INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Luminothermique : (Effet thermique et lumineux) qui brûle et incendie.
De part sa conception, cet abri assure 90 % de sécurité, du fait, qu'il est aussi antisismique, jusqu'à une force de 9 sur l'échelle de RICHTER.
STRUCTURE L'abri atomique est constitué de murs périphériques en béton armé dosé à 400 Kg. de ciment pour radier, épaisseur 30 cm., les refends intérieurs ont le même dosage et même épaisseur, la dalle pleine pour le plafond à une épaisseur de 40 cm. Son ratio d'acier est de 95 Kg./M3 de béton.
De ce fait, il résiste à des pressions de 35 tonnes au M2.
Le tout est enterré sous 1,50 m de terre.
En général, afin d'augmenter l'activité d'une enzyme voulue dans les cellules d'un micro-organisme, on a proposé le clonage du gène codant pour l'enzyme voulue et la transformation des cellules de micro-organisme par le gène cloné. Pour le gène codant pour PEPC, on a cloné un gène codant pour PEPC dérivé de Brevibacterium lactofermentum lItoh et autres, abrégés des conférences données à la rencontre annuelle de Agricultural Chemical Society of Japan, page 431 (1984)3 . Par ailleurs, on a proposé que le gène cloné codant pour PEPC dérivé de la bactérie Brevibacterium lactofermentum soit transformé dans les cellules de la bactérie Brevibacterium lactofermentum pour augmenter l'activité de PEPC de la bactérie (description de la demande de brevet au Japon No. 60-87788).Afin d'obtenir une bactérie appartenant au genre Corynebacterium capable de produire des acides aminés, des acides nucléiques, etc..., à un haut rendement, on a tenté de transformer le gène de PEPC cloné ci-dessus mentionné dérivé de Brevibacterium lactofermentum dans les cellules d'une bactérie produisant l'acide glutamique appartenant au genre Corynebacterium, laquelle bactérie est industriellement utilisée pour la production des acides aminés, des acides nucléiques, etc.... Cependant, des résultats satisfaisants n'ont pas été obtenus par rapport à la production des acides aminés. En effet-, l'on a pas obtenu une bactérie produisant l'acide glutamique appartenant au genre Corynebacterium capable de produire des acides aminés, des acides nucléiques, etc... à un haut rendement.
Afin de surmonter le problème ci-dessus mentionné, les présents inventeurs ont effectué des études extensives et intensives. Par suite, ils ont réussi à isoler un fragment d'ADN, dérivé d'une bactérie produisant l'acide glutamique, appartenant au genre Corynebacterium, contenant un gène codant pour la phosphoénolpyruvate carboxylase et clonant le fragment d'ADN. Ils ont également trouvé que lorsqu'un tel fragment d'ADN est inséré dans un vecteur pour obtenir un ADN recombinant et qu'une cellule d'un micro-organisme appartenant au genre Corynebacterium est transformée par le recombinant obtenu, l'activité de PEPC dans la cellule du micro-organisme transformé peut être accrue. Ainsi, a été accomplie la présente invention.
Par conséquent, la présente invention a pour objet de produire un fragment d'ADN contenant un gène codant pour la phosphoénolpyruvate carboxylase, utile pour la production d'acides aminés, d'acides nucléiques, etc..., à un haut rendement par technique d'ADN recombinant.
La présente invention a pour autre objet un ADN recombinant contenant le fragment d'ADN ci-dessus mentionné.
La présente invention a pour autre objet la production d'un micro-organisme contenant l'ADN recombinant ci-dessus mentionné.
