INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
La zone de flambage 17a et la pédale d'actionnement 12 du dispositif de freinage sont prévus pour coopérer ensemble, c'est-à-dire que lorsque la pédale d'actionnement est entraînée vers le bas par la semelle de chaussure, elle vient faire pression sur la zone de flambage, de façon à aplatir cette zone et contraindre la lame à s'expanser contre chaque plaque de base 25, 35.
En se référant à la figure 7, une chaussure schématisée en 50 est engagée entre les éléments de fixation avant et arrière 2 et 3. La pédale d'actionnement 12 du dispositif de freinage se trouve en position basse, entre la semelle de chaussure et la zone de flambage 1 7a de la lame 15 qu'elle plaque contre la surface supérieure de l'embase 1. La disparition du flambage de la zone 17a, provoquée par la présence de la chaussure 50, tend à augmenter la distance entre les extrémités 22 et 23 de la lame, qui sont en appui contre les plaques de base avant et arrière 25 et 35. Ceci provoque donc dans la lame 15 une contrainte de compression, qui est transmise aux plaques de base 25 et 35, et qui induit un moment de flexion de l'extrémité avant et de l'extrémité arrière de l'embase 1.
Lorsque la chaussure quitte les éléments de fixation 2 et 3, ou bien à la suite d'une Iloération accidentelle, ou bien d'une libération volontaire, la pédale d'actionnement 12 remonte en position haute qui correspond à la figure 2, sous l'impulsion du ressort de rappel du frein 9, ce qui permet à la zone 1 7a de se déformer de nouveau par flambage. Cette déformation réduit l'action que la lame 15 exerce sur les plaques de base 25 et 35, ce qui réduit, par ailleurs, les moments de flexion auquel les extrémités avant et arriere de l'embase sont soumises.
Eventuellement, une cale 49 est placée entre la surface supérieure de l'embase 1 et la zone 1 7a de la lame, pour maintenir une amorce de flambage lorsque cette zone 1 7a est aplatie par la pédale contre la surface supérieure de l'embase 1 du ski.
- Après séchage sur sulfate de magnésium et filtration, le Dichlorométhane est évaporé sous pression réduite.
On recueille 53,8 mg . Rendement = 97 %.
BIBLIOGRAPHIE 1. H. PAULSEN - Angew. Chem. Int. Eryl., 29, 823-839 (1990) 2. R. SCHMIDT - Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 25, 212-235 (1986) 3. K. IGARASHI - Adv. Carb. Chem. and Biochem., 34, 243 (1977) 4. FROST-PEARSON, Kinetics and Mechanisms, 2nd ed., pp 77-102 - John Wiley and Sons Inc., New York (1961).
La présente invention concerne une souche de levure permettant la co-expression d'une activité mono-oxygénase de cytochrome P450 microsomal hétérologue et d'une NADPH-cytochrome P450-réductase endogène ou hétérologue.
La présente invention concerne également un procédé de coexpression chez une levure d'une activité mono-oxygénase de cytochrome P450 microsomal hétérologue. et de la NADPH-cytochrome P450-réductase endogène ou hétérologue.
La présente invention concerne également l'utilisation à des fins de bioconversion d'une souche de levure selon l'invention.
Plus précisément, la présente invention concerne un procédé de bioconversion destiné à la monoxygénation spécifique, notamment à l'hydroxylation stéréospécifique, d'un composé substrat d'un cytochrome P450.
La présente invention concerne enfin une séquence d'ADNc codant pour le cytochrome P450 catalysant l'hydroxylase du trans-cinnamate dans les tubercules de topinambour ou CA4H.
Les cytochromes P450 sont des protéines à activité mono-oxygénase qui constituent une des plus grandes superfamilles de gènes connue chez les eucaryotes supérieurs. Ils sont capables d'oxyder une très grande variété de substrats généralement hydrophobes en se servant de l'oxygène moléculaire dissous dans le cytoplasme, ainsi que des équivalents réducteurs fournis par la NADPH-cytochrome P450-réductase.
