INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Ledit système permet la production en quantités importantes de protéines spécifiques de l'épithélium intestinal, telles que les facteurs de croissance, lesdites protéines étant excrétées dans le milieu de culture.
La présente invention a également pour objet un procédé d'obtention desdites protéines spécifiques de l'épithélium intestinal, caractérisé en ce qu'on cultive la lignée cellulaire, conforme à l'invention sur un milieu approprié à base de sels inorganiques, de glucose, de rouge de phénol, d'amino-acides, de vitamines, et comprenant, en outre de l'insuline et/ou de la transferrine et/ou de la toxine cholérique et/ou du facteur de croissance épithéliale (EGF) et/ou des extraits hypophysaires et/ou de la dexaméthasone et/ou du sélénium et/ou des albumines sériques, pendant un temps approprié, en ce qu'on extrait lesdites protéines du milieu de culture et en ce qu'on les purifie.
La présente invention a également pour objet l'application de la lignée conforme à l'invention en tant que modèle d'étude et d'identification des systèmes biochimiques dont l'expression nucléaire, cytoplasmique ou membranaire est impliquée dans la prolifération et la différenciation cellulaires des cellules épithéliales intestinales.
Conformément à la présente invention, pour une telle application, ladite lignée cellulaire est mise en oeuvre dans une méthode d'étude et d'identification des systèmes biochimiques dont l'expression nucléaire, cytoplasmique ou membranaire est impliquée dans la prolifération et la différenciation cellulaire des cellules épithéliales intestinales, qui est caractérisée en ce que (1) ladite lignée est cultivée sur un milieu à base de sels inorganiques de glucose, de rouge de phénol, d'amino-acides, de vitamines, comprenant, en outre de l'insuline et/ou de la transferrine et/ou de la toxine cholérique et/ou du facteur de croissance épithéliale (EGF) et/ou des extraits hypophysaires et/ou de la dexaméthasone et/ou du sélénium et/ou des albumines sériques, pendant un temps approprié, (2) on ajoute éventuellement dans ledit milieu des inducteurs chimiques, (3) on cultive ladite lignée sur un support approprié.
Les inducteurs chimiques utilisés sont connus et agissent au niveau membranaire ou nucléaire et induisent une différenciation cellulaire.
On peut citer, comme inducteur chimique, et ce de manière non limitative, le DMSO, le butyrate de métal alcalin ou alcalino-terreux, le phorbolmyristate acétate (PMA), le tétradécanoyl phorbolacétate (TPA), l'acide réti nique.
Selon un autre aspect de ladite méthode, le support est constitué de cellules vivantes en co-culture, prises notamment dans le groupe qui comprend les cellules mésenchymateuses et les fibroblastes d'origine intestinale.
Selon encore un autre aspect de ladite méthode, ledit support est constitué d'une matrice extracellulaire appropriée secrétée par des cellules de l'endothélium de cornée de boeuf et/ou des boîtes de culture surfactées par des facteurs d'adhésion cellulaire : laminine et/ou fibronectine et/ou collagène et/ou glycosaminoglycanes.
Ladite méthode permet d'étudier des facteurs de croissance ou d'interférence (lymphokines) capables de réguler la prolifération et la différenciation des cellules intestinales.
Elles permet également d'étudier l'expression des (proto)oncogènes cellulaires impliqués dans la prolifération et la différenciation cellulaire.
Elle permet, en outre, l'étude du métabolisme et de la toxicité de substances diverses qui peuvent être ingérées, notamment de médicaments, d'aliments.
Elle permet, de plus, l'étude des cellules épithéliales présentant un déficit génétique, par exemple, dans la mucoviscidose Selon encore un autre aspect de ladite méthode, elle comprend en outre une étape de transformation de ladite lignée traitée obtenue, en cellules tumorales par (4) transfection secondaire par un (proto)oncogène cellulaire normal ou muté approprié et (5) sélection en milieu de culture contenant un antibiotique approprié.
