INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le cadre ouvert de lecture code pour une protéine de 155 amino acides avec une Mr calculée de 16700 + 10%. Cette protéine (NPDK) est complètement dépourvue de résidus cystéine.
Sa taille et sa composition en acides aminés sont analogues à celles rapportées pour les monomères de NDP kinase de levures ou de foie de rat obtenus par extraction (14).
La protéine de Dictyostelium exprimée chez E.coli est très basique (pI calculé : 9,15) et contient un fragment hydrophobe (résidus 64 à 84).
IDENTIFICATION DE L'ACTIVITE NUCLEOSIDE DIPHOSPHATE KINASE DANS DES EXTRAITS BACTERIENS Afin de caractériser les propriétés biochimiques de la protéine NDPK, on a construit le plasmide pNDK exprimant la protéine dans E.coli.
Après incubation des extraits bactériens avec 1OnM de C35S] GTPaS comme décrit dans la partie expérimentale, on observe un transfert covalent de [35S] aux protéines qui est dépendant de l'induction du promoteur lac par IPTG.
Les extraits de bactéries recombinantes montrent une incorporation thiophosphate proportionnelle au temps d'incubation jusqu'à 5 min à 15 C tandis que les extraits témoins (bactéries transformées avec le plasmide ne contenant pas d'insert) incorporent seulement des traces de [S35].
La formation d'ADP résultant du transfert de phosphates de 1'ATP à la dTDP démontre la présence d'une activité NDP kinase. Cette activité est fortement augmentée dans les extraits des bactéries exprimant la NDP kinase comparés aux extraits témoins.
ANALYSE SDS-PAGE DE L'INCORPORATION DE rS351 Pour caractériser la cible du marquage avec [353) dans les extraits bactériens, on réalise le SDS-PAGE avec des extraits préalablement incubés avec (35S] GTPaSN comme décrit plus haut. Une seule bande marquée de Mr correspondant à la NDP kinase est détectée dans les extraits de bactéries recombinantes. Elle correspond vraisemblablement à la formation de l'intermédiaire phospho-enzyme durant la réaction de la NDP kinase, expliquant pourquoi les clones ont été isolés par marquage avec [35S]GTPγS directement sur les répliques de filtre de la banque d'expression.
L'enzyme est purifiée à homogénéité en deux étapes. La suspension bactérienne est lavée par centrifugation. Le culot est repris dans 1 du volume 25 de la suspension initiale de tampon A : Tris 50 mM pH 8,5 contenant 20 mM de MgC12 et 1 mM de EDTA et les cellules sont cassées par sonication. Les débris bactériens sont éliminés par centrifugation et le surnageant est déposé sur une colonne de DEAE Sephacel (Pharmacia). L'éluat est recueilli et déposé sur une colonne de résine Affigel-Blue (BioRad) rincée ensuite par 2 volumes de colonne de tampon A. La colonne est éluée par un gradient continu de NaCl, de 0 à 1 M NaCl. Le pic d'activité NDP kinase correspond à une seule bande protéique selon analyse sur gel de polyacrylamide à 12% - SDS coloré au nitrate d'argent.
La composition globale en acides aminés correspond exactement à celle de la séquence d'acides aminés représentée sur la figure 2.
Dans le mode de réalisation de la figure 5, le dispositif de commande de commutation 29 et les dispositifs commutateurs 25 et 30 assurent la commutation des signaux de commande envoyés sur les entrées de commande 21, 22 et 23 des interrupteurs analogiques 17, 18 et 19. La figure 7 représente un autre mode de réalisation, dans lequel le dispositif de commande de commutation 29 et les dispositifs commutateurs 25 et 30 assurent directement la commutation des signaux générateurs de sons en sortie des interrupteurs analogiques 17, 18 et 19. L'effet de commutation est équivalent à celui obtenu dans le mode de réalisation de la figure 5. Toutefois, dans ce mode de réalisation de la figure 7, il s' avère que la commutation peut être effectuée par des circuits relativement plus simples.Ainsi, les dispositifs commutateurs 25 et 30 peuvent être réalisés chacun sous forme de relais à contacts repostravail, de tels relais étant parfaitement capables de commuter la puissance de sortie des interrupteurs analogiques. Les autres parties du dispositif représenté sur la figure 7 sont identiques à celles du dispositif de la figure 5, de sorte qu'il ntest pas nécessaire de reprendre la description en détail.
