INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
De préférence, le moyen déphaseur permet de faire varier le décaLage de phase de façon simultanée pour chacun des éiéments émetteur-récepteur pour faire varier l'angle (0) à une vitesse déterminée en réalisant ainsi un baLayage éLectronique, parallèlement à une génératrice du tube, balayage qui permet de détecter à chaque parcours cyclique de L'espace angulaire (8) tous Les défauts dont L'orientation par rapport à L'axe correspond à un angLe d'orientation (a T = 0) , Le régLage de L'angLe d'incLinaison (a L) étant pris à une valeur moyenne pour obtenir un angLe d'incidence (i) correct.En fait, grâce à L'utilisation du groupe de transducteurs suivant L'invention comprenant au moins un transducteur seuLement récepteur équipé du même système de baLayage réglé en phase avec ce lui du transducteur émetteur-récepteur on constate qu'un moyen déphaseur qui permet d'obtenir un angLe (e) de baLayage de par exemple 3 à 6 par rapport à un pLan de référence pris par exemple perpendicuLaire à L'axe du tube permet de détecter avec une bonne sensibiLité tous les défauts obliques incLinés d'un angLe pouvant aLLer jusqu'à environ 20 par rapport à L'axe du tube.En inversant le sens de déphasage on détecte de La même façon Les défauts ayant L'orientation opposée par rapport à un plan perpendicuLaire à L'axe du tube également jusqu'à environ 20". Le nombre "n" des éléments piézoéLectríques émetteurs-récepteurs du transducteur est, de préférence, d'au moins 4 et peut atteindre 5 à 15.Comme dans Le cas des moyens de réaLisation précédents du dispositif suivant L'invention, Les moyens électroniques de traitement permettent de mesurer Les ampLitudes des signaux-écho provenant du transducteur émetteurrécepteur ainsi que des transducteurs seulement récepteurs et aussi d'effectuer si nécessaire La sommation de ces amplitudes On peut enfin intégrer un groupe de transducteurs suivant L'invention dans un ensembLe de transducteurs identiques aptes chacun à constituer successivement le transducteur émetteur-récepteur du groupe de transducteurs et à effectuer un balayage cyclique dans un domaine anguLaire déterminé grâce au moyen de déphasage suivant L'invention.
Les figures et les exemples ci-après décrivent, de façon non Limitative, des modes particuLiers de réalisation du dispositif et du procédé suivant L'invention.
Figure i vue d'un mode de réalisation du dispositif suivant L'invention.
Figure 2 vue suivant la flèche F1 de La coupe A-A de La figure 1 Figure 3 courbes de détection de défauts obliques par un transducteur unique.
Figure 4 courbes de détection de défauts obLiques par un groupe de transducteurs suivant L'invention.
Figure 5 vue schématique, en élévation, d'un mode particuLier de réalisation d'une instaLLation de contrôLe par ultra-sons de tubes métaLliques au moyen d'un dispositif suivant L'invention.
Figure 6 vue schématique de côté suivant La fLèche F2 de la figure 5 limitée par L'axe X4 - X4 du tube.
Figure 7 LentiLLe divergente-convergente pour transducteurs appartenant au groupe suivant L'invention.
Figure 8 ensemble de transducteurs à Lentille divergente-convergente pour L'exécution d'un mode de mise en oeuvre particulier du dispositif et du procédé suivant L'invention.
Figure 9 dispositif suivant L'invention comportant un moyen de baLayage électronique ExempLe 1 : On effectue la détection de défauts orientés obliquement par rapport à L'axe du tube sur un tube 1 en acier de 98 mm de diamètre extérieur et 12,8 mm d'épaisseur représenté Figures 1 et 2.
