INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Une autre approche pour restaurer les fonctions de la protéine p53 sauvage est basée sur la réversion des protéines mutées endogènes vers un phénotype sauvage, c'est-à-dire présentant les propriétés suppresseur de tumeur et apoptotiques de la p53 sauvage. Cette approche découle de la mise en évidence que les pertes de fonction des mutants de p53 sont dues à un changement conformationnel de la protéine induit par la/les mutations. A cet égard, la demande W094/12202 montre qu'un anticorps monoclonal particulier, désigné pAb421, dirigé contre la protéine p53, est capable de restaurer à une certaine classe de mutants fréquemment représentés dans les cancers humains la fonction de liaison à l'ADN in vitro. L'utilisation de ce type de composés présente cependant des inconvénients importants, liés notamment à la quantité élevée d'anticorps nécessaire (et donc aux problèmes de production/purification associés) et à leur faible pénétration intracellulaire.
La présente demande décrit une approche plus performante pour restaurer les propriétés sauvage d'un mutant de la protéine p53. La présente demande décrit en particulier la construction de ligands particulièrement spécifiques de la protéine p53, ayant des propriétés avantageuses de restauration des fonctions p53 sauvage. Plus particulièrement, la présente demande décrit la construction d'anticorps simple chaine (ScFv) spécifiques de la protéine p53, et notamment lt molécule 11D3. La présente demande montre en outre que les ScFv sont capables de reconnaitre p53, d'être exprimés efficacement au sein d'une cellule tumorale et de réactiver une partie de la fonction transactivatrice d'une certaine classe de mutants de p53.
Par rapport aux méthodes de l'art antérieur, cette molécule présente des avantages importants et notamment la possibilité d'être exprimée in situ dans une cellule tumorale, en quantités importantes. Les résultats présentés ci-après sont d'autant plus inattendus que des pertes d'affinité avaient souvent été observées entre un anticorps classique et un ScFv. En outre, la demanderesse a montré qu'il est possible d'exprimer les ScFv dans les compartiments intracellulaires appropriés, permettant d'obtenir une activité biologique optimale.
Un premier objet de l'invention réside donc dans un procédé pour restaurer dans des cellules présentant une protéine p53 mutée une activité de transactivation p53-dépendante comprenant l'introduction dans ladite cellule d'un anticorps simple chaine capable de lier spécifiquement la protéine p53 mutée. Avantageusement, le procédé de l'invention comprend l'introduction dans la cellule d'un acide nucléique comprenant une séquence codant pour ledit anticorps simple chaine sous le contrôle d'un promoteur fonctionnel dans la cellule. Un autre aspect de l'invention concerne l'utilisation d'un anticorps simple chaine chaine capable de lier spécifiquement une protéine p53 mutée pour modifier la conformation de ladite protéine. L'invention concerne également l'utilisation d'un anticorps simple chaine capable de lier spécifiquement une protéine p53 mutée pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement des désordres hyperprolifératifs dans lesquels une protéine p53 mutée est impliquée, ainsi que l'utilisation d'un acide nucléique codant pour un anticorps simple chaine capable de lier spécifiquement une protéine p53 mutée pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement des désordres hyperprolifératifs dans lesquels une protéine p53 mutée est impliquée.
Le procédé de l'invention repose donc en partie sur la construction, la vectorisation et l'introduction dans des cellules d'anticorps simple chaine capables de lier spécifiquement une protéine p53 mutée. Les anticorps simple-chaine (ScFv) sont constitués essentiellement d'une région VH liée à une région VL par un bras. La construction de ScFv et des séquences d'acides nucléiques codant pour de tels anticorps modifiés a été décrite par exemple dans le brevet US4,946,778 ou dans les demandes WO94/02610, W094/29446 incorporées à la présente par référence.
