INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
B. Contrôle Chimique 1.Contrôle de l'empreinte de la plante par chromatographie sur couche mince . Support : Plaque recouverte de gel de silice.
Solution essai : 1,5 g d'atomisat dans 5 ml de dichloróméthane, filtration.
e Solution témoin : 7,5 g de plante fraîche dans 30 ml de dichlorométhane, filtration, concentration à 5 ml à froid sous pression réduite.
e Solution de migration : Toluène-Ether isopropylique (8 ; 2) Révélation : Vanilline Vanilline sulfurique.
e Résultat : Le chromatogramme obtenu avec l'essai est semblable à celui obtenu avec le témoin.
2. Dosage de l'huile essentielle Par la méthode de la pharmacopée on trouve des valeurs égales pour l'atomisat et pour la plante fraîche t 5 Z.
3. Contrôle du maintien de l'activite enzymatigue : 1 g d'atomisat est mis en suspension dans 10 ml de tampon phosphate à pH 5. On ajoute 1 ml de solution aqueuse à 0,1 % de paraphénylène diamine. On porte au bain-marie à 400C 30 mn, on arrête la réaction par 10 ml d'éthanol à 95 , on filtre et on lit l'absorbance à 483 nm contre un blanc obtenu dans les mêmes conditions mais en ajoutant en même temps le paraphénylène diamine et ltéthanol et en ne passant pas au bain-marie.
Nature des constituants lipopolysaccharide (LPS) du V. cholerae de ~caractère lisse.
On extrait du complexe lipopolysaccharideprotéines obtenu comme on l'a indiqué plus haut, le lipopolysaccharide par la technique de Westphal et on soumet celui-ci à une électrophorèse en gel de polyacrylamide en milieu dissociant selon la méthode de Laemmli. Après oxydation par le periodate, les constituants sont révélés par une coloration au nitrate d'argent. Le profil électrophorétique obtenu est caractéristique du LPS de V. cholerae de caractère lisse.
On note que les préparations vaccinales contenant du LPS ne présentant pas le profil du caractère smooth ne possèdent pas les activités biologiques recherchées protéines de membrane externe du V. cholerae.
Ces protéines participent à la réponse immunitaire induite par le complexe lipopolysaccharideprotéines.
Ce rôle des proteines est mis en évidence par les faits suivants - la dénaturation des protéines par chauffage, par exemple à une températule de l'ordre de 100-C pendant 30 minutes, détruit totalement les propriétés vaccinantes, - administré par voie orale au lapin , le complexe lipopolysaccharide-protéines provoque la sécrétion intestinale d'immunoglobulines spécifiques des protéines entrant dans la composition du complexe.
La mise en evidence de ces immunoglogulines est effectuée par la technique d'"immunoblot" sur les protéines du complexe, après que celles-ci ont été séparées par électrophorèse en gel polyacrylamide mono- ou bidimensionnelle.
On observe, enfin, que le pouvoir vibriocide des sérums de lapins vaccinés par voie orale n'est inhibé qu'en partie seulement lorsque ces sérums sont additionnés de r.ps extrait de V. cholerae, alors que ce pouvoir vibriocide est totalement inhibé par la présence du complexe.
L'électrophorèse en gel de polyacrylamide en milieu dissociant des protéines du complexe vaccinant permet de mettre en évidence une série de polypeptides de poids moléculaires compris entre 28 000 et 70 000 daltons.
Propriétés biologiques.
Les propriétés biologiques du principe actif ont été mises en évidence par une série d'expérimentations effectuées sur l'animal auquel a été administré soit le principe actif lui-même, soit le vaccin correspondant, et dont les résultats sont rapportés ci-dessous.
A - Pour mettre en évidence les propriétés biologiques du principe actif, on a effectué ces essais a) Administré par voie parentérale aux souris, il i e protège contre l'infection mortelle par le V.
chol erae.
