INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
ABREVIATIONS Par commodité, on a utilisé dans la présente description les abréviations suivantes (a) en ce qui concerne les aminoacides ou leurs restes Ala = alanine Arg = arginine Asn = asparagine Asp = acide aspartique Cys = cystéine Gln = glutamine Glu = acide glutamique Gly = glycine Ile = isoleucine Leu = leucine Lys = lysine Pro = proline (b) en ce qui concerne les autres abréviations C-13 = peptide court constitué par les 13 derniers aminoacides (i.e. 58-70) de l'extrémité C-terminale du pF4, C-24 = peptide long constitué par les 24 derniers aminoacides (i.e. 47-70) de l'extrémité C-terminale du pF4, CFU = unité formant colonie (de l'anglais "colony-forming unit") CFU-MK = progéniteur mégacaryocytaire (de l'anglais "megakaryocyte colony-stimulating unit") HEL = érythroleucémie humaine HPLC = chromatographie liquide de haute performance MEM = milieu essentiel minimal MK = mégacaryocyte pF4 = facteur plaquettaire 4 (de l'anglais : "plate- let factor 4") PMA = myristate/acétate de phorbol RT = température ambiante (15-20 C) SDS-PAGE = électrophorèse sur gel dodécylsulfate de sodium-polyacrylamide (de l'anglais : "sodium dodecylsulphate-polyacylamide gel électropho phoresis") DESCRIPTION DETAZLLEE DE L'INVENTION Dans le composé monomère dodécapeptide de formule I, l'extrémité C-terminale, qui se trouve sur l'aminoacide en position 12 (i.e. Pro), présente une terminaison -COOH, et l'extrémité N-terminale, qui se trouve sur l'aminoacide en position 1 (i.e. Asn) présente une terminaison -NH2. I1 en est de même du composé dimère de formule II, qui résulte de la formation d'un pont disulfure -S-S- entre les Cys de deux chaînes monomères.
A l'exception de Gly, tous les autres alphaaminoacides des molécules du composé monomère de formule I et du composé dimère de formule II comportent un atome de carbone asymétrique, et sont chacun de configuration L ou D. D'un point de vue pratique, l'on préfère selon l'invention que (i) tous les alpha-aminoacides différents de Gly et présents dans les structures de formule I et de formule II soient de configuration L, ou (ii) tous les alpha-aminoacides de la séquence 3-12 soient de configuration L et l'alpha-aminoacide en position 1 (i.e. Asn) soit de configuration D.
La dimérisation de I en II par formation d'un pont disulfure entre les Cys de 2 chaînes monomères, s'initie spontanément en milieu aqueux à RT. Pour éviter cette dimérisation en milieu aqueux, on a intérêt à introduire dans ledit milieu aqueux un moyen antioxydant, un moyen bloquant la fonction latérale -SH de Cys ou un moyen clivant le pont du sulfure selon le mécanisme
Le composé dodécapeptide de formule I à l'état sec, notamment obtenu par lyophilisation après purifica tion, est nettement moins sensible à ladite dimérisation que le même composé en milieu aqueux, voire même substantiellement insensible à ladite dimérisation.
Selon un mode avantageux pour la préparation du composé dodécapeptide de formule I, l'on fait appel à un procédé, qui met en oeuvre une synthèse peptidique séquentielle dans un milieu réactionnel hétérogène et une étape de purification, comprenant l'utilisation d'un agent réducteur (i) dans le milieu réactionnel à partir de l'ins tant où Cys intervient dans la synthèse dudit peptide monomère, ou ultérieurement (ii) avant et/ou après purification, afin de réduire substantiellement ou d'empêcher la production du peptide dimère de formule II qui résulte de la formation d'un pont disulfure -S-S- entre les Cys de deux peptides monomères.
De façon préférée, ledit agent réducteur sera introduit dans le milieu réactionnel à partir de l'instant où Cys intervient dans la synthèse du peptide monomère, d'une part, et sera présent dans ledit milieu au moins jusqu'à l'étape de purification.
