INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Bien entendu, en vue de réaliser des effets spéciaux au niveau de l'image reproduite, effets spéciaux tels que quadrillage ou surcoupe, le créateur autorisé peut effectuer deux tramages pour une même couleur élémentaire par exemple.
Une description plus détaillée du système de reproduction d'images pour la création de documents imprimables conforme à I'objet de l'invention sera donnée tout d'abord en liaison avec la figure 6a.
134 est connectée à l'entrée de données du premier circuit d'en-
clenchement 132, le second circuit d'enclenchement 134 empêche que le premier circuit d'enclenchement 132 soit réglé avant le flanc
montant de son entrée d'horloge; par exemple le circuit d'enclen-
chement 134 doit avoir sa sortie mise au niveau haut par le fait de l'aimant entrant dans le champ de détection du détecteur 130 avant que le circuit d'enclenchement 132 puisse répondre au flanc
montant du signal du détecteur 130 via le signal de la borne DT-3.
Lorsque le circuit d'enclenchement 132 répond en mettant sa sortie non inversée au niveau haut, le transistor Q7 s'enclenche, enclenchant par cela les circuits de triac couplé optiquement 118 et 116 qui,
à leur tour, coupent l'alimentation du moteur 28.
Les circuits d'enclenchement 132 et 134 sont remis à l'état initial par la borne de remise à zéro qui devient basse comme
expliqué plus haut.
Les LED des triacs couplés optiquement 116 et 118 sont couplées, via des résistances respectives R19 et R20, entre
le noeud de puissance 124 et le collecteur du transistor Q7. L'émet-
teur du transistor est connecté à la masse. Un troisième triac couplé optiquement 136 comprend aussi une LED L connectée en série avec une résistance R21 entre le noeud de puissance 124 et le collecteur du transistor Q7. Le triac TR du troisième triac couplé optiquement 136 est connecté aux première et deuxième bornes du bloc à bornes ST3. La troisième borne ST3-3 de ce dernier est connectée à la
borne ST2-2 de la figure 6.
Si le transistor Q7 est déclenché, aucun des circuits à triac couplé optiquement 116, 118 et 136 n'ont leur LED L qui
conduisent. Les triacs TR sont enclenchés par les LED L qui con-
duisent mais la tension respective appliquée à chaque triac TR doit -17être réduite à zéro afin que les triacs reviennent à leur état non conducteur. Les premier et deuxième circuits à triac 116 et 118 sont couplés au circuit d'alimentation d'actionneur 100, voir la figure , et ils peuvent être actionnés pour désexciter le moteur 28 lorsque le transistor Q7 est enclenché. En conséquence, après chaque tour
Cette sonde peut alors être utilisée. pour l'hybridation directe sur les blots ou pour la cartographie à la nucléase Sl. Les techniques que nous suivons sont classiques bien que légèrement modifiées. Voici quelques précisions : Exemple 7 . détection d'un ARN de virus Mokola à l'aide d'une sonde conforme à l'invention (Blots d'ARN) Un milieu dthybridation qui comprend - un mélange Na1H2PO4-Na2H1PO4 pH 7r4 @ 0,5 M - SDS 7 % - EDTA 1 mM - sérum albumine bovine (BSA) 1 , convient à la fois pour la préhybridation (au maximum 2 h) et pour l'hybridation (en général durant la nuit) qui se déroulent toutes deux à + 65 C.
Le lavage des filtres est réalisé à la même température, en quatre bains successifs de 10 min chacun, dans le tampon suivant - un mélange Na1H2PO4-Na2H1PO4 pH 7,4 40 mM - SDS 1 % - EDTA pH 7,5 1 mM Pour des hybridations de sondes strictement complémentaires aux transcrits recherchés, cette méthode donne de forts bons résultats, en particulier une très grande discrétion du bruit de fond.
Exemple 8 : Procédé de détection et d'identification rapide de faibles quantités de Lyssavirus.
