INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Tout l'intérêt industriel des adipates, et en particulier, de l'adipate d'ammonium, réside dans le fait qu'il constitue l'une des bases fondamentales pour la fabrication du nylon-6,6.
S'agissant des 5-cyanovalérates, ils sont susceptibles de constituer des produits de départ de choix, pour la préparation de caprolactame, donnant lui-même accès au nylon-6.
L'action de ces amidases s'intègre dans un schéma connu de synthèse enzymatique d'adipate de diammonium, à partir d'un dinitrile, à savoir l'adiponitrile.
Ce schéma est le suivant:
NH = nitrile hydratase, Ni= nitrilase, A= amidase, R = (CH2)n, n étant un nombre entier égal à 4 dans le cas de composés adipiques.
Un tel schéma est resté pendant longtemps uniquement d'intérêt thérorique, car on ne connaissait que l'amidase à activité générale de Brevibacterium R 312, décrite notamment dans les articles suivants: - ARNAUD et al., "Etude de l'activité amidasique de quelques bactéries", FOLLI MICROBIOLOGICA, 1976, 21, pages 178-185, - MAESRACCAT et al., "Utilisation d'une amidase à activité générale pour la bioconversion des amides en acides organiques", Microbiologie - aliments nutrition, 1986, vol. 4, pages 19-24.
Selon ces auteurs, une telle amidase est apte à hydrolyser l'adipamide en acide adipique (ou adipate d'ammonium).
En fait, il a été démontré, par la suite, notamment par la Demanderesse, que l'activité, vis-à-vis de 1'adipamide, de cette amidase à activité générale est extrêmement faible, voire nulle et ce, que l'on utilise l'enzyme issue de Brevibacteflum R 312 ou celle issue d'un micro-organisme recombinant comprenant le gène d'expression de cette enzyme.
Cette absence d'activité enzymatique de l'amidase à activité générale se vérifie, également, pour les substrats amides se présentant sous forme de sels solubles dans l'eau.
La faisabilité industrielle de la synthèse enzymatique d'adipates, en particulier de diammonium, ou d'acide adipique à l'aide d'amidases n'a pu être envisagée qu'à partir du moment où la Demanderesse a pu mettre en évidence des polypeptides exprimés par Brevibacterium R 312 et Rhodococcus et caractérisés, notamment, par une activité amidase, dite énantiosélective, c'est-à-dire qu'ils sont capables d'hydrolyser énantiosélectivement des racémiques d'amides en un acide, soit de forme S, soit de forme R. Cela concerne particulièrement les aryl-2 propionamides et les aryloxy-2 propionamides racémiques.
En isolant, purifiant et caractérisant ces amidases "énantiosélectives", il a été possible de proposer un procédé de synthèse enzymatique d'adipate d'ammonium présentant des rendements améliorés.
C'est ce que décrit la demande de brevet FR 90-14 853.
P-8 Les brevets des Etats-Unis d'Amérique 4 334 012 et 4 336 328 décrivent l'utilisation de l'ultra filtration pendant la précipitation par double jet soit dans un unique récipient de réaction soit dans un dispositif utilisant des zones séparées de nucléation de grains et de croissance.
P-9 La demande de brevet japonaise 65799/66, déposée le 6 octobre 1966 décrit une émulsion très sensible à contraste élevé obtenue en introduisant une émulsion de chlorure d'argent en même temps que les sels d'argent d'halogénure pour préparer une émulsion négative.
P-10 Le brevet de Grande-Bretagne 1 170 648 décrit la préparation d'une émulsion aux halogénures d'argent en plaçant des germes de grains d'halogénure d'argent dans le récipient de réaction avant l'introduction de sels d'argent et d'halogénure.
