INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
On peut de la même façon et pour les mêmes raisons envisager une huile de moteur "écologique", où la proportion de la présente association serait par exemple de 20% en poids pour 80% en poids d'huile minérale, les deux étant parfaitement miscibles. La proportion de l'association pourrait atteindre 25% en poids. L'incorporation peut avoir lieu dans le bidon d'huile au remplissage de celui-ci, ou directement dans le moteur.
Des modifications du domaine des équivalents techniques peuvent être apportées à l'association et à ses applications décrites ci-dessus, sans que l'on s'écarte pour autant du domaine de l'invention.
Par exemple, le fragment d'ADN ci-dessus mentionné ayant une longueur moléculaire d'environ 3,4 kb peut être modifié en changeant le bout collant formé par clivage par EcoRI en un bout collant formé par SalI, en utilisant un linker de SalI. Le fragment d'ADN ainsi obtenu a les caractéristiques suivantes (1) Le fragment d'ADN a une longueur moléculaire d'environ 3,4 kb.
(2) Le fragment d'ADN a ses deux bouts collants formés par clivage par SalI.
(3) Le fragment d'ADN a les sites de clivage par endonucléase de restriction qui suivent un premier site HindIII, un premier site PstI, un second site PstI, un second site HindIII, un site XbaI, un troisième site HindIII, un troisième site PstI, un premier site BamHI, un quatrième site PstI et un cinquième site PstI, ledit premier site PstI, ledit second site PstI, ledit second site HindIII, ledit site XbaI, ledit troisième site HindIII, ledit troisième site PstI, ledit premier site BamHI , ledit quatrième site PstI et ledit cinquième site PstI étant respectivement placés à environ O kb (plus particulierement moins de 0,05 kb) mais plus de O kb, environ 0,2 kb, environ 0,4 kb, environ 0,4 kb, environ 1,1 kb, environ 1,1 kb, environ 1,1 kb, environ 1,7 kb et environ 2,5 kb dudit premier site HindIII.
Les sites de clivage par endonucléase de restriction des fragments d'ADN ci-dessus peuvent être déterminés sensiblement de la même manière qu'on l'a mentionné précédemment.
Comme on l'a mentionné ci-dessus, le fragment d'ADN contenant un gène codant pour l'enzyme GS, AH ou ICDH peut être facilement modifié tout en retenant le gène codant pour l'enzyme. La modification peut être accomplie en changeant la séquence des bases d'au moins un site de restriction du fragment d'ADN de manière que la séquence changée résultante de bases ne puisse plus être digérée ou puisse être digérée par une sorte différente de l'enzyme de restriction. Le fragment d'-ADN peut également être changé au moins à son extrémité par rapport à la séquence des bases de manière que l'extrémité du fragment d'ADN puisse être adaptée à la séquence des bases d'une portion scindée d'un vecteur, laquelle portion scindée doit être liée à l'extrémité du fragment d'ADN.Par ailleurs, une partie du fragment d'ADN peut etre éliminée tout en retenant le gène codant pour l'enzyme ci-dessus mentionnée dans le fragment d'ADN pour obtenir un dérivé par délétion du fragment d'ADN. La délétion partielle du fragment d'ADN peut être effectuée par digestion du fragment d'ADN par une ou plusieurs enzymes de restriction. Le fragment d'ADN de la présente invention contient des fragments modifiés d'ADN tels que ceux ci-dessus mentionnés.
Comme on l'a précédemment décrit, la souche d'une bactérie ci-dessus mentionnée déficiente en CS, AH ou ICDH nécessite l'acide glutamique pour sa croissance et ne produit pas CS, AH ou ICDH. Cependant,lorsqu'un ADN recombinant qui comprend un fragment d'ADN contenant un gène codant pour CS, AH ou ICDH est incorporé dans la souche ci-dessus mentionnée, celle-ci est forcée à ne pas nécessiter d'acide glutamique pour sa croissance et à produire CS, AH ou ICDH.Par conséquent, la présence d'un gène codant pour CS, AH ou ICDH dans le fragment d'ADN de la présente invention peut être confirmée par le fait que lorsque le fragment d'ADN de la présente invention est inséré dans un vecteur pour former un ADN recombinant puis que l'ADN recombinant est transféré dans des cellules de la souche ci-dessus mentionnée, les cellules croissent dans un milieu ne contenant pas d'acide glutamique et y produisent CS, AH ou ICDH.