Le dispositif 29 de commande de commutation doit permettre, selon l'invention, de commander la commutation à un instant bien défini dans lequel le point de localisation apparent de source sonore est dans une zone déterminée dans laquelle les deux transducteurs électroacousti- ques devant être commutés reçoivent des signaux d'amplitudes égales. Les instants de commutation ont été définis précédemment, en relation avec les phases du procédé.
Dans un premier mode de réalisation, le dispositif de commande de commutation 29 comprend un moyen de temporisation de durée T, dont le début de comptage de durée T commence lorsqu'est détecté un état particulier des quatre signaux de commande de répartition et qui produit à la fin du comptage de durée T un signal autorisant la commutation au prochain instant défini dans lequel le point de localisation apparent de source sonore est dans ladite zone déterminée. Par exemple, le comptage de durée T commence lors d'une première transition, et le dispositif de commande de commutation 29 autorise une transition suivante après la durée T. Dans ce cas, le dispositif 29 de commande de commutation comprend un générateur très basses fréquences, autorisant une transition toutes les T secondes.La transition suivante n'intervient pas immédiatement après les T secondes, mais ne se produit que lorsque le point de localisation apparent de source sonore atteint la zone dans laquelle peut se produire la transition. Dans les cas où le déplacement du point de localisation apparent de source sonore dépend de paramètres variables tels que l'amplitude des signaux électriques générateurs de sons, on produit ainsi une transition à des instants aléatoires qui dépendent en partie des signaux électriques générateurs de sons reçus sur l'entrée 15.
Selon un autre mode de réalisation, le dispositif 29 de commande de commutation comprend un moyen de comptage recevant lui-même les signaux produits par un moyen de détection 33. Le moyen de détection 33 produit un signal de détection chaque fois que les quatre signaux de commande de répartition produits par le dispositif 24 générateur de signaux de commande de répartition sont dans un état particulier correspondant à une position remarquable du point de localisation apparent de source sonore. Le moyen de comptage compte lesdits signaux de détection et produit un signal de commutation lorsque N signaux de détection ont été reçus.
Selon un autre mode de réalisation, le dispositif 29 de commande de commutation comprend un moyen de comptage recevant lui-même les signaux produits par un second moyen de détection 34. Le second moyen de détection 34 produit un signal de détection chaque fois que l'amplitude des signaux électriques générateurs de sons reçus sur l'entrée 15 dépassent leur valeur moyenne. Le moyen de comptage compte lesdits signaux de détection, et produit un signal de commutation lorsque M signaux de détection ont été reçus. Par exemple, sur la figure 4, on a représenté la variation temporelle VM d'un signal générateur de sons présent sur l'entrée 15, avec une commande de commutation I lorsque le signal générateur de sons a atteint à deux reprises sa valeur moyenne représentée par le trait en pointilles.
Selon un autre mode de réalisation, le dispositif 34 de détection produit un signal de détection chaque fois que l'amplitude des signaux générateurs de sons reçus sur l'entrée 15 atteint un ou plusieurs seuils déterminés. Dans ce cas, le dispositif 29 de commande de commutation produit un signal de commutation à chaque réception d'un signal de détection.
Selon un autre mode de réalisation, le dispositif de commande de commutation 29 comprend un moyen de comptage recevant lui-même un signal image de déplacement produit par le dispositif générateur de signaux de commande de répartition 24, ledit moyen de comptage produisant un signal de comptage lorsque le signal image de déplacement atteint un seuil prédéterminé indiquant que le point de localisation apparent de source sonore a effectué un parcours de longueur L prédéterminée, ledit signal de comptage autorisant la production d'un signal de commutation par le dispositif de commande de commutation 29 audit instant défini dans lequel les transducteurs devant être commutés reçoivent des signaux générateurs de sons d'amplitudes égales.