Environ 1 g d'ARN total provenant de cellules fibroblastiques BHK21 ou neuronales murines N2A infectées par un Lyssavirus (souches rabiques classiques PV, CVS, AvOl, PM, ERA, souches rabiques sauvages "chien du Gabon", "chauve-souris bresilienne", "renard d'Europe", Mokola, etc...), est hybridée avec environ 100 ng d'amorce "G", correspondant à un oligonucléotide long de 23 nucléotides, de sens (+) et s'étendant entre les positions 4665 et 4687 du génome rage PV, et un ADN de sens (+) complémentalre au génome est amorcé spécifiquement et synthétisé comme décrit dans l'exemple 1. Le milieu réactionnel est extrait au phénol, précipité à l'éthanol, lavé deux fois avec de l'éthanol à 70 %, puis séché.Il est alors repris dans 50 l comprenant - Amorce "L" 100 ng - Tris HC1, pH 8,8 60 mM - Ammonium sulfate 17 mM - MgCl2 6,7 mM - B-mercaptoéthanol 10 mM - EDTA 5 mM - BSA 170 pg/ml - DMSO 10 % (vol/vol) - dNTP's 25 mM - Taq DNA polymérase 2 Unités l'amorce "L" correspond à un oligonucléotide long de 24 nucléotides, de sens (-) et s'étendant entre les positions 5520 et 5543 du génome rage PV.
Le milieu réactionnel est placé dans un tube eppendorf de 1,5 ml, recouveru de 100 l d'huile minérale pour éviter l'évaporation, et incubé dans une "machine à P.C.R." lui faisant subir les étapes suivantes + 95 C 5 min pour dénaturer + 50'C 2 min pour que les amorces s'hybrident + 72 C 2 min pour que la Taq polymérase allonge les brins d'ADNc.
Cette étape est réalisée une fois, puis elle est répétée 40 fois de suite en limitant le temps de dénaturation à 2 min.
Enfin, elle est répétée une 41ème fois allongeant le temps de synthèse des ADNc à 10 min pour compléter la réaction.
La bande d'ADNc amplifiée peut être observée après migration des produits réactionnels sur un gel d'agarose approprié. Après transfert, elle peut Autre caractérisée au moyen d'une sonde appropriée, provenant du clonage du génome de la souche analysée ou d'une autre souche de Lyssavirus.
Exemple 9 : Expression de la glycoprotéine G du virus Kola.
Les inserts pMD10 et pMA10-, issus du clonage du génome Kola, couvrent chacun pour moitié le gène de la glycoprotéine G. Grâce au site de restriction BglII qu'ils ont en commun, on peut les rejoindre en un seul insert pM7 couvrant les 6 830 nucléotides 3' du génome. A partir de celui-ci, on isole ltADNc du gène de la glycoprotéine G par une double digestion combinant les enzymes de restriction FnuDII et SspI, qui est inséré entre la région promotrice 5' du gène de la polyédrine du baculovirus et sa région 3' correspondant notamment au signal de polyadénylation. Cette construction est réalisée dans un vecteur pUC, pour permettre sa multiplication. Elle est ensuite cotransfectée avec un baculovirus de type sauvage dans des cellules de chenille Spodoptera frugiperda Sf9 se multipliant en suspension. Le gène de la glycoprotéine G s'insère en lieu et place de celui de la polyédrine du virus sauvage1 par double recombinaison. Après clonage, les plages de baculovirus recombinants sont repérées par leur aspect terne en épiluminescence, qui se distingue aisément de l'aspect refringent des plages de virus sauvage.
Quelques clones recombinants sélectionnés ont servi à réinfecter des cultures de cellules de chenille. Au bout de trois jours après l'infection, les extraits cellulaires protéiques totaux ont été préparé. Une bande protéique supplémentaire, de taille voisine de celle de la glycoprotéine Mokola a été observée uniquement dans les extraits provenant des clones recombinants. Afin de mieux étudier -cette protéine supplémentalre, d'autres cultures ont été infectées dans un milieu carencé en méthionine, puis complémenté avec de la méthionine radioactive. La glycoprotéine G est alors apparue de façon beaucoup plus intense, représentant sans aucun doute le polypeptide le plus fortement exprimé dans les cultures au moment du marquage (figure 5a).
La figure 5b correspond à un témoin négatif.