D'un point de vue pratique, ledit agent réducteur sera choisi parmi l'ensemble constitué par les substances clivant le pont disulfure -S-S-, les substances proté- geant l'extrémité -SH du groupe latéral de Cys et leurs mélanges.
De préférence, ledit agent réducteur sera choisi parmi l'ensemble constitué par (1) le dithiothréitol qui est utilisé à partir de l'instant où Cys intervient dans la synthèse, avant et/ou après purification, et (2) les composés iodoacétiques qui sont utilisés après purification, notamment l'acide iodoa cétique ou l'iodoacétamide.
Selon un mode particulier, que l'on recommande pour la préparation du composé dodécapeptide de formule I, le procédé que l'on préconise comprend en outre l'utilisation, avant et/ou après purification, d'un agent antioxydant, notamment un composé ascorbique (notamment l'acide ascorbique, ou un ascorbate de métal alcalin, de métal alcalino-terreux ou d'ammonium) et de préférence un tampon acide ascorbique/ascorbate de sodium ou acide ascorbique/ ascorbate de potassium.
Le matériau peptidique selon l'invention, qu'il soit sous forme nomomère de formule I, sous forme dimère de formule II ou sous la forme d'un mélange monomère/dimère, est utile en tant que substance anti-mégacaryocytaire, notamment in vivo.
On préconise donc en premier lieu, une utilisation qui est caractérisée en ce que l'on fait appel à un matériau peptidique selon l'invention, en tant que substance anti-mégacaryocytaire pour l'obtention d'un médicament anti-thrombocytémie ou d'un outil pour le diagnostic des thrombocytémies.
On préconise en second lieu une utilisation qui est caractérisée en ce que l'on fait appel à un matériau peptidique selon l'invention, en tant que substance antimégacaryocytaire dans des tests biologiques concernant la détermination de la mégacaryocytopoièse.
Après homogénéisation de la solution l'évolution de l'absorbance est enregistrée en fonction du temps, à la longueur d'onde caractérisant l'apparition du produit d'autoxydation du réactif utilisé (539 nm, par exemple, pour la braziline), afin de déterminer la vitesse maximale d'autoxydation.
La détermination de l'activité SOD dans un échantillon biologique est effectuée en déterminant la différence des vitesses mesurées en présence (Vs) et en l'absence de l'échantillon (VC). Cette différence peut être reportée par exemple en ordonnée d'une courbe d'étalonnage qui a été établie dans les mêmes conditions opératoires à partir, par exemple, d'un standard de SOD.
Cette courbe d'étalonnage peut être tracée en représentant, en fonction de la concentration du standard utilisé, la variation de la différence de vitesse d'autoxydation mesurée en présence et en absence de ce standard.
Toutefois, selon un mode préféré de mise en oeuvre, cette courbe d'étalonnage est tracée en représentant la variation de l'inverse de la différence des vitesses en question, en fonction de l'inverse de la concentration en standard.
Selon l'intensité de l'activité SOD à mesurer, la sensibilité du dosage dans la gamme de pH utilisée (8,0 à 9,0) est adaptable en modifiant par exemple un ou plusieurs des paramètres suivants : concentration en composé de formule générale I choisi, concentration du tampon et tempé rature de mesure.
L'acide borique est un exemple de dérivé du bore qui peut être utilisé pour moduler également la vitesse d'autoxydation du composé de formule générale I utilisé, dans le but de diminuer cette vitesse.
En outre, si la solution-mère d'un composé de formule générale I de la première ou de la quatrième série, définies ci-dessus (OH catécholiques non protégés) est préparée en présence d'un tel dérivé du bore, il est possible de s'affranchir d'une préparation anaérobie de la solution-mère du réactif pour une utilisation pendant un temps donné, qui dépend notamment des concentrations respectives du réactif et du dérivé du bore, de la nature de celui-ci et des conditions de stockage de la solution-mère de réactif. Ainsi, une solution aqueuse de braziline préparée avec de l'acide borique, telle que le rapport des concentrations en acide borique et en braziline soit égal à 75, est stable au moins un mois en aérobiose, si la solution est conservée entre 0 et 40C.