Le mode de réalisation de la figure 5 correspond à la répartition d'un signal générateur de sons unique présent sur une entrée unique 15, permettant une écoute monophonique.
Pour une écoute stéréophonique. on utilise de manière similaire quatre transducteurs électroacoustiques A, B, C et D, un dispositif générateur de signaux de commande de répartition 24, un dispositif 29 de commande de commutation. Par contre, il faut disposer huit interrupteurs analogiques tels que l'interrupteur analogique 16, les quatre premiers étant connectés comme le représente la figure 5, les quatre autres étant connectés en parallèle sur les quatre premiers et étant commandés par quatre autres sorties du dispositif 24 générateur de signaux de commande de répartition.La seconde série de quatre sorties du dispositif 24 générateur de signaux de commande de répartition produit quatre signaux déphasés d'un quart de cycle les uns par rapport aux autres, cette seconde série étant déphasée d'un demi cycle par rapport à la première série de signaux issue des premières sorties du dispositif 24.
Selon l'invention, on peut également définir un plus grand nombre n de chemins suivis par le point de localisation apparent de source sonore, par exemple en prévoyant plus de quatre transducteurs électroacoustiques connectés chacun à un interrupteur analogique tel que l'interrupteur analogique 16.
Le dispositif représenté sur la figure 5 a été décrit en relation avec des transducteurs électroacoustiques tels que les transducteurs A, B, C, D permettant de sonoriser une zone d'écoute 1.
Toutefois, le même dispositif peut être utilisé pour réaliser des enregistrements sonores, par exemple une bande magnétique à n pistes, que l'on peut ensuite utiliser pour reproduire les mêmes effets sonores dans une zone d'écoute 1. Pour cela, les sorties des n interrupteurs analogiques tels que les interrupteurs 16, 17, 18 et 19 sont connectées chacune à un dispositif respectif d'enregistrement sur un support d'enregistrement tel qu'une bande magnétique ou un disque. Ainsi, à partir d'un signal générateur de sons présent sur l'entrée 15, on produit n signaux électriques que l'on enregistre sur un ou plusieurs supports d'enregistrement.Les signaux ainsi enregistrés peuvent ensuite être reproduits par n amplificateurs dont les sorties sont connectées à des transducteurs électroacoustiques tels que les transducteurs A, B, C et D, reproduisant les mêmes effets que ceux obtenus avec le dispositif de la figure 5. Ainsi, l'invention permet de réaliser des supports d'enregistrement comprenant n pistes parallèles sur lesquelles sont enregistrés les signaux de sortie du dispositif de la figure 5, et la reproduction des signaux ainsi enregistrés avec n amplificateurs permet de reproduire le mouvement du point de localisation apparent de source sonore, avec les transitions appropriées entre plusieurs chemins de déplacement.
Sur la figure 8, on a représenté de manière plus détaillée un mode de réalisation des circuits logiques de commande remplissant les fonctions du dispositif générateur de signaux de commande de répartition 24, et permettant la commande simultanée d'un dispositif générateur de signaux lumineux produisant une représentation visuelle du déplacement du point de localisation apparent de source sonore.
Dans ce mode de réalisation, un compteur numérique 40, par exemple à huit signaux binaires, compte les impulsions reçues d'un circuit d'entrée 41. Le circuit d'entrée 41 peut être de types très divers, par exemple un circuit produisant des impulsions de sortie à une fréquence proportionnelle à une tension présente sur sa borne d'entrée 39. Le compteur numérique 40 reçoit également, sur son entrée 42, un signal provenant d'un circuit logique 43 d'inversion de comptage et de traitement de comptage ; en fonction du signal présent sur son entrée 42, le compteur numérique 40 incrémente ou décrémente le comptage, ce qui produit une inversion du sens de déplacement du point de localisation apparent de source sonore.Le circuit logique 43 reçoit, pour son fonctionnement, les signaux de sortie du compteur numérique 40, et produit un signal d'inversion de comptage1 par exemple lorsque n signaux de sortie ont été reçus du compteur numérique 40.
