INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Afin de faire communiquer entre eux les TRCV-S des différentes stations, il est fait appel à une boucle à jeton supportée par des artères à haut débit reliant entre elles les stations concernées. Le débit instantané d'ETHERNET étant de 10 Mb/s, il- faut l'équivalent de 156,25 voies temporelles à 64 kb/s pour acheminer ce débit. En prévoyant 156 voies temporelles, l'insuffisance du débit ainsi offert provoque, dans la station émettrice, une accumulation qui peut atteindre 2 à 3 octets pour les trames les plus longues (1518 octets). Cette accumulation est aisément absorbée par une mémoire FIFO constituant un troisième tampon. Les 156 voies temporelles affectées à ETHERNET se répartissent toutes les 6 à 7 voies temporelles de la trame de 125 microsecondes, afin d'obtenir la répartition la plus régulière possible sur les 1024 voies temporelles de cette trame.L'interface entre le transceiver TRCV-S et la boucle est gérée par un microcontrôleur, le MC.
-Sur le BUS-MC de ce contrôleur est place l'équivalent d'un coupleur ETHERNET. Ce dernier peut être constitué par exemple d'un transcodeur Manchester DP8391 fourni par la Société NATIONAL SEMICONDUCTOR (NS), le TRSCOD et d'un coprocesseur de réseau-local DP 8390, de la même société, le COPRO. Le coprocesseur est capable de gérer l'accès au câble CCX selon les procédures 802-3 et de ranger ou d'extraire les trames de données en mémoire RAM, selon une procédure de chaînage, les trames étant rangées les unes à la suite dans une zone de mémoire tampon et relues dans cet ordre.
Les messages d'anomalie sont transmis au BUS-MP par l'intermédiaire d'un coupleur CMP. Dès qu'une trame provenant du câble CCX est prise en compte par le coprocesseur, le microcontrôleur MC en est averti et émet un message DPE vers un automate chargé de gérer la boucle de données ETHERNET, l'AUTOMATE E, synchronisé par le BUS BT. Cet automate extrait les données, concernant cette boucle et provenant du BUS-EM, pour les charger dans un registre parallèle de 10 bits, le EM-ETH, à partir d'une commande VEM-ETH. Lorsque la boucle ETHERNET est fermée sur la station, le contenu de EM-ETH est cycliquement transféré, via un BUS-LOCAL-ENTREE, vers un registre de rebouclage REB-ETH, par une commande VSB-E émise par l'AUTOMATE E. Le contenu de REB-ETH est à son tour transféré dans un registre REC-ETH, via le BUS-LOCAL SORTIE, par une commande V-REC-E , puis sur le BUS-REC.
Après avoir reçu le message DPE, l'AUTOMATE E surveille le passage du jeton circulant sur la boucle ETHERNET.
L'arrivée de ce jeton dans la station est détectée par un circuit décodeur, le DEC-E, placé sur le BUS-LOCAL-ENTREE, et qui reconnaît la configuration R S correspondante.
Le DEC E produit un signal JETON-E émis vers l'AUTOMATE E, lequel envoie un signal PAE à l'attention du microcontrôleur. Simultanément la commande VSBE est invalidée, interdisant ainsi le bouclage et l'AUTOMATE E émet une signalisation DTFS vers une interface de transfert ITFS entre la mémoire RAM et le BUS-LOCAL SORTIE. Grâce à une fonction DMA gérée par le coprocesseur, la trame va être transférée, octet par octet, vers le BUS-REC. En fin de transfert, l'AUTOMATE E, lors de la disparition du signal DPE, envoie vers un circuit codeur le COD-E, respectivement des commandes EM TEMOIN et EM-JETON qui vont provoquer les émissions successives du témoin et du jeton sur la boucle, via le BUS-LOCAL-SORTIE et le BUS-REC.
Au retour du témoin, le circuit DEC-E produira un signal TEMOIN-E qui va inviter l'AUTOMATE E à rétablir le bouclage via REB-ETH. Dans le même temps, l'AUTOMATE E établit une validation DTFE vers une interface ITFE, laquelle met en communication le BUS-LOCAL-ENTREE avec une zone de rangement en mémoire RAM, sous le contrôle du coprocesseur. On remarque que la réception n'est pas permanente comme dans le cas de la boucle de signalisation. Ainsi toute trame circulant sur la boucle ETHERNET, parviendra en mémoire RAM et le coprocesseur établira une demande d'émission vers le câble CCX à destination des terminaux raccordés sur la station.
