INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le ou les (nano)pigments d'oxyde de titane peuvent être présents dans la composition selon l'invention dans une proportion comprise entre 1 et 30% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence, entre 2 et 25% en poids par rapport au poids total de la composition.
La présente Invention est relative à un procédé de production de peroxydases à partir du champignon Phanerochaete chrysosporium.
Phanerochaete chrysosporium est un champignon associé à la n pourriture blanche du bois ". C'est un hyménomycète, qui fait partie de l'ordre des aphylophorales et de la famille des corticaceae. I1 présente la propriété de dégrader la lignine jusqu'à minéralisation (produits finaux : CO2 + H20) - Ce champignon produit des peroxydases exocellulaires : il s'agit en particulier des isozymes de la manganèse-peroxydase (MnPs) [KUWAHARA et al. FEBS Let., 169, p. 247-250, (1984)], et de celles de la lignineperoxydase (LiPs) [TIEN M. et KIRK. T.K., Science, 221, p. 661-663, (1983); GLENN et al. Biochem. Biophys. Res.
Commun., 114, p. 1077-1083]. Ces enzymes sont des hémoprotéines glycosylées, dont la masse moléculaire moyenne est de 40 KDa [LEISOLA et al., J. Biol. Chem., 262 p. 419-424, (1984)].
Les manganèse-peroxydases et lignineperoxydases sont capables de catalyser l'oxydation de nombreux substrats aromatiques, en particulier la lignine, en utilisant l'eau oxygénée comme cosubstrat. Ces propriétés trouvent leurs applications principales dans le domaine de la papeterie et celui du traitement des déchets.
Jusqu'à présent, ce sont essentiellement les lignine-peroxydases qui ont été utilisées dans ce type d' applications.
Par exemple, le Brevet Français 2 574 427 décrit deux souches de Phanerochaete chrysosporium, possédant une activité lignine-peroxydase particulièrement élevée, et leur culture sur un milieu contenant une source d'azote assimilable, ainsi qu'une source de carbone assimilable, et une source de sels minéraux assimilables.
Il a également été proposé (Brevet Français 2 600 077) de cultiver Phanerochaete chrysosporium sur un milieu de culture de base supplémenté avec des acides gras insaturés, et/ou des acides aminés naturels.
D'autres équipes ont proposé l'addition de détergent du type TWEEN [FAISON et KIRK , Appl. Environ.
Microbiol.(1985),49, p.299-304], ou bien celle d'alcool vératrylique [LEISOLA et al., J.Biotechnol.(1985),3, p.97-107], afin d'augmenter la synthèse de la lignineperoxydase.
L'équipe des Inventeurs a également, lors de travaux précédents, mis en évidence différents paramètres dont l'optimisation permettait d'augmenter la production de lignine-peroxydase ajout d'acide oléique et/ou de phospholipides exogènes, contrôle de la température de culture, etc.. Ces travaux ont abouti à la mise au point d'un procédé de production de lignine-peroxydase, qui fait l'objet du Brevet Européen 0 437 500.
Ce procédé comprend plusieurs étapes successives, chacune d'entre elles étant effectuée dans des conditions de culture différentes ; la première étape est effectuée sur milieu synthétique, comprenant des sels minéraux, une source de carbone et une source d'azote, en présence d'extrait de levure, d'une source de phospholipides, et d'acides gras émulsifiés ; le mycélium formé est alors cultivé dans un milieu de culture partiellement renouvelé, additionné d'alcool vératrylique, mais ne comprenant pas d' acides gras émulsifiés, et dont la teneur en phospholipides ne représente que 1/7 à 1/8 de celle du milieu de culture utilisé dans la première étape ; lors d'une troisième étape, le milieu est entièrement remplacé par un milieu neuf, comprenant la même proportion de phospholipides et d'alcool vératrylique que celui de la deuxième étape, et la source de carbone, la source d'azote, et l'extrait de levure, au 1/4 de leur teneur dans le milieu de la première étape ; une quatrième étape de culture est enfin effectuée dans un milieu dépourvu d'extrait de levure, de source de carbone, et d'acides gras émulsifiés, mais comprenant la même proportion de phospholipides et d'alcool vératrylique que celui des étapes précédentes.
