INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
C'est pourquoi l'étape suivante va consister à dénaturer les protéines présentes sous forme insoluble. Pour cela, les pellets encapsulés sont mis en présence d'une solution de dissolution. Cette solution contient au moins un agent chaotropique, dont le rôle est de provoquer la dissociation des protéines en altérant leur configuration spatiale ou leur conformation ; la solution peut contenir également au moins un agent réducteur, qui va rompre les ponts disulfures des protéines.
Parmi les agents chaotropiques, on peut citer l'urée et le chlorhydrate de guanidine. L'un des agents préférés est le chlorhydrate de guanidine 6M.
Parmi les agents réducteurs, on peut citer le 2-mercaptoéthanol et le dithiothreitol. Un agent préféré est le 2-mercapto-éthanol 50 mM. Par action de cette solution de dissolution, les protéines dénaturées sont solubilisées et libérées des particules encapsulées. Les protéines passent à l'extérieur de la capsule, alors que les contaminants insolubles restent emprisonnés. La capsule doit résister au milieu dénaturant.
Dans les étapes suivantes, la protéine va être renaturée. Pour cela, après élimination des particules insolubles, on va diluer progressivement la solution par addition de tampon. La concentration en agents dénaturants décroit donc et la protéine se renature avec un excellent rendement. Le rendement de récupération de la protéine est proche de 100 %.
On procède ensuite à la purification finale de la protéine, par chromatographie d'échange d'ions et chromatographie hydrophobe.
Cette technique est reproductible et facilement extrapolable à grande échelle. Elle rend inutile l'étape de centrifugation de la solution de dissolution, l'élimination des composés insolubles étant réalisée par encapsulation.
L'encapsulation des pellets permet d'effectuer plus facilement leur lavage. La présente invention concerne donc un procédé de purification tel qu'il a été défini, caractérisé en ce qu'on lave par une solution tampon les pellets encapsulés, avant de réaliser l'étape de dissolution. De manière préférée, on utilise une solution tampon Tris- HC1 10 mM, pH 8,5 contenant 0,1 96 de Triton X-100 dans laquelle on laisse incuber les pellets encapsulés, sous agitation douce, à basse température (4 - 6"C).
Cette étape permet l'élimination des composés solubles, et les pellets encapsulés sont remis en suspension dans du tampon avant d'être mis en présence de la solution de dissolution.
Les pellets bruts obtenus après broyage et centrifugation des cellules microbiennes peuvent être lavés avant d'être encapsulés.
L'invention se rapporte également à un procédé de purification d'une protéine secrétée sous forme de corps d'inclusion, caractérisé en ce qu'on lave et on homogénéise les pellets avant de réaliser la suspension. En particulier, les pellets peuvent être lavés par du tampon Tris- HCl 10 mM, pH 8,5 contenant 0,1 % de Triton X-100. Les pellets lavés sont concentrés par microfiltration et remis en suspension dans du tampon Tris- HCl 10 mM, pH 8,5.
La présente invention se rapporte à un procédé de purification d'une protéine, caractérisé en ce que la protéine est secrétée par une souche d'Escherichia coli. En effet, on a pu sélectionner des souches de cette bactérie particulièrement aptes à produire des protéines. Ces protéines peuvent se trouver secrétées sous forme de corps d'inclusion.
E. coli est un hôte de choix pour le clonage de gènes. C'est pourquoi la présente invention se rapporte à un procédé de purification d'une protéine caractérisé en ce que la protéine est une protéine recombinante, produite par E. coli.
Le secteur technique de l'invention est le domaine de construction de parois tels que les murs de bâtiment, et de la fabrication des outillages de maçonnerie nécessaires à cette construction.
Une des applications principales de l'invention est en effet de permettre à tous les hommes de métier et même aux non professionnels de prendre une verticale facilement sans risque de fil entortillé ou sale, et de pouvoir contrôler et réaliser des murs ou parois bien verticaux.
