INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
EXEMPLE 2 Préparation d'un conjugué oligonucléotide ASB L'oligonucléotide est synthétisé sur un appareil automatique APPLIED 381A en utilisant la chimie des phosphoramidîtes. Le bras phosphoram- idite, dissout dans de l'acétonitrile anhydre à une concentration de 0.2 Molaire, est placé en position X du synthétiseur et l'addition du bras se fait selon le protocole standard en fin de synthèse. Après déprotection une nuit à 55 G dans NH4OH 33 %, précipitation dans l'éthanol à - 20 C, l'oligonucléotide est séché sous vide et repris dans 1 ml d'eau. 3.10-8 mole d'oligonucléotide sont séchés sous vide et repris dans 25 l de tampon borate de sodium 0.1 M ph 9.3. On additionne 500 l d'une solution à 30 mg/ml de DITC (Fluka 78480) dans le DMF. Le mélange est agité 1h 30 à température ambiante avant l'addition de 3 ml d'H2O, Après extraction de la solution par le butanol (3 x 3 ml), la phase aqueuse restante (500 l) est séchée sous vide puis reprise par 1.10-7 mole (6,6 mg) de BSA (Pierce 30444) dans 200 l de tampon borate. Après une nuit sous agitation à température ambiante le conjugué est purifié par échange d'ions en CLHP sur une colonne AX300 (BROWNLEE 4.6 X 100 mm) par un gradient de NaCI (Tableau 1). Le pic du conjugué est dialysé contre de l'eau (2 X Ilitre) concentré sous vide , repris par 1 ml H2O et stocké à - 200 C.
LONGUEUR OLIGONUCLEOTIDE Tr min mM NaCI Ratio oligo/ASB 20 5'-AACGCTACTACTATTAGTAG-3' 11,90 (2M) 603 1,0 15 5'-TTGCATTTAGAGCCC-3' 15,50 (1M) 395 1,4 13 5'-TGCATTTAGAGCC-3' 15,47 (1M) 385 1,1 12 5'-GCATTTAGAGCC-3' 14,49 (1M) 367 1,6 11 5'-GCATTTAGAGC-3' 14,41 (1M) 365 1,2 9 5'-CATTTAGAG-3' 13,99 (1M) 356 1,1 * Tr = temps de rétention en loncilon de la concentration en NaCl * Le gradient d'élution est de 10% à 56% de tampon B en 25 minutes avec tampon A =20 mM tampon phosphate de sodium, pH 7.00 tampon B = tampon A contenant 2M (ou 1M) NaCI EXEMPLE 3 Préparation d'un conjugué oligonucléotide péroxydase de raifort.
Selon l'example 2, l'oligonuclétide activé séché sous vide est repris par 1.25 10-7 mole (5 mg de péroxydase de raifort (Boehringer 413470) dans 200 Cll de tampon borate.
Le protocole de purification est identique : le conjugué est stocké à - 200c dans un tampon 50 mM tris HCI ph 7.0, 40 % glycérol Les résultats sont présentés dans le tableau2.
pective du réflecteur au sommet de celle-ci L'axe de
révolution 17 des parties 11, 12 du réflecteur consti-
tuant des ellipsoïdes de révolution, coïncide avec la
ligne de jonction des premiers et seconds foyers res-
pectifs FI et F 2 Les rayons lumineux émis par le corps lumineux 16 sont réfléchis et concentrés par les parties de réflecteur 11, 12 sur chacun des seconds
foyers F 2.
