2. Mesure des acides gras libérés. On peut mesurer les acides gras produits après l'hydrolyse selon un certain nombre de procédés. On peut les titrer après extraction, ou bien on peut les titrer en continu au cours de l'hydrolyse. Ce dernier procédé permet de réaliser un essai cinétique d'une hydrolase d'ester mais il est limité à l'intervalle de pH alcalin et nécessite un appareil de titration à erregistrement spécial. On peut mesurer des variations de couleur d'un indicateur acide-base au fur et à mesure que l'hydrolyse progresse, ce qui fournit théoriquement un essai très sensible.Toutefois, pour que le procédé soit applicable à un grand nombre d'hydrolases d'ester avec des optima de pH différents, un certain nombre d'indicateurs sont nécessaires et il est nécessaire d'harmoniser leurs pK à l'hydrolase particulière a mesurer de même que le pK de tout tampon présent dans la solution de telle sorte que l'on obtienne des cinétiques d'ordre zéro. La sensibilité de ce type de procédé est inversement proportionnelle a la quantité de tampon presexst. On peut également déterminer les acides gras libérés par première transformation en leurs sels de cuivre, et ensuite mesurés par voie colorimétrique. Le procédé le plus sensible comprend l'utilisation d'esters radioactifs marques dans la fraction acide.On compte l'acide gras libéré après séparation de l'ester non hydrolysé å l'aide dlun compteur de scintillations approprié. Toutefois, ce type de procedé est très long et très cher. 3. Mesure de l'alcool libéré. Certains esters de phénol sont utilisés dans cette technique et on mesure par voie colorimé- trique le phénol libre produit par l'hydrolyse. Ce type de procédé permet un contrôle continu de la réaction seulement dans- linter- valle de pH pour lequel le phénol est coloré.Comme élargissement de ce procédé, et un procédé d'une sensibilité plus grande est celui de l'analyse fluorométrique après couplage du phénol libéré avec un colorant azotique. Toutefois, la spécificité des esters de phénol pour certaines hydrolases est mise en question, plus particulièrement des esters de phénol solubles dans lseau vis-à-vis de la lipase de triglycéride telle que celle que l'on rencontre dans le pancréas. De même, la lipase pancréatique présente une activité spécifique très faible même pour des esters de phénol solubles dans l'eau.Plutôt que des esters phénoliques, d'autres procédés fluorométriques utilisent des esters d'acide carboxylique d'alcools tels que le F -naphtcl, la fluoresceine, ou la 4-méthyl-umbelliferone qui présentent une fluorescence après l'hydrolyse. Toutefois, ces esters sont des supports faibles pour la lipase pancréatique. On a également utilisé des esters de vinyle pour mesurer des hydrolases (Brockerhoff, H., Biochimica et 3iophysica Acta, 212, 92 (1970)et 3rockerhoff, H et coll, Analytical Biochemîstry , 37, 26-31 (1970).Avec ces esters, on ne mesure pas la fraction contenant le vrouFerent OH, mais son produit d'isomérisation, l'acétaldéhyde. Dans la technique de Brockerhoff, on émulsionne l'ester de vinyle ce qui empêche par conséquent toute mesure optique possible au fur et a mesure que la réaction progresse. Des fractions aliquotes du mélange réactionnel contenant l1acétaldéhyde sont couplées à la 3-methyl- 2-benzothiazolone hydrazone, pour donner un produit coloré qui est déterminé par voie colorimétrique à 666 nm. Cependant, l'oléate de vinyle qui est utilisé comme support présente une efficacité de 29,4% par rapport à celle du trioléate de glycérol dans les mêmes conditions en utilisant de la lipase pancréatique de porc pour ces mesures.Toutefois, l'oléate de vinyle est un support bien meilleur que les esters phénoliques ou que les esters des alcools fluorescents ; d'une manière significative, Brockerhoff note que les cinétiques de son procédé ne sont pas linéaires au-dessus d'une absorption d'environ 0,6. Le procédé de Brockerhoff, bien qu'il soit une amélioration par rapport à de nombreux procédés de l'art antérieur, est un procédé qui doit être réalisé manuellement et qui nécessite la préparation de quelques solutions différentes de même qu'une quantité importante d'ordre technicien.