L'ADN recombinant de la présente invention comprend un premier fragment d'ADN, dérivé d'une bactérie corynéforme produisant l'acide glutamique, contenant un gène codant pour une enzyme qui catalyse une réaction pour la synthèse de 1' -cétoglutarate à partir d'oxaloacétate et d'acétyl CoA dans le cycle TCA et un second fragment d'ADN contenant un gène pour la réplication dans une cellule d'une bactérie. Le premier fragment d'ADN est directement ou indirectement lié audit second fragment d'ADN.
Pour le premier fragment d'ADN , on utilise le fragment d'ADN ci-dessus mentionné de la présente invention Pour le second fragment d'ADN, on peut mentionner tous les fragments d'ADN dérivés d'un plasmide habituellement employé en technique d'ADN recombinant. Pour ce fragment d'ADN, on peut mentionner , par exemple, des fragments d'ADN dérivés de plasmides employés dans un système hôte-vecteur connu où l'on utilise, comme hôte, E. coli, Bacillus subtilis , une bactérie corynéforme produisant l'acide glutamique et analogues. Par exemple, pour les plasmides employés dans un système hôte-vecteur où l'on utilise E. coli comme hôte, on peut mentionner le plasmide pBR325 et les plasmides qui en sont dérivés.Comme plasmides employés dans un système hôte-vecteur où l'on utilise Bacillus subtilis comme hôte, on peut mentionner le plasmide pUB110 et les plasmides qui en sont dérivés.
Comme plasmides employés dans un système hôte-vecteur où l'on utilise comme hôte une bactérie corynéforme produisant l'acide glutamique, on peut mentionner les plasmides pAG1, pAG3, pAG14 et pAG50 et les plasmides qui en sont dérivés.
Pour préparer l'ADN recombinant de la présente invention, on peut employer divers systèmes hôte-vecteur tels que les systèmes hôte-vecteur ci-dessus mentionnés où l'on utilise , comme hôte, E. coli, Bacillus subtilis, une bactérie corynéforme produisant l'acide glutamique et analogues.
Pour l'ADN recombinant de la présente invention comprenant le premier fragment d'ADN et le second fragment d'ADN, on peut mentionner, par exemple, pAG302, pAG303, pAG311, pAG3001, pAG401, pAG4001, pAG4002, pAG4003, pAGSO1, pAG5001, etc.
Chacun des ADN recombinants pAG302, pAG303 et pAG311 comprend, comme premier fragment d'ADN, le fragment d'ADN ci-dessus mentionné contenant un gène codant pour ICDH et, comme second fragment d'ADN, un plasmide pBR325 scindé par EcoRI ou un plasmide qui en est dérivé. L'ADN recombinant pAG3001 comprend, comme premier fragment d'ADN, le fragment d'ADN ci-dessus mentionné contenant un gène codant pour ICDH et, comme second fragment d'ADN, le plasmide pAG50 dérivé d'une bactérie corynéforme produisant l'acide glutamique.
L'ADN recombinant pAG4O1 comprend , comme premier fragment d'ADN, le fragment d'ADN ci-dessus mentionné contenant un gène codant pour CS et,comme second fragment d'ADN, un plasmide dérivé d'un plasmide pBR325 scindé par EcoRi. Les ADN recombinantspAG4001, pAG4002 et pAG4003 comprennent, comme premier fragment d'ADN, le fragment d'ADN ci-dessus mentionné contenant un gène codant pour (:S et, comme se.cond fragment d'ADN, le plasmide pAG50 ou un plasmide qui en est dérivé. Le plasmide pAG50 peut être préparé par la méthode expliquée ultérieurement.
L'ADN recombinant pAGSO1 comprend, comme premier fragment d'ADN, le fragment d'ADN ci-dessus mentionné contenant un gène codant pour AHet,comme second fragment d'ADN, un plasmide dérivé du plasmide pUB110 dérivé de Bacillus subtilis. L'ADN recombinant pAG5001 comprend, comme premier fragment d'ADN , le fragment d'ADN ci-dessus mentionné contenant un gène codant pour AH et, comme second fragment d'ADN, le plasmide pAG5O.