La présente demande décrit plus particulièrement la création d'une banque d'hybr-nres produisant des anticorps dirigés contre p53, et la construction, à partir de cette banque, de ScFv correspondants. Elle décrit également le clonage des acides nucléiques correspondants dans des vecteurs d'expression et leur transfert dans des cellules. Elle montre également que ce transfert permet, in vivo, de restaurer efficacement l'activité de liaison à l'ADN de mutants de p53, ainsi que leur activité de transactivateur.
Plus particulièrement, le procédé de l'invention met en oeuvre des ScFv capables de lier spécifiquement un épitope présent dans la région Cterminale de p53, qui porte le domaine d'oligomérisation et le domaine de régulation. A cet égard, la présente demande décrit également un test permettant de sélectionner les ScFv possèdant cette propriété, par technique ELISA.
Encore plus préférentiellement, les ScFv utilisés dans le procédé de l'invention sont capables de lier spécifiquement un épitope présent dans la région C-terminale de p53 comprise entre les résidus 320-393. A cet égard, la demande décrit à titre d'exemple particulier la construction et l'expression du ScFv ScFv421 de séquence SEQ ID n" i et du 11 D3 de séquence SEQ ID n" 2.
Un autre désavantage des structures de type SOI et des dispositifs réalisés à partir de ces structures est lié à leur coût.
Exposé de l'invention La présente invention a pour but de proposer une structure avec une partie isolée électriquement dont la réalisation est peu coûteuse et qui ne présente pas les limitations évoquées ci-dessus.
Un autre tut est également de proposer une structure avec une partie isolée ne subissant quasiment pas d'effets de capacité parasite, et utilisable pour la réalisation d'un capteur. Un but de l'invention est également de proposer un procédé de réalisation d'une telle structure.
Pour atteindre les buts mentionnés ci-dessus, l'invention a plus précisément pour objet une structure comportant une première partie et au moins une deuxième partie isolée électriquement de la première partie! les première et deuxième parties étant chacune formée dans la même plaque de matériau, lesdites première et deuxième parties ayant chacune sensiblement une même épaisseur, s'étendant sensiblement dans un même plan, et présentant au moins un bord mutuellement adjacent, et, les bords adjacents des première et deuxième parties étant séparés par un espacement. Conformément à l'invention, la structure comporte en outre au moins un joint de matériau isolant, disposé dans l'espacement, pour rendre les première et deuxième parties solidaires, le joint étant en contact mécanique avec au moins une portion de chaque plaque et s'étendant sensiblement sur toute l'épaisseur des plaques.
Le joint de matériau isolant a une fonction double. Une première fonction est de fournir une isolation électrique entre les première et deuxième parties. On peut noter que la qualité de l'isolation électrique peut être adaptée en jouant sur la largeur de l'espacement, et donc la largeur du joint, ainsi que sur le matériau utilisé pour former le joint. Une deuxième fonction du joint isolant est de maintenir la cohésion de la structure en rendant les première et deuxième parties solidaires. Le joint permet en particulier de maintenir les plaques avec leurs faces principales sensiblement dans un meme plan.
Bien que la structure ainsi obtenue puisse être associée à une structure de support adaptée, la deuxième partie isolée peut être suffisamment éloignée du support ou séparée de la première partie pour éviter des influences capacitives, si celles-ci ne sont pas souhaitées.
Dans d'autres applications, au contraire, les bords adjacents des première et deuxième parties peuvent être configurés de telle manière et disposées suffisamment proches pour former une capacité variable.
La La mesure de cette capacité et de ses variations, permet alors de déterminer un éventuel déplacement entre les première et deuxième parties. Cet aspect, permettant la réalisation d'un accéléromètre ou d'un actionneur, est exposé plus en détail dans la suite de la description.
Selon un aspect avantageux, les première et deuxième parties peuvent présenter des formes complémentaires. L'espacement entre les parties est alors sensiblement uniforme.
Les première et deuxième parties peuvent être simplement des plaques juxtaposées, obtenues en découpant un substrat en deux parties selon une ligne.
