INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le circuit complémentaire est maintenant indépendant du circuit principal. Il est disposé entre le circuit principal et le circuit oscillant. La borne 21 correspond aussi à la sortie du circuit de compensation. C'est sur cette borne que l'on obtient la tension de compensation.
4) Récupération des pics C et D de rat après divers modes d'extraction A la différence de I'imnzunoréactivité des molécules de type LHRH qui a été décrite précédemment comme dépendante de la procédure d'extraction (tableau 1), le rapport des pics C et D reste constant après chromatographie sur phase inverse et ce indépendamment du milieu initial d'extraction utilisé (tableau 6). L'addition de mLHRH synthétique dans des quantités correspondant au contenu en LHRH de 300 à 600 hypothalamus de rat durant l'homogénéisation selon la méthode d'extraction combinée (2 M d'acide acétique et 70 % de méthanol) n'affecte pas l'immunoréactivité du pic C par comparaison à celle évaluée en l'absence de mLHRH synthétique éxogène. Par comparaison, l'immunoréactivité du pic D est considérablement augmentée après l'addition de peptide synthétique.
5) Description des tests de détection par radio immunolo qie (RIA) des molécules de tvpe LHRH Des aliquotes des extraits bruts et des fractions de CLHP obtenues sur colonne CHLP ainsi que de la mLHRH synthétique pour les courbes standard, sont lyophilisées en présence de 100 microlitres d'un tampon RIA (50 mM d'un tampon phosphate Na/Na2, pH 7, contenant 0,9 % (poids/ volume) de NaC1 et 0,1 % (poids/volume) de gélatine afin d'éviter l'absorbtion de matériel immunoréactif.
Les échantillons lyophilisés sont resuspendus en présence d'un des trois anticorps et testés contre la LHRH monoiodée par l'iode 125 I comme décrit précédemment (Gautron et al. 1989, Placenta, 10, 19-35).
Le test RIA est mis en oeuvre avec quelques modifications selon la méthode de Nett et al. (1973) Clin. Endocrinol. Métab. 36, 880-885). Les incubations sont réalisées en présence de 100 microlitres de sérum de lapin normal (dilution 1,60) et 10 microlitres d'un indicateur de pH (solution indicatrice universelle, pH 4-10, Merck) pour vérifier la présence de substances interférentes au niveau du pH dans les extraits bruts et les fractions collectées à partir de chromatographie CLHP. Le complexe antigèneanticorps est précipité avec 1 ml d'éthanol absolu après 48 heures de réaction à 40C.
EXEMPLE 2 : Caractérisation des pics obtenus dans l'Exem ple 1 1) Filtration sur tamis moléculaire Les peptides purifiés et élués dans les pics C et D de rat sont resuspendus dans 200 jil de tampon acétate d'ammonium 20 mM, pH 4,2 contenant du chlorhydrate de guanidine 6 M. Ces peptides sont ensuite chromatographiés en condition CLHP sur une colonne TSK G 2000 SW (7,5 X 300 mm, Interchim.) éluée avec le même tampon utilisé pour la resuspension des échantillons. Le débit de la colonne est de 0,5 ml par minute et le volume des fractions collectées est de 0,1 à 0,5 ml. Une boucle de 200 microlitres est utilisée pour l'injection. La guanidine est éliminée des fractions collectées par passage sur cartouches SEP PAK C 18 (Waters).
La colonne est calibrée avec de la mLHRH et des fragments N- et C- terminaux ainsi qu'avec les peptides suivants : le peptide vaso-actif intestinal (VIP), la béta endorphine humaine, le neuropeptide Y (NPY), les somatostatines-14 et-28, les angiotensines humaines 1 et 2 et la beta casomorphine (1, 4) amide.
La Figure 7 représente les profils d'élution des pics C et D de rat. Après plusieurs chromatographies, les poids moléculaires des deux peptides élués dans les pics C et D sont estimés entre 1086 et 1188 Daltons.