L'ADN recombinant ci-dessus mentionné de la présente invention peut être modifié tout en retenant le gène codant pour CS, AH ou ICDH et le gène pour la réplication. La modification peut être accomplie en changeant la séquence des bases d'au moins un site de restriction de l'ADN recombinant de manière que la séquence résultante changée des bases ne puisse plus être digérée ou puisse être digérée par une sorte différente d'enzyme de restriction.
Le micro-organisme de la présente invention comprend une bactérie et un ADN recombinant contenant un gène codant pour CS, AH ou ICDH qui y est contenu.
A titre d'exemple, on peut utiliser - la bipyridine (Bipy) de formule - l'orthophénanthroline (OPhe) de formule - la tripyridine-2,4,6-triazine-1,3,5 (TPTZ) de formule
Les extractants échangeurs cationiques utilisés dans l'invention sont également choisis en fonction du métal à extraire et des espèces cationiques présentes en solution aqueuse telles que les formes protonées du ligand, ions H etc., de façon que la compétition vis-å-vis de l'extraction entre les différentes espèces cationiques du métal de transition soit favorable au complexe. De même, on choisit un extractant réagissant rapidement avec le complexe formé.
Généralement, la phase organique comprend un diluant inerte qui peut etre constitué par un composé hydrocarboné comme le tétrachlorure de carbone, le trichlorométhane et le tertiobutylbenzene. Dans ce cas, on choisit, de préférence un extractant capable de former des micelles inverses dans ce diluant. Ceci permet d'améliorer encore la cinétique d'extraction du complexe dans la phase organique. Généralement, on utilise comme extractant un extractant acide comportant par exemple un groupement carboxylique, un groupement sulfonique ou un groupement phosphorique comme les acides organosulfoniques et organophosphoriques.De préférence, on utilise un acide dialkylsulfonaphtalène ou un acide phosphorique de formule dans laquelle R est un radical alkyle ou un radical phényle non substitué ou substitué par un ou plusieurs radicaux alkyle.
A titre d'exemple de tels extractants acides, on peut citer l'acide dinonylsulfonaphtaléne (HDNNS) de formule et les acides octylphénylphosphorique, monodécylphosphorique et monooctylphosphorique de formule :
Pour mettre en oeuvre le procédé de l'invention, on peut utiliser des appareillages classiques tels que les équipements utilisés pour l'extraction liquide-liquide, par exemple des batteries de mélangeurs-décanteurs, des colonnes (colonnes pulsées, colonnes à garnissage, etc.), et des extracteurs centrifuges.
On peut opérer à la température ambiante et à la pression atmosphérique.
Toutefois, dans le premier mode de mise en oeuvre du procédé, lorsque la réaction de formation du complexe est lente, on réalise de préférence la première étape de complexation à une température supérieure à la température ambiante pour améliorer la cinétique de réaction.
Après extraction en phase organique, les métaux de transition peuvent être réextraits dans une solution aqueuse par mise en contact de la phase organique contenant le complexe avec une solution acide ayant une acidité plus élevée que les solutions de départ, par exemple une solution 2N à 5N d'acide nitrique, d'acide chlorhydrique ou d'acide sulfurique. On peut aussi réextraire le métal de transition en solution aqueuse par mise en contact de la phase organique avec une solution aqueuse faiblement acide contenant le ligand.
Dans le procédé de l'invention, les conditions d'acidité et les concentrations en extractant échangeur cationique de la phase organique sont généralement ajustées pour que le ligand reste presque exclusivement présent en phase organique aussi bien à l'extraction qu'à la réextraction.
Par ailleurs, la concentration en extractant de la phase organique doit être suffisante pour que l'on atteigne pratiquement La saturation du solvant en complexe extrait.
Généralement, un rapport de 2 moles d'extractant par mole de complexe extrait correspond à une saturation du solvant.
