INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Selon la méthode de la présente invention, l'homme du métier peut sans difficulté déterminer le pH auquel la formation d'esters alkyliques de peptide est obtenue. Il suffit d'effectuer le test de détermination de la quantité d'alcool liée au produit par hydrolyse basique du groupe ester décrit dans l'exemple 1 ci-dessous. Cette détermination est effectuée pour une série de valeurs de pH différentes et les valeurs qui permettent la formation d'esters alkyliques sont ainsi déterminées. Dans le contexte de la présente invention, le taux d'estérification du produit considéré comme significatif est d'au moins 10 % environ. De préférence le taux d'estérification est d'au moins 25 % et avantageusement d'au moins 40 %.
Selon le procédé de l'invention, l'alcoolyse est effectuée en mettant en contact simultané le substrat protéique, l'enzyme et un alcool qui est soit entièrement miscible à l'eau, soit au moins partiellement soluble dans l'eau. Comme exemples de ce type d'alcools, on peut citer des alcanols aliphatiques possédant entre 1 et 5 atomes de carbone, par exemple le méthanol, l'éthanol, le propanol, le butanol et le pentanol. Le n-propanol, le n-butanol et le n-pentanol sont préférés. Les alcools qui sont totalement miscibles, en toutes proportions, à l'eau tels que le méthanol, l'éthanol et le n-propanol sont particulièrement avantageux. Néanmoins, lorsque l'alcool est partiellement miscible ou non miscible à l'eau, l'efficacité de la réaction d'alcoolyse peut être augmentée par la présence d'un autre composé à la fois miscible à l'eau et miscible à l'alcool, par exemple le 2-propanol.
Le produit obtenu par le procédé de l'invention est un mélange de peptides et d'esters de peptides issus des réactions simultanées d'hydrolyse et d'alcoolyse. Le mélange est constitué d'une population hétérogène de peptides et d'esters de peptides de longueurs de chaînes variables, le groupement alkylique des esters provenant directement de l'alcool, et ayant donc entre 1 et 5 atomes de carbone. La nature précise du produit est influencée, d'une part, par la nature du substrat et, d'autre part, par la pureté de l'enzyme. Par exemple, un substrat protéique composé d'un mélange de protéines différentes donnera lieu à un mélange très complexe d'esters et de peptides.De même, une protéase ou une carboxypepsidase contaminée par d'autres enzymes présentant d'autres activités enzymatiques pourrait conduire à la présence d'autres substances chimiques dans le produit, surtout si le substrat est également impur. Les mélanges de peptides et d'esters de peptides peuvent être soumis à une étape de purification pour obtenir un mélange enrichi en esters.
La solubilité du produit dans l'eau ou dans l'alcool varie selon les réactifs et n'est pas toujours la même que celle du substrat. Par exemple, l'utilisation de la gliadine de blé comme substrat donne lieu à des esters qui sont solubles dans l'eau, tandis que l'utilisation de la zéine de maïs conduit à la formation d'esters solubles dans l'alcool.
Pourtant, la gliadine et la zéine sont toutes deux solubles dans l'alcool. Lorsque le substrat protéique est un mélange complexe de protéines présentant des solubilités différentes, il est probable que le produit de la réaction d'alcoolyse sera constitué d'esters et de peptides possédant des solubilités différentes. Dans ce cas, la fraction soluble dans l'eau ou soluble dans l'alcool peut être récupérée selon l'utilisation ultérieure du produit. Par exemple, en cosmétique, des produits solubles dans l'eau sont préférés.
La durée de la réaction d'alcoolyse varie entre 2 à 30 heures selon la nature du substrat protéique et de l'alcool. Par exemple, l'alcoolyse d'un substrat protéique complexe tel que le gluten se déroule de préférence pendant environ 24 heures. En revanche, un substrat protéique pur tel que les gliadines de blé donne lieu, dans un milieu alcoolique miscible à l'eau, à des taux d'estérification important après seulement 2 à 6 heures. La réaction est arrêtée par dénaturation de l'enzyme par ajustement du pH à une valeur fortement acide, éventuellement accompagne par un chauffage à 50 environ pendant 30 à 50 minutes.
