INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Les séquences nécessaires à la réplication et/ou la propagation sont par exemple la région El, la région E4 ou la région L5. Plus particulièrement, s'agissant de la région E4, les gènes importants sont les gènes ORF3 et ORF6.
La demanderesse a plus particulièrement montré qu'il est possible de déplacer une fonction essentielle à la réplication ou à la propagation virale sans affecter les propriétés de I'adénovirus comme vecteur de thérapie génique, à savoir son haut pouvoir d'infection des cellules, notamment humaines, et sa capacité à transférer efficacement une gène d'intérêt dans lesdites cellules. Ainsi, dans un mode préféré, la présente invention a pour objet des adénovirus recombinants dont une région essentielle à la réplication et/ou à la propagation virale est présente dans une position génomique autre que sa position d'origine. Avantageusement, cette région se situe au niveau ou à proximité d'une autre région génomique rendue non fonctionnelle.
Les vecteurs de l'invention sont particulièrement avantageux puisqu'ils permettent l'incorporation de gènes d'intérêt de grande taille et qu'ils peuvent être produits à des titres élevés, sans production de particule virale réplicative contaminante.
Dans les vecteurs de l'invention, la région El ou tout autre région peut être inactivée ou rendue non fonctionnelle par différentes techniques connues de l'homme du métier, et notamment par suppression, substitution, délétion, et/ou addition d'une ou plusieurs bases. De telles modifications peuvent être obtenues in vitro (sur de I'ADN isolé) ou in situ, par exemple, au moyen des techniques du génie génétique, ou encore par traitement au moyen d'agents mutagènes. La ou lesdites modifications génétiques peuvent être localisées dans une partie codante de la région, ou en dehors d'une région codante, et par exemple dans les régions responsables de l'expression et/ou de la régulation transcriptionelle desdits gènes.L'inactivation peut donc se manifester par la production de protéines inactives en raison de modifications structurales ou conformationelles, par l'absence de production, par la production de protéines ayant une activité altérée, ou encore par la production de protéines naturelles à un niveau atténué ou selon un mode de régulation désiré.
Parmi les agents mutagènes utilisables pour l'inactivation, on peut citer par exemple les agents physiques tels que les rayonnements énergétiques (rayons X, ", ultra violet, etc..), ou les agents chimiques capables de réagir avec différents groupements fonctionnels des bases de l'ADN, et par exemple les agents alkylants [éthylméthane sulfonate (EMS), N-méthyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, Nnitroquinoléine-l-oxyde (NQO)], les agents bialkylants, les agents intercalants, etc.
Les modifications génétiques peuvent également être obtenues par disruption génique, par exemple selon le protocole initialement décrit par Rothstein [Meth.
Enzymol. 101 (1983) 202]. Dans ce cas, tout ou partie de la séquence codante est préférentiellement perturbée pour permettre le remplacement, par recombinaison homologue, de la séquence génomique par une séquence non fonctionnelle ou mutante.
Préférentiellement, dans les adénovirus de l'invention, la région concernée est inactivée par mutation et/ou délétion d'une ou de plusieurs bases. Encore plus préférentiellement, elle est inactivée par délétion totale ou partielle.
Plus particulièrement, on entend par délétion toute suppression de tout ou partie du gène considéré. Il peut s'agir notamment de tout ou partie de la région codante dudit gène, et/ou de tout ou partie de la région promotrice de la transcription dudit gène. La suppression peut être effectuée par digestion au moyen d'enzymes de restriction appropriées, puis ligature, selon les techniques classiques de biologie moléculaire, ainsi qu'illustré dans les exemples.
On voit sur la figure 4 un petit évidement conique, dans cette paroi, sur l'axe Y, en regard de la cible, pour éviter une atténuation trop forte des rayons X émis par la cible.
Deux canalisations 82, dont une seule est visible sur la figure 4, sont prévues, dans l'épaisseur de la paroi de la structure accélératrice 16, pour la circulation d'un fluide de réfrigération, par exemple de l'eau.
