INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
EXEMPLE 6 On prépare le mélange des esters méthylique de la N-[(6-nitro-naphtyl)-1 thiocarbonyl] -L-méthionine et de la N-[(3-nitro-naphtyl)-1-thiocarbonyl]-L- méthionine dans un rapport 70-30, avec un rendement de 50%, par le réactif de LAWESSON, selon la méthode dOCAIN et RICH., J. Med. Chem, 31 (11), 2195 (1988), à partir d'un mélange de l'ester méthylique de la N-[(6-nitro-naphtyl)-1 carbonyl]-Irméthionine et de l'ester méthylique de la N-[(3-nitro-naphtyl)-1- carbonyl]-L-méthionine dans un rapport 70-30.
- spectre de masse (DIC ; NH3) : M/Z = 379 (MH+) A une solution de 2 g du mélange des esters méthylique de la N-[(6-nitro naphtyl)-1-thiocarbonyl]-L-méthionine et de la N-[(3-nitro-naphtyl)-l-thiocarbonyl]- Irméthionine dans 10 cm3 d'éthanol, on ajoute 5,87 g de dihydrate de chlorure d'étain (in). Le mélange réactionnel est agité pendant 30 minutes à une température voisine de 70"C, puis refroidi à une température voisine de 200C. On ajoute 40 cm3 d'acétate d'éthyle. Le mélange réactionnel est versé sur de la glace puis amené à pH voisin de 78 par addition d'une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium à 5 % (p/v).
Le mélange obtenu est filtré sur verre fritté garni de célite. La phase organique est séparée par décantation et la phase aqueuse est extraite successivement 3 fois par 150 cm3 d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont réunies, séchées sur du sulfate de magnésium, filtrées et concentrées à sec sous pression réduite. On obtient ainsi 1,8 g du mélange des esters méthylique de la N-[(6-aminonaphtyl)-1-thioearbonyfl-I- méthionine et de la N-[(3-amino-naphtyl)-1-thiocarbonyl]-L-méthionine dans un rapport 70-30, sous forme d'une huile.
A une solution de 1,8 g du mélange des esters méthylique de la N-[(o-amino- naphtyl) - 1 -thiocarbonyl] -L-méthionine et de la N- [(3-amino-naphtyl) - 1 -thioearbonyl] - L-méthionine dans 70 cm3 d'acétonitrile on ajoute 6,9 g de S-triphénylméthyl-N-tert butoxycarbonyl-cystéinal préparé selon le procédé décrit dans le brevet EP-0 618 221, 0,91 cm3 d'acide acétique concentré, du tamis moléculaires (3 ) puis 0,97 g de cyanoborohydrure de sodium. Le mélange réactionnel est agité pendant 24 heures à une température voisine de 20"C puis filtré sur verre fritté garni de célite. Le verre fritté est lavé par de l'acétonitrile. Le filtrat est concentré sous pression réduite.On obtient une meringue qui est purifiée par chromatographie sur silice en éluant avec un mélange dichlorométhane-acétate d'éthyle (95-5 en volumes). On obtient 1,2 g de mélange des esters méthylique de la N-[6-(2(R)-tert-butoxycarbonylamino3- triphénylméthylthio-propylamino)-naphtyl-1-thiocarbonyl]-L-méthionine et de la N [3 - (2(R) -tert-butoxycarbonylamino- 3-triphénylméthylthio-propylamino) -naphtyl- 1 - thioearbonyl]-I-méthionine dans un rapport 70-30, sous forme d'un solide jaune.
A une solution de 0,9 g de mélange des esters méthylique de la N-[6-(2(R) tert-butoxycarbonylamino-3 -triphénylméthylthio-propylamino) -naphtyl- 1 thiocarbonyl]-L-méthionine et de la N-[3-(2(R)-tert-butoxycarbonylamino-3 triphénylméthylthiopropylamino) -naphtyl- 1 -thiocarbonyl] -Irméthionine dans 2,25 cm3 d'eau distillée et 22,5 cm3 de tétrahydrofuranne, on ajoute 0,17 g de lithine hydratée. La solution est agitée pendant 20 heures à une température voisine de 200C, puis concentrée sous pression réduite.On obtient 0,88 g de mélange de la N-[6-(2(R) tert-butoxycarbonylamino-3-triphénylméthylthio-propylamino) -naphtyl- 1 thiocarbonyl]-L-méthionine et de la N-[3-(2(R)-tert-butoxycarbonylamino-3 triphénylméthylthiopropylamino) -naphtyl- 1 -thiocarbonyl] -L-méthionine sous forme d'une meringue.