2) Spectre de masse 420 picomoles du peptide du pic C de rat sont dissous dans un mélange de dithiothréitol et de dithioerythritol (5:1 en poids) pour analyses (Néosystème Laboratoires) et le pic a été analysé entre 1000 et 1400 m/z. Les résultats de la Figure 8 représentent le spectre de masse obtenu. Une intensité à 1198,8 m/z correspond à la masse du peptide élué dans le pic C. - Dans les mêmes conditions expérimentales, la masse du peptide synthétique mLHRH est déterminée à 1182,8 m/z.
Le peptide contenu dans le pic C de rat et le peptide synthétique LHRH peuvent être considérés comme différents de 16 Daltons.
3) Analyse de la composition en amino-acides Cent picomoles de peptides purifiés et élués dans les pics C et D de rat sont hydrolysées dans de l'acide chlorhydrique 6 M à 1100C pendant 22 heures en l'absence d'acide mercapto-sulfonique. Les hydrolysats sont séchés et les acides aminés sont déterminés par la méthode PITC (Phenyl Iso Thio Cyanate).
L'analyse des amino-acides montre que le peptide élué dans le pic D correspond à la mLHRH (tableau 7).
L'analyse est moins claire pour le pic C en raison d'une contamination importante. Une comparaison entre la composition en amino-acides des pics C et D suggère que leur composition est à peu près similaire. La différence principale concerne l'absence apparente de proline dans le peptide du pic C, tandis qu'elle pourrait au contraire contenir une leucine et/ou une sérine additionnelle.
La différence de masse (16,04 daltons) due au remplacement de la proline par la leucine est la valeur la plus proche de la différence de masse (16 daltons)-entre le poids moléculaire obtenu par spectromètrie de masse à partir du peptide dont le poids moléculaire est déterminé (1188,8 daltons) et la mLHRH (1182,8 daltons). Cependant, la correspondance parfaite est obtenue seulement par le remplacement de la proline par une hydroxyproline (Hyp) qui élue à proximité de la sérine lors de l'analyse des aminoacides. Ceci peut expliquer le haut niveau de sérine dans l'analyse de ce peptide.
Dans le cadre de la présente invention, on a donc synthétisé la (Leucine 9) LHRH et la (Hyp 9) LHRH et comparé leur sensibilité à la digestion enzymatique ainsi que leur comportement en chromatographie par comparaison avec le peptide endogène élué dans le pic C.
4) Synthèse des (Hvp 9) LHRH et (Leu 9) LHRH : Des séquences de type LHRH ont été synthétisées par les Laboratoires Neosystem. La pureté des peptides est vérifiée par CLHP et confirmée par analyse des acides aminés. La synthèse de la HYP-9-LHRH est effectuée avec de la 4-hydroxyproline.
5) Disestion enzvmatique 5 ng de mLHRH synthétique, de (Lys 8) LHRH, de (Leu 9) LHRH et de (Hyp 9) LHRH ainsi que de peptide de rat purifié sont digérés par 0,25 ng de trypsine (7500 à 9000 unités par mg de protéine) traitée par du DPCC (chlorure de diphénylcarbamyle), ou par 10 ng de clostripaïne (215 unités par mg de protéine) ou par 5 mg de pyroglutamate aminopeptidase ( PGA) (160 unités par mg de protéine).
De manière générale, des déphasages obtenus respectivement entre des couples de modes spatiaux différents pour un même état de polarisation ou entre des couples de modes de polarisation différents pour un même état spatial fourniraient des fonctions #1 et linéairement dépendantes ne permettant pas l'extraction de P1 et P2.
Des fonctions 1 et #2 linéairement indépendantes sont obtenues lorsque ces fonctions représentent les déphasages entre un couple de modes spatiaux différents de même polarisation, d'une part, et un couple de mode de polarisation différent de même état spatial, d'autre part.
A la sortie de la fibre de mesure 1, les trois modes LP11 sont recombinés deux à deux par le moyen d'analyse 4 afin de créer des interférences.
Pour recombiner deux modes de même structure spatiale et de polarisation orthogonale, par exemple LPllG/G et LPlîG/P, il est connu qu'il faut placer un polariseur à 450 des axes neutres de biréfringence. Les deux polarisations se projettent sur la même direction intermédiaire à 450 et peuvent donc interférer. Pour recombiner deux modes de même polarisation et de structure spatiale différente, il faut réaliser une opération équivalente de projection. Pour deux modes LP11 de structure spatiale orthogonale, par exemple LP11G/G et LPllP/G, une solution particulièrement intéressante consiste à placer en sortie de la fibre, une fibre identique mais avec une rotation de 450 des axes du coeur elliptique. Les deux modes spatiaux LP11 se répartissent chacun sur les deux modes spatiaux LP11 de la fibre à 450.