En appliquant les conditions recommandées par i 'OMS pour 1 < test de protection de la souris, on constate que le principe actif lyophilisé possede (par mg de PyQ- philisat) une activité supérieure de 2 à 10 fois celle de la référence.
/ b) Administré par voie sous-cutanee à des lapins, le principe actif induit une forte réponse en anticorps vibriocides.
On observe qu'après injection d'une quantité de principe actif équivalente au 1/20 de la dose humaine, les titres en anticorps vibriocides sont supérieurs à 50 000. Ces titres sont semblables à ceux obtenus par l'injection d'une dose humaine de vaccin composé de germes tués.
c) Administré par voie orale à des lapins, le principe actif sous forme de suspension (c'est-à-dire présenté sous forme non gastrorésistante) induit une apparition d'anticorps vibriocides dans le sérum de ces animaux.
L'invention a pour but, surtout, de fournir une machine électrique a courant continu, en particulier un moteur, du genre défini précédemment, qui réponde mieux que jusqu'a présent aux diverses exigences de la pratique et qui, notamment, n'exige qu'un nombre réduit de moyens interrupteurs, au niveau des moyens de commande d'inversion du sens de rotation.
Selon l'invention, une machine électrique à courant continu, destinée à être associée à des moyens de commande d'inversion du sens de rotation, de maniere à pouvoir fonctionner dans un sens ou dans l'autre, du genre en question, est caractérisée par le fait qu'elle comporte au moins un balai supplémentaire propre à coopérer avec le collecteur, ce balai étant destiné à etre relié å l'un des pâles d'une source d'alimentation électrique continue, tandis que l'un au moins des premiers balais est destiné a être relié à l'autre pôle decca source, selon le sens de rotation souhaité, un autre au moins des deux premiers balais restant isole de cet autre pâle, de telle sorte qu'un seul moyen interrupteur est associé à chacun des deux premiers balais.
Généralement, les premiers balais sont au nombre de deux et diamétralement opposes.
Avantageusement deux balais supplémentaires sont prévus et reliés électriquement entre eux par un conducteur.
La machine de l'invention peut fonctionner avec un seul balai supplémentaire, mais son rendement devient alors médiocre ; dans ce qui suit on considérera essentiellement le cas GÙ deux balais supplémentaires sont prévus.
Les balais supplémentaires ou seconds balais, sont de préférence situes sur une ligne isopotentielle. Avantageusement, les seconds balais sont diamétralement opposés.
Les deux balais supplémentaires, reliés l'un a l'autre, peuvent etre branchés sur la borne positive de la source d'alimentation alors que les moyens interrupteurs pour la commande du sens de rotation sont prévus entre les deux premiers balais et la borne négative, ou la masse, de la source d'alimentation.
Selon une autre possibilité, les deux balais supplémentaires reliés l'un à l'autre sont branches a la masse alors que les moyens interrupteurs pour la commande du sens de rotation sont prévus entre la borne positive de la source d'alimentation et les deux premiers balais.
La ligne des balais supplémentaires peut être décalée par rapport à un diamètre du moteur de maniere à rendre dissymétriques le couple et les vitesses de rotation fournis par le moteur suivant son sens de commande.
Un moteur à courant continu, conforme à l'invention, est particulièrement approprie pour la commande d'un embrayage pilote de véhicule automobile.
Avantageusement, les balais supplémentaires ont une dimension tangentielle, appelée ci-après largeur, suffisamment faible pour éviter un court-circuit prolongé entre deux lames de collecteur, les balais ayant une dimension axiale, appelée ci-apres hauteur, suffisante pour que la surface de contact avec le collecteur soit satisfaisante.
Dans le cas où les balais supplémentaires reliés l'un à l'autre sont branchés à la masse, alors que les deux premiers balais sont reliés à la borne positive par les moyens interrupteurs, chaque moyen interrupteur est avantageusement constitué par la combinaison d'un transistor PNP suivi d'un transistor NPN branchés de manière à réduire les pertes en tension.