A 0,4 g de mélange de la N-[6-(2(R)-tert-butoxycarbonylamino-3- triphénylméthylthio-propylamino)-naphtyl-1-thiocarbonyl]-L-méthionine et de la N [3-(2(R)-tert-butoxycarbonylamino-3-triphénylméthylthio-propylamino)-naphtyl-1- thiocarbonyl]]-Irméthionine dans 2,5 cm3 de dichlorométhane et 0,1 cm3 de triéthylsilane, on ajoute, à une température voisine de 20"C, 2,5 cm3 d'acide trifluoroacétique. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à une température voisine de 20"C, puis concentré sous pression réduite. Le résidu est trituré successivement par 3 fois 5 cm3 d'hexane, 3 fois 5 cm3 de pentane, 3 fois 5 cm3 d'éther éthylique puis séché sous pression réduite.Les composés sont purifiés et séparés par chromatographie liquide à haute performance (phase C18) en éluant avec un mélange acétonitrile-eau contenant 0,1 % d'acide trifluoroacétique. On obtient 0,028 g de trifluoroacétate de la N-[6-(2(R)-amino-3-mercapto-propylamino)naphtyl-1-thiocarbonyl]-L-méthionine et 0,012 g de trifluoroacétate de la N-[3-(2(R) amino-3-mercapto-propylamino) -naphtyl- l-thiocarbonyl]-Lméthionine sous forme de poudres.
Le trifluoroacétate de la N-[3-(2(R)-amino-3-mercapto-propylamino) naphtyl-1-thiocarbonyl]-L-méthionine présente les caractéristiques suivantes: - spectre de résonance magnétique nucléaire du proton (400 MHz, (CD3)2SO d6, à une température de 333 K, 6 en ppm) : 2,15 (s, 3H : SCH3) ; 2,20 (mt, 2H : CH 2,65 (AB limite, 2H: SCH2) ; 2,90 (AB limite, 2H : CH2S) ; de 3,30 à 3,60 (mt, 3H: NCH2CHN) ; 5,30 (mt, 1H : CHCOO) ; 6,15 (mf étalé, 1H : ArNH) ; 6,95 (d, J=2Hz, 1H: H4) ; 7,10 (d,J=2Hz, 1H: H2) ; 7,22 (tlarge,J = 8Hz, 1H: H7); 7,40 (t large, J = 8 Hz, 1H : H 6); 7,66 (d large, J = 8 Hz, 1H : H 5); 7,96 (d large, J = 8 Hz, 1H: H 8) ;8,00(mf,3H:NH2) ; 10,62 (d, J = 7,5 Hz, 1H:ArCSNH).
Pour chaque expérimentation, 4 femelles (âgées de 2 ou 3 jours) sont lâchées dans la cage, et après une nuit, le nombre d'oeufs déposés sur chaque pomme est compté.
A partir du nombre d'oeufs sur les pommes traitées (A) et sur les pommes témoins (B) l'index de déterrence a été calculé selon la formule suivante DI (%) = (A - B)/(A + B) x 100.
Les différents traitements ont consisté en - un traitement de contrôle : 16 pommes témoin traitées dans du solvant seul (10% méthanol, 90% eau distillée additionnée de 1 ml/l de TRITON X100) - un choix à deux possibilités, entre les pommes trempées dans le solvant et les pommes trempées dans l'un des mélanges suivants a) La composition IV b) La composition V c) La composition VI.
Les acides gras et leurs esters méthyliques ont été dilués dans le solvant mentionné ci-dessus ; la dilution a été calculée afin d'obtenir les dépôts de 0,03 g ou 0,3 g de chaque mélange par pomme, correspondant respectivement à 72 et 720 équivalent-oeufs par pomme, ou bien à 0,9 et 9 équivalent oeufs par cm2 de surface de pomme.
Dans les essais de contrôle, 28 des 36 femelles fécondées ont pondu pendant la nuit sur les pommes non traitées. Pour les autres traitements, ce nombre varie de 20 (composition IV à la dose la plus élevée) à 27 (composition IV à la dose la moins élevée) ces différences ne sont pas significatives.
Le nombre total des oeufs déposés pour chaque femelle ne différe pas significativement d'un traitement à l'autre. Il varie de 18,9 oeufs par femelle (composition IV à haute dose), à 25,4 oeufs par femelle (composition IV à faible dose), avec une valeur de 23,9 oeufs en moyenne pour les essais sur les pommes contrôle.