Les signaux de sortie du compteur numérique 40- sont envoyés d'une part à un convertisseur numérique-analogique 44 et d'autre part à un dispositif 45 de répartition des signaux lumineux.
Le convertisseur 44 produit, sur sa sortie 20, un signal analogique constitué d'une suite de rampes linéaires, et ce signal est envoyé à un circuit de modulation de largeur d'impulsions 46 transformant ledit signal en rampes an un signal carré à fréquence F modulé en largeur, présent sur sa sortie 47. La largeur d'impulsion du signal présent sur la sortie 47 est proportionnelle à la valeur instantanée du signal en rampes présent sur l'entrée 20. La fréquence F est avantageusement voisine de 100 000 Hertz ou plus, pour les applications de découpage des fréquences audio habituelles. Le rapport cyclique du signal carré varie avantageusement entre 0,05 et 0,95.Le signal carré présent sur la sortie 47 est envoyé à un circuit logique 48 de distribution de signaux, recevant également les signaux provenant du circuit logique 43, pour produire sur sa sortie 49 autant de signaux de commande qu'il y a dtinterrupteurs analogiques à commander, les signaux de commande étant déphasés les uns par rapport aux autres.
On constate que toutes les fractions testées stimulent la synthèse d'ADS, généralement d'une manière fonction de la concentration.Les fractions ayant subi un traitement thermique (Fl, et Fl2) ou les fractions ayant subi une 'ultrafiltration à 500C (F9 et Fîo) se sont révelées plus efficaces que les fractions obtenues de la même manière mais non chauffées (F2 et F3).
L'examen de ces résultats montre également qu'avec (F11) et (F12), les cellules d'hybridomes ont une vitesse de croissance équivalente à celle observée avec SVF seul.
b) Cultures de fibroblastes Des fractions de lactosérum de l'invention ont été testées dans des cultures de fibroblastes humains.
Les fibroblastes sont appliqués sur des plaques de microtitrage renfermant 96 puits à la concentration de 4 x 104/puits. Ils sont synchronisés en Go/Gt par culture pendant 24 h dans un milieu RPNI 1640, lavés 2 fois et mis à incuber avec 200 ul de fractions de lactosérum diluées à tester, pendant 48 h. On ajoute 50 ul de thymidine 3H (1 xuCi/ml) pour une durée de 18 à 20 h. Les cellules sont recueillies et la radioactivité comptée.
Les résultats obtenus avec des concentrations de 58 v/Er et de 10% v/v sont rapportés sur la figure 3 . Comme pour les cultures d'hybridomes, les fractions thermisées (F11) se sont révélées plus efficaces que les fractions similaires non chauffées (F2 > L'activité mitogène des fractions (fit) a été également testée sur des cultures de fibroblastes 3T3.
Les résultats obtenus ont montré que ces fractions stimulent la synthèse d'ADN des cellules 3T3 B) PROLIFERATION DES CELLULES A LONG TERSE On indique ci-après l'effet des fractions de l'invention sur la prolifération d'hybridomes F34.
Des sous-cultures de ces hybridomes sont effectuées 2 fois par semaine. A chaque passage, les cellules viables sont comptées en utilisant un hématocymètre après coloration des cellules avec 0,5% de bleu trypan. La suspension cellulaire est diluée à une concentration de 7 x 104 cellules/ml et ensemencée à nouveau (100 microlitres) dans des plaques de microtitrage à 96 puits dans un milieu contenant des quantités croissantes de fractions de lactosérum à tester. Les cultures témoins sont supplémentées avec 10% de SVF.
Dans une autre série d'expériences, les passages des cellules d'hybridomes sont effectués directement dans un milieu contenant 9,5% de fractions de lactosérum et 0,52 de SVF.
