INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Cependant, et comme on l'a vu, il y a dans cette zone utile, dans le visage, des zones de forte expression faciale dont le rendu doit être le plus fidèle possible, à savoir par exemple celles de la bouche et de chaque oeil. Le codage ultérieur tiendra compte de ces zones dites d'intérêt particulier, qui peuvent être traitées indépendamment ou au contraire dans une seule fenêtre. On a choisi ici, comme indiqué sur la figure 9, de distinguer trois fenêtres séparées, pour chaque oeil et pour la bouche, en incluant éventuellement le nez et une partie des joues, mais le choix plus simple d'une seule fenêtre, ici limitée strictement aux yeux et à la bouche, est possible également. On décrira ci-après ces deux options, mises en oeuvre, dans l'un ou l'autre cas, par un circuit 302 dit de sélection de zones d'intérêt particulier et de détermination de leur mouvement.
Dans le cas d'une seule fenêtre, on retient, selon l'un ou l'autre des trois formats cités plus haut (CIF, QCIF, ou format 4/3), les coordonnées du coin supérieur gauche, notées (xG, y,), , et celles du coin inférieur droit (x. y,) de la fenêtre, ce qui donne ici par exemple (a) format 4/3 XG = Xe (tempe gauche) + dist x YG = y, (oeil gauche) - dist y1 XD = x, (tempe droite) - dist x YD = y, (bouche) + dist y2 expressions dans lesquelles xc(.) et y,(.) désignent les coordonnées des points caractéristiques, et dist x, dist yt, dist y2 sont des valeurs qui permettent d'ajuster la taille de la fenêtre (pour ce format, on a choisi : dist x = de O à 40 pixels, dist yt = 45, dist y2 = 40).
(b) formats CIF et QCIF : même détermination que dans le cas maintenant examiné de trois fenêtres distinctes.
Dans le cas de trois fenêtres, les coordonnées, pour l'un ou l'autre des trois formats, sont déterminées comme suit (a) format 4/3 (a) pour la bouche (BO), la fenêtre est définie à partir des points caractéristiques de la bouche et des coins des yeux, toutes les valeurs ci-après, telles que 20, 40, etc... correspondant à des exemples qui ont été testés et vérifiés xG(BO) = x, (oeil gauche, coin gauche) y,(BO) = y, (bas du nez) + 20 xD(BO) = x, (oeil droit, coin droit) YD(BO) = y, (bouche, point inférieur) + 40 (a2) pour l'oeil gauche (OG), la fenêtre est définie à partir des points caractéristiques des tempes et des yeux xG(OG) = x, (tempe gauche) + 40 YG(OG) = y, (oeil gauche, coin gauche) - 35 xD(OG) = Xc(tempe gauche)+xc(tempe droite))/2 yD(OG) = oeil gauche, coin gauche)+35 (a3) pour l'oeil droit (OD), la fenêtre est définie également à partir des points caractéristiques des tempes et des yeux xG(OD) = (xc(tempe gauche)+xc(tempe droite))/2 yG(OD) = oeil droit, coin droit)-35 xD(OD) = tempe droite)-40 yD(OD) = oeil droit, coin droit)+35 (b) en format CIF, les coordonnées de fenêtre sont données par les égalités suivantes (dans lesquelles l'expression "fenêtre concernée" désigne respectivement la fenêtre bouche, oeil gauche, ou oeil droit), telles que définies ci-dessus pour le format 4/3 XG(CIF) = (xG(fenêtre concernée)+19)/2 yG(CIF) = (yG(fenêtre concernée)+32)/2 xD(CIF) = (xD(fenêtre concernée)+19)/2 yD(CIF) = (yD(fenêtre concernée)+32)/2 (c) en format QCIF, les coordonnées de fenêtre sont de façon similaire données par les égalités suivantes XG(QCIF) = (XG( fenêtre concernée)+19)/4 yG(QCIF) = (yG(fenêtre concernée)+32)/4 xD(QCIF) = (xG(fenêtre concernée)+19)/4 YD(QCIF) = (yG(fenêtre concernée)+32)/4 La taille de la ou des fenêtres ainsi définies est ensuite adaptée à un multiple MUL de la taille des blocs qui vont être utilisés pour le codage, en l'arrondissant par exemple au nombre entier de blocs immédiatement supérieur. Les valeurs aux et hy ainsi ajoutées à la taille réelle de la ou des fenêtres, comprises entre 0 et, au maximum, la taille