On utiLise, suivant L'invention, un groupe de deux transducteurs 2, 3 comprenant un transducteur émetteur-récepteur 2 et un transducteur seulement récepteur 3, ayant tous deux des axes parallèles d'émissionréception X1 ou réception seuLement X2 des faisceaux d'ultra-sons. Ces axes sont, dans Le cas du premier exempLe, dans des pLans perpendiculaires à L'axe X3 du tube 1.Leur angle d'incidence (i) par rapport à un rayon du tube au point de pénétration de L'axe du faisceau est de 16 à 17 Des moyens électroniques 4 d'alimentation et de traitement sont reliés aux deux transducteurs 2, 3. Ces moyens Les excitent de façon impuîsionneîle et la fréquence d'émission est de 4 MHz par exempLe, et reçoivent les signaux-écho qui résultent de la réflexion par Le défaut 5 représenté grossi de façon exagérée du faisceau réfracte 6, d'uLtra-sons provenant du transducteur émetteurrécepteur 2. Ces moyens de traitement permettent de mesurer séparement Les ampLitudes des signaux-écho reçus par chacun des transducteurs 2, 3 et de faire si nécessaire La somme de ces signaux.Ces mesures ne sont bien sûr possibles que parce que le faisceau d'uLtra-sons ne rencontre pas d'obstacle à sa propagation dans L'espace 7 qu'iL parcourt à aller entre la surface rayonnante 8 du transducteur émetteur-récepteur 2 et La surface extérieure 9 de La paroi du tube 1 et au retour entre cette surface extérieure 9 et ces transducteurs 2, 3. Pour ceLa, de façon connue et non représentée, on interpose un liquide tet que de L'eau qui rempLit cet espace intermédiaire et mouille Les surfaces en regard des transducteurs 2, 3 et de La paroi 9 du tube 1.
- Ou l'arrêt de l'ancre rotative provoquée par la consistance des déchets solides au fond du reacteur melangeur(2).
A ce niveau et à l'aide du bascule à torsion et du detecteur de niveau de déchet restant au fond du melangeur (2) la densité du déchet restant en fonction de son volume pourrait décider l'arret de l'installation.
La condition de fractionnement à pression réduite est un avantage compte tenu de la désintegration de quelques solvants avant d'atteindre leur point d'ébullition à pression normale, tels que les aromatiques et aliphatiques à point de distillation plus de 170 0C à pression normale.
Cet arrêt en sorte n'est pas l'unique du côté sécurité mais aussi un coupe circuit(46) peut s'effectuer au niveau du thermomètre (47) du mélangeur-réacteur (2) en cas de surchauffement.
Un autre coupe circuit (39) est présenté au niveau de la colonne du recueil (16) suivant son détecteur de niveau (17).
Une installation pilote de laboratoire a été monté pour le recyclage de déchets liquides en provenance d'une usine peinture 2000 ml de déchets avec un recueil de 95% du volatile équivalent à 1805 ml avec les chararteristiques suivants: Analyse Chimique Aliquots Fractionnement Du Déchet No. %age recueil a 760mm ml OC Valeur d'acide : 8 1 10 56 Valeur de (OH) : 80 2 15 75 Valeur de saponification : 250 3 5 79-80.5 Pourcentage solide : 5 4 15 97.5 Pourcentage cendre : 1,2 5 55 108-112 Pourcentage d'azote : 0 Pourcentage de chlore : 0 Les aliquots ont étés identifiés par une colonne chromatographique 1 comme acétone, l'aliquot 2 comme acétate d'ethyle, l'aliquot 3 comme éthyle méthyle cétone, et l'aliquot 4 comme n-propanol,l'aliquot 5 comme toluene,ce mélange a été refait pour composer 1000 ml possédant les %age suivant: 70% toluene, 20% propanol , 5% acetate d'ethyle, 5% methyle ethyle cetone.Cette composition a servie comme diluant de laque industrielle.
PROCEDE ET DISPOSITIF POUR ASSOCIER RIGIDEMENT ENTRE ELLES DEUX PARTIES EXTREMES LIBRES DE GAINE A SOUFFLETS L'invention concerne un procédé et un dispositif pour associer rigidement entre elles deux parties extrêmes libres semblables de gaine à soufflets.