On connaît en effet depuis de très nombreuses années l'usage de "fil à plomb" dont la définition figure au dictionnaire comme étant "un instrument formé d'une masse de plomb fixée à un fil servant à donner la verticale11 : cet instrument peut être ainsi bricolé par toute personne disposant ainsi d'une telle masse et d'un fil ; et pour que celui-ci permette un bon contrôle de verticale il faut qu'il soit accroché au centre de gravité de cette masse et que celle-ci ne frotte pas contre l'objet.
Pour cela, il s'avère qu'il est nécessaire que cette masse soit de forme au mieux cylindrique et maintenue assez éloignée de l'objet à contrôler soit que le point d'accrochage de l'extrémité supérieure du fil soit à une distance de l'objet au moins égale au rayon du cylindre constituant ladite masse : ces différentes considérations, rajoutées au fait que cette distance ne doit pas être trop importante pour mieux apprécier la verticalité de l'objet et pouvoir y tracer une ligne, amènent les fabricants d'outillages à préparer des formes de plomb et des platines d'accrochage du fil assez élaborées et de dimensions précises.Ainsi certains ont apporté des améliorations à l'une ou l'autre de ces pièces et on relève quelques brevets dans ce domaine, tels que - la demande de brevet FR 2507769 déposée le 15 Juin 1981 par Monsieur MARTIN sur un support de fil à plomb qui comprend des mâchoires mobiles montées sur vis et actionnés à l'extrémité par une tige coulissante, et la demande de brevet FR 2304059 DU 10 Mars 1975 de Monsieur R. MATTEI sur un "dispositif servant à remplacer la plaque du fil à plomb".
- la demande de brevet ER 2266143 déposée le 24 Mars 1975 par la Société STANLES WORDS sur un "plomb pour fil à plomb combiné vertical et horizontal".
Tous ces systèmes comportent, par définition, un fil de liaison entre la plaque support et la masse du plomb et ce fil qui est en général assez long de quelques mètres, est stocké, quand il n'est pas utilisé, en paquet, entortillé autour du plomb ou de lui-même comme une vulgaire ficelle ; provoquant alors des noeuds. prenant la pluie et les salissures, il est souvent mal aisé d'utilisation.
Pour remédier à ce problème surtout quand les distances à contrôler sont grandes et que le fil est d'autant plus long, il est tentant de vouloir enrouler celui-ci pour le protéger et faciliter son stockage dans un boîtier enrouleur : en effet, ce système est déjà utilisé dans de nombreuses autres applications et en particulier pour les fils électriques. ou pour les mètres à ruban de géomètre ; chacune de ces applications ayant ses propres impératifs impose des principes et des réalisations différentes ; ainsi on relève dans le domaine des rallonges de câbles électriques la demande de brevet FR 2615052 déposée le 04 mai 1987 par la Société LEGRAND sur un "enrouleur, en particulier pour câble électrique" présentant latéralement une ouverture pour la sortie du câble et une flasque rotative constituant un tambour d'enroulement et solidaire d'une embase de branchement.
On note également la demande de brevet FR 2582187 déposée le 22 mai 1985 par la Société BRMD SARL sur un enrouleur de cordeau et son piquet". constitué d'une poignée, d'un tube cylindrique d;extrémité conique fermée, d'une bobine avec un cliquet et une couronne crantée permettant son blocage et sur laquelle est enroulé le cordeau.
Dans le domaine des fils à plomb, un dispositif à enrouleur à fait l'objet également d'une demande de certificat d'utilité n02370955 FR déposée le 10 Novembre 1976 puis d'une demande de certificat d'addition FR2424516 du 28 Avril 1978 par Monsieur BONNOT : il s'agit d'un boîtier assez lourd se plaçant horizontalement sur le dessus de l'objet à vérifier et comprenant un contre poids et une équerre support de fixation. Ceci n'est donc pas utilisable en tant qu'outillage à main portatif.Pour cette usage aucun matériel n'existe ainsi à ce jour et la présente invention propose un dispositif adapté à celui-ci car comme indiqué ci-dessus, chaque utilisation du principe d'un roulement pour une application donnée doit être adaptée à celleci et il n'est pas évident de trouver une ou des solutions techniques permettant d'obtenir le résultat recherché avec fiabilité et satisfaction pour les utilisateurs.
