INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
16N. La figure 1 représente un agencement comprenant trente fibres optiques 14, éléments réfléchissants 16 et éléments de lentille 20. Les éléments de lentille 20 sont placés suivant une courbe sur le côté gauche de la surface avant (non représentée) du véhicule tel qu'une automobile et
jusqu'à l'axe 22 de celle-ci. L'automobile présente un agen-
cement complémentaire du sous-système 10 de la figure 1 sur
l'autre côté de l'axe 22 de sorte que des diagrammes prédé-
terminés de lumière, qu'on décrira, sont émis par une bande optique relativement petite qui est exposée sur la plus grande partie de la surface avant de l'automobile. La lumière développée par le sous-système 10 de la figure 1
sert à l'éclairage en code de l'automobile au style aérody-
namique.
On peut décrire le développement d'un tel éclai-
La description qui précède a été faite en référence
à une scie à bande horizontale 1 constituant la machine de
coupe dans ce mode de réalisation de l'invention. Cepen-
dant, il est possible de mettre en oeuvre le procédé de détection de l'usinabilité de la pièce W pour de nombreux types de machines-outils qui exécutent une opération de coupe d'une pièce W. Par exemple, dans le cas de l'utilisation d'un tour,
comme représenté schématiquement sur la figure 7, une pre-
mière extrémité de la pièce W est serrée dans un mandrin 127 qui peut tourner librement sur un tour 125. L'autre
extrémité de la pièce est supportée, de la manière néces-
saire, par un centre rotatif 129 et la pièce W est entrai-
née en rotation à une vitesse particulière. Une vis 133 de guidage est déplacée par un dispositif 131 d'avance à force constante et avance en direction latérale par rapport à un porte-outil 135. La découpe de la pièce W est réalisée à l'aide d'un outil de coupe 137 monté sur le porteoutil , avec une amplitude uniforme de coupe H. Dans ce cas, la vitesse de rotation du mandrin 127
correspond à une vitesse spécifiée de rotation et l'ampli-
tude de coupe H est uniforme. En outre, la coupe de la pièce W est réalisée dans des conditions spécifiées pour lesquelles la force appliquée à l'outil de coupe 137 par le
dispositif 131 d'avance à force constante devient uniforme.
En conséquence, le fait que l'outil de coupe 137 découpe la pièce W sur une longueur uniforme N est détecté par un appareil de mesure 139, par exemple une échelle linéaire ou une jauge de déplacement, et l'usinabilité de la pièce W est déterminée par mesure d'un intervalle de coupe d'une longueur uniforme L, à l'aide d'une horloge 141. Plus précisément, dans ce mode de réalisation de l'invention, comme les données d'intervalles de temps de coupe concernant chaque type de dimension et la qualité. du matériau de la pièce, sont chargées précédemment dans la première base de données 115, il est possible de déterminer l'usinabilité de la pièce W par comparaison des données de référence de la première base de données 115 à l'intervalle
de coupe lorsque la pièce W est usinée en réalité.
En outre, dans ce mode de réalisation de l'inven-
tion, lors de la détermination de l'usinabilité de la pièce
2) Préparation d'une moelle osseuse de boeuf Les côtes d'une génisse fraîchement abattue d'un an ayant un poids d'environ 1000 kg ont été séparées à partir de sa carcasse. Le tissu mou en a été séparé et chaque côte a été sciée en quatre parties. Les os ont été rincés à plusieurs reprises avec une solution isotonique stérile à -4iC, avant d'être montés dans un étau. La moelle osseuse a été extraite à partir de la matière spongieuse avec un instrument de forage à main et entraîné à faible vitesse. La matière obtenue a été immédiatement suspendue dans une solution isotonique saline et stérile et les molécules ont été dissociées par agitation douce.
La suspension des cellules de moelle osseuse dans la solution saline isotonique a ensuite été soumise à une première centrifugation à 15.000 g, pour éliminer les matières particulaires telles que les cellules et les fragments d'os. Le surnageant a été filtré sur gaze naturelle dans le but de retenir toute matière grasse encore présente. Le précipité a été mis de côté et le surnageant immédiatement congelé.
