INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Des résultats reproductibles ont été obtenus en utilisant comme sonde intragénique, un fragment d'ADN comportant 850pb nucléotides délimité par les sites de restriction en position iinaIII - ClaI.
Les fragments intragéniques sont avantageusement utilisables comme sondes pour l'étude de la dissémination de la résistance à Tc. Les hybridations avec l'ADN d'autres cocci à Gram-positif permettent d'étudier la variabilité de la résistance.
L'invention vise également les applications immunologiques de la protéine codée, plus spécialement pour l'élaboration -d'antisérum spécifique ainsi que d'anticorps polyclonaux et monoclonaux. Les anticorps polyclonaux sont formés selon les techniques classiques par injection de la protéine à des animaux, récupération des antisérums, puis des anticorps à partir des antisérums par exemple par chromatographie d'affinité.
D'autres avantages et caractéristiques de 1 'invention sont rapportés dans la description qui suit concernant le clonage du gène tetM chez n.coli, la détermination de sa séquence nucléotidique et l'analyse des produits d'expression. Dans cette description, il sera fait référence aux figures 1 à 4, - la figure 1, représentant une carte de restriction simplifiée d'un fragment de 4 kb HincII--HincII portant le gène tetM et la stratégie de séquençage utilisée pour déterminer sa séquence nucléotidique, - la figure 2, la séquence nucléotidique du gène tetM, - la figure 3, les codons de terminaison du fragment d'ADN de 2094 pb contenant le gène tetM pour les trois phases ouverts de lecture sur les deux brins d'ADN, - la figure 4, les résultats de l'analyse des protéines codées par les plasmides recombinants pAT183 et ses dérivés dans la souche d'.coli AR 1062 produisant des minicellules, et - la figure 5, les résultats d'études épidémiologiques effectuées avec différentes sondes.
MATERIELS ET METHODES a/ - Plasmides. souches de bactéries et de bactério Phases Le transposon conjugatif Tnl545, est préparé à partir de la souche S. faecalis BM4127 qui héberge pIP804 (pIP964 :: Tn1545). Pour les expériences de clonage, on construit pAT181 (Tcs, Kmr, Apr) qui est un dérivé de pBR322 (pAT95 (28) # (BamHI-AyaI).
La souche d' E.coli JM101 est transfectée avec les fragments d'ADN à séquencer en utilisant les bactériophages soit M13mp18, M13mp19, (9) soit M13mp10 (10).
Les plasmides recombinants sont introduits par transformation (11) dans E.coli HB1Ol (12) et dans la souche AR1062 (13) produisant des minicellules. Comme concentration d'antibiotique pour la sélection des cellules, on utilise 100 pg/ml d'ampicilline, 20 pg/ml de kanamycine et 5 pg/ ml de tétracycline.
bl - Préparation de l'ADN nlasmidique pIP804 est préparé selon (14) et des préparations à grande ou à petite échelle d'ADN plasmidique de E.coli sont effectuées respectivement selon (11) et (15).
c/ - Analvse et Purification des fragments d'ADN On analyse les fragments de restriction par électrophorèse sur plaques (10 x 10 x 0,7 cm) de gel d'agarose à 0,8% en utilisant un tampon Tris-Borate EDTA. On récupère les fragments d'ADN à partir de gels par électrotransfert sur membrane de dialyse.
d/ - Séauencaae Les fragments d'ADN clonés dans les bactériophages M13mp10, M13mp18 et M13mp19, sont séquencés selon la technique de terminaison de chaîne (16). On soumet les fragments d'ADN à une électrophorèse sur gel vertical de polyacrylamide à 8% (40 x 30 x-0,05 m), contenant 8M d'urée, puis on effectue des autoradiogrammes.
e/ - Analvse des protéines Plasmidiques avec des minicellules Les minicellules sont préparées, marquées avec de la 35S-méthionine lysées et les extraits soumis à une électrophorèse sur gel de polyacrylamide-SDS comme décrit dans (17).
