INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Dans les liposomes,la distribution des phospholipides entre la couche externe et la couche interne est une distribution asymetrique.La couche externe a une plus grande densité de lipides chargés.Dans des membranes d'ovolecitihines additionnées de dipalmitoyl phosphatidylcholine ou de diarachidonyl phosphatidylcholines,l'espèce la plus insaturée se localise de preference sur la face externe.Ce fait est dû à l'impossibilité,pour l'acide gras insaturé,de se tasser aussi fortement que l'acide gras saturé.Neanmoins,dans un melange de phosphatidylcholine et de sphingomyeline,cette dernière se localise plutôt sur la face externe.
En presence de cholesterol,la composition des deux couches est semblable.Si le rapport molaire cholesterol/phospholipide est superieur à 0.3,le cholesterol est de preference sur la face interne.Il faut noter que la presence de cholesterol associé aux phospholipides donne aux liposomes une grande stabilité dans le temps,même à sec (ce qui est le cas des dispositifs etudiés ici).
Le but de la presente invention est (Figure 2) d'integrer une proteine reactive R1 (ex : un recepteur) au feuillet superieur (ou feuillet externe dans les cas de liposomes) et un reactif R2 (ex: Proteine G) au feuillet inferieur,de les installer en etat fonctionnel afin que le contact de la substance recherchée (ex :: un ligand) avec R1 declenche via R2 une cascade de reactions chimiques en (C).Mais ceci est une schematisation rapide necessitée pour une description la plus claire possible du procédé.En fait si RI est un recepteur,il doit toujours être en position transmembranaire (traverse les deux feuillets),presenter l'extremité N-terminale (extra-cytoplas mique) au ligand,et plonger l'extremité C-terminale dans la zone cytoplasmique (C) tandis que la proteine G est accrochée à la face inferieure du feuillet inferieur (ou interne dans le cas des liposomes) au voisinage du recepteur.Un effecteur enzymatique reagissant à l'activation de R2 est libre ou fixe en position transmembranaire mais tous les autres reactifs de (C) sont libres.
ll faut donc installer en (C) sous la membrane (B) tous les elements concernés par cette cascade de reactions,mais,à l'etat inactivé.C'est le contact ligand-recepteur qui activera l'un après l'autre ces differents elements.
EXEMPLE DE PREPARATION DE MEMBRANES (B! ET DE LA ZONE (C) La preparation de cet etage comprend deux etapes: 1 - Production des molecules de recepteur.
2 - Incorporation de ces molecules aux solutions proteolipidiques soigneusement equilibrées dans leur composition pour respecter les conditions de fonctionnement des recepteurs.
3 - Preparation de la zone (C) : tous les composants inactifs destinés à être activés par le contact ligand-recepteur pour emettre finalement un signal en (t)).
MEMBRANE INTéGRANT UN RECEPTEUR DE L'EPIDERMAL GROWTH FACTOR POUR LE DOSAGE DE L'EGF Le facteur de croissance epidermique (EGF) est un polypeptide mitogènique pour de nombreux types cellulaires,composé de 53 acides aminés avec un poids moleculaire de 6045 daltons.fl est synthetisé dans de nombreux organes sous la forme d'une proteine precurseur (1217 acides aminés) de haut poids moleculaire qui subit un phenomène de maturation pour donner la forme active du mitogène.Des fibroblastes transformés par des retrovirus ou par des carcinogènes,secrètent un autre facteur,le TGF (Transforming growth factorocb qui a la particularité de se fixer sur le recepteur de l'EGF.Des etudes recentes ont decrit leur presence dans les cellules tumorales humaines qui ont une capacité à les produire et à repondre à leur propres facteurs de croissance,ce qui leur permet d'acquerir une certaine autonomie de croissance et constitue un lien entre facteurs de croissance et oncogènes.Certains oncogènes permettent aux cellules de proliferer independemment de la presence de'facteurs de croissance,non seulement en codant pour des facteurs autocrines ou leurs recepteurs,mais aussi en amplifiant les signaux mitogeniques provoqués par la liaison du facteur de croissance sur son recepteur membranaire.
