INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Si le signal est émis par le transducteur I à la Figure 4, il est réfléchi le long du trajet d'écoulement par le transducteur récepteur II et est ensuite réfléchi dans le transducteur I vers le transducteur II. Le deuxième signal reçu par le transducteur II est "l'écho 3L".
D'autres échos peuvent aussi être détectés. Par exemple, le transducteur I peut détecter l'écho 2L après une réflexion unique sur le transducteur II.
L'utilisation de mesures de phase venant d'un écho 3L permet d'effectuer les mesures indépendamment et d'affiner tel en éliminant le besoin de calibrage.
On mesure efl +, ef2*+, efl*-, ef2*- dans une deuxième analyse de phase, pendant l'écho 3L, le signe * indiquant une mesure d'écho 3L.
Ces mesures sont traitées, d'une manière équivalente aux valeurs précédentes, afin de dériver d*+ et d*-.
Cependant, dans le calcul de d*, d* est situé dans la plage de 1398 ps à 2198 ps pour une longueur de trajet acoustique de 180 mm et des valeurs Q de transducteurs de 25. Ces valeurs sont supérieures à 1 f1 - f2 de sorte qu'il faut une procédure pour identifier une valeur appropriée de nl - n2. Pour un codage initial, la valeur du terme n1 - n2 devrait toujours être de 1. Pour des gaz autres que le méthane, il faut vérifier la faisabilité. Ceci prend la forme d'une boucle.
si d+ ou d- d (max) soustraire 1 de (n1 - n2) et recalculer d.
On doit pouvoir ensuite prédire d* précisément comme 2(d-tel) + tel On effectue donc une boucle semblable sur d*.
si d*+ ou d*- d*(max) soustraire 1 de (n1 - n2) en utilisant d* min et max comme 3d - 2tel + 1/2f pour ajuster (nl - n2)*.
Toute instruction conditionnelle utilise ces bits de status pour déterminer un déroulement de programme. Les notations et définitions de bits du registre de status sont les suivantes.
* bit O U bit d'utilisateur établi ou rétabli par l'utilisateur; ce bit est utilisé dans la condition ?U.
* bit 1 U1 le bit d'utilisateur est établi ou rétabli par l'utilisateur.
* bit 2 B/L bit de sélection du mode de lecture/ écriture de la mémoire de données.
* bit 3 El Interruptions d'autorisation globale. Ce bit autorise/inhibe les interruptions masquables du BBSP.
0 = inhibition de la requête d'interrup tion globale masquable.
1 = autorisation de la requête d'inter ruption globale masquable.
* bit 4 Ell Interruption d'autorisation 1:1 = inter ruption autorisée, 0 = interruption inhibée.
* bit 9 C Report : ce bit de status est établi par des instructions arithmétiques lorsque l'opération donne un report.
Une soustraction A - B est considérée comme une addition A +(-B) et le report est établi en conséquence (inverse de retenue).
C = O si A < B; C = 1 si A 2 B.
L'opération A NEG A est effectuée comme une addition de SA + 1 et un report est établi en conséquence.
* bit 10-12 D10-12 Numéro de page pour adressage direct.
* bit 13 PZ Zéro précédent : PZ est une pile à un niveau pour le bit Z. PZ est chargé avec Z lorsque le status de mise à jour est requis.
* bit 14 Z Zéro : passé à un par la CPU si le résultat de l'opération précédente était O; autrement, effacé.
* bit 15 N Négatif : la CPU établit ce bit à la valeur du bit le plus significatif (bit de signe) du résultat de l'opération précédente.
Par nprotéine immunologiquement apparentéen on entend toute protéine reconnue par des anticorps dirigés de façon spécifique contre la thaumétopoéine.
Plusieurs techniques peuvent naturellement être envisagées pour la réalisation du procédé décrit cidessus. On aura par exemple recours à la technique immuno-enzymatique ELISA décrite dans les exemples, à la technique de dosage radio-immunologique.
Dans le cas du dosage des IgE, on aura avantageusement recours à un test de "radioallergosorbant" (RAST). Dans ce test qui reprend les étapes des tests RIA, l'antigène en l'occurence la thaumétopoéine est fixé de façon covalente à un support tel qu'un disque de cellulose.
