INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Lorsque cela s'avère nécessaire, les produits sont purifiés par chromatographie liquide haute performance (HPLC) préparative sur colonne de silice (C8, 5ru), en éluant par un mélange eau/acétonitrile. Une lyophilisation finale permet d'aboutir aux produits désirés avec des rendements non optimisés compris entre 20 et 97 %.
Lorsque cela s'avère approprié, l'alkylation est réalisée dans l'iodure de méthyle au reflux, ou à l'aide de sulfate de méthyle dans l'acétone au reflux ou de fluorosulfonate de méthyle dans un solvant organique, tel que par exemple le glyme, selon le produit final désiré.
Les composés de formule générale I dans laquelle R1 à R4 et Y sont définis comme précédemment, étant entendu que - lorsque R3 = hydrogène ou OH et R4 = hydrogène, R2 ne représente pas F, Cl, Br ou I, et - lorsque R2 = hydrogène et R3 = hydrogène ou OH, R4 ne représente pas F, Cl, Br ou I sont nouveaux et constituent l'un des objets de la présente invention.
Les composés de formule générale II dans laquelle R1, R7 à R12 et Y sont définis comme précédemment, étant entendu que - lorsque R8 = F, Cl, Br ou I, alors R7, R9, R10, R11 et R12 ne peuvent représenter simultanément H - lorsque R9 = F ou Cl, alors R7, R8r R10, R11 et R12 ne peuvent représenter simultanément H ; - lorsque R10 = Cl, alors R7, R8, R9, R11 et R12 ne peuvent représenter simultanément H ; - lorsque R11 = F ou C1, alors R7, R8, R9, R10 et R12 ne peuvent représenter simultanément H ; et - lorsque R8 = R11 = Cl, alors R7, R9, R10 et R12 ne peuvent représenter simultanément H, sont nouveaux et constituent l'un des objets de la présente invention.
Selon un autre mode de réalisation, l'invention fournit un procédé de dosage du glutathion réduit (GSH) dans un échantillon aqueux, notamment biologique, caractérisé en ce qu'il comprend essentiellement les étapes consistant à 1. former un produit de substitution chromophorique entre tous les mercaptans présents dans l'échantillon et un réactif choisi parmi les composés de formule générale I ou de formule générale II définies ci-dessus ; et 2. amener le pH du milieu réactionnel à une valeur comprise entre 12,8 et 13,8, pour former spécifiquement une thione chromophorique à partir du produit de substitution chromophorique formé à l'étape 1. entre le GSH et ledit réactif.
Le principe du dosage du glutathion réduit selon l'invention repose donc sur une stratégie comprenant deux étapes chimiques consécutives - tout d'abord, formation d'un produit de substitution, appelé ci-après "adduit", entre tous les mercaptans (RSH) présents dans l'échantillon, dont notamment le glutathion réduit (GSH), et l'un des réactifs définis cidessus, appelé "réactif BXT", selon la réaction RSH + réactif BXT
RS-BXT (chromophore 1) - puis, après alcalinisation du milieu, à pH compris entre 12,8 et 13,8, selon le réactif BXT utilisé, formation, par réaction de ss-élimination, d'une thione chromophorique, spécifique de l'adduit GS-BXT, formé à partir du GSH et du réactif BXT, selon la réaction
GS-BXT 13H alcalin3~ thione (chromophore 2).
Cette méthode permet de déterminer, au moyen de mesures spectrophotométriques * dans un premier temps, la quantité de mercaptans totaux (RSH) présents dans l'échantillon ; * dans un deuxième temps, la quantité de glutathion réduit (GSH) dans ce même échantillon ; et * par différence, la quantité de mercaptans distincts du glutathion.
Cette méthode permet donc d'avoir accès à trois paramètres à l'aide d'une seule prise d'échantillon.
L'originalité du procédé de dosage selon l'invention est basée sur une stratégie comprenant une première étape de formation d'un adduit chromophorique entre le réactif BXT et tous les mercaptans présents dans l'échantillon et une seconde étape, après alcalinisation, de formation d'une thione chromophorique, spécifiquement avec l'adduit GSH/réactif BXT.