d'un bloc ou d'un macrobloc, sont réparties uniformément des deux côtés de la fenêtre concernée, ce qui donne de nouvelles coordonnées XG, YG, X1), : XG(fen) = xG(fen) - Ax(fen) YG(fen) = yG(fen) + hy(fen) XD(fen) = xD(fen) + Ax(fen) YD(fen) = yD(fen) - ty(fen) Enfin, lorsque ces fenêtres sont en mouvement dans une séquence d'images, les coordonnées d'une fenêtre de la trame de rang N sont déduites des coordonnées de fenêtre définies dans la trame de rang (N-1) selon les expressions suivantes XG(fenN) = XG(fenn-1) - DEPL(x)N YG(fenN) = YG(fenN-1) DEPL(Y)N-1 XD(fenN) = XD(fenN-1) - DEPL(x)N-1 YD(fenN) = Y,D(fenN-1) - DEPL(y)N-1 dans lesquelles DEPL(x)N~1, DEPL(y)N 1 représentent les composantes en x et en y du déplacement de la trame N par rapport à la trame (N-1).
La réactualisation des informations utiles est donc réalisée, après la calibration initiale, de la façon qui vient d'être décrite. Il reste, comme dans le cas de ladite calibration, à effectuer un codage, ici le codage des informations de réactualisation. Cette opération est réalisée dans le dispositif de codage 400 par un circuit 431 de codage des informations de sortie du circuit 301 de détermination du mouvement des points caractéristiques et par un circuit 432 de codage des informations de sortie du circuit 302 de sélection de zones d'intérêt particulier.
Le circuit 431 assure le codage, pour chaque point caractéristique, des paramètres calculés précédemment, à savoir : de, d#, dtp, dTx, dTy, DEPL(x), DEPL(y). Ces paramètres sont par exemple codés sur 5 bits, suivant une séquence déterminée pour les retrouver toujours dans le même ordre. Si les points caractéristiques sont, comme on l'a vu, les tempes gauche et droite, l'oeil gauche et l'oeil droit, et le point inférieur du nez et de la bouche, l'ordre de grandeur du nombre de bits transmis est, dans l'exemple décrit, d'environ 95 bits par image.
Le circuit 432 assure, lui, le codage des informations présentes dans la ou les fenêtres englobant la ou les zones d'intérêt particulier (on décrira ci-après le circuit 432 en parlant plutôt d'une fenêtre, mais la généralisation au cas de plusieurs fenêtres trois fenêtres séparées, dans l'exemple cité précédemment - est immédiate). La position et la taille de la (de chaque) fenêtre étant bien définies, on stocke en mémoire la portion d'image originale inscrite dans ces fenêtres, en appelant FEN(i,j) chaque portion d'image composée de i lignes et de j colonnes, et l'on appelle image source cette portion d'image originale incluse dans la fenêtre et qui va maintenant être celle soumise au codage.
Le codage de cette image source est ici réalisé selon un mode de codage hybride, du type des standards MPEG et H261 (le standard MPEG - Moving Pictures Expert Group - et le standard H261, recommandé par le CCITT, sont mentionnés dans l'article déjà cité de la revue IEEE Spectrum), en ce sens qu'il combine un codage d'informations de même origine spatiale (ou codage intra) et un codage d'informations n' ayant pas la même origine spatiale (ici codage par prédiction). Dans le codage dit intra, les informations codées sont propres à une seule et même image, tandis que, dans le codage par prédiction, la prédiction est dite simple si le codage assure une compensation de mouvement unidirectionnelle à partir d'images antérieures à celle en cours de codage (c'est le cas des standards H261 et MPEG) ou bidirectionnelle si le codage assure une compensation de mouvement bidirectionnelle à partir d'images antérieure(s) et postérieure(s) à celle en cours de codage (c'est le cas du standard MPEG uniquement). Ce principe de codage de l'image source est bien adapté au codage des zones de forte expression faciale, qui sont les zones du visage les plus intéressantes mais subissant les déplacements les plus importants.