On pourra également avoir recours à un test de type "radio-immunoabsorbant" (RIST), correspondant à un dosage radio-immunologigue par compétition, des IgE sériques. Une première étape consiste à sensibiliser la plaque avec des anti-IgE et des quantités croissantes d'IgE marquées sont ajoutées pour déterminer la quantité maximale d'IgE que peut fixer la plaque. Dans un second dosage l'échantillon susceptible de contenir les IgE recherchées, est mélangé avec une quantité d'IgE, correspondant à la quantité d'IgE marquées qui se sont fixées sur la plaque lors du premier dosage.
les IgE recherchées, lorsqu'elles sont présentes dans l'échantillon, entrent en compétition avec les IgE marquées, pour se fixer aux anti-IgE. La quantité d'IgE recherchées de l'échantillon sera déterminée par rapport à la quantité d'IgE marquées non fixées dans le second dosage.
Pour la réalisation de ce procédé de détection d'IgE, la thaumétopoéine mise en oeuvre peut être celle isolée chez la chenille processionnaire du pin, ou la thaumétopoéine de la chenille processionnaire du chêne.
Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention le procédé de détection est caractérisé en ce que la thaumétopoéine est fixée sur un support et en ce que la détection du complexe thaumétopoéine-IgE, est réalisée à l'aide d'un anticorps anti-IgE spécifique d'espèce, marqué par exemple par une enzyme.
Tous les supports habituellement utilisés pour fixer les protéines peuvent être utilisés.
L'anticorps spécifique d'espèce, utilisé pour révéler la présence du complexe thaumétopoéine-IgE est marqué par exemple avec une substance radioactive, un marqueur fluorescent ou chemoluminescent ou avantageusement par une enzyme susceptible d'être ensuite révélée par mise en contact avec son substrat, de préférence grâce à une réaction colorée.
Selon une variante de l'invention, le procédé de détection est caractérisé en ce que la détection du complexe thaumétopoéine-IgE, est réalisée à l'aide d'un ligand capable de se fixer sur les IgE, ce ligand étant marqué, par exemple par une enzyme.
Un procédé avantageux de détection in vitro, entrant dans le cadre de la définition générale donnée ci-dessus est caractérisé en ce qu'il comprend - la mise en contact de l'échantillon testé le cas échéant dilué, avec la thaumétopoéine préalablement fixée sur un support, par exemple fixée dans les puits d'une plaque, - le lavage pour éliminer les protéines libres contenues dans l'échantillon testé, - l'addition d'anticorps anti-IgE spécifiques d'espèce, marqués par exemple par une enzyme, dans des conditions permettant la réaction de ces anticorps avec les IgE réagi avec la thaumétopoéine, - le lavage pour éliminer les anticorps anti-IgE libres, - l'addition d'un substrat spécifique de l'enzyme, pour révéler par exemple par coloration, la présence d'anticorps anti-IgE ayant réagi avec les IgE de 1 'échantillon testé, - le cas échéant, le dosage de la quantité d'IgE de l'échantillon testé, ayant réagi avec la thaumétopoéine, par exemple par la mesure de la densité optique.
La détection des IgE dirigées contre la thaumétopoéine est qualitative, voire quantitative après avoir établi des courbes d'étalonnage.
Pour la réalisation du test de détection, la thaumétopoéine et l'échantillon sont préparés selon des concentrations relatives permettant la réaction. Ces concentrations ont été décrites dans les exemples pour la réalisation d'un test ELISA et l'homme du métier est en mesure d'adapter ces données à d'autres types de tests décrits.
L'invention a également pour objet un kit pour la détection in vitro dans un échantillon biologique, de la présence d'anticorps de type IgE, dirigés de façon spécifique contre la thaumétopoéine ou une protéine immunologiquement apparentée, caractérisé en ce qu'il comprend - la thaumétopoéine ou une protéine immunologiquement apparentée, fixée sur un support, - un anticorps anti-IgE spécifique d'espèce, - un marqueur capable de se fixer à l'anticorps anti-IgE, - le cas échéant un révélateur du marqueur, - le cas échéant un témoin négatif et/ou un témoin positif.