L'utilisation des réactifs et du procédé décrits permet donc de mesurer, sur une seule prise d'échantillon, la quantité globale de mercaptans, en général, et celle du GSH, en particulier, en milieu aqueux, à l'aide d'une double mesure colorimétrique. La simplicité de mise en oeuvre de cette méthode originale est très supérieure à celle des méthodes spectrophotométriques préalablement décrites. La méthode de dosage colorimétrique du GSH qui est décrite ici, est la première qui soit totalement spécifique, en l'absence de tout réactif enzymatique.
Cette nouvelle méthode de dosage constitue donc un nouvel outil pour les recherches biologiques en général ainsi qu'en Chimie Clinique, en particulier pour l'élaboration de kits de dosage ou de diagnostic, les physiopathologies potentielles étant par exemple la cataracte, le diabète, la polyarthrite rhumatoïde, l'ischémie.
Les échantillons visés sont notamment les érythrocytes, le plasma, les plaquettes sanguines, et d'une façon générale tout échantillon, notamment biologique, contenant des mercaptans et en particulier du GSH.
Selon un mode avantageux de mise en oeuvre, l'invention a pour objet un procédé de dosage des mercaptans totaux dans un échantillon aqueux, notamment biologique, caractérisé en ce qu'il comprend essentiellement les étapes consistant à 1. ajouter à l'échantillon à doser, tamponné dans la gamme de pH 7,0 à 7,5, un aliquot d'une solution-mère, dans l'eau ou dans un solvant miscible à l'eau, d'un réactif BXT de formule générale I ou II en excès, 2. homogénéiser le milieu réactionnel ainsi obtenu, 3. laisser incuber pendant au moins 5 minutes, 4. mesurer, à l'aide d'un spectrophotomètre, l'absorbance du ou des produit(s) de substitution ou adduit(s) formé(s) entre le réactif BXT et le ou les mercaptan(s) présent(s) dans l'échantillon et 5. déterminer la concentration en moles/litre des mer captans totaux présents dans l'échantillon, selon la formule [mercaptans totaux] = (A/m x d) x D dans laquelle - A représente l'absorbance mesurée, - em représente le coefficient d'extinction molaire spécifique du réactif BXT utilisé, exprimé en l.mole-1.cm-l, - d représente la longueur de la cuve, exprimée en cm, et - D représente le coefficient de dilution.
La préparation des liposomes contenant au moins en partie l'extrait de Simaba précité peut être réalisée selon l'un des procédés connus pour incorporer des substances actives dans des liposomes.
Selon un mode de réalisation préféré, selon la présente invention, on utilise un procédé d'atomisation des constituants de la phase lipidique, permettant d'obtenir une poudre lipidique facilement dispersible dans une solution aqueuse pour former des liposomes par exemple selon le procédé décrit dans le document US,-A-4 508703. La suspension de liposomes ainsi obtenue peut être homogénéisée au moyen d'ultrasons, ou dans le cas d'une production de masse, au moyen d'une homogénéisation sous pression, conformément au procédé décrit dans US-A-4 621023.
L'extrait de Simaba précité peut être incorporé soit dans la phase lipidique soit dans la phase aqueuse des liposomes en particuclier en utilisant les procédés précédemment décrits. Dans le cas de l'incorporation dans la phase lipidique des liposomes, on peut procéder comme suit. On dissout l'extrait de Simaba avec les constituants de la phase lipidique, avant l'atomisation, dans une solution organique contenant au moins un lipide amphiphile, tel que la lécithine de soja, éventuellement un composé hydrophobe liphophile tel qu'un stérol, en particulier le cholestérol ou le p-sitostérol. De préférence, le solvant est choisi parmi le dichlorométhane, le chloroforme ou le méthanol, ou l'un de leurs mélanges.
La solution organique peut avantageusement contenir un agent antioxydant tel que l'a-tocophérol.
La poudre lipidique obtenue est dispersée dans un milieu aqueux convenable, par exemple une solution tampon PBS, une solution de glucose ou une solution de chlorure de sodium. On obtient ainsi une suspension de liposomes.
