INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Suspension en PBS -1 AMS précipitation 10-20% $ addition HIC HIC sepharose -+ Lyophilisation taurodeoxycholate pic élution (eau) $ de Na jusqu'à 0,5 % repris par Tris5m M Gnd Hcl 8,5M -1 -1 agitation 2h à 200C 2h à 370C -1 -1 ultracentrifugation addition de Tris 5mM 110000g 200mn final 6M Gnd Hcl $ $ Ta Sephacryl S300 Gnd Hcl 6M $ $ Culot CS31A natif pic2 $ dialyse-lyophylisation $ cs3lA dénturé a) Purification sous forme native (polymérique) La purification de l'antigène natif de haut poids moléculaire est réalisée selon une méthode simple décrite ci-après dont les différentes étapes permettent d'éliminer la quasi totalité des contaminations, en particulier celles liées aux débris membranaires (protéines et LPS). Le tableaux 1 ci-dessus etle tableau 2 ci-après permettent de suivre les étapes de la purification (dosage du KDO : Méthods in microbiology, vol.5B, p. 209-344). Les bactéries récoltées en PBS à partir d'une culture de 10 flacons de Roux en milieu gélosé Minca décrit par Guinée (Infection and Immunity, 1976, 13, 1369-1377) sont homogénéisées à vitesse maximum pendant 3 x 1 mn à température ambiante puis centrifugées 15 mn à 25000 g.Le surnageant est centrifugé à 100C pendant 30 mn à 55000g. Le surnageant obtenu est soumis à une précipitation séquentielle au sulfate d'ammonium. Le culot obtenu entre 10 et 20 % de saturation est remis en solution dans du PBS pH 7,2 à 40C pendant une nuit, additionné de NaCl (2 M), laissé en équilibre une heure à température ambiante, puis purifié par chromathographie à interactions hydrophobes (HIC) sur phenyl Sepharose CL4B (Pharmacia). La protéine native éluée par l'eau est additionnée de taurodeoxycholate de sodium (DOC) 0,5% puis soumis à une ultra centrifugation de 200 mn à 110.000 g. Le culot (UC en TDC) essentiellement constitué par la protéine CS31A sous forme native de haut poids moléculaire est repris en tampon Tris 10 mM (pH 7,8) et laissé en dissolution à 40C (une nuit sans agitation).
Le tableau 2 ci-dessous indique les mesures de contrôle de la purification de CS31A par mesure du KDO résiduel.
Tableau 2 CS31A natif Orne 6 (UC en TDC) Protéines mg % des protéine % pds sec KDO totales totales bactéries total gg Surnageant 12000g 54,60 100 4,23 0,110 Surnageant 50000g 52,00 95 4,03 0,110 Surnageant 20% 29,45 54 2,22 0,065 Culot 20% 5,40 9,9 0,42 0,009 HIC élué 2M NaC1 0,35 0,7 0,03 0 HIC élué eau 1,806 3,3 0,14 0 UC en TDC 1,033 1,9 0,08 0 110000q 200mn b) Purification de CS31A sous forme dénaturée (sous-unité) L'antigène de haut PM purifié (lyophilisat HIC) comme décrit dans le tableau 1, est dissocié en sous-unités (30 kDa) par 8,5 M de chlorure de guanidium (Gnd, Hcl) 2h à 37 OC. La concentration est ramenée à 6 M de (Gnd, Hcl) par addition de Tris (pH 7,8) et la protéine est purifiée par une chromatographie sur gel permeation sur Sephacryl S 300 (Pharmacia) en tampon dissociant (Tris pH 7,8; Gnd, Hcl 6 M). Le produit correspondant à l'élution d'une protéine de 30 KDalton est recueilli, dialysé contre un tampon acétate d'ammonium (5 mM pH 7,8), lyophilisé et conservé à -800C.
10) Préparation des anticorps spécifiques Les anticorps ont été préparés chez le lapin (soit contre la protéine native soit contre la protéine dénaturée) par 4 injections intra-dermiques de 250 Rg de protéines purifiées, à 15 jours d'intervalle en présence d'adjuvant de Freund incomplet. Les IgG ont été purifiées par chromathographie d'affinité sur Protéine A Sépharose (Pharmacia) et marquées à la biotine par la méthode décrite par Hantowich et al. (Journal Nuclear Medecine 1987; 28; 1294-1302).
