INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
1111111 I 1 I I Temps en heures I o 1 2 1 6 I 8 1 10 I 12 14 16 I- liii I I I I i Concentration en nitrates dans le I I I I I I I I I I I réacteur (mg/l N03) 325 309 202 79 18 17 11 4 171 111 4 Température moyenne 200C Agitation limitée au fond du réacteur Pas de support bactérien.
Comme représenté sur la figure 5, le décodeur de réduction de bande passante conforme à la présente invention comporte aussi un deuxième bloc "IC2". Le bloc "IC2" correspond à la partie interpolation compensée en mouvement de la voie 40 ms. I1 doit utiliser l'information de vecteur de mouvement "MV3" qui est en fait le signal "MV" retardé de 60 ms afin de compenser tous les retards introduits dans les traitements vidéo précédents. Le circuit "TC2" comporte donc un circuit de codage 110 qui reçoit en fait l'information "MV3" du circuit "CSD" prévu sur ce bloc, un interpolateur 111 qui reçoit un certain nombre dtinformations provenant des interpolateurs 40 ms prévus sur le bloc "IC3" décrit ultérieurement, un registre 112 comportant des coefficients, des additionneurs 113 et un multiplicateur 114.Le rôle de ce bloc "IC2" est de régénérer une partie des informations manquantes à partir des trames impaires transmises et des vecteurs de mouvement correspondant à chaque bloc.
Comme représenté sur la figure G, le décodeur de réduction de bande passante comporte aussi un troisième bloc "IC3" qui intègre les différents interpolateurs des différentes voies permettant de régénérer la structure orthogonale d'échantillonnage en sortie ainsi que le commutateur de sélection de voie. De manière plus détaillée, le circuit "IC3" comporte deux interpolateurs 40 ms 120, deux interpolateurs 20 ms 121. Les interpolateurs 120 sont reliés directement ou par l'intermédiaire d'un multiplexeur aux sorties 40A et 40C du circuit "SSPC".Les interpolateurs 20 ms 121 sont connectés en sortie de multiplexeurs 122 qui reçoivent respectivement soit la sortie d'un circuit à retard 109 connecté aux voies 801 et 802 du "SSPC" ou à la sortie d'un circuit convertissant la voie 40 ms en 80 ms référencé 123, le circuit 123 étant lui-même connecté en sortie du multiplicateur 104 tlll bloc "IC2". Les sorties des interpolateurs 20 ms 121 sont connectées à des commutateurs de sélection de voies 124 qui reçoivent aussi les sorties dn bloc "IC2" par l'intermédiaires de circuits à retard "CD2". Les signaux issus des circuits 124 sont remis en forme dans des circuits améliorant la compatibilité 125.Comme représenté sur la figure 5, le bloc "il3" comporte aussi plusieurs circuits "CSD" associés soit à des interpolateurs 40 ms, soit avec les interpolateurs 20 ms pour régénérer les signaux de synchronisation et d'assistance digitale nécessaires.
D'autre part, les multiplexeurs 108 du bloc t?ICî?t ont pour but d'effacer le retour ligne de la voie vidéo pour alimenter les interpolateurs.
On notera en fait que la surface de silicium utilisée par le circuit de la figure 5 nécessaire à l'entrée de chaque circuit intégré "CSDn pour décomprimer les signaux "BD" et "MV", effacer le signal vidéo pendant les retours, éventuellement comprimer à nouveau et insérer les signaux d'assistance digitale en sortie, est très faible et bien moins importante que les surfaces demandées par des mémoires. En conséquence, l'économie réalisée par la suppression des retards de 20 ms spécifiques aux signaux "BD" et "MV" est très importante.
La présente invention a été décrite en se référant à des informations codées sur 8 bits ou octet. Toutefois, il est évident quelle peut s'appliquer à d'autres types de codage, fonction notamment du codage du signal vidéo.
L'invention concerne un procédé de marquage d'objets postaux, consistant à imprimer sur chaque objet postal un code barres correspondant au code postal de la destination de l'objet ; elle concerne également un code barres correspondant, et un procédé de lecture de ce code barres.