La lignine-peroxydase peut ensuite être récupérée à partir du milieu de culture. La mise en oeuvre de ce procédé permet d'accroître très significativement la teneur en enzyme ; l'activité lignine-peroxydase dans le milieu est d'environ 240 U par litre et par jour.
Les recherches effectuées jusqu'à présent ont principalement porté sur l'accroissement de l'activité lignine-peroxydase ; cependant, les manganèse-peroxydases apparaissent de plus en plus comme susceptibles de jouer un rôle clef dans la biotransformation de composés aromatiques polymériques de type lignine. En effet, contrairement aux lignine-peroxydases dont l'activité est limitée par la faible pénétration des parois lignifiées par l'enzyme, les manganèse-peroxydases agissent par l'intermédiaire d'espèces de faible poids moléculaire, diffusant aisément. En bref, le cycle catalytique des manganèse-peroxydases fait intervenir l'oxydation du Mn(II) en Mn(III) qui, après complexation à des acides organiques, génère des espèces oxydantes diffusantes capables de dépolymériser la lignine naturelle [WARIISHI K., et al., Biochem. Biophys.Res. Comm. 176, p. 269-276, (1991)].
BONNARME et JEFFRIES [J. Ferment. Bioeng.
70:158-163 (1990)] ont étudié la régulation dela production de lignine-peroxydase et manganèse-peroxydase de Phanerochaete chrysosporum sous différentes conditions de culture ; ils ont ainsi observé que la quantité de ces enzymes variait, en particulier, en fonction de la concentration en Mn(II) à faible concentration, la lignine-peroxydase est préférentiellement produite (760 nmol/ml.min dans les conditions optimales), tandis qu'à concentration élevée c ' est la production de manganèseperoxydase (950 nmol/ml.min dans les conditions optimales) qui est privilégiée.
Les Inventeurs se sont fixé pour but l'augmentation de la production de peroxydases exocellulaires de Phanerochaete chrysosporium à partir de cultures de ce champignon, ainsi que l'augmentation du rapport MnP/LiP.
Après purification sur silice avec le mélange éluant cyclohexane 7/acétate d'éthyle 3, on obtient 1,3 g de produit attendu (cristaux jaunes).
ANALYSES IR CHCl3 (cm-l) Système conj + Aromatique 1620-1600-1498 EXEMPLE 100 : 3, 4-dihydroxy-5- (4-méthylphényl) - benzenecarbothioate de O-méthyle On procède comme à l'exemple 2 à partir de 1,2 g de produit de l'exemple 99 dans 100 ml d'un mélange acide acétique 80/eau 20.
La suspension est versée dans 300 ml d'eau, on extrait avec trois fois 100 ml d'éther isopropylique et la phase organique est lavée à l'eau, séchée et évaporée à sec.
Après chromatographie sur silice avec le mélange éluant clycohexane 5/acétate d'éthyle 5, puis recristallisation dans 30 ml d'acétate d'éthyle et 10 ml de cyclohexane, on obtient 0,33 g de produit attendu.
ANALYSES IR CHCl3 (cm-1) -OH -3563 Aromatique 1619-1598-1508-1495 -S02 -1192-1178 EXEMPLE 101 : 4,5-dihydroxy-3-(((4-méthylphényl)sulfonyl) oxy) -2- (phénylméthyl)benzoate de méthyle STADE 1 : 3,4-dihydroxy-5-(phenylmethoxy)-2-(phenylméthyl)- benzoate de méthyle On procède comme à l'exemple 3 à partir de 3 g de gallate de méthyle dans 90 ml diméthylformamide, 1,56 g d'hydrure de sodium, 2,7 ml de triéthylborate et 2,9 ml de bromure de benzoyle.