Les antipeptides ont été obtenus par trois injections intra-dermiques de peptides synthétiques couplés à l'olvalbumine par la glutaraldelhyde ou par la Bis-aminobenzidine sur résidu tyrosine (présence d'un NH2 dans le peptide) suivant les techniques décrites par Van Regenmortel et al. (Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Synthetic polypeptides as antigens, 1988).
Afin d'éviter les réactions non spécifiques, les anticorps utilisés sont absorbés contre les différentes souches bactériennes, soit avec des cellules entières, soit avec des extraits cétoniques obtenus à partir de préparations cellulaires ultra soniquées.
11) Techniques immunologiques - La présence de l'antigène CS31A sur des bactéries absorbées sur un filtre de nitrocellulose est révélée par une méthode immunologique en utilisant des anticorps spécifiques polyclonaux dirigés soit contre la protéine préparée sous forme native ou dénaturée, soit contre des peptides couplés à l'ovalbumine. La fixation des anticorps non marqués est détectée par des IgG de chèvre anti-lapin marquées à la péroxydase (Nordic), celle des IgG biotinylées par la streptavidine couplée à la péroxydase (Pierce) le substrat étant le 4chloronaphtol. Les protéines séparées par SDS-PAGE sont transférées sur membrane de nitrocellulose, laquelle est ensuite soumise à un test de détection immunologique avec les divers anticorps spécifiques décrits ci-dessus selon la technique dite du "Western blot".
- Le dosage des antigènes et des anticorps est réalisé par une méthode ELISA par capture d'anticorps (directe ou "sandwich") pour le dosage des anticorps, et en compétition pour le dosage de l'antigène. La spécificité et le titre des antipeptides sont mesurés par une méthode de capture d'anticorps par les peptides fixés sur des plaques Immulon II (Dynatech).
- La définition des épitopes continus est réalisée par mesure de l'immunoréactivité réactivité de 257 peptides de 9 résidus se chevauchant à un résidu prêt, recouvrant la totalité de la séquence primaire de la protéine.
L'épitope scanning décrit par Geysen et al (1984, Proc. Natl. Acad. Sci. 81, 3998) est réalisé grâce à un kit (Cambridge Research Biochemicals Northwich, UK) fournissant : un logiciel qui permet de piloter la synthèse peptidique et d'exploiter les résultats; les têtes de synthèse activées; les 20 dérivés des acides aminés nécessaires à la synthèse des peptides. La détection des anticorps fixés sur les peptides est assurée par une méthode ELISA, la lecture des plaques (Dynatec MR5000) et la définition des épitopes sont pilotées par le logiciel livré par le fournisseur. Les épitopes ont été définis avec les anticorps dirigés contre la protéine native ou contre la protéine dénaturée.
L'antigénicité des épitopes ainsi définis a été mesurée soit - en comparant le profil d'épitope scanning obtenu avant et après compétition avec l'antigène sous forme native; - en mesurant la diminution du titre d'antipeptides soumis à une compétition avec la protéine native; - en mesurant la capture des anticorps par la protéine native (ELISA sandwich ou Dot-Blot sur nitrocellulose).
12) Observation en microscopie électronique Toutes les observations ont été réalisées avec un microscope électronique EM400 (Philips Electronic Instrument, Inc., Mahwah, N.J.) avec un courant d'accélération de 80 Kv.
Les bactéries et les extraits purifiés ont été observés (grille 300 mesch recouverts de collodion) après coloration négative par 1 % d'acide phosphotungstique.
Les cellules bactériennes entières ont été observées après marquage à l'or colloïdal après avoir fait agir les anticorps anti-CS31A obtenus contre la protéine native, par la technique décrite par Levine et al. (Infection and Immunity : 1984, 44, 409-420). Le marquage à la ferritine sur coupe de bactérie a été réalisé par la méthode décrite par Orskov et al.
- les produits surgelés ou congelés, notamment les gâteaux congelés, les glaces, les tartes, et autres plats cuisinés (pizzas, lasagnes, etc;).
