INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Pour préparer les argiles acides, on part préférentiellement des argiles naturelles présentant une structure dite "TOT" ou tétraèdre-octaèdre-tétraèdre.
Les argiles TOT se présentent sous forme de feuillets élémentaires comprenant deux couches de tétraèdres d'atomes d'oxygène dans lesquels sont inclus les atomes de silicium séparées par une couche d'octaèdres d'atomes d'oxygène dans lesquels est inclus le métal M de type MO4(OH)2 ou M est un cation divalent ou trivalent.
Lorsque tous les tétraèdres sont occupés par des ions Si4+, la neutralité électrique du feuillet peut être mesurée de deux façons, selon la charge du cation octaédrique: - s'il est divalent (Mg2+, Fe2+,...), toutes les cavités octaédriques sont occupées; le feuillet est alors dit trioctaédrique, - s'il est trivalent (Al3+, Fe3+,...), deux cavités octaédriques sur trois sont occupées et le feuillet est dioctaédrique.
La synthèse automatisée de cet oligonucléotide reprend les quatre étapes décrites au II-1.
Chaque synthèse a été effectuée sur une colonne contenant 40 mg de support solide. Le rendement de chaque incorporation est de 98 %. La durée d'un cycle d'élongation par monomère 4'-Sr-U est de 21,43 minutes contre 6,73 minutes pour un monomère dT Cette différence est dûe à l'augmentation du temps de couplage d'une entité 4'-Sr-U qui est de 915 secondes contre 36 secondes pour dT (tableau 2).
ETAPES TEMPS (secondes) SOLVANTS ET REACTIFS Lavage-séchage 25 CH CN / Argot Couplage 4!-Sr-U 915 Nucléoside phosphoramidite 0,1 M (20 eq.) dans CH3CN + tetrazole dT 36 0,5 M (10 eq.) dans CH3CN.
Lavage-séchage 41 CH3CN/Argon.
Oxydation 36 I2(0,1 M) dans THF/Pyr/H2O (40/10/1).
Lavage-séchage 59 CH CH3CN / ARGON.
Masquage 23 Méthylimidazole-:1 Ac2O/lutidine/THF:1/1/8:1.
Lavage-séchage 71 CH3CN / Argon.
Détritylation 98 TCA à 3% dans CH2Cl2.
Lavage-séchage 33 CH3CN/Argon.
TABLEAU 2 : Cycle d'élongation utilisé pour la synthèse de 4'-SrU3-dT6-4'-SrU3 / Pll, 4.
III-2-2Oligonucléotide 4'-SrU3-dT6-4'-SrU3/P3PS5P3, 5.
Les mêmes conditions de synthèse automatisée ont été appliquées à ce dodécamère mixte comportant à la fois des liaisons phosphodiesters et phosphorothioates.
La synthèse a été effectuée à l'échelle d'une mole soit sur une colonne contenant environ 40 mg de support solide fonctionnalisé à 21 mole / g. Le rendement moyen d'incorporation est de98%.
Lors de l'introduction d'une liaison internucléotidique de type phosphorothioate, l'étape d'oxydation définie au paragraphe IV-2-1 été 4, Tableau 2) a été remplacée par une étape oie sulfurisation de 51 secondes utilisant le réactif de Beaucage (*sul- fone-carboxythio2nhydride derivative of benzene" dissout dans i 'acétonitrile à une concentration de 0,05 M.
Les autres étapes du cycle d'élongation demeurént mchangées.
2.2 Site de sélection des produits Il comprend les moyens suivants: - interfaces d'achats (appartient au client) ou des clés - stands d'expositions/sélection - postes de contrôle - le système de stockage provisoire La sélection d'un produit nécessite l'utilisation de la clé ou de l'interface d'achat.
2.3 Site de paiement 1l comprend les moyens suivants: - interface d'achat (appartient au client) - le poste de paiement Le site offre deux possibilités: - paiement sur des postes automatiques par carte de crédit ou à l'aide de l'interface d'achat, - paiement en numéraires ou chèques.