L'invention sera mieux comprise et d'autres buts, caractéristiques détails et avantage-s de celle-ci apparattront plus clairement au cours de la description explicative qui va suivre faite en référence aux dessins schématiques annexés donnés uniquement à titre d'exemple illustrant plusieurs modes de réalisation et dans lesquels - la figure 1 illustre carte de scission par endonucléase de restriction d'un plasmide pAG203 de la présente invention - la figure 2 illustre la carte de scission par endonucléase de restriction d'un plasmide pAG211 de la présente invention - la figure 3 illustre la carte de scission par endonucléase de restriction d'un plasmide pAG103 utilisé dans la présente invention - la figure 4 illustre la carte de scission par endonucléase de restriction d'un plasmide pAG204 de la présente invention - la figure 5 illustre la carte de scission par endonucléase de restriction d'un plasmide pAG221 de la présente invention - la figure 6 illustre la carte de scission par endonucléase de restriction d'un plasmide pAG1 utilisé dans la présente invention - la figure 7 illustre la carte de scission par endonucléase de restriction d'un plasmide pAG3 utilisé dans la présente invention - la figure 8 illustre la carte de scission par endonucléase de restriction d'un plasmide pAG14 utilisé dans la présente invention - la figure 9 illustre la carte de scission par endonucléase de restriction d'un plasmide pAG50 utilisé dans la présente invention - la figure 10 illustre la carte de scission par endonucléase de restriction d'un plasmide pAG2001 de la présente invention ; et - la figure Il illustre la carte de scission par eridonucléase de restriction d'un plasmide pAG2002 de la présente invention .
Sur les figures 1 à 11, les positions sur la carte des divers sites de restriction sont données en coordonnées de kilobases (que l'on appellera ci-après "kb") relativement au site de restriction de PstI à 0,0/11,5 kb sur la figure 1, au site de restriction de SalI à 0,0/9,3 kb sur la figure 2, au site de restriction de EcoRI à 0,0/11,4 kb sur la figure 3, au site de restriction de XbaIII à 00/22,9 kb sur la figure 4, au site de restriction de XbaI à 0,0/17,5 kb sur la figure 5 > site de restriction de XbaI à 0,0120,4 kb sur la figure 6, au site de restriction de Hind III à 0,0/4,5 kb sur la figure 7, au site de restriction de XbaI à 0,0/10,6 kb sur la figure 8, au site de restriction de BarsHI à 0,0/7 > 6 kb sur la figure 9, au site de restriction de SalI à 0,0/10,9 kb sur la figure 10- et au site de restriction de xbai à 0,0/19,1 kb sur la figure Il Sur la figure 1, ADN-A est un fragment d'ADN de la présente invention ayant une longueur moléculaire d'environ 5,5 kb et pBR 325-(A) est un fragment d'ADN obtenu par scission par PstI du plasmide pBR325. Sur la figure 2, ADN-(B) est un fragment d'ADN de la présente invention ayant une longueur moléculaire d'environ 3,3 kb et pBR325-(B) est un fragment d'ADN obtenu par scission par SalI du plasmide pBR325.Sur la figure 3, ADN-(C) est un fragment d'ADN contenant un gène codant pour la glutamate déshydrogénase et ayant une longueur moléculaire d'environ 5,4 kb et pBR325-(C) est un fragment d'ADN obtenu par scission par EcoRI du plasmide pBR325. sur la figure 4, ADN-(D) est un fragment d'ADN de la présente invention ayant une longueur moléculaire d'environ 11,5 kb et pAG103-(A) est un fragment d'ADN obtenu par scission par XbaI du plasmide pAG103. Sur la figure 5, pBR325-(D) est un fragment d'ADN obtenu par scission par XbaI du plasmide dérivé du plasmide pBR325.
Sur la figure 9, ADN-(E) est un fragment d'ADN obtenu par scission par BamHI et scission par BglII du plasmide pAG14. Sur la figure 10, pAG50-(A) est un fragment d'ADN obtenu par scission par SalI du plasmide pAG50 et ADN-(B) est identique à celui de la figure 2. Sur la figure 11, ADN-(D) est identique à celui de la figure 4 et pAG50-(B) est un fragment d'ADN obtenu par scission par Xbai du plasmide pAG50.
Essentiellement, selon la présente invention, on prévoit un fragment d'ADN, dérivé d'une bactérie produisant l'acide glutamique appartenant au genre Corynebacterium, contenant un gène codant pour la phosphoénolpyruvate carboxylase.
Par ailleurs, selon la présente invention, on prévoit un ADN recombinant comprenant un premier fragment d'ADN, dérivé d'une bactérie produisant l'acide glutamique appartenant au genre Corynebacterium, contenant un gène codant pour la phosphoénolpyruvate carboxylase et un second fragment d'ADN contenant un gène pour la réplication dans une cellule d'une bactérie, ledit premier fragment d'ADN étant directement ou indirectement lié audit second fragment d'ADN.