D'autre part de nombreuses variantes peuvent être envisagées, l'exemple de réalisation n'étant qu'un choix parmi d'autres. par exemple: - le dispositif d'amenée peut être une colonne verticale compartimentée, chaque compartiment contenant une préparation culinaire. La colonne descend d'un compartiment à chaque pas.
- la table peut-etre remplacée par un support horizontal constitué d'une pluralité de tablettes identiques, ou élément de surface, comportant chacune un évidement, chaque tablette circulant dans un circuit fermé assurant la continuité du procédé. Le circuit peut être horizontal ou dans un plan vertical, les tablettes peuvent circuler comme une bande de transport, sans fin.
La présente invention est relative à des lignées de cellules endothéliales cérébrales immortalisées, à leur procédé de préparation et à leurs applications en tant que modèle d'étude de la physiopathologie cérébrale et plus particulièrement en tant que modèle cellulaire de la barrière hémato-encéphalique.
I1 est difficile, à l'heure actuelle, de disposer de systèmes permettant l'analyse des cellules endothéliales de la barrière hémato-encéphalique. En dépit des travaux effectués dans le domaine de la culture des cellules endothéliales cérébrales, l'étude de ces cellules est encore difficile, en raison notamment de la durée de vie limitée de ces cellules en culture (de l'ordre de douze passages) conduisant, de plus, à des changements phénotypiques considérables concomitamment au vieillissement cellulaire (DURIEU-TRAUTMANN et al., J.
Neurochem., 1991).
Les Inventeurs se sont, en conséquence, donné pour but de pourvoir à un modèle d'étude des cellules endothéliales de la barrière hémato-encéphalique, ne pré- sentant pas les inconvénients des cultures de ces cellules et permettant l'étude des processus neuro- et immuno- chimiques impliqués dans le contrôle de l'activité de la barrière hémato-encéphalique.
La présente invention a pour objet des lignées de cellules endothéliales cérébrales de mammifère, caractérisées en ce qu'elles sont obtenues par transfection de cellules endothéliales cérébrales par un fragment d'acide nucléique comprenant au moins un fragment immortalisant d'un oncogène viral ou cellulaire, éventuellement associé à au moins un gène marqueur et en ce que les lignées ainsi transfectées sont immortalisées et présentent le phénotype non transformé de cellules endothéliales cérébrales différenciées.
De telles lignées cellulaires présentent, de manière surprenante, au moins l'une des propriétés suivantes des cellules endothéliales cérébrales - expression des marqueurs endothéliaux, - sécrétion de produits spécifiques de 1 ' endothélium (endothéline, facteur vasorelaxant par exemple), - activité y-GT, - expression de récepteurs de neurotransmetteurs tels que les récepteurs B adrénergiques, et - existence de jonctions serrées.
Conformément à l'invention, ledit gène marqueur est avantageusement un gène codant pour la résistance à un antibiotique.
Selon un mode de réalisation avantageux de ladite lignée, elle est obtenue par transfection de cellules endothéliales de capillaires cérébraux bovins par le plasmide pSV3 néo contenant le gène néo de la résistance à la néomycine et un fragment de l'oncogène T de SV40.
Le plasmide pSV3 néo est plus particulièrement décrit dans l'article au nom de Southern et Berg, (J.
Mol. Appl. Genet., 1982, 1, 327-341).
Cette lignée cellulaire a été dénommée SV-BEC par les Inventeurs.
Conformément à l'invention, ladite lignée a été déposée sous le n I-1143 en date du 19 septembre 1991 auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par l'Institut Pasteur.
Selon un autre mode de réalisation avantageux de ladite lignée, elle est obtenue par transfection de cellules endothéliales de capillaires cérébraux de rat par un plasmide contenant la région précoce E1A du génome de l'adénovirus 2 et le gène de résistance à la néomycine.