L'équation des ellipses dont la rotation en-
gendre les parties de réflecteur 11, 12 constituant des ellipsoïdes de révolution, est de la forme généra- le:
x + y = 1 a 2 b 2 dans laquelle: a = grand demi axe de l'ellipse b = petit demi axe de l'ellipse x = coordonnées x y = coordonnées y L'excentricité numérique e de l'ellipse est définie comme suit: e = c/a o c = a 2 b 2 ( 2)
La distance focale f de l'ellipse est défi-
nie comme étant la distance entre le sommet et le foyer: f = a c ( 3) La constitution du réflecteur 10 à partir
des deux parties de réflecteur 11, 12 dont les pre-
miers foyers Fl coïncident et dont le second foyer F 2 se situe respectivement au sommet de l'autre partie de réflecteur, implique une excentricité numérique e des
ellipsoïdes de révolution égale à 0,3 Lors de la con-
ception du réflecteur, il est choisi pour les réflec-
Ainsi, F. ABOUBELA et coll. (Nucl. Acid. Res., 31,4811,1985) trouvent que les mésappariements contenant une Guanine (GT-GG-GA) sont moins déstabilisants que les mésappariements contenant une Cytosine (CA-CC) ou un mésappariement entre 2 pyrimidines (TT-CC-TC).
S. IKUTA et coli. (Nucl. Acid. Res., 15, 797, 1987) montrent que les mésappariements GT, GA sont moins déstabilisants que AA, TT, CT, CA.
L'exemple décrit ici présente une méthode de détection d'un ADN parfaitement homologue par un protocole sandwich à 370 C. Les oligonucléotides de capture sont fixés passivement sur la plaque.
Les 5 cibles choisies sont décrites dans le tableau 5.
TABLEAU 5 3'-ATTCCGTTGTAACGTTCTGTAACATAACGTAAATCTCGGGGTTTTAAGGCCAACTGGAA-5' X 3'-ATTCCGTTGTAACGTTCTGTAACATAACGTAAATCTCGGGGTTTTAAGGCCAACTGGAA-5' XGT 3'-ATTCCGTTGTAACGTTCTGTAACATAACGTAAATCTCGGGGTTTTAAGGCCAACTGGAA-5' XAA 3'-ATTCCGTTGTAACGTTCTGTAACATAACGTAAATCTCGGGGTTTTAAGGCCAACTGGAA-5' XTT 3'-ATTCCGTTGTAACGTTCTGTAACATAACGTAAATCTCGGGGTTTTAAGGCCAACTGGAA-5' XAG 4 mutations différentes ont été introduites dans 4 séquences cibles qui diffètent de la séquence X par I seule mutation.
Les mutations sont situées dans la zone 32 à 35 de la cible. Les 4 mésappariements sont de type GT (XGT), AA (XAA), TT (XTT), et AG (XAG), et on retrouve 2 mésappariements GT et AG qui sont les moins déstabilisants pour un hybride.
La sonde de détection D1 5'-TAAGGCAACATTGCAAGACA-3' est complémentaire de la région 1-20 de la cible est et commune pour toutes les cibles. Elle est marquée à l'extrémité 5' avec la péroxydase selon l'exemple 3.
La spécificité du système est amenée par les oligonucléotides de capture (Tableau 6).
OLIGONUCLEOTIDE Tm 1,00E-0 9 M Tm 1,00E-08 M C C capture C15 5'-TTGCATTTAGAGCCC-3' 59,4 63,9 capture C13 5'-TGCATTTAGAGCC-3' 49,2 54,2 capture C12 5'-GCATTTAGAGCC-3' 43,7 48,8 capture C11 5'-GCATTTAGAGC-3' 34,3 39,8 capture C9 5'-CATTTAGAG-3' 7,7 14,1 Le Tm est calculé dans les conditions d'hydridation, c'est à dire 600 mM en sel pour les 2 concentrations de cible 10-8 et 10-9 molaire.
Les 5 oligonucléotides possèdent en 5' un bras C5NH2 pour permettre le couplage covalent sur ralbumine de sérum de boeuf (C15, 013, C12, C11, C9).
Sauf indications contraires, le protocole sandwich est identique à celui décrit dans l'exemple 5.
La cible est déposée à 10-9 mole/l soit 20 pg/ l (Tableau 7) ou 10-8 moleil soit 200 pg/ l (Tableau 8).
