INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
De manière préférentielle, on utilise, à titre de co-réactif B de nature B1, le N,N'-4,4'-diphénylméthane-bis-maléimide pris seul ou en mélange avec le N,N'-méthyl-2 phénylène-1,3-bis-maléimide, le N,N'-méthyl-4 phénylène-1,3-bis-maléimide, le N,N'-méthyl-5 phénylène-1,3-bis-maléimide et/ou le N-phényl-maléimide.
Les différentes cellules sur lesquelles le procédé de l'invention peut être appliqué, sont représentées par toute cellule du corps humain ou animal ou encore les cellules végétales, aux génomes modifiés ou non, notamment par mise en oeuvre de manipulations génétiques ou par mutation. Ces cellules peuvent également être infectées par des micro-organismes tels que décrits cidessous.
Les micro-organismes sur lesquels le procédé de lyse de l'invention est susceptible d'être appliqué sont représentés notamment par les bactéries ou les virus humains ou animaux (ou encore de végétaux) présentant des glycoprotéines d'enveloppe susceptibles d'être sous forme oligomérique. Dans le cas ou ces micro-organismes sont des virus, ces derniers peuvent être responsables de la fusion des membranes virus-hôte lors de l'infection, et sont plus particulièrement représentés par les rétrovirus humains du type HIV-1, HIV-2 et HTLV-I, HTLV-II, les myxovirus, notamment les virus de l'influenza, les paramyxovirus, notamment le virus des oreillons et le virus de la rougeole.
Le procédé de lyse selon l'invention est avantageusement appliqué aux différents types de virus responsables du SIDA, HIV 1 ou HIV-2 ou un mélange de ces derniers, en vue de la séparation, pour ce qui concerne HIV-1, d'une part de la protéine d'enveloppe transmembranaire de HIV-1, de 4lkDa décrite ci-dessus et connue sous le nom de gp41 (responsable de la fusion des membranes avec les cellules cibles lors de l'infection), sous forme oligomérique, c'est à dire trimérique de 120kDa et plus particulièrement tétramérique de 160 kDa, et d'autre part des autres protéines entrant dans la composition du virion, notamment les produits des gènes viraux "gag", "pol" et "env", y compris la gpl20 (autre produit de clivage décrit ci-dessus du précurseur de la protéine d'enveloppe gp160 et qui est responsable de la reconnaissance de la cellule cible CD4 positive) sous forme monomérique.
Pour ce qui concerne HIV-2, l'application du procédé de l'invention permet la séparation d'une part des formes oligomériques de la protéine d'enveloppe de 36kDa connue sous le nom de gp36 et, d'autre part des autres protéines constitutives du virion de façon analogue à celles d'HIV-l.
Le procédé de lyse selon l'invention peut également être appliqué aux différents types de myxovirus responsables de la grippe ou influenza, avec possibilité de séparer, d'une part la protéine d'enveloppe HA aux propriétés hémaglutinantes sous forme oligomérique et plus particulièrement trimérique et, d'autre part, les autres protéines entrant dans la composition du virion.
L'invention a également pour objet un procédé d'obtention de protéines sous leur forme oligomérique telle qu'existante dans la membrane de cellules ou dans la membrane de micro-organismes, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de lyse des cellules, des microorganismes, notamment de virus, ou des hôtes cellulaires infectés par ces micro-organismes, suivant le procédé de l'invention décrit ci-dessus, le cas échéant suivie d'une étape de séparation proprement dite des protéines obtenues lors de l'étape précédente, notamment par électrophorèse en gel de polyacrylamide en présence de dodécyl sulfate de sodium par exemple, permettant la séparation des protéines en fonction de leur masse moléculaire, les protéines sous forme oligomérique restant associées sous une telle forme.
Avantageusement le procédé sus-mentionné peut être utilisé dans le but d'obtenir lesdites protéines oligomériques sous forme purifiée, notammment en faisant suivre l'étape de lyse ou celle de séparation précédemment décrites, par une étape de purification, notamment par immuno-affinité ou par séparation moléculaire et recueil de la (ou des) fraction(s) contenant la (ou les) protéine(s) oligomérique(s) recherchée(s) purifiée ( s).
Il va de soi que la réalisation, après l'étape de lyse sus-mentionnée, de la purification des protéines permet d'obtenir un composition comprenant différentes protéines oligomériques en association, tandis que la réalisation de cette étape de purification après celle de séparation permet d'obtenir des protéines oligomériques isolées et purifiées.