La préparation des émulsions aux halogénures d'argent qui sont prévues pour piéger des électrons générés par des photons à l'intérieur des grains, émulsions qui sont en général employées pour donner des images positives directes, est plus complexe que celle des émulsions négatives dans lesquelles les électrons générés par des photons forment de façon prédominante des images latentes de surface sur la surface des grains. Ceci est vrai en particulier quand on désire des latitudes d'exposition modérées ou plus étendues. Les émulsions positives directes le plus couramment employées qui sont basées sur le piégeage interne des électrons sont celles (a) dans lesquelles la surface des grains est voilée et les trous générés par les photons blanchissent le voile de surface et (b) dans lesquelles les électrons piégés de façon interne forment une image latente interne désensibilisée qui retarde le développement de surface. Les émulsions positives directes de sensibilité élevée sont de ce dernier type, et présentent des grains d'halogénure d'argent qui sont sensibilisés en surface mais d'une manière contrôlée qui permet la formation d'une image latente interne caractéristique de ces grains.Ceci est en général obtenu en formant une émulsion à coeur (ou "core") monodisperse, qui est soit sensibilisée en surface soit dopée, et en entourant ce coeur par une coque (ou "shell"), et en sensibilisant jusqu'à un certain point la surface des grains coeur-coque (core-shell) afin d'augmenter la sensibilité. Quand la courbe caractéristique désirée nécessite la préparation et le mélange de plusieurs émulsions positives directes, en particulier des émulsions core-shell, on se rend facilement compte que la préparation de ces émulsions devient extrêment complexe. On peut le voir dans les brevets de la technique antérieure suivants P-ll Le brevet des Etats-Unis d'Amérique 3 367 778 décrit une émulsion aux halogénures d'argent positive directe du type core-shell, dans laquelle les grains sont voilés en surface plutôt que d'être sensibilisés en surface.
P-12 Le brevet des Etats-Unis d'Amérique 3 761 276 décrit une émulsion aux halogénures d'argent positive directe du type core-shell dans laquelle les grains sont sensibilisés en surface.
P-13 Le brevet des Etats-Unis d'Amérique 4 269 927 décrit une émulsion aux halogénures d'argent positive directe du type core-shell préparée en mélangeant des émulsions ayant des sensibilisations de coeur différentes.
P-14 Le brevet US 4 552 838 décrit quant à lui un procédé dans lequel a) on introduit dans le réacteur une émulsion aux halogénures d'argent formée essentiellement d'un milieu de dispersion et de grains d'halogénure d'argent stables formant une population initiale de grains hôtes capables de jouer le rôle de sites de dépôt pour les ions argent et halogénure, b) on introduit dans le réacteur les ions argent et halogénure sans former de grains d'halogénure d'argent stables supplémentaires, déposant ainsi l'halogénure d'argent sur les grains hôtes dans le réacteur pour augmenter leurs diamètres, c) on continue et on régule l'introduction dans le réacteur de l'émulsion aux halogénures d'argent formée essentiellement d'un milieu de dispersion et de grains d'halogénure d'argent stables pour fournir des grains hôtes supplémentaires au cours de l'introduction des ions argent et halogénure, afin d'obtenir ainsi une répartition de tailles prédéterminée des grains d'halogénure d'argent sensibles aux radiations dans l'émulsion photographique, d) on contrôle le diamètre minimum des grains d'halogénure d'argent sensibles aux radiations dans l'émulsion en contrôlant le diamètre des grains d'halogénure d'argent hôtes introduits, et e) on arrête la croissance des grains d'halogénure d'argent quand le dépôt sur la population initiale des grains hôtes a donné des grains d'halogénure d'argent sensibles aux radiations ayant le diamètre maximum souhaite.
Cette technique, même si elle permet la préparation d'émulsions polydisperses, ne permet pas d'obtenir de distributions cibles complètement prédéterminées. En réalité, selon cette technique, ne sont déterminés que les tailles minimales de grains, les tailles maximales, la valeur moyenne ainsi que les rapports entre petits et gros grains. Cela résulte du fait que la technique mathématique utilisée relève d'une technique dite "des moments" qui simplifie une distribution par ses caractéristiques (moyenne, écart-type, etc.). En conséquence, la technique décrite dans ce brevet ne permet pas d'avoir à priori une connaissance fine de la distribution finale obtenue. Il est par exemple difficile, voire impossible d'obtenir des gaussiennes dont on puisse faire varier finement la déviation standard.