CIBLE (1,00E-09 M) X XGT XAA XTT XAG C15 2,390 0,667 0,061 0,137 0,234 C13 0,405 0,030 0,005 0,008 0,018 C12 0,271 0,015 0,003 0,005 0,007 C11 0,100 0,004 0,004 0,005 0,005 C9 0,005 0,004 0,005 0,005 0,005 valuer de D.O. à 492 nm Tableau 8
CIBLE (1,00E-09 M) X XGT XAA XTT XAG C15 > 2,5 > 2,5 0,211 0,973 0,328 C13 2,320 0,198 0,0190 0,060 0,081 C12 1,500 0,095 0,005 0,028 0,032 C11 0,610 0,014 0,003 0,014 0,008 C9 0,002 0,004 0,003 0,007 0,003 valuer de D.O. à 492 nm L'hybride formé avec la cible contenant un mésappariement de type GT est le moins déstabilisé donc le plus difficile à détecter.
Une plaquette métallique 47 est collée sous chaque bloc pour assurer sa tenue mécanique suivant l'axe vertical. Cette plaquette 47 n'est pas en contact avec les bouts de cornière 37, 38 des mâchoires de serrage de câble qui conservent une certaine liberté de débattement en raison de la souplesse des blocs.
Les figures Sa à 5f sont des coupes verticales du bloc de matériau souple et amortisseur 15 illustrant les déformations qu'il subit sous les contraintes imposées par les mouvements de vibration.
Dans la figure 5a, le bloc 15 est représenté au repos, en l'absence de contrainte. Sa section est trapézoïdale. Il ne transmet aucun mouvement de torsion aux câbles 17, 18.
Dans la figure 5b, le bloc 16 est représenté alors qu'il subit une contrainte verticale du haut vers le bas. Il s'écrase tandis que ses côtés fixés aux cables 17. 18 se relèvent en faisant subir aux câbles 17 et 18 deux torsions de sens opposés.
Dans la figure 5c, le bloc 15 subit une contrainte verticale du bas vers le haut. Il se bombe tandis que ses côtés fixés aux câbles 17, 18 s'abaissent en faisant subir aux cables 17 et 18 deux torsions de sens opposés, inverses des précédentes.
Dans la figure 5d, le bloc 15 subit une contrainte horizontale de la gauche vers la droite. Il se tort entraînant un relèvement de son côté fixé au câble 17 et un abaissement de son côté fixé au câble 18 et fait subir aux cibles 17 et 18 deux torsions de même sens.
Dans la figure 5e, le bloc 15 subit une contrainte horizontale de la droite vers la gauche. I1 se tort entraînant un abaissement de son côté fixé au câble 17 et un relèvement de son côté fixé au câble 18, et fait subir aux câbles 17 et 18 deux torsions de même sens inverses des précédentes.
Dans la figure 5f, le bloc subit une contrainte horizontale avant arrière qui provoque un mouvement de cisaillement tendant à entraîner un abaissement ou un relèvement simultané de ses côtés fixés aux cibles 17 et 18 et à faire subir aux câbles 17 et 18 des torsions de sens opposés.
Les câbles 17 et 18 sont tendus de manière à avoir une fréquence de résonance en torsion inférieure à celles des vibrations que l'on cherche à amortir. Ils sont éventuellement enduits d'un composant aux silicones de manière à augmenter leur coefficient de frottement entre brins.
En variante, chaque pontage peut être réalisé à l'aide d'un pendule de torsion à câble multibrin. Il comporte alors un ou deux câbles multibrins tendus en travers des cibles 17, 18, fixés à ces derniers au moyen de pièces d'attache à bras de levier et pourvus au voisinage de leur milieu d'un point d'attache à bras de levier pour la fixation du bloc de ventilateurs.
PHARE POUR VEHICULE DU TYPE PROJECTEUR
ARRIERE-PLAN DE L'INVENTION
Domaine de l'Invention La présente invention concerne un phare pour automobile, pour motocyclette ou pour bicyclette entraînée par moteur (désignée ci-après dans des applications typiques par "phare de véhicule") et plus particulièrement à un phare de véhicule du type à projection dans lequel le rayon lumineux émis par une source lumineuse et réfléchi par un réflecteur rayonne à travers une lentille de projection. On connaît des phares de véhicule du type à projection qui font l'objet par exemple de US-A-4 631 -642 Le phare de ce type est ainsi désigné, comme représenté sur la Figure 1, du fait que le rayon lumineux émis par une source lumineuse, à savoir une ampoule lumineuse 2, est réfléchi par un réflecteur 3 et le rayon lumineux ainsi réfléchi rayonne à travers une lentille de projection 4 Le réflecteur 3 dans lequel est logée l'ampoule lumineuse 2 et no la monture de lentille 5 qui supporte la lentille de projection 4 sont assemblés l'un à l'autre de façon
intégrée et forment ainsi une unité de projection 1.