Ces deux compartiments pourront pivoter grâce à l'ouverture d'une fermeture éclair et faciliteront le rangement.
D'autres particularités et avantages de l'invention ressortiront encore de la description ci-après d'un exemple non limitatif.
Aux dessins annexés * la figure 1 est une coupe schématique longitunidale au niveau de l'âme centrale (7), X la figure 2 est une vue schematique des gouttières (3 - 4 par exemplepour balles et bouteilles sur le support de l'âme (1) i la figure 3 est une vue supérieure longitudinale du sac laissant apparaître les éléments internes. (compar timents, âme, raquettes, gouttières, fermeture exté rieure, cache grille).
& la figure 4 est une vue supérieure schématique longitu dinale du sac laissant apparaître la grille par ouverture du cache grille.
* la figure 5 est une coupe frontale schématique du sac, laissant apparaitre l'âme centrale, les compartiments raquettes, les gouttières, ainsi que la grille et le cache grille.
i la figure 6 est une vue externe du flanc du sac et met en évidence les orifices de sortie des raquettes et des balles.
Le sac représenté à la figure 1 comprend un élément de l'âme centrale (1) qui maintiendra latéralement les raquettes.
On remarque au niveau médian une échancrure (8) de l'âme (1) permettant la prise de la raquette par les branches de celle-ci lors d'une sortie interne du sac, c'est à dire par l'ouverture supérieure de ce meme sac. Ceci ayant pour but d'optimiser la facilité de préhension de la raquette du sac.
Le matériau choisi pour cette âme centrale sera de préférence de la matière plastique relativement rigide pouvant etre injectée ou moulée ou autre.
On remarque, toujours sur cette figure 1, l'ouventure et fermeture externe (5) pour la sortie externe,du flanc du sac des raquettes, il suffira de tirer sur une languette (12) pour ouvrir l'orifice de la raquette ou compartiment (2).
Ce type de fermeture ou ouverture externe pourra se faire, par exemple, grâce à des ("VELCROS" R).
Selon l'invention, l'âme dite centrale (1) comprend des panneaux rigides entre lesquels nous trouvons des compartiments (2).
Le nombre de compartiments sera limité en fonction de la grandeur du sac, notamment au niveau de sa largeur.
Comme le montre la figure 2, sur les flancs du panneau de l'âme centrale (1) on disposera deux types de gouttières inclinées de haut en bas et de dedans en dehors.
Un type de gouttières pour les balles, par exemple, de tennis qui pourront être disposées par l'intérieur du sac, par l'ouverture supérieure et pouvant âtre enlevées soit par l'intérieur du sac, soit par l'extérieur grâce à une fermeture ou ouverture externe (6) solidaire du sac, par exemple grâce à des ("VELCROS" R). Le fait d'incliner cette gouttière permet la descente des balles automatiquement grâce à l'effet de pesanteur.
Le type de gouttière (3) correspondant au rangement des balles pourra âtre réalisé en toute matière permettant le glissement des balles, le non écrasement de cette même gouttière et une certaine légéreté du matériau pourne pas alourdir le sac.
Cependant l'urokinase, si son action est systémique, peut entrainer un risque hémorragique aux doses couramment employées en thérapeutique.
On sait que le système enzymatique de fibrinolyse est placé sous la dépendance du plasminogène, qui peut être activé en plasmine, la plasmine catalysant la dégradation de la fibrine. On distingue les inhibiteurs de la plasmine, comme l'alpha 2 anti-plasmine et les activateurs du plasminogène. La régulation est effectuée grâce à des interactions moléculaires entre le plasminogène, les activateurs du plasminogène et la fibrine. Parmi les activateurs du plasminogène, l'urokinase double chaîne présente une forte affinité pour le plasminogène qu'elle peut activer même en l'absence de fibrine. Ceci la différencie de la pro-urokinase, qui présente également une forte affinité, mais ne semble activer le plasminogène qu'en présence de fibrine, d'où une relative spécificité pour les caillots de fibrine.Cette absence d'activité systémique rend l'utilisation de la pro-urokinase particulièrement intéressante en thérapeutique.
La pro-urokinase a tout d'abord été isolée dans l'urine humaine et à partir de différentes cultures cellulaires, mais le gène responsable de son expression a pu être isolé et cloné, pour l'obtention de la protéine recombinante.
La production de protéines recombinantes par des bactéries, en particulier par E. coli, se heurte à un problème de purification.