Le recepteur de l'EGF comporte une seule chaine polypeptide de 1186 residus acides aminés, avec 621 residus extracellulaires,23 (hydrophobes) transmembranaires.La sequence Nterminale extracellulaire est glycosylée,riche en residus cysteyls et comporte le site de liaison de l'EGF.Une sequence en heIice- traverse la bicouche lipidique.L'extremité C-terminale intracelulaire porte les sites Tyrosine-kinase: dès le contact EGF avec son recepteur,dans les cellules normales,le residu Lys 721 capte le troisième Phosphate de l'ATP et le dirige vers le residu Tyrosine 1173 qui est ainsi autophosphorylé.Cette autophosphorylation maintient une ativité enzymatique elevée (en activant des cascades de reactions) qui ne necessite pas la presence continue del'EGF.De plus,l'exposition à l'EGF,conduit à une rapide oligomerisation des molecules de recepteurs (Cochet et al. - J.Biol.Chem.263,3290-3295.1988).D'après Yarden et Schlesinger (Biochemistery 26; ;1434-1451.1987) cette oligomerisation allosterique explique l'activation du site Tyrosine Kinase.Dans les cellules intactes,ce recepteur est soumis à une regulation fine qui met enjeu plusieurs types de phosphorylations et modulent son expression.C'est ainsi qu'une des consequences de l'activation du site tyrosine kinase d'un recepteur,est l'activation de la proteine kinase C cytoplasmique qui vient phosphoryler le residu intracytoplasmique Threonine 654 situé à 10 acides aminés du domaine transmembranaire,entrainant l'internalisation de l'ensemble EGF+recepteur,leur degradation et leur recyclage,et surtout la disparition de toute affinité de l'EGF pour les recepteurs encore libres (Hunter et al.Nature 311,480483 - 1985).Une elegante etude menée par Lin et al. (1986 - Cell 44,839-848) decrit les consequences d'une mutation ponctuelle experimentale de ce site Threonine 654 : l'ensemble EGF-recepteur est internalisé mais pas degradé.Ce qui prouve qu'au moins deux mecanismes independants interviennent dans la perte du signal normalement induit par l'EGF ainsi que dans l'internalisation + degradation de l'ensemble EGF+recepteur.
La transduction du signal mitogenique induit par la liaison de l'EGF à son recepteur se traduit donc par l'activation de nombreuses fonctions cellulaires qui requièrent au prealable l'integralité de l'ativité tyrosine kinase du recepteur,mais qui assurent surtout,cette fine regulation de l'activité cellulaire,avec la possibilité d'inhiber en temps voulu,l'action de l'EGF.Des etudes recentes permettent d'envisager un rôle du recepteur à l'EGF et de ses ligands (EGF,TGFd+ss) dans le developpement de certaines tumeurs humaines,par disparition de cette fine regulation à differents niveaux (par ex : le signal de l'EGF n'est plus inhibé : soit par la non-phosphorylation du site Threonine 654 qui aurait subi un dommage,soit par l'absence de Proteine Kinase C activée intracytoplasmique et donc la non-phosphorylation du residu Thr 654,soit par l'action d'un oncogène dont le produit serait un recepteur ne fonctionnant que dans un sens : insensible à toute inhibition,et donc repondant à toute stimulation des facteurs EGF ou TGF eux-mêmes produits d'ailleurs en excès par les cellules neoplasiques.) Mecanisme de transduction du signal induit par le contact EGF-recepteur: Dimerisation ou oligomerisation des molecules de recepteur - > Activation de leur site Tyrosine Kinase - > Transformation en GTP du GDP lié à la sous-unité K de la proteine Gp - > mobilisation de ce complexe GTP+sous-unité avers la sous-unité catalytique de la Phospholipase C pour sensibiliser (par phosphorylation) cette dernière au calcium - > Activation,en presence d'ATP de cette phospholipase C selective du PIP2 (Phosphatidylinositol 4,5 Diphosphate) lui même issu de Ia phosphorylation du Phosphatidyllnositol (provenant des phospholipides du feuillet interne de la membrane plasmique) - > Production de DAG (diacylglycerol) et de IP3 (Inositol 1,4,5 triphosphate : responsable du passage massif et rapide (quelques secondes) du Ca++ du reticulum sarcoplasmique vers le cytoplasme,y faisant brusquement passer la concentration en Ca++ de 0.1 MM à 1 mM.