BRIX NST D0635 D0489 D0600 B Glucose Fructose Saccharose Minéraux Nitrates pH Acidité Sol 1%, pH 5,0 (% de la solution) (%) (ppm) neq/kg Jus départ 13,25 12,77-12,87 1,97 0,68 0,15 5,55 0,45 0,645 6,95 5,861 2900 4,6 50 to + 10 min:permeat 6,0 6,78 0,106 0,07 0,01 1,225 0,45 0,57 3,16 / 4,1 50 concentrat 15,0 14,28 1,22 0,79 0,17 5,60 0,64 0,895 9,05 / 4,6 70 to + 25 min::permeat 6,0 6,34-5,98 0,413 0,06 0,81 1,035 0,39 0,51 2,24 0,661 2000 4,6 50 concentrat 17,0 15,90-15,00 1,455 0,94 0,21 6,99 0,61 0,79 7,56 1,195 2500 4,0 65 Permeat diaf. 1 6,25 6,03-5,08 0,685 0,068 0,008 6,35 0,57 0,73 1,84 0,716 2800 4,0 30/35 Permeat diaf. 2 5,25 5,50 0,067 0,048 0,007 8,89 / 4,6 38/35 Permeat diaf. 3 5,0 4,91-4,73 0,958 0,042 0,006 8,81 0,532 4,7 30/35 Permeat diaf. 4 4,5 4,45 0,651 0,036 0,005 0,70 / 4,6 30 Permeat diaf. 5 4,25 4,02-3,95 0,547 0,034 0,405 0,77 0,440 4,6 30 Permeat diaf. 6 4,6 3,63 0,042 0,531 0,035 0,735 / 4,6 25/30 Permeat diaf. 7 3,25 3,3 0,0395 0,020 0,605 0,35 / 4,6 25/30 Permeat diaf. 8 3,6 3,02-2,00 0,035 0,026 0,894 0,82 0,243 4,6 26 Concentrat final 13,25 12,04-12,20 1,47 0,25 0,22 7,77 0,536 170 4,6 50
ARTICULATEUR DENTAIRE A PLAQUES DE MONTAGE STABILISEES La présente invention concerne les articulateurs pour l'art dentaire, utilisés pour la réalisation de travaux d'analyses occlusales et de prothèses dentaires.
On connait notamment un tel articulateur décrit dans le document W083/02223, comprenant un membre inférieur dont la partie antérieure forme une platine inférieure recevant une plaque amovible de montage inférieure destinée à supporter un moulage de mâchoire inférieure et supporte un plateau incisif, et dont la partie postérieure comprend deux branches latérales supportant chacune une boule condylienne. Les boules condyliennes forment rotules sur lesquelles s'articule un membre supérieur comportant un moyeu postérieur muni de logements appropriés pour enfermer les boules condyliennes. Le membre supérieur comporte une platine supérieure recevant une plaque amovible de montage supérieure destinée à supporter un moulage de mâchoire supérieure. La platine supérieure est solidaire du moyeu postérieur et sa partie antérieure reçoit une tige incisive venant en appui sur le plateau incisif.
Les plaques de montage inférieure et supérieure sont réalisées en métal, ainsi que les membres inférieur et supérieur. L'adaptation des plaques amovibles de montage se fait par introduction d'une vis solidaire -d'une plaque de montage dans un alésage correspondant de la platine de membre inférieur ou supérieur, et par blocage de la vis dans l'alésage par un écrou. Par le fait que les pièces sont métalliques, le positionnement des plaques de montage peut être précis, de sorte que l'articulateur peut reproduire avec précision les mouvements mandibulaires des moulages de mâchoire fixés sur les plaques de montage.
Cet articulateur connu est réalisé en métal. La structure générale de cet articulateur n'est pas adaptée pour une réalisation en matériau plastique moulé.
L'inconvénient d'un tel articulateur métallique est son coût de production relativement élevé pour une production de masse en grande série. La précision nécessaire des mouvements mandibulaires nécessite en effet des usinages relativement précis, notamment pour l'adaptation des plaques de montage sur les platines correspondantes, et pour la réalisation de l'articulation du membre supérieur sur le membre inférieur.
Les solutions utilisées dans cet articulateur pour la fixation des plaques de montage ne sont pas transposables à un articulateur en matière plastique moulée.
