INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le logement de lés@@@@@ pout être i@@@@@puté aver tout ou p@@@@ du pysième d'admin sion du mot9our, comme liluntré schémmtlquement d'exemple daus la t@@ d'un muteur à quatre cylindres on coupe tran@vor@@l@ la figure 107 et en coupe d'élévation aur ln fig. 108 le long da la ligna de joint des piècos 320, ou 301 est le logement de réacteur principal, 321 un logement de rencteur interéléments, 322 la sortin des gaz d'échappement, 325 l'ensemhle de carburateur, 323 le colle@@ teur d'admission et 324 le contour des lumières d'échappement.Les ptinclpes illuntrés ci-dennus peuvent être appliqués au logement d'admission et de réacteur intégré pour toute configuraLion de la batterie de cylindres du moteur. Pour faciliter la fabrication, l'ensemble de réacteur de la fig. 107 a été réalisé en deux pièces principales qui sont fixées l'une à l'autre de façon à faciliter le remplacement de la matière filamenteuse. Le jointoiement et la division de pièces de ce type, bien que non illustrés, peuvent être incrrporés au logement de toute configuration, y compris les configurations illustrées dans le présent texte.Ces pièces peuvent être fixées l'une à l'autre de manière amovible de n'importe quelle manière, y compris la méthode utilisant des fixations comme, par exemple, des boulons placés dans des arêtes distributrices de charge creuses coincidentes, cosse décrit au chapitre six. Dans une autre solution. les joints peuvent être effectués par des éléments en 'L' dos à dos 326 de forme arquée espacés ou continus, comme illustré par la coupe transversale partielle de la fig. 109, où les éléments en 'L' au moyen des boulons d'interconnexion 327, des écrous 328 et des plaques en rondelles 329, pressent les deux pièces ensemble, de préférence à un joint comportant des surfaces jointives non plates comme en 330 pour assurer le positionnement correct des pièces, séparées par de la matiere compressible 331.
Dans d'autres mises en applications, particulièrement lorsqu'on s'attend que la matière filamenteuse subsiste pendant toute la durée utile de l'ensemble de réacteur complet, il peut être souhaitable que le réacteur soit monté sous la forme d'un ensemble complet et demeure efficacement étanchéifié, peut-être parcè que le constructeur souhaite garantir que les réglages effectués à l'usine ne soient jamais dérangés. Dans un tel cas, les diverses pièces du réacteur pourraient être correctement assemblées et le jointoiement pourrait être effectué avec un adhésif permanent ou par une pâte à joint au mastic qui pourraient lier les surfaces adjacentes ensemble après passage au four, ou chauffage, ou traitement chimique de l'ensemble.
L'inhibition de la saccharase est maximale dans le cas du dérivé à 2 motifs, le dérivé ayant un motif de glucose n'ayant plus que la moitié de cette activité inhibitrice et le membre supérieur a une activité spécifique d'inhibition de la saccharase encore plus réduite.
In vivo, l'activité d'inhibition de la saccharase est à peu près parallèle à l'activité inhibitrice spécifique constatée in vitro. Par contre, dans le test de dégradation de l'amidon in vivo, on trouve de façon surprenante pour les composés ayant 1, 2 ou 7 motifs de glucose, une activité 10 à 40 fois plus forte que dans l'inhibition de l'amylase in vitro.
Pour la production d'une hyperglycémie et d'une hyperinsulinémie alimentaires, on fait absorber à des groupes comportant chacun 6 rats à jeun a) 2,5 g de saccharose, b) 2,5 g de maltose ou c) 1 g d'amidon cuit par voie orale en solution aqueuse ou en suspension. Six autres rats reçoivent les glucides mentionnés en la même quantité et, en outre, un inhibiteur de glucoside-hydrolase à la dose indiquée.
De plus, 6 autres rats reçoivent une quantité correspondante de solution de sel.