Selon un mode de réalisation avantageux, et surtout dans le cas d'une composition de liposomes, après avoir éventuellement homogénéisé la composition obtenue, les compositions de liposomes sont gélifiées par mélange avec un gel, tel qu'un gel de polymère vinylique, en particulier commercialisé sous la dénomination commerciale CarbopolB 940. Cette procédure de gélification est également décrite dans US-A-4 508 703, en particulier dans les exemples.
Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, la concentration de l'extrait de Simaba précité est comprise entre 0,001 et 30% en poids, de préférence entre 0,01 et 10% en poids, de la phase lipidique desdits liposomes.
Selon un deuxième aspect, la présente invention concerne aussi une composition cosmétique, ou pharmaceutique, notamment dermatologique, de préférence à application topique, présentant notamment une activité dépigmentante, ainsi qu'une activité favorisant la différenciation des kératinocytes, et destinée en particulier à traiter les taches pigmentaires cutanées, notamment des taches de sénescence, à traiter le vitiligo, les désordres cutanés s'accompagnant de dérèglement de la différenciation des kératinocytes, tels que le psoriasis, à restaurer, préserver et/ou renforcer la fonction protectrice de la peau, notamment la fonction de barrière hydrique, en permettant ainsi notamment d'obtenir un effet hydratant en empêchant la perte excessive d'eau par l'épiderme, en permettant ainsi une utilisation notamment pour le traitement des peaux sèches, quel que soit le degré de sécheresse, y compris les peaux ichtyosiques, et les peaux psoriasiques, à améliorer la qualité des cheveux, conduisant ainsi à un embellissement de la chevelure, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité cosmétiquement ou pharmaceutiquement, notamment dermatologiquement, efficace d'un extrait de Simaba.
D'autres caractéristiques particulières de la composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique, apparaissent clairement à la partir de la description précédente concernant les diverses caractéristiques particulières de l'utilisation et apparaissent également pour l'homme de l'art à partir de la description complète de l'invention, notamment illustrée par les exemples qui vont suivre.
Une composition selon l'invention précédemment décrite contenant un extrait de Simaba, éventuellement sous forme au moins en partie incorporée dans des phases lamellaires lipidiques hydratées ou dans des liposomes, peut se présenter sous différentes formes utilisables en cosmétique ou en dermatologie. Par exemple, ces compositions peuvent être des gels, des crèmes, des laits ou des lotions.
Ces compositions, appliquées sur les zones à traiter de la peau, ou du cuir chevelu, ont pour effet de réguler la différenciation des kératinocytes, en favorisant ainsi la formation et la restauration d'un épiderme de bonne qualité, notamment au niveau de la couche cornée, de renforcer la fonction de barrière cutanée protectrice de l'épiderme, en particulier de barrière hydrique, et d'obtenir un embellissement de la chevelure, comme ceci a été expliqué plus haut en ce qui concerne les effets et les avantages de cette différenciation.
Ainsi, selon un mode de réalisation particulier, la composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention présente un pouvoir hydratant, notamment en empêchant une perte excessive d'eau dans l'épiderme, et peut être destinée au traitement des peaux sèches, notamment des peaux ichtyosiques.
Selon un autre mode de réalisation particulier, la composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention permet de restaurer la différenciation normale des kératinocytes lors de leur transformation en cornéocytes, accom pagnée de la perte du noyau et de la cornéification cellulaire. Ainsi, cette composition peut être destinée au traitement des peaux psoriasiques.
- Streptococus faecium (CY06) Cette souche est anaérobie facultative. Cette caractéristique lui permet de se développer même dans un milieu riche en oxygène. Son développement est possible dans une gamme de température de 10 à 50"C. Sa température optimale de croissance se situe entre 30 et 40'C.
Elle est amylolytique et résistante à la pression osmotique.
Elle peut croître dans des milieux contenant jusqu'à 50 g / 1 de Na C1.