Ces réactions sont le plus souvent caractérisées par l'insertion d'un atome d'oxygène dans des liaisons C-H, C=C, N=N, soit par l'oxydation d'un hétéroatome ou encore dans des cas plus rares par une réduction de groupes nitro ou une déshalogénation (Guengerich et Macdonald, 1990, FASEB J. 4, pp 2453-2459).
Les cytochromes P450 sont des protéines membranaires associés le plus souvent au reticulum endoplasmique, quelques formes étant mitochondriales.
Leur intervention chez l'homme et les animaux dans les premières étapes de la métabolisation de substances xénobiotique telles que les médicaments ou des polluants, ainsi que leur implication dans des voies importantes du métabolisme endogène des stéroïdes membranaires et hormonaux, des acides biliaires, des phéromones, de la vitamine B, des acides gras, des prostaglandines ont fait des cytochromes P450 un objet d'un vif intérêt (Nebert et Gonzales, 1987, Ann. Rev. Biochem. 56, pp 945993).
Les intenses efforts de recherche se sont traduits par le développement d'un grand nombre d'outils biochimiques, immunologiques et génétiques qui ont permis l'isolement d'environ 200 séquences d'ADN (génomique ou ADNc) à ce jour.
Par rapport au nombre rapidement croissant des séquences connues de nombreuses isoformes de cytochromes P450 chez l'homme et chez les animaux, aucune séquence d'ADN d'un cytochrome P450 avec une fonction bien définie a été isolée. Bozak et al. (1990, PNAS, 90) ont bien reporté le clonage d'un ADNc végétal possédant toutes les caractéristiques conservées au sein des cytochromes P450 mais on n'a pas pu lui associer une fonction. Dans le cadre de la présente invention, est revendiquée la séquence d'ADNc d'un cytochrome P450 végétal, la ca4H, qui catalyse l'hydroxylation en position 4 du trans-cinnamate. Le produit ainsi formé est le trans-coumarate.
D'une manière générale, les progrès de la recherche dans le domaine des cytochromes P450 de plantes ont été retardés en raison de leur faible teneur dans les tissus végétaux et des grandes difficultés auxquelles on se heurte lors de leur purification. Néanmoins, on possède aujourd'hui de sérieuses évidences que les cytochromes P450 de plantes sont très similaires aux cytochromes P450 de mammifères concernant les types de réaction, les mécanismes de réaction et le cycle catalytique (Reichart et al., 1980, Plant Physiol. 66, pp 600-604). Les oxydations de substrats endogènes dans les plantes, catalysées par des ctytochromes P450, comprennent des hydroxylations de composés aliphatiques et aromatiques, des époxydations, des déméthylations et des réarrangements intramoléculaires.Une quarantaine d'activités enzymatiques catalysées par des cytochromes P450 ont été caractérisées jusqu'à présent chez les végétaux. Elles sont impliquées dans les métabolismes des phénylpropanoïdes, des terpènes des lipides et participent aussi à la synthèse des phytoalexines, des anthocyanes, des tannins, des arômes, des hormones, des stérols membranaires, des alcaloïdes et des cutines et suberines. Compte tenu de leur participation à la synthèse de ce large nombre de métabolites végétaux dont certains présentent un grand intérêt industriel en tant qu'additifs alimentaires ou pigments naturels, le clonage et la surexpression coordonnée de cytochromes P450 dans un microorganisme adapté afin d'y effectuer des réactions de bioconversion est clairement digne d'intérêt.
Il a été également reporté la déalkylation de substances xénobiotiques (Fonné et al., 1988, Plant Sci., 55, pp 9-20). On constate un net gain d'intérêt agronomique dans les cytochromes P450 de plantes puisqu'ils interviennent dans les premières étapes de la métabolisation de certains pesticides ou herbicides tels que le diclofop ou le chlortoluron (Zimmerlin et Durst, 1990, Phytochemistry, 29, pp 1729-1732, Fonne-Pfister et Kreuz, 1990, Phytochemistry 29, pp 2793-2797) ce qui leur confère une résistance sélective à ces produits. Leur maîtrise et la compréhension de leur fonction est donc de première importance pour l'industrie agronomique.
Plus précisément, l'invention concerne une composition contenant - de l'extrait de coeur et de foie de canard de Barbarie, - un sel de métal, notamment de cuivre, dans lequel le métal est à la valence 2, - et/ou un extrait d'Echinacea.