Dans le cas ou les balais supplémentaires reliés l'un å l'autre sont branchés à la borne positive, alors que les deux premiers balais sont reliés à la borne négative, ou à la masse, par les moyens interrupteurs, ces derniers sont avantageusement constitués par la combinaison d'un transistor NPN suivi d'un transistor PNP branches de maniere å réduire les pertes en tension.
L'invention concerne également l'ensemble d'une tel le machine électrique à courant continu, en particulier d'un moteur, avec les moyens interrupteurs de commande pour l'inversion du sens de rotation de cette machine, notamment du moteur.
L'invention consiste, mises à part les dispositions exposées ci-dessus, en un certain nombre d'autres dispositions dont il sera plus explicitement question ciaprès a propos de modes de réalisation particuliers décrits avec référence aux dessins ci-annexés, et qui ne sont nul le ment limitatifs.
La figure 1, de ces dessins, est un schéma d'un pont de commande classique de l'art antérieur, dit "pont en H", pour pouvoir faire tourner un moteur à courant continu dans les deux sens de rotation à partir d'une source de tension unique.
Après extraction par le mélange phénol-chloroformealcool isoamylique et précipitation à l'éthanol absolu, le mélange des deux ADN est dénaturé à 100 C pendant 10 mn puis réassocié à 68 C pendant 22 heures dans un tampon contenant 2M (NH4)2SO4, 50 mM phosphate de sodium (pH = 6,8-) et 5 mM EDTA.-Un aliquot (1 Vg)d'ADN double brin réassocié est mélangé avec 100 ng de plasmide pUC9 (Ampr-Lac Z ) préalablement linéarisé par l'endonucléase Bam H1 (Boehringer) et déphosphorylé par la phosphatase alcaline (CIP Boehringer).
L'insertion de 1'ADN bovin male dans le plasmide est effectuée avec de la ligase T4 (Biolabs) à 16 C pendant 16 heures.
Les plasmides recombinants sont utilisés pour transformer 2 ml de bactéries Escherichia coli-JM83 rendues hautement compétentes par traitement par un milieu contenant : 10 mM K-Mes (pH = 6,2),100 mM RbC12, 45 mM MnCl2, 3 mM Co(NH3)6C13 pendant 10 mn à 0 C. Les bactéries ainsi transformées sont étalées sur du milieu LB-Agar contenant 100 vg/ml d'Ampicilline et 2 kl/ml de X-gal (5-bromo-4-chloro 3-indolyl-E-D-galacto-pyranoside) a 2 % dans le diméthylformamide. Approximativement 200 clones (Ampr-LacZ-) ont été obtenus.
EXEMPLE 2 ANALYSE DE LA LIBRAIRIE Afin de rechercher la présence d'inserts d'ADN bovin mâle, chaque clone est repiqué individuellement et les plasmides sont isolés des bactéries par minilysat.
Chaque plasmide isolé est digéré par l'endonucléase Pvu2 (Boehringer) et analysé par électrophorèse en gel d'agarose à 1 % (30 volts - 16 h).
Cinquante clones, parmi les 200 analysés, contiennent de 1'ADN bovin (insert).
La spécificité des inserts ainsi produits a été démontrée par hybridation avec de 1'ADN génomique (lymphocytes) mâle et femelle digéré par l'endonucléase EcoRI (Boehringer) et transféré après électrophorèse sur du papier DBM tu des membranes HYBOND (AMERSHAM) selon la technique de SOUTHERN.
L'hybridation de la sonde b.c.1.2 avec de 1'ADN génomique mâle digéré par EcoRI révèle la présence d'une bande de 7,0 kilobases (kb) absente de 1'ADN génanicue femelle. Ce résultat a été confirmé par l'étude de 12 animaux males et 13 femelles (p < 104).