L'invention a également pour objet les protéines oligomériques telles qu'obtenues par mise en oeuvre du procédé sus-mentionné de l'invention.
L'invention vise plus spécifiquement le trimère de 120ka et le tétramère de 160kDa sus-mentionnés sous forme purifiée, ou encore les formes oligomériques de la gp36 sus-mentionnées, tels qu'obtenus par mise en oeuvre du procédé de lyse de l'invention suivi d'une étape de purification, de la manière décrite ci-dessus, de ces protéines oligomériques ainsi obtenues, lesdites protéines présentant la caractéristique d'être stables à température ambiante en présence de quantités de SDS supérieures ou égales à environ 0,5%, notamment d'environ 1%, et de quantités de CHAPS qui soient au moins du même ordre que celles de SDS.
L'invention vise plus particulièrement des compositions de protéines sous forme oligomérique obtenues par mise en oeuvre d'un procédé tel que décrit ci-dessus de lyse de virus du type HIV, ou d'hôtes cellulaires susceptibles de contenir de tels virus, et le cas échéant purifiées, ces compositions comprenant soit des protéines oligomériques différentes entre elles en association, soit des protéines oligomériques identiques isolées.
L'invention vise notamment des compositions comprenant le trimère de la protéine d'enveloppe transmembranaire de HIV-1 de 41kDa (ou gp41), à savoir le trimère de 120kDa décrit ci-dessus, et/ou le tétramère de cette gp41, à savoir le tétramère de 160kDa décrit cidessus, et/ou une ou plusieurs formes oligomériques de la gp36 d'HIV-2 sus-mentionnées.
L'invention vise également des compositions comprenant les formes oligomériques de la protéine d'enveloppe de 36kDa sus-mentionnée.
L'invention vise encore des compositions comprenant les protéines oligomériques, et plus particulièrement trimérique, de la protéine HA des myxovirus tels que ceux responsables de la grippe ou infuenza.
L'invention vise également l'application de compositions comprenant une ou plusieurs protéines oligomériques, et obtenues selon le procédé décrit cidessus pour la mise en oeuvre de méthodes de diagnostic ou de tests de confirmation in vitro de pathologies causées par l'infection d'individus (homme ou animal) par des micro-organismes susceptibles d'être porteurs de telles protéines oligomériques.
A ce titre, l'invention a pour objet toute méthode de diagnostic ou tout test de confirmation sus-mentionnés, et réalisés par détection des anticorps reconnus spécifiquement par ces protéines oligomériques et susceptibles d'être présents dans des échantillons biologiques, notamment dans du sérum, provenant d'individus eux-mêmes susceptibles d'être infectés par les micro-organismes en question (notamment ceux décrits ci-dessus).
Outre les modifications consistant en la substitution et/ou la suppression et/ou l'addition de une ou plusieurs bases au niveau de la séquence d'ADN codante, et nlentrainant aucune conséquence sur la biogénèse de la sous-unité, on entend tout particulièrement par modification, l'introduction dans l'ADN sauvage d'un fragment d'ADN étranger dont la séquence et sa phase de lecture dans le gène recombinant déterminent la séquence polypeptidique hétérologue introduite dans la séquence en acides aminés de la sousunité. Il peut alors s'agir du remplacement d'un fragment de l'ADN sauvage par un fragment d'ADN étranger ou de l'addition d'un fragment d'ADN étranger.
L'invention concerne donc aussi les procédés permettant d'obtenir une sous-unité d'une capsule CS31A dont la séquence en acides aminés est modifiée par au moins un peptide hétérologue, consistant à introduire au niveau d'au moins une des régions permissives A, B, C, D du gène sauvage codant pour la sous-unité, au moins un fragment d'ADN codant pour un peptide hétérologue. Les séquences hétérologues sont introduites - par clonage après mutagénèse dirigée conduisant à la création de sites de restriction permettant des insertions ou des substitutions; - par clonage dans des sites de restriction tels que EcoR1, introduits par mutagénèse insertionnelle au hasard; - par insertion dirigée en clonant directement la séquence hétérologue entre le peptide signal et le peptide mature de la pré-protéine ClpG.
Le fragment d'ADN étranger peut être naturel ou synthétique; il est choisi ou préparé en fonction du peptide que l'on souhaite exprimer au niveau de la sous unité de CS31A, lui même déterminé selon l'application envisagée.