Les gaines à soufflets sont utilisées dans le domaine technique de l'emballage, notamment dans des installations d'emballage de charges palettisées. Une telle installation comporte une table support de la charge, des moyens d'alimentation en gaine à soufflets, et des moyens d'ouverture de la gaine et d'enfilement de la gaine ouverte sur la charge.
Une telle gaine à soufflets est stockée aplatie, les soufflets n'étant pas déployés, et enroulée sur ellemême pour former une bobine.
Un des problèmes rencontré dans ce genre de technique est lorsque l'on arrive à une partie extrême terminale de la gaine à soufflets, en particulier lorsque la bobine de gaine est terminée.
La présente invention vise à remédier à ce problème en proposant un procédé et une installation permettant d'associer rigidement entre elles deux parties extrêmes libres semblables de gaine à soufflets, applicable plus spécialement lorsque chaque partie extrême libre appartient à une gaine, à savoir la première partie extrême libre initiale à une première gaine et la seconde partie extrême libre terminale à une seconde gaine.
A cet effet, dans le procédé selon l'invention, successivement - on fend les plis internes d'une première partie extrême libre sur une certaine longueur attenante au bord libre transversal - on place la première partie extrême libre ainsi fendue à recouvrement sur la seconde partie extrême libre - et, dans cette situation de recouvrement, on soude réciproquement les deux parties extrêmes libres en contact l'une sur l'autre.
Un dispositif pour la mise en oeuvre de ce procédé comprend - des moyens de coupe aptes à fendre les plis internes d'une première partie extrême libre sur une certaine longueur et des moyens d'ouverture des fentes ainsi réalisées - des moyens mobiles de saisie placés fonctionnellement en aval des moyens de coupe, aptes à amener la première partie extrême libre ainsi fendue à recouvrement sur la seconde partie extrême libre - et des moyens de soudage, placés fonctionnellement essentiellement en aval des moyens mobiles de saisie, aptes à assurer le soudage réciproque des deux parties extrêmes libres en contact l'une sur l'autre.
Le procédé et le dispositif selon l'invention sont applicables à un procédé et une installation d'emballage d'une charge palettisée avec une gaine à soufflets.
Les autres caractéristiques et avantages de l'invention résulteront de la description qui suivra en référence aux dessins annexés dans lesquels - Les figures 1 à 3 sont trois vues schématiques, partielles, en élévation, d'étapes successives du procédé selon l'invention.
- La figure 4 est une vue schématique en coupe selon la ligne IV-IV de la figure 3.
La membrane (NC) est destinée à pieger ces anticorps s'ils ne sont pas saturés en IL-1,c'est à dire s'il n'y a pas suffisemment d'IL-1 : la quantité de recepteurs de l'IL-1 bien calculée à l'avance en (B),a fixé et stoppé la quantité admise d'IL-1.fl n'y a pas d'fl-1 excedentaire dans l'echantillon et les anticorps n'etant pas saturés en IL-1,vont se fixer sur (NC) et n'apporteront pas en (D) de peroxydase à 1'H202 produit par le contact IL-1 avec son recepteur.Par contre si la quantité d'IL-1 dans l'echantillon depasse le taux maximal.admis (Fig. 9+),elle va saturer les anticorps qui ne pourront plus reconnaitre le peptide 163-176 de 1 r- xe en en(NC) et qui vont donc migrer vers (I)) où leur peroxydase va provoquer la coloration du TMB au contact de 1'H202 provenant du contact IL-i avec son recepteur.
Toujours pour les mêmes raisons,une membrane à lyse programée M3 stoppe temporairement la migration des fluides de l'echantillon.
Ce procédé du double signal permet une meilleure fiabilité: la coloration sera issue de deux voies differentes;chacune des voies n'etant possible que s'il y a la substance recherchée.