4 litres de surnageant acellulaire de moelle osseuse ont été obtenus à partir de la totalité des côtes d'une génisse. Elles ont été réunies et congelées (sous forme -d'aliquots) à -30iC.
Toutes les opérations qui précèdent, à commencer par le rinçage sus-indiqué des côtes, ont été effectuées dans des conditions stériles et à +4-C.
C'est le dernier surnageant ci-après désigné "moelle osseuse", qui a constitué le matériel de départ pour les purifications ultérieures. Il est entendu que le surnageant de lapin susdit aurait pu être mis en oeuvre dans.des conditions identiques.
B. PREPARATION ET PURIFICATION DU FACTEUR INHIBITEUR DE LA CROISSANCE DES TUMEURS (FIT) A PARTIR DE LA MOELLE OSSEUSE.
1) PréParation du surnaaeant.
On met en oeuvre un matériel stérile et des solutions stériles, préparés à partir d'eau fraîchement distillée, puis stérilisés par passage en autoclave 20 minutes à 120*C.
Deux flacons contenant chacun environ 200 ml de moelle osseuse sont décongelés par incubation sous agitation dans un bain-marie préalablement équilibré à la température de 37-C. La solution décongelée est répartie dans des godets à centrifuger de 100 ml, puis centrifugée 30 minutes à 38.000 g à +4-C. Le surnageant est récupéré puis filtré sur gaze stérile. Son volume est mesuré. Dans une expérience type,- ce volume est d'environ 400 ml. Pour des raisons pratiques, ce volume est divisé en quatre fractions identiques (volume = 100 ml) correspondant chacune à un échantillon destiné à être chromatographié.
On ajoute à chaque fraction 1 ml d'une solution d'azoture de sodium (NaN3) à 2 % (p/v) en eau distillée stérile.
Dans l'attente de la chromatographie ultérieure, les fractions sont stockées à +4-C.
Les boyaux utilisés pour les dialyses sont éprouvés avec de l'eau fraîchement distillée, puis répartis par groupes de cinq dans des flacons "plasma" stériles contenant environ 100 ml d'eau fraîchement distillée. Les flacons sont alors stérilisés par passage en autoclave, 20 minutes à 120'C.
2) Première étaPe de Purification : Obtention d'une fraction active Purifiée par filtration sur ael.
Le gel mis en oeuvre consiste en une matrice mixte d'un polyacrylamide à haute résolution et d'un agarose stabilisant en suspension aqueuse, possédant une zone préférentielle de fractionnement comprise entre environ 20.0po et environ 350.000. C'est plus particulièrement un gel de polyacrylamide (3 %)-agarose (4 %), commercialisé sous la désignation ULTROGEL ACA34 (marque LOB), qui a été utilisé dans l'essai dont la description suit.
On utilise des colonnes d'ULTROGEL AcA34 (5x90 cm) préalablement équilibrées par environ 5 litres d'une solution de chlorure de sodium 0,9 % contenant NaN3 0,02 %, à l'aide d'une pompe péristaltique.
Une partie du surnageant (100 ml) est déposée sur la colonne (débit : 60 ml/h).
Comme le montre la figure 4, l'élément de charnière femelle 1 est donc réglable dans deux directions orthogonales dans le même plan, c'est-à-dire dans la direction axiale le long des éléments de guidage 9a du coulis seau 6 et perpendiculaire à celle-ci par déplacement du croisillon 9 le long de la plaquette sous-jacente 12.
La vis a qui est pévue dans le coulisseau 6 permet en outre de déplacer le plan du coulisseau 6 dans des positions inclinées par rapport au croisillon sous-jacent 9; on obtient ainsi un déplacement du petit tube 2 dans une direction perpendiculaire au plan des deux déplacements premièrement cités.