Ce fluide permet le refroidissement de l'extrémité 70 de la structure 16 et notamment de la cible 3 qui s'y trouve.
Chacune de ces deux canalisations a la forme d'un U comme on le voit sur la figure 4.
De plus, ces deux canalisations sont parallèles et symétriques l'une de l'autre par rapport à l'axe Y.
Dans le cas de la figure 5, une seule canalisation 84 est prévue pour le refroidissement de l'extrémité 70 de la structure accélératrice 16.
Cette canalisation 84 se trouve à la périphérie de la structure 16 et a la forme d'un U ayant l'axe Y comme axe de symétrie, comme on le voit sur la figure 5.
La cible 3, par exemple en tungstène, est fixée dans la canalisation 84 en face du perçage 80, d'où un meilleur refroidissement de cette cible que dans le cas de la figure 4.
La structure 16 comprend aussi une enveloppe externe étanche 86, par exemple en acier inoxydable, qui renferme toutes les cavités résonnantes et la canalisation 84.
La figure 6 illustre de façon schématique et partielle un appareil conforme à l'invention, dans lequel la source de rayons X de haute énergie de la figure 3, comprenant l'accélérateur d'électrons 2 et la cible 3, est remplaçable par une autre source 88 de rayons X de basse énergie, servant à l'examen du patient 10 par imagerie tridimensionnelle de type morphomètre.
Dans ce cas, on utilise les moyens de détection 12 en association avec la source 88.
Dans le cas de la figure 6, la partie 66 de l'élément 74 est coupée en deux morceaux 66a et 66b suivant un plan perpendiculaire à l'axe Y.
Le morceau 66a entoure l'extrémité 70 de la structure accélératrice 16.
Le morceau 66b contient la cible 3.
Comme on le voit sur la figure 6, la partie 68 de l'élément 64 s'arrête au niveau du morceau 66a (et n'entoure donc pas le morceau 66b).
Des moyens symbolisés par des flèches F permettent un déplacement en translation du morceau 66b par rapport au morceau 66a, perpendiculairement à l'axe Y.
La présente invention concerne enfin les compositions pharmaceutiques comprenant au moins un composé de formule générale I selon l'invention, et un excipient approprié.
Les compositions pharmaceutiques peuvent être adaptée pour l'administration par voie injectable ou par voie orale sous forme de capsule, de gélules, de comprimés, à la posologie de 2 à 200 mg/m2 par 24h par voie injectable et de 5 à 400 mg/m2 par 24 h pour la voie orale.
PROCEDE DE VALORISATION DE PULPES DE BETTERAVE, EN PARTICULIER POUR PREPARER DES COLLES, DES PRODUITS D'ENDUCTION, OU DES FILMS ADHESIFS REVERSIBLES A l'EAU L'invention concerne un procédé de valorisation de pulpes de betteraves permettant d'obtenir une substance biodégradable, soluble dans l'eau, ayant un bon pouvoir collant, utilisable en particulier pour préparer des colles ou des produits d'enduction, ou des films souples adhésifs. L'invention s'étend aux applications de ladite substance biodégradable et aux procédés de préparation mis en oeuvre dans le cadre de ces applications.
Après extraction du saccharose, les pulpes de betterave constituent un résidu d'extraction qui est actuellement vendu par les industries sucrières aux formulateurs d'alimentation animale ou directement aux éleveurs en vue d'être incorporé dans les rations alimentaires d'animaux (essentiellement de ruminants).
Toutefois, ce marché est à la baisse depuis plusieurs années et il n'est plus possible d'absorber par cette voie de valorisation toute la production de pulpes de betterave.
Par ailleurs, le brevet FR-2.213.962 propose un procédé de valorisation de matières riches en pectine consistant à faire réagir lesdites matières avec un polyol en vue d'obtenir un gel qui est ensuite soumis à une processus de déshydratation pour fabriquer des produits d'enrobage ou d'emballage. Ce gel ne parait pas posséder un pouvoir collant. La pulpe de betterave est, entre autres, citée dans ce brevet comme susceptible de constituer une matière première riche en pectines. L'inconvénient majeur de ce procédé réside dans le fait qu'il nécessite l'utilisation d'un polyol (qui joue le rôle de plastifiant) : le coût d'un tel composé et de l'opération d'addition rend le procédé non rentable dans le cas de la valorisation des pulpes de betterave.