On obtient ainsi 1 g de produit attendu.
STADE 2 : 3 hydroxy 4,5-(diphénylméthoxy)-2-(phénylméthyl)- benzoate de méthyle On introduit 2 g du produit obtenu au stade 1 ci-dessus dans 50 ml de diméthylformamide, ajoute 0,26 g d'hydrure de sodium, agite une heure à température ambiante, ajoute 0,65 ml de bromure de benzyle en solution dans 15 ml de diméthylformamide et agite deux heures à température ambiante.
La solution est versée dans 150 ml d'eau. La phase aqueuse est extraite avec trois fois 50 ml d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée abondamment à l'eau, séchée et évaporée à sec.
On purifie par recristallisation dans l'éther isopropylique et obtient 2,39 g de produit attendu (cristaux jaunes).
ANALYSES IR CHOC13 (cl 1) -OH - 3515 -O 1718 Aromatique 1605-1576-1502-1495 STADE 3 : 3-(((4-méthylphényl)sulfonyl)oxy) 4,5 (diphénylmethoxy)-2-(phénylméthyl)-benzoate de méthyle On introduit 0,4 g du produit obtenu au stade 2 cidessus dans 40 ml de chlorure de méthylène anhydre, ajoute 0,15 ml de triéthylamine, agite 5 minutes à température ambiante, 0,170 g de chlorure de tosyle en solution dans 10 ml de chlorure de méthylène et agite deux heures à température ambiante.
La solution est versée dans 150 ml d'eau. La phase aqueuse est extraite avec trois fois 150 ml de chlorure de méthylène. La phase organique est lavée abondamment à l'eau, puis avec 5 ml d'une solution d'acide chlorhydrique 2N et séchue.
On purifie par chromatographie sur silice avec le mélange éluant cyclohexane /7 acétate d'éthyle 3 et obtient 0,6 g de produit attendu (cristaux blancs).
ANALYSES IR CHCl3 (cal) Absence d'OH -O 1722 Aromatique 1599-1565-1500-1495 STADE 4 : 4,5-dihydroxy-3-(((4-methylphenyl)sulfonyl)oxy)-2- (phénylméthyl)-benzoate de méthyle On introduit 0,6 g du produit obtenu au stade 3 ci dessus dans 30 ml de tétrahydrofuranne, ajoute 0,1 g de palladium sec à 10 % sur charbon activé et hydrogène pendant une heure sous une pression de 500 mbar.
On purifie sur silice avec le mélange éluant cyclohexane 7/acétate d'éthyle puis par rescritallisation dans 5 ml d'acétate d'éthyle et 3 ml de cyclohexane et obtient 0,180 g de produit attendu (cristaux blancs) F = 1690C.
Les plants de tabac utilisées pour les expériences de transformation (Nicotiana tabacum var. Xanthi NC et PBD6) sont cultivées in vitro sur le milieu de base de Murashige et Skoog (1962) additionné des vitamines de Gamborg et al. (1968, Sigma référence M0404) de saccharose à 20 g/l et d'agar (Merck) à 8 g/l. Le pH du milieu est ajusté à 5,8 avec une solution de potasse avant autoclavage à 1200C pendant 20 min. Les plantules de tabac sont repiquées par bouture des entre-noeuds tous les 30 jours sur ce milieu de multiplication MS20.
Toutes les cultures in vitro sont réalisées en enceinte climatisée, dans les conditions définies ci-dessous: - intensité lumineuse de 30 E.m-2.S-1; photopériode de 16h; - thermopériode de 26"C le jour, 24"C la nuit.
Une préculture d'Agrobacterium tumefaciens souche LBA4404 contenant les plasmides pBIOC29 ou pBIOC26 ou pBIOC25 est réalisée durant 48h à 28"C sous agitation, dans du milieu LB (Sambrook et al., 1989) additionné des antibiotiques adéquats (rifampicine et tétracycline). La préculture est ensuite diluée au 50ème dans le même milieu et cultivée dans les mêmes conditions. Après une nuit, la culture est centrifugée (10 min., 3000 g), les bactéries sont reprises dans un volume équivalent de milieu MS30 (30 g/l saccharose) liquide et cette suspension est diluée au 10ème.