Pour ce codage d'images animées, il faut donc stocker en permanence, dans le cas d'un codage de type H261, les images originales de rang n et n-1, ou bien, dans le cas ici décrit d'un codage de type MPEG, les images originales de rang n(=image courante), n-1, n-2 et n-3, ce qui est réalisé dans le circuit 432. On considère en outre que le codage est effectué par groupes d'images, les groupes successifs constituant la séquence d'images résultant de la prise de vues d'origine. Chaque groupe d'images est lui-même constitué de plusieurs images, en nombre N compris par exemple entre 8 et 16, et débute toujours par une image codée en intra. La figure 10 montre pour N=10, un exemple d'un tel groupe, dans lequel les images P3, P2, P1 sont déduites respectivement des images P2, P1 et I (image initiale codée en intra) par prédiction simple, et les images B1 à B6 sont déduites chacune d'une image antérieure et d'une image postérieure par prédiction bidirectionnelle (B1 et B2 sont déduites de I et P2 ; B3 et B, de P1 et P2 ; B5 et B6 de P2 et P3). Les flèches portées sur la figure 10 sont destinées à mettre en évidence ce mode de prédiction simple ou bidirectionnelle. Ces précisions étant données, on ne décrira pas davantage ce codage d'images animées, décrit, comme on vient de le rappeler, dans différents documents, notamment l'article "Video compression makes big gains" déjà cité (revue IEEE Spectrum, octobre 1991, vol.28, ne10, pp.16-19).
Ces codages spécifiques du modèle tridimensionnel en mouvement et des fenêtres d'intérêt particulier étant ainsi assures par les circuits 431 et 432, il faut observer que les informations spécifiques codées sont d'origine différente : celles codées par le circuit 431 sont, à un instant donné, des informations de même origine spatiale (mise à jour périodique des coordonnées des points caractéristiques du modèle), tandis que celles codées par le circuit 432 sont, on l'a vu, d'origine plus complexe (images codées en intra, images obtenues par prédiction simple, images interpolées obtenues par prédiction bidirectionnelle). En outre, on observe que les luminances à l'intérieur et à l'extérieur des fenêtres ne coïncident pas nécessairement, en raison du choix des valeurs de luminance I(AMB) et I(INC) effectué pour la détermination de l'ombrage du modèle tridimensionnel. En effet, ce choix ne reflète pas nécessairement les caractéristiques d'éclairement présentes lors de la prise de vues, et la superposition telle quelle de la ou des fenêtres codées sur l'image de synthèse qui est obtenue à partir de l'adaptation des points caractéristiques du modèle tridimensionnel laisse apparaître, du fait de cette différence d'éclairement, la frontière entre les deux régions.
Pour éviter ce décalage de luminance entre 1' image de synthèse et l'image dans les fenêtres, l'ensemble de codage et de décodage qui fait l'objet de la présente description prévoit de le corriger, et cette correction dans la ou les fenêtres concernées peut être effectuée soit dans le système de décodage d'images visiophoniques, soit dans le système de codage. Dans le premier cas, le dispositif de codage 400 n'a pas à prévoir ladite correction. Dans le second cas, le dispositif de codage 400 comprend un circuit 433 de correction de décalage de luminance qui opère comme suit.
La suite de l'exposé sera faite par référence aux figures ci-jointes, et dont les légendes suivent Fiv.1 : l(a), l(b), l(c), l(d), l(e), l(f), l(g), l(h), l(i) : Séquence nucléotidique du brin d'ADN d'HPV42 analogue a l'ARNm. La position 1 sur le génome circulaire a été déterminée par alignement avec les positions 1 de HPVll et HPV39.
