INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le phénotype de résistance à l'antibiotique G-418 est stable dans les conditions de culture mis en oeuvre en vue de la sélection. Il en est encore de même, même lorsque les cellules sont cultivées dans le même milieu, mais en l'absence de l'antibiotique. Les cellules ne deviennent pas sensibles à l'antibiotique G-418, même après plusieurs passages.
Transformation par les plasmides recombinants de cellules de singes et de cellules humaines.
On a comme dans le cas précédent obtenu des lignées résistantes à l'antibiotique G-418, après transfection de cellules de singes (VC10, OMK) et de cellules humaines (lignée HeLa) après transfection avec les plasmides pAG50 et pAG60. Aucune colonie résistante n'a cependant été obtenue en utilisant uniquement le support ADN issu du sperme de saumon.Le rendement de transformation obtenu avec ces cellules, a été inférieur à celui auquel ont conduit les cellules de souris L TK . pAG50 s'est révélé transformer les cellules HeLa avec une efficacité d'environ une colonie par Fg d'ADN. pAG60 a permis la transformation de cellules de singes VC10 et OMK avec une efficacité de 0.1 à 1 colonie par Ag d'ADN.
Transferts simultanés du gène HSVî TK et du marqueur sélectif APH(3')-II Pour étudier les possibilités de co-transformation ou de transformations simultanées d'un gène déterminé avec le marqueur sélectif APH(3')-II on a eu recours au gène HSV1 TK du fait de sa capacité de détection aisée. Les plasmides circularisés pAG60 et pFG24 portant respectivement les gènes APH(3')-II et TK respectivement ont été utilisés en vue d'opérer des co-transformations ou transformations simultanées de cellules TK 1D. Les deux plasmides ont été utilisés dans des proportions massiques correspondant à 5 APH(3')-II pour 8 TK.
Après une opération de sélection dans un milieu ne contenant que l'antibiotique G-418,on a isolé 20 clones.
Neuf clones parmi les 20 précédents (soit 45 %) se sont révélés capables de se développer également dans le milieu sélectif HAT. Ces 9 clones possédaient par conséquent à la fois le phénotype APH(3')-II et TK . Partant de colonies répliquées à partir de 5 des clones résistants au milieu HAT de 4 clones sensibles au ilie HAT et après culture en présence du seul G-418, on a testé l'activité TK in vitro des 9 cultures obtenues. Les 5 clones qui présentaient le phénotype TK se sont révélés avoir une activité enzymatique importante. Des résultats semblables ont été obtenus avec des cellules co-transformées par pAG50 et pFG24.
Cet essai est évidemment représentatif des possibilités qu'offrent les marqueurs génétiques sélectifs selon l'invention, de repérer les cellules eucaryotes trains formées par un autre ADN, dont l'expression pourrait être recherchée, tel que par exemple un ADN ou cADN codant pour une protéine, telle que l'insuline, l'interféron humain, etc., ou une protéine virale destinée à la production de vaccins, telle que l'antigène HBs du virus de l'hépatite virale B, etc...
Le rendement de transformation et de détection est évidemment susteptible d'être plus important si l'on a recours, non à une co-transformation des cellules, telle qu'elle a été décrite ci-dessus à titre d'exemple, par un plasmide marqueur conforme à l'invention et par un plasmide distinct, porteur de la séquence d'ADN dont l'expression est recherchée, mais à une transformation par le plasmide marqueur selon l'invention lui-même, dans lequel aura été insérée au préalable la séquence d'ADN dont l'expression est recherchée.Cette dernière insertion peut, dans le cas des plasmides préférés qui ont été décrits cidessus, être réalisée avec avantage dans l'un des sites contenant les facteurs de résistance à la tétracycline et à l'ampicilline, qu'ils ont en commun avec pAGO et qui n'ont pas été affectés par la modification qui a conduit aux plasmides selon l'invention.