L'expression "extrait de coeur et de foie de canard de Barbarie" correspond soit à un autolysat, soit à un lyophilisat obtenus à partir de coeur et de foie de canard de Barbarie.
La préparation de l'autolysat peut se faire comme indiqué ci-après.
On prélève de façon stérile les organes (foie et coeur) de canards indemnes de toute pathologie virale et bactérienne et non traités par des médicaments à activité antibactérienne et/ou antivirale.
On laisse incuber le foie et le coeur prélevés stérilement et introduits dans un ballon stérile contenant une solution stérile de peptone pancréatique et une solution stérile de glucose, cette incubation ayant lieu à environ 37-C pendant une durée d'au moins 48 h et pendant avantageusement 40 jours, et on obtient ainsi un autolysat de foie et de coeur que l'on peut ensuite filtrer.
Après filtration, l'autolysat se présente sous forme d'un liquide limpide coloré en jaune.
En vue de sa conservation, cet autolysat peut être lyophilisé selon les techniques classiques de lyophilisation.
La préparation de l'autolysat et du lyophilisat est effectuée dans des conditions strictes d'asepsie, notamment dans un local placé sous rayonnement ultraviolet.
On remarque que la préparation de l'autolysat de foie et de coeur de canard de Barbarie est très proche du procédé de préparation de l'autolysat de viande de boeuf, de porc et de placenta humain, désignée sous le nom de Pyrogenium, lequel procédé est bien connu de l'homme de l'art.
La préparation de lyophilisat de coeur et de foie de canard de Barbarie peut se faire à partir d'organes prélevés, lesquels sont transformés en un broyat, puis lyophilisés, le lyophilisat pouvant être remis en suspension et additionné, dans des proportions appropriées, de peptone pancréatique et de glucose.
Le lyophilisat et l'autolysat lyophilisé de foie et de coeur de canard de Barbarie entrant dans les compositions de l'invention se présentent sous forme d'une patte, mais peuvent également être mis en solution dans de l'eau distillée et/ou un mélange d'eau et d'alcool, correspondant à la solution de teinture mère (TM) (le rapport entre le poids du lyophilisat ou de l'autolysat lyophilisé et le volume de la solution étant de 10%) dilués et agités selon les procédés décrits ci-après.
Pour obtenir la solution de dilution hahnemannienne de première CH (1 CH) (d'extrait de foie et de coeur de canard de Barbarie) qui sert à l'obtention des solutions de dilution indiquées ciaprès, on dilue un volume de la solution de teinture mère ci-dessus définie dans 100 parties en volume de solvant approprié et on agite.
On peut également préparer des solutions d'extrait de foie et de coeur de canard de Barbarie de dilution korsakovienne par dilution et/ou agitation successives en flacon unique.
En ce qui concerne le sel de métal, dans lequel le métal est à la valence 2, on utilisera de préférence un sel de métal ayant des propriétés anti-infectieuses et qui soit, de préférence, facilement assimilable par l'organisme, étant entendu que, par "assimilable" on désigne une forme pouvant être absorbée soit par voie sublinguale, soit par voie digestive.
Comme sel de métal, on utilise avantageusement un sel de cuivre choisi parmi l'acétate de cuivre, le gluconate de cuivre, le chlorure de cuivre.
On utilise avantageusement le gluconate de cuivre.
On comprendra mieux ces caractéristiques nouvelles, ainsi que d'autres qui s'y rattachent et les avantages de l'invention, en se reportant à la description suivante, dont d'abord, le shama de la Fiv.1 illustre bien, l'interaction de fonctionnement de principe précité.
En effet, cette Fig.1 représente, une coupe schématique en élévation de tronçons, de la partie supérieure, d'un piston de moteur à explosion et de l'induit périphérique correspondant, dans son cylindre de guidage et coiffé de la culasse appropriée, dans la position dite de fin de course de compression, du piston.
Tandis que, la Fig.2 représente, une coupe schématique partielle, en élévation, d'un tronçon de la partie inférieure, d'une jupe de piston de moteur à explosion et de son environnement, pour réaliser un alternateur de véhicule allégé, simplifié et économique.