I1 est déjà connu d'imprimer sur les objets postaux "mécanisables", c'est-à-dire les lettres de formats standard, un code barres qui correspond au code postal de destination et qui peut être lu ensuite de fa çon opto-électronique dans des installations de tri automatique. Dans l'Administration Française des Postes, ce code barres est constitué de bâtonnets imprimés à l'encre fluorescente, chaque chiffre du code postal étant codé dans un code 3 parmi 5 et associé à un bâtonnet de début, de sorte que le code postal à 5 chiffres est représenté par une suite de 20 bâtonnets répartis sur 30 emplacements possibles.
Les bâtonnets ont des dimensions standardisées (une hauteur d'environ 4 à 5 millimètres, une largeur d'environ 0,6 millimètres) et sont imprimés avec un pas constant d'environ 1,67 millimètres.
Lorsque ces codes barres sont imprimés sur des enveloppes de format et de qualité standard, dont le fond est en général uni, leur lecture ne pose pas de trop grands problèmes et les têtes de lecture utilisées ont des performances très élevées (de l'ordre de 99,9 % de bonnes lectures avec une tête de lecture numérique développée par BERTIN & CIE quand les codes barres sont correctement imprimés).
En ce qui concerne les paquets postaux, ces derniers sont en général envoyés par des sociétés de vente par correspondance qui, pour la plupart, acceptent de coller une étiquette portant le code barres sur chacun de leurs paquets postaux. Dans ces conditions, la lecture des codes barres peut se faire également sans difficulté majeure.
I1 existe cependant un grand nombre d'objets postaux qui ne sont ni des paquets, ni des lettres standardisées, et que l'on désigne sous le nom générique d'"objets plats". Ces objets plats comprennent des lettres de dimension et d'épaisseur diverses, non standardisées, des journaux, des revues, etc..., sur lesquels il est peu facile d'imprimer un code barres qui puisse être lu ensuite de façon automatique avec de bonnes chances de succès. En effet, le code barres serait souvent imprimé sur une surface comportant déjà des signes imprimés, ou sur une feuille de matière plastique transparente recouvrant une surface imprimée.
I1 en résulte que ces objets plats sont, pour la plupart, triés de façon manuelle.
Elle a notamment pour objet un procédé de marquage d'objets postaux, tels que les objets plats précités, avec un code barres qui puisse être lu de façon automatique, même dans des conditions difficiles, avec des chances de succès supérieures à 99 %.
Elle a encore pour objet un code barres d'un type nouveau, destiné en particulier aux objets plats précités.
Elle a encore pour objet un procédé de lecture d'un code barres du type précité, permettant de détecter et de corriger quelques erreurs dans le code barres lu.
Ainsi, l'invention a pour objet des compositions telles que décrites ci-dessus dans lesquelles le dérivé nucléotidique associé au vecteur de transport, et, le cas échéant, à un dérivé hydrophobe, code pour un polypeptide déterminé.
L'invention a plus particulièrement pour objet des compositions du type sus-mentionné dans lesquelles le dérivé nucléotidique déterminé est inséré dans la séquence nucléotidique d'un vecteur de gènes, notamment d'un plasmide, ce plasmide étant lui-même associé à un dérivé hydrophobe sus-mentionné, l'ensemble constitué par ce plasmide associé au dérivé hydrophobe, étant lui-meme associé à un vecteur de transport tel que décrit ci-dessus.
Ce dérivé nucléotidique compris dans ce plasmide peut également posséder une structure nucléotidique telle qu'elle permette le blocage de la synthèse d'une protéine déterminée. Dans ce cas, une telle composition est particulièrement avantageuse, en association avec un véhicule physiologiquement acceptable, pour le traitement de pathologies liées à la synthèse d'une (ou plusieurs) protéine déterminée indésirable.
D'autres caractéristiques de l'invention apparaîtront encore aux cours de la description qui suit d'exemple d'obtention de compositions de l'invention. I1 va de soi que ces exemples revêtent aucun caractère limitatif.
