INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'inactivation des virus les rend inoffensifs comme agents biologiques, mais n'en détruit pas l'immunogénicité. Ltinjec- tion de ces particules de virus "tués" à un hôte va alors déclencher une réponse immunitaire capable de neutraliser une infection future par un virus vivant. Cependant, un souci majeur concernant l'utilisation des vaccins tués (utilisant des virus inactivés) concerne le risque de non-ihactivation de la totalité des particules de virus. Même si l'inactivation est réalisée, puisque les virus tués ne se multiplient pas dans leur hôte, l'immunité obtenue est souvent de courte durée et il faut habituellement des immunisations supplémentaires. Finalement, le processus d'inactivation peut altérer les protéines virales et les rendre moins efficaces comme immunogènes.
L'atténuation désigne la production de souches de virus qui ont essentiellement perdu leur aptitude à provoquer des maladies. Une voie pour y parvenir consiste à soumettre le virus à des conditions inhabituelles de croissance et/ou à un passage fréquent en culture cellulaire. On choisit ensuite des mutants de virus qui ont perdu de la virulence mais sont encore capables de déclencher une réponse immunitaire. Les virus atténués constituent généralement de bons immunogènes,car ils se répliquent dans la cellule de l'hôte et déclenchent une immunité de longue durée.
Cependant, on rencontre plusieurs problèmes lors de l'utilisation de vaccins vivants, dont le plus gênant est une atténuation insuffisante.
Au lieu des méthodes ci-dessus, on peut utiliser ce que l'on appelle les vaccins de sous-unités, ou sousunités de vaccins. Cela implique une immunisation obtenue seulement à l'aide des protéines contenant le matériau immunologique concerné. Pour de nombreux virus à enveloppe, la glycoprotéine à codage viral contient les épitopes capables de déclencher la production d'anticorps neutralisants ; elles comprennent les glycoprotéines du virus La Crosse (F. Gonzalez Scarano, R.E. Shope, C.E. Calisher et N. Nathanson, 1982, Virology 120:42.), le virus de la diarrhée néonatale du veau (S. Matsuno et S. Inouye, 1983, Infection and Immunity 39:155), le vérus de l'encéphalomyélite équine du Vénézuela (J.H.
Mathews et J.T. Roehrig, 1982, J. Imm. 129:2763), le virus de Punta Toro (J.M. Dalrymple, C.J. Peters, J.F. Smith et M.K. Gentry, 1981 dans "Replication of Negative Strand Viruses" (Réplication de virus de Strand négatif), D.H.L.
Bishop et R.W. Compans, page 167, Elsevier, New-York), virus de la leucémie de souris (R.A. Steeves, M. Strand et J.T.
August, 1974, J. Virol. 14:187) et "Mouse Mammary Tumor Virus" (virus de la tumeur des mamelles de souris) (R.J. Massey et G. Schochetman, 1981, Virology 115:20). Un avantage des vaccins de sous-unités est que le matériau viral non intéressant est exclu Les vaccins sont souvent administrés en association avec divers adjuvants. Les adjuvants aident à atteindre un niveau plus durable et plus élevé d'immunité en utilisant de plus faibles quantités d'antigènes en de plus faibles doses que si l'immunogène était administré seul. Le mécanisme de l'action des adjuvants est complexe et n'est pas entièrement compris. Cependant, il peut impliquer la stimulation de la phagocytose et d'autres activités du système réticuloendothélial aussi bien qu'un retard de libération et de dégradation de l'antigène.Des exemples d'adjuvants comprennent l'adjuvant de Freund (complet ou incomplet), l'adjuvant 65 (contenant de l'huile d'arachide, du monooléate de mannide et du monostéarate d'aluminium), le polyol "Pluronic L-121", "Avridine", et les gels minéraux comme de l'hydroxyde d'aluminium, du phosphate d'aluminium ou de l'alun. L'adjuvant de Freund n'est plus utilisé dans la formulation des vaccins pour les êtres humains, car il contient de l'huile minérale non métabolisable et il constitue un agent carcinogène potentiel.
L'utilisation de la technologie de 1'ADN recombinant pour la production de vaccins de sous-unités implique le clonage moléculaire et l'expression dans un vecteur approprié de l'information génétique virale codant pour les protéines pouvant déclencher une réponse neutralisante dans l'animal hôte. Tous les autres renseignements génétiques du virus sont exclus et seules les protéines nécessaires pour établir une réponse neutralisante sont présentées à l'animal hôte. L'hôte n'est jamais exposé à la totalité du virus et il ne risque pas de devenir infecté.