La plaquette interne 12 du croisillon est en outre munie de deux trous 15 pour le passage des vis de fixation à la paroi du meuble la, dont la tête est accessible à travers de larges trous boutonnière 16 constitués dans la branche du croisillon 9 qui est perpendiculaire au corps mobile 6. Enfin, un prolongement 17 apte à constituer un moyen d'engagement par enclenchement avec un cliquet qui sera expliqué dans ce qui suit est prévu sur le bras 5 de la charnière femelle.
Le gond femelle dont la structure est représentée à la figure 4 est fixé à la paroi de la baie d'un meuble en bloquant au moyen des vis 15 la plaquette sous-jacente 12 contre la paroi proprement dite. La plaquette 12 étant fixée, le corps mobile qui supporte la section de petit tube 2 peut ainsi subir des opérations de réglage dans le sens perpendiculaire à la porte, dans le sens transversal aux éléments de guidage 9a du corps 6 et, si nécessaire, dans le sens perpendiculaire au plan desdits deux réglages au moyen de la vis 8.
L'élément de charnière mâle, indiqué dans son ensemble en la aux figures 5-6, destiné à être accouplé à rotation à l'élément femelle 1, est en substance constitué par un corps en forme de botte arrondi 18, muni de deux ailettes opposées 19 comprenant des trous 20 pour le blocage sur une porte au moyen de vis et encastrement préalable du corps en forme de botte arrondi'18 dans la porte elle-même. Au corps arrondi 18 est associé un bras 21 à l'extrémité duquel sont prévus deux pivots coaxiaux et opposés, indiqués en 4a à la figure 5. L'axe des deux pivots est continu dans un plan parallèle au plan des deux ailettes 19 de manière à astre également parallèle au plan de la porte.
Le pivot 4 constitue le moyen d'engagement à rotation dans la cavité 2a de l'élément femelle 1 tandis que le pivot opposé 4a est de section polygonale ou en croix pour pouvoir être enfoncé à force dans l'extrémité opposée d'un élément d'écartement habituel 22, comme le montre la figure 6 et comme cela sera expliqué plus clairement dans ce qui suit. Du plan des ailettes 19 part un corps en forme de boite 23, partiellement ouvert à sa partie supérieure et à l'avant de manière à former deux éléments de guidage supérieurs parallèles 24, 24a (figure 5) aptes à retenir un corps prismatique 25 constituant un cliquet destiné à venir en prise, quand la charnière est fermée, avec l'élément 17 qui fait saillie de la charnière femelle et qui a déjà été cité.
Ledit cliquet est constitué essentiellement par un petit bloc 25 muni à l'avant d'un nez 25a recourbé vers le bas, et muni à l'arrière d'un trou 25b (ou de deux trous 25b-25c comme à la figure 9) dans lequel est logé un ressort (26) (ou deux ressorts). Le petit bloc 25 est en outre muni de deux cannelures parallèles 27 (figure 9) aptes à permettre au petit bloc de glisser sur les parties de guidage 24-24a du corps en forme de botte 23 à l'encontre des ressorts interposés entre la paroi de fond du corps 23 et le petit bloc 25, quand le nez 25a du petit bloc vient heurter et passer sur la saillie 17 pendant la fermeture de la charnière.
En fait, comme le montrent les figures 7 et 8, quand les deux éléments de charnière 1 et la sont parvenus dans une position proche de la fermeture, la saillie 17 qui heurte le nez 25a s'enfonce dans le petit bloc en comprimant les ressorts 27 et, à peine après avoir dépassé la saillie elle-même, le nez 25a ressort en étant poussé par la réaction des ressorts et se bloque à l'arrière de la saillie. I1 en résulte que la fermeture de la charnière est autobloquante. Il est clair que les deux éléments de charnière supérieurs 1-la ont leurs pivots respectifs 4-4a inversés par rapport à ceux des éléments inférieurs 1-la.
Le montage, le fonctionnement et le réglage de la double charnière décrite ci-dessus peuvent être résumés brièvement comme suit, en se référant à la figure 6.
Sur cette figure est représentée une double charnière appliquée à la porte d'un meuble et à la paroi du meuble, représentée ouverte de 1800, les deux éléments de charnière 1 et la étant dans le même plan.