La réaction d'alcoolyse se déroule normalement à une température comprise entre 20 et 45"C, par exemple autour de 25 .
La concentration de l'alcool est d'au moins 30 % v/v et de préférence, d'au moins 70 % v/v. Lorsque l'alcool est l'éthanol, la concentration peut être de 90 % v/v. Si la concentration de l'alcool est trop basse, la réaction d'alcoolyse ne peut avoir lieu et la réaction d'hydrolyse domine.
La masse molaire moyenne du produit peut être déterminée par chromatographie par perméation de gel (FPLC) et reflète la taille des peptides et des esters de peptides obtenus. La masse molaire moyenne du produit varie selon la nature du substrat protéique, c'est-à-dire protéique ou peptidique, et selon la durée de la réaction et la concentration de l'enzyme.
En général, la masse molaire moyenne du produit issu de l'alcoolyse de protéines est inférieure à 10 000, par exemple entre 6 000 et 10 000, et celle du produit issu de l'alcoolyse de peptides est inférieure à 5 000, par exemple entre 3 000 et 5 000. Dans tous les cas, la masse molaire moyenne du produit est supérieure à 1 000 Daltons. La réaction de l'invention aboutit donc à des produits ayant une masse molaire moyenne plus élevée que la masse molaire moyenne obtenue après une réaction d'hydrolyse en milieu aqueux. En effet, en milieu alcoolique (n-propanol, 70 % v/v), la masse molaire moyenne du produit de la réaction d'alcoolyse de gluten, soluble dans l'eau est de 6 200 (exemple 1), alors que le produit de la réaction d'hydrolyse de gluten, soluble dans l'eau est de 4 200 (exemple 2).La condensation de peptides de maïs sur le n-propanol conduit à la formation d'une population de peptides estérifiés de masse molaire moyenne 4 200.
Selon une variante de l'invention, le procédé peut comporter une étape supplémentaire permettant de récupérer le produit de l'invention, sous forme de microparticules. Selon cette variante, le produit doit être soluble en milieu alcoolique. Normalement, cette étape comprend la précipitation du produit (soluble en milieu alcoolique) dans une phase aqueuse. La phase aqueuse contient avantageusement au moins un agent antiagrégant facilitant la formation de particules de petite taille. Comme agents antiagrégants, on peut citer des agents tensio-actifs et des gommes telles que la gomme arabique et la carboxyméthylcellulose.
L'agent antiagrégant est présent dans la phase aqueuse à une concentration comprise entre 0,2 % et 1,0 % (p/v). Par microparticules, il faut comprendre dans le contexte de la présente invention, des particules ayant une taille de 0,2 à 10 , de préférence autour de 1 , par exemple 0,8 à 1,2 . L'introduction de la solution alcoolique dans la solution aqueuse est accompagnée d'une agitation vigoureuse. Bien entendu, il est important de veiller à ce que le produit ne soit pas dénaturé.
Comme précédemment mentionné, en raison des capacités parasites ramenées aux bornes des enroulements du transformateur 1, il se produit, pendant la phase de régime libre trl, un mode oscillatoire haute fréquence plus ou moins amorti visible sur les figures 2 et 3.
L'invention propose de supprimer cet inconvénient grâce à un circuit de commutation permettant à chacune des périodes T de bloquer le régime oscillant pendant la phase de régime libre trl, par le maintien à une valeur quasi nulle des tensions aux bornes des différents enroulements B1, B2 du transformateur 1 jusqu'à la fermeture de l'interrupteur de hachage Il.
Dans l'exemple représenté sur la figure 4, ce résultat est obtenu grâce à un circuit de commutation 2 monté entre les bornes de l'enroulement secondaire B2 du transformateur 1 et comprenant , en série, une diode D3 et un interrupteur commandable 12.
L'association de la diode D3 à l'interrupteur I2 permet une commande facilitée de celui-ci et une précision de l'instant d'action - l'interrupteur I2 est fermé à chaque période de hachage, après un temps issu d'un circuit de temporisa tion At, succédant à l'ouverture de I1, - l'action de blocage de régime oscillant, déterminée par la mise en roue libre de l'enroulement concerné, ne prend alors effet qu'à l'instant où la tension VT aux bornes de l'interrupteur I1 s'abaisse au-dessous de la valeur E de la tension de source.
