une manière préférentielle, R' représente un groupe méthyle.
Avantageusement, R1 représente un groupe choisi parmi les 2-formyl phényle, 4formyl-phényle, 3-formyl-phényle, 4acétyl phényle, 4cyano phényle, 4 trifluoro acétyl phényle et 2,diformyl phényle.
Des dérivés trisubstitués de formule I où R' = CH3 et R= aryloxyacétyl, sont décrits dans la demande de brevet FR-A-2 699 535. Ces composés, qui ont montré une activité anticancéreuse améliorée par rapport à l'étoposide, ne manifestent pas une survie aussi importante que les nouveaux dérivés selon la présente invention.
L'activité particulièrement intéressante observée pour les dérivés selon l'invention apparaît provenir de la substitution du noyau aromatique du groupement R phénoxyacétyle tel qu'elle est définie ciaessus.
La présente invention concerne également les procédés de préparation d'un composé de formule I, pour lequel on fait réagir le dérivé de formule I ci-dessus pour lequel R représente un atome d'hydrogène et R' est défini ci-dessus, avec un précurseur de 1 'acyle R défini auparavant, tel que par exemple l'acide R1 OCH2COOH activé, en particulier un halogénure d'acide R 1OCH2COX, dans lequel X représente un halogène tel que le chlore ou le brome, de préférence le chlore.
Il s'agit d'une manière préférentielle des chlorures des acyles dont les groupes R1 sont définis ci-dessus.
Les chlorures d'acide utilisés sont préparés par action du chlorure d'oxalyle dans le CH2Cl2 à O C en présence de traces de DMF. Le couplage avec les dérivés de formule I pour lesquels R=H se fait directement dans le même solvant avec un rapport molaire (chlorure d'acideldérivé) de 5 à 8, en présence de pyridine.
On obtient ainsi les dérivés de formule générale I.
Les exemples ci-dessous décrivent la préparation de différents composés de formule générale I selon l'invention.
EXEMPLE 1 : 4'-Déméthyl 4(2-formyl phénoxy acétyl)4-0-(2,3-bis(2-formyl phénoxy acétyl)-4,6-éthylidène-ss-D-glucosyl)-épipodophyllotoxine.
Dans un ballon tricol de 100 ml, 2,3 g d'acide 2-formyl phénoxy acétique (12,7 mmoles) sont placés en solution dans 50 ml de CH2C12 sous argon à l'abri de l'humidité. Un bain de glace maintient la température du milieu réactionnel à 0 C, puis sont introduits l ml de DMF et 1,78 g de chlorure d'oxalyle (14 mmoles) dans 5 ml de CH2C12 goutte à goutte. Le milieu est agité 2h à cette température.Cette solution est alors introduite goutte à goutte dans le milieu réactionnel d'un second tricol de 250 ml dans lequel sont placés 1,5 g d'étoposide (2,55 mmoles), 2,1 ml de pyridine dans 50 ml de CH2C12 sous agitation à 0 C. Le milieu réactionnel est laissé sous agitation 24 h avec retour à température ambiante. Le milieu réactionnel est versé sur une solution d'HCl N (l00 ml) puis la phase organique est décantée, lavée par une solution saturée de Nazi, puis séchée sur Na2SO4 et évaporée. Le résidu est chromatographié sur SiO2 et élué par un mélange éther de pétrole / AcOEt: 60/40 puis 50/50 pour obtenir 710 mg (Rd 25%) de dérivé triacylé qui est cristallisé dans l'éther isopropylique.
Différents gènes, appelés oncogènes et gènes suppresseurs, sont impliqués dans le contrôle de la division cellulaire. Parmi ceuxci, les gènes ras, et leurs produits généralement désignés protéines p21, jouent un rôle clé dans le contrôle de la prolifération cellulaire chez tous les organismes eucaryotes où ils ont été recherchés. Notamment, il a été montré que certaines modifications spécifiques de ces protéines leur font perdre leur contrôle normal et les conduisent à devenir oncogénique. Ainsi, un grand nombre de tumeurs humaines ont été associées à la présence de gènes ras modifiés, et en particulier de gènes ras possédant des mutations ponctuelles, le plus souvent sur les positions 12, 13 et 61. De même, une surexpression des protéines p21 peut conduire à un dérèglement de la prolifération cellulaire.La compréhension du rôle exact de ces protéines p21 dans les cellules, et la mise au point de méthodes permettant d'inhiber leur activité dans les cellules tumorales constituent donc un enjeu majeur pour l'approche thérapeutique de la cancérogénèse.
