INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
L'étape suivante de montage de l'emballage consiste à plier l'ensemble formé par les panneaux 1, 2, 3, 4 et 5 autour de la ligne de pliage L5 en faisant tourner cet ensemble de quatre-vingt-dix degrés autour de cette ligne, à relever le panneau 7 par rapport au panneau 6 par pliage autour la ligne transversale L6, et à fixer la face initialement inférieure du panneau 3 sur la face supérieure préencollée du panneau 7.
Les bords longitudinaux 34 du panneau 6 ayant été préalablement rabattus sur la face supérieure de ce panneau et fixés à celle-ci par collage à leur extrémités (comme représenté en figure 2), il suffit d'introduire les extrémités des pattes 24 du panneau 2 sous les parties centrales des bords rabattus 34, pour assurer le maintien en forme du berceau formé par le panneau 2.
L'emballage représenté en figure 3 est alors prêt à être utilisé.
2 -Le FAISCEAU TUBULAIRE - FIG. 12 (20).
Un Diviseur classique, situé en amont de l'ECHANGEUR sur la Ligne liquide, répartit uniformément le GAZ entre les différents Tubes (19) composant le Faisceau aboutissant à l'ECHANGEUR.
Celui-ci (19) pénètre dans la CUVE par le Fond bombé supérieur (17). A l'intérieur de celle-ci (16), le faisceau décrit des spirales concentriques (20) et sort par le fond bombé inférieur (76)-.
C'est le Circuit Secondaire-.
Chacun des Tubes (7c) est alors prolongé par un Tube Capillaire (21) classique qui aboutit, à son autre extrémité à un des Tubes du Faisceau (1)-Il y a un Capillaire par Tubes.
Cet appareil est solidaire d'un " U " de fixation Fig 13 - (22) -.
III - LA CUVE de CONGELATION: Les parties nouvelles et originales de cette CUVE, objet de la présente invention, sans aucun caractère limitatif quant aux dimensions ni aux matériaux ds fabrication utilisés sont les suivantes 1 - 3 FOND et son REPARTITEU-Fig. 16 et 17-.
20- La GRILLE DOUBLE-FOND - Fig. 16-17 et 19-.
3 -Les COTES LATERAUX - Fig. 16-17 et 18-.
40- Le OOT AVANT - Fi. 16-17 et 18-.
5 - Le COTE ARIERE - Fig. 18-.
6 - Les RECEVEURS des Moules et Mouleaux, Fig 21 et 22-.
1 - Le FOND ET SON REPARTITEUR: Cette pièce (22), rigide, objet de la présente invention, sans aucun caractère limitatif quant aux dimension ni aux matériaux de fabrication utilisés, partis d'un tout, présente les caractéristiques suivantes La FACE Intérieure comprend a)- Une Surface plane, le FOND proprement dit, (22).
b)- Une pièce de même nature et de même longueur que le Fond, en forme d'Oméga (23), dont les a les sont soudées ou collées sur le dit Fond, cest le REPARTITEUR (25). Il est localisé dans l'axe longitudinal de la CUVE et son embouchure correspond à la PIPE (30) d'Alimentation en Médium refroidi provenant de l'ECHANGEUR THERMIQUE. Ses flancs sont percés d'Orifices à Diamètre croissant et disposés à intervalles réguliers (23)-.
Le rôle de ce REPARTITEUR, est de distribuer st de diriger, dans l'Espace (33), compris entre le Fond et la Double-fond, le Médium, avec une pression identique dans tout ce volume La FACE Extérieure, (28), traitée en métal ou tout autre matériau rigide est plane.
Elle (28) forme avec la Face Intérieure (22) un CAISSON (29) rempli en totalité par un matériau isolant classique à haut coefficient d'isolation thermique.
Conformément à la présente invention, les moyens de masquage du ballon 40 sont constitués par une feuille souple transparente 50, réalisée par exemple à partir d'un film mince de polycarbonate, sur laquelle est réalisé, par
sérigraphie, un masquage opaque 52 de géométrie appropriée.
Dans le cas o l'aspect du feu éteint doit être blanc ou gris, pour assurer une continuité d'aspect satisfaisante' par exemple avec un projecteur situé à côté, on utilisera dans le processus de sérigraphie une encre blanche ou grise,
de préférence d'aspect brillant, afin de renforcer, en éclai-
rage ambiant, la couleur blanc-gris des rayons reémis par
le feu vers l'extérieur.