En effet, le problème posé est de réaliser un dispositif d'enroulement de fil à plomb qui puisse être manipulé d'une seule main tant à l'enroulement qu'au déroulement, qui protège le fil dans un boîtier et lui permette d'être stocké d'une manière fiable sans risque de blocage et d'usure prématurée du fil, qui assure une disponibilité de longueur du fil à la demande toujours par une seule main et qui donne à l'utilisateur toutes les garanties de solidité, de rapidité et de facilité de mise en oeuvre, et de qualité de contrôle de verticalité.
Une solution au problème posé est un dispositif d'enroulement de fil à plomb comprenant un boîtier renfermant un système à ressort permettant un enroulement automatique dudit fil et toute masse ou plomb connue de forme symétrique de révolution autour de l'axe de ce f-il auquel il est accroché ; ledit boîtier est fermé à sa partie inférieure à une plaque rigide polygonale percée d'un trou au travers duquel passe le fil, et dont un côté au moins de son périmètre extérieur et tangent en projection au cercle le plus grand du plomb lorsque l'ensemble du dispositif est maintenu en position de contrôle de verticalité.
Dans un mode préférentiel de réalisation; ladite plaque fermant le boîtier est de forme carrée dont les quatre côtés sont tangents au cercle extérieur du plomb et dont le trou est alors percé au centre du carré.
De même ledit système à ressort est de préférence constitué d'une part d'un ressort à spirales dont l'extrémité intérieur axiale est solidaire d'une pièce immobilisée en rotation et situé suivant l'axe horizontal et l'extrémité périphérique est accrochée à une flasque dudit tambour, ledit ressort étant renfermé dans un logement cylindrique faisant partie dudit tambour, et d'autre part d'un ressort situé dans l'axe autour de ladite pièce fixe et pouvant être comprimé entre une paroi du boîtier et ledit logement.
Le résultat est de nouveaux dispositifs d'enroulement de fil à plomb pour permettre à tous les hommes de métier, et même à des non professionnels, de prendre une verticale facilement sans risque de fil entortillé ou sale et pouvoir contrôler et réaliser des murs ou parois bien verticaux.
Les dispositifs suivant l'invention répondent en effet aux inconvénients cités précédemment et au problème posé : en effet d'une part de par la disposition des pièces les unes par rapport aux autres, la qualité de contrôle de verticale est garantie, et d'autre part de part la conception compacte du boîtier du système d'enroulement l'ensemble peut être tenu et manoeuvré d'une seule main ; ceci est très important pour les travaux réalisés par les hommes de métier qui ont souvent besoin de prendre la verticale en différents endroits tout en faisant des marques éventuellement de l'autre main disponible, sans nécessiter d'aide.
Le dispositif selon l'invention est fonctionnel, solide, de mise en oeuvre rapide et rend le travail plus efficace, grâce en particulier au fait que le fil ne traîne plus, ce qui souvent à ce jour retarde, ou même incite les maçons à ne pas en faire souvent, les prises de contrôle et/ou mesures car le fil s'entortillant fait des noeuds et se salit.
Exemple ici: Un ensemble de compartiments de 240 mm de #, voir (Fig 15). C'est un ensemble pour obtenir de l'eau déminéralisée à pH basique. Il comprend: - Une chambre d'arrivée d'eau (77), de 30 mm de haut.
-Un compartiment (78), de 100mode haut rempli de CHARBON ACTIF.
- Un compartiment (79), de 150 mm de haut, rempli de RESINE ANIONIQUE.
- Un compartiment (80), identique au (79).
- Un compartiment (81), identique au (78), rempli de RESINE CATIONIQUE.
- Une chambre (82), d'eau déminéralisée identique au (77), à fond plein.
NOTA: - Sur ce type d'appareils, les chambres de lavage et détassage, ne sont pas utiles.