A cet instant, en effet, la tension développée aux bornes de l'enroulement concerné, polarise au travers de 12 la diode D3 dans le sens direct ; cela détermine ainsi de façon simple et précise le début du régime de roue libre, provoquant le blocage des oscillations parasites décrites précédemment.
Ainsi, pendant la phase d'atténuation mise en oeuvre à la suite de la fermeture de l'interrupteur I2, on observe un courant sensiblement constant parcourant l'enroulement secondaire B2, ce courant prenant fin lors de l'ouverture de l'interrupteur 12 qui se produit avec une légère avance Asti, par rapport à la fermeture de l'interrupteur Il.
Le détail des formes d'ondes de courant et la chronologie des commutations effectuées par les interrupteurs I1, I2 sont donnés sur la figure 5.
Sur cette figure 5, le temps tl correspond à l'instant d'ouverture de l'interrupteur de hachage I1.
Cette ouverture de l'interrupteur I1 amorce une élévation de la tension VT jusqu'à obtention d'une valeur Vo nl/n2 + E au temps t2 (courbe C1). Parallèlement, le courant IT1 traversant l'interrupteur I1 s'annule (courbe C2), tandis que les courants 1D2, IT2 circulant dans les diodes D2 et D3 sont sensiblement nuls.
La phase de démagnétisation qui s'amorce lorsque la tension VT aux bornes de l'interrupteur I1 a atteint la valeur Vo nî/n2 + E, se traduit par une circulation dans la diode D2 d'un courant ID2 de transfert d'énergie qui va en décroissant jusqu a s'annuler à la fin de cette phase (temps t3).
A partir du temps t3, la tension VT décroît jusqu a ce qu'elle revienne, à un instant t4, à la valeur E.
A cet instant t4, la diode D3 se trouve polarisée en direct, et l'interrupteur 12 déjà fermé agit en laissant le passage à un courant d'amortissement, et ce, jusqu'à sa réouverture, à un instant t5 qui précède de peu la fermeture de l'interrupteur I1, instant t6. Cette fermeture de l'interrupteur Il amorce la phase de magnétisation tm.
Au cours de cette phase de magnétisation, la tension VT aux bornes de l'interrupteur I1 s'annule, tandis que le courant qui le parcourt s'accroît. Cette phase de magnétisation tm prend fin à l'instant t7 marquant la réouverture de l'interrupteur I1 et le départ d'un nouveau cycle de hachage.
La bonne mise en oeuvre du dispositif précédemment décrit fait apparaître deux conditions nécessaires - l'interrupteur I2 doit être fermé avec un retard mini mum AT2 par rapport à l'ouverture de l'interrupteur de hachage 11 : pour un convertisseur donné, ce temps est essentiellement dépendant de la charge CH secondaire et de la tension primaire d'alimentation E - l'interrupteur 12 doit être réouvert avec une avance minimale AT1 par rapport à la fermeture de l'interrupteur I1.
Ces deux conditions sont nécessaires pour éviter une mise en court-circuit momentanée primaire/secondaire du convertisseur de laquelle résulterait une pointe très importante de courant direct dans l'interrupteur I1 et dans le circuit d'atténuation T2 D3.
On constate que si le retard AT2 est programmé trop long par rapport à l'ouverture de l'interrupteur I1, le régime oscillatoire se développe au-delà d'un quart de période T'/4. Le fonctionnement se rapproche alors de celui d'un convertisseur classique, avec les inconvénients correspondants (pertes cuivre et pertes ferrite plus importantes).
La synthèse est effectuée sur une colonne contenant 39,8 mg de support solide fonctionnalisé à 21 mole/g de résine, soit 0,835 ,umole (1 éq) de 4'-thiouridine.
Chaque cycle d'élongation nécessite un excés de synthon phosphoramidite (20 pmole, 24 é) soit 240 ,umole au total pour la synthèse du dodécamère. Le synthétiseur prélevant 200y1 d'une solution 0,1 M de synthon dans l'acétonitrile par incorporation.