La géométrie du masquage pourra prendre toute configuration appropriée. Les zones opacifiées pourront être en forme de bandes horizontales et/ou verticales de largeurs et de pas déterminés, ou encore de points disposés en réseau carré, en quinconce, etc.,ici encore avec des
dimensions et des pas prédéterminés.
Comme on le verra en détail par la suite, la géométrie des zones opaques et transparentes du masque 50 pourra être déterminée en fonction des types d'éléments
optiques réfringents prévus sur le globe de fermeture.
Afin de ne pas excessivement atténuer le ren-
dement lumineux du feu, les zones opaques sérigraphiées devront laisser entre elles des zones transparentes non revêtues 51 de dimensions substantielles; à titre d'exemple, les zones opaques pourront couvrir de l'ordre
de 40 à 60% de la surface totale de la feuille.
s Comme le montre la figure 1, la feuille souple
est montée dans le feu en pénétrant par ses bords supé-
rieur et inférieur dans deux rainures 54e 55 formées res-
Chaque douille, voir figure 3, est constituée d'un corps cylindrique 10 avec des rainures internes 11 pour un montage des lampes à baionnettes, le corps étant prolongé pour présenter quatre pattes 12 et deux languettes d'ancrage 16 décalées angulairement de 1800, chaque languette 16 présentant un ergot élastique en saillie 17. Les pattes 12 s'étendent dans un même plan perpendiculaire à l'axe longitudinal des douilles 1 à 5.
Toutes les douilles sont identiques et peuvent, par conséquent être utilisables pour des blocs optiques différents.
L'ensemble de pistes 6 est découpé dans une feuille d'un matériau bon conducteur de l'éléctricité de manière à présenter des pistes 19, 20, 21, 22, 23 pour l'alimentation des lampes destinées à être montées dans les douilles et à former des languettes 25 destinées à coopérer avec les plots des lampes.
Lors du découpage de la feuille sont maintenus des ponts 26 qui permettent aux différentes pistes de rester attenantes.
Les pistes comportent aux endroits devant supporter les douilles 1,2,3,4 et 5 des barrettes 28 destinées à être rabattues sur les pattes 12 afin d'assurer la fixation des douilles.
L'ensemble de pistes 6 est également conformé pour présenter une série de doigts 30 s'étendant en saillie sur la face dudit ensemble de pistes 6 opposé à celle destintée à recevoir les douilles 1 à 5, chaque doigt présentant au voisinage de son extrémité libre un bossage 31.
Le support 7 est réalisé en matière plastique moulée et présente une série d'ergots 33, des paires de fentes 34 pour la fixation des douilles 1 à 5 et des logements 36.
Comme on le voit à la figure 4 chaque languette d'ancrage 16 des douilles l à 5 traverse une fente 34 moyennant une déformation élastique de l'ergot 17 dont l'extrémité libre vient ensuite buter contre la face interne du support.
Dans l'ensemble de pistes 6 à des endroits déterminés correspondant aux emplacements des ergots 33, il est prévu des lumières allongées 39 dont les levures sont séparées par un intervalle légèrement inférieur à l'épais- seur des ergots 33. Lorsqu'on monte l'ensemble de pistes 6 sur le support 7 (voir figure 5) les hords des lèvres des lumières 39 se déforment et s'ancrent dans l'épaisseur desdits ergots 33.
De manière à obtenir une bonne liaison électrique avec une fiche d'alimentation reliée à une source de courant électrique, chaque doigt 30 est relié à une fiche 40. L'ensemble de pistes 6 peut être réalisé en un matériau bon marché et conducteur de l'électricité, tandis que les fiches 40 sont réalisées en un matériau très bon conducteur, mais bien entendu, beaucoup plus cher.
Les logements 36 (voir figure 6) du support 7 présentent une cavité 36a avec un fond percé d'une fente 36b et raccordé à la cavité par une partie inclinée 36c.
Chaque fiche 40 est réalisée à partir d'une bande métallique pliée en deux pour présenter deux branches 40a et 4Ob, la branche 40a étant terminée par une butée 41 destinée à coopérer avec la face correspondante du support, la branche 40b comportant une butée correspondante 42. Les branches 40a et 40b sont dans leur partie voisine des butées 41 et 42 légèrement écartées pour former un réceptacle destiné à enserrer le doigt 30 correspondant, ledit réceptacle comportant des creux 40c et 40d correspondant au bossage 31.