La demande de brevet EP-0.506.650 propose un matériau d'emballage obtenu par une dégradation acide à chaud de déchets végétaux, le mélange dégradé obtenu étant dilué, homogénéisé, puis amené à un pH acide déterminé (pH : 3) et traité à l'étuve pour obtenir des feuilles ; la pulpe de betterave est citée comme exemple de déchets végétaux utilisables. Une telle technique qui utilise, pour réaliser le nouveau matériau en feuilles, l'ensemble des constituants des déchets végétaux après dégradation acide, semble constituer une solution possible au problème de la valorisation des pulpes de betterave.Toutefois, ce document ne donne aucune indication sur les qualités de souplesse et de tenue au pliage des matériaux obtenus et, en l'absence d'additifs, il est probable, dans le cas des pulpes de betterave, que les matériaux fabriqués à partir desdites pulpes soient cassants, présentent de faibles performances en souplesse (en raison notamment de la présence de la fraction cellulosique) et, en tout cas, ne présentent pas de pouvoir collant : en conséquence, les applications de ces matériaux obtenus à partir de pulpes de betterave demeurent limitées ou nécessitent l'addition de tiers corps comme dans le cas précédent.
Le brevet US-4.831.127 propose un procédé de fabrication de cellulose de parenchyme (PCC) à partir notamment de pulpes de betteraves. Ce brevet décrit deux voies de traitement distinctes, soit acide combinée à un traitement mécanique intense, soit basique également combinée à un traitement mécanique intense, en vue d'extraire et de purifier les celluloses. Des hémicelluloses contenant des arabinogalactanes et des pectines sont récupérées en mélange comme sous-produit et il est proposé de les incorporer dans des gommes végétales adhésives. Toutefois, le pouvoir collant de ce sous-produit est faible ou nul et ne permet pas de l'utiliser seul comme agent collant : ce sous-produit présente une faible valeur ajoutée et sert uniquement de charge rhéologique.
La présente invention se propose de fournir un nouveau procédé de valorisation spécifiquement adapté aux pulpes de betterave pour permettre de valoriser, de façon rentable, la totalité des pulpes produites par les industries sucrières.
Un objectif de 1 invention est en particulier de fournir un procédé de valorisation des pulpes de betteraves conduisant à une substance biodégradable qui soit utilisable dans de larges applications en raison, d'une part, de son pouvoir collant élevé, réversible à l'eau, d'autre part, des propriétés de souplesse et de résistances mécaniques des produits susceptibles d'être préparés à partir de celle-ci.
Un autre objectif est de fournir un procédé conduisant à un coproduit cellulosique lui-même valorisable.
Le procédé de valorisation de pulpes de betteraves conforme à l'invention pour obtenir une substance biodégradable, soluble dans l'eau, ayant un pouvoir collant est caractérisé en ce que (a) on utilise de la pulpe de betteraves après extraction du saccharose, (b) on met ladite pulpe en présence d'une solution acide dans des conditions douces de température propres à solubiliser sélectivement la fraction pectique de ladite pulpe, (c) on sépare la phase liquide pectique de la phase solide résiduelle, dite phase solide dépectinée, (d) on met la phase solide dépectinée en présence d'une solution basique dans des conditions douces de température propres à solubiliser la fraction hémicellulosique, (e) on sépare la phase liquide hémicellulosique de la phase solide résiduelle, dite phase solide cellulosique, (f) on réalise un mélange de pectines et d'hémicelluloses à partir de la phase pectique issue de l'opération (c) et de la phase hémicellulosique issue de l'opération (e), ledit mélange constituant la substance biodégradable recherchée.
Par "conditions douces de température", , on entend une température inférieure à environ 1000 C 1100 C.