La durée d'un cycle d'élongation est de 21,1 mn (Tableau 1).
L'étape de couplage a été considérablement augmentée (900 s contre 45 s dans le cas d'un désoxynucléoside) à cause de la moindre réactivité du synthon ribonucléotide.
Le dosage des cations diméthoxytrityles libérés à chaque étape de détritylation a permis d'évaluer le rendement moyen d'incorporation de l'unité thioribonucléotidique à 98,7 %.
I-4) Décrochage, déprotection et purification du thio homododécamère BrSU12.
Le support solide portant le thio-homododécamère BrSU12 est traité par 5 ml d'une solution de thiophénol, triéthylamine, dioxane 1, 2 (1/2/2) pendant une demi-heure à température ambiante.
La solution de thiophénol est alors filtrée et le support lavé par une solution d'ammoniaque 32 % dans l'ethanol 95 (3/1: v/v) (3 x 500 l) pour décrocher le thio-homododécamère du support solide. La solution ainsi obtenue est évaporée, reprise par 500 tLl d'eau puis lyophilisée.
L'oligomère est alors dissout dans 300 l d'une solution de TBAF (1,1 M) dans le THF. Le mélange réactionnel est laissé sous agitation pendant 24 heures. La réaction est alors stoppée avec 300 Cll d'une solution aqueuse d'acétate d'ammonium (0,05 M).
La solution est évaporée à sec, coévaporée 3 fois avec de l'eau et le résidu chromatographié sur colonne de gel d'exclusion Sephadex G-25. Les fractions contenant le thiooligomère sont rassemblées, évaporées à sec et analysées par CLPH.
Analyse et Purification du thio-oligomère BrSU12 obtenu.
L'analyse CLPH du thiooligomère a été éffectuée sur une colonne Beckman C-18 RP 3 IL x LODS Ultrasphère dans les conditions de gradient suivantes: A: 10 % d'acétonitrile dans une solution aqueuse 0,05 M d'acétate de triéthylammonium.
B: 15 % d'acétonitrile dans une solution aqueuse 0,05 M d'acétate de triéthylammonium.
Gradient: A#B#B#A 20' 10' 5' Temps d'analyse: 30'.
Dans ces conditions, on constate que le thiooligomère est pur à 92,73 %.
L'unité 40b de production de l'adresse à fournir est constituée du premier et du second détecteurs 41a et 42 et d'un autre sélecteur 43a d'adresse réelle.
Le sélecteur 43a d'adresse réelle est relié à la sous-mémoire tampon 31'a d'adresse d'accès/d'adresse réelle, au registre 31 d'adresse d'accès/d'adresse réelle et au comparateur 32 d'adresse d'accès en registre. En réponse au signal de coïncidence d'adresse d'accès en registre, le sélecteur 43a d'adresse réelle sélectionne au titre d'adresse réelle à fournir l'une des deux, de l'adresse réelle fournie et mémorisée en sous-mémoire tampon et de l'adresse réelle fournie et contenue en registre. De façon plus spécifique, le sélecteur 43 d'adresse réelle sélectionne l'adresse réelle fournie et mémorisée en sous-mémoire tampon au titre d'adresse réelle à fournir lorsque le signal de coïncidence d'adresse d'accès en registre ne lui est pas fourni.Le sélecteur 43 d'adresse réelle sélectionne l'adresse réelle fournie et contenue en registre, au titre de l'adresse réelle à fournir, lorsque le signal de coïncidence d'adresse d'accès en registre lui est fourni.
Au lieu du sélecteur d'adresse réelle 43a, l'unité 40b de production de l'adresse à fournir peut comporter le sélecteur 43 d'adresse réelle représenté sur la figure 4.
Bien que l'unité 40b de production de l'adresse à fournir comporte le second détecteur 42 qui comprend S verseur 42-1verser42-1et la porte ET 42-2, l'unité 40b de production de l'adresse à fournir peut comprendre le second détecteur modifié 42a comme représenté sur la figure 5, au lieu du second détecteur 42.