En effet, la protéine est secretée au sein de corps d'inclusion, insolubles. Classiquement, on va d'abord concentrer les cellules microbiennes à partir du milieu de culture, par centrifugation ou ultrafiltration. La membrane des cellules est rompue par broyage mécanique ou sonication ou traitement enzymatique et les corps d'inclusion sont récoltés par centrifugation. Lors de cette centrifugation, le surnageant contient les constituants solubles de la bactérie. Mais la fraction particulaire ainsi recueillie, ou pellets, contient outre les corps d'inclusion renfermant les protéines recombinantes, des cellules non broyées, des débris cellulaires et des contaminants protéiques, solubles ou non.
Les pellets bruts sont ensuite lavés. Ce lavage est réalisé par une solution tampon aqueuse, afin d'éliminer les contaminants solubles.
Toutefois, ceci implique des étapes de mélange et de centrifugation supplémentaires, et ne peut être effectué aisément à grande échelle.
Les protéines insolubles présentes dans les pellets sont ensuite mises en solution par dénaturation, en faisant varier la composition du milieu. Ainsi, dans US 4 694 073, la somatotropine recombinante est solubilisée par addition d'urée et/ou de diméthylsulfone. US 518 526 propose comme solution de dénaturation une solution contenant par exemple du chlorhydrate de guanidine, de l'urée, du SDS ou du Triton. Les composés insolubles doivent ensuite être éliminés par centrifugation, ce qui donne des résultats imparfaits.
La protéine est ensuite renaturée par suppression des agents dénaturants dans son environnement ; ceci est réalisé en diluant la solution de dissolution.
On peut ensuite procéder à des étapes de purification ultérieures par chromatographie d'échange d'ions ou filtration sur gel.
C'est pourquoi la présente invention concerne un procédé de purification d'une protéine secrétée sous forme de corps d'inclusion insolubles par une bactérie, caractérisé en ce que a) on récolte les corps d'inclusion sous forme de pellets par broyage des cellules microbiennes et centrifugation, b) on met les pellets en suspension avec une solution de substance hydrosoluble pouvant être gélifiée, c) on injecte goutte à goutte le mélange des pellets et de la solution de substance hydrosoluble, dans une solution de gélification, par exemple une solution contenant des cations multivalents, réalisant ainsi l'encapsulation des pellets dans la substance gélifiée, d) on met les pellets encapsulés en présence d'une solution de dissolution contenant au moins un agent chaotropique et éventuellement un agent réducteur, e) on obtient la protéine dénaturée et purifiée en solution.
Certaines protéines, en particulier les protéines hétérologues dont le gène est introduit dans le génôme de la bactérie sont maturées par celle-ci sous forme de corps d'inclusion. Ces corps d'inclusion, qui présentent un indice de réfraction les différenciant, forment des agrégats insolubles dans le cytoplasme.
Afin de récupérer la protéine sous forme purifiée, il faudra tout d'abord isoler les corps d'inclusion. Pour cela on réalise un broyage mécanique des cellules microbiennes, préalablement concentrées par centrifugation, microfiltration ou ultrafiltration.
Après le broyage, une centrifugation de 4 000 à 5 000 g permet de séparer les pellets qui sont remis en suspension dans une solution tampon ; en particulier, on peut utiliser du tampon Tris- HC1 10 mM, pH 8,5. De préférence, l'ensemble de ces étapes est conduit à une température proche de 4"C, afin d'inhiber les protéases pouvant être présentes dans la préparation.
La suspension des pellets dans une solution d'une substance hydrosoluble pouvant être gélifiée peut être réalisée par mélange d'une solution de cette substance avec la suspension de pellets. Elle peut également être réalisée en ajoutant cette substance sous forme de poudre à la suspension de pellets.
Par substances hydrosolubles pouvant être gélifiées, on entend des substances qui, sous l'effet d'une solution de gélification par exemple d'une solution présentant un certain pH ou par exposition à des cations multivalents, vont donner une masse conservant sa forme, essentiellement sous forme de gouttelettes solides.
Lors de la recherche de l'origine de l'action du méthanol, on a été amené à analyser les produits formés dans la réaction étudiée. Après évaporation à sec de la solution ultrafiltrée et extraction du PNP avec un minimum d'eau distillée, le résidu a été solubilisé dans le mélange eau-méthanol 75:25. L'analyse dichrographique de la solution obtenue n'a révélé aucune trace d'activé optique attribuable au chromophore aromatique CBZ attaché à la L-leucine chirale.
On a pu alors montrer qu'en réalité le groupement amine de la leucine se trouvait également déprotégé par hydrolyse basique et décarboxylation selon la réaction connue où R est le reste de l'acide aminé.