La substance biodégradable obtenue par mise en oeuvre du procédé ci-dessus défini se caractérise en ce qu'elle comprend un mélange polysaccharidique de pectines sensiblement non dégradées et d'hémicelluloses sensiblement non dégradées, en l'absence sensible de celluloses. Par "pectines sensiblement non dégradées", ou "hemicelluloses sensiblement non dégradées", on entend un composé dans lequel la fraction éventuellement dégradée représente moins de 5 % en poids. La proportion pondérale de pectines est en particulier comprise entre 25 % et 50 % dans le mélange polysaccharidique. Les expérimentations ont montré qu'une telle substance présente un fort pouvoir collant et qu'elle permet en particulier de préparer, sans additif, des colles et des produits d'enduction et des films souples biodégradables adhésifs, translucides sous faible épaisseur, réversibles à l'eau.Les colles obtenues peuvent servir pour coller des matériaux tels que papier, bois dense, métal, matériaux synthétiques, verre ou réaliser des étiquetages réversibles, en particulier étiquetage de flaconnages consignés qu'il est possible de démarquer par simple trempage. Les enductions obtenues peuvent être utilisées pour encoller des papiers peints (susceptibles d'être facilement retirées par solubilisation à l'eau) ou pour enduire des supports poreux afin d'augmenter leur étanchéité à l'air. Les films obtenus présentent des caractéristiques mécaniques qui sont adaptées pour permettre de les utiliser comme protection d'objets ou de surface ou comme produits de masquage éliminables par lavage à l'eau.
Comme le montrent les exemples fournis plus loin, la substance conforme à l'invention présente un pouvoir collant élevé, remarquable si on la compare aux substances de même type connues de l'art antérieur, en particulier au sous-produit issu du procédé décrit dans le brevet US-4.831.127. Ceci peut s'expliquer par le fait que dans ce procédé US, les pectines ou les hémicelluloses sont fortement dégradées (déméthylation ou hydrolyse) ce qui réduit ou annule leur pouvoir collant. En effet, si la voie "basique" est choisie, les pectines sont fortement dégradées dans le procédé US, tandis que ce sont les hémicelluloses qui sont fortement dégradées lorsque c'est le traitement acide qui est choisi dans les conditions de mise en oeuvre utilisées (en particulier, température comprise entre 1400 C et 2000 C), le traitement mécanique intense contribuant à cette dégradation.Au contraire, dans le procédé de l'invention, on combine deux traitements successifs doux qui permettent de séparer les pectines et les hémicelluloses sans les dégrader sensiblement : d'abord un traitement acide doux, propre à solubiliser sélectivement la fraction pectique, (sans dégradation de la fraction hémicellulosique compte tenu des conditions), ensuite un traitement basique qui ne porte que sur la fraction dépectinée et ne dégrade donc pas les pectines déjà extraites.
On a pu mettre en évidence que le pouvoir collant élevé de la substance obtenue est lié à la synergie des pectines non dégradées et des hémicelluloses non dégradées que celle-ci contient. Chaque composé non dégradé possède séparément un pouvoir collant nettement inférieur à celui du mélange (chaque composé dégradé n'ayant pratiquement pas de pouvoir collant comme déjà indiqué).
Selon un mode de mise en oeuvre préféré, on réalise le mélange de pectines et d'hémicelluloses à partir de la phase pectique liquide et de la phase hémicellulosique liquide, en mélangeant les deux phases liquides, en traitant le mélange liquide obtenu de façon à précipiter les composés en solution, et en extrayant le précipité obtenu.
Ce mode de mise en oeuvre présente l'avantage d'être très simple puisqu'il évite d'extraire séparément les composés pectiques et hémicellulosiques ; de plus, l'acidité d'une des solutions et la basicité de l'autre contribuent à la neutralisation du mélange obtenu avant précipitation : le cas échéant un ajustement de pH peut être réalisé de façon que celui-ci soit sensiblement compris entre 5 et 7.
De préférence le mélange liquide est concentré avant précipitation, cette dernière étant obtenue par addition d'un alcool en particulier d'éthanol.