Cependant, selon une variante, la deuxième partie peut être une portion de plaque de matériau découpée selon un motif déterminé dans la plaque de matériau formant la première partie.
Dans la suite du texte, on ne fait référence qu'à une seule première partie et à une seule deuxième partie. I1 est toutefois possible de concevoir la structure avec une première partie et une pluralité de deuxièmes parties, isolées mutuellement et isolées de la première partie. En particulier, il est possible de découper dans les plaques de matériau formant la première partie, une pluralité de portions de plaques qui forment ainsi une pluralité de deuxièmes parties de la structure.
Selon les applications envisagées, et en particulier pour la réalisation de capteurs tels qu'un accéléromètre par exemple, ou d'un actionneur, le matériau de la plaque formant respectivement les première et deuxième parties de la structure peut être choisi non-isolant. On entend par matériau non-isolant un-matériau semi-conducteur ou conducteur.
A titre d'exemple, le matériau est choisi parmi les matériaux semi-conducteurs suivants AsGa, Si, SiC, les métaux suivants Au, W, Ti, Cr, Al, Fe, Ni, Mo et les alliages de ces métaux.
L'invention a également pour objet un procédé de réalisation d'une structure comportant une première partie et au moins une deuxième partie, coplanaire, isolée électriquement de la première partie. Le procédé comprend les étapes suivantes a) découpe d'une plaque de substrat pour définir dans la plaque une première et une deuxième parties, au moins une portion de substrat, dite de maintien, reliant les première et deuxième parties, étant préservée lors de la découpe, b) substitution d'un joint isolant de maintien, reliant au moins une portion des première et deuxième parties sur sensiblement toute leur épaisseur, à ladite portion de substrat de maintien reliant les première et deuxième parties de substrat.
On entend par substitution d'un joint isolant de maintien à la portion de substrat de maintien reliant les première et deuxième parties, soit la mise en place dudit joint et l'élimination de la portion de substrat, soit la transformation de la portion de substrat de maintien en un joint isolant.
Appeler itc hi delete 90 Sur les figures 5 et 26, lorsque l'application client particulière cesse de s'exécuter (c'est-à-dire, lorsque l'opérateur au niveau du poste de travail 10 ferme une fenêtre 12b représentant l'application client particulière), le logiciel d'Affichage avec Interaction de l'Opérateur 32d de la figure 5 en avertit le logiciel de Lancement IH-ITC 32a. En réponse, le bloc "Appeler itc~hi~Delete" 90 du logiciel de Lancement IH-ITC 32a en avertit la Structure ITC 34 et la Structure ITC 34 avertit le serveur 26c2 que l'application client particulière est fermée. En réponse, le serveur 26c2 supprime l'enregistrement d'une partie ou de tous les objets d'intérêt mémorisés dans celui-ci qui sont associés à l'application client particulière, et, ensuite, le serveur 26c2 en avertit toutes les autres applications client. En réponse, les autres applications client suppriment l'enregistrement des intérêts exprimés par l'application client particulière dans certains événements enregistrés précédemment. En résultat, les autres applications client n'enverront aucune information d'événements correspondant aux événements préalablement enregistrés à l'application client particulière.
Sur la figure 27, le code de programme réel qui correspond au logiciel de Lancement IH-ITC 32a des figures 5 et 26 est illustré.
En se reportant aux figures 28 et 29, la construction détaillée et le fonctionnement du logiciel "Envoyer Un Evénement" 32b de la figure 5 sont illustrés.
Sur la figure 28, le bloc "Envoyer Un Evénement" 32b de la figure 5 inclut deux blocs de code : (1) "Chercher Structure de Données à Envoyer" 92, et (2) "Appeler itc hi Transmit Event" 94. Chacun de ces blocs de code sera décrit individuellement.