Dans la branche 43 est découpé un ergot élastique 43. Les fiches 40 sont engagées dans les logements 36 les butées 41 et 42 portant contre la face du support 7 destinée à recevoir ) 'ensemble de pistes 6, tandis que les ergots 43 coopèrent avec l'autre face dudit support.
Pour réaliser le bloc optique on procède de la façon suivante On met en place en premier les fiches 40 dans les logements 36 du support 7, on place ensuite sur ce dernier, l'ensemble de pistes 6 les doigts 30 étant engagés dans les réceptacles des fiches 40 et les ergots 33 traversant les lumières 39. Les douilles 1,2,3,4 et 5 sont ensuite placées aux endroits correspondants, de manière que les languettes 16 s'insèrent dans les trous 34 et que les ergots 17 assurent l'ancrage, les barrettes 28 étant ensuite pliées sur les pattes 12. Les différents ponts 26 sont alors découpés.
On conçoit qu'une telle réalisation est parti culierement simple. On peut aisément rattraper les différences de cotes pouvant exister entre les parties métalliques et le support, les douilles pouvant sans inconvénients être décalées de queloues dixièmes par rapport à l'ensemble de pistes.
Bien entendu, l'irvention n'est pas limitée au mode de réalisation ui vient d'être décrit et représenté. On pourra y apporter de nombreuses modifications de détail sans sortir pour cela du cadre de l'invention.
CROISSANCE D'UN HERPES VIRUS ANIMAL EN CULTURE DE CELLULES.
Des lignes cellulaires fixées ou des cellules primaires peuvent être utilisées. La méthodologie pour la croissance de ces virus se trouve dans la littérature et ne nécessite pas de nouveau développement. Le HVE se développe dans des cellules Vero, le HVC se développe dans des cellules de reirsde chien Madin Darby et le HVF se développe dans des cellules de reins de chat Crandell.
PURIFICATION D'ADN D'HERPES VIRUS. Le mode opératoire décrit dans le présent mémoire pour la purification d'ADN d'herpès virus a été mis en oeuvre avec succès pour tous les herpès virus essayés, comprenant le VPR, le RIB, le HVD et le cytomégalovirus, et est un procédé général pouvant être appliqué à tous les herpès virus.
CLONAGE DE FRAGMENT DE RESTRICTION. Le clonage de fragments de restriction d'herpes virus est un mode opératoire utilisant l'ADN recombinant faisant partie de l'état actuel de la technique et est décrit dans Maniatis et collaborateurs (1) .
CARTE DES FRAGMENTS DE RESTRICTION DU GENOME. Il est utile de posséder une carte des enzymes de restriction du génome viral pour identifier et sélectionner des régions pour une délétion et une insertion. Ces cartes sont disponibles pour VPR et RIB, et partiellement pour HMD, Une carte existe pour HVE, mais non pour HVC ou HVF. La création de cette carte ne nécessite aucune nouvelle technologie et est décrite en détail par Maniatis et collaborateurs (1).
IDENTIFICATION DES FRAGMENTS DE RESTRICTION QUI CORRESPON DENT A LA REGION DE REPETITION. L'identification des régions de répétition nécessite le mode opératoire d'ANALYSE PAR LA METHODE DE SOUTHERN, tel que décrit en détail dans le paragraphe concernant les méthodes. Des clones de la région de répétition s'hybrident à des bandes multiples dans un produit de digestion par enzyme de restriction, en raison du fait qu'ils sont répétés dans le génome viral. Cette caractéristique, associée à leur emplacement dans le génome, constitue un diagnostic des régions de répétition.
PRODUCTION D'UNE DELETION DANS LE CLONE DE REGIONS DE REPETITION. L'information génétique dans la région de répétition est soumise à une duplication dans l'autre copie de la séquence de répétition dans le génome. Une copie de la région de répétition n'est donc pas essentielle pour la réplication du virus. En conséquence, la région de répétition convient pour des-délétion et insertion d'ADN étrangers. Après clonage et cartographie par des enzymes de restriction de la région de répétition, des enzymes peuvent être choisis pour soumettre à une manipulation génétique la délétion de répétition et pour insérer de l'ADN étranger. Il est évident pour l'homme de l'art que des sites d'enzymes existent dans une extension donnée d'ADN et qu'ils peuvent etre trouvés par analyse.La méthodologie comprend une DIGESTION D'ADN PAR RESTRICTION, ELECTROPHORESE D'ADN -SUR GEL D'AGAROSE, LIGATION et un clonage dans des cellules bactériennes, de la matière decrite en détail dans le paragraphe concernant les méthodes et par Maniatis et collaborateurs (1).