L'invention s'applique naturellement de la même manière et dans des conditions analogues à la transformation et la détection de cellules eucaryotes supérieures par un ADN ou cADN codant pour une protéine déterminée.
En particulier, les résultats qui précèdent démontrent que l'invention peut être mise en oeuvre pour la transformation et la détection de lignées cellulaires de singes (Vero et OMK) et humaines HéLa, pour ne retenir que quelques exemples. En particulier, les résultats précédents font apparaître que les séquences contenant un facteur de résistance à certains antibiotiques, tel que le gène du transposon Tn5 qui code pour l'APH(3')-II, qui est dépourvu d'introns, peuvent être exprimées après leur transfert dans des cellules de mammifères.
Le système sélectif qui a été décrit présente un nombre de caractéristiques et d'avantages particulièrement intéressants. Tout d'abord, on observe que la sélection n'implique pas l'utilisation de voies métaboliques spéciales ou de voies de synthèse de nucléotides spéciales, contrairement à ce que requièrent les techniques antérieures utilisant à titre de marqueurs des gènes TK, APRT, XGPRT ou DHFR. Le procédé selon I'invention peut également être appliqué à ltétude des efficacités relatives de différents promoteurs, que ces efficacités s'expriment en rendements de transformation vis-à-vis d'un type de lignée cellulaire déterminé ou à égard du nombre plus ou moins important de cellules eucaryotes d'origines différentes que peut transformer chacun des promoteurs testés.Il est à cet égard intéressant-de noter l'efficacité toute particulière des promoteurs qui normalement contrôlent la transcription des gènes TK. L'invention fournit par conséquent des marqueurs qui peuvent être exprimés dans des lignées variées de cellules de mammifères, particulièrement dans des lignées cellulaires dépourvues de tout caractère oncogène, comme par exemple les lignées cellulaires hétéro ploies Véro de primates non humains, telles que celles décrites par PETRICCIANI, J.C., KIRSCHSTEIN, R.L., HINES, J.E., WALLACE, R.E. et MARTIN, D.P. (1973), 'tJ. Natal. Cancer Inst.", 51, 191-196, ces dernières cellules s'étant révélées non tumorigènes, même lorsque testées dans des singes soumis à un traitement immunosuppresseur. Les cellules marquées obtenues sont donc particulièrement utiles pour la synthèse de produits des tinés à des usages biologiques ou thérapeutiques, par exemple l'insuline ou lXinterféron, ou encore des principes actifs de vaccin, tels que les séquences polypeptidiques correspondant à l'antigène HBs du virus de l'hépatite virale B.
D'une façon générale, l'invention s'étend à tous les équivalents des différents marqueurs qui ont été décrits ou définis plus haut. A cet égard, il importe encore de fa.ire les observations complémentaires suivantes.
La définition " promoteur eucaryote connu ou reconnu par sa capacité à diriger l'expression dans une cellule eucaryote d'un gène qui lui est normalement associé, s'étend aussi aux promoteurs associés à des gènes homologues dans d'autres types de cellules ou mircro-organismes, y inclus les virus qui codent pour une protéine homologue à celle spécifiée par le promoteur eucaryote correspondant.
En l'occurrence, il s'agit des promoteurs associés à des "ADN de complémentation", au sens qui a été donné de cette expression dans la demande de brevet européen nO 80400828 déposée le 9 juin 1980. En particulier, il a été fait usage d'un tel promoteur dans l'exemple sus-expose.
pqur la préparation des matières à base de résine à couler selon la présente invention, les époxydes cycloaliphatiques appropriés sont par exemple : 3,4-époxyclohexylméthyl (3,4-époxy)cyclohexanecarboxylate, 2-(3,4-époxy)cyclohexyl-5,5 spiro(3,4-époxy)cyclohexane-m-dioxane et les mélanges des deux.