- Expériences d'hybridation Les sondes sont marquées in vitro avec 32p et hybridées selon (19) à de l'ADN immobilisé sur des filtres de cellulose (11).
EXEMPLE 1 LOCALISATION ET CLONAGE DE LA REGION DE RESISTANCE A LA TETRACYCLINE DE Tn1545.
On a représenté en 15 le dispositif éjecteur qui est l'objet principal de la présente invention. Du fait de la forte exagération du déplacement de la lame, le dispositif éjecteur, dans la position représentée en pointillés, paratt avoir basculé d'un angle important. En fait, ce basculement est beaucoup plus faible, et compatible avec les jeux normaux. La force d'attraction magnétique permet de maintenir le contact sans qu'aucune mesure spéciale soit nécessaire.
Sur la figure 2, la lame 4 est représentée en traits interrompus, et est donc supposée enlevée. Le dispositif éjecteur 15, représenté à titre d'exemple, est composé d'une pièce d'éjection 16, et d'un support 17. La pièce d'éjection 16, ainsi qu'il est plus visible à la figure 3, comprend deux plaques de matière plastique du type "Celoron" (marque déposée). Ces deux plaques sont traversées par six vis 20-21 ayant chacune une tête ronde 22-23, et associées à un écrou 24-25 pour serrer les plaques 18-19 l'une contre l'autre. Entre les deux plaques est placé d'une part un barreau magnétique 26, et d'autre part, autour des vis 21 les plus écartées de la lame 4, des tubes entretoises 27 dus hauteur égale à celle du barreau magnétique 26.On conçoit que le serrage des boulons 24-25 maintient fermement serré le barreau magnétique 26 entre les deux plaques 18-19.
Le barreau magnétique 26, qui stétend sur toute la longueur des plaques 18-19, a ses piles plus et moins disposés au contact des deux plaques 18 et 19. il se trouve sensiblement en retrait par rapport aux bords de ces plaques d'un intervalle d'environ 1 mm, qui constitue l'entrefer. Dans une réalisation pratique, on a utilisé un barreau magnétique de longueur 35 cm, de section carrée d'environ 0,8 x 0,8 cm, formé d'une série de plaques de matériau magnétique serrées entre deux pièces polaires formées de baguettes d'acier doux situées au contact des plaques 18 et 19. Le support 17 est constitué d'une plaque 28, disposée perpendiculairement au plan de la lame 4, tout en faisant un angle d'environ 450 avec la verticale, c'està-dire avec la direction de déplacement de la lame au voisinage du point de contact.La plaque 28 porte deux tétons 29, 30, perpendiculaires à son plan. Ces tétons 29-30 pénètrent dans deux lumières 31-32 des plaques 18 et 19. Ces lumières sont allongées horizontalement, cest-à- dire dans la direction perpendiculaire au plan de la lame 4, elles reçoivent les tétons 29-30 avec un jeu suffisant pour permettre des déplacements faciles. La pièce dsséjec- tion 16 repose sur la plaque 28 par l'intermédiaire des têtes rondes 22-23 des vis 20-21, donc avec un frottement très faible, l'autre source de frottement étant le contact des tétons 29-30 avec le bord des lumières 31-32.La plaque 28 est en retrait par rapport à la lame dans sa position correspondant au recul maximal des poussoirs 19114. La position des vis 20 les plus proches de la lame 4 est telle que les tettes 22 se déplacent toujours sur la plaque 28 lors du déplacement d'avant en arrière des poussoirs 13-14.