PRODUCTION D'UNE INSERTION D'UN GENE MARQUEUR DANS LA DELETION DANS UN CLONE DE REGION DE-REPETITION.
La méthodologie de cette insertion est celle décrite par Maniatis et collaborateurs (1) pour le clonage des gènes dans des bactéries. Ce qui n'est pas évident avant la présente divulgation est quels gènes marqueurs doivent être utilises qui sont actifs dans un herpès virus ni quels séquences-signaux doivent être utilisées pour l'expression des gènes étrangers dans ces herpès virus. Le gène de la bêta-galactosidase de E. Coli et le gène de la résistance à la néomycine sous le contrôle du promoteur ICP4 de VHS-1, le promoteur gpX de VPR ou le promoteur TK de VSH-1 ont été utilisés. Le promoteur gpX, en particulier, convient dans VPR, RIB et HVD. Les autres promoteurs ont également convenu dans un essai plus limité.
TRANSFECTION AVEC UN CLONE DE GENE MARQUEUR + DE L'ADN D'HERPES VIRUS.
Le but de ce mode opératoire consiste à placer dans la même cellule l'ADN d'herpès virus intact et le clone de régions de répétition présentant la délétion et contenant le gène marqueur. Une fois ces deux ADN présents dans la même cellule, les mécanismes normaux de recombinaison homologue permettent d'être sûr qu'une recombinaison se produit entre les régions homologues dans le clone et la même région dans l'ADN d'herpès virus, les régions éliminées par délétion dans le virus étant ainsi remplacees par le gène marqueur, avec une fréquence d'environ 1 %. La technique comprend le PROCEDE DE TRANSFECTION POUR LA PRODUCTION D'HERPES VIRUS RECOMBINANTS, tel que décrit en détail dans le paragraphe concernant les méthodes.
PURIFICATION D'ADN D'HERPES VIRUS.
L'ADN d'herpès virus peut être purifié suivant les méthodes décrites ci-dessus.
SELECTION DE PLAQUES DE RECOMBINANTS.
Tous les herpès virus concernés par la présente invention forment des plaques (foyers d'infection en culture de cellules) qui permettent leur purification. Une plaque résulte d'une infection par une seule particule virale.
Ainsi, le prélèvement d'une seule plaque permet de choisir ia descendance d'un seul événement ae recombinaison. Cette réussite technique nécessite un procédé pour identifier la plaque qui doit être prélevée. Les procédés utilisés dans le présent mémoire comprennent l'ANALYSE DE L'ADN PAR LA METHODE DE SOUTHERN pour prélever la plaque sur la base de la présence du gène inséré, la SELECTION PAR DES ANTICORPS D'HERPES VIRUS RECOMBINANT pour prélever la plaque sur la base de la présence d'une protéine produite à partir du gène, la SELECTION D'HERPES VIRUS RECOMBINANT AU MOYEN DU BLUOGAL pour prélever une plaque qui effectue l'expression du gène marqueur de la bêta-galactosidase, ou la SELECTION PAR G-418 POUR PURIFIER DES HERPES VIRUS RECOM BINANTS pour prélever la plaque par son aptitude à se former en présence de l'antibiotique G-418. Les deux premiers procédés peuvent s'appliquer à n'importe quel gène.; les deux derniers sont spécifiques respectivement du gène de la bêta-galactosidase et du gène de résistance à la néomycine. La biologie de ces systèmes d'examen et de sélection est telle qu'ils peuvent s'appliquer à n'importe quel herpès virus, comprenant HVE, HVC, HVF et n'importe quel herpès virus animal apparenté à ceux-ci.
autre avantage est un meilleur mélange des rayons directs
et des rayons réfléchis.
Bien entendu, le procédé de réalisation du globe 20' sera essentiellement identique à celui du globe , à ceci-près que le modèle qui servira à réaliser le
moule sera taillé sur ses deux faces.
Il va de soi que l'on pourra organiser les diverses zones du globe comme on le souhaitera, et l'on choisira en particulier tout nombre de zones approprié sur la surface intérieure et/ou extérieure du globe, ces zones pouvant avoir toute largeur souhaitée, définie par le nombre de tours d'un sillon en spirale de largeur donnée
ou encore par le nombre de sillons circulaires concentri-
ques, et tout profil prismatique adapté à la position du filament de la lampe et à la configuration du miroir à
anneaux récupérant du flux arrière.