Récemment, le phare ainsi désigné à été employé sur une grande échelle dans la technique du fait que, comparé à un phare qui utilise un réflecteur parabolique, il est de construction compacte et émet une grande quantité de lumière tout en assurant une ligne de contraste nette recherchée. Cependant, l'emploi de phare du type à projection pour une motocyclette comporte les inconvénients suivants étant donné que le phare du type à projection présente une forte intensité lumineuse, comme représenté sur la Figure 2, la surface rayonnée A et la surface non rayonnée B présentent à l'avant de la motocyclette un contraste de luminosité excessif et la visibilité est faible dans la région frontière C (hachurée sur la Figure 2) entre ces deux zones A et B.
RESUME DE L'INVENTION
La rotation verticale du bras ne peut s'effectuer que lorsque la rotule (17) est située au maximum de sa course supérieure, c est-à-dire en appui contre l'extrémité supérieure (23) de la lumière (21). Dans ce cas, l'axe du cône (16) se trouve sensiblement à l'horizontale, et la rotation dans le plan vertical du bras est ainsi rendue possible, compte tenu qu'aucun obstacle n'empêche la libre rotation de celui-ci. De fait, l'axe de rotation du bras se trouve sensiblement confondu avec la génératrice du cône (16).
Compte tenu de la structure de l'architecture de cette articulation, la peau (10) entourant le squelette peut librement épouser le bras, et ce quelque soit le mouvement qu'on lui imprime, évitant ainsi de rapporter purement et simplement un bras sur le tronc, toujours disgracieux et affectant le réalisme du jouet.
De plus, les débattements rendus possibles par l'articulation conforme à l'invention restent dans la limite de la réalité.
Enfin, l'ensemble des pièces de cette articulation, finalement limitées à deux, sont facilement réalisables par injection sans avoir à rapporter aucune autre pièce supplémentaire.
POUPEE ARTICULEE.
L'invention concerne un nouveau type de poupée.
Dans la description et dans les revendications, par "poupée", on désigne un jouet représentant aussi bien un être humain qu'un animal, comprenant essentiellement un tronc sur lequel sont articulés une tête, deux bras et deux jambes. Actuellement, ces différentes parties du corps sont réalisées en matière plastique et ces pièces individuelles sont ensuite assemblées par des articulations appropriées sur le tronc. L'ensemble nu est assez peu esthétique et doit donc être habillé. En outre, selon la nature des articulations, l'enfant peut arracher plus ou moins facilement un membre, avec les inconvénients que cela comporte.
L'invention pallie ces inconvénients. Elle vise un nouveau type de poupée plus esthétique et ne présentant pas les dangers énoncés ci-dessus.
Cette poupée articulée, comportant un tronc sur lequel sont articulés une tête, deux bras et deux jambes, se caractérise en ce qu'elle se compose de deux parties distinctes, à savoir - d'une part, un squelette interne, formant tronc, destiné à recevoir les ossatures et les articulations des bras et des jambes, ainsi que la tête - d'autre part, une enveloppe externe, conformée à l'apparence du corps, en matière plastique souple, moulée en une seule pièce sur le squelette.
En d'autres termes, l'invention consiste en une poupée constituée d'un squelette, formant ossature articulée, recouvert d'une enveloppe monopièce externe, ayant l'apparence du corps, en une matière plastique souple et élastique, qui adhère peu ou pas au squelette, de sorte que l'enveloppe autorise tous les débattements des membres autour de leur articulation sur le tronc.