Le problème proposé par la présente invention est de concevoir une nouvelle structure d'articulateur dans laquelle sont prévus des moyens particuliers d'adaptation de plaques de montage sur les platines de membres inférieur et supérieur, ces moyens devant assurer une précision appropriée de positionnement des plaques de montage, précision suffisamment haute pour être compatible avec la haute définition des mouvements mandibulaires que I'ariculateur doit reproduire, ces moyens devant être en outre compatibles avec une réalisation de pièces en matière plastique moulée.
L'invention a également pour avantage de simplifier la manipulation des plaques de montage, qui peuvent être adaptées sur l'articulateur ou retirées de l'articulateur sans manipulation longue et fastidieuse d'une vis ou d'un écrou de serrage.
L'invention a en outre pour avantage de simplifier la structure de l'articulateur, cette structure étant ainsi plus adaptée à une réalisation sous forme de pièces en matière plastique moulée.
Pour cela, la structure d'articulateur selon la présente invention reprend les principaux moyens du document W083/02223, mais en prévoyant des moyens particuliers de fixation des plaques amovibles de montage inférieure et supérieure sur les platines correspondantes : ces moyens particuliers comprennent des moyens élastiques d'encliquetage réversible mâle-femelle, s'opposant aux efforts d'arrachement de la plaque de montage à l'écart de la platine correspondante, des moyens de butée, s'opposant au mouvement de rapprochement de la plaque de montage en direction de la platine correspondante, et des moyens de centrage s'opposant aux déplacements latéraux de la plaque de montage par rapport à la platine correspondante. Cette structure particulière est compatible avec une réalisation de la plaque de montage et des membres supérieur et inférieur en matière plastique moulée.
Les parties mâles des moyens d'accrochage et de blocage de la plaque de montage sont placées de préférence sur la plaque elle-même, de façon que leur rupture éventuelle ne nécessite pas le remplacement d'un membre entier d'articulateur. La difficulté est alors que ces parties mâles ne doivent pas gêner le positionnement stable d'une plaque de montage retournée sur un plan de travail.
Pour cela, selon l'invention - les moyens d'accrochage comportent des éléments proéminents dépassant de la face de maintien de plaque de montage, - chaque plaque de montage comprend des éléments d'appui, dépassant de sa face de maintien selon une hauteur supérieure à celle des moyens d'accrochage, disposés de façon à échapper à la platine correspondante en position assemblée, et formant un appui stable lorsque la plaque de montage repose par ses éléments d'appui sur un plan de travail.
D'autres objets, caractéristiques et avantages de la présente invention ressortiront de la description suivante de modes de réalisation particuliers, faite en relation avec les figures j ointes, parmi lesquelles - la figure 1 est une vue de côté en coupe longitudinale d'un articulateur selon un mode de réalisation de la présente invention - la figure 2 est une vue de dessus de l'articulateur de la figure 1 - la figure 3 est une vue de face de l'articulateur de la figure 1 - la figure 4 est une vue de côté en coupe à plus grande échelle de la zone de plaque de montage supérieure selon un mode de réalisation préféré ; - la figure 5 est une vue de côté en coupe à plus grande échelle de la zone de plaque de montage inférieure selon le mode de réalisation préféré - la figure 6 est une vue de face en coupe de la zone de plaque de montage inférieure selon l'invention ; ; et - la figure 7 illustre une plaque de montage selon l'invention, posée retournée sur un plan de travail.
Le relais comprenant la bobine 202 et les contacts 204 et 206 est autoalimenté après l'actionnement de l'interrupteur de commande 101.
Cet actionnement valide tout d'abord la temporisation 212 qui permet de masquer la phase transitoire d'établissement des courants permanents, tels que le courant de la lampe de plafonnier comme indiqué précédemment.
A la fin de la temporisation définie par l'élément 212, la seconde temporisation 232 est validée.
Celle-ci va imposer un courant de valeur prédéterminée, par exemple de 10A, débité par la batterie. Ce courant est défini par le module 234.
La durée de ce courant est imposé par la temporisation 232, par l'intermédiaire de l'étage de mise en forme 235 contrôlant la source de courant 234.
La durée du courant est par exemple 100ms.
En parallèle, les étages comparateurs 260 et 270 comparent la tension mesurée aux bornes de la batterie avec des valeurs de consigne spécifiques.