Récemment, une nouvelle approche a été décrite, qui est potentiellement utile pour la production de vaccins de sous-unités (M. Mackett, G.L. Smith et B. Moss, 1982, Proc. Nat'l. Acad. Sci. 79, 7415-7419 ; M. Mackett, G.L.
Smith et B. Moss, 1984, J. Virol. 49, 857-864 ; D. Panicali et E. Paoletti, 1982, Proc. Nat'l. Acad. Sci. 79, 4927-4931).
Cette approche implique l'utilisation du virus de la vaccine comme vecteur pour exprimer des gènes étrangers insérés dans son génome. Quand il est introduit dans des hôtes animaux, le virus de vaccine recombinant exprime le gène étranger inséré et déclenche ainsi une réponse immunitaire de l'hôte à de tels gènes. Puisque le virus vivant de vaccine recombinant peut servir de vaccin, une telle approche combine l'avantage des vaccins de sous-unités et des vaccins vivants.
Le virus de la vaccine contient un génome de ADN (acide désoxyribonucléique) linéaire à double brin comportant environ 167 paires de kilobases et il se réplique au sein du cytoplasme de cellules infectées. Ces virus contiennent un système complet d'enzymes de transcription (ce qui comprend les enzymes de coiffage, de méthylation et de polyadénylation) au sein du noyau du virus, qui sont nécessaires pour l'infectivité du virus. Les séquences de régulation de transcription du virus de la vaccine (promoteurs) permettent l'amorçage de la transcription par 1'ARN polymérase de vacine, mais non pas par 1'ARN polymérase des cellules de l'hôte.
L'expression de l'ADN étranger dans des virus de vaccine recombinants exige la ligature des promoteurs de vaccine sur des séquences de ADN codant pour des protéines du gène étranger. Des vecteurs de plasmide, appelés également vecteurs d'insertion, ont été construits pour insérer des gènes chimiques dans des virus de vaccine.Un type de vecteur d'insertion est composé : (a) d'un promoteur de virus de vaccine comprenant le site d'initiation de transcription; (b) de plusieurs sites de clonage par endonucléase de restriction unique,situés en aval du site de début de transcription pour l'insertion de fragments de ADN étrangers (c) de ADN non essentiel de virus de vaccine (comme le gène TK) entourant les sites du promoteur et de clonage qui dirigent l'insertion du gène chimérique dans la région homologue non essentielle du génome de virus ; et (d) d'un marqueur d'origine bactérienne de réplication et de résistance à des antibiotiques pour la réplication et la sélection dans E. coli.
Des exemples de tels vecteurs sont décrits par Mackett (M. Mackett, J.L. Smith et B. Moss, 1984, J. Virol. 49, 857864).
La partie du cadre 83 délimitée par l'entretoise 85 et les cotés 83d, 83b et 83c reçoit, soudee ou collee, une glace cristal 93 de forme correspondante, également soudee ou collée.
On conçoit que le voyant de feux de signalisation, selon l'invention, est parfaitement monobloc une fois terminé et qu'il facilite la réalisation d'un grand nombre de combinaisons sans grever le prix de revient puisque le moulage de la structure permet d'obtenir directement certaines parties qui, normalement, sont moulées séparément et qui posent souvent des problemes de montage.
Bien entendu, l'invention n'est pas limitée aux modes de réalisation qui viennent d'être décrits et qui ont été représentes, on pourra y apporter de nombreuses modifications de détail, sans sortir, pour cela, du cadre de l'inven- tion.
DISPOSITIF D'IMAGERÀGRANDE SENS ED'UN FAISCEAU DE PARTICULES La présente invention a pour objet un dispositif d'imagerie, à grande sensibilité, d'un faisceau de particules notamment choisi dans le groupe comprenant les ions lourds, les protons, les photons X et gamma.
On connaît dans la technique actuelle d'assez nombreux dispositifs qui permettent théoriquement de visualiser un faisceau de particules, notamment ionisantes, mais qui présentent tous l'inconvénient d'avoir une sensibilité réduite et une faible dynamique. En d'autres termes, on ne sait aujourd'hui mettre en évidence optiquement parlant de façon pratique que des faisceaux de particules de grande énergie ou à flux élevé.