Les cellules d'hybridomes sont soumises deux fois par semaine à des sous-cultures comme indiqué cidessus. A chaque passage, les cellules viables sont comptées et ensemencées à nouveau à une concentration de 7 x 104 cellules/ml.
On rapporte ci-après les résultats obtenus avec les fractions de lactosérum F7, Fii, F12 utilisées selon des quantités croissantes à chaque passage d'hybridomes F34 2,5 de FL (fraction de lactosérum) + 7,5 de SVF au de jour ; 5 FL * 5 SVF au 7e jour 7,5 FL - 2,5 SVF au 10e jour 9 FL i SVF au 14e jour 9,5 FL - 0,55 SVF au 18e jour.
On a représenté, sur la figure 4, le nombre de cellules d'hybridomes viables par ml en fonction du nombre de jours de culture. La ligne pleine représente le nombre de cellules ensemencées à chaque passage. Les symboles utilisés présentent les significations suivantes témoin SVF 108 ; Fï Fi i et
Fi 2.
Il ressort des résultats obtenus que les hybridomes F34 cultivés en milieus supplémentés avec des fractions de lactosérum montrent une vitesse de croissance supérieure à celle des cellules cultivées en milieux suppplémentés avec du SVF. Il a cependant été nécessaire d'ajouter 0.5% du SVF aux fractions de lactosérum afin d'éviter un dépérissement rapide des cellules. Cette expérience montre que les fractions Fl et F12 (thermisées et ultrafiltrées) sont plus efficaces que les fractions F7 (uniquement thermisées).
A l'arrêt de l'expérimentation, au 18e jour, 97% des cellules étaient viables.
La concentration en immunoglobulines sécrétées par les hybridomes a été déterminée selon la méthode Elisa en utilisant des anticorps de chèvre anti-IgG ou anti-lgM de souris et un deuxième anticorps conjugué à la peroxydase.
Sur la figure 5, on a représenté la variation de la concentration en immunoglobulines (en pg/ml) en fonction des jours de culture dans des milieus supplémentés avec 10% de SVF ou des quantités croissantes de fractions (FIl) et (F12)
Ce n'est pas le code confidentiel directement frapé par le morteur qui joue le rôle de clé de transfert (KST) . Les informations qui se trouvent dans la zone secrète et confidentielle ne doivent pas pouvoir être modifiées ni par le serveur, ni par le porteur. Or ce dernier, s'il apprenait le système utilisé dans le boltier (toujours possible) et la géographie des zones secrètes et de travail (également possible) serait à même de modifier des informations comme la valeur de ses compteurs, ou son identifiant par exemple. C'est pour cette raison que le code confiflen- tiel ne suffit pas à la gestion des registres du microcontrôleur.
Voila pourquoi KST n'est pas directement le code confidentiel, mais une information dérivée de ce code et d'une information aléatoire S, par exemple que seul le processeur connaît. Ainsi la frappe du bon code confidentiel est indispensable au bon fonctionnement de l'ensemble, mais sa connaissance n'apporte pas la maltrise des informations internes du micro-processeur.
II a été précisé que l'algorithme de sauvegarde interne des informations est un des algorithmes qui servent également à véhiculer les informations sur la ligne téléphonique. Cet algorithme peut être secret, jelousement préservé de toute publicité. On peut choisir également le GDC connu de l'homme du métier.
Les caractéristiques de fabrication du boîtier BA selon l'invention sont égarements avantageuses.
Ainsi, le boltier BA comporte (voir Figures 2 et 3) un circuit imprimé 11, 12, 13 disposé entre deux éléments de carcasse 20a, 20b du boltier et se présentant sous la forme d'un profilé en U. Les branches latérales 11, 12 dudit profilé s'étendent sensiblement perpendiculairement audits éléments de carcasse, la face Ila de l'une 11 des branches opposées à la branche centrale 13 du U supportant les pattes de raccordement PR des éléments de batterie PLl et PL2 et celles des moyens de connexion extérieure femelle du boltier BA. L'autre face llb de cette branche supporte les pattes de raccordement des deux autres éléments de batterie PL3 et PL4. La face extérieure 12a de l'autre branche latérale 12 du U supporte les pattes de raccordement des moyens de connexion extérieure mâles CM du boîtier BA.