Des anhydrides d'acides carboxyliques appropriés sont par exemple les anhydrides tétrahydrophtalique, méthylhexahydrophtalique, hexahydrophtalique, dodécényl-succinique et succinique. Est particulièrement approprié 1' anhydride hexahydrophtalique. On peut utiliser également des mélanges des anhydrides mentionnés.
Comme aceélérateur de la réaction est approprié un ectoate de zinc constitué par du zinc et le reste de l'acide 2-ethylhexans-carboxylique dans le rapport molaire de 1s2, correspondant à une teneur en zinc d'environ 18 J en poids.
Est particulièrement valable un octoate de zinc comprenant 21 â 22 % en poids de zinc. On peut ainsi en utilisant la même quantité pondérale d'accélérateur diminuer la durée de démou- lage pour une température de durcissement de 150 à moins de 3 minutes, même pour de très petites quantités (inférieur à 0,1 6) de matière à base de résine à couler. On utilise de préférence l'ootoate de zinc en solution avec un composé organique du phosphore.Pour la dissolution sont appropriés des composés qui d'une part dissolvent complètement l'octoate de zinc et le phosphite utilisé et d'autre part lors du durcisse- ment par au moins un groupe réactif par l'intermédiaire d'une réaction d'addition engendre un composé chimique avec les constituants de la résine ou du durcisseur, pour empêcher une migration ultérieure du solvant dans la matière moulée à base de résine à couler.
Des solvants appropriés sont par exemple les polyols à bas poids moléculaire et les esters d'acides carboxyliques à bas poids moléculaire et leurs mélanges. Sont particulièrement appropriés le triméthylolpropane ou le 3-méthylpentanediol-l,5 et l'hexahydrophtalate mono-éthylique.
Des composés organiques du phosphore appropriés sont par exemple le diphényldécylphosphite, triphénylphosphite, didécylpénylptiosphite. Est particulièrement approprié le diphényldécylphosphite. Ces composés agissent comme antioxydant et comme accélérateurs de la réaction et diminuent la viscosité initiale de la matière à base de résine à couler.
Comme asurant optique est approprié le "Waxoline Tielett Â (R). disponible dans le commerce0 Des matières pulvérulentes, dispersant la lumière appropriées , sont les silices préparées par hydrolyse dans la flanc du tétrachlorure de silicium dans la flamme de gaz de carneaux , disponibl dans le commerce sous forme d'tAérosil (R)" ainsi que les silices poreuses, micronisées,préparées synthétiquement et disponibles dans le commerce sous la marque "Syloid(R)" et le sulfate de baryum , le nitrure de bore, le carbonate de calcium et le fluorure de calcium.
Pour colorer les matières à base de résine à couler conformes à la présente invention on peut utiliser les colorants "Orasol(R)" disponibles dans le commerce (par exemple "Ecarlate Orasol G111 , aune Orasol 3 GIG") , les colorants "Waxoline(R)" (par exemple Rouge Waxoline O") ,les colorants "Mikrolit(R)" (par exemple "Vert Mikrolit GT") , et des matières colorantes pigmentaires telles que (l'oxyde de chrome , la pâte tinctoriale ftw 04") .
les matières à base de résine à couler conformes à la présente invention sont liquides à la température ordinaire.
A cette température elles ont une longue durée d'utilisation.
Elles sont facilement dosables, ce qui facilite beaucoup leur mise en oeuvre avec des doseurs multiples. Un grand avantage est l'aptitude au démoulage rapide des matières moulées préparées à partir des matières à base de résine à couler conformes à la présente invention ce qui diminue fortement la durée d'occupation des ioules.
Les matières à base de résine à couler conformes à la présente invention peuvent être utilisées pour revêtir ou enrober les composants électro-optiques tels que par exemple les diodes luminescents , les photodiodes, les phototransistors et pour le moulage des organes d'affichage à diodes lumines- cents et sous forme de résines guidant la lumière pour des coupleurs électro-optiques.
