INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Ce type point de contrôle ne peut être défini que pour des objets du programme sous-test.
Un objet point de contrôle déclaré est - soit un point d'entrée : entête de procédure sous-test, label sous-test ou numéro de ligne, - soit un point d'arrêt : label sous-test ou numéro de ligne.
Ils correspondent donc à une adresse instruction sous-test II.2.2 Type point de contrôle anonyme Le type point de contrôle anonyme n'a pas d'utilité en tant que type déclaré.
Un objet de type point de contrôle déclaré correspond à une adresse instruction dans la machine sous-test; alors qu'un objet de type point de contrôle anonyme n'a aucune réalité dans la machine sous-test. Il n'est matérialisé que dans le système d'observation de la machine sous-test.
Syntaxe déclaration~d' objetbe typepcint~decontrale ::= identificateur : "CHECKPOINT" Action~matériel (Action~logiciel ] Action matériel ::= DETECTION IS Ccondition de synchronisationl fonction~matériel Fonction~matériel ::= TRACE ((liste d 'identifications) I STOP Action~logiciel ::= ACTION IS bloc Sémantique La condition de synchronisation est une condition composée portant sur des variables sous-test ou sur des valeurs du compteur ordinal identifié par $PP.
Les opérateurs de synchronisation sont "OU" et "PUIS".
Ce dernier permet de décrire des conditions ordonnées dans le temps. L'opérateur "OU" est prioritaire. Ces opérateurs permettent de lier des conditions~simples.
Condition simple ::= (identificateurlSPPIopérateur de comparaison expression IIN(liste d 'intervalle expression)) ) Ex : ( $PP IN (PROC!1 .. PROC!3, PROC!6, PROC!10)) L'action matériel 2 types d'action~matériel sont disponibles - enregistrer en mémoire de trace par la fonction TRACE.
si la fonction TRACE n'est pas paramétrée, la condi tion~de~ synchronisation est obligatoire. On enregis tre alors l'état du bus, à chaque fois que cette condition est réalisée.
Ex à chaque fois que le programme sous-test affecte 1 à X.
si la fonction TRACE est paramétrée, la liste d 'identificateurs représente l'ensemble des variables sous-test à surveiller. Celles-ci doivent être définies sur 16 bits. La surveillance de ces variables peut être validée par une condition~ de synchronisation (l'invalidation n'est pas prise en compte). La surveillance provoque l'enregistrement en mémoire de trace de l'état du bus, lorsque l'une des variables est modifiée. Cet enregistrement permet de connaître la nouvelle valeur de cette variable.
Ex (SPP = PROC!100) TRACE Dès que l'instruction 100 du programme sous-test est exécutée, le système espionne les variables EX et EY jusqu'à la fin.
- arrêter le calculateur sous-test par la fonction STOP.
L'analyse syntaxique 131 vérifie que la phrase IDAS qui lui est fournie est correcte à l'égard de la syntaxe du langage, et réagit soit par un message d'erreur, soit au contraire par une transmission des informations vers le bloc 133 d'analyse sémantique.
Ce bloc 133 procède à des vérifications statiques (contrôle de cohérence de type entre deux objets) et dynamique (non dépassement de borne en cours d'exécution), puis exécute l'instruction, en cas de demande d'exécution par l'utilisateur.
Pour la vérification, elle fait appel à la gestion de la table des symboles 105, qui lui fournit tous les attributs des symboles dont elle a besoin.
Pour l'exécution, elle assure certains traitements, qui peuvent faire appel à la gestion de la table des symboles 105, à l'interface avec l'environnement sous test 104, ou à la sôus-fonction de manipulation de fichier 135, (en liaison avec le système d'exploitation 101) dans le cas d'instructions IDAS relatives à des fichiers.
Cette instruction 135, qui effectue les différentes opérations relatives aux instructions d'entrée-sortie, peut aussi être appelée par l'interface homme-machine, par exemple pour éditer un programme de test, ou encore par l'analyse sémantique lorsque celle-ci a traité des instructions d'entrée/sortie ou des outils spécifiques IDAS qui nécessitent la lecture d'un fichier.