La présente invention a précisément pour objet un dispositif d'imagerie d'un faisceau de particules, beaucoup plus sensible que les dispositifs de l'art antérieur.
Ce dispositif se caractérise en ce qu'il comprend dans un espace vide et dans cet ordre, sur le trajet du faisceau à visualiser : - des moyens de conversion des particules en électrons - un jeu de galettes de microcanaux pour réaliser l'amplification du flux d'électrons par multiplication de ceuxci ; - un écran électroluminescent couplé à un ensemble de fibres optiques collectant les photons lumineux apparus sur cet écran ; - une matrice de diodes photosensibles ; - un dispositif de numérisation et de mémorisation des signaux délivrés par les diodes.
Comme on le voit, le dispositif de L'invention conduit à transformer les particules à visualiser en électrons, à multiplier ces électrons et à utiliser ensuite un écran luminescent pour obtenir des photons lumineux que l'on adresse enfin à une matrice de diodes et à un dispositif d'analyse d'images.
Dans cette combinaison de moyens, c'est le jeu de galettes de microcanaux qui constitue l'un des moyens essentiels de l'invention car, en produisant une multiplication importante, 4 5 par exemple de L'ordre de 10 à 10 , du nombre des électrons,il permet d'augmenter considerablement la sensibilité du dispositif.
On connait en effet de telles galettes de microcanaux qui sont constituées de disques en matière isolante, percés de canaux micrométriques Légèrement inclinés par rapport aux faces de la galette et sur lesquelles les électrons incidents, accélérés par une différence de potentiel de plusieurs centaines de volts, se multiplient par chocs.
Selon une caractéristique également importante de la présente invention, les moyens de conversion des particules en électrons consistent en une feuille mince de matière plastique recouverte d'un métal électriquement conducteur, par exemple de l'or. La feuille de matière plastique utilisée est suffisamment mince pour que le faisceau de particules à visualiser puisse le traverser et atteindre la couche métallique où elle provoque la naissance d'un flux d'électrons secondaires.
Selon une autre caractéristique du dispositif objet de l'invention, l'écran luminescent utilisé et la matrice de diodes sont des éléments achetés dans le commerce et comme généralement L'écran luminescent a une surface très supérieure à celle de la matrice de diodes, on tes relie à l'aide d'un faisceau de fibres optiques convergent pour assurer la réduction correspondante de l'image.
Derrière la matrice de diodes, on peut envisager d'utiliser selon les cas tout dispositif de numérisation et de mémorisation de l'information et l'on peut même envisager un traitement particulier des informations par ordinateur si l'analyse que l'on souhaite pratiquer le nécessite.
De toute façon, l'invention sera mieux comprise en se référant à la description qui suit de deux exemples de mise en oeuvre du dispositif d'imagerie qui sera faite en se référant aux figures 1 et 2 ci-jointes sur lesquelles : - la figure 1 est un schéma de principe de L'ensemble du dispositif objet de l'invention ; - la figure 2 montre un mode d'emploi particulier du disositif de la figure 1.
Sur le dispositif de la figure i, on a figuré par des flèches F un faisceau de particules invisibles que l'on désire imager. Conformement à l'invention, ce faisceau rencontre successivement une feuille 1 de matière plastique recouverte d'une couche métallique, qui a pour but d'opérer la conversion des particules en électrons ; derrière la feuille 1 se trouve un systeme de deux galettes à microcanaux 2 que l'on utilise sous haute tension pour provoquer une multiplication du flux 4 précédent dans un apport de L'ordre de 104 5 d'électrons précédent dans un rapport de l'ordre de 10 à 10 .
Les électrons ainsi multipliés atteignent ensuite L'écran luminescent 3 d'un type en soi connu qui transforme Le flux d'électrons en un flux de photons lumineux. L'ensemble des moyens qui viennent d'etre décrits jusqu'à la face d'entrée de L'écran luminescent 3 est situé dans une enceinte sous vide 4.
découvertes les régions conductrices du circuit desti-
nées à établir le contact électrique avec les électrodes des lampes et avec un connecteur amenant les tensions
d'alimentation pour les diverses lampes.