Pour les essais de contrôle (toutes les pommes sont traitées avec le solvant seul), les oeufs sont distribués de façon homogène entre les 16 pommes. Le nombre moyen d'oeufs par pomme dans ces essais est de 4,6+4 avec 8,3% de pommes ne portant aucun oeuf.
La composition IV provoque une déterrence significative à la dose de 72 équivalent oeufs par pomme (DI = - 31%). Cet effet est augmenté pour la dose de 720 équivalent oeufs par pomme, pour lequel 118 oeufs ont été déposés sur les pommes traitées et 261 sur les pommes non traitées (DI = -38%) est plus important que celui observé à la dose de 72 équivalent oeufs. Si l'on compare aux essais de contrôle, la composition IV à la plus faible dose réduit le nombre moyen d'oeufs (3,3+ 2,9), mais le pourcentage de pommes ne portant pas d'oeufs n'est pas significativement différent.
La composition IV à la dose la plus forte réduit significativement à la fois le nombre d'oeufs par pomme (1,6+ 1,8) et le pourcentage de pommes qui ont été attaquées (37,5 & ne portent pas d'oeufs).
Les pommes traitées avec la composition V (mélange d'acide palmitique et de palmitate de méthyle) à la dose de 72 équivalent oeufs par pomme ont été évitées de façon significative (361 oeufs sur les pommes non traitées, 188 sur les pommes traitées) ; l'index de déterrence (DI = -32%) n'est pas significativement différent de celui observé avec la composition IV à la dose de 72 équivalent oeufs par pomme.
En revanche, la composition V à la dose de 720 équivalent oeufs par pomme provoque une déterrence élevée (487 oeufs sur les pommes non traitées, 134 oeufs sur les pommes traitées DI = -57%). Cette déterrence est plus élevée que celle observée pour n'importe lequel des autres traitements. D'autre part, dans le cas des essais avec la composition V, on observe une quantité d'oeufs par pomme significativement inférieure à celle des essais de contrôle 2,6+ 2,8 et 1,8+ 2 respectivement contre 4,6+ 4 dans les essais de contrôle. Le pourcentage de pommes qui ne portent aucun oeuf est également plus élevé que celui observé dans les essais de contrôle (18,1% et 26,4% respectivement, contre 8,3% dans le contrôle).
La composition VI (mélange de palmitate de méthyle, linoléate de méthyle et stéarate de méthyle) provoque une légère déterrence non significative (328 oeufs sur les pommes non traitées, 253 sur les pommes traitées : DI = -13%). L'indice de déterrence ne diffère pas significativement de celui du traitement de contrôle.
Cependant la composition VI à la dose la plus importante réduit significativement le nombre d'oeufs par pomme (3,5+ 4,4), si on compare au contrôle, et l'on observe également un nombre de pommes sans oeuf significativement plus important que dans les essais de contrôle. Le nombre d'oeufs par pomme observé avec la composition VI à la dose la plus importante est équivalent à celui observé avec la composition IV à la dose la plus faible.
Dans les essais de contrôle, seulement 8% des pommes ne portent pas d'oeufs. Ceci est probablement dû à la densité élevée des femelles par cage (4 femelles pour 16 pommes). Les compositions IV et V à doses élevées augmentent la protection des pommes, avec respectivement 38% et 26% de pommes qui ne portent pas d'oeufs. En revanche, à la dose de 72 équivalent oeufs/pomme, une protection augmentée est observée seulement avec la composition V. La composition VI à la dose la plus élevée augmente également légèrement la protection (18% de pommes ne portant pas d'oeufs).
Il est à noter que la composition V (mélange d'acide palmitique et de palmitate de méthyle) a pour effet un indice de déterrence similaire ou plus élevé que celui observé avec le composition IV aux mêmes doses. En revanche, la composition V utilisée à des concentrations similaires n'a que peu effet sur la sélection des sites d'oviposition. En conséquence, la présence de l'acide palmitique permet de rendre compte pour l'essentiel, de la déterrence observée dans ces expérimentations.