I - ASSOCIATION OLIGONUCLEOTIDES-NANOPARTICULES Expérience standard Dans 1 ml de milieu de polymérisation contenant 1% de Dextran 70 et la quantité nécessaire de HCl pour que le pH du milieu soit égal à 3, on ajoute 10 l de monomère IsoButyl CyanoAcrylate (IBCA) sous agitation magnétique énergique pour disperser le monomètre. Au bout de 10 à 15 minutes où la polymérisation se traduit par une opalescence du milieu, on ajoute la solution éthanolique (80 jl à 200 l) contenant le complexe entre le mono ou oligonucléotide et l'ion hydrophobe, étudie dans des proportions définies par r, r étant égal au rapport des charges positives aux charges négatives de l'oligonucléotide. On laisse le mélange en contact avec les nanoparticules en cours de formation pendant 45 minutes sous agitation. On neutralise ensuite le milieu avec 7 Ctl de tampon phosphate 1 M ajusté à pH 7, puis on ajoute 30 1 de NaCl 5 M pour ajuster la concentration ionique du milieu à 0.15 M NaC1. On laisse tourner 30 minutes pour équilibrer le mélange et on centrifuge la solution à 35000 g à 10-C.
L'oligonucléotide étant marqué à une extrémité par le phosphore 32, la mesure de la radioactivité du surnageant S et du culot C permet de déterminer le taux d'encapsulation r = 100 (C/C + S).
Les ions hydrophobes utilisés dans les essais qui suivent sont représentés sur les tableaux 1 à 3 suivants TABLEAU 1 Code Formule Composé : ST : CH3-(CH2)17-NH+3 :Stearylamine SP CH3-(CH2)14-CHOH-CH-CH2OH DL-Dihydro-sph sine NH3 (DL-1,3dihydroxy2-amino-octadécane Tableau 2
# X Code R1 R2,R3,R4 x COMPOSE A1 CH3 CH3 Cl Tétraméthylammorium, chlorure A2 n-C4H9 n-C4H9 Cl Tétrabutylammonium, chlorure A3 n-C6H13 n-C6H13 Cl Tétrahexylammomum, chlorure A4 n-C8H17 n-C8H17 Cl Tétraoctylammonium, chlorure A5 n-C16H33 CH3 Br Hexadecyltrimethylammonium, bromure (CTAB) Tableau 1
# X Code R1 R2,R3,R4 x COMPOSE P1 CH3 CH3 Cl Tétraméthylphosphonium, chlorure P2 n-C4H9 n-C4H9 Cl Tétrabutylphosphonium, chlorure P3 C6H5 C6H5 Cl Tétraphénylphosphonium, chloure P4 n-C16H33 n-C4H9 Br Hexadecyltributylphosphonium, bromure (CTPB) A) Encapsulation de l'adénosine triphosphate Les essais d'encapsulation de l'adénosine 5'triphosphate (ATP) ou du didesoxyadénosine 5'triphosphate (dd-ATP) en présence d'amines 9 longue chaîne comme la stéarylamine ou la sphingosine a permis d'atteindre des taux d'encapsulation importants (Tableau 4). Dans ces expériences, le marqueur utilisé est le -dérivé radioactif marqué au phosphore-32 correspondant.
TABLEAU 4 N expérience Cation XTP(a) r : 1 : : ATP : 200 : 55 : :Stearylamine: : 2 : : dd-ATP : 200 : 46 : 3 : : ATP : 200 : 73 : Sphingosine : 4 : : dd-ATP : 200 : 77 (a) : La concentration en XTP est maintenue constante et égale à 1,50 x 10-5 M en phosphate et celle du cation à 3 x 10-3 M d'où r = 200.
B) Encapsulation d'oligonucleotides 1. Octathymidylate : La concentration en p(dT) est maintenue constante et égale à 1,5 x 105 M en phosphate ou 1,9 aM en oligonucléotide. Dans les expériences qui suivent, l'oligonucléotide est marqué au 32P à l'extrémité 5' et purifié par électrophorèse sur gel de polyacrylamide.
Les variations des taux d'encapsulation du cation P3 (cf tableau 3) marqué au carbone 14C et du p(dT)8 (marqué au 32p) (méthode de double marquage) en fonction de la concentration en P3 sont présentées sur la figure 1. Dans cette figure, les valeurs de r représentent celles obtenues sans rajout de NaCl en fin de polymérisation. Les valeurs de r présentées dans les autres tableaux et figures sont obtenues en présence de 0,15 M NaCl final. Dans le Tableau 5, les résultats montrent que dans de nombreux cas, on peut encapsuler l'oligonucléotide à plus de 90 %, tout en évitant le phénomène de floculation des nanoparticules.