Aussi est-ce un des objets de la présente invention que de fournir un procédé permettant de préparer des émulsions photographiques polydisperses aux halogénures d'argent à caractéristiques granulométriques complètement prédéfinies.
C'est un autre objet que de fournir un dispositif permettant la mise en oeuvre d'un tel procédé.
D'autres objets de la présente invention apparaitront de manière plus détaillée dans la description qui suit.
Ces objets sont atteints par un procédé comprenant les étapes suivantes a) dans un premier réacteur, ajouter simultanément et séparément, selon des débits contrôlés, une solution de sel d'argent et une solution d'au moins un halogénure à une solution agitée de gélatine, les espèces ainsi ajoutées précipitant pour, lors d'une phase de nucléation, former des grains d'halogénure d'argent puis, lors d'une (ou plusieurs) phase(s) de croissance, faire croître lesdits grains selon une vitesse contrôlée et prédéterminée, afin d'obtenir une émulsion monodisperse b) après la phase de nucléation et pendant la (ou les) phase(s) de croissance, prélever en continu, selon un débit variable contrôlé, l'émulsion monodisperse préparée en a) et l'acheminer dans un second réacteur, des moyens de calcul appropriés étant prévus pour contrôler en continu les débits d'introduction de la solution de sel d'argent et de la solution d'halogénure dans le premier réacteur ainsi que le débit de prélèvement de l'émulsion monodisperse du premier réacteur de manière à obtenir dans ledit second réacteur une émulsion présentant la courbe de répartition de taille de grains souhaitée, tous ces débits étant calculés de manière à ce que la précipitation obtenue dans le premier réacteur présente des caractéristiques de croissance identiques à celles que l'on obtiendrait pour une précipitation de référence effectuée sans prélèvement avec un nombre de grains identique.
Selon l'invention, on réalise également un dispositif comprenant a) un premier réacteur dans lequel on ajoute simultanément et séparément, selon des débits contrôlés, une solution de sel d'argent et une solution d'au moins un halogénure à une solution agitée de gélatine, les espèces ainsi ajoutées précipitant pour, lors d'une phase de nucléation, former des grains d'halogénure d'argent puis, lors d'une (ou plusieurs) phase(s) de croissance, faire croître lesdits grains selon une vitesse contrôlée et prédéterminée afin d'obtenir une émulsion monodisperse b) un second réacteur c) des moyens pour, après la phase de nucléation et pendant la (ou les) phase(s) de croissance, prélever en continu, selon un débit variable contrôlé, l'émulsion monodisperse préparée dans le premier réacteur et l'acheminer dans ledit second réacteur d) des moyens de calcul appropriés pour contrôler en continu les débits d'introduction de la solution de sel d'argent et de la solution d'halogénure dans le premier réacteur ainsi que le débit de prélèvement de l'émulsion monodisperse du premier réacteur, de manière à obtenir dans ledit second réacteur une émulsion présentant la courbe de répartition de taille de grains souhaitée, tous ces débits étant calculés de manière à ce que la précipitation obtenue dans le premier réacteur présente des caractéristiques de croissance identiques à celles que l'on obtiendrait pour une précipitation de référence effectuée sans prélèvement avec un nombre de grains identique.