EXEMPLE 3 PREPARATION DE L'ADN GENOMIQUE BOVIN L'ADN bovin de mdle et de femelle est purifié a partir de 5x107 lymphocytes périphériques. Les cellules sont incubées a 42 C pendant 18 heures sous agitation lente dans 10 ml de solution de lyse [10 mM Tris-HCl pH7,5, 10 mM thylènediaminetétraacétate- Na2 (EDTA), 50 mM Nazi, 0,4 % dodécyl sulfate de sodium plus 2 mg de protéinase K (Boehringer)]. 1 mg de ribonucléase A (Boehringer) dans 1 ml de 10 mM Tris-HCl pH 7,5 ; 1 mM EDTA, est ajouté en 1 heure à 37 C, suivi d'une seconde digestion par la Protéinase K (1 mg, 1h à 42 C). Les lysats sont extraits 3 fois avec 15 ml d'un mélange composé de phénol : chloro forme : alcool isoamylique (3:1:0,01 v/v) saturé avec 0;2 M Tris-HCl pH 7,5. Les phases aqueuses sont lavées 3 fois avec une solution chloroforme - alcool isoamylique (1:0,04).
L'ADN est précipité avec 2 volumes d'éthanol absolu en présence de 150 mM NaCl et lavé avec de l'méthanol à 80 % dans l'eau.
DIGESTION PAR LES ENDONUCLEASES DE RESTRICTION Des échantillons de 15 ug d'ADN bovin sont digérés à 37 C pendant 18 heures avec l'endonucléase de restriction EcoRI (Boehringer) dans le tampon d'incubation contenant 100 mM Tris-HCl, 50 mM Nazi, 10 mM MgCl2, pH 7,5. La digestion complète est obtenue avec un total de 6-10 unités par g de 1'ADN ajouté en 3 fois. Les fragments de 1'ADN digérés sont soumis à une séparation électrophorétique en gel d'agarose de 0,7 % dans du tampon 0,04 M Tris-CH3COOH pH 8, 0,002 M EDTA. Le calibrage du gel est obtenu en incluant un échantillon de 1'ADN de phage-Lambda digéré par Hind III.
TRANSFERT Les fragments de 1'ADN contenu dans le gel sont dépurinés pendant 15 mn à température ambiante dans du 0,25 M HC1, dénaturés en 0,5 M NaOH + 1,5 M Nazi, puis neutralisés par passages successifs dans du 1,5 M tampon phosphate pH 5,5 (3x15 mn) puis 0,15 M pH 5,5 (2x15 mn). Une membrane (Hybond-N Amersham ou Pail-Biodyne-A Flobio) en 'hylon"est ensuite placée sur le gel et par capillarité les fragments de 1'ADN contenu dans le gel sont transférés sur la membrane. Après 16 heures de transfert en 20 x SSC, la membrane est lavée dans du 2 x SSC, séchée à l'air puis placée pour 2 heures dans un four à 80 C.
MARQUAGE DE LA SONDE AU 32 100 à 200 ng de sonde b.c.1.2 sous un volume de 1 à 5 Li sont ajoutés au mélange réactionnel suivant 50 M de dATP (1 p1), 50 vM de dTTP ( 1 p1), 50 pM de dCTP (1 l), 50uCi de α-32p-dGTP (5 (5 l),2 l) , 2 ulde tampon de réaction contenant 500 mM Tris-HCl pH 7,5, 500 mM HgC12, 100 mM B-mercaptoéthanol. La réaction est effectuée à 16 C pendant 1 heure 30, puis arrêtée par addition de 200 ul de la solution contenant 10 mM Tris-HCl pH 7,5, 80 mM EDTA, 0,5 % dodécyl sulfate de sodium.
La sonde radiomarquée est séparée des nucléotides par passage sur une colonne (10 cm x 1 cm) de Sephadex G100 (Pharmacia) et éluée par du tampon 10 mM Tris-HCl pH 7,5, 1 mM EDTA. Les fractions d'élution contenant le plus de radioactivité sont ensuite poolées.