Par ailleurs, selon la présente invention, on prévoit un micro-organisme qui comprend une bactérie et l'ADN recombinant ci-dessus mentionné, ledit ADN recombinant étant contenu dans ladite bactérie.
La bactérie produisant l'acide glutamique appartenant au genre Corynebacterium est une bactérie non mobile et aérobie, à Gram positif, qui ne forme pas de spore et nécessite de la biotine pour sa croissance, et qui produit l'acide L-glutamique à un haut rendement dans un milieu contenant de la biotine en une quantité limitée ou dans un milieu additionné d'un surfactant contenant de la biotine en une forte quantité. Le fragment d'ADN de la présente invention est dérivé de la bactérie ci-dessus mentionnée produisant l'acide glutamique qui appartient au genre Corynebacterium.
Le fragment d'ADN de la présente invention contient un gène codant pour la phosphoénolpyruvate carboxylase. Lorsque le gène est exprimé dans une cellule d'un micro-organisme, la phosphoénolpyruvate carboxylase (PEPC) est produite dans la cellule. La phosphoénolpyruvate carboxylase est une enzyme et catalyse la conversion entre l'acide phosphoénolpyruvique et l'acide oxaloacétique.
Le fragment d'ADN contenant un gène codant pour PEPC peut être isolé de la bactérie corynéforme produisant l'acide glutamique en utilisant un système hôte-vecteur habituel. Pour l'hôte, on peut employer, par exemple, Escherichia coli (souvent appelé ci-après "E.
Coli"). Pour E. coli, on peut employer la souche K12 de E. coli et ses variantes. Comme vecteur utilisé dans un système hôte-vecteur, où l'on utilise E. coli ou sa variante comme hôte, on peut mentionner les plasmides habituellement employés pour transformer E. coli et ses variantes. On peut également employer un système hôte-vecteur où l'on utilise une bactérie corynéforme produisant l'acide glutamique comme hôte et un plasmide habituel compatible avec la bactérie corynéforme produisant l'acide glutamique est utilisé comme vecteur.
Comme bactérie corynéforme produisant l'acide glutamique, on peut mentionner les bactéries appartenant à Corynebacterium, Brevibacterium ou Microbacterium.
L'ensemble des registres 520a, 520b et 520c est ainsi équivalent à un système de numérotation de base 3 à P = 9 chiffres offrant 3P = 39 = 19683 combinaisons possibles de mot d'identification. Par une permutation de l'emplacement du ruban conducteur 120d avec les emplacements analogues des plots 121duo à 121du et par des permutations des zones 12g et 12d, le système de P numérotation peut offrir 4 x 3 = 78732 combinaisons possibles ou types de carte, sans accroissement du cot du lecteur et modifications autres que celles résultant d'une permutation des emplacements des doubles palpeurs 21g, 26g et 21d, 26d.
Une porte ET 529, jouant un rôle analogue à la porte 329, a trois entrées reliées respectivement aux sorties des portes ET 526a, 526b et 526c. Un état l'l" à une sortie de la porte 529 confirme la mémorisation du mot d'identification dans la carte correspondant à l'organisme et au service ou produit distribué.
L'ensemble de tous les contrôles dans les zones 12g et 12d est regroupé par une porte ET 350 incluse dans un circuit de commande d'ouverture de porte 35, ayant deux entrées reliées aux sorties des portes 329 et 529. Dans le circuit 35 montré à la Fig. 21, un transistor PNP 351 monté en base commune a un émetteur relié à la sortie 353 de la porte 350 et un collecteur relié à la bobine de l'électro-aimant 223 afin d'attirer les armatures 2230 et 2235 (Fig. 5) et ainsi soulever le rouleau de porte 220 pour permettre la translation de la carte 1 vers le bloc de palpeurs 23 lorsque la sortie de la porte 350 passe à l'état "1".