Selon ce schéma de la Fig.1, on voit que le piston-I-, en alliage d'aluminium, représenté dans sa position supérieure, de fin de course dite de compression, dans l'un des cylindres d'un moteur à explosion, par exemple et avantageusement à 3 cylindres, dit 2 temps, permet ainsi d'obtenir, de façon connue, une réduction de poids, d'encombrement et des frictions, par rapport aux 4 cylindres à 4 temps traditionnels et un fonctionnement plus souple, comparable à un 6 cylindres.
En outre et surtout, la surface supérieure de ce piston -1- est originalement incurvée, en -2- et comporte, une mince transformation superficielle, de l'ordre de 0,3 millimètre d'épaisseur, en alumine poreux, par une oxydation "anodique dite aluminitage", réalisant ainsi et à la fois, une robuste incorporation, dans le métal sous jacent et une bonne isolation thermique et électrique, de faible inertie, tandis que ce même traitement est réalisé, sur toute la surface interne, de la chambre d'explosion -3- dans la "culasse" -4-, également moulée de façon usuelle, en alliage d'aluminium, avec des segmentations superficielles, en forme de mosaïque, pour en faciliter les variations de dilatation, tandis que cet aluminitage se retrouve, à la périphérie du joint de culasse -J-, s'il est avantageusement, en alliage d'aluminium.
Ce sommet du piston -1-, réalise en même temps, un "bouclier" de protection thermique, devant le "noyau", originalement annulaire -5- de 1' "induit", qui est réalisé en alliage de "fer et nickel", à haute perméabilité magnétique et point de Curie élevé, avantageusement filé, feuilleté ou fritté, pour y réduire les pertes, complété par son bobinage de cuivre -6- et sa "cuirasse", également ferro-magnétique -7-, tandis qu' une circulation d'air et préférablement d'eau, en assure le refroidissement.
Cette interaction de moyens et procédés est avantageusement combine a.vec, une alimentation de carburant pulvérisé, dite par injection directe "multipoint", de façon à permettre de mettre en oeuvre, staux de compression maximaux avec des "auto-surchauffes" correspondantes des gaz comprimés, tandis que l'orientation tangentielle -T-, de cette pulvérisation réalise, par effet dit d'avalanche, une sorte de catapultage nréfé- rentiel des turbulences, en forme de mini-tornaRes, selon une orientation centrifuge, qui amène les fractions les plus loures à la périphérie et celles de carburant les moins denses, au voisinage de la bougie centrale -8-, précisément au moment où son étincelle, entrainera. ainsi l'explosion avec détente brutale des gaz et des fronts de flammes élargis qui, asso ciés à des "ondes de chocs" et à leur "focalisation" commune, avec celles des rayonnements, dans la zone centrale et bien isolée, thermiquement et électriquement du "confinement", y exacerbe la formation de "plasma" et donc de "charges électriques libres" et de champs magnétique- qui y sont inhérents et dont l'apparition et la disparition fugace et synchronisée avec l'effacement, de l'effet de bouclier du piston -1-, devant l'induit et d'abord son noyau -5-, assurera ainsi leur défilement à proximité par effet centrifuge et 'aspiration magnétique", en produisant une impulsion de courant électrique induit correspondante, dans le bobinage -6- et ré itérée a chaque cycle.
I1 est alors facile de comprendre, sans exposé complémentaire, que le processus ainsi décrit, pourra être mis en oeuvre, dans au moins un cylin re d'un moteur à explosion et ponr toutes applications, notamment aussi bien, pour des moteurs mono ou polycylindriques, à 2 comme à 4 temps et que cette production d'électricité, par au moins un "induit", incorporé au bloc moteur, permettra de faire l'économie de l'alternateur usuel et du même coup, de simplement substituer, au même emplacement, le moteur électrique auxiliaire, avantageusement "à impulsions" approprié, pour surajouter à la puissance du moteur à explosion usuel, celle de l'énergie électrique, ainsi récupérée et "en phase", tandis que la discontinuité de puissance, serait compensée de la façon habituelle, par le "volant d'inertie" renforcé en conséquence, alors que l'appareillage électronique connu de regroupement des impulsions électriques, donnerait avantageusement la priorité, à la recharge après "redressement", de la batterie usuelle des automobiles, au prix de la réduction correspondante, de la puissance du moteur, avant de s'y surajouter, dès la fin de recharge de l'accumulateur détectée des que la tension prédéterminée, à cet égard serait atteinte et alors limitée, par un contacteur disjoncteur approprié et agissant aussi bien, lors de la recharge de la batterie, dans un garage.