La mise en évidence de l'expression de la glycoprotéine du virus Mokola à la surface des cellules infectées par le Baculovirus recombinant est effectuée sur des cellules de spodoptera frugiperda, après infection par le baculovirus recombinant exprimant la glycoprotéine du virus Mokola. Les cellules sont fixées dans l'acétone à 20C pendant 30 min. Elles sont ensuite incubées avec les Acm dirigés contre la glycoprotéine du virus Mokola.
Après lavage, la révélation se fait par incubation avec un anticorps anti-immunoglobuline de souris couplé à l'isothiocyanate de fluorescéine (ITCF).
L'observation après lavage se fait au microscope sous excitation ultra-violette (figures 5a et 5b).
La glycoprotéine a été également clairement localisée à la surface des cellules infectées par le virus recombinant, au moyen d'anticorps monoclonaux fluorescents spécifiques de la glycoprotéine du virus Mokola (figure 6).
La sortie 562 de la porte logique 560 est reliée à l'entrée de la cellule 570. La sortie 562 de la porte logique 560 est validée lorsque simultanément le compteur 540 est à zéro, et la temporisation n'évolue pas.
Cela signifie qu'aucune fonction de la station n'est activée.
La cellule 570 peut alors générer un signal de sommeil qui commande le passage de la station correspondante de l'état actif à l'état de veille.
Pour cela lorsqu'un message de mise en sommeil est généré par une station, son module de gestion 300 commande l'ouverture de la cellule 504 contrôlant l'alimentation interruptible +VINTER.
De préférence il est prévu au niveau de chaque station, une temporisation de contrôle (qui peut correspondre à la temporisation dénommée auxiliaire précédemment) qui interdit la génération du signal de sommeil avant l'écoulement d'un délai déterminé consécutif au réveil de celle-ci, qu'il résulte d'un processus de réveil local ou d'un processus de réveil distant. Cette temporisation de contrôle est initialisée lors de la validation de la sortie de la porte logique 502. La même temporisation de contrôle peut également être conçue pour être initialisée lors de la validation de la sortie de la porte logique 560, afin d'interdire la génération du signal de sommeil avant l'écoulement d'un délai déterminé consécutif à cette validation.
Le cas échéant, on peut prévoir que quel que soit le type de fonction mise en jeu au niveau d'une station, la sollicitation de celle-ci entraîne la génération d'un signal d'activation, tandis qu'un signal de désactivation est généré automatiquement lors de l'achèvement de la fonction.
Dans ce cas, la temporisation 550 représentée sur la figure 5 et précédemment évoquée devient inutile.
Selon d'autres caractéristiques avantageuses de la présente invention - s'il existe une coîncidence entre l'émission d'un message de sommeil et l'activation d'une fonction locale, l'alimentation de la station correspondante est coupée et réactivée au bout d'une temporisation déterminée, par exemple de l'ordre de 5ms.
- les modules 500 comprennent en outre des moyens de diagnostic aptes à contrôler l'état de chacune des charges associées à une station donnée. A titre d'exemple, il peut s'agir de surveiller l'état des filaments d'ampoule.
- les messages de réveil qui transitent par le bus de communication 10 sont non adressés, c'est-à-dire qu'ils sont destinés à l'ensemble des stations S1 à S4 connectées au bus 10. En revanche, les autres messages transitant par le bus 10 et destinés par exemple à contrôler la mise en service de fonction particulière d'une station donnée, sont adressés, c'est-à-dire qu'ils comprennent une partie d'adresse permettant d'activer la ou les seules stations adéquates.
- dans le cas d'émission sur le bus de communication 10 d'un message autre qu un message de réveil, ce message d'information doit être précédé d'un message de réveil distant afin d'assurer que la station destinatrice du message soit receptive.
- chaque station peut comprendre un module abaisseur de tension de sorte que la tension +VINTER et la tension +VPER soient différentes de la tension de la batterie du véhicule automobile.
Bien entendu la présente invention n'est pas limitée aux modes de réalisation particuliers qui viennent d'être décrits mais s'étend à toutes variantes conformes à son esprit.
PROCEDE DE LOCALISATION CONTINUE DANS L'ESPACE ET LE TEMPS D'UN VECTEUR TEL Q'UN OBJET, ANIMAL OU PERSONNE, FIXE OU MOBILE,EN PARTICULIER UN VEHICULE ET SYSTEME POUR LA MISE EN OEUVRE DU PROCEDE.