Des explants d'environ 1 cm2 sont découpés à partir des feuilles des plantules décrites ci-dessus. Ils sont ensuite mis au contact de la suspension bactérienne pendant lh, puis séchés rapidement sur papier filtre et placés sur un milieu de coculture (MS30 solide).
Après 2 jours, les explants sont transférés en boîtes de Pétri sur le milieu de régénération MS30, contenant un agent sélectif, la kanamycine (200 mg/l), un bactériostatique, l'augmentin (400 mg/l) et les hormones nécessaires à l'induction de bourgeons (BAP, 1 mg/l et ANA, 0,1 mg/l). Un repiquage des explants est effectué sur le même milieu après 2 semaines de culture. Après 2 semaines supplémentaires, les bourgeons sont repiqués en boîtes de Pétri sur le milieu de développement composé du milieu MS20 additionné de kanamycine et d'augmentin. Après 15 jours, les bourgeons sont repiqués de moitié. L'enracinement prend environ 20 jours, au terme desquels les plantules peuvent être clonées par bouture d'entre-noeuds ou sorties en serre.
V. ANALYSE DE L'EXPRESSION DE LA LIPASE GASTRIQUE DE CHIEN DANS LES PLANTES DE TABAC.
Le protocole d'extraction de la lipase à partir de feuilles de tabac prélevées sur des plantes en serre est le suivant: 1 g de feuilles (poids frais) est broyé dans l'azote liquide puis à 4"C dans 5 ml de tampon Tris-HC1 25 mM pH 7,5, additionné d'EDTA 1 mM et de mercaptoéthanol 10 mM (tampon A) ou de tampon glycine-HC1 25 mM pH 3, additionné d'EDTA 1 mM, de -mercaptoéthanol 10 mM, de Triton X-100 0,2% et de NaCI 250 mM (tampon B). Le broyat total est immédiatement centrifugé à 4"C pendant 15 min à 10000 g.
Pour les graines de tabac, l'extraction est réalisée dans le tampon B à raison de 0,1 g de graines pour 4 ml de tampon.
L'activité lipasique est déterminée à l'aide d'un pH-STAT par la méthode titrimétrique de Gargouri et al. (1986) dans laquelle le substrat utilisé est la tributyrine. L'émulsion de tributyrine (4 ml pour 30 ml d'émulsion) est réalisée au vortex en présence de sels biliaires (1,04 g/l) d'albumine bovine (0,1 g/l) et de NaCI (9 g/l). Le dosage consiste à neutraliser l'acide butyrique libéré sous l'action de la lipase par une solution de soude à un pH de consigne de 5,5 et à 37"C. Une unité lipase correspond à la quantité d'enzyme qui provoque la libération d'une micromole d'acides gras en 1 min. à 37"C et dans les conditions optimales de pH (5,5). La lipase gastrique de chien naturelle (purifiée) a une activité spécifique de 570 unités/mg de protéine.
L'activité lipase peut être mesurée sur le broyat total, sur le culot ou sur le surnageant de centrifugation.
Sur le surnageant de centrifugation (tampon A), un dosage des protéines totales solubles est réalisé par la méthode de Bradford (1976).
Un test ELISA en sandwich (Carrière et al., 1993) est également réalisé sur le surnageant de centrifugation avec 2 populations d'anticorps polyclonaux anti-lipase extraite d'estomac de chien. La première population inclut les anticorps réagissant avec la lipase gastrique humaine et ont été purifiés par affinité à partir de l'antisérum total sur lipase gastrique humaine greffée sur colonne Affigel 10 (Aoubala et al., 1993). Ces anticorps sont utilisés pour revêtir les puits de plaques ELISA à une concentration de 1 yg/ml. La 2ème population comprend les anticorps qui ne connaissent pas la lipase humaine.