La description qui suit sera faite en référence au dessin dans lequel la figure 1 est une courbe caractéristique d'une émulsion négative aux halogénures d'argent ; les figures 2 et 3 sont des courbes représentant la fréquence de grains en fonction du diamètre des grains pour deux émulsions conventionelles aux halogénures d'argent préparées par la technique de précipitation à jet simple la figure 4 représente un mode de réalisation du dispositif utilisé pour la mise en oeuvre du procédé selon la présente invention la figure 5 représente une courbe de répartition granulométrique d'une émulsion de référence monodisperse et monomorphique préparée sans prélèvement;; la figure 6 représente la courbe de répartition granulométrique souhaitée ainsi que la courbe de répartition granulométrique obtenue pour une émulsion polydisperse préparée avec le procédé selon la présente invention la figure 7 représente des courbes illustrant les débits d'introduction d'argent et d'halogénure ainsi que le débit de prélèvement du premier réacteur en fonction du temps pour la préparation de l'émulsion dont la courbe de répartition granulométrique est représentée à la figure 6 ; la figure 8 et 9 représentent les courbes de répartition granulométrique (calculées et expérimentales) pour deux autres émulsions préparées par le procédé selon la présente invention ;; la figure 10 représente des courbes illustrant les débits d'introduction d'argent et d'halogénure ainsi que le débit de prélèvement du premier réacteur en fonction du temps pour la préparation de l'émulsion dont la courbe de répartition granulométrique est représentée à la figure 9.
La figure 4 à laquelle il est maintenant fait réference, illustre de maniere schématique un mode de réalisation du dispositif utilisé pour la mise en oeuvre du procédé selon la présente invention. Par la technique du double-jet, on prepare dans un premier réacteur 1 une émulsion photographique monodisperse et monomorphique en ajoutant au moyen de pompes appropriées (2, 3), simultanément et séparément, selon des débits contrôlés, une solution de sel d'argent, par exemple du nitrate d'argent et une solution d'au moins un halogénure à une solution agitée de gélatine. L'halogénure peut être à titre d'exemple, du bromure de potassium, de l'iodure de potassium ou du chlorure de potassium. Avantageusement, la solution agitée de gélatine contient des modificateurs de croissance.Selon un mode de réalisation, le contenu du premier réacteur est maintenu sous agitation au moyen d'un agitateur (5) dont la vitesse, pour un réacteur d'environ 20 litres, varie entre 1500 et 7000 tr/mn. La température du réacteur (1) dépend des caractéristiques de l'émulsion à obtenir et, de préférence varie entre 400 et 750. Les espèces ainsi ajoutées précipitent pour, lors d'une phase de nucléation, former un nombre donné de grains d'halogénures d'argent monodisperses et monomorphiques tels que des cubes, des octaèdres ou des cubo-octaèdres (en fonction des conditions de préparation de l'émulsion : pAg, température, etc.). Après cette phase de nucléation, on fait croître les grains obtenus en continuant à ajouter de manière contrôlée les solutions d'halogénure et de nitrate d'argent, dans des conditions telles qu'il ne se forme plus aucun nouveau grain.En réalité, tout le sel d'argent ajouté agit comme s'il était absorbé par les grains existant, considérés comme ayant à tout moment la taille moyenne de la distribution formée dans le premier réacteur.
Pendant la ou les phases de croissance on prélève en continu selon un débit variable contrôlé, de la manière décrite en détail par la suite, l'émulsion monodisperse préparée dans le premier réacteur (1). Avantageusement, on utilise une pompe péristaltique (4) pour effectuer ce prélèvement. En réalité, connaissant à tout moment le nombre de grains dans le premier réacteur (nombre de grains initial - nombre de grains prélevés), connaissant également la courbe de croissance d'une émulsion de référence préparée avec un nombre de grains identique sans prélèvement, on contrôle à tout moment les débits d'introduction de la solution d'halogénure et de la solution de sel d'argent ainsi que le débit de prélèvement de sorte que les grains restant dans le premier réacteur croissent exactement de la même manière qu'une précipitation de référence préparée avec un nombre de grains identique sans prélèvement. Ainsi, à tout moment on connait le nombre et la taille des grains dans le premier réacteur, ce qui permet à tout moment de prélever dans le premier réacteur les grains permettant d'obtenir une émulsion polydisperse de n'importe quel type de distribution prédéterminée (la largeur de la distribution prédéterminée que l'on souhaite obtenir étant plus grande que celle de l'émulsion de référence).L'émulsion prélevée est acheminée dans un second réacteur (6), lequel est maintenu sous agitation au moyen d'un agitateur (7) dont la vitesse est, selon un premier mode de réalisation, d'environ 50 tr/mn.