Or, cette réaction de déprotection du groupement N-CBZ est connue pour ne se produire qu'en milieu fortement alcalin, à pH supérieur à 10.
Cette observation surprenante montre la nature fortement basique du coeur des microglobules utilisées comme catalyseurs. Cette nature fortement basique avait déjà été soupçonnée lors de l'observation de l'excès d'ionisation du PNP piégé dans le coeur des microglobules, et du rôle nocif du gaz carbonique.
Par ailleurs, la formation de gaz carbonique par décarboxylation du CBZ pourrait expliquer pourquoi les essais successifs conduisaient à l'inhibition du catalyseur.
Toutefois, lors d'essais effectués avec le catalyseur en solution aqueuse (sans alcool), pour hydrolyser le caproate de p-nitrophényle, qui ne possède pas de groupement protecteur N-CBZ > on a à nouveau constaté un vieillissement du catalyseur. Il est probable que dans ce cas, le vieillissement était dû à une accumulation dans le catalyseur de l'acide caproique formé, soit par interaction hydrophobe, soit parce qu'il est un acide faible qui peut contribuer à neutraliser le milieu fortement basique formé par les coeurs des microglobules.
On a de toute façon constaté que les problèmes rencontrés concernant les effets nocifs du gaz carbonique, de l'accumulation de PNP et éventuellement de l'accumulation d'un acide formé, étaient résolus en utilisant comme milieu réactionnel un mélange d'eau et d'alcool, qui permet d'opérer sans vieillissement du catalyseur, même lorsque la réaction catalysée fournit du gaz carbonique dont on sait pourtant qu'il est nuisible à l'action du catalyseur.
Il est également important de remarquer que la découverte de l'hydrolyse du groupement N-CBZ dans un milieu aqueux à pH neutre, grâce au système catalyseur polymère, n' avait jamais été observée. En fait, on n'avait jamais observé avec les catalyseurs polymère la possibilité de mettre en oeuvre une réaction dans des conditions où normalement elle ne se produit pas. En effet, la réaction d'hydrolyse des esters p-nitrophénoliques, étudiée dans l'art antérieur cité ci-dessus, se fait déjà, quoique très lentement, à pH neutre, alors que ce n'est pas le cas pour la réaction de clivage du groupement N-CBZ.
Il s'agit là d'un effet surprenant, qui peut être mis à profit en chimie préparative grâce au procédé en continu de l'invention. Le procédé de l'invention peut ainsi être utilisé pour effectuer à pH faiblement alcalin, et même éventuellement à pH légèrement acide, une réaction chimique qui n'a lieu, dans les milieux homogènes, qu a un pH au moins égal à 9, ou même égal à 10.
Un autre intérêt du procédé de l'invention, dans ce cas, est de permettre la déprotection simultanée d'un groupe amine protégé par un carbamate et d'un groupe carboxylique protégé sous forme d'ester.
L'exemple suivant illustre l'invention.
EXEMPLE Le dispositif expérimental, qui est décrit schématiquement dans la figure unique annexée, comprend principalement une cellule d'ultrafiltration 1, munie d'une membrane d'ultrafiltration 2. Un réservoir 3 destiné à recevoir une solution de la substance hydrophobe dans un solvant approprié est relié à la cellule d'ultrafiltration par l'intermédiaire d'une conduite 4 permettant l'introduction de la solution de substance hydrophobe dans la cellule 1. Le réservoir 3 est relié à une bouteille d'azote (non représentée) par l'intermédiaire d'une conduite 5. La pression d'azote est régulée par un manomètre 6 et permet l'introduction continue ou discontinue, à un débit ajustable, de la solution de substance hydrophobe.L'augmentation de la pression d'azote entraîne également l'augmentation de la pression de l'atmosphère présente au-dessus du milieu réactionnel dans la cellule 1, ce qui permet de régler le débit d'ultrafiltration et également de maintenir le niveau constant dans la cellule I. Par l'intermédiaire de la vanne à plusieurs voies 7, on peut également introduire dans la cellule 1 de l'eau distillée ou tout autre solvant contenu dans un réservoir approprié. La solution passant à travers la membrane d'ultrafiltration est recueillie dans un conteneur 8.
Dans le dispositif particulier utilisé, la cellule d'ultrafiltration avait un volume de 50 cm3. Cette cellule était équipée d'une électrode (non représentée) pour mesurer en permanence le pH, ainsi que d'une microseringue (non représentée) asservie à une vis micrométrique pour introduire avec précision des microquantités d'acide chlorhydrique ou de solution de soude (NaOH), sans ouvrir la cellule, afin d'ajuster le pH.