Lorsquaprès un certain temps dtusage, les bords des lames 18-19 sont usés au point que l'entrefer de l'aimant 26 paratt insuffisant, et que par conséquent un serrage exagéré apparatt entre la pièce d'éjection 16 et la lame 4, on enlève très simplement la pièce 16, en la soulevant au-dessus des tétons 29-30. tes plaques 18-19 sont alors rectifiées en atelier, et, après desserrage des écrous 24-25, on recule également l'aimant 26 par rapport à la nouvelle position du bord des plaques 18-19. Cette opération se fait en atelier avec des calibres appropriés, et ne présente aucune difficulté.Ensuite, la pièce d'éjection 16 est remise en place, de façon très simple, en enfilant à nouveau les tétons 29-30 dans les lumières 31-32. Bien entendu, il est possible de disposer de plusieurs jeux de pièces d'éjection 16, si bien que le fonctionnement de la scie n'est interrompu que pendant quelques secondes pour l'échange d'une pièce d'éjection usagée pour une pièce d'éjection neuve ou rénovée.
On a représenté à la figure 4 un patin de poussoir tel que 13 ou 14, particulièrement adapté à coopérer avec l'éjecteur de poussières qu'on vient de décrire.
Ce patin 40 est formé d'un bloc parallélépipédique en matière "Celoron". Ce bloc présente sur sa face destinée à être en contact avec la lame des alésages 41, reliés par un conduit intérieur 42 à une amenée d'air comprimé 43. Du côté qui correspond à la denture de la scie, le bloc est renforcé par une pièce de polyamide 44 percée d'une gouttière 45. La pièce 44 et la gouttière 45 sont orientées à environ 450 sur la direction de déplacement de la lame.
Le fond de la gouttière 45, à sa partie supérieure, est relié par un autre conduit interne 46 à une autre amenée d'air comprimé 47. L'air comprimé s'échappant par la gouttière 45 chasse une partie des particules de sciures, copeaux et poussières qui ont été entratnées par la denture, et par conséquent réduit l'usure du dispositif éjecteur décrit plus haut.
-1- La présente invention concerne d'une façon générale les blocs optiques
de véhicules automobiles, et concerne en particulier une paire de deux blocs optiques comprenant chacun plusieurs lampes aptes à remplir les fonctions lumineuses différentes, par
exemple à l'arrière du véhicule.
L'invention concerne également un procédé pour réaliser une telle paire de blocs optiques gauche et droit. Un bloc optique comprend généralement un ensemble de lampes qui sont montées sur un même support et auxquelles sont attribuées des fonctions lumineuses
différentes. Afin de supprimer le câblage manuel con-
ventionnellement nécessaire pour assurer la connexion électrique des lampes avec leur tension d'alimentation respective et avec la masse, il est connu dans la technique antérieure de relier électriquement les lampes
aux broches juxtaposées d'une fiche multiple par l'in-
termédiaire d'un circuit constitué par un ensemble de bandes conductrices minces fixées d'une manière ou d'une autre sur le support des lampes. Les tensions d'alimentation des diverses lampes sont amenées sur le bloc optique par un connecteur mis en place sur la fiche multiple lors du montage, et le circuit assure
la distribution des tensions vers les lampes associées.
Selon chaque cas d'exploitation du procédé, on donne selon la hauteur de l'élément de recouvrement la distance voulue dans le sens vertical entre les pièces 3 et 4, donc 15 et 16, pour que les vis 13 et 14 soient faciles d'accès pour être manoeuvrées respectivement par dessus et par dessous.
On a dit plus haut que les vis 13 ou 14 sont à composante verticale. Afin d'assurer dans certains cas une accessibilité plus aisée aux vis 13 ou 14, celles-ci peuvent être disposées avec une certaine inclinaison par rapport à la verticale, mais dans la limite où l'angle de la vis avec la verticale reste inférieur à l'angle des surfaces inclinées 7 ou 8 avec la verticale. Tel est le sens qu'on donne selon l'invention à "vis à composante verticale". Toutefois, plus la vis est proche de la verticale, plus la possibilité de réglage en hauteur avec une course de vis moindre est importante. Une inclinaison faible est donc préférable (quelques degrés). Pour des raisons de commodité la vis du haut pourra être verticale et celle du bas inclinée.