Une des approches proposées dans l'art antérieur pour inhiber l'activité des oncogènes ras réside dans l'utilisation d'oligonucléotides antisens. La régulation de l'expression de gènes-cible au moyen d'oligonucléotides antisens constitue en effet une approche thérapeutique en développement croissant Cette approche repose sur la capacité des oligonucléotides à s'hybrider spécifiquement à des régions complémentaires d'un acide nucléique, et à inhiber ainsi spécifiquement ltexpfesson de gènes déterminés. Cette inhibition peut intervenir soit au niveau traductiannel (oligonucléotide anti-sens) soit au niveau transcriptionnel (oligonucléotide anti-gène).
Plus particulièrement, les acides nucléiques anti-sens sont des séquences nucléiques capables de s'hybrider sélectivement avec des ARNs messager cellulaires cible, pour inhiber leur traduction en protéine. Ces oligonucléotides forment avec l'ARNm cible, de manière locale, des régions double-brin, de type ARN/ARNm ou même ADN/ARNm, par interaction de type Watson-Crick classique. n peut s'agir par exemple d'oligonucléotides synthétiques, de petite taille, complémentaires d'ARNm cellulaires, et qui sont introduits dans les cellulesìble. De tels oligonucléotides ont par exemple été décrits dans le brevet nO EP 92 574. ll peut également s'agir de gènes anti-sens dont l'expression dans la cellule-cible génère des ARN complémentaires d'ARNm cellulaires. De tels gènes ont par exemple été décrits dans le brevet n" EP 140 308.
Cependant l'utilisation in vivo d'acides nucléiques antisens dirigés contre les gènes ras se heurte à un certain nombre de difficultés qui limitent jusqu'à aujoutdhui leur exploitation thérapeutique. Tout d'abord, les acides nucléiques présentent une grande sensibilité à la dégradation par des enzymes de l'organisme, telles que les nucléases, ce qui implique l'emploi de doses importantes. De plus, ils ont une faible pénétration dans certains types cellulaires et une distribution intracellulaire souvent inadéquate, ce qui les rend sans effet thérapeutique. Enfin, il est important de pouvoir disposer de séquences suffisament sélectives et stables pour obtenir un effet spécifique sans altérer d'autres fonctions cellulaires.
Pour tenter de résoudre certains de ces problèmes, il a été proposé de modifier chimiquement le squelette phosphodiester des acides nucléiques, pour donner lieu à de nouvelles classes d'oligonucléotides artificiels tels que les oligonucléotides phosphonates, phosphotriesters, phosphoramidates et phosphorothioates qui sont décrits, par exemple, dans la demande de brevet W094/08003. Toutefois, si certains de ces composés modifiés présentent une bonne résistance aux nucléases, leur pouvoir de pénétration et de distribution dans les différents compartiments cellulaires reste très faible et ils présentent certains effets secondaires liés à la présence de motifs non-naturels dans leur structure.
La présente invention offre une solution particulièrement avantageuse à ces problèmes. La présente invention fournit en effet de nouvelles compositions contenant des acides nucléiques antisens présentant une résistance élevée aux nucléases, une bonne pénétration cellulaire suivie d'une répartition appropriée dans les cellules, une très haute sélectivité vis-à-vis de leur cible, et formant des complexes particulièrement stables avec leur cibles.
Un premier objet de la présente invention réside dans une composition comprenant des acides nucléiques simple-brin de 8 à 13 nucléotides, complémentaires d'une région d'un ARNm d'un oncogène ras humain portant une mutation ponctuelle, adsorbés, inclus ou encapsulés dans des nanoparticules.
De manière surprenante, la demanderesse a maintenant montré qu'il était possible d'obtenir in vivo des effets thérapeutiques importants et sélectifs en utilisant des acides nucléiques antisens courts, non modifiés chimiquement et adsorbés dans des nanoparticules.
Les acides nucléiques utilisés dans le cadre de la présente invention sont des acides nucléiques naturels, c'est-à-dire non modifiés chimiquements. La demanderesse a en effet montré que l'utilisation de nanoparticules permettait de prolonger la durée de vie et la pénétration des acides nucléiques naturels. Cette caractéristique de l'invention est particulièrement avantageuse puisqu'elle permet d'éviter tous les inconvénients liés aux acides nucléiques modifiés chimiquement tels que les effets secondaires, les effets immunogènes, l'absence de biodégradabilité, la présence de plusieurs isomères en mélange, etc. Les composition selon l'invention sont constituées de produits naturels, métabolisables en monomères naturels, et de structure définie.De plus, ils sont également plus avantageux que les acides nucléiques artificiels, compte tenu de leur simplicité d'obtention et de leur faible prix de revient.