EXEMPLE 2: DOSAGE DE L'INERLEUKNE-2 L'IL-2 est à l'heure actuelle la plus connue des immuno-hormones et les resultats preliminaires dans l'administration in vivo est extremement prometteuse.Elle a été decouverte par hasard par l'equipe du laboratoire de Robert Gallo : les cultures de lymphocytes stimulés produisaient un nouveau facteur induisant la multiplication in vitro des lymphocytes T d'où son ancienne denomination de T Cell Growth Factor (TCGF)l'lL-2 est secrétée par les lymphocytes T Helper stimulés par une cascade d'interactions impliquant l'antigène agresseur et les monocytes.
C'est une simple chaine polypeptide de PM 15 à 16.000 Da qui contient 133 acides aminés et qui est très stable.
Steve Gillis et ses collègues du Kendall Smith's laboratory (J.Exp.Med. 152,1709 - 1980- USA) ont examiné en culture continue in vitro de nombreuses lignées de cellules tumorales ou de leucemiques.Une seule lignée : Jurkatt lymphocyte line produit de larges quantités de IL-2 ce qui a permis de la sequencer et à Taniguchi et al.(Nature 302,305 ,1983) de la cloner : le gène de l'IL-2 contient 4,5 kilobases et 3 exons (sequences non-codantes) et ne presente aucune homologie avec aucun facteur connu,ni proteine ni hormone.Aucun oncogène connu ne contient une sequence homologue à celle de l'lL-2.Stimulés par l'IL-1 et l'antigène presenté par les macrophages,les lymphocytes T Helper se differencient et se mettent à produire de 1'IL-2.
En fait l'IL-2 joue un rôle predominant dans le developpement de la seconde phase de la reponse immunitaire (production de cellules T Killer et de cellules B productrices d'anticorps).C'est veritablement le conducteur de l'immunité .Parmi les cellules les plus sensibles à l'IL-2 figurent par exemple les CTL (Cytotoxic T Lymphocytes) responsable de l'elimination de virus influenza et de cellules infectées selon un mecanisme d'une extrême precision: en presence de virus influenza,seules les CTL precurseurs sont activés: ils se mettent à produire des recepteurs de 1'IL-2 à leur surface: et à proliferer (puisque 1'IL-2 induit lui même une proliferation) mais surtout deviennent competentes: detruire les cellules infectées par le virus et epargner les cellules saines.
Le taux d'IL-2 est très diminué dans les cancers et le SIDA (AIDS).
D'où le grand interêt de son dosage.
Tout recemment,il est apparu que les LGL (Large Granular Lymphocytes : 5% des lymphocytes du sang peripherique) possedent une activité cytotoxique contre les NK cells (lignées tumorales).Cette activité a été multipliée par 100 après une courte incubation dans 1'IL-2 in vitro: elles sont devenues des LAK cells (Lymphokine Actvated Killer cells),hautement cytotoxiques pour de nombreuses cellules-cibles,incluant des cellules tumorales.
Ces cellules LAK ont été utlisées in vivo pour traiter des patients cancereux.Mais l'IL-2 s'est revélée hautement toxique (hemorragies capillaires).
Rosenberg et al. (Ann.Internatl.Med.l08,853-864 - 1988) a proposé une solution elegante au problème de cette toxicité: traiter extemporanément les LGL par l'IL-2 : ces lymphocytes sont extraits de la tumeur (d'où leur nom de TIL: tumor-infiltrating lymphocytes) et cultivés in vitro en presence d'IL-2,avant d'être reinjectés (sans 1'IL-2 bien sûr) au patient: leur pouvoir cytotoxique est apparu 50 à 100 fois plus fort encore que les LAK et ont favorisé la regression de lesions metastatiques de certains cancers : l'immunotherapie du cancer par des associations de lymphokines est très prometteuse.Le New England Journal of Medicine du 30 Aout 1990,323,9,page 570 - publie le premier bilan des experiences realisées dans le traitement du melanome malin metastasé,par Steven A Rosenberg,de l'Institut national du cancer à Bethesda (Washington D.C.) : il obtient 50% de remissions de melanomes metastasés,sans effets secondaires chez le patient.Ce qui l'a conduit à obtenir des autorités federales la première autorisation d'inserer un gène codant pour l'IL-2 dans des lymphocytes reinjectés au patient.