En outre, du fait que certains règlements, notamment en Europe, interdisant de prévoir des prismes saillants ou analogues à l'extérieur du globe ou de la glace d'un organe optique, un globe conforme à l'invention et muni d'un ou de plusieurs sillons extérieurs devra le cas échéant être complété d'une contre-plaque extérieure
pour satisfaire à ces règlements.
Par ailleurs, les prismes à réflexion totale seront prévus de préférence dans les régions du globe qui sont les plus éloignées de la lampe, et nécessairement du
côté intérieur dudit globe.
Enfin la présente invention ne se limite pas aux formes de réalisation décrites ci-dessus et représentées sur les dessins, mais l'homme de l'art pourra y apporter
toute variante ou modification conforme à son esprit.
A cet égard, bien que l'on ait envisagé dans
toute la description un miroir arrière généralement plat,
L'ADN dans la solution d'ADN a été scindé comme suit. 13 unités de l'enzyme de restriction XbaI (fabriquée et vendue par Nippon Gene Co., Ltd., Japon) ont été ajoutées à 128/ug de l'ADN et le mélange résultant a été mélangé à 200 t d'un tampon contenant Tris-HCl 50 mM (pH 7,4), MUS04 10 mM et NaC1 100 mM et on a laissé reposer à 37 C pendant 2 heures de manière que la réaction se passe. Alors, le mélange réactionnel a été chauffé à 70 C pendant 10 minutes pour- arrêter la réaction, et ainsi obtenir l'échantillon I d'ADN.
Etape 2 (Préparation du plasmide pBR325 et son clivage) La souche W620 de Escherichia coli K12 a été inoculée dans 50 mi d'un bouillon L (contenant 10 gel de polypeptone, 5 9/t d'extrait de levure et 5 g/ de NaCl; pH 7,2) et mise en culture à 37 C jusqu'à ce que la concentration en cellules atteigne 5 x 108 cellules/mi Les cellules ont été recueillies de la culture par centrifugation à 2 C. Les cellules ont été mises en suspension dans 50 mi d'une solution aqueuse de MgC12 100 mM tout en refroidissant avec de la glace.De la suspension, les cellules ont été recueillies et mises en suspension dans 25 mi d'une solution aqueuse de CaCl2 100 mM tout en refroidissant avec de la glace. On a laissé la suspension ainsi obtenue reposer dans la glace pendant 30 minutes. De la suspension, les cellules ont été recueillies et mises en suspension dans 5 mt d'une solution aqueuse de CaC12 100 mM tout en refroidissant avec de la glace. On a laissé la solution ainsi obtenue reposer dans la glace pendant 1 heure. A 200 pt de la suspension, on a ajouté 0,1 yg de l'ADN de pBR325 (fabriqué et vendu par Bethesda Research Laboratories, EUA) et on a laissé le mélange résultant reposer dans la glace pendant 1 heure.Subséquemment, on a laissé le mélange reposer à 42 C pendant 2 minutes et ensuite on a ajouté, au mélange, 5 mi d'un bouillon L. Le mélange résultant a été incubé stationnairement à 370C pendant 90 minutes.
Alors, le mélange a été dilué avec une solution aqueuse de CaCl2 100 mM et étendu sur un milieu d'agar L (milieu obtenu en ajoutant 15 g d'agar à un bouillon L de manière que le volume total soit de 1 litre) contenant 10 de tétracycline, avec ensuite incubation pendant une nuit à 37 C pour obtenir Escherichia coli transformé par le plasmide pBR325.
La souche W620 de Escherichia coli K12 transformée par le plasmide pBR325 a été inoculée dans 100 mQ d'un bouillon L contenant 10 pg/me de tétracycline et on a mis en culture pendant une nuit à 370C.
De la culture, des cellules ont été recueillies par centrifugation et lavées avec un tampon TE. Les cellules ont été mises en suspension dans 2 mt d'une solution aqueuse contenant 15% (poids/volume) de saccharose, Tris-HCl 50 mM (pH 8,5), EDTA 50 mM et 2 mg/mlQ de lysozyme (fabriqué et vendu par Sigma Chemical (:ompany, EUA) et on a laissé reposer à température ambiante pendant 30 minutes pour avancer une réaction.A la suspension résultante, on a ajouté 2 mt d'une solution de Triton t 0,1% (poids/volume) de Triton X-100 (fabriqué par Rohm et Haas Co., EUA, et vendu par Wako Pure Chemical Industries, Ltd, Japon), Tris-HCl 50 mM et EDTA 50 mM; pH 8,5 et on a laissé reposer à 37 C pendant 30 minutes.