Avantageusement, en pratique - le squelette est en une matière plastique rigide, résistant aux conditions de moulage de l'enveloppe, notamment de température ; on obtient de bons résultats en réalisant le squelette en polyamide 6.6 chargé en fibres de verre ou en polycarbonate ; - l'enveloppe monopièce caractéristique est, quant à elle, réalisée en un polymère souple type élastomère, ayant une dureté Shore A comprise entre 20 et 35, de préférence au voisinage de 25 ; en effet, on a observé que si la dureté Shore était inférieure à 25, la matière plastique devient trop collante et en outre, manque de résilience ; de même, si cette dureté excède 35, on manque de souplesse ; comme déjà dit, on obtient les meilleurs résultats avec une dureté au voisinage de 25 ; - en pratique, le polymère de l'enveloppe doit être souple et facile à injecter sous pression, pour obtenir un cycle de fabrication compatible avec les exigences industrielles - avantageusement, l'enveloppe monopièce caractéristique est réalisée un un copolymère styrène-éthylène/ butadiène-styrène (S-EB-S).
I1 importe que l'enveloppe monopièce caractéristique soit réalisée en un matériau qui d'une part, soit souple et élastique à l'instar du caoutchouc, et d'autre part, adhère peu ou pas, du moins de manière significative, au squelette interne, pour permettre à l'ossature tous les mouvements de débattements des membres autour de leur articulation.
Comme déjà dit, on obtient de bons résultats avec un squelette interne en polyamide 6.6 chargé de fibres de verre, recouvert d'une enveloppe monopièce en polymère S EB-S. Ainsi, lors de l'opération de moulage par injection sous pression, ce polymère linéaire se réticule par ses extrémités, ce qui lui confère des propriétés comparables à celles du caoutchouc, propriétés qui sont recherchées pour cette application.
I1 va de soi que le polymère de l'enveloppe peut comporter des colorants, des pigments appropriés. Ce polymère peut contenir également d'autres agents, tels que par exemple - des agents gonflants pour alléger et assouplir l'enveloppe, tels que par exemple des porogènes ; - des agents anti-collants pour rendre l'enveloppe plus souple - et enfin, des agents parfumants pour masquer l'odeur souvent jugée désagréable des matières plastiques.
La figure 1 montre en coupe vue de face, un squelette caractéristique de l'invention.
Deux exemples de réalisation de l'invention sont représentés sur les dessins ci-joints et vont
être exposés plus en détail dans la description ci-
après.
la figure 1 montre, selon une représenta-
tion simplifiée, un premier exemple de réalisation d'un dispositif d'éclairage, la figure 2 montre en coupe transversale le réflecteur du dispositif d'éclairage de la figure 1,
la figure 3 montre une variante du dispo-
sitif d'éclairage de la figure 1, la figure 4 montre un second exemple de réalisation du dispositif d'éclairage, la figure 5 montre un troisième exemple de réalisation du dispositif d'éclairage,
la figure 6 montre une variante du dispo-
sitif d'éclairage de la figure 5.
Un premier exemple de réalisation d'un dis-
positif d'éclairage pour véhicules représenté sur la figure 1, comporte un réflecteur 10 disposé dans une position centrale dans le véhicule Ce réflecteur 10 est constitué de deux parties de réflecteur 11 et 12 qui sont disposées avec leurs ouvertures de sortie de lumière tournées l'une vers l'autre, et qui forment conjointement un corps creux essentiellement clos Les deux parties 11, 12 du réflecteur sont des parties d'ellipsoïde de révolution et elles sont disposées de façon que les premiers foyers F 1 des deux parties de réflecteur coïncident, tandis qu'à la transition entre les deux parties de réflecteur, on a une brisure 13 A l'intérieur du réflecteur 10 est disposée une source de lumière 14 qui peut être une lampe à incandescence ou bien une lampe à décharge de gaz Au voisinage du premier foyer commun Fl des parties de réflecteur 11,
12, s'étend l'élément lumineux 16 de la source de lu-
mière 14, cet élément pouvant correspondre à un fila-
ment incandescent ou bien à un arc électrique.
Le second foyer F 2 des parties de réflecteur
11, 12 se situe sur la surface de l'autre partie res-
On injecte du ciment liquide à prise rapide jusqu'à la hauteur du cône inférieur délimitant ainsi la zone du ciment supérieur.