Le microcontrôleur I est soudé sur la face intér ieure de la branche centrale 13 du U à proximité de l'horloge 14. Tandis que les éléments de batterie PL1 à PL4 s étendent de part et d'autre de la branche centrale 13 du U, perpendiculairement entre lesdits éléments de carcasse 20a et 20b. Le circuit imprimé porte également de part et d'autre de ces branches 11, 12 et 13 les autres composants 16 du circuit.
La conception précitée du circuit imprimé permet tout à la fois d'obtenir une structure compacte et rigide, c'est-à-dire résistant particulièrement bien à l'écrasement, le boltier BA devant être fréquemment manipulé.
Par ailleurs, (voir Figures 5 et 6), le boltier BA comporte un capuchon 23 adapté à se fixer sur ce boîtier en recouvrant la prise DYN de connexion mâle CM, ce capuchon 23 présentant un anneau de fixation 21 du boîtier BA à un porte-clés ou analogue.
La Figure 9 illustre le procédé d'initialisation des boîtiers BA conformes à l'invention. Ce procédé est ca- ractérisé en ce qu'il comprend essentiellement les étapes consistant à connecter bout à bout plusieurs bol tiers BA, BA1, BA2, BA3, BA4, etc... en enfichant la prise femelle CF du boltier BA4 dans la prise mâle CM du boltier BA3 et la prise femelle du boltier BA3 dans la prise mâle du boîtier BA2, etc.... tandis que le boltier d'extrémité BA est relié à un microordinateur ou analogue PM et initialisé successi- vement et de manière différenciée en utilisant le microordinateur PM, chacun desdits boltiers BA, BA1, BA2, etc...
Plus spécifiquement, l'initialisation est réalisée de la manière suivante. Le microordinateur PM envoie une séquence d'informations qui comprend en tête une valeur jouant le rôle d'indice qui est systématiquement décrémentée par chacun des boltiers intermédiaires, c'est-à-dire que la valeur qui entre sur la prise mâle du premier boltier ressort sur sa prise femelle décrémentée d'une unité. Lorsque cette valeur atteint la valeur I, le boltier qui la reçoit comprend que la table d' informations qui suit cet index le concerne et celle-ci est inscrite dans sa mémoire RAM aux adresses spécifiées. Le boltier en question renvoie alors en direction du microordinateur PM un bloc d'acquittement précédé de la valeur 1. Celle-ci est réincrémentée à chacun de ses passages dans les différents boltiers reliés au microordinateur PM de sorte que lorsqu'elle atteint ce microordinateur, sa valeur égale sa valeur initiale. Ce procédé permet de tester les différents boltiers intermédiaires qui jouent un r61e actif dans ledit procédé mais également de savoir exactement le rang du boîtier éventuellement défaillant. Si un boltier s avère défaillant son index donne sa position de manière à ce qu'il soit prélevé de la chaîne et que le boîtier suivant lui soit substitué. Pour cette initialisation, on utilise les procédures de sécurisation de transfert interne au boîtier, telles que le CRC (de l'anglais code sheck redudancy) afin d'assurer le transfert de données, de manière parfaite.
Les avantages du boltier conforme à l'invention sont nombreux et on citera en particulier une portabilité comparable à celle d'une clé, un coût de fabrication réduit et une sécurité de transaction comparable à celle de la carte à mémoire.
'Les applications du boîtier BA selon l'invention sont nombreuses. Les applications essentielles sont: LA SIGNATURE ELECTRONIQUE: Le boltier BA permet une sécurité absolue dans toutes les transactions avec un serveur vidéotex, notamment en matière de télépaiement. Par ses algorithmes de chiffrement bancaires réputés infaillibles (DES et RSA) il constitue l'arme absolue contre les tentatives de fraudes, les opérations illicites, et le cracking.