Le procédé de l'invention s'applique en particulier aux métaux de transition du groupe d, c'est-à-dire aux métaux des groupes IVA à IB des quatrième, cinquième et sixième périodes du tableau périodique ; à titre d'exemples, ces métaux peuvent être le fer, le nickel, le cobalt,le cuivre, le manganèse, le ruthénium, le rhodium, le platine, le palladium, le zinc et le niobium.
De préférence, on utilise le procédé de l'invention pour séparer le nickel et le cobalt à partir de solutions acides, pour séparer le ruthénium du rhodium et pour extraire Le rhodium à partir de solutions nitriques.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples suivants donnés bien entendu à titre illustratif et non limitatif, en référence au dessin annexé sur lequel - la figure 1 est un diagramme illustrant les variations des coefficients de distribution du nickel et du cobalt en fonction de l'acidité de la solution aqueuse de départ, - la figure 2 est un diagramme illustrant les variations des coefficients de distribution du nickel et du cobalt en fonction de la concentration en extractant échangeur cationique de la phase organique, - la figure 3 est un diagramme illustrant les variations des coefficients de distribution du cobalt et du nickel en fonction de la concentration en acide sulfurique de la solution aqueuse de départ, - la figure 4 est un diagramme illustrant les variations des coefficients de distribution du nickel et du cobalt en fonction de la concentration en acide sulfurique de la solution aqueuse de départ, - la figure 5 est un diagramme représentant les variations du coefficient de distribution du rhodium en fonction de la concentration en acide nitrique de la solution aqueuse de départ losqu'on utilise differents Ligands pour l'extraction, - la figure 6 est un diagramme illustrant les variations du coefficient de distribution du ruthénium en fonction de la concentration en extractant acide de la phase organique, et - la figure 7 est un diagramme illustrant Les variations du coefficient de distribution du ruthénium en fonction de la concentration en acide nitrique de la solution aqueuse de départ.
EXEMPLE 1 : Separation nickel/cobalt Dans cet exemple, on utilise comme ligand la bipyridine et comme extractant acide, l'acide dinonylsulfonaphtalène. Le diluant inerte est du tétrachlorure de carbone.
La solution aqueuse de départ est une solution -1 -1 sulfurique contenant 0,005 mol.l de nickel et 0,005 mol.l de cobalt sous forme de sulfates.
Dans l'exemple de réalisation représenté sur la figure 1, la paroi de fond 15 comporte une face 18 plane, orthogonale à l'axe A, du côté opposé à l'entrée 3. La partie centrale de cette face 18 est solidaire d'un manchon 19 faisans saillie du côté opposé à l'entrée 3 et coaxial à l'axe A.
Ce manchon 19 est monté libre en rotation dans un alésage borgne 20 prévu dans la partie lb, constituant un palier d'extrémité pour le rotor 2.
Du côté tourné vers l'entrée 3, la paroi de fond 15 présente une protubérance 21 de révolution autour de l'axe A l'extrémité de cette protubérance 21 est arrondie. En variante on pourrait prévoir, dans la face 18, un alésage borgne sté- tendant à l'intérieur de la protubérance 21, ledit alésage borgne étant destiné à recevoir l'axe porté par le carter 1, pour la rotation du rotor 2.
La paroi annulaire 16 correspond à la région du rotor 2 qui s'étend, radialement, entre une partie tubulaire 22 délimitant le passage axial 14 et la volute collectrice 6.
Dans l'exemple de réalisation de la figure 1, les canaux 13, à leur extrémité voisine de la volute 6, sont orientés radialement, c > est-à-dire à angle droit par rapport à la direction du courant d'entrée, provenant du passage 14, parallèlement à l'axe A. Dans d'autres types de réalisation, les canaux 13 pourraient avoir une inclinaison différente à leur sortie vers la volute 6, et assurer une déviation angulaire moins forte de l'écoulement de liquide.
La paroi annulaire 16 comporte, du côté tourné vers la paroi de fond, des gorges 23 destinées à recevoir les bords des parois de séparation 17.
La partie tubulaire 22 et la paroi annulaire 16 appartiennent, de préférence, à une même pièce.
La paroi de fond 15 munie des parois de séparation 17 et la paroi annulaire 16, solidaire de la partie 22, sont avantageusement réalisées par moulage. Ces pièces peuvent être fabriquées en matière plastique.