PREHYBRIDATION ET HYBRIDATION Les filtres (blots) sont préhybridés à 42 C pendant 4-10 heures avec un mélange contenant 50 % v/v de formamide désionisée, 1 M NaCl, 0,2 % de solution de Denhart, 2,5 % de sulfate de dextran, 0,1 % de dodécyl sulfate de sodium et 0,5 mg/ml d'ADN de sperme de saumon soniqué.
L'hybridation est réalisée dans le meme mélange excepté le sulfate de dextran qui est à 5 9 et le Nacra à 0,5 M. La sonde radiomarquée ac 32P dénaturée à îcr pendant 10 min est ajoutée dans le mélange d'hybridation a 1x 106 cpm/ml, ce qui représente environ 10 ng de sonde par ml. L'hybridation est réalisée à 42 C pendant au moins 18 heures. Après l'hybridation, les filtres sont lavés une première fois à 65 C pendant 30 mn dans du tampon 2 x SSC (0,3 M NaCl et 0,03 M Citratedesodium)+ 0,1 % SDS puis encore 30 mn dans le meme tampon dilué 10 fois (0,2 x SSC).Les filtres sont ensuite placés dans une cassette équipée des intensificateurs "Zronex" (DUPONT), mise en contact avec un film KODAK XAR-5 pour l'autoradiographie pendant 6 à 24 heures à -70 C.
ment de la deuxième face, en arrière du bord avant de l'âme, soit également exposé au contact de la matière en feuille pendant la coupe, le revêtement (32, 132, 232) étant plus résistant à l'usure que l'âme (30, 130, 230). 2 - Lame de couteau selon la revendication 1, caractérisée en ce que le revêtement (32, 132, 232) est
plus dur que l'âme (30, 130, 230).
3 - Lame de couteau selon la revendication 2, caractérisée en ce que les deux faces (225, 236) de l'âme sont concaves et inclinées par rapport à un plan
(237) qui définit la direction naturelle de coupe de la-
dite lame.
4 - Lame de couteau selon la revendication 2,
caractérisée en ce que le revêtement porté par la deuxi-
ème face (25, 140, 225) est d'une épaisseur sensiblement
- Lame de couteau selon la revendication 4, caractérisée en ce que le revêtement est d'une épaisseur
de moins de 25,4 microns.
6 - Lame de couteau selon la revendication 5,
2592 caractérisée en ce que le revêtement est fait de nitrure
de titane.
7 - Lame de couteau selon la revendication 3, caractérisée en ce qu'au moins l'une des faces (25, 36) présente des gorges (45) qui sont sécantes par rapport à
l'arête tranchante (40).
Le commutateur 3 étant en position PV (petite vitesse) alimente le moteur d'essuie-glaces ainsi que le relais RT1, le contact R1 étant ouvert, les lampes FC ne sont pas alimentées et restent éteintes.
Le dispositif illustré en Figure IO comprend Figure IO - Marche Grande vitesse d'essuie-glaces et Pleins phares Le commutateur lumière en position PP (pleins phares) alimente le relais instantané R qui permet d'ouvrir les contacts R1 - R3 - R5 et fermer R2 et R4 , le courant passe par les contacts R2 ce qui alimente les lampes PP (Pleins phares). Le contact R4 étant fermé permet d'alimenter les Feux rouges arrière FR en passant par la Diode 7.
Le commutateur 3 en position GV (grande vitesse) alimente le moteur d'essuieglaces en grande vitesse ainsi que le relais RT2, le contact R3 étant ouvert, les lampes FC ne sont pas alimentées. Elles restent éteintes.
Le dispositif illustré en Figure 11 comprend Figure 11 - Marche Petite vitesse en position de Feux de croisement Le commutateur 3 en position PV alimente le relais RT1, celui-ci ferme un contact 5 secondes plus tard par exemple, ce qui permet au courant de passer par le contact R1 et d'alimenter les Feux de croisement FC et les Feux arrière FR èn passant par le contact R5 et le Diode 6.