Elle est homofermentaire: 1 glucose ou 1 fructose pour 2 acide lactique et se développe dans une zone de Ph de 6.5-7 à 4.5. En 7 heures, dans un milieu de culture de base d'amidon et de protéines végétales, le Ph de départ 6.5/7 est abaissé à 4/4.5 uniquement gracie à la production d'acide lactique. La forme isomérique d'acide lactique produit est L+. Cette forme d'acide lactique est très rapidement métabolisée pour la néoglucogénèse et évite donc les risques d'acidoses possibles dans le cas de production massive d'acide lactique D-. Le pouvoir d'acidification de Streptococus faecium (CYO6) est donc très important.
Elle est non toxique: cette souche a été isolée d'une préparation destinée à la fabrication de produits pour l'alimentation humaine.
Ci Exposé de l'invention Notre invention permet la production maitrisée de céréales germées par: - un réveil de la dormance uniforme - un contrôle de la température et de l'hygrométrie - un brassage des graines homogène - un apport d'oxygène - un arrêt de la germination uniforme - le respect de l'intégrité des graines Cette production est effectuée dans une cuve solidaire de son caisson et gracie à un équipement de transfert interne hydrodynamique.
Notre invention permet également, sans changement de réceptacle, de procéder à une fermentation lactique homogène des graines en maitrisant les acidifications et la production d'acide lactique isomère L+.
Nous avons choisi deux souches particulièrement intéressantes pour leurs caractéristiques: - Lactobacillus plantarum (CY058) - Streptococus faecium (CYO6) Notre invention apporte ainsi la production d'un aliment stable assurant une prédigestion optimale pour l'organisme.
DI Dessins: Les dessins annexés illustrent l'invention: - figure 1: vue en coupe du dispositif de l'invention - figure 2: vue en coupe du support et des accessoires - figure 3: vue en plan de la partie supérieure de la cuve El Exposé détaillé de l'invention Notre invention consiste en la fabrication d'un matériel et de son procédé d'utilisation.
Ce matériel est monté sur chèssis dont l'installation, l'utilisation et les déplacements sont faciles.
I1 est prêt à fonctionner seul. Il faut seulement prévoir une alimentation en eau et en électricité, et le tout à l'égout pour son fonctionnement ainsi qu'un Ph-mètre afin de contrôler la fin du procédé.
I1 comprend: 1/ Une cuve et son caisson solidaire - Cette cuve (1) va servir à laver, trier, décontaminer, faire germer les graines et à effectuer une fermentation lactique.
La cuve est équipée d'un déversoir (la) à son extrémité supérieure qui permet d'éliminer les impuretés de surface.
- Ce caisson , fixé à l'extrémité inférieure de la cuve, va servir au transfert de la ventilation dans la cuve et de la récupération des produits élaborés.
Il comprend: - une grille amovible (lb) sur un cadre On utilise des grilles de tamis différents selon les graines travaillées.
- une porte (lc) avec fermeture à forte attache rapide pour l'évacuation des graines - une vanne de vidange (nid) - une trappe (le) permettant l'obturation de l'orifice d'arrivée d'air et de sortie d'eau lors de l'évacuation des graines 21 Infrastructure de la cuve (2) L'ensemble cuve + caisson est équipé: - de 3 pieds supports (2a), d'une base permettant le déplacement par transpalette dans sa version 2 m3 (2b), d'une plate-forme circulaire (2c), d'une échelle d'accès C2d) et d'un cadre support (2e) de l'équipement de transfert interne.
Conformément à l'invention, l'eau secondaire est introduite dans une partie basse de l'espace annulaire de recirculation 32 par une tubulure d'alimentation 34 qui traverse de façon étanche une partie 36, avanta geusement de plus grand diamètre, de l'enveloppe extérieure 10 et débouche dans l'espace 32 par un collecteur d'alimentation 38.
La structure du collecteur d'alimentation 38 va à présent être décrite plus en détail en se référant à la figure 2.