L'invention concerne un procédé de localisation continue dans le temps et l'espace d'un vecteur tel qu'un objet, animal ou personne fixe ou mobile, susceptible de se trouver soit dans un état passif lorsque la localisation n'est pas souhaitée, soit dans un état actif permettant la localisation continue dans le temps et l'espace par l'intermédiaire des bornes-relais du système et au final par la centrale de localisation.
On connait déjà différents procédés et systèmes antivols pour véhicules.
Selon une autre caractéristique de l'invention, la composition contient également comme ingrédient actif de 1 'Euphorbia Hirta.
Selon encore une autre caractéristique de l'invention, la composition contient (en % en poids) - 10 à 90 % d'Euphorbia Hirta, et - 10 à 90 % de Simarouba Glauca.
Selon un mode préféré de l'invention, la composition contient en % en poids - 30 % d'Euphorbia Hirta, et - 70 % de Simarouba Glauca.
L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description explicative qui va suivre, faite en référence aux expériences et aux observations données ci-après uniquement à titre d'exemple.
Le tableau 1 illustre six compositions selon l'invention.
Le tableau 3 est un tableau comparatif de deux compositions selon l'invention et de la composition de la demande de brevet français nO 86 16 337, dans le traitement de différents troubles.
L'invention réside dans la découverte du fait que l'espèce Simarouba Glauca, du genre des Simarubacées, présente des propriétés pharmacologiques non décelées jusqu'alors. En effet, la Simarouba Glauca ne fait pas partie de la pharmacopée.
Différentes compositions selon l'invention sont préparées de la façon suivante.
La préparation de la Simarouba Glauca se fait par micronisation. L'écorce de Simarouba Glauca est utilisée.
Le broyage est effectué par passage sur un appareil de broyage traditionnel, dans des conditions strictement définies et reproductibles.
Cette poudre micronisée est extraite à raison de 1 : 1, c'est-à-dire qu'un kilo d'écorce broyée permet d'obtenir un kilo de poudre micronisée. Cette dernière est conditionnée dans par exemple des gélules, pour l'obtention d'un médicament ou d'un complément alimentaire destiné à l'absorption orale.
Une composition conforme à l'invention peut également contenir à titre d'ingrédient actif un mélange de Simarouba Glauca et d'Euphorbia Hirta, du genre des Euphorbiacées.
Dans ce cas, la préparation de l'Euphorbia Hirta se fait par micronisation, à partir de la plante entière qui est broyée dans les mêmes conditions que la Simarouba Glauca. La poudre ainsi obtenue est intimement mélangée à la poudre micronisée de Simarouba Glauca.
I1 est à noter ici que la composition ne contient pas de levure de bière, ni aucun substituant pharmaceutiquement acceptable de celle-ci.
La composition à base de ce mélange est également préparée sous forme de gélules. La composition peut aussi se présenter sous la forme d'une solution alcoolique, de teintures mères ou encore d'extraits.
Cette séquence montre une homologie avec celles de plusieurs protéines qui sont des activateurs de transcription, notamment des protéines de E. coli Dye, OmpR, une protéine de Salmonella tvPhimurium, CheY (DRURY et al, J. Biol. Chem., 260 : 4236-4242 (1985)) ou des protéines de B. subtilis, SpoOA, SpoOf (TRACH et al, Proc. Natl. Acad. Sci., 82 : 7260-7264 (1985)).
Pour les besoins de la représentation formelle des homologies de structure partielle entre sacU5 et les autres protéines apparaissent à la figure 8, certains acides aminés se trouvent quelquefois davantage écartés de ceux qui normalement les jouxtent, de façon à permettre la mise en évidence (grâce à des encadrements verticaux) desdites homologies partielles.
Cette séquence ne peut donc être active par elle-meme mais on ne peut éliminer le fait qu'elle puisse jouer un rôle dans l'expression de la protéine SacU5.