La commutateur 4 en position FP et FC laisse passer le courant sur un circuit déjà alimenté.
Le dispositif illustré en Figure 12 comprend azure 12 - Marche Grande vitesse en position de Feux de croisement Le commutateur 3 en position GV alimente le relais RT2 et établit le contact 3 secondes plus tard par exemple, en passant par le contact du Relais instanta -ne' R3, alimente les Feux de croisement ainsi que les Feux rouges arrière en faisant par le contact R5 et la Diode 6.
La commutateur 4 en position FP et FC laisse passer le courant sur un circuit dêà alimenté.
CONCLUSION Ce dispositif ne gêne en rien la commande manuelle des veilleuses, codes et phares puisque ce principe est réalisé en raccordement électrique dit - .
Ce dispositif objet de l'invention peut-être monté en Usine sur tous les véhicules en construction.
I1 peut prendre la forme d'un accessoire à monter sur les véhicules finis et à raccorder sur les fils d'alimentation électrique du moteur d'essuie-glaces et tdes lampes, son faible volume autorisant une intégration aisée sous tous les tableaux de bord ou sous les capots.
CoUme nous pouvons le constater, cette invention permet d'éclairer les véhicules automatiquement dès que les essuie-glaces sont en marche.
- --Cêtte invention pourrait-être en fonctionnement que lorsque les véhicules 'roulent en dehors des villes, en utilisant un contact de mise en marche du principe sur la 3ème ou 4ème vitesse, mais nous serions en infraction au Code de la Route.
-L?Invention sera décrite plus en détail, en regard des dessins annexés - -sentant' les différentes phases de fonctionnement.
SUPPORT PUBLICITAIRE ARTICULE.
le badge est constitué de 6 pièces.
fig n' I - une face avant fig n 2 = pièce de déclenchement fig n" 3 - support plastique fig n' 4 = bracelet caoutchouc fig n" 5 - face arrière fig n' 6 = épingle de fixation fig n" i: la face avant est la pièce qui supporte tout le mecanisme et par conséquent tout l'ensemble.
Etape 6 (Délétion partielle d'un fragment d'ADN contenant un gène codant pour CS et ayant une longueur moléculaire d'environ 3,2 kb) On a fait réagir 5 pg de l'ADN du plasmide pAG4002 préparé à l'étape 5 de l'Exemple 4 avec 20 unités d'une enzyme de restriction SalI dans 50 Sui d'un tampon contenant Tris-HCl 50 mM (pH 7,4), MgSO4 10 mM et NaC1 100 mM à une température de 37 C pendant 2 heures. Au mélange réactionnel , on a ajouté un volume égal d'un mélange à 1:1 (volume/volume) de phénol et de chloroforme, et on a soumis à agitation avec ensuite récupération d'une phase aqueuse.A la phase,aqueuse on a ajouté un volume égal de chloroforme et on a soumis à agitation, avec ensuite récupération d'une phase aqueuse. A la phase aqueuse, on a ajouté de l'acétate de sodium jusqu'à une concentration finale de 300 mM puis un volume double d'éthanol et on a laissé reposer à -30 C pendant 3 heures. Ensuite, le mélange a été soumis à centrifugation à 12.000 t/mn (8.900 g) à température ambiante pendant 10 minutes pour obtenir une boulette d'ADN. L'ADN ainsi obtenu a été séché sous pression réduite.On a fait réagir la totalité de la quantité de l'ADN séché avec 3 unités d'ADN ligase T4 phagique dans 50 sut d'un tampon contenant Tris-HCl 50 mM (pH 7,4), MgCl2 10 mM, dithiothréitol 10 mM, spermidine lmM, ATP 1 mM et 0,1 mgSmt de BSA (albumine de sérum bovin) à une température de 15 C pendant une nuit . La température a été élevée à 700C et maintenue à cette valeur pendant 10 minutes pour terminer la réaction.