Fig.2 : Distribution des codons d'initiation (start) (barres au dessus) et des codons stop (barres au dessous) dans les trois fragments de lecture de 1'ADN d'HPV42, de l'ARNm. Les ORFs ont été identifiés par comparaison avec d'autres types d'HPV. La numérotation est en accord avec celle de la Figure 1.
Fig.3 : Caractéristiques principales de la région non-codante (NCR). Les motifs de séquences suivants de la NCR s'étendant du nucléotide 7346 jusqu'au nucléotide 113 (nt.7346-113) sont représentés. On spécifie, ci-après, certains des éléments, notamment palindromes de 12 bp spécifiques du papillomavirus (nt.7466, 7883, 44, 59) ; site de polyadénylation nt.7401 ; boîte TATA : nt.6,74 ; boîte CAAT nt.15 ; élément promoteur conservé (AAAGGGAGTA) nt.34 ; site de liaison au facteur nucléaire 1 (NF1) : nt.7503, 7663, 7778, 7803 ; site de liaison du facteur associé (NFA) au facteur (NF1) nt.7552 ; site de liaison du facteur associé à l'amplificateur de papillomavirus (PVF) (nt.7760).
Le génome de HPV42, propagé dans le plasmide pSP64 a été sous-clôné par fragmentation au hasard (en anglais : "shotgun") dans le phage N13 et séquencé par la méthode de terminaison de chaîne didésoxy (14). Des parties correspondantes à 93 % de la totalité du génome ont été obtenues à partir de chacun des brins et chacun des nucléotides a fait l'objet de 5 séquençages. Les régions pour lesquelles subsistait un doute ont été séquencées à nouveau dans les deux directions par la mise en oeuvre dans les deux directions d'oligonucléotides synthétiques utilisés en tant qu'amorces. La séquence longue de 7917 bp (Figure 1) a une teneur en GC de 39,5 %. Le nucléotide +1 a été défini par alignement de la séquence avec celles des HPV de types 11 et 39.La carte de restriction déjà publiée (13) a été confirmée, à l'exception de deux sites supplémentaires Accl aux positions 895 et 943, de part et d'autre d'un site BglII.
L'analyse des séqences correspondant aux phases de lecture ouverte (ORF) a révélée la conservation de l'organisation que l'on retrouve dans tous les génomes de HPV (Figure 2) (15, 39). Tous les ORFs sont localisés sur le meme brin d'ADN. La région E4 est incluse de façon complète dans la région E2, tandis que El ainsi que les régions L1 et L2 se superposent partiellement. Ni E4, ni ES ne possèdent un codon départ ATG (Figure 1 ; Tableau 1). Six signaux de polyadénylation (AATAAA) ont été localisés dans le génome. Deux d'entre eux (nt.4378,7401) consistant en une série de thymidines et purines attenantes et un dinucléotide CA (16, 17) étant placé en aval des groupes de gènes fonctionnellement interconnectés (en anglais "clusters") respectivement précoces et tardifs.Tous sont probablement utilisés pour la polyadénylation.
Une région non codante (NCR) d'environ 680 bp est localisée entre le codon d'arrêt de L1 et le codon d'initiation de E6.
Les caractéristiques générales des NCR de tous les HPV sont bien conservées dans HPV42 (Figure 3).
Quatre copies du motif d'amplification ACCGNNNNCGGT restent placés sous la dépendance de E2 (nt.444,59,7466,7883) (18,19), des sites de liaison pour les facteurs de transcription de NF1 (nt.7503, 7663, 7778, 7803) (21, 22), NFA (nt.7552) (20), une protéine d'amplification de papillomavirus (NFA ; nt.7760) (20), deux boîtes TATA (nt.6, 74), une boîte putative CAAT (nt.15) ainsi qu'un élément de promoteur conservé AAAGGGAGTA (nt.34) (23) sont situés dans le NCR. Aucun élément consensus réagissant de façon évidente à un glucocorticoïde (GRE) n'a été localisé dans le NCR (18, 19, 24). On remarque la présence comme chez HPV39 d'un GRE comportant 3 défauts d'appariement ("mismatches") dans 1'ORF de L1 (nt.6555) (8) chez HPV39.