J.R.Ortaldo,J.Frey,Toshikazu Takeshita et Kazuo Sugamura (European Cytokine Network,vol 1 No 1,March-April 1990,pp 27-34) ont observé l'effet d'un anticorps monoclonal TU27 contre le recepteur p70-75 de l'IL-2 sur les lymphocytes CD3- : l'IL-2 ne pouvait plus se lier à son recepteur : pas d'induction d'activité LAK mais,au contact de cet anticorps,les lymphocytes CD3- produisaient de grandes quantités d'interferon gamma.
Le recepteur de 1'IL2 est une proteine largement glycosylée de 55 KDa sequencée aux USA par le groupe de Waidmann (Uchiyama et al. J.Immunol. 126,1393,-1981) et clonée par le groupe Yodoï au Japon (Nikaido et al. Nature,311,631,1984).Le RNA messager corresopondant à cet ADNc produit une proteine (le recepteur) de 35 KDa (depourvue d'acide sialique et d'aminoglycannes,ce qui explique la difference avec les 55 KDa du PM cité plus haut) qui se lie à l'lL-2.En 1987 un autre recepteur a été decouvert de PM 70 KDa et il est apparu que ces deux recepteurs associés en un heterodimère formaient un complexe avec une très forte affinité (Kd = 30x10-2) pour l'IL2,bien superieure à celle observée avec un seul des deux recepteurs.Seul le recepteur p70 contient un domaine intracytoplasmique.
L'effet de l'IL2 sur les recepteurs est une augmentation rapide d'AMPc dans le cytoplasme et une cascade de reactions aboutissant à la division et proliferation des cellules identiques (possedant un recepteur à l'IL-2.) Les steroides et la cyclosporine (therapeutique anti-rejet) inhibent l'effet de l'IL-2.
L'INTERLEU1UNE- 6 C'est une proteine de 21 KDa d'origine très diversifiée: monocytes,lymphocytes T,fibroblastes,cellules de myxome cardiaque et d'osteosarcome.Les lymphocytes B transformées par le virus d'Epstein Barr secrètent de 1'IL6 dans le liquide surnageant les cultures.
Exemple 3 : 2-(2-méthylthio 4-thiazolyl) 3-méthoxy 2-propé- noate de méthyle (isomère E) et (isomère Z).
Stade A : 2-(2-méthylthio 4-thiazolyl) 3-hydroxy 2-propénoate de méthyle.
A un mélange de 1,92 g d'hydrure de sodium (a 50% dans l'huile) et 40 cm3 de tétrahydrofuranne, on ajoute une solution de 4 g de produit obtenu au stade C de la préparation 2 avec 25 cm3 de formiate d'éthyle dans 40 cm3 de tetrahydrofu- ranne, on agite pendant 2 heures 30 minutes et verse dans 200 cm3 d'acide chlorhydrique 2N, agite puis extrait avec 3 fois 200 cm3 de chlorure de méthylène, sèche, filtre et évapore à sec sous pression réduite. On obtient 9,15 g de produit attendu utilisé tel quel.
Spectre IR Aborsption générale type OH C=O : 1700 cm Région C=C 1616 cm 1 C=N 1519 cm Stade B : 2- (2-méthylthio 4-thiazolyl) 3-méthoxy 2-propénoate de méthyle (isomère E) et (isomère Z).