L'invention concerne aussi les capsules protéiques CS31A comportant une sous-unité ClpG modifiée selon l'invention, ainsi que les micro-organismes dont la membrane externe porte de telles capsules. Celles-ci peuvent être obtenues par exemple en cultivant une bactérie E. coli exprimant les gènes gouvernant la biogénèse de la capsule CS31A modifiée par au moins un fragment d'ADN codant pour un peptide hétérologue. De manière avantageuse, la culture précédente est réalisée soit sur un milieu de culture gélosé permettant la collecte des bactéries à la surface de la gélose, soit sur un milieu liquide en fermenteur permettant la collecte des bactéries après centrifugation.Une fraction enrichie en capsule CS31A modifiée peut être obtenue à partir de ces micro-organismes par une agitation vigoureuse des suspensions bactériennes issues de la collecte à la surface de la gélose ou culture en fermenteur. Après centrifugation à 5000 g, on obtient un surnageant riche en capsule CS31A modifiée. Celle-ci peut être avantageusement purifiée à partir d'une fraction précipitée au sulfate d'ammonium 20 % par une étape de chromatographie à interaction hydrophobe sur phényl Sépharose. L'élution par l'eau permet d'obtenir un produit de haut poids moléculaire dont le degré de pureté est supérieur à 90 %. A partir de cette fraction, les sous-unités CS31A modifiées peuvent être facilement purifiées par filtration moléculaire sur une colonne de Sephacryl S 300 en présence de chlorure de guanidium 6 M.
La sous-unité de CS31A présente un caractère fortement antigénique et immunogénique.
L'introduction d'un peptide hétérologue au sein de cette sous-unité, dans les régions définies précédemment, permet de conférer un caractère antigénique nouveau tant à la sous-unité qu'aux micro-organismes dont les capsules CS31A portent une telle sous-unité.
La capsule protéique CS31A constitue en outre un système particulièrement adapté à la production de peptides destinés notamment à la préparation de tests immunologiques; les protéines hybrides obtenues par introduction dans le gène codant pour la protéine ClpG d'un ADN codant pour un peptide hétérologue préalablement déterminé, peuvent être avantageusement utilisées, soit en tant qu'antigène pour la détection d'anticorps, soit en tant qu'immunogène pour produire des anticorps contre des protéines par exemple de pathogènes qu'il est impossible de cultiver.
Ainsi l'invention concerne l'utilisation de la sous-unité de CS31A dont la séquence en acides aminés est modifiée par au moins un peptide hétéroloque, la capsule protéique CS31A comportant une telle sous-unité, ou encore les micro-organismes dont la membrane externe porte de telles capsules protéiques CS3îA, en tant que principe actif pour la fabrication de compositions immunogènes.
Ces compositions immunogènes peuvent avantageusement être mises en oeuvre pour la préparation de vaccins humains ou animaux ou encore de tests immunologiques, utiles en santé humaine ou animale.
D'autres caractéristiques de l'invention apparaîtront dans la description qui suit, se rapportant au clonage et au séquençage du gène codant pour la sousunité de CS31A, ainsi qu'à l'identification des régions de la sous-unité ClpG pouvant accepter des peptides hétérologues et à l'intoduction de tels peptides dans les régions déterminées, et enfin à l'immunogènicité des peptides hétérologues dans les protéines ClpG recombinantes produites par les bactéries.
A) MATERIEL ET METHODES 1) Souches E. coli et plasmides - DB 6433 : A(lacZYA), pro, met, Su III, Xs, Nal r, Rif r. (Davis RW, Botstein D, Roth JR. In Advanced bacterial genetics. New York : Cold Spring Harbor laboratory 1980).
- 31A : souche sauvage hébergeant p31A, déposée à la collection de l'Institut Pasteur, 25 Rue du Docteur Roux, Paris 15, sous le NO I105.
- Orne 6 : souche sauvage de sérotype 017: K7: H18 produisant CS31A, utilisée pour purifier CS31A.
Cette souche E. coli ne porte pas d'autres protéines de surface susceptibles d'interférer ou compliquer la purification de CS31A.
Les souches bactériennes utilisées pour le transfert de plasmides recombinants par transformation sont - DH5 a : F-80 dlac Zamias, end Al, rec Al, hsdR17 (rk,m+k) sup E44, thi-l, gyr A, rel Al, A(lac ZYA -arg F), U169, X-. (Bethesda Research Laboratories, Life Technologies, Inc.).