L'existence, dans un échantillon, notamment biologique, de composés interférant avec le dosage se manifeste le plus souvent par une diminution de la vitesse mesurée en présence de l'échantillon par rapport à celle mesurée en son absence.
Dans le cas d'interférences liées à la présence de mercaptans, tels que par exemple le glutathion, l'introduction dans le milieu réactionnel d'un "réactif piégeur de mercaptans" tel que défini plus haut est alors nécessaire.
Ainsi le tétrafluoroborate de 1,4,6-triméthyl-2vinylpyridinium (composé de l'exemple 6), par exemple sera incorporé à une concentration cinquante fois supérieure à celle du glutathion pour le dosage de l'activité SOD dans un lysat érythrocytaire.
Si l'existence, dans un échantillon, notamment biologique, d'un composé susceptible d'introduire une activation artéfactuelle de l'autoxydation du composé de formule générale I est suspectée, une combinaison telle que celle décrite ci-dessous, qui fait intervenir une seconde mesure effectuée dans des conditions d'inhibition de l'autoxydation, doit être entreprise.
De même, dans le cas de l'exploration de milieux, notamment biologiques, présentant une faible activité SOD, la sensibilité et la précision du dosage peuvent être accrues en combinant à la mesure faite dans des conditions d'activation de l'autoxydation, une mesure effectuée dans des conditions d'inhibition de l'autoxydation.
L'invention a donc également pour objet un procédé du type décrit ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comporte également une mesure effectuée dans des conditions d'inhibition de l'autoxydation.
Le milieu réactionnel utilisé pour cette seconde mesure se distingue du milieu décrit précédemment par l'emploi d'un tampon à un pH compris dans la gamme de 7,2 à 7,8, notamment un tampon phosphate constitué par exemple par un mélange adéquat de dihydrogénophosphate de potassium, d'hydrogénophosphate dipotassique, toutes choses étant égales par ailleurs.
On mesure, dans ces conditions opératoires, la vitesse maximale d'autoxydation du composé de formule générale I utilisé en absence (V' C) et en présence de l'échantillon (V's). La détermination de l'activité SOD dans l'échantillon est alors obtenue au moyen de (VS - VC - V'S + V'C).
Comme précédemment, la valeur obtenue peut être reportée en ordonnée d'une courbe d'étalonnage, qui a été établie dans les mêmes conditions expérimentales.
en termes de propriétés optiques.
Une lentille pour une lampe et un procédé de fabrication d'une matrice pour celle-ci selon la présente invention sont décrits ci-après à titre de mode de
réalisation accompagné des dessins.
La Figure 1 illustre une action de réfraction des échelons de lentille de Fresnel 7,7,o un rayon lumineux est réfracté deux fois tandis qu'il passe à travers un échelon de lentille Le numéro de référence 9 dénote une courbe qui représente la surface de sortie 6 de la lentille intérieure 5, et est une ligne en coupe transversale obtenue lorsque la surface de sortie 6 est coupée par un plan horizontal contenant l'axe optique Cette ligne est d'abord donnée comme une forme se conformant à la forme du corps du véhicule Une ligne pointillée Lf en Figure 1 indique une trajectoire lumineuse Un vecteur VIN est un vecteur de direction d'un rayon incident, et un vecteur V est un vecteur de
direction d'un rayon réfracté.
Le caractère de référence A dénote une ligne
droite représentant une surface limite S de réfraction.
Un vecteur NIN est un vecteur normal de la surface
limite S au niveau d'un point incident PI.
Un vecteur VOUT est un vecteur de direction d'un rayon réfracté sur la surface de sortie 6, et un vecteur NOUT est un vecteur normal de la surface de sortie 6 au niveau d'un point PO sur la ligne
d'intersection 9.
S'il est requis que le vecteur de direction V_OUT du rayon finalement déterminé soit parallèle à l'axe optique x-x, la trajectoire Lf est déterminée uniquement suivant la loi de Snell lorsque l'épaisseur
de la lentille est spécifiée.