Avec cette structure, il est possible d'effectuer rapidement la translation d'adresse si l'adresse réelle demandée est soit contenue dans le registre 31 d'adresse d'accès/d'adresse réelle soit mémorisée dans la sous-mémoire tampon 31' d'adresse d'accès/d'adresse réelle. Ceci provient du fait que le registre 31 d'adresse d'accès/d'adresse réelle et la sous-mémoire tampon 31'a d'adresse d'accès/d'adresse réelle présentent des temps d'accès en registre et en sous-mémoire tampon qui sont l'un et l'autre plus courts que le temps d'accès dans la mémoire 21 de translation d'adresse. En outre, le dispositif de translation d'adresse est constitué du dispositif conventionnel de translation d'adresse représenté sur la figure 1 avec addition de peu de matériel informatique.Ceci provient du fait qu'aussi bien le registre 31 d'adresse d'accès/d'adresse réelle que la sous-mémoire tampon 31'a d'adresse d'accès/d'adresse réelle ne contiennent ni ne mémorisent la première zone A de l'adresse virtuelle qui est contenue dans le registre 10 d'adresse virtuelle.
En outre il est possible que le dispositif de translation d'adresse illustré sur la figure 6 mémorise deux adresses réelles dont l'une et l'autre correspondent à la même seconde sous-zone B2 de l'adresse virtuelle contenue en registre tandis qu'il est possible que le dispositif de translation d'adresse représenté sur la figure 3 ne mémorise qu'une seule adresse réelle qui corresponde à la même seconde sous-zone B2 de l'adresse virtuelle contenue en registre. Il est possible de faire en sorte que le dispositif de translation d'adresse représenté sur la figure 6 effectue la translation d'adresse à une vitesse plus élevée en comparaison du dispositif de translation d'adresse représenté sur la figure 4. Ceci provient du fait que le dispositif de translation d'adresse représenté sur la figure 4 présente un temps de retard de signalisation plus long, temps défini par un chemin allant du registre 10 d'adresse virtuelle au sélecteur 43 d'adresse réelle en passant par la sous-mémoire tampon 31a d'adresse d'accès/d'adresse réelle et par le comparateur 32a d'adresse d'accès en sous-mémoire tampon, tandis que le dispositif de translation d'adresse représenté sur la figure 6 présente un temps de retard de signalisation différent, plus court que le temps de retard de signalisation le plus long, temps défini par un autre chemin allant du registre 10 d'adresse virtuelle au sélecteur 43a d'adresse réelle en passant par le registre 31 d'adresse d'accès/d'adresse réelle et le comparateur 32 d'adresse d'accès en registre.
Dispositif de comptage des impulsions d'un signal logique.
La présente invention concerne un dispositif de comptage des impulsions d'un signal logique.
Un tel dispositif de comptage est, de manière connue, formé par association d'un certain nombre de circuits logiques séquentiels à deux états stables, appelés bascules, dont la sortie est susceptible de prendre, à chaque impulsion d'un signal logique incident appliqué à l'une de ses entrées, dite entrée d'horloge, l'un ou l'autre desdits états, en fonction de l'état, à l'instant considéré, d'un signal logique appliqué à une, ou deux suivant le type de bascule, entrées, dites ici entrées de positionnement.
On définit l'état de comptage d'un compteur à un instant donné comme le nombre binaire représentant à cet instant une combinaison de sorties des différentes bascules de ce dispositif, cette combinaison devant être telle qu'un état de comptage différent soit obtenu pour chacune des impulsions d'un groupe de "n" impulsions successives d'un signal logique incident reçu par ce compteur, dans le cas d'un compteur apte à compter suivant des cycles de comptage de "n" états de comptage chacun , au rythme des impulsions de ce signal logique incident.
Le signal incident peut par exemple être appliqué à la bascule de poids le plus faible du compteur, ce qui est le cas des compteurs dits binaires, le signal d'horloge des autres bascules étant alors généré de façon interne au compteur, ou à chacune des bascules du compteur, ce qui est le cas des compteurs dits de Johnson.
Un circuit de décodage des différents états de comptage du compteur, ayant "n" sorties actives à tour de rôle pour distinguer les uns des autres chacun desdits états de comptage, peut en outre être prévu, notamment en vue de la commande sélective d'un circuit parmi "n" dans un ensemble plus complexe.