Après avoir préalablement préparé le tube d'écartement 22 de manière que sa longueur soit adaptée à la hauteur de la porte, on insère dans les extrémités opposées du tube 22 le pivot denté 4a d'une charnière mâle la, en l'enfonçant manuellement; de manière que les deux éléments mâles et opposés l'un à l'autre s'ancrent de façon stable dans le tube d'écartement et déterminent un positionnement coaxial automatique des pivots de rotation 4 destinés à la réception des petits tubes 2 des éléments femelles 1.
On réalise alors l'encastrement des éléments mâles la dans la porte et on fixe ces éléments au moyen de vis passant par les trous 20 des ailettes 19. Après fixation des éléments mâles, on enfonce sur les pivots 4 les petits tubes 2 des deux éléments femelles complets, comme illustré à la figure 4, et on bloque les plaquettes sous-jacentes respectives 12 sur la paroi du meuble en agissant sur les vis passant par les trous 15, dont la tête est accessible de l'extérieur par les trous ovalisés 16 constitués sur le bras transversal du croisillon 9.
L'ancrage de la plaquette 12 ne permet d'obtenir que difficilement immédiatement un positionnement relatif parfait entre les deux éléments 1 et la des charnières pour obtenir un positionnement par ailleurs parfait de la porte par rapport à la baie du meuble. Cependant, pour obtenir par la suite ce positionnement précis, et en maintenant desserrées les vis 13 et 11 (destinées respectivement au blocage du corps du coulisseau 6 sur le croisillon 9 et du croisillon sur la plaquette sous-jacente déjà fixée 12), il est possible de régler le positionnement de la porte en déplaçant horizontalement le corps 6 sur le croisillon 9 et le croisillon dans le sens perpendiculaire sur la plaquette 12 jusqu'à ce que le positionnement correct de la porte soit obtenu.Si ensuite cette porte, déjà ajustée dans deux directions orthogonales dans le meme plan, ntest pas parfaitement en correspondance avec la baie d'ouverture du meuble, on soumet le coulisseau 6, en agissant sur la vis 8, à une inclinaison réglable par rapport au plan du croisillon sous-jacent en obtenant ainsi une concordance parfaite entre la porte et le plan de la baie du meuble. On visse alors a fond les vis 13 et il et on obtient ainsi l'ancrage stable de la porta. Cette stabilité est également favorisée par les parties dentées 14 et 14à constituées sur le coulisseau 6 et sur les parties de guidage 9a du croisillon, lesquelles, après serrage des vis 13 et 11, restent stablement en prise mutuelle.
Quand il est nécessaire de démonter la porte, il suffit de desserrer les vis 13, de déplacer les corps 6 sur les croisillons jusqu'à ce que les têtes des vis 13 viennent en correspondance avec la partie large 7a de la boutonnière 7, dans cette position, les coulisseaux 6 se libèrent des vis 13 et la porte peut être retirée avec les coulisseaux respectifs. La remise en place de la porte est facile et immédiate; on fait passer les vis 13 dans la boutonnière 7a des coulisseaux et on bloque les vis, si nécessaire, après réglage comme déjà indiqué.
La double charnière qui fait l'objet de l'invention permet donc de mettre en place et de retirer facilement et rapidement la porte d'un meuble et également de permettre trois réglages dans ltespace, avec les avantages pratiques et esthétiques que cela comporte.
Enfin, la présence du cliquet 25a qui peut céder élastiquement permet d'obtenir la fermeture automatique des deux charnières opposées, éliminant ainsi l'utilisation de cliquets en saillie à l'intérieur de la baie du meuble et/ou de la porte ouvrable.
Plus généralement, l'invention permet l'étude in vitro de l'influence de facteurs susceptibles d'interférer avec l'infection virale, le procédé sus-défini comprenant alors la mise en contact des cellules contenant la séquence génique ou le provirus recombinant selon l'invention, en présence de ce facteur, avec des quantités déterminées de rétrovirus extérieur et la détection des doses de facteurs, notamment de principe actif de médicament, qui préviennent l'infection rétrovirale, détectable par l'activation du marqueur, desdites cellules.