CIRCUIT DE BALAYAGE DE COLONNES ET DE LIGNES 6 Les cellules de mémoire destructibles dans la zone 123 de la carte 1 sont explorées grâce à un circuit de balayage de colonnes et lignes 6 montré à la Fig.22, qui est activé dès que la zone 121 de la carte est correctement positionnée sous le bloc de palpeurs 23 et les palpeurs de positionnement 26g et 26d. Le circuit 6 est destiné à adresser successivement les cellules 120,0 à 127,15 ligne par ligne, en commençant par la première ligne et par la première cellule dans chacune des lignes, et à détecter une première cellule ayant une dio.de en état de fonctionnement et donc non détruite.Cette détection est traduite par le lecteur 2 en une information transmise vers d'autres organes de l'appareil distributeur en vue de déclencher la distribution de service ou produit correspondant au coût d'une taxe de base matérialisée par une diode non détruite Le déclenchement est analogue à celui réalisé classiquement par l'introduction d'une pièce de monnaie dans des appareils distributeurs connus à prépaiemnt par monnaie. Par exemple, la taxe de base correspond à une durée entre deux impulsions de taxe pour un appareil téléphonique public à prépaiement par monnaie et/ou par carte.
L'exploration des 27 = 128 cellules dans la zone 123 est effectuée en 128 millisecondes au plus.
Le circuit 6 comprend un compteur binaire d'adresse 60 à 7 étages ayant des sorties 6010 à 6013 de premiers étages fournissant un premier mot d'adresse j à quatre bits représentant une adresse de colonne 0 à 15 en code binaire, et ayant des sorties 6014 à 6016 fournissant un second mot d'adresse i à trois bits représentant une adresse de ligne 0 à 7 en code binaire. Une entrée d'horloge 60H est reliée à la sortie 41 de la base de temps 4 (Fig.l9) pour rythmer le comptage à la fréquence d'horloge H = 1000 Hz correspondant à une lecture de chaque cellule en 1 milliseconde.
Le compteur 60 offre également une entrée de blocage 60B pour arrêter le comptage lorsqu'une première cellule non détruite de la matrice 23 est détectée au cours du balayage, et une entrée de remise à zéro 60RZ pour remettre à zéro tous les étages du compteur suite au positionnement correct de la zone 121 sous le bloc de palpeurs 23 (Figs.6 et 7) et à l'alimentation du circuit 6 et donc du compteur 60.
Le circuit de balayage 6 comprend également 16 portes ET à quatre entrées 61Co à 61C15 destinées- à adresser les colonnes de la zone de mémoire 123 et 8 portes ET à trois entres 61lao à 61L7 destinées à adresser les lignes de la zone 123. Ainsi, une porte 61C. correspondant au mot binaire d'adresse de colonne j a J des entrées reliées directement à des sorties 6010 à 6013 du compteur 60 pour les bits à l'état "1" du mot d'adresse j, et des entrées reliées à travers des inverseurs 630 à 633 à des sorties 6010 à 6013 du compteur 60 pour les bits à l'état "0" du mot d'adresse j. Lorsque le compte du compteur 60 est égal à j, une sortie 62C. de la porte 61C. est à l'état "1" et les autres J J portes de colonnes ont leur sortie à l'état "0".Par exemple, la porte 61C5 correspondant au mot d'adresse 5 = "0101" a des première et troisième entrées reliées directement aux sorties 6010 et 6012 correspondant aux bits "1" de poids 0 et 2 et a des seconde et quatrième entrées reliées à travers les inverseurs 631 et 633 aux sorties 6011 et 6013 correspondant aux bits "0" de poids 1 et 3. De même, une porte 61L. correspondant au mot binaire d'adresse de ligne i a des entrées reliées directement à des sorties 6014 à 6016 du compteur 60 pour les bits à l'état "1" du mot d'adresse i, et des entrées reliées à travers des inverseurs 634 à 636 à des sorties 6014 à 6016 du compteur 60 pour les bits à l'état "0" du mot d'adresse i. Lorsque le compte du compteur 60 varie de 16i à 16i + 15, une sortie 62L. de la porte 61L. est à l'état "1", et les autres portes de ligne ont leur sortie à l'état "0".Ainsi, lorsque le compteur progresse de O à 127, les cellules 120, à 120,15 de la ligne de rang 0 sont successivement adressées, puis les cellules de la second ligne de rang 1 et ainsi de suite jusqu'aux cellules 127,0 à 127 15 de la dernière ligne.