I1 faut donc ensuite séparer ces modes pour opérer une fonction équivalente au polariseur dans le cas des modes de polarisation. Cette séparation peut être obtenue par découplage par prisme (voir l'article W.V. SORIN et al.
"PHASE VELOCITY MEASUREMENT USING PRISM OUTPUT COUPLING FOR SINGLE AND FEW MODES OPTICAL FIBER" - OPTICS LETTERS, 11, p106-108, 1986) avec la fibre polie latéralement et placé en contact avec un milieu d'indice supérieur au coeur de la fibre.
Notons que cette méthode du découplage par prisme peut être aussi utilisée pour séparer les deux polarisations (voir l'article H. C. LEFEVRE et al. "HIGH SELECTIVITY POLARISATION SPLITTING FIBER COUPLERS" S.P.I.E. Vol. 988 (1988), p63-69).
Pour réaliser le dérivateur à prisme 3 (figure 4), on place la fibre 7 dans un support 8 qui lui donne une courbure et permet son polissage jusqu'au voisinage du coeur. Le coeur de la fibre est alors mis en contact avec un milieu 9 d'indice supérieur à son propre indice.
Chacun des modes (LP1lG/pt LP11G/G' LPllp/pr LPllp/G) a une vitesse de propagation différente de celle des autres de telle sorte qu'il se réfracte au passage dans le milieu 9 selon un angle qui lui est propre. Les modes sont ainsi géométriquement séparés. Au moins un détecteur 30 mesure le flux lumineux produit. I1 fournit un signal à l'unité de traitement 40 qui assure, après étalonnage, l'extraction des valeurs P1 et P2 des paramètres à partir de Çi et Si une telle fibre de mesure peut être utilisée dans un montage interférométrique classique, il est particulièrement intéressant d'utiliser les techniques d'interférométrie en lumière blanche (figure 5).Dans ce cas, la source S à spectre large peut être considérée comme émettant des trains d'onde 10 de longueur égale à la longueur de cohérence de la source. Le train d'onde est couplé sur au moins trois des modes de la fibre, par exemple LPllG/Gx LP11G/P et LPllp/G. A l'extrémité de l'élément de fibre sensible, le train d'onde initiale 10 est décomposé en trois trains d'onde 11, 12, 13 séparés temporellement à cause de la différence de vitesses des modes. Ces trois trains d'onde 11, 12, 13 sont recombinés par le moyen d'analyse 4 mais ne peuvent pas interférer car ils n'ont pas de recouvrement temporel. L'information de déphasage est cependant codée spectralement et peut être restituée en faisant passer ces trois trains recombinés dans un interféromètre d'analyse 14 qui a une différence de marche variable.Le contraste des franges réapparait alors quand la différence de marche de l'interféromètre de relecture compense les déphasages de la fibre de mesure. la mesure des différences de marche restaurant un maximum local de contraste permet de détecter à distance les déphasages g i(P1, P2), & 2(P1, P2) deux à deux entre les trois modes.
L'interféromètre de relecture 14 peut être un interféromètre de MICHELSON par exemple ou bien un interféromètre à coin d'air où l'interférogramme est projeté sur une barrette de photodiodes. Ces interféromètres sont en eux-mêmes connus.
On a jusqu'à présent décrit un dispositif de mesure à fibre optique permettant de réaliser des mesures en un point, plus précisément d'accéder aux effets cumulés des paramètres observés sur toute la longueur de la fibre de mesure. Ce dispositif est bien adapté à la réalisation de mesures multiplexées, c'est-à-dire aux mesures indépendantes de l'effet des paramètres étudiés P1 et P2 entre différents points successifs A1, A2, A3, etc... d'une même fibre optique.