- JM 109 : F'traD36, lac Iq, A(lacZ)AM15, proAB, recAl, end Al, gyr A96, thi, hsd R17, supE 44ex4~ rel Al, A (lac-proAB). (Yanisk-Perron C, Viera J, Messing J, (1985).Gene 33, 103-119).
Taux d'extraction Vanadium : 54,8 % Molybdène : 94,1 % Aluminium : 13,8 % Cobalt : 86,3 % Nickel : 80,6 % EXEMPLE 6 Un autre catalyseur usé présentait l'analyse suivante: Catalyseur à traiter Vanadium : 0,1 % Molybdène : 6,7 % Aluminium : 26,6 % Cobalt : 2,1 % Nickel : 0,1 % Carbone : 15,2 % Soufre : 5,8 % H2O : 2,9 % Soluble dans chloroforme et CS2 : 13,3 % Un échantillon de ce catalyseur est chloruré à 5000C pendant 30 minutes avec un mélange gazeux de chlore et d'azote ayant un rapport C12/N2 égal à 1.
Les oxychlorures et/ou chlorures de molybdène sont condensés, donnant un condensat dont la composition est la suivante: Condensat: Molybdène : 10,8 % Aluminium : 9,6 % Cobalt : 0,4 % Analyse des résidus après carbochloruration et lixiviation des chlorures (C12- N2).
Molybdène : 3,3 % Nickel : 28,1 % Cobalt : 0,7 % Les taux d'extraction sont groupés dans le tableau suivant: Taux d'extraction Molybdène : 69,0 % Aluminium : 32,8 % Cobalt : 78,9 % EXEMPLE 7 Un autre catalyseur usé présentait l'analyse suivante: Catalyseur à traiter Molybdène : 8,7 % Aluminium : 24,1 % Cobalt : 0,0 % Nickel : 6,3 % Silicium : 7,8 % Carbone : 0,1 % Soufre : 0,9 % H2O : 3,1 % Soluble dans chloroforme et CS2 : 1,0 % 100 g de ce catalyseur sont mélangés avec 8,5 g du charbon.Ce mélange est chloruré à 5000C pendant 1 heure avec un mélange gazeux de chlore et d'air ayant un rapport Cl2/O2 égal à 1.
Les oxychlorures et/ou chlorures de molybdène sont condensés, donnant un condensat dont la composition est la suivante: Condensat: Molybdène : 19,5 % Aluminium : 2,6 % Nickel : 0,04 % Analyse des résidus après carbochloruration et lixiviation des chlorures (C12 - C - air).
Molybdène : 1,2 % Aluminium : 31,8 % Nickel : 1,8 % Analyse des filtrats de lixiviation, après séchage: Molybdène : 0,03 % Aluminium : 2,4 % Nickel : 17,6 % Les taux d'extraction sont groupés dans le tableau suivant.
Taux d'extraction Molybdène 90,1 % Aluminium : 2,9 % Nickel : 78,8 % Silicium : 5,5 % EXEMPLE 8 Le même mélange catalyseur - charbon que celui utilisé dans l'exemple 7 est chloruré à 5000C pendant 1 heure avec un mélange gazeux de chlore et d'air ayant un rapport Cl2/O2 égal à 3.
Les oxychlorures et/ou chlorures de molybdène sont condensés, donnant un condensat dont la composition est la suivante: Condensat: Molybdène . 12,6 % Aluminium : 6,2 % Nickel : 0,03 % Analyse des résidus après carbochloruration et lixiviation des chlorures (C12 - C - air).
Molybdène : 0,8 % Aluminium : 31,7 % Nickel : 1,5 % Analyse des filtrats de lixiviation, après séchage: Molybdène 0,02 % Aluminium : 6,2 % Nickel : 30,6 % Les taux d'extraction sont groupés dans le tableau suivant.
Taux d'extraction Molybdène : 93,7 % Aluminium : 13,9 % Nickel : 84,2 % Silicium : 16,5 % EXEMPLE 9 Un autre catalyseur usé présentait l'analyse suivante: Catalyseur à traiter Molybdène : 8,9 % Aluminium : 29,1 % Cobalt : 1,1 % Nickel : 1,6 % Carbone : 0,0 % Soufre : 0,9 % H2O : 5,5 % Soluble dans chloroforme et CS2 : O, 1 % 100 g de ce catalyseur sont mélangés avec 6,1 g du charbon. Ce mélange est chloruré à 5000C pendant 1 heure avec un mélange gazeux de chlore et d'air ayant un rapport Cl2/O2 égal à 3.