L'application des procédés de mise en oeuvre ci-dessus décrits convient pour la fixation de panneaux venant oôte à côte ou en superposition verticale. De telles applications sont permises grâce à la fixation indépendante de chaque panneau par utilisation, d'autant de fois deux jeux complets de supports que de panneaux à fixer. Toutefois, dans certains cas, on peut n'utiliser qu'un jeu de supports par panneau, les panneaux contigus se bloquant les uns les autres.
Le dispositif de l'invention présente par rapport aux solutions traditionnelles de nombreux avantages.
Le système est conçu pour utiliser des accessoires (supports) présentant une faible saillie frontale et la manoeuvre des vis s'effectue au ras des surfaces porteuses.
La faible saillie des accessoires permet de les loger dans des cavités de faible profondeur, pratiquées au revers des panneaux. Les accessoires peuvent donc être rendus invisibles frontalement jusque dans le cas d'emploi de panneaux d'épaisseur relativement réduite.
Les manoeuvres de crochetage et de réglage des accessoires se limitent à l'emploi d'un tourne-vis, donc l'accès aux accessoires nécessite seulement un trou de passage de tourne-vis.
Les trous de passage, au nombre de quatre par panneau, ne sont visibles que latéralement, par dessus et par dessous. Le masquage de ces trous de passage, s'il est imposé pour des raisons esthétiques, n'est nécessaire que si les niveaux supérieur et inférieur des panneaux sont accessibles au regard. Dans ces cas, le masquage est facilement réalisable au moyen d'accessoires de camouflage courants esthétiquement acceptables.
En relation avec les avantages précités, le système réalise une application directe du panneau contre la paroi porteuse, supprimant totalement la nécessité de vide ou espace mort intercalaire.
Par sa facilité de mise en oeuvre, le systeme de l'invention est compatible avec 1 absence de qualification professionnelle. La réalisation de la fixation et du réglage se fait avec l'outillage courant de l'amateur - nombre minimal d'accessoires de fixation réduit à deux jeux, soit 4 fixations à la partie porteuse pour chaque panneau; - intégration au système de fixation du système de réglage du positionnement précis de chaque panneau; - importante latitude corrective de l'imprécision du positionnement des accessoires à fixer sur les parties porteuses.
Dans la mesure où l'accès aux vis de réglage est préservé, ces vis étant en permanence en position et libres de tout mouvement, toute correction du positionnement des panneaux reste possible à tout moment.
Le système de l'invention offre la possibilité de démontages et remontages en nombre illimité et très rapides.
Enfin, le système de l'invention procure un effet de raidissement des panneaux dans le sens vertical qui peut être utile pour des panneaux trop flexibles.
-1- La présente invention concerne d'une façon
générale les feux de signalisation de véhicules auto-
mobiles, et concerne plus particulièrement un feu de signalisation destiné à émettre un rayonnement lumineux coloré. Dans un certain nombre de feux de signalisation à rayonnement coloré existants, la coloration du feu est donnée par la glace ou le globe de fermeture du feu,
La numérotation débute à la première paire de base séquencée. Le cadre hachuré correspond au gène tetM dont le sens de transcription est indiqué par la flèche.
La figure 4 représente les résultats de l'analyse des protéines codées par les plasmides recombinants pAT183 et ses dérivés dans la souche & coli AR1062 produisant des minicellules Les polypeptides marquées par de la [35S]-méthionine, synthétisés dans les minicellules, ont été analysés par électrophorèse sur gel de polyacrylamide-SDS et visualisés par autoradiographie.
La migration des protéines standards et leur masse moléculaire M respective, sont indiquées sur la gauche ainsi que l'échelle de Mr déduite.
La protéine de 29,2 kd, APH (3'), spécifique pour la résistance à la kanamycine, apparaît dans chaque échantillon analysé.
La protéine de résistance à Tc (1 ou TETM) présentant une M apparente de 68 kd n'est que détectable que dans la piste de pAT183. Une série de trois autres polypeptides de 32,5 à 35 kd (numérotés 2,3 et 4) sont également produites par pAT183 et pAT183 @ indIII mais non par pAT181. On obtient une version tronquée de ces quatre polypeptides avec le plasmide pAT183 KPnI.