2) Une deuxième série d'expérimentations a été effectuée avec une composition comprenant les constituants de la composition III, dilués dans un mélange acétone/eau 50/50 de sorte à obtenir sur chaque pomme le dépôt des quantités (en Ag par pomme) indiquées dans le tableau VIII ci-dessous TABLEAU VIII Acide myristique 2,5 Acide palmitique 10 Acide palmitoléique 1,25 Acide oléique 5 Acide stéarique 10 Acide linoléique 10 Acide linolénique 6,25 Des pommes (variété Golden delicious) sont trempées dans la composition ci-dessus, ou dans le solvant seul.
Les objets de l'invention définis ci-dessus permettent notamment la préparation de tests diagnostiques et de vaccins, et sont notamment utiles dans des procédés d'essai d'agents anti-viraux à usage pharmacologique, dans des procédés de diagnostic ou de thérapie génique.
Etant donné qu'un virus possédant une activité enzymatique transcriptase inverse peut être génétiquement caractérisé aussi bien sous forme d'ARN que d'ADN, il sera fait mention aussi bien de l'ADN que de l'ARN viral pour caractériser les séquences relatives à un virus possédant une telle activité transcriptase inverse.
L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description détaillée qui va suivre faite en référence aux figures 1 à 9 annexées, dans lesquelles - la figure 1 illustre la disposition relative des différents clones F11-1, MSRV-1B, M003-P004 et PSJ17 séquencés dans la région pol du virus MSRV-1, - la figure 2 représente la séquence nucléotidique SEQ ID N01, et une trame fonctionnelle de lecture possible en acides aminés de SEQ ID N01; sur cette séquence nucléotidique, les séquences consensus des transcriptases inverses rétrovirales sont soulignées, - les figure 3, 4, 5, 6 représentent les séquences nucléotidiques respectivement SEQ ID N02, SEQ ID N03, SEQ ID N04, et SEQ ID N05, des clones dénommés respectivement F11-1, MSRV-1, M003-P004, et PSJ17; sur la figure 3 représentant SEQ ID N02, la partie signalée dans la région de l'amorce correspond à une variabilité imposée par le choix de l'amorce ayant servi au clonage de F11-1;; sur cette même figure, la traduction en acides aminés de SEQ ID N02 est représentée, - la figure 7 est une représentation matricielle de l'homologie entre SEQ ID N02 du clone F11-1, et celle d'un rétrovirus endogène connu, dénommé ERV9 ou HSERV9, cette homologie étant mise en évidence par un trait plein, et la divergence significative par l'absence de trait, - la figure 8 est une représentation matricielle de la comparaison de SEQ ID N01 de MSRV-1, avec celle du rétrovirus endogène ERV9 ou HSERV9 à une échelle différente de la représentation donnée à la figure 7, - la figure 9 représente la séquence nucléotidique SEQ ID N06.
EXEMPLE 1: OBTENTION DE CLONES, DEFINISSANT UNE FAMILLE MSRV-1B, PAR AMPLIFICATION PCR "NICHEE" DES REGIONS POL CONSERVEES DES RETROVIRUS SUR DES PREPARATIONS DE VIRIONS ISSUES DES LIGNEES LM7 ET PLI-2.
Une technique PCR dérivée de la technique publiée par Shih et coll. a été utilisée. Cette technique permet, par traitement de tous les composants du milieu réactionnel par la DNase, d'éliminer toute trace d'ADN contaminant.
Elle permet parallèlement, par l'utilisation d'amorces différentes mais chevauchantes dans deux séries successives de cycles d'amplifications PCR, d'augmenter les chances d'amplifier un ADNc résultant d'une quantité d'ARN faible au départ et encore réduite dans l'échantillon par l'action parasite de la DNAse sur l'ARN, ce, d'autant plus la DNase est utilisée dans des conditions d'activité en excès qui permettent d'éliminer toute trace d'ADN contaminant avant inactivation de cette enzyme restant dans l'échantillon par chauffage à 850C pendant 10 minutes.Cette variante de la technique PCR décrite par Shih et coll, a été utilisée sur des fractions de virions, purifiés comme précédemment pour les surnageants congelés des cultures LM7, issus cette fois de lignée lymphoblastoïde B spontanée provenant d'un nouveau cas de SEP, de la culture PLI-2 (ECACC n 92072201) et de la culture LM7PC (ECACC n 93010817), ces deux dernières cultures ayant été obtenues selon les méthodes ayant fait l'objet du brevet n WO 93/20188.