Les oxychlorures et/ou chlorures de molybdène sont condensés, donnant un condensat dont la composition est la suivante: Condensat: Molybdène : 15,78 % Aluminium : 0,31 % Cobalt : 0,1 % Nickel : 0,04 % Analyse des résidus après carbochloruration et volatilisation des chlorures (Cl2 - C - air).
Molybdène : 1,4 % Aluminium : 38,1 % Cobalt : 0,5 % Nickel : 0,9 % Analyse des filtrats de lixiviation, après séchage: Molybdène : 0,1 % Aluminium : 3,5 % Cobalt : 7,6 % Nickel : 10,4 % Les taux d'extraction sont groupés dans le tableau suivant.
Taux d'extraction Molybdène . 88,3 % Aluminium : 1,6 % Cobalt : 67,5 % Nickel : 59,0 % EXEMPLE 10 Un autre catalyseur usé présentait l'analyse suivante: Catalyseur à traiter Tungstène : 6,7 % Titane : 37,0 % Vanadium : 0,3 % Silicium : 3,1 % Aluminium : 0,9 % Soufre : 1,3 % H2O : 3,9 % Un échantillon de ce catalyseur est chloruré à 3500C pendant 4 heures avec un mélange gazeux de chlore, d'oxyde de carbone et d'azote ayant un rapport Cl2/CO égal à 1 et une teneur d'azote de 33,3 %.
Analyse des résidus après carbochloruration et volatilisation des chlorures (Cl2 - CO - N2).
Tungstène : 2,0 % Titane : 24,9 % Les taux d'extraction sont groupés dans le tableau suivant.
Taux d'extraction Tungstène : 93 % Titane : 85 % EXEMPLE 11 Un autre échantillon du même catalyseur que celui de l'exemple 10 est chloruré à 350"C pendant 12 heures avec un mélange gazeux de chlore, d'oxyde de carbone et d'azote ayant un rapport Cl2/CO égal à 1 et une teneur d'azote de 33,3 %.
Analyse des résidus après carbochloruration et volatilisation des chlorures (Cl2 - CO - N2) Tungstène : 0,23 % Titane : 0,03 % Les taux d'extraction sont groupés dans le tableau suivant.
4. Décodage d'instruction.
Second niveau de pipeline.
5. Génération d'une adresse d'opérande.
6. Lecture des opérandes.
7. Mise à jour des adresses des opérandes.
(si l'adressage est indirect avec post incrémentation).
8. Exécution et sauvegarde du résultat dans un registre de destination ou en mémoire.
On va maintenant examiner le jeu d'instructions du BBSP.
Le BBSP comporte quatre formats d'instructions.
Les instructions de registre à registre qui définissent une opération entre deux registres Ra et Rb.
Les instructions indirectes de registre concernent une opération entre une adresse de mémoire de données définie dans le registre Ra et le registre Rb.
Les instructions de registre à mémoire concernent des opérations entre une adresse de mémoire de données définie dans le champ d'instructions et le registre Rb.
Les instructions de commande, assurent la commande du flux d'exécution du programme.
Le format des instructions va maintenant être décrit en référence à la Fig.17 qui présente sous forme de quatre lignes les quatre formats d'instructions énumérés ci-dessus.
Les instructions de registre à registre indirectes de registre et de registre à mémoire, sont des instructions entières. Le dernier format est l'instruction de commande.
Le format d'instruction est choisi dans le champ [ 3.0J.
Lorsque la composition est utilisée sous forme de mousse, il est évident que ces adjuvants ne doivent pas empêcher la formation de mousse après distribution du produit sous pression à partir du dispositif aérosol.
Le procédé conforme à l'invention consiste à appliquer sur les fibres kératiniques et en particulier les cheveux humains, au moins un sel de magnésium et au moins du 5,6-dihydroxyindole et/ou un de ses dérivés répondant à la formule (I) sur les fibres, le sel de magnésium étant appliqué soit préalablement à l'application du 5,6 dihydroxyindole et/ou de ses dérivés de formule (I) sur les fibres, soit simultanément, soit postérieurement à l'application de la composition contenant le 5,6-dihydroxyindole et/ou l'un de ses dérivés de formule (I), le sel de magnésium et le 5,6-dihydroxyindole et/ou ses dérivés de formule (I) étant appliqués à l'aide de compositions les contenant dans un milieu approprié pour la teinture tels que définis ci-dessus.