Ils sont purifiés ultérieurement sur colonne de Sépharose couplés à la protéine A puis couplés à la biotine. La fixation de l'anticorps est mise en évidence par le biais d'un conjugué streptavidine/péroxydase dont l'activité enzymatique est révélée au moyen du substrat o-phénylènediamine. Les résultats obtenus ont une valeur qualitative et sont notés à l'aide des symboles + et -.
Dosages sur les feuilles et les graines de tabac. test ELISA.
Les résultats obtenus sur 98 plantes TO du génotype Xanthi (stade 15 à 20 feuilles) sont donnés dans le tableau 1. Les dosages ont tous été réalisés sur les broyats de feuilles ou de graines avant centrifugation. Pour chaque construit, les activités mesurées présentent une grande variabilité suivant les transformants. Environ 20% des plantes n'ont aucune activité ou une activité trop faible pour être décelée. Les activités moyennes et les activités maximales sont données dans le tableau 1.
Des supports témoins, n'ayant subi aucun traitement, ont également été utilisés.
Les supports d'oviposition ont été placés dans les cages. 10 femelles fécondées âgées de 2 jours ont été laissées en présence des supports, pendant 1 nuit, à l'issue de laquelle le nombre et la disposition des oeufs déposés sur les zones traitées et sur les zones non traitées ont été notés. D'autre part, les oeufs pondus pendant l'expérimentation sont comptés.
On détermine pour chaque composition l'indice d'évitement (IE), selon la formule IE (%) = (T - NT)/(T + NT) x 100, T = nombre moyen d'oeufs sur les zones traitées NT = nombre moyen d'oeufs sur les zones non traitées (T et NT sont rapportés à des surfaces équivalentes).
Un indice de -100 indique un évitement total et un indice de 0 indique l'absence d'effet (pas d'évitement).
La moyenne des indices obtenus pour chaque composition est comparée entre les différents types de traitement.
Les résultats sont les suivants - Dans le cas du support témoin (bristol sans traitement), IE = +1% (Sd = 24%) (pas d'effet), ce qui indique que les dépôts d'oeufs sont régulièrement répartis sur toute la superficie du support de ponte une répartition similaire est observée dans le cas du support traité au solvant.
- En ce qui concerne la composition I : à la dose de 2 équivalents oeufs par dépôt, IE = -358 (Sd = 17%), ce qui indique que les femelles déposent de préférence leurs oeufs sur des zones non traitées (bien qu ' une fraction des femelles testées ne semble pas sensible à cette dose) ; cet effet de déterrence apparaît comme étant dose-dépendant, car il est encore augmenté à la dose de 20 équivalents oeufs par dépôt, où IE = -758 (Sd = 258).
Un résultat identique est obtenu avec la composition II.
En ce qui concerne la composition III : à la dose de 20 e.e. par dépôt, IE = -66% (Sd = 8%).
Le nombre d'oeufs pondus par les femelles pendant l'expérimentation a été déterminé, avec les compositions I, III, et IV aux doses de 20 e.e. par dépôt ; les résultats sont représentés dans le tableau VII ci-dessous: TABLEAU VII
TEMOIN COMPOSITION COMPOSITION COMPOSITION III Iv N 21,73 15,60(**) 22,43(ns) 16,2(**) N = nombre moyen d'oeufs par femelle Différence par rapport au témoin ** = statistiquement significative ; ns = non significative Les résultats ci-dessus montrent que : les compositions I et IV utilisées à la dose de 20 équivalents-oeufs par dépôt réduisent la ponte (environ - 25%) ; en revanche la composition III (mélange de 7 acides gras) ne présente pas d'activité significative sur la réduction de la ponte.
EXEMPLE 3 : ACTIVITE SUR PO8MRS 1) Une première série d'expérimentations a été effectuée avec les compositions IV, V, et VI.