2.4 Site de prise en charge n comprend les moyens suivants: - interface d'achat (appartient au client) - le poste de chargement Le site comprend un certain nombre de postes de chargement.
L'accès est adapté soit à un chargement pour voitures, soit à un chargement pour piétons.
2.5 Site coulisses Il comprend les moyens suivants: - le système de stockage provisoire - le système de stockage/de-stockage - le système central Ce site est réservé au personnel.
2.6 Site parking I1 est classique, il n'y a pas de chariots disponibles.
La sortie du parking canalise le client vers le site de prise en charge.
3 Principe général vu du côté client Le client motorisé se gare sur le parking.
Il est canalisé vers l'accueil où il prend connaissance du mode d'emploi du magasin. Celui ci bien que très simple est nécessaire pour une première utilisation. Un support audio-visuel multilangues d'une minute parait suffisant pour l'expliquer.
Mode d'emploi du magasin: Phase 1 Le client prend au passage une clé (carte à puce spécialisée) en échange d'une caution, ou la possède déjà si il est abonné ou encore il possède une interface d'achat dans ce cas il peut stocker l'actualité magasin.
Cette clé ou l'interface d'achat lui permet de s'identifier en tant que client par le système (tout en restant anonyme).
Nota: Si le client ne dispose pas de monnaie pour la caution de la clé évoluée (carte à puce), il peut tout de même retirer gratuitement une clé rudimentaire (sans puce) pour effectuer ses achats, par contre il ne bénéficiera pas de toutes les prestations.
Cette clé rudimentaire contient uniquement l'identification du client sous forme de codage à trou par exemple ou de code barre. Cette clé sera échangée au moment du paiement par une clé évoluée.
Phase 2 Les marchandises sont présentées dans le site de sélection du magasin par groupements de produits.
Des interfaces conviviales et rapides permettent par l'utilisation de la clé ou de l'Interface d'achats: - d'identifier le client lorsqu'il y insère sa clé, - de sélectionner un produit sans toutefois pouvoir en disposer immédiatement.
- d'envoyer en stockage provisoire un produit pesé ou essayé qui lui convient.
DIC : désorption par ionisation chimique.
Synthèse du tétrafluoroborate de 1,4,6-triméthyl-2vinylpyridinium: A une solution du produit B (0,61 g; 4,1 mmoles) dans 4,0 ml de chlorure de méthylène sous atmosphère inerte, on ajoute, en une portion, du tétrafluoroborate de triméthyloxonium (0,50 g; 3,76.10-3 mole ; LANCASTER). La suspension est laissée réagir pendant 2 h à 250C. La suspension est filtrée et le produit est séché sous vide.
* SM (IE, 70eV): 148(10); 147(18); 133(34); 121(100); 106(25); 91(31); 77(52); 49(77).
IE = impact électronique * Microanalyse Calculé (e) : C 51,10; H 6,00; N 6,00 Trouvé (%) : C 49,80; H 6,08; N 5,96.
Exemple 4 : Préparation du tétrafluoroborate de 1 méthyl-4-vinylquinollinium.
Synthèse du produit C (4-vinylquinoléine) Une solution de 4-quinoléine-carboxaldéhyde (5 g; 3,18.10-2 mole ; ALDRICH) dans 32 ml de benzène, sous atmosphère inerte, contenant de l'iodure de triphénylméthylphosphonium (26 g; 6,3 mmoles ; ALDRICH) est additionnée à une solution de soude (96 ml; 5N). Le système biphasique est agité à 450C pendant 30 minutes. Après décantation, la phase aqueuse est extraite par de l'acétate d'éthyle (3x100 ml).
Les phases organiques sont réunies et lavées par une solution d'HCI 1N (2x30 ml), puis la phase aqueuse est neutralisée par du NaHCO3 et extraite par du chlorure de méthylène (3x100 ml). La phase organique est séchée sur MgSO4. Le produit désiré est purifié par chromatographie sur colonne de silice MERCK F254 (éluant = cyclohexane/AcOEt, 8/2).