C'est à dire que la direction du vecteur V peut être déterminée à partir du parallélisme du vecteur V_OUT et de l'axe optique x-x,d' un angle de réfraction formé par le vecteur normal NOUT et le vecteur VOUT, et d'un indice de réfraction de la lentille intérieure 5 De plus, le vecteur normal NIN et la surface limite S peuvent etre déterminés à partir des vecteurs V et VIN. Les Figures 2-7 montrent, étape par étape,un procédé de fabrication d'une matrice pour les échelons de lentille de Fresnel 7,7 Comme il est apparent à partir du fait qu'une coupe transversale obtenue en coupant 1 ' échelon de lentille de Fresnel 7 par un plan incluant l'axe optique présente une forme triangulaire, une matrice pour fabriquer la lentille peut être réalisée en façonnant,par usinage NC (à commande numérique), des rainures en forme de V correspondant aux échelons
respectifs sur un matériau de matrice.
D'abord, comme montré en Figure 2, sur une surface de sortie de dessin K, le vecteur V est déterminé selon la loi de Snell à partir du vecteur normal NOUT au niveau du point de sortie PO et le vecteur de direction V_OUT d'un rayon réfracté qui passe par le point PO et qui est parallèle à l'axe optique x-x En général, la surface de sortie K est une surface libre qui ne peut pas être
TEMPO IONS ECHANTILLONS R2 20 pl 20 Rl Ethanol à 50 % (v/v) dans l'eau 40 pl distillée ECHANTILLONS 40 fl T 930 Rl 930 Rl Pour chacune des mesures, on détermine la vitesse maximale d'autoxydation, exprimée en unités d'absorbance par minute, en soustrayant la valeur d'absorbance relevée au bout de 20 s de celle relevée au bout de 80 s, ce qui correspond à une phase d'oxydation linéaire de la braziline.
Expression des résultats Dans les conditions de ce dosage, une unité d'activité SOD (U) correspond à une augmentation de la formation de braziléine (produit d'autoxydation de la braziline), par rapport au témoin, de 0,5 mole.l-1.min-1.
Soient VC et Vs les vitesses correspondant respectivement au témoin et à l'échantillon, l'activité SOD de celui-ci est calculée en en reportant l'inverse de la différence (Vs-Vc) en ordonnée de la courbe d'étalonnage représentée sur la figure 1 annexée, dans laquelle l'inverse de la concentration en SOD, exprimé en ml/U, est porté en abscisse et l'inverse de la différence (Vs-Vc), ex primé en min/variation de ltabsorbance (min/ abs.), est porté en ordonnée; 20 en déterminant la valeur de l'abscisse correspondante sur cette courbe d'étalonnage; et 30 en multipliant l'inverse de la valeur de cette abscisse par le facteur de dilution, soit ici 250, pour exprimer les résultats en U/ml d'érythrocytes.
Remarques Le contrôle de la procédure de dosage peut être effectué en dosant l'activité SOD d'un lysat érythrocytaire au 1/5ème, préparé comme décrit précédemment et conservé à -700C sous forme d'aliquots pour servir de témoin.
EXEMPLE 9 : Procédure de dosage utilisant le brazilane (composé de 1 l'exemple 2) Le coffret de réactifs utilisé contient les mêmes réactifs que celui de l'exemple 8, à ceci près que le réactif R1 est remplacé par le réactif D1 défini ciaprès Dl : Solution de brazilane 2.10-3 M dans le mélange DMSO/H2O, 50/50 (v/v) contenant de l'acide borique 0,15 M. (conditions de conservation comme dans l'exemple 8).
Préparation de l'échantillon Comme dans l'exemple 8.
Procédure de dosage On procède comme dans l'exemple 8, si ce n'est que chaque réaction est déclenchée par l'ajout de 10 Al de réactif D1 et que l'évolution de l'absorbance est suivie pendant 1 min à 520 nm au lieu de 1 min 30 s à 539 nm et que la vitesse maximale d'autoxydation, exprimée en unités d'absorbance par minute, est obtenue en soustrayant la valeur d'absorbance relevée au bout de 20 s de celle relevée au bout de 50 s (au lieu de 80 s), ce qui correspond à une phase d'oxydation linéaire du brazilane.