Le mecanisme d'expulsion du Ca++ hors du reticulum sarcoplasmique (où sa concentration est de 1 mM) est le suivant : l'lP3 entre en contact avec une proteine tetramerique (4 sous-unités de 400 kDa chacune - 5037 acides aminés dont la sequence est connue depuis Takeshima et al.en 1989 : Nature 339:439445) de la membrane du reticulum sarcoplasmique.Cette proteine change alors de conformation et se comporte très rapidement comme un canal permettant un efflux de Ca++ hors du reticulum sarcoplasmique (Agnew 1988 :Nature 334 : 299-300) A la lumière de ce rappel,le procédé proposé ici pour le dosage de l'EGF est le suivant: (Figure No ) 1 - Mise en contact de l'EGF de l'echantillon avec son recepteur R1 inseré dans la membrane (B).L'activation du site Tyrosine Kinase active une proteine Gp (R2) en presence d'ATP,laquelle active une phospholipase C toujours en presence d'ATP.Cette phospholipase activée hydrolyse en (C) le PIP2 en DAG et IP3.
2 - L'IP3 agit sur la proteine-canal tetramerique extraite de reticulum sarcoplasmique et inserée dans la bicouche d'un liposome (RS) renfermant du Ca++ en solution: ouverture de ce canal et efflux de Ca++ hors du liposome 3 - Revelation de ce Ca++ par une sonde chromogène sensible au Ca++ ou par fluorescence,etc..
Le recepteur est obtenu par les techniques de genie genetique: a - en faisant exprimer l'ADNc ou le gène dans un système d'expression,soit par injec tion de l'ARN correspondant dans des oocytes de xénope,soit par transfection dans des cellules eucaryotes (par exemple des cellules L ou des cellules de hamster chinois: Chinese Hamster Ovary cells :CHO) ou dans des cellules eucaryotes (ex : E.Coli) b - en utilisant la similitude du produit de certains oncogènes avec le recepteur à l'EGF. C' est cette dernière methode qui sera utilisée dans le mode operatoire de produc tion du recepteur de l'EGF.
La proteine canal tetramerique decrite par Takeshima au niveau du reticulum sarcoplasmique est obtenue plus facilement par extraction et purification à partir de cellules de muscles squelettiques d'animaux,puis inserée dans la bicouche de vesicules lipidiques.
Ces vesicules mimant le mieux possible un reticulum sarcoplasmique sont des R.E.V (Reversible Evaporation Vesicles),une variété de liposomes particulièrement solides (polymerisation des chaines d'acides gras par exposition aux U.V.) ne permettant aucune fuite de Ca++ encapsulé tant que la proteine canal n'est pas en contact avec l'IP3,et donc permettent d'eviter des faux resultats.
Le dispositif quant à lui correspond exactement aux diverses options decrites plus hautin peut se presenter par exemple sous la forme d'un empilement de membranes rondes de 10 à 15 mm de diametre,ou carrées de 15 mm de côté;ce sont de bas en haut(Figure 3): une membrane filtre (A),une membrane plane (B) avec le recepteur (R1) et les reactifs (R2) :Proteine G + GDP,la membrane MI à lyse programmée,une zone (C) contenant d'une part les reactifs activés par l'EGF (Proteine Gp,GDP,ATP,Phospholipase inactive) ainsi que des ions catalysant ces reac tions (Mg++,Ca++ < 0.1,uM),et d'autre part les vesicules supportant la proteine canal et enfer- mant le Ca++ à grande concentration.L'ensemble reactifs et vesicules est melangé et deposé sur un support très poreux soigneusement preparé à l'avance (Papier Durieux No 122 par exemple) ce qui donne l'aspect d'une epaisse membrane (100 u d'epaisseur).Sur la face opposée à celle du depôt,un film (M2) d'acrylique copolymère (obtenu par depôt de 15 fi d'acrylique en solution alcoolique puis seché) aura été deposé avant le depot sur l'autre face,du melange reactifs+vesicules.Ce film acrylique (M2) sera temporairement impermeable (30 sec à 2 minutes selon la concentration en acrylique) pour laisser le temps aux diverses reactions de s'accomplir.