La figure 10 illustre la gestion de la table des symboles, qui est la structure centrale dans laquelle sont archi vées toutes les informations manipulées dans l'environnement de l'interpréteur.
En 105-1 sont schématisés trois outils disponibles, qui permettent - la création de la table, par initialisation de la table ou définition d'un symbole dans celle-ci, - la consultation de la table, par lecture d'un symbole qui peut être complète ou partielle (type, valeur, adresse), - la modification de la table qui peut être l'écriture de la valeur d'un objet ou la suppression d'un symbole.
L'accès à ces différents outils se fait par une interface standardisée illustrée en 104 et comprenant en 104-1 le décodage des mnémoniques de commande, en 104-2 la mise en forme des paramètres, et en 104-3 la constitution de la liste des résultats et du message de retour.
L'interface 104 avec l'environnement sous test (figures 7 et 9) comporte une partie logicielle, à laquelle s'ajoutent les cartes d'interface 3, 4 et 5 déjà décrites.
L'ensemble 104 comprendra tout d'abord une interface avec la machine sous test, qui a pour rôle d'adapter les différentes commandes demandées par la fonction interprétation ou compilation à la machine sous test, et notamment - conversion pour les lectures/écritures des variables sous test, par exemple si le mode flottant est différent entre la machine de test et la machine sous test), - mise en forme des paramètres pour l'appel aux fonctions de l'interface standardisé (pour les lectures et écritures en mémoire ou registre et également pour le chargement et l'exécution de programmes sous test par exemple).
L'ensemble 104 comprend aussi une interface standardisée qui a pour but d'élaborer, à partir des commandes qui lui sont transmises par l'interface de la machine sous test, une succession d'appels aux fonctions "physiques" assurées par l'interface spécifique < enchaînement d'ordres simples de lecture/écriture pour une copie de mémoire à mémoire par exemple). C'est au niveau de cette interface que sont également gérés les problèmes liés au cadrage des informations (frontière de mots ou non).
Enfin, l'ensemble 104 comprend aussi une interface spécifique, constituée de toutes les procédures physiques de plus bas niveau qui permettent d'exploiter l'interface matériel - lecture d'un mot mémoire d'un registre écriture, - mise en place d'un point de synchronisation, - mise en place du mode de fonctionnement du calculateur (pas à pas par exemple), - exploitation de la mémoire de trace.
Cette partie logicielle est pratiquement la seule qui dépend de l'interface matériel et de la machine sous test 9.
La figure 11 est un schéma synoptique du fonctionnement du compilateur 140.
L'analyse syntaxique 141 vérifie que le programme de test en entrée du compilateur est conforme à la syntaxe du langage IDAS. Elle utilise pour cela une interface 149 de lecture du code source IDAS, qui délivre les lignes IDAS une à une, ainsi qu'une unité 142 d'analyse lexicale délivrant des unités lexicales une à une.
Des contrôles sémantiques sont effectués par un bloc 143 qui vérifie notamment l'existence ou la non-existence de noms, la compatiblité de type, les contrôles sur les paramètres de procédure. Les éventuelles erreurs sont traitées en 144 par la production d'un message d'erreur convenable après quoi il est possible en 145 d'engendrer le listing IDAS.
La condition de synchronisation est obligatoire. Lorsque cette condition est détectée, l'exécution du programme sous-test est arrêtée.
L'action logiciel Pour chaque enregistrement en mémoire de trace, la machine de test exécute l'action~logiciel décrite dans le point de contrôle qui a provoqué cet enregistrement. Cette action se déroule alors que le programme sous-test poursuit son exécution, elle ne doit donc pas faire référence à la machine sous-test. Les opérations suivantes sont donc interdites ancement/chargement d'un programme sous-test, - accès en lecture/écriture à la machine sous-test, - validation de points de contrôle.
L'enregistrement courant en mémoire de trace est référencé par la variable prédéfinie : TRACE~MEMORY.
L'utilisateur a alors accès à 2 informations - TRACE~MEMORY.ADDRESS contenant l'adresse de la variable ou la valeur du compteur ordinal.