On mesure la glycémie et l'insuline du sérum à de courts intervalles de temps dans le sang prélevé dans le plexus veineux rétroorbital. les déterminations de la glycémie sont effectuées dans un analyseur automatique ("Technicon", d'après Hoffman : "J. biol. Chem." 120, 51 (1937)) ou par voie enzymatique avec la glucose-oxydase et le chlorhydrate d'o-dianisidine les déterminations de l'insuline sérique sont effectuées d'après la méthode de Hales et Randle, ":Biochem. J." 88, 137 (1963).
Les résultats de l'inhibition de la saccharase in vivo (administration de saccharose) chez le rat à jeun sont indiqués sur le tableau III suivant TABLEAU III Formule n Dose (UIS) Glycémie en mg % (valeur moyenne # l'écart type) 15 minutes 30 minutes 45 minutes 60 minutes Solution de sel 69 # 5,2 84 # 3,9 91 # 5,9 Saccharose (témoin) 117 # 11 135 # 8,1 152 # 18 IIB 1 Saccharose + 50 UIS 105 # 11 123 # 5,2* 128 # 11* Saccharose + 100 UIS 89 # 6,5*** 111 # 4,1*** 116 # 3,9*** Saccharose + 200 UIS 72 # 4,6*** 95 # 9,1*** 104 # 9,6*** Solution de sel 55 # 4,5 92 # 8,5 95 # 6,4 IIIB 2 Saccharose (témoin) 113 # 9,9 126 # 20 127 # 14 Saccharose + 25 UIS 71 # 3,7*** 100 # 7,3* 107 # 2,4** Saccharose + 100 UIS 58 # 5,9*** 92 # 4,0** 98 # 5,0*** Solution de sel 66 # 4,6 # 4,6 73 # 4,3 76 # 3,9 Saccharose (témoin) 122 # 6,6 125 # 16,0 128 # 14,8 V 3 Saccharose + 25 UIS 88 # 11,4** 101 # 12,0* 104 # 7,4** Saccharose + 50 UIS 91 # 9,4** 106 # 7,0* 94 # 9,0*** Saccharose + 100 UIS 81 # 7,2** 90 # 8,0*** 97 # 1,6*** - TABLEAU III (suite) Formule n Dose (UIS) Glycémie en mg % (valeur moyenne # l'écart type) 15 minutes 30 minutes 45 minutes 60 minutes Solution de sel 58 # 2,9 49 # 3,3 54 # 4,8 63 # 5,0 Saccharose (témoin) 107 # 11 121 # 6,0 132 # 16 132 # 6,7 4-6 Saccharose + 25 UIS 109 # 6,4 105 # 10** 112 # 9,1* 108 # 8,1*** Saccharose + 50 UIS 103 # 4,1 107 # 15 102 # 7,7** 101 # 9,2*** Saccharose + 100 UIS 85 # 8,1** 94 # 9,9*** 95 # 8,5*** 85 # 6,4*** Solution de sel 58 # 2,9 49 # 3,3 54 # 4,8 63 # 5,0 Saccharose (témoin) 107 # 11 121 # 6,0 132 # 16 132 # 6,7 5-7 Saccharose + 75 UIS 102 # 11 108 # 9,6* 109 # 7,5** 101 # 7,9** Saccharose + 150 UIS 92 # 7,0* 100 # 8,3*** 109 # 3,7** 102 # 6,3*** Saccharose + 300 UIS 95 # 8,1* 84 # 8,7*** 93 # 9,0*** 91 # 4,5*** * = Probabilité par rapport au témoin avec saccharose = < 0,05 ** = Probabilité par rapport au témoin avec saccharose = < 0,01 *** = Probabilité par rapport au témoin avec saccharose = < 0,001.
Par conséquent, bien que l'activité inhibitrice d'amylase in vivo diminue avec le poids moléculaire, les valeurs de DE50 de l'inhibition de la digestion de l'amidon pour tous les composés conformes à l'invention sont essentiellement les mêmes.
C'est ce que montre le tableau VI suivant.