Cet inconvénient réside dans la difficulté de séparer les particules entraînées dans La veine gazeuse en sortie du sécheur ou du four d'incinération pour rejeter dans le milieu naturel un gaz propre.
Plusieurs équipements existent à L'heure actuelle dans l'industrie pour réaliser cette fonction.
Il s'agit par exemple de cyclones, de filtres à manches, de laveurs.
Malheureusement, de nombreux inconvénients sont répertoriés.
En effet, il est Le plus souvent impératif de refroidir les gaz de sortie de l'incinérateur avant traitement pour éviter tout risque de dégradation du matériel.
Les équipements qui ont le meilleur pouvoir de séparation ne fonctionnent hélas qu'avec des gaz faiblement chargés.
Ainsi d'une façon générale, les équipements de séparation actuels ont des domaines d'application relativement limités, soit par la concentration en poussière, soit par la température maximale du gaz à traiter.
D'autre part, après avoir obtenu une séparation des particuLes entraînées par le gaz, il est nécessaire de les recueillir. Or, les organes de recueil des particules disposés en pied de cyclone ou de filtre à manches, tels que des vis sans fin ou des écluses par exemple, posent des problèmes d'étanchéité.
L'étanchéité est encore pLus difficile à obtenir lorsque les particules sont chaudes pour des questions de tenue en température des joints par exemple.
Le problème d'étanchéité se complique souvent au niveau de l'opération d'évacuation du contenu des particules.
Lorsqu'il s'agit de déchets issus de l'industrie nucléaire, les particules doivent obligatoirement être enrobées.
Les techniques de conditionnement existantes emploient comme enrobant du béton, du bitume ou des polymères. Or, le plus souvent ces techniques sont mises en oeuvre par des équipements indépendants de L'équipement d'incinération. L'inconvénient de cette solution réside dans le fait qu'il est nécessaire de transférer sous confinement les particules, depuis le pied du séparateur jusqu'à l'équipement de conditionnement.
L'invention teLle qu'elle est caractérisée dans Les revendications résout le problème consistant à créer un dispositif qui permet d'obtenir La séparation des particules contenues dans un gaz issues d'un sécheur ou d'un incinérateur, quelle que soit la température des gaz, et qui réalise en outre la récupération et le conditionnement des particules en continu.
La présente invention a plus particulièrement pour objet un dispositif de séparation et de conditionnement de particules contenues dans un gaz, caractérisé en ce qu'il comporte une enceinte munie d'une entrée pour le gaz chargé de particules, disposée de sorte que le gaz tourbillonne à l'intérieur de l'enceinte, les particules étant plaquées par effet centrifuge contre la paroi interne de L'enceinte et caractérisé en ce que L'enceinte comporte, dans sa partie supérieure, une rigole remplie d'un fluide visqueux qui s'écoule le long de cette paroi interne en entraînant les particules vers la partie inférieure, laquelle est pourvue d'un orifice d'évacuation du fluide chargé des particules.
Selon un autre aspect de l'invention, le dispositif comporte en outre une enceinte de conditionnement placée sous l'orifice d'évacuation de l'enceinte permettant ainsi de récupérer en continu le fluide dans lequel les particules ont été piégées.
Lors de l'injection du mélange de poudres dans le faisceau 1, l'alliage de titane injecté est entièrement fondu et une partie de la surface des grains de carbure de titane est fondue et dissoute dans le bain liquide.
Lors de la solidification et du refroidissement du dépôt qui s'opèrent rapidement, on obtient un mélange homogène constitué d'une matrice métallique d'alliage de titane contenant d'une part les grains initiaux de carbure de titane partiellement affectées par la fusion et d'autre part un réseau secondaire très fin de précipités de carbure de titane qui se forme à partir du bain liquide et qui assure un durcissement de la matrice.