- Il est possible de modifier à volonté la disposition et le nombre des compartiments, ainsi que leur contenu, suivant la qualité de l'eau demandée.
DESODORISATION des eaux avec CHARBON ACTIF en complément de filtration, etc..
FILTRATION au sable seul (Fig 16+17). La description est identique au Filtre mixte décrit dans la page 4, mais le compartiment (57), (cartouches et diatomée), a été supprimé, et remplacé par un 3e compartiment à sable, identique aux (45+46).
La chambre (56), dans ce cas, est supprimée aussi, et remplacée par une chambre à crépine identique à (50).
DESCRIPTION du BLOC VANNES AUTOMATIQUE Permet l'automatisme de la filtration et le lavage du filtre.
Voir (Fig 18). Il est composé de: UN MICRO-MOTEUR d'entraînement (83), relié à une horloge de programmation automatique.
UN ARBRE à CAMES (84), entraîné par le moteur, commandant l'ouverture et la fermeture des pistons (85).
UNE CHAMBRE d'arrivée d'eau sale (86).
DES CHAMBRES d'arrivée d'eau propre (87+88), pour le lavage du filtre, reliées par un tuyau (9), et comportant une vanne (92).
* TFSC = 146 C.
EXEMPLE 2 Dans cet exemple, on décrit la préparation d'un copolyamide semicristallin à partir d'acide téréphtalique, de méthyl-2 pentaméthylènediamine et d'hexaméthylènediamine (60 % en mole dans le mélange des diamines) par le procédé de polycondensation thermique conduite en solution dit "troisième procédé commode 1/ Préparation des réactifs On opère dans un petit réacteur de verre cylindrique de 100 ml, muni d'un agitateur type ancre.Le chauffage du réacteur est assuré par l'immertion de celui-ci dans un bain d'alliage de Lipowitz chauffé au-dessus de 180 C. Le réacteur est aussi équipé - d'un système permettant d'effectuer un balayage d'azote, - d'un circuit permettant de condenser et de recueillir les produits volatils, - et d'un dispositif de mise sous une pression inférieure à la pression atmosphérique.
On introduit à froid dans le réacteur - 13,75 g de sel hexaméthylènediamine/acide téréphtalique cristallisé et sec (0,04876 mole), - 5,40 g d'acide téréphtalique (0,03253 mole), - 3,96 g de méthyl-2 pentaméthylènediamine (0,03414 mole), - 30 g de diméthyl-1,3 imidazolidone-2.
Les charges correspondent à un excès molaire de méthyl-2 pentaméthylènediamine de 4,99 %, soit un excès molaire de réactif aminé de 1,98 49.
2/ Polycondensation On effectue successivement les étapes suivantes étape 1" Sous atmosphère d'azote, on élève la température à 2150C et on élimine par distillation régulière sous la pression atmosphérique l'eau d'amidification pendant une durée de 30 minutes . étapes 2" Sous atmosphère d'azote, on élève la température de la masse réactionnelle à 2600C et on élimine par distillation sous la pression atmosphérique le reste d'eau et le solvant pendant une durée de 45 minutes . étape 3" On achève la polycondensation en laissant réagir la masse réactionnelle portée à une température de 3300C en opérant sous une pression réduite égale à 0,1.102 Pa pendant une durée de 15 minutes.
3/ Résultats Le polymère obtenu est homogène et a un aspect semi-cristallin. Il présente les caractéristiques suivantes Caractéristiques moléculaires - IV (m-crésol) = 82,3 ml/g - pertes en basicité dans les distillats : 9,48.10-3 équivalents amino d'où une perte en basicité totale de 5,72 %.
. Caractéristiques thermiques - Tg = 1400C - Tcr = 2960C - Tf = 3200C - la différence AT = Tf - Tcr est égale à 24 C.
EXEMPLE 3 Dans cet exemple, on décrit la préparation d'un copolyamide semicristallin à partir d'acide téréphtalique, de méthyl-2 pentaméthylènediamine et d'hexaméthylènediamine (70 % en moles dans le mélange des diamines) par le procédé en masse dit "second procédé commode".