Selon un mode de réalisation préféré de ce kit, le marqueur est une enzyme et le révélateur est son substrat.
L'invention a également pour objet des fractions de la thaumétopoéine, capables de déclencher une réaction d'allergie chez l'homme ou chez l'animal, réaction se manifestant par la production d'IgE reconnaissant la thaumétopoéine et en particulier la fraction testée.
Ainsi, alors que selon la disposition décrite dans la demande de brevet de la demanderesse FR 9204834 mentionnée plus haut, la turbine 4 se monte sur le piston à l'intérieur du convertisseur 1, donc en aveugle, et la mise en place des rivets 15 s'effectue par tatonnement, l'invention permet d'effectuer le montage de la turbine 4 sur le piston 7 et la pose des rivets 15, à l'extérieur de la cloche 2.
Le montage du convertisseur 1, pourra donc être réalisé selon les étapes suivantes, dans l'ordre indiqué ou dans un ordre différent: - montage de l'amortisseur 10, sur la cloche 2, - montage du joint 17, dans la gorge 16 du moyeu de piston 13, - montage de la rondelle 12, sur le piston 7, -montage du piston 7, sur le moyeu de piston 13, - montage de l'ensemble rondelle 12, piston 7, moyeu de piston 13, dans la cloche 2, - montage de I'élément de serrage 11, sur l'amortisseur 10, - montage du plateau 6, sur le moyeu de turbine 14, - montage de l'ensemble plateau 6, moyeu de turbine 14, sur le moyeu de piston 13.
Enfin la fonction du repère 20, mentionné plus haut est la suivante.
Lorsque le montage de la turbine 2 est achevé l'opérateur déplace en rotation l'arbre de turbine 5. La rondelle 12 étant solidaire en rotation de celui-ci, si les crans 19 du moyeu de turbine 14 ont été correctement engagés dans les évidements 18 correspondants du moyeu de piston 13, le repère 20 suit l'arbre de turbine 5.
L'opérateur dispose ainsi d'un moyen de contrôle simple et fiable lui permettant de s'assurer que les deux parties 13 et 14 du moyeu, et donc la turbine 4 et le piston 7, sont sont correctement assemblés.
CONDUIT ARTICULE POUR L'ALIMENTATION EN LUBRIFIANT DE PIECES A USINER.
L'invention concerne un conduit articulé pour l'alimentation en lubrifiant de pièces à usiner, constitué de segments tubulaires susceptibles d'être accouplés, à force, les uns à la succession des autres pour former un corps creux modulaire de longueur variable.
Les conduits de ce type sont bien connus sur les machines-outils ou les centres d'usinage et servent à déverser, au voisinage de l'outil, un jet de lubrifiant évitant ainsi son échauffement intempestif.
Ces conduits présentent la particularité d'être constitués d'un corps creux, de longueur variable, formés de segments tubulaires comportant respectivement un embout mâle et un embout femelle, de forme complémentaire, afin de pouvoir être accouplés les uns aux autres pour former une chaîne dont chaque segment constitue un maillon articulé. Afin de permettre une orientation multidirectionnelle de ce conduit, la partie mâle de chaque segment est avantageusement constituée d'une portion de sphère et la partie femelle est formée d'un siège, également en portion de sphère, dont les dimensions sont complémentaires de celles de la partie mâle, de manière à constituer une articulation à rotule. Ainsi, le conduit peut être mû dans toutes les directions en un point quelconque de sa longueur simplement en agissant sur deux segments contigus.
Le coefficient de frottement entre deux segments contigus du conduit est suffisamment élevé pour que celui-ci ne puisse pas fléchir ou se déformer de lui même, ledit conduit devant en effet rester orientable mais rigide et notamment être insensible aux vibrations. Les articulations entre segments sont uniquement destinées à permettre une orientation manuelle de tout ou partie du conduit pour diriger le jet de lubrifiant sur la partie de l'outil ou de la pièce à usiner la mieux appropriée. Après ce réglage, le conduit doit rester en place selon l'orientation qui lui a été donnée.