- TRACE~MEMORY.VALUE contenant la valeur sous la forme BIT~SLICE (16) de la variable ou le code opération pour le compteur ordinal.
L'arrêt du programme sous-test se fait - soit par un point de contrôle ayant STOP comme fonction~ matériel, - soit lorsque la mémoire de trace est pleine.
Exemple CHECK : CHECKPOINT DETECTION IS TRACE (fX, Ỳ) ACTION IS BEGIN IF TRACE MEMORY.ADDRESS= X'ADDRESS THEN PUT "fX =", TRACE~MEMORY.VALUE ELSE PUT "Ỳ =", TRACE~MEMORY.VALUE END IF END II.3 DECLARATION DE TYPE SIMULATION Syntaxe Déclaration de simulation ::= identificateur :SIMULATION OF instruction~à~simuler WITH identificateur BETWEEN zone de simulation ; instruction~à~simuler ::= liste de constante CMASKED BY liste de constante3 liste de constante ::= constante { , constante ) zone de simulation ::= identificateurl C , identifica teur2 ] Sémantique Ce type de déclaration permet de définir les objets de l'entité simulation.
Par la suite, on emploiera le terme instruction pour une séquence de mots (16 bits) débutant par un code opération et d'une longueur maximale de 12 mots.
- Les constantes qui apparaissent dans la liste~de~constante sont de type BIT~SLICE < 16) ou BIT SLICE(32).
Elles définissent . soit une instruction à simuler si l'option MASKED~BY est absente, . soit une famille d'instructions si l'option MASKED~BY est présente. Les bits à 1 du masque sélectionnent les bits significatifs de la définition de l'instruction.
- L'identificateur qui suit le mot réservé WITH doit être l'identificateur d'une procédure préalablement déclarée dans le programme de test. Cette procédure est utilisée comme procédure de simulation.
- Les identificateurs qui apparaissent dans zone~de~simula tion sont de type CHECKPOINT sous test (label, numéro de ligne, ...).
La zone de simulation est . soit l'instruction désignée par identificateurl, si identificateurl apparaît seul, . soit la séquence d'instructions localisées entre identificateurl et identificateur2, si identificateur2 est présent.
Exemple de déclaration Simulation d'un branchement à une procédure particulière dont l'adresse hexadécimale est 3FCAFE.
Procédure de simulation PROCEDURE PROCSIMU BODY IS BEGIN PUT "APPEL DE PROC"; END PROCSIMU; Déclaration de la simulation CALLPROC : SIMULATION OF 20100111010111001,'3FCAFE WITH PROCSIMU BETWEEN DEBPROG, FINPROG 2#0100111010111001# correspond au code de l'instruction de branchement à simuler et '3FCAFE à l'adresse de la procédure particulière.
ANNEXE III INSTRUCTIONS SPECIFIQUES EXECUTABLES DU LANGAGE DE TEST IDAS ICI.1 VALIDATION D'UN POINT DE CONTROLE ANONYME Syntaxe posede~pointsde contrôle ::= SET~CHECKPOINT (Liste d'identificateurs); Sémantique Cette instruction indique les points de contrôle à valider.
La figure 7B représente les résultats d'une analyse par radioimmunoprécipitation de protéines marquées par 3Hglucosamine produites par les recombinants de vaccine-LAV de l'invention. Les cellules Hela ont été soit infectées par des cellules non infectieuses (mock"i non-infection) (pistes 1 et 5) soit infectées par des virus de vaccine de type sauvage (pistes 2 et 6), v-env5 (pistes 3 et 7) ou v-env2 (pistes 4 et 8) et marquées par de la 3H-glucosamine.
Les lysats de cellules ont été immunoprécipités avec du sérum humain normal (pistes 1-4) ou avec du sérum groupé provenant de personnes à sérum positif à l'égard de LAV/ HTVL III (pistes 5-8) et de la protéine A. Les protéines immunoprécipitées ont été résolues par électrophorèse sur gel de SDS-polyacrylamide.