Plus précisément, le circuit en lui-même est constitué par un certain nombre de bandes conductrices minces qui sont destinées à effectuer la connexion -7- électrique entre un ensemble de broches saillantes constituant une fiche multiple 12 pour le raccordement du bloc optique avec un connecteur (représenté en traits pointillés et désigné par la référence 14) qui amène les diverses tensions d'alimentation des lampes ainsi que la masse, et des surfaces conductrices de connexion situées au voisinage de quatre ouvertures généralement
circulaires destinées à recevoir les extrémités termi-
nales des culots de quatre lampes à filament(s) (non
représentées sur la figure 1).
Dans le présent exemple de réalisation, le
circuit à bandes découpées et son support 10 sont sy-
métriques par rapport à un plan central vertical Y-Y perpendiculaire au plan du circuit. On va donc décrire en détail ci-dessous seulement la moitié de gauche du circuit. Trois bandes conductrices 101, 102, 103 s'étendent verticalement vers le bas à partir de trois broches saillantes associées 121, 122, 123 de la fiche multiple 12. Quatre bandes conductrices 111,112, 113,
114 s'étendent, à partir des régions d'extrémité-infé-
rieure des bandes 101,102 et 103, respectivement vers deux surfaces de connexion 161, 162 adjacentes à une première ouverture de lampe 181, formée dans le support 10 en haut à gauche, vers une troisième surface de connexion 163 adjacente à l'ouverture de lampe 182 située en bas à gauche, et vers des régions de contact 201, 202 s'étendant autour des ouvertures 181 et 182, l'ensemble de la bande 114 et desdites régions tenant
lieu de ligne de masse.
Comme on le voit, les bandes 101 et 111 sont en continuité l'une avec l'autre, via un coude à angle droit, tout comme les bandes 102 et 112. Trois pontets sécables, sous forme de régions conductrices de largeur réduite, relient certaines bandes conductrices entre elles. En particulier, un premier pontet 201 relie l'extrémité inférieure de la bande 102 à l'extrémité
adjacente de la bande 113, cette dernière étant égale-
ment reliée à l'extrémité inférieure de la bande 103 par un pontet 202. Enfin, un troisième pontet 203 relie l'extrémité inférieure de la bande 103 à la bande
Plasmide Caracteres phénotypiques Origine ou génotypiques (a) pAT63 (4) Tra Mob ereA Apa pBR322n[pIP1100 partielle Sau3A(ereA) 1,66kb] pAT70 (5) Tra Mob ereB Ap Cm pBR329# [pIP1527 BHI (ereB)-3,8kb] pAT72 (5) Tra Mob ereB Ap pUC8#[pAT70 partielle Sau3A(ereB) 1906 pb] pUC8 (6) Tra Mob Ap construction in vitro pAT76 Tra Mob Ap pUC8 (pAT72 EcoRI-PstI-838pb) (a) la nomenclature des caractères phénotypiques des plasmides est donnée selon R. Novick et al (7).
b/ Milieux.
On utilise un bouillon d'une infusion coeurcerveau et de l'agar Pasteur Diagnostics. On réalise les tests de sensibilité sur de l'agar Mueller-Hinton.
Toutes les incubations sont effectuées à 37'C.
ci Inactivation de l'érythromycine par des cellules au repos.
On inactive l'érythromycine à l'aide de cellules au repos de E.coli BM694/pAT63 (ereA) ou BM694/ pAT72 dans un tampon phosphate O,1M pH 7,0 (8).
d/ Préparation de l'ADN.
L'isolement à grande echelle d'ADN de pBR329 pUC8 et d'ADN de plasmides dérivés est effectué comme décrit dans (9).
e/ Electrophorèse et purification de fragments de restriction d'ADN.
Les fragments d'ADN de restriction sont séparés par électrophorèse sur plaques de gel horizontales (20 x 15 x 0,7cmj contenant 0,8% d'agarose se gélifiant à basse température du type VII (Sigma).
Les fragments d'ADN sont purifiés comme décrit dans (10).
e/ Séquençage de l'ADN.
Les fragments de restriction d'ADN sont clonés dans les bactériophages Mi3mp8 et M13mp9 et séquencés par la technique de terminaison de chaîne (11). La séquence complète d'ADN est déterminée en utilisant les programmes d'ordinateurs DBCOMP et DBUTIL (12).
EXEMPLE 2 1/ Structure de l'érvthromvcine modifiée.