TABLEAU VI Inhibition Inhibition de di d'α-amylase gestion de l'ami For- Unités de don mule glucose in vitro in vivo UIA/mg (DE50, mg/kg) II13 (1) 300 0,76 IIIB (2) 300 1;60 V (3) 1400 1,61 (4-6) 17500 1,42 - (5-7) 30000 1,00 On peut donc obtenir de façon surprenante avec les composés IIB, IIIB et V une inhibition simultanée de la digestion du saccharose et de l'amidon, à savoir pour une dose précise, prévisible et caractéristique.
les composés exercent en outre un effet avantageux en ce qui concerne l'absorption du glucose. Cela ressort des résultats suivants donnés sur le tableau VII (expériences portant sur des rats affamés) pour le composé de formule III:S (n1 = 2).
TABLEAU VII Dose Glycémie en mg * (valeur moyenne + l'écart type) 15 minutes 30 minutes 45 minutes Solution de sel 72 +4,6 78# 1,3 87+ 6,8 Glucose (témoin) 142 + 12 142 + 12 158 + 19 Glucose + 30 mg 135 + 13 128 + 5,5 132 + 7,3 Glucose + 60 mg 125 + 13* 118 + 2,9** 130 + * Probabilité par rapport au témoin avec glucose = 0,05 ** Probabilité par rapport au témoin avec glucose = 0,01 La purification du mélange des termes supérieurs de cette série et l'utilisation de ce mélange sous la forme pure conduisent de façon inattendue à une activité et à une spécificité encore plus grandes. On peut le constater par une comparaison des résultats d'inhibition in vitro de l'a-amylase et de la saccharase indiqués sur le tableau II avec les résultats indiqués sur le tableau VIII suivant pour les composés purs.
TABLEAU VIII Nombre d'unités Inhibition de Inhibition de la sac de glucose l'a-amylase, UIA/g charase, UIS/g 4 67 000 000 7 000 5 57 000 000 3 50C 6 42 000 000 1 200 7 24 000 000 60 8 5 000 000 10 Les résultats indiqués ci-dessus démontrent la grande activité du composé ayant 4 unités de glucose, dans le rôle d'un inhibiteur d'a-amylase. les composés ayant 5 et 6 motifs déploient également une bien plus grande activité inhibitrice spécifique que les substances déjà connues.Une baisse de l'activité inhibi trice apparaît lorsque le poids moléculaire augmente, ce que l'on peut constater dans le cas des composés ayant 7 et 8 motifs de glucose1 bien que ces composés montrent encore une activité inhibitrice considérable. L'inhibition de la saccharase in vitro semble être inversement proportionnelle au poids moléculaire. Be composé ayant 4 motifs de glucose montre une activité spécifique qui est à peu près le dixième de celle du composé ayant 2 motifs de glucose, tandis que l'activité inhibitrice du composé ayant 8 motifs de glucose n'est qutinsignifiante.
les composés peuvent être administrés sans dilution, par exemple sous forme de poudre ou dans une capsule de gélatine ou en association avec un support dans une composition pharmaceutique.
Des préparations pharmaceutiques peuvent contenir une quantité plus ou moins grande de l'inhibiteur, par exemple 0,1 à 99,5 ffi en association avec un support inerte non toxique acceptable du point de vue pharmaceutique, le support pouvant contenir une ou plusieurs substances auxiliaires solides, semisolides ou liquides telles qu'un diluant, une charge et/ou un ad juvant de formulation inerte, non toxiqueet acceptable du point de vue pharmaceutique.Ces préparations pharmaceutiques sont de préférence sous la forme d'unités posologiques, c'est-à-dire d'unités physiquement distinctes contenant une quantité déterminée de l'inhibiteur, qui ccrrespondent à une fraction ou à un multiple de la dose produisant l'effet inhibiteur recherché. les unités posologiques peuvent contenir 1, 2, 3, 4 ou plus de 4 doses individuelles ou la moitié, le tiers ou le quart d'une dose individuelle. Une dose individuelle contient de préférence une quantité suffisante de substance active pour obtenir l'effet inhibiteur désiré lors de l'administration, conformément à un schéma posologique pré-établi, d'une ou plusieurs unités posologiques, la totalité, la moitié, le tiers ou le quart de la dose quotidienne étant habituellement administré 1 fois, 2 fois, 3 fois ou 4 fois par jour.D'autres agents thérapeutiques peuvent aussi être incorporés. Bien que la posologie et le schéma d'administration doivent dans chaque cas être établis soigneusement avec la compé tence de l'homme de l'art et en tenant compte de ltâge, du poids et de l'état du patient, de la nature et de la gravité de la maladie, la dose à administrer se situe habituellement dans une gamme d t environ 30 à environ 3 x 1 105 UIA/kg et d'environ 1 à environ 1 x 104 UIS/kg de poids corporel par jour. Dans quelques cas, on obtient un effet thérapeutique suffisant avec une dose plus faible, tandis que dans d'autres cas, une dose plus grande s'impose.