Les produits issus de la PCR et de la RT-PCR ont été purifiés après purification sur gel d'agarose selon les méthodes conventionnelles (Sambrook J., Fritsch E.F., et Maniatis T., Molecular cloning, a laboratory manual. Cold spring harbor laboratory press, 1989), puis resuspendu dans 10ml d'eau distillée. Une des propriétés de la polymérase Taq consistant à ajouter une adénine à l'extémité 3' de chacun des deux brins d'ADN, 1'ADN obtenu a été directement inséré dans un plasmide à l'aide du kit TA C1oning (British Biotechnology). Les 2p1 de solution d'ADN ont été mélangés avec 5b1 d'eau distillée stérile, 1Z1 d'un tampon de ligation 10 fois concentré "lOx LIGATION BUFFER", 2 1 de "pCRTM VECTOR" (25 ng/ml) et 1 1 de "TA DNA LIGASE". Ce mélange a été incubé une nuit à 120C. Les étapes suivantes ont été réalisées conformément au instructions du kit TA Cloninge (British Biotechnology). A la fin de la procédure, les colonies blanches de bactéries recombinantes (white) ont été repiquées pour être cultivées et permettre l'extraction des plasmides incorporés selon la procédure dite de "miniprep" (Sambrook J., Fritsch E.F., et Maniatis T., Molecular cloning, a laboratorj manual.Cold spring harbor laboratory press, 1989). La préparation de plasmide de chaque colonie recombinante a été coupée par une enzyme de restriction appropriée et analysée sur gel d'agarose. Les plasmides possédant un insert détecté sous lumière UV après marquage du gel au bromure d'éthidium, ont été sélectionnés pour le séquençage de l'insert, après hybridation avec une amorce complémentaire du promoteur Sp6 présent sur le plasmide de clonage du TA Cloning Kit.
La réaction préalable au séquençage a ensuite été effectuée selon la méthode préconisée pour l'utilisation du kit de séquençage "Prism ready reaction kit dye deoxyterminator cycle sequencing kit" (Applied Biosystems, ref. 401384) et le séquençage automatique a été réalisé avec l'appareil "automatic sequencer", modèle 373 A Applied Biosystems selon les instructions du fabricant.
Cette technique a d'abord été appliquée à deux fractions de virions purifiés comme décrit ci-après, sur saccharose à partir de l'isolat "POL-2" produit par la lignée PLI-2 d'une part, et à partir de l'isolat MS7PG produit par la lignée LM7PC d'autre part: les surnageants de cultures sont collectés deux fois par semaine, précentrifugés à 10 000 tr/min pendant 30 minutes pour éliminer les débris cellulaires, et ensuite congelés à -800C ou utilisés tels que pour les étapes suivantes. Les surnageants frais ou décongelés sont centrifugés sur un coussin de PBS-glycérol 30% à 100 000g (ou 30 000 tr/min dans un rotor LKB-HITACHI de type 45 T) pendant 2h à 40C.
Après élimination du surnageant, le culot sédimenté est repris dans un petit volume de PBS et constitue la fraction de virions concentrés, mais non purifiés. Le virus concentré est ensuite déposé sur un gradient de sucrose dans un tampon PBS stérile (15 à 50% poids/poids) et ultracentrifugé à 35 000 tr/min (100 000g) pendant 12 h à +40C dans un rotor à godets. 10 fractions sont recueillies et 20p1 sont prélevés dans chaque fraction après homogénéisation pour y doser l'activité transcriptase inverse selon la technique décrite par H.
Perron et coll. (Res. Virol. 1989; 140, 551-561). Les fractions contenant le pic d'activité RT de type LM7 sont ensuite diluées dans du tampon PBS stérile et ultracentrifugées une heure à 35 000 tr/min (1000 000 g) pour sédimenter les particules virales. Le culot de virions purifiés ainsi obtenu est alors repris dans un petit volume d'un tampon adéquat pour l'utilisation ultérieure qui en sera faite (Ex. Tampon Guanidium Thiocyanate pour l'extraction des ARN; PBS stérile pour le stockage à -80 C).
Les séquences clonées et séquencées à partir de ces deux échantillons ont été analysées à l'aide du logiciel Geneworkse sur la dernière version (nO 79, novembre 93) à ce jour de la banque de données Genebanke.
Elles correspondent à quatre catégories. Une première catégorie de séquence (type 1), correspond à des séquences amplifiées à partir de matériel nucléique rétroviral contaminant la transcriptase inverse du MoMuLV utilisée pour l'étape de synthèse de l'ADN complémentaire, ainsi que cela a déjà été signalé précédemment. La deuxième catégorie (type 2), retrouvée dans la majorité des clones (55% des clones issus des isolats POL-2 des culture PLI-2, et, 67% des clones issus des isolats MS7PG des cultures LM7PC) correspond à une famille de séquences "pol" proches mais différentes du rétrovirus endogène humain dénommé ERV-9 ou HSERV-9.