Le passage axial 14, délimité par la partie tubulaire 22, présente avantageusement une forme tronconique dont le diamètre augmente progressivement en direction de la paroi de fond 15. L'angle d'inclinaison des génératrices de ce passage 14, par rapport à l'axe A est de préférence de l'ordre de quelques degrés, notamment inférieur ou égal à 5 . Cette conicité contribue à améliorer le rendement de la pompe.
Il est à noter que l'ensemble de la partie annulaire 16 et du manchon 22 peut être réalisé par moulage, même avec un passage axial 14 tronconique tel que décrit ci-dessus, puisque la paroi de fond 15 est réalisée séparément ; il est donc possible, après moulage, de retirer le noyau délimitant le passage axial 14 du côté opposé à l'extrémité de petit diamètre, c'est-à-dire du côté où se trouve, normalement, la paroi de fond 15.
L'assemblage de la paroi de fond 15 munie des parois de séparation 17, et de la paroi annulaire 16 peut être réalisé par collage ou par soudage.
L'extrémité 24, de la partie tubulaire 22, éloignée de la paroi 15, est montée à rotation dans la jupe 11 du carter qui sert de palier. Cette extrémité 24 peut avoir un diamètre extérieur réduit par rapport au restant de la partie 22 une douille anti-friction 25 peut être prévue autour de l'extrémité 24, à l'intérieur de la jupe 11.
Un stator 26 de moteur électrique, constituant un inducteur, est logé à l'intérieur de l'enveloppe cylindrique 8. Le stator 26 comprend, d'une manière classique, une carcasse ferro-magnétique 27 et des enroulements 28 dans lesquels circule un courant électrique. Avantageusement, le stator 26 est propre à créer un champ magnétique tournant. Ce stator 26 est, de préférence, du type stator de moteur à com- mutation électronique sans balais. Le stator 26 entoure la par tie tubulaire 22 du rotor 2 de pompe.
Le rotor (induit) 29 du moteur électrique est fixé sur cette partie tubulaire 22.
Cet induit 29 peut être du type massif, non bobiné, et constitué, par exemple, par un manchon métallique 29a, com me représenté sur la figure 3.
Selon une autre possibilité, le rotor 29 est constitué par un ensemble 29b d'aimants permanents. Dans l'exemple représenté sur la figure 4, quatre aimants permanents tels que 29c, en forme d'arc de couronne, sont fixés sur la périphérie de la partie tubulaire 22, suivant une répartition régulière.
Comme on le sait, le sexe (mule ou femelle) est déterminé par les chromosomes sexuels. Chez les mammifères la présence d'un chromosome Y est suffisante pour produire un phénotype male et il semble que les gènes déterminant le sexe presents sur le chromosome Y se comportent comme un trait génétique dominant.
La première démarche adoptée pour la détermination précoce du sexe des embryons humains a donc consisté en une analyse chromosomique de cellules de liquide amniotique mises en culture. Cependant comme ce type d'analyse dure deux à trois semaines, il est apparu nécessaire de pourvoir à d'autres méthodes de détermination précoce du sexe d'embryons, susceptibles de donner des résultats plus rapides.
I1 a été établi que la totalité du chromosome Y n'est pas impliquée dans la différenciation sexuelle. I1 a donc paru logique d'analyser les séquences présentes sur le chromosome Y et la première démarche dans ce sens a consisté à isoler et cloner 1'ADN du chromosome Y.
C'est ainsi que KUNKEL et Al. (notamment dans BIOCHEM vol. 18, nO 15 p. 3343-3353, 1979) ont isolé des fragments de 3,4 -kilobases (kb) d'ADN de maies humains par coupure à l'aide d'endonucléases de restriction telles que HaeIII, EcoRI ou EcoRII et ont montré que 1'ADN répétifif spécifique du chromosome Y (ADN Y-it) est présent dans ces molécules de 3,4 kb. Cependant si les travaux de KUNKEL et Al. donnent des indications précieuses sur l'Qrganisa- tion de deux types de séquences répétitives, respectivement spécifique et non spécifique du chromosome Y, dans chaque molécule de 3,4 kb, ils ne sont pas utilisables directement dans le sexage.