Ce ciment s'infiltre par vibration dans les failles du sol et permet ainsi une bonne prise dans le terrain, une partie lisse du côté du moule B.
Dès que le ciment est bien pris, nous pouvons extraire le moule B. Après séchage, le puits est prêt à recevoir le système d'injection d'acide (voir montage Ensemble feuille 3/3) dont l'appareil a fait l'objet d'un dépôt de brevet.
Ce système est valable pour tous les diamètres de puits.
DESCRIPTION DU SYSTEME DE CIMENTAGE
Le moule Rep. B se compose à la partie inférieure d'un cône Rep. 30 obturé d'un fond Rep. 34 qui permet l'étanchéité du moule Rep. B et du gainage du puits I par l'intermédiaire des rondelles de carton C.
D'un cône renversé Rep. 31 sur Rep. 30, l'ensemble relié par un tube 26 X 34 - Rep. 32 surmonté d'une platine Rep. 33 permettant de recevoir le vibreur pneumatique.
L'ensemble est en acier, le tout est soudé. Sur le bout du tube arasé on met des rondelles en carton dont le diamètre extérieur est le plus près du diamètre extérieur du tube et le diamètre intérieur des rondelles est inférieur au diamètre du tube J.
POUTRE EQUIPEE D'UN DISPOSITIF D'AMORTISSEMENT PROGRESSIF DE VIBRATK)NS La présente invention concerne d'une manière générale une poutre équipée d'un dispositif d'amortissement de vibrations, et plus particulièrement un ski.
Pour amortir les vibrations que subit une structure, il est connu d'utiliser des matériaux visco-élastiques associés à la structure, afin de réduire l'amplitude des vibrations par dégradation d'une partie de l'énergie de déformation sous forme de chaleur. Des amortisseurs visco-élastiques sont utilisés dans différents secteurs d'activité: aéronautique, automobile, construction navale, équipement sportif.
Dans le cas des skis, les amortisseurs, sous forme de bandes planes, peuvent être soit inclus à l'intérieur de la structure comme décrit dans les documents FR 79 23298, FR 80 04128, FR 81 07519, US 3 844 576 et US 3 901 522, soit fixés sur la surface du ski, avec recouvrement par une plaque de contrainte à haut module d'élasticité, comme décrit dans les documents FR 84 20189 et US 3 537 717.
Ces amortisseurs disposés longitudinalement présentent l'inconve- nient d'exercer leur action de manière uniforme le long du ski, alors que les contraintes de flexion et de torsion engendrant les vibrations que subit un ski ne s'exercent pas de manière uniforme en différents points de celuici. Ceci peut affecter les performances du ski et son confort d'utilisation.
Il est important de noter qu'il convient de réaliser un amortissement sélectif de certains modes de vibrations spécifiques en fonction du type de performances recherchées pour le ski en veillant à conserver ses qualités de vivacité et d'accrochage.
Pour remédier à ces inconvénients, il a été conçu un ski à amortissement réparti, décrit dans les brevets FR 87 03117, FR 87 07542, FR 87 07543 et FR 87 07544, qui comprend des volumes internes en matériau visco-élastique présentant une section transversale variable le long du corps du ski, de manière à lui conférer des propriétés d'amortissement mécanique variable en fonction de la position longitudinale considérée.
Le dispositif d'amortissement de ce ski présente les inconvénients d'être complexe de réalisation puisque nécessitant une découpe spécifique de chaque bande ou des éléments de remplissage interne et relativement peu sélectif dans l'amortissement des vibrations engendrées par les efforts du ski en flexion, qui sont les plus fréquents et les plus importants.
Sur une poutre sollicitée en flexion, la surface définie par ses fibres ne subissant ni extension, ni compression, est appelée surface neutre.