L'invention concerne donc également des nécessaires ou kits permettant la mise en oeuvre du procédé qui vient d'être décrit, ces kits comportant - des cellules sensibles modifiées contenant le rétrovirus ou provirus recombinant défectif sus-défini, - des moyens de révélation de l'expression du marqueur, notamment lorsque le marqueur est une enzyme, un substrat spécifique de l'enzyme, - éventuellement les tampons et réactifs nécessaires à la réalisation de la mise en contact, avec l'échantillon biologique, des cellules contenant la séquence génique ou le rétrovirus recombinant défectif à étudier et l'incubation du mélange de réaction dans des conditions permettant l'infection éventuelle de ces cellules au contact de l'échantillon étudié, - le cas échéant des milieux de conservation ou de culture desdites cellules saines et modifiées.
Avantageusement les cellules indicatrices utilisées dans ces kits sont constituées par des lignées cellulaires "immortalisées" infectables par le rétrovirus recombinant correspondant. Par exemple, dans le cas d'un kit destiné à la détection d'un virus HIV, lesdites cellules sensibles modifiées et les cellules saines appartiendraient toutes deux à des lignées cellulaires du type CEM, HUT, etc.
Dans les exemples indiqués plus loin, les possibilités de l'invention sont illustrées en rapport avec la production d'un virus recombinant défectif dérivé d'un virus HIV-1.
Il est donc tout à fait clair que l'invention s'adresse à la détection de tout type de rétrovirus éventuellement infectieux vis-à-vis de cultures cellulaires déterminées et présentant les caractéristiques essentielles de structure dont il a été question plus haut. En particulier, elle s'applique à la fabrication de rétrovirus recombinants défectifs permettant, dans les conditions qui ont été indiquées, la détection du pouvoir infectieux (ou la modulation du pouvoir infectieux) des rétrovirus connus sous les dénominations HTLV I, HTLV II, HIV I (ou encore LAV ou HTLV III), HIV II (ou LAV II), HTLV IV. Il en est encore de même pour de nombreux rétrovirus infectieux à l'égard de l'animal. A titre d'exemple, on mentionnera les rétrovirus leucémiques des bovins (Bovine Leukemia Viruses) et des félins (FeLV).
Des caractéristiques supplémentaires de l'invention apparaitront encore au cours de la description d'exemples de réalisation, appliquée à la production de rétrovirus recombinants défectifs conformes à l'invention, dérivé de HIV-1.
D'autres buts de l'invention et les moyens qui permettent de les atteindre résulteront encore de la description de certains des modes de réalisation présentés, soit à titre préféré, soit à titre d'illustration des possibilités offertes par l'invention pour l'étude de tous les aspects des diverses interactions possibles entre des rétrovirus sauvages déterminés et des cellules indicatrices infectables par ces rétrovirus et de la modulation de ces interactions.
Il sera dans ce qui suit fait référence aux figures dans lesquelles - les figures la et lb font apparaitre de façon schématique les caractéristiques de séquences géniques recombinantes conformes à l'invention - les figures 2a, 2b et 2c sont des représentations schématiques d'exemples de rétrovirus défectifs recombinants conformes à l'invention.
Les figures la et lb sont illustratives de deux gènes recombinants conformes à l'invention, tous deux dépourvus de la région tat. Le gène recombinant de la figure lb se distingue de celui de la figure la par une délétion partielle du LTR5,. Ces gènes, incorporés dans le génome de cellules sensibles à l'infection par HIV, sont fonctionnels lorsque les cellules en cause sont placées au contact de source de virus HIV sauvage.