Les résultats des différentes déterminations physico-chimiques concernant l'érythromycine modifiée par l'estérase de type I ou celle de type II sont en accord avec la structure représentée sur la figure 1.
2/ Séquence nucléotidique de l'insertion dans PAT72.
On a infecté des monocouches confluentes de cellules BSC-40 ou HeLa avec v-env5 ou v-env2 de virus recombinant à une multiplicité ou taux d'infection de 50 unités de formation de plaques par cellule. Douze heures après l'infection, on a lavé deux fois les cellules dans une solution saline tamponnée par des phosphates, on les a remises en suspension dans du tampon pour échantillon de Laemmli et l'on a fait bouillir durant 5 minutes. On a résolu, par électrophorèse sur gel de polyacryamide comportant du dodécyl sulfate de sodium (SDS-PAGE) les protéines provenant de cellules infectées, on les a soumises à électrotransfert vers une membrane nitrocellulosique et on les a fait réagir avec du sérum groupé provenant de personnes à sérum positif dans la recherche de LAV/HTLV-III.On a décelé à l'aide de la protéine A, qui a été marquée par 125 I par la méthode à la chloramine T, les protéines immunoréactives. Sur la figure 6B, les pistes 1 et 5 contiennent des protéines provenant de cellules infectées par des virus non infectieux ; les pistes 2 et 6 contiennent des protéines provenant de cellules infectées par du virus de vaccine de type sauvage ; les pistes 3 et 7 des protéines provenant de cellules infectées par v-env-5 ; et les pistes 4 et 8 proviennent de cellules infectées par v-env2. On a utilisé comme témoin (LAV) des protéines de virion de LAV purifiées à l'aide d'un gradient de saccharose, et les positions des protéines d'enveloppe gp150, gel 10 et gp41 étaient comme indiqué sur la figure.
Les poids moléculaires ont été exprimés en kilodaltons (kd).
On a décelé dans les cellules infectées par v-env (figure 6B, pistes 3 et 7) trois protéines majeures capables d'une réaction immunitaire avec du sérum groupé provenant de personnes à sérum donnant une réponse positive. On a estimé que les poids moléculaires de ces protéines étaient de 150 kd, 120 kd et 41 kd, semblables à ceux des glycoprotéines d'enveloppe de LAV gap150, gpllO et gp41.
V-env2 de virus recombinant ne comportait pas la séquence supposée émettre un signal pour l'enveloppe de LAV, mais pouvant produire au moins trois polypeptides immunoréactifs ayant pour poids moléculaires 99 kd, 68 kd et 40 kd (figure 6B, pistes 4 et 8).
IDENTIFICATION, PAR DES TECHNIQUES D'IMMUNOPRECIPITATION, DE PROTEINES APPARENTEES A L'ENVELOPPE DE LAV ET EXPRIMEES DANS DES CELLULES INFECTEES PAR DU VIRUS DE VACCINE RECOMBINANT Le dosage par immunoprécipitation, décrit ci-après, a montré que des cellules infectées par des virus de vaccine recombinants de la présente invention synthétisent des protéines capables d'une réaction immunitaire spécifique avec du sérum provenant de patients atteints de SIDA.
On a infecté par du virus de vaccine de type sauvage, ou par ses recombinants v-env5 ou v-env2, à un taux ou multiplicité d'infection de 10, une boite de 100 ml comportant des cellules confluentes BSC-40. Après l'écoulement d'un intervalle de temps de 9,5 heures après l'infection, on a remplacé le milieu de croissance par MEMD sans méthionine et sans complément de sérum. A 10 heures après l'infection, on a remplacé le milieu par 2 ml de MEMD sans méthionine contenant 100 ,uCi/ml de (35S)méthionine et on a laissé le marquage se poursuivre durant 2 heures à 37"C. A la fin de la periode de marquage, on a lavé les cellules une fois avec de la solution saline physiologique tamponnée par des phosphates (PBS) et on les a collectées par centrifugation.
On a remis en suspension les culots de cellules dans 1 ml de tampon de lyse:1 % de NP 40 (polyoxyéthylène (9) p-tertoctylphénol), 0,5 % de désoxycholate de sodium, NaCl 0,1 M, tris-HCl 0,01M, pH 7,4, EDTA lmM, et on a séparé le lysat par centrifugation durant 1 minute dans une microcentrifugeuse Eppendorf.