Chercher structures de données à envoyer 92 Sur la figure 28, le bloc de code "Chercher Structure de Données à Envoyer" 92 répond à trois types différents de données d'entrée : (1) des données d'entrée résultant d'une interaction utilisateur, (2) des données d'entrée provenant d'une Base de Données, et (3) des données d'entrée provenant d'un Flux d'E/S (entrée/sortie).
Sur les figures 5 et 28, le logiciel d'Affichage avec Interaction de l'Opérateur 32d répond aux modifications qui sont apportées à une application client particulière par un opérateur assis au niveau d'un poste de travail 10 de la figure 1 en produisant des données d'entrée du type "interaction utilisateur" qui sont ensuite entrées sur le bloc de code "Chercher Structure de Données à Envoyer" 92 associé au logiciel "Envoyer Un Evénement" 32b. Par exemple, lorsque l'opérateur assis au niveau du poste de travail 10 de la figure 1 travaille avec une application client particulière, telle que représentée par l'un des affichages à fenêtres 12b de la figure 1, l'opérateur peut changer la couleur, ou la taille de police, ou il peut apporter d'autres modifications à l'application client particulière. Si ces modifications se trouvent dans la liste d'événements du bloc "Construire Liste d'Evénements ITC" 80 de la figure 26 et lorsqu'une autre application client a demandé des informations d'événements associées à ces modifications, le logiciel d'Affichage avec Interaction de l'Opérateur 32d de la figure 5 répond aux modifications apportées par l'opérateur à l'application client particulière en avertissant le logiciel de Lancement IH-ITC 32a.
Le bloc "Appeler itc hi Filter And Session" 86 du logiciel de Lancement IH-ITC 32a fournit ls.infprma- tions suivantes au bloc "Chercher Structure de Données à Envoyer" 92 du logiciel "Envoyer Un Evénement" 32b de la figure 28 : (1) le nom de l'événement qui est associé aux modifications mentionnées ci-dessus qui ont été apportées par l'opérateur à l'application client particulière, et (2) les données ou les informations d'événements qui sont associées à l'événement dénommé mentionné ci-dessus.
Cependant, il existe deux autres origines possibles quant aux informations (nom de l'événement, et données ou informations d'événements associées à l'événement dénommé) que fournit le logiciel de Lancement IH-ITC 32a au bloc "Chercher Structure de Données à Envoyer" 92 du logiciel "Envoyer Un Evénement" 32b de la figure 28 (1) données d'entrée provenant d'une Base de données, et (2) données d'entrée provenant d'un Flux d'E/S.
Appeler itc hi transmit event 94 On va maintenant décrire le bloc "Appeler itc~hi~Transmit Event" 94.
Sur la figure 28, lorsque le bloc "Chercher Structure de Données à Envoyer" 92 du logiciel "Envoyer Un Evénement" 32b de la figure 28 reçoit (1) le nom de l'événement qui est associé aux modifications qui ont été apportées par l'opérateur à l'application client particulière, et (2) les données ou les informations d'événements qui sont associées à l'événement dénommé mentionné ci-dessus, un appel au logiciel "itc hi~Transmit Event" 94 est effectué. Le logiciel "itc hi Transmit Event" 94 transmettra le nom de l'événement et les données ou les informations d'événements, associées à cet événement dé nommé, à la Structure ITC (Noyau ITC) 34 de l'application client particulière des figures 4 et 5. Par exemple, pour un événement de profondeur, les données de profondeur et le nom d'événements de profondeur seront envoyés, par le logiciel "itc hi Transmit Event" 94, à la Structure ITC (Noyau ITC) 34. Pour un événement de couleur, les nouvelles données de couleur et le nom de l'événement de couleur seront envoyés, par le logiciel "itc hi Transmit Event" 94, au Noyau ITC 34.
Sur la figure 29, le code de programme réel qui correspond au logiciel "Envoyer Un Evénement" 32b des figures 5 et 28 est illustré.