Au contraire, lorsque le générateur de vapeur est du type à économiseur ou à préchauffage comme l'illustre la figure 1, c'est-à-dire lorsqu'une plaque de séparation verticale 39 s'élève dans le faisceau de tubes, à partir de la plaque à tubes 12 entre les branches chaudes et froides des tubes 24, en séparant physiquement ces deux branches et, lorsqu'une plaque de séparation (non représentée) sépare physiquement l'espace annulaire 32 en un espace annulaire côté chaud et un espace annulaire côté froid, l'alimentation en eau secondaire peut se faire soit en totalité du côté des branches froides, ce qui implique que le collecteur 38 présente une forme semi-torique, soit en majorité du côté des branches froides et, pour une faible part, du côté des branches chaudes, ce qui conduit comme dans le cas d'un générateur de vapeur de type bouilleur, à l'utilisation d'un collecteur d'alimentation 38 de forme torique (figure re 1). Dans les deux cas, une enveloppe circulaire de protection métallique (non représentée) de l'enveloppe extérieure 10 peut être installée, afin de protéger cette enveloppe de chocs thermiques dus à l'impact des jets d'eau alimentaire. Cette protection n'est à installer que du côté où se trouve le demi-tore (cas économiseur ou préchauffage) ou en totalité (cas bouilleur), entre le collecteur d'alimentation 38 et l'enveloppe extérieure 10.
Dans le mode de réalisation illustré sur les figures, le collecteur d'alimentation 38 présente une section sensiblement rectangulaire, dont les grands côtés sont orientés verticalement et dont les petits côtés sont orientés horizontalement. De façon plus précise, la paroi intérieure du collecteur 38, formant en section l'un des grands côtés du rectangle, est formée directement par l'enveloppe intérieure 26 du générateur de vapeur.
Les parois supérieure et inférieure du collecteur 38, formant en section les petits côtés du rectangle, sont soudées directement sur l'enveloppe 26, de telle sorte que cette dernière assure le supportage du collecteur 38.
La forme rectangulaire donnée au collecteur d'alimentation 38 présente l'avantage de limiter l'encombrement radial du collecteur, pour une section maximale donnée, ce qui réduit l'augmentation de diamètre de la partie 36 de l'enveloppe extérieure 10. On peut toutefois envisager de donner au collecteur d'alimentation 38 une section de forme différente, telle qu'une section semi-circulaire, carrée ou autre.
L'eau secondaire admise dans le collecteur d'alimentation 38 pénètre dans l'espace annulaire 32 du générateur de vapeur par des trous 40 (figure 2) agencés de façon à orienter l'eau secondaire qui s'écoule dans l'espace 32 selon une direction moyenne sensiblement verticale. Ces trous 40 sont avantageusement orientés vers le bas comme 1 t illustre la figure 2, c'est-à-dire qu'ils sont formés sur le côté inférieur du rectangle formé en section par le collecteur 38 dans le mode de réalisation représenté.
Les trous 40 peuvent aussi être formés dans le collecteur 38 de façon à permettre simultanément un écoulement de l'eau secondaire vers le haut et vers le bas dans l'espace annulaire 32. Lorsque le collecteur 38 présente une section rectangulaire, cela signifie que les trous 40 sont formés dans les petits côtés horizontaux du rectangle formé en section par le collecteur.
Dans certains cas, il est à noter que des trous 40 peuvent être formés dans le collecteur de façon à permettre seulement un écoulement vers le haut de l'eau secondaire qui s'écoule dans l'espace 32.
EXEMPLE 4. Dosage quantitatif de la gentamicine par test kaolin indirect (inhibition d'agglutination).
Dans les microcupules d'une microplaque ou d'une barrette de type ELISA, on dépose en doublet 20 1ll des différents points d'une gamme étalon liquide (15 ; 30 ; 60 120 ; 240 ; 480 ng.ml-1 de gentamicine) que l'on fait réagir à température ambiante avec 20 iii d'un antisérum de lapin anti-gentamicine/BSA (SIGMA, France) dilué au 1/200 en tampon glycine 0,10M pH=8,2. Après 1 minute d'agitation, on ajoute 10 il du réactif kaolin gentamicine adsorbé tel que préparé en (3) et on incube ce mélange dans les mêmes conditions d'agitation pendant 2 minutes. On dilue ensuite le volume réactionnel par 150 Crl d'une solution saline à 0,2 % de TRITONS X-100 et on agite 2 minutes.