Les expérimentations ont été effectuées sur des femelles de Cydia pomonella fécondées.
Des pommes non traitées dépourvues de tout résidu de pesticide ont été récoltées juste avant les expériences et les pommes portant des oeufs ou des traces de larves de C. pomonella ont été écartées.
Les essais ont été effectués dans une cage (1 m x 0,4 m x 0,5 m) recouverte d'un tulle.
4 rangées de 4 pommes espacées de manière équidistantes sont suspendues au plafond de la cage. 8 pommes traitées et 8 pommes témoins sont rangées alternativement.
Afin de ne pas confondre les réponses, les pions sont de différentes couleurs, comme les contremarques 200 et, bien entendu, il est logique qu'un même joueur reçoive une contremarque 200 et trois pions 400 de même couleur.
La disposition des fiches 300 et celle des lettres 303-304 permettent d'associer plusieurs fiches 300 en ne laissant apparaître que la lettre retenue.
La figure 10 représente un exemple selon lequel quatre fiches de consonnes 301 et deux fiches de voyelles 302 permettent de composer le nom "MARTIN".
En se reportant maintenant aux figures 11 à 14, on voit que le jeu conforme à l'invention comprend des cartes 500 sur chacune desquelles figurent d'une part un chiffre 501 qui, comme ceux des cases 104 et du disque 204, est un chiffre de 1 à 9, et d'autre part des symboles 509, 510 et 511 analogues aux symboles 309, 310 et 311 et aux cases 101, 102 et 103, correspondant respectivement à la vie affective, à la vie sociale et à la vie matérielle.
En face de chaque symbole 509, 510 et 511, se trouve un commentaire 512 destiné à chaque joueur et tel qu'une indication d'un trait de caractère, une probabilité d'évolution d'avenir, un conseil général de comportement, une mise en garde vis-à-vis d'un défaut etc., le tout en relation avec le domaine correspondant au symbole.
Afin d'éviter la monotonie des commentaires 512 qui ne peuvent se référer qu'à trois domaines, il faut qu'ils soient nombreux afin de revenir rarement, par roulement.
C'est pourquoi les cartes 500 portent plusieurs séries de commentaires 512, aussi bien sur leur recto que sur leur verso et, en outre, sont relativement nombreuses pour l'ensemble du jeu, de sorte que 1' on choisit les cartes 500 au hasard dans un stock de cartes portant toutes le même chiffre 501 de 1 à 9. En l'occurrence, il s'agit d'une carte 500 portant le chiffre 2.
Pour éviter que le lecteur d'un commentaire 512 se trompe de ligne, ou de sujet, on place la carte 500 à lire dans un étui opaque 520 dont une face est traversée d'une fenêtre 521 dont les dimmensions sont choisies pour que le commentaire 512 et son symbole correspondant apparaissent seuls et en entier (figures 13 et 14).
De même, pour que l'attention soit attirée sur le chiffre 501, afin de vérifier que l'on n'a pas commis une erreur de choix, l'étui 520 présente une encoche supérieure 522 dans laquelle apparaît le chiffre 501, même quand la carte 500 est entièrement engagée dans l'étui 520 (figure 14).
Après avoir engagé la carte 500 dans l'étui 520, on fait glisser la carte 500 soit vers le bas, soit vers le haut, à la manière d'une réglette, jusqu'à ce que le lecteur du voie par la fenêtre 521 le symbole et le commentaire qui lui conviennent.
On va maintenant donner, à titre d'exemple, un règle de jeu possible mais il doit être bien entendu que de nombreuses applications et variantes différentes peuvent aussi être adoptées.
REGLE DU JEU Le but du jeu est d'aider à la compréhension de l'analyse caractérielle des individus par la numérologie.
Les différentes étapes du jeu sont des prétextes à assimiler des principes de base de la numérologie tout en se distrayant.
On dispose le plateau 100 sur une table, puis on pose le stock de fiches 301 sur la case 120 et le stocke de fiches 302 sur la case 121.