Caractéristiques physiques * RMN 1H (200 MHz, CDCl3) 5,60 ppm (d, 1H, J=10 Hz); 5,95 ppm (d, 1H, J=14 Hz); 7,30-7,55 ppm (m, 4H); 7,60-7,75 ppm (t, 1H, J=4 Hz); 8,07 ppm (t, 2H, J=6 Hz); 8,85 ppm (d, 1H, J=4 Hz).
Synthèse du tétrafluoroborate de 1-méthvl-4-vinylquino- leinium : A une solution du produit C (0,72 g; 4,64.10-3 mole) dans un mélange acétonitrile/acétone (2,5/1) est ajouté sous atmosphère inerte, en une portion, du tétrafluoroborate de triméthyloxonium (1,58 g; 10,7.10-3 mole LANCASTER). La suspension est laissée réagir pendant 1 h à 250C. Le solvant est évaporé sous pression réduite, le résidu est repris par du 2-propanol (25 ml) puis agité pendant 30 minutes à température ambiante. Après addition d'éther éthylique (25 ml), la suspension est filtrée. Le produit désiré est séché sous vide.
* SM (FAB) glycérol-NOBA : ion positif M+ = 170(100), ion négatif M- = 87(100).
* Microanalyse Calculé (%) : C 56,00; H 4,60; N 5,40 Trouvé (%) : C 55,56; H 4,35; N 4,12.
Environ 200 régions hypervariables ont été détectées à ce jour en explorant des banques de cosmides avec des oligonucléotides enrichis en Guanine, identiques aux motifs répétés isolés des séquences minisatellites isolées précédemment (NAKAMURA et al. ,1987, 1988). On estime à environ 1500 le nombre minimum de tels locus chez l'homme. De nouvelles techniques permettant la détection de nouvelles régions hypervariables sont nécessaires à la construction des cartes génétiques.
Le procédé de l'invention peut être comparé à l'utilisation de sondes VNTR clonées détectant des familles de VNTR proches. La différence principale tient au nombre illimité de nouveaux polynucléotides, et au fait que certains d'entre-eux détectent par hybridation en conditions faiblement stringentes un petit nombre de cosmides dont une forte proportion contient un locus hypervariable.Inversement, lorsqu'un nombre limité de sondes multilocus est accessible, et lorsque ces sondes détectent de nombreux locus du génome humain (ROYLE et al., 1988), il peut être nécessaire de construire une banque spéciale enrichie en séquences mini-satellites pour retirer les fragments monomorphes cross-hybridant avec la sonde, afin d'obtenir une meilleure efficacité d'identification de régions hypervariables; la procédure généralement utilisée consiste à cloner des fragments de grande taille, après digestion par des enzymes de restriction telles que Sau3A (MboI), HaeIII (WONG et al., 1987; ARMOUR et al., 1990; GEORGES et al., 1991); ce qui peut avoir pour conséquence, que les minisatellites avec une prédominance de petits allèles soient difficiles à obtenir.
Les résultats de l'étude rapportée dans le cadre de la description de l'invention, confirment que les VNTR sont regroupés dans les régions télomériques du génome humain. Il est donc intéressant de remarquer que les nouvelles régions hypervariables détectées dans le cadre de l'invention présentent une distribution similaire à celle des VNTR déjà identifiés.
Les polynucléotides utilisés chez l'homme dans le procédé de l'invention sont également utilisables chez une grande variété d'espèce, comme la souris, le rat, les bovins, les chiens et les chevaux.
En ce qui concerne les sondes de l'invention, l'une d'entre-elles détecte un locus qui apparaît hautement mutable. Bien que l'ADN utilisé dans la présente étude provienne de lignées cellulaires de lymphoblastes transformés, il est peu probable que les mutations soient apparues lors de la culture des cellules (ARMOUR et al., 1989). La présente invention rapporte la preuve directe de l'existence chez l'homme d'une région hypervariable hautement mutable (CEB1), laquelle mutation apparaît principalement en meïose mâle.La mise en évidence de locus à taux de mutation différents chez llhomme et chez la femme constitue un indice encourageant pour rechercher d'autres locus hypermutables, et la localisation de ces locus permettrait la construction d'une carte du génome humain corrélée à d'autres observations concernant par exemple les taux de recombinaison différents entre l'homme et la femme.