La quatrième catégorie correspond à diverses séquences trouvées généralement en un exemplaire, ainsi qu'une de type rétroviral endogène, cependant jamais retrouvées par d'autres approches ou dans d'autres échantillons provenant de culture exprimant une activité transcriptase inverse de type LM7.
La deuxième catégorie de séquences rprésentant la majorité des clones est constituée de séquences dont la variabilité permet de définir quatre sous-familles de séquences. Ces sous-familles sont suffisamment proches entre elles pour qu'on puisse les considérer comme des quasi-espèces provenant d'un même rétrovirus, tel que cela est bien connu pour le rétrovirus HIV-1 par exemple (Meyerhans et al., Cell 1989; 58, 901-910), ou comme le resultat de l'expression de plusieurs provirus endogènes co-régulés dans les cellules productrices, puisqu'appartenant à la même famille de rétrovirus endogène et donc sensibles aux mêmes signaux de régulation générés éventuellement par le provirus réplicatif (Linial M.L. and Miller A.D. dans "Current topics in microbiology and immunobiology.
Cet espace est le siège d'infiltrations d'air et d'eau en particulier à l'avant du véhicule, ce qui entraîne des problèmes acoustiques et d'étanchéité. La présente invention a pour but de résoudre ces problèmes techniques de manière satisfaisante., Ce but est atteint au moyen d'un système optique pour dispositif d'éclairage ou de signalisation de véhicule automobile comprenant notamment un vitrage destiné à obturer au moins partiellement un boîtier de lampe fixé dans une cavité de carrosserie, caractérisé en ce que ledit vitrage comporte un surmoulage périphérique en matériau élastiquement déformable portant d'une part, un élément de liaison étanche avec la carrosserie et, d'autre part, sur au moins une partie de
son pourtour, un élément d'assemblage avec ledit boîtier.
Selon une caractéristique avantageuse, ledit élément de liaison étanche avec la carrosserie comporte une lèvre destinée à venir en appui
contre le rebord de ladite cavité.
Selon une autre caractéristique, ledit élément d'assemblage
comporte un pied destiné à être rendu solidaire dudit boîtier.
Selon un mode de réalisation particulier, au moins une partie du bord périphérique du vitrage est conformée de façon à définir un
logement pour l'élément d'assemblage avec le boîtier.
Dans ce cas, l'élément d'assemblage est fixé dans ledit logement
et surmoulé sur le rebord du boîtier.
Selon une variante de réalisation, ledit élément d'assemblage
comporte un organe d'accrochage sur le rebord du boîtier.
Selon encore une autre caractéristique, la face extérieure du
vitrage est affleurante avec ledit surmoulage.
Selon un autre mode de réalisation, ledit surmoulage est pourvu
d'un organe de fixation sur la carrosserie.
Les deux catalyseurs sont mélangés en suspension à la solution sucrée dans un mélangeur 4. Le mélange obtenu est introduit à la partie supérieure 5 d'une colonne pulsée 6. La colonne pulsée 6 est contrôlée en température. Selon l'invention, la température est supérieure à 1500 C, notamment de l'ordre de 1650 C.
Simultanément, on introduit en continu à la partie inférieure 7 de la colonne pulsée 6, un solvant d'extraction du HMF produit. La solution sucrée étant avantageusement une solution aqueuse, le solvant d'extraction utilisé est avantageusement la MIBC. En partie supérieure 5 de la colonne pulsée 6, on récupère le solvant d'extraction qui a circulé à contre-courant et qui est chargé en HMF. Ce solvant chargé en HMF est passé à travers un évaporateur 8 qui fournit en sortie 9 une solution concentrée de HMF exempte de sucres et de sous-produits, et notamment exempte d'aldohexoses.
A la partie inférieure 7 de la colonne pulsée 6, on récupère le reliquat de solution sucrée non transformée en HMF avec les catalyseurs en suspension. Ce mélange est passé au travers d'un filtre 10 qui permet de séparer les phases liquides et solides. La phase solide constituée des catalyseurs est recyclée directement ou à travers un four de régénération 11 dans le mélangeur 4. La phase liquide est évacuée directement ou vers un épurateur.