Selon une disposition avantageuse de cette méthode, ledit oncogène cellulaire est choisi parmi les onco gène s connus pour être fréquemment exprimés dans les cancers coliques chez l'Homme, comme c'est le cas, notamment de l'oncogène ras, l'oncogène myc, l'oncogène fos.
Selon une autre disposition ledit oncogène cellulaire est recombiné dans un plasmide porteur d'une ré gion régulatrice et d'un marqueur de sélection, notamment un gène de résistance a un antibiotique.
Selon encore une autre disposition, l'antibiotique est la néomycine et/ou l'un de ses analogues.
moins deux faces.
13. Unité selon l'une quelconque des reven-
dications 11 ou 12, caractérisée en ce que les échantillons (24) de baguettes comprennent des plaquettes de matériau magnétique et en ce que le présentoir (30) mobile a une surface extérieure métallique de façon que les échantillons se fixent
de façon amovible sur le présentoir mobile.
14. Unité selon l'une quelconque des reven-
dications précédentes, caractérisée en ce que les moyens d'essais de coordination comprennent un panneau (20) sensiblement vertical et monté mobile en rotation autour d'un axe perpendiculaire au comptoir de façon à permettre l'accès visuel de la même face de ce panneau de part et d'autre du comptoir.
15. Unité selon la revendication 14, carac-
térisée en ce que le panneau (20) a une surface métallique de façon à recevoir les échantillons de
baguettes munis de plaquettes de matériau magnéti-
que. 16. Unité selon la revendication 14 ou 15, caractérisée en ce que le panneau (20) comprend un rebord (26) en partie inférieure de façon & retenir une image (22) plaquée sur ce panneau.
17. Unité selon l'une quelconque des reven-
dications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend un toit (14) disposé au dessus du comptoir (10) et fixé & celui-ci par des montants (16) de
façon que l'ensemble soit auto-porteur.
18. Unité selon la revendication 17, carac-
térisée en ce qu'elle comprend des éclairages (40)
fixés au toit et en ce que les cables d'alimenta-
L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui suit et à l'examen des figures qui l'accompagnent. Celles-ci ne sont données qu'à titre indicatif et nullement limitatif de l'invention. Les figures montrent - figure 1 : la représentation schématique d'un accélérateur linéaire selon l'invention ; - figure 2 : une réalisation détaillée d'une structure accélératrice conforme à l'invention ; - figure 3 : la représentation d'un mode de compensation de déphasages entre une première section et une deuxième section de la structure accélératrice en fonction de la fréquence de l'onde hyperfréquence injectée - figure 4 : une représentation symbolique de la compensation d'effets de déphasage dans la structure - figure 5 : une variante de l'accélérateur de l'invention utilisée pour produire des positrons.
La figure 1 montre un accélérateur linéaire pour accélérer des particules chargées électriquement. Ces particules chargées sont par exemple des électrons injectés en amont 1 de l'accélérateur par un canon à électrons 2. Un canon à électrons est essentiellement une diode-tube électronique munie d'une cathode disposée en face d'une anode creuse. Les électrons sont accélérés dans l'accélérateur et ressortent en aval 3 des l'accélérateur avec une énergie stable monoénergétique.
Comme on le verra plus loin l'énergie de ces électrons n'est pas trop affectée par les variations de la quantité d'électrons injectés par le canon 2, ni par les variations de fréquence ou de puissance d'un modulateur HF de puissance. L'accélérateur comporte essentiellement une structure accélératrice allongée 4. La structure 4 a une longueur L. Dans un exemple L vaut 6 mètres. La structure 4 est alimentée en puissance HF par un modulateur 5. Elle est dite du type à ondes progressives inverses parce qu'elle est telle que cette onde HF se propage dans la structure 4 dans un sens allant de l'aval 3 vers l'amont 1.
Le modulateur HF 5 d'alimentation en puissance est raccordé à cette première structure accélératrice 4 par un premier dispositif d'injection 6. Ce qui caractérise l'invention est le fait que le dispositif d'injection 6 est placé en position intermédiaire de la longueur L de la structure accélératrice du type à onde progressive.