EXEMPLE 3 INACTIVATION PAR LES ION IN VITRO DU GENE tetM ET ANALYSE PAR MINICELLULES.
On a confirmé l'étendue du gène tetM en construisant des dérivés du plasmide pAT183 et en examinant les protéines codées par ceux-ci dans des minicellules. On a construit par digestion, remplissage et ligation les plasmides suivants : pAT183 #(HindIII), pAT183(Sac I), pAT183#(Kpn I) et pAT183A(Sac I - KPn I).
Ces plasmides ainsi que pAT181 et pAT183 ont été introduits par transformation dans la souche E.coli AR1062 productrice de minicellules.
On a sélectionné les clones en fonction de leur résistance à la kanamycine. On a constaté que pAT183 est le seul plasmide recombinant conférant à E.coli la résistance à la tétracycline.
Les protéines marquées produites par les minicellules ont été analysées par électrophorèse sur gel de polyacrylamide - SDS (voir figure 4).
Parmi les protéines codées par pAT183 dans les minicellules, on décèle un polypeptide de 68000 daltons.
La suppression du site KPnI conduit à la synthèse d'une protéine tronquée de 65000 daltons.
On constate, en outre, que toutes les autres protéines liées à la présence de l'insertion HincII ~ BAL31, en particulier les protéines de 35000, 34500, et 33000 daltons sont décalées et présentent une masse moléculaire apparente réduite d'environ 2000 daltons.
D'après ces résultats, ces produits proviendraient du même transcript et il existerait des sites secondaires internes d'initiation de la traduction au sein du gène tetM.
On considère que ces sites d'initiation de la traduction sont localisés dans le milieu du gène tetM, à proximité du site ClaI, étant donné que les protéines 2, 3 et 4 ne sont plus synthétisées lorsque le site SacI et le fragment Sacl - SDnI sont délétés.
EXEMPLE 4 Construction-d'une sonde intragénique tetM pour des études épidémiologiques.
La séquence codante du gène tetM est caractérisée en ce qu'elle est définie par le codon d'initiation ATG en position 131 et le codon de terminaison TAG en position 2047 dans une phase de lecture ouverte (ou PLO en abrégé) de 1917 paires de base.
Selon un autre aspect, la séquence du gène tetM est caractérisée en ce qu'elle est présente dans le transposon navette conjugatif Tn1545 du plasmide pIP804 présent dans la souche de Streotococcus faecalis BM4127, à laquelle il confère un haut niveau de résistance à Tc.
Cette souche a été déposée le 24 Juillet 1986 sous le n I 582 à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (C.N.C.M).
Le gène tetM est également caractérisé en ce qu'il est porté par un fragment d'ADN de restriction HincII - HincII de 4 kb environ tel qu'obtenu par digestion par fiiiiclI d'un mélange de plasmides pIP804 et pAT181, ce dernier étant construit par délétion in vitro des fragments BamHI - AvaI de pAT95 (pBR322 ;t Km).
Ce fragment de 4 kb environ contient des sites uniques HindIII, ClaI, SacI et KDnI.
L'expression de la séquence nucléotidique du déterminant de résistance à Tc selon l'invention, dans des minicellules d'E.coli selon les techniques habituelles conduit à une protéine TETM ayant une masse moléculaire apparente M de l'ordre de 68.000 daltons, telle que déterminée par électrophorèse sur gel de PLOyacrylamide -SDS.
Il apparaît que cette protéine ne présente pas d'homologie structurale avec les determinants de résistance à Tc des Gram-négatifs (tetA, tetB, tetC) ou de Bacillus et de StaPhvlococcus.
L'estimation de 68.000 daltons de M est en accord avec la Mr de 72.500 daltons déduite de la séquence nucléotidique de la PLO de 1917 pb ci-dessus.