La mesure de DO est faite à 405 et 540 nm sur un lecteur optique de microplaque ORTHO DIAGNOSTIC SYSTEMS.
On obtient ainsi les résultats consignés dans le Tableau B ci-après.
TABLEAU B. GAMME ETALON GENTAMICINE/REACTIF KAOLIN
Concentration de gentamicine DO405 nm DO0 nm 15 ng.ml-l 0,735 0,702 30 0,638 0,601 60 0,551 0,511 120 0,449 0,415 240 0,357 0,316 480 0,276 0,229 Quand on établit pour des longueurs d'onde de 405 nm (Courbe 5A) et 540 nm (Courbe 5B) les courbes étalons semi-logarithmiques sur la base des données cidessus, comme illustré Figure 5, on constate l'existence d'une étroite corrélation entre la concentration en gentamicine et la valeur de DO, quelle que soit la longueur d'onde de mesure.
Par conséquent, les valeurs de DO obtenues pour des liquides d'épreuve testés suivant ie même protocole, peuvent être comparées avec l'une des courbes d'étalonnage semi-logarithmiques ainsi établies, permettant dès lors de déterminer la concentration en gentamicine dans n'importe quel échantillon.
EXEMPLE 5. Préparation d'un réactif latex genfamicine adsorbé.
a. Le conjugué gentamicine/BSA est préparé comme au (3a), excepté la dialyse qui est effectuée contre un tampon phosphate 0,15M pH=7,8.
b. Dans un tube en verre, on place 4 ml d'une solution en tampon phosphate 0,15M pH=7,8 de conjugué gentamicine/BSA préparé en (a) à une concentration de 0,8 mg.ml-1 équivalent BSA, puis on ajoute, sous agitation, 0,5 ml d'une solution commerciale de latex de polystyrène carboxylé (0,52 im) à une concentration de 10 % en poids (Réf. P0005070PN, BANGS LABORATORIES, USA). Après agitation pendant 2 minutes, le mélange est laissé reposer 8 heures à température ambiante, puis 16 heures à +4 "C. Le mélange est ensuite centrifugé à 10 000 g, 20 minutes, +4 "C et le culot repris en même tampon phosphate. On pratique ainsi deux lavages successifs. Le dernier culot est repris et ajusté en tampon de stockage (tampon phosphate 0,15M pH=7,8; PEG 6000 3 % Azide de Sodium 19.1-1).
Dans ces conditions de préparation, le réactif latex gentamicine adsorbé est stable pendant au moins 3 mois, et ne présente aucun phénomène de désorption.
EXEMPLE 6. Dosage quantitatif de la gentamicine par test latex indirect (inhibition d'agglutination).
Dans les microcupules d'une microplaque ou d'une barrette de type ELISA, on dépose en doublet 20 1ll des différents points d'une gamme étalon liquide (15 ; 30 ; 60 120 ; 240 ; 480 ng.ml-1 de sulfate de gentamicine) que l'on fait réagir à température ambiante avec 20 yI d'un antisérum de lapin anti-gentamicine/BSA (SIGMA, France) dilué au 1/200 en tampon phosphate 0,15M pH=7,8. Après 1 minute d'agitation, on ajoute 10 pI du réactif latex gentamicine adsorbé tel que préparé en (5) et on incube ce mélange dans les mêmes conditions d'agitation pendant 2 minutes. On dilue ensuite le volume réactionnel par 50 21l d'une solution saline à 0,1 % de TRITON) X-100 et on agite 2 minutes.
La mesure de DO est faite à 405 et 540 nm sur un lecteur optique de microplaque ORUHO DIAGNOSTIC SYSTEMS.
Les valeurs de DO obtenues pour des liquides d'épreuve testés suivant le même protocole, sont comparées avec la courbe d'étalonnage semi-logarithmique établie à partir des données de la gamme étalon ci-dessous (Tableau C), ce qui permet de déterminer la concentration en gentamicine des échantillons dosés.
TABLEAU C. GAMME ETALON GENTAMîCINE/REACTîF LATEX