Comme montré à la Fig.22, les sorties 6010 à 6016 du compteur sont reliées également à un afficheur à trois caractères décimaux, par exemple à cristaux liquides, 64 à travers un codeur binaire-décimal 65 afin d'afficher le numéro (i + 1)(j + 1) de première cellule trouvée créditée ayant une diode en fonctionnement. Comme on le verra dans la suite, le balayage est arrêté automatiquement par la première maille créditée rencontrée.
L'arrêt du balayage sur une cellule de rang (i + l)(j + 1) indique ainsi d'une manière non équivoque que (i + l)(j + 1)-1 cellules sont débitées et détruites et que (I + 1)(J + 1)-(i + 1)(j + 1) cellules disposent d'un crédit.
L'afficheur 64 est relié au codeur 65 à travers un circuit de commutation 66 sélectionnant automatiquement un dispositif d'encaissement à pièce de monnaie et le lecteur de carte lorsque le service ou le produit distribué par l'appareil peut être payé par pièce de monnaie ou par carte. L'affichage ne peut s'effectuer qu'après l'arrêt du balayage sur la première cellule trouvée valide signalée par une sortie 77CD d'un circuit de test et d'oblitération décrit ci-après. De cette manière, l'affichage est réalisé de manière stable.
CIRCUIT DE TEST ET D'OBLITERATION 7 En se référant maintenant aux Figs.23A et 23B, un circuit de test et d'oblitération 7 inclus dans le lecteur de carte 2 est destiné d'une part, à tester les cellules 120,0 à 127,15 dans la zone de mémoire 123 de la carte par un balayage de cette zone à l'aide du circuit de balayage 6 en vue de détecter-une première cellule non détruite en état de fonctionnement, d'autre part, à oblitérer électriquement la carte en modifiant successivement par destruction les diodes des cellules en des isolements au fur et à mesure de la distribution du service ou produit correspondant à des taxes de base débitées.Une diode détruite 12i,j est équivalent à un isolement entre bornes de la diode matérialisées par les fils de liaison 126i,j et 127i,j de la cellule (Fig. 3). Le circuit 7 détecte également des anomalies dans les zones 123 et 12c de la carte 1 correspondant à un court-circuit entre les bornes 12Li-126i j et 12C -127 d'une cellule 12i j.
i,j j i,j Test d'une cellule Le circuit de test et d'oblitération 7 comprend, comme moyens pour tester les cellules de la zone 123, I = 8 circuits de test 7L0 à 7L7 reliées respectivement aux lignes de la matrice de cellules, et J = 16 portes de test ET à deux entrées 7Co à 7C15 reliées respectivement aux colonnes de la matrice de cellules.
Chaque circuit de test 7Lo à 7L7 comprend une porte ET 710 à 717 ayant deux entrées reliées à la sortie 401 de la base de temps 4 et à la sortie respective 62L0 à 62L7 du circuit de balayage 6, une diode 720 à 727 et une résistance 730 à 737 et une diode 740 à 747 reliées en série à la sortie de la porte 710 à 717, une porte ET 750 à 757 ayant deux entrées reliées à la cathode de la diode 740 à 747 et à la sortie respective 62L0 à 62L7 du circuit de balayage 6, et un circuit à résistance et condensateur parallèles RC 760 à 767. Les cathodes des diodes 720 à 727 sont également reliées aux têtes, formant broches, des vis 253 des simples palpeurs 25L0 à 25L7 (Figs.14, 15) à travers le connecteur 231 et la nappe de fils 232 (Fig. 16) respectivement. Du côté des colonnes de la matrice, les portes 7Co à 7C15 sont équivalentes aux portes 710 à 717 du côté des lignes, et ont chacune deux entrées reliées à la sortie 400 de la base de temps 4 et à la sortie respective 62Co à 62C15 du circuit de balayage 6. Des sorties des portes 7Co à 7C15 sont reliées aux têtes, formant broches, des vis 253 des simples palpeurs 25Co à 25C15- à travers le connecteur 231 et la nappe de fils 232 respectivement.Lorsque la carte 1 est convenablement positionnée sous le bloc de palpeurs 23, comme montré schématiquement à la Fig.23A, les collerettes de contact 2524 des simples palpeurs 25L0 à 25L7 et 25Co à 25C15 sont en contact électriques et mécaniques avec les plots 12L0 à 12L7 et 12Co à 12C15 de la carte 1 respectivement.