En utilisant le mélange réactionnel de ligase obtenu ci-dessus, on a transformé des cellules de Corynebacterium melassecola 801 (FERM BP-558) sensiblement de la même manière qu'à l'étape 3 de l'Exemple 4 pour obtenir des transformants résistants à la tétracycline.
On a fait croître les transformants résistants à la tétracycline ainsi formés sous une forme biologiquement pure sur un milieu d'agar LG contenant 10 Mg/me de tétracycline.
Un plasmide a été isolé de chacun des transformants sensiblement de la même manière qu'à la sous-étape (1) de l'étape 1 de l'Exemple 4 avec ensuite analyse en utilisant les enzymes de restriction EcoRI, HindIII, PstI, BamHI, SalI et XbaI sensiblement de la même manière qu'à l'étape 6 de l'Exemple 1. On a ainsi obtenu un plasmide.
Le plasmide obtenu a été désigné par pAG4003. La carte de clivage par endonucléase de restriction du plasmide pAG4003 est montrée à la figure 12. Comme cela est apparent sur la figure 12, le plasmide pAG4003 a une structure telle qu'un fragment SalI ayant une longueur moléculaire d'environ 0,7 kb a été éliminé du plasmide pAG4002. Le transformant retenant le plasmide pAG4003 a été désigné par Corynebacterium melassecola 801 (pAG4003).
L'activité de CS de Corynebacterium melassecola 801 (pAG 4003) a été déterminée sensiblement de la même manière qu'à l'étape 4 de l'Exemple 4. Le résultat est montré au Tableau 4 donné ci-dessous ainsi que les données obtenues aux étapes 4 et 5 de l'Exemple 4, en comparaison avec les données concernant les cellules retenant le plasmide pAG50 et les cellules ne retenant pas de plasmide.
Souche Activité spécifique de CS *1) 801 *2) 0,50 801 (pAG5O) 0,52 801 (pAG4001) 2,06 801 (pAG4002) 2,07 801 (pAG4003) 2,10 Notes: *1) comme mentionné à la Note *1) du Tableau 1 *2) Corynebacterium melassecola 801 déposé au Fermentation Research Institute sous le numéro d'accession FERM BP-558.
Comme cela est apparent du Tableau 4, les cellules retenant le plasmide pAG4001, les cellules retenant le plasmide pAG4002 et les cellules retenant le plasmide pAG4003 avaient une forte activité spécifique de CS en comparaison aux cellules retenant le plasmide pAG50 et aux cellules ne retenant pas de plasmide.
Etape 7 (Isolement d'un fragment BamHI contenant un gène codant pour CS et ayant une longueur moléculaire d'environ 3,2 kb) A 10 ug de 1'ADN du plasmide pAG4002 obtenu à l'étape 5 de l'Exemple 4, on a ajouté 30 unités d'une enzyme de restriction BamHI. On a laissé le mélange resultant réagir dans 100 lut d'un tampon contenant Tris-HCl 10 mM (pH 7,4), MUS04 10 mM, NaCl 50 mM et dithiothréitol 1 mM à une température de 37 C pendant 2 heures. Le plasmide digéré a été soumis à une électrophorèse sur gel agarose sensiblement de la même manière qu'à l'étape-7 de l'Exemple 1.Le gel agarose a été teinté de bromure d'éthidium et exposé à une irradiation de lumière ultraviolette de manière à observer visuellement un fragment d'ADN contenant un gène codant pour CS et ayant une longueur moléculaire d'environ 3,2 kb. Une portion du gel où l'on a trouvé un tel fragment d'ADN a été découpée.
Du gel découpé, on a isolé environ 1 jjg d'un fragment BamHI contenant un gène codant pour CS et ayant une longueur moléculaire d'environ 3,2 kb, sensiblement de la même manière qu'à l'étape 7 de l'Exemple 1.