La structure accélératrice 4 comporte ainsi, entre autres, une section amont 13 et une section aval 14. En amont 1 l'accélérateur comporte un dispositif de prélèvement 7 pour prélever, sous la forme d'un deuxième signal hyperfréquence la partie de l'énergie hyperfréquence du signal HF injectée par l'injecteur 6 qui n'a pas été transférée aux électrons pour les accélérer. Ce signal HF récupéré est alors envoyé par un guide d'onde 8 en aval de la structure 4 pour y être réinjecté par l'intermédiaire d'un deuxième injecteur 9.
La deuxième section de la structure 4 est également de préférence du type à onde progressive inverse de telle façon que cette onde récupérée et réinjectee se propage à nouveau vers l'amont. A proximité de l'endroit où se trouve le premier injecteur 6, légèrement en aval, ses trouve une paroi 10 de court-circuit empêchant cette onde récupérée réinjectée de se propager plus loin, dans la section amont. Les résidus de puissance de cette onde sont alors dirigés vers une charge hyperfréquence 11 adaptée.
La structure accélératrice de l'invention est intéressante lorsqu'en amont 1, juste après le canon à électrons 2, se trouve une section de groupement et de préaccélération ou "groupeur" 12 assurant la mise en paquet des électrons injectés par le canon 2. La section de groupement comporte des cavités accélératrices très semblables à celles des sections amont 13 ou aval 14 de la structure 4. Mais les longueurs des cavités sont légèrement réduites. Entre la section accélératrice amont 13 et la section de groupement 12, l'énergie HF se transmet par des trous de couplage qui seront détaillés ci-après. On note qu'en pratique on passe insensiblement des sections 13 à 12 par modification des longueurs des cavités.
Si on admet que le dispositif d'injection 6 se trouve à mi-distance de la longueur L de la structure accélératrice 4, et sans tenir compte de la section de groupement 12 on peut considérer qu'en amont, dans la section 13, environ une moitié de l'énergie aura été consommée. L'autre moitié est injectée par l'injecteur 9 après le passage dans le guide 8. Cette autre moitié de l'énergie est alors transférée au faisceau d'électrons dans la section 14. Pour simplifier l'explication on peut admettre que la puissance HF injectée par le premier injecteur 6 est de l'ordre de 100 unités et que seulement 50 unités sont transférées aux paquets d'électrons dans les sections 13 et 12, la plus grande partie des 50 autres étant transférée aux paquets d'électrons dans la section 14.On voit que si la charges de faisceau, par ses variations, contribue à un transfert de puissance modifié, par exemple de 10%, il restera encore en puissance HF l'équivalent de 45 unités à transférer en aval de la structure. Le champ électrique correspondant en amont 1 de la structure ne variera que de 5 % car le champ varie comme la racine de la puissance. Dans ces conditions, la section de groupement 12 fonctionne correctement. Elle tolère ce déréglage.
Par contre si on avait utilisé une structure accélératrice, en onde inverse raccordée complètement en aval, et telle que presque toute l'énergie de l'onde soit transférée aux paquets d'électrons avant que la dernière partie restante de cette énergie ne serve qu'à alimenter le groupeur, la variation de l'énergie restante s'appliquerait directement à l'alimentation en puissance électrique de la section du groupement 12.
Celle-ci ne fonctionnerait plus alors correctement elle recevrait tantôt une énergie égale à par exemple 10 unités tantôt une énergie nulle. Le groupeur serait affecté airectement, et non pas relativement, par cette variation.
La figure 2 montre, dans un exemple préféré de réalisation, des détails de la structure 4. L'injecteur 6 peut consister en un orifice 16 débouchant sur un guide d'onde 17 provenant du compresseur 15 et communiquant avec une première cavité 19 de la section amont 13 de la structure 4. La section amont 13 comporte beaucoup de cavités telle que la cavité 19. En effet la section amont 13, comme la section aval 14 mesurent environ 3 mètres, et comportent environ 75 cavités 19 mesurant chacune environ 4 cm de long. La cavité 19 présente des nez de cavité arrondis.