Les protéines E6 et E7 des HPV associées avec des tumeurs malignes ont été reconnues comme jouant un rôle crucial dans la transformation des cellules (25-28). Les motifs Cys-X-X-Cys qui présentent la forme de "doigts de zinc" ("zinc-finger") (29, 30) dont le rôle a été jugé essentiel pour la transformation dans le cas de HPV16, (31) sont présents 4 fois et 2 fois respectivement dans E6 et E7. Des sites potentiels donneurs d'épissage (nt.237), et des sites accepteurs (nt.412) dans 1'ORF de E6 et susceptibles de transcription en un ARNm codant pour une protéine épissée E7, E6*, sont bien conservées dans HPV42 (32-34). Jusqu'à ce jour un site d'épissage n'avait été identifié que dans les HPV associés avec des cancers ano-génitaux (6).
En outre le motif de division cellulaire de la protéine E7 que l'on avait associée à sa capacité de transformation (31, 35-37) est complètement conservé dans HPV42.
Aucune homologie de séquence prononcée avec d'autres types de HPV, dont les séquences sont connues, n'a pu être mise en évidence. Dans une analyse des homologies assistée par ordinateur, des homologies de l'ordre de 52 à 56 % ont été obtenues avec les HPV de type 6b, 11, 16, 18, 31 et 33. I1 s'agit de valeurs dont les faiblesses sont prononcées lorsqu'on les compare aux homologies de séquences que l'on peut observer entre virus d'un même sous-groupe (4-11). En outre 1'HPV42 que l'on associe avec des lésions génitales bénignes, présente des caractéristiques que l'on ne connaissait à ce jour que pour des HPV associés aux seuls carcinomes ; il en est de meme en ce qui concerne la présence d'un site E6* et du motif de division cellulaire conservée dans la protéine E7.
En outre un GRE présent dans les NCRs de tous les HPVs génitaux séquencés jusqu'à ce jour (8), est en revanche absent dans le NCR de HPV42. HPV42 peut donc être considéré comme le premier représentant séquencé d'un nouveau groupe de papillomavirus humains.
I1 résulte donc de ce qui précède que l'organisation du génome est conservée pour HPV42 comme pour tous les HPVs. Malgré son association à des lésions génitales bénignes, HPV42 présente des caractéristiques qui ont à ce jour été trouvées seulement soit chez des HPVs associés à des carcinomes invasifs, soit dans des HPV non génitaux.
Au surplus on ne remarque aucune homologie de séquence étendue de HPV42 avec les HPV connus. La séquence nucléotidique fournie par l'invention témoigne donc de l'identification de la séquence du premier type d'un nouveau sous-groupe de papillomavirus humains.
D'une façon générale, l'invention concerne donc également tout ADN recombinant contenant 1'ADN-HPV susdit ou des fragments de cet ADN-HPV, en particulier des sondes d'hybridation formees de ces ADNs recombinants et spécialement adaptées à la détection d'une infection par HPV42 ou d'un variant ou sous-type de ce papillomavirus.Ces sondes peuvent, soit être marquées elles-mêmes, soit être modifiées au niveau de certains nucléotides, notamment en vue de leur couplage, direct ou indirect, avec un marqueur distinct. I1 va de soi que dans ces sondes les parties étrangères à la séquence nucléotidique correspondante à 1'ADN du papillomavirus et provenant normalement d'un vecteur de clonage, sont telles qu'elles ne risquent pas d'hybrider dans des conditions strictes ou stringentes avec les autres acides nucléiques éventuellement contenus dans l'échantillon testé pour sa teneur éventuelle en ADN du papillomavirus correspondant ou de l'un de ses variants.