La solution ainsi obtenue a été soumise à centrifugation à 30.000 t/mn (64.000 g) à 5 C pendant 1 heure pour obtenir un produit surnageant. Au produit surnageant, on a ajouté un tampon TE en une quantité telle que le mélange résultant ait un volume de 18 mi . On a doucement dissous 1,2 m l d'une solution aqueuse à 10 mg/mi de bromure d'éthidium et 18,64 g de chlorure de césium, dans le mélange ci-dessus obtenu, avec ensuite centrifugation à 40.000 t/mn (100.000 g) à 15 C pendant 48 heures. Après accomplissement de la centrifugation, deux bandes ont été visualisées sous lumière ultraviolette. La bande inférieure a été retirée du tube de centrifugeuse par le côté du tube en utilisant une seringue pour obtenir une fraction du plasmide pBR325.La fraction ainsi obtenue a été soumise à une extraction quatre fois avec un volume égal d'alcool isopropylique pour obtenir un extrait. De l'extrait, le bromura d'éthidium a été enlevé et la solution résultante a été dialysée avec le tampon TE pour obtenir 1 mk d'un dialysat contenant le plasmide pBR325 et ayant une concentration en ADN de 190 A une aliquote du dialysat contenant 5 ug de 1'ADN du plasmide pBR325 obtenu, on a ajouté 20 unités de l'enzyme de restriction EcoRi. Le mélange résultant a été ajouté à 50 Xut d'une solution tampon contenant tris-HCl 50 mM (pH 7,4), MES 10 mM et NaC1 100 mM, avec ensuite incubation à 37 C pendant 2 heures pour faire avancer une réaction.
Ensuite, le mélange a été chauffé à 70 C pendant 10 minutes pour arrêter la réaction. Au mélange réactionnel, on a ajouté de l'acétate de sodium en une quantité telle que le mélange résultant contienne de l'acétate de sodium à une concentration de 300 mM. Au mélange, on a ajouté un volume double d'éthanol et on a laissé le mélange obtenu reposer à -300C pendant 3 heures. Alors, le mélange a été soumis à centrifugation à 12.000 t/mn (8.900 g) à température ambiante pendant 10 minutes pour obtenir un produit surnageant et des précipités. Les précipités ont été recueillis et séchés sous pression réduite, pour ainsi obtenir un échantillon II d'ADN.
L'échantillon II d'ADN ainsi obtenu et 3 unités d'ADN polymérase T4 (fabriquée et vendue par Takara Shuzo Co., Ltd., Japon) ont été ajoutés à 44 pi d'un mélange réactionnel aqueux contenant Tris-CH3COOH 33 mM (pH 7,9), CH3COOK 66 mM, (CH3COO)2Mg 10 mM, du dithiothréitol 0,5 mM, de l'albumine de sérum bovin à 0,1 mg/mt (BSA; fabriquée et vendue par Bethesda Research Laboratories, EUA), 2'-désoxyadénosine 5'-triphosphate 0,1 mM (fabriqué et vendu par Sigma Chemical (::ompany, EUA), 2'-désoxycytidine 5'-triphosphate 0,1 mM (fabriqué et vendu par Sigma Chemical 6ompany, EUA), 2'-désoxy-guanosine 5'-triphosphate 0,1 mM (fabriqué et vendu par Sigma Chemical Company, EUA) et thymidine 5'-triphosphate 0,1 mM (fabriqué et vendu par Sigma Chemical Company, EUA). On a laissé le mélange ainsi obtenu reposer à 300C pendant 20 minutes pour faire avancer une réaction. Au mélange, on a ajouté de l'acétate de sodium jusqu'à une concentration finale en acétate de 300 mM. Alors, on a ajouté un volume double d'éthanol, dans le mélange, et on a laissé le mélange reposer à -30 C pendant 3 heures. Subséquemment, le mélange a été soumis à centrifugation à 12.000 t/mn (8.900 g) à température ambiante pendant 10 minutes pour obtenir un produit surnageant et des précipités.Les précipités ont été recueillis et séchés sous pression réduite, pour ainsi obtenir l'échantillon iii d'ADN.