Or, on observe fréquemment que ce réglage manuel, par nature grossier, ne permet pas de diriger avec précision le jet de lubrifiant, ce qui amène l'opérateur à devoir, en cours d'usinage, tenter d'agir sur la partie du conduit la plus proche de l'outil pour affiner la position du jet. Cette opération est délicate et dangereuse et se fait par des tâtonnements successifs qui vont à l'encontre des règles de sécurité. En outre, elle est peu fiable car l'opérateur, craignant de s'exposer, contrarie plus qu'il ne l'ajuste l'orientation du jet, ce qui peut être préjudiciable à l'outil ou à la pièce en cours d'usinage.
L'invention a pour but de remédier à ces inconvénients et concerne un dispositif de réglage fin de l'orientation du jet du lubrifiant, conçu pour agir sur au moins deux segments contigus du conduit afin de permettre par un effet multiplicateur, de modifier cette orientation, et par suite, celle de la buse d'extrémité.
Selon un mode de réalisation préférentiel, ce dispositif est constitué d'un étrier en forme de U dont les ailes latérales sont découpées pour former des griffes ouvertes, l'âme de cet étrier comportant un trou taraudé pour recevoir une vis de réglage dont l'axe est situé à égale distance desdites griffes.
Avantageusement, ce dispositif est amovible et peut être fixé en toutes positions relatives du conduit, l'ouverture des griffes étant au moins égale au plus faible diamètre des segments modulaires pour pouvoir être mobile en rotation à 3600 sur lesdits segments.
Selon une autre caractéristique préférentielle, la vis de réglage agit sur la zone de transition des parties mâle et femelle d'un segment tubulaire, en réaction aux deux autres segments contigus retenus par les griffes de l'étrier et situés de part et d'autre du segment intéressé par la vis.
D'autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description ci-après et des dessins annexés dans lesquels - la figure 1 est une vue en perspective d'un conduit articulé, tel que connu dans le commerce, et formé de segments tubulaires accouplés les uns aux autres pour constituer un conducteur de lubrifiant de longueur déterminée, - la figure 2 est une vue en perspective du dispositif de réglage de l'orientation du conduit articulé, - la figure 3 est une vue schématique du dispositif de réglage fixé en un point de la longueur du conduit articulé.
PARTIE EXPERIMENTALE 1) Isolation de l'ADNc du Cytochrome P450 catalysant I'hydroxyîation du tr-cinnamate dans les tubercules de topinåmbour'('C 4H = cinnamate 4-h,ydroxylase.E.C.1.14.13.1).
La procédure de clonage de la CA4H met en oeuvre des méthodes classiques de la biologie moléculaire connues de l'homme de l'art. Le protocole de purification, ainsi que l'obtention d'un anticorps anti-CA4H spécifique à l'aide de la protéine purifiée, est décrit dans la littérature scientifique (Gabriac et al, Archives of Biochemistry and Biophysics, 1991, Vol 288, pp 302-309) et n'est pas repris en détail ici. Brièvement, des tranches de tubercules de topinambour, incubés dans un milieu contenant du manganèse pour induire la synthèse de l'activité enzymatique de la CA4H, constitue le matériel de départ pour la préparation de la fraction microsomale. Il suit une première étape d'enrichissement en CA4H par une partition de phases en triton X-114, et deux étapes de chromatographie sur DEAE-Trisacryl et sur Hydroxylapatite.