Les cavités de la structure 13 sont couplées selon; un mode inverse. Un exemple est l'adoption du mode 4fi/5 mais on envisage aussi d'autres modes possibles tels que 3fi/4, etc. ... Dans ce mode les parois communes 20 de cavités voisines 19 et 21 sont percées d'orifices 22 ou 23 alternés de part et d'autre de l'axe de propagation 24 lorsqu'on passe d'une paroi 20 à une paroi suivante.
La paroi 10 ne comporte pas de tels orifices : elle présente ainsi un court-circuit pour l'onde HF qui est injecté par l'injecteur 6, et aussi pour l'onde HF réinjectée par l'injecteur 9. La paroi 10 possède aussi des nez. La section 12 de groupement est couplée simplement en amont de la structure accélératrice 13 par un orifice 26 du même type.
Le dispositif de prélèvement 7, semblable au dispositif d'injection 16, comporte un orifice radial 29 dans une cavité de la section de groupement 12.
L'orifice 29 débouche sur le guide d'onde 8. Le guide d'onde 8 de type rectangulaire aboutit au dispositif d'injection 9 semblable au dispositif de prélèvement 7.
On retrouve encore un dispositif de prélèvement similaire, à l'endroit le plus en amont de la section aval 14 de la structure accélératrice 4, où est prélevée l'énergie HF résiduelle qui est orientée sur une charge adaptée 11.
D'autre part, l'accélérateur linéaire comporte une source 3 de particules à accélérer. Les particules à accélérer sortant de la source 3 entrent par une ouverture 11 de la première cavité résonnante 10 et sortent, accélérées, par une ouverture 12, de la dernière cavité résonnante 10.
La source 3 de particules à accélérer est dans le cas d'un accélérateurs d'électrons, par exemple un canon à électrons. Sur la figure 1 le canon à électrons 3 schématisé comprend une cathode 5 et une anode 6.
La source 2 est une source d'énergie hyperfréquence.
On peut par exemple utiliser des fréquences comprises entre 100 MHz à 100 GHz. Selon les fréquences, et puissances désirées, la source 2 comporte soit un tube à vide, par exemple du type Klystron, soit un ensemble de modules à transistors, par exemple du type à arséniure de gallium. Le dispositif de limitation de puissance 4 comporte, par exemple, une charge résistive. Quatre exemples de dispositif de limitation 4 seront illustrés sur les figures 3 à 8.
Sur la figure 2, on peut voir un second exemple de réalisation d'un accélérateur linéaire selon la présente invention. L'accélérateur de la figure 2 comporte une enceinte cryogénique 94 incluant l'ensemble 1 de cavités résonnantes 10.
L'enceinte cryogénique 94 permet l'utilisation de cavités résonnantes supraconductrices. L'utilisation de cavités résonnantes supraconductrices permet de diminuer la taille, d'augmenter les performances et de diminuer la consommation électrique de l'accélérateur. La diminution de la consommation électrique est notamment provoquée par la réduction des pertes dans la cavité résonnante 10. Toutefois le problème découvert, à savoir, la possibilité d'augmentation avec le temps de l'énergie contenue dans les cavités résonnantes 10 en l'absence de faisceaux de particules à accélérer est particulièrement grave dans le cas d'accélérateurs présentant de très faibles pertes comme les accélérateurs supraconducteurs.
De plus, dans la mesure où l'on veut limiter la consommation d'énergie nécessaire au refroidissement de matériaux supraconducteurs il est avantageux d'employer des matériaux qui restent supraconducteurs à des températures relativement élevées par exemple 50 K, 70 K ou 150 K. Il est bien entendu que le matériau doit rester supraconducteur à haute fréquence et pas seulement en courant continu. Or de tels matériaux par exemple à base de l'oxyde de cuivre sont relativement fragiles et donc nécessitent une protection contre les tensions.
Sur la figure 2, on a représenté, de plus, au niveau du canon à électrons 3 une électrode supplémentaire 22 appelée Wehnelt, et en sortie derrière l'ouverture 12 une optique de réflexion. 21 monobloc connues en soi.