1/ Préparation du sel diamines (méthyl-2 pentaméthylènediamine et hexaméthylènediamine)/acide téréphtalique en solution aqueuse On opère dans un réacteur en verre de 2 litres équipé - d'un système de chauffage, - d'un agitateur de type ancre, - d'un système permettant un balayage d'azote et le maintien d'une atmosphère exempte d'oxygène, et - d'un système permettant de condenser les produits volatils.
On introduit à froid dans le réacteur maintenu sous léger balayage d'azote - 350 g de sel hexaméthylènediamine/acide téréphtalique (1,2411 moles), - 88,3 g d'acide téréphtalique (0,5319 mole), - 66,7 g de méthyl-2 pentaméthylènediamine (0,5750 mole), et - 500 g d'eau.
On obtient un pH de 9,20 ; dans cet exemple, on met en oeuvre un excès molaire de méthyl-2 pentaméthylènediamine de 8,1 %, soit un excès molaire de réactif aminé de 2,43 %.
2/ Polycondensation en autoclave L'appareillage utilisé est constitué par un autoclave de 1 litre en acier inoxydable agité et équipé pour travailler jusqu'à 3400C et 3 MPa de pression. Il est muni - d'un système de chauffage à double enveloppe par fluide caloporteur, - d'un agitateur de type cadre, - d'un système permettant la mise sous pression d'azote, - d'un circuit permettant de condenser et de recueillir les produits volatils, - et d'un dispositif de mise sous une pression inférieure à la pression atmosphérique.
On introduit 820 g de la solution aqueuse de sel préparée ci-avant avec 0,35 g d'une solution aqueuse à 50 % en poids d'acide hypophosphoreux.
On opère exactement comme indiqué ci-avant à l'exemple 1 jusqu'à la fin de l'étape 1 avec seulement les variantes suivantes - on concentre la solution aqueuse de sel de 49,75 % en poids à 69,3 % en poids ; la température atteint alors 1940C ; - au niveau de l'étape 1, la température de début de distillation est égale à 229 C, la durée de chauffage étant alors de 20 minutes et on atteint 1,8 MPa de pression autogène. On distille ensuite sous cette pression en 1 heure 35 minutes l'eau présente dans la masse réactionnelle et la température T2 atteinte au bout de ce temps est égale à 244 C.
Après, on effectue successivement les étapes suivantes . étape 2' On effectue rapidement en 10 minutes la vidange du réacteur pendant cette période la pression de vapeur d'eau est abaissée de la pression autogène à la valeur de la pression atmosphérique. On récupère le polymère formé qui est un prépolymère, puis on le refroidit et on le transforme par broyage en poudre fine.
Le prépolymère obtenu a un aspect semi-cristallin. Il présente les caractéristiques moléculaires suivantes - GT NH2 = 122,5 méq/kg - GT COOH = 123 méq/kg - GT MPP = 5 méq/kg - teneur en BHT = 2,7 mM/kg, soit 0,058 % en poids - la masse moléculaire en nombre calculée est de 8071 g/mole - IV (H2S04) = 14,2 ml/g - pertes en basicité dans les distillats : 0,1235 équivalent amino d'où une perte en basicité totale de 3,41 %.
L'émission permanente du Jeton ou du Témoin est détectée par le circuit DEC d'une station placée en aval du défaut.
Celle-ci émet alors une trame à destination du Centre d'Administration de réseau, lequel procèdera à une reconfiguration.