En continu avec l'injection de poudres, on peut réaliser un apport gazeux en azote projeté par des orifices 9 dans la zone de solidification du dépôt en arrière de la zone d'interaction 5 où se trouve le bain fondu.
Cet apport en azote permet une nitruration en surface assurant un durcissement superficiel supplémentaire de la matrice métallique.
PHARE D'AUTOMOBILE DU TYPE PROJECTEUR D'ASPECT AMELIORÉ
La présente invention concerne un phare d'automobile du type projecteur employant un ensemble formant lampe du type projecteur. Récemment sont venus en usage courant des phares du type projecteur utilisant un ensemble formant lampe du type projecteur dans lequel le faisceau de lumière émis d'une source lumineuse (ampoule) passe à travers une lentille de projection, à savoir, une lentille convexe Cette disposition est avantageuse du fait de la-quantité de lumière émise, plus grande que dans un phare du type réflecteur dans lequel le faisceau de lumière émis de la source lumineuse a la forme d'un faisceau lumineux parallèle utilisant
un réflecteur.
Comme représenté sur la figure 8, dans un phare connu de ce type général, un ensemble 3 formant lampe de type projecteur est disposé dans une chambre de lampe S définie par un corps de lampe 1 et une lentille 2 Sur la figure 8, le repère 4 désigne un couvercle de lampe de type projecteur, présentant une surface 4 a qui réfléchit la lumière le couvercle 4 de la lampe de type projecteur présente une ouverture 5 dans laquelle est insérée la lentille de projection 3 a de l'ensemble 3 formant lampe de
type projecteur.
Dans le cas du phare conventionnel décrit ci-dessus, la surface 4 a qui réfléchit la lumière réfléchit la lumière extérieure, mais la lentille de projection 3 a ne réfléchit que rarement la Lumière extérieure Par conséquent, lorsque la lampe est allumée, un observateur qui se tient à l'avant du véhicule verra un anneau relativement sombre dans la lampe; c'est-à-dire que Le jeu 6 entre la périphérie de l'ouverture 5 et l'ensemble 3 formant lampe du type projecteur apparatt sous forme d'un anneau sombre, comme représenté en hachuré sur la figure 9 Par ailleurs, du fait que le couvercle 4 de la lampe vient substantie L Lement affleurer avec la lentille de projection 3 a, la Lampe apparaît de peu de profondeur, ou relativement plate, et ceci est d'un
aspect plutôt peu attractif.
Au vu de ce qui précède, un but de l'invention est de proposer un phare d'automobile employant un ensemble formant lampe du type projecteur qui ait un excellent aspect extérieur, la zone située autour de l'ensemble formant lampe du type projecteur
ayant une apparence améliorée.
On a atteint les buts ci-dessus, ainsi que d'autres, de l'invention au moyen d'un phare d'automobile dans lequel un couvercle de lampe du type projecteur, présentant une surface qui réfléchit la lumière, est disposé dans une chambre de lampe définie par un corps de lampe et par une lentille, et dans lequel un ensemble formant lampe du type projecteur est inséré dans une ouverture formée dans le couvercle de la lampe, dans lequel, selon l'invention, l'ensemble formant lampe du type projecteur vient en saillie, depuis l'ouverture, en direction de la lentille, et dans lequel la surface extérieure d'un porte-lentille qui porte la lentille de projection de l'ensemble formant lampe du type
projecteur est une surface qui réfléchit la lumière.
2 - Associer aux composants des etages superieurs du dispositif,la collagenase à 0.2 % (2 mg/ ml) referencée plus haut.Dès qu'elle est solubilisée,elle degrade le collagène en 30 secondes et la membrane qui supportait le collagène devient permeable par lyse Il est possible d'allonger ou de raccourcir le delai de permeabilisation en diminuant ou en augmentant la concentration de collagenase.
Ces differents exemples de membranes à lyse programmée ne sont pas limitatifs et ont simplement pour but de donner un aperçu des moyens mis en oeuvre pour retarder l'ecoulement de l'echantillon à travers le dispositif.