TYPE SEQUENCE 5'...3' Tr min mMNaCl Ratio oligo/HRP TEM TGCCATAACCATGAGTG 22,26 (1M) 491 1,1 TEM ATAACACTGCGGCCAAC 20,01 (1M) 450 1,0 TEM GTTGGCCGCAGTGTTAT 11,03 (2M) 569 1,5 TEM CACTCATGGTTATGGCA 11,45 (2M) 585 1,3 B GLUCURONDASE GATCGCGGTGTCAGTTCTT 11,85 (2M) 599 1,5 B GLUCURONDASE TTCCATGGGTTTCTCACAGA 11,83 (2M) 600 1,5 B GLOBINE GTATCATGCCTCTTTGCACC 11,57 (2M) 590 1,0 B GLOBINE TTTCTGGGTTAAGGCAATAGC 11,82 (2M) 600 1,1 RAS TTCCTCTGTGTATTTGCCAT 22,99 (1M) 505 1,0 RAS ACATGAGGACAGGCGAAGGC 20,97 (1M) 467 1,1 C. TRACHOMATIS AATCCTGGCTGAACCAAGCCT 20,70 (1M) 462 1,0 C. TRACHOMATIS AAGGTTTCGGCGGAGATCCT 19,30 (1M) 437 1,0 HIV 1-2 GAG GAAGCTGAGAATGGGA 9,18 (2M) 501 1,3 HIV 1ENV AACAATTTGCTGAGGGCTAT 25,19 (1M) 545 1,0 HIV 2ENV GGTCAAGAGACAACAAGAA 9,19 (2M) 501 1,4 HIV 1 POL GCCTGTTGGTGGGGC 9,56 (2M) 515 1,0 HLA DR CCGGGCGGTGACGTTGAGCTGGGGC 12,31 (2M) 618 1,3 HLA DR GAACAGCCAGAAGGAC 9,84 (2M) 525 1,0 HLA DQ GGCGGCCTGATGCCGAGTAC 10,16 (2M) 537 1,1 HPV 6/11 GACCCTGTAGGGTTACATT 10,20 (2M) 539 1,0 HPV 6/11 TGACCTGTTGCTGTGGA 9,91 (2M) 528 1,0 HPV 16 CCGGACAGAGCCCCCATTAC 11,33 (2M) 580 1,1 HPV 16 CTCTACGCCTTCGGTTGTGC 11,65 (2M) 592 1,0 HPV 18 GTATTGCATTTAAGAGCCCCA 13,07 (2M) 644 1,1 HPV 18 TAAGGCAACATTGCAAGACA 11,18 (2M) 574 1,1 alpha HPV 18 ACCCCGAGATTTACGTTATGT 10,80 (2M) 560 1,0 *Tr = temps de rétention (minutes) en fonction de la concentration saline (1M ou 2M) *Les conditions de gradient sont identiques à celles décrites dans l'exemple 2 EXEMPLE 4 Préparation d'un conjugué oligonucléotide-phosphatase alcaline.
Selon l'exemple 2, l'oligonucléotide activé séché sous vide est repris par 5.7 10-8 mole (8.0 mg) de phosphatase alcaline (Boehringer 567752) dans le tampon du fabricant.
Le protocole de purification est identique (Tableau 3). Le conjugué est stocké à + 4 C dans un tampon Tris HCI 30 mM, 1M NaCi, 1 mM MgC12, pH 8.0.
TABLEAU 3 ~~~~~~~~~~
TYPE ADN OLIGONUCLEOTIDE Tr min mMNaCl Ratio oligo/enzyme HPV 18 5'-GTATTGCATTTAGAGCCCCA-3' 9,53 (2M) 650 1,6 HPV 18 5'-TAAGGCAACATTGCAAGACA-3' 13,04 (2M) 680 1,4 HPV 18/33 5'-GTTCCAATGCCAGGTGGATGAT 10,10 (2M) 572 1,0 * Tr= temps de rétention (minutes) en fonction de la concentration saline Les conditions de gradient sont les mimes que pour l'exemple 2 EXEMPLE 5 Détection d'une séquence acide nucléique par protocole sandwich.
Dans une plaque de microtitration (Nunc 439454) est déposée une solution de l'oligonucléotide 5'-TCAGAGGAAGAAAACGATGA-3' à ng/ l (0,15 M) dans du PBS 3X (0.45 M NaCI 0.15 M phosphate de sodium ph 7.0).
La plaque est incubée 2 h à 370 C.