A cet effet, (figures 8 à 10) on crée à chacun de ces points A1, A2, A3, etc... un léger couplage entre les différents modes transitant dans la fibre de mesure 1. Ces points de couplage sont en pratique réalisés en produisant sur la fibre, en un point donné, une légère torsion, en portant ce point à une certaine température puis en relâchant la torsion. Ces points de couplage produisent un transfert d'une partie de l'énergie contenue dans chacun des modes dans chacun des autres modes.
Les modes LP11 spatiaux ayant une orientation axiale similaire aux modes de polarisation linéaire, une rotation des axes de symétrie de la fibre de mesure crée un couplage entre un mode LP11 et le même mode spatial de polarisation orthogonale mais aussi un couplage de valeur similaire entre ce mode LP11 de départ et le mode LP11 spatialement orthogonal et de même polarisation. Le couplage dans le mode de structure spatiale et de polarisation orthogonale peut être considéré comme du deuxième ordre et donc négligeable.
Dans ce cas, le couplage de la source S à l'entrée de la fibre optique de mesure 1 est réalisé selon l'un des modes, par exemple le mode LP11G/G et la source lumineuse S à spectre large émet des trains d'onde.
A chaque point de couplage, le train d'onde émis (LP11G/G) donne naissance à des trains d'ondes faibles selon les deux autres modes (L1lG/pt L11p/G) On obtient donc en sortie de la fibre, un train principal (LP11G/G) et une série de trains de faible intensité (LPlîG/Pi), (LP11p/Gi) où i représente le point de couplage Ai.
A la sortie de la fibre de mesure, on produit la recombinaison entre le flux lumineux contenu dans le mode initialement excité LP11G/G et les flux sortants dans les deux autres modes, LP1lG/p et LP1lp/G.
L'invention a pour objet, surtout, de faire en sorte que ledit procédé soit applicable à d'autres substrats, en l'occurrence les phénols et amines aromatiques et ce avec un rendement amélioré.
L'intérêt de ce procédé est d'autant plus grand que les produits obtenus soit sont dans de nombreux cas doués de propriétés intéressantes dans les domaines pharmaceutiques et phytosanitaires, soit constituent des intermédiaires de valeur permettant d'accéder à de tels produits.
Et les Inventeurs ont eu le mérite de trouver, à l'issue de recherches approfondies, que la préparation de composés organiques du soufre et du sélénium à partir de phénols et d'amines aromatiques devenait possible avec un rendement satisfaisant dès lors que - dans une première étape, on génère les cations électro philes en ayant recours à un milieu comportant un solvant et un électrolyte support dans lequel plonge une électrode soluble à base de carbone et de soufre ou sélénium, ledit solvant ayant une constante diélectrique telle que la dissociation de l'électrolyte soit suf fi- sante pour assurer une bonne conduction du milieu, ce solvant devant résister par ailleurs à l'oxydation à un potentiel de travail d1au moins 2 volts par rapport à l'électrode de référence au calomel et être facilement éliminable par distillation, ledit électrolyte support étant soluble dans le solvant et résistant à l'oxydation à un potentiel de travail d'au moins 2 volts, la concen tration de l'électrolyte dans le solvant étant par ail leurs d'environ 0,1 à environ 0,2 mole par litre, - dans une deuxième étape, on introduit dans le milieu solvant-électrolyte support comportant les cations élec trophiles générés au cours de la première étape, d'une part le phénol ou l'amine aromatique devant réagir avec lesdits cations et, d'autre part soit une quantité de l'ordre de 1 mole par litre de solvant constitué par un acide organique fort, notamment l'acide trichloroacéti que, soit des quantités catalytiques de fer en poudre ou de chlorure ferrique, soit encore une quantité de 1 à 2 équivalents par rapport au substrat à traiter de base organique, notamment de pyridine ou de 2,6-diméthyl pyridine ou d'un acide de Lewis, notamment du SnC14 ou du Ait3.
Le procédé conforme à l'invention conduit à des rendements qui sont très largement supérieurs à ceux du procédé selon l'art antérieur.