Au surplus, ce moteur électrique auxiliaire d'automobile, serait avan tageusement approprié, pour être réversible en générateur et permettre d' en inverser le fonctionnement et récupérer l'énergie de freinage, en réa lisant ainsi un "ralentisseur", asservi à un contacteur à inertie et ré duisant d'autant, l'usure des garnitures des freins, tout en rechargeant gratuitement la batterie d'accumulateurs de l'automobile.
Abstraction faite, de cette dernière caractéristique, les autres seraient aussi bien obtenues, selon une variante d'exécution, substituant aux induits de production d'électricité et à leur utilisation, dans un moteur auxiliaire, une mise en oeuvre directe, dès la naissance des charges électriques libres, en réalisant alors et ainsi, une électrolyse d' eau sous haute température, dite "thermolyse", à état pulvérisé et injecté, simultanément avec l'injection de carburant et selon la même pro grammation, ou plus simplement par pulvérisation dite "indirecte" et réalisant, dans tous les cas, une sorte de "post-combustion", mais simultanée, de lthydrogène et de 1 'oxygène ainsi thermoXysés et au surplus, très réactifs, en leur état dit "naisspnt", en réhabilitant encore, du moins pPrtiellement, le fameux moteur à eau.
D'autre part et dans tous les cas, pour tous autres véhicules, même à propulsion dite "diesel", comme pour la simple animation d'outils, selon l'invention, on pourra avantageusement substituer, à l'alternateur, au volant magnétique, ou un organe nquivalent, une production d 'impul- sions de courant conparables, selon la Fig.2, par l'interaction d'un aimant "permanent" tubulaire -9-, avantageusement à "hautes performances serti à l'extrémité de la jupe du piston -1- et calibré extérieurement, au même diamètre, par rectification dite "centerless", suivie d'une incorporation de lubrifiant, comme le bisulfure de molybdène, pour coulisser, dans le noyau tubulaire -10-, feuilleté ou fritté en alliage de fernickel, à haute perméabilité magmatique et point de Curie élevé, retenu per effet crJroaknique et alésé en même temps et au même diamètre, que 1' alésage du piston -1-, tandis qu'il est combiné avec son bobinage d > in- duction -11-, avantageusement enrobé d'isolant, et ainsi susceptible d' etre utilisé isolément, ou groupé avec un nombre quelconque de cylindres ainsi équipéret ainsi produire, dans l'exemple choisi d'un moteur à 3 cylindres, des impulsions électriques "triphasées".
On précisera que dans cette combinaison, l'utilisation d'un aimant permanent tubula.ire fendu, à la façon des "segments", réduirait d'autant "l'entre-fer" avec le noyau -10-, tandis qu'une alimentation inversée et renforcée, du bobinage -11-, pourrait assurer une réaimantation coaplé- me nt aire et cyclique, de l'aimant permanent -9-.
L'invention vise encore les combinaisons nouvelles, de moteurs ainsi perfectionnés ou non, avec des structures d'automobiles allégées et connues, pour faciliter ainsi le lancement original et économique, conforme à l'invention, d'automobiles dites "hybrides électriques", avec des frais de fabrication très réduits, même pour de petites séries et d'autant que la "capacité" de la batterie dite de traction est réduite en conséquence.