La présente invention se rapporte plus particulièrement aux compteurs dits de Johnson, dont la particularité est d'avoir des cycles de comptage tels qu'un seul élément binaire change entre chaque état de comptage et le suivant et dont un exemple de schéma est rappelé sur la figure 1.
Le compteur de Johnson représenté comporte N bascules B1,...,BN montées en registre à décalage "rebouclé", c'est-à-dire avec les bascules Bi(i=2...N) ici de type "D" ayant leur entrée de positionnement, ou ici entrée "D", connectée à la sortie non inverseuse, ou sortie "Q" de la bascule précédente Bi-l, fournissant un signal Qi-l, la bascule B1 ayant son entrée "D" connectée à la sortie inverseuse, ou sortie "Q", de la bascule BN, fournissant un signal QN, le signal incident H étant en outre appliqué à l'entrée d'horloge, notée "CK", de chacune des bascules.
La forme des signaux H, Q1, Q2...QN est indiquée sur la figure 2, à titre d'exemple pour une valeur de N égale à trois. Les états de comptage correspondants, notés J1, J2, ..., J6, sont indiqués dans le tableau ci-dessous, avec les états logiques correspondants des signaux Q1, Q2, Q3
Q1 Q2 Q3 O O O 1 O O J2 1 i O J3 i i i J4 O 1 1 J5 O O 1 ~ J6 Comme on peut le vérifier sur cet exemple, le nombre d'états de comptage d'un compteur de Johnson à N bascules est égal à 2N.
Les joints annulaires 4, qui assurent une liaison flexible étanche entre les embouts 1 et le manchon 3, sont réalisés en caoutchouc et fixés aux surfaces métalliques de ceux-ci par adhérisation, ce mode de fixation présentant l'avantage de fournir une liaison continue et extrêmement résistante. Lorsque la tuyauterie est l'objet de contraintes au niveau du raccord flexible, le joint 4 de l'un au moins des embouts 1 se déforme en autorisant un déplacement angulaire du manchon 3 par rapport à cet embout (figure 4), ce déplacement étant assimilable à une rotation d'angle autour du centre C du joint annulaire 4, l'axe 5 du manchon n'étant plus aligné avec l'axe 6 de l'embout 1.
Ainsi, le raccord flexible confère à la tuyauterie une possibilité de flexion (autour de l'un des centres ou des deux centres C) et de débattement latéral (par flexions égales et de sens opposés autour des deux centres C) autorisant un décalage latéral d comme représenté à la figure 4. En outre, par déformation des joints 4 avec cisaillement soit en direction axiale, soit en direction circonférentielle, le raccord flexible confère à la tuyauterie une certaine latitude soit d'extension ou de contraction suivant cette direction, soit de torsion autour de l'axe.
Afin d'augmenter les facultés d'élongation axiale et de torsion du raccord flexible, le manchon 3 n'est pas fait d'une seule pièce, mais est constitué par un ensemble de trois tubes 7, 8, 7. Il s'agit de tubes métalliques rigides, dont les axes sont confondus avec l'axe 5 du manchon 3. Ces tubes s'emboîtent télescopiquement les uns dans les autres, et sont assemblés de façon étanche au moyen d'éléments élastiques de liaison assurant la rigidité transversale du manchon composite 7, 8, 7 - qui lui interdit de se courber -, mais permettant de petits déplacements entre tubes soit en translation suivant l'axe 5, soit en rotation autour de cet axe. Les deux tubes 7 qui forment les extrémités du manchon 3 sont identiques, le troisième tube 8 constituant un tube intermédiaire par lequel sont reliés les deux tubes extrêmes 7, via les éléments élastiques précités.Ces derniers tubes ont un diamètre supérieur à celui du tube intermédiaire 8, égal au diamètre des embouts 1, et ce tube est engagé sur une égale longueur dans l'un et dans l'autre des tubes 7, mutuellement espacés, un espacement étant de même réservé entre les extrémités du tube 8 et des embouts 1 de façon qu'elles ne puissent se heurter lorsque le raccord flexible se déforme.