On distribue aux joueurs une contremarque 200 d'une certaine couleur et trois pions 400 de la même couleur.
Chaque joueur calcule alors son "année personnelle" en additionnant des nombres de la manière suivante - quantième de la naissance, soit 24 par exemple; - numéro du mois de naissance, soit 03 par exemple; - année en cours (et NON année de naissance), soit 1994.
On recristallise dans 45 ml d'acétate d'éthyle et obtient 0,6 g de produit attendu (cristaux blancs) F = 1950C.
ANALYSES IR NUJOL (cal) Région OH/NH : max - 3480-3290 =0 1701 Aromatique Hétéroatome 1613-1536 EXEMPLE 89 : 7-(((2-chloro-3-nitro-5-thiényl)sulfonyl)oxy)- 2,2-diphenyl-1,3-benzodioxole-5-carboxylate de méthyle On procède comme au stade 2 de l'exemple 1 à partir de 2 g du produit obtenu au stade 1 de l'exemple 1 dans 120 ml de chlorure de méthylène avec 1,2 ml de triéthylamine et 1,5 g de chlorure de 2-chloro-3-nitrothiophène-5-sulfonyle.
On obtient ainsi 2,35 g de produit attendu (cristaux) ANALYSES IR CHCl3 (cal) Absence d'OH -O 1720 Hétérocycle + Aromatique + NO2 1624-1590-1549-1516-1504 EXEMPLE 90 : 5-(((2-chloro-3-nitro-5-thienyl)sulfonyl)oxy)- 3,4-dihydroxy-benzoate de méthyle On procède comme à l'exemple 2 à partir de 2,1 g de produit de l'exemple 89 dans 100 ml d'un mélange acide acétique 80/eau 20.
On recristallise dans 45 ml d'acétate d'éthyle et 15 nil de cyclohexane et obtient 0,46 g de produit attendu (cristaux blancs) F = 2230C.
ANALYSES IR NUJOL (cal) Absorptions OH/NH 3465-3310 -O 1696 Système conj + Aromatique + NO2 1618-1610-1545-1512 EXEMPLE 91 : 7-(((3,5-dichloro-2-hydroxyphényl)sulfonyl)oxy)- 2,2-diphényl-1,3-benzodioxole-5-carboxylate de méthyle On procède comme au stade 2 de l'exemple 1 à partir de 2 g du produit obtenu au stade 1 de l'exemple 1 dans 100 ml de chlorure de méthylène avec 0,27 g d'hydrure de sodium à 50 % dans l'huile et 2,87 g de chlorure de 3,5-dichloro-2hydroxybenzène sulfonyle.
On obtient ainsi 1,9 g de produit attendu (gomme) ANALYSES IR CHCl3 (cm-1) -O 1722 Aromatique 1627-1619-1587-1498 EXEMPLE 92 : 5-(((3,5-dichloro-2-hydroxyphényl)sulfonyl)oxy)- 3,4-dihydroxy-benzoate de méthyle On procède comme à l'exemple 2 à partir de 1,8 g de produit de l'exemple 91 dans 100 ml d'un mélange acide acétique 80/eau 20.
On recristallise dans 60 ml d'acétate d'éthyle et 10 ml de cyclohexane et obtient 0,45 g de produit attendu (cristaux blancs) F = 1970C.
ANALYSES IR NUJOL (cm-1) Absorptions région OH/NH -O 1704 Aromatique 1612-1536 EXEMPLE 93 : 2,2-diphényl-7-(((5-(3-isoxazolyl)-2-thiényl) sulfonyl)oxy)-1,3-benzodioxole-5-carboxylate de méthyle On procède comme au stade 2 de l'exemple 1 d partir de 2 g du produit obtenu au stade 1 de l'exemple 1 dans 120 ml de chlorure de méthylène avec 1,2 ml de triéthylamine et 1,45 g de chlorure de 5-(isoxazol-3-yl)thiophène-2-sulfonyle.