Sur la figure -3, on peut voir un exemple de réalisation particulièrement simple d'un dispositif de limitation de l'énergie 4 des figures 1 et 2. Le dispositif de la figure 3 comporte une charge résistive 40. Dans un premier exemple de réalisation du dispositif selon la présente invention la valeur de la résistance de la charge résistive 40 est telle, à la fréquence de fonctionnement, que l'amortissement total de l'énergie qui parcoure l'ensemble de cavités résonnantes et la charge résistive 40, en absence du faisceau de particules, est sensiblement égale à 3 dB. Ainsi, à chaque passage à travers le circuit de recirculation 93 des figures 1 et 2 l'énergie perd la moitié de sa puissance. La suite etc converge et est égale à 2 P où P est la puissance fournie par la source 2. Ainsi, la croissance de l'énergie présente dans les cavités résonnantes 10 est limitée.
Dans une seconde variante de réalisation on utilise une charge résistive 40 de valeur de résistance plus faible permettant une meilleure récupération de l'énergie sans toutefois permettre un accroissement trop important de l'énergie présente dans la cavité 10 risquant la destruction de celle-ci.
On notera que pour les valeurs de résistance très faibles cette charge résistive peut être limitée au circuit de recirculation non supraconducteur lui-même.
Sur la figure 4, on peut voir, un dispositif de limitation commandable. Le dispositif de limitation de la figure 4 comporte en parallèle un interrupteur 41 et une charge résistive 40. Quand l'interrupteur 41 est fermé il court-circuite la résistance 40 et permet de fournir toute l'énergie non couplée au faisceau de particules à l'entrée 8 de la première cavité résonnante 10.
Lorsque l'interrupteur 41 est ouvert, l'énergie hyperfréquence passe par la charge résistive 40 et est de ce fait atténuée.
Dans une première variante de réalisation l'interrupteur 41 est un interrupteur mécanique ou électromécanique commandable.
Avantageusement, l'interrupteur 41 comporte un commutateur électronique, par exemple comportant des diodes PIN.
Sur la figure 5, on peut voir un exemple de réalisation du dispositif de limitation de puissance comportant deux branches placées en parallèle. Une première branche correspond à un court-circuit. La seconde branche comporte une charge résistive 40. En sortie, un interrupteur 41 permet de sélectionner la première ou la seconde branche.
Le bon fonctionnement de ce gène Per est notamment responsable chez a 3 Drosophile, de certains comportements périodiques.
La séquence d'ADN codant pour ce gène Per présente également un haut degré de polymorphisme (Yu, Q., et al. , 1987).
Dans l'article de SHIN et al. référencée cidessus, il a été montré que cette région "minisatellite" du gène Per était capable de s'hybrider avec des échantillons d'ADN provenant de différentes espèces de vertébrés, telles que le poulet, le chat, la souris et l'homme.
On a pu ainsi cloner un fragment d'ADN de q suris appelé pSP64.2.5EI, homologue en partie au gène Per et dont la séquence nucléotidique comprend une région mini-satellite comportant les motifs ACNGGN et TCAGGC dans lesquels N représente l'un quelconque des 4 nucléotides adénine, cytosine, guanine et thymine (Shin et al 1985).
Utilisé comme sonde, ce fragment particulier d'ADN, pSP 64.2.5EI, reconnait un grand nombre de séquences polymorphes chez l'homme et différentes espèces animales, donnant lieu à des empreintes génétiques (Georges et al. 1987b & 1988).
L'utilisation de cette sonde sur de l'ADN de bétail, ayant subi une restriction par l'une des enzymes de restrictions HaeIII, HinfI, ou MboI, présente chez les femelles une image d'empreinte génétique typique alors que l'image chez les mâles est masquée par un signal intense (figure 1). I1 a donc été montré que cette sonde, déjà connue pour sa capacité à détecter des régions d'ADN mini-satellites dans le génome humain ou animal, était également capable de détecter la présence du chromosome Y dans un échantillon d'ADN de ruminants. (voir demande de brevet français 88/10706).
Ce phénomène a suggéré aux inventeurs que pSP64.2.5EI redonnant en dehors des différents locus autosomaux des séquences Y spécifique chez le bétail.