Le procédé selon l'invention pour le diagnostic in vitro sur un échantillon biologique à tester, provenant normalement d'un patient humain, d'une infection par un papillomavirus pouvant entraîner ou ayant entraîné une néoplasie génitale, notamment un cancer cervical, vulvaire ou pénien, est donc caractérisé par la mise en contact d'une sonde telle que ci-dessus définie, avec les acides nucléiques de cet échantillon, le cas échéant préalablement rendus accessibles à la sonde, de préférence dans des conditions d'hybridation stringentes, et par la détection de l'hybride formé entre 1'ADN viral recherché, éventuellement présent dans l'échantillon et ladite sonde.
Les déplacements chimiques sont exprimés en ppm par rapport au signal de H3PO4 pris comme référence externe.
5'-O-Diméthylthexylsilyl 2' -didesoxythymidine 2.
La 2'-desoxythymidine 1 (1,09 g, 4,50 mmol.) en solution dans 32 ml de pyridine est mise en réaction avec 1,10 ml (5,50 mmol.) de chlorure de diméthylthexylsilyle durant 48 h.
L'acide libéré est neutralisé par addition d'une solution de bicarbonate de triéthylammonium et le produit est extrait avec du dichlorométhane. La phase organique est concentrée sous pression réduite et chromatographiée sur colonne de gel de silice (éluant : MeOH (0-4%) dans CH2Cl2) pour donner 1,39 g (80%) de 2.
2 UV (EtOH) : X max 266 nm (E 10600) x min 233 nm (E 1700) SM (FAB positif, GT) : 385 (2M+H)+, 127 (TH2)+, RMN H (DMSO-d6) : 6 = 0,11 (s, 6H, (CH3)2Si) ; 0,82-0,87 (m, 12H, H(CH3)2C(CH3)2Si) ; 1,59 (quintuplet, 1H, H(CH3)2)C(CH3)2Si, J = 6,8 Hz) ; 1,78 (s, 3H, CH3) ; 2,06 (m, 2H, H-2', 2'') ; 3,73 (m, 2H, H-5',5'') ; 3,79 (m, 1H, H-4') ; 4,18 (m, 1H, H3') ; 5,28 (d, 1H, OH, J = 3,3 Hz) ; 6,15 (t, 1H, H-i', J = 6,9 Hz) ; 7,43 (s, 1H, H-6) ; 7,73 (sl, 1H, NHCO) ppm.
3'-O-(4-Méthoxytrityl) 5'-O-diméthylthexysilyl 2'-desoxy- thymidine 3.
A une solution de 1,33 g (3,45 mmol.) de 2 dans 11 ml de pyridine sont ajoutés 2,14 g (6,93 mmol.) de chlorure de 4-méthoxytrityle. Après 40 heures, le mélange réactionnel est dilué avec du CH2Cl2 et lavé avec une solution aqueuse de NaHCO3 puis avec de l'eau. La phase organique est séchée sur Na2SO4, concentrée et purifiée par chromatographie sur colonne de gel de silice (éluant : MeOH (0-5%) dans CH2Cl2) pour conduire à 2,19 g (96%) de 3 suffisamment pur pour la suite de la synthèse.
3 UV (EtOH) : À max 266 nm (E 13700) À min 249 nm (E 10400) À max 231 nm (E 19300) À min 227 nm (E 19000) SM(FAB positif, NBA) : 657 (M+H) , 273 (MTr) RMN H (DMSO-d6) : 6 = -0,07 et -0,04 (s et s) ; 3H et 3H, 2CH3Si) ; 0,65-0,73 (m, 12H, H(CH3)2C(CH3)2CSi) ; 1,35-1,60 (m, 3H, H-2',2'' H(CH3)2C(CH3)2Si) ; 1,70 (s, 3H, CH3) 3,40 (H-5' partiellement masqué par l'eau) ; 3,55 (d, 1H, H-5'', J = 13,5 Hz) ; 3,73 (s, 3H, CH3OTr) ; 3,97 (s, 1H, H-4') ; 4,17 (d, 1H, H-3', J = 4 Hz) ; 6,14 (dd, 1H, H-l', J = 6,1 et 8,4 Hz) ; 6,89-7,45 (m, 15H, Tr, H-6), 11,3 (sl, NHCO) ppm.