La protéine ainsi purifiée, qui montre un poids moléculaire apparent de 57KD en gel SDS-Acrylamide, a été utilisé pour la fabrication d'anticorps polyclonaux. Ces anticorps réaissent de manière sélective avec un polypeptide de 57 KD en Western blot et inhibent aussi fortement l'activité CA4H dans des microsomes de différentes es peces régétales. Leur utilisation pour cribler une banque d'ADNc de topinambour dans le phage lambda go11, obtenue à partir de tubercules induits pour la surexpression de la CADI, a permis d'isoler un fragment d'ADNc de 1130 bp présentant des séquences caractéristiques de cytochromes P450 bactériens, fongiques ou animaux. Ce fragment a été ensuite utilisé comme sonde pour cribler une deuxième banque d'ADNc de topinambour dans le phage lambda gtiO construite par amorçage à l'oligodT. Ceci a permis dtiso- ler un clone de 1608 bp qui présente toutes les séquences caractéristiques d'un P450 et la séquence complète est montré en figure 1. Cet ADNc peut être identifié comme étant celui de la CA4H de topinambour pour des raisons suivantes : a) les pH isoélectriques de la protéine purifiée et celui calculé du polypeptide issu de l'ADNcr sont tous deux voisins de pH 9,0 b) l'anticorps anti CA4H reconnalt dans la banque d'expression un polypeptide de fusion présentant des séquences caractéristiques de P450 c) la partie 5' terminale du polypeptide déduit de l'ADNc isolé par criblage immunologique avec un anticorps spécifique anti-CA4H est totalement identique à la séquence N-terminale de la CA4H purifiée.
Nous disposons donc de la première séquence nucléotidique codant pour un cytochrome P450 d'origine végétale de fonction connue, déterminée à ce jour.
2)'clonage de la région codante de la CA4H de Topinambour dans le vecteur d'expression de levure pYEDP 60 La méthode de clonage schématisée en figure 2 fait appel à une étape d'amplification par PCR, qui par un choix judicieux des oligonucléotides servant d'amorces pour la PCR, résulte en l'amplification sélective de la région codante de la CA4H, débarrasse l'ADNc amplifié des bordures 5' et 3' non-codantes et introduit également des sites de restriction convenables pour la suite du sousclonage. Après un passage du fragment d'ADNc amplifié possédant des bouts francs dans pUC 19 digéré par SmaI, le plasmide pCA4H ainsi obtenu est ensuite digéré par des enzymes de restriction adéquats flanquant le fragment d'ADNc, qui ont été préalablement introduits par PCR.Le vecteur de levure pYEDPGO est ensuite digéré au niveau du site de multiclonage situé entre le promoteur GAL10/ CYCi et le terminateur PGK de façon à générer un vecteur linéaire comprenant des bouts compatibles avec le fragment d'ADNc contenant la région codante de la CA4H. Puis on procède à la recircularisation dans un milieu réaction nel comprenant le vecteur linéarisé, le fragment d'ADNc contenant la CA4H et de la ligase.Le vecteur recircularisé ainsi obtenu contient les séquences nécessaires à la propagation chez E. coli (origine de replication et Le gène bla conférant la résistance à l'ampicilline chez E. coli), à la propagation chez S. cer (origine de replication chez S. cer et les gènes URA3 et ADE2 permettant de complémenter les auxotrophies de la souche hôte), ainsi que les signaux de régulation permettant l'induction de l'expression de I'ADNc codant pour la CA4H en milieu galactosé (figure 2). Toutes les méthodes utilisées afin de réaliser c clonage sont des méthodes standard et bien décrites dans des livres de référence (Sambrook, Fritsch and Maniais, 1989, Molecular Cloning, 2 éd., CSH Laboratory Press).La construction du vecteur de levure pYEDP 60 a été décrit dans la littérature (Urban, Cullin et Pompon, 1990, Biochimie, 72, pp 463-472).
3) Caractérisation de l'activité enzymatique de la CA4H chez S. cer.
3.1) Description de l'environnement génétique de la souche WRCA En figure 3 est schématisé la souche de levure WRCA qui a été construite de façon à surexprimer simultanément en milieu galactose la CA4H exogène et la P450 Réductase endogène. La souche WRCA est obtenue par transformation de la souche PES 1-3U par le plasmide pCA4H/ YeDP6O décrit ci-dessus. La souche PES 1-3U, qui porte comme mutations connues Ura31 Ade2, Hisl, et Leu2, a été transformée selon une méthode standard au chlorure de li thium (Pompon, 1988, Eur. J. Biochem., 177, pp 285-293), suivie d'une sélection pour la restauration du phénotype videz qui est apporté en présence du plasmide.La souche PES 1-3U, dont la description détaillée fait objet d'une demande de brevet en France nO 91 08884, a été déposée auprès de la Collection Nationale des Cultures et de Microorganismes le 17 mars 1992, sous le numéro de dépit 1-1187. Cette souche haploïde (mating type alpha) est complètement isogénique à la souche de laboratoire W303.1B, sauf la région promotrice précédant la phase codante de la P450 Réductase endogène, qui est modifiée par recombinaison homologue de façon à remplacer le promoteur naturel de la P450 Réductase par le promoteur inductible GAL10-CYC1.