Le milieu réactionnel est maintenu homogène grâce à un barreau aimanté 9 actionne par un agiteur magnétique externe non représenté.
La cellule est équipée d'une membrane d'ultrafiltration DIAFLO YM 10 (AMICON) d'une surface de 4 cm2 (seuil de coupure : 10 000 Daltons).
Le dispositif décrit ci-dessus a permis d'hydrolyser et de déprotéger en continu, le L-leucinate de p-nitrophényle dont le groupement amine est protégé sous la forme de CBZ.
On a illustré sur la figure 6 les profils théoriques P Tio, PT 20 et PT 3 o de la strie obtenue, respectivement pour des cotes z = 10 mnm, z = 20 mm et
z = 30 mm.
Dans le présent exemple, il s'est avéré avantageux de substituer au profil P Tio un profil réel P Rio constitué par une portion de parabole d'axe Oy et de distance focale de 7,60 mm En revanche, on a trouvé que les profils PT 2 o et P Tao étaient approchés de façon - optimale par des profils réels PR 20 et PR 3 o constitués par des 'portions d'hyperboles d'équation 2 /a 2 y 2/b 2 + 2 y/a = O ( 2) avec a = 104,71 et b = 49,14 pour le profil PR 20 et a = 99,88 et b = 55,52 pour le profil PR 3 o. Dans la représentation de la figure 6 également, les profils P Rio à PR 30 ne peuvent pratiquement pas être
distingués des profils théoriques correspondants.
En référence maintenant aux figures 7 a et 7 b, on a illustré deux manières possibles de juxtaposer sur une glace de fermeture des stries réalisées conformément à la
Dans l'exemple de la figure 7 a, les stries individuelles S sont délimitées latéralement par deux plans verticaux
PV parallèles au plan y Oz.
Dans l'exemple de la figure 7 b, on réalise particulièrement avantageusement des stries alternativement en creux et en plein et séparées par des plans de transition qui ont même inclinaison que les prismes élémentaires marginaux desdites stries Les stries ont ici une longueur L, en s'étendant vers le bas
à partir d'une cote z = 0.
Ainsi sur cette figure, la strie Si est réalisée comme décrit plus haut, c'est à dire que la courbe d'appui Poi est un arc de cercle (ou autre courbe sans rupture de pente) concave situé dans la partie supérieure de la strie En revanche, la strie immédiatement voisine 52 est réalisée avec le même type de construction, mais en prenant comme courbe d'appui PL 2 un arc de cercle (ou autre courbe régulière) convexe situé dans la partie inférieure de la strie En corollaire, les stries Si et 52 sont séparées par un plan de transition incliné Pl qui est perpendiculaire au plan de la glace et qui s'étend parallèlement à l'inclinaison du prisme él J'mnentaire il - frontalier de chacune des deux stries, présentant l'angle de prisme maximal On peut noter ici que l'on peut réaliser deux stries se raccordant l'une à l'autre sans rupture de pente Il suffit en effet de s'assurer que le profil de base PL 2 de la strie 52 se raccorde lui-même sans rupture de pente avec le profil P Li de la strie Si à la même hauteur Ainsi l'on retrouve de part et d'autre du plan de transition entre les deux stries deux prismes élémentaires ayant même angle de prisme et même inclinaison par rapport à la verticale, ladite inclinaison correspondant par ailleurs à celle dudit plan
de transition.
Dans la description qui précède, on a décrit des
stries permettant de dévier latéralement des rayons incidents sans induire de rabattement vertical Mais il est bien entendu que l'invention s'applique également à la réalisation de stries destinées à étaler un faisceau lumineux par exemple au-dessous d'un demi-plan de coupure montant, incliné à 15 par rapport à l'horizontale, tel que prévu notamment dans les règlements européens en la matière Dans ce cas, les couples (A,i) de chaque prisme élémentaire PE sont calculés de manière à ce que lesdits prismes assurent une déviation selon la direction appropriée, parallèle au demi-plan incliné C'est ainsi
que, dans la description tout comme dans les
revendications, le terme "horizontal" ne doit pas être
Avantageusement, on prévoit un couvercle formé par un flan présentant sur deux côtés opposés un pan divisé par une ligne de pliage en deux bandes dont celle qui est à l'intérieur est destinée à recouvrir le pan replié de chaque paroi latérale de la barquette et celle qui est à l'extérieur est destinée à être repliée au-dessous dudit pan.