A l'inverse aucune mutation n'a été observée avec la sonde CEB11, correspondant à une région hypervariable détectée sur le même cosmide que CEB1. Les séquences de nucléotides de CEB1 et de MS1 (65% GC; 5G 1C) sont extrêmement riches en Guanine et Cytosine et contiennent un brin riche en Guanine; de nombreux autres locus VNTR montrent la même distribution sans taux de mutation élevé. Les mutations détectées par CEB1 ne sont pas liées aux tailles de l'allèle comme le montre le tableau 4 et la figure 5. Toutefois il semble y avoir un lien entre l'augmentation de taille de l'allèle et les cas de mutation. L'isolement de sites hypermutables est également important pour comprendre la nature des réarrangements survenant dans la génération de la variabilité du locus VNTR.L'hypothèse selon laquelle les nouveaux allèles sont générés par un échange inégal entre régions homologues a déjà été étudiée pour trois locus. Une simple mutation d'origine maternelle au niveau du locus D17S5 a été caractérisée au niveau moléculaire par WOLFF et al. (1988), et 36 mutations ont été observées dans le panel du CEPH au niveau du locus D1S7 (MS1). L'analyse génétique avec des RFLPs informatifs flanquants a été appliquée à 12 mutations dans la perspective de détecter des cas de "crossingover" (WOLFF et al., 1989). Le locus D1S8 (MS32) a été étudié en cartographiant les variations internes de plus de 60 mutants méiotiques (JEFFREYS et al., 1990). Dans tous les cas, il apparaît que les nouveaux allèles ne sont pas générés par des "crossing-over" inégaux.
Les données préliminaires rapportées dans la présente étude suggèrent fortement que les mutations au niveau du locus détecté par la séquence de nucléotide CEB1 ne sont également pas générées par un échange inégal entre homologues. Vingt-neuf cas de mutation sont apparus chez des individus doublement informatifs pour les marqueurs flanquants dont une région 33-cM, et seulement 8 individus montrent une recombinaison dans la région. En conséquence, la question de l'origine de l'ADN additionnel dans l'allèle dont la taille a augmenté en raison de mutations reste posée. La cartographie des variants internes comme décrit par JEFFREYS et al. (1990), appliquée à la région hypervariable définie par CEB1 pourrait être une approche prometteuse pour répondre à cette question.
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La sélection d'un groupement protecteur pour l'hydroxyle en 2' doit correspondre à plusieurs critères, il doit être stable: - sous les conditions de couplage pendant la déprotection des groupements protecteurs en 5' pour permettre l'extension de la chaîne.
- pendant l'oxydation dans le cas de la méthode aux phosphites triesters.
- pendant le masquage qui suit le couplage.
- pendant la déprotection des groupements protecteurs des amines exocycliques.
- pendant la déprotection des phosphates.
- et dans le cas des synthèses sur support solide pendant le clivage de l'oligomère du support.
Finalement ce groupement protecteur doit être enlevé sous des conditions très douces pour éviter une attaque de la fonction hydroxyle en 2' libérée sur la liaison phosphodiester adjacente.
Un nombre important de stratégies pour protéger les hydroxyles en 2' ont été développées et illustrent les difficultés dans le choix du schéma de protection des groupements hydroxylés.
(C. B. REESE, Nucléosides Nucléotides, 1985, 4, 117-127; R. KIERZECK, M. H.
CARUTHERS, C. E. LONGFELLOW, D. SWINTON, D. H. TURNIER et S. M.
FREIER, Biochemistry, 1986, 25, 7840-7846; S. IWAI et E. OHTSUKA, Nucleic Acids Res., 1988, 16, 9443-9456; C. LEHMANN, Y. Z. XU, C. CHRISTODOULOU, Z. K. TAN et M. J. GAIT, Nucleic Acids Res., 1989, 17, 2379-2390; T. TANAKA, S. TAMATSUKURI, et M. IKEHARA, NucleîcAcîdsRes., 1986, 14, 6265-6279.).