3'-0-( 4-Méthoxytrityl) 2'-désoxythymidine 4 La désilylation de 2,06 g (3,14 mmol.) de 3 est réalisée à l'aide de 5,70 ml d'une solution 1,1 M de fluorure de tétrabutylammonium dans le THF en 6 h. Le solvant est évaporé et le brut obtenu purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (éluant : MeOH (0-8%) dans CH2Cl2) pour conduire à 1,47 g (91%) de 4.
4 UV (EtOH) : À max 265 nm (E 12100) À min 250 nm (E 10500) À inflex 228 nm (E 18500) SM (FAB positif, NBA) : 515 (M+H)+, 273 (MTr) RMN H (DMSO-d6) : 6 = 1,50 (dd, 1H, H-2', J = 5,5 et 13,4 Hz) ; 1,62-1,79 (m, 1H, H-2") ; 1,70 (s, 3H, CH3) ; 3,15 (m, 1H, H5t) ; 3,36 (m, 1H, H-5") ; 3,74 (s, 3H, CH3OTr) ; 3,76 (m, 1H, H-4') ; 4,25 (d, 1H, H-3', J = 5,3 Hz) ; 4,95 (t, 1H, OH, J = 5,0 Hz) ; 6,18 (dd, 1H, H-l', J = 5,4 et 9,3 Hz) ; 6,90-7,44 (m, 14H, Tr) ; 7,60 (s, 1H, H-6) ; 11,3 (sl, 1H, NHCO) ppm.
0-(2',3' -didésoxyuridin-Ei '-yl) -hydrogénophosphonate 5.
Une solution 2 M d'acide phosphoreux (70,5 ml, 141 mmol.) dans la pyridine anhydre est ajoutée à 3,00 g de 2',3'-didé- soxyuridine 6 (14,1 mmol.) et est traité avec 9,6 ml de chlorure de pivaloyle (77,9 mmol.). Après 3 heures de réaction, une solution aqueuse 1 M de bicarbonate de triéthylammonium est ajoutée jusqu'à neutralisation et le solvant est évaporé sous pression réduite. L'huile obtenue est chromatographiée sur colonne de gel de silice (éluent MeOH (0-35%) dans CH2Cl2) pour conduire à 5. Le produit est repris dans du méthanol et est filtré sur filtre Millipore. L'évaporation du solvant donne 4,17 g (78%) de 5 (forme triéthylammonium) suffisamment pur pour la suite de la synthèse. Un échantillon de plus grande pureté est obtenu après une purification supplémentaire par chromatographie sur couche mince de gel de silice utilisant un mélange d'isopropanol, ammoniaque, eau (8:1:1:) comme éluant. Le produit sous forme ammonium est extrait de la silice avec du méthanol, le solvant est chassé par évaporation et le résidu est repris à l'eau, filtré sur filtre Millipore et lyophilisé.
5 CLHP: TR = 172s (99,9%) (3% CH3CN/AcONH4 0,1 M).
UV (H2O) : X max 262 nm (E 9940) À min 230 nm (E 2080) SM (FAB négatif, GT) : 275 (M) RMN H (DMSO-d6) :6 = 1,78-2,05 (m, 3H, H-2',3',3'') ; 2,18-2,45 (m, 1H, H-2") ; 3,65-3,95 (m, 2H, H-5',S'') ; 4,11 (m, 1H, H-4') ; 5,55 (d, 1H, H-5, J = 8,1 Hz) ; 5,95 (dd, 1H, H-1', J = 6,8 et 3,8 Hz), 6,63 (d, 1H, HP, J = 592 Hz) ; 7,87 (d, 1H, H-6, J = 8,1 Hz) ppm RMN P (DMSO-d6) : 6 = 1,596 ppm.
O-(5'-0-(4-Méthoxytrityl) 2'-désoxythymidin-3'yl) hydrogénophosphonate 7.