3.2 Détermination de la concentration en Cytochrome P450 dans la fraction microsomale de la souche WRCA On réalise une préculture (150 ml) de la souche WRCA en milieu SW5 à 280C sous agitation modérée (100 rpm) jusqu a une densité cellulaire de 3 OD, puis on ajoute 1 vol)vol de milieu YPGAL (induction de la CA4H et de la P450 Réductase) et on continue la culture jusqu'à une densité cellulaire de 10 OD. On arrete la culture par centrifugation des cellules puis on procède à la préparation des microsomes selon un procédé standard impliquant la casse mécanique des cellules (Cullin et Pompon, 1988, Gene, 65, pp 203-217).On obtient ainsi une solution homogène de microsomes de 2,8 ml, conservée à -800C sous forme d'aliquots de 100 microlitres, et qui sert de solution stock pour toutes les expériences décrites par la suite. Pour mesurer la concentration totale en protéines dans cette solution stock de microsomes on se sert de la méthode de Pierce avec la serumaîbumine comme standard.
La concentration globale en Cytochrome P450 contenu dans ces microsomes est mesurée par spectrophotométrie différentielle selon la méthode décrite par Omura et Sato (1964, J. Biol. Chem. 239, pp 2379-2387) qui met en évidence la formation du pic caractéristique d'absorption autour de 450 nm du Cytochrome P450 réduit après fixation d'une molécule de monoxide de carbone sur l'atome fer du chromophore, par rapport à la forme réduite du cytochrome P450 en absence de monoxide de carbone.Plus précisément, on répartit dans deux cuvettes spectrophotométriques des quantités égales de la solution stock de microsomes (environ 2 mg de protéines toales) diluée 10 fois dans un tampon composé de 50 mM Tris-Hcl pH 7,4 et 1 mM EDTA et à laquelle on a ajouté auparavant quelques graines de dithionite de sodium afin de réduire totalement les cytochromes P450 présents dans les microsomes et de consommer tout oxygène libre dissous dans la solution.Les deux cuvettes contenant des quantités égales de microsomes réduits servent à faire la ligne de base entre 400 et 500 nn. On fait ensuite barboter une dizaine de bulles de monoxide de carbone dans la cuvette d'essai, ce qui mène à la formation du pic d'absorption vers 450 nm dû à la fixation du monoxide de carbone à l'ion fer du groupe hème présent dans le cytochrome P450, par rapport aux microsomes réduits dans la cuve témoin. En se servant du coefficient d'absorption qui est de 91 mM 1.cl 1 pour les cytochromes P450 on peut déduire directement de l'amplitude du pic la concentration totale en cytochromes P450 contenu dans les microsomes. Dans la figure 4 est montré le spectre de différence en présence de monoxide de carbone obtenu avec une solution de microsomes 10 fois diluée de la solution stock. A partir du spectre qui montre le pic caractéristique à 453,5 nm, nous avons déterminé la concentration globale dans les microsomes après induction est de 1,2 micromolaire. La culture de contrôle (PES 1-3U) ne montrant dans les mêmes conditions expérimentales et les mêmes conditions de sensibilité aucune trace détectable de cytochromes P450 nous pouvons conclure que le pic observé avec les microsomes de la culture induite de la souche WRCA doit provenir de l'expression de 1'ADNc de la CA4H sur le plasmide.
3.3 Obtention d'un spectre de perturbation de type I suite à l'ajout de l'acide tr-cinnamique aux micro somes obtenues à partir de la culture induite de la souche WRCA Une des propriétés les plus intéressantes des cytochromes P450 est la possibilité de pouvoir monitorer l'interaction de différentes molécules avec le site actif.