Expression des résultats Elle est obtenue comme dans l'exemple 8, en utilisant la courbe d'étalonnage représentée sur la figure 2 annexee.
Exemple 10 : Procédure de dosage utilisant la 3-O méthylbraziline Le coffret de réactifs utilisé contient les memes réactifs que dans l'exemple 8, à ceci près que R1 est remplacé par D2 défini ci-dessous.
D2 : Solution de 3-O-méthylbraziline 2.10-3 M dans le mélange DMSO/H2O, 50/50 (v/v) contenant de l'acide borique 0,15 M.
(A conserver entre 0 et 40C pendant les mesures; stable au moins 1 mois après préparation, dans les conditions de stockage mentionnées ci-dessous).
En outre, la centrale d'alarme comportant la commande de désactivation est souvent éloignée des appareils protégés, et il arrive que le vol se produise pendant que le vendeur se déplace entre la centrale d'alarme et l'appareil qu'il souhaite présenter à un client potentiel. Enfin, de telles centrales nécessitent un câblage électrique complexe, ce qui entraîne des frais d'installation, de maintenance et de transformation des rayons, relativement lourds.
Selon un mode de réalisation avantageux, le dispositif de détection est constitué par un capteur incorporé dans une prise à laquelle est connecté l'appareil protégé. Cette prise peut être la prise d'alimentation secteur de l'appareil considéré, une prise de raccordement à un périphérique ou tout autre prise de type connu. Le capteur est constitué par un moyen mécanique mobile entre une première position, lorsque la prise complémentaire de l'appareil est en place et une deuxième position lorsque la prise de l'appareil est retirée. Ce déplacement mécanique génère un signal électrique mis en oeuvre par la centrale d'alarme.
Selon une variante, l'introduction ou le retrait de la prise complémentaire solidaire de l'appareil provoque la modification de l'état du capteur, par des moyens optique, électrique ou magnétique. A titre d'exemple, les rayonnages sur lesquels sont exposés les appareils à protéger sont munis de prises d'alimentation au secteur femelles. Ces prises femelles comportent un téton en érection au repos. L'introduction d'une prise mâle de l'appareil à protéger provoque l'enfoncement de ce téton, qui provoque la fermeture d'un contact électrique. Ce contact électrique est relié à la centrale d'alarme. Le retrait de la prise de l'appareil protégé ou l'interruption de la liaison entre ledit contact électrique et la centrale d'alarme provoque le déclenchement du processus d'alarme.
L'objet de la présente invention est de remédier à ces inconvénients en proposant une centrale d'alarme présentant une sécurité améliorée.
A cet effet, la centrale d'alarme selon la présente invention comporte des moyens d'identification de la personne ayant désactivée un appareil, ainsi que des moyens de mémorisation des données relatives à la personne considérée et à l'entrée ou aux entrées désactivées par ladite personne. De préférence, les moyens de mémorisation enregistrent en outre des données relatives au moment auquel ladite personne a désactivée la ou les entrées considérées.
Ces moyens de mémorisation permettent de limiter le nombre de personne dont la responsabilité est susceptible d'être engagée en cas de vol. Cela entraîne par ailleurs une plus grande responsabilisation des vendeurs qui savent que leur identification est enregistrée et que si un vol se produit sur le ou les appareils qu'ils ont désactivés, leur responsabilité peut être engagée.
Selon un mode de réalisation avantageux, les moyens d'identification sont constitués par un clavier de saisie d'un code d'identification, ledit clavier étant associé à une mémoire contenant les codes autorisées, ainsi qu'à un comparateur interdisant la désactivation d'une ou plusieurs entrées, si le code saisi sur le clavier ne correspond pas à un code correspondant dans ladite mémoire.
Il est ainsi possible de limiter strictement la liste des personnes autorisées à désactiver l'alarme, et à modifier éventuellement cette liste, en cas de modification dans l'effectif des vendeurs ou des chefs de rayon.