Les acides nucléiques utilisés dans le cadre de la présente invention ont une longueur comprise entre 8 et 13 nucléotides. Contrairement à la ce que l'on pouvait attendre, la demanderesse a en effet montré qu'il était plus avantageux pour obtenir un effet sélectif combiné à une bonne stabilité, d'utiliser des oligonucléoddes relativement courts. Comme illustré dans les exemples, la sélectivité de l'acide nucléique antisens anti-ras diminue dès que l'oligonucléotide possède une longueur supérieure à 14 bases. Il est donc particulièrement important d'utiliser des acides nucléiques de taille inférieure à 14 bases. Préférentiellement, les acides nucléiques utilisés dans le cadre de la présente invention ont une longueur comprise entre 10 et 13 nucléotides. Des résultats particulièrement avantageux ont été obtenus avec des acides nucléiques de 12 nucléotides. A titre d'exemple, on peut citer l'acide nucléique de séquences SEQ ID n" 10 qui possède des propriétés tout à fait remarquables.
Dans un mode de réalisation particulièrement préféré de l'invention, les acides nucléiques utilisés sont choisis de sorte que la mutation ponctuelle ciblée sur l'oncogène ras soit localisée au centre de la région complémentaire. La danandaesse a en effet montré qu'il était particulièrement avantageux que l'acide nucléique antisens utilisé soit centré autour de la mutation ciblée. Comme illustré dans les exemples, lorsque l'acide nucléique est centré sur la mutation, une inhibition sélective de 1004b est obtenue, alors que celle-ci n'est que de 50% lorsque la mutation est décalée seulement de 2 bases.Ces résultats particulièrement surprenants pm1 pour une région cible donnée, de préparer des acides nucléiques antiseus beaucoup plus efficaces.
Comme indiqué ci-avant, les compositions selon l'invention comprennent des acides nucléiques antisens particuliers adsorbés, inclus ou encapsulés dans des nanoparticules. La demanderesse a en effet montré que l'emploi de nanoparticules permettait d'augmenter considérablement l'effet thérapeutique des acides nucléiques antisens anti-ras. Comme indiqué dans les exemples, l'activité des compositions selon l'invention est 100 fois supérieure à l'activité de l'acide nucléique seul.
Les nanoparticules utilisables dans le cadre de la présente invention peuvent être toute particule de petite dimension, généralement inférieure à 500 nm, coostituée de polymère(s) biocompatible(s), capable de transporter ou de vectoriser un principe actif dans les cellules ou dans la circulation sanguine. PréférentiellemeS, les nanoparticules selon l'invention sont constituées par des polymères comportant une majorité de motifs dégradables tels que l'acide polylactique, éventuellement copolymérisé à du polyéthylène glycol, ou les cyanoacrylates d'alkyle. D'autres polymères utilisables dans la réalisation de nanoparticules ont été décrits dans Fart antérieur (voir par exemple EP 275 796 et EP 520 889).
Dans un mode préféré de mise en oeuvre de l'invention, on utilise des nanoparticules constituées de polymères de cyanoacrylates d'alkyle (telles que décrits dans le brevet européen EP 0 007 895 et le brevet français 8 08172) ou de polymères de l'acide lactique ou de copolymères de l'acide lactique et de l'acide glycolique (telles que décrites par G. Spenlehauer et coll., J. Control. Release, (1988), Z, 217229).
Les nanoparticules selon l'invention possèdent généralement un diamètre moyen de l'ordre de 50 à 500 nanomètres. De préférence, les nanoparticules utilisées dans le cadre de la présente invention ont un diamètre moyen de l'ordre de 200 nanomètres.
D'un intérêt tout particulier sont les nanoparticules obtenues par polymérisation des cyanoacrylates de méthyle, d'éthyle, d'isobutyle ou d'isohexyle ou celles obtenues par copolymérisation de l'acide lactique et de l'acide glycolique.
dentel, de leur extrémité de fixation, de la liaison d'entraînement avec la transmission, ce qui les protège
bien mieux contre leur perte. La structure en forme de cro-
chet à bec de la pièce de renforcement combinée à une butée
de verrouillage solidaire du boîtier, prévue dans le pro-
longement de la trajectoire, assure une protection particu-
lièrement efficace contre la perte ou contre l'accident provoqué par le décrochage de lames de scie dépassant leur course Suivant d'autres caractéristiques avantageuses de l'invention: - la zone sert à définir la solidité de l'extrémité de fixation de la lame de scie et forme un point de rupture de consigne au niveau de la découpe d'accrochage;
- la zone forme un crochet de butée et en com-
mun avec l'une des cames de verrouillage solidaire du boî-
tier, prévue dans sa trajectoire, une protection contre la perte; - au niveau de l'extrémité de fixation de la lame de scie, du côté opposé à celui de la découpe d'accrochage elle comporte une zone dépassant du côté denté et servant de pièce de renforcement; - la zone dépassant du côté denté présente un contour en forme de crochet; - caractérisée en ce que la zone constitue un
crochet d'accrochage venant contre une butée de ver-
rouillage solidaire du boîtier dans la trajectoire de la zone pour servir de protection contre la perte; - la zone forme une zone de rupture de consigne
au niveau de la découpe d'accrochage à l'extrémité de fixa-
tion) de la lame de scie.