EXEMPLES : tes de détection d'un rétrovirus sauvage de type HIV par trans-activation d'une copie défective intégrée dans une cellule infectable L'ADN recombinant dont l'expression doit être amplifiée par la présence du produit du gène tat externe possède les éléments suivants 1 un promoteur (pro dans la figure 2a) permettant la transcription d'une séquence susceptible d'être exprimée, placée sous son contrôle 2 la région R de HIV-1 jusqu'au site Hind III (nucléotide n 83 selon WRIGHT et al., Science fli, p. 988 ou nucléotide n- 77 dans CSH, RNA tumor virus, tome 2, p. 1 104, 1985) comme démontré dans l'article de WRIGHT et al., Science 234, p. 988.Ce fragment contient en effet les éléments qui confèrent en cis la trans-activation par les produits du gène tat 3 un gène marqueur tel que par exemple le fragment de 3.3 kb du gène nls LacZ tel que décrit dans l'article de KALDERON et SMITH 4 un signal de polyadénylation de l'ARN.
Cette structure est schématisée en figure 2a.
Un autre exemple particulier est donné en figure 2b dans laquelle la séquence recombinante comprend le LTR complet d'un rétrovirus HIV-1 comportant donc le promoteur (U3), la région cis (R) nécessaire à la trans-activation, fusionnée par recombinaison génétique avec un fragment nls LacZ extrait à l'aide d'enzymes de restriction du vecteur L7RHBgal décrit dans l'article de KALDERON et SMITH avant d'être placé par ligation in vitro sous la dépendance de la région R du LTR et relié, également par ligation, au signal de polyadénylation du virus HBV.
Un autre exemple particulier est donné dans la figure 2c où l'ADN du provirus infectieux décrit dans l'article de M. MARTIN et al. (Journal of Virol., vol. 59, p. 284-291) a été fragmenté par les enzymes de restriction Sphl (nucléotide n' 989 de la séquence publiée dans RNA tumor viruses, Cold Spring Harbor 1985) et BamHI (nucléotide 8 032, même référence) comme indiqué à la figure 2c et où le gène nls LacZ (fragment SalI BamHI du plasmide pMMuLVnls LacZ) a été mis à la place de qgq, nol et env.
Ces fragments sont coupés, isolés et lignés comme indiqué dans MANIATIS.
Les plasmides décrits dans les figures la, lb ou 2a, 2b, 2c peuvent être introduits, de préférence par cotransfection, en utilisant les méthodes habituelles décrites par exemple dans GRAHAM et VANDER Eb 19873, Virology 52, 456 et NICOLAS et BERG, CHS, Cell proliferation, 10, 469, dans des cellules infectables par le rétrovirus HIV sauvage, telles que les lignées de cellules Leu 30KT4 auxquelles se réfère l'article de MALCOLM MARTIN ou CEM (CNCM 1-416 et CNCM I-417) ou SupTI.
Quel que soit le gène recombinant introduit, il ne conduira qu'à une expression minimale du gène LacZ dans les cellules dans lesquelles il a été introduit. Une telle cellule (formant la cellule indicatrice) comporte une ou plusieurs copies de la construction LacZ. Ces cellules indicatrices peuvent alors être mises en oeuvre dans un test de détection dans un échantillon biologique d'un virus sauvage. L'infection d'une cellule indicatrice entrainera l'activation (en trans) du gène LacZ et, par conséquent, son expression.
En outre, lors de cette analyse, le préfiltrage est avantageusement réalisé en introduisant plus ou moins dans le champ du faisceau lumineux deux filtres aptes à filtrer chacun une des composantes chromatiques fondamentales.
L'analyse initiale du faisceau incident permet d'éclairer l'original au moyen d'un faisceau lumineux dont l'équilibre chromatique reste identique quelle que soit la température de couleurs de la source lumineuse. Ainsi, la qualité des tirages n'est pas altérée lors d'une variation de cette température de couleur consécutive à une utilisetion prolongée de la source lumineuse ou au vieillissement de celle-ci.
En outre, l'étalonnage effectué lors de la mise au point du dispositif afin de déterminer les valeurs de référence qui seront mémorisées, n'a pas à être revu lors d'un changement de la source lumineuse.
L'invention s'étend à un dispositif pour le tirage d'épreuves photographiques à partir d'un original, du type comportant un support de l'original, un support d'une surface à couche sensible, un système optique doté d'un diaphragme et interposé entre lesdits supports, et une source lumineuse projetant l'image de l'original sur la couche sensible au travers dudit système optique.