Avant ageu s ement , la centrale d'alarme comporte en outre un circuit de temporisation introduisant un délai prédéterminé entre le moment où le moyen d'identification a été actionné de façon valide et le moment où l'entrée sélectionnée est effectivement désactivée. Ce délai permet au responsable de se déplacer entre la centrale d'alarme et le rayon où se trouve l'appareil dont la protection a été désactivée, et empêche le vol pendant la durée de son déplacement.
Selon une autre variante, la centrale d'alarme comporte un circuit de temporisation propre à déclencher l'alarme lorsqu'une entrée a été désactivée pendant une durée supérieure à une valeur maximale déterminée. Selon cette variante, lorsqu'un appareil reste sans protection pendant une durée considérée comme anormale, soit par négligence du vendeur, soit par défaillance technique du capteur, l'alarme se déclenche.
Selon une autre variante, la centrale comporte des moyens interdisant la désactivation des entrées lorsque l'alarme et actionnée. Ce mode de réalisation permet d'empêcher le vol d'un appareil par un chaland indélicat profitant du déclenchement, justifié ou intempestif de l'alarme signalant un événement survenant à un autre appareil protégé par la même centrale.
Selon un mode de réalisation préféré, la centrale comporte des récepteurs infrarouges correspondant à chacune des entrées, lesdits récepteurs étant aptes à coopérer avec des émetteurs complémentaires intégrés aux dispositifs de protection fixés sur les appareils. Les dispositifs de protection sont dans ce cas reliés mécaniquement à un support fixe, afin d'empêcher leur éloignement non autorisé. Le contrôle de l'éloignement non autorisé peut également résulter de la portée limitée des émetteurs intégrés aux boîtiers fixés sur les appareils.
Selon une variante, les moyens d'émission et de réception sont de type hertzien.
Selon une autre variante, les moyens d'identification sont constitués par un boîtier de télécommande comportant un clavier se saisie d'un code d'identification, ledit boîtier transmettant le code saisi à un récepteur complémentaire intégré à la centrale d'alarme.
Ce mode de réalisation évite au vendeur de se déplacer jusqu a la centrale. Il peut ainsi désactiver un appareil à distance, sans interrompre le contrôle et la surveillance des manipulations dudit appareil.
La présente invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui suit, s'appuyant sur les dessins où La figure 1 représente une vue de l'appareil ou une vue de la centrale d'alarme selon l'invention.
Une première zone est une zone photo-sensible. De façon générale, cette zone se décompose en éléments photo-sensibles distribués sur N lignes, chaque ligne contenant M éléments. Chaque élément photo-sensible, dénommé pixel, est un volume élémentaire de matériau tel que les photons en provenance de l'image à reproduire sont convertis en charges électriques par effet photo-électrique. Des électrodes, placées en surface du semiconducteur et photo-transparentes afin de permettre. aux photons d'être absorbés par ledit matériau, permettent de polariser chaque élément photo-sensible de façon que celui-ci devienne un puits de potentiel dans lequel les électrons sont stockés.
Une deuxième zone est une zone de lecture des charges ainsi accumulées. Cette zone de lecture est constituée de registres à décalage à transfert de charges positionnés de façon à récupérer les charges stockées précédemment et à les évacuer. Cette zone est non photo-sensible. Sous certaines conditions de polarisation appliquées de la même manière que précédemment, par l'intermédiaire d'électrodes, certaines zones du matériau sont transformées en puits de potentiel pouvant stocker les charges collectées dans la zone photo-sensible.
La lecture de l'information ainsi recueillie est alors effectuée par déplacement desdites charges vers une zone de sortie. I1 est connu de l'homme de I'art que le déplacement des charges est obtenu par modification de la position des puits de potentiel sous l'action de tensions de polarisation appliquées aux électrodes de commande.
Ces tensions de polarisation suivent certains chronogrammes précis et sont appliquées par l'intermédiaire d'horloges.
n y a différentes manières de transférer les charges de la zone photosensible vers la zone de sortie. Les principaux types de transferts sont le transfert inter-lignes, le transfert de trames, et le transfert inter-lignes associé à une mémoire de trame.