La figure 7C représente les résultats d'une analyse de radioimmunoprécipitation "par impulsions de chasse" des protéines d'enveloppe LAV produites par les recombinants de vaccine LAV. On a infecté des cellules HeLa avec dues virus de vaccine de type sauvage, v-env5 ou v-env2 comme indiqué, marqué par 35S-méthionine, et on a lavé avec un milieu de chasse. Aux intervalles suivants de temps, on a lavé les cellules, on les a lysées et immunoprécipitées avec du sérum groupé provenant de personnes à sérum positif à l'égard de LAV/HTLV III et l'on a résolu par SDS-PAGE (électrophorèse sur gel de polyacrylamide) : O heure (pistes 1, 7, 13) une demi-heure (pistes 2, 8, 14) ; 1 heure (pistes 3, 9, 15) ; 2 heures (pistes 4, 10, 16) ; 6 heures (pistes 5, 11, 17) et 12 heures (pistes 6, 12, 18).
La figure 7D représente les résultats d'une analyse de radioimmunoprécipitation des protéines apparentées à l'enveloppe LAV que l'on trouve dans les cellules et dans des milieux provenant de cellules infectées par les virus de vaccine-LAV recombinants de l'invention. Des cellules HeLa ont été soit'infectées par des virus non infectés (c'est-à-dire non-infectées ; piste 1 "mock"), soit infectés par le virus de vaccine de type sauvage (piste 2) v-env5 (piste 3) ou v-env2 (piste 4) et marquéeas par 35S-méthionine.
Les cellules ont été separées du milieu et lysées. Les lysats de cellules (culot) et le milieu (supe) (rieur) ont été chacun immunoprécipités à l'aide de sérum groupé provenant de personnes à sérum positif à l'égard de LAV/HTLV III. Les protéines immunoprécipitées ont été résolues par électropho- rèse sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE).
La figure 8 représente une analyse par immunocoa gulation de Western d'échantillons de sérum provenant de souris immunisées par des virus recombinants de vaccine LAV. Les souris avaient été immunisés avec du virus de vaccine recombinant v-env5 ou v-env2. Au bout de 8 semaines, on a fait réagir les échantillons de sérum avec des proté ines de virion LAV qui avaient été résolues par électropho rèse sur SDS-PAGE (gel de polyacrylamide) et électrotrans férées sur du papier nitrocellulosique. On a utilisé une immunoglobuline anti-souris de chèvre conjuguée à de la phosphatase alcaline pour déceler les protéines LAV qui ont été reconnues par les sérums de souris.Les pistes a à e représentent les échantillons de sérum de 5 souris indivi duelles auxquelles on a inoculé v-env5, et les pistes 9 k représentent des échantillons de sérum provenant de 5 souris individuelles auxquelles on a inoculé v-env2. Les sérums groupés provenant de personnes à résultat positif pour LAV/HTLV III (SIDA) et de souris non immunisées C57B16J (NMS) ont servi de témoins positif et négatif, respective ment. Les positions des glycoprotéines d'enveloppe LAV gp150, gel 10 et gp43 sont indiquées.
La figure 9 représente une analyse par immunocoa gulation de Western d'échantillons de sérum provenant de macaques immunisés par du virus recombinant de vaccine LAV.
On a inoculé à quatre singes macaques (numéros 168, 175, 180, 182) 2 x 108 unités de formation de plaques de recombinants vaccine-herpès simplex gD (v-HSgD1). On a collecté des échantillons de sérum avant l'inoculation (pistes p) et au bout de 3, 4 et 6 semaines après inoculation (pistes 3, 4 et 6, respectivement). On a dilué 50 fois des parties aliquotes de sérum que l'on a fait réagir avec de la protéine de virion LAV qui a été résolue par électrophorèse sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE) et immobilisée par électrotransfert sur des filtres en nitrocellulose. Les protéines de LAV reconnues par ces sérums ont été décelées par de l'immunoglobuline anti-humaine de chèvre conjuguée à de la phosphatase alcaline. Les sérums groupés provenant de personnes à réponse positive à LAV/HTLV III (SIDA) ont servi de témoin positif.
On va maintenant présenter une description plus détaillée de l'invention.