Lorsque le courant débité par la batterie à travers l'étage 234 est interrompu, l'étage de mise en forme 237 commande, par l'intermédiaire du signal "horloge", la mémorisation de l'état des sorties des comparateurs 260, 270 sur l'ensemble à double bascule 280.
Selon l'état de la batterie, l'un des voyants vert, orange ou rouge représentés sur la figure 5 est alimenté par l'intermédiaire de l'étage de décodage 282, pendant la validation du signal S2.
L'alimentation des témoins lumineux V, O, R est interrompu lorsque la ligne + AC est validée. Cette validation entraine par ailleurs, par l'intermédiaire de l'étage de mise en forme 256, le blocage du transistor T208, et de là le retour du relais 202, 204, 206 en position d'origine non alimentée.
AUTRES MODES DE REALISATION DE L'INVENTION La présente invention n'est pas limitée à un processus de contrôle de batterie d'un véhicule automobile.
La présente invention peut également trouver application par exemple dans l'initiation de la mesure d'un niveau de fluide, notamment à sonde résistive et, en particulier, une mesure de niveau d'huile par un dispositif thermique, par exemple à fil chaud.
Le principe d'une telle mesure est décrit dans le document FR-A-2367276.
Par ailleurs, différents perfectionnements à ce dispositif de mesure sont décrits dans les documents suivants: FR-A-2522065, FR-A-2514134, FR-A-2514497, FR-A-2457480, FR-A-2485726, FR-A-2573866, FR-A-2526940 ou encore dans les demandes de brevet FR 91.04255, FR 92.05072, FR 92.05073 et FR 92.05075.
On se référera utilement à ces documents pour bien comprendre la structure de ces moyens de mesure à fil chaud.
On rappelle que pour l'essentiel ces dispositifs de mesure comprennent une sonde formée par un élément électriquement résistif à coefficient de température de la résistivité élevé, destinée à être plongée dans le liquide d'un réservoir, un élément d'alimentation en courant de la sonde, et des moyens permettant de comparer la tension initiale U0 aux bornes de la sonde à la tension Ut présente aux bornes de celle-ci au bout d'un temps t pour lequel la sonde a atteint, ou tout du moins a approché son état de stabilité thermique. L'élément composant la sonde est généralement métallique.
Les parties centrales 4 et 62 sont amincies dans le plan de flexion P1, tandis que les parties de liaison et terminales forment des éléments tubulaires de section droite transversale circulaire.
Bien entendu, il peut être envisagé de choisir un matériau composite fibreux se présentant sous la forme de nappe, de fils, d'étoffes tissées ou non tissées en matière organique ou minérale.
Avantageusement, il peut être envisagé de placer des inserts de renforcement dans les parties terminales 71 et 72 destinées à former les poignées et dans les parties 51 et 52 de liaison avec la potence 3. I1 est à noter qu'un insert commun peut être placé pour constituer le renforcement des parties de liaison 51 et 52. De tels inserts de renforcement peuvent être avantageusement montés et noyés lors de l'opération de moulage.
Avantageusement aussi, au moins les parties terminales 71 et 72 des demicintres sont renforcées par une armature de reprise des efforts de torsion susceptibles de s'exercer sur les parties terminales formant les poignées. Par exemple, cette armature peut être réalisée par l'intermédiaire d'une tresse en verre enfilée sur la structure de fibres de verre.
Les parties terminales 71 et 72 sont destinées à recevoir divers équipements connus en soi pour constituer des poignées 9 (fig. 1). I1 est à noter, également, que les parties centrales 61 et 62 peuvent recevoir une gaine 10 permettant l'adaptation de divers équipements utiles pour l'utilisateur.
Dans certaines applications sportives, il peut être avantageux d'équiper un tel cintre à l'aide de moyens limitant son mouvement vers le haut. A cet effet, une ou plusieurs contre-lames 11 sont placées en contact avec les parties de liaison 5,, 52 et en recouvrant partiellement les parties centrales 61, 62, tel qu'illustré à la fig. 6. Ces contre-lames il peuvent être précambrées, afin de garder le contact avec le cintre. Dans le même but, il peut être envisagé de conformer le cintre afin qu'il présente dans un plan de symétrie parallèle au plan P2, une face inférieure concave et une face supérieure convexe.