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La présente invention a pour objet des phosphotriesters de la ddU, leur préparation et leur application en thérapeutique.
La ddU est la 2',3'-didésoxy-uridine dont la formule est donnée en annexe 1.
Les composés de l'invention répondent à la formule (I) donnée en annexe 1 dans laquelle R'1 est la 5'-ddU, la 3'-dT ou la 5'-dT, R'2 est un cation, le radical méthyle, le radical -CH2O-CO- C(CH3)3, -CH2CH20CH3, -CH2CH2CN, -CH2CH2S-CO-C(CH3)3, -CH2CH2S - S CH2CH2OH,
La 2'-désoxythymidine (dT) se lie par la liaison 3'ou 5' les formules sont données en annexe 1.
La préparation des composés est indiquée ci-après et dans 1 ' annexe 2.
Les chromatographies sur couche mince ont été réalisées sur plaques de silice Merck 60F 254 (art.5554). Les chromatographies sur colonne de gel de silice ont été effectuées avec de la silice Merck 60 H (art. 7736) ou avec de la silice silanisée RP2 Merck (art. 7719).
Les analyses CLPH ont été effectuées sur colonne Waters Radial-Pak (diam.: 8 mm, l : 100 mm) C18 de granulométrie sphérique de 10 pm. Cette colonne est protégée par une préco- lonne Guard-Pak. Le système CLHP est composé d'un injecteur U6K, de deux pompes M-6000 A, d'un programmateur M-720 (Waters), d'un détecteur UV multicanal Pye Unicam PU 4021 et d'un centre de contrôle vidéo PU 4850 (Philipps). L'élution a été réalisée avec une solution d'acétonitrile dans un tampon d'acétate d'ammonium 0,1 M (pH 5,9) à un débit de 2 ml par minute (TR : temps de rétention).
Les purifications CLHP ont été effectuées sur colonne SFCC Nucléosil (diam.: 19 mm, 1 : 150 mm) de granulométrie sphérique de 10 pm. Le système CLHP est composé d'un injecteur UsK, de deux pompes M-510 EF, d'un programmateur M-720, d'un détecteur UV M-481 et d'un enregistreur Data Module 746 (Waters). L'élution est réalisée avec une solution d'acétonitrile dans lveau à un débit de 6,25 ml par minute.
Avant analyse, purification CLHP ou lyophilisation, les solutions ont été filtrées sur filtre Millex HV-4 (Millipore).
Les spectres de masse ont été pris sur un appareil JEOL JMS DX 300 par la méthode d'ionisation FAB dans une matrice de glycérol (G), glycérol/thioglycérol (GT) ou d'alcool 3-nitrobenzylique (NBA).
Les spectres RMN du proton ont été enregistrés sur un appareil Varian EM 360 ou sur appareil Brüker AC 250.
Les déplacements chimiques sont exprimés en ppm par rapport au signal du tétraméthylsilane (TMS).
La multiplicité et l'allure des signaux observés par RMN sont indiquées par une (ou plusieurs) lettre(s) : s (singulet), d (doublet), t (triplet), m (multiplet), 1 (large).
La présence d'une coloration intense montre que les deux enzymes encapsulées dans les BVSM de type-L conservent leur activité. Le dosage de l'activité des enzymes encapsulées donne un résultat comparable à celui obtenu avec les enzymes en solution aqueuse à la même concentration.