L'administration orale peut être effectuée en utilisant des unités posologiques solides et liquides, par exemple des poudres, des comprimés, des dragées, des capsules, des granulés, des suspensions, des solutions, etc. On prépare une poudre en pulvérisant la substance en particules de diamètre convenable et en mélangeant les particules avec un support pharmaceutique également subdivisé. Bien qu'un glucide comestible tel que l'amidon, le lactose, le saccharose ou le glucose soit normalement utilisé à cette fin et qu'on puisse l'utiliser en l'occurence, il est désirable d'utiliser un glucide non métabolisable tel qu'un dérivé de cellulose.
Après centrifugation (30 minutes, 3000 tr/min) pour séparer le mycélium, on obtient 20,5 l d'une solution de culture de couleur brun foncé contenant 67 000 UIS/l. On ajuste le pH à 3,5 par addition d'acide nitrique et on ajoute, pour effectuer la décoloration,60g/l de "Lewapol" (Ca 9221, particules de 0,35 mm, firme Bayer), soit 1,23 kg. Après agitation pendant 20 minutes, on filtre le liquide sur un filtre Seitz "K 3". La solution de culture décolorée est neutralisée àl'ammoniaque(18,5 l, 67 000 UIS/l).
Pour adsorber la substance active, on incorpore ensuite en agitant 20 g de charbon actif par litre, soit un total de 370 g, et on agite pendant 30 minutes. On filtre ensuite sur un filtre Seitz "X3" garni d'une couche de "Clarcel" (auxiliaire de filtration).
On jette le filtrat (17,5 1, 3600 UIS/l). On lave le résidu de charbon 3 fois avec à chaque fois 2 1 d'eau distillée. Pour effectuer la désorption de la substance active du charbon, on agite ce dernier successivement 3 fois pendant 15 minutes, avec à chaque fois 1 1 d'acétone à 80%, en ajustant le pH à 2,5 par addition d'acide chlorhydrique concentré. On rassemble les phases de désorption (2,4 l, 371 000 UIS/l). On introduit dans ce produit de désorption 20 g/l de "Dowex" H+ ("Dowex 50WX 4", forme H , firme Serva, Heidelberg), c'est-à-dire 46 g de "Dowex", et on agite pendant 20 minutes.Ensuite, on sépare la résine par filtration (fractions de "Dowex" I) puis on la lave avec de l'acé- tone à environ 75 5S. Le filtrat et la liqueur de lavage (3 1 = 215 000 liIS/l) sont agités avec 60 g de "Amberlite IRA 410" (forme OH ) (firme Serva, Heidelberg) par litre, jusqu'à ce que le pH soit égal à 7. Ensuite, on filtre et on ajoute au filtrat (2,8 1, 219 00D UIS/l) 72 g de "Dowex" forme Hf et on agite pendant 20 minutes.
On maintient alors le pH à 3,0 par suspension d'un sac poreux en "Nylon" rempli de résine "Amberlite IRA 410" forme OH . On enlève ensuite la résine "Dowex" par filtration (fractions de "Dowex"II ) et on jette le filtrat (2,6 1, 27 OCO UIS/l).