Suite à cette observation fortuite, les inventeurs ont utilisé ce clone pSP64.2.5EI apparenté à "Per" dans la première étape de l'isolement de la séquence susceptible d'être spécifique au chromosome Y bovin. Ils ont ensuite cloné et caractérisé cette séquence d'ADN, qui a une taille de 4.2kb et qui a été appelée, btDYZ-l, et cartographiée dans la région du centromère Y.
La séquence btDYZ-l a été digérée par l'enzyme de restriction EcoRI, et le fragment EcoRI de 1.2 kb de cette séquence btDYZ-l, appelé Y1.2 a été séquence.
Il a été ainsi constaté que ce fragment est formé d'un motif (appelé "X") de 40 paires de bases répété 17 fois et dont la divergence entre les unitts est de 27%. Les motifs X sont séparés l'un de l'autre par des séquences riches en TG, (appelé "Z"), de longueur variable. Les désignations X et Z sont définies plus précisément ci-dessous.
Utilisant les segments btDYZ-1 ou Y1.2 comme sondes dans des expériences d'hybridation, les inventeurs ont ensuite démontré que - ces segments d'ADN spécifique du chromosome Y permettent de réaliser le sexage du bovin à partir de 100 picogrammes d'ADN bovin (l'équivalent d'environ 15 cellules); - que ces segments d'ADN reconnaissent une séquence présente sur le chromosome Y au nombre de 100.000 copies environ; - par hybridation in situ que les segments d'ADN clonés correspondent à une zone péricentrique du chromosome Y bovin; - que les segments clones, utilisés comme sonde, mettent en évidence un polymorphisme de taille de fragments de restrictions (RFLP), par exemple avec Hae III, spécifique au chromosome Y et permettent de déterminer des relations de filiation basées.
uniquement sur la transmission de matériel Y; - que les nouvelles sondes moléculaires sont utilisables pour le sexage d'autres espèces de bovinés.
En outre, dès que la séquence précise de Y1.2 était elucidée, la technique de réaction de polyinérisation en chaine (PCR) a pu être utilise pour amplifier la séquence. La présence d'ADN du chromosome Y bovin a ainsi pu être détectée à partir de 0.5 pg d'ADN génomique bovin purifié. Les séquences amplifiées ont été directement visualisés par fluorescence après addition de bromure d'ethidium.
L'invention a pour objet une séquence nucléotidique isolée spécifique au chromosome Y des différentes espèces de la sous-famille des bovinés caractérisée en ce qu'elle comprend - soit la séquence Aa-[(X)p-(Z)n-(W)q]m-Bb dans laquelle X = CNNTTNTCAGCCCTGTGCCCTGGNRAYTGTGNAANNNGTT N = l'une quelconque des 4 nucléotides thymine (ou uracile), guanine, adénine et cytosine; R = purine; Y = pyrimidine, ou un fragment de cette séquence à condition qu'au moins 12 nucléotides consécutifs soient présents, ou une séquence présentant au moins 70% d'homologie avec celle-ci; Z = une sequence nucléotidique riche en TG contenant au moins 50%, de préférence 80% en TG, w = n'importe quelle séquence nucléotidique qui n'est pas X ou Z; A et B = séquences nucleotidiques essentiellement exemptes de séquences présentes dans le chromosome Y bovin; p > l nO q # 0 mrl a = O ou i b = O ou 1 et les séquences X, Z et W peuvent être dans l'ordre indiqué o0 dans un ordre différent; à condition que la séquence X représente au moins 1*, de préférence au moins 30X, de la longueur totale de la partie [(X)p-(Z)n-(W)q]m et que lorsque les valeurs de p, n; q et/ou m sont supérieures à 1, les multiples exemplaires des séquences X, Z, W et/ou [X-Z-W] respectivement peuvent être identiques ou différents; - soit la séquence A@-[S]-Bb dans laquelle S = la séquence complémentaire de la séquence (X > p - (Z)n - (W)q ).
ou une séquence qui hybride avec la séquence [(X)p-(Z)a-(W)q].