La présente invention vise l'obtention de virus qui produisent les peptides et protéines apparentés à des épitopes de LAV/HTLV III. L'invention vise également des peptides et protéines apparentés à des épitopes de LAV/HTLV III, que l'on peut produire en utilisant des méthodes faisant appel à de 1'ADN recombinant ou par synthèse chimique. Les virus ou peptides et protéines de la présente invention peuvent servir d'immunogènes dans diverses formulations de vaccins, ce qui comprend des formulations de vaccins multivalents pour protéger contre une infection par LAV/HTLV III, qui est l'agent responsable de LAS (syndrome d'adénopathie) et du SIDA Selon une forme de mise en oeuvre de la présente invention, on utilise des techniques faisant appel à de 1'ADN recombinant pour insérer des séquences de nucléotides codant des épitopes de LAV/HTLV III dans des vecteurs d'expression qui vont diriger l'expression de séquences de LAV/HTLV III dans des cellules d'hôtes appropriés.Ces systèmes vecteurs d'expression-cellules d'hôtes peuvent servir à produire in vitro des peptides et protéines apparentés à LAV/HTLV III et, dans ce cas, les gènes produits peuvent être purifiés à partir des cellules en culture et servir d'immunogène dans des formulations de vaccins de sous-unités.
En variante, les séquences d'aminoacides de ces peptides et protéines peuvent être déduites des séquences des nucléotides de LAV/HTLV III contenues dans des recombinants qui expriment des peptides et protéines immunogènes apparentés à LAV/HTLV III. Ces peptides et protéines peuvent ensuite faire l'objet de synthèses chimiques et servir dans des formulations de vaccins à sous-unités synthétiques.
Quand le vecteur d'expression est un virus, le virus lui-même peut être formulé à titre de vaccin. Des virus recombinants infectieux, qui ne déclenchent pas une maladie dans l'hôte, peuvent servir dans des préparations de vaccins à virus vivant pour conférer une immunité importante. En variante, on peut préparer des vaccins contenant des virus inactivés, quand on utilise des virus "tues". En outre, on peut préparer des vaccins multivalents contenant des épitopes de LAV/HTLV III ainsi que ceux d'autres agents provoquant des maladies.
Pour une description claire, le procédé de l'invention peut être divisé en les étapes suivantes : (a) isolement d'un gène, ou fragment de gène, codant des protéines de virus LAV/HTLV III ; (b) insertion du gène, ou du fragment de gène,dans des vecteurs d'expression ; (c) identification et croissance du vecteur d'expression recombinant dans un système hôte qui est capable d'assurer la réplication et l'expression du gène ; (d) identification et purification du produit obtenu à l'aide du gène ; (e) détermination du pouvoir immunitaire du produit, et (f) formulation d'un vaccin.
Dans une forme spécifique de mise en oeuvre de l'invention, on décrit la construction de virus de vaccine recombinants contenant le gène d'enveloppe de LAV/HTLV III qui dirige l'expression de protéines immunologiquement liées aux protéines d'enveloppe de LAV/HTLV III dans des cellules en culture tissulaire infectées par les virus recombinants.
Cependant, les compositions et procédés que l'on décrit ici ne se limitent pas à la construction des virus de vaccine recombinants exprimant des protéines apparentées à l'enveloppe de LAV/HTVL III, et ils peuvent servir à reconstruire des recombinants dans n'importe quel système de vecteur d'expression pour la production de polypeptides apparentés à des antigènes de n'importe quel agent étiologique du SIDA.
Pour la clarté de l'exposé, la totalité du procédé sera étudiée en termes de gènes de l'enveloppe de LAV/HTLV III. Cependant, la même technique peut être appliquée de façon analogue pour construire des vecteurs d'expression recombinants et pour produire des polypeptides apparentés à n'importe laquelle des protéines de LAV/HTLV III ainsi que pour celles de virus apparentés.
Des virus de vaccine recombinants sont produits par transfection de plasmides d'insertion de bactéries recombinantes,contenant le gène étranger des cellules précédemment infectées par le virus de la vaccine. Une recombinaison homologue se produit au sein des cellules infectées et produit l'insertion du gène étranger dans le génome viral. Les cellules infectées peuvent être dépistées à l'aide de techniques immunologiques, d'hybridation sur plaque de ADN, ou de choix génétique de virus recombinants que l'on peut isoler par la suite. Ces recombinants de vaccine conservent leurs fonctions essentielles et leur infectivité et ils peuvent être construits de manière à comporter environ 35 kilobases de ADN étranger.