La présente invention est illustrée par les exemples descriptifs et non limitatifs ci-après t Exemple 1 Matière à base de résine à couler transparente Préparation du prémélange A.
On mélange d'une façon homogène, à la température ordinaire 94 parties en poids de 3 ,4-époxycyclohexylméthyl- (3,4-époxy)cyclohexanecarboxylate avec 0,00015 partie en poids de "Waxoline Violett A" et 6 parties en poids de 3-méthylpentanediel-1,5.
Préparation du prémélange B On mélange d'une façon homogène à 60 - 70 C,88 parties en poids d'anhydride hexahydrophtalique avec parties en poids d'hexahydrophtalate-mono-éthylique.
Préparation du prémélange C On mélange à la température ordinaire 7 parties en poids de diphényldécylphosphite et 6 parties en poids d'octoate de zinc avec 13 parties en poids d'hexahydrophtalate mono-éthylique fondu à 40 - 50 C.
B/ DISPOSITIF MOBILE I1 se compose d'un oscillateur LC (L I, C I, TR 6, R I, R 2, R 3) d'un multivibrateur (TR 4/TR 5, R 4, R 5; R 6, R 7, R 8, C 2, C 3) et d'un ensemble de commutation.
te fonctionnement est le suivant L'ouverture du contact du micro permet au condensateur C 4 de se charger à travers R 9, R IO et R Il et TR 2 assurant ainsi la conduction de ce dernier et celle de TR 3, qui commande alors TR I (par R I3) qui maintient le relais en position collee (par Z I).
Simultanément, le multivibrateur est mis en route, co-andé également par TR 3 via R 5. Lorsque TR 5 est conducteur, l'oscillateur est bloque par courcircuitage de la base de TR 6 (D 2) et de l'inductance (D 3). Lorsque TR 3 est bloqué, l'oscillateur fonctionne. Le signal est envoyé via C 5 et R 15 sur l'étage modulateur de l'E/R Lorsque la charge de C 4 est terminee, TR 2, TR 3, TR 4 se bloquent et le relais d'alternat décolle.
Pour éviter que les tensions d'alimentation et d'induction diverses viennent perturber TR 2, le condensateur C 4 est polarisé à 4 V par le pont R IO/ R 16 lui-meme alimenté à partir de la régulation R 9/ Z 2.
La présente invention se rapporte, d'une manière générale, aux installations de coulée continue et plus articulièrement à des agencements de fours, de grues et de machines de coulée continue appropriées pour améliorer la commodité et le rendement de l'exploitation de telles installations. Plus précisément, la présente invention se rapporte à une installation de coulée qui est toute entière contenue dans un unique atelier et est munie d'une grue à pont tournant conçue pour transporter des poches de transport de métal liquide à partir d'un ou de plusieurs fours de fabrication d'acier Jusqu'd une ou plusieurs machines de coulée continue.
Les installations de coulée continue Actuelles comprennent, en général, deux ateliers adjacents dont l'un est appelé l'atelier à poches et dont l'autre est appelé l'atelier de coulée. Chaque atelier est muni de sa propre grue à pont roulant qui se déplace suivant sa propre paire de rails, les deux paires de rails étant parallèles entre elles. Les paires de rails sont espacées ldgbrement l'une de l'autre pour permettre à chacune des deux grues de se déplacer indépendamment à l'intérieur de son propre atelier, sans gagner le déplacement de l'autre à l'intérieur de son atelier respectif.Les deux ateliers sont séparés l'un de l'autre, non pas nécessairement physiquement par une barrière, telle qu'un mur, mais fonctionnellement par un espace entre les paires de rails de guidage des grues qui forme une zone de séparation entre les ateliers. Toutes les fonctions relatives aux déplacements et aux manoeuvres des poches sont effectuées dans atelier à poches par la grue de l'atelier à poches tandis que toutes les fonctions qui sont liées à l'opération de coulée effective sont effectuées dans l'atelier de coulée par la rue de l'atelier de coulée.