Les fractions de 1,Dowex" I et II sont lavées chacune individuellement 3 fois avec de l'acétone à 75 *, à un pH égal à 3,5, puis désorbées chacune 3 fois avec à chaque fois 100 ml (fraction "Dowex î")et 150 ml (fraction "Dowex" II) de solution ammoniacale à 0,6 *. Lors de la première désorption, dans laquelle la quantité d'ammoniac pour la neutralisation de la résine "Dowex" ne suffit pas, on ajuste le pH à 9 en s'aidant d'un pHmètre, par addition d'ammoniaque concentrée.Les 3 phases de désorption des fractions de "Dowex" I et II sont rassemblées individuellement, évaporées presque à sec à l'évaporateur rotatif, reprises dans 50 mi d'eau, additionnées d'acide chlorhydrique pour ajuster le pH à 3-4 (pH-mètre) et additionnées de 50 ml de méthanol. les solutions sont versées goutte à goutte dans 1,5 1 d'acétone absolu, sous agitation, le précipité formé est filtré à la trompe et lavé 3 fois à l'acétone et 1 fois à l'éther, puis séché sous vide.
Rendement : Fraction I 6,5 g 25 000 UIS/g Fraction II 12,3 g 36 000 UIS/g.
'les fractions I et II contiennent comme composants doués d'activité inhibitrice principalement le composé de l'invention dans lequel la somme n1 + n2 est égale à 2, à côté de faibles proportions du composé pour lequel la somme n1 + n2 est égale à 3.
Le tableau suivant indique les activités inhibitrices de saccharase de la préparation au cours des étapes successives: Rendement Volume UIS/l UIS totales Rendement en (1) UIS, % 1) Solution de 20,5 67000 1 373 500 100 culture 2) Après décolo ration au "Lewapol" 19,5 67000 1 306 500 95 3) Après adsorp tion au char bon actif 18,5 3600 66 600 (4,8 jeté) 4) 1er produit de désorption 0,7 742000 519 400) 37,8) 5) 2e produit de ) ) désorption 0,9 329000 296 100#883500 21,6)64,4 6) 3e produit de ) désorption 0,8 85000 68 000 5,0) 7) Mélange des produits de désorption (4 à 6) 2,4 371000 890 400 64,8 8) Après première adsorption sur "Dowex" 3,0 215000 645 000 9) Après neutrali sation à la résine "IRA"OH-2,8 219000 613 200 10)Après deuxième adscrption sur "Dowex" 2,5 27000 67 500 (4,9 jeté) 11)Produits ras semblés de dé sorption à l'ammoniaque de la fraction de "Dowex" I 0,29 682000 197 780 14,4) 12) de la fraction )60,9 de "Dowex" II 0,45 1 419000 638 550 46,5) 13)Précipitation de la fraction I 6,5 g 25000/g 162 50C 11,8) Précipitation )44,0 de la fraction 12,3g 36000/g 442 800 32,2) II Exemple 10 On dissout 200 g d'une préparation du type décrit dans l'exemple 1 dans 940 ml d'eau distillée et 60 ml d'acide sulfurique concentré et on chauffe la solution obtenue pendant 4 heures au reflux (température interne : 98 à 100 0 ; température du bain d'huile : 14000). a solution refroidie, de couleur brun foncé, est additionnée de 10 g de charbon actif (Merck, 'Art. 2186") et agitée pendant 1 heure. Ensuite, on filtre le charbon actif à la trompe, on le lave à l'eau et on ajuste le pH du filtrat à 7-8 par addition d'environ 250 ml d'hydroxyde de potassium ION. On agite la solution pendant 1 heure avec 50 g de charbon actif. On filtre le charbon à la trompe, on le lave avec 2 1 d'eau et on jette le filtrat. Pour effectuer la désorption, on fait digérer le charbon pendant environ 16 heures avec 2 1 d'alcool à 30*. Enfin, on filtre le charbon à la trompe, et on concentre la solution alcoolique à l'évaporateur rotatif.On obtient un résidu de 6,2 g. Ce produit brut (6,2 g) est dissous dans 500 ml d'eau et la solution est agitée avec précaution pendant 1 heure avec 30 g de "Amberlite IR 120'! (forme H+). On sépare la résine échangeuse par filtration et on la lave avec de l'eau distillée jusqu'à ce que le filtrat soit neutre et exempt de glucose. La résine échangeuse est agitée ensuite pendant-environ 16 heures avec 15 ml de solution à 25 * d'ammoniac dans 1000 ml d'eau, puis elle est séparée et jetée. Be filtrat est concentré à 11 évaporateur rotatif. On obtient un résidu de 3,7 g.