L'utilisation de groupements protecteurs alkylsilyl et notamment le tert-butyldiméthylsilyl (TBDMS) pour l'hydroxyle en 2' a facilité la synthèse des oligoribonucléotides. Le groupement TBDMS est suffisament stable dans des conditions acides ou basiques et est facilement enlevé par le fluorure de tétra-butyl ammonium dans le THF pour être utilisé dans la stratégie en phase solide (N. USMAN, K. K. OGILVIE, M. Y. JIANG et R. L.
LEDERGEN, J. Am. Chem. Soc., 1987, 109, 7845-7854; N. USMAN, K.
NICOGHOSIAN, R. L. CEDERGREN et K. K. OGILVIE, Proc. Natl. Sci. USA, 1988, 85, 5764-5768.; S. A. SCARINGE, C. F. FRANCKLYN et N. USMAN, Nucleic Acids Res., 1990, 18, 5433-5441.;K. K. OGILVIE et M. J. NEMER, Tétrahedron Lett., 1980, 21, 4159; R. T. PON et K. K. OGILVIE, Nucléosides Nucléotides, 1984, 3, 485; R. T.
PON et K. K. OGILVIE, Tétrahedron Lett., 1984, 25, 713.).
On a donc appliqué en série B oligothioribonucléotide le schéma de protection utilisé pour les nucléosides oxygénés (Schéma 8).
Le dispositif de codage 400 présent en sortie des dispositifs 200 et 300 comprend, comme on le verra, divers sousensembles de codage, mais tout d'abord un circuit 420 de codage des diverses informations disponibles en sortie du circuit d'ajustement 203, à savoir les nouvelles coordonnées des noeuds du modèle tridimensionnel et des grandeurs dites coefficients de texture et attachées à chaque facette F. Si l'image de synthèse que l'on veut obtenir tient compte de l'ombrage, elle est alors définie, pour chaque facette, à partir du produit du coefficient de texture correspondant par le coefficient d'ombrage lié à ladite facette, ce qui se traduit par l'expression suivante I(SYNTH)F = 1OMB (F) x CT(F) le coefficient de texture CT(F) pour la facette F étant lui-même déterminé lors de la calibration initiale à partir de l'image originale I (SOURCE) F vue de face CT(F) = I(SOURCE)F/IOMs(F) Ceci dans le cas où la réalisation du sous-ensemble de codage est telle que ce dernier est prévu pour transmettre au sous-ensemble de décodage un tableau regroupant tous les coefficients de texture (calculés comme indiqué ci-dessus) pour toutes les facettes, ledit sous-ensemble de décodage reconstruisant alors l'image de synthèse selon l'expression ci-dessus, en considérant successivement la luminance de chaque point. Ainsi, pour coder une séquence de plusieurs images, il suffit de transmettre une seule fois le tableau de coefficients de texture correspondant à la première image. Ensuite, au cours du mouvement du personnage, les déplacements du modèle entraînent des déformations des facettes qui constituent ce modèle, mais la texture de ces facettes est calculée par interpolation des valeurs initiales des coefficients de texture.
Une autre réalisation du sous-ensemble de codage est possible, dans laquelle on ne transmet pas ce tableau des coefficients de texture, mais simplement la partie d'image originale correspondante, codée par exemple selon un standard vidéo numérique de type JPEG -Joint Photographic Experts Group- qui est adapté à la compression et au codage de données appartenant à des images fixes. Ce standard, décrit dans de nombreux documents, et par exemple dans l'article "Video compression makes big gains", paru dans la revue IEEE Spectrum, octobre 1991, vol.28, ne10, pp.16-19, prévoit que chaque composante vidéo de l'image est divisée en blocs qui sont alors transformés, selon une transformation orthogonale de type DCT (transformation cosinus discrète, en anglais Discrete Cosinus Transform) en coefficients représentatifs du contenu en fréquence de ces blocs, et eux-mêmes quantifiés puis codés. Avec cet autre mode de réalisation, on transmet ainsi à la fois les informations nécessaires au calcul des coefficients de texture, qui ne seront extraits qu'au niveau du sous-ensemble de décodage et, bien entendu, toujours la partie correspondant au fond des images. Le coût de codage, dans ce cas, est de l'ordre de 0,5 bit/pixel. Là encore, comme dans le cas de la précédente réalisation, pour coder une séquence de plusieurs images, il suffit d'effectuer une seule fois le codage de type JPEG au cours du mouvement du personnage. Cette méthode permet en outre de transmettre toute l'image lors de la phase d'initialisation, ctest-à- dire une image du fond en même temps que les informations de texture.