Les travaux de BISHOP et Al. (NATURE, vol. 303,30 Juin 1983, p. 831-832) ont visé à construire une librairie partielle du chromosome Y en utilisant un hybride de cellules somatiques contenant uniquement le chromosome Y humain sur une base murine, obtenu par fusion de lymphocytes humains males avec la lignée cellulaire murine RAG et contenant un nombre modal de quatre chromosomes Y humains par cellule ; ils ont extrait de l'hybride de 1'ADN de poids moléculaire élevé, et ont réalisé une digestion partielle à l'aide de l'enzyme de restriction MboI et ont cloné les fragments de 35-50 kb dans des bactéries Escherichia coli en utilisant le cosmide pJB8.Pour différencier les clones contenant des inserts d'ADN humains (dérivés d'Y) de ceux contenant de l'ADN murin, les colonies ont été testées à basse densité avec de l'ADN humain répétitif 32p-marqué, dans le but de ne détecter que les séquences répétitives et de créer la banque visée. Les Auteurs ont sélectionné parmi les clones recombinés des séquences d'ADN nonrépétitif dérivé de Y afin d'étudier l'organisation du chromosome Y humain au niveau moléculaire. Ces travaux dont l'intéret scientifique est déterminant, ne sont pas, eux non plus, directement utilisables pour le sexage des embryons de mammifères d'élevage.
Plusieurs méthodes de détermination précoce du sexe d'embryons humains ont été proposées sur la base des travaux de KUNKEL et Al., c'est-à-dire en utilisant des séquences d'ADN spécifique du chromosome Y. En particulier LAU et Al. (THE LANCET, 7 Janvier 1984, p. 14-16) ont pro- posé un test de détermination du sexe chez l'embryon humain à l'aid d'une sonde isolée à partir de la séquence répétitive humaine de 3,4 kb dérivée de l'hétérochromatine du chromosome Y (méthode de KUNKEL et Ai.). Cette sonde a ensuite été hybridée à de 1'ADN isolé d'un petit nombre de cellules provenant de 0,2 ml de liquide amniotique.Le taux d'hybridation est 1000 fois plus grand à l'égard de 1'ADN génomique male (isolé de cellules de liquide amniotique) qu'à l'égard de 1'ADN génomique femelle. La méthode proposée par GOSDEN et Al. (THE LANCET, 10 mars 1984, p. 540-541) qui est la méthode des "DOT BLOT" utilise une sonde spécif i- que du chromosome Y, dénommée pHY2,1 précédemment décrite par ces Auteurs. Cette sonde s'hybride à de 1'ADN provenant d'une biopsie de villosités choriales d'un embryon humain maire.
LAMAR et PALMER (CELL, vol. 37, Mai 1984, p. 171177) ont cherché à développer une méthode générale de clonage de 1'ADN du chromosome Y chez la souris. La méthode proposée par ces Auteurs consiste à fragmenter 1'ADN de foie de souris femelles par sonication et à digérer complètement de 1'ADN de souris males par MbOI. Un échantillon de 1'ADN femelle fragmenté et 1'ADN male digéré sont mélangés dans une proportion de 100:1. Le mélange est dénaturé et réassocié à un Cot=1320 dans un tampon approprié : dans ces conditions, 95 % de 1'ADN est sous forme double brin.Ceux-ci sont constitués d'ADN femelle homogène, de double-brins hétérogènes male-femelle correspondant aux séquences communes aux deux sexes et enfin de duplex spécifiques males. Les double-brins sont isolés par chromatographie sur colonne d'hydroxylapatite. Ils sont recombinés dans le plasmide pBR 322. Les plasmides recombinants sont utilisés pour transformer des bactéries Escherichia Coli HB 101 compétentes.
Environ 100 000 clones (Ampr-TetS) ont été testés, parmi lesquels 3 000 contiennent de 1'ADN présumé spécifique du chromosome Y. Trois de ces sondes se sont révélées etre spécifiques de la souris male, ce qui tendrait à démontrer une spécificité d'espèce des sondes moléculaires d'ADN male.