La séquence correspondante d'acides aminés est la suivante AET LTS ILE ILE ASA ILE SLT Y@R LEU ALA NIS YAL ASP ALA GLY LYS THR LHR LEU INR ELU EE@ LEU LEU TIA ASN SER ELY ALA ILE THR SLU LEU GLY SER VAL AS@ ARG ELY THR THR LYS THR AS@ ASX THR IEU LEU GLU AGS ELA ARG SLY ILE TNR ILE ELN THR ALA IIE THR SER THE GL@ IAP LYS ASK THR LYS YAL ASN ILE ILE ASP THR PRO SLY NIS AET ASP PHE LEU ALA GLU VAL TYA ACG SEA LEU SER YAL LEU AST GLY ALA ILE LEU IEU ILE GGA ALA LYS AS@ GLY VAL @LA ALA GL@ THR ARS ILE LEU PHE NIS ALA LEU ARS LTS TLE GLY ILE PRO THR ILE @@E @@E ILE ASN LYS ILE ASP GLA ASN GLY ILE AS@ LEU GG@ THR VAL TTR GLA ASP ILE LTS SLU LYS LEU SEA ALA GLU TLE YAL ILE LTS GLK LTS YAL GLU LEU HIS PRO AS@ @EI ARG YAL NET AS@ @HE IHR @@U SER SLU SL@ TRP ASP AET VAL TLE GLU @LT ASK AS@ TTR LEU LEU GLU LTS TYA THR SER GLT LYS LEU LEU GLU ALA LEU IEU @@U GLA SLU GLU SER ILE ARS PHE NIS ASA EYS SER LEU IHE P@D VAL TYR NIS SLT GGR ALA LYS ASA ASA IL@ @LT ILE ASP ASA LEU ILE GLU VAL ILE THR ASA LYS PHE IYR SEA SER THR NIS ARG @@Y @@@ GEA @@@ LTU CYS @LT LYS VAL PNE LYS ILE SLU TT@ SER GLU LTS ARS GLA ARS LEU ALA TYA ILE AR@ L@@ TTR SER SLY VAL ILU @IS LEU AAS AS@ IRO VAL A@S ILE SE@ IRU LYS IRU LYS LIE LTS ILE THR @LU AET TRA THR SEA ILE AS@ GLY GLU IEU ETS LTS ILE ASP LYS ALA TTR SEA SLY GLU ILE YAL ILE LEU SLN AS@ SLU PHE IEU LYS LEU AS@ SEA YAL LEU SLY ASP THR LYS IEU LEU P@O BLA A@S GRU ARS ILE SLU ASN PRO LEU IPO LEU LEU BLA IHR THR VAL @R@ P@@ @EA LYS PAS GL@ @LT ARG ALU RET LEU LEU AS@ ALA LEU LEU GL@ ILE SEA ASP SER ASP PRO LEU LE@ A@S TTR TYA VAL ASP SEA ALA TNR NIS SLU ILE ILE LEU SER PNE LEU GLY LYS VAL SL@ @ET @LU VAR TNR CTS ALA LEU LEU GLN SLU LYS TYE HIS VAL GLU ILE SLU ILE LTS GLU PRO TNR VAL ILE TYR NEI SLU ARS PRO LEU LYS LTS ALA GLU TTR INR ILE NIS ILE @LU VAL PRO YRO ASN PRO PHE I@P ALA SEA ILE SLY LEU SEA VAL ALA PRO LEU PRO LEU ELT SER SLY VA@ SLA TTR ELU SER SER VAL SER LEU GLY TYR LEU ASN ELA SER PHE SLA ASA ALA VAL @ET SLU GLY ILE ARS TTR SLT CTS GLU @LA @@T LEU TYA ILT T@@ ASN VAL TNR ASP CYS LTS ILE CTS PNE LTS TTR @LY LEU TYR TYR SER PRO PAL SEA TNR PEO ALA ASP PME A@S @ET LEU ALA P@O ILE VAL LEU SLU @L@ YAL LEU LYS LYS ALA SLY T@@ @LU LEU LEU SLU PRO TYA TYR LEU SEA LYS ILE TTE A@A P@O @L@ ELU TYR LEU SEA ARE ALA TYA AS@ AS@ ALA PRO LTS TYR CYS ALA ASA ILE YAL ASP THR SL@ LEU LTS ASN AS@ GLU VAL ILE LEU SER ELT @IU ILE PEO ILA A@O TYS ILE EL@ CLD TYA ARS SER AS@ LEU THR PNE PHE I@@ AS@ ELY A@@ SER YAL CTS LEU THR TLU LEU LYS @LT TYR HIS VAL THR THR CLY ELU P@O VAL CTS @L@ P@@ A@@ A@S P@O AS@ SER AAG ILE ASP LYS VA@ A@G TYR @@@ PHE ASN LYS TLE THR +++ La protéine TETM est caractérisé par une hydropathie d'environ -0,21 ce qui contraste fortement avec les hydropathies calculées pour les autres protéines TET qui sont nettement hydrophobes (valeurs de 0,76 à 0,93).