En se reportant aux figures 30 et 31, la construction détaillée et le fonctionnement du logiciel "Recevoir Un Evénement" 32c de la figure 5 sont illustrés.
Sur la figure 30, on suppose qu'une l'application client particulière envoie une pluralité d'objets d'intérêt aux autres applications client via le serveur 26c2, et qu'une ou plusieurs des autres applications client vont, en réponse, envoyer les événements demandés directement à l'application client particulière via la ligne 40 sur la figure 6. La Structure ITC (connue aussi comme "Noyau ITC") 34 associée à l'application client particulière recevra l'événement ou les plusieurs événements à partir de la ligne 40 de la figure 6 en provenance des autres applications client.
Appeler fonction de réception 96.
Sur les figures 5 et 30, la Structure (Noyau) ITC 34 de l'application client particulière va entrer les événements reçus (qui sont reçus en provenance des autres applications client via la ligne 40 de la figure 6) sur le logiciel "Recevoir Un Evénement" 32c de la figure 5.
Le logiciel "Recevoir Un Evénement" 32c de la figure 5 inclut un bloc de code qui sera appelé par la suite code "Appeler Fonction de Réception" 96.
L'abscisse du sommet du pic de corrélation de cette fonction continue est notée tO.
La largeur à mi-hauteur de ce pic est proportionnelle à l'inverse de la largeur de la bande passante des signaux.
Il est préférable de disposer de signaux a large bande passante pour obtenir un pic étroit que l'on détecte avec plus de précision.
Plus précisément, dans les moyens électroniques de traitement (non représentés), ces signaux sont échantillonnés pendant un temps déterminé, formant ainsi un nombre N d'échantillons par cycle de mesure.
Ces échantillons sont également mémorisés et traités dans ces moyens électroniques de traitement.
Avec au moins 2N échantillons, ces moyens électroniques de traitement déterminent, à partir d'une fonction de corrélation discrète entre les signaux, le numéro TO de l'échantillon correspondant au maximum de cette fonction de corrélation discrète.
Chaque valeur Cxy(X) de cette fonction discrète est donnée par la formule suivante
La connaissance de tO permet de déterminer le temps to correspondant au pic de corrélation et donc de déterminer la vitesse V, comme on l'a vu précédemment : V=D/6T=D/tO.
Les moyens électroniques sont également capables de déterminer, par traitement d'intercorrélation, le sens de déplacement de l'objet ainsi que la distance parcourue par celui-ci (par intégration de la vitesse).
La figure 3 est une vue schématique d'un mode de réalisation particulier du dispositif objet de l'invention dans une configuration disposant d'au moins deux réseaux linéaires de photodétecteurs.
Le dispositif 6 de la figure 3 est encore destiné à la mesure optique de la vitesse d'un objet 2, comme par exemple un véhicule, sur lequel est monté ce dispositif et qui se déplace par rapport au sol 4 suivant une direction indiquée par la flèche F.
Le dispositif représenté sur la figure 3 comprend - des moyens d'émission de lumière en direction du sol, ce dernier étant apte à rétrodiffuser la lumière, - des moyens de réception de la lumière rétrodiffusée comprenant deux réseaux linéaires de photodétecteurs qui ont respectivement les références 16a et 16b et qui sont disposés parallèlement à la trajectoire du véhicule 2 et destinés à recevoir la lumière rétrodiffusée, et - des moyens électroniques 18 de traitement, par corrélation, des signaux électriques fournis par deux photodétecteurs, ces derniers appartenant soit à un même réseau soit respectivement aux deux réseaux 16a et 16b.
Les moyens électroniques de traitement 18 sont conçus pour déterminer la vitesse du véhicule 2 à des moments successifs, ltespacement des deux photodétecteurs étant variable et choisi, à un moment donné, en fonction de la vitesse de l'objet, déterminée à un moment précédent.