L'invention concerne toute séquence d'ADN issue du fragment SalI-SPhI de 2,55 kb mentionné plus haut, séquence incluant en particulier la séquence codant pour le polypeptide SacU capable de conférer le phénotype Sedh ainsi que les Sedh, ainsi que les séquences nucléotidiques comprenant les éléments de régulation de l'expression de ce dernier.
A titre d'exemples de fragments conformes à l'invention et satisfaisant à l'ensemble des conditions qui ont été rappelées dans la définition sus-indiguée du fragment d'ADN selon l'invention, on mentionnera - le polynucléotide délimité par des nucléotides situés aux positions 1 et 2310 respectivement de la figure 5, présumé comprendre le promoteur de transcription, le site de liaison ribosomique, le gène de structure du polypeptide SacU5 et le terminateur de transcription.
- tout polynucléotide contenant le fragment délimité par des nucléotides d'extrémités correspondant aux positions 1 à 2310 respectivement de la figure 5, et comprenant, en outre, en-amont dudit fragment, une séquence suffisamment longue pour également inclure le promoteur endogène permettant la transcription dans la cellule hote, notamment par B. subtilis.
L'invention concerne également tout fragment d'ADN capable de s'hybrider avec le fragment d'ADN SalI-SDhI de 2,55 kb sus-mentionné, dans des conditions stringentes ou non stringentes sus-mentionnées.
L'invention concerne plus particulièrement tout fragment d'ADN issu d'une souche de B subtilis h comportant une mutation sacUh, notamment dans les conditions décrites ci-dessus, caractérisé en ce qu'il est capable de s'hybrider avec le fragment d'ADN de 2,55 kb de .la figure 5, et en ce qu'il confère le phénotype Sedh à la souche bactérienne , notamment de B. subtilis, dans laquelle il est incorpore.
L'invention concerne aussi tout acide nucléique recombinant contenant la partie fonctionnelle de sacU contenue dans le fragment SalI-SPhI sus-défini en particulier le fragment du type sus-indiqué codant pour le polypeptide SacU5 conférant le phénotype Sedh associé avec des fragments d'acide nucléique hétérologues vis-àvis dudit fragment, c'est-à-dire des fragments d'acide.
nucléique qui peuvent avoir un effet en combinaison avec la séquence codant pour le polypeptide, par exemple des séquences d'acide nucléique susceptibles de contenir un promoteur fort ou une séquence régulatrice ayant pour effet d'augmenter la production de la protéine SacU sauvage ou modifiée dans l'hôte utilisé.
A ce titre, l'invention concerne tout ADN recombinant contenant un fragment d'ADN selon l'invention, conférant le phénotype Sedh associé avec un promoteur de transcription reconnu par une cellule hôte, autre que celle dont ledit fragment d'ADN est issu. Avantageusement, le susdit promoteur utilisé est un promoteur fort tel que le promoteur du gène sacB (A. KLIER et al, Molec. Microbiol., 1 : 233-241 (1987)), ou le promoteur Pn25 du bactériophage T5 (M. ZUKOWSKI et L. MILLER, Gene, 46 : 247-255 (1986)).Avantageusement, cet ADN recombinant comprend un fragment d'ADN selon l'invention, un promoteur, notamment un promoteur fort, et, le cas échéant, un terminateur de transcription hétérologue par rapport à l'ADN de B. subtilis, ce promoteur et, le cas échéant, ce terminateur étant néanmoins reconnu par la cellule hote, dans des conditions permettant au susdit fragment d'ADN selon l'invention d'y etre exprimé, lorsque ledit ADN recombinant y aura été introduit. Par exemple, cet ADN recombinant comprend un promoteur et, le cas échéant, un terminateur d'un autre microorganisme.
A cet égard, l'invention concerne plus particulièrement les ADN recombinants consistant en des vecteurs, contenant un fragment d'ADN selon l'invention en l'un de leurs sites non essentiels pour leur réplication, notamment du type plasmide, qui sont aptes-a se répliquer dans une cellule hôte tout en permettant à la partie fonctionnelle du locus sacU de manifester son activité, notamment à permettre l'expression de la séquence codant pour le polypeptide SacU5.
Avantageusement, le susdit promoteur de transcription est un promoteur inductible. A titre d'exemple de promoteur inductible, on citera le promoteur de sacB inductible par le saccharose (SHIMOTSU et HENNER, J.