Selon un mode de réalisation préféré du susdit procédé, le solvant mis en oeuvre lors de la première étape est choisi dans le groupe comprenant le dichlorométhane (constante diélectrique = 8,9), le 1,2-dichloroéthane (constante diélectrique = 10,4) et l'acétonitrile (constante diélectrique = 36) et l'électrolyte support est choisi parmi ceux du groupe comprenant le tétrafluoroborate de tétrabutylammonium, le perchlorate de tétraéthylammonium et l'hexafluorophosphate de tétrabutylammonium.
Selon un autre mode de réalisation préféré du susdit procédé, on a recours, pour générer les cations électrophiles, à une cellule d'électro-percolation qui comprend l'électrode soluble à base de carbone et de soufre ou de sélénium, cette électrode qui forme anode consistant en un mélange de poudres des deux produits disposé entre deux membranes, de préférence en toile de graphite, qui permettent le contact électrique, l'ensemble étant agencé de telle sorte que les cations électrophiles s'accumulent dans l'une des parties de la cellule d'où ils sont soutirés régulièrement pour être mis en réaction avec un substrat constitué par un phénol ou une amine aromatique.
Selon un autre mode de réalisation préféré du procédé conforme à l'invention, le substrat est choisi - dans la mesure où il s'agit d'un phénol, dans le groupe comprenant, outre le phénol proprement dit, ceux de formule: 4-chlorophénol 2,6 -diméthoxyphénol 3, 5-diméthoxyphénol 4-bromophénol 4-nitrophénol 1-naphtol 2 -naphtol - dans la mesure où il s'agit d'amines aromatiques, dans le groupe comprenant celles de formule:: aniline
N-éthylaniline
N,N-diméthylaniline N,N-diméthyl-1-naphtylamine 1,2-diaminobenzène diphénylamine L'invention vise encore d'autres dispositions qui s'utilisent, de préférence, en même temps et dont il sera plus explicitement question ci-après.
Et elle pourra, de toute façon, être bien comprise à l'aide du complément de description, des exemples et du dessin qui suivent et qui sont donnés à titre non limitatif pour illustrer des modes de réalisation avantageux.
Dans le dessin, la figure unique représente en coupe schématique un mode de réalisation de la cellule d'électropercolation mise en oeuvre conformément à l'invention.
Se proposant, par conséquent, de préparer des composés du soufre et du sélénium avec des phénols et des amines aromatiques, on s'y prend comme suit ou de façon équivalente.
Il s'agit tout d'abord de générer les cations électrophiles S six++ et Sex Pour ce faire, on a recours à un milieu comportant un solvant et un électrolyte support dans lequel plonge une électrode soluble formant anode à base de carbone et de soufre ou de sélénium.
Le solvant est choisi parmi ceux qui ont une constante diélectrique telle que la dissociation de l'électro- lyte soit suffisante pour assurer une bonne conduction du milieu; il doit résister à l'oxydation à un potentiel de travail d'au moins 2 volts par rapport à l'électrode de référence au calomel et il doit être facilement éliminable par distillation.
Avantageusement, il est choisi dans le groupe comprenant le dichlorométhane (constante diélectrique = 8,9), le 1,2-dichloroéthane (constante diélectrique = 10,4) et l'acétonitrile (constante diélectrique = 36).
L'électrolyte support est choisi parmi ceux qui sont solubles dans le solvant et qui résistent à l'oxydation à un potentiel de travail d'au moins 2 volts; sa concentration dans le solvant est choisie dans le domaine d'environ 0,1 à 0,2 mole par litre.
Suivant une réalisation particulière de l'invention, le conduit d'alimentation précité et ses logements associés sont réalisés dans un matériau non poreux, et des joints d'étanchéité au carburant sont placés entre respectivement les parties supérieure et inférieure de l'injecteur et la paroi des logements en regard de ces parties.
Les logements des injecteurs sont reliés entre eux par une platine de renfort.
Les injecteurs sont maintenus en position dans les logements grâce à une plaque coiffant la partie supérieure desdits logements, et fixée sur la platine de renfort au moyen d'une vis.
On précisera que la partie inférieure de la paroi des logements comporte une platine assurant la fixation du dispositif sur le conduit d'admission ou à proximité de ce conduit d'admission du cylindre.
Suivant une autre caractéristique de l'invention, un joint d'étanchéité plat est interposé entre la partie inférieure de la paroi d'au moins un logement et le bord de l'ouverture correspondante du conduit d'admission.