Dessins La présente invention sera décrite ci-après de manière plus détaillée à l'aide d'exemples de réalisation
représentés schématiquement dans les dessins dans les-
quels: - la figure 1 est une vue en perspective d'une scie alternative selon l'invention, - la figure 2 est une vue en coupe du sabre équipé des lames de scie selon l'invention, - la figure 3 est une vue de côté du sabre et des lames de scie selon l'invention, - la figure 4 est une vue de côté d'un exemple de réalisation d'une seule lame de scie selon l'invention, - la figure 5 est une vue de dessous de la lame de scie selon la figure 4, - la figure 6 est une vue à échelle agrandie
a) préparation de la 4,4'-dicarboxy-2,2'-bipyridine 2.
La 4.4'-diméthyl-2,2' -bipyridine (64,0 mmol ; 12,0 g) est dissoute dans 100 ml d'acide sulfurique concentré. La solution est refroidie à OOC et l'oxyde de chrome (39,0 g ; 6 éq.) est ajouté par petites portions durant 1 heure. Le mélange bleu-vert est chauffé à 75 C pendant 4 heures, puis agite une nuit a température ambiante. La solution est versee dans un mélange eau-glace (100 ml), puis filtrée sur verre fritté. Après un lavage a l'eau (SxS0 ml), le précipité jaune clair est dissous dans 50 ml d'une solution de KOH 1N jusqu'à ce que la solution devienne basique (formation du dicarboxylate de potassium).
Après filtration sur célite, le filtrat est acidifié par une solution d'HCl 1N (50 mi). Le diacide précipité est lavé à l'eau (3x50 ml) : obtient ainsi 14,5 g de 2 (Rdt : 92,7%).
CCM : Rf 0.08 (CH2Cl2-EtOAc : 9-1) ; Rf 0,75 (CHCl3 MeOH-AcOH : 14-6-2) ; RMN 1H (300 MHz, CF3COOD) : # 9,17 (s, 2 H, H3, H3), 9, 07 (d, 2 H, J5-6=J5'-6'= 5,3 Hz, H6, H62), 8,49 (d, 2 H, J5-6=J5i-6'= 5,3 Hz, Hs, H5') RMN 13C (75,47 MHz, CF3COOD+D2O) : 145,96 (2C, C7, C7'), 125,89 (2C, C2, C2'), 121,65 (2C, C6, C6'), 119,25 (2C, C4, C4'), 111, 72 (2C, C5, C5,), 107,92 (2C, C3, C3') ; IR (KBr) : 3114 #(C-H) arom, 2457 u(O-H) acide, 1722 # (C=O) acide arom, 1604-1563 #(C=N) et #(C=C) bipy, 766 #(C-H) arom ; W (NaOH 0,1 N, 0,0171g/l) : 216 (19736), 293 (11782) SM (70eV/DCI/NH3/ intensité %) : m/z : 245 (100 ; [M+1]+), 201 (25,76 ; [M-CO2]+) SMHR : masse théorique : 244,04840 masse trouvée 244,0474 ; Microanalyse pour C12H8N2O4.1/2H2O : Calc. : C, 56,92 ; H, 3,58 ; N, 11,04 ; Exp. : C, 57,26 ; H, 3,77 ; N, 11,20.
b) préparation du 4-t-butyldiméthylsilyloxybutanol 3 .
NaH à 60% en dispersion dans l'huile (44,8 mmol ; 1,792 g) est mis en suspension dans du THF anhydre (88 ml). Le 1,4-butanediol (44,8 mmol ; 4,0 ml) est ajouté goutte à goutte, puis le milieu est agité pendant 45 minutes à température ambiante. Un précipité blanc se forme alors. Après addition du chlorure de tbutyldiméthylsilyle (44,8 mmol ; 6,752 g), le mélange est agité vivement pendant 45 minutes. La solution est versée dans 700 ml d'éther, lavée par 240 ml de K2CO3 à 108 et 240 ml de NaCl. La phase organique décantée est séchée sur Na2SO4, filtrée puis concentrée sous vide.