En fonctionnement normal, chaque station est chargée de gérer les lignes et terminaux qui lui sont raccordés. Le bon état des artères à haut débit est surveillé par chacune des stations qui y est raccordée. La surveillance s'effectue sur la voie réception par contrôle de l'arrivée régulière du couple J K. Lorsqu'une artère est coupée ou seulement saturée, la station responsable diffuse un message afin de renseigner l'ensemble des stations et le CA. La nécessité de reconfiguration est détectée par la disparition du couple J K en arrivée sur une artère à haut débit, ce qui indique que cette artère est en panne ou que la station placée à l'autre extrémité est invalidée. Dans ce cas, la station détectant le défaut doit d'abord vérifier si l'artère incriminée transporte la boucle de signalisation.Si oui, un rebouclage doit être tenté en aval du défaut afin de rétablir la boucle, sur la voie retour, comme expliqué précédemment. En cas de nouvel échec, la station tente d'établir la boucle de signalisation sur le chemin de secours qui lui a été communiqué lors de l'initialisation. Dans tous les cas, dès que la boucle de signalisation fonctionne, un message indiquant la ou les artères coupées doit être diffusé à l'ensemble des stations et au CA. Chacune des stations doit alors, en fonction des informations reçues, déterminer la carte des liaisons encore en état de fonctionner et, en fonction de celle-ci, réarranger son plan de routage, jusqu a ce que le CA signale la disparition du défaut. La procédure de rebouclage, décrite pour la boucle de signalisation, peut également être étendue aux réseaux locaux, afin de minimiser les conséquences d'une défaillance du système.
Coupleur ETHERNET Le réseau local ETHERNET est exploité selon la norme IEEE 802-3, selon un protocole d'accès CSMA-CD. La fréquence de transmission des trames de données s'effectue à 10 Mbit/s.
Pour cette raison, le -support de transmission utilisé est un câble coaxial à haute protection électro-magnétique. Le prix de ce support a amené les concepteurs à utiliser d'autres supports, en particulier la paire torsadée. Dans ce cas, le réseau local ne peut excéder quelques dizaines de mètres.
L'autocommutateur permet l'interconnexion de ces réseaux locaux sur paire torsadée, afin que l'ensemble se présente à l'utilisateur comme un réseau ETHERNET unique7 qui aurait été réalisé en un seul câble coaxial. Pour ce faire, il faut réaliser les conditions ci-après -toute trame de données émise par tout terminal placé sur l'un des réseaux locaux doit être présentée à l'ensemble des réseaux locaux (fonction de diffusion) ; -une trame ne peut être émise sur un réseau local lorsqu'une trame diffusée provient d'un autre réseau local (fonction de contention) -la longueur des trames peut atteindre 1518 octets -la durée entre la fin d'une trame et le début de la trame suivante ne peut tomber en dessous de 9,6 microsecondes.
Pour raccorder des terminaux au réseau ETHERNET, le coupleur ETHERNET placé dans le terminal est relié par 4 paires torsadées à l'émetteur-récepteur (ou transceiver) placé sur le câble coaxial. Le rôle des 4 paires est le suivant: émission de données, réception de données, détection de collision, téléalimentation du transceiver.
La longueur de ces paires ne peut excéder 50 mètres. Une telle distance est toutefois compatible avec le présent système dans la mesure où les transceivers sont placés sur des modules enfichables au niveau de la station. Dans ce cas là, seules les 3 premières paires sont nécessaire pour raccorder un terminal. On se garde également la possibilité, dans le cas des installations existantes, de raccorder directement le câble coaxial sur la station. Les 2 modes de raccordement peuvent cohabiter sur la même station.
La figure 9 montre un exemple de réalisation, qui s'inspire de la boucle de données et de signalisation précédemment décrite. Les terminaux sont, comme indiqué ci-dessus, raccordés par 3 paires torsadées, chacun à un transceiver TRCV-1 à TRCV-n. Ce transceiver peut être, par exemple, le composant DP8392 de la société des Etats Unis d'Amérique: National Semiconductor (NS). La sortie de chacun de ces transceivers est raccordée à un câble coaxial fictif d'impédance caractéristique de 50 ohms, le CCX. Il est également possible de connecter directement un câble coaxial ETHERNET sur la prise P. Le câble fictif CCX est raccordé à la station par un autre transceiver le TRCV-S. Chacun de ces transceivers voit le câble CCX comme un câble ETHERNET à part entière, avec gestion des accès, des collisions et des incidents.