Suivant une variante de réalisation de l'invention, l'étanchéité entre la partie inférieure de la paroi d'au moins un logement et le bord de l'ouverture correspondante du conduit d'admission est réalisée au moyen d'un joint torique.
Suivant une autre forme de réalisation, un joint d'étanchéité plat est interposé entre la paroi inférieure de la platine d'au moins un logement et le bord de l'ouverture correspondante du conduit d'admission.
Mais d'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparatront mieux dans la description détaillée qui suit et se réfère aux dessins annexés, donnés uniquement à titre d'exemples et dans lesquels - la figure 1 est une vue partielle et en coupe transversale, du dispositif d'alimentation et de maintien de plusieurs injecteurs de carburant selon l'invention, implanté dans un moteur à combustion interne - la figure 2 est une vue de dessus de ce dispositif sans les injecteurs - la figure 3 est une vue en coupe suivant la ligne III-III de la figure 2, et illustrant trois variantes de réalisation de montage étanche du conduit d'alimentation sur le conduit d'admission La figure Lt est une vue en coupe, suivant la ligne IV-IV de la figure 3, et illustrant le conduit d'alimentation de l'invention sans la présence d'injecteur - les figures 5 et 6 sont des vues en coupe suivant respectivement les ligne V-V et VI-VI de la figure 3.
En se reportant à la figure 1, on voit un des injecteurs 2 de carburant du système d'injection d'un moteur, introduit et centré dans un des logements 10 formés en même temps qu'un conduit d'alimentation latérale 1 des injecteurs 2. Ce logement 10 présente une forme correspondant sensiblement à celle de l'injecteur 2, et sa partie supérieure présente un évidement annulaire 100 destiné à recevoir une partie supérieure de forme correspondante de l'injecteur 2 de manière à assurer son positionnement dans ledit logement 10 (figure 5).
Ce conduit d'alimentation 1 et ses logements 10 associés sont réalisés dans un matériau non poreux présentant des caractéristiques d'étanchéité au carburant satisfaisantes. La partie inférieure du logement 10 est introduite et centrée dans une ouverture 30 du conduit d'admission 3 d'un cylindre du moteur, à travers laquelle est injecté le carburant. Deux joints d'étanchéité au carburant Lt sont interposés respectivement, entre les parties supérieure 21 et inférieure 22 des injecteurs 2, et la paroi 11, 12 des logements 10 en regard de ces parties 21, 22, de sorte que la partie de l'injecteur 2 située entre ces deux joints Lt se trouve noyée dans le carburant.Pour assurer l'étanchéité de la liaison entre le logement 10 et le conduit d'admission 3 du cylindre, un joint 8 est interposé entre les parois d'extrémité de la partie inférieure 13 du logement 10 et les parois délimitant un évidement 17 ménagé dans le bord de l'ouverture 30 du conduit d'admission 3.
Sur les figures 2, 3 et Lt, on voit que le dispositif d'alimentation et de maintien comporte trois logements 10 destinés à recevoir chacun un injecteur 2, reliés entre eux par une platine de renfort 18. Chaque injecteur 2 est maintenu en position dans son logement 10 au moyen d'une plaque 5 coiffant l'injecteur 2, dans laquelle a été ménagée une ouverture permettant le passage de la partie supérieure 24 de l'injecteur 2. La plaque précitée 5 prend appui par sa face inférieure sur le bord supérieur des logements 10, et est fixée sur la platine de renfort 18 par l'intermédiaire d'une vis de fixation 101.
On voit en outre, que la fixation du dispositif selon l'invention, sur le conduit d'admission 3, est réalisée au moyen d'une platine 1lut, formée à la base des logements 10, et dans laquelle a été ménagée une ouverture 14a pour le passage d'une vis de fixation destinée à être vissée sur le conduit d'admission 3 du cylindre. Pour permettre ce vissage dans le cas du logement 10 médian, il est prévu, dans la platine 18, une découpe 18a, au droit de l'ouverture 14a pratiquée dans la platine 14 solidaire de ce logement. Il est à noter que l'on peut prévoir également une fixation de la platine 14 au voisinage dudit conduit d'admission 3.