Un autre agencement couramment utilisé pour les installations de coulée continue nécessite l'emploi de trois ateliers adjacents. L'un de ces ateliers est l'atelier des fours, le second est un atelier de manutention du métal liquide et le troisième est un atelier de coulée. Chacun de ces ateliers est muni. de sa propre grue à pont roulants dont chacune fonctionne le long de sa propre paire de rails, les paires de rails s'étendant parallèlement entre elles.
Les paires de rails sont légèrement espacées les unes des autres pour permettre à chacune des trois grues de se dépla- cer indépendamment à l'intérieur de son propre atelier sans gêner le déplacement des autres grues. Les trois ateliers sont séparés les uns des autres, au soins fonctionnellement, par les espaces séparant lez paires de rails qui forment des zones de séparation entre les ateliers.
Que deux ateliers ou trois ateliers voient util- sés, un équipement de transport transversal est nécessaire pour transporter les poches contenant du métal liquide d'un atelier au suivant. Un type d'dqulpement de transport transversal qui est couramment utilie.- eot un mécanisme de rotation de poches qui est constitué par une tourelle porte poches ayant un entre vertical disposé entre les ateliers et portant deux bras orientés dans des sens opposés, montés pivotants sur l'arbre, un arbre-s'étendant dans l'atelier à poches (installation à deux ateliers) ou dans atelier de manutention du métal liquide (installation à trois ateliers) pret à recevoir une nouvelle poche pleine et l'autre bras s'étendant dans l'atelier de coulée pour porter une poche en position pour la vider dans le panier d'une machine de coulée. Lorsque la poche disposée au-dessus du panier est vide, on fait tourner les bras de 180 pour amener une poche pleine provenant de l'atelier à poches ou de l'atelier de manutention du métal liquide dans l'atelier de coulée. Un autre type d'équipement de transport transversal utilise des wagonnets de transport de poches qui se déplacent, par exemple, sur des rails et transportent les poches pleines ou vides d'un atelier au suivant.
Les grues et l'équipement de transport utilisés avec les installations de coulée continue actuelles doivent en général manutentionner des poches de transport de métal liquide dont le poids est compris entre environ 200 tonnes et environ 400 tonnes et, par conséquent, ce sont nécessairement des structures massives qui sont conteuses à installer, entretenir et utiliser. Il serait, par conséquent, avantageux de réduire le nombre des grues qui doivent être utilisées pour desservir une installation de coulée continue et de réduire au minimum, voire supprimer, la nécessité d'avoir à utiliser un équipement de transport transversal.
Des installations de coulée continue en un unique atelier du type décrit ci-après sont conçues d'une manière telle qu'elles ne nécessitent l'emploi que d'une seule grue pour desservir le ou les fours et la ou les chaines de coulée continue de l'installation et qu'elles suppriment ainsi la nécessité d'avoir à utiliser plusieurs grues séparées et des équipements de transports transversal, tels que des mécanismes de rotation de poches et des wagonnets de transport de poches.D'une manière générale, l'invention a pour objet la réalisation d'une installation de coulée continue en un seul atelier comprenant des moyens formant four pour produire du métal liquide, les moyens formant four comportant des moyens supports pour positionner des poches afin qu'elles puissent recevoir du métal liquide des moyens formant fours, des moyens de coulée continue pour former du métal solidifié, les moyens de coulée continue comportant des moyens supports pour positionner les poches contenant du métal liquide de manière à permettre le transfert du métal liquide des poches aux moyens de coulée et une grue à pont tournant pour transporter les poches de métal liquide des moyens supports des moyens formant four Jusqu'aux moyens supports des moyens de coulée, les moyens supports des moyens formant four et les moyens supports des moyens de coulée étant disposés à l'intérieur de la zone en forme d'arc desservie par la grue. Dans un mode de réalisation préféré, les moyens formant four comprennent deux fours à arc électrique et les moyens de coulée comprennent deux channes de coulée espacées parallèles.