L'expression de gènes étrangers peut être décelée par des dosages enzymatiques ou immunologiques (par exemple par immunoprécipitation, dosage radioimmunologique ou immunocoagulation). Les glycoprotéines naturelles de membrane produites par des cellules infectées par de la vaccine recombinante sont glycosylées et peuvent être transportées vers la surface des cellules. On peut obtenir des taux élevés d'expression en utilisant des promoteurs forts ou en obtenant par clonage des copies multiples d'un seul gène.
On va décrire des virus qui dirigent l'expression de peptides ou protéines apparentés à des épitopes de LAV/ HTLV III. Ces virus peuvent être formulés sous forme de vaccins de virus pour protéger les êtres humains contre une infection par LAV/HTLV III. Dans une forme particulière de mise en oeuvre de la présente invention, on peut préparer des formulations de vaccins de virus vivants, en utilisant des virus infectieux qui expriment des épitopes apparentés à LAV/HTLV III dans un hôte infecté, mais ne provoquent pas une telle maladie chez cet hôte.
L'invention vise également des peptides ou protéines apparentés aux épitopes de LAV/HTLV III. On peut les formuler en des vaccins de sous-unités pour protéger les êtres humains contre une infection par LAV/HTLV III ou bien on peut les formuler dans des vaccins multivalents. Les peptides ou protéines de la présente invention peuvent être produits dans, et isolés à partir de, n'importe quel système de vecteur d'expression dans des cellules hôtes ; cela comprend, par exemple, des cultures de cellules d'animaux ou d'insectes infectées par du virus recombinant approprié ; des microorganismes comme des bactéries transfectées par des plasmides recombinants, des cosmides ou des phages ; et de la levure transformée à l'aide de plasmides recombinants.La présente invention propose également des méthodes, des modes opératoires et des constructions de ADN servant à l'expression de l'information génétique codant pour les épitopes de LAV/HTLV III. En variante, on peut effectuer la synthèse chimique des peptides et protéines de la présente invention.
Dans une forme spécifique de mise en oeuvre de la présente invention, le gêne codant pour les glycoprotéines d'enveloppes de LAV/HTLV III (gène env de LAV/HTLV III) est inséré dans un plasmide de manière qu'un promoteur de virus de vaccine antérieur soit placé en 5' par rapport à la séquence méthionine d'amorçage (ATG) du gène env LAV/HTLV III, ce qui donne un gène chimérique qui est à son tour flanqué ou entouré par des séquences de thymidine kinase (TK) de ADN de vaccine. Ce plasmide est ensuite transfecté (introduit) dans des cellules qui ont été au préalables infectées par du virus de vaccine de type sauvage,ce qui permet aux gènes chimériques env LAV/HTLV III, entourés par les séquences de TK, de se recombiner dans le gène TK du virus de vaccine.
On laisse les cellules se lyser et l'on cultive le virus résultant sur des plaques de cellules de TK-. On choisit le virus recombinant d'après son aptitude à se fixer sur des cultures de ces cellules en plaques en présence de 5-bromo-désoxyuridine ainsi que par hybridation ADN-ADN sur une sonde radiomarquée d'enveloppe LAV/HTLV III.
On purifie des plaques positives à l'hybridation, on en provoque la croissance et l'on soumet le virus recombinant résultant à des essais d'aptitude à la production des glycoprotéines d'enveloppe de LAV/HTLV III. On utilise des stocks de virus, ou virus de réserve, produisant ces protéines pour infecter les animaux d'essai. Le sérum obtenu sur ces animaux peut être soumis à des dosages d'anticorps contre de la glycoprotéine LAV/HTLV III, pour déterminer l'aptitude de ce sérum à empêcher une virémie provoquée par LAV/HTLV III, et enfin pour en déceler l'aptitude à conférer une protection contre le SIDA.
On va maintenant brièvement décrire les figures annexées.