En ce qui concerne les nouvelles coordonnées des noeuds du modèle, on pourrait transmettre et/ou stocker, en vue du décodage, ces coordonnées elles-mêmes. I1 est cependant bien plus économique, en matière de débit de transmission, de considérer que les coordonnées d'origine des noeuds du modèle tridimensionnel sont déjà connues et stockées côté décodage, et de n'envoyer alors, pour transmission et/ou stockage, que les valeurs des différences entre ces coordonnées d'origine et les nouvelles valeurs calculées. En codant ces différences avec un nombre suffisant de bits, par exemple 6, on peut ainsi envisager des déplacements de noeud importants (64 pixels pour 6 bits). La calibration est réalisée pendant une période de temps limitée correspondant par exemple à un nombre déterminé d'images de la séquence. Cette période peut être définie par le commutateur 250 représenté sur la figure 1 et qui bascule du dispositif 200 vers le dispositif 300 après écoulement de cette période. A chaque position du commutateur 250 est associé un signal de mode qui doit être transmis en même temps que les autres données codées pour que le système de décodage puisse ultérieurement reconnaître la nature des signaux qui lui parviennent. Lorsque cette calibration initiale et le codage des informations de calibration sont achevés, comme indiqué plus haut, c'est le dispositif 300 qui va permettre la réactualisation desdites informations relatives au modèle tridimensionnel.
Ce dispositif 300, qui reçoit lui aussi (ici par l'intermédiaire du commutateur 250) les signaux numériques correspondant à la partie animée de la séquence d'images et sélectionnés ici par segmentation, comprend tout d'abord un circuit 301 de détermination du mouvement des points caractéristiques du modèle tridimensionnel précédemment construit, qui doit, à partir de ces informations de modèle, déterminer les translations et rotations du visage, afin de pouvoir ultérieurement ne coder que les paramètres qui permettront, au décodage, de trouver la position correcte du modèle tridimensionnel. Cette description de mouvement en trois dimensions implique de déterminer les mouvements en translation et en rotation du modèle, selon les six degrés de liberté représentés sur la figure 7, où les mouvements en translation sont repérés sur les axes T, T, Tz et les mouvements en rotation par les angles #, ç par rapport à ces axes respectivement.
Pour déterminer les déplacements dxi, dy1 des différents points caractéristiques i par translation et rotation, on va suivre les déplacements de fenêtres définies en des zones caractéristiques du visage, comme indiqué sur la figure 8. En supposant que le personnage reste dans le même plan durant toute la séquence (pour éviter d'avoir à tenir compte de mouvements en profondeur), on recherche pour chaque fenêtre d'une image donnée, comme le montre ladite figure, celle des fenêtres qui lui ressemble le plus à l'intérieur d'une zone de recherche située dans l'image qui suit ladite image donnée, selon un critère de ressemblance qui est par exemple celui de la recherche du minimum de l'erreur absolue. Pour chaque point caractéristique i, les déplacements dxi, dy1 sont finalement donnés par les expressions dxi = r(yi).cos0.dA + r(zi).cosYE.dS! + dTx ayi = r(xi).cos#.d# + r(zi).cosSF.dS! + dTy où r(xi), r(yi), r(zi) désignent les rayons de rotation pour un point caractéristique i déterminé. En résolvant alors ce système d'égalités pour les différents points caractéristiques i, on obtient les paramètres d < p(.),de(.), d#(.), et dT(.), les angles absolus étant déjà connus à partir de l'image précédente. Cette extraction de paramètres permet de réactualiser le modèle tridimensionnel pour prendre en compte les modifications éventuelles de forme de la zone utile.