Dans ce but, selon l'invention, on combine de préférence un moteur déjà perfectionné, selon les dispositions précitées, et par exemple, avec une structure d'ensemble d'automobile aite: EXV-IV, par son constructeur TOYOTA au JAPON et constituant, un petit coupé deux places aérodynamique, qui roule très vite, à pres de 170 Kmh. avec son moteur de 64 CV. seulement, glace a un poids 'ensemble très réduit, de l'ordre de 450 Kgs.
pour un encombrement de 3,40 X 1,60 mètres, du fait de la constitution de son chassis en alliage d'aluminium, façonné par nervuraga"en "nids d'abeilles", coiffé d'une carrosserie de même alliage, avec un capot intégrant les ailes et réalisé en matière dite "plastique", tandis que le moteur bicylindre 2 temps ae 800 cm3, serait de puissance avantageusement renforcée électriquement, selon l'invention précitée, bien que pour n'assurer d'ailleurs, une vitesse maximum de propulsion e l'ordre de 100 .t. du fait de la. surcharge de l'autozobile, par les batteries d'accunulateurs électriques, dites de traction, assurant l'entrainement d'un moteur électrique auxiliaire de propulsion connu et couplé a.u villebrequin.
Il convient à cet égard de préciser, que le rapport de couplage, entre les deux motorisations alternatives serait réduit, par exemple de 1' ordre de noitié, de façon que la propulsion électrique, n'entraine des vitesses de déplacement, que de l'ordre de la moitié, de la propulsion thermique, tout en étant dans les deux cas modulable, par la meAme transmission usuelle et unique conservée, grâce à des neutralisations mutuelles et automatiques, des deux motorisations, par exemple, par des asservissements réciproques, de leurs alimentations respectives.
L'exemple 4 de la partie expérimentale qui suit illustre la préparation d'un composé de ce type dans lequel R1 = R2 = trifluoroacétyle et R3 = OR4, avec R4 = trifluoroacétyle.
Les composés de la troisième série qui répondent à la formule générale I, dans laquelle R1 = R2 = COR5, S02R5, PG2R5, C02R6, SO3R6 ou Po3R6, et R3 = OR4, R4 ayant les significations indiquées précédemment, à l'exception de l'hydrogène, COR5, S02R5, Po2R5, C02R6, SO3R6 et Po3R6, et R5 et R6 étant définis comme précédemment, peuvent être synthétisés selon la procédure générale suivante De la braziliner en solution dans un solvant fraîchement distillé, comme par exemple le dichlorométhane, est mise en réaction avec le chlorure d'acide, comme par exemple le chlorure de p-nitrobenzènesulfonyle ou le chlorosulfonate de trifluorométhyle, ou l'anhydride d'acide, comme par exemple l'anhydride trifluorométhanesulfonique ou l'anhydride trifluoroacétique, correspondant à l'ester désiré. Puis, le groupement alcool tertiaire est alkylé à l'aide d'un agent alkylant, tel que le tétrafluoroborate de triméthyloxonium, l'iodure de méthyle, le bromure de benzyle, le chlorure de vinyle, un chlorure de trialkylsilane, ou bien acylé à l'aide d'un agent acylant, comme par exemple le chlorure d'acétyle, un chloroformiate d'alkyle, un chloroforamidate d'alkyle, ou bien nitré, ou bien phosphorylé avec par exemple un phosphochlorure d'alkyle, ou bien encore sulfoné avec par exemple un sulfochlorure d'alkyle tel que le chlorure de tosyle, choisi selon la signification de R4.
On peut également utiliser une braziline déjà substituée de façon appropriée sur le groupement alcool tertiaire et la soumettre à la réaction d'estérification.
Les composés de la quatrième série qui répondent à la formule générale I, dans laquelle R1 = hydrogène,.COR5, S02R5, Po2R5, C02R6, S03R6, ou Po3R6, R2 = alkyle (avec 1 à 6 atomes de carbone), et R3 = hydrogène ou OR4, R4, R5 et R6 étant définis comme précédemment.
peuvent être préparés selon la procédure générale suivante La braziline ou un de ses dérivés, dans lequel R1 = R2 = hydrogène et R3 est différent de OH, est protégé sur ses deux hydroxyles catécholiques par un pont méthylène, par exemple au moyen de formaldéhyde. Le dérivé obtenu est alkylé sur son hydroxyle non protéger, au moyen d'un agent alkylant tel que par exemple un halogénure d'alkyle, puis déprotégé en milieu acide et éventuellement estérifié.
L'exemple 5 de la partie expérimentale qui suit illustre la préparation d'un composé de ce type dans lequel R1 = hydrogène, R2 = méthyle et R3 = OH.