Avantageusement, la grue à pont tournant utili- sée dans l'installation de coulée continue comporte un pont approximativement rectangulaire allongé horizontal, un rail en arc de cercle, un élément support vertical allongé situé dans une disposition radialement espacée par rapport au rail, le pont comportant des roues disposées au-dessous d'une première extrémité du pont, ces roues étant agencées de façon à pouvoir se déplacer le long du rail, l'extrémité du pont opposée à la première extrémité étant montée à rotation sur l'élément support, des moyens pour entraîner les roues, des moyens de levage montés sur le pont, et une paire de crochets à poche suspendus aux moyens de levage, ces crochets à poche étant agencés de façon à pouvoir être accrochés aux tourillons d'une poche de transport de métal liquide, les moyens de levage étant agencés de façon à pouvoir soulever et abaisser cette poche. Dans un mode de réalisation préféré, les moyens de levage comprennent un chariot monté sur le pont et agencé de façon à pouvoir se déplacer radialement le long du pont. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux le rail est circulaire.
D'autres caractéristiques de l'invention apparattront à la lecture de la description qui va suivre et à l'examen des dessins annexés dans les diverses figures desquels on a utilisé les mêmes références pour désigner les mêmes éléments et dans lesquels : La Figure 1 est une vue en élévation d'une installation de coulée continue mettant en oeuvre la présente invention selon un mode de réalisation particulier, la grue à pont tournant de cette installation étant représentée en traits mixtes dans une seconde position de fonctionnement de ladite grue ; et La Figure 2 est une vue en plan, à plus petite échelle, de l'installation de coulée continue représentée sur la Figure 1 prise suivant la ligne 2-2 de la Figure 1.
L'installation de coulée continue de la présente invention représentée sur les Figures 1 et 2 comprend deux fours de fusion de l'acier à arc électrique désignés par les références générales 10 et 10a, une paire de chatnes de coulée continue semi-horizontales espacées parallèles désignées par les références générales 12 et 12a et une grue à pont tournant désignée par la référence générale 14 qui est agencde pour transporter des poches de transport de métal liquide du poste de remplissage des poches de l'un ou l'autre four Jusqu'au poste de coulée de l'une ou l'autre channe de coulée continue, comme on l'expliquera plus complètement ci-après.Les fours 10 et 10a, les machines de coulée 12 et 12a et la grue 14 sont tous logés à l'intérieur de la structure de bttiment 15. Dans le mode de réalisation représenté, les éléments ou caractéristiques désignés par un chiffre suivi de la lettre "a" sont identiques aux éléments ou caractéristiques désignés par un chiffre seul ; par conséquent, et par commodité, on ne se référera dans la description qui va suivre qu'aux éléments ou caractéristiques désignés par un chiffre, cette description étant également applicable aux éléments ou caractéristiques désignés par les mêmes chiffres suivis de la lettre "a".
Dans le mode de réalisation représenté, les fours 10 et 10a sont d'une conception, d'une construction et d'un fonctionnement identiques, et, par conséquent, il suffit de décrire la conception, la construction et le fonctionnement du four 10, cette description étant également applicable au four 10a Le four 10 est un four à arc direct à garnissage basique muni d'un fond non conducteur qui est principalement un four de fusion de riblons et ferrailles bien que l'on puisse utiliser, pour la charge, du fer sous la forme de métal de haut fourneau fondu et des matières réduites directement (par exemple, des agglomérés préala- blement réduits).Un transformateur triphasé 16 équipé pour pouvoir faire varier la tension du secondaire est utilisé pour alimenter le four 10 en courant, à partir d'un réseau d'alimentation en courant électrique, à l'intérieur d'un intervalle approprié de niveaux de puissance qui peuvent être déterminés par tous les spécialistes de la technique.