Pour parfaire la purification, on effectue une chromatographie sur de la cellulose. On charge 4,5 g de la matière désorbée de l'échangeur sur une colonne de 1 m de longueur et de 2,5 cm de largeur, garnie de cellulose. On utilise comme éluant tout d'abord un mélange d'éthanol et d'eau à 5:1 pour éluer le composé de l'invention dans lequel n1 est égal à 1 puis un mélange d'éthanol et d'eau à 3:1.A une vitesse d'écoulement de 20 gouttes par minute, on recueille des fractions de 14 ml chacune. 'les fractions individuelles sont examinées par chromatographie en couche mince. les fractions 47 à 85 donnent après concentration 1,6 g d'un composé conforme à l'invention, de couleur légèrement brunatre, ayant 1 motif de glucose. les impuretés colorantes ne jouent aucun rôle quantitatif. Be composé dans lequel la somme nl + n2 est égale à 1 est obtenu sous la forme d'une résine incolore lorsqu'on effectue la purification avec un échangeur ionique fortement acide non pas en discontinu, mais sur une colonne.
Exemple 1 1 On dissout 200 g d'une préparation du type décrit dans l'exemple 1 dans 940 ml d'eau distillée et 60 ml d'acide sulfurique concentré et on chauffe la solution au reflux pendant 15 minutes (température interne : 98-1000G ; température du bain d'huile : 1400C). La solution de couleur brun foncé qui a été refroidie est additionnée de 10 g de charbon actif (Merck, "Art 2186") et agitée pendant 1 heure.Ensuite,on filtre le charbon actif à la trompe,on le lave à 11 eau et on ajuste lepH du filtrat à 7-8 par addition d'environ 250 ml d'hydroxyde de potassium ?ON. On agite la solution pendant 1 heure avec 50 g de charbon actif.On filtre le charbon à la trompe, on le lave avec 2 1 d'eau et on jette le filtrat. Pour effectuer la désorption, on fait digérer le-charbon pendant environ 16 heures avec 2 1 d'alcool à 30*. Enfin, on filtre le charbon à la trompe et on concentre la solution alcoolique à l'évaporateur rotatif. On obtient un résidu de 8,0 g.
On reprend le résidu dans 15 ml d'eau et on fait passer la solution sur une colonne de 20 cm de hauteur et 2,4 cm de diamètre, garnie de 50 g de résine "Amberlite IR 120" (forme H+). On règle la vitesse d'écoulement à 3 gouttes par minute, puis on effectue un lavage à l'eau (12 gouttes par minute) jusqu'à ce que tous les composants non basiques aient été éliminés. Ensuite, on élue les produits basiques de la colonne avec une solution à 0,5 % d'ammoniac (vitesse dtécoulement = 12 gouttes/min) et on évapore la solution aqueuse à sec, à l'évaporateur rotatif. On obtient un résidu de 4,1 g.
On dissout 2 g de ce résidu dans un peu d'eau et on charge la solution sur une colonne garnie de "Sephadex G-15" (hauteur de 200 cm, diamètre de 3,0 cm). On effectue l'élution avec de l'eau. En réglant la vitesse d'écoulement à 8 ml/h, on recueille des fractions de 2 ml chacune. Des fractions individuelles sont analysées par chromatographie en couche mince. 'les fractions 85 à 94 donnent 280 mg du composé pour lequel la somme n1 + n2 est égale à 2, ayant une activité spécifique de 50 000 UIS/g.