Selon un autre mode de mise en oeuvre, il est possible de réaliser le mélange de pectines et d'hémicelluloses : en traitant la phase liquide pectique de façon à précipiter et extraire les pectines, en traitant la phase liquide hémicellulosique de façon à précipiter et extraire les hémicelluloses, et en mélangeant les extraits ainsi obtenus de pectines et d'hémicelluloses.
Il est nécessaire, dans ce cas, de neutraliser la phase liquide hémicellulosique avant précipitation (pH porté à une valeur sensiblement comprise entre 5 et 7). Chaque phase liquide est de préférence concentrée avant précipitation, cette dernière étant obtenue, comme dans le premier mode de mise en oeuvre, par addition d'un alcool, en particulier d'éthanol. Ce mode de mise en oeuvre, plus complexe, peut permettre dans certains cas de réaliser avec plus de souplesse des formulations différentes du mélange pectines/hémicelluloses.
Le procédé de l'invention conduit à l'issue de l'opération de séparation (e) à une phase solide cellulosique qui peut elle-même être valorisée par des procédés connus de pressage (thermopressage ou pressage à froid), le cas échéant après remise en suspension. Par exemple, il est possible de fabriquer avec ce coproduit, des objets biodégradables qui sont généralement fabriqués à partir de tourbe ou de cellulose de bois, tels que pots ou godets de repiquage, supports divisés de culture hors sol, barquettes de conditionnement de produits fragiles, plateaux jetables ..... Une telle covalorisation accroît la rentabilité du procédé de l'invention. Bien entendu, la fraction cellulosique obtenue peut, le cas échéant, être utilisée dans d'autres applications.
L'opération de traitement acide (b) qui permet de solubiliser sélectivement la fraction pectique s'opère dans des conditions douces de température en particulier au moyen d'une solution aqueuse d'acide fort, portée à une température sensiblement comprise entre 500 C et 900 C. Le pH du bain est avantageusement ajusté à une valeur sensiblement comprise entre 1 et 2, la durée de traitement étant prévue pour solubiliser au moins 70 % des pectines présentes. De préférence, le rapport pondéral de dilution liquide/solide (matière sèche) est ajusté à une valeur comprise entre 8 et 30 au cours du traitement acide.
Une telle mise en oeuvre bénéficie d'une bonne sélectivité et solubilise les pectines sans hydrolyse sensible des hémicelluloses (moins de 5 % d'hémicelluloses dégradées).
L'opération de traitement basique (d) s'opère également en conditions douces. La phase solide dépectinée peut en particulier être mise en présence d'une solution de soude ou de potasse telle que le nombre de milli-équivalents molaires OH par gramme de matières solides soit compris entre 4 et 38 g-1, le rapport pondéral de dilution liquide/solide étant de préférence compris entre 8 et 30. La température de ce traitement basique est avantageusement ajustée à une valeur comprise entre 400 C et 900 C. En pratique, le traitement basique sera poursuivi pendant une durée permettant de solubiliser au moins 70 % des hémicelluloses présentes.
Le procédé de l'invention donne de bons résultats lorsque le taux de saccharose résiduel des pulpes utilisées est faible et en pratique inférieur à 3 % en poids. En général dans les industries sucrières, le taux résiduel des pulpes de betterave est de l'ordre de 2 %, de sorte que le procédé de l'invention peut être mis en oeuvre directement après l'extraction du saccharose sans préparation préalable spécifique.
Les opérations de séparation précitées des phases liquide et solide peuvent être réalisées de façon classique par une décantation et un pressage, une filtration sous pression, un essorage, ... ou par tout autre procédé connu.
La substance obtenue par mise en oeuvre du procédé de l'invention peut être utilisée dans toutes les applications où les propriétés suivantes sont recherchées fort pouvoir collant réversible à l'eau, biodégradabilité, solubilité à l'eau, caractère filmogène.
En particulier, cette substance permet de fabriquer soit des colles, notamment en ajustant le taux d'hydratation pondéral du mélange (eau/matière sèche) à une valeur sensiblement comprise entre 14 et 25 pour obtenir une solution de viscosité appropriée, soit des produits d'enduction, notamment en ajustant le taux d'hydratation pondéral à une valeur sensiblement comprise entre 4 et 15 pour obtenir une composition pâteuse.