* Activité anti-bactérienne contre une souche d'Escherichia coli: On prépare un milieu de culture LB Glucose mélangé à une gélose Agar, coulé dans des boîtes à antibiogramme. La souche d'E. coli est ensemencée à la surface de la gélose à raison de 200 cL1 / boîte. Des disques papier stériles sont imprégnés de suspensions d'enzymes, encapsulées ou non et déposés sur la gélose des boites ensemencées. On laisse incuber 2Ah à 37"C et on mesure les diamètres d'inhibition autour des disques.
Les disques ont été imprégnés avec des concentrations en enzymes variant de 0,05 à 0,6 mg/ml de LP et de 0,8 à 10 mg/ml de GO. Les diamètres d'inhibition varient de 12 à 20 mm et sont comparables que les enzymes aient été encapsulées ou non.
EXEMPLE 11:- STABILISATION DE L'ACTIVITE ANTIBACTERIENNE DES ENZYMES ENCAPSULEES DANS LES BVSM Trois lots de glucose oxydase ont été préparés. Le lot 1 est constitué d'une solution aqueuse de GO à 0,2 mg/ml, le lot 2 par une suspension aqueuse de GO encapsulée dans des BVSM préparés selon les précédents brevets, avec un taux d'encapsulation de 200% par rapport au poids de particules et dont la concentration en GO est de 0,2 mg /ml et le lot 3 par une suspension aqueuse de GO encapsulée dans des BVSM de ty.pe-L selon l'exemple 8, et dont la concentration en GO est également de 0,2 mg/ml.
Ces trois suspensions sont laissées à 4 C et dosées toutes les semaines puis tous les mois par la méthode décrite à l'exemple I ().
L'activité de la solution de GO décroît au cours du temps et devient nulle au bout de 250 jours. A l'inverse, l'activité des deux suspensions de (;O encapsulée soit dans les BVSM soit dans les BVSM de type-L reste constante et demeure égale à 100% de l'activité initiale au bout de 320 jours.
Par ailleurs, sont également préparés une solution aqueuse de lactopéroxydase à 0,1 mg/ml et une suspension de LP encapsulées dans des BVSM de type-PS préparés selon l'exemple 9 et dont la concentration en LP est également de 0,1 mg/ml.
Ces deux suspensions sont laissées à * C et dosées toutes les semaines puis tous les mois par la méthode décrite à l'exemple 10.
L'activité de la solution de LP décroît au cours du temps et, au bout de 90 jours, l'activité résiduelle n'est plus que de 35% de celle de l'acticité initiale. A l'inverse, l'activité de la suspension de LP encapsulée dans les BVSM de type-PS reste constante et demeure égale à 100% de l'activité initiale au bout de 90 jours.
EXEMPLE 12 : INCORPORATION D'OLIGOMERES PROCYANIDOLIQUES (OPC) DANS LES BVSM DE TYPE-L Les oligomères procyanidoliques (OPC) sont des agents antioxydants de la famille des tannins hydrolysables (flavonoïdes). Ils présentent des propriétés anti-radicaux libres. Leur poids moléculaire moyen est d'environ 2 000 daltons. Ils sont solubles dans l'eau à un pH inférieur à 7.
On solubilise 5 grammes d'OPC dans une quantité minimum d'eau distillée (environ 5 millilitres) et on introduit 10 grammes de gel type CAVE, préparé selon l'exemple 2. Le mélange est hydraté avec 180 millilitres de tampon à pH 6, au dessus du pKa moyen des OPC, sous agitation pour obtenir une pâte homogène. Le mélange est laissé agité une nuit. Le pH est alors ramené à 3,5, au dessous du pKa moyen des OPC, laissé incubé 30 min. sous agitation puis lavé à l'eau distillée par centrifugation afin d'éliminer les OPC libres. La quantité d'OPC libre dans le surnageant est dosée par UV à 280 nm. On obtient un rendement d'encapsulation de 82% et un taux de chargement de 41% par rapport au poids du gel.