Le principe de test de chaque cellule 12 est analogue à celui déjà décrit pour des cellules contenant un digit ternaire a ou b dans les zones 12g et 12d, en référence aux Figs.l9 et 21. La cellule 12. j est testée dès que les sorties 62Li et 62L. du i,J i J circuit de balayage 6 sont à l'état "1", ce qui ouvre les portes 71i et 7Cj. Les impulsions du signal Fg délivrées par la sortie 400 de la base de temps 4 sont appliquées aux anodes des diodes 120 j à 127 j de la colonne j, mais parviennent au seul réseau RC 76. à travers la diode 12i,j du fait que seule, la i i,J porte 71. transmet les impulsions du signal opposé F1 = Fo délivré par la sortie 401 de la base de temps 4.
La constante de temps des circuits RC 760 à 767 est inférieure à la période de balayage de lms des cellules de mémoire et est égal par exemple à 4 périodes des signaux Fg et Fî soit 4 x 0,125 = 0,5ms. Par ailleurs, le seuil de tension de déclenchement pour l'ouverture de chaque porte ET 750 à 757 correspond à une charge du condensateur du circuit 760 à 767 à l'expiration d'une durée comprise entre 0,25ms et 0,5ms.
A cette fin, elle propose un dispositif permettant le transfert des articles d'un convoyeur horizontal à la chaine d'un convoyeur suspendu équipé de supports offrant une portée inférieure à la bague de ces articles et situé à un niveau supérieur, dispositif constitué d'un carrousel synchronisé avec la chaine de ce second convoyeur et muni d'un ensemble de vérins pneumatiques d'axe vertical possédant une course supérieure à la différence entre niveaux homologues des deux convoyeurs, vérins porteurs de montages alimentés par le premier convoyeur, qui, tour à tour, sous l'effet d'une came de commande, viennent se placer sous les supports puis s'effacent une fois ces derniers en prise.
De préférence, le dispositif s'inscrit dans une boucle circulaire du convoyeur suspendu, formée autour d'une roue dentée, en prise sur laquelle les maillons successifs de sa chaine reposent librement, leurs douilles de liaison en face des vérins, et l'effort appliqué par un vérin sous l'effet de la pression de l'air comprimé qui l'alimente est inférieur au poids de chaque élément de la chaine.
De façon avantageuse, les organes de commande des pinces sont eux aussi constitués d'un ensemble de vérins pneumatiques, solidaire du premier sur le carrousel et que commande une seconde came ; les deux ensembles sont montés sur un même arbre vertical solidaire de la roue.
Le carrousel de transfert est ainsi apte à soulever les articles du convoyeur inférieur au convoyeur supérieur pour les présenter en appui sous un effort donné pendant que la commande des pinces provoque le fonctionnement de ces dernières. Par une légère modification de ses cames, il devient au demeurant capable d'effectuer le déchargement du convoyeur supérieur.
Un exemple avantageux de construction d'un dispositif conforme à l'invention sera décrit ci-dessous de façon détaillée, en référence aux dessins, qui montrent - figure 1 : une vue en plan schématique du-dispositif, - figure 2 : une coupe en élévation transversale du convoyeur suspendu passant à l'intérieur de la cabine de pulvérisation.
- figure 3 : une coupe en élévation selon la ligne III.III de la figure 1, Au cours de leur traitement, les bouteilles sont transportées par un convoyeur suspendu 1, dont la chaine circule sur des rails 2. Ce convoyeur est alimenté à partir de bouteilles A posées en file d'attente sur un convoyeur horizontal à palettes 3.
La machine de chargement est placée entre le convoyeur horizontal 3 et le convoyeur suspendu 1, sur un bâti 4 solidaire de leurs ossatures ; elle comporte essentiellement un carrousel de transfert vertical 5. Ce dernier est alimenté à son niveau inférieur par une roue en étoile 6 qui vient prélever les bouteilles dans la file d'attente du convoyeur 3 pour les déposer une à une à ses postes successifs 7. Il élève les bouteilles à son niveau supérieur, où il s'insère entre deux tourteaux de renvoi 8a, 8b dans une boucle du convoyeur suspendu, auquel il les présente et qui vient les y saisir.
Le bâti supporte également un des moteurs 9 d'entrainement de la chaine du convoyeur 1, avec son barbotin 9a.