A un mélange de 2 g d'hydrure de sodium (à 50 % dans l'huile) et 180 cm3 de tétrahydrofuranne, on ajoute 9,5 g du produit obtenu comme au stade A dans 90 cm3 de tétrahydrofuranne. On agite pendant 5 heures et ajoute 25,5 cm3 d'iodure de méthyle. On agite 16 heures à 20/25 C et verse dans 1 litre d'eau, extrait avec du chlorure de méthylène, sèche, filtre et évapore à sec sous pression réduite. On chromatographie le résidu (11,5 g) sur silice (éluant : hexane-acétate d'éthyle 7-3). On obtient 3,11 g d'isomère Z, F < 50 C et 980 mg d'isomère E.
Isomère Z Analvse : CgH1lNO3S2 Calculé : C% 44,06 H% 4,52 N% 5,71 S% 26,14 Trouvé : 44,1 4,2 5,7 25,9 Isomère E Calculé : C% 44,06 H% 4,52 N% 5,71 S% 26,14 Trouvé : 44,3 4,5 5,8 25,8 Exemple 4 : 2-(2-méthylthio 4-thiazolyl) 3-(2-méthoxyéthoxy) méthyloxy propénoate de méthyle (isomère Z) et (isomère E).
On opère comme à l'exemple 2 à partir de 22,9 g de produit formylé obtenu au stade A de l'exemple 3 en utilisant 11,8 cm3 de chlorure de méthoxyéthoxymèthyle. On obtient après chromatographie (éluant : hexane-acétate d'ethyle 7-3) 18,76 g d'isomère Z et 5,8 g d'isomère E.
Analyse : C12H17NO5S2 Calcule : C% 45,12 H% 5,36 N% 4,38 S% 20,08 Isomère Z Trouvé : 45,0 5,3 4,2 20,1 Isomère E Trouvé : 45,1 5,5 4,3 19,8 Préparation 3 : (E) rméthyl [1-oxo 3-(4-thiazolyl) 2-propé- nylli aminoj acétate de méthyle.
Stade A : Méthanethioamide.
A une solution de 150 g de formamide dans 150 cm3 de tétrahydrofuranne, on ajoute à 25/30 C, 165 g de pentasulfure de phosphore, on agite 2 heures à 25 C, filtre et evapore le solvant sous pression réduite. On reprend avec 500 cm3 d'éther, filtre l'insoluble et évapore à sec. On reprend avec 400 cm3 d'acétate d'éthyle, traite avec du charbon actif, filtre et refroidit la solution à -60 C. On essore le produit cristallisé. On obtient 103 g de produit recherché que l'on utilise tel quel pour le stade suivant. F = 20-25 C.
Stade B : 4-thiazole carboxylate d'éthyle.
On opère comme au stade B de la préparation 1 à partir de 18,04 g de thioformamide obtenu au stade A en utilisant 58,5 g de bromopyruvate d'éthyle. On obtient après chromatographie sur silice (éluant : chlorure de méthylène-éther 95-5) 25,9 g de produit attendu isolé de l'éther de pétrole (Eb : 40-70 C).
F = 52 C.
Analyse : C6H7O2NS Calculé : Ci 45,8 H% 4,54 N% 8,9 S% 20,4 Trouvé : 45,8 4,5 8,9 20,7 Spectre IR (CHCl3) : -l C=O : 1724 cm hétérocycle : 1501, 1486 cm Stade C : 4-hydroxyméthylthiazole.
On opère comme au stade C de la préparation 1 à partir de 35 g de thiazol-4-yl carboxylate d'éthyle. On obtient 18,3 g de produit recherché utilisé tel quel pour le stade suivant.
Stade D : 4-formylthiazole.
EXEMPLE: DOSAGE DE L'INTERLEUKINE 1 L'interleukine 1 est une hormone polypeptidique produite notemment par les macrophages.Elle stimule la croissance et la proliferation de nombreuses cellules du système immunitaire et existe sous deux formes : l'IL1- (localisation membranaire) et l'IL1-ss (qui est la forme majeure d'IL1 produite et secrétée par les phagocytes monoclunéés) issues de deux gènes distincts mais partageant le même recepteur: en effet,le sixième exon code la partie homologue des deux formes < et B,qui comporte precisément le site de fixation.Le PM est de 17,5 KDa.