TABLEAU 5 N d'expérience : Cation : r : r(8) 5 : 200 : 98f Tetraoctyl N+ (A4) 6 50 31,3 7 : : 200 : 90 CTAB (A5) 8 50 66 9 : : 200 : 68,4 Tétraphényle P+(P3) 10 50 41,6 11 : : 200 : CTPB(P4) 12 50 31,6 13 : : 200 : 95f Stearylamine (ST) 14 50 51,5 15 : : 200 : 96,8 16 : Sphingosine (SP) : 50 : 88 17 : : 20 : 41,6 f : Observation d'agrégation des nanoparticules ou floculation aux rapports r élevés en cation hydrophobe.
2. Hexadecathvmidylates P(dT)rZ Dans ces expériences, la concentration en oligonucléotide est égale à 1,84 M ou 2,94 x 105 en phosphate. Les résultats présentés dans le Tableau 6 montrent que les cations comportant une longue chaîne hydrocarbonée permettent d'atteindre des taux d'encapsulation élevés ( > 95 %) pour des rapport r relativement faibles (r = 20). De plus, l'utilisation de faibles concentrations de cation permettent de réaliser des suspensions stables de nanoparticules sauf dans le cas du DOTMA. L'évolution du taux d'encapsulation (r) en fonction du rapport r (nombre de cations par phosphate) est présenté sur la figure 2 pour les 3 cations A5,ST et SP.
TABLEAU 6 N d'expérienca Cation r @(%) 18 Tétraoctyl N+ (14) 20 61,4 19 CTAB (15) 20 98 20 CTPB (P4) 20 96,7 21 Stearylamine (ST) 20 96 22 Sphingosine (SP) 20 97,5 23 DOTMAa 7 69,5f a : N-[1(2,3-dioleyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylam monium, chlorure.
f : floculation.
D'autres dérivés hydrophobes particulièrement préférés de l'invention sont constitués par des amines à chaîne grasse comportant une charge positive, à pH physiologique, et dont les chaînes hydrocarbonées comprennent notamment de 5 à 25 atomes de carbone, comme par exemple la stéarylamine, la sphingosine, ou encore par les lipides ou les phospholipides, et dont les chaînes hydrocarbonées comprennent notamment de 10 à 25 atomes de carbone comportant également une charge positive dans leur structure.
L'association du dérivé nucléotidique avec un dérivé hydrophobe chargé tel que décrit ci-dessus, se fait avantageusement, par simple mise en contact du dérivé hydrophobe, présentant une charge complémentaire de celle du dérivé nucléotidique, avec ledit dérivé nucléotidique dans des conditions permettant la formation d'une liaison du type électrostatique entre ces deux dérivés.
Cette dernière solution représente une variante préférée du procédé de préparation des compositions de l'invention. En effet, l'établissement d'une simple liaison électrostatique entre le dérivé hydrophobe et le dérivé nucléotidique ne modifie en rien les propriétés structurelles et fonctionnelles de ce dernier, à la différence d'une liaison de covalence qui risque de modifier les propriétés sus-mentionnées et par conséquent d'altérer les effets thérapeutiques et/ou de diagnostic desdits dérivés nucléosidiques ou nucléotidiques.
Dans le cadre de cette variante préférée du procédé de l'invention, l'étape de mise en contact du dérivé nucléotidique avec le dérivé hydrophobe sous forme ionique, est avantageusement réalisée de manière à ce que le rapport charge du dérivé hydrophobe r= charge du dérivé nucléotidique, soit compris entre 1 et 200, de préférence entre 10 et 50.
L'invention a également pour objet un procédé de préparation de ces compositions comprenant principalement les étapes suivantes - le cas échéant, la mise en contact du dérivé nucléotidique avec un dérivé hydrophobe, de préférence chargé, lorsque ledit dérivé nucléotidique est hydrophile et chargé, dans des conditions, telles que décrites ci-dessus, autorisant la formation d'une liaison entre eux, étant entendu que l'expression "liaison" s'entend comme le résultat d'une affinité mutuelle, notamment chimique (par exemple résultant d'un couplage), ou physique (complexation par exemple) ou électrostatique, - l'incorporation du composé constitué du dérivé nucléotidique lié, le cas échéant, au dérivé hydrophobe sus-mentionné, dans le vecteur de transport, par interpénétration mutuelle mécanique, notamment par encapsulation, ou encore par adsorption de l'un dans l'autre.