Exemple 12 En faisant incuber 2 g d'une préparation du type décrit dans l'exemple 1 dans 60 ml de tampon au glycérophosphate de sodium 20 mM (pH 6,9) et de concentration 1 mM en CaCl2 avec 1 g d'a-amylase d'Aspergillus spec. ("SERVA" N0 13418) sous agitation constante pendant 120 heures à 37 C, puis en chauffant pendant 5 minutes à 1000C et en centrifugeant à 400C tr/min pour éliminer la matière non dissoute, on obtient après lyophilisation de la solution 1,9 g d'un produit contenant 3500 UIS/g et 2 x jo6 UIA/g.En analysant ce produit par chromatographie en couche mince et par la couleur d'inhibition à la saccharase comme décrit dans l'exemple 1, on constate que les composés doués d'activité inhibitrice sont principalement les composés de l'invention pour lesquels la somme n1 + n2 est égale à 1, 2 et 3.
Exemple 13 En faisant incuber 2 g d'une préparation du type décrit dans l'exemple 1 dans 30 ml de tampon à l'acétate 20 mM de pH égal à 4,8 avec 1,25 mg de amylase de patate douce (Boehringer) sous agitation constante pendant 120 heures à 3700 puis en chauffant pendant 5 minutes à 100 C et en centrifugeant à 4000 tr/min pour enlever la matière non dissoute, on obtient après lyophilisation de la solution 1,5 g d'un produit contenant 1800 UIS/g et 3,8 x 106 UIA/g.En analysant ce produit par chro matographie en couche mince et par la-couleur dtinhibition de la saccharase comme décrit dans l'exemple 1, on constate que les composés doués d'activité inhibitrice sont principalement les composés de l'invention dans lesquels la somme n1 + n2 est égale à 2 et 3.
Exemple 14 En inoculant une fiole d'Erlenmeyer de 200 ml qui contient 25 ml d'une solution nutritive renfermant 0,1 * de K2HPO4, 0,2 ( de (NH4)2S04, 0,05 * de MgSO4, 0,05 * de KCl 0,01 * de PeSO4, 2 * d'une préparation du type décrit dans l'exem- ple 1, avec une suspension de spores de la souche Aspergillus niger ATCC Il 394 et en la faisant incuber à 280C sur une secoueuse mécanique circulaire, le titre en UIA s'abaisse en 6 jours de 210 000 UIA/ml à 53 000 UIA/ml et au bout de 10 jours, à 21 300 UIA/ml.En même temps, la teneur en UIS/ml passe de 7,0 à 72.
On centrifuge à 3000 tr/min pendant 30 minutes 20 ml d'une solution ayant incube pendant 10 jours avec la suspension de spores, pour enlever le mycélium. les 15 ml de liqueur surna- geante (72 000 UIS/l) sont débarrassés des sels par agitation pendant 30 minutes avec 2 g de "Amberlite IRC 50" forme H et 1 g de "Amberlite IRA 410" forme OH-(conductivité inférieure à 2 mS.cm 1). On filtre et on fait passer le filtrat à un débit de 5 ml/h sur une colonne de "Dowex" forme H+, équilibrée dans de l'acide chlorhydrique millinormal (diamètre de la colonne, 1 cm ; longueur 10 cm). On lave ensuite la colonne avec 200 ml d'acide chlorhydrique 0,001 N.Pour effectuer la désorption, on fait passer par pompage à travers la colonne une solution ammoniacale à 0,6 *, à un débit de 10 ml par heure, et on recueille des fractions de 5 ml. les fractions qui renferment l'activité inhibitrice de saccharase sont rassemblées, concentrées à 2 ml à l'évaporateur rotatif et additionnées de 2 mi de méthanol.
Pour le brevet précité N 3 174 870 des Etats-Unis d'Amérique, il faut un agent de moussage qui est stable en présence d'oxygène à une température inférieure à 1050oC et l'on ajoute donc un agent fournissant de l'oxygène, tel qu'un sulfate alcalin. Â titre d'agent réducteur, on énumère des métaux finement divisés, des carbures métalliques et des sulfures de métaux qui sont stables à l'oxygène jusqu'à 1100OC environ.