La substance conforme à l'invention permet également de fabriquer des films souples, adhésifs, notamment en ajustant le taux d'hydratation pondéral du mélange obtenu (eau/matière sèche) sensiblement à une valeur comprise entre 4 et 25, en étalant le produit obtenu sur une surface en vue de former une couche et en réalisant un séchage partiel de ladite couche jusqu'à un taux d'hydratation pondéral sensiblement compris entre 0,1 et 0,2.
L'invention est illustrée par les exemples de mise en oeuvre qui suivent EXEMPLE 1 : FABRICATION D'UNE SUBSTANCE BIODEGRADABLE PAR MELANGE DE PECTINES ET D'HEMICELLULOSES Dans cet exemple, la matière première utilisée est de la pulpe de betterave obtenue après extraction du saccharose (teneur en saccharose résiduel - Obtention des Pectines : 68 g de matière sèche de pulpes de betteraves déshydratées sont introduits dans un réacteur contenant 1,5 litre d'eau et 4,6 g d'acide sulfurique (pH 1,5). L'ensemble est maintenu sous agitation à 700 C pendant 2 heures. La phase liquide et la phase solide sont ensuite séparées par filtration.La phase liquide pectique est concentrée par élimination de 50 % d'eau, par évaporation sous pression réduite (20 mm Hg) à 400 C. Les pectines contenues dans le concentrat sont ensuite précipitées par ajout de 3 volumes d'éthanol par volume de concentrat. Après une période de repos de 12 heures à 40 C, le gâteau pectique séparé de la phase liquide par filtration, est séché à l'étuve ventilée à 400 C et broyé.
Selon ce procédé, le rendement en poudre pectique est de 13,5 % par rapport à la matière sèche de pulpes de betteraves.
Ces différents antisens ont été incubés en présence d'extraits nucléaires de cellules HeLa, et leur capacité à hybrider avec le messager de ras muté a été déterminée par clivage par la RNase H comme décrit dans les matériels et méthode.
Les résultats obtenus sont présentés sur la figure 1B. Ils montrent que les antisens AS-Val et (b) produisent déjà une réponse maximale. Ils montrent également qu'un signal non-spécifique important apparait dès que la longueur de l'antisens dépasse 13 mer. Ces résultats montrent donc que le meilleur rapport sjélectivité/affinité est obtenu avec les antisens de 12 ou 13 mer.
1.2. Effet de la position Cet exemple montre que, en plus de la longueur, la position de l'antisens par rapport à sa séquence cible est importante.
Les antisens 12-mer suivants ont été synthétisés: - 5'-TGCCCACACCGA (roi : SEQ ID n" 7) - 5'-GCCCACACCGAC (R2 : SEQ ID n" 8) - 5'-CCACACCGACGG (R3 : SEQ ID nO 9) - 5'-CACACCGACGGC (R4: SEQ ID nO 1) - 5'-CACCGACGGCGC (R5 : SEQ ID n" 10) - 5'-CCGACGGCGCCC (R6 : SEQ ID n" 11) - 5'-GACGGCGCCCAC (R7 : SEQ ID nO 12) - 5'-ACGGCGCCCACC (R8: SEQ ID n" 13) La position de ces antisens vis-à-vis de la séquence cible (SEQ ID nO 6) est présentée sur la figure 1C.Ces différents antisens ont été incubés en présence d'extraits nucléaires de cellules HeLa, et leur capacité à hybrider avec le messager de ras muté a été déterminée par clivage par la RNase H comme décrit dans les matériels et méthodes. Les résultats obtenus sont présentés sur la figure 1D. Ils montrent que les antisens centrés autour de la région mutée de la séquence cible (R4 et R5) produisent une réponse maximale.
Exemple 2: Inhibition de la croissance des cellules HBLlOOrasl (figure 2) Cet exemple démontre les propriétés d'inhibition tout à fait remarquables de l'antisens encapsulé selon l'invention.