Dans le cas de l'utilisation d'un vecteur de transport de nature polymérique, l'étape d'encapsulation du composé constitué du dérivé nucléotidique lié, le cas échéant, au dérivé hydrophobe, dans ce vecteur est réalisée - soit par mise en présence dudit composé avec les unités monomères du vecteur suivie d'une étape de polymérisation dudit vecteur englobant alors ledit compose, - soit au cours même de la polymérisation, c'est-à-dire après le démarrage de la polymérisation mais avant l'achèvement de celle-ci, - soit par mise en présence dudit composé avec le vecteur sous forme polymérisée, des lors que l'on peut régler les conditions de cette mise en présence de manière à permettre une rétention physique (ou une adsorption) suffisamment forte dudit composé sur le polymère, pour que le composé adsorbé ou retenu sur le polymère puisse atteindre en même temps que ce dernier les cellules cibles.
Des conditions optimales dans lesquelles l'encapsulation dudit composé dans des particules submicroscopiques, notamment dans des nanoparticules d'alkylcyanoacrylate telles que les nanoparticules d'isobutylcyanoacrylate, peut être réalisée, sont plus particulièrement décrites dans le brevet européen 064967 sus-mentionné, ainsi que dans la description détaillée qui suit.
Ainsi, l'invention a plus particulièrement pour objet un procédé de préparation d'une composition telle que décrite ci-dessus, qui comprend l'ajout sous agitation, du composé lié, le cas échéant, à un dérivé hydrophobe, à une solution comprenant un polymère du type sus-mentionné, soit sous forme monomère, soit en cours de polymérisation, soit sous forme polymérisée.
I1 peut être davantage précisé que dans le cadre de l'utilisation des nanoparticules sus-mentionnées, l'étape d'encapsulation desdits composés se fera avantageusement en solution à un pH physiologique voisin de 7, et à des concentrations en NaCl (0,15 M) proches des concentrations salines physiologiques.
L'adsorption desdits composés aux protéines plasmatiques, notamment aux lipoprotéines, se fait avantageusement dans les conditions semblables à celles énoncées ci-dessus.
L'invention a également pour objet un procédé de préparation comprenant une étape d'adsorption desdits composés (constitués de dérivés nucléotidiques associés, le cas échéant, à un dérivé hydrophobe), à des protéines plasmatiques notamment des lipoprotéines, suivie d'une étape d'encapsulation du complexe précédemment obtenu dans des particules polymériques, notamment dans des nanoparticules telles que définies ci-dessus.
L'invention a également pour objet des compositions pharmaceutiques comprenant au moins une des compositions sus-mentionnées en association avec un véhicule physiologiquement acceptable.
De telles compositions pharmaceutiques sont plus particulièrement destinées au traitement de maladies d'origine virale (notamment du SIDA), bactérienne, parasitaire, ou tumorale ou de toute autre pathologie liée à une modification du génome d'un individu Les dosages et les voies d'administration de ces compositions peuvent varier selon le type d'infection devant être traitée.
Dans le cas le plus général, les compositions pharmaceutiques de l'invention se présentent sous forme de préparations injectables en association avec un liquide pharmaceutiquement acceptable, à pH physiologique.
L'invention a également pour objet une méthode de transfection cellulaire comprenant la mise en contact d'une composition selon l'invention comprenant un dérivé nucléotidique déterminé, notamment un ou plusieurs gènes déterminés, avec des cellules pour permettre l'internalisation du dérivé nucléotidique sus-mentionné dans lesdites cellules.
L'invention concerne plus particulièrement une méthode de transfection telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit dérivé nucléotidique déterminé comprend une séquence nucléotidique. codant pour un polypeptide déterminé, et, le cas échéant, des éléments de régulation permettant l'expression de ce fragment d'acide nucléique dans la cellule hôte, notamment un promoteur reconnu par les polymérases de ladite cellule hôte. L'obtention du polypeptide déterminé se fait par mise en culture des cellules hôtes transformées dans un milieu de culture approprié, suivie de la récupération du polypeptide déterminé à partir de ces cellules ou du milieu de culture.