La Figure 12 (a), (b) et (c) montre les résultats obtenus après l'amplification spécifique de l'ADN male au moyen de la PCR.
La Figure 13 est un schéma des étapes et cycles successives de la PCR.
EXEMPLES Dans les exemples qui suivent, les matériaux et méthodes suivants sont utilisés Extractions d'ADN, restrictions et hybridation de Southern blot Les procédures d'extraction d'ADS, de restriction par digestions enzymatiques et hybridations de Southern blots sont décrits ailleurs (Georges et al., 1987). L'hybridation de "Dot Blots" étaient réalisées selon Anderson et Young (1985) : une feuille de nitrocellulose est immergée dans l'eau, transférée sur du papier Whatman 3MM et transférée pendant 30 minutes dans une solution 20 x ssc. Le filtre est séché à la température ambiante.
L'échantillon d'ADN gnomique bovin est appliqué sur le filtre sous la forme d'échantillons de 1 pu dans un tampon TE (Tris-HCl 10 m, pH 8, EDTA 1 mM, pH 8).
Les échantillons sont mis à sécher à la température ambiante.
L'ADN est dénaturé en plaçant le filtre pendant 5 minutes sur une feuille de papier Whatman 3 MM saturée avec NaCl 1,5 M, NaOH 0,5 M.
Ensuite, le filtre est transféré pendant 30 secondes sur un papier Whatman 3 m saturé avec du Tris-HCl 0,5 M, pH 7,4, puis sur un papier Whatman 3 MM saturé avec NaCl 1,5 M, Tris-HCl 0,5 M, pH 7,4 pendant 5 minutes.
Le filtre est mis à sécher à l'air et cuit à 800C pendant 2 heures.
Les conditions de préhybridation, d'hybridation et de lavage sont stringentes, définies ci-dessous.
Afin de permettre une normalisation du signal obtenu avec la sonde, des doubles des filtres sont mis à hybrider dans les mêmes conditions avec 500 ng d'ADN génomique bovin, marqué radioactivement avec l'isotope 32 du phosphore par la méthode de Feinberg et ai.
Clonage de btDYZ-1 : 500 ug d'ADN bovin male purifié étaient digérés complètement par MboI et séparés selon la taille par centrifugation dans un gradient de sucrose 10-40%.
Après dialyse et précipitation, les fractions > 2kb étaient ligués dans un vecteur pUC13 clivé par BamHI et déphosphorylé. Le clonage ' est fait par transformation dans des bactéries compétentes DH5a (Hanahan, 1985). L'hybridation sur colonies est effectuée selon les procédures habituelles.
Séquençage d'ADA': Le sequençage des ADN est fait en utilisant la T7 DNA Polymerase (Pharmacia) engagée dans la réaction de terminaison des chaines, après sous-clonage dans le vecteur Mi3mpl8 et la production de délétions progressives unidirectionnelles par l'exonucléase III.
Préparation des chromosomes et identification Des étalements de plaques chromosomiques étaient préparés à partir de lignées cellulaires fibroblastiques par la technique de détachement mitotique. La lignée cellulaire fibroblastique était établie à partir de tissu de foetus bovin mâle. Les chromosomes étaient marqués et identifiés selon Fries et al. (1988).
Préparation des sondes : Pour les expériences d'hybridations in situ l'insert de 4.2-kb était marqué par trois nucléotides tritiés (Shin et al., 1985 & Fries et al., 1986).
En conséquence, il est nécessaire de transmettre au moins 90 mots de 10 bits plus les trois bits des signaux de synchronisation.
Or, dans les systèmes de transmission actuels, on peut transmettre 864 octets par ligne dont 720 sont actifs et représentent le signal vidéo proprement (lit. Il reste donc 144 octets pour transmettre les informations numériques de contrôle.
En fait, comme représenté sur la figure 1, les 144 octets libres comportent tout d'abord un premier octet dans lequel a été enregistré une valeur particulière, par exemple la valeur "FF".
Cet octet est utilisé pour signaler que l'octet suivant est un octet de synchronisation noté "XY". Cetto valeur particulière "FF" devra être éliminée des valeurs possibles du signal vidéo.