Les compositions mises en oeuvre au cours du procédé sont telles que définies ci-dessus.
Un autre objet de Invention est constitué par une composition tinctoriale pour fibres kératiniques, en particulier pour cheveux humains, caractérisée par le fait qu'elle contient dans un milieu approprié pour la teinture, au moins un sel de magnésium tel que défini ci-dessus et au moins le 5,6-dihydroxyindole et/ou un de ses dérivés répondant à la formule (I) définie ci-dessus.
Cette composition contient de préférence le sel de magnésium dans des proportions comprises entre 0,05 et 20% en poids par rapport au poids total de la composition et de préférence entre 0,2 et 10% en poids et le 5,6-dihydroxyindole et/ou ses dénvés de formule (I) dans des proportions comprises entre 0,01 et 5% en poids et de préférence entre 0,2 et 3% en poids par rapport au poids total de la composition.
Le procédé de teinture conforme à l'invention est mis en oeuvre de préférence sans utilisation d'un autre agent oxydant que l'oxygène de l'air.
EXEMPLE 1 PRE-TRAITEMENT - MgCl2, 6H2 4,3 g - Triéthanolamine qs pH = 7 - Eau déminéralisée qsp 100 g GEL COLORANT - 5,6-dihydroxyindole 0,5 g - Alcool éthylique à 960 10 g - Hydroxyéthylcellulose vendue sous la dénomination "KLUCEL G" par la Société AQUALON 2 g - AIkyl(C8-C10)polyglycoside en solution aqueuse à 60% de MA, vendu sous la dénomination "TRITON CG 110" par la Société ROHM & HAAS 3,5 g - Nonylphénol oxyéthyléné (9 moles d'oxyde d'éthylène), vendu sous la dénomination "RHODlASURF NP 90 R" par la Société RHONE POULENC 0,1 g - Acide tartrique 0,3 g - Triéthanolamine qs pH = 8,5 - Eau déminéralisée qsp 100 g La lotion de prétraitement est appliquée sur des cheveux naturels gris à 90% de blancs, à raison de 1 g pour 1,5 g de cheveux.
Après imprégnation des cheveux et sans rinçage intermédiaire, 5 g de gel colorant sont appliqués sur les cheveux.
Après 10 minutes de pose, les cheveux sont rincés et séchés.
On renouvelle l'application une fois.
Les cheveux sont teints uniformément en gris et présentent une bonne résistance à la lumière, la couleur restant dans les tons neutres.
EXEMPLE 2 GEL COLORANT 5,6-dihydroxyindole 0,5 g - Alcool éthylique à 960 10 g - Hydroxyéthylcellulose vendue sous la dénomination "KLUCEL G" par la Société AQUALON 2 g - Alkyl(C8-C10)polyglycoside en solution aqueuse à 60% de MA, vendu sous la dénomination "TRITON CG 110" par la Société ROHM & HAAS 3,5 g Nonylphénol oxyéthyléné (9 moles d'oxyde d'éthylène), vendu sous la dénomination "RHODIASURF NP 90 R" par la Société RHONE POULENC 0,1 g - Acide tartrique 0,3 g - Triéthanolamine qs pH = 8,5 - Eau déminéralisée qsp 100 g POST-TRAfFEMENT MgC12, 6H2O 4,3 g - Ethanol à 960 17 g Poly-ss-alanine en solution aqueuse à 20% de MA 2,5 g - Triéthanolamine qs pH = 7 - Eau déminéralisée qsp 100 g La composition colorante est appliquée sur des cheveux naturels gris à 90% de blancs, à raison de 5 g pour 1,5 g de cheveux.
Après 10 minutes de pose, les cheveux sont rincés et essorés.
1 g de lotion de post-traitement est alors réparti sur la mèche. Les cheveux sont séchés après 5 minutes de pose et sans rinçage terminal.
Après deux applications, les cheveux sont teints uniformément en gris et présentent une bonne résistance à la lumière.
Les chambres de fermentation comprennent un nombre déterminé de godets, dont chacun peut être porteur de une, deux poches, ou davantage, destinées à contenir chacune une boule ou portion de pâte à pain.
La mise en place des boules ou portions de pâte à pain dans les godets pose des problèmes d'automatisation, cette opération étant généralement effectuée de façon manuelle.
Pour éviter ce problème, on connaît des appareils ou dispositifs d'alimentation de structure généralement compli quée.