On a effectué une immunoprécipitation en ajoutant 5 microlitres de sérum humain inactivé par chauffage, provenant d'une population témoin ou de patients atteints de SIDA, à 100 ml de lysat de cellules. Après 1 heure d'incubation à 4"C, on a ajouté 60 ml de cellules de Staphylococcus aureus activées (cellules "Pansorbin", Calbiochem-Behring Corp., LaJolla, CA) et on a laissé l'incubation se poursuivre durant 1 heure supplémentaire à 4"C. On a collecté par centrifugation durant 30 secondes, dans une microcentrifugeuse Eppendorf à 4 C. les complexes d'immunoprécipitation et on les a lavés une fois dans NaCl 1M + 0,1 % de NP 40 + Tris-HCl 0,01M, à pH 7,4, et deux fois du tampon RIPA (Tris-HCl îOmM, pH 7,2, NaCl 0,15 M, 1 % de désoxycholate de sodium, 1 % de "Triton-X 100" (polyoxyéthylène (9-10) p-tert-octylphénol), 0,1 % de laurylsulfate de sodium). On a remis en suspension les immunoprécipités, lavés, dans 50 ml d'un tampon pour échantillon de Laemmli, on a fait bouillir durant 1 minute et centrifugé durant 1 minute dans une microcentrifugeuse Eppendorf. On a analysé par électrophorèse sur des gels de polyacryamide à 15 S de SDS les protéines immunoprécipitées présentes dans le liquide surnageant.Après l'électrophorèse, on a coloré les gels avec du colorant bleu de Coomassie, on les a traités par du salicylate de sodium (30 minutes à température ambiante dans du salicylate de sodium îM) et on les a séchés pour fluorographie.
Les résultats de cette analyse, tels que représentés sur la figure 7A, ont indiqué que v-env5 recombinant a synthétisé une famille de protéines présentant une immunoréaction spécifique avec du sérum de patient atteint de SIDA.
Ces proteines présentaient des poids moléculaires apparents de 160, 140, 120, 42 et 40 kilodaltons (kd), correspondant approximativement aux poids moléculaires apparents des glycoprotéines apparentées à l'enveloppe citées pour LAV/HTLV III (W.G. Robey et col., 1985, Science 228:593-595). Ces protéines n'étaient pas présentes dans des cellules "infectées' par des virus non infect-ieux ou dans des cellules infectées par du virus de vaccine de type sauvage et elles ne subissaient pas non plus d'immunoprécipitation par du sérum humain témoin. Dans des cellules infectées par v-env2, une protéine tronquée, d'un poids moléculaire apparent de 95 d, a été produite et reconnue par du sérum de patient atteint de SIDA.
Cette forme tronquée de protéine apparentée à l'enveloppe de LAV part très probablement du codon AUG codé par la séquence d'agents de liaison située en 5' près de la séquence insérée, correspondant à LAV, dans ce recombinant.
MARQUAGE PAR 3H-GLUCOSAMINE DE PROTEINES APPARENTEES A L'ENVELOPPE DE LAV PRODUITES PAR DES VIRUS RECOMBINANTS DE VACCINE CORRESPONDANT A LAV Le dosage par radioimmunoprécipitation décrit ciaprès a indiqué que les virus recombinants de vaccine, correspondant à LAV, de la présente invention ont produit des protéines d'enveloppe glycosylées.
On a soumis des cellules HeLa à une infection par des virus non infectieux (voir figure 7B, pistes 1 et 5) ou à une infection séparément par du virus de vaccine de type sauvage (pistes 1 et 6), du v-env5 recombinant (pistes 3 et 7) ou v-env2 (pistes 4 et 8), le tout à un taux d'infection de 50 unités de formation de plaques par cellule. On a ajouté au milieu de cultureientre 4 et 16 heures après l'infection,de la glucosamine marquée par 3H (0,25 ,uCi à 23 mCi/mg, Amersham).On a lavé les cellules deux fois avec une solution saline physiologique tamponnée par du phosphate et on les a lysées dans du tampon contenant NaCl O,lM, tris HC1 O,OlM à pH 7,4, EDTA lmM, 1% de NP-40 (polyoxySthylène (9) p-tert-octylphénol) et 0,5 % de désoxycholate de sodium.