Le recepteur de l'IL1 des lymphocytes de souris a été sequencé et cloné par Sims et al. (cDNA expression cloning of the IL1 receptor,a member of the immunoglobulin superfamily. Science 241 : 585-588 - 1988).La sequence N-terminale est extracellul aire, comprend les trois domaines caracteristiques de la superfamille,comporte 319 acides aminés et sept sites potentiels de Nglycosylation (Asn).L'helicetC transmembranaire comporte 21 acides aminés dont 3 residus cysteyls.La sequence C-terminale (217 acides aminés) est intracytoplasmique et ne comporte pas de sequence caracteristique d'une activité tyrosine kinase.Par contre la sequence Lys429 Lys-Ser-Arg-Arg433 sert de substrat à une proteine kinase C: l'association des deux aboutit à une diminution de l'affinité de l'IL1 pour son recepteur : regulation fine.
La transduction après le contact ILI-recepteur : Shirakawa et al. (Cyclic-AMP : an intracellular second messenger for ilterleukin 1.Proc.Natl.Acad.Sci. USA 85 : 8201-8205 - 1988) a montré le couplage du recepteur à l'adenylate cyclase et l'augmentation de l'AMPc entrainant une proliferation cellulaire mais surtout induit la synthèse du recepteur de l'IL2 : le lymphocyte devient receptif à l'IL2 sous l'action de l'IL1.
MODE OPERATOIRE: Le recepteur sequencé par Sims et al (cité plus haut) est produit par la technique decrite pour le recepteur de l'EGF,puis associé à l'adenylate cyclase dans la solution proteolipidique decrite dans le même chapitre qui sera deposée sur le film de proteine G + GDP recouvrant la membrane impermeable d'acrylate copolymère à lyse programmée.
La zone (C) est un carré de papier Durieux No 22 preparé comme decrit plus haut (15 tel de acrylate copolymère sur une face pour la rendre temporairement impermeable,noter la face de depose,secher,retourner le papier) et on depose 15 Sd de la solution suivante: -ATP - (ref Sigma A 1020) 0.1 M - Ionophore A23187 Ref C 5149: Ca++ et Mg++ (molar ratio 1:1) 0.1 mM - Phosphorylase kinase : Ref P 2014 Sigma 2 UI/ ml de PRE à 0.5% in PBS (Phosphorus Ruptoring Enzyme: desactive la phosphorylase kinase).
- Phosphorylase b . Ref P 6635. inactive: 0.05 mg/ml (devient phosphorylase a active quand la phosphorylase kinase redevient active grâce à l'AMPc) - Glycogene Sigma Type X (Rabbit liver) - Ref G 4011 : 0,5 mg/ml - Peroxydase Ref P 6782: 0,1g/ml - Glucose-oxydase Ref G 1262: 1 U.I./d Sechage sous vide poussé pendant 1 heure.
La zone de revelation (D) est un carré de nylon blanc sur lequel on depose 2 ou 3,xd de la solution suivante de TMB à 1 mg/ml - 3-3'-5-5'-Tetra Methyl Benzidine (de preference Lab Miles) 1 mg - Methanol pur 99% lml.Agiter au vortex pendant au moins 3 minutes car le TMB est lent à se dissoudre completement.
Secher et surtout garder à l'abri de la lumière car le TMB vire spontanément au bleu après exposition prolongée à la lumière.
Assemblage : Placer,bien superposés, sur une plaque de PVC transparente: I'element (A) sur l'element (C) sur l'element (D) Placer une plaque opaque de PVC perforée d'un orifice de 8 mm,sur l'element (A) bien visible au fond de l'orifice,puis thermosouder les deux plaques.Garder au noir dans un sachet opaque,à sec et sous vide avec reinjection d'argon.