Dans l'exemple représenté sur la figure 3, le dispositif comprend deux voies de mesure 20a et 20b qui sont identiques l'une à l'autre et comprennent respectivement le réseau 16a et le réseau 16b, ces réseaux étant identiques l'un à l'autre.
Une partie des moyens d'émission de lumière du dispositif se retrouve dans chaque voie et il en est de même pour les moyens de réception de la lumière rétrodiffusée.
Il est à noter que la voie de mesure 20a analyse une partie déterminée du sol 4 avant l'autre voie 20b.
Sur les figures 13a et 13b, un schéma de haut niveau représentant la distribution d'intérêts en suspens dans une nouvelle application client est illustré. On suppose maintenant qu ' une nouvelle application client, "Application Client 5" 50 ("Application 5"), sur la figure 13a, commence à s'exécuter dans un poste de travail du réseau de postes de travail, similaire au poste de travail 10 de la figure 1. Lorsque le programme de l'Application 5 s'exécute, une fenêtre est affichée sur le poste de travail, laquelle est similaire aux affichages à fenêtres 12b de la figure 1. Lorsque l'Application 5 commence à s' exécuter, l'Application 5 s'enregistre ellemême avec le serveur 26c2 sur la figure 13 en envoyant un "signal d'enregistrement" (via une ligne 52 sur la figure 13) à partir de "l'Application 5" 50 vers le serveur 26c2. En réponse au "signal d'enregistrement", le serveur 26c2 enregistre, au sein de celui-ci, l'existence de la nouvelle application client, "l'Application 5" 50. On suppose maintenant que les "Application 2" 26cl, "Application 3" 42 et "Application 4" 44 sur la figure 13 ont envoyé précédemment vers le serveur 26c2 un "objet d'intérêt" dans un événement, appelé "événement X", et, éventuellement, dans d'autres événements. Dans ce cas, après que le serveur 26c2 ait enregistré au sein de celui-ci l'existence de la nouvelle "Application 5" Client, le serveur 26c2 redistribuera les objets d'intérêt provenant de toutes les autres applications client (Applications 2, 3 et 4) à la nouvelle "Application 5" Client (via une ligne 54 sur la figure 13a). Dans l'exemple de la figure 13a, le serveur 26c2 redistribue à l'Application 5 : (1) l'intérêt exprimé précédemment par l'Application 2 dans l'événement X et dans d'autres événements, (2) l'intérêt exprimé précédemment par l'Application 3 dans l'événement X et dans d'autres événements, et (3) l'intérêt exprimé précédemment par l'Application 4 dans l'événement X et dans d'autres événements (appelés ci-après "intérêts exprimés précédemment"). Lorsque la nouvelle "Application 5" Client 50 reçoit les intérêts exprimés précédemment (c'est-à-dire, les objets d'intérêt) dans l'événement X et dans d'autres événements (qui proviennent des Applications 2, 3 et 4) à partir du serveur 26c?, "l'Application 5" enregistre, au sein de celle-ci, les intérêts précédemment exprimés. Lorsque de tels intérêts précédemment exprimés (c'est-à-dire, les objets d'intérêt) en provenance des Applications 2, 3 et 4 sont enregistrés au sein de l'Application 5, l'Application 5 sait que les Applications 2, 3 et 4 requièrent certaines informations spécifiques concernant l'exécution et/ou la pratique de "l'événement X" et d'autres événements. En résultat, lorsque l'événement X ou d'autres événements sont exécutés par l'Application 5, l'Application 5 envoie ces certaines informations spécifiques directement aux Applications 2, 3 et 4 (ces certaines informations spécifiques ne passent pas par le serveur 26c2 ni ne sont enregistrées par celui-ci comme cela était le cas dans la description de Good).
En se reportant aux figures 14 à 25, une description détaillée du fonctionnement du logiciel d'Affi chage avec Interaction de l'Opérateur 32d de la figure 5 est illustrée.