PREPARATION DES MEMBRANES (B1 et B2) ET DE LA ZONE (C) CONSIDERATIONS GENERALES ll existe plusieurs categories de recepteurs transmembranaires (excluant les recepteurs intracytoplasmique des steroides): 1 - Les recepteurs monomeriques,peptides presentant sept domaines intramembranaires et associés à une proteine G à fonction GTPasique,elle même associée à un effecteur enzymatique comme l'adenylate cyclase ou la phospholipase C,ou à un canal ionique (Ca++ ou K+).Ces recepteurs sont impliqués dasn l'effet de nombreux mediateurs (noradrenaline,dopamine,serotonine) et hormones.
2 - Les recepteurs à activité tyrosine kinase : constitués d'une ou plusieurs sous-unités prteiniques transmembranaires caractérisées par la presence d'une seule helice ~ transmembranaire.La ou les extremités proteiniques intracellulaires sont caracterisées par un site enzymatique qui acquiert une activité Tyrosine Kinase dès que le ligand entre en contact avec le recepteur,aboutissant à l'activation d'une phospholipase C specifique du glycosyl-phosphatidyl inositol .Ce groupe comprend les recepteurs à l'insuline,à l'interleukine 4,au TGF (facteur de croissance des tumeurs),au PDGF (facteur de croissance des plaquettes) et à l'EGF qui a acquis ces derniers temps une importance dans le diagnostic et le suivi de cancers.
3 - Un groupe heterogène de recepteurs membranaires comportant aussi une seule helice > e transmembranaire.Il comprend: - des proteines de la superfamile des immunoglobulines (recepteur des interleukine 1 et 6,recepteur Fc des Immunoglobuliones G et E (Fc~RI),le recepteur des antigènes au niveau des lymphocytes et des proteines du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) - des proteines de la superfamille des lectines avec notemment les recepteurs assurant l'endocytose des glycoproteines et le recepteur à basse affinité pour les IgE (Fc RII) - des recepteurs divers à une helice et transmembranaire comme le recepteur du facteur de croissance des nerfs (NGF) et le recepteur assurant l'endocytose des lipoproteines (LDL) 4 - Les recepteurs polymeriques incluant un canal ionique,constitués de plusieurs peptides etroitement associés presentant eux-mêmes plusieurs domaines transmembranaires.La liaison à l'agoniste (ligand) entraine une legère modification de la conformation de cet ensemble transmembranaire permettant le passage selectif d'ions dans le sens de leur gradient electrochimique.Ces recepteurs sont selectifs de certains neuromediateurs comme l'acetylcholine,l'acide gamma-amino-butyrique (GABA) ,le glutamate et la glycine.
Le but de la presente invention est d'utiliser ces recepteurs pour doser les ligands correspondants recherchés dans l'echantillon ou d'utiliser des ligands pour doser les recepteurs circulants contenus dans l'echantillon.Ceci est devenu d'une grande importance depuis que la biologie moleculaire a prouvé que de nombreux oncogènes codent pour des recepteurs membranaires des facteurs de croissance collaborant ainsi au processus de croissance anarchique.Ainsi le produit des oncogènes HERS2/neu ou v-erb B est identique au recepteur de l'EGF.Les produits des oncogènes v-fms et c-kit sont proches du recepteur du PDGF (facteur de croissance des plaquettes).Le produit de l'oncogène viral fms est un recepteur du facteur de croissance des macrophages (facteur CSF-1) - (Revue Yarden et Ullrich,1988).
Une fraction importante de ces recepteurs se retrouve dans le sang circulant (après lyse des cellules par exemple) et il est possible de les doser.Il existe dejà des dosages de marqueurs tumoraux qui sont en fait des proteines membranaires de cellules neoplasiques (CA 15-5 pour le cancer du sein, CA 19-9 pour le pancreas,CEA pour le colon,AFP pour le foie,etc..).Mais les quantités circulantes sont si faibles que les techniques actuelles de dosage (immunologiques essentiellement) ne peuvent deceler un processus debutant.L'interet du procédé objet de la presente invention est donc de substituer au dosage du recepteur lui même (pratiquement impossible),le dosage d'un produit final activé après une cascade d'amplifications telles que ce produit devient dosable,proportionnel au taux de recepteur recherché.