L'invention vise également les ADN recombinants contenant les fragments d'ADN ci-dessus recombinés avec des fragments hétérologues,ainsi que les vecteurs recombinants, notamment les plasmides hybrides comportant au moins une partie du gène tetM.
De tels plasmides comprennent le plasmide pAT183 tel qu'obtenu par introduction d'un fragment de 4 kb environ HincII-HincII dans le site unique HincII de pAT181, clivage par PvuI du plasmide pAT182 résultant, suivi d'une digestion par BAL31.
L'invention vise en outre, en tant qu'intermédiaires, les souches bactériennes modifiées, ou transformants, caractérisées par l'insertion dans leur génome d'au moins une partie d'un fragment d'ADN tel que défini ci-dessus.
Conformément à l'invention, le séquençage du déterminant de résistance à Tc comprend - l'introduction du fragment de 4kb Hincîl-Hincil dans le site unique HincII de pAT181, ce qui conduit au plasmide recombinant pAT182, - le sous-clonage du gène tetM par clivage par PvuI, suivi d'une digestion par l'exonucléase BAL-31, ce qui conduit au plasmide recombinant DAT183, et - le séquençage d'un fragment de 2094 pb contenu dans l'insertion de 2,9kb environ HincII-BAL-31 capable de conférer la résistance à la tétracycline.
La séquence codante est avantageusement purifiée puis le fragment HincII-HaeIII de 3 kb environ est soumis à une digestion par diverses endonucléases de restriction. On effectue le clonage des fragments obtenus dans des formes réplicatives appropriées deM13mpl0, M13mp18 et M13mp19. La séquence nucléotidique du déterminant est alors déterminée selon les techniques haBi- tuelles à partir des fragments obtenus.
L'invention vise également les applications biochimiques d'au moins une partie de la séquence du gène tetM définie ci-dessus.
Ces applications comprennent l'élaboration de sondes pour la détection de la résistance à Tc dans les bactéries.
/ X /D = -2 +1 c = 1% CHCl3 - le 1R /1 α, 3 ss/ 2,2-diméthyl 3-(2,2-diiodo éthényl) cyclopropane carboxylate de α méthyl 1-(6-phénoxy 2-pyridyl) méthyle.
/α/D = +25 5 +1 c = 1% CHCl3 - le 1R /1 α 3 ss / 2,2-diméthyl 3-(2,2-diiodo éthényl) cyclopropane carboxylate d'α cyano 1-(6-phenoxy 2-pyridyl) méthyle.
/ α /D = +16 #0 5 c = 1,5% CHCl3 - le 1R /1 α (S) 3α/2,2-diméthyl 3-(2,2-diiodo éthényl) cyclopropane carboxylate de 3-(2-propényl) 2-méthyl 4-oxo 2-cyclopentèn-yle.