Par dérivés nucléotidiques d'intérêt thérapeutiqué ou clinique entrant dans la constitution des compositions de l'Tinvention, on entend plus particulièrement tout dérivé susceptible soit d'être directement actif contre une maladie déterminée, soit de permettre la mise en oeuvre d'une méthode de diagnostic in vitro de cette maladie.
Parmi ces dérivés nucléotidiques, on distingue en premier lieu les dérivés mononucléotidiques constitués d'un nucléotide naturel ou modifié et comportant dans leur structure un, deux ou trois groupes phosphates.
Les dérivés oligonucléotidiques, dits "antisens" sont susceptibles de reconnaitre spécifiquement une séquence d'ADN ou d'ARN (ou séquence cible), représentative d'une pathologie déterminée et/ou directement liée au processus du développement de cette pathologie. Ces dérivés antisens comprennent généralement dans leur structure une séquence complémentaire de la séquence cible.
Ces séquences cibles d'ADN, ou d'ARN, ainsi reconnues, sont soit des séquences endogènes (ou encore naturellement presentes dans le génome humain ou animal), soit des séquences exogènes (ou encore n'appartenant pas au génome humain ou animal d'origine, mais provenant de l'extérieur, notamment par l'intermédiaire de bactéries, de parasites, ou de virus).
D'une manière générale, les dérivés d'intérêt thérapeutique compris dans les compositions de l'invention se fixent aux séquences sus-mentionnées de manière à inhiber le processus de développement d'une maladie déterminée provoquée lors de l'expression de cette séquence. En d'autres termes, ils sont actifs par "blocage sélectif" de l'expression d'un gène dont le produit d'expression est responsable d'une maladie déterminée.
Par blocage sélectif, on entend aussi bien le blocage d'une séquence impliquée dans l'initiation, la propagation, ou la terminaison de la réplication d'un gène, lors de la transcription d'un, ou de plusieurs gènes, et/ou de la maturation ou de la traduction des ARN messagers correspondants.
I1 peut s'agir également d'une action de protection qui rend la séquence "bloquée" inaccessible pour une protéine, une enzyme ou un composé chimique par exemple.
Les dérivés d'intérêt clinique compris dans les compositions de z invention sont généralement des sondes nucléotidiques susceptibles de s'hybrider spécifiquement dans des conditions déterminées avec des séquences d'ADN ou d'ARN spécifiques d'un virus, d'une bacterie ou d'un parasite, suite à une infection d'un individu, ou d'un animal, ou encore à une pathologie issue d'un dérèglement du fonctionnement de certains génies d'un individu (par exemple tumeurs, pathologies liées à des dérèglements hormonaux et/ou enzymatiques).
D'une manière générale, les dérivés nucléotidiques (comportant généralement de 1 à 50 nucléotides, et de préférence de 12 à 20 nucléotides) ou polynucléotidiques en simple et en double brins (comportant généralement de 102 à 109 nucléotides, et de préférence 500 à 20.000 nucléotides) utilisés dans le cadre de la présente invention, même s'ils comportent certaines modifications, sont de préférence hydrophiles et comportent des charges, plus particulièrement des charges négatives.
Les dérivés nucléotidiques naturels sont plus avantageux à utiliser dans le cadre de la présente invention, compte tenu de leur simplicité d'obtention et de leur faible prix de revient, que les dérivés nucléotidiques modifiés qui risquent, pour certains d'entre eux, de ne pas s'hybrider correctement avec la séquence cible.
A titre d'exemples, de dérivés mononucléotidiques particulièrement intéressants dans le cadre de la présente invention, on peut citer ceux décrits dans l'article de ROBINS et al précédemment cité.
Parmi les oligonucléotides et polynucléotides particulièrement intéressants à utiliser dans cette invention, on citera, notamment ceux à activité antitumorale (notamment par blocage des oncogènes) ou à activité antivirale, ou antiparasitaire, sous forme chargée, tels que décrits dans le brevet français n 84.11795, et dans l'article d'AGRAWAL et al susmentionnés.
Les vecteurs de transport sus-mentionnés sont de préférence biocompatibles et biodégradables, hydrophobes et de nature polymérique ou protéique.